JP2022538922A - ペプチド-mhc複合体 - Google Patents
ペプチド-mhc複合体 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022538922A JP2022538922A JP2022500150A JP2022500150A JP2022538922A JP 2022538922 A JP2022538922 A JP 2022538922A JP 2022500150 A JP2022500150 A JP 2022500150A JP 2022500150 A JP2022500150 A JP 2022500150A JP 2022538922 A JP2022538922 A JP 2022538922A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- mhc
- binding
- amino acid
- complexes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 101
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims abstract description 34
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 17
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 claims description 50
- 102100028970 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E Human genes 0.000 claims description 44
- 101000986085 Homo sapiens HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E Proteins 0.000 claims description 44
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims description 43
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 34
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 30
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 18
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims description 8
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 claims description 3
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- TUMGFDAVJXBHMU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-5-sulfanylpentanoic acid Chemical group OC(=O)C(N)CCCS TUMGFDAVJXBHMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- HBMWPJLCTYKAGL-UHFFFAOYSA-N 2-amino-6-sulfanylhexanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCCCS HBMWPJLCTYKAGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 26
- 108010066345 MHC binding peptide Proteins 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 14
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 14
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 13
- LZOIGVDSAMDBIO-LXWJMTKESA-N (2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-4-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C1=CC=CC=C1 LZOIGVDSAMDBIO-LXWJMTKESA-N 0.000 description 11
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 11
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 7
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 7
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 5
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 5
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 5
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 4
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 description 3
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical group SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 150000001944 cysteine derivatives Chemical group 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 230000037451 immune surveillance Effects 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 102100027314 Beta-2-microglobulin Human genes 0.000 description 2
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 2
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 150000002019 disulfides Chemical class 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- -1 homocysteine (2-amino-5-sulfanyl-pentanoic acid) Chemical compound 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N Cys-Cys Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O OABOXRPGTFRBFZ-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- CEXINUGNTZFNRY-BYPYZUCNSA-N Gly-Cys-Gly Chemical group [NH3+]CC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC([O-])=O CEXINUGNTZFNRY-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102100028976 HLA class I histocompatibility antigen, B alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100028971 HLA class I histocompatibility antigen, C alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100028966 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain F Human genes 0.000 description 1
- 102100028967 HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain G Human genes 0.000 description 1
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010058607 HLA-B Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010052199 HLA-C Antigens Proteins 0.000 description 1
- 108010070768 HLA-C*03 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010024164 HLA-G Antigens Proteins 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 101000986080 Homo sapiens HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain F Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 1
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 238000003505 heat denaturation Methods 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002062 molecular scaffold Substances 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000003345 scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70539—MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
- G01N33/5047—Cells of the immune system
- G01N33/505—Cells of the immune system involving T-cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
本発明者らは、予想外にも、pMHC複合体が、該ペプチドのC末端アンカーアミノ酸残基と該MHC結合溝のFポケット内のアミノ酸残基との間に非天然型連結を導入することにより、安定化され得ることを見出した。この連結は、pMHC複合体が天然型pMHC複合体の三次元立体構造を保持し、天然型複合体を認識するTCRにより認識されることができるものである。
下記表は、種々のMHCクラスI分子における好ましいシステイン又はその誘導体変異のアイデンティティー及び位置を示す。番号付けはMHC重鎖上の位置を参照する。
ジスルフィド結合を形成することができる好ましい非天然アミノ酸の例には、ホモシステイン、及び追加(例えば1又は2)のメチル基が組み込まれて延長された炭素側鎖を有するホモシステインアナログが含まれる。好ましい例としては、2-アミノ-5-スルファニル-ペンタン酸(本明細書において「h3C」と呼ぶ)(例えば、Chem-Impex International Inc.が提供するもの、Cat No 29777;又はIris Biotech GmbHが提供するもの、Cat. No. # 917883-62-6)及び2-アミノ-6-スルファニルヘキサン酸(本明細書において「h4C」と呼ぶ)(これは、例えば、Creative Chemistry Solutionsからカスタム合成として入手可能である)が挙げられる。非天然アミノ酸(h3C及びh4Cを含む)は、D又はL異性体配置であり得る。
この情報を考慮して、当業者は、どの非天然アミノ酸(h3C又はh4C)をペプチドのC末端アンカー残基から置換すべきか、及びMKC結合溝のFポケット中のどの残基(116又は147)をシステインに置換すべきかを決定することができる。ジスルフィド結合は、ペプチドのC末端アンカー位置のh3CとHLA-Eの147位のシステインとの間、又はペプチドのC末端アンカー位置のh4CとHLA-Eの116位のシステインとの間に形成されていることが好ましい。或いは、ジスルフィド結合は、ペプチドのC末端アンカー位置のh3CとHLA-Eの116位のシステインとの間、又はペプチドのC末端アンカー位置のh4CとHLA-Eの147位のシステインとの間に形成されている。
本発明の複合体は、単離され及び/又は実質的に純粋な形態であり得る。例えば、複合体は、他のポリペプチド又はタンパク質を実質的に含まない形態で提供され得る。pMHC複合体は可溶性形態であり得、このことは、MHC複合体がその膜貫通領域及び細胞質領域を除去するように短縮化され得ることを意味する。
本発明のpMHC複合体は更に改変されていてもよい。例えば、pMHC複合体は、治療部分に融合され、及び/又は固体支持体に付着され、及び/又はビオチンタグのようなタグに融合され、及び/又は多量体形態であり得る。タグはC末端であってもよい。
本発明のpMHC複合体は、多量体形態、例えば、二量体又は四量体又は五量体又は八量体又はそれ以上の多量体の形態であり得る。多量体ペプチドMHC複合体の製造に適切な方法の例は、Gretenら(Clin. Diagn. Lab. Immunol. 2002 Mar;9(2):216-20)及びその参照文献並びにWooldridgeら(Immunology (2009) 126(2):147-64)に記載されている。一般に、ペプチド-MHC多量体は、ビオチン残基をタグ付加され、蛍光標識ストレプトアビジンを介して複合体化されたペプチド-MHCを用いて製造し得る。或いは、多量体のポリペプチド-MHC複合体は、免疫グロブリンを分子足場として用いることにより形成し得る。この系では、MHC分子の細胞外ドメインは、免疫グロブリン重鎖の定常領域と、短いアミノ酸リンカーで隔てられて融合される。ポリペプチド-MHC多量体は、キャリア分子(例えばデキストラン)を用いて製造されている(WO02072631)。多量体のペプチドMHC複合体は、アビディティ効果のため、当該複合体を結合する結合性部分(例えば、T細胞受容体)の検出の向上に有用であり得る。
本発明において有用なMHCを産生する簡便な方法は、該MHCをコードする核酸を発現系において用いて発現させることである。本発明はさらに、本発明において有用な安定化MHCをコードする単離核酸を提供する。核酸にはDNA及びRNAが含まれる。当業者は、本発明において有用な安定化MHCを依然として提供する、前記核酸に対する置換、欠失及び/又は付加を決定することができる。
第1の観点の複合体を、T細胞受容体(TCR)、TCR模擬抗体又はT細胞の集団と組み合わせること;及び
該複合体に結合するTCR、TCR模擬抗体又はT細胞を同定すること
を含むスクリーニング方法を提供する。
本発明の各観点の好ましい特徴は、他の観点の各々についても、必要な変更を加えて上で同様である。本明細書で言及される先行技術文献は、法律により許容される最大限まで組み込まれる。
ここで、本発明を、以下の非限定的実施例及び図面を参照して説明する。
図1は、経時的なILT2結合の喪失により決定される、示されたpMHC複合体の安定性を示す。天然型pHLA-E複合体は限定的な安定性を示す。
図2は、天然型pMHC複合体と、既存の方法論を用いて安定化された同等のpMHC複合体との間のTCR認識の差を示す。
図3は、天然型pMHC複合体と、本発明の同等な安定化pMHC複合体との間のTCR認識の違いを示す。
本実施例は、単離ペプチドHLA-E複合体が短い半減期を有することを実証し、このことが、結合性物質(例えばTCR及び抗体)を同定及び特徴付けに用いるに十分に安定でないことを意味する。この目的には、少なくとも4時間の半減期が代表的には好ましく、これを実質的に超える半減期が望ましい。
安定性は、HLA-Eにより提示されることが知られている幾つかのペプチドを用いて評価される。これらペプチドには、Joostenら(PLoS Pathog. 2010 Feb 26;6(2):e1000782)及びHansenら(Science. 2016 Feb 12;351(6274):714-20)にそれぞれ記載されたMTBペプチド及びHIVペプチド、並びにHLA-A*02及びHLA-Cw3からのリーダーペプチドに相当する2つの自己ペプチドが含まれる。
ペプチド
ペプチドは Peptide Protein Research Ltdから化学合成により取得し、使用前にDMSO中で4mg/mlの濃度に可溶化した。
HLA-E*01:01及びHLA-E*01:03ペプチド複合体の作製
HLA-E重鎖及びβ2-ミクログロブリン(β2m)を、別々にE. coliにおいて封入体として発現させ、その後、以前(Garbocziら、Proc Natl Acad Sci U S A. 1992 Apr 15;89(8):3429-33)に記載された方法を用いてリフォールドさせて精製した。HLA-E重鎖は、C末端ビオチン化タグ(AviTagTM GLNDIFEAQKIEWHE)を含んでいたが、膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを除かれていた。簡潔には、HLA-E重鎖及びβ2mを興味対象ペプチドと共に30:5:2の比で混合してリフォールドさせた。次いで、リフォールドした可溶性pHLAを、アニオン交換に続いてサイズ排除クロマトグラフィー(SEC)が組み込まれた2工程プロトコルを用いて精製した。ビオチン化複合体を生成するため、ビオチン化工程を、アニオン交換の後で、かつ、O'Callaghanら,Anal Biochem. 1999 Jan 1;266(1):9-15に記載されるようにビオチン-タンパク質リガーゼ(BirA)を用いるSECの前に含ませた。
ペプチド-HLA-E複合体の安定性は、BIAcore T200 装置を用いる表面プラズモン共鳴(SPR)により評価した。約500~1000応答単位(RU)の精製ビオチン化ペプチド-HLA-Eモノマーを、ストレプトアビジン結合CM-5シリーズSセンサーチップに捕捉した。親和性を増強された可溶形態のIg様転写物2受容体(ILT2)を1μMの濃度で、チップ表面上に10μl/分の流速で60秒間流した。ILT2はクラスI HLA分子に立体配置依存性様式で結合するため、複合体の安定性の指標として用いられる。pHLA-E複合体へのILT2結合を5時間にわたって一定間隔で測定し、次いでペプチド-HLAを含まない対照フローセルでのバルク緩衝液の応答を差し引くことによって、応答をILT2結合について規格化した。結合半減期(T1/2)は、BIA T200評価ソフトウェア及びGraphPad Prism 8を用いて、%活性を時間に対してプロットすることにより算出した。
下記表1は、ILT2結合により決定された、HLA-E*01:03と複合体化した、示されたペプチドの各々の半減期(T1/2)を提供する。示した複合体の全てが、5時間以下の半減期を有し、幾つかの複合体は1時間以下の半減期を有する。結合性データの代表例を図1(左側パネル)に提供する。
A)
本実施例では、HLA-E重鎖を、Y84位にシステイン変異が組み込まれるように改変し;ペプチドを、C末端に追加の3アミノ酸(Gly-Cys-Gly)が含まれるように改変した。このアプローチは、一般には「Cysトラップ」と呼ばれ、ペプチドを結合溝に「捕捉」することによって、種々のHLA複合体の安定性を向上させるために用いられて成功している(Truscott J Immunol 2007 May 15;178(10):6280-9;Mitaksovら,Chem Biol. 2007 Aug;14(8):909-22)。
実施例1に記載したものと同じ実験方法を用いた。
結果
下記の表2は、ILT2結合により決定された、示されたcys捕捉ペプチドHLA-E複合体の各々の半減期を提供する。示した複合体の全てが、実施例1に示した未改変複合体と比較して実質的に延長した半減期を有し、大部分は20時間を超えている。結合性データの代表例を図1(右側パネル)に提供する。
続いて、MTBペプチドRLPAKAPLL+GCGを含むCys捕捉安定化ペプチド-HLA-E複合体を、抗原特異的TCRによる認識について試験し、未改変複合体と比較した。このペプチドを選択した。なぜならば、未改変の天然型ペプチドHLA-E複合体は、比較的長い半減期を有し、したがってTCR結合の評価に適しているからである。
ペプチド-HLA-E複合体へのTCR結合の評価
MTBペプチドRLPAKAPLL HLA-E複合体を認識する4つのTCRを、ナイーブなファージライブラリから単離し、以前(Boulterら,Protein Eng. 2003 Sep;16(9):707-11)に記載したとおりに可溶性αβヘテロダイマーとして調製した。
精製された可溶性TCRのペプチド-HLA複合体への結合解析は、BIAcore T200装置を用いて表面プラズモン共鳴(SPR)により行った。ビオチン化pHLA-E分子を、上記実施例1に記載されるように、興味対象ペプチドと共にリフォールドさせた。全ての測定は、0.005%の界面活性剤P20を補充したダルベッコPBS緩衝液中で25℃にて行った。
ビオチン化ペプチド-HLA-Eモノマーを、ストレプトアビジン結合CM-5シリーズSセンサーチップに不動化した。平衡結合定数は、約1000応答単位(RU)のペプチド-HLA-E*01:03複合体を被覆したフローセル上に10~30μl/分の一定流速で注入した可溶性TCRの連続希釈物を用いて決定した。平衡応答は、ペプチド-HLAを含まない対照フローセルでのバルク緩衝液の応答を差し引くことによって、各TCR濃度について規格化した。KD値は、GraphPad Prism 8ソフトウェアを用いた非線形曲線フィッティング及びLangmuir結合等温式 結合 = C×Max/(C+KD)(式中、「結合」は注入されたTCR濃度Cでの平衡結合(単位RU)であり、Maxは最大結合である)により得た。
下記表2に示す結合親和性は、図2に示す結合曲線と共に、抗原特異的TCRが天然型の非安定化ペプチドHLA-E複合体を認識可能である一方、cysトラップ安定化複合体の認識は実質的に低下し、場合によっては検出レベル未満であることを示している。
A)
本実施例では、ペプチドHLA-E複合体を、新規な操作されたジスルフィド結合がHLA-E重鎖のペプチド結合溝とペプチドのC末端アンカー残基との間に組み込まれるように改変した。
新規ジスルフィドを創出するため、MTBペプチドであるRLPAKAPLLペプチドのP9アンカー残基を、非天然アミノ酸L-3-Cホモシステイン(2-アミノ-5-スルファニル-ペンタン酸)(RLPAKAPL-h3C)に改変し、HLA-E重鎖のF116位又はS147位のいずれかをシステインに変異させた。
実施例1に記載のように、ペプチドHLA-E複合体を作製して、安定性について評価した。TCR結合は実施例2に記載のように評価した。
結果
下記表4は、新規ジスルフィドが、複合体の半減期を天然型複合体より長くしたことによって示されるように、安定性の実質的な向上をもたらしたことを実証している。
表5及び6は、安定化複合体(それぞれF116又はS147にシステイン変異を有する)に対するTCR結合が、全ての場合で保存されることを示す。各TCRについて、安定化複合体と天然型複合体との間で、結合に僅かな差しか観察されず、このことは、ペプチドがほぼ天然様立体構造をとっていることを示している。
図3は表5の4つのTCRについての結合曲線を示す。
更なる実施例では、MTBペプチドであるRLPAKAPLLペプチドのP9アンカー残基を、非天然アミノ酸L-4-Cホモシステイン(2-アミノ-6-スルファニルヘキサン酸)(RLPAKAPL-h4C)に改変し、HLA-E重鎖のF116又はS147位をシステインに変異させた。複合体の安定性及びTCR結合はAの部に記載したとおりに評価した。
得られた複合体の結合半減期は24.47時間であった。このことは、新規ジスルフィドが天然型複合体に比べて安定性の実質的な向上をもたらしたことを実証している(表4に示す)。6つのTCRについてTCR結合を評価した。6つ全ての場合で、安定化複合体へのTCR結合は保存された。天然型複合体と比較した結合の差は、F116とのジスルフィドについては1.53~3.24倍の範囲、S147とのジスルフィドについては1.11~2.83倍の範囲であった。
Claims (15)
- ペプチドのC末端アンカー残基とMHC結合溝のFポケット中のアミノ酸残基との間に非天然型連結を含む安定化ペプチド-MHC(pMHC)複合体。
- 前記非天然型連結が共有結合である、請求項1に記載の複合体。
- 前記共有結合が、前記MHC結合溝のFポケット及び/又は天然型ペプチドのC末端アンカー残基中のアミノ酸残基から置換されたアミノ酸同士間、好ましくはMHC結合溝のFポケット及び天然型ペプチドのC末端アンカー残基の両方のアミノ酸残基から置換されたアミノ酸同士間に形成されている、請求項2に記載の複合体。
- 前記MHC結合溝のFポケット中の置換アミノ酸残基が116位又は147位にある、請求項3に記載の複合体。
- 前記非天然型連結がジスルフィド結合である、請求項1~4のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記MHC重鎖の116位又は147位のアミノ酸残基がシステインに置換されている、請求項5に記載の複合体。
- 前記ペプチドのC末端アンカー残基から置換されたアミノ酸が非天然アミノ酸である、請求項1~6のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記ペプチドのC末端アミノ酸アンカー残基が、延長された炭素側鎖を有するホモシステインアナログに置換されている、請求項7に記載の複合体。
- 前記ホモシステインアナログが、2-アミノ-5-スルファニル-ペンタン酸又は2-アミノ-6-スルファニルヘキサン酸である、請求項8に記載の複合体。
- 可溶性である請求項1~9のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記MHCがビオチン化タグを含み、該タグはC末端であってもなくてもよい、請求項1~10のいずれか1項に記載の複合体。
- 前記MHCがHLA-Eである、請求項1~11のいずれか1項に記載の複合体。
- 請求項1~12のいずれか1項に記載の複合体の多量体。
- 前記MHC重鎖と前記ペプチドのC末端アミノ酸アンカー残基との間に共有結合を形成することを含む、請求項1~12のいずれか1項に記載のペプチド-MHC複合体を製造する方法。
- 請求項1~12のいずれか1項に記載の複合体を、T細胞受容体(TCR)、TCR模擬抗体又はT細胞の集団と組み合わせること;及び
前記複合体に結合するTCR、TCR模擬抗体又はT細胞を同定すること
を含む、スクリーニング方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB1909509.0A GB201909509D0 (en) | 2019-07-02 | 2019-07-02 | Peptide-MHC complexes |
GB1909509.0 | 2019-07-02 | ||
PCT/EP2020/068491 WO2021001414A1 (en) | 2019-07-02 | 2020-07-01 | Peptide-mhc complexes |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022538922A true JP2022538922A (ja) | 2022-09-06 |
JPWO2021001414A5 JPWO2021001414A5 (ja) | 2023-07-07 |
Family
ID=67540088
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022500150A Pending JP2022538922A (ja) | 2019-07-02 | 2020-07-01 | ペプチド-mhc複合体 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20230054274A1 (ja) |
EP (1) | EP3994161A1 (ja) |
JP (1) | JP2022538922A (ja) |
KR (1) | KR20220031046A (ja) |
CN (1) | CN114174329A (ja) |
AU (1) | AU2020299989A1 (ja) |
BR (1) | BR112021026149A2 (ja) |
CA (1) | CA3143567A1 (ja) |
GB (1) | GB201909509D0 (ja) |
IL (1) | IL289390A (ja) |
MX (1) | MX2021016117A (ja) |
WO (1) | WO2021001414A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB202010329D0 (en) * | 2020-07-06 | 2020-08-19 | Immunocore Ltd | Specific binding molecules |
US20240076350A1 (en) * | 2020-12-31 | 2024-03-07 | Oxford University Innovation Limited | Mhc: peptide complexes |
EP4348255A1 (en) * | 2021-06-01 | 2024-04-10 | Oxford University Innovation Limited | Peptide screen |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998006749A2 (en) * | 1996-08-16 | 1998-02-19 | President And Fellows Of Harvard College | Soluble monovalent and multivalent mhc class ii fusion proteins, and uses therefor |
GB9725764D0 (en) * | 1997-12-04 | 1998-02-04 | Isis Innovation | HLA-E binding |
ES2747357T3 (es) | 2001-03-14 | 2020-03-10 | Dako Denmark As | Construcciones de moléculas MHC y sus usos para el diagnóstico y terapia |
GB0411773D0 (en) * | 2004-05-26 | 2004-06-30 | Avidex Ltd | Method for the identification of polypeptides which bind to a given peptide mhc complex or cd 1-antigen complex |
JP5368301B2 (ja) * | 2006-06-22 | 2013-12-18 | ノボ・ノルデイスク・エー/エス | 可溶性ヘテロ二量体レセプター及びその使用 |
US8992937B2 (en) | 2006-08-28 | 2015-03-31 | Washington University | Disulfide trap MHC class I molecules and uses therefor |
DE112011100879A5 (de) | 2011-08-30 | 2013-11-14 | Jacobs University Bremen Ggmbh | Gen codiert für ein MHC-Klasse-I-Molekül, Plasmid, Expressionssystem, Protein, Multimer, Reagenz und Kit zum Analysieren einer T-Zellen-Frequenz |
GB201314404D0 (en) * | 2013-08-12 | 2013-09-25 | Immunocore Ltd | T Cell Receptors |
GB201516277D0 (en) * | 2015-09-15 | 2015-10-28 | Adaptimmune Ltd And Immunocore Ltd | TCR libraries |
JP2019517499A (ja) * | 2016-06-02 | 2019-06-24 | イムノコア リミテッド | gp100特異的TCR−抗CD3 scFv融合タンパク質の投薬レジメン |
-
2019
- 2019-07-02 GB GBGB1909509.0A patent/GB201909509D0/en not_active Ceased
-
2020
- 2020-07-01 US US17/624,222 patent/US20230054274A1/en active Pending
- 2020-07-01 CA CA3143567A patent/CA3143567A1/en active Pending
- 2020-07-01 EP EP20735584.3A patent/EP3994161A1/en active Pending
- 2020-07-01 CN CN202080049097.9A patent/CN114174329A/zh active Pending
- 2020-07-01 WO PCT/EP2020/068491 patent/WO2021001414A1/en active Application Filing
- 2020-07-01 MX MX2021016117A patent/MX2021016117A/es unknown
- 2020-07-01 KR KR1020227003473A patent/KR20220031046A/ko unknown
- 2020-07-01 BR BR112021026149A patent/BR112021026149A2/pt unknown
- 2020-07-01 AU AU2020299989A patent/AU2020299989A1/en active Pending
- 2020-07-01 JP JP2022500150A patent/JP2022538922A/ja active Pending
-
2021
- 2021-12-26 IL IL289390A patent/IL289390A/en unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20230054274A1 (en) | 2023-02-23 |
CN114174329A (zh) | 2022-03-11 |
CA3143567A1 (en) | 2021-01-07 |
BR112021026149A2 (pt) | 2022-02-08 |
AU2020299989A1 (en) | 2022-02-17 |
EP3994161A1 (en) | 2022-05-11 |
WO2021001414A1 (en) | 2021-01-07 |
IL289390A (en) | 2022-02-01 |
MX2021016117A (es) | 2022-06-08 |
KR20220031046A (ko) | 2022-03-11 |
GB201909509D0 (en) | 2019-08-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Borg et al. | The CDR3 regions of an immunodominant T cell receptor dictate the'energetic landscape'of peptide-MHC recognition | |
US20240294601A1 (en) | Peptide deficient-mhc class i/chaperone compositions and methods | |
Khan et al. | The structure and stability of an HLA-A* 0201/octameric tax peptide complex with an empty conserved peptide-N-terminal binding site | |
JP2022538922A (ja) | ペプチド-mhc複合体 | |
ES2599010T3 (es) | Receptores de linfocitos T con alta afinidad por el VIH | |
US9056920B2 (en) | Disulphide bond-stabilized functional soluble MHC class II heterodimers | |
US20200088726A1 (en) | Method for high throughput peptide-mhc affinity screening for tcr ligands | |
US20060093613A1 (en) | Soluble T cell receptor | |
JP2008500527A (ja) | 所定のpMHC複合体に結合するポリペプチドの同定法 | |
He et al. | Promiscuous antigen presentation by the nonclassical MHC Ib Qa-2 is enabled by a shallow, hydrophobic groove and self-stabilized peptide conformation | |
EP1024822B1 (en) | Cd8 as an inhibitor of the cellular immune system | |
US11814420B2 (en) | Peptide deficient-MHC class I/chaperone compositions and methods | |
Webb et al. | The structure of H-2Kb and Kbm8 complexed to a herpes simplex virus determinant: evidence for a conformational switch that governs T cell repertoire selection and viral resistance | |
Gao et al. | Assembly and crystallization of the complex between the human T cell coreceptor CD8α homodimer and HLA‐A2 | |
US20210371499A1 (en) | Peptide-receptive mhc-i complex compositions and methods | |
JP6415716B2 (ja) | 可溶性のヘテロ二量体t細胞受容体およびその製法と使用 | |
US20210371498A1 (en) | Mhc class i compositions and methods | |
WO2021212085A1 (en) | Peptide-receptive mhc-i complex compositions and methods | |
Jiang et al. | Chaperone-mediated MHC-I peptide exchange in antigen presentation | |
Sgourakis | High Throughput pMHC-I Tetramer Library Production Using Chaperone Mediated Peptide Exchange | |
Sgourakis | High Throughput pMHC-I Tetramer Library Production Using Chaperone Mediated Peptide | |
Jiang et al. | IUCr J |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20221128 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20230119 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230628 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230628 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240604 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20240826 |