JP2022532667A - Ｇｐｃｒヘテロマー阻害剤及びその使用 - Google Patents

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Abstract

本発明は、がんに関連するＣＸＣ受容体４（ＣＸＣＲ４）－Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）ヘテロマー（ＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲへテロマー）の阻害剤であって、ＣＸＣＲ４が他のＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲｘ）との機能性ヘテロマーを形成する、前記阻害剤に関する。より具体的には、本発明は、ＣＸＣＲ４とのヘテロマーを形成するＡＤＲＢ２であって、ＣＸＣＲ４作動薬及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時にＣＸＣＲ４の下流で増強されるシグナル伝達をもたらす前記ＡＤＲＢ２に関する。本発明はまた、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を含む医薬組成物及びキット、ならびにがんを処置するための、及びがんの診断及び／または処置において使用する方法を提供する。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、それぞれの開示が全体で本明細書に援用される２０２０年５月１１日出願の米国特許仮出願第６３／０２２，８４５号及び２０１９年５月１７日出願の米国特許仮出願第６２／８４９，７５５号による優先権の利益を主張する。
配列表
本出願は、本出願と共にＡＳＣＩＩテキスト形式で提出された、２０２０年５月１１日に作成され、サイズが１，５１６バイトである「１４４６２－０１２－２２８＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴＩＮＧ．ｔｘｔ，」と標題された配列表を参照により援用する。
分野
本発明はがん治療の分野に関する。詳細には、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを含む医薬組成物、ならびにそれを使用する、抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、及び使用のための医薬組成物を本明細書において提供する。
Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）は、Ｇタンパク質と共役している７回膜貫通ドメイン細胞表面受容体である。ＧＰＣＲは、光、香気物質、ホルモン、神経伝達物質、ケモカイン、脂質低分子及びヌクレオチドを含む刺激を知覚することにより多様な感覚応答及び生理応答を媒介する。ヒトゲノム中にはおよそ８００のＧＰＣＲ遺伝子が存在し、そのうちの半分よりも多くが感覚受容体、例えば、嗅覚、視覚及び味覚受容体をコードすると予測されている（Ｂｊａｒｎａｄｏｔｔｉｒ，Ｔ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ；（２００６）Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ａｎｄ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｍｏｕｓｅ，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ８８，２６３－２７３）。残りの３５０のＧＰＣＲは、胚発生、行動、気分、認知、血圧調整、心拍数及び消化プロセス、免疫系調整及び炎症、恒常性維持、ならびにがんの成長及び転移において生理学的に重要な役割を有する（Ｆｉｌｍｏｒｅ，Ｄ．（２００４）Ｉｔ’ｓ ａ ＧＰＣＲ ｗｏｒｌｄ． Ｍｏｄｅｒｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ２００４（Ｎｏｖｅｍｂｅｒ），２４－２８；Ｏｖｅｒｉｎｇｔｏｎ，Ｊ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ，（２００６）Ｈｏｗ ｍａｎｙ ｄｒｕｇ ｔａｒｇｅｔｓ ａｒｅ ｔｈｅｒｅ？ Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ ５，９９３－９９６）。ＧＰＣＲは多くの疾患に関連しており、全処方薬のおよそ４０％の標的である（Ｆｉｌｍｏｒｅ，Ｄ．（２００４））。
ＣＸＣ受容体４（「ＣＸＣＲ４」）は、ケモカイン受容体ファミリーＧＰＣＲのメンバーである。ＣＸＣＲ４は、ほとんどの造血細胞種、骨髄幹細胞、内皮前駆細胞、脈管内皮細胞、ニューロン及び神経幹細胞、小膠細胞及びアストロサイトに発現する（Ｋｌｅｉｎ，Ｒ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｉｍｍｕｎｅ ａｎｄ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ＣＸＣＬ１２ ａｎｄ ＣＸＣＲ４： ｐａｒａｌｌｅｌ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｐａｔｔｅｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２５，３０６－３１４；Ｇｒｉｆｆｉｔｈ，Ｊ．Ｗ．，ｅｔ． ａｌ．，（２０１４）Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ： ｐｏｓｉｔｉｏｎｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ｈｏｓｔ ｄｅｆｅｎｓｅ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３２，６５９－７０２）。ＣＸＣＲ４は、そのリガンドであり間質細胞由来因子１（ＳＤＦ－１）としても知られるＣＸＣモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）に応答し、造血系、心血管系及び神経系の胚発生において本質的役割を有する（Ｇｒｉｆｆｉｔｈ，Ｊ．Ｗ．，ｅｔ． ａｌ．，（２０１４））。ＣＸＣＲ４は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の共受容体として発見され、造血幹細胞（ＨＳＣ）の骨髄への帰巣、炎症、組織の免疫監視、及び成人における組織再生において重要な役割を有する（Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｔｈｅ ｉｎｔｒｉｃａｔｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ＣＸＣＲ４ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ，Ａｄｖ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ １２４，３１－８２）。ＣＸＣＲ４は、様々な免疫及び自己免疫疾患、例えば、ＨＩＶ感染症、虚血、創傷治癒、関節リウマチ、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、間質性肺炎、血管疾患、多発性硬化症、肺線維症、及びアレルギー性気道疾患に関係している（Ｃｈｕ，Ｔ． ｅｔ ａｌ．，（２０１７）ＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＲ７ Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ Ａｘｉｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｎｅｒｖｏｕｓ Ｓｙｓｔｅｍ： Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｔａｒｇｅｔｓ ｆｏｒ Ｒｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ ｉｎ Ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｔｉｓｔ ２３，６２７－６４８；Ｄｅｂｎａｔｈ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１３）Ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｏｆ ＣＸＣＲ４，Ｔｈｅｒａｎｏｓｔｉｃｓ ３，４７－７５；及びＤｏｍａｎｓｋａ，Ｕ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１３）Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｎ ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２ ａｘｉｓ ｉｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ： ｎｏ ｐｌａｃｅ ｔｏ ｈｉｄｅ，Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ４９，２１９－２３０）。ＣＸＣＲ４はまた、多種多様ながんに関連付いており、悪性腫瘍における複数の潜在的役割を有していると考えられている。ＣＸＣＲ４は、乳癌、肺癌、脳癌、腎臓癌（または腎細胞癌腫）、膵臓癌、卵巣癌、前立腺癌、黒色腫、白血病、多発性骨髄腫、消化器癌及び軟組織肉腫を含む２３種を上回るヒトがんにおいて過剰発現し、不良な予後のマーカーとみなされている（Ｄｏｍａｎｓｋａ，Ｕ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１３）；Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１４）；及びＦｕｒｕｓａｔｏ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１０）ＣＸＣＲ４ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ，Ｐａｔｈｏｌ Ｉｎｔ ６０，４９７－５０５）。
ＣＸＣＲ４及びＧＰＣＲのヘテロマーの形成は、限られた数のＧＰＣＲファミリー内、例えば、ケモカイン、アドレナリン及びオピオイド受容体ファミリー内で研究されてきた。様々な病状におけるＣＸＣＲ４の主要な役割及び発現の増加を考慮すると、特定の疾患に対して独特な特徴を付与する種々のＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマーが存在している可能性が大きい。
ベータ－２アドレナリン受容体またはβ２アドレノセプター（「ＡＤＲＢ２」）と時に称されるアドレナリン受容体ベータ２は、シグナル伝達が下流のＬ型カルシウムチャネル相互作用を介して平滑筋弛緩及び気管支拡張などの生理的応答を媒介するエピネフリン（ホルモン及び神経伝達物質（リガンドの別名、アドレナリン））と相互作用する細胞膜貫通ベータ－アドレナリン受容体である（Ｇｒｅｇｏｒｉｏ，Ｇ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ，（２０１７）Ｓｉｎｇｌｅ－ｍｏｌｅｃｕｌｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｌｉｇａｎｄ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｉｎ ｂｅｔａ２ＡＲ－Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ５４７，６８－７３）。ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２のヘテロマー（ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー）の形成、心筋細胞におけるＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２（ｐ２－ＡＲ）の共発現、ならびに同時免疫沈降及び生物発光共鳴エネルギー移動を使用してのＣＸＣＲ４とＡＤＲＢ２との物理的会合（ＬａＲｏｃｃａ，Ｔ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．（２０１０）ｂｅｔａ２－Ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｃａｒｄｉａｃ ｍｙｏｃｙｔｅ ｉｓ ｍｏｄｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ＣＸＣＲ４，Ｊ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ５６，５４８－５５９；Ｎａｋａｉ，Ａ．，ｅｔ ａｌ，（２０１４）Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｅｇｒｅｓｓ ｆｒｏｍ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｂｅｔａ２－ａｄｒｅｎｅｒｇｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ ２１１，２５８３－２５９８）。
様々な病状におけるＣＸＣＲ４の主要な役割及び発現の増加を考慮すると、特定の疾患に対して独特な特徴を付与するＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが存在している可能性が大きい。したがって、当技術分野では、例えば、ＣＸＣＲ４阻害剤単剤治療と比べて高い有効性及び低い副作用を有するＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー標的がん治療薬として使用するために、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの阻害剤を同定及び開発することが必要とされている。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの阻害剤、またはＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの阻害剤の組合せ、及びそれらを含む医薬組成物、または医薬キット、ならびに処置方法及び使用方法を本明細書において提供し、その際、増強される下流シグナル伝達は、機能性ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー形成に起因し（例えば、ＣＸＣＲ４に対する下流でのシグナル伝達の増強、またはＡＤＲＢ２に対する下流でのシグナル伝達の増強）；対象の細胞などの対象における当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在はがんなどの疾患と関連する。
一態様では、がんに罹患している対象の細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達の抑制方法であって、対象に（ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び（ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、その際、（ｉ）増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因し；かつ（ｉｉ）阻害剤の組合せの投与が、がん対象における当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、当該方法を本明細書において提供する。
別の態様では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象におけるがんの処置方法であって、対象に（ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び（ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、（ｉ）増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因し；かつ（ｉｉ）阻害剤の組合せの投与が、がん対象における当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、当該方法を本明細書において提供する。
別の態様では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象におけるがんの処置方法であって、（ａ）対象の細胞がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有し、その際、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因するか否かを決定すること；及び（ｂ）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するならば、そのがん対象に（ｉ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び（ｉｉ）ＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含む、当該方法を本明細書において提供する。
別の態様では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、（１）対象がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有するか否かを、対象から生体試料を得るか、または得ていること；及び（ｉ）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否か；または（ｉｉ）ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが：対象由来細胞（複数可）において当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性もしくは機能を変化させる否か；当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる否か；もしくは当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象においてがんの進行を減少させるか否かを決定するために、生体試料でアッセイを実行するか、もしくは実行していることにより決定すること；ならびに（２）対象が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有するならば、そのがん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに（３）対象が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有さなければ、そのがん対象に、ブリキサフォルまたはＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含む、当該方法を本明細書において提供する。
別の態様では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、（１）対象がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有するか否かを、対象から生体試料を得るか、または得ていること；及び（ｉ）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否か；または（ｉｉ）ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが：対象由来細胞（複数可）において当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性もしくは機能を変化させる否か；当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる否か；もしくは当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象においてがんの進行を減少させるか否かを決定するために、生体試料でアッセイを実行するか、もしくは実行していることにより決定すること；ならびに（２）対象が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有するならば、そのがん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに（３）対象が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有さなければ、そのがん対象に、ブリキサフォルまたはＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含み、その際、（ａ）ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該細胞を有する対象におけるがんの進行が、がん対象へのブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せの投与時に、ブリキサフォルまたはＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤の投与と比べて５～１００％の範囲でより多く減少し；（ｂ）ブリキサフォルの有効性が、ＡＤＲＢ２阻害剤との組合せでＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該細胞を有する対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合のブリキサフォルの有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇し；及び／または（ｃ）ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性が、ブリキサフォルとの組合せでＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該細胞を有する対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合のＡＤＲＢ２阻害剤の有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇する、当該方法を本明細書において提供する。
別の態様では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、（１）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを、対象から生体試料を得るか、または得ていること、及び当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが対象の細胞に存在するか否かを決定するために生体試料でアッセイを実行する、または実行していることにより決定し；その際、生体試料で実行されるアッセイが共内在化アッセイ、共局在化アッセイ、インサイチューハイブリダイゼーション、免疫組織化学、免疫電子顕微鏡法、近接度に基づくアッセイ、共免疫沈降アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、ＲＮＡｓｅｑ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、マイクロアレイ、または蛍光動物アッセイのうちの１つもしくは複数であるか、または１つもしくは複数を含むこと；ならびに（２）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有するならば、そのがん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに（３）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有しなければ、そのがん対象に、ブリキサフォルまたはＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含む、当該方法を本明細書において提供する。
別の態様では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、（１）対象の細胞がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを、対象から生体試料を得るか、または得ていること、及び当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが対象の細胞に存在するか否かを決定するために生体試料でアッセイを実行するか、または実行していることにより決定し；その際、生体試料で実行されるアッセイが共内在化アッセイ、共局在化アッセイ、インサイチューハイブリダイゼーション、免疫組織化学、免疫電子顕微鏡法、近接度に基づくアッセイ、共免疫沈降アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、ＲＮＡｓｅｑ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、マイクロアレイ、または蛍光動物アッセイのうちの１つもしくは複数であるか、または１つもしくは複数を含むこと；ならびに（２）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するならば、そのがん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに（３）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有しなければ、そのがん対象に、ブリキサフォルまたはＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含み、その際、（ａ）ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該細胞を有する対象におけるがんの進行が、がん対象へのブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せの投与時に、ブリキサフォルまたはＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤の投与と比べて５～１００％の範囲でより多く減少し；（ｂ）ブリキサフォルの有効性が、ＡＤＲＢ２阻害剤との組合せでＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該細胞を有する対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合のブリキサフォルの有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇し；及び／または（ｃ）ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性が、ブリキサフォルとの組合せでＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該細胞を有する対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合のＡＤＲＢ２阻害剤の有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇する、当該方法を本明細書において提供する。
別の態様では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象においてがんを処置する際に使用するための医薬キットであって、（ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び（ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤を含み；その際、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、当該医薬キットを本明細書において提供する。
別の態様では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象においてがんを処置する際に使用するための医薬組成物であって、（ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；（ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤；及び（ｃ）薬学的に許容される担体を含み、その際、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、当該医薬組成物を本明細書において提供する。
別の態様では、（ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；（ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤；及び（ｃ）薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を本明細書において提供する。
二分子蛍光補完（ＢｉＦＣ）アッセイの模式図を示す。ＧＰＣＲ Ａは黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）ＶｅｎｕｓのＮ末端側断片（ＶＮ）と融合しており、ＧＰＣＲ ＢはＶｅｎｕｓのＣ末端側断片（ＶＣ）と融合している。ＧＰＣＲ Ａ及びＢがヘテロマーを形成すると、相補的なＶＮとＶＣとが機能性Ｖｅｎｕｓを形成するのに十分近くなる。
ＢｉＦＣアッセイを用いる、ＡＤＲＢ２と相互作用するＣＸＣＲ４の同定を示す。陰性ＢｉＦＣ信号を示した代表的画像は、ＣＸＣＲ４－ＶＮ及びＨＡ－ＶＣ（Ａ）、及びＣＸＣＲ４－ＶＮ及びＧＣＧＲ－ＶＣ（Ｃ）である。陽性ＢｉＦＣ信号を示したＣＸＣＲ４及びＧＰＣＲｘの代表的画像は、ＣＸＣＲ４－ＶＮ及びＣＸＣＲ４－ＶＣ（Ｂ）、及びＣＸＣＲ４－ＶＮ及びＡＤＲＢ２－ＶＣ（Ｄ）である。
Ａ～Ｂは、ＧＰＣＲ共内在化研究の原理を示す。ＣＸＣＲ４－ＧＦＰ及びＧＰＣＲｘを共発現する細胞をＧＰＣＲｘ特異的作動薬で処理する。（Ａ）ＣＸＣＲ４及びＧＰＣＲｘが互いに物理的に相互作用していない。ＧＰＣＲｘ作動薬はＧＰＣＲｘの内在化を誘導するが、ＣＸＣＲ４－ＧＦＰの内在化を誘導しない。（Ｂ）ＣＸＣＲ４及びＧＰＣＲｘが物理的に相互作用しており、ヘテロマーを形成している。ＧＰＣＲｘ作動薬はＧＰＣＲｘの内在化を誘導し、ＣＸＣＲ４－ＧＦＰはＧＰＣＲｘと一緒に共内在化する。
Ａ～Ｂは、ＧＰＣＲｘをその対応する作動薬で刺激したときのＣＸＣＲ４－ＥＧＦＰの共内在化を示す（対照：ＣＸＣＲ４－ＧＦＰ（Ａ））。ＣＸＣＲ４－ＥＧＦＰ及びＧＰＣＲｘ－ＶＣをコードするアデノウイルスをＵ－２ ＯＳ細胞に共形質導入し、以下のＧＰＣＲｘパートナーがＣＸＣＲ４－ＥＧＦＰとヘテロマーを形成してＣＸＣＲ４－ＥＧＦＰの共内在化を誘導するかを調べた：ＧＰＣＲｘは、ＡＤＲＢ２（Ｂ）を表す。
Ａ～Ｄは、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を共発現する細胞におけるそれらそれぞれの選択的作動薬での共刺激時のカルシウム応答の増強を示す。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト乳癌細胞に、ＣＸＣＲ４及びＨＡ－ＶＣ（Ａ）、ＡＤＲＢ２及びＨＡ－ＶＣ（Ｂ）、またはＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２（Ｃ）をコードするアデノウイルスを形質導入した。ＨＡ－ＶＣをコードするアデノウイルスを、形質導入されたアデノウイルスの総量を調整するために使用した。細胞にＧＰＣＲを２日間にわたって発現させ、Ｃａｌ－５２０ ＡＭと共に２時間にわたってインキュベートし、１５ｎＭのＣＸＣＬ１２、１００ｎＭのサルメテロール（ＡＤＲＢ２選択的作動薬）、またはＣＸＣＬ１２とサルメテロールで処理した。ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ ３ Ｍｕｌｔｉ－Ｍｏｄｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒを使用してカルシウム動員を測定した。結果をベースライン活性に対して正規化した。データは３回の独立した実験を表す（平均±ＳＥＭ）。（Ｄ）Ａ～Ｃにおいて各グラフの曲線下面積（ＡＵＣ）を算出することによりカルシウム動員を定量化した。データを、ＣＸＣＲ４のみを発現する細胞におけるＣＸＣＬ１２刺激カルシウム応答に対して正規化した。合計は、相乗作用の可視化を可能にするためにＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を共発現する細胞においてＣＸＣＬ１２及びサルメテロールの個々の刺激の後に得られた応答の作用和を算出したものを表す。＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。
ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を発現していて、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞をＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬のサルメテロールで同時に刺激したときに増強されるカルシウム応答が、両方の拮抗薬の共投与により効率的に抑制されたことを示す。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２をコードするアデノウイルスを共形質導入した。細胞をＣａｌ－５２０ ＡＭと共に２時間にわたってインキュベートし、ＡＤＲＢ２拮抗薬またはビヒクルと共に３０分間にわたってインキュベートし、表示の量のＣＸＣＬ１２、ＡＤＲＢ２作動薬のサルメテロール、またはＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬のサルメテロールで刺激した。カルシウム動員を図５Ｄに記載のとおりに定量化した。データは３つの独立した実験を表す（平均±ＳＥＭ）。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１、スチューデントのｔ検定。
内在化阻害研究の原理を示す。ＣＸＣＲ４－ＧＦＰ及びＧＰＣＲｘを共発現する細胞をＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ－１）及び／またはＧＰＣＲｘ特異的拮抗薬で処理する。シナリオＡ：ＣＸＣＲ４及びＧＰＣＲｘがヘテロマーを形成する。ＣＸＣＲ４作動薬であるＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ－１）は、ＣＸＣＲ４－ＧＦＰのみ、またはＧＰＣＲｘを伴ったＣＸＣＲ４－ＧＦＰの内在化を誘導した。シナリオＢ：ＧＰＣＲｘ拮抗薬はＣＸＣＲ４－ＧＦＰの内在化を誘導しない。シナリオＣ：ＣＸＣＬ１２（ＳＤＦ－１）で刺激されたＣＸＣＲ４－ＧＦＰの内在化はＧＰＣＲｘ特異的拮抗薬により阻害される。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに対するＡＤＲＢ２拮抗薬による内在化の阻害を示す。ＣＸＣＲ４－ＧＦＰ発現Ｕ－２ ＯＳ細胞に、ＡＤＲＢ２をコードするアデノウイルスを形質導入した。ＣＸＣＲ４作動薬であるＣＸＣＬ１２による処理は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２内在化を誘導した。しかし、ＡＤＲＢ２拮抗薬であるカルベジロールは内在化を誘導しなかった。ＣＸＣＬ１２及びカルベジロールでの共処理は、ＣＸＣＬ１２誘導ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２内在化を部分的に阻害した。
がん患者からの患者由来細胞（ＰＤＣ）の生存に対するＡＤＲＢ２拮抗薬の作用を示す。ＰＤＣの生存に対するＡＤＲＢ２拮抗薬（カルベジロール）の作用。カルベジロールは、細胞の生存率の有意な低下を誘導した（ＩＣ５０＝１１．６９μＭ）。
Ａ～Ｃは、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を過剰発現するＵ－２ ＯＳ細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロ二量体のＰＬＡ及びＲＴ－ｑＰＣＲによる検出を示す。ＡＤＲＢ２をコードするアデノウイルスを種々のＭＯＩで２日間、ＣＸＣＲ４－ＧＦＰ発現Ｕ－２ ＯＳ細胞に形質導入した。次いで、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２共発現Ｕ－２ ＯＳ細胞にＰＬＡを実施した。Ａ：ＰＬＡによるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー検出の画像。Ｂ：ＡＤＲＢ２の発現レベルに用量依存的に比例するＰＬＡ信号の増大。Ｃ：Ｕ－２ ＯＳ細胞の内因性ＡＤＲＢ２発現レベルを示すＲＴ－ｑＰＣＲからのデータ。
Ａ～Ｂは、ＰＬＡによるＰＤＣ中のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの検出を示す。ＧＢＭを起源とするＰＤＣ（試料ＩＤ：９８６Ｔ、９４８Ｔ、７８３Ｔ、７７７Ｔ、３５２Ｔ１、３５２Ｔ２、５７８Ｔ、５５９Ｔ、４６４Ｔ、４４８Ｔ、０９６Ｔ）をチャンバスライドに播種し、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２に特異的な抗体を使用してＰＬＡによりＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを検出した。Ａ：ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー検出の画像。核をＤＡＰＩ染色で可視化し、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを小さな点で示した。Ｂ：ＰＤＣ中のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの比率。
Ａ～Ｂは、ＰＤＸ中のＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマーの検出からの結果を示す。ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２に特異的な抗体を使用するＰＬＡにより、ＧＢＭを起源とするＰＤＸ（試料ＩＤ：７７７Ｔ、７８３Ｔ、９４８Ｔ、５５９Ｔ）のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを検出した。Ａ：ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー検出の画像。核をＤＡＰＩ染色で可視化し、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを小さな点で示した。Ｂ：ＰＤＸ中のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの比率。
ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時の、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を共発現する細胞におけるカルシウム応答の増強を示す。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２をコードするアデノウイルスを形質導入した。細胞を３日間にわたって培養し、Ｃａｌ－５２０ ＡＭで染色し、ＣＸＣＬ１２（３０ｎＭ）単独か、漸増用量のサルメテロール単独か、または３０ｎＭのＣＸＣＬ１２と組み合わせた漸増用量のサルメテロールかのいずれかで処理した。ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ ３を使用してカルシウム動員を測定した。合計は、３０ｎＭのＣＸＣＬ１２単独（白抜き四角）及び表示の用量のＡＤＲＢ２リガンド単独（黒丸）により引き起こされた応答の和の値を算出したものを表す。合計グラフは逆三角形と破線で描いた。各点における合計（逆三角）と共処理（黒四角）との統計的有意差をスチューデントのｔ検定により決定した。＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１；データは平均±標準偏差を表す（ｎ＝３）。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを発現する細胞をＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬で同時に刺激した場合に、抗ＣＸＣＲ４抗体及びＡＤＲＢ２拮抗薬で共処理することによる、増強されるカルシウム応答の効率的な抑制を示す。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２をコードするアデノウイルスを共形質導入した。細胞を、表示の濃度のＡＤＲＢ２拮抗薬（カルベジロール）、抗ＣＸＣＲ４抗体（１２Ｇ５）またはビヒクルで処理し、Ｃａｌ ６と共に２時間にわたってインキュベートした。その後、表示の量のＣＸＣＬ１２、ＡＤＲＢ２作動薬（サルメテロール）、またはＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬で細胞を刺激した。
Ａは、親細胞Ａ５４９、ＣＸＣＲ４を安定過剰発現するＡ５４９－ＣＸＣＲ４、及びＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを安定過剰発現するＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２をそれぞれ移植された３匹のマウスの移植後２８日目の画像を示す。Ｂは、Ａからの移植細胞の腫瘍成長を比較するグラフを示し、腫瘍の長さ（Ｌ）及び幅（Ｗ）を測定することならびに腫瘍体積を以下の式に基づいて算出することにより腫瘍成長を３日ごとまたは４日ごとにモニターした：体積＝０．５ＬＷ２。結果を３匹の個体の平均±標準偏差として表す。
Ａ～Ｂは、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞における、ＣＸＣＬ１２及び／またはサルメテロールの刺激によるＥＲＫ活性化を示す。Ａは、ＣＸＣＬ１２（１０ｎＭ）及び／またはサルメテロール（１０ｎＭ）で２０分間にわたって処理されたＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２におけるホスホ－ＥＲＫ１／２ Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４及び総ＥＲＫ１／２のウェスタンブロット分析を示す。Ｂは、総ＥＲＫタンパク質レベルと比べたホスホ－ＥＲＫ１／２ Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４タンパク質発現のデンシトメトリー分析（ｉＢｒｉｇｈｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を示す。
Ａ～Ｂは、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現Ａ５４９細胞における、ＣＸＣＬ１２及び／またはサルメテロールの刺激によるＥＲＫ活性化を示す。Ａは、ＣＸＣＬ１２（１０ｎＭ）及び／またはサルメテロール（１０ｎＭ）で１０分間にわたって処理されたＡ５４９、Ａ５４９－ＣＸＣＲ４、及びＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞におけるホスホ－ＥＲＫ１／２ Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４及び総ＥＲＫ１／２のウェスタンブロット分析を示す。Ｂは、総ＥＲＫタンパク質レベルと比べたホスホ－ＥＲＫ１／２ Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４タンパク質発現のデンシトメトリー分析（ｉＢｒｉｇｈｔ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ）を示す。
ＣＸＣＲ４－ＣＸＣＬ１２媒介増殖増加に対するＣＸＣＲ４拮抗薬の作用を示す。Ａ５４９二重陰性細胞（ＲＬｕｃ－Ｌｕｃ２Ｐ）と、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を過剰発現するＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞とを９６ウェルプレートに播種し、７２時間にわたって、ＣＸＣＬ１２及び／または表示の薬物（ＡＭＤ３１００（１０μＭ））で、無血清条件で刺激した。３つの反復ウェルからの蛍光を測定し、データを蛍光の平均比（薬物処理／ビヒクル）±ＳＥＭとして表す。 ＣＸＣＲ４－ＣＸＣＬ１２媒介増殖増加に対するＣＸＣＲ４拮抗薬の作用を示す。Ａ５４９二重陰性細胞（ＲＬｕｃ－Ｌｕｃ２Ｐ）と、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を過剰発現するＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞とを９６ウェルプレートに播種し、７２時間にわたって、ＣＸＣＬ１２及び／または表示の薬物（ＬＹ２５１０９２４（１０μＭ））で、無血清条件で刺激した。３つの反復ウェルからの蛍光を測定し、データを蛍光の平均比（薬物処理／ビヒクル）±ＳＥＭとして表す。 ＣＸＣＲ４－ＣＸＣＬ１２媒介増殖増加に対するＣＸＣＲ４拮抗薬の作用を示す。Ａ５４９二重陰性細胞（ＲＬｕｃ－Ｌｕｃ２Ｐ）と、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を過剰発現するＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞とを９６ウェルプレートに播種し、７２時間にわたって、ＣＸＣＬ１２及び／または表示の薬物（ＡＭＤ０７０（１μＭ））で、無血清条件で刺激した。３つの反復ウェルからの蛍光を測定し、データを蛍光の平均比（薬物処理／ビヒクル）±ＳＥＭとして表す。 ＣＸＣＲ４－ＣＸＣＬ１２媒介増殖増加に対するＣＸＣＲ４拮抗薬の作用を示す。Ａ５４９二重陰性細胞（ＲＬｕｃ－Ｌｕｃ２Ｐ）と、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を過剰発現するＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞とを９６ウェルプレートに播種し、７２時間にわたって、ＣＸＣＬ１２及び／または表示の薬物（ＴＧ－００５４（１０μＭ））で、無血清条件で刺激した。３つの反復ウェルからの蛍光を測定し、データを蛍光の平均比（薬物処理／ビヒクル）±ＳＥＭとして表す。 ＣＸＣＲ４－ＣＸＣＬ１２媒介増殖増加に対するＣＸＣＲ４拮抗薬の作用を示す。Ａ５４９二重陰性細胞（ＲＬｕｃ－Ｌｕｃ２Ｐ）と、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を過剰発現するＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞とを９６ウェルプレートに播種し、７２時間にわたって、ＣＸＣＬ１２及び／または表示の薬物（ＢＫＴ－１４０（１０μＭ））で、無血清条件で刺激した。３つの反復ウェルからの蛍光を測定し、データを蛍光の平均比（薬物処理／ビヒクル）±ＳＥＭとして表す。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現と腫瘍成長との間の相関を示す。Ａ５４９親細胞、ＣＸＣＲ４ホモマー発現Ａ５４９－ＣＸＣＲ４細胞系、及びＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞系における、ＰＬＡによるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの検出を示す。 ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現と腫瘍成長との間の相関を示す。Ａ５４９、Ａ５４９－ＣＸＣＲ４、及びＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２における、ＰＬＡによるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの定量化を示す。 ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現と腫瘍成長との間の相関を示す。Ａ５４９親細胞担持マウスと、Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞担持マウスとの腫瘍成長の比較を示す。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現と腫瘍成長との間の相関を示す。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１親細胞、ＣＸＣＲ４ホモマー発現ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞系、及びＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞系における、ＰＬＡによるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの検出を示す。 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４、及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２における、ＰＬＡによるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの定量化を示す。 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１親細胞、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４、またはＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞担持マウスの中での腫瘍成長の比較を示す。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現Ａ５４９異種移植マウスにおける腫瘍成長に対する、ＣＸＣＲ４阻害剤単独の作用を示す。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを発現するＡ５４９細胞系を移植されたマウスに、様々な種類のＣＸＣＲ４阻害剤のうち、ＡＭＤ３１００を用量依存的に与えて、腫瘍サイズを比較した。 ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現Ａ５４９異種移植マウスにおける腫瘍成長に対する、単独のＣＸＣＲ４阻害剤の作用を示す。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを発現するＡ５４９細胞系を移植されたマウスに、様々な種類のＣＸＣＲ４阻害剤のうち、ＬＹ２５１０９２４を用量依存的に与えて、腫瘍サイズを比較した。 ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現Ａ５４９異種移植マウスにおける腫瘍成長に対する、単独のＣＸＣＲ４阻害剤の作用を示す。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを発現するＡ５４９細胞系を移植されたマウスに、様々な種類のＣＸＣＲ４阻害剤のうち、ＡＭＤ０７０を用量依存的に与えて、腫瘍サイズを比較した。 ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現Ａ５４９異種移植マウスにおける腫瘍成長に対する、単独のＣＸＣＲ４阻害剤の作用を示す。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを発現するＡ５４９細胞系を移植されたマウスに、様々な種類のＣＸＣＲ４阻害剤のうち、ＴＧ－００５４を用量依存的に与えて、腫瘍サイズを比較した。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現細胞がマウスに移植されて、単独か、または組合せでのＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤カルベジロールで処理された場合の腫瘍の相対的成長を示す。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞がマウスに同所移植されて、単独か、または組合せでのＣＸＣＲ４阻害剤（ＡＭＤ３１００）及びＡＤＲＢ２阻害剤カルベジロールで処理された場合の腫瘍の相対的成長を示す。結果は、５匹の個体の平均±標準偏差として表されている。 ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現細胞がマウスに移植されて、単独か、または組合せでのＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤カルベジロールで処理された場合の腫瘍の相対的成長を示す。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞がマウスに同所移植されて、単独か、または組合せでのＣＸＣＲ４阻害剤（ＬＹ２５１０９２４）及びＡＤＲＢ２阻害剤カルベジロールで処理された場合の腫瘍の相対的成長を示す。結果は、５匹の個体の平均±標準偏差として表されている。 ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現細胞がマウスに移植されて、単独か、または組合せでのＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤カルベジロールで処理された場合の腫瘍の相対的成長を示す。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞がマウスに同所移植されて、単独か、または組合せでのＣＸＣＲ４阻害剤（ＡＭＤ０７０）及びＡＤＲＢ２阻害剤カルベジロールで処理された場合の腫瘍の相対的成長を示す。結果は、５匹の個体の平均±標準偏差として表されている。 ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現細胞がマウスに移植されて、単独か、または組合せでのＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤カルベジロールで処理された場合の腫瘍の相対的成長を示す。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現Ａ５４９細胞がマウスに移植されて（Ａ５４９異種移植片モデル）、単独か、または組合せでのＡＭＤ３１００（ＣＸＣＲ４阻害剤）及びカルベジロール（ＡＤＲＢ２阻害剤）で処理された場合の腫瘍の相対的成長を示す。腫瘍成長を３または４日ごとに、腫瘍の長さ（Ｌ）及び幅（Ｗ）を測定し、かつ次式：体積＝０．５ＬＷ２に基づき腫瘍体積を計算することによりモニターした。結果は、１０匹の固体の平均±標準偏差として表されている。
表示のＭＯＩでＡｄ－ＣＸＣＲ４及びＡｄ－ＡＤＲＢ２に一過性に感染し、かつ競合剤としてのプロプラノロール（ＩμＭ）の存在または非存在下でＴＺ１４０１１－ｔｂ及びＰｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ－ｇ２で標識されたＡ５４９細胞で観察されたリガンド利用ＴＲ－ＦＲＥＴシグナルを示す。
表示のＭＯＩでＡｄ－ＣＸＣＲ４及びＡｄ－ＡＤＲＢ２に一過性に感染したＵ２ＯＳ細胞で観察された抗体利用ＴＲ－ＦＲＥＴシグナルを示す。続いてウサギ抗ＣＸＣＲ４抗体及びマウス抗ＡＤＲＢ２抗体とのインキュベーションを行い、テルビウムクリプタートで標識されたヤギ抗ウサギＩｇＧならびにＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７で標識されたヤギ抗マウスＩｇＧをＴＲ－ＦＲＥＴのために使用した。
固形腫瘍がん細胞系：Ａ５４９（肺癌）、Ｕ２ＯＳ（骨肉腫）、及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１（乳癌）における、ＰＬＡによるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー検出及びＲＴ－ｑＰＣＲによるＲＮＡ発現レベルを介してのＣＸＣＲ４またはＡＤＲＢ２の定量化を示す。Ａは、ＲＴ－ｑＰＣＲによるＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２のＲＮＡ発現レベルを示す。Ｂは、ＰＬＡにより検出されたＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２ヘテロマーの画像を示す。Ｃは、ＰＬＡによるＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２ヘテロマーの定量化を示す。
Ａ～Ｃは、血液がん細胞系：ＨＬ６０（白血病）、Ｕ９３７（白血病）、及びＲＰＭＩ ８２２６（骨髄腫）における、ＰＬＡによるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー検出及びＲＴ－ｑＰＣＲによるＲＮＡ発現レベルを介してのＣＸＣＲ４またはＡＤＲＢ２の定量化を示す。Ａは、ＲＴ－ｑＰＣＲによるＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２のＲＮＡ発現レベルを示す。Ｂは、ＰＬＡにより検出されたＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２ヘテロマーの画像を示す。Ｃは、ＰＬＡによるＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２ヘテロマーの定量化を示す。
Ａ～Ｂは、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬（ホルモテロール）で共刺激された場合の、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを発現する細胞におけるカルシウム応答の増強を示す。Ａは、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬のホルモテロールで共刺激されたときの、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを発現するＵ９３７細胞におけるカルシウム応答の増強を示す。Ｂは、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬のホルモテロールで共刺激されたときの、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを発現するＨＬ－６０細胞におけるカルシウム応答の増強を示す。
略語
別段に示されていない限り、以下は本明細書に開示の用語の略語を含む：急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、アデノウイルス高処理量システム（ＡｄＨＴＳ）、アドレナリン受容体ベータ２（ＡＤＲＢ２）、二分子蛍光補完（ＢｉＦＣ）、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、がん幹細胞（ＣＳＣ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、ＶｅｎｕｓのＣ末端側断片（ＶＣ）、Ｃ－Ｘ－Ｃモチーフケモカインリガンド１２（ＣＸＣＬ１２）、ＣＸＣ受容体４（ＣＸＣＲ４）、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、Ｇタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）、多形神経膠芽腫（ＧＢＭ）、グルカゴン受容体（ＧＣＧＲ）、ＧＰＣＲヘテロマー同定技術（ＧＰＣＲ－ＨＩＴ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、造血幹細胞（ＨＳＣ）、肝細胞癌腫（ＨＣＣ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、国際薬理学会受容体命名委員会（ＮＣ－ＩＵＰＨＡＲ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、多重感染度（ＭＯＩ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、ＶｅｎｕｓのＮ末端側断片（ＶＮ）、患者由来細胞（ＰＤＣ）、患者由来異種移植片（ＰＤＸ）、陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）、近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）、定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ｑＰＣＲ、またはｑＲＴ－ＰＣＲ、またはｑＰＣＲ、またはリアルタイムＰＣＲと時には称される）、単一光子放射コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）、間質細胞由来因子１（ＳＤＦ－１）、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、閾値サイクル（Ｃｔ）、時間分解ＦＲＥＴ（ＴＲ－ＦＲＥＴ）、腫瘍微小環境（ＴＭＥ）、血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）、ＷＨＩＭ症候群（疣贅、低ガンマグロブリン血症、易感染性、ミエロカテキシス）、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、及び黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）。
発明の詳細な説明
本明細書で使用される場合、冠詞「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、冠詞の文法的対象の１つまたは１つ以上を指す。例として、試料（ａ ｓａｍｐｌｅ）は、１つの試料または２つ以上の試料を指す。
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は哺乳動物を指す。対象は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物、例えば、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、マウス、ラット、ウサギ、またはそれらのトランスジェニック種であり得る。対象は、患者、またはがん患者であり得る。
本明細書で使用される場合、「試料」という用語は、１つまたは複数の目的の成分を含む物質または物質の混合物を指す。対象からの試料は、インビボもしくはインサイチューで得られるか、届けられるか、または収集される生物学的組織または流体起源の試料を含む、対象から得られた試料を指す。試料は、前がんもしくはがん細胞または組織を含有する対象の部位から得ることができる。そのような試料は、限定されないが、哺乳動物から単離される臓器、組織、画分及び細胞であり得る。ある特定の実施形態では、試料は、生体液試料または生物学的組織試料などの生体試料であってよい。試料はまた、組織生検であり得る。ある特定の実施形態では、生体試料には、限定されないが、リンパ節、血液試料、血漿試料、全血、部分的に精製された血液、血清、骨髄、細胞溶解産物、細胞培養物、細胞系、組織、経口組織、胃腸組織、臓器、細胞器官、生体液、尿試料、皮膚試料、唾液試料、脳脊髄液試料、または眼液試料が含まれる。
本明細書で使用される場合、「処置する」、「処置すること」または「処置」という用語は、がん患者に関連して使用される場合、（ａ）がんの成長を阻害すること、またはがんの発生を停止すること、及び（ｂ）がんの退縮を惹起すること、またはがんの存在と関連する１つもしくは複数の症状を遅延させる、もしくは最小化することを含めて、がんの重症度を低下させる、またはがんの進行を遅延もしくは減速させる行動を指す。
本明細書で使用される場合、「投与する」、「投与すること」、または「投与」という用語は、本明細書に記載か、または別段に当技術分野で公知の方法により、化合物、化合物の組合せ、または化合物を含む医薬組成物を対象の身体に送達する、または送達されるようにする行動を指す。化合物、化合物の組合せ、または化合物を含む医薬組成物を投与することは、化合物、化合物の組合せ、または化合物を含む医薬組成物が患者の身体に送達されるように処方することを含む。投与の例示的な形態には、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、懸濁剤などの経口剤形；静脈内（ＩＶ）、筋肉内（ＩＭ）、または腹腔内（ＩＰ）；皮下（ＳＣ）、頭蓋内（ＩＣ）などの注射剤形；クリーム剤、ゼリー剤、散剤、または貼付剤を含む経皮剤形；頬側剤形；吸入散剤、噴霧剤、懸濁剤、及び直腸坐剤が含まれる。
本明細書で使用される場合、「治療薬」という語句は、がん及び／またはがんに関連する症状の処置、寛解、予防、または管理において使用することができる任意の作用物質を指す。ある特定の実施形態では、治療薬は、本発明のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの阻害剤を指す。治療薬は、がん及び／またはがんに関連する症状の処置、寛解、予防、または管理のために有用であることが周知であるか、または使用されているか、もしくは現在使用されようとしている作用物質であり得る。
本明細書で使用される場合、「有効量」という語句は、本明細書で使用される場合、有利か、または所望の結果をもたらすために十分な量を指す。有効量は、１つまたは複数の投与、施与または投薬で投与することができる。そのような送達は、個々の投薬単位が使用されることになっている期間、作用物質の生物学的利用能、投与経路などを含むいくつかの変項に依存する。
本明細書で使用される場合、疾患または障害と関連して使用される場合の化合物（例えば、本明細書において提供される阻害剤、拮抗薬、または任意の他の治療薬などの治療薬）または化合物の組合せの「治療有効量」という用語は、疾患または障害の処置または管理において治療効果を得るために、または疾患もしくは障害と関連する１つもしくは複数の症状を遅延させる、もしくは最小化するために十分な量を指す。化合物の治療有効量は、単独で、または他の治療と組み合わせて使用された場合に、疾患または障害の処置または管理において治療効果をもたらすであろう化合物の量を意味する。この用語は、治療全体を改善する、症状を緩和もしくは回避する、または別の治療薬の治療効力を増強する量を包含する。この用語はまた、研究者、獣医師、医師、または臨床医が求めている生物学的分子（例えば、タンパク質、酵素、ＲＮＡ、またはＤＮＡ）、細胞、組織、システム、動物、またはヒトの生物学的または医学的応答を十分に誘発する化合物の量を指す。
本明細書で使用される場合、「ヘテロマー」という用語は、それぞれＣＸＣＲ４単量体もしくはＡＤＲＢ２単量体の生化学的特性とは実証可能に異なるか、またはそれぞれＣＸＣＲ４単量体及びＡＤＲＢ２単量体の両方の生化学的特性とは実証可能に異なる生化学的特性を有する、ＣＸＣＲ４単位（または時には、ＣＸＣＲ４含有ヘテロマーの状況で同定される場合、ＣＸＣＲ４プロトマーと称される）及びＡＤＲＢ２単位（または時には、ＡＤＲＢ２含有ヘテロマーの状況で同定される場合、ＡＤＲＢ２プロトマーと称される）から構成される高分子複合体を指す。ヘテロマー化は、インサイチューハイブリダイゼーション、免疫組織化学、ＲＮＡｓｅｑ、逆転写－定量的ＰＣＲ（時には、ＲＴ－ｑＰＣＲ、またはｑＲＴ－ＰＣＲ、またはｑＰＣＲ、またはリアルタイムＰＣＲと称される）、同定されるヘテロマーの各単量体もしくはプロトマーの発現レベル（例えば、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーと関連付けられるようなＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベル）、マイクロアレイ、近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）、時間分解ＦＲＥＴ（ＴＲ－ＦＲＥＴ）、全身単光子放射型コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）または陽電子放射型断層撮影法／コンピュータ断層撮影［法］（ＰＥＴ／ＣＴ）により評価することができる。
本明細書で使用される場合、「細胞内Ｃａ２＋アッセイ」、「カルシウム動員アッセイ」という語句、またはそれらの変化形は、ＣＸＣＲ４活性化もしくは阻害及び／またはＡＤＲＢ２活性化もしくは阻害などのＧＰＣＲ活性化または阻害と関連するカルシウム流を測定するための細胞ベースのアッセイを指す。この方法は、ほとんどの細胞の細胞質に取り込まれるカルシウム感受性蛍光色素を利用する。色素は、細胞内貯蔵から放出されたカルシウムと結合して、その蛍光を増大させる。蛍光強度の変化は、目的の受容体のリガンド活性化に応答して細胞質に放出される細胞内カルシウムの量と直接相関する。ある特定の実施形態では、ＧＰＣＲはＣＸＣＲ４である。ある特定の実施形態では、ＧＰＣＲはＡＤＲＢ２である。ある特定の実施形態では、細胞ベースのアッセイは、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー活性化または阻害と関連するカルシウム流を測定する。
本明細書で使用される場合、「近接度に基づくアッセイ」という語句は、ＣＸＣＲ４タンパク質（単量体または単位）及びＡＤＲＢ２タンパク質（単量体または単位）の近接度及び／または結合など、インビトロ（細胞溶解物中）及び生細胞中での２つのタンパク質分子の近接度及び／または結合をモニターすることができる生物物理学的及び生物化学的技術を指し、生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、二分子蛍光補完（ＢｉＦＣ）、近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）、システイン架橋、及び共免疫沈降を含む（Ｆｅｒｒｅ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｂｕｉｌｄｉｎｇ ａ ｎｅｗ ｃｏｎｃｅｐｔｕａｌ ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｆｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｈｅｔｅｒｏｍｅｒｓ，Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ５，１３１－１３４；Ｇｏｍｅｓ，Ｉ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ－Ｃｏｕｐｌｅｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｈｅｔｅｒｏｍｅｒｓ，Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ ５６，４０３－４２５）。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー形成を検出するための代替の方法には、限定されないが：免疫染色（Ｂｕｓｈｌｉｎ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｌｌｏｓｔｅｒｉｃａｌｌｙ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｄｅｌｔａ ｏｐｉｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｄｕｒｉｎｇ ｎｅｕｒｏｐａｔｈｉｃ ｐａｉｎ，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ７，ｅ４９７８９；Ｄｅｃａｉｌｌｏｔ，Ｆ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ｍｕ－ｄｅｌｔａ ｏｐｉｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｓ ｂｙ ＲＴＰ４，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０５，１６０４５－１６０５０）；免疫電子顕微鏡法（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｄｕｅｎａｓ，Ｖ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｕｎｔａｎｇｌｉｎｇ ｄｏｐａｍｉｎｅ－ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ ｉｎ ｒａｔｓ，Ｄｉｓ Ｍｏｄｅｌ Ｍｅｃｈ ８，５７－６３）；ＢＲＥＴ（Ｐｆｌｅｇｅｒ，Ｋ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｉｌｌｕｍｉｎａｔｉｎｇ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｕｓｉｎｇ ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ（ＢＲＥＴ），Ｎａｔ Ｍｅｔｈｏｄｓ ３，１６５－１７４）；時間分解ＦＲＥＴアッセイ（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｄｕｅｎａｓ，Ｖ．，ｅｔ ａｌ．，２０１５）；インサイチューハイブリダイゼーション（Ｈｅ，Ｓ．Ｑ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｆａｃｉｌｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕ－ｏｐｉｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｂｙ ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ ｄｅｌｔａ－ｏｐｉｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｏｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ，Ｎｅｕｒｏｎ ６９，１２０－１３１）；ＦＲＥＴ（Ｌｏｈｓｅ，Ｍ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ／ ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｔｏ ｓｔｕｄｙ Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ ６４，２９９－３３６）；ＧＰＣＲヘテロマー同定技術（ＧＰＣＲ－ＨＩＴ、Ｄｉｍｅｒｉｘ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）（Ｍｕｓｔａｆａ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｈｅｔｅｒｏｍｅｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ： ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｏｆ ＧＰＣＲ ｈｅｔｅｒｏｍｅｒｓ，Ｊ Ｌａｂ Ａｕｔｏｍ １６，２８５－２９１）を使用し、ＢＲＥＴ、ＦＲＥＴ、ＢｉＦＣ、二分子ルミネセンス補完、酵素切断アッセイ、及びＴａｎｇｏ Ｔａｎｇｏ ＧＰＣＲアッセイシステム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）（Ｍｕｓｔａｆａ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｕｎｃｏｖｅｒｉｎｇ ＧＰＣＲ ｈｅｔｅｒｏｍｅｒ－ｂｉａｓｅｄ ｌｉｇａｎｄｓ，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ Ｔｅｃｈｎｏｌ ７，ｅ１－ｅ９４）を使用するβ－アレスチン動員アッセイ；ＰＲＥＳＴＯ－Ｔａｎｇｏシステム（Ｋｒｏｅｚｅ，Ｗ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１５）ＰＲＥＳＴＯ－Ｔａｎｇｏ ａｓ ａｎ ｏｐｅｎ－ｓｏｕｒｃｅ ｒｅｓｏｕｒｃｅ ｆｏｒ ｉｎｔｅｒｒｏｇａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｄｒｕｇｇａｂｌｅ ｈｕｍａｎ ＧＰＣＲｏｍｅ，Ｎａｔ Ｓｔｒｕｃｔ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２２，３６２－３６９）；分泌調節／凝集技術（ＡＲＩＡＤ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（Ｈａｎｓｅｎ，Ｊ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｌａｃｋ ｏｆ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ＡＴ１Ｒ／Ｂ２Ｒ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｉｎ ＣＯＳ－７，ＨＥＫ２９３，ａｎｄ ＮＩＨ３Ｔ３ ｃｅｌｌｓ： ｈｏｗ ｃｏｍｍｏｎ ｉｓ ｔｈｅ ＡＴ１Ｒ／Ｂ２Ｒ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ？ Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８４，１８３１－１８３９）；受容体選択及び増幅技術（ＡＣＡＤＩＡ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）（Ｈａｎｓｅｎ，Ｊ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，２００９）；ＤｉｍｅｒＳｃｒｅｅｎ（Ｃａｒａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）（Ｍｕｓｔａｆａ，Ｓ．，２０１０）；二量体／相互作用タンパク質移行アッセイ（Ｐａｔｏｂｉｏｓ）（Ｍｕｓｔａｆａ，Ｓ．，２０１０）；共免疫沈降（Ａｂｄ Ａｌｌａ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ ｅｎｈａｎｃｅｓ Ｂ２ ｂｒａｄｙｋｉｎｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ３８７，１８６－１９０）；表面酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用するＧＰＣＲ内在化アッセイ（Ｄｅｃａｉｌｌｏｔ，Ｆ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，２００８）またはフローサイトメトリー（Ｌａｗ，Ｐ．Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕ－ ａｎｄ ｄｅｌｔａ－ｏｐｉｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｏｃｃｕｒｓ ａｔ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｏｎｌｙ ａｎｄ ｒｅｑｕｉｒｅｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８０，１１１５２－１１１６４）；全細胞リン酸化アッセイ（Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ ａｎｄ ｏｐｉｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｃｒｏｓｓ－ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ，ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｄｅｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７７，１９７６２－１９７７２）；ならびに近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ，Ａ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ａｇａｉｎｓｔ ｄｏｐａｍｉｎｅ Ｄ１／Ｄ２ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｈｅｔｅｒｏｍｅｒｓ，Ｍｏｌ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ２０，１３７３－１３８５）が含まれる。
ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を発現する細胞における薬理学的特性、シグナル伝達特性、及び／または輸送特性の変化を検出するための代替の方法には、限定されないが：放射性リガンド結合アッセイ（Ｂｕｓｈｌｉｎ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｐｆｅｉｆｆｅｒ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，２００２）；細胞表面ビオチン化及び免疫ブロット法（Ｈｅ，Ｓ．Ｑ．，ｅｔ ａｌ．，２０１１）；免疫染色（Ｂｕｓｈｌｉｎ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，２０１２；Ｄｅｃａｉｌｌｏｔ，Ｆ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，２００８）；免疫電子顕微鏡法（Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｄｕｅｎａｓ，Ｖ．，ｅｔ ａｌ．，２０１５）；［３５Ｓ］ＧＴＰ－γＳ結合アッセイ（Ｂｕｓｈｌｉｎ，Ｔ．，ｅｔ ａｌ．，２０１２）；Ｆｕｒａ ２－アセトメトキシエステル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ）、Ｆｌｕｏ－４ ＮＷ カルシウム色素（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、またはＦＬＩＰＲ５色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）などの色素を使用するカルシウム（Ｃａｌｃｕｉｍ）イメージングまたはアッセイ；ラジオイムノアッセイキット（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用するｃＡＭＰアッセイ；ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）；パラメーター環状ＡＭＰアッセイ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）；ｆｅｍｔｏ ｃＡＭＰキット（Ｃｉｓｂｉｏ）；ｃＡＭＰ Ｄｉｒｅｃｔ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）またはＧｌｏＳｅｎｓｏｒ ｃＡＭＰアッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）；ＧＴＰアーゼアッセイ（Ｐｅｌｌｏ，Ｏ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｌｉｇａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＸＣＲ４／ｄｅｌｔａ－ｏｐｉｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｓ ｒｅｖｅａｌｓ ａ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ３８，５３７－５４９）；ＰＫＡ活性化（Ｓｔｅｆａｎ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｙｎａｍｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｕｓｉｎｇ Ｒｅｎｉｌｌａ ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｐｐｌｉｅｄ ｔｏ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ａ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｉｎ ｖｉｖｏ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０４，１６９１６－１６９２１）；ＥＲＫ１／２及び／またはＡｋｔ／ＰＫＢリン酸化アッセイ（Ｃａｌｌｅｎ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ＣＢ１ ａｎｄ ＣＢ２ ｆｏｒｍ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｈｅｔｅｒｏｍｅｒｓ ｉｎ ｂｒａｉｎ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８７，２０８５１－２０８６５）；ｃＡＭＰ応答要素（ＣＲＥ）などのレポーターアッセイ；血清応答要素（ＳＲＥ）；血清応答因子応答要素（ＳＲＦ－ＲＥ）；ならびに分泌アルカリホスファターゼアッセイ（Ｄｅｃａｉｌｌｏｔ，Ｆ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，２０１１）；ＴＲ－ＦＲＥＴまたは［３Ｈ］ミオイノシトールを使用するイノシトール１－リン酸生成の測定（Ｍｕｓｔａｆａ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ａｌｐｈａ１Ａ－ａｄｒｅｎｏｃｅｐｔｏｒ－ＣＸＣ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ ｈｅｔｅｒｏｍｅｒ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８７，１２９５２－１２９６５）；下流標的遺伝子発現を測定するためのＲＴ－ｑＰＣＲ（Ｍｕｓｔａｆａ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，２０１２）；ならびにアデニリルシクラーゼ活性（Ｇｅｏｒｇｅ，Ｓ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕ－ ａｎｄ ｄｅｌｔａ－ｏｐｉｏｉｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ． Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７５，２６１２８－２６１３５）；次世代シーケンシング（ＮＧＳ）；ならびに受容体ヘテロ二量化の結果としての受容体機能の変化を検出することができる任意の他のアッセイが含まれる。
本明細書で使用される場合、「ＡＤＲＢ２」という用語は、シグナル伝達が下流のＬ型カルシウムチャネル相互作用を介して平滑筋弛緩及び気管支拡張などの生理的応答を媒介するエピネフリン（ホルモン及び神経伝達物質（リガンドの別名、アドレナリン））と相互作用するアドレナリン受容体ベータ２（ベータ－２アドレナリン受容体またはβ２アドレノセプターとも称される）、細胞膜貫通ベータアドレナリン受容体を指す（Ｇｒｅｇｏｒｉｏ，Ｇ．Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，２０１７）。ＡＤＲＢ２はまた、固有の例示的なデータベース識別子（ＩＤ）及び表１に示されているとおりの代替名称により識別される。ＡＤＲＢ２は、平滑筋弛緩、運動神経末端、グリコーゲン分解などの筋肉系において、かつ心筋収縮、心拍出量増加などの循環系において機能する。正常な眼では、サルブタモールによるベータ－２刺激は、網膜を介して眼内圧を上昇させる。消化系では、ＡＤＲＢ２は、肝臓におけるグリコーゲン分解及びグルコース新生ならびに膵臓からのインスリン分泌を誘導する（Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，（２００４）“Ｔａｂｌｅ ２０：２”（Ｍａｓｓ： Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ））。ＡＤＲＢ２の活性化は、腫瘍成長を増強し、転移を促進し得る細胞増殖及び侵襲を促進し、がん細胞のアポトーシスを抑制するＲａｓ媒介Ｒａｆ癌原遺伝子セリン／トレオニン－プロテインキナーゼ（Ｒａｆ）／二重特異性マイトジェン活性化プロテインキナーゼキナーゼ（ＭＥＫ）／細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、ホスホイノシチド３－キナーゼ（ＰＩ３Ｋ）／ＲＡＣセリン／トレオニン－プロテインキナーゼ（Ａｋｔ）及びｃＡＭＰ／プロテインキナーゼＡ／マイトジェン活性化プロテインキナーゼ経路（Ｑｕｏｃ Ｌｕ’ｏ’ｎｇ，Ｋ．Ｖ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ｃａｎｃｅｒ Ｍａｎａｇ Ｒｅｓ ４： ４３１－４４５）を含む、腫瘍成長及び転移を促進するシグナル伝達経路を刺激し得る（Ａｎｔｏｎｉ，Ｍ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ ６： ２４０－２４８；Ｔｈａｋｅｒ，Ｐ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｎａｔ Ｍｅｄ １２： ９３９－９４４）。
本明細書で使用される場合、「ＣＸＣＲ４」という用語は、固有の例示的なデータベース識別子（ＩＤ）及び表１に示されているとおりの代替名称によっても識別されるＣ－Ｘ－Ｃモチーフケモカイン受容体４を指す（Ｃｈａｔｔｅｒｊｅｅ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，２０１４；Ｄｅｂｎａｔｈ，Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｄｏｍａｎｓｋａ，Ｕ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，２０１３；Ｇｕｏ，Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１６）ＣＸＣＬ１２／ＣＸＣＲ４： ａ ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ ｂｒｉｄｇｅ ｌｉｎｋｉｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｓｔｒｏｍａｌ ｎｅｉｇｈｂｏｒｓ ｉｎ ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ｎｅｔｗｏｒｋｓ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ３５，８１６－８２６；Ｐｅｌｅｄ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ＣＸＣＲ４－ｂａｓｅｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔｉｇ Ｄｒｕｇｓ ２１，３４１－３５３；Ｒｏｃｃａｒｏ，Ａ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１４）ＳＤＦ－１ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｔａｒｇｅｔｓ ｔｈｅ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｎｉｃｈｅ ｆｏｒ ｃａｎｃｅｒ ｔｈｅｒａｐｙ，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ ９，１１８－１２８；Ｗａｌｅｎｋａｍｐ，Ａ．Ｍ．Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１７）ＣＸＣＲ４ Ｌｉｇａｎｄｓ： Ｔｈｅ Ｎｅｘｔ Ｂｉｇ Ｈｉｔ？ Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ ５８，７７Ｓ－８２Ｓ）。ＣＸＣＲ４へのＣＸＣＬ１２の結合により、リガンド結合の下流の多種多様なシグナル伝達経路が開始され、走化性、細胞生存及び／または増殖、細胞内カルシウムの増加、及び遺伝子転写などの様々な応答が生じ得る。走化性は、ＰＫＣを介するか、またはＧαｉを介してＭＡＰＫにより媒介され、これはＥｒｋ／１／２を介してシグナル伝達し得ることが示されている（Ｍｅｌｌａｄｏ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ；１９：３９７－４２１；Ｂｅｎｄａｌｌ，Ｌ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ；６５：３２９０－８）。ケモカインＣＸＣＬ１２及びケモカイン受容体ＣＸＣＲ４の対は、腫瘍形成の多くの段階において重要な役割を果たす。ＣＸＣＲ４は、様々なヒトがんで過剰発現され、この過剰発現は、乳房、肺、腎臓、結腸、卵巣、及び脳の癌、さらにはリンパ腫及び白血病を含む複数のがん対象における再発及び不十分な全生存期間についてのリスクの上昇と相関する（Ｂａｌｋｗｉｌｌ，Ｆ．，（２００４）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｎｃｅｒ；４：５４０－５０． １－５；Ｏｒｉｍｏ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｃｅｌｌ；１２１：３３５－４８；Ｄｏｍａｎｓｋａ，Ｕ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，２０１３）。がん及び他の疾患におけるＣＸＣＲ４の重要な役割が、臨床用途のための選択的ＣＸＣＲ４阻害剤の開発の引き金となっている。
Figure 2022532667000002
本明細書で使用される場合、「ＣＸＣＬ１２」という用語（または間質細胞由来因子１（「ＳＤＦ－１」））は、リンパ球のための強力な走化性因子を指す。胚形成の間は、ＣＸＣＬ１２は、胎児肝臓から骨への造血細胞の遊走を指示し、成人では、ＣＸＣＬ１２は、ＣＸＣＲ４依存性機構を介して内皮前駆細胞を動員することにより、血管新生において重要な役割を果たす。ＣＸＣＬ１２は、脾赤髄及びリンパ節髄質索内でも発現される（Ｐｉｔｔ，ｅｔ ａｌ．，（２０１５）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ，２７：７５５－７６８；及びＺｈａｏ，ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ １０８：３３７－３４２）。ヒトＣＸＣＬ１２の例示的なアミノ酸配列及び対応するコーディング核酸配列は、それぞれＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号：ＮＰ＿９５４６３７．１及びＮＭ＿１９９１６８．３において見い出すことができる。
サルメテロールは、長時間作用性β２アドレナリン受容体作動薬（ＬＡＢＡ）であり、アミンから１１個の原子の鎖長を有するアリールアルキル基を有する。このかさ高性が、この化合物をより親油性に、かつβ２アドレナリン受容体について選択的にしていると考えられる。Ｇｌａｘｏ（現在のＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ、ＧＳＫ）により１９８０年代に初めて販売及び製造されたサルメテロールは、Ｓｅｒｅｖｅｎｔ（登録商標）として１９９０年に発売された。この製品はＧＳＫにより、英国ではＡｌｌｅｎ ＆ Ｈａｎｂｕｒｙｓの商標で販売されている。使用されるサルメテロールは、喘息症状の保守及び予防ならびに慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）症状の保守である（２０１０ Ｇｌｏｂａｌ ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ ｆｏｒ ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｄｉｓｅａｓｅ）。気管支痙攣の症状には、息切れ、呼気性喘鳴、咳及び胸部圧迫感が含まれる。サルメテロールはまた、運動中の呼吸困難（運動誘導性気管支収縮）を予防するためにも使用される。
本明細書で使用される場合、「ＡＤＲＢ２阻害剤」という用語は、ＡＤＲＢ２単量体、またはＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２単位もしくはプロトマーの機能を阻害または抑制する分子を指す。本明細書において提供される処置方法、抑制方法、医薬組成物及び／または医薬キット、ならびにそれらの方法及び使用において使用することができるＡＤＲＢ２阻害剤の非限定的例には、限定されないが、ＡＤＲＢ２拮抗薬、ＡＤＲＢ２インバース作動薬、ＡＤＲＢ２陽性アロステリック修飾因子、ＡＤＲＢ２陰性アロステリック修飾因子、ＡＤＲＢ２特異性抗体または単一ドメイン抗体様スキャフォールドを含むその抗原結合部分、スペーサーアームによりＣＸＣＲ４について選択的なファルマコホアに接続している、ＡＤＲＢ２について選択的なファルマコホアを有する二価リガンド、ＡＤＲＢ２及びＣＸＣＲ４に対する二重特異性抗体、ＣＸＣＲ４リガンドと連結している放射標識されたＡＤＲＢ２リガンド、ならびにＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー選択的シグナル伝達を阻害する小分子リガンドが含まれる。ある特定の実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤は、ＡＤＲＢ２単量体の機能を阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２単位またはプロモーターの機能を阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの機能を阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤は、ＡＤＲＢ２単量体のＡＤＲＢ２作動薬での刺激時に増強される応答を阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２単位のＡＤＲＢ２作動薬での刺激時に増強される応答を阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２単位のＡＤＲＢ２作動薬及びＣＸＣＲ４作動薬での共刺激時に増強される応答を阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２作動薬及びＣＸＣＲ４作動薬での共刺激時に増強される応答を阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、増強される応答は、増強されるＣａ２＋応答である。ある特定の実施形態では、増強される応答は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強されるがん進行である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される細胞増殖である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される細胞遊走である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される転移である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される腫瘍成長である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される血管新生である。ある特定の実施形態では、細胞（複数可）は、がん細胞（複数可）である。ある特定の実施形態では、細胞（複数可）は、対象に由来する。ある特定の実施形態では、細胞（複数可）は、対象から得られた生体試料に由来する。ＡＤＲＢ２阻害剤のある特定の例を表２に列挙する。
本明細書で使用される場合、「ＣＸＣＲ４阻害剤」という用語は、ＣＸＣＲ４単量体、またはＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４単位もしくはプロトマーの機能を阻害または抑制する分子を指す。本明細書において提供される処置方法、抑制方法、医薬組成物及び／または医薬キット、ならびにそれらの方法及び使用において使用することができるＣＸＣＲ４阻害剤の非限定的例には、限定されないが、ＣＸＣＲ４拮抗薬、ＣＸＣＲ４インバース作動薬、ＣＸＣＲ４陽性アロステリック修飾因子、ＣＸＣＲ４陰性アロステリック修飾因子、ＣＸＣＲ４特異性抗体または単一ドメイン抗体様スキャフォールドを含むその抗原結合部分、スペーサーアームによりＡＤＲＢ２について選択的なファルマコホアに接続している、ＣＸＣＲ４について選択的なファルマコホアを有する二価リガンド、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２に対する二重特異性抗体、ＡＤＲＢ２リガンドと連結している放射標識されたＣＸＣＲ４リガンド、及びＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー選択的シグナル伝達を阻害する小分子リガンドが含まれる。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤は、ＣＸＣＲ４単量体の機能を阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４単位またはプロトマーの機能を阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの機能を阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤は、ＣＸＣＲ４単量体のＣＸＣＲ４作動薬での刺激時に増強される応答を阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４単位のＣＸＣＲ４作動薬での刺激時に増強される応答を阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４単位のＣＸＣＲ４作動薬及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に増強される応答を阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４作動薬及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に増強される応答を阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、増強される応答は、増強されるＣａ２＋応答である。ある特定の実施形態では、増強される応答は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強されるがん進行である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される細胞増殖である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される細胞遊走である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される転移である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される腫瘍成長である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される血管新生である。ある特定の実施形態では、細胞（複数可）は、がん細胞（複数可）である。ある特定の実施形態では、細胞（複数可）は、対象に由来する。ある特定の実施形態では、細胞（複数可）は、対象から得られた生体試料に由来する。ＣＸＣＲ４阻害剤のある特定の例を表２に列挙する。
本明細書で使用される場合、「拮抗薬」という用語は、受容体に結合して遮断することにより生物学的応答を遮断する、または減衰させる種類の受容体リガンドまたは薬物を指し、ブロッカーとも呼ばれる。拮抗薬は、それらの同族受容体について親和性を有し、それらの結合は、同族受容体における作動薬またはインバース作動薬の相互作用を破壊して、その機能を阻害する。例えば、ＡＤＲＢ２拮抗薬は、ＡＤＲＢ２受容体に結合して遮断することにより生物学的応答を遮断する、または減衰させるＡＤＲＢ２リガンドまたはＡＤＲＢ２薬物であってよい。ある特定の実施形態では、ＡＤＲＢ２拮抗薬は、ＡＤＲＢ２作動薬またはＡＤＲＢ２インバース作動薬とＡＤＲＢ２（例えば、ＡＤＲＢ２単量体、またはＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２プロトマーもしくは単位）との相互作用を破壊し得る、及び／またはＡＤＲＢ２作動薬またはＡＤＲＢ２インバース作動薬とＡＤＲＢ２（例えば、ＡＤＲＢ２単量体、またはＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２プロトマーもしくは単位）との機能を阻害し得る。ある特定の実施形態では、ＡＤＲＢ２拮抗薬は、ＡＤＲＢ２単量体の機能を遮断、阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＡＤＲＢ２拮抗薬は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２単位またはプロトマーの機能を遮断、阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＡＤＲＢ２拮抗薬は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの機能を遮断、阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＡＤＲＢ２拮抗薬は、ＡＤＲＢ２単量体のＡＤＲＢ２作動薬での刺激時に増強される応答を遮断、阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＡＤＲＢ２拮抗薬は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２単位のＡＤＲＢ２作動薬での刺激時に増強される応答を遮断、阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＡＤＲＢ２拮抗薬は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２単位のＡＤＲＢ２作動薬及びＣＸＣＲ４作動薬での共刺激時に増強される応答を遮断、阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＡＤＲＢ２拮抗薬は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２作動薬及びＣＸＣＲ４作動薬での共刺激時に増強される応答を遮断、阻害または抑制する。例えば、ＣＸＣＲ４拮抗薬は、ＣＸＣＲ４受容体に結合する、及び／またはそれを遮断することにより生物学的応答を遮断する、または減衰させるＣＸＣＲ４リガンドまたはＣＸＣＲ４薬物であり得る。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４拮抗薬は、ＣＸＣＲ４作動薬またはＣＸＣＲ４インバース作動薬とＣＸＣＲ４（例えば、ＣＸＣＲ４単量体、またはＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４プロトマーもしくは単位）との相互作用を破壊し得る、及び／またはＣＸＣＲ４作動薬またはインバース作動薬とＣＸＣＲ４（例えば、ＣＸＣＲ４単量体、またはＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４プロトマーもしくは単位）との機能を阻害し得る。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４拮抗薬は、ＣＸＣＲ４単量体の機能を遮断、阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４拮抗薬は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４単位またはプロトマーの機能を遮断、阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４拮抗薬は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの機能を遮断、阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４拮抗薬は、ＣＸＣＲ４単量体のＣＸＣＲ４作動薬での刺激時に増強される応答を遮断、阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４拮抗薬は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４単位のＣＸＣＲ４作動薬での刺激時に増強される応答を遮断、阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４拮抗薬は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４単位のＡＤＲＢ２作動薬及びＣＸＣＲ４作動薬での共刺激時に増強される応答を遮断、阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、ＣＸＣＲ４拮抗薬は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２作動薬及びＣＸＣＲ４作動薬での共刺激時に増強される応答を遮断、阻害または抑制する。ある特定の実施形態では、増強される応答は、増強されるＣａ２＋応答である。ある特定の実施形態では、増強される応答は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強されるがん進行である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される細胞増殖である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される細胞遊走である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される転移である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される腫瘍成長である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される血管新生である。ある特定の実施形態では、細胞（複数可）はがん細胞（複数可）である。ある特定の実施形態では、細胞（複数可）は、対象に由来する。ある特定の実施形態では、細胞（複数可）は、対象から得られた生体試料からのものである。ＣＸＣＲ４拮抗薬及びＡＤＲＢ２拮抗薬のある特定の例を表２に列挙する。
Figure 2022532667000003
本明細書で使用される場合、「タンパク質間相互作用阻害剤」、「ＰＰＩ阻害剤」という語句、またはそれらの変化形は、タンパク質間相互作用に干渉することができる任意の分子を指す。明確な結合ポケットが関与する酵素－基質相互作用とは違ってタンパク質間相互作用は、比較的広い領域にわたるタンパク質同士の一時的な相互作用または会合であり、静電相互作用、疎水相互作用、水素結合、及び／またはファンデルワールス力により駆動されることが多い。ＰＰＩ阻害剤には、限定されないが、ＧＰＣＲヘテロマー界面、例えばＣＸＣＲ４及びまたはＡＤＲＢ２単位の膜貫通ヘリックス、細胞内ループまたはＣ末端側尾部を妨害する、ペプチド配列と融合した膜透過性ペプチドまたは脂質が含まれ得る。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＰＰＩ阻害剤は、例えば、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー界面（複数可）を標的とするペプチドと複合化した膜透過性ペプチドもしくは細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）であってもよいし、またはＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー界面（複数可）を標的とする細胞透過性脂質化ペプチドであってもよい。
例えば、膜透過性ペプチドまたは細胞透過性ペプチドには、ＨＩＶ－１ ＴＡＴペプチド、例えばＴＡＴ４８－６０及びＴＡＴ４９－５７；ペネトラチン、例えばｐＡｎｔｐ（４３－５８）；ポリアルギニン（Ｒｎ、例えばＲ５～Ｒ１２）；Ｄｉａｔｏｓペプチドベクター１０４７（ＤＰＶ１０４７、Ｖｅｃｔｏｃｅｌｌ（登録商標））；ＭＰＧ（ＳＶ４０大型Ｔ抗原の核内局在化シグナル（ＮＬＳ）と融合したＨＩＶ ｇｐ４１）；Ｐｅｐ－１（ＳＶ４０大型Ｔ抗原のＮＬＳと融合した、トリプトファンに富むクラスター）；ｐＶＥＣペプチド（血管内皮カドヘリン）；ｐ１４代替リーディングフレーム（ＡＲＦ）タンパク質に基づくＡＲＦ（１－２２）；未プロセシングウシプリオンタンパク質のＮ末端ＢＰｒＰｒ（１－２８）；モデル両親媒性ペプチド（ＭＡＰ）；トランスポータン；アズリン由来ｐ２８ペプチド；両親媒性βシートペプチド、例えばＶＴ５；プロリンに富むＣＰＰ、例えばＢａｃ７（Ｂａｃ１－２４）；疎水性ＣＰＰ、例えば、α１－アンチトリプシンに由来するＣ１０５Ｙ；合成Ｃ１０５Ｙに由来するＰＦＶＹＬＩ；Ｐｅｐ－７ペプチド（ＣＨＬ８ペプチドファージクローン）；ならびに改変型疎水性ＣＰＰ、例えば、ステープルドペプチド及びプレニル化ペプチド（Ｇｕｉｄｏｔｔｉ，Ｇ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１７）Ｃｅｌｌ－Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ： Ｆｒｏｍ Ｂａｓｉｃ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｔｏ Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｃｉ ３８，４０６－４２４；Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１６）Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ａｎｄ Ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ ｆｏｒ Ｕｓｅ ｏｆ Ｃｅｌｌ－Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｓ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃａｒｇｏｓ，Ｉｎｔ Ｊ Ｍｏｌ Ｓｃｉ １７）が含まれる。膜透過性ペプチドまたは細胞透過性ペプチドにはさらに、例えば、ＴＡＴ由来細胞透過性ペプチド、シグナル配列に基づく（例えばＮＬＳ）細胞透過性ペプチド、疎水性膜移行配列（ＭＴＳ）ペプチド、及びアルギニンに富む分子トランスポーターが含まれ得る。細胞透過性脂質化ペプチドには、例えば、ペプデュシン、例えばＩＣＬ１／２／３、Ｃ尾部短鎖パルミトイル化ペプチドが含まれる（Ｃｏｖｉｃ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｂｙ ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｍｅｍｂｒａｎｅ－ｔｅｔｈｅｒｅｄ ｐｅｐｔｉｄｅｓ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，９９，６４３－６４８；及びＯ’Ｃａｌｌａｇｈａｎ，Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ｔｕｒｎｉｎｇ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｏｎ ａｎｄ ｏｆｆ ｗｉｔｈ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｅｐｄｕｃｉｎｓ： ｎｅｗ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｒｕｇ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ． Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８７，１２７８７－１２７９６）。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー界面を標的とするペプチド（複数可）は、例えば、ＣＸＣＲ４の膜貫通ドメイン、ＡＤＲＢ２の膜貫通ドメイン、ＣＸＣＲ４の細胞内ループ、ＡＤＲＢ２の細胞内ループ、ＣＸＣＲ４のＣ末端側ドメインまたはＡＤＲＢ２のＣ末端側ドメイン、ＣＸＣＲ４の細胞外ループ、ＡＤＲＢ２の細胞外ループ、ＣＸＣＲ４のＮ末端側領域またはＡＤＲＢ２のＮ末端側領域であり得る。
本明細書で使用される場合、遺伝子に関連して使用される場合の「発現する」、「発現」、または「発現すること」などの用語は、遺伝子が担っている情報が、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）への遺伝子の転写、その後のポリペプチド鎖へのｍＲＮＡ分子の翻訳、ならびに最終的なタンパク質へのそのアセンブリを含めて、表現型として現れることとなるプロセスを指す。ある特定の実施形態では、がんなどの疾患は、特定の遺伝子からの最終的なタンパク質の発現に関してなど、特定の遺伝子の発現に関して特徴づけられ得る。例えば、がんは、ＣＸＣＲ４発現性がん、ＡＤＲＢ２発現性がん、またはＣＸＣＲ４発現性及びＡＤＲＢ２発現性がんとして特徴づけられ得る。
本明細書で使用される場合、遺伝子に関連して使用される場合の「発現レベル」という語句は、例えば、遺伝子のＲＮＡ産物の量（遺伝子のＲＮＡレベル）または遺伝子のタンパク質産物の量（遺伝子のタンパク質レベル）などの遺伝子の発現産物の量または蓄積を指す。遺伝子が１つよりも多い対立遺伝子を有する場合、遺伝子の発現レベルは、別段に指定されていない限り、この遺伝子について存在するすべての対立遺伝子の発現産物の蓄積の総量を指す。例えば、がんは、遺伝子の特定のＲＮＡ産物または遺伝子の特定のタンパク質産物などの遺伝子の特定の産物の発現レベル（量）と関連し得る。例えば、がんは、遺伝子の特定のＲＮＡ産物または遺伝子の特定のタンパク質産物などの遺伝子の特定の産物の発現レベル（量）と関連し得る。例えば、がんは、ＣＸＣＲ４遺伝子の特定の発現レベルを有し得る。例えば、がんは、ＡＤＲＢ２遺伝子の特定の発現レベルを有し得る。例えば、がんは、ＣＸＣＲ４遺伝子の特定の発現レベル及びＡＤＲＢ２遺伝子の特定の発現レベルを有し得る。例えば、がんは、ＣＸＣＲ４タンパク質の特定の発現レベルを有し得る。例えば、がんは、ＡＤＲＢ２タンパク質の特定の発現レベルを有し得る。例えば、がんは、ＣＸＣＲ４タンパク質の特定の発現レベル及びＡＤＲＢ２タンパク質の特定の発現レベルを有し得る。
本明細書で使用される場合、定量化可能な値に関して使用される場合の「基準」という用語は、試料において測定されるような値の有意性を決定するために使用することができる所定の値を指す。
本明細書で使用される場合、「基準発現レベル」という語句は、細胞または試料における遺伝子の発現レベルの有意性を決定するために使用することができる遺伝子の所定の発現レベルを指す。遺伝子の基準発現レベルは、当技術分野で通常の技能を有する者により決定される基準細胞における遺伝子の発現レベルであり得る。例えば、ＣＸＣＲ４遺伝子の基準発現レベルは、Ｔ細胞またはがん細胞などの細胞におけるその平均発現レベルであり得る。したがって、細胞（または細胞の試料）におけるＣＸＣＲ４遺伝子の発現レベルが、Ｔ細胞またはがん細胞などの細胞におけるその平均発現レベルよりも高ければ、その細胞（または細胞の試料）がＣＸＣＲ４発現性細胞（または細胞のＣＸＣＲ４発現性試料）であることを示していると決定することができる。例えば、ＡＤＲＢ２遺伝子の基準発現レベルは、Ｔ細胞またはがん細胞などの細胞におけるその平均発現レベルであり得る。したがって、細胞（または細胞の試料）におけるＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルが、Ｔ細胞またはがん細胞などの細胞におけるその平均発現レベルよりも高ければ、その細胞がＡＤＲＢ２発現性細胞（または細胞のＡＤＲＢ２発現性試料）であることを示していると決定することができる。遺伝子の基準発現レベルは、様々な試料細胞集団における遺伝子の発現レベルの統計的解析を介して当技術分野で通常の技能を有する者により決定されるカットオフ値でもあり得る。例えば、がんは、試料において、ＣＸＣＲ４遺伝子の基準レベルよりも高いＣＸＣＲ４遺伝子の発現レベルを有し得る。例えば、がんは、試料において、ＣＸＣＲ４タンパク質の基準レベルよりも高いＣＸＣＲ４タンパク質の発現レベルを有し得る。例えば、がんは、試料において、ＡＤＲＢ２遺伝子の基準レベルよりも高いＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルを有し得る。例えば、がんは、試料において、ＡＤＲＢ２タンパク質の基準レベルよりも高いＡＤＲＢ２タンパク質の発現レベルを有し得る。例えば、がんは、試料において、ＣＸＣＲ４遺伝子の基準レベル及びＡＤＲＢ２遺伝子の基準レベルよりもそれぞれ高いＣＸＣＲ４遺伝子の発現レベル及びＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルを有し得る。例えば、がんは、試料において、ＣＸＣＲ４タンパク質の基準レベル及びＡＤＲＢ２タンパク質の基準レベルよりもそれぞれ高いＣＸＣＲ４タンパク質の発現レベル及びＡＤＲＢ２タンパク質の発現レベルを有し得る。ある特定の実施形態では、例えば、ある遺伝子を発現することが既知の細胞を少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％有する試料細胞集団においてその遺伝子の発現レベルを分析することにより、当技術分野で通常の技能を有する者はカットオフ値を、未知の構成を有する細胞集団においてその遺伝子を発現する細胞のパーセンテージを示すために使用することができる遺伝子の基準発現レベルとして決定することができる。
本明細書で使用される場合、対象（例えば、がん患者などのがん対象）に関連する「選択すること」及び「選択される」という用語は、特定の対象が所定の基準または所定の基準のセットを有すること、例えば、対象が基準レベルを超えるＣＸＣＬＲ４発現レベルを有すること、対象が基準レベルを超えるＡＤＲＢ２発現レベルを有すること、または対象がそれぞれの基準レベルを超えるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルを有することに基づき（そのことにより）、特定の対象が、より大きな対象の群から特異的に選ばれることを意味するために使用される。同様に、「対象を選択的に処置すること」は、特定の対象が所定の基準または所定の基準のセットを有すること、例えば、対象が基準レベルを超えるＣＸＣＬＲ４発現レベルを有すること、対象が基準レベルを超えるＡＤＲＢ２発現レベルを有すること、または対象がそれぞれの基準レベルを超えるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルを有することに基づき（そのことにより）、より大きな対象の群から特異的に選ばれている対象（例えば、がん患者などのがん対象）に、処置を与えることを指す。同様に、「選択的に投与すること」は、特定の対象が所定の基準または所定の基準のセットを有すること、例えば、対象が基準レベルを超えるＣＸＣＬＲ４発現レベルを有すること、対象が基準レベルを超えるＡＤＲＢ２発現レベルを有すること、または対象がそれぞれの基準レベルを超えるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルを有することに基づき（そのことにより）、より大きな対象の群から特異的に選ばれている対象（例えば、がん患者などのがん対象）に、薬物を投与することを指す。選択すること、選択的に処置すること、及び選択的に投与することでは、対象に、単に疾患または障害（例えば、がん）を有することに基づく標準処置レジメンを送達するのではなく、対象の生物学に基づき疾患または障害、例えば、がんについての個別療法を送達することが意図されている。
従来、ＧＰＣＲは、リガンド結合時にヘテロ三量体Ｇタンパク質と相互作用する単量体として機能すると考えられ、単量体またはホモマーのＧＰＣＲに基づいて薬物が開発された（Ｍｉｌｌｉｇａｎ，Ｇ．（２００８）Ａ ｄａｙ ｉｎ ｔｈｅ ｌｉｆｅ ｏｆ ａ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ： ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｔｏ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ，Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １５３ Ｓｕｐｐｌ １，Ｓ２１６－２２９）。この考え方は、ＧＰＣＲがヘテロマーを形成することができ、いくつかのＧＰＣＲにはヘテロマー化が必須であることの発見により大幅に変化した。ＧＰＣＲヘテロマー化は、ＧＰＣＲ成熟及び細胞表面送達、リガンド結合親和性、シグナル伝達強度及び経路、ならびに受容体脱感作及び再生を変化させることが知られている（Ｔｅｒｒｉｌｌｏｎ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｒｏｌｅｓ ｏｆ Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ＥＭＢＯ Ｒｅｐ ５，３０－３４；Ｆｅｒｒｅ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，（２００９）；Ｒｏｚｅｎｆｅｌｄ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｈｅｔｅｒｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｃｉ ３１，１２４－１３０；Ｇｏｍｅｓ，Ｉ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１６）；Ｆａｒｒａｎ，Ｂ．（２０１７）Ａｎ ｕｐｄａｔｅ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｒｅｌｅｖａｎｃｅ ｏｆ ＧＰＣＲ ｏｌｉｇｏｍｅｒｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｓ １１７，３０３－３２７）。異なるＧＰＣＲヘテロマーは別個の機能的及び薬理学的特性を呈し、ＧＰＣＲヘテロマー化は細胞種、組織、及び疾患または病状に応じて変化し得る（Ｔｅｒｒｉｌｌｏｎ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，２００４；Ｆｅｒｒｅ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，２００９；Ｒｏｚｅｎｆｅｌｄ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，２０１０；Ｇｏｍｅｓ，Ｉ．，ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｆａｒｒａｎ，Ｂ．，２０１７）。現在、ＧＰＣＲヘテロマー化は一般的現象とみなされており、ＧＰＣＲヘテロマー化の解明は、受容体機能、生理学、疾患及び病状における役割を理解するための新しい道を切り開く。したがって、ＧＰＣＲヘテロマー及びその機能的特性を同定することは、より少ない副作用、より高い有効性、及び向上した組織選択性で新しい医薬品を開発するためまたは従前の薬物の新たな用途を見出すための新たな機会を提供する（Ｆｅｒｒｅ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，２００９；Ｒｏｚｅｎｆｅｌｄ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，２０１０；Ｆａｒｒａｎ，Ｂ．，２０１７）。
真のＧＰＣＲヘテロマーの同定には徹底的かつ批判的な評価を要する。ＧＰＣＲヘテロマーとＧＰＣＲの単純な会合とを区別するために、この分野の研究者及び国際薬理学会受容体命名委員会（ＮＣ－ＩＵＰＨＡＲ）は、ＧＰＣＲヘテロマーが、「少なくとも２つの（機能性）受容体単位［プロトマー］からなり、その個々の構成要素の生化学特性とは明らかに異なった生化学特性を有する巨大分子複合体」であり、これらのヘテロマーが天然組織中に存在することを言明した（Ｆｅｒｒｅ，Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，２００９；Ｇｏｍｅｓ，Ｉ．，ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｐｉｎ，Ｊ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｏｎ ｏｆ Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ． ＬＸＶＩＩ． Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｏｆ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｈｅｔｅｒｏｍｕｌｔｉｍｅｒｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖ ５９，５－１３）。彼らは、ＧＰＣＲヘテロマーを実証するための３つの基準を提案した：（１）共免疫沈降、インサイチューハイブリダイゼーション、または近接ライゲーションアッセイを含めた近接度に基づく技術を用いて、ヘテロマーは、両方の受容体を発現する細胞／組織においてはアロステリズムを可能にする適切な共局在化及び相互作用を呈し、片方の受容体を欠く細胞／組織においてはそれを呈さないものでなければならない；（２）ヘテロマーは、両方の受容体を発現する細胞／組織のみにおいてシグナル伝達、リガンド結合及び／または輸送の変化などの明確な特性を呈し、片方の受容体を欠く細胞／組織においてはそれを呈さないものでなければならない；ならびに（３）ヘテロマー選択的試薬はヘテロマー特異的特性を変化させなければならない。ヘテロマー選択的試薬には、ヘテロマー選択的抗体、膜透過性ペプチド、及び二価／二官能性リガンドが含まれる（Ｇｏｍｅｓ，Ｉ．，ｅｔ ａｌ．，２０１６；Ｐｉｎ，Ｊ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，２００７）。多くのＧＰＣＲヘテロマーは、異種細胞に発現させた組換え受容体を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏで同定されたが、ごく少数のみが新規特性を示し、技術的問題のために天然組織でＧＰＣＲヘテロマー化の証拠を示したものはほとんどなかった（Ｇｏｍｅｓ，Ｉ．，ｅｔ ａｌ．，２０１６）。ＮＣ－ＩＵＰＨＡＲは、新たなＧＰＣＲヘテロマーであると認められるためには当該３つの基準のうちの少なくとも２つを満たす証拠を示さなければならないと発表した（Ｐｉｎ，Ｊ．Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，２００７）。
本明細書に開示のとおり、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在／実在を判定する際に３つのうちの基準１を（ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用しているか否かに関して）満たすか否かについて立証するためには、以下を含む方法のうちの１つ以上が利用され得るが、これらに限定されない：共内在化アッセイ；共局在化アッセイ（細胞区画内での受容体プロトマーの共局在化を判定するもの）、例えば、インサイチューハイブリダイゼーション、免疫組織化学、または免疫電子顕微鏡法；近接度に基づくアッセイ、例えば、近接度に基づく生物物理学的技術、例えば、共鳴エネルギー移動（ＲＥＴ）、生物発光ＲＥＴ（ＢＲＥＴ）、蛍光ＲＥＴ（ＦＲＥＴ）、時間分解蛍光ＲＥＴ（ＴＲ－ＦＲＥＴ）、抗体利用ＦＲＥＴ、リガンド利用ＦＲＥＴ、二分子蛍光補完（ＢｉＦＣ）、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベル、及び近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）；共免疫沈降アッセイ；または蛍光動物。例えば、ＢｉＦＣ、共内在化アッセイ、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベル、またはＰＬＡを利用してＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが３つのうちの基準１を満たすか否かを評価した。
本明細書に開示のとおり、３つのうちの基準２を（ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが個々のプロトマーの特性とは別個の特性を呈するか否かに関して）満たすか否か、例えば、増強される下流シグナル伝達、例えば増強されるカルシウム動員（例えばカルシウム動員アッセイで決定される）をもたらすＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーであるか否かについて立証するためには、上述した３つのうちの基準１を満たしたＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに対して２段階の手法を利用した：（１）個々のプロトマーの状況で、増強される下流シグナル伝達、例えば増強されるカルシウム動員（相乗作用）の存在／非存在を判定すること－ＨＡ－ＶＣと片方のプロトマー（ＣＸＣＲ４かＡＤＲＢ２かのいずれか）とを共発現する細胞においてカルシウム動員を（ａ）ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時と、（ｂ）ＣＸＣＬ１２単独またはＡＤＲＢ２作動薬単独のいずれかでの刺激時とで比較する；及び（２）ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの状況で、増強される下流シグナル伝達、例えば増強されるカルシウム動員（相乗作用）の存在／非存在を判定すること－ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を共発現する細胞においてカルシウム動員を（ａ）ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時と、（ｂ）ＣＸＣＬ１２単独またはＡＤＲＢ２作動薬単独かのいずれかでの刺激の合計とで比較する。本明細書に開示のとおり、３つのうちの基準２を満たし、増強される下流シグナル伝達、例えば増強されるカルシウム動員をもたらすＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーとみなされるためには、（１）いずれかのプロトマーの状況（すなわち、ＣＸＣＲ４とＨＡ－ＶＣの状況、またはＡＤＲＢ２とＨＡ－ＶＣの状況）での増強される下流シグナル伝達、例えば増強されるカルシウム動員の非存在、及び（２）ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの状況での増強される下流シグナル伝達、例えば増強されるカルシウム動員の存在がなければならない。プロトマーの状況及びＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの状況のどちらにおいても、細胞を刺激するために用いた（単剤としての、またはＡＤＲＢ２作動薬との組合せでの）ＣＸＣＬ１２の濃度、及び細胞を刺激するために用いた（単剤としての、またはＣＸＣＬ１２との組合せでの）ＡＤＲＢ２作動薬（ＡＤＲＢ２に対する内因性作動薬か既知の選択的作動薬かのいずれか）の濃度は独立にＥＣ５０濃度の１００倍以下の濃度である。例えば、細胞を刺激するために利用した（単剤としての、またはＡＤＲＢ２作動薬との組合せでの）ＣＸＣＬ１２の濃度は、（ＣＸＣＲ４に対するおおよそのＥＣ５０濃度である）１５ｎＭの濃度であった。
本明細書に開示のとおり、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在／実在を判定する際に３つのうちの基準３を（ヘテロマー選択的試薬がヘテロマー特異的特性を変化させるか否かに関して）満たすか否かについて立証するためには、３つのうちの基準１及び３つのうちの基準２を満たす対象由来細胞を拮抗薬（ＣＸＣＲ４拮抗薬、ＡＤＲＢ２拮抗薬またはＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー拮抗薬）の存在下に置き、例えば、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞を細胞増殖させる。
一部の実施形態では、本明細書に開示のとおりの処置方法、抑制方法、医薬組成物、または医薬キットは、細胞におけるＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の会合が、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーとみなされるための以下を含む基準または特徴のうちの少なくとも２つを満たすことを確立することを含む、またはそれに依拠する：１）判定を以下：共内在化アッセイ、共局在化アッセイ、インサイチューハイブリダイゼーション、免疫組織化学、免疫電子顕微鏡法、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベル、近接度に基づくアッセイ、共免疫沈降アッセイもしくは蛍光動物アッセイのうちの１つ以上により行った場合に、細胞内のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用していること；２）カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ａ）ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に細胞内の個々のプロトマーの状況においてＣＸＣＲ４またはＡＤＲＢ２かのいずれかが、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかもしくはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらし、ｂ）ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時にＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と比べて増強されるカルシウム動員を呈するような、増強されるカルシウム動員量；または３）ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー選択的試薬が、ｉ）対象由来細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる、ｉｉ）対象由来細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる、ｉｉｉ）ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞のヘテロマー特異的特性を変化させる、もしくはｉｖ）ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の細胞進行を減少させること（例えば、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）のがん進行の減少、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の細胞増殖の減少、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の細胞遊走の減少、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の転移の減少、及び／または当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の血管新生の減少）。一部の実施形態では、以下の方法のうちの少なくとも１つにより判定するとき、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー選択的試薬は対象由来細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる：ＰＬＡ、放射性リガンド結合アッセイ、［３５Ｓ］ＧＴＰ－γＳ結合アッセイ、カルシウムアッセイ、ｃＡＭＰアッセイ、ＧＴＰアーゼアッセイ、ＰＫＡ活性化、ＥＲＫ１／２及び／またはＡｋｔ／ＰＫＢリン酸化アッセイ、Ｓｒｃ及びＳＴＡＴ３リン酸化アッセイ、ＣＲＥレポーターアッセイ、ＮＦＡＴ－ＲＥレポーターアッセイ、ＳＲＥレポーターアッセイ、ＳＲＦ－ＲＥレポーターアッセイ、分泌型アルカリホスファターゼアッセイ、イノシトール１－リン酸産生アッセイ、アデニリルシクラーゼ活性アッセイ、標的遺伝子発現のＲＴ－ＰＣＲによる、ＲＴ－ｑＰＣＲによる、ＲＮＡｓｅｑによる、次世代シーケンシング（ＮＧＳ）による、またはマイクロアレイによる分析。一部の実施形態では、以下の方法のうちの少なくとも１つにより判定するとき、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー選択的試薬は、対象由来細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる：ＰＬＡ、放射性リガンド結合アッセイ、［３５Ｓ］ＧＴＰ－γＳ結合アッセイ、カルシウムアッセイ、ｃＡＭＰアッセイ、ＧＴＰアーゼアッセイ、ＰＫＡ活性化、ＥＲＫ１／２及び／またはＡｋｔ／ＰＫＢリン酸化アッセイ、Ｓｒｃ及びＳＴＡＴ３リン酸化アッセイ、ＣＲＥレポーターアッセイ、ＮＦＡＴ－ＲＥレポーターアッセイ、ＳＲＥレポーターアッセイ、ＳＲＦ－ＲＥレポーターアッセイ、ＮＦ－ｋＢ－ＲＥレポーターアッセイ、分泌型アルカリホスファターゼアッセイ、イノシトール１－リン酸産生アッセイ、アデニリルシクラーゼ活性アッセイ、標的遺伝子発現のＲＴ－ＰＣＲによる、ＲＴ－ｑＰＣＲによる、ＲＮＡｓｅｑによる、またはマイクロアレイによる分析。一部の実施形態では、以下の方法のうちの少なくとも１つにより判定するとき、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー選択的試薬は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞のヘテロマー特異的特性を変化させる：がん細胞の増殖、遊走、浸潤及び薬物耐性（生存）に関するアッセイ、免疫細胞機能の調節、血管新生、脈管形成、転移、薬剤抵抗性、組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）、及びがん細胞－腫瘍微小環境（ＴＭＥ）相互作用。例えば、一部の実施形態では、本明細書に開示のとおりの処置方法、抑制方法、医薬組成物、または医薬キットは、細胞におけるＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の会合が、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーとみなされるための以下を含む基準または特徴のうちの少なくとも２つを満たすことを確立することを含む、またはそれに依拠する：１）判定を以下：共内在化アッセイ、二分子蛍光補完（ＢｉＦＣ）、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベル、または近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）のうちの１つ以上により行った場合に、細胞内のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用していること；２）カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ａ）ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に細胞内の個々のプロトマーの状況においてＣＸＣＲ４またはＡＤＲＢ２のいずれかが、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかもしくはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらし、ｂ）ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時にＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、ＣＸＣＬ１２かＡＤＲＢ２作動薬かのいずれかによる単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と比べて増強されるカルシウム動員を呈するような、増強されるカルシウム動員量；または３）ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー選択的試薬が、ｉ）対象由来細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる、ｉｉ）対象由来細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる、ｉｉｉ）ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞のヘテロマー特異的特性を変化させる、もしくはｉｖ）当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象のがん進行を減少させること（例えば、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）のがん進行の減少、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の細胞増殖の減少、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の細胞遊走の減少、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の転移の減少、及び／または当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の血管新生の減少）。一部の実施形態では、本明細書に開示のとおりの処置方法、抑制方法、医薬組成物、または医薬キットは、細胞におけるＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の会合が、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーとみなされるための基準１及び２を満たすことを確立することを含む、またはそれに依拠する。一部の実施形態では、本明細書に開示のとおりの処置方法、抑制方法、医薬組成物、または医薬キットは、細胞におけるＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の会合が、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーとみなされるための基準１及び３を満たすことを確立することを含む、またはそれに依拠する。一部の実施形態では、本明細書に開示のとおりの処置方法、抑制方法、医薬組成物、または医薬キットは、細胞におけるＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の会合が、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーとみなされるための基準２及び３を満たすことを確立することを含む、またはそれに依拠する。一部の実施形態では、本明細書に開示のとおりの処置方法、抑制方法、医薬組成物、または医薬キットは、細胞におけるＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の会合が、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーとみなされるための基準１、２及び３を満たすことを確立することを含む、またはそれに依拠する。
本明細書に開示のとおり、３つの基準のうちの少なくとも２つを満たすＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーは、増強される下流シグナル伝達を有し得る、引き起こし得る、または生じさせ得る。増強される下流シグナル伝達は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに、例えば、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのアゴニズムに、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４アゴニズムに、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２アゴニズムに、及び／またはＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４アゴニズム及びＡＤＲＢ２アゴニズムに起因し得る。一部の実施形態では、増強される下流シグナル伝達は、ＣＸＣＲ４、ＡＤＲＢ２、またはＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの下流であり得る。一部の実施形態では、増強される下流シグナル伝達は、それぞれ個々のプロトマーの状況でのＣＸＣＲ４プロトマーまたはＡＤＲＢ２プロトマーからの下流シグナル伝達と比べて、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーからのものであり得る。一部の実施形態では、増強される下流シグナル伝達は、それぞれ個々のプロトマーの状況でのＣＸＣＲ４プロトマーからの下流シグナル伝達と比べて、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーからのものであり得る。一部の実施形態では、増強される下流シグナル伝達は、それぞれ個々のプロトマーの状況でのＡＤＲＢ２プロトマーからの下流シグナル伝達と比べて、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーからのものであり得る。一部の実施形態では、増強される下流シグナル伝達は、それぞれ個々のプロトマーの状況でのＣＸＣＲ４プロトマー及びＡＤＲＢ２プロトマーからの下流シグナル伝達と比べて、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーからのものであり得る。当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達は、一部の実施形態では、がん対象において抑制され得、例えば、対象のがん細胞において抑制され得る。一部の実施形態では、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達は、増強されるカルシウム動員量（または相乗的なカルシウム動員の量）であり得るが、これは、細胞内Ｃａ２＋アッセイ、例えばカルシウム動員アッセイにより決定され得る。
本明細書に開示のとおり、３つの基準のうちの少なくとも２つを満たすＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーは、増強される下流シグナル伝達を有し得る、引き起こし得る、または生じさせ得るが、その際、その増強される下流シグナル伝達は、増強されるカルシウム動員量である。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強されるカルシウム動員量は、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時にカルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの当該細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも少なくとも１０％多いカルシウム動員量であり得る。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強されるカルシウム動員量は、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時にカルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの当該細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも少なくとも１０％多い相乗的なカルシウム動員の量であり得る。例えば、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強されるカルシウム動員量（または相乗的なカルシウム動員の量）は、ＣＸＣＬ１２及び選択的ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時にカルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの当該細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも少なくとも２０％多い、少なくとも３０％多い、少なくとも４０％多い、少なくとも５０％多い、少なくとも７５％多い、少なくとも９０％多い、少なくとも１００％多い、少なくとも１５０％多い、または少なくとも２００％多いカルシウム動員量であり得る。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強されるカルシウム動員量（または相乗的なカルシウム動員の量）は、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時にカルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの当該細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも１０～１００％多いカルシウム動員量であり得、例えば、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時にカルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの当該細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも２５～１００％多い、５０～１００％多い、７５～１００％多い、または１００～２００％多いものであり得るカルシウム動員量であり得る。
一部の実施形態では、本明細書に開示のとおりの処置方法、抑制方法、医薬組成物、または医薬キットによれば、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーは、３つの基準のうちの少なくとも２つを満たし、それにより、増強される下流シグナル伝達を有する、引き起こす、または生じさせるが、その際、その増強される下流シグナル伝達は、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ａ）ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に細胞内の個々のプロトマーの状況においてＣＸＣＲ４またはＡＤＲＢ２のいずれかが、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかまたはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらし、ｂ）ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時にＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と比べて増強されるカルシウム動員を呈するような、増強されるカルシウム動員量である。例えば、一部の実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達は、ｉ）カルシウム動員アッセイにより決定した場合に細胞内の個々のプロトマーの状況でのプロトマーＣＸＣＲ４またはＡＤＲＢ２からのカルシウム動員が非相乗的であり、ｉｉ）カルシウム動員アッセイにより決定した場合に細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーからのカルシウム動員が相乗的であるような、増強されるカルシウム動員量である。一部の実施形態では、個々のプロトマーの状況は、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、ａ）個々のプロトマーＡＤＲＢ２の非存在下での細胞内の個々のプロトマーＣＸＣＲ４、またはｂ）個々のプロトマーＣＸＣＲ４の非存在下での細胞内の個々のプロトマーＡＤＲＢ２が、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかまたはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらすものであり得る。一部の実施形態では、個々のプロトマーの状況は独立に、ａ）個々のプロトマーＡＤＲＢ２の非存在下での細胞内の個々のプロトマーＣＸＣＲ４、及びｂ）個々のプロトマーＣＸＣＲ４の非存在下での細胞内の個々のプロトマーＡＤＲＢ２が、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかまたはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらすものであり得る。例えば、一部の実施形態では、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時にＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーは、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの当該細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも多いカルシウム動員量をもたらし得る。
がんに罹患している対象の細胞中のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達の抑制方法であって、対象に：（ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び（ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み；その際、（ｉ）増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因し；かつ（ｉｉ）投与される阻害剤の組合せが、がん対象において当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、当該方法を本明細書において提供する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象におけるがんの処置方法であって、対象に：（ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び（ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み；その際、（ｉ）増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因し；かつ（ｉｉ）投与される阻害剤の組合せが、がん対象において当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、当該方法を本明細書において提供する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象におけるがんの処置方法であって、（ａ）対象の細胞がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを決定し、その際、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因すること；及び（ｂ）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するならば、そのがん対象に：（ｉ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び（ｉｉ）ＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含む、当該方法を本明細書において提供する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、（１）対象がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有するか否かを、対象から生体試料を得るか、または得ていること；及び（ｉ）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否か；または（ｉｉ）ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが：対象由来細胞（複数可）において当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性もしくは機能を変化させる否か；当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる否か；もしくは当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象においてがんの進行を減少させるか否かを決定するために、生体試料でアッセイを実行するか、または実行していることにより決定すること；ならびに（２）対象が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有するならば、そのがん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに（３）対象が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有さなければ、そのがん対象に、ブリキサフォルまたはＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含む、当該方法を本明細書において提供する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、（１）対象がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有するか否かを、対象から生体試料を得るか、または得ていること；及び（ｉ）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否か；または（ｉｉ）ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが：対象由来細胞（複数可）において当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性もしくは機能を変化させる否か；当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる否か；もしくは当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象においてがんの進行を減少させるか否かを決定するために、生体試料でアッセイを実行するか、または実行していることにより決定すること；ならびに（２）対象が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有するならば、そのがん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに（３）対象が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有さなければ、そのがん対象に、ブリキサフォルまたはＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含み、その際、（ａ）ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該細胞を有する対象におけるがんの進行が、がん対象へのブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せの投与時に、ブリキサフォルまたはＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤の投与と比べて５～１００％の範囲でより多く減少し；（ｂ）ブリキサフォルの有効性が、ＡＤＲＢ２阻害剤との組合せでＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該細胞を有する対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合のブリキサフォルの有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇し；及び／または（ｃ）ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性が、ブリキサフォルとの組合せでＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該細胞を有する対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合のＡＤＲＢ２阻害剤の有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇する、当該方法を本明細書において提供する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、（１）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを、対象から生体試料を得るか、または得ていること、及び当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが対象の細胞に存在するか否かを決定するために生体試料でアッセイを実行するか、または実行していることにより決定し；その際、生体試料で実行されるアッセイが共内在化アッセイ、共局在化アッセイ、インサイチューハイブリダイゼーション、免疫組織化学、免疫電子顕微鏡法、近接度に基づくアッセイ、共免疫沈降アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、ＲＮＡｓｅｑ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、マイクロアレイ、または蛍光動物アッセイのうちの１つもしくは複数であるか、または１つもしくは複数を含むこと；ならびに（２）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するならば、そのがん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに（３）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有しなければ、そのがん対象に、ブリキサフォルまたはＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含む、当該方法を本明細書において提供する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、（１）対象の細胞がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを、対象から生体試料を得るか、もしくは得ていること、及び当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが対象の細胞に存在するか否かを決定するために生体試料でアッセイを実行するか、もしくは実行していることにより決定し；その際、生体試料で実行されるアッセイが共内在化アッセイ、共局在化アッセイ、インサイチューハイブリダイゼーション、免疫組織化学、免疫電子顕微鏡法、近接度に基づくアッセイ、共免疫沈降アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、ＲＮＡｓｅｑ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、マイクロアレイ、または蛍光動物アッセイのうちの１つもしくは複数であるか、または１つもしくは複数を含むこと；ならびに（２）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するならば、そのがん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに（３）対象の細胞が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有しなければ、そのがん対象に、ブリキサフォルまたはＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含み、その際、（ａ）ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該細胞を有する対象におけるがんの進行が、がん対象へのブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せの投与時に、ブリキサフォルまたはＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤の投与と比べて５～１００％の範囲でより多く減少し；（ｂ）ブリキサフォルの有効性が、ＡＤＲＢ２阻害剤との組合せでＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該細胞を有する対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合のブリキサフォルの有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇し；及び／または（ｃ）ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性が、ブリキサフォルとの組合せでＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該細胞を有する対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合のＡＤＲＢ２阻害剤の有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇する、当該方法を本明細書において提供する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象においてがんを処置する際に使用するための医薬キットであって、（ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び（ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤を含み；その際、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、当該医薬キットを本明細書において提供する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象においてがんを処置する際に使用するための医薬組成物であって、（ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；（ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤；及び（ｃ）薬学的に許容される担体を含み、その際、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、当該医薬組成物を本明細書において提供する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
（ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；（ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤；及び（ｃ）薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を本明細書において提供する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達の抑制方法であって、細胞に：（ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び（ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み；その際、（ｉ）増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因し；かつ（ｉｉ）ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤との接触が、細胞における当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、当該方法を本明細書において提供する。ある特定の実施形態では、当該方法はさらに、細胞がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを決定することを含む。具体的な実施形態では、細胞は対象の細胞である。具体的な実施形態では、対象の細胞はがん細胞である。具体的な実施形態では、細胞はがん細胞である。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
細胞においてＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を抑制する際に使用するための医薬キットであって、（ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び（ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤を含み；その際、（ｉ）増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、当該医薬キットを本明細書において提供する。具体的な実施形態では、細胞は対象の細胞である。具体的な実施形態では、対象の細胞はがん細胞である。具体的な実施形態では、細胞はがん細胞である。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
細胞においてＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を抑制する際に使用するための医薬組成物であって、（ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；（ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤及び（ｃ）薬学的に許容される担体を含み；その際、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、当該医薬組成物を本明細書において提供する。具体的な実施形態では、細胞は対象の細胞である。具体的な実施形態では、対象の細胞はがん細胞である。具体的な実施形態では、細胞はがん細胞である。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物はさらに、がん対象においてＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在を検出することを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法及び使用はさらに、がん対象においてＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを同定することを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法及び使用はさらに、対象から生体試料を得ることを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法及び使用はさらに、当該対象から得られた生体試料でアッセイを行うことを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法及び使用はさらに、（ｉ）がん対象から生体試料を得ること、または得ていること；（ｉｉ）がん対象から得られた生体試料においてＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在、アイデンティティ、または存在及びアイデンティティを決定するための診断アッセイを行うこと、または行っていること；ならびに（ｉｉｉ）ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を抑制するために、ブリキサフォルと組み合わせて投与するためのＡＤＲＢ２阻害剤を選択することを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法及び使用はさらに、対象の細胞がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを決定すること、対象から得られた生体試料においてアッセイを実行することを含むことを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法及び使用はさらに、対象の細胞がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを決定すること、対象から生体試料を得ることを含むこと、及び当該対象から得られた生体試料においてアッセイを実行することを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法及び使用は、当該対象から得られた生体試料がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有することを含む。一部の実施形態では、対象の生体試料は生体液試料である。一部の実施形態では、生体液試料は血液試料、血漿試料、唾液試料、脳脊髄液試料、眼液試料、または尿試料である。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法及び使用はさらに、液体生検を生体液試料で実行することを含む。一部の実施形態では、対象の生体試料は生物学的組織試料である。一部の実施形態では、生物学的組織試料は臓器組織試料、骨組織試料、または腫瘍組織試料である。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法及び使用はさらに、組織試料アッセイを生物学的組織試料で実行することを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法及び使用は、対象の細胞がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有することを含む。一部の実施形態では、細胞はがん細胞である。一部の実施形態では、対象の細胞はがん細胞である。一部の実施形態では、対象は患者である。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物はさらに、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、以下の特徴：
（１）細胞内のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用していること；（２）増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因すること；及び／または（３）ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが：（ｉ）対象由来細胞（複数可）におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる；（ｉｉ）対象由来細胞（複数可）におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる；（ｉｉｉ）ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる；及び／または（ｉｖ）当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象においてがん進行を減少させること
のうちの２つ以上を有することを含む。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：細胞内のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用していることを有すると特徴づけられることを含む。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法及び使用はさらに、細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２構成要素の共局在化ならびに直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介しての物理的相互作用を同定または決定するためのアッセイを実行することを含む。具体的な実施形態では、細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素の共局在化及び物理的相互作用を決定するアッセイには、共内在化アッセイ、共局在化アッセイ、インサイチューハイブリダイゼーション、免疫組織化学、免疫電子顕微鏡法、近接度に基づくアッセイ、共免疫沈降アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、ＲＮＡｓｅｑ、ＲＴ－ＰＣＲ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、ＣＸＣＲ４の発現レベル、ＡＤＲＢ２の発現レベル、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベル、マイクロアレイ、または蛍光動物アッセイのうちの１つまたは複数が含まれる。具体的な実施形態では、アッセイは共内在化アッセイである。具体的な実施形態では、アッセイは共局在化アッセイである。具体的な実施形態では、アッセイはインサイチューハイブリダイゼーションアッセイである。具体的な実施形態では、アッセイは共免疫沈降アッセイである。具体的な実施形態では、アッセイは近接度に基づくアッセイである。具体的な実施形態では、近接度に基づくアッセイは、共鳴エネルギー移動（ＲＥＴ）、生物発光ＲＥＴ（ＢＲＥＴ）、蛍光ＲＥＴ（ＦＲＥＴ）、時間分解蛍光ＲＥＴ（ＴＲ－ＦＲＥＴ）、抗体利用ＦＲＥＴ、リガンド利用ＦＲＥＴ、二分子蛍光補完（ＢｉＦＣ）、または近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）であるか、またはそれを含む。具体的な実施形態では、ＴＲ－ＦＲＥＴはリガンド利用ＴＲ－ＦＲＥＴである。具体的な実施形態では、ＴＲ－ＦＲＥＴは抗体利用ＴＲ－ＦＲＥＴである。具体的な実施形態では、アッセイは二分子蛍光補完（ＢｉＦＣ）である。具体的な実施形態では、アッセイは近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）である。具体的な実施形態では、アッセイは酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）である。具体的な実施形態では、アッセイはフローサイトメトリーアッセイである。具体的な実施形態では、アッセイは、ＣＸＣＲ４の発現レベル、ＡＤＲＢ２の発現レベル、及び／またはＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、アッセイは、ＲＮＡｓｅｑを介してＣＸＣＲ４の発現レベル、ＡＤＲＢ２の発現レベル、及び／またはＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、アッセイは、ＲＴ－ＰＣＲを介してＣＸＣＲ４の発現レベル、ＡＤＲＢ２の発現レベル、及び／またはＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、アッセイは、ＲＴ－ｑＰＣＲを介してＣＸＣＲ４の発現レベル、ＡＤＲＢ２の発現レベル、及び／またはＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、アッセイはマイクロアレイアッセイである。具体的な実施形態では、アッセイは蛍光動物アッセイである。具体的な実施形態では、アッセイは、当該対象から得られた生体試料におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在を決定する。具体的な実施形態では、アッセイは、対象におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在を決定する。具体的な実施形態では、アッセイは、対象の細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在を決定する。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因することを有すると特徴づけられることを含む。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーは、増強される下流シグナル伝達をもたらす。具体的な実施形態では、増強される下流シグナル伝達は、当該対象の細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在に起因する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーは、対象の細胞において増強される下流シグナル伝達をもたらす。具体的な実施形態では、増強される下流シグナル伝達はＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのアゴニズムに起因する。具体的な実施形態では、増強される下流シグナル伝達は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４アゴニズムに起因する。具体的な実施形態では、増強される下流シグナル伝達は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２アゴニズムに起因する。具体的な実施形態では、増強される下流シグナル伝達は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４アゴニズム及びＡＤＲＢ２アゴニズムに起因する。具体的な実施形態では、増強される下流シグナル伝達は、ＣＸＣＲ４、ＡＤＲＢ２、またはＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの下流である。具体的な実施形態では、増強される下流シグナル伝達はＣＸＣＲ４の下流である。具体的な実施形態では、増強される下流シグナル伝達はＡＤＲＢ２の下流である。具体的な実施形態では、増強される下流シグナル伝達はＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの下流である。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達は、それぞれ個々のプロトマーの状況におけるＣＸＣＲ４プロトマーまたはＡＤＲＢ２プロトマーからの下流シグナル伝達と比べてのものである。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達は、個々のプロトマーの状況におけるＣＸＣＲ４プロトマーからの下流シグナル伝達と比べてのものである。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達は、個々のプロトマーの状況におけるＡＤＲＢ２プロトマーからの下流シグナル伝達と比べてのものである。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達は、それぞれ個々のプロトマーの状況におけるＣＸＣＲ４プロトマー及びＡＤＲＢ２プロトマーからの下流シグナル伝達と比べてのものである。具体的な実施形態では、増強される下流シグナル伝達は、増強されるカルシウム動員量である。具体的な実施形態では、増強される応答は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強されるがん進行である。具体的な実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される細胞増殖である。具体的な実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される細胞遊走である。具体的な実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される転移である。具体的な実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される腫瘍成長である。具体的な実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される血管新生である。具体的な実施形態では、細胞（複数可）は、がん細胞（複数可）である。具体的な実施形態では、細胞（複数可）は、対象由来細胞（複数可）である。具体的な実施形態では、細胞（複数可）は、対象から得られた生体試料に由来する。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因することを有すると特徴づけられ；増強されるカルシウム動員量が細胞内Ｃａ２＋アッセイにより決定されることを含む。具体的な実施形態では、細胞内Ｃａ２＋アッセイは、カルシウム動員アッセイである。具体的な実施形態では、カルシウム動員アッセイは、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが増強される下流シグナル伝達をもたらすことを決定する。具体的な実施形態では、カルシウム動員アッセイは、増強される下流シグナル伝達がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在に起因することを決定する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーは、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ａ）ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に細胞内の個々のプロトマーの状況においてＣＸＣＲ４またはＡＤＲＢ２のいずれかが、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかまたはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらし；かつｂ）ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時にＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と比べて増強されるカルシウム動員を呈するような、カルシウム動員の量の増強を示す。具体的な実施形態では、細胞内の個々のプロトマーの状況におけるプロトマーＣＸＣＲ４またはＡＤＲＢ２からのカルシウム動員は、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、非相乗的であり；かつ細胞内のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーからのカルシウム動員は、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、相乗的である。具体的な実施形態では、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、個々のプロトマーの状況において：ａ）個々のプロトマーＡＤＲＢ２の非存在下での細胞内の個々のプロトマーＣＸＣＲ４、またはｂ）個々のプロトマーＣＸＣＲ４の非存在下での細胞内の各個々のプロトマーＡＤＲＢ２は、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかまたはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらす。具体的な実施形態では、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、個々のプロトマーの状況において、ａ）個々のプロトマーＡＤＲＢ２の非存在下での細胞内の個々のプロトマーＣＸＣＲ４、及びｂ）個々のプロトマーＣＸＣＲ４の非存在下での細胞内の各個々のプロトマーＡＤＲＢ２は独立に、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬かのいずれかによる単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかまたはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらす。具体的な実施形態では、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激は、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの当該細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも多いカルシウム動員量をもたらす。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの共刺激に起因するカルシウム動員量は、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員の合計と比べて増強されるカルシウム動員量である。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強されるカルシウム動員量は、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの当該細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも多い、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時のカルシウム動員量である。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強されるカルシウム動員量は、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの当該細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも少なくとも１０％多い、少なくとも２０％多い、少なくとも３０％多い、少なくとも４０％多い、少なくとも５０％多い、少なくとも７５％多い、または少なくとも９０％多い、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時のカルシウム動員量である。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強されるカルシウム動員量は、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの当該細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも少なくとも１００％多い、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時のカルシウム動員量である。具体的な実施形態では、増強されるカルシウム動員量は、相乗的なカルシウム動員の量である。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞からの相乗的なカルシウム動員の量は、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、ＣＸＣＬ１２またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの当該細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも少なくとも１０％多い、少なくとも２０％多い、少なくとも３０％多い、少なくとも４０％多い、少なくとも５０％多い、少なくとも７５％多い、または少なくとも９０％多い、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時のカルシウム動員量である。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：増強される応答（または増強される下流シグナル伝達）が当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの共刺激などの当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの刺激に起因することを有すると特徴づけられることを含む。ある特定の実施形態では、増強される応答（または増強される下流シグナル伝達）は、増強されるカルシウム動員量である。ある特定の実施形態では、カルシウム動員は、細胞内Ｃａ２＋アッセイにより決定される。具体的な実施形態では、細胞内Ｃａ２＋アッセイはカルシウム動員アッセイである。ある特定の実施形態では、増強される応答は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強されるがん進行である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される細胞増殖である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される細胞遊走である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される転移である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される腫瘍成長である。ある特定の実施形態では、増強されるがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する対象において増強される血管新生である。ある特定の実施形態では、細胞（複数可）は、がん細胞（複数可）である。ある特定の実施形態では、細胞（複数可）は、対象に由来する。ある特定の実施形態では、細胞（複数可）は、対象から得られた生体試料に由来する。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、（１）ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが対象由来細胞（複数可）におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる；（２）ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが対象由来細胞（複数可）におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる；（３）ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せがＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる；ならびに（４）ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）のがん進行を減少させる、からなる群から選択される特徴の１つまたは複数を有すると特徴づけられることを含む。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーは、ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが対象由来細胞（複数可）におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させると特徴づけられる。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーは、ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが対象由来細胞（複数可）におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させると特徴づけられる。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーは、ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せがＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させると特徴づけられる。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーは、ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）のがん進行を減少させると特徴づけられる。具体的な実施形態では、減少するがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）のがん進行の減少を含む。具体的な実施形態では、減少するがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の細胞増殖の減少を含む。具体的な実施形態では、減少するがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の細胞遊走の減少を含む。具体的な実施形態では、減少するがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の転移の減少を含む。具体的な実施形態では、減少するがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の血管新生の減少を含む。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：ＣＸＣＲ４作動薬またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの単独刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量と比べて多い量の下流ＥＲＫシグナル伝達がＣＸＣＲ４作動薬及びＡＤＲＢ２作動薬でのＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの共刺激に起因することを有すると特徴づけられることを含む。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ４作動薬及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量は、ＣＸＣＲ４作動薬での単独刺激に起因する量よりも多い。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ４作動薬及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量は、ＣＸＣＲ４作動薬での単独刺激に起因する量よりも少なくとも５％多い。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ４作動薬及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量は、ＣＸＣＲ４作動薬での単独刺激に起因する量よりも少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、または少なくとも９０％多い。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ４作動薬及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量は、ＣＸＣＲ４作動薬での単独刺激に起因する量よりも５～１５％、１０～２５％、２０～５０％、４０～７５％、または６０～１００％の範囲で多い。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ４作動薬及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量は、ＡＤＲＢ２作動薬での単独刺激に起因する量よりも多い。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ４作動薬及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量は、ＡＤＲＢ２作動薬での単独刺激に起因する量よりも少なくとも５％多い。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ４作動薬及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量は、ＡＤＲＢ２作動薬での単独刺激に起因する量よりも少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、または少なくとも９０％多い。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ４作動薬及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量は、ＡＤＲＢ２作動薬での単独刺激に起因する量よりも５～１５％、１０～２５％、２０～５０％、４０～７５％、または６０～１００％の範囲で多い。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４作動薬はＣＸＣＬ１２であり、ＡＤＲＢ２作動薬はサルメテロールである。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物は、投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが（ｉ）対象由来細胞（複数可）におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる；（ｉｉ）対象由来細胞（複数可）におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる；（ｉｉｉ）ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せがＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる；または（ｉｖ）当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象においてがん進行を減少させること含む。具体的な実施形態では、投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せは、対象由来細胞（複数可）におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる。具体的な実施形態では、投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せは、対象由来細胞（複数可）におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる。具体的な実施形態では、投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せは、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる。具体的な実施形態では、投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せは、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象においてがん進行を減少させる。具体的な実施形態では、減少するがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）のがん進行の減少を含む。具体的な実施形態では、減少するがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の細胞増殖の減少を含む。具体的な実施形態では、減少するがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の細胞遊走の減少を含む。具体的な実施形態では、減少するがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の転移の減少を含む。具体的な実施形態では、減少するがん進行は、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の血管新生の減少を含む。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物は、投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが、当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから、例えば、細胞における当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから、またはがん対象の細胞における当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーからなど、がん対象における当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制することを含む。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素は、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の個々のプロトマーを含む。一部の実施形態では、個々のプロトマーの状況においてＣＸＣＲ４またはＡＤＲＢ２のいずれかを含有する細胞は、それぞれ（ｉ）個々のプロトマーＡＤＲＢ２の存在もしくは非存在下で個々のプロトマーＣＸＣＲ４；または（ｉｉ）個々のプロトマーＣＸＣＲ４の存在もしくは非存在下で個々のプロトマーＡＤＲＢ２を含む。一部の実施形態では、個々のプロトマーの状況においてＣＸＣＲ４を含有する細胞は、個々のプロトマーＡＤＲＢ２の存在もしくは非存在下で個々のプロトマーＣＸＣＲ４を含む。具体的な実施形態では、個々のプロトマーの状況においてＣＸＣＲ４を含有する細胞は、個々のプロトマーＡＤＲＢ２の非存在下で当該個々のプロトマーＣＸＣＲ４を含む。具体的な実施形態では、個々のプロトマーの状況においてＣＸＣＲ４を含有する細胞は、個々のプロトマーＡＤＲＢ２の存在下で当該個々のプロトマーＣＸＣＲ４を含む。一部の実施形態では、個々のプロトマーの状況においてＡＤＲＢ２を含有する細胞は、個々のプロトマーＣＸＣＲ４の存在または非存在下で個々のプロトマーＡＤＲＢ２を含む。具体的な実施形態では、個々のプロトマーの状況においてＡＤＲＢ２を含有する細胞は、個々のプロトマーＣＸＣＲ４の非存在下で当該個々のプロトマーＡＤＲＢ２を含む。具体的な実施形態では、個々のプロトマーの状況においてＡＤＲＢ２を含有する細胞は、個々のプロトマーＣＸＣＲ４の存在下で当該個々のプロトマーＡＤＲＢ２を含む。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルであり、かつＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
一部の実施形態では、がんの進行は、当該対象への単一の阻害剤としてのＣＸＣＲ４阻害剤またはＡＤＲＢ２阻害剤の投与と比べて、阻害剤の組合せの投与時に相乗的に減少する。一部の実施形態では、阻害剤の組合せを投与したときのがんの進行の減少は、当該対象に単一の阻害剤としてＣＸＣＲ４阻害剤またはＡＤＲＢ２阻害剤を投与することにより達成される進行のレベルの減少の合計よりも大きい。一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該がん細胞を有する対象におけるがんの進行は、阻害剤の組合せの投与時に、当該対象への単一の阻害剤としてのＣＸＣＲ４阻害剤またはＡＤＲＢ２阻害剤の投与と比べて５～１００％の範囲でより多く減少する、例えば、阻害剤の組合せの投与時に、当該対象への単一の阻害剤としてのＣＸＣＲ４阻害剤またはＡＤＲＢ２阻害剤の投与と比べて５～１００％の範囲でより多く、１０～１００％多く、２０～１００％多く、３０～１００％多く、４０～１００％多く、５０～１００％多く、６０～１００％多く、７５～１００％多く、５～７５％多く、５～５０％多く、または５～２５％多く減少する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルである。具体的な実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。具体的な実施形態では、がんの進行は、腫瘍サイズのパーセンテージ変化により決定される。具体的な実施形態では、がんの進行は、１か月、２か月、３か月、６か月、１年、または２年の期間にわたる腫瘍サイズのパーセンテージ変化により決定される。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物では、ＣＸＣＲ４阻害剤の有効性は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該がん細胞を有する対象にＡＤＲＢ２阻害剤との組合せで投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合のＣＸＣＲ４阻害剤の有効性と比べて５～５０００％の範囲で上昇する、例えば、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該がん細胞を有する対象にＡＤＲＢ２阻害剤との組合せで投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合のＣＸＣＲ４阻害剤の有効性と比べて５～４５００％、５～４０００％、５～３５００％、５～３０００％、５～２５００％、５～２０００％、５～１７５０％、５～１５００％、５～１２５０％、５～１０００％、５～９００％、５～８００％、５～７００％、５～５００％、５～４００％、５～２５０％、５～２００％、５～１００％、５～７５％、５～５０％、５～４０％、５～３０％、５～２５％、１０００～３０００％、２０００～４０００％、３０００～５０００％、３５００～４５００％、４０００～５０００％、１００～２０００％、２００～２０００％、３００～２０００％、５００～２０００％、７５０～２０００％、１０００～２０００％、１２５０～２０００％、１５００～２０００％、５～１５００％、２５～１５００％、５０～１５００％、７５～１５００％、１００～１５００％、２００～１５００％、３００～１５００％、５００～１５００％、７５０～１５００％、１０００～１５００％、または１２５０～１５００％の範囲で上昇する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルである。具体的な実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。具体的な実施形態では、対象の細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに対するＣＸＣＲ４阻害剤の（例えばＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達の抑制における）有効性の上昇は、ＣＸＣＲ４阻害剤が単一の阻害剤として投与される場合のＩＣ５０値と比べての、ＣＸＣＲ４阻害剤がＡＤＲＢ２阻害剤との組合せで投与される場合のＩＣ５０値の変化により決定される。具体的な実施形態では、本明細書に開示のアッセイによるＣＸＣＲ４阻害剤のＩＣ５０値の決定は、１～１０μＭの範囲のＡＤＲＢ２阻害剤の濃度、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０μＭの濃度を利用することができる。具体的な実施形態では、本明細書に開示のアッセイによるＣＸＣＲ４阻害剤のＩＣ５０値の決定は、ＡＤＲＢ２に対してそのＩＣ９０濃度のＡＤＲＢ２阻害剤、例えば、１～１，０００ｎＭ、例えば、１～５００ｎＭ、１００～７５０ｎＭ、または６００～１，０００ｎＭの範囲の濃度のＡＤＲＢ２阻害剤、例えば、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、６００、７００、８００、９００、または１，０００ｎＭの濃度を利用することができる。
一部の実施形態では、本明細書において提供される処置方法、抑制方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物では、ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該がん細胞を有する対象にＣＸＣＲ４阻害剤との組合せで投与される場合、単一の阻害剤として投与される場合のＡＤＲＢ２阻害剤の有効性と比べて５～５０００％の範囲で上昇する、例えば、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する当該がん細胞を有する対象にＣＸＣＲ４阻害剤との組合せで投与される場合、単一の阻害剤として投与される場合のＡＤＲＢ２阻害剤の有効性と比べて５～４５００％、５～４０００％、５～３５００％、５～３０００％、５～２５００％、５～２０００％、５～１７５０％、５～１５００％、５～１２５０％、５～１０００％、５～９００％、５～８００％、５～７００％、５～５００％、５～４００％、５～２５０％、５～２００％、５～１００％、５～７５％、５～５０％、５～４０％、５～３０％、５～２５％、１０００～３０００％、２０００～４０００％、３０００～５０００％、３５００～４５００％、４０００～５０００％、１００～２０００％、２００～２０００％、３００～２０００％、５００～２０００％、７５０～２０００％、１０００～２０００％、１２５０～２０００％、１５００～２０００％、５～１５００％、２５～１５００％、５０～１５００％、７５～１５００％、１００～１５００％、２００～１５００％、３００～１５００％、５００～１５００％、７５０～１５００％、１０００～１５００％、または１２５０～１５００％の範囲で上昇する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルである。具体的な実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。具体的な実施形態では、対象の細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに対するＡＤＲＢ２阻害剤の（例えばＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達の抑制における）有効性の上昇は、ＡＤＲＢ２阻害剤が単一の阻害剤として投与される場合のＩＣ５０値と比べての、ＡＤＲＢ２阻害剤がＣＸＣＲ４阻害剤との組合せで投与される場合のＩＣ５０値の変化により決定される。具体的な実施形態では、具体的な実施形態では、本明細書に開示のアッセイによるＡＤＲＢ２阻害剤のＩＣ５０値の決定は、１～１０μＭの範囲のＣＸＣＲ４阻害剤の濃度、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０μＭの濃度を利用することができる。具体的な実施形態では、本明細書に開示のアッセイによるＡＤＲＢ２阻害剤のＩＣ５０値の決定は、ＣＸＣＲ４に対してそのＩＣ９０濃度のＣＸＣＲ４阻害剤、例えば、１～１，０００ｎＭ、例えば、１～５００ｎＭ、１００～７５０ｎＭ、または６００～１，０００ｎＭの範囲の濃度のＣＸＣＲ４阻害剤を、例えば、１０、２５、５０、１００、２５０、５００、６００、７００、８００、９００、または１，０００ｎＭの濃度で利用することができる。
一部の実施形態では、本明細書において提供される処置方法、抑制方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物は、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、その際、当該方法または使用は、がん対象におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を、単一の阻害剤投与と比べて５～２０００倍の範囲で抑制し、例えば、がん対象における当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を、単一の阻害剤投与と比べて５～１７５０倍、５～１５００倍、５～１２５０倍、５～１０００倍、５～９００倍、５～８００倍、５～７００倍、５～５００倍、５～４００倍、５～２５０倍、５～２００倍、５～１００倍、５～７５倍、５～５０倍、５～４０倍、５～３０倍、５～２５倍、１００～２０００倍、２００～２０００倍、３００～２０００倍、５００～２０００倍、７５０～２０００倍、１０００～２０００倍、１２５０～２０００倍、１５００～２０００倍、５～１５００倍、２５～１５００倍、５０～１５００倍、７５～１５００倍、１００～１５００倍、２００～１５００倍、３００～１５００倍、５００～１５００倍、７５０～１５００倍、１０００～１５００倍、または１２５０～１５００倍の範囲で抑制する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルである。具体的な実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
一部の実施形態では、本明細書において提供される処置方法、抑制方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物は、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、その際、当該方法または使用は、がん対象におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を、それぞれ個々のプロトマーの状況におけるＣＸＣＲ４プロトマーまたはＡＤＲＢ２プロトマーのいずれかからの下流シグナル伝達の抑制と比べて５～２０００倍の範囲で抑制し、例えば、がん対象における当該ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を、それぞれ個々のプロトマーの状況におけるＣＸＣＲ４プロトマーまたはＡＤＲＢ２プロトマーのいずれかからの下流シグナル伝達の抑制と比べて５～１７５０倍、５～１５００倍、５～１２５０倍、５～１０００倍、５～９００倍、５～８００倍、５～７００倍、５～５００倍、５～４００倍、５～２５０倍、５～２００倍、５～１００倍、５～７５倍、５～５０倍、５～４０倍、５～３０倍、５～２５倍、１００～２０００倍、２００～２０００倍、３００～２０００倍、５００～２０００倍、７５０～２０００倍、１０００～２０００倍、１２５０～２０００倍、１５００～２０００倍、５～１５００倍、２５～１５００倍、５０～１５００倍、７５～１５００倍、１００～１５００倍、２００～１５００倍、３００～１５００倍、５００～１５００倍、７５０～１５００倍、１０００～１５００倍、または１２５０～１５００倍の範囲で抑制する。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルである。具体的な実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
本明細書に開示の方法に従って、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する際に、及び／または本明細書に開示のアッセイに従ってＩＣ５０値を決定する際に有効か、または治療上有効かに関する阻害剤、または阻害剤の組合せの当初の試験及び評価では、１～１０μＭの範囲の濃度の阻害剤を（または組合せの阻害剤のそれぞれを１～１０μＭの範囲の濃度で）、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０μＭの濃度で利用することができる。阻害剤によるシグナルの抑制が、確定することができる測定値に十分とは認められなければ、より高い濃度の阻害剤を、ＩＣ５０値などの確定することができる測定値をより良好に評価するために使用することができる。阻害剤によるシグナルの抑制が非常に強ければ、より低い濃度の阻害剤を、ＩＣ５０値などの確定することができる測定値をより良好に評価するために使用することができる。
一部の実施形態では、本明細書において提供される方法は、疾患の処置、寛解、または予防を必要とする対象において疾患を処置する、寛解させる、または予防するための方法である。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法は、治療有効量の本明細書において提供される医薬組成物を対象に投与することを含んでよい。例えば、本明細書において提供される医薬組成物は、ＣＸＣＲ４阻害剤、ＡＤＲＢ２阻害剤、またはＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せと；薬学的に許容される担体とを含み得る。本発明の方法を使用して処置または予防することができる疾患には、限定されないが、がん、腫瘍、転移、及び／または血管新生が含まれる。例えば、一部の実施形態では、本明細書において提供される方法は、がん、腫瘍、及び／または微小環境の細胞がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを発現するがんまたは関連症状を処置するために有用である。一部の実施形態では、がんは、血液学的がんまたは固形腫瘍である。一部の実施形態では、がんは、再発性または難治性がんである。一部の実施形態では、がんは血液学的がんである。一部の実施形態では、血液学的がんは、リンパ腫、白血病、骨髄腫、及び多発性骨髄腫からなる群から選択される。一部の実施形態では、血液学的がんは、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病、急性単球性白血病、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、ホジキンリンパ腫、急性前骨髄球性白血病、慢性好酸球性白血病、及びバーキットリンパ腫からなる群から選択される。一部の実施形態では、本発明の方法を使用して処置する、寛解させる、または予防することができるがんまたは腫瘍の非限定的例には、消化管の腫瘍、例えば、乳癌、肺癌、肺の小細胞癌、肝細胞癌、脳癌、腎臓癌、膵臓癌または膵臓腺癌、卵巣癌、前立腺癌、黒色腫、リンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、腎細胞癌、軟部組織肉腫、胃腸癌、胃癌、結腸癌、結腸直腸癌、結腸直腸腺癌、膀胱腺癌、食道癌、ならびに胃、食道、咽喉、及び尿生殖路の腺癌が含まれる。一部の実施形態では、リンパ腫は、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、またはＮＫ細胞リンパ腫である。一部の実施形態では、リンパ腫は、再発性または難治性リンパ腫である。一部の実施形態では、リンパ腫は、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、活性化Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、濾胞性中心リンパ腫、形質転換リンパ腫、中分化型のリンパ球性リンパ腫、中間型リンパ球性リンパ腫（ＩＬＬ）、びまん性低分化リンパ球性リンパ腫（ＰＤＬ）、中心細胞性リンパ腫、びまん性核切れ込み小細胞型リンパ腫（ＤＳＣＣＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、マントル細胞リンパ腫、及び低悪性度濾胞性リンパ腫からなる群から選択される。一部の実施形態では、白血病は、（ａ）急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、急性単球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）、急性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病及び骨髄芽球、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、ならびに赤白血病からなる群から選択される急性白血病；（ｂ）慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病（慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）白血病；ＣＭＬ）、及び慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）からなる群から選択される慢性白血病；または（ｃ）慢性骨髄性単球性白血病（ＣＭＭＬ）、慢性好酸球性白血病、若年性骨髄性単球性白血病（ＪＭＭＬ）、真性多血症、ナチュラルキラー細胞白血病（ＮＫ白血病）、もしくはヘアリーセル白血病である。一部の実施形態では、がんは固形腫瘍である。一部の実施形態では、固形腫瘍は良性腫瘍またはがんである。一部の実施形態では、固形腫瘍は、癌腫または肉腫である。一部の実施形態では、固形腫瘍は、膵臓腺癌、膵臓管状腺癌、腎細胞癌、乳房腺癌、乳癌、乳房管状腺癌、卵巣漿液性腺癌、卵巣明細胞腺癌、卵巣粘液性嚢胞腺癌、子宮癌肉腫、子宮内膜腺癌、子宮内膜間質性肉腫、子宮内膜癌、胃管状腺癌、胃腺扁平上皮癌、多発性内分泌新形成、黒色腫、甲状腺癌、前立腺癌、肝細胞癌、肝臓内胆管癌、肺腺癌、小細胞肺癌、腺扁平上皮肺癌、悪性類上皮中皮腫、神経膠芽腫、髄芽細胞腫、神経膠星状細胞腫、肺胞横紋筋肉腫、及び骨肉腫からなる群から選択される。一部の実施形態では、固形腫瘍は、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、滑膜腫、中皮腫、悪性類上皮中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、胃癌、結腸直腸癌、食道癌、結腸癌、リンパ悪性病変、膵臓癌、膵臓腺癌、膵臓管状腺癌、乳癌、乳房腺癌、乳房管状腺癌、肺癌、小細胞肺癌、肺腺癌、腺扁平上皮肺癌、肺胞横紋筋肉腫、卵巣癌、卵巣明細胞腺癌、卵巣粘液性嚢胞腺癌、卵巣漿液性腺癌、前立腺癌、肝細胞癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌腫、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、髄様甲状腺癌、乳頭状甲状腺癌、甲状腺癌、褐色細胞腫、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支癌、胃腸癌、胃管状腺癌、胃腺扁平上皮癌、腎臓癌、肝臓内胆管癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛上皮腫、ウィルムス腫瘍、子宮癌肉腫、子宮内膜腺癌、子宮内膜間質性肉腫、子宮内膜癌、子宮頸癌、精巣腫瘍、精上皮腫、膀胱癌、黒色腫、多発性骨髄腫、多発性内分泌新形成、ＣＮＳ腫瘍、神経膠芽腫、神経膠星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽腫、神経鞘腫 頭蓋咽頭腫（ｃｒａｎｉｏｐｈａｒｙｏｇｉｏｍａ）、上衣細胞腫、松果体腫（ｐｉｎｅａｉｏｍａ）、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、及び脳転移からなる群から選択される。一部の実施形態では、固形腫瘍は、乳癌、肺癌、及び肝細胞癌腫からなる群から選択される。一部の実施形態では、固形腫瘍は乳癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は肺癌である。一部の実施形態では、固形腫瘍は肝細胞癌である。一部の実施形態では、がんの処置方法は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達の抑制方法である。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達の抑制方法は、がんの処置方法である。一部の実施形態では、がんはＣＸＣＲ４発現がんである。一部の実施形態では、がんはＡＤＲＢ２発現がんである。一部の実施形態では、がんはＣＸＣＲ４発現がん及びＡＤＲＢ２発現がんである。一部の実施形態では、対象におけるＣＸＣＲ４発現レベルは基準レベルよりも高い。一部の実施形態では、対象におけるＡＤＲＢ２発現レベルは基準レベルよりも高い。一部の実施形態では、対象におけるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルは、それぞれの基準レベルよりも高い。一部の実施形態では、細胞におけるＣＸＣＲ４発現レベルは基準レベルよりも高い。一部の実施形態では、細胞におけるＡＤＲＢ２発現レベルは基準レベルよりも高い。一部の実施形態では、細胞におけるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルはそれぞれの基準レベルよりも高い。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物はさらに、細胞における、対象における、または対象から得られた試料におけるＣＸＣＲ４遺伝子の発現レベルを決定することを含み、その際、発現レベルがＣＸＣＲ４遺伝子の基準レベルよりも高ければ、細胞、対象、または対象から得られた試料はＣＸＣＲ４発現がんを有すると決定される。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、細胞においてＣＸＣＲ４遺伝子の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、対象においてＣＸＣＲ４遺伝子の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、対象から得られた試料においてＣＸＣＲ４遺伝子の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、がんはＣＸＣＲ４発現がんである。具体的な実施形態では、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現レベルは基準レベルよりも高い。具体的な実施形態では、対象におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現レベルは基準レベルよりも高い。具体的な実施形態では、対象から得られた試料におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現レベルは基準レベルよりも高い。ＣＸＣＲ４遺伝子発現レベルが基準レベルよりも高い具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含む。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルである。具体的な実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物はさらに、細胞における、対象における、または対象から得られた試料におけるＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルを決定することを含み、その際、発現レベルがＡＤＲＢ２遺伝子の基準レベルよりも高ければ、細胞、対象、または対象から得られた試料はＡＤＲＢ２発現がんを有すると決定される。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、細胞においてＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、対象においてＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、対象から得られた試料においてＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、がんはＡＤＲＢ２発現がんである。具体的な実施形態では、細胞におけるＡＤＲＢ２遺伝子発現レベルは基準レベルよりも高い。具体的な実施形態では、対象におけるＡＤＲＢ２遺伝子発現レベルは基準レベルよりも高い。具体的な実施形態では、対象から得られた試料におけるＡＤＲＢ２遺伝子発現レベルは基準レベルよりも高い。ＡＤＲＢ２遺伝子発現レベルが基準レベルよりも高い具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含む。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルである。具体的な実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物はさらに、細胞における、対象における、または対象から得られた試料におけるＣＸＣＲ４遺伝子及びＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルを決定することを含み、その際、ＣＸＣＲ４遺伝子及びＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルがＣＸＣＲ４遺伝子及びＡＤＲＢ２遺伝子のそれぞれの基準レベルよりも高ければ、細胞、対象、または対象から得られた試料はＣＸＣＲ４発現及びＡＤＲＢ２発現がんを有すると決定される。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、細胞においてＣＸＣＲ４遺伝子及びＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、対象においてＣＸＣＲ４遺伝子及びＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、対象から得られた試料においてＣＸＣＲ４遺伝子及びＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、がんはＣＸＣＲ４発現及びＡＤＲＢ２発現がんである。具体的な実施形態では、細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子及びＡＤＲＢ２遺伝子発現レベルはそれぞれの基準レベルよりも高い。具体的な実施形態では、対象におけるＣＸＣＲ４遺伝子及びＡＤＲＢ２遺伝子発現レベルはそれぞれの基準レベルよりも高い。具体的な実施形態では、対象から得られた試料におけるＣＸＣＲ４遺伝子及びＡＤＲＢ２遺伝子発現レベルはそれぞれの基準レベルよりも高い。ＣＸＣＲ４遺伝子及びＡＤＲＢ２遺伝子発現レベルがそれぞれの基準レベルよりも高い具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含む。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルである。具体的な実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物はさらに、細胞における、対象における、または対象から得られた試料におけるＣＸＣＲ４タンパク質の発現レベルを決定することを含み、その際、発現レベルがＣＸＣＲ４タンパク質の基準レベルよりも高ければ、細胞、対象、または対象から得られた試料は、ＣＸＣＲ４発現がんを有すると決定される。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、細胞においてＣＸＣＲ４タンパク質の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、対象においてＣＸＣＲ４タンパク質の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、対象から得られた試料においてＣＸＣＲ４タンパク質の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、がんはＣＸＣＲ４発現がんである。具体的な実施形態では、細胞におけるＣＸＣＲ４タンパク質発現レベルは基準レベルよりも高い。具体的な実施形態では、対象におけるＣＸＣＲ４タンパク質発現レベルは基準レベルよりも高い。具体的な実施形態では、対象から得られた試料におけるＣＸＣＲ４タンパク質発現レベルは基準レベルよりも高い。ＣＸＣＲ４タンパク質発現レベルが基準レベルよりも高い具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含む。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルである。具体的な実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物はさらに、細胞における、対象における、または対象から得られた試料におけるＡＤＲＢ２タンパク質の発現レベルを決定することを含み、その際、発現レベルがＡＤＲＢ２タンパク質の基準レベルよりも高ければ、細胞、対象、または対象から得られた試料は、ＡＤＲＢ２発現がんを有すると決定される。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、細胞においてＡＤＲＢ２タンパク質の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、対象においてＡＤＲＢ２タンパク質の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、対象から得られた試料においてＡＤＲＢ２タンパク質の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、がんはＡＤＲＢ２発現がんである。具体的な実施形態では、細胞におけるＡＤＲＢ２タンパク質発現レベルは基準レベルよりも高い。具体的な実施形態では、対象におけるＡＤＲＢ２タンパク質発現レベルは基準レベルよりも高い。具体的な実施形態では、対象から得られた試料におけるＡＤＲＢ２タンパク質発現レベルは基準レベルよりも高い。ＡＤＲＢ２タンパク質発現レベルが基準レベルよりも高い具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含む。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルである。具体的な実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物はさらに、細胞における、対象における、または対象から得られた試料におけるＣＸＣＲ４タンパク質及びＡＤＲＢ２タンパク質の発現レベルを決定することを含み、その際、ＣＸＣＲ４タンパク質及びＡＤＲＢ２タンパク質の発現レベルがＣＸＣＲ４タンパク質及びＡＤＲＢ２タンパク質のそれぞれの基準レベルよりも高ければ、細胞、対象、または対象から得られた試料はＣＸＣＲ４発現及びＡＤＲＢ２発現がんを有すると決定される。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、細胞においてＣＸＣＲ４タンパク質及びＡＤＲＢ２タンパク質の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、対象においてＣＸＣＲ４タンパク質及びＡＤＲＢ２タンパク質の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、対象から得られた試料においてＣＸＣＲ４タンパク質及びＡＤＲＢ２タンパク質の発現レベルを決定する。具体的な実施形態では、がんはＣＸＣＲ４発現及びＡＤＲＢ２発現がんである。具体的な実施形態では、細胞におけるＣＸＣＲ４タンパク質及びＡＤＲＢ２タンパク質発現レベルはそれぞれの基準レベルよりも高い。具体的な実施形態では、対象におけるＣＸＣＲ４タンパク質及びＡＤＲＢ２タンパク質発現レベルはそれぞれの基準レベルよりも高い。具体的な実施形態では、対象から得られた試料におけるＣＸＣＲ４タンパク質及びＡＤＲＢ２タンパク質発現レベルはそれぞれの基準レベルよりも高い。ＣＸＣＲ４タンパク質及びＡＤＲＢ２タンパク質発現レベルがそれぞれの基準レベルよりも高い具体的な実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含む。具体的な実施形態では、ＣＸＣＲ４阻害剤はブリキサフォルである。具体的な実施形態では、ＡＤＲＢ２阻害剤はカルベジロールである。
一部の実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物（本明細書では時に「医薬製剤」と称される）は、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せと、薬学的に許容される担体とを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物は、ＣＸＣＲ４阻害剤と、薬学的に許容される担体とを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物は、ＡＤＲＢ２阻害剤と、薬学的に許容される担体とを含む。本発明の医薬組成物において使用することができる薬学的に許容される担体は、生理学的に許容される担体などの当技術分野で公知の標準的な医薬担体、添加剤または安定剤、例えば、リン酸緩衝生理食塩溶液、水及び乳剤、例えば、油性及び水性乳剤、ならびに様々な種類の湿潤剤のいずれかを含む。これらの医薬組成物は、処置を必要とする対象の標的領域にＣＸＣＲ４阻害剤、ＡＤＲＢ２阻害剤、またはＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを送達するために十分な液体単位剤形で、または任意の他の投薬形態として調製することができる。例えば、医薬組成物は、選択された投与様式、例えば、血管内、筋肉内、皮下、皮内、髄腔内などに適切な任意の手法で調製することができる。他の任意選択の成分、例えば、医薬品グレードの安定化剤、緩衝剤、防腐剤、添加剤などは当業者により容易に選択することができる。ｐＨ、等張性、安定性などに十分な考慮がなされている医薬組成物の調製は当技術分野における技能のレベルの範囲内である。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物において利用することができる本明細書において提供される医薬組成物は、（ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；（ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤；及び（ｃ）薬学的に許容される担体を含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物、またはそれを利用する本明細書において提供される使用方法は、ＡＤＲＢ２阻害剤が、ＡＤＲＢ２の拮抗薬、ＡＤＲＢ２のインバース作動薬、ＡＤＲＢ２の部分拮抗薬、ＡＤＲＢ２のアロステリック修飾因子、ＡＤＲＢ２の抗体、ＡＤＲＢ２の抗体断片、ＡＤＲＢ２のリガンド、または抗体－薬物コンジュゲートであることを含む。具体的な実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物、またはそれを利用する本明細書において提供される使用方法は、ＡＤＲＢ２阻害剤が拮抗薬ＡＤＲＢ２であることを含む。具体的な実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物、またはそれを利用する本明細書において提供される使用方法は、ＡＤＲＢ２阻害剤がインバース作動薬ＡＤＲＢ２であることを含む。具体的な実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物、またはそれを利用する本明細書において提供される使用方法は、ＡＤＲＢ２阻害剤が部分拮抗薬ＡＤＲＢ２であることを含む。具体的な実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物、またはそれを利用する本明細書において提供される使用方法は、ＡＤＲＢ２阻害剤がＡＤＲＢ２のアロステリック修飾因子であることを含む。具体的な実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物、またはそれを利用する本明細書において提供される使用方法は、ＡＤＲＢ２阻害剤がＡＤＲＢ２の抗体であることを含む。具体的な実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物、またはそれを利用する本明細書において提供される使用方法は、ＡＤＲＢ２阻害剤がＡＤＲＢ２の抗体断片であることを含む。具体的な実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物、またはそれを利用する本明細書において提供される使用方法は、ＡＤＲＢ２阻害剤がＡＤＲＢ２のリガンドであることを含む。具体的な実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物、またはそれを利用する本明細書において提供される使用方法は、ＡＤＲＢ２阻害剤が抗体－薬物コンジュゲートであることを含む。具体的な実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物、またはそれを利用する本明細書において提供される使用方法は、ＡＤＲＢ２阻害剤がアルプレノロール、アテノロール、ベタキソロール、ブプラノロール、ブトキサミン、カラゾロール、カルベジロール、ＣＧＰ １２１７７、シクロプロロール、ＩＣＩ １１８５５１、ＩＣＹＰ、ラベタロール、レボベタキソロール、レボブノロール、ＬＫ ２０４－５４５、メトプロロール、ナドロール、ＮＩＨＰ、ＮＩＰ、プロパフェノン、プロプラノロール、ソタロール、ＳＲ５９２３０Ａ、及びチモロールからなる群から選択されることを含む。具体的な実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物、またはそれを利用する本明細書において提供される使用方法は、ＡＤＲＢ２阻害剤がカルベジロールであることを含む。具体的な実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物、またはそれを利用する本明細書において提供される使用方法は、治療有効量のブリキサフォルを対象に投与することを含む。具体的な実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物、またはそれを利用する本明細書において提供される使用方法は、準治療有効量のブリキサフォルを対象に投与することを含む。具体的な実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物、またはそれを利用する本明細書において提供される使用方法は、治療有効量のＡＤＲＢ２阻害剤を対象に投与することを含む。具体的な実施形態では、本明細書において提供される医薬組成物、またはそれを利用する本明細書において提供される使用方法は、準治療有効量のＡＤＲＢ２阻害剤を対象に投与することを含む。
一部の実施形態では、本明細書において提供される抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物は、ブリキサフォルを、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物として投与することを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、ＡＤＲＢ２阻害剤を、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物として投与することを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを連続的に、併用して、または同時に投与することを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを、薬学的に許容される担体をさらに含む医薬組成物として投与することを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤を医薬組成物の組合せとして投与することを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、医薬組成物の組合せが（ａ）ブリキサフォル及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物；ならびに（ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物を含むことを含む。一部の実施形態では、本明細書において提供される方法または使用は、医薬組成物の組合せを連続的に、併用して、または同時に投与することを含む。
本明細書において提供されるＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を含有する医薬製剤、ＣＸＣＲ４阻害剤を含有する医薬製剤、ならびにＡＤＲＢ２阻害剤を含有する医薬製剤は、貯蔵のために、所望の純度を有する阻害剤を任意選択の生理学的に許容される最適な担体、添加剤または安定化剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１９９０）Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）と混合することにより凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製することができる。許容される担体、添加剤または安定化剤は、採用される投薬量及び濃度で受容者に対して非毒性であり、それには、緩衝剤、例えば、リン酸塩、クエン酸塩及び他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；保存剤、例えば塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えばメチルもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール；約１０残基未満の低分子量ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンもしくはリジン；単糖類、二糖類及び他の炭水化物、例えば、グルコース、マンノースもしくはデキストリン；ＥＤＴＡなどのキレート剤；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトール；塩形成性対イオン、例えばナトリウム；金属錯体、例えばＺｎ－タンパク質錯体；及び／または非イオン性界面活性剤、例えば、ＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれる。
本発明の様々な実施形態の活性に実質的に影響を与えない改変も、本明細書において提供される本発明の定義の内に含まれることは理解される。したがって、以下の実施例は本明細書に開示の本発明を例示するものであって、限定するものではないことが意図されている。
実施例１。ＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマー形成のＢｉＦＣアッセイによる評価
新規ＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマーを同定するために、黄色蛍光タンパク質ＶｅｎｕｓのＮ末端側断片（ＶＮ）と融合した１４３種のＧＰＣＲ、及びＶｅｎｕｓのＣ末端側断片（ＶＣ）と融合した１４７種のＧＰＣＲをコードする組換えアデノウイルスを調製した（例えば、Ｓｏｎｇ，Ｙ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ａｎ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ－ｂａｓｅｄ ｂｅｔａ－ａｒｒｅｓｔｉｎ ｂｉｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ａｓｓａｙ，Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ４４９，３２－４１；韓国特許第１０１０２９９７２Ｂ１号、２０１１年４月１２日発行；Ｙ．Ｂ．，（２０１２）“Ｇｌｏｂａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＧＰＣＲ ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ＡｄＢｉＦＣ ａｓｓａｙ，” Ａ Ｔｈｅｓｉｓ Ｓｕｂｍｉｔｔｅｄ ｉｎ Ｐａｒｔｉａｌ Ｆｕｌｆｉｌｌｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｄｅｇｒｅｅ ｏｆ Ｄｏｃｔｏｒ ｏｆ Ｐｈｉｌｏｓｏｐｈｙ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｅｏｕｌ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，１２６ ｐａｇｅｓを参照されたい）。二分子蛍光補完（ＢｉＦＣ）アッセイを用いてＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマーを同定し（図１）、その際、Ｖｅｎｕｓの２つの相補的なＶＮ及びＶＣ断片は、それらと融合している２つの異なるタンパク質の間の相互作用により両断片が十分に近接しているときにのみ、蛍光信号を再構成するものである（Ｈｕ，Ｃ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ａｍｏｎｇ ｂＺＩＰ ａｎｄ Ｒｅｌ ｆａｍｉｌｙ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｌｉｖｉｎｇ ｃｅｌｌｓ ｕｓｉｎｇ ｂｉｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ ９，７８９－７９８）。
Ｕ－２ ＯＳ細胞を９６ウェルプレートに播種し、ＣＸＣＲ４－ＶＮとＧＰＣＲｘ－ＶＣ、またはＣＸＣＲ４－ＶＣとＧＰＣＲｘ－ＶＮをコードするアデノウイルスをそれぞれ３０ＭＯＩで共形質導入し、ＧＰＣＲを２日間発現させた。細胞をヘキスト３３３４２で染色した後に、ＩＮ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｚｅｒ １０００を使用して１ウェルあたり３つの視野からＢｉＦＣ及び核画像を取得した。各ウェルからの約２００細胞の画像をＩＮ Ｃｅｌｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｅｒ ＴｏｏｌＢｏｘ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ，Ｗａｕｋｅｓｈａ，ＷＩ）内の多標的分析ソフトウェアにより解析した。細胞境界をヘキスト信号に基づいて目立たせ、細胞１個あたりの蛍光強度を測定した。バックグラウンドレベルよりも高い蛍光強度を有する細胞をＢｉＦＣ陽性細胞とみなした。極めて高い強度を示した死細胞は細胞計数から除外した。陽性細胞を判定し、陽性細胞計数比率（「ＢｉＦＣスコア」）を（陽性細胞／全細胞）×１００として算出した。
ＣＸＣＲ４－ＶＮがＨＡ－ＶＣ（図２Ａ）と、またはグルカゴン受容体をコードするＧＰＣＲであるＧＣＧＲ－ＶＣ（図２Ｃ）と共発現する場合、黄色蛍光タンパク質（ＹＦＰ）信号（ＢｉＦＣ信号）は観察されなかった。対照的に、ＣＸＣＲ４－ＶＮがＣＸＣＲ４－ＶＣと共発現する場合（図２Ｂ）、原形質膜及び細胞質においてＢｉＦＣ信号が観察された。ＣＸＣＲ４－ＶＮをＡＤＲＢ２－ＶＣ（図２Ｄ）と共形質導入した場合、強いＢｉＦＣ信号が原形質膜及び細胞質において観察された。バックグラウンドレベルよりも高いＢｉＦＣ蛍光信号を示した細胞をＢｉＦＣ陽性細胞として計数し、ＢｉＦＣスコアを算出した。
タンパク質間相互作用は、ＢｉＦＣの蛍光タンパク質断片またはＢＲＥＴのウミシイタケルシフェラーゼなどの融合タグによる影響をパートナータンパク質の発現、折りたたみまたは局在化への干渉を通じて受けることがある。パートナータンパク質も、融合タグの発現または折りたたみを悪化させ、近接度に基づくアッセイの結果に影響を与えることがある。このため、特定の組合せにおける２つのタンパク質の間のシグナルの非存在は必ずしもタンパク質が相互作用しないことの示唆であるとは限らず、単に、結合しているドナー及びアクセプター分子が、相互作用を起こさせない特定の配座にあるということを示唆している（Ｅｉｄｎｅ，Ｋ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｄｙｎａｍｉｃ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｌｉｖｉｎｇ ｃｅｌｌｓ，Ｔｒｅｎｄｓ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ １３，４１５－４２１；Ｋｅｒｐｐｏｌａ，Ｔ．Ｋ．，（２００６）Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｂｉｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ（ＢｉＦＣ）ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｌｉｖｉｎｇ ｃｅｌｌｓ，Ｎａｔ Ｐｒｏｔｏｃ １，１２７８－１２８６）。
したがって、ＣＸＣＲ４－ＶＮ及びＧＰＣＲｘ－ＶＣ、またはＣＸＣＲ４－ＶＣ及びＧＰＣＲｘ－ＶＮのいずれかの組合せでＢｉＦＣ信号を示したＣＸＣＲ４及びＧＰＣＲｘは、相互作用しているタンパク質であると考えられる。周知のホモマーであるＣＸＣＲ４－ＶＮとＣＸＣＲ４－ＶＣとの対のＢｉＦＣスコアは９．９であった。このため、１０と等しいかまたはそれよりも高いＢｉＦＣスコアを示したＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘ対をＣＸＣＲ－ＧＰＣＲｘヘテロマーの候補として選択した。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２のＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘ対は、２４のＢｉＦＣスコアを示し、したがって、ＣＸＣＲ－ＧＰＣＲｘヘテロマー候補と考えられた。ＢｉＦＣ分析に関する追加のＧＰＣＲの評価は、２０１８年１２月１８日出願の国際出願ＰＣＴ／ＫＲ２０１８／０１６１６６に報告された。
実施例２。ＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマー形成の共内在化アッセイによる評価
ＧＰＣＲヘテロマーのいくつかは、ヘテロマー化の結果として輸送特性の変化、例えば、パートナーＧＰＣＲ（ＧＡＢＡ（Ｂ）受容体）の成熟（Ｗｈｉｔｅ，１９９８）、作動薬により媒介される細胞表面からのパートナーＧＰＣＲの内在化（ＤＯＲ－ＧＲＰＲ、Ａ２Ａ－Ｄ２Ｒ）（Ｈｉｌｌｉｏｎ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｃｏａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ，ｃｏｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｃｏｄｅｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ａ２Ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｎｄ ｄｏｐａｍｉｎｅ Ｄ２ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７７，１８０９１－１８０９７；Ｌｉｕ，Ｘ．Ｙ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｕｎｉｄｉｒｅｃｔｉｏｎａｌ ｃｒｏｓｓ－ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＧＲＰＲ ｂｙ ＭＯＲ１Ｄ ｕｎｃｏｕｐｌｅｓ ｉｔｃｈ ａｎｄ ａｎａｌｇｅｓｉａ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｏｐｉｏｉｄｓ，Ｃｅｌｌ １４７，４４７－４５８；Ｔｏｒｖｉｎｅｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ ｏｆ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ａ２Ａ ａｎｄ ｄｏｐａｍｉｎｅ Ｄ２ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｊ Ｍｏｌ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ ２５，１９１－２００）、及びパートナーＧＰＣＲの細胞内区画から細胞表面への局在化の変化（ＤＯＲ－ＣＢ１）（Ｒｏｚｅｎｆｅｌｄ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１２）Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｈｅｔｅｒｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｅｘｐａｎｄｓ ｔｈｅ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ ｏｆ ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｒｏｄｅｎｔ ｎｅｕｒｏｎｓ，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ７，ｅ２９２３９）を呈することが知られている。
対の片方のみに対して選択的な作動薬に応答した共発現ＧＰＣＲの対の共内在化を用いてＧＰＣＲヘテロマー化を確認した（Ｍｉｌｌｉｇａｎ，２００８）。ＧＰＣＲｘが、共発現する場合のＣＸＣＲ４の輸送を調節するか否か及びＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマーを形成するか否かを調べるために、さらにはＢｉＦＣアッセイを用いて確認されたＣＸＣＲ４及びＧＰＣＲｘの間の物理的相互作用を裏付けるために、ＣＸＣＲ４－ＧＦＰ及びＧＰＣＲｘをコードするアデノウイルスを細胞に共形質導入し、ＧＰＣＲｘ作動薬での刺激の前及び３０分後にＧＦＰ画像を取得した。細胞表面におけるＧＦＰ発現の減少または細胞の内部におけるＧＦＰ顆粒の出現をＧＰＣＲｘとのＣＸＣＲ４－ＧＦＰ共内在化とみなした（図３のＡ～Ｂ）。
図４のＡ～Ｂでは、ＣＸＣＲ４（図４Ａ）及びＡＤＲＢ２（図４Ｂ）に特異的なＧＰＣＲｘ作動薬で、細胞を刺激した（それぞれ１０ｎＭのＣＸＣＬ１２（図４Ａ）及び１００ｎＭのホルモテロール（図４Ｂ））。作動薬刺激の前及び３０分後に画像を取得し、ＩＮ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｚｅｒ ２０００を使用して分析した。これらのＧＰＣＲｘ作動薬の濃度の選択を最初はそれぞれの特異的ＧＰＣＲｘのＥＣ５０濃度（または別法では、ＫｉまたはＫｄ濃度）に定め、生じた信号が強すぎる場合には濃度をＥＣ５０未満に下げ、生じた信号が弱すぎる場合には濃度をＥＣ５０濃度の１０，０００倍以下に上げた。
ＣＸＣＲ４－ＧＦＰを発現する細胞をＣＸＣＬ１２で刺激すると、原形質膜から別個の細胞内顆粒へとＧＦＰが再配置され、表面ＣＸＣＲ４－ＧＦＰの細胞質中への内在化が示された（図４Ａ）。ＢｉＦＣアッセイにより同定されたＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに関して、ＣＸＣＲ４－ＧＦＰ及びＡＤＲＢ２を共発現する細胞における細胞内ＧＦＰ顆粒の増加及び原形質膜でのＧＦＰ信号の減少により明らかになったとおり（図４Ｂ）、ＡＤＲＢ２はＣＸＣＲ４の内在化を誘導し、したがってヘテロマー共内在化が確認された。ＣＸＣＲ４の誘導内在化に関する追加のＧＰＣＲの評価は、２０１８年１２月１８日出願の国際出願ＰＣＴ／ＫＲ２０１８／０１６１６６に報告された。
実施例３。ＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマー形成時に増強されるＣＸＣＲ４下流シグナル伝達及び増強されるシグナル伝達の阻害のＣａ２＋動員アッセイによる評価
ＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマーが（片方の受容体を欠く細胞において）個々のプロトマーの特性とは別個の特性を呈するか否かをさらに調べるために、いずれかのＧＰＣＲまたは両方のＧＰＣＲを発現する細胞においていずれかまたは両方の作動薬の存在下でのカルシウムシグナル伝達を研究した。この実施例では、実施例２に記述したとおり、これらのＧＰＣＲｘ作動薬の濃度の選択を最初はそれぞれの特異的ＧＰＣＲｘのＥＣ５０濃度（または別法では、ＫｉまたはＫｄ濃度）に設定し、生じたＣａ２＋信号が強すぎる場合には濃度をＥＣ５０未満に下げ、生じたＣａ２＋信号が弱すぎる場合には濃度をＥＣ５０濃度の１００倍以下に上げた。
ＣＸＣＲ４をコードするアデノウイルスをＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト乳癌細胞に形質導入した場合、ＣＸＣＬ１２での刺激は細胞内カルシウム動員を引き起こした（図５Ａ）。ＡＤＲＢ２選択的作動薬であるサルメテロールでの細胞の刺激はカルシウム応答を誘導せず、ＣＸＣＬ１２により引き起こされるカルシウム応答はＣＸＣＲ４により媒介されることが実証された。ＣＸＣＬ１２及びサルメテロールでの細胞の共刺激は、ＣＸＣＬ１２単独により誘導されるカルシウム応答と比較して同程度のカルシウム応答を誘導した。ＡＤＲＢ２のみを過剰発現する細胞では、ＣＸＣＬ１２単独はカルシウム応答を誘導しなかったが、サルメテロール単独はカルシウム応答を誘導し、サルメテロールがＡＤＲＢ２を介してカルシウム応答を誘導することが示された（図５Ｂ）。両方の作動薬での共刺激は、サルメテロール単独により刺激されるカルシウム応答と同程度のカルシウム応答を誘導した。
ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を過剰発現する細胞において、各作動薬での刺激は、ＣＸＣＲ４またはＡＤＲＢ２を単独で発現する細胞で示されるカルシウム応答と同程度のカルシウム応答を誘導した（図５のＡ及びＢに対するＣ）。対照的に、両方の作動薬一斉での共刺激は、個々の作動薬により引き起こされるカルシウム応答と比較して、カルシウム応答を有意に増加させた（図５のＣ及びＤ）。カルシウムシグナル伝達の増強は、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を発現する細胞でのみ認められ、ＣＸＣＲ４またはＡＤＲＢ２のいずれかを単独で発現する細胞では認められなかった。これらの結果は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、そのそれぞれ個々のＧＰＣＲプロトマーの特性とは別個の特性を示すことを実証している。
ＣＸＣＬ１２及びＧＰＣＲｘリガンドでの共刺激時にＣＸＣＲ４及びＧＰＣＲｘを共発現する細胞において増強されるカルシウム応答が、ＧＰＣＲｘ拮抗薬により阻害されるか否かをさらに調べた。具体的には、図６に示されているとおり、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を共発現する細胞では、ＡＤＲＢ２拮抗薬であるカルベジロール（１０μＭ）の投与は、カルシウムシグナル伝達の増強を有意に抑制し、かつＣＸＣＲ４拮抗薬（ＡＭＤ３１００；１０ｕＭ）及びＡＤＲＢ２拮抗薬カルベジロール（１０μＭ）の両方の共投与は、カルシウムシグナル伝達のさらに大きな抑制をもたらした。この結果は、ＣＸＣＲ４拮抗薬、ＡＤＲＢ２拮抗薬、またはＣＸＣＲ４拮抗薬とＡＤＲＢ２拮抗薬との組合せをＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに対する治療薬として使用することができることを実証している。それぞれの作動薬の一方または両方の存在下で、及びそれぞれの拮抗薬の一方または両方の存在下でのカルシウムシグナル伝達に関する追加のＧＰＣＲの評価は、２０１８年１２月１８日出願の国際出願ＰＣＴ／ＫＲ２０１８／０１６１６６に報告された。
共投与の結果はまた、ヘテロマーのそれぞれのプロトマーを標的とする小用量の拮抗薬が、高用量の個々のそれぞれの拮抗薬に関連する副作用を回避しながらＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマー応答を効率的に抑制する新規の治療ツールを提供し得ることを示唆している。
実施例４。ＧＰＣＲｘ拮抗薬による内在化の阻害
ＣＸＣＲ４ヘテロ二量体の共内在化がパートナーＧＰＣＲｘ拮抗薬により遮断されるか否かについてさらに研究するために、内在化阻害アッセイを実行した。図４Ｂ（ＧＰＣＲｘはＡＤＲＢ２である）に示されているとおり、細胞にＣＸＣＲ４及びＧＰＣＲｘを同時に形質導入した場合、ＣＸＣＲ４－ＧＦＰ発現Ｕ－２ ＯＳ細胞はパートナーＧＰＣＲｘ特異的作動薬により共内在化した（対照：ＣＸＣＲ４－ＧＦＰ（図４Ａ））。ＣＸＣＲ４がＧＰＣＲｘとヘテロ二量体を形成してパートナーＧＰＣＲｘにより共内在化した場合、ＧＰＣＲｘ特異的拮抗薬によりそれを遮断することができる。
ＧＰＣＲｘ（ＡＤＲＢ２）をコードするアデノウイルスを、ＣＸＣＲ４－ＧＦＰを安定発現するＵ－２ ＯＳ細胞に形質導入した。２日後に、ＣＸＣＲ４特異的作動薬ＣＸＣＬ１２（２０ｎＭ）及び／またはＧＰＣＲｘ特異的拮抗薬（１０μＭ）での細胞の刺激の前及び２０分後に画像を取得した。ＩＮ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｚｅｒ ２５００を使用して、ＣＸＣＲ４－ＧＦＰの内在化がＧＦＰ顆粒として観察された。細胞表面におけるＧＦＰ発現の減少または細胞の内部におけるＧＦＰ顆粒の出現をＣＸＣＲ４－ＧＦＰ共内在化とみなした。この場合、評価されたＧＰＣＲｘはＡＤＲＢ２であった。ＣＸＣＲ４作動薬ＣＸＣＬ１２での刺激は、ＣＸＣＲ４－ＧＦＰのＡＤＲＢ２との内在化を誘導した（図８、左側のパネル）。ＡＤＲＢ２拮抗薬であるカルベジロールの投与は、ヘテロマーの内在化に対して作用を有さなかった（図８、中央のパネル）。ＣＸＣＬ１２により刺激されたＣＸＣＲ４－ＧＦＰのＡＤＲＢ２との内在化はＡＤＲＢ２拮抗薬により阻害された（図８、右側のパネル）。ＧＰＣＲｘ拮抗薬による内在化の阻害に関する追加のＧＰＣＲの評価は、２０１８年１２月１８日出願の国際出願ＰＣＴ／ＫＲ２０１８／０１６１６６に報告された。
これらのデータは、ＣＸＣＲ４ヘテロマーの内在化の阻害により、がんなどのＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー過剰発現細胞における異常な下流シグナルを治療目的のために遮断することができることを示唆している。
実施例５。腫瘍成長に対するＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマーシグナル伝達の阻害剤の表現型関連作用の細胞増殖アッセイによる評価
ＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマーに基づく治療薬を開発するために、細胞増殖に対するＣＸＣＲ４拮抗薬及びＧＰＣＲｘ拮抗薬の共投与の作用を、特にＡＤＲＢ２に関して評価した。
患者から切除し解離させた神経膠芽腫組織の単細胞懸濁液を調製した（韓国ソウルのＳａｍｓｕｎｇ Ｓｅｏｕｌ病院から提供を受けた）。これらの細胞を、正常神経幹細胞の増殖及び非分化に最適な条件下で培養した。培地は、塩基性ＦＧＦ及びＥＧＦが補充された無血清Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地からなるものであった。
患者由来細胞（ＰＤＣ）の生存に対するＧＰＣＲｘ拮抗薬の作用を、ＡＴＰｌｉｔｅ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、カタログ番号６０１６７３９試薬）を使用して評価した。ＡＴＰｌｉｔｅは、ホタルルシフェラーゼに基づくアデノシン三リン酸モニタリングシステムである。この発光アッセイは、培養された哺乳動物細胞の増殖及び細胞毒性の定量的評価のための比色分析、蛍光分析及び放射線同位体アッセイの代替である。細胞を３８４ウェルプレートに培養培地４０μＬ中５００細胞／ウェルで播種した。一晩増殖させた後に、いくつかの用量のＧＰＣＲｘ拮抗薬またはＤＭＳＯ単独の存在下で細胞を７日間にわたって培養した。７日間のインキュベーション後に、１５μＬのＡＴＰｌｉｔｅを各ウェルに加え、プレートをオービタルシェーカーで７００ｒｐｍで５分間にわたって振盪した。ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ ＴｏｐＣｏｕｎｔ検出器で発光信号を３０分以内で検出した。等式：細胞生存能（％）＝（拮抗薬処理のＯＤ／ＤＭＳＯ単独処理のＯＤ）×１００％を用いて細胞生存能を算出した。
ＡＤＲＢ２特異的拮抗薬であるカルベジロールを、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を発現するＰＤＣに投与した場合、細胞の成長は有意に阻害された。（ＩＣ５０＝１１．６９μＭ、図９）。細胞増殖に関する追加のＧＰＣＲの評価は、２０１８年１２月１８日出願の国際出願ＰＣＴ／ＫＲ２０１８／０１６１６６に報告された。
これらの結果は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現細胞において、ＣＸＣＲ４ヘテロマーにより誘導される異常細胞増殖をＡＤＲＢ２拮抗薬により遮断することができることを示唆しており、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー保有患者におけるＡＤＲＢ２拮抗薬を使用してのがん細胞成長の阻害が、がん治療薬としてのＣＸＣＲ４阻害剤のみを投与する単独治療の限界を克服することができることを示している。
実施例６。近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）を用いての、患者由来細胞（ＰＤＣ）におけるＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマー形成の評価
天然組織におけるＧＰＣＲ複合体の存在を調査するために、原子間力顕微鏡法（Ｆｏｔｉａｄｉｓ，Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，（２００６）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ ｒｈｏｄｏｐｓｉｎ ｄｉｍｅｒ： ａ ｗｏｒｋｉｎｇ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ Ｇ－ｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ １６，２５２－２５９）、共免疫沈降（Ｇｏｍｅｓ，Ｉ．，ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕ ａｎｄ ｄｅｌｔａ ｏｐｉａｔｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｍｏｒｐｈｉｎｅ ａｎａｌｇｅｓｉａ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，１０１（１４）：５１３５－５１３９）、及び結合または機能アッセイ（Ｗｒｅｇｇｅｔｔ，Ｋ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９５）Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｉｔｙ ｍａｎｉｆｅｓｔ ｉｎ ｔｈｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｃａｒｄｉａｃ ｍｕｓｃａｒｉｎｉｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７０，２２４８８－２２４９９）などの様々な手法が用いられてきた。相互作用をモニターするための最も一般的な方法は、標識タンパク質を使用して実行される共鳴エネルギー移動に基づく。標識は抗体または蛍光リガンドなどの選択的プローブにより実行することができる（Ｒｏｅｓｓ，Ｄ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｌｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ ｈｏｒｍｏｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ａｒｅ ｓｅｌｆ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ １４１，４５１８－４５２３；Ｐａｔｅｌ，Ｒ．Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｌｉｇａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｏ ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｏｌｉｇｏｍｅｒ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｌｉｖｅ ｃｅｌｌｓ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ ９９，３２９４－３２９９）。
Ｂａｚｉｎらは、よりはるかに高い信号対雑音比を呈する時間分解蛍光共鳴エネルギー移動（ＴＲ－ＦＲＥＴ）に基づく手法を採用した（Ｂａｚｉｎ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｔｉｍｅ ｒｅｓｏｌｖｅｄ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｒｙｐｔａｔｅ ｅｍｉｓｓｉｏｎ： ａ ｖｅｒｓａｔｉｌｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｔｏ ｔｒａｃｅ ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ８２，２３３－２５０）。ＦＲＥＴは、近傍にある場合のドナーとアクセプターとの２つのフルオロフォアの間でのエネルギーの移動に基づく。生体分子間の分子間相互作用は、各パートナーに蛍光標識を結合させること及びエネルギー移動のレベルを検出することにより評価することができる。系の励起と蛍光測定との間におよそ５０～１５０μ秒の時間遅延を導入することにより信号から非特異的な短寿命発光を排除することが可能である。
近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）は、従来の免疫アッセイの可能性を拡げてタンパク質、タンパク質相互作用及び修飾の高い特異性及び感度での直接検出を含む技術である（Ｇｕｌｌｂｅｒｇ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，（２００４）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ａｎｔｉｂｏｄｙ－ｂａｓｅｄ ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ ｌｉｇａｔｉｏｎ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ １０１，８４２０－８４２４）。異なる種に発生させた２つの一次抗体は、目的のタンパク質上の標的抗原を認識する。異なる一次抗体の定常領域を指向するＰＬＡプローブと呼称される二次抗体は一次抗体に結合する。各ＰＬＡプローブには特有の短いＤＮＡ鎖が結合している。ＰＬＡプローブが近傍にある場合（つまり、図に示されているとおり、元々の２つの目的のタンパク質が近傍にあるか、またはタンパク質複合体の一部である場合）、ＤＮＡ鎖は、適切な基質及び酵素が添加されるとローリングサークルＤＮＡ合成に編入され得る。ＤＮＡ合成反応はＤＮＡサークルの数百倍の増幅をもたらす。次に、蛍光標識相補的オリゴヌクレオチドプローブを添加し、それらは増幅されたＤＮＡに結合する。生じた高濃度の蛍光は、蛍光顕微鏡で観察すると際立った明るい点として簡単に視認することができる（Ｇｕｓｔａｆｓｄｏｔｔｉｒ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ ｌｉｇａｔｉｏｎ ａｓｓａｙｓ ｆｏｒ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎａｌｙｓｅｓ，Ａｎａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ ３４５，２－９）。
ＣＸＣＲ４過剰発現細胞系Ｕ２ＯＳ－ＣＸＣＲ４に０、２．５、１０、４０ＭＯＩの用量のＡＤＲＢ２発現アデノウイルスＡｄ－ＡＤＲＢ２を２日間にわたって感染させた。ＰＬＡを、以前に記述がされたとおりに実行した（Ｂｒｕｅｇｇｅｍａｎｎ，Ｌ．Ｉ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｃ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｋｖ７．４ ａｎｄ Ｋｖ７．５ ｓｕｂｕｎｉｔｓ ｏｆ ｖａｓｃｕｌａｒ Ｋｖ７ ｃｈａｎｎｅｌｓ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２８９，２０９９－２１１１；Ｔｒｉｐａｔｈｉ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１４）ＣＸＣ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ４ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｕｐｏｎ ｃｏ－ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｓｔｒｏｍａｌ ｃｅｌｌ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｆａｃｔｏｒ－１ａｌｐｈａ ａｎｄ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ６５，１２１－１２５）。ＰＬＡを実行するために、感染細胞を４％のパラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で１６ウェル組織培養スライド上に固定した。Ｄｕｏｌｉｎｋにより提供されるブロッキング用溶液でスライドをブロッキングし、マウス抗ＣＸＣＲ４（１：２００、Ｓａｎｔａｃｒｕｚ、Ｓｃ－５３５３４）、ウサギ抗ＡＤＲＢ２（１：２００、Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＰＡ５－３３３３３）、ウサギ抗ＣＨＲＭ１（１：２００、Ｌｓ ｂｉｏ、Ｌｓ－Ｃ３１３３０１）と共に３７℃で１時間にわたって、加湿チャンバ内でインキュベートした。次いで、スライドを洗浄し、プラス及びマイナスＤｕｏｌｉｎｋ ＩＩ ＰＬＡプローブと結合した二次抗ウサギ及び抗マウス抗体と共にインキュベートした（３７℃で１時間）。スライドを再び洗浄し、次いで、ライゲーション－リガーゼ溶液と共にインキュベートし（３７℃で３０分）、続いて、増幅用ポリメラーゼ溶液と共にインキュベートした（３７℃で２時間）。次いで、スライドに最低限の体積のＤｕｏｌｉｎｋ ＩＩ載置用培地を４’，６－ジアミジノ－２フェニルインドール（ＤＡＰＩ）と共に１５～３０分間にわたって載せ、ＩＮ Ｃｅｌｌ ａｎａｌｙｚｅｒ ２５００の下でＰＬＡ信号［Ｄｕｏｌｉｎｋ Ｉｎ Ｓｉｔｕ検出試薬緑色（λ励起／発光４９５／５２７ｎｍ）または赤色（λ励起／発光５７５／６２３ｎｍ）を蛍光点として同定した。
図１０Ａ～１０Ｂに示されているとおり、ＰＬＡ信号は、用量に依存してＡＤＲＢ２の発現レベルとして増大する。図１０Ａ：一連のＭＯＩ（多重感染度）でのＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを発現するＵ２ＯＳ細胞からのＰＬＡ信号の画像。図１０Ｂ：赤色信号点を計数し、陰性対照に対する正規化により算出した。ＰＬＡ信号は用量依存的にＡＤＲＢ２の発現レベルに比例して増大した。内因性ＡＤＲＢ２発現を調べるために、ｑＲＴ－ＰＣＲによる分析を、ＡＤＲＢ２特異的プライマーを使用して実行した。図１０Ｃに示されているとおり、Ｕ２ＯＳ細胞の内因性ＡＤＲＢ２発現レベルは極めて高く、ウイルス感染のない（ＡＤＲＢ２が０ＭＯＩである）部分においてさえＰＬＡ信号が検出されることを示していた。
従来、神経膠芽腫（ＧＢＭ）は最も一般的かつ致死的な原発性脳腫瘍である。前臨床がん生物学は概してｉｎ ｖｉｔｒｏでのヒトがん細胞系の使用及びこれらの確立された細胞系の異種移植片プロセスに依拠している。しかしながら、従来の細胞系を確立するプロセスは重要な生物学的特性の不可逆的喪失を招き、結果として異種移植片腫瘍モデルは、元の腫瘍に存在していたゲノム及び表現型の特質を維持していない。
神経膠芽腫にそのまま由来する患者由来細胞（ＰＤＣ）は正常神経幹細胞との広範囲にわたる類似性を内包しており、ヒト神経膠芽腫の遺伝子型、遺伝子発現パターン及びインビボでの生物学を再現する。
ＰＤＣ試料でＰＬＡを実行するために、患者由来細胞を１６ウェル組織培養スライド上に播種し、４％のＰＦＡで固定した。Ｄｕｏｌｉｎｋにより提供されるブロッキング用溶液でスライドをブロッキングし、マウス抗ＣＸＣＲ４（１：２００、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ、Ｓｃ－５３５３４）、ウサギ抗ＡＤＲＢ２（１：２００、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＰＡ５－３３３３３）、ウサギ抗ＣＨＲＭ１（１：２００、Ｌｓｂｉｏ、Ｌｓ－Ｃ３１３３０１）と共に３７℃で１時間、加湿チャンバ内でインキュベートした。次いで、スライドを洗浄し、プラス及びマイナスＤｕｏｌｉｎｋ ＩＩ ＰＬＡプローブと結合した二次抗ウサギ及び抗マウス抗体と共にインキュベートした（３７℃で１時間）。スライドを再び洗浄し、次いで、ライゲーション－リガーゼ溶液と共にインキュベートし（３７℃で３０分）、続いて、増幅用ポリメラーゼ溶液と共にインキュベートした（３７℃で２時間）。次いで、スライドに最低限の体積のＤｕｏｌｉｎｋ ＩＩ載置用培地を４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール（ＤＡＰＩ）と共に１５～３０分間にわたって載せ、ＩＮ Ｃｅｌｌ ａｎａｌｙｚｅｒ ２５００の下でＰＬＡ信号［Ｄｕｏｌｉｎｋ Ｉｎ Ｓｉｔｕ検出試薬緑色（λ励起／発光４９５／５２７ｎｍ）または赤色（λ励起／発光５７５／６２３ｎｍ）を蛍光点として同定した。
図１１のＡ～Ｂに示されているとおり、ＰＬＡ比はＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに関連しており、ヘテロマー形成の頻度は患者に応じて変動する。ＰＬＡ比は、ＰＤＣ試料の蛍光点の数／陰性対照の蛍光点の数として算出した。陰性対照（ＮＣ）はバックグラウンド蛍光信号を表し、これは、ＰＬＡ処理において一次抗体（マウス抗ＣＸＣＲ４、ウサギ抗ＡＤＲＢ２）処理をせず、プラス及びマイナスＤｕｏｌｉｎｋ ＩＩ ＰＬＡプローブと結合した二次抗体だけで処理した場合の点の数により示されるものである。これらのデータは、がん患者試料中のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロ二量体の定量分析を実証している。ＰＤＣにおけるヘテロマー形成に関する追加のＧＰＣＲの評価は、２０１８年１２月１８日出願の国際出願ＰＣＴ／ＫＲ２０１８／０１６１６６に報告された。
実施例７。ＰＤＸモデルを使用してのインビボでのＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマー形成の評価
患者由来異種移植片（ＰＤＸ）でＰＬＡを実行するために、（韓国ソウルのＳａｍｓｕｎｇ Ｓｅｏｕｌ病院から提供された）神経膠芽腫患者由来ＦＦＰＥ試料を使用した。ＦＦＰＥ試料の脱パラフィンを行った後に、熱誘導抗原回復を１５分間にわたって１００℃で実施した。Ｄｕｏｌｉｎｋにより提供されるブロッキング用溶液でスライドをブロッキングし、ウサギ抗ＣＸＣＲ４（１：２００、Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＰＡ３３０５）、マウス抗ＡＤＲＢ２（１：２００、Ｓａｎｔａｃｒｕｚ、Ｓｃ－２７１３２２）と共に３７℃で１時間にわたって、加湿チャンバ内でインキュベートした。その他のプロセスは上記（ＰＤＣでのＰＬＡ）と同じであった。
図１２Ａでは、核をＤＡＰＩ染色で可視化し、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ４ヘテロマーをＰＬＡで小さな点として染色した。図１２Ｂに示されているとおり、ＰＬＡ比は患者により異なっており、この結果に基づいて、コンパニオン診断により個別化医療を実行することが可能であることを示している。
実施例８。ＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマー形成時に増強されるＣＸＣＲ４下流シグナル伝達のＣａ２＋動員アッセイによる評価
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２をコードするアデノウイルスを形質導入した（図１３）。細胞を３日間にわたって培養し、Ｃａｌ－５２０ ＡＭで染色し、ＣＸＣＬ１２（３０ｎＭ）単独か、漸増用量のサルメテロール単独か、または３０ｎＭのＣＸＣＬ１２と組み合わせたサルメテロールかのいずれかで処理した。カルシウム動員を、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ ３を使用して測定した。ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を過剰発現するＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞では、サルメテロール単独での刺激は、カルシウム動員を用量依存的には誘導しなかった（図１３）。しかし、細胞をＣＸＣＬ１２の存在下でサルメテロールで共刺激した場合に、カルシウムシグナル伝達は、幅広い範囲のサルメテロール濃度、例えば、１０ｎＭ～３００ｎＭの範囲の濃度で著しく増強した。
実施例９。ＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマー形成時に増強されるＣＸＣＲ４下流シグナル伝達及び増強されるシグナル伝達の阻害のＣａ２＋動員アッセイによる評価
ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を過剰発現するＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞において、ＣＸＣＬ１２、ＣＸＣＲ４作動薬、及びサルメテロール（ＡＤＲＢ２選択的作動薬）での共刺激は、それぞれ個々の作動薬での単一刺激により誘発されるカルシウム応答と比べて、カルシウム応答を有意に上昇させた（図１４）。これらの結果は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の個々のＧＰＣＲのものとは別個の特性を示すことを実証している。
ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を共発現している細胞においてＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２リガンドでの共刺激時に増強されるカルシウム応答が、ＣＸＣＲ４拮抗薬としての抗ＣＸＣＲ４抗体により阻害されるか否かも調べた。図１４に示されているとおり、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を共発現する細胞において、２μｇの抗ＣＸＣＲ４抗体１２Ｇ５の投与は、カルシウムシグナル伝達の増強を抑制した。また、両方の拮抗薬（ＡＤＲＢ２拮抗薬であるカルベジロール及びＣＸＣＲ４拮抗薬である１２Ｇ５）の共投与はカルシウムシグナル伝達のより有意な抑制をもたらした。これらの結果は、抗ＣＸＣＲ４抗体及びＡＤＲＢ２拮抗薬をＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー媒介疾患に対する効率的な治療薬（または組合せ療法）として使用することができることを実証している。
特に、カルシウム動員アッセイを利用して、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト乳癌細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞で、１０％ＦＢＳを補充された１００μＬのＲＰＭＩ １６４０中で、黒色透明底９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｓｔａｒ、＃３３４０）に播種した。翌日、１０ＭＯＩのＣＸＣＲ４及び３０ＭＯＩのＧＰＣＲｘを細胞に共形質導入した。２日後に、表示の量のＡＤＲＢ２拮抗薬であるカルベジロール（Ｔｏｃｒｉｓ）、抗ＣＸＣＲ４抗体１２Ｇ５（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、３５－８８００）で細胞を処理し、Ｃａｌ ６（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ＤｅｖｉｃｅｓのＦＬＩＰＲ（登録商標）Ｃａｌｃｉｕｍ ６ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ、カタログＲ８１９１）と共に２時間にわたってインキュベートした。次いで、表示の量のＣＸＣＬ１２、ＡＤＲＢ２作動薬、またはＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬で細胞を刺激した。ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ ３Ｍｕｌｔｉ－Ｍｏｄｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒを使用してカルシウム動員を測定した。結果をベースライン活性について正規化した。各グラフの曲線下面積（ＡＵＣ）を算出することによりカルシウム動員を定量化した。データを、ＣＸＣＲ４のみを発現する細胞におけるＣＸＣＬ１２刺激カルシウム応答に対して正規化した。データは３つの独立した実験を表す（平均±ＳＥＭ）。＊Ｐ＜０．０５、スチューデントのｔ検定。
実施例１０。腫瘍成長に対するＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの作用
腫瘍成長に対するＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの作用を調査するために、ＣＸＣＲ４のみ（「Ａ５４９－ＣＸＣＲ４細胞」）、または細胞がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するようにＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方（「Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞」）を安定過剰発現する細胞系をＡ５４９肺癌細胞で作製し、同じ量の細胞（１×１０７細胞／匹）をヌードマウスに皮下注射して腫瘍成長速度を比較した。図１５のＡ～Ｂに示されているとおり、移植後２８日目の腫瘍サイズはＡ５４９では３５１．４±２１４．７ｍｍ３、Ａ５４９－ＣＸＣＲ４細胞では７２６．９±２５９．６ｍｍ３、及びＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞では１０１２．２±５５６．１ｍｍ３であった。Ａ５４９－ＣＸＣＲ４細胞（ＣＸＣＲ４を過剰発現）を移植されたマウスの腫瘍成長速度は、親Ａ５４９のみを保有するマウスのそれよりも速く、Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞（ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を過剰発現）を移植されたマウスで最も速い腫瘍増殖が認められた。これらの結果は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの形成がＣａ２＋応答を相乗的に増大させ、したがって腫瘍成長を促進するということを示唆している。
親細胞Ａ５４９、Ａ５４９－ＣＸＣＲ４細胞（ＣＸＣＲ４を安定過剰発現）、またはＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞（ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を安定過剰発現）のいずれかが移植された３匹のマウスの移植後２８日目の画像が図１５Ａに示されている。これらの画像は、それらの中でもＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞（ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を安定過剰発現）を保有するマウスの腫瘍サイズが最も大きい（最も加速される）ことを示す。これら３匹の異なるマウスの経時的な腫瘍成長速度を図１５Ｂにグラフで示す。腫瘍の長さ（Ｌ）及び幅（Ｗ）を測定すること、ならびに腫瘍体積を以下の式に基づいて算出することにより腫瘍成長を３日ごとまたは４日ごとにモニターした：体積＝０．５ＬＷ２。親細胞Ａ５４９を保有するマウスと比較して、Ａ５４９－ＣＸＣＲ４細胞を保有しているマウスは比較的速い腫瘍成長を示し、Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞（ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を安定過剰発現）が移植されたマウスでは腫瘍成長が最も速い。
実施例１１。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー形成時に増強されるＣＸＣＲ４下流シグナル伝達のＣａ２＋動員阻害 － 単一の阻害剤処理と組合せ阻害剤処理との比較
ＣＸＣＲ４のみを発現するＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（単量体または個々のプロトマーの状況；「ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞」）において単一処理として、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を過剰発現してＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞系（「ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞」）において単一処理として、ならびにＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞においてＡＤＲＢ２阻害剤（カルベジロール；１０μＭ）との共処理として評価されるブリキサフォル（ＣＸＣＲ４阻害剤、ＴＧ－００５４とも称される）について、阻害度（Ｃａ２＋応答についてのＩＣ５０値として測定）を比較した。
ＣＸＣＲ４のみ、またはＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２をコードするアデノウイルスをＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に形質導入した。細胞を２日間にわたって培養し、ブリキサフォル（ＣＸＣＲ４阻害剤）単独で処理するか、またはブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤（カルベジロール；１０ｕＭ）で共処理した。次いで、細胞をＣａｌ－６で２時間にわたって染色し、ＣＸＣＲ４作動薬（ＣＸＣＬ１２、２０ｎＭ）及びＡＤＲＢ２作動薬（サルメテロール、１μＭ）で刺激した。ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ３を使用してカルシウム動員を測定し、その結果を表３に示すが、これは、（１）ブリキサフォル単独で処理されたＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞（第２列）；（２）ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤カルベジロールで同時に処理されたＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞（第３列）；ならびに（３）ブリキサフォル単独で処理されたＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞（第４列）におけるＣａ２＋応答のＩＣ５０を示している。
Figure 2022532667000004
 表３において示されているとおり、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞におけるＣａ２＋応答のＩＣ５０値は、ＡＤＲＢ２阻害剤カルベジロール（第３列）と組み合わせて処理した場合、ＣＸＣＲ４阻害剤ＴＧ－００５４単独での単一処理（第４列）と比べて４５００倍以上低下した。この結果は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞において、ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤での共処理は、ブリキサフォル単独での単一処理よりもＣａ２＋応答の増大をより効果的に阻害することを示唆している。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー形成が配座変化を誘導する及び／またはＣＸＣＲ４阻害剤についての結合親和性を変化させる可能性を決定するために、Ｃａ２＋応答のＩＣ５０値を、ＣＸＣＲ４のみを発現するＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞と、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞とにおいてブリキサフォル（ＴＧ－００５４）での単一処理の間で比較した。結果は、ＣＸＣＲ４阻害剤での単一処理がＩＣ５０値をＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞（第４列）では、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞（第２列）と比べて約１．４倍だけ変化させたことを示した。この結果は、ＣＸＣＲ４阻害剤、例えば、ブリキサフォル（ＴＧ－００５４）、及びＡＤＲＢ２阻害剤での共処理が、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー含有対象及び／または対象細胞／組織に対する治療効力を、ＣＸＣＲ４阻害剤での単一処理と比較して、ある特定のＣＸＣＲ４阻害剤では劇的なほど上昇させ得ることを示唆している。
表３に示されているとおり、ブリキサフォル及びカルベジロールでの共処理は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞におけるＣａ２＋応答のＩＣ５０値の低下をもたらす。ＡＤＲＢ２拮抗薬の過剰用量はカウンターパートＣＸＣＲ４の活性に影響を及ぼし得るので、ＣＸＣＲ４拮抗薬のＩＣ５０値の変化を６５０ｎＭのそのＩＣ９０値濃度のカルベジロールの組合せにより、一連のＣＸＣＲ４拮抗薬との組合せで測定した。データを表４に示す。
Figure 2022532667000005
 表４に示されているとおり、ＣＸＣＲ４阻害剤のＩＣ５０値は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの状況でのＣａ２＋応答の点において、ＡＤＲＢ２阻害剤との組合せで投与した場合（第３列）、ＣＸＣＲ４阻害剤単独での単一投与（第４列）と比べて低下した。例えば、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの状況におけるＣａ２＋応答のＩＣ５０値は、それぞれＡＭＤ３１００、ウロクプルマブ、ＢＫＴ１４０、ＴＧ－００５４と共にカルベジロール（６００ｎＭ、単量体の状況におけるＡＤＲＢ２に対するそのＩＣ９０濃度値）を共投与すると、約１０．５倍（２２．４５ｎＭから２．１２ｎＭへ）、約２９．３倍（０．８８ｎＭから０．０３ｎＭへ）、約４５．７倍（８８．６６ｎＭから１．９４ｎＭへ）、約６０．７倍（９０．５４ｎＭから１．４９ｎＭへ）低下した。この結果は、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の低用量での共投与が、ＣＸＣＲ４阻害剤の単一投与と比較して、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー含有対象に対する治療効力を上昇させ得ることを示唆している。
実施例１２。ＣＸＣＬ１２及び／またはサルメテロールでの刺激は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞系においてＥＲＫシグナル伝達の活性化を誘導する
ＥＲＫ１／２は、種々の細胞型において走化性または生存を調節する（Ｒｉｏｌ－Ｂｌａｎｃｏ，Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｔｈｅ ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＣＣＲ７ ａｃｔｉｖａｔｅｓ ｉｎ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｔｗｏ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｍｏｄｕｌｅｓ ｔｈａｔ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ ａｎｄ ｍｉｇｒａｔｏｒｙ ｓｐｅｅｄ，Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １７４（７），４０７０－４０８０；Ｋｌｅｍｋｅ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｍｏｔｉｌｉｔｙ ｂｙ ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ，Ｊ． Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ． １３７（２），４８１－４９２；Ｃｏｐｐ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，（２００９）ＯＲＣ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｒａｐａｍｙｃｉｎ（ｍＴＯＲ）： ｐｈｏｓｐｈｏ－Ｓｅｒ２４８１ ｉｓ ａ ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ｉｎｔａｃｔ ｍＴＯＲ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｃｏｍｐｌｅｘ ２，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． ６９（５），１８２１－１８２７）。ＥＲＫ１／２活性を、ＣＸＣＬ１２（ＣＸＣＲ４作動薬）及び／またはサルメテロール（ＡＤＲＢ２作動薬）で細胞中のＣＸＣＲ４またはＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを刺激して評価した。具体的には、Ｒｌｕｃ－ｌｕｃ２Ｐを発現するＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（「ＭＤＡ－ＭＢ－２３１親細胞」）、ＣＸＣＲ４を発現するＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（「ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞」）、及びＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（「ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞」）のＣＸＣＬ１２刺激は１０分後にＥＲＫ１／２の活性化を誘導し、６０分後に最高レベルの活性に達した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１親細胞、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞、及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞のサルメテロール刺激も、２０分後にＥＲＫ活性化を誘導し、６０分後に基礎レベルに減衰した（データは図示せず）。
ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２シグナル伝達の相乗効果を決定するために、ＥＲＫ１／２活性化のレベルを、ＣＸＣＬ１２及びサルメテロール刺激の後に測定した。Ｒｌｕｃ－ｌｕｃ２ＰもしくはＣＸＣＲ４を発現するか、またはＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞及びＡ５４９細胞を６ウェルプレートに、１ウェルあたり５×１０５細胞の密度で播種した。血清飢餓から１６時間後に、それぞれの細胞をＣＸＣＬ１２ １０ｎＭ及び／またはサルメテロール１０ｎＭで、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１親細胞、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞、及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞では２０分間にわたって、またＲｌｕｃ－ｌｕｃ２Ｐを発現するＡ５４９細胞（「Ａ５４９親細胞」）、ＣＸＣＲ４のみを発現するＡ５４９細胞（単量体または個々のプロトマーの状況；「Ａ５４９－ＣＸＣＲ４細胞」）、ならびにＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を安定過剰発現してＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するＡ５４９細胞系（「Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞」）では１０分間にわたって処理した。その後、細胞セットのそれぞれを収集し、ウェスタンブロット法分析を行った。
ＣＸＣＬ１２またはサルメテロール単独での刺激では、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞におけるＥＲＫ１／２活性化のレベルは、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１親細胞よりも高かった。ＥＲＫ１／２リン酸化は、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞と比較して、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞において有意に増加した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１親細胞をＣＸＣＬ１２及びサルメテロールで同時に刺激した場合、ＥＲＫ１／２リン酸化が単一作動薬刺激のレベルと同様のレベルで誘導された。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞では、ＥＲＫ１／２リン酸化は、各作動薬単独の合計ほど増加したが、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞では、ＥＲＫ１／２活性化は相乗的に増加した（図１６のＡ～Ｂ）。
ＥＲＫ１／２活性化も、Ａ５４９親細胞、Ａ５４９－ＣＸＣＲ４細胞、及びＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞において調査した。ＥＲＫ１／２リン酸化を、Ａ５４９－ＣＸＣＲ４細胞またはＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞においてＣＸＣＬ１２またはサルメテロール単独での刺激時に検出した。Ａ５４９親細胞では、ＥＲＫ１／２リン酸化は、ＣＸＣＬ１２またはサルメテロール単独での刺激により誘導されなかったが、ＣＸＣＬ１２及びサルメテロールでの共刺激時には有意に増加した。Ａ５４９－ＣＸＣＲ４細胞では、ＥＲＫ１／２リン酸化が各作動薬単独により誘導され、ＣＸＣＬ１２及びサルメテロールで共刺激した場合には、各刺激の合計ほど増加した。Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞では、ＥＲＫ１／２リン酸化は、ＣＸＣＬ１２単独よりもサルメテロール単独で刺激した場合にかなり大きく誘導され、ＣＸＣＬ１２及びサルメテロールで同時刺激した場合には有意に活性化された（図１７Ａ～１７Ｂ）。
これらの結果は、がん細胞におけるＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現が、特にがん細胞がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する場合には、下流ＥＲＫ活性化の有意な誘導をもたらし得、かつがん細胞増殖及び走化性に対して多大な作用を有し得ることを示唆している。
実施例１３。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するＡ５４９細胞系におけるＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２媒介増殖増加に対するＣＸＣＲ４拮抗薬の作用
がん細胞増殖に関して、がん細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在の影響を調査するために、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を安定過剰発現するＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するＡ５４９細胞（「Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞」）の成長を、対照としてのＲｌｕｃ－ｌｕｃ２Ｐを発現するＡ５４９細胞（Ａ５４９二重陰性細胞；「Ａ５４９親細胞」）の成長と、かつＣＸＣＬ１２作動薬の存在に応じて比較した。
Ａ５４９親細胞またはＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞を１×１０４細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートにプレーティングし、培養培地中で２４時間にわたってインキュベートして接着させた。洗浄した後に、無血清培地±ＣＸＣＬ１２を、表示のＣＸＣＲ４阻害剤（図１８Ａ：ＡＭＤ３１００（１０μＭ）、図１８Ｂ：ＬＹ２５１０９２４（１０μＭ）、図１８Ｃ：ＡＭＤ０７０（１μＭ）、図１８Ｄ：ＴＧ－００５４（１０μＭ）、及び図１８Ｅ：ＢＫＴ－１４０（１０μＭ））を伴って、または伴わずに無血清条件下で添加し、細胞を７２時間（播種後９６時間）にわたってインキュベートした。インキュベーションの終了時に、細胞増殖を、Ｐｒｅｓｔｏｂｌｕｅ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を製造者指示に従って使用することにより評価した。
図１８のＡ～Ｅは、細胞増殖速度がＣＸＣＬ１２作動薬の存在下で約２０％上昇することが観察され、かつこの上昇が、試験されたＣＸＣＲ４拮抗薬のそれぞれによりブロックされたことを示している。正常な細胞成長条件（１０％血清）下では、Ａ５４９親細胞とＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞との間で、細胞増殖速度に差は観察されなかった。しかしながら、無血清条件下では、Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞（Ａ５４９親細胞ではない）は、ＣＸＣＬ１２の存在下で、用量依存的に細胞増殖の増加を示した（データは図示せず）。約２０％の最大増加が１００ｎＭのＣＸＣＬ１２の存在下で７２時間にわたって達成された。ＣＸＣＬ１２媒介細胞増殖の増加は、血清濃度が上昇するにつれて減衰した（データは図示せず）。細胞増殖速度の上昇がＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２特異的シグナル伝達により媒介されることを確認するために、複数のＣＸＣＲ４特異的拮抗薬、ＡＭＤ３１００、ＬＹ２１０９２４、ＡＭＤ０７０、ＴＧ－００５４、及びＢＫＴ－１４０を評価した。試験されたＣＸＣＲ４拮抗薬のそれぞれが、細胞増殖に関するＣＸＣＬ１２作用を遮断した。ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２シグナル伝達軸が無血清条件下では細胞増殖速度を約２０％上昇させ、これは、ＣＸＣＲ４／ＣＸＣＬ１２が最適以下条件でのみ増殖の増加を誘導するという先行する報告と一致する（Ｂａｌｋｗｉｌｌ，Ｆｒａｎ（２００４）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｔｈｅ Ｃｈｅｍｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗｏｒｋ，４：５４０－５５０）。
ＣＸＣＲ４を標的とする阻害剤は、例えば、ＣＸＣＬ１２の存在により増加したのと同じだけを阻害し得るに過ぎず、より高濃度のＣＸＣＲ４阻害剤の使用は細胞傷害性をもたらし得る（データは図示せず）。これらの結果は、がん処置のためのクリニックにおいて、単独の活性薬剤としてのＣＸＣＲ４阻害剤の使用と関連して腫瘍成長阻害の低い有効性及び有害作用が観察されることを説明し得る。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象では、ＣＸＣＲ４阻害剤単独での処置が腫瘍成長を効果的に阻害し得ない一方で、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の共投与が腫瘍成長を効果的に阻害し得る。
実施例１４。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー量と腫瘍成長との間の相関
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの量と腫瘍成長との間の相関を調査するために、ＣＸＣＲ４ホモマーを安定過剰発現するＡ５４９細胞系（「Ａ５４９－ＣＸＣＲ４細胞」）ならびにＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を安定過剰発現してＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するＡ５４９細胞系（「Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞」）を調製した。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの量を、操作細胞系におけるＰＬＡを介して比較した。図１９のＡ～Ｂは、ＰＬＡにより決定した場合、それぞれＡ５４９親細胞、Ａ５４９－ＣＸＣＲ４細胞、及びＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞において検出される約３０、約８０、及び１５０超のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが存在することを示している。
細胞レベルでＰＬＡにより決定した場合に、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有することが腫瘍成長を用量依存的に増大させるか否かを決定するために、Ａ５４９親細胞及びＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞を調製し、同量の細胞（１×１０７細胞／匹）をヌードマウスに皮下注射して、腫瘍成長速度を比較した。腫瘍の長さ（Ｌ）及び幅（Ｗ）を測定すること、ならびに腫瘍体積を以下の式に基づいて算出することにより腫瘍成長を３日ごとまたは４日ごとにモニターした：体積＝０．５ＬＷ２。図１９Ｃに示されているとおり、移植後４４日目の腫瘍サイズは、Ａ５４９異種移植片マウス（Ａ５４９親細胞を有する）では５６２．８±２４５．９ｍｍ３、及びＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２異種移植片マウス（Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞を有する）では９６７．２±４９３．０ｍｍ３であった。Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞を移植されたマウスの腫瘍成長速度は、Ａ５４９親細胞を移植されたマウスのものよりも速かった。これらの結果は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの形成がＣａ２＋応答を相乗的に増大させ、したがって、腫瘍成長を促進することを示唆している。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの（存在及び）量と腫瘍増殖との間の相関をＡ５４９肺癌細胞系及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳癌細胞系において確認した。Ａ５４９細胞系の状況においてと同じ手法で、ＣＸＣＲ４ホモマーを過剰発現するＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞系（「ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞」）ならびにＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方の過剰発現によりＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞系（「ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞」）を調製し、次いで、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現の量をＰＬＡを介して比較した。図２０のＡ～Ｂに示されているとおり、それぞれＭＤＡ－ＭＢ－２３１親細胞、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞、及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞で検出される約６５、約８０、及び１８０超のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが存在する。細胞レベルでＰＬＡにより検証した場合にＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの（存在及び）量が腫瘍成長を用量依存的に増加するか否かを決定するために、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１親細胞、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞、及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞を調製し、同量の細胞（５×１０６細胞／匹）をヌードマウスの乳房脂肪パッドに同所注射して、腫瘍成長速度を比較した。図２０Ｃに示されているとおり、移植後６７日目の腫瘍サイズは、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植片マウス（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１親細胞を有する）では２６５．８±１６１．８ｍｍ３、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４異種移植片（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞を有する）では４５９．２±３９９．６ｍｍ３、及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２異種移植片マウス（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞を有する）では１１０７．０±１８４．８ｍｍ３であった。腫瘍サイズは、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２異種移植片マウス、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４異種移植片マウス、及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植片マウスの順序で観察され、これは、腫瘍のサイズが、存在するＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの量に応じて増大することを示している。これらの結果は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの量が増加するにつれて、腫瘍がより悪性になることを示唆している。したがって、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを有するがんを、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを標的とする阻害剤、またはＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤などの阻害剤の組合せの投与により効果的に処理することができる。
実施例１５。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するＡ５４９異種移植マウスにおける腫瘍成長に対するＣＸＣＲ４阻害剤単独の作用
ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を安定過剰発現することによりＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２を含有するＡ５４９細胞（「Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞」）を移植されたマウスにおける抗腫瘍作用を、現在開発中か、または販売中のＣＸＣＲ４阻害剤を使用して評価した。Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞（１×１０７細胞／匹）をヌードマウスに皮下注射した。腫瘍サイズが約５０～１００ｍｍ３の平均サイズに達したら、マウス（ｎ＝１０／試験群）をＣＸＣＲ４阻害剤：ＡＭＤ３１００（図２１Ａ）、ＬＹ２５１０９２４（図２１Ｂ）、ＡＭＤ０７０（図２１Ｃ）、またはＴＧ－００５４（図２１Ｄ）で処理した。ＣＸＣＲ４阻害剤を１日１回４週間にわたって投与した。
図２１のＡ～Ｄに示されているとおり、試験されたＣＸＣＲ４阻害剤のほとんどが、腫瘍成長の限られた阻害を示した。加えて、用量依存的腫瘍減少は観察されず、阻害作用はわずかであった。さらに、通常の用量よりも多い投与にも関わらず、腫瘍成長の阻害は限定された。１０ｍｐｋの高用量でのＬＹ２５１０９２４での処理は、わずか２回の用量で、試験されたマウス１０匹のうちの３匹を死亡させた。
実施例１１及び表３～４において記述したとおり、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（Ｃａ２＋シグナルが増加している）において、ＣＸＣＲ４拮抗薬及びＡＤＲＢ２阻害剤での共処理は、ＣＸＣＲ４拮抗薬単独での単一処理よりも有効である。細胞成長アッセイ（実施例１３、及び図１８Ａ～１８Ｅ）において記述したとおり、ＣＸＣＲ４阻害剤は、ＣＸＣＬ１２刺激に起因する細胞増殖の増加を減少させた。ＣＸＣＲ４阻害剤の量を漸増させると、細胞傷害性が生じた。これらの結果は、ＣＸＣＲ４阻害剤とＡＤＲＢ２阻害剤との組合せの共投与は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの機能の阻害、及び腫瘍成長の阻害において、ＣＸＣＲ４阻害剤単独の投与よりも有効であり得ることを示唆している。
実施例１６。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー含有ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞同所異種移植マウス（またはＡ５４９細胞異種移植マウス）における腫瘍成長に対する、単独または組合せでのＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の作用
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー含有ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞同所異種移植マウス：
ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を安定過剰発現することによりＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（「ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞」）を移植されたマウスにおいて、ＣＸＣＲ４阻害剤単独の投与は有効な抗腫瘍処理ではなかった。図２２Ａ～２２Ｃに示されているとおり、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在により増大した腫瘍成長の阻害（抗腫瘍作用）を、単独または組合せでのＣＸＣＲ４阻害剤（ＡＭＤ３１００（図２２Ａ）、ＬＹ２５１０９２４（図２２Ｂ）、ＡＭＤ０７０（図２２Ｃ））及びＡＤＲＢ２阻害剤（カルベジロール）の投与を比較することにより評価した。雌のＢａｌｂ／ｃ－ｎｕ／ｎｕマウスに、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞を同所移植した（１×１０６細胞／匹）。ＡＭＤ３１００（２．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ）、ＬＹ２５１０９２４（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）、ＡＭＤ０７０（３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ）及び／またはカルベジロール（３０ｍｇ／ｋｇ）を１日１回４週間にわたって投与した（合計２８回）。ＡＭＤ３１００、ＬＹ２５１０９２４、及びＡＭＤ０７０は皮下投与し、カルベジロールは経口投与した。腫瘍のサイズは、薬物投与初日での１００に対して腫瘍サイズを換算することにより算出した（腫瘍成長％）。図２２Ｃに示されているとおり、ＣＸＣＲ４阻害剤ＡＭＤ０７０単独またはＡＤＲＢ２阻害剤カルベジロール単独の投与は、限られた腫瘍成長の抑制を示した。しかしながら、ＡＭＤ０７０とカルベジロールとの共投与は、それぞれの単一投与と比較して腫瘍の成長を効果的に阻害し、かつ組合せ（カルベジロールを含む）を投与した場合には、ＣＸＣＲ４阻害剤ＡＭＤ０７０の量が増加するにつれて、腫瘍の成長も用量依存的に減少した。これらの結果は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー形成により増大する腫瘍のサイズの阻害（抗腫瘍作用）を、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の共投与を介して得ることができることを示唆している。
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー含有Ａ５４９細胞異種移植マウス：
腫瘍成長に対するＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー阻害剤の抗腫瘍作用を調査するために、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を安定過剰発現することによりＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するＡ５４９細胞（「Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞）（１×１０７細胞／匹）をヌードマウスに皮下注射した。腫瘍サイズが５０～１００ｍｍ３の平均に達したら、単独または組合せでのＣＸＣＲ４阻害剤（ＡＭＤ３１００）、ＡＤＲＢ２阻害剤（カルベジロール）を投与した。
図２２Ｄは、単一投与または共投与を介して１日１回４週間にわたって（合計２８回）投与されたＣＸＣＲ４阻害剤ＡＭＤ３１００（２．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ）及び／またはＡＤＲＢ２阻害剤カルベジロール（３０ｍｇ／ｋｇ）のインビボ抗腫瘍作用について、腫瘍成長速度を比較するためのグラフである；ＡＭＤ３１００は皮下投与し、カルベジロールは経口投与した。腫瘍の長さ（Ｌ）及び幅（Ｗ）を測定することならびに腫瘍体積を以下の式に基づいて算出することにより腫瘍成長を３日ごとまたは４日ごとにモニターした：体積＝０．５ＬＷ２。
実施例１７Ａ～１７Ｂ。リガンド利用ＴＲ－ＦＲＥＴによるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの検出
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの検出を、時間分解蛍光エネルギー移動（ＴＲ－ＦＲＥＴ）を使用して評価した。ＴＲ－ＦＲＥＴは、時間分解蛍光分析（ＴＲＦ）の低い背景アスペクトを、ＦＲＥＴの均一なアッセイ形式と組み合わせている。生じたアッセイは、柔軟性、信頼性及び感度の上昇をもたらす。ＦＲＥＴは、２つのフルオロフォア、１つのドナー及び１つのアクセプターを必要とする。ドナー及びアクセプターの２つが相互に所与の近接内にあるならば、エネルギー源によるドナーの励起は、アクセプターへのエネルギー移動をもたらす。次いで、アクセプターは、その特徴的な波長で発光する。Ａ５４９細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞の密度で９６ウェルプレートに播種した。アデノウイルス感染、続く、３７℃、５％ＣＯ２での４８時間のインキュベーションにより、Ａ５４９細胞において、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２が一過性に過剰発現された。ＣＸＣＲ４発現アデノウイルスを０、０．１、０．５、１．２５、２．５、５、１０及び２０のＭＯＩで処理し、ＡＤＲＢ２発現アデノウイルスを３倍高いＭＯＩで処理した。ＨＡ－ＶＣをコードするアデノウイルスを使用して、形質導入されるアデノウイルスの全量を調節した。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを特徴づけるために、標識リガンドを用いるＴＲ－ＦＲＥＴアッセイを、蛍光標識プロプラノロール及びテルビウム標識ＴＺ１４０１１を用いて実行した。図２３Ａは、ＦＲＥＴシグナルがＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２発現の量に応じて増加し（形成するＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの量に影響を及ぼし）、未標識プロプラノロールがＡＤＲＢ２拮抗薬に対する競合物質プロプラノロール－ｇ２として処理される場合、ＦＲＥＴシグナルが消失することを示しており、これがＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２特異的シグナルであることを示している。これらの結果は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーがリガンド利用ＴＲ－ＦＲＥＴ方法により定量的に検出され得ることを示している。
蛍光がＧＰＣＲ特異的リガンドにコンジュゲートしているリガンド－蛍光複合体を使用することに加えて、蛍光がＧＰＣＲ特異的抗体または二次抗体にコンジュゲートしている抗体－蛍光複合体をＴＲ－ＦＲＥＴのために使用してもよい。
Ｕ２ＯＳ細胞を９６ウェルプレートに、１ウェルあたり２０，０００細胞の密度で播種した。アデノウイルスシステムを使用すると（０．９～３０ＭＯＩのＣＸＣＲ４担持アデノウイルス及び０．５～１５ＭＯＩのＡＤＲＢ２担持アデノウイルス）、３７℃加湿インキュベーター内での一晩のインキュベーションの後に、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方が一過性に過剰発現された。ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２についての抗体利用ＴＲ－ＦＲＥＴのダイナミックレンジ及び検出限界を解析するために、広範な感染多重度（ＭＯＩ）のＣＸＣＲ４担持及びＡＤＲＢ２担持アデノウイルス（それぞれＡｄ－ＣＸＣＲ４及びＡｄ－ＡＤＲＢ２）を採用した。各アデノウイルスの４８時間感染後に、細胞を洗浄し、４％パラホルムアルデヒドを用いて室温で１０分間にわたって固定した。細胞を２回洗浄した後に、細胞を透過性にするために０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含有するＤＰＢＳを室温で１０分間にわたって処理した。次いで、細胞を室温で３０分間にわたってブロックし、続いて、ウサギ抗ＣＸＣＲ４抗体及びマウス抗ＡＤＲＢ２抗体の両方と共に室温で３時間にわたってインキュベートした。細胞をＤＰＢＳで４回洗浄した後に、テルビウムクリプタートで標識されたヤギ抗ウサギＩｇＧ及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７で標識されたヤギ抗マウスＩｇＧを室温で１時間にわたって処理した。次いで、細胞をＤＰＢＳで４回洗浄し、続いて、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ ＬＵＸ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒを使用して分析した。
抗体利用ＴＲ－ＦＲＥＴの性能は、２ Ａｄ－ＣＸＣＲ４：１ Ａｄ－ＡＤＲＢ２の比において、最高のシグナルを示した（図２３Ｂ）。したがって、Ａｄ－ＣＸＣＲ４及びＡｄ－ＡＤＲＢ２をそれぞれ３０ＭＯＩ及び１５ＭＯＩから半分に連続希釈した。ＨＡ－ＶＣ担持アデノウイルスを陰性対照として使用した。０．９ＭＯＩのＡｄ－ＣＸＣＲ４及び０．５ＭＯＩのＡｄ－ＡＤＲＢ２で、ＦＲＥＴ有効性が成功裏に検出され、用量依存も観察された。これらの結果は、抗体利用ＴＲ－ＦＲＥＴがＧＰＣＲヘテロマー診断のための有望なツールであり得ることを示唆している。
実施例１８Ａ～１８Ｃ。血液がん及び固形腫瘍細胞系における、ＰＬＡによるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー検出ならびにＲＴ－ｑＰＣＲによるＣＸＣＲ４またはＡＤＲＢ２ ＲＮＡ発現レベルの定量化
個々のＧＰＣＲ、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２により産生されるＲＮＡの量と、血液がん及び固形腫瘍細胞系において検出されるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの量との間の関係を調べた。ＣＸＣＲ４は、様々なヒトがん、例えば、骨髄腫及び白血病などの血液学的がん、ならびに肺癌及び乳癌などの固形腫瘍で過剰発現される。また、この過剰発現は、再発のリスクの増大及び不十分な全生存期間と相関している。
ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２ ＲＮＡの発現が、ｑＰＣＲにより検査された３つすべての固形腫瘍細胞系において観察された：Ａ５４９（肺癌）、Ｕ２ＯＳ（骨肉腫）、及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１（乳癌）（図２４Ａ）。Ａ５４９、Ｕ２ＯＳ、及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの内因性発現レベルを評価するために、ＰＬＡを、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２のために２つの異なる一次抗体を用いて利用した。得られたローリングサークル増幅（ＲＣＡ）産物は赤色の蛍光シグナルとして示され、細胞表面全体が広く染色され、核（ＤＡＰＩで染色されている）及びサイトゾル（図２４Ｂ）を覆っていた。各細胞での平均ＰＬＡシグナルが、細胞数で割ったＲＣＡ産物として表示された。平均して、各ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞は約６０のＲＣＡ産物の値を有し、続いて、Ａ５４９細胞は約３５のＲＣＡ産物を有し、及びＵ２ＯＳ細胞は約２０のＲＣＡ産物を有する（図２４Ｃ）。ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２のＲＮＡ発現レベルは、Ａ５４９及びＵ２ＯＳ細胞のものと比較して、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞系において最高であり（ＣＸＣＲ４／ＡＤＲＢ２のデルタＣｔ：７．４／８．８、１０．６／１２．４、１２．８／１０．５）、ＰＬＡ値も、Ａ５４９及びＵ２ＯＳ細胞と比較して、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞系において最高であった。ＲＮＡ発現とＰＬＡ値との間に有意な相関が存在することが分かり得る。これらの結果は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを有する患者を、ＰＬＡ及びＲＮＡ発現レベルの分析によりスクリーニングすることができることを示している。
ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２ ＲＮＡの発現が、ｑＰＣＲにより検査された３つすべての血液がん細胞系で観察された：ＨＬ６０（白血病）、Ｕ９３７（白血病）、及びＲＰＭＩ ８２２６（骨髄腫）（図２５Ａ）。ＨＬ－６０、Ｕ９３７及びＲＰＭＩ ８２２６細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの内因性発現レベルを評価するために、ＰＬＡを、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２のために２つの異なる一次抗体を用いて利用した。得られたローリングサークル増幅（ＲＣＡ）産物は、細胞表面全体が染色された赤色の蛍光シグナルとして示された（図２５Ｂ）。各細胞での平均ＰＬＡシグナルが、細胞数で割ったＲＣＡ産物として表示された。平均して、各ＨＬ－６０細胞は、３０のＲＣＡ産物の値を有し、それに、ＨＬ－６０の値のほぼ半分であったＵ９３７及びＲＰＭＩ ８２２６細胞の両方が続いた（図２５Ｃ）。定量的ＰＣＲによりＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２のＲＮＡ発現レベルを比較すると、ＡＤＲＢ２発現は、これら３つの細胞において同様であったが（デルタＣｔ：９）、ＨＬ６０細胞におけるＣＸＣＲ４の発現レベルは他の細胞系Ｕ９３７及びＲＰＭＩ ８２２６のものの２倍であった（デルタＣｔ値：４．７、５．９、５．８）。これらの差は、ＰＬＡ値において同様のパターンを示し、これは、ＲＮＡ発現レベルとＰＬＡ値との間の有意な相関を示している。これらの結果は、懸濁細胞のＰＬＡシグナルを成功裏に検出することができることを示しており、ＨＬ－６０細胞が、Ｕ９３７及びＲＰＭＩ ８２２６細胞よりも２倍多いＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを有することを示している。
ＣＸＣＲ４ヘテロマーの診断は、ＣＸＣＲ４テロマーを発現する対象をスクリーニングして、パートナーＧＰＣＲの種類に従って選択された薬物を供給するために必須である。ＣＸＣＲ４ヘテロマーを診断するための方法として本発明者らの研究所において既に設定されているＰＬＡは、ホルマリン固定パラフィン包埋（ＦＦＰＥ）試料中の抗体を使用して、固形癌対象から抽出された組織を診断する方法である。これらの結果は、血液がん対象の試料、尿、及び沈降物などの液体生検においてＣＸＣＲ４ヘテロマーを検出する可能性を提供する。
実施例１９。ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２プロトマーを内因性発現する天然細胞において増強されるＣＸＣＲ４下流シグナル伝達のＣａ２＋動員アッセイによる評価
ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーなどのＣＸＣＲ４－ＧＰＣＲｘヘテロマーの特性を、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方をそれぞれ内因性発現するＵ９３７細胞（図２６Ａ）及びＨＬ－６０細胞（図２６Ｂ）におけるカルシウム動員アッセイにより、それらのそれぞれの作動薬の一方または両方での刺激または共刺激時に生じるカルシウムシグナル伝達を測定することにより評価した。カルシウム動員を、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ３を使用して測定した。
Ｕ９３７細胞（図２６Ａ）及びＨＬ－６０細胞（図２６Ｂ）の両方において、ＣＸＣＲ４作動薬であるＣＸＣＬ１２単独（２００ｎＭで）での刺激が細胞間カルシウム動員を誘導した一方で、ＡＤＲＢ２作動薬であるホルモテロール単独（１０ｕＭ）での刺激は、カルシウム応答を誘導しなかった。しかしながら、両方の作動薬（ＣＸＣＬ１２及びホルモテロール、それぞれ２００ｎＭ及び１０ｕＭ）での共刺激は、単一作動薬刺激により誘導される応答と比べて、Ｕ９３７細胞（図２６Ａ）及びＨＬ－６０細胞（図２６Ｂ）の両方においてカルシウム応答の著しい増大をもたらした（ＣＸＣＬ１２での単一刺激と比べて、Ｕ９３７細胞ではカルシウム応答が約４倍増大し、ＣＸＣＬ１２での単一刺激と比べて、ＨＬ－６０細胞ではカルシウム応答が約８倍増大した）。
実施例２０。Ｕ９３７及びＨＬ－６０細胞系におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー形成時に増強されるＣＸＣＲ４下流シグナル伝達のＣａ２＋動員阻害 － 組合せ阻害剤処理に対する単一阻害剤処理の比較
Ｕ９３７細胞及びＨＬ－６０細胞の両方におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのカルシウム応答の増大の抑制におけるＣＸＣＲ４阻害剤の有効性（実施例１９）を、代表的なＡＤＲＢ２阻害剤であるカルベジロールの存在または非存在下で測定した。実施例１９において論述したとおり、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのカルシウム応答の増大を、作動薬であるＣＸＣＬ１２（２００ｎＭ）及びホルモテロール（１０μＭ）により誘導し、ＣＸＣＲ４阻害剤（ＡＤＲＢ２阻害剤であるカルベジロールの存在または非存在下）を、作動薬で細胞を処理する２時間前に添加した。カルシウム動員を、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ３を使用して測定し、生じたＣａ２＋応答のＩＣ５０を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して算出した。データを表５に示す。
Figure 2022532667000006
表５に示されているとおり、Ｕ９３７細胞において、それぞれのＣＸＣＲ４阻害剤のＩＣ５０値の低下と共に示されているとおり、ＣＸＣＲ４阻害剤であるＡＭＤ３１００、ウロクプルマブ及びＴＧ－００５４は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２シグナル伝達を１０μＭのカルベジロールの存在下でより効率的に抑制した。特に、ＴＧ－００５４のＩＣ５０値はカルベジロールの存在下で有意に低下した。カルベジロールと、それぞれＡＭＤ３１００、ウロクプルマブ、またはＴＧ－００５４との共処理時に、Ｃａ２＋応答のＩＣ５０値は、約６．４倍（３．３４ｎＭから０．５２ｎＭへ）、約４．８倍（１．２５ｎＭから０．２６ｎＭへ）及び約６９倍（２４ｎＭから０．３５ｎＭへ）低下した。
表５に示されているとおり、ＨＬ－６０細胞において、ＣＸＣＲ４阻害剤のそれぞれが、１０μＭのカルベジロールの存在下でＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２シグナル伝達をより効率的に抑制した。カルベジロールと、それぞれＡＭＤ３１００、ウロクプルマブ、ＡＭＤ０７０及びＴＧ－００５４との共処理時に、Ｃａ２＋応答のＩＣ５０値は、約４．４倍（１．５０ｎＭから０．３４ｎＭへ）、約３．３倍（０．０２ｎＭから０．００６ｎＭへ）、約１２．７倍（３．５６ｎＭから０．２８ｎＭへ）及び約１２．５倍（４ｎＭから０．３２ｎＭへ）低下した。
これらの結果は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞において、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤一斉での共処理が、ＣＸＣＲ４阻害剤単独での単一処理よりも効果的にＣａ２＋応答の増大を阻害することを示唆している。
実施例２１。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞系におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー形成時に増強されるＣＸＣＲ４下流シグナル伝達のＣａ２＋動員の阻害 － 組合せ阻害剤処理に対する単一阻害剤処理の比較
ＡＤＲＢ２のカルシウム応答を抑制する際のＡＤＲＢ２阻害剤の有効性を、ＡＤＲＢ２のみをコードするアデノウイルスを形質導入されたＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞において測定し、シグナル伝達を、サルメテロール（１μＭ）で細胞を刺激して測定した。データを表６に示す。加えて、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２をコードするアデノウイルスを共形質導入されたＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞において増強されるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのカルシウム応答（増強されるシグナル伝達）を抑制する際のＡＤＲＢ２阻害剤の有効性を、代表的なＣＸＣＲ４阻害剤であるＡＭＤ３１００の存在または非存在下で測定した。Ｃａ２＋流を、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞をＣＸＣＬ１２（２０ｎＭ）及びサルメテロール（１μＭ）で共刺激して測定し、ＡＤＲＢ２阻害剤（ＣＸＣＲ４阻害剤であるＡＭＤ３１００の存在または非存在下）を、細胞を作動薬で処理する２時間前に添加した。カルシウム動員を、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ３を使用して測定し、生じたカルシウム応答のＩＣ５０値をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して算出した。データを表６に示す。
Figure 2022532667000007
表６に示されているとおり、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞では、ブプラノロールの単一処理は、ＩＣ５０値としての０．８２ｎＭでＡＤＲＢ２シグナル伝達を阻害し、ラベタロールの単一処理は、ＩＣ５０値としての２４．８１ｎＭでＡＤＲＢ２シグナル伝達を阻害した。ＡＤＲＢ２阻害剤であるブプラノロールまたはラベタロールはＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２シグナル伝達を、ＩＣ５０値の低下で示されるとおり、ＡＭＤ３１００の非存在下でのＡＤＲＢ２阻害剤のＩＣ５０値と比べて、６５０ｎＭ（ＩＣ９０）のＡＭＤ３１００の存在下で、より高い効力でより効率的に抑制した。ブプラノロールのＩＣ５０の値はＡＭＤ３１００との組合せで、単一処理と比べて約３３倍低下した一方で（３．１２ｎＭから０．１０ｎＭへ）、ラベタロールのＩＣ５０はＡＭＤ３１００との組合せで、単一処理と比べて約１０７倍低下した（５７．９８ｎＭから０．５４ｎＭへ）。これらの結果は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞において、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤一斉での共処理がＣａ２＋応答の増大を、ＡＤＲＢ２阻害剤単独での単一処理よりも効果的に阻害することを示唆している。
実施例２２。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞系におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー形成時に増強されるＣＸＣＲ４下流シグナル伝達のＣａ２＋動員阻害 － 組合せ阻害剤処理に対するＴＧ－００５４単一処理の比較
ＣＸＣＲ４の応答を抑制する際のＣＸＣＲ４阻害剤であるＴＧ－００５４の有効性を、ＣＸＣＲ４のみをコードするアデノウイルスを形質導入されたＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞において測定し、シグナル伝達を、ＣＸＣＬ１２（２０ｎＭ）で細胞を刺激して測定した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞（ＣＸＣＲ４を発現）において、ＴＧ－００５４は、６５．７８±１．３４のＩＣ５０値（ｎＭ）を有すると測定された。次に、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの増強されるシグナル伝達を抑制する際のＴＧ－００５４の有効性を、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２をコードするアデノウイルスを共形質導入されたＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞において、ＡＤＲＢ２阻害剤（１０ｕＭ）の存在または非存在下で測定した。データを表７に示す。Ｃａ２＋流を、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞をＣＸＣＬ１２（２０ｎＭ）及びサルメテロール（１μＭ）で共刺激して測定し、ＣＸＣＲ４阻害剤ＴＧ－００５４（ＡＤＲＢ２阻害剤の存在または非存在下）を、作動薬で細胞を処理する２時間前に添加した。カルシウム動員を、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ３を使用して測定し、生じたカルシウム応答のＩＣ５０値をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して算出した。データを表７に示す。
Figure 2022532667000008
上述のとおり、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞では、ＴＧ－００５４の単一処理は、ＣＸＣＲ４のみを形質導入されたＭＤＡ－ＭＢ－２３１において、ＩＣ５０値としての６５．７８ｎＭでＣＸＣＲ４シグナル伝達を阻害した。表７に示されているとおり、ＴＧ－００５４はＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２シグナル伝達を、ＩＣ５０値の低下で示されるとおり、ＡＤＲＢ２阻害剤の存在下で、ＡＤＲＢ２阻害剤の非存在下での単一の処理と比べて高い効力でより効率的に抑制した。ＴＧ－００５４のＩＣ５０値は、カルベジロールとの組合せで約４６４５倍低下し（９２．８９ｎＭから０．０２ｎＭへ）、ラベタロールとの組合せで約３５７３倍低下し（９２．８９ｎＭから０．０２６ｎＭへ）、ＡＤＲＢ２阻害剤であるアルプレノロール、カラゾロール、プロパフェノン、またはチモロールのいずれか１種との組合せで処理した場合には約１０倍以上低下した。これらの結果は、ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞において、ＴＧ－００５４及びＡＤＲＢ２阻害剤で一斉に共処理することで、ＴＧ－００５４単独での単一処理よりも効果的に、Ｃａ２＋応答の増大が阻害されることを示唆している。
例示的な実施形態
実施形態Ａ１。がんに罹患している対象の細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達の抑制方法であって、前記対象に、
ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び
ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤
を投与することを含み、
その際、
ｉ）前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因し；かつ
ｉｉ）前記投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤が、前記がん対象における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、前記方法。
実施形態Ａ２。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象におけるがんの処置方法であって、前記対象に、
ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び
ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤
を投与することを含み、
その際、
ｉ）増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因し；かつ
ｉｉ）前記投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤が、前記がん対象における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、前記方法。
実施形態Ａ３。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象におけるがんの処置方法であって、
ａ）前記対象の細胞がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有し、その際、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因するか否かを決定すること；及び
ｂ）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するならば、前記がん対象に：
ｉ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び
ｉｉ）ＡＤＲＢ２阻害剤
を投与することを含む、前記方法。
実施形態Ａ４。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、
１）前記対象が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有するか否かを、前記対象から生体試料を得るか、または得ていること；及び
ｉ）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否か；または
ｉｉ）ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが：前記対象由来細胞（複数可）において前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性もしくは機能を変化させる否か；前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる否か；もしくは前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する前記対象においてがんの進行を減少させるか否か
を決定するために、前記生体試料でアッセイを実行するか、もしくは実行していることにより決定すること；ならびに
２）前記対象が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有するならば、前記がん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに
３）前記対象が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有さなければ、前記がん対象に、前記ブリキサフォルまたは前記ＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含む、前記方法。
実施形態Ａ５。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、
１）前記対象が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有するか否かを、前記対象から生体試料を得るか、または得ていること；及び
ｉ）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否か；または
ｉｉ）ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが：前記対象由来細胞（複数可）において前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性もしくは機能を変化させる否か；前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる否か；もしくは前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する前記対象においてがんの進行を減少させるか否か
を決定するために、前記生体試料でアッセイを実行するか、もしくは実行していることにより決定すること；ならびに
２）前記対象が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有するならば、前記がん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに
３）前記対象が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有さなければ、前記がん対象に、前記ブリキサフォルまたは前記ＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含み、その際、
ａ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有する前記対象における前記がんの進行が、前記がん対象への前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せの投与時に、前記ブリキサフォルまたは前記ＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの前記単一の阻害剤の投与と比べて５～１００％の範囲でより多く減少し；
ｂ）前記ブリキサフォルの有効性が、前記ＡＤＲＢ２阻害剤との組合せで前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有する前記対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合の前記ブリキサフォルの有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇し；及び／または
ｃ）前記ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性が、前記ブリキサフォルとの組合せで前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有する前記対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合の前記ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇する、前記方法。
実施形態Ａ６。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、
１）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを、前記対象から生体試料を得るか、または得ていること、及び前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが前記対象の細胞に存在するか否かを決定するために前記生体試料でアッセイを実行する、または実行していることにより決定し；その際、前記生体試料で実行されるアッセイが共内在化アッセイ、共局在化アッセイ、インサイチューハイブリダイゼーション、免疫組織化学、免疫電子顕微鏡法、近接度に基づくアッセイ、共免疫沈降アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、ＲＮＡｓｅｑ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、ＣＸＣＲ４の発現レベル、ＡＤＲＢ２の発現レベル、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベル、マイクロアレイ、または蛍光動物アッセイのうちの１つもしくは複数であるか、または１つもしくは複数を含むこと；
２）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するならば、前記がん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに
３）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有しなければ、前記がん対象に、前記ブリキサフォルまたは前記ＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含む、前記方法。
実施形態Ａ７。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、
１）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを、前記対象から生体試料を得るか、または得ていること、及び前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが前記対象の細胞に存在するか否かを決定するために前記生体試料でアッセイを実行する、または実行していることにより決定し；その際、前記生体試料で実行されるアッセイが共内在化アッセイ、共局在化アッセイ、インサイチューハイブリダイゼーション、免疫組織化学、免疫電子顕微鏡法、近接度に基づくアッセイ、共免疫沈降アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、ＲＮＡｓｅｑ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、ＣＸＣＲ４の発現レベル、ＡＤＲＢ２の発現レベル、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベル、マイクロアレイ、または蛍光動物アッセイのうちの１つもしくは複数であるか、または１つもしくは複数を含むこと；
２）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するならば、前記がん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに
３）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有しなければ、前記がん対象に、前記ブリキサフォルまたは前記ＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含み、その際、
ａ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有する前記対象における前記がんの進行が、前記がん対象への前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せの投与時に、前記ブリキサフォルまたは前記ＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの前記単一の阻害剤の投与と比べて５～１００％の範囲でより多く減少し；
ｂ）前記ブリキサフォルの有効性が、前記ＡＤＲＢ２阻害剤との組合せで前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有する前記対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合の前記ブリキサフォルの有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇し；及び／または
ｃ）前記ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性が、前記ブリキサフォルとの組合せで前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有する前記対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合の前記ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇する、前記方法。
実施形態Ａ８。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象においてがんを処置する際に使用するための医薬キットであって、
ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び
ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤を含み；
その際、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、前記医薬キット。
実施形態Ａ９。ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象においてがんを処置する際に使用するための医薬組成物であって、
ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；
ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤；及び
ｃ）薬学的に許容される担体を含み;
その際、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、前記医薬組成物。
実施形態Ａ１０。細胞中のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達の抑制方法であって、前記細胞に：
ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び
ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤
を投与することを含み；
その際、
ｉ）前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因し；かつ
ｉｉ）前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤との接触が、前記細胞において前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、前記方法。
実施形態Ａ１１。前記細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを決定することをさらに含む、実施形態Ａ１０に記載の抑制方法。
実施形態Ａ１２。細胞においてＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を抑制する際に使用するための医薬キットであって、
ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び
ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤
を含み；
その際、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、前記医薬キット。
実施形態Ａ１３。細胞においてＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を抑制する際に使用するための医薬組成物であって、
ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；
ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤；及び
ｃ）薬学的に許容される担体
を含み；
その際、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、前記医薬組成物。
実施形態Ａ１４。前記細胞が対象の細胞である、実施形態Ａ１０～Ａ１３のいずれか１つに記載の抑制方法。
実施形態Ａ１５。前記対象の細胞ががん細胞である、実施形態Ａ１４に記載の抑制方法。
実施形態Ａ１６。前記細胞ががん細胞である、実施形態Ａ１～Ａ１３のいずれか１つに記載の抑制方法。
実施形態Ａ１７。前記方法が、前記がん対象において前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在を検出することをさらに含む、実施形態Ａ１～Ａ９のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１８。前記方法が、前記がん対象において前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを同定することをさらに含む、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１９。前記方法が、前記対象から生体試料を得ることをさらに含む、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ１８のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ２０。前記方法が、前記対象から得られた前記生体試料でアッセイを実行することをさらに含む、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ１９のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ２１。
前記方法が、
ｉ）前記がん対象から生体試料を得ること、または得ていること；
ｉｉ）前記がん対象から得られた前記生体試料においてＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在、アイデンティティ、または存在及びアイデンティティを決定するための診断アッセイを行うこと、または行っていること；ならびに
ｉｉｉ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を抑制するために、ブリキサフォルとの組合せで投与するためのＡＤＲＢ２阻害剤を選択すること
をさらに含む、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ２０のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ２２。前記方法が、前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを決定することであって、前記対象から得られた生体試料においてアッセイを実行することを含む、前記決定することをさらに含む、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ２１のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ２３。前記方法が、前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを決定することであって、前記対象から生体試料を得ること、及び前記対象から得られた前記生体試料においてアッセイを実行することを含む、前記決定することをさらに含む、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ２２のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ２４。前記対象から得られた前記生体試料が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ２３のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ２５。前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ２４のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ２６。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、以下の特徴：
１）前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用していること；
２）増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因すること；及び／または
３）ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが：
ｉ）前記細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる；
ｉｉ）前記細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる；及び／または
ｉｉｉ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞のヘテロマー特異的特性を変化させること
のうちの２つ以上を有する、実施形態Ａ１～Ａ２５のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ２７。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、以下の特徴：
１）前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用していること；
２）増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因すること；及び／または
３）ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが：
ｉ）前記対象由来細胞（複数可）における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる；
ｉｉ）前記対象由来細胞（複数可）における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる；
ｉｉｉ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる；及び／または
ｉｖ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する前記対象においてがん進行を減少させること
のうちの２つ以上を有することを含む、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ２５のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ２８。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用していることを有すると特徴づけられる、実施形態Ａ１～Ａ２７のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ２９。前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用し、共内在化アッセイ、共局在化アッセイ、インサイチューハイブリダイゼーション、免疫組織化学、免疫電子顕微鏡法、近接度に基づくアッセイ、共免疫沈降アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、ＲＮＡｓｅｑ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、ＣＸＣＲ４の発現レベル、ＡＤＲＢ２の発現レベル、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベル、マイクロアレイ、または蛍光動物アッセイのうちの１つまたは複数により決定される、実施形態Ａ１～Ａ２８のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ３０。前記近接度に基づくアッセイが共鳴エネルギー移動（ＲＥＴ）、生物発光ＲＥＴ（ＢＲＥＴ）、蛍光ＲＥＴ（ＦＲＥＴ）、時間分解蛍光ＲＥＴ（ＴＲ－ＦＲＥＴ）、抗体利用ＦＲＥＴ、リガンド利用ＦＲＥＴ、二分子蛍光補完（ＢｉＦＣ）、または近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）であるか、またはそれを含む、実施形態Ａ１～Ａ２９のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ３１。前記ＴＲ－ＦＲＥＴがリガンド利用ＴＲ－ＦＲＥＴである、実施形態Ａ３０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ３２。前記ＴＲ－ＦＲＥＴが抗体利用ＴＲ－ＦＲＥＴである、実施形態Ａ３０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ３３。前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用し、共内在化アッセイ、二分子蛍光補完（ＢｉＦＣ）、ＲＴ－ＰＣＲ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、ＣＸＣＲ４の発現レベル、ＡＤＲＢ２の発現レベル、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベル、または近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）のうちの１つまたは複数により決定される、実施形態Ａ１～Ａ３０のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ３４。前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用し、共内在化アッセイにより決定される、実施形態Ａ３３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ３５。前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用し、二分子蛍光補完（ＢｉＦＣ）により決定される、実施形態Ａ３３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ３６。前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用し、近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）により決定される、実施形態Ａ３３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ３７。前記アッセイが、前記対象から得られた前記生体試料における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在を決定する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ３６のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ３８。前記アッセイが、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの前記ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２構成要素の共局在化及び相互作用を決定する、実施形態Ａ１～Ａ３７のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ３９。前記アッセイが前記対象の細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在を決定する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ３８のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ４０。前記アッセイが、前記対象から得られた前記生体試料における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在を決定する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ３９のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ４１。前記アッセイが、前記対象における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在を決定する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ４０のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ４２。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因することを有すると特徴づけられる、実施形態Ａ１～Ａ４１のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ４３。前記増強される下流シグナル伝達が前記対象の細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ４２のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ４４。前記増強される下流シグナル伝達が前記対象の細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在に起因する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ４３のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ４５。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが前記増強される下流シグナル伝達をもたらす、実施形態Ａ１～Ａ４４のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ４６。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが前記対象の細胞において前記増強される下流シグナル伝達をもたらす、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ４５のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ４７。前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのアゴニズムに起因する、実施形態Ａ１～Ａ４６のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ４８。前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４アゴニズムに起因する、実施形態Ａ１～Ａ４７のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ４９。前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２アゴニズムに起因する、実施形態Ａ１～Ａ４７のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ５０。前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４アゴニズム及びＡＤＲＢ２アゴニズムに起因する、実施形態Ａ１～Ａ４７のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ５１。前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４、前記ＡＤＲＢ２、または前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの下流である、実施形態Ａ１～Ａ５０のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ５２。前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４の下流である、実施形態Ａ５１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ５３。前記増強される下流シグナル伝達が前記ＡＤＲＢ２の下流である、実施形態Ａ５１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ５４。前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの下流である、実施形態Ａ５１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ５５。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達が、それぞれ個々のプロトマーの状況におけるＣＸＣＲ４プロトマーまたはＡＤＲＢ２プロトマーからの下流シグナル伝達と比べてのものである、実施形態Ａ１～Ａ５０のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ５６。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達が、個々のプロトマーの状況におけるＣＸＣＲ４プロトマーからの下流シグナル伝達と比べてのものである、実施形態Ａ５５に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ５７。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達が、個々のプロトマーの状況におけるＡＤＲＢ２プロトマーからの下流シグナル伝達と比べてのものである、実施形態Ａ５５に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ５８。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達が、それぞれ個々のプロトマーの状況におけるＣＸＣＲ４プロトマー及びＡＤＲＢ２プロトマーからの下流シグナル伝達と比べてのものである、実施形態Ａ５５に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ５９。前記増強される下流シグナル伝達が、増強されるカルシウム動員量である、実施形態Ａ１～Ａ５８のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ６０。前記増強されるカルシウム動員量を細胞内Ｃａ２＋アッセイにより決定する、実施形態Ａ５９に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ６１。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を細胞内Ｃａ２＋アッセイにより決定する、実施形態Ａ１～Ａ６０のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ６２。前記細胞内Ｃａ２＋アッセイがカルシウム動員アッセイである、実施形態Ａ６１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ６３。前記カルシウム動員アッセイが、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが前記増強される下流シグナル伝達をもたらすことを決定する、実施形態Ａ６２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ６４。前記カルシウム動員アッセイが、前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在に起因することを決定する、実施形態Ａ６２またはＡ６３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ６５。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、
ａ）ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に前記細胞内の個々のプロトマーの状況において前記ＣＸＣＲ４または前記ＡＤＲＢ２のいずれかが、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかまたはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらし；かつ
ｂ）前記ＣＸＣＬ１２及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と比べて増強されるカルシウム動員を示すような、前記増強されるカルシウム動員量を示す、実施形態Ａ１～Ａ６４のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ６６。
ｉ）前記細胞内の前記個々のプロトマーの状況における前記プロトマーＣＸＣＲ４またはＡＤＲＢ２からの前記カルシウム動員が、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、非相乗的であり；かつ
ｉｉ）前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーからの前記カルシウム動員が、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、相乗的である、
実施形態Ａ１～Ａ６５のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ６７。カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記個々のプロトマーの状況において：
ａ）前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２の非存在下での前記細胞内の前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４、または
ｂ）前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４の非存在下での前記細胞内の前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２
が、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかまたはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらす、実施形態Ａ１～Ａ６６のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ６８。カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記個々のプロトマーの状況において独立に、：
ａ）前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２の非存在下での前記細胞内の前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４、及び
ｂ）前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４の非存在下での前記細胞内の前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２
が、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかまたはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらす、実施形態Ａ１～Ａ６７のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ６９。カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、前記ＣＸＣＬ１２及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの前記細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも多いカルシウム動員量をもたらす、実施形態Ａ１～Ａ６８のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ７０。カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの共刺激に起因した前記カルシウム動員量が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員の合計と比べて増強されるカルシウム動員量である、実施形態Ａ１～Ａ６９のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ７１。カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因した前記増強されるカルシウム動員量が、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの前記細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも多い、カルシウム動員量である、実施形態Ａ１～Ａ７０のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ７２。カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因した前記増強されるカルシウム動員量が、前記ＣＸＣＬ１２及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの前記細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも少なくとも１０％多い、少なくとも２０％多い、少なくとも３０％多い、少なくとも４０％多い、少なくとも５０％多い、少なくとも７５％多い、または少なくとも９０％多いカルシウム動員量である、実施形態Ａ７１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ７３。カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因した前記増強されるカルシウム動員量が、前記ＣＸＣＬ１２及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの前記細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも少なくとも１００％多いカルシウム動員量である、実施形態Ａ７１またはＡ７２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ７４。前記増強されるカルシウム動員量が、相乗的なカルシウム動員の量である、実施形態Ａ７１～Ａ７３のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ７５。カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞からの前記相乗的なカルシウム動員の量が、前記ＣＸＣＬ１２及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの前記細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも少なくとも１０％多い、少なくとも２０％多い、少なくとも３０％多い、少なくとも４０％多い、少なくとも５０％多い、少なくとも７５％多い、または少なくとも９０％多いカルシウム動員量である、実施形態Ａ７４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ７６。カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記増強されるカルシウム動員量が、
ａ）細胞内の個々のプロトマーの状況において前記ＣＸＣＲ４または前記ＡＤＲＢ２のいずれかが、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかまたはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらし；かつ
ｂ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、前記ＣＸＣＬ１２及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と比べて増強されるカルシウム動員を呈するような、カルシウム動員の量の増強を示す
と特徴づけられる、実施形態Ａ１～Ａ７５のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ７７。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：ＣＸＣＲ４作動薬またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの単独刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量と比べて、多い量の下流ＥＲＫシグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの共刺激に起因することを有すると特徴づけられる、実施形態Ａ１～Ａ７６のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ７８。前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＣＸＣＲ４作動薬での単独刺激に起因する量よりも多い、実施形態Ａ７７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ７９。前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＣＸＣＲ４作動薬での単独刺激に起因する量よりも少なくとも５％多い、実施形態Ａ７８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ８０。前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＣＸＣＲ４作動薬での単独刺激に起因する量よりも少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、または少なくとも９０％多い、実施形態Ａ７８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ８１。前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＣＸＣＲ４作動薬での単独刺激に起因する量よりも５～１５％、１０～２５％、２０～５０％、４０～７５％、または６０～１００％の範囲で多いある、実施形態Ａ７８～Ａ８０のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ８２。前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＡＤＲＢ２作動薬での単独刺激に起因する量よりも多い、実施形態Ａ７７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ８３。前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＡＤＲＢ２作動薬での単独刺激に起因する量よりも少なくとも５％多い、実施形態Ａ８２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ８４。前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＡＤＲＢ２作動薬での単独刺激に起因する量よりも少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、または少なくとも９０％多い、実施形態Ａ８２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ８５。前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＡＤＲＢ２作動薬での単独刺激に起因する量よりも５～１５％、１０～２５％、２０～５０％、４０～７５％、または６０～１００％の範囲で多い、実施形態Ａ８２～Ａ８４のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ８６。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが前記対象由来細胞（複数可）における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させることを有すると特徴づけられる、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ８５のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ８７。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが前記対象由来細胞（複数可）における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させることを有すると特徴づけられる、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ８６のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ８８。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させることを有すると特徴づけられる、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ８７のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ８９。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のがん進行を減少させることを有すると特徴づけられる、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ８８のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ９０。前記投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、実施形態Ａ１～Ａ８９のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ９１。前記投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが、前記細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、実施形態Ａ１～Ａ９０のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ９２。前記投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが、前記がん対象における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ９１のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ９３。前記投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが、前記がん対象の前記細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ９２のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ９４。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素がＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の個々のプロトマーを含む、実施形態Ａ１～Ａ９３のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ９５。個々のプロトマーの状況において前記ＣＸＣＲ４を含有する前記細胞が、前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２の存在もしくは非存在下で前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４を含む、実施形態Ａ１～Ａ９４のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ９６。個々のプロトマーの状況において前記ＣＸＣＲ４を含有する前記細胞が、前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２の非存在下で前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４を含む、実施形態Ａ９５に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ９７。個々のプロトマーの状況において前記ＣＸＣＲ４を含有する前記細胞が、前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２の存在下で前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４を含む、実施形態Ａ９５に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ９８。個々のプロトマーの状況において前記ＡＤＲＢ２を含有する前記細胞が、前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４の存在もしくは非存在下で前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２を含む、実施形態Ａ１～Ａ９４のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ９９。個々のプロトマーの状況において前記ＡＤＲＢ２を含有する前記細胞が前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４の非存在下で前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２を含む、実施形態Ａ９８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１００。個々のプロトマーの状況において前記ＡＤＲＢ２を含有する前記細胞が前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４の存在下で前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２を含む、実施形態Ａ９８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１０１。前記投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが：
ｉ）前記細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる；
ｉｉ）前記細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる；及び／または
ｉｉｉ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞のヘテロマー特異的特性を変化させる、
実施形態Ａ１～Ａ１００のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１０２。投与される前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せが：
ｉ）前記対象由来細胞（複数可）における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる；
ｉｉ）前記対象由来細胞（複数可）における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる；
ｉｉｉ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる；または
ｉｖ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する前記対象においてがん進行を減少させる、
実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ１０１のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１０３。投与される前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せが、前記対象由来細胞（複数可）において前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる、実施形態Ａ１０２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１０４。投与される前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せが、前記対象由来細胞（複数可）における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる、実施形態Ａ１０２または１０３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１０５。投与される前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せが、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる、実施形態Ａ１０２～Ａ１０４のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１０６。投与される前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せが、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する前記対象においてがん進行を減少させる、実施形態Ａ１０２～Ａ１０５のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１０７。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のがん進行を減少させることを有すると特徴づけられる、実施形態Ａ１０２～Ａ１０６のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１０８。前記減少するがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のがん進行の減少を含む、実施形態Ａ１０２～Ａ１０７のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１０９。前記減少するがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の細胞増殖の減少を含む、実施形態Ａ１０２～Ａ１０８のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１１０。前記減少するがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）の細胞遊走の減少を含む、実施形態Ａ１０２～Ａ１０９のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１１１。前記減少するがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）の転移の減少を含む、実施形態Ａ１０２～Ａ１１０のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１１２。前記減少するがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）の血管新生の減少を含む、実施形態Ａ１０２～Ａ１１１のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１１３。前記ブリキサフォルを、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物として投与する、実施形態Ａ１～Ａ１１２のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１１４。前記ＡＤＲＢ２阻害剤を、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物として投与する、実施形態Ａ１～Ａ１１３のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１１５。前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せを連続的に、併用して、または同時に投与することを含む、実施形態Ａ１～Ａ１１４のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１１６。前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せを、薬学的に許容される担体をさらに含む医薬組成物として投与する、実施形態Ａ１～Ａ１１５のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１１７。前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤を医薬組成物の組合せとして投与する、実施形態Ａ１～Ａ１１６のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１１８。医薬組成物の前記組合せが、
ａ）前記ブリキサフォル及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物；ならびに
ｂ）前記ＡＤＲＢ２阻害剤及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物
を含む、実施形態Ａ１１７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１１９。前記医薬組成物の組合せを連続的に、併用して、または同時に投与する、実施形態Ａ１１７またはＡ１１８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１２０。前記がんが血液学的がんまたは固形腫瘍である、実施形態Ａ１～Ａ１１９のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１２１。前記がんが血液学的がんである、実施形態Ａ１２０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１２２。前記血液学的がんがリンパ腫、白血病、骨髄腫、及び多発性骨髄腫からなる群から選択される、実施形態Ａ１２１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１２３。前記リンパ腫がＢ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、またはＮＫ細胞リンパ腫である、実施形態Ａ１２２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１２４。前記リンパ腫が再発性または難治性リンパ腫である、実施形態Ａ１２２またはＡ１２３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１２５。前記リンパ腫が、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、活性化Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、濾胞性中心リンパ腫、形質転換リンパ腫、中分化型のリンパ球性リンパ腫、中間型リンパ球性リンパ腫（ＩＬＬ）、びまん性低分化リンパ球性リンパ腫（ＰＤＬ）、中心細胞性リンパ腫、びまん性核切れ込み小細胞型リンパ腫（ＤＳＣＣＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、マントル細胞リンパ腫、及び低悪性度濾胞性リンパ腫からなる群から選択される、実施形態Ａ１２２～Ａ１２４のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１２６。前記白血病が：
ａ）急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、急性単球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）、急性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病及び骨髄芽球、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、ならびに赤白血病からなる群から選択される急性白血病；
ｂ）慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病（慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）白血病；ＣＭＬ）、及び慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）からなる群から選択される慢性白血病；または
ｃ）慢性骨髄性単球性白血病（ＣＭＭＬ）、慢性好酸球性白血病、若年性骨髄性単球性白血病（ＪＭＭＬ）、真性多血症、ナチュラルキラー細胞白血病（ＮＫ白血病）、またはヘアリーセル白血病
である、実施形態Ａ１２２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１２７。前記がんが固形腫瘍である、実施形態Ａ１２０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１２８。前記固形腫瘍が良性腫瘍またはがんである、実施形態Ａ１２７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１２９。前記固形腫瘍が癌腫または肉腫である、実施形態Ａ１２７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１３０。前記固形腫瘍が、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、滑膜腫、中皮腫、悪性類上皮中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、胃癌、結腸直腸癌、食道癌、結腸癌、リンパ悪性病変、膵臓癌、膵臓腺癌、膵臓管状腺癌、乳癌、乳房腺癌、乳房管状腺癌、肺癌、小細胞肺癌、肺腺癌、腺扁平上皮肺癌、肺胞横紋筋肉腫、卵巣癌、卵巣明細胞腺癌、卵巣粘液性嚢胞腺癌、卵巣漿液性腺癌、前立腺癌、肝細胞癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌腫、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、髄様甲状腺癌、乳頭状甲状腺癌、甲状腺癌、褐色細胞腫、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支癌、胃腸癌、胃管状腺癌、胃腺扁平上皮癌、腎臓癌、肝臓内胆管癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛上皮腫、ウィルムス腫瘍、子宮癌肉腫、子宮内膜腺癌、子宮内膜間質性肉腫、子宮内膜癌、子宮頸癌、精巣腫瘍、精上皮腫、膀胱癌、黒色腫、多発性骨髄腫、多発性内分泌新形成、ＣＮＳ腫瘍、神経膠芽腫、神経膠星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽腫、神経鞘腫 頭蓋咽頭腫、上衣細胞腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、及び脳転移からなる群から選択される、実施形態Ａ１２７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１３１。前記固形腫瘍が乳癌、肺癌、及び肝細胞癌からなる群から選択される、実施形態Ａ１３０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１３２。前記固形腫瘍が乳癌である、実施形態Ａ１３１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１３３。前記固形腫瘍が肺癌である、実施形態Ａ１３１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１３４。前記固形腫瘍が肝細胞癌である、実施形態Ａ１３１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１３５。前記対象の生体試料が生体液試料である、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ１３４のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１３６。液体生検を生体液試料で実行する、実施形態Ａ１３５に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１３７。前記生体液試料が、血液試料、血漿試料、唾液試料、脳脊髄液試料、眼液試料、または尿試料である、実施形態Ａ１３５またはＡ１３６に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１３８。前記対象の生体試料が生物学的組織試料である、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ１３７のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１３９。組織試料アッセイを前記生物学的組織試料で実行する、実施形態Ａ１３８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１４０。前記生物学的組織試料が臓器組織試料、骨組織試料、または腫瘍組織試料である、実施形態Ａ１３８またはＡ１３９に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１４１。がんの前記処置方法が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達の抑制方法である、実施形態Ａ１～Ａ１４０のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１４２。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達の前記抑制方法が、がんの処置方法である、実施形態Ａ１～Ａ１４０のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１４３。前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記がん細胞を有する前記対象における前記がんの進行が、前記がん対象への前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せの投与時に、前記ブリキサフォルまたは前記ＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの前記単一の阻害剤の投与と比べて５～１００％の範囲でより多く減少する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ１４２のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１４４。前記ブリキサフォルの有効性が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記がん細胞を有する前記対象に前記ＡＤＲＢ２阻害剤との組合せで投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合の前記ブリキサフォルの有効性と比べて５～５０００％の範囲で上昇する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ１４３のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１４５。ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記がん細胞を有する前記対象に前記ブリキサフォルとの組合せで投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合の前記ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性と比べて５～５０００％の範囲で上昇する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ１４４のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１４６。前記がん対象への前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せの投与が、前記がん対象における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を、単一の阻害剤投与と比べて５～２０００倍の範囲で抑制する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ１４５のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１４７。前記がん対象への前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せの投与が、前記がん対象における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を、それぞれ個々のプロトマーの状況におけるＣＸＣＲ４プロトマーまたはＡＤＲＢ２プロトマーのいずれかからの下流シグナル伝達の抑制と比べて５～２０００倍の範囲で抑制する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ１４６のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１４８。前記細胞ががん細胞である、実施形態Ａ１７～Ａ１４７のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１４９。前記細胞が対象の細胞である、実施形態Ａ１７～Ａ１４７のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１５０。前記対象の細胞ががん細胞である、実施形態Ａ１４９に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１５１。前記対象ががん対象である、実施形態Ａ１～Ａ１５０のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１５２。前記対象が患者である、実施形態Ａ１～Ａ１５１のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
実施形態Ａ１５３。医薬組成物であって、
ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；
ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤；及び
ｃ）薬学的に許容される担体
を含む、前記医薬組成物。
実施形態Ａ１５４。前記ＡＤＲＢ２阻害剤が、ＡＤＲＢ２の拮抗薬、ＡＤＲＢ２のインバース作動薬、ＡＤＲＢ２の部分拮抗薬、ＡＤＲＢ２のアロステリック修飾因子、ＡＤＲＢ２の抗体、ＡＤＲＢ２の抗体断片、ＡＤＲＢ２のリガンド、または抗体－薬物コンジュゲートである、実施形態Ａ１～Ａ１５３のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１５５。前記ＡＤＲＢ２阻害剤が拮抗薬ＡＤＲＢ２である、実施形態Ａ１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１５６。前記ＡＤＲＢ２阻害剤がインバース作動薬ＡＤＲＢ２である、実施形態Ａ１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１５７。前記ＡＤＲＢ２阻害剤が部分拮抗薬ＡＤＲＢ２である、実施形態Ａ１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１５８。前記ＡＤＲＢ２阻害剤がＡＤＲＢ２のアロステリック修飾因子である、実施形態Ａ１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１５９。前記ＡＤＲＢ２阻害剤がＡＤＲＢ２の抗体である、実施形態Ａ１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１６０。前記ＡＤＲＢ２阻害剤がＡＤＲＢ２の抗体断片である、実施形態Ａ１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１６１。前記ＡＤＲＢ２阻害剤がＡＤＲＢ２のリガンドである、実施形態Ａ１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１６２。前記ＡＤＲＢ２阻害剤が抗体－薬物コンジュゲートである、実施形態Ａ１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１６３。前記ＡＤＲＢ２阻害剤が、
アルプレノロール、アテノロール、ベタキソロール、ブプラノロール、ブトキサミン、カラゾロール、カルベジロール、ＣＧＰ １２１７７、シクロプロロール、ＩＣＩ １１８５５１、ＩＣＹＰ、ラベタロール、レボベタキソロール、レボブノロール、ＬＫ ２０４－５４５、メトプロロール、ナドロール、ＮＩＨＰ、ＮＩＰ、プロパフェノン、プロプラノロール、ソタロール、ＳＲ５９２３０Ａ、及びチモロール
からなる群から選択される、実施形態Ａ１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１６４。前記ＡＤＲＢ２阻害剤がカルベジロールである、実施形態Ａ１６３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１６５。治療有効量の前記ブリキサフォルを前記対象に投与する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ１６４のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１６６。準治療有効量の前記ブリキサフォルを前記対象に投与する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ１６４のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１６７。治療有効量の前記ＡＤＲＢ２阻害剤を前記対象に投与する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ１６６のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１６８。準治療有効量の前記ＡＤＲＢ２阻害剤を前記対象に投与する、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１７～Ａ１６６のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１６９。前記方法または使用がさらに、前記細胞における、前記対象における、または前記対象から得られた前記試料におけるＣＸＣＲ４遺伝子の発現レベルを決定することを含み、その際、前記発現レベルが前記ＣＸＣＲ４遺伝子の基準レベルよりも高ければ、前記細胞、前記対象、または前記対象から得られた前記試料はＣＸＣＲ４発現がんを有すると決定される、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ１６８のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１７０。前記がんがＣＸＣＲ４発現がんである、実施形態Ａ１６９に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１７１。前記細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現レベルが基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１６９またはＡ１７０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１７２。前記対象におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現レベルが基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１６９またはＡ１７０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１７３。前記対象から得られた前記試料におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現レベルが基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１６９またはＡ１７０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１７４。前記ＣＸＣＲ４遺伝子発現レベルが前記基準レベルよりも高いと決定されたら、前記方法または使用が、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルである、実施形態Ａ１６９～Ａ１７３のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１７５。前記方法または使用がさらに、前記細胞における、前記対象における、または前記対象から得られた前記試料におけるＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルを決定することを含み、その際、前記発現レベルが前記ＡＤＲＢ２遺伝子の基準レベルよりも高ければ、前記細胞、前記対象、または前記対象から得られた前記試料はＡＤＲＢ２発現がんを有すると決定される、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ１６８のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１７６。前記がんがＡＤＲＢ２発現がんである、実施形態Ａ１７５に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１７７。前記細胞におけるＡＤＲＢ２発現レベルが基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１７５またはＡ１７６に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１７８。前記対象におけるＡＤＲＢ２発現レベルが基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１７５またはＡ１７６に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１７９。前記対象から得られた前記試料におけるＡＤＲＢ２発現レベルが基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１７５またはＡ１７６に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１８０。前記ＡＤＲＢ２遺伝子発現レベルが前記基準レベルよりも高いと決定されたら、前記方法または使用が、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルである、実施形態Ａ１７５～１７９のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１８１。前記方法または使用がさらに、前記細胞における、前記対象における、または前記対象から得られた前記試料におけるＣＸＣＲ４遺伝子及びＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルを決定することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４遺伝子及び前記ＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルが前記ＣＸＣＲ４遺伝子及び前記ＡＤＲＢ２遺伝子のそれぞれの基準レベルよりも高ければ、前記細胞、前記対象、または前記対象から得られた前記試料はＣＸＣＲ４発現及びＡＤＲＢ２発現がんを有すると決定される、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ１６８のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１８２。前記がんがＣＸＣＲ４発現がん及びＡＤＲＢ２発現がんである、実施形態Ａ１８１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１８３。前記細胞におけるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルがそれぞれの基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１８１またはＡ１８２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１８４。前記対象におけるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルがそれぞれの基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１８１またはＡ１８２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１８５。前記対象から得られた試料におけるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルがそれぞれの基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１８１またはＡ１８２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１８６。前記ＣＸＣＲ４遺伝子及び前記ＡＤＲＢ２遺伝子発現レベルが前記それぞれの基準レベルよりも高いと決定されたら、前記方法または使用が、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルである、実施形態Ａ１８１～Ａ１８５のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１８７。前記方法または使用がさらに、前記細胞における、前記対象における、または前記対象から得られた前記試料におけるＣＸＣＲ４タンパク質の発現レベルを決定することを含み、その際、前記発現レベルが前記ＣＸＣＲ４タンパク質の基準レベルよりも高ければ、前記細胞、前記対象、または前記対象から得られた前記試料はＣＸＣＲ４発現がんを有すると決定される、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ１６８のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１８８。前記がんがＣＸＣＲ４発現がんである、実施形態Ａ１８７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１８９。前記細胞におけるＣＸＣＲ４発現レベルが基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１８７またはＡ１８８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１９０。前記対象におけるＣＸＣＲ４発現レベルが基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１８７またはＡ１８８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１９１。前記対象から得られた前記試料におけるＣＸＣＲ４発現レベルが基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１８７またはＡ１８８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１９２。前記ＣＸＣＲ４タンパク質発現レベルが前記基準レベルよりも高いと決定されたら、前記方法または使用が、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルである、実施形態Ａ１８７～Ａ１９１のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１９３。前記方法または使用がさらに、前記細胞における、前記対象における、または前記対象から得られた前記試料におけるＡＤＲＢ２タンパク質の発現レベルを決定することを含み、その際、前記発現レベルが前記ＡＤＲＢ２タンパク質の基準レベルよりも高ければ、前記細胞、前記対象、または前記対象から得られた前記試料はＡＤＲＢ２発現がんを有すると決定される、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ１６８のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１９４。前記がんがＡＤＲＢ２発現がんである、実施形態Ａ１９３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１９５。前記細胞におけるＡＤＲＢ２発現レベルが基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１９３またはＡ１９４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１９６。前記対象におけるＡＤＲＢ２発現レベルが基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１９３またはＡ１９４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１９７。前記対象から得られた前記試料におけるＡＤＲＢ２発現レベルが基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１９３またはＡ１９４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１９８。前記ＡＤＲＢ２タンパク質発現レベルが前記基準レベルよりも高いと決定されたら、前記方法または使用が、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルである、実施形態Ａ１９３～Ａ１９７のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ１９９。前記方法または使用がさらに、前記細胞における、前記対象における、または前記対象から得られた前記試料におけるＣＸＣＲ４タンパク質及びＡＤＲＢ２タンパク質の発現レベルを決定することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４タンパク質及び前記ＡＤＲＢ２タンパク質の前記発現レベルが前記ＣＸＣＲ４タンパク質及び前記ＡＤＲＢ２タンパク質のそれぞれの基準レベルよりも高ければ、前記細胞、前記対象、または前記対象から得られた前記試料はＣＸＣＲ４発現及びＡＤＲＢ２発現がんを有すると決定される、実施形態Ａ１～Ａ９またはＡ１４～Ａ１６８のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２００。前記がんがＣＸＣＲ４発現がん及びＡＤＲＢ２発現がんである、実施形態Ａ１９９に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２０１。前記細胞におけるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルがそれぞれの基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１９９またはＡ２００に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２０２。前記対象におけるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルがそれぞれの基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１９９またはＡ２００に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２０３。前記対象から得られた試料におけるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルがそれぞれの基準レベルよりも高い、実施形態Ａ１９９またはＡ２００に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２０４。前記ＣＸＣＲ４タンパク質及び前記ＡＤＲＢ２タンパク質発現レベルが前記それぞれの基準レベルよりも高いと決定されたら、前記方法または使用が、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルである、実施形態Ａ１９９～Ａ２０３のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２０５。前記ＡＤＲＢ２阻害剤がカルベジロールである、実施形態Ａ１～Ａ２０４のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２０６。前記増強される下流シグナル伝達が、ＣＸＣＲ４作動薬及びＡＤＲＢ２作動薬での前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの共刺激に対して増強される応答である、実施形態Ａ１～Ａ２０５のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２０７。前記増強される下流シグナル伝達が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する前記対象において増強されるがん進行である、実施形態Ａ１～Ａ２０６のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２０８。前記増強されるがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する前記対象において増強される細胞増殖である、実施形態Ａ２０７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２０９。前記増強されるがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する前記対象において増強される細胞遊走である、実施形態Ａ２０７またはＡ２０８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２１０。前記増強されるがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する前記対象において増強される転移である、実施形態Ａ２０７～Ａ２０９のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２１１。前記増強されるがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する前記対象において増強される腫瘍成長である、実施形態Ａ２０７～Ａ２１０のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２１２。前記増強されるがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する前記対象において増強される血管新生である、実施形態Ａ２０７～Ａ２１１のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２１３。前記細胞（複数可）ががん細胞（複数可）である、実施形態Ａ２０７～Ａ２１２のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２１４。前記細胞（複数可）を対象から得る、実施形態Ａ２０７～Ａ２１３のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
実施形態Ａ２１５。前記細胞（複数可）が対象から得られた生体試料に由来する、実施形態Ａ２０７～Ａ２１４のいずれか１つに記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
材料及び方法
試薬
ＣＸＣＬ１２は、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ、ＵＳＡ）から購入した。ウロクプルマブ及びＢＫＴ１４０はそれぞれ、Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｓｈｉｒｌｅｙ、ＮＹ、ＵＳＡ）及びＣｈｅｍ Ｓｃｅｎｅ（Ｍｏｎｍｏｕｔｈ Ｊｕｎｃｔｉｏｎ、ＮＪ、ＵＳＡ）から購入した。ＡＭＤ３１００は、Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ、ＭＩ、ＵＳＡ）から得た。ＡＭＤ０７０及びＬＹ２５１０９２４はＭｅｄｃｈｅｍ ｅｘｐｒｅｓｓ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、ＮＪ、ＵＳＡ）から購入した。ＴＧ－００５４（Ｂｒｉｘａｆｏｒ）はＭｅｄＫｏｏ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ（Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ、Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ、ＵＳＡ）から購入した。カルベジロールは４ Ｃｈｅｍ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｋｏｒｅａ）から購入した。使用薬物についての情報は次のとおりである：組換えヒトＳＤＦ－１ａ（ＣＸＣＬ１２）（ＰＥＰＲＯＴＥＣＨ、カタログ３００－２８Ａ、Ｒｏｃｋｙ Ｈｉｌｌ、ＮＪ、ＵＳＡ）、サルメテロール（Ｔｏｃｒｉｓ、カタログ４７１２、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）、カルベジロール（Ｔｏｃｒｉｓ、カタログ２６８５、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）、ＡＭＤ３１００（Ｔｏｃｒｉｓ、カタログ３２９９、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ、ＵＳＡ）、ＴＧ－００５４（ＭｅｄＫｏｏ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｘ，Ｉｎｃ．、カタログ２０６５２２、Ｍｏｒｒｉｓｖｉｌｌｅ、ＮＣ、ＵＳＡ）、ブプラノロール（Ａｂｃａｍ、ａｂ１４１１３２、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＣＢ２ ０ＡＸ、ＵＫ）、ラベタロール（Ｐｒｅｓｔｗｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ（登録商標）、Ｐｒｅｓｔｗ－２７７）、アルプレノロール（Ｐｒｅｓｔｗｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ（登録商標）、Ｐｒｅｓｔｗ－２５０、Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ Ｇｏｎｔｈｉｅｒ ｄ’Ａｎｄｅｒｎａｃｈ Ｐａｒｃ ｄ’ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ ６７４００ ＩＬＬＫＩＲＣＨ － Ｆｒａｎｃｅ）、カラゾロール（ＰｕｂＣｈｅｍ、カタログ ７１７３９、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、ＵＳＡ）、プロパフェノン（Ｐｒｅｓｔｗｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ（登録商標）、Ｐｒｅｓｔｗ－４９９）、及びチモロール（Ｐｒｅｓｔｗｉｃｋ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ（登録商標）、Ｐｒｅｓｔｗ－９４８）。
細胞培養
すべての細胞系をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）から購入した。Ａ５４９、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、Ｕ２ＯＳ、ＨＬ－６０、Ｕ９３７及びＲＰＭＩ ８２２６細胞は、１０％ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ）及び１％ペニシリン－ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）を補充されたＲＰＭＩ培地１６４０（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）中で成長させた。すべての細胞系を３７℃で５％ＣＯ２の存在下で培養した。
安定な細胞系の構築
ハイグロマイシン及びブラストサイジン抵抗性を有する対照細胞系として安定なＲｌｕｃ及びｌｕｃ２Ｐ発現細胞系を確立するために、ＶｉｒａＰｏｗｅｒレンチウイルスパッケージングミックス（Ｉｎｖｉｒｔｏｇｅｎ、Ｋ４９７５００）とｐＬｅｎｔｉ６－Ｒｌｕｃ発現構築物とを産生２９３ＦＴ細胞系に共トランスフェクトすることにより、（ｐＬｅｎｔｉ－ＣＭＶ Ｈｙｇｒｏ ＤＥＳＴ（Ａｄｄｇｅｎｅ、＃１７４５４）にＲｌｕｃ遺伝子を挿入したものであるｐＬｅｎｔｉ６－Ｒｌｕｃ発現構築物をパッケージングして含有する）レンチウイルス原料を生産した。Ａ５４９細胞系へのこのレンチウイルス原料の形質導入を実施し、続いて、ハイグロマイシン（１００μｇ／ｍＬ）で選択した。安定なＲｌｕｃ－ｌｕｃ２Ｐ発現細胞系を確立するために、ＶｉｒａＰｏｗｅｒパッケージングミックスとｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５－ｌｕｃ２Ｐ発現構築物とを産生２９３ＦＴ細胞系に共トランスフェクトすることにより、（ｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５－ＤＥＳＴ Ｇａｔｅｗａｙ（商標）ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｖ４９６１０）にＬｕｃ２Ｐ遺伝子を挿入したものであるｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５－ｌｕｃ２Ｐ発現構築物をパッケージングして含有する）レンチウイルス原料を生産した。Ａ５４９－Ｒｌｕｃ細胞系へのこのレンチウイルス原料の形質導入を実施し、続いて、ブラストサイチン（ｂｌａｓｔｉｃｉｔｉｎ）（５μｇ／ｍＬ）で選択した。次いで、抗生物質に対して耐性であるクローンを選択し、ＲＴ－ｑＰＣＲ及び免疫蛍光法を実施して挿入遺伝子Ｒｌｕｃ及びｌｕｃ２Ｐの発現を確認した。
安定なＣＸＣＲ４発現細胞系を確立するために、ＶｉｒａＰｏｗｅｒレンチウイルスパッケージングミックス（Ｉｎｖｉｒｔｏｇｅｎ、Ｋ４９７５００）とｐＬｅｎｔｉ６－ＣＸＣＲ４発現構築物とを産生２９３ＦＴ細胞系に共トランスフェクトすることにより、（ｐＬｅｎｔｉ－ＣＭＶ Ｈｙｇｒｏ ＤＥＳＴ（Ａｄｄｇｅｎｅ、＃１７４５４）にＣＸＣＲ４遺伝子を挿入したものであるｐＬｅｎｔｉ６－ＣＸＣＲ４発現構築物をパッケージングして含有する）レンチウイルス原料を生産した。Ａ５４９細胞系へのこのレンチウイルス原料の形質導入を実施し、続いて、ハイグロマイシン（１００μｇ／ｍＬ）で選択した。安定なＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー発現細胞系を確立するために、ＶｉｒａＰｏｗｅｒパッケージングミックスとｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５－ＡＤＲＢ２発現構築物とを産生２９３ＦＴ細胞系に共トランスフェクトすることにより、（ｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５－ＤＥＳＴ Ｇａｔｅｗａｙ（商標）ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｖ４９６１０）にＡＤＲＢ２遺伝子を挿入したものであるｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５－ＡＤＲＢ２発現構築物をパッケージングして含有する）レンチウイルス原料を生産した。Ａ５４９－ＣＸＣＲ４細胞系へのこのレンチウイルス原料の形質導入を実施し、続いて、ハイグロマイシン（１００μｇ／ｍＬ）及びブラストサイチン（ｂｌａｓｔｉｃｉｔｉｎ）（５μｇ／ｍＬ）で選択した。次いで、抗生物質に対して耐性であるクローンを選択し、ＲＴ－ｑＰＣＲ及び免疫蛍光法を実施して挿入遺伝子ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現を確認した。ｐＬｅｎｔｉ ＣＭＶ Ｈｙｇｒｏ ＤＥＳＴ（ｗｌ １７－１）はＥｒｉｃ Ｃａｍｐｅａｕ氏及びＰａｕｌ Ｋａｕｆｍａｎ氏から寄贈された（Ａｄｄｇｅｎｅプラスミド＃１７４５４）（Ｃａｍｐｅａｕ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，（２００９）Ａ ｖｅｒｓａｔｉｌｅ ｖｉｒａｌ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌｓ，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ４，ｅ６５２９）。ＣＸＣＲ４ ｃＤＮＡを、ＬＲ組換えを用いてレンチウイルスベクターに挿入した。ＣＸＣＲ４をコードするレンチウイルスを、ＶｉｒａＰｏｗｅｒレンチウイルス発現システム（Ｉｎｖｉｒｔｏｇｅｎ）を使用して生産した。
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳癌細胞系において安定なＣＸＣＲ４発現細胞系を確立するために、ＶｉｒａＰｏｗｅｒレンチウイルスパッケージングミックス（Ｉｎｖｉｒｔｏｇｅｎ、Ｋ４９７５００）とｐＬｅｎｔｉ６－ＣＸＣＲ４発現構築物とを産生２９３ＦＴ細胞系に共トランスフェクトすることにより、（ｐＬｅｎｔｉ－ＣＭＶ Ｈｙｇｒｏ ＤＥＳＴ（Ａｄｄｇｅｎｅ、＃１７４５４）にＣＸＣＲ４遺伝子を挿入したものであるｐＬｅｎｔｉ６－ＣＸＣＲ４発現構築物をパッケージングして含有する）レンチウイルス原料を生産した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞系へのこのレンチウイルス原料の形質導入を実施し、続いて、ハイグロマイシン（１００μｇ／ｍＬ）で選択した。細胞がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するようにＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を発現する安定な細胞系を確立するために、ＶｉｒａＰｏｗｅｒパッケージングミックスとｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５－ＡＤＲＢ２発現構築物とを産生２９３ＦＴ細胞系に共トランスフェクトすることにより、（ｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５－ＤＥＳＴ Ｇａｔｅｗａｙ（商標）ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｖ４９６１０）にＡＤＲＢ２遺伝子を挿入したものであるｐＬｅｎｔｉ６／Ｖ５－ＡＤＲＢ２発現構築物をパッケージングして含有する）レンチウイルス原料を生産した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４細胞系へのこのレンチウイルス原料の形質導入を実施し、続いて、ハイグロマイシン（１００μｇ／ｍＬ）ブラストサイチン（ｂｌａｓｔｉｃｉｔｉｎ）（５μｇ／ｍＬ）で選択した。次いで、抗生物質に対して耐性であるクローンを選択し、ＲＴ－ｑＰＣＲ及び免疫蛍光法を実施して挿入遺伝子ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現を確認した。
カルシウム動員アッセイ
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１ヒト乳癌細胞を１ウェルあたり２０，０００細胞で、１０％のＦＢＳを補充された１００μｌのＲＰＭＩ １６４０中で黒色透明底９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｓｔａｒ，＃３３４０）に播種した。翌日、１０ＭＯＩのＣＸＣＲ４及び３０ＭＯＩのＧＰＣＲｘを細胞に共形質導入した。ＨＡ－ＶＣをコードするアデノウイルスを、形質導入されるアデノウイルスの総量を調整するために使用した。２日後に、細胞を表示の量の拮抗薬で処理し、Ｃａｌ ６（ＦＬＩＰＲ（登録商標）Ｃａｌｃｉｕｍ ６ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、カタログ Ｒ８１９１）と共に２時間にわたってインキュベートした。そして次いで、細胞を表示の量のＣＸＣＬ１２、ＡＤＲＢ２作動薬、またはＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬で刺激した。カルシウム動員を、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ ３ Ｍｕｌｔｉ－Ｍｏｄｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して測定した。結果をベースライン活性に対して正規化した。カルシウム動員を４９０ｎｍの励起波長及び５２５ｎｍの発光波長を使用して３７℃で測定し、各グラフの曲線下面積（ＡＵＣ）を算出することにより定量化した。データをＣＸＣＲ４のみを発現する細胞におけるＣＸＣＬ１２刺激カルシウム応答に対して正規化した。データは３回の独立した実験を表している（平均±ＳＥＭ）。
カルシウム動員アッセイを利用して、Ｕ９３７（ヒト骨髄性白血病細胞）及びＨＬ－６０（ヒト白血病細胞）細胞を１ウェルあたり１００，０００細胞で、１０％ＦＢＳを補充された１００μＬのＲＰＭＩ １６４０中で黒色透明底９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｓｔａｒ、＃３３４０）に播種した。そして細胞を１００×ｇで１分間にわたって遠心した。細胞をアッセイバッファー（フェノールレッド不含のハンクス平衡塩溶液）中で希釈したＣａｌ ６（ＦＬＩＰＲ（登録商標）Ｃａｌｃｉｕｍ ６ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、カタログ Ｒ８１９１）で染色し、２時間にわたってインキュベートした。必要であれば、拮抗薬を作動薬処理の２時間前に添加した。細胞を表示の量のＣＸＣＲ４作動薬（ＣＸＣＬ１２、２００ｎＭ）、ＡＤＲＢ２作動薬（ホルモテロール、１０μＭ）で刺激した。カルシウム動員を、ＦｌｅｘＳｔａｔｉｏｎ ３ Ｍｕｌｔｉ－Ｍｏｄｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）を使用して測定した。細胞内Ｃａ２＋を４９０ｎｍの励起波長及び５２５ｎｍの発光波長を使用して３７℃で測定した。結果をベースライン活性に対して正規化した。各グラフの曲線下面積（ＡＵＣ）を算出することによりカルシウム動員を定量化した。データをＣＸＣＲ４のみを発現する細胞におけるＣＸＣＬ１２刺激カルシウム応答に対して正規化した。そして、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して、ＩＣ５０値を算出した。
ウェスタンブロット分析
細胞を６ウェルプレートに、１ウェルあたり５×１０５細胞の密度で播種した。血清飢餓から１６時間後に、当該細胞を１０ｎＭのＳＤＦ－１（ＰＥＲＯＴＥＣＨ、＃３００－２８Ａ）及びサルメテロール（ＴＯＣＲＩＳ、＃４７１２）で、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４、及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞では２０分間にわたって、ならびにＡ５４９、Ａ５４９－ＣＸＣＲ４、Ａ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞では１０分間にわたって処理した。その後、ホスファターゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ、＃４９０６８４５００１）及びプロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃Ａ３２９５３）を補充されたＮＰ－４０溶解バッファー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃ＦＮＮ００２１）を使用して、細胞を収集した。細胞溶解産物のタンパク質濃度をＢｉｏ－Ｒａｄタンパク質アッセイ（Ｂｉｏ－Ｒａｄ、＃５０００００６）により決定した。２０μｇのタンパク質試料を還元型ＳＤＳ－ＰＡＧＥにかけ、ドライ式移送システム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃ＩＢ２１００１）を使用してＰＶＤＦ（ポリビニリデンジフルオリド）に移送した。膜を、１％Ｔｗｅｅｎ－ｔｗｅｎｔｙを含むトリス緩衝生理食塩水中の５％脱脂乳（ＢＤ Ｄｉｆｃｏ、＃２３２１００）で１時間にわたってブロックし、ホスホ－ＥＲＫ１／２ Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃４３７０）及びｔｏｔａｌ－ＥＲＫ１／２（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、＃４６９５）抗体と共にインキュベートした。ホースラディッシュペルオキシダーゼにカップリングした二次抗体（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、続いて、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ Ｗｅｓｔ Ｆｅｍｔｏ Ｍａｘｉｍｕｍ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、＃３４０９６）と共にインキュベートすることにより、抗原－抗体複合体を検出した。ウェスタンブロット画像を撮影し、ｉＢｒｉｇｈｔ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ 、＃Ａ３２７５２）により解析した。
定量的ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）
ＴＲＩｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して全ＲＮＡを抽出し、ＤＮアーゼＩ（Ｓｉｇｍａ）での処理の後に１μｇの全ＲＮＡからｃＤＮＡを合成した。ｑＰＣＲはＳｅｎｓｉＦＡＳＴ ＳＹＢＲキット（Ｂｉｏｌｉｎｅ）を使用して行った。プライマー配列は以下のとおりである：
ＡＤＲＢ２－Ｆ：５’－ＣＴＣＴＴＣＣＡＴＣＧＴＧＴＣＣＴＴＣＴＡＣ－３’（配列番号１）、
ＡＤＲＢ２－Ｒ：５’－ＡＡＴＣＴＴＣＴＧＧＡＧＣＴＧＣＣＴＴＴ－３’（配列番号２）；
ＣＸＣＲ４－Ｆ：５’－ ＣＣＡＣＣＡＴＣＴＡＣＴＣＣＡＴＣＡＴＣＴＴＣ－３’（配列番号３）、
ＣＸＣＲ４－Ｒ：５’－ＡＣＴＴＧＴＣＣＧＴＣＡＴＧＣＴＴＣＴＣ－３’（配列番号４）；
β－アクチン－Ｆ：５’－ＧＧＡＡＡＴＣＧＴＧＣＧＴＧＡＣＡＴＴＡＡＧ－３’（配列番号５）、
β－アクチン－Ｒ：５’－ＡＧＣＴＣＧＴＡＧＣＴＣＴＴＣＴＣＣＡ－３’（配列番号６）；
閾値サイクル（Ｃｔ）はＱｕａｎｔＳｔｕｄｉｏ ３ Ｒｅａｌ－Ｔｉｍｅ ＰＣＲシステム（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）により算出した。デルタＣｔ（ΔＣｔ）は、ＣｔＳＯＩ（目的の配列）と、通常のハウスキーピング遺伝子配列であるＣｔ ＲＳ（基準配列）との間の差に対応する；デルタＣｔ（ΔＣｔ）＝Ｃｔ（ＣＸＣＲ４またはＡＤＲＢ２）－Ｃｔ（アクチン）。
ＧＰＣＲ ｃＤＮＡを含有するアデノウイルスベクターの構築
ヒトＧＰＣＲ ｃＤＮＡクローンはＭｉｓｓｏｕｒｉ Ｓ＆Ｔ ｃＤＮＡ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ（Ｒｏｌｌａ、ＭＯ、ＵＳＡ）から入手した。ＧＰＣＲ ｃＤＮＡをＰＣＲにより増幅し、ｐＤＯＮＲ２０１ベクターにクローニングした。ＧＰＣＲ及びｐＡｄＨＴＳベクターを含有するエントリークローン間でのインビトロＬＲ組換え及びその後の、以前に記述されたとおりのＡｄＨＴＳシステム（Ｃｈｏｉ，Ｅ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１２）ＡｄＨＴＳ： ａ ｈｉｇｈ－ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｇｅｎｅｒａｔｉｎｇ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｓ，Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １６２，２４６－２５２；ａｎｄ Ｓｏｎｇ，Ｙ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．，（２０１４））を使用した２９３Ａ細胞へのトランスフェクションにより、ＧＰＣＲをコードするアデノウイルスを得た。
増殖アッセイ
Ａ５４９二重陰性（ＲＬｕｃ－ｌｕｃＰ）細胞系またはＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を過剰発現するＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞系を１～１０４細胞／ウェルの密度で９６ウェルプレートに播種し、培養培地中で２４時間にわたってインキュベートして接着させた。洗浄した後に、無血清ＲＰＭＩ１６４０±ＳＤＦ－Ｉαを表示の量の薬物を伴って、または伴わずに添加し、細胞を７２時間（播種後９６時間）にわたって３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートした。インキュベーションの終了時に、製造者指示に従ってＰｒｅｓｔｏｂｌｕｅ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ Ａ１３２６２）を使用することにより、細胞増殖を評価した。簡単に述べると、細胞を１×Ｐｒｅｓｔｏｂｌｕｅ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ｒｅａｇｅｎｔ中で１時間にわたって３７℃でインキュベートした。Ｖａｒｉｏｓｋａｎ ＬＵＸマルチモードマイクロプレートリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して、蛍光を５６０ｎｍ励起及び５９０ｎｍ発光で測定した。検出される蛍光量はウェル内の細胞数と比例した。結果は、３連のウェルからの平均比（蛍光薬物／蛍光ビヒクルのみ）±ＳＥＭとして表される。
マウス異種移植片モデル
５週齢の雌のＢａｌｂ／ｃ－ｎｕ／ｎｕマウスをＥｎｖｉｇｏ（フランス）から入手し、特定病原体が排除された動物施設の中で飼育した。動物使用及び安楽死のためのすべてのプロトコルは動物保護法に基づいてＱｕｂｅｓｔ Ｂｉｏ（韓国）動物実験倫理委員会により承認された。１×１０７細胞のＡ５４９、またはＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２を１００μＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に懸濁させ、マウスの右側の鎖骨と胸壁との間の腋窩領域に皮下埋植した。電子キャリパーで腫瘍の長さ（Ｌ）及び幅（Ｗ）を測定し、腫瘍体積を以下の式に基づいて算出することにより腫瘍成長を３日ごとまたは４日ごとにモニターした：体積＝０．５ＬＷ２。
抗腫瘍作用研究
ＣＸＣＲ４阻害剤を使用する抗腫瘍有効性検査のために、Ａ５４９においてＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２を過剰発現するＡ５４９－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞系である肺癌細胞系（ＰＢＳ１００μＬ中１×１０７細胞／匹）をＢＡＬＢ／ｃ－ｎｕに皮下投与した。腫瘍サイズが５０～１００ｍｍ３に達したときに、マウス１０匹からなる群に、ビヒクル（ＰＢＳ中１％ジメチルセルロース）、ＡＭＤ３１００（ＰＢＳ中で製剤化された７．５ｍｐｋ、２２．５ｍｐｋ）、ＬＹ２５１０９２４（ＰＢＳ中で製剤化された３ｍｐｋ、１０ｍｐｋ）、ＡＭＤ０７０（ＰＢＳ中１％ジメチルセルロース中で製剤化された１０ｍｐｋ、３０ｍｐｋ）またはＴＧ－００５４（ＰＢＳ中で製剤化された１０ｍｐｋ、３０ｍｐｋ）またはカルベジロール（ＰＢＳ中１％ジメチルセルロース中で製剤化された２０ｍｐｋ）を投与した。１日１回４週間（合計２８回）にわたって、ＡＭＤ３１００、ＬＹ２５１０９２４及びＴＧ－００５４は皮下注射し、ＡＭＤ０７０及びカルベジロールは経口投与した。腫瘍の長さ（Ｌ）及び幅（Ｗ）を測定することにより腫瘍成長を３日ごとまたは４日ごとにモニターした：体積＝０．５ＬＷ２。
同所性モデル
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞またはＭＤＡ－ＭＢ－２３１－ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２細胞を、ＦＢＳ非含有培地を使用して雌のＢａｌｂ／ｃ－ｎｕ／ｎｕマウス（５×１０６細胞／匹（細胞１００μＬ＋マトリゲル１００μＬ））に同所投与する。細胞を投与前に、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（商標）（ＢＤ、３５４２４８）で次の手法で処理する。１）Ｍａｔｒｉｇｅｌならびに投与に使用されるシリンジ及び針も、投与まで１０℃の条件に維持する。２）Ｍａｔｒｉｇｅｌを細胞懸濁液と５０：５０の比で混合し、細胞破壊を防止するために、２３Ｇの針サイズを使用する。
針先を前投与部位（ニップル２及び３の間）に入れ、針を右か左に動かして、広い皮下ポケットを作製する。Ｍａｔｒｉｇｅｌ混合物（マトリゲル：細胞懸濁液＝５０：５０）を皮下ポケットに注射する。液体が注射部位で溢れていないことを確認した後に、動物を飼育器に入れる。腫瘍サイズが約５０～１００ｍｍ３に達したときに、本発明者らは、単独か、または組合せでのＣＸＣＲ４阻害剤またはＡＤＲＢ２阻害剤で、表示の用量で１日１回４週間にわたって処理する。薬物処理の日を１日目と定義する。ＡＭＤ３１００（ＰＢＳ中で２．５ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ）、ＬＹ２５１０９２４（ＰＢＳ中で１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ）、ＡＭＤ０７０（ＰＢＳ中１％メチルセルロース中で３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ）及び／またはカルベジロール（ＰＢＳ中１％メチルセルロース中で３０ｍｇ／ｋｇ）を１日１回４週間（合計２８回）にわたって投与した。ＡＭＤ３１００、ＬＹ２５１０９２４、及びＡＭＤ０７０を皮下投与し、カルベジロールを経口投与した。腫瘍のサイズを、薬物投与の初日での１００に対して腫瘍サイズを換算することにより算出した。結果は、５匹の個体の平均±標準偏差として表される。
抗体ＴＲ－ＦＲＥＴ
ＴＲ－ＦＲＥＴアッセイの前に、１０，０００の細胞を９６ウェルハーフエリアプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）の各ウェルに播種した。３７℃加湿インキュベーター内での一晩のインキュベーションの後に、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の両方を、アデノウイルス系（０．９～３０ＭＯＩのＣＸＣＲ４担持アデノウイルス及び０．５～１５ＭＯＩのＡＤＲＢ２担持アデノウイルス）を使用して一過性に過剰発現させた。各アデノウイルスの４８時間の感染後に、細胞をＤＰＢＳで２回洗浄し、室温で１０分間にわたって４％パラホルムアルデヒドで固定した。細胞を２回洗浄した後に、細胞を透過性にするために、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含有するＤＰＢＳを室温で１０分間にわたって処理した。次いで、細胞を２％ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）を補充されたＤＰＢＳで室温で３０分間にわたってブロックし、続いて、ウサギ抗ＣＸＣＲ４抗体（＃ａｂ１２４８２４、ａｂｃａｍ）及びマウス抗ＡＤＲＢ２抗体（＃ｓｃ２７１３２２、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）の両方と共に室温で３時間にわたってインキュベートした。細胞をＤＰＢＳで４回洗浄した後に、テルビウムクリプタート（Ｃｉｓｂｉｏ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ、ＵＳＡ）で標識されたヤギ抗ウサギＩｇＧ及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ）で標識されたヤギ抗マウスＩｇＧを室温で１時間にわたって処理した。次いで、細胞をＤＰＢＳで４回洗浄し、続いて、Ｖａｒｉｏｓｋａｎ ＬＵＸ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を使用して分析した。ＦＲＥＴ比を各ウェルについて、５２０ｎｍでのアクセプターＦＲＥＴシグナルと６２０ｎｍでのドナー発光との比として簡単に算出する。
ＦＲＥＴ比＝５２０ｎｍでの信号／６２０ｎｍでの信号×１００００
得られたデータはＦＲＥＴ効率を表す。ΔＦ％の算出は異なるＦＲＥＴ比に基づく。
ΔＦ％＝（比試料－比陰性）／比陰性×１００
ΔＦ％は、ドナー濃度の変化を考慮に入れ、陰性対照と比較したＦＲＥＴ上昇のパーセンテージに対応する。しかしながら、ΔＦ％パラメーターは、同じドナー－リガンド濃度で実行されない実験の比較を可能にするものではない。
リガンドＴＲ－ＦＲＥＴ
Ａ５４９細胞を９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＵＳＡ ＃３６８８）に１ウェルあたり２０，０００細胞の密度で播種した。ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２はＡ５４９細胞において、アデノウイルス感染、続く、３７℃、５％ＣＯ２での４８時間のインキュベーションにより一過性に過剰発現された。ＣＸＣＲ４発現アデノウイルスは０、０．１、０．５、１．２５、２．５、５、１０及び２０のＭＯＩで処理し、ＡＤＲＢ２発現アデノウイルスは３倍高いＭＯＩで処理した。ＨＡ－ＶＣをコードするアデノウイルスを使用して、形質導入されたアデノウイルスの総量を調節した。
ＣＸＣＲ４：ＡＤＲＢ２ヘテロマーを特徴づけるために、標識リガンドを用いるＴＲ－ＦＲＥＴアッセイを蛍光標識プロプラノロール及びテルビウム標識ＴＺ１４０１１（Ｃｉｓｂｉｏ、ＵＳＡ）で実行した。ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２への感染から１８時間後に、リガンドを氷冷Ｔｒｉｓ－ＫＲＥＢＳバッファー（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１１８ｍＭ ＮａＣｌ、５．６ｍＭグルコース、１．２ｍＭ ＫＨ２ＰＯ４、１．２ｍＭ ＭｇＳＯ４、４．７ｍＭ ＫＣｌ、１．８ｍＭ ＣａＣｌ２、ｐＨ７．４）中で別々に調製し、氷上に維持した（１５℃未満で作業することにより、内在化現象はすべて回避される）。このステップで、すべてのリガンド溶液を、Ｔｒｉｓ－ＫＲＥＢＳバッファーを用いて所望の最終濃度の５倍で調製した。細胞を、９６ウェルプレート内で１０ｎＭ ＴＺ１４０１１－ｔｂ、２０ｎＭ Ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ－ｇ２（Ｃｉｓｂｉｏ、ＵＳＡ ＃Ｌ００１１ＧＲＥ）及び１０ｍＭ非標識プロプラノロール（ＰＲＥＳＴＷＩＣＫ ＣＨＥＭＩＣＡＬ、Ｆｒａｎｃｅ）を用いて、１８時間にわたって４℃暗所でインキュベートすることにより標識し、ＴＲ－ＦＲＥＴ信号をＶａｒｉｏｓｋａｎ ＬＵＸ Ｍｕｌｔｉｍｏｄｅ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＵＳＡ）プレートリーダーで測定した。調製物を３３４ｎｍで励起させ、蛍光発光をドナーについては６２０ｎｍ（ＴＺ１４０１１－Ｔｂ）で、かつアクセプター（Ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ－ｇ２）に応じて５２０ｎｍで、ＶＡＲＩＯＳＫＡＮで測定した。データ分析は抗体ＴＲ－ＦＲＥＴ分析と同じである。
近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）
アンフォールドＰＬＡ（ｕｎｆｏｌｄ ＰＬＡ）を製造者プロトコル（Ｏｌｉｎｋ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）に従って実行した。アッセイで使用される細胞は浮遊しているので、すべての再懸濁ステップを２，０００ｒｐｍでの３分間にわたる遠心分離により行った。各洗浄ステップを、すべての反応の合間に遠心分離を用いて２回実施した。培養細胞をＤＰＢＳ １ｍＬ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中で洗浄し、続いて、細胞を４％パラホルムアルデヒド中で室温で１０分間にわたって固定した。次いで、細胞を、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００を含有するＤＰＢＳ中で透過性にし、ブロッキング液中で３７℃で１時間にわたってブロックした。次いで、ブロッキング液を除去し、細胞を一次抗体溶液により再懸濁した。マウス抗－ＣＸＣＲ４抗体（＃３５－８８００、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及びウサギ抗ＡＤＲＢ２抗体（＃ＰＡ５－３３３３３、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）の両方を抗体希釈剤（それぞれ１：２００及び１：２０００）中で希釈した。３７℃で１時間にわたるインキュベーションの後に、ＰＬＡプローブを、抗体希釈剤中で希釈された１：５０の希釈で施与した。プローブを当該細胞と共に３７℃で１時間にわたってインキュベートした。プローブの消化を３７℃で１時間にわたって実行し、その後、３７℃で３０分間にわたるライゲーションステップを続けた。次いで、増幅ミックスで３７℃で１００分間にわたって細胞を処理した。細胞を、ＤＡＰＩ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を含む２０μＬのＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ Ａｎｔｉｆａｄｅ Ｍｏｕｎｔｉｎｇ Ｍｅｄｉｕｍと共に搭載する。ＰＬＡ画像をＩＮ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｚｅｒ ２５００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で得る。
本明細書において述べられる刊行物及び特許出願はすべて、それぞれ個々の刊行物または特許出願が具体的かつ個別に、参照により援用されると示されている場合と同じ程度で、それらの全体が参照により本明細書に援用される
好ましい実施形態を本明細書において示し、かつ記載してきたが、そのような実施形態が例として提供されているに過ぎないことは当業者には明白であろう。次の特許請求の範囲が本発明の範囲を規定すること、及び特許請求の範囲内の方法及び構造ならびにそれらの均等物が本発明の範囲に包含されることが意図されている。

Claims (215)

  1. がんに罹患している対象の細胞におけるＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達の抑制方法であって、前記対象に、
    ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び
    ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤
    を投与することを含み、
    その際、
    ｉ）前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因し；かつ
    ｉｉ）前記投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤が、前記がん対象における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、前記方法。
  2. ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象におけるがんの処置方法であって、前記対象に、
    ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び
    ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤
    を投与することを含み、
    その際、
    ｉ）増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因し；かつ
    ｉｉ）前記投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤が、前記がん対象における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、前記方法。
  3. ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象におけるがんの処置方法であって、
    ａ）前記対象の細胞がＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有し、その際、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因するか否かを決定すること；及び
    ｂ）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するならば、前記がん対象に：
    ｉ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び
    ｉｉ）ＡＤＲＢ２阻害剤
    を投与することを含む、前記方法。
  4. ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、
    １）前記対象が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有するか否かを、前記対象から生体試料を得るか、または得ていること；及び
    ｉ）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否か；または
    ｉｉ）ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが：前記対象由来細胞（複数可）において前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性もしくは機能を変化させる否か；前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる否か；もしくは前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する前記対象においてがんの進行を減少させるか否か
    を決定するために、前記生体試料でアッセイを実行するか、もしくは実行していることにより決定すること；ならびに
    ２）前記対象が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有するならば、前記がん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに
    ３）前記対象が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有さなければ、前記がん対象に、前記ブリキサフォルまたは前記ＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含む、前記方法。
  5. ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、
    １）前記対象が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有するか否かを、前記対象から生体試料を得るか、または得ていること；及び
    ｉ）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否か；または
    ｉｉ）ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが：前記対象由来細胞（複数可）において前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性もしくは機能を変化させる否か；前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる否か；もしくは前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する前記対象においてがんの進行を減少させるか否か
    を決定するために、前記生体試料でアッセイを実行するか、もしくは実行していることにより決定すること；ならびに
    ２）前記対象が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有するならば、前記がん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに
    ３）前記対象が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有さなければ、前記がん対象に、前記ブリキサフォルまたは前記ＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含み、その際、
    ａ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有する前記対象における前記がんの進行が、前記がん対象への前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せの投与時に、前記ブリキサフォルまたは前記ＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの前記単一の阻害剤の投与と比べて５～１００％の範囲でより多く減少し；
    ｂ）前記ブリキサフォルの有効性が、前記ＡＤＲＢ２阻害剤との組合せで前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有する前記対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合の前記ブリキサフォルの有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇し；及び／または
    ｃ）前記ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性が、前記ブリキサフォルとの組合せで前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有する前記対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合の前記ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇する、前記方法。
  6. ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、
    １）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを、前記対象から生体試料を得るか、または得ていること、及び前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが前記対象の細胞に存在するか否かを決定するために前記生体試料でアッセイを実行する、または実行していることにより決定し；その際、前記生体試料で実行されるアッセイが共内在化アッセイ、共局在化アッセイ、インサイチューハイブリダイゼーション、免疫組織化学、免疫電子顕微鏡法、近接度に基づくアッセイ、共免疫沈降アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、ＲＮＡｓｅｑ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、ＣＸＣＲ４の発現レベル、ＡＤＲＢ２の発現レベル、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベル、マイクロアレイ、または蛍光動物アッセイのうちの１つもしくは複数であるか、または１つもしくは複数を含むこと；
    ２）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するならば、前記がん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに
    ３）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有しなければ、前記がん対象に、前記ブリキサフォルまたは前記ＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含む、前記方法。
  7. ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有し、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する対象におけるがんの処置方法であって、
    １）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを、前記対象から生体試料を得るか、または得ていること、及び前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが前記対象の細胞に存在するか否かを決定するために前記生体試料でアッセイを実行する、または実行していることにより決定し；その際、前記生体試料で実行されるアッセイが共内在化アッセイ、共局在化アッセイ、インサイチューハイブリダイゼーション、免疫組織化学、免疫電子顕微鏡法、近接度に基づくアッセイ、共免疫沈降アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、ＲＮＡｓｅｑ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、ＣＸＣＲ４の発現レベル、ＡＤＲＢ２の発現レベル、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベル、マイクロアレイ、または蛍光動物アッセイのうちの１つもしくは複数であるか、または１つもしくは複数を含むこと；
    ２）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するならば、前記がん対象に、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せを投与し、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルであること；ならびに
    ３）前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有しなければ、前記がん対象に、前記ブリキサフォルまたは前記ＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの単一の阻害剤を投与することを含み、その際、
    ａ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有する前記対象における前記がんの進行が、前記がん対象への前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せの投与時に、前記ブリキサフォルまたは前記ＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの前記単一の阻害剤の投与と比べて５～１００％の範囲でより多く減少し；
    ｂ）前記ブリキサフォルの有効性が、前記ＡＤＲＢ２阻害剤との組合せで前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有する前記対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合の前記ブリキサフォルの有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇し；及び／または
    ｃ）前記ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性が、前記ブリキサフォルとの組合せで前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞を有する前記対象に投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合の前記ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性と比べて５～２０００％の範囲で上昇する、前記方法。
  8. ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象においてがんを処置する際に使用するための医薬キットであって、
    ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び
    ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤を含み；
    その際、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、前記医薬キット。
  9. ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する対象においてがんを処置する際に使用するための医薬組成物であって、
    ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；
    ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤；及び
    ｃ）薬学的に許容される担体を含み、その際、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、前記医薬組成物。
  10. 細胞中のＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達の抑制方法であって、前記細胞に：
    ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び
    ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤
    を投与することを含み；
    その際、
    ｉ）前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因し；かつ
    ｉｉ）前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤との接触が、前記細胞において前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、前記方法。
  11. 前記細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを決定することをさらに含む、請求項１０に記載の抑制方法。
  12. 細胞においてＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を抑制する際に使用するための医薬キットであって、
    ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；及び
    ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤
    を含み；
    その際、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、前記医薬キット。
  13. 細胞においてＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を抑制する際に使用するための医薬組成物であって、
    ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；
    ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤；及び
    ｃ）薬学的に許容される担体
    を含み；
    その際、増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、前記医薬組成物。
  14. 前記細胞が対象の細胞である、請求項１０～１３のいずれか１項に記載の抑制方法。
  15. 前記対象の細胞ががん細胞である、請求項１４に記載の抑制方法。
  16. 前記細胞ががん細胞である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の抑制方法。
  17. 前記方法が、前記がん対象において前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在を検出することをさらに含む、請求項１～９のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  18. 前記方法が、前記がん対象において前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを同定することをさらに含む、請求項１～９または１７のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  19. 前記方法が、前記対象から生体試料を得ることをさらに含む、請求項１～９または１７～１８のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  20. 前記方法が、前記対象から得られた前記生体試料でアッセイを実行することをさらに含む、請求項１～９または１７～１９のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  21. 前記方法が、
    ｉ）前記がん対象から生体試料を得ること、または得ていること；
    ｉｉ）前記がん対象から得られた前記生体試料においてＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在、アイデンティティ、または存在及びアイデンティティを決定するための診断アッセイを行うこと、または行っていること；ならびに
    ｉｉｉ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を抑制するために、ブリキサフォルとの組合せで投与するためのＡＤＲＢ２阻害剤を選択すること
    をさらに含む、請求項１～９または１７～２０のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  22. 前記方法が、前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを決定することであって、前記対象から得られた生体試料においてアッセイを実行することを含む、前記決定することをさらに含む、請求項１～９または１７～２１のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  23. 前記方法が、前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有するか否かを決定することであって、前記対象から生体試料を得ること、及び前記対象から得られた前記生体試料においてアッセイを実行することを含む、前記決定することをさらに含む、請求項１～９または１７～２２のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  24. 前記対象から得られた前記生体試料が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する、請求項１～９または１７～２３のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  25. 前記対象の細胞が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する、請求項１～９または１４～２４のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  26. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、以下の特徴：
    １）前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用していること；
    ２）増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因すること；及び／または
    ３）ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが：
    ｉ）前記細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる；
    ｉｉ）前記細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる；及び／または
    ｉｉｉ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞のヘテロマー特異的特性を変化させること
    のうちの２つ以上を有する、請求項１～２５のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  27. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、以下の特徴：
    １）前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用していること；
    ２）増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因すること；及び／または
    ３）ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが：
    ｉ）前記対象由来細胞（複数可）における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる；
    ｉｉ）前記対象由来細胞（複数可）における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる；
    ｉｉｉ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる；及び／または
    ｉｖ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する前記対象においてがん進行を減少させること
    のうちの２つ以上を有することを含む、請求項１～９または１４～２５のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  28. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用していることを有すると特徴づけられる、請求項１～２７のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  29. 前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用し、共内在化アッセイ、共局在化アッセイ、インサイチューハイブリダイゼーション、免疫組織化学、免疫電子顕微鏡法、近接度に基づくアッセイ、共免疫沈降アッセイ、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、ＲＮＡｓｅｑ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、ＣＸＣＲ４の発現レベル、ＡＤＲＢ２の発現レベル、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベル、マイクロアレイ、または蛍光動物アッセイのうちの１つまたは複数により決定される、請求項１～２８のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  30. 前記近接度に基づくアッセイが共鳴エネルギー移動（ＲＥＴ）、生物発光ＲＥＴ（ＢＲＥＴ）、蛍光ＲＥＴ（ＦＲＥＴ）、時間分解蛍光ＲＥＴ（ＴＲ－ＦＲＥＴ）、抗体利用ＦＲＥＴ、リガンド利用ＦＲＥＴ、二分子蛍光補完（ＢｉＦＣ）、または近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）であるか、またはそれを含む、請求項１～２９のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  31. 前記ＴＲ－ＦＲＥＴがリガンド利用ＴＲ－ＦＲＥＴである、請求項３０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  32. 前記ＴＲ－ＦＲＥＴが抗体利用ＴＲ－ＦＲＥＴである、請求項３０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  33. 前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用し、共内在化アッセイ、二分子蛍光補完（ＢｉＦＣ）、ＲＴ－ＰＣＲ、ＲＴ－ｑＰＣＲ、ＣＸＣＲ４の発現レベル、ＡＤＲＢ２の発現レベル、ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の発現レベル、または近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）のうちの１つまたは複数により決定される、請求項１～３０のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  34. 前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用し、共内在化アッセイにより決定される、請求項３３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  35. 前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用し、二分子蛍光補完（ＢｉＦＣ）により決定される、請求項３３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  36. 前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素が共局在化して直接、またはアロステリズムの伝達手段として作用する中間体タンパク質を介して、物理的に相互作用し、近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）により決定される、請求項３３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  37. 前記アッセイが、前記対象から得られた前記生体試料における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在を決定する、請求項１～９または１７～３６のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  38. 前記アッセイが、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの前記ＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２構成要素の共局在化及び相互作用を決定する、請求項１～３７のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  39. 前記アッセイが前記対象の細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在を決定する、請求項１～９または１４～３８のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  40. 前記アッセイが、前記対象から得られた前記生体試料における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在を決定する、請求項１～９または１７～３９のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  41. 前記アッセイが、前記対象における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在を決定する、請求項１～９または１７～４０のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  42. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因することを有すると特徴づけられる、請求項１～４１のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  43. 前記増強される下流シグナル伝達が、前記対象の細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因する、請求項１～９または１４～４２のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  44. 前記増強される下流シグナル伝達が前記対象の細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在に起因する、請求項１～９または１４～４３のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  45. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが前記増強される下流シグナル伝達をもたらす、請求項１～４４のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  46. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが前記対象の細胞において前記増強される下流シグナル伝達をもたらす、請求項１～９または１４～４５のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  47. 前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのアゴニズムに起因する、請求項１～４６のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  48. 前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４アゴニズムに起因する、請求項１～４７のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  49. 前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＡＤＲＢ２アゴニズムに起因する、請求項１～４７のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  50. 前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのＣＸＣＲ４アゴニズム及びＡＤＲＢ２アゴニズムに起因する、請求項１～４７のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  51. 前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４、前記ＡＤＲＢ２、または前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの下流である、請求項１～５０のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  52. 前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４の下流である、請求項５１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  53. 前記増強される下流シグナル伝達が前記ＡＤＲＢ２の下流である、請求項５１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  54. 前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの下流である、請求項５１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  55. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達が、それぞれ個々のプロトマーの状況におけるＣＸＣＲ４プロトマーまたはＡＤＲＢ２プロトマーからの下流シグナル伝達と比べてのものである、請求項１～５０のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  56. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達が、個々のプロトマーの状況におけるＣＸＣＲ４プロトマーからの下流シグナル伝達と比べてのものである、請求項５５に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  57. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達が、個々のプロトマーの状況におけるＡＤＲＢ２プロトマーからの下流シグナル伝達と比べてのものである、請求項５５に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  58. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達が、それぞれ個々のプロトマーの状況におけるＣＸＣＲ４プロトマー及びＡＤＲＢ２プロトマーからの下流シグナル伝達と比べてのものである、請求項５５に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  59. 前記増強される下流シグナル伝達が増強されるカルシウム動員量である、請求項１～５８のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  60. 前記増強されるカルシウム動員量を細胞内Ｃａ２＋アッセイにより決定する、請求項５９に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  61. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を細胞内Ｃａ２＋アッセイにより決定する、請求項１～６０のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  62. 前記細胞内Ｃａ２＋アッセイがカルシウム動員アッセイである、請求項６１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  63. 前記カルシウム動員アッセイが、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが前記増強される下流シグナル伝達をもたらすことを決定する、請求項６２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  64. 前記カルシウム動員アッセイが、前記増強される下流シグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの存在に起因することを決定する、請求項６２または６３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  65. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、
    ａ）ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に前記細胞内の個々のプロトマーの状況において前記ＣＸＣＲ４または前記ＡＤＲＢ２のいずれかが、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかまたはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらし；かつ
    ｂ）前記ＣＸＣＬ１２及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と比べて増強されるカルシウム動員を示すような、前記増強されるカルシウム動員量を示す、請求項１～６４のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  66. ｉ）前記細胞内の前記個々のプロトマーの状況における前記プロトマーＣＸＣＲ４またはＡＤＲＢ２からの前記カルシウム動員が、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、非相乗的であり；かつ
    ｉｉ）前記細胞内の前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーからの前記カルシウム動員が、カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、相乗的である、
    請求項１～６５のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  67. カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記個々のプロトマーの状況において：
    ａ）前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２の非存在下での前記細胞内の前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４、または
    ｂ）前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４の非存在下での前記細胞内の前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２
    が、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかまたはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらす、請求項１～６６のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  68. カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記個々のプロトマーの状況において独立に：
    ａ）前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２の非存在下での前記細胞内の前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４、及び
    ｂ）前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４の非存在下での前記細胞内の前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２
    が、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかまたはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらす、請求項１～６７のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  69. カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、前記ＣＸＣＬ１２及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの前記細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも多いカルシウム動員量をもたらす、請求項１～６８のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  70. カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの共刺激に起因した前記カルシウム動員量が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員の合計と比べて増強されるカルシウム動員量である、請求項１～６９のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  71. カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因した前記増強されるカルシウム動員量が、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの前記細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも多い、カルシウム動員量である、請求項１～７０のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  72. カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因した前記増強されるカルシウム動員量が、前記ＣＸＣＬ１２及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの前記細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも少なくとも１０％多い、少なくとも２０％多い、少なくとも３０％多い、少なくとも４０％多い、少なくとも５０％多い、少なくとも７５％多い、または少なくとも９０％多いカルシウム動員量である、請求項７１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  73. カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因した前記増強されるカルシウム動員量が、前記ＣＸＣＬ１２及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの前記細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも少なくとも１００％多いカルシウム動員量である、請求項７１または７２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  74. 前記増強されるカルシウム動員量が、相乗的なカルシウム動員の量である、請求項７１～７３のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  75. カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞からの前記相乗的なカルシウム動員の量が、前記ＣＸＣＬ１２及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの前記細胞の単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計よりも少なくとも１０％多い、少なくとも２０％多い、少なくとも３０％多い、少なくとも４０％多い、少なくとも５０％多い、少なくとも７５％多い、または少なくとも９０％多いカルシウム動員量である、請求項７４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  76. カルシウム動員アッセイにより決定した場合に、前記増強されるカルシウム動員量が、
    ａ）細胞内の個々のプロトマーの状況において前記ＣＸＣＲ４または前記ＡＤＲＢ２のいずれかが、ＣＸＣＬ１２及びＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と等しいかまたはそれよりも少ないカルシウム動員量をもたらし；かつ
    ｂ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、前記ＣＸＣＬ１２及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激時に、前記ＣＸＣＬ１２または前記ＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの単一作動薬刺激に起因するカルシウム動員量の合計と比べて増強されるカルシウム動員を呈するような、カルシウム動員の量の増強を示す
    と特徴づけられる、請求項１～７５のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  77. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：ＣＸＣＲ４作動薬またはＡＤＲＢ２作動薬のいずれかでの前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの単独刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量と比べて、多い量の下流ＥＲＫシグナル伝達が前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの共刺激に起因することを有すると特徴づけられる、請求項１～７６のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  78. 前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＣＸＣＲ４作動薬での単独刺激に起因する量よりも多い、請求項７７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  79. 前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＣＸＣＲ４作動薬での単独刺激に起因する量よりも少なくとも５％多い、請求項７８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  80. 前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＣＸＣＲ４作動薬での単独刺激に起因する量よりも少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、または少なくとも９０％多い、請求項７８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  81. 前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＣＸＣＲ４作動薬での単独刺激に起因する量よりも５～１５％、１０～２５％、２０～５０％、４０～７５％、または６０～１００％の範囲で多い、請求項７８～８０のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  82. 前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＡＤＲＢ２作動薬での単独刺激に起因する量よりも多い、請求項７７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  83. 前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＡＤＲＢ２作動薬での単独刺激に起因する量よりも少なくとも５％多い、請求項８２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  84. 前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＡＤＲＢ２作動薬での単独刺激に起因する量よりも少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、または少なくとも９０％多い、請求項８２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  85. 前記ＣＸＣＲ４作動薬及び前記ＡＤＲＢ２作動薬での共刺激に起因する下流ＥＲＫシグナル伝達の量が、前記ＡＤＲＢ２作動薬での単独刺激に起因する量よりも５～１５％、１０～２５％、２０～５０％、４０～７５％、または６０～１００％の範囲で多い、請求項８２～８４のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  86. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが前記対象由来細胞（複数可）における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させることを有すると特徴づけられる、請求項１～９または１４～８５のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  87. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが前記対象由来細胞（複数可）における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させることを有すると特徴づけられる、請求項１～９または１４～８６のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  88. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させることを有すると特徴づけられる、請求項１～９または１４～８７のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  89. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のがん進行を減少させることを有すると特徴づけられる、請求項１～９または１４～８８のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  90. 前記投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、請求項１～８９のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  91. 前記投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが、前記細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、請求項１～９０のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  92. 前記投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが、前記がん対象における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、請求項１～９または１７～９１のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  93. 前記投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが、前記がん対象の前記細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーから増強される下流シグナル伝達を抑制する、請求項１～９または１７～９２のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  94. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマー構成要素がＣＸＣＲ４及びＡＤＲＢ２の個々のプロトマーを含む、請求項１～９３のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  95. 個々のプロトマーの状況において前記ＣＸＣＲ４を含有する前記細胞が、前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２の存在もしくは非存在下で前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４を含む、請求項１～９４のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  96. 個々のプロトマーの状況において前記ＣＸＣＲ４を含有する前記細胞が、前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２の非存在下で前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４を含む、請求項９５に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  97. 個々のプロトマーの状況において前記ＣＸＣＲ４を含有する前記細胞が、前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２の存在下で前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４を含む、請求項９５に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  98. 個々のプロトマーの状況において前記ＡＤＲＢ２を含有する前記細胞が、前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４の存在もしくは非存在下で前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２を含む、請求項１～９４のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  99. 個々のプロトマーの状況において前記ＡＤＲＢ２を含有する前記細胞が前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４の非存在下で前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２を含む、請求項９８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  100. 個々のプロトマーの状況において前記ＡＤＲＢ２を含有する前記細胞が前記個々のプロトマーＣＸＣＲ４の存在下で前記個々のプロトマーＡＤＲＢ２を含む、請求項９８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  101. 前記投与されるブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが：
    ｉ）前記細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる；
    ｉｉ）前記細胞における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる；及び／または
    ｉｉｉ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記細胞のヘテロマー特異的特性を変化させる、
    請求項１～１００のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  102. 投与される前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せが：
    ｉ）前記対象由来細胞（複数可）における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる；
    ｉｉ）前記対象由来細胞（複数可）における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる；
    ｉｉｉ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる；または
    ｉｖ）前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する前記対象においてがん進行を減少させる、
    請求項１～９または１４～１０１のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  103. 投与される前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せが、前記対象由来細胞（複数可）において前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的特性を変化させる、請求項１０２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  104. 投与される前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せが、前記対象由来細胞（複数可）における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーのヘテロマー特異的機能を変化させる、請求項１０２または１０３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  105. 投与される前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せが、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のヘテロマー特異的特性を変化させる、請求項１０２～１０４のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  106. 投与される前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せが、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞を有する前記対象においてがん進行を減少させる、請求項１０２～１０５のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  107. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーが、次の特徴：ブリキサフォル及びＡＤＲＢ２阻害剤の組合せが前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のがん進行を減少させることを有すると特徴づけられる、請求項１０２～１０６のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  108. 前記減少するがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）のがん進行の減少を含む、請求項１０２～１０７のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  109. 前記減少するがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する対象由来細胞（複数可）の細胞増殖の減少を含む、請求項１０２～１０８のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  110. 前記減少するがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）の細胞遊走の減少を含む、請求項１０２～１０９のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  111. 前記減少するがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）の転移の減少を含む、請求項１０２～１１０のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  112. 前記減少するがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記対象由来細胞（複数可）の血管新生の減少を含む、請求項１０２～１１１のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  113. 前記ブリキサフォルを、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物として投与する、請求項１～１１２のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  114. 前記ＡＤＲＢ２阻害剤を、薬学的に許容される担体を含む医薬組成物として投与する、請求項１～１１３のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  115. 前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せを連続的に、併用して、または同時に投与することを含む、請求項１～１１４のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  116. 前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せを、薬学的に許容される担体をさらに含む医薬組成物として投与する、請求項１～１１５のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  117. 前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤を医薬組成物の組合せとして投与する、請求項１～１１６のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  118. 医薬組成物の前記組合せが、
    ａ）前記ブリキサフォル及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物；ならびに
    ｂ）前記ＡＤＲＢ２阻害剤及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物
    を含む、請求項１１７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  119. 前記医薬組成物の組合せを連続的に、併用して、または同時に投与する、請求項１１７または１１８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  120. 前記がんが血液学的がんまたは固形腫瘍である、請求項１～１１９のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  121. 前記がんが血液学的がんである、請求項１２０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  122. 前記血液学的がんがリンパ腫、白血病、骨髄腫、及び多発性骨髄腫からなる群から選択される、請求項１２１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  123. 前記リンパ腫がＢ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、またはＮＫ細胞リンパ腫である、請求項１２２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  124. 前記リンパ腫が再発性または難治性リンパ腫である、請求項１２２または１２３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  125. 前記リンパ腫が、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｂ細胞リンパ腫、活性化Ｂ細胞リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、バーキットリンパ腫、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、濾胞性中心リンパ腫、形質転換リンパ腫、中分化型のリンパ球性リンパ腫、中間型リンパ球性リンパ腫（ＩＬＬ）、びまん性低分化リンパ球性リンパ腫（ＰＤＬ）、中心細胞性リンパ腫、びまん性核切れ込み小細胞型リンパ腫（ＤＳＣＣＬ）、末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、マントル細胞リンパ腫、及び低悪性度濾胞性リンパ腫からなる群から選択される、請求項１２２～１２４のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  126. 前記白血病が：
    ａ）急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、Ｔ細胞急性リンパ球性白血病（Ｔ－ＡＬＬ）、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、急性単球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）、急性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病及び骨髄芽球、前骨髄球性、骨髄単球性、単球性、ならびに赤白血病からなる群から選択される急性白血病；
    ｂ）慢性骨髄球性（顆粒球性）白血病、慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病（慢性骨髄性（ｍｙｅｌｏｉｄ）白血病；ＣＭＬ）、及び慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）からなる群から選択される慢性白血病；または
    ｃ）慢性骨髄性単球性白血病（ＣＭＭＬ）、慢性好酸球性白血病、若年性骨髄性単球性白血病（ＪＭＭＬ）、真性多血症、ナチュラルキラー細胞白血病（ＮＫ白血病）、またはヘアリーセル白血病
    である、請求項１２２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  127. 前記がんが固形腫瘍である、請求項１２０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  128. 前記固形腫瘍が良性腫瘍またはがんである、請求項１２７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  129. 前記固形腫瘍が癌腫または肉腫である、請求項１２７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  130. 前記固形腫瘍が、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、滑膜腫、中皮腫、悪性類上皮中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、胃癌、結腸直腸癌、食道癌、結腸癌、リンパ悪性病変、膵臓癌、膵臓腺癌、膵臓管状腺癌、乳癌、乳房腺癌、乳房管状腺癌、肺癌、小細胞肺癌、肺腺癌、腺扁平上皮肺癌、肺胞横紋筋肉腫、卵巣癌、卵巣明細胞腺癌、卵巣粘液性嚢胞腺癌、卵巣漿液性腺癌、前立腺癌、肝細胞癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌腫、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、髄様甲状腺癌、乳頭状甲状腺癌、甲状腺癌、褐色細胞腫、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、髄様癌、気管支癌、胃腸癌、胃管状腺癌、胃腺扁平上皮癌、腎臓癌、肝臓内胆管癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛上皮腫、ウィルムス腫瘍、子宮癌肉腫、子宮内膜腺癌、子宮内膜間質性肉腫、子宮内膜癌、子宮頸癌、精巣腫瘍、精上皮腫、膀胱癌、黒色腫、多発性骨髄腫、多発性内分泌新形成、ＣＮＳ腫瘍、神経膠芽腫、神経膠星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽腫、神経鞘腫 頭蓋咽頭腫（ｃｒａｎｉｏｐｈａｒｙｏｇｉｏｍａ）、上衣細胞腫、松果体腫（ｐｉｎｅａｉｏｍａ）、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫（ｍｅｎａｎｇｉｏｍａ）、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、及び脳転移からなる群から選択される、請求項１２７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  131. 前記固形腫瘍が乳癌、肺癌、及び肝細胞癌からなる群から選択される、請求項１３０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  132. 前記固形腫瘍が乳癌である、請求項１３１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  133. 前記固形腫瘍が肺癌である、請求項１３１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  134. 前記固形腫瘍が肝細胞癌である、請求項１３１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  135. 前記対象の生体試料が生体液試料である、請求項１～９または１７～１３４のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  136. 液体生検を生体液試料で実行する、請求項１３５に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  137. 前記生体液試料が、血液試料、血漿試料、唾液試料、脳脊髄液試料、眼液試料、または尿試料である、請求項１３５または１３６に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  138. 前記対象の生体試料が生物学的組織試料である、請求項１～９または１７～１３７のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  139. 組織試料アッセイを前記生物学的組織試料で実行する、請求項１３８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  140. 前記生物学的組織試料が臓器組織試料、骨組織試料、または腫瘍組織試料である、請求項１３８または１３９に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  141. がんの前記処置方法が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達の抑制方法である、請求項１～１４０のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  142. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達の前記抑制方法が、がんの処置方法である、請求項１～１４０のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  143. 前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記がん細胞を有する前記対象における前記がんの進行が、前記がん対象への前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せの投与時に、前記ブリキサフォルまたは前記ＡＤＲＢ２阻害剤のいずれかの前記単一の阻害剤の投与と比べて５～１００％の範囲でより多く減少する、請求項１～９または１７～１４２のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  144. 前記ブリキサフォルの有効性が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記がん細胞を有する前記対象に前記ＡＤＲＢ２阻害剤との組合せで投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合の前記ブリキサフォルの有効性と比べて５～５０００％の範囲で上昇する、請求項１～９または１７～１４３のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  145. ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する前記がん細胞を有する前記対象に前記ブリキサフォルとの組合せで投与される場合に、単一の阻害剤として投与される場合の前記ＡＤＲＢ２阻害剤の有効性と比べて５～５０００％の範囲で上昇する、請求項１～９または１７～１４４のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  146. 前記がん対象への前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せの投与が、前記がん対象における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を、単一の阻害剤投与と比べて５～２０００倍の範囲で抑制する、請求項１～９または１７～１４５のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  147. 前記がん対象への前記ブリキサフォル及び前記ＡＤＲＢ２阻害剤の前記組合せの投与が、前記がん対象における前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーに起因して増強される下流シグナル伝達を、それぞれ個々のプロトマーの状況におけるＣＸＣＲ４プロトマーまたはＡＤＲＢ２プロトマーのいずれかからの下流シグナル伝達の抑制と比べて５～２０００倍の範囲で抑制する、請求項１～９または１７～１４６のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  148. 前記細胞ががん細胞である、請求項１７～１４７のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  149. 前記細胞が対象の細胞である、請求項１７～１４７のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  150. 前記対象の細胞ががん細胞である、請求項１４９に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  151. 前記対象ががん対象である、請求項１～１５０のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  152. 前記対象が患者である、請求項１～１５１のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、または使用のための医薬組成物。
  153. 医薬組成物であって、
    ａ）ブリキサフォルであるＣＸＣＲ４阻害剤；
    ｂ）ＡＤＲＢ２阻害剤；及び
    ｃ）薬学的に許容される担体
    を含む、前記医薬組成物。
  154. 前記ＡＤＲＢ２阻害剤が、ＡＤＲＢ２の拮抗薬、ＡＤＲＢ２のインバース作動薬、ＡＤＲＢ２の部分拮抗薬、ＡＤＲＢ２のアロステリック修飾因子、ＡＤＲＢ２の抗体、ＡＤＲＢ２の抗体断片、ＡＤＲＢ２のリガンド、または抗体－薬物コンジュゲートである、請求項１～１５３のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  155. 前記ＡＤＲＢ２阻害剤が拮抗薬ＡＤＲＢ２である、請求項１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  156. 前記ＡＤＲＢ２阻害剤がインバース作動薬ＡＤＲＢ２である、請求項１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  157. 前記ＡＤＲＢ２阻害剤が部分拮抗薬ＡＤＲＢ２である、請求項１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  158. 前記ＡＤＲＢ２阻害剤がＡＤＲＢ２のアロステリック修飾因子である、請求項１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  159. 前記ＡＤＲＢ２阻害剤がＡＤＲＢ２の抗体である、請求項１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  160. 前記ＡＤＲＢ２阻害剤がＡＤＲＢ２の抗体断片である、請求項１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  161. 前記ＡＤＲＢ２阻害剤がＡＤＲＢ２のリガンドである、請求項１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  162. 前記ＡＤＲＢ２阻害剤が抗体－薬物コンジュゲートである、請求項１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  163. 前記ＡＤＲＢ２阻害剤が、
    アルプレノロール、アテノロール、ベタキソロール、ブプラノロール、ブトキサミン、カラゾロール、カルベジロール、ＣＧＰ １２１７７、シクロプロロール、ＩＣＩ １１８５５１、ＩＣＹＰ、ラベタロール、レボベタキソロール、レボブノロール、ＬＫ ２０４－５４５、メトプロロール、ナドロール、ＮＩＨＰ、ＮＩＰ、プロパフェノン、プロプラノロール、ソタロール、ＳＲ５９２３０Ａ、及びチモロール
    からなる群から選択される、請求項１５４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  164. 前記ＡＤＲＢ２阻害剤がカルベジロールである、請求項１６３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  165. 治療有効量の前記ブリキサフォルを前記対象に投与する、請求項１～９または１７～１６４のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  166. 準治療有効量の前記ブリキサフォルを前記対象に投与する、請求項１～９または１７～１６４のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  167. 治療有効量の前記ＡＤＲＢ２阻害剤を前記対象に投与する、請求項１～９または１７～１６６のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  168. 準治療有効量の前記ＡＤＲＢ２阻害剤を前記対象に投与する、請求項１～９または１７～１６６のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  169. 前記方法または使用がさらに、前記細胞における、前記対象における、または前記対象から得られた前記試料におけるＣＸＣＲ４遺伝子の発現レベルを決定することを含み、その際、前記発現レベルが前記ＣＸＣＲ４遺伝子の基準レベルよりも高ければ、前記細胞、前記対象、または前記対象から得られた前記試料はＣＸＣＲ４発現がんを有すると決定される、請求項１～９または１４～１６８のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  170. 前記がんがＣＸＣＲ４発現がんである、請求項１６９に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  171. 前記細胞におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現レベルが基準レベルよりも高い、請求項１６９または１７０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  172. 前記対象におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現レベルが基準レベルよりも高い、請求項１６９または１７０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  173. 前記対象から得られた前記試料におけるＣＸＣＲ４遺伝子発現レベルが基準レベルよりも高い、請求項１６９または１７０に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  174. 前記ＣＸＣＲ４遺伝子発現レベルが前記基準レベルよりも高いと決定されたら、前記方法または使用が、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルである、請求項１６９～１７３のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  175. 前記方法または使用がさらに、前記細胞における、前記対象における、または前記対象から得られた前記試料におけるＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルを決定することを含み、その際、前記発現レベルが前記ＡＤＲＢ２遺伝子の基準レベルよりも高ければ、前記細胞、前記対象、または前記対象から得られた前記試料はＡＤＲＢ２発現がんを有すると決定される、請求項１～９または１４～１６８のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  176. 前記がんがＡＤＲＢ２発現がんである、請求項１７５に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  177. 前記細胞におけるＡＤＲＢ２発現レベルが基準レベルよりも高い、請求項１７５または１７６に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  178. 前記対象におけるＡＤＲＢ２発現レベルが基準レベルよりも高い、請求項１７５または１７６に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  179. 前記対象から得られた前記試料におけるＡＤＲＢ２発現レベルが基準レベルよりも高い、請求項１７５または１７６に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  180. 前記ＡＤＲＢ２遺伝子発現レベルが前記基準レベルよりも高いと決定されたら、前記方法または使用が、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルである、請求項１７５～１７９のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  181. 前記方法または使用がさらに、前記細胞における、前記対象における、または前記対象から得られた前記試料におけるＣＸＣＲ４遺伝子及びＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルを決定することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４遺伝子及び前記ＡＤＲＢ２遺伝子の発現レベルが前記ＣＸＣＲ４遺伝子及び前記ＡＤＲＢ２遺伝子のそれぞれの基準レベルよりも高ければ、前記細胞、前記対象、または前記対象から得られた前記試料はＣＸＣＲ４発現及びＡＤＲＢ２発現がんを有すると決定される、請求項１～９または１４～１６８のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  182. 前記がんがＣＸＣＲ４発現がん及びＡＤＲＢ２発現がんである、請求項１８１に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  183. 前記細胞におけるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルがそれぞれの基準レベルよりも高い、請求項１８１または１８２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  184. 前記対象におけるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルがそれぞれの基準レベルよりも高い、請求項１８１または１８２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  185. 前記対象から得られた試料におけるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルがそれぞれの基準レベルよりも高い、請求項１８１または１８２に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  186. 前記ＣＸＣＲ４遺伝子及び前記ＡＤＲＢ２遺伝子発現レベルが前記それぞれの基準レベルよりも高いと決定されたら、前記方法または使用が、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルである、請求項１８１～１８５のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  187. 前記方法または使用がさらに、前記細胞における、前記対象における、または前記対象から得られた前記試料におけるＣＸＣＲ４タンパク質の発現レベルを決定することを含み、その際、前記発現レベルが前記ＣＸＣＲ４タンパク質の基準レベルよりも高ければ、前記細胞、前記対象、または前記対象から得られた前記試料はＣＸＣＲ４発現がんを有すると決定される、請求項１～９または１４～１６８のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  188. 前記がんがＣＸＣＲ４発現がんである、請求項１８７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  189. 前記細胞におけるＣＸＣＲ４発現レベルが基準レベルよりも高い、請求項１８７または１８８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  190. 前記対象におけるＣＸＣＲ４発現レベルが基準レベルよりも高い、請求項１８７または１８８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  191. 前記対象から得られた前記試料におけるＣＸＣＲ４発現レベルが基準レベルよりも高い、請求項１８７または１８８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  192. 前記ＣＸＣＲ４タンパク質発現レベルが前記基準レベルよりも高いと決定されたら、前記方法または使用が、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルである、請求項１８７～１９１のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  193. 前記方法または使用がさらに、前記細胞における、前記対象における、または前記対象から得られた前記試料におけるＡＤＲＢ２タンパク質の発現レベルを決定することを含み、その際、前記発現レベルが前記ＡＤＲＢ２タンパク質の基準レベルよりも高ければ、前記細胞、前記対象、または前記対象から得られた前記試料はＡＤＲＢ２発現がんを有すると決定される、請求項１～９または１４～１６８のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  194. 前記がんがＡＤＲＢ２発現がんである、請求項１９３に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  195. 前記細胞におけるＡＤＲＢ２発現レベルが基準レベルよりも高い、請求項１９３または１９４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  196. 前記対象におけるＡＤＲＢ２発現レベルが基準レベルよりも高い、請求項１９３または１９４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  197. 前記対象から得られた前記試料におけるＡＤＲＢ２発現レベルが基準レベルよりも高い、請求項１９３または１９４に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  198. 前記ＡＤＲＢ２タンパク質発現レベルが前記基準レベルよりも高いと決定されたら、前記方法または使用が、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルである、請求項１９３～１９７のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  199. 前記方法または使用がさらに、前記細胞における、前記対象における、または前記対象から得られた前記試料におけるＣＸＣＲ４タンパク質及びＡＤＲＢ２タンパク質の発現レベルを決定することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４タンパク質及び前記ＡＤＲＢ２タンパク質の前記発現レベルが前記ＣＸＣＲ４タンパク質及び前記ＡＤＲＢ２タンパク質のそれぞれの基準レベルよりも高ければ、前記細胞、前記対象、または前記対象から得られた前記試料はＣＸＣＲ４発現及びＡＤＲＢ２発現がんを有すると決定される、請求項１～９または１４～１６８のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  200. 前記がんがＣＸＣＲ４発現がん及びＡＤＲＢ２発現がんである、請求項１９９に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  201. 前記細胞におけるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルがそれぞれの基準レベルよりも高い、請求項１９９または２００に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  202. 前記対象におけるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルがそれぞれの基準レベルよりも高い、請求項１９９または２００に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  203. 前記対象から得られた試料におけるＣＸＣＲ４発現レベル及びＡＤＲＢ２発現レベルがそれぞれの基準レベルよりも高い、請求項１９９または２００に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  204. 前記ＣＸＣＲ４タンパク質及び前記ＡＤＲＢ２タンパク質発現レベルが前記それぞれの基準レベルよりも高いと決定されたら、前記方法または使用が、ＣＸＣＲ４阻害剤及びＡＤＲＢ２阻害剤を投与することを含み、その際、前記ＣＸＣＲ４阻害剤がブリキサフォルである、請求項１９９～２０３のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  205. 前記ＡＤＲＢ２阻害剤がカルベジロールである、請求項１～２０４のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  206. 前記増強される下流シグナル伝達が、ＣＸＣＲ４作動薬及びＡＤＲＢ２作動薬での前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーの共刺激に対して増強される応答である、請求項１～２０５のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  207. 前記増強される下流シグナル伝達が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する前記対象において増強されるがん進行である、請求項１～２０６のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  208. 前記増強されるがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する前記対象において増強される細胞増殖である、請求項２０７に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  209. 前記増強されるがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する前記対象において増強される細胞遊走である、請求項２０７または２０８に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  210. 前記増強されるがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する前記対象において増強される転移である、請求項２０７～２０９のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  211. 前記増強されるがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する前記対象において増強される腫瘍成長である、請求項２０７～２１０のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  212. 前記増強されるがん進行が、前記ＣＸＣＲ４－ＡＤＲＢ２ヘテロマーを含有する細胞（複数可）を有する前記対象において増強される血管新生である、請求項２０７～２１１のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  213. 前記細胞（複数可）ががん細胞（複数可）である、請求項２０７～２１２のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  214. 前記細胞（複数可）を対象から得る、請求項２０７～２１３のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
  215. 前記細胞（複数可）が対象から得られた生体試料に由来する、請求項２０７～２１４のいずれか１項に記載の抑制方法、処置方法、使用のための医薬キット、使用のための医薬組成物、または医薬組成物。
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