JP2022531602A - 肺の炎症および炎症性リモデリングの予防および治療用Ｒ－エナンチオマーβ２アゴニストの、有害作用を軽減するための使用 - Google Patents

肺の炎症および炎症性リモデリングの予防および治療用Ｒ－エナンチオマーβ２アゴニストの、有害作用を軽減するための使用 Download PDF

Info

Publication number
JP2022531602A
JP2022531602A JP2021565870A JP2021565870A JP2022531602A JP 2022531602 A JP2022531602 A JP 2022531602A JP 2021565870 A JP2021565870 A JP 2021565870A JP 2021565870 A JP2021565870 A JP 2021565870A JP 2022531602 A JP2022531602 A JP 2022531602A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
agonists
inflammatory
salbutamol
enantiomer
terbutaline
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2021565870A
Other languages
English (en)
Inventor
ウェン タン
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Individual
Original Assignee
Individual
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from PCT/US2019/050120 external-priority patent/WO2020051568A1/en
Application filed by Individual filed Critical Individual
Publication of JP2022531602A publication Critical patent/JP2022531602A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/137—Arylalkylamines, e.g. amphetamine, epinephrine, salbutamol, ephedrine or methadone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
    • A61K31/138—Aryloxyalkylamines, e.g. propranolol, tamoxifen, phenoxybenzamine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
    • A61K31/167—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide having the nitrogen of a carboxamide group directly attached to the aromatic ring, e.g. lidocaine, paracetamol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
    • A61K31/27—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carbamic or thiocarbamic acids, meprobamate, carbachol, neostigmine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/439—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom the ring forming part of a bridged ring system, e.g. quinuclidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/46—8-Azabicyclo [3.2.1] octane; Derivatives thereof, e.g. atropine, cocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4704—2-Quinolinones, e.g. carbostyril
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/538—1,4-Oxazines, e.g. morpholine ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5386—1,4-Oxazines, e.g. morpholine spiro-condensed or forming part of bridged ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
    • A61K31/573—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone substituted in position 21, e.g. cortisone, dexamethasone, prednisone or aldosterone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本発明は、気管支－肺炎症症状または炎症性線維症リモデリングを治療するための免疫調節剤としてのＲ－エナンチオマーテルブタリンおよび他のＲ－エナンチオマーβ２アゴニストの新たな使用を開示した。本発明はまた、気道過敏性および気道線維症を含む、ラセミまたはＳ－エナンチオマーβ２アゴニストに関連する有害作用を減少させるための、Ｒ－テルブタリンおよびＲ－β２アゴニストの新たな使用を開示した。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年５月７日に出願された米国仮出願第６２８４４３９８号の利益を主張する。
本出願は、２０１８年９月９日に出願された米国特許出願第６２７２８８００号の続きである、２０１９年９月７日に出願された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ１９／５０１２０号の一部継続出願でもある。
本発明は、気管支－肺炎症症状および／または炎症性リモデリングを、有害作用を低減して治療するための免疫調節剤としてのＲ－エナンチオマーテルブタリンおよび他のＲ－エナンチオマーβ２アゴニストの新しい使用を開示した。有害作用は、ラセミβ２アゴニストの頻繁な使用に関係する。
β２アゴニストであるテルブタリンは、主に喘息の治療において３０年余り使用されており、いくつかの国では早期分娩のための子宮収縮抑制療法としても使用されている。テルブタリン分子は、Ｒ－およびＳエナンチオマーの両方からなる。現在、錠剤、エアロゾル、または注射用製剤中のＡＰＩとして市販されているテルブタリンは、ＳおよびＲエナンチオマーテルブタリンを５０％含有するラセミ体である。ＲまたはＳ β２アゴニスト、例えばサルブタモールは、生物学的効果において大きく異なり得ることが報告されている。Ｒエナンチオマーは、理論的に有効なウテマー（ｕｔｅｍｏｒ）であり、一方、Ｓエナンチオマーは、β２受容体および毒性物質をも活性化しないディステマー（ｄｉｓｔｅｍｏｒ）である。したがって、キラルスイッチは、必要としている患者にとって有益であり得る。しかしながら、先行技術においてＳ－テルブタリンの有害作用についての研究はほとんどない。むしろ、Ｓ－テルブタリンは治療的に不活性であるが、毒性はないと一般的に考えられており、したがって、ラセミテルブタリンの代わりにＲ－テルブタリンを使用することは、必要としている患者にとって有益ではない。このため、吸入剤または他の製剤としてＲエナンチオマーテルブタリンを開発することは、研究開発の高コストが患者への臨床的利益の理由にならないため、必要なかったと考えられる。今日、市販されているほとんどのβ２アゴニストは、少量、例えばレボサルブタモールやアルフォルモテロールなどを除き、ラセミ形態のままである。主要な臨床試験において、吸入剤β２アゴニストの使用に、ラセミ体を上回る有意な利益がないことが実証された。（Ｍａｎｓｆｉｅｌｄ ｅｔａｌ．，Ｓｉｎｇｌｅ－ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒ ｄｒｕｇｓ：ｅｌｅｇａｎｔ ｓｃｉｅｎｃｅ，ｄｉｓａｐｐｏｉｎｔｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ４３（５）：２８７－９０・２００４年２月）
一方、気道過敏性による、β２アゴニストの長期使用の安全性への懸念が高まっている。肺の劣化および長期生存率の低下は、β２アゴニストの長期使用に関係する。場合によっては、長時間作用型βアゴニスト（ＬＡＢ Ａｓ）は、生命を脅かす喘息発作および急性呼吸窮迫症候群、ＡＲＤＳに関連している（Ｂａｓｓｆｏｒｄ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｒｉｓｅ ａｎｄ ｆａｌｌ ｏｆ β－ａｇｏｎｉｓｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ＡＲＤＳ，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ ２０１２，１６：２０８）。最近、β２アゴニストの代わりに、β２遮断剤が喘息患者に有益であり得ることが示唆された。（Ａｌｂｏｕａｉｎｉ．Ｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｅｔａ－ｂｌｏｃｋｅｒｓ ｕｓｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｃｈｒｏｎｉｃ ｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，Ｉｎｔ Ｊ Ｃｈｒｏｎ Ｏｂｓｔｒｕｃｔ Ｐｕｌｍｏｎ Ｄｉｓ．２００７ Ｄｅｃ；２（４）：５３５－５４０）
この議論は、喘息－ＣＯＰＤまたはＡＲＤＳの臨床管理における問題を引き起こす。本発明において、本発明者らは、喘息－ＣＯＰＤ、呼吸不全および生命を脅かす他の状態の治療における有効性および毒性に関して、Ｒ対ＳテルブタリンおよびＲ－サルブタモールなどの他のβ２アゴニストの大きな違いがあることを開示した。ラセミβ２アゴニストの有害作用は、β２アゴニストのＳ－エナンチオマーにのみ関連している可能性がある。したがって、ラセミテルブタリンの代わりにＲ－テルブタリンを使用すると、必要とする患者に大きな利益をもたらす可能性がある。他のＲ－エナンチオマーβ２アゴニスト（サルブタモール、バンブテロール、ビランテロール、サルメテロール、クレンテロール、ホルモテロール、トランチンテロール、インダカテロールなど）の使用にも同じことが当てはまる。
β２アゴニストを使用するための他の重要な態様は、β２アゴニストが細気管支平滑筋の弛緩によって気管支痙攣を緩和するためにのみ使用されるという、医療行為における長期的な共通の理解があるということである。コルチコステロイドは、時にはβ２アゴニストと組み合わせて、炎症性肺症状の治療において抗炎症剤として一般的に使用される一方、β２アゴニスト単体では、喘息／ＣＯＰＤに関連する、または関連しない炎症性肺疾患または症状の治療には使用されていない。サルブタモールの、動物または細胞研究においていくつかのサイトカインを阻害する効果が先行技術で報告されたが、β２アゴニストは、平滑筋弛緩の他に、免疫炎症または気管支線維症リモデリングに対する治療効果を有するとは、当業者に考えられなかった。
これらに基づいて、潜在的な抗炎症薬としてのｂ２－ＡＲアゴニストの評価が強く保証される。しかしながら、喘息において気管支拡張剤として使用されるｂ２－ＡＲアゴニストの、これらの薬物の全体的な治療効果に対する最終的な免疫調節活性への相対的な寄与は、まだ確立されていない。
さらに、ＲおよびＳエナンチオマーβ２アゴニスト間で起こりうる相反する効果は、臨床では十分に実証されなかった。ラセミβ２アゴニストが使用された場合、Ｒ－エナンチオマーの可能性ある治療効果は、そのＳ－エナンチオマーの相反する作用によって低減または減少され得る。
病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）に応答して繰り返されるアレルギー反応は、多くの場合、症例ごとに重症度および変化の割合が変動し得る「リモデリング」プロセスにつながる。これらの変化の主なものは、異常な気道壁を形成する気管支脈管系および神経のあまり明確に定義されない変化に加えて、気道線維症、平滑筋量の増加、粘液化生、および腺肥大である。
本発明は、アレルギー反応、敗血症のサイトカインストームまたはアセチルコリンストームの場合の病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）によって誘発される肺の炎症および悪化した慢性細気管支炎、上腕肺線維症リモデリング、気腫、ならびに過剰な粘液生成を予防または治療するための抗免疫炎症薬としてのＲ－エナンチオマーβ２アゴニストの、新しい使用を開示した。さらに、本発明は、慢性細気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症および肺高血圧症を含む、ラセミβ２アゴニスト（５０およびＳ－エナンチオマーからなる）の長期使用に関連する有害作用を低減するための、Ｒ－エナンチオマーβ２アゴニストの新しい使用を開示した。
発明の詳細
本発明では、臨床アレルギー反応を模倣するために、ＯＶＡ感作／ＯＶＡチャレンジマウスを使用して、Ｒ、Ｓまたはラセミβ２アゴニストの効果を研究した。動物には、気道抵抗の増加、免疫炎症反応、サイトカイン放出、ＲＯＳ産生、および肺組織の病理組織学的変化を含む、重度のアレルギー性炎症症状が現れた。ＯＶＡ免疫化およびチャレンジによってアレルギー性喘息モデルを確立した後、動物を上記の薬物のエアロゾルの吸入によって７日間繰り返し前処理した。同じ動物において、メタコリンの吸入によって喘息発作を引き起こし、肺機能を研究した。ＢＡＬＦおよび組織サンプルを分析のために収集した。これらのプロトコルは、喘息患者が薬物で繰り返し治療された臨床治療に類似している。ベースライン条件は、従来技術で使用された正常な動物と比較して非常に大きく異なっていた。既存の喘息状態の動物におけるβ２アゴニストに対する応答は、正常な動物、または従来技術で使用される培養細胞株で見られる応答とは根本的に異なることが一般に知られている。本発明によって開示された喘息動物に基づく結果は、正常な動物または従来技術の培養細胞からの結果に従って当業者が予測することはできない。
本発明は、Ｓ－エナンチオマーがＯＶＡ感作／ＯＶＡチャレンジマウスの喘息において、気道抵抗および応答性を増強することを開示した。オボアルブミン（ＯＶＡ）誘発喘息マウスでは、Ｓ－テルブタリンの治療により、ベースライン気道抵抗が有意に増強され、肺コンプライアンスが低下した。喘息マウスをムスカリン受容体アゴニストであるメタコリンでチャレンジした場合、喘息反応は、Ｓ－エナンチオマーで前処置したマウスでは、Ｒ－エナンチオマーまたは生理食塩水（対照）のいずれかで前処置したマウスよりもはるかに重症であった。プレチスモグラフィーによって測定された気道抵抗の増加は、生理食塩水またはＲ－エナンチオマーテルブタリンのいずれかで前処置したマウスと比較して、Ｓ－エナンチオマーで前処置したマウスで有意に高かった。Ｓ－テルブタリンで処置された喘息マウスの肺組織切片において、細気管支の重度の狭窄が顕微鏡下で観察され得る。一方、Ｒ－エナンチオマーテルブタリンは、抗喘息および炎症性病変に対してＲＳテルブタリンよりも有意に効果が高い。サルブタモール、バンブテロール、ビランテロール、クレンブテロール、サルメテロール、ホルモテロール、トランチンテロール、およびインダカテロールのＲまたはＳ－エナンチオマーにも同じことが当てはまる。
これは、Ｓ－エナンチオマーが治療的に不活性であるだけでなく、薬物誘発気道過敏性の原因であることを明確に実証した。本発明は、Ｓ－エナンチオマーが、ラセミβ２アゴニスト治療を受けている患者の生命を脅かす喘息発作に関連していることを開示した。したがって、ＲＳ－ラセミの代わりにＲ－エナンチオマーを使用すると、望ましくない有害作用を減らすことができる。
本発明は、Ｓ－エナンチオマーβ２アゴニストによって、気管支肺胞洗浄液で測定した場合に、好酸球の血液および肺中の浸潤が増加することを開示した。喘息マウスにおいて、好酸球は、重度の炎症反応をもたらし得る喘息反応の重要なマーカーである。しかしながら、先行技術では、ＯＶＡ感作／ＯＶＡチャレンジマウスにおいて、Ｒ－サルブタモールは好酸球を有意に減少させないことが報告された。他の先行技術では、サルブタモールの（Ｒ）－、および（Ｓ）－エナンチオマーの両方によって、喘息のマウスモデルにおける気道好酸球輸送および粘液過剰分泌が減少することが報告された。（Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ ｅｔａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｌｌｅｒｇｙ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １１６（２）：３３２－４０・２００５年９月）。本発明では、Ｓ－テルブタリンおよび他のＳ－エナンチオマーβ２アゴニストは、臨床治療を模倣するために、ＯＶＡ感作／ＯＶＡチャレンジ喘息後のマウスにおいて７日間毎日吸入され、曝露された。一方、先行技術では、Ｓ－サルブタモールは、埋め込み型浸透圧ポンプによって非経口的に与えられた。議論は、薬物投与の経路が異なることに起因し得る。
本発明は、Ｓ－テルブタリンの繰り返し吸入後、ＯＶＡ誘発喘息マウスの血液またはＢＡＬＦのいずれかの好酸球の数が有意に増加することを開示した。ラセミテルブタリンの吸入は、Ｓ－テルブタリンと、程度は低いが同様の効果を有する一方、Ｒ－テルブタリンの繰り返し吸入は、Ｓまたはラセミテルブタリンと比較して反対の効果を有し、血液およびＢＡＬの両方の好酸球の数は、喘息マウスにおいて有意に減少した。同様のことが、サルブタモール、バンブテロール、ビランテロール、クレンテロール、サルメテロール、ホルモテロール、トランチンテロールおよびインダカテロールおよび他のβ２アゴニストのラセミ、ＲまたはＳ－エナンチオマーにも見られた。
本発明による本開示は、Ｒ－テルブタリンおよび他のβ２エナンチオマーアゴニストが好酸球媒介喘息反応を低減するために使用され得る一方で、Ｓ－テルブタリンおよび他のＳ－エナンチオマーβ２アゴニストは、必要とする患者によって吸入された場合、好酸球媒介喘息反応を悪化させ得ることを実証する。同じ理由で、５０％のＳ－エナンチオマーを含有するラセミβ２アゴニストの吸入は、患者の喘息治療に有害であり得る。これは、先行技術によって開示されたことはなく、実際、先行技術は反対のことを開示した。したがって、本発明の開示は、新規かつ進歩的であると見なされるべきである。
本発明は、Ｓ－エナンチオマーβ２アゴニストが、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）においてサイトカインおよびＩＬＣ媒介炎症を増強することを開示した。ＯＶＡ誘発喘息マウスのＢＡＬＦでは、自然リンパ球（ＩＬＣ）および２型炎症が活性化され、ＩＬ４およびＩＬ１３の放出が増加した。本発明は、Ｓ－テルブタリンおよび他のＳ－エナンチオマーβ２アゴニストを長期間繰り返し吸入した後、ＯＶＡ感作／ＯＶＡチャレンジ喘息マウスにおいて、ＢＡＬＦ中のＩＬ４およびＩＬ１３を含むサイトカインならびに血液中のＩｇＥがさらに増加したことを開示した。これらのサイトカインの増加は、肺の自然リンパ球（ＩＬＣ）の活性化を示す。一方、Ｒ－テルブタリンおよび他のＲ－エナンチオマーβ２アゴニストの繰り返し吸入は、ＯＶＡ感作／ＯＶＡチャレンジマウスのＯＶＡ感作／ＯＶＡチャレンジ喘息マウスにおけるＢＡＬＦで、ＩＬ５の放出を有意に阻害した。同様の結果が、サルブタモール、バンブテロール、ビランテロール、クレンテロール、サルメテロール、ホルモテロール、トランチンテロールおよびインダカテロールおよび他のβ２アゴニストのラセミ、ＲまたはＳ－エナンチオマーにも見られた。ラセミβ２アゴニストであるサルブタモールおよびクレンテロールが、肺におけるＩＬＣの活性化を阻害し得ることが先行技術で報告されている。本発明は、Ｓ－エナンチオマーβ２アゴニストが、実際、肺において２型炎症およびＩＬＣを活性化することを開示した。本発明で開示された、ＳおよびＲエナンチオマーサルブタモールおよびクレンテロール間で逆の２型炎症への効果は、先行技術では報告されていなかった。本発明は、この場合にラセミ体の代わりにＲ－エナンチオマーを使用すると、必要とする患者に肺炎症の管理における予想外の有意な利益をもたらすであろうことを開示した。本発明におけるこの開示は、新規かつ進歩的であると見なされるべきである。
持続性の気管支－肺炎症は、炎症性リモデリングにつながるであろう。本発明は、Ｓ－エナンチオマーβ２アゴニストの繰り返し吸入が、ＯＶＡ感作／ｏｖａチャレンジマウスにおいて、細気管支平滑筋および肺線維芽細胞の肥大および増殖、ならびに細胞外マトリックスでのコラーゲンの沈着をさらに増強し得ることを開示した。ＯＶＡ感作／ｏｖａチャレンジ喘息マウスは、重度の炎症、粘膜浮腫、上皮病変、好中球、リンパ球および好酸球の間質浸潤を発症した。平滑筋および線維芽細胞の肥大および増殖によって、細気管支平滑筋層の厚さが増し、コラーゲンが沈着した。Ｓ－テルブタリンを数日間繰り返し吸入すると、粘液の過剰産生で満たされた細気管支の内腔の重度の狭窄を伴って、上記の組織病理学的変化がさらに悪化する。したがって、炎症性リモデリングはＳ－テルブタリンによって増強されたが、Ｒ－テルブタリンによって減少した。
肺組織の肺胞隔壁の厚さも、さらに増加した。これらによって、ＯＶＡ感作／ｏｖａチャレンジ喘息マウスにおいて肺機能が低下し、ガス血液関門を介した酸素交換が減少するであろう。
Ｓ－テルブタリンを繰り返し吸入すると、ＯＶＡ感作／ＯＶＡチャレンジマウスにおいて杯細胞の過形成および過剰な粘液産生が増加した。ＰＡＳおよびマッソン染色は、気道杯細胞の過形成およびコラーゲン沈着、および上皮下マトリックス糖タンパク質の増加を示した。これらは、気管支－肺炎症、肺線維症、肺炎および肺気腫、ＣＯＰＤまたは無気肺の悪化につながり得る。
一方、阻害されるＲ－テルブタリンの吸入は、そのＳ－エナンチオマーとは逆の効果を示した。Ｒ－テルブタリンは、喘息マウスの細気管支平滑筋細胞の増殖、線維芽細胞およびコラーゲン沈着、杯細胞の過形成、および粘液産生を有意に阻害した。ラセミテルブタリンの吸入の効果は、Ｒ－テルブタリンと比較すると、はるかに少ないか、またはなかった。
同様の効果または結果が、サルブタモール、バンブテロール、ビランテロール、クレンテロール、サルメテロール、ホルモテロール、トランチンテロールおよびインダカテロールおよび他のβ２アゴニストを含む、ラセミ、ＲまたはＳ－エナンチオマーβ２アゴニストにも見られた。
Ｓ－サルブタモールは、正常な細胞培養調製物において細気管支平滑筋および線維芽細胞の増殖を増加させ得ることが報告された。これは、細胞を直接計数するのではなく、培養皿中の総タンパク質を測定することにのみ基づいた（Ｂａｓｉｌ Ｏ Ｉｂｅ、ｅｔ．ａｌ、Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００８；１４６：３２１－３３３による）。どのタイプの細胞が増殖するのか教示されず、測定されたタンパク質が個々の細胞の分泌活性の増加に起因するのか、または細胞数の増加に起因するのかも教示されていなかった。一方、本発明は、Ｓ－テルブタリンまたはＳ－サルブタモールの、インビボ、すなわちＯＶＡ感作／チャレンジによって正常ではなく炎症状態下にある動物モデルでの疾患への効果を開示し、薬物を肺内への吸入によって試験した。さらに、本発明は、Ｓ－テルブタリンまたはＳ－サルブタモールまたは他のβ２アゴニストの繰り返し前処置による、ＯＶＡ感作／チャレンジ誘発炎症の変性を開示した。したがって、先行技術は、本発明の開示を明白にするべきではない。
血管の変化は、肺の炎症性リモデリングの重要な部分である。本発明は、Ｓ－エナンチオマーβ２アゴニストの吸入によって、ＯＶＡ感作／ｏｖａチャレンジマウスの血管の中間層がさらに増加することを開示した。ＯＶＡ感作／ｏｖａチャレンジマウスの肺では、血管平滑筋細胞および線維芽細胞のサイズおよび数の増大、過剰なコラーゲン沈着、ならびに血管間質マトリックスにおける炎症性浸潤があった。内皮細胞は増殖し、形が歪んでいる。血管壁の厚さが増した。Ｓ－テルブタリンの繰り返し吸入後、内皮細胞、平滑筋細胞および線維芽細胞の増殖がさらに増強され、血管の中間層にコラーゲンがさらに沈着し、これにより血管の壁厚がさらに増加した。さらに、肺胞の間質層における線維芽細胞の増殖およびコラーゲン沈着があり、肺胞の隔壁の厚さが増した。これらの変化は、酸素交換の減少、血管抵抗の増加につながり、肺高血圧症をもたらし得る。したがって、本発明は、ＯＶＡ感作／ｏｖａチャレンジに示される炎症性リモデリングプロセスがＳ－テルブタリンの繰り返し吸入後にさらに増強されたが、これらのプロセスはＲ－テルブタリンの吸入後に有意に減少したことを開示した。本発明の開示は、当業者によって予想され得ない。それは新規かつ進歩的であると見なされるべきである。
本発明はまた、サルブタモール、バンブテロール、ビランテロール、クレンテロール、サルメテロール、ホルモテロール、トランチンテロールおよびインダカテロールおよび他のβ２アゴニストを含む、ラセミ、ＲまたはＳ－エナンチオマーβ２アゴニストの使用についての同様の効果または結果を開示した。
急性呼吸窮迫症状などの呼吸不全は、敗血症によって誘発され得る。それは、ウイルス、細菌、またはＰＡＭＰ、例えばＰＬＳに応答した、サイトカイン、ケモカインの急速かつ過剰な放出、および免疫機能不全を特徴とした。マクロファージ活性化が敗血症における決定的かつ重要な段階であることは、十分に認められている。本発明は、Ｓ－アルブテロール（サルブタモール）がマクロファージ極性化を促進し、ＰＬＳによる炎症チャレンジ中にサイトカインの放出および活性酸素種（ＲＯＳ）の産生を増加させた一方で、Ｒ－サルブタモールがマクロファージの極性化を有意に阻害したことを開示した。（Ｒ）－サルブタモールは、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－４、５、６、１３およびＭＣＰ－１を含む、ＬＰＳ誘導Ｍ１マクロファージにおけるサイトカインの放出および発現を阻害した。これらの阻害効果は、特異的β２アゴニスト遮断剤であるＩＣＩ－１１８５５１によって遮断され得る。Ｓ－サルブタモールは、逆の効果を有した。マクロファージは、重度のアレルギー反応の開始、および敗血症によって誘発されるサイトカインストーム、呼吸窮迫または不全において重要な役割を果たす。Ｍ１マクロファージ極性化は、炎症性疾患を促進する。この研究では、β２受容体アゴニストである（Ｒ）－サルブタモールがマクロファージの細胞代謝を阻害し、再プログラムすることを発見した。（Ｒ）－サルブタモールは、フローサイトメトリー分析によって決定されるように、ＬＰＳ誘発Ｍ１マクロファージの極性化を有意に阻害した。（Ｒ）－サルブタモールは、腫瘍壊死因子ａ（ＴＮＦ－α）、インターロイキン－１β（ＩＬ－１β）、および単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１）など、典型的なＭ１マクロファージサイトカインのタンパク質およびｍＲＮＡの両方の発現をダウンレギュレートし、（Ｒ）－サルブタモールがＭ１マクロファージで通常発現されるサイトカインを転写的に抑制できることを示唆している。
さらに、（Ｒ）－サルブタモールは、還元型グルタチオン（ＧＳＨ）／酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）の比率を増加させ、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）を阻害し、一酸化窒素（ＮＯ）および活性酸素種（ＲＯＳ）の産生を大幅に減少させた。対照的に、（Ｓ）－サルブタモールはＮＯおよびＲＯＳの産生を増加させた。生体エネルギー学プロファイルは、（Ｒ）－サルブタモールが好気的解糖を有意に減少させ、ミトコンドリア呼吸を弱めることを示した。さらに、非標的メタボロミクス分析は、（Ｒ）－サルブタモールが代謝経路を調節することを実証した。フェニルアラニン代謝、ペントースリン酸経路、およびグリセロリン脂質代謝が、（Ｒ）－サルブタモールによって最も顕著に影響を受けた経路であった。（Ｒ）－サルブタモールのＭ１極性化への効果は、特異的β２受容体拮抗薬であるＩＣＩ－１１８５５１によって遮断された。本発明は、（Ｒ）－サルブタモールが、好気的解糖およびグリセロリン脂質代謝をダウンレギュレートすることにより、ＬＰＳ誘導マクロファージのＭ１表現型を阻害することを開示した。本発明によるこの開示は、新規かつ進歩的である。
マクロファージの活性化および増殖は、敗血症の開始および発症の重要な段階であると考えられた。一実施形態では、ＬＰＳ（細菌由来のＰＡＭＰ）は、腹膜液からのマクロファージの増殖および極性化を誘導した。これらのマクロファージの数は、（Ｒ）－サルブタモールで処理されると、正常レベルに向かって有意に減少した。極性化Ｍ１マクロファージまたはＭ２マクロファージも、敗血症状態と比較して有意に減少した。これらの阻害効果は、特異的β２受容体遮断剤の使用によって遮断され得る。一方、（Ｓ）－サルメテロールによる敗血症の治療で、Ｍ１およびＭ２マクロファージの両方が、敗血症の状態と比較してさらに増加した。
ＬＰＳは、ＴＬＲなどの病原体認識受容体と相互作用し、ＮＦ－κＢおよびＭＡＲＫ経路も活性化し、それによりサイトカインの過剰産生をさらにもたらす。本発明は、（Ｒ）－テルブタリンが、敗血症においてＬＰＳによって活性化されるＮＦ－κＢおよびＭＡＲＫ経路の両方を、それらの発現またはリン酸化を減少させることにより有意に阻害することを開示した。しかしながら、逆に、（Ｓ）－テルブタリンは敗血症においてＮＦ－κＢおよびＭＡＲＫ経路の両方をさらに増強した。敗血症における「サイトカインストーム」は、ＩＮＦ、ＩＬ－１Ｂ、ＩＬ－２、４、６、１０、１２、ＴＮＦａおよびＭＣＰなどの過剰放出を伴う。本発明は、（Ｒ）－テルブタリンならびに（Ｒ）－サルブタモールが「サイトカインストーム」を効果的に予防または改善することができ、これらのサイトカインの産生または放出を有意に減少させたことを開示した。
敗血症では、ＲＯＳなどのケモカインも過剰に産生される。本発明は、（Ｒ）－テルブタリンおよび（Ｒ）－サルブタモールが、誘導型ＮＯ（ｉＮＯ）、およびＬＰＳ敗血症によって誘導される別のＲＯＳの過剰産生を有意に防止および阻害できることを開示した。本発明は、サルブタモール、バンブテロール、ビランテロール、クレンテロール、サルメテロール、ホルモテロール、トランチンテロールおよびインダカテロールおよび他のβ２アゴニストを含む、他のＲＳ－ラセミ、Ｓ－エナンチオマーまたはＲ－エナンチオマーβ２アゴニストの同様の効果を開示した。
敗血症は、比較的高い死亡率を有する。それは主に、ＰＡＭＰに対する不均衡な宿主免疫応答、ならびに呼吸窮迫または多臓器不全を伴う肺の炎症につながる、サイトカインおよびケモカインの過剰産生に起因する。マクロファージの活性化は、敗血症の発症における最も重要な段階の１つである。本発明は、敗血症の死亡率が、（Ｒ）－テルブタリンおよび（Ｒ）－サルブタモールによって大幅に減少するか、またはさらに減少することを開示した。それはおそらく、マクロファージの活性化および増殖を阻害することによるものであった。マクロファージの活性化に対する（Ｒ）－テルブタリンおよび（Ｒ）－サルブタモールの治療効果、様々なサイトカインおよびケモカインの阻害、ならびに敗血症の緩和は、先行技術から予想することはできない。
本発明はまた、サルブタモール、バンブテロール、ビランテロール、クレンテロール、サルメテロール、ホルモテロール、トランチンテロールおよびインダカテロールを含む、他の短時間または長時間作用型（Ｒ）－エナンチオマーβ２アゴニストの同様の効果を開示した。
併用療法は、気管支－肺炎症症状の臨床管理において一般的に使用される。本発明は、ムスカリン受容体アゴニストを、そのラセミまたはＳ－エナンチオマーの代わりにＲ－エナンチオマーβ２アゴニストと組み合わせる有益な効果を開示した。ｏｖａ感作／ｏｖａチャレンジマウスでは、Ｓ－サルブタモールの吸入によって、上記のように、より重度の炎症および組織リモデリング反応が発生する。ムスカリン受容体拮抗薬であるイプラトロピウムをＳ－サルブタモールと組み合わせた場合、喘息マウスにおいて改善は観察できなかった。しかしながら、Ｓ－エナンチオマーの代わりにＲ－サルブタモールを使用した場合、上記の喘息状態は有意に改善された。特に、杯細胞の増殖および粘液の過剰産生が有意に減少し、細気管支の内層の上皮細胞が回復した。さらに、メタコリンによって誘発される気道抵抗は、生理食塩水（対照）で治療された喘息マウスと比較して、Ｓ－サルブタモールで治療された喘息マウスではるかに大きい。同様のことが、テルブタリン、バンブテロール、ビランテロール、クレンテロール、サルメテロール、ホルモテロール、トランチンテロールおよびインダカテロールおよび他のβ２アゴニストのラセミ、ＲまたはＳ－エナンチオマーにも見られた。したがって、本発明は、β２アゴニストとイプラトロピウムまたは他のムスカリン受容体拮抗薬との併用療法において、ラセミの代わりにＲ－エナンチオマーを使用すると、効果が有意に向上し、有害作用が大幅に低減することを開示した。
本発明は、ムスカリン受容体拮抗薬の代わりにブデソニドまたはフルチカゾンプロピオナートなどのコルチコステロイドが使用された場合にも、同様の有益な効果が見られることを開示した。
併用療法におけるＲ－エナンチオマー－β２アゴニストの、この有益な効果は、先行技術に開示されていない。それは、新規かつ進歩的であると考えられるべきである。
さらに、本発明は、ムスカリン拮抗薬（イプラトロピウム）、コルチコステロイド（ブデソニドまたはフルチカゾン）プロピオナート、およびＲ－エナンチオマーβ２アゴニスト（Ｒ－テルブタリンまたはＲ－サルブタモールまたはＲ－サルメテロール）を組み合わせて使用する、トリプル併用療法を開示した。トリプル併用では、Ｒ－エナンチオマーβ２アゴニストは、喘息発作、免疫炎症、および組織リモデリングに対して、そのラセミ体よりも優れていた。
本発明によるムスカリン受容体拮抗薬は、チオトロピウム、グリコピロニウム、アクリジニウムおよびウメクリジニウムを含む。
本発明によるコルチコステロイドには、シクレソニド、ベクロメタゾン、モメタゾン、デキサメタゾン、プレドニゾロン、フルニソリド、トリアムシノロンアセトニド、および本発明による他の薬学的に使用されるコルチコステロイドまたはそれらの生理学的に許容される塩および／またはそれらの溶媒和物が含まれる。
β２アゴニストは細気管支平滑筋の弛緩による抗気管支痙攣にのみ使用されることが、医療行為における一般的に理解である。それは、炎症性肺疾患または症状を治療するための免疫調節剤としては使用されていない。
ＢＡＬＦまたは培養細胞における、Ｒ－サルブタモールによるいくつかのサイトカインの阻害が報告されているが、従来技術では、β２アゴニストは気管支拡張薬としての使用以外に、抗気管支肺炎症薬として使用することは推奨されていない。
本発明は、Ｒ－エナンチオマーβ２アゴニストの、気管支－肺炎症および炎症性リモデリングを予防または治療するための抗免疫炎症薬としての新しい使用を開示した。本発明は、Ｒ－エナンチオマーβ２アゴニストを使用して、肺免疫炎症状態も治療できることを開示した。肺免疫炎症状態は、ＩＢＤ（炎症性腸疾患）、ＨＩＶ感染症、結核、特発性肺炎、間質性肺疾患（ＩＬＤ）、特発性肺線維症（ＩＰＦ）、外因性アレルギー性肺胞炎（ＥＡＡ）、肺癌または敗血症性ショックおよび全身感染などの他の疾患に関連する。
さらに、本発明は、持続性および悪化した慢性細気管支炎、悪化した慢性閉塞性肺疾患、肺線維症および肺高血圧症を含む、ラセミβ２アゴニストの長期使用に関連する有害作用を低減するための、Ｒ－エナンチオマーβ２アゴニストの新しい使用を開示した。
本発明は、短時間作用型β２アゴニスト：ビトルテロール、フェノテロール、イソプレナリン、オルシプレナリンまたはメタプロテレノール、ピルブテロール、プロカテロール、リトドリン；および長時間作用型β２アゴニスト、：バンブテロール、アルフォルモテロール、ホルモテロール、Ｐｅｒｆｏｒｏｍｉｓｔ；および超長時間作用型β２アゴニスト：アベジテロール、カルモテロール、インダカテロール、オロダテロール、ビランテロール、イソクスプリン、マブテロールおよびジルパテロールのＲまたはＲ’Ｒ’エナンチオマーを含む、他のＲ－エナンチオマーβ２アゴニストの同様の有益な効果を開示した。
本発明によるＲ－テルブタリンおよび上に列挙された他のＲ－エナンチオマーβ２アゴニストの医薬品は、経口使用のための固形剤形；ゲル、直腸または膣用の坐剤、点眼薬、注射用の液体または凍結乾燥粉末；局所使用のための軟膏またはパッチ、ならびに肺および鼻への吸入用のエアロゾルまたは乾燥粉末を含む。
本発明によるＲ－テルブタリンおよび上に列挙された他のＲ－エナンチオマーβ２アゴニストの薬学的に許容される塩には、従来の薬学的に許容される無機または有機酸、例えば、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、二水素リン酸塩、メタンスルホン酸塩、臭化物、硫酸メチル、酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、グリコネート（ｇｌｙｃｏｎａｔｅ）、グルコン酸塩、クエン酸塩、酒石酸、乳酸、ピルビン酸イセチオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩またはパラトルエンスルホン酸塩で形成されるものが含まれる。
Ｒ－、Ｓ－、およびＲＳ－テルブタリンの吸入による７日間の前処理後のＯＶＡ感作／チャレンジマウスにおける、気管支収縮剤、エアロゾル化メタコリンに対する反応。この図は、Ｓ－エナンチオマーβ２アゴニストの繰り返し使用による過敏反応性の有害作用を開示した。 図１に記載されるＯＶＡ感作／チャレンジマウスにおける肺の組織病理学的変化。 ＯＶＡ感作／チャレンジマウスにおいて、７日間連続してＲ－、Ｓ－およびラセミテルブタリンで前処置した後に放出されたサイトカイン。Ｒ－テルブタリンは放出を有意に阻害したが、Ｓ－テルブタリンはその逆であった。 Ｒ－、Ｓ－およびラセミテルブタリンの前処置によって影響されたＭＡＰＫおよびＮＦ－κＢ経路のリン酸化および活性化。Ｒ－テルブタリンは、全ｐ３８ ＭＡＰＫに対するリン酸化の比率、および全ｐ６５ ＮＦ－κＢに対するリン酸化の比率の両方を低下させたが、一方、Ｓ－テルブタリンは、比率の両方を上げた。Ｒ－テルブタリンは抗炎症性であったが、Ｓ－テルブタリンは炎症誘発性であった。 図２のマウスの肺組織の過ヨウ素酸シッフ（Ｐａｒａｔｉｏｎ Ｓ）染色。この図は、Ｒ－、Ｓ－、およびＲＳ－テルブタリンの前処置に影響された気管支－肺炎症および炎症性リモデリングのプロセスを開示した。 Ｒ－サルブタモール（Ｒ－Ｓａ）、Ｓ－サルブタモール（Ｓ－ｓａ）、およびイプラトロピウム（ＩＰＲ）との組み合わせで前処置した正常マウスおよびＯＶＡ感作／チャレンジマウスの肺組織のマッソン染色および過ヨウ素酸シッフ（Ｐａｒａｔｉｏｎ Ｓ）染色。 Ｒ－サルブタモール（Ｒ－Ｓａ）、Ｓ－サルブタモール（Ｓ－ｓａ）、およびイプラトロピウム（ＩＰＲ）との組み合わせで前処置した正常マウスおよびＯＶＡ感作／チャレンジマウスの肺組織のマッソン染色および過ヨウ素酸シッフ（Ｐａｒａｔｉｏｎ Ｓ）染色。Ｒ－サルブタモールの抗炎症効果は、ムスカリン遮断薬との組み合わせにより増強された。 （Ｒ）－サルブタモールは、ＬＰＳチャレンジによって誘発されたＭ１マクロファージの活性化および極性化を阻害した。マクロファージの活性化は、敗血症誘発呼吸不全の重要な段階である。 （Ｒ）－サルブタモールは、ＬＰＳチャレンジによって誘発されたＭ１マクロファージにおけるサイトカインの発現を阻害した。 （Ｒ）－サルブタモールは、ＬＰＳチャレンジによって誘発されたマクロファージにおけるｉＮＯＳの発現およびＮＯの産生を阻害した。ｉＮＯＳおよびＮＯは、炎症プロセスに関与する重要なケモカインである。
実施例
ＯＶＡ感作／チャレンジ喘息モデルマウスを、オボアルブミン（ＯＶＡ）または生理食塩水で感作し、チャレンジした。手短に言うと、１０μｇのＯＶＡ抗原を含む０．２ｍＬの２％水酸化アルミニウム（ＡＬＵＭ）ゲルを０日目および１４日目に腹腔内（ｉ．ｐ．）注射することによって、マウスを感作した。２１、２２、および２３日目に、生理食塩水（０．０１ｇ／ｍＬ）中の１％ＯＶＡで、ネブライザー（ＰＡＲＩ Ｔｕｒｂｏ ｂｏｙ）によって２０分間マウスをチャレンジした。２６日目に、生理食塩水（０．０５ｇ／ｍＬ）中の５％ＯＶＡを用いて、２０分間の霧状ＯＶＡチャレンジを実施した。対照群には、０日目および１４日目に２％ＡＬＵＭを含む０．２ｍＬの生理食塩水を腹腔内投与した後、２１、２２、２３、および２６日目に２０分間、ＯＶＡを含まない霧状生理食塩水を投与した。
方法：
メタコリンに対する気道反応性の測定
メタコリン（Ｍｃｈ）に対するインビボ気道反応性は、意識があり、自由に動き、自発呼吸しているマウスにおいて、全身プレチスモグラフィー（Ｂｕｘｃｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ Ｉｎｃ．）によって２８日目に評価した。マウスを、エアロゾル化した生理食塩水、または超音波ネブライザーによって投与される増加する濃度のＭｃｈ（２、１０、２０ｍｇ／ｍＬ）で２分間チャレンジした。Ｍｃｈチャレンジの前に、テルブタリンの短時間作用型気管支拡張効果のために、２０μＬの薬物エアロゾルまたは生理食塩水をマウスに与えた。
気管支収縮の程度は、エンハンスドポーズ（ｅｎｈａｎｃｅｄ ｐａｕｓｅ、Ｐｅｎｈ）、すなわち、気道抵抗、インピーダンス、および胸膜腔内圧の測定値と相関する、計算された無次元値として表した。Ｐｅｎｈ値を記録し、それぞれの霧化チャレンジ後４分間で平均した。
サンプル採取および全血分析
メタコリンチャレンジ後、マウスに麻酔をかけ、血液学的分析のために血液を採取した。採取した血液の一部をヘパリン化したエッペンドルフチューブに移し、穏やかに混合し、４°Ｃの８４５×ｇ下で１０分間遠心分離して、さらなる分析のために血漿検体を分離した。０．３ｍＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を使用して、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を右肺で４回行った。生理食塩水を肺に注入し、３０秒間平衡化させた後に回収し、遠心分離後の上清をさらなるサイトカイン分析のために－８０°Ｃで保存する一方、細胞ペレットを０．５ｍｌ ＰＢＳに懸濁し、ライト染色を使用して好酸球の計数を実施した。次に、すべての臓器（肝臓、右肺葉、脾臓、腎臓、心臓、脳）を外科的に切除し、氷冷ＰＢＳで完全に洗浄して血液を除去し、次いで濾紙で吸い取って乾燥させた。次に、これらの組織標本を正確に秤量し、ＬＣ－ＭＳ／ＭＳで薬物分布を検出するために－８０°Ｃで保存した。白血球（ＷＢＣ）数およびＷＢＣ分画を、採血後４時間内にＰｒｏＣｙｔｅ Ｄｘ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｎａｌｙｚｅｒ（ＩＤＥＸＸ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して分析した。
ＯＶＡ－ｓＩｇＥの測定
酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）キットを製造業者の仕様書に従って使用して、血漿中のＯＶＡ－ｓＩｇＥを測定した。
ＢＡＬ液中のサイトカインレベルの分析
市販のＥＬＩＳＡキットを製造業者の説明書（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎ）に従って使用して、マウスＩＬ－４およびＩＬ－５の濃度についてＢＡＬ液サンプルを分析した。ＩＬ－１３を、マウスＩＬ－１３イムノアッセイキット（Ａｂｅａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、英国）を製造業者のプロトコルに従って使用して、ＢＡＬ液中でアッセイした。
肺組織病理学
組織病理学のために左肺組織を採取し、１０％ホルマリン中に２４時間固定した後、パラフィン包埋し、次いでヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ、Ｓｏｌａｒｂｉｏ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、中国）で、もしくは過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ、Ｓｏｌａｒｂｉｏ、Ｂｅｉｊｉｎｇ、中国）で慣例的に染色するために４μｍで切片化するか、またはマッソンの三色染色（Ｂａｓｏ、Ｚｈｕｈａｉ、中国）に供した。染色された肺切片の画像をＡｘｉｓｐｌｕｓ画像取込システム（Ｚｅｉｓｓ、ドイツ）によって得た後、グループ分けに盲検化された病理学者が画像解析コンピュータシステム（ＩＰＰ）を使用して、マウス一匹あたり最低３つの気管支（管腔直径、１５０－５００μｍ）を様々なパラメータについて解析した。組織学的スコア、気道平滑筋厚、ＰＡＳスコア（杯細胞過形成）、およびコラーゲン沈着を、半定量的スコアリング法によって評価した。
肺におけるＮＦ－κＢのｍＲＮＡのレベルは、定量的リアルタイムＰＣＲ分析によって分析した。全ＲＮＡを、ＲＮａＥＸＴＭ Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｇｅｎｅｒａｙ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用して肺組織から抽出した。ＲＮＡサンプルの質および量を、ＮａｎｏＤｒｏｐ ＮＤ－２０００ｃ分光光度計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．、Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）によって評価した。全ＲＮＡ（１μｇ）は、ｃＤＮＡ逆転写キット（Ｖａｚｙｍｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｎａｎｊｉｎｇ、中国）を製造業者の説明書に従って使用して、ｃＤＮＡに逆転写した。リアルタイムＰＣＲ反応は、ＡｃｅＱ ｑＰＣＲ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ｖａｚｙｍｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｎａｎｊｉｎｇ、中国）を備えた７５００リアルタイムＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、米国）を使用して実施した。マウス用に設定されたプライマーは、Ｓａｎｇｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｓｈａｎｇｈａｉ、中国）によって合成された。
ウエスタンブロット分析
肺組織からの全タンパク質を製造業者（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ、中国）のガイドラインに従って抽出し、濃度をＢＣＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ）によって決定した。標準としてのｐ３８ ＭＡＰＫ（ＣＳＴ＃８６９０）、ｐ－ｐ３８ ＭＡＰＫ（Ｔｈｒ１８０／Ｔｙｒ１８２、ＣＳＴ＃４５１１）、ＮＦ－κＢ ｐ６５（ＧｅｎｅＴｅｘ＃ＧＴＸ １０２０９０）、ｐ－ＮＦ－κＢ ｐ６５（Ｓ５３６、ＣＳＴ＃３０３３）、およびＧＡＰＤＨ（Ａｆｆｉｎｉｔｙ＃ＡＦ７０２１）に対する一次抗体を購入し、使用した。
結果：ＯＶＡ誘発気道過敏性に対するＲ－、Ｓ－およびｒａｃ（ＲＳ）－テルブタリンの効果
ＯＶＡ誘発マウスモデルを確立し、エアロゾル化されたＭｃｈに応答する気道反応性を、非侵襲的インビボプレチスモグラフィーによって評価した。下の図に示すように、対照群と比較して、ＯＶＡ群のベースライン値は、生理食塩水に曝露すると有意に増大し（ＯＶＡ群の０．８０±０．１２に対して対照群の０．５５±０．０８）、Ｒテルブタリンおよび２倍モル量のｒａｃ－テルブタリン治療は、ベースラインＰｅｎｈ値を有意に低下させることができた。
しかしながら、Ｓ－テルブタリン治療後のベースライン気道反応性は、対照群と比較して有意に増加した（０．７０±０．１３）。さらに、Ｓ－テルブタリン治療群は、Ｍｃｈの投与量の増加に応答して気道活動亢進のさらなる悪化を示した。Ｒ－テルブタリンの治療は、Ｍｃｈに対する気道気管支収縮を有意に減弱し、効果的な気管支痙攣保護を示した。一方、ＲＳ－テルブタリン（ｒａｃ－ｔｅｒ）（Ｒ－ｔｅｒの２倍の投与量）投与は、Ｒ－ｔｅｒ／ＯＶＡ群と比較して、はるかに小さいＭｃｈに対する効果を示した。
（図１）
Figure 2022531602000001
全血分析およびＢＡＬ液中の好酸球数
血液中の総ＷＢＣおよびＷＢＣ分画（好中球、リンパ球、単球、好酸球および好塩基球）、ならびにＢＡＬ液中の好酸球数を検出した。血液中の総ＷＢＣは、有意差なく類似していた。血液中のＷＢＣ分画のパーセンテージは、好酸球数のパーセンテージ以外は、すべての群内で有意差がないことが分かった。血液中およびＢＡＬＦ中の好酸球数のパーセントは、対照群と比較して、ＯＶＡ、Ｓ－テルブタリンおよびＲＳ（ｒａｃ）－テルブタリン治療群で有意に高かった。好酸球数は、Ｓ－テルブタリン群で最も高かった。Ｒ－テルブタリンによる治療は、ＢＡＬＦへの好酸球の流入を有意に阻害した。
肺組織の組織病理学的評価
マウスの肺におけるアレルギー性炎症性変化をさらに調査するために、次いでＨ＆Ｅ染色を行った。図２Ａに示すように、対照群では炎症、粘膜浮腫、上皮病変は観察されなかったが、ＯＶＡ誘発喘息マウスは、間質浸潤ならびに多数のリンパ球および好酸球浸潤を含む重度の炎症、粘膜浮腫、上皮病変を発症した（図２Ｂモデル）。Ｒ－テルブタリンおよび２倍投与量のｒａｃ－テルブタリン治療により、炎症性細胞浸潤の程度がそれぞれ改善したことが、組織学的スコアによって確認された。一方、ＯＶＡ治療マウスは、細気管支および血管の両方で平滑筋肥大を示し、気管支および血管の平滑筋層の厚さが増加し、これらはＲ－ｔｅｒによって抑制され、Ｓ－ｔｅｒによってさらに増強された（図２Ｃ）。同様に、ＰＡＳおよびマッソン染色は、ＯＶＡ群において上皮下マトリックス糖タンパク質の沈着、気道杯細胞の過形成およびコラーゲン沈着があり、これらの状態がＳ－ｔｅｒ治療後にさらに悪化したことを示した。一方、ＯＶＡ群で見られた炎症状態、コラーゲン沈着、杯の過形成、ならびに平滑筋および線維芽細胞の増殖および肥大は、Ｒ－ｔｅｒの治療後に後退し、正常に向かって回復した。
（図２）
Figure 2022531602000002
ＯＶＡ－ｓＩｇＥ（血清ＩｇＥ）およびＴｈ２サイトカインの測定
ＢＡＬ液中の血漿ＯＶＡ－ｓＩｇＥおよび代表的なＴｈ２サイトカイン（ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－１３）を評価した。ＯＶＡで治療されたマウスは、ＯＶＡ－ｓＩｇＥレベルの有意な増加を示したが、Ｒ－ｔｅｒの投与によって著しく阻害された。同様に、Ｔｈ２サイトカイン（ＩＬ－４、５、および１３）は、ＯＶＡ治療群で増強されることが分かり、Ｒ－ｔｅｒ治療は、ＢＡＬＦ中のＩＬ－５を有意に減少させた。しかしながら、Ｓ－ｔｅｒ治療は、ＯＶＡ群と比較して、ＩＬ－４およびＩＬ－１３の放出をさらに増加させた（図３）。これは、Ｓ－テルブタリンがＩＬＣを活性化し、Ｔｈ２型炎症を誘発し得ることを実証している。
（図３）
Figure 2022531602000003
Ｒ－テルブタリンは、肺におけるｐ３８ ＭＡＰＫリン酸化およびＮＦ－κＢ発現を阻害した。ＯＶＡでチャレンジした後、炎症性ＮＦ－κＢの発現は、対照群と比較してｍＲＮＡ転写物において増加した（図４Ｂ）。これは、Ｓ－ｔｅｒ治療群においてさらに増強された。一方、Ｒ－ｔｅｒ治療は、ＮＦ－κＢ発現の増加を効果的に阻害した。ＮＦ－κＢのｐ６５サブユニットのリン酸化において、同様の結果が見られた（図４Ｄ）。ＭＡＰＫ、特にｐ３８およびＥＲＫ１／２は、気道炎症および炎症性メディエーターの調節、例えばＮＦ－κＢの活性化に関与している。したがって、本発明は、Ｒ－ｔｅｒによる炎症反応の阻害が、ＯＶＡ誘発喘息マウスのＭＡＰＫ経路を介してもたらされることを開示した。図４Ｃに示すように、ＯＶＡ治療マウスは、著しくアップレギュレートされたｐ３８ ＭＡＰＫリン酸化を示し、Ｓ－ｔｅｒ治療は、ＯＶＡ群と比較してｐ３８ ＭＡＰＫ活性化をさらに増加させた。Ｒ－ｔｅｒ治療は、ＯＶＡ群と比較してｐ３８ ＭＡＰＫの活性化を著しく抑制した。
まとめると、これらのデータは、Ｒ－ｔｅｒがｐ３８ ＭＡＰＫリン酸化およびＮＦ－κＢ発現の活性化を阻害することによりＯＶＡ誘発喘息マウスに抗炎症効果を発揮し、ラセミＲＳ－テルブタリン（ｒａｃ－ｔｅｒ）の発揮する効果は、はるかに小さいことを明らかにした。対照的に、Ｓ－ｔｅｒの治療は、ｏｖａ感作喘息マウスの生理食塩水治療群と比較して、ｐ３８ ＭＡＰＫリン酸化およびＮＦ－κＢ活性化をさらに増強した。
（図４）
Figure 2022531602000004
肺組織のＰＡＳ染色に対するＲ－およびＳ－テルブタリンの効果
本発明は、ＯＶＡ感作／チャレンジ喘息マウスにおいて、結合組織、ムチン、線維芽細胞、平滑筋、およびコラーゲン分泌、ならびに肺胞の隔壁および細気管支壁の厚さの増加を含む、有意な炎症反応および組織病理学的変化の悪化があることを開示した。さらに、細気管支の明確な狭窄もあった。これらの症状は、Ｓ－テルブタリンによってさらに増強される。Ｒ－テルブタリンの治療は、これらの変化を有意に改善し得る。
（図５）
Figure 2022531602000005
イプラトロピウムとＲＳ－、Ｒ－およびＳ－サルブタモールとの併用療法の効果。上記と同様の方法を使用した。生理食塩水、メタコリン２ｍｇ／ｍｌ（低投与量）または１０ｍｇ／ｍｌ（高投与量）の霧化エアロゾルを、吸入によってＯＶＡ誘発喘息マウスに投与した。
結果
１）肺機能：イプラトロピウム（Ｉｐｒ）は、サルブタモール（Ｓａ）と組み合わせたムスカリン受容体遮断薬であり、β２アゴニストは、抗喘息および抗炎症について改善された効果を示した。メタコリンに反応した気道抵抗の増加は、Ｒ－サルブタモールによって有意に減少し、イプラトロピウムと組み合わせると、効果がさらに改善された。併用療法としてのＲ－サルブタモールの効果は、ＲＳ－サルブタモールよりもはるかに効果的である。しかしながら、Ｓ－サルブタモール単体は、メタコリンに対する気道反応をさらに増強し得る。Ｓ－サルブタモールの有害作用は、わずかな割合のイプラトロピウムと組み合わせるだけで軽減され得る。
Figure 2022531602000006
２）肺組織病理学：
ａ．マッソン染色
（図６Ａ）
Figure 2022531602000007
（図６Ｂ）
Figure 2022531602000008
５．１．（Ｒ）－サルブタモールは、ＬＰＳ誘発Ｍ１マクロファージ極性化を有意に阻害し、（Ｒ）－サルブタモールは、典型的なＭ１マクロファージサイトカインの発現をダウンレギュレートした
方法
マクロファージを、ＬＰＳ刺激の前に（Ｒ）／（Ｓ）－サルブタモールを用いずに、または用いて１時間処理し、その後１２時間インキュベートした。（Ｒ）－サルブタモール（＞９９％純度、９９．８５％ｅｅ）および（Ｓ）－サイブタモール（＞９９％純度、９２．７３％ｅｅ）。細胞内ＲＯＳレベルを、ＲＯＳインジケーター、ＤＣＦＨ－ＤＡ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ－Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＭＡ、米国）を使用して調べた。酸化生成物（２’，７’－ジクロロフルオレセイン、ＤＣＦ）の蛍光を、ＬＳＭ ７１０レーザー走査型共焦点顕微鏡（Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ、Ｊｅｎａ、ドイツ）を使用して評価した。培養物上清中のＮＯ濃度を、Ｇｒｉｅｓｓアッセイ（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ、Ｓｈａｎｇｈａｉ、中国）を製造業者の説明書に従って使用して、亜硝酸塩（安定したＮＯ分解産物）の濃度をアッセイすることによって測定した。細胞内ＮＯレベルを、ＮＯ感受性蛍光プローブＤＡＦ－ＦＭ ＤＡ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、米国）を使用して検出した（２４）。細胞をＤＡＦ－ＦＭ ＤＡ（１０μＭ）で３７℃で３０分間標識し、ＰＢＳで３回穏やかに洗浄した。ＬＳＭ７１０レーザー走査型共焦点顕微鏡（スケールバー、１００μｍ）（Ｃａｒｌ Ｚｅｉｓｓ、Ｊｅｎａ、ドイツ）を使用して、蛍光を検出した。
Ｓｅａｈｏｒｓｅ分析：（Ｒ）－サルブタモールを用いた、または用いない、ＬＰＳで誘導されたＲＡＷ２６４．７細胞の酸素消費速度（ＯＣＲ）および細胞外酸性化速度（ＥＣＡＲ）を、Ｓｅａｈｏｒｓｅ ＸＦ９６細胞外フラックスアナライザー（Ａｇｉｌｅｎｔ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ、ＣＡ、米国）を使用してリアルタイムで測定した。
結果
（Ｒ）－サルブタモールは、ＬＰＳ誘導ＲＡＷ２６４．７細胞におけるＭ１マクロファージの極性化を阻害した
ＲＡＷ２６４７細胞に対する（Ｒ）－サルブタモールの細胞毒性効果を決定するために、ＣＣＫ－８アッセイを使用して細胞生存率を調べた。本発明者らのデータは、ＬＰＳ（１００ｎｇ／ｍＬ）の有無にかかわらず、（Ｒ）－サルブタモールの濃度が１００μＭに達した場合でも、細胞生存率の変化は示さなかった。様々な濃度（０．２５μＭ、０．５μＭ、１μＭ、２μＭ、５μＭ、１０μＭ、および１００μＭ）の（Ｒ）－サルブタモールで前処置した後に生成されたＮＯおよびＲＯＳを、ＬＰＳ誘導ＲＡＷ２６４．７細胞において調べた。この研究では、１０μＭの（Ｒ）－サルブタモールの濃度を選択した。
マクロファージ極性化に対するβ２アドレナリン受容体活性化の効果を調査するために、マクロファージを（Ｒ）－サルブタモールで前処置し、続いて１００ｎｇ／ｍＬのＬＰＳで誘導した。マクロファージＭ１（Ｆ４／８０＋／ＣＤ１１ｃ＋／ＣＤ２０６－）およびＭ２（Ｆ４／８０＋／ＣＤ１１ｃ－／ＣＤ２０６＋）極性化を、フローサイトメトリーを使用して分析した。フローサイトメトリー分析は、マクロファージの基礎レベルが２４．７％であり、ＬＰＳで刺激すると、マクロファージの５９．２％がＭ１表現型に極性化することを示し、ＬＰＳがＭ１極性化を誘発し得ることを示唆している。マクロファージをＬＰＳで刺激する前に（Ｒ）－サルブタモールで前処置した場合、Ｍ１マクロファージの有病率は３１．８％に減少し、（Ｒ）－サルブタモールがＬＰＳに誘発されるＭ１マクロファージの極性化を緩和したことを示唆している。
細胞の総数に対するＭ１細胞の比率は、異なる治療群間で類似していた（図７）。Ｍ２マクロファージ極性化に対する（Ｒ）－サルブタモールの効果を決定するために、フローサイトメトリーを使用した。データは、ＬＰＳによる刺激および（Ｒ）－サルブタモールによる前処置で、Ｍ２マクロファージの基礎レベルが０．２４４％から０．２３９％および０．２１４％にそれぞれ減少することを示した。これらの結果は、（Ｒ）－サルブタモールがＭ２極性化に影響を及ぼさないことを示唆している。さらに、（Ｒ）－サルブタモールがβ２アドレナリン受容体を介してＭ１マクロファージ極性化に対してその効果をもたらすかどうかを調査するために、特異的β２アドレナリン受容体拮抗薬であるＩＣＩ－１１８５５１をこの研究で使用した。本発明は、細胞をＩＣＩ－１１８５５１とのインキュベーション後に（Ｒ）－サルブタモールで前処置した場合、Ｍ１マクロファージのパーセンテージが５５．８％に増加したことを開示した（図７）。これは、β２アドレナリン受容体を介して、（Ｒ）－サルブタモールがＭ１マクロファージ極性化に対してその阻害効果を発揮したことを示唆した。
（Ｒ）－サルブタモールは、ＬＰＳ誘導マクロファージＲＡＷ２６４．７細胞におけるＴＮＦ－α、ＩＬ－１βおよびＭＣＰ－１の産生を減少させる。
ＬＰＳによる刺激後、Ｍ１極性化がＭ２極性化よりも優勢であることを確認するために、ＥＬＩＳＡを使用して典型的なＭ１マクロファージサイトカイン（すなわち、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、およびＭＣＰ－１）のレベルを定量化した。これらのサイトカインは、主にマクロファージによって合成され、炎症性疾患において重要な役割を果たす（３５，３６）。本発明は、ＴＮＦ－αがＬＰＳ刺激後に対照レベルの２．６２倍から０．７５倍に減少したことを開示した（図８Ａ）。ＩＬ－１βは、ヒトにおいて多くの慢性炎症性疾患の特徴であり、報告によると、急性期反応に関連している（３５，３７）。ＥＬＩＳＡを使用してＩＬ－１βを定量し、本発明者らのデータは、ＬＰＳ刺激後にＩＬ－１βが対照レベルの２．２４倍から１．１２倍に減少したことを示した（図８Ｂ）。さらに、以前の研究では、ＭＣＰ－１の阻害によって毛細血管－肺胞関門が損傷し、マクロファージの動員が減少することが示された（３８－４０）。この研究では、ＭＣＰ－１の濃度がＬＰＳ誘導後に、１．５８８ｎｇ／ｎｉＬから１．１５ｎｇ／ｍＬに減少した（図８Ｃ）。ＬＰＳでの刺激の前に細胞を（Ｒ）－サルブタモールで前処置すると、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、およびＭＣＰ－１のレベルが有意に低下した（図８Ａ－図８Ｃ）。本発明者らは、ＬＰＳはＭ１極性化を引き起こしやすいが、Ｍ２極性化を引き起こしづらいと結論付ける。
ＴＮＦ－α、ＩＬ－１βおよびＭＣＰ－１のｍＲＮＡ発現を調べるために、定量的リアルタイムＰＣＲを実施した。サイトカイン発現研究と一致して、ＴＮＦ－αのｍＲＮＡ発現は、ＬＰＳ誘導群において対照群と比較して２．２６倍増加した（図８Ｄ）。ＩＬ－１βおよびＭＣＰ－１のｍＲＮＡ発現は、ＬＰＳ誘導群において対照群と比較して、それぞれ１２．７４倍（図８Ｅ）および３．１倍増加した（図８Ｆ）。ＬＰＳ刺激の前に細胞を（Ｒ）－サイブタモールで前処置すると、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、およびＭＣＰ－１のｍＲＮＡレベルが有意に低下した。ＴＮＦ－α、ＩＬ－１βおよびＭＣＰ－１のｍＲＮＡ発現は、ＩＣＩ－１１８５５１治療細胞において対照群と比較して、それぞれ２．２８倍、１２．４１倍、および３．３６倍増加した。ＬＰＳ誘導ＲＡＷ２６４．７細胞と比較して、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１βおよびＭＣＰ－１のｍＲＮＡ発現は、ＩＣＩ－１１８５５１治療細胞において明白な変化を示さず（図８Ｄ－図８Ｆ）、（Ｒ）－サルブタモールがβ２アドレナリン受容体に作用し、これらのサイトカインの発現を減らすことを示唆している。これらの開示は、（Ｒ）－サイブタモールがβ２アドレナリン受容体を介して、転写レベルでＴＮＦ－α、ＩＬ－１βおよびＭＣＰ－１の発現を阻害し、それが次に、ＬＰＳ誘発マクロファージにおけるＴＮＦ－α、ＩＬ－１βおよびＭＣＰ－１のタンパク質発現を減少させることを示唆した。
５．２．マクロファージＲＡＷ２６４．７細胞におけるＮＯおよびＲＯＳの産生に対する（Ｒ）－サルブタモールおよび（Ｓ）－サルブタモールの効果
（Ｒ）－サルブタモールは、誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）を阻害し、一酸化窒素（ＮＯ）および活性酸素種（ＲＯＳ）の産生を大幅に減少させた。対照的に、（Ｓ）－サルブタモールはＮＯおよびＲＯＳの産生を増加させた。
（Ｒ）－サルブタモールは、ＬＰＳ誘発ＲＡＷ２６４．７細胞におけるＮＯおよびＲＯＳの産生を減少させた。ＬＰＳは、ＮＯ産生の増加に通常関連する慢性炎症を引き起こした。Ｍ１マクロファージの極性化に対する（Ｒ）－サルブタモールの抗炎症効果を決定するために、細胞内ＮＯレベルをＮＯ感受性蛍光プローブ、ＤＡＦ－ＦＭ ＤＡを使用して決定した。代表的な画像は、ＤＡＦで染色された細胞の数が、対照細胞と比較してＬＰＳ誘導細胞で増加したのに対し、（Ｒ）－サルブタモールで前処置された細胞では、対照細胞と比較して染色された細胞の数が減少したことを示した（図９Ａ）。ＤＡＦ蛍光レベルは、ＬＰＳ誘導群において対照群と比較して４２４％増加したが、細胞を（Ｒ）－サルブタモールで前処置した場合、ＤＡＦ蛍光レベルは２．６８倍減少した（図９Ｂ）。ＩＣＩ－１１８５５１による治療でＮＯレベルが増加し、（Ｒ）－サルブタモールがβ２アドレナリン受容体機構を介してＮＯ産生を阻害したことを示唆した。さらに、培養物上清中のＮＯ濃度を、Ｇｒｉｅｓｓアッセイを使用して亜硝酸塩（安定したＮＯ分解産物）の濃度をアッセイすることによって測定した。対照条件と比較して、ＮＯ２の発現は、ＬＰＳ刺激によって２０．２５倍増加し、ＮＯ２発現は、（Ｒ）－サルブタモール前処置によって２．２８倍減少した（図９Ｃ）。Ｍ１マクロファージは、ｉＮＯＳを活性化してＬ－アルギニンからＮＯを産生することが示されている。ｉＮＯＳのレベルへの（Ｒ）－サルブタモールの役割を調査するために、ｉＮＯＳのｍＲＮＡおよびタンパク質レベルを決定した。本発明は、マクロファージにおいて、ＬＰＳ治療によってｉＮＯＳのｍＲＮＡレベルが増加したが、ＬＰＳに加えて（Ｒ）－サルブタモールで前処置した場合、それが減少したことを開示した（図９Ｄ）。ｍＲＮＡと一致して、ｉＮＯＳタンパク質レベルは、ＬＰＳでの治療およびＬＰＳ＋（Ｒ）－サルブタモールでの治療後に同じ変化を示した（図９Ｅ）。（Ｒ）－サルブタモールの効果は、ＩＣＩ－１１８５５１を追加することによって遮断された。
ＬＰＳは、ミトコンドリア機能不全を介して細胞アポトーシスを促進することができ、ミトコンドリアは、ＲＯＳの主な発生源である。この研究では、ＲＯＳをＤＣＦＨ－ＤＡ色素で可視化した。染色された細胞の数は、（Ｒ）－サルブタモール前処置しない群と比較して、（Ｒ）－サルブタモール前処置群で減少した（図９Ａ）。ＤＣＦのレベルは、ＬＰＳ誘導ＲＡＷ２６４．７細胞で７．３０倍増加し、（Ｒ）－サルブタモールで前処置した細胞で３．３８倍減少した（図９Ｂ）。本発明は、ＬＰＳ誘導細胞におけるＮＯおよびＲＯＳのレベルを、（Ｓ）－サルブタモールでの前処置によって増加させ、（Ｒ）－サルブタモールでの前処置によって減少させるという対立する効果を開示した。さらに、本発明は、Ｍ１極性化がβ２アドレナリン受容体の活性化を必要とするのは、その効果が特異的β２遮断剤であるＩＣＩ－１１８５５１によって減少したためである、という発見を開示した。
本発明は、（Ｓ）－エナンチオマーサルフタモールが、炎症反応におけるマクロファージの活性化に関して、その（Ｒ）－エナンチオマーとは異なる機構を有することを開示した。
５．３．（Ｒ）－サルブタモールは、ＬＰＳ誘発マクロファージＲＡＷ２６４．７細胞におけるＧＳＨ／ＧＳＳＧの比率を増加させる
ＧＳＳＧに対するＧＳＨの比率は、酸化ストレスのマーカーである。この比率は、ＬＰＳ治療細胞では対照レベルから７０，６０％に減少し、（Ｒ）－サルブタモールで前処理した場合８４，５０％増加し、これはβ２アドレナリン受容体遮断薬であるＩＣＩ－１１８５５１によって遮断された。
５．４．（Ｒ）－サルブタモールは、ＬＰＳ誘導ＲＡＷ２６４．７細胞においてミトコンドリア呼吸を救援し、好気的解糖を阻害する
マクロファージの活性化は、様々な代謝プロファイルを誘発した。ＬＰＳ誘発マクロファージは、解糖代謝プロファイルを利用した。本発明は、ＬＰＳ治療マクロファージにおけるβ２アドレナリン受容体媒介ワールブルク代謝（好気的解糖）を開示した。ＯＣＲおよびＥＣＡＲを細胞外フラックスアナライザーを使用して測定し、ＬＰＳはＯＣＲ、すなわち酸素消費速度の測定値を５９．２９％減少させ、（Ｒ）－サルブタモールは、ＬＰＳ治療細胞におけるＯＣＲを６９．５９％増加させた。ＥＣＡＲは、細胞外酸性化速度の測定値であり、細胞の解糖速度の指標である。ＬＰＳ治療は、ＥＣＡＲ、好気的解糖を対照条件と比較して有意にアップレギュレートしたが、（Ｒ）－サルブタモールは、好気的解糖を阻害した。本発明は、（Ｒ）－サルブタモールがＬＰＳ誘導細胞における代謝シフトを媒介する可能性があり、それがＬＰＳ誘導炎症から保護することを開示した。これはまた、ＩＣＩ－１１８５５１治療によって遮断された。ＯＣＲ／ＥＣＡＲの比率は、ＬＰＳ治療細胞において減少したが、ＬＰＳ治療細胞におけるＯＣＲ／ＥＣＡＲの比率は、（Ｒ）－サルブタモールで前処置した場合に増加した。
（図７）
Figure 2022531602000009
（図８）
Figure 2022531602000010
（図９）
Figure 2022531602000011
敗血症によって誘発される呼吸不全および死亡に対するＲ－アルブテロールおよびＲ－テルブタリンの予防効果
方法：生存率試験：ＢＡＬＢ／ｃマウスを、生理食塩水対照（０．１ｍＬ／１０ｇ）、（Ｒ）－サルブタモール（０．１、０．２５または０．５ｍｇ／ｋｇの投与量）、（Ｓ）－サルブタモール（０．５ｍｇ／ｋｇ）、およびＤｅｘ（デキサメタゾン）（５ｍｇ／ｋｇ）を含む、異なる治療群にランダムに割り当てた（ｎ＝１１）。治療は３日間連続して腹腔内に投与した。３日目の治療の１時間後、ＬＰＳ（１５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与した。動物を監視した。その後、生存率を１２時間毎に１４４時間記録した。
肺機能の測定
肺機能は、Ｂｕｘｃｏシステム（Ｂｕｘｃｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ、米国）を使用して測定した。チャンバーに短時間順応させた後、マウスに生理食塩水の最初のベースラインチャレンジを与えた。ＬＰＳの投与の６時間後に、１回換気量、および気道抵抗の指標であるＰｅｎｈを含む測定を行った。
結果：ＬＰＳ投与によって４８時間以内にほとんどの動物が死亡し、死亡率は９０．９％であった。しかながら、高投与量のＲ－サルブタモールで前処置されたすべての動物は、ＰＬＳチャレンジから生き残った。デキサメタゾン（５ｍｇ）で前処置された動物は、ＰＬＳチャレンジ後の死亡率が最も高かった。前処置なしのＬＰＳチャレンジ群との比較において、Ｓ－サルブタモールで前処置された動物は、４８時間での死亡率は同じであったが、ＬＰＳチャレンジ後３６時間での死亡率は、より高かった（表６．１）。
さらに、ＰＬＳチャレンジ後６時間以内では、すべての動物が生存していた。次いで肺機能を測定し、群間で比較した。ＬＰＳは、気道抵抗の増加および１回換気量の減少によって示されるように、呼吸機能の有意な抑制を誘発した。ＬＰＳによって誘発されたこの呼吸機能の低下は、Ｒ－サルブタモールで前処置した動物では回復した（表６．２）。
Figure 2022531602000012
Figure 2022531602000013

Claims (31)

  1. 急性または慢性の気管支－肺炎症症状または炎症性リモデリングの予防または治療のための医薬品の製造において、有害作用を軽減するために、光学的に十分純粋なＲ－エナンチオマーβ２アゴニストおよびその薬学的に許容される塩を免疫調節剤として使用する
    方法。
  2. 前記Ｒ－エナンチオマーβ２アゴニストが、５０％～８５％のエナンチオマー過剰率値を有する、
    請求項１に記載の方法。
  3. 前記Ｒ－エナンチオマーβ２アゴニストが、８５％～９８％のエナンチオマー過剰率値を有する、
    請求項１に記載の方法。
  4. 前記Ｒ－エナンチオマーβ２アゴニストが、９８％～９９．９％のエナンチオマー過剰率値を有する、
    請求項１に記載の方法。
  5. 前記Ｒ－エナンチオマーβ２アゴニストが、テルブタリン、サルブタモール、バンブテロール、ビランテロール、クレンテロール、サルメテロール、ホルモテロール、トランチンテロールおよびインダカテロールである、
    請求項１に記載の方法。
  6. 前記Ｒ－エナンチオマーβ２アゴニストが、短時間作用型β２アゴニスト：ビトルテロール、フェノテロール、イソプレナリン、オルシプレナリン、またはメタプロテレノール、ピルブテロール、プロカテロール、リトドリン；および長時間作用型β２アゴニスト、：バンブテロール、アルフォルモテロール、ホルモテロール、Ｐｅｒｆｏｒｏｍｉｓｔ；および超長時間作用型β２アゴニスト：アベジテロール、カルモテロール、インダカテロール、オロダテロール、ビランテロール、イソクスプリン、マブテロールおよびジルパテロールのＲまたはＲ’Ｒ’エナンチオマーである、
    請求項１に記載の方法。
  7. 前記炎症症状が、肺炎または気管支炎、細菌、ウイルスまたは他の病原体関連分子パターン（ＰＡＭＰ）に応答した急性呼吸窮迫症候群である、
    請求項１に記載の方法。
  8. 前記慢性炎症症状が、気腫、または肺炎悪化を伴う持続性慢性気管支炎である、
    請求項１に記載の方法。
  9. 前記炎症症状が、Ｍ１型マクロファージの活性化もしくは増殖、または肺もしくは血液中の好気的解糖の増強を特徴とする、
    請求項１に記載の方法。
  10. 前記炎症症状が、肺および血液中の好酸球の増加を特徴とする、
    請求項１に記載の方法。
  11. 前記炎症症状が、肺または血液中の単球走化性タンパク質－１（ＭＣＰ－１）の増加を特徴とする、
    請求項１に記載の方法。
  12. 前記炎症症状が、肺または血液中のＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６およびＩＬ－１３を含むサイトカインの増加を特徴とする、
    請求項１に記載の方法。
  13. 前記炎症症状が、全ｐ３８ＭＡＰＫに対するリン酸化ｐ３８ＭＡＰＫの比率、および全ｐ６５ＮＦ－κＢに対するリン酸化ｐ６５ＮＦ－κＢの比率の増加を特徴とする、
    請求項１に記載の方法。
  14. 前記炎症症状が、血清ＩｇＧの増加を特徴とする、
    請求項１に記載の方法。
  15. 前記炎症症状が、肺および血液におけるＲＯＳおよびＯＮ産生の増加、または誘導型一酸化窒素合成酵素（ｉＮＯＳ）の発現の増加を特徴とする、
    請求項１に記載の方法。
  16. 前記炎症性リモデリングが、気腫、粘液過剰分泌、炎症性喀痰産生および気道線維症である、
    請求項１に記載の方法。
  17. 前記炎症性リモデリングが、上皮下線維症、筋線維芽細胞過形成、気道および血管平滑筋肥大、細気管支壁および血管の厚さの増加、粘液腺および杯細胞過形成、ならびに上皮破壊、ならびにコラーゲンの過剰な間質沈着、ならびに肺胞隔壁またはガス／血液関門の増加を特徴とする、
    請求項１に記載の方法。
  18. 前記炎症性リモデリングが、肺細動脈抵抗の増加、肺細動脈または血管のリモデリング、および肺高血圧症を特徴とする、
    請求項１に記載の方法。
  19. 前記有害作用が、Ｓ－エナンチオマーまたは（ＲＳ）－ラセミβ２アゴニストの頻繁な使用に関連する有害作用である、
    請求項１に記載の方法。
  20. 前記有害作用が、（Ｓ）－エナンチオマーまたは（ＲＳ）－ラセミβ２アゴニストの頻繁な使用に起因する、アレルギー誘発性薬剤に対する気道過敏性を特徴とする、
    請求項１に記載の方法。
  21. 前記（Ｓ）－エナンチオマー関連の有害作用が、細気管支平滑筋の増殖およびリモデリング、ならびに喘息－ＣＯＰＤ状態の悪化をさらに増強することを特徴とする、
    請求項１８に記載の方法。
  22. 前記（Ｓ）エナンチオマー関連の有害作用が、線維芽細胞の増殖および間質コラーゲン沈着の増強、ならびに肺胞隔壁およびガス／血液関門の増加、喘息－ＣＯＰＤにおける血中酸素の減少、または（ＲＳ）－ラセミβ２アゴニストの頻繁な使用の結果としての肺機能の悪化による呼吸不全状態を特徴とする、
    請求項１９に記載の方法。
  23. 前記有害作用が、子宮収縮抑制療法または早期分娩のためのラセミテルブタリンまたはラセミサルブタモールの使用に関連する、
    請求項１に記載の方法。
  24. 前記医薬品が、固体剤形、ゲル、坐剤、注射用の液体または凍結乾燥粉末、局所使用用の軟膏またはパッチ、および肺吸入または経鼻用のエアロゾルまたは乾燥粉末である、
    請求項１に記載の方法。
  25. 前記治療が、肺または鼻を介した吸入による前記薬剤の投与を特徴とする、
    請求項１に記載の方法。
  26. 前記治療が、前記薬剤の経口による、静脈内または皮下への注射による、および直腸または膣での坐剤としての投与を特徴とする、
    請求項１に記載の方法。
  27. 前記治療が、イプラトロピウムまたは他のムスカリン受容体遮断薬と組み合わせた前記薬剤の投与を特徴とする、
    請求項１に記載の方法。
  28. 前記治療が、イプラトロピウムまたは他のムスカリン受容体遮断薬およびコルチコステロイドと組み合わせた前記薬剤の投与を特徴とする、
    請求項１に記載の方法。
  29. 前記ムスカリン受容体遮断薬が、チオトロピウム、グリコピロニウム、アクリジニウムおよびウメクリジニウムである、
    請求項２７に記載の方法。
  30. 前記コルチコステロイドが、ブデソニド、フルチカゾン、シクレソニド、ベクロメタゾン、モメタゾン、フルニソリド、プレドニゾロンおよびトリアムシノロンアセトニドである、
    請求項２８に記載の方法。
  31. 前記薬学的に許容される塩が、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、硫酸水素塩、二水素リン酸塩、メタンスルホン酸塩、臭化物、硫酸メチル、酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、グリコネート（ｇｌｙｃｏｎａｔｅ）、グルコン酸塩、クエン酸塩、酒石酸、乳酸、ピルビン酸イセチオン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩またはパラトルエンスルホン酸塩である、
    請求項１に記載の方法。
JP2021565870A 2019-05-07 2020-05-05 肺の炎症および炎症性リモデリングの予防および治療用Ｒ－エナンチオマーβ２アゴニストの、有害作用を軽減するための使用 Pending JP2022531602A (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962844398P 2019-05-07 2019-05-07
US62/844,398 2019-05-07
PCT/US2019/050120 WO2020051568A1 (en) 2018-09-08 2019-09-07 NEW USE OF R-ENANTIOMER OF ADRENERGIC β2 RECEPTOR AGONISTS FOR TREATMENT OF INFLAMMATORY BOWEL DISEASE AND ITS EXTRA INTESTINAL MANIFESTATIONS
USPCT/US2019/050120 2019-09-07
PCT/US2020/031539 WO2020247136A2 (en) 2019-05-07 2020-05-05 USE OF R-ENANTIOMER β2-AGONISTS FOR PREVENT AND TREATMENT OF PULMONARY INFLAMMATION AND INFLAMMATORY REMODELING FOR REDUCED ADVERSE EFFECTS

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2022531602A true JP2022531602A (ja) 2022-07-07

Family

ID=73652896

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2021565870A Pending JP2022531602A (ja) 2019-05-07 2020-05-05 肺の炎症および炎症性リモデリングの予防および治療用Ｒ－エナンチオマーβ２アゴニストの、有害作用を軽減するための使用

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20220362174A1 (ja)
JP (1) JP2022531602A (ja)
CN (1) CN113874006A (ja)
AU (1) AU2020287832A1 (ja)
WO (1) WO2020247136A2 (ja)

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992016173A1 (en) * 1991-03-19 1992-10-01 Sepracor, Inc. Methods and compositions for treating pulmonary disorders using optically pure terbutaline
US6866839B2 (en) * 1991-04-05 2005-03-15 Sepracor Inc. Methods and compositions for treating pulmonary disorders using optically pure (R,R)-formoterol
US6299863B1 (en) * 1992-04-03 2001-10-09 Sepracor Inc. Aerosol formulations containing micronized optically pure (R,R) formoterol for bronchodilating therapy
SE9404080L (sv) * 1993-12-28 1995-06-29 Ciba Geigy Ag Förfarande för framställning av en optiskt ren enantiomer av formoterol
US7495028B2 (en) * 2002-08-08 2009-02-24 Wen Tan R-bambuterol, its preparation and therapeutic uses
EP2002831A1 (en) * 2002-08-08 2008-12-17 Wen Tan R-Bambuterol, its preparation and therapeutic uses
RU2356537C2 (ru) * 2007-07-25 2009-05-27 Закрытое Акционерное Общество (ЗАО) "Пульмомед" Фармацевтический состав дозированных аэрозолей, содержащий противоастматические лекарственные средства в виде суспензий, растворов, эмульсий, растворов и эмульсий
JP2012530134A (ja) * 2009-06-16 2012-11-29 タン，ウェン 呼吸器疾患治療における併用療法及び吸入薬剤としてのｒ型バンブテロールの使用
RU2493827C1 (ru) * 2012-10-03 2013-09-27 Шолекс Девелопмент Гмбх Стабильный комбинированный раствор фенотерола гидробромида и ипратропия бромида
AU2019336248A1 (en) * 2018-09-08 2021-05-13 Tan WEN New use of R-enantiomer of adrenergic β2 receptor agonists for treatment of inflammatory bowel disease and its extra intestinal manifestations

Also Published As

Publication number Publication date
WO2020247136A2 (en) 2020-12-10
WO2020247136A4 (en) 2021-05-06
AU2020287832A1 (en) 2022-02-03
CN113874006A (zh) 2021-12-31
WO2020247136A3 (en) 2021-03-25
US20220362174A1 (en) 2022-11-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Barnes et al. COPD: current therapeutic interventions and future approaches
Rogers Mucociliary dysfunction in COPD: effect of current pharmacotherapeutic options
JP7169693B2 (ja) 呼吸器疾患の治療
Wenzel The role of leukotrienes in asthma
Jain et al. TNF-alpha and IL-1 beta upregulate nitric oxide-dependent ciliary motility in bovine airway epithelium
Wang et al. The natural compound notopterol binds and targets JAK2/3 to ameliorate inflammation and arthritis
JPH08505157A (ja) 局所麻酔薬の投与による気管支ぜん息の処置のための方法
Kumar et al. Protective effect of diallyl disulfide against cerulein-induced acute pancreatitis and associated lung injury in mice
US20070049641A1 (en) Methods for treating and monitoring inflammation and redox imbalance cystic fibrosis
Barnes Current and future therapies for airway mucus hypersecretion
WO2019033122A1 (en) TREATMENT OF PULMONARY DISEASES USING PHARMACEUTICAL AGENTS THAT ELIMINATE SENESCENT CELLS
De Luca et al. Pharmacological therapies for pediatric and neonatal ALI/ARDS: an evidence-based review
Yang et al. Triiodothyronine ameliorates silica-induced pulmonary inflammation and fibrosis in mice
WO2024017161A1 (zh) 一种福多司坦雾化吸入溶液组合物、药物组件及其应用
AU2021215045A1 (en) Human anti-inflammatory peptides for the inhalatory treatment of inflammatory pulmonary diseases
Chen et al. Trans-cinnamaldehyde attenuates renal ischemia/reperfusion injury through suppressing inflammation via JNK/p38 MAPK signaling pathway
Jin et al. Effect of safflor yellow injection on inhibiting lipopolysaccharide-induced pulmonary inflammatory injury in mice
JP2022531602A (ja) 肺の炎症および炎症性リモデリングの予防および治療用Ｒ－エナンチオマーβ２アゴニストの、有害作用を軽減するための使用
US6576669B2 (en) Use of an LTB4 antagonist for the treatment or prevention of diseases caused by increased expression of mucin genes
US20200354336A9 (en) Treatment of Lung Diseases Using Pharmaceutical Agents that Eliminate Senescent Cells
Beng et al. Differential effects of inhaled R-and S-terbutaline in ovalbumin-induced asthmatic mice
US20080249144A1 (en) Preventive or Therapeutic Agent for Chronic Inflammatory Lung Disease
Christie et al. The effect of inhalation of the leukotriene receptor antagonist, SK&F 104353, on leukotriene C4-and leukotriene E4-induced bronchoconstriction in subjects with asthma
JP2023545880A (ja) 炎症性および線維性疾患および障害の処置法
CN115175672A (zh) 用于管理慢性阻塞性肺病的组合物

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20220629