JP2022531230A - Ｐｉｍキナーゼインヒビター組成物及びその使用 - Google Patents

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Abstract

本開示は、ＰＩＭキナーゼのインヒビターとして有用な化合物及び組成物に関する。また、癌性悪性腫瘍に罹患した個体の治療における、ＰＩＭインヒビターの合成方法及び使用方法も提供される。【選択図】図１Ａ

Description

背景
プロテインキナーゼは、ヌクレオシド三リン酸から、シグナル伝達経路が関与しているタンパク質アクセプタへのリン酸転移を引き起こすことにより、細胞内シグナル伝達を媒介する。これらのリン酸化事象は、標的タンパク質の生物学的機能を調節又は制御することができる、分子のオン／オフスイッチとして働く。
多くの疾患が、先に説明されたような、プロテインキナーゼが媒介した事象により駆動される異常な細胞反応に関連している(Roskoski, R. Jr.、Pharmacol. Res., 2015, 100, 1-23；Fleuren, E.D.G.ら、Nat. Rev. Cancer, 2016, 16, 83-98)。これらの疾患は、癌、自己免疫疾患、炎症性疾患、骨疾患、代謝性疾患、神経学的及び神経変性疾患、心臓血管疾患、アレルギー及び喘息、アルツハイマー病、及びホルモン関連疾患を含むが、これらに限定されるものではない。従って治療薬として有用である、新規の安全で効果的なプロテインキナーゼインヒビターを見つける必要性が依然存在している。
モロニーマウス白血病ウイルス（ＰＩＭ）キナーゼに関するプロウイルスの組込み部位は、３種の構成的活性型の癌原遺伝子のセリン／スレオニンキナーゼであるＰＩＭ１、ＰＩＭ２、及びＰＩＭ３のファミリーであり、これらは細胞の生存、増殖、分化、及びアポトーシスを含む、いくつかの重要な正常な生物学的プロセスに関連したシグナル伝達を制御することが示されている。しかし、これらのプロセスが破壊又は過剰活性化され始めた時点で、これらは癌の顕著な特徴を呈する。ＰＩＭキナーゼは、細胞の生存を促進し、且つ細胞アポトーシスをダウンレギュレートし、従って腫瘍形成に関連したシグナル伝達機序に直接関与していることが示されている。
ＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ３を過剰発現する内胚葉癌及び他の癌に関連した予後不良及び限定された治療の選択肢のために、ＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ３キナーゼの選択的インヒビターの開発は、現存する治療モダリティと比べ、より高い有効性、より低い毒性、及びより低い抵抗への感受性を示す薬物により、単独で、又は他の治療薬と組合せてのいずれかで、癌、特にユーイング肉腫などの肉腫、又は胃、肝臓、結腸、前立腺、食道、膵臓、及び他の内胚葉器管の癌を、特異的に治療するための新規戦略を表している。
要約
本開示は、以下に詳述する一般式（Ｉ）の３種のＰＩＭインヒビター組成物のファミリーの強力で選択的なインヒビター、医薬製剤、それらの調製方法、及びＰＩＭ３の選択的阻害を通じて内胚葉癌を特異的に標的化することを目的とする使用を含む、それらの使用を提供する。
開示された実施態様は、式（Ｉ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり；ここで、式（Ｉ）は、規定されているものである。
別の実施態様は、式（ＩＩＡ）又は（ＩＩＢ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで式（ＩＩＡ）又は（ＩＩＢ）は、以下に規定されているものである。
別の実施態様は、式（ＩＩＩＡ）又は（ＩＩＩＢ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで式（ＩＩＩＡ）又は（ＩＩＩＢ）は、以下に規定されているものである。
別の実施態様は、式（ＩＶＡ）又は（ＩＶＢ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで式（ＩＶＡ）又は（ＩＶＢ）は、以下に規定されているものである。
別の実施態様は、式（ＶＡ）又は（ＶＢ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで式（ＶＡ）又は（ＶＢ）は、以下に規定されているものである。
別の実施態様は、式（ＶＩＡ）又は（ＶＩＢ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで式（ＶＩＡ）又は（ＶＩＢ）は、以下に規定されているものである。
別の実施態様は、式（ＶＩＩＡ）又は（ＶＩＩＢ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで式（ＶＩＩＡ）又は（ＶＩＩＢ）は、以下に規定されているものである。
別の実施態様は、式（ＶＩＩＩＡ）又は（ＶＩＩＩＢ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで式（ＶＩＩＩＡ）又は（ＶＩＩＩＢ）は、以下に規定されているものである。
本開示の別の実施態様は、式（ＩＸＡ）又は（ＩＸＢ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで式（ＩＸＡ）又は（ＩＸＢ）は、以下に規定されているものである。
同じく、本明細書に開示された化合物、例えばそれらの立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種；又は、それらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグを含む、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物；並びに、１又は複数の薬学的に許容される賦形剤を含有する医薬組成物も開示されている。
本明細書に開示された化合物、例えば、それらの立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、もしくは同位体変種；又は、それらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグを含む、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物の治療的有効量を、対象へ投与することを含む、対象におけるＰＩＭ３発現に関与した障害、疾患、又は病態の１又は複数の症状を治療、予防、又は改善する方法が、更に開示される。
同じく、本明細書に開示された化合物、例えば、それらの立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、もしくは同位体変種；又は、それらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグを含む、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物の治療的有効量を、対象へ投与することを含む、胃、肝臓、結腸、膵臓、前立腺、及び胆嚢などの、内胚葉器管の癌、並びにＰＩＭ３発現に関与する他の癌を含む、対象における障害、疾患、又は病態の１又は複数の症状を治療、予防、又は改善する方法も、開示される。
加えて、本明細書において開示された化合物、例えば、それらの立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、もしくは同位体変種；又は、それらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグを含む、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物の治療的有効量と、ＰＩＭ３キナーゼを、インビトロ又はインビボにおいて、接触させることを含む、ＰＩＭ３キナーゼ活性を調節する方法が、開示される。
同じく、本明細書において開示された化合物、例えば、それらの立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、もしくは同位体変種；又は、それらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグを含む、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物の治療的有効量を、対象へ投与することを含む、対象においてＰＩＭ３キナーゼ－媒介した障害、疾患、又は病態の１又は複数の症状を治療、予防、又は改善する方法も、開示され、ここでこの化合物は、ＰＩＭ３活性を部分的又は完全に阻害し、並びにＰＩＭ１キナーゼ、ＰＩＭ２キナーゼ及び人体に存在することが分かっている他のキナーゼと比べ、ＰＩＭ３キナーゼに対する増大した効能及び／又はＰＩＭ３キナーゼの阻害に関する増大した選択性を発揮する。
同じく、例えば、異常な疲労、疼痛、持続性のしこり、出血、硬直、眩暈、貧血、感染症に対する感受性、持続性の咳又はそう痒、頭痛、突然の体重減少、回復しない痛み、及び発熱により特徴付けられる癌性病態を治療する方法も、開示される。癌性悪性腫瘍は、心臓、脳、神経、筋肉、皮膚、眼、関節、肺、膵臓、前立腺、生殖器、腎臓、腺、リンパ系、免疫系、胃腸系、循環系及び血管を含む、体のほとんど全ての部位に影響を及ぼし得る。
図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃは、化合物１８に関する、生化学アッセイを使用し、ＰＩＭ１－３を標的化するＩＣ50プロットのグラフ表示であり、ＰＩＭ３選択性を示している。 図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃは、化合物１８に関する、生化学アッセイを使用し、ＰＩＭ１－３を標的化するＩＣ50プロットのグラフ表示であり、ＰＩＭ３選択性を示している。 図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃは、化合物１８に関する、生化学アッセイを使用し、ＰＩＭ１－３を標的化するＩＣ50プロットのグラフ表示であり、ＰＩＭ３選択性を示している。 図２Ａ及び２Ｂは、各々、化合物３２及び５３に関する、ＬＡＮＣＥウルトラアッセイを使用し、ＰＩＭ１－３キナーゼを標的化する、ＩＣ50プロットのグラフ表示であり、ＰＩＭ１及びＰＩＭ３選択性を示している。 図２Ａ及び２Ｂは、各々、化合物３２及び５３に関する、ＬＡＮＣＥウルトラアッセイを使用し、ＰＩＭ１－３キナーゼを標的化する、ＩＣ50プロットのグラフ表示であり、ＰＩＭ１及びＰＩＭ３選択性を示している。 図３Ａ、３Ｂ及び３Ｃは、化合物１９、２４及び３７に関する、ＥＣ50細胞傷害性プロットのグラフ表示であり、それぞれ、癌細胞株ＨｅｐＧ２、Ａ６７３、及びＨｕｈ７へ添加した場合の、成長阻害を示している。 図３Ａ、３Ｂ及び３Ｃは、化合物１９、２４及び３７に関する、ＥＣ50細胞傷害性プロットのグラフ表示であり、それぞれ、癌細胞株ＨｅｐＧ２、Ａ６７３、及びＨｕｈ７へ添加した場合の、成長阻害を示している。 図３Ａ、３Ｂ及び３Ｃは、化合物１９、２４及び３７に関する、ＥＣ50細胞傷害性プロットのグラフ表示であり、それぞれ、癌細胞株ＨｅｐＧ２、Ａ６７３、及びＨｕｈ７へ添加した場合の、成長阻害を示している。 図４は、化合物４９の投薬時の、ＣＤ５７マウスにおける相対Ｈｅｐａｌ－６腫瘍サイズのグラフ表示である。
詳細な説明
本明細書に説明した開示の理解を促進するために、数多くの用語を、以下に定義する。
一般に、本明細書において使用される命名法、並びに本明細書に記載された有機化学、医化学、分子生物学、微生物学、生化学、酵素学、計算生物学、計算化学、及び薬理学の実験手順は、当該技術分野において周知であり且つ通常利用される。別に定義しない限りは、全ての技術用語及び科学用語は、一般に本開示が属する分野の業者により通常理解されるものと同じ意味を有する。
別に指摘されない限りは、以下の定義が適用されるべきである。本開示の目的に関して、化学元素は、元素の周期表、ＣＡＳ版「化学・物理学ハンドブック」、第７５版に従い確定される。加えて有機化学の一般原則は、「有機化学」、Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999、及び「March最新有機化学」、第６版、編集：Smith, M. B.及びMarch, J., John Wiley & Sons、ニューヨーク：2007に説明されており、これらの全ての内容は、引用により本明細書中に組み込まれている。
ＰＩＭキナーゼの選択的インヒビターを、それを必要とする対象へ投与することによる、特定型の癌の治療に関する、化合物及び方法が、本明細書に提供される。特定の実施態様において、対象は、ＰＩＭキナーゼの過剰発現又は過剰活性に関連していることがわかっている癌を伴うと診断されているか、又は罹患が疑われる。胃、肝臓、結腸、膵臓及び胆嚢などの、内胚葉器管の癌は、ＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ３の関与が明らかにされている癌の例を表しており、従って効果的ＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ３インヒビターによる治療のための候補である。
ＰＩＭインヒビター
ＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ３の選択的阻害を示す特定の化合物による、ＰＩＭキナーゼのインヒビターが、開示されている。高度に選択性のＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ３インヒビターは、その病理学的成長及び増殖に関して、このキナーゼを発現し及び／又はその活性に左右される癌の治療に、特に有用である。胃、結腸、肝臓、膵臓、前立腺、及び胆嚢の悪性腫瘍を含む、内胚葉の癌は、ＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ３を過剰発現することが示されており、並びにＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ３の阻害は、これらの癌の成長を阻害することが明らかにされている。同じく、内胚葉癌を含む、癌性悪性腫瘍に関連した１又は複数の負の症状を逆行又は軽減するための、ＰＩＭインヒビター（例えば、本明細書記載のＰＩＭインヒビター化合物）を含有する医薬組成物も、本明細書において説明されている。同じく内胚葉癌を含む、癌性悪性腫瘍に関連した負の症状の進行を停止又は遅延するための、ＰＩＭインヒビターを含有する医薬組成物も、本明細書において説明されている。１又は複数の癌の症状を治療するための医薬品の製造のための、ＰＩＭインヒビターの使用は、本明細書に説明されている。
一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、全てのＰＩＭキナーゼを、ほぼ同等の効力で阻害する。特定の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、１又は複数のＰＩＭキナーゼの活性を減少又は阻害する一方で、その他の活性には大きく影響しない。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、ＰＩＭ３のキナーゼ活性を実質的に減少又は阻害する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、ＰＩＭ３キナーゼの実質的に完全なインヒビターである。本明細書において使用される、「実質的に完全な阻害」は、例えばＰＩＭ３の＞９５％阻害を意味する。別の実施態様において、「実質的に完全な阻害」は、例えばＰＩＭ３の＞９０％阻害を意味する。一部の別の実施態様において、「実質的に完全な阻害」は、例えばＰＩＭ３の＞８０％阻害を意味する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭ３インヒビターは、ＰＩＭ３の部分的インヒビターである。本明細書において使用される、「部分的阻害」は、例えばＰＩＭ３の約４０％～約６０％阻害を意味する。別の実施態様において、「部分的阻害」は、例えばＰＩＭ３の約５０％～約７０％阻害を意味する。本明細書において使用される、ＰＩＭ３インヒビターは、ＰＩＭ３の活性を実質的に阻害又は部分的に阻害する一方で、ＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ２の活性に大きく影響しないとは、例えば、ＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ２が、ＰＩＭ３インヒビターと同じ濃度で接触される場合に、ＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ２の約１０％未満の阻害を意味する。別の場合において、ＰＩＭ３インヒビターは、ＰＩＭ３の活性を実質的に阻害又は部分的に阻害する一方で、ＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ２の活性に大きく影響しないとは、例えば、ＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ２が、ＰＩＭ３について使用されるものと同じ濃度と接触される場合に、ＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ２の約５％未満の阻害を意味する。更に別の場合において、ＰＩＭ３インヒビターは、ＰＩＭ３の活性を実質的に阻害又は部分的に阻害する一方で、ＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ２の活性に大きく影響しないとは、例えば、ＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ２が、ＰＩＭ３に使用されるものと、同じ濃度のＰＩＭ３インヒビターと接触される場合に、ＰＩＭ１及び／又はＰＩＭ２の約１％未満の阻害を意味する。
一実施態様は、式（Ｉ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり；ここで：
Figure 2022531230000002
Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤの各々は、同じ又は異なり、並びに、独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－ＯＲ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択された任意の置換基から選択され；
Ａ’、Ｂ’、Ｃ’、及びＤ’の各々は、同じ又は異なり、並びに、独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＲ3，－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択された任意の置換基から選択され；
Ｅ、Ｆ、Ｇ、及びＭの各々は、独立してＣ又はＮであり；
Ｅ’、Ｆ’、Ｇ’、及びＭ’の各々は、独立してＣ又はＮであり；
各Ｙは、一置換された、二置換された、又は環状のアミン基であり；
各Ｌは、ＹのアミンＮ原子に直接連結された１～６個の炭素の直鎖アルキルであり；
各Ｘは、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、又はＣＨ2であり；
Ｒ1は、Ｈ、もしくは直線又は分岐した置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のシクロアルケニル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリールもしくは置換又は非置換のヘテロアリールであり；
Ｒ2は、直線又は分岐した置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のシクロアルケニル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリールもしくは置換又は非置換のヘテロアリールであり；
各Ｒ3は、独立して、Ｈ、直線又は分岐した置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のシクロアルケニル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、もしくは置換又は非置換のアシル（－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ1）であるか、或いは２個のＲ3は、それらが結合した原子と一緒に置換又は非置換のヘテロ環を形成し；
式（Ｉ）の化合物は、それら自身、プロテインキナーゼインヒビターとして有用であるか、又はキナーゼインヒビター活性を示す化合物の調製に有用な中間体を表す。先に注記したように、キナーゼインヒビターは、癌、中枢神経系障害、アルツハイマー病、心臓血管疾患、皮膚科疾患、炎症、関節リウマチなどの自己免疫疾患、及び糖尿病性合併症を含む、様々な病態の治療に有用である。
別の実施態様は、式（ＩＩＡ）、（ＩＩＢ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これらは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで：
Figure 2022531230000003
各Ｒ4は、以下のアミン基の１つであり、式中、ｎ＝０～５であり：
Figure 2022531230000004
Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、及びＲ10の各々は、同じ又は異なり、並びに独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択された任意の置換基から選択される。
式ＩＩＡ及びＩＩＢの選択された化合物は、式ＩＩＡ及びＩＩＢの化合物を含み、ここで各Ｒ4は、以下からなる群から選択され：
Figure 2022531230000005
 （式中、ｎ＝１である）；
Ｒ5、Ｒ6、Ｒ8及びＲ9の各々は、同じ又は異なり、並びにＨ、ハロゲン、又は－ＯＨから独立して選択され、並びにＲ7及びＲ10の各々は、Ｈである。
別の実施態様は、式（ＩＩＩＡ）、（ＩＩＩＢ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで：
Figure 2022531230000006
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、及びＲ10の各々は、式（ＩＩＡ）について先に規定されている。
別の実施態様は、式（ＩＶＡ）、（ＩＶＢ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで：
Figure 2022531230000007
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、及びＲ10の各々は、式（ＩＩＡ）について先に規定されている。
別の実施態様は、式（ＶＡ）、（ＶＢ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで：
Figure 2022531230000008
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、及びＲ10の各々は、式（ＩＩＡ）について先に規定されている。
別の実施態様は、式（ＶＩ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで：
Figure 2022531230000009
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9の各々は、式（ＩＩ）について先に規定されている。
式ＶＩＡ及びＶＩＢの選択された化合物は、各Ｒ4が、以下からなる群から選択される、式ＶＩＡ及びＶＩＢの化合物を含み：
Figure 2022531230000010
 式中、ｎ＝１であり、
Ｒ5、Ｒ6、及びＲ8の各々は、同じ又は異なり、並びに独立して、Ｈ、ハロゲン、又は－ＯＨから選択され、並びにＲ7及びＲ9の各々は、Ｈである。
別の実施態様は、式（ＶＩＩ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで：
Figure 2022531230000011
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9の各々は、式（ＩＩ）について先に規定されている。
別の実施態様は、式（ＶＩＩＩ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで：
Figure 2022531230000012
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9の各々は、式（ＩＩ）について先に規定されている。
別の実施態様において、式（ＩＸ）の構造を有する化合物、又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、及び代謝産物であり、これは、キナーゼインヒビターを表す例であり、ここで：
Figure 2022531230000013
Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9の各々は、式（ＩＩ）について先に規定されている。
別の実施態様は、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物であり、ここで非置換のアルキルは、メチル、エチル、ｎ－プロピル、ｉｓｏ－プロピル、ｎ－ブチル、ｉｓｏ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシルなどから選択される。別の実施態様において、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤの各々は、独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＯＨ、－ＣＮ、－Ｎ3、－ＯＲ3、－ＮＯ2、－ＮＨ2、－ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換された１，２，３－トリアゾール、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、もしくは置換又は非置換のアシルであり；別の実施態様において、Ａ’、Ｂ’、Ｃ’、及びＤ’は、独立してＨ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、－ＯＨ、－ＣＮ、－Ｎ3、－ＯＲ3、－ＮＯ2、－ＮＨ2、－ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換された１，２，３－トリアゾール、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、もしくは置換又は非置換のアシルであり；別の実施態様において、Ｅ、Ｆ、Ｇ、又はＭは、独立して窒素である。別の実施態様において、Ｅ’、Ｆ’、Ｇ’、又はＭ’は、独立して窒素である。別の実施態様において、Ｅ及びＦは、窒素である。別の実施態様において、Ｅ’及びＦ’は、窒素である。別の実施態様において、Ｅ及びＦは、窒素である。別の実施態様において、Ｅ及びＧは、窒素である。別の実施態様において、Ｅ’及びＧ’は、窒素である。
別の実施態様において、Ｅ及びＭは、窒素である。別の実施態様において、Ｅ’及びＭ’は、窒素である。別の実施態様において、Ｆ及びＭは、窒素である。別の実施態様において、Ｆ’及びＭ’は、窒素である。
この開示の別の実施態様において、式（ＩＩ）の化合物であり、ここでＹ、Ｚ、Ｙ’、及びＺ’は、水素であり、並びにＸは、－ＣＨ2Ｎ（Ｍｅ）2である。
代わりの実施態様において、組合せた転写／翻訳（ＴＸ－ＴＬ）無細胞生合成（ＣＦＢ）システムにより、式（Ｉ）－（ＩＸ）のビスインドールアルカロイド及びアナログを生成する方法が、本明細書に提供され、ここで反応は、代謝酵素、塩、補因子、アミノ酸、糖、ヌクレオチド、並びにトリプトファン及び／又はトリプトファン誘導体などの前駆体分子を含む無細胞抽出物への、ビスインドールアルカロイド経路遺伝子の添加により実施され、並びにここで任意に、この混合物は、式（Ｉ）の分子を生成する、インビトロにおける転写、翻訳及び／又は組合せ転写／翻訳が可能であり、式中Ｑ及びＲは独立して、水素、１個のインドール窒素原子に結合したグリコース基のいずれかであるか、又は一緒に両方のインドール窒素原子を架橋するグリコースを形成する。式（Ｉ）の化合物は引き続き、水素でないＱ基及びＲ基を導入する化学変換を通じて生成されてよい。
代わりの実施態様において、無細胞抽出物は、オープン細胞(open cell)の成長及び破壊、細胞膜及び細胞壁物質の除去、並びに未変性のＤＮＡ及び／又はＲＮＡの消化により作製され、ここでこれらの細胞は、様々な界、門、綱、目、科、属又は種に由来し、並びにこれらの細胞は、原核細胞又は真核細胞；或いは、細菌細胞、真菌細胞、藻細胞、古細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞、植物細胞、哺乳動物細胞又はヒト細胞である。
代わりの実施態様において、ビスインドールアルカロイド合成に関する天然又は非天然の経路酵素に対応する単離された酵素の使用が関与する、無細胞反応を通じて、式（Ｉ）－（ＩＸ）のビスインドールアルカロイド及びアナログを生成する方法が、本明細書に提供され、ここでトリプトファン及び／又はトリプトファン誘導体は、そのような酵素と結合され、式（Ｉ）－（ＩＸ）の分子をもたらす。
同じく本明細書に開示された化合物、例えばそれらの立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、もしくは同位体変種；又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグを含む、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物；並びに、１又は複数の薬学的に許容される賦形剤を含有する医薬組成物も、本明細書に提供される。
対象においてＰＩＭ３発現が関与している障害、疾患、又は病態の１又は複数の症状を治療、予防、又は改善する方法が、更に本明細書に提供され、これは対象へ、治療的有効量の本明細書に開示された化合物、例えばそれらの立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、もしくは同位体変種；又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグを含む、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物を投与することを含む。
同じく、対象において、胃、肝臓、結腸、膵臓、前立腺、及び胆嚢などの内胚葉器管の癌、並びにＰＩＭ３発現が関与している他の癌を含む、障害、疾患、又は病態の１又は複数の症状を治療、予防、又は改善する方法も、本明細書に提供され、これは対象へ、治療的有効量の本明細書に開示された化合物、例えばそれらの立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、もしくは同位体変種；又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグを含む、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物を投与することを含む。
加えて、ＰＩＭキナーゼ活性を調節する方法が、本明細書に提供され、これはＰＩＭキナーゼを、インビトロ又はインビボにおいて、治療的有効量の本明細書に開示された化合物、例えばそれらの立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、もしくは同位体変種；又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグを含む、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物と接触させることを含む。
同じく、ＰＩＭキナーゼ－媒介型障害、疾患、又は病態の１又は複数の症状を治療、予防、又は改善する方法も、本明細書に提供され、これは対象へ、治療的有効量の本明細書に開示された化合物、例えばそれらの立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、もしくは同位体変種；又はそれらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグを含む、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物を投与することを含み、ここでこの化合物は、ＰＩＭ活性を部分的に又は完全に阻害し、並びに１種のＰＩＭキナーゼに対する増強された効能、及び／又は他の２種のＰＩＭキナーゼと比べ及び人体に存在することがわかっている他のキナーゼと比べ１種のＰＩＭキナーゼの阻害に関する増大された選択性を示す。
一部の実施態様において、ＰＩＭインヒビターは、小型分子である。本明細書に言及される「小型分子」は、サイズが約５キロダルトン（ｋＤａ）未満である有機分子である。一部の実施態様において、小型分子は、約４ｋＤａ未満、３ｋＤａ、約２ｋＤａ、又は約１ｋＤａである。一部の実施態様において、小型分子は、約８００ダルトン（Ｄａ）未満、約６００Ｄａ、約５００Ｄａ、約４００Ｄａ、約３００Ｄａ、約２００Ｄａ、又は約１００Ｄａである。一部の実施態様において、小型分子は、約４０００ｇ／ｍｏｌ未満、約３０００ｇ／ｍｏｌ未満、２０００ｇ／ｍｏｌ未満、約１５００ｇ／ｍｏｌ未満、約１０００ｇ／ｍｏｌ未満、約８００ｇ／ｍｏｌ未満、又は約５００ｇ／ｍｏｌ未満である。一部の実施態様において、小型分子は、非－多量体型である。典型的には、小型分子は、タンパク質、ポリペプチド、ポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、多糖、糖タンパク質、又はプロテオグリカンではないが、最大約４０個のアミノ酸のペプチドは含む。小型分子の誘導体は、当初の小型分子と同じ構造中心を共有するが、当初の小型分子を変動し且つその誘導体を形成する一連の化学反応により調製される分子を指す。一例として、小型分子のプロドラッグは、その小型分子の誘導体である。小型分子のアナログは、当初の小型分子と同じもしくは類似した構造中心を共有し、並びに当初の小型分子と類似の又は関連した経路によるか、又は当該技術分野において認められた変形により合成された分子を指す。特定の実施態様において、本明細書記載の化合物は、１又は複数のキラル中心を有する。従って、全ての立体異性体が、本明細書において構想される。様々な実施態様において、本明細書記載の化合物は、光学活性型又はラセミ型で存在する。本明細書記載の化合物は、本明細書記載の治療的に有用な特性を持つ、ラセミ体、光学活性型、位置異性型及び立体異性型、又はそれらの組合せを包含することは理解されるべきである。光学活性型の調製は、非限定的例として、再結晶技術によるラセミ体の分割による、光学活性のある出発材料からの合成による、キラル合成による、又はキラル固定相を使用するクロマトグラフィー分離によるなどを含む、任意の好適な様式で達成される。一部の実施態様において、１又は複数の異性体の混合物は、本明細書記載の治療的化合物として利用される。特定の実施態様において、本明細書記載の化合物は、１又は複数のキラル中心を含む。これらの化合物は、エナンチオ選択的合成並びに／又はエナンチオマー及び／もしくはジアステレオマーの混合物の分離を含む、任意の手段により調製される。化合物及びそれらの異性体の分割は、非限定的例として、化学プロセス、酵素的プロセス、分別晶析、蒸留、クロマトグラフィーなどを含む、任意の手段により達成される。
様々な実施態様において、本明細書記載の薬学的に許容される塩は、非限定的例として、硝酸塩、塩化物、臭化物、リン酸塩、硫酸塩、酢酸塩、ヘキサフルオロリン酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、安息香酸塩、プロピオン酸塩、酪酸塩、スルホサリチル酸塩、マレイン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、アムソネート(amsonate)、パモ酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、メシラートなどを含む。更に、薬学的に許容される塩は、非限定的例として、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム又はマグネシウム）、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム－依存型又はカリウム）、アンモニウム塩などを含む。
本明細書記載の化合物はまた、１又は複数の原子が、同じ原子番号を有するが、通常天然に認められる原子質量もしくは質量数とは異なる原子質量もしくは質量数を有する原子により置き換えられている、同位体－標識された化合物も含む。
本明細書記載の化合物、及び異なる置換基を有する他の関連する化合物は、本明細書記載の技術及び材料、並びに／又は、例えば、Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis、1-17巻(John Wiley and Sons, 1991)；Rodd's Chemistry of Carbon Compounds、1-5巻及び補遺(Elsevier Science Publishers, 1989)；Organic Reactions、1-40巻(John Wiley and Sons, 1991)；Larock's Comprehensive Organic Transformations(VCH Publishers Inc., 1989)；March, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY、第6版(Wiley 2007)；Carey and Sundberg, ADVANCED ORGANIC CHEMISTRY、第4版、A及びB巻(Plenum 2000, 2001)、並びにGreen and Wuts, PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS、第3版(Wiley 1999)に記載された技術及び材料を用いて合成され、これらの文献は全て本開示に関して引用により本明細書中に組み込まれている。本明細書記載の化合物の調製に関する全般的方法は、本明細書に提供される式において認められる様々な部分の導入に関する、好適な試薬及び条件の使用により、改変される。
定義
置換基部分を確定するために本明細書において使用される用語「ハロ」及び「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素を表し、好ましくはフッ素、塩素又は臭素を表す。
用語「アルキル」は、単独又は組合せて、環状、直鎖又は分岐鎖の飽和炭化水素基を表し、これは直鎖又は分岐鎖の場合、好ましくは１～４個の炭素原子を有し（Ｃ1－Ｃ4アルキル）、及び環状炭化水素の場合、好ましくは３～７個の炭素原子を有する。用語「置換されたアルキル」は、Ｈではない置換基により置換されたアルキル基を含むことが意図される。アルキル基の言及は、「飽和アルキル」及び／又は「不飽和アルキル」を含む。アルキル基は、飽和又は不飽和かどうかにかかわらず、分岐鎖基、直鎖基、又は環状基を含む。「低級アルキル」は、Ｃ1－Ｃ6アルキルである。
用語「シクロアルキル」は、環状炭化水素鎖を指し、ここでシクロアルキルは、本明細書記載の１又は複数の置換基により任意に置換される。一実施態様において、単環式又は多環式シクロアルキル基は、飽和又は不飽和であるが、非－芳香族、並びに／又はスピロ及び／又は非－スピロ、並びに／又は架橋、及び／もしくは非架橋の、並びに／又は縮合した二環式基であってよく、ここで環を形成する各原子（すなわち骨格原子）は、炭素原子である。様々な実施態様において、シクロアルキルは、飽和又は部分的に不飽和である。一部の実施態様において、シクロアルキルは、芳香環に縮合される。用語シクロアルキルは、「不飽和の非芳香族カルボシクリル」基又は「非芳香族の不飽和カルボシクリル」基を含み、両方共、本明細書で定義されたように、少なくとも１個の炭素－炭素二重結合又は１個の炭素－炭素三重結合を含む非芳香族炭素環を指す。
用語「ハロアルキル」は、１又は複数のハロ原子により置換された、１つのそのように置換されたアルキルであり、及び好ましくは、１～５個のハロ原子により置換されたＣ1～Ｃ10アルキルである。ハロアルキル基の例は、以下を含むが、これらに限定されるものではない：ジフルオロメチル、ジクロロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル、及びペンタフルオロエチル。
単独又は組合せて使用される用語「アルコキシ」は、単独又は組合せて－Ｏ－連結を介して親分子に共有結合された、アルキル、好ましくはＣ1～Ｃ4アルキルである。アルコキシ基の例は、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ及びｔ－ブトキシである。用語アルコキシカルボニルは、例えば、ｔ－ブトキシカルボニル又はＢＯＣである。「アルコキシ」基は、（アルキル）Ｏ－基を指し、ここでアルキルは本明細書において定義されている。
用語「アルキルアミン」は、－Ｎ（アルキル）xＨy基を指し、ここでアルキルは、本明細書において定義され、並びにｘ及びｙは、群ｘ＝１、ｙ＝１及びｘ＝２、ｙ＝０から選択される。ｘ＝２である場合、アルキル基は、それらが結合した窒素と一緒に、環状環系を任意に形成する。
本明細書において使用される用語「アリール」は、環を形成する各原子が炭素原子である、芳香環を指す。本明細書記載のアリール環は、５個、６個、７個、８個、９個、又は９個よりも多い炭素原子を有する環を含む。アリール基は、任意に置換される。アリール基の例は、フェニル、及びナフタレニルを含むが、これらに限定されるものではない。用語「アリール」は、単独又は組合せて使用される場合、置換又は非置換のフェニル、ビフェニル、又はナフチルを表す。アリールは、ヒドロキシ、カルボキシ、アルコキシ、好ましくはＣ1～Ｃ10アルコキシ、アルキル、好ましくはＣ1－Ｃ10アルキル、ハロアルキル、ニトロ、－ＮＲ2Ｒ3、－ＮＨＣＯ（Ｃ1－Ｃ10アルキル）、－ＮＨＣＯ（ベンジル）、－ＮＨＣＯ（フェニル）、－ＳＨ、－Ｓ（Ｃ1－Ｃ4アルキル）、－（Ｃ1－Ｃ4アルキル）、－ＳＯ2（ＮＲ2Ｒ3）、－ＳＯ2（Ｃ1－Ｃ10アルキル）、－ＳＯ2（フェニル）、又はハロ（ここでＲ2及びＲ3は先に定義されている）から独立して選択される１又は複数の置換基により、任意に置換されてよい。
用語「アリールオキシ」は、－Ｏ－連結を介して共有結合された１つのそのようなアリールである。用語「アリールアルキル」は、置換されたアルキルと考えることができ、且つ－（ＣＨ2）mアリールを表し（ｍは一般に１～３の整数である）、並びに好ましくはベンジルである。対照的に用語アルキルアリールは、置換されたアリールと考えることができ、且つ例えば、アリール（ＣＨ2）n－ＣＨ3などの部分を表す（ｎは一般に０～６の整数である）。
用語「アルケニル」は、１又は複数の炭素－炭素二重結合、好ましくは１又は２個の二重結合を含む、２～１０個の炭素の、直鎖又は分岐鎖の炭化水素を指し、ここでアルケニル基は、１又は複数の本明細書記載の置換基により任意に置換されている。アルケニルの例は、エチレニル、プロピレニル、１，３－ブタジエニル、及び１，３，５－ヘキサトリエニルを含む。
用語「アルキニル」は、１又は複数の炭素－炭素三重結合（複数可）を含む、直鎖又は分岐鎖の炭化水素を指し、ここでアルキニルは、１又は複数の本明細書記載の置換基により任意に置換されている。
アシルアミノ基又はアシルアミノアルキル基のアシル部分は、最大１０個、好ましくは最大６個の炭素原子を含むアルカン酸（例えば、アセチル、プロピオニル又はブチリル）から、或いは芳香族カルボン酸（例えば、ベンゾイル）から誘導される。アシルオキシは、－Ｏ－連結により結合された、１つのそのようなアシルであり、例えば、アセチルオキシ、ＣＨ3Ｃ（＝Ｏ）Ｏ－である。アシルアミノは、例えば、ＣＨ3（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ－（アセチルアミノ）である。同様にアシルアミノアルキルは、ＣＨ3（Ｃ＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ2）m－である。
用語「ヘテロ原子」は、ハロゲン、リン、窒素、酸素、又は硫黄など、炭素又は水素ではない、任意の原子を指し、並びに窒素又は硫黄の任意の酸化された形、及び塩基性窒素の四級化された形を含む。「ヘテロアルキル」基は、アルキル基の任意の１個の炭素を、好適な数の結合した水素原子を有するヘテロ原子で置換する（例えば、ＣＨ基をＮＨ基又はＯ基へ）。
「アミド」は、式－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ又は－ＮＨＣ（Ｏ）Ｒを伴う化学部分を指し、ここでＲは、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール（環炭素を介し結合される）及びヘテロ脂環式（環炭素を介し結合される）から選択される。
用語「エステル」は、式－Ｃ（Ｏ）ＯＲを伴う化学部分であり、ここでＲは、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロ脂環式からなる群から選択される。
用語ヘテロ環又はヘテロ環式基は、また「Ｈｅｔ」又は「ヘテロシクリル」とも記され、これらは安定した、飽和、部分的不飽和、又は芳香族の５－もしくは６－員のヘテロ環式基であることができる。このヘテロ環は、炭素原子、並びに窒素、酸素、及び硫黄からなる群から独立して選択される１～３個のヘテロ原子からなる。ヘテロアリール基は、ピリジンなど、芳香族であるヘテロ環である。ヘテロ環式基は、ハロゲン、アルキル、アリール、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロアルキル、ニトロ、アミノ、アシルアミノ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アルキルチオ、アルキルスルフィニル及びアルキルスルホニルから独立して選択される、１～４個の置換基により任意に置換されることができるか、或いはヘテロ環式基が、芳香族窒素－含有ヘテロ環式基である場合、この窒素原子は、オキシド基を保有することができる。そのようなヘテロ環式基の例は、イミダゾリル、イミダゾリニル、チアゾリニル、ピリジル、インドリル、フリル、ピリミジニル、モルホリニル、ピリダジニル、ピラジニル、トリアジニル及びトリアゾリルである。２個以上のヘテロ環は縮合して、ポリヘテロ環、例えばアザインドール又はプリンを形成してよい。
用語「ヘテロアリール」又は代わりに「ヘテロ芳香族」は、窒素、酸素及び硫黄から選択される１又は複数の環ヘテロ原子を含む、アリール基を指す。Ｎ－含有「ヘテロ芳香族」又は「ヘテロアリール」部分は、その環の少なくとも１個の骨格原子が、窒素原子である、芳香族基を指す。特定の実施態様において、ヘテロアリール基は、単環式又は多環式である。
用語「ヘテロシクロアルキル」は、飽和又は部分的不飽和である環状の非－芳香族化合物を指し、且つその環内に１又は複数のカルボニル（Ｃ＝Ｏ）官能基を含んでよい。
用語「トリプトファン誘導体」又は「トリプトファンアナログ」は、１又は複数のその芳香環上で、水素以外の１又は複数の置換基により置換されており、従ってこれらの置換基は、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ａ’、Ｂ’、Ｃ’、及びＤ’について提供された定義に対応しているアミノ酸トリプトファン、並びに／又は先にＥ、Ｆ、Ｇ、Ｍ、Ｅ’、Ｆ’、Ｇ’、及びＭ’について定義されたようなＣ又はＮにより環位置で置換されているトリプトファンを指す。
用語「置換された」は、水素の代わりに、主要炭化水素スカフォールドの炭素に結合されている、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤについて説明されたもののような、置換基又は官能基もしくは複数の基を意味する。
本明細書において使用される用語「脱離基」（ＬＧ）は、当業者により容易に理解される。一般に脱離基は、求核性の基又は原子により容易に置き換えるために、それが結合した原子の求電子性を増強する任意の基又は原子である。好ましい脱離基の例は、トリフラート（－ＯＳＯ2ＣＦ3）、メシラート、トシラート、イミデート、塩化物、臭化物、及びヨウ化物である。
特定の状況下において、公知の安定した「保護基」により、式（Ｉ）の化合物の合成時に中間体の窒素（Ｎ）を保護することは、少なくとも望ましく、且つ必要とされることが多い。そのような窒素保護基の導入及び除去は、当業者には周知である。
これに関して、同様の状況において使用され、並びに本明細書及び請求項において使用される用語「－ＮＨ保護基」及び「保護基」は、その化合物上の他の官能基と反応しながら、－ＮＨ官能性をブロック又は保護するために通常使用されるアミノ保護基の亜クラスを指す。本開示の方法を実行する上で利用される保護基の種類は、誘導された－ＮＨ基が、後続の反応（複数可）の条件（複数可）に対し安定し、且つその分子の残余を破壊することなく適当な時点で除去され得る限りは、重要ではない。T. W. Greene及びP. Wuts、「有機合成における保護基」、第7章、385-394及び397-403頁は、インドール及びマレイミドに関して通常利用される保護基の一覧を提供している。好ましいインドール保護基は、トリメチルシリルエトキシメチル、ベンジル、トシル、カルバメート、アミド、アルキル又はアリールスルホンアミドであるのに対し、マレイミド保護基は、アルコキシ、ベンジル、ジアルコキシベンジル、ベンジルオキシアルキル又はアリルを含む。関連する用語「保護された－ＮＨ」は、－ＮＨ保護基により置換された基を定義している。
特定の状況において、本開示の合成プロセス時に、ヒドロキシ基及びアミノ基を保護する必要性も存在することがある。当業者は、そのような「ヒドロキシ保護基」及びそのような「アミノ保護基」を熟知している。用語「ヒドロキシ保護基」は、ヒドロキシ基をブロック又は保護するために通常利用される一方で、反応は化合物上の他の官能基で実行される、ヒドロキシ基のエーテル又はエステル誘導体の１つを指す。利用されるヒドロキシ保護基の種類は、誘導体化されたヒドロキシ基が、後続の反応（複数可）の条件に対し安定し、且つその分子の残余を破壊することなく適当な時点で除去することができる限りは、重要ではない。好ましいヒドロキシ保護基は、ｔｅｒｔ－ブチルジフェニルシリルオキシ（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリルオキシ（ＴＢＤＭＳ）、トリフェニルメチル（トリチル）、モノ－もしくはジメトキシトリチル、又はアルキルもしくはアリールエステルである。
用語「アミノ保護基」は、アミノ官能性をブロック又は保護するために通常利用される一方で、その化合物上の他の官能基と反応する、アミノ基の置換基を指す。本開示の方法を実行する際に利用されるアミノ保護基の種類は、誘導体化されたアミノ基が、後続の反応（複数可）の条件（複数可）に対し安定し、且つその分子の残余を破壊することなく適当な時点で除去され得る限りは、重要ではない。好ましいアミノ保護基は、ｔ－ブトキシカルボニル、フタルイミド、環状アルキル、及びベンジルオキシカルボニルである。
本明細書において使用される用語「活性化されたマレイミド」は、試薬との及び特に任意にＮ－置換されたオルガノメタリック－３－インドールとの反応を促進する少なくとも１個の脱離基により置換された、３，４－二置換されたマレイミド（ピロリル－２，５－ジオン）又は２，３，４－三置換されたマレイミドを指す。
用語「インドリルマレイミド」は、それらの基本構造(root structure)として３－（インドール－３－イル）－ピロリル－２，５－ジオンを有する化合物の部類を包含し、並びにそれらの基本構造として、３，４－（インドール－３－イル）－ピロリル－２，５－ジオンを有する「ビスインドリルマレイミド」の亜部類を含み、ここでインドール－３－イル部分又は複数の部分は、任意にＮ－置換されており、インドリル部分の縮合された６－員の芳香環上で任意に置換されてよく、並びにインドール－３－イル部分又は複数の部分の２位で任意に置換されてよい。同じく、インドリルのＮ－置換基が、式（Ｉ）及び式（ＩＩ）について先にＱ及びＲについて説明された架橋部分を介して一緒に連結されているビスインドリルマレイミドも含まれる。先行技術は、広範なそのような任意に置換されたインドリルマレイミドを説明している。
用語「インドロカルバゾール」は、トリプトファンから誘導された２個のインドール環及び縮合されたマレイミド又はラクタム官能性を含むアルカロイド化合物、及びそれらの誘導体を指す。最も頻繁に単離される天然のインドロカルバゾールは、インドロ（２，３－ａ）カルバゾールであり、最も一般的な亜群は、インドロ（２，３－ａ）ピロール（３，４－ｃ）カルバゾールである。
本明細書記載のように、本開示の化合物は、「任意に置換された」部分を含んでよい。概して、用語「置換された」は、用語「任意に」が先行するかどうかにかかわらず、指定された部分の１又は複数の水素が、好適な置換基により置き換えられることを意味する。別に指定しない限りは、「任意に置換された」基は、その基の各置換可能な位置に好適な置換基を有してよく、並びにいずれか所定の構造の２つ以上の位置が、特定された群から選択された２個以上の置換基により選択される場合、この置換基は、各位置において、同じ又は異なってよい。本明細書において使用される用語「安定した」は、本明細書において開示された１又は複数の目的のために、それらの保護、検出、並びに特定の実施態様において、それらの回収、精製、及び使用を可能にする条件に供された場合に、実質的に変更されない化合物を指す。
本明細書において使用される用語「可溶化基」は、それが結合した化合物の溶解度を促進する化学的部分を指す。好適な可溶化基は、例えば、モルホリノ、ピペラジニル、及びピペラジニルなどの飽和されたヘテロ環、並びにジメチルアミノ及びメトキシプロピルアミノなどのアミノ基を含む。
別に指定しない限りは、本明細書に描かれた構造はまた、その構造の全ての異性体（例えば、エナンチオマーの、ジアステレオマーの、及び幾何（又は配座））の形状；例えば、各不斉中心についてＲ及びＳ配置、Ｚ及びＥ二重結合異性体、並びにＺ及びＥ立体配置異性体を含むことも意味する。従って、本化合物の単独の立体化学異性体、並びにエナンチオマー、ジアステレオマー、及び幾何異性体（又は配座）の混合物は、本開示の範囲内である。別に指定しない限りは、本開示の化合物の全ての互変異性体は、本開示の範囲内である。
用語「同位体変種」は、そのような化合物を構成する１又は複数の原子の同位体を非天然の割合で含む化合物を指す。特定の実施態様において、化合物の「同位体変種」は、不安定な形状であり、すなわち放射性である。そのような化合物は、例えば、分析ツールとして、生物学的アッセイにおけるプローブとして、又は本開示に従う治療薬として有用である。
用語「溶媒和物」は、化学量論的な又は非－化学量論的な量で存在する、溶質、例えば本明細書に提供される化合物の１又は複数の分子、及び溶媒の１又は複数の分子により形成される複合体又は凝集体を指す。好適な溶媒は、水、メタノール、エタノール、ｎ－プロパノール、イソプロパノール、及び酢酸を含むが、これらに限定されるものではない。特定の実施態様において、溶媒は、薬学的に許容される。一実施態様において、複合体又は凝集体は、結晶形状である。別の実施態様において、複合体又は凝集体は、非晶質形状である。溶媒が水である場合、溶媒和物は水和物である。水和物の例は、半水和物、一水和物、二水和物、三水和物、四水和物、及び五水和物を含むが、これらに限定されるものではない。
核酸分子、アミノ酸、ポリペプチド、小型分子の天然生成物、宿主細胞などの天然に生じる生物学的物質と結びつけて使用される場合の用語「天然に生じる」又は「天然の」又は「未変性の」は、自然界に認められるか又は自然界から直接単離される、並びにヒトにより変化もしくは操作されない物質を指す。同様に「天然に生じない」又は「非天然の」又は「不自然の」又は「非-未変性の」は、自然界に存在することが不明であるか又は自然界に認められないか、又はヒトにより構造的に修飾されるかもしくは合成された物質を指す。
用語「半合成」は、当初の天然の物質の新規の変種、誘導体、又はアナログを合成的に作製するために、天然の材料を修飾することを指す。用語「誘導体」又は「アナログ」は、天然又は非天然の物質から誘導される化合物の構造的変種を指す。
用語「光学活性」及び「鏡像異性的に活性」とは、鏡像体過剰率の約５０％以上、約７０％以上、約８０％以上、約９０％以上、約９１％以上、約９２％以上、約９３％以上、約９４％以上、約９５％以上、約９６％以上、約９７％以上、約９８％以上、約９９％以上、約９９．５％以上、又は約９９．８％以上を有する、分子の集合を指す。特定の実施態様において、この化合物は、問題のラセミ体の総重量を基に、一方のエナンチオマーを約９５％以上及び他方のエナンチオマーを約５％未満含む。光学活性化合物を説明する際に、そのキラル中心（複数可）についての分子の絶対配置を示すために、接頭辞Ｒ及びＳが使用される。記号（＋）及び（－）は、化合物の旋光、すなわち光学活性化合物により偏光面が回転される方向を示すために使用される。接頭辞（－）は、化合物が左旋性である、すなわち化合物は偏光面を左へ又は反対時計回りに回転することを指摘している。接頭辞（＋）は、化合物が右旋性である、すなわち化合物は偏光面を右へ又は時計回りに回転することを指摘している。しかし、旋光度の記号（＋）及び（－）は、その分子の絶対配置Ｒ及びＳとは関係がない。
語句「それらの立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、もしくは同位体変種；又は、それらの薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグ」は、語句「そこで言及された化合物の立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、もしくは同位体変種；そこで言及された化合物の薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグ；又は、そこで言及された化合物の立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、もしくは同位体変種の薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、もしくはプロドラッグ」と同じ意味を有する。
用語「約」又は「およそ」は、その値の測定又は決定方法により一部左右される、当業者により決定されるような特定の値に関する許容誤差を意味する。特定の実施態様において、用語「約」又は「およそ」は、１、２、３、又は４標準偏差以内を意味する。特定の実施態様において、用語「約」又は「およそ」は、所定の値又は範囲の５０％、２０％、１５％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、１％、０．５％、又は０．０５％以内を意味する。
用語「活性成分」及び「活性物質」は、障害、疾患、又は病態の１又は複数の症状の治療、予防、改善のために対象へ、単独で又は１又は複数の薬学的に許容される賦形剤と組合せて投与される化合物を指す。本明細書において使用される「活性成分」及び「活性物質」は、本明細書記載の化合物の光学活性異性体又は同位体変種であってよい。
用語「薬物」、「治療薬」、及び「化学療法薬」は、障害、疾患、又は病態の１又は複数の症状の治療、予防、改善のために対象へ投与される、化合物、又はその医薬組成物を指す。
用語「対象」は、非限定的に霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、又はマウスを含む、動物を指す。用語「対象」及び「患者」は、例えば、ヒト対象などの哺乳動物の対象を言及するよう、本明細書において互換的に使用され、一実施態様において、ヒトである。
本明細書において使用される用語「患者」は、動物、好ましくは哺乳動物、及び最も好ましくはヒトを意味する。
用語「治療する」、「治療している」及び「治療」は、障害、疾患、又は病態を、もしくは障害、疾患、又は病態に関連した１又は複数の症状を、緩和又は抑止すること；或いは、障害、疾患、又は病態それ自身の原因(複数可)を緩和又は根絶することを含むことを意味する。
用語「予防する」、「予防している」及び「予防」は、障害、疾患、又は病態及び／又はその随伴症状の開始を遅延及び／又は排除する；対象が障害、疾患、又は病態を獲得することを阻む；或いは、障害、疾患、又は病態を獲得する対象のリスクを低下する方法を含むことを意味する。
用語「治療的有効量」は、投与される場合に、治療される障害、疾患、又は病態の１又は複数の症状の発達を予防する、又はある程度緩和するのに十分である化合物量を含むことを意味する。用語「治療的有効量」はまた、研究者、獣医師、医師、又は臨床医により求められる、生物学的分子（例えば、タンパク質、酵素、ＲＮＡ、もしくはＤＮＡ）、細胞、組織、体系、動物、又はヒトの生物学的又は医学的反応を誘発するのに十分である、化合物の量も指す。
用語「ＩＣ50」又は「ＥＣ50」は、そのような反応を測定するアッセイにおける最大反応の５０％阻害に必要とされる化合物の量、濃度、又は用量を指す。用語「ＣＣ50」は、宿主の生存度の５０％減少を生じる化合物の量、濃度、又は用量を指す。特定の実施態様において、化合物のＣＣ50は、化合物により処置される細胞の生存度を、その化合物により処置されない細胞と比べ、５０％だけ減少するために必要とされる化合物の量、濃度、又は用量である。用語「Ｋd」は、小型分子リガンド（小型分子薬物など）が、キナーゼなどのタンパク質について有する結合強度を評価するために測定される、リガンド及びタンパク質の平衡解離定数を指す。解離定数Ｋdは、リガンドとタンパク質の間の親和性；すなわち、どの位密にリガンドが特定のタンパク質に結合するかを説明するために、通常使用され、並びにこれは会合定数の逆数である。リガンド－タンパク質親和性は、２つの分子の間の非共有的分子間相互作用、例えば水素結合、静電相互作用、疎水性及びファンデルワールス力などにより、影響を受ける。類似の用語「Ｋi」は、インヒビター定数又は阻害定数であり、これは酵素インヒビターに関する平衡解離定数であり、インヒビターの効能の指標を提供する。
本明細書において使用される語句「生物学的活性」は、生物学的体系及び／又は生物において活性を有する任意の物質の特徴を指す。例えば、生物へ投与される場合に、その生物に生物学的効果を有する物質は、生物学的活性があると考えられる。特定の実施態様において、タンパク質又はポリペプチドに生物学的活性がある場合、タンパク質又はポリペプチドの少なくとも１つの生物活性を共有している、そのタンパク質又はポリペプチドの部分は、典型的には「生物学的活性」部分と称される。
本明細書において使用される用語「有効量」は、全身に投与される場合に、恩恵のある又は所望の臨床結果など、恩恵のある又は所望の結果を、又は疾患の状態の改善に繋がる他の所望の効果を作用するのに十分である量である。有効量はまた、予防作用を生じる量、例えば自己免疫疾患又は癌に関連した病理学的状態又は望ましくない状態の出現を遅延、軽減、又は排除する量でもある。有効量は、１又は複数回の投与で任意に投与される。治療に関して、本明細書記載の組成物の「有効量」は、自己免疫疾患又は癌の進行を和らげる、緩和する、改善する、安定化する、逆行する又は遅くするのに十分である量である。
本明細書において使用される用語「インヒビター」は、標的分子、例えばＰＩＭキナーゼの１又は複数の生物学的活性を阻害（部分的阻害又はアロステリック阻害を含む）することが可能である分子を指す。インヒビターは、例えば、標的分子の活性を減少もしくは抑制する、及び／又はシグナル伝達を減少もしくは抑制することにより、作用する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、３種のＰＩＭキナーゼ全ての実質的に完全な阻害を引き起こす。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、ＰＩＭ１及びＰＩＭ３など、２種のＰＩＭキナーゼの実質的に完全な阻害を引き起こす。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、ＰＩＭ３など、１種のＰＩＭキナーゼの実質的に完全な阻害を引き起こす。一部の実施態様において、語句「部分的インヒビター」は、例えば、標的分子の活性を部分的に減少もしくは抑制する及び／又はシグナル伝達を部分的に減少もしくは抑制することにより、部分的反応を誘導することができる分子を指す。場合によっては、部分的インヒビターは、インヒビターの空間的配置、電子特性、又は一部の他の物理化学的及び／もしくは生物学的特性を模倣する。場合によっては、上昇したレベルのインヒビターの存在下で、部分的インヒビターは、標的分子の占拠についてインヒビターと競合し、インヒビター単独と比べ、低下した有効性を提供する。
一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、ＰＩＭキナーゼの部分的インヒビターである。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、ＰＩＭキナーゼのアロステリックモジュレーターである。一部の実施態様において、ＰＩＭインヒビターは、ＰＩＭキナーゼのキナーゼドメインに結合する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、ＰＩＭのＡＴＰ結合部位をブロックする。一部の実施態様において、ＰＩＭインヒビターは、「ＩＩ型」キナーゼインヒビターである。一部の実施態様において、ＰＩＭインヒビターは、それらの不活性配座又は状態にあるＰＩＭキナーゼを安定化する。一部の実施態様において、ＰＩＭインヒビターは、ＰＩＭキナーゼの「ＤＦＧ－アウト」配座を安定化する。
一部の実施態様において、ＰＩＭインヒビターは、ＰＩＭと、少なくとも１種のその天然の結合パートナー（例えば、アポトーシス促進性Ｂｃｌ－２－関連したデスプロモータータンパク質（ＢＡＤ）、リボソームタンパク質４Ｅ－ＢＰ１、及び転写因子ｃ－Ｍｙｃなど）の間の結合を低下、破棄、及び／又は除去する。場合によっては、ＰＩＭと少なくとも１種のその天然のパートナーの間の結合は、ＰＩＭインヒビターの非存在下で、ＰＩＭインヒビターの存在下よりもより強力となる（例えば、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％（°A）又は２０％だけ）。代わりに又は加えて、ＰＩＭインヒビターは、例えば、触媒部位に直接結合するか、又はＰＩＭの配座を変更し、その結果触媒部位が基質と接近不可能になることにより、ＰＩＭキナーゼのリン酸転移酵素活性を阻害する。一部の実施態様において、ＰＩＭインヒビターは、例えば転写因子ＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５（シグナル伝達因子及び転写活性化因子）、ｃ－Ｍｙｃ、ＦｏｘＯ１ａ、及びＦｏｘＯ３ａ、細胞周期制御因子ｐ２７、Ｃｄｃ２５Ａ、及びＣｄｃ２５Ｃ、又はそれ自身など、その標的基質の少なくとも１つをリン酸化するＰＩＭキナーゼの能力を阻害する。ＰＩＭインヒビターは、無機化合物及び／又は有機化合物を含む。
一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、サイトカイン受容体に結合するインターロイキン及びインターフェロンなどの、分裂促進性増殖因子により誘導されたシグナル伝達を減少する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、アポトーシス促進性ＢＡＤのリン酸化を減少し、結果的に細胞アポトーシスが可能である。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、転写因子タンパク質ｃ－Ｍｙｃの細胞レベルを減少する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、解糖及びミトコンドリア新生が可能である酵素ペルオキシソーム増殖因子－活性化受容体γ共役因子１α（ＰＧＣ－１α）の細胞レベルを減少する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、転写因子ＳＴＡＴ３、Ｍｙｂ、ＦｏｘＯ１ａ、及びＦｏｘＯ３ａのリン酸化及び活性化を減少する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、耐糖能及びインスリン感受性を増大する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、ＳＴＡＴ３をリン酸化することにより、ＶＥＧＦ及び血管新生のレベルを低下する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、膵癌細胞の細胞増殖を減少する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、胃癌細胞の細胞増殖を減少する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、結腸直腸癌細胞の細胞増殖を減少する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、前立腺癌細胞の細胞増殖を減少する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、胆嚢癌細胞の細胞増殖を減少する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、鼻咽腔癌細胞の細胞増殖を減少する。一部の実施態様において、本明細書記載のＰＩＭインヒビターは、肝癌細胞の細胞増殖を減少する。
一部の実施態様において、本明細書記載の方法に適したＰＩＭインヒビターは、直接的ＰＩＭインヒビターである。一部の実施態様において、本明細書記載の方法に適したＰＩＭインヒビターは、間接的ＰＩＭインヒビターである。一部の実施態様において、本明細書の方法に適したＰＩＭインヒビターは、ＰＩＭ活性の基本レベルに比べ、約１．１倍～約１０００倍、例えば約１．２倍、１．５倍、１．６倍、１．７倍、２．０倍、３．０倍、５．０倍、６．０倍、７．０倍、８．５倍、９．７倍、１０倍、１２倍、１４倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、９５倍、１００倍、２００倍、３００倍、４００倍、５００倍、６００倍、７００倍、８００倍、９００倍、１０００倍だけ、ＰＩＭ活性を減少するか、又は基本ＰＩＭ３活性に比べ約１．１倍～約１０００倍の任意の他の量だけ減少する。一部の実施態様において、ＰＩＭインヒビターは、可逆的ＰＩＭインヒビターである。別の実施態様において、ＰＩＭインヒビターは、不可逆的ＰＩＭインヒビターである。直接的ＰＩＭインヒビターは、悪性又は癌性の疾患の治療のための医薬品の製造に、任意に使用される。
一部の実施態様において、本明細書記載の方法に使用されるＰＩＭインヒビターは、ＰＩＭインヒビターをＰＩＭキナーゼと接触させた後、１００μＭ未満（例えば、１０μＭ未満、５μＭ未満、４μＭ未満、３μＭ未満、１μＭ未満、０．８μＭ未満、０．６μＭ未満、０．５μＭ未満、０．４μＭ未満、０．３μＭ未満、０．２μＭ未満、０．１μＭ未満、０．０８μＭ未満、０．０６μＭ未満、０．０５μＭ未満、０．０４μＭ未満、０．０３μＭ未満、０．０２μＭ未満、０．０１μＭ未満、０．００９９μＭ未満、０．００９８μＭ未満、０．００９７μＭ未満、０．００９６μＭ未満、０．００９５μＭ未満、０．００９４μＭ未満、０．００９３μＭ未満、０．０００９２μＭ未満、０．００９０μＭ未満、０．００１０μＭ未満、又は０．０００１０μＭ未満）の、１又は複数のＰＩＭキナーゼの活性の５０％が残る阻害濃度として定義される、インビトロＩＣ50、又は解離定数（Ｋd）、又は阻害定数（Ｋi）を有する。
本明細書において使用される核酸配列の「発現」は、以下の事象の１又は複数を指す：（１）ＤＮＡ配列からのＲＮＡ鋳型の作製（例えば、ＤＮＡのメッセンジャーＲＮＡへの転写による）；（２）ＲＮＡ転写物のプロセッシング（例えば、スプライシング、編集、５'キャップ形成、及び／又は３'末端形成）；（３）ＲＮＡのポリペプチド又はタンパク質への翻訳；（４）ポリペプチド又はタンパク質の翻訳後修飾。
本明細書において使用される用語「ＰＩＭポリペプチド」又は「ＰＩＭタンパク質」又は「ＰＩＭ」又は「ＰＩＭキナーゼ」は、ヒトキナーゼのセリン／スレオニンファミリーに属するタンパク質を指す。ＰＩＭ１アミノ酸配列の代表例は、ヒトＰＩＭ１(GenBank寄託番号P11309)を含むが、これに限定されるものではない。ヒトＰＩＭ１はまた、同定された３４ｋＤａ及び４４ｋＤａの２種の切断型アイソフォームも有し、並びにＰＩＭ１ホモログは、動物界全体に存在する。ＰＩＭ２アミノ酸配列の代表例は、ヒトＰＩＭ２(GenBank寄託番号Q9P1W9)を含むが、これに限定されるものではない。ヒトＰＩＭ２もまた、同定された３種の切断型アイソフォーム３４ｋＤａ、３７ｋＤａ、及び４０ｋＤａを有し、並びにＰＩＭ２ホモログは、動物界全体に存在する。ＰＩＭ３アミノ酸配列は、ヒトＰＩＭ３(GenBank寄託番号Q86V86)を含むが、これに限定されるものではない。ヒトＰＩＭ３もまた、同定された多くの切断型アイソフォームを有し、並びにＰＩＭ３ホモログは、動物界全体に存在する。
一部の実施態様において、ＰＩＭ１ポリペプチドは、GenBank寄託番号P11309の配列と、少なくとも６０％～１００％同一、例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約７０％～約１００％の任意の他の割合同一である、アミノ酸配列を含む。一部の実施態様において、ＰＩＭ２ポリペプチドは、GenBank寄託番号Q9P1W9の配列と、少なくとも６０％～１００％同一、例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約７０％～約１００％の任意の他の割合同一である、アミノ酸配列を含む。一部の実施態様において、ＰＩＭ３ポリペプチドは、GenBank寄託番号Q86V86の配列と、少なくとも６０％～１００％同一、例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約７０％～約１００％の任意の他の割合同一である、アミノ酸配列を含む。
ＰＩＭ１タンパク質をコードしているヒトＰＩＭ１遺伝子の代表例は、ヒトＰＩＭ１(GenBank寄託番号5292)を含むが、これに限定されるものではない。一部の実施態様において、ヒトＰＩＭ１遺伝子は、GenBank寄託番号5292の配列と、少なくとも７０％～１００％同一、例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約７０％～約１００％の任意の他の割合同一であるヌクレオチド配列を含む。ＰＩＭ２タンパク質をコードしているヒトＰＩＭ２遺伝子の代表例は、ヒトＰＩＭ２(GenBank寄託番号11040)を含むが、これに限定されるものではない。一部の実施態様において、ヒトＰＩＭ２遺伝子は、GenBank寄託番号11040の配列と、少なくとも７０％～１００％同一、例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約７０％～約１００％の任意の他の割合同一であるヌクレオチド配列を含む。ＰＩＭ３タンパク質をコードしているヒトＰＩＭ３遺伝子の代表例は、ヒトＰＩＭ３(GenBank寄託番号415116)を含むが、これに限定されるものではない。一部の実施態様において、ヒトＰＩＭ３遺伝子は、GenBank寄託番号415116の配列と、少なくとも７０％～１００％同一、例えば、少なくとも７５％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、９０％、９１％、９２％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は約７０％～約１００％の任意の他の割合同一であるヌクレオチド配列を含む。
２種のアミノ酸配列又は２種の核酸のホモロジー率を決定するために、これらの配列を、最適に比較するために整列させる（例えば、第二のアミノ酸又は核酸配列との最適なアラインメントのために、ギャップを、第一のアミノ酸配列又は核酸配列に導入することができる）。次に対応するアミノ酸位置又はヌクレオチド位置のアミノ酸残基又はヌクレオチドを比較する。第一の配列の位置が、第二の配列の対応する位置と同じアミノ酸残基又はヌクレオチドにより占拠されている場合、この分子は、その位置で同一である。２つの配列間のホモロジー率は、それらの配列により共有される同一の位置の数の関数である（すなわち、％同一性＝同一位置の数／位置の総数（例えば、重複する位置）×１００）。一実施態様において、これら２つの配列は、同じ長さである。
２つの配列間のホモロジー率を決定するために、Karlin, S.及びAltschul, S.F., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1990, 87:2264-2268；改編されたKarlin, S.及びAltschul S.F.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, 90:5873-5877のアルゴリズムが使用される。そのようなアルゴリズムは、Altschul, S.F.ら、J. Mol. Biol., 1990, 215, 403-410のNBLAST及びBLASTプログラムに組み込まれている。BLASTヌクレオチド検索は、NBLASTプログラム、スコア＝１００、ワードレングス＝１２で実行され、本明細書に説明又は開示された核酸分子とホモログなヌクレオチド配列を得る。BLASTタンパク質検索は、BLASTプログラム、スコア＝５０、ワードレングス＝３で実行される。比較目的でギャップ付きアラインメントを得るためには、Altschul, S.F.ら、Nucleic Acids Res., 1997, 25, 3389-3402に説明されたGapped BLASTが、利用される。BLAST及びGapped BLASTプログラムを利用する場合、各プログラム(例えば、BLAST及びNBLAST)のデフォルトのパラメータが使用される。更なる詳細については、米国国立生物工学情報センター（ＮＩＢＣ）のウェブサイトを参照されたい(www.ncbi.nlm.nih.gov)。本明細書記載の方法における使用に適したタンパク質もまた、本明細書記載の任意のタンパク質ＰＩＭ３インヒビターのアミノ酸配列と比べ、１～１５個のアミノ酸変化、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５個のアミノ酸の置換、欠失、又は付加を有するタンパク質を含む。別の実施態様において、変更されたアミノ酸配列は、本明細書記載の任意のタンパク質ＰＩＭ３インヒビターのアミノ酸配列と、少なくとも７５％同一、例えば、７７％、８０％、８２％、８５％、８８％、９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％同一である。そのような配列－バリアントタンパク質は、変更されたアミノ酸配列が、本明細書記載の組成物及び方法において機能するのに十分な生物活性を保持する限りは、本明細書記載の方法に適している。アミノ酸置換が成される場合は、これらの置換は、保存的アミノ酸置換でなければならない。２０種の一般的タンパク質を構成するアミノ酸の中で、例えば「保存的アミノ酸置換」は、各々以下の群内のアミノ酸の間の置換により例証される：（１）グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシン、（２）フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン、（３）セリン及びスレオニン、（４）アスパラギン酸及びグルタミン酸、（５）グルタミン及びアスパラギン、並びに（６）リジン、アルギニン及びヒスチジン。BLOSUM62表は、タンパク質配列セグメントの約２，０００のローカルマルチプルアラインメント由来の、アミノ酸置換マトリクスであり、これは関連タンパク質の５００を超える群の高度に保存された領域を表している(Henikoff、S.ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、1992、89、10915-10919)。従って、BLOSUM62置換頻度は、説明された又は本明細書記載のアミノ酸配列へ導入され得る保存的アミノ酸置換を規定するために使用される。化学特性のみを基にアミノ酸置換をデザインすることは（先に考察したように）可能であるが、語句「保存的アミノ酸置換」は、１より大きいBLOSUM62値により表される置換を指すことが好ましい。例えば、アミノ酸置換が、BLOSUM62値０、１、２、又は３により特徴付けられる場合に、その置換は保存的である。このシステムに従い、好ましい保存的アミノ酸置換は、少なくとも１（例えば、１、２又は３）のBLOSUM62値により特徴付けられるが、より好ましい保存的アミノ酸置換は、少なくとも２（例えば、２又は３）のBLOSUM62値により特徴付けられる。
本明細書において使用される用語「ＰＩＭ活性」は、別に特定しない限りは、少なくとも１種のＰＩＭキナーゼタンパク質－タンパク質相互作用、ＰＩＭリン酸転移酵素活性（分子間又は分子間）、１又は複数のＰＩＭアイソフォームの転座などを含むが、これらに限定されるものではない。本明細書において使用される「ＰＩＭインヒビター」は、ＰＩＭ活性を直接又は間接に減少する、任意の分子、化合物、又は組成物を指す。一部の実施態様において、ＰＩＭインヒビターは、ＰＩＭ ｍＲＮＡ及び／又はタンパク質のレベルを、もしくはＰＩＭ ｍＲＮＡ及び／又はタンパク質の半減期を、阻害、減少、及び／又は破棄し、そのようなインヒビターは、「クリアランス物質」と称される。一部の実施態様において、ＰＩＭインヒビターは、ＰＩＭの活性を阻害、減少、及び／又は破棄する、ＰＩＭアンタゴニストである。一部の実施態様において、ＰＩＭインヒビターはまた、標準方法を用いて測定される、ＰＩＭと、その天然の結合パートナー（例えば、ＰＩＭ３キナーゼ、又はＢＡＤ、又はｃ－Ｍｙｃの基質）、又は病的状態のＰＩＭの結合パートナーであるタンパク質との間の相互作用を破壊、阻害、又は破棄する。
一部の実施態様において、ＰＩＭ３インヒビターは、ＰＩＭと、その天然の結合パートナー（例えば、ＢＡＤ、ＡＭＰＫ、ＳＴＡＴ３、ｃ－Ｍｙｃ、Ｍｙｂ、ＦｏｘＯ１ａ、及びＦｏｘＯ３ａ、ｐ２１、ｐ２７、ＰＧＣ－１α、ｅＩＦ４Ｂ、Ｃｄｃ２５Ａ，、Ｃｄｃ２５Ｃ、又は翻訳制御された腫瘍タンパク質ＴＣＴＰ／ＴＰＴ１）の少なくとも１種との間の結合を減少、破棄、及び／又は除去する。場合によっては、ＰＩＭと、その天然の結合パートナーの間の結合は、ＰＩＭインヒビターの非存在下で、ＰＩＭインヒビターの存在下よりも、より強力である（例えば、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％又は２０％だけ）。一部の実施態様において、ＰＩＭインヒビターは、ＰＩＭと、疾患状態の細胞又は組織中で異常に蓄積又は凝集するタンパク質の間の結合を予防、減少、又は破棄する。場合によっては、ＰＩＭと、細胞又は組織において凝集又は蓄積するタンパク質の少なくとも１種の間の結合は、ＰＩＭインヒビターの非存在下で、インヒビターの存在下よりも、より強力である（例えば、９０％、８０％、７０％、６０％、５０％、４０％、３０％又は２０％だけ）。「個体」又は「個体」は、哺乳動物である。一部の実施態様において、個体は、動物、例えば、ラット、マウス、イヌ又はサルである。一部の実施態様において、個体は、ヒト患者である。一部の実施態様において、個体は、癌に罹患しているか、又は癌に罹患していることが疑われるか、又は遺伝学的に癌の素因がある。一部の実施態様において、ＰＩＭインヒビターを含有する薬理学的組成物は、「末梢投与」か又は「末梢に投与され」る。本明細書において使用されるこれらの用語は、個体へ、中枢神経系へ直接投与されない物質、すなわち、血液－脳関門の非脳側と接触させる物質、例えば治療薬の投与の任意の形を指す。本明細書において使用される「末梢投与」は、静脈内、動脈内、皮下、筋肉内、腹腔内、経皮、吸入による、口腔経由、鼻腔内、経直腸、経口、非経口、舌下、又は経鼻を含む。一部の実施態様において、ＰＩＭ３インヒビターは、脳内経路により投与される。
用語「ポリペプチド」、及び「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すよう、本明細書において互換的に使用される。すなわち、ポリペプチドに関する説明は、タンパク質の説明に同等に適用され、逆もまた当てはまる。これらの用語は、天然のアミノ酸ポリマー、並びに１又は複数のアミノ酸残基が非天然のアミノ酸、例えばアミノ酸アナログであるアミノ酸ポリマーに適用される。本明細書において使用される用語は、完全長タンパク質（すなわち、抗原）を含む、任意の長さのアミノ酸鎖を包含し、ここでアミノ酸残基は、共有ペプチド結合により連結されている。
用語「アミノ酸」は、天然及び非天然のアミノ酸、並びに天然のアミノ酸と類似の方法で機能するアミノ酸アナログ及びアミノ酸模倣体を指す。用語「核酸」は、一本鎖又は二本鎖のいずれかの形の、デオキシリボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオシド、リボヌクレオシド、又はリボヌクレオチド、及びそれらのポリマーを指す。具体的に限定しない限りは、この用語は、参照核酸と類似の結合特性を有し、並びに天然のヌクレオチドに似た様式で代謝される、天然のヌクレオチドの公知のアナログを含む核酸を包含している。別に具体的に限定されない限りは、この用語はまた、ＰＮＡ（ペプチド核酸）を含むオリゴヌクレオチドアナログ、アンチセンス技術で使用されるＤＮＡのアナログ（ホスホロチオエート、ホスホロアミデートなど）も指す。別に指摘しない限りは、特定の核酸配列はまた、それらの保存的に修飾されたバリアント（非限定的に、縮重コドン置換を含む）及び相補的配列、並びに明確に示された配列を暗に包含する。具体的には、縮重コドン置換は、１又は複数の選択された（又は全ての）コドンの第三の位置が、混合された－塩基及び／又はデオキシイノシン残基により置換されている配列を作製することにより、実現されてよい(Batzer, M.A.ら、Nucleic Acid Res., 1991, 19, 5081-1585；Ohtsuka, E.ら、J. Biol. Chem., 1985, 260, 2605-2608；及び、Rossolini, G.M.ら、Mol. Cell. Probes, 1994, 8, 91-98)。
用語「単離された」及び「精製された」は、その天然の環境から実質的に又は本質的に除去された又は濃縮された物質を指す。例えば、単離された核酸は、それ又は試料中の他の核酸もしくは成分（タンパク質、脂質など）と通常隣接している拡散から分離されているものである。別の例において、ポリペプチドは、それが、その天然の環境において実質的に除去されるか又は濃縮されている場合に、精製される。核酸及びタンパク質の精製及び単離の方法は、文書化された方法論である。
用語「抗体」は、天然に又は部分的もしくは全体に合成により生成された免疫グロブリンを説明する。この用語はまた、抗原結合ドメインであるか又はそれに相同である、結合ドメインを有する任意のポリペプチド又はタンパク質も対象としている。ＣＤＲグラフト抗体もまた、この用語により企図される。本明細書において使用される用語抗体はまた、抗原へ特異的に結合する能力を保持している１又は複数の抗体の断片を意味することも理解されるであろう(一般に：Holliger, P.ら、Nature Biotech. 2005, 23 (9), 1126-1129参照)。
「アッセイする」により、実験条件の作出、並びに具体的実験条件に晒された特定の結果に関するデータの集積を意味する。例えば、酵素は、検出可能な基質に対し作用するそれらの能力を基に、アッセイされ得る。化合物は、特定の標的分子又は分子類に結合するその能力を基に、アッセイされ得る。
本明細書において使用される用語「調節している」又は「調節する」は、生物活性、特にプロテインキナーゼなどの特定の生体分子に関連した生物活性を変更する（すなわち、活性を増加又は減少する）作用を指す。例えば特定の生体分子のインヒビターは、酵素などの生体分子の活性を減少することにより、その生体分子、例えば酵素の活性を調節する。そのような活性は、典型的には、例えば酵素に関して、インヒビターについての化合物の阻害濃度（ＩＣ50）の観点から指定される。
モジュレーターであるか又はそうであり得る化合物の使用、試験又はスクリーニングの状況において、用語「接触している」は、化合物（複数可）が、生物内の特定の分子、複合体、細胞、組織に対し、又は化合物と他の特定された物質の間の可能性のある結合相互作用及び／もしくは化学反応が起こり得る他の特定された物質に対し、十分に近接するようにされることを意味する。
キナーゼ活性アッセイ
キナーゼ活性に関する数多くの様々なアッセイが、活性モジュレーターをアッセイし、及び／又は特定のキナーゼもしくはキナーゼ群に関するモジュレーターの特異性を決定するために、利用され得る。下記実施例において言及したアッセイに加え、当業者は、利用することができる他のアッセイを知っており、且つ特定の適用のためにアッセイを修飾することができる。例えば、キナーゼに関する多くの論文が、使用することができるアッセイを説明している。加えて代替のアッセイは、結合の決定を利用することができる。例えばいくつかのアッセイは、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）フォーマットにおいて、又はストレプトアビジンもしくはリン光体－特異的抗体に結合されるドナー試薬及びアクセプタ試薬を変動することによるAlphaScreen（化学増幅型ルミネセンスプロキシミティホモジニアスアッセイ）フォーマットの使用のいずれかでフォーマットすることができる。
本明細書において使用される用語「生物製剤特性」は、対象への投与時の化合物の溶解、吸収及び分布を含む、本開示の化合物又は複合体の薬物動態作用を指す。従って本開示の化合物の非晶質複合体などの、本開示の化合物の特定の固体形は、この活性化合物の改善された溶解及び吸収を提供することが意図され、これは典型的には、改善されたＣｍａｘ（薬物投与後の血漿内の最大到達濃度）及び改善されたＡＵＣ（すなわち、薬物投与後の薬物血漿濃度、対、時間の曲線下面積）を反映している。
代替の化合物形又は誘導体
本明細書において企図された化合物は、一般式及び具体的化合物の両方に関して説明されている。代替形又は誘導体は、例えば、（ａ）プロドラッグ、及び活性代謝産物、（ｂ）互変異性体、異性体（立体異性体及び位置異性体を含む）、並びにラセミ混合物、（ｃ）薬学的に許容される塩、並びに（ｄ）それらの水和物及び溶媒和物を含む、様々な結晶形、多形性又は非晶質固体を含む、固体形、及び他の形：を含む。
（ａ）プロドラッグ及び代謝産物
本式及び本明細書記載の化合物に加え、本開示はまた、プロドラッグ（一般に薬学的に許容されるプロドラッグ）、活性代謝誘導体（活性代謝産物）、及びそれらの薬学的に許容される塩も含む。
プロドラッグは、生理的条件下で代謝される場合、又は加溶媒分解により変換される場合に、所望の活性化合物を生じる、化合物又はそれらの薬学的に許容される塩である。一部のプロドラッグは、酵素的に活性化され、活性化合物を生じるか、或いは化合物は、更なる化学反応を受け、活性化合物を生じる。プロドラッグは、プロドラッグ形から単独の工程で活性形まで進行されるか、又はそれら自身活性があるかもしくは不活性である、１又は複数の中間体形を有してよい。The Practice of Medicinal Chemistry、第31-32章(編集Wermuth、Academic Press、サンディエゴ、CA.、2001)に記載されたように、プロドラッグは、２つの非－排他的なカテゴリーである、生体前駆体プロドラッグ及び担体プロドラッグに概念的に分けることができる。一般に、生体前駆体プロドラッグは、１又は複数の保護基を含み、且つ代謝又は加溶媒分解により活性形へ変換される、不活性であるか又は対応する活性薬物化合物と比べ低い活性を有する化合物である。活性薬物形及び任意の放出された代謝生成物は両方共、許容し得る低い毒性を有さなければならない。典型的には、活性薬物化合物の形成は、代謝プロセス又は反応に関与している。
（ｂ）互変異性体、立体異性体、及び位置異性体
一部の化合物は、互変異性を示してよいことが理解される。そのような場合、本明細書に提供される式は、ただ１つの可能性のある互変異性形を明白に描いている。従って、本明細書に提供される式は、描かれた化合物の任意の互変異性形を表しすことを意図し、並びに式の図により描かれた具体的な互変異性形のみに限定されないことは理解される。同様に、本開示に従う化合物の一部は、立体異性体として、すなわち原子の空間的配向は異なるが、共有結合した原子と同じ原子結合性を有するものとして、存在してよい。反対を特定しない限り、そのような立体異性体形は全て、本明細書に提供される式に含まれる。
一部の実施態様において、本開示のキラル化合物は、単独の異性体を少なくとも８０％（６０％鏡像体過剰（”ｅ．ｅ．”）又はジアステレオマー過剰（”ｄ．ｅ．”））、又は少なくとも８５％（７０％ｅ．ｅ．又はｄ．ｅ．）、９０％（８０％ｅ．ｅ．又はｄ．ｅ．）、９５％（９０％ｅ．ｅ．又はｄ．ｅ．）、９７．５％（９５％ｅ．ｅ．又はｄ．ｅ．）、もしくは９９％（９８％ｅ．ｅ．又はｄ．ｅ．）含む形である。当業者に一般に理解されるように、１つのキラル中心を有する光学的に純粋な化合物は、２種の可能なエナンチオマーの１つから本質的になるもの（すなわち、鏡像異性的に純粋）であり、並びに２つ以上のキラル中心を有する光学的に純粋な化合物は、ジアステレオマー的に純粋および鏡像異性的に純粋の両方であるものである。一部の実施態様において、この化合物は、当該技術分野において公知の方法（例えば、再結晶技術、キラル合成技術（光学的に純粋な出発材料からの合成を含む）、及びキラルカラムを使用するクロマトグラフィー分離により、調製及び／又は単離される光学的に純粋な形など、光学的に純粋な形で存在する。
（ｃ）薬学的に許容される塩
反対を特定しない限り、本明細書の化合物の仕様は、そのような化合物の薬学的に許容される塩を含む。
本明細書において使用する用語「薬学的に許容される塩」は、正当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などを伴わずに、且つ妥当なベネフィット／リスク比と釣り合っている、ヒト又は下等動物の組織と接触して使用するのに適しているそれらの塩を指す。薬学的に許容される塩は、当該技術分野において周知である。例えば、薬学的に許容される塩は、S. M. Bergeら、J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19に説明されており、これは引用により本明細書中に組み込まれている。
（ｄ）その他の化合物形
固体である物質の場合、当業者により、これらの化合物及び塩は、異なる結晶形又は多形体形で存在してよいか、又は共晶として製剤化されてよいか、又は非晶質形であってよいか、又はそれらの任意の組合せであってよい（例えば、部分的に結晶、部分的に非晶質、又は多形体の混合物）ことが理解され、それらの全ては、本開示及び特定された式の範囲内であることが意図される。
薬学的に許容される組成物
用語「薬学的に許容される担体」、「薬学的に許容される賦形剤」、「生理的に許容し得る担体」、又は「生理的に許容し得る賦形剤」は、薬学的に許容される物質、組成物、又はビヒクル、例えば液体又は固体の充填剤、希釈剤、溶媒、又は封入材料を指す。一実施態様において、各成分は、医薬製剤の他の構成成分と適合可能であり、且つ妥当なベネフィット／リスク比と釣り合って、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、免疫原性、又は他の問題点もしくは合併症を伴うことなく、ヒト及び動物の組織又は器官と接触して使用するのに適しているという意味で、「薬学的に許容される」。「Remington:薬学の科学と実践」、第21版; Lippincott Williams & Wilkins、フィラデルフィア、Pa., 2005；「医薬賦形剤ハンドブック」、第6版；Roweら編集; The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: 2009；「医薬添加剤ハンドブック」、第3版、Ash及びAsh編集; Gower Publishing Company: 2007；Pharmaceutical Preformulation and Formulation、第2版; Gibson編集; CRC Press LLC：ボカラトン、Fl., 2009を参照されたい。用語「薬学的に許容される担体、アジュバント、又はビヒクル」は、それと共に製剤化されている化合物の医薬活性を破壊しない、無毒の担体、アジュバント、又はビヒクルを指す。別の実施態様に従い、本開示は、本開示の化合物又はそれらの薬学的に許容される誘導体、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、又はビヒクルを含有する組成物を提供する。
「薬学的に許容される誘導体」は、レシピエントへの投与時に、直接的又は間接的のいずれかで、本開示の化合物又はそれらの阻害活性のある代謝産物もしくは残基を提供することが可能である、本開示の化合物の任意の無毒の塩、エステル、エステルの塩又は他の誘導体を意味する。
本明細書において使用される用語「阻害活性のあるそれらの代謝産物又は残基」は、それらの代謝産物又は残基は、ＰＩＭ３又はその変異体のインヒビターでもあることを意味する。
本開示の組成物は、経口、非経口、吸入スプレーにより、局所的、経直腸、経鼻、口腔内、経膣、又は移植された貯蔵庫を介して投与されてよい。本明細書において使用される用語「非経口」は、皮下、静脈内、筋肉内、動脈内、関節滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、肝内、病巣内及び頭蓋内の注射又は注入技術を含む。
好ましくは、本組成物は、経口、腹腔内又は静脈内に投与される。この開示の組成物の無菌の注射可能な形は、水性又は油性の懸濁液であってよい。これらの懸濁液は、好適な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を使用し、当該技術分野において公知の技術に従い製剤化されてよい。この開示の薬学的に許容される組成物は、カプセル剤、錠剤、水性懸濁剤又は液剤を含むが、これらに限定されるものではない、任意の経口的に許容し得る剤形で、経口投与されてよい。
あるいは、この開示の薬学的に許容される組成物は、直腸投与のための坐剤の形状で投与されてよい。これらは、本物質を、室温では固体であるが、直腸温度では液体であり、従って直腸内で溶融し、薬物を放出する、好適な無刺激性の賦形剤と混合することにより、調製することができる。そのような材料は、カカオバター、蜜ろう及びポリエチレングリコールを含む。
この開示の薬学的に許容される組成物はまた、特に、治療の標的が眼、皮膚、又は下部腸管の疾患を含む局所適用により容易にアクセス可能な領域又は器官を含む場合、局所的に投与されてよい。本明細書において使用される用語「インヒビター」は、測定可能な親和性で、標的プロテインキナーゼに結合及び／又は阻害する化合物として定義される。特定の実施態様において、インヒビターは、約５０μＭ未満、約１μＭ未満、約５００ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、又は約１ｎＭ未満のＩＣ50及び／又は結合定数を有する。
本開示の化合物は、検出可能な部分に繋がれてよい。当業者は、検出可能な部分は、好適な置換基を介して、提供された化合物に結合されてよいことを認めるであろう。本明細書において使用される用語「好適な置換基」は、検出可能な部分への共有結合が可能である部分を指す。
本明細書において使用される用語「検出可能な部分」は、用語「標識」と互換的に使用され、並びに例えば一次標識及び二次標識など検出されることが可能な部分に関連している。例えば放射性同位元素（例えば、トリチウム、32Ｐ、33Ｐ、35Ｓ、又は14Ｃ）、質量タグ、及び蛍光標識などの一次標識は、更なる修飾を伴わずに検出することができるシグナルを発生するレポーター基である。検出可能な部分はまた、ルミネセンス基及びリン光基を含む。
本明細書において使用される用語「測定可能な親和性」及び「測定できる阻害」とは、本開示の化合物、又はその組成物、及びタンパク質を含有する試料と、該化合物、又はその組成物の非存在下で、プロテインキナーゼを含有する同等の試料の間でのプロテインキナーゼ活性の測定可能な変化を意味する。
本明細書において使用される用語「ＰＩＭ－媒介した」障害又は病態は、本明細書において使用されるようにＰＩＭキナーゼ、又はその変異体が、役割を果たすことが分かっている任意の疾患又は他の有害な病態を意味する。従って、本開示の別の実施態様は、１又は複数のＰＩＭキナーゼ又はその変異体が、役割を果たすことがわかっている、１又は複数の疾患を治療するか又はその重症度を軽減することに関する。具体的には、本開示は、増殖性障害から選択される疾患又は病態を治療するか又はその重症度を軽減する方法に関し、ここで該方法は、本開示の化合物又は組成物を、それを必要とする患者へ投与することを含む。
一部の実施態様において、本開示は、様々な癌形から選択された１又は複数の障害を治療するか又はその重症度を軽減する方法を提供する。一部の実施態様において、癌は、固形腫瘍に関連している。特定の実施態様において、癌は、乳癌、膵臓癌、肝細胞癌、前立腺癌、胃癌、膠芽細胞腫、肺癌、頭頸部癌、結腸直腸癌、膀胱癌、又は非－小細胞肺癌である。場合によっては、本開示は、扁平上皮癌、唾液腺癌、卵巣癌、又は膵臓癌から選択される１又は複数の障害を治療するか又はその重症度を軽減する方法を提供する。別の実施態様において、癌は、白血病、リンパ腫又は骨髄腫などの可溶性腫瘍に関連している。
一部の実施態様において、本開示は、喘息、アレルギー、移植拒絶反応、移植片対宿主拒絶反応などの１又は複数の免疫障害又は過敏障害、関節リウマチ、筋萎縮性側索硬化症、及び多発性硬化症などの自己免疫疾患、並びに白血病、リンパ腫、及び骨髄腫などの固形及び血液系悪性疾患を治療するか又はその重症度を軽減する方法を提供し、ここで該方法は、本開示の組成物を、それを必要とする患者へ投与することを含む。治療される特定の病態、又は疾患に応じて、その病態を治療するために通常投与される追加の治療薬もまた、この開示の組成物中に存在してよい。本明細書において使用されるような、特定の疾患、又は病態を治療するために通常投与される追加の治療薬は、「治療される疾患、又は病態に好適である」として公知である。例えば、本開示の化合物、又はそれらの薬学的に許容される組成物は、増殖性疾患及び癌を治療するために、化学療法薬と組合せて投与される。公知の化学療法薬の例は、中でも、アドリアマイシン、デキサメタゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、トポテカン、タキソール、インターフェロン、白金誘導体、タキサン（例えばパクリタキセル）、ビンカアルカロイド（例えばビンブラスチン）、アントラサイクリン（例えばドキソルビシン）、エピポドフィロトキシン（例えばエトポシド）、シスプラチン、ｍＴＯＲインヒビター（例えばラパマイシン）、メトトレキセート、アクチノマイシンＤ、ドラスタチン１０、コルヒチン、エメチン、トリメトレキサート、メトプリン、シクロスポリン、ダウノルビシン、テニポシド、アンホテリシン、アルキル化剤（例えばクロラムブシル）、５－フルオロウラシル、カンプトテシン、シスプラチン、メトロニダゾール、及びグリーベック（商標）を含むが、これらに限定されるものではない。別の実施態様において、本開示の化合物は、アバスチン（商標）又はベクチビックス（商標）などの、生物剤と組合せて投与される。特定の実施態様において、本開示の化合物、又はそれらの薬学的に許容される組成物は、抗増殖薬又は化学療法薬と組合せて投与される。
本明細書において使用される用語「組合せ」、「組合せた」及び関連用語は、この開示に従う治療薬の同時又は連続投与を指す。例えば、本開示の化合物は、個別の単位剤形中で又は単独の単位投与剤形中で一緒に、別の治療薬と同時に又は連続して投与されてよい。従って本開示は、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物、追加の治療薬、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、又はビヒクルを含有する単独の単位投与剤形を提供する。単独の剤形を作製するために担体物質と組合せられてよい、（先に記載された追加の治療薬を含有するそれらの組成物中の）本発明の化合物及び追加の治療薬の両方の量は、治療される宿主及び特定の投与様式に応じて変動するであろう。好ましくは、この開示の組成物は、本発明の化合物の０．０１～１００ｍｇ／ｋｇ体重／日の間の用量が投与され得るように、製剤化されるべきである。
追加の治療薬を含有するそれらの組成物において、その追加の治療薬及びこの開示の化合物は、相乗的に作用してよい。従ってそのような組成物中の追加の治療薬の量は、その治療薬のみを利用する単剤療法において必要とされる量未満であろう。そのような組成物において、追加の治療薬の０．０１～１，０００ｍｇ／ｋｇ体重／日の間の用量が、投与され得る。この開示の組成物中に存在する追加の治療薬の量は、単独の物質としてその治療薬を含有する組成物中で通常投与される量を超えないであろう。好ましくはここで開示された組成物中の追加の治療薬の量は、単独の治療的活性物質としてその物質を含有する組成物中に通常存在する量の約５０％～１００％の範囲であろう。
本開示の化合物、又はその医薬組成物はまた、プロテーゼ、人工弁、血管グラフト、ステント及びカテーテルなどの、移植可能な医療用具をコーティングするための組成物に混入されてもよい。
薬物耐性が、標的化された療法への重大なチャレンジとして出現している。例えば、薬物耐性は、グリーベック（商標）及びイレッサ（商標）、並びに数種の他の開発中のキナーゼインヒビターについて報告されている。薬物耐性は、例えば、癌治療に使用されるインヒビターｃＫｉｔ及びＥＧＦＲキナーゼについて報告されている。不可逆的インヒビターは、プロテインキナーゼの薬物耐性型に対して効果があることが報告されている(Kwak, E.L.ら、Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 2005, 102, 7665-7670参照)。本開示の化合物は、プロテインキナーゼの薬物耐性型の効果的インヒビターであることができる。
本明細書において使用される用語「臨床的薬物耐性」とは、薬物標的における変異の結果として薬物治療に対する薬物標的の感受性が失われることを指す。本明細書において使用される用語「耐性」は、標的タンパク質又はそのプロモーター、及び／又は標的のタンパク質配列をコードしている野生型の核酸配列の変化を指し、その変化は、標的タンパク質に対するインヒビターの阻害作用を減少又は破棄する。例えば、ＰＩＭ３インヒビター耐性はまた、ＰＩＭ１などの別のプロテインキナーゼの発現に関与することができ、このことはＰＩＭ３キナーゼ活性の喪失を補う。本明細書記載の化合物及び組成物により阻害される及びそれに対して本明細書に記載の方法が有用であるキナーゼの例は、ＰＩＭキナーゼ、又はその変異体である。
標的キナーゼ、特にＰＩＭキナーゼ及び好ましくはＰＩＭ３、又はその変異体のインヒビターとしてこの開示において利用される化合物の活性は、インビトロ、インビボ又は細胞株においてアッセイされてよい。インビトロアッセイは、活性化された標的キナーゼ、又はその変異体の、リン酸化活性及び／又はその後の機能的結果、又はＡＴＰａｓｅ活性のいずれかの阻害を決定するより多くのアッセイを含む。別のインビトロアッセイは、標的キナーゼ、例えばＰＩＭ３に結合するインヒビターの能力を定量する。インヒビター結合は、結合前にインヒビターを放射標識するか、インヒビター／標的キナーゼ複合体を単離するか、及び結合された放射標識の量を決定することにより、測定されてよい。或いは、インヒビター結合は、新規インヒビターが、既知の放射性リガンドに結合された標的キナーゼと一緒にインキュベーションされる競合実験を試行することにより、決定されてよい。特定のキナーゼ、又はその変異体のインヒビターとしてこの開示において利用される化合物をアッセイするための詳細な条件は、以下の実施例に説明されている。
プロテインキナーゼは、ＡＴＰ又はＧＴＰから、タンパク質基質上に配置されたアクセプタアミノ酸残基（例えば、チロシン、セリン、及びスレオニン残基）へのリン酸基の転移を触媒する酵素のクラスである。受容体キナーゼは、リン酸化事象を介して、二次的メッセージ伝達エフェクター(secondary messaging effector)により、細胞の外側から、内側へ、シグナルを伝達するように作用する。増殖、糖利用、タンパク質合成、血管新生、細胞成長、及び細胞生存を含むこれらのシグナルにより、様々な細胞プロセスが促進される。
本明細書に使用される用語「治療」、「治療する」及び「治療している」は、本明細書記載の疾患又は障害、もしくはそれらの１又は複数の症状の進行の逆行、緩和、発症の遅延、又は阻害を指す。一部の実施態様において、治療は、１又は複数の症状が顕在化した後に、投与されてよい。別の実施態様において、治療は、症状の非存在下で投与されてよい。例えば、治療は、症状の発症前に感受性のある個体に投与されてよい（例えば、症状の病歴を考慮し、及び／又は遺伝的もしくは他の感受性因子を考慮し）。治療はまた、例えば、それらの再発を予防又は遅延するために、症状が消散した後も継続されてよい。
提供された化合物は、標的ＰＩＭキナーゼのインヒビターであり、並びにＰＩＭキナーゼの活性に関連した１又は複数の障害の治療に有用である。従って特定の実施態様において、本開示は、本開示の化合物、又はそれらの薬学的に許容される組成物を、それを必要とする患者へ投与する工程を含む、ＰＩＭ－媒介した障害を治療する方法を提供する。
一部の実施態様において、この開示の化合物は、任意にＰＩＭインヒビタークリアランス物質と組合せて投与される。一部の実施態様において、この開示の化合物は、任意に、ＰＩＭの上流エフェクターの活性化又は活性を直接又は間接に減少する化合物と組合せて投与される。例えば一部の実施態様において、Ｊａｎｕｓキナーゼ（ＪＡＫ１－３）の活性を阻害する化合物が組合せて使用され、これによりＰＩＭキナーゼの活性化を減少する。例えば、ＪＡＫインヒビターであるトファシチニブの使用は、活性ＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５のリン酸化及び生成を減少し、その結果ＰＩＭ３の発現、活性又は活性化を減少する(Hodge, J.A.ら、Clin. Exp. Rheumatol., 2016; 34, 318-328参照)。一部の実施態様において、ＰＩＭ３活性化はまた、ＳＴＡＴ３及びＳＴＡＴ５へ直接結合する小型分子により減少される。一部の実施態様において、ＰＩＭ３インヒビターは、ＢＡＤに直接結合する物質、又はこれらの下流エフェクターのセリン残基（例えば、ＢＡＤ Ｓｅｒ１１２）のリン酸化からＰＩＭキナーゼを保護する物質と組合せて使用される。
一部の実施態様において、本開示の化合物は、ＰＩＭの下流標的の脱リン酸化を阻害するペプチド、ポリペプチド、又は小型分子を含む、ＰＩＭキナーゼのレベルを減少する化合物と組合せて任意に投与され、その結果下流標的のリン酸化は、ＰＩＭレベルのダウンレギュレーションにつながるレベルであり続ける。一部の実施態様において、ＰＩＭ活性は、ＰＩＭの上流レギュレーター及び／又は下流標的の活性化及び／又は阻害を介して、減少又は阻害される。一部の実施態様において、ＰＩＭのタンパク質発現は、ダウンレギュレートされる。一部の実施態様において、細胞内のＰＩＭの量は、減少される。一部の実施態様において、細胞内のＰＩＭ３タンパク質レベルを減少する化合物はまた、細胞内のＰＩＭキナーゼの活性を減少する。一部の実施態様において、ＰＩＭタンパク質レベルを減少する化合物は、細胞内のＰＩＭ活性を減少しない。一部の実施態様において、細胞内のＰＩＭ活性を増加する化合物は、細胞内のＰＩＭタンパク質レベルを減少する。
ＰＩＭインヒビター及び第二の治療薬の任意の組合せは、本明細書記載のいずれかの方法と適合可能である。
加えて、ＰＩＭインヒビターは任意に、患者への相加的又は相乗的ベネフィットを提供する手順と組合せて使用される。単なる例として、患者は、本明細書記載の方法に治療的及び／又は予防的ベネフィットを認めることが予想され、ここでＰＩＭインヒビターの医薬組成物及び／又は他の治療薬との組合せは、個体が、特定の疾患又は病態に関連している変異体遺伝子のキャリアであるかどうかを決定する遺伝子試験と組合せられる。
ＰＩＭインヒビター及び追加の療法は、疾患又は病態の発生前、発生時、又は発生後に、任意に投与され、並びにＰＩＭインヒビターを含有する組成物の投与のタイミングは、一部の実施態様において変動する。従って例えばＰＩＭインヒビターは、予防薬として使用され、並びに疾患又は病態の発生を予防するために、病態又は疾患を発生する傾向を持つ個体へ継続して投与される。
医薬組成物、製剤、及び投与方法
治療的有効量の任意の本明細書記載の化合物（例えば、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物）を含有する組成物が、特定の実施態様において本明細書において提供される。医薬組成物は、活性化合物の医薬として使用される調製品への加工処理を促進する賦形剤及び補助剤を含む１又は複数の生理的に許容し得る担体を用い、製剤化される。適切な製剤は、選択された投与経路によって決まる。医薬組成物のまとめは、例えば、「Remington:薬学の科学と実践」、第19版(イーストン、Pa.: Mack Publishing社、1995)；Hoover, John E.、「Remington薬科学」、Mack Publishing社、イーストン、Pa. 1975；Liberman, H. A.及びLachman, L.編集、Pharmaceutical Dosage Forms、Marcel Decker社、ニューヨーク、N.Y., 1980；並びに、Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems、第7版(Lippincott Williams & Wilkins社, 1999)において認められる。
ＰＩＭインヒビター及び薬学的に許容される希釈剤（複数可）、賦形剤（複数可）、又は担体（複数可）を含有する医薬組成物が、本明細書に提供される。加えて、ＰＩＭインヒビターは、併用療法として、その中で他の活性成分と混合されている医薬組成物として、任意に投与される。一部の実施態様において、本医薬組成物は、他の薬剤又は医薬品、担体、アジュバント、例えば保存剤、安定化剤、湿潤剤又は乳化剤など、溶解促進剤、浸透圧を調節するための塩、及び／又は緩衝液などを含有している。加えて医薬組成物はまた、他の治療的価値のある物質も含有する。本明細書において使用される医薬組成物は、ＰＩＭインヒビターの、例えば担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、及び／又は賦形剤などの他の化学成分との混合物を指す。本医薬組成物は、ＰＩＭインヒビターの生物への投与を促進する。本明細書に提供される治療及び使用の方法の実践において、ＰＩＭインヒビターの治療的有効量が、医薬組成物中で、治療されるべき病態、疾患、又は障害を有する哺乳動物へ、投与される。好ましくは、この哺乳動物は、ヒトである。治療的有効量は、病態の重症度及び病期、個体の年齢及び相対的健康状態、使用されるＰＩＭインヒビターの効能及び他の要因に応じて変動する。ＰＩＭインヒビターは任意に、単独で、又は混合物の成分として１又は複数の治療薬と組合せて使用される。
本明細書記載の医薬製剤は、水性液体分散剤、自己乳化型分散剤、固溶体、リポソーム分散剤、エアロゾル、固体剤形、散剤、即時放出製剤、制御放出製剤、速溶性製剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、遅延放出製剤、持続放出製剤、パルス放出製剤、多粒子製剤、並びに混合型即時及び制御放出製剤を含むが、これらに限定されるものではない。本医薬組成物は、遊離酸もしくは遊離塩基の形で、又は薬学的に許容される塩の形で、活性成分として、少なくとも１種のＰＩＭインヒビターを含むであろう。加えて本明細書記載の方法及び医薬組成物は、Ｎ－オキシド、結晶形（多形体としても公知）、並びに同じ活性型を有するこれらのＰＩＭインヒビターの活性代謝産物の使用を含む。「担体物質」は、医薬品中で通常使用される任意の賦形剤を含み、且つＰＩＭインヒビターなどの本明細書に開示された化合物との相溶性、並びに所望の剤形の放出プロファイル特性を基に選択されるべきである。
経口使用のための医薬調製品は、１又は複数の固体賦形剤を、ＰＩＭインヒビターと混合し、生じる混合物を任意に粉砕し、並びに望ましいならば錠剤もしくは糖衣錠コアを得るために、好適な補助剤の添加後、顆粒の混合物を加工することにより、任意に得られる。好適な賦形剤は、例えば、乳糖、ショ糖を含む糖、マンニトール、又はソルビトールなどの充填剤；例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースなどの、セルロース調製品；又は、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰもしくはポビドン）又はリン酸カルシウムなどのその他のものを含む。望ましいならば、崩壊剤、例えば架橋クロスカルメロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、寒天、又はアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩が添加される。糖衣錠コアは、好適なコーティングを備えている。この目的のために、濃縮された糖溶液が一般に使用され、これは任意にアラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カーボポールゲル、ポリエチレングリコール、及び／又は二酸化チタン、ラッカー液、並びに好適な有機溶媒もしくは溶媒混合物を含む。活性化合物の投与量の異なる組合せの識別又は特徴付けのために、染料又は顔料が、錠剤又は糖衣錠コーティングに任意に添加される。
一部の実施態様において、本明細書に開示された固体剤形は、錠剤（懸濁液錠剤、速溶性錠剤、咀嚼錠、急速崩壊錠、発泡錠、又はカプレットを含む）、丸剤、散剤（無菌包装された散剤、分散性散剤、又は発泡散剤を含む）、カプセル剤（軟カプセル又は硬カプセルの両方、例えば、動物由来のゼラチン又は植物由来のＨＰＭＣから作製されたカプセル剤、又は「スプリンクルカプセル」を含む）、固体分散剤、固溶体、生分解性剤形、制御放出製剤、パルス放出剤形、多粒子剤形、ペレット、顆粒剤、又はエアロゾルの形状である。例として、実施例２０は、錠剤である経口固体剤形を説明している。
PIMインヒビターを含有する、本明細書記載の製剤を含む、医薬用固体経口剤形は、PIMインヒビターの制御放出を提供するために任意に更に製剤化される。制御放出は、延長された期間にわたり所望のプロファイルに従うそれが混入されている剤形からの、PIMインヒビターの放出を指す。制御放出プロファイルは、例えば、持続放出、延長された放出、パルス放出、及び遅延放出のプロファイルを含む。
別の実施態様において、ＰＩＭインヒビターを含有する、本明細書記載の製剤は、パルス剤形を使用し送達される。パルス剤形は、管理された時間のずれの後予め決められた時点での、又は特定の部位での、１又は複数の即時放出パルスを提供することが可能である。ＰＩＭインヒビターを含有する本明細書記載の製剤を含むパルス剤形は、米国特許第５，０１１，６９２号；第５，０１７，３８１号、第５，２２９，１３５号、及び第５，８４０，３２９号において説明されたものを含むが、これらに限定されるものではない、様々なパルス製剤を用いて、任意に投与される。本製剤との使用に適した他のパルス放出剤形は、例えば、米国特許第４，８７１，５４９号；第５，２６０，０６８号；第５，２６０，０６９号；第５，５０８，０４０号；第５，５６７，４４１号；及び第５，８３７，２８４号を含むが、これらに限定されるものではない。
経口投与のための液体製剤剤形は、任意に、非限定的に、薬学的に許容される水性経口分散剤、乳剤、液剤、エリキシル剤、ゲル剤、及びシロップ剤を含む群から選択される水性懸濁液である。例えば、Singhら、Encyclopedia of Pharmaceutical Technology、第2版、754-757頁(2002)参照。ＰＩＭインヒビターに加えて、これらの液体剤形は、任意に、添加剤、例えば：（ａ）崩壊剤；（ｂ）分散剤；（ｃ）湿潤剤；（ｄ）少なくとも１種の保存剤、（ｅ）増粘剤、（ｆ）少なくとも１種の甘味剤、及び（ｇ）少なくとも１種の香味剤などを含む。一部の実施態様において、水性分散剤は、結晶形成するインヒビターを更に含む。
一部の実施態様において、本明細書記載の医薬製剤は、自己乳化型薬物送達システム（ＳＥＤＤＳ）である。乳剤は、別の相中の１つの非混和相の分散剤であり、通常液滴を形成する。一般に、乳剤は、激しい機械的分散により作製される。乳剤又はマイクロエマルジョンとは対照的に、ＳＥＤＤＳは、過剰な水に添加される場合に、外部の機械的分散又は激しい攪拌を伴わずに、乳剤を自然発生的に形成する。ＳＥＤＤＳの利点は、溶液全体に液滴を分布するために、穏やかな混合のみが必要であることである。加えて、水又は水相は、投与の直前に、任意に添加され、このことは、不安定な又は疎水性の活性成分の安定性を確実にする。従って、ＳＥＤＤＳは、疎水性活性成分の経口及び非経口の送達に関して、効果的送達システムを提供する。一部の実施態様において、ＳＥＤＤＳは、疎水性活性成分の生物学的利用能の改善を提供する。自己乳化型剤形の製造方法は、例えば、米国特許第５，８５８，４０１号；第６，６６７，０４８号；及び、第６，９６０，５６３号を含むが、これらに限定されるものではない。
好適な鼻腔内製剤は、例えば、米国特許第４，４７６，１１６号及び第５，１１６，８１７号に説明されたもの、並びに活性成分に添加されるある量の水を含む。ｐＨ調節剤、乳化剤もしくは分散剤、保存剤、界面活性剤、ゲル化剤、又は緩衝剤及び他の安定化剤及び可溶化剤などの少量の他の構成成分が、任意に存在する。
吸入による投与に関して、ＰＩＭインヒビターは、任意にエアロゾル、ミスト又は粉末の形状である。本明細書記載の医薬組成物は、好都合なことに、好適な噴射剤、例えば、ジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素又は他の好適な気体などを使用する、加圧パック又はネブライザーからのエアロゾルスプレー放出の形状で送達される。加圧されたエアロゾルの場合、単位用量は、定量された量が送達される、バルブにより決定される。吸入器又は注入器において使用するための、単に例としてのゼラチンなどの、カプセル及びカートリッジは、ＰＩＭインヒビター及び乳糖又はデンプンなどの好適な粉末基剤の粉末混合物を含有するよう、製剤化される。
ＰＩＭインヒビターの経皮製剤は、皮膚を通じて投与される。本明細書記載の経皮製剤は、少なくとも３種の成分を含む：（１）ＰＩＭインヒビターの製剤；（２）浸透増強剤；及び、（３）水性アジュバント。加えて経皮製剤は、非限定的に、ゲル化剤、クリーム及び軟膏の基剤などの成分を含む。一部の実施態様において、経皮製剤は更に、吸収を増強し、及び皮膚からの経皮製剤の脱落を防止するために、物質に対する織物又は非織物の裏当てを含む。別の実施態様において、本明細書記載の経皮製剤は、皮膚への拡散を促進するために、飽和された又は過剰飽和された状態を維持する。筋肉内、皮下、又は静脈内注射に適したＰＩＭインヒビターを含有する製剤は、生理的に許容し得る無菌の水性又は非水性の溶液、分散剤、懸濁剤又は乳剤、並びに無菌の注射用溶液又は分散液に再構成するための無菌散剤を含む。
投薬方法及び治療レジメンの例
ＰＩＭ３インヒビターは任意に、少なくとも一部は、症状の改善から恩恵がある、疾患又は障害の予防的及び／又は治療的処置のための医薬品の調製に使用される。加えて、そのような治療を必要とする個体において本明細書記載の任意の疾患又は病態を治療する方法は、少なくとも１種の本明細書記載のＰＩＭ３インヒビター、又はその薬学的に許容される塩、薬学的に許容されるＮ－オキシド、医薬活性のある代謝産物、薬学的に許容されるプロドラッグ、又は薬学的に許容される溶媒和物を、該個体に対する治療的有効量で含有する、医薬組成物の投与に関与している。
患者の病態が改善しない場合は、医師の裁量により、患者の疾患又は病態の症状を改善、又はそうでなければ管理もしくは限定するために、ＰＩＭ３インヒビターの投与が、任意に慢性的に、すなわち患者の人生の期間を通じてを含む延長された期間、投与される。
患者の状態が改善する場合、医師の裁量により、ＰＩＭ３インヒビターの投与は、任意に継続して与えられるか；或いは、投与される薬物の投与量は、ある期間にわたり、一時的に減少又は一時的に中断される（すなわち、「休薬期間」）。休薬の長さは、任意に２日間～１年間の間を変動し、単に例として、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、７日間、１０日間、１２日間、１５日間、２０日間、２８日間、３５日間、５０日間、７０日間、１００日間、１２０日間、１５０日間、１８０日間、２００日間、２５０日間、２８０日間、３００日間、３２０日間、３５０日間、又は３６５日間を含む。休薬時の投与量減少は、１０％～１００％を含み、単に例として、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％を含む。一旦患者の病態の改善が生じたならば、必要に応じて、維持量が投与される。引き続き、用量又は投与頻度は、症状の関数として、改善された疾患、障害又は病態が続くレベルにまで両方共減少される。
一部の実施態様において、患者は、症状の何らかの再発を基に長期間の断続的治療を必要とする。一部の実施態様において、本明細書記載の医薬組成物は、正確な用量の単回投与に適した単位剤形である。単位剤形において、この製剤は、１又は複数のＰＩＭインヒビターの適量を含む、単位投与量に分割される。一部の実施態様において、単位用量は、製剤の個別の量を含有するパッケージの形状である。非限定的例は、包装された錠剤又はカプセル剤、及びバイアル又はアンプル内の散剤である。一部の実施態様において、水性懸濁組成物は、単回－投与量の再び密封できない容器中に包装されている。或いは、複数回－投与量の再び密封できる容器が使用され、その場合典型的には、組成物中に保存剤を含む。単なる例として、非経口注射用の製剤は、単位剤形で提供され、これはアンプル、又は添加された保存剤を伴う反復投与量容器を含むが、これらに限定されるものではない。ＰＩＭ３インヒビターに適した１日量は、約０．０１～約２．５ｍｇ／ｋｇ体重である。非限定的にヒトを含む比較的大型の哺乳動物における指定された１日量は、約０．５ｍｇ～約１０００ｍｇの範囲であり、好都合なことに、非限定的に１日に最大４回又は長時間放出型を含む、分割量で投与される。経口投与に好適な単位剤形は、約１～約５００ｍｇの活性成分、約１～約２５０ｍｇの活性成分、又は約１～約１００ｍｇの活性成分を含む。前述の範囲は、単なる示唆であり、個別の治療レジメンに関する変数の数は大きく、これらの推奨値からのかなりの偏位は珍しいことではない。そのような用量は、使用されるＰＩＭインヒビターの活性、治療される疾患又は病態、投与様式、個体の必要要件、治療される疾患又は病態の重症度、並びに医師の判断を含むが、これらに限定されるものではない、数多くの変数に応じて、任意に変更される。
そのような治療レジメンの毒性及び治療有効性は、ＬＤ50（集団の５０％の致死量）及びＥＤ50（集団の５０％において治療的に有効な投与量）の決定を含むが、これらに限定されるものではない、細胞培養物又は実験動物において任意に決定される。毒性効果と治療効果の間の投与量比は、治療係数であり、これはＬＤ50とＥＤ50の間の比として表される。高い治療係数を示すＰＩＭインヒビターが、好ましい。細胞培養アッセイ及び動物試験から得られたデータは、ヒトにおける使用に関する用量範囲の処方において任意に使用される。そのようなＰＩＭインヒビターの用量は、最小毒性を伴うＥＤ50を含む循環濃度の範囲内であることが好ましい。用量は、使用される剤形及び利用される投与経路に応じて、この範囲内を、任意に変動する。
ＰＩＭ３インヒビターの同定及び特徴決定のためのアッセイ
小型分子ＰＩＭインヒビターは、例えば、米国特許第８，２８３，３５６Ｂ２号、第７，６７１，０６３Ｂ２号、及び第８，４３１，５８９Ｂ２号に記載された、ハイスループットのインビトロアッセイ又は細胞アッセイにおいて任意に同定される。本明細書記載の方法に適したＰＩＭインヒビターは、天然（例えば、細菌培養物、土壌、又は植物抽出物）及び合成の両方を含む様々な給源から入手可能である。例えば、候補ＰＩＭインヒビターは、コンビナトリアルライブラリー、すなわち、数多くの化学「ビルディングブロック」の組合せにより、化学合成又は生物学的合成のいずれかにより作製された多様な化学的化合物の収集物から単離される。例えば、ポリペプチドライブラリーなどの線状コンビナトリアル化学ライブラリーは、所定の化合物の長さ（すなわち、ポリペプチド化合物中のアミノ酸の数）について全ての可能な様式でアミノ酸と称される化学ビルディングブロックのセットを組合せることにより、形成される。１００万種の化学的化合物が、所望のように、化学ビルディングブロックのそのようなコンビナトリアル混合を通じて、合成され得る。理論的には、１００の交換可能な化学ビルディングブロックの体系的コンビナトリアル混合は、１００００万種の四量体化合物又は１００億の五量体化合物の合成を生じる(例えば、Gallop, M.A.ら、J. Med. Chem., 1994, 37(9), 1233-1251参照)。ライブラリーの各メンバーは、単独であってよいか、及び／又は混合物の一部であってよい（例えば、「圧縮ライブラリー」）。このライブラリーは、精製された化合物を含んでよく、及び／又は「ダーティ」（すなわち、かなりの不純物を含む）であってよい。コンビナトリアル化学ライブラリーの調製及びスクリーニングは、文書化された方法論である(Cabilly, S.編集、Combinatorial Peptide Library Protocols in Methods in Molecular Biology, Humana Press、トトワ、N.J., (1998)参照)。コンビナトリアル化学ライブラリーは、以下を含むが、これらに限定されるものではない：例えば、DeWitt, S.H.ら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 1993, 90, 6909-6913に記載されたような、ヒダントイン、ベンゾジアゼピン、及びジペプチドなどのダイバーソマー(diversomers)；Chen, C.ら、J. Am. Chem. Soc., 1994,116, 2661-2662に記載されたような、小型化合物ライブラリーの類似の有機合成；Cho, C.Y.ら、Science, 1993, 261, 1303-1305に記載されたような、オリゴカルバメート；Campbell, D.A.、Bermak, J.C.、J. Org. Chem., 1994, 59, 658-660に記載されたような、ペプチジルホスホネート；並びに、例えば、チアゾリジノン及びメタチアザノン（米国特許第５，５４９，９７４号）、ピロリジン（米国特許第５，５２５，７３５号及び第５，５１９，１３４号）、ベンゾジアゼピン（米国特許第５，２８８，５１４号）を含む、小型有機分子ライブラリー。
コンビナトリアルライブラリーの調製のための装置は、市販されている(例えば、Advanced Chem Tech社(ルイビル、Ky.)からの357 MPS、390 MPS；Rainin社(ウーバン、MA)からのSymphony；Applied Biosystem社(フォスターシティ、CA)からの433A；並びに、Millipore社(ベッドフォード、MA)からの9050 Plusを参照)。液相化学に関する数多くのロボットシステムも、開発されている。これらのシステムは、Hamilton社(リノ、NV)により開発されたMicrolab NIMBUS、Microlab VANTAGE、及びMicrostarシステム、並びにChemspeed Technologies社(ニューブランスウィック、NJ)により開発されたFLEX ISYNTHシステムなどの、自動化されたワークステーション及び自動化された合成システム、更にロボットアームを使用する多くのロボットシステム(例えば、Staubli)を含む。先の装置はいずれも、本明細書記載の方法に適している小型分子ＰＩＭインヒビターにより実施される手動合成操作に類似している、ＰＩＭインヒビターの同定及び特徴決定のためのコンビナトリアルライブラリーを作製するために、任意に使用される。先の装置はいずれも、本明細書記載の方法に適している小型分子ＰＩＭインヒビターを同定及び特徴決定するために、任意に使用される。
可能性のあるＰＩＭインヒビターの同定は、例えば、候補インヒビターの存在下で、ＰＩＭキナーゼをインビトロにおいてキナーゼ活性をアッセイすることにより決定される。そのようなアッセイにおいて、ＰＩＭ及び／又は組換え手段により作製された特徴的ＰＩＭ断片は、放射標識されたリン酸を含むリン酸ドナー（例えばＡＴＰ）の存在下で、基質と接触され、並びにＰＩＭに依存した取込みが測定される。「基質」は、ＰＩＭにより触媒される反応において、ｙ－リン酸基をＡＴＰなどのドナー分子から受け取ることができる、好適なヒドロキシル部分を含む任意の物質を含む。基質は、ＰＩＭの内在性基質、すなわち天然のＰＩＭ３により未修飾の細胞においてリン酸化される天然の物質（例えば、ＢＡＤ又はＣｄｃ２５Ａ）、或いは生理的条件においてはＰＩＭにより通常リン酸化されないが、利用される条件においてはリン酸化され得る任意の他の物質であってよい。基質は、タンパク質又はペプチドであってよく、並びにリン酸化反応は、この基質のセリン及び／又はスレオニン残基で起こり得る。例えば、そのようなアッセイにおいて通常利用される特異的基質は、ヒストンタンパク質及びミエリン塩基性タンパク質を含むが、これらに限定されるものではない。一部の実施態様において、ＰＩＭ３インヒビターは、IMAP（登録商標）技術又はLanthaScreen技術を用いて同定される。
基質のＰＩＭ依存型リン酸化の検出は、放射標識されたリン酸取込みの測定以外の、数多くの手段により定量することができる。例えば、リン酸基の取込みは、電気泳動の移動度、クロマトグラフィー特性、光吸収、蛍光、及びリン光などの、基質の物理化学的特性に影響を及ぼし得る。或いは、基質のリン酸化された形をリン酸化されない形から選択的に認識する、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体が、作製されることができ、これにより抗体を、ＰＩＭ３キナーゼ活性のインジケーターとして機能させる。
ハイスループットＰＩＭキナーゼアッセイを、例えば、ＰＩＭキナーゼ又はその活性断片、各ウェルに共有的に結合された基質、Ｐ32放射標識されたＡＴＰ及び可能性のあるＰＩＭインヒビター候補を含む各ウェルを備える、マイクロタイタープレートにおいて実行することができる。マイクロタイタープレートは、コンビナトリアルライブラリー化合物の大規模スクリーニングのために、９６ウェル又は１５３６ウェルを含むことができる。リン酸化反応が完了した後、そのプレートを洗浄し、結合した基質を除去する。次にプレートを、オートラジオグラフィー又は抗体検出により、リン酸基取込みについて検出する。候補ＰＩＭインヒビターは、単独のＰＩＭリン酸転移酵素能力と比べ、基質に対するＰＩＭ３リン酸転移酵素能力の量を減少するそれらの能力により、同定される。
可能性のあるＰＩＭインヒビターの同定はまた、例えば、ＡＴＰ結合部位及び／又は基質結合部位などのＰＩＭの触媒部位に対するインビトロ競合結合アッセイにより、決定されてもよい。ＡＴＰ結合部位に対する結合アッセイに関して、スタウロスポリンなどの、ＡＴＰ結合部位に対し高い親和性を持つ既知のプロテインキナーゼインヒビターが使用される。スタウロスポリンは、固定され、且つ蛍光標識されるか、放射標識されるか、又は検出を可能にする任意の様式であってよい。標識されたスタウロスポリンは、組換えにより発現されたＰＩＭタンパク質又はその断片へ、可能性のあるＰＩＭ３インヒビター候補と共に導入される。この候補は、ＰＩＭタンパク質への結合に関して、濃度－依存様式で、固定されたスタウロスポリンと競合するその能力について試験される。スタウロスポリン結合したＰＩＭの量は、候補インヒビターのＰＩＭキナーゼへの親和性に反比例する。可能性のあるインヒビターは、スタウロスポリンのＰＩＭへの定量可能な結合を減少するであろう(例えば、Fabian, M.A.ら、Nat. Biotech., 2005, 23, 329-336参照)。次にＰＩＭ３に対するＡＴＰ結合部位に関してこの競合結合アッセイから同定された候補は、ＰＩＭキナーゼ特異性に関して他のキナーゼに対する選択性について更にスクリーニングされる。
可能性のあるＰＩＭインヒビターの同定はまた、例えば、インヒビター候補の存在下での、ＰＩＭ活性の細胞アッセイによっても、決定されてよい。この目的のために特異的に操作された細胞を含む、様々な細胞株及び組織が、使用される。インヒビターの細胞スクリーニングにおいて、候補は、ＰＩＭ活性の下流作用、並びに成長、成長停止、分化、もしくはアポトーシスなどの他の細胞反応をモニタリングすることにより、ＰＩＭ活性をアッセイすることができる。
或いは、ＰＩＭの下流標的のＰＩＭ－媒介したリン酸化は、最初に様々な細胞株又は組織を、ＰＩＭインヒビター候補により処理し、その後これらの細胞を溶解し、且つＰＩＭ媒介した事象を検出することによる、細胞ベースのアッセイにおいて認めることができる。この実験において使用される細胞株（例えば、ＨｅｐＧ２、ＨｅｐａＲＧ、Ｈｕｈ７、及びＨｅｐ３ｂなどの肝癌細胞株）は、この目的のために特異的に操作された細胞を含んでよい。ＰＩＭ媒介した事象は、下流ＰＩＭメディエーターのＰＩＭ媒介したリン酸化を含むが、これらに限定されるものではない。例えば、下流ＰＩＭメディエーターのリン酸化は、リン酸化されたＰＩＭメディエーターを特異的に認識するが、リン酸化されない形は認識しない抗体を用いて検出する事ができる。これらの抗体は、文献に説明されており、且つキナーゼスクリーニングキャンペーンにおいて広範囲に使用されている。
多くの外部委託研究（ＣＲＯ）が、ＰＩＭキナーゼアッセイサービスを提供し、これはDiscoverX社(サンディエゴ、CA)、Reaction Biology Corporation社(マルバーン、PA)、ChemDiv社サンディエゴ、CA)、及びCarna Biosciences社(東京、日本)を含む。
可能性のあるＰＩＭインヒビターの同定は、例えば、特異的欠損を持つか、又は候補物質の生体内の異なる細胞への到達及び／又は影響する能力を測定するために使用することができるマーカーを保有するように操作された、トランスジェニック動物を含む、動物モデルの使用が関与するインビボアッセイによっても決定されてよい。例えば、マウスは、ＰＩＭを過剰発現するように操作され、これはＰＩＭインヒビターにより治療され得る、悪性腫瘍などの疾患につながる。
前述に従い、本開示はまた、以下も提供する：
（１）医薬品として使用するための、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩；
（２）ＰＩＭインヒビターとして使用するため、例えば本明細書において先に説明した特定の適応症のいずれかにおいて使用するための、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩；
（３）式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を、１又は複数の薬学的に許容される希釈剤又はそのための担体と一緒に含有する、例えば本明細書において先に説明した適応症のいずれかにおいて使用するための、医薬組成物；
（４）有効量の式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩を、対象へ投与することを含む、それを必要とする対象において先に説明された特定の適応症のいずれかを治療する方法；
（５）例えば、先に考察したような；ＰＩＭ３活性化が役割を果たすか又は関与している疾患又は病態の治療又は予防のための医薬品を製造するための、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩の使用。式（Ｉ）－（Ｖ）の化合物は、単独の活性成分として、或いは例えばアジュバントとして、他の薬物と、例えば、同種もしくは異種移植の急性もしくは慢性の拒絶反応、又は炎症もしくは自己免疫疾患の治療もしくは予防のための免疫抑制レジメンもしくは免疫調節レジメン又は他の抗炎症薬、化学療法薬又は感染治療薬、例えば、例として抗－レトロウイルス薬もしくは抗生物質などの抗ウイルス薬と結びつけて、投与されてよい。例えば、式（Ｉ）の化合物は、以下と組合せて使用されてよい：カルシニューリンインヒビター、例えば、シクロスポリンＡ、ＩＳＡ２４７又はＦＫ５０６など；ｍＴＯＲインヒビター、例えば、ラパマイシン、ＣＣ１７７９、ＡＢＴ５７８、ｂｉｏｌｉｍｕｓ－７、ｂｉｏｌｉｍｕｓ－９、ＴＡＦＡ－９３、ＡＰ２３５７３、ＡＰ２３４６４、又はＡＰ２３８４１など；免疫抑制特性を有するアスコマイシン、例えば、ＡＢＴ－２８１、ＡＳＭ９８１など；コルチコステロイド；カテプシンＳインヒビター；シクロホスファミド；アザチオプリン；メトトレキセート；レフルノミド；ミゾリビン；ミコフェノール酸；ミコフェノレートモフェチル；１５－デオキシスペルグアリン又はそれらの免疫抑制性のホモログ、アナログもしくは誘導体；スフィンゴシン－ｌ－リン酸受容体アゴニスト、例えば、ＦＴＹ７２０、又はそのアナログ、例えばＹ－３６０１８など；白血球受容体に対するモノクローナル抗体、例えば、ＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ５８、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３７、ＩＣＯＳ、ＣＤ１５０（ＳＬＡＭ）、ＯＸ４０、４－１ＢＢ、又はそれらのリガンド、例えば、ＣＤ１５４又はそのアンタゴニスト；他の免疫調節化合物、例えば、ＣＴＬＡ４の細胞外ドメインの少なくとも一部又はその変異体を有する組換え結合分子、例えば、非－ＣＴＬＡ４タンパク質配列へ結合されたＣＴＬＡ４の少なくとも細胞外部分又はその変異体、例えばＣＴＬＡ４Ｉｇ(例えばATCC 68629と指定される)又はその変異体、例えばＬＥＡ２９Ｙ；接着分子インヒビター、例えば、ＬＦＡ－１アンタゴニスト、ＩＣＡＭ－１もしくは－３アンタゴニスト、ＶＣＡＭ－４アンタゴニストもしくはＶＬＡ－４アンタゴニスト、例えばナタリズマブ（アンテグレン（登録商標））；又は、抗ケモカイン抗体又は抗ケモカイン受容体抗体又は低分子量ケモカイン受容体アンタゴニスト、例えば、抗ＭＣＰ－１抗体。
式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物はまた、他の抗増殖剤と組合せて使用されてもよい。そのような抗増殖剤は、以下を含むが、これらに限定されるものではない：
（ｉ）アロマターゼインヒビター、例えば、ステロイド、特にエクセメスタン及びホルメスタン、並びに特に、非－ステロイド、特にアミノグルテチミド、ボロゾール、ファドロゾール、アナストロゾール及び非常に特別にレトロゾール；
（ｉｉ）抗エストロゲン剤、例えば、タモキシフェン、フルベストラント、ラロキシフェン及びラロキシフェン塩酸塩；
（ｉｉｉ）トポイソメラーゼＩインヒビター、例えば、トポテカン、イリノテカン、９－ニトロカンプトテシン及び高分子カンプトテシンコンジュゲートＰＮＵ－１６６１４８（Ｗ０９９／１７８０４の化合物Ａｌ）；
（ｉｖ）トポイソメラーゼＩＩインヒビター、例えば、アントラサイクリン系ドキソルビシン（リポソーム製剤、例えばCAELYX(商標)を含む)、エピルビシン、イダルビシン及びネモルビシン、アントラキノン系ミトキサントロン及びロソキサントロン、並びにポドフィロトキシン系エトポシド及びテニポシド；
（ｖ）微小管活性化剤、例えば、タキサン系パクリタキセル及びドセタキセル、ビンカアルカロイド、例えばビンブラスチン、特にビンブラスチン硫酸塩、ビンクリスチン、特にビンクリスチン硫酸塩、並びにビノレルビン、ディスコデルモリド、並びにエポチロン、例えばエポチロンＢ及びＤ；
（ｖｉ）アルキル化剤、例えば、シクロホスファミド、イホスファミド及びメルファラン；
（ｖｉｉ）ヒストンデアセチラーゼインヒビター；
（ｖｉｉｉ）ファルネシルトランスフェラーゼインヒビター；
（ｉｘ）ＣＯＸ－２インヒビター、例えば、セレコキシブ（セレブレックス（登録商標））、ロフェコキシブ（バイオックス（登録商標））及びルミラコキシブ（ＣＯＸ１８９）；
（ｘ）ＭＭＰインヒビター；
（ｘｉ）ｍＴＯＲインヒビター；
（ｘｉｉ）抗悪性腫瘍性代謝産拮抗薬、例えば、５－フルオロウラシル、テガフル、カペシタビン、クラドリビン、シタラビン、フルダラビンリン酸エステル、フルオロウリジン、ゲムシタビン、６－メルカプトプリン、ヒドロキシ尿素、メトトレキセート、エダトレキサート及びそのような化合物の塩、並びに更にＺＤ１６９４（ラルチトレキセド（商標））、ＬＹ２３１５１４（アリムタ（商標））、ＬＹ２６４６１８（ロモトレキソール（商標））及びＯＧＴ７１９；
（ｘｉｉｉ）白金化合物、例えば、カルボプラチン、シスプラチン及びオキサリプラチン；
（ｘｉｖ）プロテインキナーゼ活性を減少する化合物及び更に抗血管新生化合物、例えば、（ｉ）血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、（ｂ）上皮成長因子（ＥＧＦ）、ｃ－Ｓｒｃ、プロテインキナーゼＣ、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、Ｂｃｒ－Ａｂｌチロシンキナーゼ、ｃ－ｋｉｔ、Ｆｌｔ－３及びインスリン様成長因子Ｉ受容体（ＩＧＦ－ＩＲ）及びサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）の活性を減少する化合物；（ｉｉ）イマチニブ、ミドスタウリン、イレッサ（商標）（ＺＤ１８３９）、ＣＧＰ７５１６６、バタラニブ、ＺＤ６４７４、ＧＷ２０１６、ＣＨＩＲ－２００１３１、ＣＥＰ－７０５５／ＣＥＰ－５２１４、ＣＰ－５４７６３２及びＫＲＮ－６３３；（ｉｉｉ）サリドマイド（サロミド）、セレコキシブ（セレブレックス）、ＳＵ５４１６及びＺＤ６１２６；
（ｘｖ）ゴナドレリンアゴニスト、例えば、アバレリクス、ゴセレリン及びゴセレリン酢酸塩；
（ｘｖｉ）抗－アンドロゲン、例えば、ビカルタミド（カソデックス（商標））；
（ｘｖｉｉ）ベンガミド；
（ｘｖｉｉｉ）ビスホスホネート、例えば、エチドロン酸、クロドロン酸、チルドロン酸、パミドロン酸、アレンドロン酸、イバンドロン酸、リセドロン酸及びゾレドロン酸；
（ｘｉｘ） 抗増殖性抗体、例えば、トラスツズマブ（ハーセプチン（商標））、トラスツズマブ－ＤＭ１、エルロチニブ（タルセバ（商標））、ベバシズマブ（アバスチン（商標））、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））、ＰＲＯ６４５５３（抗－ＣＤ４０）及び２Ｃ４抗体；
（ｘｘ）テモゾロミド（テモダール（商標））。
コード番号、一般名又は商標により確定された活性物質の構造は、標準の概要である「The Merck Index」の書籍版(actual edition)から又はデータベース、例えば、Patents International(例えば、IMS World Publications)から、得ることができる。
前述のことに従い、本開示は、また更なる態様を提供する：
（６）例えば、同時に又は順に、治療的有効量の（ａ）式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物、又はその許容し得る塩、及び（ｂ）第二の原薬を同時投与することを含む、先に規定された方法であって、該第二の原薬は、例えばここで先に説明した特定の適応症のいずれかに使用される：
（７）治療的有効量のＰＩＭキナーゼインヒビター、例えば式（Ｉ）及び／又は（ＩＩ）の化合物、又はその薬学的に許容される塩、並びに第二の原薬を含有する組合せであって、該第二の原薬は、例えば先に明らかにされている。ＰＩＭキナーゼインヒビター、例えば式（Ｉ）及び／又は（ＩＩ）の化合物が、例えば先に明らかにされた、他の免疫抑制性、免疫調節性、抗炎症性又は抗悪性腫瘍性の薬剤と一緒に投与される場合、同時投与される薬物又は薬剤の用量は、使用される共薬物もしくは薬剤の種類、又は使用される具体的薬物又は薬剤、又は治療される病態などにより当然変動するであろう。
無細胞生合成
一部の実施態様において、ＰＩＭインヒビターを含む、本開示の化合物及び組成物を合成する方法及びシステムは、生存細胞を伴わずに、細胞、酵素及び代謝機構を使用する、タンパク質及び小型分子代謝産物を生成するプラットフォームとして働く、インビトロ無細胞生合成（ＣＦＢ）システムである(Hodgman, C.E., Jewett, M. C., Metab. Eng., 2012, 14(3), 261-269参照)。本明細書に提供される無細胞生合成システムは、天然の生合成遺伝子及び経路の迅速な発現を可能にすることにより、並びにプラスミドベースのクローニング及びインビボ増殖を必要とすることなく、活性スクリーニングを可能にすることにより、創薬に関する多くの適用を有し、その結果迅速なプロセス／生成物パイプライン（小型分子ライブラリーの作製）が可能である。本明細書において使用されるＣＦＢ方法及びシステムの重要な特徴は、標的化合物への生合成経路フラックスは、ユーザーが規定した目的物へリソースを方向付けることにより、最適化され得、その結果大きい配列空間の探索を可能にすることである。中心となる代謝、酸化、リン酸化、及びタンパク質合成は、ユーザーにより同時活性化され得る。細胞壁の欠如はまた、毒性のある代謝産物、タンパク質、及び小型分子を容易にスクリーニングする能力を提供する。インビトロ転写／翻訳（ＴＸ－ＴＬ）に関与する無細胞生合成法を使用し、（１）タンパク質（例えば、Carlson, E.D.ら、Biotechnol. Adv., 2012, 30(5),1185-1194；Swartz, J.ら、米国特許第７，３３８，７８９号；Goerke, A.R.ら、米国特許第８，７１５，９５８号参照）、（２）抗体及び抗体アナログ（例えば、Zimmerman, E.S.ら、Bioconjugate Chem., 2014, 25, 351-361；Thanos, C.D.ら、米国特許第２０１５／００１７１８７Ａ１号参照）、並びに（３）小型分子（例えば、Kay, J.ら、Metabolic Engineering, 2015, 32, 133-142；Goering, A.W.ら、ACS Synth Biol., 2017, 6(1), 39-44；Blake, W.J.ら、米国特許第９，４６９，８６１号参照）を生成する。
ＣＦＢ方法及びシステムを、迅速なプロトタイプ新規複合体バイオサーキット並びに代謝経路に使用することができる。線状及びプラスミドベースのＤＮＡを含む、複数のＤＮＡピースからのタンパク質発現が、実行され得る。このＣＦＢ方法及びシステムは、個別の経路の酵素をコードしているＤＮＡの濃度の調節、並びに代謝産物生成に対する関連作用の試験を可能にする。ＣＦＢ方法及びシステムにおいて線状ＤＮＡを使用しマルチ－酵素経路を発現する能力は、プラスミドのインビボにおける選択及び増殖の必要性を回避する。線状ＤＮＡ断片は、等温又はGolden Gate集成技術により、１～３時間（ｈｒｓ）の間に集成され、且つＣＦＢ反応に直ちに使用され得る。ＣＦＢ反応には、数時間、例えばおよそ４～８時間かけることができるか、又は最大４８時間までより長い期間かけて試行されてよい。線状ＤＮＡの使用は、ＤＮＡ／遺伝子のラピッドプロトタイピングライブラリーのための価値のあるプラットフォームを提供する。ＣＦＢ方法及びシステムにおいて、ｔｅｔリプレッサー及びＴ７ ＲＮＡポリメラーゼなどの大腸菌に、又は他の宿主細胞抽出物に対し外来の調節及び転写の機序は、内在性の特性、多様性又は生成を生じ且つ最大化するようにユーザーにより規定されるので、補足され得る。ＣＦＢ方法及びシステムは更に、ｍＲＮＡ及びＤＮＡ分解速度を含む内在性の特性を修飾することにより、標的化合物の多様性及び生成を増強する。タンパク質合成の強力なインヒビターである、無機リン酸の再利用を可能にするＡＴＰ再生システムは、ＣＦＢ方法及びシステムにおいて操作される。例えばＮＡＤ／ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰ／ＮＡＤＰＨを含む酸化還元電位は、ＣＦＢ、並びに次にユーザーがＣＦＢシステムにおける任意の反応を選択的に調節することを可能にする特定の補因子の酸化還元及び利用可能性を修飾する方法において、再生される。
代わりの実施態様において、ＣＦＢ方法及びシステムは、インビトロ無細胞転写／翻訳システム（ＴＸ－ＴＬ）、並びに生合成経路遺伝子由来の生成物の、例えば天然生成物（ＮＰ）又は天然生成物アナログ（ＮＰＡ）の、合成、修飾及び同定のためのラピッドプロトタイピングプラットフォームとしての機能を可能にする。代わりの実施態様において、ＣＦＢシステムは、本開示において提供されるものなどの、天然生成物及び天然生成物アナログのコンビナトリアル生合成に使用される。代わりの実施態様において、ＣＦＢシステムは、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物の合成に関するコンビナトリアルデザインを迅速に評価する方式としての、複雑な生合成経路のラピッドプロトタイピングに使用される。代わりの実施態様において、これらのＣＦＢシステムは、本開示において提供される式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物などの、天然生成物経路遺伝子、コードされ且つ合成される天然生成物、並びに天然生成物アナログのラピッドプロトタイピングに関するハイスループット自動化のために多重化される。ＣＦＢ方法及びシステムは、Culler, S.らのＰＣＴ特許出願第ＷＯ２０１７／０３１３９９Ａ１号に説明されており、これは引用により本明細書中に組み込まれている。
本明細書記載のように、ＣＦＢ組成物、方法、及びシステムは、既知の化合物のアナログ、例えば式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物などの、天然生成物アナログ及び二次代謝の構造的アナログの迅速な生成に使用され得る。従ってＣＦＢ方法は、多様性のある生成物を作製する本明細書記載のプロセスにおいて使用することができる。一部の実施態様において、本明細書に提供される方法は、式（Ｉ）－（ＩＸ）の化合物の構造を作製し、合成し又は変更するための、無細胞（インビトロ）生合成（ＣＦＢ）方法を含む。ＣＦＢ方法は、変更された化合物のライブラリーを作製するために、ＴＸ－ＴＬ抽出物又は少なくとも２種以上の変更された化合物の抽出混合物を生成することができ；好ましくはこのライブラリーは、ＣＦＢ方法により調製され、合成され又は修飾された、天然生成物アナログライブラリーである。
代わりの実施態様において、この開示の実践は、分子生物学、微生物学、及び組換えＤＮＡにおいて通常使用される、任意の慣習的技術の使用を含み、これは当該技術分野の技術の範囲内である。そのような技術は、当業者に公知であり、数多くのテキスト及び参考文献において説明されている（例えば、Sambrookら、「分子クローニング：実験マニュアル」第2版、コールドスプリングハーバー、1989；及び、Ausubelら、「最新分子生物学プロトコール」、1987参照）。本明細書において別に規定しない限りは、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、この開示の関係する技術分野の業者により通常理解されるものと同じ意味を有する。例えば、Singleton及びSainsbury、「微生物学及び分子生物学事典」、第2版、John Wiley and Sons, NY (1994)；並びに、Hale及びMarham、「ハーパーコリン生物学事典」、Harper Perennial, NY (1991)は、当業者にこの開示において使用される多くの用語の一般的辞書を提供する。本明細書記載のものと類似又は同等の方法及び材料は、本開示の実践における使用を認めるが、好ましい方法及び材料は、本明細書に記載されている。従って、すぐ下段に規定した用語は、総じて本明細書を参照することにより、より完全に説明される。
本明細書において別に規定しない限りは、本明細書において使用される全ての技術用語及び科学用語は、この開示の関係する技術分野の業者により通常理解されるものと同じ意味を有する。本明細書記載のものと類似又は同等の方法及び材料は、本開示の実践における使用を認めるが、好ましい方法及び材料は、本明細書に記載されている。従って、すぐ下段に規定した用語は、総じて本明細書を参照することにより、より完全に説明される。
本明細書において使用される単数用語「ある("a"、"an"及び"the")」は、文章が別に明確に指摘しない限りは、複数の言及を含む。別に指定しない限りは、それぞれ、核酸は、左から右へ５'から３'の方向で記載され；アミノ酸配列は、左から右へ、アミノからカルボキシの方向で記載される。この開示は、当業者により使用される状況に応じて変動することができるので、この開示は、記載された特定の方法論、プロトコール、及び試薬に限定されないことは理解されるべきである。
合成方法
数多くの方法が、式（Ｉ）－（ＩＸ）により表されるものなどの化合物の合成に利用可能である。これらの方法の一部は、Rao, B.P.C.ら、Strategies Towards the Synthesis of Staurosporine Indolocarbazole Alkaloid and Its Analogues in Scope of Selective Heterocycles from Organic and Pharmaceutical Perspective、第4章、Intech Publishers；Rijeka, クロアチア(EU), 2016において検証されている。同じく、Wilson, L.J.ら、米国特許出願第ＵＳ２００７／０２４９５９０Ａ１号；Kleinschroth, J.ら、米国特許第５，４３８，０５０号；Kleinschroth, J.ら、米国特許第５，４８９，６０８号；Faul, M.M.ら、米国特許第５，６６５，８７７号；Faul, M.M.ら、米国特許第５，９１９，９４６号；Faul, M.M.ら、米国特許第５，６１４，６４７号；Faul, M.M.ら、米国特許第６，０３７，４７５号も参照されたい。
Figure 2022531230000014
一実施態様において、式（Ｉ）の化合物は、スキーム２に示し且つ文献に報告されたように、インドール－３－アセトアミド誘導体を、ＴＨＦ溶媒中カリウムｔｅｒｔ－ブトキシドの存在下で、メチルインドール－３－グリオキシラートと反応することにより、調製されてよい（例えば、Faulら、Tetrahedron Lett., 1999, 40, 1109-1112；Faulら、J. Org. Chem. 1998, 63, 6053-6058；Faulら、J. Org. Chem. 1999, 64, 2465-2470参照)。インドール－３－アセトアミド及びインドール－３－グリオキシラート誘導体は、広範な利用可能な置換されたインドールから迅速に調製される。Ｐｄ（ＯＡｃ）2、ＰｄＣｌ2、ｈｖ／Ｏ2又はＩ2、ＤＤＱ、ＣｕＣｌ2、又はＰｄ（ＯＴｆ）2を含む、様々なオキシダント［Ｏ］による処理により、式（ＸＩ）により例示される最初に形成されたビスインドロマレイミド誘導体の閉環は、式（Ｘ）により表されるインドロ［２，３－ａ］カルバゾールをもたらす(例えば、Faulら、J. Org. Chem. 1999, 64, 2465-2470参照)。それに続く２－クロロエチルアミンなどの反応物質による式（Ｘ）のアルキル化は、その後所望の式（Ｉ）を生じる。
Figure 2022531230000015
別の実施態様において、式（ＸＩ）の化合物は、スキーム３に示したように（Ｘ＝Ｃｌ、Ｂｒ）及び文献に説明されたように（例えば、Faulら、Synthesis, 1995, 1511-1516；Gallantら、J. Org. Chem. 1993, 58, 343-349参照）、Ｍｇ又は他の金属により金属化されている、置換されたインドールの、３，４－ジハロスクシンイミド又はそのＮ－保護型との逐次反応により調製されてよい。次に式（Ｉ）の化合物は、スキーム２で先に説明したように、酸化により調製される。スキーム２及びスキーム３の両方において、イミド官能性は、水素化ホウ素ナトリウム又は亜鉛アマルガムなどの、標準試薬を使用し、ラクタム官能性へ還元することができる。スキーム３において、Ｑ基及び／又はＲ基は、インドールＮ－Ｈ官能性との反応を通じて（例えば、アルキル化又はアシル化反応を通じて）、標準方法により付加することができる。
Figure 2022531230000016
別の実施態様において、式（Ｘ）及び（ＸＩ）の化合物は、スキーム４に示したような、無細胞生合成（ＣＦＢ）が関与するプロセスにおいて、トリプトファン誘導体を反応することにより、調製されてよい。この生物学的プロセスにおいて、酵素は、２個のトリプトファン分子又はトリプトファン誘導体を縮合し、式（Ｉ）の化合物（ここで、Ｑ及びＲは水素である）を直接生成するために、使用される。これらの転換に必要とされる酵素は、解明されており、並びに様々な経路由来の酵素を使用し、インドロカルバゾール誘導体を作製することができる。特定の酵素は、転換を触媒し、並びに天然のインドロカルバゾールを生成する経路を促進することがわかっている。これらの酵素は、例として、プロセスＣＦＢ－１を使用する式（Ｘ）について：ビオラセイン経路のＶｉｏＡ（アミノオキシダーゼ）及びＶｉｏＢ（クロモピロール酸合成酵素）、スタウロスポリン経路のＳｔａＯ（アミノオキシダーゼ）、ＳｔａＤ（クロモピロール酸合成酵素）、ＳｔａＰ（シトクロムＰ４５０モノオキシゲナーゼ）、及びＳｔａＣ（フラビン水酸化酵素）、並びにレベッカマイシン経路のＲｅｂＯ（アミノオキシダーゼ）、ＲｅｂＤ（クロモピロール酸合成酵素）、ＲｅｂＰ（シトクロムＰ４５０モノオキシゲナーゼ）、及びＲｅｂＣ（フラビン水酸化酵素）、又はそれらのホモログが挙げられる（例えば、Sanchezら、Nat. Prod. Rep. 2006, 23, 1007-1045；Sanchezら、Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2005, 102, 461-466；Duら、ACS Synth. Biol. 2015, 4, 682-688；Duら、Curr. Opin. Chem. Bio., 2016, 31, 74-81参照)。同様に、式（ＸＩ）の化合物は、例えば酵素ＶｉｏＡ及びＶｉｏＢ、ＳｔａＯ及びＳｔａＤ、ＲｅｂＯ及びＲｅｂＤ、又はそれらのホモログを、メチルアルシリアルビン経路の酵素ＭａｒＣもしくはそれらのホモログと組合せて用いる、プロセスＣＦＢ－２を使用し、生成することができる(Chang, F.-Y.及びBrady, S.F.、ChemBioChem, 2014, 15(6), 815-821参照)。これらの酵素は、式（Ｘ）及び（ＸＩ）の化合物（前駆体としてトリプトファンが使用される場合、式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ａ’、Ｂ’、Ｃ’、Ｄ’、Ｑ及びＲは水素であり、並びにＥ、Ｆ、Ｇ、Ｍ、Ｅ’、Ｆ’、Ｇ’、Ｍ’は炭素である）を直接生成するために、ここで使用される。これらの酵素は、操作された生存細胞において、代わりに無細胞プロセスにおいて使用し、式（Ｘ）の無細胞反応生成物の化学アルキル化により、式（Ｉ）の化合物を生成することができる。天然生成物－様化合物の無細胞生合成は、Culler, S.らのＰＣＴ出願ＷＯ２０１７／０３１３９９Ａ１に説明されており、これは引用により本明細書中に組み込まれている。
本開示の一実施態様において、ビオラセイン経路の酵素ＶｉｏＡ及びＶｉｏＢ、スタウロスポリン経路のＳｔａＯ、ＳｔａＤ、ＳｔａＰ、及びＳｔａＣ、並びに／又はレベッカマイシン経路のＲｅｂＯ、ＲｅｂＤ、ＲｅｂＰ、及びＲｅｂＣ、並びに／又はメチルアルシリアルビン経路のＭａｒＣは、スキーム４に概説したように、無細胞生合成プロセスにおいて使用され、２個の同じ又は異なる置換されたトリプトファン誘導体の結合又は転換により、式（Ｘ）又は（ＸＩ）の化合物を生成する。レベッカマイシン経路酵素（ＲｅｂＯ、ＲｅｂＤ、ＲｅｂＰ、及びＲｅｂＣ）を使用し、式（Ｘ）又は式（ＸＩ）の化合物を直接生成することができる。
Figure 2022531230000017
本開示の別の実施態様において、式（Ｘ）又は（ＸＩ）の化合物は、式（Ｉ）により表されるように、インドールＮ原子に結合されたヘテロ原子－含有する尾部を導入するように、化学プロセスを通じて転換されてよい。
実施例
全般的方法
本開示に関連した実施例が、以下に説明される。ほとんどの場合において、代替の技術を使用することができる。実施例は、例証することを意図しており、この開示の範囲を限定もしくは制限するものではない。例えば、追加の化合物が特定の化合物に関するスキームのプロトコールに従い調製される場合、条件は、例えば溶媒、反応時間、試薬、温度、後処理条件のいずれかを変動し得るか、又は他の反応パラメータは変動され得ることは理解される。全ての分子生物学的反応及び無細胞生合成反応は、典型的にはＤＮＡ、ＲＮＡ及びタンパク質などの生物学的分子を作業する場合に利用される、標準のプレート、バイアル、及びフラスコを使用し、実施した。全ての合成化学は、実施例において別に指摘しない限りは、標準の実験用ガラス製品及び装置で実行した。市販の試薬は、受け取った状態で使用した。ＬＣ／ＭＳデータは、質量分離器(PE SCIEX API 150EX)に接続され及び自動サンプラー(Gilson 215)を装着した、Shimadzu SCL10Avp HPLCシステム、又は交互の陽イオン及び陰イオンスキャンを伴う、Applied Biosystems 3200 APCIトリプル四重極質量分析計のいずれかを用いて収集した。高解像質量分析は、Thermo Fisher Q Exactive MS計器を用いて行った。Exactive HR MS：陰及び／又は陽イオン化モードのＥＳＩ、ＸＩＣ 正確な質量±１０ｐｐｍ（ｍ／ｚ）：ＧＣ－ＭＳは、5973N不活性質量選択検出装置を装備したAgilent 6890N計器を用いて行った。全てのマイクロ波照射実験は、最大出力３００Ｗの連続照射で、周波数２．４５ＧＨｚで操作する、マイクロウェーブ反応器(Biotage Initiator EXP EU 355301)において実行した。光化学反応は、高圧水銀ランプ(LISMA、DRL-400 E40)を使用し実施した。イオンクロマトグラフィーは、Metrohm 940 Professional IC Vario計器を用いて行った。マイクロ波反応は、加熱時間及び圧力を制御するために計器ソフトウェアを使用し、Biotage Initiatorにおいて行った。水素化反応は、市販の触媒カートリッジを使用し、H-Cube上で行った。シリカゲルクロマトグラフィーは、標準カラムを用い手動で、又はWaters社の予め充填されたSep-Pakシリカカートリッジを用いるかのいずれかで行った。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析は、アルミフォイルで裏当てしたシリカゲルプレート60 F254 シリカ(Sorbfil、ロシア)を用いて行った。カラムクロマトグラフィー（ＣＣ）は、Merck 60(70-230メッシュ)シリカを用いて実行した。分取ＨＰＬＣは、２２０ｎｍでのＵＶ検出器及び手動収集を備えた、Waters 1525/2487上で行った。1Ｈ－ＮＭＲは、Jeol JNM-ECS-400上で４００ＭＨｚで、又はBruker DRX-600上で６００ＭＨｚで、又はBruker DPX-400上で４００ＭＨｚで行い、1Ｈ－ＮＭＲに関して、溶媒残留ピークは、各々、ＣＤＣｌ3の７．２６ｐｐｍ又はＤＭＳＯ－ｄ６の２．５４ｐｐｍのいずれかを参照した。６－アザインドール、６－ベンジルオキシインドール及び３－フルオロ－４－ヒドロキシベンズアルデヒドは、Combi-Blocks社(サンディエゴ, CA, USA)から購入した。略語は以下の通りである：ＲＴ又はｒｔは、室温であり；ＴＨＦは、テトラヒドロフランであり；ＥｔＯＡｃは、酢酸エチルであり；ＴＦＡは、トリフルオロ酢酸であり；Ｅｔ2Ｏは、ジエチルエーテルであり；ＤＣＭは、ジクロロメタンであり；ｐｐｍは、百万分率であり；ｓ＝一重線；ｄ＝二重線；ｔ＝三重線；ｍ＝多重線；ｄｄ＝二重の二重線；ｂｒ＝広幅である。
実施例１． ３，４－ジブロモ－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（３）の合成
Figure 2022531230000018
 工程１：３，４－ジブロモ－２，５－フランジオンである中間体（２）の合成。アルゴン大気下で、フラスコに、マレイン酸無水物（３．００ｇ、３０．６ｍｍｏｌ）、臭素（３．１５ｍｌ、６１．２ｍｍｏｌ）、及び塩化アルミニウム（０．２００ｇ、１．５３ｍｍｏｌ）を充填した。このフラスコを密封し、反応混合物を、１２０～１３０℃に加熱し、この温度で１６ｈ維持した。ｒｔまで冷却した後、この混合物を、ＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）中に溶解し、濾過した。濾液を、真空において蒸発乾固させ、粗化合物２（１０．１ｇ）を明オレンジ色油状物と無色の結晶の混合物として供した。この粗生成物を、更に精製することなく、次工程で使用した。
工程２：３，４－ジブロモ－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（３）の合成。酢酸（５０ｍｌ）中の粗化合物２（１０．１ｇ）の撹拌溶液へ、２，４－ジメトキシベンジルアミンを、Ａｒ下、ｒｔで滴加した。この混合物を、Ａｒ下、１６ｈ還流した。溶液を蒸発乾固させ、残渣をＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）中に溶解し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液、水、及びブラインで洗浄した。この溶液を、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させ、カラムクロマトグラフィー（（シリカゲル、溶離液ＤＣＭ／ＣＣｌ4の１：１からＤＣＭ１００％まで）により精製し、化合物（３）（３．８ｇ、２工程にわたる合計収率３１％）を黄色固形物として供した。生成物純度をＮＭＲで確認した。1H-NMR (400MHz, CDCl3):δ(ppm) 7.21 (d, 1H), 6.41-6.45 (m, 2H), 4.74 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.76 (s, 3H)。
実施例２． ６－（ベンジルオキシ）－５－フルオロ－１Ｈ－インドール（８）の合成
Figure 2022531230000019
 工程１：中間体アジド酢酸エチルの合成。トルエン（２００ｍＬ）中のブロモ酢酸エチル（５５．０ｍＬ、０．５ｍｏｌ）の撹拌溶液へ、テトラブチルアンモニウム硫酸水素塩（３．３ｇ、０．００９ｍｏｌ）を添加し、混合物を５～１０℃に冷却した。その後水（１００ｍＬ）中のアジ化ナトリウム（３４．０ｇ、０．５ｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（２．１５ｇ、０．０２ｍｏｌ）の溶液を添加した。得られた混合物を、外界温度で３ｈ撹拌した。次に有機相を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過した。得られるアジド酢酸エチルの溶液を、更に精製することなく次工程で使用した。
工程２：３－フルオロ－４－ベンジルオキシベンズアルデヒド（５）の合成。ＤＭＦ（０．５Ｌ）中の３－フルオロ－４－ヒドロキシベンズアルデヒド（４）（５０ｇ、０．３５ｍｏｌ）の撹拌溶液へ、Ｋ2ＣＯ3（５９．２ｇ、０．４３ｍｏｌ）及び臭化ベンジル（６７ｇ、０．３９ｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、５５℃で２ｈ撹拌し（ＴＬＣ対照）、その後冷却し、水（１．５Ｌ）を添加し、形成された沈殿物を濾過し、少量ずつのＤＭＦ、水で洗浄し、その後乾燥させ、化合物（５）（７４ｇ、９０％）を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ(ppm) 9.86 (d, 1H), 7.56-7.68 (m, 2H), 7.31-7.53 (m, 5H), 7.13 (t, 1H), 5.25 (s, 2H)。
工程３：エチル ６－（ベンジルオキシ）－５－フルオロ－１Ｈ－インドール－２－カルボキシラート（６）の合成。化合物（５）（２５．０ｇ、０．１ｍｏｌ）を、トルエン中のアジド酢酸エチルの溶液中に溶解した（前記参照）。この混合物を、エタノール（２５０ｍＬ）中のナトリウムエトキシド（１３．５ｇ、０．４４ｍｏｌ）の冷（－２０℃）溶液へ、８０分以内でゆっくり添加した。この反応混合物を、０℃で３ｈ撹拌し、濾過し、沈殿物を、少量のエタノールで洗浄した。次にこの固形物を、塩化アンモニウム（１Ｌ）飽和水溶液と酢酸エチル（１Ｌ）の間で分配した。水層を、酢酸エチルにより抽出し、一緒にした有機相を、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、乾燥するまで真空において濃縮した。この固形残渣を、ｐ－キシレン（２００ｍＬ）中に懸濁させ、２ｈ還流した。溶媒を、真空において蒸発乾固させた。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ＤＣＭ）により精製し、化合物（６）（１２．０ｇ、４４％）を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ(ppm) 8.90 (br, 1H), 7.44-7.51 (m, 2H), 7.32-7.43 (m, 4H), 7.14 (d, 1H), 6.94 (d, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.33-4.46 (m, 2H), 1.40 (t, 3H)。
工程４：６－（ベンジルオキシ）－５－フルオロ－１Ｈ－インドール－２－カルボン酸（７）の合成。メタノール（１００ｍＬ）中の化合物６（１２ｇ、０．０４ｍｏｌ）の溶液へ、水（５０ｍＬ）中のＮａＯＨ（１．８ｇ、０．０８ｍｏｌ）の溶液を添加した。この溶液を、１ｈ還流し（ＴＬＣ対照）、真空下で蒸発乾固させた。残渣を、水（２００ｍＬ）中に再懸濁させ、この溶液を、ＨＣｌでｐＨ３に調節し、形成された沈殿物を濾過し、水で洗浄し、乾燥させ、酸（７）（９．８ｇ、９０％）を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 12.8 (br, 1H), 11.67 (s, 1H), 7.5 (d, 2H), 7.40 (m, 3H), 7.35 (t, 1H), 7.09 (d, 1H), 7.01 (s, 1H), 5.18 (s, 2H)。
工程５：６－（ベンジルオキシ）－５－フルオロ－１Ｈ－インドール（８）の合成。酸（７）（７．５ｇ、０．０２７３ｍｏｌ）を、油浴上で、完全に溶融するまで２４０℃で加熱し、引き続きこの温度で更に１０分間加熱した。冷却後、残渣を、ヘキサン／ＤＣＭの２：３の最小量の混合物中に溶解し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ヘキサン／ＤＣＭの２：３）により精製し、６－（ベンジルオキシ）－５－フルオロ－１Ｈ－インドール（８）（３．６ｇ、５４％）を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ(ppm) 8.02 (br, 1H), 7.49 (d, 2H), 7.40 (t, 2H), 7.30-7.36 (m, 2H), 7.14 (t, 1H), 6.98 (d, 1H), 6.47 (t, 1H), 5.18 (s, 2H)。
実施例３． ｔｅｒｔ－ブチル ３－（トリブチルスタンニル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｃ］ピリジン－１－カルボキシラート（１２）の合成
Figure 2022531230000020
 工程１：３－ブロモ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｃ］ピリジン（１０）の合成。ＭｅＯＨ（３０ｍｌ）中の６－アザインドール（９）（２．３０ｇ、１９．５ｍｍｏｌ）及び炭酸水素ナトリウム（４．９１ｇ、５８．５ｍｍｏｌ）の撹拌混合物へ、ＭｅＯＨ（５ｍｌ）中の臭素（３．１２ｇ、１９．５ｍｍｏｌ）の溶液を－５～０℃で滴加した。得られた混合物を、ｒｔで４ｈ撹拌した。この反応混合物を、真空において蒸発乾固させ、残渣を、ＥｔＯＡｃ（１００ｍｌ）中に溶解し、この溶液を水及びブラインで洗浄した。有機層を、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させ、粗生成物を供した。この生成物を、エーテル／ヘキサンの１：１混合液からの再結晶により精製し、化合物（１０）（３．００ｇ、７８％）をベージュ色固形物として供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 11.99 (br, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.19 (dd, 1H), 7.82-7.81 (m, 1H), 7.40 (dd, 1H)。
工程２：ｔｅｒｔ－ブチル ３－ブロモ－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｃ］ピリジン－１－カルボキシラート（１１）の合成。ジオキサン（８０ｍｌ）中の化合物（１０）（３．００ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）及び触媒量のＤＭＡＰ（１５０ｍｇ）の撹拌溶液へ、ジオキサン（２０ｍｌ）中のＢｏｃ－無水物（４．００ｇ、１８．２ｍｍｏｌ）の溶液をｒｔで添加した。得られる溶液を、ｒｔで１６ｈ撹拌し、その後真空において蒸発乾固させた。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ＤＣＭ／エーテルの８：１）により精製し、化合物（１１）（４．０ｇ、８８％）をベージュ色固形物として供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣで確認した。1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ(ppm) 9.41 (s, 1H), 8.51 (d, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.50 (d, 1H), 1.71 (s, 9H)。MS (ESI) m/z 299.3 [MH]+。
工程３：ｔｅｒｔ－ブチル ３－（トリブチルスタンニル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｃ］ピリジン－１－カルボキシラート（１２）の合成。ＴＨＦ（３００ｍｌ）中の化合物（１１）（３．００ｇ、１０．１ｍｍｏｌ）及び塩化トリブチルスズ（１９．７０ｇ、６０．６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液へ、ＴＨＦ中のブチルリチウムの２．５Ｍ溶液（２０．０ｍｌ、５０．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン大気下、－７０℃で滴加した。得られる溶液を、－７０℃で３０分間攪拌し、その後ひとりでにｒｔに到達させた。この反応混合物を、水（２００ｍｌ）でクエンチさせ、エーテル（２００ｍｌ）で希釈し、その後有機層を分離し、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させた。残渣を、エーテル（３ｍｌ）中に溶解し、ヘキサン（１５ｍｌ）で希釈し、その後形成された沈殿物を濾過した（固形物は出発材料３である）。濾液を、真空において蒸発乾固させ、残渣を、ＣＣｌ4中に溶解させ、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ＥｔＯＡｃ／ヘキサンの１：１０からＥｔＯＡｃ／ヘキサンの１：５まで）により精製し、化合物（１２）（２．００ｇ、４０％）を淡黄色油状物として供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ(ppm) 9.38 (br, 1H), 8.39 (d, 1H), 7.68-7.73 (m, 1H), 7.48 (d, 1H), 1.72 (s, 9H), 1.52-1.60 (m, 6H), 1.31-1.40 (m, 6H), 1.15-1.19 (m, 6H), 0.9 (t, 9H)。
実施例４． 化合物（１８）及び（１９）（個別の異性体）の合成
Figure 2022531230000021
 工程１：３－［６－（ベンジルオキシ）－５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル］－４－ブロモ－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンの化合物（１３）の合成。ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の６－（ベンジルオキシ）－５－フルオロ－１Ｈ－インドール（８）（１．２ｇ、４．９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液へ、ＴＨＦ／トルエンの１：３中の１．４Ｍメチルマグネシウムブロミド溶液（３．８ｍｌ、４．９ｍｍｏｌ）を、アルゴン大気下、ｒｔで滴加した。得られる暗色溶液を、４０～５０℃で１ｈ撹拌した。この反応混合物を、ｒｔまで冷却し、ＴＨＦ（１０ｍｌ）中のジブロモマレイミド（２）（１．０ｇ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン下、ｒｔで１ｈ以内で滴加した。この反応混合物を、外界温度で１ｈ撹拌し、その後氷冷した１０％クエン酸水溶液（２００ｍｌ）に注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）により抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させた。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液１００％ＤＣＭからＤＣＭ／ＥｔＯＡｃの９：１まで）により精製し、化合物（１３）（１．２ｇ、８６％）を供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ(ppm) 8.71 (br, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.43-7.50 (m, 2H), 7.30-7.43 (m, 4H), 7.22 (d, 1H), 6.97 (d, 1H), 6.37-6.54 (m, 1H), 5.18 (s, 2H), 4.80 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.79 (s, 3H)。
工程２：ｔｅｒｔ－ブチル ６－（ベンジルオキシ）－３－［４－ブロモ－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－３－イル］－５－フルオロ－１Ｈ－インドール－１－カルボキシラートの化合物（１４）の合成。ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の化合物（１３）（１．２ｇ、２．１ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．０１２ｇ、０．１ｍｍｏｌ）の撹拌溶液へ、ＴＨＦ（５ｍｌ）中のＢｏｃ2Ｏ（０．５ｇ、２．２ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン下、ｒｔで添加した。得られる溶液を、ｒｔで２ｈ撹拌し、その後、真空において蒸発乾固させた。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液１００％ＤＣＭからＤＣＭ／ＥｔＯＡｃの９：１まで）により精製し、化合物（１４）（１．２ｇ、８５％）を供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ(ppm) 8.15 (s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.61 (d, 1H), 7.50 (d, 2H), 7.30-7.46 (m, 3H), 7.25 (d, 1H), 6.40-6.52 (m, 2H), 5.23 (s, 2H), 4.80 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.79 (S, 3H), 1.68 (s, 9H)。
工程３：ｔｅｒｔ－ブチル ６－（ベンジルオキシ）－３－［１－（２，４－ジメトキシベンジル）－４－（１Ｈ－インドール－３－イル）－２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－３－イル］－５－フルオロ－１Ｈ－インドール－１－カルボキシラートの化合物（１５）の合成。ＴＨＦ（５０ｍｌ）中のＨＭＤＳ（０．５ｇ、３．４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液へ、ＴＨ中の２．５Ｍブチルリチウム溶液Ｆ（１．４ｍｌ、３．４ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、０℃で滴加した。得られる溶液は、０℃で、３０分間攪拌した。その後この溶液を、－２０℃まで冷却し、ＴＨＦ（５ｍｌ）中の１Ｈ－インドール（０．３７ｇ、３．１ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。この反応混合物を、－２０℃で４５分間攪拌した。その後この攪拌溶液へ、ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の中間体化合物（１４）（０．７ｇ、１．０ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン大気下、－２０℃で、４５分間かけて滴加した。得られた混合物を、－２０℃で４５分間、加えて０℃で１ｈ攪拌し、その後得られた混合物を、氷冷した１０％クエン酸水溶液（２００ｍｌ）へ注いだ。この混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）により抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させた。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液１００％ＤＣＭからＤＣＭ／ＥｔＯＡｃの９：１まで）により精製し、化合物（１５）（５２５ｍｇ、６８％）を供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 11.92 (br, 1H), 7.78-8.04 (m, 3H), 7.24-7.55 (m, 7H), 6.97-7.14 (m, 2H), 6.85 (d, 1H), 6.73 (t, 1H), 6.53-6.65 (m, 2H), 6.47 (d, 1H), 5.14 (s, 2H), 4.67 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 1.60 (s, 9H)。
工程４：ｔｅｒｔ－ブチル １０－（ベンジルオキシ）－６－（２，４－ジメトキシベンジル）－９－フルオロ－５，７－ジオキソ－５，６，７，１３－テトラヒドロ－１２Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－１２－カルボキシラートの化合物（１６）の合成。トルエン（７００ｍｌ）中の化合物（１５）（０．３ｇ、０．６８ｍｍｏｌ）の溶液へ、ヨウ素（１．７ｇ、６．８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物に、高圧水銀ランプ（４００Ｗ）を４ｈ照射し、その後溶液を、真空において、乾燥するまで濃縮した。残渣を、エーテルから結晶化し、化合物（１５）（１５０ｍｇ、５９％）を供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 11.7 (s, 1H), 11.61 (s,1H), 8.92 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.27-7.67 (m, 9H), 7.02 (d, 1H), 6.59 (s, 1H), 6.44 (d, 1H), 5.34 (s, 2H), 4.74 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 1.68 (s, 9H)。
工程５：１－（２－クロロエチル）－モルホリン遊離塩基の調製。１－（２－クロロエチル）－モルホリン塩酸塩（５．００ｇ、２６．８６ｍｍｏｌ）を、水（１０ｍｌ）に溶解し、この溶液へ、エーテル（１０ｍｌ）を添加した。激しく攪拌した混合物へ、水（１０ｍｌ）中のＫＯＨ（１．５０ｇ、２６．８０ｍｍｏｌ）の溶液を、ｒｔで５分間かけて滴加した。有機層を分離し、水層を、エーテル（２×２０ｍｌ）で抽出した。一緒にした有機抽出液を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させ、粗１－（２－クロロエチル）－モルホリン（３．１ｇ、７８％）を淡黄色油状物として得た。生成物を、精製せずに次の合成に使用した。
工程６：２－（ベンジルオキシ）－６－（２，４－ジメトキシベンジル）－３－フルオロ－１２－（２－モルホリン－４－イルエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオン及び２－（ベンジルオキシ）－６－（２，４－ジメトキシベンジル）－３－フルオロ－１３－（２－モルホリン－４－イルエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの、各々、異性体１７Ａ及び１７Ｂの合成。ＤＭＦ（３ｍＬ）中の化合物（５）（０．３７ｇ、０．５ｍｍｏｌ）の溶液へ、６０％水素化ナトリウム（０．０４２ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を添加した。得られた暗色混合物を、外界温度で１ｈ撹拌し、その後１－（２－クロロエチル）－モルホリン（０．１５ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、外界温度で１６ｈ撹拌し、その後得られた混合物を、氷冷した１０％クエン酸水溶液（２０ｍｌ）へ注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）により抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させた。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ＥｔＯＡｃ勾配０％－１００％のＤＣＭ）により精製し、化合物（１７Ａ）（１４０ｍｇ、３７％）：1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 12.10 (br, 1H), 8.98 (d, 1H), 8.63 (d, 1H), 7.76 (d, 1H), 7.51-7.65 (m, 4H), 7.46 (t, 2H), 7.27-7.41 (m, 2H), 6.95 (d, 1H), 6.57 (s, 1H), 6.39 (d, 1H), 5.34 (s, 2H), 4.87 (s, 2H), 4.63 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.29 (s, 4H), 2.44 (s, 2H), 2.32 (s, 4H)；及び、化合物（１７Ｂ）（１６０ｍｇ、４２％）を供した：1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 12.00 (s, 1H), 9.02 (d, 1H), 8.67 (d, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.51-7.65 (m, 3H), 7.27-7.50 (m, 5H), 6.99 (d, 1H), 6.58 (s, 1H), 6.41 (d, 1H), 5.35 (s, 2H), 4.90 (s, 2H), 4.67 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.28 (s, 4H), 2.75 (m, 2H), 2.34 (s, 4H)。
工程７：３－フルオロ－２－ヒドロキシ－１２－（２－モルホリン－４－イルエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオン（１８）の合成。アニソール／ＴＦＡの１：１混合液（２ｍｌ）中の化合物（１７Ａ）（０．１４０ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）の溶液を、マイクロウェーブ反応器内で１５０℃で２ｈ撹拌した。得られた混合物を、ｒｔまで冷却し、エーテル（５ｍｌ）で希釈した。沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、得られる固形物を、ＥｔＯＡｃ／ＴＨＦの２：１混合液（１０ｍｌ）中に溶解した。溶液を、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液、水、及びブラインで洗浄した。この有機溶液を、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させ、エーテルから結晶化し、化合物（１８）（７０ｍｇ、８９％）を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル、１０分間かけて５％－８７％、保持時間６．１９分）で確認した。構造は、2D-NOESY NMR H-H及びH-F相関を基に割り当てた。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 12.00 (br, 1H), 11.00 (s, 1H), 10.36 (s,1H), 9.04 (d, 1H), 8.73 (d, 1H), 7.77 (d, 1H), 7.56 (t, 1H), 7.20-7.43 (m, 2H), 4.93 (s, 2H), 3.41 (s, 4H), 2.79 (s, 2H), 2.41 (s, 4H)。MS (ESI) m/z 473.3 [MH]+。
工程８：（３－フルオロ－２－ヒドロキシ－１３－（２－モルホリン－４－イルエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオン（１９）の合成。工程７に説明したものと同じ手順で、化合物（１７Ｂ）を使用し、異性体生成物である化合物（１９）（７０ｍｇ、８１％）を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル、１０分間かけて５％－８７％、保持時間６．０６分）で確認した。構造は、2D-NOESY NMR H-H及びH-F相関を基に割り当てた。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 11.95 (br, 1H), 10.98 (s, 1H), 10.35 (br, 1H), 9.06 (d, 1H), 8.70 (d,1H), 7.81 (d, 1H), 7.58 (t, 1H), 7.18-7.47 (m, 2H), 4.97 (s, 2H), 3.38 (s, 4H), 2.75 (s, 2H), 2.37 (s, 4H)。MS (ESI) m/z 473.3 [MH]+。
実施例５． 化合物２３及び２４（任意に割り当てられた個別の異性体）の合成
Figure 2022531230000022
 工程１：３－（６－（ベンジルオキシ）－５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－ブロモ－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンの化合物（３）の合成。ＴＨＦ（２５ｍｌ）中の６－（ベンジルオキシ）－５－フルオロ－１Ｈ－インドール（８）（１．２ｇ、５．２ｍｍｏｌ、実施例２参照）の撹拌溶液へ、ＴＨＦ／トルエンの１：３混合液中の１．４Ｍメチルマグネシウムブロミド溶液（３．８ｍＬ、５．２ｍｍｏｌ）を、アルゴン大気下、外界温度で滴加した。得られる暗色溶液を、４０～５０℃で１ｈ撹拌した。この反応混合物を、外界温度まで冷却し、ＴＨＦ（２５ｍｌ）中の３，４－ジブロモ－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（３）（１．０ｇ、２．６ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン大気下、外界温度で、１ｈ以内で滴加した。反応混合物を、外界温度で２ｈ撹拌し、その後氷冷した１０％クエン酸水溶液（２００ｍｌ）へ注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×７０ｍｌ）により抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させた。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ＤＣＭ１００％からＤＣＭ／ＥｔＯＡｃの９：１まで）により精製し、化合物（１３）（１．２ｇ、８６％）を供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, CDCl3):δ(ppm) 8.71 (br, 1H), 7.96 (d, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.43-7.50 (m, 2H), 7.30-7.43 (m, 4H), 7.22 (d, 1H), 6.97 (d, 1H), 6.37-6.54 (m, 1H), 5.18 (s, 2H), 4.80 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.79 (s, 3H)。
工程２：ｔｅｒｔ－ブチル ３－（４－（６－（ベンジルオキシ）－５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－３－イル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｃ］ピリジン－１－カルボキシラートの化合物（２０）の合成。ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の化合物（１３）（１．０ｇ、１．８ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチル ３－（トリブチルスタンニル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｃ］ピリジン－１－カルボキシラート（１２）（１．３ｇ、２．６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液へ、ＣｕＢｒ＊ＳＭｅ2（０．５５ｇ、２．６ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ3）4（０．０４ｇ、０．０３ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を、３０分間還流した。この反応混合物を、ｒｔまで冷却し、次に３３％のＮＨ4ＯＨ水溶液を添加した（２ｍｌ／ｍｍｏｌ）。触媒を、セライト床を通す濾過により除去し、セライト層を、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍｌ）で洗浄した。有機層を分離し、次に２０％炭酸ナトリウム水溶液で、青色の変色が消えるまで洗浄し、その後ブラインで洗浄し、真空において蒸発乾固させた。残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ＤＣＭ１００％からＤＣＭ／ＥｔＯＡｃの１：１まで）により精製し、化合物（２０）（０．７ｇ、５６％）を供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 11.83 (s, 1H), 9.27 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.27-7.47 (m, 5H), 7.16 (d, 1H), 7.08 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 6.54-6.63 (m, 2H), 6.48 (dd, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.68 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 1.65 (s, 9H)。MS (ESI) m/z 703.7 [MH]+。
工程３：１０－（ベンジルオキシ）－６－（２，４－ジメトキシベンジル）－９－フルオロ－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［４'，３'：４，５］ピロロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（２１）の合成。トルエン（７００ｍＬ）中の化合物（２０）（０．２ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の溶液へ、ヨウ素（０．７ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物に、高圧水銀ランプ（４００Ｗ）を４ｈ照射し、その後溶液を、真空において蒸発乾固させ、エーテルから再結晶化し、化合物（２１）（０．１５０ｍｇ、８８％）を黄色固形物として供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 12.09 (br, 1H), 11.87 (br, 1H), 9.11 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.35-8.52 (m, 2H), 7.30-7.65 (m, 8H), 7.00 (d, 1H), 6.69 (s, 1H), 6.40 (d, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.68 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.71 (s, 3H)。MS (ESI) m/z 601.5 [MH]+。
工程４：化合物（２２Ａ）及び（２２Ｂ）（位置異性体）の合成。ＤＭＦ（１ｍｌ）中の化合物（２１）（０．２００ｇ、０．３３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液へ、６０％水素化ナトリウム（０．０２６ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた暗色混合物を、外界温度で１ｈ撹拌し、その後１－（２－クロロエチル）－モルホリン（０．１ｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、外界温度で１６ｈ撹拌し、その後氷冷した１０％クエン酸水溶液（２０ｍｌ）へ注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ／ＴＨＦ（２×１０ｍｌ）により抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において乾燥するまで濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ＤＣＭ１００％からＤＣＭ＋２．５容量％ＭｅＯＨまで）により精製し、個別の（任意に構造を割当て）異性体（２２Ａ）（４０ｍｇ、１６％）及び（２２Ｂ）（４０ｍｇ、１６％）を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR(22A)(400 MHz, CDCl3):δ(ppm) 9.30 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.46 (s, 1H), 7.29-7.66 (m, 8H), 7.11-7.24 (m, 1H), 6.89-7.05 (m, 1H), 6.24-6.57 (m, 2H), 5.31 (s, 2H), 4.74 (s, 4H), 3.85 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.66 (s, 4H), 3.05 (s, 2H), 2.67 (s, 4H)；及び、(22B)(400 MHz, CDCl3):δ(ppm) 12.43 (br, 1H), 8.40-9.11 (m, 4H), 7.30-7.63 (m, 8H), 7.00-7.20 (m, 2H), 6.30-6.59 (m, 2H), 5.32 (s, 2H), 4.82 (s, 4H), 3.89 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.68 (s, 4H), 3.17 (s, 2H), 2.68 (s, 4H)。MS (ESI) m/z 714.3 [MH]+。
工程５：化合物（２３）の合成。アニソール／ＴＦＡの１：１混合液（２ｍｌ）中の異性体（２２Ａ）（０．０８０ｇ、０．１ｍｍｏｌ）の溶液を、マイクロウェーブ反応器中、１５０℃で２ｈ撹拌した。得られた混合物を、外界温度まで冷却し、エーテル（５ｍｌ）で希釈した。沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、ＴＦＡ塩（２３）（０．０５０ｇ、６６％）を供した。この固形物を、ＥｔＯＡｃ／ＴＨＦの２：１混合液（１０ｍＬ）中に溶解し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液、水、及びブラインで洗浄した。有機溶液を、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させ、残渣を、エーテル中で結晶化し、化合物の遊離塩基型（２３）（９ｍｇ、１７％）を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、１０分間かけて５％から８７％のアセトニトリル、保持時間４．６１分）で確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 12.07 (br, 1H), 11.09 (br, 1H), 10.41 (br, 1H), 9.24 (m, 1H), 8.81 (m, 1H), 8.48 (d, 1H), 7.34 (m, 1H), 5.00 (s, 2H), 3.37 (s, 4H), 2.79 (s, 2H), 2.33 (s, 4H)。MS (ESI) m/z 474.3 [M+H]+。
工程６：化合物（２４）の合成。工程５に説明したものと同じ手順を使用し、化合物２２Ｂを利用し、異性体生成物の化合物の遊離塩基型（２４）（８ｍｇ、１６％）を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、１０分間かけて５％から８７％のアセトニトリル、保持時間４．４４分）で確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 12.33 (br, 1H), 11.06 (br, 1H), 10.46 (br, 1H), 9.14 (s, 1H), 8.81 (m, 1H), 8.70 (m, 1H), 8.49 (m, 1H), 7.33 (m, 1H), 4.90 (s, 2H), 3.39 (m, 4H), 2.75 (s, 2H), 2.36 (m, 4H)。MS (ESI) m/z 474.3 [MH]+。
実施例６． ２，１０－ジヒドロキシ－１２－（２－モルホリノエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（３２）の合成
Figure 2022531230000023
 工程１：３－（６－（ベンジルオキシ）－１Ｈ－インドール－３－イル）－４－ブロモ－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンの化合物（２６）の合成。ＴＨＦ（２５ｍｌ）中の６－（ベンジルオキシ）－１Ｈ－インドール（２５）（２．２０ｇ、９．８７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液へ、ＴＨＦ／トルエンの１：３中の１．４Ｍメチルマグネシウムブロミド溶液（７．０ｍｌ、９．８７ｍｍｏｌ）を、アルゴン大気下、ｒｔで滴加した。得られる暗色溶液を、５０～６０℃で１ｈ撹拌した。反応混合物を、ｒｔまで冷却し、ＴＨＦ（２５ｍｌ）中のジブロモマレイミド（２）（２．００ｇ、４．９３ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン大気下で、ｒｔで１ｈ以内で滴加した。この反応混合物を、ｒｔで１ｈ撹拌し、その後氷冷した１０％クエン酸水溶液（２００ｍｌ）へ注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×７０ｍｌ）で抽出し、有機層を水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において乾燥するまで濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ＤＣＭ／ＣＣｌ4の１：１から１００％ＤＣＭまで）により精製し、化合物（２６）（１．８０ｇ、６６％）を、赤茶色がかった固形物として供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 11.96 (br, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.46-7.48 (m, 2H), 7.40 (t, 2H), 7.30-7.35 (m, 1H), 7.02-7.07 (m, 2H), 6.89 (dd, 1H), 6.56-6.57 (m, 1H), 6.46 (dd, 1H), 5.15 (s, 2H), 4.61 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.70 (s, 3H)。MS (ESI) m/z 549.5 [MH]+。
工程２：ｔｅｒｔ－ブチル ６－（ベンジルオキシ）－３－［４－ブロモ－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－３－イル］－１Ｈ－インドール－１－カルボキシラートの化合物（２７）の合成。ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の化合物（２６）（１．８０ｇ、３．２８ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．０２ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液へ、ＴＨＦ（５ｍｌ）中のＢｏｃ－無水物（０．７９ｇ、３．６１ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン大気下、ｒｔで添加した。得られる溶液を、ｒｔで２ｈ撹拌し、その後真空において乾燥するまで濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ＤＣＭ／ＣＣｌ4の１：２から１００％ＤＣＭまで）により精製し、化合物（２７）（１．５５ｇ、７３％）を黄色固形物として供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 8.02 (s, 1H), 7.77 (br, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.47-7.49 (m, 2H), 7.49 (t, 2H), 7.31-7.35 (m, 1H), 7.09 (t, 2H), 6.56 (s, 1H), 6.46 (dd, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.62 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 1.64 (s, 9H)。
工程３：ｔｅｒｔ－ブチル ６－（ベンジルオキシ）－３－［４－［６－（ベンジルオキシ）－１Ｈ－インドール－３－イル］－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－３－イル］－１Ｈ－インドール－１－カルボキシラートの化合物（２８）の合成。ＴＨＦ（５０ｍｌ）中のＨＭＤＳ（１．１１ｇ、６．９０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液へ、ＴＨＦ中の２．５Ｍブチルリチウム溶液（２．８ｍｌ、６．９０ｍｍｏｌ）を、アルゴン大気下、０℃で滴加した。得られる溶液を、０℃で３０分間攪拌し、その後－２０℃まで冷却し、ＴＨＦ（５ｍｌ）中の６－（ベンジルオキシ）－１Ｈ－インドール（０．６２ｇ、２．７８ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。この反応混合物を、－２０℃で４５分間攪拌した。その後ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の化合物（２７）（１．５０ｇ、２．３０ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン大気下、－２０℃で４５分間以内で滴加した。得られた混合物を、－２０℃で４５分間、その後０℃で１ｈ撹拌し、次に氷冷した１０％クエン酸水溶液（２００ｍｌ）へ注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×７０ｍｌ）により抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において乾燥するまで濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液１００％ＤＣＭからＤＣＭ／エーテルの５：１まで）により精製し、化合物（２８）（１．１０ｇ、６１％）を赤茶色がかった固形物として供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): 11.68 (br, 1H), 7.81-7.82 (m, 1H), 7.76-7.78 (m, 1H), 7.71 (br, 1H), 7.30-7.41 (m, 10H), 7.04 (dd, 1H), 6.97 (br, 1H), 6.87 (t, 2H), 6.57-6.63 (m, 2H), 6.47 (dd, 2H), 6.05 (d, 4H), 4.66 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 1.60 (s, 9H)。
工程４：ｔｅｒｔ－ブチル ２，１０－ｂｉｓ（ベンジルオキシ）－６－（２，４－ジメトキシベンジル）－５，７－ジオキソ－５，６，７，１３－テトラヒドロ－１２Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－１２－カルボキシラートの化合物（２９）の合成。トルエン（７００ｍｌ）中の化合物（２８）（０．３５０ｇ、０．４４３ｍｍｏｌ）の溶液へ、触媒量のヨウ素を添加した。得られた混合物に、高圧水銀ランプ（４００Ｗ）を２ｈ照射し、その後真空において蒸発乾固させ、エーテルから再結晶化し、粗生成物（２９）の０．２５０ｇを暗緑色固形物として供した。粗生成物を、ＤＣＭ中に溶解し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ＤＣＭ／エーテルの５：１）により精製し、化合物（２９）（０．１６０ｇ、４７％）を黄色固形物として供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6): 11.17 (br, 1H), 8.99 (d, 1H), 8.80 (d, 1H), 7.69 (1H), 7.36-7.52 (m, 11H), 7.11 (d, 1H), 6.96 (t, 2H), 6.57 (br, 1H), 6.39 (d, 1H), 5.19 (d, 4H), 4.65 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 1.79 (s, 9H)。
工程５：２，１０－ビス（ベンジルオキシ）－６－（２，４－ジメトキシベンジル）－１２－（２－モルホリノエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（７）の合成。ＤＭＦ（１ｍｌ）中の化合物（２９）（０．２４０ｇ、０．３０４ｍｍｏｌ）の溶液へ、６０％水素化ナトリウム（０．０２４ｇ、０．６０８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた暗色混合物を、ｒｔで１ｈ撹拌し、その後１－（２－クロロエチル）－モルホリン（０．０９１ｇ、０．６０８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、ｒｔで１６ｈ撹拌し、その後氷冷した１０％クエン酸水溶液（２０ｍｌ）へ注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍｌ）により抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において乾燥するまで濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ＤＣＭ／エーテル５：１）により精製し、化合物（３０）（０．１３０ｇ、５４％）を黄色固形物として供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル、１０分間かけて４０％から８７％まで、保持時間７．２８分）で確認した。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 11.91 (br, 1H), 8.88-8.91 (m, 2H), 7.52-7.54 (m, 4H), 7.35-7.45 (m, 7H), 7.28 (br, 1H), 7.02-7.06 (m, 3H), 6.59 (br, 1H), 6.43 (d, 1H), 5.28(br, 4H), 4.91 (br, 2H), 4.76 (br, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.29 (br, 4H), 2.72 (br, 2H), 2.34 (br, 4H)。MS (ESI) m/z 801.5 [MH]+。
工程６：６－（２，４－ジメトキシベンジル）－２，１０－ジヒドロキシ－１２－（２－モルホリノエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（３１）の合成。１：１のＴＨＦ／ＭｅＯＨ混合液（２０ｍｌ）中の化合物（３０）（０．１３０ｇ、０．１６２ｍｍｏｌ）の溶液へ、触媒量の炭素上に担持された１０％のパラジウム（１０ｍｇ）を添加した。得られた混合物を、水素大気下、ｒｔで１６ｈ撹拌した。この溶液を濾過し、触媒を除去し、濾液を、ＴＨＦ／ＭｅＯＨにより洗浄した。濾液を、真空において乾燥するまで濃縮し、エーテルから結晶化し、粗生成物（３１）（０．０８０ｇ、８０％）を黄色固形物として供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、１０分間かけてアセトニトリルの５％から８７％まで、保持時間７．０７分）で確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 11.75 (br, 1H), 9.83 (s, 1H), 9.78 (s, 1H), 8.80 (t, 2H), 7.11 (d, 1H), 7.00-7.07 (m, 2H), 6.78-6.83 (m, 2H), 6.59 (d, 1H), 6.43 (dd, 1H), 4.83 (t, 2H), 4.77 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.38 (m, 4H), 2.75 (t, 2H), 2.40 (m, 4H)。MS (ESI) m/z 621.3 [MH]+。
工程７：２，１０－ジヒドロキシ－１２－（２－モルホリノエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（３２）の合成。アニソール／ＴＦＡの１：１混合液（４ｍｌ）中の化合物（８）（０．０８０ｇ、０．１２９ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン大気下、７０～８０℃で５ｈ撹拌した。得られた混合物を、ｒｔまで冷却し、エーテル（５ｍｌ）で希釈した。この沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、ＴＦＡ塩３２（０．０５０ｇ、６６％）として供した。固形物残渣を、ＥｔＯＡｃ／ＴＨＦの２：１混合液（１０ｍｌ）中に溶解し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液、水、及びブラインで洗浄した。この溶液を、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において乾燥するまで濃縮し、エーテルから再結晶化させ、化合物（３２）の遊離塩基型（０．０３０ｇ、４０％）を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、１０分間かけてアセトニトリルの５％から８７％まで、保持時間５．５０分）で確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 11.56 (br, 1H), 10.89 (br, 1H), 9.92 (br, 1H), 9.82 (br, 1H), 8.80-8.86 (m, 2H), 7.12-7.14 (m, 2H), 6.89 (d, 1H), 6.81 (d, 1H), 5.10 (br, 2H), 3.70 (br, 4H), 2.40-2.53 (m, 6H)。MS (ESI) m/z 471.3 [MH]+。
実施例７． ３，９－ジフルオロ－２，１０－ジヒドロキシ－１２－（２－モルホリノエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオン、化合物（３７）の合成
Figure 2022531230000024
 工程１－７：工程１及び３において、６－（ベンジルオキシ）－１Ｈ－インドールの代わりに、６－（ベンジルオキシ）－５－フルオロ－１Ｈ－インドール（実施例２の化合物８）を使用したことを除いて、実施例６で利用した同じ手順を使用し、表題化合物（３７）を生成した。この手順は、化合物（３７）の遊離塩基型（０．０３０ｇ、４０％）を黄色固形物として供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、１０分間にわたりアセトニトリルの５％から８７％まで、保持時間６．０２分）で確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 11.82 (br, 1H), 10.95 (s, 1H), 10.29 (s, 2H), 8.67 (dd, 2H), 7.28 (dd, 2H), 4.84 (t, 2H), 3.34 (m, 4H), 2.71 (t, 2H), 2.54 (m, 2H), 2.37 (m, 2H). MS (ESI) m/z 507.4 [MH]+。
実施例８． 化合物４１及び４２の合成
Figure 2022531230000025
 工程１：３－［６－（ベンジルオキシ）１Ｈ－インドール－３－イル］－４－ブロモ－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンの化合物（２６）の合成。ＴＨＦ（５０ｍＬ）中の６－（ベンジルオキシ）－１Ｈ－インドール（２５）（３．３ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）の撹拌溶液へ、ＴＨＦ／トルエン１：３の混合液中の１．４Ｍメチルマグネシウムブロミド溶液（１０．６ｍＬ、１４．９ｍｍｏｌ）を、アルゴン大気下、外界温度で滴加した。得られる暗色溶液を、４０～５０℃で１ｈ撹拌した。この反応混合物を、外界温度まで冷却し、ＴＨＦ（２５ｍＬ）中の３，４－ジブロモ－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（３）（３．０ｇ、７．５ｍｍｏｌ）の溶液を、Ａｒ下、外界温度で１ｈ滴加した。反応混合物を、アルゴン大気下、外界温度で１ｈ以内撹拌した。この反応混合物を、外界温度で２ｈ撹拌し、次に氷冷した１０％クエン酸水溶液（２００ｍｌ）へ注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）により抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させた。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ＤＣＭの１００％からＤＣＭ／ＥｔＯＡｃの９：１まで）により精製し、化合物（２６）（３．２ｇ、７５％）を供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 11.96 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.84 (d, 1H), 7.28-7.55 (m, 5H), 6.99-7.11 (m, 2H), 6.90 (dd, 1H), 6.56 (s, 1H), 6.47 (dd, 1H), 5.15 (s, 2H), 4.61 (s, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.73 (s, 3H)。
工程２：ｔｅｒｔ－ブチル ３－［４－［６－（ベンジルオキシ）－１Ｈ－インドール－３－イル］－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－３－イル］－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｃ］ピリジン－１－カルボキシラートの化合物（３８）の合成。ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の化合物（２６）（０．６ｇ、１．１ｍｍｏｌ）及びｔｅｒｔ－ブチル ３－（トリブチルスタンニル）－１Ｈ－ピロロ［２，３－ｃ］ピリジン－１－カルボキシラート（１２）（０．７２ｇ、１．４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液へ、ＣｕＢｒ＊ＳＭｅ2（０．２９ｇ、１．４ｍｍｏｌ）及びＰｄ（ＰＰｈ3）4（０．０２５ｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を添加し、得られた混合物を、３０分間還流した。この反応混合物を、ｒｔまで冷却し、その後３３％ＮＨ4ＯＨ水溶液を添加した（３．６ｍｌ）。触媒を、セライト床を通す濾過により除去し、セライト層を、ＥｔＯＡｃ（２×３０ｍｌ）により洗浄した。有機層を、分離し、次に２０％炭酸ナトリウム水溶液により、青色の変色が消えるまで洗浄し、その後ブラインで洗浄し、真空において蒸発乾固させた。残渣を、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ＤＣＭの１００％からＤＣＭ／ＥｔＯＡｃの１：１まで）により精製し、化合物（３８）（０．４５ｇ、６０％）を供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 11.76 (s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.01 (s, 1H), 8.06 (d, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.21-7.47 (m, 6H), 7.06 (d, 1H), 6.98 (s, 1H), 6.82 (d, 1H), 6.70 (d, 2H), 6.57 (s, 1H), 6.39-6.51 (m, 2H), 5.02 (s, 2H), 4.67 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 1.64 (s, 9H)。MS (ESI) m/z 685.7 [MH]+。
工程３：１０－（ベンジルオキシ）－６－（２，４－ジメトキシベンジル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－ピリド［４'，３'：４，５］ピロロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（３９）の合成。トルエン（７００ｍＬ）中の化合物（３８）（０．１５ｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の溶液へ、ヨウ素（０．７ｇ、２．８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた混合物に、高圧水銀ランプ（４００Ｗ）を４ｈ照射し、その後真空において蒸発乾固させ、エーテルから再結晶化し、化合物（３９）（０．１２ｇ、９４％）を黄色固形物として供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 13.20 (br.s. 1H), 12.56 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 8.70 (d, 1H), 8.50 (d, 1H), 7.50-7.65 (m, 2H), 7.32-7.49 (m, 3H), 7.29 (s, 1H), 7.01 (t, 1H), 6.57 (s, 1H), 6.26 (d, 1H), 4.70 (c, 2H), 4.68 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.70 (s, 3H)。MS (ESI) m/z 583.3 [MH]+。
工程４：化合物（４０Ａ）及び（４０Ｂ）（個別の異性体）の合成。ＤＭＦ（５ｍｌ）中の化合物３９（０．２０ｇ、０．３４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液へ、６０％水素化ナトリウム（０．０４ｇ、０．９６ｍｍｏｌ）を添加した。得られた暗色混合物を、外界温度で１ｈ撹拌し、その後１－（２－クロロエチル）－モルホリン（０．８ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、外界温度で１６ｈ撹拌し、その後氷冷した１０％クエン酸水溶液（２０ｍｌ）へ注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ／ＴＨＦ（２×１０ｍｌ）で抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において乾燥するまで濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ＤＣＭの１００％からＤＣＭ＋２．５容量％ＭｅＯＨまで）により精製し、個別の位置異性体（４０Ａ）（６５ｍｇ、２７％）及び（４０Ｂ）（２５ｍｇ、１０％）を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (40A)(400 MHz, CDCl3):δ(ppm) 9.19 (s, 1H), 8.85-9.04 (m, 2H), 8.50 (s, 1H), 7.48-7.60 (m, 2H), 7.34-7.48 (m, 3H), 7.17 (d, 1H), 7.02 (d, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.38 (d, 1H), 5.19 (s, 2H), 4.76 (s, 2H), 4.47-4.65 (m, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.66 (br, 4H), 2.98 (br, 2H), 2.59 (br, 4H)；(40B)(400 MHz, CDCl3):δ(ppm) 12.27 (br, 1H), 8.80-9.10 (m, 3H), 8.56 (s, 1H), 7.48-7.58 (m, 2H), 7.32-7.49 (m, 3H), 7.0-7.21 (m, 3H), 6.44 (d, 1H),6.37 (dd, 1H), 5.23 (s, 2H), 4.68 (br, 4H), 3.84 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.40 (br, 4H), 3.01-3.22 (m, 2H), 2.56-2.8 (m, 4H)。MS (ESI) m/z 696.3 [MH]+。
工程５：化合物（４１）の合成。アニソール／ＴＦＡの１：１混合液（２ｍｌ）中の（４０Ａ）（０．０６５ｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）の溶液を、マイクロウェーブ反応器内で、１５０℃で２ｈ撹拌した。得られた混合物を、外界温度まで冷却し、エーテル（５ｍｌ）により希釈した。その沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、化合物（４１）のＴＦＡ塩（０．０７ｇ）を供した。この固形物を、ＥｔＯＡｃ／ＴＨＦの２：１混合液（１０ｍＬ）中に溶解し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液、水、及びブラインで洗浄した。有機溶液を、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させ、残渣を、エーテル中で結晶化し、化合物（４１）の遊離塩基型（４０ｍｇ、９７％）を供した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 11.06 (br, 1H), 9.93 (br, 1H), 9.15 (s, 1H), 8.82-8.92 (m, 2H), 8.51 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.89 (d, 1H), 4.92 (br, 2H), 3.76 (s, 4H), 2.11 (br, 2H), 2.37 (br, 4H)。この遊離塩基試料を、ＴＦＡ－含有溶離液による分取ＨＰＬＣに供した。この生成物画分を、真空において蒸発乾固させ、化合物（４１）のＴＦＡ塩（２１ｍｇ、３１％）を得た。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、１０分間かけて５％から８７％までのアセトニトリル、保持時間４．３３分）で確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 11.29 (s, 1H), 10.17 (br, 1H), 9.33 (s, 1H), 9.20 (d, 1H), 8.89 (d, 1H), 8.68 (s, 1H), 7.22 (s, 1H), 6.98 (br, 1H), 5.14 (br, 4H), 1.23 (br, 2H)。MS (ESI) m/z 456.5 [M+H]+。
工程６：化合物（４２）の合成。化合物（４０Ｂ）を利用し、工程５において説明したものと同じ手順で、生成物の化合物（４２）のＴＦＡ塩（１４ｍｇ、２１％）を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、１０分間かけて５％から８７％までのアセトニトリル、保持時間４．４１分）で確認した。1H-NMR (400 MHz, CD3OD):δ(ppm) 9.33 (s, 1H), 9.23 (d, 1H), 8.26 (d, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.54 (d, 1H), 4.95 (br, 2H), 3.76 (br, 4H), 3.24 (br, 2H), 2.94 (br, 4H)。MS (ESI) m/z 456.5 [MH]+。
実施例９． ｔｅｒｔ－ブチル ６－（２，４－ジメトキシベンジル）－３，９－ジフルオロ－５，７－ジオキソ－５，６，７，１３－テトラヒドロ－１２Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－１２－カルボキシラートの化合物（４７）の合成
Figure 2022531230000026
 工程１：３－ブロモ－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－４－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンの化合物（４４）の合成。ＴＨＦ（２０ｍＬ）中の５－フルオロ－１Ｈ－インドール（４３）（２．５ｇ、１８．５ｍｍｏｌ、Sigma Aldrich、セントルイス、MO)の撹拌溶液へ、ＴＨＦ／トルエン１：３中の１．４Ｍメチルマグネシウムブロミド溶液（１３．２ｍｌ、１８．５ｍｍｏｌ）を、アルゴン大気下、ｒｔで滴加した。得られる暗色溶液を、５０～６０℃で１ｈ撹拌した。この反応混合物を、ｒｔまで冷却し、ＴＨＦ（１０ｍｌ）中のジブロモマレイミド（３）（２．５ｇ、６．２ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン大気下、ｒｔで、１ｈ以内で滴加した。この反応混合物を、ｒｔで１ｈ撹拌し、その後、氷冷した１０％クエン酸水溶液（１００ｍｌ）へ注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍｌ）で抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において乾燥するまで濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液１００％ＤＣＭからＤＣＭ／ＥｔＯＡｃの９：１まで）により精製し、化合物（４４）（２．８ｇ、９９％）を供し、これを更に精製することなく使用した。
工程２：ｔｅｒｔ－ブチル ３－［４－ブロモ－１－（２，４－ジメトキシベンジル）－２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－３－イル］－５－フルオロ－１Ｈ－インドール－１－カルボキシラートの化合物（４５）の合成。ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の化合物（４４）（２．８ｇ、６．１ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（０．０３５ｇ、０．３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液へ、ＴＨＦ（５ｍｌ）中のＢｏｃ－無水物（１．３ｇ、６．１ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン大気下、ｒｔで添加した。得られる溶液を、ｒｔで２ｈ撹拌し、次に真空において乾燥するまで濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液１００％ＤＣＭからＤＣＭ／ＥｔＯＡｃの９：１まで）により精製し、化合物（４５）（３．０ｇ、８８％）を供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 8.90 (s, 1H), 8.14 (dd, 1H), 7.57 (dd, 1H), 7.24-7.36 (m, 1H), 7.12 (d, 1H), 6.57 (d, 1H), 6.46 (dd, 1H), 4.63 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 1.65 (s, 9H)。
工程３：ｔｅｒｔ－ブチル ３－［１－（２，４－ジメトキシベンジル）－４－（５－フルオロ－１Ｈ－インドール－３－イル）－２，５－ジオキソ－２，５－ジヒドロ－１Ｈ－ピロール－３－イル］－５－フルオロ－１Ｈ－インドール－１－カルボキシラートの化合物（４６）の合成。ＴＨＦ（５０ｍｌ）中のＨＭＤＳ（３．２ｇ、１６．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶液へ、ＴＨＦ中の２．５Ｍブチルリチウム溶液（６．４ｍｌ、１６．０ｍｍｏｌ）を、アルゴン大気下、０℃で滴加した。得られる溶液を、０℃で３０分間攪拌し、その後－２０℃まで冷やし、ＴＨＦ（５ｍｌ）中の５－フルオロ－１Ｈ－インドール（４３）（０．９ｇ、６．０ｍｍｏｌ）の溶液を滴加した。この反応混合物を、－２０℃で４５分間攪拌した。その後ＴＨＦ（３０ｍｌ）中の化合物４５（３．０ｇ、５．０ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン大気下、－２０℃で、４５分間以内で滴加した。得られた混合物を、－２０℃で４５分間、その後０℃で１ｈ攪拌し、その後氷冷した１０％クエン酸水溶液（１００ｍｌ）へ注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×１００ｍｌ）により抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において乾燥するまで濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液１００％ＤＣＭからＤＣＭ／ＥｔＯＡｃの７：３まで）により精製し、化合物（４６）（２．３ｇ、８５％）を供した。
工程４：ｔｅｒｔ－ブチル ６－（２，４－ジメトキシベンジル）－３，９－ジフルオロ－５，７－ジオキソ－５，６，７，１３－テトラヒドロ－１２Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－１２－カルボキシラートの化合物（４７）の合成。トルエン（７００ｍｌ）中の化合物（４６）（０．５０ｇ、８ｍｍｏｌ）の溶液へ、触媒量のヨウ素を添加した。得られた混合物に、高圧水銀ランプ（４００Ｗ）を２ｈ照射し、その後真空において蒸発乾固させ、エーテルから再結晶化し、化合物（４７）（０．３２ｇ、６４％）を供した。生成物の純度は、ＮＭＲで確認した。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6):11.72 (s, 1H), 8.51 (dd,1H), 7.76 (dd, 1H), 7.30-7.47 (m, 1H), 6.96 (d, 1H), 6.57 (s, 1H), 6.40 (d, 1H), 4.62 (s, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 1.67 (s, 9H)。
実施例１０． ３，９－ジフルオロ－１２－（２－モルホリン－４－イルエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（４９）の合成
Figure 2022531230000027
 工程５：６－（２，４－ジメトキシベンジル）－３，９－ジフルオロ－１２－（２－モルホリン－４－イルエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（４８）の合成。ＤＭＦ（５ｍｌ）中の化合物（４７）（０．２ｇ、０．４ｍｍｏｌ）の溶液へ、６０％水素化ナトリウム（０．０４７ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた暗色混合物を、ｒｔで１ｈ撹拌し、その後１－（２－クロロエチル）－モルホリン（０．１２ｇ、０．８ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、ｒｔで１６ｈ撹拌し、次に氷冷した１０％クエン酸水溶液（２０ｍｌ）へ注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍｌ）により抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において乾燥するまで濃縮した。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液１００％ＤＣＭから１００％ＥｔＯＡｃまで）により精製し、化合物（４８）（０．１ｇ、５０％）を供した。
工程６：３，９－ジフルオロ－１２－（２－モルホリン－４－イルエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（４９）の合成。アニソール／ＴＦＡの１：１混合液（２ｍｌ）中の化合物４８（０．１ｇ、０．１６ｍｍｏｌ）の溶液を、マイクロウェーブ反応器内で、１３０℃で５分間攪拌した。得られた混合物を、ｒｔまで冷やし、エーテル（５ｍｌ）で希釈した。その沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、その後固形物を、ＥｔＯＡｃ／ＴＨＦの２：１混合液（１０ｍｌ）中に溶解し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液、水、及びブラインで洗浄した。この溶液を、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において乾燥するまで濃縮し、エーテルから再結晶化し、化合物（４９）（０．０３０ｇ、４０％）の遊離塩基型を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、１０分間かけてアセトニトリル５％から８７％まで、保持時間６．８０分）で確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 12.18 (br., 1H), 11.07 (br, 1H), 8.56-8.90 (m, 2H), 7.66-7.95 (m, 2H), 7.27-7.57 (m, 2H), 4.96 (s, 2H), 3.21-3.29 (m, 4H), 2.74 (s, 2H), 2.18-2.41 (m, 4H)。MS (ESI) m/z 475.3 [MH]+。
実施例１１． ３，９－ジフルオロ－１２－（２－ピペリジン－１－イルエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（５１）の合成
Figure 2022531230000028
 工程１－２：３，９－ジフルオロ－１２－（２－ピペリジン－１－イルエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（５１）の合成。１－（２－クロロエチル）ピペリジン塩酸塩（５．００ｇ、２７．０ｍｍｏｌ）を、水（５ｍｌ）に溶解し、この撹拌溶液へ、エーテル（１０ｍｌ）を添加した。激しく攪拌している得られた混合物へ、水（５ｍｌ）中のＫＯＨ（１．５０ｇ、２７．０ｍｍｏｌ）の溶液を、ｒｔで５分間かけて滴加した。この有機層を分離し、水層を、エーテル（２×１０ｍｌ）で抽出した。一緒にした有機抽出液を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において一定の残留容積になるまで蒸発させ、粗１－（２－クロロエチル）ピペリジン（２．５ｇ、６２％）を明黄色油状物として生じた。この生成物を、精製せずに、次の合成に使用した。
ＤＭＦ（５ｍｌ）中の化合物（４７）（０．１９、０．４ｍｍｏｌ）の溶液へ、６０％水素化ナトリウム（０．０４７ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた暗色混合物を、外界温度で１ｈ撹拌し、その後１－（２－クロロエチル）ピペリジン（０．１１ｇ、０．８ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、ｒｔで１６ｈ撹拌し、その後反応混合物を、氷冷した１０％クエン酸水溶液（２０ｍＬ）へ注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍｌ）で抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させた。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液１００％ＤＣＭから１００％ＥｔＯＡｃまで）により精製し、化合物（５０）（０．１ｇ、５０％）を供した。この生成物を、アニソール／ＴＦＡの１：１混合液（２ｍｌ）中に溶解し、この溶液を、マイクロウェーブ反応器内で、１３０℃で５分間攪拌した。得られた混合物を、ｒｔまで冷却し、エーテル（５ｍｌ）で希釈した。沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄した。この固形物を、ＥｔＯＡｃ／ＴＨＦの２：１の混合液（１０ｍｌ）中に溶解し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液、水、及びブラインで洗浄した。この有機溶液を、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させ、残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液１００％ＤＣＭからＤＣＭ／ＴＨＦの９：１まで）により精製し、化合物（５１）（２０ｍｇ、３２％）の遊離塩基型を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、１０分間かけてアセトニトリル５％から８７％、保持時間６．８４分）で確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 12.69 (br, 1H), 11.05 (s, 1H), 8.56-8.97 (m, 2H), 7.66-7.98 (m, 2H), 7.27-7.57 (m, 2H), 4.88 (s, 2H), 2.75 (s, 2H), 2.20-2.42 (m, 4H), 1.14-1.39 (m, 6H)。 MS (ESI) m/z 473.3 [MH]+。
実施例１２． １２－｛２－［（２Ｒ，６Ｓ）－２，６－ジメチルピペリジン－１－イル］エチル｝－３，９－ジフルオロ－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（５３）の合成
Figure 2022531230000029
工程１－２：１２－｛２－［（２Ｒ，６Ｓ）－２，６－ジメチルピペリジン－１－イル］エチル｝－３，９－ジフルオロ－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオン（５３）の合成。ＤＭＦ（５ｍｌ）中の化合物（４７）（０．１９ｇ、０．４ｍｍｏｌ）の溶液へ、６０％水素化ナトリウム（０．０４７ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた暗色混合物を、外界温度で１ｈ撹拌し、その後（２Ｒ，６Ｓ）－１－（２－クロロエチル）－２，６－ジメチルピペリジン（０．１３ｇ、０．８ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、ｒｔで１６ｈ撹拌し、その後氷冷した１０％クエン酸水溶液（２０ｍＬ）へ注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍｌ）で抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させた。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液１００％ＤＣＭから１００％ＥｔＯＡｃまで）により精製し、化合物（５２）（０．１２ｇ、５３％）を供した。この生成物を、アニソール／ＴＦＡの１：１の混合液（２ｍｌ）中に溶解し、この溶液を、マイクロウェーブ反応器内で、１３０℃で５分間撹拌した。得られた混合物を、ｒｔまで冷却し、Ｅｔ2Ｏ（５ｍｌ）で希釈した。この沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄した。固形物を、ＥｔＯＡｃ／ＴＨＦの２：１の混合液（１０ｍｌ）中に溶解し、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液、水、及びブラインで洗浄した。この溶液を、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させ、残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液１００％ＤＣＭからＤＣＭ／ＴＨＦの７：３まで）により精製し、化合物（５３）（２５ｍｇ、３５％）を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、１０分間かけてアセトニトリル５％から８７％まで、保持時間６．７８分）で確認した。1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 13.17 (br, 1H), 11.05 (s, 1H), 8.56-8.84 (m, 2H), 7.66-7.91 (m, 2H), 7.19-7.57 (m, 2H), 4.73 (s, 2H), 3.07 (s, 2H), 1.04-1.65 (m, 6H), 0.74 (s, 6H)。MS (ESI) m/z 501.3 [MH]+。
実施例１３． ２，１０－ジヒドロキシ－１２－（２－ピペリジノエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオン（ＺＥ１２－００２７Ａ）の合成
Figure 2022531230000030
 工程１：２，１０－ビス（ベンジルオキシ）－６－（２，４－ジメトキシベンジル）－１２－（２－ピペリジノエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（５４）の合成。ＤＭＦ（１ｍｌ）中のｔｅｒｔ－ブチル ２，１０－ビス（ベンジルオキシ）－６－（２，４－ジメトキシベンジル）－５，７－ジオキソ－５，６，７，１３－テトラヒドロ－１２Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－１２－カルボキシラート（２９）（０．３２０ｇ、０．４０６ｍｍｏｌ）の溶液へ、６０％水素化ナトリウム（０．０３３ｇ、０．８１２ｍｍｏｌ）を添加した。得られた暗色混合物を、ｒｔで１ｈ撹拌し、その後１－（２－クロロエチル）－ピペリジン（０．１２０ｇ、０．８１２ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、ｒｔで１６ｈ撹拌し、氷冷した１０％クエン酸水溶液（２０ｍｌ）に注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍｌ）で抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させた。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液ＤＣＭ／エーテル５：１）により精製し、化合物（５４）（０．１８０ｇ、５６％）を黄色固形物として供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル、勾配４０％から８７％まで、保持時間７．１１分）で確認した。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 12.28 (br, 1H), 8.91 (d, 1H), 8.86 (d, 1H), 7.53-7.58 (m, 6H), 7.36-7.46 (m, 6H), 7.09 (d, 1H), 7.01 (t, 2H), 6.59 (s, 1H), 6.43 (dd, 1H), 5.32 (s, 4H), 5.22 (s, 2H), 4.75 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 3.59-3.66 (m, 2H), 3.43-3.52 (m, 2H), 2.98-3.11 (m, 2H), 1.75-1.92 (m, 5H), 1.33-1.46 (m, 1H)。MS (ESI) m/z 799.5 [MH]+。
工程２：６－（２，４－ジメトキシベンジル）－２，１０－ジヒドロキシ－１２－（２－ピペリジノエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（５５）の合成。ＴＨＦ／ＭｅＯＨの１：１混合液（２０ｍｌ）中の化合物（５４）（０．１８０ｇ、０．２２５ｍｍｏｌ）の溶液へ、触媒量の炭素上に担持された１０％パラジウム（１０ｍｇ）を添加した。得られた混合物を、水素大気下、ｒｔで１６ｈ撹拌した。触媒を濾過により除去し、ＴＨＦ／ＭｅＯＨで洗浄した。濾液を、真空において蒸発乾固させ、残渣を、エーテルにより結晶化し、化合物（５５）（０．１００ｇ、７１％）を黄色固形物として供した。生成物の純度は、ＬＣＭＳ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル、勾配５％から８７％まで、保持時間７．１３分）で確認した。MS (ESI) m/z 799.5 [MH]+。
工程３：２，１０－ジヒドロキシ－１２－（２－ピペリジノエチル）－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオン（５６）の合成。アニソール／ＴＦＡの１：１混合液（４ｍｌ）中の化合物（５５）（０．１００ｇ、０．１６２ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン大気下、７０～８０℃で５ｈ撹拌した。得られた混合物を、ｒｔまで冷却し、エーテル（５ｍｌ）で希釈した。この沈殿物を濾過し、エーテルで洗浄し、化合物（５６）のＴＦＡ塩型（０．０３０ｇ、４０％）を黄色固形物として供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、アセトニトリル、勾配５％から８７％まで、保持時間５．８２分）で確認した。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 12.01 (s, 1H), 11.02 (br, 1H), 10.89 (s, 1H), 9.92 (s, 1H), 9.77 (s, 1H), 8.86 (d, 1H), 8.80 (d, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.84 (dd, 2H), 5.26-5.31 (m, 2H), 3.65-3.70 (m, 2H), 3.44-3.52 (m, 2H), 3.04-3.11 (m, 2H), 1.74-1.92 (m, 5H), 1.34-1.45 (m, 1H)。MS (ESI) m/z 469.4 [MH]+。
実施例１４． １２－｛２－［（２Ｒ，６Ｓ）－２，６－ジメチルピペリジン－１－イル］エチル｝－３，９－ジフルオロ－２，１０－ジヒドロキシ－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（５９）の合成
Figure 2022531230000031
 工程１：２，１０－ビス（ベンジルオキシ）－６－（２，４－ジメトキシベンジル）－１２－｛２－［（２Ｒ，６Ｓ）－２，６－ジメチルピペリジン－１－イル］エチル｝－３，９－ジフルオロ－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（５７）の合成。ＤＭＦ（５ｍｌ）中の化合物（３４）（０．２ｇ、０．２４ｍｍｏｌ）の溶液へ、６０％水素化ナトリウム（０．０１９ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた暗色混合物を、外界温度で１ｈ撹拌し、その後（２Ｒ，６Ｓ）－１－（２－クロロエチル）－２，６－ジメチルピペリジン（０．０８５ｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を、ｒｔで１６ｈ撹拌し、その後氷冷した１０％クエン酸水溶液（２０ｍｌ）へ注いだ。得られた混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍｌ）により抽出し、有機層を、水、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空において蒸発乾固させた。残渣を、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル、溶離液１００％ＤＣＭから１００％ＥｔＯＡｃまで）により精製し、粗化合物（５７）（１５０ｍｇ、７２％）を供した。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 8.55 (d, 2H), 7.31-7.65 (m, 12H), 7.22 (d, 1H), 6.92 (d, 1H), 6.57 (d, 1H), 6.38 (dd, 1H), 5.36 (s, 2H), 5.33 (s, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.45-4.55 (m, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 2.90-3.11 (m, 2H), 2.35-2.45 (m, 2H), 0.90-1.59 (m, 6H), 0.68 (s, 3H), 0.66 (s, 3H)。
工程２：６－（２，４－ジメトキシベンジル）－１２－｛２－［（２Ｒ，６Ｓ）－２，６－ジメチルピペリジン－１－イル］エチル｝－３，９－ジフルオロ－２，１０－ジヒドロキシ－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（５８）の合成。ＴＨＦ／ＭｅＯＨの１：１混合液（２０ｍｌ）中の化合物（２）（０．１５０ｇ、０．１６２ｍｍｏｌ）の溶液へ、触媒量の炭素に担持された１０％パラジウム（１０ｍｇ）を添加した。得られた混合物を、水素大気下、ｒｔで１６ｈ撹拌した。触媒を濾過により除去し、ＴＨＦ／ＭｅＯＨで洗浄した。濾液を、真空において蒸発乾固させ、残渣を、エーテルにより結晶化させ、化合物（５８）（０．１００ｇ、８２％）を黄色固形物として供した。
工程３：１２－｛２－［（２Ｒ，６Ｓ）－２，６－ジメチルピペリジン－１－イル］エチル｝－３，９－ジフルオロ－２，１０－ジヒドロキシ－１２，１３－ジヒドロ－５Ｈ－インドロ［２，３－ａ］ピロロ［３，４－ｃ］カルバゾール－５，７（６Ｈ）－ジオンの化合物（５９）の合成。アニソール／ＴＦＡの１：１混合液（２ｍｌ）中の化合物５８（０．１００ｇ）の溶液を、９０℃で１２ｈ撹拌した。得られた混合物を、外界温度まで冷却し、エーテル（５ｍｌ）で希釈した。この沈殿物を、濾過し、エーテルで洗浄し、化合物（５９）（２０ｍｇ、３３％）を供した。最終生成物の純度は、ＮＭＲ及びＨＰＬＣ（Ｃ１８カラム、１０分間かけてアセトニトリル５％から８７％まで、保持時間６．１８分）で確認した。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6):δ(ppm) 11.87 (s, 1H), 11.05 (s, 1H), 10.60 (s, 1H), 10.40 (s, 1H), 9.40 (s, 1H), 8.74 (d, 1H), 8.65 (d, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.26 (d, 1H), 5.09-5.43 (m, 2H), 3.23-3.45 (m, 4H), 1.44-2.04 (m, 6H), 1.23 (s, 6H)。MS (ESI) m/z 533.4 [MH]+。
実施例１５：
キナーゼアッセイ
ＰＩＭキナーゼの阻害に関する本開示の化合物の有効性を評価するために、キナーゼ阻害活性を測定する２種の異なるアッセイを利用した。ひとつのアッセイは、放射標識されたＡＴＰを利用する標準生化学アッセイであり、ここでキナーゼ活性の５０％阻害濃度（ＩＣ50）は、標準のペプチド基質への放射標識取込みの量を定量することにより、測定した。使用した第二のアッセイは、Perkin Elmer社のＬＡＮＣＥ（登録商標）ウルトラキナーゼアッセイであり、これはULight(商標)-標識したペプチド基質、及び好適なユーロピウム-標識した抗－ホスホ抗体を使用する。この基質が関心対象のキナーゼによりリン酸化され始めると、この基質上のリン酸化部位は、ユーロピウム-標識した抗－ホスホ抗体により認識される。ユーロピウムドナー発蛍光団の３２０ｎｍ又は３４０ｎｍでの励起時に、エネルギーは、基質上のULightアクセプタ色素へ移動され、６６５ｎｍの光の放出を生じる（ＦＲＥＴ）。発光強度は、ULightペプチドリン酸化のレベルに比例する。キナーゼインヒビターは、ＦＲＥＴシグナルを減少し、その結果阻害効能の正確で感度の良い測定を提供する。
生化学キナーゼアッセイ
基本の生化学アッセイは、放射標識されたＡＴＰを利用し、下記一般式に従う、放射性リンのチロシン－含有ペプチド基質へのキナーゼ－触媒した移動を測定する：
反応：基質＋［γ－33Ｐ］－ＡＴＰ→33Ｐ－基質＋ＡＤＰ
ＰＩＭ３のために使用された標準プロトコールは、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2、１０ｍＭ ＭｎＣｌ2、１ｍＭ ＥＧＴＡ、０．０２％Ｂｒｉｊ３５、０．０２ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ、０．１ｍＭ Ｎａ3ＶＯ4、２ｍＭ ＤＴＴ、０．０２％ Ｂｒｉｊ３５、１０μＭ ＡＴＰ、及び２０μＭペプチド基質RSRHSSYPAGTを含有する２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）において実行された捕獲アッセイを使用し、Reaction Biology社(モルバーン、PA)により実行された。ＤＭＳＯ中のインヒビターを、ＤＭＳＯの最終濃度が１％を超えないように、及び酵素をＡＴＰの消費が１０％未満であるように添加した。試薬を一緒にし、且つ３０℃で３０分間インキュベーションし、この反応を、［γ－33Ｐ］－ＡＴＰ（１０μＣｉ／ｍＬ［γ－33Ｐ］－ＡＴＰ）の添加により開始し、３０℃で２ｈインキュベーションした。その後この反応を、１／３容積の停止試薬（ｄＨ2０中０．２５ｍＭ ＥＤＴＡ及び３３ｍＭ ＡＴＰ）の添加により、停止した。１５ｍＬアリコートを取りだし、Ｐ－８１フィルターマットイオン交換ペーパー上にスポッティングし、１０％（ｗ／ｖ）クロロ酢酸及びｄＨ2０により連続して洗浄し、ＡＴＰを除去した。結合した33Ｐ－ペプチド基質を、シンチレーション計数により定量し、壊変毎分（ｄｐｍ）を得、これはＰＩＭ３により生成された33Ｐ－ペプチドの量に正比例し、これを使用し、各化合物に関するＩＣ50を決定した。ＰＩＭ１及びＰＩＭ２に関するアッセイは、ＰＩＭ１についてペプチド基質KKRNRTLTKを、及びＰＩＭ２についてRSRHSSYPAGTを使用した以外は、同様に行った。
各化合物のＰＩＭキナーゼに対する阻害活性は、Reaction Biology社(モルバーン、PA)から入手可能な、基質リン酸化アッセイの一種である、放射性同位体のフィルター結合アッセイにより測定した。ＰＩＭ３キナーゼが関与するこのアッセイにおいて、この開示の化合物は、０．１ｎＭ～２μＭの範囲、好ましくは０．１ｎＭ～１０ｎＭの範囲のＩＣ50値を示す。実施例４の化合物１８は、ＰＩＭ３に関して０．２５ｎＭのＩＣ50を示す。陽性対照インヒビターであるスタウロスポリンは、このアッセイを使用し、ＰＩＭ３に対し０．１４ｎＭのＩＣ50を有する。
ＰＩＭ１及びＰＩＭ２キナーゼに関与するこのアッセイにおいて、本開示の化合物は、０．１ｎＭ～１０μＭの範囲、好ましくは０．１ｎｍ～＜１０μＭの範囲のＩＣ50を示す。実施例４の化合物１８は、このアッセイを使用し、ＰＩＭ１に関して１．８ｎＭ、及びＰＩＭ２に関して７．４ｎＭのＩＣ50を示す。陽性対照インヒビターのスタウロスポリンは、このアッセイを使用し、ＰＩＭ１及びＰＩＭ２に対し、各々、４．０ｎＭ及び３３ｎＭのＩＣ50を有する。
ＩＣ50値による化合物１８及び１９によるＰＩＭキナーゼの生化学阻害の例は、表１に示される。
Figure 2022531230000032
 この生化学アッセイを使用し、ＰＩＭ１－３を標的化する化合物１８に関するＩＣ50プロットを、図１Ａ、１Ｂ及び１Ｃに提供している。
ＬＡＮＣＥ（登録商標）ウルトラキナーゼアッセイ
このアッセイは、２工程で、３８４－ウェルプレートにおいて実行した：
ＰＩＭキナーゼを、緩衝液中でULight-基質(CREBtide)と混合し、１０分間インキュベーションした。引き続き、ＡＴＰ及び本開示の分子を、キナーゼ緩衝液へ、好適な濃度で添加し、この反応液を、暗所において、室温で１時間インキュベーションした。
１ｈ後、ＥＤＴＡを添加し、このキナーゼ反応を停止し、Eu-W1024-標識した抗-ホスホセリン-CREB(Ser133)抗体(抗-ホスホCREBtide特異的抗体)を、ＬＡＮＣＥ検出緩衝液中の反応物へ添加した。この混合物を、３０分間インキュベーションし、抗体をリン酸化部位に結合させ、その後このプレートを、Tecanマイクロプレートリーダーを用いて測定した。
Figure 2022531230000033
Tecan測定パラメータ：
励起フィルター：３２５ｎｍ(BW 20nm)
吸収フィルター１：６１６ｎｍ(BW 12nm)
吸収フィルター２：６６５ｎｍ(BW 12nm)
ゲイン：１００
Ｚ－位置：２３８００
遅滞時間：６０ｕｓ
積分時間：５００ｕｓ
使用した材料：
プレート：３８４ウェル、白色Corning低容積(#3674)
Tecan Infinite M1000マイクロプレートリーダー(Thermo Fisher、ウォルサ、MA)
マルチチャネルピペット：５～１２０μｌ、０．２～１０μｌ
フリーザー：－２０℃
P30-384FXピペットチップ(Beckman)
Biomek FXラボラトリー自動化ワークステーション
試薬：
ＰＩＭ１キナーゼ１０ｕｇ(#0186-0000-1；ProQinase、フライブルグ、独国)
ＰＩＭ２キナーゼ１０ｕｇ(#0223-0000-1；ProQinase、フライブルグ、独国)
ＰＩＭ３キナーゼ１０ｕｇ(#P37-10BG；SignalChem、リッチモンド、カナダ)
LANCE（登録商標）Ultra ULight(商標)-CREBtide 5nmol(#TRF0107-M；PerkinElmer、ウォルサム、MA)
ＡＴＰ(#A1388；Sigma、セントルイス、MO)－１００ｍＭストック液
Eu-W1024-標識した抗－ホスホセリン－ＣＲＥＢ（Ｓｅｒ１３３）抗体(#TRF0200-D；PerkinElmer、ウォルサム、MA)
キナーゼアッセイ緩衝液－５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）、１ｍＭ ＥＧＴＡ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2、０．０１％ＢＲＩＪ－３５。
ＰＩＭキナーゼに対する各化合物の阻害活性は、ChemDiv社(サンディエゴ、CA)により、LANCE(登録商標) Ultraキナーゼアッセイで測定した。２種の既知の汎－ＰＩＭインヒビターであるPIM447及びAZD-1208(両方共Selleckchem社、ヒューストン、TX、USAから購入)を、陽性対照として使用した。このアッセイを使用して測定したＰＩＭ１、ＰＩＭ２、及びＰＩＭ３のＡＴＰ Ｋｍ値は、以下であった：ＰＩＭ１＝１７０μＭ、ＰＩＭ２＝４μＭ、ＰＩＭ３＝１７μＭ。ＬＡＮＣＥ（登録商標）ウルトラキナーゼアッセイにより測定したこの開示の化合物を使用するＰＩＭキナーゼ阻害の例は、表１に、ＩＣ50値及び使用したＡＴＰ濃度と共に示している。
Figure 2022531230000034
 ０．１ｍＭ ＡＴＰでＬＡＮＣＥアッセイを使用しＰＩＭ１－３を標的化している化合物３２及び５３の重ねたＩＣ50プロットは、図２Ａ及び２Ｂに提供される。
実施例１６
ＰＩＭインヒビターに関する細胞－ベースの成長阻害
成長及び増殖阻害アッセイに使用した癌細胞株は、RIKEN(東京、日本)から購入した肝癌細胞株Ｈｕｈ７以外は、商業的共有業者(Life Technologies、カールスバッド、CA又はATCC、マナサス、VA)から入手した。全ての細胞株は、供給業者の指示に従い、１０％ウシ胎仔血清(Thermo Fisher、ウォルサム、MA)を含有する推奨される培地内で貯蔵し且つ維持した。活性についてＰＩＭインヒビターをスクリーニングする為に使用した癌細胞株は、以下を含む：
膵臓：ＭＩＡ ＰａＣａ－２、ＰＡＮＣ－１、Ｃａｐａｎ－１、ＰＳＮ１、及びＪＯＰＡＣＡ－１
結腸直腸：Ｃａｃｏ－２、ＣＯＬＯ ３２０、ＤＬＤ－１、ＨＣＴ－１５、ＨＣＴ－１１６、ＨＴ－２９、及びＳＷ４８
胃：ＡＧＳ、ＳＮＵ－１、ＳＮＵ－５、ＳＮＵ－１６、Ｈｓ ７４６Ｔ、ＮＣＩ－Ｎ８７、ＫＡＴＯ ＩＩＩ、ＨＧＣ－２７、ＭＮＫ２８、ＭＮＫ４５
肝臓：ＨｅｐＧ２、Ｃ３Ａ、ＨｕＨ７、Ｈｅｐ３Ｂ、ＨＬＥ、ＨｅｐａＲＧ、ＨＬＦ、ＳＫ－Ｈｅｐ１、ＰＬＣ／ＰＲＦ／５
前立腺：ＤＵ－１４５、ＰＣ－３及びＬＮＣａＰ、ＬＡＰＣ－４、ＬＡＰＣ－９、及びＶＣａＰ
ユーイング肉腫：Ａ６７３、ＴＣ－７１、ＲＤ－ＥＳ、Ａ４５７３、Ｈｓ ８２２Ｔ、Ｈｓ ８６３Ｔ
癌細胞成長阻害データ：
この開示の化合物を、CELL TITER-GLO（登録商標）2.0ルミネセント細胞生存度アッセイ(Promega社、マジソン、WI)を使用し、ＨｅｐＧ２、Ｈｕｈ７、ＨｅｐＲＧ、Ａ６７３、及びＤＵ－１４５を含む癌細胞株に対する成長阻害について試験した。CELL TITER-GLO（登録商標）2.0ルミネセント細胞生存度アッセイは、培養物中の生存細胞の数を決定するための、感度の良い均質な方法である。検出は、生存細胞からのＡＴＰ量を測定するための、ルシフェラーゼ反応の使用を基にし、測定する。細胞内のＡＴＰ量は、細胞生存度と相関している。膜の完全性を喪失した後わずかな時間内に、細胞は、ＡＴＰを合成する能力を失い、且つ内在性ＡＴＰａｓｅは、残存するＡＴＰを破壊し；従って、ＡＴＰレベルは、急勾配で下落する。CellTiter-Glo（登録商標）試薬は、細胞への添加時に３つの働きをする。これは、細胞膜を溶解し、ＡＴＰを放出し；これは、内在性ＡＴＰａｓｅを阻害し、且つ生物発光反応を使用するＡＴＰの測定に必要な、ルシフェリン、ルシフェラーゼ及び他の試薬を放出する。独自の特性は自社開発の(proprietary)安定したルシフェラーゼである。発光シグナルと１ウェル当たり０～５０．０００個細胞の細胞数の間には、直線関係が存在する（ｒ２＝０．９９）。
使用した試薬：
・ＤＭＥＭ（Paneco、カタログ番号C420)
・Ｗｉｌｌｉａｍｓ培地(Gibco、カタログ番号12551032)
・ウシ胎仔血清、ＦＢＳ(HyClone、カタログ番号SH 30084.03)
・Ｐｅｎ－Ｓｔｒｅｐ(Paneco、カタログ番号A065)
・ＭＥＭ非必須アミノ酸(Paneco、カタログ番号F115)
・Ｌ－グルタミン(Paneco、カタログ番号F032)
・ピルビン酸ナトリウム(Paneco、カタログ番号F023)
・ベルセン(Paneco、カタログ番号P080)
・アキュターゼ(Innovative Cell Technologies社、カタログ番号AT104)
・ＤＭＳＯ(Panreac、カタログ番号141954.1611)
・CellTiter-Glo（登録商標）ルミネセント細胞生存度アッセイ(Promega、カタログ番号G7573)。
使用した装置及び材料：
・Biomek 384 FXラボラトリー自動化ワークステーション(Beckman Coulter社、フラートン、CA)
・Biomek 2000ラボラトリー自動化ワークステーション(Beckman Coulter社、フラートン、CA)
・顕微鏡Axiovert 40
・微生物安全キャビネット、クラスＩＩ(NuAire、USA)
・ＣＯ2インキュベーター(VWR Science、USA)
・ブライトライン血球計(Z359629、Sigma、IL、USA)
・Tecan Infinite M1000マイクロプレートリーダー(Thermo Fisher、ウォルサム、MA)
・プレート：３８４－ウェル黒色／透明、組織培養処理、平底(Falcon、#353962)。
細胞株：
・Ｈｕｈ７
・ＨｅｐＧ２
・Ａ６７３
・ＤＵ－１４５
・ＨｅｐａＲＧ。
Figure 2022531230000035
全てのアッセイは、Reaction Biology社(モルバーン、PA)又はChemDiv社(サンディエゴ、CA)により行った。Ｈｕｈ７(RIKEN、東京、日本)及びＨｅｐａＲＧ(Life Technologies、カールスバッド、CA)を除いて、全ての細胞株は、アメリカンタイプカルチャーコレクション(ATCC、マナサス、VA)から購入した。細胞株は、１０％ウシ胎仔血清、１００μｇ／ｍＬペニシリン及び１００μｇ／ｍＬストレプトマイシンの存在する、推奨される培養培地において、ＨＥＰＡ－フィルターを通して５％ＣＯ2及び９５％空気の、加湿した大気中、３７℃で維持した。
細胞増殖
条件：３７℃、空気９５％；ＨＥＰＡ－フィルターを通した二酸化炭素（ＣＯ2）５％、加湿した大気。
・細胞は、１７５ｃｍ2フラスコにおいて、集密度８０～９０％まで成長させた。
・培養培地を、吸引し、細胞層を、ベルセン溶液で簡単にすすぎ、微量の血清を完全に除去した。
・２ｍＬのアキュターゼを、細胞へ添加した。
・フラスコを、５分間インキュベーターに戻し、細胞を剥離させた。
・完全成長培地６．０ｍＬを添加した。
・穏やかにピペッティングすることにより、単独の細胞浮遊液を作製した。
・細胞を、血球計を用いてカウントし、且つ望ましい細胞濃度の浮遊液を調製した。
細胞プレーティング
・単独の細胞浮遊液を、前述のように調製し、細胞を、再度カウントし、且つ最終密度に再浮遊させる。
・細胞を、Biomek 384 FXによる３８４－ウェル光学底のプレートに、各ウェルに細胞浮遊液４０μＬでプレーティングした。
・アッセイプレートを、１００ｒｐｍで１分間遠心し、次に３７℃、５％ＣＯ2、加湿大気で２４時間維持し、その後処置した。
成長阻害試験を開始するために、この開示の化合物及び参照化合物を、ＤＭＳＯ溶液に溶解し、１０ｍＭストック溶液を作製した。ストック溶液（７０ｍＬ）を、細胞培養培地により希釈し、５００×連続希釈物を作製し、最終の化合物希釈物１０ｍＬを、アッセイプレート内の細胞へ添加し、１００ｍＭから始まる、連続する１０種の投与量をスクリーニングした。最終のＤＭＳＯ濃度は、０．２％であった。アッセイプレートは、１００ｒｐｍで１分間遠心し、３７℃、５％ＣＯ2、加湿大気で維持した。化合物と共に７２時間インキュベーションした後、CellTiter-Glo試薬１０μＬを、Biomek 384 FXを用いて、アッセイプレートへ添加した。CellTiter-Glosi試薬と５分間インキュベーションした後、ルミネセンス強度を、Tecan M 1000マイクロプレートリーダーを用い、各ウェルについて測定した。培養物中の生存細胞の数を、各培養ウェルに存在するＡＴＰの量を基に決定した。実験データを、処置したウェル由来のルミネセンス値を、未処置対照ウェル由来の平均ルミネセンス値で除算し、１００から減算することにより、成長阻害率（％）として計算した。ＥＣ50値は、未処置の対照細胞の成長と比べ、細胞成長を５０％阻害するために必要とされる薬物濃度として規定した。ＥＣ50曲線を、プロットし、且つＥＣ50値を、Ｓ字型の用量－反応曲線を基に、GraphPad Prism 4プログラムを使用し算出した。表４は、試験した癌細胞株に対する、この開示の化合物のＥＣ50値を列挙している。
Figure 2022531230000036
 化合物１９、２４及び３７による癌成長の阻害を示すＥＣ50プロットを、図３Ａ、３Ｂ及び３Ｃに提供している。
実施例１７．
動物モデルにおける本明細書において開示されたＰＩＭインヒビター化合物の投与による肝癌の治療
動物モデルを使用し、この開示の化合物の肝癌の成長を改善する能力を試験した。この開示のインヒビターを、マウスの皮下もしくは腹腔内空間へのＨｅｐ２ＧもしくはＨｕｈ７などの肝癌細胞の移植によるか、又はヒト－マウス肝腫瘍異種移植片の生成を介して、作出された異種移植片により、肝腫瘍が誘導されているマウスに適用した。
マウス：１２匹の雌のＢＡＬＢ／ｃマウスを、The Jackson Laboratory(バーハーバー、ME、USA)から購入した。動物は、「実験動物の管理と使用に関する指針」に従い維持した。全ての試験プロトコールは、施設の動物の管理と使用に関する委員会の承認を受けている。
化合物：化合物２４及び３７は、０．５％メチルセルロース／０．０２５％Ｔｗｅｅｎ ２０(Sigma-Aldrich、セントルイス、MO)を含有するＰＢＳビヒクル(リン酸-緩衝食塩水：ThermoFisher Scientific社、ウォルサム、MA)中でインビボにおける腹腔内投与のために調製した。
肝癌異種移植片マウス
ＨｅｐＧ２ヒト肝癌細胞を、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）中に浮遊させ（２×１０7個細胞／ｍＬ）、この浮遊液（１００μＬ）を、２１匹の雌のＢＡＬＢ／ｃマウスの背中に皮下注射した。マウスを、ＨｅｐＧ２細胞の注射後１５日間維持し、その後無作為に、１群につき６匹の治療マウス及び１匹の対照マウスの３群に分けた。ヌードマウス異種移植片モデルの確立後、腫瘍寸法を、マイクロメーターキャリパーを使用し、３日毎に測定した。化合物２４（２５ｍｇ／ｋｇ）を、各群６匹の治療マウスに腹腔内投与する一方で、各群の対照マウスは、ビヒクルのみを、１日１回（ｑ．ｄ．）５連続日受け取り、その後２日間は注射を受け取らず、並びにこのサイクルをその後３回繰り返した。マウスは、ＨｅｐＧ２細胞注射の日（０日目）から始めて、毎日秤量した。ＨｅｐＧ２細胞の皮下接種後４３日目に、マウスを、二酸化炭素による窒息により安楽死させ、全ての腫瘍を、死後直ちに摘出し、秤量し且つ測定し、その後液体窒素中に瞬間凍結させた。腫瘍容積（ＴＶ）を、下記式により計算し：ＴＶ＝０．５ａｂ2、ここでａは、腫瘍長（ｍｍ）であり、ｂは、腫瘍幅（ｍｍ）である。この開示の化合物は、対照腫瘍と比べ、腫瘍サイズの０％～８８％の減少を示し、並びにマウス体重は、０日目のベースラインの１０％以内に維持された。
異種移植片標本中のアポトーシス細胞の免疫蛍光分析
６個の連続切片（厚さ５μｍ）を、各凍結腫瘍から入手し、ガラススライド上に搭載し、その後１％パラホルムアルデヒドで固定した。アポトーシス検出のための末端デオキシヌクレオチジル転移酵素－媒介したニック末端標識－ベースのＴＵＮＥＬアッセイを、インサイチュBrdU-Red TUNELアッセイキットを製造業者(Abcam、ケンブリッジ、UK)の指示に従い使用し、４個の切片について行った。末端デオキシヌクレオチジル転移酵素の非存在下で処理した２個の組織切片は、陰性対照として働いた。蛍光色素－コンジュゲートした抗－ＢｒｄＵ－Ｒｅｄ抗体を、４９０ｎｍバンドパスフィルターを用いて励起し、発光を５７６ｎｍで収集した。
蛍光顕微法は、Olympus Eclipse TE2000-S倒立相顕微鏡(Olympus、メルビル、NY, USA)上、４０×対物レンズ(Zeiss Plan-Neofluar)を用いて行った。画像は、Image-Pro Plusソフトウェアバージョン4.0を用いて解析した。各動物のアポトーシス-陽性細胞数は、実験手順について盲検化された試験官により、４００×倍率で１０個の無作為に選択された視野において決定した。同じ腫瘍について４個の切片及び１群につき４個の腫瘍を解析した。腫瘍は、解析から輪郭(edges)並びに壊死性及び非悪性組織を除くために、並行してＨ＆Ｅ切片を参照し、手動により追跡した。離散した核断片のクラスターからなることが多い、アポトーシス核は、人為結果を拒絶するための画像解析基準を用い、容易に規定することができる。各腫瘍内のアポトーシスの程度は、比例面積として表し、これは、総生存腫瘍面積により除算した、ＴＵＮＥＬ－陽性ピクセル面積の合計から計算した。
統計解析：平均値及び標準偏差を、測定した全てのパラメータについて計算した。各群間のマウス体重並びに腫瘍重量及び容積は、対のあるスチューデントｔ－検定を使用し比較し、平均±標準偏差として報告した。対照群と治療群の間の比較を行い、並びに統計学的有意性は、SPSS 10ソフトウェア(IBM社、シカゴ、IL, USA)を使用し、一元配置ＡＮＯＶＡにより、その後チューキー・クレーマー検定により、評価した。Ｐ－値＜０．０５を、統計学的有意性のある結果を示すものと考えた。
Ｈｅｐａ１－６肝癌異種移植片マウス
Ｈｅｐａ１－６マウス肝癌細胞を、ハンクス平衡塩溶液（ＨＢＳＳ）中に浮遊させ（２×１０7個細胞／ｍＬ）、この浮遊液（１００μＬ）を、６匹の雌のＣＤ５７免疫応答性マウスの脇腹後方に皮下注射した。２１日間成長させた後、腫瘍を切除し、小片に細断し、１２匹の雌のＣＤ５７マウスの各脇腹後方上の皮膚の下側に挿入した（合計２４の腫瘍）。マウスを、腫瘍挿入後１５日間維持し、堅固で一貫した腫瘍成長を確実にした。これらのマウスを、各２匹のマウスの（２つの腫瘍／マウス）の６群に無作為に分けた。ＣＤ５７マウスにおけるＨｅｐａ１－６異種移植片の確立後、腫瘍寸法を、マイクロメーターキャリパーを使用し、２日毎に測定した。４群は、１日１回（ｑ．ｄ．）の経口（ＰＯ、経管栄養）及び腹腔内（ＩＰ）投与の両方で、化合物４９（ＰＯ：２５ｍｇ／ｋｇ及び５０ｍｇ／ｋｇ；ＩＰ：１０ｍｇ／ｋｇ及び２５ｍｇ／ｋｇ）により治療し、２対照群には、ビヒクルのみを、同じ経路で、１０日間連続して投与した。マウスは、Ｈｅｐａ１－６腫瘍挿入の日（０日目）から始めて、毎日秤量した。Ｈｅｐａ１－６腫瘍の皮下接種後２５日目に、マウスを、二酸化炭素による窒息により安楽死させ、全ての腫瘍を、死後直ちに摘出し、秤量し且つ測定し、その後液体窒素中に瞬間凍結させた。腫瘍容積（ＴＶ）を、下記式により計算し：ＴＶ＝０．５ａｂ2、ここでａは、腫瘍長（ｍｍ）であり、ｂは、腫瘍幅（ｍｍ）である。この試験からの相対腫瘍データを、図４に示している。この開示の化合物４９は、投与量２５ｍｇ／ｋｇを使用するＩＰ注射により投与した場合に、対照腫瘍と比べ最大５０％の腫瘍サイズの減少を示した。本試験において、より少ない投与量、又はＰＯ投薬時には、腫瘍減少は認められなかった。全ての群のマウス体重は、０日目のベースラインの１０％以内に維持された。
製剤実施例
実施例１８
非経口製剤
注射による投与に適しているこの開示の化合物の非経口医薬組成物を調製するために、これらの化合物を、混合物として製剤化し、且つ単位剤形へ取り込むことができる。例として、この開示の化合物の代表的５ｍｇ／ｍＬ非経口製剤は、化合物それ自身（０．５％）に加え、プロピレングリコール（４０％）、エチルアルコール（１０％）、安息香酸ナトリウム／安息香酸（５％）、ベンジルアルコール（１．５％）、及び水（４３％）を比例して含有する。
実施例１９．
経口マイクロエマルジョン製剤
経口投与に適しているこの開示の化合物の医薬組成物を調製するために、この化合物を、混合物として製剤化し、且つ単位投与剤形へ取り込むことができる。例として、この開示の化合物の代表的２５ｍｇ経口（カプセル）製剤は、化合物それ自身に加え、ポリオキシル４０、水素化ヒマシ油、ゼラチン、ポリエチレングリコール４００、グリセリン８５％、無水アルコール、トウモロコシ油、モノ－ジ－トリグリセリド、二酸化チタン、ビタミンＥ、黄色酸化鉄、赤色酸化鉄、カーマイン、ヒプロメロース２９１０、プロピレングリコール、及び精製水を含む。
実施例２０．
経口固形製剤
経口の固形用量（錠剤）の投与に適しているこの開示の化合物の医薬組成物を調製するために、この化合物を、混合物として製剤化し、且つ単位投与剤形へ取り込むことができる。例として、この開示の化合物の代表的５０ｍｇ経口固形投薬製剤は、化合物それ自身に加え、加工デンプン、ポリエチレングリコール４００、クエン酸ステアリル、ポリビニルピロリドン、レシチン、マンニトール、ソルビトール、セージ抽出物、リン酸カルシウム及びゼラチンを含む、賦形剤、結合剤及び充填剤を含有する固形混合物へ、造粒し、且つ圧縮することにより調製することができる。
実施例２１
舌下（硬舐剤）組成物
硬舐剤などの口腔内送達のための医薬組成物を調製するために、この開示の化合物１００ｍｇの粉末化した糖４２０ｍｇと混合し、その後ライトコーンシロップ１．６ｍＬ、蒸留水２．４ｍＬ、及びミント抽出物０．４２ｍＬと混合する。この混合物を穏やかに配合し、型に注ぎ、口腔内投与に適した舐剤を形成する。
実施例２２．
即時崩壊性舌下錠
即時崩壊性舌下錠は、この開示の化合物の４８．５重量％化合物を、４４．５重量％の微結晶性セルロース（ＫＧ－８０２）、５重量％の低置換ヒドロキシプロピルセルロース（５０ｇｍ）、及び２重量％のステアリン酸マグネシウムと一緒に混合することにより、調製することができる。この製剤は、式（Ｉ）又は（ＩＶ）－（ＶＩ）の化合物を、三次元手動ミキサー(INVERSINA（登録商標）、Bioengineering AG、スイス)を４．５分間使用し、総量の微結晶性セルロース（ＭＣＣ）及び２／３量の低置換ヒドロキシプロピルセルロース（Ｌ－ＨＰＣ）と混合することにより、調製することができる。ステアリン酸マグネシウム（ＭＳ）の全量及び残りの１／３量のＬ－ＨＰＣは、混合が終わる３０秒前には添加する。錠剤は、直接打錠により調製する(AAPS Pharma Sci Tech.、2006; 7(2):E41)。圧縮錠の総重量は、１５０ｍｇで維持される。

Claims (28)

  1. 式（Ｉ）の構造を有する化合物：
    Figure 2022531230000037
     （式中、
    Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤの各々は、同じ又は異なり、並びに、独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－ＯＲ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択された任意の置換基から選択され；
    Ａ’、Ｂ’、Ｃ’、及びＤ’の各々は、同じ又は異なり、並びに、独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ，－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2），－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2，－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＲ3，－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択された任意の置換基から選択され；
    Ｅ、Ｆ、Ｇ、及びＭの各々は、独立してＣ又はＮであり；
    Ｅ’、Ｆ’、Ｇ’、及びＭ’の各々は、独立してＣ又はＮであり；
    各Ｙは、一置換された、二置換された、又は環状のアミン基であり；
    各Ｌは、ＹのアミンＮ原子に直接連結された１～６個の炭素の直鎖アルキルであり；
    各Ｘは、ＮＨ、Ｏ、Ｓ、又はＣＨ2であり；
    Ｒ1は、Ｈ、もしくは直線又は分岐した置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のシクロアルケニル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリールもしくは置換又は非置換のヘテロアリールであり；
    Ｒ2は、直線又は分岐した置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のシクロアルケニル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリールもしくは置換又は非置換のヘテロアリールであり；並びに
    各Ｒ3は、独立して、Ｈ、直線又は分岐した置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のシクロアルケニル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、もしくは置換又は非置換のアシル（－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ1）であるか、或いは２個のＲ3は、それらが結合した原子と一緒に置換又は非置換のヘテロ環を形成する）。
  2. 式（ＩＩＡ）又は式（ＩＩＢ）の構造を有する化合物：
    Figure 2022531230000038
     （式中、各Ｒ4は、以下からなる群から選択され：
    Figure 2022531230000039
     （式中、ｎ＝０～５である）
    Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、及びＲ10の各々は、同じ又は異なり、並びに独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択された任意の置換基から選択される）。
  3. 前述の各Ｒ4が、以下からなる群から選択され：
    Figure 2022531230000040
     （式中、ｎ＝１である）
    Ｒ5、Ｒ6、Ｒ8、及びＲ9の各々は、同じ又は異なり、並びに独立して、Ｈ、ハロゲン、又は－ＯＨから選択され、並びにＲ7及びＲ10の各々は、Ｈである、請求項２記載の化合物。
  4. 式（ＩＩＩＡ）又は式（ＩＩＩＢ）の構造を有する化合物：
    Figure 2022531230000041
     （式中、各Ｒ4は、以下からなる群から選択され：
    Figure 2022531230000042
     （式中、ｎ＝０～５である）、
    Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9及びＲ10の各々は、同じ又は異なり、並びに独立して、Ｈ、ハロゲン、又は－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択された任意の置換基から選択される）。
  5. 式（ＩＶＡ）又は式（ＩＶＢ）の構造を有する化合物：
    Figure 2022531230000043
     （式中、各Ｒ4は、以下からなる群から選択され：
    Figure 2022531230000044
     （式中、ｎ＝０～５である）、
    Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9及びＲ10の各々は、同じ又は異なり、並びに独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択される任意の置換基から選択される）。
  6. 式（ＶＡ）又は式（ＶＢ）の構造を有する化合物：
    Figure 2022531230000045
     （式中、各Ｒ4は、以下からなる群から選択され：
    Figure 2022531230000046
     （式中、ｎ＝０～５である）
    Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、及びＲ10の各々は、同じ又は異なり、並びに独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択された任意の置換基から選択される）。
  7. 式（ＶＩＡ）又は式（ＶＩＢ）の構造を有する化合物：
    Figure 2022531230000047
     （式中、各Ｒ4は、以下からなる群から選択され：
    Figure 2022531230000048
     （式中、ｎ＝０～５である）
    Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9の各々は、同じ又は異なり、並びに独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択される任意の置換基から選択される）。
  8. 前述の各Ｒ4が、以下からなる群から選択され：
    Figure 2022531230000049
     （式中、ｎ＝１である）、並びに
    Ｒ5、Ｒ6、Ｒ8の各々が、同じ又は異なり、並びに、独立して、Ｈ、ハロゲン、又は－ＯＨから選択され、並びにＲ7及びＲ9の各々が、Ｈである、請求項７記載の化合物。
  9. 式（ＶＩＩＡ）又は式（ＶＩＩＢ）の構造を有する化合物：
    Figure 2022531230000050
     （式中、各Ｒ4は、以下からなる群から選択され：
    Figure 2022531230000051
     （式中、ｎ＝０～５である）、
    Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8及びＲ9の各々は、同じ又は異なり、並びに独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは、例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択された任意の置換基から選択される）。
  10. 式（ＶＩＩＩＡ）又は式（ＶＩＩＩＢ）の構造を有する化合物：
    Figure 2022531230000052
     （式中、各Ｒ4は、以下からなる群から選択され：
    Figure 2022531230000053
     （式中、ｎ＝０～５である）、
    Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9の各々は、同じ又は異なり、並びに、独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択される任意の置換基から選択される）。
  11. 式（ＩＸＡ）又は式（ＩＸＢ）の構造を有する化合物：
    Figure 2022531230000054
     （式中、各Ｒ4は、以下からなる群から選択され：
    Figure 2022531230000055
     （式中、ｎ＝０～５である）、
    Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9の各々は、同じ又は異なり、並びに、独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択される任意の置換基から選択される）。
  12. 式（Ｉ）の構造を有する化合物：
    Figure 2022531230000056
     （式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤの各々は、同じ又は異なり、並びに、独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－ＯＲ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは、例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択される任意の置換基から選択され；
    Ａ’、Ｂ’、Ｃ’、及びＤ’の各々は、同じ又は異なり、並びに、独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは、例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択される任意の置換基から選択され；
    Ｅ、Ｆ、Ｇ、及びＭの各々は、独立してＣ又はＮであり；
    Ｅ’、Ｆ’、Ｇ’、及びＭ’の各々は、独立してＣ又はＮであり；
    各Ｙは、一置換された、二置換された、又は環状のアミン基であり；
    各Ｌは、ＹのアミンＮ原子に直接連結された１～６個の炭素の直鎖アルキルであり；
    各Ｘは、Ｏ、Ｓ、又はＣＨ2であり；
    Ｒ1は、Ｈ、もしくは直線又は分岐した置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のシクロアルケニル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリールもしくは置換又は非置換のヘテロアリールであり；
    Ｒ2は、直線又は分岐した置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のシクロアルケニル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリールもしくは置換又は非置換のヘテロアリールであり；並びに
    各Ｒ3は、独立して、Ｈ、直線又は分岐した置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のシクロアルケニル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、置換又は非置換のヘテロアリール、もしくは置換又は非置換のアシル（－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ1）であるか、或いは２個のＲ3は、それらが結合した原子と一緒に、置換又は非置換のヘテロ環を形成する）。
  13. 式（ＩＩＡ）又は式（ＩＩＢ）の構造を有する化合物：
    Figure 2022531230000057
     （式中、各Ｒ4は、以下からなる群から選択され：
    Figure 2022531230000058
     （式中、ｎ＝０～５である）、
    Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、及びＲ10の各々は、同じ又は異なり、並びに、独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは、例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択される任意の置換基から選択される）。
  14. 前述の各Ｒ4が、以下からなる群から選択され：
    Figure 2022531230000059
     （式中、ｎ＝１である）、
    Ｒ5、Ｒ6、Ｒ8、及びＲ9の各々は、同じ又は異なり、並びに、独立して、Ｈ、ハロゲン、又は－ＯＨから選択され、並びにＲ7及びＲ10の各々は、Ｈである、請求項１３記載の化合物。
  15. 式（ＶＩＡ）又は式（ＶＩＢ）の構造を有する化合物：
    Figure 2022531230000060
     （式中、各Ｒ4は、以下からなる群から選択され：
    Figure 2022531230000061
     （式中、ｎ＝０～５である）、
    Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、及びＲ9の各々は、同じ又は異なり、並びに独立して、Ｈ、ハロゲン、－Ｎ3、－ＣＮ、－ＮＯ2、－ＯＨ、－ＯＣＦ3、－ＯＣＨ2Ｆ、－ＯＣＦ2Ｈ、－ＣＦ3、－ＣＦ2Ｈ、－ＳＲ1、－Ｓ（＝Ｏ）Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－ＯＳ（＝Ｏ）2Ｆ、－ＯＳ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－Ｓ（＝Ｏ）2（ＯＲ2）、－ＮＲ3Ｓ（＝Ｏ）2Ｒ2、－Ｓ（＝Ｏ）2Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＣ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＣＯ2Ｒ3、－Ｎ（Ｈ）Ｒ3、－Ｎ（Ｒ3）2、－ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｒ2、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ3、－ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、ＣＨ2ＮＨ2、－ＣＨ2Ｎ（Ｒ3）2、－ＣＨ2ＳＲ1、－Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｒ3）2、－Ｃ（＝Ｏ）Ｒ3、置換又は非置換のアルキル、置換又は非置換のアルケニル、置換又は非置換のアルキニル、置換又は非置換のアルコキシ、置換又は非置換のヘテロアルキル、置換又は非置換のシクロアルキル、置換又は非置換のヘテロシクロアルキル、置換又は非置換のアリール、もしくは置換又は非置換のヘテロアリール、或いは、例えば、ハロアルキル、アルケニル、アリールアルキル、アルコキシアルキル、ヒドロキシアルキル、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アシルアミノアルキル、アシルオキシアルキル、シアノアルキル、アミジノアルキル、カルボキシアルキル、アルコキシカルボニルアルキル、アミノカルボニルアルキル、アリール、アルキルアリール、アミノアルキル、ヘテロアリール、カルボニルアルキル、アミジノチオアルキル、ニトログアニジノアルキル、保護基、グリコース、アミノグリコース又はアルキルグリコース残基から選択された任意の置換基から選択される）。
  16. 前述の各Ｒ4が、以下からなる群から選択され：
    Figure 2022531230000062
     （式中、ｎ＝１である）、並びに
    Ｒ5、Ｒ6、Ｒ8の各々は、同じ又は異なり、並びに独立して、Ｈ、ハロゲン、又は－ＯＨから選択され、並びにＲ7及びＲ9の各々は、Ｈである、請求項１５記載の化合物。
  17. 請求項１～１６のいずれか一項記載の、薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、Ｎ－オキシド、プロドラッグ、立体異性体、エナンチオマー、エナンチオマー混合物、ジアステレオマー混合物、同位体変種、又は代謝産物。
  18. 請求項１～１７のいずれか一項記載の化合物を、薬学的に許容される賦形剤、担体又は結合剤と組合せて含有する、医薬組成物。
  19. 前記化合物が、セリン／スレオニンキナーゼＰＩＭ１、ＰＩＭ２、及び／又はＰＩＭ３の触媒活性を阻害する、請求項１～１７のいずれか一項記載の化合物。
  20. 前記化合物が、１又は複数のＰＩＭキナーゼの触媒活性を選択的に阻害する、請求項１～１７のいずれか一項記載の化合物。
  21. 前記化合物が、ＰＩＭ３キナーゼの触媒活性を選択的に阻害する、請求項１～１７のいずれか一項記載の化合物。
  22. 請求項１～１７のいずれか一項記載の化合物をＰＩＭキナーゼと接触させることを含む、ＰＩＭキナーゼの活性を阻害又は部分的に阻害する方法。
  23. 請求項１～１７のいずれか一項記載の化合物をＰＩＭキナーゼと接触させることを含む、１又は複数のＰＩＭキナーゼの活性を選択的に阻害する方法。
  24. 請求項１～１７のいずれか一項記載の化合物を、３種のキナーゼと、インビトロ又はインビボにおいて、個別に又は一緒に接触させることを含む、１．５、１０、１００、１０００倍、又はそれ以上でＰＩＭ１及びＰＩＭ２キナーゼに勝るＰＩＭ３の選択的阻害により、ＰＩＭキナーゼの活性を阻害又は部分的に阻害する方法。
  25. 請求項１～１７のいずれか一項記載の化合物の治療的有効量を患者へ投与することを含む、悪性疾患を有する患者を治療する方法。
  26. 前記悪性疾患が、盲腸、膵臓、肝臓、胃、小腸、結腸、前立腺、甲状腺、食道、肺、及び胆嚢を含むが、これらに限定されるものではない、内胚葉器管の癌である、請求項２５記載の方法。
  27. 前記癌が、膵臓癌、肝癌、胃癌、結腸直腸癌、前立腺癌、食道腺癌、扁平上皮癌、鼻咽喉癌、胃腺癌、膵管腺癌、肝細胞癌、肝芽腫、胆嚢腺癌、前立腺腺癌、結腸直腸腺癌、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、又は消化管カルチノイド腫瘍である、請求項２６記載の方法。
  28. 前記悪性疾患が、血管肉腫、軟骨肉腫、線維芽細胞肉腫、婦人科肉腫、脂肪肉腫、骨肉腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫、カポジ肉腫、又はユーイング肉腫を含むが、これらに限定されるものではない、骨又は軟組織の肉腫である、請求項２５記載の方法。
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