JP2022530359A - バッテン病の視覚効果を治療または予防するための遺伝子療法 - Google Patents

Abstract

本開示は、神経セロイドリポフスチン症ニューロン６（ＣＬＮ６）ポリヌクレオチドの組換えアデノ随伴ウイルス（ｒＡＡＶ）送達を含む、バッテン病患者における光受容体を保存するかつ／または網膜変性を阻害または予防する遺伝子療法方法に関する。本明細書で提供されるのは、例えば、光受容体を保存し、光受容体の変性を予防もしくは阻害し、かつ／または網膜の変性を阻害するために、遺伝子送達ベクターを使用してそれを必要とする対象にＣＬＮ６ポリヌクレオチドを送達することによって、バッテン病の視覚効果の予防を必要とする患者においてそれを行うための、遺伝子療法方法である。

Description

相互参照
本出願は、２０１９年４月１５日に出願された米国仮特許出願第６２／８３４，３４０号の優先権を主張し、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

電子的に提出された資料の参照による組み込み
本開示の一部である配列表を明細書と同時にテキストファイルとして提出する。配列表を含むテキストファイルの名称は、「５５５９９＿Ｓｅｑｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」であり、これは２０２０年４月１４日に作成され、サイズは２３．９９４バイトである。配列表の内容は、参照により本明細書に組み込まれる。

本開示は、ポリヌクレオチドをコードするセロイドリポフスチン症ニューロン６（ＣＬＮ６）の送達によってバッテン病患者における視覚効果を治療または予防するための遺伝子療法方法に関する。

神経セロイドリポフスチン症（ＮＣＬ）は、まとめてバッテン病と称される一群の重度の神経変性障害である。これらの障害は神経系に影響を及ぼし、典型的には、例えば、移動および思考能力に関する問題を悪化させる。異なるＮＣＬは、それらの遺伝学的原因によって区別される。

ＣＬＮ６－バッテン病は、２つの異なる形態、より一般的な形態の後期乳児変異型（ｖＬＩＮＣＬ）、および成人発症型ＮＣＬ（Ａ型クフス病とも呼ばれる）として起こり得る（Ｃａｎｎｅｌｉｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．２００９；３７９（４）：８９２－７、Ａｒｓｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ．２０１１；８８（５）：５６６－７３）。ｖＬＩＮＣＬ（本明細書ではＣＬＮ６－バッテン病と称される）では、発症年齢は１８ヶ月～６歳の間であり、死亡は通常１２～１５歳までに起こる。ＣＬＮ６－バッテン病は最初、早期の幼児期における言語障害および運動／認知発達の遅延として現れ、ほとんどの患者は発症から４年以内に車椅子に拘束される（Ｃａｎａｆｏｇｌｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．２０１５；８５（４）：３１６－２４）。この疾患は、視力喪失、重度の運動障害、再発性発作、認知症および他の神経変性症状を含むように進行する。

ＣＬＮ６は、７つの推定膜貫通ドメインを有する３１１個のアミノ酸のタンパク質であり、かつ主に小胞体に局在する。他のＣＬＮタンパク質と同様に、その正確な機能は不明のままであるが、それは細胞内輸送およびリソソーム機能に関与している。ＣＬＮ６には現在７０を超える特徴付けられた疾患を引き起こす変異があり（Ｗａｒｒｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ．２０１３；１８３２（１１）：１８２７－３０）、これらの変異の大部分はＣＬＮ６タンパク質の完全な喪失または高度に不安定および／もしくは非機能的であると考えられる切断型ＣＬＮ６タンパク質産物の産生のいずれかをもたらす。ＣＬＮ６－バッテン病のいくつかの天然型動物モデルが記載されており、これらには、ヒツジ、イヌ、およびマウスのモデルが含まれる。Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウスモデル（本明細書では「Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウス」と称される）に見出される自然変異は、疾患の病理学的かつ行動的側面の多くを再現する（Ｍｏｒｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ．２０１３；８（１１）：ｅ７８６９４）。Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウスは、追加のシトシン（ｃ．３０７ｉｎｓＣ、Ｐ１０２後のフレームシフト）の挿入を含み、ＣＬＮ６－バッテン病患者に一般的に見られる変異と相同である未成熟終止コドンが生じる（Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ．２００２；７０（２）：３２４－３５、Ｗｈｅｅｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ．２００２年；７０（２）：５３７－４２）。
現在、バッテン病の視覚効果を予防または逆転させることができる療法はない。したがって、バッテン病患者におけるこれらの効果のための治療に対する、当該技術分野における必要性が存在する。

Ｃａｎｎｅｌｉｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ．２００９；３７９（４）：８９２－７ Ａｒｓｏｖ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｈｕｍ Ｇｅｎｅｔ．２０１１；８８（５）：５６６－７３ Ｃａｎａｆｏｇｌｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．２０１５；８５（４）：３１６－２４

本明細書で提供されるのは、例えば、光受容体を保存し、光受容体の変性を予防もしくは阻害し、かつ／または網膜の変性を阻害するために、遺伝子送達ベクターを使用してそれを必要とする対象にＣＬＮ６ポリヌクレオチドを送達することによって、バッテン病の視覚効果の予防を必要とする患者においてそれを行うための、遺伝子療法方法である。

本明細書で提供されるのは、光受容体の保存を必要とするバッテン病を有する個体において光受容体を保存する方法であって、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターを含む薬学的組成物を個体に投与することを含む、方法である。加えて、提供されるのは、光受容体の保存を必要とするバッテン病を有する個体において光受容体を保存するための組成物が提供され、組成物は、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターを含む。また、提供されるのは、光受容体の保存を必要とするバッテン病を有する個体における光受容体を保存するための医薬の調製のためのＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターの、使用である。いくつかの実施形態では、ＣＬＮ６ポリペプチドは、配列番号１のポリペプチドと少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、遺伝子療法ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、または単純ヘルペスウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶである。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈＳ、ＡＡＶｒｈ１０ベクター、ＡＡＶｒｈ３３、ＡＡＶｒｈ３４、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶ Ａｎｃ８０、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ、およびＡＡＶ－ＤＪからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、５’から３’の順序で、第１の逆方向反復、配列番号３の核酸配列を含むニワトリベータアクチン（ＣＢ）プロモーター、配列番号１と９０％同一のアミノ酸配列を含むセロイドリポフスチン症ニューロンタンパク質６（ＣＬＮ６）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２の逆方向反復を含む、ｒＡＡＶ９ゲノムを含む組換えＡＡＶ９（ｒＡＡＶ９）である。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサをさらに含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、ＳＶ４０イントロンをさらに含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、一本鎖ゲノムまたは自己相補的ゲノムである。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、ＣＭＶエンハンサ、配列番号３のヌクレオチド配列を含むＣＢプロモーター、ＳＶ４０イントロン、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号３の配列を含むＣＢプロモーター、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、ＣＭＶエンハンサ、配列番号３の配列を含むＣＢプロモーター、ＳＶ４０イントロン、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ逆方向末端反復は、ＡＡＶ２逆方向末端反復である。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、脳室内、髄腔内、脳実質内、静脈内、網膜下、眼内、硝子体内、またはそれらの組み合わせで投与される。髄腔内送達は、脳または脊髄のくも膜の下の空間への送達を指す。いくつかの実施形態では、髄腔内投与は、槽内注射または腰椎内注射を介したものである。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、脳室内投与される。いくつかの実施形態では、約１×１０^８ｖｇ～約１×１０^１５ｖｇのｒＡＡＶウイルス粒子は、個体の１グラム体重当たりで投与される。いくつかの実施形態では、視覚障害の症状は、予防または改善される。いくつかの実施形態では、個体の中心網膜における光受容細胞は、実質的に保存されている。いくつかの実施形態では、個体は、治療の６ヶ月後に少なくとも４層の光受容細胞を含む網膜を含む。いくつかの実施形態では、個体は、治療の少なくとも６ヶ月後に少なくとも８層の光受容細胞を含む網膜を含む。いくつかの実施形態では、個体は、治療の少なくとも９ヶ月後に少なくとも４層の光受容細胞を含む網膜を含む。いくつかの実施形態では、個体は、治療の少なくとも９ヶ月後に少なくとも８層の光受容細胞を含む網膜を含む。いくつかの実施形態では、個体は、１０歳未満である。いくつかの実施形態では、個体は、１歳未満である。さらなる実施形態では、個体は、治療後少なくとも６ヶ月で４層を超える網膜を保持した。さらなる実施形態では、個体は、治療後少なくとも９ヶ月で４層を超える光受容細胞を保持した。さらなる実施形態では、個体は、治療後少なくとも９ヶ月で８層を超える光受容細胞を保持した。いくつかの実施形態では、個体は、バッテン病に関連する変異を含むＣＬＮ６遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、方法は、個体のＣＬＮ６遺伝子におけるバッテン病に関連する変異を検出することをさらに含む。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、非イオン性低浸透圧性化合物、緩衝剤、ポリマー、塩、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、非イオン性低浸透圧性造影剤は、イオビトリドール、イオヘキソール、イオメプロール、イオパミドール、イオペントール、イオプロミド、イオベルソール、イオキシラン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される。

本明細書で提供されるのは、網膜変性の阻害を必要とするバッテン病を有する個体において網膜変性を阻害する方法であって、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターを含む薬学的組成物を個体に投与することを含む、方法である。加えて、提供されるのは、網膜変性の阻害を必要とするバッテン病を有する個体において網膜変性を阻害するための組成物であって、組成物が、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターを含む、組成物である。また、提供されるのは、網膜変性の阻害を必要とするバッテン病を有する個体における網膜変性を阻害するための医薬の調製のためのＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターの、使用である。いくつかの実施形態では、ＣＬＮ６ポリペプチドは、配列番号１のポリペプチドと少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、遺伝子療法ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、または単純ヘルペスウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶである。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈＳ、ＡＡＶｒｈ１０ベクター、ＡＡＶｒｈ３３、ＡＡＶｒｈ３４、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶ Ａｎｃ８０、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ、およびＡＡＶ－ＤＪからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、５’から３’の順序で、第１の逆方向反復、配列番号３の核酸配列を含むニワトリベータアクチン（ＣＢ）プロモーター、配列番号１と９０％同一のアミノ酸配列を含むセロイドリポフスチン症ニューロンタンパク質６（ＣＬＮ６）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２の逆方向反復を含む、ｒＡＡＶ９ゲノムを含む組換えＡＡＶ９（ｒＡＡＶ９）である。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサをさらに含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、ＳＶ４０イントロンをさらに含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、一本鎖ゲノムまたは自己相補的ゲノムである。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、ＣＭＶエンハンサ、配列番号３のヌクレオチド配列を含むＣＢプロモーター、ＳＶ４０イントロン、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号３の配列を含むＣＢプロモーター、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、ＣＭＶエンハンサ、配列番号３の配列を含むＣＢプロモーター、ＳＶ４０イントロン、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ逆方向末端反復は、ＡＡＶ２逆方向末端反復である。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、脳室内、髄腔内、脳実質内、静脈内、網膜下、眼内、硝子体内、またはそれらの組み合わせで投与される。髄腔内送達は、脳または脊髄のくも膜の下の空間への送達を指す。いくつかの実施形態では、髄腔内投与は、槽内注射または腰椎内注射を介したものである。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、脳室内投与される。いくつかの実施形態では、約１×１０^８ｖｇ～約１×１０^１５ｖｇのｒＡＡＶウイルス粒子は、個体の１グラム体重当たりで投与される。いくつかの実施形態では、視覚障害の症状は、予防または改善される。いくつかの実施形態では、個体の中心網膜における光受容細胞は、実質的に保存されている。いくつかの実施形態では、個体は、治療の６ヶ月後に少なくとも４層の光受容細胞を含む網膜を含む。いくつかの実施形態では、個体は、治療の少なくとも６ヶ月後に少なくとも８層の光受容細胞を含む網膜を含む。いくつかの実施形態では、個体は、治療の少なくとも９ヶ月後に少なくとも４層の光受容細胞を含む網膜を含む。いくつかの実施形態では、個体は、治療の少なくとも９ヶ月後に少なくとも８層の光受容細胞を含む網膜を含む。さらなる実施形態では、個体は、治療後少なくとも６ヶ月で４層を超える網膜を保持した。さらなる実施形態では、個体は、治療後少なくとも９ヶ月で４層を超える光受容細胞を保持した。さらなる実施形態では、個体は、治療後少なくとも９ヶ月で８層を超える光受容細胞を保持した。いくつかの実施形態では、個体は、１０歳未満である。いくつかの実施形態では、個体は、１歳未満である。いくつかの実施形態では、個体は、バッテン病に関連する変異を含むＣＬＮ６遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、方法は、個体のＣＬＮ６遺伝子におけるバッテン病に関連する変異を検出することをさらに含む。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、非イオン性低浸透圧性化合物、緩衝剤、ポリマー、塩、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、非イオン性低浸透圧性造影剤は、イオビトリドール、イオヘキソール、イオメプロール、イオパミドール、イオペントール、イオプロミド、イオベルソール、イオキシラン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される。

本明細書で提供されるのは、視覚効果の治療を必要とするバッテン病を有する個体においてそれを行う方法であって、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターを含む薬学的組成物を個体に投与することを含む、方法である。加えて、それを必要とするバッテン病を有する個体の視覚効果を治療するための組成物が提供され、この組成物は、治療有効量のＣＬＮ６ポリペプチドをコードする遺伝子療法ベクターを含む。また、提供されるのは、視覚効果の治療を必要とするバッテン病を有する個体における視覚効果を治療するための医薬の調製のためのＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターの、使用である。いくつかの実施形態では、ＣＬＮ６ポリペプチドは、配列番号１のポリペプチドと少なくとも９０％同一である。いくつかの実施形態では、遺伝子療法ベクターは、ウイルスベクターである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、または単純ヘルペスウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、ＡＡＶである。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈＳ、ＡＡＶｒｈ１０ベクター、ＡＡＶｒｈ３３、ＡＡＶｒｈ３４、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶ Ａｎｃ８０、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ、およびＡＡＶ－ＤＪからなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、５’から３’の順序で、第１の逆方向反復、配列番号３の核酸配列を含むニワトリベータアクチン（ＣＢ）プロモーター、配列番号１と９０％同一のアミノ酸配列を含むセロイドリポフスチン症ニューロンタンパク質６（ＣＬＮ６）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２の逆方向反復を含む、ｒＡＡＶ９ゲノムを含む組換えＡＡＶ９（ｒＡＡＶ９）である。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサをさらに含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、ＳＶ４０イントロンをさらに含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、一本鎖ゲノムまたは自己相補的ゲノムである。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、ＣＭＶエンハンサ、配列番号３のヌクレオチド配列を含むＣＢプロモーター、ＳＶ４０イントロン、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号３の配列を含むＣＢプロモーター、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶ９ゲノムは、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、ＣＭＶエンハンサ、配列番号３の配列を含むＣＢプロモーター、ＳＶ４０イントロン、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ逆方向末端反復は、ＡＡＶ２逆方向末端反復である。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、脳室内、髄腔内、脳実質内、静脈内、網膜下、眼内、硝子体内、またはそれらの組み合わせで投与される。髄腔内送達は、脳または脊髄のくも膜の下の空間への送達を指す。いくつかの実施形態では、髄腔内投与は、槽内注射または腰椎内注射を介したものである。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、脳室内投与される。いくつかの実施形態では、約１×１０^８ｖｇ～約１×１０^１５ｖｇのｒＡＡＶウイルス粒子は、個体の１グラム体重当たりで投与される。いくつかの実施形態では、視覚障害の症状は、予防または改善される。いくつかの実施形態では、個体の中心網膜における光受容細胞は、実質的に保存されている。いくつかの実施形態では、個体は、治療の６ヶ月後に少なくとも４層の光受容細胞を含む網膜を含む。いくつかの実施形態では、個体は、治療の少なくとも６ヶ月後に少なくとも８層の光受容細胞を含む網膜を含む。いくつかの実施形態では、個体は、治療の少なくとも９ヶ月後に少なくとも４層の光受容細胞を含む網膜を含む。いくつかの実施形態では、個体は、治療の少なくとも９ヶ月後に少なくとも８層の光受容細胞を含む網膜を含む。さらなる実施形態では、個体は、治療後少なくとも６ヶ月で４層を超える網膜を保持した。さらなる実施形態では、個体は、治療後少なくとも９ヶ月で４層を超える光受容細胞を保持した。さらなる実施形態では、個体は、治療後少なくとも９ヶ月で８層を超える光受容細胞を保持した。いくつかの実施形態では、個体は、１０歳未満である。いくつかの実施形態では、個体は、１歳未満である。いくつかの実施形態では、個体は、バッテン病に関連する変異を含むＣＬＮ６遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、方法は、個体のＣＬＮ６遺伝子におけるバッテン病に関連する変異を検出することをさらに含む。いくつかの実施形態では、薬学的組成物は、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、賦形剤は、非イオン性低浸透圧性化合物、緩衝剤、ポリマー、塩、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、非イオン性低浸透圧性造影剤は、イオビトリドール、イオヘキソール、イオメプロール、イオパミドール、イオペントール、イオプロミド、イオベルソール、イオキシラン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される。

本明細書中の見出しは、読者の便宜のためのものであり、限定的であることを意図しない。

本明細書における「ｍａｙ」および「ｃａｎ」の使用は、請求項内に含まれる様々な実施形態を説明するためのものであり、請求項の範囲についての不確実性を示すためのものではない。

ｓｃＡＡＶ．ＣＢ．ＣＬＮ６のｓｃＡＡＶゲノムの概略図を提供する。 ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６遺伝子カセットの核酸配列（配列番号４）を提供する。ＡＡＶ２ ＩＴＲ核酸配列は、イタリック体で示されており（５’ＩＴＲは配列番号９として記載され、３’ＩＴＲは配列番号８として記載されている）、ＣＭＶエンハンサ核酸配列（配列番号６）は、点線で下線が引かれており、ＣＢプロモーター核酸配列（配列番号３）は、一重線で下線が引かれており、ＳＶ４０イントロン核酸配列（配列番号１１）は、二重線で下線が引かれており、ヒトＣＬＮ６ ｃＤＮＡ配列の核酸配列（配列番号２）は、太字で示されており、ＢＧＨポリＡターミネーターの核酸配列（配列番号１０）は、破線で下線が引かれている。 完全ＡＡＶ．ＣＢ．ＣＬＮ６の核酸配列（配列番号５）を提供する。 同上。 ＯｐｔｏＭｏｔｒｙ視運動性追跡を使用するＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウス（ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６またはＰＢＳを投与された）およびＷＴマウスの視力のプロットを提供する。ＣＳＦを介して送達されたｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６の単回の生後１日目の注射は、雄および雌のＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウスの視力を部分的に回復させる。線形当てはめを比較すると、未治療の雌Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウスは、野生型およびＡＡＶ９治療されたＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウスよりも顕著に急激な低下を有する。野生型とＡＡＶ９治療されたＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウスとの間の傾きは、顕著に異なることなく、雄マウス間でも異ならなかった。通常の二元配置ＡＮＯＶＡ、テューキー補正。線形当てはめについては、傾きを、通常の一元配置ＡＮＯＶＡ、事後テューキーを使用して比較した。雄：３Ｍでｎ＝１１～１７、６Ｍでｎ＝６～１４、９Ｍでｎ＝３～１１。雌：３Ｍでｎ＝１１～１６、６Ｍでｎ＝５～１２、９Ｍでｎ＝３～６。平均±ＳＥＭ。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウス（ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６またはＰＢＳを投与された）およびＷＴマウスの自己蛍光貯蔵物質蓄積の画像ならびにプロットを提供する。ＣＳＦを介して送達されたｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６の単回の生後１日目の注射は、６ヶ月および９ヶ月の齢での背側外側膝状体、一次視覚野、および上丘における貯蔵物質蓄積（ＡＳＭ）を予防する。平均±ＳＥＭ、各時点についての一元配置ＡＮＯＶＡ、ボンフェローニ補正。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウス（ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６またはＰＢＳを投与された）およびＷＴマウスのミクログリア活性化の画像ならびにプロットを提供する。ＣＳＦを介して送達されたｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６の単回の生後１日目の注射は、６ヶ月および９ヶ月の齢での背側外側膝状体、一次視覚野、および上丘におけるＣＤ６８^＋ミクログリア活性化を予防する。平均±ＳＥＭ、各時点についての一元配置ＡＮＯＶＡ、ボンフェローニ補正。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウス（ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６またはＰＢＳを投与された）およびＷＴマウスの星状細胞反応性の画像ならびにプロットを提供する。 Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウス（ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６またはＰＢＳを投与された）およびＷＴマウスの脳の領域におけるニューロン数のプロットを提供する。ＣＳＦを介して送達されたｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６の単回の生後１日目の注射は、６ヶ月および９ヶ月の齢での背側外側膝状体（ＤＬＧ）、一次視覚野（Ｖ１）、および上丘（ＳｕｐＣｏｌ）における進行性のニューロン喪失を予防する。平均±ＳＥＭ、各時点についての一元配置ＡＮＯＶＡ、ボンフェローニ補正。＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１、＊＊＊＊ｐ＜０．０００１。 Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウス（ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６またはＰＢＳを投与された）およびＷＴマウスの網膜の画像ならびに光受容体の数のプロットを提供する。クレシルバイオレットで染色された視神経乳頭近くの網膜切片は、網膜積層および光受容体（青）を示す。ＣＳＦを介して送達されたｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６の単回の生後１日目の単回注射は、３ヶ月、６ヶ月、および９ヶ月のＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウスにおける進行性の光受容体喪失を予防する。野生型動物は、１０～１２列の光受容体核を示す一方で、未治療のＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウスは、９ヶ月の齢までに１層の光受容体のみを保持する。対照的に、ＡＡＶ９治療されたＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウスは、調べたすべての時点で８～１０列の光受容体を維持する。プロットに示された光受容体密度の定量化。 Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウス（ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６またはＰＢＳを投与された）の網膜の層におけるＣＬＮ６分布の画像を提供する。抗ヒトＣＬＮ６（赤）およびロドプシン（光受容体、緑）抗体で免疫標識された網膜切片は、主にＲＧＣ、ＩＮＬ、ＯＮＬ、およびＲＰＥ層における３、６、および９ヶ月の齢のＡＡＶ９治療されたＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウスにおけるｈＣＬＮ６を検出した。抗ヒトＣＬＮ６（赤）および抗グルタミンシンテターゼ（ミュラーグリア、緑）で二重染色された網膜切片は、共局在を示さず、ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６がこの投与戦略を使用してグリア層よりも核および上皮層を優先的に標的としたことを示している。各時点についてｎ＝６／治療、同数の雄および雌によって表される。

本開示は、例えば、光受容体を保存すること、光受容体の変性を予防もしくは阻害すること、および／または網膜の変性を阻害することによって、バッテン病の視覚効果の治療または予防を必要とする患者においてそれを行うための方法および製品を提供する。方法は、遺伝子送達ベクターを使用して対象にＣＬＮ６ポリヌクレオチドを送達することを伴う。いくつかの実施形態では、遺伝子療法ベクターは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、または単純ヘルペスウイルスである。いくつかの実施形態では、遺伝子送達ベクターは、ＡＡＶである。

本明細書で使用される場合、本明細書で交換可能に使用される「ベクター」または「遺伝子療法ベクター」という用語は、治療用遺伝子（例えば、治療用タンパク質をコードする）を細胞に送達する、遺伝子療法送達ビヒクルまたは担体を指す。遺伝子療法ベクターは、遺伝子療法における使用に好適な任意のベクター、例えば、患者の標的細胞（例えば、ニューロン）への核酸ポリマー（ポリペプチドまたはその変異型をコードする）の治療的送達に好適な任意のベクターである。ベクターは、任意の型のものであり得、例えば、それは、プラスミドベクターまたはミニサークルＤＮＡであり得る。典型的には、ベクターは、ウイルスベクターである。ベクターは、アデノウイルスなどの遺伝学的に無効なウイルス、ならびにリポソームなどの非ウイルスベクターの両方を含む。ウイルスベクターは、例えば、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、レトロウイルス、ポックスウイルス、ワクシニアウイルス、レンチウイルス、単純ヘルペスウイルス、またはアデノウイルスに由来し得る。ＡＡＶ由来ベクターについては、ベクターは、ＡＡＶゲノムまたはその誘導体を含み得る。

アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、複製欠損パルボウイルスであり、その一本鎖ＤＮＡゲノムは、２つの１４５個のヌクレオチドの逆方向末端反復（ＩＴＲ）を含む約４．７ｋｂの長さであり、ウイルスそれ自体またはその誘導体を指すように使用することができる。この用語は、他に特定されない限り、すべてのサブタイプおよび天然に存在する形態および組換え形態の両方を包含する。ＡＡＶの複数の血清型がある。ＡＡＶの血清型は、各々特定のクレードと関連しており、そのメンバーは血清学的および機能的類似性を共有している。したがって、ＡＡＶはまた、クレードによって称され得る。例えば、ＡＡＶ９配列は、「クレードＦ」配列と称される（Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７８：６３８１－６３８８（２００４））。本開示は、特定のクレード、例えばクレードＦ内の任意の配列の使用を企図する。ＡＡＶ血清型のゲノムのヌクレオチド配列は既知である。例えば、ＡＡＶ－１の完全なゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００２０７７に提供されており、ＡＡＶ－２の完全なゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００１４０１およびＳｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，４５：５５５－５６４（１９８３）に提供されており、ＡＡＶ－３の完全なゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿１８２９に提供されており、ＡＡＶ－４の完全なゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００１８２９に提供されており、ＡＡＶ－５ゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＦ０８５７１６に提供されており、ＡＡＶ－６の完全なゲノムは、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＣ＿００ １８６２に提供されており、ＡＡＶ－７およびＡＡＶ－８ゲノムの少なくとも部分は、それぞれ、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＸ７５３２４６およびＡＸ７５３２４９に提供されており、ＡＡＶ－９ゲノムは、Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７８：６３８１－６３８８（２００４）に提供されており、ＡＡＶ－１０ゲノムは、Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，１３（１）：６７－７６（２００６）に提供されており、ＡＡＶ－１１ゲノムは、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，３３０（２）：３７５－３８３（２００４）に提供されており、ＡＡＶ－１２ゲノムの部分は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＤＱ８１３６４７に提供されており、ＡＡＶ－１３ゲノムの部分は、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＥＵ２８５５６２に提供されている。ＡＡＶ ｒｈ．７４ゲノムの配列は、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，４３４，９２８号に提供されている。ＡＡＶ－Ｂ１ゲノムの配列は、Ｃｈｏｕｄｈｕｒｙ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｔｈｅ．，２４（７）：１２４７－１２５７（２０１６）に提供されている。ウイルスＤＮＡ複製（ｒｅｐ）、キャプシド形成／パッケージング、および宿主細胞染色体組み込みを指示するＣｉｓ作用配列は、ＩＴＲ内に含有される。３つのＡＡＶプロモーター（それらの相対マップ位置に対してｐ５、ｐ１９、およびｐ４０と名付けられる）は、ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子をコードする２つのＡＡＶ内部オープンリーディングフレームの発現を駆動する。単一のＡＡＶイントロンの差異的スプライシング（ヌクレオチド２１０７および２２２７における）と相まって、２つのｒｅｐプロモーター（ｐ５およびｐ１９）により、ｒｅｐ遺伝子から４つのｒｅｐタンパク質（ｒｅｐ７８、ｒｅｐ６８、ｒｅｐ５２、およびｒｅｐ４０）が産生される。ｒｅｐタンパク質は、最終的にウイルスゲノムの複製に関与する複数の酵素特性を有する。ｃａｐ遺伝子は、ｐ４０プロモーターから発現され、３つのキャプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、およびＶＰ３をコードする。選択的スプライシングおよび非コンセンサス翻訳開始部位は、３つの関連キャプシドタンパク質の産生に関与する。単一コンセンサスポリアデニル化部位は、ＡＡＶゲノムのマップ位置９５に位置する。ＡＡＶの生活環および遺伝学は、Ｍｕｚｙｃｚｋａ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５８：９７－１２９（１９９２）に概説されている。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈＳ、ＡＡＶｒｈ１０ベクター、ＡＡＶｒｈ３３、ＡＡＶｒｈ３４、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶ Ａｎｃ８０、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ、およびＡＡＶ－ＤＪからなる群から選択される。

ＡＡＶは、例えば、遺伝子療法において、外来ＤＮＡを細胞に送達するためのベクターとして魅力的にする固有の特徴を有する。培養中の細胞のＡＡＶ感染は、非細胞変性であり、ヒトおよび他の動物の自然感染は、サイレントかつ無症候性である。さらに、ＡＡＶは、多くの哺乳動物細胞を感染させ、インビボで多くの異なる組織を標的化する可能性を可能にする。さらに、ＡＡＶは、緩徐に分裂する細胞および非分裂細胞を形質導入し、転写的に活性な核エピソーム（染色体外要素）として本質的にそれらの細胞の寿命にわたって存続し得る。天然のＡＡＶプロウイルスゲノムは、組換えゲノムの構築を実現可能にするプラスミド中のクローン化ＤＮＡとして感染性である。さらに、ＡＡＶ複製、ゲノムキャプシド形成および組み込みを指示するシグナルがＡＡＶゲノムのＩＴＲ内に含まれるので、ゲノムの内部約４．３ｋｂ（複製および構造キャプシドタンパク質、ｒｅｐ－ｃａｐをコードする）のいくつかまたはすべてを置換することができるプロモーター、目的のＤＮＡおよびポリアデニル化シグナルを含む遺伝子カセットのような外来ＤＮＡと接触させる。場合によっては、ｒｅｐおよびｃａｐタンパク質は、トランスで提供される。ＡＡＶの別の重要な特徴は、それが極めて安定した頑健なウイルスであることである。これは、アデノウイルスを不活性化するために使用される条件（５６℃～６５℃で数時間）に容易に耐え、ＡＡＶの低温保存の重要性を低くする。ＡＡＶは、凍結乾燥され得る。最後に、ＡＡＶ感染細胞は、重複感染に耐性を示さない。

本明細書で使用される「ＡＡＶ」という用語は、野生型ＡＡＶウイルスまたはウイルス粒子を指す。「ＡＡＶ」、「ＡＡＶウイルス」、および「ＡＡＶウイルス粒子」という用語は、本明細書では互換的に使用される。「ｒＡＡＶ」という用語は、組換えＡＡＶウイルスまたは組換え感染性のカプセル化ウイルス粒子を指す。「ｒＡＡＶ」、「ｒＡＡＶウイルス」、および「ｒＡＡＶウイルス粒子」という用語は、本明細書では互換的に使用される。

「ｒＡＡＶゲノム」という用語は、修飾されている天然のＡＡＶゲノムに由来するポリヌクレオチド配列を指す。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、天然のｃａｐおよびｒｅｐ遺伝子を除去するために修飾されている。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは内因性５’および３’逆方向末端反復（ＩＴＲ）を含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、ＡＡＶゲノムが由来するＡＡＶ血清型とは異なるＡＡＶ血清型からのＩＴＲを含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは、逆方向末端反復（ＩＴＲ）によって５’末端および３’末端に隣接した目的の導入遺伝子（例えばＣＬＮ６をコードするポリヌクレオチド）を含む。いくつかの実施形態では、ｒＡＡＶゲノムは「遺伝子カセット」を含む。例示的な遺伝子カセットを図１Ａに記載し、そして核酸配列を配列番号４に記載する。ｒＡＡＶゲノムは、本明細書で「ｓｃＡＡＶゲノム」と称される自己相補的（ｓｃ）ゲノムであり得る。あるいは、ｒＡＡＶゲノムは、本明細書で「ｓｓＡＡＶゲノム」と呼ばれる一本鎖（ｓｓ）ゲノムであり得る。

「ｓｃＡＡＶ」という用語は、自己相補的ゲノムを含むｒＡＡＶウイルスまたはｒＡＡＶウイルス粒子を指す。「ｓｓＡＡＶ」という用語は、一本鎖ゲノムを含むｒＡＡＶウイルスまたはｒＡＡＶウイルス粒子を指す。

本明細書で提供されるｒＡＡＶゲノムは、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み得る。ＣＬＮ６ポリペプチドは、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含むか、または配列番号１に記載のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドを含み、ＣＬＮ６活性（例えば、光受容体の変性の阻害または予防、網膜劣化の阻害、リソソーム自己蛍光貯蔵物質のクリアランスの増加、ＡＴＰシンターゼサブユニットＣのリソソーム貯蔵の減少、および例えば、治療前の患者と比較して治療した場合の患者における星状細胞ならびにミクログリアの活性化の減少のうちの少なくとも１つ）を有するポリペプチドをコードする。

本明細書で提供されるｒＡＡＶゲノムは、場合によっては、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、ポリヌクレオチドは、配列番号２に記載のヌクレオチド配列、または配列番号２に記載のヌクレオチド配列と少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一のポリヌクレオチドを有し、ＣＬＮ６活性（例えば、光受容体の変性の阻害または予防、網膜変性の阻害、リソソーム自己蛍光貯蔵物質のクリアランスの増加、ＡＴＰシンターゼサブユニットＣのリソソーム貯蔵の減少、および例えば、治療前の患者と比較して治療した場合の患者における星状細胞ならびにミクログリアの活性化の減少のうちの少なくとも１つ）を有するポリペプチドをコードする。

本明細書に提供されるｒＡＡＶゲノムは、いくつかの実施形態では、ＣＬＮ６活性を有するポリペプチドをコードし、かつストリンジェントな条件下で配列番号２の核酸配列、またはその相補体にハイブリダイズするポリヌクレオチド配列を含む。「ストリンジェントな」という用語は、ストリンジェントとして当該技術分野において一般に理解される条件を指すために使用される。ハイブリダイゼーションストリンジェシーは、主に、温度、イオン強度、およびホルムアミドなどの変性剤の濃度によって決定される。ハイブリダイゼーションおよび洗浄のためのストリンジェントな条件の例は、０．０１５Ｍの塩化ナトリウム、６５～６８℃での０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム、または４２℃での０．０１５Ｍの塩化ナトリウム、０．００１５Ｍのクエン酸ナトリウム、および５０％ホルムアミドである。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．１９８９）を参照されたい。

本明細書に提供されるｒＡＡＶゲノムは、いくつかの実施形態では、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに隣接する１つ以上のＡＡＶ ＩＴＲを含む。ＣＬＮ６ポリヌクレオチドは、遺伝子カセットを形成するために標的細胞内で機能的である転写制御要素（プロモーター、エンハンサおよび／またはポリアデニル化シグナル配列が含まれるが、これらに限定されない）に作動可能であるように結合されている。プロモーターの例は、ニワトリβアクチンプロモーターおよびＰ５４６プロモーターである。シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭＭＴＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）長い末端反復（ＬＴＲ）プロモーター、ＭｏＭｕＬＶプロモーター、トリ白血病ウイルスプロモーター、エプスタイン－バーウイルス即時型プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、ならびにヒト遺伝子プロモーター（例えば、限定されないが、アクチンプロモーター、ミオシンプロモーター、伸長因子－１ａプロモーター、ヘモグロビンプロモーター、クレアチンキナーゼプロモーター）が挙げられるが、これらに限定されない追加のプロモーターが本明細書で企図される。本明細書でさらに提供されるのは、ＣＢ転写促進活性を有するプロモーターである、配列番号３に記載のＣＢプロモーター配列、および配列番号３に記載のヌクレオチド配列と少なくとも６５％、７０％、７５％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のプロモーター配列である。転写制御因子の他の例は、組織特異的制御因子、例えば、ニューロン内での特異的発現を可能にするか、または星状細胞内での特異的発現を可能にするプロモーターである。例としては、ニューロン特異的エノラーゼおよびグリア線維性酸性タンパク質プロモーターが挙げられる。誘導性プロモーターもまた、企図される。誘導性プロモーターの非限定的な例としては、メタロチオネインプロモーター、グルココルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーター、およびテトラサイクリン調節プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。遺伝子カセットはまた、哺乳動物細胞中で発現されたときにＣＬＮ６ ＲＮＡ転写産物のプロセシングを容易にするためのイントロン配列を含んでもよい。このようなイントロンの一例は、ＳＶ４０イントロンである。

いくつかの実施形態では、５’から３’の順序で、ハイブリッドニワトリβ－アクチン（ＣＢ）プロモーター、およびＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む、ｒＡＡＶ９ゲノムを含む、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする組換えアデノ随伴ウイルス９（ｒＡＡＶ９）がある。場合によっては、ｒＡＡＶ９ゲノムは、自己相補的ゲノムを含む。あるいは、ｒＡＡＶ９ゲノムは、一本鎖ゲノムを含む。

配列番号１に記載のＣＬＮ６ポリペプチドをコードする自己相補的組換えアデノ随伴ウイルス９（ｓｃＡＡＶ９）が提供され、この中で、ｓｃＡＡＶ９のゲノムは、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号３の配列を含むハイブリッドニワトリβ－アクチン（ＣＢ）プロモーター、配列番号２に記載のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む。ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２と少なくとも９０％同一であり得る。

また提供されるのは、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、ＣＭＶエンハンサ、ハイブリッドニワトリβ－アクチンプロモーター（ｃｂ）、ＳＶ４０イントロン、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含むゲノムを有するｓｃＡＡＶ９；５’～３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号３の配列を含むＣＢプロモーター、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含むゲノムを有するｓｃＡＡＶ９；および配列番号４の核酸配列で記載される遺伝子カセットを含むゲノムを有するｓｃＡＡＶ９である。

また提供されるのは、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、ＣＭＶエンハンサ、ハイブリッドニワトリβ－アクチンプロモーター（ＣＢ）、ＳＶ４０イントロン、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含むゲノムを有するｓｓＡＡＶ９；５’～３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号３の配列を含むＣＢプロモーター、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含むゲノムを有するｓｓＡＡＶ９；または配列番号４の核酸配列で記載される遺伝子カセットを含むゲノムを有するｓｓＡＡＶ９である。

配列番号４に記載の核酸配列は、図１に提供される遺伝子カセットである。提供されるのは、ｓｃＡＡＶ９ゲノムもしくは配列番号４の核酸配列と少なくとも９０％同一、配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％同一、または配列番号４の核酸配列と少なくとも９８％同一である核酸配列を含むｓｓＡＡＶ９ゲノムを含むｒＡＡＶ９である。

さらに提供されるのは、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号３の核酸配列を含むＣＢプロモーター、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードする核酸配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む核酸分子である。いくつかの実施形態では、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、配列番号２の核酸配列と少なくとも９０％同一であり得る。

また提供されるのは、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号３のヌクレオチド配列を含むＣＢプロモーター、ＳＶ４０イントロン、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードする核酸配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む核酸分子である。加えて、提供されるのは、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号３のヌクレオチド配列を含むＣＢプロモーター、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードする核酸、ＢＧＨポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む核酸分子である。提供されるポリヌクレオチドのいずれかにおいて、ＣＬＮ６ポリペプチドは、配列番号２の核酸配列と少なくとも９０％同一の核酸配列によってコードされ得る。

提供されるのは、ｓｃＡＡＶゲノムまたｓｓＡＡＶゲノムを有するｒＡＡＶであり、ここでゲノムは、配列番号４の核酸配列と少なくとも９０％同一、または配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％同一、または配列番号４の核酸配列と少なくとも９８％同一である核酸配列を含む。

提供されるｒＡＡＶは、本明細書に開示されるポリヌクレオチドのいずれかを含み得る。加えて、開示された核酸のいずれかを含むウイルス粒子が提供される。自己相補的または一本鎖ゲノムを有するｒＡＡＶもまた、提供される。

また提供されるのは、５’から３’の順序で、配列番号６と少なくとも９０％同一の核酸配列を含むＣＭＶエンハンサ、配列番号３と少なくとも９０％同一の核酸配列を含むＣＢプロモーター、および配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むｒＡＡＶ９ゲノムを含むＣＬＮ６ポリペプチドをコードする組換えアデノ随伴ウイルス９（ｒＡＡＶ９）ウイルス粒子である。いくつかの実施形態では、提供されるｒＡＡＶ９ウイルス粒子は、自己相補的ゲノムを含む。あるいは、提供されるｒＡＡＶ９ウイルス粒子は、一本鎖ゲノムを含む。

さらに提供されるのはｒＡＡＶ９ウイルス粒子であり、ここでｒＡＡＶ９ゲノムは、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号６と少なくとも９０％同一の核酸配列を含むＣＭＶエンハンサ、配列番号３と少なくとも９０％同一の核酸配列を含むＣＢプロモーター、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む。提供されるｒＡＡＶ９粒子は、配列番号１と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む。ｒＡＡＶ９ウイルス粒子のいずれも、任意選択的に、ＳＶ４０イントロン、および／またはＢＧＨポリＡ配列をさらに含む。

さらなる実施形態では、ｒＡＡＶ９ウイルス粒子は、配列番号４の核酸配列と少なくとも９０％同一、配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％同一、または配列番号４の核酸配列と少なくとも９８％同一である核酸配列を含むＡＡＶ９ゲノムを含む。

提供されるｒＡＡＶ、ｓｓＡＡＶ、またはｓｃＡＡＶのいずれにおいても、ＡＡＶ逆方向末端反復は、ＡＡＶ２逆方向末端反復であり得る。

また提供されるのは、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号６と少なくとも９０％同一の核酸配列を含むＣＭＶエンハンサ、配列番号３と少なくとも９０％同一の核酸配列を含むＣＢプロモーター、および配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むｒＡＡＶ９ゲノムを含む核酸分子である。提供される核酸分子は、自己相補的ゲノムおよび／または一本鎖ゲノムを含む。

さらに提供されるのは、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号６と少なくとも９０％同一の核酸配列を含むＣＭＶエンハンサ、配列番号３と少なくとも９０％同一の核酸配列を含むＣＢプロモーター、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含むｒＡＡＶ９ゲノムを含む核酸分子である。提供される核酸分子は、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％同一のアミノ酸配列を含むＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むことができる。加えて、核酸分子は、配列番号４の核酸配列と少なくとも９０％同一、配列番号４の核酸配列と少なくとも９５％同一、配列番号４の核酸配列と少なくとも９８％同一である核酸配列を含むＡＡＶ９ゲノムを含むことができる。提供される核酸分子のいずれも、任意選択的に、ＳＶ４０イントロン、および／またはＢＧＨポリＡ配列をさらに含む。

「パッケージング」とは、ＡＡＶ粒子の組み立ておよびキャプシド形成をもたらす一連の細胞内事象を指す。「産生」という用語は、充填細胞によるｒＡＡＶ（感染性のカプセル化されたｒＡＡＶ粒子）の産生プロセスを指す。

ＡＡＶ「ｒｅｐ」および「ｃａｐ」遺伝子は、それぞれアデノ随伴ウイルスの複製タンパク質およびキャプシド形成タンパク質をコードするポリヌクレオチド配列を指す。ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐは、本明細書においてＡＡＶ「パッケージング遺伝子」と称される。

ＡＡＶについての「ヘルパーウイルス」は、ＡＡＶ（例えば、野生型ＡＡＶ）が哺乳動物細胞によって複製およびパッケージングされることを可能にするウイルスを指す。アデノウイルス、ヘルペスウイルス、およびワクシニアなどのポックスウイルスを含む、ＡＡＶに対する様々なこのようなヘルパーウイルスは、当該技術分野において既知である。アデノウイルスは、いくつかの異なるサブグループを包含し得るが、サブグループＣのアデノウイルス５型が最も一般的に使用される。ヒト、非ヒト哺乳動物、およびトリ起源の多数のアデノウイルスが既知であり、ＡＴＣＣなどの寄託機関から入手可能である。ヘルペス科のウイルスには、例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）およびエプスタイン－バーウイルス（ＥＢＶ）、ならびにサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）および偽狂犬病ウイルス（ＰＲＶ）が含まれ、これらはＡＴＣＣなどの寄託機関からも入手可能である。

「ヘルパーウイルス機能」とは、（本明細書に記載の複製およびパッケージングのための他の要件と併せて）ＡＡＶ複製およびパッケージングを可能にするヘルパーウイルスゲノムにコードされている機能を指す。本明細書中に記載されるように、「ヘルパーウイルス機能」は、ヘルパーウイルスを提供すること、または例えば必要な機能をコードするポリヌクレオチド配列をトランスでプロデューサー細胞に提供することによることを含む多くの方法で提供され得る。

本明細書で提供されるｒＡＡＶゲノムは、ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ ＤＮＡを欠く。本明細書に企図されるｒＡＡＶゲノム（例えば、ＩＴＲ）内のＡＡＶ ＤＮＡは、組換えウイルスを導出するのに好適な任意のＡＡＶ血清型からであり得、ＡＡＶ血清型ＡＡＶ－１、ＡＡＶ－２、ＡＡＶ－３、ＡＡＶ－４、ＡＡＶ－５、ＡＡＶ－６、ＡＡＶ－７、ＡＡＶ－８、ＡＡＶ－９、ＡＡＶ－１０、ＡＡＶ－１１、ＡＡＶ－１２、ＡＡＶ－１３、ＡＡＶ ｒｈ．７４、およびＡＡＶ－Ｂ１が挙げられるが、これらに限定されない。上記に記載されるように、様々なＡＡＶ血清型のゲノムのヌクレオチド配列が、当該技術分野において既知である。キャプシド変異を有するｒＡＡＶもまた、企図される。例えば、Ｍａｒｓｉｃ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，２２（１１）：１９００－１９０９（２０１４）を参照されたい。本明細書中の修飾キャプシドもまた、企図され、グリコシル化および脱アミド化などの種々の翻訳後修飾を有するキャプシドを含む。アスパラギンまたはグルタミン側鎖を脱アミド化してアスパラギン残基をアスパラギン酸またはイソアスパラギン酸残基に変換すること、およびグルタミンをグルタミン酸またはイソグルタミン酸に変換することは、本明細書に提供されるｒＡＡＶキャプシドにおいて企図される。例えば、Ｇｉｌｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，２６（１２）：２８４８－２８６２（２０１８）を参照されたい。本明細書中の修飾キャプシドもまた、治療を必要とする罹患組織および臓器にｒＡＡＶを指向させる標的化配列を含むと企図される。

本明細書で提供されるＤＮＡプラスミドは、本明細書に記載されるｒＡＡＶゲノムを含む。ＤＮＡプラスミドは、ＡＡＶ９キャプシドタンパク質を用いて感染性ウイルス粒子中にｒＡＡＶゲノムを組み立てるために、ＡＡＶのヘルパーウイルス（例えば、アデノウイルス、Ｅ１欠損アデノウイルス、またはヘルペスウイルス）による感染を許容できる細胞に導入される。パッケージングされるべきｒＡＡＶゲノム、ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、およびヘルパーウイルス機能が細胞に提供されるｒＡＡＶを産生する技術は、当該技術分野において標準的である。ｒＡＡＶ粒子の産生は、以下の成分、ｒＡＡＶゲノム、ｒＡＡＶゲノムから分離した（すなわち、その中に存在しない）ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、ならびにヘルパーウイルス機能が、単一細胞（本明細書でパッケージング細胞と表される）内に存在することを必要とする。ＡＡＶのｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子は、組換えウイルスが由来し得る任意のＡＡＶ血清型に由来してもよく、ｒＡＡＶゲノムＩＴＲとは異なるＡＡＶ血清型に由来してもよい。偽型ｒＡＡＶの生成は、例えば、ＷＯ０１／８３６９２に開示され、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。様々な実施形態では、ＡＡＶキャプシドタンパク質は、組換えｒＡＡＶの送達を増強するために修飾され得る。キャプシドタンパク質に対する修飾は、一般的に当該技術分野において既知である。例えば、その開示全体が参照により本明細書に組み入れられる、ＵＳ２００５／００５３９２２およびＵＳ２００９／０２０２４９０を参照されたい。

パッケージング細胞を生成する方法は、ｒＡＡＶの産生に必要な成分をすべて安定して発現する細胞株を作成することである。例えば、ＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子を欠くｒＡＡＶゲノム、ｒＡＡＶゲノムから分離したＡＡＶ ｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子、およびネオマイシン耐性遺伝子などの選択可能なマーカーを含むプラスミド（または複数のプラスミド）が、細胞のゲノムに組み込まれてもよい。ｒＡＡＶゲノムは、ＧＣテーリング（Ｓａｍｕｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９８２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ６．ＵＳＡ，７９：２０７７－２０８１）、制限エンドヌクレアーゼ切断部位を含有する合成リンカーの付加（Ｌａｕｇｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，１９８３，Ｇｅｎｅ，２３：６５－７３）、または直接平滑末端ライゲーション（Ｓｅｎａｐａｔｈｙ ＆ Ｃａｒｔｅｒ，１９８４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５９：４６６１－４６６６）などの手順により細菌プラスミドに導入されてもよい。その後、パッケージング細胞株は、アデノウイルスなどのヘルパーウイルスに感染させられ得る。この方法の利点は、細胞が選択可能であり、ｒＡＡＶの大規模産生に好適であることである。好適な方法の他の例は、ｒＡＡＶゲノムならびに／またはｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子をパッケージング細胞に導入するためにプラスミドではなくアデノウイルスまたはバキュロウイルスを用いる。

ｒＡＡＶ粒子産生の一般的原理は、例えば、Ｃａｒｔｅｒ，１９９２，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１５３３－５３９、およびＭｕｚｙｃｚｋａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ．ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５８：９７－１２９）に概説されている。様々なアプローチは、Ｒａｔｓｃｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．４：２０７２（１９８４）、Ｈｅｒｍｏｎａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６４６６（１９８４）、Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏ１．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：３２５１（１９８５）、ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６２：１９６３（１９８８）、およびＬｅｂｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，１９８８ Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，７：３４９（１９８８）、Ｓａｍｕｌｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（１９８９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，６３：３８２２－３８２８）、米国特許第５，１７３，４１４号、ＷＯ９５／１３３６５および対応する米国特許第５，６５８，７７６号、ＷＯ９５／１３３９２、ＷＯ９６／１７９４７、ＰＣＴ／ＵＳ９８／１８６００、ＷＯ９７／０９４４１（ＰＣＴ／ＵＳ９６／１４４２３）、ＷＯ９７／０８２９８（ＰＣＴ／ＵＳ９６／１３８７２）、ＷＯ９７／２１８２５（ＰＣＴ／ＵＳ９６／２０７７７）、ＷＯ９７／０６２４３（ＰＣＴ／ＦＲ９６／０１０６４）、ＷＯ９９／１１７６４、Ｐｅｒｒｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｖａｃｃｉｎｅ １３：１２４４－１２５０、Ｐａｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：６０９－６１５、Ｃｌａｒｋ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：１１２４－１１３２、米国特許第５，７８６，２１１号、米国特許第５，８７１，９８２号、および米国特許第６，２５８，５９５号に記載されている。前述の文書は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれ、ｒＡＡＶ粒子産生に関する文書の部分を特に強調する。

本明細書でさらに提供されるのは、感染性ｒＡＡＶ粒子を産生するパッケージング細胞である。一実施形態では、パッケージング細胞は、ＨｅＬａ細胞、２９３細胞、およびＰｅｒＣ．６細胞（同種２９３株）などの安定して形質転換されたがん細胞であり得る。別の実施形態では、パッケージング細胞は、形質転換されたがん細胞ではない細胞、例えば、低継代２９３細胞（アデノウイルスのＥ１で形質転換されたヒト胎児腎細胞）、ＭＲＣ－５細胞（ヒト胎児線維芽細胞）、ＷＩ－３８細胞（ヒト胎児線維芽細胞）、Ｖｅｒｏ細胞（サル腎細胞）、およびＦＲｈＬ－２細胞（アカゲザル胎児肺細胞）であり得る。

本開示のｒＡＡＶゲノムを含むｒＡＡＶ（例えば、感染性キャプシド形成したｒＡＡＶ粒子）も本明細書で提供される。ｒＡＡＶのゲノムは、ＡＡＶのｒｅｐおよびｃａｐ ＤＮＡを欠いており、すなわち、ｒＡＡＶのゲノムのＩＴＲ間にＡＡＶのｒｅｐまたはｃａｐ ＤＮＡが存在しない。ｒＡＡＶゲノムは自己相補的（ｓｃ）ゲノムであり得る。ｓｃゲノムを有するｒＡＡＶは、本明細書中でｓｃＡＡＶと称される。ｒＡＡＶゲノムは一本鎖（ｓｓ）ゲノムであり得る。一本鎖ゲノムを有するｒＡＡＶは、本明細書中でｓｓＡＡＶと称される。

本明細書で提供される例示的なｒＡＡＶは、「ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６」と命名されるｓｃＡＡＶである。ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６ ｓｃＡＡＶは、ハイブリッドニワトリβ－アクチン（ＣＢ）プロモーター（配列番号３）の制御下にあるヒトＣＬＮ６ ｃＤＮＡを含むｓｃＡＡＶゲノムを含有する。ｓｃＡＡＶゲノムはまた、ＳＶ４０イントロン（ヒトＣＬＮ６ ｃＤＮＡの上流）およびウシ成長ホルモンポリアデニル化（ＢＧＨポリＡ）ターミネーター配列（ヒトＣＬＮ６ ｃＤＮＡの下流）を含む。このｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６遺伝子カセットの配列を配列番号４に記載する。ｓｃＡＡＶゲノムは、ＡＡＶ９キャプシドにパッケージングされており、ＡＡＶ２ ＩＴＲ（１つはＣＢプロモーターの上流にあり、他のＩＴＲはＢＧＨポリＡターミネーター配列の下流にある）を含む。

ｒＡＡＶは、当該技術分野で標準的な方法によって、例えば、カラムクロマトグラフィーまたは塩化セシウム勾配によって精製され得る。ヘルパーウイルスからｒＡＡＶベクターを精製するための方法は、当該技術分野で既知であり、例えば、Ｃｌａｒｋ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，１０（６）：１０３１－１０３９（１９９９）、Ｓｃｈｅｎｐｐ ａｎｄ Ｃｌａｒｋ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，６９ ４２７－４４３（２００２）、米国特許第６，５６６，１１８号、およびＷＯ９８／０９６５７に開示される方法を含み得る。

遺伝子療法ベクターを含む組成物もまた、提供される。組成物は、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする遺伝子療法ベクターを含む。組成物は、目的の異なるポリペプチドをコードする２つ以上の遺伝子療法ベクターを含み得る。いくつかの実施形態では、遺伝子療法ベクターは、ｒＡＡＶである。いくつかの態様では、ｒＡＡＶはｓｃＡＡＶまたはｓｓＡＡＶである。

本明細書で提供される組成物は、遺伝子療法ベクターと、薬学的に許容される賦形剤とを含む。いくつかの実施形態では、遺伝子療法ベクターは、ｒＡＡＶである。許容される賦形剤は、レシピエントにとって非毒性であり、好ましくは、用いられる投薬量および濃度で不活性であり、リン酸塩［例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）］、クエン酸塩、もしくは他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸などの抗酸化剤；低分子量ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンもしくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；マンニトールもしくはソルビトールなどの糖アルコール；ナトリウムなどの塩形成対イオン；および／またはＴｗｅｅｎ（登録商標）、ポロキサマー１８８などのコポリマー、プルロニック（登録商標）（例えば、プルロニック（登録商標）Ｆ６８）もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で提供される組成物は、イオビトリドール、イオヘキソール、イオメプロール、イオパミドール、イオペントール、イオプロミド、イオベルソール、またはイオキシランなどの非イオン性低浸透圧性化合物を含有する薬学的に許容される水性賦形剤を含むことができ、非イオン性低浸透圧性化合物を含有する水性賦形剤は、以下の特性：約１８０ｍｇＩ／ｍＬ、約３２２ｍＯｓｍ／ｋｇ水の蒸気圧浸透圧法による容量オスモル濃度、約２７３ｍＯｓｍ／Ｌの容量オスモル濃度、２０℃で約２．３ｃｐおよび３７℃で約１．５ｃｐの絶対粘度、ならびに３７℃で約１．１６４の比重のうちの１つ以上を有することができる。例示的な組成物は、約２０～４０％の非イオン性低浸透圧性化合物、または約２５％～約３５％の非イオン性低浸透圧性化合物を含む。例示的な組成物は、２０ｍＭのトリス（ｐＨ８．０）、１ｍＭのＭｇＣｌ_２、２００ｍＭのＮａＣｌ、０．００１％のポロキサマー１８８、約２５％～約３５％の非イオン性の低浸透圧性化合物中に配合されたｓｃＡＡＶまたはｒＡＡＶウイルス粒子を含む。別の例示的組成物は、１×ＰＢＳおよび０．００１％プルロニック（登録商標）Ｆ６８中に配合されたｓｃＡＡＶを含む。

本開示の方法で投与されるｒＡＡＶの投薬量は、例えば、特定のｒＡＡＶ、投与モード、投与の時間、治療目標、個体、および標的とされる細胞型に応じて異なることになり、当該技術分野における標準の方法によって決定され得る。投薬量は、ウイルスゲノム（ｖｇ）の単位で表されてもよい。本明細書で企図される投薬量は、約１×１０^１１、約１×１０^１２、約１×１０^１３、約１．１×１０^１３、約１．２×１０^１３、約１．３×１０^１３、約１．５×１０^１３、約２×１０^１３、約２．５×１０^１３、約３×１０^１３、約３．５×１０^１３、約４×１０^１３、約４．５×１０^１３、約５×１０^１３、約６×１０^１３、約１×１０^１４、約２×１０^１４、約３×１０^１４、約４×１０^１４、約５×１０^１４、約１×１０^１５、約１×１０^１６まで、またはそれ以上の総ウイルスゲノムを含む。約１×１０^１１～約１×１０^１５ｖｇ、約１×１０^１２～約１×１０^１５ｖｇ、約１×１０^１２～約１×１０^１４ｖｇ、約１×１０^１３～約６×１０^１４ｖｇ、および約６×１０^１３～約１．０×１０^１４ｖｇの投薬量もまた、企図される。本明細書中に例示される１用量は、６×１０^１３ｖｇである。本明細書に例示される他の用量は、１．５×１０^１３である。

標的細胞（光受容体、網膜細胞、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞、双極細胞、水平細胞、アマクリン細胞、およびミュラーグリア；神経系の細胞、神経またはグリア細胞などの目の細胞を含むがこれらに限定されない）にｒＡＡＶを形質導入する方法が、提供される。神経系の細胞は、下位運動ニューロン、ミクログリア細胞、乏突起膠細胞、星状細胞、シュワン細胞、またはそれらの組み合わせなどの、ニューロンを含む。

「形質導入」という用語は、レシピエント細胞による機能性ポリペプチドの発現をもたらす、本開示の複製欠損ｒＡＡＶを介した、インビボまたはインビトロのいずれかでの、標的細胞へのＣＬＮ６ポリヌクレオチドの投与／送達を指すように使用される。本開示のｒＡＡＶによる細胞の形質導入は、ｒＡＡＶによってコードされるポリペプチドまたはＲＮＡの持続的発現をもたらす。したがって、本開示は、髄腔内、脳室内、硝子体内、眼内、網膜下、脳実質内、もしくは静脈内経路、またはそれらの任意の組み合わせによって、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするｒＡＡＶを対象に投与／送達する方法を提供する。いくつかの実施形態では、投与は、脳室内である。いくつかの実施形態では、投与は、眼内、硝子体内、または網膜下である。いくつかの実施形態では、投与は、髄腔内、脳室内、脳実質内、または静脈内および硝子体内、眼内、または網膜下の組み合わせである。髄腔内送達は、脳または脊髄のくも膜の下の空間への送達を指す。いくつかの実施形態では、髄腔内投与は槽内注射または腰椎注射を介したものである。

本明細書で提供される方法は、標的細胞（網膜細胞、神経細胞および／またはグリア細胞を含むが、これらに限定されない）に本明細書に記載の１つ以上のｒＡＡＶを形質導入することを含む。いくつかの実施形態では、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むｒＡＡＶウイルス粒子は、患者の脳、脊髄、および／または目に投与または送達される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、網膜などの目に送達される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、脳に送達される。送達が企図される脳の領域としては、運動皮質、視覚野、小脳、脳室、および脳幹が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、脊髄に送達される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、光受容体、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）、網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞、双極細胞、水平細胞、アマクリン細胞、およびミュラーグリアなどの網膜の細胞に送達される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、下位運動ニューロンなどのニューロンに送達される。ポリヌクレオチドは、神経細胞およびグリア細胞に送達され得る。グリア細胞は、ミクログリア細胞、乏突起膠細胞、または星状細胞である。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、シュワン細胞に送達される。

本明細書で提供される方法のいくつかの実施形態では、患者は、ｒＡＡＶの投与後トレンデレンベルク体位（頭低位）に保持される（例えば、約５、約１０、約１５または約２０分間）。例えば、患者は、頭を下げた位置で約１度～約３０度、約１５～約３０度、約３０～約６０度、約６０～約９０度、または約９０～約１８０度傾けられてもよい。

提供される方法のうちのいずれにおいても、組成物は、ヒト患者を含むがこれに限定されない対象に、早期の齢で投与され得る。例えば、本明細書で提供される組成物は、それを必要とする若年成人、子供、または乳児に投与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、２０歳未満、１５歳未満、１０歳未満、５歳未満、１歳未満、６ヶ月未満、または１ヶ月未満の対象に投与され得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される組成物は、出生時にそれを必要とする対象に投与され得る。例えば、組成物は、胎児段階でＣＬＮ６変異を有すると以前に識別される対象に投与され得る。

本明細書で使用される場合、「有効量」、「有効用量」または「治療有効量」という用語は、治療されている疾患または状態の症状のうちの１つ以上をある程度軽減または改善することになる、例えば、疾患の１つ以上の徴候、症状、もしくは原因の減少および／または緩和、あるいは生物学的システムの任意の他の所望の変化となる、投与されている薬剤あるいは組成物の十分な量を指す。適切な「有効」量は、個々の場合において、用量漸増研究などの技術を使用して決定され得る。

本明細書で提供される方法は、本明細書で提供される遺伝子療法ベクター（例えば、ｒＡＡＶ）を含む組成物の有効用量または有効複数用量を、それを必要とする対象（例えば、ヒト患者を含むが、これに限定されない動物）に投与する工程を含む。用量がバッテン病の発症前に投与される場合、投与は予防的である。用量がバッテン病の発症後に投与される場合、投与は治療的である。有効用量は、疾患に関連する少なくとも１つの症状を緩和（排除または減少）する用量であり、疾患の進行を遅らせ、または予防する用量であり、疾患の範囲を縮小する用量であり、疾患の寛解（部分的または完全な）をもたらす用量であり、および／または生存を延長させる用量である。治療前の対象と比較して、または未治療の対象と比較して、本明細書で提供される方法は、バッテン病の進行および／または改善を評価するために使用される尺度、例えば、統一バッテン病評価システム（ＵＢＤＲＳ）またはハンブルク運動および言語尺度のうちの１つ以上の安定化、進行の減少、または改善をもたらす。ＵＢＤＲＳ評価尺度（Ｍａｒｓｈａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ．２００５ ６５（２）：２７５－２７９）［ＵＢＤＲＳ身体評価尺度、ＵＢＤＲＳ発作評価尺度、ＵＢＤＲＳ行動評価尺度、ＵＢＤＲＳ能力評価尺度、ＵＢＤＲＳ症状発現順序、およびＵＢＤＲＳ臨床全般印象（ＣＧＩ）を含む］、小児科の生活の質の尺度（ＰＥＤＳＱＯＬ）は、運動機能、言語機能、認知機能、および生存を量る。治療前の対象と比較して、または未治療の対象と比較して、本明細書で提供される方法は、以下の、光受容体の変性の減少または遅延、網膜変性の減少または遅延未治療の対象と比較して増加した数の網膜光受容体、自己蛍光貯蔵物質のリソソーム蓄積の減少または遅延、ＡＴＰシンターゼサブユニットＣのリソソーム蓄積の減少または遅延、グリア活性化（星状細胞および／またはミクログリア）活性化の減少または遅延、星状細胞増加症の減少または遅延、およびＭＲＩによって測定された脳容積損失の減少または遅延のうちの１つ以上をもたらし得る。

併用療法もまた、提供される。本明細書で使用される併用は、同時治療または連続治療のいずれかを含む。本明細書に記載の方法と標準的な薬物療法との組み合わせが特に企図される。

バッテン病に関連するＣＬＮ６における変異は、遺伝学的試験で試験され得る。遺伝学的検査および配列分析の方法は、当業者に既知である（Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ：セロイドリポフスチン症ニューロン６。）。いくつかの実施形態では、遺伝学的試験は、本明細書で提供される治療を用いた初期段階介入を可能にするために、子供、若年成人または乳児に対して実施され得る。いくつかの実施形態では、遺伝学的試験は、胎児段階で実施され得る。出生後の送達を必要とする対象への送達が企図される一方で、胎児への子宮内送達も企図される。

以下の実施例により特定の実施形態を説明するが、当業者には変形および修正が発生するであろうことが理解される。したがって、請求項に見られるそのような制限のみが、本発明に課せられるべきである。

実施例１ ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６の産生
ヒトＣＬＮ６ ｃＤＮＡクローンは、Ｏｒｉｇｅｎｅ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤから入手した。ｈＣＬＮ６ ｃＤＮＡをハイブリッドニワトリβ－アクチンプロモーター（ＣＢ）の下でＡＡＶ９ゲノムにさらにサブクローニングし、インビトロおよびインビボで試験した。ニワトリβ－アクチン（ＣＢ）ハイブリッドプロモーターの制御下にあるヒトＣＬＮ６（ｈＣＬＮ６）遺伝子を含む自己相補的アデノ随伴ウイルス（ｓｃＡＡＶ）血清型９ウイルスゲノムを生成した。ＡＡＶ２ ＩＴＲ間に挿入されたＣＬＮ６ ｃＤＮＡを示すプラスミド構築物の概略図を図１に提供する。プラスミド構築物はまた、ＣＰプロモーター、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）キメライントロン、およびウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリアデニル化シグナル（ＢＧＨポリＡ）も含む。

ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６を、ＨＥＫ２９３細胞（３６）中のアデノウイルスヘルパープラスミドｐＨｅｌｐｅｒ（商標）（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ）とともに、前に述べたような（Ｇａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７８：６３８１－６３８８（２００４）Ｒｅｐ２Ｃａｐ９配列をコードするプラスミドを有する、二本鎖ＡＡＶ２－ＩＴＲベースのＣＢ－ＣＬＮ６ベクターを使用して、一過性トリプルプラスミドトランスフェクション手順により、ｃＧＭＰ条件下で産生した。純度およびベクトルの滴定量は、４～１２％ドデシル硫酸ナトリウム－アクリルアミドゲル電気泳動および銀染色ならびにｑＰＣＲによって評価した。クローニング後、導入遺伝子の発現を、ＨＥＫ２９３細胞においてインビトロで、ならびに胎生１５．５日目にて子宮ＩＣＶ電気穿孔法を介してインビボで確認した。この分析により、インビボでのニューロン標的化およびヒトＣＬＮ６タンパク質の発現を確認した。

実施例２ ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６側脳室注射は網膜光受容体を保存する
ＣＬＮ６バッテン病マウスモデルを使用して、網膜保存に対するｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６の有効性を試験した。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊバックグラウンドでの野生型およびホモ接合型Ｃｌｎ６変異体マウス（Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆ）を、すべての研究について使用し、同一の条件下で飼育した。マウスは、低体温鎮静後に、生後１日目（Ｐ１、生後の日）にＰＢＳ（ｎ＝１８）またはｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６（ｎ＝１８）（４μＬ容量中で５×１０^１０ｖｇ／動物）のいずれかの単回の脳室内（ＩＣＶ）注射を受けた。動物を、鎮静から完全に回復するまで、その後は毎日、継続的に監視した。網膜下注射：ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６を３ヶ月（ｎ＝１１）および６ヶ月（ｎ＝１０）で注射し、ＡＡＶ－ＧＦＰ（ｎ＝１０）またはＰＢＳ（ｎ＝１０）注射を対照として使用した。眼球を、３、６、および９ヶ月の時点で収集した。網膜クリオスタット切片を、組織学および免疫蛍光のために処理した。

Ｐ１でのｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６のＩＣＶ送達は、ＰＢＳ治療された目における０～３層と比較して、６および９ヶ月の時点の両方で光受容体（８～１０層）を顕著にレスキューした。目の中心部での光受容体の保存は、周辺部よりも多くの証拠である。これらのマウスでは変性速度が不均一であり、網膜の鼻および背部が網膜の側頭および腹側部よりもゆっくりと変性したことに、留意されたい。Ｃｌｎ６抗体染色は、ＲＧＣ、ＲＰＥ、およびＯＮＬにおいて、主に視神経乳頭周辺の網膜の中央部において、陽性のｃｌｎ６を示した。ミュラーグリアおよびいくつかの内網膜細胞もまた、陽性に染色された。ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６の網膜下注射は、ＡＡＶ－ＧＦＰおよびＰＢＳ治療された網膜と同様に、光受容体をレスキューしなかった。しかしながら、強いｃｌｎ６抗体染色が、ＲＧＣにおいてではなくＯＮＬおよびＲＰＥ層において検出された。加えて、Ｔ細胞浸潤が、網膜下注射を受けたマウスにおいて頻繁に観察された。

実施例３ ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６視覚研究
高レベルの研究デザイン：
研究１：Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウスにおける視覚障害を標的とする脳室内（ＩＣＶ）注射の評価。動物を、ＩＣＶ注射を介してＰ１でＰＢＳまたはｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６のいずれかを注射し、３、６、および９ヶ月の齢で機能的視力、網膜における病理、および脳の視覚処理中枢における病理について評価した。

研究２：Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウスにおける視覚障害を標的とするＩＣＶおよび網膜下（ＳＲ）注射の比較。マウスに、３または６ヶ月の齢のいずれかでのＳＲ注射を介して、ＰＢＳ、ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６、またはｓｃＡＡＶ９．ＣＣＢ．ＧＦＰのいずれかを注射し、網膜病理を注射後３ヶ月で評価した。６および９ヶ月の組織を、研究１からの年齢一致させたＩＣＶ注射組織と比較した。

研究１の詳細な研究デザイン：
注射：生後１日目（Ｐ１）のＷＴおよびＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウスに、側脳室の脳室内注射を介して２．５ｅ１０ｖｇのｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６またはＰＢＳのいずれかを注射した。すべての注射は、２μｌの容量からなった。

機能的視覚評価：動物を、Ｃｅｒｅｂｒａｌ ＭｅｃｈａｎｉｃｓによるＯｐｔｏＭｏｔｒｙ（商標）システムを使用して、３、６、および９ヶ月の齢で視力について評価した。システムは、マウスを囲み、異なるコントラストの回転正弦波格子を動物に投影する４台のコンピューターモニターからなる。ユーザーは、オーバーヘッドカメラを使用して動物を監視し、動物が反射的な頭および首の運動で格子を追跡するかどうかを確認する。動物追跡に関するユーザーの応答に基づいて、ＯｐｔｏＭｏｔｒｙソフトウェアは、動物の空間視力（サイクル／度）を計算する。

組織収集：動物を、３、６、または９ヶ月の齢でＣＯ_２安楽死させ、心臓灌流した。目を取り出し、角膜を穿刺し、改変されたＤａｖｉｄｓｏｎの溶液中で２４時間固定した。脳を取り出し、１ｍｍの脳ブロックに配置し、２つの半球に二分した。１つの半球を４％のＰＦＡ中に２４時間配置し、一方で、もう１つの半球を、もう一度二分し、別々に瞬間冷凍した。追加の収集は、固定および凍結された組織バンキングのための、血液、血清、脊髄、心臓、肝臓、脾臓、および腎臓を含んだ。

研究２の詳細な研究デザイン：
注射および組織収集：３または６ヶ月のＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウスに麻酔をかけ、強膜と網膜層との間に引っ張られたガラス毛細管の配置を可能にするように、小さな切開を強膜に行った。動物に、１つの目において２．５ｅ１０ｖｇのｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６を注射し、反対側の目において２．５ｅ１０ｖｇのｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＧＦＰまたはＰＢＳを注射した。すべての注射は、２μｌの容量からなった。動物を、注射の３ヶ月後にＣＯ_２安楽死させ、心臓灌流した。目を取り出し、角膜を穿刺し、改変されたＤａｖｉｄｓｏｎの溶液中で２４時間固定した。脳を取り出し、１ｍｍの脳ブロックに配置し、２つの半球に二分した。１つの半球を４％のＰＦＡ中に２４時間配置し、一方で、もう１つの半球を、もう一度二分し、別々に瞬間冷凍した。

研究１の結果：
機能的視覚評価：Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウスは、６ヶ月の齢で始まるＷＴ対応物と比較して、より低い視力を有した。網膜および他の視覚経路ニューロンの保存が視覚機能をレスキューしたかどうかを評価するために、動物を、３から９ヶ月の齢まで視運動性追跡を使用して視覚能力について試験した（ＯｐｔｏＭｏｔｒｙ、Ｃｅｒｅｂｒａｌ Ｍｅｃｈａｎｉｃｓ）。簡潔には、動物を、正方形に配置された４つのモニターに囲まれたプラットフォーム上に個別に配置し、異なるコントラストの勾配が、時計回りまたは反時計回りのいずれかでマウスの周りを回転した。視力を評価するために、遺伝子型および治療状態について盲検化された実験者は、動物を観察し、動物が勾配を追跡しているかどうかを判断した。６ヶ月の齢で始まるが、両方の性の未治療のＣｌｎ６^ｎｃｌｆ動物は、空間視力（サイクル／度）を低下させ、欠損は９ヶ月の齢での最後の時点まで進行した（図４）。重要なことに、未治療のＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウス、特に雌は、ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６治療されたＣｌｎ６^ｎｃｌｆまたは野生型対照マウスと比較すると、３ヶ月の期間にわたって視覚における顕著に急激な低下を有した（傾きの比較）。実際、ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６治療されたＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウスにおける視覚能力は、野生型動物と同様な様式で低下し（傾きの比較）、９ヶ月の鈴までに野生型と未治療のＣｌｎ６^ｎｃｌｆとの間で視力を維持した。

脳病理、視覚中枢：Ｐ１でのｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６の単回のＩＣＶ注射は、視覚系に関連する脳の３つの領域において、Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウスにおける自己蛍光貯蔵物質蓄積（ＡＳＭ）を予防した。図５は、背側外側膝状体、一次視覚野、および上丘におけるＣｌｎ６^ｎｃｌｆ動物中の強い貯蔵物質蓄積（ＡＳＭ）を実証し、新生児のｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６治療は、調べたすべての時点でこの特徴的な蓄積を予防した。

ＡＳＭの蓄積と同様に、Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆ動物は、調べたすべての視覚中枢において頑健な星状細胞（ＧＦＡＰ^＋）およびミクログリア（ＣＤ６８^＋）の免疫反応性とともに現れた。Ｐ１でのｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６の単回のＩＣＶ注射は、調べたすべての時点で、背側外側膝状体、一次視覚野、および上丘におけるＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウス中でミクログリア活性化（ＣＤ６８）を予防した（図６）。

Ｐ１でのｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６の単回のＩＣＶ注射は、視覚系に関連する脳の３つの領域において、Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウス中で星状細胞反応性（ＧＦＡＰ）を予防した（図７）。

Ｐ１でのｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６の単回のＩＣＶ注射は、調べたすべての時点で、視覚系に関連する脳の３つの領域において、Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウス中でニューロン喪失を予防した（図８）。

網膜病理：ニューロン完全性がＡＡＶ９治療されたＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウスにおける脳の視覚処理中枢において維持されているため、網膜におけるニューロン完全性もまた、この病状が予防されているかどうかを確認するために冷笑した。未治療のＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウスは、３～９ヶ月の齢で光受容体を漸進的に喪失し、特に外顆粒層（矢印）および網膜周辺部において顕著な変性を伴った（図５）。Ｐ１でのｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６の単回のＩＣＶ注射は、Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウスにおける網膜神経節、内顆粒、および外顆粒層を保持した。未治療のＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウスは、３ヶ月の齢でこれらの層の網膜菲薄化を始めた。さらに、ＡＡＶ９治療は、９ヶ月の齢まで多数の光受容体を維持した。（図９）。野生型動物は、調べた各時点で１０層の光受容体とともに現れ、ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６は、９ヶ月の齢までＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウスの中心網膜におけるこれらの層を保存した。しかしながら、周辺網膜における光受容体は、ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６治療後に、齢とともに、特に９ヶ月の齢で、喪失し続けた。

ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６のＩＣＶ注射で治療されたＣｌｎ６^ｎｃｌｆマウスにおける予想外の程度の光受容体保護を考慮して、ヒトＣＬＮ６が治療されたマウスの網膜に存在するかどうかを調査した。網膜におけるＩＣＶ送達されたｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６の発現パターンを特徴付けるために、内因性マウスＣｌｎ６転写産物を、改変されたインサイツ技術（ＲＮＡｓｃｏｐｅ）および免疫標識を用いるトランスジェニックヒトＣＬＮ６（ｈＣＬＮ６）タンパク質を用いて視覚化した（マウスＣｌｎ６を標的とする市販の抗体の欠如が、二重免疫標識を排除した）。導入遺伝子の頑健な発現が、網膜全体を通して観察された。内因性ｍＣｌｎ６転写物は、主に内および外顆粒層に存在し、網膜神経節細胞（ＲＧＣ）および網膜色素上皮において低レベルの発現である（図１０）一方で、ｈＣＬＮ６は、ＲＧＣ層、内顆粒層、外顆粒層、網膜色素上皮、および脈絡膜全体を通して広く発現され、特にＲＧＣにおいて頑健な発現を伴った。ミュラーグリアに対するマーカー（グルタミンシンテターゼ（ＧＳ^＋））および双極細胞に対するマーカーであるＰＫＣａと共標識すると、ｈＣＬＮ６免疫標識は、これらの細胞と共局在せず（ＰＫＣ染色についてのデータは示されない）、ＡＡＶ９の網膜下送達後の優勢的なニューロン発現の報告（Ｗａｔａｎａｂｅ ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ８：ｅ５４１４６）と一致した。まとめると、ｓｃＡＡＶ９．ＣＢ．ＣＬＮ６の単回のＩＣＶ注射は、そのいくらか異所的な網膜発現パターンにもかかわらず、Ｃｌｎ６^ｎｃｌｆマウスにおいて網膜に形質導入し、光受容体を顕著に保存した。

本発明の好ましい実施形態を本明細書に示し、記載しているが、そのような実施形態が例としてのみ提供されていることは当業者には明らかであろう。当業者であれば、本発明から逸脱することなく、多数の変形、変更、および置換を思い付くであろう。本明細書に記載の実施形態に対する様々な代替形態を採用してもよいことを理解されたい。以下の請求項が本発明の範囲を定義し、これらの請求項の範囲内の方法および構造ならびにそれらの同等物がそれによって包含されることが意図される。

本出願で参照されるすべての文書は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
配列
ＣＬＮ６ポリペプチド配列
配列番号１
Met Glu Ala Thr Arg Arg Arg Gln His Leu Gly Ala Thr Gly Gly Pro
Gly Ala Gln Leu Gly Ala Ser Phe Leu Gln Ala Arg His Gly Ser Val
Ser Ala Asp Glu Ala Ala Arg Thr Ala Pro Phe His Leu Asp Leu Trp
Phe Tyr Phe Thr Leu Gln Asn Trp Val Leu Asp Phe Gly Arg Pro Ile
Ala Met Leu Val Phe Pro Leu Glu Trp Phe Pro Leu Asn Lys Pro Ser
Val Gly Asp Tyr Phe His Met Ala Tyr Asn Val Ile Thr Pro Phe Leu
Leu Leu Lys Leu Ile Glu Arg Ser Pro Arg Thr Leu Pro Arg Ser Ile
Thr Tyr Val Ser Ile Ile Ile Phe Ile Met Gly Ala Ser Ile His Leu
Val Gly Asp Ser Val Asn His Arg Leu Leu Phe Ser Gly Tyr Gln His
His Leu Ser Val Arg Glu Asn Pro Ile Ile Lys Asn Leu Lys Pro Glu
Thr Leu Ile Asp Ser Phe Glu Leu Leu Tyr Tyr Tyr Asp Glu Tyr Leu
Gly His Cys Met Trp Tyr Ile Pro Phe Phe Leu Ile Leu Phe Met Tyr
Phe Ser Gly Cys Phe Thr Ala Ser Lys Ala Glu Ser Leu Ile Pro Gly
Pro Ala Leu Leu Leu Val Ala Pro Ser Gly Leu Tyr Tyr Trp Tyr Leu
Val Thr Glu Gly Gln Ile Phe Ile Leu Phe Ile Phe Thr Phe Phe Ala
Met Leu Ala Leu Val Leu His Gln Lys Arg Lys Arg Leu Phe Leu Asp
Ser Asn Gly Leu Phe Leu Phe Ser Ser Phe Ala Leu Thr Leu Leu Leu
Val Ala Leu Trp Val Ala Trp Leu Trp Asn Asp Pro Val Leu Arg Lys
Lys Tyr Pro Gly Val Ile Tyr Val Pro Glu Pro Trp Ala Phe Tyr Thr
Leu His Val Ser Ser Arg His
ＣＬＮ６ポリヌクレオチド配列
配列番号２
atggaggcga cgcggaggcg gcagcacctg ggagcgacgg gcggcccagg cgcgcagctg 60
ggcgcctcct tcctgcaggc caggcatggc tctgtgagcg ctgatgaggc tgcccgcacg 120
gctcccttcc acctcgacct ctggttctac ttcacactgc agaactgggt tctggacttt 180
gggcgtccca ttgccatgct ggtattccct ctcgagtggt ttccactcaa caagcccagt 240
gttggggact acttccacat ggcctacaac gtcatcacgc cctttctctt gctcaagctc 300
atcgagcggt ccccccgcac cctgccacgc tccatcacgt acgtgagcat catcatcttc 360
atcatgggtg ccagcatcca cctggtgggt gactctgtca accaccgcct gctcttcagt 420
ggctaccagc accacctgtc tgtccgtgag aaccccatca tcaagaatct caagccggag 480
acgctgatcg actcctttga gctgctctac tattatgatg agtacctggg tcactgcatg 540
tggtacatcc ccttcttcct catcctcttc atgtacttca gcggctgctt tactgcctct 600
aaagctgaga gcttgattcc agggcctgcc ctgctcctgg tggcacccag tggcctgtac 660
tactggtacc tggtcaccga gggccagatc ttcatcctct tcatcttcac cttcttcgcc 720
atgctggccc tcgtcctgca ccagaagcgc aagcgcctct tcctggacag caacggcctc 780
ttcctcttct cctccttcgc actgaccctc ttgcttgtgg cgctctgggt cgcctggctg 840
tggaatgacc ctgttctcag gaagaagtac ccgggtgtca tctacgtccc tgagccctgg 900
gctttctaca cccttcacgt cagcagtcgg cactga 936
ハイブリッドニワトリＢ－アクチンプロモーター
配列番号３
ccacgttctg cttcactctc cccatctccc ccccctcccc acccccaatt ttgtatttat 60
ttatttttta attattttgt gcagcgatgg gggcgggggg gggggggggg cgcgcgccag 120
gcggggcggg gcggggcgag gggcggggcg gggcgaggcg gagaggtgcg gcggcagcca 180
atcagagcgg cgcgctccga aagtttcctt ttatggcgag gcggcggcgg cggcggccct 240
ataaaaagcg aagcgcgcgg cgggcgggag 270
遺伝子カセット
配列番号４
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtggaatt cacgcgtgga 120
tctgaattca attcacgcgt ggtacctctg gtcgttacat aacttacggt aaatggcccg 180
cctggctgac cgcccaacga cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata 240
gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc 300
cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac 360
ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg 420
cagtacatct actcgaggcc acgttctgct tcactctccc catctccccc ccctccccac 480
ccccaatttt gtatttattt attttttaat tattttgtgc agcgatgggg gcgggggggg 540
ggggggggcg cgcgccaggc ggggcggggc ggggcgaggg gcggggcggg gcgaggcgga 600
gaggtgcggc ggcagccaat cagagcggcg cgctccgaaa gtttcctttt atggcgaggc 660
ggcggcggcg gcggccctat aaaaagcgaa gcgcgcggcg ggcgggagcg ggatcagcca 720
ccgcggtggc ggcctagagt cgacgaggaa ctgaaaaacc agaaagttaa ctggtaagtt 780
tagtcttttt gtcttttatt tcaggtcccg gatccggtgg tggtgcaaat caaagaactg 840
ctcctcagtg gatgttgcct ttacttctag gcctgtacgg aagtgttact tctgctctaa 900
aagctgcgga attgtacccg cggccgatcc accggtctta agggccgagg cggccagatc 960
tttcgaagat atcggcgccg ctagcgcggc cgcatggagg cgacgcggag gcggcagcac 1020
ctgggagcga cgggcggccc aggcgcgcag ctgggcgcct ccttcctgca ggccaggcat 1080
ggctctgtga gcgctgatga ggctgcccgc acggctccct tccacctcga cctctggttc 1140
tacttcacac tgcagaactg ggttctggac tttgggcgtc ccattgccat gctggtattc 1200
cctctcgagt ggtttccact caacaagccc agtgttgggg actacttcca catggcctac 1260
aacgtcatca cgccctttct cttgctcaag ctcatcgagc ggtccccccg caccctgcca 1320
cgctccatca cgtacgtgag catcatcatc ttcatcatgg gtgccagcat ccacctggtg 1380
ggtgactctg tcaaccaccg cctgctcttc agtggctacc agcaccacct gtctgtccgt 1440
gagaacccca tcatcaagaa tctcaagccg gagacgctga tcgactcctt tgagctgctc 1500
tactattatg atgagtacct gggtcactgc atgtggtaca tccccttctt cctcatcctc 1560
ttcatgtact tcagcggctg ctttactgcc tctaaagctg agagcttgat tccagggcct 1620
gccctgctcc tggtggcacc cagtggcctg tactactggt acctggtcac cgagggccag 1680
atcttcatcc tcttcatctt caccttcttc gccatgctgg ccctcgtcct gcaccagaag 1740
cgcaagcgcc tcttcctgga cagcaacggc ctcttcctct tctcctcctt cgcactgacc 1800
ctcttgcttg tggcgctctg ggtcgcctgg ctgtggaatg accctgttct caggaagaag 1860
tacccgggtg tcatctacgt ccctgagccc tgggctttct acacccttca cgtcagcagt 1920
cggcactgag tctctagaaa gcttatcgat accgtcgact agagctcgct gatcagcctc 1980
gactgtgcct tctagttgcc agccatctgt tgtttgcccc tcccccgtgc cttccttgac 2040
cctggaaggt gccactccca ctgtcctttc ctaataaaat gaggaaattg catcgcattg 2100
tctgagtagg tgtcattcta ttctgggggg tggggtgggg caggacagca agggggagga 2160
ttgggaagac aatagcaggc atgctgggga gagatcgatc tgaggaaccc ctagtgatgg 2220
agttggccac tccctctctg cgcgctcgct cgctcactga ggccgggcga ccaaaggtcg 2280
cccgacgccc gggctttgcc cgggcggcct cagtgagcga gcgagcgcgc agagagggag 2340
ｔｇｇ ２３４３
ＡＡＶ．ＣＢ．ＣＬＮ６
配列番号５
ctgattctaa cgaggaaagc acgttatacg tgctcgtcaa agcaaccata gtacgcgccc 60
tgtagcggcg cattaagcgc ggcgggtgtg gtggttacgc gcagcgtgac cgctacactt 120
gccagcgccc tagcgcccgc tcctttcgct ttcttccctt cctttctcgc cacgttcgcc 180
ggctttcccc gtcaagctct aaatcggggg ctccctttag ggttccgatt tagtgcttta 240
cggcacctcg accccaaaaa acttgattag ggtgatggtt cacgtagtgg gccatcgccc 300
tgatagacgg tttttcgccc tttgacgttg gagtccacgt tctttaatag tggactcttg 360
ttccaaactg gaacaacact caaccctatc tcggtctatt cttttgattt ataagggatt 420
ttgccgattt cggcctattg gttaaaaaat gagctgattt aacaaaaatt taacgcgaat 480
tttaacaaaa tattaacgct tacaatttaa atatttgctt atacaatctt cctgtttttg 540
gggcttttct gattatcaac cggggtacat atgattgaca tgctagtttt acgattaccg 600
ttcatcgccc tgcgcgctcg ctcgctcact gaggccgccc gggcaaagcc cgggcgtcgg 660
gcgacctttg gtcgcccggc ctcagtgagc gagcgagcgc gcagagaggg agtggaattc 720
acgcgtggat ctgaattcaa ttcacgcgtg gtacctctgg tcgttacata acttacggta 780
aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat aatgacgtat 840
gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga gtatttacgg 900
taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc ccctattgac 960
gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt atgggacttt 1020
cctacttggc agtacatcta ctcgaggcca cgttctgctt cactctcccc atctcccccc 1080
cctccccacc cccaattttg tatttattta ttttttaatt attttgtgca gcgatggggg 1140
cggggggggg gggggggcgc gcgccaggcg gggcggggcg gggcgagggg cggggcgggg 1200
cgaggcggag aggtgcggcg gcagccaatc agagcggcgc gctccgaaag tttcctttta 1260
tggcgaggcg gcggcggcgg cggccctata aaaagcgaag cgcgcggcgg gcgggagcgg 1320
gatcagccac cgcggtggcg gcctagagtc gacgaggaac tgaaaaacca gaaagttaac 1380
tggtaagttt agtctttttg tcttttattt caggtcccgg atccggtggt ggtgcaaatc 1440
aaagaactgc tcctcagtgg atgttgcctt tacttctagg cctgtacgga agtgttactt 1500
ctgctctaaa agctgcggaa ttgtacccgc ggccgatcca ccggtcttaa gggccgaggc 1560
ggccagatct ttcgaagata tcggcgccgc tagcgcggcc gcatggaggc gacgcggagg 1620
cggcagcacc tgggagcgac gggcggccca ggcgcgcagc tgggcgcctc cttcctgcag 1680
gccaggcatg gctctgtgag cgctgatgag gctgcccgca cggctccctt ccacctcgac 1740
ctctggttct acttcacact gcagaactgg gttctggact ttgggcgtcc cattgccatg 1800
ctggtattcc ctctcgagtg gtttccactc aacaagccca gtgttgggga ctacttccac 1860
atggcctaca acgtcatcac gccctttctc ttgctcaagc tcatcgagcg gtccccccgc 1920
accctgccac gctccatcac gtacgtgagc atcatcatct tcatcatggg tgccagcatc 1980
cacctggtgg gtgactctgt caaccaccgc ctgctcttca gtggctacca gcaccacctg 2040
tctgtccgtg agaaccccat catcaagaat ctcaagccgg agacgctgat cgactccttt 2100
gagctgctct actattatga tgagtacctg ggtcactgca tgtggtacat ccccttcttc 2160
ctcatcctct tcatgtactt cagcggctgc tttactgcct ctaaagctga gagcttgatt 2220
ccagggcctg ccctgctcct ggtggcaccc agtggcctgt actactggta cctggtcacc 2280
gagggccaga tcttcatcct cttcatcttc accttcttcg ccatgctggc cctcgtcctg 2340
caccagaagc gcaagcgcct cttcctggac agcaacggcc tcttcctctt ctcctccttc 2400
gcactgaccc tcttgcttgt ggcgctctgg gtcgcctggc tgtggaatga ccctgttctc 2460
aggaagaagt acccgggtgt catctacgtc cctgagccct gggctttcta cacccttcac 2520
gtcagcagtc ggcactgagt ctctagaaag cttatcgata ccgtcgacta gagctcgctg 2580
atcagcctcg actgtgcctt ctagttgcca gccatctgtt gtttgcccct cccccgtgcc 2640
ttccttgacc ctggaaggtg ccactcccac tgtcctttcc taataaaatg aggaaattgc 2700
atcgcattgt ctgagtaggt gtcattctat tctggggggt ggggtggggc aggacagcaa 2760
gggggaggat tgggaagaca atagcaggca tgctggggag agatcgatct gaggaacccc 2820
tagtgatgga gttggccact ccctctctgc gcgctcgctc gctcactgag gccgggcgac 2880
caaaggtcgc ccgacgcccg ggctttgccc gggcggcctc agtgagcgag cgagcgcgca 2940
gagagggagt ggcccccccc cccccccccc cggcgattct cttgtttgct ccagactctc 3000
aggcaatgac ctgatagcct ttgtagagac ctctcaaaaa tagctaccct ctccggcatg 3060
aatttatcag ctagaacggt tgaatatcat attgatggtg atttgactgt ctccggcctt 3120
tctcacccgt ttgaatcttt acctacacat tactcaggca ttgcatttaa aatatatgag 3180
ggttctaaaa atttttatcc ttgcgttgaa ataaaggctt ctcccgcaaa agtattacag 3240
ggtcataatg tttttggtac aaccgattta gctttatgct ctgaggcttt attgcttaat 3300
tttgctaatt ctttgccttg cctgtatgat ttattggatg ttggaatcgc ctgatgcggt 3360
attttctcct tacgcatctg tgcggtattt cacaccgcat atggtgcact ctcagtacaa 3420
tctgctctga tgccgcatag ttaagccagc cccgacaccc gccaacacta tggtgcactc 3480
tcagtacaat ctgctctgat gccgcatagt taagccagcc ccgacacccg ccaacacccg 3540
ctgacgcgcc ctgacgggct tgtctgctcc cggcatccgc ttacagacaa gctgtgaccg 3600
tctccgggag ctgcatgtgt cagaggtttt caccgtcatc accgaaacgc gcgagacgaa 3660
agggcctcgt gatacgccta tttttatagg ttaatgtcat gataataatg gtttcttaga 3720
cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa 3780
tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt caataatatt 3840
gaaaaaggaa gagtatgagt attcaacatt tccgtgtcgc ccttattccc ttttttgcgg 3900
cattttgcct tcctgttttt gctcacccag aaacgctggt gaaagtaaaa gatgctgaag 3960
atcagttggg tgcacgagtg ggttacatcg aactggatct caacagcggt aagatccttg 4020
agagttttcg ccccgaagaa cgttttccaa tgatgagcac ttttaaagtt ctgctatgtg 4080
gcgcggtatt atcccgtatt gacgccgggc aagagcaact cggtcgccgc atacactatt 4140
ctcagaatga cttggttgag tactcaccag tcacagaaaa gcatcttacg gatggcatga 4200
cagtaagaga attatgcagt gctgccataa ccatgagtga taacactgcg gccaacttac 4260
ttctgacaac gatcggagga ccgaaggagc taaccgcttt tttgcacaac atgggggatc 4320
atgtaactcg ccttgatcgt tgggaaccgg agctgaatga agccatacca aacgacgagc 4380
gtgacaccac gatgcctgta gcaatggcaa caacgttgcg caaactatta actggcgaac 4440
tacttactct agcttcccgg caacaattaa tagactggat ggaggcggat aaagttgcag 4500
gaccacttct gcgctcggcc cttccggctg gctggtttat tgctgataaa tctggagccg 4560
gtgagcgtgg gtctcgcggt atcattgcag cactggggcc agatggtaag ccctcccgta 4620
tcgtagttat ctacacgacg gggagtcagg caactatgga tgaacgaaat agacagatcg 4680
ctgagatagg tgcctcactg attaagcatt ggtaactgtc agaccaagtt tactcatata 4740
tactttagat tgatttaaaa cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt 4800
ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc 4860
ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct 4920
tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa 4980
ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact gttcttctag 5040
tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca tacctcgctc 5100
tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg 5160
actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca 5220
cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag cgtgagctat 5280
gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta agcggcaggg 5340
tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc 5400
ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc 5460
ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc 5520
cttttgctca catgttcttt cctgcgttat cccctgattc tgtggataac cgtattaccg 5580
cctttgagtg agctgatacc gctcgccgca gccgaacgac cgagcgcagc gagtcagtga 5640
gcgaggaagc ggaagagcgc ccaatacgca aaccgcctct ccccgcgcgt tggccgattc 5700
attaatgcag ctggcgtaat agcgaagagg cccgcaccga tcgcccttcc caacagttgc 5760
gcagcctgaa tggcgaatgg cgattccgtt gcaatggctg gcggtaatat tgttctggat 5820
attaccagca aggccgatag tttgagttct tctactcagg caagtgatgt tattactaat 5880
caaagaagta ttgcgacaac ggttaatttg cgtgatggac agactctttt actcggtggc 5940
ctcactgatt ataaaaacac ttctcaggat tctggcgtac cgttcctgtc taaaatccct 6000
ttaatcggcc tcctgtttag ctcccgct 6028
ＣＭＶ配列
配列番号６
cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt 60
gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca 120
atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc 180
aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta 240
catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac 280
ｓｃＡＡＶ９配列
配列番号７
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Gln Pro
Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro
Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly
Lys Ser Gly Ala Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr
Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro
Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly
Ala Pro Val Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu
Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Ser Thr Ser Gly Gly Ser Ser Asn Asp Asn
Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg
Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn
Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile
Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn
Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Asp Tyr Gln Leu
Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Glu Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro
Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asp
Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe
Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu
Phe Glu Asn Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu
Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser
Lys Thr Ile Asn Gly Ser Gly Gln Asn Gln Gln Thr Leu Lys Phe Ser
Val Ala Gly Pro Ser Asn Met Ala Val Gln Gly Arg Asn Tyr Ile Pro
Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn
Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn
Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys
Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly
Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile
Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser
Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln
Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln
Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met
Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala
Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr
Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn
Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
AAV2 3’ ITR
配列番号８
aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg 60
ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc 120
gagcgcgcag agagggagtg g 141
AAV2 5’ ITR
配列番号９
ctgcgcgctc gctcgctcac tgaggccgcc cgggcaaagc ccgggcgtcg ggcgaccttt 60
ggtcgcccgg cctcagtgag cgagcgagcg cgcagagagg gagtgg 106
ＢＧＨポリＡ
配列番号１０
cctcgactgt gccttctagt tgccagccat ctgttgtttg cccctccccc gtgccttcct 60
tgaccctgga aggtgccact cccactgtcc tttcctaata aaatgaggaa attgcatcgc 120
attgtctgag taggtgtcat tctattc 147
ＳＶ４０イントロン
配列番号１１
gtaagtttag tctttttgtc ttttatttca ggtcccggat ccggtggtgg tgcaaatcaa 60
ページ

Claims (98)

1. 光受容体の保存を必要とするバッテン病を有する個体において光受容体を保存する方法であって、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターを含む薬学的組成物を前記個体に投与することを含む、方法。
2. 網膜変性の阻害を必要とするバッテン病を有する個体において網膜変性を阻害する方法であって、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターを含む薬学的組成物を前記個体に投与することを含む、方法。
3. 視覚効果の治療を必要とするバッテン病を有する個体においてそれを行う方法であって、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターを含む薬学的組成物を前記個体に投与することを含む、方法。
4. 前記ＣＬＮ６ポリペプチドが配列番号１のポリペプチドと少なくとも９０％同一である、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
5. 前記遺伝子療法ベクターが、ウイルスベクターである、請求項１～３のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、または単純ヘルペスウイルスである、請求項５に記載の方法。
7. 前記ウイルスベクターが、ＡＡＶである、請求項６に記載の方法。
8. 前記ＡＡＶが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈＳ、ＡＡＶｒｈ１０ベクター、ＡＡＶｒｈ３３、ＡＡＶｒｈ３４、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶ Ａｎｃ８０、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ、およびＡＡＶ－ＤＪからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
9. 前記ＡＡＶが、５’から３’の順序で、第１の逆方向反復、配列番号３の核酸配列を含むニワトリベータアクチン（ＣＢ）プロモーター、配列番号１と９０％同一のアミノ酸配列を含むセロイドリポフスチン症ニューロンタンパク質６（ＣＬＮ６）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２の逆方向反復を含む、ｒＡＡＶ９ゲノムを含む組換えＡＡＶ９（ｒＡＡＶ９）である、請求項７または８に記載の方法。
10. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサをさらに含む、請求項９に記載の方法。
11. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、ＳＶ４０イントロンをさらに含む、請求項９または１０に記載の方法。
12. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列をさらに含む、請求項９～１１のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、一本鎖ゲノムまたは自己相補的ゲノムである、請求項９～１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、ＣＭＶエンハンサ、配列番号３のヌクレオチド配列を含むＣＢプロモーター、ＳＶ４０イントロン、配列番号１のＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである、請求項９～１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号３の前記配列を含むＣＢプロモーター、配列番号１の前記ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである、請求項９～１３のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、ＣＭＶエンハンサ、配列番号３の前記配列を含むＣＢプロモーター、ＳＶ４０イントロン、配列番号１の前記ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである、請求項９～１３のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記ＡＡＶ逆方向末端反復が、ＡＡＶ２逆方向末端反復である、請求項９～１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記薬学的組成物が、脳室内、髄腔内、脳実質内、静脈内、網膜下、眼内、硝子体内、またはそれらの組み合わせで投与される、請求項１～１７のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記薬学的組成物が、脳室内投与される、請求項２に記載の方法。
20. 約１×１０^８ｖｇ～約１×１０^１５ｖｇのｒＡＡＶウイルス粒子が、前記個体の１グラム体重当たりで投与される、請求項１～１９のいずれか一項に記載の方法。
21. 視覚障害の症状が、予防または改善される、請求項１～２０のいずれか一項に記載の方法。
22. 前記個体の中心網膜における光受容細胞が、実質的に保存されている、請求項１～２１のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記個体が、治療の６ヶ月後に少なくとも４層の光受容細胞を含む網膜を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
24. 前記個体が、治療の６ヶ月後に少なくとも８層の光受容細胞を含む網膜を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
25. 前記個体が、治療の９ヶ月後に少なくとも４層の光受容細胞を含む網膜を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
26. 前記個体が、治療の９ヶ月後に少なくとも８層の光受容細胞を含む網膜を含む、請求項１～２２のいずれか一項に記載の方法。
27. 前記個体が、１０歳未満である、請求項１～２６のいずれか一項に記載の方法。
28. 前記個体が、１歳未満である、請求項２７に記載の方法。
29. 前記個体が、バッテン病に関連する変異を含むＣＬＮ６遺伝子を含む、請求項１～２８のいずれか一項に記載の方法。
30. 請求項１～２９のいずれか一項に記載の方法、前記方法は、前記個体のＣＬＮ６遺伝子におけるバッテン病に関連する変異を検出することをさらに含む。
31. 前記薬学的組成物が、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤をさらに含む、請求項１～３０のいずれか一項に記載の方法。
32. 前記賦形剤が、非イオン性低浸透圧性化合物、緩衝剤、ポリマー、塩、またはそれらの組み合わせを含む、請求項３１に記載の方法。
33. 非イオン性低浸透圧性造影剤が、イオビトリドール、イオヘキソール、イオメプロール、イオパミドール、イオペントール、イオプロミド、イオベルソール、イオキシラン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
34. 光受容体の保存を必要とするバッテン病を有する個体において光受容体を保存するための組成物であって、前記組成物が、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターを含む、組成物。
35. 網膜変性の阻害を必要とするバッテン病を有する個体において網膜変性を阻害するための組成物であって、前記組成物が、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターを含む、組成物。
36. 視覚効果の治療を必要とするバッテン病を有する個体において視覚効果を治療するための組成物であって、前記組成物が、ＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターを含む、組成物。
37. 前記ＣＬＮ６ポリペプチドが配列番号１のポリペプチドと少なくとも９０％同一である、請求項３４～３６のいずれか一項に記載の組成物。
38. 前記遺伝子療法ベクターが、ウイルスベクターである、請求項３４～３６のいずれか一項に記載の組成物。
39. 前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、または単純ヘルペスウイルスである、請求項３８に記載の組成物。
40. 前記ウイルスベクターが、ＡＡＶである、請求項３９に記載の組成物。
41. 前記ＡＡＶが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈＳ、ＡＡＶｒｈ１０ベクター、ＡＡＶｒｈ３３、ＡＡＶｒｈ３４、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶ Ａｎｃ８０、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ、およびＡＡＶ－ＤＪからなる群から選択される、請求項４０に記載の組成物。
42. 前記ＡＡＶが、５’から３’の順序で、第１の逆方向反復、配列番号３の核酸配列を含むニワトリベータアクチン（ＣＢ）プロモーター、配列番号１と９０％同一のアミノ酸配列を含むセロイドリポフスチン症ニューロンタンパク質６（ＣＬＮ６）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２の逆方向反復を含む、ｒＡＡＶ９ゲノムを含む組換えＡＡＶ９（ｒＡＡＶ９）である、請求項４１に記載の組成物。
43. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサをさらに含む、請求項４２に記載の組成物。
44. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、ＳＶ４０イントロンをさらに含む、請求項４２または４３に記載の組成物。
45. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列をさらに含む、請求項４２～４４のいずれか一項に記載の方法。
46. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、一本鎖ゲノムまたは自己相補的ゲノムである、請求項４２～４５のいずれか一項に記載の組成物。
47. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、ＣＭＶエンハンサ、配列番号３のヌクレオチド配列を含むＣＢプロモーター、ＳＶ４０イントロン、配列番号１の前記ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである、請求項４２に記載の組成物。
48. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号３の前記配列を含むＣＢプロモーター、配列番号１の前記ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである、請求項４２に記載の組成物。
49. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、ＣＭＶエンハンサ、配列番号３の前記配列を含むＣＢプロモーター、ＳＶ４０イントロン、配列番号１の前記ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである、請求項４２に記載の組成物。
50. 前記ＡＡＶ逆方向末端反復が、ＡＡＶ２逆方向末端反復である、請求項４２～５０のいずれか一項に記載の組成物。
51. 前記組成物が、脳室内、髄腔内、脳実質内、静脈内、網膜下、眼内、硝子体内、またはそれらの組み合わせで投与されるために配合される、請求項３５～５０のいずれか一項に記載の方法。
52. 前記薬学的組成物が、脳室内投与される、請求項５１に記載の組成物。
53. 前記組成物が、前記個体の１グラム体重当たり１×１０^８ｖｇ～約１×１０^１５ｖｇのｒＡＡＶウイルス粒子を含む、請求項３４～５２のいずれか一項に記載の組成物。
54. 前記組成物の投与が、予防または改善し、視覚障害の症状が、予防または改善される、請求項３４～５３のいずれか一項に記載の組成物。
55. 前記組成物の投与が、前記個体の中心網膜における光受容細胞を実質的に保存する、請求項３５～５４のいずれか一項に記載の組成物。
56. 前記個体が、前記組成物の投与の６ヶ月後に少なくとも４層の光受容細胞を含む網膜を含む、請求項３４～５５のいずれか一項に記載の組成物。
57. 前記個体が、前記組成物の投与の６ヶ月後に少なくとも８層の光受容細胞を含む網膜を含む、請求項３４～５５のいずれか一項に記載の組成物。
58. 前記個体が、前記組成物の投与の９ヶ月後に少なくとも４層の光受容細胞を含む網膜を含む、請求項３４～５５のいずれか一項に記載の組成物。
59. 前記個体が、前記組成物の投与の９ヶ月後に少なくとも８層の光受容細胞を含む網膜を含む、請求項３４～５５のいずれか一項に記載の組成物。
60. 前記個体が、１０歳未満である、請求項３４～５９のいずれか一項に記載の組成物。
61. 前記個体が、１歳未満である、請求項６０に記載の組成物。
62. 前記個体が、バッテン病に関連する変異を含むＣＬＮ６遺伝子を含む、請求項３４～６１のいずれか一項に記載の組成物。
63. 前記組成物が、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤をさらに含む、請求項３４～６２のいずれか一項に記載の組成物。
64. 前記賦形剤が、非イオン性低浸透圧性化合物、緩衝剤、ポリマー、塩、またはそれらの組み合わせを含む、請求項６３に記載の組成物。
65. 非イオン性低浸透圧性造影剤が、イオビトリドール、イオヘキソール、イオメプロール、イオパミドール、イオペントール、イオプロミド、イオベルソール、イオキシラン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項６４に記載の組成物。
66. 光受容体の保存を必要とするバッテン病を有する個体における光受容体を保存するための医薬の調製のためのＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターの、使用。
67. 網膜変性の阻害を必要とするバッテン病を有する個体における網膜変性を阻害するための医薬の調製のためのＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターの、使用。
68. 視覚効果の治療を必要とするバッテン病を有する個体における視覚効果を治療するための医薬の調製のためのＣＬＮ６ポリペプチドをコードする治療有効量の遺伝子療法ベクターの、使用。
69. 前記ＣＬＮ６ポリペプチドが、配列番号１のポリペプチドと少なくとも９０％同一である、請求項６６～６８のいずれか一項に記載の使用。
70. 前記遺伝子療法ベクターが、ウイルスベクターである、請求項６６～６９のいずれか一項に記載の使用。
71. 前記ウイルスベクターが、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、アデノウイルス、レトロウイルス、ポックスウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、または単純ヘルペスウイルスである、請求項７０に記載の使用。
72. 前記ウイルスベクターが、ＡＡＶである、請求項７１に記載の使用。
73. 前記ＡＡＶが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶｒｈＳ、ＡＡＶｒｈ１０ベクター、ＡＡＶｒｈ３３、ＡＡＶｒｈ３４、ＡＡＶｒｈ７４、ＡＡＶ Ａｎｃ８０、ＡＡＶＰＨＰ．Ｂ、およびＡＡＶ－ＤＪからなる群から選択される、請求項７２に記載の使用。
74. 前記ＡＡＶが、５’から３’の順序で、第１の逆方向反復、配列番号３の核酸配列を含むニワトリベータアクチン（ＣＢ）プロモーター、配列番号１と９０％同一のアミノ酸配列を含むセロイドリポフスチン症ニューロンタンパク質６（ＣＬＮ６）ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２の逆方向反復を含む、ｒＡＡＶ９ゲノムを含む組換えＡＡＶ９（ｒＡＡＶ９）である、請求項７２または７３に記載の使用。
75. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサをさらに含む、請求項７４に記載の使用。
76. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、ＳＶ４０イントロンをさらに含む、請求項７４または７５に記載の使用。
77. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列をさらに含む、請求項７４～７６のいずれか一項に記載の使用。
78. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、一本鎖ゲノムまたは自己相補的ゲノムである、請求項７４～７７のいずれか一項に記載の使用。
79. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、５’から３’の順序で、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、ＣＭＶエンハンサ、配列番号３のヌクレオチド配列を含むＣＢプロモーター、ＳＶ４０イントロン、配列番号１の前記ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである、請求項７４～７８のいずれか一項に記載の使用。
80. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、配列番号３の前記配列を含むＣＢプロモーター、配列番号１の前記ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである、請求項７４～７８のいずれか一項に記載の使用。
81. 前記ｒＡＡＶ９ゲノムが、第１のＡＡＶ逆方向末端反復、ＣＭＶエンハンサ、配列番号３の前記配列を含むＣＢプロモーター、ＳＶ４０イントロン、配列番号１の前記ＣＬＮ６ポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、ウシ成長ホルモンポリアデニル化ポリＡ配列、および第２のＡＡＶ逆方向末端反復を含む、自己相補的ゲノムである、請求項７４～７８のいずれか一項に記載の使用。
82. 前記ＡＡＶ逆方向末端反復が、ＡＡＶ２逆方向末端反復である、請求項７４～８１のいずれか一項に記載の使用。
83. 前記医薬が、脳室内、髄腔内、脳実質内、静脈内、網膜下、眼内、硝子体内、またはそれらの組み合わせでの投与のために配合される、請求項６６～８２のいずれか一項に記載の使用。
84. 前記薬学的組成物が、脳室内投与される、請求項８３に記載の使用。
85. 前記医薬が、前記個体の１グラム体重当たり１×１０^８ｖｇ～約１×１０^１５ｖｇのｒＡＡＶウイルス粒子を含む、請求項６６～８４のいずれか一項に記載の使用。
86. 医薬の投与が、前記個体における視覚障害の症状を予防または改善する、請求項６６～８５のいずれか一項に記載の使用。
87. 前記医薬の投与が、前記個体の中心網膜における光受容細胞を実質的に保存する、請求項６６～８５のいずれか一項に記載の使用。
88. 前記個体が、前記医薬の投与の６ヶ月後に少なくとも４層の光受容細胞を含む網膜を含む、請求項６７～８７のいずれか一項に記載の使用。
89. 前記個体が、前記医薬の投与の６ヶ月後に少なくとも８層の光受容細胞を含む網膜を含む、請求項６７～８７のいずれか一項に記載の使用。
90. 前記個体が、前記医薬の投与の９ヶ月後に少なくとも４層の光受容細胞を含む網膜を含む、請求項６７～８７のいずれか一項に記載の使用。
91. 前記個体が、前記医薬の投与の９ヶ月後に少なくとも８層の光受容細胞を含む網膜を含む、請求項６７～８７のいずれか一項に記載の使用。
92. 前記個体が、１０歳未満である、請求項６６～９１のいずれか一項に記載の使用。
93. 前記個体が、１歳未満である、請求項９２に記載の使用。
94. 前記個体が、バッテン病に関連する変異を含むＣＬＮ６遺伝子を含む、請求項６６～９３のいずれか一項に記載の使用。
95. 請求項６６～９４のいずれか一項に記載の使用、前記方法は、前記個体のＣＬＮ６遺伝子におけるバッテン病に関連する変異を検出することをさらに含む。
96. 前記医薬が、薬学的に許容される賦形剤、担体、または希釈剤をさらに含む、請求項６６～９５のいずれか一項に記載の使用。
97. 前記賦形剤が、非イオン性低浸透圧性化合物、緩衝剤、ポリマー、塩、またはそれらの組み合わせを含む、請求項９６に記載の使用。
98. 非イオン性低浸透圧性造影剤が、イオビトリドール、イオヘキソール、イオメプロール、イオパミドール、イオペントール、イオプロミド、イオベルソール、イオキシラン、およびそれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９７に記載の使用。
    
    

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