JP2022525393A - 抗メソテリン抗体、抗cd3抗体又は抗egfr抗体を含む融合タンパク質、それを含む二重特異性又は三重特異性抗体、及びその使用 - Google Patents
抗メソテリン抗体、抗cd3抗体又は抗egfr抗体を含む融合タンパク質、それを含む二重特異性又は三重特異性抗体、及びその使用 Download PDFInfo
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Abstract
Description
抗癌剤治療において、第1の癌免疫療法としてのモノクローナル抗体は、固形癌だけでなく血液癌にも優れた効果を示しているが、まだ限界がある。このことについて、抗体のFc領域を操作して、抗体の抗体依存性細胞傷害(ADCC)効果を高める技術や、1つの抗体で複数の標的にアクセスできるように、二重特異性又は三重特異性抗体を開発する技術が導入されている。
[技術的課題]
既存の二重特異性抗体の問題点を解決するために鋭意研究を行った結果、本発明者らは、抗体の重鎖と軽鎖がリンカーを介して連結され、単鎖として含まれている融合タンパク質、及びそれを含む二重特異性又は三重特異性抗体を開発した。並びに本発明者らは、これらの融合タンパク質及び抗体が、誤対合の問題を解決し、腫瘍細胞に対する高い殺傷効果を有することを見出して、本発明を完成させた。
上述の課題を解決するために、本発明の一態様では、メソテリンと特異的に結合する抗体とCD3に特異的に結合する抗体を含む、単鎖の形態の第1の融合タンパク質が提供される。
本発明の融合タンパク質及びそれを含む二重特異性抗体又は三重特異性抗体は、高収率且つ高純度で製造することができ、優れた殺腫瘍効果及び増殖抑制効果を有するため、癌治療に有効に利用することができる。
[構造式1]
N’-A-B-L1-C-D-L2-E-F-L3-G-H-L4-I-C’
(式中、N’は融合タンパク質のN末端であり、
C’は融合タンパク質のC末端であり、
Aは、メソテリンと特異的に結合する抗体の軽鎖可変ドメインであり、ドメインは配列番号25の軽鎖CDR1、配列番号26の軽鎖CDR2、及び配列番号27の軽鎖CDR3を含み、
Bは、抗体の軽鎖定常ドメインであり、
Cは、メソテリンと特異的に結合する抗体の重鎖可変ドメインであり、ドメインは配列番号28の重鎖CDR1、配列番号29の重鎖CDR2、及び配列番号30の重鎖CDR3を含み、
Dは、抗体の重鎖定常ドメイン中のCH1ドメインであり、
Eは、CD3と特異的に結合する抗体の軽鎖可変ドメインであり、ドメインは配列番号31の軽鎖CDR1、配列番号32の軽鎖CDR2、及び配列番号33の軽鎖CDR3を含み、
Fは、抗体の軽鎖定常ドメインであり、
GはCD3と特異的に結合する抗体の重鎖可変ドメインであり、ドメインは配列番号34の重鎖CDR1、配列番号35の重鎖CDR2、及び配列番号36の重鎖CDR3を含み、
Hは、抗体の重鎖定常ドメイン中のCH1ドメインであり、
Iは、Fc領域又はそのバリアントであり、
L1、L2、L3、及びL4のそれぞれは、ペプチドリンカーである)
を有する第1の融合タンパク質が提供される。
[構造式2]
N’-A-B-L1-C-D-L5-J-C’
(式中、N’は融合タンパク質のN末端であり、
C’は融合タンパク質のC末端であり、
Aは、メソテリンと特異的に結合する抗体の軽鎖可変ドメインであり、ドメインは配列番号25の軽鎖CDR1、配列番号26の軽鎖CDR2、及び配列番号27の軽鎖CDR3を含み、
Bは、抗体の軽鎖定常ドメインであり、
Cは、メソテリンと特異的に結合する抗体の重鎖可変ドメインであり、ドメインは配列番号28の重鎖CDR1、配列番号29の重鎖CDR2、及び配列番号30の重鎖CDR3を含み、
Dは、抗体の重鎖定常ドメイン中のCH1ドメインであり、
Jは、Fc領域又はその断片であり、
L1及びL5のそれぞれは、ペプチドリンカーである)
を有する第2の融合タンパク質が提供される。
[構造式3]
N’-K-M-L6-N-O-L7-P-C’
(式中、N’は融合タンパク質のN末端であり、
C’は融合タンパク質のC末端であり、
Kは、EGFRと特異的に結合する抗体の軽鎖可変ドメインであり、ドメインは配列番号37の軽鎖CDR1、配列番号38の軽鎖CDR2、及び配列番号39の軽鎖CDR3を含み、
Mは、抗体の軽鎖定常ドメインであり、
Nは、EGFRと特異的に結合する抗体の重鎖可変ドメインであり、ドメインは配列番号40の重鎖CDR1、配列番号41の重鎖CDR2、及び配列番号42の重鎖CDR3を含み、
Oは、抗体の重鎖定常ドメイン中のCH1であり、
Pは、Fc領域又はその断片であり、
L6及びL7のそれぞれは、ペプチドリンカーである)
を有する第3の融合タンパク質が提供される。
以下、本発明の理解を助けるために、好ましい実施例を提供する。しかし、以下の実施例は、本発明の理解を容易にするために与えられたものに過ぎず、本発明の範囲はこれに限定されるものではない。
実施例1.1 MSLN、CD3、又はEGFR特異的抗体の製造
MSLNに特異的な抗体を選択するために、マウスに組換えヒトMSLNを免疫した後、そこからB細胞を抽出し、様々な抗体遺伝子をクローニングした。ファージディスプレイを用いて、これらの遺伝子を用いて抗体ライブラリーを作製し、組換えヒトMSLNと結合する抗体をクローニングした。最後に、抗体のヒト化を行い、配列番号1のアミノ酸配列からなるHMI323クローンが得られ、このアミノ酸配列は配列番号4のヌクレオチド配列からなる遺伝子によってコードされている。
実施例1.2.1 抗体発現用ベクターの構築
図1に示すように、抗MSLN抗体(HMI323)と、抗MSLN Fab(HMI323)に抗CD3 Fab(A15)を連結して得られた抗体との共発現を行い、ノブイントゥホール構造を有する二重特異性抗体(HMI323/HMI323-A15)が発現するように、以下のようにベクターを構築した。
24時間前に、Expi293F(商標)細胞(Thermo Fisher Scientific)を2.0×106細胞/mlの密度で、Expi293(商標)発現培地(Thermo Fisher Scientific)を用いて125±10rpm、37℃、8%CO2の振盪インキュベーターで継代培養した。トランスフェクション時に、細胞数と細胞生存率を測定し、95%以上の細胞生存率を示すかどうかを確認した。500mLの培養フラスコに5×108個の細胞を分注し、次いでExpi293(商標)発現培地を加えて最終容量を170mL(200mLを基準)に調整した。
実施例2.1 アフィニティークロマトグラフィーを使用した精製
プロテインAと抗体の特異的な相互作用を利用した抗体のみを分離する実験として、培養液を4000rpmで30分間遠心分離し、0.22μmのボトルトップフィルターで濾過し、細胞片を除去した上清を調製した。次いで、Mabselect PrismA樹脂(GE Healthcare)を5ml充填したカラムを、AKTA PrimePlus(GE Healthcare)に接続して使用した。その後、結合緩衝液(Pierce)による洗浄を行い、次いで上清を5ml/分の速度で装填した。調製した上清をすべて装填した後、同じ速度で結合緩衝液(Pierce)による洗浄を行い、非特異的結合を除去した。
実施例2.2 サイズ排除クロマトグラフィーを使用した精製(SEC)
分離した抗体のうち、200kDaの標的抗体のみをサイズによる分離精製法で分離する実験として、Superdex 200 SECカラム(GE Healthcare)を、AKTA pure 150L装置(GE Healthcare)に接続して使用した。PBSとの緩衝液交換を行った抗体サンプルをサンプルループに充填し、AKTA pure 150L装置(GE Healthcare)に接続した。次いで、1ml/分の流速条件で工程を行い、ピークパターンに応じて溶出サンプルを1mlずつ分取した。分取した溶出液をSDS-PAGE(NuPAGE(登録商標)、Novex 4~12% Bis-Tris Gel、Invitrogen)に供し、次いでクーマシーブルーで染色して確認した。200kDaの高純度標的抗体のみをプールした。
Octetシステムを用いて、二重特異性抗体(HMI323/HMI323-A15)と三重特異性抗体(セツキシマブ/HMI323-A15)の、それぞれヒトMSLN、ヒトCD3、及びヒトEGFRに対する親和性を測定した。
フローサイトメトリーを用いて、二重特異性抗体(HMI323/HMI323-A15)又は三重特異性抗体(セツキシマブ/HMI323-A15)が特定の細胞株に対して親和性を示すかどうかを確認した。
実施例5.1 標的細胞株の構築
2種類のMSLN+腫瘍細胞(H226、AsPC-1)にIncuCyte(登録商標) NucLight Red Lentivirus Reagent(EF-1αプロモーター、ピューロマイシン選択)を形質導入し、ピューロマイシンで処理することで、NucLight Redを形質導入した腫瘍細胞株である標的細胞株を最終的に構築した。
1×トリプシン-EDTA溶液で細胞を回収し、4℃、1,200rpmで5分間遠心分離を行った。その後、上清を除去し、cRPMI(RPMI、A10491-01+10%FBS+55μM β-ME)で再懸濁した。次いで、細胞数を定量化した。それぞれの細胞株の懸濁液を調製し、96ウェルプレートに10,000細胞/ウェルで添加し、プレートを37℃のCO2インキュベーターで1日インキュベートし、標的細胞株を調製した。
凍結保存した末梢血単核細胞(PBMC)を37℃のウォーターバスで急速に解凍し、次いで50mlの円錐試験管に移した。そこに解凍用培地(RPMI、11875-093+10%FBS+55μM β-ME)を滴下し、振盪しながら混合した。次いで、4℃、1,200rpmで10分間遠心分離を行って上清を除去し、cRPMIで再懸濁した。次いで、細胞数を定量化した。
標的細胞をウェルにプレーティングした。24時間後、二重特異性抗体(HMI323/HMI323-A15)と三重特異性抗体(セツキシマブ/HMI323-A15)のそれぞれをcRPMIで希釈し、次いで20nMから始めて1/5に希釈した(0.26pM~20nMの濃度範囲で)。次いで、PBMC:標的細胞=20:1又は10:1の割合でPBMCを調製し、cRPMIに懸濁した後、ウェルに添加した。
明視野及び赤色蛍光は、37℃のCO2インキュベーター内で2日間インキュベーションを行いながら、IncuCyteS3を使用して24時間後及び48時間後に10倍で測定した。MSLN発現腫瘍細胞に対する抗体によるPBMCを介した殺細胞のIC50値は下記の表6に示す通りであり、MSLN発現腫瘍細胞に対する抗体によるPBMCを介した殺細胞の最大効果(%)は下記の表7の通りである。
実施例6.1 標的細胞株の構築
2種類のMSLN+腫瘍細胞(H226、AsPC-1)にIncuCyte(登録商標)NucLight Red Lentivirus Reagent(EF-1αプロモーター、ピューロマイシン選択)を形質導入し、ピューロマイシンで処理することで、NucLight Redを形質導入した腫瘍細胞株である標的細胞株を最終的に構築した。
1×トリプシン-EDTA溶液で細胞を回収し、4℃、1,200rpmで5分間遠心分離を行った。その後、上清を除去し、cRPMI(RPMI、A10491-01+10%FBS+55μM β-ME)で再懸濁した。次いで、細胞数を定量化した。それぞれの細胞株の懸濁液を調製し、96ウェルプレートに10,000細胞/ウェルで添加し、プレートを37℃のCO2インキュベーターで1日インキュベートし、標的細胞株を調製した。
凍結保存した末梢血単核細胞(PBMC)を37℃のウォーターバスで急速に解凍し、次いで50mlの円錐試験管に移した。そこに解凍用培地(RPMI、11875-093+10%FBS+55μM β-ME)を滴下し、振盪しながら混合した。次いで、4℃、1,200rpmで10分間遠心分離を行って上清を除去し、MACS培地(PBS+0.5%FBS+2mM EDTA)に懸濁した。そこに細胞数に応じてCD3マイクロビーズを加え、4℃で15分間染色を行った。LSカラムを使用してCD3 T細胞のみを単離した。単離したCD3 T細胞をX-VIVOに懸濁した。次いで、そこにαCD3/28 Dynabeads(登録商標)、IL-2(200U/ml、Proleukin(登録商標))、及びヒト血漿(5%)を加え、37℃のインキュベーターでインキュベーションを行った。インキュベーション開始から4日後と7日後に細胞数を計測し、細胞濃度が1×106細胞/mlになるようにX-VIVO、IL-2、及びヒト血漿を追加添加した。
標的細胞をウェルにプレーティングした。24時間後、二重特異性抗体(HMI323/HMI323-A15)と三重特異性抗体(セツキシマブ/HMI323-A15)のそれぞれをcRPMIで希釈し、次いで20nMから始めて1/5に希釈した(0.26pM~20nMの濃度範囲で)。次いで、T細胞:標的細胞=10:1又は5:1の割合で増殖したT細胞を最終的に調製し、cRPMIに懸濁した後、ウェルに添加した。
明視野及び赤色蛍光は、37℃のCO2インキュベーター内で2日間インキュベーションを行いながら、IncuCyteS3(Essenbio)を使用して24時間後及び48時間後に10倍で測定した。MSLN発現腫瘍細胞に対する抗体によるT細胞を介した殺細胞のIC50値は下記の表8に示す通りであり、MSLN発現腫瘍細胞に対する抗体によるT細胞を介した殺細胞の最大効果(%)は下記の表9の通りである。
T細胞誘導抗体として開発中の二重特異性抗体(HMI323/HMI323-A15)と三重特異性抗体(セツキシマブ/HMI323-A15)の腫瘍増殖抑制効果を確認するために、これらの抗体を腫瘍移植モデルマウスに投与した。
動物飼育室に搬入されたマウスに、実験開始前に約1週間の馴化期間を設けた。H226腫瘍細胞株(1×107/200μL PBS)又はAsPC-1腫瘍細胞株(5×106/200μL PBS)を、マウスの腋窩に皮下注射した。腫瘍細胞注射後5日目に、精製及び活性化したヒトT細胞を、T細胞:腫瘍細胞=2:1の割合で腹腔内に注射した。腫瘍細胞注射後7日目に、マウスを4群(各群5匹)に分けて、統計解析を行った。その結果、各群間で腫瘍サイズに有意差がないことが確認された。
T細胞注射後2日目から、PBS又は抗体(HMI323/HMI323-A15又はセツキシマブ/HMI323-A15)を3mg/kgの濃度で週2回(合計4回)腹腔内投与した。
群分けした日から終点まで、週に2回、腫瘍サイズ(腫瘍体積(mm3)=短軸×長軸×高さ×0.5)を測定した。短軸、長軸、高さの長さは、同じ試験者が定規を用いて測定した。
腫瘍増殖率(相対腫瘍体積(RTV)%)は、V1/V0法を用いて算出した。V1は実験効果を測定する時点での体積、V0は実験開始時点での体積を意味する。各群の相対腫瘍増殖率(T/C%)は、各群の平均腫瘍増殖率をPBS群の平均腫瘍増殖率(測定を行った時点で得られた平均腫瘍増殖率)で除し、得られた値に100を乗じた値であり、腫瘍増殖抑制率(抑制効果)は100から相対腫瘍増殖率を減じた値として算出した。統計解析には、実験の種類に応じて一元配置ANOVA又は二元配置ANOVAを用い、p値が0.05未満の場合を統計的に有意であると判断した。
腫瘍が増殖したマウスを抗体(HMI323/HMI323-A15又はセツキシマブ/HMI323-A15)で処理してから1週間後、腫瘍サンプルを取り出し、ホルマリンで固定した。その後、サンプルにパラフィンを浸潤させて包埋し、次いでミクロトームでパラフィン切片を得た。パラフィン切片を脱パラフィン化、水和、及び洗浄し、次いでヒトCD3(抗CD3、Abcam)又はヒトCD8(抗CD8、Abcam)で染色した。組織切片をマイヤーのヘマトキシリン(Dako)で対比染色し、オリンパスBX51顕微鏡で観察した。
マウスは頸椎脱臼又はCO2により安楽死させた。その結果、メソテリン過剰発現肺腺癌細胞株H226を異種移植したモデルマウスに対して、セツキシマブ/HMI323-A15又はHMI323/HMI323-A15抗体を3mg/kgの濃度で合計4回腹腔内投与した場合、いずれの抗体投与群もPBS投与群と比較して優れた腫瘍増殖抑制効果を示した(図20及び21)。
さらに、H226に比べてメソテリンの発現レベルが比較的低い膵臓癌細胞株であるAsPC-1を異種移植したマウスモデルに対して、セツキシマブ/HMI323-A15又はHMI323/HMI323-A15抗体を3mg/kgの濃度で合計4回腹腔内投与した場合、いずれの抗体投与群もPBS投与群と比較して優れた腫瘍増殖抑制効果を同様に示した(図23及び24)。
T細胞誘導抗体として開発中のセツキシマブ/HMI323-A15又はHMI323/HMI323-A15の薬物動態(PK)データを得るために、マウス血清中の抗体のPKパラメータを解析した。
セツキシマブ/HMI323-A15又はHMI323/HMI323-A15抗体を3mg/kgの濃度でマウスの尾静脈に注射した。抗体注射後、5分、1時間、4時間、8時間、24時間、48時間、72時間、120時間、168時間、240時間、336時間、504時間、及び672時間後に後眼窩神経叢からの採血を行った。各群の3匹以上の動物から100μLの血液を採取した。血液を室温で約20~30分かけて凝固させた後、10,000rpmで10分間遠心分離し、血清を分離した。
抗ヒトFab(50ng/100μL/ウェル)をプレートに添加し、4℃で一晩反応させた。次いで、残留した溶液を完全に除去した。そこに1%BSA/PBS溶液を200μL/ウェルで添加し、室温で1時間反応させた。次いで、残留した溶液を完全に除去した。1%血清/1%BSA/PBS溶液を用いて標準溶液(標準抗体)を1μg/mLに調整し、次いでそれを用いて1/2に希釈することによって調製した。試験液を1%BSA/PBS溶液で100倍に希釈して調製した。
Claims (23)
- 構造式1:
[構造式1]
N’-A-B-L1-C-D-L2-E-F-L3-G-H-L4-I-C’
(式中、N’は、融合タンパク質のN末端であり、
C’は、融合タンパク質のC末端であり、
Aは、メソテリンと特異的に結合する抗体の軽鎖可変ドメインであり、前記ドメインは配列番号25の軽鎖CDR1、配列番号26の軽鎖CDR2、及び配列番号27の軽鎖CDR3を含み、
Bは、前記抗体の軽鎖定常ドメインであり、
Cは、メソテリンと特異的に結合する前記抗体の重鎖可変ドメインであり、前記ドメインは配列番号28の重鎖CDR1、配列番号29の重鎖CDR2、及び配列番号30の重鎖CDR3を含み、
Dは、前記抗体の重鎖定常ドメイン中のCH1ドメインであり、
Eは、CD3と特異的に結合する抗体の軽鎖可変ドメインであり、前記ドメインは配列番号31の軽鎖CDR1、配列番号32の軽鎖CDR2、及び配列番号33の軽鎖CDR3を含み、
Fは、前記抗体の軽鎖定常ドメインであり、
Gは、CD3と特異的に結合する前記抗体の重鎖可変ドメインであり、前記ドメインは配列番号34の重鎖CDR1、配列番号35の重鎖CDR2、及び配列番号36の重鎖CDR3を含み、
Hは、前記抗体の重鎖定常ドメイン中のCH1ドメインであり、
Iは、Fc領域又はそのバリアントであり、
L1、L2、L3、及びL4のそれぞれは、ペプチドリンカーである)
を有する第1の融合タンパク質。 - L1、L2、L3、及びL4のそれぞれが、1~50アミノ酸からなるペプチドリンカーである、請求項1に記載の第1の融合タンパク質。
- L1及びL3のそれぞれが、配列番号43のアミノ酸配列からなるペプチドリンカーである、請求項1に記載の第1の融合タンパク質。
- L2が配列番号44のアミノ酸配列からなるペプチドリンカーである、請求項1に記載の第1の融合タンパク質。
- L4が配列番号45のアミノ酸配列からなるペプチドリンカーである、請求項1に記載の第1の融合タンパク質。
- 配列番号1のアミノ酸配列からなる、請求項1に記載の第1の融合タンパク質。
- 構造式2:
[構造式2]
N’-A-B-L1-C-D-L5-J-C’
(式中、N’は、融合タンパク質のN末端であり、
C’は、融合タンパク質のC末端であり、
Aは、メソテリンと特異的に結合する抗体の軽鎖可変ドメインであり、前記ドメインは配列番号25の軽鎖CDR1、配列番号26の軽鎖CDR2、及び配列番号27の軽鎖CDR3を含み、
Bは、前記抗体の軽鎖定常ドメインであり、
Cは、メソテリンと特異的に結合する前記抗体の重鎖可変ドメインであり、前記ドメインは配列番号28の重鎖CDR1、配列番号29の重鎖CDR2、及び配列番号30の重鎖CDR3を含み、
Dは、前記抗体の重鎖定常ドメイン中のCH1ドメインであり、
Jは、Fc領域又はその断片であり、
L1及びL5のそれぞれは、ペプチドリンカーである)
を有する第2の融合タンパク質。 - L1及びL5のそれぞれが、1~50アミノ酸からなるペプチドリンカーである、請求項7に記載の第2の融合タンパク質。
- L1が配列番号43のアミノ酸配列からなるペプチドリンカーである、請求項7に記載の第2の融合タンパク質。
- L5が配列番号45のアミノ酸配列からなるペプチドリンカーである、請求項7に記載の第2の融合タンパク質。
- 配列番号3のアミノ酸配列からなる、請求項7に記載の第2の融合タンパク質。
- 構造式3:
[構造式3]
N’-K-M-L6-N-O-L7-P-C’
(式中、N’は、融合タンパク質のN末端であり、
C’は、融合タンパク質のC末端であり、
Kは、EGFRと特異的に結合する抗体の軽鎖可変ドメインであり、前記ドメインは配列番号37の軽鎖CDR1、配列番号38の軽鎖CDR2、及び配列番号39の軽鎖CDR3を含み、
Mは、前記抗体の軽鎖定常ドメインであり、
Nは、EGFRと特異的に結合する前記抗体の重鎖可変ドメインであり、前記ドメインは配列番号40の重鎖CDR1、配列番号41の重鎖CDR2、及び配列番号42の重鎖CDR3を含み、
Oは、前記抗体の重鎖定常ドメイン中のCH1ドメインであり、
Pは、Fc領域又はその断片であり、
L6及びL7のそれぞれは、ペプチドリンカーである)
を有する第3の融合タンパク質。 - L6及びL7のそれぞれが、1~50アミノ酸からなるペプチドリンカーである、請求項12に記載の第3の融合タンパク質。
- L6が配列番号43のアミノ酸配列からなるペプチドリンカーである、請求項12に記載の第3の融合タンパク質。
- L7が配列番号45のアミノ酸配列からなるペプチドリンカーである、請求項12に記載の第3の融合タンパク質。
- 配列番号5のアミノ酸配列からなる、請求項12に記載の第3の融合タンパク質。
- 請求項1に記載の第1の融合タンパク質、及び
請求項7に記載の第2の融合タンパク質、
を含む二重特異性抗体。 - ノブ修飾が前記第1の融合タンパク質のIに含まれ、ホール修飾が前記第2の融合タンパク質のJに含まれる;又は、ホール修飾が前記第1の融合タンパク質のIに含まれ、ノブ修飾が前記第2の融合タンパク質のJに含まれる、請求項17に記載の二重特異性抗体。
- 請求項1に記載の第1の融合タンパク質、及び
請求項12に記載の第3の融合タンパク質、
を含む三重特異性抗体。 - ノブ修飾が前記第1の融合タンパク質のIに含まれ、ホール修飾が前記第3の融合タンパク質のPに含まれる;又は、ホール修飾が前記第1の融合タンパク質のIに含まれ、ノブ修飾が前記第3の融合タンパク質のPに含まれる、請求項19に記載の三重特異性抗体。
- 癌を治療するための医薬組成物であって、有効成分として、
請求項1に記載の第1の融合タンパク質、
請求項7に記載の第2の融合タンパク質、
請求項12に記載の第3の融合タンパク質、
請求項17に記載の二重特異性抗体、又は
請求項19に記載の三重特異性抗体、
を含む医薬組成物。 - 癌の治療を必要とする個体における癌を治療するための医薬品の製造のための以下のタンパク質又は抗体の使用であって、
請求項1に記載の第1の融合タンパク質、
請求項7に記載の第2の融合タンパク質、
請求項12に記載の第3の融合タンパク質、
請求項17に記載の二重特異性抗体、又は
請求項19に記載の三重特異性抗体、
の使用。 - 個体における癌を治療する方法であって、
治療有効量の請求項21に記載の医薬組成物を、個体に投与するステップ
を含む方法。
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