JP2022523749A - Ｔｃｒ融合タンパク質およびｔｃｒ融合タンパク質を発現する細胞 - Google Patents

Abstract

Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）であって、前記融合タンパク質は、ＴＣＲサブユニット（またはＴＣＲユニットと呼ばれる）、および抗原を識別する抗原識別ユニットを含み、前記抗原は、ＧＰＣ３またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２である。前記融合タンパク質を含むＴ細胞、ならびに癌等の疾患を治療するために前記融合タンパク質またはＴ細胞を使用する医薬組成物および使用方法を開示する。本発明のＴＦＰまたはＴ細胞は、腫瘍細胞の増殖を阻害するだけでなく、より少ないサイトカインを放出することができることにより、サイトカインストームの可能性を効果的に低減する。

Description

本発明は、免疫療法の分野に属する。より具体的には、本発明は、ＴＣＲ融合タンパク質およびＴＣＲ融合タンパク質を発現する細胞に関する。

現在、免疫療法は、腫瘍の臨床治療において不可欠な段階になっている。免疫療法の薬物やプログラムは、体の免疫系が癌細胞を識別して、攻撃する様々な段階に関する。既存の腫瘍免疫薬は、癌細胞を標的とする抗体、養子細胞療法、腫瘍溶解性ウイルス、樹状細胞関連療法、ＤＮＡおよびタンパク質レベルの腫瘍ワクチン、免疫活性化サイトカインおよび他の免疫調節化合物等の複数のタイプを含む。ここで、Ｔ細胞チェックポイント阻害タンパク質に対する抗体薬や腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の養子療法は、近年飛躍的な進歩を遂げ、幅広い注目を集めている。

Ｔ細胞に基づく遺伝子工学操作は、ＣＡＲ―ＴおよびＴＣＲ―Ｔを含む。前者は、キメラ抗原受容体を構築する必要があり、通常、一本鎖抗体は、ヒンジ領域と膜貫通セグメントとを介してＣＤ３ζの細胞内セグメントに接続された後、ウイルス形質導入によってＴ細胞が生成され、一本鎖抗体と腫瘍細胞表面の抗原との結合により、ＣＤ３ζの細胞内シグナルを活性化し、それにより形質導入されたＴ細胞が腫瘍細胞に対する殺傷作用を果たす。後者は、通常腫瘍抗原ペプチド／ＭＨＣ複合体を特異的に識別できるＴＣＲをＴ細胞に形質導入する必要があり、次に、これらのＴＣＲを使用して、Ｔ細胞の内部のＣＤ３サブユニットと新しいＴＣＲ複合体を形成することにより、Ｔ細胞が腫瘍細胞を特異的に標的化し、ＴＣＲ複合体全体のシグナル経路を活性化して、腫瘍細胞を殺傷するという目的を達成できるようにする。

本明細書で説明される方法は、新規なＴ細胞改造形態であって、一本鎖抗体をＣＤ３εまたはＣＤ３γと融合させて、内因性ＴＣＲ複合体の他のサブユニットと新しいＴＣＲ複合体を形成し、一本鎖抗体の標的性を利用するだけでなく、ＴＣＲ複合体のシグナル経路全体を利用する。

本発明の目的は、固形腫瘍における腫瘍免疫療法の適用効果を改善するために、ＴＣＲ融合タンパク質および当該ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞を提供することである。

本発明で採用される技術的解決手段は、次のとおりである。
第１の態様において、本発明は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）を提供し、前記融合タンパク質は、
（ａ）ＴＣＲサブユニット（またはＴＣＲユニットと呼ばれる）、および
（ｂ）抗原を識別する抗原識別ユニットを含み、
前記抗原は、ＧＰＣ３またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２であり、
ここで、前記ＴＣＲサブユニットと前記抗原識別ユニットとは、操作可能に接続される。
具体的な実施形態において、前記ＴＣＲサブユニットは、
（ｉ）ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、および
（ｉｉ）ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲαまたはＴＣＲβの細胞内シグナル伝達ドメインに由来する刺激性ドメインを含むＴＣＲ細胞内ドメインを含む。

一つの好ましい例において、前記ＴＦＰは、Ｔ細胞で発現される時にＴＣＲに組み込まれる。
具体的な実施形態において、ＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、次の表に示される軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、および／またはＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、次の表に示される重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、

または
ｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、次の表に示される軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、および／またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、次の表に示される重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有する。

具体的な実施形態において、ＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖可変領域は、次の表に示される軽鎖可変領域から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、および／またはＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する重鎖可変領域は、次の表に示される重鎖可変領域から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、

または、
ｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖可変領域は、次の表に示される軽鎖可変領域から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、および／またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する重鎖可変領域は、次の表に示される重鎖可変領域から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有する。

具体的な実施形態において、ＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、次の表のいずれかの行に示される軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の組み合わせであるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、および／またはＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、次の表のいずれかの行に示される重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の組み合わせであるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、

または
ｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、次の表のいずれかの行に示される軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の組み合わせであるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、および／またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、次の表のいずれかの行に示される重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の組み合わせであるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有する。

具体的な実施形態において、ＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、次の表のいずれかの行に示される軽鎖可変領域および重鎖可変領域の組み合わせであるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、

または、
ｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、次の表のいずれかの行に示される軽鎖可変領域および重鎖可変領域の組み合わせであるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有する。

具体的な実施形態において、ＧＰＣ３の抗原識別ユニットを識別するアミノ酸配列は、次の表に示される配列から選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、

または、
ｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットを識別するアミノ酸配列は、次の表に示される配列から選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有する。

一つの好ましい例において、前記抗原識別ユニットは、リンカー配列を介して前記ＴＣＲ細胞外ドメインに接続される。
一つの好ましい例において、前記リンカー配列は、（Ｇ_４Ｓ）ｎを含み、ここで、ｎ＝１～４であり、または前記リンカーのコード配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、１１または１２に示される核酸配列を有する。

一つの好ましい例において、前記ＴＣＲサブユニットは、細胞外ドメイン、および／または膜貫通ドメイン、および／または細胞内ドメインを含み、好ましくは、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインのうちの少なくとも二つは、同じＴＣＲサブユニットに由来する。
一つの好ましい例において、前記ＴＣＲサブユニットは、刺激性ドメインを含むＴＣＲ細胞内ドメインを含み、前記刺激性ドメインは、ＣＤ３ε、ＣＤ３γまたはＣＤ３δの細胞内シグナル伝達ドメインから選択されるか、またはそのうちに少なくとも一つの修飾されたアミノ酸配列を有する。

一つの好ましい例において、
（ｉ） ＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列に結合する軽鎖可変領域、ここで、前記軽鎖可変領域は、本明細書で提供される抗ＧＰＣ３抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対して少なくとも一つであるが３０以下の修飾を有するアミノ酸配列、または本明細書で提供される抗ＧＰＣ３抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列と９０～９９％の同一性を有する配列を含み、または
（ｉｉ） ｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列に結合する軽鎖可変領域、ここで、前記軽鎖可変領域は、本明細書で提供される抗ｃｌａｕｄｉｎ１８．２抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列に対して少なくとも一つであるが３０以下の修飾を有するアミノ酸配列、または本明細書で提供される抗ｃｌａｕｄｉｎ１８．２抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列と９０～９９％の同一性を有する配列を含む。

一つの好ましい例において、
（ｉｉｉ） ＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列に結合する重鎖可変領域、ここで、前記重鎖可変領域は、本明細書で提供される抗ＧＰＣ３抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列に対して少なくとも一つであるが３０以下の修飾を有するアミノ酸配列、または本明細書で提供される抗ＧＰＣ３抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列と９０～９９％の同一性を有する配列を含み、または
（ｉｖ） ｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列に結合する重鎖可変領域、ここで、前記重鎖可変領域は、本明細書で提供される抗ｃｌａｕｄｉｎ１８．２抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列に対して少なくとも一つであるが３０以下の修飾を有するアミノ酸配列、または本明細書で提供される抗ｃｌａｕｄｉｎ１８．２抗体の重鎖可変領域のアミノ酸配列と９０～９９％の同一性を有する配列を含む。

一つの好ましい例において、前記ＴＦＰは、ＴＣＲサブユニットの細胞外ドメインを含み、前記細胞外ドメインは、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δＴＣＲサブユニット、その機能的フラグメント、および少なくとも一つであるが２０以下の修飾を有するアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の細胞外ドメインまたはその部分を含む。

一つの好ましい例において、前記ＴＦＰは、膜貫通ドメインを含み、前記膜貫通ドメインは、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＣＤ３εＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δＴＣＲサブユニット、その機能的フラグメント、および少なくとも一つであるが２０以下の修飾を有するアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む。

一つの好ましい例において、前記ＴＦＰは、膜貫通ドメインを含み、前記膜貫通ドメインは、ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、ＴＣＲζ鎖、ＣＤ３εＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δＴＣＲサブユニット、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ２８、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、その機能的フラグメント、および少なくとも一つであるが２０以下の修飾を有するアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質の膜貫通ドメインを含む。

一つの好ましい例において、前記抗原識別ユニットは、抗体またはそのフラグメントを含み、好ましくは、前記抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、線状抗体、単一ドメイン抗体、またはｃａｍｅｌｉｄ ＶＨＨドメインであり、より好ましくは、前記抗体は、ｓｃＦｖである。

一つの好ましい例において、前記ＴＦＰは、共刺激性ドメインをさらに含む。
一つの好ましい例において、前記共刺激性ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ―１、ＬＦＡ―１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）および４―１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ならびに少なくとも一つであるが２０以下の修飾を有するアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質から得られた機能性シグナル伝達ドメインである。

第２の態様において、本発明は、前記融合タンパク質と他の因子との組み合わせを提供し、前記他の因子は、サイトカイン、転写因子、ケモカイン、および／またはその組み合わせを含み、前記発現カセットは、構成性発現または誘導性発現であり、好ましくは、前記発現カセットのプロモーターは、免疫細胞誘導性プロモーターであり、好ましくは、前記免疫細胞誘導性プロモーターは、ＮＦＡＴ６プロモーターであり、好ましくは、前記ＮＦＡＴ６プロモーターは、逆調節である。
一つの好ましい例において、前記融合タンパク質および他の因子は、同じ核酸分子によって発現されるか、または異なる核酸分子によって発現される。
一つの好ましい例において、前記融合タンパク質および他の因子は、同じ核酸分子によって発現され、前記他の因子の発現カセットと、ＴＦＰとの間、および発現カセットとの間には、直接接続されるか、またはタンデムフラグメントによって接続され、前記タンデムフラグメントは、Ｆ２Ａ、ＰＡ２、Ｔ２Ａ、および／またはＥ２Ａから選択される。

一つの好ましい例において、前記サイトカインは、ＩＬ―７、ＩＬ―１２から選択され、前記ケモカインは、ＣＣＬ１９またはＣＣＬ２１であり、前記転写因子は、ＲＵＮＸ３であり、好ましくは、前記他の因子は、サイトカインとケモカインとの組み合わせであり、好ましくは、前記他の因子は、ＩＬ７とＣＣＬ２１との組み合わせであるか、またはＩＬ７とＣＣＬ１９との組み合わせである。
一つの好ましい例において、前記少なくとも一つであるが２０以下の修飾は、細胞シグナル伝達を媒介するアミノ酸修飾、またはＴＦＰへのリガンド結合に応答してリン酸化されるアミノ酸修飾を含む。

一つの好ましい例において、前記ＴＦＰは、ＴＣＲサブユニットの免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含み、前記ＩＴＡＭは、ＣＤ３ζＴＣＲサブユニット、ＣＤ３εＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γＴＣＲサブユニット、ＣＤ３δＴＣＲサブユニット、ＴＣＲζ鎖、Ｆｃε受容体１鎖、Ｆｃε受容体２鎖、Ｆｃγ受容体１鎖、Ｆｃγ受容体２ａ鎖、Ｆｃγ受容体２ｂ１鎖、Ｆｃγ受容体２ｂ２鎖、Ｆｃγ受容体３ａ鎖、Ｆｃγ受容体３ｂ鎖、Ｆｃβ受容体１鎖、ＴＹＲＯＢＰ（ＤＡＰ１２）、ＣＤ５、ＣＤ１６ａ、ＣＤ１６ｂ、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ３２、ＣＤ６４、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８９、ＣＤ２７８、ＣＤ６６ｄ、その機能的フラグメント、および少なくとも一つであるが２０以下の修飾を有するアミノ酸配列からなる群から選択されるタンパク質のＩＴＡＭまたはその部分を含む。

一つの好ましい例において、前記ＩＴＡＭは、ＣＤ３γ、ＣＤ３δまたはＣＤ３εのＩＴＡＭを置換する。
一つの好ましい例において、前記ＩＴＡＭは、ＣＤ３ζＴＣＲサブユニット、ＣＤ３εＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γＴＣＲサブユニットおよびＣＤ３δＴＣＲサブユニットから選択され、ＣＤ３ζＴＣＲサブユニット、ＣＤ３εＴＣＲサブユニット、ＣＤ３γＴＣＲサブユニットおよびＣＤ３δＴＣＲサブユニットから選択された異なるＩＴＡＭを置換する。
一つの好ましい例において、前記ＴＦＰ分子は、リーダー配列をさらに含む。

第３の態様において、本発明は、核酸分子を提供し、前記核酸分子は、第１の態様に記載の融合タンパク質または第２の態様に記載の組み合わせを発現する。
一つの好ましい例において、前記核酸は、ＤＮＡおよび／またはＲＮＡからなる。
一つの好ましい例において、前記核酸は、ｍＲＮＡである。
一つの好ましい例において、前記核酸は、ヌクレオチド類似体を含む。

第４の態様において、本発明は、第３の態様に記載の核酸分子を含む、ベクターを提供する。
一つの好ましい例において、前記ベクターは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プラスミド、レンチウイルスベクター、アデノウイルスベクター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）ベクターまたはレトロウイルスベクターからなる群から選択される。

第５の態様において、本発明は、第４の態様に記載のベクターが含まれるか、またはそのゲノムに第３の態様に記載の核酸分子が統合される、細胞を提供する。
一つの好ましい例において、前記細胞は、ヒトＴ細胞であり、好ましくは、同種異系Ｔ細胞である。

第６の態様において、本発明は、
ｉ）第１の態様に記載の融合タンパク質ＴＦＰ分子、および
ｉｉ）少なくとも一つの内因性ＴＣＲサブユニットまたは内因性ＴＣＲ複合体を含む、タンパク質複合体を提供する。

第７の態様において、本発明は、細胞を調製する方法を提供し、前記方法は、第４の態様に記載のベクターまたは第３の態様に記載の核酸分子を使用してＴ細胞を形質導入する段階を含む。

第８の態様において、本発明は、ＲＮＡ工学操作された細胞集団を生成する方法を提供し、前記方法は、インビトロで転写されたＲＮＡまたは合成ＲＮＡを細胞に導入する段階を含み、
（ｉ）ここで、前記ＲＮＡは、第３の態様に記載の核酸を含む。

第９の態様において、本発明は、哺乳動物の体内で抗腫瘍免疫性を提供する方法を提供し、前記方法は、有効量の第１の態様に記載の融合タンパク質、第２の態様に記載の組み合わせ、第３の態様に記載の核酸分子、第４の態様に記載のベクターまたは第５の態様に記載の細胞を前記哺乳動物に投与する段階を含む。
一つの好ましい例において、前記哺乳動物は、ヒトである。

第１０の態様において、本発明は、ＧＰＣ３またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２発現に関連する疾患に罹患している哺乳動物を治療する方法を提供し、前記方法は、有効量の第１の態様に記載の融合タンパク質、第２の態様に記載の組み合わせ、第３の態様に記載の核酸分子、第４の態様に記載のベクターまたは第５の態様に記載の細胞を前記哺乳動物に投与する段階を含む。

一つの好ましい例において、前記ＧＰＣ３またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２発現に関連する疾患は、結腸がん、直腸がん、腎細胞がん、肝臓がん、肺がん、小腸がん、食道がん、黒色腫、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頚部がん、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門がん、胃がん、精巣がん、子宮がん、ファロピウス管がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、膣がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟組織肉腫、尿道がん、陰茎がん、膀胱がん、腎がんまたは尿管がん、腎骨盤がん、中枢神経系（ＣＮＳ）がん、腫瘍血管新生、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮がん、ＧＰＣ３またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２発現に関連する非癌関連の適応症から選択され、好ましくは、肝臓がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、腎臓がん、甲状腺がん、胃がん、結腸直腸がん、膵臓がん、食道がんから選択される。

一つの好ましい例において、前記ＴＦＰ分子を発現する細胞と、ＴＦＰ分子を発現する細胞の効力を増加させる薬剤とを組み合わせて投与する。
一つの好ましい例において、ＧＰＣ３キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する有効量のＴ細胞を投与された哺乳動物と比較して、前記哺乳動物は、より少ないサイトカインを放出する。

一つの好ましい例において、前記ＴＦＰ分子発現する細胞は、ＴＦＰ分子を発現する細胞の投与に関連する一つまたは複数の副作用を改善する薬剤と併用して投与される。
一つの好ましい例において、前記ＴＦＰ分子を発現する細胞は、前記ＧＰＣ３またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２に関連する疾患を治療する薬剤と組み合わせて投与する施用。

第１１の態様において、本発明は、薬物として使用される、第１の態様に記載の融合タンパク質、第２の態様に記載の組み合わせ、第３の態様に記載の核酸分子、第４の態様に記載のベクターまたは第５の態様に記載の細胞を提供する。
一つの好ましい例において、前記薬物は、ＧＰＣ３またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２発現するに関連する疾患を予防または治療するための薬物である。

一つの好ましい例において、前記ＧＰＣ３またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２発現に関連する疾患は、結腸がん、直腸がん、腎細胞がん、肝臓がん、肺がん、小腸がん、食道がん、黒色腫、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頚部がん、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門がん、胃がん、精巣がん、子宮がん、ファロピウス管がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、膣がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟組織肉腫、尿道がん、陰茎がん、膀胱がん、腎がんまたは尿管がん、腎骨盤がん、中枢神経系（ＣＮＳ）がん、腫瘍血管新生、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮がん、ＧＰＣ３またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２発現に関連する非癌関連の適応症から選択され、好ましくは、肝臓がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、腎臓がん、甲状腺がん、胃がん、結腸直腸がん、膵臓がん、食道がんから選択される。

本発明の一態様は、ＴＣＲ融合タンパク質を提供し、前記ＴＣＲ融合タンパク質は、腫瘍抗原識別ユニットおよびＴＣＲユニットを含み、前記腫瘍抗原識別ユニットは、固形腫瘍抗原を識別する抗体であり、前記ＴＣＲユニットは、ＣＤ３細胞外ドメイン、ＣＤ３膜貫通ドメインおよびＣＤ３細胞内シグナルドメインの少なくとも一部を含む。
一つの好ましい実施形態において、前記固形腫瘍抗原は、ＧＰＣ３、ｃｌａｕｄｉｎ６、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２から選択される。より好ましくは、ＧＰＣ３またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２である。

一つの好ましい実施形態において、前記固形腫瘍は、結腸がん、直腸がん、腎細胞がん、肝臓がん、肺がん、小腸がん、食道がん、黒色腫、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頚部がん、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門がん、胃がん、精巣がん、子宮がん、ファロピウス管がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、膣がん、外陰がん、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟組織肉腫、尿道がん、陰茎がん、膀胱がん、腎がんまたは尿管がん、腎骨盤がん、中枢神経系（ＣＮＳ）がん、腫瘍血管新生、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮がんから選択され、好ましくは、肝臓がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、腎臓がん、甲状腺がん、胃がん、結腸直腸がん、胃がん、膵臓がん、食道がんから選択される。

一つの好ましい実施形態において、前記抗体は、完全な免疫グロブリンまたは抗体フラグメントであり、好ましくは、前記抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ、ｓｄＦｖ、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、線状抗体、単一ドメイン抗体、またはｃａｍｅｌｉｄ ＶＨＨドメインであり、より好ましくは、前記抗体は、ｓｃＦｖである。
一つの好ましい実施形態において、前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５に示されるＨＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６に示されるＨＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７に示されるＨＣＤＲ３、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８に示されるＬＣＤＲ１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ１９：に示されるＬＣＤＲ２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０に示されるＬＣＤＲ３を有する。

一つの好ましい実施形態において、前記抗体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１に示されるＶＨおよびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２に示されるＶＬを有する。
一つの好ましい実施形態において、前記ＣＤ３細胞内シグナルドメインは、ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３ζ、またはＣＤ３δの細胞内シグナルドメインであり、好ましくは、ＣＤ３εおよびＣＤ３γの細胞内シグナルドメインであり、より好ましくは、ＣＤ３εの細胞内シグナルドメインである。

一つの好ましい実施形態において、前記腫瘍抗原識別ユニットは、前記ＴＣＲユニットに操作可能に接続される。
一つの好ましい実施形態において、前記腫瘍抗原識別ユニットは、リンカーを介して前記ＴＣＲ細胞外ドメインに接続される。
好ましくは、前記リンカー配列は、（Ｇ_４Ｓ）ｎであり、ｎ＝１～４の間の任意の自然数であるか、または前記リンカーは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５、１１または１２に示される核酸配列を有する。

一つの好ましい実施形態において、前記ＴＣＲユニットは、同じＴＣＲサブユニットに由来するＴＣＲ細胞外ドメイン、ＴＣＲ膜貫通ドメインおよびＣＤ３細胞内シグナルドメインの少なくとも一部を含む。
一つの好ましい実施形態において、前記ＴＣＲユニットは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３または８に示されるアミノ酸配列を有する。
一つの好ましい実施形態において、前記ＴＣＲ融合タンパク質のコード核酸は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７、８、１３、１４に示される配列を有する。

本発明の一態様は、本発明に記載のＴＣＲ融合タンパク質をコードする核酸を提供する。

本発明の一態様は、本発明に記載の核酸を含む、発現ベクターを提供する。

本発明の一態様は、本発明に記載の発現ベクターを含む、ウイルスを提供する。

本発明の一態様は、本発明に記載のＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞を提供する。
一つの好ましい実施形態において、前記Ｔ細胞は、サイトカイン、転写因子、別のキメラ受容体、ケモカイン、ケモカイン受容体、ＰＤ―１発現を低下させるｓｉＲＮＡまたはＰＤ―Ｌ１を遮断するタンパク質、ＴＣＲ、もしくは安全スイッチをさらに発現する

別の好ましい実施形態において、前記因子は、発現されたサイトカインを含む融合タンパク質である。
別の好ましい実施形態において、前記サイトカインは、ＩＬ―１２、ＩＬ―１８、ＩＬ―２１、またはＩ型インターフェロンから選択される。
別の好ましい実施形態において、前記融合タンパク質は、サイトカインおよびケモカインを含む。

別の好ましい実施形態において、前記ケモカインは、ＣＣＬ１９またはＣＣＬ２１であり、好ましくは、前記融合タンパク質は、ＩＬ７およびＣＣＬ２１、またはＩＬ７およびＣＣＬ１９を含む。
別の好ましい実施形態において、前記ケモカイン受容体は、ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、ＣＸＣＲ２、またはＣＸＣＲ４を含む。
別の好ましい実施形態において、前記安全スイッチは、ｉＣａｓｐａｓｅ―９、Ｔｒｕａｎｃａｔｅｄ ＥＧＦＲまたはＲＱＲ８を含む。

別の好ましい実施形態において、前記別のキメラ受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、修飾Ｔ細胞（抗原）受容体（ＴＣＲ）、Ｔ細胞融合タンパク質（ＴＦＰ）、Ｔ細胞抗原カプラー（ＴＡＣ）から選択される。
別の好ましい実施形態において、前記転写因子は、ＲＵＮＸ３である。
別の好ましい実施形態において、前記Ｔ細胞は、腫瘍の微小環境を阻害する融合タンパク質、またはＴ細胞を刺激する融合タンパク質をさらに発現する
別の好ましい実施形態において、前記ケモカインは、リンパ球ケモカインであり、好ましくは、前記ケモカインは、ＣＣＬ２１である。

本発明の一態様は、腫瘍を阻害するための薬物の調製に使用される、本発明に記載の発現ベクター、または本発明に記載のウイルス、または本発明に記載の細胞の用途を提供する。

本発明の範囲内で、本発明の上記の各技術的特徴と以下（例えば、実施例）に具体的に説明される各技術的特徴との間を、互いに組み合わせることにより、新しいまたは好ましい技術的解決策を構成することができることに理解されたい。スペースに限りがあるため、ここでは繰り返さない。

Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２およびＧＰＣ３を標的とする構築されたＴＣＲ融合タンパク質ベクターを示す。 ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞の陽性率の結果を示す。 膵臓がん細胞および胃がん細胞に対するＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞のインビトロでの死滅結果を示す。

ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞を膵臓がん細胞および胃がん細胞と共培養した後のサイトカイン分泌の検出結果を示す。 異なるＴＣＲ融合タンパク質の陽性率の検出結果を示す。 ＧＰＣ３を標的とするＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞の細胞死滅効果を示す。

ＥＬＩＳＡによって検出されたＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞の様々なサイトカインの分泌状況を示す。 ＧＰＣ３を標的とするＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞のインビボでの抗腫瘍結果を示す。 ＧＰＣ３を標的とするＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞で治療した後の各グループのマウスの体重状況を示す。

本願発明は、ＴＣＲ融合タンパク質を発現する細胞による固形腫瘍の治療、特に胃がんおよび膵臓がんの治療のための技術的解決手段を提供する。

特に定義しない限り、本明細書で使用されるすべての技術的および化学的用語は、遺伝子治療，生化学、遺伝学および分子生物学の分野の当業者によって一般に理解されているのと同じ意味を有する。本明細書で説明されるそれらと類似または同等のすべての方法および材料は、本発明の実施または試験に使用されることができ、ここで、適切な方法および材料が本明細書で説明される。本明細書で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許および他の参照文献は、すべてその全体が参照により本明細書に引用される。行き違いが存在する場合、定義を含む本明細書を基準とする。さらに、特に規定しない限り、材料、方法および実施例は、例示にすぎず、制限することを意図するものではない。
特に明記しない限り、本発明の実施は、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、トランスジェニック生物学、微生物学、組換えＤＮＡおよび免疫学の伝統的な技術を使用し、これらは、すべてこの分野の技術的範囲に属する。これらの技術は、文献で詳しく説明される。例えば、分子生物学の現在のプロトコル（Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（ＦｒｅｄｅｒｉｃｋＭ．ＡＵＳＵＢＥＬ、２０００、Ｗｉｌｅｙａｎｄ ｓｏｎＩｎｃ、Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ、ＵＳＡ）、分子クローニング：実験マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）、Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、（Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ、２００１、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮｅｗＹｏｒｋ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）、オリゴヌクレオチド合成（Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔｅｄ．、１９８４）、Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４６８３１９５、核酸ハイブリダイゼーション（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）（Ｂ．Ｄ．Ｈａｒｒｉｅｓ ＆ Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓｅｄｓ．１９８４）、転写と翻訳（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ａｎｄ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）（Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ ＆ Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓｅｄｓ．１９８４）、動物細胞の培養（Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ）（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．、１９８７）、固定化された細胞と酵素（Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ Ｃｅｌｌｓ Ａｎｄ Ｅｎｚｙｍｅｓ）（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ、１９８６）、Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ、分子クローニングの実用ガイド（Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ Ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）（１９８４）、シリーズ、酵素学の方法（ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ ＥＮＺＹＭＯＬＯＧＹ）（Ｊ．ＡｂｅｌｓｏｎおよびＭ．Ｓｉｍｏｎ、ｅｄｓ．―ｉｎ―ｃｈｉｅｆ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、特に、Ｖｏｌｓ．１５４および１５５（Ｗｕｅｔａｌ．ｅｄｓ．）およびＶｏｌ．１８５、「遺伝子発現技術（Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）」（Ｄ．Ｇｏｅｄｄｅｌ、ｅｄ．）、哺乳類細胞用の遺伝子導入ベクター（Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ）（Ｊ．Ｈ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓｅｄｓ．、１９８７、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）、細胞および分子生物学における免疫化学的方法（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｃｅｌｌ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ）（ＭａｙｅｒおよびＷａｌｋｅｒ、ｅｄｓ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ、１９８７）、実験免疫学ハンドブック（Ｈａｎｄ ｂｏｏｋ Ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）、第Ｉ―ＩＶ巻（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ、ｅｄｓ．、１９８６）、ならびにマウス胚の操作（Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ）（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、１９８６）を参照する。

本発明をより容易に理解するために、関連する用語は、次のように定義される。
本明細書で使用されるように、「約」とは、具体的な状況に依存しかつ当業者に知られているか、または知ることができることを意味し得る。
１％未満または１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２５％、３０％または３０％を超えて増減する。

「ＴＣＲサブユニットまたはＴＣＲユニットとも呼ばれるＴ細胞（抗原）受容体（Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＴＣＲ）」という用語は、すべてのＴ細胞表面にある特徴的なマークであり、非共有結合によってＣＤ３に結合して、ＴＣＲ―ＣＤ３複合体を形成する。ＴＣＲは、主要組織適合性複合体分子に結合する抗原の識別を担う。ＴＣＲは、二つの異なるペプチド鎖で構成されるヘテロダイマーであり、二つのペプチド鎖αおよびβで構成され、各ペプチド鎖は、可変領域（Ｖ領域）、定常領域（Ｃ領域）、膜貫通領域および細胞質領域等のいくつかの領域に分けることができ、その特徴は、細胞質領域が非常に短いいことである。ＴＣＲ分子は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属し、その抗原特異性は、Ｖ領域に存在し、Ｖ領域（Ｖα、Ｖβ）には、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３の三つの超可変領域があり、ここで、ＣＤＲ３の変動が最大で、ＴＣＲの抗原結合特異性を直接決定する。ＴＣＲがＭＨＣ―抗原ペプチド複合体を識別するする場合、ＣＤＲ１とＣＤＲ２とは、ＭＨＣ分子の抗原結合溝を結合する側壁を識別し、ＣＤＲ３は、抗原ペプチドに直接結合する。ＴＣＲは、ＴＣＲ１およびＴＣＲ２の二つのカテゴリに分類され、ＴＣＲ１は、γおよびδの二つの鎖で構成され、ＴＣＲ２は、αおよびβの二つの鎖で構成される。これらの天然（または他の手段で製造された）の「抗がん」Ｔ細胞の識別能力は、しばしば比較的に弱いため、癌細胞に対する有利な攻撃を形成することはできない。この場合、部分的な遺伝子の改変の方法、即ち、高親和性ＴＣＲを介して、対応するＴＡＡに対するこれらのＴＣＲの「親和性」および戦闘効果を改善することができる。「遺伝子修飾ＴＣＲ」技術も、それによって「親和性強化されたＴＣＲ」技術（Ａｆｆｉｎｉｔｙ―Ｅｎｈａｎｃｅｄ ＴＣＲ）と呼ばれる。遺伝子修飾Ｔ細胞受容体（Ｇｅｎｅ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＴＣＲ）は、ＴＣＲ分子と同じ免疫グロブリンスーパーファミリーに属する抗体重鎖および軽鎖の定常領域ドメインを使用して、それぞれそのＢ鎖およびａ鎖の定常領域ドメインを置き換え、キメラ型ＴＣＲ分子（ｃｈｉｍ―ＴＣＲ）を形成する。
「ＴＣＲ融合タンパク質」または「ＴＦＰ」という用語は、様々なＴＣＲタンパク質に由来する組換えタンパク質を含み、一般に、ｉ）標的細胞の表面抗原に結合し、ｉｉ）Ｔ細胞に局在する場合、完全なＴＣＲ複合体の他のポリペプチド成分と相互作用することができる。「ＴＦＰ Ｔ細胞」とは、例えば、天然のＴＣＲに導入されたＴＦＰを形質導入（例えば、本明細書に開示される方法）および発現されたＴ細胞である。いくつかの実施形態において、当該Ｔ細胞は、ＣＤ４＋Ｔ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＣＤ４＋／ＣＤ８＋Ｔ細胞である。いくつかの実施形態において、当該ＴＦＰ Ｔ細胞は、ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態において、当該ＴＦＰ Ｔ細胞は、γδＴ細胞である。
本発明の「ＴＣＲ融合タンパク質」は、細胞外抗原結合ドメイン（抗原識別ユニットとも呼ばれる）、ＴＣＲ膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインをふくみ、ここで、抗原結合ドメインは、例えば、単一ドメイン抗体フラグメント（ｓｄＡｂ）、マウス、ヒト化またはヒト抗体に由来する一本鎖抗体（ｓｃＦｖ）の一部を含む、連続的なポリペプチド鎖として発現される（Ｈａｒｌｏｗら、１９９９、抗体の使用：実験室マニュアル（Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．、Ｈａｒｌｏｗら、１９８９、抗体：実験マニュアル（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．、Ｈｏｕｓｔｏｎら、１９８８、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９―５８８３、Ｂｉｒｄら、１９８８、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３―４２６）。一つの態様において、本発明のＴＦＰ組成物の抗原結合ドメインは、抗体フラグメントを含む。別の態様において、ＴＦＰは、ｓｃＦｖまたはｓｄＡｂを含む抗体フラグメントを含む。

本発明は、ＴＦＰをコードする組換えＤＮＡ構築物を含み、ここで、当該ＴＦＰは、ＧＰＣ３またはＣｌａｕｄｉｎ１８．２に特異的に結合する抗体フラグメントを含み、ここで、当該抗体フラグメントの配列は、ＴＣＲユニットまたはその一部をコードする核酸配列に隣接しかつ同じリーディングフレームにある。本明細書で提供されるＴＦＰは、一つまたは複数の内因性（または代替的に、一つまたは複数の外因性、または内因性と外因性との組み合わせ）ＴＣＲユニットに結合して、機能的なＴＣＲ複合体を形成することができる。

一つの態様において、本発明の的ＴＦＰは、抗原識別ユニットとも呼ばれる標的特異的結合要素を含む。一部の選択は、標的細胞表面を定義する標的抗原のタイプおよび数によって異なる。例えば、標的細胞上の特定の疾患状態に関連する細胞表面マーカーとして標的抗原を識別するように抗原識別ユニットを選択することができる。従って、本発明のＴＦＰにおいて、抗原識別ユニットの標的抗原として使用されることができる細胞表面マーカーの例としては、ウイルス、細菌および寄生虫感染、自己免疫疾患および癌性疾患（例えば、悪性疾患）に関連するマーカーを含む。

本発明のＴＦＰの細胞外ドメインは、天然の供給源または組換えの供給源に由来することができる。天然の供給源の場合、当該ドメインは、任意のタンパク質、特に膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来する可能性がある。一つの態様において、細胞外ドメインは、膜貫通ドメインと結合することができる。本発明において、特に有用な細胞外ドメインは、少なくとも、例えば、Ｔ細胞受容体のα、βまたはζ鎖、またはＣＤ３ε、ＣＤ３γまたはＣＤ３δを含み、または代替的な実施形態において、ＣＤ２８、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４を含む。

本発明のＴＦＰの膜貫通ドメインは、天然の供給源または組換えの供給源に由来することができる。天然の供給源の場合、当該ドメインは、任意の膜結合タンパク質または膜貫通タンパク質に由来することができる。一つの態様において、ＴＦＰが標的に結合する時に、膜貫通ドメインは、ずっと細胞内ドメインにシグナルを送ることができる。本発明において、特に有用な膜貫通ドメインは、少なくとも、Ｔ細胞受容体のα、βまたはζ鎖、またはＣＤ２８、ＣＤ３ε、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４の膜貫通領域を含み得る。いくつかの状況において、膜貫通ドメインは、ヒンジ（例えば、ヒトタンパク質に由来するヒンジ）によって、ＴＦＰの細胞外領域（例えば、ＴＦＰの抗原結合ドメイン）に接続することができる。例えば、一つの実施形態において、当該ヒンジは、例えば、ＩｇＧ４ヒンジまたはＣＤ８ａヒンジ等のヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）ヒンジであり得る。

本発明のリンカーは、任意選択で、２～１０個のアミノ酸の長さを有する短いオリゴペプチドまたはポリペプチドリンカーが、ＴＦＰの膜貫通ドメインと細胞質領域との間の接続を形成することができる。グリシン―セリンダブレットは、特に適切なリンカーを提供する。
ＴＦＰにＣＤ３γ、δまたはεポリペプチドが含まれる場合、ＴＦＰの細胞質ドメインは、細胞内シグナル伝達ドメインを含み得、ＴＣＲαおよびＴＣＲβのサブユニットは、通常シグナル伝達ドメインを欠失する。細胞内シグナル伝達ドメインは、通常、ＴＦＰが導入された免疫細胞の少なくとも一つの正常なエフェクター機能を活性化する役割を果たす。「エフェクター機能」という用語は、細胞の特殊な機能を指す。例えば、Ｔ細胞のエフェクター機能は、サイトカインの分泌を含む、細胞溶解活性または補助活性であり得る。一つの実施例において、ＴＦＰ標的化抗原を過剰発現する腫瘍細胞と共培養し、前記ＴＦＰ―Ｔ細胞は、大量のＩＦＮ―γ、Ｇｒａｎｚｙｍｅ―Ｂ、ＩＬ２、ＴＮＦ―αおよびＧＭ―ＣＳＦを分泌することができ、同じ抗原識別ユニットで構築されたＣＡＲ Ｔ細胞と比較して、ＴＣＲ―Ｔは、同じ有意な細胞毒性を維持するが、サイトカイン分泌量が有意に減少し、サイトカインストームの可能性を効果的に減少させる。

従って、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを形質導入しかつ細胞が特殊な機能を実行するように誘導するタンパク質の一部を指す。通常、細胞内シグナル伝達ドメイン全体を使用できるが、多くの場合、鎖全体を使用する必要がある。細胞内シグナル伝達ドメインの檀淑部分が使用される場合、エフェクター機能シグナルを伝達する限り、そのような短縮部分は完全な鎖の代わりに使用することができる。従って、「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、エフェクター機能シグナルを伝達するのに十分な細胞内シグナル伝達ドメインの任意の短縮部分を含むことを意図している。

本発明のＴＦＰに使用される細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、抗原受容体の接合の後にシグナル形質導入を介するために相乗的に作用する、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の細胞質配列および補助受容体の細胞質配列、ならびに、これらの配列のいずれかの誘導体または変異体、および同じ機能的能力を有する任意の組換え配列を含む。Ｔ細胞の活性化は、二つの異なるタイプの細胞質シグナル伝達配列、即ち、ＴＣＲによる抗原依存性の一次活性化を開始するシグナル伝達配列（一次細胞内シグナル伝達ドメイン）および抗原非依存性的に機能して二次または共刺激シグナルを提供するシグナル伝達配列（共刺激ドメイン等の二次細胞質ドメイン）によって媒介されると言える。一次シグナル伝達ドメインは、刺激的な方法または阻害的な方法でＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する。刺激的な方法で作用する一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）と呼ばれる、シグナル伝達モチーフを含む。

本発明において、特に有用であるＩＴＡＭを含む一次細胞内シグナル伝達ドメインの例としては、ＣＤ３ζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ６６ｄの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一つの実施形態において、本発明のＴＦＰは、例えば、ＣＤ３εの一次シグナル伝達ドメイン等の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一つの実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、例えば、天然のＩＴＡＭドメインと比較して改変された（例えば、あげられたまたは下げられた）活性を有する突然変異ＩＴＡＭドメイン等の、修飾されたＩＴＡＭドメインを含む。一つの実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、修飾されたＩＴＡＭを含む一次細胞内シグナル伝達ドメイン、例えば、最適化および／または短縮されたＩＴＡＭを含む一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一つの実施形態において、一次シグナル伝達ドメインは、一つ、二つ、三つ、四つまたはそれ以上のＩＴＡＭモチーフを含む。

ＴＦＰの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインのみを含み得るか、または本発明のＴＦＰの背景下で有用な他の任意の所望の細胞内シグナル伝達ドメインと組み合わせられることができる。例えば、ＴＦＰの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ε鎖部分および共刺激シグナル伝達ドメインを含み得る。共刺激シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内ドメインを含むＴＦＰの一部を指す。共刺激分子は、抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子であり、抗原に対するリンパ球の効果的な応答に必要する。これらの分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４―１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＰＤ１、ＩＣＯＳ、リンパ球機能関連抗原―１（ＬＦＡ―１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７―Ｈ３およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンド等を含む。

本発明のＴＦＰの細胞質部分における細胞内シグナル伝達配列は、ランダムまたは特定の順序で互いに接続することができる。任意選択で、短いオリゴペプチドまたはポリペプチドリンカー、例えば、長さが２～１０個のアミノ酸（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９または１０个アミノ酸）は、細胞内シグナル伝達配列の間で接続を形成することができる。

別の態様において、本明細書で説明されるＴＦＰを発現する細胞は、例えば、サイトカイン、転写因子、ケモカイン、および／またはその組み合わせ等の別の因子をさらに発現して、Ｔ細胞の増殖、細胞生存、抗アポトーシス効果、腫瘍浸潤等等の効果を増加して、抗腫瘍活性を向上させることができる。一つの実施例において、ＴＦＰを発現するＴ細胞は、サイトカインＩＬ―７およびケモカインＣＣＬ２１、サイトカインＩＬ―１２または転写因子ＲＵＮＸ３をさらに発現し、前記ＴＦＰ―Ｔ細胞は、ＴＦＰ標的抗原を発現する腫瘍細胞と共培養され、前記ＴＦＰ―Ｔ細胞は、インビトロで腫瘍細胞の死滅毒性を大幅に増加させることができ、腫瘍細胞によって形成されるインビボ皮下移植腫瘍を大幅に阻害することができ、インビトロサイトカイン分泌検出は、前記ＴＦＰ―Ｔ細胞が大量のＩＦＮ―γ、Ｇｒａｎｚｙｍｅ―Ｂを分泌することができることが分かり、ここで、ＩＬ―１２を発現するＴＦＰ―Ｔ細胞の分泌量が一番多い。

本発明は、細胞に直接トランスフェクトすることができるＴＦＰをコードするＲＮＡ構築物を含む。トランスフェクション用のｍＲＮＡを生成する方法は、特別に設計されたプライマーを使用したテンプレートに対してインビトロ転写（ＩＶＴ）し、次に、ポリＡを追加して、３’および５’非翻訳配列（“ＵＴＲ”）、５’キャップおよび／または内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）を生成し、通常、発現される核酸およびポリＡテールの構築物の長さは、５０～２０００個の塩基である。このようにして生成されたＲＮＡは、様々な種類の細胞を効果的にトランスフェクトすることができる。一つの態様において、テンプレートは、ＴＦＰの配列を含む。一つの態様において、抗メソセリンＴＦＰは、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）によってコードされる。一つの態様において、抗ＧＰＣ３またはＣｌａｕｄｉｎ１８．２に対するＴＦＰをコードするｍＲＮＡをＴ細胞に導入して、ＴＦＰ―Ｔ細胞を生成する。一つの実施形態において、インビトロで転写されたＲＮＡ ＴＦＰは、一過性トランスフェクションの形態として細胞に導入されることができる。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって生成されたテンプレートを使用してインビトロ転写によってＲＮＡを生成する。適切なプライマーおよびＲＮＡポリメラーゼを使用して、任意の供給源からの目的ＤＮＡをＰＣＲによってインビトロｍＲＮＡ合成のテンプレートに直接変換することができる。ＤＮＡの供給源は、例えば、ゲノムＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、ファージＤＮＡ、ｃＤＮＡ、合成ＤＮＡ配列または任意の他の適切なＤＮＡ供給源であり得る。インビトロ転写に必要なテンプレートは、本発明のＴＦＰである。一つの実施形態において、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、オープンリーディングフレームを含む。当該ＤＮＡは、生物のゲノムに天然に存在するＤＮＡ配列に由来することができる。一つの実施形態において、当該核酸は、５’および／または３’の非翻訳領域（ＵＴＲ）のいくつかまたはすべてを含み得る。当該核酸は、エキソンおよびイントロンを含み得る。一つの実施形態において、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、ヒトの核酸配列である。別の実施形態において、ＰＣＲに使用されるＤＮＡは、５’および３’ＵＴＲを含むヒトの核酸配列である。または、当該ＤＮＡは、天然に存在する生物では通常発現されない人口ＤＮＡ配列であることができる。例示的な人工ＤＮＡ配列は、融合タンパク質をコードするオープンリーディングフレームを形成するために一緒に結合された遺伝子部分を含む配列である。一緒に接続されたＤＮＡ部分は、単一の生物体または複数の生物体に由来することができる。

ＰＣＲを使用して、ｍＲＮＡのインビトロ転写用のテンプレートを生成し、当該ｍＲＮＡは、トランスフェクションに使用される。ＰＣＲを実行する方法は、当技術分野でよく知られている。ＰＣＲに使用されるプライマーは、ＰＣＲテンプレートとして使用されるＤＮＡ領域に実質的に相補的な領域を有するように設計される。本明細書で使用されるように、「実質的に相補的」とは、プライマー配列中のほとんどまたはすべての塩基が相補的であるか、または一つまたは複数の塩基が非相補的またはミスマッチである、ヌクレオチド配列を指す。ＰＣＲに使用することができるプライマーは、当技術分野で知られている合成方法によって生成することができる。

本発明は、本明細書に記載の一つまたは複数のＴＦＰ構築物をコードする核酸分子をさらに提供する。本発明は、本発明のＤＮＡが挿入されるベクターをさらに提供する。レンチウイルスなどのレトロウイルスに由来するベクターは、導入遺伝子の長期的で、安定した統合およびその娘細胞での増殖を可能にするため、長期的な遺伝子導入を実現するのに適した手段である。例えば、核酸は、プラスミド、ファージミド、ファージ誘導体、動物ウイルスおよびコスミド等を含むがこれらに限定されないベクターにクローニングすることができる。ベクターとして使用することができるウイルスは、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルスおよびレンチウイルスを含むが、これらに限定されない。本発明は、構成的プロモーターの使用に限定されず、誘導性プロモーターも考慮する。誘導性プロモーターの使用は、発現が必要な場合にそれが操作可能に接続されるポリヌクレオチド配列の発現を開始することができるか、または発現が必要とされない場合に当該発現を閉じることができる、分子スイッチを提供する。誘導性プロモーターの例としては、ＮＦＡＴ６プロモーター、メタロチオネインプロモーター、糖質コルチコイドプロモーター、プロゲステロンプロモーターおよびテトラサイクリン調節プロモーターを含むが、これらに限定されない。

目的ポリヌクレオチドを宿主細胞に導入するための生物学方法は、ＤＮＡおよびＲＮＡベクターを使用する段階を含む。ウイルスベクター、特にレトロウイルスベクターは、ヒト細胞等の哺乳動物に遺伝子を挿入するために最も広く使用されている方法になっている。他のウイルスベクターは、レンチウイルス、ポックスウイルス、単純ヘルペスウイルスＩ、アデノウイルスおよびアデノ随伴ウイルス等に由来することができる。

増殖および遺伝子組み換えの前に、被験者からＴ細胞の供給源を得る。被験者の例としては、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラットおよびそのトランスジェニック種を含む。Ｔ細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位の組織、腹水、胸水、脾臓組織および腫瘍を含む、多くの供給源から得ることができる。本発明の特定の態様において、当技術分野で利用可能な任意の数のＴ細胞株を使用することができる。本発明の特定の態様において、ＦｉｃｏｌｌＴＭ分離技術等の、当業者に知られている任意の数の技術を使用して、被験者から収集された血液ユニットからＴ細胞を得ることができる。一つの好ましい態様において、アフェレーシスを介して、個人の循環血液からの細胞を得る。アフェレーシス製品は、通常、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、その他の有核白血球、赤血球および血小板を含む、リンパ球を含む。一つの態様において、アフェレーシスによって収集された細胞は、血漿画分を除去し、かつ細胞を適切な緩衝液または培地に入れて、その後の処理段階で提供する。本発明の背景において、複数のラウンドの選択を使用することもできる。特定の態様において、選択手順を実行し、かつ活性化および増殖中に「選択されていない」細胞を使用する必要があり得る。「選択されていない」細胞は、他のラウンドの選択を受けることもできる。

通常、本発明のＴ細胞は、ＣＤ３／ＴＣＲ複合体関連シグナルを刺激する薬剤およびＴ細胞表面上の共刺激分子を刺激するリガンドが付着している表面と接触することによって拡大することができる。特に、本明細書に説明されるように、Ｔ細胞集団は、抗ＣＤ３抗体またはその抗原結合フラグメントまたは表面に固定化された抗ＣＤ２抗体と接触されるか、またはプロテインキナーゼＣ活性化剤（例えば、ブリオスタチン）およびカルシウムイオンベクターと接触されることによって刺激される。

Ｃｌａｕｄｉｎ１８という用語は、それぞれ、遺伝子登録番号がＮＰ＿０５７４５３およびＮＭ０１６３６９であるスプライスバリアント１（ＣＬＤＮ１８Ａ１）、ならびに遺伝子登録番号がＮＭ＿００１００２０２６およびＮＰ＿００１００２０２６であるスプライスバリアント２（ＣＬＤ１８Ａ２）の二つのスプライスバリアントを有する、クローディン１８（ＣＬＤＮ１８、ＣＬＤ１８）である。Ｃｌａｕｄｉｎ１８という用語は、上皮と内皮との間の密着結合に位置する固有の膜貫通タンパク質である。いくつかの実施形態において、前記クローディン１８Ａ２またはクローディン１８Ａ２ペプチドまたはＣｌａｕｄｉｎ １８．２は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４のアミノ酸配列のペプチドまたは前記アミノ酸配列の変異体を含むタンパク質／ペプチドである。「変異体」という用語は、突然変異体、スプライスバリアント、コンフォメーション、アイソフォーム、対立遺伝子変異体、種変異体（ｓｐｅｃｉｅｓ ｖａｒｉａｎｔ）および種相同体（ｓｐｅｃｉｅｓ ｈｏｍｏｌｏｇ）、特に天然に存在する変異体を指す。対立遺伝子変異体は、遺伝子の正常な配列の改変を伴い、その重要性は一般に明らかではない。全遺伝子シーケンシングは、通常特定の遺伝子の大量の対立遺伝子変異体を同定する。種間ホモログは、所与の核酸またはアミノ酸配列とは異なる種起源を有する核酸またはアミノ酸配列である。

ＣＬＤ１８Ａ２は、胃がん、食道がん、膵臓がんおよび例えば、非小細胞肺がん等の肺がん、卵巣がん、結腸がん、肝臓がん、頭頚部がんおよび胆嚢がん、例えば、ケルケンベルグ（Ｋｒｕｋｅｎｂｅｒｇ）腫瘍等の胃がん転移、腹膜転移およびリンパ節転移、肺腫瘍ならびにヒト癌細胞株等を含む、いくつかの癌タイプで強く発現し、発現は、主にこれらの適応症の腺がんサブタイプにあるため、ＣＬＤＮ１８Ａ２は、抗体を介して原発腫瘍およびその転移の予防および／または治療の標的として使用に特に適している。一つの例において、ＴＦＰの抗原結合部分は、胃がん、食道がん、膵臓がんおよび、例えば、非小細胞肺がん等の肺がん、卵巣がん、結腸がん、肝臓がん、頭頚部がんおよび胆嚢がん、例えば、ケルケンベルグ腫瘍等の胃がん転移、腹膜転移およびリンパ節転移、肺腫瘍ならびにヒト癌細胞株で発現するＣＬＤ１８Ａ２の細胞外ドメインのエピトープに識別して結合する。

「ＧＰＣ３」または「グリピカン３」という用語は、細胞の増殖および分化の調節に重要な役割を果たすグリピカン（Ｇｌｙｐｉｃａｎ）ファミリーのメンバーである。ＧＰＣ３の異常発現は、肝臓がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、腎臓がん、甲状腺がん、胃がん、結腸直腸がん等における異常な発現等、様々な腫瘍の発生、発症と密接に関連する。
「免疫エフェクター細胞」という用語は、免疫反応中にエフェクター機能を発揮する細胞を指す。例えば、サイトカインおよび／またはケモカインを分泌し、微生物を死滅し、抗体を分泌し、腫瘍細胞を識別または排除する免疫細胞を含む。いくつかの実施例において、免疫エフェクター細胞は、Ｔ細胞（細胞毒性Ｔ細胞、補助Ｔ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞）、Ｂ細胞、ナチュラル死滅細胞、好中球、マクロファージおよび樹状細胞を含む。

「免疫エフェクター機能」という用語は、免疫系の組成によって媒介される任意の機能を含み、腫瘍の拡大および転移の阻害を含む、腫瘍増殖および／または腫瘍形成の阻害につながることができる。好ましくは、免疫エフェクター機能は、腫瘍細胞を死滅する。好ましくは、本発明における免疫エフェクター機能は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞媒介性貪食（ＡＤＣＰ）、腫瘍関連抗原を保有する細胞のアポトーシス誘導（例えば、抗体による表面抗原との結合）、ＣＤ４０Ｌを媒介したシグナル形質導入の阻害（例えば、抗体によるＣＤ４０受容体またはＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）との結合）、および／または腫瘍関連抗原を保有する細胞の増殖等を含む、抗体媒介性であり、好ましくは、ＡＤＣＣおよび／またはＣＤＣである。従って、一つまたは複数の免疫エフェクター機能を媒介することができる抗体は、好ましくは、ＣＤＣ媒介性溶解、ＡＤＣＣ媒介性溶解、アポトーシス、ホモ接着および／または食作用を誘導することによって（好ましくは、ＣＤＣを媒介した溶解および／またはＡＤＣＣを媒介した溶解を誘導することによって）、腫瘍細胞の死滅を媒介することができる。抗体は、癌細胞の表面にある腫瘍関連抗原に簡単に結合するだけでも作用することができる。例えば、抗体は、腫瘍細胞の表面にある腫瘍関連抗原に結合することにより、腫瘍関連抗原の機能を遮断するか、またはアポトーシスを誘導することができる。

「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」という用語は、表面に外来抗原および主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）の複合体を表す補助細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状状細胞等）等の免疫系細胞を指す。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を使用してこれらの複合体を識別することができる。ＡＰＣは、抗原を処理し、かつＴ細胞に提示する。
「抗腫瘍効果」という用語は、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞の数の減少、転移の数の減少、所望寿命の増加、腫瘍細胞増殖の減少、腫瘍細胞の生存率の減少、または癌状態に関連する様々な生理学的症状を含むがこれらに限定されない、様々な方法で表現できる生物学的効果を指す。「抗腫瘍効果」は、そもそも腫瘍形成を防止する本発明のペプチド、ポリヌクレオチド、細胞および抗体の能力によって表現されることができる。

「自体」という用語は、後で当該個体に再導入される同じ個体に由来する任意の材料を指す。
「同種異系」という用語は、当該材料が導入された個体と同じ種の異なる動物または異なる患者に由来する任意の材料を指す。一つまたは複数の遺伝子座の遺伝子が異なる場合、二つまたはそれ以上の個体は、互いに同種異系であると見なされる。いくつかの態様において、同じ種の個体からの同種異系材料は、抗原相互作用が起こるのに十分に遺伝的に異なることができる。

「異種」という用語は、移植片が異なる種に由来する動物を指す。
「遺伝子操作された細胞」という用語は、遺伝子工学によって改変された細胞を指す。

「治療有効量」、「治療有効」、「有効量」または「有効量で」という用語は、本明細書で交換可能に使用され、Ｔ細胞応答を促進するのに十分な量または用量などであるがこれらに限定されない、本明細書に記載の特定の生物学的結果を効果的に達成する化合物、製剤、物質または組成物の量を指す。「免疫学的有効量」、「抗腫瘍有効量」、「腫瘍阻害有効量」または「治療有効量」を示す場合、投与される本発明の免疫エフェクター細胞および治療剤の正確な数は、個人の年齢、体重、腫瘍の大きさ、感染または転移の程度、および患者（被験者）の状況を考慮して医師が決定することができる。有効量の免疫エフェクター細胞とは、免疫エフェクター細胞の抗腫瘍活性を増加、増強または延長する能力、抗腫瘍免疫エフェクター細胞または活性化免疫エフェクター細胞の数を増加させる能力、ＩＦＮ―γ分泌を促進する能力、腫瘍の退縮、腫瘍の縮小、腫瘍壊死の免疫エフェクター細胞の数を指すが、これらに限定されない。

ＣＤ３（分化クラスター３）Ｔ細胞の補助受容体は、四つの異なる鎖で構成されるタンパク質複合体である。哺乳動物において、当該複合体は、一つのＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、および二つのＣＤ３ε鎖を含む。これらの鎖は、パラＴ細胞受容体（ＴＣＲ）と呼ばれる分子、およびＴリンパ球の活性化シグナルを生成するζ―鎖を有する。当該ＴＣＲ、ζ鎖およびＣＤ３分子は、一緒になってＴ細胞受容体複合体を構成する。ＣＤ３分子は、塩橋を介してＴ細胞抗原受容体（Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ、ＴＣＲ）に接続され、ＴＣＲ―ＣＤ３複合体を構成し、Ｔ細胞シグナル形質導入に関与し、主に胸腺細胞、Ｔリンパ球およびＴ細胞リンパ腫の標識に使用される。ＣＤ３細胞質セグメントは、免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ｉｍｍｕｎｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｔｙｒｏｓｉｎｅ―ｂａｓｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｍｏｔｉｆ、ＩＴＡＭ）を含み、ＴＣＲは、ＭＨＣ（ｍａｊｏｒ ｈｉｓｔｏ―ｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ ｃｏｍｐｌｅｘ）分子によって提示される抗原ペプチドを識別して結合し、ＣＤ３のＩＴＡＭ保存配列のチロシン残基をＴ細胞のチロシンプロテインキナーゼｐ５６ｌｃｋによってリン酸化され、次に、ＳＨ２（Ｓｃｒ ｈｏｍｏｌｏｇｙ ２）ドメインを含む他のチロシンプロテインキナーゼ（例えば、ＺＡＰ―７０）を動員することができる。ＩＴＡＭのリン酸化およびＺＡＰ―７０の結合は、Ｔ細胞活性化のシグナル伝達プロセスの初期段階における重要な生化学反応のひとつである。従って、ＣＤ３分子の機能は、ＴＣＲによって形質導入された活性化シグナルを伝達して抗原を識別することである。本出願において、標的抗原に結合でき、かつＣＤ３シグナル活性化を誘発できる外因性受容体は、細菌物質、ウイルスタンパク質、自己免疫マーカーまたは特定の細胞に存在する抗原（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ナチュラル死滅（ＮＫ）細胞、骨髄細胞、食細胞または腫瘍細胞の細胞表面タンパク質）に特異的な少なくとも一つのＣＤ３結合部位および少なくとも一つの別の追加の抗原結合部位を含む。このような外因性受容体は、２種類の細胞を架橋し、かつＴ細胞を特定の標的に向け、標的細胞に対するＴ細胞の細胞毒性活性を誘発するために使用される。こんな標的の例としては、腫瘍細胞またはウイルス性病原性または細菌性病原体等の感染因子であり得る。

「刺激」という用語は、刺激ドメインまたは刺激分子（例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体）のその同族リガンドへの結合によって誘導される一次応答を指し、それにより、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体を介したシグナル形質導入等であるがこれらに限定されない、シグナル形質導入イベントを媒介する。刺激は、特定の分子の発現の改変および／または細胞骨格構造の再編成を媒介することができる。

「刺激分子」または「刺激ドメイン」という用語は、Ｔ細胞によって発現される分子またはその一部を指し、Ｔ細胞シグナル伝達経路の少なくともいくつかの態様に向けられた刺激的な方法でＴＣＲ複合体の一次活性化を調節する一次細胞質シグナル伝達配列を提供する。一つの態様において、一次シグナルは、例えば、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体のペプチド負荷ＭＨＣ分子への結合によって開始され、かつ増殖、活性化、分化等を含むがこれらに限定されないＴ細胞応答の媒介をもたらす。刺激的方法で作用する一次細胞質シグナル伝達配列（「一次シグナル伝達ドメイン」とも呼ばれる）は、免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフまたは「ＩＴＡＭ」と呼ばれるシグナル伝達モチーフを含み得る。本発明において、特に有用であるＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例としては、ＴＣＲζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ２７８（「ＩＣＯＳ」とも呼ばれる）、およびＣＤ６６ｄから派生したそれらの配列を含むが、これらに限定されない。

「細胞内シグナル伝達ドメイン」という用語は、分子の細胞内部分を指す。細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＦＰを発現するＴ細胞等のＴＦＰ細胞を含む免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。例えば、ＴＦＰを発現するＴ細胞における免疫エフェクター機能の例としては、サイトカインの分泌を含む細胞溶解活性およびＴ補助細胞活性を含む。一つの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含み得る。例示的な一次細胞内シグナル伝達ドメインは、一次刺激または抗原依存性刺激に関与する分子に派生する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一つの実施形態において、細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激細胞内ドメインを含み得る。例示的な共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激シグナルまたは抗原非依存性刺激に関与する分子に派生する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。

一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＩＴＡＭ（「免疫受容体チロシンに基づく活性化モチーフ」）を含み得る。ＩＴＡＭを含む一次細胞質シグナル伝達配列の例としては、ＣＤ３ζ、ＦｃＲγ、ＦｃＲβ、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＣＤ３ε、ＣＤ５、ＣＤ２２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂおよびＣＤ６６ｄ、ならびにＤＡＰ１０およびＤＡＰ１２に由来するあれらの配列を含むが、これらに限定されない。
「共刺激分子」という用語は、共刺激リガンドに特異的に結合することにより、増殖等であるがこれらに限定されないＴ細胞の共刺激反応を媒介する、Ｔ細胞上の相同結合パートナーを指す。共刺激分子は、効果的な免疫応答に必要とする抗原受容体またはそのリガンド以外の細胞表面分子である。共刺激分子は、ＭＨＣ１クラス分子、ＢＴＬＡおよびＴｏｌｌリガンド受容体、ならびにＤＡＰ１０、ＤＡＰ１２、ＣＤ３０、ＬＩＧＨＴ、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ―１、ＬＦＡ―１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）および４―１ＢＢ（ＣＤ１３７）を含むが、これらに限定されない。共刺激細胞内シグナル伝達ドメインは、共刺激分子の細胞内部分であり得る。共刺激分子は、ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達性リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）および活性化ＮＫ細胞受容体等のタンパク質ファミリーで表すことができる。このような分子の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４―１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ、リンパ球機能関連抗原１（ＬＦＡ―１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０、ＣＤ１６０、Ｂ７―Ｈ３およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンド等を含む。細胞内シグナル伝達ドメインは、それが派生する分子の細胞内部分全体または天然の細胞内シグナル伝達ドメイン全体、またはその機能的フラグメントを含み得る。「４―１ＢＢ」という用語は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＡ６２４７８．２で提供されるアミノ酸配列、またはマウス、齧歯類動物、サル、類人猿等の非ヒト種からの同等の残基を有する、ＴＮＦＲスーパーファミリーのメンバーを指し、「４―１ＢＢ共刺激ドメイン」という用語は、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＡＡ６２４７８．２のアミノ酸残基２１４―２５５、またはマウス、齧歯類動物、サル、類人猿等の非ヒト種からの同等の残基として定義される。

「コードする」という用語は、生物学的プロセスにおいて他のポリマーおよび高分子を合成するためのテンプレートとして使用される遺伝子、ｃＤＮＡまたはｍＲＮＡの特定のヌクレオチド配列等のポリヌクレオチドの固有の特性を指し、当該ポリマーおよび高分子は、決定されたヌクレオチド配列（例えば、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡおよびｍＲＮＡ）または決定されたアミノ酸配列およびそれらから生成される生物学的特性を有する。従って、遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写および翻訳が細胞または他の生物学的システムでタンパク質を生成する場合、当該遺伝子、ｃＤＮＡまたはＲＮＡは、タンパク質をコードする。コード鎖およびそのヌクレオチド配列は、すべてｍＲＮＡ配列と同じであり、かつ通常配列リストで提供され、遺伝子またはｃＤＮＡ転写のためのテンプレートとして使用される非コード鎖は、コードされたタンパク質または当該遺伝子またはｃＤＮＡの他の産物と呼ばれることができる。特に明記しない限り、「アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列」は、互いに縮重した形態であり、かつ同じアミノ酸配列をコードするすべてのヌクレオチド配列を含む。タンパク質またはＲＮＡをコードする「ヌクレオチド配列」という句は、タンパク質をコードするヌクレオチド配列がいくつかの形態で一つまたは複数のイントロンを含み得る程度までイントロンをさらに含み得る。

「発現」という用語は、プロモーターによって駆動される特定のヌクレオチド配列の転写および／または翻訳を指す。
「転移ベクター」という用語単離された核酸と、単離された核酸を細胞の内部に送達するために使用する物質との含む組成物を指す。線状ポリヌクレオチド、イオンまたは両親媒性化合物に関連するポリヌクレオチド、プラスミドおよびウイルスを含むがこれらに限定されない多くのベクターは、当技術分野で知られている。従って、「転移ベクター」という用語は、プラスミドまたはウイルスを自律的に複製することを含む。当該用語は、ポリリジン化合物、リポソーム等の、細胞への核酸の移動を促進する非プラスミドおよび非ウイルス化合物をさらに含むと解釈されるべきである。ウイルス転移ベクターの例としては、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター等を含むが、これらに限定されない。

「発現ベクター」という用語は、発現されるヌクレオチド配列に操作可能に接続された発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現のための十分なシス作用エレメントを含み、発現のための他のエレメントは、宿主細胞によって、またはインビトロ発現システムにおいて提供されることができる。発現ベクターは、コスミド、プラスミド（例えば、裸またはリポソームに含まれる）および組換えポリヌクレオチドを組み込んだウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス和アデノ随伴ウイルス）を含む、当技術分野で知られているすべての発現ベクターを含む。

「相同」または「同一性」という用語は、二つのポリマー分子の間、例えば、二つのＤＮＡ分子または二つのＲＮＡ分子等の二つの核酸分子の間、または二つのポリペプチド分子の間のサブユニット配列の同一性を指す。二つの分子のサブユニットの位置が同じモノマーサブユニットによって占められる場合、例えば、二つのＤＮＡ分子のそれぞれの位置がアデニンによって占められる場合、それらは当該位置で相同または同一である。二つの配列の間の相同性は、一致または相同位置の数の直接的な関数であり、例えば、二つの配列の位置の半分（例えば、長さが１０個のサブユニットであるポリマーの五つの位置）が相同である場合、この二つの配列は、５０％相同であり、９０％の位置（例えば、１０個中の九つ）が一致または相同である場合、この二つの配列は、９０％相同である。

二つまたはそれ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈において、同一性のパーセンテージは、同じである二つまたはそれ以上の配列を指す。比較ウィンドウまたは指定された領域で最大の対応を比較または対照する場合、次の配列比較アルゴリズムのいずれかを使用して、または手動のアラインメントと目視検査によって測定されるように、二つの配列が指定されたパーセンテージで同じアミノ酸残基またはヌクレオチドを有する場合（例えば、指定された領域で、または指定されていない状況下で配列全体が６０％の同一性、任意選択で、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する）、この二つの配列は、「実質的に相同」である。任意選択で、同一性は、長さが少なくとも約５０個のヌクレオチド（または１０個のアミノ酸）である領域にわたって、またはより好ましくは、長さが１００～５００個または１０００個またはそれ以上のヌクレオチド（または２０、５０、２００個またはそれ以上のアミノ酸）である領域にわたって存在する。配列比較の場合、通常、一つの配列は、試験シーケンスが比較される参照配列として機能する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列および参照配列をコンピューターに入力し、必要に応じてサブ配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメーターを指定する。デフォルトのプログラムパラメータを使用することも、代替パラメーターを指定することもできる。次に、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメーターに基づいて、参照配列に対する試験配列のパーセンテージの同一性を計算する。比較のための配列アラインメントの方法は、当技術分野で知られている。一つの態様において、本発明は、機能的に同等の分子を生成する出発抗体またはフラグメント（例えば、ｓｃＦｖ）のアミノ酸配列の修飾を企図する。例えば、ｓｃＦｖのＶＨまたはＶＬ等、ＴＦＰに含まれる抗ＧＰＣ３またはＣｌａｕｄｉｎ１８．２結合ドメインを修飾して、抗ＧＰＣ３またはｓｃＦｖ等のＣｌａｕｄｉｎ１８．２結合ドメインの出発ＶＨまたはＶＬフレームワーク領域の少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％の同一性を保持することができる。本発明は、機能的に同等の分子を生成するために、ＴＦＰ構築物全体の修飾、例えば、ＴＦＰ構築物の各ドメインの一つまたは複数のアミノ酸配列の修飾を検討する。ＴＦＰ構築物を修飾して、出発ＴＦＰ構築物の少なくとも約７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を保持することができる。

具体的な実施形態において、本発明で使用されることができる抗ＧＰＣ３の抗体およびそのＣＤＲ配列、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３、２６―３３および１３７―２０８に示される。好ましい実施形態において、本発明で使用される抗ＧＰＣ３の抗体およびそのＣＤＲ配列、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３および２６―３３に示される。

一つの実施例において、本発明で使用されることができる抗Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗体およびそのＣＤＲ配列、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、１５―２２および５６―１３６に示される。好ましい実施形態において、本発明で使用される抗Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗体およびそのＣＤＲ配列、重鎖可変領域および軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１および１５―２２に示される。

「単離された」という用語は、自然の状態から変化または除去されたことを意味する。例えば、生きている動物に天然に存在する核酸またはペプチドは、「単離」されないが、その天然状態で共存する物質から部分的または完全に単離された同じ核酸またはペプチドは「単離される」。単離された核酸またはタンパク質は、実質的に製造された形態で存在することができるか、または宿主細胞等の非天然環境に存在することができる。

「操作可能に接続する」または「転写制御」という用語は、調節配列と異種核酸配列との間の機能的接続を指し、後者の発現をもたらす。例えば、第１の核酸配列と第２の核酸配列とが機能的な関係で配置される場合、第１の核酸配列と第２の核酸配列とは操作可能に接続される。例えば、プロモーターがコード配列の転写または発現に影響を与える場合、当該プロモーターは、当該コード配列に操作可能に接続される。操作可能に接続されるＤＮＡ配列は、互いに隣接することができ、例えば、二つのタンパク質コード領域を接続する必要がある場合、当該ＤＮＡ配列は、同じリーディングフレーム内にある。

「核酸」または「ポリヌクレオチド」という用語は、一本鎖または二本鎖形態のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）およびそのポリマーを指す。明確に限定しない限り、当該用語は、参照核酸と同様の結合特性を有し、天然に存在するヌクレオチドと同様の方法で代謝される、天然ヌクレオチドの既知の類似体を含む核酸を含む。特に明記しない限り、特定の核酸配列は、その保存的に修飾された変異体（例えば、縮重コドン置換）、対立遺伝子、オルソログ、ＳＮＰおよび相補的配列ならびに明確に示された配列を暗黙的に含む。具体的には、縮重コドン置換は、一つまたは複数の選択された（またはすべて）コドンの第３の位置が混合塩基および／またはデオキシイノシン残基によって置換される配列を生成することによって達成することができる。

「ペプチド」、「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、交換可能に使用され、ペプチド結合によって共有結合されたアミノ酸残基からなる化合物を指す。タンパク質またはペプチドは、少なくとも二つのアミノ酸を含む必要があり、タンパク質またはペプチド配列を構成できるアミノ酸の最大数に制限はない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互いに接続された二つまたはそれ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまたはタンパク質を含む。本明細書で使用されるように、当該用語は、短い鎖と長い鎖との両者を指し、短い鎖は、当技術分野では一般にペプチド、オリゴペプチドおよび寡聚体とも呼ばれ、長い鎖は、当技術分野では一般にタンパク質と呼ばれ、多くの種類が存在する。「ポリペプチド」は、例えば、生物学的に活性なフラグメント、実質的に相同なポリペプチド、オリゴペプチド、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチド変異体、修飾ポリペプチド、誘導体、類似体、融合タンパク質等を含む。ポリペプチドは、天然ペプチド、組換えペプチドまたはその組み合わせを含む。

「プロモーター／調節配列」という用語は、プロモーター／調節配列に操作可能に接続される遺伝子産物を発現するために必要とされる核酸配列を指す。「構成的」プロモーターという用語は、遺伝子産物をコードまたは指定するポリヌクレオチドに操作可能に接続される場合、細胞のほとんどまたはすべての生理学的条件下で細胞内で遺伝子産物の生成をもたらすヌクレオチド配列を指す。「誘導性」プロモーターという用語は、遺伝子産物をコードまたは指定されるポリヌクレオチドに操作可能に接続される場合、実質的に、当該プロモーターに対応するインデューサーが細胞に存在する場合のみ、細胞内の遺伝子産物のヌクレオチド配列の産生をもたらす。

「インビトロ転写されたＲＮＡ」は、インビトロで合成されたＲＮＡ、好ましくは、ｍＲＮＡを指す。一般に、インビトロで転写されたＲＮＡは、インビトロ転写ベクターによって生成される。インビトロ転写ベクターは、インビトロ転写ＲＮＡを生成するためのテンプレートを含む。
「抗体」という用語は、抗原に特異的に結合する免疫グロブリン分子に由来するタンパク質またはポリペプチド配列を指す。抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナル、多鎖または一本鎖、または免疫グロブリン全体であり得、天然源または組換え源に由来することができる。抗体は、免疫グロブリン分子の四量体であり得る。

「抗体フラグメント」という用語は、抗原のエピトープと特異的に相互作用する（例えば、結合、立体障害、安定化／不安定化、空間分布等による）能力を保持する抗体の少なくとも一部を指す。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖフラグメント、ｓｃＦｖ抗体フラグメント、ジスルフィド結合―接続されるＦｖｓ（ｓｄＦｖ）、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、線状抗体、単一ドメインｓｄＡｂ（ＶＬまたはＶＨ）、ｃａｍｅｌｉｄ ＶＨＨドメイン、抗体のフラグメント（例えば、ヒンジ領域のジスルフィド結合によって接続された二つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント）から形成された多重特異性抗体、および抗体の単離されたＣＤＲまたは他のエピトープ結合フラグメント等の単一ドメイン抗体を含むが、これらに限定されない。抗原結合フラグメントは、単一ドメイン抗体、最大抗体、微小抗体、ナノ抗体、細胞内抗体、二重抗体、三重抗体、四重抗体、ｖ―ＮＡＲおよびｄｏｕｂｌｅ―ｓｃＦｖ（例えば、ＨｏｌｌｉｎｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２３）：１１２６―１１３６、２００５）に組み込まれることなない。

「ｓｃＦｖ」という用語は、軽鎖の可変領域を含む少なくとも一つの抗体フラグメントと、重鎖の可変領域を含む少なくとも一つの抗体フラグメントとを含む融合タンパク質を指し、ここで、前記軽鎖および重鎖の可変領域は、隣接し（例えば、短い柔軟性ポリペプチドリンカー等の合成リンカーを介して）、一本鎖ポリペプチド形態で発現することができ、ここで、前記ｓｃＦｖは、それが由来する完全な抗体の特異性を保持する。特に指定しない限り、本明細書で使用されるように、ｓｃＦｖは、任意の順序で（例えば、ポリペプチドのＮ―末端およびＣ末端に対して）ＶＬおよびＶＨ可変領域を有することができ、ｓｃＦｖは、ＶＬ―リンカー―ＶＨを含み得るか、またはＶＨ―リンカー―ＶＬを含み得る。

「抗体重鎖」という用語は、天然に存在する構成で抗体分子に存在し、かつ通常それが属する抗体のタイプを決定する、二つのポリペプチド鎖のうちの大きい方を指す。
「抗体軽鎖」という用語は、天然に存在する構成で抗体分子に存在する二つのポリペプチド鎖のうちの小さい方を指す。κ（ｋ）およびλ（ｌ）軽鎖は、抗体軽鎖の二つの主なアイソフォームを指す。

「組換え抗体」という用語は、例えば、ファージまたは酵母菌発現系によって発現される抗体等の、組換えＤＮＡ技術を使用して生成される抗体を指す。当該用語は、抗体または特定の抗体のアミノ酸配列をコードするＤＮＡ分子（ここで、ＤＮＡ分子が抗体タンパク質を発現する）を合成することによって生成された抗体指すと解釈されるべきであり、ここで、前記ＤＮＡまたはアミノ酸配列は、利用可能であり、当技術分野で知られている組換えＤＮＡまたはアミノ酸配列技術を使用して得ることができる。

当業者は、本発明の抗体または抗体フラグメントが、アミノ酸配列（例えば、野生型と比較して）に変化を有するが、所望の活性に変化がないようにさらに修飾されることができることを理解されたい。例えば、タンパク質に追加のヌクレオチド置換を行うことができ、「非必須」アミノ酸残基でのアミノ酸置換をもたらす。例えば、分子内の非必須アミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基によって置換されることができる。別の実施形態において、アミノ酸ストリングは、構造が類似しているが、側鎖ファミリーのメンバーとは順序および／または組成が異なるストリングによって置換されることができ、例えば、保存的に置換されることができ、ここで、アミノ酸残基は、類似の側鎖を有するアミノ酸残基によって置換される。

当技術分野では、すでに類似な側鎖を有するアミノ酸残基ファミリーを定義し、塩基性側鎖（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン）、β―分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を含む。

「抗原」または「Ａｇ」という用語は、免疫応答を引き起こす分子を指す。当該免疫応答は、抗体の生成または特異的免疫能力を有する細胞の活性化または両者を含むことができる。当業者は、事実上すべてのタンパク質またはペプチドを含む任意の高分子が抗原として役立つことができることを理解されたい。さらに、抗原は、組換えまたはゲノムＤＮＡに由来することができる。当該用語が本明細書で使用される場合、当業者は、免疫応答を引き起こすタンパク質のヌクレオチド配列またはヌクレオチド配列の任意のＤＮＡをコードすることにより、「抗原」をコードすることを理解されたい。さらに、当業者は、抗原が遺伝子の完全長ヌクレオチド配列によってのみコードされる必要はないことを理解されたい。本発明が二つ以上の遺伝子のヌクレオチド配列の一部の使用を含むが、これらに限定されないことは明らかであり、これらのヌクレオチド配列は、所望の免疫応答を誘発するポリペプチドをコードするように異なる組み合わせで配置される。そして、当業者は、抗原が「遺伝子」によってコードされる必要は全くないことを理解されたい。抗原が合成的に生成されることができるか、または生物学的サンプルに由来されることができるか、またはポリペプチド以外の高分子であり得ることは明らかである。このような生物学的サンプルは、組織サンプル、腫瘍サンプル、他の生物学的成分を有する細胞または液体を含むことができるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される「抗原識別ユニット」という用語は、免疫グロブリン分子および免疫分子の免疫学的に活性な部分、即ち、抗原に特異的に結合する（「免疫反応」）抗原結合部位を含む分子を指す。「抗原識別ユニット」という用語は、無脊椎動物または脊椎動物を含む様々な種に由来する免疫グロブリン分子をさらに含む。構造的に、最も簡単な天然に存在する抗体（例えば、ＩｇＧ）は、ジスルフィド結合によって相互接続する二つの重（Ｈ）鎖および二つの軽（Ｌ）鎖の四つのポリペプチド鎖を含む。免疫グロブリンは、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ等のいくつかのタイプの分子を含む大きなファミリーの分子を表す。「免疫グロブリン分子」という用語は、例えば、ハイブリッド抗体または改変された抗体およびそのフラグメントを含む。抗体の抗原結合機能は、天然に存在する抗体のフラグメントによって実行されることができることを示す。これらのフラグメントは、総称して「抗原識別ユニット」と呼ばれる。「抗原識別ユニット」という用語は、エピトープに一致し、かつエピトープを識別する特定の形状を有するポリペプチド鎖を含む任意の分子構造を含み、ここで、一つまたは複数の非共有結合の相互作用により、分子構造とエピトープとの間の複合体が安定される。前記抗原識別ユニットの例としては、Ｆａｂフラグメント、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる一価フラグメント、ヒンジ領域のジスルフィド架橋によって接続される二つのＦａｂフラグメントを含む二価フラグメント（Ｆ（ａｂ）_２フラグメント）、ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント、抗体の片方のアームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ、３４１：５４４―５４６、１９８９）、および単離された相補的決定領域（ＣＤＲ）またはそのような抗原識別ユニットを含む任意の融合タンパク質を含む。

抗原識別ユニットが他の参照抗原（ポリペプチドまたは他の物質を含む）との結合と比較してより高い親和性または結合力で抗原に結合する場合、前記抗原識別ユニットは、抗原に「特異的に結合」するか、または抗原と「免疫反応性」である。

「腫瘍抗原」は、特定の過剰増殖性疾患に共通の抗原を指す。特定の態様において、本発明の過剰増殖性障害抗原は、癌に由来する。本発明の腫瘍抗原は、甲状腺刺激ホルモン受容体（ＴＳＨＲ）、ＣＤ１７１、ＣＳ―１、Ｃ型レクチン様分子―１、ガングリオシドＧＤ３、Ｔｎ抗原、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＣＤ３３、ＣＤ４４、ＣＤ４４ｖ７／８、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、Ｂ７Ｈ３（ＣＤ２７６）、Ｂ７Ｈ６、ＫＩＴ（ＣＤ１１７）、インターロイキン１３受容体サブユニットα（ＩＬ―１３Ｒα）、インターロイキン１１受容体α（ＩＬ―１１Ｒα）、前立腺幹細胞抗原（ＰＳＣＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、癌胚性抗原（ＣＥＡ）、ＮＹ―ＥＳＯ―１、ＨＩＶ―１Ｇａｇ、ＭＡＲＴ―１、ｇｐ１００、チロシナーゼ、メソセリン、ＥｐＣＡＭ、プロテアーゼセリン２１（ＰＲＳＳ２１）、血管内皮増殖因子受容体、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）、ルイス（Ｙ）抗原、ＣＤ２４、血小板由来成長因子受容体β（ＰＤＧＦＲ―β）、段階特異的胚性抗原抗原―４（ＳＳＥＡ―４）、細胞表面関連ムチン１（ＭＵＣ１）、ＭＵＣ６、表皮成長因子受容体ファミリーおよびその突然変異体（ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲ２、ＥＲＢＢ３、ＥＲＢＢ４、ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）、炭酸アンヒドラーゼＩＸ（ＣＡＩＸ）、ＬＭＰ２、エフリンＡ型受容体２（ＥｐｈＡ２）、フコシルＧＭ１、シアリルルイス接着分子（ｓＬｅ）、ガングリオシドＧＭ３（ａＮｅｕ５Ａｃ（２―３）ｂＤＧａｌｐ（１―４）ｂＤＧｌｃｐ（１―１）Ｃｅｒ、ＴＧＳ５、高分子量黒色腫関連抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、ｏ―アセチルＧＤ２ガングリオシド（ＯＡｃＧＤ２）、葉酸受容体、腫瘍血管内皮マーカー１（ＴＥＭ１／ＣＤ２４８）、腫瘍血管内皮マーカー７関連（ＴＥＭ７Ｒ）、Ｃｌａｕｄｉｎ６、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．１、ＡＳＧＰＲ１、ＣＤＨ１６、５Ｔ４、８Ｈ９、αｖβ６インテグリン、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＣＡ９、κ軽鎖（ｋａｐｐａ ｌｉｇｈｔ ｃｈａｉｎ）、ＣＳＰＧ４、ＥＧＰ２、ＥＧＰ４０、ＦＡＰ、ＦＡＲ、ＦＢＰ、胚性ＡｃｈＲ、ＨＬＡ―Ａ１、ＨＬＡ―Ａ２、ＭＡＧＥＡ１、ＭＡＧＥ３、ＫＤＲ、ＭＣＳＰ、ＮＫＧ２Ｄリガンド、ＰＳＣ１、ＲＯＲ１、Ｓｐ１７、ＳＵＲＶＩＶＩＮ、ＴＡＧ７２、ＴＥＭ１、フィブロネクチン、テネイシン、腫瘍壊死領域の癌胚性変異体、Ｇタンパク質カップリング受容体Ｃクラス５グループ―メンバーＤ（ＧＰＲＣ５Ｄ）、Ｘ染色体オープンリーディングフレーム６１（ＣＸＯＲＦ６１）、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、未分化リンパ腫キナーゼ（ＡＬＫ）、ポリシアル酸、胎盤特異的１（ＰＬＡＣ１）、ｇｌｏｂｏＨ ｇｌｙｃｏｃｅｒａｍｉｄｅのヘキソース部分（ＧｌｏｂｏＨ）、乳房分化抗原（ＮＹ―ＢＲ―１）、ｕｒｏｐｌａｋｉｎ２（ＵＰＫ２）、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体１（ＨＡＶＣＲ１）、アドレナリン受容体β３（ＡＤＲＢ３）、ｐａｎｎｅｘｉｎ３（ＰＡＮＸ３）、Ｇタンパク質カップリング受容体２０（ＧＰＲ２０）、リンパ球抗原６複合体遺伝子座Ｋ９（ＬＹ６Ｋ）、嗅覚受容体５１Ｅ２（ＯＲ５１Ｅ２）、ＴＣＲγ交互リーディングフレームタンパク質（ＴＡＲＰ）、ウイルムス腫瘍タンパク質（ＷＴ１）、ＥＴＳトランスロケーションバリアント遺伝子６（ＥＴＶ６―ＡＭＬ）、精子タンパク質１７（ＳＰＡ１７）、Ｘ抗原ファミリーメンバー１Ａ（ＸＡＧＥ１）、アンギオポイエチン結合細胞表面受容体２（Ｔｉｅ２）、黒色腫精巣抗原―１（ＭＡＤ―ＣＴ―１）、黒色腫精巣抗原―２（ＭＡＤ―ＣＴ―２）、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３突然変異体、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）、肉腫移行ブレークポイント、細胞アポトーシスの黒色腫阻害剤（ＭＬ―ＩＡＰ）、ＥＲＧ（膜貫通プロテアーゼセリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）ＥＴＳ融合遺伝子）、Ｎ―アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＶ（ＮＡ１７）、マッチングボックスタンパク質Ｐａｘ―３（ＰＡＸ３）、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、Ｖ―ｍｙｃトリ骨髄症ウイルス腫瘍遺伝子神経芽細胞腫瘍由来ホモログ（ＭＹＣＮ）、ＲａｓホモログファミリーメンバーＣ（ＲｈｏＣ）、チトクロームＰ４５０ １Ｂ１（ＣＹＰ１Ｂ１）、ＣＣＣＴＣ結合因子（亜鉛フィンガータンパク質）様（ＢＯＲＩＳ）、Ｔ細胞によって識別される扁平上皮がん抗原３（ＳＡＲＴ３）、マッチングボックスタンパク質Ｐａｘ―５（ＰＡＸ５）、ｐｒｏａｃｒｏｓｉｎ結合タンパク質ｓｐ３２（ＯＹＴＥＳ１）、リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ（ＬＣＫ）、Ａキナーゼ固定タンパク質４（ＡＫＡＰ―４）、滑膜肉腫Ｘブレークポイント２（ＳＳＸ２）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１）、ＩｇＡ受容体のＦｃフラグメント（ＦＣＡＲ）、白血球免疫グロブリン様受容体サブファミリーメンバー２（ＬＩＬＲＡ２）、ＣＤ３００分子様ファミリーメンバーｆ（ＣＤ３００ＬＦ）、Ｃ型レクチンドメインファミリー１２メンバーＡ（ＣＬＥＣ１２Ａ）、骨髄間質細胞抗原２（ＢＳＴ２）、ＥＧＦ様モジュール含有ムチン様ホルモン受容体様２（ＥＭＲ２）、リンパ球抗原７５（ＬＹ７５）、グリピカン―３（ＧＰＣ３）、Ｆｃ受容体様５（ＦＣＲＬ５）、免疫グロブリンλ様ポリペプチド１（ＩＧＬＬ１）を含むが、これらに限定されない。

病原体抗原は、ウイルス、細菌、真菌、原生動物、または寄生虫抗原から選択され、ウイルス抗原は、サイトメガロウイルス抗原、エプスタインバーウイルス抗原、ヒト免疫不全ウイルス抗原、またはインフルエンザウイルス抗原から選択される。
「腫瘍の不均一性」という用語は、腫瘍が増殖過程において、複数の分裂および増殖を経て、その娘細胞が分子生物学または遺伝的変化を示すことにより、腫瘍の増殖率、浸潤能力、薬剤感受性、予後等の側面で差が発生する。これは、悪性腫瘍の特徴の一つである。

「癌」という用語は、インビトロ（例えば、形質転換細胞）またはインビボでの過剰増殖性細胞増殖を特徴とする広範囲のカテゴリーの障害を指す。本発明の方法によって治療または予防することができる病状は、例えば、良性または悪性腫瘍、様残な過形成等を含む様々な新生物を含む。本発明の方法は、そのような病状に言及される望ましくない過剰増殖性細胞増殖の阻害および／または逆転を達成することができる。癌の具体的な例としては、血液がん、結腸がん、直腸がん、腎細胞がん、肝臓がん、肺の非小細胞がん、小腸がん、食道がん、黒色腫、骨がん、膵臓がん、皮膚がん、頭頚部がん、皮膚または眼内悪性黒色腫、子宮がん、卵巣がん、直腸がん、肛門がん、胃がん、精巣がん、子宮がん、ファロピウス管がん、子宮内膜がん、子宮頸がん、膣がん、外陰がん、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、内分泌系がん、甲状腺がん、副甲状腺がん、副腎がん、軟組織肉腫、尿道がん、陰茎がん、儿童固形腫瘍、膀胱がん、腎がんまたは尿管がん、腎骨盤がん、中枢神経系（ＣＮＳ）がん、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊椎腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、扁平上皮がん、Ｔ細胞リンパ腫、環境により誘発される癌、前記癌の組み合わせおよび前記癌の転移性病状をふくむが、これらに限定されない。

「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」という用語は、外因性核酸が宿主細胞に転移または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」細胞は、外因性核酸でトランスフェクトされ、形質転換され、または形質導入された細胞である。前記細胞は、原発性被験者の細胞およびその子孫を含む。

「特異的に結合する」という用語は、サンプルに存在する結合パートナー（例えば、腫瘍抗原）タンパク質を識別して結合する抗体またはリガンドを指すが、当該抗体またはリガンドは、サンプル内の他の分子を実質的に識別または結合しない。

本明細書で使用される「難治性」とは、治療に反応しない、癌等の疾患を指す。実施形態において、難治性癌は、治療前または開始時の治療における抵抗性であることができる。他の実施形態において、難治性癌は、治療中に耐性になることができる。難治性癌は、耐性がんとも呼ばれる。本発明において、難治性癌は、放射線療法に感受性がない、放射線療法後に再発する、化学療法に感受性がない、化学療法後に再発する、ＣＡＲ―Ｔ治療に感受性がない、または治療後に再発する癌を含むが、これらに限定されない。難治性または再発性悪性腫瘍は、本明細書で説明される治療法案を使用することができる。

本明細書で使用される「再発」とは、例えば、癌治療の以前の治療等の治療後の、改善期間中の疾患（例えば、癌）または癌等の疾患の徴候および症状の再発を指す。
「個体」および「被験者」という用語は、本明細書では同じ意味を有し、ヒトおよび他の種の動物であり得る。「患者」は、疾患、病症または病状を有するか、または疾患、病症または病状に苦しむリスクがあるか、または他の側面で本明細書で提供される組成物および方法を必要とする被験者である。

「増強」という用語は、被験者または腫瘍細胞が本明細書で開示される治療に応答するその能力を改善することを可能にすることを指す。例えば、増強された応答は、応答性の５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％またはそれ以上の増加を含み得る。本明細書で使用されるように、「増強」は、免疫エフェクター細胞療法等の治療に応答する被験者の数を増加させることをさらに指すことができる。例えば、増強された応答は、治療に応答する被験者の合計パーセンテージを指すことができ、ここで、パーセンテージは、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９８％以上である。

一つの態様において、治療は、臨床結果によって判断され、Ｔ細胞の抗腫瘍活性によって増加、増強または延長することができ、治療前の数と比較して、抗腫瘍Ｔ細胞または活性化Ｔ細胞の数の増加は、ＩＦＮ―γ分泌またはその組み合わせの決定を促進する。別の態様において、臨床結果は、腫瘍の退縮、腫瘍の縮小、腫瘍の壊死、免疫系を介した抗腫瘍応答、腫瘍の拡大、再発または拡散またはその組み合わせである。別の態様において、治療効果は、Ｔ細胞の存在、Ｔ細胞の炎症を示す遺伝子マーカーの存在、ＩＦＮ―γ分泌またはその組み合わせによって予測される。

本明細書で開示される細胞は、例えば、経口または例えば、静脈内、筋肉内、皮下、眼窩内、嚢内、腹腔内、直腸内、槽内、腫瘍内、鼻腔内（ｉｎｔｒａｖａｓａｌｌｙ）、皮内または例えば、それぞれ皮膚パッチまたは経皮イオントフォレーシスを使用して、皮膚を介した受動的または促進された吸収等の非経口を含む様々な経路によって個体に投与することができる。

本発明の方法を実施する際に投与される試薬の総量は、ぼーらすとしての単回投与として、または比較的短期間の注入によって対象に投与することができ、または段階的治療方案を使用して投与することができ、ここで、延長期間において、複数の投与量で投与される。当業者は、被験者の病的状態を治療するための組成物の量は、被験者の年齢および一般的な健康、ならびに投与経路および治療の数を含む多くの要因に依存することが分かる。これらの要因を考慮して、技術者は、必要に応じて特定の投与量を調整する。一般的に言えば、最初に、第Ｉ相および第ＩＩ相臨床試験を使用して、組成物の処方ならびに投与の経路および頻度を決定する。

範囲：本開示全体において、本発明の様々な態様は、範囲形態で存在することができる。範囲形態の説明は、単に便宜上および簡潔にするためのものであり、本発明の範囲に対する変更不可能な制限と見なされるべきではないことを理解されたい。従って、範囲の説明は、その範囲内のすべての可能なサブ範囲と個々の値を具体的に開示するものと見なされる必要がある。例えば、１～６等の範囲の説明は、１～３、１～４、１～５、２～４、２～６、３～６等のサブ範囲、および，１、２、２．７、３、４、５、５．３および６等の範囲内の個々の値を具体的に開示することを検討する必要がある。別の例として、９５～９９％の同一性等の範囲は、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する範囲を含み、９６～９９％、９６～９８％、９６～９７％、９７～９９％、９７～９８％および９８～９９％の同一性等のサブ範囲を含む。範囲の幅に関係なく適用される。

本開示の内容に基づいて、当業者は、開示された具体的な実施法案において多くの変化または変更を行うことができ、それでも反発明の精神および範囲から逸脱することなく同じまたは同様の結果を得ることができることを理解すべきである。本発明は、範囲が本明細書で説明される具体的な実施形態（これは、本発明の様々な態様の例示としてのみ意図される）に限定されず、機能的に同等の方法および構成要素が本発明の範囲内にある。事実上、本発明の様々な修飾に加えて、本明細書に示されかつ説明されたものは、前述の説明に基づいて当業者に明らかになるであろう。

ＧＰＣ３およびＧＰＣ３陽性腫瘍
本明細書で使用される「ＧＰＣ３」または「グリピカン３」は、細胞の成長および分化の調節において重要な役割を果たす遺伝子登録番号ＮＭ＿０１６６９７．３、ＮＰ＿０５７９０６．２を有するＧｌｙｐｉｃａｎファミリーのメンバーである。ＧＰＣ３の異常発現は、様々な腫瘍の発生および発症に密接に関連し、例えば、肝臓がん、肺がん、乳がん、卵巣がん、腎臓がん、甲状腺がん、胃がん、結腸直腸がん等で異常に発現する。

本発明において、免疫エフェクター細胞は、ＧＰＣ３陽性に発現する腫瘍を標的とする。具体的な実施形態において、前記腫瘍は、肝臓がん、胃がん、肺がん、食道がん、頭頚部がん、膀胱がん、卵巣がん、子宮頸がん、腎臓がん、膵臓がん、子宮頸がん、脂肪肉瘤、黒色素瘤、副腎がん、神経鞘腫、悪性線維性組織球腫、食道がんをふくむが、これらに限定されない。当業者は、肝臓がん細胞等のいくつかの腫瘍細胞が多くの薬物に感受性がないことを知り、従って、インビトロで有効な薬剤でさえ、インビボで有効ではない、さらに有効でさえない可能性がある。従って、好ましい実施形態において、本明細書に記載のＧＰＣ３陽性発現腫瘍またはＧＰＣ陽性腫瘍は、肝臓がん、胃がん、肺がん、食道がんである。

ＴＣＲ修飾Ｔ細胞
本発明は、ＴＣＲをコードする核酸、または当該核酸を含む前述の組換えプラスミド、または当該プラスミドを含むウイルスで形質導入されるＴＣＲ修飾Ｔ細胞をさらに提供する。非ウイルス性およびウイルス性形質導入法を含む、当技術分野における従来の核酸形質導入法を本発明で使用することができる。非ウイルスに基づく形質導入法は、エレクトロポレーション法およびトランスポゾン法を含む。最近、Ａｍａｘａ社によって開発されたＮｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒ核トランスフェクション機器は、外来遺伝子を核に直接導入して、標的遺伝子の効率的な形質導入を得ることができる。さらに、Ｓｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ ｓｙｓｔｅｍまたはＰｉｇｇｙＢａｃトランスポゾン等のトランスポゾンシステムに基づく形質導入効率は、通常のエレクトロポレーションよりもはるかに高く、ｎｕｃｌｅｏｆｅｃｔｏｒトランスフェクション装置およびＳｌｅｅｐｉｎｇ Ｂｅａｕｔｙ ｓｙｓｔｅｍの併用が報告されており［Ｄａｖｉｅｓ ＪＫ．、ｅｔ ａｌ．Ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ ＣＤ１９ ｒｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ａｌｌｏａｎｅｒｇｉｚａｔｉｏｎ ｔｏ ｇｅｎｅｒａｔｅ ｔｕｍｏｒ―ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｆｏｒ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｃｅｌｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｂ―ｃｅｌｌ ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、２０１０、７０（１０）：ＯＦ１―１０．］、当該方法は、形質導入効率が高いだけでなく、標的遺伝子の標的化された統合を実現することができる。本発明の一つの実施形態において、キメラ抗原受容体の遺伝子修飾を実現する免疫エフェクター細胞の形質導入法は、レトロウイルスまたはレンチウイルス等のウイルスの形質導入法に基づいている。当該方法は、高い形質導入効率、外来遺伝子の安定した発現、および免疫エフェクター細胞を培養してインビトロで臨床レベルに達するまでの時間を檀淑するという利点を有する。当該トランスジェニック免疫エフェクター細胞の表面では、形質導入された核酸は、転写および翻訳を通じてその表面に発現される。様々な培養腫瘍細胞でのインビトロ細胞毒性実験を通じて、本発明のキメラ抗原によって修飾された免疫エフェクター細胞は、非常に特異的な腫瘍細胞死滅效果（細胞毒性とも呼ばれる）を有し、腫瘍組織において効果的に生存することができる。従って、本発明のキメラ抗原受容体をコードする核酸、当該核酸を含むプラスミド、当該プラスミドを含むウイルスおよび上記核酸、プラスミドまたはウイルスが形質導入されたトランスジェニック免疫エフェクター細胞は、腫瘍免疫療法に効果的に使用されることができる。

本発明のＴＣＲ修飾Ｔ細胞は、医薬組成物または診断試薬の調製に適用されることができる。有効量の免疫細胞を含むことに加えて、前記組成物は、薬学的に許容されるベクターをさらに含み得る。「薬学的に許容される」という用語は、分子実体および組成物が動物またはヒトに適切に投与される場合、それらが有害、アレルギーまたは他の有害反応を引き起こさないことを意味する。

薬学的に許容されるベクターまたはその成分として使用されるいくつかの物質の具体的な例としては、例えば、乳糖、ブドウ糖およびショ糖等の糖、例えば、トウモロコシ澱粉およびジャガイモ澱粉等の澱粉、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよびメチルセルロース等のセルロースおよびその誘導体、トラガカントパウダー、モルト、ゼラチン、タルク、例えば、ステアリン酸およびステアリン酸マグネシウム等の固体潤滑剤、硫酸カルシウム、例えば、落花生油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびココア油等の植物油、例えば、プロピレングリコール、グリセロール、ソルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール等のポリオール、アルギン酸、例えば、Ｔｗｅｅｎa等の乳化剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム等の湿潤剤、着色剤、香料、タブレットプレス剤、安定剤、酸化防止剤、防腐剤、パイロジェンフリー水等の等張塩溶液およびリン酸塩緩衝液などである。

本発明の組成物は、必要に応じて様々な剤形にすることができ、医師は、患者のタイプ、年齢、体重、一般的な病状、投与方法、およびその他の要因に従って、患者にとって有益な用量を決定することができる。投与方法は、注射または他の値用方法であり得る。

本発明の利点：
本明細書は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質を使用して癌等の疾患を治療するための材料組成と方法を提供する。本明細書で使用されるように、「Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質」または「ＴＦＰ」は、ＴＣＲを含む様々なポリペプチドに由来する組換えポリペプチドを含み、それは、一般にｉ）標的細胞上の表面抗原に結合し、ｉｉ）通常Ｔ細胞内またはＴ細胞の表面に同じ場所にある場合に、インタクトなＴＣＲ複合体の他のポリペプチド成分と相互作用することができる。本明細書で提供されるように、キメラ抗原受容体とひかくして、ＴＦＰは、腫瘍細胞の増殖を阻害するだけでなく、放出するサイトカインも少なく、サイトカインストームの可能性を効果的に低減する。

以下、本発明は、具体的実施例と併せてされに説明される。これらの実施例は、本発明を説明するためにのみ使用され、本発明の範囲を限定するものではないことを理解されたい。以下の実施例において、具体的条件を示さない実験方法は、通常、例えば、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋら、分子クローニング：実験マニュアル（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、１９８９）、第３版、科学出版社、２００２に記載される条件等の従来の条件、またはメーカーによって提案された条件に従う。本明細書で言及されるすべての刊行物、特許および特許出願は、個々の刊行物、特許または特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示される範囲で、参照により本明細書に組み込まれる。

ＣＡＲを含む本発明の例示的な抗原受容体、ならびに受容体を操作して細胞に導入するための方法は、例えば、中国特許出願公開番号ＣＮ１０７０５８３５４Ａ、ＣＮ１０７４６０２０１Ａ、ＣＮ１０５１９４６６１Ａ、ＣＮ１０５３１５３７５Ａ、ＣＮ１０５７１３８８１Ａ、ＣＮ１０６１４６６６６Ａ、ＣＮ１０６５１９０３７Ａ、ＣＮ１０６５５４４１４Ａ、ＣＮ１０５３３１５８５Ａ、ＣＮ１０６３９７５９３Ａ、ＣＮ１０６４６７５７３Ａ、ＣＮ１０４１４０９７４Ａ、国際特許出願公開番号ＷＯ２０１７１８６１２１Ａ１、ＷＯ２０１８００６８８２Ａ１、ＷＯ２０１５１７２３３９Ａ８、ＷＯ２０１８／０１８９５８Ａ１に開示されている方法を参照する。

実施例１．ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞の構築
当技術分野における従来の分子生物学的方法を使用し、本実施例で使用されるｓｃＦｖは、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２を標的とする抗体であり、アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１に示される。

１．プラスミドの構築
ＰＲＲＬＳＩＮ―ｃＰＰＴ．ＥＦ―１α（ａｄｄｇｅｎｅから購入）をベクターとして、異なる長さのリンカーを挿入することによって接続された抗Ｃａｌｕｄｉｎ１８．２の一本鎖抗体とＣＤ３εまたはＣＤ３γとは、四つの異なる抗Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２のレンチウイルスプラスミドを形成する（図１Ａ）。

ｐＲＲＬＳＩＮ―ｃＰＰＴ．ＥＦ―１α―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３εは、抗ｃｌｕａｄｉｎ１８．２の一本鎖抗体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、長いリンカー（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）、ＣＤ３ε（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）を順序に接続する。この三つのフラグメントの遺伝子配列一本鎖抗体ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）、長いリンカー（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）およびＣＤ３ε（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）は、ブリッジングＰＣＲによって接続されて形成され、制限酵素ＭｌｕＩ＆ＳａｌＩで二重消化して、フラグメントｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３ε（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）を形成する。制限酵素ＭｌｕＩ＆ＳａｌＩでベクターを二重消化して、線形化ベクターｐＲＲＬ―ＭｌｕＩ＆ＳａｌＩを得て、相同リコンビナーゼを使用してベクターとフラグメントとの環状化を切断して、プラスミドｐＲＲＬ―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３εを形成する。

ｐＲＲＬＳＩＮ―ｃＰＰＴ．ＥＦ―１α―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３γは、抗ｃｌｕａｄｉｎ１８．２の一本鎖抗体ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、長いリンカー（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）、ＣＤ３γ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）を順序に接続する。この三つのフラグメントの遺伝子配列一本鎖抗体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）、長いリンカー（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）およびＣＤ３γ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）は、ブリッジングＰＣＲによって接続されて形成され、制限酵素ＭｌｕＩ＆ＳａｌＩを使用して二重消化し、フラグメントｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３γ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）を形成する。制限酵素ＭｌｕＩ＆ＳａｌＩでベクターを二重消化して、線形化ベクターｐＲＲＬ―ＭｌｕＩ＆ＳａｌＩを得て、相同リコンビナーゼを使用してベクターとフラグメントとの環状化を切断して、プラスミドｐＲＲＬ―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３γを形成する。

ｐＲＲＬＳＩＮ―ｃＰＰＴ．ＥＦ―１α―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３εは、抗ｃｌｕａｄｉｎ１８．２の一本鎖抗体ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、短いリンカー（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ＣＤ３ε（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）を順序に接続する。この三つのフラグメントの遺伝子配列一本鎖抗体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）、短いリンカー（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）およびＣＤ３ε（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）は、ブリッジングＰＣＲによって接続されて形成され、制限酵素ＭｌｕＩ＆ＳａｌＩを使用して二重消化し、フラグメントｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３ε（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）を形成する。制限酵素ＭｌｕＩ＆ＳａｌＩでベクターを二重消化して、線形化ベクターｐＲＲＬ―ＭｌｕＩ＆ＳａｌＩを得て、相同リコンビナーゼを使用してベクターとフラグメントとの環状化を切断して、プラスミドｐＲＲＬ―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３εを形成する。

ｐＲＲＬＳＩＮ―ｃＰＰＴ．ＥＦ―１α―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３γは、抗ｃｌｕａｄｉｎ１８．２の一本鎖抗体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、短いリンカー（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ＣＤ３γ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）を順序に接続する。この三つのフラグメントの遺伝子配列一本鎖抗体ｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）、短いリンカー（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）およびＣＤ３γ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）は、ブリッジングＰＣＲによって接続されて形成され、制限酵素ＭｌｕＩ＆ＳａｌＩを使用して二重消化し、フラグメントｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３γ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）を形成する。制限酵素ＭｌｕＩ＆ＳａｌＩでベクターを二重消化して、線形化ベクターｐＲＲＬ―ＭｌｕＩ＆ＳａｌＩを得て、相同リコンビナーゼを使用してベクターとフラグメントとの環状化を切断して、プラスミドｐＲＲＬ―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３γを形成する。

２．ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞の調製
１）培養皿に２９３Ｔ細胞を接種し、当技術分野の従来の技術を使用し、それぞれプラスミドｐＲＲＬ―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３ε、ｐＲＲＬ―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３γ、ｐＲＲＬ―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３ε、ｐＲＲＬ―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３γを使用して、２９３Ｔ細胞をトランスフェクトし、７２時間トランスフェクトした後、ウイルス上清液を収集し、それぞれレンチウイルスｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３ε、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３γ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３ε、およびｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３γを得る。

２）末梢血単球（ＰＢＭＣ）は、標準的な手順に従ってフィコール密度勾配遠心分離法によって健康なドナーの血液から分離される。約１×１０^６／ｍＬの密度で、ＡＩＭ―Ｖ培地（２％ヒトＡＢ血清を含む）を培養し、かつ細胞：１：１の磁気ビーズ比率でＣＤ３／ＣＤ２８活性化磁気ビーズ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）と最終濃度が３００Ｕ／ｍＬである組換えヒトＩＬ―２を加えて４８時間刺激培養する。次に、ＭＯＩ＝１０で上記で構築された組換えレンチウイルスにＴ細胞を感染させて、ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞であるｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３ε細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３γ細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３ε細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３γ細胞を得る。

フローサイトメトリーによって検出され、結果は、図１Ｂに示され、陽性率は、すべて７０％以上である。
陽性率の検出方法は、次のとおりである。一次抗体：ｃｌａｕｄｉｎ１８．２抗体―Ｂｉｏｔｉｎ―Ｆ（ａｂ）２（科剤生物医薬（上海）株式会社）、濃度２０ｕｇ／ｍｌを使用し、氷上で４５分間インキュベートし、二次抗体：Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ＰＥ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社）（１：２００）、氷上で４５分間インキュベートする。注：一次抗体および二次抗体は、すべてＰＢＳ＋１％ＦＢＳを使用して１回洗浄する。

実施例２．インビトロ死滅毒性検出およびインビトロサイトカイン分泌検出
ＣｙｔｏＴｏｘ９６非放射性細胞毒性検出キット（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を使用する。具体的な方法は、ＣｙｔｏＴｏｘ９６非放射性細胞毒性検出キット取扱説明書を参照する。

標的細胞の数は、（ＢｘＰＣ―３：１５０００／ウェル、ＨＧＣ―２７：１００００／ウェル）であり、３：１、１：１または１：３のエフェクター：ターゲット比に従って、エフェクター細胞と１８時間共培養して、（１６４０＋５％ＦＢＳ、２００ｕｌシステム）を検出し、エフェクター細胞は、それぞれＵｎｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ（ＵＴＤ）Ｔ細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―２８Ｚ（ＣＮ１０５３１５３７５Ａの構築方法を参照する）、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＢＢＺ（ＣＮ１０５３１５３７５Ａの構築方法を参照する）、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３ε細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３γ細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３ε細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３γ細胞である。従来の分子生物学技術を使用して、ヒトｃｌａｕｄｉｎ１８．２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４）フラグメントを、それぞれ膵臓がん細胞Ｂｘｐｃ―３（ＡＴＣＣから購入）、胃がん細胞ＨＧＣ―２７（ＡＴＣＣから購入）に導入して、ヒトｃｌａｕｄｉｎ１８．２タンパク質を発現するＢｘｐｃ―３―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２およびＨＧＣ―２７―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２細胞を構築する。

実験結果は、図２に示され、標的抗原が陽性であるＢｘｐｃ―３―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２およびＨＧＣ―２７―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―２８Ｚ，ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＢＢＺ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３ε細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３γ細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３ε細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３γ細胞は、すべて非常に有意な特異的細胞毒性を示し、勾配に依存するエフェクター：ターゲット比を示し、即ち、エフェクター：ターゲット比が高いほど、細胞毒性が強くなり、Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２を発現しないＢｘｐｃ―３およびＨＧＣ―２７細胞に対する特異的な細胞毒性はない。ここで、エフェクター：ターゲット比が３：１である場合、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―２８Ｚ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＢＢＺ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３ε細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３γ細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３ε細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３γ細胞のＢｘｐｃ―３―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２に対する細胞毒性は、それぞれ５９．６６％、４５．７７％、５９．５１％、５７．３４％、６３．９１％、５８．１０％であり、ＨＧＣ―２７―ｃｌａｕｄｉｎ１８．２に対する細胞毒性は、それぞれ４６．１８％、４７．９３％、５０．５６％、４２．７１％である。第２世代ＣＡＲ Ｔ細胞ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―２８Ｚおよびｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＢＢＺと比較して、ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞は、標的細胞に対する毒性死滅の差がほとんどない。

ＣＢＡキット（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞と膵臓がんＢｘＰＣ―３、ＢｘＰＣ―３―Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２、および胃がんＨＧＣ―２７、ＨＧＣ―２７―Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２とを共培養した後のサイトカインの分泌状況を検出し、１：１のエフェクター：ターゲット比で２４時間培養し、細胞培養上清中のサイトカインの発現を検出し、結果は、図３に示される。

Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２を過剰発現する標的細胞ＢｘＰＣ―３―Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２およびＨＧＣ―２７―Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２を共培養する場合、ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞は、大量のＩＦＮ―γ、ＩＬ―２およびＴＮＦ―αを分泌することができ、ここで、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３γ細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３γがこの三つのサイトカインを分泌する量は、すべてＣＤ３ε ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３ε細胞、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３ε細胞（表１を詳細に参照）よりも少ない。しかし、第２世代ＣＡＲ Ｔ細胞ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―２８Ｚおよびｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＢＢＺと比較して、ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞分泌サイトカインの量は、有意に減少する。Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２を発現しない細胞ＢｘＰＣ―３およびＨＧＣ―２７細胞を共培養する場合、上記サイトカインの分泌は、ほとんど検出されない。

実施例３．皮下移植腫瘍の抗腫瘍治療実験
ＨＧＣ２７―Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２胃がん細胞のＮＰＧマウス皮下移植腫瘍
３×１０^６の胃がん細胞ＨＧＣ２７―Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２を雌ＮＰＧマウス（北京維通達生物技術株式会社）の右腋窩の皮下にそれぞれ接種し、接種日記は、Ｄ０である。

腫瘍組織の皮下接種のＤ１７日後で、腫瘍の平均体積は、約２７０ｍｍ^３であり、移植腫瘍マウスをＵＴＤグループ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３ε細胞グループ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３ γ細胞グループ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３ε細胞グループおよびｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３ γ細胞グループ等の五つのグループに分け、ＴＣＲ融合タンパク質を発現する対応するＴ細胞をそれぞれ注射し、注射用量は、５×１０^５細胞／匹である。ＵＴＤグループは、５×１０^５細胞／匹の非形質導入Ｔ細胞を注射して対照する。

ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞の投与後、ＨＧＣ２７―Ｃｌａｕｄｉｎ１８．２移植腫瘍の体積を３～４日ごとに測定し、各グループのマウス腫瘍体積の変化を記録し、腫瘍体積の計算式は、（長さ×幅^２）／２である。結果は、図に示される。

ＴＣＲ融合タンパク質のＴ細胞注射のＤ２１日後に、マウスを安楽死させる。ＵＴＤグループと比較して、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３ε細胞の腫瘍阻害率は、４０．４２％であり、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３ γ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３ε細胞およびｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３ γ細胞の腫瘍阻害率は、すべてｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３ε細胞より低い。マウスの体重変化過程を記録したところ、各グループのマウスの体重に有意な鎖は見られなかった。免疫完全性Ｃ５７ＢＬ／６マウスの肝臓がんモデルにおいて、ＵＴＤグループと比較して、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３ γ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３ε、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＬＬ―ＣＤ３ γ、ｃｌａｕｄｉｎ１８．２―ＳＬ―ＣＤ３ε細胞の腫瘍阻害率は、約２５～４５％である。

実施例４．ＧＰＣ３を標的とするＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞の構築
当技術分野における従来の分子生物学的方法を使用し、本実施例で使用されるｓｃＦｖは、ＧＰＣ３を標的とする抗体であり、アミノ酸配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３に示され、ヌクレオチド配列は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４に示される。

１．プラスミドの構築
ｐＭＳＣＶ（ａｄｄｇｅｎｅから購入）をベクターとして、短いリンカーを挿入することによって接続された抗ＧＰＣ３の一本鎖抗体ＧＰＣ３とＣＤ３εとは、抗ＧＰＣ３のレトロウイルスプラスミドを形成する。

抗ＧＰＣ３の一本鎖抗体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）、短いリンカー（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、ｍＣＤ３ε（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）を順序に接続する。この三つのフラグメントの遺伝子配列一本鎖抗体（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、短いリンカー（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）およびｍＣＤ３ε（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５）は、ブリッジングＰＣＲによって接続されてフラグメントＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）を形成する（図１Ａ）。制限酵素ＥｃｏＲＩ＆ＨｉｎｄＩＩＩでベクターを二重消化して、線形化ベクターｐＭＳＣＶ―ＥｃｏＲＩ＆ＨｉｎｄＩＩＩを得て、相同リコンビナーゼを使用してベクターとフラグメントとの環状化を切断して、プラスミドｐＭＳＣＶ―ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３εを形成する。

ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３εは、Ｆ２Ａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）およびｍＣＣＬ２１ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）を順序に接続する。遺伝子配列Ｆ２Ａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）およびｍＣＣＬ２１ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）は、ブリッジングＰＣＲによって接続されてＦ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂを形成する。制限酵素ＥｃｏＲＩ＆ＨｉｎｄＩＩＩでベクターを二重消化して、線形化ベクターｐＭＳＣＶ―ＥｃｏＲＩ＆ＨｉｎｄＩＩＩを得て、相同リコンビナーゼを使用してベクターとフラグメントＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε、Ｆ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂとの環状化を切断して、プラスミドｐＭＳＣＶ―ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂを形成する（図１Ａ）。

ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３εは、Ｆ２Ａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）およびｍＩＬ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）を順序に接続する。遺伝子配列Ｆ２Ａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）およびｍＩＬ７（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）は、ブリッジングＰＣＲによって接続されてＦ２Ａ―ｍＩＬ７を形成する。遺伝子配列Ｐ２Ａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）およびｍＣＣＬ２１ｂ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）は、ブリッジングＰＣＲによって接続されてＰ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂを形成する。制限酵素ＥｃｏＲＩ＆ＨｉｎｄＩＩＩでベクターを二重消化して、線形化ベクターｐＭＳＣＶ―ＥｃｏＲＩ＆ＨｉｎｄＩＩＩを得て、相同リコンビナーゼを使用してベクターとフラグメントＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε、Ｆ２Ａ―ｍＩＬ７、Ｐ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂとの環状化を切断して、プラスミドｐＭＳＣＶ―ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＩＬ７―Ｐ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂを形成する（図１Ａ）。

ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３εは、ＮＦＡＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）、ｍＩＬ２ Ｍｉｎｉｍａｌ Ｐｒｏｍｏｔｅｒ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６）、ｍＩＬ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）およびＰＡ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２）を接続し、この四つのフラグメントの遺伝子配列ＮＦＡＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５）、ｍＩＬ２ Ｍｉｎｉｍａｌ Ｐｒｏｍｏｔｅｒ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７）、ｍＩＬ１２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９）およびＰＡ２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３）は、ブリッジングＰＣＲによって接続されてＮＦＡＴ―ｍＩＬ１２―ＰＡ２を形成する。制限酵素ＥｃｏＲＩ＆ＨｉｎｄＩＩＩでベクターを二重消化して、線形化ベクターｐＭＳＣＶ―ＥｃｏＲＩ＆ＨｉｎｄＩＩＩを得て、相同リコンビナーゼを使用してベクターとフラグメントＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε、ＮＦＡＴ―ｍＩＬ１２―ＰＡ２との環状化を切断して、プラスミドｐＭＳＣＶ―ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―ＮＦＡＴ―ｍＩＬ１２を形成する（図１Ａ）。

ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３εは、Ｆ２Ａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）およびｍＲｕｎｘ３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０）を順序に接続する。この二つのフラグメントの遺伝子配列Ｆ２Ａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）およびｍＲｕｎｘ３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１）は、ブリッジングＰＣＲによって接続されてＦ２Ａ―ｍＲｕｎｘ３を形成する。制限酵素ＥｃｏＲＩ＆ＨｉｎｄＩＩＩでベクターを二重消化して、線形化ベクターｐＭＳＣＶ―ＥｃｏＲＩ＆ＨｉｎｄＩＩＩを得て、相同リコンビナーゼを使用してベクターとフラグメントＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε、Ｆ２Ａ―ｍＲｕｎｘ３との環状化を切断して、プラスミドｐＭＳＣＶ―ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＲｕｎｘ３を形成する（図１Ａ）。

２．ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞の構築
１）培養皿に２９３Ｔ細胞を接種し、当技術分野の従来の技術を使用し、それぞれプラスミドｐＭＳＣＶ―ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε、ｐＭＳＣＶ―ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂ、ｐＭＳＣＶ―ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＩＬ７―Ｐ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂ、ｐＭＳＣＶ―ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―ＮＦＡＴ―ｍＩＬ１２、またはｐＭＳＣＶ―ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＲｕｎｘ３を使用して、２９３Ｔ細胞をトランスフェクトし、４８時間トランスフェクトした後、ウイルス上清液を収集し、レトロウイルスＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂ、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε― Ｆ２Ａ―ｍＩＬ７―Ｐ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂ、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε― ＮＦＡＴ―ｍＩＬ１２、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε― Ｆ２Ａ―ｍＲｕｎｘ３を得る。

２）マウスＴ細胞を上記レトロウイルスにそれぞれ感染させて、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε細胞、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂ細胞、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＩＬ７―Ｐ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂ細胞、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―ＮＦＡＴ―ｍＩＬ１２細胞、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε― Ｆ２Ａ―ｍＲｕｎｘ３細胞を得る。
陽性率検出の結果は、図４にしめされ、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂ、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＩＬ７―Ｐ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂの陽性率は、７０％以上である。ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε― ＮＦＡＴ―ｍＩＬ１２の陽性率は、３０％以上である。ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＲｕｎｘ３細胞の陽性率は、５０％以上である。

陽性率の検出方法は、次のとおりである。一次抗体：抗ＧＰＣ３抗体―Ｂｉｏｔｉｎ―Ｆ（ａｂ）２（科剤生物医薬（上海）株式会社）、濃度２０ｕｇ／ｍｌを使用し、氷上で４５分間インキュベートし、二次抗体：Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ＰＥ（１：２００）、氷上で４５分間インキュベートする。

実施例５．インビトロ死滅毒性検出およびインビトロサイトカイン分泌検出
ＣｙｔｏＴｏｘ９６非放射性細胞毒性検出キット（Ｐｒｏｍｅｇａ社）を使用する。具体的な方法は、ＣｙｔｏＴｏｘ９６非放射性細胞毒性検出キット取扱説明書を参照する。従来の分子生物学技術を使用して、マウスのＧＰＣ３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５）フラグメントを肝臓がん細胞Ｈｅｐａ １―６（中国科学アカデミー細胞収集センター（上海））に導入して、マウスのＧＰＣ３タンパク質を発現するＨｅｐａ １―６ ＧＰＣ３細胞に構築する。

標的細胞の数は、（Ｈｅｐａ １―６：１００００／ウェル、Ｈｅｐａ １―６ ＧＰＣ３：１００００／ウェル）であり、１：１、１：３のエフェクター：ターゲット比に従って、エフェクター細胞と１８時間共培養して、（１６４０＋１０％ＦＢＳ、２００ｕｌシステム）を検出し、エフェクター細胞は、それぞれＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞のＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε細胞、ＧＰＣ３―ＳＬ―ＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂ細胞、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＩＬ７―Ｐ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂ細胞、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―ＮＦＡＴ―ｍＩＬ１２細胞、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＲｕｎｘ３細胞、Ｕｎｔｒａｎｓｄｕｃｅｄ（ＵＴＤ）Ｔ細胞である。

実験結果は、図５にしめされ、ＧＰＣ３を発現しないＨｅｐａ １―６細胞に対して、上記ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞は、異なるエフェクター：ターゲット比の状況下ですべて細胞毒性死滅効果がない。標的抗原ＧＰＣ３を発現するＨｅｐａ １―６ ＧＰＣ３細胞にたいして、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε細胞、ＧＰＣ３―ＳＬ―ＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂ細胞、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＩＬ７―Ｐ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂ細胞、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―ＮＦＡＴ―ｍＩＬ１２細胞、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＲｕｎｘ３細胞は、すべてより優れた死滅を実現し、非常に有意な特異的細胞毒性を示し、勾配に依存するエフェクター：ターゲット比を示し、即ち、エフェクター：ターゲット比が高いほど、細胞毒性が強くなり、ここで、エフェクター：ターゲット比が１：１である場合、Ｈｅｐａ １―６ ＧＰＣ３に対する細胞毒性は、それぞれ、７０．７％、７３．２％、７３．４％、９１．５％、８２．２％である。
ＥＬＩＳＡを使用して、ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞と肝臓がんＨｅｐａ １―６ ＧＰＣ３とを共培養した後のサイトカインの分泌状況を検出し、１：１のエフェクター：ターゲット比で２４時間共培養し、細胞培養上清中のサイトカインの発現を検出し、ＩＦＮ―γ、Ｇｒａｎｚｙｍｅ―Ｂ、ＩＬ２、ＴＮＦ―αおよびＧＭ―ＣＳＦの分泌状況は、それぞれ図６Ａ、６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ、６Ｅに示され、ここで、Ｇｒａｎｚｙｍｅ―Ｂは、Ｔ細胞の脱顆粒を表し、ＧＭ―ＣＳＦは、Ｔ細胞の活性化後に放出されるサイトカインである。

ＧＰＣ３を過剰発現する標的細胞Ｈｅｐａ １―６ ＧＰＣ３を共培養する場合、ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞は、大量のＩＦＮ―γ、Ｇｒａｎｚｙｍｅ―Ｂを分泌し、ここで、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―ＮＦＡＴ―ｍＩＬ１２の分泌の量は、他のグループより高い。

実施例６．皮下移植腫瘍の抗腫瘍治療実験
１．Ｈｅｐａ １―６ ＧＰＣ３肝臓がん細胞のＣ５７ＢＬ／６マウス皮下移植腫瘍
１×１０^７の肝臓がん細胞Ｈｅｐａ １―６ ＧＰＣ３を雌Ｃ５７ＢＬ／６マウス（上海Ｘｉｐｕｅｒ－Ｂｉｋａｉ実験動物株式会社）の右腋窩の皮下にそれぞれ接種し、接種日記は、Ｄ０である。
腫瘍組織の皮下接種のＤ７日後に、腫瘍の平均体積は、約３５５～３７３ｍｍ^３である。ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞を１．５×１０^６細胞／匹の注射用量でテール静脈に注射した。ブランク対照グループは、１．５×１０^６細胞／匹を注射した。

ＴＣＲ融合タンパク質を発現するＴ細胞の投与後、Ｈｅｐａ １―６ ＧＰＣ３移植腫瘍の体積を３～４日ごとに測定し、各グループのマウス腫瘍体積の変化を記録し、腫瘍体積の計算式は、（長さ×幅^２）／２である。結果は、図７に示され、腫瘍接種２１日後に、ＵＴＤグループと比較して、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε、ＧＰＣ３―ＳＬ―ＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂ、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＩＬ７―Ｐ２Ａ―ｍＣＣＬ２１ｂ、ＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―ＮＦＡＴ―ｍＩＬ１２およびＧＰＣ３―ＳＬ―ｍＣＤ３ε―Ｆ２Ａ―ｍＲｕｎｘ３の治療グループの腫瘍阻害率は、それぞれ３９．９％，２５．３％，８５．７５％，８５．８％および７３．７％である。
マウス体重は、対照グループと比較して有意な変化はなく、結果は、図８に示される。

本発明で言及されたすべての文書は、あたかも各文書が個別に参照として引用されたかのように、本出願における参照として引用される。さらに、本発明の上記の教示内容を読んだ後、当業者は本発明に様々な変更または修正を加えることができ、これらの同等の形態も、本出願の添付の請求範囲によって定義される範囲に含まれる。

Claims (17)

1. Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）であって、
   前記融合タンパク質は、
   （ａ）ＴＣＲサブユニット（またはＴＣＲユニットと呼ばれる）、および
   （ｂ）抗原を識別する抗原識別ユニットを含み、
   前記抗原は、ＧＰＣ３またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２であり、
   ここで、前記ＴＣＲサブユニットと前記抗原識別ユニットとは、操作可能に接続されることを特徴とする、前記Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）融合タンパク質（ＴＦＰ）。
2. 前記ＴＣＲサブユニットは、
   （ｉ）ＴＣＲ細胞外ドメインの少なくとも一部、および
   （ｉｉ）ＣＤ３ε、ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、ＴＣＲαまたはＴＣＲβの細胞内シグナル伝達ドメインに由来する刺激性ドメインを含むＴＣＲ細胞内ドメインを含むことを特徴とする
   請求項１に記載の融合タンパク質。
3. ＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、次の表に示される軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、および／またはＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、次の表に示される重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、
   

   

   または、
   ｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、次の表に示される軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、および／またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、次の表に示される重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有することを特徴とする
   

   

   請求項１に記載の融合タンパク質。
4. ＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖可変領域は、次の表に示される軽鎖可変領域から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、および／またはＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する重鎖可変領域は、次の表に示される重鎖可変領域から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、
   

   

   または、
   ｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖可変領域は、次の表に示される軽鎖可変領域から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、および／またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する重鎖可変領域は、次の表に示される重鎖可変領域から独立して選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有することを特徴とする
   

   

   

   請求項１に記載の融合タンパク質。
5. ＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、次の表のいずれかの行に示される軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の組み合わせであるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、および／またはＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、次の表のいずれかの行に示される重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の組み合わせであるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、
   

   

   または
   ｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３は、次の表のいずれかの行に示される軽鎖ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３の組み合わせであるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、および／またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３は、次の表のいずれかの行に示される重鎖ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３の組み合わせであるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有することを特徴とする
   

   

   請求項１に記載の融合タンパク質。
6. ＧＰＣ３の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、次の表のいずれかの行に示される軽鎖可変領域および重鎖可変領域の組み合わせであるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、
   

   

   

   または、
   ｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットのアミノ酸配列を識別する軽鎖可変領域および重鎖可変領域は、次の表のいずれかの行に示される軽鎖可変領域および重鎖可変領域の組み合わせであるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有することを特徴とする
   

   

   請求項１に記載の融合タンパク質。
7. ＧＰＣ３の抗原識別ユニットを識別するアミノ酸配列は、次の表に示される配列から選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有し、
   

   

   または、
   ｃｌａｕｄｉｎ１８．２の抗原識別ユニットを識別するアミノ酸配列は、次の表に示される配列から選択されるか、またはそれと７０～１００％の配列同一性を有することを特徴とする
   

   

   

   請求項１に記載の融合タンパク質。
8. 請求項１～７のいずれか１項に記載の融合タンパク質と他の因子との組み合わせであって、
   前記他の因子は、サイトカイン、転写因子、ケモカイン、および／またはその組み合わせを含み、発現カセットは、構成性発現または誘導性発現であり、好ましくは、前記発現カセットのプロモーターは、免疫細胞誘導性プロモーターであり、好ましくは、前記免疫細胞誘導性プロモーターは、ＮＦＡＴ６プロモーターであり、好ましくは、前記ＮＦＡＴ６プロモーターは、逆調節であることを特徴とする、前記請求項１～７のいずれか１項に記載の融合タンパク質と他の因子との組み合わせ。
9. 核酸分子であって、
   前記核酸分子は、請求項１～７のいずれか１項に記載の融合タンパク質または請求項８に記載の組み合わせを発現することを特徴とする、前記核酸分子。
10. ベクターであって、
    請求項９に記載の核酸分子を含むことを特徴とする、前記ベクター。
11. 細胞であって、
    請求項１０に記載のベクターが含まれるか、またはそのゲノムに請求項９に記載の核酸分子が統合されることを特徴とする、前記細胞。
12. タンパク質複合体であって、
    ｉ）請求項１～７のいずれか１項に記載の融合タンパク質ＴＦＰ分子、および
    ｉｉ）少なくとも一つの内因性ＴＣＲサブユニットまたは内因性ＴＣＲ複合体を含むことを特徴とする、前記タンパク質複合体。
13. 細胞を調製する方法であって、
    前記方法は、請求項１０に記載のベクターまたは請求項９に記載の核酸分子を使用してＴ細胞を形質導入する段階を含むことを特徴とする、前記細胞を調製する方法。
14. ＲＮＡ工学操作された細胞集団を生成する方法であって、
    前記方法は、インビトロで転写されたＲＮＡまたは合成ＲＮＡを細胞に導入する段階を含み、
    （ｉ）ここで、前記ＲＮＡは、請求項９に記載の核酸を含むことを特徴とする、前記ＲＮＡ工学操作された細胞集団を生成する方法。
15. 哺乳動物の体内で抗腫瘍免疫性を提供する方法であって、
    前記方法は、有効量の請求項１～７のいずれか１項に記載の融合タンパク質、請求項８に記載の組み合わせ、請求項９に記載の核酸分子、請求項１０に記載のベクターまたは請求項１１に記載の細胞を前記哺乳動物に投与する段階を含むことを特徴とする、前記哺乳動物の体内で抗腫瘍免疫性を提供する方法。
16. ＧＰＣ３またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２発現に関連する疾患に罹患している哺乳動物を治療する方法であって、
    前記方法は、有効量の請求項１～７のいずれか１項に記載の融合タンパク質、請求項８に記載の組み合わせ、請求項９に記載の核酸分子、請求項１０に記載のベクターまたは請求項１１に記載の細胞を前記哺乳動物に投与する段階を含むことを特徴とする、前記ＧＰＣ３またはｃｌａｕｄｉｎ１８．２発現に関連する疾患に罹患している哺乳動物を治療する方法。
17. 薬物として使用される、前記請求項１～７のいずれか１項に記載の融合タンパク質、請求項８に記載の組み合わせ、請求項９に記載の核酸分子、請求項１０に記載のベクターまたは請求項１１に記載の細胞。
    

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