JP2022523600A - グルテン不耐性の治療管理のための方法および組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2019年4月2日に出願された、米国仮出願第62/827,955号からの優先権を主張するPCT出願である。
グルテン不耐性の管理のためのプロバイオティクスの使用は、文献において既に報告されている。
1. Samsel A, Seneff S, Glyphosate, pathways to modern diseases II: Celiac sprue and gluten intolerance. Interdiscip Toxicol. 2013 6(4):159-84. doi: 10.2478/intox-2013-0026.
2. De Angelis M, Rizzello CG, Fasano A, Clemente MG, De Simone C, Silano M, De Vincenzi M, Losito I, Gobbetti M. VSL#3 probiotic preparation has the capacity to hydrolyze gliadin polypeptides responsible for Celiac Sprue. Biochim Biophys Acta. 1762(1):80-3. Epub 2005 Oct 21
3. Wei G, Tian N, Siezen R, Schuppan D, Helmerhorst EJ (2016) Identification of food-grade subtilisin’s as gluten-degrading enzymes to treat celiac disease. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 311(3): G571-580.
しかし、プロバイオティクスまたはその生成物の生物学的な影響は株に特異的であり、属、種および株間で一般化することはできないことが当科学技術分野において周知である(Probiotics: In Depth/NCCIH, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health)。従って、グルテンの利用および除去の可能性が向上した優れたプロバイオティクス株を見出す必要性がある。本発明は、グルテン不耐性の管理および食料品からのグルテンの除去の向上に対する、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスMTCC5856の治療上の可能性を開示することによって、上記の課題を解決する。本発明はまた、上記の使用のための、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスおよび多酵素複合体を含む相乗的な組み合わせを開示する。
本発明の別の目的は、哺乳動物においてグルテンの利用を促進させるための、単独のまたは多酵素複合体と組み合わせた、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスの使用を開示することである。
本発明のさらに別の目的は、哺乳動物においてグルテン不耐性および関連状態を治療管理するための、単独のまたは多酵素複合体と組み合わせた、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスの使用を開示することである。
本発明は上記で言及した目的を解決し、さらに関連する利点を提供する。
生物材料の寄託
本発明は、グルテンに富む食物中のグルテン分を低減させるための、単独のまたは多酵素複合体と組み合わせた、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスの可能性を開示する。
本発明は、哺乳動物においてグルテンの利用を増進させるための、単独のまたは多酵素複合体と組み合わせた、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスの可能性をさらに開示する。
本発明は、バチルス・コアグランスおよび多酵素複合体を含む組成物を使用してグルテン不耐性および関連状態を管理するための方法をさらに開示する。
本発明の他の特徴および利点が、本発明の原理を例により示す以下のより詳細な説明から明らかになるであろう。
本明細書に含まれる下記の具体例は、前述の本発明の最も好ましい実施形態を例示する。
培地中でのバチルス・コアグランスMTCC5856によるグルテン(GL)の利用
方法
VeratoxのグリアジンR5は、サンドイッチ酵素結合免疫吸着測定法(S-ELISA)である。グリアジンは、60%のエタノール溶液を用いて、振とう機で振とうすることによって試料から抽出する。150μLの対照と抽出した試料をトランスファーウェルに添加した。次いで、100μLを抗体ウェルに移し、10分間インキュベートし、平らな面上で前後に滑らせるように動かすことにより20秒間混合し、抗体ウェルから液体を取り除いた。12チャネルピペッターを使用して試薬ボートから100μLのコンジュゲートを抗体ウェルに移し、平らな面上で前後に滑らせるように動かすことにより20秒間混合し、10分間インキュベートした。インキュベーション後、12チャネルピペッターを使用して試薬ボートから抗体ウェルへと100μLの基質を前記溶液に添加し、10分間インキュベートした。平らな面上で前後に滑らせるように動かすことによって20秒間よく混合した。さらに試薬ボートから100μLのred Stopを抗体ウェルに移し、よく混合し、マイクロウェル読み取り装置において結果を読み取った。青色の発現は、試料が高レベルのグリアジンを含有していることを示す一方、紫または赤の試料はグリアジンをほとんど含有していない、または全く含有していないことを示す。対照の光学密度で標準曲線を作成し、該曲線に対して試料の光学密度をプロットして百万分率(ppm)におけるグリアジンの正確な濃度を計算する。
試験データは、バチルス・コアグランスMTCC5856が、栄養源として小麦グルテンを発酵させながら増殖する能力を有することを示唆した(図1)。
バチルス・コアグランスがグリアジン分を除去する可能性に関しては、バチルス・コアグランスMTCC5856の芽胞および栄養細胞の両方が、培地からグリアジン分を顕著に除去した(図2)。
コムギ粉(WF)中でのバチルス・コアグランスMTCC5856によるグルテンの利用
方法
B.コアグランスMTCC5856を、培地(組成:5g/l 動物組織のペプシン消化物、5g/l 酵母抽出液、2g/l ブドウ糖、0.5g/l リン酸二カリウム、0.5g/l リン酸一カリウム、0.3g/l 硫酸マグネシウムおよび0.3g/l 塩化ナトリウム、0.1g/l 硫酸マンガン pH6.5)中で増殖させた。48時間のインキュベーション後、250mLのシードを生理食塩水で2回洗浄し、最後に得られたペレットを10mLの生理食塩水と混合し、新鮮な滅菌培地に移した。
24時間のインキュベーション後、シードを新鮮な滅菌培地(組成:1000mLのリン酸カリウム緩衝液(0.1M、pH6.5)中に2.5~10g/lのコムギ粉)に移し、37℃で72時間、180rpmでインキュベートした。24、48および72時間のインキュベーションごとに、発酵ブロスを集めて凍結乾燥した。さらに、粉末を集め、グリアジン分の分析をVeratox(登録商標)のグリアジンR5キットを使用して、実施例1に記載の手順の通りに実施した。
バチルス・コアグランスMTCC5856の芽胞および栄養細胞を、全粒コムギ粉と共にインキュベートした。バチルス・コアグランスMTCC5856の芽胞および栄養細胞の両方が、コムギ粉からグリアジン分を顕著に除去した(図3)。
さらに、バチルス・コアグランスMTCC5856のコムギからグリアジン分を除去する能力を、他のバチルス・コアグランス株(バチルス・コアグランスATCC31284)と比較した。バチルス・コアグランスMTCC5856は、バチルス・コアグランスATCC31284と比較して、コムギからグリアジン分を除去することにおいてはるかにより有効であった(表1)。
培地およびコムギ粉(WT)中でのグルテン(GL)の利用のためのバチルス・コアグランスMTCC5856および多酵素複合体の組み合わせ試験
B.コアグランスMTCC5856を培地(組成:10g/l コムギ由来グルテン(sigma-Aldrich)、2.5g/l ブドウ糖、1.0g/l リン酸二カリウム、1.0g/l リン酸一カリウム、0.5g/l 硫酸マグネシウムおよび2g/l 塩化ナトリウム、pH6.5)中で増殖させ、さまざまな濃度の多酵素複合体(150mg/L)を、培地の滅菌後にB.コアグランスMTCC5856と共に添加し、37℃で72時間インキュベートした。72時間のインキュベーション後に、発酵ブロスを集めて凍結乾燥した(VirTis 2 K Freeze Dryer、SP Industries、Inc.、Warminster、PA USA)。さらに、粉末を集めてグリアジン分の分析を実施した。多酵素複合体を含まない1群もこの実験に入れた。多酵素複合体の内容を表3に開示する。
結果を表4に示す。
ラクトース不耐性のための、バチルス・コアグランスおよび多酵素複合体を含有する製剤
バチルス・コアグランスおよび多酵素複合体は、賦形剤、アジュバント、基材、希釈剤、担体、調整剤、バイオアベイラビリティー賦活剤、抗酸化剤および防腐剤を含む医薬品/栄養補助食品として許容される組成物と共に、かつ/または他の肝保護組成物と組み合わせて製剤化され、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ製剤、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、ドロップ剤または食料品の形態において経口的に投与され、グルテン不耐性の処置のために投与される。以下の表に、種々のバチルス・コアグランスおよび多酵素複合体の組成物の例を示す。
表5~表10に、グルテン不耐性の処置/管理のためのバチルス・コアグランスMTCC5856(LACTOSORE(登録商標))を含有する製剤の実例を示す。
*Sabinsa Corporation、USAの登録商標
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔1〕食物中のグルテン分を低減させる方法であって、グルテン分を低減させる効果をもたらすために、グルテンを含有する食物をプロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスと単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて接触させるステップを含む、方法。
〔2〕グルテンの種類が、グリアジン、ホルデイン、アベニンおよびセカリンからなる群から選択される、前記〔1〕に記載の方法。
〔3〕グルテンを含有する食物が、オオムギ、コムギ、ライムギおよびオーツムギからなる群から選択される、前記〔1〕に記載の方法。
〔4〕前記バチルス・コアグランス株がバチルス・コアグランスMTCC5856である、前記〔1〕に記載の方法。
〔5〕バチルス・コアグランスの有効用量が、2×10 9 コロニー形成単位(cfu)である、前記〔1〕に記載の方法。
〔6〕前記多酵素複合体が、a)α-アミラーゼ:24000DU/g以上、b)セルラーゼ:1100CU/g以上、c)リパーゼ:200FIP/g以上、d)ラクターゼ:4000ALU/g以上およびe)中性または酸性プロテアーゼ:6000PC/g以上、を含む、前記〔1〕に記載の方法。
〔7〕哺乳動物においてグルテンの利用を増進させる方法であって、グルテンの利用を増進させる効果をもたらすために、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスを単独でおよび/または多酵素複合体と組み合わせて前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
〔8〕前記バチルス・コアグランス株がバチルス・コアグランスMTCC5856である、前記〔7〕に記載の方法。
〔9〕バチルス・コアグランスの有効用量が、2×10 9 コロニー形成単位(cfu)である、前記〔7〕に記載の方法。
〔10〕前記多酵素複合体が、a)α-アミラーゼ:24000DU/g以上、b)セルラーゼ:1100CU/g以上、c)リパーゼ:200FIP/g以上、d)ラクターゼ:4000ALU/g以上およびe)中性または酸性プロテアーゼ:6000PC/g以上、を含む、前記〔7〕に記載の方法。
〔11〕前記哺乳動物がヒトである、前記〔7〕に記載の方法。
〔12〕グルテンの利用を促進させることによって哺乳動物において、グルテン不耐性および関連状態を治療管理するための方法であって、グルテン不耐性の症状の低減をもたらすために、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスを単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて含む組成物をそのような治療を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
〔13〕前記バチルス・コアグランス株がバチルス・コアグランスMTCC5856である、前記〔12〕に記載の方法。
〔14〕バチルス・コアグランスの有効用量が、2×10 9 コロニー形成単位(cfu)である、前記〔12〕に記載の方法。
〔15〕前記多酵素複合体が、a)α-アミラーゼ:24000DU/g以上、b)セルラーゼ:1100CU/g以上、c)リパーゼ:200FIP/g以上、d)ラクターゼ:4000ALU/g以上およびe)中性または酸性プロテアーゼ:6000PC/g以上、を含む、前記〔12〕に記載の方法。
〔16〕前記グルテン不耐性の関連状態が、セリアック病、疱疹状皮膚炎、グルテン失調症、非セリアック・グルテン過敏症(NCGS)、グルテン摂取、グルテン吸収不良のような自己免疫障害からなる群から選択される、前記〔12〕に記載の方法。
〔17〕前記哺乳動物がヒトである、前記〔12〕に記載の方法。
〔18〕バチルス・コアグランスを単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて含む前記組成物が、医薬品/栄養補助食品として許容される賦形剤、アジュバント、基材、希釈剤、担体、調整剤、バイオアベイラビリティー賦活剤、抗酸化剤および防腐剤と共に製剤化されて、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ製剤、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、ドロップ剤または食料品の形態において経口的に投与される、前記〔12〕に記載の方法。
本明細書に含まれる下記の具体例は、前述の本発明の最も好ましい実施形態を例示する。
Claims (18)
- 食物中のグルテン分を低減させる方法であって、グルテン分を低減させる効果をもたらすために、グルテンを含有する食物をプロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスと単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて接触させるステップを含む、方法。
- グルテンの種類が、グリアジン、ホルデイン、アベニンおよびセカリンからなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- グルテンを含有する食物が、オオムギ、コムギ、ライムギおよびオーツムギからなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記バチルス・コアグランス株がバチルス・コアグランスMTCC5856である、請求項1に記載の方法。
- バチルス・コアグランスの有効用量が、2×109コロニー形成単位(cfu)である、請求項1に記載の方法。
- 前記多酵素複合体が、a)α-アミラーゼ:24000DU/g以上、b)セルラーゼ:1100CU/g以上、c)リパーゼ:200FIP/g以上、d)ラクターゼ:4000ALU/g以上およびe)中性または酸性プロテアーゼ:6000PC/g以上、を含む、請求項1に記載の方法。
- 哺乳動物においてグルテンの利用を増進させる方法であって、グルテンの利用を増進させる効果をもたらすために、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスを単独でおよび/または多酵素複合体と組み合わせて前記哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
- 前記バチルス・コアグランス株がバチルス・コアグランスMTCC5856である、請求項7に記載の方法。
- バチルス・コアグランスの有効用量が、2×109コロニー形成単位(cfu)である、請求項7に記載の方法。
- 前記多酵素複合体が、a)α-アミラーゼ:24000DU/g以上、b)セルラーゼ:1100CU/g以上、c)リパーゼ:200FIP/g以上、d)ラクターゼ:4000ALU/g以上およびe)中性または酸性プロテアーゼ:6000PC/g以上、を含む、請求項7に記載の方法。
- 前記哺乳動物がヒトである、請求項7に記載の方法。
- グルテンの利用を促進させることによって哺乳動物において、グルテン不耐性および関連状態を治療管理するための方法であって、グルテン不耐性の症状の低減をもたらすために、プロバイオティクス細菌バチルス・コアグランスを単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて含む組成物をそのような治療を必要とする哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
- 前記バチルス・コアグランス株がバチルス・コアグランスMTCC5856である、請求項12に記載の方法。
- バチルス・コアグランスの有効用量が、2×109コロニー形成単位(cfu)である、請求項12に記載の方法。
- 前記多酵素複合体が、a)α-アミラーゼ:24000DU/g以上、b)セルラーゼ:1100CU/g以上、c)リパーゼ:200FIP/g以上、d)ラクターゼ:4000ALU/g以上およびe)中性または酸性プロテアーゼ:6000PC/g以上、を含む、請求項12に記載の方法。
- 前記グルテン不耐性の関連状態が、セリアック病、疱疹状皮膚炎、グルテン失調症、非セリアック・グルテン過敏症(NCGS)、グルテン摂取、グルテン吸収不良のような自己免疫障害からなる群から選択される、請求項12に記載の方法。
- 前記哺乳動物がヒトである、請求項12に記載の方法。
- バチルス・コアグランスを単独でまたは多酵素複合体と組み合わせて含む前記組成物が、医薬品/栄養補助食品として許容される賦形剤、アジュバント、基材、希釈剤、担体、調整剤、バイオアベイラビリティー賦活剤、抗酸化剤および防腐剤と共に製剤化されて、錠剤、カプセル剤、シロップ剤、グミ製剤、散剤、懸濁剤、乳剤、チュアブル剤、ドロップ剤または食料品の形態において経口的に投与される、請求項12に記載の方法。
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