JP2022522027A

JP2022522027A - 抗原特異的免疫細胞におけるｃｄ１６０機能をモジュレートする方法およびその使用

Info

Publication number: JP2022522027A
Application number: JP2021550310A
Authority: JP
Inventors: チャン－ジェンチェン，; ファジョウ，; ティアン－チャンスン，; イーリンルオ，; グオチャンドン，
Original assignee: アケロイスバイオファーマ，インコーポレイテッド
Priority date: 2019-03-01
Filing date: 2020-02-28
Publication date: 2022-04-13
Also published as: WO2020180742A1; US20220152098A1; CN113613664A; TW202102237A; EP3930733A4; EP3930733A1

Abstract

本発明は、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する改変抗原特異的免疫細胞を提供する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、操作されたＴＣＲまたはＣＡＲなどの、機能的外因性受容体をさらに含む。本発明はまた、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０活性をモジュレートする方法も提供する。本発明はまた、本明細書に記載の改変抗原特異的免疫細胞およびＣＤ１６０活性のモジュレーターを使用する、がん処置のための方法および医薬組成物も提供する。

Description

関連出願との相互参照
本出願は、２０１９年３月１日に出願された米国仮特許出願第６２／８１２，８９７号の利益を主張し、それぞれの内容全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出

ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる：コンピューター可読形態（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：７５６５９２０００２４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２０年２月２４日、サイズ：１７ＫＢ）。

本発明は、操作された抗原認識を用いて、または用いずに、天然の、および操作された抗原特異的αβＴ細胞を含む抗原特異的免疫細胞ならびにナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞、およびマクロファージなどの他の免疫細胞におけるＣＤ１６０機能をモジュレートする方法、およびその使用に関する。本発明はまた、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する抗原特異的免疫細胞、ならびにがんの処置における抗原特異的免疫細胞の機能をモジュレートするためのその使用方法に関する。

Ｔ細胞は、感染およびがんから、我々の身体を保護する天然の薬である。特に、がん患者を処置するためのチェックポイント遮断およびキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞療法によって、腫瘍標的化Ｔ細胞を効率的に再びエンゲージすることができる。これらの免疫療法の成功は、Ｔ細胞ががん処置にとって非常に有効であることを明確に確立し、がんに対する戦いにおいてＴ細胞を活性化し、エンゲージするための多様な手法の探索に火を付けている。先駆的研究者および医師は、過去半世紀にわたって、ヒト固形腫瘍を処置するために腫瘍標的化Ｔ細胞の養子移入を探索してきた。ｉｎｖｉｔｒｏで活性化されたＴ細胞、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）、腫瘍抗原または腫瘍関連抗原（ＴＣＲ－Ｔ）を認識する特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を有するＴ細胞、および腫瘍抗原をロードした樹状細胞に由来するＴ細胞（ＤＣ－Ｔ）を含む、様々な腫瘍標的化Ｔ細胞を試験し、前臨床モデルおよびヒト患者において有望な有効性を示した。より最近では、突然変異がん細胞に由来する新生抗原を認識するＴ細胞が、肺がんおよび乳がんのための養子Ｔ細胞療法において使用され、一部の症例において有効性を示した。それにも拘わらず、放射線、ワクチン接種、化学療法、および抗腫瘍サイトカインＩＬ－２の同時輸注などの他の療法を援用したとしても、腫瘍標的化Ｔ細胞の養子移入を用いた固形腫瘍の持続的制御および除去を再現性よく達成することが困難であった。

輸注された腫瘍標的化Ｔ細胞による比較的低い応答率および腫瘍制御の最終的な喪失は、Ｔ細胞に対する多様な内因性および外因性の障壁に起因し得る。これらの障壁は、恒常性免疫寛容機構ならびに腫瘍誘導性免疫抑制機構に由来する。特に、これらの寛容力は、Ｔ細胞による腫瘍の有効な制御を防止する障壁を作り出した。例えば、正および負の胸腺選択を含む中枢性寛容機構によって制御される、天然に存在する抗腫瘍Ｔ細胞は、非突然変異腫瘍抗原または腫瘍関連抗原に対する低いか、または中間の親和性を有するＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を有することが多い。さらに、進化する腫瘍は、クラスＩまたはＩＩの腫瘍組織適合複合体（ＭＨＣ）分子の発現を減少させ、事実上、腫瘍細胞上への腫瘍抗原の提示を制限し、結果として、コグネートＴＣＲを有するＴ細胞による認識を制限する。これらの障壁を克服するために、様々な成功の度合いで、この分野において多くの努力が払われた。ＣＡＲは、Ｔ細胞を腫瘍細胞と効率的にエンゲージし、Ｔ細胞による、不十分な腫瘍認識または腫瘍認識の喪失を克服するのを助ける。顕著なことに、ＣＤ１９またはＢＣＭＡ抗原を標的とするＣＡＲ－Ｔ細胞は、それぞれ、Ｂ細胞白血病／リンパ腫または多発性骨髄腫を除去することができる。他の手法は、ｉｎｖｉｔｒｏでの進化を介して腫瘍特異的ＴＣＲの親和性をブーストすることによって、または有効性に対する適度の改善を示す新生抗原を認識するＴＣＲを選択することによって、認識障壁の克服に焦点を合わせた。

これらの戦略は有望であるが、腫瘍標的化Ｔ細胞に、確立された腫瘍を除去させるか、またはそれを持続的に制御させるために克服しなければならない、抗原認識を超えるさらなる障壁が存在する。特に、腫瘍内のＴ細胞を活性化しない、コールド腫瘍は、予後不良および免疫療法に対する低い応答性と相関する。チェックポイント抑制、Ｔ細胞特異的化学誘引物質のシャットダウン、好ましくない栄養摂取および低酸素症の結果としてのＴ細胞疲弊だけでなく、腫瘍微小環境における他の多くの未知の因子も、コールド腫瘍現象に寄与し得ることが前提とされてきた。腫瘍におけるＴ細胞輸送および活性化を強化するために、多様な遺伝子操作戦略が探索された。ケモカイン受容体の異所性発現または腫瘍特異的Ｔ細胞中のＶＥＧＦＲを認識するＣＡＲは、移入されたＴ細胞による腫瘍制御をブーストすることが示された。さらに、腫瘍特異的Ｔ細胞中での、ＰＤ－１、またはＣＢＬＢ、またはアデノシン２Ａ受容体などの負のＴ細胞調節因子の不活化は、Ｔ細胞の抗腫瘍機能の増強をもたらした。興味深いことに、ＰＧＣ１アルファ、もしくはＯＰＡ１の異所性発現、またはＣＤ２７８シグナル伝達ドメインを有するＣＡＲなどの、ミトコンドリア発生および酸化的リン酸化を増強するシグナルも、移入されたＴ細胞の抗腫瘍機能をブーストすることができる。腫瘍制御におけるＴ細胞機能は多様な分子および細胞プロセスによって強化され得るが、これらの戦略は一般には、Ｔ細胞によって持続的な腫瘍制御を可能にするか、または確立された腫瘍を除去するには不十分であり、かくして、固形腫瘍の持続的制御および除去のために腫瘍標的化Ｔ細胞を再プログラミングするために使用することができる分子を検索することが重要である。

ＣＤ１６０は、２７ｋＤａの糖タンパク質であり、モノクローナル抗体ＢＹ５５を用いてヒトナチュラルキラー細胞上で最初に同定された（Ｍａｉｚａｅｔａｌ．，１９９３，ＪＥｘｐＭｅｄ．．１７８（３）：１１２１－６）。後に、優性型のＣＤ１６０は、主なＣＤ１６＋ＮＫ細胞サブセット、ＮＫ－Ｔ細胞、γδ－Ｔ細胞、ＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８＋細胞溶解性Ｔ細胞の一部のサブセット、ならびに活性化された内皮細胞に見出されるグリコシル－ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アンカー免疫グロブリン（Ｉｇ）様細胞膜受容体である（ＬｅＢｏｕｔｅｉｌｌｅｒｅｔａｌ．，２０１１，ＩｍｍｕｎｏｌＬｅｔｔ．，１３８（２）：９３－６）。ヒトＣＤ１６０のｃＤＮＡ配列は、単一のＩｇ様ドメインを有する１８１アミノ酸の、システインに富むグリコシルホスファチジルイノシトールアンカータンパク質をコードする。続いて、膜貫通ドメインを含む、および／または細胞外Ｉｇ様ドメインを含まない、さらなるアイソフォームが同定された。ＣＤ１６０は、堅くジスルフィド結合した多量体として細胞表面に発現される。ＣＤ１６０は、ＨＶＥＭのリガンドであり、ＣＤ１６０のＨＶＥＭへの結合は、Ｔ細胞阻害およびアネルギーをもたらした（Ｃａｉｅｔａｌ．，２００９，ＮａｔＩｍｍｕｎｏｌ．，９（２）：１７６－１８５）。ＣＤ１６０は、抗ＰＤ－１抗体と共に抗がん活性を有する免疫チェックポイント阻害剤と考えられることが多い（Ｓｔｅｃｈｅｒｅｔａｌ．，２０１７，ＦｒｏｎｔＩｍｍｕｎｏｌ．，８：５７２）。ＣＤ１６０は、ＨＶＥＭへの結合についてＢＴＬＡ（ＣＤ２７２）と競合すると提言されている（Ｋｏｊｉｍａｅｔａｌ．，２０１１，ＪＭｏｌＢｉｏｌ．，４１３（４）：７６２－７２）。ＮＫ細胞および一部のヒトＴ細胞のサブセット上のマウスおよびヒトＣＤ１６０は、ＭＨＣクラスＩａおよびＩｂに対する低い親和性を有し、ＮＫおよびＴ細胞活性化において役割を果たし得る（Ｍａｅｄａｅｔａｌ．，２００５，ＪＩｍｍｕｎｏｌ．，１７５（７）：４４２６－３２；Ａｇｒａｗａｌｅｔａｌ．，１９９９，ＪＩｍｍｕｎｏｌ．，１６２（３）：１２２３－６）。ＣＤ１６０はまた、内皮細胞によっても発現され、現行の抗血管新生薬に応答しない、またはそれに耐性になるヒトの病理学的な眼および腫瘍の血管新生の場合に潜在的な新しい標的として提唱されている（Ｃｈａｂｏｔｅｔａｌ．，２０１１，ＪＥｘｐＭｅｄ．，２０８（５）：９７３－８６）。マウスにおけるＣＤ１６０機能分析の喪失は、ＣＤ１６０がＮＫ媒介性ＩＦＮ－γ産生にとっては重要であるが、ＮＫ細胞の細胞溶解活性にとっては重要ではなく、見かけ上、Ｔリンパ球の発生および機能に必要とされないことを示していた（Ｔｕｅｔａｌ．，２０１５，ＪＥｘｐＭｅｄ．，２１２（３）：４１５－２９）。今までのところ、確立された腫瘍の制御および除去における抗原特異的Ｔ細胞上のＣＤ１６０の機能に関する公開された証拠はない。
本明細書で言及される全ての刊行物、特許、特許出願および公開特許出願の開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

Ｍａｉｚａｅｔａｌ．，１９９３，ＪＥｘｐＭｅｄ．．１７８（３）：１１２１－６ＬｅＢｏｕｔｅｉｌｌｅｒｅｔａｌ．，２０１１，ＩｍｍｕｎｏｌＬｅｔｔ．，１３８（２）：９３－６

本出願は、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞、およびがんを処置するためのその使用方法を提供する。本発明はまた、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０活性をモジュレートする方法も提供する。

本出願の一態様は、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞であって、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、免疫細胞がＴ細胞である、改変抗原特異的免疫細胞を提供する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性αβＴ細胞、γδＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、抗原提示細胞（ＡＰＣ）により活性化される抗腫瘍Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）からなる群から選択される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞は、樹状細胞（ＤＣ）により活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞およびマクロファージからなる群から選択される。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９０％の同一性を有するそのバリアントを含む。

上記の改変抗原特異的免疫細胞のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、膜結合型である。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＧＰＩリンカーを介して膜に結合している。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、免疫細胞結合部分を介して改変抗原特異的免疫細胞に結合している。一部の実施形態では、免疫細胞結合部分は、免疫細胞の表面分子に結合する。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＣＤ１６０スプライスバリアントに由来する細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットは、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、およびＣＤ３イプシロンからなる群から選択される。

上記の改変抗原特異的免疫細胞のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、膜結合型であり、細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、またはその両方を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外ＣＤ１６０ドメイン、膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、および４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外ＣＤ１６０ドメイン、膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ２８共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、一次シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、一次シグナル伝達ドメインを含まない。

上記の改変抗原特異的免疫細胞のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、機能的外因性受容体をさらに含む。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。

本出願の一態様は、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、免疫細胞がＴ細胞である、方法を提供する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性αβＴ細胞、γδＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）からなる群から選択される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞は、ＤＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞およびマクロファージからなる群から選択される。

上記の生産方法のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、方法は、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質とを接触させることを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、免疫細胞の表面分子に結合する免疫細胞結合部分を含む。一部の実施形態では、生産方法は、前駆体抗原特異的免疫細胞中に、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸を導入することを含む。一部の実施形態では、核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡである。一部の実施形態では、核酸は、トランスフェクションによって前駆体抗原特異的免疫細胞中に導入される。一部の実施形態では、核酸は、形質導入または電気穿孔によって前駆体抗原特異的免疫細胞中に導入される。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９０％の同一性を有するそのバリアントを含む。

上記の生産方法のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、膜結合型である。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＧＰＩリンカーを介して膜に結合している。一部の実施形態では、免疫細胞結合部分は、免疫細胞の表面分子に結合する。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、免疫細胞結合部分を介して改変抗原特異的免疫細胞に結合している。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＣＤ１６０スプライスバリアントに由来する細胞内ドメインをさらに含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットは、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、およびＣＤ３イプシロンからなる群から選択される。

上記の生産方法のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、膜結合型であり、細胞内ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、またはその両方を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外ＣＤ１６０ドメイン、膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、および４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外ＣＤ１６０ドメイン、膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ２８共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、一次シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、一次シグナル伝達ドメインを含まない。

上記の生産方法のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、機能的外因性受容体をコードする第２の核酸を含む。一部の実施形態では、生産方法は、前駆体抗原特異的免疫細胞と、機能的外因性受容体をコードする第２の核酸とを接触させることをさらに含む。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の実施形態では、第１の核酸と、第２の核酸とは、同じプロモーターに作動可能に連結されている。一部の実施形態では、第１の核酸と、第２の核酸とは、別々のプロモーターに作動可能に連結されている。一部の実施形態では、第１の核酸と、第２の核酸とは、同じベクター上にある。一部の実施形態では、第１の核酸および／または第２の核酸は、別々のベクター上にある。一部の実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、エピソームベクター発現ベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、およびその誘導体からなる群から選択される。一部の実施形態では、ベクターは、非ウイルスベクターである。

上記の生産方法のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、方法は、第１および／または第２の核酸を含む免疫細胞を単離または富化することをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、ＣＤ１６０を発現する改変抗原特異的免疫細胞を、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に製剤化することをさらに含む。

また、上記の生産方法のいずれか１つに記載の方法によって生産された改変抗原特異的免疫細胞も提供される。

さらに、上記の改変免疫細胞のいずれか１つに記載の改変抗原特異的免疫細胞と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物が提供される。

本出願の別の態様は、個体における疾患を処置する方法であって、個体に、上記の改変抗原特異的免疫細胞のいずれか１つに記載の改変抗原特異的免疫細胞または上記の医薬組成物のいずれか１つに記載の医薬組成物の有効量を投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、個体に由来する。本出願のさらに別の態様は、個体における疾患を処置する方法であって、個体に、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸の有効量を投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、個体中の免疫細胞上の表面分子を認識する結合部分を含む、方法を提供する。

上記の処置方法のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、投与は、腫瘍内投与である。一部の実施形態では、投与は、リンパ節への投与である。一部の実施形態では、疾患は、がんである。一部の実施形態では、がんは、固形腫瘍である。一部の実施形態では、がんは、転移性がんである。一部の実施形態では、がんは、黒色腫、肺がん、食道がん、膵がん、乳がん、肝臓がん、脳がん、卵巣がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。

本発明の一態様は、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する方法であって、抗原特異的免疫細胞と、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の有効量とを接触させることを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を増強することを含み、薬剤は、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を増強する。

本発明の一態様は、個体における免疫疾患を処置する方法であって、個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性をモジュレートする薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、免疫疾患は、自己免疫疾患または炎症性疾患であり、薬剤は、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を阻害する。

本発明の一態様は、個体におけるがんを処置する方法であって、個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法を提供する。本発明の別の態様は、個体における感染を処置する方法であって、個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法を提供する。

改変抗原特異的免疫細胞のいずれか１つを含む組成物、使用、キットおよび製品も提供される。

図１Ａは、ＦＡＣＳによって分析された、対照ＰｍｅｌＴ細胞と比較した、ＰｍｅｌＴ細胞中でのマウスＣＤ１６０の異所性発現を示す。図１Ｂは、対照と比較した、外因性ＣＤ１６０で改変されたＰｍｅｌＴ細胞のためのＣＤ１６０染色の中央蛍光強度（ＭＦＩ）を示す。

図２Ａは、細胞内染色およびＦＡＣＳ分析によって決定された、Ｔ細胞中でのグランザイムＡおよびパーフォリンのレベルに対する外因性ＣＤ１６０発現の効果を示す。図２Ｂは、細胞内染色およびＦＡＣＳ分析によって決定された、Ｔ細胞中でのＩＮＦ－γおよびＴＮＦαのレベルに対する外因性ＣＤ１６０発現の効果を示す。図２Ｃは、Ｂ１６Ｆ０黒色腫腫瘍細胞と同時培養した場合の、対照ウイルスまたはＣＤ１６０ウイルスを感染させたＰｍｅｌＴ細胞の細胞溶解活性分析を示す。同上。

図３Ａは、対照ＰｍｅｌＴ細胞（Ｂ１６Ｆ０中の腫瘍抗原に特異的なＴ細胞）または１０万、２０万、３０万もしくは４０万個のＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を投与したＢ１６Ｆ０担持マウスの腫瘍サイズに対する効果を示す。図３Ｂは、対照ＰｍｅｌＴ細胞、ＣＤ１６０改変脾臓Ｔ細胞（Ｂ１６Ｆ０抗原に非特異的）ならびにＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を投与したＢ１６Ｆ０担持マウスの腫瘍サイズに対する効果を示す。

図４Ａは、シクロホスファミド（ＣＹＰ）プレコンディショニングおよび（ａ）対照ＰｍｅｌＴ細胞；または（ｂ）ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を投与したＢ１６Ｆ０担持マウスの腫瘍サイズにおける相対的変化を示す。図４Ｂは、ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞で処置した代表的なマウスの様々な時点での増殖曲線および選択された腫瘍イメージを示す。図４Ｃは、ＣＹＰプレコンディショニングおよび（ａ）対照ＰｍｅｌＴ細胞；または（ｂ）ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を投与したＢ１６Ｆ０黒色腫担持マウスのＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存分析を示す。同上。

図５Ａは、ＣＹＰプレコンディショニングおよび（ａ）ＰＢＳ；（ｂ）１５万個の対照ＰｍｅｌＴ細胞；または（ｃ）１５万個の対照ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を投与したＢ１６Ｆ０担持マウスの腫瘍サイズにおける相対的変化を示す。図５Ｂは、ＣＹＰプレコンディショニングおよび（ａ）ＰＢＳ；（ｂ）３０万個の対照ＰｍｅｌＴ細胞；または（ｃ）３０万個の対照ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を投与したＢ１６Ｆ０担持マウスの腫瘍サイズにおける相対的変化を示す。図５Ｃは、ＣＹＰプレコンディショニングおよび（ａ）ＰＢＳ；（ｂ）対照ＰｍｅｌＴ細胞；（ｃ）１５万個の対照ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞；または（ｄ）３０万個の対照ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を投与したＢ１６Ｆ０黒色腫担持マウスのＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存分析を示す。同上。

図６Ａは、未処置のままの、またはＣＹＰプレコンディショニングおよび（ａ）ＰＢＳ；（ｂ）対照ＰｍｅｌＴ細胞；もしくは（ｃ）ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を投与した転移性Ｂ１６Ｆ１０担持マウスの平均腫瘍サイズに対する効果を示す。図６Ｂは、未処置のままの、またはＣＹＰプレコンディショニングおよび（ａ）ＰＢＳ；（ｂ）対照ＰｍｅｌＴ細胞；もしくは（ｃ）ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を投与した転移性Ｂ１６Ｆ１０担持マウスの個々の腫瘍サイズに対する効果を示す。同上。

図７Ａは、ＣＹＰプレコンディショニングおよび（ａ）対照ＰｍｅｌＴ細胞；または（ｂ）ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を投与したＢ１６Ｆ１０担持マウスの腫瘍サイズにおける相対的変化を示す。図７Ｂは、ＣＹＰプレコンディショニングおよび（ａ）ＰＢＳ；（ｂ）対照ＰｍｅｌＴ細胞；または（ｃ）ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を投与したＢ１６Ｆ１０黒色腫担持マウスのＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存分析を示す。

図８Ａ～Ｃは、ＣＹＰプレコンディショニングおよびＰＢＳ、ｍＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞、または示されるようなＣＤ１６０キメラ（図８Ａ中のＧＥＭ１２４、１２５；図８Ｂ中のＧＥＭ１２６、１２７；および図８Ｃ中のＧＥＭ１２３、１２８）の１つで改変されたＰｍｅｌＴ細胞を投与したＢ１６Ｆ０担持マウスの腫瘍サイズにおける相対的変化を示す。同上。同上。

図９Ａは、左から右に向かって、ＧＰＩアンカー型ｍＣＤ１６０、ＧＰＩアンカー型ｈＣＤ１６０アイソフォーム、膜貫通型ｈＣＤ１６０アイソフォーム、および細胞内ドメインを含有する膜貫通型ｈＣＤ１６０アイソフォームを示す概略図である。図９Ｂは、マウスとヒトのＣＤ１６０アイソフォームのヌクレオチド配列およびその間の保存度を示す。同上。

図１０Ａは、ＣＹＰプレコンディショニングおよび（ａ）対照ＰｍｅｌＴ細胞（ＶＥＣＴＯＲ）；または（ｂ）それぞれ、外因性ＧＰＩアンカー型ｍＣＤ１６０、ＧＰＩアンカー型ｈＣＤ１６０アイソフォーム、膜貫通型ｈＣＤ１６０アイソフォーム、もしくは細胞外ドメインを含有する膜貫通型ｈＣＤ１６０アイソフォームで改変されたＰｍｅｌＴ細胞を投与したＢ１６Ｆ０担持マウスの腫瘍サイズにおける相対的変化を示す。図１０Ｂは、ＣＹＰプレコンディショニングおよび（ａ）対照ＰｍｅｌＴ細胞（ＶＥＣＴＯＲ）；または（ｂ）それぞれ、外因性ＧＰＩアンカー型ｈＣＤ１６０アイソフォーム、膜貫通型ｈＣＤ１６０アイソフォーム、もしくは細胞外ドメインを含有する膜貫通型ｈＣＤ１６０アイソフォームで改変されたＰｍｅｌＴ細胞を投与したＢ１６Ｆ０黒色腫担持マウスのｔＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存分析を示す。同上。

図１１Ａは、ルイス肺がん（ＬＬＣ）細胞と同時培養した場合の、対照ウイルスまたはｍＣＤ１６０ウイルスに感染させたＬＬＣから抽出された腫瘍浸潤性Ｔ細胞（ＴＩＬ）の細胞溶解活性分析を示す。図１１Ｂは、外因性ＣＤ１６０またはＣＤ１６０キメラ（ＧＥＭ１２４）で改変されたＬＬＣＴＩＬによるＬＬＣ腫瘍制御能力に関するｉｎｖｉｖｏ実験の代表的な概略図を示す。図１１Ｃは、未処置のままの、またはＣＹＰプレコンディショニングおよび（ａ）ＰＢＳ；（ｂ）対照ＴＩＬ；（ｃ）ｍＣＤ１６０改変ＴＩＬ；もしくは（ｄ）ＣＤ１６０キメラＧＥＭ１２４で改変されたＴＩＬを投与したＬＬＣ担持マウスのＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存分析を示す。同上。

図１２Ａは、ヒトＣＤ１６０またはＣＤ１６０ＴＣなどのそのバリアントを過剰発現するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞を代表する概略図を示す。図１２Ｂは、ＣＤ１９などの、ＣＡＲ認識腫瘍特異的抗原と一緒に、ヒトＣＤ１６０またはそのバリアントを過剰発現するように設計されたレンチウイルスベクター構成を示す。同上。

図１３Ａは、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞と、ＣＤ１６０を過剰発現しないＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞（野生型ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ）との増殖を示す。図１３Ｂは、培養２週間後の、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞と、野生型ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞との生存能力を示す。図１３Ｃは、様々なエフェクターの標的に対する（Ｅ：Ｔ）比での、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞と、野生型ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞との細胞溶解活性分析を示す。図１３Ｄは、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞と、野生型ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞とにおけるＩＦＮ－ｇ産生を示す。図１３Ｅは、（ａ）ＣＡＲ－Ｔ細胞なし（なし）；（ｂ）対照ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞（１９ＣＡＲ）または（ｃ）ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＤ１６０ＴＣ１９ＣＡＲ）を投与したＮａｌｍ６腫瘍担持マウスにおける腫瘍サイズを示すトポグラフを示す。図１３Ｆは、（ａ）ＣＡＲ－Ｔ細胞なし（－－）；（ｂ）野生型ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞または（ｃ）ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現するＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞（ＣＤ１６０ＴＣ）を投与したＲａｍｏｓ腫瘍担持マウスのＫａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ生存分析を示す。同上。

図１４Ａは、ヒトＣＤ１６０またはｈｕＣＤ１６０ＴＣなどのそのバリアントを過剰発現するＮＹ－ＥＳＯ－１特異的ＴＣＲ－Ｔ細胞を代表する概略図を示す。図１４Ｂは、ＮＹ－ＥＳＯ－１特異的ＴＣＲなどの、ＴＣＲ認識腫瘍特異的抗原と一緒に、ヒトＣＤ１６０またはそのバリアントを過剰発現するように設計されたレンチウイルスベクター構成を示す。同上。

図１５Ａは、野生型１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞およびｈｕＣＤ１６０ＴＣを発現する１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞に関する、四量体分析によって決定されたＮＹ－ＥＳＯ－１特異的１Ｇ４－ＴＣＲレベルを示すＦＡＣＳ分析を示す。図１５Ｂは、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現する１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞と、ＣＤ１６０を過剰発現しない１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞（野生型１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ）との増殖を示す。図１５Ｃは、野生型１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞およびｈｕＣＤ１６０ＴＣを発現する１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞中の幹／記憶Ｔ細胞のパーセンテージを示す。図１５Ｄは、様々なエフェクターの標的に対する（Ｅ：Ｔ）比でのｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現する１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞と、野生型１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞との細胞溶解活性分析を示す。図１５Ｅは、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現する１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞と、野生型１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞とにおけるＩＦＮ－ｇ産生を示す。図１５Ｆは、（ａ）ＴＣＲ－Ｔ細胞なし（なし）；（ｂ）対照１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞または（ｃ）ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現する１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞を投与したＡ３７５黒色腫担持マウスにおける腫瘍サイズを示す。同上。同上。

図１６は、患者由来異種移植（ＰＤＸ）マウス腫瘍モデルにおける自己ＴＩＬ療法の実験概略図を示す。肺がん、食道がん、結腸がん、胃がん、または膵がんなどの様々ながんを有するがん患者から切除された腫瘍組織を、ＮＳＧ免疫不全マウスに埋め込み、継代して、ヒト腫瘍を有するＰＤＸモデルを生成した。自己腫瘍浸潤性白血球（ＴＩＬ）を、ＣＤ１６０改変およびＰＤＸモデルにおける自己ヒト腫瘍中でのその後の機能試験のために、切除された腫瘍から抽出した。

図１７Ａは、ヒトＣＤ１６０またはｈｕＣＤ１６０ＴＣなどのそのバリアントを過剰発現する抗腫瘍ＴＩＬを代表する概略図を示す。図１７Ｂは、同時発現リポーターとしてのＧＦＰと共に、ヒトＣＤ１６０またはそのバリアントを過剰発現するレンチウイルスベクター構成を示す。同上。

図１８Ａは、様々なエフェクターの標的に対する（Ｅ：Ｔ）比での、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現する腫瘍特異的ＴＩＬ（ＣＤ１６０ＴＣ）と、ＣＤ１６０を過剰発現しない対応するＴＩＬ（なし；ベクター）との細胞溶解活性分析を示す。図１８Ｂは、（ａ）ＣＤ１６０を過剰発現しない対照ＴＩＬ（なし）または（ｃ）ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現するＴＩＬを投与した自己食道腫瘍担持マウスにおける腫瘍サイズを示す。ＧＥＭは、対応するＴＩＬによって発現される遺伝子的な増強調節因子を示す。

本出願は、ＣＤ１６０の免疫刺激活性をモジュレートするための方法および組成物を提供する。本出願は、主にＴ細胞のための阻害的チェックポイント分子として機能すると以前に考えられていたＣＤ１６０が、Ｔ細胞などの、抗原特異的免疫細胞において免疫応答を刺激する原因であり得るという驚くべき知見に基づく。

本発明者らは、腫瘍特異的Ｔ細胞を、ＣＤ１６０を用いて再プログラミングして、免疫能力のあるマウスにおける確立された固形腫瘍を制御し、除去することができることを証明した。さらに、ＣＤ１６０でプログラミングされたＴ細胞は、これらの処置が非常に困難なマウスモデルにおいて転移性黒色腫および肺がんを制御するのに非常に有効であることも示された。ＣＤ１６０の異所性発現は、ＧＰ１００を特異的に認識するＴＣＲを有する腫瘍特異的Ｔ細胞および複数の抗原を認識するポリクローナル肺がん腫瘍浸潤性Ｔ細胞（「ＴＩＬ」）の機能を増強させた。ＣＤ１６０改変腫瘍特異的Ｔ細胞は、その転移性に関係なく異なる組織起源の固形腫瘍の有効な制御を提供した。さらに、ＴＣＲおよび共刺激シグナル伝達ドメインを有するＣＤ１６０キメラを作出することにより、本発明者らは、ＣＤ２８共刺激シグナルがＣＤ１６０と相乗作用することを示し、抗原特異的Ｔ細胞の機能をさらに増強させた。

重要なことに、ヒトおよびマウスＣＤ１６０は、ｉｎｖｉｖｏでの腫瘍制御および除去における抗原特異的Ｔ細胞の機能の強化において保存された機能を有し、これは、ＣＤ１６０が抗原特異的Ｔ細胞の機能の調節において高度に保存された経路を制御し得ることを示唆している。これらの知見は、ＣＤ１６０を使用して、抗原特異的Ｔ細胞を、確立された固形腫瘍などのがんの制御および除去のための強力な医薬に変化させることができることを初めて証明した。さらに、これらの知見は、ＣＤ１６０に基づく免疫細胞（Ｔ細胞など）の再プログラミングが、全ての腫瘍標的化免疫細胞（Ｔ細胞など）および異なる組織起源の腫瘍に広く適用可能であり得ることを強く示唆する。

上で考察された知見は、ＣＤ１６０が、抗原特異的Ｔ細胞の機能をブーストするか、または抑制する外因性モジュレーションのための重要な標的であり得ることをさらに示唆する。例えば、抗原特異的免疫細胞中の内因性ＣＤ１６０は、抗原特異的Ｔ細胞の活性をブーストし、ウイルスおよび細菌感染などに対する炎症性応答を活性化するために標的化することができる。逆に、ＣＤ１６０を、例えば、炎症および自己免疫疾患における、望ましくない免疫応答中の抗原特異的Ｔ細胞の活性を阻害するために標的化することができる。抗原特異的Ｔ細胞におけるＣＤ１６０の重要な機能を考慮すると、ＣＤ１６０発現レベルは、腫瘍または炎症組織を含む炎症部位での抗原特異的Ｔ細胞の有効かつ機能的な状態と相関し得る。これらの細胞中でのより高いＣＤ１６０発現は、抗原特異的Ｔ細胞の活性化状態を示唆し、一方、低レベルのＣＤ１６０発現またはＣＤ１６０発現の非存在は、抗原特異的Ｔ細胞の不活性状態を示唆し得る。かくして、ＣＤ１６０を、抗原特異的Ｔ細胞の機能状態、したがって、免疫療法の有効性を予測するためのバイオマーカーとして使用することができる。

かくして、一態様では、外因性ＣＤ１６０タンパク質を（例えば、表面上に）含む改変抗原特異的免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）であって、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して、改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす、改変抗原特異的免疫細胞が提供される。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＧＰＩリンカーを介して改変抗原特異的免疫細胞の細胞膜に結合している。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、膜貫通ドメインを含む膜貫通タンパク質である。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、膜貫通ドメインと、共刺激分子に由来する細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、Ｔ細胞表面分子を認識し、活性化する抗体などの、免疫細胞結合部分を介して改変抗原特異的免疫細胞に結合している。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、改変Ｔ細胞受容体、操作されたＴ細胞受容体またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などの機能的外因性受容体をさらに含む。また、上記の改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法も提供される。

別の態様では、例えば、自己免疫疾患および炎症疾患などの免疫疾患を処置するための、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性をモジュレートする方法が提供される。一部の実施形態では、抗原特異的免疫細胞と、ＣＤ１６０の活性を活性化する（例えば、増強する）薬剤（例えば、アゴニスト抗ＣＤ１６０抗体）とを接触させることによって、抗原特異的免疫細胞のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する（例えば、増強する）方法が提供される。一部の実施形態では、抗原特異的免疫細胞と、ＣＤ１６０の活性を阻害する（例えば、下方調節する）薬剤（例えば、アンタゴニスト抗ＣＤ１６０抗体）とを接触させることによって、ＣＤ１６０の免疫刺激活性を阻害する（例えば、下方調節する）方法が提供される。

また、改変抗原特異的免疫細胞を含む組成物（医薬組成物など）、キットおよび製品、ならびに本明細書に記載の改変抗原特異的免疫細胞を使用してがんを処置する方法も提供される。
Ｉ．定義

本明細書で使用される場合、「処置」または「処置すること」は、臨床結果を含む有益な、または望ましい結果を取得するための手法である。本発明の目的のために、有益な、または望ましい臨床結果としては、限定されるものではないが、以下：疾患の結果生じる１つもしくは複数の症状の軽減、疾患の程度の減少、疾患の安定化（例えば、疾患の悪化の防止もしくは遅延）、疾患の拡散（例えば、転移）の防止もしくは遅延、疾患の再発の防止もしくは遅延、疾患の進行の遅延もしくは減速、疾患状態の改善、疾患の寛解（部分的もしくは全体的）、疾患を処置するのに必要とされる１つもしくは複数の他の薬剤の用量の減少、疾患の進行の遅延、生活の質の増大、および／または生存の延長のうちの１つまたは複数が挙げられる。また、疾患の病理学的結果の低減も「処置」によって包含される。本発明の方法は、処置のこれらの態様のうちの任意の１つまたは複数を企図する。

用語「防止する」、および「防止された」、「防止すること」などの同様の単語は、疾患または状態、例えば、がんの再発の可能性を防止する、阻害する、または低減させるための手法を示す。また、それは、疾患もしくは状態の再発を遅延させること、または疾患もしくは状態の症状の再発を遅延させることも指す。本明細書で使用される場合、「防止」および同様の単語は、疾患または状態の再発前の疾患または状態の強度、効果、症状および／または負荷を低減させることも含む。

本明細書で使用される場合、がんの発症を「遅延させること」は、疾患の発症を延期させること、妨害すること、減速させること、遅らせること、安定化すること、および／または先送りすることを意味する。この遅延は、処置される疾患および／または個体の履歴に応じて、変化する時間の長さにわたるものであってよい。がんの発症を「遅延させる」方法は、その方法を使用しない場合と比較して、所与の時間枠において疾患発症の確率を低下させる、および／または所与の時間枠において疾患の程度を低減させる方法である。そのような比較は、典型的には、統計学的に有意な数の個体を使用する、臨床試験に基づく。がんの発症は、限定されるものではないが、コンピューター断層撮影（ＣＡＴスキャン）、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、腹部超音波、凝固検査、動脈造影法、または生検などの標準的な方法を使用して検出可能であってもよい。発症はまた、初期には検出不可能であり得るがん進行を指してもよく、発生、再発、および開始を含む。

本明細書で使用される用語「有効量」とは、特定の障害、状態または疾患を処置する、例えば、１つまたは複数のその症状を改善する、軽減する、低下させる、および／または遅延させるのに十分な薬剤または薬剤の組合せの量を指す。がんを参照すると、有効量は、腫瘍の縮小および／または腫瘍の増殖速度の低下（腫瘍成長の抑制など）または他の望ましくない細胞増殖の防止もしくは遅延を引き起こすのに十分な量を含む。一部の実施形態では、有効量は、疾患発症を遅延させるのに十分な量である。一部の実施形態では、有効量は、再発を防止する、または遅延させるのに十分な量である。有効量は、１回または複数回の投与で投与することができる。薬物または組成物の有効量は、（ｉ）がん細胞の数を減少させる；（ｉｉ）腫瘍サイズを低下させる；（ｉｉｉ）末梢臓器へのがん細胞浸潤をある程度阻害する、遅らせる、減速させる、好ましくは、停止させる；（ｉｖ）腫瘍転移を阻害する（すなわち、ある程度減速させる、好ましくは停止させる）；（ｖ）腫瘍成長を阻害する；（ｖｉ）腫瘍の発生および／もしくは再発を防止する、もしくは遅延させる；および／または（ｖｉｉ）がんと関連する１つもしくは複数の症状をある程度緩和させることができる。

本明細書で使用される場合、「個体」または「対象」とは、限定されるものではないが、ヒト、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、齧歯類、または霊長類などの哺乳動物を指す。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。

「単離された」核酸とは、その天然の環境の成分から分離されている核酸分子を指す。単離された核酸は、通常は核酸分子を含有する細胞中に含有される核酸分子を含むが、核酸分子は染色体外、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。

本明細書で使用される用語「ベクター」とは、それが連結される別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。この用語は、自己複製する核酸構造としてのベクターならびにそれが導入された宿主細胞のゲノム中に組み込まれるベクターを含む。ある特定のベクターは、それらが作動可能に連結された核酸の発現を方向付けることができる。そのようなベクターは、本明細書では「発現ベクター」と呼ばれる。

本明細書で使用される用語「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」とは、異種核酸が宿主細胞中に移入または導入されるプロセスを指す。「トランスフェクトされた」または「形質転換された」または「形質導入された」細胞は、異種核酸をトランスフェクトされた、形質転換された、または形質導入されたものである。細胞は、一次対象細胞およびその子孫を含む。

本明細書で同定されるポリペプチド配列に関する「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」または「相同性」は、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮して配列を整列させた後、比較されるポリペプチド中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントを、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）、またはＭＵＳＣＬＥソフトウェアなどの公共的に利用可能なコンピューターソフトウェアを使用する、当業界における技術の範囲内にある様々な方法で達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するのに必要とされる任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメーターを決定することができる。しかしながら、本明細書の目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータープログラムＭＵＳＣＬＥ（Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ３２（５）：１７９２－１７９７，２００４；Ｅｄｇａｒ，Ｒ．Ｃ．，ＢＭＣＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ５（１）：１１３，２００４）を使用して生成される。

本明細書で使用される場合、「抗原特異的免疫細胞」は、天然の、および／または操作された抗原認識受容体を介した標的細胞上の抗原の特異的認識を示す免疫細胞である。免疫細胞としては、限定されるものではないが、操作された抗原認識を示す、または示さない、αβＴ細胞、γδＴ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、およびマクロファージが挙げられる。抗原特異的免疫細胞は、ポリクローナルまたはモノクローナルであってもよい。例えば、一部の実施形態では、「抗原特異的免疫細胞」は、切除された腫瘍から単離することができる腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）；またはそれぞれの抗原結合四量体を使用して単離することができる、新生抗原特異的Ｔ細胞；または末梢血Ｔ細胞と、腫瘍抗原がロードされている樹状細胞との同時培養および活性化によって生成される樹状細胞活性化Ｔ細胞；またはＣＡＲもしくはＴＣＲ様抗原受容体を発現する、γδＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫ－Ｔ細胞、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、およびマクロファージなどの、他の免疫細胞である。

本明細書で使用される場合、「抗原特異的受容体」は、天然の、もしくは操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）、またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などの操作された抗原受容体である。

本明細書で使用される「Ｔ細胞受容体」または「ＴＣＲ」とは、ＭＨＣ分子に結合した特異的抗原性ペプチドに結合する細胞外抗原結合ドメインを含む、内因性または改変Ｔ細胞受容体を指す。一部の実施形態では、ＴＣＲは、ＴＣＲαポリペプチド鎖と、ＴＣＲβポリペプチド鎖とを含む。一部の実施形態では、ＴＣＲは腫瘍抗原に特異的に結合する。「ＴＣＲ－Ｔ」とは、組換えＴＣＲを発現するＴ細胞を指す。

本明細書で使用される場合、「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」とは、１つまたは複数の抗原特異性を、αβＴ細胞、γδＴ細胞、ＮＫ細胞、マクロファージなどの細胞に移植する、遺伝子操作された受容体を指す。ＣＡＲは、「人工Ｔ細胞受容体」、「キメラＴ細胞受容体」または「キメラ免疫受容体」としても知られる。一部の実施形態では、ＣＡＲは、腫瘍抗原に特異的な抗体の細胞外可変ドメインと、１つまたは複数の共刺激ドメインなどの、Ｔ細胞または他の受容体の細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。「ＣＡＲ－Ｔ」とは、ＣＡＲを発現するＴ細胞を指す。

本明細書における用語「抗体」は、最も広い意味で使用され、限定されるものではないが、所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体断片を含む様々な抗体構造を包含する。用語抗体は、限定されるものではないが、Ｆｖ、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、および（Ｆａｂ’）_２などの抗原に結合することができる断片を含む。用語抗体は、従来の４鎖抗体、および重鎖のみの抗体またはその断片、例えば、Ｖ_ＨＨなどの単一ドメイン抗体を含む。

本明細書で使用される場合、用語「結合する」、「特異的に結合する」または「～に特異的である」とは、生体分子を含む異種分子集団の存在下での標的の存在を決定する、標的と抗体との間の結合などの、測定可能かつ再現可能な相互作用を指す。例えば、標的（エピトープであってもよい）に結合する、または特異的に結合する抗体は、それが他の標的に結合するよりも高い親和性、アビディティで、より容易に、および／またはより長い持続期間でこの標的に結合する抗体である。一実施形態では、抗体の、非関連標的に対する結合の程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定された場合、抗体の標的に対する結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、標的に特異的に結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、または０．１ｎＭ以下の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある特定の実施形態では、抗体は、異なる種に由来するタンパク質間で保存されているタンパク質上のエピトープに特異的に結合する。別の実施形態では、特異的結合は、排他的結合を含んでもよいが、それを必要としない。

本明細書に記載の本発明の実施形態は、実施形態「からなる」および／または「から本質的になる」を含むと理解される。

本明細書で「約」のついた値またはパラメーターに対する言及は、その値またはパラメーター自体が対象となる変動を含む（かつ記述する）。例えば、「約Ｘ」と言及する記述は、「Ｘ」の記述を含む。

本明細書で使用される場合、ある値またはパラメーター「ではない」に対する言及は、一般には、ある値またはパラメーター「以外」を意味し、記述する。例えば、Ｘ型のがんを処置するために使用されない方法は、その方法が、Ｘ以外の型のがんを処置するために使用されることを意味する。

本明細書で使用される用語「約Ｘ～Ｙ」は、「約Ｘ～約Ｙ」と同じ意味を有する。

本明細書および添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、本文が別途明確に記述しない限り、複数の指示対象を含む。
ＩＩ．外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する改変抗原特異的免疫細胞

本発明の一態様は、外因性ＣＤ１６０タンパク質を（例えば、表面上に）含む改変抗原特異的免疫細胞であって、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して、改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす、改変抗原特異的免疫細胞を提供する。一部の実施形態では、アップモジュレーションは、細胞溶解性リンパ球（ＣＴＬ）活性の増大を含む。一部の実施形態では、アップモジュレーションは、免疫能力のある宿主における腫瘍殺傷活性の増強を含む。一部の実施形態では、アップモジュレーションは、Ｔ細胞および／またはＮＫ細胞媒介性殺傷の増強を含む。一部の実施形態では、アップモジュレーションは、グランザイムＡおよび／またはパーフォリンの発現の増強を含む。一部の実施形態では、アップモジュレーションは、炎症応答の増強を含む。一部の実施形態では、アップモジュレーションは、炎症性サイトカインの発現および／または分泌の増強を含む。一部の実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＦＮ－γおよび／またはＴＮＦ－αを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約８０％の同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つに対して約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞表面上の外因性ＣＤ１６０タンパク質は、多量体（限定されるものではないが、二量体、三量体、四量体、五量体または六量体など）の形態にある。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性αβＴ細胞、γδＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）からなる群から選択される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性αβＴ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞は、ＤＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞およびマクロファージからなる群から選択される。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、個体の腫瘍から単離される。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、モノクローナルである。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、ポリクローナル集団に由来する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、モノクローナルである。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ポリクローナル集団に由来する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、機能的外因性受容体をさらに含む。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である。一部の実施形態では、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、腫瘍抗原または腫瘍関連抗原を認識する。さらなる実施形態では、機能的外因性受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、同一エピトープに特異的である複数の免疫細胞である。非限定例としては、同じ機能的外因性受容体（ＣＡＲなど）をそれぞれ含む複数のＴ細胞が挙げられる。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、複数の非同一エピトープ（部分的に重複する、または全体として異なるエピトープなど）の１つにそれぞれ特異的な複数の免疫細胞である。非限定例としては、ポリクローナルＴＩＬなどの、複数のポリクローナル免疫細胞が挙げられる。

一部の実施形態では、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞であって、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型である、改変抗原特異的免疫細胞が提供される。

一部の実施形態では、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞であって、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質がグリコホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）リンカーによって膜に結合している、改変抗原特異的免疫細胞が提供される。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＧＰＩアンカーペプチド配列を含む。

一部の実施形態では、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞であって、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜貫通ドメインを含む、改変抗原特異的免疫細胞が提供される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ１６０、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＣＤ２４４、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファサブユニット、ＴＣＲベータサブユニット、またはＴＣＲゼータサブユニットからなる群から選択される分子に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ８０、ＣＤ１５２およびＰＤ－１からなる群から選択される分子に由来する。

一部の実施形態では、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞であって、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含む、改変抗原特異的免疫細胞が提供される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ１６０、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＣＤ２４４、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファサブユニット、ＴＣＲベータサブユニット、またはＴＣＲゼータサブユニットからなる群から選択される分子に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ８０、ＣＤ１５２およびＰＤ－１からなる群から選択される分子に由来する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ１６０スプライスバリアントに由来する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットは、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、およびＣＤ３イプシロンからなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｔ細胞刺激分子に由来する１つまたは複数のシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ８０、またはＣＤ２５８のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ８０、およびＣＤ２５８からなる群から選択される２つのシグナル伝達ドメインの組合せを含む。［［ＣＤ１６０－ＴＭ＋共刺激；カバー５－７＋］］

一部の実施形態では、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞であって、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含み、細胞内ドメインが１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、改変抗原特異的免疫細胞が提供される。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８個のいずれか、またはそれより多い共刺激シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、１、２、３、４、または５個以下のいずれか１つの共刺激シグナル伝達ドメイン含有する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインまたは４－１ＢＢとＣＤ３ζドメインとの組合せを含まない。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＣＤ８０、ＣＤ２５８、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド、およびそれらの組合せからなる群から選択される共刺激分子に由来する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、またはその両方を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外ＣＤ１６０ドメイン、膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、および４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外ＣＤ１６０ドメイン、膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ２８共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、膜貫通ドメインに隣接する。一部の実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、膜貫通ドメインのＣ末端に隣接する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、一次シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζドメインを含む。他の実施形態では、細胞内ドメインは、一次シグナル伝達ドメインを含まない。他の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζドメインまたは４－１ＢＢとＣＤ３ζドメインとの組合せを含まない。

一部の実施形態では、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞であって、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が免疫細胞結合部分によって改変抗原特異的免疫細胞に結合している、改変抗原特異的免疫細胞が提供される。一部の実施形態では、免疫細胞結合部分は、免疫細胞の表面分子に結合する。一部の実施形態では、免疫細胞結合部分は、Ｔ細胞表面分子を認識する抗体を含む。一部の実施形態では、抗体は、全長抗体またはｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）_２、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、もしくはＶ_ＨＨドメインなどの抗体断片であってもよい。非限定例としては、ＴＣＲを認識する、および／またはＴＣＲシグナル伝達を活性化する抗ＣＤ３ε抗体が挙げられる。一部の実施形態では、免疫細胞結合部分は、コグネートＴ細胞表面受容体に結合するリガンドを含む。非限定例としては、ＴＣＲおよびＩＬ－２を認識する腫瘍特異的ペプチドＭＨＣ複合体が挙げられる。

本明細書に記載の改変抗原特異的免疫細胞のいずれかに記載の一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約８０％の同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つに対して約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞表面上の外因性ＣＤ１６０タンパク質は、多量体（限定されるものではないが、二量体、三量体、四量体、五量体または六量体など）の形態にある。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性αβＴ細胞、γδＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）からなる群から選択される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞は、ＤＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞およびマクロファージからなる群から選択される。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、個体の腫瘍から単離される。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、モノクローナルである。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、ポリクローナル集団に由来する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、モノクローナルである。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ポリクローナル集団に由来する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、機能的外因性受容体をさらに含む。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である。一部の実施形態では、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、腫瘍抗原または腫瘍関連抗原を認識する。さらなる実施形態では、機能的外因性受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、同一エピトープに特異的である複数の免疫細胞である。非限定例としては、同じ機能的外因性受容体（ＣＡＲなど）をそれぞれ含む複数のＴ細胞が挙げられる。一部の実施形態では、改変免疫細胞は、複数の非同一エピトープ（部分的に重複する、または全体として異なるエピトープなど）の１つにそれぞれ特異的な複数の免疫細胞である。非限定例としては、ポリクローナルＴＩＬなどの、複数のポリクローナル免疫細胞が挙げられる。

一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、天然の抗原認識を示す。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、操作された抗原認識を示す。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞の抗原認識は、限定されるものではないが、ＣＡＲおよびＴＣＲなどの機能的外因性受容体によって少なくとも部分的に付与される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、腫瘍関連抗原、突然変異発がん抗原および無作為体細胞抗原、ならびに他の新生抗原を標的とする。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ヒト免疫細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、マウス免疫細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ＴＣＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＩＬ、または内因性抗原特異的Ｔ細胞のうちの１つまたは複数から改変される。ヒトおよびマウスＴＣＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＩＬ、または内因性抗原特異的Ｔ細胞の一部の例は、Ｔｒａｎｅｔａｌ．，ＮａｔＩｍｍｕｎｏｌ．２０１７；１８（３）：２５５－６２、ＭａｃＫａｙｅｔａｌ．，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０２０；３８（２）：２３３－４４およびＳｃｈｕｍａｃｈｅｒｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＮｅｏａｎｔｉｇｅｎｓ．ＡｎｎｕＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ．２０１９；３７：１７３－２００に報告されており、これらは参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、広範囲の抗原を標的とする。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、表１に列挙される抗原の１つまたは複数を標的とする。
表１：腫瘍抗原および関連するがん適応の例示的一覧

一部の実施形態では、本明細書に記載の改変抗原特異的免疫細胞のいずれかを含む医薬組成物が提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載の改変抗原特異的免疫細胞のいずれか１つを生成するための方法が提供される。
外因性ＣＤ１６０を含む改変抗原特異的免疫細胞のライブラリーおよび抗原特異的免疫細胞をスクリーニングする方法

一部の実施形態では、異なる抗原（腫瘍抗原または腫瘍関連抗原など）を認識する機能的外因性受容体をそれぞれ有する抗原特異的免疫細胞（Ｔ細胞など）のライブラリーが提供される。一態様では、異なる腫瘍または腫瘍関連抗原を認識する機能的外因性受容体をそれぞれ有する抗原特異的免疫細胞（Ｔ細胞など）のライブラリーであって、ライブラリー中のそれぞれの抗原特異的免疫細胞が、その表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質をさらに含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体免疫細胞と比較して改変免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす、ライブラリーが提供される。

一態様では、ポリクローナル免疫細胞（ＴＩＬなど）のライブラリーであって、ポリクローナル組成物中のそれぞれの免疫細胞が、複数の非同一エピトープ（部分的に重複する、または完全に異なるエピトープなど）の１つに特異的であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体免疫細胞と比較して改変免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす、ライブラリーが提供される。

一部の実施形態では、試験抗原に特異的な機能的外因性受容体を含む免疫細胞についてスクリーニングする方法であって、試験抗原と、異なる抗原（腫瘍または腫瘍関連抗原など）を認識する機能的外因性受容体をそれぞれ有する抗原特異的免疫細胞（Ｔ細胞など）のライブラリーとを接触させることを含み、ライブラリー中のそれぞれの抗原特異的免疫細胞が、その表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質をさらに含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体免疫細胞と比較して改変免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす、方法が提供される。機能的外因性受容体（所望の機能的外因性受容体など）を発現する所望の抗原特異的免疫細胞を、試験抗原と、異なる抗原を認識する機能的外因性受容体をそれぞれ有する抗原特異的免疫細胞（Ｔ細胞など）のライブラリーとを接触させた後、ライブラリー中の細胞の試験抗原に対する結合活性を分析することによって、または限定されるものではないが、任意のサイトカイン分泌（例えば、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－αおよび／もしくはＩＬ－２）のＥＬＩＳＡ分析などの、ライブラリー中の細胞の抗原特異的免疫活性を測定することによって、同定することができる。

一部の実施形態では、試験抗原に特異的な免疫細胞をスクリーニングする方法であって、試験抗原と、ポリクローナル免疫細胞（ＴＩＬなど）のライブラリーとを接触させることを含み、ポリクローナル組成物中のそれぞれの免疫細胞が、複数の非同一エピトープ（部分的に重複する、または完全に異なるエピトープなど）のうちの１つに特異的であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体免疫細胞と比較して改変免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす、方法が提供される。ポリクローナル組成物内の所望の抗原特異的免疫細胞を、試験抗原と、それぞれの細胞が複数の非同一エピトープのうちの１つに特異的である、ポリクローナル免疫細胞（ＴＩＬなど）のライブラリーとを接触させた後、ライブラリー中の細胞の試験抗原に対する結合活性を分析することによって、または限定されるものではないが、任意のサイトカイン分泌（例えば、ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－αおよび／もしくはＩＬ－２）のＥＬＩＳＡ分析などの、ライブラリー中の細胞の抗原特異的免疫活性を測定することによって、同定することができる。

上記の方法のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、試験抗原は、１つまたは複数の免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、試験抗原は、腫瘍溶解物などの溶解物に由来する。一部の実施形態では、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞のライブラリーは、複数の前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞のライブラリーを生産することを含むプロセスによって生産される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれかのアミノ酸配列、または配列番号１～４に対して少なくとも約８０％の同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性αβＴ細胞、γδＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）からなる群から選択される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞は、ＤＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞およびマクロファージからなる群から選択される。
ＣＤ１６０タンパク質

本明細書に記載の改変抗原特異的免疫細胞は、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現し、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす。本出願はまた、外因性ＣＤ１６０タンパク質およびその組成物も提供する。表２は、例示的な外因性ＣＤ１６０タンパク質の配列を示す。

一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす、天然に存在するＣＤ１６０ポリペプチドを含む外因性ＣＤ１６０タンパク質またはその断片が提供される。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質またはその断片からなる、またはそれから本質的になる。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質のＩｇ様Ｖ型ドメイン、またはその断片を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質のシステインリッチドメイン、またはその断片を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、アミノ酸配列の番号付けが配列番号１～３のいずれか１つに基づくものである、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質のアミノ酸２５～１３３を含む。

一部の実施形態では、細胞表面上の外因性ＣＤ１６０タンパク質は、単量体形態にある。一部の実施形態では、細胞表面上の外因性ＣＤ１６０タンパク質は、多量体にある。一部の実施形態では、細胞表面上の外因性ＣＤ１６０タンパク質は、二量体、三量体、四量体、五量体、または六量体などの多量体にある。一部の実施形態では、多量体は、１つまたは複数の外因性ＣＤ１６０タンパク質と、１つまたは複数の天然に存在するＣＤ１６０タンパク質とを含む。一部の実施形態では、多量体は、１つまたは複数の外因性ＣＤ１６０タンパク質と、１つまたは複数の内因性ＣＤ１６０タンパク質とを含む。一部の実施形態では、細胞表面上のＣＤ１６０タンパク質多量体は、共有結合している。一部の実施形態では、細胞表面上のＣＤ１６０タンパク質多量体は、ジスルフィド結合している。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質中の少なくとも１、２、３、または４個のシステイン残基が突然変異している。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、システイン残基Ｃｙｓ２６、Ｃｙｓ４４、Ｃｙｓ６１、Ｃｙｓ６８、Ｃｙｓ１１２、Ｃｙｓ１１３中に１つまたは複数の突然変異、またはその任意の組合せをさらに含む、配列番号１～３のいずれか１つのアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、システイン残基Ｃｙｓ２９、Ｃｙｓ４７、Ｃｙｓ６４、Ｃｙｓ７１、Ｃｙｓ１１５、Ｃｙｓ１１６中に１つまたは複数の突然変異、またはその任意の組合せをさらに含む、配列番号４のアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、上記の１つまたは複数の突然変異を有する外因性ＣＤ１６０タンパク質は、多量体を形成することができない。

一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質と同じか、または本質的に同じ、ＭＨＣ－Ｉに対する結合親和性を示す。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質と比較して、ＭＨＣ－Ｉに対する増大した結合親和性を示す。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質のＭＨＣ－Ｉ結合親和性は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質のものよりも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％のうちのいずれか１つの割合で、高い。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質のＭＨＣ－Ｉ結合親和性は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質のものよりも約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約４０倍、約５０倍、または約１００倍のうちのいずれか１つの変化倍数で、高い。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質と比較して、ＭＨＣ－Ｉに対する低下した結合親和性を示す。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質のＭＨＣ－Ｉ結合親和性は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質のものよりも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％のうちのいずれか１つの割合で、低い。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質のＭＨＣ－Ｉ結合親和性は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質のものの約２分の１、約３分の１、約４分の１、約５分の１、約１０分の１、約１５分の１、約２０分の１、約２５分の１、約３０分の１、約４０分の１、約５０分の１、または約１００分の１のうちのいずれか１つである。

一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質と同じか、または本質的に同じ、ヘルペスウイルス侵入メディエータ（ＨＶＥＭ）に対する結合親和性を示す。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質と比較して、ＨＶＥＭに対する増大した結合親和性を示す。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質のＨＶＥＭ結合親和性は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質のものよりも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％のうちのいずれか１つの割合で、高い。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質のＨＶＥＭ結合親和性は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質のものよりも約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約２５倍、約３０倍、約４０倍、約５０倍、または約１００倍のうちのいずれか１つの変化倍数で、高い。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質と比較して、ＨＶＥＭに対する減少した結合親和性を示す。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質のＨＶＥＭ結合親和性は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質のものよりも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約１００％のうちのいずれか１つの割合で、低い。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質のＨＶＥＭ結合親和性は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質のものの約２分の１、約３分の１、約４分の１、約５分の１、約１０分の１、約１５分の１、約２０分の１、約２５分の１、約３０分の１、約４０分の１、約５０分の１、または約１００分の１のうちのいずれか１つである。

一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＨＶＥＭへの結合についてＢＴＬＡ（ＣＤ２７２としても知られる）と競合する。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＨＶＥＭへの結合についてＢＴＬＡと競合しない。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＢＴＬＡと類似するＨＶＥＭに対する結合親和性を示す。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＢＴＬＡと比較してより高い、ＨＶＥＭに対する結合親和性を示す。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＢＴＬＡと比較してより低い、ＨＶＥＭに対する結合親和性を示す。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＢＴＬＡと同じか、または本質的に同じ、ＨＶＥＭに対する結合親和性を示す。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＢＴＬＡと比較してより高い、ＨＶＥＭに対する結合親和性を示す。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＢＴＬＡと比較してより低い、ＨＶＥＭに対する結合親和性を示す。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＢＴＬＡと同じか、または本質的に同じ、ＨＶＥＭ結合からの解離速度を示す。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＢＴＬＡと比較してより高い、ＨＶＥＭ結合からの解離速度を示す。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＢＴＬＡと比較してより低い、ＨＶＥＭ結合からの解離速度を示す。

一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９０％の同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つに対する少なくとも約８５％、約８７％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％のいずれか１つまたはそれより高い配列同一性などの、少なくとも約８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つに対して約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、哺乳動物のＣＤ１６０タンパク質に由来する。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、マウス、イヌ、ネコ、ウマ、ラット、ヤギ、またはウサギのＣＤ１６０タンパク質に由来する。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ヒトのＣＤ１６０タンパク質に由来する。

一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、全長ＣＤ１６０タンパク質を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０は、配列番号１～４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。限定されるものではないが、ＵｎｉＰｒｏｔ（ワールドワイドウェブｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）受託番号Ｏ９５９７１およびＯ８８８７５を有する配列を含む、ＣＤ１６０タンパク質配列が当業界で公知である。限定されるものではないが、ＮＣＢＩ（ワールドワイドウェブｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）受託番号ＮＭ＿００７０５３．３、ＸＭ＿００５２７２９２９．３、およびＮＭ＿００１１６３４９７．１を有する配列を含む、ＣＤ１６０タンパク質をコードするｍＲＮＡの配列も当業界で公知である。

一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、少なくとも約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約１２５、約１５０、約１７５、約２００、約２５０、約３００、約３５０、約４００、約４５０、約５００、約５５０、約６００個のいずれか１つまたはそれより多いアミノ酸を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、約６００、約５５０、約５００、約４５０、約３５０、約３００、約２５０、約２００、約１７５、約１５０、約１２５、約１００、約９０、約８０、約７０、約６０、約５０個以下のいずれか１つ、またはそれより少ないアミノ酸を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、約５０～６０、約５０～７５、約５０～１００、約５０～１５０、約５０～２００、約５０～２５０、約１００～１５０、約１００～２００、約１００～２５０、約１５０～２５０、約２５０～５００、または約５０～５５０個のいずれか１つのアミノ酸を含む。

一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質のアミノ酸配列バリアントまたはその断片を含む。例えば、ＣＤ１６０タンパク質の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善するのが望ましい場合がある。ＣＤ１６０タンパク質のアミノ酸配列バリアントを、ＣＤ１６０タンパク質をコードするヌクレオチド配列中に適切な改変を導入することによって、またはペプチド合成によって調製することができる。そのような改変としては、例えば、ＣＤ１６０タンパク質のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／またはそれへの挿入、および／またはその置換が挙げられる。最終構築物が所望の特性、例えば、炎症促進活性を有するという条件で、最終構築物に到達するために、任意の組合せの欠失、挿入、および置換を作製することができる。

一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質または天然に存在するＣＤ１６０タンパク質もしくはその断片の配列と比較して、１つもしくは複数（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、１０、１５、２０個の、もしくはそれより多いアミノ酸）の保存的置換を有するその断片を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、天然に存在するＣＤ１６０タンパク質または天然に存在するＣＤ１６０タンパク質もしくはその断片の配列に対して少なくとも約８５％、約８７％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％のいずれか１つもしくはそれより高い配列同一性などの、少なくとも約８０％の配列同一性を有するその断片を含む。

保存的置換を、以下の表３に示す。
表３：保存的置換

アミノ酸を、共通の側鎖特性に従って異なるクラスに分類することができる：
ａ．疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
ｂ．中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
ｃ．酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
ｄ．塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
ｅ．鎖の向きに影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
ｆ．芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスに交換することを必要とするであろう。

当業者であれば、突然変異誘発、ポリメラーゼ連鎖反応、相同組換え、または当業者には公知の任意の他の遺伝子操作技法を含む、任意の好適な方法を、目的の遺伝子中で突然変異を生成するために使用することができることを認識できるであろう。突然変異は、単一のヌクレオチド（ＤＮＡ配列内の単一のヌクレオチド塩基の除去、付加もしくは置換を含む点突然変異など）を含んでもよいか、またはそれは多数のヌクレオチドの挿入もしくは欠失を含んでもよい。突然変異は、ＤＮＡ複製の忠実性におけるエラーなどの事象の結果として自発的に生じ得るか、または化学的もしくは物理的変異原への曝露後に誘導される。突然変異はまた、当業者には周知である特定の標的化方法の使用による部位特異的なものであってもよい。

突然変異誘発のために標的化することができるポリペプチドの残基または領域の同定のための有用な方法は、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍａｎｄＷｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５によって記載されたように、「アラニンスキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、およびｇｌｕなどの荷電残基）の残基または群が同定され、ポリペプチド剤（例えば、ＣＤ１６０バリアント）による免疫アップモジュレーションが影響されるかどうかを決定するために、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）で置き換えられる。さらなる置換を、初期の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入してもよい。あるいは、またはさらに、ＣＤ１６０：ＭＨＣＩ複合体またはＣＤ１６０：ＨＶＥＭ複合体の結晶構造を決定して、それぞれ、ＣＤ１６０とＭＨＣ－Ｉとの間またはＣＤ１６０とＨＶＥＭとの間の接触点を同定することができる。そのような接触残基および近隣残基を、疾患兆候に応じて抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の機能を増強するか、または抑制するための置換のための候補として標的化または除去することができる。バリアントをスクリーニングして、それらが所望の特性を含有するかどうかを決定することができる。

アミノ酸配列挿入としては、１個の残基から、１００個またはそれより多い残基を含有するポリペプチドまでの長さの範囲のアミノおよび／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。

一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、改変抗原特異的免疫細胞から分泌される。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、シグナルペプチドを含む。シグナルペプチド（「リーダー配列」としても知られる）は、典型的には、Ｍｅｔイニシエーターの直後でタンパク質のＮ末端に挿入される。シグナルペプチドを、改変抗原特異的免疫細胞からの外因性ＣＤ１６０タンパク質の輸送時に切断して、成熟タンパク質を形成させることができる。シグナルペプチドは、天然または合成のものであってよく、それらは、それらが結合するタンパク質にとって異種または同種であってもよい。シグナルペプチドの選択は広く、例えば、ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ＮａｔｉｏｎａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｉｎｇａｐｏｒｅによって維持されるオンラインのＬｅａｄｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅＤａｔａｂａｓｅなどにおいて当業者にはアクセス可能である。Ｃｈｏｏｅｔａｌ．，ＢＭＣＢｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ，６：２４９（２００５）；およびＰＣＴ公開番号ＷＯ２００６／０８１４３０を参照されたい。
機能的外因性受容体

任意の上記の改変抗原特異的免疫細胞は、機能的外因性受容体をさらに発現してもよい。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、操作された受容体である。例示的な機能的外因性受容体としては、限定されるものではないが、ＣＡＲおよび操作されたＴＣＲが挙げられる。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、抗原（例えば、腫瘍抗原）に特異的に結合する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインおよび／または共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＴＣＲ共受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする異種核酸配列によってコードされる。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、プロモーター（構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターなど）に作動可能に連結された第２の異種核酸によってコードされる。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、ＣＥＬＬＳＱＵＥＥＺＥ（登録商標）（例えば、米国特許出願公開第２０１４０２８７５０９号を参照されたい）などの、マイクロ流体システムに細胞を通過させながら、タンパク質を細胞膜に挿入することによって、改変抗原特異的免疫細胞に導入される。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、ＣＲＩＳＰＲ媒介性遺伝子編集によって改変免疫細胞に導入される。機能的外因性受容体は、改変抗原特異的免疫細胞を標的化すること、シグナルを形質導入すること、および／または改変抗原特異的免疫細胞の細胞傷害性を増強することなどによって、改変抗原特異的免疫細胞の機能を増強することができる。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ＣＡＲまたはＴＣＲなどの機能的外因性受容体を発現しない。

一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、少なくとも１つの腫瘍抗原を標的とする１つまたは複数の特異的結合ドメインと、１つもしくは複数の一次細胞内シグナル伝達ドメインおよび／または共刺激ドメインなどの１つまたは複数の細胞内エフェクタードメインとを含む。

一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。多くのキメラ抗原受容体が当業界で公知であり、本発明の改変抗原特異的免疫細胞にとって好適であってよい。例えば、抗体分子の抗原結合断片または抗体可変ドメインを利用することによって、任意の細胞表面マーカーに対する特異性を有するＣＡＲを構築することもできる。ＣＡＲを生産するための任意の方法を、本明細書において使用することができる。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，４１０，３１９号、米国特許第７，４４６，１９１号、米国特許第７，５１４，５３７号、米国特許第９７６５３４２Ｂ２号、ＷＯ２００２／０７７０２９、ＷＯ２０１５／１４２６７５、ＵＳ２０１０／０６５８１８、ＵＳ２０１０／０２５１７７、ＵＳ２００７／０５９２９８、ＷＯ２０１７０２５０３８Ａ１、およびＢｅｒｇｅｒＣ．ｅｔａｌ．，Ｊ．ＣｌｉｎｉｃａｌＩｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ１１８：１２９４－３０８（２００８）を参照されたい。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ＣＡＲ－αβＴ細胞、ＣＡＲ－γδＴ細胞、ＣＡＲ－ＮＫ細胞、またはＣＡＲ－マクロファージである。

本発明のＣＡＲは、少なくとも１つの腫瘍抗原に特異的に結合する少なくとも１つの標的化ドメインを含む細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞、例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞の免疫エフェクター機能を促進するシグナルを生成する。「免疫エフェクター機能または免疫エフェクター応答」とは、例えば、標的細胞の免疫攻撃を増強する、または促進する、免疫エフェクター細胞の機能または応答を指す。例えば、免疫エフェクター機能または応答は、標的細胞の殺傷またはその成長もしくは増殖の阻害を促進するＴまたはＮＫ細胞の特性を指してもよい。例えば、ＣＡＲ－Ｔ細胞における免疫エフェクター機能の例としては、細胞溶解活性（抗体依存性細胞傷害、またはＡＤＣＣなど）およびヘルパー活性（サイトカインの分泌など）が挙げられる。一部の実施形態では、ＣＡＲは、免疫エフェクター機能が減弱した細胞内シグナル伝達ドメインを有する。一部の実施形態では、ＣＡＲは、全長および野生型ＣＤ３ζならびに必要に応じて、１つまたは複数の共刺激ドメインを有するＣＡＲと比較して、約９０％、約８０％、約７０％、約６０％、約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％以下のいずれかまたはそれ未満の免疫エフェクター機能（標的細胞に対する細胞溶解機能など）を有する細胞内シグナル伝達ドメインを有する。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＡＲ含有細胞の増殖および／または生存を促進するシグナルを生成する。一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ２８、ＣＤ１３７、ＣＤ３、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、およびＯＸ４０のシグナル伝達ドメインから選択される１つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。天然に存在する分子のシグナル伝達ドメインは、分子の、細胞内（すなわち、細胞質）部分全体、もしくは天然細胞内シグナル伝達ドメイン全体、またはその断片もしくは誘導体を含んでもよい。

一部の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含む。「一次細胞内シグナル伝達ドメイン」とは、刺激様式で作用して、免疫エフェクター機能を誘導する細胞質シグナル伝達配列を指す。一部の実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ、またはＩＴＡＭとして知られるシグナル伝達モチーフを含有する。一部の実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、共通ＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲｉｂ）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２からなる群から選択されるタンパク質の機能的シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、一次細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ゼータ、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、ＣＤ３イプシロン、共通ＦｃＲガンマ（ＦＣＥＲ１Ｇ）、ＦｃＲベータ（ＦｃイプシロンＲｉｂ）、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＦｃガンマＲＩＩａ、ＤＡＰ１０、およびＤＡＰ１２からなる群から選択されるタンパク質の非機能的な、または減弱されたシグナル伝達ドメインを含む。非機能的な、または減弱されたシグナル伝達ドメインは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を含む、細胞溶解活性またはヘルパー活性などの１つまたは複数の免疫エフェクター機能を減弱させる、または無効化する点突然変異、挿入または欠失を有する突然変異シグナル伝達ドメインであってもよい。一部の実施形態では、ＣＡＲは、非機能的な、または減弱されたＣＤ３ゼータ（すなわち、ＣＤ３ζまたはＣＤ３ｚ）シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、一次細胞内シグナル伝達ドメインを含まない。減弱された一次細胞内シグナル伝達ドメインは、同じ構築物を有するが、野生型一次細胞内シグナル伝達ドメインを有するＣＡＲと比較して、約９０％、約８０％、約７０％、約６０％、約５０％、約４０％、約３０％、約２０％、約１０％以下のいずれかまたはそれ未満の免疫エフェクター機能（標的細胞に対する細胞溶解機能など）を誘導してもよい。

一部の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、１つまたは複数（１、２、３つのいずれか、またはそれより多いものなど）の共刺激ドメインを含む。「共刺激ドメイン」は、共刺激分子の細胞内部分であってもよい。用語「共刺激分子」とは、共刺激リガンドと特異的に結合することによって、限定されるものではないが、増殖および生存などの免疫細胞による共刺激応答を媒介する、免疫細胞（Ｔ細胞など）上のコグネート結合パートナーを指す。共刺激分子は、抗原受容体以外の細胞表面分子または効率的な免疫応答に寄与するそのリガンドである。共刺激分子は、以下のタンパク質ファミリーに代表され得る：ＴＮＦ受容体タンパク質、免疫グロブリン様タンパク質、サイトカイン受容体、インテグリン、シグナル伝達リンパ球活性化分子（ＳＬＡＭタンパク質）、および活性化ＮＫ細胞受容体。共刺激分子としては、限定されるものではないが、ＭＨＣクラスＩ分子、ＢＴＬＡおよびＴｏｌｌリガンド受容体、ならびにＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、および４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）が挙げられる。そのような共刺激分子のさらなる例としては、ＣＤＳ、ＩＣＡＭ－１、ＧＩＴＲ、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦ１）、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＣＤ４、ＣＤ８アルファ、ＣＤ８ベータ、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒアルファ、ＩＴＧＡ４、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＮＫＧ２Ｄ、ＮＫＧ２Ｃ、ＴＮＦＲ２、ＴＲＡＮＣＥ／ＲＡＮＫＬ、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＣＤ６９、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＬＡＴ、ＧＡＤＳ、ＳＬＰ－７６、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＣＤ１９ａ、およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドが挙げられる。

一部の実施形態では、ＣＡＲは、単一の共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、２つのまたはそれより多い共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、機能的一次細胞内シグナル伝達ドメインおよび１つまたは複数の共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、機能的一次細胞内シグナル伝達ドメイン（ＣＤ３ζなど）を含まない。一部の実施形態では、ＣＡＲは、１つまたは複数の共刺激ドメインからなる、またはそれから本質的になる細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲは、非機能的な、または減弱された一次細胞内シグナル伝達ドメイン（突然変異ＣＤ３ζなど）と、１つまたは複数の共刺激ドメインとからなる、またはそれから本質的になる細胞内シグナル伝達ドメインを含む。標的化ドメインの腫瘍抗原への結合時に、ＣＡＲの共刺激ドメインは、ＣＡＲを有する操作された免疫細胞（Ｔ細胞など）の増殖、生存および分化の増強のためのシグナルを形質導入し、活性化誘導細胞死を阻害することができる。一部の実施形態では、１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）、ＯＸ４０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、リンパ球機能関連抗原－１（ＬＦＡ－１）、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３およびＣＤ８３に特異的に結合するリガンドからなる群から選択される１つまたは複数の分子に由来する。

一部の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインと、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメインとを含む。一部の実施形態では、本出願のキメラ受容体中の細胞内シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ（すなわち、ＣＤ１３７）に由来する共刺激シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインと、４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメインとを含む。

一部の実施形態では、ＣＡＲの細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメインと、４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメインとを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメイン、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメイン、および４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内シグナル伝達ドメインは、Ｎ末端からＣ末端に向かって、ＣＤ２８の共刺激シグナル伝達ドメイン、４－１ＢＢの共刺激シグナル伝達ドメイン、およびＣＤ３ζの細胞質シグナル伝達ドメインを含むポリペプチドを含む。

一部の実施形態では、ＣＡＲの標的化ドメインは、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）_２、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはＶ_ＨＨドメインなどの、抗体または抗体断片である。一部の実施形態では、ＣＡＲの標的化ドメインは、腫瘍抗原に特異的に結合する受容体のリガンドまたは細胞外部分である。一部の実施形態では、ＣＡＲの１つまたは複数の標的化ドメインは、単一の腫瘍抗原に特異的に結合する。一部の実施形態では、ＣＡＲは、２つの、またはそれより多い腫瘍抗原に結合する標的化ドメインを含む二重特異性または多重特異性ＣＡＲである。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｖＩＩＩなど）、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＷＴ１、および臨床的有意性を有する他の腫瘍抗原、ならびにそれらの組合せからなる群から選択される。

一部の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、Ｔ細胞受容体のアルファ、ベータまたはゼータ鎖、ＣＤ２８、ＣＤ３イプシロン、ＣＤ４５、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ８、ＣＤ９、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ６４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＫＩＲＤＳ２、ＯＸ４０、ＣＤ２、ＣＤ２７、ＬＦＡ－１（ＣＤ１１ａ、ＣＤ１８）、ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＧＩＴＲ、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＨＶＥＭ（ＬＩＧＨＴＲ）、ＳＬＡＭＦ７、ＮＫｐ８０（ＫＬＲＦｌ）、ＣＤ１６０、ＣＤ１９、ＩＬ－２Ｒベータ、ＩＬ－２Ｒガンマ、ＩＬ－７Ｒａ、ＩＴＧＡ１、ＶＬＡ１、ＣＤ４９ａ、ＩＴＧＡ４、ＩＡ４、ＣＤ４９Ｄ、ＩＴＧＡ６、ＶＬＡ－６、ＣＤ４９ｆ、ＩＴＧＡＤ、ＣＤ１１ｄ、ＩＴＧＡＥ、ＣＤ１０３、ＩＴＧＡＬ、ＣＤ１１ａ、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＡＭ、ＣＤ１１ｂ、ＩＴＧＡＸ、ＣＤ１１ｃ、ＩＴＧＢ１、ＣＤ２９、ＩＴＧＢ２、ＣＤ１８、ＬＦＡ－１、ＩＴＧＢ７、ＴＮＦＲ２、ＤＮＡＭ１（ＣＤ２２６）、ＳＬＡＭＦ４（ＣＤ２４４、２Ｂ４）、ＣＤ８４、ＣＤ９６（Ｔａｃｔｉｌｅ）、ＣＥＡＣＡＭ１、ＣＲＴＡＭ、Ｌｙ９（ＣＤ２２９）、ＣＤ１６０（ＢＹ５５）、ＰＳＧＬ１、ＣＤＩＯＯ（ＳＥＭＡ４Ｄ）、ＳＬＡＭＦ６（ＮＴＢ－Ａ、Ｌｙｌ０８）、ＳＬＡＭ（ＳＬＡＭＦ１、ＣＤ１５０、ＩＰＯ－３）、ＢＬＡＭＥ（ＳＬＡＭＦ８）、ＳＥＬＰＬＧ（ＣＤ１６２）、ＬＴＢＲ、ＰＡＧ／Ｃｂｐ、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４６、ＮＫＧ２Ｄ、および／またはＮＫＧ２Ｃの膜貫通ドメインから選択される膜貫通ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ４、ＣＤ３、ＣＤ８α、またはＣＤ２８の膜貫通ドメインである。一部の実施形態では、ＣＡＲの膜貫通ドメインは、ＣＤ８αの膜貫通ドメインを含む。

一部の実施形態では、細胞外ドメインは、ヒンジ領域によって膜貫通ドメインに接続される。一実施形態では、ヒンジ領域は、ＣＤ８αのヒンジ領域を含む。

一部の実施形態では、ＣＡＲは、ＣＤ８αＳＰなどのシグナルペプチドを含む。

一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、改変Ｔ細胞受容体である。一部の実施形態では、操作されたＴＣＲは、腫瘍抗原に特異的である。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、ＣＤ１９、ＢＣＭＡ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＶＥＧＦＲ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３８、ＣＥＡ、ＥＧＦＲ（ＥＧＦＲｖＩＩＩなど）、ＧＤ２、ＨＥＲ２、ＩＧＦ１Ｒ、メソテリン、ＰＳＭＡ、ＲＯＲ１、ＷＴ１、および臨床的有意性を有する他の腫瘍抗原からなる群から選択される。一部の実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍細胞の細胞内タンパク質に由来する。例えば、ＮＹ－ＥＳＯ－１がん精巣抗原、ｐ５３腫瘍抑制抗原、黒色腫（例えば、ＭＡＲＴＩ、ｇｐ１００）、白血病（例えば、ＷＴ１、マイナー組織適合性抗原）、および乳がん（例えば、ＨＥＲ２、ＮＹ－ＢＲ１）における腫瘍抗原のためのＴＣＲを含む、腫瘍抗原（腫瘍関連抗原を含む）に特異的な多くのＴＣＲが記載されている。当業界で公知の任意のＴＣＲを、本出願において使用することができる。一部の実施形態では、ＴＣＲは、腫瘍抗原に対する親和性が増強している。例示的なＴＣＲおよびＴＣＲを免疫細胞に導入するための方法は、例えば、米国特許第５，８３０，７５５号、およびＫｅｓｓｅｌｓｅｔａｌ．ＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙｔｈｒｏｕｇｈＴＣＲｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｒ．Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２，９５７－９６１（２００１）に記載されている。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ＴＣＲ－Ｔ細胞である。

ＴＣＲ受容体複合体は、３つの二量体シグナル伝達モジュールＣＤ３δ／ε、ＣＤ３γ／εおよびＣＤ２４７（Ｔ細胞表面糖タンパク質ＣＤ３ゼータ鎖）ζ／ζまたはζ／ηを含む可変ＴＣＲ受容体αおよびβ鎖（γδＴ細胞の場合はγおよびδ鎖）によって形成される八量体複合体である。各サブユニットの膜貫通ドメイン中のイオン化可能残基は、複合体を一緒に保持する相互作用の極性ネットワークを形成する。ＴＣＲ複合体は、Ｔ細胞におけるシグナル伝達カスケードを活性化する機能を有する。

一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、任意の組合せのＣＡＲ、またはＴＣＲ受容体などの、１より多い機能的外因性受容体を発現する。

一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞により発現される機能的外因性受容体（ＣＡＲまたはＴＣＲなど）は、１つまたは複数の腫瘍抗原を標的とする。腫瘍抗原は、免疫応答、特に、Ｔ細胞媒介性免疫応答を惹起することができる腫瘍細胞によって産生されるタンパク質である。本発明の標的とされる抗原の選択は、処置しようとする特定の型のがんに依存するであろう。例示的な腫瘍抗原としては、例えば、グリオーマ関連抗原、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、β－ヒト絨毛性ゴナドトロピン、アルファフェトタンパク質（ＡＦＰ）、レクチン反応性ＡＦＰ、サイログロブリン、ＲＡＧＥ－１、ＭＮ－ＣＡＩＸ、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２（ＡＳ）、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔｈｓｐ７０－２、Ｍ－ＣＳＦ、プロスターゼ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＡＰ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－ｌａ、ｐ５３、プロステイン、ＰＳＭＡ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、スルビビンおよびテロメラーゼ、前立腺癌腫瘍抗原－１（ＰＣＴＡ－１）、ＭＡＧＥ、ＥＬＦ２Ｍ、好中球エラスターゼ、エフリンＢ２、ＣＤ２２、インスリン増殖因子（ＩＧＦ）－Ｉ、ＩＧＦ－ＩＩ、ＩＧＦ－Ｉ受容体ならびにメソテリンが挙げられる。

一部の実施形態では、腫瘍抗原は、悪性腫瘍と関連する１つまたは複数の抗原性がんエピトープを含む。悪性腫瘍は、免疫攻撃のための標的抗原として働き得るいくつかのタンパク質を発現する。これらの分子としては、限定されるものではないが、黒色腫におけるＭＡＲＴ－１、チロシナーゼおよびｇｐ１００ならびに前立腺がんにおける前立腺酸性ホスファターゼ（ＰＡＰ）および前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）などの組織特異的抗原が挙げられる。他の標的分子は、がん遺伝子ＨＥＲ２／Ｎｅｕ／ＥｒｂＢ－２などの形質転換関連分子の群に属する。さらに別の群の標的抗原は、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）などのがん胎児抗原である。Ｂ細胞リンパ腫では、腫瘍特異的イディオタイプ免疫グロブリンは、個々の腫瘍にとって独特のものである真の腫瘍特異的免疫グロブリン抗原を構成する。ＣＤ１９、ＣＤ２０およびＣＤ３７などのＢ細胞分化抗原は、Ｂ細胞リンパ腫における標的抗原のための他の候補である。

一部の実施形態では、腫瘍抗原は、腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）または腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）である。ＴＳＡは、腫瘍細胞にとって独特のものであり、体内の他の細胞上には存在しない。ＴＡＡ関連抗原は、腫瘍細胞にとって独特のものではなく、その代わりに、抗原に対して免疫寛容の状態を誘導することができない条件下では正常細胞上でも発現される。腫瘍上での抗原の発現は、免疫系が抗原に応答することができる条件下で起こり得る。ＴＡＡは、免疫系が未熟であり、応答することができない場合、胎児発生の間に正常細胞上で発現される抗原であってよいか、またはそれらは正常細胞上では極端に低いレベルで通常は存在するが、腫瘍細胞上でははるかにより高いレベルで発現される抗原であってもよい。

ＴＳＡまたはＴＡＡ抗原の非限定例としては、以下のもの：ＭＡＲＴ－１／ＭｅｌａｎＡ（ＭＡＲＴ－Ｉ）、ｇｐ１００（Ｐｍｅｌ１７）、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２などの分化抗原およびＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ｐｌ５などの腫瘍特異的多系統抗原；ＣＥＡなどの過剰発現される胎児性抗原；ｐ５３、Ｒａｓ、ＨＥＲ２／ｎｅｕなどの過剰発現されるがん遺伝子および突然変異腫瘍抑制遺伝子；ＢＣＲ－ＡＢＬ、Ｅ２Ａ－ＰＲＬ、Ｈ４－ＲＥＴ、ＩＧＨ－ＩＧＫ、ＭＹＬ－ＲＡＲなどの染色体転座の結果生じる独特の腫瘍抗原；ならびにエプスタイン・バーウイルス抗原ＥＢＶＡおよびヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原Ｅ６およびＥ７などのウイルス抗原が挙げられる。他の大きなタンパク質に基づく抗原としては、ＴＳＰ－１８０、ＭＡＧＥ－４、ＭＡＧＥ－５、ＭＡＧＥ－６、ＲＡＧＥ、ＮＹ－ＥＳＯ、ｐｌ８５ｅｒｂＢ２、ｐｌ８０ｅｒｂＢ－３、ｃ－ｍｅｔ、ｎｍ－２３ＨＩ、ＰＳＡ、ＴＡＧ－７２、ＣＡ１９－９、ＣＡ７２－４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ－ｒａｓ、ベータ－カテニン、ＣＤＫ４、Ｍｕｍ－１、ｐ１５、ｐ１６、４３－９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、アルファフェトタンパク質、ベータ－ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ１５－３＼ＣＡ２７．２９＼ＢＣＡＡ、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ－５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８＼Ｐ１、ＣＯ－０２９、ＦＧＦ－５、Ｇ２５０、Ｇａ７３３＼ＥｐＣＡＭ、ＨＴｇｐ－１７５、Ｍ３４４、ＭＡ－５０、ＭＧ７－Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ－ＣＯ－１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ－９０＼Ｍａｃ－２結合タンパク質＼シクロフィリンＣ関連タンパク質、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、およびＴＰＳが挙げられる。
核酸

一部の実施形態では、本明細書に記載の改変抗原特異的免疫細胞は、本明細書に記載の外因性ＣＤ１６０タンパク質のいずれか１つおよび／または機能的外因性受容体のいずれか１つをコードする１つまたは複数の異種核酸配列を含む。

一部の実施形態では、本明細書に記載の外因性ＣＤ１６０タンパク質のいずれか１つをコードする核酸配列を含む単離された核酸が提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載の機能的外因性受容体のいずれか１つをコードする核酸配列を含む単離された核酸が提供される。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡである。一部の実施形態では、核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸は、線状である。一部の実施形態では、核酸は、環状である。

外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸配列および／または機能的外因性受容体をコードする核酸を、１つまたは複数の調節配列に作動可能に連結することができる。コード配列の転写および／または翻訳を制御する例示的な調節配列は、当業界で公知であり、限定されるものではないが、プロモーター、転写の適切な開始、調節および／または終結（例えば、ポリＡ転写終結配列）、ｍＲＮＡ輸送（例えば、核局在化シグナル配列）、プロセシング（例えば、スプライシングシグナル）、安定性（例えば、イントロンならびに非コード５’および３’配列）、翻訳（例えば、開始Ｍｅｔ、３部分リーダー配列、ＩＲＥＳリボソーム結合部位、シグナルペプチドなど）、および挿入物をウイルスベクター中に導入するための挿入部位のためのさらなるエレメントを含んでもよい。一部の実施形態では、調節配列は、プロモーター、転写エンハンサーならびに／または外因性ＣＤ１６０タンパク質および／もしくは機能的外因性受容体の適切な発現を可能にする配列である。

用語「調節配列」または「制御配列」とは、作動可能に連結されたコード配列の発現に影響するＤＮＡ配列を指す。そのような調節配列の性質は、宿主生物に応じて異なる。原核生物では、調節配列は一般に、プロモーター、リボソーム結合部位、およびターミネーターを含む。真核生物では、調節配列は、プロモーター、ターミネーターおよび一部の例では、エンハンサー、トランスアクチベーターまたは転写因子を含む。

用語「作動可能に連結されている」とは、そのように記載された成分が、その意図される様式で機能するのを可能にする関係にある並置を指す。コード配列に「作動可能に連結された」調節配列は、コード配列の発現が調節配列と適合する条件下で達成されるような方法でライゲーションされている。

本明細書で使用される場合、「プロモーター」または「プロモーター領域」とは、それが作動可能に連結されているＤＮＡまたはＲＮＡの転写を制御するＤＮＡまたはＲＮＡのセグメントを指す。プロモーター領域は、ＲＮＡポリメラーゼ認識、結合および転写開始に関与する特定の配列を含む。さらに、プロモーターは、ＲＮＡポリメラーゼの認識、結合および転写開始活性（すなわち、１つまたは複数の転写因子の結合）をモジュレートする配列を含む。これらの配列は、ｃｉｓ作用性であってもよいか、またはｔｒａｎｓ作用因子に応答性であってもよい。プロモーターは、調節の性質に応じて、構成的または調節性であってもよい。調節性プロモーターは、誘導性または環境応答性（例えば、ｐＨ、嫌気的条件、浸透圧調節物質、温度、光、または細胞密度などの合図に応答する）であってもよい。多くのそのようなプロモーター配列は、当業界で公知である。例えば、米国特許第４，９８０，２８５号；第５，６３１，１５０号；第５，７０７，９２８号；第５，７５９，８２８号；第５，８８８，７８３号；第５，９１９，６７０号、およびＳａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔａｌ．，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，２ｎｄＥｄ．，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＰｒｅｓｓ（１９８９）を参照されたい。

一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸配列は、第１のプロモーターに作動可能に連結されている。一部の実施形態では、機能的外因性受容体をコードする核酸配列は、第２のプロモーターに作動可能に連結されている。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸配列と、機能的外因性受容体をコードする核酸配列とは、同じプロモーターに作動可能に連結されている。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸配列と、機能的外因性受容体をコードする核酸配列とは、別々のプロモーターに作動可能に連結されている。

一部の実施形態では、プロモーターは、内因性プロモーターである。例えば、外因性ＣＤ１６０タンパク質および／または機能的外因性受容体をコードする核酸を、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９法などの当業界で公知の任意の方法を使用して、内因性プロモーターの下流で改変抗原特異的免疫細胞のゲノムにノックインすることができる。一部の実施形態では、内因性プロモーターは、ベータ－アクチンなどの豊富なタンパク質のためのプロモーターである。一部の実施形態では、内因性プロモーターは、例えば、改変抗原特異的免疫細胞の内因性活性化シグナルによって誘導可能な、誘導性プロモーターである。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞がＴ細胞である場合、プロモーターは、Ｔ細胞活性化依存性プロモーター（ＩＬ－２プロモーター、ＮＦＡＴプロモーター、またはＮＦκＢプロモーターなど）である。一部の実施形態では、プロモーターは、異種プロモーターである。

様々なプロモーターが哺乳動物細胞中での遺伝子発現について探索されており、当業界で公知のプロモーターのいずれかを本発明において使用することができる。プロモーターは、構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターなどの調節性プロモーターとして大まかに分類することができる。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質および／または機能的外因性受容体をコードする異種核酸配列は、構成的プロモーターに作動可能に連結されている。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質および／または機能的外因性受容体をコードする異種核酸配列は、誘導性プロモーターに作動可能に連結されている。一部の実施形態では、構成的プロモーターは、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸配列に作動可能に連結され、誘導性プロモーターは、機能的外因性受容体をコードする核酸配列に作動可能に連結されている。一部の実施形態では、構成的プロモーターは、機能的外因性受容体をコードする核酸配列に作動可能に連結され、誘導性プロモーターは、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸配列に作動可能に連結されている。一部の実施形態では、第１の誘導性プロモーターは、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸配列に作動可能に連結され、第２の誘導性プロモーターは、機能的外因性受容体をコードする核酸配列に作動可能に連結されている。一部の実施形態では、第１の誘導性プロモーターは、第１の誘導条件によって誘導され、第２の誘導性プロモーターは、第２の誘導条件によって誘導される。一部の実施形態では、第１の誘導条件は、第２の誘導条件と同じである。一部の実施形態では、第１の誘導性プロモーターおよび第２の誘導性プロモーターは、同時に誘導される。一部の実施形態では、第１の誘導性プロモーターおよび第２の誘導性プロモーターは、連続的に誘導され、例えば、第１の誘導性プロモーターは第２の誘導性プロモーターの前に誘導されるか、または第１の誘導性プロモーターは第２の誘導性プロモーターの後に誘導される。

構成的プロモーターは、異種遺伝子（トランスジーンとも呼ばれる）を宿主細胞中で構成的に発現させることができる。本明細書で企図される例示的な構成的プロモーターとしては、限定されるものではないが、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ヒト伸長因子－１アルファ（ｈＥＦ１α）、ユビキチンＣプロモーター（ＵｂｉＣ）、ホスホグリセロキナーゼプロモーター（ＰＧＫ）、サルウイルス４０初期プロモーター（ＳＶ４０）、およびＣＭＶ初期エンハンサーと結合させたニワトリβ－アクチンプロモーター（ＣＡＧＧ）が挙げられる。トランスジーン発現の駆動に対するそのような構成的プロモーターの効率は、多数の研究において広く比較されている。一部の実施形態では、プロモーターは、ｈＥＦ１αプロモーターである。

一部の実施形態では、プロモーターは、誘導性プロモーターである。誘導性プロモーターは、調節性プロモーターのカテゴリーに属する。誘導性プロモーターは、物理的条件、改変抗原特異的免疫細胞の微小環境、または改変抗原特異的免疫細胞の生理的状態、誘導因子（例えば、誘導剤）、またはそれらの組合せなどの、１つまたは複数の条件によって誘導することができる。一部の実施形態では、誘導条件は、改変抗原特異的免疫細胞中で、および／または医薬組成物を受ける対象中で、内因性遺伝子の発現を誘導しない。一部の実施形態では、誘導条件は、誘導因子、照射（イオン化放射、光など）、温度（熱など）、酸化還元状態、腫瘍環境、および改変抗原特異的免疫細胞の活性化状態からなる群から選択される。

一部の実施形態では、プロモーターは、誘導因子によって誘導される。一部の実施形態では、誘導因子は、化合物などの低分子である。一部の実施形態では、低分子は、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、アルコール、金属、またはステロイドからなる群から選択される。化学誘導性プロモーターは、最も広く探索されている。そのようなプロモーターは、転写活性が、ドキシサイクリン、テトラサイクリン、アルコール、ステロイド、金属および他の化合物などの低分子化学物質の存在または非存在によって調節されるプロモーターを含む。逆テトラサイクリン制御トランスアクチベーター（ｒｔＴＡ）およびテトラサイクリン応答エレメントプロモーター（ＴＲＥ）を用いるドキシサイクリン誘導システムが、現在最も確立されたシステムである。ＷＯ９４２９４４２は、テトラサイクリン応答性プロモーターによる真核細胞中での遺伝子発現の厳密な制御を記載している。ＷＯ９６０１３１３は、テトラサイクリン調節性転写モジュレーターを開示している。さらに、Ｔｅｔ－ｏｎシステムなどのＴｅｔ技術が、例えば、ＴｅｔＳｙｓｔｅｍｓ．ｃｏｍのウェブサイト上に記載されている。任意の公知の化学的に調節されるプロモーターを使用して、本出願における治療タンパク質の発現を駆動することができる。

一部の実施形態では、誘導因子は、増殖因子、ホルモン、または細胞表面受容体、例えば、腫瘍抗原に特異的に結合するポリペプチドに対するリガンドなどのポリペプチドである。一部の実施形態では、ポリペプチドは、改変抗原特異的免疫細胞によって発現される。一部の実施形態では、ポリペプチドは、異種核酸中の核酸によってコードされる。また、多くのポリペプチド誘導因子が当業界で公知であり、それらは本発明における使用にとって好適であり得る。例えば、エクジソン受容体に基づく遺伝子スイッチ、プロゲステロン受容体に基づく遺伝子スイッチ、およびエストロゲン受容体に基づく遺伝子スイッチは、ステロイド受容体由来トランスアクチベーターを用いる遺伝子スイッチに属する（ＷＯ９６３７６０９およびＷＯ９７３８１１７など）。

一部の実施形態では、誘導因子は、低分子成分と、１つまたは複数のポリペプチドとの両方を含む。例えば、ポリペプチドの二量体化に依存する誘導性プロモーターが、当業界で公知であり、本発明における使用にとって好適であり得る。１９９３年に開発された、初めての低分子ＣＩＤシステムは、薬物ＦＫ５０６の誘導体であるＦＫ１０１２を使用して、ＦＫＢＰのホモ二量体化を誘導した。同様の戦略を用いることにより、Ｗｕｅｔａｌは、ラパログ／ＦＫＰＢ－ＦＲＢ^＊およびジベレリン／ＧＩＤ１－ＧＡＩ二量体化依存的遺伝子スイッチを使用することによってＯＮスイッチ様式を介して滴定可能なＣＡＲ－Ｔ細胞を上手く作製した（Ｃ．－Ｙ．Ｗｕｅｔａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ３５０，ａａｂ４０７７（２０１５））。他の二量体化依存的スイッチシステムとしては、クーママイシン／ＧｙｒＢ－ＧｙｒＢ（Ｎａｔｕｒｅ３８３（６５９６）：１７８－８１）、およびＨａＸＳ／Ｓｎａｐ－ｔａｇ－ＨａｌｏＴａｇ（ＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＢｉｏｌｏｇｙ２０（４）：５４９－５７）が挙げられる。

一部の実施形態では、プロモーターは、光誘導性プロモーターであり、誘導条件は光である。哺乳動物細胞中での遺伝子発現を調節するための光誘導性プロモーターも、当業界で周知である（例えば、Ｓｃｉｅｎｃｅ３３２，１５６５－１５６８（２０１１）；Ｎａｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ９，２６６－２６９（２０１２）；Ｎａｔｕｒｅ５００：４７２－４７６（２０１３）；ＮａｔｕｒｅＮｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ１８：１２０２－１２１２（２０１５）を参照されたい）。そのような遺伝子調節システムを、（１）ＤＮＡ結合または（２）ＤＮＡに結合したタンパク質への転写活性化ドメインの動員のその調節に基づいて２つのカテゴリーに大まかに分割することができる。例えば、青色光（４８０ｎｍ）に応答して、ＮＦＡＴのカルシニューリン媒介性移動をもたらす細胞内カルシウム増加を誘発する、メラノプシンに基づく合成哺乳動物青色光制御転写システムが開発され、哺乳動物細胞中で試験された。より最近では、Ｍｏｔｔａ－Ｍｅｎａｅｔａｌは、ヒト細胞系およびゼブラフィッシュ胚における転写開始の、高レベルの青色光感受性制御をもたらす天然に存在するＥＬ２２２転写因子から開発された新しい誘導性遺伝子発現システムを記載した（Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１０（３）：１９６－２０２（２０１４））。さらに、Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａの光受容体フィトクロムＢ（ＰｈｙＢ）とフィトクロム相互作用因子６（ＰＩＦ６）との赤色光誘導性相互作用が、赤色光誘発性遺伝子発現調節のために利用された。さらに、紫外線Ｂ（ＵＶＢ）誘導性遺伝子発現システムも開発され、哺乳動物細胞中での標的遺伝子転写において有効であることが証明された（Ｃｈａｐｔｅｒ２５ｏｆＧｅｎｅａｎｄＣｅｌｌＴｈｅｒａｐｙ：ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＭｅｃｈａｎｉｓｍｓａｎｄＳｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ＦｏｕｒｔｈＥｄｉｔｉｏｎＣＲＣＰｒｅｓｓ，Ｊａｎ．２０^ｔｈ，２０１５）。本明細書に記載の光誘導性プロモーターのいずれかを使用して、本発明における治療タンパク質の発現を駆動することができる。

一部の実施形態では、プロモーターは、光誘導性分子と、光との組合せによって誘導される光誘導性プロモーターである。例えば、化学的誘導因子上の光切断性光ケージ化基は、光ケージ基が照射または他の手段によって除去されない限り、誘導因子を不活性に保持する。そのような光誘導性分子としては、低分子化合物、オリゴヌクレオチド、およびタンパク質が挙げられる。例えば、ケージ化エクジソン、ｌａｃオペロンと共に使用するためのケージ化ＩＰＴＧ、リボザイム媒介性遺伝子発現のためのケージ化トヨカマイシン、Ｔｅｔ－ｏｎシステムと共に使用するためのケージ化ドキシサイクリン、および光媒介性ＦＫＢＰ／ＦＲＢ二量体化のためのケージ化ラパログが開発されている（例えば、ＣｕｒｒＯｐｉｎＣｈｅｍＢｉｏｌ．１６（３－４）：２９２－２９９（２０１２）を参照されたい）。

一部の実施形態では、プロモーターは、放射線誘導性プロモーターであり、誘導条件は、イオン化放射などの放射線である。放射線誘導性プロモーターも、トランスジーン発現を制御することが当業界で公知である。遺伝子発現の変更は、細胞の照射時に起こる。例えば、「極初期遺伝子」として知られる遺伝子群は、イオン化放射時に即座に反応することができる。例示的な極初期遺伝子としては、限定されるものではないが、Ｅｒｇ－１、ｐ２１／ＷＡＦ－１、ＧＡＤＤ４５アルファ、ｔ－ＰＡ、ｃ－Ｆｏｓ、ｃ－Ｊｕｎ、ＮＦ－カッパＢ、およびＡＰ１が挙げられる。極初期遺伝子は、そのプロモーター領域中に放射線応答配列を含む。コンセンサス配列ＣＣ（Ａ／Ｔ）_６ＧＧ（配列番号７）がＥｒｇ－１プロモーター中に見出されており、血清応答エレメントと呼ばれるか、またはＣＡｒＧエレメントとして公知である。放射線誘導性プロモーターと、トランスジーンとの組合せが集中的に研究されており、治療利益に関して効率的であることが証明されている。例えば、ＣａｎｃｅｒＢｉｏｌＴｈｅｒ．６（７）：１００５－１２（２００７）およびＣｈａｐｔｅｒ２５ｏｆＧｅｎｅａｎｄＣｅｌｌＴｈｅｒａｐｙ：ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＭｅｃｈａｎｉｓｍｓａｎｄＳｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ＦｏｕｒｔｈＥｄｉｔｉｏｎＣＲＣＰｒｅｓｓ，Ｊａｎ．２０^ｔｈ，２０１５を参照されたい。

一部の実施形態では、プロモーターは、熱誘導性プロモーターであり、誘導条件は熱である。トランスジーン発現を駆動する熱誘導性プロモーターも、当業界で広く研究されている。Ｈｓｐ９０、Ｈｓｐ７０、Ｈｓｐ６０、Ｈｓｐ４０、Ｈｓｐ１０などを含む熱ショックまたはストレスタンパク質（ＨＳＰ）は、熱または他の物理的および化学的ストレス下での細胞の保護において重要な役割を果たしている。熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）プロモーターならびに増殖停止およびＤＮＡ損傷（ＧＡＤＤ）１５３プロモーターを含むいくつかの熱誘導性プロモーターが、前臨床試験において試みられている。１９８５年に初めて記載された、ヒトｈｓｐ７０Ｂ遺伝子のプロモーターは、最も高効率の熱誘導性プロモーターの１つであると考えられる。Ｈｕａｎｇｅｔａｌは、ｈｓｐ７０Ｂ－ＥＧＦＰ、ｈｓｐ７０Ｂ－ＴＮＦアルファおよびｈｓｐ７０Ｂ－ＩＬ１２コード配列の導入後、腫瘍細胞は熱処理時に非常に高いトランスジーン発現を発現するが、熱処理の非存在下では、トランスジーンの発現は検出されないと報告した。そして、腫瘍成長は、ｉｎｖｉｖｏでＩＬ１２トランスジーン＋熱処理群のマウスにおいて有意に遅延した（ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．６０：３４３５（２０００））。別のグループの科学者は、ＨＳＶ－ｔｋ自殺遺伝子と、ｈｓｐ７０Ｂプロモーターとを関連付け、マウス乳がんを担持するヌードマウスにおいてそのシステムを試験した。腫瘍にｈｓｐ７０Ｂ－ＨＳＶｔｋコード配列を投与し、熱処理したマウスは、非熱処理対照と比較して、腫瘍退縮および有意な生存率を示した（Ｈｕｍ．ＧｅｎｅＴｈｅｒ．１１：２４５３（２０００））。当業界で公知のさらなる熱誘導性プロモーターを、例えば、Ｃｈａｐｔｅｒ２５ｏｆＧｅｎｅａｎｄＣｅｌｌＴｈｅｒａｐｙ：ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＭｅｃｈａｎｉｓｍｓａｎｄＳｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ＦｏｕｒｔｈＥｄｉｔｉｏｎＣＲＣＰｒｅｓｓ，Ｊａｎ．２０^ｔｈ，２０１５に見出すことができる。本明細書で考察される熱誘導性プロモーターのいずれかを使用して、本発明の治療タンパク質の発現を駆動することができる。

一部の実施形態では、プロモーターは、酸化還元状態によって誘導される。酸化還元状態によって誘導される例示的なプロモーターとしては、誘導性プロモーターおよび低酸素誘導性プロモーターが挙げられる。例えば、ＰｏｓｔＤＥｅｔａｌは、ＨＩＦ活性腫瘍細胞中でトランスジーン発現を特異的かつ強力に誘導する低酸素誘導性因子（ＨＩＦ）応答性プロモーターを開発した（ＧｅｎｅＴｈｅｒ．８：１８０１－１８０７（２００１）；ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．６７：６８７２－６８８１（２００７））。

一部の実施形態では、プロモーターは、改変抗原特異的免疫細胞の内因性活性化シグナルなどの生理的状態によって誘導される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞がＴ細胞である場合、プロモーターは、改変Ｔ細胞の内因性活性化シグナルによって誘導される、Ｔ細胞活性化依存的プロモーターである。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、ホルボールミリステートアセテート（ＰＭＡ）、イオノマイシン、またはフィトヘマグルチニンなどの誘導因子によって活性化される。一部の実施形態では、改変Ｔ細胞は、機能的外因性受容体（ＣＡＲまたはＴＣＲなど）を介する腫瘍細胞上の腫瘍抗原の認識によって活性化される。一部の実施形態では、Ｔ細胞活性化依存的プロモーターは、ＩＬ－２プロモーターである。一部の実施形態では、Ｔ細胞活性化依存的プロモーターは、ＮＦＡＴプロモーターである。一部の実施形態では、Ｔ細胞活性化依存的プロモーターはＮＦκＢプロモーターである。

本明細書に記載の異種核酸配列は、１つまたは複数のタンパク質コード配列と、必要に応じて、１つまたは複数のプロモーターとを含む、異種遺伝子発現カセット中に存在してもよい。一部の実施形態では、異種遺伝子発現カセットは、単一のタンパク質コード配列を含む。一部の実施形態では、異種遺伝子発現カセットは、単一のプロモーター（すなわち、多シストロン性）によって駆動される２つのまたはそれより多いタンパク質コード配列を含む。一部の実施形態では、異種遺伝子発現カセットは、１つまたは複数の調節配列（５’ＵＴＲ、３’ＵＴＲ、エンハンサー配列、ＩＲＥＳ、転写終結配列など）、組換え部位、１つまたは複数の選択マーカー（抗生物質耐性遺伝子、リポーター遺伝子など）、シグナル配列、またはそれらの組合せをさらに含む。

一部の実施形態では、本明細書に記載の外因性ＣＤ１６０タンパク質および／または機能的外因性受容体をコードする核酸のいずれか１つを含むベクターが提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載の外因性ＣＤ１６０タンパク質のいずれか１つをコードする第１の核酸配列と、本明細書に記載の機能的外因性受容体のいずれか１つをコードする第２の核酸配列とを含むベクターが提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載の外因性ＣＤ１６０タンパク質のいずれか１つをコードする第１の核酸配列を含む第１のベクターと、本明細書に記載の機能的外因性受容体のいずれか１つをコードする第２の核酸配列を含む第２のベクターとを含む組成物が提供される。

「ベクター」は、単離された核酸を含み、単離された核酸を細胞の内部に送達するために使用することができる組成物である。限定されるものではないが、線状ポリヌクレオチド、イオン性または両親媒性化合物と会合したポリヌクレオチド、プラスミド、およびウイルスを含む、いくつかのベクターが当業界で公知である。一般に、好適なベクターは、少なくとも１つの生物において機能的な複製起点、プロモーター配列、都合のよい制限エンドヌクレアーゼ部位、および１つまたは複数の選択マーカーを含有する。また、用語「ベクター」は、例えば、ポリリシン化合物、リポソームなどの、核酸の細胞中への移入を容易にする非プラスミドおよび非ウイルス化合物を含むと解釈されるべきである。

一部の実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。ウイルスベクターの例としては、限定されるものではないが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レンチウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ワクシニアベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、およびそれらの誘導体が挙げられる。ウイルスベクター技術は、当業界で周知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．（２００１，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ）、ならびに他のウイルス学および分子生物学のマニュアルに記載されている。

いくつかのウイルスに基づくシステムが、哺乳動物細胞への遺伝子導入のために開発されている。例えば、レトロウイルスは、遺伝子送達システムのための都合のよいプラットフォームを提供する。当業界で公知の技術を使用して、異種核酸をベクター中に挿入し、レトロウイルス粒子中にパッケージングすることができる。次いで、組換えウイルスを単離し、ｉｎｖｉｔｒｏまたはｅｘｖｉｖｏで改変抗原特異的免疫細胞に送達することができる。いくつかのレトロウイルスシステムが当業界で公知である。一部の実施形態では、アデノウイルスベクターが使用される。一部の実施形態では、レンチウイルスベクターが使用される。一部の実施形態では、自己不活化レンチウイルスベクターが使用される。例えば、自己不活化レンチウイルスベクターを、当業界で公知のプロトコールを用いてパッケージングすることができる。当業界で公知の方法を使用して、得られるレンチウイルスベクターを使用して哺乳動物細胞（ヒトＴ細胞など）に形質導入することができる。

一部の実施形態では、ベクターは、プラスミドなどの非ウイルスベクター、またはエピソーム発現ベクターである。

一部の実施形態では、ベクターは、発現ベクターである。「発現ベクター」は、選択された宿主を形質転換するために使用することができる構築物であり、選択された宿主中でのコード配列の発現を提供する。発現ベクターは、例えば、クローニングベクター、バイナリーベクターまたは組込みベクターであってもよい。発現は、核酸分子の、好ましくは翻訳可能なｍＲＮＡへの転写を含む。真核細胞中での発現を確保する調節エレメントが、当業者には周知である。真核細胞の場合、それらは通常、転写の開始を確保するプロモーターと、必要に応じて、転写の終結および転写物の安定化を確保するポリＡシグナルとを含む。真核宿主細胞中での発現を可能にする調節エレメントの例は、酵母におけるＡＯＸ１もしくはＧＡＬ１プロモーターまたは哺乳動物および他の動物細胞におけるＣＭＶ、ＳＶ４０、ＲＳＶプロモーター（ラウス肉腫ウイルス）、ＣＭＶエンハンサー、ＳＶ４０エンハンサーもしくはグロビンイントロンである。さらに、使用される発現系に応じて、ポリペプチドを細胞区画へ方向付ける、またはそれを培地中に分泌することができるリーダー配列を、記載の核酸配列のコード配列に付加することができ、それらは当業界で周知である。リーダー配列を、翻訳、開始および終結配列、ならびに好ましくは、翻訳されるタンパク質、またはその一部の、ペリプラズム空間または細胞外培地中への分泌を方向付けることができるリーダー配列と共に適切な段階で集合させる。必要に応じて、核酸配列は、所望の特性、例えば、発現される組換え産物の安定化または精製の単純化を提供するＮ末端同定ペプチドを含む融合タンパク質をコードしてもよい。Ｏｋａｙａｍａ－ＢｅｒｇｃＤＮＡ発現ベクターｐｃＤＶ１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｐＥＦ－Ｎｅｏ、ｐＣＤＭ８、ｐＲｃ／ＣＭＶ、ｐｃＤＮＡ１、ｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＥＦ－ＤＨＦＲおよびｐＥＦ－ＡＤＡ（Ｒａｕｍｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｔｈｅｒ（２００１）５０（３），１４１－１５０）またはｐＳＰＯＲＴ１（ＧＩＢＣＯＢＲＬ）などの、好適な発現ベクターが当業界で公知である。
外因性ＣＤ１６０を含む改変抗原特異的免疫細胞の調製方法

本出願はまた、本明細書に記載の改変抗原特異的免疫細胞のいずれか１つを生産する方法も提供する。

ある特定の態様では、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす、方法が提供される。一部の実施形態では、方法は、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質とを接触させることを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、免疫細胞の表面分子に結合する免疫細胞結合部分を含む。一部の実施形態では、方法は、前駆体抗原特異的免疫細胞中に、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸を導入することを含む。一部の実施形態では、核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡである。核酸を、ウイルスまたは非ウイルス法を含む、当業界で公知の任意のトランスフェクションまたは形質導入法を使用して、改変抗原特異的免疫細胞中に導入することができる。例示的な非ウイルストランスフェクション法としては、限定されるものではないが、リン酸カルシウム、デンドリマー、リポソーム、またはカチオン性ポリマー（例えば、ＤＥＡＥ－デキストランもしくはポリエチレンイミン）などを使用する化学物質に基づくトランスフェクション；電気穿孔、セルスクイージング、ソノポレーション、光学的トランスフェクション、インペールフェクション、プロトプラスト融合、水力学的送達、またはトランスポゾンなどの非化学的方法；遺伝子銃、マグネクトフェクション（ｍａｇｎｅｃｔｏｆｅｃｔｉｏｎ）またはマグネットアシストトランスフェクション、粒子ボンバードメントなどを使用する粒子に基づく方法；およびヌクレオフェクションなどのハイブリッド方法が挙げられる。一部の実施形態では、核酸は、トランスフェクションによって前駆体抗原特異的免疫細胞中に導入される。一部の実施形態では、核酸は、形質導入または電気穿孔によって前駆体抗原特異的免疫細胞中に導入される。

一部の実施形態では、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす、方法が提供される。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれかのアミノ酸配列、または配列番号１～４に対して少なくとも約８０％の同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４に対して少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４に対して少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４に対して少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞表面上の外因性ＣＤ１６０タンパク質は、多量体（限定されるものではないが、二量体、三量体、四量体、五量体または六量体など）の形態にある。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性αβＴ細胞、γδＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）からなる群から選択される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞は、ＤＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞およびマクロファージからなる群から選択される。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、個体中の腫瘍から単離される。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、モノクローナルである。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、ポリクローナル集団に由来する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、モノクローナルである。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ポリクローナル集団に由来する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、機能的外因性受容体をさらに含む。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である。一部の実施形態では、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、腫瘍抗原または腫瘍関連抗原を認識する。さらなる実施形態では、機能的外因性受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、同一エピトープに特異的である複数の免疫細胞である。非限定例としては、同じ機能的外因性受容体（ＣＡＲなど）をそれぞれ含む複数のＴ細胞が挙げられる。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、非同一エピトープ（部分的に重複する、または全体として異なるエピトープなど）にそれぞれ特異的な複数の免疫細胞である。非限定例としては、ポリクローナルＴＩＬなどの、複数のポリクローナル免疫細胞が挙げられる。

一部の実施形態では、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型である、方法が提供される。

一部の実施形態では、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質がグリコホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）リンカーを介して膜に結合している、方法が提供される。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＧＰＩアンカーペプチド配列を含む。

一部の実施形態では、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜貫通ドメインを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ１６０、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＣＤ２４４、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファサブユニット、ＴＣＲベータサブユニット、またはＴＣＲゼータサブユニットからなる群から選択される分子に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ８０、ＣＤ１５２およびＰＤ１からなる群から選択される分子に由来する。

一部の実施形態では、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜貫通ドメインと細胞内ドメインとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ１６０、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＣＤ２４４、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファサブユニット、ＴＣＲベータサブユニット、またはＴＣＲゼータサブユニットからなる群から選択される分子に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ８０、ＣＤ１５２およびＰＤ－１からなる群から選択される分子に由来する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ１６０スプライスバリアントに由来する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットは、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、およびＣＤ３イプシロンからなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｔ細胞刺激分子に由来する１つまたは複数のシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ８０、またはＣＤ２５８のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ８０、およびＣＤ２５８からなる群から選択される２つのシグナル伝達ドメインの組合せを含む。

一部の実施形態では、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、ＣＤ１６０タンパク質が膜貫通ドメインと細胞内ドメインとを含み、細胞内ドメインが１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８個のいずれか、またはそれより多い共刺激シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、１、２、３、４、または５個以下のいずれか１つの共刺激シグナル伝達ドメインを含有する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインまたは４－１ＢＢとＣＤ３ζドメインとの組合せを含まない。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＣＤ８０、ＣＤ２５８、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド、およびそれらの組合せからなる群から選択される共刺激分子に由来する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、またはその両方を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外ＣＤ１６０ドメイン、膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、および４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外ＣＤ１６０ドメイン、膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ２８共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、膜貫通ドメインに隣接する。一部の実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、膜貫通ドメインのＣ末端に隣接する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、一次シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζドメインを含む。他の実施形態では、細胞内ドメインは、一次シグナル伝達ドメインを含まない。他の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζドメインまたは４－１ＢＢとＣＤ３ζドメインとの組合せを含まない。

一部の実施形態では、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が免疫細胞結合部分を介して改変抗原特異的免疫細胞に結合している、方法が提供される。一部の実施形態では、免疫細胞結合部分は、免疫細胞の表面分子に結合する。一部の実施形態では、免疫細胞結合部分は、Ｔ細胞表面分子を認識する抗体を含む。一部の実施形態では、抗体は、全長抗体またはｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）_２、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、もしくはＶ_ＨＨドメインなどの抗体断片であってもよい。非限定例としては、ＴＣＲを認識する、および／またはＴＣＲシグナル伝達を活性化する抗ＣＤ３ε抗体が挙げられる。一部の実施形態では、免疫細胞結合部分は、コグネートＴ細胞表面受容体に結合するリガンドを含む。非限定例としては、ＴＣＲおよびＩＬ－２を認識する腫瘍特異的ペプチドＭＨＣ複合体が挙げられる。

本明細書に記載の方法のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれかのアミノ酸配列、または配列番号１～４に対して少なくとも約８０％の同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４に対して少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４に対して少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４に対して少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞表面上の外因性ＣＤ１６０タンパク質は、多量体（限定されるものではないが、二量体、三量体、四量体、五量体または六量体など）の形態にある。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性αβＴ細胞、γδＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）からなる群から選択される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞は、ＤＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞およびマクロファージからなる群から選択される。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、個体中の腫瘍から単離される。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、モノクローナルである。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、ポリクローナル集団に由来する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、モノクローナルである。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ポリクローナル集団に由来する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、機能的外因性受容体をさらに含む。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である。一部の実施形態では、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、腫瘍抗原または腫瘍関連抗原を認識する。さらなる実施形態では、機能的外因性受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、同一エピトープに特異的である複数の免疫細胞である。非限定例としては、同じ機能的外因性受容体（ＣＡＲなど）をそれぞれ含む複数のＴ細胞が挙げられる。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、非同一エピトープ（部分的に重複する、または全体として異なるエピトープなど）にそれぞれ特異的な複数の免疫細胞である。非限定例としては、ポリクローナルＴＩＬなどの、複数のポリクローナル免疫細胞が挙げられる。

表面上に本明細書に記載の外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、機能的外因性受容体をコードする第２の核酸をさらに含む。一部の実施形態では、方法は、前駆体抗原特異的免疫細胞と、機能的外因性受容体をコードする第２の核酸とを接触させることをさらに含む。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である。一部の実施形態では、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、腫瘍抗原または腫瘍関連抗原を認識する。さらなる実施形態では、機能的外因性受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の実施形態では、第１の核酸と、第２の核酸とは、同じプロモーターに作動可能に連結されている。一部の実施形態では、第１の核酸配列と、第２の核酸配列とは、別々のプロモーターに作動可能に連結されている。一部の実施形態では、第１の核酸と、第２の核酸とは、同じベクター上にある。一部の実施形態では、第１の核酸と、第２の核酸とは、別々のベクター上にある。一部の実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、およびその誘導体からなる群から選択される。一部の実施形態では、ベクターは、非ウイルスベクターである。一部の実施形態では、ベクターは、エピソーム発現ベクターである。一部の実施形態では、方法は、第１の核酸および／または第２の核酸を含む免疫細胞を単離すること、または富化することをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、改変抗原特異的免疫細胞を、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に製剤化することをさらに含む。

一部の実施形態では、本明細書に記載の方法のいずれかによって得られる改変抗原特異的免疫細胞が提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載の改変抗原特異的免疫細胞のいずれかと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物が提供される。

一部の実施形態では、本明細書に記載の核酸またはベクターのいずれか１つを含む単離された宿主細胞が提供される。宿主細胞は、外因性ＣＤ１６０タンパク質および／または機能的外因性受容体、外因性ＣＤ１６０タンパク質および／または機能的外因性受容体をコードする核酸またはベクターの発現またはクローニングにおいて有用であってよい。好適な宿主細胞は、限定されるものではないが、原核細胞、真菌細胞、酵母細胞、または哺乳動物細胞などの高等真核細胞を含んでもよい。一部の実施形態では、宿主細胞は、第１のポリペプチドをコードする第１のベクターと、第２のポリペプチドをコードする第２のベクターとを含む。一部の実施形態では、宿主細胞は、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとをコードする単離された核酸を含む単一のベクターを含む。一部の実施形態では、第１のポリペプチドは、外因性ＣＤ１６０タンパク質である。一部の実施形態では、第２のポリペプチドは、機能的外因性受容体である。

前駆体抗原特異的免疫細胞を、当業界で公知の様々な方法を使用して調製することができる。例えば、Ｔ細胞などの一次免疫細胞を、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位に由来する組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍などのいくつかの供給源から取得することができる。一部の実施形態では、免疫細胞（Ｔ細胞など）を、ＦＩＣＯＬＬ（商標）分離などの、当業界で公知の任意数の技術を使用して個体から収集された血液の単位から取得することができる。一部の実施形態では、個体の循環血液に由来する細胞は、アフェレーシスによって得られる。アフェレーシス産物は、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒細胞、Ｂ細胞、他の有核白血球、赤血球、および血小板を含むリンパ球を含有する。一部の実施形態では、アフェレーシスによって収集された細胞を洗浄して、血漿画分を除去し、その後の処理ステップのために細胞を適切な緩衝剤または媒体に入れることができる。一部の実施形態では、細胞を、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、またはカルシウムおよびマグネシウムなどの二価カチオンを欠く洗浄溶液で洗浄する。当業者であれば容易に理解できるように、洗浄ステップを、当業界で公知の方法によって、例えば、製造業者の使用説明書に従って半自動化「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ２９９１細胞プロセッサー、ＢａｘｔｅｒＣｙｔｏＭａｔｅ、またはＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓＣｅｌｌＳａｖｅｒ５）を使用することによって、達成することができる。洗浄後、細胞を、例えば、Ｃａ^２＋非含有、Ｍｇ^２＋非含有ＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅＡ、または緩衝剤を含む、もしくは含まない他の塩水溶液などの、様々な生体適合性緩衝剤中に再懸濁することができる。あるいは、アフェレーシス試料の望ましくない成分を除去し、細胞を培養培地中に直接的に再懸濁することができる。

一部の実施形態では、赤血球を溶解し、単球を枯渇させることによって、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）勾配による遠心分離または向流遠心分離水簸によって、一次Ｔ細胞を末梢血リンパ球から単離する。ＣＤ３^＋、ＣＤ２８^＋、ＣＤ４^＋、ＣＤ８^＋、ＣＤ４５ＲＡ、およびＣＤ４５ＲＯ細胞などの、Ｔ細胞の特定のサブ集団を、陽性または陰性選択技術によってさらに単離することができる。例えば、一実施形態では、所望のＴ細胞の陽性選択にとって十分な期間にわたって、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標）Ｍ－４５０ＣＤ３／ＣＤ２８Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８）コンジュゲート化ビーズと共にインキュベートすることによって、Ｔ細胞を単離する。

一部の実施形態では、Ｔ細胞集団は、陰性選択された細胞にとって独特の表面マーカーに対する抗体の組合せを使用する陰性選択によって、Ｔ細胞集団をさらに富化することができる。例えば、１つの方法は、陰性選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体のカクテルを使用する、陰性磁気免疫付着（ｎｅｇａｔｉｖｅｍａｇｎｅｔｉｃｉｍｍｕｎｏａｄｈｅｒｅｎｃｅ）またはフローサイトメトリーによる細胞選別および／または選択を含む。例えば、陰性選択によってＣＤ４^＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１ｌｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。ある特定の実施形態では、典型的には、ＣＤ４^＋、ＣＤ２５^＋、ＣＤ６２Ｌ^ｈｉ、ＧＩＴＲ^＋、およびＦｏｘＰ３^＋を発現する調節性Ｔ細胞を富化する、または陽性選択することが望ましい場合がある。あるいは、ある特定の実施形態では、調節性Ｔ細胞を、抗ＣＤ２５コンジュゲート化ビーズまたは他の類似する選択方法によって枯渇させる。

ベクターまたは核酸を宿主細胞（前駆体抗原特異的免疫細胞など）に導入する方法は、当業界で公知である。ベクターまたは核酸を、物理的、化学的、または生物学的方法によって宿主細胞に移入することができる。

ベクターまたは核酸を宿主細胞中に導入するための物理的方法としては、リン酸カルシウム沈降、リポフェクション、粒子ボンバードメント、マイクロインジェクション、電気穿孔などが挙げられる。ベクターおよび／または外因性核酸を含む細胞を生産するための方法は、当業界で周知である。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋｅｔａｌ．（２００１）ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＮｅｗＹｏｒｋを参照されたい。一部の実施形態では、ベクターは、電気穿孔によって細胞中に導入される。

ベクターまたは核酸を宿主細胞中に導入するための生物学的方法としては、ＤＮＡおよびＲＮＡベクターの使用が挙げられる。ウイルスベクターは、遺伝子を哺乳動物、例えば、ヒト細胞中に挿入するための最も広く使用される方法になっている。

ベクターまたは核酸を宿主細胞中に導入するための化学的手段としては、高分子複合体、ナノカプセル、ミクロスフェア、ビーズなどのコロイド分散系、ならびに水中油エマルジョン、ミセル、混合ミセル、およびリポソームなどの脂質に基づく系が挙げられる。ｉｎｖｉｔｒｏでの送達ビヒクルとしての使用のための例示的なコロイド系は、リポソーム（例えば、人工膜小胞）である。

一部の実施形態では、形質導入またはトランスフェクトされた前駆体抗原特異的免疫細胞を、異種核酸の導入後にｅｘｖｉｖｏで増殖させる。一部の実施形態では、形質導入またはトランスフェクトされた前駆体抗原特異的免疫細胞を、少なくとも約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約１０日、約１２日、または約１４日のいずれかにわたって培養し、増殖させる。一部の実施形態では、形質導入またはトランスフェクトされた前駆体抗原特異的免疫細胞を、約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約１０日、約１２日、または約１４日以下のいずれかにわたって培養する。一部の実施形態では、形質導入またはトランスフェクトされた前駆体抗原特異的免疫細胞を、さらに評価またはスクリーニングして、改変抗原特異的免疫細胞を選択する。

リポーター遺伝子を、潜在的にトランスフェクトされた細胞を同定するため、および調節配列の機能を評価するために使用することができる。一般に、リポーター遺伝子は、レシピエント生物または組織の中に存在しないか、またはそれによって発現されず、発現がいくらか容易に検出可能な特性、例えば、酵素活性によって示されるポリペプチドをコードする遺伝子である。リポーター遺伝子の発現は、ＤＮＡがレシピエント細胞中に導入された後、好適な時間でアッセイされる。好適なリポーター遺伝子は、ルシフェラーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ、分泌型アルカリホスファターゼ、または緑色蛍光タンパク質遺伝子をコードする遺伝子を含んでもよい（例えば、Ｕｉ－Ｔｅｉｅｔａｌ．ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒｓ４７９：７９－８２（２０００））。

前駆体抗原特異的免疫細胞中の異種核酸の存在を確認するための他の方法としては、例えば、サザンおよびノーザンブロッティング、ＲＴ－ＰＣＲ、およびＰＣＲなどの当業者には周知の分子生物学的アッセイ；例えば、免疫学的方法（ＥＬＩＳＡおよびウェスタンブロットなど）による特定のペプチドの存在または非存在の検出などの生化学的アッセイが挙げられる。

一部の実施形態では、本明細書に記載の１つまたは複数の外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する改変抗原特異的免疫細胞が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現する改変抗原特異的免疫細胞が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、内因性タンパク質である。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、外因性タンパク質である。一部の実施形態では、ＣＤ１６０改変抗原特異的免疫細胞は、ＣＤ１６０改変ではない抗原特異的免疫細胞と比較して増殖の増大および／または生存能力の増大を示す。一部の実施形態では、ＣＤ１６０改変抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力は、ＣＤ１６０改変ではない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、もしくは約１００００倍のいずれか１つ、またはそれより大きな変化倍数で、増大している。一部の実施形態では、ＣＤ１６０改変抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力は、ＣＤ１６０改変ではない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％もしくは約１００％のいずれか１つ、またはそれより大きな割合で、増大している。一部の実施形態では、ＣＤ１６０改変抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力は、ＣＤ１６０改変ではない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１倍～約２倍、約２倍～約５倍、約５倍～約１０倍、約１０倍～約２０倍、約２０倍～約５０倍、約５０倍～約１００倍、約１００倍～約５００倍、約５００倍～約１０００倍、または約１０００倍～約１００００倍のいずれか１つの変化倍数で、増大している。一部の実施形態では、ＣＤ１６０改変抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力は、ＣＤ１６０改変ではない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１０％～約２０％、約２０％～約３０％、約３０％～約４０％、約４０％～約５０％、約５０％～約６０％、約６０％～約７０％、約７０％～約８０％、約８０％～約９０％、または約９０％～約１００％のいずれか１つの割合で、増大している。

一部の態様では、抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力を増大させる方法であって、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸を免疫細胞中に導入することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力は、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して少なくとも約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、もしくは約１００００倍のいずれか１つ、またはそれより大きな変化倍数で、増大している。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力は、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％もしくは約１００％のいずれか１つ、またはそれより大きな割合で、増大している。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力は、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１倍～約２倍、約２倍～約５倍、約５倍～約１０倍、約１０倍～約２０倍、約２０倍～約５０倍、約５０倍～約１００倍、約１００倍～約５００倍、約５００倍～約１０００倍、または約１０００倍～約１００００倍のいずれか１つの変化倍数で、増大している。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力は、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１０％～約２０％、約２０％～約３０％、約３０％～約４０％、約４０％～約５０％、約５０％～約６０％、約６０％～約７０％、約７０％～約８０％、約８０％～約９０％、または約９０％～約１００％のいずれか１つの割合で、増大している。一部の実施形態では、ＣＤ１６０改変抗原特異的免疫細胞の収量の増大は、ＣＤ１６０改変抗原特異的免疫細胞の増殖速度の増大によって引き起こされる。

一部の態様では、抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力を増大させる方法であって、免疫細胞中でのＣＤ１６０タンパク質の過剰発現を引き起こすことを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、内因性タンパク質である。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、外因性タンパク質である。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現する抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力は、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、もしくは約１００００倍のいずれか１つ、またはそれより大きな変化倍数で、増大している。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現する抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力は、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％もしくは約１００％のいずれか１つ、またはそれより大きな割合で、増大している。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現する抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力は、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１倍～約２倍、約２倍～約５倍、約５倍～約１０倍、約１０倍～約２０倍、約２０倍～約５０倍、約５０倍～約１００倍、約１００倍～約５００倍、約５００倍～約１０００倍、または約１０００倍～約１００００倍のいずれか１つの変化倍数で、増大している。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現する抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力は、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１０％～約２０％、約２０％～約３０％、約３０％～約４０％、約４０％～約５０％、約５０％～約６０％、約６０％～約７０％、約７０％～約８０％、または約８０％～約９０％、または約９０％～約１００％のいずれか１つの割合で、増大している。一部の実施形態では、ＣＤ１６０改変抗原特異的免疫細胞の収量の増大は、ＣＤ１６０改変抗原特異的免疫細胞の増殖速度の増大によって引き起こされる。

一部の実施形態では、治療的抗原特異的免疫細胞を製造する方法であって、本明細書に記載の方法のいずれか１つに従って選択された抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力を増大させるための方法を含む、方法が提供される。一部の実施形態では、治療的抗原特異的免疫細胞は、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）を含む。一部の実施形態では、治療的抗原特異的免疫細胞は、機能的外因性受容体を含む。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。また、本明細書に記載の方法のいずれか１つに従って製造された治療的抗原特異的免疫細胞も提供される。一部の実施形態では、治療的ＴＩＬ、ＴＣＲ－Ｔ細胞の収量および／もしくは生存能力、ならびに／またはＣＡＲ－Ｔ細胞産生を増大させるためのＣＤ１６０過剰発現の使用が提供される。一部の実施形態では、治療的ＴＩＬ、ＴＣＲ－Ｔ、および／またはＣＡＲ－Ｔ細胞産生の収量および／または生存能力を増大させるための外因性ＣＤ１６０発現の使用が提供される。

一部の実施形態では、本明細書に記載の１つまたは複数の外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する改変抗原特異的免疫細胞が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現する改変抗原特異的免疫細胞が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、内因性タンパク質である。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、外因性タンパク質である。一部の実施形態では、ＣＤ１６０改変抗原特異的免疫細胞は、ＣＤ１６０改変ではない抗原特異的免疫細胞と比較して、ｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性の増大を示す。一部の実施形態では、ＣＤ１６０改変抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性は、ＣＤ１６０改変ではない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、もしくは約１００００倍のいずれか１つ、またはそれより大きな変化倍数で、増大している。一部の実施形態では、ＣＤ１６０改変抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性は、ＣＤ１６０改変ではない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％もしくは約１００％のいずれか１つ、またはそれより大きな割合で、増大している。一部の実施形態では、ＣＤ１６０改変抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性は、ＣＤ１６０改変ではない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１倍～約２倍、約２倍～約５倍、約５倍～約１０倍、約１０倍～約２０倍、約２０倍～約５０倍、約５０倍～約１００倍、約１００倍～約５００倍、約５００倍～約１０００倍、または約１０００倍～約１００００倍のいずれか１つの変化倍数で、増大している。一部の実施形態では、ＣＤ１６０改変抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性は、ＣＤ１６０改変ではない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１０％～約２０％、約２０％～約３０％、約３０％～約４０％、約４０％～約５０％、約５０％～約６０％、約６０％～約７０％、約７０％～約８０％、約８０％～約９０％、または約９０％～約１００％のいずれか１つの割合で、増大している。

一部の態様では、抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性を増大させる方法であって、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸を免疫細胞中に導入することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性は、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して少なくとも約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、もしくは約１００００倍のいずれか１つ、またはそれより大きな変化倍数で、増大している。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性は、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％もしくは約１００％のいずれか１つ、またはそれより大きな割合で、増大している。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性は、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１倍～約２倍、約２倍～約５倍、約５倍～約１０倍、約１０倍～約２０倍、約２０倍～約５０倍、約５０倍～約１００倍、約１００倍～約５００倍、約５００倍～約１０００倍、または約１０００倍～約１００００倍のいずれか１つの変化倍数で、増大している。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性は、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１０％～約２０％、約２０％～約３０％、約３０％～約４０％、約４０％～約５０％、約５０％～約６０％、約６０％～約７０％、約７０％～約８０％、または約８０％～約９０％、または約９０％～約１００％のいずれか１つの割合で、増大している。

一部の態様では、抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性を増大させる方法であって、免疫細胞中でのＣＤ１６０タンパク質の過剰発現を引き起こすことを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、内因性タンパク質である。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、外因性タンパク質である。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現する抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性は、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して少なくとも約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、もしくは約１００００倍のいずれか１つ、またはそれより大きな変化倍数で、増大している。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現する抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性は、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％もしくは約１００％のいずれか１つ、またはそれより大きな割合で、増大している。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現する抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性は、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１倍～約２倍、約２倍～約５倍、約５倍～約１０倍、約１０倍～約２０倍、約２０倍～約５０倍、約５０倍～約１００倍、約１００倍～約５００倍、約５００倍～約１０００倍、または約１０００倍～約１００００倍のいずれか１つの変化倍数で、増大している。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現する抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性は、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して、少なくとも約１０％～約２０％、約２０％～約３０％、約３０％～約４０％、約４０％～約５０％、約５０％～約６０％、約６０％～約７０％、約７０％～約８０％、約８０％～約９０％、または約９０％～約１００％のいずれか１つの割合で、増大している。一部の実施形態では、治療的抗原特異的免疫細胞を製造する方法であって、本明細書に記載の方法のいずれか１つに従って選択された抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性を増大させるための方法を含む、方法が提供される。一部の実施形態では、治療的抗原特異的免疫細胞は、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）を含む。一部の実施形態では、治療的抗原特異的免疫細胞は、機能的外因性受容体を含む。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。また、本明細書に記載の方法のいずれか１つに従って製造された治療的抗原特異的免疫細胞も提供される。一部の実施形態では、ｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの治療的抗原特異的Ｔ細胞（限定されるものではないが、ＴＩＬ、ＴＣＲ－Ｔ細胞、およびＣＡＲ－Ｔ細胞を含む）の細胞溶解活性を増大させるためのＣＤ１６０過剰発現の使用が提供される。一部の実施形態では、ｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの治療的抗原特異的Ｔ細胞（限定されるものではないが、ＴＩＬ、ＴＣＲ－Ｔ細胞、およびＣＡＲ－Ｔ細胞を含む）の細胞溶解活性を増大させるための外因性ＣＤ１６０発現の使用が提供される。
ＩＩＩ．外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する改変抗原特異的免疫細胞を使用する処置方法

本出願の一態様は、個体における疾患を処置する方法であって、個体に、本明細書に記載の改変抗原特異的免疫細胞のいずれか１つまたは本明細書に記載の医薬組成物のいずれか１つの有効量を投与することを含む、方法に関する。本出願は、単独で、または別の療法との任意の組合せで、および少なくとも一部の態様では、薬学的に許容される担体または賦形剤と一緒に投与することができる改変抗原特異的免疫細胞を企図する。一部の実施形態では、投与の前に、改変抗原特異的免疫細胞を、当業界で周知の好適な薬学的担体および賦形剤と混合してもよい。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、個体に由来する。

本出願の別の態様は、個体における疾患を処置する方法であって、個体に、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸の有効量を投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、個体中の免疫細胞上の表面分子を認識する結合部分を含む、方法に関する。

したがって、一部の実施形態では、個体（例えば、ヒト）における疾患（例えば、がん）を処置する方法であって、個体に、（例えば、表面上に）外因性ＣＤ１６０タンパク質を含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす、改変抗原特異的免疫細胞の有効量を投与することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする第１の核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含むプロセスによって産生される、外因性ＣＤ１６０タンパク質を（例えば、表面上に）含む改変抗原特異的免疫細胞の有効量を個体に投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす、方法が提供される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、個体に由来する。一部の実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、（ａ）（例えば、表面上に）外因性ＣＤ１６０タンパク質を含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす、改変抗原特異的免疫細胞；および（ｂ）薬学的に許容される担体を含む医薬組成物の有効量を個体に投与することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、個体に由来する。本明細書に記載の処置方法のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約８０％の同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つに対して約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞表面上の外因性ＣＤ１６０タンパク質は、多量体（限定されるものではないが、二量体、三量体、四量体、五量体または六量体など）の形態にある。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性αβＴ細胞、γδＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）からなる群から選択される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞は、ＤＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞およびマクロファージからなる群から選択される。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、個体中の腫瘍から単離される。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、モノクローナルである。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、ポリクローナル集団に由来する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、モノクローナルである。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ポリクローナル集団に由来する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、機能的外因性受容体をさらに含む。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である。一部の実施形態では、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、腫瘍抗原または腫瘍関連抗原を認識する。さらなる実施形態では、機能的外因性受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、同一エピトープに特異的である複数の免疫細胞である。非限定例としては、同じ機能的外因性受容体（ＣＡＲなど）をそれぞれ含む複数のＴ細胞が挙げられる。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、非同一エピトープ（部分的に重複する、または全体として異なるエピトープなど）にそれぞれ特異的な複数の免疫細胞である。非限定例としては、ポリクローナルＴＩＬなどの、複数のポリクローナル免疫細胞が挙げられる。

一部の実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、個体に、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞の有効量を投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型である、方法が提供される。一部の実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする第１の核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含むプロセスによって産生される、外因性ＣＤ１６０タンパク質を表面上に含む改変抗原特異的免疫細胞の有効量を個体に投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型である、方法が提供される。

一部の実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、個体に、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞の有効量を投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質がＧＰＩリンカーを介して膜に結合している、方法が提供される。一部の実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする第１の核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含むプロセスによって産生される、外因性ＣＤ１６０タンパク質を表面上に含む改変抗原特異的免疫細胞の有効量を個体に投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、改変抗原特異的免疫細胞が個体に由来し、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質がＧＰＩリンカーを介して膜に結合している、方法が提供される。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、ＧＰＩアンカーペプチド配列を含む。

一部の実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、個体に、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞の有効量を投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜貫通ドメインを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする第１の核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含むプロセスによって産生される、外因性ＣＤ１６０タンパク質を表面上に含む改変抗原特異的免疫細胞の有効量を個体に投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜貫通ドメインを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ１６０、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＣＤ２４４、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファサブユニット、ＴＣＲベータサブユニット、またはＴＣＲゼータサブユニットからなる群から選択される分子に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ８０、ＣＤ１５２およびＰＤ－１からなる群から選択される分子に由来する。

一部の実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、個体に、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞の有効量を投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする第１の核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含むプロセスによって産生される、外因性ＣＤ１６０タンパク質を表面上に含む改変抗原特異的免疫細胞の有効量を個体に投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、改変抗原特異的免疫細胞が個体に由来し、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ１６０、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ１６、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ３７、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１３４、ＣＤ１３７、ＣＤ１５４、ＣＤ２４４、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）アルファサブユニット、ＴＣＲベータサブユニット、またはＴＣＲゼータサブユニットからなる群から選択される分子に由来する。一部の実施形態では、膜貫通ドメインは、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＣＤ８０、ＣＤ１５２およびＰＤ－１からなる群から選択される分子に由来する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ１６０スプライスバリアントに由来する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットは、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、およびＣＤ３イプシロンからなる群から選択される。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、Ｔ細胞刺激分子に由来する１つまたは複数のシグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、シグナル伝達ドメインは、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ８０、またはＣＤ２５８のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＯＸ４０、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ８０、およびＣＤ２５８からなる群から選択される２つのシグナル伝達ドメインの組合せを含む。

一部の実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、個体に、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞の有効量を投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含み、細胞内ドメインが１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする第１の核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含むプロセスによって産生される、外因性ＣＤ１６０タンパク質を表面上に含む改変抗原特異的免疫細胞の有効量を個体に投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜貫通ドメインおよび細胞内ドメインを含み、細胞内ドメインが１つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８個のいずれか、またはそれより多い共刺激シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、１、２、３、４、または５個以下のいずれか１つの共刺激シグナル伝達ドメインを含有する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインまたは４－１ＢＢとＣＤ３ζドメインとの組合せを含まない。一部の実施形態では、共刺激シグナル伝達ドメインは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、４－１ＢＢ、ＯＸ４０、ＤＡＰ１０、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ３、ＣＤ８０、ＣＤ２５８、ＬＦＡ－１、ＣＤ２、ＣＤ７、ＬＩＧＨＴ、ＮＫＧ２Ｃ、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ８３のリガンド、およびそれらの組合せからなる群から選択される共刺激分子に由来する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ２８共刺激ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、またはその両方を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外ＣＤ１６０ドメイン、膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、および４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外ＣＤ１６０ドメイン、膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ２８共刺激ドメインを含む。一部の実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、膜貫通ドメインに隣接する。一部の実施形態では、ＣＤ２８共刺激ドメインは、膜貫通ドメインのＣ末端に隣接する。一部の実施形態では、細胞内ドメインは、一次シグナル伝達ドメインを含む。一部の実施形態では、一次シグナル伝達ドメインは、ＣＤ３ζドメインを含む。他の実施形態では、細胞内ドメインは、一次シグナル伝達ドメインを含まない。他の実施形態では、細胞内ドメインは、ＣＤ３ζドメインまたは４－１ＢＢとＣＤ３ζドメインとの組合せを含まない。

一部の実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、個体に、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞の有効量を投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が免疫細胞結合部分を介して改変抗原特異的免疫細胞に結合している、方法が提供される。一部の実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする第１の核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含むプロセスによって産生される、外因性ＣＤ１６０タンパク質を表面上に含む改変抗原特異的免疫細胞の有効量を個体に投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型であり、外因性ＣＤ１６０タンパク質が免疫細胞結合部分を介して改変抗原特異的免疫細胞に結合している、方法が提供される。一部の実施形態では、免疫細胞結合部分は、免疫細胞の表面分子に結合する。一部の実施形態では、免疫細胞結合部分は、Ｔ細胞表面分子を認識する抗体を含む。一部の実施形態では、抗体は、全長抗体またはｓｃＦｖ、Ｆｖ、Ｆａｂ、（Ｆａｂ’）_２、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、もしくはＶ_ＨＨドメインなどの抗体断片であってもよい。非限定例としては、ＴＣＲを認識する、および／またはＴＣＲシグナル伝達を活性化する抗ＣＤ３ε抗体が挙げられる。一部の実施形態では、免疫細胞結合部分は、コグネートＴ細胞表面受容体に結合するリガンドを含む。非限定例としては、ＴＣＲおよびＩＬ－２を認識する腫瘍特異的ペプチドＭＨＣ複合体が挙げられる。

本明細書に記載の処置方法のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約８０％の同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つに対して約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、細胞表面上の外因性ＣＤ１６０タンパク質は、多量体（限定されるものではないが、二量体、三量体、四量体、五量体または六量体など）の形態にある。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性αβＴ細胞、γδＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）からなる群から選択される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞傷害性Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞は、ＤＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞およびマクロファージからなる群から選択される。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、個体中の腫瘍から単離される。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、モノクローナルである。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、ポリクローナル集団に由来する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、モノクローナルである。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ポリクローナル集団に由来する。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、機能的外因性受容体をさらに含む。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である。一部の実施形態では、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、腫瘍抗原または腫瘍関連抗原を認識する。さらなる実施形態では、機能的外因性受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、同一エピトープに特異的である複数の免疫細胞である。非限定例としては、同じ機能的外因性受容体（ＣＡＲなど）をそれぞれ含む複数のＴ細胞が挙げられる。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、非同一エピトープ（部分的に重複する、または全体として異なるエピトープなど）にそれぞれ特異的な複数の免疫細胞である。非限定例としては、ポリクローナルＴＩＬなどの、複数のポリクローナル免疫細胞が挙げられる。

本明細書に記載の処置方法のいずれかに記載の一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法は、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質とを接触させることを含む。一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質は、免疫細胞の表面分子に結合する免疫細胞結合部分を含む。一部の実施形態では、方法は、前駆体抗原特異的免疫細胞中に、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸を導入することを含む。一部の実施形態では、核酸は、ｍＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡである。核酸を、ウイルスまたは非ウイルス法を含む、当業界で公知の任意のトランスフェクションまたは形質導入法を使用して、改変抗原特異的免疫細胞中に導入することができる。例示的な非ウイルストランスフェクション法としては、限定されるものではないが、リン酸カルシウム、デンドリマー、リポソーム、またはカチオン性ポリマー（例えば、ＤＥＡＥ－デキストランもしくはポリエチレンイミン）などを使用する化学物質に基づくトランスフェクション；電気穿孔、セルスクイージング、ソノポレーション、光学的トランスフェクション、インペールフェクション、プロトプラスト融合、水力学的送達、またはトランスポゾンなどの非化学的方法；遺伝子銃、マグネクトフェクションまたはマグネットアシストトランスフェクション、粒子ボンバードメントなどを使用する粒子に基づく方法；およびヌクレオフェクションなどのハイブリッド方法が挙げられる。一部の実施形態では、核酸は、トランスフェクションによって前駆体抗原特異的免疫細胞中に導入される。一部の実施形態では、核酸は、形質導入または電気穿孔によって前駆体抗原特異的免疫細胞中に導入される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約８０％の同一性を有するそのバリアントを含む。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質は、配列番号１～４に対して少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの同一性を有するアミノ酸配列を含む。

一部の実施形態では、個体における疾患を処置する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする第１の核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含むプロセスによって産生される改変抗原特異的免疫細胞の有効量を個体に投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす、方法が提供される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、改変Ｔ細胞である。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、前駆体Ｔ細胞である。一部の実施形態では、前駆体抗原特異的免疫細胞は、機能的外因性受容体をコードする第２の核酸をさらに含む。本明細書に記載の処置方法のいずれかに記載の一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法は、前駆体抗原特異的免疫細胞に、機能的外因性受容体をコードする第２の核酸を導入することをさらに含む。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である。一部の実施形態では、機能的外因性受容体は、改変Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）である。一部の実施形態では、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）は、腫瘍抗原または腫瘍関連抗原を認識する。さらなる実施形態では、機能的外因性受容体は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である。一部の実施形態では、第１の核酸と、第２の核酸とは、同じプロモーターに作動可能に連結されている。一部の実施形態では、第１の核酸配列と、第２の核酸配列とは、別々のプロモーターに作動可能に連結されている。一部の実施形態では、第１の核酸と、第２の核酸とは、同じベクター上にある。一部の実施形態では、第１の核酸と、第２の核酸とは、別々のベクター上にある。一部の実施形態では、ベクターは、ウイルスベクターである。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、およびその誘導体からなる群から選択される。一部の実施形態では、ベクターは、非ウイルスベクターである。一部の実施形態では、ベクターは、エピソーム発現ベクターである。一部の実施形態では、方法は、第１の核酸および／または第２の核酸を含む免疫細胞を単離すること、または富化することをさらに含む。本明細書に記載の処置方法のいずれかに記載の一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法は、改変抗原特異的免疫細胞を、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に製剤化することをさらに含む。

一部の実施形態では、個体におけるがんを処置する方法であって、個体に、（例えば、表面上に）外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞の有効量を投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす、方法が提供される。一部の実施形態では、個体におけるがんを処置する方法であって、前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする第１の核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含むプロセスによって産生される改変抗原特異的免疫細胞の有効量を個体に投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらす、方法が提供される。一部の実施形態では、がんは、固形がんである。一部の実施形態では、がんは、白血病またはリンパ腫である。一部の実施形態では、がんは、黒色腫、肺がん、食道がん、膵がん、乳がん、肝臓がん、脳がん、卵巣がんからなる群から選択される。一部の実施形態では、がんは、ＨＰＶ関連がんまたはＥＢＶ関連がんなどのウイルス関連がんである。一部の実施形態では、がんは、転移性がんである。一部の実施形態では、がんを処置する方法は、以下の生物活性：（１）がん細胞の殺傷；（２）がん細胞の増殖の阻害；（３）末梢Ｔ細胞の再分布の誘導；（４）腫瘍における免疫応答の誘導；（５）腫瘍サイズの低減；（６）がんを有する個体における１つまたは複数の症状の軽減；（７）腫瘍転移の阻害；（８）生存の延長；（９）がん進行までの時間の延長；（１０）がんの再発の可能性の防止、阻害、または低減；（１１）個体の生活の質の改善；（１２）腫瘍におけるＴ細胞浸潤の容易化、および（１３）元々存在する腫瘍転移（リンパ節への転移など）の発生または負荷の低減のうちの１つまたは複数を有する。一部の実施形態では、方法は、少なくとも約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％のいずれか、またはそれより高い腫瘍細胞死率を達成する。一部の実施形態では、方法は、腫瘍サイズを、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約１００％のいずれかを含む）減少させる。一部の実施形態では、方法は、転移を、少なくとも約１０％（例えば、少なくとも約２０％、約３０％、約４０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、または約１００％のいずれかを含む）阻害する。一部の実施形態では、方法は、個体の生存を、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４ヶ月のいずれか、またはそれより長く延長する。一部の実施形態では、方法は、がん進行までの時間を、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１８、２４ヶ月のいずれか、またはそれより長く延長する。

本明細書に記載の処置方法のいずれかに記載の一部の実施形態では、投与は、腫瘍内投与である。一部の実施形態では、投与は、リンパ節への投与である。一部の実施形態では、投与は、非経口的、経皮的（真皮に）、管腔内的、動脈内的（動脈に）、筋肉内的（筋肉に）、髄腔内的または静脈内的に実施される。一部の実施形態では、医薬組成物は、皮下的に（皮膚の下に）投与される。一部の実施形態では、投与は、静脈内的に実施される。

本明細書に記載の方法は、固形がんと液性がんとの両方を含む様々ながんを処置するのに好適である。方法は、初期ステージのがん、非転移性がん、原発がん、進行がん、局部進行がん、転移性がん、または寛解中のがんを含む、あらゆるステージのがんに適用可能である。本明細書に記載の方法を、アジュバント設定またはネオアジュバント設定における、第１の療法、第２の療法、第３の療法、または化学療法、外科手術、ホルモン療法、放射線、遺伝子療法、免疫療法（Ｔ細胞療法など）、骨髄移植、幹細胞移植、標的療法、低温療法、超音波療法、光力学療法、高周波アブレーションなどの当業界で公知の他の型のがん療法との併用療法として使用することができる（すなわち、方法を一次／根治療法の前に実行することができる）。一部の実施形態では、方法は、以前に処置されたことがある個体を処置するために使用される。一部の実施形態では、がんは、以前の療法に不応性であった。一部の実施形態では、方法は、以前に処置されたことがない個体を処置するために使用される。

本明細書に記載の方法のいずれかに記載の一部の実施形態では、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞は、確立された固形腫瘍を制御および除去するための短期細胞溶解剤として使用される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む。一部の実施形態では、方法は、改変抗原特異的免疫細胞または医薬組成物を、約７日、約１０日、約１４日、約２１日または約３０日毎に投与することを含む。一部の実施形態では、方法は、改変抗原特異的免疫細胞または医薬組成物を、約２週、約３週、約４週、約５週、約６週、約７週、約８週、約９週、約１０週毎に投与することを含む。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞または医薬組成物は、複数回（２、３、４、５、６回のいずれかまたはそれより多い回数など）投与される。一部の実施形態では、方法は、１つまたは複数の治療剤を投与することをさらに含む。一部の実施形態では、治療剤は、放射線療法、化学療法、または免疫療法のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、治療剤は、免疫チェックポイント阻害剤である。一部の実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのいずれか１つを免疫チェックポイント阻害剤の標的とする。一部の実施形態では、ＰＤ－１および／またはＰＤ－Ｌ１を免疫チェックポイント阻害剤の標的とする。一部の実施形態では、治療剤は、サイトカインを含む。一部の実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ、ＩＬ－１２ｂ、またはＩＬ－１５である。一部の実施形態では、治療剤は、免疫応答をさらにモジュレートする、および／または生じさせる物質である。一部の実施形態では、治療剤は、ＴＬＲアゴニストを含む。一部の実施形態では、治療剤は、ＴＬＲ３アゴニスト、ＴＬＲ４アゴニスト、ＴＬＲ７アゴニスト、ＴＬＲ８アゴニスト、またはＴＬＲ９アゴニストを含む。

一部の実施形態では、方法は、コンディショニング処置またはプレコンディショニング処置をさらに含む。一部の実施形態では、コンディショニング処置またはプレコンディショニング処置は、新しい骨髄のための空間を創出するために基礎疾患を低減させるか、または除去するために使用される。一部の実施形態では、方法は、化学療法をさらに含む。一部の実施形態では、化学療法は、改変抗原特異的免疫細胞または改変医薬組成物の投与前に投与される。一部の実施形態では、化学療法は、改変抗原特異的免疫細胞または改変医薬組成物の投与後に投与される。一部の実施形態では、化学療法は、がんを担持する個体をプレコンディショニングするために使用される。一部の実施形態では、方法は、プレコンディショニングを含まない。一部の実施形態では、方法は、化学療法も化学療法プレコンディショニングもさらに含まない。一部の実施形態では、方法は、放射線療法も放射線プレコンディショニングもさらに含まない。一部の実施形態では、方法は、ワクチン接種の使用をさらに含まない。一部の実施形態では、方法は、限定されるものではないが、インターロイキン－２（ＩＬ－２）などのインターロイキンの使用をさらに含まない。

本明細書に記載の方法において投与される改変抗原特異的免疫細胞または医薬組成物の有効量は、処置されるがんの特定の型およびステージ、投与経路、外因性ＣＤ１６０タンパク質および／または機能的外因性受容体の活性などのいくつかの因子に依存するであろう。医師であれば、患者のサイズ、体表面積、年齢、投与される特定の化合物、性別、投与の時間および経路、一般的な健康、ならびに同時に投与される他の薬物などの臨床因子に基づいて、適切な投薬量レジメンを決定することができる。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞または医薬組成物の有効量は、医薬組成物を個体に投与する場合に、毒性効果（すなわち、臨床的に許容されるレベルの毒性を超える効果）を誘導するレベルより低いか、または潜在的な副作用を制御するか、もしくは許容することができるレベルにある。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞または医薬組成物の有効量は、約１０^５～約１０^１０個の改変抗原特異的免疫細胞を含む。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞または医薬組成物の有効量は、約１０万、約２０万、約５０万、約７５万、約１００万、約２００万、約５００万、約１０００万、約２０００万、約５０００万、約１億、約２億、約５億個のいずれか１つの改変抗原特異的免疫細胞を含む。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞または医薬組成物の有効量は、約１億、約２億、約５億、約７．５億、約１０億、約２０億、約３０億、約４０億、約５０億、約６０億、約７０億、約８０億、約９０億、約１００億、約１１０億、約１２０億、約１３０億、約１４０億、約１５０億個のいずれか１つの改変抗原特異的免疫細胞を含む。

一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞または医薬組成物は、１回（例えば、ボーラス注射）投与される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞または医薬組成物は、複数回（２、３、４、５、６回のいずれかまたはそれより多い回数など）投与される。複数回投与の場合、それらを同じか、または異なる経路によって実施してもよく、同じ部位または異なる部位で行ってもよい。医薬組成物を、毎日から年１回までなどの好適な頻度で投与してもよい。医薬の当業者であれば、疾患の兆候について患者をモニタリングし、それに応じて処置を調整することによって、特定の患者のための最適な投薬量および処置レジメンを容易に決定することができる。

一部の実施形態では、方法は、改変抗原特異的免疫細胞または医薬組成物を、約７日、約１０日、約１４日、約２１日または約３０日毎に投与することを含む。一部の実施形態では、方法は、改変抗原特異的免疫細胞または医薬組成物を、約２週、約３週、約４週、約５週、約６週、約７週、約８週、約９週、約１０週毎に投与することを含む。一部の実施形態では、方法は、改変抗原特異的免疫細胞または医薬組成物を、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月または約８ヶ月毎に投与することを含む。一部の実施形態では、処置される個体は、哺乳動物である。哺乳動物の例としては、限定されるものではないが、ヒト、サル、ラット、マウス、ハムスター、モルモット、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ウシなどが挙げられる。一部の実施形態では、個体は、ヒトである。
医薬組成物

本明細書に記載の改変抗原特異的免疫細胞のいずれか１つと、必要に応じて、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物が、本出願によってさらに提供される。

本出願の医薬組成物は、任意数の改変抗原特異的免疫細胞を含んでもよい。一部の実施形態では、医薬組成物は、単一コピーの改変抗原特異的免疫細胞を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも約１、約１０、約１００、約１０００、約１０^４、約１０^５、約１０^６、約１０^７、約１０^８、約１０^９のいずれか１つまたはそれより多いコピーの改変抗原特異的免疫細胞を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも約１０万、約２０万、約５０万、約７５万、約１００万、約２００万、約５００万、約１０００万、約２０００万、約５０００万、約１億、約２億、約５億個のいずれか１つの改変抗原特異的免疫細胞を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも約１億、約２億、約５億、約７．５億、約１０億、約２０億、約３０億、約４０億、約５０億、約６０億、約７０億、約８０億、約９０億、約１００億、約１１０億、約１２０億、約１３０億、約１４０億、約１５０億個のいずれかの改変抗原特異的免疫細胞を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、単一の型の改変抗原特異的免疫細胞を含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも２つの型の改変抗原特異的免疫細胞を含み、異なる型の改変抗原特異的免疫細胞は、その細胞源、細胞型、発現されるキメラ受容体、および／またはプロモーターなどによって異なる。

本明細書で使用される「担体」としては、用いられる投薬量および濃度で、それに曝露される細胞または個体にとって非毒性的である、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤が挙げられる。生理的に許容される担体は、水性ｐＨ緩衝溶液であることが多い。好適な薬学的担体の例は、当業界で周知であり、リン酸緩衝食塩溶液、水、油／水エマルジョンなどのエマルジョン、様々な型の湿潤剤、滅菌溶液などが挙げられる。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、用いられる投薬量および濃度でレシピエントにとって非毒性的である。

そのような担体を含む医薬組成物を、周知の従来の方法によって製剤化することができる。溶媒または希釈剤は、好ましくは、等張性、低張性、または弱高張性であり、比較的低いイオン強度を有する。代表例としては、滅菌水、生理食塩水（例えば、塩化ナトリウム）、リンゲル溶液、グルコース、トレハロースまたはサッカロース溶液、ハンクス溶液、および他の水性生理的平衡塩溶液（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：ＴｈｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＰｒａｃｔｉｃｅｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓの最新版を参照されたい）が挙げられる。

本明細書に記載の医薬組成物を、任意の好適な経路によって投与することができる。一部の実施形態では、医薬組成物は、非経口的、経皮的（真皮に）、管腔内的、動脈内的（動脈に）、筋肉内的（筋肉に）、髄腔内的または静脈内的に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、皮下的に（皮膚の下に）投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、静脈内的に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、輸注または注射によって個体に投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、例えば、内部もしくは外部標的部位へのバイオリスティック送達によって、または動脈中の部位にカテーテルによって、標的部位に直接投与される。一部の実施形態では、医薬組成物は、局部的に、例えば、腫瘍内的に投与される。投与は、従来のシリンジおよび針または対象における活性薬剤の送達を容易にする、もしくは改善することができる当業界で利用可能な任意の化合物もしくはデバイスを使用してもよい。

非経口投与のための調製物としては、滅菌水性または非水性溶液、懸濁液、およびエマルジョンが挙げられる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルである。水性担体としては、塩水および緩衝化媒体を含む、水、アルコール性／水性溶液、エマルジョンまたは懸濁液が挙げられる。非経口ビヒクルとしては、塩化ナトリウム溶液、リンゲルデキストロース、デキストロースおよび塩化ナトリウム、乳酸化リンゲル、または固定油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、液体および栄養素補給剤、電解質補給剤（リンゲルデキストロースなどに基づくものなど）などが挙げられる。例えば、抗微生物剤、抗酸化剤、キレート剤、および不活性ガスなどの、保存剤および他の添加剤も存在してもよい。さらに、本開示の医薬組成物は、例えば、好ましくはヒト起源の血清アルブミンまたは免疫グロブリンのようなタンパク質性担体を含んでもよい。凍結、液体形態または凍結乾燥形態の様々なウイルス製剤が当業界で利用可能である（例えば、ＷＯ９８／０２５２２、ＷＯ０１／６６１３７、ＷＯ０３／０５３４６３、ＷＯ２００７／０５６８４７およびＷＯ２００８／１１４０２１など）。固体（例えば、乾燥粉末または凍結乾燥）組成物を、減圧乾燥および凍結－乾燥を含むプロセスによって取得することができる（例えば、ＷＯ２０１４／０５３５７１を参照されたい）。本開示の医薬組成物は、本明細書に記載の改変抗原特異的免疫細胞に加えて、医薬組成物の意図される使用に応じて、さらなる生物活性剤を含んでもよいことが想定される。

一部の実施形態では、医薬組成物は、ヒト使用のために好適に緩衝化される。好適な緩衝剤としては、限定されるものではないが、生理的またはわずかに塩基性のｐＨ（例えば、約ｐＨ７～約ｐＨ９）を維持することができる、リン酸緩衝剤（例えば、ＰＢＳ）、重炭酸緩衝剤および／またはＴｒｉｓ緩衝剤が挙げられる。一部の実施形態では、医薬組成物を、グリセロールなどの、好適な等張性改変剤の添加によって血液と等張性にすることもできる。

一部の実施形態では、医薬組成物は、単回使用密閉バイアルなどの単回使用バイアル中に含有される。一部の実施形態では、医薬組成物は、複数回使用バイアル中に含有される。一部の実施形態では、医薬組成物は、容器中にバルクで含有される。

一部の実施形態では、医薬組成物は、個体への投与のためのある特定の基準を満たさなければならない。例えば、米国食品医薬品局は、２１ＣＦＲ６１０および２１ＣＦＲ６１０．１３を含む、細胞に基づく免疫治療製品のための規制ガイドライン設定基準を発行している。医薬組成物の外見、同一性、純度、安全性、および／または効力を評価するための方法が当業界で公知である。一部の実施形態では、医薬組成物は、改変抗原特異的免疫細胞以外の、細胞培養において使用される動物起源のタンパク質などのアレルギー効果をもたらし得る外来タンパク質を実質的に含まない。一部の実施形態では、「実質的に含まない」は、医薬組成物の総体積または重量の約１０％、約５％、約１％、約０．１％、約０．０１％、約０．００１％、１ｐｐｍ未満のいずれか、またはそれより少ない。一部の実施形態では、医薬組成物は、ＧＭＰレベルの工場で調製される。一部の実施形態では、医薬組成物は、非経口投与のために約５ＥＵ／ｋｇ体重／ｈｒ未満の内毒素を含む。一部の実施形態では、医薬組成物中の少なくとも約７０％の改変抗原特異的免疫細胞が、静脈内投与のために生存している。一部の実施形態では、医薬組成物は、米国薬局方（ＵＳＰ）に記載の１４日直接接種試験法を使用して評価した場合、「増殖なし」の結果を有する。一部の実施形態では、医薬組成物の投与前に、改変抗原特異的免疫細胞と、薬学的に許容される賦形剤との両方を含む試料を、最後の回収の約４８～７２時間前に（または培養物の最後の再供給と同時に）、無菌試験のために採取すべきである。一部の実施形態では、医薬組成物は、マイコプラズマ夾雑物を含まない。一部の実施形態では、医薬組成物は、検出可能な微生物因子を含まない。一部の実施形態では、医薬組成物は、Ｉ型ＨＩＶ、ＩＩ型ＨＩＶ、ＨＢＶ、ＨＣＶ、ヒトＴリンパ向性ウイルス、Ｉ型；およびヒトＴリンパ向性ウイルス、ＩＩ型などの、伝染性疾患因子を含まない。

一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、天然の抗原認識を示す。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、操作された抗原認識を示す。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞の抗原認識は、限定されるものではないが、ＣＡＲおよびＴＣＲなどの機能的外因性受容体によって少なくとも部分的に付与される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、腫瘍関連抗原、突然変異発がん抗原および無作為体細胞抗原、ならびに他の新生抗原を標的とする。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ヒト免疫細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、マウス免疫細胞である。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、ＴＣＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＩＬ、または内因性抗原特異的Ｔ細胞のうちの１つまたは複数から改変される。ヒトおよびマウスＴＣＲ－Ｔ細胞、ＣＡＲ－Ｔ細胞、ＴＩＬ、または内因性抗原特異的Ｔ細胞の一部の例は、Ｔｒａｎｅｔａｌ．，ＮａｔＩｍｍｕｎｏｌ．２０１７；１８（３）：２５５－６２、ＭａｃＫａｙｅｔａｌ．，ＮａｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０２０；３８（２）：２３３－４４およびＳｃｈｕｍａｃｈｅｒｅｔａｌ．，ＣａｎｃｅｒＮｅｏａｎｔｉｇｅｎｓ．ＡｎｎｕＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ．２０１９；３７：１７３－２００に報告されており、これらは参照により本明細書に組み込まれる。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、広範囲の抗原を標的とする。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、表１に列挙される抗原の１つまたは複数を標的とする。
ＩＶ．抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性のモジュレーション

本発明の一態様は、抗原特異的免疫細胞のＣＤ１６０の免疫刺激活性をモジュレートする薬剤の治療有効量を投与することを含む、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０タンパク質の免疫刺激活性をモジュレートするための方法を提供する。

一部の態様では、内因性ＣＤ１６０の発現、機能または活性のモジュレーターを同定するための方法であって、ＣＤ１６０発現免疫細胞（ＮＫ細胞など）と、試験薬剤とを接触させること；ならびに試験される免疫細胞中の細胞溶解または炎症経路のエフェクター発現および／または機能を測定することを含む、方法も提供される。一実施形態では、試験薬剤は、その薬剤が、対照免疫細胞と比較して試験される免疫細胞中の細胞溶解または炎症経路のエフェクター発現および／または機能をモジュレートする場合、ＣＤ１６０の発現、機能または活性のモジュレーターとして同定される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０の発現、機能または活性は、正常ベースライン対照と比較して実質的にモジュレートされる。一部の実施形態では、モジュレーターは、ＣＤ１６０の発現、機能または活性の阻害剤である。一部の実施形態では、モジュレーターは、ＣＤ１６０の発現、機能または活性の活性化因子である。

一部の態様では、内因性ＣＤ１６０の発現、機能または活性のモジュレーターを同定するための方法であって、ＣＤ１６０を発現する抗原特異的免疫細胞（ＮＫ細胞など）と、試験薬剤とを接触させること；および抗原チャレンジ時の免疫細胞によるサイトカイン分泌などの、試験される免疫細胞によって惹起されるｉｎｖｉｖｏでの免疫機能を測定することを含む、方法が提供される。一実施形態では、試験薬剤は、その薬剤が、対照免疫細胞と比較して試験される免疫細胞中の細胞溶解または炎症経路のエフェクター発現および／または機能をモジュレートする場合、ＣＤ１６０の発現、機能または活性のモジュレーターとして同定される。好ましくは、ＣＤ１６０の発現、機能または活性は、正常ベースライン対照と比較して実質的にモジュレートされる。一部の実施形態では、モジュレーターは、ＣＤ１６０の発現、機能または活性の阻害剤である。一部の実施形態では、モジュレーターは、ＣＤ１６０の発現、機能または活性の活性化因子である。

本発明の一態様は、個体における免疫疾患を処置する方法であって、個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性をモジュレートする薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、免疫疾患は、自己免疫疾患または炎症性疾患であり、薬剤は、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を阻害する。
抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性の阻害

本発明の一態様は、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を阻害する方法であって、抗原特異的免疫細胞と、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を阻害する薬剤の有効量とを接触させることを含む、方法を提供する。

一部の実施形態では、個体における自己免疫疾患を処置する方法であって、個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を阻害する薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、個体における炎症疾患を処置する方法であって、個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を阻害する薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法が提供される。

一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質の内因性免疫刺激活性を阻害する薬剤は、アンタゴニスト抗体を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質の内因性免疫刺激活性を阻害する薬剤は、アンタゴニストタンパク質を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質の内因性免疫刺激活性を阻害する薬剤は、１つまたは複数の核酸を含む。一部の実施形態では、薬剤は、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の形態である。一部の実施形態では、薬剤は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質の内因性免疫刺激活性を阻害する薬剤は、低分子を含む。一部の実施形態では、薬剤は、ドミナントネガティブ形態のＣＤ１６０タンパク質を含む。

一部の実施形態では、薬剤は、ＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％または約９９％のいずれか１つの割合で、阻害する。一部の実施形態では、薬剤は、ＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を、約１分の１、約２分の１、約３分の１、約４分の１、約５分の１、約１０分の１、約２０分の１、約３０分の１、約４０分の１、約５０分の１、約６０分の１、約７０分の１、約８０分の１、約９０分の１、約１００分の１、約５００分の１、または約１０００分の１のいずれか１つまで、阻害する。

一部の実施形態では、自己免疫応答を処置する方法は、免疫応答の抑制および／または寛容の誘導を含む。自己免疫応答の減少は、限定されるものではないが、Ｉ型糖尿病、関節リウマチ、乾癬、多発性硬化症、アルツハイマー病、ＡＬＳ、ハンチントン病、パーキンソン病、全身性エリテマトーデス、シェーグレン病、クローン病、または潰瘍性大腸炎と関連する抗原に対する免疫応答の減少または寛容の誘導が挙げられる。一部の実施形態では、免疫応答の抑制および／または寛容の誘導は、アレルギー応答の減少を含む。例えば、アレルギー応答の減少は、アレルギー性喘息、アトピー性皮膚炎、アレルギー性鼻炎（花粉症）、食物アレルギー、およびグルテンアレルギーと関連する抗原に対する免疫応答の減少または寛容の誘導を含んでもよい。一部の実施形態では、抗原は、移植組織と関連する抗原である。一部の実施形態では、免疫応答の抑制および／または寛容の誘導は、移植組織に対する免疫応答の減少または寛容の誘導を含む。一部の実施形態では、抗原は、ウイルスと関連する。一部の実施形態では、免疫応答の抑制および／または寛容の誘導は、ウイルスに対する病原性免疫応答の減少または寛容の誘導を含む。例えば、病原性免疫応答は、ある特定のウイルス感染によって生成されるサイトカインストームを含んでもよい。サイトカインストームは、サイトカインと白血球との間の正のフィードバックループからなる潜在的に致死性の免疫反応である。かくして、一部の実施形態では、免疫応答の抑制および／または寛容の誘導は、サイトカインストームの低減または除去を含む。

一部の実施形態では、抗原特異的免疫細胞によって認識される抗原は、タンパク質である。一部の実施形態では、抗原は、自己抗原である。一部の実施形態では、自己抗原は、Ｉ型糖尿病または関節リウマチと関連する。一部の実施形態では、抗原は、治療剤と関連する。一部の実施形態では、抗原は、治療ポリペプチド、または治療ポリペプチドの断片である。一部の実施形態では、治療剤は、限定されるものではないが、第ＶＩＩＩ因子および第ＩＸ因子などの凝固因子である。一部の実施形態では、治療剤は、抗体である。一部の実施形態では、治療剤は、ホルモンである。一部の実施形態では、治療剤は、インスリンである。一部の実施形態では、治療剤は、組換えサイトカインである。一部の実施形態では、治療剤は、免疫チェックポイント阻害剤である。
免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性の活性化

一部の実施形態では、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する方法であって、抗原特異的免疫細胞と、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の有効量とを接触させることを含む、方法を提供が提供される。一部の実施形態では、方法は、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を増強し、薬剤は、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を増強する。一部の実施形態では、方法は、外因性ＣＤ１６０タンパク質と、抗原特異的免疫細胞とを接触させることを含む。一部の実施形態では、方法は、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードするヌクレオチドと、抗原特異的免疫細胞とを接触させることを含む。

一部の実施形態では、個体におけるがんを処置する方法であって、個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、個体における感染を処置する方法であって、個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法が提供される。

一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質の免疫刺激活性を活性化する薬剤は、アゴニストペプチドまたはタンパク質を含む。一部の実施形態では、薬剤は、低分子を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質の内因性免疫刺激活性を活性化する薬剤は、アゴニスト抗体を含む。

一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質の内因性免疫刺激活性を活性化する薬剤は、１つまたは複数の核酸を含む。一部の実施形態では、薬剤は、ＤＮＡおよび／またはｍＲＮＡである。

一部の実施形態では、薬剤は、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化し、抗原特異的免疫細胞は、薬剤と接触する前に検出可能なＣＤ１６０活性を示さない。一部の実施形態では、薬剤は、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を増強する。一部の実施形態では、薬剤は、ＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％または約９９％のいずれか１つの割合で、増強する。一部の実施形態では、薬剤は、ＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を、約１、約２、約３、約４、約５、約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約５００、または約１０００倍のいずれか１つの変化倍数で、増強する。

一部の実施形態では、がんを処置する方法は、腫瘍抗原または腫瘍関連抗原に対する免疫応答の増大を含む。一部の実施形態では、抗原特異的免疫細胞によって認識される抗原は、タンパク質である。一部の実施形態では、抗原特異的免疫細胞は、腫瘍抗原または腫瘍関連抗原に特異的である。一部の実施形態では、腫瘍関連抗原は、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＴＳＨＲ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ－１、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、ＴｎＡｇ、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、インターロイキン－１１受容体（ＩＬ－１１Ｒａ）、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＬｅｗｉｓＹ、ＣＤ２４、血小板由来増殖因子受容体－ベータ（ＰＤＧＦＲ－ベータ）、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ（ＦＲａ）、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、上皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１００、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶＥ６、Ｅ７、ＭＡＧＥＡ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、精子タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３突然変異体、プロステイン、スルビビンおよびテロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、メランＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ突然変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫転座切断点、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、およびＩＧＬＬ１からなる群から選択される。一部の実施形態では、抗原は、新生抗原、例えば、がん関連新生抗原に由来する。一部の実施形態では、抗原は、新生エピトープ、例えば、がん関連新生エピトープを含む。

一部の実施形態では、個体における感染を処置する方法であって、個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、個体における感染を処置する方法であって、個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法が提供される。

一部の実施形態では、感染を処置する方法は、感染性因子と関連する抗原に対する免疫応答の増大を含む。一部の実施形態では、抗原は、非自己抗原である。一部の実施形態では、抗原は、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または真菌抗原である。
Ｖ．腫瘍環境におけるＣＤ１６０のレベルまたは活性に基づいてがんを処置するための方法

本発明の一態様は、ＣＤ１６０を、抗原特異的Ｔ細胞の機能状態、したがって、免疫療法の有効性を予測するためのバイオマーカーとして使用することができる、がんを処置する方法に関する。これらの細胞中でのより高いＣＤ１６０発現は、抗原特異的Ｔ細胞の活性化状態を示唆するが、低レベルのＣＤ１６０発現またはＣＤ１６０発現の非存在は、抗原特異的Ｔ細胞の不活性状態を示唆し得る。

したがって、一部の実施形態では、個体におけるがんを処置する方法であって、個体に、抗原特異的免疫細胞を含む組成物の治療有効量を投与することを含み、個体における内因性ＣＤ１６０レベルまたは活性が、処置のための個体を選択するための基礎として使用される、方法が提供される。一部の実施形態では、個体が高いＣＤ１６０レベルまたは活性を有する場合、個体は処置のために選択される。一部の実施形態では、個体が低いＣＤ１６０レベルまたは活性を有する場合、個体は処置のために選択される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルまたは活性は、免疫組織化学的方法によって決定される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルまたは活性は、ＣＤ１６０タンパク質発現レベルに基づく。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルまたは活性は、ＣＤ１６０ｍＲＮＡレベルに基づく。一部の実施形態では、個体の腫瘍中のＣＤ１６０レベルまたは活性が測定される。一部の実施形態では、個体の腫瘍浸潤性Ｔ細胞（ＴＩＬ）中のＣＤ１６０レベルまたは活性が測定される。一部の実施形態では、個体の末梢Ｔ細胞中のＣＤ１６０レベルまたは活性が測定される。

一部の実施形態では、個体におけるがんを処置する方法であって、個体に、（例えば、表面上に）外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞を含む組成物の治療有効量を投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、免疫細胞がＴ細胞であり、個体における内因性ＣＤ１６０レベルまたは活性が、処置のための個体を選択するための基礎として使用される、方法が提供される。一部の実施形態では、個体が高いＣＤ１６０レベルまたは活性を有する場合、個体は処置のために選択される。一部の実施形態では、個体が低いＣＤ１６０レベルまたは活性を有する場合、個体は処置のために選択される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルは、免疫組織化学的方法によって決定される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルまたは活性は、ＣＤ１６０タンパク質発現レベルに基づく。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルまたは活性は、ＣＤ１６０ｍＲＮＡレベルに基づく。一部の実施形態では、個体の腫瘍中のＣＤ１６０レベルまたは活性が測定される。一部の実施形態では、個体の腫瘍浸潤性Ｔ細胞（ＴＩＬ）中のＣＤ１６０レベルまたは活性が測定される。一部の実施形態では、個体の末梢Ｔ細胞中のＣＤ１６０レベルまたは活性が測定される。

一部の実施形態では、個体におけるがんを処置する方法であって、個体に、１つまたは複数の免疫チェックポイント阻害剤を含む組成物の治療有効量を投与することを含み、個体における内因性ＣＤ１６０レベルまたは活性が、処置のための個体を選択するための基礎として使用される、方法が提供される。一部の実施形態では、個体が高いＣＤ１６０レベルまたは活性を有する場合、個体は処置のために選択される。一部の実施形態では、個体が低いＣＤ１６０レベルまたは活性を有する場合、個体は処置のために選択される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルは、免疫組織化学的方法によって決定される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルまたは活性は、ＣＤ１６０タンパク質発現レベルに基づく。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルまたは活性は、ＣＤ１６０ｍＲＮＡレベルに基づく。一部の実施形態では、個体の腫瘍中のＣＤ１６０レベルまたは活性が測定される。一部の実施形態では、個体の腫瘍浸潤性Ｔ細胞（ＴＩＬ）中のＣＤ１６０レベルまたは活性が測定される。一部の実施形態では、個体の末梢Ｔ細胞中のＣＤ１６０レベルまたは活性が測定される。一部の実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのいずれか１つを免疫チェックポイント阻害剤の標的とする。

一部の実施形態では、個体におけるがんを処置する方法であって、個体にＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤を含む組成物の治療有効量を投与することを含み、個体における内因性ＣＤ１６０レベルまたは活性が、処置のための個体を選択するための基礎として使用される、方法が提供される。一部の実施形態では、個体が高いＣＤ１６０レベルまたは活性を有する場合、個体は処置のために選択される。一部の実施形態では、個体が低いＣＤ１６０レベルまたは活性を有する場合、個体は処置のために選択される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルは、免疫組織化学的方法によって決定される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルまたは活性は、ＣＤ１６０タンパク質発現レベルに基づく。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルまたは活性は、ＣＤ１６０ｍＲＮＡレベルに基づく。一部の実施形態では、個体の腫瘍中のＣＤ１６０レベルまたは活性が測定される。一部の実施形態では、個体の腫瘍浸潤性Ｔ細胞（ＴＩＬ）中のＣＤ１６０レベルまたは活性が測定される。一部の実施形態では、個体の末梢Ｔ細胞中のＣＤ１６０レベルまたは活性が測定される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質の免疫刺激活性を活性化する薬剤は、アゴニストペプチドまたはタンパク質を含む。一部の実施形態では、薬剤は、低分子を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質の内因性免疫刺激活性を活性化する薬剤は、アゴニスト抗体を含む。一部の実施形態では、ＣＤ１６０タンパク質の内因性免疫刺激活性を活性化する薬剤は、１つまたは複数の核酸を含む。一部の実施形態では、薬剤は、ＤＮＡおよび／またはｍＲＮＡである。一部の実施形態では、薬剤は、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化し、抗原特異的免疫細胞は、薬剤と接触する前に検出可能なＣＤ１６０活性を示さない。一部の実施形態では、薬剤は、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を増強する。一部の実施形態では、薬剤は、ＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％または約９９％のいずれか１つの割合で、増強する。一部の実施形態では、薬剤は、ＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を、約１、約２、約３、約４、約５、約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約５００、または約１０００倍のいずれか１つの変化倍数で、増強する。

他の態様では、治療剤を含む組成物を用いて処置のためのがん（黒色腫または肺がんなど）を有する個体を選択する（同定する、を含む）方法であって、個体におけるＣＤ１６０レベルまたは活性を決定することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、免疫療法を含む組成物を用いて処置のためのがん（黒色腫または肺がんなど）を有する個体を選択する（同定する、を含む）方法であって、個体におけるＣＤ１６０レベルまたは活性を決定することを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、高レベルのＣＤ１６０を有する個体が、処置のために選択される。一部の実施形態では、低レベルのＣＤ１６０を有する個体が、処置のために選択される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０のレベルは、タンパク質発現レベルに基づいて決定される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０のレベルは、ｍＲＮＡレベルに基づいて決定される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０のレベルは、免疫組織化学アッセイによって決定される。

一部の実施形態では、レベルは、対照（本明細書に記載の対照のいずれかなど）と比較することによって決定される（例えば、高い、または低い）。一部の実施形態では、方法は、ＣＤ１６０レベルまたは活性と、対照とを比較することをさらに含む。一部の実施形態では、レベルは、本明細書に記載のＨスコアシステムなどのスコアリングシステムに基づいて決定される（例えば、高い、または低い）。非対照試料と同じ供給源および方法を使用して、対照試料を取得することができる。一部の実施形態では、対照試料は、異なる個体（例えば、がんを有しない個体および／または類似する民族、年齢、および性別の同一性を共有する個体）から取得される。試料が腫瘍組織試料である一部の実施形態では、対照試料は、同じ個体に由来する非がん性試料であってもよい。一部の実施形態では、複数の対照試料（例えば、異なる個体に由来する）を使用して、特定の組織、臓器、または細胞集団中のＣＤ１６０活性のレベルの範囲を決定する。一部の実施形態では、対照試料は、適切な対照と決定された培養組織または細胞である。一部の実施形態では、対照は、ＣＤ１６０を発現しない細胞である。一部の実施形態では、対照は、高レベルのＣＤ１６０を発現する細胞である。一部の実施形態では、標準化された試験における臨床的に許容される正常レベルが、関連組織中のＣＤ１６０活性を決定するための対照レベルとして使用される。一部の実施形態では、対象における参照ＣＤ１６０レベルまたは活性は、ＣＤ１６０染色に関する免疫組織化学に基づくスコアリングシステム、例えば、本明細書でさらに考察されるＨスコアなどの、スコアリングシステムに従って、高、中または低と分類される。一部の実施形態では、対象における参照ＣＤ１６０レベルまたは活性は、Ｈスコアが全体中央Ｈスコアよりも低いか、またはそれと等しい場合、低い試料と分類される。

一部の実施形態では、個体におけるがんを処置する方法であって、個体に、表面上に機能的外因性受容体を含む改変抗原特異的免疫細胞を含む組成物の治療有効量を投与することを含み、免疫細胞がＴ細胞であり、個体におけるＣＤ１６０レベルまたは活性が、がんの処置における使用のための改変抗原特異的免疫細胞を選択するための基礎として使用される、方法が提供される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞が高いＣＤ１６０レベルまたは活性を有する場合、処置のために選択される。一部の実施形態では、改変抗原特異的免疫細胞は、細胞が低いＣＤ１６０レベルまたは活性を有する場合、処置のために選択される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルは、免疫組織化学的方法によって決定される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルまたは活性は、ＣＤ１６０タンパク質発現レベルに基づく。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルまたは活性は、ＣＤ１６０ｍＲＮＡレベルに基づく。一部の実施形態では、ＣＤ１６０レベルまたは活性は、外因性機能的受容体を含まない前駆体免疫細胞と比較される。一部の実施形態では、表面上に外因性機能的受容体を含む改変抗原特異的免疫細胞のＣＤ１６０レベルまたは活性は、表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞と比較される。一部の実施形態では、表面上に外因性機能的受容体を含む改変抗原特異的免疫細胞のＣＤ１６０レベルまたは活性は、表面上に外因性ドミナントネガティブ形態のＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞と比較される。

本明細書に記載の方法のいずれかに記載の一部の実施形態では、ＣＤ１６０のレベルは、ＣＤ１６０タンパク質発現レベルに基づいて決定される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０のレベルは、ｍＲＮＡレベルに基づいて決定される。一部の実施形態では、ヌクレオシド輸送因子のレベルは、免疫組織化学アッセイによって決定される。一部の実施形態では、レベルは、対照（本明細書に記載の対照のいずれかなど）と比較することによって決定される（例えば、高い、または低い）。一部の実施形態では、レベルは、本明細書に記載のＨスコアシステムなどのスコアリングシステムに基づいて決定される（例えば、高い、または低い）。一部の実施形態では、スコアリングは、米国特許出願公開第２０１３／０００５６７８号に記載の「Ｈスコア」に基づく。Ｈスコアは、式：３×強く染色する細胞のパーセンテージ＋２×中程度に染色する細胞のパーセンテージ＋弱く染色する細胞のパーセンテージによって得られ、０～３００の範囲である。
ＶＩ．キットおよび製品

また、本明細書に記載の改変抗原特異的免疫細胞、または組成物（例えば、医薬組成物）のいずれか１つを含むキット、単位剤形、および製品も提供される。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物のいずれか１つを含有し、好ましくは、その使用のための使用説明書を提供するキットが提供される。一部の実施形態では、キットは、改変抗原特異的免疫細胞に加えて、化学療法、ホルモン療法、および／または免疫療法などの第２のがん療法をさらに含む。キットを、個体のために特定のがんに対して調整してもよく、キットは個体のための対応する第２のがん療法を含む。

また、ＣＤ１６０発現、機能もしくは活性のモジュレーター（阻害剤もしくは活性化因子など）のいずれか１つまたはＣＤ１６０活性をモジュレートする（阻害する、もしくは活性化するなど）薬剤のいずれか１つを含むキット、単位剤形、および製品も提供される。

キットは、改変抗原特異的免疫細胞の増殖または誘導を可能にする、容器、試薬、培養培地、誘導因子、サイトカイン、緩衝剤、抗体などの１つまたは複数のさらなる成分を含有してもよい。キットはまた、医薬組成物の腫瘍部位への局部投与（腫瘍内注入など）のためのデバイスを含有してもよい。

別の態様では、１）外因性機能的受容体（ＣＡＲなど）、ＣＤ１６０活性のモジュレーター、および／または免疫療法（免疫チェックポイント阻害剤など）を含む改変抗原特異的細胞を含む組成物ならびに２）ＣＤ１６０レベルまたは活性を決定するための薬剤を含むキットが提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１６０発現レベルを決定するための薬剤は、ＣＤ１６０タンパク質を認識する抗体である。

本出願のキットは、好適な包装中にある。好適な包装としては、限定されるものではないが、バイアル、ボトル、広口瓶、フレキシブル包装（例えば、密封されたマイラーバッグまたはプラスチック袋）などが挙げられる。キットは、必要に応じて、緩衝剤および解釈情報などの追加成分を提供することができる。かくして、本出願は、バイアル（密封バイアルなど）、ボトル、広口瓶、フレキシブル包装などを含む製品も提供する。キットの一部の成分を、水性媒体中で、または凍結乾燥形態で包装することができる。

製品は、容器と、容器の上の、または容器と関連するラベルまたは添付文書とを含んでもよい。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジなどが挙げられる。容器を、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成させることができる。一般に、容器は、本明細書に記載の疾患または障害（がんなど）を処置するのに有効である組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有してもよい（例えば、容器は、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルであってもよい）。ラベルまたは添付文書は、組成物が個体における特定の状態を処置するために使用されることを示す。ラベルまたは添付文書は、組成物を個体に投与するための使用説明書をさらに含むであろう。ラベルは、復元および／または使用のための指示を示してもよい。医薬組成物を保持する容器は、復元された製剤の反復投与（例えば、２～６回の投与）を可能にする複数回使用バイアルであってもよい。添付文書とは、治療薬の使用に関する適応症、使用、投薬量、投与、禁忌および／または警告に関する情報を含有する治療薬の商業パッケージに慣用的に含まれる使用説明書を指す。さらに、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル溶液およびデキストロース溶液などの、薬学的に許容される緩衝剤を含む第２の容器をさらに含んでもよい。それは、他の緩衝剤、希釈剤、充填剤、針、およびシリンジを含む、商業的観点およびユーザーの観点から望ましい他の材料をさらに含んでもよい。

キットまたは製品は、薬局、例えば、院内薬局および調剤薬局における保存および使用にとって十分な量で包装された、医薬組成物の複数の単位用量と、使用のための使用説明書とを含んでもよい。
例示的実施形態

本発明は、以下の列挙される実施形態を提供する。

実施形態１：表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞であって、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、免疫細胞がＴ細胞である、改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態２：細胞傷害性αβＴ細胞、γδＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、抗原提示細胞（ＡＰＣ）により活性化される抗腫瘍Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）からなる群から選択される、実施形態１に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態３：細胞傷害性Ｔ細胞である、実施形態１に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態４：腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である、実施形態２に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態５：ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞およびマクロファージからなる群から選択される、実施形態１に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態６：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９０％の同一性を有するそのバリアントを含む、実施形態１から５のいずれか１つに記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態７：外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型である、実施形態１から５のいずれか１つに記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態８：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、ＧＰＩリンカーを介して膜に結合している、実施形態７に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態９：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、膜貫通ドメインを含む、実施形態７に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態１０：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、細胞内ドメインをさらに含む、実施形態９に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態１１：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、ＣＤ１６０スプライスバリアントに由来する細胞内ドメインをさらに含む、実施形態９または１０に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態１２：細胞内ドメインが、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１０に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態１３：ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットが、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、およびＣＤ３イプシロンからなる群から選択される、実施形態１２に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態１４：細胞内ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、またはその両方を含む、実施形態１０に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態１５：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外ＣＤ１６０ドメイン、膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、および４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む、実施形態１４に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態１６：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外ＣＤ１６０ドメイン、膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ２８共刺激ドメインを含む、実施形態１４に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態１７：細胞内ドメインが、一次シグナル伝達ドメインを含む、実施形態１０から１６のいずれか１つに記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態１８：一次シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζドメインを含む、実施形態１７に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態１９：細胞内ドメインが、一次シグナル伝達ドメインを含まない、実施形態１０から１６のいずれか１つに記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態２０：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、免疫細胞結合部分を介して改変抗原特異的免疫細胞に結合している、実施形態７に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態２１：免疫細胞結合部分が、免疫細胞の表面分子に結合する、実施形態２０に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態２２：機能的外因性受容体をさらに含む、実施形態１から２１のいずれか１つに記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態２３：機能的外因性受容体が、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態２２に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態２４：機能的外因性受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態２２に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態２５：表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法であって、
前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする第１の核酸とを接触させることによって、改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含み、
外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、免疫細胞がＴ細胞である、方法。

実施形態２６：改変抗原特異的免疫細胞が、細胞傷害性αβＴ細胞、γδＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）からなる群から選択される、実施形態２５に記載の方法。

実施形態２７：改変抗原特異的免疫細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞である、実施形態２５に記載の方法。

実施形態２８：改変抗原特異的免疫細胞が、腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である、実施形態２６に記載の方法。

実施形態２９：免疫細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞およびマクロファージからなる群から選択される、実施形態２６に記載の方法。

実施形態３０：前駆体抗原特異的免疫細胞と、外因性ＣＤ１６０タンパク質とを接触させることを含む、実施形態２５から２９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３１：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、免疫細胞の表面分子に結合する免疫細胞結合部分を含む、実施形態３０に記載の方法。

実施形態３２：前駆体抗原特異的免疫細胞中に、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸を導入することを含む、実施形態２５から２９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３３：核酸が、ｍＲＮＡである、実施形態３２に記載の方法。

実施形態３４：核酸が、ＤＮＡである、実施形態３２に記載の方法。

実施形態３５：核酸が、トランスフェクションによって前駆体抗原特異的免疫細胞に導入される、実施形態３２から３４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３６：核酸が、形質導入または電気穿孔によって前駆体抗原特異的免疫細胞に導入される、実施形態３２から３４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３７：ＣＤ１６０タンパク質が、配列番号１～４のいずれかのアミノ酸配列、または配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９０％の同一性を有するそのバリアントを含む、実施形態２５から３６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３８：外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型である、実施形態２５から３７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態３９：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、ＧＰＩリンカーを介して膜に結合している、実施形態３８に記載の方法。

実施形態４０：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、膜貫通ドメインを含む、実施形態３８に記載の方法。

実施形態４１：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、細胞内ドメインをさらに含む、実施形態３９に記載の方法。

実施形態４２：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、ＣＤ１６０スプライスバリアントに由来する細胞内ドメインをさらに含む、実施形態４０または４１に記載の方法。

実施形態４３：細胞内ドメインが、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、実施形態４１に記載の方法。

実施形態４４：ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットが、ＣＤ３ガンマ、ＣＤ３デルタ、およびＣＤ３イプシロンからなる群から選択される、実施形態４３に記載の改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態４５：細胞内ドメインが、ＣＤ２８共刺激ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、またはその両方を含む、実施形態４１に記載の方法。

実施形態４６：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外ＣＤ１６０ドメイン、膜貫通ドメイン、ＣＤ２８共刺激ドメイン、および４－１ＢＢ共刺激ドメインを含む、実施形態４５に記載の方法。

実施形態４７：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、Ｎ末端からＣ末端に向かって、細胞外ＣＤ１６０ドメイン、膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、およびＣＤ２８共刺激ドメインを含む、実施形態４５に記載の方法。

実施形態４８：細胞内ドメインが、一次シグナル伝達ドメインを含む、実施形態４１から４７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態４９：一次シグナル伝達ドメインが、ＣＤ３ζドメインを含む、実施形態４８に記載の方法。

実施形態５０：細胞内ドメインが、一次シグナル伝達ドメインを含まない、実施形態４１から４７のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５１：外因性ＣＤ１６０タンパク質が、免疫細胞結合部分を介して改変抗原特異的免疫細胞に結合している、実施形態３８に記載の方法。

実施形態５２：免疫細胞結合部分が、免疫細胞の表面分子に結合する、実施形態５１に記載の方法。

実施形態５３：前駆体抗原特異的免疫細胞が、機能的外因性受容体をコードする第２の核酸を含む、実施形態２５から５２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５４：前駆体抗原特異的免疫細胞と、機能的外因性受容体をコードする第２の核酸とを接触させることをさらに含む、実施形態２５から５２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５５：機能的外因性受容体が、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態５３または５４に記載の方法。

実施形態５６：機能的外因性受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態５３または５４に記載の方法。

実施形態５７：第１の核酸と、第２の核酸とが、同じプロモーターに作動可能に連結されている、実施形態５４から５６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５８：第１の核酸と、第２の核酸とが、別々のプロモーターに作動可能に連結されている、実施形態５４から５６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態５９：第１の核酸と、第２の核酸とが、同じベクター上にある、実施形態５４から５８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態６０：第１の核酸および／または第２の核酸が、別々のベクター上にある、実施形態５４から５９のいずれか１つに記載の方法。

実施形態６１：ベクターが、ウイルスベクターである、実施形態５９または６０に記載の方法。

実施形態６２：ウイルスベクターが、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、エピソームベクター発現ベクター、単純ヘルペスウイルスベクター、およびその誘導体からなる群から選択される、実施形態６１に記載の方法。

実施形態６３：ベクターが、非ウイルスベクターである、実施形態５９または６０に記載の方法。

実施形態６４：第１および／または第２の核酸を含む免疫細胞を単離または富化することをさらに含む、実施形態２５から６３のいずれか１つに記載の方法。

実施形態６５：ＣＤ１６０を発現する改変抗原特異的免疫細胞を、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に製剤化することをさらに含む、実施形態２５から６４のいずれか１つに記載の方法。

実施形態６６：実施形態２５から６５のいずれか１つに記載の方法によって得られる改変抗原特異的免疫細胞。

実施形態６７：実施形態１から２４および６６のいずれか１つに記載の改変抗原特異的免疫細胞と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。

実施形態６８：個体における疾患を処置する方法であって、個体に、実施形態１から２４および６６のいずれか１つに記載の改変抗原特異的免疫細胞または実施形態６７に記載の医薬組成物の有効量を投与することを含む、方法。

実施形態６９：改変抗原特異的免疫細胞が、個体に由来する、実施形態６８に記載の方法。

実施形態７０：個体における疾患を処置する方法であって、個体に、外因性ＣＤ１６０タンパク質または外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸の有効量を投与することを含み、外因性ＣＤ１６０タンパク質が、個体中の免疫細胞上の表面分子を認識する結合部分を含む、方法。

実施形態７１：投与が、腫瘍内投与である、実施形態６８から７０のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７２：投与が、リンパ節への投与である、実施形態６８から７０のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７３：疾患が、がんである、実施形態６８から７２のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７４：がんが、固形腫瘍である、実施形態７３に記載の方法。

実施形態７５：がんが、転移性がんである、実施形態７３または７４に記載の方法。

実施形態７６：がんが、黒色腫、肺がん、食道がん、膵がん、乳がん、肝臓がん、脳がん、卵巣がんからなる群から選択される、実施形態７３から７５のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７７：個体がヒトである、実施形態６８から７６のいずれか１つに記載の方法。

実施形態７８：抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を阻害する方法であって、抗原特異的免疫細胞と、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を阻害する薬剤の有効量とを接触させることを含む、方法。

実施形態７９：抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する方法であって、抗原特異的免疫細胞と、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の有効量とを接触させることを含む、方法。

実施形態８０：方法が、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を増強し、ここで、薬剤が、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を増強する、実施形態７９に記載の方法。

実施形態８１：個体における免疫疾患を処置する方法であって、個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性をモジュレートする薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法。

実施形態８２：免疫疾患が、自己免疫疾患または炎症性疾患であり、薬剤が、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を阻害する、実施形態８１に記載の方法。

実施形態８３：個体におけるがんを処置する方法であって、個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法。

実施形態８４：個体における感染を処置する方法であって、個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法。

実施形態８５：抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力を増大させる方法であって、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸を免疫細胞中に導入することを含む、方法。

実施形態８６：抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力を増大させる方法であって、免疫細胞中でのＣＤ１６０タンパク質の過剰発現を引き起こすことを含む、方法。

実施形態８７：ＣＤ１６０タンパク質が内因性タンパク質である、実施形態８６に記載の方法。

実施形態８８：ＣＤ１６０タンパク質が外因性タンパク質である、実施形態８６に記載の方法。

実施形態８９：外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する抗原特異的免疫細胞の収量が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して少なくとも約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍または約１００００倍のいずれか１つの変化倍数で、増大している、実施形態８５に記載の方法。

実施形態９０：外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する抗原特異的免疫細胞の生存能力が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して少なくとも約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍または約１００００倍のいずれか１つの変化倍数で、増大している、実施形態８５に記載の方法。

実施形態９１：ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現する抗原特異的免疫細胞の収量が、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して少なくとも約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍または約１００００倍のいずれか１つの変化倍数で、増大している、実施形態８５から８８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態９２：ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現する抗原特異的免疫細胞の生存能力が、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して少なくとも約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍または約１００００倍のいずれか１つの変化倍数で、増大している、実施形態８５から８８のいずれか１つに記載の方法。

実施形態９３：実施形態８５から９２のいずれか１つに記載の方法から選択される抗原特異的免疫細胞の収量および／または生存能力を増大させるための方法を含む、治療的抗原特異的免疫細胞を製造する方法。

実施形態９４：治療的抗原特異的免疫細胞が、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）を含む、実施形態９３に記載の方法。

実施形態９５：治療的抗原特異的免疫細胞が、機能的外因性受容体を含む、実施形態９３に記載の方法。

実施形態９６：機能的外因性受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態９５に記載の方法。

実施形態９７：機能的外因性受容体が、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態９５に記載の方法。

実施形態９８：抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性を増大させる方法であって、外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸を免疫細胞中に導入することを含む、方法。

実施形態９９：抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性を増大させる方法であって、免疫細胞中でのＣＤ１６０タンパク質の過剰発現を引き起こすことを含む、方法。

実施形態１００：ＣＤ１６０タンパク質が内因性タンパク質である、実施形態９９に記載の方法。

実施形態１０１：ＣＤ１６０タンパク質が外因性タンパク質である、実施形態９９に記載の方法。

実施形態１０２：外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏでの細胞溶解活性が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して少なくとも約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍または約１００００倍のいずれか１つの変化倍数で、増大している、実施形態９８に記載の方法。

実施形態１０３：外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現する抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性が、外因性ＣＤ１６０タンパク質を発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して少なくとも約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍または約１００００倍のいずれか１つの変化倍数で、増大している、実施形態９８に記載の方法。

実施形態１０４：ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現する抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏでの細胞溶解活性が、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して少なくとも約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍または約１００００倍のいずれか１つの変化倍数で、増大している、実施形態９８から１０１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１０５：ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現する抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性が、ＣＤ１６０タンパク質を過剰発現しない抗原特異的免疫細胞と比較して少なくとも約０．５倍、約１倍、約１．５倍、約２倍、約５倍、約１０倍、約２０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍または約１００００倍のいずれか１つの変化倍数で、増大している、実施形態９８から１０１のいずれか１つに記載の方法。

実施形態１０６：実施形態９８から１０５のいずれか１つに記載の方法から選択される抗原特異的免疫細胞のｉｎｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎｖｉｖｏでの細胞溶解活性を増大させるための方法を含む、治療的抗原特異的免疫細胞を製造する方法。

実施形態１０７：治療的抗原特異的免疫細胞が、腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）を含む、実施形態１０６に記載の方法。

実施形態１０８：治療的抗原特異的免疫細胞が、機能的外因性受容体を含む、実施形態１０６に記載の方法。

実施形態１０９：機能的外因性受容体が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、実施形態１０８に記載の方法。

実施形態１１０：機能的外因性受容体が、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）である、実施形態１０８に記載の方法。

（実施例１）
ＰｍｅｌＴ細胞中でのｍＣＤ１６０の異所性発現
免疫細胞中でのＣＤ１６０の機能を検査するために、ＧＰＩアンカー型のマウスＣＤ１６０を抗腫瘍Ｔ細胞中で異所的に発現させ、ＦＡＣＳ分析によって定量した。

具体的には、マウス全長ＣＤ１６０（ｍＣＤ１６０）を、ＭＳＣＶに基づくレトロウイルスベクター中にクローニングし、Ｐ２Ａスペーサーを介してＧＦＰリポーターと融合し、ＣＤ１６０とＧＦＰタンパク質との独立した合成を可能にした（図１Ａ）。次いで、ｍＣＤ１６０ウイルスを、ヒト黒色腫抗原ＧＰ１００のマウスホモログを認識するＴＣＲを有するＰｍｅｌＴ細胞中に形質導入した。

ＦＡＣＳ分析によって示されるように、ＣＤ１６０の異所性発現は、通常は低レベルの内因性ＣＤ１６０を発現するＰｍｅｌＴ細胞上でのＣＤ１６０発現の約２．５倍の増加をもたらした（図１Ｂ、１Ｃ）。
（実施例２）
ＣＤ１６０発現は、培養中のＢ１６Ｆ０黒色腫細胞に対するＰｍｅｌＴ細胞のＣＴＬ機能を強化する

Ｔ細胞の細胞溶解機能に対する異所性ＣＤ１６０発現の効果を示すために、グランザイムＡおよびパーフォリンの発現；炎症性サイトカインの発現；ならびにＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞の殺傷活性を測定した。モック感染したＰｍｅｌＴ細胞を対照として使用した。

具体的には、ｍＣＤ１６０ウイルスを、実施例１に記載のようにＰｍｅｌＴ細胞中に形質導入し、グランザイムＡおよびパーフォリンの発現をＦＡＣＳによって測定した。グランザイムＡおよびパーフォリンは、Ｔ細胞およびＮＫ細胞により媒介される殺傷のための顆粒エキソサイトーシス経路における２つの必須タンパク質である。図２Ａに示されるように、グランザイムＡおよびパーフォリンの発現は、対照ＰｍｅｌＴ細胞と比較して増加したが、これは、外因性ｍＣＤ１６０が腫瘍特異的Ｔ細胞の内在性ＣＴＬ機能を強化したことを示している。

炎症性サイトカインＩＦＮ－γおよびＴＮＦ－αの発現プロファイルを、ＦＡＣＳを使用して、対照ＰｍｅｌＴ細胞と比較してＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞中で測定した。図２Ｂに示されるように、ＩＦＮ－γおよびＴＮＦ－αの発現は、対照ＰｍｅｌＴ細胞と比較して増加したが、これは、外因性ｍＣＤ１６０が腫瘍特異的Ｔ細胞の炎症活性を強化したことを示している。

ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞が腫瘍細胞を殺傷する能力も検査し、対照ＰｍｅｌＴ細胞と比較した。簡単に述べると、ＰｍｅｌＴ細胞を、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８ビーズで刺激し、ＩＬ－２と共にＴ細胞拡大培地中で３日間培養した。３日目に、標的腫瘍細胞Ｂ１６Ｆ０を３７℃で１０分温め、３７℃で３０分、１μＭのＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識した後、９６ウェル培養プレート上に播種した。対照またはＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を、規定のエフェクターの標的細胞に対する比で各ウェルに添加した後、４～６時間インキュベートした。続いて、標的細胞を回収し、７－アミノアクチノマイシンＤ（７－ＡＡＤ、ＢＤＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で標識し、ＦＡＣＳによって分析して、エフェクターＴ細胞による殺傷を決定した。ＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ色素＋／７－ＡＡＤ＋細胞の集団は、殺傷された標的細胞を表し、ＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ色素＋／７－ＡＡＤ－集団は、残存する生きた標的細胞を表した。図２Ｃに示されるように、ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞は、対照Ｔ細胞と比較して、同時培養中のＢ１６Ｆ０黒色腫細胞の殺傷においてより強力であった。

総合すると、これらの結果は、ＣＤ１６０の異所性発現が、内在性細胞溶解活性を強化し、炎症機能をブーストし、抗原特異的Ｔ細胞の腫瘍殺傷活性を増強することを示していた。
（実施例３）
ＣＤ１６０発現は、ＰｍｅｌＴ細胞によるマウスにおけるＢ１６Ｆ０黒色腫の制御を強化する

異所性ＣＤ１６０が、ｉｎｖｉｖｏで抗原特異的Ｔ細胞の腫瘍制御活性を強化することができるかどうかを検査するために、ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を、皮下Ｂ１６Ｆ０黒色腫腫瘍を担持するレシピエントマウスに養子移入した。

具体的には、１×１０^５個のＢ１６Ｆ０細胞を、６～８週齢のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下注射した。養子細胞移入の前に、マウスを無作為化して、実験の開始時にサイズの偏りがないことを確保した。１つの実験では、１０万、２０万、３０万もしくは４０万個のＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞または３０万個の対照ＰｍｅｌＴ細胞の単回用量を、埋込み後８日目に腫瘍担持マウスに養子移入した（図３Ａ）。マウスを、触診によって腫瘍形成について週２回チェックし、腫瘍面積をノギス測定によって測定した。腫瘍面積は、１群あたり少なくとも５匹のマウスの平均測定値である（＋／－ＳＥＭ、両側ｔ検定）。図３Ａに示されるように、ＣＤ１６０改変Ｐｍｅｌは、ＣＤ１６０－ＰｍｅｌＴ細胞の移入に応答する腫瘍制御に対する用量依存的効果を示した。

別の実験では、Ｂ１６Ｆ０黒色腫腫瘍の制御に対する、ＣＤ１６０改変抗原特異的Ｔ細胞および非抗原特異的Ｔ細胞の養子移入の効果を分析した（図３Ｂ）。簡単に述べると、それぞれ３０万個の（ｉ）対照ＰｍｅｌＴ細胞、（ｉｉ）ＣＤ１６０改変抗原特異的ＰｍｅｌＴ細胞、または（ｉｉｉ）ＣＤ１６０改変、非抗原特異的脾臓Ｔ細胞の単回用量を、埋込み後８日目に腫瘍担持マウスに養子移入した。図３Ｂに示されるように、非抗原特異的脾臓Ｔ細胞による腫瘍制御に対しては、わずかな統計的に有意でない効果のみがあるが、ＣＤ１６０の異所性発現は、腫瘍特異的ＰｍｅｌＴ細胞による腫瘍制御活性を有意に増強させた。

総合すると、これらの結果は、腫瘍特異的Ｔ細胞中での異所性ＣＤ１６０発現は、相乗的な免疫能力のあるマウス腫瘍モデルにおいて腫瘍制御を強化することができることを示していた。
（実施例４）
ＣＤ１６０改変Ｔ細胞は、ＩＬ－２およびワクチン接種なしに、確立されたＢ１６Ｆ０黒色腫腫瘍を制御し、除去することができる

確立された腫瘍の除去におけるＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞の能力を検査するために、ＣＤ１６０－ＰｍｅｌＴ細胞を、化学療法プレコンディショニング後に、確立されたＢ１６Ｆ０黒色腫腫瘍を担持するマウスに養子移入した。

簡単に述べると、１×１０^５個のＢ１６Ｆ０細胞を、６～８週齢のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下注射した。腫瘍埋込み後、マウスを毎日観察し、死亡の兆候が見られたら犠牲にした。マウスを、触診によって腫瘍形成について週２回チェックし、腫瘍面積をノギス測定によって測定した。養子細胞移入の前に、マウスを無作為化して、実験の開始時にサイズの偏りがないことを確保した。腫瘍埋込み後７日目で開始して、マウスに１４日間隔でＰｍｅｌＴ細胞を輸注したが、それぞれのＴ細胞輸注の前にシクロホスファミド（ＣＹＰ）コンディショニングレジメン（処置あたり１００ｍｇ／ｋｇ）を行ったが、ワクチン接種およびＩＬ－２輸注は行わなかった。平均腫瘍サイズは、埋込み後３５日目でピークに達した。正規化されたスパイダープロットを適切にプロットし、３５日目でのピーク腫瘍サイズを「１」として正規化して、対照ＰｍｅｌＴ細胞またはＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を使用する処置に応答した腫瘍サイズの相対変化を示した。図４Ａに示されるように、ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞の養子移入は、マウスにおいてほぼ１００％の応答率を記録し、腫瘍は、サイズにおいて９０％を超えて縮小したか、または８０％を超えるマウスにおいて完全に除去された。

ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞の養子移入による生存の改善も測定した。図４Ｃに示されるように、ＣＹＰおよびＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞の２週毎の処置を投与されたマウスにおいて、埋込み後１１０日まで死亡は観察されなかった。対照的に、ＣＹＰのみ、またはＣＹＰおよび対照ＰｍｅｌＴ細胞で処置されたマウスは、埋込み後７５日より前に死亡し、それぞれ、埋込み後２７日または６０日の中央生存期間を示した。

総合すると、これらの結果は、ＣＹＰプレコンディショニングを用いたＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞の養子移入が、特に、ＩＬ－２サイトカインまたはワクチン接種レジメンを必要とすることなく、確立されたＢ１６Ｆ０黒色腫腫瘍を効率的に制御し、それを除去することができることを示していた。
（実施例５）
Ｂ１６Ｆ０黒色腫上でのＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞の制御は用量依存的である

Ｂ１６Ｆ０黒色腫の制御に対するＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞の用量依存的効果を特徴付けるために、Ｂ１６Ｆ０を担持するマウスに、１５万個または３０万個のＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を輸注した。

簡単に述べると、１×１０^５個のＢ１６Ｆ０細胞を、６～８週齢のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下注射した。腫瘍埋込み後、マウスを毎日観察し、死亡の兆候が見られたら犠牲にした。マウスを、触診によって腫瘍形成について週２回チェックし、腫瘍面積をノギス測定によって測定した。養子細胞移入の前に、マウスを無作為化して、実験の開始時にサイズの偏りがないことを確保した。腫瘍埋込み後７日目に開始して、マウスに、１４日間隔（２週毎）で（Ａ）１５万個または（Ｂ）３０万個のＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を輸注したが、それぞれのＴ細胞輸注の前にＣＹＰコンディショニングレジメン（処置あたり１００ｍｇ／ｋｇ）を行った。スパイダープロットを、実施例４に記載と同様に正規化し、プロットした。

２週毎の移入あたり、１５万個のＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞の用量レジメンで、処置されたマウス間で腫瘍制御における１００％の応答率が観察されたが、９０％を超える腫瘍サイズ減少を示したマウスは２０～３０％に過ぎなかった（図５Ａ）。比較すると、２週毎の移入あたり、３０万個のＣＤ１６０－ＰｍｅｌＴ細胞の用量レジメンでは、処置されたマウス間で腫瘍縮小における１００％の応答率が観察され、約４０～５０％のマウスが、９０％を超える腫瘍サイズ減少を示した（図５Ｂ）。

２つの投薬量で、ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞の養子移入による生存の改善も測定した。両方の投薬量で、ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞で処置した腫瘍担持マウスは、有意な生存改善を示し、１５万個または３０万個のＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞で処置したマウスについて、埋込み後１２０日で、それぞれ８０％または１００％の生存率を示した（図５Ｃ）。対照的に、ＣＹＰのみ、またはＣＹＰおよび対照ＰｍｅｌＴ細胞で処置したマウスは、９０日より前に死亡し、中央生存期間は、それぞれ、埋込み後６１．５日または５６日であった。

総合すると、これらの結果は、ＣＹＰプレコンディショニングを用いたＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞の養子移入が、確立されたＢ１６Ｆ０黒色腫腫瘍を効率的に制御し、除去することができ、腫瘍制御効果が用量依存的であることを示していた。
（実施例６）
ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞は、転移性Ｂ１６Ｆ１０黒色腫腫瘍の増殖を効率的に制御した

転移性腫瘍の増殖の阻害におけるＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞の能力を検査するために、ＣＤ１６０－ＰｍｅｌＴ細胞を、化学療法プレコンディショニング後に、転移性Ｂ１６Ｆ１０黒色腫腫瘍を担持するマウスに養子移入した。

簡単に述べると、１×１０^５個のＢ１６Ｆ１０細胞を、６～８週齢のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下注射した。腫瘍埋込み後、マウスを毎日観察し、死亡の兆候が見られたら犠牲にした。マウスを、触診によって腫瘍形成について週２回チェックし、腫瘍面積をノギス測定によって測定した。養子細胞移入の前に、マウスを無作為化して、実験の開始時にサイズの偏りがないことを確保した。腫瘍埋込み後７日目に開始して、マウスに、１４日間隔（２週毎）で３０万個のＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞を輸注したが、それぞれのＴ細胞輸注の前にＣＹＰコンディショニングレジメン（処置あたり１００ｍｇ／ｋｇ）を行った。

図６Ａに示されるように、ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞は、ＣＹＰプレコンディショニングと組み合わせた場合、未処置のマウス、ＣＹＰ化学療法のみで処置したマウス、または対照ＰｍｅｌＴ細胞およびＣＹＰプレコンディショニングで処置したマウスと比較して、平均腫瘍サイズの増大を有意に停止させることができた。腫瘍面積は、１群あたり少なくとも５匹のマウスの平均測定値である（＋／－ＳＥＭ、両側ｔ検定）。図６Ｂは、処置なし、ＣＹＰ処置のみ、または対照ＰｍｅｌＴ細胞およびＣＹＰによる処置と比較した、個体の腫瘍成長の制御におけるＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞（ＣＹＰプレコンディショニングを用いる）の能力を示した。

総合すると、養子移入されたＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞は、ＣＹＰプレコンディショニングと組み合わせた場合、未処置のマウス、ＣＹＰ化学療法のみで処置したマウス、または対照ＰｍｅｌＴ細胞およびＣＹＰプレコンディショニングで処置したマウスと比較した場合、皮下腫瘍の増殖を効率的に制御することが示された。

ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞による、より長期間の腫瘍制御および生存改善も検査した。腫瘍サイズに関するスパイダープロットを、実施例４と同様に正規化した。

図７Ａに示されるように、処置の期間にわたって、ＣＤ１６０－ＰｍｅｌＴ細胞の養子移入によって皮下腫瘍を制御または除去することができた。図７Ｂに示されるように、未処置のマウス、ＣＹＰ化学療法のみで処置したマウス、および対照ＰｍｅｌＴ細胞およびＣＹＰプレコンディショニングで処置したマウスは全て、転移の結果として、埋込み後８０日より前に死亡し、中央生存期間は、それぞれ、埋込み後３９、３９、および５９日であった。対照的に、ＣＤ１６０－ＰｍｅｌＴ細胞およびＣＹＰプレコンディショニングで処置したマウス群は、埋込み後１２０日（図７Ｂ）で、およびＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞の連続輸注の持続期間を通して（データは示さない）、８０％の生存率を維持した。

総合すると、これらの結果は、ＣＤ１６０改変ＰｍｅｌＴ細胞が、皮下腫瘍の増殖の制御に加えて、腫瘍転移に対する制御および阻害を確立することもできることを示していた。
（実施例７）
マウスＣＤ１６０活性化キメラの腫瘍抑制活性の増強

ＣＤ１６０の腫瘍抑制活性をさらなるドメインを用いてモジュレートすることができるかどうかを精査するために、マウスＣＤ１６０の細胞外ドメインを、様々な構成で、ＴＣＲならびにＣＤ３ζ、ＣＤ２８、および４－１ＢＢを含むその共刺激経路に由来する細胞内シグナル伝達ドメインと融合して、図８Ａ～Ｃに示されるようなＣＤ１６０活性化キメラを誘導した。確立されたＢ１６Ｆ０黒色腫マウスの制御における、これらのＣＤ１６０キメラを発現するＰｍｅｌＴ細胞の能力を測定し、ＧＰＩアンカーマウスＣＤ１６０（ｍＣＤ１６０）を発現するものと比較した。

簡単に述べると、１×１０^５個のＢ１６Ｆ１０細胞を、６～８週齢のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下注射した。腫瘍埋込み後、マウスを毎日観察し、死亡の兆候が見られたら犠牲にした。マウスを、触診によって腫瘍形成について週２回チェックし、腫瘍面積をノギス測定によって測定した。養子細胞移入の前に、マウスを無作為化して、実験の開始時にサイズの偏りがないことを確保した。腫瘍埋込み後７日目で開始して、マウスに、１４日間隔（２週毎）で、それぞれ、ｍＣＤ１６０、ＧＥＭ１２３、ＧＥＭ１２４、ＧＥＭ１２５、ＧＥＭ１２６、ＧＥＭ１２７、またはＧＥＭ１２８を異所的に発現する３０万個のＰｍｅｌＴ細胞を輸注したが、それぞれのＴ細胞輸注の前に、ＣＹＰコンディショニングレジメン（処置あたり１００ｍｇ／ｋｇ）を行った。

図８Ａに観察されるように、膜貫通ドメインから遠いＣＤ２８シグナル伝達ドメインを有するキメラであるＧＥＭ１２５を発現するＰｍｅｌＴ細胞は、ｍＣＤ１６０を発現するＰｍｅｌＴ細胞と比較して弱い腫瘍制御を示したが、膜貫通ドメインに隣接するＣＤ２８シグナル伝達ドメインを有するキメラであるＧＥＭ１２４を発現するＰｍｅｌＴ細胞は、ｍＣＤ１６０を発現するＰｍｅｌＴ細胞と比較して強い腫瘍制御を示した。これらの結果は、膜貫通に隣接して位置するＣＤ２８シグナル伝達ドメインが、抗原特異的Ｔ細胞の免疫応答の強化におけるＣＤ１６０キメラの能力をさらに増強することができることを示していた。

図８Ｂに観察されるように、膜貫通ドメインに隣接する４－１ＢＢシグナル伝達ドメインを有するキメラであるＧＥＭ１２７を発現するＰｍｅｌＴ細胞は、ｍＣＤ１６０を発現するＰｍｅｌＴ細胞と比較して弱い腫瘍制御を示したが、膜貫通ドメインに隣接するＣＤ２８シグナル伝達ドメインを有するキメラであるＧＥＭ１２６を発現するＰｍｅｌＴ細胞は、ｍＣＤ１６０を発現するＰｍｅｌＴ細胞と比較して強い腫瘍制御を示した。これらの結果は、膜貫通ドメインに隣接して位置する場合、４－１ＢＢドメインではなく、ＣＤ２８シグナル伝達ドメインが、抗原特異的Ｔ細胞の免疫応答の強化におけるＣＤ１６０キメラの能力をさらに増強することができることを示していた。

図８Ｃに観察されるように、膜貫通ドメインに隣接するＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを有するキメラであるＧＥＭ１２３を発現するＰｍｅｌＴ細胞は、ｍＣＤ１６０を発現するＰｍｅｌＴ細胞と比較して弱い腫瘍制御を示した。さらに、膜貫通ドメインから遠位末端にＣＤ３ζドメインを含む３つのシグナル伝達ドメインを有するキメラであるＧＥＭ１２８は、膜貫通ドメインに隣接するＣＤ２８シグナル伝達ドメインを有するにも拘わらず、ｍＣＤ１６０と比較して有意に低い腫瘍制御を示した。

総合すると、これらの結果は、ＣＤ２８共刺激ドメインが、膜貫通ドメインの隣に位置する場合、抗原特異的Ｔ細胞の免疫応答の強化におけるＣＤ１６０キメラの能力をさらに増強することができることを示していた（図８Ａ、ＢにおけるＧＥＭ１２４、ＧＥＭ１２６）。しかしながら、腫瘍制御を強化するＣＤ１６０の能力は、組み込まれたＣＤ３ζと適合しない可能性がある（図８Ｂ、８ＣにおけるＧＥＭ１２３、ＧＥＭ１２７、ＧＥＭ１２８）。
（実施例８）
ヒトＣＤ１６０およびそのバリアントは、マウスにおける確立されたＢ１６Ｆ０黒色腫の制御において保存された機能を有する

ヒトＣＤ１６０バリアントの腫瘍抑制活性をマウスＣＤ１６０と比較するために、確立されたＢ１６Ｆ０黒色腫マウスの制御におけるこれらのそれぞれの形態のＣＤ１６０を発現するＰｍｅｌＴ細胞の能力を測定した。

簡単に述べると、１×１０^５個のＢ１６Ｆ１０細胞を、６～８週齢のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスに皮下注射した。腫瘍埋込み後、マウスを毎日観察し、死亡の兆候が見られたら犠牲にした。マウスを、触診によって腫瘍形成について週２回チェックし、腫瘍面積をノギス測定によって測定した。養子細胞移入の前に、マウスを無作為化して、実験の開始時にサイズの偏りがないことを確保した。ＣＤ１６０実体の異所性発現を達成するために、ＰｍｅｌＴ細胞に、それぞれ、ＧＰＩアンカー型マウスＣＤ１６０、ＧＰＩアンカー型ヒトＣＤ１６０バリアント、膜貫通型ヒトＣＤ１６０バリアント、または細胞内ドメインを有する膜貫通型ヒトＣＤ１６０を有するウイルスを感染させた。腫瘍埋込み後７日目に開始して、マウスに、１４日間隔（２週毎）で、記載されたマウスまたはヒトＣＤ１６０バリアントを異所的に発現する３０万個のＰｍｅｌＴ細胞を輸注したが、それぞれのＴ細胞輸注の前に、ＣＹＰコンディショニングレジメン（処置あたり１００ｍｇ／ｋｇ）を行った。

図１０Ａに観察されるように、ヒトＣＤ１６０バリアントを発現する全てのＰｍｅｌＴ細胞が、ｍＣＤ１６０を発現するＰｍｅｌＴ細胞と比較した場合、確立されたＢ１６Ｆ０黒色腫腫瘍の制御および除去においてより強力な活性を示した。特に、ＧＰＩアンカー型ヒトＣＤ１６０を発現するＰｍｅｌＴ細胞および細胞内ドメインを有するヒトＣＤ１６０を発現するＰｍｅｌＴ細胞は、腫瘍制御において最も強力な活性を示した。

様々なＣＤ１６０バリアントを発現するＰｍｅｌＴ細胞の養子移入による生存改善も測定した。図１０Ｂに示されるように、ＧＰＩアンカー型ヒトＣＤ１６０を発現するＰｍｅｌＴ細胞によって、および細胞内ドメインを有するヒトＣＤ１６０を発現するＰｍｅｌＴ細胞によって、最も強力な生存改善が提供された。

総合すると、これらの結果は、ヒトＣＤ１６０バリアントが、マウスＣＤ１６０がそうであるように、マウスにおける確立されたＢ１６Ｆ０黒色腫腫瘍の制御および除去に対する腫瘍特異的Ｔ細胞の強化において保存された機能を示すことを示し、これは、それらがヒトにおける確立された固形腫瘍の制御においても同様の機能を有する可能性が高いことを示唆している。
（実施例９）
ＣＤ１６０改変ＬＬＣＴＩＬは、マウスにおいて転移性ルイス肺がんの発症を阻害する

転移性肺がんの発症を阻害するＣＤ１６０改変抗原特異的免疫細胞の能力を検査するために、ＣＤ１６０改変腫瘍浸潤性リンパ球（ＴＩＬ）を、ｉｎｖｉｔｒｏでルイス肺がんを殺傷するその能力について、およびルイス肺がんマウスモデルにおいてｉｎｖｉｖｏで生存を改善するその能力について検査した。

ＴＩＬを誘導するために、肺腫瘍を、ルイス肺がんを担持するマウスから単離し、注意深く小片に細かく刻んだ後、３７℃でコラゲナーゼＶを用いて消化した。消化された試料を７０～１００μｍの細胞ストレーナーに通過させることによって、単一細胞懸濁液を得た。シリンジプランジャーを使用して、必要に応じて細胞ストレーナーメッシュを通して消化された組織を穏やかに搾った。次いで、単一細胞懸濁液を、フィコエリトリン（ＰＥ）にコンジュゲートさせた抗ＴＣＲβで染色し、抗ＰＥ磁気ビーズを用いてさらに富化し、最後にＳＯＮＹＳＨ８００ＦＡＣＳソーター上で選別した。記載された実験において使用された選別されたＴＩＬの純度は、ＦＡＣＳ分析によって決定した場合、８５％を超えていた。次いで、ＴＩＬを、ｍＣＤ１６０またはＣＤ１６０キメラＧＥＭ１２４を発現するように改変した（図８Ａを参照されたい）。

ＣＤ１６０改変ＴＩＬが腫瘍細胞を殺傷する能力を最初に検査し、対照ＴＩＬと比較した。簡単に述べると、ＴＩＬを、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８ビーズで刺激し、ＩＬ－２と共にＴ細胞拡大培地中で３日間培養した。３日目に、標的腫瘍細胞、ＬＬＣを３７℃で１０分温め、３７℃で３０分、１μＭのＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識した後、９６ウェル培養プレート上に播種した。対照またはＣＤ１６０改変ＴＩＬを、規定のエフェクターの標的細胞に対する比で各ウェルに添加した後、４～６時間インキュベートした。続いて、標的腫瘍細胞を回収し、７－アミノアクチノマイシンＤ（７－ＡＡＤ、ＢＤＰｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で標識し、ＦＡＣＳによって分析して、ＴＩＬによる殺傷を決定した。ＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ色素＋／７－ＡＡＤ＋細胞の集団は、殺傷された標的細胞を表し、ＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ色素＋／７－ＡＡＤ－集団は、残存する生きた標的細胞を表した。

図１１Ａに示されるように、ｍＣＤ１６０改変ＴＩＬは、ＴＩＬよりも、同時培養物中のルイス肺癌細胞の殺傷においてより強力であった。

ｉｎｖｉｖｏで転移性肺がんの発症を阻害するＣＤ１６０改変ＴＩＬの能力も検査した。転移性肺がんモデルを生成するために、２×１０^５～２×１０^６個のルイス肺がん細胞（ＬＬＣ）を、気管内注入によって６～８週齢のメスのＣ５７ＢＬ／６マウスの肺に直接導入した。養子細胞移入の前に、マウスを無作為化して、実験の開始時にサイズの偏りがないことを確保した。腫瘍埋込み後１０日目に開始して、マウスに、１２日間隔で、３０万個の対照ＴＩＬ、またはｍＣＤ１６０もしくはＧＥＭ１２４を異所的に発現するＴＩＬを輸注したが、それぞれのＴ細胞輸注の前に、ＣＹＰコンディショニングレジメン（処置あたり１００ｍｇ／ｋｇ）を行った。一次皮下腫瘍はＣＹＰ処置レジメンによって一般に制御され、その後、マウスの死亡が肺転移の結果として起こった。腫瘍埋込み後、マウスを毎日観察し、死亡の兆候が見られたら犠牲にした。マウスを、触診またはノギス測定によって腫瘍形成について週２回チェックした。腫瘍サイズが直径１．２～１．５ｃｍに達するか、または皮膚潰瘍形成時に、マウスを犠牲にし、腫瘍を回収した（図１１Ｂ）。

特に、ＧＥＭ１２４を発現するＴＩＬで処置したマウスは、実験終了の時点で埋込み後７５日で９０％の生存率を有していたが、ｍＣＤ１６０を発現するＴＩＬを輸注したマウスは、７０日の中央生存期間を有していた。対照的に、未処置のマウス、ＣＹＰのみで処置したマウス、または対照ＴＩＬおよびＣＹＰで処置したマウスは、それぞれ、４２、４７、および４７日の中央生存期間を示した（図１１Ｃ）。

総合すると、これらの結果は、ＣＤ１６０が、ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏで肺がんＴＩＬの腫瘍制御活性を強化することができることを示していた。さらに、マウス肺がんから抽出されたＴＩＬは自然ではポリクローナルであるため、これらの結果はまた、ＣＤ１６０およびその活性化キメラが、複数の腫瘍抗原を認識するＴＣＲを有するそのような内因性ポリクローナル抗腫瘍Ｔ細胞による腫瘍制御能力を強化することができることも示していた。
（実施例１０）
ＣＤ１６０改変ヒトＣＡＲ－Ｔ細胞は、ｉｎｖｉｖｏおよびｉｎｖｉｔｒｏで増殖の改善、アポトーシスの減少、および腫瘍制御の増強を示した

ＣＤ１６０がヒトＣＡＲ－Ｔ細胞の機能を増強することができるかどうかを決定するために、ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ＣＤ１６０を過剰発現するように改変した後、培養物中で増殖するその能力について、ならびにｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏでの腫瘍に対するその機能的活性について検査した。

簡単に述べると、ヒトＴ細胞を、膜貫通ドメインと細胞質ゾルドメインとの両方を有するヒトＣＤ１６０バリアント（ｈｕＣＤ１６０ＴＣと呼ばれる）と、ＣＤ１９陽性腫瘍細胞上での腫瘍関連抗原の認識のためのＣＤ１９キメラ抗原受容体（ＣＤ１９－ＣＡＲ）とを同時発現するように設計した（図１２Ａ）。レンチウイルスベクターを使用して２Ａペプチドによって連結されたＣＤ１９－ＣＡＲとｈｕＣＤ１６０ＴＣとを同時発現させる例示的方法も示した（図１２Ｂ）。ＣＤ１６０改変ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞を、ヒトＴ細胞にレンチウイルスを形質導入することによって生成し（図１２Ａ、１２Ｂ）、次いで、培養物および腫瘍モデルにおける機能的改善について試験した。

次いで、培養物中でのヒトＣＡＲ－Ｔ細胞の機能的改善に関するＣＤ１６０の能力を検査するために、ＣＤ１６０改変ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞を、拡大培養にかけ、その増殖速度を毎日記録し、非ＣＤ１６０改変ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較した。簡単に述べると、Ｔ細胞を、ヒト末梢血から単離し、記載のレンチウイルスベクターを使用してＣＤ１９－ＣＡＲとｈｕＣＤ１６０ＴＣとを同時発現させることによって改変した。培養の第１週の間に、それぞれのＴ細胞を、図１２Ｂ中のレンチウイルスの形質導入によってｈｕＣＤ１６０ＴＣとＣＤ１９－ＣＡＲとを発現するように改変したか、またはＣＤ１９－ＣＡＲのみを発現するように改変した。次いで、ＣＤ１９－ＣＡＲのみを発現するＴ細胞、またはＣＤ１６０改変ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞を、適切な増殖因子と共にＴ細胞拡大培地中で培養した。続いて、細胞の濃度および生存能力を決定するために、細胞を、１μｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウムで染色し、蛍光計測ビーズ（Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ）と混合し、ＳＰ６８００ＳｏｎｙＳｐｅｃｔｒａｌフローサイトメーター上で分析した。データを、機器上で直接、またはＦＣＳＥｘｐｒｅｓｓを用いて分析して、絶対細胞計数ならびに生細胞および死細胞のパーセントを決定した。２週間の長さの培養の間のＴ細胞拡大の程度を、細胞計数と分裂因子とを組み合わせることによって算出し、ＰＲＩＳＭソフトウェアを使用してプロットした。

図１３Ａに示されるように、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現するヒトＣＤ１９－ＣＡＲＴ細胞は、過剰発現しないものよりも効率的に一貫して拡大した。この培養システムでは、第１週の間にＴ細胞は活性化および感染プロセスを経由し、全体として、拡大が限定されていた。このプロセスと一致して、増殖の差異は、培養の第１週の間にはあまり顕著ではなかったが、培養の第２週の間にはより明らかとなった。特に、培養開始後１４～１６日で、ＣＤ１６０ＴＣを過剰発現するヒトＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞は、トリパンブルー染色またはヨウ化プロピジウム（ＰＩ）もしくは７ＡＡＤを使用するＦＡＣＳ分析によって決定した場合、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現しない対照ＣＡＲ－Ｔ細胞と比較して死細胞のパーセンテージが有意に低かった（図１３Ｂ）。これらの結果は、ＣＤ１６０ＴＣを発現するＣＤ１９－ＣＡＲＴ細胞が、より高い増殖能力ならびに後期段階の細胞培養で細胞死の低い傾向の両方を示すことを証明し、かくして、ＣＡＲ－Ｔ細胞中でのＣＤ１６０過剰発現を使用して、ＣＡＲ－Ｔ細胞産生を増強することができることを示している。重要なことに、ＣＤ１６０ＴＣを発現するＣＤ１９－ＣＡＲＴ細胞と、対照ＣＡＲＴ細胞とは両方とも、培養の２週間後に増殖を実質的に停止し（データは示さない）、これは、ＣＡＲ－Ｔ細胞中でのＣＤ１６０の過剰発現が、未制御のＴ細胞拡大をもたらさなかったことを示している。

ｉｎｖｉｔｒｏでのＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍に対する機能的活性に関するＣＤ１６０ＴＣ過剰発現の改善を検査するために、ＣＤ１９陽性腫瘍培養物上でのＣＤ１６０改変ＣＤ１９－ＣＡＲＴ細胞の細胞溶解機能を評価した。簡単に述べると、標的腫瘍細胞Ｎａｌｍ６、またはＲａｍｏｓ、またはＣＤ１９＋／Ｋ５６２細胞を、３７℃で１０分加温し、３７℃で３０分、１μＭのＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識した後、９６ウェル培養プレート上に播種した。対照またはＣＤ１６０改変ＣＡＲ－Ｔ細胞を、示されたエフェクターの標的細胞に対する比で各ウェルに添加した後、２４～４８時間インキュベートした。続いて、標的細胞を回収し、７－アミノアクチノマイシンＤ（７－ＡＡＤ、ＢＤＰＨＡＲＭＩＮＧＥＮ（商標））で標識し、ＦＡＣＳによって分析して、エフェクターＴ細胞による殺傷を決定した。ＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ色素＋／７－ＡＡＤ＋細胞の集団は、殺傷された標的細胞を表し、ＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ色素＋／７－ＡＡＤ－集団は、残存する生きた標的細胞を表した。図１３Ｃに示されるように、ｈｕＣＤ１６０ＴＣとＣＤ１９－ＣＡＲとを同時発現するヒトＴ細胞は、対照ＣＤ１９－ＣＡＲＴ細胞と比較して、培養物中のＲａｍｏｓ細胞（ＣＤ１９＋）の殺傷の増強を示した。より重要なことに、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを有するＣＤ１９－ＣＡＲＴ細胞はまた、細胞内染色およびＦＡＣＳ分析によって示されるように、高レベルの炎症性サイトカインＩＦＮ－γを発現した（図１３Ｄ）。これらの結果は、ＣＤ１６０過剰発現が、培養物中でヒトＣＡＲ－Ｔ細胞の炎症機能および細胞溶解活性をブーストすることができることを示している。

ｉｎｖｉｖｏでのＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍に対する機能的活性に関するＣＤ１６０ＴＣ過剰発現による改善を検査するために、Ｎａｌｍ６またはＲａｍｏｓ腫瘍（ＣＤ１９陽性腫瘍）を担持する３組の免疫不全ＮＣＧマウス上でＣＤ１６０改変ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞によって発揮される腫瘍制御を評価した。ＣＤ１６０改変を有する、または有しない、それぞれのＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞を、静脈内送達されたＮａｌｍ６／Ｌｕｃ腫瘍を担持するＮＣＧマウスに養子移入した。具体的には、腫瘍埋込み後、１４、２１、および２８日で、マウス１匹あたり５０万個のＣＤ１６０改変ＣＤ１９－ＣＡＲＴ細胞または対照ＣＤ１９－ＣＡＲＴ細胞を移入し、腫瘍成長に対する効果を、Ｌｉｃｏｒイメージング分析装置を使用してルシフェラーゼ活性を測定することによって観察した（図１３Ｅ）。対照マウスは未処置（なし）であった。その結果、ＣＤ１６０改変ＣＤ１９－ＣＡＲＴ細胞は、対照ＣＤ１９－ＣＡＲＴ細胞よりも腫瘍制御において有意に有効であることが示された。さらに、投与されたＣＡＲ－Ｔ細胞投薬量で、ＣＤ１６０改変ＣＤ１９－ＣＡＲＴ細胞処置を受けるＮＣＧ／Ｒａｍｏｓモデルマウスは、ＣＡＲ－Ｔ細胞を受けない対照マウスと比較して有意な生存利益を示したが、対照ＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞は有意な生存利益を示さなかった（図１３Ｆ）。総合すると、これらの結果は、ＣＤ１６０発現が、ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏで腫瘍制御におけるＣＤ１９－ＣＡＲＴ細胞の活性を有意に増強することを示していた。しかしながら、ＮＣＧマウスに対して実施された上記分析は、上記結果が示すものよりも強力であり得る、免疫能力のあるヒト患者における腫瘍制御におけるＣＡＲ－Ｔ細胞機能をブーストする際のＣＤ１６０の機能を過小評価し得ることを指摘することが重要である。免疫不全であるＮＣＧマウスは、免疫能力のあるヒト患者に存在する恒常性および腫瘍内在性障壁を再現するために使用することはできない。ＣＤ１６０過剰発現は、抗原特異的Ｔ細胞が免疫能力のあるマウスにおける特異的な抑制障壁に打ち勝つのを助けることができることを考慮すると、ＣＤ１６０改変は、血液がんと固形腫瘍との両方を標的化する免疫能力のあるヒト患者におけるＣＡＲ－Ｔ細胞による腫瘍制御に対してより強力な効果を有する可能性が高い。
（実施例１１）
ＣＤ１６０改変ヒトＴＣＲ－Ｔ細胞は、ｉｎｖｉｖｏおよびｉｎｖｉｔｒｏで増殖の改善および腫瘍制御の増強を示した

ＣＤ１６０がヒトＴＣＲ－Ｔ細胞の機能を増強することができるかどうかを決定するために、１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞を、ＣＤ１６０を過剰発現するように改変した後、培養物中で増殖するその能力について、ならびにｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏでの腫瘍に対するその機能的活性について検査した。

簡単に述べると、ヒトＴ細胞を、膜貫通ドメインと細胞質ゾルドメインとの両方を有するヒトＣＤ１６０バリアント（ｈｕＣＤ１６０ＴＣと呼ばれる）と、ＮＹ－ＥＳＯ－１腫瘍関連抗原を認識する臨床的に検証されたＴＣＲである１Ｇ４－Ｔ細胞受容体（１Ｇ４－ＴＣＲ）とを同時発現するように設計した（図１４Ａ）。全て、レンチウイルスベクターを使用して２Ａペプチドによって連結された、３つのポリペプチド鎖：ＴＣＲα鎖、ＴＣＲβ鎖、およびｈｕＣＤ１６０ＴＣを同時発現させる例示的方法も示した（図１４Ｂ）。ＣＤ１６０改変１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞を、ヒトＴ細胞にレンチウイルスを形質導入することによって生成し（図１４Ａ、１４Ｂ）、続いて、培養物および腫瘍モデルにおける機能的改善について試験した。

１Ｇ４－ＴＣＲレベルを、ｈｕＣＤ１６０ＴＣと１Ｇ４－ＴＣＲとを同時発現するＴ細胞と、１Ｇ４－ＴＣＲのみを発現するＴ細胞との両方において測定した。図１５Ａに観察されるように、ヒトＴ細胞中での１Ｇ４ＴＣＲ－Ｔ細胞とＣＤ１６０ＴＣとの同時発現は、ＮＹ－ＥＳＯ－１四量体のＦＡＣＳ分析によって示されるように、１Ｇ４ＴＣＲ発現のレベルのわずかな低下を引き起こした。

次いで、ＴＣＲ－Ｔ培養物中での機能的改善に関するＣＤ１６０の能力を検査するために、ＣＤ１６０改変１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞を、拡大培養にかけ、その増殖速度を毎日記録し、非ＣＤ１６０改変１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞と比較した。簡単に述べると、ヒト末梢血から単離されたＴ細胞を、図１４Ｂ中のレンチウイルスの形質導入によってｈｕＣＤ１６０ＴＣと１Ｇ４－ＴＣＲとの両方を発現するように改変したか、または１Ｇ４－ＴＣＲのみを発現するように改変した。次いで、１Ｇ４－ＴＣＲのみを発現するＴ細胞、またはＣＤ１６０改変１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞を、適切な増殖因子と共にＴ細胞拡大培地中で培養した。続いて、細胞の濃度および生存能力を決定するために、細胞を、１μｇ／ｍｌのヨウ化プロピジウムで染色し、蛍光計測ビーズ（Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ）と混合し、ＳＰ６８００ＳｏｎｙＳｐｅｃｔｒａｌフローサイトメーター上で分析した。データを、機器上で直接、またはＦＣＳＥｘｐｒｅｓｓを用いて分析して、絶対細胞計数ならびに生細胞および死細胞のパーセントを決定した。１週間の長さの培養の間のＴ細胞拡大の程度を、細胞計数と分裂因子とを組み合わせることによって算出し、ＰＲＩＳＭソフトウェアを使用してプロットした。

図１５Ｂに示されるように、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現するヒト１Ｇ４－ＴＣＲＴ細胞は、過剰発現しないものよりも効率的に一貫して拡大した。この培養システムでは、第１週の間にＴ細胞は活性化および感染プロセスを経由し、全体として、拡大が限定されていた。このプロセスと一致して、増殖の差異は、培養の第１週の間にはあまり顕著ではなかったが、培養の第２週の間にはより明らかとなった。特に、培養開始後、１４～１６日目で、ＣＤ１６０ＴＣを過剰発現するヒト１Ｇ４ＴＣＲ－Ｔ細胞は、対照ＴＣＲ－Ｔ細胞と比較して死細胞のパーセンテージが有意に低かったが（データは示さない）、これは、ＣＤ１６０ＴＣを発現する１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞が、より高い増殖能力ならびに後期段階の細胞培養で細胞死の低い傾向の両方を示すことを示しており、ＴＣＲ－Ｔ細胞中でのＣＤ１６０過剰発現を使用して、ＴＣＲ－Ｔ細胞産生を増強することができることを示している。ＣＤ１６０ＴＣを発現する１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞と、対照ＴＣＲ－Ｔ細胞とは両方とも、培養の２週間後に増殖を実質的に停止し（データは示さない）、これは、ＴＣＲ－Ｔ細胞中でのＣＤ１６０の過剰発現が、未制御のＴ細胞拡大をもたらさなかったことを示すことに留意することも重要である。さらに、１Ｇ４ＴＣＲ－Ｔ細胞中でのＣＤ１６０の過剰発現は、ＦＡＣＳ分析（ＣＤ４５^＋／ＣＤ６２^＋）によって示されるように、幹細胞／記憶細胞表現型を有するＴ細胞のパーセンテージに有意に影響しなかった（図１５Ｃ）。

ｉｎｖｉｔｒｏでの１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞による腫瘍に対する機能的活性に関するＣＤ１６０過剰発現による改善を検査するために、ＮＹ－ＥＳＯ－１陽性腫瘍培養物上でのｈｕＣＤ１６０ＴＣ改変１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞の細胞溶解機能を、ＩＦＮ－γの細胞内染色およびＦＡＣＳに基づくＣＴＬ分析によって示されるように評価した。簡単に述べると、標的ＮＹ－ＥＳＯ－１陽性Ａ３７５腫瘍細胞を、３７℃で１０分加温し、３７℃で３０分、１μＭのＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識した後、９６ウェル培養プレート上に播種した。対照またはＣＤ１６０改変１Ｇ４ＴＣＲ－Ｔ細胞を、示されたエフェクターの標的細胞に対する比で各ウェルに添加した後、２４～４８時間インキュベートした。続いて、標的細胞を回収し、７－アミノアクチノマイシンＤ（７－ＡＡＤ、ＢＤＰＨＡＲＭＩＮＧＥＮ（商標））で標識し、ＦＡＣＳによって分析して、エフェクターＴ細胞による殺傷を決定した。ＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ色素＋／７－ＡＡＤ＋細胞の集団は、殺傷された標的細胞を表し、ＣＥＬＬＴＲＡＣＥ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ色素＋／７－ＡＡＤ－集団は、残存する生きた標的細胞を表した。図１５Ｄに示されるように、ｈｕＣＤ１６０ＴＣと１Ｇ４－ＴＣＲとの両方を同時発現するヒトＴ細胞は、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現しない対照１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞と比較して、培養物中のＮＹ－ＥＳＯ－１陽性Ａ３７５細胞を殺傷するのにより有効であることがわかった。より重要なことに、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現する１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞はまた、細胞内染色およびＦＡＣＳ分析によって示されるように高レベルの炎症性サイトカインＩＦＮ－γを示した（図１５Ｅ）。これらの結果は、ＣＤ１６０過剰発現が、培養物中でヒトＣＡＲ－Ｔ細胞の炎症機能および細胞溶解活性をブーストすることができることを示している。

ｉｎｖｉｖｏでの１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞による腫瘍に対する機能的活性に関するＣＤ１６０ＴＣ過剰発現による改善を検査するために、Ａ３７５黒色腫腫瘍（ＮＹ－ＥＳＯ－１陽性腫瘍）を担持するＮＣＧマウス上のＣＤ１６０改変１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞によって発揮される腫瘍制御も評価した。ＣＤ１６０改変を有する、または有しないそれぞれのＣＤ１９－ＣＡＲ－Ｔ細胞を、皮下ＮＹ－ＥＳＯ－１陽性Ａ３７５黒色腫腫瘍を担持するＮＣＧマウスに養子移入した。具体的には、皮下腫瘍埋込み後、１４、２１、および２８日でマウス１匹あたり１００万個のＣＤ１６０改変ＣＤ１９－ＣＡＲＴ細胞または対照ＣＤ１９－ＣＡＲＴ細胞を移入し、腫瘍成長に対する効果を、ノギスを用いた腫瘍サイズ測定によって観察した（図１５Ｆ）。対照マウスは未処置（なし）であった。図１５Ｆに示されるように、ＣＤ１６０改変１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞は、対照１Ｇ４－ＴＣＲ－Ｔ細胞よりも腫瘍制御において有意に有効であった。総合すると、これらの結果は、ＣＤ１６０過剰発現が、ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏで腫瘍制御における１Ｇ４ＴＣＲ－Ｔ細胞の活性を有意に増強することを示していた。

しかしながら、上記分析は、上記結果が示すものよりも強力であり得る、免疫能力のあるヒト患者における腫瘍制御におけるＣＡＲ－Ｔ細胞機能をブーストする際のＣＤ１６０の機能を過小評価し得ることを指摘することが重要である。ＮＣＧマウスは、免疫不全であり、免疫能力のあるヒト患者に存在する恒常性および腫瘍内在性障壁を再現するために使用することはできない。ＣＤ１６０過剰発現は、抗原特異的Ｔ細胞が免疫能力のあるマウスにおけるある特定の抑制障壁に打ち勝つのを助けることができることを考慮すると、ＣＤ１６０改変は、血液がんと固形腫瘍との両方を標的化する免疫能力のあるヒト患者におけるヒトＴＣＲ－Ｔ細胞による腫瘍制御に対してより強力な効果を有する可能性が高い。
（実施例１２）
ＣＤ１６０改変ヒトＴＩＬは、ｉｎｖｉｖｏおよびｉｎｖｉｔｒｏで腫瘍制御の増強を示した

ＣＤ１６０がヒトＴＩＬの機能を増強することができるかどうかを決定するために、自己ＴＩＬを、ＣＤ１６０を過剰発現するように改変した後、ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏで腫瘍に対するその機能的活性について検査した。

患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルを生成して、腫瘍制御におけるヒトＴＩＬに対するＣＤ１６０の効果を検査した。肺がん、食道がん、結腸がん、胃がん、膵がんなどの様々ながんを有するがん患者から切除された腫瘍組織を、ＮＳＧ免疫不全マウスに埋め込み、継代して、ヒト腫瘍を有するＰＤＸモデルを生成した。自己ＴＩＬを、肺がん、食道がん、結腸がん、膵がん、胃がんおよび他のがんに関して対応する腫瘍から単離し、拡大し、ＣＤ１６０改変およびＰＤＸモデルにおけるＴＩＬによる腫瘍制御における機能試験のために凍結保存した。

ＣＤ１６０改変ＴＩＬを生成して、ＣＤ１６０がヒトＴＩＬの機能を増強することができるかどうかを決定した（図１６）。その目的のために、ヒト患者に由来するＴＩＬを、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現するように設計した（図１７Ａ）。レンチウイルスベクターを使用して２Ａペプチドにより連結されたｈｕＣＤ１６０ＴＣおよびＧＦＰマーカーを過剰発現させる例示的な方法を示した（図１７Ｂ）。次いで、ＣＤ１６０改変ＴＩＬを、ヒトＴ細胞にレンチウイルスを形質導入することによって生成し（図１７Ａ、１７Ｂ）、続いて、培養物および自己腫瘍を有するＰＤＸ腫瘍モデルにおいて機能的改善について試験した。

ｉｎｖｉｔｒｏでのヒトＴＩＬによる腫瘍に対する機能的活性に関するＣＤ１６０ＴＣ過剰発現による改善を検査するために、ＰＤＸモデルに由来する自己腫瘍細胞上でのＣＤ１６０改変ヒトＴＩＬの細胞溶解機能を、ＦＡＣＳに基づくＣＴＬアッセイを使用することによって評価した。簡単に述べると、自己食道腫瘍細胞を、３７℃で１０分加温し、３７℃で３０分、１μＭのＣＳＦＥ色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識した後、９６ウェル培養プレート上に播種した。対照またはＣＤ１６０改変ＴＩＬを、規定のエフェクターの標的細胞に対する比で各ウェルに添加した後、２４時間インキュベートした。続いて、標的細胞を回収し、７－アミノアクチノマイシンＤ（７－ＡＡＤ、ＢＤＰＨＡＲＭＩＮＧＥＮ（商標））で標識し、ＦＡＣＳによって分析して、エフェクターＴ細胞による殺傷を決定した。ＣＳＦＥ色素＋／７－ＡＡＤ＋細胞の集団は、殺傷された標的細胞を表し、ＣＳＦＥ色素＋／７－ＡＡＤ－集団は、残存する生きた標的細胞を表した。図１８Ａに示されるように、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現するヒトＴＩＬは、ｈｕＣＤ１６０ＴＣを過剰発現しない対照ヒトＴＩＬと比較して、培養物中の自己食道がん細胞の殺傷においてより有効であることがわかった。

ｉｎｖｉｖｏでのヒトＴＩＬによる腫瘍に対する機能的活性に関するＣＤ１６０ＴＣ過剰発現による増強を検査するために、皮下自己腫瘍を担持するＮＣＧマウス上でＣＤ１６０改変ヒトＴＩＬによって発揮される腫瘍制御も評価した。ＣＤ１６０改変を有する、または有しないそれぞれのヒトＴＩＬを、皮下自己食道腫瘍を担持するＮＣＧマウスに養子移入した。具体的には、皮下腫瘍埋込み後、７、１４、および２１日でマウス１匹あたり１００万個のＣＤ１６０改変ＴＩＬまたは対照ＴＩＬを移入し、腫瘍成長に対する効果を、ノギスを用いた腫瘍サイズ測定によって観察した（図１８Ｂ）。対照マウスにはＰＢＳを投与した（なし）。図１８Ｂに示されるように、ＣＤ１６０改変ＴＩＬは、対照ＴＩＬよりも腫瘍制御において有意に有効であった。総合すると、これらの結果は、ＣＤ１６０過剰発現が、ｉｎｖｉｔｒｏとｉｎｖｉｖｏとの両方において腫瘍制御を発揮する際のＴＩＬの活性を有意に増強することを示していた。

ｉｎｖｉｖｏでのヒトＴＩＬによる腫瘍に対する機能的活性に関するＣＤ１６０ＴＣ過剰発現による増強を検査するために、皮下自己腫瘍を担持するＮＣＧマウス上でＣＤ１６０改変ヒトＴＩＬによって発揮される腫瘍制御も評価した。ＣＤ１６０改変を有する、または有しないそれぞれのヒトＴＩＬを、皮下自己食道腫瘍を担持するＮＣＧマウスに養子移入した。具体的には、皮下腫瘍埋込み後、７、１４、および２１日でマウス１匹あたり１００万個のＣＤ１６０改変ＴＩＬまたは対照ＴＩＬを移入し、腫瘍成長に対する効果を、ノギスを用いた腫瘍サイズ測定によって観察した（図１８Ｂ）。対照マウスにはＰＢＳを投与した（なし）。図１８Ｂに示されるように、ＣＤ１６０改変ＴＩＬは、対照ＴＩＬよりも腫瘍制御において有意に有効であった。総合すると、これらの結果は、ＣＤ１６０過剰発現が、ｉｎｖｉｔｒｏとｉｎｖｉｖｏとの両方において腫瘍制御を発揮する際のＴＩＬの活性を有意に増強することを示していた。
本発明は、例えば以下の項目を提供する。
（項目１）
表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞であって、前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前記外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して前記改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、前記免疫細胞がＴ細胞である、改変抗原特異的免疫細胞。
（項目２）
細胞傷害性αβＴ細胞、γδＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、抗原提示細胞（ＡＰＣ）により活性化される抗腫瘍Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）からなる群から選択される、項目１に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
（項目３）
細胞傷害性Ｔ細胞である、項目１に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
（項目４）
腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である、項目２に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
（項目５）
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞およびマクロファージからなる群から選択される、項目１に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
（項目６）
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９０％の同一性を有するそのバリアントを含む、項目１から５のいずれか一項に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
（項目７）
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型である、項目１から５のいずれか一項に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
（項目８）
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、（ａ）ＧＰＩリンカーにより膜に結合しているか、または（ｂ）膜貫通ドメインを含む、項目７に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
（項目９）
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、細胞内ドメインをさらに含む、項目８に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
（項目１０）
前記細胞内ドメインが、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、項目９に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
（項目１１）
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、免疫細胞結合部分を介して前記改変抗原特異的免疫細胞に結合している、項目７に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
（項目１２）
前記免疫細胞結合部分が、前記免疫細胞の表面分子に結合する、項目１１に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
（項目１３）
機能的外因性受容体をさらに含む、項目１から１２のいずれか一項に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
（項目１４）
前記機能的外因性受容体が、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、項目１３に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
（項目１５）
表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法であって、
前駆体抗原特異的免疫細胞と、前記外因性ＣＤ１６０タンパク質または前記外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする第１の核酸とを接触させることによって、前記改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含み、
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前記前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して前記改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、前記免疫細胞がＴ細胞である、方法。
（項目１６）
前記改変抗原特異的免疫細胞が、細胞傷害性αβＴ細胞、γδＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）からなる群から選択される、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記改変抗原特異的免疫細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞である、項目１５に記載の方法。
（項目１８）
前記改変抗原特異的免疫細胞が、腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である、項目１６に記載の方法。
（項目１９）
前記免疫細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞およびマクロファージからなる群から選択される、項目１６に記載の方法。
（項目２０）
前記前駆体抗原特異的免疫細胞と、前記外因性ＣＤ１６０タンパク質とを接触させることを含む、項目１５から１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２１）
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前記免疫細胞の表面分子に結合する免疫細胞結合部分を含む、項目２０に記載の方法。
（項目２２）
前記前駆体抗原特異的免疫細胞中に、前記外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸を導入することを含む、項目１５から１９のいずれか一項に記載の方法。
（項目２３）
前記ＣＤ１６０タンパク質が、配列番号１～４のいずれかのアミノ酸配列、または配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９０％の同一性を有するそのバリアントを含む、項目１５から２２のいずれか一項に記載の方法。
（項目２４）
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型である、項目１５から２３のいずれか一項に記載の方法。
（項目２５）
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、（ａ）ＧＰＩリンカーを介して膜に結合している；または（ｂ）膜貫通ドメインを含む、項目２４に記載の方法。
（項目２６）
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、免疫細胞結合部分を介して前記改変抗原特異的免疫細胞に結合している、項目２４に記載の方法。
（項目２７）
前記免疫細胞結合部分が、前記免疫細胞の表面分子に結合する、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記前駆体抗原特異的免疫細胞が、機能的外因性受容体をコードする第２の核酸を含む、項目１５から２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目２９）
前記前駆体抗原特異的免疫細胞と、機能的外因性受容体をコードする第２の核酸とを接触させることをさらに含む、項目１５から２７のいずれか一項に記載の方法。
（項目３０）
前記機能的外因性受容体が、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、項目２８または２９に記載の方法。
（項目３１）
前記第１の核酸と、前記第２の核酸とが、同じプロモーターに作動可能に連結されている、項目２９または３０に記載の方法。
（項目３２）
前記第１の核酸と、前記第２の核酸とが、同じベクター上にある、項目２９から３１のいずれか一項に記載の方法。
（項目３３）
前記第１および／または前記第２の核酸を含む免疫細胞を単離または富化することをさらに含む、項目１５から３２のいずれか一項に記載の方法。
（項目３４）
ＣＤ１６０を発現する前記改変抗原特異的免疫細胞を、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に製剤化することをさらに含む、項目１５から３３のいずれか一項に記載の方法。
（項目３５）
項目１５から３４のいずれか一項に記載の方法によって得られる改変抗原特異的免疫細胞。
（項目３６）
項目１から１４および３５のいずれか一項に記載の改変抗原特異的免疫細胞と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
（項目３７）
個体における疾患を処置する方法であって、前記個体に、項目１から１４および３５のいずれか一項に記載の改変抗原特異的免疫細胞または項目３６に記載の医薬組成物の有効量を投与することを含む、方法。
（項目３８）
前記改変抗原特異的免疫細胞が、前記個体に由来する、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
個体における疾患を処置する方法であって、前記個体に、外因性ＣＤ１６０タンパク質または前記外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸の有効量を投与することを含み、前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前記個体中の免疫細胞上の表面分子を認識する結合部分を含む、方法。
（項目４０）
前記疾患が、がんである、項目３７から３９のいずれか一項に記載の方法。
（項目４１）
前記がんが、黒色腫、肺がん、食道がん、膵がん、乳がん、肝臓がん、脳がん、卵巣がんからなる群から選択される、項目４０に記載の方法。
（項目４２）
前記個体がヒトである、項目３８から４１のいずれか一項に記載の方法。
（項目４３）
抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を阻害する方法であって、前記抗原特異的免疫細胞と、前記抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を阻害する薬剤の有効量とを接触させることを含む、方法。
（項目４４）
抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する方法であって、前記抗原特異的免疫細胞と、前記抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の有効量とを接触させることを含む、方法。
（項目４５）
前記方法が、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を増強し、ここで、前記薬剤が、前記抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の前記内因性免疫刺激活性を増強する、項目４４に記載の方法。
（項目４６）
個体における免疫疾患を処置する方法であって、前記個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性をモジュレートする薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法。
（項目４７）
前記免疫疾患が、自己免疫疾患または炎症性疾患であり、前記薬剤が、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の前記内因性免疫刺激活性を阻害する、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
個体におけるがんを処置する方法であって、前記個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法。
（項目４９）
個体における感染を処置する方法であって、前記個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法。

Claims

表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞であって、前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前記外因性ＣＤ１６０タンパク質を含まない前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して前記改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、前記免疫細胞がＴ細胞である、改変抗原特異的免疫細胞。
細胞傷害性αβＴ細胞、γδＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、抗原提示細胞（ＡＰＣ）により活性化される抗腫瘍Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）からなる群から選択される、請求項１に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
細胞傷害性Ｔ細胞である、請求項１に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である、請求項２に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞およびマクロファージからなる群から選択される、請求項１に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、配列番号１～４のいずれか１つのアミノ酸配列、または配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９０％の同一性を有するそのバリアントを含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型である、請求項１から５のいずれか一項に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、（ａ）ＧＰＩリンカーにより膜に結合しているか、または（ｂ）膜貫通ドメインを含む、請求項７に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、細胞内ドメインをさらに含む、請求項８に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
前記細胞内ドメインが、ＴＣＲ複合体のシグナル伝達サブユニットに由来する細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項９に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、免疫細胞結合部分を介して前記改変抗原特異的免疫細胞に結合している、請求項７に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
前記免疫細胞結合部分が、前記免疫細胞の表面分子に結合する、請求項１１に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
機能的外因性受容体をさらに含む、請求項１から１２のいずれか一項に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
前記機能的外因性受容体が、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項１３に記載の改変抗原特異的免疫細胞。
表面上に外因性ＣＤ１６０タンパク質を含む改変抗原特異的免疫細胞を生産する方法であって、
前駆体抗原特異的免疫細胞と、前記外因性ＣＤ１６０タンパク質または前記外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする第１の核酸とを接触させることによって、前記改変抗原特異的免疫細胞を生産することを含み、
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前記前駆体抗原特異的免疫細胞と比較して前記改変抗原特異的免疫細胞のアップモジュレーションをもたらし、前記免疫細胞がＴ細胞である、方法。
前記改変抗原特異的免疫細胞が、細胞傷害性αβＴ細胞、γδＴ細胞、ヘルパーＴ細胞、腫瘍浸潤性Ｔ細胞、ＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞、およびナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
前記改変抗原特異的免疫細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞である、請求項１５に記載の方法。
前記改変抗原特異的免疫細胞が、腫瘍浸潤性Ｔ細胞またはＡＰＣにより活性化される抗腫瘍Ｔ細胞である、請求項１６に記載の方法。
前記免疫細胞が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫ－Ｔ細胞）、ｉＮＫ－Ｔ細胞、ＮＫ－Ｔ様細胞、γδＴ細胞およびマクロファージからなる群から選択される、請求項１６に記載の方法。
前記前駆体抗原特異的免疫細胞と、前記外因性ＣＤ１６０タンパク質とを接触させることを含む、請求項１５から１９のいずれか一項に記載の方法。
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前記免疫細胞の表面分子に結合する免疫細胞結合部分を含む、請求項２０に記載の方法。
前記前駆体抗原特異的免疫細胞中に、前記外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸を導入することを含む、請求項１５から１９のいずれか一項に記載の方法。
前記ＣＤ１６０タンパク質が、配列番号１～４のいずれかのアミノ酸配列、または配列番号１～４のいずれか１つに対して少なくとも約９０％の同一性を有するそのバリアントを含む、請求項１５から２２のいずれか一項に記載の方法。
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が膜結合型である、請求項１５から２３のいずれか一項に記載の方法。
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、（ａ）ＧＰＩリンカーを介して膜に結合している；または（ｂ）膜貫通ドメインを含む、請求項２４に記載の方法。
前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、免疫細胞結合部分を介して前記改変抗原特異的免疫細胞に結合している、請求項２４に記載の方法。
前記免疫細胞結合部分が、前記免疫細胞の表面分子に結合する、請求項２６に記載の方法。
前記前駆体抗原特異的免疫細胞が、機能的外因性受容体をコードする第２の核酸を含む、請求項１５から２７のいずれか一項に記載の方法。
前記前駆体抗原特異的免疫細胞と、機能的外因性受容体をコードする第２の核酸とを接触させることをさらに含む、請求項１５から２７のいずれか一項に記載の方法。
前記機能的外因性受容体が、操作されたＴ細胞受容体（ＴＣＲ）またはキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）である、請求項２８または２９に記載の方法。
前記第１の核酸と、前記第２の核酸とが、同じプロモーターに作動可能に連結されている、請求項２９または３０に記載の方法。
前記第１の核酸と、前記第２の核酸とが、同じベクター上にある、請求項２９から３１のいずれか一項に記載の方法。
前記第１および／または前記第２の核酸を含む免疫細胞を単離または富化することをさらに含む、請求項１５から３２のいずれか一項に記載の方法。
ＣＤ１６０を発現する前記改変抗原特異的免疫細胞を、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に製剤化することをさらに含む、請求項１５から３３のいずれか一項に記載の方法。
請求項１５から３４のいずれか一項に記載の方法によって得られる改変抗原特異的免疫細胞。
請求項１から１４および３５のいずれか一項に記載の改変抗原特異的免疫細胞と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
個体における疾患を処置する方法であって、前記個体に、請求項１から１４および３５のいずれか一項に記載の改変抗原特異的免疫細胞または請求項３６に記載の医薬組成物の有効量を投与することを含む、方法。
前記改変抗原特異的免疫細胞が、前記個体に由来する、請求項３７に記載の方法。
個体における疾患を処置する方法であって、前記個体に、外因性ＣＤ１６０タンパク質または前記外因性ＣＤ１６０タンパク質をコードする核酸の有効量を投与することを含み、前記外因性ＣＤ１６０タンパク質が、前記個体中の免疫細胞上の表面分子を認識する結合部分を含む、方法。
前記疾患が、がんである、請求項３７から３９のいずれか一項に記載の方法。
前記がんが、黒色腫、肺がん、食道がん、膵がん、乳がん、肝臓がん、脳がん、卵巣がんからなる群から選択される、請求項４０に記載の方法。
前記個体がヒトである、請求項３８から４１のいずれか一項に記載の方法。
抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を阻害する方法であって、前記抗原特異的免疫細胞と、前記抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を阻害する薬剤の有効量とを接触させることを含む、方法。
抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する方法であって、前記抗原特異的免疫細胞と、前記抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の有効量とを接触させることを含む、方法。
前記方法が、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性を増強し、ここで、前記薬剤が、前記抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の前記内因性免疫刺激活性を増強する、請求項４４に記載の方法。
個体における免疫疾患を処置する方法であって、前記個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の内因性免疫刺激活性をモジュレートする薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法。
前記免疫疾患が、自己免疫疾患または炎症性疾患であり、前記薬剤が、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の前記内因性免疫刺激活性を阻害する、請求項４６に記載の方法。
個体におけるがんを処置する方法であって、前記個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法。
個体における感染を処置する方法であって、前記個体に、抗原特異的免疫細胞中のＣＤ１６０の免疫刺激活性を活性化する薬剤の治療有効量を投与することを含む、方法。