JP2022520663A - in situハイブリダイゼーションによって、核酸をマルチプレックス検出する方法 - Google Patents
in situハイブリダイゼーションによって、核酸をマルチプレックス検出する方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022520663A JP2022520663A JP2021548194A JP2021548194A JP2022520663A JP 2022520663 A JP2022520663 A JP 2022520663A JP 2021548194 A JP2021548194 A JP 2021548194A JP 2021548194 A JP2021548194 A JP 2021548194A JP 2022520663 A JP2022520663 A JP 2022520663A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- labeled probe
- subsets
- agent
- probe
- amplifying agent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 668
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 668
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 668
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 105
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 14
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 title description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 3115
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 1665
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims abstract description 450
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims abstract description 450
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims abstract description 92
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 371
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 371
- 238000002844 melting Methods 0.000 claims description 186
- 230000008018 melting Effects 0.000 claims description 186
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 86
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 74
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 73
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 73
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 claims description 68
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 68
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 68
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 claims description 68
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 68
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims description 68
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 claims description 37
- 108091064355 mitochondrial RNA Proteins 0.000 claims description 33
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 claims description 33
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 claims description 33
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 claims description 28
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 14
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 14
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 11
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims description 11
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 16
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 3
- 208000005443 Circulating Neoplastic Cells Diseases 0.000 description 2
- 108091046869 Telomeric non-coding RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6841—In situ hybridisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
- C12Q1/6818—Hybridisation assays characterised by the detection means involving interaction of two or more labels, e.g. resonant energy transfer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
- C12Q1/682—Signal amplification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
Abstract
Description
[背景技術]
[発明の概要]
[図面の簡単な説明]
[図2]マルチプレックスアッセイのワークフロー(RNAscope(商標)HiPlex Assay Workflow)の概略図を示している。図2に示されている実施形態では、12個の標的配列が、標的プローブ(ダブルZ型プローブとして示されている)にハイブリダイゼーションし、シグナルが、RNAscope(商標)のような増幅システムによって、同時に増幅される。示されている実施形態では、非スペクトルな重なり合った蛍光色素にコンジュゲートした4種のオリゴ(標識プローブ)を介して、第1の4つの標的を検出し、従来の蛍光顕微鏡またはスキャナーを用いてイメージングする。続いて、フルオロフォアを標識プローブから切断し、次の4つの標的を標識し、同じ方法を用いてイメージングする。1ラウンドあたり4つの標的を検出するラウンドをL回(例えば3回)行った後、画像レジストレーションソフトウェアのアルゴリズムを用いて、画像をレジストレーションして、重ね合わせた画像の最終合成物をシングルセルの解像度で作成する。
[図3A]標的核酸を垂直方向で標識する概略図である。図3Aに示されているのは、RNAscope(商標)アッセイに基づき、標的核酸を垂直方向で標識することである。図3Aに示されているのは、3つの例示的な標的核酸を、それぞれのシグナル生成複合体(SGC)で標識することである。図3Aには、標的プローブ対1(TP1a及びTP1b)が標的核酸1に結合しているのが示されている。プレ増幅剤(PA1)が、標的プローブ対(TP1a及びTP1b)に結合しているのが示されている。複数の増幅剤(AMP1)が、PA1に結合しているのが示されている。複数の標識プローブ(LP1)が、増幅剤に結合しているのが示されている。図3Aには、標的2及び3についても、同様の構成が示されており、SGCの成分(標的プローブ、プレ増幅剤、増幅剤、標識プローブ)は、対応する標的のそれぞれに特異的である。
[図3B]標的核酸を垂直方向で標識する概略図である。図3Aに示されている構成の修正形態を示している。図3Bに示されているのは、2つの例示的な標的核酸を、それぞれのシグナル生成複合体(SGC)で標識することである。図3Bには、標的プローブ対1(TP1a及びTP1b)が標的核酸1に結合しているのが示されている。プレ-プレ増幅剤(PPA1)が、標的プローブ対(TP1a及びTP1b)に結合しているのが示されている。複数のプレ増幅剤(PA1)が、PPA1に結合しているのが示されている。複数の増幅剤(AMP1)が、PA1に結合しているのが示されている。簡略化のために、増幅剤は、1つのプレ増幅剤に結合しているように示されているが、増幅剤は、すべてのプレ増幅剤に結合できることが理解される。複数の標識プローブ(LP1)が、増幅剤に結合しているのが示されている。図3Bには、標的2についても、同様の構成が示されており、SGCの成分(標的プローブ、プレ-プレ増幅剤、プレ増幅剤、増幅剤、標識プローブ)は、対応する標的のそれぞれに特異的である。
[図3C]標的核酸を垂直方向で標識する概略図である。図3Cに示されているのは、Basescope(商標)アッセイに基づき、標的核酸を垂直方向で標識することである。図3Cに示されているのは、2つの例示的な標的核酸を、それぞれのシグナル生成複合体(SGC)で標識することである。図3Cには、標的プローブ対1(TP1a及びTP1b)が標的核酸1に結合しているのが示されている。プレ-プレ増幅剤対(PPA1a及びPPA1b)が、それぞれの標的プローブ対(TP1a及びTP1b)に結合しているのが示されている。プレ増幅剤(PA1)が、プレ-プレ増幅剤対(PPA1a及びPPA1b)に結合しているのが示されている。複数の増幅剤(AMP1)が、PA1に結合しているのが示されている。簡略化のために、増幅剤は、1つのプレ増幅剤に結合しているように示されているが、増幅剤は、すべてのプレ増幅剤に結合できることが理解される。複数の標識プローブ(LP1)が、増幅剤に結合しているのが示されている。図3Cには、標的2についても、同様の構成が示されており、SGCの成分(標的プローブ、プレ-プレ増幅剤、プレ増幅剤、増幅剤、標識プローブ)は、対応する標的のそれぞれに特異的である。
[図4A]3ラウンドの蛍光検出で、HeLa細胞内の12個のポジティブコントロール遺伝子を検出した結果を示している。ホルマリン固定パラフィン包埋切片として調製したHeLa細胞に、12個の異なる標的に対するプローブ対をハイブリダイゼーションさせ、プレ増幅剤及び増幅剤の配列との逐次的なハイブリダイゼーションラウンドによって、ハイブリダイゼーションシグナルを併せて増幅した。図4Aは、標的核酸、すなわち、RNAポリメラーゼIIサブユニットA(POLR2A)遺伝子、ペプチジルプロリルイソメラーゼB(PPIB)遺伝子、ユビキチンC(UBC)遺伝子及びヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ1(HPRT1)遺伝子に結合した標識を可視化した1回目のラウンドの検出結果を示している。POLR2A、PPIB、UBC、及びHPRT1は、フルオロフォアのAlexa488、ATTO550、ATTO647N、及びAlexa750で標識した。別のスライドで、同じ蛍光標識を用いた、細菌のジヒドロジピコリン酸レダクターゼ(dapB)遺伝子に対するネガティブコントロールプローブを使用して、非特異的なバックグラウンドを評価した。核は、DAPI(4’,6-ジアミジノ-2-フェニルインドール)(青色)で染色した。
[図4B]3ラウンドの蛍光検出で、HeLa細胞内の12個のポジティブコントロール遺伝子を検出した結果を示している。1回目のラウンドで結合した標識を切断後、標的核酸、すなわち、クラスIのβチューブリン(TUBB)、リボソームタンパク質L28(RPL28)、リボソームタンパク質L5(RPL5)、及びβ-2ミクログロブリン(B2M)に結合した標識を、それぞれフルオロフォアのAlexa488、ATTO550、ATTO647N、及びAlexa750を用いて可視化した2回目のラウンドの検出結果を示している。
[図4C]3ラウンドの蛍光検出で、HeLa細胞内の12個のポジティブコントロール遺伝子を検出した結果を示している。2回目のラウンドで結合した標識を切断後、標的核酸、すなわち、βアクチン(ACTB)、乳酸デヒドロゲナーゼA(LDHA)、リボソームタンパク質ラテラルストークサブユニットP0(RPLP0)、及びグリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼ(GAPDH)に結合した標識を、フルオロフォアのAlexa488、ATTO550、ATTO647N、及びAlexa750を用いて可視化した3回目のラウンドの検出結果を示している。
[図5]新鮮な凍結マウス脳におけるニューロンマーカーの検出及び画像レジストレーションの結果を示している。3ラウンドの標識プローブハイブリダイゼーションを行って、Alexa488、ATTO550、ATTO647N及びAlexa750というフルオロフォアを用いて、5-ヒドロキシトリプタミン(セロトニン)受容体7(Htr7)、プロトカドヘリン8(Pcdh8)、Meisホメオボックス1(Meis1)、チロシンヒドロキシラーゼ(Th)、クリスタリンμ(Crym)、シナプトポリン(Synpr)、ドーパミン受容体D1(Drd1a)、カンナビノイド受容体1(脳)(Cnr1)、ウォルフラミンER膜貫通糖タンパク質(Wfs1)、ドーパミン受容体D2(Drd2)及びカルビンジン1(Calb1)を検出した後、ATTO550を用いて、NeuN(RNA結合タンパク質fox-1ホモログ(C.elegans)3によってコードされる)に対する抗体によって免疫蛍光検出を行い、4枚からなる画像セットを得てから、画像解析ソフトウェアを用いることによってレジストレーションを行って、同じ個別細胞上の12個の標的シグナルを重ね合わせた。
[図6]A~Cは、シグナル生成複合体(SGC)を用いて、核酸標的を検出する上記方法の概略図を示している。PPAはプレ-プレ増幅剤、PAはプレ増幅剤、AMPは増幅剤、LPは標識プローブである。
[発明を実施するための形態]
反復的な蛍光検出ラウンドでの標的核酸の検出
この実施例では、3ラウンドの蛍光検出で、HeLa細胞内の12個のポジティブコントロール遺伝子を検出することが説明されている。
反復的な蛍光検出ラウンドでの標的核酸の検出
この実施例では、新鮮な凍結マウス脳内のニューロンマーカーの検出及び画像レジストレーションが説明されている。
Claims (219)
- 複数の標的核酸の検出方法であって、
(A)複数の核酸を含む細胞を含む試料を、複数の標的プローブセットと接触させることであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を含む、前記接触させることと、
(B)その試料をプレ増幅剤セットと接触させることであって、前記プレ増幅剤セットが、複数のプレ増幅剤を含み、前記複数のプレ増幅剤が、前記標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける前記標的プローブ対に対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含む、前記接触させることと、
(C)その試料を増幅剤セットと接触させることであって、前記増幅剤セットが、前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な複数の増幅剤サブセットを含み、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含む、前記接触させることと、
(D)その試料を第1の標識プローブセットと接触させることであって、前記第1の標識プローブセットが、第1の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第1の標識プローブセットが、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(E)前記標的核酸に結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第1の標的核酸サブセットを検出することと、
(F)前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットから、前記標識を切断することと、
(G)その試料を第2の標識プローブセットと接触させることであって、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第2の標識プローブセットが、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(H)前記標的核酸に結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第2の標的核酸サブセットを検出することと、
を含み、
前記複数の標的核酸を検出する前記方法。 - (I)前記第2の標的核酸セットに結合した前記第2の標識プローブセットから、前記標識を切断することと、
(J)その試料を第3の標識プローブセットと接触させることであって、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第3の標識プローブセットが、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(K)前記標的核酸に結合した前記第3の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第3の標的核酸サブセットを検出することと、
をさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記工程(I)~(K)を1回以上繰り返すことを含む、請求項2に記載の方法。
- 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項1~3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項1~4のいずれか1項に記載の方法。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項5に記載の方法。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項1~6のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項1~6のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項1~6のいずれか1項に記載の方法。
- (A)複数の標的核酸を含む少なくとも1つの固定及び/または浸透化細胞と、
(B)複数の標的プローブセットであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションした標的プローブ対を含む前記複数の標的プローブセットと、
(C)複数のプレ増幅剤を含むプレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ増幅剤が、前記標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける前記標的プローブ対に対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ増幅剤が、それぞれの特異的な前記標的プローブ対にハイブリダイゼーションされている前記プレ増幅剤セットと、
(D)前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な複数の増幅剤サブセットを含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含み、前記増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的なそれぞれの前記プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記増幅剤セットと、
(E)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第1の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する前記第1の標識プローブセットと、
を含む、固定及び/または浸透化細胞の試料であって、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第1の標的核酸サブセット上に供給される前記試料。 - 前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識が、切断される、請求項10に記載の試料。
- 前記試料が、第2の標識プローブセットを含み、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第2の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第2の標的核酸サブセット上に供給される、請求項11に記載の試料。 - 前記第2の標的核酸サブセットに結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識が、切断される、請求項12に記載の試料。
- 前記試料が、第3の標識プローブセットを含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第3の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第3の標的核酸サブセット上に供給される、請求項13に記載の試料。 - 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項10~14のいずれか1項に記載の試料。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項10~15のいずれか1項に記載の試料。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項16に記載の試料。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項10~17のいずれか1項に記載の試料。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項10~17のいずれか1項に記載の試料。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項10~17のいずれか1項に記載の方法。
- (A)標的核酸を含む固定及び/または浸透化細胞を少なくとも1つ含む複数の固定及び/または浸透化細胞が上に固定化されているスライドと、
(B)複数の標的プローブセットであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションした標的プローブ対を含む前記複数の標的プローブセットと、
(C)複数のプレ増幅剤を含むプレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ増幅剤が、前記標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける前記標的プローブ対に対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ増幅剤が、それぞれの特異的な前記標的プローブ対にハイブリダイゼーションされている前記プレ増幅剤セットと、
(D)前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な複数の増幅剤サブセットを含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含み、前記増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的なそれぞれの前記プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記増幅剤セットと、
(E)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第1の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する前記第1の標識プローブセットと、
を含むスライドであって、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第1の標的核酸サブセット上に供給される前記スライド。 - 前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識が、切断される、請求項21に記載のスライド。
- 前記スライドが、第2の標識プローブセットを含み、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第2の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第2の標的核酸サブセット上に供給される、請求項22に記載のスライド。 - 前記第2の標的核酸サブセットに結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識が、切断される、請求項23に記載のスライド。
- 前記スライドが、第3の標識プローブセットを含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第3の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第3の標的核酸サブセット上に供給される、請求項24に記載のスライド。 - 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項21~25のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項21~26のいずれか1項に記載のスライド。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項27に記載のスライド。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項21~28のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項21~28のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項21~28のいずれか1項に記載のスライド。
- 標的核酸をin situで検出するためのキットであって、
(A)複数のプレ増幅剤を含むプレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ増幅剤が、標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける標的プローブ対に対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含む前記プレ増幅剤セットと、
(B)前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な複数の増幅剤サブセットを含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含む前記増幅剤セットと、
(C)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第1の標識プローブセットが、第1の標的核酸サブセットを特異的に標識できる前記第1の標識プローブセットと、
(D)第2の標識プローブサブセットを複数含む第2の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第2の標識プローブセットが、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる第2の標的核酸サブセットを特異的に標識できる前記第2の標識プローブセットと、
を含む前記キット。 - 前記キットが、第3の標識プローブセットをさらに含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第3の標識プローブセットが、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる第3の標的核酸サブセットを特異的に標識できる、請求項32に記載のキット。
- 前記キットが、標的プローブセットを1つ以上含み、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を含む、請求項32または33に記載のキット。
- 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションできる標的プローブ対を2対以上含む、請求項34に記載のキット。
- 前記切断可能な標識を前記標識プローブから切断する切断剤を含む、請求項32~35のいずれか1項に記載のキット。
- 細胞を浸透化するための試薬を少なくとも1つ含む、請求項32~36のいずれか1項に記載のキット。
- 複数の核酸の検出方法であって、
(A)複数の核酸を含む細胞を含む試料を、複数の標的プローブセットと接触させることであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を含む、前記接触させることと、
(B)その試料をプレ-プレ増幅剤セットと接触させることであって、前記プレ-プレ増幅剤セットが、プレ-プレ増幅剤対を複数含み、前記プレ-プレ増幅剤セットが、前記標的プローブセットの前記標的プローブ対のそれぞれに特異的なプレ-プレ増幅剤対を含み、前記プレ-プレ増幅剤対の各プレ-プレ増幅剤が、前記標的プローブセットの前記標的プローブ対の標的プローブの1つに対する結合部位を含み、前記プレ-プレ増幅剤が、プレ増幅剤に対する結合部位を複数含む、前記接触させることと、
(C)その試料をプレ増幅剤セットと接触させることであって、前記プレ増幅剤セットが、複数のプレ増幅剤を含み、前記複数のプレ増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記プレ-プレ増幅剤セットのプレ-プレ増幅剤対の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含む、前記接触させることと、
(D)その試料を増幅剤セットと接触させることであって、前記増幅剤セットが、前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的な前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含み、前記増幅剤サブセットの増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対に特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含む、前記接触させることと、
(E)その試料を第1の標識プローブセットと接触させることであって、前記第1の標識プローブセットが、第1の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第1の標識プローブセットが、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(F)前記標的核酸に結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第1の標的核酸サブセットを検出することと、
(G)前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットから、前記標識を切断することと、
(H)その試料を第2の標識プローブセットと接触させることであって、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第2の標識プローブセットが、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(I)前記標的核酸に結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第2の標的核酸サブセットを検出することと、
を含み、
前記複数の標的核酸を検出する前記方法。 - (J)前記第2の標的核酸セットに結合した前記第2の標識プローブセットから、前記標識を切断することと、
(K)その試料を第3の標識プローブセットと接触させることであって、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第3の標識プローブセットが、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(L)前記標的核酸に結合した前記第3の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第3の標的核酸サブセットを検出することと、
をさらに含む、請求項38に記載の方法。 - 前記工程(J)~(L)を1回以上繰り返すことを含む、請求項39に記載の方法。
- 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項38~40のいずれか1項に記載の方法。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項38~41のいずれか1項に記載の方法。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項42に記載の方法。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項38~43のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項38~43のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項38~43のいずれか1項に記載の方法。
- (A)複数の標的核酸を含む少なくとも1つの固定及び/または浸透化細胞と、
(B)複数の標的プローブセットであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションした標的プローブ対を含む前記複数の標的プローブセットと、
(C)プレ-プレ増幅剤対を複数含むプレ-プレ増幅剤セットであって、前記プレ-プレ増幅剤セットが、前記標的プローブセットの前記標的プローブ対のそれぞれに特異的な前記プレ-プレ増幅剤対を含み、前記プレ-プレ増幅剤対の各プレ-プレ増幅剤が、前記標的プローブセットの前記標的プローブ対の標的プローブの1つに対する結合部位を含み、前記プレ-プレ増幅剤が、プレ増幅剤に対する結合部位を複数含み、前記プレ-プレ増幅剤が、それぞれの特異的な前記標的プローブ対にハイブリダイゼーションされている前記プレ-プレ増幅剤セットと、
(D)複数のプレ増幅剤を含むプレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記プレ-プレ増幅剤セットのプレ-プレ増幅剤対の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ増幅剤が、それぞれの前記プレ-プレ増幅剤対にハイブリダイゼーションされている前記プレ増幅剤セットと、
(E)前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的な前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットの増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対に特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含み、前記増幅剤が、それぞれの前記プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記増幅剤セットと、
(F)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第1の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する前記第1の標識プローブセットと、
を含む、固定及び/または浸透化細胞の試料であって、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第1の標的核酸サブセット上に供給される前記試料。 - 前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識が、切断される、請求項47に記載の試料。
- 前記試料が、第2の標識プローブセットを含み、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第2の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第2の標的核酸サブセット上に供給される、請求項48に記載の試料。 - 前記第2の標的核酸サブセットに結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識が、切断される、請求項49に記載の試料。
- 前記試料が、第3の標識プローブセットを含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第3の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第3の標的核酸サブセット上に供給される、請求項50に記載の試料。 - 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項47~51のいずれか1項に記載の試料。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項47~52のいずれか1項に記載の試料。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項53に記載の試料。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項47~54のいずれか1項に記載の試料。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項47~54のいずれか1項に記載の試料。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項47~54のいずれか1項に記載の試料。
- (A)標的核酸を含む固定及び/または浸透化細胞を少なくとも1つ含む複数の固定及び/または浸透化細胞が上に固定化されているスライドと、
(B)複数の標的プローブセットであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションした標的プローブ対を含む前記複数の標的プローブセットと、
(C)プレ-プレ増幅剤対を複数含むプレ-プレ増幅剤セットであって、前記プレ-プレ増幅剤セットが、前記標的プローブセットの前記標的プローブ対のそれぞれに特異的な前記プレ-プレ増幅剤対を含み、前記プレ-プレ増幅剤対の各プレ-プレ増幅剤が、前記標的プローブセットの前記標的プローブ対の標的プローブの1つに対する結合部位を含み、前記プレ-プレ増幅剤が、プレ増幅剤に対する結合部位を複数含み、前記プレ-プレ増幅剤が、それぞれの特異的な前記標的プローブ対にハイブリダイゼーションされている前記プレ-プレ増幅剤セットと、
(D)複数のプレ増幅剤を含むプレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記プレ-プレ増幅剤セットのプレ-プレ増幅剤対の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ増幅剤が、それぞれの前記プレ-プレ増幅剤対にハイブリダイゼーションされている前記プレ増幅剤セットと、
(E)前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的な前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットの増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対に特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含み、前記増幅剤が、それぞれの前記プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記増幅剤セットと、
(F)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第1の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する前記第1の標識プローブセットと、
を含むスライドであって、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第1の標的核酸サブセット上に供給される前記スライド。 - 前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識が、切断される、請求項58に記載のスライド。
- 前記スライドが、第2の標識プローブセットを含み、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第2の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第2の標的核酸サブセット上に供給される、請求項59に記載のスライド。 - 前記第2の標的核酸サブセットに結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識が、切断される、請求項60に記載のスライド。
- 前記スライドが、第3の標識プローブセットを含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第3の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第3の標的核酸サブセット上に供給される、請求項61に記載のスライド。 - 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項58~62のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項58~63のいずれか1項に記載のスライド。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項64に記載のスライド。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項58~65のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項58~65のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項58~65のいずれか1項に記載のスライド。
- 標的核酸をin situで検出するためのキットであって、
(A)プレ-プレ増幅剤対を複数含むプレ-プレ増幅剤セットであって、前記プレ-プレ増幅剤セットが、標的プローブセットの標的プローブ対のそれぞれに特異的な前記プレ-プレ増幅剤対を含み、前記プレ-プレ増幅剤対の各プレ-プレ増幅剤が、前記標的プローブセットの前記標的プローブ対の標的プローブの1つに対する結合部位を含み、前記プレ-プレ増幅剤が、プレ増幅剤に対する結合部位を複数含む前記プレ-プレ増幅剤セットと、
(B)複数のプレ増幅剤を含むプレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記プレ-プレ増幅剤セットのプレ-プレ増幅剤対の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含む前記プレ増幅剤セットと、
(C)前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的な前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットの増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対に特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含む前記増幅剤セットと、
(D)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第1の標識プローブセットが、第1の標的核酸サブセットを特異的に標識できる前記第1の標識プローブセットと、
(E)第2の標識プローブサブセットを複数含む第2の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第2の標識プローブセットが、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる第2の標的核酸サブセットを特異的に標識できる、前記第2の標識プローブセットと、
を含む前記キット。 - 前記キットが、第3の標識プローブセットをさらに含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第3の標識プローブセットが、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる第3の標的核酸サブセットを特異的に標識できる、請求項69に記載のキット。
- 前記キットが、標的プローブセットを1つ以上含み、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を含む、請求項69または70に記載のキット。
- 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションできる標的プローブ対を2対以上含む、請求項71に記載のキット。
- 前記切断可能な標識を前記標識プローブから切断する切断剤を含む、請求項69~72のいずれか1項に記載のキット。
- 細胞を浸透化するための試薬を少なくとも1つ含む、請求項69~73のいずれか1項に記載のキット。
- 複数の標的核酸の検出方法であって、
(A)複数の核酸を含む細胞を含む試料を、複数の標的プローブセットと接触させることであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を含む、前記接触させることと、
(B)その試料をプレ-プレ増幅剤セットと接触させることであって、前記プレ-プレ増幅剤セットが、複数のプレ-プレ増幅剤を含み、前記複数のプレ-プレ増幅剤が、前記標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ-プレ増幅剤を含み、前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける標的プローブ対に対する結合部位と、プレ増幅剤に対する複数の結合部位を含む、前記接触させることと、
(C)その試料をプレ増幅剤セットと接触させることであって、前記プレ増幅剤セットが、前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれに特異的なプレ増幅剤サブセットを複数含み、前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれが、複数のプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤サブセットの前記プレ増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ-プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含む、前記接触させることと、
(D)その試料を増幅剤セットと接触させることであって、前記増幅剤セットが、前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含み、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記プレ増幅剤サブセットの1つにおけるプレ増幅剤に対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含む、前記接触させることと、
(E)その試料を第1の標識プローブセットと接触させることであって、前記第1の標識プローブセットが、第1の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第1の標識プローブセットが、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(F)前記標的核酸に結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第1の標的核酸サブセットを検出することと、
(G)前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットから、前記標識を切断することと、
(H)その試料を第2の標識プローブセットと接触させることであって、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第2の標識プローブセットが、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(I)前記標的核酸に結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第2の標的核酸サブセットを検出することと、
を含み、
前記複数の標的核酸を検出する前記方法。 - (J)前記第2の標的核酸セットに結合した前記第2の標識プローブセットから、前記標識を切断することと、
(K)その試料を第3の標識プローブセットと接触させることであって、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第3の標識プローブセットが、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(L)前記標的核酸に結合した前記第3の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第3の標的核酸サブセットを検出することと、
をさらに含む、請求項75に記載の方法。 - 前記工程(J)~(L)を1回以上繰り返すことを含む、請求項76に記載の方法。
- 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項75~77のいずれか1項に記載の方法。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項75~78のいずれか1項に記載の方法。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項79に記載の方法。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項75~80のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項75~80のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項75~80のいずれか1項に記載の方法。
- (A)複数の標的核酸を含む少なくとも1つの固定及び/または浸透化細胞と、
(B)複数の標的プローブセットであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションした標的プローブ対を含む前記複数の標的プローブセットと、
(C)複数のプレ-プレ増幅剤を含むプレ-プレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ-プレ増幅剤が、前記標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ-プレ増幅剤を含み、前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける標的プローブ対に対する結合部位と、プレ増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ-プレ増幅剤が、それぞれの特異的な前記標的プローブ対にハイブリダイゼーションされている前記プレ-プレ増幅剤セットと、
(D)前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれに特異的なプレ増幅剤サブセットを複数含むプレ増幅剤セットであって、前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれが、複数のプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤サブセットの前記プレ増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ-プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的なそれぞれの前記プレ-プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記プレ増幅剤セットと、
(E)前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記プレ増幅剤サブセットの1つにおけるプレ増幅剤に対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含み、前記増幅剤が、それぞれの前記プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記増幅剤セットと、
(F)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第1の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する前記第1の標識プローブセットと、
を含む、固定及び/または浸透化細胞の試料であって、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第1の標的核酸サブセット上に供給される前記試料。 - 前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識が、切断される、請求項84に記載の試料。
- 前記試料が、第2の標識プローブセットを含み、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第2の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第2の標的核酸サブセット上に供給される、請求項85に記載の試料。 - 前記第2の標的核酸サブセットに結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識が、切断される、請求項86に記載の試料。
- 前記試料が、第3の標識プローブセットを含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第3の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第3の標的核酸サブセット上に供給される、請求項87に記載の試料。 - 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項84~88のいずれか1項に記載の試料。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項84~89のいずれか1項に記載の試料。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項90に記載の試料。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項84~91のいずれか1項に記載の試料。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項84~91のいずれか1項に記載の試料。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項84~91のいずれか1項に記載の試料。
- (A)標的核酸を含む固定及び/または浸透化細胞を少なくとも1つ含む複数の固定及び/または浸透化細胞が上に固定化されているスライドと、
(B)複数の標的プローブセットであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションした標的プローブ対を含む前記複数の標的プローブセットと、
(C)複数のプレ-プレ増幅剤を含むプレ-プレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ-プレ増幅剤が、前記標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ-プレ増幅剤を含み、前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける標的プローブ対に対する結合部位と、プレ増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ-プレ増幅剤が、それぞれの特異的な前記標的プローブ対にハイブリダイゼーションされている前記プレ-プレ増幅剤セットと、
(D)前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれに特異的なプレ増幅剤サブセットを複数含むプレ増幅剤セットであって、前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれが、複数のプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤サブセットの前記プレ増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ-プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的なそれぞれの前記プレ-プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記プレ増幅剤セットと、
(E)前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記プレ増幅剤サブセットの1つにおけるプレ増幅剤に対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含み、前記増幅剤が、それぞれの前記プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記増幅剤セットと、
(F)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第1の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する前記第1の標識プローブセットと、
を含むスライドであって、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第1の標的核酸サブセット上に供給される前記スライド。 - 前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識が、切断される、請求項95に記載のスライド。
- 前記スライドが、第2の標識プローブセットを含み、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第2の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第2の標的核酸サブセット上に供給される、請求項96に記載のスライド。 - 前記第2の標的核酸サブセットに結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識が、切断される、請求項97に記載のスライド。
- 前記スライドが、第3の標識プローブセットを含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第3の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第3の標的核酸サブセット上に供給される、請求項98に記載のスライド。 - 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項95~99のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項95~100のいずれか1項に記載のスライド。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項101に記載のスライド。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項95~102のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項95~102のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項95~102のいずれか1項に記載のスライド。
- 標的核酸をin situで検出するためのキットであって、
(A)複数のプレ-プレ増幅剤を含むプレ-プレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ-プレ増幅剤が、標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ-プレ増幅剤を含み、前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける標的プローブ対に対する結合部位と、プレ増幅剤に対する複数の結合部位を含む前記プレ-プレ増幅剤セットと、
(B)前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれに特異的なプレ増幅剤サブセットを複数含むプレ増幅剤セットであって、前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれが、複数のプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤サブセットの前記プレ増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ-プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含む前記プレ増幅剤セットと、
(C)前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記プレ増幅剤サブセットの1つにおけるプレ増幅剤に対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含む前記増幅剤セットと、
(D)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第1の標識プローブセットが、第1の標的核酸サブセットを特異的に標識できる前記第1の標識プローブセットと、
(E)第2の標識プローブサブセットを複数含む第2の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第2の標識プローブセットが、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる第2の標的核酸サブセットを特異的に標識できる前記第2の標識プローブセットと、
を含む前記キット。 - 前記キットが、第3の標識プローブセットをさらに含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第3の標識プローブセットが、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる第3の標的核酸サブセットを特異的に標識できる、請求項106に記載のキット。
- 前記キットが、標的プローブセットを1つ以上含み、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を含む、請求項106または107に記載のキット。
- 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションできる標的プローブ対を2対以上含む、請求項108に記載のキット。
- 前記切断可能な標識を前記標識プローブから切断する切断剤を含む、請求項106~109のいずれか1項に記載のキット。
- 細胞を浸透化するための試薬を少なくとも1つ含む、請求項106~110のいずれか1項に記載のキット。
- 複数の標的核酸の検出方法であって、
(A)複数の核酸を含む細胞を含む試料を、複数の標的プローブセットと接触させることであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を含む、前記接触させることと、
(B)その試料をプレ増幅剤セットと接触させることであって、前記プレ増幅剤セットが、複数のプレ増幅剤を含み、前記複数のプレ増幅剤が、前記標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける標的プローブ対に対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含む、前記触させることと、
(C)その試料を増幅剤セットと接触させることであって、前記増幅剤セットが、前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な複数の増幅剤サブセットを含み、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含む、前記接触させることと、
(D)その試料を第1の標識プローブセットと接触させることであって、前記第1の標識プローブセットが、第1の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第1の標識プローブセットが、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(E)前記標的核酸に結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第1の標的核酸サブセットを検出することと、
(F)前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットから、前記標識を除去することと、
(G)その試料を第2の標識プローブセットと接触させることであって、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第2の標識プローブセットが、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(H)前記標的核酸に結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第2の標的核酸サブセットを検出することと、
を含み、
前記複数の標的核酸を検出する前記方法。 - (I)前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記第2の標的核酸セットに結合した前記第2の標識プローブセットから、前記標識を除去することと、
(J)前記試料を第3の標識プローブセットと接触させることであって、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第3の標識プローブセットが、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(K)前記標的核酸に結合した前記第3の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第3の標的核酸サブセットを検出することと、
をさらに含む、請求項112に記載の方法。 - 工程(I)~(K)を1回以上繰り返すことを含む、請求項113に記載の方法。
- 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項112~114のいずれか1項に記載の方法。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項112~115のいずれか1項に記載の方法。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項116に記載の方法。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項112~117のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項112~117のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項112~117のいずれか1項に記載の方法。
- (A)複数の標的核酸を含む少なくとも1つの固定及び/または浸透化細胞と、
(B)複数の標的プローブセットであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションした標的プローブ対を含む前記複数の標的プローブセットと、
(C)複数のプレ増幅剤を含むプレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ増幅剤が、前記標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける前記標的プローブ対に対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ増幅剤が、それぞれの特異的な前記標的プローブ対にハイブリダイゼーションされている前記プレ増幅剤セットと、
(D)前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な複数の増幅剤サブセットを含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含み、前記増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的なそれぞれの前記プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記増幅剤セットと、
(E)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第1の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する前記第1の標識プローブセットと、
を含む、固定及び/または浸透化細胞の試料であって、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第1の標的核酸サブセット上に供給される前記試料。 - 前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートことによって、前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識が除去される、請求項121に記載の試料。
- 前記試料が、第2の標識プローブセットを含み、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第2の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第2の標的核酸サブセット上に供給される、請求項122に記載の試料。 - 前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記第2の標的核酸サブセットに結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識が除去される、請求項123に記載の試料。
- 前記試料が、第3の標識プローブセットを含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第3の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第3の標的核酸サブセット上に供給される、請求項124に記載の試料。 - 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項121~125のいずれか1項に記載の試料。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項121~126のいずれか1項に記載の試料。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項127に記載の試料。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項121~128のいずれか1項に記載の試料。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項121~128のいずれか1項に記載の試料。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項121~128のいずれか1項に記載の試料。
- (A)標的核酸を含む固定及び/または浸透化細胞を少なくとも1つ含む複数の固定及び/または浸透化細胞が上に固定化されているスライドと、
(B)複数の標的プローブセットであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションした標的プローブ対を含む前記複数の標的プローブセットと、
(C)複数のプレ増幅剤を含むプレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ増幅剤が、前記標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける前記標的プローブ対に対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ増幅剤が、それぞれの特異的な前記標的プローブ対にハイブリダイゼーションされている前記プレ増幅剤セットと、
(D)前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な複数の増幅剤サブセットを含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含み、前記増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的なそれぞれの前記プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記増幅剤セットと、
(E)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第1の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する前記第1の標識プローブセットと、
を含むスライドであって、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第1の標的核酸サブセット上に供給される前記スライド。 - 前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記標識を除去することによって、前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識が除去される、請求項132に記載のスライド。
- 前記スライドが、第2の標識プローブセットを含み、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第2の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第2の標的核酸サブセット上に供給される、請求項133に記載のスライド。 - 前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって除去することによって、前記第2の標的核酸サブセットに結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識が除去される、請求項134に記載のスライド。
- 前記スライドが、第3の標識プローブセットを含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第3の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第3の標的核酸サブセット上に供給される、請求項135に記載のスライド。 - 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項132~136のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項132~137のいずれか1項に記載のスライド。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項138に記載のスライド。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項132~139のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項132~139のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項132~139のいずれか1項に記載のスライド。
- 標的核酸をin situで検出するためのキットであって、
(A)複数のプレ増幅剤を含むプレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ増幅剤が、標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける標的プローブ対に対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含む前記プレ増幅剤セットと、
(B)前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な複数の増幅剤サブセットを含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含む前記増幅剤セットと、
(C)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第1の標識プローブセットが、第1の標的核酸サブセットを特異的に標識できる前記第1の標識プローブセットと、
(D)第2の標識プローブサブセットを複数含む第2の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第2の標識プローブセットが、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる第2の標的核酸サブセットを特異的に標識できる前記第2の標識プローブセットと、
を含む前記キット。 - 前記キットが、第3の標識プローブセットをさらに含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第3の標識プローブセットが、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる第3の標的核酸サブセットを特異的に標識できる、請求項143に記載のキット。
- 前記キットが、標的プローブセットを1つ以上含み、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を含む、請求項143または144に記載のキット。
- 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションできる標的プローブ対を2対以上含む、請求項145に記載のキット。
- 細胞を浸透化するための試薬を少なくとも1つ含む、請求項143~146のいずれか1項に記載のキット。
- 複数の核酸の検出方法であって、
(A)複数の核酸を含む細胞を含む試料を、複数の標的プローブセットと接触させることであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を含む、前記接触させることと、
(B)その試料をプレ-プレ増幅剤セットと接触させることであって、前記プレ-プレ増幅剤セットが、プレ-プレ増幅剤対を複数含み、前記プレ-プレ増幅剤セットが、前記標的プローブセットの前記標的プローブ対のそれぞれに特異的な前記プレ-プレ増幅剤対を含み、前記プレ-プレ増幅剤対の各プレ-プレ増幅剤が、前記標的プローブセットの前記標的プローブ対の標的プローブの1つに対する結合部位を含み、前記プレ-プレ増幅剤が、プレ増幅剤に対する結合部位を複数含む、前記接触させることと、
(C)その試料をプレ増幅剤セットと接触させることであって、前記プレ増幅剤セットが、複数のプレ増幅剤を含み、前記複数のプレ増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記プレ-プレ増幅剤セットのプレ-プレ増幅剤対の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含む、前記接触させることと、
(D)その試料を増幅剤セットと接触させることであって、前記増幅剤セットが、前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的な前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含み、前記増幅剤サブセットの増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対に特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含む、前記接触させることと、
(E)その試料を第1の標識プローブセットと接触させることであって、前記第1の標識プローブセットが、第1の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第1の標識プローブセットが、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(F)前記標的核酸に結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第1の標的核酸サブセットを検出することと、
(G)前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットから、前記標識を除去することと、
(H)その試料を第2の標識プローブセットと接触させることであって、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第2の標識プローブセットが、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(I)前記標的核酸に結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第2の標的核酸サブセットを検出することと、
を含み、
前記複数の標的核酸を検出する前記方法。 - (J)前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記第2の標的核酸セットに結合した前記第2の標識プローブセットから、前記標識を除去することと、
(K)その試料を第3の標識プローブセットと接触させることであって、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第3の標識プローブセットが、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(L)前記標的核酸に結合した前記第3の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第3の標的核酸サブセットを検出することと、
をさらに含む、請求項148に記載の方法。 - 前記工程(J)~(L)を1回以上繰り返すことを含む、請求項149に記載の方法。
- 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項148~150のいずれか1項に記載の方法。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項148~151のいずれか1項に記載の方法。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項152に記載の方法。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項148~153のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項148~153のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項148~153のいずれか1項に記載の方法。
- (A)複数の標的核酸を含む少なくとも1つの固定及び/または浸透化細胞と、
(B)複数の標的プローブセットであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションした標的プローブ対を含む前記複数の標的プローブセットと、
(C)プレ-プレ増幅剤対を複数含むプレ-プレ増幅剤セットであって、前記プレ-プレ増幅剤セットが、前記標的プローブセットの前記標的プローブ対のそれぞれに特異的な前記プレ-プレ増幅剤対を含み、前記プレ-プレ増幅剤対の各プレ-プレ増幅剤が、前記標的プローブセットの前記標的プローブ対の標的プローブの1つに対する結合部位を含み、前記プレ-プレ増幅剤が、プレ増幅剤に対する結合部位を複数含み、前記プレ-プレ増幅剤が、それぞれの特異的な前記標的プローブ対にハイブリダイゼーションされている前記プレ-プレ増幅剤セットと、
(D)複数のプレ増幅剤を含むプレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記プレ-プレ増幅剤セットのプレ-プレ増幅剤対の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ増幅剤が、それぞれの前記プレ-プレ増幅剤対にハイブリダイゼーションされている前記プレ増幅剤セットと、
(E)前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的な前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットの増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対に特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含み、前記増幅剤が、それぞれの前記プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記増幅剤セットと、
(F)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第1の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する前記第1の標識プローブセットと、
を含む、固定及び/または浸透化細胞の試料であって、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第1の標的核酸サブセット上に供給される前記試料。 - 前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識が除去される、請求項157に記載の試料。
- 前記試料が、第2の標識プローブセットを含み、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第2の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第2の標的核酸サブセット上に供給される、請求項158に記載の試料。 - 前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記第2の標的核酸サブセットに結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識が除去される、請求項159に記載の試料。
- 前記試料が、第3の標識プローブセットを含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第3の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第3の標的核酸サブセット上に供給される、請求項160に記載の試料。 - 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項157~161のいずれか1項に記載の試料。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項157~162のいずれか1項に記載の試料。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項163に記載の試料。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項157~164のいずれか1項に記載の試料。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項157~164のいずれか1項に記載の試料。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項157~164のいずれか1項に記載の試料。
- (A)標的核酸を含む固定及び/または浸透化細胞を少なくとも1つ含む複数の固定及び/または浸透化細胞が上に固定化されているスライドと、
(B)複数の標的プローブセットであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションした標的プローブ対を含む前記複数の標的プローブセットと、
(C)プレ-プレ増幅剤対を複数含むプレ-プレ増幅剤セットであって、前記プレ-プレ増幅剤セットが、前記標的プローブセットの前記標的プローブ対のそれぞれに特異的な前記プレ-プレ増幅剤対を含み、前記プレ-プレ増幅剤対の各プレ-プレ増幅剤が、前記標的プローブセットの前記標的プローブ対の標的プローブの1つに対する結合部位を含み、前記プレ-プレ増幅剤が、プレ増幅剤に対する結合部位を複数含み、前記プレ-プレ増幅剤が、それぞれの特異的な前記標的プローブ対にハイブリダイゼーションされている前記プレ-プレ増幅剤セットと、
(D)複数のプレ増幅剤を含むプレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記プレ-プレ増幅剤セットのプレ-プレ増幅剤対の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ増幅剤が、それぞれの前記プレ-プレ増幅剤対にハイブリダイゼーションされている前記プレ増幅剤セットと、
(E)前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的な前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットの増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対に特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含み、前記増幅剤が、それぞれの前記プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記増幅剤セットと、
(F)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第1の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する前記第1の標識プローブセットと、
を含むスライドであって、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第1の標的核酸サブセット上に供給される前記スライド。 - 前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識が除去される、請求項168に記載のスライド。
- 前記スライドが、第2の標識プローブセットを含み、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第2の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第2の標的核酸サブセット上に供給される、請求項169に記載のスライド。 - 前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記第2の標的核酸サブセットに結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識が除去される、請求項170に記載のスライド。
- 前記スライドが、第3の標識プローブセットを含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第3の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第3の標的核酸サブセット上に供給される、請求項171に記載のスライド。 - 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項168~172のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項168~173のいずれか1項に記載のスライド。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項174に記載のスライド。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項168~175のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項168~175のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項168~175のいずれか1項に記載のスライド。
- 標的核酸をin situで検出するためのキットであって、
(A)プレ-プレ増幅剤対を複数含むプレ-プレ増幅剤セットであって、前記プレ-プレ増幅剤セットが、標的プローブセットの標的プローブ対のそれぞれに特異的な前記プレ-プレ増幅剤対を含み、前記プレ-プレ増幅剤対の各プレ-プレ増幅剤が、前記標的プローブセットの前記標的プローブ対の標的プローブの1つに対する結合部位を含み、前記プレ-プレ増幅剤が、プレ増幅剤に対する結合部位を複数含む前記プレ-プレ増幅剤セットと、
(B)複数のプレ増幅剤を含むプレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的なプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤のそれぞれが、前記プレ-プレ増幅剤セットのプレ-プレ増幅剤対の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含む前記プレ増幅剤セットと、
(C)前記プレ-プレ増幅剤対のそれぞれに特異的な前記プレ増幅剤のそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットの増幅剤が、前記プレ-プレ増幅剤対に特異的な前記プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含む前記増幅剤セットと、
(D)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第1の標識プローブセットが、第1の標的核酸サブセットを特異的に標識できる前記第1の標識プローブセットと、
(E)第2の標識プローブサブセットを複数含む第2の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識が、切断可能であり、前記第2の標識プローブセットが、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる第2の標的核酸サブセットを特異的に標識できる前記第2の標識プローブセットと、
を含む前記キット。 - 前記キットが、第3の標識プローブセットをさらに含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第3の標識プローブセットが、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる第3の標的核酸サブセットを特異的に標識できる、請求項179に記載のキット。
- 前記キットが、標的プローブセットを1つ以上含み、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を含む、請求項179または180に記載のキット。
- 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションできる標的プローブ対を2対以上含む、請求項181に記載のキット。
- 細胞を浸透化するための試薬を少なくとも1つ含む、請求項179~182のいずれか1項に記載のキット。
- 複数の標的核酸の検出方法であって、
(A)複数の核酸を含む細胞を含む試料を、複数の標的プローブセットと接触させることであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を含む、前記接触させることと、
(B)その試料をプレ-プレ増幅剤セットと接触させることであって、前記プレ-プレ増幅剤セットが、プレ-プレ増幅剤を複数含み、前記複数のプレ-プレ増幅剤が、前記標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ-プレ増幅剤を含み、前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける標的プローブ対に対する結合部位と、プレ増幅剤に対する複数の結合部位を含む、前記接触させることと、
(C)その試料をプレ増幅剤セットと接触させることであって、前記プレ増幅剤セットが、前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれに特異的なプレ増幅剤サブセットを複数含み、前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれが、複数のプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤サブセットの前記プレ増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ-プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含む、前記接触させることと、
(D)その試料を増幅剤セットと接触させることであって、前記増幅剤セットが、前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含み、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記プレ増幅剤サブセットの1つにおけるプレ増幅剤に対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含む、前記接触させることと、
(E)その試料を第1の標識プローブセットと接触させることであって、前記第1の標識プローブセットが、第1の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第1の標識プローブセットが、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(F)前記標的核酸に結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第1の標的核酸サブセットを検出することと、
(G)前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットから、前記標識を除去することと、
(H)その試料を第2の標識プローブセットと接触させることであって、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第2の標識プローブセットが、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(I)前記標的核酸に結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第2の標的核酸サブセットを検出することと、
を含み、
前記複数の標的核酸を検出する前記方法。 - (J)前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記第2の標的核酸セットに結合した前記第2の標識プローブセットから、前記標識を除去することと、
(K)その試料を第3の標識プローブセットと接触させることであって、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第3の標識プローブセットが、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識する、前記接触させることと、
(L)前記標的核酸に結合した前記第3の標識プローブセットの前記標識プローブを検出することによって、前記第3の標的核酸サブセットを検出することと、
をさらに含む、請求項184に記載の方法。 - 前記工程(J)~(L)を1回以上繰り返すことを含む、請求項185に記載の方法。
- 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項184~186のいずれか1項に記載の方法。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項184~187のいずれか1項に記載の方法。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項188に記載の方法。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項184~189のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項184~189のいずれか1項に記載の方法。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項184~189のいずれか1項に記載の方法。
- (A)複数の標的核酸を含む少なくとも1つの固定及び/または浸透化細胞と、
(B)複数の標的プローブセットであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションした標的プローブ対を含む前記複数の標的プローブセットと、
(C)複数のプレ-プレ増幅剤を含むプレ-プレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ-プレ増幅剤が、前記標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ-プレ増幅剤を含み、前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける標的プローブ対に対する結合部位と、プレ増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ-プレ増幅剤が、それぞれの特異的な前記標的プローブ対にハイブリダイゼーションされている前記プレ-プレ増幅剤セットと、
(D)前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれに特異的なプレ増幅剤サブセットを複数含むプレ増幅剤セットであって、前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれが、複数のプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤サブセットの前記プレ増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ-プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的なそれぞれの前記プレ-プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記プレ増幅剤セットと、
(E)前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記プレ増幅剤サブセットの1つにおけるプレ増幅剤に対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含み、前記増幅剤が、それぞれの前記プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記増幅剤セットと、
(F)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第1の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する前記第1の標識プローブセットと、
を含む、固定及び/または浸透化細胞の試料であって、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第1の標的核酸サブセット上に供給される前記試料。 - 前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識が除去される、請求項193に記載の試料。
- 前記試料が、第2の標識プローブセットを含み、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第2の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第2の標的核酸サブセット上に供給される、請求項194に記載の試料。 - 前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記第2の標的核酸サブセットに結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識が除去される、請求項195に記載の試料。
- 前記試料が、第3の標識プローブセットを含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第3の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第3の標的核酸サブセット上に供給される、請求項196に記載の試料。 - 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項193~197のいずれか1項に記載の試料。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項193~198のいずれか1項に記載の試料。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項199に記載の試料。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項193~200のいずれか1項に記載の試料。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項193~200のいずれか1項に記載の試料。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項193~200のいずれか1項に記載の試料。
- (A)標的核酸を含む固定及び/または浸透化細胞を少なくとも1つ含む複数の固定及び/または浸透化細胞が上に固定化されているスライドと、
(B)複数の標的プローブセットであって、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションした標的プローブ対を含む前記複数の標的プローブセットと、
(C)複数のプレ-プレ増幅剤を含むプレ-プレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ-プレ増幅剤が、前記標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ-プレ増幅剤を含み、前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける標的プローブ対に対する結合部位と、プレ増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ-プレ増幅剤が、それぞれの特異的な前記標的プローブ対にハイブリダイゼーションされている前記プレ-プレ増幅剤セットと、
(D)前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれに特異的なプレ増幅剤サブセットを複数含むプレ増幅剤セットであって、前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれが、複数のプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤サブセットの前記プレ増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ-プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含み、前記プレ増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的なそれぞれの前記プレ-プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記プレ増幅剤セットと、
(E)前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記プレ増幅剤サブセットの1つにおけるプレ増幅剤に対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含み、前記増幅剤が、それぞれの前記プレ増幅剤にハイブリダイゼーションされている前記増幅剤セットと、
(F)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第1の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第1の標的核酸サブセットを特異的に標識する前記第1の標識プローブセットと、
を含むスライドであって、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第1の標的核酸サブセット上に供給される前記スライド。 - 前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記第1の標的核酸サブセットに結合した前記第1の標識プローブセットの前記標識が除去される、請求項204に記載のスライド。
- 前記スライドが、第2の標識プローブセットを含み、前記第2の標識プローブセットが、第2の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第2の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第2の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第2の標的核酸サブセット上に供給される、請求項205に記載のスライド。 - 前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度よりも高く、かつ前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低い温度で、前記試料をインキュベートすることによって、前記第2の標的核酸サブセットに結合した前記第2の標識プローブセットの前記標識が除去される、請求項206に記載のスライド。
- 前記スライドが、第3の標識プローブセットを含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第3の標識プローブセットが、それぞれの前記増幅剤にハイブリダイゼーションして、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる複数の標的プローブセットにハイブリダイゼーションした第3の標的核酸サブセットを特異的に標識し、
前記ハイブリダイゼーションにより、検出可能な標識が前記第3の標的核酸サブセット上に供給される、請求項207に記載のスライド。 - 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を2対以上含む、請求項204~208のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記標的核酸が独立して、DNAまたはRNAである、請求項204~209のいずれか1項に記載のスライド。
- RNAである前記標的核酸が独立して、メッセンジャーRNA(mRNA)、マイクロRNA(miRNA)、リボソームRNA(rRNA)、ミトコンドリアRNA及びノンコーディングRNAからなる群から選択されている、請求項210に記載のスライド。
- 前記試料が、組織検体であるか、または組織検体から抽出したものである、請求項209~211のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記試料が、血液試料であるか、または血液試料から抽出したものである、請求項209~211のいずれか1項に記載のスライド。
- 前記試料が、細胞学的試料であるか、または細胞学的試料から抽出したものである、請求項209~211のいずれか1項に記載のスライド。
- 標的核酸をin situで検出するためのキットであって、
(A)複数のプレ-プレ増幅剤を含むプレ-プレ増幅剤セットであって、前記複数のプレ-プレ増幅剤が、標的プローブセットのそれぞれに特異的なプレ-プレ増幅剤を含み、前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれが、前記標的プローブセットの1つにおける標的プローブ対に対する結合部位と、プレ増幅剤に対する複数の結合部位を含む前記プレ-プレ増幅剤セットと、
(B)前記プレ-プレ増幅剤のそれぞれに特異的なプレ増幅剤サブセットを複数含むプレ増幅剤セットであって、前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれが、複数のプレ増幅剤を含み、前記プレ増幅剤サブセットの前記プレ増幅剤が、前記標的プローブセットに特異的な前記プレ-プレ増幅剤の1つに対する結合部位と、増幅剤に対する複数の結合部位を含む前記プレ増幅剤セットと、
(C)前記プレ増幅剤サブセットのそれぞれに特異的な増幅剤サブセットを複数含む増幅剤セットであって、前記増幅剤サブセットのそれぞれが、増幅剤を複数含み、前記増幅剤サブセットの前記増幅剤が、前記プレ増幅剤サブセットの1つにおけるプレ増幅剤に対する結合部位と、標識プローブに対する複数の結合部位を含む前記増幅剤セットと、
(D)第1の標識プローブサブセットを複数含む第1の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第1の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第1の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第1の標識プローブセットが、第1の標的核酸サブセットを特異的に標識できる前記第1の標識プローブセットと、
(E)第2の標識プローブサブセットを複数含む第2の標識プローブセットであって、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第2の標識プローブサブセットが、前記第1の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第2の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第2の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第2の標識プローブセットが、前記第1の標的核酸サブセットとは異なる第2の標的核酸サブセットを特異的に標識できる前記第2の標識プローブセットと、
を含む前記キット。 - 前記キットが、第3の標識プローブセットをさらに含み、前記第3の標識プローブセットが、第3の標識プローブサブセットを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に特異的であり、前記第3の標識プローブサブセットが、前記第1及び前記第2の標識プローブサブセットとは異なる増幅剤サブセットの増幅剤に特異的であり、前記標識プローブサブセットのそれぞれが、標識プローブを複数含み、前記標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識プローブが、標識と、前記増幅剤サブセットの1つにおける前記増幅剤に対する結合部位を含み、前記第3の標識プローブサブセットのそれぞれにおける前記標識が、前記第3の標識プローブサブセット間で識別可能であり、前記標識プローブ及び前記増幅剤の間の融解温度が、前記標的プローブ、前記プレ-プレ増幅剤、前記プレ増幅剤及び前記増幅剤の間の融解温度よりも低く、前記第3の標識プローブセットが、前記第1及び前記第2の標的核酸サブセットとは異なる第3の標的核酸サブセットを特異的に標識できる、請求項215に記載のキット。
- 前記キットが、標的プローブセットを1つ以上含み、前記標的プローブセットのそれぞれが、前記標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションする標的プローブ対を含む、請求項215または216に記載のキット。
- 前記標的プローブセットのそれぞれが、同じ標的核酸に特異的にハイブリダイゼーションできる標的プローブ対を2対以上含む、請求項217に記載のキット。
- 細胞を浸透化するための試薬を少なくとも1つ含む、請求項215~218のいずれか1項に記載のキット。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201962806574P | 2019-02-15 | 2019-02-15 | |
US62/806,574 | 2019-02-15 | ||
PCT/US2020/018241 WO2020168162A1 (en) | 2019-02-15 | 2020-02-14 | Methods for multiplex detection of nucleic acids by in situ hybridization |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022520663A true JP2022520663A (ja) | 2022-03-31 |
JPWO2020168162A5 JPWO2020168162A5 (ja) | 2023-02-17 |
Family
ID=72044135
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021548194A Pending JP2022520663A (ja) | 2019-02-15 | 2020-02-14 | in situハイブリダイゼーションによって、核酸をマルチプレックス検出する方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20220154262A1 (ja) |
EP (1) | EP3924501A4 (ja) |
JP (1) | JP2022520663A (ja) |
CN (1) | CN114555825A (ja) |
SG (1) | SG11202108618VA (ja) |
WO (1) | WO2020168162A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3874057A4 (en) * | 2018-11-01 | 2022-08-17 | Advanced Cell Diagnostics, Inc. | PROCEDURE FOR DIGITAL IN SITU MULTIPLEXING OF NUCLEIC ACIDS |
AU2020386050A1 (en) * | 2019-11-20 | 2022-06-23 | Advanced Cell Diagnostics, Inc. | Methods for sequential detection of nucleic acids |
WO2024124041A1 (en) * | 2022-12-07 | 2024-06-13 | Advanced Cell Diagnostics, Inc. | Multiplexed detection of nucleic acid targets |
Family Cites Families (21)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
NL154598B (nl) | 1970-11-10 | 1977-09-15 | Organon Nv | Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking. |
US3817837A (en) | 1971-05-14 | 1974-06-18 | Syva Corp | Enzyme amplification assay |
US3939350A (en) | 1974-04-29 | 1976-02-17 | Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation |
US3996345A (en) | 1974-08-12 | 1976-12-07 | Syva Company | Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays |
US4277437A (en) | 1978-04-05 | 1981-07-07 | Syva Company | Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay |
US4275149A (en) | 1978-11-24 | 1981-06-23 | Syva Company | Macromolecular environment control in specific receptor assays |
US4366241A (en) | 1980-08-07 | 1982-12-28 | Syva Company | Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays |
US5124246A (en) | 1987-10-15 | 1992-06-23 | Chiron Corporation | Nucleic acid multimers and amplified nucleic acid hybridization assays using same |
US5849481A (en) | 1990-07-27 | 1998-12-15 | Chiron Corporation | Nucleic acid hybridization assays employing large comb-type branched polynucleotides |
US5681697A (en) | 1993-12-08 | 1997-10-28 | Chiron Corporation | Solution phase nucleic acid sandwich assays having reduced background noise and kits therefor |
JP2001514859A (ja) * | 1997-09-04 | 2001-09-18 | バイエル コーポレイション | クエンチ可能な蛍光標識を有するオリゴヌクレオチドプローブおよびその使用方法 |
US20090081688A1 (en) | 2005-06-20 | 2009-03-26 | Advanced Cell Diagnostics | Methods of detecting nucleic acids in individual cells and of identifying rare cells from large heterogeneous cell populations |
CN104673903B (zh) | 2005-06-20 | 2018-11-13 | 领先细胞医疗诊断有限公司 | 检测单个细胞中的核酸和鉴定异质大细胞群中罕见细胞的方法 |
CA2640171C (en) | 2006-01-27 | 2014-10-28 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 6-modified bicyclic nucleic acid analogs |
US20130023433A1 (en) * | 2009-09-28 | 2013-01-24 | Yuling Luo | Methods of detecting nucleic acid sequences with high specificity |
CN107365847A (zh) | 2010-10-21 | 2017-11-21 | 领先细胞医疗诊断有限公司 | 用于原位检测核酸的超灵敏方法 |
DK3362462T3 (da) | 2015-10-12 | 2021-10-11 | Advanced Cell Diagnostics Inc | In situ-detektion af nukleotidvarianter i prøver med højt støjniveau, og sammensætninger og fremgangsmåder relateret dertil |
CA3031586A1 (en) * | 2016-07-27 | 2018-02-01 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Highly-multiplexed fluorescent imaging |
US11352660B2 (en) * | 2016-10-04 | 2022-06-07 | Howard Hughes Medical Institute | Materials and methods for serial multiplexed detection of RNA in cells and tissues |
ES2969671T3 (es) * | 2016-11-08 | 2024-05-21 | Harvard College | Obtención de imágenes con multiplexación usando MERFISH, microscopía de expansión y tecnologías relacionadas |
AU2020386050A1 (en) * | 2019-11-20 | 2022-06-23 | Advanced Cell Diagnostics, Inc. | Methods for sequential detection of nucleic acids |
-
2020
- 2020-02-14 EP EP20755307.4A patent/EP3924501A4/en active Pending
- 2020-02-14 SG SG11202108618VA patent/SG11202108618VA/en unknown
- 2020-02-14 CN CN202080027949.4A patent/CN114555825A/zh active Pending
- 2020-02-14 US US17/430,463 patent/US20220154262A1/en active Pending
- 2020-02-14 WO PCT/US2020/018241 patent/WO2020168162A1/en unknown
- 2020-02-14 JP JP2021548194A patent/JP2022520663A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3924501A4 (en) | 2022-11-23 |
CN114555825A (zh) | 2022-05-27 |
WO2020168162A1 (en) | 2020-08-20 |
EP3924501A1 (en) | 2021-12-22 |
SG11202108618VA (en) | 2021-09-29 |
US20220154262A1 (en) | 2022-05-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11535887B2 (en) | Methods for spatial analysis using targeted RNA depletion | |
US11898205B2 (en) | Increasing capture efficiency of spatial assays | |
US20230279477A1 (en) | Methods for spatial analysis using targeted rna capture | |
US9315854B2 (en) | Ultra sensitive method for in situ detection of nucleic acids | |
KR20190093197A (ko) | 표지된 핵산 조영제를 사용한 다중 이미지형성을 위한 개선된 방법 | |
EP4063519B1 (en) | Methods to further enhance signal amplification for the in situ detection of nucleic acids | |
JP2022520663A (ja) | in situハイブリダイゼーションによって、核酸をマルチプレックス検出する方法 | |
US20230002815A1 (en) | Methods for sequential detection of nucleic acids | |
US20150045251A1 (en) | Duplex chromogenic assay for in situ detection of nucleic acids | |
CA3117944A1 (en) | Methods and compositions for sequentially detecting targets | |
US20220119870A1 (en) | Methods for digital multiplexing of nucleic acids in situ | |
US20220177953A1 (en) | Detection of double stranded nucleic acids in situ and methods related thereto | |
US20230151415A1 (en) | Methods for detecting target nucleic acids by in situ hybridization and a kit thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230209 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230209 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20240124 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240130 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240426 |