JP2022515298A - 結合部位制御可能なｐｅｇ化生体分子の製造方法 - Google Patents

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Abstract

本発明の１つ態様によれば、ブロッカーを生体分子に結合する工程（１）と、生体分子をＰＥＧ化する工程（２）と、ブロッカーを生体分子から単離する工程（３）とを含む結合部位制御可能なＰＥＧ化生体分子の製造方法が提供される。本発明のさらに別の態様によれば、ＩＬ－２をＩＬ－２α受容体に結合させ、ＩＬ－２のα結合部位を閉鎖する工程（１）と、ＰＥＧ化し、すなわちＰＥＧをＩＬ－２に結合する工程（２）と、ＩＬ－２をＩＬ－２α受容体から単離する工程（３）とを含む結合部位制御可能なＰＥＧ化ＩＬ－２の製造方法が提供される。ＩＬ－２の結合部位を調整しコントロールすることにより、ＰＥＧ化の過程において、１つまたは２つのＰＥＧのみを加えて、ＩＬ－２をＩＬ－２ Ｒβγ系受容体に選択的に結合させる。

Description

本発明は、医薬技術分野に属し、具体的には、結合部位制御可能なＰＥＧ化生体分子の
製造方法に関する。
インターロイキン－２（ＩＬ－２）は、植物性血球凝集素（ＰＨＡ）などの分裂促進因
子がリンパ球増殖を刺激する際に産生される。近年、この因子及びその受容体に対する研
究は日増しに徹底させ、細胞免疫、体液免疫及び免疫調節において重要な役割を果たして
いることを発見した。特に、腫瘍免疫治療における作用と臨床的意義は多くの筆者から重
視されている。
ほとんどのＩＬ－２はＣＤ４＋のヘルパーＴ細胞（Ｔｈ）から産生され、少数がＣＤ８
＋や他の免疫細胞から産生される。これらの細胞はＩＬ－１の作用下で、ＩＬ－２を分泌
することができる。リンパ球から産生されるＩＬ－２は、表面にＩＬ－２受容体を有する
細胞に作用し、細胞を増殖させることで、その生物学的機能を発揮し、正常なＴ、Ｂリン
パ球、ＮＫ細胞の前駆細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬ）及びリンパ因子活性化キラー細
胞の前駆細胞などに作用することができる。ＩＬ－２の生物学的機能は、活性化後のＴ細
胞の生体外長期生存を維持し、そして、その生物学的機能活性を維持し、いくつかの腫瘍
抗原によって活性化されたＴ細胞はＩＬ－２の作用下で、その腫瘍細胞を殺傷する機能を
増強し、抗腫瘍作用を強化できることと、Ｂ細胞の増殖を促進し、分化し、抗体を産生す
ることと、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子及びγ－インターフェロンなどの分
泌を刺激し、リンパ球によるこれらの受容体の発現を促進し、サブ用量の分裂促進因子の
存在下で胸腺の増殖を維持し、ＩＬ－２受容体の発現を促進し、生体の免疫調節系に参与
し、免疫のバランス及び安定を維持することとを含む。
ＩＬ－２は最初の免疫治療薬であり、１９９２年及び１９９８年に遡って、米国のＦＤ
ＡがＩＬ－２薬物であるアルデスロイキン（Ａｌｄｅｓｌｅｕｋｉｎ）の末期腎臓がんと
悪性黒色腫への応用を許可し、有効率は１５％－２０％であり、１０％～１５％近くの患
者の生存期間を５年以上にすることを可能にしたが、臨床での使用量が非常に高いため、
例えば、重篤な低血圧や血管漏出症候群など、ＩＬ－２の副作用が非常に大きい。当時、
ＩＬ－２治療法を受ける患者は入院して、２４時間綿密に観察しなければならず、やや不
用意になると、生命の危険があった。したがって、巨大な副作用でＩＬ－２の使用が制限
され、多くの臨床医はそれを採用することを思いとどまらせている。。
ＩＬ－２の作用機序は、以下のとおりである：
ＩＬ－２は、主に抗原で刺激されたＣＤ４＋Ｔ細胞から産生され、ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｎ
Ｋ細胞とＤＣ細胞も分泌できる。高用量のＩＬ－２はＣＤ４＋Ｔ細胞の分化、ＣＤ８＋Ｔ
細胞とＮＫ細胞の増殖を促進し、これらの細胞の殺傷力を増加させることで、生体の免疫
反応を発揮させることができる。逆に、低用量のＩＬ－２は制御性Ｔ細胞の増殖を促進し
、免疫系を抑制する作用があるため、低用量のＩＬ－２も自己免疫疾患の治療に用いられ
ることも多い。
このような違いがあるのは、主に免疫細胞表面のＩＬ－２受容体の分布が異なり、ＩＬ
－２受容体においては、合わせて３つのサブユニットを有してα、β、γサブユニットを
構成するからである。ＣＤ８陽性Ｔ細胞とＮＫ細胞などのキラー細胞表面受容体は、主に
βとγサブユニット（ＩＬ－２Ｒβγ）から構成され、該受容体のＩＬ－２に対する親和
力が比較的に低く、高用量のＩＬ－２により活性化させる必要があるが、制御性Ｔ細胞表
面の多くは、α、β、γという３つのサブユニットからなる高親和性の抗体（ＩＬ－２Ｒ
αβγ）であり、低用量のＩＬ－２のほうがこれらを活性化しやすく、それにより免疫抑
制の役割を果たす。
２０年も前から、腎細胞腫と転移性悪性黒色腫の治療用薬として、ＩＬ－２は許可を受
けたが、ずっと免疫治療において重視されなくなり、あまり使用されていなかった。なぜ
かというと、主として以下の原因がある。一つ目は有効率が低く、ＩＬ－２のみを使用す
る場合、有効率は１５－２０％程度しか達成できないことである。二つ目は、ＩＬ－２機
能が両面性を有し、低用量のＩＬ－２により制御性Ｔ細胞の増殖を促進して免疫抑制を引
き起こし、どのようにこの２つの機能を調和させるかはまだ解決できないことである。三
つ目は、半減期が短く、数分間しかなく、持続的に効果を発揮するには、高用量で投与し
なければならないことである。四つ目は、副作用が重篤であり、過度に活性化された免疫
系が、自己臓器を攻撃して臓器不全を引き起こすおそれがあり、用量範囲が狭いことであ
る。ＩＬ－２の治療効果の向上や副作用の減少のために、科学者たちは様々な併用療法、
例えばＩＬ－２＋インターフェロン療法、ＩＬ－２＋リンパ因子活性化キラー（ＬＡＫ）
細胞療法、ＩＬ－２＋化学療法などを試したことがあったが、いずれも期待される治療効
果が得られなかった。
近年、正常のＩＬ－２分子上に化学修飾を加えることにより、ＩＬ－２の効果を維持す
るとともに、その使用濃度を低下させ、副作用を軽減させることができることが明らかに
なった。したがって、ＮＫＴＲ－２１４が誕生した。ＮＫＴＲ－２１４は神秘的なもので
はなく、本質的に２０年以上前に発売された従来の薬品ＩＬ－２のアップグレード版であ
り、副作用が更に低く、特異性が更に良く（Ｔｒｅｇ細胞ではなくＣＤ８を活性化しやす
くなる）、免疫系をより効率的に活性化することができる。具体的には、ＩＬ－２分子上
に、６つのポリエチレングリコール（ＰＥＧ）修飾を加えて不活性薬物が形成され、不思
議なことに、腫瘍患者に注射すると、これら６つのＰＥＧ修飾は徐々に脱落し、活性のあ
る２－ＰＥＧと１－ＰＥＧの形式が形成された。
ＮＫＴＲ－２１４はＰＥＧ化のＩＬ－２であり、その原薬の活性が非常に低い。６つの
ＰＥＧ鎖をＩＬ－２におけるＩＬ－２Ｒαβγ高親和性抗体αサブユニットを結合可能な
部位に巧みに連結されることにより、ＰＥＧ化後のＩＬ－２をキラー免疫細胞におけるＩ
Ｌ－２Ｒβγ系受容体に結合する傾向がより高まるようになる。ＰＥＧが１つずつ分解さ
れるにつれて、薬物の活性が緩やかに放出される。ＮＫＴＲ－２１４により、ＰＥＧダウ
ングレードを通じて薬物の徐放効果を達成し、それによって耐性を大幅に高めることと、
キラー免疫細胞に対する選択性を高め、微小環境における免疫細胞ＰＤ－１の発現量を増
加させるというＩＬ－２の腫瘍治療における２つの課題を解決した。
２０１５年１０月７日、Ｎｅｋｔａｒ社が、ナスダックで、米国食品医薬品局（ＦＤＡ
）にＮＫＴＲ－２１４の新薬申請を提出したと発表した。同社は、すでにＮＫＴＲ－２１
４の前臨床研究を完成し、２０１５年末に該薬物の一期と二期臨床研究を開始する予定で
あった。
前臨床研究では、従来のＩＬ－２治療薬であるアルデスロイキンに比べて、ＮＫＴＲ－
２１４は、単回投与後、ＮＫＴＲ－２１４腫瘍内のＡＵＣ値がアルデスロイキンの４００
倍近くになった。また、Ｎｅｋｔａｒ社が提供したデータによると、ＮＫＴＲ－２１４は
複数の前臨床動物モデルにおいていずれも持効性抗腫瘍免疫治療効果を示した。腫瘍浸潤
リンパ球モデルにおいて、ＮＫＴＲ－２１４で処理した後、ＣＤ８陽性Ｔ細胞とＣＤ４陽
性Ｔ細胞との比が、約４５０：１であり、強力な腫瘍殺傷作用を示した。そのため、ＮＫ
ＴＲ－２１４は、免疫刺激因子系抗がん薬に属し、抗体に近い治療効果を有し、Ｔ細胞の
成長を刺激することができ、それにより腫瘍に対する殺傷作用を実現する。前臨床研究の
結果から、該薬物は持効性抗腫瘍治療効果を有し、非常に期待性のある抗がん薬物である
ことを明らかにした。
しかしながら、実際の製造過程では、正常のＩＬ－２分子上に化学修飾により６つのＰ
ＥＧを加えてＮＫＴＲ－２１４を形成することで、ＩＬ－２のＩＬ－２Ｒβγ系受容体へ
の選択的な結合を実現した。本発明においては、出願人は、インビトロで生体分子の結合
部位を人間の介入により、暴露させたまま、ＰＥＧ化していない状態で、生体分子の体内
への標的性をより強くし、治療効果をより迅速に発揮させる結合部位制御可能なＰＥＧ化
生体分子の製造方法を提案しており、具体的には、ＩＬ－２を修飾する際に、ＩＬ－２の
結合部位を調整しコントロールすることにより、ＰＥＧ化のときに、１つまたは２つのＰ
ＥＧのみを加えて、ＩＬ－２をＩＬ－２Ｒβγ系受容体に選択的に結合させる。
本発明は、結合部位制御可能なＰＥＧ化生体分子の製造方法を提供し、具体的には、結
合部位制御可能なＰＥＧ化ＩＬ－２の製造方法を提供することを目的とする。
前述した目的を達成するために、本発明の用いる技術案は以下のとおりである。
結合部位制御可能なＰＥＧ化生体分子の製造方法であって、ブロッカーを、生体分子に
おける少なくとも１つの結合部位に結合する工程（１）と、生体分子をＰＥＧ化する工程
（２）と、ブロッカーを生体分子から単離する工程（３）とを含む。
前記工程（１）において、生体分子は、ブロッカーと特異的に結合する作用を有する生
体高分子または低分子から選択され、前記生体分子上には、少なくとも１つのブロッカー
用の結合部位を有する。ブロッカーおよび生体分子は、リガンドと受容体、ＤＮＡとその
相補的ＤＮＡまたはＲＮＡ、酵素とその基質、酵素とその競合阻害剤、酵素とその補酵素
因子、ビタミンとその特異的結合タンパク質、糖タンパク質とそれに対応するレクチンな
どの組み合わせから選択される。好ましくは、前記リガンドと受容体は、ホルモンと受容
体、薬物と受容体から選択される。
前記ＤＮＡとその相補的ＤＮＡまたはＲＮＡは、遺伝子プローブと塩基に相補的な遺伝
子配列から選択される。
前記酵素とその基質は、プロテアーゼとタンパク質、アミラーゼとデンプン、ヌクレア
ーゼと核酸、乳酸デヒドロゲナーゼと乳酸、オキサロ酢酸デカルボキシラーゼとオキサロ
酢酸から選択される。
前記酵素とその競合阻害剤は、コハク酸デヒドロゲナーゼとマロン酸、ジヒドロ葉酸シ
ンターゼとスルフォンアミド類薬物、コリンエステラーゼと有機リン農薬、スルフヒドリ
ル酵素とルイサイトから選択される。
前記酵素とその補酵素因子は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼとＭｎ２＋、カタラーゼお
よび酸化還元酵素とＦｅ２＋／Ｆｅ３＋から選択される。
前記ホルモンと受容体は、エストロゲンとエストロゲン受容体、アンドロゲンとアンド
ロゲン受容体、鉱質コルチコイドと鉱質コルチコイド受容体、甲状腺ホルモンと甲状腺ホ
ルモン受容体、プロゲステロンとプロゲステロン受容体から選択される。
前記薬物と受容体は、インスリン、インスリン様成長因子、上皮成長因子、血小板由来
成長因子およびリンパ因子とチロシンキナーゼ活性を有する受容体、アドレナリン、ドー
パミン、５－ヒドロキシトリプタミン、Ｍ－アセチルコリン、オピオイド類、プリン類、
プロスタグランジンおよびポリペプチドホルモン類薬物とＧ－タンパク質共役受容体から
選択される。
好ましくは、前記薬物と受容体は、葉酸と葉酸受容体、インターロイキンとインターロ
イキン受容体から選択される。
より好ましくは、前記薬物と受容体は、インターロイキン－２とインターロイキン－２
受容体から選択され、具体的には、インターロイキン－２受容体は、インターロイキンα
、β、γ受容体である。
前記ビタミンとその特異的結合タンパク質は、ビタミンＡとレチノール結合タンパク質
、ビタミンＤとビタミンＤ結合タンパク質、α－トコフェロールとα－トコフェロール輸
送タンパク質、ビタミンＫとリポタンパク質から選択される。
前記糖タンパク質とそれに対応するレクチンは、ホースラディッシュペルオキシダーゼ
とコンカナバリンＡ、レンズマメレクチンとエンドウレクチン、ジャカリン関連レクチン
とガラクトース、ヒユ科レクチンとＮ－アセチルガラクトサミン、二量体キチン結合レク
チンとＮ‐アセチルグルコサミンオリゴ糖、ＤＢＡレクチンと血液型Ａ物質、ハリエニシ
ダレクチンと血液型Ｏ物質２－Ｌ－フコースから選択される。
前記工程（２）において、ＰＥＧ化生体分子は、以下の式Iで表される構造を有する。
Figure 2022515298000002
式中、Ｘは、ＰＥＧと生体分子との間の結合基であり、－（ＣＨ２）ａ－、－（ＣＲ１
Ｒ２）ａ－、－（ＣＨ２）ａＮＨ－、－ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ａ－、－（ＣＨ２）ａＣＯＮ
Ｈ－、－（ＣＨ２）ａＣＯ－、－ＣＯ（ＣＨ２）ａ－、－（ＣＨ２）ａＣＯＮＨ（ＣＨ２
）ａ－、－（ＣＨ２）ａ－Ｓ－Ｓ－（ＣＨ２）ａ－、－（ＣＨ２）ａＣＯＯ（ＣＨ２）ａ
－、－（ＣＨ２）ａ－Ｓ－（ＣＨ２）ａ－から選択される１つ又は複数の組み合わせであ
る。
ａは、０～１０の整数である。好ましくは、前記ａは、０～５の整数であり、例えば、
０、１、２、３、４または５である。より好ましくは、０～３の整数である。
ｍは、１～１２の整数であり、具体的には１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０
、１１、または１２であってもよい。
Ｒ１およびＲ２は、独立して、－Ｈ、Ｃ１－６のアルキル基、－ＯＲ´、－ＮＨＲ´、
－Ｎ（Ｒ´）２、－ＣＮ、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＯＲ´、－ＣＯＯＲ´、－
ＯＣＯＲ´、－ＣＯＮＨＲ´、または－ＣＯＮ（Ｒ´）２から選択される１つ又は複数の
組み合わせである。好ましくは、Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１－３のアルキル
基から選択され、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基またはイソプロピル
基、－ＯＨ、Ｃ１－３のアルコキシ基、－ＮＨ２、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒおよび－Ｉから
選択される１つ又は複数の組み合わせであってもよい。より好ましくは、Ｈ、－ＣＨ３、
－ＯＨ、－ＯＣＨ３および－ＯＣＨ２ＣＨ３から選択される。本発明の一実施例では、Ｒ
１は－Ｈであり、Ｒ２は、－ＣＨ３、－ＯＨ、－ＯＣＨ３および－ＯＣＨ２ＣＨ３から選
択される。
Ｒ´は、－Ｈ、Ｃ１－６のアルキル基、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉから選択され
る。好ましくは、Ｒ´は、－ＨおよびＣ１－３のアルキル基から選択され、具体的には、
メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基またはイソプロピル基であってもよい。
好ましくは、前記Ｘは、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－
ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２Ｃ
Ｈ２ＮＨ－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＯ－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ－
、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＣＨ２ＣＯＮＨ－、－Ｃ
ＯＣＨ２－、－ＣＯＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｓ－Ｓ－
ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＯＯＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－から選択される１つ又は複
数の組み合わせである。
より好ましくは、前記Ｘは、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ
ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ－、－ＣＨ２ＣＯＯＣＨ２－から選択される。
前記ＰＥＧは、直鎖、Ｙ型、多分岐ポリエチレングリコール残基であり、例えば、モノ
メトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、直鎖両末端ＰＥＧ、Ｙ型ＰＥＧ、４－Ａ
ｒｍ分岐鎖ＰＥＧ、６－Ａｒｍ分岐鎖ＰＥＧまたは８－Ａｒｍ分岐鎖ＰＥＧなどを含む。
好ましくは、前記ＰＥＧの分子量は、１～１０ＫＤａであってもよく、例えば、１～１
０ＫＤａ（具体的には、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ＫＤａであって
もよい）、１０～５０ＫＤａ（具体的には、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０
、４５または５０ＫＤａであってもよい）、または５０～１００ＫＤａ（具体的には、５
０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００ＫＤａであっ
てもよい）などであり、さらに好ましくは、１０～５０ＫＤａである。
本発明の具体的な実施形態において、前記ＰＥＧは、一般式IIまたはIIIで表される構
造を有する直鎖ポリエチレングリコール残基である。
Figure 2022515298000003
Figure 2022515298000004
式中、ｐおよびｑは、独立して、１～２２８０の整数から選択され、好ましくは、２２
０～１１４０の整数である。
Ｙは、エンドキャップ基であり、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基（具体的には、メチル基、エ
チル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブ
チル基、ｎ－ペンチル基、ｎ－ヘキシル基などであってもよい）、Ｃ３－６シクロアルキ
ル基（具体的には、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキ
シル基などであってもよい）、Ｃ６－１０アリール基（具体的には、フェニル基、ナフチ
ル基などであってもよい）、－Ｌ－Ｔから選択される。
Ｌは、酸素（Ｏ）と末端基Ｔとの間の結合基であり、－（ＣＨ２）ｂ－、－（ＣＲ３Ｒ
４）ｂ－、－（ＣＨ２）ｂＮＨ－、－ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｂ－、－（ＣＨ２）ｂＣＯＮＨ
－および－ＣＯ（ＣＨ２）ｂ－から選択される１つ又は複数の組み合わせであり、ｂは０
～１０の整数である。
Ｒ３およびＲ４は、独立して、－Ｈ、Ｃ１－６のアルキル基、－ＯＲ´´、－ＮＨＲ´
´、－Ｎ（Ｒ´´）２、－ＣＮ、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＯＲ´、－ＣＯＯＲ
´´、－ＯＣＯＲ´´、－ＣＯＮＨＲ´´、および－ＣＯＮ（Ｒ´´）２から選択される
１つ又は複数の組み合わせである。
Ｒ´´は、－Ｈ、Ｃ１－６のアルキル基、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒおよび－Ｉから選択さ
れる。
好ましくは、Ｌは、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＯ
ＮＨ－、－ＮＨ－、－ＣＯ－、－ＣＯＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＣＨ２ＣＯＮＨ
－および－ＣＯＣＨ２－から選択される１つ又は複数の組み合わせである。
Ｔは、末端基であり、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－６シクロアルキル基、Ｃ６－１
０アリール基、単糖（具体的には、グルコース、フルクトース、ガラクトース、リボース
、デオキシリボースなどであってもよい）、オリゴ糖（具体的には、二糖（ショ糖、乳糖
など）、三糖（ゲンチアノース、ラフィノースなどであってもよい）残基から選択される
。
好ましくは、Ｔはメチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、シクロブ
チル基、シクロヘキシル基、ベンジル基、
Figure 2022515298000005
および
Figure 2022515298000006
から選択される。
好ましくは、前記Ｙはメチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、シク
ロブチル基、シクロヘキシル基、ベンジル基、
Figure 2022515298000007
および
Figure 2022515298000008
から選択される。
本発明の１つの好適な実施例において、前記Ｙはメチル基である。
本発明の別の好適な実施例において、前記Ｙは
Figure 2022515298000009
または
Figure 2022515298000010
である。
本発明の具体的な実施形態において、前記ＰＥＧは、一般式IVまたはVで表される構造
を有するＹ型ポリエチレングリコール残基である。
Figure 2022515298000011
Figure 2022515298000012
式中、ｉおよびｈは、独立して、１～１１４０の整数から選択され、好ましくは、１１
０～５７０の整数である。
Ｙは、上記一般式IIと同様の定義を有し、好ましくは、メチル基、エチル基、イソプロ
ピル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロヘキシル基、ベンジル基、
Figure 2022515298000013
および
Figure 2022515298000014
から選択され、より好ましくは、メチル基、
Figure 2022515298000015
および
Figure 2022515298000016
から選択される。
本発明の具体的な実施形態において、前記ＰＥＧは、一般式VIで表される構造を有する
多分岐ポリエチレングリコール残基である。
Figure 2022515298000017
式中、ｋは、１～７６０の整数であり、好ましくは、７０～３８０の整数である。
ｊは、３～８の整数である。
Ｑは、多分岐ポリエチレングリコールのコア分子であり、ペンタエリスリトール、オリ
ゴペンタエリスリトール、メチルグルコシド、スクロース、ジエチレングリコール、プロ
ピレングリコール、グリセロールおよびポリグリセロールの残基から選択され、好ましく
は、ペンタエリスリトール、ジペンタエリスリトールおよびトリポリペンタエリスリトー
ルから選択される。
好ましくは、前記多分岐ポリエチレングリコール残基は、以下の式VIIで表される構造
を有する。
Figure 2022515298000018
式中、Ｑ、ｋおよびｊは、上記一般式VIと同様の定義を有し、Ｙは、上記一般式IIと同
様の定義を有し、好ましくは、メチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基
、シクロブチル基、シクロヘキシル基、ベンジル基、
Figure 2022515298000019
および
Figure 2022515298000020
から選択され、より好ましくは、メチル基、
Figure 2022515298000021
および
Figure 2022515298000022
から選択される。
本発明の１つの好適な実施例において、前記多分岐ポリエチレングリコール残基は、以
下の式VIIIで表される構造を有する。
Figure 2022515298000023
式中、ｗは１～５７０の整数であり、好ましくは、５５～２８５の整数である。
ｔは１～１０の整数（具体的には、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０で
ある）であり、好ましくは、１～６の整数である。
ここで、Ｙは、上記一般式IIと同様の定義を有し、好ましくは、メチル基、エチル基、
イソプロピル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロヘキシル基、ベンジル基、
Figure 2022515298000024
および
Figure 2022515298000025
から選択され、より好ましくは、メチル基、
Figure 2022515298000026
および
Figure 2022515298000027
から選択される。
本発明の別の好適な実施例において、前記多分岐ポリエチレングリコール残基は、以下
の式IXで表される構造を有する。
Figure 2022515298000028
式中、ｓは１～２８０の整数であり、好ましくは、２８～１４０の整数である。
ｙは１～１０の整数であり、具体的には、１、２、３、４、５、６、７、８、９または
１０であってもよく、好ましくは、１～５の整数であり、より好ましくは、１～３の整数
である。
Ｙは、上記一般式IIと同様の定義を有し、好ましくは、メチル基、エチル基、イソプロ
ピル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロヘキシル基、ベンジル基、
Figure 2022515298000029
および
Figure 2022515298000030
から選択され、より好ましくは、メチル基、
Figure 2022515298000031
および
Figure 2022515298000032
から選択される。
前記工程（３）において、ブロッカーを生体分子から単離する方法は、遠心分離、沈殿
分離、ろ過分離、泡沫分離、抽出分離、膜分離、クロマトグラフィー分離、電気泳動分離
、グラジエント溶離のうちの１つまたは複数の組み合わせを含む。
本発明は、上記の方法により製造された結合部位制御可能なＰＥＧ化生体分子を提供す
る。
本発明は、上記の方法により製造された結合部位制御可能なＰＥＧ化生体分子と、薬学
的に許容される担体とを用いて製造された薬物組成物を提供する。
本発明は、疾患の治療および／または予防のための薬物の製造における、上記の方法に
より製造された結合部位制御可能なＰＥＧ化生体分子と、薬学的に許容される担体とを用
いて製造された薬物組成物の使用を提供する。
本発明の１つの好ましい実施形態において、前記生体分子はＩＬ－２であり、前記ブロ
ッカーはＩＬ－２α受容体（ＩＬ－２ Ｒα）である。
具体的には、本発明は、結合部位制御可能なＰＥＧ化ＩＬ－２の製造方法を提供し、該
方法は、ＩＬ－２をＩＬ－２α受容体に結合する工程（１）と、ＰＥＧ化し、すなわちＰ
ＥＧをＩＬ－２に結合する工程（２）と、ＩＬ－２をＩＬ－２α受容体から単離する工程
（３）とを含む。
好ましくは、本発明は、結合部位制御可能なＰＥＧ化ＩＬ－２の製造方法を提供し、該
方法は、ＩＬ－２α受容体親和カラムを調製する工程（１）と、ＩＬ－２を親和カラムに
てＩＬ－２α受容体に結合する工程（２）と、ＰＥＧ化し、すなわちＰＥＧをＩＬ－２に
結合する工程（３）と、ＩＬ－２をグラジエント溶離によりＩＬ－２α受容体から単離す
る（４）工程とを含む。
上記の方法により製造された結合部位制御可能なＰＥＧ化ＩＬ－２は、以下の式Xで表
される構造を有する。
Figure 2022515298000033
式中、ｎは１または２であり、好ましくは、ｎは１である。
ＸおよびＰＥＧの定義は、上記定義と同様である。
Ｘは、ＰＥＧとＩＬ－２との間の結合基であり、－（ＣＨ２）ａ－、－（ＣＲ１Ｒ２）
ａ－、－（ＣＨ２）ａＮＨ－、－ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ａ－、－（ＣＨ２）ａＣＯＮＨ－、
－（ＣＨ２）ａＣＯ－、－ＣＯ（ＣＨ２）ａ－、－（ＣＨ２）ａＣＯＮＨ（ＣＨ２）ａ－
、－（ＣＨ２）ａ－Ｓ－Ｓ－（ＣＨ２）ａ－、－（ＣＨ２）ａＣＯＯ（ＣＨ２）ａ－、－
（ＣＨ２）ａ－Ｓ－（ＣＨ２）ａ－から選択される１つ又は複数の組み合わせである。
ａは、０～１０の整数である。好ましくは、前記ａは、０～５の整数であり、例えば０
、１、２、３、４または５である。より好ましくは、０～３の整数である。
Ｒ１およびＲ２は、独立して、－Ｈ、Ｃ１－６のアルキル基、－ＯＲ´、－ＮＨＲ´、
－Ｎ（Ｒ´）２、－ＣＮ、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＯＲ´、－ＣＯＯＲ´、－
ＯＣＯＲ´、－ＣＯＮＨＲ´、または－ＣＯＮ（Ｒ´）２から選択される１つ又は複数の
組み合わせである。好ましくは、Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１－３のアルキル
基から選択され、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基またはイソプロピル
基、－ＯＨ、Ｃ１－３のアルコキシ基、－ＮＨ２、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒおよび－Ｉから
選択される１つ又は複数の組み合わせであってもよい。より好ましくは、Ｈ、－ＣＨ３、
－ＯＨ、－ＯＣＨ３および－ＯＣＨ２ＣＨ３から選択される。本発明の一実施例では、Ｒ
１は－Ｈであり、Ｒ２は、－ＣＨ３、－ＯＨ、－ＯＣＨ３および－ＯＣＨ２ＣＨ３から選
択される。
Ｒ´は、－Ｈ、Ｃ１－６のアルキル基、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉから選択され
る。好ましくは、Ｒ´は、－ＨおよびＣ１－３のアルキル基から選択され、具体的には、
メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基またはイソプロピル基であってもよい。
好ましくは、前記Ｘは、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－
ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２Ｃ
Ｈ２ＮＨ－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＯ－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ－
、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＣＨ２ＣＯＮＨ－、－Ｃ
ＯＣＨ２－、－ＣＯＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｓ－Ｓ－
ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＯＯＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－から選択される１つ又は複
数の組み合わせである。
より好ましくは、前記Ｘは、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ
ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ－、－ＣＨ２ＣＯＯＣＨ２－から選択される。
前記ＰＥＧは、直鎖、Ｙ型、多分岐ポリエチレングリコール残基であり、例えば、モノ
メトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、直鎖両末端ＰＥＧ、Ｙ型ＰＥＧ、４－Ａ
ｒｍ分岐鎖ＰＥＧ、６－Ａｒｍ分岐鎖ＰＥＧまたは８－Ａｒｍ分岐鎖ＰＥＧなどを含む。
好ましくは、前記ＰＥＧの分子量は、１～１００ＫＤａであってもよく、例えば、１～
１０ＫＤａ（具体的には、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０ＫＤａであっ
てもよい）、１０～５０ＫＤａ（具体的には、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４
０、４５または５０ＫＤａであってもよい）、または５０～１００ＫＤａ（具体的には、
５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５または１００ＫＤａであ
ってもよい）などであり、さらに好ましくは、１０～５０ＫＤａである。
本発明の具体的な実施形態において、前記ＰＥＧは、一般式IIまたはIIIで表される構
造を有する直鎖ポリエチレングリコール残基である。
Figure 2022515298000034
Figure 2022515298000035
式中、ｐおよびｑは、独立して、１～２２８０の整数から選択され、好ましくは、２２
０～１１４０の整数である。
Ｙは、エンドキャップ基であり、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基（具体的には、メチル基、エ
チル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブ
チル基、ｎ－ペンチル基、ｎ－ヘキシル基などであってもよい）、Ｃ３－６シクロアルキ
ル基（具体的には、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキ
シル基などであってもよい）、Ｃ６－１０アリール基（具体的には、フェニル基、ナフチ
ル基などであってもよい）、－Ｌ－Ｔから選択される。
Ｌは、酸素（Ｏ）と末端基Ｔとの間の結合基であり、－（ＣＨ２）ｂ－、－（ＣＲ３Ｒ
４）ｂ－、－（ＣＨ２）ｂＮＨ－、－ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｂ－、－（ＣＨ２）ｂＣＯＮＨ
－および－ＣＯ（ＣＨ２）ｂ－から選択される１つ又は複数の組み合わせであり、ｂは０
～１０の整数である。
Ｒ３およびＲ４は、独立して、－Ｈ、Ｃ１－６のアルキル基、－ＯＲ´´、－ＮＨＲ´
´、－Ｎ（Ｒ´´）２、－ＣＮ、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＯＲ´、－ＣＯＯＲ
´´、－ＯＣＯＲ´´、－ＣＯＮＨＲ´´および－ＣＯＮ（Ｒ´´）２から選択される１
つ又は複数の組み合わせである。
Ｒ´´は、－Ｈ、Ｃ１－６のアルキル基、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒおよび－Ｉから選択さ
れる。
好ましくは、Ｌは－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＯＮ
Ｈ－、－ＮＨ－、－ＣＯ－、－ＣＯＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ ＣＨ２ＣＯＮＨ
－および－ＣＯＣＨ２－から選択される１つ又は複数の組み合わせである。
Ｔは、末端基であり、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－６シクロアルキル基、Ｃ６－１
０アリール基、単糖（具体的には、グルコース、フルクトース、ガラクトース、リボース
、デオキシリボースなどであってもよい）、オリゴ糖（具体的には、二糖（ショ糖、乳糖
など）、三糖（ゲンチアノース、ラフィノースなどであってもよい）残基から選択される
。
好ましくは、Ｔはメチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、シクロブ
チル基、シクロヘキシル基、ベンジル基、
Figure 2022515298000036
および
Figure 2022515298000037
から選択される。
好ましくは、前記Ｙはメチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、シク
ロブチル基、シクロヘキシル基、ベンジル基、
Figure 2022515298000038
および
Figure 2022515298000039
から選択される。
本発明の１つの好適な実施例において、前記Ｙはメチル基である。

本発明の別の好適な実施例において、前記Ｙは
Figure 2022515298000040
または
Figure 2022515298000041
である。
本発明の具体的な実施形態において、前記ＰＥＧは、一般式IVまたはVで表される構造
を有するＹ型ポリエチレングリコール残基である。
Figure 2022515298000042
Figure 2022515298000043
式中、ｉおよびｈは、独立して、１～１１４０の整数から選択され、好ましくは、１１
０～５７０の整数である。
Ｙは、上記一般式IIと同様の定義を有し、好ましくは、メチル基、エチル基、イソプロ
ピル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロヘキシル基、ベンジル基、
Figure 2022515298000044
および
Figure 2022515298000045
から選択され、より好ましくは、メチル基、
Figure 2022515298000046
および
Figure 2022515298000047
から選択される。
本発明の具体的な実施形態において、前記ＰＥＧは、一般式VIで表される構造を有する
多分岐ポリエチレングリコール残基である。
Figure 2022515298000048
式中、ｋは、１～７６０の整数であり、好ましくは、７０～３８０の整数である。
ｊは、３～８の整数である。
Ｑは、多分岐ポリエチレングリコールのコア分子であり、ペンタエリスリトール、オリ
ゴペンタエリスリトール、メチルグルコシド、スクロース、ジエチレングリコール、プロ
ピレングリコール、グリセロールおよびポリグリセロールの残基から選択され、好ましく
は、ペンタエリスリトール、ジペンタエリスリトールおよびトリポリペンタエリスリトー
ルから選択される。
好ましくは、前記多分岐ポリエチレングリコール残基は、以下の式VIIで表される構造
を有する。
Figure 2022515298000049
式中、Ｑ、ｋおよびｊは、上記一般式VIと同様の定義を有し、Ｙは、上記一般式IIと同
様の定義を有し、好ましくは、メチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基
、シクロブチル基、シクロヘキシル基、ベンジル基、
Figure 2022515298000050
および
Figure 2022515298000051
から選択され、より好ましくは、メチル基、
Figure 2022515298000052
および
Figure 2022515298000053
から選択される。
本発明の１つの好適な実施例において、前記多分岐ポリエチレングリコール残基は、以
下の式VIIIで表される構造を有する。
Figure 2022515298000054
式中、ｗは１～５７０の整数であり、好ましくは、５５～２８５の整数である。
ｔは１～１０の整数（具体的には、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０で
ある）であり、好ましくは、１～６の整数である。
ここで、Ｙは、上記一般式IIと同様の定義を有し、好ましくは、メチル基、エチル基、
イソプロピル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロヘキシル基、ベンジル基、
Figure 2022515298000055
および
Figure 2022515298000056
から選択され、より好ましくは、メチル基、
Figure 2022515298000057
および
Figure 2022515298000058
から選択される。
本発明の別の好適な実施例において、前記多分岐ポリエチレングリコール残基は、以下
の式IXで表される構造を有する。
Figure 2022515298000059
式中、ｓは１～２８０の整数であり、好ましくは、２８～１４０の整数である。
ｙは１～１０の整数であり、具体的には、１、２、３、４、５、６、７、８、９または
１０であってもよく、好ましくは、１～５の整数であり、より好ましくは、１～３の整数
である。
Ｙは、上記一般式IIと同様の定義を有し、好ましくは、メチル基、エチル基、イソプロ
ピル基、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロヘキシル基、ベンジル基、
Figure 2022515298000060
および
Figure 2022515298000061
から選択され、より好ましくは、メチル基、
Figure 2022515298000062
および
Figure 2022515298000063
から選択される。
本発明は、上記の方法により製造された結合部位制御可能なＰＥＧ化ＩＬ－２と、薬学
的に許容される担体とを用いて製造された薬物組成物を提供する。
本発明は、疾患の治療および／または予防のための薬物の製造における、上記の方法に
より製造された結合部位制御可能なＰＥＧ化ＩＬ－２と、薬学的に許容される担体とを用
いて製造された薬物組成物の使用を提供する。
好ましくは、前記疾患は、腫瘍、自己免疫疾患、ウイルス性疾患または細菌性疾患であ
る。
前記腫瘍疾患は、腎細胞がん、悪性黒色腫、悪性血管内皮細胞腫、皮膚Ｔ細胞腫、卵巣
がん、乳がん、膀胱がん、肺がん、神経膠腫、神経芽細胞腫、肝がん、有毛細胞白血病、
髄様母細胞白血病、結腸がん、がん性胸腹腔液貯留または非ホジキンリンパ腫である。
前記自己免疫疾患は、リウマチ様関節炎、全身性エリテマトーデスまたはシェーグレン
症候群である。
前記ウイルスは、肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、単純ヘルペスウイルス（Ｈ
ＳＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ヒトヘルペスウイルス４型（ＥＢＶ）、コロ
ナウイルスおよびインフルエンザウイルスであり、より好ましくは、Ｂ型肝炎ウイルス（
ＨＢＶ）またはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）のような肝炎ウイルスである。
前記細菌性疾患は、ハンセン病または肺結核症である。
特に定義されない限り、本明細書で用いられる技術用語又は科学用語は、本発明が属す
る技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同様の意味を有している。
本明細書で用いられる用語「インターロイキン２」、「インターロイキン－２」、「Ｉ
Ｌ－２」は、本明細書の記述の中では同義的に交換可能に使用されることができる。例え
ば、天然インターロイキン２、組換えタンパク質（例えば、組換え型ヒトインターロイキ
ン２）、または同様に天然ＩＬ－２機能を有する突然変異体（例えば、「組換え型ヒトイ
ンターロイキン２（ＩＬ－２）突然変異体クローンおよびピキア酵母系での発現および精
製」、劉堰の博士学位論文に記載されている「ＩＬ－２－Ｃ１２５Ａ／Ｌ１８Ｍ／Ｌ１９
Ｓ」）であってもよい。組織培養、タンパク質合成、細胞培養（天然、組換え細胞または
突然変異体）方法により得られた生成物も含む。天然、組換えＩＬ－２または突然変異体
の抽出および単離は、当業者に知られている従来の方法によって実施される。
本明細書で使用されるように、「薬学的に許容される」用語は、ヒトへの投与後に生理
的適合性を有し、胃腸失調、例えば、めまいのようなアレルギー反応または同様の反応を
引き起こさないことを意味する。添加剤は、賦形剤、崩壊剤、接着剤、潤滑剤、懸濁剤、
安定剤などの何れかの１つであってもよい。賦形剤は、例えば、乳糖、マンニトール、イ
ソマルト、微結晶セルロース、ケイ化微結晶セルロース、粉末セルロースなどを含む。崩
壊剤は、例えば、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、クロスポビドン、デンプング
リコール酸ナトリウム、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム、デンプンなどを含
む。接着剤は、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒプロメロース、ポビドン、コ
ポビドン、予備ゼラチン化デンプンなどを含む。潤滑剤は、例えば、ステアリン酸、ステ
アリン酸マグネシウム、フマル酸ステアリルナトリウムなどを含む。湿潤剤は、例えば、
ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポロキサマー、ポリオキシエチレンヒマ
シ油誘導体などを含む。懸濁剤は、例えば、ヒプロメロース、ヒドロキシプロピルセルロ
ース、ポビドン、コポビドン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロー
スなどを含む。安定剤は、例えば、クエン酸、フマル酸、コハク酸などを含む。さらに、
本発明の薬物組成物は、凝固阻害剤、風味剤、乳化剤、防腐剤などのいずれかを含むこと
もできる。
本明細書で記載される薬物組成物は、錠剤（糖衣錠剤、フィルムコーティング錠、舌下
錠剤、口腔崩壊錠、口腔錠剤などを含む）、丸剤、粉剤、顆粒剤、カプセル剤（ソフトカ
プセル、マイクロカプセルを含む）、ロゼンジ、シロップ剤、液体、乳剤、懸濁剤、放出
制御製剤（例えば、瞬間放出製剤、徐放性製剤、徐放性マイクロカプセル）、噴霧剤、フ
ィルム剤（例えば、口腔内崩壊フィルム剤、口腔粘膜－接着膜剤））注射剤（例えば、皮
下注射、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射）、静脈点滴剤、経皮吸収製剤、軟膏剤、
ローション、貼付剤、坐剤（例えば、直腸坐剤、膣坐剤）、小丸薬、鼻製剤、肺製剤（吸
入剤）、点眼剤など、経口または非経口製剤（例えば、静脈内、筋肉内、皮下、器官内、
鼻内、皮内、点滴、脳内、直腸内などの投与形式、腫瘍の近傍への投与及び病変部への直
接投与）などであってもよい。好ましくは、前記薬物組成物は注射剤である。
好ましくは、本明細書で記載される薬学的に許容される添加剤は、例えば、等張無菌塩
溶液（リン酸二水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウ
ム、塩化カルシウム、塩化マグネシウムなど、またはこれらの塩の混合物）などの薬学的
に許容される注射剤添加剤、または無菌水または生理食塩水を適切に添加することによっ
て注射可能な溶質を形成する凍結乾燥組成物である。
本明細書で記載されるＰＥＧ化ＩＬ－２は、略称してＰＥＧ－ＩＬ－２と呼ぶことがで
きる。
ＩＬ－２の受容体親和カラムにおけるＰＥＧ化のクロマトグラフである。 ＰＥＧ－ＩＬ－２の電気泳動結果であり、図中の１がＰＥＧ－ＩＬ－２で、２がタンパク標準品である。 ＰＥＧ－ＩＬ－２のゲルクロマトグラフィー分離スペクトルである。 ＰＥＧ－ＩＬ－２のＳＤＳ－ＰＡＧＥ結果であり、図中の１がタンパク標準品で、２がＩＬ－２、３がピーク２、４がピーク１である。
以下、本発明の実施例の技術案について明確かつ完全に説明する。明らかなように、記
載の実施例は、本発明の一部の実施例にすぎず、全ての実施例ではない。本発明の実施例
に基づいて、当業者が創造的な労働をせずに取得するその他の実施例は、いずれも本発明
の保護範囲に含まれる。
実施例１：ＩＬ－２α受容体親和カラムの調製
Ｓ１：ＣＮＢｒ活性化アガロースゲル（ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＮＢｒ）０．８ｇを秤
量し、１２ｍｌの１ｍＭＨＣｌを加え、均一になるまで人工でゆっくり混合し、４℃の冷
蔵庫で１５ｍｉｎ反応させた。
Ｓ２：カップリングｂｕｆｆｅｒを調製し、すなわち、０．１Ｍ ＮａＨＣＯ３ ｐＨ
８．３と０．５Ｍ ＮａＣｌとを十分に混合し、１２ｍｌのカップリングｂｕｆｆｅｒを
取って、前のステップで膨潤した充填剤を洗浄した。
Ｓ３：ＩＬ－２α受容体４ｍｇを４ボトル取り、２ｍｌのカップリングｂｕｆｆｅｒに
溶解し、ステップ２で溶解した充填剤に加えた。
Ｓ４：室温下で２時間ゆっくり揺動した。
Ｓ５：５倍カラム体積のカップリングｂｕｆｆｅｒで余分な受容体を洗い落とした。
Ｓ６：０．１Ｍ ｐＨ８．０のトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ－
ＨＣｌ）を加え、室温２時間放置し、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌを捨てた。
Ｓ７：０．５Ｍ ＮａＣｌを含む５倍カラム体積の０．１Ｍ ｐＨ４．０酢酸／酢酸ナ
トリウム緩衝液で洗浄し、０．５Ｍ ＮａＣｌを含む５倍カラム体積の０．１Ｍ ｐＨ８
．０のＴｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液で洗浄した。
Ｓ８：ステップ６及びステップ７を３回繰り返した。
Ｓ９：０．１Ｍ ｐＨ８．０のＴｒｉｓ－ＨＣをｌ０．５ｍｌ加えた。
Ｓ１０：ｓｅｐｈａｒｏｓｅ樹脂を５ｍｌの空カラムに注入し、４℃の冷蔵庫で保管し
た。
実施例２：ＩＬ－２の受容体親和カラム上でのＰＥＧ化
Ｓ１：５ｍｌ受容体親和カラムをタンパク精製用クロマトグラフィーシステム（ＡＫＴ
Ａ Ｐｕｒｉｆｉｅｒ）に装着した。
Ｓ２：移動相を調製し、すなわち、Ａ相：５ｍＭ ＰＢＳ、ｐＨ７．０；Ｂ相：０．２
Ｍ ＮａＣｌを含む０．２Ｍ酢酸溶液。
Ｓ３：移動相の流量を０．４５ｍｌ／ｍｉｎに設定した。
Ｓ４：Ａ相をＵＶ曲線安定まで平衡化した。
Ｓ５：ＩＬ－２サンプルをサンプルループでサンプリングし、ＩＬ－２上のα受容体結
合部位をＩＬ－２α受容体に結合した。
Ｓ６：適量の分子量が２０ ＫＤａであるメトキシポリエチレングリコール－プロピオ
ン酸スクシンイミド（Ｍ－ＳＰＡ－２０Ｋ）をｐＨ８．０、２．５ ｍＭＰＢに溶解し、
その最終濃度を４０ｍｇ／ｍｌとし、２ｍｌのＭ－ＳＰＡ－２０Ｋを抽出してサンプルル
ープでサンプリングし、ＵＶ曲線が安定するまで平衡化した。
Ｓ７：ステップ６を３回繰り返した。
Ｓ８：グラジエント溶離を行い、クロマトグラムは、図１に示すとおりである。溶出ピ
ークを収集し、限外ろ過濃縮を経て、ドデシル硫酸ナトリウム－ポリアクリルアミドゲル
電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）により検出した。
実施例３：ＰＥＧ－ＩＬ－２ゲルろ過クロマトグラフィー単離
ゲルろ過クロマトグラフィーの条件：移動相：５ｍＭ ＰＢＳ、流量：０．７５ ｍｌ
／ｍｉｎ、カラム：ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００ ＧＬ
とした。
単離手順は以下のとおりである：
Ｓ１：クロマトグラフィーシステムをＵＶ曲線安定まで平衡化した。
Ｓ２：サンプリング後、溶出ピークを収集した。
Ｓ３：収集成分限外ろ過濃縮後、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ測定を行い、その結果が図３と図４
に示されている。
検出結果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥにより、図４のピーク１はＰＥＧ－ＩＬ－２で、ピーク２
はＩＬ－２であることが認められた。
実施例４：受容体親和性テスト
図４のピーク１（ＰＥＧ－ＩＬ－２）とピーク２（ＩＬ－２）サンプルをそれぞれ収集
し、濃縮後、ＳＰＲ解析装置を介して親和性テストを行った。受容体タンパクは、それぞ
れＩＬ－２α受容体、ＩＬ－２β受容体であり、試験の結果は以下の通りである。

Figure 2022515298000064

上表の結果が、本発明に係る方法により調製されたＰＥＧ－ＩＬ－２とＩＬ－２β受容体
との結合力が強いことを明らかにした。
なお、以上、本発明の技術案について、各実施例に基づき具体的に説明したが、本発明
は、上記実施形態に限定されるものではない。上記実施例は本発明を分かりやすく説明す
るために詳細に説明したものであり、当業者であれば、特許請求の範囲に記載された範疇
において、ある実施形態の技術特徴の一部または全部を他の実施形態の技術特徴に置き換
えることもでき、各種の変更例または修正例に想到し得ることは明らかであり、それらに
ついても当然に本発明の技術的範囲に属するものと了解される。

Claims (16)

  1. 結合部位制御可能なＰＥＧ化生体分子の製造方法であって、ブロッカーを、生体分子に
    おける少なくとも１つの結合部位に結合する工程（１）と、生体分子をＰＥＧ化する工程
    （２）と、ブロッカーを生体分子から単離する（３）工程とを含み、
    前記工程（１）において、生体分子は、ブロッカーと特異的に結合する作用を有する生
    体高分子または低分子から選択され、前記生体分子上には、少なくとも１つのブロッカー
    の結合部位を有し、
    ブロッカーおよび生体分子は、リガンドと受容体、ＤＮＡとその相補的ＤＮＡまたはＲ
    ＮＡ、酵素とその基質、酵素とその競合阻害剤、酵素とその補酵素因子、ビタミンとその
    特異的結合タンパク質、糖タンパク質とそれに対応するレクチンなどの組み合わせから選
    択され、
    好ましくは、前記リガンドと受容体は、ホルモンと受容体、薬物と受容体から選択され
    る、結合部位制御可能なＰＥＧ化生体分子の製造方法。
  2. 前記ＤＮＡとその相補的ＤＮＡまたはＲＮＡは、遺伝子プローブと塩基に相補的な遺伝
    子配列から選択され、
    前記酵素とその基質は、プロテアーゼとタンパク質、アミラーゼとデンプン、ヌクレア
    ーゼと核酸、乳酸デヒドロゲナーゼと乳酸、オキサロ酢酸デカルボキシラーゼとオキサロ
    酢酸から選択され、
    前記酵素とその競合阻害剤は、コハク酸デヒドロゲナーゼとマロン酸、ジヒドロ葉酸シ
    ンターゼとスルフォンアミド類薬物、コリンエステラーゼと有機リン農薬、スルフヒドリ
    ル酵素とルイサイトから選択され、
    前記酵素とその補酵素因子は、ピルビン酸デヒドロゲナーゼとＭｎ２＋、カタラーゼお
    よび酸化還元酵素とＦｅ２＋／Ｆｅ３＋から選択され、
    前記ホルモンと受容体は、エストロゲンとエストロゲン受容体、アンドロゲンとアンド
    ロゲン受容体、鉱質コルチコイドと鉱質コルチコイド受容体、甲状腺ホルモンと甲状腺ホ
    ルモン受容体、プロゲステロンとプロゲステロン受容体から選択され、
    前記薬物と受容体は、インスリン、インスリン様成長因子、上皮成長因子、血小板由来
    成長因子およびリンパ因子とチロシンキナーゼ活性を有する受容体、アドレナリン、ドー
    パミン、5-ヒドロキシトリプタミン、Ｍ－アセチルコリン、オピオイド類、プリン類、プ
    ロスタグランジンおよびポリペプチドホルモン類薬物とＧ－タンパク質共役受容体から選
    択され、好ましくは、前記薬物と受容体は、葉酸と葉酸受容体、ＩＬとＩＬ受容体から選
    択され、
    前記ビタミンとその特異的結合タンパク質は、ビタミンＡとレチノール結合タンパク質
    、ビタミンＤとビタミンＤ結合タンパク質、α－トコフェロールとα－トコフェロール輸
    送タンパク質、ビタミンＫとリポタンパク質から選択され、
    前記糖タンパク質とそれに対応するレクチンは、ホースラディッシュペルオキシダーゼ
    とコンカナバリンＡ、レンズマメレクチンとエンドウレクチン、ジャカリン関連レクチン
    とガラクトース、ヒユ科レクチンとＮ－アセチルガラクトサミン、二量体キチン結合レク
    チンとＮ‐アセチルグルコサミンオリゴ糖、ＤＢＡレクチンと血液型Ａ物質、ハリエニシ
    ダレクチンと血液型Ｏ物質２－Ｌ－フコースから選択される、ことを特徴とする請求項１
    に記載の製造方法。
  3. 前記薬物と受容体は、ＩＬ－２とＩＬ－２受容体から選択され、
    ＩＬ－２受容体は、ＩＬ－２α受容体、ＩＬ－２β受容体、ＩＬ－２γ受容体を含む、
    ことを特徴とする請求項２に記載の製造方法。
  4. 前記工程（３）において、ブロッカーを生体分子から単離する方法は、遠心分離、沈殿
    分離、ろ過分離、泡沫分離、抽出分離、膜分離、クロマトグラフィー分離、電気泳動分離
    、グラジエント溶離のうちの１つまたは複数種類の組み合わせを含む、ことを特徴とする
    請求項１に記載の製造方法。
  5. 前記工程（２）において、ＰＥＧ化生体分子は、以下の式Iで表される構造を有し、

    Figure 2022515298000065
    式中、ｍが、１～１２の整数であり、具体的には１、２、３、４、５、６、７、８、９
    、１０、１１、または１２であってもよく、
    Ｘは、ＰＥＧと生体分子との間の結合基であり、－（ＣＨ２）ａ－、－（ＣＲ１Ｒ２）
    ａ－、－（ＣＨ２）ａＮＨ－、－ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ａ－、－（ＣＨ２）ａＣＯＮＨ－、
    －（ＣＨ２）ａＣＯ－、－ＣＯ（ＣＨ２）ａ－、－（ＣＨ２）ａＣＯＮＨ（ＣＨ２）ａ－
    、－（ＣＨ２）ａ－Ｓ－Ｓ－（ＣＨ２）ａ－、－（ＣＨ２）ａＣＯＯ（ＣＨ２）ａ－、－
    （ＣＨ２）ａ－Ｓ－（ＣＨ２）ａ－から選択される１つ又は複数の組み合わせであり、
    ａが、０～１０の整数であり、
    Ｒ１およびＲ２は、独立して、－Ｈ、Ｃ１－６のアルキル基、－ＯＲ´、－ＮＨＲ´、
    －Ｎ（Ｒ´）２、－ＣＮ、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＯＲ´、－ＣＯＯＲ´、－
    ＯＣＯＲ´、－ＣＯＮＨＲ´、または－ＣＯＮ（Ｒ´）２から選択される１つ又は複数の
    組み合わせであり、
    Ｒ´は、－Ｈ、Ｃ１－６のアルキル基、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒまたは－Ｉから選択され
    、
    前記ＰＥＧは、直鎖、Ｙ型、多分岐ポリエチレングリコール残基であり、例えば、モノ
    メトキシポリエチレングリコール（ｍＰＥＧ）、直鎖両末端ＰＥＧ、Ｙ型ＰＥＧ、４－Ａ
    ｒｍ分岐鎖ＰＥＧ、６－Ａｒｍ分岐鎖ＰＥＧまたは８－Ａｒｍ分岐鎖ＰＥＧを含み、
    ＰＥＧの分子量が、１～１００ＫＤａである、ことを特徴とする請求項１に記載の製造
    方法。
  6. 前記ａが、０～５の整数であり、
    Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１－３のアルキル基、－ＯＨ、Ｃ１－３のアルコ
    キシ基、－ＮＨ２、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒおよび－Ｉから選択される１つ又は複数の組み
    合わせであり、
    Ｒ´は、－Ｈ、Ｃ１－３のアルキル基から選択され、
    前記ＰＥＧは、一般式IIまたはIIIで表される構造を有する直鎖ポリエチレングリコー
    ル残基であり、

    Figure 2022515298000066

    Figure 2022515298000067
    式中、ｐおよびｑは、独立して、１～２２８０の整数から選択され、
    または、前記ＰＥＧは、一般式IVまたはVで表される構造を有するＹ型ポリエチレング
    リコール残基であり、

    Figure 2022515298000068

    Figure 2022515298000069
    式中、ｉおよびｈは、独立して、１～１１４０の整数から選択され、
    または、前記ＰＥＧは、一般式VIで表される構造を有する多分岐ポリエチレングリコー
    ル残基であり、

    Figure 2022515298000070
    式中、ｋが、１～７６０の整数であり、ｊが、３～８の整数であり、
    Ｙは、エンドキャップ基であり、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基（具体的には、メチル基、エ
    チル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｎ－ブチル基、イソブチル基、ｔｅｒｔ－ブ
    チル基、ｎ－ペンチル基、ｎ－ヘキシル基などであってもよい）、Ｃ３－６シクロアルキ
    ル基（具体的には、シクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル基、シクロヘキ
    シル基などであってもよい）、Ｃ６－１０アリール基（具体的には、フェニル基、ナフチ
    ル基などであってもよい）、－Ｌ－Ｔから選択され、
    Ｌは、酸素（Ｏ）と末端基Ｔとの間の結合基であり、－（ＣＨ２）ｂ－、－（ＣＲ３Ｒ
    ４）ｂ－、－（ＣＨ２）ｂＮＨ－、－ＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｂ－、－（ＣＨ２）ｂＣＯＮＨ
    －および－ＣＯ（ＣＨ２）ｂ－から選択される１つ又は複数の組み合わせであり、ｂが、
    ０～１０の整数であり、
    Ｒ３およびＲ４は、独立して、－Ｈ、Ｃ１－６のアルキル基、－ＯＲ´´、－ＮＨＲ´
    ´、－Ｎ（Ｒ´´）２、－ＣＮ、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒ、－Ｉ、－ＣＯＲ´、－ＣＯＯＲ
    ´´、－ＯＣＯＲ´´、－ＣＯＮＨＲ´´または－ＣＯＮ（Ｒ´´）２から選択される１
    つ又は複数の組み合わせであり、
    Ｒ´´は、－Ｈ、Ｃ１－６のアルキル基、－Ｆ、－Ｃｌ、－Ｂｒおよび－Ｉから選択さ
    れ、
    Ｔは、末端基であり、Ｈ、Ｃ１－６アルキル基、Ｃ３－６シクロアルキル基、Ｃ６－１
    ０アリール基、単糖（具体的には、グルコース、フルクトース、ガラクトース、リボース
    、デオキシリボースなどであってもよい）、オリゴ糖（具体的には、二糖（ショ糖、乳糖
    など）、三糖（ゲンチアノース、ラフィノースなどであってもよい）残基から選択され、
    Ｑは、多分岐ポリエチレングリコールのコア分子であり、ペンタエリスリトール、オリ
    ゴペンタエリスリトール、メチルグルコシド、スクロース、ジエチレングリコール、プロ
    ピレングリコール、グリセロールおよびポリグリセロールの残基から選択される、ことを
    特徴とする請求項５に記載の製造方法。
  7. 前記Ｔは、メチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、シクロブチル基
    、シクロヘキシル基、ベンジル基、
    Figure 2022515298000071
    および
    Figure 2022515298000072
    から選択され、

    Ｌは、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＯＮＨ－、－Ｎ
    Ｈ－、－ＣＯ－、－ＣＯＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ ＣＨ２ＣＯＮＨ－および－
    ＣＯＣＨ２－から選択される１つ又は複数の組み合わせであり、

    前記Ｙは、メチル基、エチル基、イソプロピル基、シクロプロピル基、シクロブチル基
    、シクロヘキシル基、ベンジル基、
    Figure 2022515298000073
    および
    Figure 2022515298000074
    から選択され、
    Ｑは、ペンタエリスリトール、ジペンタエリスリトールおよびトリポリペンタエリスリ
    トールから選択される、ことを特徴とする請求項６に記載の製造方法。
  8. 前記多分岐ポリエチレングリコール残基は、以下の式VII、式VIIIまたは式IXで表され
    る構造を有し、

    Figure 2022515298000075

    Figure 2022515298000076
    式中、ｗが、１～５７０の整数であり、ｔが、１～１０の整数であり、

    Figure 2022515298000077
    式中、ｓが、１～２８０の整数であり、ｙが、１～１０の整数である、ことを特徴とす
    る請求項６または７に記載の製造方法。
  9. 前記ａが、０～３の整数であり、
    Ｒ１およびＲ２は、独立して、Ｈ、－ＣＨ３、－ＯＨ、－ＯＣＨ３および－ＯＣＨ２Ｃ
    Ｈ３から選択される、ことを特徴とする請求項６～８のいずれか１項に記載の製造方法。
  10. 前記Ｘは、－ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＯＮ
    ＨＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２ＮＨ－、
    －ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２－、－ＣＨ２ＣＯ－、－ＣＨ２ ＣＨ２ＣＯ－、－ＣＨ２
    ＣＨ２ＣＯＮＨＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２ＮＨ－、－ＣＨ２ＣＯＮＨ－、－ＣＯＣＨ２－
    、－ＣＯＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｓ－Ｓ－ＣＨ２－、
    －ＣＨ２ＣＯＯＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－から選択される１つ又は複数の組み合
    わせである、ことを特徴とする請求項６～９のいずれか１項に記載の製造方法。
  11. 結合部位制御可能なＰＥＧ化ＩＬ－２の製造方法であって、
    ＩＬ－２をＩＬ－２α受容体に結合する工程（１）と、
    ＰＥＧ化し、すなわちＰＥＧをＩＬ－２に結合する工程（２）と、
    ＩＬ－２をＩＬ－２α受容体から単離する工程（３）とを含む、ことを特徴とする請求項
    １～１０に記載の製造方法。
  12. 結合部位制御可能なＰＥＧ化ＩＬ－２の製造方法であって、
    ＩＬ－２α受容体親和カラムを調製する工程（１）と、
    ＩＬ－２を親和カラムにてＩＬ－２α受容体に結合する工程（２）と、
    ＰＥＧ化し、すなわちＰＥＧをＩＬ－２に結合する工程（３）と、
    ＩＬ－２をグラジエント溶離によりＩＬ－２α受容体から単離する工程（４）とを含む、
    ことを特徴とする請求項１１に記載の製造方法。
  13. 請求項１１または１２に記載の製造方法により製造された結合部位制御可能なＰＥＧ化
    ＩＬ－２であって、以下の式Xで表される構造を有し、
    Figure 2022515298000078
    式中、ＰＥＧおよびＸの範囲は、請求項５～１０に記載の範囲であり、ｎが、１または
    ２であり、好ましくは、ｎが１である、ＰＥＧ化ＩＬ－２。
  14. 請求項１１または１２に記載の製造方法により製造された結合部位制御可能なＰＥＧ化
    ＩＬ－２と、薬学的に許容される担体とを用いて製造された薬物組成物。
  15. 疾患の治療および／または予防のための薬物の製造における、請求項１１または１２に
    記載の製造方法により製造された結合部位制御可能なＰＥＧ化ＩＬ－２と、薬学的に許容
    される担体とを用いて製造された薬物組成物の使用。
  16. 前記疾患は、腫瘍、自己免疫疾患、ウイルス性疾患または細菌性疾患である、ことを特
    徴とする請求項１５に記載の使用。

JP2021556649A 2018-12-27 2019-12-27 結合部位制御可能なｐｅｇ化生体分子の製造方法 Pending JP2022515298A (ja)

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Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113121670B (zh) * 2020-01-15 2022-11-22 天津键凯科技有限公司 二取代peg化白细胞介素2及其制备方法、应用
CN113121671A (zh) * 2020-01-15 2021-07-16 天津键凯科技有限公司 一种制备结合位点可控的peg化生物分子的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001506670A (ja) * 1997-03-10 2001-05-22 イミュネックス・コーポレーション 部位保護されたタンパク質修飾
JP2012505901A (ja) * 2008-10-15 2012-03-08 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド 結合抗体の存在下における組換え血液凝固因子のｐｅｇ化
JP2017528444A (ja) * 2014-08-11 2017-09-28 デリニア， インコーポレイテッド 自己免疫疾患の処置のために調節性ｔ細胞を選択的に活性化させる改変ｉｌ−２変異体

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1012184B1 (en) * 1997-07-14 2007-10-10 Bolder Biotechnology, Inc. Derivatives of growth hormone and related proteins
DE602004025799D1 (de) * 2003-04-15 2010-04-15 Glaxosmithkline Llc Humane il-18 substitutionsmutanten und deren konjugate
ZA200601759B (en) * 2003-08-29 2007-04-25 Bayer Pharmaceuticals Corp Modified IL-4 mutein receptor antagonists
CN101584866A (zh) * 2008-05-21 2009-11-25 北京双鹭药业股份有限公司 聚乙二醇修饰的人白介素-2、其制备方法及应用
US20110150820A1 (en) * 2008-08-28 2011-06-23 Insight Biopharmaceuticals Ltd. Methods for covalently attaching a polymer to a methionine residue in proteins and peptides
CN101591649B (zh) * 2009-07-10 2013-02-13 江苏泰康生物医药有限公司 甲氧基聚乙二醇修饰的精氨酸脱亚氨酶及其制备与应用
US9724396B2 (en) * 2013-03-15 2017-08-08 Massachusetts Institute Of Technology Use of antagonists of growth hormone or growth hormone receptor to prevent or treat stress-sensitive psychiatric illness

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001506670A (ja) * 1997-03-10 2001-05-22 イミュネックス・コーポレーション 部位保護されたタンパク質修飾
JP2012505901A (ja) * 2008-10-15 2012-03-08 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド 結合抗体の存在下における組換え血液凝固因子のｐｅｇ化
JP2017528444A (ja) * 2014-08-11 2017-09-28 デリニア， インコーポレイテッド 自己免疫疾患の処置のために調節性ｔ細胞を選択的に活性化させる改変ｉｌ−２変異体

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BIOMATERIALS, vol. 22, JPN6022031522, 2001, pages 405 - 417, ISSN: 0005130257 *
THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY, vol. 263, no. 29, JPN6023033933, 1988, pages 15064 - 15070, ISSN: 0005130258 *

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