JP2022503961A - 操作されたＦｃドメインを有する抗ＣＤ４０結合分子およびその治療用途 - Google Patents

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Abstract

本開示は、操作されたヒトＩｇＧドメイン、例えば、ヒンジドメインに変異を有するヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４バリアントを含むＣＤ４０結合分子を提供し、これらは、１つ以上のＦｅｙ受容体に対して改変された結合活性を示す。本明細書には、ＣＤ４０結合分子を使用して対象における免疫応答を選択的に活性化または阻害するための方法も記載されている。

Description

関連出願
本出願は、２０１８年９月２８日に出願された国際特許出願第ＰＣＴ／ＣＮ２０１８／０１０８２８５号の利益を主張し、これは参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
表面抗原分類（Ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）４０（ＣＤ４０）は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の活性化に必要なＡＰＣの共刺激タンパク質である。ＣＤ４０は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリーのメンバーであり、Ｔ細胞依存性免疫グロブリンクラススイッチ、メモリーＢ細胞の発達、胚中心形成を含む、様々な免疫および炎症応答に不可欠である。さらに、ＣＤ４０は、Ｂリンパ腫などの腫瘍細胞の表面およびすべての固形腫瘍の約７０％に見られる。その活性化は、腫瘍特異的抗原に対する耐性を逆転させ、抗原特異的抗腫瘍免疫をもたらすことが示されている。
Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）は、抗体のＦｃ部分に結合できる免疫細胞表面タンパク質のファミリーである。Ｆｃγ受容体、Ｆｃα受容体、Ｆｃε受容体、および新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）を含み、それぞれＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、およびＩｇＧ抗体との異なる結合活性を有するいくつかの異なるタイプのＦｃ受容体がある。Ｆｃγ受容体サブファミリーには、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２ａ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２ｂ）、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２ｃ）、ＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６ａ）、およびＦｃγＲＩＩＩＢ（ＣＤ１６ｂ）が含まれる。ＦｃγＲＩはＩｇＧ１およびＩｇＧ３抗体に対して高い結合親和性を有するが、他のＦｃγＲはＩｇＧ抗体に対して低い結合親和性を有する。
様々なタイプのＦｃ受容体が、免疫系で様々な役割を果たす。例えば、ＮＫ細胞およびマクロファージに発現するＦｃγＲＩＩＩ受容体は、感染細胞または侵入病原体へ付着する抗体に結合し、免疫細胞の抗体媒介性食作用（ＡＤＣＰ）または抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘発し、それにより、感染した細胞または侵入病原体の排除につながる。一方、Ｂ細胞および樹状細胞に発現するＦｃγＲＩＩＢ受容体は、ＩｇＧ抗体に結合すると免疫細胞の活性を下方調節（ｄｏｗｎ ｒｅｇｕｌａｔｅ）する可能性がある。
活性化された免疫細胞を含む療法は、癌細胞などの病気の細胞を排除するための有望なアプローチである。しかしながら、そのような治療アプローチはしばしば安全上の懸念を引き起こす。例えば、過剰に活性化された免疫細胞は、望ましくない細胞毒性をもたらし、組織の損傷を引き起こす。したがって、効果的かつ安全な新しい免疫療法を開発することは非常に興味深いことである。
本開示は、所望のヒンジ柔軟性と、好ましいＦｃ受容体結合活性および／または選択性、例えば、ＦｃγＲＩＩＢに対して増強された結合親和性および／もしくは選択性または１つ以上のＦｃγＲ受容体に対して実質的に低下された結合親和性、とを示す、操作された（バリアント）Ｆｃ領域（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４分子の操作されたＦｃ領域）を含む、ＣＤ４０結合分子（例えば、ＣＤ４０アゴニストまたはＣＤ４０アンタゴニスト）の設計に、少なくとも部分的に、基づいている。そのようなＣＤ４０結合分子は、治療を必要とする対象における免疫応答を調節する（ｍｏｄｕｌａｔｅ）ために（例えば、免疫応答を選択的に増強または選択的に阻害するために）使用することができる。
したがって、本開示の一態様は、ＣＤ４０結合部分と、野生型Ｆｃ領域の対応物と比較して、位置２２０～３３１のうちのいずれか、例えば、位置２２８～３２９のうちのいずれかで少なくとも１つの変異を含む、操作されたＦｃ領域を含む抗体重鎖定常領域と、を含むＣＤ４０結合分子（例えば、ＣＤ４０アゴニストまたはＣＤ４０アンタゴニスト）を提供する。番号付けシステムは、ＥＵインデックスに従う。
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０結合部分は、ＣＤ４０Ｌの細胞外ドメインであり、これは、配列番号１４０のアミノ酸配列を含み得る。そのようなＣＤ４０結合部分を含むＣＤ４０結合分子は、ＣＤ４０アゴニストであり得る。
他の実施形態では、ＣＤ４０結合部分は、抗ＣＤ４０抗体フラグメントであり得る。一実施形態では、抗ＣＤ４０抗体フラグメントは、本明細書に記載の操作されたＦｃ領域のいずれかに連結される重鎖可変領域を含む重鎖と、軽鎖可変領域および軽鎖定常領域を含む軽鎖とを含む。
場合によっては、バリアントＦｃ領域は、野生型対応物と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対する結合親和性および／または選択性を増強させ得る。他の例では、バリアントＦｃ領域は、１つ以上のＦｃγＲ受容体に対して結合親和性を実質的に低下させ得る。いくつかの例では、バリアントＦｃ領域は、すべてのＦｃγＲ受容体に対する結合活性が低いか、まったくない。
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０結合分子は、ＩｇＧ１分子（例えば、ヒトＩｇＧ１分子）のバリアントＦｃ領域を含み得、これは、以下のうちの１つ以上を含む変異を含み得る：（ａ）位置２３３～２３８（例えば、２３４～２３８）内のアミノ酸置換もしくは欠失、（ｂ）位置２６５での置換、（ｃ）位置２６７での置換、（ｄ）位置２９７での置換、（ｅ）位置３２８での置換、位置３２９での置換；またはこれらの組み合わせ。あるいは、またはさらに、ＩｇＧ１分子のＦｃバリアントは、位置２２０、２２６、２２９、２３８、２７３、３２７、３３０、および／または３３１において１つ以上の変異を含み得る。一例では、変異は、位置２３３～２３６のうちのいずれかでの置換、位置２３６～２３８のうちの１つ以上での欠失、またはこれらの組み合わせを含む。例えば、位置２３３～２３５での置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、および／またはＬ２３５Ｅを含み得る。一例では、変異は、位置２３６～２３８のうちの１つ以上での欠失を含む。別の例では、位置２３８での置換は、Ｐ２３８Ｓであり得、位置２６５での置換は、Ｄ２６５Ａであり得、またはこれらの組み合わせであり得る。さらに別の例では、置換は位置２６７にあり、Ｓ２６７Ｅである。さらなる例では、置換は位置３２９にあり、Ｐ３２９Ｇである。追加の例では、変異は、位置２６５での置換、位置２９７での置換、またはこれらの組み合わせを含み得る。例えば、位置２６５での置換はＤ２６５Ａであり得、位置２９７での置換はＮ２９７Ａであり得る。さらに、位置２２０、２２６、２２９、３２７、３３０、および３３１での１つ以上の置換は、Ｃ２２０Ｓ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓであり得る。ヒトＩｇＧ１に由来する例示的なバリアントＦｃ領域は、Ｇ１ｍ１、Ｇ１ｍ２、Ｇ１ｍ１７、Ｇ１ｍ２７、Ｇ１ｍＡＡ、Ｇ１ｍＡＡＧ、Ｇ１Ｎ２９７Ａ、Ｇ１ｍ２４０、およびＧ１ｍ４０のうちの１つであり得る。
他の実施形態では、ＣＤ４０結合分子は、ＩｇＧ２分子（例えば、ヒトＩｇＧ２分子）のＦｃ領域を含み得、これは、以下のうちの１つ以上を含む変異を含み得る：（ａ）位置２３７および２３８のうちの１つ以上の欠失、（ｂ）位置２６５での置換、（ｂ）位置２６７での置換、（ｃ）位置２９７での置換、（ｄ）位置３２８での置換；またはこれらの組み合わせ。いくつかの例では、欠失は、位置２３７、または位置２３７および２３８の両方にある。あるいは、またはさらに、ＩｇＧ２分子のＦｃバリアントは、位置２３３～２３５、２３７、２３８、２６８、２７３、３３０、および３３１のうちの１つ以上での置換を含む少なくとも１つの変異を含み得る。例えば、位置２３３～２３５、２３７、２３８、２６８、２７３、３３０、および３３１のうちの１つ以上での置換は、Ｐ２３３Ｅ、Ｖ２３４Ａ、Ｖ２３４Ｌ、Ａ２３５Ｌ、Ａ２３５Ｓ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ２７３Ｅ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓであり得る。一例では、置換は位置２６７にあり、Ｓ２６７Ｅである。別の例では、置換は位置３２８にあり、Ｌ３２８Ｆである。追加の例では、変異は、位置２６５での置換、位置２９７としての置換、またはこれらの組み合わせを含み得る。例えば、位置２６５での置換はＤ２６５Ａであり得、位置２９７での置換はＮ２９７Ａであり得る。いくつかの特定の例では、ＩｇＧ２に由来するバリアントＦｃ領域は、Ｇ２ｍ１、Ｇ２ｍ１７、Ｇ２ｍ１８、Ｇ２ｍ１９、Ｇ２ｍ２０、Ｇ２ｍ２７、Ｇ２ｍ２８、Ｇ２ｍ２９、Ｇ２ｍ２０４０、Ｇ２ｍ４３、Ｇ２Ｇ４、Ｇ２ｍＡＡ、およびＧ２ｍ４０のうちの１つであり得る。
さらに他の実施形態では、ＣＤ４０結合分子は、ＩｇＧ４分子（例えば、ヒトＩｇＧ４分子）のＦｃ領域を含み得、これは、（ａ）位置２２８でのアミノ酸残基置換、（ｂ）任意の１つの位置２３５～２３８での置換もしくは欠失、（ｃ）位置２６５での置換、（ｄ）位置２６７での置換、（ｅ）位置２９７での置換、（ｅ）位置３２８での置換、またはこれらの組み合わせを含み得る。一例では、位置２２８での置換はＳ２２８Ｐである。別の例では、欠失は、位置２３６、２３７、および２３８のうちの１つ以上に（例えば、位置２３６および２３７の両方に）ある。あるいは、またはさらに、ＩｇＧ４分子のＦｃバリアントは、位置２３３～２３５、２３７、および２７３のうちの１つ以上での置換を含み得る。例えば、１つ以上の位置２３３～２３５、２３７、および２７３での置換は、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、およびＶ２７３Ｅであり得る。別の例では、位置２６７での置換はＳ２６７Ｅである。さらなる例では、位置３２８での置換はＬ３２８Ｆである。追加の例では、変異は、位置２６５での置換、位置２９７での置換、またはこれらの組み合わせを含み得る。例えば、位置２６５での置換はＤ２６５Ａであり得、位置２９７での置換はＮ２９７Ａであり得る。いくつかの特定の例では、バリアントＦｃ領域は、Ｇ４ｍ１、Ｇ４ｍ２、Ｇ４ｍ２０、Ｇ４ｍ２８、Ｇ４ｍ３０、Ｇ４ｍ４１、Ｇ４ｍ４２、Ｇ４ｍ４６、Ｇ４ｍＰＥ、Ｇ４ｍＡＡ、およびＧ４ｍ４０のうちの１つである。
本明細書に記載のバリアントＦｃ領域のいずれも、野生型Ｆｃ領域と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対して増強された結合活性および／または増強された選択性を示し得る。あるいは、本明細書に記載のバリアントＦｃ領域は、ＦｃγＲ受容体のいずれに対しても結合活性が低いか、または全くない可能性がある。場合によっては、バリアントＦｃ領域はＦｃγＲＩＩＢに対して減少した結合親和性を示す可能性がある。あるいは、またはさらに、バリアントＦｃ領域はＦｃＲｎに結合する。
本明細書に記載のＣＤ４０結合分子のいずれかにおける抗ＣＤ４０抗体フラグメントは、ヒト抗体またはヒト化抗体のものであり得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、アゴニスト抗体である。いくつかの例では、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１２８のものと同じ重鎖相補性決定領域（ＨＣ ＣＤＲ）、もしくは１９Ｇ６Ｄ６、３６Ｇ７Ｂ８、１３Ｆ１Ａ７、９Ｆ１２Ｄ９、および１７Ｃ５Ｃ２のうちのいずれか１つと同じ重鎖相補性決定領域（ＨＣ ＣＤＲ）ならびに／または、配列番号１２９のものと同じ軽鎖相補性決定領域（ＬＣ ＣＤＲ）もしくは１９Ｇ６Ｄ６、３６Ｇ７Ｂ８、１３Ｆ１Ａ７、９Ｆ１２Ｄ９、および１７Ｃ５Ｃ２のうちのいずれか１つと同じ軽鎖相補性決定領域（ＬＣ ＣＤＲ）、を含む。一例では、抗体フラグメントは、配列番号１２８の重鎖可変領域および／または配列番号１２９の軽鎖可変領域を含み得る。他の例では、抗体フラグメントは、１９Ｇ６Ｄ６、３６Ｇ７Ｂ８、１３Ｆ１Ａ７、９Ｆ１２Ｄ９、および１７Ｃ５Ｃ２のうちの１つと同じ重鎖可変領域および／または同じ軽鎖可変領域を含み得る。
さらに、本明細書で提供されるのは、本明細書に記載のＣＤ４０結合分子のいずれかおよび薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物である。そのような薬学的組成物は、対象における免疫応答を選択的に調節する（例えば、選択的に活性化または選択的に阻害する）ために使用され得る。
さらに別の態様では、本開示は、対象における免疫応答を選択的に調節する（例えば、選択的に活性化または選択的に阻害する）ための方法を提供し、この方法は、それを必要とする対象に本明細書に記載の有効量のＣＤ４０結合分子を投与することを含む。
本明細書に記載の方法のいずれにおいても、対象は、癌を患っているかまたは癌を患っている疑いのあるヒト患者であり得、ＣＤ４０結合分子は、ＣＤ４０アゴニストであり得る。例示的な癌には、肺癌、胃癌、肝臓癌、乳癌、皮膚癌、膵臓癌、脳癌、前立腺癌、膀胱癌、結腸直腸癌、肉腫、骨癌、リンパ腫、および血液癌が含まれる。
あるいは、対象は、免疫関連障害を患っているかまたは患っている疑いのあるヒト患者であり得、ＣＤ４０結合分子は、ＣＤ４０アンタゴニストであり得る。例示的な免疫障害には、自己免疫疾患、免疫不全、またはアレルギーが含まれる。いくつかの実施形態では、治療の標的疾患は、自己免疫疾患である。
さらに別の態様では、本開示は、１９Ｇ６Ｄ６、３６Ｇ７Ｂ８、１３Ｆ１Ａ７、９Ｆ１２Ｄ９、および１７Ｃ５Ｃ２からなる群から選択される参照抗体と同じＣＤ４０のエピトープに結合するか、またはエピトープへの結合が参照抗体と競合する、単離された抗ＣＤ４０抗体を提供する。
いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、これらは集合的に、参照抗体のそれぞれの重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一であり、かつ／または抗体は、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、および軽鎖ＣＤＲ３を含み、これらは集合的に、参照抗体のそれぞれの軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である。
別の実施形態では、重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、および重鎖ＣＤＲ３は、参照抗体のそれぞれの重鎖ＣＤＲと比較して、１０個以下のアミノ酸変異を集合的に含み、かつ／または軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、および軽鎖ＣＤＲ３は、参照抗体のそれぞれの軽鎖ＣＤＲと比較して、１０個以下のアミノ酸変異を集合的に含む。
一実施形態では、抗体は、参照抗体の重鎖可変領域と少なくとも８５％同一である重鎖可変領域、および／または参照抗体の軽鎖可変領域と少なくとも８５％同一である軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、参照抗体の重鎖可変領域と比較して１０個以下のアミノ酸残基変異、および／または参照抗体の軽鎖可変領域と比較して１０個以下のアミノ酸変異を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの例では、本明細書に開示される抗ＣＤ４０抗体は、参照抗体と同じ重鎖可変領域ＣＤＲおよび／または参照抗体と同じ軽鎖可変領域ＣＤＲを含み得る。
本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体のいずれも、ヒト抗体またはヒト化抗体であり得る。本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体のいずれかおよび薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物もまた本明細書に提供される。
さらに、本開示は、本明細書に記載のＣＤ４０結合分子のいずれかまたは抗ＣＤ４０抗体のいずれかを集合的にコードする単離された核酸または核酸のセットを特徴とする。核酸または核酸のセットは、１つまたは２つのベクター、例えば、発現ベクターに位置し得る。そのようなベクター（複数可）を含む宿主細胞もまた、本明細書で提供される。
本開示はまた、本明細書に記載のＣＤ４０結合分子のうちの１つ以上および／または本明細書に開示される抗ＣＤ４０抗体のうちの１つ以上を含む本明細書に記載の標的障害の治療に使用するための薬学的組成物、または標的障害の治療に使用するための医薬を製造するためのそのようなＣＤ４０結合分子および／または抗ＣＤ４０抗体の使用を特徴とする。
本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、以下の説明に記載されている。本発明の他の特徴または利点は、以下の図面およびいくつかの実施形態の詳細な説明から、ならびに添付の特許請求の範囲からも明らかであろう。
示されている様々な濃度で、ＣＨＯ－Ｋ１細胞に発現される様々なタイプのＦｃγ受容体に対して示される様々な抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの結合活性を示すグラフである。各ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．１μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、および３０μｇ／ｍｌである。右端の２つのバー（「二次のみ」および「ブランク」）が対照となる。図１Ａ：ＦｃγＲＩに対する結合親和性。 示されている様々な濃度で、ＣＨＯ－Ｋ１細胞に発現される様々なタイプのＦｃγ受容体に対して示される様々な抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの結合活性を示すグラフである。各ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．１μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、および３０μｇ／ｍｌである。右端の２つのバー（「二次のみ」および「ブランク」）が対照となる。図１Ｂ：ＦｃγＲＩＩに対する結合親和性。 示されている様々な濃度で、ＣＨＯ－Ｋ１細胞に発現される様々なタイプのＦｃγ受容体に対して示される様々な抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの結合活性を示すグラフである。各ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．１μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、および３０μｇ／ｍｌである。右端の２つのバー（「二次のみ」および「ブランク」）が対照となる。図１Ｃ：ＦｃγＲＩＩＢに対する結合親和性。 示されている様々な濃度で、ＣＨＯ－Ｋ１細胞に発現される様々なタイプのＦｃγ受容体に対して示される様々な抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの結合活性を示すグラフである。各ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．１μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、および３０μｇ／ｍｌである。右端の２つのバー（「二次のみ」および「ブランク」）が対照となる。図１Ｄ：ＦｃγＲＩＩＩＡに対する結合親和性。 ＩＬ８分泌によって示される多数の抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントによるレポーターアッセイにおけるヒトＣＤ４０活性化の刺激を示すグラフである。各ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．００３μｇ／ｍｌ、０．０１μｇ／ｍｌ、０．０３μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、および１０μｇ／ｍｌに対応する。 ＣＨＯ－Ｋ１細胞に発現する様々なタイプのＦｃγ受容体に対して示される、多数の抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの結合活性を示すグラフである。各抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．３μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、および３０μｇ／ｍｌである。右端の２つのバー（「二次のみ」および「ブランク」）が対照となる。図３Ａ：ＦｃγＲＩＩＢに対する結合親和性。 ＣＨＯ－Ｋ１細胞に発現する様々なタイプのＦｃγ受容体に対して示される、多数の抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの結合活性を示すグラフである。各抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．３μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、および３０μｇ／ｍｌである。右端の２つのバー（「二次のみ」および「ブランク」）が対照となる。図３Ｂ：ＦｃγＲＩに対する結合親和性。 ＣＨＯ－Ｋ１細胞に発現する様々なタイプのＦｃγ受容体に対して示される、多数の抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの結合活性を示すグラフである。各抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．３μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、および３０μｇ／ｍｌである。右端の２つのバー（「二次のみ」および「ブランク」）が対照となる。図３Ｃ：ＦｃγＲＩＩＡに対する結合親和性。 ＣＨＯ－Ｋ１細胞に発現する様々なタイプのＦｃγ受容体に対して示される、多数の抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの結合活性を示すグラフである。各抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．３μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、３μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ、および３０μｇ／ｍｌである。右端の２つのバー（「二次のみ」および「ブランク」）が対照となる。図３Ｄ：ＦｃγＲＩＩＩＡに対する結合親和性。 溶液および／またはＦｃγＲＩＩＢ発現細胞との共培養、における多数の抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントによるレポーターアッセイでのＩＬ８分泌により示されるヒトＣＤ４０活性化の刺激を示すグラフである。各ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．００３μｇ／ｍｌ、０．０１μｇ／ｍｌ、０．０３μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、および１μｇ／ｍｌに対応する。破線は、各アッセイのベースラインレポーターシグナルを示している。図４Ａ：ＩｇＧバリアントＩｇＧ１ｍ２、ＩｇＧ２ｍ２０、ＩｇＧ１ｍ４０、ＩｇＧ４ｍ４０。 溶液および／またはＦｃγＲＩＩＢ発現細胞との共培養、における多数の抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントによるレポーターアッセイでのＩＬ８分泌により示されるヒトＣＤ４０活性化の刺激を示すグラフである。各ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．００３μｇ／ｍｌ、０．０１μｇ／ｍｌ、０．０３μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、および１μｇ／ｍｌに対応する。破線は、各アッセイのベースラインレポーターシグナルを示している。図４Ｂ：ＩｇＧバリアントＩｇＧ１ｍ２４０、ＩｇＧ２ｍ２０４０、ＩｇＧ４ｍ４１、ＩｇＧ４ｍ４２、ＩｇＧ２ｍ４３、ＩｇＧ２ｍ４４、およびＩｇＧ４ｍＡＡ。 溶液および／またはＦｃγＲＩＩＢ発現細胞との共培養、における多数の抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントによるレポーターアッセイでのＩＬ８分泌により示されるヒトＣＤ４０活性化の刺激を示すグラフである。各ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．００３μｇ／ｍｌ、０．０１μｇ／ｍｌ、０．０３μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、および１μｇ／ｍｌに対応する。破線は、各アッセイのベースラインレポーターシグナルを示している。図４Ｃ：ＩｇＧバリアントＩｇＧ１Ｎ２９７Ａ、ＩｇＧ２ｍＡＡ、ＩｇＧ２Ｇ４、ＩｇＧ４ｍＰＥ、およびＩｇＧ１ｍＡＡＧ。 溶液および／またはＦｃγＲＩＩＢ発現細胞との共培養、における多数の抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントによるレポーターアッセイでのＩＬ８分泌により示されるヒトＣＤ４０活性化の刺激を示すグラフである。各ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．００３μｇ／ｍｌ、０．０１μｇ／ｍｌ、０．０３μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、および１μｇ／ｍｌに対応する。破線は、各アッセイのベースラインレポーターシグナルを示している。図４Ｄ：ＩｇＧバリアントＩｇＧ１ｍ４７、ＩｇＧ１ｍ４８、ＩｇＧ１ｍ４９、ＩｇＧ１ｍ５０、およびＩｇＧ１ｍＡＡ。 溶液および／またはＦｃγＲＩＩＢ発現細胞との共培養、における多数の抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントによるレポーターアッセイでのＩＬ８分泌により示されるヒトＣＤ４０活性化の刺激を示すグラフである。各ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．００３μｇ／ｍｌ、０．０１μｇ／ｍｌ、０．０３μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、および１μｇ／ｍｌに対応する。破線は、各アッセイのベースラインレポーターシグナルを示している。図４Ｅ：ＩｇＧバリアントＩｇＧ４ｍ４６およびＩｇＧ４ｍ３０。 溶液および／またはＦｃγＲＩＩＢ発現細胞との共培養、における多数の抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントによるレポーターアッセイでのＩＬ８分泌により示されるヒトＣＤ４０活性化の刺激を示すグラフである。各ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．００３μｇ／ｍｌ、０．０１μｇ／ｍｌ、０．０３μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、０．３μｇ／ｍｌ、および１μｇ／ｍｌに対応する。破線は、各アッセイのベースラインレポーターシグナルを示している。図４Ｆ：ＩｇＧバリアントＩｇＧ１ｍ２７、ＩｇＧ２ｍ１９、ＩｇＧ２ｍ１、ＩｇＧ４ｍ２およびＩｇＧ４ｍ２０。 溶液における（図５Ａおよび５Ｂ）またはヒトＦｃγＲＩＩＢを発現するＣＨＯ細胞の共培養における（図５Ｃおよび５Ｄ）、抗体による健康なドナーからのヒト樹状細胞（ＤＣ）の活性化で示される、例示的な抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの活性を示す棒グラフのセットを含む。ＤＣ活性化は、培養上清中のＩＬ－８のシグナル棒グラフによって示される。 溶液における（図５Ａおよび５Ｂ）またはヒトＦｃγＲＩＩＢを発現するＣＨＯ細胞の共培養における（図５Ｃおよび５Ｄ）、抗体による健康なドナーからのヒト樹状細胞（ＤＣ）の活性化で示される、例示的な抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの活性を示す棒グラフのセットを含む。ＤＣ活性化は、培養上清中のＩＬ－８のシグナル棒グラフによって示される。 溶液における（図５Ａおよび５Ｂ）またはヒトＦｃγＲＩＩＢを発現するＣＨＯ細胞の共培養における（図５Ｃおよび５Ｄ）、抗体による健康なドナーからのヒト樹状細胞（ＤＣ）の活性化で示される、例示的な抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの活性を示す棒グラフのセットを含む。ＤＣ活性化は、培養上清中のＩＬ－８のシグナル棒グラフによって示される。 溶液における（図５Ａおよび５Ｂ）またはヒトＦｃγＲＩＩＢを発現するＣＨＯ細胞の共培養における（図５Ｃおよび５Ｄ）、抗体による健康なドナーからのヒト樹状細胞（ＤＣ）の活性化で示される、例示的な抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの活性を示す棒グラフのセットを含む。ＤＣ活性化は、培養上清中のＩＬ－８のシグナル棒グラフによって示される。 ＣＨＯ－Ｋ１細胞に発現するヒトＣＤ４０に対して示される、抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの結合活性を示すグラフである。各ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、および１０μｇ／ｍｌである。右端の３つのバー（「ハーセプチン」、「二次のみ」、および「ブランク」）が対照となる。図６Ａ：示されるように、多数の抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアント。 ＣＨＯ－Ｋ１細胞に発現するヒトＣＤ４０に対して示される、抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの結合活性を示すグラフである。各ＩｇＧバリアントの濃度は、左から右に、０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、および１０μｇ／ｍｌである。右端の３つのバー（「ハーセプチン」、「二次のみ」、および「ブランク」）が対照となる。図６Ｂ：示されるように、多数の抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアント。 マウス腫瘍モデルに示される様々な抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの腫瘍成長曲線を示すグラフである。図７Ａ：ホモ接合体Ｂ－ｈＣＤ４０ Ｃ５７ＢＬ６マウスにおける抗体処理後の様々な時点での腫瘍体積変化を示すグラフ。腫瘍サイズの平均±ＳＥＭを示す。 マウス腫瘍モデルに示される様々な抗ＣＤ４０抗体３８３ ＩｇＧバリアントの腫瘍成長曲線を示すグラフである。図７Ｂ：ホモ接合体Ｂ－ｈＣＤ４０ Ｃ５７ＢＬ６マウスにおいて示される、抗体の処理後の血清アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ、肝損傷時に血清中に放出される肝酵素）レベルを示すグラフである。腫瘍サイズの平均±ＳＥＭを示す。
本明細書で提供されるのは、ＣＤ４０結合部分（例えば、ＣＤ４０リガンドの細胞外ドメインまたは抗ＣＤ４０抗体フラグメント）および操作された（バリアント）Ｆｃ領域を含むＣＤ４０結合分子（例えば、ＣＤ４０アゴニストまたはＣＤ４０アンタゴニスト）であり、１つ以上のＦｃ受容体に対して改変された結合親和性および／または特異性、例えば、ＦｃγＲＩＩＢに対して増強した結合親和性、ＦｃγＲＩＩＢに対して増強した結合特異性、および／または１つ以上のＦｃγＲ受容体に対して実質的に低下した結合親和性（例えば、すべてのＦｃγＲ受容体に対して低い結合活性または結合活性がない）、を有し得る。
このようなＣＤ４０結合分子は、予想外の優れた治療活性を示すことが期待されている。例えば、ＦｃγＲＩＩＢに対して増強した結合親和性を有するバリアントＦｃ領域を有するＣＤ４０結合分子は、増強されたアゴニスト活性を示すことが期待され、ＦｃγＲＩＩＢに対して増強した結合特異性を有するバリアントＦｃ領域を有するＣＤ４０結合分子は、野生型対応物と比較してより高い腫瘍選択性を示すことが期待される。さらに、ＦｃγＲ受容体に対して低い結合親和性を有するまたは全く有しないＣＤ４０結合分子は、腫瘍微小環境においてＣＤ４０陽性免疫細胞を活性化し、かつ／または免疫障害においてＣＤ４０陽性免疫細胞を遮断するのに役立つ。
したがって、本明細書に記載されているのは、ＣＤ４０結合部分と、ＩｇＧ分子（例えば、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、およびヒトＩｇＧ４分子などのＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４分子）のものであり得る操作されたＦｃ領域（Ｆｃバリアント）とを含むＣＤ４０結合分子を設計するためのアプローチ、および免疫応答を調節するためのそれらの使用である。そのようなＦｃバリアントは、野生型対応物と比較して、ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）に対して増強された結合親和性および／またはＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）などの他のＦｃ受容体と比較して増強された結合選択性を有し得る。あるいは、そのようなＦｃバリアントは、野生型対応物と比較して、１つ以上のＦｃγＲ受容体（例えば、すべてのＦｃγＲ受容体）に対して実質的に低下した結合親和性を有し得る。「実質的に低下した」とは、ＦｃバリアントのＦｃγＲ受容体に対する結合親和性が、同じＦｃγＲ受容体に対する野生型対応物の結合親和性より少なくとも６０％低い（例えば、７０％低い、８０％低い、９０％低い、９５％低い、９８％低い、または９９％低い）ことを意味する。いくつかの例では、Ｆｃバリアントは、すべてのＦｃγＲ受容体に対して低い結合親和性を有し得るかまたは全く結合親和性を有し得ない、すなわち、結合親和性が従来のアッセイによって検出できないか、または結合親和性が実質的に低く、有意な生物活性が誘発されない。
Ｉ．ＣＤ４０結合分子
本明細書に記載されているのは、本明細書に記載の、１つ以上のＦｃ受容体に対して改変された結合親和性および／または特異性を有する操作されたＦｃ領域に連結されたＣＤ４０結合部分を含むＣＤ４０結合分子である。このようなＣＤ４０結合分子は、細胞表面ＣＤ４０に結合すると、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌによって媒介されるシグナル伝達を誘発することができるＣＤ４０アゴニストになり得る。あるいは、本明細書に記載のＣＤ４０結合分子は、細胞表面ＣＤ４０に結合するとＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌによって媒介されるシグナル伝達を阻害することができる、ＣＤ４０アンタゴニストである。ＣＤ４０結合分子は、治療を必要とする対象に投与された場合、免疫応答を調節する（選択的に調節する）のに有用である。
（ｉ）ＣＤ４０結合部分
本明細書に記載のＣＤ４０結合部分は、ＣＤ４０、例えばヒトＣＤ４０、に結合する任意のペプチドまたはポリペプチドであり得る。ＣＤ４０は当技術分野でよく知られている免疫細胞受容体である。例えば、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ２５９４２．１およびＡＡＢ０８７０５．１は、それぞれヒトおよびマウスＣＤ４０に関する情報を提供する。以下に提供されるのは、例示的なヒトＣＤ４０ポリペプチドのアミノ酸配列である。
ヒトＣＤ４０：
ＭＶＲＬＰＬＱＣＶＬＷＧＣＬＬＴＡＶＨＰＥＰＰＴＡＣＲＥＫＱＹＬＩＮＳＱＣＣＳＬＣＱＰＧＱＫＬＶＳＤＣＴＥＦＴＥＴＥＣＬＰＣＧＥＳＥＦＬＤＴ
ＷＮＲＥＴＨＣＨＱＨＫＹＣＤＰＮＬＧＬＲＶＱＱＫＧＴＳＥＴＤＴＩＣＴＣＥＥＧＷＨＣＴＳＥＡＣＥＳＣＶＬＨＲＳＣＳＰＧＦＧＶＫＱＩＡＴＧＶＳＤ
ＴＩＣＥＰＣＰＶＧＦＦＳＮＶＳＳＡＦＥＫＣＨＰＷＴＳＣＥＴＫＤＬＶＶＱＱＡＧＴＮＫＴＤＶＶＣＧＰＱＤＲＬＲＡＬＶＶＩＰＩＩＦＧＩＬＦＡＩＬＬ
ＶＬＶＦＩＫＫＶＡＫＫＰＴＮＫＡＰＨＰＫＱＥＰＱＥＩＮＦＰＤＤＬＰＧＳＮＴＡＡＰＶＱＥＴＬＨＧＣＱＰＶＴＱＥＤＧＫＥＳＲＩＳＶＱＥＲＱ（配列番号１４１）
他の種からのＣＤ４０ポリペプチドは当技術分野で知られており、ヒト配列またはマウス配列のいずれかをクエリとして使用して、公的に利用可能な遺伝子データベース、例えば、ＧｅｎＢａｎｋから取得することができる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ４０結合部分は、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０ＬまたはＣＤ１５４）の細胞外ドメインを含むポリペプチドであり得る。ＣＤ４０Ｌは、Ｔ細胞の表面に発現する膜糖タンパク質である。この分子は、Ｂ細胞の増殖およびサイトカインの存在下での免疫グロブリンの分泌を刺激することが示されている。さらに、ＣＤ４０Ｌは末梢血単球でサイトカイン産生と殺腫瘍活性を誘導し得る。ＣＤ４０Ｌの配列およびその細胞外ドメインは当技術分野でよく知られている。例えば、ＮＣＢＩ ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００００６５．１（細胞外ドメイン、アミノ酸４７～２６１）は、ヒトＣＤ４０Ｌに関する情報を提供する。以下に提供されるのは、例示的なヒトＣＤ４０Ｌの細胞外ドメインのアミノ酸配列である。
ヒトＣＤ４０Ｌ（細胞外ドメイン）：
ＨＲＲＬＤＫＩＥＤＥＲＮＬＨＥＤＦＶＦＭＫＴＩＱＲＣＮＴＧＥＲＳＬＳＬＬＮＣＥＥＩＫＳＱＦＥＧＦＶＫＤＩＭＬＮＫＥＥＴＫＫＥＮＳＦＥＭＱＫＧＤＱＮＰＱＩＡＡＨＶＩＳＥＡＳＳＫＴＴＳＶＬＱＷＡＥＫＧＹＹＴＭＳＮＮＬＶＴＬＥＮＧＫＱＬＴＶＫＲＱＧＬＹＹＩＹＡＱＶＴＦＣＳＮＲＥＡＳＳＱＡＰＦＩＡＳＬＣＬＫＳＰＧＲＦＥＲＩＬＬＲＡＡＮＴＨＳＳＡＫＰＣＧＱＱＳＩＨＬＧＧＶＦＥＬＱＰＧＡＳＶＦＶＮＶＴＤＰＳＱＶＳＨＧＴＧＦＴＳＦＧＬＬＫＬ（配列番号１４０）
他の種からのＣＤ４０Ｌポリペプチドは当技術分野で知られており、ヒト配列をクエリとして使用して、公的に利用可能な遺伝子データベース、例えば、ＧｅｎＢａｎｋから取得することができる。
他の実施形態では、本明細書に記載のＣＤ４０結合部分は、抗ＣＤ４０抗体を含むことができる。本明細書で使用される場合、「抗ＣＤ４０抗体」という用語は、ＣＤ４０ポリペプチドに結合することができる任意の抗体を指し、これは、好適な供給源、例えば、ヒトまたは非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、サルなどの霊長類）のものであり得る。
本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体は、本明細書に記載のＦｃバリアントのいずれかに連結される重鎖可変ドメインを含む重鎖、ならびに任意選択で、軽鎖可変領域および軽鎖定常領域を含む軽鎖を含む。重鎖可変領域（ＶＨ）および任意選択で軽鎖可変領域（ＶＬ）は通常、抗原（この場合はＣＤ４０）の結合に関与する。
ＶＨおよびＶＬ領域は、「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）としても知られる超可変性の領域にさらに細分化でき、「フレームワーク領域」（「ＦＲ」）として知られる、より保存された領域が点在する。各ＶＨおよびＶＬは、典型的には、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端まで、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置されている。フレームワーク領域およびＣＤＲの範囲は、当技術分野で知られている方法論を使用して、例えば、これらすべてが当技術分野でよく知られている、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義、および／または接触定義によって、正確に同定できる。例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１－３２４２，Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７、Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７，Ａｌ－ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７－９４８、およびＡｌｍａｇｒｏ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．１７：１３２－１４３（２００４）を参照されたい。ｈｇｍｐ．ｍｒｃ．ａｃ．ｕｋおよびｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ）も参照されたい。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０に結合し、ＣＤ４０の活性を少なくとも５０％（例えば、その中の任意の増分を含めて、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％以上）阻害することができる。阻害剤の効力の尺度を提供する見かけの阻害定数（ＫｉａｐｐまたはＫｉ，ａｐｐ）は、酵素活性を低下させるために必要な阻害剤の濃度に関連し、酵素濃度に依存しない。本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体の阻害活性は、当技術分野で知られている通常の方法によって決定することができる。
抗体のＫｉ， ａｐｐ値は、反応の程度（例えば、酵素活性）に対する様々な濃度の抗体の阻害効果を測定することによって決定することができ、阻害剤濃度の関数としての疑似一次速度定数（ｖ）の変化を修正されたモリソン方程式（式１）に当てはめると、見かけのＫｉ値の推定値が得られる。競合阻害剤の場合、Ｋｉａｐｐは、Ｋｉ， ａｐｐ対基質濃度のプロットの線形回帰分析から抽出されたｙ切片から取得することができる。
Figure 2022503961000001
 ここで、Ａは、ｖｏ／Ｅに相当し、阻害剤の非存在下での酵素反応の初速度（ｖｏ）を総酵素濃度（Ｅ）で割ったものである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体は、標的抗原または抗原エピトープについて１０００、９００、８００、７００、６００、５００、４００、３００、２００、１００、５０、４０、３０、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１、１０、９、８、７、６、５ｐＭ以下のＫｉａｐｐ値を有し得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体のいずれかは、標的抗原またはその抗原性エピトープに対する抗体のＫｉａｐｐを低下させるために、さらに親和性成熟され得る。
場合によっては、抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用によって誘発されるシグナル伝達を少なくとも５０％（例えば、その中の任意の増分を含めて、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％以上）抑制することができる。そのような阻害活性は、従来の方法または本明細書に記載のアッセイによって決定することができる。
本明細書に記載の抗体は、マウス、ラット、ヒト、または他の任意の起源（キメラまたはヒト化抗体を含む）であり得る。そのような抗体は、天然に存在しない、すなわち、ヒトの作用なしに動物で産生されない（例えば、そのような動物を所望の抗原またはそのフラグメントで免疫するか、または抗体ライブラリーから単離する）。
いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体は、ヒト化抗体であり、これは、本明細書の以下または他の箇所に記載される要素または特徴のうちの１つ以上を有し得る。ヒト化抗体は、特異的なキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、または非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含むそれらの抗原結合フラグメントである非ヒト（例えば、マウス）抗体の形態を指す。一般に、ヒト化抗体は、レシピエントのＣＤＲからの残基が、所望の特異性、親和性、および容量を有するマウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基によって置き換えられるヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲもしくはフレームワーク配列にも見られないが、抗体性能をさらに洗練および最適化するために含まれる残基を含み得る。場合によっては、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、および典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み得、ここで、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリンの領域に対応し、かつＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列の領域である。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン定常領域またはドメイン（Ｆｃ）の少なくとも一部、典型的にはヒト免疫グロブリンのものを含むであろう。抗体は、ＷＯ９９／５８５７２に記載されているように修飾されたＦｃ領域を有し得る。他の形態のヒト化抗体は、元の抗体に対して改変された１つ以上のＣＤＲ（１、２、３、４、５、または６つ）を有し、これらは元の抗体に由来する１つ以上のＣＤＲに「由来する」１つ以上のＣＤＲとも呼ばれる。ヒト化抗体はまた、親和性成熟を伴い得る。
ヒト化抗体を構築するための方法もまた、当技術分野でよく知られている。例えば、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：１００２９－１００３３（１９８９）を参照されたい。一例では、親非ヒト抗体のＶＨおよびＶＬの可変領域は、当技術分野で知られている方法に従って三次元分子モデリング分析に供される。次に、正しいＣＤＲ構造の形成に重要であると予測されるフレームワークアミノ酸残基が、同じ分子モデリング分析を使用して同定される。並行して、親非ヒト抗体のアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列を有するヒトＶＨおよびＶＬ鎖は、検索クエリとして親ＶＨおよびＶＬ配列を使用して任意の抗体遺伝子データベースから同定される。次に、ヒトＶＨおよびＶＬアクセプター遺伝子が選択される。
選択されたヒトアクセプター遺伝子内のＣＤＲ領域は、親非ヒト抗体またはその機能的バリアントからのＣＤＲ領域で置き換えることができる。必要に応じて、ＣＤＲ領域との相互作用に重要であると予測される親鎖のフレームワーク領域内の残基を使用して、ヒトアクセプター遺伝子の対応する残基を置き換えることができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体は、対応する標的抗原またはそのエピトープ、例えば、ＣＤ４０抗原またはエピトープに特異的に結合する。抗原またはエピトープに「特異的に結合する」抗体は、当技術分野でよく理解されている用語である。分子は、代替の標的よりも頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、および／または特定の標的抗原とのより大きな親和性で反応する場合、「特異的結合」を示すといわれる。抗体は、他の物質に結合するよりも高い親和性で、アビディティで、より容易に、および／またはより長い持続時間で結合する場合、標的抗原またはエピトープに「特異的に結合する」。例えば、抗原（ＣＤ４０）またはその中の抗原性エピトープに特異的に（または優先的に）結合する抗体は、それが同じ抗原内の他の抗原または他のエピトープに結合するよりも、より高い親和性で、アビディティで、より容易に、および／またはより長い持続時間でこの標的抗原に結合する抗体である。この定義により、例えば、第１の標的抗原に特異的に結合する抗体は、第２の標的抗原に特異的または優先的に結合する場合もしない場合もあることも理解される。したがって、「特異的結合」または「優先的結合」は、（それを含むことができるが）必ずしも排他的結合を必要としない。いくつかの例では、標的抗原またはそのエピトープに「特異的に結合する」抗体は、同じ抗原内の他の抗原または他のエピトープに結合しない場合がある（すなわち、ベースライン結合活性のみが従来の方法で検出できる）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０に特異的に結合する。あるいは、またはさらに、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体は、マウス対応物と比較してヒトＣＤ４０またはそのフラグメントに特異的に結合するか、またはその逆である（例えば、同じアッセイ条件下で同じアッセイで決定されるように、一方の抗原に対して他方よりも少なくとも１０倍高い結合親和性を有する）。他の例では、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体は、ヒトおよび非ヒトＣＤ４０（例えば、マウス）と交差反応する可能性があり、例えば、ヒトおよび非ヒトＣＤ４０に対する結合親和性の差は５倍未満、例えば２倍未満、または実質的に同様である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような抗ＣＤ４０抗体は、標的抗原（例えば、ＣＤ４０）またはその抗原性エピトープに対して好適な結合親和性を有する。本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、見かけの会合定数またはＫＡを指す。ＫＡは、解離定数（ＫＤ）の逆数である。本明細書に記載される抗ＣＤ４０抗体は、標的抗原または抗原性エピトープに対して少なくとも１０－５、１０－６、１０－７、１０－８、１０－９、１０－１０Ｍの、またはそれより低い結合親和性（ＫＤ）を有する。結合親和性の増加は、ＫＤの減少に相当する。第２の抗原と比較して第１の抗原に対する抗体のより高い親和性結合は、第２の抗原を結合するためのＫＡ（または数値ＫＤ）よりも第１の抗原を結合するためのより高いＫＡ（またはより小さい数値ＫＤ）によって示すことができる。そのような場合、抗体は、第２の抗原（例えば、第２のコンフォメーションもしくはその模倣物の同じ第１のタンパク質、または第２のタンパク質）と比較して、第１の抗原（例えば、第１のコンフォメーションもしくはその模倣物の第１のタンパク質）に対して特異性を有する。結合親和性の違い（例えば、特異性または他の比較のための）は、少なくとも１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、３７．５、５０、７０、８０、９１、１００、５００、１０００、１０，０００または１０５倍になり得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ４０抗体のいずれかは、標的抗原またはその抗原性エピトープに対する抗体の結合親和性を増加させるために、さらに親和性成熟され得る。
結合親和性（または結合特異性）は、平衡透析、平衡結合、ゲル濾過、ＥＬＩＳＡ、表面プラズモン共鳴、または分光法（例えば、蛍光アッセイを使用）を含む様々な方法によって決定することができる。結合親和性を評価するための例示的な条件は、ＨＢＳ－Ｐ緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．００５％（ｖ／ｖ）Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ Ｐ２０）である。これらの技術は、標的タンパク質濃度の関数として結合した結合タンパク質の濃度を測定するために使用することができる。結合した結合タンパク質の濃度（［Ｂｏｕｎｄ］）は、一般に、次の式によって遊離の標的タンパク質（［Ｆｒｅｅ］）の濃度に関連している。
［Ｂｏｕｎｄ］＝［Ｆｒｅｅ］／（Ｋｄ＋［Ｆｒｅｅ］）
ただし、例えば、ＥＬＩＳＡまたはＦＡＣＳ分析などの方法を使用して決定される親和性の定量的測定を取得するだけでＫＡに比例する場合があり、したがって、例えば２倍高いなどのより高い親和性が親和性の定性的測定値を取得することであるか、または例えば機能アッセイ、例えばインビトロもしくはインビボアッセイ、における活性による親和性の推測を取得することであるかどうかを決定するなどの比較に使用できるため、ＫＡの正確な決定を行う必要は必ずしもない。
以下に、例である抗ＣＤ４０抗体３８３を提供する（ＶＨおよびＶＬアミノ酸配列、ＣＤＲは太字で示されている）。
ＶＨ：
Figure 2022503961000002
 ＶＬ：
Figure 2022503961000003
 さらなる例示的な抗ＣＤ４０抗体を以下に提供する（ＣＤＲは太字で示されている）。
１９Ｇ６Ｄ６
ＶＨ：
Figure 2022503961000004
 ＶＬ：
Figure 2022503961000005
 ３６Ｇ７Ｂ８
ＶＨ：
Figure 2022503961000006
 ＶＬ：
Figure 2022503961000007
 １３Ｆ１Ａ７
ＶＨ：
Figure 2022503961000008
 ＶＬ：
Figure 2022503961000009
 ９Ｆ１２Ｄ９
ＶＨ：
Figure 2022503961000010
 ＶＬ：
Figure 2022503961000011
 １７Ｃ５Ｃ２
ＶＨ：
Figure 2022503961000012
 ＶＬ：
Figure 2022503961000013
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体は、本明細書に記載の例示的な抗体のいずれかと同じエピトープに結合するか、またはＣＤ４０抗原に対する結合から例示的な抗体と競合する。
「エピトープ」は、抗体によって認識され、結合される標的抗原上の部位を指す。この部位は、完全にアミノ酸成分で構成されていても、完全にタンパク質のアミノ酸の化学修飾（例えば、グリコシル部分）で構成されていても、またはこれらの組み合わせで構成されていてもよい。重複するエピトープには、少なくとも１つの共通のアミノ酸残基が含まれる。エピトープは線形であり得、これは典型的には、６～１５アミノ酸長である。あるいは、エピトープは立体構造であり得る。抗体が結合するエピトープは、通常の技術、例えば、エピトープマッピング法によって決定することができる（例えば、以下の説明を参照されたい）。本明細書に記載の例示的な抗体と同じエピトープに結合する抗体は、例示的な抗体と、正確に同じエピトープまたは実質的に重複するエピトープ（例えば、３つ未満の重複しないアミノ酸残基、２つ未満の重複しないアミノ酸残基、または１つのみの重複しないアミノ酸残基を含む）に結合し得る。同族の抗原に対する結合で２つの抗体が互いに競合するかどうかは、当技術分野でよく知られている競合アッセイによって決定することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ４０抗体は、（ａ）配列番号１２８および配列番号１２９、（ｂ）配列番号１３０および配列番号１３１（１９Ｇ６Ｄ６）、（ｃ）配列番号１３２および配列番号１３３（３６Ｇ７Ｂ８）、（ｄ）配列番号１３４および配列番号１３５（１３Ｆ１Ａ７）、（ｅ）配列番号１３６および配列番号１３７（９Ｆ１２Ｄ９）、または（ｆ）配列番号１３８および配列番号１３９（１７Ｃ５Ｃ２）のものと同じ重鎖および軽鎖ＣＤＲを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１２８、配列番号１３０、配列番号１３２、配列番号１３４、配列番号１３６、もしくは配列番号１３８の重鎖可変ドメイン、および／または配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３７、もしくは配列番号１３９の軽鎖可変ドメインを含む。
また、本開示の範囲内に、本明細書に開示される例示的な抗ＣＤ４０抗体のいずれか１つの機能的バリアントがある。このような機能的バリアントは、構造的および機能的の両方において、例示的な抗ＣＤ４０抗体のいずれか１つと実質的に類似している。機能的バリアントは、例示的な抗ＣＤ４０抗体のいずれか１つと実質的に同じＶＨおよびＶＬＣＤＲを含む。例えば、それは、抗体の全ＣＤＲ領域（集合的に）において最大１０（例えば、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、または１）個のアミノ酸残基変異のみを含むことができ、ＣＤ４０の同じエピトープに実質的に同様の親和性で結合する（例えば、同じオーダーでのＫＤ値を有する）。あるいは、またはさらに、アミノ酸残基変異は、保存的なアミノ酸残基の置換である。本明細書で使用される場合、「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸置換が行われるタンパク質の相対的な電荷またはサイズ特性を改変させないアミノ酸置換を指す。バリアントは、当技術分野の通常の技術の１つに知られているポリペプチド配列を改変するための方法、例えばそのような方法をまとめる参考文献、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８９、またはＣｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに見られるような方法、に従って調製することができる。アミノ酸の保存的置換には、以下のグループ内のアミノ酸間で行われる置換が含まれる（ａ）Ｍ、Ｉ、Ｌ、Ｖ、（ｂ）Ｆ、Ｙ、Ｗ、（ｃ）Ｋ、Ｒ、Ｈ、（ｄ）Ａ、Ｇ、（ｅ）Ｓ、Ｔ、（ｆ）Ｑ、Ｎ、および（ｇ）Ｅ、Ｄ。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体は、組み合わせて（集合的に）、配列番号１２８、配列番号１３０、配列番号１３２、配列番号１３４、配列番号１３６、または配列番号１３８の重鎖ＣＤＲと少なくとも８０％（例えば、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％およびその中の任意の増分パーセント）の配列同一性を有する重鎖ＣＤＲを含み得る。あるいは、またはさらに、抗ＣＤ４０抗体は、集合的に、配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３７、または配列番号１３９のものと少なくとも８０％（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％およびその中の任意の増分パーセント）の配列同一性を有する軽鎖ＣＤＲを含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体は、配列番号１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、もしくは１３８に対して少なくとも８０％（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％およびその中の任意の増分パーセント）である重鎖可変ドメインおよび／または配列番号１２９、１３１、１３３、１３５、１３７、もしくは１３９と少なくとも８０％（例えば、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％およびその中の任意の増分パーセント）同一である軽鎖可変ドメインを含み得る。
２つのアミノ酸配列の「パーセント同一性」は、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－７７，１９９３のように修正される、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌ Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４－６８，１９９０のアルゴリズムを使用して決定される。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０，１９９０のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込まれている。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３を用いて実施され、目的のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を取得することができる。２つの配列の間にギャップが存在する場合、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９－３４０２，１９９７に記載されているように、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。
（ｉｉ）操作されたＦｃ領域
本明細書に記載のＣＤ４０結合分子は、Ｆｃドメインが修飾されて、ＦｃγＲなどのＦｃ受容体に対するその結合親和性および／または特異性を調節する、修飾された重鎖定常領域を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＣＤ４０結合分子におけるＦｃバリアントは、その野生型対応物と比較して、ＦｃγＲＩＩＢ選択性が増強されている。ＦｃγＲＩＩＢに対する選択性、ＦｃγＲＩＩＢに対する選択的結合、またはＦｃγＲＩＩＢに対する特異的結合を有するＦｃフラグメントは、当技術分野でよく理解されている用語である。分子は、別の標的（例えば、ＦｃγＲＩＩＩ受容体）との反応よりも、特定の標的抗原（例えば、ＦｃγＲＩＩＢ受容体）と、より頻繁に、より迅速に、より長い持続時間で、および／またはより大きな親和性で、反応する場合、「選択的結合」または「特異的結合」を示すといわれる。Ｆｃフラグメントは、他のＦｃ受容体に結合するよりも、より高い親和性で、アビディティで、より容易に、および／またはより長い持続時間で結合する場合、Ｆｃ受容体に「特異的に結合」する。例えば、ＦｃγＲＩＩＢに特異的に（または優先的に）結合するＦｃフラグメントは、他のＦｃ受容体に結合するよりもより高い親和性、アビディティで、より容易に、および／またはより長い持続時間でこのＦｃ受容体に結合するＦｃフラグメントである。この定義により、例えば、第１のＦｃ受容体に選択的または特異的に結合するＦｃフラグメントは、第２のＦｃ受容体に特異的または優先的に結合する場合もしない場合もあることも理解される。したがって、「選択的結合」、「特異的結合」または「優先的結合」は、（それを含むことができるが）必ずしも排他的結合を必要としない。いくつかの例では、標的Ｆｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＢ）に「選択的に結合する」または「特異的に結合する」Ｆｃフラグメントは、他のＦｃ受容体に結合しない（すなわち、通常の方法では結合できない）場合がある。他の実施形態では、バリアントＦｃフラグメントは、いずれのＦｃγＲにも結合しない。
異なるＦｃ受容体に対するＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４の相対的結合親和性を以下の表１に示す。
Figure 2022503961000014
本明細書に記載のＦｃバリアントは、それらの野生型対応物（Ｆｃバリアントを産生するために変異が導入される野生型親Ｆｃ領域）と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対する選択性を増強することができる。そのようなＦｃバリアントの、ＦｃγＲＩＩＢ対他のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＩ）、に対する相対的結合活性は、野生型対応物の、ＦｃγＲＩＩＢ対他のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＩ）に対する相対的結合活性よりも高い。Ｆｃバリアントは、ＦｃγＲＩＩＢに対する結合活性を増強させ、かつ／または別のＦｃ受容体、例えば、ＦｃγＲＩＩＩに対する結合活性を減少させ得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、ＦｃγＲＩＩＢおよび別のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＩ）の両方に対する結合活性を減少させ得るが、しかしながら、他のＦｃ受容体（例えば、ＦｃγＲＩＩＩ）に対する減少した結合活性のレベルは、ＦｃγＲＩＩＢに対する減少した結合活性のレベルよりも大きい。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、ＦｃγＲＩＩＢに対して好適な結合親和性を有し、例えば、Ｆｃバリアントが由来する野生型親Ｆｃと比較して増強される。本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、見かけの会合定数またはＫＡを指す。ＫＡは、解離定数（ＫＤ）の逆数である。本明細書に記載されるＦｃバリアントは、ＦｃγＲＩＩＢに対して、少なくとも１０－５、１０－６、１０－７、１０－８、１０－９、１０－１０Ｍ、またはそれより低い結合親和性（ＫＤ）を有することができる。結合親和性の増加は、ＫＤの減少に相当する。第２のＦｃ受容体と比較して第１のＦｃ受容体に対するＦｃフラグメントのより高い親和性結合は、第２のＦｃ受容体を結合するためのＫＡ（または数値ＫＤ）よりも第１のＦｃ受容体を結合するためのより高いＫＡ（またはより小さい数値ＫＤ）によって示すことができる。このような場合、Ｆｃバリアントは、第２のＦｃ受容体と比較して第１のＦｃ受容体に特異性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、ＦｃγＲＩＩＩ（ＦｃγＲＩＩＩＡまたはＦｃγＲＩＩＩＢのいずれか）に対する結合親和性と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対するより高い結合親和性（より高いＫＡまたはより小さいＫＤ）を有する。結合親和性の違い（例えば、特異性または他の比較のための）は、少なくとも１．５、２、３、４、５、１０、１５、２０、３７．５、５０、７０、８０、９１、１００、５００、１０００、１０，０００または１０５倍になり得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、例えば、対応するマウスＩｇＧ、例えばマウスＩｇＧ１のアミノ酸残基に照らして、野生型のヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４ Ｆｃフラグメントの１つ以上のアミノ酸残基を変異させることによって設計され得る。ヒトおよびマウスＩｇＧ（それぞれｈＩｇＧおよびｍＩｇＧ）の配列比較を以下に示す（上から下へ、配列番号６０～６４、それぞれが対応するＦｃ領域のフラグメント２１１～２４５、２６０～２７８、および３２０～３３２の組み合わせを表す）：
Figure 2022503961000015
野生型マウスＩｇＧ１およびＩｇＧ２ Ｆｃフラグメントのアミノ酸配列、およびＦｃγＲ結合が低下した例示的なＦｃバリアントを以下に示す。
野生型マウスＩｇＧ１ Ｆｃフラグメントのアミノ酸配列：
ＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号１４２）
野生型マウスＩｇＧ２ａ Ｆｃフラグメントのアミノ酸配列：
ＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ（配列番号１４３）
変異型マウスＩｇＧ１ｍＤＡＮＡ Ｆｃフラグメントのアミノ酸配列：
ＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＡＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＡＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号１４４）
変異型マウスＩｇＧ２ａ１ｍＤＡＮＡ Ｆｃフラグメントのアミノ酸配列：
ＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＡＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＡＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ（配列番号１４５）
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、Ｆｃフラグメントのヒンジドメインに１つ以上の変異（例えば、アミノ酸置換、欠失、または付加）を含むヒトＩｇＧ１、Ｇ２、またはＧ４ Ｆｃバリアントである。ヒトＩｇＧは、ヒンジドメイン（ＥＵインデックスによれば位置２２６～２２９）にＣＰＰＣまたはＣＰＳＣのコアモチーフを含んでいる。位置２１６～２２５はヒンジドメインの上部（ｕｐｐｅｒ ｐｏｒｔｉｏｎ）とみなされ、位置２３０～２３８はヒンジドメインの下部（ｌｏｗｅｒ ｐｏｒｔｉｏｎ）とみなされる。ここで使用されている番号付けシステムは、明示的に示されていない限り、ＥＵインデックスに準拠している。いくつかの例では、１つ以上の変異は、ヒンジドメインの上部に位置することができる。あるいは、またはさらに、１つ以上の変異は、ヒンジドメインの下部に位置することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗ＣＤ４０分子のいずれかのＦｃ領域は、位置２２０～３３１のうちのいずれか、好ましくは位置２２８～３２９のうちのいずれかで少なくとも１つの変異を含み得る。このようなＦｃバリアントは、それらの天然の対応物と比較して、Ｆｃ受容体のうちの１つ以上（例えば、ＦｃγＩＩＢ、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、またはＦｃγＲＩＩＩＡ）に対して改変された結合親和性および／または特異性を有する可能性がある。
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ Ｆｃに対する変異は、マウスＩｇＧ１のヒンジドメインにおける対応するアミノ酸残基に従って行うことができる。例えば、マウスＩｇＧ１には、位置２３６～２３８にＧＧＰモチーフが含まれていない。したがって、このＧＧＰモチーフの１つ以上の残基を、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４ Ｆｃフラグメントから削除して、本明細書に記載のＦｃバリアントを産生することができる。
あるいは、またはさらに、ヒトＦｃバリアントは、ヒンジドメインの上部、下部、または両方に１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。例えば、Ｆｃバリアントは、位置２３３、２３４、２３５、および／または２３６のうちの１つ以上で１つ以上のアミノ酸置換を含み得る。このようなアミノ酸置換は、本明細書に記載のＧＧＰモチーフ（２３６～２３８）の１つ以上の欠失と組み合わせてもよい。これらの変異は、ヒトＩｇＧ２またはＩｇＧ４ Ｆｃフラグメントに導入されて、本明細書に記載のＦｃバリアントを産生し得る。いくつかの例では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、位置２３６～２３８のうちの１つ以上（例えば、２３６、２３７、２３８またはそれらの任意の組み合わせ）に欠失を含む。
本明細書に記載のヒンジドメインの変異のいずれも、Ｆｃ受容体との相互作用に関与する１つ以上の位置での変異（例えば、アミノ酸置換）と組み合わせてもよい。そのような位置には、位置２６５、２６７、２７３、２９７、および３２７～３３１、またはこれらの組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。これらの位置での例示的なアミノ酸置換には、Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｖ２７３Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ３２８Ｆ、Ｐ３２９Ｇ、Ａ３３０Ｓ、および／またはＰ３３１Ｓが含まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＦｃバリアントは、ＩｇＧ１分子（例えば、ヒトＩｇＧ１）に由来し得、位置２２０、２２６、２２９、２３４～２３８、２６５、２６７、２９７、および３２７～３３１のうちの１つ以上の位置に１つ以上の変異を含む。例えば、Ｆｃバリアントは、位置２３４～２３８内に置換もしくは欠失、位置２６５での置換（例えば、Ｄ２６５Ａ）、位置２６７での置換（例えば、Ｓ２６７Ｅ）、位置２９７での置換（例えば、Ｎ２９７Ａ）、位置３２８での置換（例えば、Ｌ３２８Ｆ）、位置３２９での置換（例えば、Ｐ３２９Ｇ）、またはこれらの組み合わせを含み得る。あるいは、またはさらに、それは、位置２２０（例えば、Ｃ２２０Ｓ）、２２６（例えば、Ｃ２２６Ｓ）、２２９（例えば、Ｃ２２９Ｓ）、３２７（例えば、Ａ３２７Ｇ）、３３０（例えば、Ａ３３０Ｓ）、および３３１（例えば、Ｐ３３１Ｓ）のうちの１つ以上での置換を含み得る。場合によっては、ＩｇＧ１分子に由来するＦｃバリアントは、位置２３６～２３８のうちの１つ以上での欠失を含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるＦｃバリアントは、ＩｇＧ２分子（例えば、ヒトＩｇＧ２）に由来し得、２３３～２３５、２３７～２３８、２６５～２６８、２７３、２９７、３２８、３３０、および３３１のうちの１つ以上の位置に１つ以上の変異を含む。いくつかの例では、そのようなＦｃバリアントは、位置２３７～２３８内の欠失（例えば、位置２３７での欠失または位置２３７および２３８の両方の欠失）、位置２６５での置換（例えば、Ｄ２６５Ａ）、位置２６７での置換（例えば、Ｓ２６７Ｅ）、位置２９７での置換（例えば、Ｎ２９７Ａ）、位置３２８での置換（例えば、Ｌ３２８Ｆ）、またはこれらの組み合わせを含み得る。あるいは、またはさらに、ＩｇＧ２分子に由来するＦｃバリアントは、位置２３３～２３５、２３７、２３８、２６８、２７３、３３０、および３３１のうちの１つ以上での置換（例えば、Ｐ２３３Ｅ、Ｖ２３４Ａ、Ｖ２３４Ｌ、Ａ２３５Ｌ、Ａ２３５Ｓ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ２７３Ｅ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓ）を含み得る。
さらに他の実施形態では、本明細書に開示されるＦｃバリアントは、ＩｇＧ４分子（例えば、ヒトＩｇＧ４）に由来し得、位置２２８、２３３～２３８、２６５、２６７、２７３、２９７、および３２８のうちの１つ以上において、１つ以上の変異を含む。いくつかの例では、このようなＦｃバリアントは、位置２２８（例えば、Ｓ２２８Ｐ）での置換、位置２３５～２３８のうちのいずれかでの置換もしくは欠失（例えば、位置２３６～２３８のうちの１つ、例えば、位置２３６および位置２３７での欠失）、位置２６５での置換（例えば、Ｄ２６５Ａ）、位置２６７での置換（例えば、Ｓ２６７Ｅ）、位置２７３での置換（例えば、Ｖ２７３Ｅ）、位置２９７での置換（例えば、Ｎ２９７Ａ）、位置３２８での置換（例えば、Ｌ３２８Ｆ）、またはこれらの組み合わせを含み得る。あるいは、またはさらに、Ｆｃバリアントは、位置２３３～２３５および２３７のうちの１つ以上での置換（例えば、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａ）を含み得る。
位置２６５、２６７、２７３、２９７、３２８、および／または３２９に１つ以上の変異を含むＩｇＧ２またはＩｇＧ４分子に由来するＦｃバリアントもまた、本開示の範囲内である。このような変異は、これらの位置の１つ以上でのアミノ酸置換、例えば、Ｄ２６５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｖ２７３Ｅ、Ｎ２９７Ａ、Ｌ３２８Ｆ、および／またはＰ３２９Ｇを含み得る。
場合によっては、本明細書に開示されるＦｃバリアントのいずれかは、位置３０９での変異、例えば、置換（例えば、Ｖ３０９Ｌ）をさらに含み得る。このようなＦｃバリアントは、ＩｇＧ２分子（例えば、ヒトＩｇＧ２）に由来し得る。いくつかの実施形態では、位置３０９での変異は、位置２３４、２６８、３３０、および３３１のうちの１つ以上での変異と組み合わせられ得る。このようなＦｃバリアントの例には、Ｇ２ｍ４３が含まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＦｃバリアントは、その野生型対応物（例えば、本明細書に記載の野生型ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、またはＩｇＧ４のＦｃフラグメント）と少なくとも８５％（例えば、９０％、９５％、９８％、９９％、またはそれ以上）同一のアミノ酸配列を含み得る。
一例では、本明細書に記載のＦｃバリアントにおけるアミノ酸残基置換は、保存的アミノ酸残基置換である。
以下に提供されるのは、変異がｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ２、およびＩｇＧ４に導入されて、本開示のための様々なＦｃバリアントを産生することができる例示的な位置を示す配列アラインメントである。
野生型ヒトＩｇＧ１と比較するヒトＩｇＧ１バリアントの配列アラインメント（上から下へ、配列番号７０～８８および１６３～１６８）：
Figure 2022503961000016
野生型ヒトＩｇＧ２と比較するヒトＩｇＧ２バリアントの配列アラインメント（上から下へ、配列番号８９－１０５および１６９－１７３）：
Figure 2022503961000017
野生型ヒトＩｇＧ４と比較するヒトＩｇＧ４バリアントの配列アラインメント（上から下へ、配列番号６５、１０６－１２７、および１７４－１７７）
Figure 2022503961000018
野生型ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４ Ｆｃフラグメントのアミノ酸配列、およびいくつかの例示的なｈＩｇＧ１、ｈＩｇＧ２、およびｈＩｇＧ４ Ｆｃバリアント（ＥＵ番号付けに基づく位置２２１以降）を以下に示す。
野生型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃフラグメントのアミノ酸配列：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１）
野生型ヒトＩｇＧ２ Ｆｃフラグメントのアミノ酸配列：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２）
野生型ヒトＩｇＧ４ Ｆｃフラグメントのアミノ酸配列：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＳＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号３）
ヒトＩｇＧ４ Ｓ２２８Ｐ Ｆｃバリアントのアミノ酸配列：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４）
例示的なヒトＩｇＧ１ Ｆｃバリアントのアミノ酸配列：
Ｇ１ｍ１：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号５）
Ｇ１ｍ２：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号６）
Ｇ１ｍ－２：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号７）
Ｇ１ｍ－４：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号８）
Ｇ１ｍ５：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＥＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号９）
Ｇ１ｍ７：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１０）
Ｇ１ｍ８：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１１）
Ｇ１ｍ９：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１２）
Ｇ１ｍ１５：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＥＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１３）
Ｇ１ｍ１７：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１４）
Ｇ１ｍ１８：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１５）
Ｇ１ｍ１９：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１６）
Ｇ１ｍ２５：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＥＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１７）
Ｇ１ｍ２７：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１８）
Ｇ１ｍ２８：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１９）
Ｇ１ｍ２９：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２０）
Ｇ１ｍＡＡ：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２１）
Ｇ１ｍＡＧ：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＧＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２２）
Ｇ１ｍ４０：
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１６０）
Ｇ１ｍ４５
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰｐｖａＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１７８）
Ｇ１ｍ２４０
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１７９）
Ｇ１ Ｎ２９７Ａ
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹａＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１８０）
Ｇ１ｍ４７
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰｐｖａＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫｇＬＰｓｓＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１８１）
Ｇ１ｍ４８
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳｓＤＫＴＨＴｓＰＰｓＰＡＰＥＬＬＧＧｓＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１８２）
Ｇ１ｍ４９
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴｓＰＰｓＰＡＰｐｖａＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１８３）
Ｇ１ｍ５０
ＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥｆｅＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡｓＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１８４）
例示的なヒトＩｇＧ２ Ｆｃバリアントのアミノ酸配列：
Ｇ２ｍ１：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２３）
Ｇ２ｍ－１：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２４）
Ｇ２ｍ２：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２５）
Ｇ２ｍ－４：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２６）
Ｇ２ｍ５：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＥＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２７）
Ｇ２ｍ７：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２８）
Ｇ２ｍ８：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２９）
Ｇ２ｍ９：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３０）
Ｇ２ｍ１０：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＥＶＳＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３１）
Ｇ２ｍ１５：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＥＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３２）
Ｇ２ｍ１７：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３３）
Ｇ２ｍ１８：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３４）
Ｇ２ｍ１９：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３５）
Ｇ２ｍ２０：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３６）
Ｇ２ｍ２７：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３７）
Ｇ２ｍ２８：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号３８）
Ｇ２ｍ４０：
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＡＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１６１）
Ｇ２ｍ４３
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰａａａｓＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳａＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶｌＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰｓｓＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１８５）
Ｇ２ｍ４４
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳｑＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶｌＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰｓｓＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１８６）
Ｇ２ｍＡＡ
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰａａａＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２１３）
Ｇ２ｍ２０４０
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＡＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１８７）
Ｇ２Ｇ４
ＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１８８）
例示的なヒトＩｇＧ４ Ｆｃバリアントのアミノ酸配列：
Ｇ４ｍ１：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号３９）
Ｇ４ｍ－１：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＳＣＤＫＴＨＴＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４０）
Ｇ４ｍ２：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４１）
Ｇ４ｍ－２：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＣＣＶＥＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４２）
Ｇ４ｍ３：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＥＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４３）
Ｇ４ｍ４：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＥＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４４）
Ｇ４ｍ５：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＥＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４５）
Ｇ４ｍ７：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４６）
Ｇ４ｍ８：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４７）
Ｇ４ｍ９：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４８）
Ｇ４ｍ１０：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＶＳＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号４９）
Ｇ４ｍ１７：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５０）
Ｇ４ｍ１８：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５１）
Ｇ４ｍ１９：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５２）
Ｇ４ｍ２０：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５３）
Ｇ４ｍ２５：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＥＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５４）
Ｇ４ｍ２７：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５５）
Ｇ４ｍ２８：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５６）
Ｇ４ｍ２９：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５７）
Ｇ４ｍ３０：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５８）
Ｇ４ｍＰＥ：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号５９）
Ｇ４ｍ４０：
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１６２）
Ｇ４ｍ４１
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１８９）
Ｇ４ｍ４２
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１９０）
Ｇ４ｍ４６
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥａＬＧａＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫａＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１９１）
Ｇ４ｍＡＡ
ＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥａａＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１９２）
本明細書に記載のＦｃバリアントは、野生型対応物と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対する増強された結合活性を示し得る。例としては、Ｇ２ｍ２、Ｇ２ｍ５、Ｇ２ｍ７、Ｇ２ｍ８、Ｇ２ｍ９、Ｇ２ｍ１９、Ｇ２ｍ４４、Ｇ１ｍ７、Ｇ１ｍ９、Ｇ１ｍ２７、Ｇ１ｍ４５、Ｇ１ｍ４７、Ｇ１ｍ４９、Ｇ１ｍ５０、Ｇ４ｍ７、Ｇ４ｍ４６、Ｇ４ｍＰＥが挙げられる。あるいは、またはさらに、Ｆｃバリアントは、それらの野生型対応物、例えば、Ｇ２ｍ１、Ｇ２ｍ２０、Ｇ２ｍ４３、Ｇ２ｍ４４、Ｇ２Ｇ４、Ｇ２ｍＡＡ、Ｇ１ｍ２、Ｇ１ｍ１５、Ｇ１ｍ１７、Ｇ１ｍ１８、Ｇ１ｍ１９、Ｇ１ｍ２７、Ｇ１ｍ２８、Ｇ１ｍ２９、Ｇ４ｍ１、Ｇ４ｍ２、Ｇ４ｍ７、Ｇ４ｍ８、Ｇ４ｍ９、Ｇ４ｍ２０、Ｇ４ｍ２５、Ｇ４ｍ２７、Ｇ４ｍ２８、Ｇ４ｍ３０、Ｇ４ｍ４６およびＧ４ｍＰＥと比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対する増強された選択性を有し得る。このようなＦｃバリアントは、ＦｃＲｎに対する結合活性を保持し得る。これらのＦｃバリアントは、免疫受容体およびＦｃγＲＩＩＢ受容体を架橋することができる本明細書に記載の治療薬を構築するために使用することができる。
あるいは、本明細書に記載の特定のＦｃバリアントは、ＦｃγＲＩＩＢに対する選択性を有し、かつ／または任意のＦｃγＲに対する明らかに低いまたは結合活性を有しない可能性がある。例としては、Ｇ１ｍ２、Ｇ１ｍ２５、Ｇ１ｍ４０、Ｇ１ｍＡＡＧ、Ｇ１ｍ２４０、Ｇ２ｍ１、Ｇ２ｍ２０、Ｇ２ｍ４０、Ｇ２ｍ２０４０、Ｇ４ｍ５、Ｇ４ｍ１８、Ｇ４ｍ１９、Ｇ４ｍ２０、Ｇ４ｍ３０、Ｇ４ｍ４０、Ｇ４ｍ４１、Ｇ４ｍ４２が挙げられる。このようなＦｃバリアントは、ＦｃＲｎに対する結合活性を保持し得る。このようなＦｃバリアントを含む治療薬（例えば、抗体）は、アビディティ効果のために免疫受容体とＦｃγＲＩＩＢ受容体を架橋することができる可能性がある。
野生型対応物と比較した、例示的なＦｃバリアントの結合親和性／特異性の変化を、以下の表２～４に提供する。「Ｎ／Ａ」は、利用可能なデータがないことを示す。Ｆｃバリアントの結合活性が野生型対応物と比較して「変化なし」であることがわかった場合、それは、同じ実験条件下での同じアッセイにより示されるように、Ｆｃバリアントと野生型対応物との間に結合活性の有意な変動がないことを意味する。Ｆｃバリアントの結合活性がその野生型対応物と比較して「増加」または「減少」する場合、Ｆｃバリアントの結合活性は、同じ実験条件下での同じアッセイによって決定された野生型対応物の結合活性よりも高いかまたは低く、当業者に知られているように、変動は有意（例えば、生物学的に有意）であることを意味する。Ｆｃバリアントの結合活性がその野生型対応物と比較して「わずかに増加」または「わずかに減少」する場合、Ｆｃバリアントの結合活性は、同じ実験条件下での同じアッセイによって決定された野生型対応物の結合活性よりも高いかまたは低く、変動は統計的に有意であるが、限られたレベル（例えば、最大１０％）であることを意味する。
Figure 2022503961000019
Figure 2022503961000020
Figure 2022503961000021
本明細書に記載のＦｃバリアントは、本明細書に提供されるガイダンスに従って設計され、通常の組換え技術を介して産生され得る。様々なＦｃ受容体に対するその結合親和性および特異性は、通常の方法で決定できる。以下の例も参照されたい。
特定の例では、本明細書に開示されるＣＤ４０結合分子（抗ＣＤ４０分子）は、ＩｇＧ１親のヒンジ領域を維持し、ＦｃγＲ２ＢなどのＦｃ受容体に対する結合親和性の低下をもたらすがＦｃ受容体に対する残留結合活性は維持する、１つ以上の変異（例えば、上で議論したように、マウスＩｇＧ１に照らして位置２３６～２３８での１つ以上の欠失）を含み得る。そのような特性を有する例示的なＦｃバリアントには、Ｇ１ｍ２、Ｇ４ｍ２０、Ｇ４ｍ３０およびＧ４ｍ４６が含まれるが、これらに限定されない。このような抗ＣＤ分子のＣＤ４０結合部分は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体に由来し得る。このようなＣＤ４０結合部分は、本明細書に開示される抗ＣＤ４０抗体３８３に由来し得る。いくつかの例において、ＣＤ４０結合部分は、抗体３８３と同じＶＨおよびＶＬＣＤＲを含む。いくつかの例では、ＣＤ４０結合部分は、抗体３８３（それぞれ、配列番号１２８および１２９）と同じＶＨおよび／またはＶＬ鎖を含み得る。あるいは、ＣＤ４０結合部分は、本明細書に開示されるように、抗体３８３の機能的バリアントであり得る。そのようなＣＤ４０結合分子は、以下の実施例に示されるように、いくつかの有利な特徴を有するであろう。例としては、治療ウィンドウが改善され、インビボでの副作用が軽減された（例えば、肝臓毒性が少ない）抗腫瘍効果の増強が含まれ、これは、ベースラインのＣＤ４０アゴニスト活性と残留ＦｃγＲＩＩＢ結合活性に起因する可能性がある。ＣＤ４０アゴニスト活性および／またはＦｃγＲＩＩＢ結合活性が高すぎると、細胞毒性などの副作用が誘導されると予想される。
他の特定の例では、本明細書に開示されるＣＤ４０結合分子は、ＩｇＧ２に由来するＦｃバリアントドメインを含み（例えば、ＩｇＧ２ヒンジを維持する）、Ｆｃ受容体に対する結合親和性、特にＦｃγＲＩＩＢに対する結合親和性を低下させるために、マウス対応物に照らして位置２３６～２３８のうちの１つ以上に、１つ以上の変異（例えば、欠失または置換）を含み得る。場合によっては、そのようなＦｃバリアントは、位置２３６～２３８の１以上に欠失を有する。あるいは、またはさらに、Ｆｃバリアントは、位置２３４、２３７、２３８、２６８またはこれらの組み合わせに置換を有し得る。このようなＦｃバリアントは、Ｆｃ受容体に対する結合に関与する１つ以上の位置、例えば、位置２６５（例えば、Ｄ２６５Ａ）にさらなる変異を含み得る。Ｆｃバリアントは、ＦｃγＲＩＩＢなどのＦｃ受容体に対する残留結合活性を維持し得る（例えば、Ｇ２ｍ２０およびＧ２ｍ４３）。あるいは、Ｆｃバリアントは、ＦｃγＲＩＩＢなどのＦｃ受容体に結合しない可能性がある（例えば、Ｇ２ｍ４０）。そのような抗ＣＤ分子のＣＤ４０結合部分は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体に由来し得る。このようなＣＤ４０結合部分は、本明細書に開示される抗ＣＤ４０抗体３８３に由来し得る。場合によっては、ＣＤ４０結合部分は、抗体３８３と同じＶＨおよびＶＬＣＤＲを含む。いくつかの例では、ＣＤ４０結合部分は、抗体３８３（それぞれ、配列番号１２８および１２９）と同じＶＨおよび／またはＶＬ鎖を含み得る。あるいは、ＣＤ４０結合部分は、本明細書に開示されるように、抗体３８３の機能的バリアントであり得る。そのようなＣＤ４０結合分子は、以下の実施例に示されるように、いくつかの有利な特徴を有するであろう。例としては、治療ウィンドウが改善され、インビボでの副作用が軽減された（例えば、肝臓毒性が少ない）抗腫瘍効果の増強が含まれ、これは、ベースラインＣＤ４０アゴニスト活性と残留ＦｃγＲＩＩＢ結合活性の組み合わせ（例えば、３８３－ＩｇｈｕＧ２ｍ２０）、または比較的高いＣＤ４０アゴニスト活性とＦｃγＲＩＩＢに対する結合がないことの組み合わせ（例えば、３８３－ＩｇｈｕＧ２ｍ４０）に起因する可能性がある。
本明細書に記載のＦＡＣＳ結合アッセイに加えて、Ｆｃγ受容体に対するＦｃバリアントの活性は、代替のアッセイで調べることができる。例えば、ＦｃγＲＩＩＢ発現細胞の共培養を伴うまたは伴わないＣＤ４０レポーターアッセイを使用して、受容体の架橋および活性化の効果を実証することができる。２つの標的（例えば、ＣＤ４０およびＦｃγＲＩＩＢ）に対する抗体の同時結合に起因するアビディティ効果のため、このアッセイはＦｃγＲＩＩＢ結合を検出するのにより感度が高くなる。ＦＡＣＳで検出可能な結合が最小限であるか、明らかでない場合、レポーターアッセイで陽性の結果が示されることがある。
ＩＩ．Ｆｃバリアントを含むＣＤ４０結合分子の調製
本明細書に記載のＣＤ４０結合分子は、従来の方法論、例えば、組換え技術によって調製することができる。以下にいくつかの例を示す。
ＣＤ４０Ｌの細胞外ドメインを含むＣＤ４０結合分子の場合、ＣＤ４０Ｌ細胞外ドメインのコード配列を好適なＦｃバリアントのコード配列とインフレームで融合させることができる。ＣＤ４０結合分子全体のコード配列は、好適な発現ベクターにクローン化することができ、タンパク質発現に適した宿主細胞に導入できる。
ＣＤ４０に結合する抗体は、当技術分野で知られている任意の方法によって調製することができる。例えば、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，（１９９８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照されたい。いくつかの実施形態では、ＣＤ４０またはその細胞外ドメインに特異的な抗体は、従来のハイブリドーマ技術によって作製され得る。全長標的受容体またはそのフラグメントは、任意選択でＫＬＨなどの担体タンパク質に結合され、その抗原に結合する抗体を生成するため宿主動物を免疫化するために使用され得る。宿主動物の免疫化の経路およびスケジュールは、一般に、本明細書でさらに説明されるように、抗体の刺激および産生のための確立された従来の技法に従っている。マウス、ヒト化、およびヒト抗体を産生するための一般的な技法は当技術分野で知られており、本明細書に記載されている。ヒトを含む任意の哺乳動物対象またはそれらからの抗体産生細胞は、ヒトを含む哺乳動物ハイブリドーマ細胞株の産生の基礎として役立つように操作され得ることが企図される。典型的には、宿主動物は、本明細書に記載されるものを含む、ある量の免疫原を腹腔内、筋肉内、経口、皮下、足底内、および／または皮内に接種される。
ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５－４９７の一般的な体細胞ハイブリダイゼーション技術、またはＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ，１８：３７７－３８１（１９８２）によって修正されたものを使用して、リンパ球および不死化骨髄腫細胞から調製することができる。Ｘ６３－Ａｇ８．６５３およびＳａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．，ＵＳＡからのものを含むがこれらに限定されない利用可能な骨髄腫株を、ハイブリダイゼーションに使用することができる。一般に、この技法は、ポリエチレングリコールなどのフソゲン（ｆｕｓｏｇｅｎ）を使用して、または当業者に周知の電気的手段によって、骨髄腫細胞とリンパ球系細胞を融合させることを含む。融合後、細胞を融合培地から分離し、ヒポキサンチン－アミノプテリン－チミジン（ＨＡＴ）培地などの選択的成長培地で成長させて、ハイブリダイズしていない親細胞を排除する。血清の有無にかかわらず、本明細書に記載の培地のいずれも、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを培養するために使用することができる。細胞融合技法の別の代替法として、ＥＢＶ不死化Ｂ細胞を使用して、本明細書に記載の抗免疫細胞受容体モノクローナル抗体を産生することができる。ハイブリドーマは、必要に応じて増やされかつサブクローン化され、上清は、従来の免疫学的試験法（例えば、放射免疫測定法、酵素免疫測定法、または蛍光免疫測定法）によって抗免疫原活性についてアッセイされる。
抗体の供給源として使用できるハイブリドーマは、標的免疫細胞受容体の活性を調節することができるモノクローナル抗体を産生する親ハイブリドーマのすべての誘導体、子孫細胞を包含する。そのような抗体を産生するハイブリドーマは、既知の手順を使用してインビトロまたはインビボで成長させることができる。モノクローナル抗体は、必要に応じて、硫酸アンモニウム沈殿、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィー、および限外濾過などの従来の免疫グロブリン精製手順によって、培養培地または体液から単離することができる。望ましくない活性が存在する場合、例えば、固相に付着した免疫原で作製された吸着剤上で調製物を処理し、免疫原から所望の抗体を溶出または放出させることによって除去することができる。二官能性または誘導体化剤、例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介した結合）、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介した）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（式中、ＲおよびＲ１は異なるアルキル基である）を使用する、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、または大豆トリプシン阻害剤など、免疫される種において免疫原性であるタンパク質にコンジュゲートした標的抗原または標的アミノ酸配列を含むフラグメントによる宿主動物の免疫化は、抗体の集団（例えば、モノクローナル抗体）を得ることができる。
必要に応じて、（例えば、ハイブリドーマによって産生される）目的の抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）を配列決定し、次にポリヌクレオチド配列をベクターにクローン化して、本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体をさらに構築することができる。目的の抗体をコードする配列は、宿主細胞内のベクターで維持され得、その後、宿主細胞は増やされかつ将来の使用のために凍結され得る。
あるいは、ポリヌクレオチド配列は、抗体を「ヒト化」するため、または親和性（親和性成熟）、または抗体の他の特性を改善するための遺伝子操作のために使用され得る。例えば、抗体がヒトでの臨床試験および治療に使用される場合、免疫応答を回避するために、定常領域をヒト定常領域により類似するように操作することができる。抗体配列を遺伝的に操作して、標的抗原に対するより大きな親和性および免疫細胞受容体の活性を阻害または活性化する際のより大きな効力を得ることが望ましい場合がある。１つ以上のポリヌクレオチドの変更を抗体に対して行うことができ、それでも標的受容体に対するその結合特異性を維持することができることは当業者には明らかであろう。
他の実施形態では、完全ヒト抗体は、特定のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作された市販のマウスを使用することによって取得することができる。より望ましい（例えば、完全ヒト抗体）またはより強力な免疫応答を産生するように設計されたトランスジェニック動物もまた、ヒト化またはヒト抗体の生成に使用され得る。このような技術の例としては、Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．（Ｆｒｅｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆ．）からのＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（登録商標）およびＭｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）からのＨｕＭＡｂ－Ｍｏｕｓｅ（登録商標）およびＴＣ ＭｏｕｓｅＴＭがある。別の代替法では、抗体は、ファージディスプレイまたは酵母技術によって組換え的に作製され得る。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号、同第５，５８０，７１７号、同第５，７３３，７４３号、および同第６，２６５，１５０号、ならびにＷｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３－４５５を参照されたい。
あるいは、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５３）、酵母ディスプレイ技術、または哺乳動物細胞ディスプレイ技術などの抗体ライブラリー技術を使用して、標的免疫受容体に特異的なヒト抗体などの抗体を単離することができる。
ヒト化抗体を構築するための方法もまた、当技術分野でよく知られている。例えば、Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８６：１００２９－１００３３（１９８９）を参照されたい。一例では、親非ヒト抗体のＶＨおよびＶＬの可変領域は、当技術分野で知られている方法に従って三次元分子モデリング分析に供される。次に、正しいＣＤＲ構造の形成に重要であると予測されるフレームワークアミノ酸残基が、同じ分子モデリング分析を使用して同定される。並行して、親非ヒト抗体のアミノ酸配列と相同であるアミノ酸配列を有するヒトＶＨおよびＶＬ鎖は、検索クエリとして親ＶＨおよびＶＬ配列を使用して任意の抗体遺伝子データベースから同定される。次に、ヒトＶＨおよびＶＬアクセプター遺伝子が選択される。
選択されたヒトアクセプター遺伝子内のＣＤＲ領域は、親非ヒト抗体またはその機能的バリアントからのＣＤＲ領域で置き換えることができる。必要に応じて、ＣＤＲ領域との相互作用に重要であると予測される親鎖のフレームワーク領域内の残基（上記の説明を参照）を使用して、ヒトアクセプター遺伝子の対応する残基を置き換えることができる。
標的免疫細胞受容体に結合できる抗体が取得されたら、その重鎖のコード配列を、好適なＦｃバリアントのコード配列とインフレームで融合させることができ、それはＦｃｇＲＩＩＢに選択的に結合する可能性がある、またはＦｃγＲに結合しない、例えば、通常の組換え技術を介して本明細書に記載されているＦｃバリアントのいずれかである。場合によっては、抗体は、それが結合する免疫細胞受容体を活性化するそのアゴニスト効果について最初に調査される。そのようなアゴニスト抗体は、アゴニスト効果を増強するために本明細書に記載のＣＤ４０結合分子を作製するのに選択することができる。
他の例では、抗体は、それが結合する免疫細胞受容体を阻害するその拮抗作用について最初に調査される。そのようなアンタゴニスト抗体は、免疫応答を下方調節するために本明細書に記載のＣＤ４０結合分子を作製するのに選択することができる。あるいは、ＣＤ４０アンタゴニストを作製するために、Ｆｃ受容体に対する結合活性が低いかまたは全くないＦｃバリアントを選択することができる。
得られた抗体分子または本明細書に記載のＣＤ４０結合分子は、以下に例示するような通常の組換え技術を介して産生することができる。本明細書に記載の抗体またはＣＤ４０結合分子のポリペプチドの重鎖および軽鎖をコードする核酸は、１つの発現ベクターにクローン化することができ、各ヌクレオチド配列は、好適なプロモーターに作動可能に連結している。一例では、重鎖および軽鎖をコードするヌクレオチド配列のそれぞれは、別個のプロンプターに作動可能に連結されている。あるいは、重鎖および軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、重鎖および軽鎖の両方が同じプロモーターから発現されるように、単一のプロモーターと作動可能に連結され得る。必要に応じて、内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）を重鎖と軽鎖のコード配列の間に挿入することができる。
いくつかの例では、抗体の２つの鎖をコードするヌクレオチド配列は、２つのベクターにクローン化され、これは、同じまたは異なる細胞に導入することができる。２つの鎖が異なる細胞で発現される場合、それらのそれぞれは、それを発現する宿主細胞から単離され得、そして単離された重鎖および軽鎖は、抗体の形成を可能にする好適な条件下で混合およびインキュベートされ得る。
一般に、抗体の１つまたはすべての鎖をコードする核酸配列は、当技術分野で知られている方法を使用して、好適なプロモーターと作動可能に連結して好適な発現ベクターにクローン化することができる。例えば、ヌクレオチド配列およびベクターは、好適な条件下で、制限酵素と接触させて、互いに対になり、リガーゼと一緒に結合することができる各分子上に相補的末端を作成することができる。あるいは、合成核酸リンカーを遺伝子の末端に連結することができる。これらの合成リンカーには、ベクター内の特定の制限部位に対応する核酸配列が含まれている。発現ベクター／プロモーターの選択は、抗体の産生に使用する宿主細胞のタイプに依存する。
本明細書に記載の抗体の発現のために、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）中間初期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスＬＴＲ、ＨＩＶ－ＬＴＲ、ＨＴＬＶ－１ ＬＴＲなどのウイルスＬＴＲ、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）初期プロモーター、Ｅ．ｃｏｌｉ ｌａｃ ＵＶ５プロモーター、および単純ヘルペスｔｋウイルスプロモーターを含むがこれらに限定されない、様々なプロモーターを使用することができる。
調節可能なプロモーターも使用することができる。このような調節可能なプロモーターには、ｌａｃオペレーターを有する哺乳動物細胞プロモーターからの転写を調節するための転写モジュレーターとして、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のｌａｃリプレッサーを使用するもの［Ｂｒｏｗｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，４９：６０３－６１２（１９８７）］、テトラサイクリンリプレッサー（ｔｅｔＲ）を使用するもの［Ｇｏｓｓｅｎ，Ｍ．，ａｎｄ Ｂｕｊａｒｄ，Ｈ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：５５４７－５５５１（１９９２）、Ｙａｏ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，９：１９３９－１９５０（１９９８）、Ｓｈｏｃｋｅｌｔ，Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２：６５２２－６５２６（１９９５）］が含まれる。他のシステムには、アストラジオール（ａｓｔｒａｄｉｏｌ）、ＲＵ４８６、ジフェノールムリスレロン（ｄｉｐｈｅｎｏｌ ｍｕｒｉｓｌｅｒｏｎｅ）、またはラパマイシンを使用する、ＦＫ５０６ダイマー、ＶＰ１６またはｐ６５が含まれる。誘導システムは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、およびＡｒｉａｄから入手できる。
オペロンとともにリプレッサーを含む調節可能なプロモーターを使用することができる。一実施形態では、Ｅ．ｃｏｌｉ由来のｌａｃリプレッサーは、転写モジュレーターとして機能して、ｌａｃオペレーターを有する哺乳動物細胞プロモーターからの転写を調節することができ［Ｍ．Ｂｒｏｗｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ，４９：６０３－６１２（１９８７）］、Ｇｏｓｓｅｎ ａｎｄ Ｂｕｊａｒｄ（１９９２）、［Ｍ．Ｇｏｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：５５４７－５５５１（１９９２）］転写活性化因子（ＶＰ１６）を有するテトラサイクリンリプレッサー（ｔｅｔＲ）と組み合わせて、哺乳動物細胞における遺伝子発現を制御するｔｅｔＲ－ｔｅｔオペレーターシステムを作成するヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）の主要な最初期プロモーターに由来するｔｅｔＯを含む最小プロモーターを使用して、ｔｅｔＲ－哺乳動物細胞転写活性化因子融合タンパク質ｔＴａ（ｔｅｔＲ－ＶＰ１６）を作成する。一実施形態では、テトラサイクリン誘導性スイッチが使用される。テトラサイクリンオペレーターがＣＭＶＩＥプロモーターのＴＡＴＡエレメントの下流に適切に配置されている場合、ｔｅｔＲ－哺乳動物細胞転写因子融合誘導体ではなく、テトラサイクリンリプレッサー（ｔｅｔＲ）のみが、哺乳動物細胞における遺伝子発現を調節する強力なトランスモジュレーターとして機能できる（Ｙａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ）。このテトラサイクリン誘導性スイッチの１つの特定の利点は、その調節可能な効果を達成するために、テトラサイクリンリプレッサー－哺乳動物細胞トランス活性化因子またはリプレッサー融合タンパク質（場合によっては細胞に毒性があり得る）の使用を必要としないことである（Ｇｏｓｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：５５４７－５５５１（１９９２）、Ｓｈｏｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２：６５２２－６５２６（１９９５））。
さらに、ベクターは、例えば、以下のいくつかまたはすべてを含むことができる：哺乳動物細胞における安定または一過性のトランスフェクタントを選択するためのネオマイシン遺伝子などの選択可能なマーカー遺伝子、高レベルの転写のためのヒトＣＭＶの最初期遺伝子からのエンハンサー／プロモーター配列、ｍＲＮＡの安定性のためのＳＶ４０からの転写終結およびＲＮＡプロセシングシグナル、ＳＶ４０ポリオーマ複製起点および適切なエピソーム複製のためのＣｏｌＥ１、内部リボソーム結合部位（ＩＲＥＳ）、多用途（ｖｅｒｓａｔｉｌｅ）マルチプルクローニングサイト、ならびにセンスおよびアンチセンスＲＮＡのインビトロ転写用のＴ７およびＳＰ６ＲＮＡプロモーター。導入遺伝子を含むベクターを産生するための好適なベクターおよび方法はよく知られており、当技術分野で利用可能である。
本明細書に記載の方法を実施するのに有用なポリアデニル化シグナルの例には、ヒトコラーゲンＩポリアデニル化シグナル、ヒトコラーゲンＩＩポリアデニル化シグナル、およびＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが含まれるが、これらに限定されない。
抗体のいずれかをコードする核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）を、抗体を産生するための好適な宿主細胞に導入することができる。宿主細胞は、抗体またはその任意のポリペプチド鎖の発現に好適な条件下で培養することができる。そのような抗体またはそのポリペプチド鎖は、従来の方法、例えば、アフィニティー精製を介して、培養細胞によって（例えば、細胞または培養上清から）回収することができる。必要に応じて、抗体のポリペプチド鎖を好適な条件下で好適な期間インキュベートして、抗体の産生を可能にすることができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体を調製するための方法は、本明細書に記載の抗体の重鎖および軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターを含む。組換え発現ベクターは、従来の方法、例えばリン酸カルシウム媒介トランスフェクションによって、好適な宿主細胞（例えば、ｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞）に導入することができる。陽性の形質転換体宿主細胞を選択し、抗体を形成する２つのポリペプチド鎖の発現を可能にする好適な条件下で培養することができ、これらは細胞または培養培地から回収することができる。必要に応じて、宿主細胞から回収された２本の鎖を好適な条件下でインキュベートして、抗体の形成を可能にすることができる。
一例では、２つの組換え発現ベクターが提供され、１つは抗免疫細胞受容体抗体の重鎖をコードし、もう１つは同じ抗体の軽鎖をコードする。２つの組換え発現ベクターの両方は、従来の方法、例えば、リン酸カルシウム媒介トランスフェクションによって、好適な宿主細胞（例えば、ｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞）に導入することができる。あるいは、発現ベクターのそれぞれを好適な宿主細胞に導入することができる。陽性の形質転換体を選択し、抗体のポリペプチド鎖の発現を可能にする好適な条件下で培養することができる。２つの発現ベクターが同じ宿主細胞に導入される場合、そこで産生された抗体は、宿主細胞または培養培地から回収することができる。必要に応じて、ポリペプチド鎖を宿主細胞または培養培地から回収し、次に抗体の形成を可能にする好適な条件下でインキュベートすることができる。２つの発現ベクターを異なる宿主細胞に導入する場合、それらのそれぞれが対応する宿主細胞または対応する培養培地から回収できる。次に、２つのポリペプチド鎖を、抗体の形成に好適な条件下でインキュベートすることができる。
標準的な分子生物学技法を使用して、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、培養培地から抗体を回収する。例えば、一部の抗体は、プロテインＡまたはプロテインＧ結合マトリックスを使用したアフィニティークロマトグラフィーによって分離できる。
本明細書に記載の抗体の生物活性は、当技術分野で知られている、または本明細書に記載されているアッセイを使用して検証することができる。
ＩＩＩ．薬学的組成物
本開示は、ＣＤ４０結合分子または本明細書に記載の抗ＣＤ４０抗体のいずれかを含む薬学的組成物、およびＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌシグナル伝達によって誘発される免疫応答を調節するためのそのような使用を提供する。本明細書に記載のＣＤ４０結合分子または本明細書にまた記載の抗ＣＤ４０抗体は、癌または免疫関連障害などの疾患を治療するために使用することができる。
本明細書に記載のＣＤ４０結合分子または抗ＣＤ４０抗体は、薬学的に許容される担体（賦形剤）と混合して、標的疾患の治療に使用するための薬学的組成物を形成することができる。「許容される」とは、担体が組成物の活性成分（ａｃｔｉｖｅ ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ）と相溶性でなければならず（そして好ましくは、活性成分を安定化することができ）、治療される対象に有害であってはならないことを意味する。薬学的に許容される賦形剤（担体）は、当技術分野で周知である緩衝液を含む。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ Ｅｄ．（２０００）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｅｄ．ＫＥ． Ｈｏｏｖｅｒを参照されたい。
本発明の方法で使用される薬学的組成物は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、薬学的に許容される担体、賦形剤、または安定剤を含むことができる。（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ Ｅｄ．（２０００）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｅｄ．Ｋ．Ｅ． Ｈｏｏｖｅｒ）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、使用される投与量および濃度でレシピエントに対して無毒であり、ホスフェート、シトレート、および他の有機酸などの緩衝液、アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤、防腐剤（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、ヘキサメトニウムクロリド、ベンザルコニウムクロリド、ベンゼトニウムクロリド、フェノール、ブチルもしくはベンジルアルコール、メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、およびｍ－クレゾールなど）、低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニンまたはリジンなどのアミノ酸、単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストランを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、スクロース、マンニトール、トレハロースもしくはソルビトールなどの糖、ナトリウムなどの塩形成対イオン、金属複合体（例えば、Ｚｎ－タンパク質複合体）、および／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤、を含み得る。
いくつかの例では、本明細書に記載の薬学的組成物は、Ｅｐｓｔｅｉｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：３６８８（１９８５）、Ｈｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４０３０（１９８０）、ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載されているような当技術分野で知られている方法によって調製できる抗体（またはコード化核酸）を含むリポソームを含む。循環時間が増強されたリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、およびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ－ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法によって生成することができる。リポソームは、規定の孔径のフィルターを通して押し出され、所望の直径を有するリポソームを得る。
ＣＤ４０結合分子、抗ＣＤ４０抗体、またはコード化核酸（複数可）はまた、例えば、コアセルベーション技法によって、または界面重合によって、調製されたマイクロカプセル、例えば、コロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルジョンにおける、それぞれヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン－マイクロカプセルおよびポリ－マイクロカプセルおよびポリ－（メチルメタシレート）マイクロカプセル、に捕捉され得る。そのような技法は当技術分野で知られており、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ，Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０ｔｈ Ｅｄ．Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００）を参照されたい。
他の例では、本明細書に記載の薬学的組成物は、徐放性形式で製剤化することができる。徐放性調製物の好適な例には、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが含まれ、これらのマトリックスは、成形品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）、もしくはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ－グルタミン酸と７エチル－Ｌ－グルタメートとのコポリマー、非分解性エチレン－酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸－グリコール酸コポリマーと酢酸リュープロリドからなる注射用ミクロスフェア）などの分解性乳酸－グリコール酸コポリマー、イソ酪酸酢酸スクロース、およびポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸が含まれる。
インビボ投与に使用される薬学的組成物は、無菌でなければならない。これは、例えば、滅菌濾過膜による濾過によって容易に達成される。治療用抗体組成物は、一般に、無菌アクセスポートを有する容器、例えば、皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグまたはバイアルに入れられる。
本明細書に記載の薬学的組成物は、経口、非経口もしくは直腸の投与、または吸入もしくは吹送による投与ために、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、顆粒、溶液または懸濁液、または坐剤などの単位剤形（ｕｎｉｔ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍ）であり得る。
錠剤などの固体組成物を調製するために、主要な活性成分を薬学的担体、例えば、コーンスターチ、ラクトース、スクロース、ソルビトール、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウムまたはガムなどの従来の錠剤成分、ならびに例えば、水などの他の医薬希釈剤と混合し、本発明の化合物の均一な混合物、またはその非毒性の薬学的に許容される塩を含む固体の予備製剤組成物を形成する。これらの予備製剤組成物を均質なものとして言及する場合、活性成分が組成物全体に均一に分散され、その結果、組成物が錠剤、丸薬およびカプセルなどの同等に有効な単位剤形に容易に細分化され得ることを意味する。次に、この固体予備製剤組成物は、０．１～約５００ｍｇの本発明の活性成分を含む上記のタイプの単位剤形に細分化される。新規組成物の錠剤または丸薬は、コーティングするか、または他の方法で配合して、長期作用の利点を与える剤形を提供することができる。例えば、錠剤または丸薬は、内側投薬量および外側投薬量の成分を含むことができ、後者は前者を覆うエンベロープの形態である。２つの成分は、胃での崩壊に抵抗するのに役立ち、内側成分が無傷で十二指腸に通過するか、放出が遅れることを可能にする腸管層によって分離することができる。様々な材料をそのような腸溶層またはコーティングに使用することができ、そのような材料は、いくつかのポリマー酸、ならびにポリマー酸とシェラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースなどの材料との混合物を含む。
好適な界面活性剤には、特に、ポリオキシエチレンソルビタン（例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）２０、４０、６０、８０または８５）および他のソルビタン（例えば、Ｓｐａｎ（商標）２０、４０、６０、８０または８５）などの非イオン性薬剤が含まれる。界面活性剤を含む組成物は、便宜上、０．０５～５％の界面活性剤を含み、０．１～２．５％であり得る。必要に応じて、他の成分、例えばマンニトールまたは他の薬学的に許容されるビヒクルを添加できることが理解されよう。
好適なエマルジョンは、Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）、Ｌｉｐｏｓｙｎ（商標）、Ｉｎｆｏｎｕｔｒｏｌ（商標）、Ｌｉｐｏｆｕｎｄｉｎ（商標）、およびＬｉｐｉｐｈｙｓａｎ（商標）などの市販の脂肪エマルジョンを使用して調製することができる。活性成分は、予め混合されたエマルジョン組成物に溶解され得るか、あるいは、それを油（例えば、大豆油、ベニバナ油、綿実油、ゴマ油、コーン油またはアーモンド油）に溶解し、リン脂質（例えば、卵リン脂質、大豆リン脂質または大豆レシチン）および水との混合時にエマルジョンを形成することもできる。エマルジョンの張度を調整するために、他の成分、例えば、グリセロールまたはグルコースを添加できることが理解されよう。好適なエマルジョンは、典型的には、最大２０％、例えば５～２０％の油を含むであろう。脂肪エマルジョンは、０．１～１．０μｍ、特に０．１～０．５μｍの脂肪液滴を含み、５．５～８．０の範囲のｐＨを有する。
エマルジョン組成物は、抗体をＩｎｔｒａｌｉｐｉｄ（商標）またはその成分（大豆油、卵リン脂質、グリセロールおよび水）と混合することによって調製されたものであり得る。
吸入または吹送用の薬学的組成物には、薬学的に許容される水性溶媒もしくは有機溶媒、またはそれらの混合物の溶液および懸濁液、ならびに粉末が含まれる。液体または固体の組成物は、上記のような好適な薬学的に許容される賦形剤を含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、局所的または全身的効果のために経口または鼻呼吸経路によって投与される。
好ましくは無菌の薬学的に許容される溶媒の組成物は、ガスの使用によって噴霧され得る。噴霧された溶液は、噴霧装置から直接呼吸することができ、または噴霧装置をフェイスマスク、テント、または断続的な陽圧呼吸機器に取り付けることができる。溶液、懸濁液または粉末の組成物は、適切な方法で製剤を送達する装置から、好ましくは経口または経鼻的に投与することができる。
ＩＶ．治療応用
本明細書に開示されるＣＤ４０結合分子または抗ＣＤ４０抗体のいずれかを使用して、侵入病原体および／または癌細胞などの罹患細胞に対する免疫応答を調節（例えば、増強または阻害）することができる。
本明細書に開示される方法を実施するために、本明細書に記載の有効量の薬学的組成物を、静脈内投与などの好適な経路を介して、例えばボーラスとしてまたは一定期間にわたる持続注入により、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、滑液嚢内、髄腔内、経口、吸入または局所経路により、治療を必要とする対象（例えば、ヒト）に投与することができる。ジェットネブライザーおよび超音波ネブライザーを含む、液体製剤用の市販のネブライザーは、投与に有用である。液体製剤は直接噴霧することができ、凍結乾燥粉末は再構成後に噴霧することができる。あるいは、本明細書に記載の抗体は、フルオロカーボン製剤および定量吸入器を使用してエアロゾル化するか、または凍結乾燥および粉砕粉末として吸入することができる。
本明細書に記載の方法によって治療される対象は、哺乳動物、より好ましくはヒトであり得る。哺乳動物には、家畜、スポーツ動物、ペット、霊長類、馬、犬、猫、マウス、ラットが含まれるが、これらに限定されない。
場合によっては、対象は、肺癌、胃癌、肝臓癌、乳癌、皮膚癌、膵臓癌、脳癌、前立腺癌、膀胱癌、または結腸直腸癌を含むがこれらに限定されない、癌などの細胞媒介性の疾患または障害を患っているか、またはそのリスクがあるヒト患者である。さらなる例示的な癌には、乳癌、胆道癌、膀胱癌、膠芽腫および髄芽腫を含む脳癌、子宮頸癌、絨毛癌、結腸癌、子宮内膜癌、食道癌、胃癌、急性リンパ性白血病および骨髄性白血病を含む血液腫瘍、例えば、Ｂ細胞ＣＬＬ、Ｔ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫、有毛細胞白血病、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、エイズ関連白血病および成人Ｔ細胞白血病／リンパ腫、ボーエン病およびパジェット病を含む上皮内腫瘍、肝臓癌、肺癌、ホジキン病およびリンパ球性リンパ腫を含むリンパ腫、神経芽細胞腫、扁平上皮癌を含む口腔癌、上皮細胞、間質細胞、生殖細胞および間葉系細胞から生じるものを含む卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、直腸癌、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫、および骨肉腫を含む肉腫、黒色腫、メルケル細胞癌、カポジ肉腫、基底細胞癌、および扁平上皮癌を含む皮膚癌、セミノーマ、非セミノーマ（奇形腫、絨毛癌）、間質腫瘍、胚細胞腫瘍などの胚性腫瘍を含む精巣腫瘍、甲状腺腺癌および髄様癌を含む甲状腺癌、ならびに腺癌およびウィルムス腫瘍を含む腎癌、が含まれるが、これらに限定されない。癌を患っている対象は、日常の健康診断、例えば、臨床検査、臓器機能検査、ＣＴスキャン、または超音波によって同定することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法によって治療される対象は、抗癌療法、例えば、化学療法、放射線療法、免疫療法、または外科手術を受けた、または受けているヒト癌患者であり得る。
他の例では、対象は、免疫関連障害を患っているか、またはそのリスクがあるヒト患者である。免疫関連障害とは、自己免疫疾患、免疫不全、および／またはアレルギーを含む免疫系の機能障害を指す。一実施形態では、免疫関連障害は自己免疫疾患である。免疫関連障害の例には、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、重量筋無力症（ＭＧ）、グレーブス病、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ギラン－バレー症候群、自己免疫性心筋炎、膜糸球体腎炎、真性糖尿病、Ｉ型またはＩＩ型糖尿病、多発性硬化症、レイノー症候群、自己免疫性甲状腺炎、胃炎、セリアック病、白斑症、肝炎、原発性胆汁性肝硬変、炎症性腸疾患、脊椎関節症、実験的自己免疫性脳脊髄炎、免疫性好中球減少症、若年発症糖尿病、ならびにサイトカイン、結核、サルコイドーシス、および多発性筋炎に典型的に見られるＴリンパ球によって媒介される遅延型過敏症に関連する免疫応答、多発性動脈炎、皮膚血管炎、天疱瘡、類天疱瘡、グッドパスチャー症候群、川崎病、全身性硬化症、抗リン脂質症候群、シェーグレン症候群、移植片対宿主（ＧＶＨ）病、および免疫性血小板減少症、が含まれるが、これらに限定されない。免疫関連障害を患っている対象は、例えば、臨床検査などの定期健康診断によって同定することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法によって治療される対象は、免疫関連障害治療、例えば、免疫抑制媒介、ホルモン補充療法、輸血、抗炎症薬、および／または鎮痛薬、を受けた、または受けている免疫関連障害を有するヒト対象であり得る。
本明細書で使用される場合、「有効量」とは、単独で、または１つ以上の他の活性剤と組み合わせて、対象に治療効果を与えるのに必要な各活性剤の量を指す。いくつかの実施形態では、治療効果は、標的免疫受容体を調節する（例えば、活性化する）ことであり、それにより、受容体によって媒介される免疫応答を誘発または増強する。本明細書に記載の組成物の量が治療効果を達成したかどうかの決定は、当業者には明らかであろう。当業者によって認識されるように、有効量は、治療される特定の状態、状態の重症度、年齢、体調、サイズ、性別および体重、治療期間、併用療法の性質（もしある場合）、特定の投与経路、および医療従事者の知識および専門知識の範囲内の同様の要因を含む個々の患者のパラメータに応じて変化する。これらの要因は当業者によく知られており、日常的な実験のみで対処することができる。一般に、個々の成分またはそれらの組み合わせの最大用量、すなわち、健全な医学的判断による最高の安全用量を使用することが好ましい。
半減期などの経験的考察は、一般的に投与量の決定に寄与する。例えば、ヒト化抗体または完全ヒト抗体などのヒト免疫系と適合性のある分子を使用して、抗体の半減期を延長し、抗体が宿主の免疫系によって攻撃されるのを防ぐことができる。投与頻度は、療法の過程にわたって決定および調整することができ、一般に、必ずしもではないが、標的疾患／障害の治療および／または抑制および／または改善および／または遅延に基づく。あるいは、抗体の徐放性製剤が適切である場合もある。徐放を達成するための様々な製剤および装置が当技術分野で知られている。
一例では、本明細書に記載のＣＤ４０結合分子または抗ＣＤ４０抗体の投与量は、抗体の１回以上の投与（複数可）を受けた個体において経験的に決定され得る。個体には、アゴニストの漸増投与量が与えられる。アゴニストの有効性を評価するために、疾患／障害の指標を追跡することができる。
一般に、本明細書に記載のＣＤ４０結合分子または抗ＣＤ４０抗体などの治療薬のいずれかの投与の場合、最初の候補投与量は約２ｍｇ／ｋｇであり得る。本開示の目的のために、典型的な１日投与量は、上記の要因に応じて、約０．１μｇ／ｋｇ～３μｇ／ｋｇ～３０μｇ／ｋｇ～３００μｇ／ｋｇ～３ｍｇ／ｋｇ、～３０ｍｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇ以上のいずれかの範囲であり得る。状態に応じて、数日以上の反復投与の場合、所望する症状の抑制が起こるまで、または標的疾患もしくは障害、もしくはその症状を緩和するのに十分な治療レベルが達成されるまで、治療が持続される。例示的な投薬計画は、約２ｍｇ／ｋｇの初期用量、続いて約１ｍｇ／ｋｇの抗体の毎週の維持用量、またはその後に隔週で約１ｍｇ／ｋｇの維持用量を投与することを含む。しかしながら、医師が達成したい薬物動態学的崩壊のパターンに応じて、他の投与計画が有用であり得る。例えば、週に１～４回からの投薬が企図されている。いくつかの実施形態では、約３μｇ／ｍｇ～約２ｍｇ／ｋｇ（例えば、約３μｇ／ｍｇ、約１０μｇ／ｍｇ、約３０μｇ／ｍｇ、約１００μｇ／ｍｇ、約３００μｇ／ｍｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、および約２ｍｇ／ｋｇ）の範囲の投薬が使用できる。いくつかの実施形態では、投薬頻度は、毎週１回、２週間ごと、４週間ごと、５週間ごと、６週間ごと、７週間ごと、８週間ごと、９週間ごと、もしくは１０週間ごと、または、毎月１回、２か月ごと、または３か月ごと、もしくはそれ以上である。この療法の進行は、従来の技法およびアッセイによって簡単に監視される。投薬計画（使用される治療法を含む）は、時間とともに変化する可能性がある。
いくつかの実施形態では、正常体重の成人患者に対して、約０．３～５．００ｍｇ／ｋｇの範囲の用量を投与することができる。いくつかの例では、本明細書に記載の抗体などの治療薬の投与量は、１０ｍｇ／ｋｇであり得る。特定の投与計画、すなわち、用量、タイミング、および繰り返しは、特定の個体およびその個体の病歴、ならびに個々の薬剤の特性（薬剤の半減期、および当技術分野で周知の他の考慮事項など）に応じて変化するであろう。
本開示の目的のために、本明細書に記載のＣＤ４０結合分子または抗ＣＤ４０抗体の適切な投与量は、使用される特定の抗体、複数の抗体および／または非抗体ペプチド（またはこれらの組成物）、疾患／障害のタイプおよび重症度、ＣＤ４０結合分子または抗ＣＤ４０抗体が予防目的あるいは治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴およびアゴニストに対する応答、および主治医の裁量に依存する。典型的には、臨床医は、所望の結果を達成する投与量に達するまで、ＣＤ４０結合分子または抗ＣＤ４０抗体を投与する。いくつかの実施形態では、所望の結果は、血栓症の減少である。投薬量が所望の結果をもたらしたかどうかを決定する方法は、当業者には明らかであろう。１つ以上のＣＤ４０結合分子または抗ＣＤ４０抗体の投与は、例えば、レシピエントの生理学的状態、投与の目的が治療的であるかまたは予防的であるか、および熟練した医師に知られている他の要因に応じて、連続的または断続的であり得る。ＣＤ４０結合分子または抗ＣＤ４０抗体の投与は、事前に選択された期間にわたって本質的に連続的であり得るか、または、例えば、標的疾患または障害の発症前、発症中、または発症後のいずれかである一連の間隔をあけた用量であり得る。
本明細書で使用される場合、「治療する」という用語は、障害、疾患の症状、または疾患もしくは障害への素因を治療、治癒、緩和、軽減、変更、救済、向上、改善、または影響することを目的として、標的疾患または障害、疾患／障害の症状、または疾患／障害への素因を有する対象への１つ以上の活性剤を含む組成物の適用または投与を指す。
標的疾患／障害の緩和には、疾患の発症または進行の遅延、または疾患の重症度の低減が含まれる。疾患の緩和は必ずしも治癒的な結果を必要としない。本明細書で使用される場合、標的疾患または障害の発症を「遅延させる」とは、疾患の進行を保留、妨害、減速、遅延、安定化、および／または延期することを意味する。この遅延は、疾患の病歴および／または治療されている個体に応じて、様々な長さの時間であり得る。疾患の発症を「遅延させる」もしくは緩和する方法、または疾患の発病を遅延させる方法は、本方法を使用しない場合と比較した場合、所与の時間枠内で疾患の１つ以上の症状を発症する可能性を低減し、および／または特定の時間枠内で症状の程度を低減する方法である。このような比較は典型的には、統計的に有意な結果をもたらすのに十分な数の対象を使用した臨床研究に基づいている。
疾患の「発症」または「進行」は、疾患の初期症状および／またはその後の進行を意味する。疾患の発症は、当技術分野で周知の標準的な臨床技法を使用して検出可能であり、評価することができる。しかしながら、発症とは、検出できない可能性のある進行も指す。本開示の目的のため、発症または進行とは、症状の生物学的経過を指す。「発症」には、発現、再発、および発病が含まれる。本明細書で使用される場合、標的疾患または障害の「発病」または「発現」には、初期の発病および／または再発が含まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の抗体は、治療を必要とする対象に、標的受容体の活性をインビボで少なくとも２０％（例えば、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％以上）活性化するのに十分な量で投与される。
治療される疾患のタイプまたは疾患の部位に応じて、医学分野の当業者に知られている従来の方法を使用して、薬学的組成物を対象に投与することができる。この組成物はまた、他の従来の経路を介して投与され、例えば、経口的に、非経口的に、吸入スプレーによって、局所的に、直腸的に、鼻腔的に、頬側に、膣内に、または移植リザーバーを介して投与され得る。本明細書で使用される「非経口」という用語は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、髄腔内、病変内、および頭蓋内の注射または注入技法を含む。さらに、１ヶ月、３ヶ月、または６ヶ月のデポー注射可能または生分解可能な材料および方法を使用するなどの注射可能なデポー投与経路を介して対象に投与することができる。いくつかの例では、薬学的組成物は、眼内または硝子体内に投与される。
注射可能な組成物は、植物油、ジメチルアクタミド、ジメチルホルムアミド、乳酸エチル、炭酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、エタノール、およびポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）などの様々な担体を含み得る。静脈内注射の場合、水溶性抗体は点滴法によって投与することができ、それにより、抗体および生理学的に許容される賦形剤を含む薬学的製剤が注入される。生理学的に許容される賦形剤には、例えば、５％デキストロース、０．９％生理食塩水、リンゲル液または他の好適な賦形剤が含まれ得る。筋肉内調製物、例えば、抗体の好適な可溶性塩形態の滅菌製剤は、注射用水、０．９％生理食塩水、または５％グルコース溶液などの薬学的賦形剤に溶解および投与することができる。
本明細書に記載の方法で使用される特定の投与計画、すなわち、用量、タイミング、および反復は、特定の対象およびその対象の病歴に依存するであろう。
いくつかの実施形態では、２つ以上の抗体、または抗体と別の好適な治療薬との組み合わせを、治療を必要とする対象に投与することができる。ＣＤ４０結合分子または抗ＣＤ４０抗体はまた、薬剤の有効性を増強および／または補完するのに役立つ他の薬剤と組み合わせて使用することができる。
標的疾患／障害の治療効果は、当技術分野で周知の方法によって評価することができる。
本明細書に記載の治療薬は、癌などの標的疾患に対する他のタイプの治療と組み合わせて利用することができる。追加の抗癌療法には、化学療法、手術、放射線療法、遺伝子療法などが含まれる。第２の治療薬が使用される場合、そのような薬剤は、本明細書に記載のＣＤ４０結合分子または抗ＣＤ４０抗体と同時にまたは連続して（任意の順序で）投与することができる。
追加の治療薬と同時投与される場合、各薬剤の好適な治療上有効な投与量は、相加作用または相乗効果のために低減され得る。
本開示の治療は、例えば、治療ワクチン（ＧＶＡＸ、ＤＣベースのワクチンなどを含むがこれらに限定されない）、またはチェックポイント阻害剤（ＣＴＬＡ４、ＰＤ１、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３など、を遮断する薬剤を含むがこれらに限定されない）などの他の免疫調節治療と組み合わせることができる。あるいは、本開示の治療は、化学療法剤と組み合わせることができ、例えば、ピリミジン類似体（５－フルオロウラシル、フロクスウリジン、カペシタビン、ゲムシタビンおよびシタラビン）、プリン類似体、葉酸拮抗剤および関連する阻害剤（メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチンおよび２－クロロデオキシアデノシン（クラドリビン））；ビンカアルカロイド（ビンブラスチン、ビンクリスチン、およびビノレルビン）などの天然物、タキサン（パクリタキセル、ドセタキセル）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ノコダゾール、エポチロンおよびナベルビンなどの微小管撹乱物質（ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ ｄｉｓｒｕｐｔｏｒ）、エピジポドフィロトキシン（エトポシド、テニポシド）、ＤＮＡ傷害剤（アクチノマイシン、アムサクリン、アントラサイクリン、ブレオマイシン、ブスルファン、カンプトテシン、カルボプラチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、サイトキサン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、エピルビシン、ヘキサメチルネラミンオキサリプラチン、イホスファミド、メルファラン、メクロレタミン、マイトマイシン、ミトキサントロン、ニトロソウレア、プリカマイシン、プロカルバジン、タキソール、タキソテール、テニポシド、トリエチレンチオホスホルアミドおよびエトポシド（ＶＰ１６））を含む抗増殖／有糸分裂阻害薬；ダクチノマイシン（アクチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、イダルビシン、アントラサイクリン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ミトラマイシン）、マイトマイシンなどの抗生物質；酵素（Ｌ－アスパラギンを全身的に代謝し、独自のアスパラギンを合成する能力を持たない細胞を欠乏させる（ｄｅｐｒｉｖｅ）Ｌ－アスパラギナーゼ）；抗血小板薬、ナイトロジェンマスタード（メクロレタミン、シクロホスファミドおよび類似体、メルファラン、クロラムブシル）、エチレンイミンおよびメチルメラミン（ヘキサメチルメラミンおよびチオテパ）、アルキルスルホネート－ブスルファン、ニトロソウレア（カルムスチン（ＢＣＮＵ）および類似体、ストレプトゾシン）、トラゼン（ｔｒａｚｅｎｅｓ）－ダカルバジニン（ｄａｃａｒｂａｚｉｎｉｎｅ）（ＤＴＩＣ）などの抗増殖／有糸分裂阻害性アルキル化剤；葉酸類似体（メトトレキサート）などの抗増殖／有糸分裂阻害性代謝拮抗剤；白金配位錯体（シスプラチン、カルボプラチン）、プロカルバジン、ヒドロキシ尿素、ミトタン、アミノグルテチミド；ホルモン、ホルモン類似体（エストロゲン、タモキシフェン、ゴセレリン、ビカルタミド、ニルタミド）およびアロマターゼ阻害剤（レトロゾール、アナストロゾール）；抗凝固剤（ヘパリン、合成ヘパリン塩およびその他のトロンビン阻害剤）；線維素溶解薬（組織プラスミノーゲン活性化因子、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼなど）、アスピリン、ジピリダモール、チクロピジン、クロピドグレル、アブシキシマブ；抗遊走剤（ａｎｔｉｍｉｇｒａｔｏｒｙ ａｇｅｎｔ）；分泌抑制剤（ブレベルジン（ｂｒｅｖｅｌｄｉｎ））；免疫抑制剤（シクロスポリン、タクロリムス（ＦＫ－５０６）、シロリムス（ラパマイシン）、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル）：抗血管新生化合物（例えば、ＴＮＰ－４７０、ゲニステイン、ベバシズマブ）および成長因子阻害剤（例えば、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）阻害剤）；アンジオテンシン受容体遮断薬；一酸化窒素ドナー；アンチセンスオリゴヌクレオチド；抗体（トラスツズマブ）；細胞周期阻害剤および分化誘導剤（トレチノイン）；ｍＴＯＲ阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤（ドキソルビシン（アドリアマイシン）、アムサクリン、カンプトテシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、エニポシド、エピルビシン、エトポシド、イダルビシンおよびミトキサントロン、トポテカン、イリノテカン）、コルチコステロイド（コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルペドニゾロン（ｍｅｔｈｙｌｐｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ）、プレドニゾン、プレニゾロン（ｐｒｅｎｉｓｏｌｏｎｅ）；成長因子シグナル伝達キナーゼ阻害剤；ミトコンドリア機能障害誘導物質（ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｅｒ）およびカスパーゼ活性化薬；クロマチン撹乱物質（ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｄｉｓｒｕｐｔｏｒ）である。
追加の有用な薬剤の例については、また、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５９．ｓｕｐ．ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，（２００５），Ｔｈｏｍｓｏｎ Ｐ Ｄ Ｒ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ Ｎ．Ｊ．、Ｇｅｎｎａｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２０．ｓｕｐ．ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，（２０００），Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ Ｍｄ．、Ｂｒａｕｎｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．Ｈａｒｒｉｓｏｎ’ｓ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１５．ｓｕｐ．ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，（２００１），ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ，ＮＹ、Ｂｅｒｋｏｗ ｅｔ ａｌ．，Ｅｄｓ．Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ，（１９９２），Ｍｅｒｃｋ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｒａｈｗａｙ Ｎ．Ｊ．を参照されたい。
Ｖ．キット
本開示はまた、本明細書に記載のＣＤ４０結合分子または抗ＣＤ４０抗体のいずれかを使用して所望の免疫応答を増強するのに使用するためのキットを提供する。
いくつかの実施形態では、キットは、本明細書に記載の方法のいずれかに従って使用するための取扱説明書を含むことができる。含まれる説明書は、本明細書に記載されているもののように、標的疾患を治療、発症を遅らせる、または軽減するための治療薬の投与の説明を含むことができる。キットは、その個体が標的疾患を有するかどうかを同定することに基づいて、治療に好適な個体を選別することの説明をさらに含み得る。さらに他の実施形態では、説明書は、標的疾患のリスクのある個体に抗体などの治療薬を投与することの説明を含む。
治療薬の使用に関する説明書は、一般に、意図された治療のための投薬量、投薬スケジュール、および投与経路に関する情報を含む。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば、複数回投与パッケージ）またはサブユニット用量であり得る。本発明のキットで提供される取扱説明書は、典型的には、ラベルまたは添付文書（例えば、キットに含まれる紙シート）に書かれた取扱説明書であるが、機械可読の取扱説明書（例えば、磁気または光学記憶ディスクで伝送される取扱説明書）も許容される。
ラベルまたは添付文書は、組成物が、癌などの標的疾患または障害を治療、発症を遅らせる、および／または緩和するために使用されることを示している。本明細書に記載の方法のいずれかを実施するための取扱説明書が提供され得る。
本発明のキットは、好適なパッケージに入っている。好適な包装には、バイアル、ボトル、ジャー、フレキシブル包装（例えば、密封されたＭｙｌａｒまたはプラスチック袋）などが含まれるが、これらに限定されない。吸入器、経鼻投与装置（例えば、噴霧器）またはミニポンプなどの輸液装置などの特定の装置と組み合わせて使用するためのパッケージも企図される。キットは、無菌のアクセスポートを有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ、または皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有するバイアルであり得る）。容器は、無菌のアクセスポートも有し得る（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ、または皮下注射針によって貫通可能なストッパーを有するバイアルであり得る）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本明細書に記載されるものとしての治療剤である。
キットは、任意選択で、緩衝液および説明情報などの追加要素を提供する場合がある。通常、キットは、容器、および容器上または容器に関連するラベルまたは添付文書を含む。いくつかの実施形態では、本発明は、上記のキットの内容物を含む製品を提供する。
一般的技法
本発明の実施は、他に示されない限り、当技術分野の技術の範囲内である、分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来の技法を使用する。そのような技法は例えば、以下のような文献で完全に説明されている：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ｅｔ ａｌ．，１９８９）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ，ｅｄ．，１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）、Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ，Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，ａｎｄ Ｄ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ，ｅｄｓ．，１９９３－８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．）、Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．，１９８７）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７）、ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ，（Ｍｕｌｌｉｓ，ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９４）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９１）、Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，１９９９）、Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ａｎｄ Ｐ．Ｔｒａｖｅｒｓ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ，１９９７）、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ．，ｅｄ．，ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，１９８８－１９８９）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ．Ｄｅａｎ，ｅｄｓ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，２０００）、Ｕｓｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９９）、Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．Ｚａｎｅｔｔｉ ａｎｄ Ｊ．Ｄ．Ｃａｐｒａ，ｅｄｓ．，Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９５）。
さらなる詳細なしに、当業者が、上記の説明に基づいて、本発明を最大限に利用することができると考えられる。したがって、本明細書で提供される特定の実施形態は、単なる例示として解釈されるべきであり、いかなる方法であれ、本開示の残りの部分を限定するものではない。本明細書で引用されるすべての刊行物は、本明細書で参照される目的または主題のために参照により組み込まれる。
実施例１．操作されたＦｃ領域を有する抗ＣＤ４０抗体
様々な重鎖ＣＨ１およびＦｃ領域またはヒトカッパ軽鎖定常領域を有する抗ＣＤ４０抗体可変ドメインをコードするｃＤＮＡ配列を合成し、クローン化した。対応する重鎖および軽鎖配列を含むプラスミドを用いて、ＣＨＯ一過性発現を実施した。これらの抗体をプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。重鎖（ＨＣ）および軽鎖（ＬＣ）のアミノ酸配列を以下に示す。
３８３－ｈｕＩｇＧ ＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＹＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＴＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＩＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＴＶＡＡＰＳＶＦＩＦＰＰＳＤＥＱＬＫＳＧＴＡＳＶＶＣＬＬＮＮＦＹＰＲＥＡＫＶＱＷＫＶＤＮＡＬＱＳＧＮＳＱＥＳＶＴＥＱＤＳＫＤＳＴＹＳＬＳＳＴＬＴＬＳＫＡＤＹＥＫＨＫＶＹＡＣＥＶＴＨＱＧＬＳＳＰＶＴＫＳＦＮＲＧＥＣ（配列番号１４６）
３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍ２ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１４７）
３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍ２７ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１４８）
３８３－ｈｕＩｇＧ２ｍ１ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１４９）
３８３－ｈｕＩｇＧ２ｍ１９ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＥＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１５０）
３８３－ｈｕＩｇＧ２ｍ２０ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１５１）
３８３－ｈｕＩｇＧ４ｍ２ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１５２）
３８３－ｈｕＩｇＧ４ｍ２０ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１５３）
３８３－ｈｕＩｇＧ４ｍ３０ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号１５４）
３８３－ｍｓＩｇＧ ＬＣ
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＶＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＹＳＷＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＮＬＬＩＹＴＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＡＮＩＦＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ（配列番号１５５）
３８３－ｍｓＩｇＧ１ ＤＡＮＡ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＡＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＡＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号１５６）
３８３－ｍｓＩｇＧ１ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＴＰＰＳＶＹＰＬＡＰＧＳＡＡＱＴＮＳＭＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＶＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＰＳＳＴＷＰＳＥＴＶＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＶＰＲＤＣＧＣＫＰＣＩＣＴＶＰＥＶＳＳＶＦＩＦＰＰＫＰＫＤＶＬＴＩＴＬＴＰＫＶＴＣＶＶＶＤＩＳＫＤＤＰＥＶＱＦＳＷＦＶＤＤＶＥＶＨＴＡＱＴＱＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＳＶＳＥＬＰＩＭＨＱＤＷＬＮＧＫＥＦＫＣＲＶＮＳＡＡＦＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＲＰＫＡＰＱＶＹＴＩＰＰＰＫＥＱＭＡＫＤＫＶＳＬＴＣＭＩＴＤＦＦＰＥＤＩＴＶＥＷＱＷＮＧＱＰＡＥＮＹＫＮＴＱＰＩＭＤＴＤＧＳＹＦＶＹＳＫＬＮＶＱＫＳＮＷＥＡＧＮＴＦＴＣＳＶＬＨＥＧＬＨＮＨＨＴＥＫＳＬＳＨＳＰＧＫ（配列番号１５７）
３８３－ｍｓＩｇＧ２ａ ＤＡＮＡ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＡＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＡＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ（配列番号１５８）
３８３－ｍｓＩｇＧ２ａ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ（配列番号１５９）
追加のＦｃ変異体を作成し、重鎖（ＨＣ）のアミノ酸配列を以下に示す（軽鎖（ＬＣ）配列を上に示されている）。
３８３－ｈｕＩｇＧ１ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２０７）
３８３－ｈｕＩｇＧ２ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２０８）
３８３－ｈｕＩｇＧ４ＳＰ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２０９）
３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍＡＡ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２１０）
３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍ４０ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶａＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹａＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１９３）
３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍ４５ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰｐｖａＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１９４）
３８３－ｈｕＩｇ Ｇ１ｍ２４０ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＡＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１９５）
３８３－ｈｕＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹａＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１９６）
３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍ４７ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰｐｖａＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫｇＬＰｓｓＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１９７）
３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍ４８ ＨＣ
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３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍ４９ ＨＣ
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３８３－ｈｕＩｇＧ２Ｇ４ ＨＣ
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３８３－ｈｕＩｇＧ４ｍ４２ ＨＣ
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３８３－ｈｕＩｇＧ４ｍＰＥ ＨＣ
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３８３－ｈｕＩｇＧ４ｍＡＡ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥａａＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号６９）
実施例２．Ｆｃ変異体を有するＣＤ４０抗体の細胞ＦｃγＲに対する結合活性
の測定
細胞Ｆｃ受容体に対するＩｇＧ変異体におけるＣＤ４０活性の結合活性を決定するために、ＣＨＯ細胞は、当技術分野で知られているレンチウイルス送達システムを使用して、ヒトＦｃγＲ（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ、およびＦｃγＲＩＩＩ）を発現するように遺伝子操作された。
例示的な抗ＣＤ４０部分として本明細書に開示される抗ＣＤ４０抗体３８３を使用して、３８３－ｍｓＩｇＧ１、３８３－ｍｓＩｇＧ１ ＤＡＮＡ、３８３－ｍｓＩｇＧ２ａ、３８３－ｍｓＩｇＧ２ａ ＤＡＮＡ、３８３－ｈＩｇＧ２、対照ｈｕＩｇＧ１、３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍ２７、３８３－ｈｕＩｇＧ２ｍ１９、３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍ２、３８３－ｈｕＩｇＧ２ｍ１、３８３－ｈｕＩｇＧ２ｍ２０、３８３－ｈｕＩｇＧ４ｍ２、３８３－ｈｕＩｇＧ４ｍ２０、３８３－ｈｕＩｇＧ４ｍ３０、３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍＡＡ、および３８３－ｈｕＩｇＧ４ＳＰ（上に示されたアミノ酸配列）を含む多数の抗ＣＤ４０ＩｇＧＦｃ変異体が、本明細書の開示に従って設計および構築された。これらのＩｇＧ変異体には、上部ヒンジドメイン、下部ヒンジドメイン、またはＣＨ２ドメイン内に変異が含まれている。
様々なＦｃγＲに対するＩｇＧ変異体の結合をＦＡＣＳ分析するために、トリプシン－ＥＤＴＡを使用してＦｃγＲを過剰発現するＣＨＯ細胞を収集し、冷染色緩衝液（ＰＢＳ中３％ＢＳＡ）に懸濁した。染色緩衝液で希釈した試験ＩｇＧ変異体を細胞に加えた。混合物を４℃で２時間インキュベートした後、冷染色緩衝液で２回洗浄し、ＰＥ標識抗ヒトＩｇＧに再懸濁し、続いて４℃で２時間インキュベートした。混合物を染色緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳ用のＰＢＳ中の２％ＰＦＡに再懸濁した。
図１Ａ～１Ｄおよび３Ａ～３Ｄに示されるように、多くの抗ＣＤ４０ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、およびＩｇＧ４変異体は、細胞表面に発現されるＦｃγＲに対する結合活性を示したが、他のものは、試験したＦｃγＲに対して明らかな所見を示さなかった。結合特性の変化の概要は、上記の表２～４に記載されている。
実施例３．Ｆｃ領域を操作したＣＤ４０抗体は異なるＣＤ４０
アゴニスト活性を示した
ＩｇＧ変異体のアゴニスト活性を測定するために、ＣＤ４０レポーターアッセイが開発され、これには、ヒトＣＤ４０Ｔ細胞を過剰発現するレポーター細胞が含まれる。このＧＳ－Ｈ２－ｈｕＣＤ４０レポーター細胞をアッセイ緩衝液に再懸濁し、細胞密度と生存率をトリパンブルーで測定した。細胞懸濁液をアッセイ緩衝液（１％ＦＢＳを含むＭＥＭ）で、１×１０４細胞／ｍＬに希釈した。アッセイプレート（Ｎｕｎｃ、カタログ番号１６７４２５）で最終細胞数が１０００細胞／ウェルになるように、細胞を１００ｕＬ／ウェルで添加した。試験試料の連続作業希釈液を、２倍の最終濃度でアッセイ緩衝液に調製した。試料を、１００ｕＬ／ウェルの試験試料で２倍の最終濃度でアッセイプレートに添加した。アッセイプレートを３７℃、５％ＣＯ２のインキュベーターで１８～２０時間インキュベートした。１８～２０時間のインキュベーション後、アッセイプレートの各ウェルから８ｕｌの上清を収集し、ＨＴＲＦ検出アッセイプレート（Ｎｕｎｃ）に添加した。ヒトインターロイキン８（ＣＤ４０活性化のレポーター）検出アッセイは、ヒトＩＬ－８アッセイキット（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号６２ＩＬ８ＰＥＢ）を使用して実施した。具体的には、１６ｕｌのアッセイ容量を使用した。Ｔｅｃａｎ Ｆ２００ｐｒｏによるＴｉｍｅ Ｒｅｓｏｌｖｅｄ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅを使用して結果を読み取り、相対光単位データを記録した。
図２および図４Ａ～４Ｅに示されるように、試験された抗ＣＤ４０抗体ＩｇＧ変異体のすべては、ＩＬ８の分泌によって証明されるように、ヒトＣＤ４０活性化を刺激した。ＣＤ４０活性化の大きさは、各抗体アイソタイプ構造のヒンジの柔軟性により、そこに含まれるＦｃバリアントの影響を受けた。
ＣＤ４０レポーターアッセイは、ＦｃγＲＩＩＢを発現するＣＨＯ細胞との共培養でも実施され、結果は図４Ａ～４Ｄに示されている。微小環境で同時に試験された抗体分子によるＣＤ４０およびＦｃγＲ２Ｂへの結合は、個々の非共有結合相互作用の複数の親和性の累積強度を指すアビディティ効果により、個々の結合に影響を及ぼす。抗体は、ＦｃγＲＩＩＢに対する結合活性と相関する増加した活性を示した。ＦｃγＲＩＩＢに対する明らかな結合が弱いか全くないＦｃバリアントを有する抗体は、共培養レポーターアッセイにおいて増強されたアゴニスト活性を示し、アビディティ効果に起因する可能性があるレポーターアッセイのより高い感度を示唆することが注目された。したがって、抗体のＦｃ構造は、同じ可変ドメインを持つ抗体のアゴニスト活性に影響を与える可能性がある。
実施例４．樹状細胞（ＤＣ）機能アッセイにおける抗ＣＤ４０抗体ＩｇＧ変異体の特性評価
様々なＦｃ変異体を含む例示的な抗ＣＤ４０抗体Ｉｇバリアントを、上記の実施例に記載のＣＤ４０結合活性およびアゴニスト活性についてインビトロで、ならびに実施例６のように抗腫瘍効果および毒性についてインビボで試験した。ヒト樹状細胞を活性化するそれらの活性は、以下のように実施された。
健康なドナーからの凍結ヒトＰＢＭＣ（Ａｌｌｃｅｌｌｓ、カタログ番号ＰＢ００５Ｆ）を解凍し、２５ｍＬのＲＰＭＩ１６４０培地を含む５０ｍｌチューブに移した。ＥａｓｙＳｅｐ（商標）ＨｕｍａｎＣＤ１４ Ｐｏｓｉｔｉｖｅ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ ＩＩ（Ｓｔｅｍｃｅｌｌ、カタログ：１７８５８）を使用してＢ細胞を単離した。ＰＢＭＣ懸濁液を２５０ｇで１５分間遠心分離し、上清を捨てて細胞を１．５ｍＬのＥａｓｙＳｅｐ（商標）緩衝液に再懸濁する。選択カクテルを１４ｍＬ（１７ｘ１００ｍｍ）ポリスチレン丸底チューブの試料に加える。１００ｕｌ／ｍｌ、各試料に１５０ｕｌ。細胞を５０ｍｌチューブから１４ｍＬ（１７ｘ１００ｍｍ）ポリスチレン丸底チューブに移し、混合し、室温（ＲＴ）で１５分間インキュベートする。試料に移す前に磁性粒子を混合する。磁性粒子を試料に移す。５０ｕｌ／ｍｌ、各試料に７５ｕｌ。混合し、室温で１０分間インキュベートする。８．５ｍｌのＥａｓｙＳｅｐ（商標）緩衝液を加えて、試料を１０ｍＬまで補充する。軽く上下に２～３回ピペッティングして混合する。チューブを磁石に入れ、５分間インキュベートする。磁石を手に取り、１回の連続動作で磁石とチューブを反転させ、上清を注ぎ出す。Ｂ細胞濃縮のためにこの上清を収集する。上記の洗浄手順をさらに２回繰り返す。細胞を５ｍＬのＲＰＭＩ１６４０に再懸濁する。細胞密度を計数する。
ヒトＰＢＭＣから単離されたＣＤ１４＋細胞を、１×１０６細胞／ｍｌに調整し、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４を添加し、細胞培養培地に添加した。細胞を３７℃、５％ＣＯ２の加湿インキュベーターで３日間インキュベートする。３日目に、培養上清を遠心分離管に移して培地を交換し、２５０ｘｇで５分間遠心分離した。１０ｍｌのＧＮ－ＣＳＦとＩＬ－４を含む新鮮な培地を使用して、細胞ペレットを遠心分離管に懸濁した後、遠心分離中にフラスコに加えて、こうして形成された細胞ペレットが１０ｍｌの新鮮な培地に再懸濁されるようにした。再懸濁した細胞を同じウェルまたはフラスコに戻し、さらに２日間インキュベートした。５日目に、培地交換のために上記の手順を繰り返した。細胞をさらに２日間さらにインキュベートした。７日目には、未成熟な樹状細胞が観察でき、所望の用途で使用する準備が整う。
ＤＣ活性化アッセイを実施するため、Ｔ７５フラスコから細胞を含む培地を５０ｍｌチューブに取り、５００ｘｇで５分間室温で遠心分離する。上清を廃棄し、細胞を３ｍＬのＲＰＭＩ１６４０ １０％ＦＢＳ培地に再懸濁した。細胞密度を計数し、細胞濃度を１ｅ６／ｍＬに調整する。０．０５ｍＬの細胞懸濁液を２．５×１０４細胞／ウェルで９６ウェルプレートに添加した。ＨｕＩＬ－１２－Ｐ７０検出キット（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号：６２ＨＩＬ１２ＰＥＨ）およびＨｕＩＬ－８検出キット（Ｃｉｓｂｉｏ、カタログ番号：６２ＨＩＬ０８ＰＥＨ）を使用して、２４時間後（３日目）に細胞培養上清でＩＬ－８およびＩＬ１２Ｐ７０を検出した。ＤＣ活性化アッセイは、ＦｃγＲ２Ｂを発現するＣＨＯ細胞との共培養でも実施された。
図５Ａ～５Ｄに示されるように、試験されたＣＤ４０抗体ＩｇＧ変異体は、抗体インキュベーション後のＤＣ培養物からのＩＬ８の分泌によって証明されるように、様々な程度でヒトＣＤ４０活性化を刺激した。ＤＣ活性化の大きさは、各抗体アイソタイプ構造のヒンジの柔軟性とＤＣ培養によって発現されるＦｃ受容体との相互作用のために、そこに含まれるＦｃバリアントの影響を受けた。
ＣＤ４０活性化に対するＦｃ－ＦｃγＲＩＩＢ架橋の効果を確認するために、ＦｃγＲ２Ｂ発現ＣＨＯ細胞との共培養でＤＣ活性化も実施した。微小環境で抗体分子が同時にＣＤ４０およびＦｃγＲＩＩＢに結合すると、抗体のＣＤ４０アゴニスト効果の変化につながるアビディティ効果により、個々の結合に影響を及ぼす。抗体は、ＦｃγＲＩＩＢに対する結合活性と相関する増加した活性を示し、上記のレポーターアッセイでの観察と一致している。したがって、抗体のＦｃ構造は、同じ可変ドメインを持つ抗体の全体的なアゴニスト活性に影響を与える。
実施例５．ＩｇＧ変異体のＣＤ４０抗体は細胞ＣＤ４０に対して同様の結合を示す
ＦＡＣＳを使用して、例示的な抗ＣＤ４０抗体ＩｇＧバリアントの結合特性を評価した。ヒトＣＤ４０またはカニクイザルＣＤ４０を過剰発現しているＣＨＯ細胞を、トリプシン－ＥＤＴＡ部分消化、続いて１０００ｒｐｍでの５分間の遠心分離を用いて回収した。細胞を冷ＰＢＳ－ＢＳＡ（２％）に５ｘ１０６／ｍｌで再懸濁し、１００ｕｌ／チューブに分注した。キメラ抗ＣＤ４０抗体をＰＢＳ－ＢＳＡで３倍に希釈し（最終濃度は０．０１、０．１、１、および１０ｕｇ／ｍｌ）、各濃度の５０ｕｌをＣＨＯ－ＣＤ４０細胞に添加した。細胞溶液を混合し、暗所で４℃で２時間インキュベートした。次に、細胞をＰＢＳ－ＢＳＡで２回洗浄した。１００ｕｌ／バイアルの濃度の二次抗体コンジュゲート（ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ－Ｆｃ（ＰＥ）、事前吸着（Ａｂｃａｍ＃ａｂ９８５９６））を添加し、細胞を混合し、暗所で４℃で１時間インキュベートした。次に、細胞をＰＢＳ－ＢＳＡで２回洗浄した後、ＰＢＳ中の２％ＰＦＡで固定し、ＦＡＣＳｃａｌｉｂｅｒでＦＡＣＳ分析を行った。図６Ａ～６Ｂに示されるように、これらの抗体は、ＣＨＯ細胞の表面に発現されたヒトＣＤ４０に対して高い結合活性を示した。
実施例６．ＩｇＧ変異体のＣＤ４０抗体は、
インビボでの動物モデルで異なる腫瘍活性を示す
様々なＦｃ変異体を有する例示的な抗ＣＤ４０抗体をインビボでマウス同系腫瘍モデルで試験して、Ｆｃ変異体がこれらの抗体の有効性および毒性にどのように影響を及ぼし得るかを試験した。ヒトＣＤ４０細胞外ドメインがノックインしたＣ５７ＢＬ６マウスを使用して、同系のマウス腫瘍モデルを開発した。マウス結腸癌ＭＣ３８細胞を０日目にホモ接合性ヒトＣＤ４０ノックインＣ５７ＢＬ６マウスに皮下移植した。腫瘍サイズが約１５０±５０ｍｍ３（ｎ＝６）のときに、マウスをグループ分けした。ＣＤ４０抗体は腹腔内注射によって投与され、腫瘍サイズは抗体治療の４～６週間の間に測定された。腫瘍サイズを、キャリバーによって週に２回測定し、０．５×長さ×幅２の式を使用して腫瘍体積として計算した。抗腫瘍効果は、対照群と抗体治療群の腫瘍サイズの間で評価された。
図７Ａに示されるように、マウスＩｇＧ２ａＤＡＮＡ（Ｆｃヌル）は、Ｆａｂ’２誘導性ＣＤ４０活性化によって引き起こされる参照効力を提供した。ヒトＧ４ｍ２、Ｇ１ｍ２、Ｇ２ｍ２０およびＧ２ｍ４０は、ｍＩｇＧ２ａＤＡＮＡより優れたまたは同等の有効性を示した。
抗体治療後の血清ＡＬＴレベルを測定することにより、マウスモデルで抗体誘導性肝毒性の可能性を調べた。ヒトＧ２は非常に大きなＡＬＴ上昇を示し、その値はアッセイの上限（＞１０００Ｕ／Ｌ）を超えた。Ｇ１ｍ２、Ｇ２ｍ２０およびＧ２ｍ４０を含む有効なＦｃ変異体は、ＡＬＴの上昇が少ないか最小限であった。
例として、３８３－Ｇ２ｍ２０および－Ｇ２ｍ４０は、架橋がない場合に高いアゴニスト活性を示し、ＦｃγＲ相互作用でインビボでの有効性を示した（Ｇ２ｍ４０は結合およびＤＣ活性化アッセイの両方でＦｃγＲヌルである）。さらに、Ｇ２ｍ２０の残留ＦｃｇＲＩＩＢ結合活性は有効性を高めた。ＦｃバリアントＧ２ｍ１およびＧ２ｍ４３は、Ｇ２ｍ２０およびＧ２ｍ４０と同様のインビトロ活性プロファイルを考えると、同様の有効性を有するが、毒性ウィンドウが改善されると予想される。
別の例として、３８３－Ｇ１ｍ２は、架橋がない場合にアゴニスト活性の低下を示した。インビボでの残留ＦｃｇＲＩＩＢ結合活性は、このＩｇＧバリアントのインビボアゴニスト活性を増強したが、肝臓毒性に対しては最小限であった。ＦｃバリアントＧ１ｍＡＡ、Ｇ１ Ｎ２７９Ａ、Ｇ４ｍ２０、Ｇ４ｍ３０、およびＧ４ｍ４６は、Ｇ１ｍ２と同様のインビトロ活性プロファイルを考えると、同様の有効性と毒性ウィンドウを持つと予想される。
その他の実施形態
本明細書に開示されているすべての特性は、任意の組み合わせで組み合わせることができる。本明細書で開示されている各特性は、同一、同等、または類似の目的を果たす代替特性に置き換えることができる。したがって、特に明記しない限り、開示される各特性は、同等または類似の特性の一般的なシリーズの例にすぎない。
上記の説明から、当業者は、本開示の本質的な特徴を容易に確認することができ、その精神および範囲から逸脱することなく、開示を様々な使用法および条件に適合させるために様々な変更および修正を行うことができる。したがって、他の実施形態も特許請求の範囲内にある。
等価物
いくつかの本発明の実施形態が本明細書に記載および図示されているが、当業者は、機能を実施するため、ならびに／または結果および／もしくは本明細書に記載される１つ以上の利点を得るための様々な他の手段および／または構造を容易に想定し、そのような変形および／または修正のそれぞれは、本明細書に記載される本発明の実施形態の範囲内であるとみなされる。より一般的には、当業者は、本明細書に記載のすべてのパラメータ、寸法、材料、および構成が例示的であることを意味し、実際のパラメータ、寸法、材料、および／または構成が、本発明の教示が用いられる特定の適用または複数の適用に依存することを容易に理解するであろう。当業者は、本明細書に記載の特定の本発明の実施形態と等価なものを日常的な実験だけで多く認識し、または確認することができるであろう。したがって、前述の実施形態は例としてのみ提示され、添付の特許請求の範囲およびそれに等価なものの範囲内で、本発明の実施形態は、具体的に記載および請求される以外の方法で実施できることを理解されたい。本開示の本発明の実施形態は、本明細書に記載の個々の特性、システム、物品、材料、キット、および／または方法のそれぞれを対象とする。さらに、そのような特性、システム、物品、材料、キット、および／または方法が相互に矛盾しない場合、そのような特性、システム、物品、材料、キット、および／または方法の２つ以上の任意の組み合わせが、本開示の発明の範囲内に含まれる。
本明細書で定義および使用されるすべての定義は、辞書の定義、参照により組み込まれる文書内の定義、および／または定義された用語の通常の意味を制御するように理解されるべきである。
本明細書に開示されるすべての参考文献、特許、および特許出願は、それぞれが引用される主題に関して参照により組み込まれ、場合によっては、文書全体を包含する場合がある。
本明細書および特許請求の範囲で本明細書で使用される不定冠詞「ａ」および「ａｎ」は、反対に明確に示されない限り、「少なくとも１つ」を意味すると理解されるべきである。
本明細書および特許請求の範囲で本明細書で使用される「および／または」という句は、そのように結合された要素、すなわち、ある場合には結合的に存在し、他の場合には分離的に存在する要素の「いずれかまたは両方」を意味すると理解されるべきである。「および／または」で列挙される複数の要素は、同じ方法で、すなわち、そのように結合された要素の「１つ以上」と解釈されるべきである。「および／または」節によって具体的に識別される要素以外の他の要素は、具体的に同定される要素に関連するか否かにかかわらず、任意選択で存在し得る。したがって、非限定的な例として、「Ａおよび／またはＢ」への言及は、「含む」などの制限のない言語と組み合わせて使用される場合、一実施形態では、Ａのみを指し（任意選択で、Ｂ以外の要素を含む）、別の実施形態では、Ｂのみを指し（任意選択でＡ以外の要素を含む）、さらに別の実施形態では、ＡおよびＢの両方などを指す（任意選択で他の要素を含む）。
本明細書および特許請求の範囲で使用される場合、「または」は、上記で定義された「および／または」と同じ意味を有すると理解されるべきである。例えば、リスト内の項目を区切る場合、「または」または「および／または」は包括的であると解釈され、すなわち、要素の数またはリスト、および任意選択で追加のリスト項目のうちの少なくとも１つを含むが、２つ以上を含むと解釈される。「ただ１つ」または「正確に１つ」、または特許請求の範囲で使用される場合は「からなる」など、反対に明確に示される用語のみが、要素の数またはリストのうち正確に１個の要素を含むことを指すだろう。一般に、本明細書で使用される「または」という用語は、「いずれか」、「のうちの１つ」、「のうちの１つだけ」、または「のうちの正確に１つ」など、排他性の用語が先行する場合、排他的選択肢を示すもの（すなわち、「両方ではなくどちらか一方」）として解釈されるべきである。「本質的にからなる」は、特許請求の範囲で使用される場合、特許法の分野で使用される通常の意味を有するべきである。
本明細書の明細書および特許請求の範囲で使用される場合、１つ以上の要素のリストに関連する「少なくとも１つ」という句は、要素のリスト内の任意の１つ以上の要素から選択される少なくとも１つの要素を意味すると理解されるべきであるが、要素のリスト内に具体的に列挙されるありとあらゆる要素のうちの少なくとも１つを含む必要はなく、要素のリスト内の要素の任意の組み合わせを除外するものではない。この定義はまた、「少なくとも１つ」という句が言及する要素のリスト内で具体的に同定される要素以外の要素が、具体的に同定される要素に関連するか否かにかかわらず、任意選択で存在し得ることを可能にする。したがって、非限定的な例として、「ＡおよびＢのうちの少なくとも１つ」（または、同等に、「ＡまたはＢのうちの少なくとも１つ」、または同等に「Ａおよび／またはＢのうちの少なくとも１つ」）は、一実施形態では、少なくとも１つのＡ（任意選択で２つ以上のＡを含む）と、Ｂが存在しないこと（および任意選択でＢ以外の要素を含む）、別の実施形態では、少なくとも１つのＢ（任意選択で２つ以上のＢを含む）と、Ａが存在しないこと（および任意選択でＡ以外の要素を含む）、さらに別の実施形態では、少なくとも１つのＡ（任意選択で２つ以上のＡを含む）および少なくとも１つのＢ（任意選択で２つ以上のＢを含む）（および任意選択で他の要素を含む）などについて言及し得る。
反対に明確に示されない限り、２つ以上のステップまたは行為を含む本明細書で請求される方法において、本方法のステップまたは行為の順序は、必ずしも、本方法のステップまたは行為が列挙される順序に限定されないことも理解されたい。
野生型ヒトＩｇＧ１と比較するヒトＩｇＧ１バリアントの配列アラインメント（上から下へ、配列番号７０～８８、１６３～１６８および２１５）：
Figure 2022503961000045
追加のＦｃ変異体を作成し、重鎖（ＨＣ）のアミノ酸配列を以下に示す（軽鎖（ＬＣ）配列を上に示されている）。
３８３－ｈｕＩｇＧ１ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２０７）
３８３－ｈｕＩｇＧ２ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＮＦＧＴＱＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＴＶＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＦＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＴＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＭＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２０８）
３８３－ｈｕＩｇＧ４ＳＰ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２０９）
３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍＡＡ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＡＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号２１０）
３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍ４０ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶａＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹａＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ（配列番号１９３）
３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍ４５ ＨＣ
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３８３－ｈｕＩｇ Ｇ１ｍ２４０ ＨＣ
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３８３－ｈｕＩｇＧ１ Ｎ２９７Ａ
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３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍ４７ ＨＣ
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３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍ４８ ＨＣ
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３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍ４９ ＨＣ
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３８３－ｈｕＩｇＧ１ｍ５０ ＨＣ
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３８３－ｈｕＩｇＧ４ｍ４０ ＨＣ
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３８３－ｈｕＩｇＧ４ｍ４１ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＶＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号６６）
３８３－ｈｕＩｇＧ４ｍ４２ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＰＶＡＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＡＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号６７）
３８３－ｈｕＩｇＧ４ｍ４６ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥａＬＧａＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫａＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号６８）
３８３－ｈｕＩｇＧ４ｍＰＥ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＣＳＲＳＴＳＥＳＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＫＴＹＴＣＮＶＤＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥＦＥＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号２１２）
３８３－ｈｕＩｇＧ４ｍＡＡ ＨＣ
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＧＹＹＭＨＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＰＤＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＩＳＴＡＹＭＥＬＮＲＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＰＬＧＹＣＴＮＧＶＣＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＲＶＥＳＫＹＧＰＰＣＰＰＣＰＡＰＥａａＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＱＥＤＰＥＶＱＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＦＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＧＬＰＳＳＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＱＥＥＭＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＲＬＴＶＤＫＳＲＷＱＥＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＬＧＫ（配列番号６９）

Claims (68)

  1. （ａ）ＣＤ４０結合部分と、（ｂ）野生型Ｆｃ領域の対応物と比較して、位置２２０～３３１のうちのいずれか、好ましくは位置２２８～３２９のうちのいずれかに少なくとも１つの変異を含む操作されたＦｃ領域と、を含む、ＣＤ４０結合分子であって、番号付けがＥＵインデックスに従う、ＣＤ４０結合分子。
  2. ＣＤ４０アゴニストまたはＣＤ４０アンタゴニストである、請求項１に記載のＣＤ４０結合分子。
  3. 前記ＣＤ４０結合部分が、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）である、請求項１または請求項２に記載のＣＤ４０結合分子。
  4. 前記ＣＤ４０Ｌが、配列番号１４０のアミノ酸配列を含む、請求項３に記載のＣＤ４０結合分子。
  5. 前記ＣＤ４０結合部分が、（ａ）重鎖可変領域を含む重鎖、ならびに（ｂ）軽鎖可変領域および軽鎖定常領域を含む軽鎖を含む抗ＣＤ４０抗体フラグメントであり、重鎖可変ドメインが、前記操作されたＦｃ領域に連結されている、請求項１または請求項２に記載のＣＤ４０結合分子。
  6. バリアントＦｃ領域が、その野生型対応物と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対して増強した結合親和性または選択性を有する、請求項１～５のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  7. 前記バリアントＦｃ領域が、その野生型対応物と比較して、１つ以上のＦｃγＲ受容体に対して低下した結合親和性を有する、請求項１～５のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  8. 前記バリアントＦｃ領域が、その野生型対応物と比較して、すべてのＦｃγＲ受容体に対して実質的に低下した結合親和性を有する、請求項７に記載のＣＤ４０結合分子。
  9. 前記分子が、ＩｇＧ１であり、前記少なくとも１つの変異が、位置２３３～２３８内の置換もしくは欠失、位置２６５での置換、位置２６７での置換、位置２９７での置換、位置３２８での置換、位置３２９での置換、またはこれらの組み合わせを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  10. 前記分子が、ＩｇＧ１であり、前記少なくとも１つの変異が、位置２２０、２２６、２２９、２３８、２７３、３２７、３３０、および３３１のうちの１つ以上での置換を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  11. 前記少なくとも１つの変異が、任意の位置２３３～２３６での置換、位置２３６～２３８のうちの１つ以上での欠失、またはこれらの組み合わせを含む、請求項９または請求項１０に記載のＣＤ４０結合分子。
  12. 位置２３３～２３５での前記置換が、Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３４Ｆ、Ｌ２３５Ａ、および／またはＬ２３５Ｅである、請求項１１に記載のＣＤ４０結合分子。
  13. 前記欠失が、位置２３６または１つ以上の位置２３６～２３８にある、請求項９～１２のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  14. 位置２３８での前記置換が、Ｐ２３８Ｓであり、位置２７３での前記置換が、Ｖ２７３Ｅであり、および／または位置２６５での前記置換が、Ｄ２６５Ａである、請求項９～１３のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  15. 位置２６７での前記置換が、Ｓ２６７Ｅである、請求項９～１４のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  16. 位置３２９での前記置換が、Ｐ３２９Ｇである、請求項９～１５のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  17. 前記少なくとも１つの変異が、位置２６５での置換、位置２９７での置換、またはこれらの組み合わせを含む、請求項９に記載のＣＤ４０結合分子。
  18. 位置２６５での前記置換が、Ｄ２６５Ａであり、位置２９７での前記置換がＮ２９７Ａである、請求項１５に記載のＣＤ４０結合分子。
  19. 位置２２０、２２６、２２９、３２７、３３０、および３３１での前記１つ以上の置換がＣ２２０Ｓ、Ｃ２２６Ｓ、Ｃ２２９Ｓ、Ａ３２７Ｇ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓである、請求項９または請求項１０に記載のＣＤ４０結合分子。
  20. 前記バリアントＦｃ領域が、Ｇ１ｍ２、Ｇ１ｍ１７、Ｇ１ｍ２７、Ｇ１ｍＡＡ、Ｇ１ｍＡＡＧ、Ｇ１Ｎ２７９Ａ、Ｇ１ｍ２４０、およびＧ１ｍ４０からなる群から選択される、請求項９に記載のＣＤ４０結合分子。
  21. 前記分子が、ＩｇＧ２であり、前記少なくとも１つの変異が、位置２３７～２３８内の欠失、位置２６５での置換、位置２６７での置換、位置２９７での置換、位置３２８での置換、またはこれらの組み合わせを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  22. ＩｇＧ２の前記分子であり、前記少なくとも１つの変異が、位置２３３～２３５、２３７、２３８、２６８、２７３、３３０、および３３１のうちの１つ以上での置換を含む、請求項１～８および２１のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  23. 前記欠失が、位置２３７または位置２３７および２３８の両方にある、請求項２１または請求項２２に記載のＣＤ４０結合分子。
  24. 位置２６７での前記置換が、Ｓ２６７Ｅである、請求項２１～２３のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  25. 位置３２８での前記置換が、Ｌ３２８Ｆである、請求項２１～２４のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  26. 位置２３３～２３５、２３７、２３８、２６８、２７３、３３０、および３３１のうちの１つ以上での前記置換が、Ｐ２３３Ｅ、Ｖ２３４Ａ、Ｖ２３４Ｌ、Ａ２３５Ｌ、Ａ２３５Ｓ、Ｇ２３７Ａ、Ｐ２３８Ｓ、Ｈ２６８Ａ、Ｈ２６８Ｑ、Ｖ２７３Ｅ、Ａ３３０Ｓ、およびＰ３３１Ｓである、請求項２２～２５のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  27. 前記少なくとも１つの変異が、位置２６５での置換、位置２９７での置換、またはこれらの組み合わせを含む、請求項２１～２６のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  28. 位置２６５での前記置換が、Ｄ２６５Ａであり、位置２９７での前記置換がＮ２９７Ａである、請求項２７に記載のＣＤ４０結合分子。
  29. 前記バリアントＦｃ領域が、Ｇ２ｍ１、Ｇ２ｍ１７、Ｇ２ｍ１８、Ｇ２ｍ１９、Ｇ２ｍ２０、Ｇ２ｍ２７、Ｇ２ｍ２８、Ｇ２ｍ２９、Ｇ２ｍ２０４０、Ｇ２ｍ４３、Ｇ２Ｇ４、Ｇ２ｍＡＡ、およびＧ２ｍ４０からなる群から選択される、請求項２１に記載のＣＤ４０結合分子。
  30. 前記分子が、ＩｇＧ４であり、前記少なくとも１つの変異が、位置２２８での置換、位置２３５～２３８のうちのいずれかでの置換もしくは欠失、位置２６５での置換、位置２６７での置換、位置２９７での置換、位置２７３での置換、位置３２８での置換、またはこれらの組み合わせを含む、請求項１～８のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  31. 前記分子が、ＩｇＧ４であり、前記少なくとも１つの変異が、位置２３３～２３５または２３７のうちの１つ以上での置換を含む、請求項１～８および３０のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  32. 位置２２８での前記置換が、Ｓ２２８Ｐである、請求項３０または請求項３１に記載のＣＤ４０結合分子。
  33. 前記欠失が、位置２３６～２３８のうちの少なくとも１つにある、請求項３０～３２のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  34. １つ以上の位置２３３～２３５および２３７での前記置換が、Ｅ２３３Ｐ、Ｆ２３４Ｖ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｓ、Ｌ２３５Ｅ、Ｌ２３５Ａ、およびＧ２３７Ａを含む、請求項３０～３３のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  35. 前記欠失が、位置２３６および２３７の両方にある、請求項３０～３４のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  36. 位置２６７での前記置換が、Ｓ２６７Ｅであり、および／または位置２７３での前記置換が、Ｖ２７３Ｅである、請求項３０～３５のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  37. 位置３２８での前記置換が、Ｌ３２８Ｆである、請求項３０～３６のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  38. 前記少なくとも１つの変異が、位置２６５での置換、位置２９７での置換、またはこれらの組み合わせを含む、請求項３０に記載のＣＤ４０結合分子。
  39. 位置２６５での前記置換が、Ｄ２６５Ａであり、位置２９７での前記置換がＮ２９７Ａである、請求項３８に記載のＣＤ４０結合分子。
  40. 前記バリアントＦｃ領域が、Ｇ４ｍ２、Ｇ４ｍ２０、Ｇ４ｍ２８、Ｇ４ｍ３０、Ｇ４ｍ４１、Ｇ４ｍ４２、Ｇ４ｍ４６、Ｇ４ｍＰＥ、Ｇ４ｍＡＡ、およびＧ４ｍ４０からなる群から選択される、請求項３０に記載のＣＤ４０結合分子。
  41. 前記バリアントＦｃ領域が、親Ｆｃ領域と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対して増強された結合親和性を示す、請求項１～４０のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  42. 前記バリアントＦｃ領域が、前記親Ｆｃ領域と比較して、ＦｃγＲＩＩＢに対して減少した結合親和性および／または増強された選択性を示す、請求項１～４１のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  43. 前記バリアントＦｃ領域が、任意のＦｃγＲに対して低い結合活性を示すかまたは全く結合活性を示さない、請求項１～４２のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  44. 前記バリアントＦｃ領域が、ＦｃＲｎに結合する、請求項１～４３のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  45. 前記重鎖可変領域が、配列番号１２８、配列番号１３０、配列番号１３２、配列番号１３４、配列番号１３６、もしくは配列番号１３８のものと同じ重鎖相補性決定領域（ＨＣ ＣＤＲ）を含み、かつ／または前記軽鎖可変領域が、配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３７、もしくは配列番号１３９のものと同じ軽鎖相補性決定領域（ＬＣ ＣＤＲ）を含む、請求項５～４４のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  46. 前記重鎖可変領域が、配列番号１２８、配列番号１３０、配列番号１３２、配列番号１３４、配列番号１３６、もしくは配列番号１３８を含み、かつ／または前記軽鎖可変領域が、配列番号１２９、配列番号１３１、配列番号１３３、配列番号１３５、配列番号１３７、もしくは配列番号１３９を含む、請求項４５に記載のＣＤ４０結合分子。
  47. 前記抗体フラグメントが、ヒト抗体またはヒト化抗体のものである、請求項５～４６のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子。
  48. 請求項１～４７のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子を集合的にコードする単離された核酸または核酸のセット。
  49. 請求項４８に記載の核酸または核酸のセットを集合的に含むベクターまたはベクターのセット。
  50. 発現ベクター（複数可）である、請求項４９に記載のベクターまたはベクターのセット。
  51. 請求項４９または請求項５０に記載のベクターまたはベクターのセットを含む宿主細胞。
  52. 請求項１～５１のいずれか一項に記載のＣＤ４０結合分子および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
  53. 対象における免疫応答を選択的に調節するための方法であって、それを必要とする対象に、請求項１～５２のいずれか一項に記載の有効量のＣＤ４０結合分子を投与することを含む、方法。
  54. 前記対象が、癌を患っているかまたは癌を患っている疑いのあるヒト患者であり、前記ＣＤ４０結合分子が、ＣＤ４０アゴニストである、請求項５３に記載の方法。
  55. 前記癌が、肺癌、胃癌、肝臓癌、乳癌、皮膚癌、膵臓癌、脳癌、前立腺癌、膀胱癌、結腸直腸癌、肉腫、骨癌、リンパ腫および血液癌からなる群から選択される、請求項５４に記載の方法。
  56. 前記対象が、免疫関連障害を患っているかまたは患っている疑いのあるヒト患者であり、前記ＣＤ４０結合分子がＣＤ４０アンタゴニストである、請求項５３に記載の方法。
  57. 前記免疫関連障害が、関節リウマチ（ＲＡ）、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、重症筋無力症（ＭＧ）、グレーブス病、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ギラン－バレー症候群、自己免疫性心筋炎、膜糸球体腎炎、真性糖尿病、Ｉ型またはＩＩ型糖尿病、多発性硬化症、レイノー症候群、自己免疫性甲状腺炎、胃炎、セリアック病、白斑症、肝炎、原発性胆汁性肝硬変、炎症性腸疾患、脊椎関節症、実験的自己免疫性脳脊髄炎、免疫性好中球減少症、若年発症糖尿病、ならびに、サイトカイン、結核、サルコイドーシス、および多発性筋炎に典型的に見られるＴリンパ球によって媒介される遅延型過敏症に関連する免疫応答、多発性動脈炎、皮膚血管炎、天疱瘡、類天疱瘡、グッドパスチャー症候群、川崎病、全身性硬化症、抗リン脂質症候群、シェーグレン症候群、移植片対宿主（ＧＶＨ）病、および免疫性血小板減少症、からなる群から選択される、請求項５６に記載の方法。
  58. １９Ｇ６Ｄ６、３６Ｇ７Ｂ８、１３Ｆ１Ａ７、９Ｆ１２Ｄ９、および１７Ｃ５Ｃ２からなる群から選択された参照抗体と同じＣＤ４０のエピトープに結合するか、または前記エピトープへの結合が前記参照抗体と競合する、単離された抗ＣＤ４０抗体。
  59. 前記抗体が、重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲ２）、および重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲ３）を含み、これらは集合的に、前記参照抗体の重鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一であり、かつ／または前記抗体が、軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、および軽鎖ＣＤＲ３を含み、これらは集合的に、前記参照抗体の軽鎖ＣＤＲと少なくとも８５％同一である、請求項５８に記載の単離された抗ＣＤ４０抗体。
  60. 前記重鎖ＣＤＲ１、重鎖ＣＤＲ２、および重鎖ＣＤＲ３が、前記参照抗体の重鎖ＣＤＲと比較して最大１０個のアミノ酸変異を集合的に含み、かつ／または前記軽鎖ＣＤＲ１、軽鎖ＣＤＲ２、および軽鎖ＣＤＲ３が、前記参照抗体の軽鎖ＣＤＲと比較して最大１０個のアミノ酸変異を集合的に含む、請求項５９に記載の単離された抗ＣＤ４０抗体。
  61. 前記抗体が、前記参照抗体の重鎖可変領域と少なくとも８５％同一である重鎖可変領域を含む、および／または前記参照抗体の軽鎖可変領域と少なくとも８５％同一である軽鎖可変領域を含む、請求項５８～６０のいずれか一項に記載の単離された抗ＣＤ４０抗体。
  62. 前記抗体が、前記参照抗体と同じ重鎖可変領域ＣＤＲおよび／または前記参照抗体と同じ軽鎖可変領域ＣＤＲを含む、請求項５８に記載の単離された抗ＣＤ４０抗体。
  63. 前記抗体が、ヒト抗体またはヒト化抗体である、請求項５８～６２のいずれか一項に記載の単離された抗ＣＤ４０抗体。
  64. 請求項５８～６３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体を集合的にコードする単離された核酸または核酸のセット。
  65. 請求項６４に記載の核酸または核酸のセットを集合的に含むベクターまたはベクターのセット。
  66. 発現ベクター（複数可）である、請求項６５に記載のベクターまたはベクターのセット。
  67. 請求項６５または請求項６６に記載のベクターまたはベクターのセットを含む宿主細胞。
  68. 請求項５８～６３のいずれか一項に記載の抗ＣＤ４０抗体、請求項６４～６６のいずれか一項に記載のコード化核酸、または請求項６７に記載の宿主細胞、ならびに薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物。
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