JP2022502478A - セルライトを治療するための組成物および方法 - Google Patents

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Abstract

本開示は、有効量のコラゲナーゼを投与することにより、ヒト対象の大腿部または臀部のセルライトを治療し、次いで、セルライトの重症度の低減を1つ以上の尺度で評価する方法に関する。【選択図】図26

Description

関連出願
本出願は、2018年9月18日に出願された米国仮出願シリアル番号第62/733,046号、2019年1月6日に出願された米国仮出願シリアル番号第62/788,916号、2019年2月28日に出願された米国仮出願シリアル番号第62/812,036号、2019年3月25日に出願された米国仮出願シリアル番号第62/823,596号、2019年7月11日に出願された国際出願番号第PCT/US2019/041494号、および2019年7月12日に出願された国際出願番号第PCT/US2019/41718号は、法律で認められる最大限の範囲で、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、セルライトの評価と治療の分野に関するものである。
セルライト(浮腫性線維硬化性皮下組織症(EFP)としても知られる)は、皮下接合部の構造的特性と生物力学的特性(すなわち、繊細な封じ込め力と押し出し力)の間の不均衡として理解できる美的状態である(Rudolphら、"Structural Gender Dimorphism and the Biomechanics of the Gluteal Subcutaneous Tissue:Implications for the Pathophysiology of Cellulite," Plast.Reconstr.Surg.2019;143(4):1077-1086)を参照)。したがって、セルライト治療の目標は、様々な種類の切除を介して、皮下の界面を強化すること、および/または、繊維性隔膜を解放することである(Rudolphら、上述)。線維性隔膜は、解剖学的および画像解析学的研究により、セルライトの貢献的な基礎原因として、またセルライトの治療対象として認識されてきた(Hexselら、"Side-by-side comparison of areas with and without cellulite depressions using magnetic resonance imaging"、Dermatol Surg.2009;35(10):1471-1477;Hexselら、"Magnetic Resance Imaging of Cellulite"。"Magnetic Resonance Imaging of Cellulite Depressed Lesions Successfully Treated by Subcision,"Dermatol Surg. 2016;42(5):693-696; Mirrashed F, Sharp JC, Krause V, Morgan J, Tomanek B. "Pilot study of dermal subcutaneous fat structures by MRI in individuals who differ in gender, BMI, and cellulite grading, "Skin Res Technol.2004;10(3):161-168; Nurnberger and Muller, "So-called cellulite: an invented disease, "J Dermatol Surg Oncol.1978;4(3):221-229; Pierardら、, "Cellulite: from standing fat herniation to hypodermal stretch marks," Am J Dermatopath.2000;22(1):34-37; Querleux ら、"Anatomy and physiology of subcutaneous adipose tissue by in vivo magnetic resonance imaging and spectroscopy: relationships with sex and presence of cellulite," Skin Res Technol.2002;8(2):118-124)。セルライトを効果的に治療するためには、多くの女性にとって悩みの種である皮膚のくぼみの原因となっている、コラーゲンで構成された真皮隔膜(図1)を溶解するなどして破壊する治療法が必要である。
セルライトを治療するために利用されてきた治療法があるが、承認された薬理学的治療法はない。複数の治療法があるにもかかわらず、現在の非薬理学的治療が有益であるという科学的根拠はほとんどない。実際、多くの根拠は逸話的、主観的、または患者の自己評価のみに基づいている。EFPの歴史的な治療法には、減量、外用剤、マッサージ、脂肪吸引、メソセラピー、高周波、切除、動力切除、レーザー治療などがある。これらの治療法の多くは望ましくない副作用がある(Avram MM, "Cellulite: a review of its physiology and treatment,"J Cosmet Laser Ther.2004;6(4):181-185; Collisら, "Cellulite treatment: a myth or reality: a prospective randomized, controlled trial of two therapies, endermologie and aminophylline cream, " Plast Reconstr Surg. 1999;104(4):1110-1114; Khan MH, Victor F, Rao B, Sadick NS. "Treatment of cellulite:Part I. Pathophysiology."J Am Acad Dermatol.2010;62(3):361-370; Hexsel DM, Mazzuco R. "Subcision: a treatment for cellulite. ".Int J Dermatol.2000;39(7):539-544; Boyce ら、, "Clinical evaluation of a device for the treatment of cellulite:Triactive." Am J Cosmet Surg. 2005;22:233-237; DiBernardo BE. "Treatment of cellulite using a 1440-nm pulsed laser with one year follow-up."Aesthet Surg J. 2011;31(3):328-341)。このように、多くの医師は美的状態の改善は簡単には得られないという見解を持っている。そのため、セルライトを持つ女性の審美的な結果を改善するための安全で効果的な非外科的治療法は、依然として満たされていない需要である。
本開示は、上記の必要性を満たし、治療上有効な量のコラゲナーゼ(詳細な説明で定義される)の皮下注射によってヒト患者のセルライトを治療する方法に関する。そのような方法は、セルライトの重症度の患者のベースラインを確立するために、様々な尺度や評価技術を用いて患者のセルライトの重症度を治療前に評価することに関する。その後、コラゲナーゼの皮下注射によるセルライトの治療が行われる。コラゲナーゼの投与量は様々であり、コラゲナーゼは、コラゲナーゼと1つ以上の薬学的に許容される賦形剤とを含む医薬組成物の形態であってもよい。このような賦形剤としては、注射用の滅菌水、pH調整剤、緊張度調整剤、安定剤などが挙げられる。治療後の評価は、ベースラインと比較して、治療の有効性を確認するために行われる。本開示の治療の方法は、セルライトの外観の著しい減少をもたらす。
詳細な説明で説明するように、治療には4つの段階があるが、それらは任意であり、その順序は厳密に限定することを意図したものではない。
1. 最初の段階では、臨床医が治療すべきセルライトのくぼみの選択を行う。次に、注射前に、評価が行われる。例えば、臨床医および/または患者は、以下の尺度または他の評価方法(詳細な説明に定義されている)の1つ以上を使用して、セルライトの治療前の重症度を独立して評価する。
〇 ヘクセルセルライト重症度尺度(CSS)(ヘクセルCSS)
〇 ヘクセルくぼみ深さスコア
〇 リッカート尺度
〇 陥凹部分析
〇 CR−PCSS(臨床医が報告したフォト数値セルライト重症度尺度)
〇 PR−PCSS(患者が報告したフォト数値セルライト重症度尺度)
〇 調査員グローバル美的改善尺度(I−GAIS)
〇 被験者グローバル美的改善尺度(S−GAIS)
〇 患者報告式セルライトインパクト尺度(PR−CIS)
〇 PR−CIS省略形
〇 被験者自己評価尺度(SSRS)
〇 セルライト治療に対する被験者の満足度(SSCT)
〇 セルライトの重症度の臨床医アセスメント(写真またはその他の画像)
〇 Body−Q
〇 フィッツパトリック尺度
〇 大腿部セルライト重症度−患者(TCS−P)、大腿部セルライト重症度−臨床医(TCS−C)
〇 セルライトの重症度、改善度、および/または患者の満足度を評価するために臨床医および/または患者が使用する検証済みのフォト数値またはその他の尺度(例えば、ヘクセル−Merz尺度(Hexselら、"Validated Assessment Scales for Cellulite Dimples on the Buttocks and Thighs in Female Patients," Dermatologic Surgery: August 2019 (Volume 45) Issue p S2?S11および米国皮膚科学会総会2019でのポスター発表)
さらに、臨床医や患者による前処理評価は、それぞれが異なるセルライトの重症度評価またはレベルを有する1〜15枚の写真、イラスト、図面、コンピュータ画像、3Dモデル、MRI画像、サーモグラム、超音波、患者の口頭でのフィードバックなどを分析することによって行うことができる。
2. 治療の第2段階では、治療すべきくぼみに臨床医がドットまたはその他のマーキングを行う(図6)。これは、くぼみの直下がある場合には、その直下に付けるのが一般的である。さらに写真を撮り、その他の評価を行うこともある。
3. 第3段階の治療では、治療有効量のコラゲナーゼを、1つ以上の治療部位(詳細な説明で定義されている)に単回投与または分割投与でくぼみに皮下注射する。投与量および注射技術は様々である。例えば、本方法は、以下の手順による注射を含んでいてもよい。
● コラゲナーゼ組成物(CCHなど)を、30ゲージの1/2インチ針付き注射器を用いて、被験者がうつ伏せになった状態で皮下に注射する。図7に示すように(以下、「治療I」)、各注射部位には、位置A、B、Cに0.1mLのアリコートを3回、合計0.3mLのコラゲナーゼ組成物を皮膚に1回注射する。注射の深さは、針の先端から根元までの治療針の長さに相当する1/2インチで、下向きの圧力がかかっていない状態である。各注射部位において、針を皮膚表面に対して垂直に90°の位置に配置して挿入し、コラゲナーゼ組成物を0.1mLのアリコートで注射する(位置A)。針をわずかに引き抜き(ただし、皮膚からは離さない)、垂直から45°ずれた位置でくぼみの長軸の上に再配置し、0.1mLアリコートのコラゲナーゼ組成物を注射する(位置B、頭部の方向)。再び針をわずかに引き抜き、くぼみの長軸の下、垂直から約45°の位置に戻し、コラゲナーゼ組成物0.1mLアリコートを注射する(位置C、足の方向)。注射後、被験者は5分間伏せたままとする。
一例として、治療Iは、0.84mgのコラゲナーゼ組成物を、それぞれが少なくとも21日(+/−3日のウィンドウ)の間隔で行われる3回の治療セッションの間に、治療部位あたり12回の皮下注射として投与するために採用されてもよい。例えば、5.04mgの累積用量を投与することができる(すなわち、3回の治療訪問×治療領域あたり0.84mg×2つの治療領域)。その他の手法については、詳細な説明で説明している。
4. 治療の第4段階では、上述の尺度やその他の評価方法(例えば、あざ分析)を用いて、注射後の評価が行われる。特定のコラゲナーゼ治療の有効性は、単一の臨床医の評価または患者の評価に基づいてもよいし、臨床医の評価と患者の評価からなる複合評価項目に基づいてもよい。ここでは、同一の対象について両方の尺度で改善が示される場合、すなわち、臨床医の尺度と患者の尺度の両方であらかじめ指定されたレベルの改善が示される場合がある。
コラゲナーゼは、約0.01mg〜約20mgの量を単回投与または分割投与で注射され、以下の1つ以上の特徴を有している。

● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜120kDa、または約90〜120kDa、または約100〜110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
本明細書で使用する場合、関連する速度論的パラメータは、本明細書に記載されているキュベットアッセイまたはマイクロプレートアッセイ(例えば、SRCキュベットアッセイ、SRCマイクロプレートアッセイ、GPAキュベットアッセイ、およびGPAマイクロプレートアッセイ)を使用して測定することができる。
いくつかの実施形態では、組成物中に存在するコラゲナーゼは、コラゲナーゼIとコラゲナーゼIIを約1:1の比率で含んでいる。コラゲナーゼIとコラゲナーゼIIの他の比率は、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0、または0:1のように採用されてもよい。コラゲナーゼIおよびコラゲナーゼIIのそれぞれは、逆相HPLCで測定した面積による純度が、少なくとも80%、または85%、または90%、または91%、または92%、または93%、または94%、または95%、または96%、または97%、または98%、または99%、または100%であってもよい。
別の実施形態では、コラゲナーゼ組成物は、約1:1のAUX IおよびAUX IIの比率を有するCCH(詳細な説明で定義される)を有する。AUX IおよびAUX IIの他の比は、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0、または0:1のように採用されてもよい。AUX IおよびAUX IIのそれぞれは、逆相HPLCで測定した面積による純度が、少なくとも80%、または85%、または90%、または91%、または92%、または93%、または94%、または95%、または96%、または97%、または98%、または99%、または100%であってもよい。
他の例では、コラゲナーゼ組成物は、液体であってもよいし、凍結乾燥した固体形態から希釈剤で再構成されていてもよい。混合物の投与量は、希釈剤を考慮せずに存在するコラゲナーゼの量によって測定され、1回以上の注射で約0.1mg〜約20mgを有していてもよい。別の実施形態では、投与される用量は、1回以上の注射で約0.06mg、0.48mg、0.84mg、1.68mg、2.52mg、3.36mg、4.2mg、5.04mg、5.88mg、6.72mg、7.56mg、または8.4mgである。例えば、約0.06mg、0.48mg、0.84mg、または1.68mgを約12回に分けて注射する。注射されるコラゲナーゼ組成物の量は、1回の注射につき0.01mLから3mLの範囲、または1回の治療訪問(詳細な説明で定義されている)につき合計約0.2mLから150mLの範囲であってもよい。特定の実施形態では、上記の投与量は、CCHを含むコラゲナーゼ組成物に対するものである。別の実施形態では、上記の投与量は、以下の特徴の1つ以上を有するコラゲナーゼ組成物に対するものである。

● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
別の実施形態では、約0.84mgのCCHを、治療部位ごとに約12回に分けて均等に注射する(約0.07mg×12回=約0.84mg)。いくつかのケースでは、0.84mgによるこのような治療は、1回の治療訪問で行われるか、または2、3、4、または5回の治療訪問で10〜40日ごとに行われる。他のケースでは、2、3、4、または5回の治療訪問のために、10〜40日ごとに0.84mgを用いて複数の治療領域が注射される。このような注射は、5回以上の治療訪問で投与することができる。
さらに、詳細な説明に記載されているように、コラゲナーゼ注射はセルライトの治療に有効である。例えば、セルライトの外観の著しい改善は、ヘクセルくぼみ深さスコア、リッカート尺度スコア、および陥凹部分析によって実証される。
CCH注射の最も一般的な副作用は、あざ、痛み、結節、かゆみ、腫れ、硬さ、変色、赤みなどの注射部位反応である。注射部位のあざは、一般的に治療回数を重ねるごとに減少する。
本発明の組成物、尺度、方法などの追加の実施形態は、以下の説明、図面、例、および請求項から明らかになるであろう。前述および以下の説明から理解されるように、本明細書に記載された各およびすべての特徴、ならびにそのような特徴の2つ以上の各およびすべての組み合わせは、そのような組み合わせに含まれる特徴が相互に矛盾しないことを条件として、本開示の範囲に含まれる。さらに、任意の特徴または特徴の組み合わせを、任意の実施形態または態様から明確に除外することができる。追加の態様および実施形態は、特に添付の例および図面と併せて考慮される場合、以下の説明および特許請求の範囲に記載される。
特許又は出願ファイルは、カラーで描かれた少なくとも1つの図面を含む。カラーの図面を含むこの特許又は特許出願公報の写しは、請求及び必要な手数料の支払に応じて、国内で提供される。
前述の実施形態の特徴は、添付の図面を参照した以下の詳細な説明を参照することにより、より容易に理解されるであろう。
図1は、コラーゲン隔壁を描写する皮膚および皮下組織の断面図である。 図2は、AUX−I(配列ID番号5)のアミノ酸配列リストである。 図3は、AUX−II(配列ID番号6)のアミノ酸配列リストである。 図4は、ヘクセルセルライト重症度尺度(CSS)(B)くぼみの深さを示している。 図5は、大腿部セルライト重症度−患者(TCS−P);大腿部セルライト重症度−臨床医(TCS−C)尺度の一例を示したものである。 図6は、臀部の被験者のくぼみと注射部位のマーキングの例を示したものである。 図7は、治療Iで使用された注射技術を示している。 図8は、RELEASE−1研究およびRELEASE−2研究における複合応答者の主要評価項目および主要副次評価項目の棒グラフである。複合応答者とは、71日目に対象となる臀部のCR−PCSS評価およびPR−PCSS評価の両方において、ベースラインから2レベル以上または1レベル以上の重症度改善が認められた患者と定義される。 図9は、71日目のCCH 0.84mgによる複合応答をベースラインと比較した一連の写真である。図9Aは、CR−PCSSとPR−PCSSの両方で2レベルの改善を示している。図9Bは、CR−PCSSおよびPR−PCSSの両方において、1レベルの改善を示している。 図10は、(データ解析のための)非標的臀部における71日目の複合応答者の主要評価項目および主要副次評価項目である棒グラフである。複合応答とは、71日目において、CR−PCSSおよびPR−PCSSの両評価において、ベースラインから2レベル以上または1レベル以上の重症度改善が認められた患者と定義した。 図11は、治療意図(ITT)集団における71日目のPR−PCSSおよびS−GAISの応答者の頻度を示す棒グラフである。 図12は、修正治療意図(mITT)集団における71日目のPR−CIS総合スコアのベースラインからの平均改善度を示す棒グラフである。71日目のPR−CIS評価を受けていない女性にはベースライン値を用いた。 図13は、グリッドへの3Dレジストレーションでのプレマーキング画像レジストレーションを示している(1日目 プレマーキング)。画像は、3D空間のグリッドに対してセンタリングされている。グリッドを基準にして、画像解析技術者(IAT)がベースライン画像を配置し、画像のおおよその中心がグリッドの原点に置かれるようにする。大腿部/臀部が+z方向に正面を向き、大腿部/臀部の上部が+y方向を向き、大腿部/臀部の下部が−y方向を向く。 図14は、画像レジストレーションのための距離ごとの色マップ(a color−by−distance map)である。 図15は、関心領域(1)の主要な陥凹部を示している。1日目のポストマーキング画像を参考にして、1日目のプレマーキング画像上で標的の陥凹部を探す。その後、技術者はトラッキングされたプレマーキング画像上で、主な陥凹部の境界をトレースする。 図16は、関心領域の主要なくぼみを転置した一連の写真である。トラッキングされたプレマーキング画像上のくぼみのトレースは、各フォローアップ画像のベースラインに対する独自の表面トラッキング関係に基づいて、22日目、43日目、71日目のフォローアップ画像上に転記される。 図17は、被験者の左臀部に注射してから4日目、8日目、15日目の正常組織とあざのある組織の輪郭を示したものである。 図18(A)は、左臀部に注射してから4日目、8日目、15日目の正常組織とあざのある組織の輪郭を示し、それらの組織のL、a、bの色の測定値を示している。 図18(B)は、左臀部に注射してから4日目、8日目、15日目の正常組織とあざのある組織の輪郭を描いたものである。Lの色の値から、正常組織とあざのある組織の平均色とΔEを算出した。 図19(A)〜図19(C)は、例示的な陥凹部分析を示している。図19(A)は、陥凹部分析パラメータの観察結果と1日目のプレマーキング画像からの変化を示している。図19(B)は、陥凹部の最大長と最大幅を示している。図19(C)は、陥凹部の底面と補間された表面の間の表面積と体積を示す図である。 図20は、実施例3の標的臀部(mITT集団)のPR−PCSS評価の平均値の経時変化の折れ線グラフである。下の線は、実施例2および3に記載されているように、CCH治療対プラセボ(上の線)である。 図21は、実施例3の非標的臀部(mITT集団)のPR−PCSS評価の平均値の経時変化の折れ線グラフである。下の線は、実施例2および3に記載されているように、CCH治療対プラセボ(上の線)である。 図22は、実施例2の標的臀部(mITT集団)のCR−PCSS評価スコアの平均値の経時変化の折れ線グラフである。下の線は、実施例2および3に記載されているように、CCH治療対プラセボ(上の線)である。 図23は、実施例2の非標的臀部(mITT集団)のCR−PCSS評価スコアの平均値の経時変化の折れ線グラフである。下の線は、実施例2および3に記載されているように、CCH治療対プラセボ(上の線)である。 図24は、71日目における標的および非標的臀部の2レベルの複合応答者を表す(ITT集団)。 図25は、実施例5の研究デザインを表している。 図26は、段階3(302/−303)の1日目から71日目まで、および実施例5(研究304)の71日目から180日目までのPR−CIS項目スコアの平均値を表す。 図27は、段階3の71日目と比較した、180日目のCCH治療対プラセボ治療のSSCTA応答者の割合を表す。 図28は、研究202における被験者の傾向を表す。注a.:提供者により研究201の薬剤ブラインドが解除されるまで、被験者は二重盲検研究(201)の1日目から90日後(すなわち、二重盲検研究終了から20日±4日以内)に開始される3ヶ月の期間に最大4回の観察のみの訪問を受けた。観察期は、各治療領域内で定義され、スクリーニングAから研究202の最初の治療日まで、または研究202で治療を受けていない場合は研究202の終了日までとした。注b:「その他」のカテゴリーには、スクリーニング失敗、治療段階への参加を拒否した被験者、被験者登録の研究日272日目にサイトが閉鎖された被験者、または研究の受診を遵守しなかった被験者のいずれかが含まれる。注c.:治療完了後(治療期71日目)、被験者は3ヶ月間隔で観察評価を行い、360日目まで追跡された。研究201でCCHを投与された被験者については、投与された治療部位について、720日目までの長期耐久性を評価した。 図29は、研究202におけるCCH治療領域における経時的な平均PR−PCSS評価を表す。 図30は、研究202における再曝露された(臀部および大腿部で治療された)対象の経時的な平均PR−PCSS評価を表す。 図31は、研究202における第1および第2の治療コース中の再曝露された臀部治療対象の経時的な平均PR−PCSS評価を表す。 図32は、研究202におけるCCH治療領域における経時的な平均CR−PCSS評価を表す。 図33は、研究202における再曝露された(臀部および大腿部で治療された)対象の経時的な平均CR−PCSS評価を表す。 図34は、研究202における第1および第2の治療コース中の再曝露された臀部治療対象の経時的な平均CR−PCSS評価を表す。
ここで、様々な態様および実施形態を本明細書で完全に説明する。しかしながら、これらの態様および実施形態は、多くの異なる形態で具体化することができ、限定的であると解釈されるべきではない。むしろ、これらの実施形態は、開示が徹底的かつ完全であり、本主題の範囲を当業者に完全に伝えるように提供される。本明細書で引用されたすべての刊行物、特許および特許出願は、上記または下記を問わず、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
A.定義
他に定義されていない限り、本明細書で使用されているすべての用語および語句は、反対のことが明確に示されているか、またはその用語または語句が使用されている文脈から明らかでない限り、その用語および語句が当技術分野で達成した意味を含む。本明細書に記載されているものと類似または同等の任意の方法および材料を本発明の実施または研究に使用することができるが、ここでは特定の方法および材料について説明する。
特に明記しない限り、個々の数値の使用は、その数値の前に「約」または「およそ」という言葉が付いているように、近似値として記載されている。同様に、本願で指定された様々な範囲の数値は、特に明示されていない限り、その範囲内の最小値と最大値の両方に「約」または「およそ」という言葉が付いているように、近似値として記載されている。このようにして、範囲内の値と実質的に同じ結果を得るために、記載された範囲の上下の変動を使用することができる。本明細書では、数値に言及する際の「約」および「およそ」という用語は、開示された主題が最も密接に関連する技術、または問題となっている範囲もしくは要素に関連する技術の通常の知識を有する者にとって、それらの明白かつ通常の意味を持つものとする。厳密な数値による境界からどれだけ広げるかは、多くの要素に依存する。例えば、要素の重要性、および/または、所定の変動量がクレーム対象物の性能に与える影響、ならびに、当業者に知られている他の考慮事項などが考慮される。本明細書では、異なる数値に異なる量の有効数字を使用することは、「約」または「およそ」という言葉の使用が特定の数値または範囲を広げるのに役立つことを制限することを意味しない。一般的には、「約」または「およそ」という言葉は、数値を広げる効果がある。また、範囲の開示は、最小値と最大値の間のすべての値を含む連続した範囲と、「約」または「およそ」という言葉の使用によって得られる範囲の拡大を意図している。従って、本明細書での数値の範囲の記載は、単に範囲内にある各個別の値を個別に参照するための略記法としての役割を果たすことを意図しており、各個別の値は、本明細書で個別に記載されているかのように本明細書に組み込まれている。
本明細書で使用される「患部」または「治療領域」は、コラゲナーゼ(以下に定義される)で治療される、または治療されたヒト患者のセルライトの領域を意味する。これには、四分円(つまり、左臀部、右臀部、左後外側大腿、右後外側大腿)が含まれる場合がある。患部や治療領域は臀部や大腿部に限定されない。むしろ、セルライトのある体のどの部分も治療領域として扱うことができる。
本明細書で使用する「有害事象」または「AE」とは、身体構造(徴候)、身体機能(症状)、検査結果(化学検査、心電図、X線検査など)の好ましくないまたは意図しない変化、または治験薬の使用に一時的に関連した既往症の悪化を意味し、治験薬との関連性があると考えられるか否かを問わない。
「Body−Q」は、Memorial Sloan Kettering Cancer Centerのライセンスに基づいて市販されている患者報告型の成果指標である。Body−Qは、体の輪郭を整えることや体重を減らすことに対する患者の認識に基づいている。18の独立した機能を持つ尺度を用いて、外観、健康関連の生活の質(HRQL)、患者の医療体験の3つの領域を測定する。患者報告式アウトカム機器については、BODY−Q:取り扱い説明書BODY−Q:取り扱い説明書、バージョン1.0、2015年7月、Memorial Sloan Kettering Cancer Center、McMaster UniversityおよびStefan Canoに記載されている。BODY−Qには、セルライトを測定するための尺度が搭載されている。https://www.mskcc.org/sites/default/files/node/174457/documents/body-q-users-guide.pdf(2019年7月3日アクセス)を参照。セルライトについては、過去1週間の時間枠で「まったくない」から「非常に気になる」までの範囲の応答選択肢を有する16の尺度項目があり、フレッシュ・キンケイド級の読解レベルを想定している。患者は次のように質問される:「セルライトのことを考えて、この1週間で、どれくらい気になったか」:[16の質問が続き、患者は回答を、1−非常に気になる、2−中程度に気になる、3−少し気になる、4−全く気にならない、とランク付けする]。スコアの範囲は、16(非常に気になる)から64(全く気にならない)である。
従来、あざの臨床検査は、あざ部分とその周辺の視覚的検査に加えて、被験者の内科的、外科的、および併用薬の履歴を評価することで行われてきた。この解釈の結果は主観的なものであり、見る角度、周囲の照明、露出していない周囲の皮膚の色、観察者の経験や視力など、いくつかの無関係な要因に影響される。本明細書で使用される「あざ分析」とは、米国特許公開第2019/0035080号に開示されている客観的な画像捕捉およびトラッキング方法をすべての対象画像に一様に適用して、被験者のコラゲナーゼ処理領域の画像から評価される皮膚の色の目に見える変化を検出することを意味する。この客観的分析は、被験者内(異なる時点での同じ被験者内)および被験者間(異なる被験者間)の両方のレベルであざを定量化し、区別し、評価する能力を提供することにより、医療提供者によるあざの視覚的および臨床的な検査を支援し、あるいは代替する可能性がある。この解析では、「赤と緑、黄と青の2色を同時に表現することはできない」という色反論理論に基づいて国際照明委員会(CIE)が定義したL色空間を使用している。下図のように、Lは明暗を、aは赤/緑の座標を、bは黄/青の座標を表している。Lのデルタ(ΔL)、aのデルタ(Δa)、bのデルタ(Δb)は正(+)でも負(−)でもよい。しかし、差の合計であるデルタE(ΔE)は常に正である。
● ΔL(LサンプルからLスタンダードを引く)=明暗の差(+=明るい、−=暗い)、数字が小さい(0〜50)と暗く、数字が大きい(51〜100)と明るい。
● Δa(aサンプルからaスタンダードを引く)=赤と緑の差(+=より赤、−=より緑)
● Δb(bサンプルからbスタンダードを引く)=黄色と青の差(+=より黄色、−=より青)
物体の色(ここでは被験者の治療領域の画像に写っているあざ)を完全に表現するためには、この3つの値が必要である。L値でデータを出力する、コラゲナーゼ治療領域(プロトコルで指定された時点での治療前および治療後の画像)の画像解析の客観的な方法論は、肌の色とその変化を、迅速、容易、正確、反復可能、かつ偏りなく定量化することを可能にする。この方法では、従来の主観的な目視による画像の推定に伴う固有の変動が排除される。ΔEは以下のように計算される。
ΔE(あざのある組織と正常組織間の色の違い)=SQRT[(L −L +(A −A +(B −B ]、ここにおいて、
=あざのある組織L
=正常組織L
=あざのある組織A*.
=正常組織A
=あざのある組織B
=正常組織B
図18(B)は、治療領域のあざの分析結果を示したものである。
本明細書で使用する「CCH」とは、AUX−I(配列ID番号5(図2))とAUX−II(配列ID番号6(図3))の混合コラゲナーゼを、クロストリジウムヒストリチカム(Hathewaya histolyticaとしても知られる)の発酵によって得られた約1:1の比率で混合したものである。CCHはXIAFLEX(登録商標)という商標で凍結乾燥粉末として市販されており、AUX−IとAUX−IIの混合物に特定の賦形剤を加えたものであるが、CCHは他の適切な賦形剤と併用してもよい。
本明細書で使用する「臨床医が報告したフォト数値セルライト重症度尺度(CR−PCSS)」は、医師/臨床医が使用するPCT特許出願PCT/US2018/020551(2018年9月7日にWO2018/160905として公開)に記載されているフォト数値尺度であり、セルライトの重症度を5段階に評価するように設計されている。
本明細書に別段の定めがある場合を除き、「コラゲナーゼ」とは、以下のいずれかを意味する。a)EC 3.4.24.3で定義された活性を有するコラゲナーゼ(変異体を含む)(https://www.brenda-enzymes.org/enzyme.phpecno=3.4.24.3(2019年7月3日アクセス);(b)クロストリジウムヒストリチカム(Hathewaya histolyticaとしても知られている)の発酵によって産生されたコラゲナーゼ;(c)CCH(上記で定義されている);(d)BLASTによって決定されたAUX−Iと少なくとも50%の配列整合性を有するコラゲナーゼ;(e)BLASTによって決定されたAUX−IIと少なくとも50%の配列整合性を有するコラゲナーゼ;(f)他の源の生物の発酵によって産生されたコラゲナーゼ(すなわち、非クロストリジウムヒストリチカム)、例えば、哺乳類、甲殻類、真菌、細菌または微生物のコラゲナーゼ;(g)組換え技術によって得られたコラゲナーゼ;(h)約65kDa〜約130kDaの分子量を有するコラゲナーゼ;(i)クラスIまたはクラスIIとして指定されたコラゲナーゼ(コラゲナーゼI(または1)、コラゲナーゼII(または2)、I型コラゲナーゼ、2型コラゲナーゼとも呼ばれる);j)コラゲナーゼIおよびIIの混合物;(k)JCM1403株(ATCC19401)由来のコラゲナーゼまたはその誘導体;(l)ATCC21000株由来のコラゲナーゼまたはその誘導体;(m)ATCC69334株由来のコラゲナーゼまたはその誘導体;(n)C.パーフリンジェンス由来のコラゲナーゼ;(o)ビブリオ・アルギノリチカス由来のコラゲナーゼ;(p)ストレプトマイセス由来のコラゲナーゼ;(q)シュードモナス由来のコラゲナーゼ;(r)Achromobacter iophagus由来のコラゲナーゼ(s)Worthington Biochemical Corp.に記載のコラゲナーゼ(www.Worthington-biochem.com;「製品ハイライト」);(t)Sigma−Aldrich(www.sigma-aldrich.com)に記載されたコラゲナーゼ;(u)以下の特徴の1つ以上を有するコラゲナーゼ:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
v)Nordmark Arzneimittel GmbH&Co.KGによって記載されたコラゲナーゼ;(w)株004からのコラゲナーゼ;または(x)前記のいずれかの等価物もしくは混合物である。本明細書の開示に使用することができるコラゲナーゼの非限定的な例は、米国特許第7,811,560号、第9,757,435号、第9,744,138号、およびWO2012/125948に記載されている。
本明細書で使用する「陥凹部分析」とは、陥凹部の体積、長さ、幅、および表面積などのパラメータが測定される、1つ以上の選択された陥凹部の分析を意味する。測定は、Eckhouseら、WO2018/116304およびWO2018/116305に記載されているものや、Cherry Imaging(www.cherryimaging.com)およびCanfield Scientific, Inc.また、Salamehら、"Novel Stereoscopic Optical System for Objectively Measuring Above-Surface Scar VolumeFirst-Time Quantification of Responses to Various Treatment Modalities," Dermatol. Surg. 00:1-7 (2017); および米国特許第9,996,923号に記載されている。体積、長さ、幅、および表面積のそのような測定値は、デジタル3Dグレースケール画像(XおよびY軸回転機能付き)およびデジタル3Dテクスチャおよび照明付き画像(XおよびY軸回転機能付き)を、そのような画像を分析するコンピュータプログラムとともに使用して計算されてもよい。一例として、臀部の治療領域では、治療前と治療後の各患者について、左の治療された臀部および/または右の治療された臀部の画像を撮影することができる。大腿部の治療部位については、治療前と治療後に、0度、45度、90度の各大腿部の治療部位の画像を撮影してもよい。大腿部の治療領域について、Canfield Scientificの方法を用いて撮影した画像を、治療前と治療後の0度、45度、90度における大腿部の治療部位のそれぞれについて撮影してもよい。
本明細書で使用する「耐久性」とは、治療効果の持続性がある期間を意味する。この期間は、約3ヶ月〜約20年、または約1年〜19年、または約2年〜18年、または約3年〜17年、または約4年〜16年、または約5年〜15年、または約6年〜14年、または約7年〜13年、または約8年〜12年、または約9年〜11年の範囲とすることができる。その期間は、約6ヶ月、約1年、約2年、約3年、約4年、約5年、約10年、約15年、または約20年であってもよい。
本明細書で使用する「早期終了訪問」とは、研究を終了した被験者の最終訪問を早期終了訪問とみなし、研究を終了した被験者に対して71日目に通常行われる評価を早期終了訪問で行うことを意味する。
本明細書で使用する「フィッツパトリック尺度」とは、表1に示すように、被験者の皮膚タイプを評価するために用いられる尺度を意味する。
Figure 2022502478
本明細書で使用する「ヘクセルセルライト重症度尺度」または「ヘクセルCSS」または「セルライト重症度尺度(CSS)」とは、セルライトの5つの主要な形態的特徴を評価する以下のフォト数値尺度を意味する(表2)。
Figure 2022502478
ポイントの合計で以下のように分類される。
Figure 2022502478
本明細書で使用する「ヘクセルくぼみ深さスコア」とは、へクセルCSS(図4)からくぼみの深さ(B)のみを評価することを意味する。
0=くぼみなし
1=表面的なくぼみ
2=中程度の深さのくぼみ
3=深いくぼみ
本明細書で使用する「画像」または「イメージ」とは、写真、イラスト、図面、モデル、3Dモデル、コンピュータで作成された画像、MRI画像などを意味する。
本明細書で使用する「リッカート尺度スコア」とは、独立した盲検評価者(または患者)が、治療後の各訪問時に、1日目の前処置(ベースライン)のセルライトの写真(2Dカラー、3Dカラー、3Dグレースケール)と治療後の訪問時の写真を比較して、治療領域(臀部または大腿部)の変化を識別したスコアを意味する。スコアは、以下の5段階のリッカート尺度で捉えられる。
Figure 2022502478
本明細書で使用する「非標的大腿部」または「非標的臀部」とは、主要な有効性評価項目の評価に選択されていない大腿部または臀部を意味する。このような非標的領域は、依然として治療を受け、二次的な有効性の評価に使用することができる。
「任意」または「任意に」は、その後に記述される要素、構成要素、または状況が発生してもしなくてもよいことを意味し、記述には要素、構成要素、または状況が発生する場合と発生しない場合が含まれる。
本明細書で使用する「患者報告式セルライトインパクト尺度(PR−CIS)」とは、セルライトの視覚的および感情的インパクト(セルライトの見た目に満足している、気になる、自覚、恥ずかしい、老けて見える、太って見える、体型が崩れて見える)を6項目の質問で評価するもので、各質問は0(全くない)から10(非常にある)までの数値評価尺度で行われる。より具体的には、PR−CISは、セルライトの視覚的および感情的なインパクト(セルライトの見た目に満足している、気になる、自覚、恥ずかしい、老けて見える、太って見える、体型が崩れて見える)を評価する6項目の静的な質問で、各項目は、被験者が自分の臀部または大腿部のデジタル画像を見ながら、0(全くない)から10(非常にある)までの11段階の数値評価(または間隔)で回答する。この評価は、各部位を個別に評価するのではなく、すべての大腿部および/または臀部をまとめて評価する場合もある。PR−CISのトータルスコアは、6つの個別の質問から得られる。
質問1:治療のために選択された領域について考えると、セルライトの外観にどの程度満足しているか?
質問2:治療のために選択された領域について考えると、あなたはあなたのセルライトの外観にどのように悩まされているか?
質問3:治療のために選択された領域について考えると、あなたはあなたのセルライトの外観についてどのくらい自覚があるか?
質問4:治療のために選択された領域について考えると、あなたはあなたのセルライトの外観についてどのくらい恥ずかしいか?
質問5:治療のために選択された領域について考えると、あなたのセルライトのせいでどれくらい老けて見えるか?
質問6:治療のために選択された領域について考えると、セルライトのために太って見えたり、体型が崩れて見えたりすることはあるか?
本明細書で使用する「患者報告式セルライトインパクト尺度(省略形)」(PR−CIS省略形)とは、セルライトの視覚的および感情的なインパクト(セルライトの見た目に満足している、気になる、自覚、恥ずかしい、太って見える、体型が崩れて見える)を、5つの質問項目を用いて評価するもので、各質問は0(全くない)から10(非常にある)までの数値評価尺度で行われる。より具体的には、PR−CIS省略形は、セルライトの視覚的および感情的な影響(セルライトの見た目に満足している、気になる、自覚、恥ずかしい、太って見える、体型が崩れて見える)を評価する5項目の静的な質問であり、各項目は、被験者が臀部または大腿部のデジタル画像を見ながら、0(全くない)から10(非常にある)までの11段階の数値評価(または間隔)で回答する。この評価は、個々の部位を個別に評価するのではなく、すべての大腿部および/または臀部をまとめて評価してもよい。限定的ではない例として、PR−CIS省略形のトータルスコアは、5つの個別の質問から導き出すことができる。
質問1:治療のために選択された領域について考えると、セルライトの外観にどの程度満足しているか?
質問2:治療のために選択された領域について考えると、あなたはあなたのセルライトの外観にどのように悩まされているか?
質問3:治療のために選択された領域について考えると、あなたはあなたのセルライトの外観についてどのくらい自覚があるか?
質問4:治療のために選択された領域について考えると、あなたはあなたのセルライトの外観についてどのくらい恥ずかしいか?
質問5:治療のために選択された領域について考えると、セルライトのために太って見えたり、体型が崩れて見えたりすることはあるか?
PR−CIS省略形トータルスコアは、PR−CIS本編の他の5つの質問セットから導き出すことができる。
本明細書で使用する「患者が報告したフォト数値セルライト重症度尺度(PR−PCSS)」は、患者が使用するPCT特許出願PCT/US2018/020551(2018年9月7日にWO2018/160905として公開)に記載されているフォト数値尺度であり、セルライトの重症度を5段階に評価するように設計されている。
本明細書で使用する「フォト数値」とは、一連の写真、イラスト、図面、モデル、3Dモデル、コンピュータで生成された画像、MRI画像、画像などを使用することを意味し、それぞれにセルライトの重症度の異なるレベルが尺度で割り当てられている。
本明細書で使用する「順次訪問」とは、セルライトの変化が尺度によって評価される2回以上の臨床医の訪問または回数を意味する。訪問間の時間は、約2週間、3週間、約1ヶ月、約2ヶ月、約3ヶ月、約4ヶ月、約5ヶ月、約6ヶ月、約1年、約18ヶ月、約2年、約3年、約4年、または約5年以上であってもよい。
本明細書で使用する「重篤な有害事象」とは、死亡に至る有害事象、直ちに生命を脅かす有害事象、入院を余儀なくされるもしくは長期化させる有害事象、永久的もしくは実質的な障害をもたらす有害事象、先天的な異常/出生時の欠損をもたらす有害事象、または重要な医療上の事象とみなされる有害事象を意味する。
本明細書で使用する「統計的に有意」とは、一般的に0.05未満の「P」値を有する統計データを意味する。本開示に関連して、臨床研究は、一般的に、対照と比較して介入(例えば、この場合、治療)の優位性を検証するように設計されている。臨床研究には、生理学的に互いに異なる人々が参加するため、結果にばらつきが生じるのは当然のことである。そこで、観察された差が偶然によるものなのか、治療法自体によるものなのかを判断するために、統計学が用いられる。統計的有意性の測定は、研究結果が偶然によるものである確率を定量化するものである。統計的有意性の測定によく用いられる「P」値は、研究結果が実際の治療効果ではなく偶然によるものである確率を表する。一般的に、統計的に有意とみなされる「P」値の従来のカットオフ値は0.05(5%)であるが、研究デザインや結果によって変わる場合がある。「P」値が0.05未満であれば、その研究結果が偶然によるものである可能性が5%未満であることを意味する。「P」値が0.05(5%)より大きい場合、治療群と対照群の間の差は統計的に有意ではなく、その差が治療に起因する可能性は低く、代わりに偶然に起因する可能性があることを意味する。
「被験者」または「患者」という用語は、本明細書では互換的に使用され、ヒトまたは他の哺乳類を意味する。
本明細書で使用する「被験者グローバル美的改善尺度(S−GAIS)」および「調査員グローバル美的改善尺度(I−GAIS)」とは、セルライトの重症度および/または改善度を評価するための以下の尺度を意味する。被験者に次のような導入質問:「治療後のセルライトの外観をどう評価するか?」をする。評価は、表3に示すように、被験者の回答に応じて−3(非常に悪化)から+3(非常に改善)の範囲で行われる。
Figure 2022502478
本明細書で使用する「セルライト治療に対する被験者の満足度」(SSCT)とは、−2から+2の範囲の被験者満足度評価を意味する。一例として、以下の表4は、臀部のセルライト治療に対するそのような評価を提供する。患者に「今日、あなたが受けたセルライト治療の結果にどの程度満足しているか?」と質問し、表4に示すような回答・評価を選択してもらう。
Figure 2022502478
表5は、大腿部のセルライト治療に対するそのような評価を示している。患者に「今日、あなたが治療を受けた大腿部の特定の領域または領域のセルライト治療の結果にどのくらい満足しているか?」と質問し、表5のような回答/評価を選択してもらう。
Figure 2022502478
本明細書で使用する「被験者自己評価尺度(SSRS)」とは、表6に示すように、被験者がセルライトに関連した外観の満足度を、0(極めて不満)から6(極めて満足)までの7段階の整数で評価するための尺度である。
Figure 2022502478
本明細書で使用する「標的大腿部」または「標的臀部」とは、主要な有効性の評価項目を評価するために選択された大腿部または臀部を意味する。
本明細書で使用される「治療有効量」という用語は、患者または統計的に有意な患者集団のセルライトの重症度を軽減するために必要なコラゲナーゼの量を意味する。採用するコラゲナーゼ組成物の量は、所望の結果を得るために必要な量のコラゲナーゼを提供するために必要な量となる。実際には、注射されるコラゲナーゼ、注射技術、および治療領域での酵素活性に応じて変化する。
本明細書で使用する「治療コース」とは、3回の治療セッション(すなわち、それぞれが治療を受けるために臨床医のもとを訪れること)を意味する。
本明細書で使用する「治療上の有害事象」または「TEAE」という用語は、治験薬による治療前には存在しなかったが治療後に現れた状態、治療開始時には存在したが治療中に悪化した状態、または治療開始時には存在したが治療中に解決して再び現れた状態(治療開始時のAEの強さに関係なく)を意味する。
本明細書で使用する「大腿部セルライト重症度−患者」(「TCS−P」)および「大腿部セルライト重症度−臨床医」(「TCS−C」)という用語は、患者(TCS−P)または臨床医(TCS−C)が大腿部セルライトの重症度、改善度、および/または患者の満足度を評価し、コラゲナーゼの有効性の評価を支援するために使用する図5に示すフォト数値尺度(または実質的に類似した尺度)を意味する。患者が報告する尺度の使用方法をTCS−Pと呼び、臨床医が報告する尺度の使用方法をTCS−Cと呼ぶ。
本明細書で使用する「治療訪問」または「治療」または「治療セッション」という用語は、1回のオフィス訪問で、セルライトの治療に有用な少なくとも1つの活性剤の治療有効量を患部に1回以上注射または治療を行うことを意味する。
本明細書で使用する「検証された」、「有効性」、「検証」という用語は、特定の尺度が正確で信頼できることを実証するプロセスを意味し、同じ結果が一貫して得られることを保証するための視覚的評価の再現性も含まれる。さらに検証では、尺度の精度、正確性、感度を検証し、尺度によって行われる測定値が信頼性、再現性、堅牢性に優れていることを確認する。
B.導入
本開示は、以下に説明する特定の注射技術を用いて、セルライトの外観を有する対象者に治療有効量の1つ以上のコラゲナーゼを投与することを有する、セルライトの治療方法に関するものである。
一般的に、治療には4つの段階がある。(1)臨床医と患者が治療前の評価を行い、治療前のベースラインを決定し、治療する陥凹部を選択する;(2)底がある場合は、臨床医は陥凹部を底で治療するようにマークする;(3)臨床医は患者をコラゲナーゼで治療する;(4)臨床医と患者が治療後の評価を行う。これらの段階を以下に詳述する。各段階およびその中の工程は任意であり、工程の順序は制限することを意図したものではない。
C.段階1−予備的な評価
本明細書に記載されているセルライトを治療する方法の第1段階では、臨床医は、以下の基準に基づいて、治療すべきセルライト陥凹部の選択を行う。
● 陥凹部は、写真で確認できるように、患者がリラックスしたポーズ(臀部の筋肉をリラックスさせた状態での立位)をとったときに、自然にはっきりと現れるものでなければならない
● 選ばれる陥凹部は、臀部や大腿部などの患部全体の美観を改善する可能性が最も高いと臨床医が判断したものでなければならない
● 治療前に患者がリラックスした状態で患部を撮影する
● 注射前に評価が行われる。すなわち、臨床医および/または患者が独立して写真を評価し、以下の尺度または評価方法の1つ以上を用いて結果を採点する
〇 ヘクセルセルライト重症度尺度(CSS)(ヘクセルCSS)
〇 ヘクセルくぼみ深さスコア
〇 リッカート尺度
〇 陥凹部分析
〇 臨床医が報告したフォト数値セルライト重症度尺度(CR−PCSS)
〇 患者が報告したフォト数値セルライト重症度尺度(PR−PCSS)
〇 調査員グローバル美的改善尺度(I−GAIS)
〇 被験者グローバル美的改善尺度(S−GAIS)
〇 患者報告式セルライトインパクト尺度(PR−CIS)
〇 被験者自己評価尺度(SSRS)
〇 セルライト治療に対する被験者の満足度(SSCT)
〇 大腿部セルライト重症度−患者(TCS−P)、大腿部セルライト重症度−臨床医(TCS−C)
〇 Body−Q
〇 フィッツパトリック尺度
〇 セルライトの重症度、改善度、および/または患者の満足度を評価するために臨床医および/または患者が使用する検証済みのフォト数値またはその他の尺度(例えば、ヘクセル−Merz尺度)
D.段階2−治療する陥凹部のマーキング
本明細書に記載された治療の第2段階では、治療すべきくぼみを臨床医がドット(複数)でマークすることができる。さらに写真を撮影してもよい。例えば、図6および15を参照のこと。
E.段階3−コラゲナーゼ注射
第3段階の治療では、臨床医がコラゲナーゼ注射を行う。
1.コラゲナーゼの種類
本開示で有用なコラゲナーゼは、上記で定義されたコラゲナーゼのいずれかを含む。さらなる背景として、マトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)は、本明細書の定義に該当するコラゲナーゼで構成され得る。例えば、MMP−1は、コラゲナーゼ1を有し、MMP−8は、コラゲナーゼ2/好中球コラゲナーゼを有し、MMP−13は、コラゲナーゼ3を有し、MMP−18は、コラゲナーゼ4を有する。さらに、カテプシンもコラゲナーゼに分類することができる。
2.コラゲナーゼ酵素の速度論
本開示で有用なコラゲナーゼは、その酵素動態によっても特徴付けられ得る。ここで、セルライトを治療するのに有効な1つ以上のコラゲナーゼのおおよその速度論的値は以下が含まれる:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
max=最大の速度
=Vmaxの50%での[基質]
cat=1秒間に切断される基質の分子数
1/Kcat=1分子の基質を切断するのに必要なマイクロ秒
これらの値は、後述のマイクロプレートアッセイを用いて、基質や時間を変えて実験的に決定してもよい。また、他のアッセイやパラメータを採用してもよい。
この値は、ミカエリス・メンテン方程式に基づいて酵素の挙動を定量的に表したものである:
Figure 2022502478
ここで、Vは基質濃度[S]での反応速度(速度)、Vmaxは観測できる最大速度、KはVmaxの50%が得られる基質濃度に相関するミカエリス定数である。
Figure 2022502478
ここで、k、k−1、kは次の工程の速度定数である。
Figure 2022502478
ここで、Eは酵素、Sは基質、ESは酵素−基質複合体、Pは生成物である。
触媒定数Kcatターンオーバー数、すなわちES複合体がE+Pに至るまでの速さを意味する。これは、各活性部位が単位時間当たりに行う触媒サイクルの数を反映している。
特定の実施形態では、AUX−IおよびAUX−IIは以下の特徴を有する。
● AUXI
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● AUXII
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
前提条件
cat=Vmax/[AUX]=(nモル 基質/nG AUX*分−1)/nG AUX
触媒効率(Kcat/K)は一般的に、基質を生成物に変換する酵素の総合的な能力を表し、結合イベントと触媒イベントの両方を反映している。別の実施形態では、AUX−IおよびAUX−IIは、以下の特徴を有する。
Figure 2022502478
3.コラゲナーゼの力価(比活性)について
コラゲナーゼの比活性(力価)を決定するためのアッセイが開発され、使用されている。そのようなアッセイは、サブセクションa.からc.に記載されており、事前に決定された酵素濃度で所定の時間内に基質を生成物に変換する能力によってコラゲナーゼを特徴付ける。特定の非限定的な実施形態において、これらのアッセイは、AUX−IおよびAUX−IIのそれぞれ、ならびに複合CCH製剤(AUX−IおよびAUX−IIの1:1の比)の力価を決定するために使用される。後述のSRCアッセイでは、反応の基質としてコラーゲンを使用する。SRCアッセイは、基質として可溶性ラット(尾)コラーゲン(SRC)を使用し、I型コラゲナーゼ活性を測定するために使用され、II型コラゲナーゼはコラゲナーゼ混合物の観察された活性の約20%に寄与する。SRCアッセイは、フルオレスカミンを利用して、SRCのI型消化によって生成されたペプチドを検出する。反応は、15mMの2価のカルシウムイオンを含む4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジンエタンスルホン酸(HEPES)緩衝液を用いて、pH7.2、25℃で2.5時間行われる。
ウシ腱コラーゲン(BTC)アッセイ(後述)は、Mandlら、Arch.Biochem.Biophys.74: 465-475 (1958)、KellerおよびMandlによって改訂されたArch.Biochem.Biophys.101: 81-88 (1963)の手順に基づいている。また、Rosen, Arch.Biochem.Biophys.67: 10-15 (1957)を参照。BTCアッセイは、基質として不溶性のウシ腱コラーゲンを用い、I型およびII型の両方の活性(AUX−IおよびIIコラゲナーゼなど)を測定する。BTCアッセイは、ニンヒドリンを利用した比色法で、BTCのI型およびII型の分解によって生成されたペプチドを検出する。この反応はpH7.2でも行われるが、10mMの2価のカルシウムイオンを含むトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン(TRIS)緩衝液中において37℃で22時間行われる。
GPAアッセイ(後述)は、可溶性の誘導体化されたヘキサペプチド(カルボベンゾキシ−GPGGPA)を基質として使用するコラゲナーゼアッセイである。GPAアッセイは、主にII型の活性を測定するために使用され、I型の活性は観察された活性の約10%である。II型コラゲナーゼはヘキサペプチドを2つのトリペプチドに切断するが、そのうちの1つ(GPA)は遊離のアミノ末端を持ち、これがフルオレスカミンと反応して蛍光生成物を与える。GPAアッセイは、100mMの2価のカルシウムイオンを含むHEPES緩衝液を用いて、pH7.2、25℃で10分間行う。
SRCおよびBTCアッセイは、ともに天然の基質(コラーゲン)を分解するもので、コラゲナーゼの注射による治療効果に近いものとなっている。GPAアッセイは、基質として明確に定義された低分子量のヘキサペプチドを使用し、明確に定義された2つのトリペプチドが生成されるという利点がある。また、GPA法は蛍光シグナルを発し、感度も高い。GPA法は、単一の基質と、酵素の初期速度に近似した反応条件(10分間のインキュベーション)を用いるため、ミカエリス・メンテン速度論的解析に適している。SRC法は、コラーゲン結合ドメインを持つコラーゲン分解酵素に適しており、GPA法は、ゼラチナーゼと呼ばれるコラーゲン結合ドメインを持たないコラーゲン分解酵素に適している。
a.GPA単位のアッセイ方法と比活性単位
i.GPAアッセイ(キュベット)で測定したコラゲナーゼ力価
GPAアッセイは、主にクラスIIコラゲナーゼの力価を測定するために用いられる。アッセイの最初の工程では、基質であるカルボベンゾキシ−グリシル−L−プロリル−グリシル−グリシル−プロリル−L−アラニン(zGPGGPA)をコラゲナーゼサンプルによる2つのペプチド:カルボベンゾキシ−グリシル−L−プロリル−グリシン(zGPG)およびグリシル−プロリル−L−アラニン(GPA)への消化を含む酵素反応を含む酵素反応を含む。第2工程では、続いて蛍光誘導体のフルオレスカミンを用いて遊離したGPAを測定する。アッセイは以下の方法に従っているが、当業者であれば、アッセイの目的を達成するために特定の変更(例えば、希釈濃度や希釈時間)を行ってもよいことを理解できるだろう。
一般的な方法は以下の通りである。ロイシン標準品を用意する。コラゲナーゼサンプルを入手し、コラゲナーゼによるzGPGGPA(以下、「基質」)の酵素的切断の第1工程で使用する溶液を調製する。続いて、コラゲナーゼ処理した試料(遊離したGPAを含む)とロイシン標準試料を、それぞれ生成したGPAとロイシン分子の遊離アミノ基を蛍光標識するために、室温で一定時間、フルオレスカミンで処理する。392nmで励起した後、各溶液の480nmでの蛍光発光を測定する。得られたロイシンとコラゲナーゼのサンプル曲線の傾きを用いて、以下のように力価単位を算出する:
力価(f−GPA単位/mg)=(Mサンプル/Mロイシン)×(DF/T)
ここで、
サンプル=コラゲナーゼサンプル力価曲線の傾き
ロイシン=ロイシン標準曲線の傾き
DF=希釈率
T=反応時間
GPAのアッセイ方法に関する追加の非限定的な詳細は、以下のとおりである。
緩衝液および試薬
1.f−アッペルの緩衝液、pH7.2(55mM HEPES、100mM 酢酸カルシウム)
2.1mM ロイシンワーキングストック溶液
3.200mM ホウ酸塩、pH9.0
4.アセトン中の0.5mM フルオレスカミン溶液
5.f−アッペルの緩衝液中の2mg/mL zGPGGPA基質
溶液調製
溶液は以下のように調製される。
f−アッペルの緩衝液:13.0gのHEPESと17.6gの酢酸カルシウムを約800mLの水に溶かす。水酸化ナトリウムでpHを7.2に調整し、水で1LになるようにQSする。2〜8℃で保存する。
10mM ロイシンストック溶液:ロイシン65.5mgを50mLの水に溶かす。ロイシンは、100mL(または同等量)のガラスビーカーに直接秤をかけて量る必要がある。ロイシン約65mg(目標重量)をビーカーに計量する。秤量したロイシンの重量をもとに、ビーカーに加える水の量を以下の式で計算する。算出した量の水をビーカーに加え、ロイシンが完全に溶解していることを確認して十分に混合する。1mLのアリコートに分注する。20℃以下で保存する。
Figure 2022502478
ここで、
C2=計量したロイシンの質量(mg)
V1=50(mLの水)
C1=65.5(mgのロイシン)
V2=10mMストック溶液を生成するために必要な水の量(mL)
1mM ロイシンワーキングストック溶液:10mMロイシンストック溶液のバイアルを解凍し、150μLと1350μLの水を合わせて1mMに希釈する。使用前によく混合する。
0.5N HCl:HClを水で0.5Nに希釈し、よく混ぜる。室温で保存する。市販の0.5N塩酸を使用することもできる。
200nM ホウ酸塩:pH9.0:2.4gのホウ酸を約150MLの水に溶かす。水酸化ナトリウムを用いてpHを9.0に調製する。水で200mLに希釈し、よく混ぜる。2〜8℃で保存する。
0.5mM フルオレスカミン溶液:15mgのフルオレカミンを100mLのアセトンと混合し、振り混ぜて溶解させる。遮光して2〜8℃で保存。
基質溶液(2mg/mL zGPGGPA):2mg/mLの基質をf−アッペルの緩衝液で調製する。機械的シェーカー/ローテーターで、完全に溶解するまで十分な時間をかけて溶解する(約15分)。
ロイシン標準曲線
ロイシンの標準曲線は、表7に従って作成される。
Figure 2022502478
その後、各ロイシンスタンダードの100μLを別々のチューブに移し、フルオレスカミンを検出する。
コラゲナーゼサンプル調製
コラゲナーゼ試料をf−アッペルの緩衝液で0.01mg/mLに2段階希釈し、穏やかにボルテックスして混合する。希釈方法の一例を以下に示す。
1.100μL×1.0mg/mL−→1000μL=0.1mg/mL
2.100μL×0.1mg/mL−→1000μL=0.01mg/mL
ブランク調製
ブランクは、希釈した調製液45μLを500μLの0.5N塩酸と組み合わせて酵素を不活性化して調製する。455μLのzGPGGPA基質溶液を加え、ボルテックスで十分に混合する。各ブランクの100μLを別のチューブに移し、フルオレスカミンと反応する可能性のある不純物を検出する。
力価曲線
各コラゲナーゼサンプルについて、以下のように1セットの力価曲線を作成する。
Figure 2022502478
基質と緩衝液の入ったチューブを25℃のウォーターバスで15分以上温める。2セット目のチューブにラベルを貼り、それぞれに50μLの0.5N塩酸を加える。希釈したコラゲナーゼサンプル製剤(0.01mg/mL)を表8に従ってチューブに加え、10分間インキュベートし、混合して25℃のウォーターバスに戻す。予め温めておいた基質に最初の調製物を加えた時点で、インキュベーション期間を開始する。
Figure 2022502478
10分間のインキュベーションの残り時間が1〜2分になったところで調製物をウォーターバスから取り出し、静かにボルテックスして混合する。最初の試薬を基質に添加してから10分後、各チューブから50μLを、50μLの0.5N塩酸を入れたチューブに移す。消化を急がせるために、調製物を直接酸に加えるべきである。すべての調製物をクエンチした後、各チューブをボルテックスしてよく混合する。
検出
各調製液(ブランク、コラゲナーゼサンプル力価曲線、ロイシン標準液)100μLが入ったすべての検出チューブに、400μLの200mMホウ酸緩衝液と500μLの0.5mM フルオレスカミン溶液を加える。十分にボルテックスして混合する。チューブを室温で最低10分間インキュベートする。
蛍光光度計の設定
以下の機器パラメータを使用して蛍光光度計を設定し、1時間の誘導体化で各調製物の蛍光を読み取る。
Figure 2022502478
計算
各ロイシン標準物質の濃度(X軸)を480nmでの蛍光応答(Y軸)に対してプロットする。傾き(m)と決定係数(R)を決定する。各力価曲線の調製物の平均蛍光を決定する。各調製物の濃度(X軸)を480nmでの平均蛍光応答(Y軸)に対してプロットすることにより、コラゲナーゼサンプルおよびロイシンの力価曲線を作成する。得られた直線曲線の傾き(m)と決定係数(R)を決定する。
コラゲナーゼサンプルの力価の測定
力価(f−GPA単位/mg)=(Mサンプル/Mロイシン)×(DF/T)
ここで、
サンプル=コラゲナーゼサンプル力価曲線の傾き
ロイシン=ロイシン標準曲線の傾き
DF=希釈率(1100μL/50μL=22)
T=反応時間(10分)
ii.コラゲナーゼ試料中のクラスIIコラゲナーゼ活性を測定するためのGPAマイクロプレートアッセイ
この方法は、マイクロプレートで行われる以外は、上記のGPAアッセイと同様である。上記のアッセイと同様に、マイクロプレートアッセイは、基質であるカルボベンゾキシ−グリシル−L−プロリル−グリシル−グリシル−プロリル−L−アラニン(zGPGGPA)(以下、「基質」という)の酵素的切断におけるコラゲナーゼサンプルのタンパク質分解活性を測定する。このアッセイは、以下の方法論に従っているが、当業者であれば、特定の変更(例えば、希釈濃度および時間)を行っても、アッセイの目的を遂行することができることを理解するであろう。
試薬
1.ペプチド基質(zGPGGPA)(Bachem M1260または同等品)
2.トリペプチドGPA(Bachem H3615または同等品)
3.フルオレスカミン(Acros 191675000または同等品)
4.精製水(Milli−Q−Plus 18.2MΩシステムまたは同等品)
5.1M HEPES緩衝液(Gibco 15630−080または同等品
6.Surfact−Amps20(商標)(10% Tween溶液)(Pierce Cat.#28320または同等品)
7.1M 酢酸カルシウム(Ca(C)(Emerald Biosciences Cat.#EBS−100−CAACまたは同等品)
8.ホウ酸(Sigma B7660または同等品)
9.2.5N NaOH (J.T Baker 5666−02または同等品)
10.0.5N 塩酸(VWR 101223−134または同等品)
11.アセトン(Sigma 270725または同等品)
溶液の調製
(i)アッセイ緩衝液(50mM HEPES pH7.1/0.05% Tween20/5mM(Ca(C)の調製:50mLの1M HEPESをピペットで800mLの純水に混ぜる。5mLの1M (Ca(C)と5mLのSurfact−Amps(10% Tween20)を加える。pHを確認し、必要に応じて7.1±0.05に調整する。十分な量の水を加えて体積を1Lに調整し、0.22ミクロンのフィルターで溶液をろ過する。このアッセイ緩衝液は、室温で最大3ヶ月間保存することができる。
(ii)0.1N NaOHの調製:48mLの純水に2.5N NaOHを2mL添加する。この溶液は、室温で3ヶ月間まで保存することができる。
(iii)4mg/mL トリペプチド GPAストック溶液の調製:400mg(±1mg)のトリペプチドGPAを10mLの0.1N NaOHに溶解し、完全に溶解するまでボルテックスをかける。十分な量のアッセイ緩衝液を加えて100mLとし、0.5mLのアリコートに分注して−70℃で保存する。4mg/mLのトリペプチドGPAストックは、−70℃で1年間保存可能である。
(iv)4mg/mL(6.8mM)のペプチド基質zGPGGPAの調製:400mg(+1mg)のペプチド基質zGPGGPAを10mLの0.1N NaOHに溶かし、完全に溶けるまでボルテックスする。十分な量のアッセイ緩衝液を加えて100 mLとする。この溶液は、4℃で3ヶ月間保存できる。
(v)120mM ホウ酸 pH9.0の調製:7.4g(±0.5g)のホウ酸を800mLの純水に溶かす。この溶液をNaOHで滴定してpH9.0とし、十分な量の純水を加えて体積を1リットルに調整する。この溶液は、室温で最大3ヶ月間保存することができる。
(vi)アセトン中の1mM フルオレスカミンの調製:28±2mgのフルオレスカミンを100mLのアセトンに溶解させる。この溶液は、新たに調製し、光と湿気から保護する必要があった。
トリペプチドGPA標準品の調製と段階希釈
0.08mg/mL(329μM)のトリペプチドGPA標準品は、4mg/mLのトリペプチドGPAストックをアッセイ緩衝液で50倍に希釈して調製する(例えば、20μLの4mg/mLのトリペプチドGPAを980μLのアッセイ緩衝液に入れる)。アッセイプレートのA列では、200μLの329μMトリペプチドGPA標準品をAlおよびA7にピペットで移す。100μLの量のアッセイ緩衝液をA2−A6およびA8−Al2にピペットで移す。
トリペプチドGPA標準品の段階希釈では、AlからA2に100μLを移して混合し、A2からA3に100μLを移して、A5まで繰り返す。A5のウェルから100μLを取り出し、最終容量が100μLになるようにする。A6ウェルには緩衝液のみが入っている。
2つ目のトリペプチドGPA標準液の段階希釈では、A7からA8に100μLを移して混合し、A8からA9に100μLを移して、これをウェルA11まで繰り返す。A11のウェルから100μLが取り出され、最終的な体積が100μLになる。A12ウェルには緩衝液のみが入っている。
コラゲナーゼサンプルの調製
コラゲナーゼサンプル(例えば、凍結乾燥したコラゲナーゼ製剤)の場合、サンプルを少なくとも10分間室温に戻し、再構成して500ng/mLのストック溶液を形成する。異なる濃度のものを使用してもよい。ストック液をアッセイ緩衝液で希釈し、テスト用コラゲナーゼサンプル(T1A)を調製する。この手順を繰り返し、3連のテストサンプル(T1A、T1B、T1C)を調製する。
議論
この方法では、96ウェルプレートにおいて、濃度を増加させたコラゲナーゼテストサンプル50μLと過剰な基質50μL(最終濃度2.0mg/mL)を混合する。50μLのアッセイ緩衝液の量を、Uボトムの96ウェルポリプロピレン反応プレートのC−G列に加える。次に、マルチチャンネルピペットを用いて、1/1.5の段階希釈を行い、B列からC列に100μLのコラゲナーゼサンプルを移し、混合し、G列に到達するまで繰り返す。表9は、50μLの基質をB列からH列に加えた後の最終的なコラゲナーゼ濃度を示している。
ブランクは、50μLのアッセイ緩衝液をピペットで移してH列に調製し、この行には酵素を含まない。例示的な濃度を表9に示す。
Figure 2022502478
コラゲナーゼ反応
zGPGGPA基質は、室温で15分間のインキュベーション時間中にクラスIIコラゲナーゼによってzGPGとGPAに切断される。インキュベーターと温度プローブをオンにする(プレートに基質を添加する前の温度は22±1℃)。B−H列のカラム1−12に、50μL 4mg/mL(6.8mM)zGPGGPA基質をカラムごとに添加し、混合する。反応開始時間は、最初のカラムに基質が添加された後に始まる。プレートに蓋をして22±1℃のインキュベーターに入れ、総反応時間を15±1分とする。
インキュベーション後、塩酸を加えて反応をクエンチし、ペプチドの遊離アミノ末端を発色試薬のフルオレカミンと反応させて、放出されたGPAペプチドの量を定量する。反応を鎮めるために、A行からH行までの各ウェルに0.5Nの塩酸を100μLずつ、列ごとに加えて混合する。最初の列にHClが加えられた時点で反応時間が終了する。
検出
195μLの量の120mMホウ酸塩pH9.0をマイクロプレートGreinerのポリプロピレン製ブラックリーディングプレートの各ウェルに加える。クエンチした反応混合物30μLを反応プレートからリーディングプレートの対応するウェルに移し、よく混合する。次に、75μLの1mM フルオレスカミンをリーディングプレートの各ウェルに添加し(フルオレスカミン/アセトンを分注するポリプロピレン製のトレイを使用)、添加するたびに直ちに混合する。フルオレスカミン添加後15分以内に、モレキュラーデバイスM2蛍光プレートリーダーを用いて以下の設定でプレートを読み取る。プレートはフルオレスカミン添加後15分以内にモレキュラーデバイスM2蛍光プレートリーダーで以下の設定で読み取る:励起380nm、発光473nm、カットオフ455nm、6リード/ウェル、PMT培地。
GPAの濃度(μM)対473nmでの発光、コラゲナーゼの濃度(ng/mL)対473nmでの発光をプロットした。各プロットについて、固定パラメータを用いずに線形回帰をフィッティングした。コラゲナーゼテストサンプルでは、ゼロ点データを線形フィットから除外し、各サンプルの3連データセット全体を用いてプロットを作成した。トリペプチドGPA標準サンプルとコラゲナーゼサンプルの傾きを求める。
力価の決定
コラゲナーゼサンプルの比活性は以下のように計算できる:
GPAマイクロプレートアッセイ単位=((コラゲナーゼサンプルの傾き)/(トリペプチドGPAの傾き×インキュベーション時間))×10
コラゲナーゼテストサンプルの比活性は、トリペプチドGPA標準品の傾きから決定し、カーブフィッティングプログラムで算出する。マイクロプレート法を用いて、異なる濃度の基質と異なる時間を用いて、ミカエリス・メンテンによる酵素反応速度を算出することができる。
iii.GPAアッセイで測定したコラゲナーゼ力価
本開示で有用なコラゲナーゼは、約100,000〜約300,000 GPA単位/mg、または約175,000〜約300,000 f−GPA単位/mgの力価を有していてもよい。他の実施形態では、力価は、約70,000〜約400,000 GPA単位/mg、または約100,000〜約375,000 GPA単位/mg、または約125,000〜約350,000 GPA単位/mg、または約150,000〜約325,000 GPA単位/mg、または約175,000〜約300,000 GPA単位/mg、または約200,000〜約275,000 GPA単位/mgであってもよい。あるいは、力価は、約70,000〜約400,000f−GPA単位/mg、約100,000〜約375,000f−GPA単位/mg、約125,000〜約350,000f−GPA単位/mg、約150,000〜約325,000f−GPA単位/mg、約175,000〜約300,000f−GPA単位/mg、約230,000〜約430,000f−GPA単位/mg、または約200,000〜約275,000f−GPA単位/mgであってもよい。また、コラゲナーゼは、約30,100〜約87,100、または約43,000〜約67,000GPAマイクロプレートアッセイ単位の力価を有していてもよい。上記のGPAアッセイは、任意のコラゲナーゼの比活性を分析するために採用されてもよい。
b.SRC単位のアッセイ方法と比活性単位
i.SRCアッセイ(キュベット)で測定したコラゲナーゼ力価
SRCアッセイは、主にクラスIコラゲナーゼの力価を測定するために使用される。一般的な方法は以下の通りである。ロイシン標準液とコラゲナーゼサンプル液を用意する。アッセイの第1工程は、コラゲナーゼによる可溶性ラット尾腱コラーゲン(SRC)の消化を含む酵素反応を含む。第2工程では、遊離したペプチドフラグメント/アミノ酸を蛍光発生誘導体であるフルオレスカミンで測定する。アッセイは以下の方法論に従うが、当業者は、特定の変更(例えば、希釈濃度および時間)がなされても、アッセイの目的を実行できることを理解するであろう。
このようなコラゲナーゼとロイシン標準サンプルを,生成したGPAに蛍光標識をつけるための試薬で処理する。ロイシン標準サンプルおよびコラゲナーゼサンプルは,室温で10分間インキュベートした後,各溶液の蛍光を392nmおよび480nmの励起波長および発光波長でそれぞれ測定する。次に、得られたロイシンおよびコラゲナーゼサンプルの曲線の傾きを用いて、以下のように力価単位を算出する:
力価(f−SRC単位/mg)=(Mサンプル/Mロイシン)×(DF/T)×CF
ここで、
サンプル=コラゲナーゼサンプル力価曲線の傾き
ロイシン=ロイシン標準曲線の傾き
DF=希釈率(1500μL/100mL=15)
T=反応時間(2.5時間×60分/1時間=150分)
CF=換算係数(1000μg/1mg=1000)
以下に、SRCアッセイ方法に関する非限定的な詳細を示す。
緩衝液と試薬
1.F−TCアッセイ緩衝液、pH7.2(22g HEPES [4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジンエタンスルホン酸]、4.4g 酢酸カルシウム)
2.F−酵素緩衝液、pH7.2
3.200mM ホウ酸塩、pH9.0
4.10mM ロイシンストック溶液
5.1mM ロイシンワーキングストック溶液
6.アセトン中の1mM フルオレスカミン溶液
7.0.02N 酢酸中の2mg/mL ラット尾腱コラーゲン
溶液調製
溶液は以下のように調製される:
F−TCアッセイ緩衝液:22gのHEPESと4.4gの酢酸カルシウムを約900mLの水に溶かす。水酸化ナトリウムでpHを7.2に調整し、水で1LになるようにQSする。2〜8℃で保存する。
F−酵素緩衝液:4mLを16mLの水と組み合わせることにより、F−TCアッセイ緩衝液を希釈する。2〜8℃で保存する。
10mM ロイシンストック溶液:65.5mgのロイシンを50mLの水に溶かす。ロイシンは、100mL(または同等量)のガラスビーカーに直接秤をかけて量る必要がある。ロイシン約65mg(目標重量)をビーカーに計量する。秤量したロイシンの重量をもとに、ビーカーに加える水の量を以下の式で計算する。算出した量の水をビーカーに加え、ロイシンが完全に溶解していることを確認して十分に混合する。1mLのアリコートに分注する。−20℃以下で保存する。
Figure 2022502478
ここで、
C2=計量したロイシンの質量(mg)
V1=50(mLの水)
C1=65.5(mgのロイシン)
V2=10mMストック溶液を生成するために必要な水の量(mL)
1mM ロイシンワーキングストック溶液:10mMロイシンストック溶液のバイアルを解凍し、150μLと1350μLの水を合わせて1mMに希釈する。使用前によく混合する。
0.5N HCl:HClを水で0.5Nに希釈し、よく混ぜる。室温で保存する。市販の0.5N塩酸を使用することもできる。
0.02N 酢酸:1N 酢酸 1mLと水49mLを混合し、よく混ぜる。室温で保存する。
200 mM ホウ酸塩、pH9.0:2.4gのホウ酸を約150mLの水に溶かす。水酸化ナトリウムを用いてpHを9.0に調整する。水で200mLに希釈し、よく混ぜる。2〜8℃で保存する。
1mM フルオレスカミン溶液:フルオレスカミン15mgを50mLのアセトンに溶解し、振り混ぜて溶かす。遮光して2〜8℃で保存する。
基質溶液(2mg/mL ラット尾腱コラーゲン):ストックラットテールコラーゲンを0.02N酢酸で2mg/mLに希釈する。2〜8℃で保存する。
ロイシン標準曲線
ロイシンの標準曲線は、表10に従って作成される。
Figure 2022502478
その後、各ロイシン標準品の100μLを別々の遠心分離チューブに移し、フルオレスカミンを検出する。
コラゲナーゼのサンプルとブランクの準備
サンプルは、F−酵素緩衝液で0.01mg/mLに2段階で希釈され、穏やかにボルテックスして混合される。希釈方法の例を以下に示す。
1.100μL×1.0mg/mL→1000μL=0.1mg/mL
2.100μL×0.1mg/mL→1000μL=0.01mg/mL
希釈したサンプルは、使用するまで室温で保存する。
ブランクは、表11に従って、まずサンプルと0.5N塩酸を組み合わせて酵素を不活性化した後、緩衝液と基質を加えて調製する。
表11にしたがってラベルを貼ったチューブにコラゲナーゼサンプルを入れる。チューブ1、2、4、6は1回の調製で、チューブ3、5、7は2回目の調製で調製したものである。
Figure 2022502478
チューブにキャップをし、軽くボルテックスして混合する。力価曲線を25℃±3℃のウォーターバスで2.5時間インキュベートする。培養終了後、力価測定用チューブをウォーターバスから取り出す。750μLの0.5N塩酸を各調製液に加え、十分にボルテックスして混合する。調製したものは、検出する前に2〜8℃で22時間まで保存することができる。
検出器・蛍光光度計の設定
ロイシン標準サンプルは、上記のように調製される。
以下の装置パラメータで発光分光計を設定し、1時間の誘導体化を行った各製剤の蛍光を読み取る。
Figure 2022502478
計算
各ロイシン標準物質の濃度(X軸)を480nmでの蛍光反応(Y軸)に対してプロットする。傾き(m)と決定係数(R)を決定する。強制的にゼロにしてはならない。各重複した調製物の平均蛍光を決定する。各コラゲナーゼサンプルの純蛍光を算出する。
F(ネット)=平均コラゲナーゼサンプル(EM480)−ブランク(EM480
各調製物中のコラゲナーゼサンプルの量(X軸)を正味の蛍光(Y軸)に対してプロットする。傾き(m)と決定係数(R)を決定する。強制的にゼロにしてはならない。
コラゲナーゼサンプルの力価の測定
力価(f−SRC単位/mg)=(Mサンプル/Mロイシン)×(DF/T)×CF
ここで、
サンプル=コラゲナーゼサンプル力価曲線の傾き
ロイシン=ロイシン標準曲線の傾き
DF=希釈率(1500μL/100mL=15)
T=反応時間(2.5時間×60分/1時間=150分)
CF=換算係数(1000μg/1mg=1000)
上記のSRCアッセイは、任意のコラゲナーゼの比活性を分析するために採用することができる。
ii.コラゲナーゼサンプル中のクラスIコラゲナーゼ活性を測定するためのSRCマイクロプレートアッセイ
この方法は、マイクロプレートで行われる以外は、上記SRCアッセイと同様である。上記のSRCアッセイと同様に、マイクロプレートアッセイは、可溶性ラット尾腱コラーゲン(SRC)基質(以下、「基質」と称する)に対するコラゲナーゼ活性を測定する。このアッセイは、以下の方法論に従っているが、当業者であれば、特定の変更を加えても、アッセイの目的を遂行できることを理解できるであろう。
試薬
1.可溶性ラットコラーゲン基質(BD Biosciences 354236)
2.トリペプチドGPA(Bachem H3615または同等品)
3.フルオレスカミン(Acros 191675000または同等品)
4.精製水(Millipore、Milli−Q−Plus 18.2MΩシステムまたは同等品)
5.1M HEPES緩衝液(Gibco 15630−080または同等品)
6.1M 酢酸カルシウム(Ca(C)(Emerald Biosciences EBS−100−CAACまたは同等品)
7.Surfact−Amps 20(商標)(10% Tween溶液)(Pierce Cat.#28320または同等品)
8.1.0N 酢酸(Sigma 318590または同等品)
9.0.5N塩酸(VWR 101223−134または同等品)
10.ホウ酸(Sigma B7660または同等品)
11.2.5N水酸化ナトリウム(J.T Baker 5666−02または同等品)
12.アセトン(Sigma 270725または同等品)
溶液の調製
(i)アッセイ緩衝液(50mM HEPES pH7.1/0.05% Tween20/5mM(Ca(C)の調製:50mLの1M HEPESをピペットで800mLの純水に混ぜる。5 mLの1 M (Ca(C23O2)と5 mLのSurfact−Amps(10% Tween20)を加える。pHを確認し、必要に応じて7.1±0.1に調整する。十分な量の水を加えて体積を1Lに調整し、溶液を0.22ミクロンのフィルターでろ過する。このアッセイ緩衝液は、室温で最大3ヶ月間保存することができる。
(ii)0.1N NaOHの調製:48mLの純水に2.5N NaOHを2mL添加する。この溶液は、室温で3ヶ月間まで保存することができる。
(iii)4mg/mL トリペプチド GPAストック溶液の調製:400mg(±1mg)のトリペプチドGPAを10mLの0.1N NaOHに溶解し、完全に溶解するまでボルテックスをかける。十分な量のアッセイ緩衝液を加えて100mLとし、0.5mLのアリコートに分注して−70℃で保存する。4mg/mLのトリペプチドGPAストックは、−70℃で1年間保存可能である。
(iv)0.02N 酢酸の調製:40mLの精製水に1.0 Nの酢酸1mLを加える。十分な量の精製水を加えて50mLに調整する。この溶液は、室温で1年まで保存できる。
(v)2 mg/mL SRC基質ストック溶液の調製:23.3 mL 0.02Nの酢酸を、基質が供給されているバイアルに直接加える(非限定的な一例では、3.75 mg/mLのSRC 100 mgとして供給)。他の濃度のSRC基質を使用してもよい。計算は以下の通りである:
100mg÷3.75mg/mL=26.7mL;
総量(mL)=(3.75mg/mL×26.7mL)/2mg/mL;
総量(50.0mL)−26.7mL=23.3mL
この溶液は、反転させることで十分に混合され、2〜8℃で3ヶ月間まで保存することができる。
(vi)0.6mg/mL SRC基質ワーキング溶液の調製:15mL コニカルチューブにアッセイ緩衝液を4.2mL加える。15mL コニカルチューブにアッセイ緩衝液を4.2mL加え、2mg/mL SRC基質ストック液を1.8mL加えて転倒混和する。この溶液は、プレートに添加する直前に調製する必要がある。
(vii)120mM ホウ酸 pH9.0の調製:7.4g(±0.5g)のホウ酸を800mLの純水に溶かす。この溶液をNaOHでpH9.0まで滴定し、十分な量のDI水を加えて1Lに調整する。この溶液は、室温で最大3ヶ月間保存することができる。
(viii)アセトン中の1mM フルオレスカミンの調製:28±2mgのフルオレスカミンを100mLのアセトンに溶解させる。この溶液は、新たに調製し、光と湿気から保護する必要があった。
トリペプチドGPA標準品の調製と段階希釈
0.08mg/mL(329μM)のトリペプチドGPA標準品は、4mg/mLのトリペプチドGPAストックをアッセイ緩衝液で50倍に希釈して調製する(例えば、20μLの4mg/mL GPAを980μLのアッセイ緩衝液に入れる)。アッセイプレートのA列では、200μLの329μMトリペプチドGPA標準品をAlおよびA7にピペッティングする。A2−A6およびA8−Al2には、100μLのアッセイ緩衝液がピペットで移される。
トリペプチドGPA標準液の段階希釈では、AlからA2に100μLを移して混合し、A2からA3に100μLを移してA5まで繰り返す。A5のウェルから100μLを取り出し、最終容量が100μLになるようにする。A6ウェルには緩衝液のみが入っている。
2回目のトリペプチド GPA標準段階希釈では、A7からA8に100μLを移して混合し、A8からA9に100μLを移してAllまで繰り返す。A11ウェルから100μLが取り出され、最終的に100μLとなる。A12ウェルには緩衝液のみが入っている。
コラゲナーゼテストサンプルの調製
コラゲナーゼサンプル(例えば、凍結乾燥したコラゲナーゼ製剤)の場合、サンプルを少なくとも10分間室温に戻し、再構成して3.0μg/mLのストック溶液を形成する。異なる濃度のものを使用してもよい。ストック液をアッセイ緩衝液で希釈し,コラゲナーゼテスト片(T1A)を調製する。この手順を繰り返し、3連のテストサンプル(T1A、T1B、T1C)を調製する。
議論
この方法では、96ウェルプレートにおいて、濃度を増加させたテスト用コラゲナーゼサンプル50μLと過剰な基質50μL(最終濃度0.2mg/mL)を混合する。50μLのアッセイ緩衝液の量を、Uボトムの96ウェルポリプロピレン反応プレートのC−G列に加える。次に、マルチチャンネルピペットを用いて、1/1.5の段階希釈を行い、B列からC列に100μLのコラゲナーゼサンプルを移し、混合し、G列に到達するまで繰り返す。100μLの量がG列から取り除かれて廃棄され、50μLのアッセイ緩衝液をH列にピペッティングすることにより、ブランクがH列に準備される。この列には酵素が含まれていない。表12は、50μLの基質をB列からH列に添加した後の最終的なコラゲナーゼ濃度を含む。
Figure 2022502478
コラゲナーゼ反応
インキュベーターと温度プローブをオンにする(プレートに基質を添加する前の温度は22±1℃)。B列からH列までの各ウェルに、50μL 0.6mg.mLのSRC基質をカラムごとに添加し、混合する。反応開始時間は、最初のカラムに基質が添加された後に始まる。プレートに蓋をして22±1℃のインキュベーターに入れ、45±5分の総反応時間をかける。反応をクエンチするために、100μLの0.5NのHClを希釈プレートの各ウェルにカラムごとに加え、混合する。最初のカラムにHClを加えた時点で反応時間は終了する。
検出
195μLの量の120mMホウ酸塩pH9.0をマイクロプレートGreinerのポリプロピレン製ブラックリーディングプレートの各ウェルに加える。クエンチした反応混合物30μLを反応プレートからリーディングプレートの対応するウェルに移し、よく混合する。次に、75μLの1mM フルオレスカミンをリーディングプレートの各ウェルに加え(フルオレスカミン/アセトンを分注するポリプロピレン製のトレイを使用)、加えるたびに直ちに混合する。フルオレスカミン添加後15分以内に、モレキュラーデバイスM2蛍光プレートリーダーを用いて以下の設定でプレートを読み取る。プレートはフルオレスカミン添加後15分以内にモレキュラーデバイスM2蛍光プレートリーダーで以下の設定で読み取る:励起380nm、発光473nm、カットオフ455nm、6リード/ウェル、PMT培地。
GPAの濃度(μM)対473nmでの発光、コラゲナーゼの濃度(ng/mL)対473nmでの発光をプロットした。各プロットについて、固定パラメータを用いずに線形回帰をフィッティングした。コラゲナーゼサンプルでは,ゼロ点のデータを線形フィットから除外し,各サンプルの3連データセット全体を用いてプロットを作成した。トリペプチドGPA標準サンプルとコラゲナーゼサンプルの傾きを求める。
比活性と相対的力価の決定
コラゲナーゼサンプルの比活性は以下のように計算できる:
SRCマイクロプレートアッセイ単位=((コラゲナーゼサンプルの傾き)/(トリペプチドGPAの傾き×インキュベーション時間))×10
コラゲナーゼテストサンプルの比活性は、トリペプチドGPA標準品の傾きから決定し、カーブフィッティングプログラムで算出する。マイクロプレート法を用いて、異なる濃度の基質と異なる時間を用いて、ミカエリス・メンテンによる酵素反応速度を算出することができる。
iii.SRCアッセイで測定したコラゲナーゼ力価
本開示で有用なコラゲナーゼは、約500〜約15,000SRC単位/mgの力価を有していてもよい。特定の実施形態では、力価は、約500〜約12,500SRC単位/mg、または約700〜約10,000SRC単位/mg、または約1,000〜約7,500SRC単位/mg、または1,500〜約6,000SRC単位/mg、または約2,500〜約5,000SRC単位/mgである。あるいは、力価は、約5,000〜約35,000f−SRC単位/mg、または約10,000〜約30,000f−SRC単位/mg、または約13,000〜約23,000f−SRC単位/mg、または約15,000〜約25,000f−SRC単位/mgであってもよい。また、コラゲナーゼは、約980〜約3,510、または約1,400〜約2,700のSRCマイクロプレートアッセイ単位の力価を有していてもよい。
c.BTC単位アッセイにおけるコラゲナーゼ力価
コラゲナーゼのためのBovine Tendon Collagen Assayは、Mandlら(1958年)の手順に基づいており、KellerとMandl(1963年)によって修正されている。牛の腱のコラーゲンは不溶性の基質であるため、細かく分割することが重要である。変性したコラーゲンやその他のタンパク質不純物の存在を考慮して、コントロールとしてトリプシンを使用する。このアッセイは、コラゲナーゼ活性に必要なカルシウムイオンの存在下で行われる。可溶化されたペプチドの数は、ペプチドのN−末端アミノ基をニンヒドリンと反応させ、形成された付加物の量を比色的に測定することによって決定される(Rosen 1957)。
この手順の目的は、コラーゲン基質を用いてコラゲナーゼ酵素の比活性をテストすることである。
試薬と溶液
1.コラーゲン基質(コラーゲン)
2.脱イオン水(水)
3.トリスアッセイ緩衝液
4.トリプシンストック溶液
5.0.5M HCl
6.ロイシン標準アッセイ溶液(1mM ロイシン)
7.ローゼン緩衝液
8.3% ニンヒドリン
9.50% イソプロパノール
インキュベーション
以下のように反応チューブを設定し、ラベルを貼る:トリプシン対照用のチューブ3本、基準液用のチューブ6本、各被検サンプル用のチューブ6本。各チューブにラベルを貼り、キャップを外す。表13の順序で10±1mgのコラーゲンを秤量し、秤量したコラーゲンを各反応チューブに入れる。
Figure 2022502478
被験サンプルの酵素量は、反応チューブ(ACT)あたり1.6〜5.7nmol leu eq/minの活性を含んでいる必要がある。未溶解のサンプルは、アッセイに使用する前にまずトリスアッセイ緩衝液に溶解する。濃度(反応チューブに加える前)は0.0065mg/mL以上とする必要がある。
マトリックスパターンになるように、表14に従って反応チューブを設定する。以下の表は、2アンダーのテストサンプルを想定している。サンプル数が多い場合や少ない場合は、反応チューブの数を調整するが、パターンは維持する。容量が一定の場合は、表14に記載されている。
Figure 2022502478
反応チューブにキャップをする。内容物を静かに、しかし十分に混合する。反応チューブを37℃のウォーターバスに入れる。22±0.5時間インキュベートする。インキュベーションを開始した実際の時間(37℃)、使用したウォーターバスの番号、コラーゲンLipidのロット番号、使用したロットのコラーゲン補正係数、使用したすべての溶液のロット番号を記録する。
クエンチングおよびろ過
インキュベートした各反応チューブに対応する濾液チューブにラベルを貼る。ラベルを貼った各濾液チューブに、濾紙を入れた漏斗と折り畳んだ濾紙を置く。培養期間が終了したら、ウォーターバスから反応チューブを取り出す。培養が終了した実際の時間を記録する。
反応チューブのキャップを外し、キャップを破棄する。各反応チューブに2mLの0.5M HClを分注し、反応を停止させる。各チューブの内容物を十分に混合する。各反応チューブの内容物を適切な濾液チューブにろ過する。
消化されていないコラーゲンは短時間で塩酸に溶ける可能性があるため、前の2つの工程はできるだけ早く終わらせる必要がある。濾液は、蓋付きの濾液チューブに入れて冷蔵保存し、発色前に95.5時間まで保存することができる。冷蔵保存と保存時間を記録する。
カラー展開
沸騰したチューブを以下のように設定し、ラベルを貼る:水およびロイシン対照用のチューブ6本(工程1)、各濾液チューブ用のチューブ2本(工程1)。6本のロイシンコントロール用チューブに、以下の量の水とロイシン標準アッセイ液を入れる。
Figure 2022502478
0.8mLの水を各沸騰チューブに入れる(工程2)。各サンプルの濾液0.2mLを、適切なラベルが貼られたブリングチューブに注入する。0.5mLのローゼン緩衝液を各ブリングチューブに注入する。フードの下で、0.5mLの3%ニンヒドリンを各ブリングチューブに入れる。ボルテックスミキサーで各チューブの内容物を完全に混合する。沸騰チューブをヒュームフード内の沸騰したウォーターバスに入れる。15±1分間沸騰させる。沸騰時間が終了したら、ウォーターバスから沸騰チューブを取り出す。封じ込めフードの下で、各沸騰チューブに5.0mLの50%イソプロパノールを分注し、内容物を完全に混合する。吸光度を読み取る前に、沸騰チューブを常温に戻する(少なくとも10分)。
吸光度の読み取り
封じ込めフードの下で作業している間、チューブの吸光度を読み取る。分光光度計の電源を入れ、ウォームアップする。分光光度計の波長を570nmに設定する。50%イソプロパノールで分光光度計をゼロにする。水、ロイシン、トリプシンのコントロールとテスト中のサンプルの吸光度(A570)を読み取る。最初のサンプルを読み取った時間を時間単位で記録する。読み取り値を1000×A570として記録し、最後のサンプルを読み取った時間を時間単位で記録する。すべての読み取りは1時間以内に行う必要がある。
計算原理
総読み取り時間と総培養時間を分単位で計算する。総読み取り時間は60分未満、インキュベーションの総時間は1290〜1350分であることが望ましい。線形最小二乗法を用いて、ロイシン標準サンプル(x=nmol ロイシン vs y=A570読み取り)の傾き「b」と相関係数「r」を算出する。「b」値の単位はA570/nmol ロイシンである。ロイシンのb値は2.88〜3.33の間である必要がある。トリプシン対照(T)の平均値を算出する。トリプシン対照(T)の平均読み取り値は221〜338とする。この平均値を小数点以下の数字で記録する(工程A)。各反応チューブの重複したサンプルA570の読み取り値を平均する。この数値を小数点以下の単位で記録する。平均サンプルA570の読み取り値から平均トリプシン(工程A)を差し引いて、正味のサンプル読み取り値を取得する。
次のようにして、チューブあたりの活性(ACT)をnmol leu eq/minで算出する。
Figure 2022502478
ここで、20は展開された反応混合物の量に対する希釈係数であり、「b」はロイシン標準曲線の傾きである。この数値を小数点以下1桁まで記録する。テスト中のサンプルのチューブあたりの活性は、1.6〜5.7nmol leu eq/分である必要がある。
次のように、BTC単位で活動量を計算する:
BTC単位=活性(nmol leu eq/分)×コラーゲン補正係数
以下のように、サンプルのBTC単位/mLの活性を算出する:
Figure 2022502478
以下のように、サンプルの比活性をBTC単位/mmで算出する:
Figure 2022502478
BTC単位からABC単位への換算は:
ABC単位=BTC単位×1.09
i.BTC単位とABC単位
様々なコラゲナーゼ組成物を採用することができ、ここでコラゲナーゼは、約5,000BTC単位/mg〜約25,000BTC単位/mg、または約10,000BTC単位/mg〜約25,000BTC単位/mg、または約15,000BTC単位/mg、または約17,500BTC単位/mg、または約20,000BTC単位/mg、または約22,500BTC単位/mg、または約9,175BTC単位/0.58mg、または15,817BTC単位/mgの比活性を有する、ここで、「mg」とは、組成物中に存在するコラゲナーゼ(単数または複数)の量を意味する(賦形剤および他の構成要素とは異なる)。
さらに、様々なコラゲナーゼ組成物を採用することができ、ここでコラゲナーゼは、約5,000ABC単位/mg〜約25,000ABC単位/mg、または約10,000ABC単位/mg〜約25,000ABC単位/mg、または約15,000ABC単位/mg、または約17,500ABC単位/mg、または約20,000ABC単位/mg、または約22,500ABC単位/mg、または約10,000ABC単位/0.58mg、または17,241ABC単位/mgの比活性を有する、ここで、「mg」とは、組成物中に存在するコラゲナーゼ(単数または複数)の量を意味する(賦形剤およびその他の構成要素とは異なる)。
d.その他のアッセイ
標識したコラーゲンを用いたアッセイ法は、Gisslowら、Anal.Biochem., 68: 70-78 (1975); Robertsonら, Clinica Chimica Acta, 42:43-45 (1972); Sakamotoら, A New Method for the Assay of Tissue Collagenase (36297) (1972)により報告されている。他の1つのアッセイは、Worthington Biochemical Corp.Assay(http://www.worthington-biochem.com/CLS/assay.html)である(2019年7月3日アクセス)。
4.コラゲナーゼの投与量
本明細書で採用されるコラゲナーゼの用量に関しては、本開示では、皮下注射時に隔膜を結合して溶解するのに十分な治療有効量のコラゲナーゼが提供され、その結果、治療前のベースラインと比較してセルライトの外観が減少する。
一実施形態では、コラゲナーゼは、約0.01mg〜約20mgの量で、単回または分割して注射することができる。別の実施形態では、コラゲナーゼは、単回または分割投与で、約0.05mg〜約15mgの量で注射されてもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、単回または分割投与で、約0.10mg〜約10mgの量で注射されてもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、単回または分割投与で、約0.15mg〜約5mgの量で注射されてもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、単回または分割投与で、約0.20mg〜約3mgの量で注射されてもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、単回または分割投与で、約0.25mg〜約2mgの量で注射されてもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、約0.05mg、約0.10mg、約0.15mg、約0.20mg、約0.25mg、約0.30mg、約0.35mg、約0.40mg、約0.45mg、約0.50mg、約0.55mg、約0.60mg、約0.65mg、約0.70mg、約0.75mg、約0.80mg、約0.85mg、約0.90mg、約0.95mg、約1.00mg、約1.05mg、約1.10mg、約1.15mg、約1.20mg、約1.25mg、約1.30mg、約1.35mg、約1.40mg、約1.45mg、約1.50mg、約1.55mg、約1.60mg、約1.65mg、約1.70mg、約1.75mg、約1.80mg、約1.85mg、約1.90mg、約1.95mg、約2.00mg、約2.05mg、約2.10mg、約2.15mg、約2.20mg、約2.25mg、約2.30mg、約2.35mg、約2.40mg、約2.45mg、約2.50mg、約2.55mg、約2.60mg、約2.65mg、約2.70mg、約2.75mg、約2.80mg、約2.85mg、約2.90mg、約2.95mg、約3.00mg、約3.05mg、約3.10mg、約3.15mg、約3.20mg、約3.25mg、約3.30mg、約3.35mg、約3.40mg、約3.45mg、約3.50mg、約3.55mg、約3.60mg、約3.65mg、約3.70mg、約3.75mg、約3.80mg、約3.85mg、約3.90mg、約3.95mg、約4.00mg、約4.05mg、約4.10mg、約4.15mg、約4.20mg、約4.25mg、約4.30mg、約4.35mg、約4.40mg、約4.45mg、約4.50mg、約4.55mg、約4.60mg、約4.65mg、約4.70mg、約4.75mg、約4.80mg、約4.85mg、約4.90mg、約4.95mg、約5.00mg、約5.05mg、約5.10mg、約5.15mg、約5.20mg、約5.25mg、約5.30mg、約5.35mg、約5.40mg、約5.45mg、約5.50mg、約5.55mg、約5.60mg、約5.65mg、約5.70mg、約5.75mg、約5.80mg、約5.85mg、約5.90mg、約5.95mg、または約6.00mgの量で注射することができる。
一実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、約2.6分−1〜5.2分−1のVmaxを有することがある。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、約3.0分−1〜5.0分−1のVmaxを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、約3.4分−1〜4.8分−1のVmaxを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、約3.5分−1〜4.5分−1のVmaxを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、Vmaxが、約2.0分−1、約2.1分−1、約2.2分−1、約2.3分−1、約2.4分−1、約2.5分−1、約2.6分−1、約2.7分−1、約2.8分−1、約2.9分−1、約3.0分−1、約3.1分−1、約3.2分−1、約3.3分−1、約3.4分−1、約3.5分−1、約3.6分−1、約3.7分−1、約3.8分−1、約3.9分−1、約4.0分−1、約4.1分−1、約4.2分−1、約4.3分−1、約4.4分−1、約4.5分−1、約4.6分−1、約4.7分−1、約4.8分−1、約4.9分−1、約5.0分−1、約5.1分−1、約5.2分−1、約5.3分−1、約5.4分−1、約5.5分−1、約5.6分−1、約5.7分−1、約5.8分−1、約5.9分−1、または約6.0分−1を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、約0.7分−1〜7.6分−1、または約1〜6、または約2〜5、または約3〜4分−1のVmaxを有することができる。
一実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約135分−1〜268分−1のVmaxを有することがある。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定される場合、約150分−1〜250分−1のVmaxを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定される場合、約175分−1〜225分−1のVmaxを有することができる。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定される場合、約130分−1、約135分−1、約140分−1、約145分−1、約150分−1、約155分−1、約160分−1、約165分−1、約170分−1、約175分−1、約180分−1、約185分−1、約190分−1、約195分−1、約200分−1,約205分−1、約210分−1、約215分−1、約220分−1、約225分−1、約230分−1、約235分−1、約240分−1、約245分−1、約250分−1、約255分−1、約260分−1、約265分−1、約270分−1、約275分−1、または約280分−1のVmaxを有することができる。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約4分−1〜400分−1、または約0.3〜30.5、または約10〜375、または約20〜350、または約50〜300、または約100〜275分−1のVmaxを有していてもよい。
一実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定される場合、約75mM〜147mMのKを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定される場合、約80mM〜140mMのKを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定される場合、約85mM〜130mMのKを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定されるように、約90mM〜120mMのKを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定される場合、約70mM、約72mM、約75mM、約77mM、約80mM、約82mM、約85mM、約87mM、約90mM、約92mM、約95mM、約97mM、約100mM、約102mM、約105mM、約107mM、約110mM、約112mM、約115mM、約117mM、約120mM、約122mM、約125mM、約127mM、約130mM、約132mM、約135mM、約137mM、約140mM、約142mM、約145mM、約147mM、約150mM、約152mM、約155mM、または約157mMのKを有していてもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、約4.4mM〜437mM、または約5〜400、または約20〜375、または約50〜325、または約100〜275、または約150〜250mM、または約4.1〜410ナノモルのKを有していてもよい。
一実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約0.03mM〜3.1mMのKを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約1.00mM〜1.60mMのKを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約1.10mM〜1.50mMのKを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約1.15mM〜1.40mMのKを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約0.80mM、約0.82mM、約0.85mM、約0.87mM、約0.90mM、約0.92mM、約0.95mM、約0.97mM、約1.00mM、約1.02mM、約1.05mM、約1.07mM、約1.10mM、約1.12mM、約1.15mM、約1.17mM、約1.20mM、約1.22mM、約1.25mM、約1.27mM、約1.30mM、約1.32mM、約1.35mM、約1.37mM、約1.40mM、約1.42mM、約1.45mM、約1.47mM、約1.50mM、約1.52mM、約1.55mM、約1.57mM、約1.60mM、約1.62mM、約1.65mM、または約1.67mMのKを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約0.027mM〜2.7mM、または約0.1〜2、または約0.5〜1.5、または約1〜1.35mMのKを有していてもよい。
一実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定された、約36秒−1〜671秒−1のKcatを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定されるように、約50秒−1〜600秒−1のKcatを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定されるように、約60秒−1〜500秒−1のKcatを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定されるように、約70秒−1〜400秒−1のKcatを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定される場合、約100秒−1〜350秒−1のKcatを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定される場合、約30秒−1、約40秒−1、約50秒−1、約60秒−1、約70秒−1、約80秒−1、約90秒−1、約100秒−1、約110秒−1、約120秒−1、約130秒−1、約140秒−1、約150秒−1、約160秒−1、約170秒−1、約180秒−1、約190秒−1、約200秒−1、約210秒−1、約220秒−1、約230秒−1、約240秒−1、約250秒−1、約260秒−1、約270秒−1、約280秒−1、約290秒−1、約300秒−1、約310秒−1、約320秒−1、約330秒−1、約340秒−1、約350秒−1、約360秒−1、約370秒−1、約380秒−1、約390秒−1、約400秒−1、約410秒−1、約420秒−1、約430秒−1、約440秒−1、約450秒−1、約460秒−1、約470秒−1、約480秒−1、約490秒−1、約500秒−1、約510秒−1、約520秒−1、約530秒−1、約540秒−1、約550秒−1、約560秒−1、約570秒−1、約580秒−1、約590秒−1、約600秒−1、約610秒−1、約620秒−1、約630秒−1、約640秒−1、約650秒−1、約660秒−1、約670秒−1、約680秒−1、約690秒−1、約700秒−1、約710秒−1、約720秒−1、約730秒−1、約740秒−1、約750秒−1、または約760秒−1のKcatを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、約1秒−1〜107秒−1、または約10〜100、または約20〜80、または約30〜70、または約40〜60秒−1のKcatを有してもよい。
一実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約90〜10,000、または約41,000秒−1〜約81,000秒−1のKcatを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約45,000秒−1〜約75,000秒−1のKcatを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約50,000秒−1〜約70,000秒−1のKcatを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約55,000秒−1〜約65,000秒−1のKcatを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約35,000秒−1、約37,500秒−1、約40,000秒−1、約42,500秒−1、約45,000秒−1、約47,500秒−1、約50,000秒−1、約52,500秒−1、約55,000秒−1、約57,500秒−1、約60,000秒−1、約62,500秒−1、約65,000秒−1、約67,500秒−1、約70,000秒−1、約72,500秒−1、約75,000秒−1、約77,500秒−1、約80,000秒−1、約82,500秒−1、または約85,000秒−1のKcatを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約1215秒−1〜約120,000秒−1、または約2,000〜100,000、または約10,000〜90,000、または約20,000〜80,000、または約30,000〜70,000、または約40,000〜60,000秒−1のKcatを有してもよい。
一実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、約376〜38,000μ秒、または約14,000μ秒〜約28,000μ秒の1/Kcatを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、約16,000μ秒〜約26,000μ秒の1/Kcatを有してもよい。一実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、約18,000μ秒〜約24,000μ秒の1/Kcatを有してもよい。一実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、約20,000μ秒〜約22,000μ秒の1/Kcatを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、約12,500μ秒、約12,750μ秒、約13,000μ秒、約13,250μ秒、約13,500μ秒、約13,750μ秒、約14,000μ秒、約14,250μ秒、約14,750μ秒、約15,000μ秒、約15,250μ秒、約15,500μ秒、約15,750μ秒、約16,000μ秒、約16,250μ秒、約16,500μ秒、約16,750μ秒、約17,000μ秒、約17,250μ秒、約17,500μ秒、約17,750μ秒、約18,000μ秒、約18,250μ秒、約18,500μ秒、約18,750μ秒、約19,000μ秒、約19,250μ秒、約19,500μ秒、約19,750μ秒、約20,000μ秒、約20,250μ秒、約20,500μ秒、約20,750μ秒、約21,000μ秒、約21,250μ秒、約21,500μ秒、約21,750μ秒、約22,000μ秒、約22,250μ秒、約22,500μ秒、約22,750μ秒、約23,000μ秒、約23,250μ秒、約23,500μ秒、約23,750μ秒、約24,000μ秒、約24,250μ秒、約24,500μ秒、約24,750μ秒、約25,000μ秒、約25,250μ秒、約25,500μ秒、約25,750μ秒、約26,000μ秒、約26,250μ秒、約26,500μ秒、約26,750μ秒、約27,000μ秒、約27,250μ秒、約27,500μ秒、約27,750μ秒、約28,000μ秒、約28,250μ秒、約28,500μ秒、約28,750μ秒、約29,000μ秒、または約29,250μ秒の1/Kcatを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、約370μ秒〜約36,700μ秒、または約750〜30,000、または約2,500〜25,000、または約5,000〜20,000、または約10,000〜18,000、または約15,000μ秒の1/Kcatを有してもよい。
一実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約4μ秒〜約430μ秒の1/Kcatを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約14μ秒〜約23μ秒の1/Kcatを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約16μ秒〜約21μ秒の1/Kcatを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合約10.0μ秒、約10.2μ秒、約10.4μ秒、約10.6μ秒、約10.8μ秒、約11.0μ秒、約11.2μ秒、約11.4μ秒、約11.6μ秒、約11.8μ秒、約12.0μ秒、約12.2μ秒、約12.4μ秒、約12.6μ秒、約12.8μ秒、約13.0μ秒、約13.2μ秒、約13.4μ秒、約13.6μ秒、約13.8μ秒、約14.0μ秒、約14.2μ秒、約14.4μ秒、約14.6μ秒、約14.8μ秒、約15.0μ秒、約15.2μ秒、約15.4μ秒、約15.6μ秒、約15.8μ秒、約16.0μ秒、約16.2μ秒、約16.4μ秒、約16.6μ秒、約16.8μ秒、約17.0μ秒、約17.2μ秒、約17.4μ秒、約17.6μ秒、約17.8μ秒、約18.0μ秒、約18.2μ秒、約18.4μ秒、約18.6μ秒、約18.8μ秒、約19.0μ秒、約19.2μ秒、約19.4μ秒、約19.6μ秒、約19.8μ秒、約20.0μ秒、約20.2μ秒、約20.4μ秒、約20.6μ秒、約20.8μ秒、約21.0μ秒、約21.2μ秒、約21.4μ秒、約21.6μ秒、約21.8μ秒、約22.0μ秒、約22.2μ秒、約22.4μ秒、約22.6μ秒、約22.8μ秒、約23.0μ秒、約23.2μ秒、約23.4μ秒、約23.6μ秒、約23.8μ秒、約24.0μ秒、約24.2μ秒、約24.4μ秒、約24.6μ秒、約24.8μ秒、約25.0μ秒、約25.2μ秒、約25.4μ秒、約25.6μ秒、約25.8μ秒、約26.0μ秒、約26.2μ秒、約26.4μ秒、約26.8μ秒、約27.0μ秒、約27.2μ秒、または約27.4μ秒の1/Kcatを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定した場合、約0.3μ秒〜約32μ秒、または約1〜30、または約5〜25、または約10〜20、または約15μ秒の1/Kcatを有してもよい。
一実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定された場合、約5,140mM−1−1〜約508,814mM−1−1のKcat/Kを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定された場合、約0.50mM−1−1〜約7.75mM−1−1のKcat/Kを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定された場合、約0.75mM−1−1〜約7.00mM−1−1のKcat/Kを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、約1.00mM−1−1〜約6.00mM−1−1のKcat/Kを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定された場合、約0.10mM−1−1、約0.20mM−1−1、約0.30mM−1−1、約0.40mM−1−1、約0.50mM−1−1、約0.60mM−1−1、約0.70mM−1−1、約0.80mM−1−1、約0.90mM−1−1、約1.00mM−1−1、約1.10mM−1−1、約1.20mM−1−1、約1.30mM−1−1、約1.40mM−1−1、約1.50mM−1−1、約1.60mM−1−1、約1.70mM−1−1、約1.80mM−1−1、約1.90mM−1−1、約2.00mM−1−1、約2.10mM−1−1、約2.20mM−1−1、約2.30mM−1−1、約2.40mM−1−1、約2.50mM−1−1、約2.60mM−1−1、約2.70mM−1−1、約2.80mM−1−1、約2.90mM−1−1、約3.00mM−1−1、約3.10mM−1−1、約3.20mM−1−1、約3.30mM−1−1、約3.40mM−1−1、約3.50mM−1−1、約3.60mM−1−1、約3.70mM−1−1、約3.80mM−1−1、約3.90mM−1−1、約4.00mM−1−1、約4.10mM−1−1、約4.20mM−1−1、約4.30mM−1−1、約4.40mM−1−1、約4.50mM−1−1、約4.60mM−1−1、約4.70mM−1−1、約4.80mM−1−1、約4.90mM−1−1、約5.00mM−1−1、約5.10mM−1−1、約5.20mM−1−1、約5.30mM−1−1、約5.40mM−1−1、約5.50mM−1−1、約5.60mM−1−1、約5.70mM−1−1、約5.80mM−1−1、約5.90mM−1−1、約6.00mM−1−1、約6.10mM−1−1、約6.20mM−1−1、約6.30mM−1−1、約6.40mM−1−1、約6.50mM−1−1、約6.60mM−1sec−1、約6.70mM−1−1、約6.80mM−1−1、約6.90mM−1−1、約7.00mM−1−1、約7.10mM−1−1、約7.20mM−1−1、約7.30mM−1−1、または約7.40mM−1−1のKcat/Kを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、SRCアッセイを用いて測定した場合、約0.0048mM−1−1〜約0.47mM−1−1、または約0.009〜約0.3、または約0.01〜約0.25、または約0.1〜0.25mM−1−1のKcat/Kを有してもよい。
一実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定された場合、約60mM−1−1〜約6,000mM−1−1のKcat/Kを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定された場合、約30,000mM−1−1〜約85,000mM−1−1のKcat/Kを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定された場合、約36,000mM−1−1〜約77,000mM−1−1のKcat/Kを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定された場合、約40,000mM−1−1〜約70,000mM−1−1のKcat/Kを有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定された場合、約40,000mM−1−1、約42,000mM−1−1、約44,000mM−1−1、約46,000mM−1−1、約48,000mM−1−1、約50,000mM−1−1、約52,000mM−1−1、約54,000mM−1−1、約56,000mM−1−1、約58,000mM−1−1、約60,000mM−1−1、約62,000mM−1−1、約64,000mM−1−1、約66,000mM−1−1、約68,000mM−1−1、約70,000mM−1−1、約72,000mM−1−1、約74,000mM−1−1、約76,000mM−1−1、約78,000mM−1−1、約80,000mM−1−1、約82,000mM−1−1、約84,000mM−1−1、約76,000mM−1−1、約86,000mM−1−1、約88,000mM−1−1、約90,000mM−1−1、約92,000mM−1−1、約94,000mM−1−1、または約96,000mM−1−1のKcat/Kを有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、GPAアッセイを用いて測定された場合、約900mM−1−1〜約90,000mM−1−1、または約2,000〜80,000、または約10,000〜70,000、または約20,000〜60,000、または約30,000〜50,000、または約40,000〜45,000mM−1−1のKcat/Kを有してもよい。
一実施形態では、コラゲナーゼは、約60kDa〜約130kDaの分子量を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約70kDa〜約130kDaの分子量を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約80kDa〜約120kDaの分子量を有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、約90kDa〜約120kDaの分子量を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約100kDa〜約110kDaの分子量を有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、約55kDa、約57kDa、約60kDa、約62kDa、約65kDa、約67kDa、約70kDa、約72kDa、約75kDa、約77kDa、約80kDa、約82kDa、約85kDa、約87kDa、約90kDa、約92kDa、約95kDa、約97kDa、約100kDa、約102kDa、約105kDa、約107kDa、約110kDa、約112kDa、約115kDa、約117kDa、約120kDa、約122kDa、約125kDa、約127kDa、約130kDa、約132kDa、約135kDa、または約137kDaの分子量を有してもよい。
一実施形態では、コラゲナーゼは、逆相HPLCによって測定される、少なくとも80%の純度を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、逆相HPLCで測定して、約80%、約81%、約82%、約83%、約84%、約85%、約86%、約87%、約88%、約89%、約90%、約91%、約92%、約93%、約94%、約95%、約96%、約97%、約98%、または約99%の純度を有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、面積比で1%以下のクロストリパインを含んでもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、面積比で1%以下のゼラチナーゼを含んでもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、面積比で1%以下のロイペプチンを含んでもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、1cfu/mL以下のバイオバーデンを含んでもよい。
一実施形態では、コラゲナーゼは、約500〜約30,000SRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約2,500〜約25,000SRC単位/mgの力価を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約5,000〜約20,000SRC単位/mgの力価を有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、約500、約1,000、約1,500、約2,000、約2,500、約3,000、約3,500、約4,000、約4,500、約5,000、約5,500、約6,000、約6,500、約7,000、約7,500、約8,000、約8,500、約9,000、約9,500、約10,000、約10,500、約11,000、約11,500、約12,000、約12,500、約13,000、約13,500、約14,000、約14,500、約15,000、約15,500、約16,000、約16,500、約17,000、約17,500、約18,000、約18,500、約19,000、約19,500、約20,000、約20,500、約21,000、約21,500、約22,000、約22,500、約23,000、約23,500、約24,000、約24,500、約25,000、約25,500、約26,000、約26,500、約27,000、約27,500、約28,000、約28,500、約29,000、約29,500、または約30,000SRC単位/mgの力価を有してもよい。
一実施形態では、コラゲナーゼは、約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約7,500〜約25,000f−SRC単位/mgの力価を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約10,000〜約20,000f−SRC単位/mgの力価を有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、約2,500、約3,000、約3,500、約4,000、約4,500、約5,000、約5,500、約6,000、約6,500、約7,000、約7,500、約8,000、約8,500、約9,000、約9,500、約10,000、約10,500、約11,000、約11,500、約12,000、約12,500、約13,000、約13,500、約14,000、約14,500、約15,000、約15,500、約16,000、約16,500、約17,000、約17,500、約18,000、約18,500、約19,000、約19,500、約20,000、約20,500、約21,000、約21,500、約22,000、約22,500、約23,000,約23,500、約24,000、約24,500、約25,000、約25,500、約26,000、約26,500、約27,000、約27,500、約28,000、約28,500、約29,000、約29,500、または約30,000f−SRC単位/mgの力価を有してもよい。
一実施形態では、コラゲナーゼは、約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約150,000〜約350,000GPA単位/mgの力価を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約200,000〜約300,000GPA単位/mgの力価を有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、約100,000、約110,000、約120,000、約130,000、約140,000、約150,000、約160,000、約170,000、約180,000、約190,000、約200,000、約210,000、約220,000、約230,000、約250,000、約260,000、約270,000、約280,000、約290,000、約300,000、約310,000、約320,000、約330,000、約340,000、約350,000、約360,000、約370,000、約380,000、約390,000、または約400,000GPA単位/mgの力価を有してもよい。
一実施形態では、コラゲナーゼは、約175,000〜約500,000f−GPA単位/mgの力価を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約250,000〜約450,000f−GPA単位/mgの力価を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約300,000〜約400,000GPA単位/mgの力価を有してもよい。さらに別の実施形態では、コラゲナーゼは、約175,000、約185,000、約195,000、約205,000、約215,000、約225,000、約235,000、約245,000、約255,000、約265,000、約275,000、約285,000、約295,000、約305,000、約315,000、約325,000、約335,000、約345,000、約355,000、約365,000、約375,000、約385,000、約395,000、約405,000、約415,000、約425,000、約435,000、約445,000、約455,000、約465,000、約475,000、約485,000、または約495,000f−GPA単位/mgの力価を有してもよい。
一実施形態では、コラゲナーゼは、約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価を有してもよい。一実施形態では、コラゲナーゼは、約7,500〜約20,000ABC単位/mgの力価を有してもよい。一実施形態では、コラゲナーゼは、約10,000〜約17,500ABC単位/mgの力価を有してもよい。別の実施形態では、コラゲナーゼは、約5,000、約5,500、約6,000、約6,500、約7,000、約7,500、約8,000、約8,500、約9,000、約9,500、約10,000、約10,500、約11,000、約11,500、約12,000、約12,500、約13,000、約13,500、約14,000、約14,500、約15,000、約15,500、約16,000、約16,500、約17,000、約17,500、約18,000、約18,500、約19,000、約19,500、約20,000、約20,500、約21,000、約21,500、約22,000、約22,500、約23,000、約23,500、約24,000、約24,500、または約25,000ABC単位/mgの力価を有してもよい。
いくつかの実施形態では、組成物中に存在するコラゲナーゼは、コラゲナーゼIとコラゲナーゼIIを約1:1の比率で含んでいる。コラゲナーゼIとコラゲナーゼIIの他の比率は、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0、または0:1のように採用されてもよい。コラゲナーゼIおよびコラゲナーゼIIのそれぞれは、逆相HPLCで測定した面積による純度が、少なくとも80%、または85%、または90%、または91%、または92%、または93%、または94%、または95%、または96%、または97%、または98%、または99%、または100%であってもよい。
別の実施形態では、コラゲナーゼ組成物は、約1:1のAUXIおよびAUXIIの比率を有するCCHを有する。AUXIとAUXIIの他の比率は、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0、または0:1のように採用されてもよい。AUXIおよびAUXIIのそれぞれは、逆相HPLCで測定した面積による純度が、少なくとも80%、または85%、または90%、または91%、または92%、または93%、または94%、または95%、または96%、または97%、または98%、または99%、または100%であってもよい。
他の例では、コラゲナーゼ組成物は、液体であってもよいし、凍結乾燥した固体形態から希釈剤で再構成されていてもよい。混合物の投与量は、希釈剤を考慮せずに存在するコラゲナーゼの量によって測定され、1回または複数回の注射で約0.1mg〜約20mgを含んでいてもよい。別の実施形態では、投与される用量は、1回以上の注射で約0.06mg、0.48mg、0.84mg、1.68mg、2.52mg、3.36mg、4.2mg、5.04mg、5.88mg、6.72mg、7.56mg、または8.4mgである。
例えば、約0.06mg、0.48mg、0.84mg、または1.68mgを約12回に分けて注射する。注射されるコラゲナーゼ組成物の量は、1回の注射につき0.01mL〜3mLの範囲、または1回の治療訪問につき合計約0.2mL〜150mLの範囲であってもよい。特定の実施形態では、上記の投与量は、CCHを有するコラゲナーゼ組成物に対するものである。別の実施形態では、上記の投与量は、以下の特徴の1つ以上を有するコラゲナーゼ組成物に対するものである:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
別の実施形態では、約0.84mgのCCHを、治療部位ごとに約12回に分けて均等に注射する(約0.07mg×12回=約0.84mg)。いくつかのケースでは、0.84mgによるこのような治療は、2、3、4、または5回の治療訪問において、10〜40日ごとに行われる。他のケースでは、複数の治療領域に、1回の治療訪問で0.84mgが注射されるか、2、3、4、または5回の治療訪問で10〜40日ごとに注射される。他の実施形態では、5回を超える治療訪問がある。
別の態様では、治療領域に注射され得るコラゲナーゼの量は、1回以上の注射における治療訪問あたり約0.001mg〜20mgのコラゲナーゼであり、例えば、約3回〜約100回の注射に等分して投与することができる。コラゲナーゼは液状であるか、または凍結乾燥した固体から希釈剤で再構成される。コラゲナーゼの投与量は、希釈剤を含まないコラゲナーゼの量で測定され、約0.1mg〜1mg、0.25mg〜0.75mg、0.1mg〜2mg、0.25mg〜1.75mg、または0.5mg〜1mg、0.1mg〜3mg、または0.25mg〜2.75mg、または0.5mg〜2.5mg、または0.75mg〜2.25mg、または1mg〜2mg、または0.1mg〜4mg、または0.25mg〜3.75mg、または0.5mg〜3.5mg、または0.75mg〜3mg、または1mg〜3mgを有し得る。他の実施形態では、投与量は、約0.001mg、0.01mg、0.04mg、0.05mg、0.07mg、0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.8mg、0.9mg、1mg、1.1mg、1.2mg、1.3mg、1.4mg、1.5mg、1.6mg、1.7mg、1.8mg、1.9mg、2mg、2.25mg、2.5mg、2.75mg、3mg、3.25mg、3.5mg、3.75mg、4.0mg、4.25mg、4.5mg、4.75mg、5.0mg、5.25mg、5.5mg、5.75mg、6mg、6.25mg、6.5mg、6.75mg、7mg、7.25mg、7.5mg、7.75mg、8mg、8.25mg、8.5mg、8.75mg、9mg、9.25mg、9.5mg、9.75mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg、または20mgを1回または複数回に分けて注射する。
別の実施形態では、投与量は約0.06mg、0.48mg、0.84mg、1.68mg、2.52mg、3.36mg、4.2mg、または5.04mgを1回または複数回の注射で投与する。別の例では、約0.06mg、0.48mg、0.84mg、1.68mg、2.52mg、3.36mg、4.2mg、または5.04mgを約12回に分けて治療領域に注射する。他の例では、コラゲナーゼの投与量を3回以上に分けて注射する。注射されるコラゲナーゼ組成物の量は、1回の注射につき0.01mLから3mLの範囲、または1回の治療訪問につき合計約1mLから150mLの範囲でよい。
一態様では、上述のAUX IおよびIIの混合物(「CCH」)を、1回の治療訪問あたり約0.01mg〜10mgのコラゲナーゼを1回以上の注射で注射してもよく、例えば、投与量を約3〜約50回の注射に等分して注射する。コラゲナーゼは、液体であってもよいし、凍結乾燥した形から希釈剤で再構成してもよい。混合物の投与量は、希釈剤を考慮せずにコラゲナーゼの量で測定され、約0.1mg〜1mg、または0.25mg〜0.75mg、または0.1mg〜2mg、または0.25mg〜1.75mg、または0.1mg〜3mg、または0.25mg〜2.75mg、または0.5mg〜2.5mg、または0.75mg〜2.25mg、または1mg〜2mg、または0.1mg〜4mg、または0.25mg〜3.75mg、または0.5mg〜3.5mg、または0.75mg〜3mg、または1mg〜3mg、または約0.05mg、0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.8mg、0.9mg、1mg、1.1mg、1.2mg、1.3mg、1.4mg、1.5mg、1.6mg、1.7mg、1.8mg、1.9mg、2mg、2.25mg、2.5mg、2.75mg、3mg、3.25mg、3.5mg、3.75mg、4.0mg、4.25mg、4.5mg、4.75mg、5.0mg、5.25mg、5.5mg、5.75mg、6mg、6.25mg、6.5mg、6.75mg、7mg、7.25mg、7.5mg、7.75mg、8mg、8.25mg、8.5mg、8.75mg、9mg、9.25mg、9.5mg、9.75mg、または10mgを1回または複数回の注射で投与する。別の実施形態では、投与されるCCHの用量は、1回以上の注射で約0.06mg、0.48mg、0.84mg、または1.68mg、2.52mg、3.36mg、4.2mg、または5.04mgである。例えば、約0.06mg、0.48mg、0.84mg、または1.68mg、2.52mg、3.36mg、4.2mg、または5.04mgが12回の注射で投与される。注射されるコラゲナーゼ組成物の量は、1回の注射につき0.01mLから3mLの範囲、または治療訪問あたり合計約1mLから80mLの範囲であり得る。
コラゲナーゼの投与量は、1回の注射につき約0.001mg〜0.5mg、約0.01mg〜約5mg、約0.005mg〜約0.1mg、または約0.005mg、0.04mg、または0.07mgのように、(やはり希釈剤を考慮せずに)1回の注射につきmgで表すこともできる。
特定の態様では、本開示は、治療訪問ごとに約500ABC単位〜約50,000ABC単位、または治療訪問ごとに約10,000ABC単位〜約25,000ABC単位を注射することを企図している。別の実施形態では、注射1回あたりのコラゲナーゼの用量は、約50ABC単位〜約2,500ABC単位、または約85ABC単位〜約2,000ABC単位、または約150ABC単位〜約1,750ABC単位、または約200ABC単位〜約1,500ABC単位、または約300ABC単位〜約1,250ABC単位、または約500ABC単位〜約1,000ABC単位である。
特定の実施形態では、様々な比活性に基づく投与量は以下の通りである:
Figure 2022502478
特定の態様では、本開示は、約5,000BTC単位〜約25,000BTC単位、または約10,000BTC単位〜約25,000BTC単位、または約15,000BTC単位、または約17,500BTC単位、または約20,000BTC単位、または約22,500BTC単位、または約9,175BTC単位、または約15,817BTC単位の量でコラゲナーゼを注射することを企図している。
5.製剤
CCHまたは他のコラゲナーゼは、CCHまたはコラゲナーゼと、薬学的に許容される賦形剤とを有する医薬製剤の形態であってもよい。このような賦形剤としては、注射用の滅菌水や塩化ナトリウム/塩化カルシウム、pH調整剤、安定剤などが挙げられる。
XIAFLEX(登録商標)は、0.9mgのCCHを再構成用の無菌凍結乾燥粉末として含む単回使用のガラスバイアルとして、申請者から商業的に提供されている。再構成用の無菌希釈剤も単回使用のガラスバイアルで提供される。非活性成分として、塩酸、スクロース、トロメタミンが含まれている。希釈剤には、0.9%塩化ナトリウム中の塩化カルシウム二水和物が含まれている。XIAFLEX(登録商標)処方箋情報(2018年)。
別の実施形態では、セルライト用CCHは、0.92mgのCCH、スクロース、トリス、マンニトール、および塩酸を含む無菌凍結乾燥粉末であり、5mLバイアルに入っている。再構成のための滅菌希釈剤は、注射用水、通常の生理食塩水、または0.6%の塩化ナトリウムと0.03%の塩化カルシウムの注射用水による脱水物を個々の5mLバイアルに充填して構成することができる。
コラゲナーゼまたはCCHは、10mL、15mL、20mL、または30mLなど、他のサイズのバイアルに充填してもよい。その他のpH調整剤、糖類、ポリオール、安定化剤については、RoweらのHandbook of Pharmaceutical Excipients5thEd)。
6.治療の方法:注射技術と投与レジメン
前述のコラゲナーゼ組成物は、ヒト対象のセルライトの重症度を治療または軽減する方法に有用である。本開示は、ヒト患者におけるセルライトの重症度を軽減する方法であって、少なくとも1つのコラゲナーゼを有する組成物を提供する工程と、治療有効量の前記組成物を1つ以上のくぼみに注射する工程と、を有し、前記患者が、治療前のベースラインレベルと比較してセルライトの重症度の軽減を示す方法に関するものである。以下にさらに詳述するように、本組成物は、様々な注射技術によって投与され、多数の尺度および他の測定ツールによって有効性を測定することができる。
本明細書に記載されたコラゲナーゼ組成物の投与は、治療訪問時に、単一の被験者において、両側(2つの大腿部または2つの臀部)または4つの象限すべて(両方の臀部および両方の大腿部)に行ってもよい。このような治療訪問は、1年間で2回、3回、4回、5回または6回の治療訪問を10〜40日ごとに行ってもよい。また、コラゲナーゼを高累積投与量で4象限すべてに注射した場合でも、3.36mgまでのCCH皮下投与後の血漿中のAUX−IまたはAUX−II濃度を検出する生体分析では、全身循環中に定量可能なレベルのCCHが存在しなかった(すなわち、アッセイの下限定量レベル以下)ことから、全身吸収がないことが示され、さらに全体的な安全性が示された。例えば、ヒトには3.36mg、ラットにはヒト換算用量(HED)の43倍の量を投与したところ、これらの量は十分に許容されることがわかった。コラゲナーゼ療法の薬物動態に関する出願人の研究は、2018年9月18日に出願された米国仮出願番号第62/733,046号、2019年1月6日に出願された米国仮出願番号第62/788,916号、米国仮出願番号第62/812,036号、2019年2月28日に出願された米国仮出願番号第62/812,036号、2019年3月25日に出願された米国仮出願番号第62/823,596号、2019年7月11日に出願された国際出願番号第PCT/US2019/041494号、2019年7月12日に出願された国際出願番号第PCT/US2019/41718号に記載され、これらは参照により本明細書に組み込まれる。
コラゲナーゼのさまざまな注射パラメータと、患者の治療に関連する技術の一般的な概要を表15に示す。
Figure 2022502478
Figure 2022502478
Figure 2022502478
特定の実施形態では、約0.84mgのCCHを約12回に等分割して4つの象限(すなわち、右または左の臀部または右または左の大腿部)などの患部に注射する(約0.07mg×12回の注射=約0.84mgのCCH)。いくつかのケースでは、0.84mgのこのような治療は、2、3、4、5、または6回の治療のために10〜40日ごとに行われる。他のケースでは、2、3、4、5、または6回の治療のために、10〜40日ごとに0.84mgを用いて複数の患部または象限を注射する。
一実施形態では、外科用マーカーを使用して、治療のために選択されたくぼみのそれぞれを円で囲む。別の実施形態では、選択された治療領域の円は、重ならない。さらに別の実施形態では、選択された治療領域の円が重なっている。
特定の実施形態では、患者は、治療I(図7)による手順を用いて、表16に示すようなコラゲナーゼを投与される。
Figure 2022502478
この例では、臨床医は、被験者が立っているときに明確で、治療に適した各臀部のくぼみを選択することができる。なお、治療するくぼみの選択には制限はない。治療は、1回の治療訪問で片方の臀部につき12回(2つの臀部で合計24回)の注射を行う。治療の目的は、臀部全体の美観を向上させることであるため、医師は臀部全体の美観を最も向上させると思われるくぼみを選択するように指示される。1つの臀部で同じくぼみを治療することも、以前に治療したくぼみと異なるくぼみを治療することもできるが、3回の治療では臀部内に注射することが望ましいである(1つの臀部につき12回の注射)。臀部に治療可能なEFP陥凹部がなく、臨床医がその臀部をCR−PCSSで0点と評価した場合を除き、各臀部は3回すべての治療を受ける。治療訪問2で特定の臀部(右または左)に注射が行われなかった場合でも、被験者は治療訪問2で対側の臀部の治療について評価され、治療訪問3に戻ってきて、被験者(PR PCSS)と治験責任医師(CR−PCSS)がそれぞれの臀部を再度評価する。治験責任医師がCR−PCSSで臀部のいずれかまたは両方を0より大きく評価した場合、治療訪問3で注射を行う。さらに、コラゲナーゼ治療は、以下の1つ以上を含むことができる:
●1つ以上の象限を治療する;
●くぼみの大きさに関係なく治療する;
●45歳以上の女性を治療する;
●皮膚のたるみや弛緩、垂れがない陥凹部を治療する;
●異なる陥凹部を、異なる治療訪問で治療する;
●1/2インチ以上の針を使用する;
●注射する陥凹部の距離を制限しない;
●スペーサー、定規、紙などの器具に頼って注射の位置を制限しない;
●陥凹部の直下に少なくとも1回の注射が行われるようにする;
●長さが約1cm未満または約2cm以上の陥凹部を治療する;
●互いに約2cm以内で注射を使用する;
●互いに約2cm未満の範囲内で注射を使用する、および/または
●ここに記載されている1つ以上の尺度と方法を用いて、効果を測定する。
特定の実施形態では、治療が上記の態様を遵守する場合、患者は治療に対する迅速な反応率を経験する。図20〜23を参照。
さらに、特定の具体的な実施形態において、治療患者のパラメータを表17および18に示す。
Figure 2022502478
Figure 2022502478
一実施形態では、再構成製品の浸透圧濃度は、約50〜約1,000、約100〜約900、約200〜約800、約300〜約700、約400〜約600、約50、約100、約150、約200、約250、約300、約350、約400、約450、約500、約550、約600、約650、約700、約750、約800、約850、約900、約950、または約1,000mOsm/kgである。さらに別の実施形態では、再構成製品の浸透圧濃度は、約512mOsm/kg、約275mOsm/kg、約281mOsm/kg、または約227mOsm/kgである。
上記の方法に加えて、本開示は、それを必要とする対象においてEFPを治療または低減する方法を提供し、この方法は、EFPの一般的な手順および治療に対して以下の利点の少なくとも1つを提供する:
a.医師が使いやすい;
b.治療にかかる時間の短縮;
c.審美的な症状を改善することは難しいという医師の一般的な見解に照らし合わせても、予想外の効果が得られる;
d.ヒアルロニダーゼを使用する必要がない;
e.熱を加える必要がない;
f.レーザーを使う必要がない;
g.サブシジョンなし;
h.麻酔の必要がない(あざにかかわらず);
i.着圧服の必要がない;
j.バキュームを使用しない。
別の実施形態では、セルライトを治療または減少させる方法は、治療するセルライトの重症度に上限を設けず、例えば、コラゲナーゼによる治療は、セルライトの有病率または重症度に関係なく、安全かつ効果的である。
F.段階4−治療評価項目と有効性の測定
本明細書に記載されている治療法は、以下に記載されているいくつかの尺度によってセルライトを治療するのに有効である。一般的に本明細書で使用されるように、用語「日」は、先行研究の71日目から日を順次測定する下記の実施例5に別段の定めがある場合を除き、治療コースにおける最初の治療から特定の治療領域におけるコラゲナーゼ治療の最初の日から日ごとに順次測定される研究日を意味する。例えば、実施例5で説明するように、「180日目」は、実施例2および3で報告された71日目から180日後を意味する。したがって、実施例5の文脈以外では、1日目は治療の最初の日であり、71日目は1日目から70日後であり、180日目は1日目から179日後である(「180日目」が実施例5のように、71日目から180日後、または治療初日から251日後であることを意味するように使用される場合を除く)。
特定の実施形態では、すべてが中等度または重度のCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価を有する患者の集団において:
●対象治療領域の臨床医がライブで評価したCR−PCSSにおいて、少なくとも50%の患者が、22日目、43日目、または71日目に重症度がベースラインから少なくとも1レベル改善している。
●対象治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したPR−PCSSにおいて、少なくとも50%の患者が、22日目、43日目、または71日目に重症度がベースラインから少なくとも1レベル改善している。
●対象治療領域の臨床医がライブで評価したCR−PCSSにおいて、少なくとも5%の患者が、22日目、43日目、または71日目に重症度がベースラインから少なくとも2レベル改善している。
●対象治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したPR−PCSSにおいて、少なくとも5%の患者が、22日目、43日目、または71日目に重症度がベースラインから少なくとも2レベル改善している。
●少なくとも5%の患者が、陥凹部のサイズ(体積、長さ、幅、深さ)の有意な減少、例えば、ベースラインから22日目、43日目、または71日目に少なくとも5%の減少、または少なくとも10%の減少、または少なくとも20%の減少を経験する。
これらおよびその他の有効性パラメータとベンチマークは以下に詳述する。さらに、以下の実施例に示されているように、コラゲナーゼ注射はセルライトの外観を著しく改善し、持続性を示し、一般的に良好な忍容性を示した。
1.CR−PCSSおよびPR−PCSSで測定された有効性
個々の患者の改善とは、ベースラインまたは前回のスコアやレーティングから少なくとも1レベルまたは1レーティングの改善を意味する。患者群の改善とは、ベースラインまたはそれ以前の平均スコアまたは評価から、平均スコアまたは評価が約0.1向上したことをいう。応答者とは、ベースラインから最大合計スコアまたは評価の少なくとも25%の改善を示す任意の患者である。特定の実施形態では、本明細書に詳述されている治療方法は、CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSによって測定される以下の有効性評価項目の1つ以上をもたらす:
1.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価がベースラインと比べて少なくとも0.1改善していること。
2.治療領域の臨床医がライブで評価したCR−PCSSにおける重症度が、ベースライン(治療前の「1日目」)から22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目において、少なくとも2レベル改善していること。
3.治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したPR−PCSSにおける重症度が、ベースライン(1日目)から22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目において、少なくとも2レベル改善していること。
4.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目に2レベルの複合応答で示される改善とは、CR−PCSSの重症度がベースラインから少なくとも2レベル改善し、PR−PCSSの重症度がベースラインから少なくとも2レベル改善した被験者と定義される。
5.治療領域の臨床医がライブで評価したCR−PCSSにおける重症度が、22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目において、ベースラインから少なくとも1レベル改善していること。
6.治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したPR−PCSSの重症度が、ベースラインから22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目において、少なくとも1レベル改善していること。
7.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目において、1レベルの複合応答で示された改善とは、CR−PCSSでベースラインから少なくとも1レベルの重症度の改善が見られ、PR−PCSSでベースラインから少なくとも1レベルの重症度の改善が見られた被験者と定義される。
8.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度であった患者集団において、少なくとも1つの治療領域の改善がプラセボと比較して統計的に有意であり、その改善が上記のNo.1からNo.7の1つ以上である。
9.初回投与後、少なくとも5%の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを少なくとも71日間維持するという結果が得られた。特定のケースでは、少なくとも10%、または20%、または30%、または40%、または50%の患者が、初回投与後、少なくとも6ヶ月、または9ヶ月、または12ヶ月、または18ヶ月、または2年、または3年、または4年、または5年、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも5%の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、初回治療、または2回目の治療、または3回目の治療から1ヶ月、または3ヶ月、または6ヶ月、または9ヶ月、または12ヶ月、または18ヶ月、または24ヶ月に、さらなる改善が見られた。
10.180日目において、ベースラインに対するCR−PCSS評価における改善は、治療領域の左右で一貫して見られた。
11.全員がCR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも1つの治療領域で最も早く2レベルのCR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの改善が得られるまでの時間の中央値は、約50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
12.全員がCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度である患者の集団において、少なくとも1つの治療領域で最も早く1レベルのCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS改善までの時間の中央値は、約15日、または20日、または30日、または40日、または50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
13.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度である患者集団において、被験者のCR−PCSSおよび/またはPR−PCSSスコアの平均値が、初回治療の21日後にプラセボから分離し、その後の治療で継続的かつ有意な改善を示した。
14.全員がCR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度である患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域でCR−PCSSおよび/またはPR−PCSSによって測定される2レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%、または50%よりも大きい。
15.全員がCR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度である患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域でCR−PCSSおよび/またはPR−PCSSによって測定される1レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%、または50%よりも大きい。
16.全員がCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度である患者の集団において、3分の1以上、または2分の1以上、または3分の2以上、または4分の3以上の患者が、治療後71日目までに少なくとも1つの治療領域で少なくとも1レベルのCR−PCSSおよび/または少なくとも1レベルのPR−PCSS応答を有し、CR−PCSSの結果が年齢、BMIまたは肌の色に依存しない。
17.セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約7、または14、または21、または30、または35、または40、または45、または50日以内に急速に起こる。
18.CR−PCSSおよびPR−PCSSの評価が中等度または重度の患者集団において、ベースライン(スクリーニング訪問)からのCR−PCSSおよびPR−PCSSの評価の最大の低下が90日目で初めて観察された。
19.CR−PCSS及び/又はPR−PCSSの評価が中等度又は重度である患者集団において、180日目前の所定の時点でのセルライト重症度の改善(すなわち、マイナスの変化)が180日目の訪問時にも維持される。
20.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度の患者集団において、90日目に、左臀部および左大腿部のCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価のベースラインからの平均(SD)変化は、それぞれ約−0.8(0.58)および約−0.6(0.62)であり、右臀部および右大腿部のCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価のベースラインからの平均(SD)変化は、それぞれ約−0.7(0.73)および約−0.5(0.70)である。
21.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度である患者集団において、180日目で、CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価のベースライン(スクリーニング訪問)からの減少が左右で一貫している。
22.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも1つの領域でCR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が2レベル改善することが、90日目には被験者の少なくとも10%、180日目には被験者の少なくとも15%で観察された。
22.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度の患者集団において、少なくとも1つの領域でCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が2レベル改善することが、90日目に少なくとも10%、180日目に少なくとも15%の被験者で観察され、その反応は臀部と大腿部の領域、および左右の側面で同様であった。
23.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも1つの治療領域でCR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が1レベル改善することが、90日目の被験者の少なくとも60%および180日目の被験者の少なくとも65%で観察された。
24.全員がCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも1つの治療領域におけるCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価の1レベルの改善が、90日目の被験者の少なくとも60%および180日目の被験者の少なくとも65%で観察され、その反応は臀部および大腿部の領域および左右の側面で同様である。
25.全員がCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも1つの治療領域で最も早く2レベルのCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS応答が得られるまでの時間の中央値は約80日と観察された。
26.全員がCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも1つの治療領域で最も早く1レベルのCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS応答が得られるまでの時間の中央値は約40日である。
27.全員がCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも50%の患者が71日目に標的臀部で1レベルのPR−PCSSおよび/またはPR−PCSS応答者である。
28.全員がCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも20%の患者が71日目に標的臀部で2レベルのPR−PCSSおよび/またはPR−PCSS応答者である。
29.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度である患者集団において、71日目で標的臀部において、少なくとも35%の患者が1レベルのCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS複合応答者である。
30.全ての患者がCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度である患者集団において、71日目に非標的臀部で少なくとも5%の患者が2レベルのCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS複合応答者である。
31.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度の患者集団において、71日目のPR−PCSSおよび/またはPR−PCSSのベースラインからの平均変化量は、コラゲナーゼを投与した被験者の方が、プラセボを投与した被験者よりも、標的臀部(それぞれ約0.9対約0.5)および非標的臀部(それぞれ約0.9対約0.5)で大きかった。
32.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度の患者集団において、1レベルのPR−PCSSおよび/またはPR−PCSS応答者の割合は、71日目において、コラゲナーゼを投与した被験者の方が、プラセボを投与した被験者よりも、標的臀部(それぞれ約62%対約40%)および非標的臀部(それぞれ約65%対約40%)で多かった。
33.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度の患者集団において、CCHを投与した被験者のCR−PCSSおよび/またはPR−PCSSのベースラインからの平均変化量は、71日目の標的臀部(それぞれ約0.7対約0.4[0.72])および非標的臀部(それぞれ約0.8対約0.3)において、プラセボを投与した被験者よりも大きかった。
34.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度の患者集団において、1レベルのCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS応答者の割合は、コラゲナーゼで治療した被験者の方が、プラセボで治療した被験者よりも、71日目の標的臀部(それぞれ約58%対約32%)および非標的臀部(それぞれ約60%対約27%)で多かった。
35.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度の患者集団において、1レベルのCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS複合応答者の割合は、コラゲナーゼで治療した被験者の方が、プラセボで治療した被験者よりも、71日目の標的臀部(それぞれ約42%対約20%)および非標的臀部(それぞれ約44%対約13%)で多かった。
36.全員がCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度である患者の集団において、本明細書に記載のコラゲナーゼ治療により、プラセボよりも少なくとも5%高い、またはプラセボよりも少なくとも7.5%高い、またはプラセボよりも少なくとも10%高い、またはプラセボよりも少なくとも12.5%高い、またはプラセボよりも少なくとも15%高い、またはプラセボよりも少なくとも20%高い、2レベル以上の複合型応答者が得られる。
37.全員がCR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度である患者の集団において、本明細書に記載されているコラゲナーゼ治療により、1レベル以上の複合応答者が、プラセボよりも少なくとも5%高い、または少なくとも7.5%プラセボより高い、または少なくとも10%プラセボより高い、または少なくとも12.5%プラセボより高い、または少なくとも15%プラセボより高い、または少なくとも20%プラセボより高い、または少なくとも25%プラセボより高い、または少なくとも30%プラセボより高い、または少なくとも35%プラセボより高い、または少なくとも40%プラセボより高い。
38.CR−PCSSおよびPR−PCSSの評価が中等度または重度である患者集団において、CR−PCSSおよびPR−PCSSの評価のベースライン(スクリーニング)からの最大の減少が、22日目、71日目、またはそれ以前に初めて観察された。
39.ベースライン(治療前)において、CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度である患者の集団において、ベースライン(スクリーニング訪問)からのCR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価の低下が左右で一貫している。
別の実施形態では、少なくとも1回の治療訪問中に、約1mg〜約20mgのコラゲナーゼを少なくとも1つの治療領域に注射することにより、上記の結果No.1〜39のうち1つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち1つ以上を有するものである:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
他のケースでは、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注射により、上記の結果No.1〜39のうちの1つ以上が得られる。
別の例では、処理Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注射により、上記の結果No.1〜39のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのCCHの注射により、上記の結果No.1〜39のうち1つ以上の結果が得られる。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが、少なくとも1回の治療訪問時に少なくとも1つの治療領域に注射され、上記の結果No.1〜39のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有するものである:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが治療Iを採用して注射され、上記の結果No.1〜39のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
他の実施形態では、上記の治療に応答して、患者は、評価時点でCR−PCSS評価がベースラインから少なくとも2レベルの改善(−2、−3、または−4の変化)を示す2レベルのCR−PCSS応答者である。1レベルのCR−PCSS応答者は、評価時点でCR−PCSS評価の改善がベースラインから少なくとも1レベル(変化量が−1、−2、−3、または−4)を示す患者である。評価時点でPR−PCSS評価がベースラインから少なくとも2レベルの改善(−2、−3、または−4の変化)を示す患者が2レベルのPR−PCSS応答者である。1レベルのPR−PCSS応答者とは、評価時点でPR−PCSS評価の改善がベースラインから少なくとも1レベル(−1、−2、−3、または−4の変化)であることを示す患者である。他の態様では、2レベルの複合応答者とは、評価時点で2レベルのPR−PCSS応答者と2レベルのCR−PCSS応答者の両方を有する患者をいう。1レベルの複合応答者とは、評価時点で1レベルのPR−PCSS応答者と1レベルのCR−PCSS応答者の両方を有する患者である。
2.ヘクセルセルライト重症度尺度(へクセルCSS)で測定される有効性
へクセルCSSでは、任意の訪問時における個々の患者の改善とは、ベースラインまたは前回のスコアから少なくとも1レベルまたは1評価の改善を指す。訪問時の患者群の改善は、ベースラインからの平均へクセルCSSスコアまたは評価または以前の平均へクセルCSSスコアまたは評価の約0.1の改善である。応答者とは、ベースラインから最大合計スコアまたは評価の少なくとも25%の改善を示す任意の患者である。特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、へクセルCSSで測定した以下の有効性評価項目の1つ以上が得られる:
1.ベースラインの1日目 へクセルCSS評価を有する患者集団において、少なくとも1回の治療訪問時に少なくとも1つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の患者が以下の有効性評価項目の1つ以上を満たす結果となった:
● 重度から中等度(スコア11〜15から6〜10)への移行
● 重度から軽度(スコア11〜15から1〜5)への移行
● 重度からゼロ(スコア11〜15から0)への移行
● 中程度から軽度(スコア6〜10から1〜5)への移行
● 中程度からゼロ(スコア6〜10から0)への移行
● 軽度からゼロ(スコア1〜5から0)への移行
2.治療領域の臨床医がライブで評価したヘクセルCSSにおいて、ベースライン(治療前の「1日目」)から22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目において、少なくとも2レベルの重症度の変化。
3.治療領域のデジタル画像を見ながら臨床医が評価したヘクセルCSSにおいて、ベースライン(1日目)から22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目において、少なくとも2レベルの重症度の変化。
4.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目における2レベルの応答によって示された変化とは、臨床医による評価でヘクセルCSSの重症度がベースラインから少なくとも2レベル改善した被験者と定義される。
5.治療領域の臨床医がライブで評価したヘクセルCSSの重症度がベースライン(1日目)から22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目のいずれかで少なくとも1レベルの重症度の変化があること。
6.治療領域のデジタル画像を見ながら臨床医が評価したヘクセルCSSの重症度が、ベースライン(1日目)から22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目のいずれかにおいて、少なくとも1レベルの重症度の変化があること。
7.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、5年目に1レベルの反応が示された変化とは、臨床医による評価でヘクセルCSSの重症度がベースラインから少なくとも1レベル改善した被験者と定義されるものである。
8.へクセルCSS評価が中等度または重度であった患者集団において、少なくとも1つの治療領域の改善がプラセボと比較して統計的に有意であり、その変化が上記のNo.2からNo.7のうち1つ以上であること。
9.初回投与後、少なくとも5%の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを少なくとも71日間維持するという結果が得られた。特定のケースでは、少なくとも10%、または20%、または30%、または、40%、または50%の患者が、初回投与後、少なくとも6ヶ月、または9ヶ月、または12ヶ月、または18ヶ月、または2年、または3年、または4年、または5年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも5%の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、初回治療、2回目の治療、3回目の治療の1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、さらに改善が見られた。
10.180日目には、ベースラインからのへクセルCSS評価の改善が、治療領域の左右で一貫して見られた。
11.へクセルCSS評価が中等度または重度である患者の集団において、少なくとも1つの治療領域で最も早く2レベルのへクセルCSS改善が得られるまでの時間の中央値は、約50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
12.へクセルCSS評価が中等度または重度である患者の集団において、少なくとも1つの治療領域で最も早く1レベルのへクセルCSS改善が得られるまでの時間の中央値は、約15日、または20日、または30日、または40日、または50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
13.へクセルCSSの評価が中等度または重度の患者集団において、初回治療の21日後に被験者のへクセルCSSスコアの平均値がプラセボから分離し、その後の治療でも継続して有意な改善を示した。
14.全員が中等度または重度のへクセルCSS評価を有する患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域でヘクセルCSSにより測定された2レベルの応答を有する被験者の割合は、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%、または50%より大きい。
15.全員が中等度または重度のへクセルCSS評価を有する患者の集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域でヘクセルCSSにより測定された1レベルの応答を有する被験者の割合は、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%、または50%より大きい。
16.中等度または重度のへクセルCSS評価を有する患者の集団において、治療後71日目までに少なくとも1つの治療領域で少なくとも1レベルのへクセルCSS応答があり、へクセルCSSの結果が年齢、BMI、または肌の色に依存しない患者の3分の1以上、または2分の1以上、または3分の2以上、または4分の3以上である。
17.セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約7、または14、または21、または30、または35、または40、または45、または50日以内に急速に起こる。
別の実施形態では、少なくとも1回の治療訪問中に、約1mg〜約20mgのコラゲナーゼを少なくとも1つの治療領域に注射することにより、上記の結果No.1〜17のうちの1つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうちの1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
他のケースでは、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注入により、上記の結果No.1〜17のうちの1つ以上が得られる。
別の例では、処理Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注入により、上記の結果No.1〜17のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのCCHの注射により、上記の結果No.1〜17のうち1つ以上の結果が得られる。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが、少なくとも1回の治療訪問中に少なくとも1つの治療領域に注入され、上記の結果No.1〜17のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが治療Iを採用して注入され、上記の結果No.1〜17のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
3.ヘクセルくぼみ深さスコアで測定した有効性
ヘクセルくぼみ深さスコアにおいて、任意の訪問時における個々の患者の改善は、ベースラインまたは前回のスコアから少なくとも1レベルまたは1評価の改善を意味する。また、患者群の改善とは、ベースラインまたは前回の平均ヘクセルくぼみ深さスコアまたは評価から約0.1の改善を意味する。応答者とは、ベースラインから最大合計スコアまたは評価の少なくとも25%の改善を示す任意の患者である。特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、ヘクセルくぼみ深さスコアで測定される以下の有効性評価項目の1つ以上が得られる:
1.ベースラインの1日目ヘクセルくぼみ深さスコア評価を全員が有した患者集団において、少なくとも1回の治療訪問時に少なくとも1つの治療領域にコラゲナーゼを注射した結果、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の1つ以上を満たした:
●深いくぼみ(3)から中程度の深さ(2)への移行
●深いくぼみ(3)から表面的なくぼみ(1)への移行
●深いくぼみ(3)からくぼみなし(0)への移行
●中程度の深さ(2)から表面的なくぼみ(1)への移行
●中程度の深さ(2)からくぼみなし(0)への移行
●表面的なくぼみ(1)からくぼみなし(0)への移行
2.治療領域の臨床医がライブで評価したヘクセルくぼみ深さスコアの重症度がベースライン(治療前の「1日目」)から22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目において少なくとも2レベルでの変化。
3.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目において2レベル応答によって示された変化は、臨床医による評価でヘクセルくぼみ深さスコアの重症度がベースラインから少なくとも2レベル改善した被験者として定義される。
4.治療領域の臨床医がライブで評価したヘクセルくぼみ深さスコアの重症度がベースライン(1日目)から22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目において少なくとも1レベル変化したこと。
5.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目に1レベル応答によって示された変化とは、臨床医による評価でヘクセルくぼみ深さスコアの重症度がベースラインから少なくとも1レベル改善した被験者と定義される。
6.へクセルCSS評価で中程度または深いくぼみを有した患者集団において、少なくとも1つの治療領域での改善がプラセボと比較して統計的に有意であり、その変化が上記のNo.2からNo.7の1つ以上であること。
7.初回投与後、少なくとも5%の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを少なくとも71日間維持するという結果が得られ た。特定のケースでは、少なくとも10%、または20%、または30%、または、40%、または50%の患者が、初回投与後、少なくとも6ヶ月、または9ヶ月、または12ヶ月、または18ヶ月、または2年、または3年、または4年、または5年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも5%の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、初回治療、2回目の治療、3回目の治療の1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、さらに改善が見られた。
8.180日目に、ヘクセルくぼみ深さスコア評価のベースラインからの 改善が、治療領域の左右で一貫して見られた。
9.ヘクセルくぼみ深さスコアの評価が中程度または深いくぼみを有した患者集団において、少なくとも1つの治療領域で最も早く2レベルのヘクセルくぼみ深さスコアの改善が得られるまでの時間の中央値は、約50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
10.ヘクセルくぼみ深さスコアの評価が中程度または深い深さである患者集団において、少なくとも1つの治療領域で最も早く1レベルのヘクセルくぼみ深さスコアの改善が得られるまでの時間の中央値は、約15日、または20日、または30日、または40日、または50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
11.ヘクセルくぼみ深さスコアが中程度または深い深さである患者集団において、初回治療の21日後に被験者の平均ヘクセルくぼみ深さスコアがプラセボから分離し、その後の治療でも継続的かつ有意な改善を示した。
12.全員がヘクセルくぼみ深さスコアの評価が中程度または深い深さである患者集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域でヘクセルくぼみ深さスコアによって測定される2レベルの反応があった被験者の割合は、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%、または50%より大きい。
13.全員がヘクセルくぼみ深さスコアの評価が中程度または深い深さである患者集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域でヘクセルくぼみ深さスコアによって測定された1レベルの応答を有する被験者の割合は、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%、または50%よりも大きい。
14.ヘクセルくぼみ深さスコアの評価が中程度または深い深さである患者集団において、治療後71日目までに、患者の3分の1以上、または2分の1以上、または3分の2以上、または4分の3以上が、少なくとも1つの治療領域で1レベルのヘクセルくぼみ深さスコアの応答を示し、ヘクセルくぼみ深さスコアの結果は、年齢、BMI、または肌の色とは無関係である。
15.セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約7、または14、または21、または30、または35、または40、または45、または50日以内に急速に起こる。
16.ベースラインから71日目までのスコアの変化が約−0.1〜約−2.0の1つ以上の治療領域。
17.統計的に有意な患者集団において、1つ以上の治療領域で最小二乗(LS)平均値が約−0.1〜約−1.5(95%信頼区間(CI))であること。
別の実施形態では、少なくとも1回の治療訪問中に、約1mg〜約20mgのコラゲナーゼを少なくとも1つの治療領域に注射することにより、上記の結果No.1〜19のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
他のケースでは、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注入により、上記の結果No.1〜19のうちの1つ以上が得られる。
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注入により、上記の結果No.1〜19のうち1つ以上の結果が得られ、ここで、コラゲナーゼは以下の特徴のうち1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのCCHの注射により、上記の結果No.1〜19のうち1つ以上の結果が得られる。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが、少なくとも1回の治療訪問中に少なくとも1つの治療領域に注入され、上記の結果No.1〜19のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが治療Iを採用して注射され、上記の結果No.1〜19のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
4.美的外観のためのリッカート尺度によって測定された有効性
リッカート尺度では、任意の訪問時における個々の患者の改善は、治療前または前回のスコアから少なくとも1レベルまたは1評価の改善である。任意の訪問時における患者群の改善とは、治療前または任意の以前の平均リッカートスコアまたは評価から、平均リッカートスコアまたは評価が約0.1向上することである。特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、リッカート尺度スコアで測定される以下の有効性評価項目の1つ以上が得られる:
1.セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1回の治療訪問時に少なくとも1つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の1つ以上を満たすことができた:
●リッカート尺度スコアが「改善された」(1)
●リッカート尺度スコアが「大幅に改善された」(2)
●リッカート尺度スコアが「非常に改善された」(3)
2.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目における治療領域の外観が、治療前と比較して、臨床医がライブで評価したリッカート尺度スコアで少なくとも2レベル改善されていること。
3.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目における治療領域の外観が、治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したリッカート尺度スコアで、治療前から少なくとも2レベル改善されていること。
4.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目における治療領域の外観が、治療前と比較して、臨床医がライブで評価したリッカート尺度スコアで少なくとも1レベル改善されていること。
5.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目における治療領域の外観が、治療前と比較して、治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したリッカート尺度スコアで少なくとも1レベル改善されていること。
6.セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域におけるリッカート尺度スコアの改善が統計的に有意であり、その改善が上記のNo.2からNo.7のうちの1つ以上であること。
7.初回投与後、少なくとも5%の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを少なくとも71日間維持するという結果が得られた。特定のケースでは、少なくとも10%、または20%、または30%、または、40%、または50%の患者が、初回投与後、少なくとも6ヶ月、または9ヶ月、または12ヶ月、または18ヶ月、または2年、または3年、または4年、または5年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも5%の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも10%、20%、30%、40%、または50%の患者が改善を示し、初回治療、2回目の治療、3回目の治療の1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、または24ヶ月後に、さらに改善が見られた。
8.180日目に、ベースラインからのリッカート尺度スコア評価で見られた改善は、右と左の治療領域で一貫していた。
9.セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い2レベルのリッカート尺度スコアの改善までの時間の中央値は、約50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
10.セルライトを有する患者の集団では、少なくとも1つの治療領域における最も早い1レベルのリッカート尺度スコアの改善までの時間の中央値は、約15日、または20日、または30日、または40日、または50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
11.セルライトを有する患者集団において、被験者のリッカート尺度スコアの平均値は、初回治療の21日後にプラセボから分離し、その後の治療でも継続的かつ有意な改善を示した。
12.セルライトを有する患者集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域でリッカート尺度スコアによって測定される2レベルの反応を有する被験者の割合は、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%、または50%より大きい。
13.セルライトを有する患者集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域でリッカート尺度スコアによって測定される1レベルの応答を有する被験者の割合は、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%、または50%より大きい。
14.セルライトを有する患者集団において、3分の1以上、または2分の1、または3分の2、または4分の3の患者が、治療後71日目までに少なくとも1つの治療領域で少なくとも1レベルのリッカート尺度スコアの反応を有し、リッカート尺度スコアの結果は、年齢、BMI、または肌の色とは無関係である。
15.セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約7、または14、または21、または30、または35、または40、または45、または50日以内に急速に起こる。
別の実施形態では、少なくとも1回の治療訪問中に、約1mg〜約20mgのコラゲナーゼを少なくとも1つの治療領域に注射することにより、上記の結果No.1〜15のうちの1つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうちの1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
他のケースでは、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注射により、上記の結果No.1〜15のうちの1つ以上が得られる。
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注入により、上記の結果No.1〜15のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのCCHの注射により、上記の結果No.1〜15のうち1つ以上の結果が得られる。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが、少なくとも1回の治療訪問中に少なくとも1つの治療領域に注入され、上記の結果No.1〜15のうちの1つ以上が得られ、ここで、コラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが治療Iを採用して注射され、上記の結果No.1〜15のうちの1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
5.陥凹部分析
特定の実施形態では、コラゲナーゼによるセルライトの治療は、以下のように陥凹部サイズのパラメータを減少させる:
深さ:約100%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、25%、または20%、または15%、または10%、または5%、または2.5%、または2%、または1%
:約100%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、25%、または20%、または15%、または10%、または5%、または2.5%、または2%、または1%
長さ:約100%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、25%、または20%、または15%、または10%、または5%、または2.5%、または2%、または1%
全体の体積:約100%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、25%、または20%、または15%、または10%、または5%、または2.5%、または2%、または1%
表面積:約100%、90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、25%、または20%、または15%、または10%、または5%、または2.5%、または2%、または1%
いくつかの実施形態では、治療の結果、少なくとも5%の患者が初回投与後少なくとも71日間、治療前のベースラインに対する改善レベルを維持した。特定のケースでは、少なくとも10%、または20%、または30%、または40%、または50%の患者が、初回投与後、少なくとも6ヶ月、または9ヶ月、または12ヶ月、または18ヶ月、または2年、または3年、または4年、または5年の間、そのようなレベルを維持した。他の実施形態では、治療により、少なくとも5%の患者が治療前のベースラインに対して改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の増加を示した。一部の治療法では、初回投与から1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、初回治療、2回目の治療、3回目の治療の1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、さらに改善が見られた。
別の実施形態では、少なくとも1回の治療訪問時に約1mg〜約20mgのコラゲナーゼを少なくとも1つの治療領域に注射することにより、陥凹部サイズパラメータの少なくとも1つが少なくとも5%、または少なくとも10%、または少なくとも20%減少し、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
他のケースでは、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注射により、陥凹部サイズパラメータの少なくとも1つが、少なくとも5%、または少なくとも10%、または少なくとも20%減少する。
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注入により、陥凹部サイズパラメータの少なくとも1つが少なくとも5%、または少なくとも10%、または少なくとも20%減少し、ここでコラゲナーゼは以下の特性の1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのCCHの注射により、陥凹部サイズのパラメータの少なくとも1つが、少なくとも5%、または少なくとも10%、または少なくとも20%減少する。
特定の実施形態では、少なくとも1回の治療訪問時に、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼとII型コラゲナーゼを少なくとも1つの治療領域に注入し、陥凹部サイズパラメータの少なくとも1つを少なくとも5%、または少なくとも10%、または少なくとも20%減少させる結果となり、I型コラゲナーゼおよびII型は以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが治療Iを採用して注射され、陥凹部サイズパラメータの少なくとも1つを少なくとも5%、または少なくとも10%、または少なくとも20%減少させる結果となり、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
6.被験者グローバル美的改善尺度(S−GAIS)および調査員グローバル美的改善尺度(I−GAIS)で測定される有効性
上記で詳述した治療方法により、S−GAISおよびI−GAISで測定される応答が改善される。2レベルのS−GAIS応答者とは、評価時点でS−GAIS評価が少なくとも2(+2または+3)の被験者である。1レベルのS−GAIS応答者は、評価時点でS−GAIS評価が少なくとも1(+1、+2、+3)の被験者である。2レベルのI−GAIS応答者は、評価時点でI−GAIS評価が少なくとも2(+2または+3)の被験者である。1レベルのI−GAIS応答者とは、評価時点でI−GAIS評価が少なくとも1(+1、+2、または+3)の被験者である。任意の訪問時における個々の患者の改善とは、ベースラインまたはそれ以前のスコアから少なくとも1レベルまたは1評価の改善をいう。患者群の改善とは、ベースラインまたは前回の平均スコアまたは評価から、平均スコアまたは評価が約0.1向上することをいう。
特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、S−GAISおよび/またはI−GAISで測定される以下の有効性評価項目の1つ以上が得られる:
1.セルライトを有する患者集団において、少なくとも1回の治療訪問時に少なくとも1つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の1つ以上を満たす:
●S−GAISおよび/またはI−GAISのスコアが「改善された」(+1)
●S−GAISおよび/またはI−GAISのスコアが「大幅に改善された」(+2)
●S−GAISおよび/またはI−GAISのスコアが「非常に改善された」(+3)
2.治療領域の臨床医がライブで評価したI−GAISにおいて、22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、365日目、または730日目に少なくとも2レベルの改善が見られたこと。
3.治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したS−GAISにおいて、22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、365日目、または730日目に少なくとも2レベルの改善が見られたこと。
4.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、365日目、または730日目に2レベルの複合応答で示される改善とは、臨床医の評価でI−GAISが少なくとも2レベル改善し、患者の評価でS−GAISが少なくとも2レベル改善した被験者と定義される。
5.治療領域の臨床医がライブで評価したI−GAISにおいて、22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、365日目、または730日目に、少なくとも1レベルの改善が見られたこと。
6.治療領域のデジタル画像を見ながら被験者が評価したS−GAISにおいて、22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、365日目、または730日目に、少なくとも1レベルの改善が見られたこと。
7.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、365日目、または730日目に1レベルの複合応答で示される改善とは、臨床医による評価でI−GAISが少なくとも1レベル改善し、患者による評価でS−GAISが少なくとも1レベル改善した被験者と定義される。
8.セルライトを有する患者集団において、少なくとも1つの治療領域におけるI−GAISおよび/またはS−GAISの改善が、プラセボと比較して統計的に有意であり、その改善が上記のNo.2からNo.7の1つ以上である。
9.この治療により、少なくとも5%の患者が初回投与後71日間、その改善レベルを維持した。特定のケースでは、少なくとも10%、または20%、または30%、または、40%、または50%の患者が、初回投与後、少なくとも6ヶ月、または9ヶ月、または12ヶ月、または18ヶ月、または2年、または3年、または4年、または5年の間、そのようなレベルを維持した。他のケースでは、少なくとも5%の患者が改善を示し、時間の経過とともに改善の度合いがさらに高まった。ある治療法では、初回投与から1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、初回治療、2回目の治療、3回目の治療の1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、さらに改善が見られた。
10.180日目において、I−GAISおよびS−GAIS評価に見られる改善は、治療領域の左右で一貫していた。
11.セルライトを有する患者集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い2レベルのI−GAISおよび/またはS−GAISの改善までの時間の中央値は、約50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
12.セルライトを有する患者集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い1レベルのI−GAISおよび/またはS−GAISの改善までの時間の中央値は、約15日、または20日、または30日、または40日、または50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
13.セルライトを有する患者集団において、被験者のI−GAISおよび/またはS−GAISの平均値は、初回治療の21日後にプラセボから分離し、その後の治療でも継続的かつ有意な改善を示した。
14.セルライトを有する患者集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域でI−GAISおよび/またはS−GAISによって測定される2レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%、または50%よりも大きい。
15.セルライトを有する患者集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域でI−GAISおよび/またはS−GAISによって測定される1レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%、または50%よりも大きい。
16.セルライトを有する患者集団において、患者の3分の1以上、または2分の1以上、または3分の2以上、または4分の3以上が、治療後71日目までに少なくとも1つの治療領域で少なくとも1レベルのI−GAISおよび/またはS−GAIS応答を有し、GAIS結果は年齢、BMI、または肌の色に依存しない。
17.セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約7、または14、または21、または30、または35、または40、または45、または50日以内に急速に起こる。
18.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度の患者集団において、少なくとも60%の患者が71日目に標的臀部で1レベルのS−GAIS応答を示した。
19.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも20%の患者が71日目に標的臀部で2レベルのS−GAIS応答を示した。
20.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度の患者集団において、71日目では、プラセボで治療した被験者と比較して、標的臀部にコラゲナーゼで治療した被験者で平均S−GAISが大きくなった(それぞれ約1.0対約0.5)。非標的臀部についても同様の結果が得られた(コラゲナーゼ治療を受けた被験者では約1.0、プラセボ治療を受けた被験者では約0.5)。
21.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度の患者集団において、71日目で、1レベルのS−GAIS応答者の割合は、標的臀部(それぞれ約70%対約40%)および非標的臀部(それぞれ約70%対約40%)において、コラゲナーゼで治療した被験者がプラセボで治療した被験者よりも多くなった。
22.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度の患者集団において、71日目では、標的臀部にコラゲナーゼを投与した被験者の平均I−GAISは、プラセボを投与した被験者と比較して、統計的に有意に大きかった(それぞれ約1.0対0.3)。非標的臀部についても同様の結果が得られた(コラゲナーゼ治療を受けた被験者では約0.6、プラセボ治療を受けた被験者では約0.1)。
23.CR−PCSS及び/又はPR−PCSS評価が中等度又は重度の患者集団において、71日目で、1レベルのI−GAIS応答者の割合は、標的臀部(それぞれ約70%対25%)及び非標的臀部(それぞれ70%対25%)において、コラゲナーゼで治療された被験者がプラセボで治療された被験者よりも多くなった。
24.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度である患者の集団において、一連のクロス集計により、PR−PCSSとS−GAISの間に一貫性があることが示された。PR−PCSSの1レベルの変化は、S−GAISの同様の変化と関連していた。
別の実施形態では、少なくとも1回の治療訪問中に、約1mg〜約20mgのコラゲナーゼを少なくとも1つの治療領域に注射することにより、上記の結果No.1〜24のうち1つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
他のケースでは、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注射により、上記の結果No.1〜24のうちの1つ以上が得られる。
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注射により、上記の結果No.1〜24のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのCCHの注射により、上記の結果No.1〜24のうち1つ以上の結果が得られる。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが、少なくとも1回の治療訪問中に少なくとも1つの治療領域に注射され、上記の結果No.1〜24のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが治療Iを採用して注射され、上記の結果No.1〜24のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
実施例2および3でさらに説明したように、患者は、標的および非標的臀部においてS−GAISを用いてベースラインと比較して治療後の改善度を評価した。図11に示すように、CCHによる治療は、S−GAISによって測定された≧2レベルおよび≧1レベルの応答によって示されるように、プラセボよりも有意に良好であった。
7.PR−CISで測定された有効性
以上のような治療方法により、PR−CISで測定される応答が改善される。PR−CISのトータルスコアは、尺度の6つの項目の合計である。PR−CISのトータルスコアは0〜60の範囲で、数値が高いほどセルライトの影響が大きいことを示している。PR−CISの項目1は、セルライトの出現にどの程度満足しているかを問うもので、被験者が報告した評価を10から引くことで逆転する。PR−CISトータルスコアでは、評価時点でPR−CISトータルスコアがベースラインから12以上減少した被験者を応答者とした。個々のPR−CISインパクトスコアについては、各時点でベースラインから少なくとも2つのスコア間隔で改善した場合を応答とする。さらに、応答者とは、最大トータルスコアがベースラインから少なくとも20%の改善を示した患者を指す。また、個々の患者の各訪問時における改善とは、ベースラインまたは前回のスコアから少なくとも1レベルまたは1評価の改善を意味する。また、患者群の改善とは、ベースラインまたは前回の平均スコアまたは評価から、平均スコアまたは評価が約0.1向上することである。さらに、改善とは、ベースラインからの変化が60のうち少なくとも1レベルであることをいう。
特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、PR−CISで測定した以下の有効性評価項目の1つ以上が得られる:
1.セルライトを有する患者集団において、少なくとも1回の治療訪問時に少なくとも1つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の1つ以上を満たす:
●PR−CISは、セルライトの見た目に対する満足度、気になること、自覚、恥ずかしさ、老けて見えること、太って見えること/体型が崩れて見えることからなる群から選択された少なくとも1つの分野において改善を示すこと。
●1つ以上の評価時点で、PR−CISトータルスコアがベースラインから12以上低下すること。
●PR−CISインパクトスコアが、1つ以上の評価時点において、ベースラインから少なくとも2スコア間隔の改善を示すこと。
●改善とは、ベースラインからの変化が60のうち少なくとも1レベルであること。
2.治療領域のPR−CISにおいて、22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または、5年目に、ベースライン(治療前の「1日目」)から少なくとも12ポイントの重症度の改善が認められること。
3.セルライトを有する患者集団において、治療領域のPR−CISで、ベースライン(治療前の第1日目)から22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目に、重症度がプラセボに対して統計的に有意に少なくとも12ポイント改善すること。
4.初回投与後、少なくとも5%の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを71日以上維持するという結果が得られた。特定のケースでは、少なくとも10%、または20%、または30%、または、40%、または50%の患者が、初回投与後、少なくとも6ヶ月、または9ヶ月、または12ヶ月、または18ヶ月、または2年、または3年、または4年、または5年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも5%の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、初回治療、2回目の治療、3回目の治療の1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、さらに改善が見られた。
5.180日目に、ベースラインからのPR−CIS評価の改善が、治療領域の左右で一貫して見られた。
6.セルライトを有する患者集団において、少なくとも1つの治療領域について、1つ以上の評価時点でPR−CISトータルスコアがベースラインから少なくとも12減少するまでの時間の中央値は、約15日、または20日、または30日、または40日、または50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
7.セルライトを有する患者集団において、初回治療の21日後に被験者のPR−CISスコアの平均値がプラセボから分離し、その後の治療でも継続的かつ有意な改善を示す。8.セルライトを有する患者集団において、3分の1以上、または2分の1以上、または3分の2以上、または4分の3以上の患者が、治療後71日目までに、少なくとも1つの治療領域において、1つ以上の評価時点でベースラインから少なくとも12のPR−CISトータルスコアの減少を有し、PR−CISの結果は、年齢、BMIまたは肌の色に依存しない。
9.セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約7、または14、または21、または30、または35、または40、または45、または50日以内に急速に起こる。
10.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度の患者集団において、71日目のPR−CISトータルスコアのベースラインからの平均変化量は、コラゲナーゼ治療を受けた被験者では約−10、プラセボ治療を受けた被験者では約−5であった。
11.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度の患者集団において、71日目のベースラインからのPR−CIS変化量の平均値は、トータルスコア(それぞれ約−12対−6)および短縮スコア(それぞれ約−10対5)、ならびに個人のインパクトスコア(セルライトの外観に対する満足度、煩わしさ、自意識、恥ずかしさ、老けた外観、体型への懸念)において、コラゲナーゼ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者で統計的に有意に良好であった。
12.71日目にCR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度である患者集団において、PR−CISの奏効者の割合は、コラゲナーゼを投与された被験者の方が、プラセボを投与された被験者よりも、トータルスコア(それぞれ約45%対約20%)および短縮スコア(それぞれ約50%対約25%)で大きくなった。さらに、個々のインパクトスコアについても、プラセボ投与群よりもコラゲナーゼ投与群の方が、回答者の割合が多かった。これらの差も統計的に有意であった。
別の実施形態では、少なくとも1回の治療訪問中に、約1mg〜約20mgのコラゲナーゼを少なくとも1つの治療領域に注射することにより、上記の結果No.1〜12のうち1つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち1つ以上を有するものである:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
他のケースでは、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注射により、上記の結果No.1〜12のうちの1つ以上が得られる。
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注入により、上記の結果No.1〜12のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのCCHの注射により、上記の結果No.1〜12のうち1つ以上の結果が得られる。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが、少なくとも1回の治療訪問中に少なくとも1つの治療領域に注入され、上記の結果No.1〜12のうちの1つ以上が得られ、ここで、コラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが治療Iを採用して注射され、上記の結果No.1〜12のうちの1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
実施例2および3でさらに説明したように、CCH対プラセボのPR−CISを用いて、治療後の患者の改善度をベースラインと比較して評価した。図11に示すように、CCHによる治療は、プラセボよりも有意に良好であった。
8.PR−CIS省略形で測定された有効性
上記の治療方法により、PR−CIS省略形で測定される応答が改善される。PR−CIS省略形のトータルスコアは、尺度の5つの項目の合計になる。PR−CIS省略形のトータルスコアは0〜50の範囲で、数値が高いほどセルライトによる悪影響が大きいことを示している。PR−CISの項目1は、セルライトの出現について被験者がどの程度満足しているかを問うものであり、被験者が報告した評価を10から引くことで逆転する。PR−CIS省略形トータルスコアでは、評価時点でPR−CISトータルスコアがベースラインから10以上減少した被験者を応答者とする。個々のPR−CIS省略形インパクトスコアについては、各時点でベースラインから少なくとも2つのスコア間隔で改善した場合を応答とする。さらに、応答者とは、最大トータルスコアがベースラインから少なくとも20%の改善を示した患者を指す。また、個々の患者については、ベースラインまたは前回のスコアから少なくとも1レベルまたは1評価の改善が見られた場合をいう。また、患者群の改善とは、ベースラインまたは前回の平均スコアまたは評価から、平均スコアまたは評価が約0.1向上することである。さらに、改善とは、ベースラインからの変化が50のうち少なくとも1レベルであることをいう。
特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、PR−CIS省略形で測定した以下の有効性評価項目の1つ以上が得られる:
1.セルライトを有する患者集団において、少なくとも1回の治療訪問時に少なくとも1つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の1つ以上を満たす:
●PR−CIS省略形では、セルライトの見た目に対する満足度、気になること、自覚、恥ずかしさ、老けて見えること、太って見えること/体型が崩れて見えることからなる群から選択された少なくとも1つの分野において改善を示すこと。
●1つ以上の評価時点で、PR−CIS省略形の合計スコアがベースラインから10以上低下すること。
●PR−CIS省略形インパクトスコアが、1つ以上の評価時点において、ベースラインから少なくとも2スコア間隔の改善を示すこと。
●さらに、改善とは、ベースラインからの変化が50のうち少なくとも1レベルであること。
2.治療領域のPR−CIS省略形において、22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目に、ベースライン(治療前の「1日目」)から少なくとも12ポイントの重症度の改善が認められること。
3.セルライトを有する患者集団において、治療領域のPR−CIS省略形において、ベースライン(治療前の第1日目)から22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目に、重症度がプラセボに対して統計的に有意に少なくとも10ポイント改善すること。
4.初回投与後、少なくとも5%の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを71日以上維持するという結果が得られた。特定のケースでは、少なくとも10%、または20%、または30%、または、40%、または50%の患者が、初回投与後、少なくとも6ヶ月、または9ヶ月、または12ヶ月、または18ヶ月、または2年、または3年、または4年、または5年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも5%の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、初回治療、2回目の治療、3回目の治療の1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、さらなる改善が見られた。
5.180日目において、PR−CIS省略形評価のベースラインからの改善は、治療領域の左右で一貫して見られた。
6.セルライトを有する患者集団において、少なくとも1つの治療領域について、1つ以上の評価時点でPR−CIS省略形のトータルスコアがベースラインから少なくとも10減少するまでの時間の中央値は、約15日、または20日、または30日、または40日、または50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
7.セルライトを有する患者集団において、初回治療の21日後に被験者のPR−CIS省略形スコアの平均値がプラセボから分離し、その後の治療でも継続的かつ有意な改善を示す。
8.セルライトを有する患者集団において、3分の1以上、または2分の1以上、または3分の2以上、または4分の3以上の患者が、治療後71日目までに、少なくとも1つの治療領域において、1つ以上の評価時点でベースラインから少なくとも10のPR−CIS略式トータルスコアの減少を有し、PR−CISの結果は、年齢、BMIまたは肌の色に依存しない。
9.セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約7、または14、または21、または30、または35、または40、または45、または50日以内に急速に起こる。
10.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度の患者集団において、71日目のPR−CIS省略形トータルスコアのベースラインからの平均変化量は、コラゲナーゼ治療を受けた被験者では約−10、プラセボ治療を受けた被験者では約−5であった。
11.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度の患者集団において、71日目のベースラインからのPR−CIS省略形の変化の平均値は、コラゲナーゼ治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者とでは、トータルスコア(それぞれ約−12対約−6)および略式スコア(それぞれ約−10対約5)において統計的に有意に良好であった。また、個々のインパクトスコア(セルライトの外観に対する満足度、煩わしさ、自覚、恥ずかしさ、老けた外観、体型への懸念)においても、コラゲナーゼ投与群とプラセボ投与群の間で統計的に有意な変化が認められた。
12.71日目にCR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度である患者集団において、PR−CIS略式化反応者の割合は、コラゲナーゼを投与された被験者の方が、プラセボを投与された被験者よりも、トータルスコア(それぞれ約45%対20%)および略式スコア(それぞれ約50%対25%)で大きくなりた。さらに、個々のインパクトスコアについても、プラセボ投与群よりもコラゲナーゼ投与群の方が、回答者の割合が多かった。これらの差も統計的に有意であった。
別の実施形態では、少なくとも1回の治療訪問中に、約1mg〜約20mgのコラゲナーゼを少なくとも1つの治療領域に注射することにより、上記の結果No.1〜12のうち1つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち1つ以上を有するものである:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
他のケースでは、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注射により、上記の結果No.1〜9のうちの1つ以上が得られる。
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注入により、上記の結果No.1〜12のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのCCHの注射により、上記の結果No.1〜12のうち1つ以上の結果が得られる。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが、少なくとも1回の治療訪問中に少なくとも1つの治療領域に注入され、上記の結果No.1〜12のうちの1つ以上が得られ、ここで、コラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが治療Iを採用して注射され、上記の結果No.1〜12のうちの1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
9.被験者自己評価尺度(SSRS)で測定された有効性
以上のような治療方法により、SSRSで測定される改善効果が得られた。SSRS応答者とは、評価時点で患部のセルライトの外観に少なくともやや満足(やや満足[4]、非常に満足[5]、または極めて満足[6])している被験者のことである。さらに、ベースラインから最大トータルスコアが17%以上改善した患者を応答者とする。任意の訪問時における個々の患者の改善とは、ベースラインまたは前回のスコアから少なくとも1レベルまたは1評価の改善を意味する。任意の訪問時の患者群の改善は、ベースラインまたは任意の以前の平均スコアまたは評価から、平均スコアまたは評価が約0.1の改善である。特定の実施形態では、治療方法は、SSRS評価によって測定される以下の有効性評価項目の1つ以上をもたらす:
1.セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1回の治療訪問時に少なくとも1つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の1つ以上を満たすことができる:
●「やや満足」のSSRS評価
●「満足」のSSRS評価
●「極めて満足」のSSRS評価
2.ベースライン(治療前の「1日目」)から22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目に、治療領域のSSRS評価が少なくとも2レベル改善すること。
3.ベースライン(1日目)から22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目に、治療領域のSSRS評価が少なくとも1レベル改善すること。
4.セルライトを有する患者集団において、少なくとも1つの治療領域におけるSSRS評価の改善が、プラセボと比較して統計的に有意であり、その改善が上記のNo.2〜No.3のうちの1つ以上であること。
5.初回投与後、少なくとも5%の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを少なくとも71日間維持するという治療結果が得られた。特定のケースでは、少なくとも10%、または20%、または30%、または、40%、または50%の患者が、初回投与後、少なくとも6ヶ月、または9ヶ月、または12ヶ月、または18ヶ月、または2年、または3年、または4年、または5年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも5%の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、初回治療、2回目の治療、3回目の治療の1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、さらに改善が見られた。
6.初回注射後180日目に、SSRS評価のベースラインからの改善は、治療領域の左右で一貫して見られた。
7.セルライトを有する患者集団において、少なくとも1つの治療領域で最も早い2レベルのSSRS評価の改善までの時間の中央値は、約50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
8.セルライトを有する患者集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早い1レベルのSSRS評価の改善までの時間の中央値は、約15日、または20日、または30日、または40日、または50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
9.セルライトを有する患者集団において、初回治療の21日後に被験者のSSRS評価の平均値がプラセボから分離し、その後の治療でも継続的かつ有意な改善を示す。
10.セルライトを有する患者集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域でSSRS評価によって測定される2レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%、または50%より大きい。
11.セルライトを有する患者集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域でSSRS評価により測定される1レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%、または50%より大きい。
12.セルライトを有する患者集団において、3分の1以上、または2分の1以上、または3分の2以上、または4分の3以上の患者が、治療後71日目までに少なくとも1つの治療領域で少なくとも1レベルのSSRS評価応答を有し、SSRS評価結果は、年齢、BMI、または肌の色とは無関係である。
13.セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約7、または14、または21、または30、または35、または40、または45、または50日以内に急速に起こる。
14.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度である患者集団において、71日目に少なくとも40%の患者が1レベルのSSRS応答者となった。
15.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度である患者集団において、71日目で、SSRSスコアの平均値は、コラゲナーゼを投与した被験者がプラセボを投与した被験者よりも統計的に有意に大きい。
16.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度の患者集団において、少なくとも50%の患者が1レベルのSSRS応答者である。
別の実施形態では、少なくとも1回の治療訪問中に、約1mg〜約20mgのコラゲナーゼを少なくとも1つの治療領域に注射することにより、上記の結果No.1〜16のうち1つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち1つ以上を有するものである:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
他のケースでは、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注射により、上記の結果No.1〜16のうちの1つ以上が得られる。
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注射により、上記の結果No.1〜16のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのCCHの注射により、上記の結果No.1〜16のうち1つ以上の結果が得られる。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが、少なくとも1回の治療訪問中に少なくとも1つの治療領域に注入され、上記の結果No.1〜16のうちの1つ以上が得られ、ここで、コラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが治療Iを採用して注入され、上記の結果No.1〜16のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
10.セルライト治療に対する被験者の満足度(SSCT)で測定される有効性
上記に詳述された治療方法により、SSCTで測定された改善が得られる。71日目のSSCT評価で「満足」または「非常に満足」の回答を得た被験者は、有効性を示す応答者とみなされる。個々の患者の改善とは、ベースラインまたは前回のスコアや評価から少なくとも1レベルまたは1評価の改善を意味する。また、患者群の改善とは、ベースラインまたはそれ以前の平均スコアまたは評価から、平均スコアまたは評価が約0.1ポイント改善したことをいう。さらに、SSCTでは、プラセボと比較して少なくとも0.1の改善がある。特定の実施形態では、治療方法は、SSCT評価によって測定される以下の有効性評価項目の1つ以上をもたらす:
1.セルライトを有する患者の集団において、少なくとも1回の治療訪問時に少なくとも1つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の1つ以上を満たすことができた:
●「満足」のSSCT評価
●「非常に満足」のSSCT評価
2.治療領域の22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目におけるSSCT評価の上昇(例えば、1から2など)。
3.セルライトを有する患者集団において、少なくとも1つの治療領域におけるSSCT評価の増加が、プラセボと比較して統計的に有意であり、その改善が22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、5年目のいずれかの時点であったことが確認された。
4.この治療法により、少なくとも5%の患者が初回投与後71日間、その改善レベルを維持した。特定のケースでは、少なくとも10%、または20%、または30%、または、40%、または50%の患者が、初回投与後、少なくとも6ヶ月、または9ヶ月、または12ヶ月、または18ヶ月、または2年、または3年、または4年、または5年の間、そのようなレベルを維持した。他のケースでは、少なくとも5%の患者が改善を示し、時間の経過とともに改善の度合いがさらに高まった。ある治療法では、初回投与から1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、初回治療、2回目の治療、3回目の治療の1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、さらなる改善が見られた。
5.180日目の時点で、SSCT評価で見られた改善は治療領域の左右で一貫している。
6.セルライトを有する患者集団において、少なくとも1つの治療領域における最も早いSSCT評価の改善までの時間の中央値は、約15日、または20日、または30日、または40日、または50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
7.セルライトを有する患者集団において、平均的な被験者のSSCT評価は、最初の治療の21日後にプラセボと分離し、その後の治療でも継続的かつ有意な改善を示す。
8.セルライトを有する患者集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域でSSCT評価が改善された被験者の割合は、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%、または50%よりも大きい。
9.セルライトを有する患者集団において、治療後71日目までに、患者の3分の1以上、または2分の1以上、または3分の2以上、または4分の3以上が、少なくとも1つの治療領域において改善されたSSCT評価を有し、SSCT評価の結果は、年齢、BMI、または肌の色とは無関係である。
10.セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約7、または14、または21、または30、または35、または40、または45、または50日以内に急速に起こる。
11.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSの評価が中等度または重度である患者集団において、180日目に半数以上の患者が治療に満足または非常に満足している。
12.CR−PCSSおよびPR−PCSS評価が中等度または重度の患者集団において、180日目に持続したCR−PCSSおよびPR−PCSS評価の低下と被験者満足度調査のスコアは、0.84mg CCHを1治療あたり12回(×2治療領域)、両側の臀部または両側の大腿部に皮下注射する3つの治療セッションがセルライトの減少に有効であることを示している。
13.CR−PCSSおよび/またはPR−PCSS評価が中等度または重度の患者集団において、コラゲナーゼによる治療を受けた患者の少なくとも50%が、セルライト治療に満足または非常に満足している。
14.CR−PCSSおよびPR−PCSSの評価が中等度または重度の患者集団において、71日目の被験者満足度の平均値に、コラゲナーゼ治療群とプラセボ治療群の間に統計的に有意な差が認められた。
別の実施形態では、少なくとも1回の治療訪問中に、約1mg〜約20mgのコラゲナーゼを少なくとも1つの治療領域に注射することにより、上記の結果No.1〜14のうち1つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうち1つ以上を有するものである:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
他のケースでは、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注入により、上記の結果No.1〜14のうちの1つ以上が得られる。
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注入により、上記の結果No.1〜14のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのCCHの注射により、上記の結果No.1〜14のうち1つ以上の結果が得られる。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが、少なくとも1回の治療訪問中に少なくとも1つの治療領域に注入され、上記の結果No.1〜14のうちの1つ以上が得られ、ここで、コラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが治療Iを採用して注射され、上記の結果No.1〜14のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
11.大腿部セルライト重症度−患者(TCS−P)、大腿部セルライト重症度−臨床医(TCS−C)で測定される有効性
任意の訪問時における個々の患者の改善とは、ベースラインまたは前回のスコアもしくは評価から少なくとも1レベルまたは1等級の改善を意味する。患者群の改善とは、ベースラインまたは前回の平均スコアまたは評価から、平均スコアまたは評価が約0.1向上したことをいう。応答者とは、ベースラインから最大合計スコアまたは評価の少なくとも20%の改善を示す任意の患者である。特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、TCS−Cおよび/またはTCS−Pによって測定される以下の有効性評価項目の1つ以上が得られる:
1.TCS−Cおよび/またはTCS−Pの評価がベースラインと比較して0.1以上改善していること。
2.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目において、標的大腿部の臨床医がライブで評価したTCS−Cの重症度が少なくとも2レベル改善すること。
3.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目において、標的大腿部のデジタル画像を見ながら被験者が評価したTCS−Pの重症度が、ベースライン(1日目)から少なくとも2レベル改善すること。
4.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目に2レベルの複合応答で示された改善とは、TCS−Cでベースラインから少なくとも2レベルの重症度の改善があり、TCS−Pでベースラインから少なくとも2レベルの重症度の改善があった被験者と定義される。
5.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目において、標的大腿部の臨床医がライブで評価したTCS−Cの重症度が、ベースライン(1日目)から少なくとも1レベル改善すること。
6.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目において、対象の大腿部のデジタル画像を見ながら被験者が評価したTCS−Pの重症度が、ベースライン(1日目)から少なくとも1レベル改善すること。
7.22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目に1レベルの複合応答で示された改善とは、TCS−Cでベースラインから少なくとも1レベルの重症度の改善があり、TCS−Pでベースラインから少なくとも1レベルの重症度の改善があった被験者と定義される。
8.TCS−C評価が中等度または重度の患者集団において、少なくとも1つの治療領域での改善がプラセボと比較して統計的に有意であり、その改善が上記のNo.1〜7の1つ以上であること。
9.初回投与後、少なくとも5%の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを少なくとも71日間維持するという結果が得られた。特定のケースでは、少なくとも10%、または20%、または30%、または、40%、または50%の患者が、初回投与後、少なくとも6ヶ月、または9ヶ月、または12ヶ月、または18ヶ月、または2年、または3年、または4年、または5年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも5%の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、初回治療、2回目の治療、3回目の治療の1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、さらに改善が見られた。
10.180日目に、ベースラインからのTCS−Cおよび/またはTCS−P評価の改善が、左右の大腿部で一貫して見られた。
11.TCS−C評価が中等度または重度の患者集団において、少なくとも1つの治療領域で最も早く2レベルのTCS−Cおよび/またはTCS−Pの改善が得られるまでの時間の中央値は、約50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
12.TCS−C評価が中等度または重度である患者集団において、少なくとも1つの治療領域において、最も早い1レベルのTCS−Cおよび/またはTCS−Pの改善までの時間の中央値は、約15日、または20日、または30日、または40日、または50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
13.TCS−C評価が中等度または重度の患者集団において、初回治療の21日後に被験者のTCS−Cおよび/またはTCS−Pスコアの平均値がプラセボと比較して分離し、その後の治療で継続的かつ有意な改善を示した。
14.TCS−C評価が中等度または重度の患者集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域でTCS−Cおよび/またはTCS−Pによって測定される2レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%、または50%より大きい。
15.TCS−C評価が中等度または重度の患者集団において、71日目に少なくとも1つの治療領域でTCS−Cおよび/またはTCS−Pによって測定される1レベルの複合応答を有する被験者の割合は、約1%〜10%、10%〜20%、20%〜30%、30%〜40%、40%〜50%、または50%より大きい。
16.全員が中等度または重度のTCS−C評価を有する患者の集団において、治療後71日目までに少なくとも1つの治療領域で少なくとも1レベルのTCS−Cおよび/または少なくとも1レベルのTCS−P応答を有する患者の3分の1以上、または2分の1以上、または3分の2以上、または4分の3以上が、TCS−Cの結果が年齢、BMI、または肌の色とは無関係である。
17.セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約7、または14、または21、または30、または35、または40、または45、または50日以内に急速に起こる。
別の実施形態では、少なくとも1回の治療訪問中に、約1mg〜約20mgのコラゲナーゼを少なくとも1つの治療領域に注射することにより、上記の結果No.1〜17のうちの1つ以上が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特性のうちの1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
他のケースでは、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注射により、上記の結果No.1〜17のうちの1つ以上が得られる。
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注射により、上記の結果No.1〜17のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうち1つ以上を有する:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのCCHの注射により、上記の結果No.1〜17のうち1つ以上の結果が得られる。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが、少なくとも1回の治療訪問中に少なくとも1つの治療領域に注射され、上記の結果No.1〜17のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが治療Iを採用して注射され、上記の結果No.1〜17のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
12.Body−Qで測定された有効性
上記の治療法により、Body−Qで測定される応答が改善される。セルライトについては、過去1週間の間に「全く気にならない」から「非常に気になる」までの範囲で患者が回答できる16の尺度の項目があり、フレッシュ・キンケイド級の読解力を想定している。スコアの範囲は、16(非常に気になる)から64(全く気にならない)までである。Body−Qトータルスコアでは、評価時点でBody−Qトータルスコアがベースラインから16以上増加した被験者を応答者とする。個々のBody−Qインパクトスコアについては、各時点でベースラインから少なくとも1つのスコア間隔の改善があることが応答である。代替的な実施形態では、尺度項目は16より多くても少なくてもよく、応答者は、ベースラインから最大トータルスコアの少なくとも25%の改善を示す任意の患者である。
特定の実施形態では、上記で詳述した治療方法により、Body−Qで測定した以下の1つ以上の有効性評価項目が得られる:
1.セルライトを有する患者集団において、少なくとも1回の治療訪問時に少なくとも1つの治療領域にコラゲナーゼを注射することにより、統計的に有意な数の当該患者が以下の有効性評価項目の1つ以上を満たす:
● Body−Qは、以下からなる群から選択された少なくとも1つの分野で改善を示す:
〇 1つ以上の評価時点で、Body−Qのトータルスコアがベースラインから16以上増加すること
〇 個々のBody−Qインパクトスコアについて、各時点でベースラインから少なくとも1つのスコア間隔の改善があること、および
〇 最大トータルスコアがベースラインから少なくとも25%改善すること。
● 1つ以上の評価時点において、Body−Qのトータルスコアがベースラインから16以上増加する。
● 1つ以上の評価時点で、Body−Qインパクトスコアがベースラインから少なくとも1スコア間隔の改善を示す。
● 90日目および/または180日目のセルライトに関するBody−Q評価のベースラインからの平均変化
2.ベースライン(治療前の「1日目」)から22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目に、標的臀部のBody−Qにおいて少なくとも16ポイント増加という重症度の改善。
3.セルライトを有する患者集団において、ベースライン(治療前の1日目)から22日目、43日目、71日目、90日目、180日目、251日目、360日目、431日目、720日目、3年目、4年目、または5年目に、標的臀部のBody−Qにおいて少なくとも16ポイント増加することによって示される、プラセボに対する重症度の統計学的に有意な改善。
4.初回投与後、少なくとも5%の患者が治療前のベースラインに対する改善レベルを71日以上維持するという結果が得られ た。特定のケースでは、少なくとも10%、または20%、または30%、または、40%、または50%の患者が、初回投与後、少なくとも6ヶ月、または9ヶ月、または12ヶ月、または18ヶ月、または2年、または3年、または4年、または5年の間、そのようなレベルを維持した。その他のケースでは、治療前のベースラインに対して少なくとも5%の患者が改善を示し、さらに時間の経過とともに改善の度合いが増加するという結果が得られた。ある治療法では、初回投与から1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、さらに改善の増加が見られた。いくつかの治療法では、少なくとも10%、20%、30%、40%、50%の患者が改善を示し、初回治療、2回目の治療、3回目の治療の1ヶ月後、3ヶ月後、6ヶ月後、9ヶ月後、12ヶ月後、18ヶ月後、24ヶ月後に、さらに改善が見られた。
5.最初の注射から180日目に、ベースラインからのBody−Q評価の 改善は、左右の臀部で一貫して見られた。
6.セルライトを有する患者集団において、少なくとも1つの治療領域について、1つ以上の評価時点でベースラインからBody−Qトータルスコアが少なくとも16増加するまでの時間の中央値は、約15日、または20日、または30日、または40日、または50日、または60日、または70日、または80日、または90日である。
7.セルライトを有する患者集団において、初回治療の21日後に被験者の平均Body−Qスコアがプラセボから分離し、その後の治療でも継続して有意な改善を示す。
8.セルライトを有する患者集団において、3分の1以上、または2分の1以上、または3分の2以上、または4分の3以上の患者が、治療後71日目までに、少なくとも1つの治療領域において、1つ以上の評価時点でベースラインから少なくとも16のBody−Qトータルスコアの増加を有し、Body−Qの結果は、年齢、BMI、または肌の色とは無関係である。
9.セルライトの重症度の減少は最初の治療訪問の後の約7、または14、または21、または30、または35、または40、または45、または50日以内に急速に起こる。
別の実施形態では、少なくとも1回の治療訪問中に、約1mg〜約20mgのコラゲナーゼを少なくとも1つの治療領域に注射することにより、上記の結果No.1〜9のうち1つ以上が得られ、ここで、コラゲナーゼは以下の特性のうち1つ以上を有するものである:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
他のケースでは、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注射により、上記の結果No.1〜9のうちの1つ以上が得られる。
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのコラゲナーゼの注射により、上記の結果No.1〜9のうちの1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼは以下の特徴のうちの1つ以上を有している:
● 約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1
● 約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
● 約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1
● 約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒
● 約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
● 約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量
● 逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度は少なくとも80%
● 約500〜30,000個のSRC単位/mgの力価(すなわち、比活性)
● 約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価
● 約100,000〜約400,000GPA単位/mgの力価
● 約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価
● 約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価
● クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下
● 1cfu/mL以下のバイオバーデン
別の例では、治療Iによる約1mg〜約20mgのCCHの注射により、上記の結果No.1〜9のうち1つ以上の結果が得られる。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが、少なくとも1回の治療訪問中に少なくとも1つの治療領域に注射され、上記の結果No.1〜9のうちの1つ以上が得られ、ここで、コラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
特定の実施形態では、約1mg〜約20mgの約1:1の比率のI型コラゲナーゼおよびII型コラゲナーゼが治療Iを採用して注射され、上記の結果No.1〜9のうち1つ以上の結果が得られ、ここでコラゲナーゼIおよびIIは以下の特徴を有する:
● I型
〇 アッセイ:SRCマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.08〜7.70
〇 K:約4.1〜410ナノモル
〇 Kcat、秒−1:約1.1〜107
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
〇 Kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
● II型
〇 アッセイ:GPAマイクロプレート
〇 Vmax、分−1:約0.3〜30.5
〇 K、mM:約0.03〜3.1
〇 Kcat、秒−1:約93〜9,179
〇 1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
〇 Kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
他の比率を採用してもよい(例えば、0.1〜2:1、または0.25〜2:1、または0.5〜2:1、または0.75〜2:1、または1:0.1〜2、または1:0.25〜2、または1:0.5〜2、または1:0.75〜2、または1:0、または0:1)。さらに、I型およびII型コラゲナーゼは、それぞれAUX−IおよびAUX−IIであってもよい。
13.3D写真/画像で測定される治療効果の評価
導入 3D写真やその他の画像は、治療効果の評価、特に陥凹部分析やあざの分析に使用することができる。3D画像を用いたくぼみ分析(上記で定義)は、くぼみの体積、長さ、幅、および面積の計算を含むことができる。計算は、EckhouseらのWO2018/116304およびWO2018/116305、Cherry Imagingに記載されているものや、Canfield Scientific,Inc.から入手可能なものなど、様々な既知の方法によって行うことができる。体積、長さ、幅、および面積のそのような測定値は、デジタル3Dグレー尺度画像(XおよびY軸回転機能付き)およびデジタル3Dテクスチャおよび照明付き画像(XおよびY軸回転機能付き)を、そのような画像を分析するコンピュータプログラムとともに使用して計算されてもよい。一実施形態では、臀部の治療領域について、治療前および治療後の各患者について、左の治療された臀部および/または右の治療された臀部の画像を撮影してもよい。別の実施形態では、大腿部の治療領域について、治療の前後に、被験者の後面、斜面、および側面の大腿部の治療領域のそれぞれについて、例えば0度、45度、および90度で画像を撮影してもよい。
臨床医および患者は、本明細書に記載されている尺度および他のツールを使用してもしなくても、写真および画像ツールを使用してセルライトの重症度を評価することができる。一実施形態では、臨床医/調査員または資格のある被指名人が、供給された標準化された3Dカメラを用いて、標準化された方法で各治療領域(例えば、各臀部または各大腿部)を撮影する。被験者は、撮影セッションごとに立ち、標準化された撮影用衣服を着用する。臨床医/調査員または資格のある被指名人は、被験者が一貫した標準化されたリラックスしたポーズで立っている間に、2つの治療領域(例えば、2つの臀部または2つの大腿部)のそれぞれを撮影する。これらの写真および上述の画像は、後述の有効性分析に使用することができる。方法論に関する追加の非限定的かつ任意の詳細は、以下に記載されている。
3D写真による画像解析 3D写真による画像解析。治療効果の評価は3D写真によって行われる。治験責任医師または資格のある被指名人が、標準化されたデジタルカメラを用いて、注射前の各治療領域(両臀部または両大腿部)を標準化された方法で撮影し、治療日1日目、22日目、および43日目に陥凹部と注射部位をマーキングする前と後に撮影する。スクリーニングおよびその他の非投与時には、各治療領域の写真を1セット撮影する。4日目、8日目、15日目、22日目、43日目、および71日目(研究終了/ET)に撮影された写真は、治療群と研究訪問日が知らされていない中央評価者によってレビューされる。
あざ、体積、表面積、最大の長さ/幅を評価するために使用される標準的な画像解析(IA)の手順を以下に説明する。カメラシステムは、カスタム照明、Vectra M1カメラ、およびCanfield Captureソフトウェア(v.3.5)を備えたCanfield Scientificから入手可能なIntelliStudioである場合がある。画像タイプ、属性、ビュー、および訪問ウィンドウは、デジタルモニタリングシステム(DMS)に直接定義され、入力される。DMSで設定した研究内容は以下の通りである。
Figure 2022502478
画像はDMSに取り込まれてステージングされ、レビューに利用できる。写真の訪問には以下が含まれる:スクリーニング、1日目/プレマーキング、1日目/ポストマーキング、4日目、8日目、15日目、22日目/プレマーキング、22日目/ポストマーキング、43日目/プレマーキング、43日目ポストマーキング、71日目/ET。
陥凹部分析:画像を確認し、各象限で指示された通りに主な陥凹部に「X」マークが付けられていることを確認する。主な陥凹部がマークされていない場合は、次の手順を実行する:
1.画像と配置画像をパワーポイントに書き出す。
2.サイトに連絡し、サイトの調査員にパワーポイント内の画像にXで主な陥凹部をマークするように依頼する。
3.通信文が保存され、画像解析(IA)チームと共有される。
陥凹部分析は、1日目(プレマーキング)、22日目、43日目、および71日目に実施される。22日目、43日目、および71日目に、陥凹部分析パラメータ、最大長、最大幅、表面積、および陥凹部ベースと補間表面との間の体積について、観察されたものと1日目のプレマーキング画像からの変化を、記述統計学を用いて治療領域および注入タイプ別にまとめる(例示的な陥凹部分析が図19(A)〜図19(C)に描かれている)。また、体積は、線形モデルを用いて解析される。
画像解析技術者(IAT)は、1日目のポストマーキング画像を参考にして、1日目のプレマーキング画像上で標的陥凹部の位置を決定する。1日目のプレマーキング画像上の陥凹部の凹みの境界をトレースする。この陥凹部のトレースを22日目のプレマーキング、43日目のプレマーキング、71日目のETの各画像に転写する。このトレースは、(i)最大長(すなわち、陥凹部を横切る最長の直線距離)、(ii)最大幅(すなわち、最大長の測定値に垂直な最長の直線距離)、(iii)陥凹部の表面積、および(iv)陥凹部の底面と補間表面との間の体積を測定するために使用される。
あざ分析:画像を確認して、各画像に白い参照ラベルが存在し、あざの領域の外側にあることを確認する。参照ラベルが存在しない場合や、あざの部分を妨げている場合は、その訪問時に該当する場合は再撮影が要求される。あざ分析は、1日目(プレマーキング)、4日目、8日目、および15日目に行われる。
サイトマーキング分析:1日目のマーキング後の訪問時に陥凹部がマークされているかどうかを画像で確認する。陥凹部がマークされていない場合は、その訪問時に必要に応じて再撮影を依頼する。
画像解析(IA)のワークフロー:解析対象として選択されたすべての画像には、ランダムなトラッキング番号が割り当てられ、これにより画像解析技術者(IAT)は、治験施設、被験者の第二識別子、治療群などの情報を把握することができる。特定の訪問時に実行される分析手順は、訪問時の名前に基づいて事前に決定される。陥凹部分析は、事前に特定された主要な陥凹部に対して行われ、体積、表面積、最大長/幅の測定が行われる。あざ分析には、あざと思われる部分のL色の測定値と、あざと思われる部分の外側の影響を受けていない皮膚の測定値が含まれる。サイトマーキング分析では、トレースの表面積測定に加えて、最大長/幅の測定を行う。
画像登録:IATは、第1日目のプレマーキング(ベースライン)検査を受けると、Vectra Analysis Module(VAM)ソフトウェアでプレマーキング画像を開き、3D空間のグリッドに合わせて画像の中心を決める。IATは、グリッドを基準にして、ベースライン画像を配置し、画像のほぼ中央がグリッドの原点にくるようにする。大腿部/臀部は+z方向に正面を向き、大腿部/臀部の上部は+y方向に、大腿部/臀部の下部は−y方向に向いている(図13)。1日目のマーキング後の画像を含め、それ以降のすべての時点は、アルゴリズムによる登録機能を使ってグリッド内のベースライン画像の位置に登録される。
VAMでは、IATがレジストレーションを確認するために使用する距離ごとの色マップが作成される。距離ごとの色マップは、2つの画像モデル間の距離を、+5〜−5mmの色尺度で表している(図14)。IATは、画像の大部分が緑色に着色されていることを確認し、2つの画像間の距離がごくわずかであること、および2つの画像が適切に配置されていることを示す。
Figure 2022502478
表面トラッキング処理:画像登録後、1日目(プレマーキング)、4日目、8日目、15日目、22日目、43日目、および71日目の各画像に表面トラッキング処理を施す。IATはまず、スクリプトを使用して、1日目のベースライン画像の高密度メッシュテンプレートを作成する。フォローアップ画像を1枚ずつ、ベースライン画像とメッシュテンプレートとともにVAMソフトウェアで開く。トラッキングシードランドマークを、基準となる識別可能な皮膚の特徴に配置する。トラッキングスクリプトを実行し、3つの新しい3D画像、トラッキングされたベースライン画像、トラッキングされたフォローアップ画像、およびトラッキングされたフォローアップ画像の形状でありトラッキングの質に関する情報を伝える品質管理(QC)画像をプログラムで作成および保存する。
品質チェックIATは、トラッキングされたフォローアップ画像とQC画像の品質を確認し、トラッキングが成功したことを検証する。陥凹部分析を行った場合、IATはトラッキングされたフォローアップ画像の上にQC画像を重ね合わせ、主な陥凹部の領域にQC画像上の大きな穴がないことを確認する。QC画像のメッシュに穴が開いていると、ドロップアウトの領域でトラッキング情報が失われていることになる。IATは、解析対象領域内で情報が失われたことによりトラッキングが受け入れられないと判断した場合、トラッキングシードランドマークを調整し、トラッキングスクリプトを再度実行する。IATは、まぶしさ、深い影、衣服による皮膚の跡、被写体の位置の大きな変化、皮膚の色素の大きな変化などに起因する、表面のトラッキング品質の低下が避けられない場合を指摘している。QC画像のメッシュに穴が開くのは、強いあざがある場合である。
主要な陥凹部関心領域(AOI)の描写:表面トラッキングが成功した後、IATはトラッキングしたベースライン画像を開き、VAMに1日目−ポストマーキング画像を登録する。1日目−ポストマーキング画像上で、IATは主要な陥凹部サイトマーキングの外側の境界をトレースする。このトレースは、陥凹部サイトの表面積、陥凹部サイトを横切る最大軸(最大陥凹部長さ)、およびその最大垂直軸の長さ(最大陥凹部幅)を測定するために使用される。このトレースは、陥凹部やあざ分析においてAOIを描写するためには使用されない。主な陥凹部がサイトによって特定されない場合、IATは彼/彼女が最大であると認識した陥凹部をトレースする。
IATは、1日目−ポストマーキング画像を参考にして、1日目−プレマーキング画像上で標的陥凹部の位置を確認する。次にIATは、トラッキングされたプレマーキング画像上で、主要な陥凹部の境界をトレースする。必要に応じてトレースを調整し、陥凹部が凹んだ隆起部のすぐ外側になるようにして、陥凹部分析のための主要な陥凹部のAOIを画定する。(図15)。トラッキングされたプレマーキングの画像上の陥凹部のトレースは、ベースラインに対する各フォローアップ画像の固有の表面トラッキング関係に基づいて、22日目、43日目、および71日目のフォローアップ画像上に転記される(図16)。IATは、転置されたAOIに影響を与える画質の低下のインスタンスを記録する。
あざの関心領域(AOI)の描出:IATは、4日目の画像上で最も大きく知覚できるあざの周囲を連続的にトレースして、「あざのある組織」のAOIを作成する(図17)。IATは、あざのある皮膚とない皮膚との間で皮膚の色素沈着に違いがあると判断できる部分の周囲をトレースする。周囲の肌色と区別できる青色/紫色、緑色、または黄色/茶色の色素沈着が見られる場合、皮膚は打撲されたとみなされる。4日目の画像であざが確認できない場合、その被験者はあざの分析のために不合格となる。
さらに、IATは2つ目のトレースである「正常組織」AOIを作成する。正常組織AOIは、衣服の圧縮線による肌の質感の歪み、異常な赤み、ニキビや瘢痕組織などの肌の特徴の影響を受けていない肌の領域に作成される。正常組織AOIは、可能であれば、1日目のプレマーキングのあざのある組織AOIの曲面に存在する影、てかり、グレアとの一致を試みる。正常組織AOIのサイズと形状は、自然に見える皮膚の量に応じて被験者ごとに異なる。トレース後、IATは、4日目の画像に対する表面トラッキング関係に基づいて、4日目の画像から1日目−プレマーキング、8日目および15日目の画像に、あざのある組織と正常な組織のAOIの両方を移す。あざのある組織のAOIまたは正常組織のAOIが、特定の被験者または被験者の側部について、他のあざ分析を行った際のエッジを超えている場合、AOIはすべての訪問で一貫するまで調整される。
IATは、1日目−プレマーキング、4日目、8日目、および15日目の画像上で白い参照ラベルを手動でトレースし、そのトレースを「白」と表示した。白の参照ラベルがあざ領域内に配置されている場合、IATはラベルの境界線をトレースし、患部の各訪問時に打撲のAOIから差し引く。白の参照ラベルが画像上に存在しない場合、その画像はあざの分析のためには不合格となる。
品質管理(QC)チェック:QCチェックは、画像の分析を行うIATとは別のIATが行う。ある訪問先での分析手順に応じて、個別にQCチェックが行われる。QCチェック中にQC IATが行った調整はすべて記録され、分析に移る前に別のIATによって再QCされる。QCを開始する前に、QC IATは最初のIATが行った画質の問題に関するメモを確認する。
分析測定:画像がQCに合格した後、分析IATがQC IATのメモを確認する。その後、分析IATは、スクリプト化された分析手順を実行する。分析手順と分析の終了点は、訪問時の画像によって異なる。くぼみの体積分析では、主要な陥凹部のAOIの上部に補間表面が作成される。体積測定は、補間表面と陥凹部の底部の間の空間を表す。
表面積は、主要な陥凹部AOI、または1日目−ポストマーキング画像の場合はサイトトレースAOIの総表面積として測定される。最大陥凹部長さは、主要な陥凹部AOIを横切る最大の点から点への軸として測定される。最大陥凹部幅は、最大陥凹部長軸に垂直な最大の点間距離として測定される。
あざ分析は、2つのL色測定で構成される。L色彩値は、「あざのある組織」と「正常な組織」のAOI内で測定される(図18(A))。以下の表は、実行可能な分析をまとめたものである(表19)。
Figure 2022502478
データの受け入れ:画像分析が完了すると、分析を行うIATは、その画像を受け入れるか、またはその画像を分析対象外とするかを決定する。画像は部分的に不合格になることがある。例えば、1日目のプレマーキングの訪問では、第4日目に目に見えるあざがないためにあざ分析が不合格になることがあるが、陥凹部の分析では合格となる。すべての不合格には、画像モデルが分析に受け入れられない理由を詳述した不合格ノートが必要である。画像の不合格は、画質の低下、トラッキングの質の低下、AOI内の障害物などが原因となる。画像は、QC IATによって不合格が推奨され、分析IATによってレビューされる。分析IATが不合格勧告に同意した場合、その画像は不合格となる。
あざ分析.1日目、4日目、8日目、および15日目に、2つのL色の測定値を用いて、あざのある組織と正常組織を3D写真で評価した(図18(B))。Lの色の強さの測定値が大きいほど、あざの状態が悪い。治療領域と注射の種類ごとに、あざのある組織と正常な組織の2色の間の視覚的な変化を測定する。
G.効果の持続性
本明細書に記載されているコラゲナーゼ治療法は、本明細書に開示されている尺度または評価方法のいずれかによって測定される効果の耐久性を有する。そのような耐久性は、約3ヶ月から5年またはそれ以上の範囲であり得る。単一の注射または一連の注射により、長期間、例えば、約6ヶ月、1年、2年、3年、4年、または5年、またはそれ以上の期間、セルライトの改善を維持したり、セルライトの外観を改善し続けたり、セルライトの外観の重症度を軽減したりすることができる。
特定の実施形態では、コラゲナーゼ注射を受けている患者は、治療後約6ヶ月の時点でCR−PCSSおよびPR−PCSSスコアのいずれかまたは両方について、ベースラインから≧1ポイントの改善を継続して示しているか、または治療後約12ヶ月の時点でCR−PCSSおよびPR−PCSSスコアのいずれかまたは両方について、ベースラインから≧1ポイントの改善を示している。さらに、そのような患者は、治療後約22日、43日、90日、または180日の時点で、CR−PCSSおよびPR−PCSSスコアのいずれかまたは両方について、ベースラインからの≧1ポイントの改善を有する。例えば、少なくとも約10%、または15%、または20%、または25%、または30%、または35%、または40%、または45%、または50%、または55%、または60%、または65%、または70%、または75%、または80%、または85%、または90%、または95%、または100%の患者がこのような持続性を示している。
別の態様では、治療方法は、2レベルの複合応答者(PR−PCSSとCR−PCSSの両方でセルライト重症度が少なくとも2レベル改善した患者)の効果の持続性を評価し、その結果、統計的に有意な数が治療後6ヶ月および12ヶ月で効果の持続性を示している。特定の実施形態では、少なくとも約10%、または15%、または20%、または25%、または30%、または35%、または40%、または45%、または50%、または55%、または60%、または65%、または70%、または75%、または80%、または85%、または90%、または95%、または100%の患者がこのような持続性を示している。
持続性の非限定的な例としては以下を含む:
a.CR−PCSS評価の低下は180日目まで維持され、被験者のセルライト治療に対する満足度評価のスコアと相まって、CCH 0.84mgを治療領域ごとに12回(×2治療領域)、両側の臀部または両側の大腿部に皮下注射した3回の治療セッションの有効性が裏付けられた。
b.180日目において、CR−PCSS評価のベースライン(スクリーニング訪問)からの低下が左右で一致していること。
c.180日目に、少なくとも1つの治療領域において、CR−PCSS評価の2レベルの改善が認められる。応答は、臀部と大腿部、および左右で同様である。
d.180日目に少なくとも1つの領域でCR−PCSS評価が1レベル改善されていること。応答は、臀部と大腿部、および左右で同様である。
e.少なくとも1つの領域で最も早く2レベルのCR−PCSS応答が得られるまでの期間の中央値は83日と観察される。
f.最も早い1レベルのCR−PCSS応答が得られるまでの期間の中央値が41日である。
g.180日目には半数以上の患者が治療に満足または非常に満足していた。
h.へクセルCSSのスコアが初めて中等度(6〜10)または軽度(1〜5)に分類され、ベースラインの重度(11〜15)と比較して中等度(6〜10)または軽度(1〜5)に分類され続けていた期間。
i.CR−PCSS、PR−PCSS、へクセルCSS、ヘクセルくぼみ深さスコア、リッカート尺度、陥凹部分析、I−GAIS、S−GAIS、PR−CIS、PR−CIS省略形、SSRS、SSCT、TCS−C、TCS−P、Body−Q、写真またはその他の画像による評価、または臨床医および/もしくは患者がセルライトの重症度、改善度、および/もしくは患者の満足度を評価するために使用するその他の有効なフォト数値もしくはその他の尺度のうちの1つ以上によって測定される改善を実証した後に、改善が測定された日からベースラインまたはそれよりも悪い状態に戻った日までの期間。
j.改善が測定された日から、CR−PCSS、PR−PCSS、へクセルCSS、ヘクセルくぼみ深さスコア、リッカート尺度、陥凹部分析、I−GAIS,S−GAIS、PR−CIS、PR−CIS省略形、SSRS、SSCT、TCS−C、TCS−P、Body−Q、写真またはその他の画像による評価、または臨床医および/もしくは患者がセルライトの重症度、改善度、および/もしくは患者の満足度を評価するために使用するその他の有効なフォト数値もしくはその他の尺度のうちの1つ以上によって測定された、被験者が治療に対する応答の観察可能な喪失を有する日までに測定された期間。
k.治療に対する応答の基準時点から、被験者が応答の変化(治療に対する初期の反応に対する改善を含む)を有するときまでの測定期間。応答の変化および/または改善は、CR−PCSS、PR−PCSS、へクセルCSS、ヘクセルくぼみ深さスコア、リッカート尺度、陥凹部分析、I−GAIS、S−GAIS、PR−CIS、PR−CIS省略形、SSRS、SSCT、TCS−C、TCS−P、Body−Q、写真または他の画像による評価、またはセルライトの重症度、改善、および/または患者の満足度を評価するために臨床医および/または患者によって使用される他の検証されたフォト数値または他の尺度のうちの1つ以上によって測定することができる。いくつかの実施形態では、基準時点は、ベースライン(投与前、1日目)または治療後71日目である。
l.被験者がCR−PCSSおよびPR−PCSSに基づく2レベルの複合型応答者となった訪問日から、評価値がベースライン評価に戻り、および持続する2回の連続した訪問日の最初の日までの期間。
m.被験者がCR−PCSSおよびPR−PCSSに基づき1レベルの複合型応答者となった訪問日から、評価値がベースライン評価に戻り、および持続する2回の連続した訪問日の最初の日までの期間。
H.コラゲナーゼ注射の安全性
現在までに行われた研究、そのいくつかは以下の実施例に詳述されているが、それらにより本明細書に記載された治療法の安全性が立証されている。例えば、これらの研究では、4つの治療領域に3.36mgのCCHを同時に皮下投与しても、コラゲナーゼの全身への曝露がないことが確認された。実際、4つの治療領域に同時投与しても、コラゲナーゼの安全性特性に新たな懸念は見られなかった。一般的に報告されている事象は、現在知られているコラゲナーゼの有害事象特性と一致していた。
CCHで治療を受けた被験者の大半が、軽度から中等度のTEAEを1回以上経験した。大腿部および臀部の治療領域によるTEAEの顕著な違いはなかった。最も多かったTEAEは注射部位応答、特に注射部位のあざであり、治療領域(臀部、大腿部)による違いはなかった。ほとんどのTEAEは21日以内に消失した。臨床検査値、血液検査値、尿検査値、バイタルサイン、併用薬などに臨床的に意味のある変化はなかった。抗薬物抗体または中和抗体を有する被験者において、臨床的に意味のある所見はなかった。
本明細書に記載し、図16〜18に示すように、あざの程度を経時的に測定するために、あざ分析を行うことができる。特定の実施形態では、コラゲナーゼ治療によって引き起こされたあざは、治療訪問後、約3日、または4日、または5日、または6日、または7日、または8日、または9日、または10日、または11日、または12日、または13日、または14日、または15日、または20日で解消するか、または色の濃さが著しく減少する可能性がある。
I.実施例
以下の例は、本開示の特定の実施形態を示すために含まれている。しかしながら、当業者であれば、本開示に照らして、開示されている特定の実施形態に変更を加えても、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、同様のまたは類似の結果を得ることができることを理解すべきである。したがって、記載されているすべての事項は例示として解釈されるべきであり、限定的な意味で解釈されるべきではない。例えば、CCHを用いた研究では、他のコラゲナーゼを、CCHと同等の活性と反応をもたらすのに十分な量(治療有効量)で使用することができる。後述の臨床研究結果において、報告された各数値は厳密な限定を意図したものではないことが理解されるべきである。本開示の範囲には、本明細書に記載された発明の事実と原理に合致する各数値の周囲の範囲が含まれる。したがって、各値は、約1%、5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、または100%、上下に変化してもよい。いくつかの例では、特定の値の文脈や状況に合わせて、125%、150%、175%、200%、225%、250%、275%、または300%程度、上下に変化することがある。
実施例1−EFPの治療のためのCCHの臨床研究(研究205)
非盲検の段階2研究が実施され、少なくとも両側の治療領域(両側の臀部または両側の大腿部)に軽度、中等度、または重度のセルライトがある被験者に対して、1日目、22日目、43日目に、指定された治療領域にCCHが投与された。すべての被験者に対しては90日目と180日目に、一部の被験者に対しては各治療セッションの1日後、3日後、6日後、13日後に追跡調査が行われた。治療効果を評価するために、90日目と180日目(すなわち、それぞれ1日目から89日目と179日目)に追跡調査を行った(写真下位研究)。本実施例では、特に明記しない限り、本研究205で用いた「日数」は、研究205の初回投与(1日目)に対するものである。
使用したCCHは、凍結乾燥ケーキ中に0.9mgのコラゲナーゼクロストリジウムヒストリチカム、0.5mgの塩酸、18.5mgのスクロース、および1.1mgのトロメタミンを含む滅菌凍結乾燥粉末であった。再構成用のCCH無菌希釈剤は、0.6%塩化ナトリウム溶液に0.03%塩化カルシウム二水和物を溶解したもので、1バイアルあたり2.0mLであった。
被験者は、スクリーニング訪問時に、臨床医が報告したフォト数値セルライト重症度スコア(CR−PCSS)が2(軽度)以上、およびヘクセルセルライト重症度尺度(CSS)スコアが13以下の2つの両側治療領域(すなわち、両方の臀部または両方の大腿部)を有する18歳以上の健康な非妊娠女性であった。以下の条件のいずれかを示した被験者は除外された:凝固障害;5年以上再発していない悪性腫瘍(基底細胞癌を除く)の兆候または病歴;ケロイド瘢痕または異常な創傷治癒の病歴;または、研究の実施を妨害したり、研究結果の解釈を混乱させたり、被験者の健康を脅かしたりする可能性のある併発疾患または状態。
被験者には,1回の治療で最大1.68mgのCCHを投与した。0.84mgのCCHを、治療領域(すなわち,各臀部または各大腿部)ごとに12回皮下注射した。CCHの投与は、21日以上の間隔をおいて3回実施した。CCHの累積投与量は5.04mg(すなわち、3回の治療セッション×治療領域あたり0.84mg×2治療領域)であった。
治療のために選択された各陥凹部に対して、注射部位が選ばれた。それぞれの注射部位には、サージカルマーカーを使ってドットを付けた。丸い陥凹部の場合、ドットは陥凹部の中心に配置した。細長い陥凹部の場合、ドットは陥凹部の長軸に沿って約2cmの間隔で配置した。1つの陥凹部に複数の注射が必要な場合は、陥凹部内の注射部位を約2cmの間隔で配置し、陥凹部の直下に少なくとも1つの注射部位がある場合は、その位置に配置した。その後、外科用マーカーを用いて、治療のために選択された各陥凹部に円を描いた。選択した治療領域の円は重ならないようにした。例えば、図6を参照。
CCHは,被験者がうつ伏せになった状態で,30ゲージの1/2インチ針付き注射器を用いて皮下に注射した。図7に示すように,各注射部位には,位置A,B,Cに0.1mLずつ3回に分けてCCHを皮下注射し,合計0.3mLの注射量とした。注射の深さは,下向きの圧力をかけずに治療針の先端から針の根元までの長さに相当する1/2インチとした。各注射部位において,針を皮膚表面に対して垂直に90°の位置に配置して挿入し、0.1mLのCCHのアリコートを注入した(位置A)。注射針をわずかに引き抜き(皮膚からは離さない)、頭部に向かって垂直から45°の位置に戻し、陥凹部の長軸の上に0.1mLのCCHを注射した(位置B)。再度、針をわずかに引き抜き,足元に向かって垂直から約45°、陥凹部の長軸の下に位置を変え、CCHを0.1mLずつ注入した(位置C)。注射後、被験者は5分間うつ伏せになったままであった。
有効性. 有効性についてセルライト治療に対するCCHの有効性は、臨床医がCR−PCSS評価を用いて分析した。CR−PCSS評価のベースライン訪問(スクリーニング訪問)からの最大の減少は、まず90日目に観察された。このセルライト重症度の改善(すなわち、マイナスの変化)は、180日目の訪問時にも維持された。研究開始時のCR−PCSS評価スコアは、被験者の大半が軽度から中等度であった。90日目のベースラインからのCR−PCSS評価値の変化の平均(SD)は、左臀部と左大腿部でそれぞれ−0.8(0.58)と−0.6(0.62)、右臀部と右大腿部でそれぞれ−0.7(0.73)と−0.5(0.70)であった。領域別、訪問別のCR−PCSSスコアを表20に示す。
Figure 2022502478
Figure 2022502478
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両側の臀部に69名、両側の大腿部に89名の被験者が治療を受けた。90日目に評価対象者の17名(13.4%)、180日目に評価対象者の20名(15.3%)(臀部に治療を受けた62名、大腿部に治療を受けた82名)の少なくとも1つの治療領域で、CR−PCSSスコアにおけるセルライトの重症度がベースラインから2レベル改善されたことが確認された。少なくとも1つの治療領域で最も早く2レベルの応答が得られるまでの期間の中央値は83日であった。2レベルのCR−PCSS応答が得られた被験者の割合と2レベルのCR−PCSS応答が得られるまでの時間の中央値は、左側と右側の治療を受けた被験者で同様であり、大腿部と臀部の治療領域でも同様であった。これらの結果を表21に示す。
Figure 2022502478
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約4分の3の被験者が、90日目までに少なくとも1つの治療領域で少なくとも1レベルの応答を示した。90日目に96名(75.6%)、180日目に90名(68.7%)の評価対象者が、少なくとも1つの治療領域において、CR−PCSSのセルライトの重症度がベースラインから1レベル改善したことが確認された。また、少なくとも1つの治療領域で最も早く1レベルの応答が得られるまでの期間の中央値は41日であった。治療を受けた被験者の1レベルのCR−PCSS応答者の割合は、左右で同程度であり、大腿部と臀部の治療領域でも同程度であった。また、最も早く1レベルのCR−PCSS反応が得られるまでの期間の中央値は、左右で同じ43日であった。これらの結果は表22にまとめられている。
Figure 2022502478
Figure 2022502478
セルライト治療におけるCCHの有効性は、被験者による満足度スコア(セルライト治療に対する被験者の満足度)を用いて分析された。180日目の時点で、評価可能な130名の応答者のうち、半数以上(56.1%)が治療に満足または非常に満足していた。治療を受けた被験者のうち、臀部の治療に満足または非常に満足した被験者の割合は71.5%であった。また、大腿部の治療に満足または非常に満足した被験者の割合は44.6%であった。これらの結果は表23にまとめられている。
Figure 2022502478
その他、有効性に関する結論としては以下のようなものがある:
1.180日目には、CR−PCSS評価におけるベースライン(スクリーニング訪問)からの低下は、左右で一貫していた。また、左臀部および大腿部のCR−PCSS評価の平均(SD)のベースラインからの変化(−0.8[0.65]および−0.6[0.69])は、右臀部および大腿部(−0.7[0.73]および−0.5[0.70])に対して、同程度であった。
2.90日目に17名(13.4%)、180日目に20名(15.3%)の評価対象者が、少なくとも1つの領域でCR−PCSS評価の2レベルの改善を確認した。また、臀部と大腿部、左右の部位で同様の効果が得られた。
3.90日目に96名(75.6%)、180日目に90名(68.7%)の評価対象者が、少なくとも1つの治療領域でCR−PCSS評価の1レベルの改善を確認した。また、臀部と大腿部、左右の部位で同様の効果が得られた。
4.少なくとも1つの治療領域において、最も早く2レベルのCR−PCSS応答が得られるまでの期間の中央値は83日(範囲:21、191)であった。少なくとも1つの治療領域において、最も早く1レベルのCR−PCSS応答が得られるまでの期間の中央値は41日(範囲:20、205)であった。
5.180日目(研究終了/治療終了)では、評価可能な応答者の半数以上(56.1%)が治療に満足または非常に満足していた(満足:48[36.9%]、または非常に満足:25[19.2%])。
6.180日目にもCR−PCSS評価の低下が持続し、被験者満足度調査のスコアと合わせて、0.84mgのCCHを両側の臀部または両側の大腿部に治療領域あたり12回(×2治療領域)皮下注射する3回の治療が有効であったことを示している。
安全性.CCHを投与した被験者の大多数が、軽度から中等度の治療上の有害事象を少なくとも1つ経験した。大腿部や臀部の治療領域によって、治療上の有害事象が発生した被験者に顕著な差はなかった。最も多かった有害事象は注射部位反応、特に注射部位のあざで、治療領域による違いはなかった。
また、本研究には写真下位研究も含まれており、被験者は各治療コースの1日後、3日後、6日後、および13日後にクリニックを訪れ,追跡調査のための写真撮影を行った。写真下位研究に参加した37名の大腿部および臀部の写真は,2つの研究施設において、施設ごと、被験者ごと、研究訪問ごとに時系列に並べられ,それぞれの治療領域(左臀部、右臀部、左大腿部、右大腿部)のコラージュとして累積された。調査員は、画像および写真のコラージュを見た後、注射部位のあざの外観についての全体的な観察結果を把握するための質問票に記入した。調査員は、注射部位のあざは治療セッションの3日後と6日後に重症化し、次の治療セッションの前に解消し、一般に各治療セッションでそれほど重篤ではなくなったことを観察した。持続した変色は、ヘモジデリン染色に起因した。
治療セッションによる治療関連注射部位応答の分析は、その後の治療セッションで注射部位応答の発生率および持続時間が減少する傾向を示し、ほとんどが21日以内に解消した。治療セッション1、2、3では、治療に起因する有害事象が21日以内に解消した被験者の割合は、それぞれ76.7%、85.2%、71%であった。
実施例2−EFPの治療のためのCCHの段階3臨床研究(研究302)
段階3の無作為化二重盲検プラセボ対照研究が行われ、各臀部に中程度または重度のレベルのセルライトがある被験者が、1日目、22日目、および43日目に割り当てられた治療領域にCCHを投与された。本実施例で特に明記しない限り、本研究302で用いた「日数」は、研究302の初回投与(1日目)に対するものであった。セルライト組成物におけるCCHは、0.92mgのコラゲナーゼクロストリジウムヒストリチカム、スクロース、トリス、マンニトール、および塩酸を有する、pH8.5までの滅菌凍結乾燥粉末であった。0.6%塩化ナトリウムおよび0.03%塩化カルシウムが水中で脱水するように再構成するためのCCH滅菌希釈剤。被験者は、1日目、22日目、43日目、および71日目に評価された。被験者は、スクリーニング訪問時および治療前の最初の治療セッションで、患者が報告したフォト数値セルライト重症度スコア(PC−PCSS)および臨床医が報告したフォト数値セルライト重症度スコア(CR−PCSS)の両方のスコアが3または4(中等度または重度)を有する18歳以上の健康な非妊娠女性であった。
被験者には、1回の治療で最大1.68mgのCCHまたはプラセボを投与した。0.84mgのCCHは、臀部あたり12回の皮下注射として投与された。CCHは、約21日間隔で行われた3回の治療セッションで各被験者に投与された。CCHの累積投与量は5.04mg(すなわち、3回の治療訪問×治療領域あたり0.84mg×2治療領域)であった。CCHは、実施例1に記載され、図7に示されたのと同じ方法で注射された。被験者の両臀部は、無作為に割り当てられた治療群に応じて、CCH治療またはプラセボ治療のいずれかを受けた。
分析対象となった集団には、以下のようなものがあった:
治療意図(ITT)集団には、無作為化された被験者のうち、少なくとも1回の研究薬の注射を行った者が含まれる。すべての人口統計学的特性およびベースライン特性の概要は、この集団に基づいている。主要および主要な副次的有効性パラメータは、この集団に基づいていた。
修正治療意図(mITT)集団とは、標的および非標的臀部について、ベースラインおよび少なくとも1回の注射後のCR−PCSSおよびPR−PCSSの両方の評価を受けたITT被験者を含む。すべての副次的評価および支持的評価は、mITT集団に基づいて行われた。
臨床医は、それぞれの臀部にある陥凹部のうち、はっきりとしていて、被験者が立っているときに明らかで、治療に適したものを選んだ。治療の目的は臀部全体の美観を向上させることであるため、臨床医は臀部全体の美観を向上させる可能性の高い陥凹部を選択するように指示された。臀部の中にある同じ陥凹部、または臀部の中にある異なる陥凹部を各治療セッションで治療することができたが、注射は臀部の中で行われなければならなかった。各臀部に治療可能なセルライトの陥凹部がなく、臨床医がCR−PCSSで0点と評価した場合を除き、各臀部には3回の治療が行われた。2回目の治療セッションで特定の臀部に注射が行われなかった場合でも、被験者は対向する臀部の治療について評価され、3回目の治療セッションに戻り、被験者と臨床医によってそれぞれの臀部が再び評価された。臨床医がCR−PCSSで臀部のいずれかまたは両方を0より大きく評価した場合、3回目の治療セッションで注射を行った。
治療セッション1では、すべての被験者が両臀部に12回の注射をすべて受けた。治療セッション2では、CCH投与群の88.1%、プラセボ投与群の94.8%の被験者が、それぞれの臀部に12回の注射を受けた。治療セッション3では、CCH投与群の89.0%、プラセボ投与群の90.6%の被験者が両臀部に12回の注射を受けた。治療した陥凹部の数と、陥凹部1つあたりの平均注射回数は、2つの治療グループ間および治療セッション間で同様であった。有効性は、以下のセルライト重症度評価システムを用いて分析した:(i)PR−PCSS、(ii)CR−PCSS、(iii)S−GAIS、(iv)I−GAIS、(v)PR−CIS、(vi)SSRS、および(vii)セルライト治療に対する被験者のグローバル満足度(SSCT)。被験者、調査員、スタッフは、標的臀部と治療法の両方について盲検化された。評価は被験者と調査員がそれぞれ独立して行い、互いのスコアについては盲検化された。有効性の主要変数は、71日目に2レベルの複合応答が得られた被験者の割合で、以下のように定義された。有効性の主要変数は、71日目に2レベルの複合応答が得られた被験者の割合であり、次のように定義された:(1)調査員が標的臀部をライブで評価したCR−PCSSにおいて、ベースライン(1日目)から少なくとも2レベルの重症度の改善が認められた、(2)標的臀部のデジタル画像を見ながら被験者が評価したPR−PCSSにおいて、ベースライン(1日目)から少なくとも2レベルの重症度の改善が認められた。無作為化された標的臀部でこれらの基準が満たされた場合、被験者は応答者とみなされた。
本研究で用いた応答者の定義は以下の通りである。
PR−PCSS応答者. 2レベルのPR−PCSS応答者は、評価時点でPR−PCSS評価がベースラインから少なくとも2レベル改善(−2、−3、または−4の変化)した被験者と定義した。1レベルのPR−PCSS応答者は、評価時点でPR−PCSS評価がベースラインから少なくとも1レベル改善(−1、−2、−3、または−4の変化)した被験者と定義した。
CR−PCSS 応答者. 2レベルのCR−PCSS応答者とは、評価時点でCR−PCSS評価がベースラインから少なくとも2レベル改善(−2、−3、または−4の変化)した被験者と定義した。1レベルのCR−PCSS応答者は、評価時点でCR−PCSS評価がベースラインから少なくとも1レベル改善(−1、−2、−3、または−4の変化)した被験者と定義した。
複合 PR−PCSS/CR−PCSS 応答者. 各臀部のPR PCSS応答者分類とCR PCSS応答者分類を用いて、その臀部の複合応答者分類を算出した。1つまたは両方の構成要素(すなわち、PR PCSS構成要素またはCR PCSS構成要素)について分類が欠けていた場合、その訪問日の複合応答者分類は欠けていた。2レベルの複合応答者は、評価時点でPR−PCSSの2レベルの応答者とCR−PCSSの2レベルの応答者の両方を満たす被験者と定義した。1レベルの複合応答者とは、評価時点で1レベルのPR−PCSS応答者と1レベルのCR−PCSS応答者の両方に該当する被験者と定義した。
S−GAIS応答者. 2レベルのS−GAIS応答者とは、評価時点でS−GAIS評価が少なくとも2(2または3)の被験者と定義した。1レベルのS−GAIS応答者とは、評価時点でS−GAIS評価が少なくとも1(1、2または3)であった被験者と定義した。
I−GAIS応答者. 2レベルのI−GAIS応答者とは、評価時点でI−GAIS評価が少なくとも2(2または3)の被験者と定義した。1レベルのI−GAIS応答者とは、評価時点でI−GAIS評価が少なくとも1(1、2または3)であった被験者と定義した。
PR−CIS応答者. PR−CISトータルスコアでは、評価時点でPR−CISトータルスコアがベースラインから少なくとも12減少した被験者を応答者と定義した。PR−CIS省略形スコアでは、評価時点でPR−CIS省略形スコアがベースラインから少なくとも10減少した被験者を応答者と定義した。個々のPR−CISインパクトスコアについて、応答は、各時点で少なくとも2スコア間隔のベースラインからの改善として定義された。
SSRS応答者. 1レベルのSSRS応答者は、71日目/早期終了訪問時に臀部のセルライトの外観に少なくともわずかに満足している(わずかに満足[4]、非常に満足[5]、または極めて満足[6])被験者と定義された。
セルライト治療に対する被験者のグローバル満足度(SSCT). 71日目/早期終了時に、セルライト治療に対する被験者の満足度評価で「満足」または「非常に満足」という回答を得た被験者を応答者とした。
主要評価項目は、治療意図を持った集団(ITT)において、71日目に標的臀部で2レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答が得られた割合であった。2レベルの複合応答者とは、CR−PCSSでベースラインから少なくとも2レベルの重症度の改善が見られ、PR−PCSSでベースラインから少なくとも2レベルの重症度の改善が見られた被験者と定義した。
本研究では、CCH治療を受けた被験者の2レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答者の割合(16[7.6%])が、プラセボ治療を受けた被験者の割合(4[1.9%])と比較して、統計的に有意な差(p=0.006)が見られた、表24および図24。
Figure 2022502478
本研究では、8つの主要な副次的評価項目を含む評価項目の3つのファミリーがあった。CCHとプラセボで治療された被験者の違いは、8つの評価項目すべてでCCHを支持し、すべての違いは統計的に有意であった。これらは、以下の表25にまとめられている。
Figure 2022502478
各訪問時にPR−PCSS評価を得て、ベースラインからの変化を調べた。ベースラインからの変化がマイナスであれば、セルライトの重症度が改善されたことを示す。ベースラインでは、すべての被験者のPR−PCSS評価が中程度または重度であった。22日目の時点で、PR−PCSSのベースラインからの変化量の平均(SD)は、標的臀部にCCHを投与した被験者(−0.4[0.67])が、プラセボを投与した被験者(−0.1[0.45])に比べて大きかった。この差は統計的に有意であった(p<0.001)。非標的臀部についても同様の結果が得られた。CCH対プラセボで治療された被験者で観察された改善は継続し、71日目を含むすべての研究訪問で標的および非標的臀部で統計的に有意なままであった。これらの結果は表26にまとめられている。
標的および非標的臀部におけるPR−PCSS1レベルおよび2レベル応答者の分析は、CCH対プラセボで治療された対象の改善において統計的に有意な差を示した。22日目の1レベルPR−PCSS応答者の割合は、標的臀部(それぞれ34.8%対16.8%)および非標的臀部(それぞれ34.8%対18.8%)において、プラセボ治療を受けた被験者よりもCCHで治療された被験者の方が大きかった。これらの差は統計的に有意であり(p<0.001)、研究全体を通して継続し、各評価で統計的に有意なままであった。これらの結果は表27にまとめられ、図22〜23に示されている。
Figure 2022502478
Figure 2022502478
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また、訪問時のCR−PCSS評価とベースラインからの変化についても分析した。CR−PCSS評価は、PR−PCSS評価と同様に、CCHとプラセボで治療された患者のセルライト重症度の統計的に有意な改善を示している。71日目におけるCR−PCSSのベースラインからの平均変化は、プラセボと比較してCCHで治療された被験者の方が大きかった。治療に対する応答は、早くも22日目で明らかであった。22日目に1レベルのCR−PCSS応答者の割合は、標的臀部(それぞれ33.2%対16.8%)、非標的臀部(36.4%対16.8%)ともに、プラセボ治療を受けた被験者よりもCCHで治療された被験者の方が大きかった。これらの差は統計的に有意であり、p<0.001であった。71日目の時点で、1レベルのCR−PCSS応答者の割合は、プラセボと比較してCCHで治療された被験者の方が大きかった。これらの結果は、表28〜29および図22〜23にまとめられている。
Figure 2022502478
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S−GAISの評価を分析した。22日目には、CCH治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の間で、S−GAISの平均値が大きくなった。この改善は、統計的に有意であった(p<0.001)。この改善は71日目にも観察された。対象臀部と非対象臀部のS−GAIS1レベルと2レベルの応答者を分析したところ、CCH治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者では、研究期間中に統計的に有意な改善が見られた。これらの結果は表30〜31にまとめる。また、I−GAIS評価でも同様の結果が得られ、表32〜33にまとめた。
Figure 2022502478
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表34に示すように、71日目におけるPR−CISのベースラインからの変化の平均値は、総合スコア(−10.9対−5.7)、略式スコア(−10.9対−5.7)、および個々の影響スコアにおいて、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べて統計的に有意に良好であった。
Figure 2022502478
Figure 2022502478
Figure 2022502478
ベースライン時のSSRSの平均値には、治療群間で統計的に有意な差はなかった。71日目には、CCH治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者と比較して、平均スコアが大きくなった。この差は、統計的に有意であった(p<0.001)。その結果を表35に示す。
Figure 2022502478
SSCTスコアに関しては、CCH治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者に比べて、セルライト治療に「満足」または「非常に満足」と答えた割合が高かった(それぞれ54.3%対25.8%、p<0.001)。71日目の被験者の満足度スコアの平均値(SD)は、CCH治療を受けた被験者(0.4[1.12])とプラセボ治療を受けた被験者(−0.4[1.17])の間で、統計的に有意な差(p<0.001)があった。これを以下の表36に示す。
Figure 2022502478
有効性の結論
一次エンドポイントは、ITT集団において、71日目に対象となる臀部で2レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答が得られた割合であった。2レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答者とは、CR−PCSSの重症度がベースラインから少なくとも2レベル改善し、PR−PCSSの重症度がベースラインから少なくとも2レベル改善した被験者と定義した。
本研究では、CCH治療を受けた被験者(16名[7.6%])の2レベルのPR−PCSS/CR−PCSS複合応答者の割合が、プラセボ治療を受けた被験者(4名[1.9%])と比較して、統計的に有意な差(p=0.006)が認められた。
直線的な尺度で薬効を確認するために、一連の二次エンドポイント項目を評価した。その結果、8つの鍵となる二次エンドポイント項目すべてにおいて、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも有利となる、統計的に有意な差が認められた。
・71日目に対象となる臀部でPR−PCSSが1レベル応答者の割合(CCH治療を受けた被験者114名(54.3%)対プラセボ治療を受けた被験者77名(36.2%)、p<0.001)。
・71日目に対象となる臀部で2レベルのPR−PCSS応答者の割合(CCH治療を受けた被験者51[24.3%]対プラセボ治療を受けた被験者26[12.2%]、p=0.001)。
・71日目に対象となる臀部で1レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答者の割合(CCH治療を受けた被験者78名(37.1%)対プラセボ治療を受けた被験者38名(17.8%)、p=<0.001)。
・71日目に非対象の臀部で2レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答者の割合(CCH治療を受けた被験者では16(7.6%)対プラセボ治療を受けた被験者では2(0.9%)、p=<0.001)。
・71日目に1レベルのSSRS応答者の割合(CCH治療を受けた被験者102名(48.6%)対プラセボ治療を受けた被験者28名(22.5%)、p=<0.001)。
・71日目におけるPR−CIS総合スコアのベースラインからの変化の平均(SD)(CCH投与群:−10.9[12.51]対プラセボ治療を受けた被験者:−5.9[11.62]、p=<0.001)。
・71日目に対象となる臀部でS−GAISの1レベルの応答者の割合(CCH治療を受けた被験者135名(64.3%)対プラセボ治療を受けた被験者82名(38.5%)、p=<0.001)。
・71日目に対象となる臀部で2レベルのS−GAIS応答者の割合(CCH治療を受けた被験者49名(23.3%)対プラセボ治療を受けた被験者13名(6.1%)、p=<0.001)。
すべての感度分析は、一次および二次エンドポイントの結果を支持した。また、CCH治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の間では、研究開始後71日目までにすべての支持的評価項目で統計的に有意な差が認められた(多くの場合、CCHによる1回の治療後という早い段階で統計的に有意な差が認められた)。重症度評価では、ベースラインからの変化がマイナスであれば、セルライトの改善を示す。対象となる臀部と対象外の臀部の結果の概要は以下の通りである。
・71日目のPR−PCSSのベースラインからの変化量の平均(SD)は、対象の臀部(それぞれ0.9[0.93]対0.5[0.88]、p<0.001)および非対象の臀部(それぞれ0.9[0.90]対0.5[0.83]、p<0.001)において、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べて大きかった。
・71日目の時点で、PR−PCSSの1レベル応答者の割合は、CCH治療を受けた被験者の方が、プラセボ治療を受けた被験者よりも、対象の臀部(それぞれ62.0%対40.7%、p<0.001)および非対象の臀部(それぞれ65.2%対41.6%、p<0.001)で大きかった。
・71日目のCR−PCSSのベースラインからの変化量の平均(SD)は、対象の臀部(それぞれ0.7[0.87]対0.4[0.72]、p<0.001)および非対象の臀部(それぞれ0.8[0.83]対0.3[0.67]、p<0.001)において、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも大きかった。
・71日目の時点で、1レベルのCR−PCSS応答者の割合は、CCH治療を受けた被験者の方が、プラセボ治療を受けた被験者よりも、対象の臀部(それぞれ58.5%対32.5%、p<0.001)および非対象の臀部(それぞれ60.7%対27.7%、p<0.001)で大きかった。
・71日目の時点で、1レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答者の割合は、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べ、対象臀部(それぞれ42.9%対20.1%、p<0.001)および非対象臀部(それぞれ44.5%対13.7%、p<0.001)で高かった。
・71日目のS−GAISの平均値(SD)は、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べ、対象の臀部で大きかった(それぞれ1.0[0.99]対0.5[0.79]、p<0.001)。非対象の臀部でも同様の結果が得られた(CCH治療を受けた被験者1.0[0.94]対プラセボ治療を受けた被験者0.5[0.76]、p<0.001)。
・71日目の時点で、1レベルのS−GAIS応答者の割合は、対象の臀部(それぞれ73.4%対43.2%、p<0.001)および非対象の臀部(それぞれ73.9%対42.6%、p<0.001)において、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べて多かった。
・71日目のI−GAISの平均値(SD)は、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者と比較して、対象の臀部で統計的に有意(p<0.001)に大きかった(それぞれ1.0[0.81]対0.3[0.66])。この結果は、非対象の臀部でも同様であった(CCH治療を受けた被験者0.6[0.63]対プラセボ治療を受けた被験者0.1[0.48])。
・71日目の時点で、1レベルのI−GAIS応答者の割合は、対象の臀部(69.9%対28.3%、p<0.001)および非対象の臀部(74.9%対27.2%、p<0.001)において、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも多かった。
・71日目のPR−CISのベースラインからの変化の平均(SD)は、CCH治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者では、総合スコア(12.5([2.63]対−6.7[12.11]、それぞれp<0.001)と略式スコア(10.9[10.72]対5.7[10.23])、および個人の影響スコア(セルライトの外観に対する満足度[p<0.001])において、統計的に有意に良好であった。23]、p<0.001)、および個人の影響スコア(セルライトの外観に対する満足度[p<0.001]、気になる[p=0.009]、自覚[p<0.001]、恥ずかしい[p=0.004]、老いに対する懸念[p=0.024]、体型に対する懸念[p=0.005])があった。
・71日目の時点で、PR−CIS応答者の割合は、総合スコアではCCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも多く(それぞれ48.4%対24.2%、p<0.001)、略式スコアでは(それぞれ52.7%対29.5%、p<0.001)、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも多かった。さらに、個々の影響スコアごとの応答者の割合は、CCH治療を受けた被験者の方がプラセボ治療を受けた被験者よりも多かった。これらの差も統計的に有意であった。
その他の補足結果は以下の通りである。
・71日目のSSRSスコアの平均値(SD)は、CCH治療を受けた被験者(3.3[1.80])の方がプラセボ治療を受けた被験者(2.1[1.75])よりも大きかった。この差は統計的に有意であった(p<0.001)。CCH治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者に比べて、SSRSの1レベルの応答を示した割合が高く、それぞれ54.9%対25.1%であった。この差も統計的に有意であった(p<0.001)。
・CCH治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者に比べて、セルライト治療に「満足」または「非常に満足」と答えた割合が高かった(それぞれ54.3%対25.8%、p<0.001)。71日目の被験者の満足度スコアの平均値(SD)は、CCH投与群(0.4[1.12])とプラセボ治療を受けた被験者(0.4[1.17])の間で、統計的に有意な差(p<0.001)があった。
・一連のクロス集計では、PR−PCSSとS−GAISの間に一貫性があることを示す。PR−PCSSの1レベルの変化は、S−GAISの同様の変化と関連した。
・一次および二次エンドポイントのサイト別解析では、複数のサイトで応答が認められ、どの有効性解析においても、1つのサイトが結果に大きく影響することはなかった。
結論
これらの臨床結果は、CCH治療が対象者の臀部のセルライトに有効であることを示す。本研究では、両側臀部のEFPを有する成人女性を対象に、両臀部に0.84mgずつ(合計1.68mg)を21日間隔で最大3回投与した結果、CCH治療を受けた被験者ではプラセボ治療を受けた被験者と比較して、CR−PCSS/PR−PCSSの2レベルの複合応答者の割合が統計的に有意に増加し、一次エンドポイント項目を達成した。8つの鍵となる二次エンドポイントおよびすべての支持的評価項目において、CCH治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の間に統計学的に有意な差が認められた。CCH投与後の安全性については、重大または予期せぬ問題はなかった。AEの大部分は注射部位に発生し、14日以内に消失した。血液学的、化学的検査項目、バイタルサインについては、臨床的に意味のある、あるいは気になる傾向は認められなかった。免疫原性の結果は、本剤の他の臨床研究で認められたものと異なる可能性は認められなかった。本研究の結果から、CCHは成人女性の臀部におけるEFPに対して、1臀部あたり0.84mg(総投与量1.68mg)を21日以上の間隔をおいて3回投与することにより、安全かつ有効な治療法であると考えられる。
実施例3−段階3 EFP治療におけるCCHの臨床研究(研究303)
2回目の臨床研究は、実施例2に記載された臨床研究と同じデザイン、無作為化、二重盲検、プラセボ対照で行われた。CCH治療を受けた被験者では、プラセボ治療を受けた被験者(1名)と比較して、対象となる臀部において2レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答者の割合が統計的に有意な差(p=0.002)を示し、CCH治療を受けた被験者でセルライトの重症度が改善されたことを示すなど、有効性が多数の解析によって裏付けられた。
分析対象となった集団には、以下のようなものがあった。
治療意図(Intent−to−treat)(ITT)集団には、無作為化された被験者のうち、研究薬の注射を1回以上行った者が含まれる。すべての人口統計学的特性およびベースライン特性の概要は、この集団に基づく。一次および鍵となる二次有効性パラメータは、この集団に基づく。
修正治療意図(Intent−to−treat)(mITT)集団は、ITT集団のうち、対象および非対象の臀部について、ベースラインおよび注射後に少なくとも1回、調査員によるCRPCSSと被験者によるPRPCSSの両方の評価を受けたすべての被験者を対象とした。すべての二次的効果および支持的効果の評価は、mITT集団に基づいて行われた。
直線的な尺度で薬効を確認するために、一連の二次的臨床エンドポイント項目を評価した。CCH治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者との間には、(i)71日目に対象となる臀部で1レベルのPR−PCSS応答者の割合、(ii)71日目に対象となる臀部で2レベルのPR−PCSS応答者の割合、(iii)対象となる臀部で1レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答者の割合、(iv)71日目の1レベルのSSRS応答者の割合、(v)71日目のPR−CIS総スコアのベースラインからの平均変化量、(vi)71日目の対象臀部における1レベルのS−GAIS応答者の割合、および(vii)71日目の対象臀部における2レベルのS−GAIS応答者の割合を含む、CCHを投与した被験者とプラセボを投与した被験者との間に統計的に有意な差が認められた。本実施例で特に明記しない限り、本研究303で使用した「日数」は、本研究303の初回投与(1日目)に対するものである。
実施例2と同様に、本研究では8つの重要な副次評価項目を含む3つのファミリーが存在した。CCHとプラセボ治療を受けた被験者の差が統計的に有意であった8項目のうち7項目でCCH治療の被験者が有利であった。非対象臀部における2レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答者については、プラセボと比較してCCH治療の被験者で応答者の割合が多かったが、ファミリーのタイプIエラー率を5%とした多重度検定により、その差は統計的有意性に達しなかった。しかし、この結果は、非対象臀部の副次評価項目の分析結果と合わせて、非対象臀部の応答の差がCCH治療の被験者でプラセボ治療の被験者よりも有利であるという傾向を強く支持するものであった。これらの結果は、以下の表37にまとめた。
Figure 2022502478
関連する臨床データを以下の表38〜48に、また図20〜21に示す。
Figure 2022502478
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セルライト治療の被験者の満足度に関して、CCH治療の被験者は、プラセボ治療を受けた被験者に比べて、セルライト治療に「満足している」または「非常に満足している」と答えた割合が高かった(それぞれ46.8%対13.6%、p<0.001)。71日目の被験者の満足度スコアの平均値(SD)は、CCH治療の被験者(0.3[1.05])とプラセボ治療の被験者(−0.6[1.04])との間で、統計的に有意な差(p<0.001)があった。これを以下の表49にまとめた。
Figure 2022502478
有効性の結論
一次エンドポイントは、ITT集団において、71日目に対象となる臀部で2レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答が得られた患者の割合であった。2レベルのCR PCSS/PR−PCSS複合応答者とは、CR−PCSSの重症度がベースラインから少なくとも2レベル改善し、PR−PCSSの重症度がベースラインから少なくとも2レベル改善した被験者と定義した。
本研究では、CCH治療を受けた被験者(12名[5.6%])の2レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答者の割合が、プラセボ治療を受けた被験者(1名[0.5%])と比較して、統計的に有意な差(p=0.002)が認められた。
薬効を確認するために、一連の二次エンドポイント項目を評価した。ITT集団を対象とした8つの鍵となる二次エンドポイント項目のうち7項目において、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べて、統計的に有意な応答の差が認められた。重症度評価では、ベースラインからの変化がマイナスであれば、セルライトの改善を示す。対象となる臀部と非対象となる臀部の結果の概要は以下のとおりである。
・71日目での対象の臀部の1レベルのPR−PCSS応答者の割合(CCH投与群124名[57.9%]対プラセボ治療を受けた被験者61名[29.6%]、p<0.001)。
・71日目での対象の臀部で2レベルのPR−PCSS応答者の割合(CCH治療を受けた被験者45[21.0%]対プラセボ治療を受けた被験者12[5.8%]、p<0.001)。
・71日目での対象の臀部で1レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答者の割合(CCH治療を受けた被験者89名(41.6%)対プラセボ治療を受けた被験者23名(11.2%)、p<0.001)。
・71日目での1レベルのSSRS応答者の割合(CCH治療を受けた被験者90名(42.1%)対プラセボ治療を受けた被験者31名(15.0%)、p<0.001)。
・71日目でのPR−CIS総合スコアのベースラインからの変化の平均(SD)(CCH治療を受けた被験者:−11.5[12.74]対プラセボ治療を受けた被験者:−6.5[11.74]、p<0.001)。
・71日目での対象の臀部で1レベルのS−GAIS応答者の割合(CCH治療を受けた被験者126名(58.9%)対プラセボ治療を受けた被験者46名(22.3%)、p<0.001)。
・71日目での対象の臀部で2レベルのS−GAIS応答者の割合(CCH治療を受けた被験者の38[17.8%]対プラセボ治療を受けた被験者9[4.4%]、p<0.001)を示した。
非対象臀部の2レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答者については、CCH治療を受けた被験者の方がプラセボ治療を受けた被験者よりも応答者の割合が多かったが(それぞれ13[6.1%]対4[1.9%]、p=0.033)、この差はファミリーのタイプIエラー率を5%とした多重度検定では統計的有意性に達しなかった。しかし、この結果は、非対象臀部の副次評価項目の分析結果と合わせて、非対象臀部の応答がCCH治療を受けた被験者でプラセボ治療を受けた被験者に比べて有利になる傾向を強く支持するものであった。すべての感度分析は、一次および鍵となる二次エンドポイントの結果を支持するものであった。
また、mITT集団では、研究開始71日目までに、CCH治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者との間で、すべての支持的エンドポイントに統計的に有意な差が認められた(多くの場合、CCHによる1回の治療後という早い段階で統計的に有意な差が認められた)。重症度評価では、ベースラインからの変化がマイナスであれば、セルライトが改善されたことになる。対象となる臀部と非対象となる臀部の結果の概要は以下の通りである。
・71日目のPR−PCSSのベースラインからの変化量の平均(SD)は、対象の臀部(それぞれ0.9[0.89]対0.4[0.64]、p<0.001)および非対象の臀部(それぞれ0.9[0.84]対0.4[0.67]、p<0.001)において、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも大きかった。
・71日目の時点で、PR−PCSSの1レベルの応答者の割合は、CCH治療を受けた被験者の方が、プラセボ治療を受けた被験者よりも、対象の臀部(それぞれ66.7%対31.9%、p<0.001)および非対象の臀部(それぞれ64.5%対35.6%、p<0.001)で大きかった。
・71日目のCR−PCSSのベースラインからの変化量の平均(SD)は、対象の臀部(それぞれ0.8[0.72]対0.2[0.55]、p<0.001)および非対象の臀部(それぞれ0.8[0.89]対0.2[0.61]、p<0.001)において、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも大きかった。
・71日目の1レベルのCR−PCSS応答者の割合は、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも、対象の臀部で(それぞれ65.4%対27.4%、p<0.001)、非対象の臀部で(それぞれ67.6%対28.4%、p<0.001)、それぞれ大きかった。
・71日目の1レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答者の割合は、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べ、対象臀部(それぞれ48.1%対12.1%、p<0.001)および非対象臀部(それぞれ49.7%対15.3%、p<0.001)で大きかった。
・71日目のS−GAISの平均値(SD)は、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者に比べ、対象の臀部で大きかった(それぞれ0.9[0.92]対0.2[0.68]、p<0.001)。非対象の臀部でも同様の結果が得られた(CCH治療を受けた被験者の0.9[0.94]対プラセボ治療を受けた被験者の0.2[0.67]、p<0.001)。
・71日目の1レベルのS−GAIS応答者の割合は、対象の臀部(それぞれ67.7%対24.1%、p<0.001)および非対象の臀部(それぞれ66.7%対26.2%、p<0.001)において、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも大きかった。
・71日目のI−GAISの平均値(SD)は、CCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者と比較して、対象の臀部において統計的に有意(p<0.001)に大きかった(それぞれ0.9[0.81]対0.3[0.52])。非対象の臀部についても同様の結果が得られた(CCH治療を受けた被験者の0.9[0.79]対プラセボ治療を受けた被験者の0.3[0.54]、p<0.001)。
・71日目のCCH治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者に比べて、対象の臀部(70.8%対24.2%、p<0.001)および非対象の臀部(70.3%対21.6%、p<0.001)において、1レベルのI−GAIS応答者の割合が統計的に有意に増加した。
・71日目のPR−CISのベースラインからの変化の平均(SD)は、総合スコア(13.2[12.80]vs−7.0[12.05]、p<0.001)と略式スコア(12.8[12.62]vs6.1[110.25]、p<0.001)において、CCH治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者で統計的に有意に良好であった。また、すべての項目で71日目に統計的に有意な差が見られた(セルライトの外観に対する満足度[p<0.001]、自覚[p=0.012]、恥ずかしい[p<0.001]、老いの外観[p=0.009]、体型への懸念[p<0.001])。ただし、気になる点については、CCH治療を受けた被験者に有利な傾向が見られたが、統計的有意差には至らなかった(p=0.052)。
・71日目のPR−CISが応答者の割合は、総合スコアではCCH治療を受けた被験者がプラセボ治療を受けた被験者よりも多く(それぞれ50.0%対26.2%)、略式スコアでは(それぞれ52.2%対29.3%)、これらの差は統計的に有意であった(p<0.001)。さらに、個々の影響スコアにおいて、CCH治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者よりも応答者の割合が多かった。これらの差も統計的に有意であった。
その他の補足結果は以下の通りである。
・71日目のSSRSスコアの平均値(SD)は、CCH治療を受けた被験者(3.1[1.68])の方が、プラセボ治療を受けた被験者(1.9[1.55])よりも大きかった。この差は統計的に有意であった(p<0.001)。さらに、CCH治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者に比べて、SSRSの1レベルの応答を示した割合が高く、それぞれ48.4%対16.2%であった。この差も統計的に有意であった(p<0.001)。
・CCH治療を受けた被験者は、プラセボ治療を受けた被験者に比べて、セルライト治療に「満足」または「非常に満足」と答えた割合が高かった(それぞれ46.8%対13.6%、p<0.001)。71日目の被験者の満足度スコアの平均値(SD)は、CCH治療を受けた被験者(0.3[1.05])とプラセボ治療を受けた被験者(0.6[1.04])の間で、統計的に有意な差(p<0.001)があった。
・一連のクロス集計は、PR−PCSSとS−GAISの間に一貫性があることを示す。PR−PCSSの1レベルの変化は、S−GAISの同様の変化と関連した。
・一次および二次エンドポイントのサイト別解析では、複数のサイトで応答が認められ、どの有効性解析においても、1つのサイトが結果に大きく影響することはなかった。
結論
本研究では、両側臀部のEFPを有する成人女性を対象に、両臀部に0.84mg(合計1.68mg)を21日間隔で最大3回投与したところ、CCH投与群の2レベルのCR−PCSS/PR−PCSS複合応答者の割合が、プラセボ治療を受けた被験者と比較して統計的に有意な差を示し、一次エンドポイント項目を達成した。8つの鍵となる二次エンドポイントのうち7項目およびすべての補足的評価項目において、CCH治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の間に統計学的に有意な差が認められた。
CCHの投与後、重大な、あるいは予期せぬ安全性の問題はなかった。AEの大部分は注射部位に発生し、14日以内に消失した。血液学的、化学的検査項目、バイタルサインについては、臨床的に意味のある、あるいは気になる傾向は認められなかった。免疫原性については、本剤の他の臨床研究で認められたものと異なる可能性は認められなかった。
本研究の結果から、CCHは成人女性の臀部におけるEFPに対して、1臀部あたり0.84mg(総投与量1.68mg/回)を21日以上の間隔をおいて3回投与することで、安全かつ有効な治療法であることがわかった。
実施例4−リリース1(RELEASE−1)/リリース2(RELEASE−2)
上記実施例2および3は、両臀部に中等度から重度のセルライト(PR−PCSSおよびCR−PCSSで評価3−4)を有する成人女性を対象に、治療部位ごとにCCH0.84mgまたはプラセボの皮下投与を最大3回行った、同一のデザインの多施設共同二重盲検無作為化プラセボ対照段階3研究(リリース−1およびリリース−2)について報告する。
段階3研究では、BMIやヘクセル重症度尺度のキャップ(登録基準)はなかった。ヘクセルの登録基準を設けなかったことは、段階2研究デザインとの違いである。この違いにもかかわらず、本研究は厳格な一次エンドポイントを達成し、16の二次エンドポイントのうち15項目に合格した。セルライトの重症度におけるヘクセルのキャップがなくなったことで、BMIの高い被験者が登録され、段階3研究の平均BMIが上昇したと考えられる。段階3では423人中210人が肥満であったのに対し、段階2bでは94人中32人が肥満であった。薬剤の効果はすべてのBMI群で認められ、患者中心の結果指標はいずれもBMIやその他の要因に影響されなかった。従って、コラゲナーゼはセルライトに対する安全で効果的な治療法であると言える。
完成した段階2b研究の応答者は、現在、5年間の安全性と耐久性を検討するロールオーバー延長研究で追跡される。また、リリース−1およびリリース−2の被験者は、現在、ロールオーバー延長研究で追跡される。その他のデータの解析では、以下の結果が得られた。
843人の女性が1回以上の注射を受けた(CCHとプラセボの比較。リリース−1、n=210対n=213、リリース−2、n=214対n=206)。)CCH治療を受けた被験者では、プラセボ治療を受けた被験者と比較し、リリース−1(約7.6%対約1.9%、p=0.006)、リリース−2(約5.6%vs.約0.5%、p=0.002)において、2レベル以上の複合応答が得られた女性の割合が統計的に有意に高かった。また、リリース−1(約37.1%対約17.8%、p=<0.001)およびリリース−2(約41.6%対約11.2%、p<0.001)では、プラセボに対して2レベル以上の複合応答が得られた。PR−PCSSおよびCR−PCSSによる有効性を示す結果を図8および図9に示す。
分析対象となった集団には、以下のようなものがあった。
治療意図(Intent−to−treat)(ITT)集団には、無作為化された被験者のうち、少なくとも1回の研究薬の注射を受けた者が含まれる。すべての人口統計学的特性およびベースライン特性の概要は、この集団に基づく。一次および二次的有効性パラメータは、この集団に基づく。
修正治療意図(Intent−to−treat)(mITT)集団は、ITT集団のうち、対象および非対象の臀部について、ベースラインおよび注射後に少なくとも1回、調査員によるCR−PCSSと被験者によるPR−PCSSの両方の評価を受けたすべての被験者を対象とした。すべての二次的効果および支持的効果の評価は、mITT集団に基づいて行われた。
同じデザインの各研究では、対象となる臀部で2レベル以上の複合応答者の割合が、CCH群で12%以上、プラセボ群で3%以下(オッズ比≧4.4)、参加者の中止率が10%程度であるという仮定に基づいて、サンプルサイズを推定した。以上の仮定により、各研究では、420人の女性を2つの治療群に1:1の割合で無作為に割り付ける必要があった。このサンプル数は、一次および鍵となる二次エンドポイントにおける統計的に有意な変化を検出するために、0.05のタイプ1エラーで90%以上の検出力を提供することを目的とした。治療に無作為に割り付けられ、研究薬の注射を1回以上受けた女性は、ITTおよび安全性集団に含まれた。一次および鍵となる二次エンドポイントのデータは、Cochran−Mantel−Haenszel検定を用いて分析し、研究実施施設の調整を行った。PR−CIS総合スコアのベースラインから71日目までの変化は、ベースライン値を調整した後、治療群と分析センターを要因とする共分散分析により評価した。71日目の有効性データが欠落している女性は、非応答者とした。人口統計、安全性、免疫原性に関するデータは、記述統計を用いてまとめた。統計解析には、SAS(商標登録)統計ソフトウェアパッケージVersion9.3以上(ノースカロライナ州、カリー、SAS Institute Inc.)を用いた.
臨床的に意味のある変化は、米国食品医薬品局のガイダンスに基づき、アンカーベースの手法を用いて推定した(US Department of Health and Human Services、Food and Drug Administration.Guidance for Industry:Patient−reported outcome measures: use in medical product development to support labeling claims.2009年12月発行.https://www.fda.gov/downloads/drugs/guidances/ucm193282.pdf.April 23、2019付でアクセス可能)に記載される。)S−GAISはPR−PCSSのアンカーの役割を果たした。セルライトの重症度の変化を検出するPR−PCSSの能力を、2つの研究のプールデータを用いて分析した。結果は、PR−PCSS(従属変数)とS−GAIS(独立変数)のデータをKruskal−Wallis 1−way ANOVAモデルで分析し、臨床的に意味のある変化のしきい値を決定した。
セルライト治療を目的としたCCHの初期の研究と同様に、CCHは段階3研究において、すべての投与量グループで良好な忍容性を示し、ほとんどの有害事象は軽度から中等度で、主に注射部位に限定された。本研究で最も多く見られた有害事象は、注射部位のあざ、注射部位の痛み、注射部位の変色、注射部位の結節、注射部位のそう痒だった。さらに、CCH投与群の有害事象による中止率は、リリース1、リリース2ともに、それぞれ約4.3%、約3.7%と非常に低かった。
リリース−1/リリース−2では、1回目の治療で平均して10人中7人以上の被験者がPR−PCSSスコアを1レベル以上改善した。また、これらの被験者は、PR−CIS幸福度スコア(セルライトの見た目に対する満足度)の大幅な上昇(プラセボと比較して統計的に有意な改善、p<0.01)を経験した。本臨床研究の他の側面では、50%以上の被験者がPR−PCSSスコアが1レベル上昇し、65%以上の被験者がS−GAIS(被験者グローバル日的改善尺度(Subject Global Aesthetic Improvement Scale))を用いて「改善した」、「かなり改善した」または「非常に改善した」と評価した。また、CR−PCSS、PR−PCSS、I−GAIS、S−GAIS、PR−CISの結果は、年齢、BMI、肌の色に関係なく得られた。そして、有意に、正常体重/BMIの女性のサブ集団内で、セルライトの外観の改善率が研究集団全体よりも高かった。例えば、約11%の正常体重の患者、約8%の過体重の患者、約2.5%の肥満の患者が、PR−PCSSおよびCR−PCSSによる2レベルの複合応答を示した。
図10は、一次および鍵となる二次エンドポイントである非対象臀部の複合応答者(データ解析のため)を示す棒グラフで、71日目にCR−PCSSおよびPR−PCSSの両方でベースラインから2レベル以上または1レベル以上の重症度改善が見られた患者と定義される。
両研究において、有効性の一次エンドポイントである71日目に、対象となる臀部のCR−PCSSおよびPR−PCSSの両方で2レベル以上の複合応答者となった女性の割合は、プラセボと比較して有意に高かった(リリース−1、p=0.006、リリース−2、p=0.002、図8)。さらに、71日目に対象となる臀部で1レベル以上の複合応答が得られた女性の割合は、プラセボと比較して有意に高かった(リリース−1および−2、いずれもp<0.001、図8)。非対象臀部における71日目の≧2レベルおよび≧1レベルの複合応答者の割合(図10)は、両研究とも対象臀部の割合と同様であった。2レベル(図9A)と1レベル(図9B)の複合応答の写真画像は、CCHによる治療後71日目の皮膚表面の形状がベースラインと比較して改善していることを示す。さらに、両研究ともに、CCH治療を受けた女性は、PR−PCSS(1レベル以上の改善)およびS−GAIS評価(1レベル以上および2レベル以上の改善、図11)、PR−CIS総合スコア(図12)について、プラセボ治療を受けた女性と比較して、ベースラインから71日目までに有意な改善(すべてp<0.001)を示した。PR−PCSSの変化を検出する能力は、このレベルの変化が外部アンカー変数であるS−GAISの改善評価と関連したことから、1レベルの改善変化の閾値が女性にとって臨床的に意味のある変化を示すことを表示した。本実施例では、特に明記しない限り、研究302および303で使用した「日数」は、研究302および303の初回投与(1日目)に対するものである。
両研究とも、PR−PCSS(1レベル以上の改善)およびS−GAIS評価(1レベル以上および2レベル以上の改善、図11)、PR−CIS総合スコア(図12)において、CCH治療を受けた女性は、プラセボ治療を受けた女性と比較して、ベースラインから71日目まで有意な改善(すべてp<0.001)を示した。PR−PCSSの変化を検出する能力は、このレベルの変化が外部アンカー変数であるS−GAISの改善評価と関連していたことから、1レベルの改善変化の閾値が女性にとって臨床的に意味のある変化を示すことがわかった。
コラゲナーゼ注射は、迅速な効果を発揮した。初回治療の21日後には、被験者のPR−PCSSスコアの平均値がプラセボとは異なり、その後の治療で継続的かつ有意な改善が見られた。同様に、初回治療の21日後には、被験者のCR−PCSSスコアの平均値がプラセボとは異なり、その後の治療でも継続して有意な改善が見られた。
段階3研究では、11%以上の患者が、CR−PCSSおよびPR−PCSSスケールで測定した2レベルの複合応答を少なくとも片方の臀部で示した。
患者と医師の両方が、以下のようなフォト数値尺度で応答を示した。
・初回治療から71日目までに、3分の2以上の患者がどちらかの臀部で少なくとも1レベルのPR−PCSS応答を確認した
・3分の2以上の医師が、初回治療から71日目までに、どちらかの臀部で少なくとも1レベルのCR−PCSS応答を確認した
・初回治療から71日目までに、4分の3以上の患者がいずれかの臀部で1レベルのCR−PCSSおよび/または1レベルのPR−PCSSの応答を得た
患者と医師の双方が、以下のようなグローバルな改善を目の当たりにした。
・初回治療から71日目までに、4分の3以上の患者がS−GAISを用いてどちらかの臀部の改善を確認した
・初回治療から71日目までに、4分の3以上の医師がI−GAISを用いてどちらかの臀部の改善を確認した
フォト数値とその他の患者中心の尺度における患者の応答は以下の通りである。
・3分の2以上の患者が、初回治療から71日目までに、どちらかの臀部でPR−PCSSが1レベル、および/またはSSRSが1レベルの応答を示した
・初回治療から71日目までに、3分の2以上の患者がいずれかの臀部においてPR−PCSSの1レベルの応答および/またはSSCTの1レベルの応答を示した
・初回治療から71日目までに、4分の3以上の患者がどちらかの臀部でPR−PCSSの1レベルの応答および/またはS−GAISの1レベルの応答を示した
・初回治療から71日目までに、4分の3以上の患者がいずれかの臀部でPR−PCSSの1レベルの満足を示す応答および/またはPR−CISの1レベルの満足と示す応答となった
・初回治療から71日目までに、4分の3以上の患者が、どちらかの臀部において、1レベルのPR−PCSS応答、および/または、1レベルのPR−CIS:気になる応答を示した
・初回治療から71日目までに、4分の3以上の患者がどちらかの臀部でPR−PCSSの1レベルの応答および/またはPR−CIS:自覚の1レベルの応答を示した
Patient Reported Cellulite Impact Scale(PR−CIS)では、すべてのドメインで統計的な改善が見られた。
・セルライトの見た目への不満
・気になる
・自覚
・恥ずかしい
・老けて見える
・太り過ぎ/体型の崩れの外観
CR−PCSS、PR−PCSS、I−GAIS、S−GAIS、および/またはPR−CISの結果は、年齢、BMI、肌の色とは無関係であった。また、体重/BMIが正常な女性の部分集団では、セルライトの外観の改善度が全体の研究集団よりも高かったことが特徴である。
PR−PCSSで1レベルの改善が見られた被験者(CCH)は、PR−CIS満足スコアが大幅に増加(プラセボに対して統計的に有意)した。さらに、本研究の応答者は、1回目の注射後にプラセボとの有意な差が見られた。
CCH を投与された被験者は、本研究の一次エンドポイント(リリース−1、p=0.006&リリース−2、p=0.002)で測定されたとおり、治療によりセルライトの外観が統計的に有意なレベルで改善し、71日目にはプラセボ治療を受けた被験者と比較して対象となる臀部のセルライトの重症度が少なくとも2レベル複合で改善された(図8)。さらに、リリース−1は8つの鍵となる二次エンドポイントのうち8つを、リリース−2は8つの鍵となる二次エンドポイントのうち7つをクリアした。CCHは、積極的に治療を受けた被験者の忍容性が高く、ほとんどの有害事象は軽度から中等度で、主に注射部位に限られた。
対象の臀部または非対象の臀部、あるいはその両方において、少なくとも1レベルのPR−PCSS応答者であった被験者のPR−CIS幸福スコアを表50に示す。このように、CCH治療は、セルライトの出現に対する被験者の幸福度を改善するために、即効性があった。
Figure 2022502478
リリース−1の一次エンドポイント
CCHを投与された被験者の7.6%が、71日目に対象となる臀部のセルライトの外観について、調査員および患者による複合評価で非常に有意な改善(p=0.006)を示した(CR−PCSS(臨床医が報告したフォト数値セルライト重症度尺度)(Clinician Reported−Photonumeric Cellulite Severity Scale)およびPR−PCSS(患者が報告したフォト数値セルライト重症度尺度)(Patient Reported−Photonumeric Cellulite Severity Scale)の両スコアで2レベルの応答が見られた)。
リリース−2の一次エンドポイント
CCHを投与された被験者の5.6%が、71日目に対象となる臀部のセルライトの外観に関する調査員と患者の複合評価において、CR−PCSSとPR−PCSSの両スコアが2レベルで改善したのに対し、プラセボ被験者では0.5%しか改善しなかった。
両リリース−1、リリース−2の二次エンドポイント
・CCHを投与されたリリース−1の被験者の37.1%、リリース−2の被験者の41.6%が、71日目に対象となる臀部のCR−PCSSとPR−PCSSの両スコアで測定されるセルライトの外観について、調査員と患者の複合評価で1レベルの非常に有意な応答を示したのに対し、プラセボ被験者ではそれぞれ17.8%と11.2%にとどまった。
・CCHを投与したリリース−1の被験者の24.3%、リリース−2の被験者の21.0%が、PR−PCSSスコアで測定した71日目の対象臀部のセルライトの出現に関する患者の評価において、プラセボ被験者の12.2%、5.8%と比較して、統計的に非常に有意な2レベルの改善を示した。
・CCHを投与したリリース−1では54.3%、リリース−2では57.9%の被験者が、PR−PCSSスコアで測定した71日目の対象臀部のセルライトの出現に関する患者の評価において、プラセボ被験者の36.2%と29.6%に比べて、統計的に有意に1レベルの改善を示した。
・CCHを投与されたリリース−1の被験者の48.6%、リリース−2の被験者の42.1%が、SSRS(被験者自己評価尺度)(Subject Self Rating Scale)で測定された71日目の対象臀部のセルライトの外観に関する患者の評価において、プラセボ被験者の22.5%、15.0%と比較して、統計的に有意に1レベルの改善を示した。
・CCHを投与されたリリース−1の被験者の54.3%、リリース−2の被験者の46.8%が、71日目のセルライト治療に対する被験者満足度評価で「満足」または「非常に満足」と答えたのに対し、プラセボ被験者ではそれぞれ25.8%、13.6%にとどまった。
・CCHを投与したリリース−1では被験者の73.3%、リリース−2では被験者の67.8%が、71日目に対象となる臀部のセルライト部位の見た目が「改善した」、「非常に改善した」、「非常に改善した」と報告されたのに対し、プラセボ被験者ではそれぞれ43.2%、24.1%にとどまった。
・CCHを投与された被験者は、リリース−1研究では71日目に非対象の臀部において、CR−PCSSスコアとPR−PCSSスコアの両方が2レベル改善したことで評価される、調査員と患者によるセルライトの外観の複合評価において、統計的に有意な改善を示したが、リリース−2研究では統計的に有意な結果は得られなかった。
コラゲナーゼ治療を受けた患者は、治療後約71日目にCR−PCSSスコアとPR−PCSSスコアの両方でベースラインから2点以上の改善が見られたか、または治療後約71日目にCR−PCSSスコアとPR−PCSSスコアの両方でベースラインから1点以上の改善が見られた。また、そのような患者は、治療後約6ヶ月の時点でCR−PCSSおよびPR−PCSSスコアの両方についてベースラインから≧2点の改善があったか、治療後約6ヶ月の時点でCR−PCSSおよびPR−PCSSスコアの両方についてベースラインから≧1点の改善があったか、治療後約12ヶ月の時点でCR−PCSSおよびPR−PCSSスコアの両方についてベースラインから≧2点の改善があったか、治療後約12ヶ月の時点でCR−PCSSおよびPR−PCSSスコアの両方についてベースラインから≧1点の改善があった。さらに、そのような患者は、治療後約22日目、43日目、90日目、または180日目に、CR−PCSSおよびPR−PCSSスコアの両方について、ベースラインから≧2ポイントまたは≧1ポイントの改善を有した。
患者は、治療後約6ヶ月の時点で、CR−PCSSスコアとPR−PCSSスコアの両方について、ベースラインから≧3ポイントの改善を示したか、治療後約12ヶ月の時点で、CR−PCSSスコアとPR−PCSSスコアの両方について、ベースラインから≧3ポイントの改善を示したか、治療後約12ヶ月の時点で、CR−PCSSスコアとPR−PCSSスコアの両方について、ベースラインから≧3ポイントの改善を示した。さらに、そのような患者は、治療後約22日、43日、90日、または180日の時点で、CR−PCSSおよびPR−PCSSスコアの両方について、ベースラインからの≧3ポイントの改善を有した。別の態様では、コラゲナーゼ治療は、耐久性(本明細書で定義される)を示した。
PR−CIS(患者報告式セルライトインパクト尺度:Patient Reported Cellulite Impact Scale)では、セルライトの外観に対する不満、気になる、自覚、恥ずかしい、老いへの懸念、太って見える/体型への懸念からなるグループから選択された少なくとも1つの領域において、統計的な改善が認められた。非プラセボ群のうち、治療後71日目に対象となる臀部の2レベルの複合改善で「有」と応答した人の割合は約15.4%であった。
その他の結論は以下の通りである。
1.3分の1以上の患者が、いずれかの臀部において少なくとも1レベルのPR−PCSS応答を示した。患者の3分の2以上が、いずれかの臀部において少なくとも1レベルのPR−PCSS応答を認めた。全患者のいずれかの臀部において、少なくとも1レベルのPR−PCSS応答が見られた。
2.3分の1以上の患者が、22日目までにどちらかの臀部で少なくとも1レベルのPR−PCSS応答を示した。3分の2以上の患者が、22日目までにいずれかの臀部で少なくとも1レベルのPR−PCSS応答を確認した。すべての患者が、22日目までにいずれかの臀部で少なくとも1レベルのPR−PCSS応答を示した。
3.3分の1以上の患者が、43日目までにどちらかの臀部で少なくとも1レベルのPR−PCSS応答を示した。3分の2以上の患者が、43日目までにいずれかの臀部で少なくとも1レベルのPR−PCSS応答を確認した。すべての患者が、43日目までにいずれかの臀部で少なくとも1レベルのPR−PCSS応答を示した。
4.3分の1以上の患者が、71日目までにどちらかの臀部で少なくとも1レベルのPR−PCSS応答を示した。3分の2以上の患者が、71日目までにいずれかの臀部で少なくとも1レベルのPR−PCSS応答を確認した。すべての患者が、71日目までにいずれかの臀部で少なくとも1レベルのPR−PCSS応答を示した。
5.3分の1以上の医師がいずれかの臀部で少なくとも1レベルのCR−PCSS応答を見た3分の2以上の医師がいずれかの臀部で少なくとも1レベルのCR−PCSS応答を見たすべての医師が、いずれかの臀部において少なくとも1レベルのCR−PCSS応答を見た。
6.3分の1以上の医師が、22日目までにどちらかの臀部に少なくとも1レベルのCR−PCSS応答を確認した。3分の2以上の医師が、22日目までにいずれかの臀部で少なくとも1レベルのCR−PCSS応答を確認した。すべての医師が、22日目までにいずれかの臀部で少なくとも1レベルのCR−PCSS応答を確認した。
7.3分の1以上の医師が、43日目までにどちらかの臀部に少なくとも1レベルのCR−PCSS応答を確認した。3分の2以上の医師が、43日目までにいずれかの臀部で少なくとも1レベルのCR−PCSS応答を確認した。すべての医師が、43日目までにいずれかの臀部で少なくとも1レベルのCR−PCSS応答を確認した。
8.3分の1以上の医師が、71日目までにどちらかの臀部に少なくとも1レベルのCR−PCSS応答を確認した。3分の2以上の医師が、71日目までにいずれかの臀部で少なくとも1レベルのCR−PCSS応答を確認した。すべての医師が、71日目までにいずれかの臀部で少なくとも1レベルのCR−PCSS応答を確認した。
9.71日目までに4分の3以上の患者がどちらかの臀部で1レベルのCR−PCSSおよび/または1レベルのPR−PCSSの応答を得た。
10.43日目には、4分の3以上の医師がI−GAISを用いてどちらかの臀部の改善を確認した。
11.3分の1以上の患者が、いずれかの臀部においてPR−PCSSの1レベルの応答および/またはSSRSの1レベルの応答を示した。3分の2以上の患者がいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答者および/または1レベルのSSRS応答者であった。3分の2以上の患者がどちらかの臀部でPR−PCSSの1レベルおよび/またはSSRSの1レベルの応答者であった。
12.3分の1以上の患者が、22日目までにいずれかの臀部でPR−PCSSの1レベルの応答および/またはSSRSの1レベルの応答を示した。3分の2以上の患者が、22日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答者および/または1レベルのSSRS応答者となった。患者の3分の2以上が、22日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのSSRS応答を示した。
13.3分の1以上の患者が、43日目までにいずれかの臀部でPR−PCSSの1レベルの応答および/またはSSRSの1レベルの応答を示した。3分の2以上の患者が、43日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのSSRS応答を示した。患者の3分の2以上が、43日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのSSRS応答を示した。
14.3分の1以上の患者が、71日目までにいずれかの臀部でPR−PCSSの1レベルの応答および/またはSSRSの1レベルの応答を示した。3分の2以上の患者が、71日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのSSRS応答を示した。患者の3分の2以上が、71日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのSSRS応答を示した。
15.3分の1以上の患者が、どちらかの臀部においてPR−PCSSの1レベルの応答および/またはSSCTの1レベルの応答を示した。3分の2以上の患者が、いずれかの臀部において1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのSSCT応答を示した。3分の2以上の患者がどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのSSCT応答を示した。
16.3分の1以上の患者が、22日目までにいずれかの臀部でPR−PCSSの1レベルの応答および/またはSSCTの1レベルの応答を示した。3分の2以上の患者が、22日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのSSCT応答を示した。患者の3分の2以上が、22日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのSSCT応答を示した。
17.3分の1以上の患者が、43日目までにいずれかの臀部でPR−PCSSの1レベルの応答および/またはSSCTの1レベルの応答を示した。3分の2以上の患者が、43日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのSSCT応答を示した。43日目までに全患者がいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのSSCT応答を示した。
18.3分の1以上の患者が、71日目までにいずれかの臀部でPR−PCSSの1レベルの応答および/またはSSCTの1レベルの応答を示した。3分の2以上の患者が、71日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのSSCT応答を示した。71日目までに全患者がいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのSSCT応答を示した。
19.4分の1以上の患者が、いずれかの臀部においてPR−PCSSの1レベルの応答および/またはS−GAISの1レベルの応答を示した。患者の2分の1以上が、いずれかの臀部においてPR−PCSSの1レベルの応答および/またはS−GAISの1レベルの応答を示した。4分の3以上の患者が、どちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのS−GAIS応答を示した。全例がいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのS−GAIS応答を示した。
20.4分の1以上の患者が、22日目までにいずれかの臀部でPR−PCSSの1レベルの応答および/またはS−GAISの1レベルの応答を示した。患者の2分の1以上が、22日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのS−GAIS応答を示した。4分の3以上の患者が、22日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのS−GAIS応答を示した。22日目までに全患者がいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのS−GAIS応答を示した。
21.4分の1以上の患者が、43日目までにいずれかの臀部でPR−PCSSの1レベルの応答および/またはS−GAISの1レベルの応答を示した。2分の1以上の患者が、43日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのS−GAIS応答を示した。4分の3以上の患者が、43日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのS−GAIS応答を示した。43日目までに全患者がどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのS−GAIS応答を示した。
22.患者の4分の1以上が、71日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのS−GAIS応答を示した。患者の2分の1以上が、71日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのS−GAIS応答を示した。4分の3以上の患者が、71日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのS−GAIS応答を示した。71日目までに全患者がいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのS−GAIS応答を示した。
23.4分の1以上の患者が、どちらかの臀部でPR−PCSSの1レベルの応答および/またはPR−CISの1レベルの応答を示した。2分の1以上の患者がいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:満足を示す応答であった。4分の3以上の患者がいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:満足を示す応答であった。全例がいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:満足を示す応答であった。
24.4分の1以上の患者が、22日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:満足を示す応答となった。患者の2分の1以上が、22日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:満足を示す応答となった。4分の3以上の患者が、22日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:満足を示す応答となった。全患者が22日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:満足を示す応答を示した。
25.4分の1以上の患者が、43日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:満足を示す応答となった。2分の1以上の患者が、43日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:満足を示す応答となった。4分の3以上の患者が、43日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:満足を示す応答となった。全ての患者が43日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:満足を示す応答となった。
26.4分の1以上の患者が、71日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:満足を示す応答となった。2分の1以上の患者が、71日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:満足を示す応答となった。4分の3以上の患者が、71日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:満足を示す応答となった。全ての患者が71日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:満足を示す応答であった。
27.4分の1以上の患者が、どちらかの臀部でPR−PCSSの1レベルの応答および/またはPR−CISの1レベルの「気になるとの応答」であった。2分の1以上の患者がいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:気になるとの応答であった。4分の3以上の患者がいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:気になるとの応答であった。患者の4分の3以上がどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:気になるとの応答であった。
28.4分の1以上の患者が、22日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:気になるとの応答となった。2分の1以上の患者が、22日目までにいずれかの臀部において1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:気になるとの応答であった。さらに別の実施形態では、患者の4分の3以上が、22日目までにいずれかの臀部において1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:気になるとの応答であった。すべての患者が、22日目までにいずれかの臀部において1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:気になるとの応答であった。
29.4分の1以上の患者が、43日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:気になるとの応答となった。2分の1以上の患者が、43日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:気になるとの応答となった。4分の3以上の患者が、43日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:気になるとの応答となった。43日目までに全患者がどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:気になるとの応答を示した。
30.4分の1以上の患者が、71日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:気になるとの応答となった。2分の1以上の患者が、71日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:気になるとの応答となった。4分の3以上の患者が、71日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:気になるとの応答となった。71日目までに全患者がどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:気になるとの応答を示した。
31.患者の4分の1以上が、いずれかの臀部において1レベルのPR−PCSS応答者および/または1レベルのPR−CIS:自覚の応答であった。別の実施形態では、患者の2分の1以上が、いずれかの臀部において、1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:自覚の応答であった。4分の3以上の患者が、どちらかの臀部において1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:自覚の応答であった。全患者がいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:自覚の応答であった。
32.4分の1以上の患者が、22日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:自覚の応答となった。患者の2分の1以上が、22日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:自覚の応答となった。4分の3以上の患者が、22日目までにいずれかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:自覚の応答となった。すべての患者が22日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:自覚の応答となった。
33.4分の1以上の患者が、43日目までにいずれかの臀部でPR−PCSSの1レベルの応答者および/またはPR−CISの1レベルの「自覚の」応答となった。2分の1以上の患者が、43日目までにいずれかの臀部において1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:自覚の応答であった。さらに別の実施形態では、43日目までに患者の4分の3以上がどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:自覚の応答であった。全ての患者が、43日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:自覚の応答であった。
34.患者の4分の1以上が、71日目までにいずれかの臀部において1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:自覚の応答であった。別の実施形態では、患者の2分の1以上が、71日目までにいずれかの臀部において1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:自覚の応答であった。4分の3以上の患者が、71日目までにいずれかの臀部において1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:自覚の応答であった。全ての患者が71日目までにどちらかの臀部で1レベルのPR−PCSS応答および/または1レベルのPR−CIS:自覚の応答であった。
35.今回の研究では、アンカーベースの分析により、PR−PCSSスコアの変化が1以上であれば臨床的に意味があるとされた。両研究において、CCH治療を受けた女性の半数以上が、PR−PCSSスコアの変化が1以上であった(54.3%および57.9%)。PR−PCSSとCR−PCSSの両方で1レベル以上の複合応答が35%以上の女性に認められ、S−GAISで1レベル以上の応答が55%以上の女性に認められた。
36.PRCIS総合スコアのベースラインからの変化に基づき、CCHで治療を受けた女性は、プラセボで治療を受けた女性と比較して、治療後にセルライトの視覚的および感情的な影響を総合的に軽減したと報告した。つまり、生活の質と自尊心が向上した。
37.AEは速やかに消失し、強度は軽度から中等度であり、研究中止の原因となる頻度は低かった(いずれの研究でも女性の5%未満)。
38.今回の研究では、これまでのセルライト研究の中で最大の合計患者数(N=843)を含み、それぞれ多施設、無作為化、二重盲検、プラセボ対照の研究デザインを採用する。
39.重度のセルライトを持つ女性を含む広範な研究参加基準を設定した。ベースラインで重度のセルライトを有する女性のうち、CR−PCSSおよびPR−PCSSで評価したCCH治療を受けた女性の15%以上および35%以上が、71日目に対象となる臀部に改善を認めた。前述のように、一次エンドポイントであるベースラインからの2レベル以上の複合的な改善は、厳しい基準と考えられる。しかし、この厳しい基準にもかかわらず、CCHを投与された女性は、プラセボと比較して、一次エンドポイントを満たす割合が有意に高かった。
40.2つの段階3無作為化プラセボ対照研究によると、CCHは中度から重度の臀部のセルライトを持つ女性に対して、安全で効果的な治療法である。
実施例2および3(研究302および303)の項目毎の結果。
実施例2および3で実施した分析は同一であったため、実施例2および3の一次および鍵となる二次エンドポイントの結果を並べた表を表51に示す。
Figure 2022502478
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ピボタル段階3研究(研究302および研究303、以下「プール1」)および無作為化二重盲検プラセボ対照研究(研究201、研究301および研究302、以下「プール2」)のプール解析結果は、各研究の結果を比較する。研究−202、−205、−304の結果は、効果の持続性を裏付け、研究−202の結果は、CCHを再投与しても耐性がないことを裏付ける。また、各研究(研究201、研究302、研究303)の一次エンドポイントの解析結果、およびプール1、2での統合結果では、臨床医(治験担当者)と患者(被験者)の尺度の複合で測定した結果、CCH治療群ではプラセボ治療群に比べてセルライトの重症度の低下がより頻繁に認められたことが示された。
一次評価項目および鍵となる二次評価項目の比較結果(プール1−ITT集団)を表52に示す。
Figure 2022502478
関連する臨床データを以下の表53−61に示す。
Figure 2022502478
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2つの多施設共同無作為化二重盲検プラセボ対照研究の結果、CCHは、プラセボと比較して、71日目に2レベルの複合応答の割合で評価されるセルライトの重症度を有意に減少させることが実証された。また、段階3研究では、CR−PCSSおよびPR−PCSSの評価において、CCH治療群とプラセボ治療群の明確な差が、最初の治療セッションから21日後という早い段階で認められた。
サブグループ解析の結果、年齢、人種、民族、BMI、フィッツパトリック・スキンタイプ、セルライトの家族歴、ベースラインのセルライトの重症度、免疫原性の有無は、有効性に明らかな影響を及ぼさないことが示された。65歳以上の年齢層およびBMIが30kg/m以上のカテゴリーにおけるCCHの効果をさらに評価するために、補足的な事後解析を行った。選択された事後解析は、主要な研究の鍵となる二次エンドポイントであり、対象臀部における1レベルの複合応答、非対象臀部における2レベルの複合応答、2レベルおよび1レベルのPR PCSS応答解析を含む。この分析結果に基づき、すべてのサブの群において、CCHはプラセボと比較して有効性が高い傾向にあることが示された。
また、すべての鍵となる二次エンドポイントにおいて、CCH治療群とプラセボ治療群の間に統計的に有意な差が認められた。これらの副次評価項目には、対象臀部のPR−PCSS1レベルの応答者の割合、対象臀部のPR−PCSS2レベルの応答者の割合、対象臀部の1レベルの複合応答者の割合、非対象臀部の2レベルの複合応答者の割合、SSRS1レベルの応答者の割合、PR−CIS総合スコアのベースライン(1日目)からの変化、対象臀部のS−GAIS1レベルの応答者、対象臀部のS−GAIS2レベルの応答者が含まれた。
これらの重要な副次評価項目には、被験者にとって適切で臨床的に意味のある、患者が報告する治療効果の影響度を評価する尺度が含まれる。PR−CISはセルライトの視覚的および感情的な影響を評価し、SSRSはセルライトの見た目に対する満足度を評価し、S−GAISは外観を評価した。全体的に、患者が報告した満足度と感情的影響の指標は、プラセボ治療群と比較して、CCH治療群でより大きく、統計的に有意な改善が見られた。セルライトの重症度の減少は、CCH0.84mg/治療部位の最初の治療セッションの投与後21日目という早い時期に明らかになり、71日間の二重盲検研究期間を通して持続した。また、−304研究の180日目までの結果では、親研究終了後6カ月までPR−PCSSおよびCR−PCSSでの耐久性(効果の持続性)が示された。
実施例5−セルライト治療におけるCCHの安全性と一時的な応答パターンを評価する段階3B、非盲検、長期研究(研究304)
本研究は、上記実施例2および3の多施設、非盲検、長期研究である。本研究では、71日間の二重盲検プラセボ対照研究(実施例2(研究302)または実施例3(研究303)、以下「親研究」("parent studies")または「親研究」("parent study"))において、成人女性のEFPを有する両側臀部2箇所の同時治療(総投与量は最大1.68mg×3回)において、以前にCCHを臀部1箇所あたり0.84mg投与された被験者を評価した。前述のいずれかの研究で終了した後、親研究の71日目(すなわち、初回治療後70日目)から最大5年間、被験者を追跡調査した(今後も追跡調査する予定)。この期間は、これらの研究でCCHに最後にさらされてから約28日後である。
本実施例で特に明記しない限り、研究304で使用した「日数」は、研究302または303のいずれかにおける初回投与(1日目)から71日目を基準とした。セルライト評価は、本研究の180日目に行われたが、これは実施例2および3で報告された71日目から約180日後であり、被験者のCCHによる最初の治療から約251日後であった。したがって、本実施例5における「180日目」とは、実施例2および3の71日目の約180日後を意味する。本実施例5の180日目の評価は、評価が完了するまで、被験者、調査員、および施設の担当者が、段階3研究で受けた治療について盲検化されているという点で、盲検化方式で実施された。
本研究の一次目的は、(a)成人女性のEFP治療におけるセルライトに対するCCHの長期安全性、(b)成人女性のEFP治療の再治療に使用した場合のCCHの安全性、(c)成人女性のEFP治療後のCCHの長期免疫原性プロファイルを評価することであった。本研究の二次的目的は、CCHで治療したEFPの成人女性における応答率低下までの期間(TRR)、すなわち治療の持続性を評価することであった。この研究は現在進行中である。本実施例は、2019年4月1日までに収集されたデータを示す。その日までに少なくとも180日目の評価来院を完了した479人の被験者が含まれる。
実施例2および3の研究を完了した755人の被験者(CCH治療を受けた被験者およびプラセボ治療を受けた被験者)のうち、617人の被験者(CCH治療を受けた被験者およびプラセボ治療を受けた被験者)がこの非盲検延長研究に参加した。本研究の180日目にこれらの被験者の盲検化が解除されると、その後CCH治療を受けた被験者のみが本研究に残った。
研究デザインの概要を図25に示す。180日目の評価が完了した後(すなわち、実施例2および3の71日目から180日後)、親研究における各被験者の研究治療についてサイトの盲検化を解除し(親研究の71日目から約6ヶ月後、親研究のCCHの初回投与から約251日後)、それらの研究中にプラセボを投与された被験者は、研究を中止し、研究を継続しなかった。CCH治療を受けた被験者は、その後、以下の3つのカテゴリーのいずれかに分類された。
・カテゴリーI(1レベルの複合応答)には、親研究でCCHの投与を受け、親研究の71日目にどちらか(または両方)の臀部で最大の複合応答が得られ、PR−PCSSおよびCR−PCSSで評価したセルライトの重症度が最大で1レベル改善された被験者が含まれる。両臀部で改善が見られた場合、複合的な1レベルの改善が同じ臀部で見られたことが対象となる(すなわち、PR−PCSSおよびCR−PCSSの改善が同じ臀部で見られたことが必要)。また、1つの尺度で2レベルの改善が見られたものの、もう1つの尺度では1レベルの改善しか見られなかった被験者も、複合的な改善が同じ臀部内で起こっていれば、カテゴリーIの被験者とみなされた。カテゴリーIの被験者は、本非盲検研究において、最大2つの臀部に対して1回の追加再治療コース(すなわち、約21日間隔で3回の治療セッション)を受けることができる。再治療は、180日目の評価後、親研究での被験者の治療の盲検化が解除された後に開始できる。親研究からの研究薬の盲検化が解除されていれば、再治療のためのスクリーニングは180日目の来院時に開始しても良い。カテゴリーIの被験者では、複合的な改善度が1レベル以下の臀部のみが再治療の対象となる。再治療開始後(治療開始日1)の非盲検有効性の評価は、本非盲検研究の治療開始日4(71日目+5日目)までとし、その後は、再治療を受けた5年間の時期に応じて、2年間は6ヵ月ごとに、その後は親研究302および303の71日目から最長5年間(1800日目)まで毎年観察する。カテゴリーIに該当する被験者で、追加の再治療を受けないことを選択した場合は、観察期間(第2〜7回、すなわち12、18、24、36、48、60カ月目)が設けられる
・カテゴリーII(2レベルの複合応答者)には、親研究でCCHの投与を受け、親研究の71日目にPR−PCSSとCR−PCSSの両方で少なくとも1つの臀部のセルライトの重症度が2レベル以上改善した被験者が含まれる(すなわち、2レベルの複合応答者)。これらの被験者は、親研究の71日目から2年間は約6カ月ごとに、その後は最大5年間(1800日目)毎年、TRR(以下に定義)と安全性について観察される。カテゴリーIIの被験者は、親研究の71日目と比較して複合応答が少なくとも1レベル低下し、かつ親研究の1日目と比較してどちらか一方または両方の臀部で複合応答が2レベルを維持しなくなった場合、再治療の対象となり、その後は観察に参加することになる。
・カテゴリーIII(非複合型応答)には、親研究で積極的にCCHを投与されたものの、カテゴリーIまたはIIに含まれる基準を満たさなかったその他のすべての被験者が含まれる。これらの被験者は、2年間は6カ月ごとに、最大5年間は1年ごとに安全性を観察され(1800日目)、研究中に再治療を受けることはできない。
ただし、治療可能なEFP陥凹部がない臀部を対象とし、調査員が治療来院1、治療来院2、または治療来院3でCR−PCSSのスコアが0であると評価した場合を除く。各再診時には、治療対象となる臀部を、本明細書に記載されているような一貫した標準化されたリラックスしたポーズで被験者が立っている状態で、陥凹部と注射部位をマーキングする前と後に写真撮影を行う。
治療領域は、対象となる臀部と定義される。被験者は、180日目以降、どちらか一方または両臀部(すなわち、左または右の臀部)に治療を受ける資格がある。すべてのセルライト評価は、個々の治療部位に対して行われる。治療部位は別々に評価される。各臀部の陥凹部は、被験者が一定のリラックスしたポーズをとって立っている時に明らかで、はっきりとしたもので、治療に適したものでなければならない。同じ臀部の陥凹部、または異なる臀部の陥凹部は、指定された治療回数で再治療することができるが、すべての治療回数において、臀部内のすべての場所に注射を行う必要がある(例:臀部1つにつき12回)。
特定の臀部(右/左)への注射が治療来院時(例えば、治療来院2)に行われなかった場合でも、治療来院1で臀部が治療されていれば、被験者はその来院時(治療来院2)に対側の臀部の再治療の評価を受ける。被験者が治療来院3に戻ってきたとき、それぞれの臀部が被験者(PR−PCSSを使用)と調査員(CR−PCSSを使用)によって再び評価される。調査員が対象となる臀部のセルライトの重症度をCR−PCSSを用いて0以上と評価した場合、注射が行われることになる。
本研究の観察段階に参加するカテゴリーIおよびカテゴリーIIの被験者は、12ヶ月目、18ヶ月目、24ヶ月目、36ヶ月目、48ヶ月目、60ヶ月目の観察来院時にセルライト評価を行う。これらの観察時に、評価の結果、臀部が再治療に適していると判断され、対象者が本研究304で以前にCCHを受けていない場合(実施例5)、対象者は対象となる臀部に対して1コースの再治療を受けることになる。
カテゴリーIおよびカテゴリーIIの対象者の再治療コースは、治療来院1、2、および治療来院3において、臀部に治療可能なEFPの陥凹部がない場合、すなわち調査員がCR−PCSSで0点と評価した場合を除き、21日間の間隔をおいて3回の再治療セッションを行う。1回の再治療は、対象となる臀部ごとにCCHを12回(1回あたり0.07mg/0.3mL)、0.84mg、3.6mL(二重盲検研究で実施された治療コースと同じ)注入し、最大2臀部まで同時に治療を行うものとする。本研究では、カテゴリーIおよびカテゴリーIIの対象者に対して、1回限り、対象となる臀部2ヵ所までの再治療を同時に実施する。再治療開始後(治療来院1回目;治療1日目)、被験者は再治療中の各注入日に安全性を評価し、治療来院2回目(22日目)、治療来院3回目(43日目)、治療来院4回目(71日目)に安全性とセルライトの重症度を評価する。再治療後、これらの被験者は、5年間のうちいつ再治療を受けたかに応じて、2年間は6カ月ごとに、その後は親研究(実施例2および3)の71日目から最大5年間(1800日目)まで毎年観察される。
研究の目的上、応答の減少(すなわち、応答の低下または消失)は、親研究の71日目にPR−PCSSおよびCR−PCSSの両方で観察されたセルライトの重症度改善の複合的な1レベルの悪化と定義される。TRRは、有効性を評価した日(親研究の71日目)から、本研究においてPR−PCSSおよびCR−PCSSの両方で複合的に1レベルの応答消失が観察された研究来院日までの期間と定義した。応答の減少および/または完全な消失の確認は、複合的な応答の減少が最初に検出されてから約2週間後のフォローアップ研究で行われる。
デジタル写真は直接的な効果測定ではないが、デジタル写真は特定の効果測定の評価に利用される。各臀部は、上述のように標準化された方法でデジタルカメラを用いて、2つの臀部のそれぞれについて以下の時点で写真撮影される。
・全被験者のスクリーニング、180日目、および確認のための来院(陥凹部や注射部位のマーキングはなし
・カテゴリーIおよび/または対象となるカテゴリーIIの被験者の治療受診日(1日目、22日目、43日目)における陥凹部および注射部位のマーキング前とマーキング後(注射前)
・71日目の来院(治療終了/早期終了)、観察評価来院(360日目、540日目、720日目、1080日目、1440日目、1800日目/研究終了(以下、「EOS」))、確認来院(陥凹部や注射部位の痕跡がないこと)
180日目の受診と二重盲検親研究の盲検解除後は、写真撮影はカテゴリーIとカテゴリーIIの被験者に限定される。
親研究で治験薬を投与された被験者のうち、本研究に参加できたのは最大843名であった。合計617名の被験者が親研究を完了し、本研究への参加に同意した。そのうち、130名が参加基準を満たさず、同意を撤回したか、180日目の来院前に追跡調査ができなくなった。また、4名の被験者が180日目来院に参加したが、盲検化解除前に研究を辞退し、中間データカットオフ(2019年4月1日)の時点で4名の被験者が盲検化解除されていなかった。したがって、合計479名の被験者が180日目の来院を完了し、データカットオフの時点で盲検化が解除された。
これらの479名の被験者のうち、238名は親研究でプラセボを投与され、180日目の来院を完了した後、本研究へのさらなる参加を取りやめた。したがって、親研究でCCHを投与され、本研究で180日目の来院を完了した241名の被験者が継続の対象となった。241名の適格被験者のうち、データカットオフ時(2019年4月1日)に198名が本研究の非盲検相への参加に同意した。そのうち30名の被験者は、データカットオフ前にCCH再治療を受ける資格があり、受けることを選択した(表62および63)。
Figure 2022502478
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投与量と投与方法
セルライト用CCHは、上述のように、0.92mgのコラゲナーゼクロストリジウムヒストリチウムからなる無菌の凍結乾燥粉末である。研究に参加する資格を得た被験者には、1回の治療につき臀部あたり最大0.84mgのCCHまたはプラセボが投与され(1回の治療での総投与量は1.68mg)、21日間隔の3回の治療で臀部あたり12回の皮下注射が行われた(表64)。
Figure 2022502478
被験者がうつ伏せになった状態で、30ゲージの1/2インチ針付き注射器を用いて、研究薬を皮下に注射する。各注射部位には、図7に示すように、位置A、B、Cに0.1mLのアリコートを3回(総注射量0.3mL)投与して、1回の皮下注射を行う。注射の深さは、下向きの圧力をかけずに、針の先端から針のハブまたは根元までの治療針の長さ(0.5インチ)に対応する。
各再診時に、臀部あたり4本の注射器が用意され、投与される。各シリンジには0.9mLの治験薬が入っている(すなわち、各シリンジに3回の注射ができる)。各治療期間中に、再治療の対象となる臀部に、1本あたり0.3mLの皮膚注射を12本行う。本研究で再治療の対象となった被験者には、1回の治療日に臀部あたり最大0.84mgのCCHが投与され、21日間隔の3回の治療時に臀部あたり最大12回の皮下注射が行われる。
評価基準
有効性は、CR−PCSSおよびPR−PCSS、患者が報告したセルライトの影響尺度(Patient Reported Cellulite Impact Scale(PR−CIS))、被験者グローバル美的改善尺度(Subject Global Aesthetic Improvement Scale(S−GAIS))、被験者自己評価尺度(Subject Self−Rating Scale(SSRS))、セルライト治療に対する被験者の満足度評価(Subject Satisfaction with Cellulite Treatment Assessment)を用いて評価した。
安全性の評価項目は、有害事象(AE)、バイタルサイン、身体検査、臨床検査、免疫原性であった。
統計手法
以下の分析集団を使用した。
・180日目の観察集団には、親研究からのロールオーバー被験者がすべて含まれる。
・非盲検観察集団には、非盲検研究に参加し、親研究でCCHを投与されたすべての被験者が含まれる。この集団には、カテゴリーI、II、IIIのすべての被験者が含まれる。
・再治療前のTRR集団には、治療を受けた臀部のいずれか/両方について、親研究の71日目にCR−PCSSとPR−PCSSの両方の評価で少なくとも1レベルまたは2レベルの改善が見られたすべての被験者が含まれる。この集団にはカテゴリーIおよびIIの被験者が含まれる。応答の軽減は、治療を受けた臀部のいずれか/両方について、親研究においてCR−PCSSおよびPR−PCSSの評価の両方で少なくとも1レベルおよび2レベルの改善が見られた被験者について、個別に評価される。再治療前の応答率の低下は、この集団を用いて解析される。
・非盲検再投与(OLR)集団には、この非盲検研究で再投与されたTRR集団のすべての被験者が含まれる。
・再治療後のTRR対象者には、OLR対象者のうち、非盲検治療期の71日目/治療終了日の診療所来院時にCR−PCSSおよびPR−PCSSの両評価で少なくとも1レベルまたは2レベルの複合的な改善が見られた被験者が含まれる。応答の軽減は、非盲検治療期において、治療した各臀部のCR−PCSSおよびPR−PCSS評価の両方で少なくとも1レベルおよび2レベルの複合的な改善が見られた被験者について、個別に評価される。再治療後の応答率の低下は、この集団を用いて解析する。
効能分析
本調査で使用した応答の定義は以下の通りである。
セルライト重症度尺度(Cellulite Severity Scale)(PR−PCSSおよびCR−PCSS)における応答の低下:応答の低下は、再治療前と再治療後に分けて評価した。本研究における応答の低下の定義の概要を表65に示す。
Figure 2022502478
Figure 2022502478
応答の低下までの時間 表66に、TRRの算出方法の概要を示す。
Figure 2022502478
セルライト重症度評価尺度(PR−PCSSおよびCR−PCSS)における応答の改善:本研究で再治療を受けた被験者について、再治療期(22日目、43日目、71日目)におけるセルライト重症度の応答の改善を、再治療期の初日と比較して評価する。
2レベルの改善:本研究の治療コース1日目(治療セッション1)の対応する評価と比較して、再治療を受けた後にPR−PCSSまたはCR−PCSSの評価でセルライトの重症度が2レベル以上改善したと定義した(すなわち、ベースラインのPR−PCSSおよび/またはCR−PCSSの評価からの変化が−2、または−3)。
1レベルの改善:本研究の治療コース1日目(治療セッション1)の対応する評価と比較して、再治療を受けた後にPR−PCSSまたはCR−PCSSの評価でセルライトの重症度が1レベル以上改善したと定義した(すなわち、ベースラインのPR−PCSSおよび/またはCR−PCSS評価からの変化が−1、−2、または−3)。
2レベル応答者:本研究の治療コース1日目(治療セッション1)の評価と比較して、PR−PCSSまたはCR−PCSSの評価が2レベル以上改善した被験者と定義した。
1レベル応答者:本研究の治療コース1日目(治療セッション1)の評価と比較して、PR−PCSSまたはCR−PCSSの評価が1レベル以上改善した被験者と定義した。
1または2レベルの複合改善は、PR−PCSSとCR−PCSSの両方を用いて評価される(例:1レベルの複合改善の場合−同じ臀部のPR−PCSSとCR−PCSSの両方で、少なくとも1レベルの応答の改善が観察される。2レベルの複合的な改善の場合−同じ臀部のPR−PCSSとCR−PCSSの両方で少なくとも2レベルの改善が観察される)。)1つまたは両方の構成要素(すなわち、PR−PCSS構成要素またはCR−PCSS構成要素)について分類が欠落する場合、その来院では複合応答者の分類が欠落する。
2レベルの複合応答者:PR−PCSSの2レベル以上の応答者およびCR−PCSSの2レベル以上の応答者と定義した。
1レベルの複合応答者:少なくとも1レベルのPR−PCSS応答者および少なくとも1レベルのCR−PCSS応答者である被験者と定義した。
PR−CISの応答者
・PR−CIS総合スコアについては、評価時点でPR−CIS総合スコアがベースラインから12以上(すなわち、各項目の平均値が2以上)低下した被験者をPR−CIS応答者と定義した。
・PR−CISの略式総合スコアについては、評価時点でPR−CISの総合スコアがベースラインから10以上(すなわち、各項目の平均値が2以上)低下した被験者をPR−CIS応答者と定義した。
・各項目のPR−CIS応答者とは、評価時点において、非盲検期の71日目のスコアからPR−CIS項目のスコアが2以上減少した被験者と定義した。
・PR−CISの項目1「セルライトが見えることに対して被験者がどの程度満足しているか」は、被験者が報告した評価を10から引くことで反転させる(つまり、複合の目的のために、「満足している」という質問のスコアを反転させ(反映させ)、他の質問と方向性を一致させる)。このように、PR−CISの質問のうち、6つの質問の数値が高ければ、よりネガティブな影響を反映していることになる。
被験者グローバル美的改善尺度:2レベルのS−GAIS応答者とは、評価時点でS−GAIS評価が2以上(すなわち、2または3)の被験者と定義される。1レベルのS−GAIS応答者とは、評価時点でS−GAIS評価が1以上(すなわち、1、2、または3)である被験者と定義される。
セルライト治療に対する被験者の満足度評価:セルライト治療に対する被験者の満足度評価において、「満足」または「非常に満足」と応答した被験者を「応答者」と定義する。
被験者自己評価尺度:SSRSの1レベルの応答者は、評価中に臀部のセルライトの見た目に少なくともわずかに満足している(すなわち、やや満足[4]、非常に満足[5]、または非常に満足[6])被験者と定義される。2レベルのSSRS応答者は、評価時に臀部のセルライトの見た目に少なくとも非常に満足する(すなわち、非常に満足[5]または非常に満足[6])被験者と定義される。
A.有効性の分析−180日目の観察集団
1.セルライトの重症度
a.PR−PCSSとCR−PCSS
表67は、180日目観察集団における、親研究の1日目から71日目まで、および本研究の180日目(親研究の71日目から180日後、親研究では研究薬の初回投与から約251日後)までのPR−PCSSおよびCR−PCSSの変化をまとめたものである。
Figure 2022502478
Figure 2022502478
親研究でCCHによる治療を受け、本研究で180日目のセルライト重症度評価を完了した241名の被験者において、親研究の1日目から71日目までのPR−PCSSの平均(SD)変化量は、左臀部で−0.8(0.85)、右臀部で−0.9(0.92)であった。また、同じ被験者において、親研究の1日目から本研究の180日目までのPR−PCSSの平均(SD)変化は、左臀部で−0.7(0.87)、右臀部で−0.7(0.92)であった。
親研究の1日目から71日目までのCR−PCSS変化量の平均(SD)は、左臀部で−0.8(0.79)、右臀部で−0.7(0.76)であった。また、親研究の1日目から本研究の180日目までのCR−PCSS変化量の平均(SD)は、左臀部で−0.6(0.83)、右臀部で−0.6(0.83)であった。
親研究でプラセボを投与された238名の被験者では、PR−PCSSの1日目から71日目までの変化量の平均(SD)は、左臀部で−0.5(0.75)、右臀部で−0.5(0.79)であった。また、親研究の1日目から本研究の180日目までのPR−PCSSの変化量の平均は、左臀部で−0.3(0.71)、右臀部で−0.4(0.80)であった。
プラセボ投与群では、初日から71日目までのCR−PCSSの変化量の平均(SD)は、左臀部で−0.3(0.64)、右臀部で−0.3(0.70)であった。また、親研究の1日目から本研究の180日目までのCR−PCSSの変化量の平均は、左臀部で−0.4(0.72)、右臀部で−0.4(0.72)であった。
親研究では1日目から71日目まで、本研究では1日目から180日目までのCR−PCSSおよびPR−PCSSの平均変化量から、180日目観察集団の被験者は親研究の集団を代表していることが示された。また、180日目におけるCCH投与群とプラセボ投与群の差は、親研究で得られた結果と一致する。
b.PR−CIS
表68は、親研究の1日目から親研究の71日目まで、および180日目観察集団における本研究の180日目までのPR−CISの変化の概要を示す。
Figure 2022502478
Figure 2022502478
Figure 2022502478
親研究でCCHを投与され、本研究でPR−CISの180日目の評価を完了した被験者では、親研究の1日目から71日目までのPR−CIS総合スコアの変化量の平均(SD)は−11.8(11.77)であった。これらの同じ被験者において、親研究の初日から本研究の180日目までのPR−CIS総合スコアの変化の平均(SD)は−10.5(11.76)であった。
親研究でプラセボを投与された被験者では、親研究の初日から71日目までのPR−CIS総合スコアの変化の平均(SD)は−6.5(12.12)であった。この被験者において、親研究の1日目から本研究の180日目までのPR−CIS総合スコアの変化量の平均(SD)は−5.4(11.30)であった。
CCH投与群では、親研究の1日目から71日目までの変化量の平均(SD)は−10.3(9.95)であり、親研究の1日目から本研究の180日目までの変化量の平均(SD)は−9.3(9.88)であった。プラセボ投与群では、親研究の1日目から71日目までの変化量の平均(SD)は−5.7(10.30)であり、親研究の1日目から本研究の180日目までのPR−CIS省略スコアの変化量の平均(SD)は−5.2(9.90)であった。
PR−CISの項目ごとに応答の変化を見ても、同様の結果が得られた。
親研究の1日目から71日目まで、および本研究の1日目から180日目までのPR−CISの総得点、略式得点、項目得点の平均変化も、180観察集団の被験者が親研究の集団を代表していることを示す。180日目におけるCCH治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の差は、親研究で得られた結果と一致する。
2.治療効果の持続性
a.PR−PCSSおよびCR−PCSSの180日目の観察集団
表69は、180日目の観察集団におけるPRPCSSおよびCR−PCSSの、親研究の71日目から本研究の180日目までの変化をまとめたものである。
Figure 2022502478
PR−PCSSでは、親研究の71日目から本研究の180日目までの変化量の平均(SD)は、CCH治療を受けた被験者では、左臀部で0.2(0.81)、右臀部で0.2(0.86)であった。プラセボ治療を受けた被験者では、PR−PCSSの平均(SD)変化量は、左臀部で0.1(0.76)、右臀部で0.0(0.84)であった。
CR−PCSSでは、親研究の71日目から本研究の180日目までの変化量の平均(SD)は、CCH治療を受けた被験者では、左臀部で0.2(0.78)、右臀部で0.1(0.76)であった。プラセボ治療を受けた被験者では、CR−PCSSの平均(SD)変化量は、左臀部で−0.1(0.74)、右臀部で−0.1(0.76)であった。
71日目と180日目のPR−PCSSおよびCR−PCSSの差が小さいことから、CCHで治療を受けた被験者の親研究では、71日目から6カ月後まで治療効果が持続していることが示された。また、これらの結果は、平均治療効果が左右の臀部でほぼ同じであったことを示す。
b.PR−CISの180日目の観察集団
表70は、親研究の71日目から本研究の180日目までの、180日目の観察集団におけるPRCISの総合スコア、略式スコア、および項目スコアの変化をまとめたものである。
Figure 2022502478
Figure 2022502478
180日目の観察集団において、親研究の71日目から本研究の180日目までのPR−CISスコア合計の変化の平均(SD)は、CCH治療を受けた被験者で1.2(11.32)、プラセボ投与群で1.0(10.14)であった。PR−CIS略式スコアでは、親研究の71日目から本研究の180日目までの平均変化量は、CCH治療を受けた被験者で1.0(9.45)、プラセボ治療を受けた被験者で0.4(8.98)であった。また、各項目のスコアにも同様の小さな平均値(SD)の変化が見られた(セルライトの外観に満足している。CCH0.5[2.68]、プラセボ0.1[2.88];気になる:CCH0.0[3.55]、プラセボ0.0[3.78]、自覚:CCH0.1[2.63]、プラセボ−0.1[2.92];恥ずかしい:CCH0.1[2.62]、プラセボ0.1[2.27];老けて見える:CCH0.3[2.92]、プラセボ0.6[2.42];体型への懸念:CCH0.3[2.59]、プラセボ0.4[2.56])。
PR−CISの総合スコア、略式スコア、項目別スコアの71日目と180日目の差が小さいことから、CCH治療を受けた被験者の親研究では71日目から6ヵ月後まで治療効果が持続していることが示された。さらに、PR−CIS応答者の割合は、71日目から180日目まで一貫した。
c.被験者の自己評価尺度 180日目の観察集団
親研究の71日目において、親研究でCCH治療を受けた被験者の24.7%が2レベルのSSRS応答を示したのに対し、180日目の観察集団ではプラセボ治療を受けた被験者の11.4%が2レベルのSSRS応答を示した。180日目には、親研究でCCH治療を受けた被験者の14.9%が2レベルのSSRS応答を示したのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では8.9%だった。
親研究の71日目では、親研究でCCH治療を受けた被験者の51.5%がSSRSの1レベルの応答を示したのに対し、180日目の観察集団ではプラセボ−の21.2%がSSRSの2レベルの応答を示した。180日目には、親研究でCCH治療を受けた被験者の36.9%が2レベルのSSRS応答を示したのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では17.3%であった(表71)。
これらの結果は、CCH治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の両方において、SSRS応答者の割合が時間の経過とともに減少したことを示す。しかし、CCH治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の間のSSRS応答者の差は、180日目には親研究の71日目に観察された差と同様であった。
Figure 2022502478
B.有効性の分析−再治療前のTRR集団
再治療前のTRR集団は、親研究でCCHによる治療を受け、CR−PCSSおよびPR−PCSSで1レベルまたは2レベルの複合応答を示し、本研究の非盲検相での継続に同意した被験者103名で構成される。そのうち19人がカテゴリーIIに、84人がカテゴリーIに分類された。
1.2レベルの低下応答−CR−PCSSとPR−PCSS
本研究では、親研究で少なくとも1つの臀部においてセルライトの重症度が2レベル以上複合的に改善された被験者が19名いた(カテゴリーII)。これらの被験者のうち、180日目にセルライトの重症度が2レベル合成で低下した者はいなかった。カテゴリーIIの被験者において、CR−PCSSとPR−PCSSを個別に検討したところ、本研究304で定義したように、180日目にCR−PCSSで2レベル以上の応答低下が見られた被験者が1名(5.3%)、PR−PCSSで2レベル以上の応答低下が見られた被験者が4名(21.1%)いた(表72)。
Figure 2022502478
臀部を個別に検討しても同様の結果が得られた。前述のカテゴリーIIの被験者19名のうち、親研究でセルライトが2レベル以上複合的に改善された臀部は合計26名であった。180日目には1名(3.8%)の臀部で2レベル以上の複合的な減少が認められた。また、180日目にCR−PCSSが2レベル以上低下した臀部が4個(15.4%)、PR−PCSSが2レベル以上低下した臀部が5個(19.2%)あった。
2.1レベル低下の応答−CR−PCSSとPR−PCSS
再治療前のTRR集団には、カテゴリーIIの被験者が19人いた。このうち3名(15.8%)は、再治療前の応答が1レベル低下した。再治療前のTRR集団に含まれるカテゴリーIの被験者84人のうち、10人(11.9%)が再治療前に1レベルの複合的な応答低下を示した。全体(カテゴリーIとカテゴリーIIを合わせた103人)では、13人(12.6%)の被験者が180日目に1レベルの複合的な応答の低下を示した(表73)。
表74は、再治療前にセルライト重症度評価の応答が1レベル低下した臀部の数を示す(再治療前の集団TRR)。
Figure 2022502478
Figure 2022502478
Figure 2022502478
臀部を個別に検討しても同様の結果が得られた。前述のカテゴリーIIの被験者19名のうち、親研究で少なくとも2レベルの複合応答を示した臀部は合計26箇所であった。このうち、6箇所(23.1%)の臀部で1レベルの複合応答の低下が見られた。カテゴリーIの被験者では、132箇所の臀部のうち19箇所(14.4%)で1レベルの応答の低下が見られた。全体(カテゴリーIおよびカテゴリーII、158箇所の臀部)では、15.8%の臀部で180日目に1レベルの複合的な応答の低下が認められた。
3.応答低下までの期間−CR−PCSSおよびPR−PCSS
TRRは、親研究の71日目/EOSから、CR−PCSSおよびPR−PCSSの複合的な応答の悪化が初めて観察された今回の研究の受診日までの日数として定義された。応答が2レベルで低下した被験者はいなかったため、応答が2レベルで低下するまでの期間を算出することはできなかった。応答性が1レベル低下するまでの期間の平均(SD)は、カテゴリーIの被験者では187.5(10.87)日、カテゴリーIIの被験者では182.7(17.47)日であった。
4.応答の完全消失−CR−PCSSおよびPR−PCSS
応答の完全消失は、CRPCSSおよびPR−PCSSの評価の両方が(親研究の)ベースラインに戻ったことと定義した。カテゴリーIIの被験者(親研究で少なくとも2レベルの複合応答が得られた被験者)では、180日目に完全に応答が消失した者はいなかった。カテゴリーIの被験者84名のうち、4名(4.8%)が完全に応答を失った(表75)。
Figure 2022502478
5.再治療前の完全な応答消失までの期間−CR−PCSSおよびPR−PCSS
応答の完全消失までの期間は、親研究の71日目/EOSから、今回の研究で初めて応答の完全消失が観察された日までの日数と定義した。カテゴリーIIの被験者では、応答の完全消失はなかった。カテゴリーIの完全な応答消失までの平均(SD)日数は183.0(2.83)日であった。
6.セルライトの重症度−再治療前のTRR集団
a.PR−PCSSとCR−PCSS
カテゴリーIとカテゴリーIIの被験者を合わせた全体では、親研究の1日目から71日目/EOSまでのPR−PCSSの変化量の平均(SD)は、左臀部で−1.3(0.64)、右臀部で−1.4(0.83)であった。また、親研究の1日目から180日目までのPR−PCSS変化量の全体平均(SD)は、再治療前のTRR集団において、左臀部で−1.0(0.80)、右臀部で−1.1(0.93)であった。
カテゴリーIの被験者では、親研究の1日目から71日目までのPR−PCSS変化量の平均値(SD)は、左右の臀部でそれぞれ−1.2(0.60)および−1.2(0.80)であった。親研究の1日目から本研究の180日目までのPR−PCSS変化の平均値(SD)は、左右の臀部でそれぞれ−1.0(0.77)および−1.1(0.96)であった。
カテゴリーIIの被験者では、親研究の1日目から71日目までのPR−PCSS変化量の平均(SD)は、左右の臀部でそれぞれ−1.7(0.65)、−2.1(0.62)であった。親研究の1日目から本研究の180日目までのPR−PCSS変化の平均値(SD)は、左右の臀部でそれぞれ−1.1(0.94)、−1.2(0.79)であった。
親研究の1日目から71日目/EOSまでの全体(カテゴリーIとカテゴリーIIの被験者を含む)のCR−PCSSの平均(SD)変化量は、左臀部で−1.2(0.57)、右臀部で−1.1(0.63)であった。また、親研究の1日目から180日目までのCR−PCSSの変化量の全体平均(SD)は、左臀部で−0.8(0.78)、右臀部で−0.9(0.78)であった。
カテゴリーIの被験者では、親研究の1日目から71日目までのCR−PCSS変化の平均値(SD)は、左右の臀部でそれぞれ−1.1(0.46)、−0.9(0.54)であった。親研究の1日目から本研究の180日目までのCR−PCSS変化の平均値(SD)は、左右の臀部でそれぞれ−0.7(0.74)、−0.9(0.78)であった。
カテゴリーIIの被験者では、親研究の1日目から71日目までのPR−PCSS変化量の平均値(SD)は、左右の臀部でそれぞれ−1.8(0.63)および−1.8(0.37)であった。親研究の1日目から本研究の180日目までのPR−PCSSの変化の平均値(SD)は、左右の臀部でそれぞれ−1.2(0.85)および−1.2(0.76)であった。
これらの結果は、この集団における応答の持続性を支持するものである。
b.PR−CIS
PR−CISの総合スコア、略式スコア、項目別スコアについても同様の結果が得られ、この集団における応答の持続性が支持された。
7.治療効果の持続性
a.治療効果の持続性−再治療前のCR−PCSSおよびPR−PCSS−TRR集団
表76は、親研究(研究302/303)の71日目から本研究の180日目までの、再治療前のTRR集団のCR−PCSSおよびPR−PCSSの変化を示したものである。
Figure 2022502478
カテゴリーIの被験者において、親研究の71日目から本研究の180日目までのPR−PCSSの変化量の平均(SD)は、左臀部で0.2(0.68)、右臀部で0.2(0.84)であった。CR−PCSSについては、親研究の71日目から本研究の180日目までの変化の平均値(SD)は、左臀部で0.4(0.72)、右臀部で0.1(0.77)であった。
カテゴリーの被験者において、親研究の71日目から本研究の180日目までのPR−PCSSの変化の平均(SD)は、左臀部で0.6(0.83)、右臀部で0.8(0.76)であった。CR−PCSSについては、親研究の71日目から本研究の180日目までの変化の平均(SD)は、CCH治療を受けた被験者では、左臀部で0.6(1.02)、右臀部で0.7(0.75)であった。
TRR集団全体では、親研究の71日目から本研究の180日目までのPR−PCSSの変化の平均(SD)は、左臀部で0.3(0.72)、右臀部で0.3(0.87)であった。CR−PCSSでは、親研究の71日目から本研究の180日目までの変化の平均(SD)は、左臀部で0.4(0.79)、右臀部で0.2(0.80)であった。
71日目と180日目の全体的なTRR集団PR−PCSSおよびCR−PCSSスコアの差が小さいことから、CCH治療を受けた被験者の親研究では、71日目から6か月後まで治療効果が持続していることが示された。また、これらの結果は、平均治療効果が左右の臀部でほぼ同じであったことを示す。
b.治療効果の持続性−再治療前のPR−CIS−TRR集団
表77は、再治療前のTRR集団における、研究302/303の71日目/EOSから本研究の180日目/早期終了までのPR−CISの総合スコア、略式スコア、項目スコアの変化を示したものである。
Figure 2022502478
Figure 2022502478
再治療前のTRR集団全体(カテゴリーIとカテゴリーIIの合計)において、PR−CISスコア合計の親研究の71日目から本研究の180日目までの変化量の平均(SD)は0.0(12.21)であった。カテゴリーIの被験者の71日目から180日目までの変化量の平均(SD)は−0.6(11.20)、カテゴリーIIの被験者の71日目から180日目までの変化量の平均は2.5(16.04)であった。
親研究の71日目から本研究の180日目までの省略PR−CISスコアの変化量の平均(SD)は0.1(9.80)であった。カテゴリーIの被験者の71日目から180日目までの変化量の平均(SD)は−0.5(9.12)であり、カテゴリーIIの被験者の71日目から180日目までの変化量の平均は2.8(12.32)であった。
同様の小さな平均値(SD)の変化が、個々の項目のスコア全体にも見られた(セルライトの外観に満足:0.7、気になる:−0.2、自覚:−0.2、恥ずかしい:−0.1、老いへの懸念:−0.1、体型への懸念:−0.1)。)
71日目と180日目のTRR集団PR−CISスコア全体の差が小さいことは、PR−PCSSおよびCR−PCSSの結果を裏付けるものであり、CCH治療を受けた被験者において、親研究の71日目から6カ月後まで治療効果が持続していることを示す。
PR−CIS、S−GAIS、被験者のセルライト治療に対する満足度、およびSSRS応答者−再治療前のTRR集団
180日目に、再治療前のTRR集団のカテゴリーIおよびカテゴリーIIの被験者は、PR−CIS(総合スコア、略式スコア、項目別スコア)、S−GAIS、セルライト治療に対する被験者の満足度、およびSSRSの応答を示した。カテゴリーIIの被験者はカテゴリーIの被験者よりも応答者の割合が多かった。
有効性の結論
A.180日目の観察集団
180日目観察集団は、180日目の来院(セルライト評価を含む)を完了し、データカットオフ時(2019年4月1日)に盲検化されていなかった479名の被験者で構成された。180日目の来院は、親研究の終了から約180日後、親研究における研究薬の初回投与から約251日後に実施された。
親研究では1日目から71日目まで、本研究では1日目から180日目までのCR−PCSS、PR−PCSS、PR−CISの平均変化量は、180日目観察集団の被験者が親研究の集団を代表していることを示す。また、180日目におけるCCH治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の差は、親研究で得られた結果と一致する。
・親研究でCCH治療を受けた被験者241名の被験者では、親研究の1日目から71日目までのPR−PCSSの変化量の平均(SD)は、左右の臀部でそれぞれ−0.8(0.85)および−0.9(0.92)であり、親研究の1日目から本研究の180日目までのPR−PCSSの変化量の平均(SD)は、左右の臀部でそれぞれ−0.7(0.87)および−0.7(0.92)であった。親研究でプラセボ治療を受けた被験者では、1日目から71日目までのPR−PCSS変化量の平均(SD)は、左右の臀部でそれぞれ−0.5(0.75)および−0.5(0.79)であった。また、親研究の1日目から本研究の180日目までのPR−PCSSの変化量の平均は、左右の臀部でそれぞれ−0.3(0.71)、−0.4(0.80)であった。
・親研究でCCH治療を受けた被験者では、親研究の1日目から71日目までのCR−PCSS変化量の平均(SD)は、左臀部で−0.8(0.79)、右臀部で−0.7(0.76)であった。親研究の1日目から本研究の180日目までのCR−PCSSの変化量(SD)の平均値は、左臀部で−0.6(0.82)、右臀部で−0.6(0.83)であった。プラセボ治療を受けた被験者では、初日から71日目までのCR−PCSS変化量の平均値(SD)は、左臀部で−0.3(0.64)、右臀部で−0.3(0.70)であった。親研究の1日目から本研究の180日目までのCR−PCSSの変化の平均は、左右の臀部でそれぞれ−0.4(0.72)および−0.4(0.72)であった。
・親研究でCCH治療を受け、本研究でPR−CISの180日目の評価を完了した被験者では、親研究の1日目から71日目までのPR−CIS総合スコアの変化量の平均(SD)は−11.8(11.77)であった。同じ被験者において、親研究の初日から本研究の180日目までのPR−CIS総合スコアの変化量の平均(SD)は−10.5(11.76)であった。親研究でプラセボ治療を受けた被験者では、親研究の初日から71日目までのPR−CIS総合スコアの変化量の平均(SD)は−6.5(12.12)であった。同じ被験者において、親研究の1日目から本研究の180日目までのPR−CIS総合スコアの変化の平均(SD)は−5.4(11.30)であった。PR−CISの略式スコアおよび項目別スコアでも同様の変化が見られた。
親研究の71日目と本研究の180日目の間のPR−PCSS、CR−PCSS、PR−CISの差が小さいことから、CCH治療を受けた被験者では、親研究の71日目から6ヵ月後まで治療効果が持続していることがわかった。また、PR−CIS応答者の割合は、71日目から180日目まで一貫した。また、PR−PCSSおよびCR−PCSSの結果から、平均治療効果は左右の臀部でほぼ同じであることが示された。
・PR−PCSSでは、親研究の71日目から本研究の180日目までの変化量の平均(SD)は、CCH治療を受けた被験者では、左右の臀部でそれぞれ0.2(0.81)および0.2(0.86)であった。プラセボ治療を受けた被験者では、PR−PCSSの平均(SD)変化量は、左右の臀部でそれぞれ0.1(0.76)および0.0(0.84)であった。
・CR−PCSSでは、親研究の71日目から本研究の180日目までの変化量の平均(SD)は、CCH治療を受けた被験者では、左右の臀部でそれぞれ0.2(0.78)および0.1(0.76)であった。プラセボ治療を受けた被験者では、CR−PCSSの平均(SD)変化量は、左右の臀部でそれぞれ−0.1(0.74)および−0.1(0.76)であった。
・180日目の観察集団において、親研究の71日目から本研究の180日目までのPR−CISスコア合計の変化の平均(SD)は、CCH治療を受けた被験者で1.2(11.32)、プラセボ治療を受けた被験者で1.0(10.14)であった。PR−CIS略式スコアでは、親研究の71日目から本研究の180日目までの平均変化量は、CCH治療を受けた被験者で1.0(9.45)、プラセボ治療を受けた被験者で0.4(8.98)であった。また、各項目別スコアにも同様の小さな平均(SD)変化が見られた。
親研究では、180日目にS−GAIS、セルライト治療に対する満足度、およびSSRSの応答者の割合は、CCH治療を受けた被験者とプラセボ治療を受けた被験者の両方で減少した。しかし、本研究では、180日目の時点で、CCH治療を受けた被験者の応答率は、プラセボ治療を受けた被験者の応答率よりも高いままであった。
・親研究では、71日目にCCH治療を受けた被験者の19.1%が左臀部でS−GAIS2レベルの応答を示し、21.6%が右臀部で2レベルの応答を示したのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では6.3%(左臀部)、7.1%(右臀部)であった。本研究304日目の180日目には、CCH治療を受けた被験者の12.4%および11.6%の被験者が、左臀部および右臀部においてS−GAISの2レベルの応答を示した。プラセボ治療を受けた被験者では、180日目に2レベルのS−GAIS応答があった被験者の割合は、左右の臀部でそれぞれ3.8%であった。
・親研究では、71日目に、CCH治療を受けた被験者の70.5%が左右の臀部でS−GAIS1レベルの応答を示したのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では37.4%(左臀部)および37.0%(右臀部)であった。180日目には、CCH治療を受けた被験者の53.5%と51.0%が、左右の臀部でそれぞれS−GAISの1レベルの応答を示した。プラセボ治療を受けた被験者では、180日目にS−GAISが1レベルであった被験者の割合は、左臀部で27.8%、右臀部で28.3%であった。
・71日目において、親研究でCCH治療を受けた被験者の50.6%がセルライト治療に「満足」または「非常に満足」と応答したのに対し、180日目観察集団ではプラセボ治療を受けた被験者の22.5%が「満足」または「非常に満足」と応答した。180日目の観察集団では、親研究でCCH治療を受けた被験者の34.4%がセルライト治療に「満足」または「非常に満足」と答えたのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では16.5%であった(図27)。
・親研究では、71日目に、CCH治療を受けた被験者の24.7%がSSRS2レベルの応答を示したのに対し、180日目の観察集団では、プラセボ治療を受けた被験者の11.4%がSSRS2レベルの応答を示した。180日目において、親研究でCCH治療を受けた被験者の14.9%が2レベルのSSRS応答を示したのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では8.9%であった。
・親研究では、71日目に、CCH治療を受けた被験者の51.5%がSSRSの1レベルの応答を示したのに対し、180日目の観察集団では、プラセボ治療を受けた被験者の21.2%であった。180日目において、親研究でCCH治療を受けた被験者の36.9%がSSRS2レベルの応答を示したのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では17.3%であった。
B.再治療前のTRR集団
再治療前のTRR集団は、親研究でCCH治療を受け、CR−PCSSおよびPR−PCSSで1レベルまたは2レベルの複合応答を示し、本研究の非盲検段階での継続に同意した被験者103名で構成される。これらの被験者のうち19人がカテゴリーIIに、84人がカテゴリーIに分類された。
PR−PCSSおよびCR−PCSSで測定された複合応答が低下した被験者はカテゴリーIIにはおらず、カテゴリーIには少数の被験者しかいなかった。応答の減少までの時間および応答の完全な減少までの時間は、データカットオフ時点での研究期間を反映する。応答低下までの期間および応答低下完了までの期間は以下のとおりであるが、これらのデータから応答の持続期間に関する結論を導き出すには、さらに長期のデータが必要である。
・本研究では、親研究で少なくとも1つの臀部においてセルライトの重症度が2レベル以上複合的に改善された被験者が19名いた(カテゴリーII)。本研究では、180日目にセルライトの重症度が2レベル合成で低下した被験者はいなかった。カテゴリーIIの被験者のCR−PCSSおよびPR−PCSSを個別に検討したところ、180日目にCR−PCSSで2レベル以上の応答低下が見られた被験者が1名(5.3%)、PR−PCSSで2レベル以上の応答低下が見られた被験者が4名(21.1%)いた。また、臀部についても同様の結果が得られた。
・再治療前のTRR集団には、カテゴリーIIの被験者が19人いた。このうち3名(15.8%)は、再治療前の応答が1レベル低下した。再治療前のTRR集団に含まれるカテゴリーIの被験者84人のうち、10人(11.9%)が再治療前に1レベルの複合的な応答低下を示した。全体(カテゴリーIとカテゴリーIIを合わせた103人)では、13人(12.6%)の被験者が180日目に1レベルの複合的な応答の低下を示した。
・応答の完全消失は、CR−PCSSおよびPR−PCSSの評価の両方がベースライン(親研究)に戻ったことと定義した。カテゴリーIIの被験者(親研究で2レベル以上の複合応答を示した被験者)では、180日目に応答が完全に消失した者はいなかった。カテゴリーIの被験者84名のうち、4名(4.8%)が完全に応答を消失した。
・TRRは、親研究の71日目/EOSから、CR−PCSSおよびPR−PCSSの複合的な応答の悪化が初めて観察された今回の研究の受診日までの日数として定義された。応答が2レベルで低下した被験者はいなかったため、応答が2レベルで低下するまでの期間を算出することはできなかった。応答が1レベル低下するまでの期間の平均(SD)は、カテゴリーIの被験者では187.5(10.87)日、カテゴリーIIの被験者では182.7(17.47)日であった。
・応答の完全消失までの期間は、親研究の71日目/EOSから、今回の研究で初めて応答の完全消失が観察された日までの日数と定義した。カテゴリーIIの被験者では、応答の完全消失はなかった。カテゴリーIの完全な応答消失までの平均(SD)日数は183.0(2.83)日であった。
再治療前のTRR集団におけるPR−PCSS、CR−PCSS、PR−CISの71日目から180日目までの全体的な差が小さいことから、CCH治療を受けた被験者の親研究では71日目から6カ月後まで治療効果が持続していることが示された。また、これらの結果は、平均治療効果が左右の臀部でほぼ同じであったことを示す。
・カテゴリーIの被験者において、親研究の71日目から本研究の180日目までのPR−PCSSの変化量の平均(SD)は、左臀部で0.2(0.68)、右臀部で0.2(0.84)であった。CR−PCSSについては、親研究の71日目から本研究の180日目までの変化量の平均値(SD)は、左臀部で0.4(0.72)、右臀部で0.1(0.77)であった。
・カテゴリーIIの被験者において、親研究の71日目から本研究の180日目までのPR−PCSSの変化の平均(SD)は、左臀部で0.6(0.83)、右臀部で0.8(0.76)であった。CCH治療を受けた被験者における親研究の71日目から本研究の180日目までのCR−PCSSの変化の平均(SD)は、左臀部で0.6(1.02)、右臀部で0.7(0.75)であった。
・親研究の71日目から本研究の180日目までのPR−CISスコア合計の変化量の平均(SD)は0.0(12.21)であった。カテゴリーIの被験者の71日目から180日目までの変化量の平均(SD)は−0.6(11.20)であり、カテゴリーIIの被験者の71日目から180日目までの変化量の平均は2.5(16.04)であった。
・親研究の71日目から本研究の180日目までの略式PR−CISスコアの変化量の平均(SD)は0.1(9.80)であった。カテゴリーIの被験者の71日目から180日目までの変化量の平均(SD)は−0.5(9.12)であり、カテゴリーの被験者の71日目から180日目までの変化量の平均は2.8(12.32)であった。
・項目別の総合スコアでも、同様の小さな平均値(SD)の変化が見られた(「セルライトの外観に満足:0.7、気になる:−0.2、自覚:−0.2、恥ずかしい:−0.1、老いへの懸念:−0.1、体型への懸念:−0.1。)
180日目に、PR−CIS(総合スコア、略式スコア、項目スコア)、S−GAIS、セルライト治療に対する被験者の満足度、およびSSRSが応答した、再治療前のTRR集団のカテゴリーIおよびカテゴリーIIの被験者の割合は、180日目の観察集団、および親研究で見られたものと同様であった。
C.OLR人口
非盲検再治療集団の有効性を評価するためには、データカットオフ時点で再治療を完了した被験者の数が不足した。
安全性
CCHの安全性プロファイルは、これまでの研究で得られた安全性の結果と一致した。CCH治療を受けた被験者(親研究)の180日目の観察期間中のAEプロファイルは、親研究でプラセボ治療を受けた被験者と非常に類似しており、データカットオフの時点でCCHの長期的な安全性に関する懸念はないことが示唆された。また、被験者のカテゴリー(I、II、III)の違いによるAEの頻度や種類の違いはほとんどなかった。免疫原性に関しては、過去の研究と同様に有意な結果は得られなかった。
結論
データカットオフ(2019年4月1日)時点での本研究の結果は、PR−PCSS、CR−PCSS、PR−CISで測定した場合、臀部EFPに対してCCH治療を受けた被験者の治療効果の持続性が、段階3二重盲検親研究の71日目以降、180日(6カ月)以上であることを示す(図26)。本研究では、複合応答が2レベル低下した被験者はおらず、親研究で2レベルの複合応答を示した被験者でも、180日目までに応答が完全に消失した被験者はいなかった。また、親研究で2レベルの複合応答を示した被験者で、180日目までに完全に応答を消失した者はいなかった。親研究では、CCH治療を受けた被験者の長期的な安全性に関する懸念は示されなかった。データカットオフ(2019年4月1日)時点にて本研究でCCHによる再治療を受けた30名の被験者について、AEプロファイルはセルライトに対するCCHの他の臨床研究で見られたものと同様であった。
実施例6:セルライト治療におけるCCHの段階2非盲検延長研究(研究202)
今回の実施例(研究202)は、成人女性を対象にCCHの安全性と有効性を評価した前回の研究(研究201)の段階2非盲検延長研究である。今回の実施例では、研究201で治療を受けた対象者を対象に、長期的な安全性を評価した。また、登録した被験者で、2回目の治療コースを受けた被験者を対象に、治療部位ごとにCCH0.84mgを再曝露した際の安全性、有効性、免疫原性を評価した。この研究では、CCH治療を受けたことのある被験者に対して、既治療部位への再治療(retreatment)または未治療部位への再投与(redosing)の安全性を評価した。最後に、前回の研究(研究201、二重盲検/非盲検評価)および今回の研究(研究202、非盲検)でCCHを投与された被験者を対象に、効果の持続性を評価した。前回の研究(研究201)でCCHを投与した被験者については、治療した部位を最長で約2年間評価し、長期的な効果の持続性を確認した。再曝露された被験者(再治療または再投与)に対しては、治療部位を最長で約1年間評価した。本実施例で特に明記しない限り、本研究202で用いた「日数」は、研究201の初回投与(1日目)に対するものである。研究201では、0.84mgのCCHまたはプラセボを、1人の患者につき1つの治療部位(1つの臀部または1つの大腿部)に投与した。
具体的には、本研究では、本研究への登録を選択したすべてのセルライトを有する被験者を対象に、本研究での治療(再治療または再投与)の有無にかかわらず、1年以上の間隔でCCHの長期安全性を評価した(最長2年間)。前回の研究(研究201)で被験者が受けた治療の盲検化を解除した後、適格な被験者はCCH治療を受けることを選択できた。被験者が研究201でCCHを受け、治療部位のセルライト重症度評価が研究201のベースライン評価に戻ったか、それよりも高かった(セルライト重症度が悪化したことを示す)場合、被験者は1つの治療コースでCCHによる前治療部位の再治療(再治療)を選択することができる。また、研究201でCCH治療を受けた被験者は、研究201でCCH治療を受けた部位以外の対象部位を治療することを選択できた(これを再投与と呼ぶ)。研究201でプラセボ治療を受けた被験者は、本研究でCCHの2つの治療コース(1コースは21日間隔の3回の治療セッションからなる)を受けることができた。各治療コースでは、CCH0.84mgを治療部位ごとに12回皮下注射し、臀部または大腿部の同一または異なる対象治療部位で最大3回の治療を行った。治療コース2は、再治療または再投与を受けた被験者で構成された。
研究201で無治療を選択した被験者(観察のみの被験者、観察期)は、研究201の1日目から3カ月間隔で安全性およびセルライト重症度の評価を行い、最長2年間追跡調査を行った。研究201でCCHの治療を受け、セルライトの重症度がPR−PCSS/CR−PCSSの複合項目で1レベル以上改善した被験者を対象に、応答の持続性を2年間にわたって評価した(二重盲検治療を受けた被験者の長期持続性期)。応答の耐久性は、CR−PCSSおよびPR−PCSSの応答者であり、CCH治療を受けた部位でこの応答を維持した(すなわち、完全な消失がなく、ベースラインまたはそれ以上に戻らなかった)被験者と定義した。本研究で治療を受けた被験者は、本研究でCCHを初めて照射してから71日目に、その後3カ月間隔で本研究の各治療領域で1年間観察を続けた。
再治療または再投与の前に、被験者の4つの治療部位(左臀部、右臀部、左大腿部後側部、右大腿部後側部)のそれぞれについて、PR−PCSS、CR−PCSS、ヘクセルCSSを用いて被験者と調査員による独立した評価を行い、スクリーニング時のセルライトの重症度を評価した。
A.研究全体のデザインと計画
201研究の71日目に安全性とセルライトの評価が完了した後、被験者に二重盲検研究の非盲検延長研究(スクリーニングA)を継続するかどうかを尋ねた。本研究に参加する時点で、被験者と調査員は、被験者が研究201で投与された試験薬の同一性について盲検化された。研究201の試験薬のブラインドが解除されるまで、被験者は3カ月間隔±7日(研究201の初回投与量に対して)で観察のみの来院を受け、治療部位の安全性およびセルライトの重症度評価の両方が二重盲検法で実施された(図28)。
201研究で受けた治療の盲検化を解除した後、対象者はCCH治療を受けることを選択できた。被験者が治療を受けないことを選択した場合、被験者は観察集団に分類され、最長で2年間観察された。非盲検治療の来院日1日目にCCHの治療を開始する14日前までに、スクリーニング評価(スクリーニングB)が行われ、指定された除外基準が満たされているかどうか、また治療部位がある場合は再治療、再投与、初回治療のいずれかによる治療を受ける資格があるかどうかが判断された。研究201でCCH治療を受けた被験者は、資格のある治療部位と同一または異なる治療部位で治療コースを受ける選択肢を持っていた。研究201でプラセボ治療を受けた被験者は、本研究でCCHの治療コースを2回受けることができた。各治療コースは、同一または異なる対象となる治療部位において、それぞれ最大3回のセッションから構成された。第1の治療コースの終了後、少なくとも28日後(例えば、第2の治療コースのスクリーニングB来院は、第1の治療領域を治療した後、71日目に実施され得る)、選択された治療領域は、再治療または再投与され得る。
さらなるCCH治療を受けないことを選択した被験者(観察のみの被験者)は、12カ月目以降も3カ月間隔で安全性とセルライトの重症度を評価するために追跡調査を続けた。治療の持続性は最大2年間評価した。
スクリーニングBでは、被験者の4つの治療部位(4分割)(左臀部、右臀部、左大腿部後面、右大腿部後面)の写真が撮影された。被験者は、PR−PCSSの使用説明を受けた後、4つの治療部位(クワドラント)のデジタル画像とPR−PCSS測定器を比較し、セルライトの重症度を評価した。この独自の自己評価は、サイトの担当者による偏見を最小限に抑えるため、プライベートな環境で行われた。次に、調査員が被験者の4つの治療領域(象限)をCR−PCSSを用いてリアルタイムでライブ評価した。調査員は、ヘクセルセルライト重症度尺度(Hexsel Cellulite Severity Scale)(CSS)を用いて、4つの治療部位(象限)を評価した。被験者は、本研究の治療段階に参加するために、以下の基準を満たす象限が1つ以上あることが必要だった。
・被験者が報告したスコアが3または4(中等度または重度)であること(PR−PCSS)、および
・調査員が報告したスコアが3または4(中等度または重度)であること(CR−PCSS)、および
・ヘクセルCSSスコアが13以上でないこと。
分析のために、被験者は以下の集団としてグループ化された。
・観察集団には、研究201から転出してきたすべての被験者が含まれる。盲検化を解除しても、再曝露しないことを選択した人は観察集団に残る。
・安全集団には、本研究でCCHを少なくとも1回投与されたすべての被験者が含まれる。
・効果集団には、本研究で治療対象として選択された治療部位において、CR−PCSSおよびPR−PCSSの両方でベースラインおよびベースライン後に少なくとも1回の評価が行われたすべての安全被験者が含まれる。
・全体の耐久性集団は、治療コースの1日目と71日目、1日目から180日後以降にCR−PCSSとPR−PCSSの両方の評価を受けたすべてのアクティブ応答者と定義した。アクティブ応答者とは、CCH治療を受けた被験者で、治療コースの71日目に各尺度(CR−PCSSおよびPR−PCSS)でベースラインから少なくとも1レベルの改善が見られた者をいう。
−二重盲検法による治療を受けた被験者の耐久性集団は、全体の耐久性集団の中で、二重盲検法による研究(研究201)でCCH治療を受けた治療部位について、71日目に各尺度(CR−PCSSおよびPR−PCSS)でベースラインから少なくとも1レベルの改善が見られたすべての被験者と定義した。
−非盲検被験者の耐久性集団は、全体の耐久性集団の中で、今回の非盲検研究(研究202)でCCH治療を受けた治療部位について、71日目にCR−PCSSとPR−PCSSの両方でベースラインから少なくとも1レベルの改善が見られたすべての被験者と定義した。
本研究の統計分析では、以下の2つの段階に分けてまとめた。
・観察期:スクリーニングAから今回の研究(研究202)における同一治療領域の最初の治療日までの期間、または研究202において同一治療領域で治療を受けていない場合は研究202の終了までと定義した。観察期は、サマリーが被験者レベルのみのものであり、治療された治療領域によって区別できない場合(例:処分、AE)を除き、治療された治療領域ごとに定義した。被験者レベルのサマリーでは、観察期は、スクリーニングAから研究202の最初の治療日まで、または研究202で治療を受けていない場合は研究202の終了日までと定義した。
・治療期:研究202の選択された治療領域の最初の治療日から研究202の終了までの期間と定義した。治療段階は、サマリーが被験者レベルのみのもので、治療された治療領域によって区別できない場合(すなわち、位置、AE)を除き、各治療領域内で定義した。被験者レベルのサマリーでは、治療期は、研究202の最初の治療日から研究202の終了までの期間と定義した。研究202の最初のCCH治療の1日目以降のデータはすべて含まれる。したがって、観察期のデータは治療期に含まれる。
被験者は、脚または臀部のEFPの治療のために以下のいずれかを下記に示す期間内に使用した場合、または研究期間中のいずれかの時点で以下のいずれかを使用することを意図していた場合、本研究における治療から除外された(ただし、観察評価からは除外されない)。(a)CCH注入前の12か月間に治療対象として選択された側の体の脂肪吸引、(b)注射(例、(b)CCH注入前の12ヶ月間に選択された治療部位での注射(メソセラピーなど)、高周波機器治療、レーザー治療、または手術(切除および/または動力切除を含む)、(c)CCH注入前の6ヶ月間に選択された治療部位でのEndermologie(商標登録)または同様の治療、(d)CCH注入前の3ヶ月間に選択された治療部位でのマッサージ治療、(e)クリーム(例、CCHを注入する前の2週間の間に、選択した治療部位でEFPを予防または軽減するためのクリーム(例えば、Celluvera(商標登録)、TriLastin(商標登録))。
調査員は、自分の評価と被験者の評価を確認し、治療可能な領域(クワドラント)がある場合は、それを決定した。非盲検研究202で治療を受けるために選択された適格な象限は、被験者の裁量で決められた。研究201でCCH治療を受けた被験者が、治療部位のセルライト重症度スコアが研究201のベースラインスコアに戻ったか、それよりも高かった場合、被験者は以前に治療を受けた象限をCCHで再治療することを選択できた(再治療と呼ぶ)。対象者が研究201でCCH治療受けた場合、対象者は研究201でCCH治療を受けたクワドラントとは別のクワドラントを治療することを選択することができる(これを再投与と呼ぶ)。
二重盲検研究で割り当てられた治療部位に活性薬剤が投与された被験者の場合、再治療の対象となるには、治療部位のセルライト重症度スコアがPR−PCSSおよびCR−PCSSの201ベースラインスコア以上であることが必要である。
治療終了後(治療期71日目)、被験者は3カ月間隔で360日目まで研究スケジュールに沿って追跡調査を受けた。被験者が201研究でプラセボ治療を受けた場合、資格があれば研究202で2つの治療部位(臀部または大腿部後面)に分けてCCHを最大2コース治療することができた。研究201でCCH治療を受けた被験者は、投与された治療部位について、720日目までの長期耐久性を評価した。
非盲検エクステンションデザインを使用することで、以下のことが可能になった。
・この集団におけるCCHの安全性プロファイルをさらに明確にするために、12ヶ月間の安全性データを収集する。
・再度の曝露(再治療/再投与)後、12ヶ月間の安全性データおよび免疫原性を評価するとともに、CCHでの治療歴のある被験者を12ヶ月間にわたってモニタリングする。
・以前にプラセボ治療を受けた被験者がCCHに暴露すること。
・CCHへの応答の持続性の評価(セルライトの重症度評価)。
本研究の主な目的は、EFPの被験者のうち、本研究への登録を選択したすべての被験者を対象に、CCH0.84mgを1年(12カ月)以上にわたって定期的に投与した場合の長期安全性を、CCHの非盲検投与による治療(再治療または再投与)を受けるか、または無治療を選択するかにかかわらず、評価することだった。
本研究の二次的な目的は以下の通りである。
・CCHによる治療を受けたことのある被験者を再治療または再投与する際の安全性および免疫原性を評価する。
・CCH−201研究でアクティブ治療を受けたことのある被験者を対象に、CCHの初回投与後12ヶ月間におけるEFPの重症度に対するCCHの応答の持続性を、PR−PCSSおよびCR−PCSSを用いて評価する。
・PR−PCSSおよびCR−PCSSを用いて、研究201でアクティブ治療を受けたことのある被験者を対象に、CCHの初回投与後12カ月以降のEFPの重症度におけるCCHの応答の持続性を評価する。
・被験者の満足度、調査員グローバル美的改善尺度(I−GAIS))、被験者グローバル美的改善尺度(S−GAIS))を含むEFPの評価において、CCHの長期的な応答を評価する。
・本研究にてCCHで治療した象限でのセルライトの重症度評価を行う。
・CCHに暴露した後の免疫原性を評価する。
CCH0.84mg/治療部位の効果の持続性を最大2年間評価した。これには、研究202で治療を受けた被験者の効果の持続性(最大1年)と、研究201でCCH治療を受けた被験者が研究202にロールオーバーされ、最大2年間観察された場合のより長期の効果の持続性が含まれる。
162名の被験者を対象に、2つの治療コース(各治療コースは3つの治療セッションで構成される)への再曝露の影響を評価した。研究201または今回の研究で1回目の治療コースを受けた被験者は、適格であれば今回の研究で2回目の治療コースを受けることができた(その部位が以前にCCHで治療されていたか、ナイーブであったかによって、それぞれ再治療または再投与と呼ぶ)。研究201で指定された治療部位にCCH治療を受けた被験者の場合、再治療を受けるためには、その治療部位のセルライト重症度スコアが201研究のベースラインと同等(またはそれ以上)である必要がある。
表78は、今回の研究の説明を表す。
Figure 2022502478
治療を受ける資格があり、治療を受けることを選択した被験者には、最大量のCCH0.84mgを、治療部位ごとに最大12回皮下注射した(表79参照)。1人の被験者が受けられるCCHの治療コースは合計で最大2コースまでとした。被験者が研究201でCCHの1コース目を受けた場合、今回の研究ではCCHの2コース目が投与された。研究201で被験者がプラセボ投与された場合、適格であれば、本研究では2つの治療部位(両臀部または後側大腿部)に分けて、最大2コースのCCHを投与することができた。
Figure 2022502478
注射の前に調査員または資格を有する被指名人は、治療部位の中で、被験者が立っているときにはっきりしていて、治療に適した陥凹部を選択した。治療の目的は治療部位全体の美観を改善することであるため、調査員は治療部位全体の美観を最も改善すると思われる陥凹部を選択するように指示された。治療部位内の同じく陥凹部、または治療部位内の異なる陥凹部を各治療セッションで治療しても良いが、3回のセッションではすべて選択された治療部位内に注射を行う必要がある。
1つの陥凹部に複数の注射が必要な場合は、陥凹部内の注射部位を約2cm間隔で配置した。各注入部位には、外科用マーカーで「点」を付けた。丸い陥凹部の場合、「ドット」は陥凹部の中心に配置し、細長い陥凹部の場合、「ドット」は陥凹部の長軸に沿って約2cmの間隔で配置した。次に、調査員またはその代理人が、外科用マーカーを使用して、治療対象となる陥凹部に円を描いた。選択した治療領域の円は重ならないようにした。
各注射部位には、図7に示すように、上述のセルライト用CCHの皮膚注射を1回行い、位置A、B、Cに0.1mLのアリコートを3回(総注射量0.3mL)投与した。注射の深さは、下向きの圧力をかけずに、針の先端から針のハブまたは根元までの治療針の長さ(0.5インチ)に対応した。各治療セッションにおいて、研究者には4本の注射器が提供された。各シリンジには、0.9mLのCCHが入った(すなわち、各シリンジで最大3回の注射が可能)。各治療セッションにおいて、選択した治療部位に1回あたり0.3mLの皮膚注射を最大12回行った。
B.投与量と投与時間
本研究で選択された用量は、親研究である研究201で使用された用量と同じである。治療を受ける資格があり、治療を受けることを選択した被験者は、21日間隔で3回CCHを投与された(研究日1、22、43日目)。研究201でプラセボを投与された被験者は、本研究で対象となる治療部位に2コースの治療を受けることを選択できた。本研究(202研究)で行われた治療コースIとIIは、本研究の第1コースでCCHを最終投与した後、28日以上の間隔を置いて行われた。
本研究は非盲検研究であった。本研究に参加した時点で、被験者と調査員は、研究201で投与された研究薬の同一性について盲検状態を維持した。治験依頼者によって研究201の研究薬のブラインドが解除されるまで、被験者は3カ月間隔±7日で観察のみの診察を受け、治療部位の安全性およびセルライトの重症度評価の両方が二重盲検法で実施された。
C.効果測定の方法
観察のみのグループとCCHの再投与または再治療を選択した被験者を対象にデジタル写真を用いて特定の時点におけるセルライトの重症度を評価した。再投与または再治療を選択した被験者のスクリーニングBでは、調査員または適格な被指名人が、スポンサー提供の標準化されたデジタルカメラを用いて各治療部位を撮影した。被験者は撮影時には立った状態で、標準化された衣服を着用して撮影した。
調査員によるセルライト評価は、被験者による評価とは独立して行われた。そのため、被験者のセルライト評価はすべて、調査員のセルライト評価が行われる前に完了した。スクリーニングBでは、被験者の評価と調査員の評価の両方が完了した後、被験者の評価と調査員の評価が比較され、治療部位の適格性が判断された。複数の治療部位が適格である場合、被験者は1つの治療部位を選択して治療を受けた。
二重盲検研究にてもともとCCHで治療された治療部位があり、360日目以降の治療継続性を評価された被験者は、特定の時点でPR−PCSSを記入した。研究201で研究薬のブラインドが解除された後、再治療または再投与を選択した被験者は、投与日1日前の14日以内に再スクリーニングを受けた(スクリーニングB来院[ベースライン])。
スクリーニングBでは、資格取得のために4つの治療部位(クワドラント)すべてのデジタル写真が撮影され、その後、被験者は両臀部と大腿部のPR−PCSSを実施した。22日目、43日目、71日目の最初の来院時に、選択した治療部位のデジタル写真を撮影し、選択した治療部位のPR−PCSSを完了した。
観察のみのグループの被験者は、二重盲検研究で割り当てられた治療部位の治療前の1日目画像(ベースライン)を比較対象として、特定の時点でS−GAISを完了した。CCH治療を受けることを選択した被験者は、特定の時点でS−GAIS評価を行い、選択した治療部位の投与前のスクリーニングB画像(治療を受ける被験者はベースライン)と比較した。再治療または再投与によってCCHの投与を受けることを選択した被験者は、被験者のセルライト治療に対する満足度評価を行った。観察のみのグループの被験者に対しては、特定の時点でCR−PCSSを実施した。
再治療または再投与としてCCHの投与を選択した被験者については、スクリーニングBの来院時(ベースライン)に被験者がPR−PCSSを用いて自己評価を行った後、調査員が臀部と大腿部のCR−PCSSを用いたライブ評価により、4つの治療部位(クワドラント)のセルライトの重症度を決定した。対象となる治療部位の選択は、被験者の判断に委ねられた。治療開始日1日目、22日目、43日目、および71日目の注射前に調査員がCR−PCSSを用いたライブ評価により、選択した治療部位を評価した。二重盲検研究でCCHを投与された被験者のうち、360日目以降の治療継続性を評価するために、特定の時点でCR−PCSSを記入した。
観察のみの群の被験者については、研究の最終来院時(12カ月目または早期終了)に二重盲検研究で割り当てられた治療領域の治療前の1日目の画像を用いてI−GAISを完成させた。I−GAISは、CCH治療を受けることを選択した被験者について、治療コースの71日目と12ヵ月目またはEOS来院時に完了した。この評価を行うために、治験責任者は、71日目および12ヵ月目またはEOS来院時のライブ評価におけるセルライトを、被験者の選択した治療部位のスクリーニングBの前処理(ベースライン)画像と比較することにより、選択した治療部位のスクリーニングBのデジタル画像からの改善度を決定した。
観察のみのグループの被験者に対しては、特定の時点でヘクセルCSSを実施した。再治療を選択した被験者には、特定の時点でヘクセルCSSを実施した。
セルライトの重症度に関する複合エンドポイントは、複合応答者の割合であった。複合応答者とは、CR−PCSSで重症度がベースラインから2レベル以上(または1レベル以上)改善し、PR−PCSSで重症度がベースラインから2レベル以上(または1レベル以上)改善した治療部位を有する被験者と定義した。これらの評価項目は、適切な記述統計を用いて、治療部位別、全体(臀部および大腿部)、研究日別にまとめられた。
治療を受けた治療エリア(クワドラント)のその他のエンドポイントは以下の通りである。
PR−PCSSのベースラインからの変化
・PR−PCSSの各改善レベルにおける割合。
−PR−PCSSの重症度がベースラインから少なくとも2レベル以上改善した被験者と定義される応答者の割合(被験者評価)。
−PR−PCSSの重症度がベースラインから少なくとも1レベル改善した被験者と定義された応答者の割合(被験者評価)。
・CR−PCSSのベースラインからの変化
・CR−PCSSの各レベルの改善度における割合:
−調査員による応答者の割合は、CR−PCSS(調査員による評価)においてベースラインから少なくとも2レベルの重症度の改善が見られた被験者と定義した。
−調査員による応答者の割合は、CR−PCSS(調査員による評価)の重症度がベースラインから少なくとも1レベル改善した被験者と定義した。
・I−GAISの各レベルにおける応答者の割合:
−71日目および360日目において、I−GAISの各レベルでの被験者の割合。
・S−GAISの各レベルにおける応答者の割合:
−71日目および360日目において、S−GAISの各レベルでの被験者の割合。
・セルライト治療に対する被験者の満足度尺度の各レベルにおける応答者の割合。
・スクリーニング来院時からのヘクセルCSS総合スコアの変化。
それぞれの処理されたトリートメントエリアの観察エンドポイントを含む。
・CR−PCSSおよびPR−PCSSにおいて、ベースラインから少なくとも2(または1)の重症度の改善が見られた被験者と定義される複合応答者の割合。
・PR−PCSSのベースラインからの変化。
・PR−PCSSにおける各レベルの改善の割合。
−PR−PCSSの重症度がベースラインから2レベル以上改善した被験者と定義される応答者の割合。
−PR−PCSSの重症度がベースラインから少なくとも1レベル改善した被験者と定義される応答者の割合。
・CR−PCSSのベースラインからの変化。
・CR−PCSSの各レベルの改善度における割合。
−調査員による応答者の割合は、CR−PCSS(調査員による評価)においてベースラインから少なくとも2レベルの重症度の改善が見られた被験者と定義した。
−調査員による応答者の割合は、CR−PCSS(調査員による評価)の重症度がベースラインから少なくとも1レベル改善した被験者と定義した。
・360日目のセルライト治療に対する被験者の満足度を示す尺度の各レベルにおける応答者の割合。
・研究201の71日目から360日目までのヘクセルCSS総合スコアの変化、または360日目以降の長期耐久の視察。
D.耐性の方法論
治療持続性の評価には、研究201で積極的な治療を受け、CR−PCSSとPR−PCSSの両方で少なくとも1レベルの改善を示した被験者の2年までの観察が含まれた。また、研究201でCCHを投与され、本研究でもCCHを投与された被験者については、研究201で治療された当初の治療部位に加え、非盲検研究で治療された治療部位(クワドラント)も本研究の720日目まで評価した。また、耐久性集団には、研究201でCCHを投与されたが、本研究では追加治療を受けないことを選択した被験者、および研究201でプラセボを投与され、本研究でCCHを投与された被験者も含まれた。
360日目以降の耐久性を評価する被験者は、以下の条件を満たす必要がある。a)二重盲検研究201に参加し、終了した者、(b)二重盲検研究201で積極的にCCHを投与された者、(c)二重盲検研究201の71日目以前の同一来院時にCR−PCSSとPR−PCSSの両方で少なくとも1レベルの改善を達成した者、(d)研究参加中、毎回太陽に当たる前にCCH−201で治療した治療部位に日焼け止めを塗布する意思がある者(すなわち、EOSによるスクリーニングを行う者)。
治療効果の持続性は、CR−PCSSおよびPR−PCSSのセルライト評価の経時的な応答に基づいていた。CR−PCSS、PR−PCSS、およびそれらの組み合わせの各レベル(すなわち、1レベルまたは2レベルの改善)において、治療を受けた治療領域(クワドラント)に関連した応答者の数と割合を研究日ごとにまとめた。
治療失敗とは、一定のフォローアップ期間中に、CCH治療を受けた治療領域でCR−PCSSおよびPR−PCSSがベースラインまたはそれ以上に戻ってしまったアクティブ・応答者と定義した。その数と割合は、研究日ごとにまとめられた(すなわち、180日目、360日目、540日目、720日目)。
応答者は以下の2つの集団から構成された。
・二重盲検法による治療を受けた被験者の耐久性集団:二重盲検研究(研究201)でCCHを投与した治療部位について、71日目(研究201)に各尺度(CR−PCSSおよびPR−PCSS)でベースラインから少なくとも1レベルの改善を示し、最大2年間追跡調査を行った耐久性集団の全被験者。
・非盲検被験者の耐久性集団:研究202でCCHを投与した治療部位において、71日目(研究202)にCR−PCSSとPR−PCSSの両方でベースラインから少なくとも1レベルの改善が見られ、その後1年間追跡調査を行った耐久性集団の全被験者。
E.安全性の評価
安全性の変数は以下の通り。安全性の変数には、AE、注射部位の応答/局所的な忍容性、バイタルサイン、臨床検査項目(血液学、血液化学、尿検査を含む)、および免疫原性が含まれた。
F.研究対象
250人の被験者が研究201から転出し、今回の研究に参加し、観察集団に含まれた(表80)。観察集団は、研究201でCCHによる治療を受けた121名の被験者と、プラセボによる治療を受けた138名の被験者で構成された。観察集団に含まれる53人(20.5%)の被験者が、二重盲検法で治療を受けた被験者の耐久性集団に含まれた。これらの被験者は、研究201の71日目以前に、CR−PCSSとPR−PCSSの両方で少なくとも1レベルの改善が認められた。
Figure 2022502478
治療段階では、200名の被験者がCCHを1回以上投与され、安全性集団に含まれた(表81)。安全性集団に含まれた被験者のうち、本研究で治療対象として選択された治療部位において、CR−PCSSとPR−PCSSの両方でベースラインおよびベースライン後に少なくとも1回の評価が行われた被験者193名が有効性集団に含まれた。治療部位の選択を臀部から大腿部に変更し、研究202の治療コースで臀部から大腿部に治療を受けた被験者が3名、研究202の治療コースで治療部位を大腿部から臀部に変更した被験者が8名いた。これらの被験者は、両方の治療領域でカウントされた。
治療段階では、被験者は最大で2つの治療コースを受けた。研究201でプラセボ治療を受けた被験者は、本研究で最大2つの治療コースを受けることができた。研究201でCCH治療を受けた被験者は、本研究で1つの治療コースを受けた。
研究期間中、163名の被験者が本研究で2回目の治療コースを受け、安全集団に含まれた。この再治療/再投与群は、本研究でCCHの2回目の治療コースを受けた(201研究で1回目の治療コースを受けた)被験者88名と、本研究で1回目と2回目の両方の治療コースを受けた被験者75名で構成された。
効果集団には、本研究で2回目の治療コースを受けた被験者162名が含まれる。この再治療/再投与群は、研究201で1回目の治療コースを受けた後、本研究でCCHの2回目の治療コースを受けた被験者87名と、本研究で1回目と2回目の両方の治療コースを受けた被験者75名で構成された。
耐久性集団のうち42名が本研究の治療段階に移行し、二重盲検法による治療を受けた被験者の耐久性集団に含まれた(表81)。
非盲検治療を受けた被験者の耐久性集団は124名であった。71日目に治療部位のCR−PCSSとPR−PCSSの両方でベースラインから少なくとも1レベルの改善を示した耐久性集団の被験者全員に、非盲検研究(研究202)でCCHを投与した。この集団は以下のグループで構成された。
1.CCH−研究201でCCHを投与された被験者のうち、CCH−研究201の治療コース1で応答した被験者で、再投与または再治療を行った被験者。
・研究201でCCHの投与を受け、治療部位のセルライト重症度スコアが研究201のベースラインスコアに戻ったか、それよりも悪化した再治療を受けた被験者。これらの被験者は、前回治療した部位をCCHで再治療することを選択できた。
・研究201でCCHを再投与された被験者
2.研究201でプラセボ治療を受けた被験者のうち、研究202で初期治療を受け、治療コースIで応答した被験者。
3.研究201でプラセボ李朝を受けた被験者で、研究202で2つの治療コースを受け、治療コース2に応答した被験者。
Figure 2022502478
G.被験者の処分
図28は、被験者がどのように処分されたかをまとめたものである。
(i)被験者の処分(観察期):観察期には259例の被験者が評価され、222例(85.7%)が観察期を終了した(表82).その理由は、CCHに曝露していないのに好酸球が軽度増加したAE(1例;0.4%)、追跡調査不能(13例;5%)、被験者による離脱(13例;5%)、その他(10例;3.9%)であった.その他のカテゴリーには、スクリーニング失敗、治療段階への参加を拒否した被験者、被験者登録の研究日272日目にサイトが閉鎖された被験者、または研究の受診を遵守しなかった被験者が含まれた。
Figure 2022502478
被験者の配置(治療段階):治療段階のために216名の被験者がスクリーニングされ、200名の被験者が登録され、156名(78%)の被験者が治療段階を完了した(表83)。全体的に、大腿部の治療部位よりも臀部の治療部位の方が多かった。臀部の治療を受けた被験者は114名、大腿部の治療を受けた被験者は96名であった。
治療段階では、163名の被験者がCCHに再曝露された。再曝露された被験者163名のグループは、研究201で最初の治療コースを受けた後、治療コースIでCCHに再曝露された被験者88名と、治療コース2で再曝露された被験者75名で構成された。
治療段階では、112名の被験者が治療コース1で初期治療を受け、88名の被験者が治療コース1で再曝露された(再曝露された被験者は82名、再曝露された被験者は6名のみ)。再投与された82名の被験者は、研究201でCCHを投与されたが、研究201で治療した治療部位以外の適格な治療部位での治療を選択した。再治療を受けた6名の被験者は、研究201でCCHを受け、治療部位のセルライト重症度スコアがベースラインスコアに戻ったか、研究201のベースラインスコアよりも高かった。これらの被験者は、以前に治療した治療部位をCCHで再治療することを選択した。
75人の被験者が、研究202で治療コース1と治療コース2の両方を受けた。治療コース2では、定義上、すべての被験者がCCHに再曝露された。大多数(73/75人、97.3%)の被験者が再投与され、2人の被験者のみが再投与された。
115人の被験者がこの研究を完了した。CCHを中止した被験者の分布は、臀部と大腿部で同様であった(22名[21.2%]対22名[22.9%])。
Figure 2022502478
H.有効性の結果
1.臨床エンドポイント
治療段階および観察段階において、研究201の有効応答者を対象に、CR−PCSS/PR−PCSS複合エンドポイントの応答を評価した。セルライトの重症度に関する複合エンドポイントは、複合応答者の割合として定義した。応答とは、ベースライン(研究201)からCR−PCSSの重症度が1レベル以上改善し、PR−PCSSの重症度が1レベル以上改善した被験者と定義した。積極的な応答を示したのは、研究201でCCH治療を受けた被験者で、研究201の治療領域のベースラインからCR−PCSSとPR−PCSSの両方で少なくとも1レベルの改善が認められた。
研究202の観察期では、研究201からロールオーバーした被験者で、治療した部位に積極的な応答が見られた被験者を最長2年間観察した。また、研究202の治療段階で治療を受け、2レベルの複合応答を示した被験者を最大1年間観察した。治療失敗は、CCHを投与され、CCHを投与された領域でCRPCSSおよびPR−PCSSがベースラインに戻った能動的な応答者と定義した。治療効果の持続性は、治療失敗の逆数として算出した。解析は、2レベルの複合応答が得られた被験者と、少なくとも1レベルの複合応答が得られた被験者で行った。
セルライトの重症度に関する複合エンドポイントは、複合応答者の割合として定義した。これは、ベースライン(研究201)からCR−PCSSの重症度が2レベル以上(または1レベル以上)改善し、PR−PCSSの重症度がベースラインから2レベル以上(または1レベル以上)改善した被験者と定義した。この解析は、観察期および治療期に登録された被験者に対して行われた。観察期における1レベルおよび2レベルの複合応答の持続性に関する調査員の評価は、二重盲検法で行われた。
評価は治療領域ごと、被験者ごとに行われた。したがって、異なる治療コースの異なる治療領域でCCH治療を受けた可能性のある被験者については、治療領域ごとに応答を評価した。1つの治療領域で応答した被験者は、他の治療領域で治療を受けた場合、同等または全く応答しなかった可能性があるため、適宜、1レベルまたは2レベルの複合応答者とされた。応答の持続性は、研究201の71日目に少なくとも1レベルまたは2レベルの複合応答を示した被験者で評価した。
180日目以降に2レベルの複合応答が得られた被験者は26名(臀部の治療を受けた19名と大腿部の治療を受けた7名を含む)であった。これらの被験者は、研究202において1または2の治療コースを受けた。研究202において、180日目(26名、100%)および360日目(21名、100%)に観察された評価可能な被験者は、すべて2レベルの応答を維持した。また、新たに治療した部位のCR−PCSSおよびPR−PCSS評価がベースライン(研究202)またはそれ以下に戻った2レベルの複合応答を示した被験者はいなかった。本研究で治療を受けた被験者では、2レベルの複合応答が持続し、180日目と360日目で同様であり、臀部と大腿部の治療部位で同様であった。
180日目に1レベルの複合応答が得られた被験者は124名(臀部治療部位72名、大腿部治療部位54名を含む)、研究202の360日目に1レベルの複合応答が維持された被験者は114名であった。治療失敗と評価された被験者のうち、CR−PCSSおよびPR−PCSSの評価がベースライン(研究202)の評価またはそれ以上に戻った被験者はいなかった。180日目と360日目に1レベルの複合応答が持続し、臀部治療部位と大腿部治療部位で同様の結果が得られた。
2.有効性の持続性
本研究では、登録を希望したセルライトを有するすべての被験者を対象に、2年間(24カ月)にわたって予定された間隔でCCHの長期安全性を評価した。対象者は、臀部または大腿部のいずれかに治療を受け、適格性に応じて、臀部または大腿部のいずれかに2回目の治療を受けることができた。応答の持続性は、研究201でCCH治療を受けた被験者では最長2年間、研究202でCCHの初回治療を受けた被験者では最長12カ月間評価された。研究201で治療を受けた研究202の720日目に評価された被験者で得られたデータは、CR−PCSSおよびPR−PCSSの応答が最大2年間持続することを裏付けた。
本研究の結果は、CCH0.84mg/治療部位×3回の治療セッションを21日間隔で実施した場合の長期的な安全性と効果の持続性について、最長2年間の支持データを提供するものである。これには、研究202で治療を受けた被験者の効果の持続(最大1年)と、研究201でCCHを治療し、研究202で延長研究に登録した被験者の効果のより長期的な持続が最大2年にわたって観察されたことが含まれる。
今回の非盲検研究(研究202)では、CR−PCSSおよびPR−PCSSにおけるセルライトの重症度がベースラインから約1レベル低下(改善)した。この減少量は、二重盲検研究で被験者が経験したCRPCSSおよびPR−PCSSの減少量と同程度であった
(a)PR−PCSS応答の1年後までの持続性:PR−PCSSのベースラインからの変化の持続性は、研究201でCCHを投与した群、研究202でCCHを投与した群、202研究で再投与した群の間で一貫した。研究201から研究202に登録した被験者259名のうち、研究201の71日目のベースラインからの変化量の平均(SD)は、CCH治療を受けた被験者(n=121)で−1.2(0.89)、プラセボ治療を受けた被験者(n=138)で−0.6(0.74)であった。1年後まで観察したところ、CCH治療を受けた被験者ではPR−PCSS評価の改善が継続して見られた。CCH治療を受けた被験者のベースラインからの変化量の平均(SD)は、180日目(n=119)、270日目(n=105)、360日目(n=96)に−0.7(0.88)、−0.7(0.96)、−1.0(0.91)であった。
研究202に登録され治療を受けた被験者のうち、193名(臀部103名、胸部90名)が治療コース1で効果を評価された。治療コース1を受けた被験者には、CCHで最初に治療を受けた被験者と、再治療または再投与を受けた被験者が含まれる。1年後まで観察した結果、CCH治療を受けた被験者は、PR−PCSS評価においてベースラインからの改善を継続して示した。180日目、270日目、360日目のベースラインからの変化は、全体の平均値(SD)がそれぞれ−1.1(0.85)、−1.1(0.87)、−1.0(0.83)であった。この応答は、臀部(n=103)と大腿部(n=90)の両方の治療部位で同様であった(図29)。
本研究では、再照射した被験者162名を対象に、最長1年間の観察により効果を評価したところ、CCH投与群では、180日目(−1.0[0.83])および360日目(−1.0[0.83])にPR−PCSSのベースラインからの改善が継続して見られた。また、臀部および大腿部の治療部位では、1回目の治療コース後も2回目の治療コース後も同様の効果が得られた(図30および図31)。
(b)CR−PCSS応答の1年までの持続性:CR−PCSSのベースラインからの変化の持続性は、研究201でCCH治療を受けた被験者群、研究202で治療した被験者群、202研究で再曝露した被験者群の間で一貫した。
CCH治療を受けた被験者群のうち、研究201から研究202に登録された121名のベースラインからの変化量の平均(SD)は、201研究の71日目にCCH治療を受けた被験者で−0.8(0.88)、プラセボ治療を受けた被験者で−0.3(0.6)であった。1年後まで観察したところ、CCH治療を受けた被験者はCR−PCSS評価の改善を継続して示した。180日目、270日目、360日目におけるベースラインからの変化の全体平均(SD)は、それぞれ−0.6(0.80)、−0.6(0.76)、−0.9(0.86)であった。
研究202に登録され治療を受けた被験者のうち、193名のCCH治療を受けた被験者(103名の臀部治療部位と90名の大腿部治療部位)が、本研究の治療コース1で効果を評価した。治療コース1を受けた被験者には、初回治療を受けた被験者と、再治療または再投与を受けた被験者が含まれる。1年後まで観察した結果、CCH治療を受けた被験者は、CR−PCSS評価の改善を継続して示した。ベースラインからの変化量の全体平均(SD)は、180日目、270日目、360日目に、それぞれ−1.0(0.80)、−1.1(0.83)、−1.1(0.82)であった(図32)。この応答は、臀部(n=103)と大腿部(n=90)の両方の治療部位で同様であった。
研究202で再曝露し、1年後まで観察して有効性を評価した162名のうち、CCH治療を受けた被験者では180日目および360日目にCR−PCSSの改善が継続して見られたベースラインからの変化量の全体平均(SD)は、180日目に−1.0(0.80)、360日目に−0.9(0.77)であった。また、臀部および大腿部の治療部位では、1回目の治療コース後も2回目の治療コース後も同様の効果が得られた(図33および図34)。
c)2レベルの複合応答の最長2年間の持続性:2レベルの複合応答を示した7名の被験者(臀部5名、大腿部2名のCCH治療部位)について、最長720日の評価を行った。720日目の時点で、CR−PCSSおよびPR−PCSSの評価がベースラインスコア(研究201での評価)またはそれ以上に戻った被験者は7人ともいなかった。
d)1レベルの複合応答の最長1年間の持続性:1レベル以上の複合応答を示した23名の被験者(臀部13名、CCH処理した大腿部10名)について、最長720日の評価を行った。720日目には、21名(91.3%)の被験者において、CR−PCSSおよびPR−PCSSの評価がベースライン(研究201)のスコアまたはそれ以上に戻ったものはなかった。
3.耐性の効果
本研究では、2回目の治療コースに対する耐性(CCHを再投与したときに、時間の経過とともに治療用量に応答する能力が失われること)を評価した。本研究のデータは、CCHの再投与による耐性(時間の経過とともに治療用量に応答する能力が失われること)がないことを裏付けた。163名の被験者が治療を受けた。このグループは、研究201で最初の治療コースを受けた後、治療コース1で再曝露された被験者88名と、治療コース2で再曝露された被験者75名で構成された。
75人の被験者が、研究202で治療コース1と治療コース2の両方を受けた。治療コース2では、定義上、すべての被験者がCCHに再曝露された。大多数の被験者(73/75人、97.3%)が再投与され、2人の被験者のみが再投与された。CCH治療の再曝露(再投与および/または再治療)を受けた被験者の安全性に関する懸念を示唆するシグナルはなかった。
(a)PR−PCSS評価のベースラインからの変化(再治療/再投与):本研究では、162名の被験者(臀部治療領域91名、大腿部治療領域71名を含む)が、CCHの1回目の治療コース終了後と2回目の治療コース終了後に、PR−PCSSで効果を評価した(1名は評価が欠けていたため、効果のある集団に含まれなかった)(表84)。
初回治療後71日目と360日目に評価したところ、2回目の治療コース後に観察されたPR−PCSSの変化は、1回目の治療コース後の同時期に観察された変化と同様であり、重ね合わせることができた。360日目のPR−PCSS評価の変化の全体平均(SD)は、1回目の治療コース後で−1.0(0.82)(表84)、2回目の治療コース後で−1.0(0.83)(表85)であった。臀部と大腿部の治療部位で同様の減少が見られた。臀部の治療部位の変化(図31)は、大腿部と臀部の治療部位を合わせた解析の変化(図30)と同様であった。202研究では、二重盲検研究(研究201、研究302、研究303)の被験者が1回目の治療を受けた後に観察された応答と同様の大きさで、PRPCSSにおけるセルライトの重症度の減少が見られた。
Figure 2022502478
Figure 2022502478
(b)CR−PCSS評価のベースラインからの変化(再治療/再投与):本研究では、162名の被験者(臀部治療領域91名、大腿部治療領域71名を含む)がCCHの1回目と2回目の治療コースを受け、CR−PCSSで効果を評価した(1名は評価が欠けていたため、効果の集団には含まれなかった)(表86)。
初回治療後71日目と360日目に評価したところ、2回目の治療コース後に観察されたCR−PCSSの変化は、1回目の治療コース後の同時期に観察された変化と同様であり、重ね合わせることができた。360日目のCR−PCSS評価の変化の全体平均(SD)は、1回目の治療コース後で−1.1(0.88)(表86)、2回目の治療コース後で−0.9(0.77)(表87)であった。臀部および大腿部の治療部位においても同様の減少が見られた。臀部の治療部位の変化(図34)は、大腿部と臀部の治療部位を合わせた解析結果(図33)の変化と同様であった。研究202では、二重盲検研究(研究201、研究302、研究303)の被験者が最初の唯一の治療コースを受けた後に観察された応答と同様の大きさで、CR−PCSSのセルライトの重症度が減少した。
Figure 2022502478
Figure 2022502478
再投与時のヘクセルCSS総合評価、I−GAIS、S−GAIS、EFP治療に対する被験者の満足度の変化:再投与時には、セルライトの重症度の低下に対するCCHの有効性がヘクセルCSSで評価され、調査員グローバル美的改善尺度(I−GAIS)と被験者グローバル美的改善尺度(S−GAIS)によって評価され、EFP治療に対する被験者の満足度が評価された。これらの尺度で評価した治療後の効果は、未治療の被験者と、再治療時または再投与時にCCHに対する耐性または頻脈性がないことを支持して再投与された被験者の治療後に同等であった。
I.安全性評価
CCHの安全性プロファイルは、これまでの研究で得られた安全性の結果と一致していた。研究期間中、併用薬に臨床的に意味のある変化はなかった。研究期間中、血清化学パラメータ、血液学パラメータ、尿検査結果、バイタルサインのベースラインからの平均変化量に臨床的に意味のある傾向は認められなかった。また、抗AUX−I抗体および抗AUX−II抗体を有する被験者、あるいは中和抗体を有する被験者において、臨床的に重要な知見は得られなかった。
J.結果と結論のまとめ
応答の持続性(完全に消失しないこと)は、研究201の評価可能な2レベルの複合応答者で観察された。CCH治療を受けた地域で、ベースラインのCR−PCSSおよびPR−PCSSレベル以上に戻った被験者はいなかった。下記の間、持続的な応答が観察された。
・それぞれ180日目と360日目での二重盲検法で評価可能な被験者19名(100%)と16名(100%)の観察期。
・それぞれ540日目および720日目での二重盲検法による評価可能な被験者7名(100%)の長期耐久期。
・それぞれ180日目および360日目での26名(100%)および21名(100%)の評価可能な非盲検治療を受けた被験者の治療期。
応答の持続性(完全消失の欠如)は、研究−201の評価可能な1レベルの複合応答者で示された。下記の間、持続的な応答が認められた。
・それぞれ180日目および360日目での二重盲検法で評価可能な被験者のうち50名(94.3%)、43名(95.6%)の観察期。
・それぞれ540日目および720日目での二重盲検法で評価可能な被験者22名(95.6%)、21名(91.3%)の長期持続期。
・それぞれ180日目および360日目での124名(100%)、114名(100%)の評価可能な非盲検治療対象者における治療期。
研究201の2レベルのCR−PCSSアクティブ応答者のうち、下記の研究期間中に2レベルの応答が維持された。
・二重盲検法による評価可能な被験者10名(47.6%)の360日目の観察期。
・それぞれ540日目および720日目での二重盲検法による評価可能な被験者3名(30%)と4名(40%)の長期持続期。
・それぞれ180日目および360日目での32名(62.7%)、26名(56.5%)の評価可能な非盲検治療を受けた被験者の治療期。
1レベルのCR−PCSSアクティブ応答者のうち、下記の研究期間中に1レベルの応答が維持された。
・それぞれ180日目および360日目での二重盲検法で治療を受けた被験者38名(84.4%)の観察期。
・それぞれ540日目および720日目での19名(82.6%)、16名(69.6%)の二重盲検者の長期持続期。
・それぞれ180日目および360日目での評価可能な非盲検治療を受けた109名(87.9%)、96名(84.2%)の治療期。
研究201の2レベルのPR−PCSSアクティブ応答者のうち、下記の研究期間中に2レベルの応答が維持された。
・二重盲検法による評価可能な被験者のうち、10名(31.3%)が180日目、14名(48.3%)が360日目の観察期。
・それぞれ540日目および720日目での二重盲検法による評価可能な被験者7名(53.8%)の長期持続期。
・それぞれ180日目および360日目での33名(66.7%)、24名(54.5%)の評価可能な非盲検治療者の治療期。
研究201の1レベルのPR−PCSSアクティブ応答者のうち、下記の研究期間中に1レベルの応答が維持された。
・それぞれ180日目および360日目での二重盲検法による評価可能な被験者の40名(75.5%)、35名(77.8%)の観察期。
・それぞれ180日目および360日目での二重盲検法による評価可能な被験者19名(82.6%)、20名(87.0%)の長期持続期。
・それぞれ180日目および360日目での103名(83.1%)、92名(80.7%)の評価可能な非盲検治療者の治療期。
また、2レベルおよび1レベルのCR−PCSS、2レベルおよび1レベルのPR−PCSSの応答者、および研究201の応答者においても、観察期、長期持続期、治療期において応答の持続性が認められた。
観察期および治療期の二重盲検非盲検研究において、治療コース1および2を受けた被験者は、360日目のCR−PCSS評価値が約1レベル低下したことが確認された。再投与および再治療においても同様の効果が認められ、CCHの2回目の治療を受けた後の治療観察日360日目のCR−PCSS評価の変化は、平均(SD)で−0.9(0.77)であった(再投与群と未治療群の比較)。
観察期にはPR−PCSS評価が360日目に約1レベル低下し、治療期には治療コース1および治療コース2を受けた二重盲検・非盲検の被験者で観察された。また、観察期360日目に再投与された被験者においても同様の効果が認められ、CCH、CCHの2回目の投与後(再投与された被験者と未投与の被験者)のPR−PCSS評価の変化量の平均値(SD)は−1.0(0.83)であった。
CCHによるセルライトの減少効果は、観察期、長期持続期、治療期(治療コース1および2)において、ヘクセルCSS、I−GAIS、S−GAIS、およびEFP治療に対する被験者の満足度の尺度で観察された。CCH治療後のこれらの尺度の変化の大きさは、再治療された被験者と再投与された被験者、および治療を受けていない被験者の間で同等であった。
・ヘクセルのCSS総合スコアでは、
−観察期、CCH治療を受けた被験者では、観察来院日360日目に、ヘクセルCSS総合スコアの71日目のベースラインからの変化が平均(SD)で−2.2(2.34)であったのに対し、プラセボ治療を受けた被験者では平均(SD)で−1.2(1.47)であったことを示した。
−長期持続期、ベースライン(研究201)からの変化量は、540日目で−1.0(0.83)、720日目で−2.9(1.74)であった。
−治療期では、再治療群と再投与を受けた被験者の360日目におけるベースライン(研究202)からの変化量は−2.4(2.37)であった。
・I−GAISの調査員によると、下記の期間:
−観察期、CCH治療を受けた被験者の半数以上(64.9%)のセルライトが観察され、I−GAISの調査員による評価では、非常に改善された(4.1%)、かなり改善された(23.7%)、改善された(37.1%)とされた。
−治療期、治療コース1の360日目に、被験者全体の約4分の3(73.2%)のセルライトが、改善された(81名、49.4%)、かなり改善された(32名、19.5%)、非常に改善された(7名、4.3%)と評価された。
−治療期、治療コース2の360日目に、被験者全体の半数以上(64.2%)が、「改善した」(24名、35.8%)、「かなり改善した」(16名、23.9%)、「非常に改善した」(3名、4.5%)と評価された。
−治療期、360日目に、2回目のCCH治療を受けた被験者において、再治療および再投与を受けた被験者の3分の2以上(71.8%)のセルライトが、改善された64(45.1%)、かなり改善された33(23.2%)、非常に改善された5(3.5%)と評価された。
・S−GAISでの被験者によると、下記の期間:
−観察期、CCH治療を受けた被験者の3分の2以上(69.1%)が、セルライトが改善された(46名、47.4%)、かなり改善された(18名、18.6%)、非常に改善された(3名、3.1%)と評価した。
−治療期中で、治療コース1の360日目に、被験者全体の3分の2以上(66.2%)が、セルライトが改善された(73人、44.8%)、かなり改善された(18人、11%)、非常に改善された17人(10.4%)と評価した。
−治療期中で、治療コース2の360日目に、被験者の約半数(51.5%)のセルライトが改善された(24名、35.3%)、かなり改善された(6名、8.8%)、非常に改善された(5名、7.4%)と評価した。
−治療期中で、360日目で、2回目のCCH治療を受けた被験者の半数以上(64.4%)が、セルライトが改善された(64人、44.8%)、かなり改善された(14人、9.8%)、非常に改善された16人(11.2%)と評価した。
・EFP治療に対する被験者の満足度評価で、被験者によって、下記の期間:
−観察期、360日目に、CCH投与群では41名(42.3%)、CCH治療を受けた被験者では14名(14.4%)の被験者が「治療に満足している」「非常に満足している」と応答した。
−治療段階中で、治療コース1の観察日360日目に、55名(33.7%)の被験者が治療に満足し、26名(16.0%)の被験者が非常に満足した。
−治療段階中で、治療コース2の観察日360日目に、21人(30.9%)の被験者が治療に満足し、10人(14.7%)の被験者が非常に満足した。
−治療段階中で、2回目のCCH治療を受けた被験者のうち、50人(35%)の被験者が治療に満足し、25人(17.5%)の被験者が治療に非常に満足したと応答した。
本研究では、193名の被験者を対象に、CCHを1部位あたり0.84mg×3回投与することで、1年後まで効果が持続することが示された。また、2年後の評価のために抽出された被験者においても、CCH投与後2年まで効果の持続性が確認された。また、CCHを1回あたり0.84mg、21日間隔で3回、臀部または大腿部に皮下投与することで、繊細な被験者、再投与・再々投与の被験者のいずれに対しても有効であることが示された。セルライトの重症度の減少は、調査員および被験者の評価尺度を含む複数の尺度で示された。効果の評価結果は、臀部と大腿部の治療部位で同様であった。
162名の被験者にCCH0.84mg/治療部位×3回の2回目の治療コースを再投与し、効果を評価したところ、治療に対する耐性は認められなかった(すなわち、治療効果の低下は認められなかった)。このことは、研究202の結果からも裏付けられており、CR−PCSSおよびPR−PCSSで観察された低下は、162名の被験者の2回目の治療コース後の応答が1回目の治療コースと比較しても、また、重要な段階3研究で観察された応答と同様であった。
本研究の結果は、PR−PCSSおよびCR−PCSSの評価のベースラインからの変化で証明されたように、効果の持続性が1年まで持続し、PR−PCSSおよびCR−PCSSの持続的な応答が1年まで持続した。また、1レベルおよび2レベルの複合応答が2年まで持続することを裏付ける結果が得られた
研究202でCCHを再投与した被験者は、2回目の治療コース後にCR−PCSSおよびPR−PCSSのセルライトの重症度が、初回治療コース後の被験者や二重盲検研究(研究201、302、303)の被験者で観察された応答と同様の大きさで減少した。
CCHに対する応答の持続性は、研究の観察期、長期持続期、治療期において評価可能な被験者で示された。研究201の2レベルの複合応答者では、評価可能な被験者全員が応答の持続性を維持し、180日目および360日目にベースラインのCR−PCSSおよびPR−PCSSレベルに戻った被験者はいなかった。201研究の1レベルの複合応答者では、ほぼすべての被験者が180日目および360日目に治療効果が持続した。本研究でも同様の結果が得られ、評価対象者全員が180日目および360日目に応答を持続した。
評価可能な2レベルおよび1レベルの複合応答者、CR−PCSS応答者、およびPR−PCSS応答者において、研究201のベースラインスコアから最大2年間の長期耐久性が示された。研究201のベースラインからのセルライトの重症度に対するCCHの効果は、ヘクセルCSS総合スコア、I−GAIS、S−GAIS、およびEFP治療に対する被験者の満足度スコアで測定され、研究201のベースラインから少なくとも1年後まで維持された。
本研究では、CCH0.84mg/治療部位の有効性を、治療を受けていない被験者と再曝露(再治療/再投与)された被験者の両方で評価した。CR−PCSS、PR−PCSS、ヘクセルCSS総合スコア、I−GAIS、S−GAIS、EFP治療に対する被験者の満足度スコアで評価した効果測定の結果は、観察集団での結果と一致し、治験責任者と被験者のどちらが評価しても、セルライトの重症度が改善することが示された。また、再治療および再投与を受けた被験者においても同様の結果が得られた。なお、2回目の投与を選択した被験者のうち、ほとんどの被験者が大部分の再投与で治療されていないことに留意する必要がある。
今回のCCHの段階2長期、非盲検、他施設の研究の全体的な結果は、EFPの治療におけるCCHの安全性、忍容性、有効性、および長期持続性をさらに証明するものである。
本明細書に記載されている実施形態は、単に例示的なものであることを意図する。当業者であれば、以下の特許請求の範囲に包含される本発明の範囲を逸脱することなく、変形や変更を行うことができることを理解するだろう。

Claims (63)

  1. ヒト患者の両臀部におけるセルライトの重症度を低減する方法であって、前記方法は、
    a.以下の特徴:
    i.約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1);
    ii.約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
    iii.約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1);
    iv.約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒;
    v.約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
    vi.約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量;
    vii.逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度が少なくとも80%であること;
    viii.約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価;
    ix.約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価;
    x.約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価;
    xi.クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下;
    xii.1cfu/mL以下のバイオバーデン;
    のうち少なくとも2つを有するコラゲナーゼ組成物を提供する工程と、
    b.治療有効量の前記コラゲナーゼ組成物を両臀部の陥凹部に注射する工程であって、前記セルライトの外観における改善が、ヘクセルセルライト重症度尺度(ヘクセルCSS)、ヘクセルくぼみ深さスコア、リッカート尺度、陥凹部分析、臨床医が報告したフォト数値セルライト重症度尺度(CR−PCSS)、患者が報告したフォト数値セルライト重症度尺度(PR−PCSS)、調査員グローバル美的改善尺度(I−GAIS)、被験者グローバル美的改善尺度(S−GAIS)、患者報告式セルライトインパクト尺度(PR−CIS)、PR−CIS省略形、被験者自己評価尺度(SSRS)、セルライト治療に対する被験者の満足度(SSCT)、セルライトの重症度の臨床医アセスメント(写真またはその他の画像)、Body−Q、セルライトの重症度、改善度、および/または患者の満足度を評価するために臨床医および/または患者が使用する検証済みのフォト数値またはその他の尺度、からなる群から選択される尺度または他の測定ツールによって確立されるものである、注射する工程と、
    を有する、方法。
  2. 請求項1記載の方法において、治療される前記陥凹部は、サイズまたは相互の距離に依存しないものである、方法。
  3. 請求項1記載の方法において、治療される前記陥凹部は、皮膚のたるみ、弛緩、または垂れがない、方法。
  4. 請求項1記載の方法において、前記患者が複数回の治療訪問を受け、異なる陥凹部は異なる治療訪問で治療される、方法。
  5. 請求項1記載の方法において、前記注射は1/2インチの針で行われる、方法。
  6. 請求項1記載の方法において、前記注射は、前記注射の位置を制限するスペーサー、定規、紙などの装置に頼らない臨床医によって行われるものである、方法。
  7. 請求項1記載の方法において、少なくとも1回の注射は、前記陥凹部の直下に行われる、方法。
  8. 請求項1記載の方法において、複数回の注射が互いに2cm以内で行われる、方法。
  9. 請求項1記載の方法において、治療される前記陥凹部の長さが1cm未満または2cm以上である、請求項1に記載の方法。
  10. 請求項1記載の方法において、前記患者が治療に対して迅速な応答速度を経験する、方法。
  11. 請求項1記載の方法において、全員が中等度または重度のCR−PCSSベースライン評価を有する患者集団に治療を行うと、前記治療は、以下からなる群:
    a.少なくとも50%の患者が、22、43、または71日目に、前記臀部の臨床医がライブで評価したCR−PCSSの重症度がベースラインから少なくとも1レベル改善していること;
    b.少なくとも50%の患者が、22、43、または71日目に、前記臀部のデジタル画像を見ながら被験者が評価したPR−PCSSの重症度がベースラインから少なくとも1レベル改善していること;
    c.患者の少なくとも5%が、22、43、または71日目に、前記臀部の臨床医がライブで評価したCR−PCSSの重症度がベースラインから少なくとも2レベル改善していること;
    d.患者の少なくとも5%が、22、43、または71日目に、前記臀部のデジタル画像を見ながら被験者が評価したPR−PCSSの重症度がベースラインから少なくとも2レベル改善していること;および
    e.少なくとも5%の患者が、陥凹部サイズの減少を経験すること;
    からなる群から選択される結果をもたらす、方法。
  12. 請求項11記載の方法において、前記陥凹部サイズのパラメータが、体積、長さ、幅、および深さからなる群から選択される、方法。
  13. 請求項11記載の方法において、前記陥凹部サイズの減少が、ベースラインから22、43、または71日目において少なくとも10%減少である、方法。
  14. 請求項1記載の方法において、注射された累積コラゲナーゼが約5.04mgである、方法。
  15. 請求項1記載の方法において、前記コラゲナーゼ組成物は、以下の特徴:
    a.AUX−I(SRCアッセイ):
    i.Vmax、分−1:約0.08〜7.70
    ii.K:約4.1〜410ナノモル
    iii.Kcat、秒−1:約1.1〜107
    iv.1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
    v.kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
    b.AUX−II(GPAアッセイ)
    i.Vmax、分−1:約0.3〜30.5
    ii.KM、mM:約0.03〜3.1
    iii.Kcat、秒−1:約93〜9,179
    iv.1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
    v.kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
    を有するAUX−IおよびAUX−IIを有する、方法。
  16. 請求項1記載の方法において、前記コラゲナーゼ組成物は、以下の特徴:
    a.AUX−I(SRCアッセイ):
    i.Vmax、分−1:約3.8
    ii.KM、mM:約2.07×10−4
    iii.Kcat、秒−1:約53
    iv.1/Kcat、マイクロ秒:約18,799
    v.kcat/K、mM−1−1:約256,977
    b.AUX−II(GPAアッセイ)
    i.Vmax、分−1:約15.4
    ii.KM、mM:約1.6
    iii.Kcat、秒−1:約4,636
    iv.1/Kcat、マイクロ秒:約216
    v.kcat/K、mM−1−1:約2,997
    を有するAUX−IおよびAUX−IIを有する、方法。
  17. 請求項1記載の方法において、前記組成物は少なくとも3つの前記特徴を有する、方法。
  18. 請求項1記載の方法において、前記組成物は少なくとも4つの前記特徴を有する、方法。
  19. 請求項1記載の方法において、前記組成物は少なくとも5つの前記特徴を有する、方法。
  20. 請求項1記載の方法において、前記組成物は約1mg〜20mgの1つまたは複数のコラゲナーゼを有する、方法。
  21. 請求項1記載の方法において、前記組成物はCCHを有する、方法。
  22. 請求項1記載の方法において、前記組成物は約10,000ABC単位/0.58mgの力価を有し、前記治療有効量は約1mg〜20mgである、方法。
  23. 請求項1記載の方法において、前記組成物は約15,000ABC単位/mg〜20,000ABC単位/mgの力価を有し、前記治療有効量は約1mg〜20mgである、方法。
  24. 請求項1記載の方法において、前記治療有効量は約1mg〜10mgであり、前記組成物は約20,000〜約30,000f−SRC単位/mg、または、約175,000〜約300,000f−GPA単位/mgの力価を有する、方法。
  25. 請求項1記載の方法において、前記治療が患者集団に行われる場合、前記治療の結果、患者の少なくとも5%が、初回投与後少なくとも71日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
  26. 請求項25記載の方法において、前記患者の少なくとも10%が、初回投与後少なくとも71日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
  27. 請求項25記載の方法において、前記患者の少なくとも20%が、初回投与後少なくとも71日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
  28. 請求項1記載の方法において、前記治療が患者集団に行われる場合、前記治療の結果、患者の少なくとも5%が治療前のベースラインに対して改善を示し、および、時間とともに改善のさらなる増加を示す、方法。
  29. 請求項1記載の方法において、治療が、CR−PCSSおよび/またはPR−PCSSによって測定される以下の有効性評価項目:
    a.22、43、71、90、180、または365日目に、前記臀部の臨床医がライブで評価したCR−PCSSの重症度がベースライン(治療前の「1日目」)から少なくとも2レベル改善していること;
    b.22、43、71、90、180、または365日目に、前記臀部のデジタル画像を見ながら患者が評価したPR−PCSSの重症度が、ベースライン(1日目)から少なくとも2レベル改善していること;
    c.前記CR−PCSSにおいてベースラインから少なくとも2レベルの重症度の改善があり、および、前記PR−PCSSにおいてベースラインから少なくとも2レベルの重症度の改善がある患者と定義される、22、43、71、90、180、または365日目に、2レベルの複合応答によって示された改善;
    d.22、43、71、90、180、または365日目に、前記臀部の臨床医がライブで評価したCR−PCSSの重症度が、ベースライン(1日目)から少なくとも1レベル改善していること;
    e.22、43、71、90、180、または365日目に、前記臀部のデジタル画像を見ながら患者が評価したPR−PCSSの重症度が、ベースライン(1日目)から少なくとも1レベル改善していること;
    f.前記CR−PCSSにおいてベースラインから少なくとも1レベルの重症度の改善があり、および、前記PR−PCSSにおいてベースラインから少なくとも1レベルの重症度の改善がある患者と定義される、22、43、71、90、180、または365日目に、1レベルの複合応答によって示される改善;および
    g.ベースライン時に全員のCR−PCSS評価が中等度または重度であった患者集団において、少なくとも1つの治療領域における改善がプラセボと比較して統計的に有意であり、その改善が上記a.からf.の1つ以上であること;
    のうち少なくとも1つの結果をもたらす、方法。
  30. 請求項1記載の方法において、前記治療が、陥凹部分析によって測定される以下の有効性評価項目:
    a.深さが少なくとも5%減少する;
    b.幅が少なくとも5%減少する;
    c.長さが少なくとも5%減少する;
    d.全体の体積が少なくとも5%減少する;
    e.表面積が少なくとも5%減少する;
    のうち少なくとも1つをもたらす、方法。
  31. ヒト患者の両臀部におけるセルライトの重症度を低減する方法であって、前記方法は、
    a.以下の特徴:
    i.約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1);
    ii.約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
    iii.約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1);
    iv.約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒;
    v.約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
    vi.約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量;
    vii.逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度が少なくとも80%であること;
    viii.約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価;
    ix.約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価;
    x.約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価;
    xi.クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下;
    xii.1cfu/mL以下のバイオバーデン;
    のうち少なくとも2つを有するコラゲナーゼ組成物を提供する工程と、
    b.治療有効量の前記コラゲナーゼ組成物を、治療Iに従って両臀部の陥凹部に注射する工程であって、治療訪問後約3日〜20日の間にあざが有意に減少するか、または色の濃さが解消される、注射する工程と、
    を有する、方法。
  32. 請求項31記載の方法において、注射された累積コラゲナーゼが約5.04mgである、方法。
  33. 請求項31記載の方法において、前記コラゲナーゼ組成物は、以下の特徴:
    a.AUX−I(SRCアッセイ):
    i.Vmax、分−1:約0.08〜7.70
    ii.K:約4.1〜410ナノモル
    iii.Kcat、秒−1:約1.1〜107
    iv.1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
    v.kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
    b.AUX−II(GPAアッセイ)
    i.Vmax、分−1:約0.3〜30.5
    ii.KM、mM:約0.03〜3.1
    iii.Kcat、秒−1:約93〜9,179
    iv.1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
    v.kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
    を有するAUX−IおよびAUX−IIを有する、方法。
  34. 請求項31記載の方法において、前記コラゲナーゼ組成物は、以下の特徴:
    a.AUX−I(SRCアッセイ):
    i.Vmax、分−1:約3.8
    ii.KM、mM:約2.07×10−4
    iii.Kcat、秒−1:約53
    iv.1/Kcat、マイクロ秒:約18,799
    v.kcat/K、mM−1−1:約256,977
    b.AUX−II(GPAアッセイ)
    i.Vmax、分−1:約15.4
    ii.KM、mM:約1.6
    iii.Kcat、秒−1:約4,636
    iv.1/Kcat、マイクロ秒:約216
    v.kcat/K、mM−1−1:約2,997
    を有するAUX−IおよびAUX−IIを有する、方法。
  35. 請求項31記載の方法において、前記組成物は少なくとも3つの前記特徴を有する、方法。
  36. 請求項31記載の方法において、前記組成物は少なくとも4つの前記特徴を有する、方法。
  37. 請求項31記載の方法において、前記組成物は少なくとも5つの前記特徴を有する、方法。
  38. 請求項31記載の方法において、前記組成物は約1mg〜20mgの1つまたは複数のコラゲナーゼを有する、方法。
  39. 請求項31記載の方法において、前記組成物はCCHを有する、方法。
  40. 請求項31記載の方法において、前記組成物は約10,000ABC単位/0.58mgの力価を有し、前記治療有効量は約1mg〜20mgである、方法。
  41. 請求項31記載の方法において、前記組成物は約15,000ABC単位/mg〜20,000ABC単位/mgの力価を有し、前記治療有効量は約1mg〜20mgである、方法。
  42. 請求項31記載の方法において、前記治療有効量は約1mg〜10mgであり、前記組成物は約20,000〜約30,000f−SRC単位/mg、または、約175,000〜約300,000f−GPA単位/mgの力価を有する、方法。
  43. 請求項31記載の方法において、前記治療が患者集団に行われる場合、前記治療の結果、患者の少なくとも5%が、初回投与後少なくとも71日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
  44. 請求項43記載の方法において、前記患者の少なくとも10%が、初回投与後少なくとも71日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
  45. 請求項43記載の方法において、前記患者の少なくとも20%が、初回投与後少なくとも71日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
  46. 請求項31記載の方法において、前記治療が患者集団に行われる場合、前記治療の結果、患者の少なくとも5%が治療前のベースラインに対して改善を示し、および、時間とともに改善のさらなる増加を示す、方法。
  47. ヒト患者の両臀部におけるセルライトの重症度を低減する方法であって、前記方法は、
    a.以下の特徴:
    i.約0.08〜7.70(SRCアッセイ)、または約0.3〜30.5(GPAアッセイ)のVmax(分−1);
    ii.約4.1〜410ナノモル(SRCアッセイ)、または約0.03〜3.1mM(GPAアッセイ)のK
    iii.約1.1〜107(SRCアッセイ)、または約93〜9,179(GPAアッセイ)のKcat(秒−1);
    iv.約376〜37,222(SRCアッセイ)、または約4〜428(GPAアッセイ)の1/Kcat、マイクロ秒;
    v.約5,140〜508,814(SRCアッセイ)、または約60〜5,934(GPAアッセイ)のKcat/K、mM−1−1
    vi.約60kDa〜約130kDa、または約70〜約130kDa、または約80〜約120kDa、または約90〜約120kDa、または約100〜約110kDaの分子量;
    vii.逆相HPLC(高圧液体クロマトグラフィー)で測定した面積比の純度が少なくとも80%であること;
    viii.約5,000〜約30,000f−SRC単位/mgの力価;
    ix.約175,000〜約500,00f−GPA単位/mgの力価;
    x.約5,000〜約25,000ABC単位/mgの力価;
    xi.クロストリパイン、ゼラチナーゼおよびロイペプチンからなる群から選択される不純物が面積比で1%以下;
    xii.1cfu/mL以下のバイオバーデン;
    のうち少なくとも2つを有するコラゲナーゼ組成物を提供する工程と、
    b.治療有効量の前記コラゲナーゼ組成物を、治療Iに従って両臀部の陥凹部に注射する工程であって、前記セルライトの外観における改善が、CR−PCSSによって確立されるものである、注射する工程と、
    を有する、方法。
  48. 請求項47記載の方法において、注射された累積コラゲナーゼが約5.04mgである、方法。
  49. 請求項47記載の方法において、前記コラゲナーゼ組成物は、以下の特徴:
    a.AUX−I(SRCアッセイ):
    i.Vmax、分−1:約0.08〜7.70
    ii.K:約4.1〜410ナノモル
    iii.Kcat、秒−1:約1.1〜107
    iv.1/Kcat、マイクロ秒:約376〜37,222
    v.kcat/K、mM−1−1:約5,140〜508,814
    b.AUX−II(GPAアッセイ)
    i.Vmax、分−1:約0.3〜30.5
    ii.KM、mM:約0.03〜3.1
    iii.Kcat、秒−1:約93〜9,179
    iv.1/Kcat、マイクロ秒:約4〜428
    v.kcat/K、mM−1−1:約60〜5,934
    を有するAUX−IおよびAUX−IIを有する、方法。
  50. 請求項47記載の方法において、前記コラゲナーゼ組成物は、以下の特徴:
    a.AUX−I(SRCアッセイ):
    i.Vmax、分−1:約3.8
    ii.KM、mM:約2.07×10−4
    iii.Kcat、秒−1:約53
    iv.1/Kcat、マイクロ秒:約18,799
    v.kcat/K、mM−1−1:約256,977
    b.AUX−II(GPAアッセイ)
    i.Vmax、分−1:約15.4
    ii.KM、mM:約1.6
    iii.Kcat、秒−1:約4,636
    iv.1/Kcat、マイクロ秒:約216
    v.kcat/K、mM−1−1:約2,997
    を有するAUX−IおよびAUX−IIを有する、方法。
  51. 請求項47記載の方法において、前記組成物は少なくとも3つの前記特徴を有する、方法。
  52. 請求項47記載の方法において、前記組成物は少なくとも4つの前記特徴を有する、方法。
  53. 請求項47記載の方法において、前記組成物は少なくとも5つの前記特徴を有する、方法。
  54. 請求項47記載の方法において、前記組成物は約1mg〜20mgの1つまたは複数のコラゲナーゼを有する、方法。
  55. 請求項47記載の方法において、前記組成物はCCHを有する、方法。
  56. 請求項47記載の方法において、前記組成物は約10,000ABC単位/0.58mgの力価を有し、前記治療有効量は約1mg〜20mgである、方法。
  57. 請求項47記載の方法において、前記組成物は約15,000ABC単位/mg〜20,000ABC単位/mgの力価を有し、前記治療有効量は約1mg〜20mgである、方法。
  58. 請求項47記載の方法において、前記治療有効量は約1mg〜10mgであり、前記組成物は約20,000〜約30,000f−SRC単位/mg、または、約175,000〜約300,000f−GPA単位/mgの力価を有する、方法。
  59. 請求項47記載の方法において、前記治療が患者集団に行われる場合、前記治療の結果、患者の少なくとも5%が、初回投与後少なくとも71日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
  60. 請求項59記載の方法において、前記患者の少なくとも10%が、初回投与後少なくとも71日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
  61. 請求項59記載の方法において、前記患者の少なくとも20%が、初回投与後少なくとも71日間、治療前のベースラインに対して改善のレベルを維持する、方法。
  62. 請求項47記載の方法において、前記治療が患者集団に行われる場合、前記治療の結果、患者の少なくとも5%が治療前のベースラインに対して改善を示し、および、時間とともに改善のさらなる増加を示す、方法。
  63. 請求項47記載の方法において、治療が、CR−PCSSによって測定される以下の有効性評価項目:
    a.22、43、71、90、180、または365日目に、前記臀部の臨床医がライブで評価したCR−PCSSの重症度がベースライン(治療前の「1日目」)から少なくとも2レベル改善していること;
    b.22、43、71、90、180、または365日目に、前記臀部のデジタル画像を見ながら患者が評価したPR−PCSSの重症度が、ベースライン(1日目)から少なくとも2レベル改善していること;
    c.前記CR−PCSSにおいてベースラインから少なくとも2レベルの重症度の改善があり、および、前記PR−PCSSにおいてベースラインから少なくとも2レベルの重症度の改善がある患者と定義される、22、43、71、90、180、または365日目に、2レベルの複合応答によって示された改善;
    d.22、43、71、90、180、または365日目に、前記臀部の臨床医がライブで評価したCR−PCSSの重症度が、ベースライン(1日目)から少なくとも1レベル改善していること;
    e.22、43、71、90、180、または365日目に、前記臀部のデジタル画像を見ながら患者が評価したPR−PCSSの重症度が、ベースライン(1日目)から少なくとも1レベル改善していること;
    f.前記CR−PCSSにおいてベースラインから少なくとも1レベルの重症度の改善があり、および、前記PR−PCSSにおいてベースラインから少なくとも1レベルの重症度の改善がある患者と定義される、22、43、71、90、180、または365日目に、1レベルの複合応答によって示される改善;および
    g.ベースライン時に全員のCR−PCSSまたはPR−PCSS評価が中等度または重度であった患者集団において、少なくとも1つの治療領域における改善がプラセボと比較して統計的に有意であり、その改善が上記a.からf.の1つ以上であること;
    のうち少なくとも1つの結果をもたらす、方法。
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