JP2022153580A - オルガノイド作製および疾患モデル化のための組成物および方法 - Google Patents

Abstract

【課題】膵島オルガノイドおよび膵臓オルガノイド、ならびに、膵島および膵島オルガノイドの迅速でありかつ信頼性のある作製に有用である細胞培養物および方法を提供する。また、本発明の膵島オルガノイドおよび膵臓オルガノイドを用いる、2型糖尿病および膵癌などの膵臓疾患を処置する方法ならびに該膵臓疾患を処置するのに有用な作用物質を同定する方法も提供する。【解決手段】膵島オルガノイドを作製する方法であって、ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞(iPSC)由来のβ様細胞を培養する段階を含み、それによって膵島オルガノイドを作製する、方法を提供する。また、ジェランガムを含む3次元マトリックス中にiPSC由来β様細胞を含む細胞培養物を提供する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、2016年5月25日に出願された米国仮特許出願第62/341,461号の恩典を主張し、その全内容は本明細書において参照により本明細書に組み入れられる。

連邦政府支援の研究に基づいてなされた発明に対する権利の言明
本発明は、米国立衛生研究所により付与された助成金第DK057978号および第DK0909962号の下で、政府の支援を受けてなされたものである。政府は本発明において一定の権利を有する。

発明の背景
動物疾患モデルは疾患の病態形成に対する洞察をもたらし得るが、動物モデルを用いてスクリーニングおよび選択された薬物は、ヒト患者に採用できない場合が多い。進化生物学、分子生物学、および遺伝学的研究により、動物とヒトは大きく異なり得ることが示されるため、ヒト細胞を用いたヒト疾患の再現および機能的なヒト臓器の作製が緊急に必要とされている。

以下に記載されるように、本発明は、膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドを含むオルガノイドを作製するための組成物および方法を特徴とする。

1つの局面において、本発明は、膵島オルガノイドを作製する方法であって、ジェランガムを含有する3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞を培養する段階を含み、それによって膵島オルガノイドを作製する、方法を提供する。

別の局面において、本発明は、ジェランガムを含有する3次元マトリックス中にiPSC由来β様細胞を含む細胞培養物を提供する。

別の局面において、本発明は、ジェランガムを含有する3次元マトリックス中にヒトiPSC由来β様細胞、ヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC)、およびヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) を含む、細胞培養物を提供する。

本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、細胞培養物は脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞を含む。

別の局面において、本発明は、iPSC由来β様細胞を含有する膵島オルガノイドであって、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、膵島オルガノイドを提供する。

別の局面において、本発明は、iPSC由来β様細胞、iPSC由来α細胞、iPSC由来δ細胞、iPSC由来導管細胞、脂肪由来幹細胞 (hADSC)、および内皮細胞を含有する膵島オルガノイドであって、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS)、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、およびグルカゴン分泌を示す、膵島オルガノイドを提供する。

関連局面において、本発明は、本明細書において詳細に説明される任意の局面のオルガノイドを移植された非ヒト生物を提供する。

別の局面において、本発明は、膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質を同定する方法であって、候補作用物質を膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドと接触させ；該候補作用物質と接触させたオルガノイドの活性を測定する段階を含み、オルガノイドの活性が参照と比較して変化した場合に、候補作用物質が、膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質として同定される、方法を提供する。

別の局面において、本発明は、膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質を同定する方法であって、膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドが移植された非ヒト対象に候補作用物質を投与する段階；および該非ヒト対象の膵臓活性を測定する段階を含み、非ヒト対象の膵臓活性が参照と比較して変化した場合に、候補作用物質が、膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質として同定される、方法を提供する。

別の局面において、本発明は、対象における膵臓疾患を処置する方法であって、膵島オルガノイドを対象に移植する段階を含み、該膵島オルガノイドが、iPSC由来β様細胞を含有し、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、方法を提供する。

別の局面において、本発明は、対象における1型糖尿病を処置する方法であって、膵島オルガノイドを対象に移植する段階を含み、該膵島オルガノイドが、iPSC由来β様細胞を含有し、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、方法を提供する。

別の局面において、本発明は、ジェランガムを含有する3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞を培養することによって作製された膵島オルガノイドを提供する。

別の局面において、本発明は、ジェランガムを含有する3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞およびiPSC由来外分泌成分細胞を培養することによって作製された膵臓オルガノイドを提供する。

別の局面において、本発明は、ジェランガムを含有する3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来の肝細胞を培養することによって作製された肝臓オルガノイドを提供する、

別の局面において、本発明は、ジェランガムを含有する3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来の心筋細胞を培養することによって作製された心臓オルガノイドを提供する、

別の局面において、本発明は、ジェランガムを含有する3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来の腸細胞を培養することによって作製された腸オルガノイドを提供する、

本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、本方法は、iPSC由来β様細胞を脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞と共に培養する段階を含む。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、本方法は、iPSC由来β様細胞をiPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、および／またはiPSC由来導管様細胞と共に培養する段階を含む。

本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、膵島オルガノイドは、iPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、および／またはiPSC由来導管様細胞を含有する。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、膵島オルガノイドは脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞を含む。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、膵島オルガノイドは、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、および／またはグルカゴン分泌を示す。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、膵島オルガノイドは、β細胞転写因子Pdx1、MafA、Pax4、Pax6、NeuroD1、Nkx6-1、Gata6、およびFoxa2のうちの1つまたは複数を発現する。ある特定の態様において、膵島オルガノイドは、iPSC由来β様細胞、iPSC由来α細胞、iPSC由来δ細胞、iPSC由来導管細胞、脂肪由来幹細胞 (hADSC)、および内皮細胞を含有し、この場合、該オルガノイドは、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS)、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、およびグルカゴン分泌を示す。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、膵島オルガノイドはiPSC由来外分泌成分によって囲まれている。様々な態様において、iPSC由来外分泌成分は、マーカーPDX1、Nkx6-1、およびPtf1のうちの1つまたは複数を発現する。

本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、本方法は、オルガノイドまたは非ヒト対象において膵臓疾患を誘発または模倣する段階を含む。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、以下の作用物質、すなわち遊離脂肪酸 (FFA)、グルコース、およびサイトカインのうちの1つまたは複数をオルガノイドと接触させることまたは非ヒト対象に投与することによって、疾患が誘発される。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、ヒト膵癌微小環境を創出するためにオルガノイドを膵癌細胞、星状細胞、および免疫細胞と共に培養することによって、疾患が模倣される。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、膵臓活性は、インスリン分泌、β細胞アポトーシス、NDUFA4、ESRRG、G6PC2、MDH1、LDHA、KCNK3、またはMAFAポリペプチドまたはポリヌクレオチドの発現または活性、アミラーゼ分泌、外分泌成分のアポトーシス、コラーゲン合成、および星状細胞活性化のうちの1つまたは複数である。様々な態様において、非ヒト対象は肝臓オルガノイドもまた移植される。

本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、候補作用物質はインスリン分泌を増加させる。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、膵臓活性を調節する作用物質として同定された候補作用物質は、膵臓疾患を処置する能力について試験される。様々な態様において、膵臓疾患は2型糖尿病または膵癌である。

本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、オルガノイドは、本明細書において詳細に説明される任意の局面によるオルガノイドである。

様々な態様において、非ヒト生物は哺乳動物（例えば、マウス）である。

本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、膵島オルガノイドは、iPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、および／またはiPSC由来導管様細胞を含有する。

本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、膵島オルガノイドは脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞を含有する。

本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様においては、対象において膵臓疾患が誘発または模倣される。特定の態様において、膵臓疾患は1型糖尿病または2型糖尿病である。ある特定の態様において、対象は哺乳動物（例えば、ヒト）である。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、対象は免疫抑制剤を投与される。

本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、肝臓オルガノイドは、マーカーAFP、ALB、およびCyp3a7のうちの1つまたは複数を発現する。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、肝臓オルガノイドは、インスリンシグナル伝達、パルミチン酸によるインスリン抵抗性、および脂質蓄積を示す。

本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、心臓オルガノイドは、マーカーhMlc2a、hNkx2-5、αMHC、およびKCNQ1のうちの1つまたは複数を発現する。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、心臓オルガノイドは心拍動を示す。

本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、腸オルガノイドは、マーカーCDX2、Muc2、およびLgr5のうちの1つまたは複数を発現する。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、腸オルガノイドはR-スポンジンに応答して出芽を示す。

本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、iPSC由来β様細胞、iPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、および／またはiPSC由来導管様細胞はヒトのものである。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、iPSC由来β様細胞、iPSC由来外分泌成分細胞、iPSC由来肝細胞、iPSC由来心筋細胞、またはiPSC由来腸細胞はヒトのものである。様々な態様において、脂肪由来幹細胞はヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) である。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、内皮細胞はヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である。

本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイドは、脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞を含有する。本明細書において詳細に説明される任意の局面の様々な態様において、膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイドは血管新生する。

別の局面において、本発明は、膵島オルガノイドを作製する方法であって、Wnt4またはWnt5aタンパク質を含む培地中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞を培養する段階を含む、方法を提供する。1つの態様において、人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞は3次元マトリックス中で培養される。前述の局面の1つの態様において、Wnt4またはWnt5aタンパク質は組換えヒトWnt4またはWnt5aタンパク質である。特定の態様において、培地は組換えヒトWnt4タンパク質を含む。別の特定の態様において、培地は組換えヒトWnt5aタンパク質を含む。

別の局面において、本発明は、ヒトiPSC由来β様細胞およびWnt4またはWnt5aタンパク質を含む、細胞培養物を提供する。1つの態様において、ヒトiPSC由来β様細胞は、ジェランガムを含む3次元マトリックス中に存在する。1つの態様において、Wnt4またはWnt5aタンパク質は組換えヒトWnt4またはWnt5aタンパク質である。特定の態様において、培地は組換えヒトWnt4タンパク質を含む。別の特定の態様において、培地は組換えヒトWnt5aタンパク質を含む。

別の局面において、本発明は、Wnt4またはWnt5aタンパク質を含む培地中で培養されたiPSC由来β様細胞を含む膵島オルガノイドであって、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、膵島オルガノイドを提供する。1つの態様において、オルガノイドは、KCl刺激インスリン分泌またはグルコース刺激インスリン分泌をさらに示す。1つの態様において、膵島オルガノイドはFltp遺伝子およびEsrrg遺伝子を発現する。1つの態様において、Wnt4またはWnt5aタンパク質は組換えヒトWnt4またはWnt5aタンパク質である。特定の態様において、培地は組換えヒトWnt4タンパク質を含む。別の特定の態様において、培地は組換えヒトWnt5aタンパク質を含む。

別の局面において、本発明は、上記で説明された局面において定義されたオルガノイドを移植された非ヒト生物を提供する。

別の局面において、本発明は、人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のオルガノイドを作製するために脂肪由来幹細胞 (ADSC) の自己組織化を増強する方法であって、Wnt5aタンパク質を含む3次元 (3D) 培養マトリックス培地中でADSCを培養する段階を含む、方法を提供する。本方法の1つの態様において、ADSCは、ジェランガムを含む3D培養マトリックス中で培養される。1つの態様において、ADSCは、Wnt5タンパク質、およびiPSC由来β様細胞、iPSC由来外分泌成分細胞、iPSC由来肝細胞、iPSC由来心筋細胞、またはiPSC由来腸細胞より選択されるiPSC由来細胞を含む3D培養マトリックス培地中で培養される。本方法の1つの態様において、iPSC由来のオルガノイドは、膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイドより選択される。本方法の1つの態様において、人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のオルガノイドは、ヒト人工多能性幹細胞 (hiPSC) 由来のオルガノイドである。本方法の1つの態様において、Wnt5aタンパク質は組換えヒトWnt5aタンパク質である。本方法の1つの態様において、膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイドは、それぞれ、iPSC由来β様細胞、iPSC由来外分泌成分細胞、iPSC由来肝細胞、iPSC由来心筋細胞、またはiPSC由来腸細胞より選択されるiPSC由来細胞に由来する。上記のいずれかの1つの態様において、iPSC由来細胞はヒトのものである。別の局面において、本発明は、膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドを作製するために脂肪由来幹細胞 (ADSC) の自己組織化を増強する方法であって、Wnt5aタンパク質を含む培地中でADSCを培養する段階を含む、方法を提供する。1つの態様において、ADSCは、ジェランガムを含む3次元マトリックス中で培養される。別の態様において、Wnt5aタンパク質は組換えヒトWnt5aタンパク質である。別の局面において、本発明は、上記で詳細に説明される方法およびその態様のいずれかによって生成された膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイドを提供する。

本発明によって定義される組成物および物品は、以下に提供される実施例に関連して単離されたまたはその他の方法で製造されたものである。本発明の他の特徴および利点は、詳細な説明から、および特許請求の範囲から明らかになるであろう。

定義
特に定義されない限り、本明細書で用いられる専門用語および科学用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者によって共通して理解されている意味を有する。以下の参考文献は、本発明において用いられる用語の多くの一般的な定義を当業者に提供する：Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2nd ed. 1994)；The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988)；The Glossary of Genetics, 5th Ed., R. Rieger et al. (eds.), Springer Verlag (1991)；およびHale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991)。本明細書で用いられる場合、以下の用語は、特に指定がない限り、以下でそれらに割り当てられる意味を有する。

「AFPポリペプチド」または「αフェトプロテイン」とは、NCBIアクセッション番号NP_001125.1に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつAFPポリペプチドの生物活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。AFPポリペプチドの例示的な生物活性には、銅、ニッケル、脂肪酸、およびビリルビンへの結合が含まれる。NCBIアクセッション番号NP_001125.1に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「AFPポリヌクレオチド」とは、AFPポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なAFPポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_001134.2に提供される。NCBI Ref: NM_001134.2に提供される配列を、以下に転載する。

「ALBポリペプチド」または「アルブミン」とは、NCBIアクセッション番号NP_000468.1に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつALBポリペプチドの生物活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。ALBポリペプチドの例示的な生物活性には、脂肪酸、カルシウムイオン、ナトリウムイオン、カリウムイオン、ホルモン、およびビリルビンへの結合；細胞外液量の安定化；ならびに血漿亜鉛の輸送が含まれる。NCBIアクセッション番号NP_000468.1に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「ALBポリヌクレオチド」とは、ALBポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なAFPポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_000477.5に提供される。NCBI Ref: NM_000477.5に提供される配列を、以下に転載する。

「作用物質」とは、任意の小分子化合物、抗体、核酸分子、もしくはポリペプチド、またはそれらの断片を意味する。

「改善する」とは、疾患の発症または進行を低減する、抑制する、減弱させる、軽減する、停止させる、または安定化することを意味する。

「変化」とは、増加または減少を意味する。増加は、例えば、少なくとも約5%、10%、もしくは20%の；少なくとも約25%、50%、75%の、またはさらには100%、200%、300%、もしくはそれ以上の、任意の正の変化である。減少は、負の変化、例えば、少なくとも約5%、10%、もしくは20%の；少なくとも約25%、50%、75%の減少；またはさらには100%、200%、300%、もしくはそれ以上の増加である。

本開示において、「含む (comprises)」、「含むこと (comprising)」、「含有すること (containing)」、および「有すること (having)」などは、米国特許法においてそれらに割り当てられた意味を有してよく、「含む (includes)」、「含むこと (including)」などを意味し得る；「～から本質的になること (consisting essentially of)」または「本質的になる (consists essentially)」も同様に、米国特許法において割り当てられた意味を有し、本用語は非制限的であり、列挙されたものの基本的または新規な特徴が、列挙されたもの以外の存在によって変化しない限り、列挙されたもの以外の存在を許容するが、先行技術の態様は除外する。

「CDX2ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_001256.3に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつ転写因子活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_001256.3に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「CDX2ポリヌクレオチド」とは、とは、CDX2ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なCDX2ポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_001265.4に提供される。NCBI Ref: NM_001265.4に提供される配列を、以下に転載する。

「CYP3A7ポリペプチド」または「シトクロムP450」とは、NCBIアクセッション番号NP_000756.3に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつモノオキシゲナーゼ活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_000756.3に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「CYP3A7ポリヌクレオチド」とは、CYP3A7ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なAFPポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_00765.4に提供される。NCBI Ref: NM_00765.4に提供される配列を、以下に転載する。

「検出する」とは、検出しようとする分析物の存在、非存在、または量を同定することを指す。

「検出可能な標識」とは、関心対象の分子に連結された場合に、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、または化学的な手段によって、後者を検出可能にする組成物を意味する。例えば、有用な標識には、放射性同位体、磁気ビーズ、金属ビーズ、コロイド粒子、蛍光色素、高電子密度の試薬、（例えば、ELISAにおいて一般的に用いられる）酵素、ビオチン、ジゴキシゲニン、またはハプテンが含まれる。

「分化」とは、系列拘束の発生過程を指す。分化は、対応する未分化対照細胞における発現と比較した、1つまたは複数の細胞特異的マーカーの増加を測定することによってアッセイすることができる。「系列」とは細胞発生の経路を指し、その経路において、前駆 (precursor) 細胞または「前駆 (progenitor)」細胞は、漸進的な生理学的変化を起こして、特徴的な機能を有する特定の細胞型になる。いくつかの態様において、細胞型はβ細胞である。いくつかの態様において、細胞型はα細胞、δ細胞、または導管細胞である。いくつかの他の態様において、細胞型は肝細胞である。さらなる他の態様において、細胞型は心筋細胞である。いくつかの態様において、細胞型は腸細胞である。分化は段階的に起こり、それによって細胞は、「最終分化」とも称される完全な成熟に達するまで、徐々により特異的となっていく。「最終分化細胞」とは、特定の系列に拘束され、分化の最終段階に達した細胞（すなわち、完全に成熟した細胞）である。いくつかの態様においては、人工多能性幹細胞 (iPSC) を、β様細胞、α様細胞、δ様細胞、または導管様細胞に分化させる。いくつかの他の態様においては、人工多能性幹細胞 (iPSC) を、肝細胞、心筋細胞、または腸細胞に分化させる。

「脱分化細胞」とは、分化の過程が少なくともある程度逆転した細胞である。脱分化は、例えば、対応する対照細胞における発現と比較した、1つまたは複数の細胞特異的マーカーの発現の減少を同定することによってアッセイすることができる。あるいは、脱分化は、胚性幹細胞、多能性もしくは多分化能細胞型において典型的に発現される、または発生のより早い段階で発現される1つまたは複数のマーカーの増加を測定することによってアッセイすることもできる。いくつかの態様において、脱分化細胞は人工多能性幹細胞 (iPSC) である。ある特定の態様において、脱分化細胞はヒト人工多能性幹細胞 (iPSC) である。

「疾患」とは、細胞、組織、または臓器の正常な機能を損傷するまたは妨げる任意の状態または障害を意味する。疾患の例には、1型糖尿病、2型糖尿病、および膵癌が含まれる。

「有効量」とは、未処置対象と比較して対象における疾患の症状を改善するのに必要な治療剤またはオルガノイドの量を意味する。疾患を治療的処置する目的で本発明を実施するために用いられる治療剤の有効量は、投与の様式、対象の年齢、体重、および一般的な健康状態に応じて異なる。最終的には、主治医または獣医師が適切な量および投与計画を決定する。そのような量は「有効」量と称される。いくつかの態様において、治療用オルガノイドは膵島オルガノイドである。いくつかの他の態様においては、膵島オルガノイドの有効量が、1型または2型糖尿病を有する対象に投与される。

「ESRRGポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_001230448.1に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつ核内ホルモン受容体活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_001230448.1に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「ESRRGポリヌクレオチド」とは、ESRRGポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なESRRGポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_001243519.1に提供される。NCBI Ref: NM_001243519.1に提供される配列を、以下に転載する。

本明細書で用いられる場合、「内分泌」とは、血流中への作用物質（例えば、ホルモン）の分泌を指す。「外分泌」とは、導管を通した上皮表面への作用物質の分泌を指す。

「断片」とは、ポリペプチドまたは核酸分子の一部を意味する。この一部は、参照核酸分子またはポリペプチドの全長の少なくとも10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、または90%を含有する。断片は、10個、20個、30個、40個、50個、60個、70個、80個、90個、または100個、200個、300個、400個、500個、600個、700個、800個、900個、または1000個のヌクレオチドまたはアミノ酸を含有し得る。

「FOXA2ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_068556.2に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつ転写因子活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_068556.2に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「FOXA2ポリヌクレオチド」とは、FOXA2ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なFOXA2ポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_021784.4に提供される。NCBI Ref: NM_021784.4に提供される配列を、以下に転載する。

「GATA6ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_005248.2に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつ転写因子活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_005248.2に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「GATA6ポリヌクレオチド」とは、GATA6ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なKCNK3ポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_005257.5に提供される。NCBI Ref: NM_005257.5に提供される配列を、以下に転載する。

「ジェランガム」とは、以下の分子構造のうちのいずれか1つを有する反復単位を伴った直鎖を有する多糖を意味する。
ジェランガム‐高アシル型

ジェランガム‐低アシル型

前述の構造中、「Ac」は酢酸基を指し、「Gly」はグリセリン酸基を指し、「M+」は一価カチオンである。いくつかの態様において、ジェランガムはKELCOGEL（登録商標）ジェランガムである。

「ハイブリダイゼーション」とは、相補的核酸塩基間の、ワトソン・クリック型、フーグスティーン型、または逆フーグスティーン型水素結合であってよい水素結合を意味する。例えば、アデニンとチミンは、水素結合の形成を介して対形成する相補的核酸塩基である。

「免疫抑制剤」または「免疫抑制薬」とは、対象中の移植された臓器またはオルガノイドの、拒絶反応などの免疫反応を抑制または予防する作用物質を意味する。免疫抑制薬の例には、バシリジマブ (basilizimab)、抗胸腺細胞グロブリン、アレムツズマブ、プレドニゾン、アザチオプリン、ミコフェノール酸、シクロスポリン、シロリムス、メトトレキサート、インターフェロン、およびタクロリムスが含まれるが、これらに限定されない。

「人工多能性幹細胞」または「iPSC」とは、細胞中で1つまたは複数の転写因子を外因的に発現させることによって多能性を獲得した分化型の体細胞を意味する。「iPSC由来細胞」とは、人工多能性幹細胞に由来する細胞である。「iPSC由来β様細胞」、「iPSC由来α様細胞」、「iPSC由来δ様細胞」または「iPSC由来導管様細胞」とは、人工多能性幹細胞に由来し、かつそれぞれβ細胞、α細胞、δ細胞、または導管細胞の特徴を有する細胞である。

「単離された」、「精製された」、または「生物学的に純粋な」という用語は、その天然状態で見出される通常それに付随する成分が様々な程度まで除去されている物質を指す。「単離する」とは、最初の供給源または周囲からのある程度の分離を示す。「精製する」とは、単離よりも高度の分離を示す。「精製された」または「生物学的に純粋な」タンパク質は、いかなる不純物もタンパク質の生物学的特性に実質的に影響を及ぼさず、または他の有害事象を引き起こさないように、他の物質が十分に除去されている。すなわち、本発明の核酸またはペプチドは、組換えDNA技法によって生成された場合には、細胞物質、ウイルス物質、もしくは培養液を実質的に含まないのであれば、または化学合成された場合には、化学的前駆体もしくは他の化学物質を実質的に含まないのであれば、精製されている。純度および均一性は典型的には、分析化学技法、例えば、ポリアクリルアミドゲル電気泳動または高速液体クロマトグラフィーを用いて決定される。「精製された」という用語は、核酸またはタンパク質が電気泳動ゲルにおいて本質的に1本のバンドを生じることを示し得る。修飾、例えばリン酸化またはグリコシル化に供され得るタンパク質に関して、異なる修飾は異なる単離されたタンパク質を生じる場合があり、それらは別々に精製され得る。

「単離されたポリヌクレオチド」とは、本発明の核酸分子の由来元である生物の天然ゲノムにおいてこの遺伝子に隣接する遺伝子を含まない核酸（例えば、DNA）を意味する。したがって本用語は、例えば、ベクター中に；自己複製プラスミドもしくはウイルス中に；または原核生物もしくは真核生物のゲノムDNA中に組み込まれている；あるいは他の配列とは独立した別個の分子（例えば、PCRまたは制限エンドヌクレアーゼ消化によって生じたcDNAまたはゲノム断片もしくはcDNA断片)として存在する組換えDNAを含む。加えて、本用語は、DNA分子から転写されたRNA分子、および付加的なポリペプチド配列をコードするハイブリッド遺伝子の一部である組換えDNAを含む。

「単離されたポリペプチド」とは、天然でそれに付随する成分から分離されている本発明のポリペプチドを意味する。典型的には、ポリペプチドは、それが天然で会合しているタンパク質および天然有機分子を含まずに、少なくとも60重量%である場合に、単離されている。調製物は、少なくとも75重量%、少なくとも90重量%、および少なくとも99重量%の本発明のポリペプチドであってよい。本発明の単離されたポリペプチドは、例えば、天然供給源からの抽出によって、そのようなポリペプチドをコードする組換え核酸の発現によって；またはタンパク質を化学合成することによって、得られ得る。純度は、任意の適切な方法、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはHPLC分析によって測定することができる。

「KCNK3ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_002237.1に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつカリウムチャネル活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_002237.1に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「KCNK3ポリヌクレオチド」とは、KCNK3ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なKCNK3ポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_002246.2に提供される。NCBI Ref: NM_002246.2に提供される配列を、以下に転載する。

「KCNQ1ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_000209.2（アイソフォーム1）またはNP_861463.1（アイソフォーム2）に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつカリウムチャネル活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_000209.2に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「KCNQ1ポリヌクレオチド」とは、KCNQ1ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なKCNQ1ポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_00218.2に提供される。NCBI Ref: NM_00218.2に提供される配列を、以下に転載する。

「LGR5ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_003658.1（アイソフォーム1）、NP_001264155.1（アイソフォーム2）、またはNP_001264156.1（アイソフォーム3）に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつ膜貫通シグナル伝達受容体活性またはGタンパク質共役型受容体活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_003658.1に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「LGR5ポリヌクレオチド」とは、LGR5ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なLGR5ポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_003667.3に提供される。NCBI Ref: NM_003667.3に提供される配列を、以下に転載する。

「LDHAポリペプチド」または「乳酸脱水素酵素Aポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_005557.1（アイソフォーム1）、NP_001128711.1（アイソフォーム2）、NP_001158886.1（アイソフォーム3）、NP_001158887.1（アイソフォーム4）、またはNP_001158888.1（アイソフォーム5）に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつ脱水素酵素活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_005557.1に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「LDHAポリヌクレオチド」または「乳酸脱水素酵素Aポリヌクレオチド」とは、LDHAポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なLDHAポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_005566.3に提供される。NCBI Ref: NM_005566.3に提供される配列を、以下に転載する。

「MAFAポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_963883.2に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつ転写因子活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_963883.2に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「MAFAポリヌクレオチド」とは、MAFAポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なMAFAポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_201589.3に提供される。NCBI Ref: NM_201589.3に提供される配列を、以下に転載する。

本明細書で用いられる場合、「マーカー」とは、疾患もしくは障害に関連して、または特定の細胞型に関連して、発現レベルまたは活性が変化する任意のタンパク質またはポリヌクレオチドを意味する。いくつかの態様において、β細胞のマーカーは、Pdx1、MafA、Pax4、Pax6、NeuroD1、Nkx6-1、Gata6、またはFoxa2である。いくつかの態様において、肝細胞のマーカーは、AFP、ALB、またはCyp3a7である。いくつかの他の態様において、心筋細胞のマーカーは、hM1c2a、hNkx2-5、αMHC、またはKCNQ1である。さらなる他の態様において、小腸細胞のマーカーは、CDX2、Muc2、またはLgr5である。

「αMHCポリペプチド」または「ミオシン重鎖 (MHC) αポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_002462.2に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつアクチン結合活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_002462.2に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「αMHCポリヌクレオチド」とは、αMHCポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なαMHCポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_002471.3に提供される。NCBI Ref: NM_002471.3に提供される配列を、以下に転載する。

「MLC2Aポリペプチド」または「ヒトMLSC2A (hMLC2A) ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_067046.1に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつカルシウム結合活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_067046.1に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「MLC2Aポリヌクレオチド」とは、MLC2Aポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なMLC2Aポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_021223.2に提供される。NCBI Ref: NM_021223.2に提供される配列を、以下に転載する。

「MUC2ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_002448.3に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつMUC2ポリペプチドの生物活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。MUC2ポリペプチドの例示的な生物活性には、ゲルへの重合、ならびに腸およびその他の粘膜含有臓器の上皮の被覆が含まれる。NCBIアクセッション番号NP_002448.3に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「MUC2ポリヌクレオチド」とは、MUC2ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なMUC2ポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_002457.3に提供される。NCBI Ref: NM_002457.3に提供される配列を、以下に転載する。

「NKX2-5ポリペプチド」または「ヒトNKX2-5 (hNKX2-5) ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_004378.1（アイソフォーム1）、NP_001159647.1（アイソフォーム2）、またはNP_001159648.1（アイソフォーム3）に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつ転写因子活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_004378.1に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「NKX2-5ポリヌクレオチド」とは、NKX2-5ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なNKX2-5ポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_004387.3に提供される。NCBI Ref: NM_004387.3に提供される配列を、以下に転載する。

「NEUROD1ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_002491.2に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつ転写因子活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_002491.2に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「NEUROD1ポリヌクレオチド」とは、NEUROD1ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なNEUROD1ポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_002500.4に提供される。NCBI Ref: NM_002500.4に提供される配列を、以下に転載する。

「NKX6-1ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_006159.2に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつ転写因子活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_006159.2に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「NKX6-1ポリヌクレオチド」とは、NKX6-1ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なNKX6-1ポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_006168.2に提供される。NCBI Ref: NM_006168.2に提供される配列を、以下に転載する。

「NDUFA4ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_002480.1に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつNADH脱水素酵素活性および酸化還元酵素活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_002480.1に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「NDUFA4ポリヌクレオチド」とは、NDUFA4ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なNDUFA4ポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_002489.3に提供される。NCBI Ref: NM_002489.3に提供される配列を、以下に転載する。

本明細書で用いられる場合、「作用物質を得ること」などにおける「得ること」は、その作用物質を合成すること、購入すること、またはその他の方法で取得することを含む。

「臓器」とは、生物学的機能を果たす細胞の集合体を意味する。1つの態様において、臓器には、膀胱、脳、神経組織、グリア組織、食道、ファロピウス管、心臓、膵臓、腸、胆嚢、腎臓、肝臓、肺、卵巣、前立腺、脊髄、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、気管、尿生殖路、尿管、尿道、子宮、乳房、骨格筋、皮膚、骨、および軟骨が含まれるが、これらに限定されない。臓器の生物学的機能は、当業者に公知の標準法を用いてアッセイすることができる。

「オルガノイド」とは、臓器の構造および機能を模倣する、インビトロで作製された身体を意味する。「オルガノイド」および「ミニ臓器」は、本明細書において互換的に用いられる。「膵島オルガノイド」は、膵島の構造および機能を模倣する、インビトロで作製された細胞塊である。膵島の例示的な機能には、非限定的に、グルコース刺激インスリン分泌 (GSIS)、塩化カリウム (KCl) 刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、またはグルカゴン分泌が含まれる。「膵島オルガノイド」および「ミニ膵島」は、本明細書において互換的に用いられる。「膵臓オルガノイド」は、膵臓の構造および機能を模倣する、インビトロで作製された身体である。膵臓の例示的な機能には、非限定的に、グルコース代謝および血糖濃度を調節する、グルコースおよびグルカゴンなどのホルモンの内分泌、ならびに炭水化物、タンパク質、および脂質の分解を助ける消化酵素の外分泌が含まれる。「膵臓オルガノイド」および「ミニ膵臓」は、本明細書において互換的に用いられる。

「PAX4ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_006184.2に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつ転写因子活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_006184.2に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「PAX4ポリヌクレオチド」とは、PAX4ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なPAX4ポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_006193.2に提供される。NCBI Ref: NM_006193.2に提供される配列を、以下に転載する。

「PAX6ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_001297090.1に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつ転写因子活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_001297090.1に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「PAX6ポリヌクレオチド」とは、PAX6ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なPAX6ポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_001310161.1に提供される。NCBI Ref: NM_001310161.1に提供される配列を、以下に転載する。

「PDX1ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_000200.1に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつ転写因子活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_000200.1に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「PDX1ポリヌクレオチド」とは、PDX1ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なPDX1ポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_000209.3に提供される。NCBI Ref: NM_000209.3に提供される配列を、以下に転載する。

「PTF1ポリペプチド」とは、NCBIアクセッション番号NP_835455.1に提供される配列と少なくとも85%のアミノ酸配列同一性を有し、かつ転写因子活性を有するタンパク質またはその断片を意味する。NCBIアクセッション番号NP_835455.1に提供されるアミノ酸配列を、以下に示す。

「PTF1ポリヌクレオチド」とは、PTF1ポリペプチドまたはその断片をコードするポリヌクレオチドを意味する。例示的なPTF1ポリヌクレオチド配列は、NCBI Ref: NM_178161.2に提供される。NCBI Ref: NM_178161.2に提供される配列を、以下に転載する。

「Wnt3aポリヌクレオチド」とは、Wnt3aポリペプチドもしくはその断片をコードするポリヌクレオチド、またはヒトWnt3aポリヌクレオチド配列と少なくとも85%の配列同一性を有するポリヌクレオチドを意味する。例示的なヒトWnt3aポリヌクレオチド配列は、NCBI GenBankアクセッション番号AB060284.1に提供される。NCBI GenBankアクセッション番号AB060284.1に提供されるポリヌクレオチド配列を、以下に転載する。

「Wnt3aポリペプチド」とは、Wnt3aポリペプチドもしくはその断片、またはヒトWnt3aポリペプチド配列と少なくとも85%の配列同一性を有するポリペプチドを意味する。例示的なヒトWnt3aポリペプチド配列は、NCBI GenBank: AAI03924.1に提供される。GenBank: AAI03924.1に提供される配列を、以下に転載する。

「Wnt4ポリヌクレオチド」とは、Wnt4ポリペプチドもしくはその断片をコードするポリヌクレオチド、またはヒトWnt4ポリヌクレオチド配列と少なくとも85%の配列同一性を有するポリヌクレオチドを意味する。例示的なヒトWnt4ポリヌクレオチド配列は、NCBI GenBankアクセッション番号AY009398.1に提供される。アクセッション番号NCBI Ref NG_008974.1は、参照標準Wnt4aポリヌクレオチド配列である。NCBI GenBankアクセッション番号AY009398.1に提供されるポリヌクレオチド配列を、以下に転載する。

「Wnt4ポリペプチド」とは、Wnt4ポリペプチドもしくはその断片、またはヒトWnt4ポリペプチド配列と少なくとも85%の配列同一性を有するポリペプチドを意味する。例示的なヒトWnt4ポリペプチド配列は、NCBI GenBankアクセッション番号：AAG38658.1に提供される。GenBankアクセッション番号：AAG38658.1に提供される配列を、以下に転載する。

「Wnt5aポリヌクレオチド」とは、Wnt5aポリペプチドもしくはその断片をコードするポリヌクレオチド、またはヒトWnt5aポリヌクレオチド配列と少なくとも85%の配列同一性を有するポリヌクレオチドを意味する。ヒトWnt5aをコードする例示的なポリヌクレオチド配列は、参照標準配列であるNCBI Ref: GenBank NM_003392に提供される。6194ヌクレオチドを有するWnt5aゲノム配列のヌクレオチド658～1800が、ヒトWnt5aポリペプチドをコードする。NCBI Ref: GenBank NM_003392の塩基658～1800に提供されるヒトWnt5aコード配列のポリヌクレオチド配列を、以下に転載する。

「Wnt5aポリペプチド」とは、Wnt5aポリペプチドもしくはその断片、またはヒトWnt5aポリペプチド配列と少なくとも85%の配列同一性を有するポリペプチドを意味する。例示的なヒトWnt5a（アイソフォーム1）ポリペプチド配列は、UniProtKB識別子：P41221-1に提供される。UniProtKB識別子：P41221-1に提供される配列を、以下に転載する。

「前駆細胞」とは、（例えば、分化または分裂によって）内皮細胞を生じることができる多分化能幹細胞を意味する。内皮細胞を生じることができる前駆細胞は、本明細書において記載されるような適切なインビトロまたはインビボ条件下で増殖された場合に、この能力を表し得る。

「子孫」とは、本発明の多分化能幹細胞に由来する細胞を意味する。子孫には、非限定的に、前駆細胞、分化細胞、および最終分化細胞が含まれる。

「～に由来する」とは、子孫細胞を得る過程を意味する。

「減少する」とは、少なくとも10%、25%、50%、75%、または100%の負の変化を意味する。

「参照」または「対照」とは、標準状態を意味する。例えば、未処理の細胞、組織、または臓器が参照として用いられる。

「参照配列」は、配列比較の基礎として用いられる規定の配列である。参照配列は、特定の配列のサブセットまたは全体；例えば、全長cDNAもしくは遺伝子配列のセグメント、または完全なcDNAもしくは遺伝子配列であってよい。ポリペプチドに関して、参照ポリペプチド配列の長さは一般的に、少なくとも約16アミノ酸、少なくとも約20アミノ酸、または少なくとも約25アミノ酸である。参照ポリペプチド配列の長さは、約35アミノ酸、約50アミノ酸、または約100アミノ酸であってよい。核酸に関して、参照核酸配列の長さは一般的に、少なくとも約50ヌクレオチド、少なくとも約60ヌクレオチド、または少なくとも約75ヌクレオチドである。参照核酸配列の長さは、約100ヌクレオチド、約300ヌクレオチド、またはそれらの前後のもしくはそれらの間の任意の整数であってよい。

「体」細胞とは、対象の組織から得られた細胞を指す。そのような対象は、発生の出生後段階にある（例えば、成人、幼児、小児である）。対照的に、「胚細胞」または「胚性幹細胞」は、発生の出生前段階にある胚に由来する。

「特異的に結合する」とは、本発明のポリペプチドを認識しそれと結合するが、本発明のポリペプチドを天然で含む試料、例えば生体試料中の他の分子を実質的に認識せず、それと実質的に結合しない化合物または抗体を意味する。

本発明の方法において有用な核酸分子には、本発明のポリペプチドまたはその断片をコードする任意の核酸分子が含まれる。そのような核酸分子は、内在性核酸配列と100%同一である必要はないが、典型的には実質的な同一性を示す。内在性配列と「実質的な同一性」を有するポリヌクレオチドは典型的には、二本鎖核酸分子の少なくとも1本の鎖とハイブリダイズすることができる。本発明の方法において有用な核酸分子には、本発明のポリペプチドまたはその断片をコードする任意の核酸分子が含まれる。そのような核酸分子は、内在性核酸配列と100%同一である必要はないが、典型的には実質的な同一性を示す。内在性配列と「実質的な同一性」を有するポリヌクレオチドは典型的には、二本鎖核酸分子の少なくとも1本の鎖とハイブリダイズすることができる。「ハイブリダイズする」とは、様々なストリンジェンシー条件下で、相補的ポリヌクレオチド配列（例えば、本明細書に記載される遺伝子）またはその一部の間で対形成して二本鎖分子を形成することを意味する（例えば、Wahl, G. M. and S. L. Berger (1987) Methods Enzymol. 152:399；Kimmel, A. R. (1987) Methods Enzymol. 152:507を参照されたい）。

例えば、ストリンジェントな塩濃度は通常、約750 mM NaClおよび75 mMクエン酸三ナトリウム未満、約500 mM NaClおよび50 mMクエン酸三ナトリウム未満、または約250 mM NaClおよび25 mMクエン酸三ナトリウム未満である。低ストリンジェンシーのハイブリダイゼーションは、有機溶媒、例えばホルムアミドの非存在下で得ることができ、高ストリンジェンシーのハイブリダイゼーションは、少なくとも約35%のホルムアミドまたは少なくとも約50%のホルムアミドの存在下で得ることができる。ストリンジェントな温度条件には通常、少なくとも約30℃、少なくとも約37℃、および少なくとも約42℃の温度が含まれる。ハイブリダイゼーション時間、界面活性剤、例えばドデシル硫酸ナトリウム (SDS) の濃度、および担体DNAを含めるかまたは含めないかなどの様々な付加的パラメータが、当業者に周知である。様々なレベルのストリンジェンシーが、これらの様々な条件を必要に応じて組み合わせることによって達成される。1つの態様において、ハイブリダイゼーションは、750 mM NaCl、75 mMクエン酸三ナトリウム、および1% SDS中、30℃で行われる。別の態様において、ハイブリダイゼーションは、500 mM NaCl、50 mMクエン酸三ナトリウム、1% SDS、35%ホルムアミド、および100μg/ml変成サケ精子DNA (ssDNA) 中、37℃で行われる。さらなる別の態様において、ハイブリダイゼーションは、250 mM NaCl、25 mMクエン酸三ナトリウム、1% SDS、50%ホルムアミド、および200μg/ml ssDNA中、42℃で行われる。これらの条件の有用な変動は、当業者に容易に明らかであろう。

大部分の適用に関して、ハイブリダイゼーションに続く洗浄段階もまた、ストリンジェンシーが異なる。洗浄のストリンジェンシー条件は、塩濃度によって、および温度によって規定され得る。上記のように、洗浄ストリンジェンシーは、塩濃度を下げることによって、または温度を上げることによって高めることができる。例えば、洗浄段階のためのストリンジェントな塩濃度は、約30 mM NaClおよび3 mMクエン酸三ナトリウム未満、または約15 mM NaClおよび1.5 mMクエン酸三ナトリウム未満である。洗浄段階のためのストリンジェントな温度条件には通常、少なくとも約25℃、少なくとも約42℃、および少なくとも約68℃の温度が含まれる。1つの態様において、洗浄段階は、30 mM NaCl、3 mMクエン酸三ナトリウム、および0.1% SDS中、25℃で行われる。別の態様において、洗浄段階は、15 mM NaCl、1.5 mMクエン酸三ナトリウム、および0.1% SDS中、42℃で行われる。さらなる別の態様において、洗浄段階は、15 mM NaCl、1.5 mMクエン酸三ナトリウム、および0.1% SDS中、68℃で行われる。これらの条件の付加的な変動は、当業者に容易に明らかであろう。ハイブリダイゼーション技法は当業者に周知であり、例えば、Benton and Davis (Science 196:180, 1977)；Grunstein and Hogness (Proc. Natl. Acad. Sci., USA 72:3961, 1975)；Ausubel et al. (Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, New York, 2001)；Berger and Kimmel (Guide to Molecular Cloning Techniques, 1987, Academic Press, New York)；およびSambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New Yorkに記載されている。

「実質的に同一の」とは、参照アミノ酸配列（例えば、本明細書に記載されるアミノ酸配列のいずれか1つ）または核酸配列（例えば、本明細書に記載される核酸配列のいずれか1つ）と少なくとも50%の同一性を示すポリペプチドまたは核酸分子を意味する。そのような配列は、比較に用いられた配列とアミノ酸レベルまたは核酸において少なくとも60%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、またはさらには少なくとも99%同一である。

配列同一性は典型的には、配列解析ソフトウェア（例えば、the Genetics Computer Group、University of Wisconsin Biotechnology Center、1710 University Avenue, Madison, Wis. 53705の配列解析ソフトウェアパッケージ、BLAST、BESTFIT、GAP、またはPILEUP/PRETTYBOXプログラム）を用いて測定される。そのようなソフトウェアは、様々な置換、欠失、および／または他の修飾に相同性の程度を割り当てることによって、同一または類似の配列を一致させる。保存的置換には典型的には、以下の群：グリシン、アラニン；バリン、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン；セリン、スレオニン；リジン、アルギニン；およびフェニルアラニン、チロシンの中での置換が含まれる。同一性の程度を決定するための例示的なアプローチでは、BLASTプログラムを使用することができ、e^-3～e^-100の確率スコアが、密接に関連した配列を示す。

本明細書において用いられる「自己複製」という用語は、幹細胞が分裂して、母細胞のものとは区別できない発生能力を有する1つ（非対称性分裂）または2つ（対照性分裂)の娘細胞を生じる過程を指す。自己複製は、増殖および未分化状態の維持の両方を含む。

「幹細胞」という用語は、自己複製して複数の細胞系列に分化する能力を有する多能性細胞または多分化能幹細胞を意味する。

「対象」とは、ヒトまたは非ヒト哺乳動物、例えば、ウシ、ウマ、イヌ、ヒツジ、齧歯類、もしくはネコなどを含むがこれらに限定されない哺乳動物を意味する。

本明細書において提供される範囲は、その範囲内の値のすべての省略表現であると理解される。例えば、1～50の範囲は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、または50からなる群からの任意の数、数の組み合わせ、または部分範囲を含むと理解される。

「組織」とは、類似の形態および機能を有する細胞の集合体を意味する。

本明細書で用いられる場合、「処置する」、「処置すること」、「処置」などの用語は、障害および／またはそれに伴う症状を軽減することまたは改善することを指す。除外されてはいないが、障害または状態を処置することは、障害、状態、またはそれに伴う症状が完全に取り除かれることを必要としないことが認識される。

「血管新生した」とは、血管を有することを意味する。いくつかの態様において、膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドは血管新生している。

具体的に記載されない限り、または文脈から明らかでない限り、本明細書で用いられる場合、「または」という用語は包括的であると理解される。具体的に記載されない限り、または文脈から明らかでない限り、本明細書で用いられる場合、「1つの (a)」、「1つの (an)」、および「その」という用語は、単数または複数であると理解される。

具体的に記載されない限り、または文脈から明らかでない限り、本明細書で用いられる場合、「約」という用語は、当技術分野における通常の許容値の範囲内、例えば平均の2標準偏差内にあると理解される。約は、記載値の10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.1%、0.05%、または0.01%以内にあると理解され得る。文脈から別段に明白でない限り、本明細書において提供される数値はすべて、約という用語によって修飾されている。

本明細書における変数の任意の定義における化学基の一覧の列挙は、任意の単一基または列挙された基の組み合わせとしての、その変数の定義を含む。本明細書における変数または局面についての態様の列挙は、任意の単一の態様としての、または任意の他の態様もしくはその一部と組み合わせた、その態様を含む。

本明細書において提供される任意の組成物または方法は、本明細書において提供される他の組成物および方法のいずれか1つまたは複数と組み合わせることができる。
[本発明1001]
膵島オルガノイドを作製する方法であって、ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞を培養する段階を含み、それによって膵島オルガノイドを作製する、方法。
[本発明1002]
iPSC由来β様細胞を脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞と共に培養する段階をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
iPSC由来β様細胞をiPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、またはiPSC由来導管様細胞と共に培養する段階をさらに含む、本発明1001または1002の方法。
[本発明1004]
iPSC由来β様細胞、iPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、またはiPSC由来導管様細胞がヒトのものである、本発明1001または1003の方法。
[本発明1005]
脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) である、本発明1002の方法。
[本発明1006]
内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、本発明1002の方法。
[本発明1007]
ジェランガムを含む3次元マトリックス中にiPSC由来β様細胞を含む細胞培養物。
[本発明1008]
脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含む、本発明1007の細胞培養物。
[本発明1009]
iPSC由来β様細胞がヒトiPSC由来β様細胞である、本発明1007または本発明1008の細胞培養物。
[本発明1010]
脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) である、本発明1008または本発明1009の細胞培養物。
[本発明1011]
内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、本発明1008～1010のいずれかの細胞培養物。
[本発明1012]
ジェランガムを含む3次元マトリックス中にヒトiPSC由来β様細胞、ヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC)、およびヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) を含む、細胞培養物。
[本発明1013]
iPSC由来β様細胞を含む膵島オルガノイドであって、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、膵島オルガノイド。
[本発明1014]
iPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、またはiPSC由来導管様細胞をさらに含む、本発明1013の膵島オルガノイド。
[本発明1015]
脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含む、本発明1013の膵島オルガノイド。
[本発明1016]
脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) であり、かつ／または内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、本発明1015の膵島オルガノイド。
[本発明1017]
KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、またはグルカゴン分泌をさらに示す、本発明1014の膵島オルガノイド。
[本発明1018]
Pdx1、MafA、Pax4、Pax6、NeuroD1、Nkx6-1、Gata6、およびFoxa2からなる群より選択されるβ細胞転写因子を発現する、本発明1013の膵島オルガノイド。
[本発明1019]
iPSC由来β様細胞、iPSC由来α細胞、iPSC由来δ細胞、iPSC由来導管細胞、脂肪由来幹細胞 (hADSC)、および内皮細胞を含む膵島オルガノイドであって、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS)、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、およびグルカゴン分泌を示す、膵島オルガノイド。
[本発明1020]
iPSC由来外分泌成分によって囲まれた本発明1013～1019のいずれかの膵島オルガノイドを含む、膵臓オルガノイド。
[本発明1021]
iPSC由来外分泌成分が、PDX1、Nkx6-1、およびPtf1からなる群より選択されるマーカーを発現する、本発明1020の膵臓オルガノイド。
[本発明1022]
本発明1013～1021のいずれかのオルガノイドを移植された非ヒト生物。
[本発明1023]
哺乳動物である、本発明1022の非ヒト生物。
[本発明1024]
マウスである、本発明1023の非ヒト生物。
[本発明1025]
膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質を同定する方法であって、
(a) 候補作用物質を膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドと接触させる段階；および
(b) 該候補作用物質と接触させたオルガノイドの活性を測定する段階
を含み、オルガノイドの活性が参照と比較して変化した場合に、候補作用物質が、膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質として同定される、方法。
[本発明1026]
膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質を同定する方法であって、
(a) 膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドが移植された非ヒト対象に候補作用物質を投与する段階；および
(b) 該非ヒト対象の膵臓活性を測定する段階
を含み、非ヒト対象の膵臓活性が参照と比較して変化した場合に、候補作用物質が、膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質として同定される、方法。
[本発明1027]
オルガノイドまたは非ヒト対象において膵臓疾患を誘発または模倣する段階をさらに含む、本発明1025または本発明1026の方法。
[本発明1028]
非ヒト対象が肝臓オルガノイドをさらに移植される、本発明1025または本発明1026の方法。
[本発明1029]
以下の作用物質、すなわち遊離脂肪酸 (FFA)、グルコース、およびサイトカインのうちのいずれか1つまたは複数をオルガノイドと接触させることまたは非ヒト対象に投与することによって、疾患が誘発される、本発明1027または本発明1028の方法。
[本発明1030]
ヒト膵癌微小環境を創出するためにオルガノイドを膵癌細胞、星状細胞、および免疫細胞と共に培養することによって、疾患が模倣される、本発明1027または本発明1028の方法。
[本発明1031]
膵臓活性が、インスリン分泌、β細胞アポトーシス、NDUFA4、ESRRG、G6PC2、MDH1、LDHA、KCNK3、またはMAFAポリペプチドまたはポリヌクレオチドの発現または活性、アミラーゼ分泌、外分泌成分のアポトーシス、コラーゲン合成、および星状細胞活性化からなる群より選択される、本発明1025または1026の方法。
[本発明1032]
候補作用物質がインスリン分泌を増加させる、本発明1025～1031のいずれかの方法。
[本発明1033]
膵臓活性を調節する作用物質として同定された候補作用物質が、膵臓疾患を処置する能力についてさらに試験される、本発明1025～1031のいずれかの方法。
[本発明1034]
膵臓疾患が2型糖尿病または膵癌である、本発明1025～1033のいずれかの方法。
[本発明1035]
オルガノイドが、本発明1013～1020のいずれかのオルガノイドである、本発明1025～1034のいずれかの方法。
[本発明1036]
非ヒト対象がマウスである、本発明1026の方法。
[本発明1037]
対象における膵臓疾患を処置する方法であって、膵島オルガノイドを対象に移植する段階を含み、該膵島オルガノイドが、iPSC由来β様細胞を含み、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、方法。
[本発明1038]
対象における1型糖尿病を処置する方法であって、膵島オルガノイドを対象に移植する段階を含み、該膵島オルガノイドが、iPSC由来β様細胞を含み、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、方法。
[本発明1039]
膵島オルガノイドが、iPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、またはiPSC由来導管様細胞をさらに含む、本発明1037または1038の方法。
[本発明1040]
膵島オルガノイドが、脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含む、本発明1037または1038の方法。
[本発明1041]
脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) であり、かつ／または内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、本発明1040の方法。
[本発明1042]
膵島オルガノイドが、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、またはグルカゴン分泌をさらに示す、本発明1037または1038の方法。
[本発明1043]
膵島オルガノイドが、Pdx1、MafA、Pax4、Pax6、NeuroD1、Nkx6-1、Gata6、およびFoxa2からなる群より選択されるβ細胞転写因子を発現する、本発明1037～1042のいずれかの方法。
[本発明1044]
膵島オルガノイドが、iPSC由来β様細胞、iPSC由来α細胞、iPSC由来δ細胞、iPSC由来導管細胞、脂肪由来幹細胞 (hADSC)、および内皮細胞を含み、該オルガノイドが血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS)、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、およびグルカゴン分泌を示す、本発明1037～1043のいずれかの方法。
[本発明1045]
膵島オルガノイドがiPSC由来外分泌成分によって囲まれている、本発明1037～1044のいずれかの方法。
[本発明1046]
iPSC由来外分泌成分が、PDX1、Nkx6-1、およびPtf1からなる群より選択されるマーカーを発現する、本発明1045の方法。
[本発明1047]
膵島オルガノイドが、本発明1013～1021のいずれかのオルガノイドである、本発明1037～1046のいずれかの方法。
[本発明1048]
対象が免疫抑制剤を投与される、本発明1037～1047のいずれかの方法。
[本発明1049]
対象がヒトである、本発明1037～1048のいずれかの方法。
[本発明1050]
膵臓疾患が1型糖尿病または2型糖尿病である、本発明1037～1049のいずれかの方法。
[本発明1051]
ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞を培養することによって作製された膵島オルガノイド。
[本発明1052]
ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞およびiPSC由来外分泌成分細胞を培養することによって作製された膵臓オルガノイド。
[本発明1053]
ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来の肝細胞を培養することによって作製された肝臓オルガノイド。
[本発明1054]
ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来の心筋細胞を培養することによって作製された心臓オルガノイド。
[本発明1055]
ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来の腸細胞を培養することによって作製された腸オルガノイド。
[本発明1056]
iPSC由来β様細胞、iPSC由来外分泌成分細胞、iPSC由来肝細胞、iPSC由来心筋細胞、またはiPSC由来腸細胞がヒトのものである、本発明1051～1055のいずれかの膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
[本発明1057]
脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含む、本発明1051～1055のいずれかの膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
[本発明1058]
脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) であり、かつ／または内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、本発明1057の膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
[本発明1059]
血管新生する、本発明1051～1055のいずれかの膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
[本発明1060]
AFP、ALB、およびCyp3a7からなる群より選択されるマーカーを発現する、本発明1053の肝臓オルガノイド。
[本発明1061]
インスリンシグナル伝達、パルミチン酸によるインスリン抵抗性、および脂質蓄積を示す、本発明1053の肝臓オルガノイド。
[本発明1062]
hMlc2a、hNkx2-5、αMHC、およびKCNQ1からなる群より選択されるマーカーを発現する、本発明1054の心臓オルガノイド。
[本発明1063]
心拍動を示す、本発明1054の心臓オルガノイド。
[本発明1064]
CDX2、Muc2、およびLgr5からなる群より選択されるマーカーを発現する、本発明1055の腸オルガノイド。
[本発明1065]
R-スポンジンに応答して出芽を示す、本発明1055の腸オルガノイド。
[本発明1066]
膵島オルガノイドを作製する方法であって、Wnt4またはWnt5aタンパク質を含む培地中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞を培養する段階を含む、方法。
[本発明1067]
人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞が3次元マトリックス中で培養される、本発明1066の方法。
[本発明1068]
Wnt4またはWnt5aタンパク質が組換えヒトWnt4またはWnt5aタンパク質である、本発明1066または本発明1067の方法。
[本発明1069]
培地が組換えヒトWnt4タンパク質を含む、本発明1068の方法。
[本発明1070]
培地が組換えヒトWnt5aタンパク質を含む、本発明1068の方法。
[本発明1071]
ヒトiPSC由来β様細胞およびWnt4またはWnt5aタンパク質を含む、細胞培養物。
[本発明1072]
ヒトiPSC由来β様細胞が、ジェランガムを含む3次元マトリックス中に存在する、本発明1071の細胞培養物。
[本発明1073]
Wnt4またはWnt5aタンパク質が組換えヒトWnt4またはWnt5aタンパク質である、本発明1071または本発明1072の細胞培養物。
[本発明1074]
培地が組換えヒトWnt4タンパク質を含む、本発明1073の細胞培養物。
[本発明1075]
培地が組換えヒトWnt5aタンパク質を含む、本発明1073の細胞培養物。
[本発明1076]
Wnt4またはWnt5aタンパク質を含む培地中で培養されたiPSC由来β様細胞を含む膵島オルガノイドであって、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、膵島オルガノイド。
[本発明1077]
KCl刺激インスリン分泌またはグルコース刺激インスリン分泌をさらに示す、本発明1076の膵島オルガノイド。
[本発明1078]
Fltp遺伝子およびEsrrg遺伝子を発現する、本発明1076または本発明1077の膵島オルガノイド。
[本発明1079]
Wnt4またはWnt5aタンパク質が組換えヒトWnt4またはWnt5aタンパク質である、本発明1076～1078のいずれかの膵島オルガノイド。
[本発明1080]
培地が組換えヒトWnt4タンパク質を含む、本発明1079の膵島オルガノイド。
[本発明1081]
培地が組換えヒトWnt5aタンパク質を含む、本発明1079の膵島オルガノイド。
[本発明1082]
本発明1076～1081のいずれかのオルガノイドを移植された非ヒト生物。
[本発明1083]
人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のオルガノイドを作製するために脂肪由来幹細胞 (ADSC) の自己組織化を増強する方法であって、Wnt5aタンパク質を含む3次元 (3D) 培養マトリックス培地中でADSCを培養する段階を含む、方法。
[本発明1084]
ADSCが、ジェランガムを含む3D培養マトリックス中で培養される、本発明1083の方法。
[本発明1085]
ADSCの3D培養マトリックス培地が、iPSC由来β様細胞、iPSC由来外分泌成分細胞、iPSC由来肝細胞、iPSC由来心筋細胞、またはiPSC由来腸細胞より選択されるiPSC由来細胞を含む、本発明1083または本発明1084の方法。
[本発明1086]
iPSC由来のオルガノイドが、膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイドより選択される、本発明1083～1085のいずれかの方法。
[本発明1087]
人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のオルガノイドがヒト人工多能性幹細胞 (hiPSC) 由来のオルガノイドである、本発明1085または本発明1086の方法。
[本発明1088]
Wnt5aタンパク質が組換えヒトWnt5aタンパク質である、本発明1083～1087のいずれかの方法。
[本発明1089]
膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイドが、それぞれ、iPSC由来β様細胞、iPSC由来外分泌成分細胞、iPSC由来肝細胞、iPSC由来心筋細胞、またはiPSC由来腸細胞より選択されるiPSC由来細胞に由来する、本発明1086～1088のいずれかの方法。
[本発明1090]
iPSC由来細胞がヒトのものである、本発明1089の方法。
[本発明1091]
本発明1083～1090のいずれかの方法によって生成された、膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。

ディッシュ中でモデル化され得るヒト疾患の様々な症状を示す概略である。機能的なヒト臓器の作製は、薬物スクリーニングおよび疾患モデル化における新たな治療戦略を提供する。3Dヒトミニ臓器をディッシュ中で作製するための新規な技法が、本明細書において記載される。この技法を用いて、ヒト2型糖尿病をディッシュ中でモデル化して、ヒト2型糖尿病などの遺伝子、患者、または環境特異的疾患において有効な薬物を見出すことができる。 図2Aは、器官形成におけるヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) の有用性を示す、一連の顕微鏡写真である。本明細書における研究において、ヒト脂肪由来幹細胞が、自己組織化されたオルガノイド（器官原基）を作製するための新規な供給源であることが見出された。図2は、プレート上 (2D) で培養されたヒトiPSC由来の膵臓前駆細胞（PP、15日目～19日目）、ヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC)、およびhADSCの外観を、3次元マトリゲル中で（Matrigel（登録商標）系、それぞれPP部細胞分化培地、内皮細胞増殖培地、およびhADSC増殖培地中で24時間）培養されたものと比較する。図2Bは、ADSCが、Matrigel中で培養された場合に次第に自己組織化する能力を実証する、一連の顕微鏡写真である。図2Cは、Matrigel中で増殖された場合にスフィア形成に必要とされる最小細胞数を実証する、表示の密度で播種されたhADSCの一連の画像である。図2Dは、ヒートマップとして示される、Matrigel中での48時間の培養中にhADSCにおいて起こる転写変化を示す。遺伝子発現の統計学的に異なる変化が、Matrigel中での表示時間後の細胞のRNA-Seq解析によって決定された。Matrigel中での培養中に変化した生物学的経路は、DAVIDソフトウェアを用いて同定された。図2Eは、Matrigel中で培養することによるヒト島様オルガノイドの作製を記述する概略図である。図2Fは、24ウェルプレートの単一ウェル内のヒト島様オルガノイドの画像である。図2Gは、hiPSC由来膵臓前駆細胞、HUVEC、およびhADSCをMatrigel中で1～5日間共培養することによって作製されたヒト島様オルガノイドの一連の画像である。GFPを用いてヒトインスリン発現（緑色、1枚目のパネル）を示し、mCherryを用いてHUVEC細胞を標識し（赤色、2枚目のパネル）、明視野画像（3枚目のパネル）、およびGFP画像とmCherry画像を重ね合わせたもの（4枚目のパネル）。 図2-1の説明を参照のこと。 図2-1の説明を参照のこと。 図2-1の説明を参照のこと。 図2-1の説明を参照のこと。 図2-1の説明を参照のこと。 図2-1の説明を参照のこと。 図3A～3Fは、定量的インスリン分泌アッセイとしてプロインスリンルシフェラーゼレポーター系を用いた、INS-1細胞、マウス島、およびヒト島のインスリン分泌の特徴づけを示すプロット、画像、および概略図である。図3Aは、ラットβ細胞株INS-1細胞中の安定発現インスリンレポーターの作製を示す概略図であり、この場合、ルシフェラーゼ発現がプロインスリンプロモーターの制御下にある。図3Bは、3 mM グルコース (G3)、20 mM グルコース (G20)、20 mM グルコース (G20) + 100 nM エキセンディン-4 (Ex-4)、または20 mM 塩化カリウム (KCl) による処理に応答して、INS-1レポーター細胞において誘導されたルシフェラーゼ活性を示すプロットである。図3Cは、96ウェルプレートの1つのウェル内の単一マウス島を示す画像である。アッセイの2日前に、マウス島にプロインスリン-ルシフェラーゼレンチウイルスレポーター構築物を感染させた。図3Dは、プロインスリンルシフェラーゼレポーターを感染させた個々のマウス島からの、3 mM グルコース (G3mM) および20 mM グルコース (G20mM) に応答したルシフェラーゼ活性（左側）、ならびに個々のアッセイの平均値（右側）を示す、一連のプロットである。図3Eは、96ウェルプレートの1つのウェル内の単一ヒト島を示す画像である。アッセイの2日前に、ヒト島にプロインスリン-ルシフェラーゼレンチウイルスレポーター構築物を感染させた。図3Fは、プロインスリンルシフェラーゼレポーターを感染させた個々のヒト島からの、3 mM グルコース (G3mM) および20 mM グルコース (G20mM) に応答したルシフェラーゼ活性（左側）、ならびに個々のアッセイの平均値（右側）を示す、一連のプロットである。図3Dおよび3Fは、グルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) が、レンチウイルスルシフェラーゼレポーターによる感染後に、それぞれ単一のマウス島およびヒト島から測定され得ることを示す。 図3-1の説明を参照のこと。 図4A～4Iは、ディッシュ中での機能的な、血管新生したヒト膵島の作製を示すプロット、画像、グラフ、および概略図である。図4Aは、機能的な、血管新生したヒト膵島をジェランガム中で作製するための図式を示す概略図である。図4Bはヒト島様ミニ臓器を示す。上部パネルは、3Dジェランガム懸濁液中で増殖された島様オルガノイド（下部パネル）のインスリン陽性細胞（インスリンプロモーターによって駆動される緑色蛍光タンパク質発現（左側））および位相差画像（左側）を示す。電子顕微鏡画像により、β様細胞中のインスリン顆粒およびhADSC中の脂肪滴が明らかになる。図4Cは、本明細書に記載される方法によって作製されたヒト島様ミニ臓器が、ヒト島と形態学的に同一であることを示す。図4Dおよび4Eは、qPCRによって測定された、β細胞決定（図4D）およびミトコンドリア機能（図4E）に関連した遺伝子の相対的発現を示す。島様細胞クラスター（ジェランガム中で培養された膵臓前駆細胞に由来、35日目）ならびに島様オルガノイド（ジェランガム中でHUVECおよびhADSCと共培養された膵臓前駆細胞に由来）を、解析する前にインスリン発現細胞（GFP陽性）と非発現細胞（GFP陰性）にFACS選別し、ヒト島における遺伝子発現と比較した。図4Fは、3Dジェランガム培養において調製された、選択された島様オルガノイド調製物、およびヒト島における、20 mM グルコースに曝露して30分後のc-ペプチド分泌の変化倍率によって測定された、グルコース刺激インスリン分泌を示す。図4Gは、本明細書に記載される方法によって作製されたヒト島様ミニ臓器が、機能的血管新生化を発達させ得ることを示す。ヒト島様オルガノイドをマトリゲルに移し、内皮増殖培地の存在下で増殖させた。インスリンを発現する細胞は、緑色蛍光として可視化される。上部パネルは、内皮細胞増殖培地 (ECM) による刺激の24時間後および48時間後のHUVEC細胞伸長を示す、細胞の蛍光画像である。下部パネルは、本実験および本知見を要約する概略図である。図4Hは、本明細書に記載される方法によって作製されたヒト島様ミニ臓器が、1型糖尿病の公知のマウスモデルであるNODSCIDにおいて血糖を調節し得ることを説明するグラフを示す。このマウスモデルでは、SCID（重症複合免疫不全）変異が、糖尿病易発性の非肥満糖尿病 (NOD) バックグラウンドに導入されている。このマウスモデルにおける複数の免疫学的欠損は、ヒト造血細胞で動物を再構成するための系を提供する。図4H中のグラフは、hiPSC由来ヒト島様オルガノイド (n=1000)、（四角付きの点線）；ヒト島 (n=1000)、（破線）の腎臓被膜への移植；またはモック処置（白丸付きの実線）の後に、1型糖尿病を誘発するためにストレプトゾトシン (STZ) (180 mg/kg) で処置したNODSCIDマウスにおける血糖レベルを示す。図4Iは、本明細書に記載される方法によって作製されたヒト島様ミニ臓器（「ヒト島オルガノイド」）が、食後にインスリンを分泌し得ることを説明する棒グラフを示す。図4Iのグラフは、ランダムな給餌条件（左側のバー）、8時間の絶食条件（中央のバー）、および再給餌条件（右側のバー）下の、図4Hに記載された移植の4週間後のNODSCIDマウスにおけるヒトc-ペプチドの血清レベル (pmol/L) を示す。ヒトc-ペプチドレベルは、内因性のマウスインスリンと異なる、移植片からのインスリン分泌の測定を提供する。 図4-1の説明を参照のこと。 図4-1の説明を参照のこと。 図4-1の説明を参照のこと。 図4-1の説明を参照のこと。 図4-1の説明を参照のこと。 図5A～5Eは、3Dジェランガム培養における機能的島様オルガノイドの作製を示す図およびプロットである。図5Aは、インスリン発現 (GFP) およびインスリン分泌（ルシフェラーゼ）に関する二重レポーターを安定して組み入れているhiPSCの作製を記述する概略図である。図5Bは、二重レポーターを組み入れているhiPSCの分化中の、ヒトインスリンの発現増加を示す棒グラフである。図5Cは、本明細書に記載される方法を用いて作製されたヒト島様オルガノイドとヒト島からのグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を比較する棒グラフである。GSISは、3mMおよび20 mMグルコースに応じて、単一の島様オルガノイドまたはヒト島において分泌ルシフェラーゼを用いて測定されたものである。矢印は、グルコース負荷に応答してインスリン分泌を増加させ得る機能的オルガノイドを示す。図5Dは、本明細書に記載されるように調製された島様オルガノイドの個々のバッチと陰性対照としてのマウス島のインスリン分泌を比較する棒グラフである。インスリン分泌は、培養の133日後に、3 mM グルコース (G3mM)、20 mM グルコース (G20mM)、20 mM グルコース (G20mM) およびエキセンディン-4 (Ex4)、または20 mM 塩化カリウム (KCl20mM) に応じて測定された。応答は、プールされたオルガノイド（オルガノイド100個／試料）からの分泌ルシフェラーゼ活性として測定された。図5Eは、細胞内インスリンの尺度としての細胞内ルシフェラーゼ活性を示す（オルガノイド100個／試料）。 図5-1の説明を参照のこと。 図5-1の説明を参照のこと。 図6A～6Hは、ディッシュ中での機能的なヒトミニ臓器の作製を示す概略図および画像である。図6Aは、ヒトの島、膵臓、肝臓、心臓、および腸を含む機能的なヒトミニ臓器の作製を示す概略図である。図6B～6Cは、ヒト心臓オルガノイドの作製を示す。図6B（上部）は、ヒト多能性幹細胞 (hPSC) を心筋細胞（2Dで培養した場合）またはミニ心臓（3DでhADSCおよびHUVECと共培養した場合）へ分化させるためのプロトコールを説明する概略図を提供する。図6B（左下）は、PPARδアゴニストGW501516を伴うおよび伴わない分化プロトコールの前（0日目）および18日目の、心筋細胞特異的遺伝子ヒトMLC2a (hMLC2a)、ヒトNkx2-5 (hNkx2-5)、αミオシン重鎖 (αMHC)、およびKCNQ1の相対的発現を示すプロットを提供する。図6Bの右下は、hiPSC由来心筋細胞の拍動を示すビデオ顕微鏡写真である。図6Cは、上記の概略図に記載されるようにhiPSC由来心筋細胞をhADSCおよびHUVECと共に培養することによって作製されたヒトミニ心臓様オルガノイドの画像を示す。図6D～6Fは、ヒト肝臓オルガノイドの作製を示す。図6D（上部）は、ヒト多能性幹細胞 (hPSC) を肝細胞へ分化させるためのプロトコールを説明する概略図を提供する。図6D（左下）は、6つの独立した調製物の分化中の、肝細胞特異的遺伝子AFP、ALB、およびCyp3a7の相対的発現を示すプロットを提供する。図6Dの右下は、hiPSC由来肝細胞を示す顕微鏡写真である。図6Eは、hiPSC由来肝細胞を示す一連の顕微鏡写真である。上部パネルは、機能的成熟を示す、hiPSC由来肝細胞におけるCyp7a1（Cyp7a1-GFPレポーター、左側）およびSREBP1c（SREBP1c-GFPレポーター、右側）の発現を示す。下部パネルは、ホスファチジン酸 (PA) と共に（右側）またはそれを伴わずに（左側）一晩培養されたhiPSC由来肝細胞を示す。左下に示される高倍率の画像は、ホスファチジン酸で処理された肝細胞における脂肪滴の蓄積を明らかにする。図6Fは、ジェランガム3D培養系においてhiPSC由来肝細胞をhADSCおよびHUVECと共に培養することによって作製されたヒトミニ肝臓様オルガノイドを示す。図6G（上部）は、ジェランガム3D培養系においてhADSCおよびHUVECと共培養した場合の、ヒト多能性幹細胞 (hPSC) を腸オルガノイドへ分化させるためのプロトコールを説明する概略図を提供する。下部の画像は、陰窩様構造と一致し、かつ機能的オルガノイドを示す、ヒト腸オルガノイド培養物の出芽を示す。図6H（上部）は、ジェランガム3D培養系においてhADSCおよびHUVECと共培養した場合の、ヒト多能性幹細胞 (hPSC) をミニ膵臓へ分化させるためのプロトコールを説明する概略図を提供する。中央パネルは、膵臓オルガノイドの、インスリンプロモーターによって駆動される緑色蛍光タンパク質の発現によって示されるインスリン陽性β細胞の画像、および対応する光学顕微鏡画像を示す。外分泌細胞は、非標識のまま残存している細胞である。下部パネルは、96ウェルプレート内の単一膵臓オルガノイドの画像を示す。 図6Aの説明を参照のこと。 図6Aの説明を参照のこと。 図6Aの説明を参照のこと。 図6Aの説明を参照のこと。 図6Aの説明を参照のこと。 図6Aの説明を参照のこと。 図6Aの説明を参照のこと。 ディッシュ中でのヒト2型糖尿病のモデル化を示す概略図である。肝臓、膵臓、および島などの機能的なヒト臓器の作製は、薬物スクリーニングおよびヒト2型糖尿病のモデル化における新たな戦略を提供する。例えば、脂質が蓄積した肝臓オルガノイドを用いて、初期のインスリン抵抗性表現型を研究することができ、ヒト島様オルガノイドを用いて、後期2型糖尿病において見られるβ細胞死を研究することができる。挿入されたグラフは、漸増濃度のヒトアミロイドポリペプチド (hIAPP) に対する島様オルガノイドの応答を示す。G0/G1期の細胞におけるヨウ化プロピジウム (PI) 染色の増加は、hIAPPが島様オルガノイドにおいてアポトーシスを誘導することを示す。 図8Aおよび8Bは、ヒト2型糖尿病および膵癌に関する潜在的候補を薬物スクリーニングし、その後評価するためのプラットフォームを示す概略図である。図8Aは、ヒト2型糖尿病またはヒト膵癌腫瘍形成において使用するための潜在的薬物を、ディッシュ中でスクリーニングするための図式を示す。疾患徴候を逆転させるかまたは軽減する化合物について薬物ライブラリーをスクリーニングする前に、オルガノイド培養物を適切なストレス（例えば、高レベルの遊離脂肪酸 (FFA)、高グルコースレベル、または関連サイトカイン）に曝露して、疾患様表現型を誘導する。図8Bは、2型糖尿病および膵癌腫瘍形成／転移のための潜在的薬物候補をマウスで評価するためのアプローチを示す。疾患を変化させる潜在的薬物候補で処置する前に、個々のヒト臓器（例えば、膵臓）またはヒト臓器の組み合わせ（例えば、膵臓および肝臓）を移植されたマウスを、適切な疾患誘発ストレス要因（例えば、高脂肪／高コレステロール (HF/HC) 食）に曝露する。 膵臓の構造および膵臓組織を示す概略図および画像、ならびに本明細書において作製された膵島様オルガノイドおよび膵臓オルガノイドの画像のセットである。図9の左側の概略図は、膵臓（上部）および膵島（下部）の解剖学的形態および構造を表す。図9の右上隅の画像は、表示されるように膵島（インスリンプロモーターによって駆動される緑色蛍光タンパク質によって示される）および外分泌／導管成分を伴うiPSC由来膵臓オルガノイドを示す。図9の右中央の画像は、上の蛍光画像に対応する光学顕微鏡画像を示す。図9の右下隅の画像は、単一の膵島オルガノイドを示す。 図10A～10Dは、PSCからの島様オルガノイドの作製を要約する、一連の概略図、画像、ヒートマップ、および棒グラフである。図10Aは、ジェランガム中で3Dで培養することによって島様オルガノイドを作製するためのプロトコールを記述する概略図である。図10Bは、本明細書において記載されるような3Dジェランガム培養におけるhPSCの増殖およびその膵臓系列への分化を記録する、一連の画像である。インスリン発現は、21日目に見られる緑色蛍光によって示される。図10Cは、hiPSCが島様オルガノイドへ分化する間の遺伝子発現の変化のヒートマップ表示である。図10Dは、本明細書における方法に記載されるような分化中の、hiPSCならびに2つの幹細胞株（HuES8およびH1ES）における、多能性マーカーNanog、内分泌ホルモンであるインスリン、ソマトスタチン、およびグルカゴン、ならびにβ細胞系列マーカーNkx6-1の相対的発現の変化を報告する、一連の棒グラフである。遺伝子発現はqPCRによって測定された。 図10Aの説明を参照のこと。 図10Aの説明を参照のこと。 図10Aの説明を参照のこと。 図11Aおよび図11Bは、3D培養のhADSCにおけるWNTタンパク質の役割を説明するヒートマップおよびグラフを示す。図11Aは、3D培養において起こる自発的な自己組織化中のhADSCにおける遺伝子発現変化のヒートマップ表示である。WNT5a経路において誘導される遺伝子が、リストに記載されている。図11Bは、時間経過に伴った、hADSC 3D培養物におけるいくつかの個々のWNTタンパク質の相対的レベルを示すグラフであり、これにより、WNT5aタンパク質が、発現される主要なタンパク質であると同定される。 図12A～図12Hは、iPSC由来島オルガノイドの代謝成熟におけるWNTタンパク質の役割を説明する、一連の棒グラフおよび画像である。図12Aは、PBS、WNT3a (500 ng/ml)、WNT4 (100 ng/ml)、またはWNT5a (400ng/ml) で5日間処理した後のiPSC由来島オルガノイド（21日目、hADSCおよびHUVECの非存在下で作製されたもの）におけるFltpおよびEsrrg遺伝子の発現を比較する棒グラフである。図12Bは、支持するhADSCおよびHUVECの非存在下で作製されたhiPSC由来島オルガノイドにおける、漸増用量のWNT4（0、10、25、50、100、200 ng/ml）およびWNT5a（0、25、50、100、200、400 ng/ml）に応答したEsrrg遺伝子発現の誘導を示す棒グラフである。図12Cは、支持するhADSCおよびHUVECの非存在下で作製されたhiPSC由来島オルガノイドにおける、漸増用量のWNT4（0、10、25、50、100、200ng/ml）およびWNT5a（0、25、50、100、200、400ng/ml）に応答した、酸化的リン酸化に関与するミトコンドリア遺伝子（Cox7a2、Ndufal、Ndufa7）、乳酸脱水素酵素 (Ldha)、ならびにFltp（Wnt／平面内細胞極性 (PCP) のエフェクターおよびレポーター遺伝子）の誘導を示す棒グラフである。図12Dは、PBSまたはWNT4 (100 ng/ml) で8日間処理した後のhiPSC由来島オルガノイド（27日目）における、ミトコンドリア（Mitotracker；Mito-Red）およびインスリン（インスリン-GFP）のレベルを示す蛍光画像を示す。図12Eは、PBSまたはWNT4 (100 ng/ml) で8日間処理した後のhiPSC由来島オルガノイド（27日目）のFACS解析の蛍光画像を示す。図12F、12G、および12Hは、PBS、WNT4 (100 ng/ml)、WNT5a (400 ng/ml)、対照線維芽細胞馴化培地 (50%)、またはWNT5aを分泌する線維芽細胞の馴化培地 (50%) で8日間処理した後のhiPSC由来島オルガノイド（27日目）のFACS解析の結果を説明する、一連の棒グラフを示す。使用したWNTタンパク質は、組換えヒト (rh) タンパク質であった。 図12-1の説明を参照のこと。 図12-1の説明を参照のこと。 hiPSC由来島オルガノイドの機能的成熟におけるWNT4の役割を実証する棒グラフを示す。ヒトiPSC (hiPSC) 由来島オルガノイド（22日目）をPBS（媒体、「Veh」）またはWNT4 (100 ng/ml) で12日間処理し、ヒトc-ペプチドの分泌を、低グルコースレベル（3mM、「G3mM」）、高グルコースレベル（20mM、「G20mM」）、または高KClレベル（20 mM、「KCL20mM」）に応じて測定した。

発明の詳細な説明
本発明は、拡張可能な、機能的な、血管新生したオルガノイド、特にヒト膵臓オルガノイドまたは膵島オルガノイドをインビトロで作製するのに有用である組成物および方法を特徴とする。本発明は、少なくとも部分的に、ジェランガムを含有する3次元マトリックス中で、iPSC由来β様細胞をヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) およびヒト臍帯静脈内皮細胞 (Huvec) と共に培養すると、機能的な膵臓オルガノイドおよび膵島オルガノイドが作製されたという発見に基づく。

作製されたオルガノイドは、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) などの機能的特性を示した。島移植は、1型糖尿病および後期2型糖尿病などのインスリン欠乏性糖尿病を治癒するための最良の治療法として公知である。最近の研究により、ヒト多能性幹細胞 (PSC) からグルコース応答性のインスリン産生β様細胞を作製する可能性が示されたが、栄養素に応答してインスリン、グルカゴン、およびソマトスタチンを分泌し得る、機能的な、血管新生した膵島をPSCから作製することは、これまで達成されていない。

本明細書において記載される研究により、ヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC)、HUVEC、およびヒトiPSC由来β様細胞の自己組織化機能を用いることで、機能的な脈管構造を形成する能力を伴った、グルコース応答性のインスリン分泌島様オルガノイドのインビトロ作製が可能になることが実証される。本明細書における研究から、ジェランガムに基づく3D培養系を使用することによる、島様オルガノイド生成の拡張の成功がさらに実証される。インスリン分泌を測定するためにガウシアルシフェラーゼレポーターを使用して、hiPSC由来島様オルガノイドにおける機能的な不均一性が特徴づけられた。理論によって縛られることは意図しないが、本明細書における結果から、新規なヒト島様オルガノイドが、糖尿病の治療的処置を提供する可能性があり、かつ薬物スクリーニング、ゲノム編集、ならびに器官形成および糖尿病の病態形成のモデル化のためのプラットフォームを提供する可能性があることが示唆される。

膵臓
いくつかの局面において、本発明は膵臓オルガノイドまたは膵島オルガノイドを提供する。膵臓は、腹部に位置し、内分泌および外分泌機能を有する臓器である。図9は、膵臓の構造を示す概略図を提供する。内分泌の役割を有する膵臓の部分は、「膵島」（ランゲルハンス島としても公知である）と称される細胞塊である。膵臓の内分泌物は、グルコース代謝および血糖濃度を調節するホルモンを含む。島内には4つの主要な細胞型が存在する：グルカゴン（血糖濃度を上昇させるホルモン）を分泌するα細胞；インスリン（血糖濃度を低下させるホルモン）を分泌するβ細胞；ソマトスタチン（α細胞およびβ細胞を調節するホルモン）を分泌するδ細胞；ならびに膵ポリペプチドを分泌するγ細胞。

外分泌の役割を有する膵臓の部分は、外分泌成分と称される。膵外分泌物は、小腸に到達し、炭水化物、タンパク質、および脂質の分解を助ける消化酵素を含有する。外分泌成分は、膵腺房と称されるクラスター内に配置された導管を有する。膵臓外分泌物は腺房の管腔内に分泌され、これは蓄積して、膵管および十二指腸に流出する。

本発明の膵島オルガノイドおよび膵臓オルガノイドは、それぞれ膵島および膵臓の構造を模倣する。いくつかの態様において、本発明の膵島オルガノイドおよび膵臓オルガノイドは、以下の細胞のうちのいずれか1つまたは複数を含有する：iPSC由来β様細胞、iPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、およびiPSC由来導管様細胞。いくつかの態様において、本発明の膵臓オルガノイドはiPSC由来外分泌成分を含有する。いくつかの態様において、iPSCはヒトiPSC (hiPSC) である。ヒト胚性幹細胞およびヒト人工多能性幹細胞は、（例えば、iPS(IMR-90)-1、iPS(IMR-90)-4、およびiPS(包皮)-1を提供するWiCellから）市販されている。ヒト人工多能性幹細胞は、種々の体細胞型から、当技術分野で公知の方法を用いて作製することもできる (Yu, J., K. Hu, et al. (2009). 「Human induced pluripotent stem cells free of vector and transgene sequences.」 Science 324(5928): 797-801)。

本発明の膵島オルガノイドおよび膵臓オルガノイドはまた、膵島および膵臓の機能を示す。ある特定の態様において、膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドは、以下の機能のうちのいずれか1つまたは複数を示す：グルコース刺激インスリン分泌 (GSIS)、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、およびグルカゴン分泌。いくつかの態様において、膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドは、転写因子Pdx1、MafA、Pax4、Pax6、NeuroD1、Nkx6-1、Gata6、およびFoxa2のうちのいずれか1つまたは複数を発現する。

膵臓オルガノイドまたは膵島オルガノイドの作製
いくつかの他の局面において、本発明は、膵臓オルガノイドまたは膵島オルガノイドを作製する方法を特徴とする。最近の研究により、グルコース応答性のインスリン産生β様細胞を作製することが可能であることが示されたが、栄養素に応答してインスリン、グルカゴン、およびソマトスタチンを分泌し得る膵島を作製する試み、ならびに幹細胞から血管新生化を得る試みは、成功していない。ヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC)、ヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC)、およびヒトiPSC由来β様細胞の自己組織化機能を用いることで、機能的な血管新生化が可能な、グルコース応答性のインスリン分泌島様オルガノイドをインビトロで作製することに成功したことを実証する結果が、本明細書において記載される。さらに、ジェランガムに基づく3D培養系を用いて、島様オルガノイドの作製法をスケールアップすることに成功した。インスリン分泌を測定するためにガウシアルシフェラーゼレポーターを使用して、hiPSC由来ヒト島様オルガノイドにおける機能的な不均一性についても調べた。

機能的なヒト臓器の作製は、薬物スクリーニング、疾患モデル化、およびエンドポイント臓器不全の阻止または予防における新たな治療戦略を提供する。ヒト胚性幹細胞 (hESC) およびヒト人工多能性幹細胞 (hiPSC) からインスリン産生β様細胞への効率的な段階的分化方法が、以前に実証された。D'Amour et alおよびKroon E et alは、4～5カ月のインビボ成熟後に、グルコースに応答してインスリンを分泌し得るインスリン産生細胞へのhESCの効率的な分化を報告した（D'Amour et al., 2006, Nature biotechnology 24, 1392-1401；Kroon et al., 2008, Nature biotechnology 26, 443-452）。最近、Rezania et al.およびPagliuca et al.は、成熟ヒトβ様細胞の形成をインビトロで誘導する分化方法を報告した、というのは、それらが、最終β細胞マーカーであるMAFAおよびNkx6-1を発現し、かつ部分的な機能性（例えば、インスリン分泌）を示したからである（Rezania et al., 2014, Nature Biotechnology Nov; 32(11):1121-33；Pagliuca et al., 2014, Cell 159, 428-439）。しかしながら、死体のヒト島とは対照的に、それらのβ様細胞は数カ月間にわたるインビボでの機能的成熟を必要とし、かつα細胞（グルカゴン分泌）およびδ細胞（ソマトスタチン分泌）による血糖コントロールなどの、他の膵島細胞型によって提供される機能性を欠いていた。さらに、β様細胞は、ヒト島が天然で有する、間充織および血管新生した内皮細胞の両方を欠いていた。hPSC由来β様細胞とヒト島との間のこれらの決定的な違いは、hPSCに基づく治療法がインスリン依存性糖尿病（1型糖尿病または後期2型糖尿病など）を処置する能力を損ない得る。

以前に、β細胞の新生児から成体への成熟中に代謝移行が起こり、そこでは、オーファン核内受容体であるエストロゲン関連受容体γ (ERRγ) が、完全に機能的なβ細胞に必要とされる酸化的代謝の増加を調節することが明らかにされた。この結果と一致して、インスリン、MAFA、およびNkx6-1を発現するヒトiPSC由来β様細胞は、ERRγの過剰発現により代謝的に成熟して、その酸化的代謝を増加させ、それによってそのグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) 機能性を増強させ得る。これらの結果から、完全に機能的なβ細胞を作製するためには、PDX1、MAFA、Nkx6-1、およびインスリンなどの系列決定因子の発現に加えて、β細胞の代謝を成熟させるさらなる細胞シグナル伝達が必要とされることが示される。

初期の膵臓器官形成中に、新たに指定された膵臓細胞が前腸内胚葉シートから生じ、凝縮した組織塊である膵芽を形成し、これは間もなく血管新生する。肝臓の器官形成においても、同様の進行が観察されている。そのような大規模な形態形成変化は、血液灌流前の、内胚葉上皮前駆細胞、間葉系前駆細胞、および内皮前駆細胞の間のシグナルの精巧な組織化 (orchestration) に依存する。Takebe et alは、肝臓内胚葉細胞を内皮系列および間葉系列と共に培養することにより、インビボで迅速に血管新生し、機能的に成熟する肝臓器官原基の作製に成功した (Takebe et al., 2013, Nature 499, 481-484)。

以前の研究は、成熟した、機能的な、かつ血管新生した、膵臓オルガノイドなどの他のオルガノイド組織型をインビトロで作製する可能性を明らかにしていなかった。さらに、以前の研究は、スケールアップ生成に使用するのに効率的ではないMATRIGEL（登録商標）マトリックスを用いてオルガノイドが作製されたという理由で、拡張可能性の欠如を示した。

ヒト島において見られるようにインスリンを分泌することができかつ血管新生したヒト島様オルガノイドの大規模作製の成功を実証する研究が、本明細書において記載される。(1) ヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) が自己組織化能を有すること；(2) 後期膵臓前駆細胞が、HUVECおよびhADSCと共培養された場合に、β様細胞に匹敵する効率で島様クラスターを形成し得ること；(3) ヒト島様オルガノイドが、系列決定因子、およびERRγを含む代謝調節因子の改善された発現を有したこと；(4) ガウシアルシフェラーゼプロインスリン系を使用して測定した島インスリン分泌アッセイにより、ヒト島様オルガノイドが、グルコースに応答してインスリンを分泌し得る機能的な細胞を含有することが明らかになったこと；(5) ヒト島様オルガノイドが血管新生化を示したこと；(6) 本明細書に記載される方法によるhiPSC由来のヒト島様オルガノイドが、ディッシュ中で、ヒト島の器官形成ならびに1型および2型糖尿病の病態形成を再現したこと；(7) 本明細書に記載される方法によるhiPSC由来のヒト島様オルガノイドが、1型および2型糖尿病を処置するための、ヒト島移植に取って代わることができる新たな供給源を提供したこと；ならびに (8) 1型糖尿病のSTZ誘発性NODSCIDマウスモデルに移植されたヒト島様オルガノイドが、レシピエント動物において1型糖尿病を改善したことが、本明細書において実証される。（図4Hおよび4I）。

ヒト島において見られるようにインスリンを分泌することができかつ血管新生する、発生中のヒト島様オルガノイドにおいて、ある特定のWnt（本明細書においては同様に「WNT」）タンパク質の役割を評価した研究もまた、本明細書において記載される。WNT遺伝子ファミリーは、発癌、ならびに細胞運命の調節および胚発生中のパターン形成を含むいくつかの発生過程に関連づけられている分泌型シグナル伝達タンパク質をコードする、構造的に関連した遺伝子からなる。Wntタンパク質は、種々の細胞生物学的過程および発生過程を組織化し (orchestrate)、それらに影響を及ぼすシグナル伝達分子の主要なファミリーを構成する。Wntタンパク質は、いくつかの高度に特殊化したプロセシング酵素が関与する複雑な一連の翻訳後修飾を受ける。細胞から放出されると、Wntタンパク質は細胞外環境において、グリカン、タンパク質結合パートナー（例えば、WIF、Sfrp）、および細胞表面受容体などのいくつかの分子と相互作用する。(Willert, K. et al., 2012, Cold Spring Harbor, Perspectives in Biology, 2012)。(1) Wnt5aが、hADSCの自己組織化を誘導する主要なWntタンパク質であること（図11Aおよび11B）；(2) Wnt5aおよびWnt4がERRγミトコンドリア代謝経路を活性化すること（図12A～12H）；(3) Wnt4が、hADSCおよびHUVECなどの付加的な細胞型の非存在下で、hiPSC由来島様オルガノイドのインビトロでの機能的成熟を誘導するのに十分であること（図13）が、本明細書において実証される。

処置の方法
島移植は、1型糖尿病および後期2型糖尿病などのインスリン欠乏性糖尿病を処置するための治療法である。したがって、別の局面において、本発明は、1型または2型糖尿病などの膵臓疾患を処置する方法であって、本発明の膵臓オルガノイドまたは膵島オルガノイドを移植によって対象（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に投与する段階を含む、方法を提供する。1つの態様は、膵臓の疾患（例えば、1型糖尿病）もしくは障害またはその症状を患っているか、またはそれにかかりやすい対象を処置する方法である。本方法は、疾患もしくは障害またはその症状を処置するのに十分である本発明の膵臓オルガノイドまたは膵島オルガノイドを、疾患もしくは障害が処置されるような条件下で哺乳動物に移植する段階を含む。

本明細書で用いられる場合、「処置する」、「処置すること」、「処置」などの用語は、障害および／またはそれに伴う症状を軽減することまたは改善することを指す。除外されてはいないが、障害または状態を処置することは、障害、状態、またはそれに伴う症状が完全に取り除かれることを必要としないことが認識される。

本明細書で用いられる場合、「予防する」、「予防すること」、「予防」、「予防的処置」などの用語は、障害または状態を有していないが、それを発症するリスクがあるかまたは発症しやすい対象において、障害または状態を発症する可能性を低下させることを指す。

本発明の治療方法（予防的処置を含む）は一般に、有効量の膵臓オルガノイドまたは膵島オルガノイドを、それを必要とする対象（例えば、動物、ヒト）、例えば哺乳動物、特にヒトに投与（特に、移植）することを含む。膵臓オルガノイドまたは膵島オルガノイドの投与は、他の成分と併用して、1型または2型糖尿病などの膵臓疾患を改善する、軽減する、または安定化するのに有効であるオルガノイドの量をもたらす、任意の適切な手段によるものであってよい。

いくつかの局面において、対象には免疫抑制薬がさらに投与される。免疫抑制薬は、対象にオルガノイドを投与（例えば、移植）する前、間、または後に、対象に投与することができる。免疫抑制剤は、移植時の移植オルガノイドの拒絶反応（例えば、急性拒絶反応）を抑制もしくは予防する作用物質、または移植後の免疫抑制を維持する作用物質であってよい。免疫抑制薬には、バシリジマブ、抗胸腺細胞グロブリン、アレムツズマブ、プレドニゾン、アザチオプリン、ミコフェノール酸、シクロスポリン、シロリムス、およびタクロリムスが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの態様においては、少なくとも約100,000個、少なくとも約200,000個、少なくとも約300,000個、少なくとも約400,000個、少なくとも約500,000個、少なくとも約600,000個、少なくとも約700,000個、少なくとも約800,000個、少なくとも約900,000個、または少なくとも約100万個の膵島オルガノイドが対象に移植される。いくつかの態様においては、本発明のオルガノイドを移植する前に、対象の島が除去される。いくつかの他の態様において、膵島オルガノイドは、対象の上腹部に注入することによって、対象に移植される。いくつかの態様において、膵島オルガノイドは肝臓内に注入される。膵島オルガノイドは、カテーテルを用いて対象に注入され得る。いくつかの他の態様において、膵臓オルガノイドまたは膵島オルガノイドは、手術によって対象に投与される。別の態様において、膵島オルガノイドは網上に移植される。大網移植には、島オルガノイド（またはその細胞）を自己血漿と混合し、網上に腹腔鏡下で重層する、重層技法を使用することができる。次いで、組換えトロンビン (1000 U/ml) を含有する溶液 (20 ml) を島オルガノイド上に重層し、続いて自己血漿の別の層を重層して、少なくとも1年間にわたり患者において残存し機能し得る生分解性生物学的足場を生成する（例えば、Baidal, D. et al., 2017, N. Engl. J. Med., 376:19を参照されたい）。別の態様においては、レシピエントによる免疫応答を緩和するヒドロゲル生体材料を、島オルガノイド移植に使用することができる（例えば、Vegas, A. et al., 2016, Nature Biotechnology, 34:345-352を参照されたい）。

対象における移植オルガノイドに対する免疫応答をさらに軽減するために、オルガノイドをヒドロゲル中に封入してから、対象に移植することができる。そのような移植の方法は、Vegas et al., Nature Medicine 2016, doi:10.1038/nm.4030；Vegas et al., Nature Biotechnology 2016, doi:10.1038/nbt.3462にさらに記載されている。いくつかの態様において、ヒドロゲルは、アルギン酸またはアルギン酸誘導体（例えば、トリアゾール-チオモルホリン二酸化物）を含有する。アルギン酸ヒドロゲルの炎症または線維化効果を実質的に軽減する、アルギン酸ヒドロゲルの様々な修飾もまた同定されている (Vegas et al., Nature Biotechnology 2016, doi:10.1038/nbt.3462)。したがって、いくつかの他の態様において、ヒドロゲルは、対象における移植オルガノイドの炎症効果を軽減する化学修飾を含有する。

スクリーニングアッセイ
本発明の膵島オルガノイドおよび膵臓オルガノイドは、インビトロまたはインビボにおいて膵臓の疾患をモデル化するのに有用であり得る。そのような膵臓疾患モデルを使用して、膵臓疾患の処置に有用である薬物を同定することができる。したがって、いくつかの局面において、本発明は、膵臓疾患、特に2型糖尿病および／または膵癌の処置に有用な調節因子、すなわち候補もしくは被験化合物または候補もしくは被験作用物質（例えば、タンパク質、ペプチド、ペプチド模倣物、ペプトイド、ポリヌクレオチド、小分子、または他の薬物）を同定するための方法を提供する。1つの態様において、作用物質は本発明のオルガノイドの活性を調節する。

本発明の被験作用物質は、単独で得ることができ、または生物学的ライブラリー；ペプトイドライブラリー（ペプチドの機能性を有するが、酵素消化に抵抗性であり、それにもかかわらず生理活性を保持している新規な非ペプチド骨格を有する分子のライブラリー；例えば、Zuckermann, R.N. (1994) et al., J. Med. Chem. 37:2678-85を参照されたい）；空間的にアドレス可能な並列固相もしくは液相ライブラリー；デコンボリューションを必要とする合成ライブラリー法；「1ビーズ1化合物」ライブラリー法；およびアフィニティークロマトグラフィー選択を用いる合成ライブラリー法を含む、当技術分野で公知のコンビナトリアルライブラリー法における多数のアプローチのうちのいずれかを使用して得ることができる。生物学的ライブラリーおよびペプトイドライブラリーアプローチはペプチドライブラリーに限定されるが、他の4つのアプローチは、ペプチド、非ペプチドオリゴマー、または低分子化合物ライブラリーに適用可能である (Lam (1997) Anticancer Drug Des. 12:145)。

分子ライブラリーを合成する方法の例は、当技術分野において、例えば、DeWitt et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90:6909；Erb et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:11422；Zuckermann et al. (1994) J. Med. Chem. 37:2678；Cho et al. (1993) Science 261:1303；Carrell et al. (1994) Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33:2059；Carell et al (1994) Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 33:2061；およびGallop et al. (1994) J. Med. Chem. 37:1233中に見出すことができる。

化合物のライブラリーは溶液中に提示してもよく（例えば、Houghten (1992), Biotechniques 13:412-421）、またはビーズ (Lam (1991), Nature 354:82-84)、チップ (Fodor (1993) Nature 364:555-556)、細菌（Ladner、米国特許第5,223,409号）、胞子（(Ladner 米国特許第5,223,409号）、プラスミド (Cull et al. (1992) Proc Natl Acad Sci USA 89:1865-1869)、もしくはファージ（Scott and Smith (1990) Science 249:386-390；Devlin (1990) Science 249:404-406；Cwirla et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. 87:6378-6382；Felici (1991) J. Mol. Biol. 222:301-310；Ladner 前記）上に提示してもよい。

被験作用物質（すなわち、潜在的な阻害剤、アンタゴニスト、アゴニスト）として使用されるべき化合物は、商業的供給源から得ることができ、または当業者に公知の標準的な合成技法および方法論を用いて、容易に入手可能な出発物質から合成することもできる。本明細書に記載の方法によって同定される化合物を合成する上で有用な合成化学変換ならびに保護基方法論（保護および脱保護）は、当技術分野で公知であり、これには、例えば、R. Larock (1989) Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers；T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd ed., John Wiley and Sons (1991)；L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994)；およびL. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995)、ならびにそれらの続版に記載されるようなものが含まれる。

本発明によって想定される化合物中の置換基と変数の組み合わせは、安定な化合物の形成をもたらすもののみである。本明細書で用いられる「安定な」という用語は、製造を可能にするのに十分な安定性を有し、かつ本明細書において詳述される目的（例えば、輸送、貯蔵、アッセイ、対象への治療的投与）に有用であるよう十分な期間にわたって化合物の完全性を維持する化合物を指す。

本明細書に記載される化合物は、1つまたは複数の不斉中心を含有してもよく、したがってラセミ体およびラセミ混合物、単一の鏡像異性体、個々のジアステレオマーおよびジアステレオマー混合物として存在し得る。これらの化合物のそのような異性体はすべて、明らかに本発明に含まれる。本明細書に記載される化合物は複数の互変異性体で表すこともでき、それらのすべてが本明細書に含まれる。化合物はまた、シス-もしくはトランス-、またはE-もしくはZ-二重結合異性体として存在し得る。そのような化合物のそのような異性体はすべて、明らかに本発明に含まれる。

本発明の被験作用物質はまた、ペプチド（例えば、増殖因子、サイトカイン、受容体リガンド）、またはそのようなペプチドをコードするポリヌクレオチドであってもよい。

本発明のスクリーニング法によって、本発明の膵島オルガノイドおよび膵臓オルガノイドの生物活性を増加または減少させる作用物質が同定される。いくつかの態様においては、膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドにおいて、2型糖尿病または膵癌などの膵臓疾患が誘発または模倣される。膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドにおける2型糖尿病は、例えば、オルガノイドを遊離脂肪酸 (FFA)、グルコース、およびサイトカイン（特に、高レベルのグルコースおよび／または高レベルのFFA）と接触させることによって誘発することができる。1つの態様においては、膵臓オルガノイドを膵癌細胞、星状細胞、および免疫細胞と共培養して、インビトロでヒト膵癌微小環境を創出する。

いくつかの態様においては、オルガノイドを候補作用物質と接触させ、候補作用物質が生物活性、機能、または事象に及ぼす影響をアッセイする。いくつかの態様において、候補作用物質は、米食品医薬品局 (FDA) によって認可された薬物である。例えば、本発明のスクリーニング法においてアッセイされる膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドの生物活性には、インスリン分泌（例えば、グルコース刺激インスリン分泌 (GSIS)）、β細胞アポトーシス、LDHA活性、K(ATP)チャネル活性、ミトコンドリア機能、NDUFA4、ESRRG、KCNK3、またはMAFAポリペプチドまたはポリヌクレオチドのレベルまたは活性、細胞死、細胞増殖、および転移が含まれる。いくつかの態様において、作用物質はGSISを増加させる。

いくつかの他の態様においては、本発明のオルガノイド（例えば、膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイド）を宿主に移植して、インビボで2型糖尿病または膵癌などの膵臓疾患をモデル化する。臓器またはオルガノイドを移植する方法は、当技術分野で公知である。宿主は、ラットまたはマウスなどの任意の非ヒト哺乳動物であってよい。

その後の宿主における移植オルガノイドに対する免疫応答を軽減するために、オルガノイドをヒドロゲル中に封入してから、宿主に移植することができる。そのような移植の方法は、Vegas et al., Nature Medicine 2016, doi:10.1038/nm.4030；Vegas et al., Nature Biotechnology 2016, doi:10.1038/nbt.3462にさらに記載されている。いくつかの態様において、ヒドロゲルは、アルギン酸またはアルギン酸誘導体（例えば、トリアゾール-チオモルホリン二酸化物）を含有する。アルギン酸ヒドロゲルの炎症または線維化効果を実質的に軽減する、アルギン酸ヒドロゲルの様々な修飾もまた同定されている (Vegas et al., Nature Biotechnology 2016, doi:10.1038/nbt.3462)。したがって、いくつかの他の態様において、ヒドロゲルは、宿主における移植オルガノイドの炎症効果を軽減する化学修飾を含有する。

いくつかの態様においては、膵臓オルガノイドおよび肝臓オルガノイドが宿主において同時移植される。肝臓は、膵癌の転移の主要な標的臓器である。マウスではインビボで、ミニ膵臓内およびミニ肝臓内の内皮細胞が互いに関係しあい、膵癌転移のための膵-肝脈管構造ネットワークを創出する。したがって、膵臓オルガノイドおよび肝臓オルガノイドが同時移植された宿主は、ヒト肝臓へのヒト膵癌転移の研究に有用であり得る。

いくつかの態様においては、本発明のオルガノイドが移植された宿主に環境ストレスを与えて（例えば、高脂肪／高グルコース食を与えるか、または膵癌細胞を投与する）、宿主において膵臓疾患を誘発または模倣する。いくつかの他の態様においては、疾患（例えば、2型糖尿病または膵癌）が誘発された膵島オルガノイドもしくは膵臓オルガノイドおよび／または肝臓オルガノイドを、宿主に移植する。

いくつかの態様においては、宿主に候補作用物質を投与する。ある特定の態様において、候補作用物質は、米食品医薬品局 (FDA) によって認可された薬物である。いくつかの態様においては、候補作用物質が宿主表現型（膵臓に関連した生物活性もしくは機能、または疾患に関連した活性など）に及ぼす影響をアッセイする。例示的な生物活性には、インスリン分泌（例えば、グルコース刺激インスリン分泌 (GSIS)）、β細胞アポトーシス、LDHA活性、K(ATP)チャネル活性、ミトコンドリア機能、NDUFA4、ESRRG、またはMAFAポリペプチドまたはポリヌクレオチドのレベルまたは活性、細胞死、細胞増殖、および転移が含まれる。いくつかの態様において、作用物質はGSISを増加させる。

本明細書における態様のいずれか1つにおいて、候補作用物質の影響（すなわち、膵臓の活性または機能を調節する能力）は、参照と比較して測定される。参照は、例えば、未処理の膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドであってよい。いくつかの態様において、参照は、本発明のオルガノイドが移植され、候補作用物質が投与されていない宿主である。

本発明の方法において有用な作用物質はまた、所望のマーカー（例えば、β細胞運命マーカーとしてのMAFA）の発現の増加を同定することによって検出することもできる。発現のレベルは、遺伝子マーカーによってコードされるmRNAの測定；遺伝子マーカーによってコードされるタンパク質の量の測定；または遺伝子マーカーによってコードされるタンパク質の活性の測定を含むがこれらに限定されない、いくつかの方法で測定することができる。

マーカーに対応するmRNAのレベルは、インサイチュー形式によって、およびインビトロ形式によって決定することができる。単離されたmRNAは、サザン解析またはノーザン解析、ポリメラーゼ連鎖反応解析、およびプローブアレイを含むがこれらに限定されない、ハイブリダイゼーションまたは増幅アッセイで使用することができる。ある形式では、例えば単離されたmRNAをアガロースゲル上で泳動し、mRNAをゲルからニトロセルロースなどの膜へ転写することにより、mRNA（またはcDNA）を表面上に固定化し、プローブと接触させる。別の形式では、例えば以下に記載される2次元遺伝子チップアレイにおいて、プローブを表面上に固定化し、mRNA（またはcDNA）をプローブと接触させる。当業者は、本明細書に記載されるマーカーによってコードされるmRNAのレベルの検出に使用するために、公知のmRNA検出法を適合させることができる。

試料中のmRNAのレベルは、例えば、rtPCR（Mullis (1987) 米国特許第4,683,202号）、リガーゼ連鎖反応 (Barany (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:189-193)、自己持続配列複製 (Guatelli et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:1874-1878)、転写増幅系 (Kwoh et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:1173-1177)、Q-βレプリカーゼ (Lizardi et al. (1988) Bio/Technology 6:1197)、ローリングサークル複製（Lizardi et al.、米国特許第5,854,033号）、または任意の他の核酸増幅法によって核酸を増幅し、続いて当技術分野で公知の技法を用いて増幅分子を検出することによって、評価することができる。本明細書で用いられる場合、増幅プライマーは、遺伝子の5'または3'領域にアニールすることができ（それぞれプラス鎖およびマイナス鎖、またはその逆）、その間に短い領域を含む、一対の核酸分子と定義される。一般に、増幅プライマーは約10～30ヌクレオチド長であり、約50～200ヌクレオチド長の領域に隣接する。適切な条件下でかつ適切な試薬を用いて、そのようなプライマーは、プライマーが隣接するヌクレオチド配列を含む核酸分子の増幅を可能にする。

本発明の実践には、特に指示のない限り、分子生物学（組換え技法を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の従来の技法が利用され、それらは十分に当業者の認識範囲内である。そのような技法は、「Molecular Cloning: A Laboratory Manual」, second edition (Sambrook, 1989)；「Oligonucleotide Synthesis」(Gait, 1984)；「Animal Cell Culture」(Freshney, 1987)；「Methods in Enzymology」「Handbook of Experimental Immunology」(Weir, 1996);「Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells」(Miller and Calos, 1987)；「Current Protocols in Molecular Biology」(Ausubel, 1987)；「PCR: The Polymerase Chain Reaction」(Mullis, 1994)；「Current Protocols in Immunology」(Coligan, 1991) などの文献において十分に説明されている。これらの技法は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの生成に適用可能であり、したがって本発明の形成および実践において考慮され得る。特定の態様に特に有用な技法は、以下の項で論じられる。

以下の実施例は、本発明のアッセイ、スクリーニング、および治療法を作製および使用する方法の完全な開示および説明を当業者に提供するために記載されており、本発明者らがその発明と見なすものの範囲を限定することを意図するものではない。

実施例1：膵臓オルガノイドおよび膵島オルガノイドの作製および特徴づけ
動物疾患モデルは疾患の病態形成に対する洞察をもたらし得るが、動物モデルを用いる選別から同定された薬物は、ヒト患者に採用できない場合が多い。機能的なヒトオルガノイドの作製は、薬物スクリーニングおよび疾患モデル化における新たな治療戦略を提供する（図1）。3Dヒト「ミニ臓器」またはオルガノイドをディッシュ中で作製するための新規な技法が、本明細書において記載される。この技法を用いて、ヒト2型糖尿病などの疾患をディッシュ中でモデル化して、ヒト2型糖尿病などの遺伝子、患者、または環境特異的疾患において有効な薬物を見出すことができる。

β様細胞を分化させるためのジェランガムに基づく3D培養系の開発
3次元 (3D) 培養系が細胞の自己組織化および組込みの促進に寄与することが公知である。したがって、コラーゲンおよびフィブロネクチンなどの細胞外マトリックス成分を含有するMATRIGEL（登録商標）マトリックスが、3D培養系の基底として用いられる場合が多い。しかしながら、MATRIGEL（登録商標）マトリックスに基づく3D培養系は、コストがかかり、かつスケールアップが難しいために、大規模なヒトオルガノイドの作製には理想的ではない。費用効果が高くかつ容易に拡張可能な、ジェランガムに基づく3D培養系、およびβ様細胞を分化させるための方法が、本明細書において記載される。完全に化学的に定義された段階的分化プロトコールを用いて（図10A）、ヒト多能性細胞 (hPSC) は、ジェランガムに基づく3D培養系において高い効率および再現性でインスリン産生性の島様の球状細胞塊に分化する（図10B）。単一の解離した多能性幹細胞 (PSC) は、ジェランガムを含有するSTEMCELL（商標）TeSR（商標）培地中で5日以内にスフィアを形成するのに成功した。既定の小分子刺激によるジェランガム含有カスタムTeSR（商標）内での分化の15～21日後に、インスリン陽性GFPクラスターが観察された（図10B）。RNA-seqによる包括的トランスクリプトーム解析により、hiPSCの、Pdx1、Nkx6-1、GATA6、およびMAFBを含むβ細胞系列特異的マーカー遺伝子を発現するインスリン陽性細胞への段階的分化が明らかになった（図10C）。qPCRにより決定された、多能性マーカーNanogの漸進的消失、β細胞特異的マーカーNkx6-1の誘導、ならびに内分泌ホルモンであるインスリン、ソマトスタチン、およびグルカゴンの漸進的誘導により、hiPSCならびにヒトESC株HuES8およびH1ESの島様細胞クラスターへの分化がさらに確認された（図10D）。これらの結果から、ジェランガムに基づく3D培養系が、hPSCから大規模な島様オルガノイドを作製するのに適していることが実証される。

拡張可能なヒト島様オルガノイドのインビトロでの作製
ヒト胚性幹細胞 (hESC) またはヒト人工多能性幹細胞 (hiPSC) に由来するβ様細胞は、機能性が制限されており、かつヒト島の形態学的および機能的特徴を欠いている。以前の研究により、hiPSC由来肝細胞をヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) およびヒト骨髄由来間葉系幹細胞 (hMSC) と共培養すると、マトリゲル内で、自己組織化した3D肝芽スフィアが生じることが明らかにされた (Takebe et al., 2013, Nature 499, 481-484)。この研究では、単離された肝細胞の分化と比較して、肝臓「オルガノイド」の系列決定因子の発現が優れていること、およびこれらのオルガノイドがインビボで迅速に血管新生し、機能的に成熟することが見出された。

本明細書における研究から、2D分化プロトコール (Yoshihara et al, Cell Metab. 23, 622-634) を用いて作製されたhiPSC由来の膵臓前駆細胞 (hiPSC-PP) が、3D MATRIGEL（登録商標）マトリックス中で自己組織化しないことが見出された（図2A）。対照的に、3D MATRIGEL（登録商標）マトリックス中で、HUVEC細胞は迅速に脈管構造様の構造を形成し、ヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) は自己組織化した（図2A）。MATRIGEL（登録商標）マトリックス中で、分散したhADSC細胞は、4時間以内に突起を突出させ、12時間以内に布様のラッパー (wrapper) を形成し、24～48時間以内にスフィア様構造をとった（図2B）。さらに、自己組織化のための最小細胞密度が同定された（すなわち、約2 cm²ウェル内のMATRIGEL（登録商標）マトリックス300μl中に細胞約10,000～20,000個）（図2C）。RNA-seq解析により、hADSC 3D自己組織化中の動的な転写変化が同定され、これにより、3D培養条件下で自己組織化する能力が、ナイーブhADSCの固有の特徴であることが示唆された（図2D）。これらの結果から、自己組織化するオルガノイドを作製するための供給源として、間葉系hADSCが同定される。

膵臓の器官形成を調査するために、hiPSC-PP（細胞1x10⁶個）細胞を、Matrigelマトリックス中でHUVEC（細胞7x10⁵個）およびhADSC（細胞1～2x10⁵個）と共培養した（図2E）。この共培養物は、播種の48時間後に、肉眼で見える3D細胞塊を生じた（図2F）。さらに、GFPレポーターの発現に基づいたインスリン発現が播種の5日後に検出され、ヒト島様オルガノイドにおいて培養の時間と共に増加した。加えて、蛍光標識 (mCherry) HUVECによって示されるように、HUVECに基づく内皮細胞が、オルガノイドの内部に組み込まれる（図2G）。

オルガノイド生成に関するMATRIGEL（登録商標）マトリックスの制限事項には、コストが高いこと、オルガノイドの回収の難しさ、拡張の制限、およびバッチ間のばらつきが含まれる。

ジェランガムに基づく3D培養を用いて、形態学的に同一のヒト島様オルガノイドを作製する方法が、本明細書に記載される（図4A～4G）。図4Aは、機能的な、血管新生したヒト膵島をディッシュ中で作製するための図式を示す。ジェランガムに基づく3D培養液50 ml中で、ヒト人工多能性幹細胞由来の膵臓前駆細胞 (hiPSC-PP)（細胞1x10⁸個）を、ヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC)（細胞2～7x10⁶個）およびヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC)（2～7x10⁶個）などの間質細胞集団と共に培養した（図4B）。図4Bは、ジェランガムに基づく3D培養液中への播種後5日以内に、hiPSC-PPがHUVECおよびhADSCと共に、迅速に島様スフィア構造を形成したことを示す。ヒト島様ミニ臓器は、播種後5日の内にヒトインスリンGFPレポーターを発現し、GFP強度は徐々に増強された。本方法に従ってhiPSC-PP、hADSC、およびHUVECを共培養することで、ヒト島と形態学的に類似したヒト島様オルガノイドが高い再現性で作製された（図4C）。加えて、作製されたヒト島様オルガノイドは、β様細胞中にインスリン顆粒を含有していた（図4B）。遺伝子発現解析から、島様オルガノイドでは、hADSCおよびHUVECとの共培養なしで調製されたものと比較して、インスリン発現細胞集団（GFP濃縮 (GFP +)）において、β細胞運命決定遺伝子（インスリン、Nkx6-1、PCSK1、およびUCN3）ならびにミトコンドリア関連代謝遺伝子（Esrrg、Ndufa1、Ndufa 12、Cox7a2. Atp5b）の発現が増加していることが明らかになった（図4Dおよび4E）。グルコース刺激ヒトc-ペプチド分泌アッセイにより、本方法によって作製された島様オルガノイドが、高 (20 mM) グルコースに応答してヒトc-ペプチドを分泌し得ることが明らかになった（図4F）。

次いで、インビトロ機能的血管新生化試験を実施した。図4Gは、実施したインビトロ機能的血管新生化試験を示す。ジェランガム中で作製された島様ミニ臓器をMATRIGEL（登録商標）マトリックスに移し、内皮増殖培地 (EGM) 中で培養した。緑色蛍光はインスリン遺伝子の発現を示す。EGMによる刺激の24時間～48時間以内に、HUVEC細胞の伸長が観察され、これにより、本明細書に記載される方法によって作製されたヒト島様オルガノイドが血管構造を形成する能力を有することが示された。

プロインスリン-NanoLucガウシアルシフェラーゼアッセイ系を用いる単一島インスリン分泌アッセイの確立
ガウシアルシフェラーゼがプロインスリンのc-ペプチド部分内に配置されたレポーター構築物が、β細胞機能に影響を及ぼすことなくインスリン分泌を正確に測定することが、以前に発表された (Burns et al., 2015, Cell metabolism 21, 126-137)。レンチウイルス系を用いて、このガウシアルシフェラーゼを安定に発現するINS-1細胞を作製した（図3A～3F）。プロインスリン-NanoLucを安定に発現するINS-1細胞からのルシフェラーゼ分泌は、高グルコース (20mM)、高グルコースおよびエキセンディン-4 (G20mM+Ex4)、ならびに脱分極剤である塩化カリウムに伴って増加し（図3A～3B）、このレポーター系の有用性が確認された。次に、プロインスリン-NanoLucレポーターを一過性に感染させたマウス島またはヒト島においてインスリン分泌を測定するためのこのレポーターの有益性を評価した。一過性に感染させたマウス島およびヒト島の両方において、20 mM 高グルコースに応答したルシフェラーゼ分泌が検出された（図3C～3F）。重要なことには、インスリン分泌が単一島のレベルで認定され得るほどに、アッセイ感度は十分であった。これらの結果から、プロインスリン-NanoLucルシフェラーゼレポーターに基づくインスリン分泌アッセイが、ラットβ細胞株INS-1細胞のみならず、初代のマウスおよびヒト初代β細胞にも適用可能であることが示される。

二重の系列レポーターおよび機能レポーターを組み入れているhiPSC細胞およびhESC細胞の確立
β細胞系列に関するレポーター（ヒトインスリンレポーター）およびβ細胞機能に関するレポーター（プロインスリン-NanoLucレポーター）を安定に発現するヒトiPSCおよびhESC、それぞれhiPSC^{hINS-GFP/Sec-Luc}およびhESC^{hINS-GFP/Sec-Luc}を作製した（図5A）。最初に、pGreenZeoレンチレポーター（SR10028PA-1、System Bioscience）のヒトインスリンプロモーター配列をpGreenFireレンチレポータープラスミド（TR019PA-1、System Bioscience）に挿入することにより、ヒトインスリンGFPレポーターのネオマイシン耐性構築物を作製した（hINS-GFP-EF1a-Neoと命名）。hINS-GFP-EF1a-Neoレンチウイルスをスピンフェクション（800g、1時間、37度）によってhiPSCおよびhESCに感染させた後、培地を新鮮なSTEMCELL（商標）TeSR（商標）培地に交換した。1度目の感染から3日後に、細胞をSTEMCELL（商標）TeSR（商標）培地中の100μg/ml G418で7日間処理した。続いて、hINS-GFP-EF1a-Neoを安定に発現する、選択されたhiPSC細胞およびhESC細胞に、プロインスリン-NanoLuc（Addgene、プラスミド#62057）レンチウイルスをスピンフェクション（800g、1時間、37度）によって感染させ、その後、新鮮なSTEMCELL（商標）TeSR（商標）培地に培地交換した。2度目の感染から3日後に、細胞をSTEMCELL（商標）TeSR（商標）培地中の5μg/ml ブラストサイジンおよび100μg/ml G418で7日間処理した。続いて、細胞をSTEMCELL（商標）TeSR（商標）培地中で維持した（図5A）。二重レポーターを組み入れている、作製された安定な細胞株は、自己複製能および多能性能、ならびにインスリン産生β様細胞に分化する能力を維持した（図5B）。

プールされたヒト島様オルガノイド培養物は、個々のオルガノイドにおいて見られたばらつきのある機能性にかかわらず、一貫したインスリン分泌を示す
最近の研究によって、グルコースに応答してインスリンを分泌し得る、hESCおよびhiPSCからのインスリン産生β様細胞の作製が報告された（Pagliuca et al. 2014, Cell 159, 428-439；Rezania et al., 2014, Nature Biotechnology Nov; 32(11):1121-33；Russ et al., 2015, EMBO Journal 34, 1759-1772）。しかしながら、グルコース、アミノ酸、脂肪酸、およびGLP-1などのインクレチンを含む栄養シグナルに応答して適切にインスリンを分泌し得る、完全に機能的なヒト島様クラスターは、これまでのところ実証されていない。今日まで、hPSCからインスリン産生β様細胞、グルカゴン産生α様細胞、およびソマトスタチン産生δ様細胞を個々に作製することに、努力の焦点が置かれてきた。しかしながら、これらのアプローチは、間葉系細胞、脂肪細胞、および脈管構造細胞などの、調節に重要な支持細胞を欠いている。島の3D構造がそれらの機能を天然で強化するため、これらの欠損している細胞成分は、島様細胞塊の機能性を損ない得る。加えて、膵島の器官形成はβ細胞のクローン性増殖を伴い、それにより、これらの細胞が島様オルガノイドにおいて複数の機能を有し得ることが示唆される。この考えを試験するため、単一オルガノイドプロインスリン分泌アッセイを実施した。本明細書に記載される方法によって作製されたヒト島様オルガノイドは、ヒト島と形態学的に同一である（図4C）。しかしながら、プロインスリンルシフェラーゼ分泌アッセイによって測定されるように、ヒト島と比較して、個々のヒト島様オルガノイドのグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) 能では顕著なばらつきが認められた（図5C）。プールされたオルガノイドでは、一貫したGSIS機能性が実証された（アッセイにつきオルガノイド10～100個）（図5D）。さらに、プールされたヒト島様オルガノイドは、GLP-1で共刺激した場合のGSISの増強、および強力なKCl刺激インスリン分泌を示す（図5D）。

本明細書において作製された、インビトロで培養されたiPSC由来ヒト膵島様オルガノイドは、長期間（133日間）の培養後に、グルコース、GLP1、およびKClに応答する能力を維持していた（図5D）。

実施例2：ヒトオルガノイドの作製および特徴づけ
本明細書に記載される方法を用いて、ヒトの島、膵臓、肝臓、心臓、および腸を含む機能的なヒトミニ臓器を作製することができる（図6A）。図9は、ヒト膵臓およびその膵臓内のヒト膵島の構造を示す。本明細書に記載される方法を用いて、ヒト膵島ミニ臓器またはオルガノイドは、約30日で作製された。作製された膵島は、ヒト人工多能性幹細胞 (hiPSC) 由来のβ細胞、α細胞、δ細胞、導管細胞、ならびに内皮細胞およびhADSCを含有した。作製された膵島オルガノイドは、インスリン、Nkx6-1、PCSK1、およびUCN3などの重要なβ細胞転写因子、ならびにEsrrg、Ndufa 1、Ndufa 12、Cox7a2、およびAtp5bを含む重要なミトコンドリア代謝遺伝子を発現する（図4D～4E）。膵島オルガノイドは、少なくとも部分的なGSIS、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、血管新生化、ソマトスタチン分泌、およびグルカゴン分泌を示した（図4G、5D）。

ヒトミニ膵臓またはヒト膵臓オルガノイドは、約30日で作製された（図6H）。ヒト膵臓オルガノイドは、オルガノイドの内部にクラスター化されたhiPSC由来の島、および島を取り囲むhiPSC由来の外分泌成分を含有した（図6H）。膵臓オルガノイドはまた、内皮細胞およびhADSCを含有した。ヒト膵臓オルガノイドの機能は、いくつかある試験の中でも特にアミラーゼ分泌試験を用いて実証された。

ヒトミニ肝臓は、約15日で作製された（図6D～6F）。ヒトミニ肝臓は、hiPSC由来の肝細胞、内皮細胞、およびhADSCを含有した。ヒトミニ肝臓の機能的特徴の解析から、ミニ肝臓が、AFP、ALB、およびCyp3a7（図6D）、ならびに成熟肝細胞マーカーCyp7a1および脂質生成マーカーSREBP1cを発現することが明らかになった（図6E）。ヒトミニ肝臓はまた、インスリンシグナル伝達、パルミチン酸によるインスリン抵抗性、および脂質蓄積を示した。ヒトミニ肝臓は、糖新生、および薬物代謝に関する代謝機能についてさらに試験される。

ヒトミニ心臓は、約15日で作製された（図6B～6C）。ヒトミニ膵臓は、hiPSC由来の心筋細胞、内皮細胞、およびhADSCを含有した。ヒトミニ膵臓は、hMlc2a、hNkx2-5、αMHC、およびKCNQ1などの重要な心筋細胞遺伝子を発現し（図6B）、培養において拍動するのが認められた。

ヒトミニ腸は、約30日で作製された（図6G）ヒトミニ腸は、hiPSC由来の腸細胞、内皮細胞、およびhADSCを含有した。ヒトミニ腸は、小腸マーカーCDX2、Muc2、およびLgr5を発現し、R-スポンジンに応答して腸オルガノイドの出芽を示した。

実施例3：機能的な膵島オルガノイドの移植は1型糖尿病マウスを救済した
hiPSC由来ヒト島様オルガノイドにおいて、MAFA、UCN3などの特異的機能島マーカー、ならびにERRγ (Esrrg)、Ndufa 1、 Ndufa 12、Cox7a2、およびAtp5bなどのミトコンドリア酸化遺伝子の発現が観察された。注目すべきことには、これらの島様オルガノイドは、ディッシュ中で、ヒト島の発生および糖尿病の病態形成の両方を再現する。これらの機能的島様オルガノイドの移植は、長期生存、迅速な血管新生化、および免疫拒絶反応の軽減を伴って、1型糖尿病マウスを救済する。

実施例4：ヒト島様オルガノイドにおける薬物スクリーニングおよび疾患モデル化
本明細書に記載される方法による機能的なヒト臓器の作製は、薬物スクリーニングおよび疾患モデル化のための新たな戦略を提供する。具体的には、機能的なオルガノイドを、薬物スクリーニングのための2型糖尿病のモデルとして使用することができる（図7）。ヒト島様オルガノイドは、2型糖尿病患者、および高血糖患者での移植後の島機能不全におけるβ細胞消失の誘導因子であるアミロイドポリペプチド (hIAPP) 毒性に応答し、hIAPPは、ヒト島様オルガノイドにおいて24時間以内に用量依存的にG0/G1停止を誘導した（図7）。

図8Aは、本明細書における方法によって作製された膵島オルガノイドおよび／または膵臓オルガノイドを用いて、2型糖尿病をモデル化し、薬物を潜在的にスクリーニングするための実験アプローチを示す概略図を提供する。例示的なアッセイでは、3Dミニ臓器を、高レベルの遊離脂肪酸 (FFA) ならびに／またはグルコースおよび選択されたサイトカインなどの、2型糖尿病を誘発するストレス要因に曝露する。次いで、ストレスを与えた3Dミニ臓器を様々な薬物で処理する。いくつかの態様において、薬物は米食品医薬品局 (FDA) によって認可されている。

アウトプットとして、ヒト膵島オルガノイドにおいて以下のものがアッセイされる：インスリン分泌、β細胞アポトーシス (PI染色)、ルシフェラーゼレポーターを介した乳酸脱水素酵素A (LDHA) 発現、ならびにNDUFA4（ミトコンドリア酸化的リン酸化）、ESRRG（ミトコンドリア機能）、KCNK3（Katpチャネル活性）、およびMAFA（β細胞運命マーカー）を含むマーカー遺伝子の発現の変化。ヒト膵臓オルガノイドについては、アミラーゼ分泌および外分泌細胞のアポトーシス（PI染色）がアッセイされる。肝臓オルガノイドについては、オイルレッドOまたは組織学的検査を用いて、脂質蓄積がアッセイされる。心臓オルガノイドの場合には、心拍動および心臓サイズ（肥大）が測定される。腸オルガノイドは、オイルレッドOまたは組織学的検査を用いて脂質蓄積を測定することにより解析される。

図8Aはまた、ディッシュ中でのヒト膵癌の腫瘍形成および転移のモデル化、ならびにそれらの疾患を標的化する薬物をスクリーニングする可能性を示す。例示的なアッセイでは、3Dミニヒト膵臓を膵癌細胞、星状細胞、および免疫細胞と共培養して、ディッシュ中でヒト膵癌微小環境を創出する。次いで、様々な薬物（例えば、FDA認可薬物）をスクリーニングして、ミニヒト膵臓微小環境において膵癌の増殖または転移を効果的に抑制する化合物を見出す。アウトプットとして、膵臓オルガノイドについて以下のものが測定される：外分泌細胞のアポトーシス（PI染色）、コラーゲン合成（トリクローム染色）、および星状細胞活性化（GFAP-レポーター）。これらのアッセイで同定された潜在的候補薬物は、膵癌の腫瘍形成および転移のマウスモデルで試験される。遺伝子発現および形態、ならびに細胞死、細胞増殖、および転移の程度が調べられる。

図8Bは、マウスにおけるヒト2型糖尿病のモデル化を示す概略図を提供する。例示的なアッセイでは、ヒト島オルガノイドおよび／またはヒト肝臓オルガノイドをマウスに移植する。次いで、マウスに、高脂肪食 (HFD) またはサイトカイン注射などの、2型糖尿病を誘発する様々なストレス要因を与える。このアッセイで同定された潜在的候補薬物は、ヒト2型糖尿病マウスモデルにおいてさらに試験される。遺伝子発現および形態ならびに糖尿病の程度が調べられる。

図8Bはまた、マウスにおけるヒト膵癌の腫瘍形成および転移のモデル化を示す。例示的なアッセイでは、ヒト膵臓オルガノイドおよび／またはヒト肝臓オルガノイドをマウスに移植する。ミニ膵臓を移植されたマウスを用いて、ヒト膵臓微小環境におけるヒト膵癌増殖を研究する。別の例示的なアッセイでは、ミニ膵臓およびミニ肝臓をマウスに同時移植する。肝臓は、膵癌の転移の主要な部位である。インビボでは、ミニ膵臓内およびミニ肝臓内の内皮細胞が、膵癌転移のための膵-肝脈管構造ネットワークを創出する。したがって、ミニ膵臓およびミニ肝臓が同時移植されたマウスを用いて、ヒト膵癌のヒト肝臓への転移を研究する。

多能性幹細胞 (PSC) から機能的な臓器様クラスターを作製することの最終的な目的は、ヒト疾患の根底にある機構への洞察を得ることである。動物において疾患モデルを開発する観点においては大きな進歩を成し遂げたが、これらのモデルの多くはヒト状態を忠実に再現することができない。膵島の場合、齧歯類とヒトにおけるそれらの発生、細胞構築、および生理機能は著しく異なる。

本明細書における結果は、以下の材料および方法を用いて得られた。

3D Kelcogel（登録商標）(3DKG) 培養液
Modernist Pantryから入手したKelcogel（登録商標）F低アシルジェランガム (GG-LA) を、純水中に0.3% (w/v) で懸濁し、90℃で撹拌するかまたは電子レンジにより溶解する。水溶液を、オートクレーブ内で121℃にて20分間滅菌する。この溶液を、TeSR（商標）(Ludwid et al., Nature methods 3, 637-646) またはカスタムTeSR（商標）培地（800ml DMEM/F12、13.28g BSA、10ml Glutamax、560mg NaHCO₃、330mg チアミン、100mg 還元型グルタチオン、3300 mg ビタミンC、14μg セレニウム、10ml NEAA、2ml 微量元素B、1ml 微量元素C、7μl β-ME、2ml DLC、2ml GABA、2ml LiCl、129.7μg ピペコリン酸、インスリン 2mg、1000mlになるよう調整）に最終濃度0.015%で添加する。メチルセルロース (MC) 保存液を最終濃度0.3%になるよう添加する (R&D systems)（例えば、0.3% Kelcogel（登録商標）ストック：Kelcogel（登録商標）F低アシルGG-LA 300mg + MilliQ水 100ml；3DKG Stem TeSR（商標）基礎培地：STEMCELL（商標）TeSR（商標）95ml + 0.3% Kelcogel（登録商標）ストック 5ml + MC保存液 300ul；3DKGカスタムTeSR（商標）基礎培地：カスタムTeSR（商標）培地 95ml + 0.3% Kelcogel（登録商標）ストック 5ml + MC保存液 300ul；最終濃度1%のペニシリン／ストレプトゾシンを3DKG培地に添加する）。

インビトロでのヒト膵臓内分泌前駆細胞およびβ様細胞の調製
膵臓内分泌細胞 (hiPSC-PE) は、以前に記載された分化方法を用いて、ヒトiPSCから調製した。簡潔に説明すると、HUVEC由来のヒト人工多能性幹細胞 (hiPSC) をStem Cell Core (Salk Institute) から入手した。細胞を、MATRIGEL（登録商標）(BD) コーティングディッシュ上で、完全STEMCELL（商標）TeSR（商標）培地中、加湿5% CO₂インキュベーター内で37度で維持した。膵臓分化のために、hiPSCにヒトインスリンレポーターレンチウイルス（pGreenZeroレンチレポーターヒトインスリン、System Biosciences）をスピンフェクション（800g、1時間）によって感染させた。方法1：培地を、100 ng/ml ヒトアクチビン (R&D Systems)、25ng/ml 組換えヒトWnt3a (R&D Systems) を含むカスタムTeSR（商標）培地（800ml DMEM/F12、13.28g BSA、10ml Glutamax、560 mg NaHCO₃、330 mg チアミン、100mg 還元型グルタチオン、3300 mg ビタミンC、14μg セレニウム、10ml NEAA、2ml 微量元素B、1ml 微量元素C、7μl β-ME、2ml DLC、2ml GABA、2ml LiCl、129.7μg PA、インスリン 2mg、1000mlになるよう調整）に交換して2日間置き、次いで100ng/ml ヒトアクチビンを含む分化培地に交換してさらに2日間置いた（段階1、膵臓内胚葉）。続いて、培地を、1uMドルソモルフィン (Calbiochem)、2μM レチノイン酸 (Sigma)、10μM SB431542、および1%のB27サプリメントを伴うカスタムTeSR（商標）培地に置換して7日間置いた（段階2）。次いで培地を、10uM フォルスコリン (Sigma)、10μM デキサメタゾン (Stemgent)、10μM TGFβ RIキナーゼ阻害剤II／Alk5阻害剤II（CalbiochemまたはEnzo）、10μM ニコチンアミド (Sigma)、1μM 3,3',5-トリヨード-L-チロニンナトリウム塩 (T3)、および1%のB27サプリメントを伴うカスタムTeSR（商標）培地に置換して4～5日間置いた（15日目～21日目、膵臓内分泌前駆細胞）。培地は、毎日（段階1）または1日おきに（段階2および段階3）置換した。

方法2：培地を、100 ng/ml ヒトアクチビン (R&D Systems)、25ng/ml 組換えヒトWnt3a (R&D Systems) または3μM CHIR99021（AxonもしくはSelleckchem）を含む分化培地 (S1) に交換して1日置き、次いで100ng/ml ヒトアクチビンを含む分化培地 (S1) に交換してさらに2日間置いた（段階1、膵臓内胚葉）。続いて、培地を、50ng/ml FGF7 (R&D Systems) を伴う分化培地 (S2) に置換して2日間置き、次いで50ng/ml FGF7、0.25μM SANT-1 (Sigma)、1μM レチノイン酸 (Sigma)、100nM LDN193189、および100nM α-アミロイド前駆体タンパク質調節因子TPBを伴う分化培地 (S3) に置換して3日間置いた。続いて、培地を、0.25μM SANT-1、50nM レチノイン酸、10μM Alk5阻害剤II、1μM T3を伴う分化培地 (S4) に置換して3日間置いた。続いて、培地を、100nM LDN193189、100nM γセクレターゼ阻害剤XX GSiXX (Millipore)、10μM Alk5阻害剤II、1μM T3を伴う分化培地 (S5) に置換して7日間置いた。続いて、培地を、10μM トロロクス (Calbiochem)、2μM R428 (Selleckchem)、1mM N-アセチルシステイン、10μM Alk5阻害剤II、1μM T3を伴う分化培地 (S5) に置換してさらに7～20日間置いた。

S1培地（MCDB 131培地、8mM グルコース、2.46g/L NaHC03、2% 脂肪酸不含BSA、0.25mM L-アスコルビン酸 0.002% インスリン-トランスフェリン-セレニウム ITS-X (GIBCO)、2mM Glutamax、1% ペニシリン-ストレプトマイシン）、S2培地（MCDB 131培地、8mM グルコース、1.23g/L NaHC03、2% 脂肪酸不含BSA、0.25mM L-アスコルビン酸、0.002% インスリン-トランスフェリン-セレニウム ITS-X (GIBCO)、2mM Glutamax、1% ペニシリン-ストレプトマイシン）、S3培地（MCDB 131培地、8mM グルコース、1.23g/L NaHC03、2% 脂肪酸不含BSA、0.25mM L-アスコルビン酸、0.5% インスリン-トランスフェリン-セレニウム ITS-X (GIBCO)、2mM Glutamax、1% ペニシリン-ストレプトマイシン）、S4培地（MCDB 131培地、8mM グルコース、1.23g/L NaHC03、2% 脂肪酸不含BSA、0.25mM L-アスコルビン酸、0.002% インスリン-トランスフェリン-セレニウム ITS-X (GIBCO)、2mM Glutamax、1% ペニシリン-ストレプトマイシン、10μg/ml ヘパリン、10μM 硫酸亜鉛）、S5培地（MCDB 131培地またはBLAR培地、20mM グルコース、1.754g/L NaHC03、2% 脂肪酸不含BSA、0.25mM L-アスコルビン酸、0.002% インスリン-トランスフェリン-セレニウム ITS-X (GIBCO)、2mM Glutamax、1% ペニシリン-ストレプトマイシン）。3次元培養については、hiPSCまたはhESCを、10μM Y-27632を伴う3DKG Stem TeSR（商標）基礎培地中で5～7日間培養し、次いで培地を、0.015% Kelcogelおよび0.3% メチルセルロースを伴う各分化培地に置換した。

インビトロでの3次元膵島芽の作製：hADSCおよびHUVECとの共培養によるMatrigel中の島様オルガノイド
初代HUVECおよびヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC)（InvitrogenまたはPromoCell）を、15cmディッシュ中で、それぞれEBM培地（Ronza、cc-3121）またはMesenProRS（商標）培地（GIBCO、12747-010、もしくは脂肪前駆細胞増殖培地キット、C-27417）を用いて、加湿5% CO₂インキュベーター内で37℃で培養した。共培養実験のために、ヒトiPSC由来の膵臓内分泌前駆細胞をAccutaseで処理し、HUVECおよびhADSCをTrypLE（GIBCO、12604-013)で処理し、細胞をそれぞれ50 mlチューブ中に収集した。細胞を計数した後、細胞1x10⁶個のhiPS-PP、細胞7x10⁶個のHUVEC、および細胞1～2x10⁵個のhADSCを、MATRIGEL（登録商標）マトリックス300ulを用いて、24ウェルの1ウェル内で共培養した。ヒト島様オルガノイドの拡張可能な作製のために、細胞1x10⁶個のhiPS-PP（15日目～21日目）、細胞7x10⁶個のHUVEC、および細胞1～2x10⁵個のhADSCを、10uM フォルスコリン (Sigma)、10μM デキサメタゾン (Stemgent)、10uM TGFβ RIキナーゼ阻害剤II／Alk5阻害剤II（CalbiochemもしくはEnzo）、10uM ニコチンアミド (Sigma)、1uM 3,3',5-トリヨード-L-チロニンナトリウム塩 (T3)、および1%のB27サプリメント、R428 (2μM)、硫酸亜鉛 (10μM)、およびN-Cys (1mM)を伴う3DKGカスタムTeSR（登録商標）培地中で共培養するか（方法1）、または100nM LDN193189、100nM γセクレターゼ阻害剤XX GSiXX (Millipore)、10μM Alk5阻害剤II、1μM T3を伴う分化培地 (S5) 中で7日間共培養した。続いて、培地を、10μM トロロクス (Calbiochem)、2μM R428 (Selleckchem)、1mM N-アセチルシステイン、10μM Alk5阻害剤II、1μM T3を伴う分化培地 (S5) に置換してさらに7～20日間置いた（方法2）。混合された細胞は、数日以内に球状の島様クラスターを形成した。培地は1日おきに交換した。

インビトロでの3D（3次元）膵島芽の作製：hADSCおよびHUVECとの共培養による、拡張可能なジェランガム中の島様オルガノイド
細胞を上記の通りに調製した。簡潔に説明すると、細胞1x10⁸個のhiPS-PP、細胞2～7x10⁷個のHUVEC、および細胞5～7x10⁶個のhADSCを、10μM フォルスコリン (Sigma)、10μM デキサメタゾン (Stemgent)、10μM TGFβ RIキナーゼ阻害剤II／Alk5阻害剤II（CalbiochemもしくはEnzo）、10μM ニコチンアミド (Sigma)、1μM 3,3',5-トリヨード-L-チロニンナトリウム塩 (T3)、および1%のB27サプリメント、R428 (2μM)、硫酸亜鉛 (10μM)、およびN-Cys (1mM)を伴う3DKGカスタムTeSR（商標）60～100ml中で共培養するか（方法1）、または100nM LDN193189、100nM γセクレターゼ阻害剤XX GSiXX (Millipore)、10μM Alk5阻害剤II、1μM T3を伴う分化培地 (S5) 中で7日間共培養した。続いて、培地を、10μM トロロクス (Calbiochem)、2μM R428 (Selleckchem)、1mM N-アセチルシステイン、10μM Alk5阻害剤II、1μM T3を伴う分化培地 (S5) に置換してさらに7～20日間置いた（方法2）。混合された細胞は、数日以内に球状の島様クラスターを形成した。培地は、毎日または1日おきに交換した。

インビトロでの3D（3次元）膵島芽の作製：hADSCおよびHUVECを使用しない (w/o)、拡張可能なジェランガム3D培養法における島様オルガノイド
iPSCまたはESCを含むヒトPSCは、最初にマトリゲルコーティングプレート中で培養した（2次元 (2D) 培養）。次いで細胞をAccutase（Innovative Cell Technologies, Inc.、San Diego, CA）で処理して単一細胞懸濁液を作製し、PBSで洗浄し、1000～1300 rpmで5分間遠心分離して細胞をペレット化した。細胞を、10μM Y-27632（RHO/ROCK経路阻害化合物）を伴う3DKG Stem TeSR（商標）基礎培地（Stemcell Technologies、Cambridge, MA）で懸濁し、PSCスフィア増殖が直径50～100μmに達するまで、さらに5～7日間培養した。次いで培地を、0.015% Kelcogelおよび0.3% メチルセルロースを補充した分化培地に置換した。培養液を、100 ng/ml ヒトアクチビン (R&D Systems)、25ng/ml 組換えヒトWnt3a (R&D Systems) または3μM CHIR99021、グリコーゲン合成酵素キナーゼGSK-3阻害剤（Axon Medchem、Reston, VA；またはSelleckchem）を含有する分化培地 (S1) に交換して1日置き、次いで100ng/ml ヒトアクチビンを含有する分化培地 (S1) に交換してさらに2日間置いた（段階1、膵臓内胚葉）。続いて、培地を、50ng/ml FGF7 (R&D Systems) を含有する分化培地 (S2) に置換して2日間置き、次いで50ng/ml FGF7、0.25uM SANT-1 (Sigma)、1μM レチノイン酸 (Sigma)、100 nM LDN193189（ALK2およびALK3阻害剤、Sigma）、ならびに100 nM α-アミロイド前駆体タンパク質調節因子TPBを含有する分化培地 (S3) に置換して3日間置いた。続いて、この培地を、0.25μM SANT-1、50 nM レチノイン酸、10μM Alk5阻害剤II、1μM T3を含有する分化培地 (S4) に置換して3日間置いた。続いて、培地を、100 nM LDN193189、100 nM γセクレターゼ阻害剤XX GSiXX (Millipore) 10μM Alk5阻害剤II、1μM T3を含有する分化培地 (S5) に置換して7日間置いた。続いて、培地を、10uM トロロクス (Calbiochem)、2μM R428 (Selleckchem)、1 mM N-アセチルシステイン、10μM Alk5阻害剤II、1μM T3を含有する分化培地 (S5) に置換してさらに7～20日間置いた。インスリン遺伝子発現をレポーター発現またはqPCRのいずれかによって確認した後（典型的には20～30日目）、培地を、10μM トロロクス (Calbiochem)、2μM R428 (Selleckchem)、1 mM N-アセチルシステイン、10μM Alk5阻害剤II、1μM T3、および100 ng/ml 組換えヒト (rh) Wnt4 (R&D Systems)、400 ng/ml rhWnt5a、または50% Wnt5a馴化培地を含有する分化培地 (S5) に交換して1～20日間置いた。Wnt5a馴化培地は、L-Wnt5a細胞株（ATCC、CRL-2814）を、10% FBS、1% ペニシリン-ストレプトマイシンを伴うDMEM中で、細胞がT175-T225 Frasko細胞培養フラスコ中で70～100%コンフルエンスに到達した後4日間培養することによって調製した。

インビトロでの3D（3次元）肝芽の作製：器官原基
以前に記載された分化方法を用いて、ヒトiPSC由来の肝細胞 (hiPSC-HE) を調製した。簡潔に説明すると、hiPSCを、MATRIGEL（登録商標）(BD) コーティングディッシュ上で、完全STEMCELL（商標）TeSR（商標）培地中、加湿5% CO₂インキュベーター内で37℃で維持した。肝臓分化のために、hiPSC（6ウェル内で90%コンフルエンス）を、RPMI1640培地中の100ng/ml ヒトアクチビン (Sigma)、および25ng/ml 組換えヒトWnt3a (R&D Systems) または3μM CHIR99021、および1% インスリン不含B27サプリメントと共に1日培養し、次いでRPMI培地中の100ng/ml ヒトアクチビンおよび1% インスリン不含B27サプリメントと共にさらに4日間培養した（段階1 肝臓-内胚葉）。続いて、培地を、RPMI1640培地中に10ng/ml bFGF、20ng/ml BMP4、および1%のB27サプリメントを伴う分化培地に置換して3日間置いた（段階2）。次いで培地を、肝細胞培養液（Lonza、MD、CC-3198、EGFおよびゲンタマイシン／アンホテリシン-Bを除去）中に0.1μM デキサメタゾン、20ng/ml オンコスタチンM (R&D Systems)、および10～20ng/ml 肝臓増殖因子（HGF、R&D Systems）、および1%のB27サプリメントを伴う分化培地に置換して4～22日間置いた（15日目～19日目、膵臓内分泌前駆細胞）。培地は、毎日（段階1）または1日おきに（段階2および段階3）置換した。初代HUVEC細胞およびヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC)（InvitrogenまたはPromoCell）を、15cmディッシュ中で、それぞれEBM培地（Ronza、cc-3121）またはMesenProRS培地（GIBCO、12747-010、もしくは脂肪前駆細胞増殖培地キット、C-27417）を用いて、加湿5% CO₂インキュベーター内で37℃で培養した。共培養実験のために、ヒトiPSC由来の10日目の肝細胞をAccutaseで処理し、HUVECおよびhADSCをTrypLE（GIBCO、12604-013)で処理し、細胞をそれぞれ50 mlチューブ中に収集した。細胞を計数した後、細胞1x10⁶個のhiPS-PP、細胞7x10⁶個のHUVEC、および細胞1～2x10⁵個のhADSCを、マトリゲル300ulを用いて、24ウェルの1ウェル内で共培養した。1～2日以内に肝臓様オルガノイドが形成された。次いで、MATRIGEL（登録商標）マトリックスから肝臓様オルガノイドを取り出し、3DKGカスタムTeSR（商標）中で培養した。

インビトロでの3D（3次元）心芽 (heart bud) の作製：器官原基
以前に記載された分化方法を用いて、心筋細胞 (hiPSC-CD) をヒトiPSCから調製した。簡潔に説明すると、hiPSCを、MATRIGEL（登録商標）(BD) コーティングディッシュ上で、完全Stemcell（商標）TeSR（商標）培地中、加湿5% CO₂インキュベーター内で37℃で維持した。肝臓分化のために、hiPSC（6ウェル内で90%コンフルエンス）を、RPMI1640培地中の100ng/ml ヒトアクチビン (R&D Systems) および10uM CHIR99021および1% インスリン不含B27サプリメントと共に1日培養し、次いでRPMI培地中の1% インスリン不含B27サプリメントと共にさらに2日間培養した（段階1 心臓-中胚葉）。続いて、培地を、RPMI培地中に5uM IWP-2および1% インスリン不含B27サプリメントを伴うRPMI1640培地に置換して1日置いた（段階2）。次いで培地を、1% インスリン不含B27サプリメントを含むRPMI培地に置換して6日間またはそれ以上置いた（段階3）。心収縮はおよそ13日目に始まった。培地は、毎日（段階1）または1日おきに（段階2および段階3）置換した。初代HUVEC細胞およびヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC)（InvitrogenまたはPromoCell）を、15cmディッシュ中で、それぞれEBM培地（Ronza、cc-3121）またはMesenProRS（商標）培地（GIBCO、12747-010、もしくは脂肪前駆細胞増殖培地キット、C-27417）を用いて、加湿5% CO₂インキュベーター内で37℃で培養した。共培養実験のために、ヒトiPSC由来の13日目～15日目の心筋細胞をディスパーゼで処理し、HUVECおよびhADSCをTrypLE（GIBCO、12604-013)で処理し、細胞をそれぞれ50 mlチューブ中に収集した。細胞を計数した後、細胞1x10⁶個のhiPS-PP、細胞7x10⁶個のHUVEC、および細胞1～2x10⁵個のhADSCを、3DKGカスタムTeSR（商標）培地中で共培養した。収縮可能な心臓様のミニ臓器が数日以内に形成された。

インビトロでの3D（3次元）腸芽 (intestine bud) の作製：器官原基
以前に記載された分化方法を用いて、腸細胞 (hiPSC-IT) をヒトiPSCから調製した。簡潔に説明すると、hiPSCを、Matrigel（登録商標）(BD) コーティングディッシュ上で、完全Stemcell（商標）TeSR（商標）培地中、加湿5% CO₂インキュベーター内で37℃で維持した。肝臓分化のために、hiPSC（6ウェル内で90%コンフルエンス）を、RPMI1640培地中の100ng/ml ヒトアクチビン (R&D Systems)、3uM CHIR99021、2mM Glutamax、および1% インスリン不含B27サプリメントと共に1日培養し、次いでRPMI1640培地中の100ng/ml ヒトアクチビン (R&D Systems)、2mM Glutamax、および1% インスリン不含B27サプリメントと共にさらに3日間培養した（段階1 前腸-内胚葉）。続いて、培地を、500ng/ml Wnt3a、500ng/ml FGF4、および1% B27サプリメントを含むRPMI 1640培地に置換して4日間置いた（段階2）。細胞をMatrigel（登録商標）マトリックスに移し、次いで3D-スフェロイド Matrigel（登録商標）ドーム (dorm) を24ウェルの底に作製した。次いで培地を、1% B27サプリメント、1% N2サプリメント、500ng/ml R-スポンジン、100ng/ml ノギン、50ng/ml EGF、2mM Glutamazx（商標）サプリメント、10uM HEPESを含むDMEM/F12培地に置換して7日間またはそれ以上置いた（段階3）。1週間以内に腸様オルガノイドスフェロイドが観察された。培地は、毎日（段階1）ならびに1日おきに（段階2および段階3）置換した。初代HUVEC細胞およびヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC)（InvitrogenまたはPromoCell）を、15cmディッシュ中で、それぞれEBM培地（Ronza、cc-3121）またはMesenProRS（商標）培地（GIBCO（登録商標）、12747-010、もしくは脂肪前駆細胞増殖培地キット、C-27417）を用いて、加湿5% CO₂インキュベーター内で37℃で培養した。共培養実験のために、ヒトiPSC由来の腸前駆細胞（7日目）をAccutaseで処理し、HUVECおよびhADSCをTrypLE（GIBCO（登録商標）、12604-013)で処理し、細胞をそれぞれ50 mlチューブ中に収集した。細胞を計数した後、細胞1x10⁶個のhiPS-PP、7x10⁶個のHUVEC細胞、および1～2x10⁵個のhADSC細胞を、3DKGカスタムTeSR（商標）培地中で共培養した。

インスリン分泌アッセイ（マウスおよびヒトの初代膵島ならびにヒトiPSC由来細胞）
無傷の島からのインスリン放出は、バッチインキュベーション法を使用してモニターした (Yoshihara et al., 2010, Nat. Commun. 1:127)。簡潔に説明すると、一晩培養した単離膵島（10% (v/v) ウシ胎仔血清および1% (v/v) 抗菌・抗真菌剤 (Gibco) を補充したRPMI-1640）を37℃で30分間、前培養した（129.4 mM NaCl、3.7 mM KCl、2.7 mM CaCl₂、1.3 mM KH₂PO₄、1.3 mM MgSO₄、24.8 mM NaHCO₃（5% CO₂、95% O₂で平衡化、pH7.4）、10mM HEPES、および0.2% (v/v) BSA（V画分、Sigma）を含有するクレブス・リンゲル炭酸水素緩衝液 (KRBB) (KRBH）と3 mMグルコース）。次いで、インスリン分泌レベルを決定するために、膵島を3 mMまたは20 mMのグルコースを伴うKRBH緩衝液中でインキュベートした（500μl／島10個）。30分後、遠心分離により島をペレット化し、ELISAによってインスリンレベルを決定した（マウスおよびヒトの島についてそれぞれ、ラット／マウスインスリンELISAキット (Millpore) およびヒトインスリンELISAキット (Millpore)）。ヒトiPSC由来細胞については、細胞（24ウェルのウェル当たり細胞1x10⁶個）を3mM グルコースKRBH緩衝液（500μl／ウェル）中で前培養した。次いで、インスリン分泌レベルの指標としてのc-ペプチド分泌レベルを決定するために、細胞を3 mMまたは20 mMのグルコースを伴うKRBH（200μl／ウェル）中でインキュベートした。30分後、遠心分離により細胞をペレット化し、ヒトc-ペプチドELISAキット (Millpore) によりc-ペプチドレベルを決定した。

定量的RT-PCR解析
TRIzol試薬 (Invitrogen) およびRNeasyキット (Qiagen) を使用して、全RNAを抽出した。逆転写は、SuperScript III第一鎖合成システムキット (Invitrogen) またはPrimeScript RT試薬キット (TAKARA) を用いて行った。リアルタイム定量的RT-PCR (qPCR) は、SYBRグリーン (Bio-Rad) を使用して行った。

プロインスリン-NanoLucのためのレンチウイルス生成
プロインスリン-NanoLuc in pLX304（Addgene、#62057）は、Addgeneから入手した。プロインスリン-NanoLucレンチウイルスは、第2世代ウイルスパッケージングシステムを使用して生成した。簡潔に説明すると、14μgのプロインスリン-NanoLuc、6.6μgのPsPAX2パッケージングプラスミド (Addgene 12260)、5.4μgのpMD2.Gエンベローププラスミド (Addgene 12259)、および54μl Lipofectamin2000 (Invitrogen) を使用して、T75フラスコのHEK293LTVパッケージング細胞をトランスフェクトした。トランスフェクションの24時間後、培地を、10% FBSおよび1% ペニシリン／ストレプトゾシンを伴う新鮮なDMEMに交換した。トランスフェクションの48時間後および96時間後に、それぞれ1日目および3日目としてウイルスを収集し、それらを0.2μm 酢酸セルロースフィルター (VWR) に通した。ウイルスを分注し、使用時まで-80℃で凍結保存した。

インスリン分泌測定のためのガウシアルシフェラーゼアッセイ
マウス島、ヒト島、およびヒト島様オルガノイドを、10μg/ml Polybrene（登録商標）ポリマー (Santacruz) を伴うそれら各々の増殖培地中にプレーテイングした。次いでウイルスを添加した。一晩培養した後、細胞を新鮮な増殖培地中に入れた。感染の48～72時間後に、マウス島、ヒト島、およびヒト島用オルガノイドを手動で拾い、次いで単一の島またはオルガノイドとして96ウェルに入れた。次いで、インスリン分泌アッセイを実施した。簡潔に説明すると、単一の島またはオルガノイドを、3mM グルコース KRBBを用いて37℃で30分～1時間プレインキュベートした。次いで細胞を、3 mMを伴うKRBB（100μl／ウェル）中で30分間インキュベートし、次いで連続して、100nM エキセンディン-4を伴うかもしくは伴わない20 mM グルコース、または20mM KClを伴う3mM グルコース（100μl／ウェル）と共にインキュベートした。インスリン分泌レベルの指標としてのガウシアルシフェラーゼ活性を決定するために、10μlの試料を、PierceガウシアルシフェラーゼFlashアッセイキット（Prod#16159、Thermo Scientific）を用いるルシフェラーゼアッセイに使用した。

INS-1細胞にウイルスをスピンフェクション（800g、1時間、37℃）によって感染させ、次いで新鮮なINS-1増殖培地に交換した。トランスフェクションの72時間後、プロインスリン-NanoLuc発現細胞を選択するために、INS-1細胞を5μg/ml ブラストサイジン (Invitrogen) で7日間処理した。インスリン分泌アッセイのため、細胞（96ウェルのウェル当たり細胞5x10⁴～1x10⁵個）を3mM グルコース KRBB（100μl／ウェル）中で前培養した。次いで細胞を、3 mMを伴うKRBB（100μl／ウェル）中でインキュベートし、次いで連続して、100nM エキセンディン-4を伴うかもしくは伴わない20 mM グルコース、または20mM KClを伴う3mM グルコース（100μl／ウェル）と共にインキュベートした。インスリン分泌レベルの指標としてのガウシアルシフェラーゼ活性を決定するために、10μlの試料を、PierceガウシアルシフェラーゼFlashアッセイキット（Prod#16159、Thermo Scientific）を用いるルシフェラーゼアッセイに使用した。

インビトロでの血管新生化試験
EBM培地 (Ronza, cc-3121) を伴うMatrigel（登録商標）マトリックス 300μlを用いて、ヒト島様オルガノイドを24ウェルプレートの1ウェル中に包埋した。24～72時間以内に、血管新生化が認められた。

hADSCの3D培養およびWNTタンパク質発現
hADSCは、3D培養において起こる自発的な自己組織化中に、Wnt遺伝子、特にWnt5a経路における遺伝子の発現に変化を来す。(図11A)。Wnt5aは、時間経過に伴ってhADSC 3D培養物において発現される、Wntタンパク質の中で主要なタンパク質であることが見出された。（図11B）

実施例5：iPSC由来島オルガノイドの代謝成熟におけるWntタンパク質
PBS、WNT3a (500 ng/ml)、組換えヒト (rh) WNT4 (100 ng/ml)、またはrhWNT5a (400ng/ml) で5日間処理した後のiPSC由来島オルガノイド（21日目、hADSCおよびHUVECとの共培養非存在下で作製されたもの）において、FltpおよびEsrrg遺伝子が発現されることが見出された。（図12A）。図12Bに示されるように、Esrrg遺伝子発現は、支持するhADSCおよびHUVECの非存在下で作製されたhiPSC由来島オルガノイドにおいて、漸増用量のrhWNT4（0、10、25、50、100、200 ng/ml）および rhWNT5a（0、25、50、100、200、400 ng/ml）に応答して誘導された。加えて、酸化的リン酸化に関与するミトコンドリア遺伝子（Cox7a2、Ndufal、Ndufa7）、乳酸脱水素酵素 (Ldha)、ならびにFltp（Wnt／平面内細胞極性 (PCP) のエフェクターおよびレポーター遺伝子）も、支持するhADSCおよびHUVECの非存在下で作製されたhiPSC由来島オルガノイドにおいて、漸増用量のrhWNT4（0、10、25、50、100、200ng/ml）および rhWNT5a（0、25、50、100、200、400ng/ml）に応答して誘導された、（図12C）。ミトコンドリア（Mitotracker；Mito-Red）およびインスリン（インスリン-GFP）のレベルは、PBSまたはWNT4 (100 ng/ml) で8日間処理した後のhiPSC由来島オルガノイド（27日目）において増加していた。（図12D）。ヒトiPSC由来島オルガノイド（27日目）は、PBSまたはWNT4 (100 ng/ml) による8日間の処理後に作製された。（図12E）。インスリン産生は、PBSおよび対照線維芽細胞馴化培地 (50%) と比較して、rhWNT4 (100 ng/ml)、rhWNT5a (400 ng/ml)、または WNT5aを分泌する線維芽細胞の馴化培地 (50%) で8日間処理した後のhiPSC由来島オルガノイド（27日目）において見出された。（図12F～12H)。rhWnt4 (100 ng/ml) で12日間処理したヒトiPSC (hiPSC) 由来島オルガノイド（22日目）は、低グルコースレベル（3mM、「G3mM」）、高グルコースレベル（20mM、「G20mM」）、または高KClレベル（20 mM、「KCL20mM」）に応じて測定されたヒトc-ペプチドの分泌に基づいて、機能的成熟を示した、（図13）。

他の態様
前述の説明から、本明細書に記載される発明に変更および修正を加えて、それを様々な使用および条件に適合させることができることが明らかであろう。そのような態様もまた、以下の特許請求の範囲の範囲内である。

本明細書における変数の任意の定義における要素の一覧の列挙は、任意の単一の要素または列挙された要素の組み合わせ（もしくはサブコンビネーション）としての、その変数の定義を含む。本明細書における態様の列挙は、任意の単一の態様としての、または任意の他の態様もしくはその一部と組み合わせた、その態様を含む。

本明細書において引用される特許および出版物はすべて、個々の特許および出版物が詳細にかつ個別に参照により組み入れられることが示されるのと同程度に、参照により本明細書に組み入れられる。

配列情報
SEQUENCE LISTING
<110> SALK INSTITUTE FOR BIOLOGICAL STUDIES
<120> COMPOSITIONS AND METHODS FOR ORGANOID GENERATION AND DISEASE
MODELING
<150> US 62/341,461
<151> 2016-05-25
<160> 52
<170> PatentIn version 3.5

<210> 1
<211> 609
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 1
Met Lys Trp Val Glu Ser Ile Phe Leu Ile Phe Leu Leu Asn Phe Thr
1 5 10 15
Glu Ser Arg Thr Leu His Arg Asn Glu Tyr Gly Ile Ala Ser Ile Leu
20 25 30
Asp Ser Tyr Gln Cys Thr Ala Glu Ile Ser Leu Ala Asp Leu Ala Thr
35 40 45
Ile Phe Phe Ala Gln Phe Val Gln Glu Ala Thr Tyr Lys Glu Val Ser
50 55 60
Lys Met Val Lys Asp Ala Leu Thr Ala Ile Glu Lys Pro Thr Gly Asp
65 70 75 80
Glu Gln Ser Ser Gly Cys Leu Glu Asn Gln Leu Pro Ala Phe Leu Glu
85 90 95
Glu Leu Cys His Glu Lys Glu Ile Leu Glu Lys Tyr Gly His Ser Asp
100 105 110
Cys Cys Ser Gln Ser Glu Glu Gly Arg His Asn Cys Phe Leu Ala His
115 120 125
Lys Lys Pro Thr Pro Ala Ser Ile Pro Leu Phe Gln Val Pro Glu Pro
130 135 140
Val Thr Ser Cys Glu Ala Tyr Glu Glu Asp Arg Glu Thr Phe Met Asn
145 150 155 160
Lys Phe Ile Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Phe Leu Tyr Ala Pro
165 170 175
Thr Ile Leu Leu Trp Ala Ala Arg Tyr Asp Lys Ile Ile Pro Ser Cys
180 185 190
Cys Lys Ala Glu Asn Ala Val Glu Cys Phe Gln Thr Lys Ala Ala Thr
195 200 205
Val Thr Lys Glu Leu Arg Glu Ser Ser Leu Leu Asn Gln His Ala Cys
210 215 220
Ala Val Met Lys Asn Phe Gly Thr Arg Thr Phe Gln Ala Ile Thr Val
225 230 235 240
Thr Lys Leu Ser Gln Lys Phe Thr Lys Val Asn Phe Thr Glu Ile Gln
245 250 255
Lys Leu Val Leu Asp Val Ala His Val His Glu His Cys Cys Arg Gly
260 265 270
Asp Val Leu Asp Cys Leu Gln Asp Gly Glu Lys Ile Met Ser Tyr Ile
275 280 285
Cys Ser Gln Gln Asp Thr Leu Ser Asn Lys Ile Thr Glu Cys Cys Lys
290 295 300
Leu Thr Thr Leu Glu Arg Gly Gln Cys Ile Ile His Ala Glu Asn Asp
305 310 315 320
Glu Lys Pro Glu Gly Leu Ser Pro Asn Leu Asn Arg Phe Leu Gly Asp
325 330 335
Arg Asp Phe Asn Gln Phe Ser Ser Gly Glu Lys Asn Ile Phe Leu Ala
340 345 350
Ser Phe Val His Glu Tyr Ser Arg Arg His Pro Gln Leu Ala Val Ser
355 360 365
Val Ile Leu Arg Val Ala Lys Gly Tyr Gln Glu Leu Leu Glu Lys Cys
370 375 380
Phe Gln Thr Glu Asn Pro Leu Glu Cys Gln Asp Lys Gly Glu Glu Glu
385 390 395 400
Leu Gln Lys Tyr Ile Gln Glu Ser Gln Ala Leu Ala Lys Arg Ser Cys
405 410 415
Gly Leu Phe Gln Lys Leu Gly Glu Tyr Tyr Leu Gln Asn Ala Phe Leu
420 425 430
Val Ala Tyr Thr Lys Lys Ala Pro Gln Leu Thr Ser Ser Glu Leu Met
435 440 445
Ala Ile Thr Arg Lys Met Ala Ala Thr Ala Ala Thr Cys Cys Gln Leu
450 455 460
Ser Glu Asp Lys Leu Leu Ala Cys Gly Glu Gly Ala Ala Asp Ile Ile
465 470 475 480
Ile Gly His Leu Cys Ile Arg His Glu Met Thr Pro Val Asn Pro Gly
485 490 495
Val Gly Gln Cys Cys Thr Ser Ser Tyr Ala Asn Arg Arg Pro Cys Phe
500 505 510
Ser Ser Leu Val Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Pro Ala Phe Ser Asp
515 520 525
Asp Lys Phe Ile Phe His Lys Asp Leu Cys Gln Ala Gln Gly Val Ala
530 535 540
Leu Gln Thr Met Lys Gln Glu Phe Leu Ile Asn Leu Val Lys Gln Lys
545 550 555 560
Pro Gln Ile Thr Glu Glu Gln Leu Glu Ala Val Ile Ala Asp Phe Ser
565 570 575
Gly Leu Leu Glu Lys Cys Cys Gln Gly Gln Glu Gln Glu Val Cys Phe
580 585 590
Ala Glu Glu Gly Gln Lys Leu Ile Ser Lys Thr Arg Ala Ala Leu Gly
595 600 605
Val

<210> 2
<211> 2057
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 2
atattgtgct tccaccactg ccaataacaa aataactagc aaccatgaag tgggtggaat 60
caattttttt aattttccta ctaaatttta ctgaatccag aacactgcat agaaatgaat 120
atggaatagc ttccatattg gattcttacc aatgtactgc agagataagt ttagctgacc 180
tggctaccat attttttgcc cagtttgttc aagaagccac ttacaaggaa gtaagcaaaa 240
tggtgaaaga tgcattgact gcaattgaga aacccactgg agatgaacag tcttcagggt 300
gtttagaaaa ccagctacct gcctttctgg aagaactttg ccatgagaaa gaaattttgg 360
agaagtacgg acattcagac tgctgcagcc aaagtgaaga gggaagacat aactgttttc 420
ttgcacacaa aaagcccact ccagcatcga tcccactttt ccaagttcca gaacctgtca 480
caagctgtga agcatatgaa gaagacaggg agacattcat gaacaaattc atttatgaga 540
tagcaagaag gcatcccttc ctgtatgcac ctacaattct tctttgggct gctcgctatg 600
acaaaataat tccatcttgc tgcaaagctg aaaatgcagt tgaatgcttc caaacaaagg 660
cagcaacagt tacaaaagaa ttaagagaaa gcagcttgtt aaatcaacat gcatgtgcag 720
taatgaaaaa ttttgggacc cgaactttcc aagccataac tgttactaaa ctgagtcaga 780
agtttaccaa agttaatttt actgaaatcc agaaactagt cctggatgtg gcccatgtac 840
atgagcactg ttgcagagga gatgtgctgg attgtctgca ggatggggaa aaaatcatgt 900
cctacatatg ttctcaacaa gacactctgt caaacaaaat aacagaatgc tgcaaactga 960
ccacgctgga acgtggtcaa tgtataattc atgcagaaaa tgatgaaaaa cctgaaggtc 1020
tatctccaaa tctaaacagg tttttaggag atagagattt taaccaattt tcttcagggg 1080
aaaaaaatat cttcttggca agttttgttc atgaatattc aagaagacat cctcagcttg 1140
ctgtctcagt aattctaaga gttgctaaag gataccagga gttattggag aagtgtttcc 1200
agactgaaaa ccctcttgaa tgccaagata aaggagaaga agaattacag aaatacatcc 1260
aggagagcca agcattggca aagcgaagct gcggcctctt ccagaaacta ggagaatatt 1320
acttacaaaa tgcgtttctc gttgcttaca caaagaaagc cccccagctg acctcgtcgg 1380
agctgatggc catcaccaga aaaatggcag ccacagcagc cacttgttgc caactcagtg 1440
aggacaaact attggcctgt ggcgagggag cggctgacat tattatcgga cacttatgta 1500
tcagacatga aatgactcca gtaaaccctg gtgttggcca gtgctgcact tcttcatatg 1560
ccaacaggag gccatgcttc agcagcttgg tggtggatga aacatatgtc cctcctgcat 1620
tctctgatga caagttcatt ttccataagg atctgtgcca agctcagggt gtagcgctgc 1680
aaacgatgaa gcaagagttt ctcattaacc ttgtgaagca aaagccacaa ataacagagg 1740
aacaacttga ggctgtcatt gcagatttct caggcctgtt ggagaaatgc tgccaaggcc 1800
aggaacagga agtctgcttt gctgaagagg gacaaaaact gatttcaaaa actcgtgctg 1860
ctttgggagt ttaaattact tcaggggaag agaagacaaa acgagtcttt cattcggtgt 1920
gaacttttct ctttaatttt aactgattta acactttttg tgaattaatg aaatgataaa 1980
gacttttatg tgagatttcc ttatcacaga aataaaatat ctccaaatgt ttccttttca 2040
aaaaaaaaaa aaaaaaa 2057

<210> 3
<211> 609
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 3
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15
Tyr Ser Arg Gly Val Phe Arg Arg Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala
20 25 30
His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu
35 40 45
Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val
50 55 60
Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp
65 70 75 80
Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp
85 90 95
Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala
100 105 110
Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln
115 120 125
His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val
130 135 140
Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys
145 150 155 160
Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro
165 170 175
Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys
180 185 190
Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu
195 200 205
Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys
210 215 220
Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val
225 230 235 240
Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser
245 250 255
Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val His Thr Glu Cys Cys His Gly
260 265 270
Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile
275 280 285
Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu
290 295 300
Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp
305 310 315 320
Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser
325 330 335
Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly
340 345 350
Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val
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Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys
370 375 380
Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu
385 390 395 400
Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys
405 410 415
Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu
420 425 430
Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val
435 440 445
Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His
450 455 460
Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val
465 470 475 480
Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg
485 490 495
Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe
500 505 510
Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala
515 520 525
Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu
530 535 540
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Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala
565 570 575
Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe
580 585 590
Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly
595 600 605
Leu

<210> 4
<211> 2264
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 4
agtatattag tgctaatttc cctccgtttg tcctagcttt tctcttctgt caaccccaca 60
cgcctttggc acaatgaagt gggtaacctt tatttccctt ctttttctct ttagctcggc 120
ttattccagg ggtgtgtttc gtcgagatgc acacaagagt gaggttgctc atcggtttaa 180
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gcagtgtcca tttgaagatc atgtaaaatt agtgaatgaa gtaactgaat ttgcaaaaac 300
atgtgttgct gatgagtcag ctgaaaattg tgacaaatca cttcataccc tttttggaga 360
caaattatgc acagttgcaa ctcttcgtga aacctatggt gaaatggctg actgctgtgc 420
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cccccgattg gtgagaccag aggttgatgt gatgtgcact gcttttcatg acaatgaaga 540
gacatttttg aaaaaatact tatatgaaat tgccagaaga catccttact tttatgcccc 600
ggaactcctt ttctttgcta aaaggtataa agctgctttt acagaatgtt gccaagctgc 660
tgataaagct gcctgcctgt tgccaaagct cgatgaactt cgggatgaag ggaaggcttc 720
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caagttagtg acagatctta ccaaagtcca cacggaatgc tgccatggag atctgcttga 900
atgtgctgat gacagggcgg accttgccaa gtatatctgt gaaaatcaag attcgatctc 960
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agtggaaaat gatgagatgc ctgctgactt gccttcatta gctgctgatt ttgttgaaag 1080
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agtgttcgat gaatttaaac ctcttgtgga agagcctcag aatttaatca aacaaaattg 1320
tgagcttttt gagcagcttg gagagtacaa attccagaat gcgctattag ttcgttacac 1380
caagaaagta ccccaagtgt caactccaac tcttgtagag gtctcaagaa acctaggaaa 1440
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tctatccgtg gtcctgaacc agttatgtgt gttgcatgag aaaacgccag taagtgacag 1560
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cgtgaaacac aagcccaagg caacaaaaga gcaactgaaa gctgttatgg atgatttcgc 1800
agcttttgta gagaagtgct gcaaggctga cgataaggag acctgctttg ccgaggaggg 1860
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tttctttttc gttggtgtaa agccaacacc ctgtctaaaa aacataaatt tctttaatca 2040
ttttgcctct tttctctgtg cttcaattaa taaaaaatgg aaagaatcta atagagtggt 2100
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agttccagtg ttctctctta ttccacttcg gtagaggatt tctagtttct tgtgggctaa 2220
ttaaataaat cattaatact cttctaaaaa aaaaaaaaaa aaaa 2264

<210> 5
<211> 313
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 5
Met Tyr Val Ser Tyr Leu Leu Asp Lys Asp Val Ser Met Tyr Pro Ser
1 5 10 15
Ser Val Arg His Ser Gly Gly Leu Asn Leu Ala Pro Gln Asn Phe Val
20 25 30
Ser Pro Pro Gln Tyr Pro Asp Tyr Gly Gly Tyr His Val Ala Ala Ala
35 40 45
Ala Ala Ala Ala Ala Asn Leu Asp Ser Ala Gln Ser Pro Gly Pro Ser
50 55 60
Trp Pro Ala Ala Tyr Gly Ala Pro Leu Arg Glu Asp Trp Asn Gly Tyr
65 70 75 80
Ala Pro Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Asn Ala Val Ala His Gly Leu
85 90 95
Asn Gly Gly Ser Pro Ala Ala Ala Met Gly Tyr Ser Ser Pro Ala Asp
100 105 110
Tyr His Pro His His His Pro His His His Pro His His Pro Ala Ala
115 120 125
Ala Pro Ser Cys Ala Ser Gly Leu Leu Gln Thr Leu Asn Pro Gly Pro
130 135 140
Pro Gly Pro Ala Ala Thr Ala Ala Ala Glu Gln Leu Ser Pro Gly Gly
145 150 155 160
Gln Arg Arg Asn Leu Cys Glu Trp Met Arg Lys Pro Ala Gln Gln Ser
165 170 175
Leu Gly Ser Gln Val Lys Thr Arg Thr Lys Asp Lys Tyr Arg Val Val
180 185 190
Tyr Thr Asp His Gln Arg Leu Glu Leu Glu Lys Glu Phe His Tyr Ser
195 200 205
Arg Tyr Ile Thr Ile Arg Arg Lys Ala Glu Leu Ala Ala Thr Leu Gly
210 215 220
Leu Ser Glu Arg Gln Val Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Ala Lys
225 230 235 240
Glu Arg Lys Ile Asn Lys Lys Lys Leu Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln
245 250 255
Pro Pro Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gln Pro Pro Gln Pro Gln Pro
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Gly Pro Leu Arg Ser Val Pro Glu Pro Leu Ser Pro Val Ser Ser Leu
275 280 285
Gln Ala Ser Val Ser Gly Ser Val Pro Gly Val Leu Gly Pro Thr Gly
290 295 300
Gly Val Leu Asn Pro Thr Val Thr Gln
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<210> 6
<211> 2370
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 6
ctccaaccat tggtgtctgt gtcattacta atagagtctt gtaaacactc gttaatcacg 60
gaaggccgcc ggcctggggc tccgcacgcc agcctgtggc gggtcttccc cgcctctgca 120
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ggcagcctcc agcgtcggtc cccaggcagc atggtgaggt ctgctcccgg accctcgcca 360
ccatgtacgt gagctacctc ctggacaagg acgtgagcat gtaccctagc tccgtgcgcc 420
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tcagattctg tatttatctt cagattttgt ctgcaactat tttttatttt ttaaagaaat 2340
gaaatatctt caaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2370

<210> 7
<211> 503
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 7
Met Asp Leu Ile Pro Asn Leu Ala Val Glu Thr Trp Leu Leu Leu Ala
1 5 10 15
Val Ser Leu Ile Leu Leu Tyr Leu Tyr Gly Thr Arg Thr His Gly Leu
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Phe Lys Lys Leu Gly Ile Pro Gly Pro Thr Pro Leu Pro Phe Leu Gly
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Asn Ala Leu Ser Phe Arg Lys Gly Tyr Trp Thr Phe Asp Met Glu Cys
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Tyr Lys Lys Tyr Arg Lys Val Trp Gly Ile Tyr Asp Cys Gln Gln Pro
65 70 75 80
Met Leu Ala Ile Thr Asp Pro Asp Met Ile Lys Thr Val Leu Val Lys
85 90 95
Glu Cys Tyr Ser Val Phe Thr Asn Arg Arg Pro Phe Gly Pro Val Gly
100 105 110
Phe Met Lys Asn Ala Ile Ser Ile Ala Glu Asp Glu Glu Trp Lys Arg
115 120 125
Ile Arg Ser Leu Leu Ser Pro Thr Phe Thr Ser Gly Lys Leu Lys Glu
130 135 140
Met Val Pro Ile Ile Ala Gln Tyr Gly Asp Val Leu Val Arg Asn Leu
145 150 155 160
Arg Arg Glu Ala Glu Thr Gly Lys Pro Val Thr Leu Lys His Val Phe
165 170 175
Gly Ala Tyr Ser Met Asp Val Ile Thr Ser Thr Ser Phe Gly Val Ser
180 185 190
Ile Asp Ser Leu Asn Asn Pro Gln Asp Pro Phe Val Glu Asn Thr Lys
195 200 205
Lys Leu Leu Arg Phe Asn Pro Leu Asp Pro Phe Val Leu Ser Ile Lys
210 215 220
Val Phe Pro Phe Leu Thr Pro Ile Leu Glu Ala Leu Asn Ile Thr Val
225 230 235 240
Phe Pro Arg Lys Val Ile Ser Phe Leu Thr Lys Ser Val Lys Gln Ile
245 250 255
Lys Glu Gly Arg Leu Lys Glu Thr Gln Lys His Arg Val Asp Phe Leu
260 265 270
Gln Leu Met Ile Asp Ser Gln Asn Ser Lys Asp Ser Glu Thr His Lys
275 280 285
Ala Leu Ser Asp Leu Glu Leu Met Ala Gln Ser Ile Ile Phe Ile Phe
290 295 300
Ala Gly Tyr Glu Thr Thr Ser Ser Val Leu Ser Phe Ile Ile Tyr Glu
305 310 315 320
Leu Ala Thr His Pro Asp Val Gln Gln Lys Val Gln Lys Glu Ile Asp
325 330 335
Thr Val Leu Pro Asn Lys Ala Pro Pro Thr Tyr Asp Thr Val Leu Gln
340 345 350
Leu Glu Tyr Leu Asp Met Val Val Asn Glu Thr Leu Arg Leu Phe Pro
355 360 365
Val Ala Met Arg Leu Glu Arg Val Cys Lys Lys Asp Val Glu Ile Asn
370 375 380
Gly Met Phe Ile Pro Lys Gly Val Val Val Met Ile Pro Ser Tyr Val
385 390 395 400
Leu His His Asp Pro Lys Tyr Trp Thr Glu Pro Glu Lys Phe Leu Pro
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Glu Arg Phe Ser Lys Lys Asn Lys Asp Asn Ile Asp Pro Tyr Ile Tyr
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Thr Pro Phe Gly Ser Gly Pro Arg Asn Cys Ile Gly Met Arg Phe Ala
435 440 445
Leu Val Asn Met Lys Leu Ala Leu Val Arg Val Leu Gln Asn Phe Ser
450 455 460
Phe Lys Pro Cys Lys Glu Thr Gln Ile Pro Leu Lys Leu Arg Phe Gly
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500

<210> 8
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<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 8
aatcactgct gtgcagggca ggaaagctcc acacacacag cccagcaaac agcagcacgc 60
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atggaacccg tacacatgga ctttttaaga agcttggaat tccagggccc acacctctgc 240
cttttttggg aaatgctttg tccttccgta agggctattg gacgtttgac atggaatgtt 300
ataaaaagta tagaaaagtc tggggtattt atgactgtca acagcctatg ctggctatca 360
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ctagcacatc atttggagtg agcatcgact ctctcaacaa tccacaagac ccctttgtgg 720
aaaacaccaa gaagctttta agatttaatc cattagatcc attcgttctc tcaataaaag 780
tctttccatt ccttacccca attcttgaag cattaaatat cactgtgttt ccaagaaaag 840
ttataagttt tctaacaaaa tctgtaaaac agataaaaga aggtcgcctc aaagagacac 900
aaaagcaccg agtggatttc cttcagctga tgattgactc tcagaattca aaagactctg 960
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ctggctatga aaccacgagc agtgttctct ccttcattat atatgaactg gccactcacc 1080
ctgatgtcca gcagaaagtg cagaaggaaa ttgatacagt tttacccaat aaggcaccac 1140
ccacctatga tactgtgcta cagttggagt atcttgacat ggtggtgaat gaaacactca 1200
gattattccc agttgctatg agacttgaga gggtctgcaa aaaagatgtt gaaatcaatg 1260
ggatgtttat tcccaaaggg gtggtggtga tgattccaag ctatgttctt catcatgacc 1320
caaagtactg gacagagcct gagaagttcc tccctgaaag gttcagtaaa aagaacaagg 1380
acaacataga tccttacata tacacaccct ttggaagtgg acccagaaac tgcattggca 1440
tgaggtttgc tctcgtgaac atgaaacttg ctctagtcag agtccttcag aacttctcct 1500
tcaaaccttg taaagaaaca cagatccccc tgaaattacg ctttggagga cttcttctaa 1560
cagaaaaacc cattgttcta aaggctgagt caagggatga gaccgtaagt ggagcctgat 1620
ttccctaagg acttctggtt tgctctttaa gaaagctgtg ccccagaaca ccagagacct 1680
caaattactt tacaaataga accctgaaat gaagacgggc ttcatccaat gtgctgcata 1740
aataatcagg gattctgtac gtgcattgtg ctctctcatg gtctgtatag agtgttatac 1800
ttggtaatat agaggagatg accaaatcag tgctggggaa gtagatttgg cttctctgct 1860
tctcatagga ctatctccac cacccccagt tagcaccatt aactcctcct gagctctgat 1920
aacataatta acatttctca ataatttcaa ccacaatcat taataaaaat aggaattatt 1980
ttgatggctc taacagtgac atttatatca tgtgttatat ctgtagtatt ctatagtaag 2040
ctttatatta agcaaatcaa taaaaacctc tttacaaaag taaaaaaaaa aaaaaaaaa 2099

<210> 9
<211> 435
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 9
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1 5 10 15
Lys Thr Glu Pro Ser Ser Pro Ala Ser Leu Thr Asp Ser Val Asn His
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35 40 45
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Cys Ser Ser Thr Ile Val Glu Asp Pro Gln Thr Lys Cys Glu Tyr Met
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Leu Asn Ser Met Pro Lys Arg Leu Cys Leu Val Cys Gly Asp Ile Ala
100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
Leu Asp Arg Val Arg Gly Gly Arg Gln Lys Tyr Lys Arg Arg Ile Asp
180 185 190
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195 200 205
Lys Pro Tyr Asn Lys Ile Val Ser His Leu Leu Val Ala Glu Pro Glu
210 215 220
Lys Ile Tyr Ala Met Pro Asp Pro Thr Val Pro Asp Ser Asp Ile Lys
225 230 235 240
Ala Leu Thr Thr Leu Cys Asp Leu Ala Asp Arg Glu Leu Val Val Ile
245 250 255
Ile Gly Trp Ala Lys His Ile Pro Gly Phe Ser Thr Leu Ser Leu Ala
260 265 270
Asp Gln Met Ser Leu Leu Gln Ser Ala Trp Met Glu Ile Leu Ile Leu
275 280 285
Gly Val Val Tyr Arg Ser Leu Ser Phe Glu Asp Glu Leu Val Tyr Ala
290 295 300
Asp Asp Tyr Ile Met Asp Glu Asp Gln Ser Lys Leu Ala Gly Leu Leu
305 310 315 320
Asp Leu Asn Asn Ala Ile Leu Gln Leu Val Lys Lys Tyr Lys Ser Met
325 330 335
Lys Leu Glu Lys Glu Glu Phe Val Thr Leu Lys Ala Ile Ala Leu Ala
340 345 350
Asn Ser Asp Ser Met His Ile Glu Asp Val Glu Ala Val Gln Lys Leu
355 360 365
Gln Asp Val Leu His Glu Ala Leu Gln Asp Tyr Glu Ala Gly Gln His
370 375 380
Met Glu Asp Pro Arg Arg Ala Gly Lys Met Leu Met Thr Leu Pro Leu
385 390 395 400
Leu Arg Gln Thr Ser Thr Lys Ala Val Gln His Phe Tyr Asn Ile Lys
405 410 415
Leu Glu Gly Lys Val Pro Met His Lys Leu Phe Leu Glu Met Leu Glu
420 425 430
Ala Lys Val
435

<210> 10
<211> 5559
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 10
aagctccaat cggggcttta agtccttgat taggagagtg tgagagcttt ggtcccaact 60
ggctgtgcct ataggcttgt cactaggaga acatttgtgt taattgcact gtgctctgtc 120
aaggaaactt tgatttatag ctggggtgca caaataatgg ttgccggtcg cacatggatt 180
cggtagaact ttgccttcct gaatcttttt ccctgcacta cgaggaagag tagacttgaa 240
tgagacctgc ctcatcagtc atgggatcat agtgtcacag atggaaaagc aactatcagc 300
tgaattgtac tgaactacac acttggctaa ttcatcttat tgctctacac atctaaagga 360
aggctcattc tgttcttgga gtctagacag catcaggagt tgggctcagt gaacaaaact 420
ttaatgtcta gagcatttat gagggtttta atgattggaa aatctatcct gagaatgtgg 480
tcaccatatg tgacagcctt gctttctatc ttgtcttcag tttctggggc ttctctgcag 540
aatgtcaaac aaagatcgac acattgattc cagctgttcg tccttcatca agacggaacc 600
ttccagccca gcctccctga cggacagcgt caaccaccac agccctggtg gctcttcaga 660
cgccagtggg agctacagtt caaccatgaa tggccatcag aacggacttg actcgccacc 720
tctctaccct tctgctccta tcctgggagg tagtgggcct gtcaggaaac tgtatgatga 780
ctgctccagc accattgttg aagatcccca gaccaagtgt gaatacatgc tcaactcgat 840
gcccaagaga ctgtgtttag tgtgtggtga catcgcttct gggtaccact atggggtagc 900
atcatgtgaa gcctgcaagg cattcttcaa gaggacaatt caaggcaata tagaatacag 960
ctgccctgcc acgaatgaat gtgaaatcac aaagcgcaga cgtaaatcct gccaggcttg 1020
ccgcttcatg aagtgtttaa aagtgggcat gctgaaagaa ggggtgcgtc ttgacagagt 1080
acgtggaggt cggcagaagt acaagcgcag gatagatgcg gagaacagcc catacctgaa 1140
ccctcagctg gttcagccag ccaaaaagcc atataacaag attgtctcac atttgttggt 1200
ggctgaaccg gagaagatct atgccatgcc tgaccctact gtccccgaca gtgacatcaa 1260
agccctcact acactgtgtg acttggccga ccgagagttg gtggttatca ttggatgggc 1320
gaagcatatt ccaggcttct ccacgctgtc cctggcggac cagatgagcc ttctgcagag 1380
tgcttggatg gaaattttga tccttggtgt cgtataccgg tctctttcgt ttgaggatga 1440
acttgtctat gcagacgatt atataatgga cgaagaccag tccaaattag caggccttct 1500
tgatctaaat aatgctatcc tgcagctggt aaagaaatac aagagcatga agctggaaaa 1560
agaagaattt gtcaccctca aagctatagc tcttgctaat tcagactcca tgcacataga 1620
agatgttgaa gccgttcaga agcttcagga tgtcttacat gaagcgctgc aggattatga 1680
agctggccag cacatggaag accctcgtcg agctggcaag atgctgatga cactgccact 1740
cctgaggcag acctctacca aggccgtgca gcatttctac aacatcaaac tagaaggcaa 1800
agtcccaatg cacaaacttt ttttggaaat gttggaggcc aaggtctgac taaaagctcc 1860
ctgggccttc ccatccttca tgttgaaaaa gggaaaataa acccaagagt gatgtcgaag 1920
aaacttagag tttagttaac aacatcaaaa atcaacagac tgcactgata atttagcagc 1980
aagactatga agcagctttc agattcctcc ataggttcct gatgagtttc tttctacttt 2040
ctccatcatc ttctttcctc tttcttccca catttctctt tctctttatt ttttctcctt 2100
ttcttctttc acctccctta tttctttgct tctttcattc ctagttccca ttctccttta 2160
ttttcttccc gtctgcctgc cttctttctt ttctttacct actctcattc ctctcttttc 2220
tcatccttcc ccttttttct aaatttgaaa tagctttagt ttaaaaaaaa atcctccctt 2280
ccccctttcc tttccctttc tttccttttt ccctttcctt ttccctttcc tttcctttcc 2340
tcttgacctt ctttccatct ttctttttct tccttctgct gctgaacttt taaaagaggt 2400
ctctaactga agagagatgg aagccagccc tgccaaagga tggagatcca taatatggat 2460
gccagtgaac ttattgtgaa ccatactgtc cccaatgact aaggaatcaa agagagagaa 2520
ccaacgttcc taaaagtaca gtgcaacata tacaaattga ctgagtgcag tattagattt 2580
catgggagca gcctctaatt agacaactta agcaacgttg catcggctgc ttcttatcat 2640
tgcttttcca tctagatcag ttacagccat ttgattcctt aattgttttt tcaagtcttc 2700
caggtatttg ttagtttagc tactatgtaa ctttttcagg gaatagttta agctttattc 2760
attcatgcaa tactaaagag aaataagaat actgcaattt tgtgctggct ttgaacaatt 2820
acgaacaata atgaaggaca aatgaatcct gaaggaagat ttttaaaaat gttttgtttc 2880
ttcttacaaa tggagatttt tttgtaccag ctttaccact tttcagccat ttattaatat 2940
gggaatttaa cttactcaag caatagttga agggaaggtg catattatca cggatgcaat 3000
ttatgttgtg tgccagtctg gtcccaaaca tcaatttctt aacatgagct ccagtttacc 3060
taaatgttca ctgacacaaa ggatgagatt acacctacag tgactctgag tagtcacata 3120
tataagcact gcacatgaga tatagatccg tagaattgtc aggagtgcac ctctctactt 3180
gggaggtaca attgccatat gatttctagc tgccatggtg gttaggaatg tgatactgcc 3240
tgtttgcaaa gtcacagacc ttgcctcaga aggagctgtg agccagtatt catttaagag 3300
gcaataaggc aaatgccaga attaaaaaaa aaaatcatca aagacagaaa atgcctgacc 3360
aaattctaaa acctaatcca tataagttta ttcatttagg aatgttcgtt taaattaatc 3420
tgcagttttt accaagagct aagccaatat atgtgctttt caaccagtat tgtcacagca 3480
tgaaagtcaa gtcaggttcc agactgttaa gaggtgtaat ctaatgaaga aatcaattag 3540
atgccccgaa atctacagtc gctgaataac caataaacag taacctccat caaatgctat 3600
accaatggac cagtgttagt agctgctccc tgtattatgt gaacagtctt attctatgta 3660
cacagatgta attaaaattg taatcctaac aaacaaaaga aatgtagttc agcttttcaa 3720
tgtttcatgt ttgctgtgct tttctgaatt ttatgttgca ttcaaagact gttgtcttgt 3780
tcttgtggtg tttggattct tgtggtgtgt gcttttagac acagggtaga attagagaca 3840
atattggatg tacaattcct caggagacta cagtagtata ttctattcct taccagtaat 3900
aaggttcttc ctaataataa ttaagagatt gaaactccaa acaagtattc attatgaaca 3960
gatacacatc aaaatcataa taatattttc aaaacaagga ataatttctc taatggttta 4020
ttatagaata ccaatgtata gcttagaaat aaaactttga atatttcaag aatatagata 4080
agtctaattt ttaaatgctg tatatatggc tttcactcaa tcatctctca gatgttgtta 4140
ttaactcgct ctgtgttgtt gcaaaacttt ttggtgcaga ttcgtttcca aaactattgc 4200
tactttgtgt gctttaaaca aaataccttg ggttgatgaa acatcaaccc agtgctagga 4260
atactgtgta tctatcatta gctatatggg actatattgt agattgtggt ttctcagtag 4320
agaagtgact gtagtgtgat tctagataaa tcatcattag caattcattc agatggtcaa 4380
taacttgaaa tttatagctg tgataggagt tcagaaattg gcacatccct ttaaaaataa 4440
caacagaaaa tacaactcct gggaaaaaag gtgctgattc tataagatta tttatatatg 4500
taagtgttta aaaagattat tttccagaaa gtttgtgcag ggtttaagtt gctactattc 4560
aactacacta tatataaata aaatatatac aatatataca ttgttttcac tgtatcacat 4620
taaagtactt gggcttcaga agtaagagcc aaccaactga aaacctgaga tggagatatg 4680
ttcaaagaat gagatacaat tttttagttt tcagtttaag taactctcag cattacaaaa 4740
gagtaagtat ctcacaaata ggaaataaaa ctaaaacgtg gatttaaaaa gaactgcacg 4800
ggctttaggg taaatgctca tcttaaacct cactagaggg aagtcttctc aagtttcaag 4860
caagaccatt tacttaatgt gaagttttgg aaagttataa aggtgtatgt tttagccata 4920
tgattttaat tttaattttg cttcttttag gttcgttctt atttaaagca atatgattgt 4980
gtgactcctt gtagttacac ttgtgtttca atcagatcag attgttgtat ttattccact 5040
attttgcatt taaatgataa cataaaagat ataaaaaatt taaaactgct atttttctta 5100
tagaagagaa aatgggtgtt ggtgattgta ttttaattat ttaagcgtct ctgtttacct 5160
gcctaggaaa acattttatg gcagtcttat gtgcaaagat cgtaaaagga caaaaaattt 5220
aaactgctta taataatcca ggagttgcat tatagccagt agtaaaaata ataataataa 5280
taataaaacc atgtctatag ctgtagatgg gcttcacatc tgtaaagcaa tcaattgtat 5340
atttttgtga tgtgtaccat actgtgtgct ccagcaaatg tccatttgtg taaatgtatt 5400
tattttatat tgtatatatt gttaaatgca aaaaggagat atgattctgt aactccaatc 5460
agttcagatg tgtaactcaa attattatgc ctttcaggat gatggtagag caatattaaa 5520
caagcttcca cttttgactg ctaaaaaaaa aaaaaaaaa 5559

<210> 11
<211> 463
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 11
Met His Ser Ala Ser Ser Met Leu Gly Ala Val Lys Met Glu Gly His
1 5 10 15
Glu Pro Ser Asp Trp Ser Ser Tyr Tyr Ala Glu Pro Glu Gly Tyr Ser
20 25 30
Ser Val Ser Asn Met Asn Ala Gly Leu Gly Met Asn Gly Met Asn Thr
35 40 45
Tyr Met Ser Met Ser Ala Ala Ala Met Gly Ser Gly Ser Gly Asn Met
50 55 60
Ser Ala Gly Ser Met Asn Met Ser Ser Tyr Val Gly Ala Gly Met Ser
65 70 75 80
Pro Ser Leu Ala Gly Met Ser Pro Gly Ala Gly Ala Met Ala Gly Met
85 90 95
Gly Gly Ser Ala Gly Ala Ala Gly Val Ala Gly Met Gly Pro His Leu
100 105 110
Ser Pro Ser Leu Ser Pro Leu Gly Gly Gln Ala Ala Gly Ala Met Gly
115 120 125
Gly Leu Ala Pro Tyr Ala Asn Met Asn Ser Met Ser Pro Met Tyr Gly
130 135 140
Gln Ala Gly Leu Ser Arg Ala Arg Asp Pro Lys Thr Tyr Arg Arg Ser
145 150 155 160
Tyr Thr His Ala Lys Pro Pro Tyr Ser Tyr Ile Ser Leu Ile Thr Met
165 170 175
Ala Ile Gln Gln Ser Pro Asn Lys Met Leu Thr Leu Ser Glu Ile Tyr
180 185 190
Gln Trp Ile Met Asp Leu Phe Pro Phe Tyr Arg Gln Asn Gln Gln Arg
195 200 205
Trp Gln Asn Ser Ile Arg His Ser Leu Ser Phe Asn Asp Cys Phe Leu
210 215 220
Lys Val Pro Arg Ser Pro Asp Lys Pro Gly Lys Gly Ser Phe Trp Thr
225 230 235 240
Leu His Pro Asp Ser Gly Asn Met Phe Glu Asn Gly Cys Tyr Leu Arg
245 250 255
Arg Gln Lys Arg Phe Lys Cys Glu Lys Gln Leu Ala Leu Lys Glu Ala
260 265 270
Ala Gly Ala Ala Gly Ser Gly Lys Lys Ala Ala Ala Gly Ala Gln Ala
275 280 285
Ser Gln Ala Gln Leu Gly Glu Ala Ala Gly Pro Ala Ser Glu Thr Pro
290 295 300
Ala Gly Thr Glu Ser Pro His Ser Ser Ala Ser Pro Cys Gln Glu His
305 310 315 320
Lys Arg Gly Gly Leu Gly Glu Leu Lys Gly Thr Pro Ala Ala Ala Leu
325 330 335
Ser Pro Pro Glu Pro Ala Pro Ser Pro Gly Gln Gln Gln Gln Ala Ala
340 345 350
Ala His Leu Leu Gly Pro Pro His His Pro Gly Leu Pro Pro Glu Ala
355 360 365
His Leu Lys Pro Glu His His Tyr Ala Phe Asn His Pro Phe Ser Ile
370 375 380
Asn Asn Leu Met Ser Ser Glu Gln Gln His His His Ser His His His
385 390 395 400
His Gln Pro His Lys Met Asp Leu Lys Ala Tyr Glu Gln Val Met His
405 410 415
Tyr Pro Gly Tyr Gly Ser Pro Met Pro Gly Ser Leu Ala Met Gly Pro
420 425 430
Val Thr Asn Lys Thr Gly Leu Asp Ala Ser Pro Leu Ala Ala Asp Thr
435 440 445
Ser Tyr Tyr Gln Gly Val Tyr Ser Arg Pro Ile Met Asn Ser Ser
450 455 460

<210> 12
<211> 2428
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 12
cccgcccact tccaactacc gcctccggcc tgcccaggga gagagaggga gtggagccca 60
gggagaggga gcgcgagaga gggagggagg aggggacggt gctttggctg actttttttt 120
aaaagagggt gggggtgggg ggtgattgct ggtcgtttgt tgtggctgtt aaattttaaa 180
ctgccatgca ctcggcttcc agtatgctgg gagcggtgaa gatggaaggg cacgagccgt 240
ccgactggag cagctactat gcagagcccg agggctactc ctccgtgagc aacatgaacg 300
ccggcctggg gatgaacggc atgaacacgt acatgagcat gtcggcggcc gccatgggca 360
gcggctcggg caacatgagc gcgggctcca tgaacatgtc gtcgtacgtg ggcgctggca 420
tgagcccgtc cctggcgggg atgtcccccg gcgcgggcgc catggcgggc atgggcggct 480
cggccggggc ggccggcgtg gcgggcatgg ggccgcactt gagtcccagc ctgagcccgc 540
tcggggggca ggcggccggg gccatgggcg gcctggcccc ctacgccaac atgaactcca 600
tgagccccat gtacgggcag gcgggcctga gccgcgcccg cgaccccaag acctacaggc 660
gcagctacac gcacgcaaag ccgccctact cgtacatctc gctcatcacc atggccatcc 720
agcagagccc caacaagatg ctgacgctga gcgagatcta ccagtggatc atggacctct 780
tccccttcta ccggcagaac cagcagcgct ggcagaactc catccgccac tcgctctcct 840
tcaacgactg tttcctgaag gtgccccgct cgcccgacaa gcccggcaag ggctccttct 900
ggaccctgca ccctgactcg ggcaacatgt tcgagaacgg ctgctacctg cgccgccaga 960
agcgcttcaa gtgcgagaag cagctggcgc tgaaggaggc cgcaggcgcc gccggcagcg 1020
gcaagaaggc ggccgccgga gcccaggcct cacaggctca actcggggag gccgccgggc 1080
cggcctccga gactccggcg ggcaccgagt cgcctcactc gagcgcctcc ccgtgccagg 1140
agcacaagcg agggggcctg ggagagctga aggggacgcc ggctgcggcg ctgagccccc 1200
cagagccggc gccctctccc gggcagcagc agcaggccgc ggcccacctg ctgggcccgc 1260
cccaccaccc gggcctgccg cctgaggccc acctgaagcc ggaacaccac tacgccttca 1320
accacccgtt ctccatcaac aacctcatgt cctcggagca gcagcaccac cacagccacc 1380
accaccacca accccacaaa atggacctca aggcctacga acaggtgatg cactaccccg 1440
gctacggttc ccccatgcct ggcagcttgg ccatgggccc ggtcacgaac aaaacgggcc 1500
tggacgcctc gcccctggcc gcagatacct cctactacca gggggtgtac tcccggccca 1560
ttatgaactc ctcttaagaa gacgacggct tcaggcccgg ctaactctgg caccccggat 1620
cgaggacaag tgagagagca agtgggggtc gagactttgg ggagacggtg ttgcagagac 1680
gcaagggaga agaaatccat aacaccccca ccccaacacc cccaagacag cagtcttctt 1740
cacccgctgc agccgttccg tcccaaacag agggccacac agatacccca cgttctatat 1800
aaggaggaaa acgggaaaga atataaagtt aaaaaaaagc ctccggtttc cactactgtg 1860
tagactcctg cttcttcaag cacctgcaga ttctgatttt tttgttgttg ttgttctcct 1920
ccattgctgt tgttgcaggg aagtcttact taaaaaaaaa aaaaaatttt gtgagtgact 1980
cggtgtaaaa ccatgtagtt ttaacagaac cagagggttg tactattgtt taaaaacagg 2040
aaaaaaaata atgtaagggt ctgttgtaaa tgaccaagaa aaagaaaaaa aaagcattcc 2100
caatcttgac acggtgaaat ccaggtctcg ggtccgatta atttatggtt tctgcgtgct 2160
ttatttatgg cttataaatg tgtattctgg ctgcaagggc cagagttcca caaatctata 2220
ttaaagtgtt atacccggtt ttatcccttg aatcttttct tccagatttt tcttttcttt 2280
acttggctta caaaatatac aggcttggaa attatttcaa gaaggaggga gggataccct 2340
gtctggttgc aggttgtatt ttattttggc ccagggagtg ttgctgtttt cccaacattt 2400
tattaataaa attttcagac ataaaaaa 2428

<210> 13
<211> 595
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 13
Met Ala Leu Thr Asp Gly Gly Trp Cys Leu Pro Lys Arg Phe Gly Ala
1 5 10 15
Ala Gly Ala Asp Ala Ser Asp Ser Arg Ala Phe Pro Ala Arg Glu Pro
20 25 30
Ser Thr Pro Pro Ser Pro Ile Ser Ser Ser Ser Ser Ser Cys Ser Arg
35 40 45
Gly Gly Glu Arg Gly Pro Gly Gly Ala Ser Asn Cys Gly Thr Pro Gln
50 55 60
Leu Asp Thr Glu Ala Ala Ala Gly Pro Pro Ala Arg Ser Leu Leu Leu
65 70 75 80
Ser Ser Tyr Ala Ser His Pro Phe Gly Ala Pro His Gly Pro Ser Ala
85 90 95
Pro Gly Val Ala Gly Pro Gly Gly Asn Leu Ser Ser Trp Glu Asp Leu
100 105 110
Leu Leu Phe Thr Asp Leu Asp Gln Ala Ala Thr Ala Ser Lys Leu Leu
115 120 125
Trp Ser Ser Arg Gly Ala Lys Leu Ser Pro Phe Ala Pro Glu Gln Pro
130 135 140
Glu Glu Met Tyr Gln Thr Leu Ala Ala Leu Ser Ser Gln Gly Pro Ala
145 150 155 160
Ala Tyr Asp Gly Ala Pro Gly Gly Phe Val His Ser Ala Ala Ala Ala
165 170 175
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ser Ser Pro Val Tyr Val Pro Thr Thr
180 185 190
Arg Val Gly Ser Met Leu Pro Gly Leu Pro Tyr His Leu Gln Gly Ser
195 200 205
Gly Ser Gly Pro Ala Asn His Ala Gly Gly Ala Gly Ala His Pro Gly
210 215 220
Trp Pro Gln Ala Ser Ala Asp Ser Pro Pro Tyr Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Ala Ala Gly Gly Gly Ala Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gly Ser Ala Ala
245 250 255
Ala His Val Ser Ala Arg Phe Pro Tyr Ser Pro Ser Pro Pro Met Ala
260 265 270
Asn Gly Ala Ala Arg Glu Pro Gly Gly Tyr Ala Ala Ala Gly Ser Gly
275 280 285
Gly Ala Gly Gly Val Ser Gly Gly Gly Ser Ser Leu Ala Ala Met Gly
290 295 300
Gly Arg Glu Pro Gln Tyr Ser Ser Leu Ser Ala Ala Arg Pro Leu Asn
305 310 315 320
Gly Thr Tyr His His His His His His His His His His Pro Ser Pro
325 330 335
Tyr Ser Pro Tyr Val Gly Ala Pro Leu Thr Pro Ala Trp Pro Ala Gly
340 345 350
Pro Phe Glu Thr Pro Val Leu His Ser Leu Gln Ser Arg Ala Gly Ala
355 360 365
Pro Leu Pro Val Pro Arg Gly Pro Ser Ala Asp Leu Leu Glu Asp Leu
370 375 380
Ser Glu Ser Arg Glu Cys Val Asn Cys Gly Ser Ile Gln Thr Pro Leu
385 390 395 400
Trp Arg Arg Asp Gly Thr Gly His Tyr Leu Cys Asn Ala Cys Gly Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Met Asn Gly Leu Ser Arg Pro Leu Ile Lys Pro Gln Lys
420 425 430
Arg Val Pro Ser Ser Arg Arg Leu Gly Leu Ser Cys Ala Asn Cys His
435 440 445
Thr Thr Thr Thr Thr Leu Trp Arg Arg Asn Ala Glu Gly Glu Pro Val
450 455 460
Cys Asn Ala Cys Gly Leu Tyr Met Lys Leu His Gly Val Pro Arg Pro
465 470 475 480
Leu Ala Met Lys Lys Glu Gly Ile Gln Thr Arg Lys Arg Lys Pro Lys
485 490 495
Asn Ile Asn Lys Ser Lys Thr Cys Ser Gly Asn Ser Asn Asn Ser Ile
500 505 510
Pro Met Thr Pro Thr Ser Thr Ser Ser Asn Ser Asp Asp Cys Ser Lys
515 520 525
Asn Thr Ser Pro Thr Thr Gln Pro Thr Ala Ser Gly Ala Gly Ala Pro
530 535 540
Val Met Thr Gly Ala Gly Glu Ser Thr Asn Pro Glu Asn Ser Glu Leu
545 550 555 560
Lys Tyr Ser Gly Gln Asp Gly Leu Tyr Ile Gly Val Ser Leu Ala Ser
565 570 575
Pro Ala Glu Val Thr Ser Ser Val Arg Pro Asp Ser Trp Cys Ala Leu
580 585 590
Ala Leu Ala
595

<210> 14
<211> 3785
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 14
agttccgacc cacagcctgg cacccttcgg cgagcgctgt ttgtttaggg ctcggtgagt 60
ccaatcagga gcccaggctg cagttttccg gcagagcagt aagaggcgcc tcctctctcc 120
tttttattca ccagcagcgc ggcgcagacc ccggactcgc gctcgcccgc tggcgccctc 180
ggcttctctc cgcgcctggg agcaccctcc gccgcggccg ttctccatgc gcagcgcccg 240
cccgaggagc tagacgtcag cttggagcgg cgccggaccg tggatggcct tgactgacgg 300
cggctggtgc ttgccgaagc gcttcggggc cgcgggtgcg gacgccagcg actccagagc 360
ctttccagcg cgggagccct ccacgccgcc ttcccccatc tcttcctcgt cctcctcctg 420
ctcccggggc ggagagcggg gccccggcgg cgccagcaac tgcgggacgc ctcagctcga 480
cacggaggcg gcggccggac ccccggcccg ctcgctgctg ctcagttcct acgcttcgca 540
tcccttcggg gctccccacg gaccttcggc gcctggggtc gcgggccccg ggggcaacct 600
gtcgagctgg gaggacttgc tgctgttcac tgacctcgac caagccgcga ccgccagcaa 660
gctgctgtgg tccagccgcg gcgccaagct gagccccttc gcacccgagc agccggagga 720
gatgtaccag accctcgccg ctctctccag ccagggtccg gccgcctacg acggcgcgcc 780
cggcggcttc gtgcactctg cggccgcggc ggcagcagcc gcggcggcgg ccagctcccc 840
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ggggtcgggc agtgggccag ccaaccacgc gggcggcgcg ggcgcgcacc ccggctggcc 960
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cgcggggcct ggcggcgctg gctcagccgc ggcgcacgtc tcggcgcgct tcccctactc 1080
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cggagccccg ctcccggtgc cccggggtcc cagtgcagac ctgctggagg acctgtccga 1440
gagccgcgag tgcgtgaact gcggctccat ccagacgccg ctgtggcggc gggacggcac 1500
cggccactac ctgtgcaacg cctgcgggct ctacagcaag atgaacggcc tcagccggcc 1560
cctcatcaag ccgcagaagc gcgtgccttc atcacggcgg cttggattgt cctgtgccaa 1620
ctgtcacacc acaactacca ccttatggcg cagaaacgcc gagggtgaac ccgtgtgcaa 1680
tgcttgtgga ctctacatga aactccatgg ggtgcccaga ccacttgcta tgaaaaaaga 1740
gggaattcaa accaggaaac gaaaacctaa gaacataaat aaatcaaaga cttgctctgg 1800
taatagcaat aattccattc ccatgactcc aacttccacc tcttctaact cagatgattg 1860
cagcaaaaat acttccccca caacacaacc tacagcctca ggggcgggtg ccccggtgat 1920
gactggtgcg ggagagagca ccaatcccga gaacagcgag ctcaagtatt cgggtcaaga 1980
tgggctctac ataggcgtca gtctcgcctc gccggccgaa gtcacgtcct ccgtgcgacc 2040
ggattcctgg tgcgccctgg ccctggcctg agcccacgcc gccaggaggc agggagggct 2100
ccgccgcggg cctcactcca ctcgtgtctg cttttgtgca gcggtccaga cagtggcgac 2160
tgcgctgaca gaacgtgatt ctcgtgcctt tattttgaaa gagatgtttt tcccaagagg 2220
cttgctgaaa gagtgagaga agatggaagg gaagggccag tgcaactggg cgcttgggcc 2280
actccagcca gcccgcctcc ggggcggacc ctgctccact tccagaagcc aggactagga 2340
cctgggcctt gcctgctatg gaatattgag agagattttt taaaaaagat tttgcatttt 2400
gtccaaaatc atgtgcttct tctgatcaat tttggttgtt ccagaatttc ttcatacctt 2460
ttccacatcc agatttcatg tgcgttcatg gagaagatca cttgaggcca tttggtacac 2520
atctctggag gctgagtcgg ttcatgaggt ctcttatcaa aaatattact cagtttgcaa 2580
gactgcattg taactttaac atacactgtg actgacgttt ctcaaagttc atattgtgtg 2640
gctgatctga agtcagtcgg aatttgtaaa cagggtagca aacaagatat ttttcttcca 2700
tgtatacaat aattttttta aaaagtgcaa tttgcgttgc agcaatcagt gttaaatcat 2760
ttgcataaga tttaacagca ttttttataa tgaatgtaaa cattttaact taatggtact 2820
taaaataatt taaaagaaaa atgttaactt agacattctt atgcttcttt tacaactaca 2880
tcccatttta tatttccaat tgttaaagaa aaatatttca agaacaaatc ttctctcagg 2940
aaaattgcct ttctctattt gttaagaatt tttatacaag aacaccaata tacccccttt 3000
attttactgt ggaatatgtg ctggaaaaat tgcaacaaca ctttactacc taacggatag 3060
catttgtaaa tactctaggt atctgtaaac actctgatga agtctgtata gtgtgactaa 3120
cccacaggca ggttggttta cattaatttt tttttttgaa tgggatgtcc tatggaaacc 3180
tatttcacca gagttttaaa aataaaaagg gtattgtttt gtcttctgta cagtgagttc 3240
cttccctttt caaagctttc tttttatgct gtatgtgact atagatattc atataaaaca 3300
agtgcacgtg aagtttgcaa aatgctttaa ggccttcctt tcaaagcata gtccttttgg 3360
agccgttttg taccttttat accttggctt atttgaagtt gacacatggg gttagttact 3420
actctccatg tgcattgggg acagttttta taagtgggaa ggactcagta ttattatatt 3480
tgagatgata agcattttgt ttgggaacaa tgcttaaaaa tattccagaa agttcagatt 3540
ttttttcttt gtgaatgaaa tatattctgg cccacgaaca gggcgatttc ctttcagttt 3600
tttccttttg caacgtgcct tgaagtctca aagctcacct gaggttgcag acgttacccc 3660
caacagaaga taggtagaaa tgattccagt ggcctctttg tattttcttc attgttgagt 3720
agatttcagg aaatcaggag gtgtttcaca atacagaatg atggccttta actgtgaaaa 3780
aaaaa 3785

<210> 15
<211> 394
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 15
Met Lys Arg Gln Asn Val Arg Thr Leu Ala Leu Ile Val Cys Thr Phe
1 5 10 15
Thr Tyr Leu Leu Val Gly Ala Ala Val Phe Asp Ala Leu Glu Ser Glu
20 25 30
Pro Glu Leu Ile Glu Arg Gln Arg Leu Glu Leu Arg Gln Gln Glu Leu
35 40 45
Arg Ala Arg Tyr Asn Leu Ser Gln Gly Gly Tyr Glu Glu Leu Glu Arg
50 55 60
Val Val Leu Arg Leu Lys Pro His Lys Ala Gly Val Gln Trp Arg Phe
65 70 75 80
Ala Gly Ser Phe Tyr Phe Ala Ile Thr Val Ile Thr Thr Ile Gly Tyr
85 90 95
Gly His Ala Ala Pro Ser Thr Asp Gly Gly Lys Val Phe Cys Met Phe
100 105 110
Tyr Ala Leu Leu Gly Ile Pro Leu Thr Leu Val Met Phe Gln Ser Leu
115 120 125
Gly Glu Arg Ile Asn Thr Leu Val Arg Tyr Leu Leu His Arg Ala Lys
130 135 140
Lys Gly Leu Gly Met Arg Arg Ala Asp Val Ser Met Ala Asn Met Val
145 150 155 160
Leu Ile Gly Phe Phe Ser Cys Ile Ser Thr Leu Cys Ile Gly Ala Ala
165 170 175
Ala Phe Ser His Tyr Glu His Trp Thr Phe Phe Gln Ala Tyr Tyr Tyr
180 185 190
Cys Phe Ile Thr Leu Thr Thr Ile Gly Phe Gly Asp Tyr Val Ala Leu
195 200 205
Gln Lys Asp Gln Ala Leu Gln Thr Gln Pro Gln Tyr Val Ala Phe Ser
210 215 220
Phe Val Tyr Ile Leu Thr Gly Leu Thr Val Ile Gly Ala Phe Leu Asn
225 230 235 240
Leu Val Val Leu Arg Phe Met Thr Met Asn Ala Glu Asp Glu Lys Arg
245 250 255
Asp Ala Glu His Arg Ala Leu Leu Thr Arg Asn Gly Gln Ala Gly Gly
260 265 270
Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ala His Thr Thr Asp Thr Ala Ser Ser Thr
275 280 285
Ala Ala Ala Gly Gly Gly Gly Phe Arg Asn Val Tyr Ala Glu Val Leu
290 295 300
His Phe Gln Ser Met Cys Ser Cys Leu Trp Tyr Lys Ser Arg Glu Lys
305 310 315 320
Leu Gln Tyr Ser Ile Pro Met Ile Ile Pro Arg Asp Leu Ser Thr Ser
325 330 335
Asp Thr Cys Val Glu Gln Ser His Ser Ser Pro Gly Gly Gly Gly Arg
340 345 350
Tyr Ser Asp Thr Pro Ser Arg Arg Cys Leu Cys Ser Gly Ala Pro Arg
355 360 365
Ser Ala Ile Ser Ser Val Ser Thr Gly Leu His Ser Leu Ser Thr Phe
370 375 380
Arg Gly Leu Met Lys Arg Arg Ser Ser Val
385 390

<210> 16
<211> 3978
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 16
ggcggcggcg gcggcggcgg ccccgggcgc tgagcgggtg cccggcgcgg agagcggcga 60
gcgcagccat gccccaggcc gcctccgggg cagcagcagc ggcggccggg gccgaggcgc 120
gggccggggg cgccgggggg ccggcggcgg cccgggcggg acgatgaagc ggcagaacgt 180
gcgcacgctg gcgctcatcg tgtgcacctt cacctacctg ctggtgggcg ccgcggtctt 240
cgacgcgctg gagtcggagc ccgagctgat cgagcggcag cggctggagc tgcggcagca 300
ggagctgcgg gcgcgctaca acctcagcca gggcggctac gaggagctgg agcgcgtcgt 360
gctgcgcctc aagccgcaca aggccggcgt gcagtggcgc ttcgccggct ccttctactt 420
cgccatcacc gtcatcacca ccatcggcta cgggcacgcg gcacccagca cggatggcgg 480
caaggtgttc tgcatgttct acgcgctgct gggcatcccg ctcacgctcg tcatgttcca 540
gagcctgggc gagcgcatca acaccttggt gaggtacctg ctgcaccgcg ccaagaaggg 600
gctgggcatg cggcgcgccg acgtgtccat ggccaacatg gtgctcatcg gcttcttctc 660
gtgcatcagc acgctgtgca tcggcgccgc cgccttctcc cactacgagc actggacctt 720
cttccaggcc tactactact gcttcatcac cctcaccacc atcggcttcg gcgactacgt 780
ggcgctgcag aaggaccagg ccctgcagac gcagccgcag tacgtggcct tcagcttcgt 840
ctacatcctt acgggcctca cggtcatcgg cgccttcctc aacctcgtgg tgctgcgctt 900
catgaccatg aacgccgagg acgagaagcg cgacgccgag caccgcgcgc tgctcacgcg 960
caacgggcag gcgggcggcg gcggaggggg tggcagcgcg cacactacgg acaccgcctc 1020
atccacggcg gcagcgggcg gcggcggctt ccgcaacgtc tacgcggagg tgctgcactt 1080
ccagtccatg tgctcgtgcc tgtggtacaa gagccgcgag aagctgcagt actccatccc 1140
catgatcatc ccgcgggacc tctccacgtc cgacacgtgc gtggagcaga gccactcgtc 1200
gccgggaggg ggcggccgct acagcgacac gccctcgcga cgctgcctgt gcagcggggc 1260
gccacgctcc gccatcagct cggtgtccac gggtctgcac agcctgtcca ccttccgcgg 1320
cctcatgaag cgcaggagct ccgtgtgact gccccgaggg gcctggagca cctgggggcg 1380
cgggcggggg acccctgctg ggaggccagg agactgcccc tgctgccttc tgcccagtgg 1440
gaccccgcac aacatccctc accactctcc cccagcaccc ccatctccga ctgtgcctgc 1500
ttgcaccagc cggcaggagg ccgggctctg aggacccctg gggcccccat cggagccctg 1560
caaattccga gaaatgtgaa acttggtggg gtcagggagg aaaggcagaa gctgggagcc 1620
tcccttccct ttgaaaatct aagaagctcc cagtcctcag agaccctgct ggtacccaga 1680
cccccacctt cggaggggac ttcatgttcc gtgtacgttt gcatctctat ttatacctct 1740
gtcctgctag gtctcccacc ttcccttggt tccaaaagcc agggtgtcta tgtccaagtc 1800
acccctactc agccccactc cccttcctca tccccagctg tgtctcccaa cctcccttcg 1860
tgttgttttg catggctttg cagttatgga gaaagtggaa acccagcagt ccctaaagct 1920
ggtccccaga aagcaggaca gaaagaagga gggacaggca ggcagcagga ggggcgagct 1980
gggaggcagg aggcagcggc ctgtcagtct gcagaatggt cgcactggag gttcaagcta 2040
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agaatctgga acagaagact tcagactcac cataattgct gataattacc cactcttaaa 2160
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tactgaggcc tggacaggtg aagtgaccag agagcaaaag gcaaaggggt gggggctggg 2340
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agcccaggaa tttgagacca gcctaggtga catagtgaga ccccatctct acaaaaaata 2460
aaaaattaac caggtgtggt ggcacgtgcc tgggagtccc agcgacttgg gaggctgagg 2520
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tcccatgctg ttcccctgcc agctccttaa cactgccgac caaggccagc cctggcattc 3360
agggaaattg gagggcagca cccgtagggt ggccagcctc aggccccacc ccagctgtgt 3420
cctctagtct ctggggaccc ctggggggaa gaagtctacc ctgcttgtga gtcccgtctc 3480
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cctgtcagtc ccgagggagc cacaaccaaa gctgcggaga gaaggtgggg aagggtgcag 3660
aatggccgtg gggcacagcg tggcagactg ttcagtctct gctgggtctt tcctagggac 3720
ctggaaggcc agtgttgctt ccccctcact ccctttcact gcaggcagcc tctctgcttc 3780
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ctatccacgg agaccagg 3978

<210> 17
<211> 676
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 17
Met Ala Ala Ala Ser Ser Pro Pro Arg Ala Glu Arg Lys Arg Trp Gly
1 5 10 15
Trp Gly Arg Leu Pro Gly Ala Arg Arg Gly Ser Ala Gly Leu Ala Lys
20 25 30
Lys Cys Pro Phe Ser Leu Glu Leu Ala Glu Gly Gly Pro Ala Gly Gly
35 40 45
Ala Leu Tyr Ala Pro Ile Ala Pro Gly Ala Pro Gly Pro Ala Pro Pro
50 55 60
Ala Ser Pro Ala Ala Pro Ala Ala Pro Pro Val Ala Ser Asp Leu Gly
65 70 75 80
Pro Arg Pro Pro Val Ser Leu Asp Pro Arg Val Ser Ile Tyr Ser Thr
85 90 95
Arg Arg Pro Val Leu Ala Arg Thr His Val Gln Gly Arg Val Tyr Asn
100 105 110
Phe Leu Glu Arg Pro Thr Gly Trp Lys Cys Phe Val Tyr His Phe Ala
115 120 125
Val Phe Leu Ile Val Leu Val Cys Leu Ile Phe Ser Val Leu Ser Thr
130 135 140
Ile Glu Gln Tyr Ala Ala Leu Ala Thr Gly Thr Leu Phe Trp Met Glu
145 150 155 160
Ile Val Leu Val Val Phe Phe Gly Thr Glu Tyr Val Val Arg Leu Trp
165 170 175
Ser Ala Gly Cys Arg Ser Lys Tyr Val Gly Leu Trp Gly Arg Leu Arg
180 185 190
Phe Ala Arg Lys Pro Ile Ser Ile Ile Asp Leu Ile Val Val Val Ala
195 200 205
Ser Met Val Val Leu Cys Val Gly Ser Lys Gly Gln Val Phe Ala Thr
210 215 220
Ser Ala Ile Arg Gly Ile Arg Phe Leu Gln Ile Leu Arg Met Leu His
225 230 235 240
Val Asp Arg Gln Gly Gly Thr Trp Arg Leu Leu Gly Ser Val Val Phe
245 250 255
Ile His Arg Gln Glu Leu Ile Thr Thr Leu Tyr Ile Gly Phe Leu Gly
260 265 270
Leu Ile Phe Ser Ser Tyr Phe Val Tyr Leu Ala Glu Lys Asp Ala Val
275 280 285
Asn Glu Ser Gly Arg Val Glu Phe Gly Ser Tyr Ala Asp Ala Leu Trp
290 295 300
Trp Gly Val Val Thr Val Thr Thr Ile Gly Tyr Gly Asp Lys Val Pro
305 310 315 320
Gln Thr Trp Val Gly Lys Thr Ile Ala Ser Cys Phe Ser Val Phe Ala
325 330 335
Ile Ser Phe Phe Ala Leu Pro Ala Gly Ile Leu Gly Ser Gly Phe Ala
340 345 350
Leu Lys Val Gln Gln Lys Gln Arg Gln Lys His Phe Asn Arg Gln Ile
355 360 365
Pro Ala Ala Ala Ser Leu Ile Gln Thr Ala Trp Arg Cys Tyr Ala Ala
370 375 380
Glu Asn Pro Asp Ser Ser Thr Trp Lys Ile Tyr Ile Arg Lys Ala Pro
385 390 395 400
Arg Ser His Thr Leu Leu Ser Pro Ser Pro Lys Pro Lys Lys Ser Val
405 410 415
Val Val Lys Lys Lys Lys Phe Lys Leu Asp Lys Asp Asn Gly Val Thr
420 425 430
Pro Gly Glu Lys Met Leu Thr Val Pro His Ile Thr Cys Asp Pro Pro
435 440 445
Glu Glu Arg Arg Leu Asp His Phe Ser Val Asp Gly Tyr Asp Ser Ser
450 455 460
Val Arg Lys Ser Pro Thr Leu Leu Glu Val Ser Met Pro His Phe Met
465 470 475 480
Arg Thr Asn Ser Phe Ala Glu Asp Leu Asp Leu Glu Gly Glu Thr Leu
485 490 495
Leu Thr Pro Ile Thr His Ile Ser Gln Leu Arg Glu His His Arg Ala
500 505 510
Thr Ile Lys Val Ile Arg Arg Met Gln Tyr Phe Val Ala Lys Lys Lys
515 520 525
Phe Gln Gln Ala Arg Lys Pro Tyr Asp Val Arg Asp Val Ile Glu Gln
530 535 540
Tyr Ser Gln Gly His Leu Asn Leu Met Val Arg Ile Lys Glu Leu Gln
545 550 555 560
Arg Arg Leu Asp Gln Ser Ile Gly Lys Pro Ser Leu Phe Ile Ser Val
565 570 575
Ser Glu Lys Ser Lys Asp Arg Gly Ser Asn Thr Ile Gly Ala Arg Leu
580 585 590
Asn Arg Val Glu Asp Lys Val Thr Gln Leu Asp Gln Arg Leu Ala Leu
595 600 605
Ile Thr Asp Met Leu His Gln Leu Leu Ser Leu His Gly Gly Ser Thr
610 615 620
Pro Gly Ser Gly Gly Pro Pro Arg Glu Gly Gly Ala His Ile Thr Gln
625 630 635 640
Pro Cys Gly Ser Gly Gly Ser Val Asp Pro Glu Leu Phe Leu Pro Ser
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Asn Thr Leu Pro Thr Tyr Glu Gln Leu Thr Val Pro Arg Arg Gly Pro
660 665 670
Asp Glu Gly Ser
675

<210> 18
<211> 3262
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 18
gcggcggggc tggcagcagt ggctgcccgc actgcgcccg ggcgctcgcc ttcgctgcag 60
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cacgtccagg gccgcgtcta caacttcctc gagcgtccca ccggctggaa atgcttcgtt 480
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gtggtcgtgg cctccatggt ggtcctctgc gtgggctcca aggggcaggt gtttgccacg 780
tcggccatca ggggcatccg cttcctgcag atcctgagga tgctacacgt cgaccgccag 840
ggaggcacct ggaggctcct gggctccgtg gtcttcatcc accgccagga gctgataacc 900
accctgtaca tcggcttcct gggcctcatc ttctcctcgt actttgtgta cctggctgag 960
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gggaagacca tcgcctcctg cttctctgtc tttgccatct ccttctttgc gctcccagcg 1140
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gagaaccccg actcctccac ctggaagatc tacatccgga aggccccccg gagccacact 1320
ctgctgtcac ccagccccaa acccaagaag tctgtggtgg taaagaaaaa aaagttcaag 1380
ctggacaaag acaatggggt gactcctgga gagaagatgc tcacagtccc ccatatcacg 1440
tgcgaccccc cagaagagcg gcggctggac cacttctctg tcgacggcta tgacagttct 1500
gtaaggaaga gcccaacact gctggaagtg agcatgcccc atttcatgag aaccaacagc 1560
ttcgccgagg acctggacct ggaaggggag actctgctga cacccatcac ccacatctca 1620
cagctgcggg aacaccatcg ggccaccatt aaggtcattc gacgcatgca gtactttgtg 1680
gccaagaaga aattccagca agcgcggaag ccttacgatg tgcgggacgt cattgagcag 1740
tactcgcagg gccacctcaa cctcatggtg cgcatcaagg agctgcagag gaggctggac 1800
cagtccattg ggaagccctc actgttcatc tccgtctcag aaaagagcaa ggatcgcggc 1860
agcaacacga tcggcgcccg cctgaaccga gtagaagaca aggtgacgca gctggaccag 1920
aggctggcac tcatcaccga catgcttcac cagctgctct ccttgcacgg tggcagcacc 1980
cccggcagcg gcggcccccc cagagagggc ggggcccaca tcacccagcc ctgcggcagt 2040
ggcggctccg tcgaccctga gctcttcctg cccagcaaca ccctgcccac ctacgagcag 2100
ctgaccgtgc ccaggagggg ccccgatgag gggtcctgag gaggggatgg ggctggggga 2160
tgggcctgag tgagagggga ggccaagagt ggccccacct ggccctctct gaaggaggcc 2220
acctcctaaa aggcccagag agaagagccc cactctcaga ggccccaata ccccatggac 2280
catgctgtct ggcacagcct gcacttgggg gctcagcaag gccacctctt cctggccggt 2340
gtgggggccc cgtctcaggt ctgagttgtt accccaagcg ccctggcccc cacatggtga 2400
tgttgacatc actggcatgg tggttgggac ccagtggcag ggcacagggc ctggcccatg 2460
tatggccagg aagtagcaca ggctgagtgc aggcccaccc tgcttggccc agggggcttc 2520
ctgaggggag acagagcaac ccctggaccc cagcctcaaa tccaggaccc tgccaggcac 2580
aggcagggca ggaccagccc acgctgacta cagggccgcc ggcaataaaa gcccaggagc 2640
ccatttggag ggcctgggcc tggctccctc actctcagga aatgctgacc catgggcagg 2700
agactgtgga gactgctcct gagcccccag cttccagcag gagggacagt ctcaccattt 2760
ccccagggca cgtggttgag tggggggaac gcccacttcc ctgggttaga ctgccagctc 2820
ttcctagctg gagaggagcc ctgcctctcc gcccctgagc ccactgtgcg tggggctccc 2880
gcctccaacc cctcgcccag tcccagcagc cagccaaaca cacagaaggg gactgccacc 2940
tccccttgcc agctgctgag ccgcagagaa gtgacggttc ctacacagga caggggttcc 3000
ttctgggcat tacatcgcat agaaatcaat aatttgtggt gatttggatc tgtgttttaa 3060
tgagtttcac agtgtgattt tgattattaa ttgtgcaagc ttttcctaat aaacgtggag 3120
aatcacaggc tgggctgggc actgctctca ccttggttcc tggggcatcc atggggtctc 3180
tcacagacag gacccctgca gttcccctgg aagcagtgcc caggtggctg tggaatagga 3240
acgctaaaaa aaaaaaaaaa aa 3262

<210> 19
<211> 907
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 19
Met Asp Thr Ser Arg Leu Gly Val Leu Leu Ser Leu Pro Val Leu Leu
1 5 10 15
Gln Leu Ala Thr Gly Gly Ser Ser Pro Arg Ser Gly Val Leu Leu Arg
20 25 30
Gly Cys Pro Thr His Cys His Cys Glu Pro Asp Gly Arg Met Leu Leu
35 40 45
Arg Val Asp Cys Ser Asp Leu Gly Leu Ser Glu Leu Pro Ser Asn Leu
50 55 60
Ser Val Phe Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Ser Met Asn Asn Ile Ser Gln
65 70 75 80
Leu Leu Pro Asn Pro Leu Pro Ser Leu Arg Phe Leu Glu Glu Leu Arg
85 90 95
Leu Ala Gly Asn Ala Leu Thr Tyr Ile Pro Lys Gly Ala Phe Thr Gly
100 105 110
Leu Tyr Ser Leu Lys Val Leu Met Leu Gln Asn Asn Gln Leu Arg His
115 120 125
Val Pro Thr Glu Ala Leu Gln Asn Leu Arg Ser Leu Gln Ser Leu Arg
130 135 140
Leu Asp Ala Asn His Ile Ser Tyr Val Pro Pro Ser Cys Phe Ser Gly
145 150 155 160
Leu His Ser Leu Arg His Leu Trp Leu Asp Asp Asn Ala Leu Thr Glu
165 170 175
Ile Pro Val Gln Ala Phe Arg Ser Leu Ser Ala Leu Gln Ala Met Thr
180 185 190
Leu Ala Leu Asn Lys Ile His His Ile Pro Asp Tyr Ala Phe Gly Asn
195 200 205
Leu Ser Ser Leu Val Val Leu His Leu His Asn Asn Arg Ile His Ser
210 215 220
Leu Gly Lys Lys Cys Phe Asp Gly Leu His Ser Leu Glu Thr Leu Asp
225 230 235 240
Leu Asn Tyr Asn Asn Leu Asp Glu Phe Pro Thr Ala Ile Arg Thr Leu
245 250 255
Ser Asn Leu Lys Glu Leu Gly Phe His Ser Asn Asn Ile Arg Ser Ile
260 265 270
Pro Glu Lys Ala Phe Val Gly Asn Pro Ser Leu Ile Thr Ile His Phe
275 280 285
Tyr Asp Asn Pro Ile Gln Phe Val Gly Arg Ser Ala Phe Gln His Leu
290 295 300
Pro Glu Leu Arg Thr Leu Thr Leu Asn Gly Ala Ser Gln Ile Thr Glu
305 310 315 320
Phe Pro Asp Leu Thr Gly Thr Ala Asn Leu Glu Ser Leu Thr Leu Thr
325 330 335
Gly Ala Gln Ile Ser Ser Leu Pro Gln Thr Val Cys Asn Gln Leu Pro
340 345 350
Asn Leu Gln Val Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Leu Leu Glu Asp Leu Pro
355 360 365
Ser Phe Ser Val Cys Gln Lys Leu Gln Lys Ile Asp Leu Arg His Asn
370 375 380
Glu Ile Tyr Glu Ile Lys Val Asp Thr Phe Gln Gln Leu Leu Ser Leu
385 390 395 400
Arg Ser Leu Asn Leu Ala Trp Asn Lys Ile Ala Ile Ile His Pro Asn
405 410 415
Ala Phe Ser Thr Leu Pro Ser Leu Ile Lys Leu Asp Leu Ser Ser Asn
420 425 430
Leu Leu Ser Ser Phe Pro Ile Thr Gly Leu His Gly Leu Thr His Leu
435 440 445
Lys Leu Thr Gly Asn His Ala Leu Gln Ser Leu Ile Ser Ser Glu Asn
450 455 460
Phe Pro Glu Leu Lys Val Ile Glu Met Pro Tyr Ala Tyr Gln Cys Cys
465 470 475 480
Ala Phe Gly Val Cys Glu Asn Ala Tyr Lys Ile Ser Asn Gln Trp Asn
485 490 495
Lys Gly Asp Asn Ser Ser Met Asp Asp Leu His Lys Lys Asp Ala Gly
500 505 510
Met Phe Gln Ala Gln Asp Glu Arg Asp Leu Glu Asp Phe Leu Leu Asp
515 520 525
Phe Glu Glu Asp Leu Lys Ala Leu His Ser Val Gln Cys Ser Pro Ser
530 535 540
Pro Gly Pro Phe Lys Pro Cys Glu His Leu Leu Asp Gly Trp Leu Ile
545 550 555 560
Arg Ile Gly Val Trp Thr Ile Ala Val Leu Ala Leu Thr Cys Asn Ala
565 570 575
Leu Val Thr Ser Thr Val Phe Arg Ser Pro Leu Tyr Ile Ser Pro Ile
580 585 590
Lys Leu Leu Ile Gly Val Ile Ala Ala Val Asn Met Leu Thr Gly Val
595 600 605
Ser Ser Ala Val Leu Ala Gly Val Asp Ala Phe Thr Phe Gly Ser Phe
610 615 620
Ala Arg His Gly Ala Trp Trp Glu Asn Gly Val Gly Cys His Val Ile
625 630 635 640
Gly Phe Leu Ser Ile Phe Ala Ser Glu Ser Ser Val Phe Leu Leu Thr
645 650 655
Leu Ala Ala Leu Glu Arg Gly Phe Ser Val Lys Tyr Ser Ala Lys Phe
660 665 670
Glu Thr Lys Ala Pro Phe Ser Ser Leu Lys Val Ile Ile Leu Leu Cys
675 680 685
Ala Leu Leu Ala Leu Thr Met Ala Ala Val Pro Leu Leu Gly Gly Ser
690 695 700
Lys Tyr Gly Ala Ser Pro Leu Cys Leu Pro Leu Pro Phe Gly Glu Pro
705 710 715 720
Ser Thr Met Gly Tyr Met Val Ala Leu Ile Leu Leu Asn Ser Leu Cys
725 730 735
Phe Leu Met Met Thr Ile Ala Tyr Thr Lys Leu Tyr Cys Asn Leu Asp
740 745 750
Lys Gly Asp Leu Glu Asn Ile Trp Asp Cys Ser Met Val Lys His Ile
755 760 765
Ala Leu Leu Leu Phe Thr Asn Cys Ile Leu Asn Cys Pro Val Ala Phe
770 775 780
Leu Ser Phe Ser Ser Leu Ile Asn Leu Thr Phe Ile Ser Pro Glu Val
785 790 795 800
Ile Lys Phe Ile Leu Leu Val Val Val Pro Leu Pro Ala Cys Leu Asn
805 810 815
Pro Leu Leu Tyr Ile Leu Phe Asn Pro His Phe Lys Glu Asp Leu Val
820 825 830
Ser Leu Arg Lys Gln Thr Tyr Val Trp Thr Arg Ser Lys His Pro Ser
835 840 845
Leu Met Ser Ile Asn Ser Asp Asp Val Glu Lys Gln Ser Cys Asp Ser
850 855 860
Thr Gln Ala Leu Val Thr Phe Thr Ser Ser Ser Ile Thr Tyr Asp Leu
865 870 875 880
Pro Pro Ser Ser Val Pro Ser Pro Ala Tyr Pro Val Thr Glu Ser Cys
885 890 895
His Leu Ser Ser Val Ala Phe Val Pro Cys Leu
900 905

<210> 20
<211> 4625
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 20
aaaaaacgag cgtgcaagca gagatgctgc tccacaccgc tcaggccgcg agcagcagca 60
aggcgcaccg ccactgtcgc cgctgcagcc agggctgctc cgaaggccgg cgtggcggca 120
accggcacct ctgtccccgc cgcgcttctc ctcgccgccc acgccgtggg gtcaggaacg 180
cggcgtctgg cgctgcagac gcccgctgag ttgcagaagc ccacggagcg gcgcccggcg 240
cgccacggcc cgtagcagtc cggtgctgct ctccgcccgc gtccggctcg tggcccccta 300
cttcgggcac catggacacc tcccggctcg gtgtgctcct gtccttgcct gtgctgctgc 360
agctggcgac cgggggcagc tctcccaggt ctggtgtgtt gctgaggggc tgccccacac 420
actgtcattg cgagcccgac ggcaggatgt tgctcagggt ggactgctcc gacctggggc 480
tctcggagct gccttccaac ctcagcgtct tcacctccta cctagacctc agtatgaaca 540
acatcagtca gctgctcccg aatcccctgc ccagtctccg cttcctggag gagttacgtc 600
ttgcgggaaa cgctctgaca tacattccca agggagcatt cactggcctt tacagtctta 660
aagttcttat gctgcagaat aatcagctaa gacacgtacc cacagaagct ctgcagaatt 720
tgcgaagcct tcaatccctg cgtctggatg ctaaccacat cagctatgtg cccccaagct 780
gtttcagtgg cctgcattcc ctgaggcacc tgtggctgga tgacaatgcg ttaacagaaa 840
tccccgtcca ggcttttaga agtttatcgg cattgcaagc catgaccttg gccctgaaca 900
aaatacacca cataccagac tatgcctttg gaaacctctc cagcttggta gttctacatc 960
tccataacaa tagaatccac tccctgggaa agaaatgctt tgatgggctc cacagcctag 1020
agactttaga tttaaattac aataaccttg atgaattccc cactgcaatt aggacactct 1080
ccaaccttaa agaactagga tttcatagca acaatatcag gtcgatacct gagaaagcat 1140
ttgtaggcaa cccttctctt attacaatac atttctatga caatcccatc cagtttgttg 1200
ggagatctgc ttttcaacat ttacctgaac taagaacact gactctgaat ggtgcctcac 1260
aaataactga atttcctgat ttaactggaa ctgcaaacct ggagagtctg actttaactg 1320
gagcacagat ctcatctctt cctcaaaccg tctgcaatca gttacctaat ctccaagtgc 1380
tagatctgtc ttacaaccta ttagaagatt tacccagttt ttcagtctgc caaaagcttc 1440
agaaaattga cctaagacat aatgaaatct acgaaattaa agttgacact ttccagcagt 1500
tgcttagcct ccgatcgctg aatttggctt ggaacaaaat tgctattatt caccccaatg 1560
cattttccac tttgccatcc ctaataaagc tggacctatc gtccaacctc ctgtcgtctt 1620
ttcctataac tgggttacat ggtttaactc acttaaaatt aacaggaaat catgccttac 1680
agagcttgat atcatctgaa aactttccag aactcaaggt tatagaaatg ccttatgctt 1740
accagtgctg tgcatttgga gtgtgtgaga atgcctataa gatttctaat caatggaata 1800
aaggtgacaa cagcagtatg gacgaccttc ataagaaaga tgctggaatg tttcaggctc 1860
aagatgaacg tgaccttgaa gatttcctgc ttgactttga ggaagacctg aaagcccttc 1920
attcagtgca gtgttcacct tccccaggcc ccttcaaacc ctgtgaacac ctgcttgatg 1980
gctggctgat cagaattgga gtgtggacca tagcagttct ggcacttact tgtaatgctt 2040
tggtgacttc aacagttttc agatcccctc tgtacatttc ccccattaaa ctgttaattg 2100
gggtcatcgc agcagtgaac atgctcacgg gagtctccag tgccgtgctg gctggtgtgg 2160
atgcgttcac ttttggcagc tttgcacgac atggtgcctg gtgggagaat ggggttggtt 2220
gccatgtcat tggttttttg tccatttttg cttcagaatc atctgttttc ctgcttactc 2280
tggcagccct ggagcgtggg ttctctgtga aatattctgc aaaatttgaa acgaaagctc 2340
cattttctag cctgaaagta atcattttgc tctgtgccct gctggccttg accatggccg 2400
cagttcccct gctgggtggc agcaagtatg gcgcctcccc tctctgcctg cctttgcctt 2460
ttggggagcc cagcaccatg ggctacatgg tcgctctcat cttgctcaat tccctttgct 2520
tcctcatgat gaccattgcc tacaccaagc tctactgcaa tttggacaag ggagacctgg 2580
agaatatttg ggactgctct atggtaaaac acattgccct gttgctcttc accaactgca 2640
tcctaaactg ccctgtggct ttcttgtcct tctcctcttt aataaacctt acatttatca 2700
gtcctgaagt aattaagttt atccttctgg tggtagtccc acttcctgca tgtctcaatc 2760
cccttctcta catcttgttc aatcctcact ttaaggagga tctggtgagc ctgagaaagc 2820
aaacctacgt ctggacaaga tcaaaacacc caagcttgat gtcaattaac tctgatgatg 2880
tcgaaaaaca gtcctgtgac tcaactcaag ccttggtaac ctttaccagc tccagcatca 2940
cttatgacct gcctcccagt tccgtgccat caccagctta tccagtgact gagagctgcc 3000
atctttcctc tgtggcattt gtcccatgtc tctaattaat atgtgaagga aaatgttttc 3060
aaaggttgag aacctgaaaa tgtgagattg agtatatcag agcagtaatt aataagaaga 3120
gctgaggtga aactcggttt aaaaaccaaa aaagaatctc tcagttagta agaaaaggct 3180
gaaaacctct tgatacttga gagtgaatat aagtctaaat gctgctttgt ataatttgtt 3240
cagctaaggg atagatcgat cacactattt aagtgagccc agatcaaaaa agcagattga 3300
aattttcttt agaaaagatt ctccatgatt tgaattgcat tctctttaaa ctcaccaatg 3360
taatcatttt gggaggaggg agaacccact tgctttccaa atgggtttat ttaaacccac 3420
aaactcaaga ggttgttggg ggaattagga aaataagggt tttcaatgac ctacattgct 3480
aggtagaggc tgtgatccat gggatttcat tctaatgacc atgtgaagat gtttgagtcc 3540
tcctttgcct ttcctcagaa agaatccttc taaggcacaa atcccttaga tggataatgt 3600
aaggtattgt taactcactc atattgagat catttttaga gataccaggt tttatgtatc 3660
agcactagat ggttccaccc tcatgggata aaactgctta caagtatttt gaaagaaaaa 3720
ctgaccaaaa ttcttaaatt gttactaagg caatcatgca caggtgacgt atgtcttatc 3780
tgatttgttt ttaactcctt ggtgcccaaa gctcagaagg gaattccact gccagcaatg 3840
aacatacctg gaaaagaaag taagcaatct gggatttttt ttctgggtta gtaaagaatt 3900
tttgcaataa gttttatcag ttgattcaaa ctgatgtgca tcttaatgat caaatgtgca 3960
cattacataa attaagtcca ctgatacaac ttcttacaca tgtatctcta gtagctctgg 4020
caaacccaat atctgacacc actttggact caagagactc agtaacgtat tatcctgttt 4080
atttagcttg gttttagctg tgttctctct ggataaccca cttgatgtta ggaacattac 4140
ttctctgctt attccatatt aatactgtgt taggtatttt aagaagcaag ttattaaata 4200
agaaaagtca aagtattaat tcttaccttc tattatccta tattagcttc aatacatcca 4260
aaccaaatgg ctgttaggta gatttatttt tatataagca tgtttatttt gatcagatgt 4320
tttaacttgg atttgaaaaa atacatttat gagatgtttt ataagatgtg taaatataga 4380
actgtattta ttactatagt aaaggttcag taacattaag gaccatgata atgataataa 4440
accttgtaca gtggcatatt ctttgattta tattgtgttt ctctgcccat tttctttaaa 4500
ttcattaact gtatatatgt aaatatatag tacttgtaaa tagattccaa atttgctttt 4560
ctattgggta aaaaataaat ttgtaataaa atgtgtgact atgaaacaaa aaaaaaaaaa 4620
aaaaa 4625

<210> 21
<211> 332
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 21
Met Ala Thr Leu Lys Asp Gln Leu Ile Tyr Asn Leu Leu Lys Glu Glu
1 5 10 15
Gln Thr Pro Gln Asn Lys Ile Thr Val Val Gly Val Gly Ala Val Gly
20 25 30
Met Ala Cys Ala Ile Ser Ile Leu Met Lys Asp Leu Ala Asp Glu Leu
35 40 45
Ala Leu Val Asp Val Ile Glu Asp Lys Leu Lys Gly Glu Met Met Asp
50 55 60
Leu Gln His Gly Ser Leu Phe Leu Arg Thr Pro Lys Ile Val Ser Gly
65 70 75 80
Lys Asp Tyr Asn Val Thr Ala Asn Ser Lys Leu Val Ile Ile Thr Ala
85 90 95
Gly Ala Arg Gln Gln Glu Gly Glu Ser Arg Leu Asn Leu Val Gln Arg
100 105 110
Asn Val Asn Ile Phe Lys Phe Ile Ile Pro Asn Val Val Lys Tyr Ser
115 120 125
Pro Asn Cys Lys Leu Leu Ile Val Ser Asn Pro Val Asp Ile Leu Thr
130 135 140
Tyr Val Ala Trp Lys Ile Ser Gly Phe Pro Lys Asn Arg Val Ile Gly
145 150 155 160
Ser Gly Cys Asn Leu Asp Ser Ala Arg Phe Arg Tyr Leu Met Gly Glu
165 170 175
Arg Leu Gly Val His Pro Leu Ser Cys His Gly Trp Val Leu Gly Glu
180 185 190
His Gly Asp Ser Ser Val Pro Val Trp Ser Gly Met Asn Val Ala Gly
195 200 205
Val Ser Leu Lys Thr Leu His Pro Asp Leu Gly Thr Asp Lys Asp Lys
210 215 220
Glu Gln Trp Lys Glu Val His Lys Gln Val Val Glu Ser Ala Tyr Glu
225 230 235 240
Val Ile Lys Leu Lys Gly Tyr Thr Ser Trp Ala Ile Gly Leu Ser Val
245 250 255
Ala Asp Leu Ala Glu Ser Ile Met Lys Asn Leu Arg Arg Val His Pro
260 265 270
Val Ser Thr Met Ile Lys Gly Leu Tyr Gly Ile Lys Asp Asp Val Phe
275 280 285
Leu Ser Val Pro Cys Ile Leu Gly Gln Asn Gly Ile Ser Asp Leu Val
290 295 300
Lys Val Thr Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ala Arg Leu Lys Lys Ser Ala
305 310 315 320
Asp Thr Leu Trp Gly Ile Gln Lys Glu Leu Gln Phe
325 330

<210> 22
<211> 2226
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 22
gtctgccggt cggttgtctg gctgcgcgcg ccacccgggc ctctccagtg ccccgcctgg 60
ctcggcatcc acccccagcc cgactcacac gtgggttccc gcacgtccgc cggccccccc 120
cgctgacgtc agcatagctg ttccacttaa ggcccctccc gcgcccagct cagagtgctg 180
cagccgctgc cgccgattcc ggatctcatt gccacgcgcc cccgacgacc gcccgacgtg 240
cattcccgat tccttttggt tccaagtcca atatggcaac tctaaaggat cagctgattt 300
ataatcttct aaaggaagaa cagacccccc agaataagat tacagttgtt ggggttggtg 360
ctgttggcat ggcctgtgcc atcagtatct taatgaagga cttggcagat gaacttgctc 420
ttgttgatgt catcgaagac aaattgaagg gagagatgat ggatctccaa catggcagcc 480
ttttccttag aacaccaaag attgtctctg gcaaagacta taatgtaact gcaaactcca 540
agctggtcat tatcacggct ggggcacgtc agcaagaggg agaaagccgt cttaatttgg 600
tccagcgtaa cgtgaacatc tttaaattca tcattcctaa tgttgtaaaa tacagcccga 660
actgcaagtt gcttattgtt tcaaatccag tggatatctt gacctacgtg gcttggaaga 720
taagtggttt tcccaaaaac cgtgttattg gaagcggttg caatctggat tcagcccgat 780
tccgttacct aatgggggaa aggctgggag ttcacccatt aagctgtcat gggtgggtcc 840
ttggggaaca tggagattcc agtgtgcctg tatggagtgg aatgaatgtt gctggtgtct 900
ctctgaagac tctgcaccca gatttaggga ctgataaaga taaggaacag tggaaagagg 960
ttcacaagca ggtggttgag agtgcttatg aggtgatcaa actcaaaggc tacacatcct 1020
gggctattgg actctctgta gcagatttgg cagagagtat aatgaagaat cttaggcggg 1080
tgcacccagt ttccaccatg attaagggtc tttacggaat aaaggatgat gtcttcctta 1140
gtgttccttg cattttggga cagaatggaa tctcagacct tgtgaaggtg actctgactt 1200
ctgaggaaga ggcccgtttg aagaagagtg cagatacact ttgggggatc caaaaggagc 1260
tgcaatttta aagtcttctg atgtcatatc atttcactgt ctaggctaca acaggattct 1320
aggtggaggt tgtgcatgtt gtccttttta tctgatctgt gattaaagca gtaatatttt 1380
aagatggact gggaaaaaca tcaactcctg aagttagaaa taagaatggt ttgtaaaatc 1440
cacagctata tcctgatgct ggatggtatt aatcttgtgt agtcttcaac tggttagtgt 1500
gaaatagttc tgccacctct gacgcaccac tgccaatgct gtacgtactg catttgcccc 1560
ttgagccagg tggatgttta ccgtgtgtta tataacttcc tggctccttc actgaacatg 1620
cctagtccaa cattttttcc cagtgagtca catcctggga tccagtgtat aaatccaata 1680
tcatgtcttg tgcataattc ttccaaagga tcttattttg tgaactatat cagtagtgta 1740
cattaccata taatgtaaaa agatctacat acaaacaatg caaccaacta tccaagtgtt 1800
ataccaacta aaacccccaa taaaccttga acagtgacta ctttggttaa ttcattatat 1860
taagatataa agtcataaag ctgctagtta ttatattaat ttggaaatat taggctattc 1920
ttgggcaacc ctgcaacgat tttttctaac agggatatta ttgactaata gcagaggatg 1980
taatagtcaa ctgagttgta ttggtaccac ttccattgta agtcccaaag tattatatat 2040
ttgataataa tgctaatcat aattggaaag taacattcta tatgtaaatg taaaatttat 2100
ttgccaactg aatataggca atgatagtgt gtcactatag ggaacacaga tttttgagat 2160
cttgtcctct ggaagctggt aacaattaaa aacaatctta aggcagggaa aaaaaaaaaa 2220
aaaaaa 2226

<210> 23
<211> 353
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 23
Met Ala Ala Glu Leu Ala Met Gly Ala Glu Leu Pro Ser Ser Pro Leu
1 5 10 15
Ala Ile Glu Tyr Val Asn Asp Phe Asp Leu Met Lys Phe Glu Val Lys
20 25 30
Lys Glu Pro Pro Glu Ala Glu Arg Phe Cys His Arg Leu Pro Pro Gly
35 40 45
Ser Leu Ser Ser Thr Pro Leu Ser Thr Pro Cys Ser Ser Val Pro Ser
50 55 60
Ser Pro Ser Phe Cys Ala Pro Ser Pro Gly Thr Gly Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Ala Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gln Ala Gly Gly Ala Pro Gly Pro
85 90 95
Pro Ser Gly Gly Pro Gly Ala Val Gly Gly Thr Ser Gly Lys Pro Ala
100 105 110
Leu Glu Asp Leu Tyr Trp Met Ser Gly Tyr Gln His His Leu Asn Pro
115 120 125
Glu Ala Leu Asn Leu Thr Pro Glu Asp Ala Val Glu Ala Leu Ile Gly
130 135 140
Ser Gly His His Gly Ala His His Gly Ala His His Pro Ala Ala Ala
145 150 155 160
Ala Ala Tyr Glu Ala Phe Arg Gly Pro Gly Phe Ala Gly Gly Gly Gly
165 170 175
Ala Asp Asp Met Gly Ala Gly His His His Gly Ala His His Ala Ala
180 185 190
His His His His Ala Ala His His His His His His His His His His
195 200 205
Gly Gly Ala Gly His Gly Gly Gly Ala Gly His His Val Arg Leu Glu
210 215 220
Glu Arg Phe Ser Asp Asp Gln Leu Val Ser Met Ser Val Arg Glu Leu
225 230 235 240
Asn Arg Gln Leu Arg Gly Phe Ser Lys Glu Glu Val Ile Arg Leu Lys
245 250 255
Gln Lys Arg Arg Thr Leu Lys Asn Arg Gly Tyr Ala Gln Ser Cys Arg
260 265 270
Phe Lys Arg Val Gln Gln Arg His Ile Leu Glu Ser Glu Lys Cys Gln
275 280 285
Leu Gln Ser Gln Val Glu Gln Leu Lys Leu Glu Val Gly Arg Leu Ala
290 295 300
Lys Glu Arg Asp Leu Tyr Lys Glu Lys Tyr Glu Lys Leu Ala Gly Arg
305 310 315 320
Gly Gly Pro Gly Ser Ala Gly Gly Ala Gly Phe Pro Arg Glu Pro Ser
325 330 335
Pro Pro Gln Ala Gly Pro Gly Gly Ala Lys Gly Thr Ala Asp Phe Phe
340 345 350
Leu

<210> 24
<211> 2373
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 24
gcgcggccgg gcgcgggccc cgggcgatgg ccgcggagct ggcgatgggc gccgagctgc 60
ccagcagccc gctggccatc gagtacgtca acgacttcga cctgatgaag ttcgaggtga 120
agaaggagcc tcccgaggcc gagcgcttct gccaccgcct gccgccaggc tcgctgtcct 180
cgacgccgct cagcacgccc tgctcctccg tgccctcctc gcccagcttc tgcgcgccca 240
gcccgggcac cggcggcggc ggcggcgcgg ggggcggcgg cggctcgtct caggccgggg 300
gcgcccccgg gccgccgagc gggggccccg gcgccgtcgg gggcacctcg gggaagccgg 360
cgctggagga tctgtactgg atgagcggct accagcatca cctcaacccc gaggcgctca 420
acctgacgcc cgaggacgcg gtggaggcgc tcatcggcag cggccaccac ggcgcgcacc 480
acggcgcgca ccacccggcg gccgccgcag cctacgaggc tttccgcggc ccgggcttcg 540
cgggcggcgg cggagcggac gacatgggcg ccggccacca ccacggcgcg caccacgccg 600
cccaccatca ccacgccgcc caccaccacc accaccacca ccaccaccat ggcggcgcgg 660
gacacggcgg tggcgcgggc caccacgtgc gcctggagga gcgcttctcc gacgaccagc 720
tggtgtccat gtcggtgcgc gagctgaacc ggcagctccg cggcttcagc aaggaggagg 780
tcatccggct caagcagaag cggcgcacgc tcaagaaccg cggctacgcg cagtcctgcc 840
gcttcaagcg ggtgcagcag cggcacattc tggagagcga gaagtgccaa ctccagagcc 900
aggtggagca gctgaagctg gaggtggggc gcctggccaa agagcgggac ctgtacaagg 960
agaaatacga gaagctggcg ggccggggcg gccccgggag cgcgggcggg gccggtttcc 1020
cgcgggagcc ttcgccgccg caggccggtc ccggcggggc caagggcacg gccgacttct 1080
tcctgtaggc gccggacccc gagcccgcgc cgccgtcgcc ggggacaagt tcgcgcaggc 1140
ctctcggggc ctcggctcgg actccgcggt acaggacgtg gacaccaggc ccggcccggc 1200
cgtgctggcc ccggtgccaa gtctgcgggc gcggggctgg aggccccttc gctcccggtc 1260
cccgttcgcg cgcgtcggcc cgggtcgccg tcctgaggtt gagcggagaa cggtgatttc 1320
taaggaaact tgagccaggt ctaacttctt tccaagcgtc cgcttgtaca tacgttgaac 1380
gtggttctcc gttcccacct tcgccctgcc agcctagagg gaccgcgctg ccgtcccttc 1440
ccgggtggcc cctgcctgcc cccgccctcc ttcgttctct tctcagcctc cctttccttg 1500
ccttttttaa cttcccctcc ccgttttaaa atcggtctta ttttcgaagt atttataatt 1560
attatgcttg gtgattagaa aagaaaacct tggaggaagc cccttctttc cccagccggg 1620
gtccgccctc agtcgcgagt cacagcatga gtcgctcgcc aggaggggcc cggcccctgc 1680
ctgccccctc cccgcttgcc cccgaccctg ctaccggcgt tccttggagg tcgaagccag 1740
ggacgtcacc cgtgctgtgt ccaggcctgc tgtcctacta tgctcaaccg ggggtggggg 1800
gaggggggtg agtcctgtgc tcagtcgggt gggggctggc ccggatcccg agctgctgtc 1860
tctctatgca ccagaacata tctgtaactc ctggggaaat acatcttgtt ttaaccttca 1920
agagaagtga aagaaaaaag taatgcacag tatttctagc agaaaatttt tttttttaag 1980
aggaggcttg ggccagagcc ttctggcatg gggcgggtgg agaaagtgtt tttattttaa 2040
tttaaattgt gtttcgtttt gtttgtggaa tctttcttta atgcttcgtc gctctttgga 2100
ctagccggga gagagggcga ggaggcgggt gctccaggcc ctgtaggctg ggccaggcgc 2160
ctgggggatc tgcccgtttt cggaggccct caggggccat cagtgggatt ccagccgctc 2220
cacacccctc ccctgagcac tcggagtgga aggcgcgccg actcgttgaa agttttgttg 2280
tgtagttggt tttcgttgag ttcttttttc atttgctacg aaactgagaa aaagaaaaaa 2340
atacacaaaa taaatctgtt cagatccaag tca 2373

<210> 25
<211> 1939
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 25
Met Thr Asp Ala Gln Met Ala Asp Phe Gly Ala Ala Ala Gln Tyr Leu
1 5 10 15
Arg Lys Ser Glu Lys Glu Arg Leu Glu Ala Gln Thr Arg Pro Phe Asp
20 25 30
Ile Arg Thr Glu Cys Phe Val Pro Asp Asp Lys Glu Glu Phe Val Lys
35 40 45
Ala Lys Ile Leu Ser Arg Glu Gly Gly Lys Val Ile Ala Glu Thr Glu
50 55 60
Asn Gly Lys Thr Val Thr Val Lys Glu Asp Gln Val Leu Gln Gln Asn
65 70 75 80
Pro Pro Lys Phe Asp Lys Ile Glu Asp Met Ala Met Leu Thr Phe Leu
85 90 95
His Glu Pro Ala Val Leu Phe Asn Leu Lys Glu Arg Tyr Ala Ala Trp
100 105 110
Met Ile Tyr Thr Tyr Ser Gly Leu Phe Cys Val Thr Val Asn Pro Tyr
115 120 125
Lys Trp Leu Pro Val Tyr Asn Ala Glu Val Val Ala Ala Tyr Arg Gly
130 135 140
Lys Lys Arg Ser Glu Ala Pro Pro His Ile Phe Ser Ile Ser Asp Asn
145 150 155 160
Ala Tyr Gln Tyr Met Leu Thr Asp Arg Glu Asn Gln Ser Ile Leu Ile
165 170 175
Thr Gly Glu Ser Gly Ala Gly Lys Thr Val Asn Thr Lys Arg Val Ile
180 185 190
Gln Tyr Phe Ala Ser Ile Ala Ala Ile Gly Asp Arg Gly Lys Lys Asp
195 200 205
Asn Ala Asn Ala Asn Lys Gly Thr Leu Glu Asp Gln Ile Ile Gln Ala
210 215 220
Asn Pro Ala Leu Glu Ala Phe Gly Asn Ala Lys Thr Val Arg Asn Asp
225 230 235 240
Asn Ser Ser Arg Phe Gly Lys Phe Ile Arg Ile His Phe Gly Ala Thr
245 250 255
Gly Lys Leu Ala Ser Ala Asp Ile Glu Thr Tyr Leu Leu Glu Lys Ser
260 265 270
Arg Val Ile Phe Gln Leu Lys Ala Glu Arg Asn Tyr His Ile Phe Tyr
275 280 285
Gln Ile Leu Ser Asn Lys Lys Pro Glu Leu Leu Asp Met Leu Leu Val
290 295 300
Thr Asn Asn Pro Tyr Asp Tyr Ala Phe Val Ser Gln Gly Glu Val Ser
305 310 315 320
Val Ala Ser Ile Asp Asp Ser Glu Glu Leu Met Ala Thr Asp Ser Ala
325 330 335
Phe Asp Val Leu Gly Phe Thr Ser Glu Glu Lys Ala Gly Val Tyr Lys
340 345 350
Leu Thr Gly Ala Ile Met His Tyr Gly Asn Met Lys Phe Lys Gln Lys
355 360 365
Gln Arg Glu Glu Gln Ala Glu Pro Asp Gly Thr Glu Asp Ala Asp Lys
370 375 380
Ser Ala Tyr Leu Met Gly Leu Asn Ser Ala Asp Leu Leu Lys Gly Leu
385 390 395 400
Cys His Pro Arg Val Lys Val Gly Asn Glu Tyr Val Thr Lys Gly Gln
405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
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450 455 460
Gly Phe Glu Ile Phe Asp Phe Asn Ser Phe Glu Gln Leu Cys Ile Asn
465 470 475 480
Phe Thr Asn Glu Lys Leu Gln Gln Phe Phe Asn His His Met Phe Val
485 490 495
Leu Glu Gln Glu Glu Tyr Lys Lys Glu Gly Ile Glu Trp Thr Phe Ile
500 505 510
Asp Phe Gly Met Asp Leu Gln Ala Cys Ile Asp Leu Ile Glu Lys Pro
515 520 525
Met Gly Ile Met Ser Ile Leu Glu Glu Glu Cys Met Phe Pro Lys Ala
530 535 540
Thr Asp Met Thr Phe Lys Ala Lys Leu Tyr Asp Asn His Leu Gly Lys
545 550 555 560
Ser Asn Asn Phe Gln Lys Pro Arg Asn Ile Lys Gly Lys Gln Glu Ala
565 570 575
His Phe Ser Leu Ile His Tyr Ala Gly Thr Val Asp Tyr Asn Ile Leu
580 585 590
Gly Trp Leu Glu Lys Asn Lys Asp Pro Leu Asn Glu Thr Val Val Ala
595 600 605
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610 615 620
Tyr Ala Thr Ala Asp Thr Gly Asp Ser Gly Lys Ser Lys Gly Gly Lys
625 630 635 640
Lys Lys Gly Ser Ser Phe Gln Thr Val Ser Ala Leu His Arg Glu Asn
645 650 655
Leu Asn Lys Leu Met Thr Asn Leu Arg Thr Thr His Pro His Phe Val
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675 680 685
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900 905 910
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1025 1030 1035
Ser Leu Glu Gln Glu Lys Lys Val Arg Met Asp Leu Glu Arg Ala
1040 1045 1050
Lys Arg Lys Leu Glu Gly Asp Leu Lys Leu Thr Gln Glu Ser Ile
1055 1060 1065
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Lys Lys Glu Phe Asp Ile Asn Gln Gln Asn Ser Lys Ile Glu Asp
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Lys Val Ser Arg Thr Leu Glu Asp Gln Ala Asn Glu Tyr Arg Val
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1355 1360 1365
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1535 1540 1545
Ala Glu Ala Ser Leu Glu His Glu Glu Gly Lys Ile Leu Arg Ala
1550 1555 1560
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1565 1570 1575
Ala Glu Lys Asp Glu Glu Met Glu Gln Ala Lys Arg Asn His Gln
1580 1585 1590
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1595 1600 1605
Ser Arg Asn Glu Val Leu Arg Val Lys Lys Lys Met Glu Gly Asp
1610 1615 1620
Leu Asn Glu Met Glu Ile Gln Leu Ser His Ala Asn Arg Met Ala
1625 1630 1635
Ala Glu Ala Gln Lys Gln Val Lys Ser Leu Gln Ser Leu Leu Lys
1640 1645 1650
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1655 1660 1665
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1700 1705 1710
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Glu Glu Ala Val Gln Glu Cys Arg Asn Ala Glu Glu Lys Ala Lys
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1760 1765 1770
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1775 1780 1785
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1790 1795 1800
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1850 1855 1860
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1865 1870 1875
Ala Tyr Lys Arg Gln Ala Glu Glu Ala Glu Glu Gln Ala Asn Thr
1880 1885 1890
Asn Leu Ser Lys Phe Arg Lys Val Gln His Glu Leu Asp Glu Ala
1895 1900 1905
Glu Glu Arg Ala Asp Ile Ala Glu Ser Gln Val Asn Lys Leu Arg
1910 1915 1920
Ala Lys Ser Arg Asp Ile Gly Ala Lys Gln Lys Met His Asp Glu
1925 1930 1935
Glu

<210> 26
<211> 5941
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 26
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gaagcaccaa gatgaccgat gcccagatgg ctgactttgg ggcagcggcc cagtacctcc 120
gcaagtcaga gaaggagcgt ctagaggccc agacccggcc ctttgacatt cgcactgagt 180
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actcgggcct cttctgtgtc actgtcaacc cctacaagtg gctgccggtg tacaatgccg 480
aggtggtggc cgcctaccgg ggcaagaaga ggagtgaggc cccgccccac atcttctcca 540
tctccgacaa cgcctatcag tacatgctga cagatcggga gaaccagtcc atcctcatca 600
cgggagaatc cggggcgggg aagactgtga acaccaagcg tgtcatccag tactttgcca 660
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tggaggacca gatcatccag gccaaccccg ctctggaggc cttcggcaat gccaagactg 780
tccggaacga caactcctcc cgctttggga aattcattag gatccacttt ggggccactg 840
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agttgctgga catgctgctg gtcaccaaca atccctacga ctacgccttc gtgtctcagg 1020
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acctgggcaa gtccaacaat ttccagaagc cacgcaacat caaggggaag caggaagccc 1800
acttctccct gatccactac gccggcactg tggactacaa catcctgggc tggctggaaa 1860
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acggggactt ccggcagagg tatcgcatcc tgaacccagt ggccatccct gagggacagt 2280
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c 5941

<210> 27
<211> 175
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 27
Met Ala Ser Arg Lys Ala Gly Thr Arg Gly Lys Val Ala Ala Thr Lys
1 5 10 15
Gln Ala Gln Arg Gly Ser Ser Asn Val Phe Ser Met Phe Glu Gln Ala
20 25 30
Gln Ile Gln Glu Phe Lys Glu Ala Phe Ser Cys Ile Asp Gln Asn Arg
35 40 45
Asp Gly Ile Ile Cys Lys Ala Asp Leu Arg Glu Thr Tyr Ser Gln Leu
50 55 60
Gly Lys Val Ser Val Pro Glu Glu Glu Leu Asp Ala Met Leu Gln Glu
65 70 75 80
Gly Lys Gly Pro Ile Asn Phe Thr Val Phe Leu Thr Leu Phe Gly Glu
85 90 95
Lys Leu Asn Gly Thr Asp Pro Glu Glu Ala Ile Leu Ser Ala Phe Arg
100 105 110
Met Phe Asp Pro Ser Gly Lys Gly Val Val Asn Lys Asp Glu Phe Lys
115 120 125
Gln Leu Leu Leu Thr Gln Ala Asp Lys Phe Ser Pro Ala Glu Val Glu
130 135 140
Gln Met Phe Ala Leu Thr Pro Met Asp Leu Ala Gly Asn Ile Asp Tyr
145 150 155 160
Lys Ser Leu Cys Tyr Ile Ile Thr His Gly Asp Glu Lys Glu Glu
165 170 175

<210> 28
<211> 619
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 28
tctgcagaga gaatggccag caggaaggcg gggacccggg gcaaggtggc agccaccaag 60
caggcccaac gtggttcttc caacgtcttt tccatgtttg aacaagccca gatacaggag 120
ttcaaagaag ccttcagctg tatcgaccag aatcgtgatg gcatcatctg caaggcagac 180
ctgagggaga cctactccca gctggggaag gtgagtgtcc cagaggagga gctggacgcc 240
atgctgcaag agggcaaggg ccccatcaac ttcaccgtct tcctcacgct ctttggggag 300
aagctcaatg ggacagaccc cgaggaagcc atcctgagtg ccttccgcat gtttgacccc 360
agcggcaaag gggtggtgaa caaggatgag ttcaagcagc ttctcctgac ccaggcagac 420
aagttctctc cagctgaggt ggagcagatg ttcgccctga cacccatgga cctggcgggg 480
aacatcgact acaagtcact gtgctacatc atcacccatg gagacgagaa agaggaatga 540
ggggcagggc caggcccacg ggggggcacc tcaataaact ctgttgcaaa attggaaaaa 600
aaaaaaaaaa aaaaaaaaa 619

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<211> 5179
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 29
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Gly His Asn Val Cys Ser Thr Trp Gly Asn Phe His Tyr Lys Thr Phe
35 40 45
Asp Gly Asp Val Phe Arg Phe Pro Gly Pro Cys Asp Tyr Asn Phe Ala
50 55 60
Ser Asp Cys Arg Gly Ser Tyr Lys Glu Phe Ala Val His Leu Lys Arg
65 70 75 80
Gly Pro Gly Gln Ala Glu Ala Pro Ala Gly Val Glu Ser Ile Leu Leu
85 90 95
Thr Ile Lys Asp Asp Thr Ile Tyr Leu Thr Arg His Leu Ala Val Leu
100 105 110
Asn Gly Ala Val Val Ser Thr Pro His Tyr Ser Pro Gly Leu Leu Ile
115 120 125
Glu Lys Ser Asp Ala Tyr Thr Lys Val Tyr Ser Arg Ala Gly Leu Thr
130 135 140
Leu Met Trp Asn Arg Glu Asp Ala Leu Met Leu Glu Leu Asp Thr Lys
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Phe Arg Asn His Thr Cys Gly Leu Cys Gly Asp Tyr Asn Gly Leu Gln
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Ser Tyr Ser Glu Phe Leu Ser Asp Gly Val Leu Phe Ser Pro Leu Glu
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Cys Glu Arg Leu Leu Thr Ala Glu Ala Phe Ala Asp Cys Gln Asp Leu
225 230 235 240
Val Pro Leu Glu Pro Tyr Leu Arg Ala Cys Gln Gln Asp Arg Cys Arg
245 250 255
Cys Pro Gly Gly Asp Thr Cys Val Cys Ser Thr Val Ala Glu Phe Ser
260 265 270
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275 280 285
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Gly Ser Pro Cys Met Asp Thr Cys Ser His Leu Glu Val Ser Ser Leu
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Cys Glu Glu His Arg Met Asp Gly Cys Phe Cys Pro Glu Gly Thr Val
325 330 335
Tyr Asp Asp Ile Gly Asp Ser Gly Cys Val Pro Val Ser Gln Cys His
340 345 350
Cys Arg Leu His Gly His Leu Tyr Thr Pro Gly Gln Glu Ile Thr Asn
355 360 365
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Ser Phe Ser Val Phe Arg Pro Ser Ser Tyr His Ile Met Val Ser Met
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Ile Arg Val Asn Cys Cys Trp Pro Met Asp Lys Cys Ile Thr Thr
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Thr Thr Thr Pro Pro Pro Thr Thr Thr Pro Ser Pro Pro Ile Thr
1430 1435 1440
Thr Thr Thr Thr Pro Pro Pro Thr Thr Thr Pro Ser Pro Pro Ile
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Thr Thr Thr Pro Ser Pro Pro Thr Thr Thr Pro Ser Pro Pro Thr
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Thr Thr Thr Thr Thr Pro Pro Pro Thr Thr Thr Pro Ser Pro Pro
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Thr Thr Thr Pro Ser Pro Pro Thr Thr Thr Thr Pro Ser Pro Pro
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Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr
3380 3385 3390
Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro
3395 3400 3405
Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr
3410 3415 3420
Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr
3425 3430 3435
Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr
3440 3445 3450
Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr
3455 3460 3465
Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro
3470 3475 3480
Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro
3485 3490 3495
Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr
3500 3505 3510
Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr
3515 3520 3525
Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr
3530 3535 3540
Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr
3545 3550 3555
Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln
3560 3565 3570
Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro
3575 3580 3585
Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile
3590 3595 3600
Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr
3605 3610 3615
Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr
3620 3625 3630
Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro
3635 3640 3645
Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly
3650 3655 3660
Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val
3665 3670 3675
Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr
3680 3685 3690
Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr
3695 3700 3705
Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr
3710 3715 3720
Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr
3725 3730 3735
Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro
3740 3745 3750
Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr
3755 3760 3765
Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr
3770 3775 3780
Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr
3785 3790 3795
Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr
3800 3805 3810
Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro
3815 3820 3825
Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro
3830 3835 3840
Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr
3845 3850 3855
Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr
3860 3865 3870
Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr
3875 3880 3885
Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr
3890 3895 3900
Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln
3905 3910 3915
Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro
3920 3925 3930
Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile
3935 3940 3945
Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr
3950 3955 3960
Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr
3965 3970 3975
Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro
3980 3985 3990
Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly
3995 4000 4005
Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val
4010 4015 4020
Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr
4025 4030 4035
Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr
4040 4045 4050
Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr
4055 4060 4065
Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr
4070 4075 4080
Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro
4085 4090 4095
Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr
4100 4105 4110
Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr
4115 4120 4125
Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr
4130 4135 4140
Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr
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Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Pro
4160 4165 4170
Thr Thr Thr Pro Ile Thr Thr Thr Thr Thr Val Thr Pro Thr Pro
4175 4180 4185
Thr Pro Thr Gly Thr Gln Thr Gly Pro Pro Thr His Thr Ser Thr
4190 4195 4200
Ala Pro Ile Ala Glu Leu Thr Thr Ser Asn Pro Pro Pro Glu Ser
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Ser Thr Pro Gln Thr Ser Arg Ser Thr Ser Ser Pro Leu Thr Glu
4220 4225 4230
Ser Thr Thr Leu Leu Ser Thr Leu Pro Pro Ala Ile Glu Met Thr
4235 4240 4245
Ser Thr Ala Pro Pro Ser Thr Pro Thr Ala Pro Thr Thr Thr Ser
4250 4255 4260
Gly Gly His Thr Leu Ser Pro Pro Pro Ser Thr Thr Thr Ser Pro
4265 4270 4275
Pro Gly Thr Pro Thr Arg Gly Thr Thr Thr Gly Ser Ser Ser Ala
4280 4285 4290
Pro Thr Pro Ser Thr Val Gln Thr Thr Thr Thr Ser Ala Trp Thr
4295 4300 4305
Pro Thr Pro Thr Pro Leu Ser Thr Pro Ser Ile Ile Arg Thr Thr
4310 4315 4320
Gly Leu Arg Pro Tyr Pro Ser Ser Val Leu Ile Cys Cys Val Leu
4325 4330 4335
Asn Asp Thr Tyr Tyr Ala Pro Gly Glu Glu Val Tyr Asn Gly Thr
4340 4345 4350
Tyr Gly Asp Thr Cys Tyr Phe Val Asn Cys Ser Leu Ser Cys Thr
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Leu Glu Phe Tyr Asn Trp Ser Cys Pro Ser Thr Pro Ser Pro Thr
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Pro Thr Pro Ser Lys Ser Thr Pro Thr Pro Ser Lys Pro Ser Ser
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Thr Pro Ser Lys Pro Thr Pro Gly Thr Lys Pro Pro Glu Cys Pro
4400 4405 4410
Asp Phe Asp Pro Pro Arg Gln Glu Asn Glu Thr Trp Trp Leu Cys
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Asp Cys Phe Met Ala Thr Cys Lys Tyr Asn Asn Thr Val Glu Ile
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Tyr Val Thr Phe Asp Gly Leu Tyr Tyr Ser Tyr Gln Gly Asn Cys
4490 4495 4500
Thr Tyr Val Leu Val Glu Glu Ile Ser Pro Ser Val Asp Asn Phe
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Gly Val Tyr Ile Asp Asn Tyr His Cys Asp Pro Asn Asp Lys Val
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Ser Cys Pro Arg Thr Leu Ile Val Arg His Glu Thr Gln Glu Val
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Leu Ile Lys Thr Val His Met Met Pro Met Gln Val Gln Val Gln
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Glu Val Tyr Gln Ser Gly Ile Asn Tyr Val Val Asp Ile Pro Glu
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Leu Gly Val Leu Val Ser Tyr Asn Gly Leu Ser Phe Ser Val Arg
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Leu Pro Tyr His Arg Phe Gly Asn Asn Thr Lys Gly Gln Cys Gly
4610 4615 4620
Thr Cys Thr Asn Thr Thr Ser Asp Asp Cys Ile Leu Pro Ser Gly
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Glu Ile Val Ser Asn Cys Glu Ala Ala Ala Asp Gln Trp Leu Val
4640 4645 4650
Asn Asp Pro Ser Lys Pro His Cys Pro His Ser Ser Ser Thr Thr
4655 4660 4665
Lys Arg Pro Ala Val Thr Val Pro Gly Gly Gly Lys Thr Thr Pro
4670 4675 4680
His Lys Asp Cys Thr Pro Ser Pro Leu Cys Gln Leu Ile Lys Asp
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Ser Leu Phe Ala Gln Cys His Ala Leu Val Pro Pro Gln His Tyr
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Tyr Asp Ala Cys Val Phe Asp Ser Cys Phe Met Pro Gly Ser Ser
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4730 4735 4740
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Leu Val Glu Cys Pro Ser His Arg Glu Tyr Gln Ala Cys Gly Pro
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Asp Cys Lys Asn Cys Val Cys Leu Glu Gly Gly Ser Gly Ile Ile
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Cys Asn Thr Ser Cys Ser Pro Gly Phe Glu Leu Met Glu Ala Pro
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Gly Glu Cys Cys Lys Lys Cys Glu Gln Thr His Cys Ile Ile Lys
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Ser Asp Pro Lys Asn Asn Cys Thr Phe Phe Ser Cys Val Lys Ile
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5030 5035 5040
Phe Asp Ala Ser Ile Cys Ile Pro Gly Ser Ile Thr Phe Met Pro
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Asn Gly Cys Cys Lys Thr Cys Thr Pro Arg Asn Glu Thr Arg Val
5060 5065 5070
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Cys Ser Cys Cys Lys Glu Glu Lys Thr Ser Gln Arg Glu Val Val
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Leu Ser Cys Pro Asn Gly Gly Ser Leu Thr His Thr Tyr Thr His
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Ile Glu Ser Cys Gln Cys Gln Asp Thr Val Cys Gly Leu Pro Thr
5150 5155 5160
Gly Thr Ser Arg Arg Ala Arg Arg Ser Pro Arg His Leu Gly Ser
5165 5170 5175
Gly

<210> 30
<211> 15720
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 30
caacccacac cgcccctgcc agccaccatg gggctgccac tagcccgcct ggcggctgtg 60
tgcctggccc tgtctttggc agggggctcg gagctccaga cagagggcag aacccgaaac 120
cacggccaca acgtctgcag cacctggggc aacttccact acaagacctt cgacggggac 180
gtcttccgct tccccggccc ctgcgactac aacttcgcct ccgactgccg aggctcctac 240
aaggaatttg ctgtgcacct gaagcggggt ccgggccagg ctgaggcccc cgccggggtg 300
gagtccatcc tgctgaccat caaggatgac accatctacc tcacccgcca cctggctgtg 360
cttaacgggg ccgtggtcag caccccgcac tacagccccg ggctgctcat tgagaagagc 420
gatgcctaca ccaaagtcta ctcccgcgcc ggcctcaccc tcatgtggaa ccgggaggat 480
gcactcatgc tggagctgga cactaagttc cggaaccaca cctgtggcct ctgcggggac 540
tacaacggcc tgcagagcta ttcagaattc ctctctgacg gcgtgctctt cagtcccctg 600
gagtttggga acatgcagaa gatcaaccag cccgatgtgg tgtgtgagga tcccgaggag 660
gaggtggccc ccgcatcctg ctccgagcac cgcgccgagt gtgagaggct gctgaccgcc 720
gaggccttcg cggactgtca ggacctggtg ccgctggagc cgtatctgcg cgcctgccag 780
caggaccgct gccggtgccc gggcggtgac acctgcgtct gcagcaccgt ggccgagttc 840
tcccgccagt gctcccacgc cggcggccgg cccgggaact ggaggaccgc cacgctctgc 900
cccaagacct gccccgggaa cctggtgtac ctggagagcg gctcgccctg catggacacc 960
tgctcacacc tggaggtgag cagcctgtgc gaggagcacc gcatggacgg ctgtttctgc 1020
ccagaaggca ccgtatatga cgacatcggg gacagtggct gcgttcctgt gagccagtgc 1080
cactgcaggc tgcacggaca cctgtacaca ccgggccagg agatcaccaa tgactgcgag 1140
cagtgtgtct gtaacgctgg ccgctgggtg tgcaaagacc tgccctgccc cggcacctgt 1200
gccctggaag gcggctccca catcaccacc ttcgatggga agacgtacac cttccacggg 1260
gactgctact atgtcctggc caagggtgac cacaacgatt cctacgctct cctgggcgag 1320
ctggccccct gtggctccac agacaagcag acctgcctga agacggtggt gctgctggct 1380
gacaagaaga agaatgtggt ggtcttcaag tccgatggca gtgtactgct caacgagctg 1440
caggtgaacc tgccccacgt gaccgcgagc ttctctgtct tccgcccgtc ttcctaccac 1500
atcatggtga gcatggccat tggcgtccgg ctgcaggtgc agctggcccc agtcatgcaa 1560
ctctttgtga cactggacca ggcctcccag gggcaggtgc agggcctctg cgggaacttc 1620
aacggcctgg aaggtgacga cttcaagacg gccagcgggc tggtggaggc cacgggggcc 1680
ggctttgcca acacctggaa ggcacagtca acctgccatg acaagctgga ctggttggac 1740
gatccctgct ccctgaacat cgagagcgcc aactacgccg agcactggtg ctccctcctg 1800
aagaagacag agaccccctt tggcaggtgc cactcggctg tggaccctgc tgagtattac 1860
aagaggtgca aatatgacac gtgtaactgt cagaacaatg aggactgcct gtgcgccgcc 1920
ctgtcctcct acgcgcgcgc ctgcaccgcc aagggcgtca tgctgtgggg ctggcgggag 1980
catgtctgca acaaggatgt gggctcctgc cccaactcgc aggtcttcct gtacaacctg 2040
accacctgcc agcagacctg ccgctccctc tccgaggccg acagccactg tctcgagggc 2100
tttgcgcctg tggacggctg cggctgccct gaccacacct tcctggacga gaagggccgc 2160
tgcgtacccc tggccaagtg ctcctgttac caccgcggtc tctacctgga ggcgggggac 2220
gtggtcgtca ggcaggaaga acgatgtgtg tgccgggatg ggcggctgca ctgtaggcag 2280
atccggctga tcggccagag ctgcacggcc ccaaagatcc acatggactg cagcaacctg 2340
actgcactgg ccacctcgaa gccccgagcc ctcagctgcc agacgctggc cgccggctat 2400
taccacacag agtgtgtcag tggctgtgtg tgccccgacg ggctgatgga tgacggccgg 2460
ggtggctgcg tggtggagaa ggaatgccct tgcgtccata acaacgacct gtattcttcc 2520
ggcgccaaga tcaaggtgga ctgcaatacc tgcacctgca agagaggacg ctgggtgtgc 2580
acccaggctg tgtgccatgg cacctgctcc atttacggga gtggccacta catcaccttt 2640
gacgggaagt actacgactt tgacggacac tgctcctacg tggctgttca ggactactgc 2700
ggccagaact cctcactggg ctcattcagc atcatcaccg agaacgtccc ctgtggcact 2760
acgggcgtca cctgctccaa ggccatcaag atcttcatgg ggaggacgga gctgaagttg 2820
gaagacaagc accgtgtggt gatccagcgt gatgagggtc accacgtggc ctacaccacg 2880
cgggaggtgg gccagtacct ggtggtggag tccagcacgg gcatcatcgt catctgggac 2940
aagaggacca ccgtgttcat caagctggct ccctcctaca agggcaccgt gtgtggcctg 3000
tgtgggaact ttgaccaccg ctccaacaac gacttcacca cgcgggacca catggtggtg 3060
agcagcgagc tggacttcgg gaacagctgg aaggaggccc ccacctgccc agatgtgagc 3120
accaaccccg agccctgcag cctgaacccg caccgccgct cctgggccga gaagcagtgc 3180
agcatcctca aaagcagcgt gttcagcatc tgccacagca aggtggaccc caagcccttc 3240
tacgaggcct gtgtgcacga ctcgtgctcc tgtgacacgg gtggggactg tgagtgcttc 3300
tgctctgccg tggcctccta cgcccaggag tgtaccaaag agggggcctg cgtgttctgg 3360
aggacgccgg acctgtgccc catattctgc gactactaca accctccgca tgagtgtgag 3420
tggcactatg agccatgtgg gaaccggagc ttcgagacct gcaggaccat caatggcatc 3480
cactccaaca tctccgtgtc ctacctggag ggctgctacc cccggtgccc caaggacagg 3540
cccatctatg aggaggatct gaagaagtgt gtcactgcag acaagtgtgg ctgctatgtc 3600
gaggacaccc actacccacc tggagcatcg gttcccaccg aggagacctg caagtcctgc 3660
gtgtgtacca actcctccca agtcgtctgc aggccggagg aaggaaagat tcttaaccag 3720
acccaggatg gcgccttctg ctactgggag atctgtggcc ccaacgggac ggtggagaag 3780
cacttcaaca tctgttccat tacgacacgc ccgtccaccc tgaccacctt caccaccatc 3840
accctcccca ccacccccac caccttcacc actaccacca ccaccaccac cccgacctcc 3900
agcacagttt tatcaacaac tccgaagctg tgctgcctct ggtctgactg gatcaatgag 3960
gaccacccca gcagtggcag cgacgacggt gaccgagaaa catttgatgg ggtctgcggg 4020
gcccctgagg acatcgagtg caggtcggtc aaggatcccc acctcagctt ggagcagcta 4080
ggccagaagg tgcagtgtga tgtctctgtt gggttcattt gcaagaatga agaccagttt 4140
ggaaatggac catttggact gtgttacgac tacaagatac gtgtcaattg ttgctggccc 4200
atggataagt gtatcaccac tcccagccct ccaactacca ctcccagccc tccaccaacc 4260
agcacgacca cccttccacc aaccaccacc cccagccctc caaccaccac cacaaccacc 4320
cctccaccaa ccaccacccc cagccctcca ataaccacca cgaccacccc tccaccaacc 4380
accactccca gccctccaat aagcaccaca accacccctc caccaaccac cactcccagc 4440
cctccaacca ccactcccag ccctccaacc accactccca gccctccaac aaccaccaca 4500
accacccctc caccaaccac cactcccagc cctccaacga ctacgcccat cactccacca 4560
gccagcacta ccacccttcc accaaccacc actcccagcc ctccaacaac caccacaacc 4620
acccctccac caaccaccac tcccagtcct ccaacgacta cgcccatcac tccaccaacc 4680
agcactacta cccttccacc aaccaccact cccagccctc caccaaccac cacaaccacc 4740
cctccaccaa ccaccactcc cagccctcca acaaccacca ctcccagtcc tccaacaatc 4800
accacaacca cccctccacc aaccaccact cccagccctc caacaacgac cacaaccacc 4860
cctccaccaa ccaccactcc cagccctcca acgactacac ccatcactcc accaaccagc 4920
actaccaccc ttccaccaac caccactccc agccctccac caaccaccac aaccacccct 4980
ccaccaacca ccactcccag ccctccaaca accaccactc ccagccctcc aataaccacc 5040
acaaccaccc ctccaccaac caccactccc agctctccaa taaccaccac tcccagccct 5100
ccaacaacca ccatgaccac cccttcacca accaccaccc ccagctctcc aataaccacc 5160
acaaccaccc cttcctcaac taccactccc agccctccac caaccaccat gaccacccct 5220
tcaccaacca ccactcccag ccctccaaca accaccatga ccacccttcc accaaccacc 5280
acttccagcc ctctaacaac tactcctcta cctccatcaa taactcctcc tacattttca 5340
ccattctcaa cgacaacccc tactacccca tgcgtgcctc tctgcaattg gactggctgg 5400
ctggattctg gaaaacccaa ctttcacaaa ccaggtggag acacagaatt gattggagac 5460
gtctgtggac caggctgggc agctaacatc tcttgcagag ccaccatgta tcctgatgtt 5520
cccattggac agcttggaca aacagtggtg tgtgatgtct ctgtggggct gatatgcaaa 5580
aatgaagacc aaaagccagg tggggtcatc cctatggcct tctgcctcaa ctacgagatc 5640
aacgttcagt gctgtgagtg tgtcacccaa cccaccacca tgacaaccac caccacagag 5700
aacccaactc cgccaaccac gacacccatc accaccacca ctacggtgac cccaacccca 5760
acacccaccg gcacacagac cccaaccacg acacccatca ccaccaccac tacggtgacc 5820
ccaaccccaa cacccaccgg cacacagacc ccaaccacga cacccatcac caccaccact 5880
acggtgaccc caaccccaac acccaccggc acacagaccc caaccacgac acccatcacc 5940
accaccacta cggtgacccc aaccccaaca cccaccggca cacagacccc aaccacgaca 6000
cccatcacca ccaccactac ggtgacccca accccaacac ccaccggcac acagacccca 6060
accacgacac ccatcaccac caccactacg gtgaccccaa ccccaacacc caccggcaca 6120
cagaccccaa ccacgacacc catcaccacc accactacgg tgaccccaac cccaacaccc 6180
accggcacac agaccccaac cacgacaccc atcaccacca ccactacggt gaccccaacc 6240
ccaacaccca ccggcacaca gaccccaacc acgacaccca tcaccaccac cactacggtg 6300
accccaaccc caacacccac cggcacacag accccaacca cgacacccat caccaccacc 6360
actacggtga ccccaacccc aacacccacc ggcacacaga ccccaaccac gacacccatc 6420
accaccacca ctacggtgac cccaacccca acacccaccg gcacacagac cccaaccacg 6480
acacccatca ccaccaccac tacggtgacc ccaaccccaa cacccaccgg cacacagacc 6540
ccaaccacga cacccatcac caccaccact acggtgaccc caaccccaac acccaccggc 6600
acacagaccc caaccacgac acccatcacc accaccacta cggtgacccc aaccccaaca 6660
cccaccggca cacagacccc aaccacgaca cccatcacca ccaccactac ggtgacccca 6720
accccaacac ccaccggcac acagacccca accacgacac ccatcaccac caccactacg 6780
gtgaccccaa ccccaacacc caccggcaca cagaccccaa ccacgacacc catcaccacc 6840
accactacgg tgaccccaac cccaacaccc accggcacac agaccccaac cacgacaccc 6900
atcaccacca ccactacggt gaccccaacc ccaacaccca ccggcacaca gaccccaacc 6960
acgacaccca tcaccaccac cactacggtg accccaaccc caacacccac cggcacacag 7020
accccaacca cgacacccat caccaccacc actacggtga ccccaacccc aacacccacc 7080
ggcacacaga ccccaaccac gacacccatc accaccacca ctacggtgac cccaacccca 7140
acacccaccg gcacacagac cccaaccacg acacccatca ccaccaccac tacggtgacc 7200
ccaaccccaa cacccaccgg cacacagacc ccaaccacga cacccatcac caccaccact 7260
acggtgaccc caaccccaac acccaccggc acacagaccc caaccacgac acccatcacc 7320
accaccacta cggtgacccc aaccccaaca cccaccggca cacagacccc aaccacgaca 7380
cccatcacca ccaccactac ggtgacccca accccaacac ccaccggcac acagacccca 7440
accacgacac ccatcaccac caccactacg gtgaccccaa ccccaacacc caccggcaca 7500
cagaccccaa ccacgacacc catcaccacc accactacgg tgaccccaac cccaacaccc 7560
accggcacac agaccccaac cacgacaccc atcaccacca ccactacggt gaccccaacc 7620
ccaacaccca ccggcacaca gaccccaacc acgacaccca tcaccaccac cactacggtg 7680
accccaaccc caacacccac cggcacacag accccaacca cgacacccat caccaccacc 7740
actacggtga ccccaacccc aacacccacc ggcacacaga ccccaaccac gacacccatc 7800
accaccacca ctacggtgac cccaacccca acacccaccg gcacacagac cccaaccacg 7860
acacccatca ccaccaccac tacggtgacc ccaaccccaa cacccaccgg cacacagacc 7920
ccaaccacga cacccatcac caccaccact acggtgaccc caaccccaac acccaccggc 7980
acacagaccc caaccacgac acccatcacc accaccacta cggtgacccc aaccccaaca 8040
cccaccggca cacagacccc aaccacgaca cccatcacca ccaccactac ggtgacccca 8100
accccaacac ccaccggcac acagacccca accacgacac ccatcaccac caccactacg 8160
gtgaccccaa ccccaacacc caccggcaca cagaccccaa ccacgacacc catcaccacc 8220
accactacgg tgaccccaac cccaacaccc accggcacac agaccccaac cacgacaccc 8280
atcaccacca ccactacggt gaccccaacc ccaacaccca ccggcacaca gaccccaacc 8340
acgacaccca tcaccaccac cactacggtg accccaaccc caacacccac cggcacacag 8400
accccaacca cgacacccat caccaccacc actacggtga ccccaacccc aacacccacc 8460
ggcacacaga ccccaaccac gacacccatc accaccacca ctacggtgac cccaacccca 8520
acacccaccg gcacacagac cccaaccacg acacccatca ccaccaccac tacggtgacc 8580
ccaaccccaa cacccaccgg cacacagacc ccaaccacga cacccatcac caccaccact 8640
acggtgaccc caaccccaac acccaccggc acacagaccc caaccacgac acccatcacc 8700
accaccacta cggtgacccc aaccccaaca cccaccggca cacagacccc aaccacgaca 8760
cccatcacca ccaccactac ggtgacccca accccaacac ccaccggcac acagacccca 8820
accacgacac ccatcaccac caccactacg gtgaccccaa ccccaacacc caccggcaca 8880
cagaccccaa ccacgacacc catcaccacc accactacgg tgaccccaac cccaacaccc 8940
accggcacac agaccccaac cacgacaccc atcaccacca ccactacggt gaccccaacc 9000
ccaacaccca ccggcacaca gaccccaacc acgacaccca tcaccaccac cactacggtg 9060
accccaaccc caacacccac cggcacacag accccaacca cgacacccat caccaccacc 9120
actacggtga ccccaacccc aacacccacc ggcacacaga ccccaaccac gacacccatc 9180
accaccacca ctacggtgac cccaacccca acacccaccg gcacacagac cccaaccacg 9240
acacccatca ccaccaccac tacggtgacc ccaaccccaa cacccaccgg cacacagacc 9300
ccaaccacga cacccatcac caccaccact acggtgaccc caaccccaac acccaccggc 9360
acacagaccc caaccacgac acccatcacc accaccacta cggtgacccc aaccccaaca 9420
cccaccggca cacagacccc aaccacgaca cccatcacca ccaccactac ggtgacccca 9480
accccaacac ccaccggcac acagacccca accacgacac ccatcaccac caccactacg 9540
gtgaccccaa ccccaacacc caccggcaca cagaccccaa ccacgacacc catcaccacc 9600
accactacgg tgaccccaac cccaacaccc accggcacac agaccccaac cacgacaccc 9660
atcaccacca ccactacggt gaccccaacc ccaacaccca ccggcacaca gaccccaacc 9720
acgacaccca tcaccaccac cactacggtg accccaaccc caacacccac cggcacacag 9780
accccaacca cgacacccat caccaccacc actacggtga ccccaacccc aacacccacc 9840
ggcacacaga ccccaaccac gacacccatc accaccacca ctacggtgac cccaacccca 9900
acacccaccg gcacacagac cccaaccacg acacccatca ccaccaccac tacggtgacc 9960
ccaaccccaa cacccaccgg cacacagacc ccaaccacga cacccatcac caccaccact 10020
acggtgaccc caaccccaac acccaccggc acacagaccc caaccacgac acccatcacc 10080
accaccacta cggtgacccc aaccccaaca cccaccggca cacagacccc aaccacgaca 10140
cccatcacca ccaccactac ggtgacccca accccaacac ccaccggcac acagacccca 10200
accacgacac ccatcaccac caccactacg gtgaccccaa ccccaacacc caccggcaca 10260
cagaccccaa ccacgacacc catcaccacc accactacgg tgaccccaac cccaacaccc 10320
accggcacac agaccccaac cacgacaccc atcaccacca ccactacggt gaccccaacc 10380
ccaacaccca ccggcacaca gaccccaacc acgacaccca tcaccaccac cactacggtg 10440
accccaaccc caacacccac cggcacacag accccaacca cgacacccat caccaccacc 10500
actacggtga ccccaacccc aacacccacc ggcacacaga ccccaaccac gacacccatc 10560
accaccacca ctacggtgac cccaacccca acacccaccg gcacacagac cccaaccacg 10620
acacccatca ccaccaccac tacggtgacc ccaaccccaa cacccaccgg cacacagacc 10680
ccaaccacga cacccatcac caccaccact acggtgaccc caaccccaac acccaccggc 10740
acacagaccc caaccacgac acccatcacc accaccacta cggtgacccc aaccccaaca 10800
cccaccggca cacagacccc aaccacgaca cccatcacca ccaccactac ggtgacccca 10860
accccaacac ccaccggcac acagacccca accacgacac ccatcaccac caccactacg 10920
gtgaccccaa ccccaacacc caccggcaca cagaccccaa ccacgacacc catcaccacc 10980
accactacgg tgaccccaac cccaacaccc accggcacac agaccccaac cacgacaccc 11040
atcaccacca ccactacggt gaccccaacc ccaacaccca ccggcacaca gaccccaacc 11100
acgacaccca tcaccaccac cactacggtg accccaaccc caacacccac cggcacacag 11160
accccaacca cgacacccat caccaccacc actacggtga ccccaacccc aacacccacc 11220
ggcacacaga ccccaaccac gacacccatc accaccacca ctacggtgac cccaacccca 11280
acacccaccg gcacacagac cccaaccacg acacccatca ccaccaccac tacggtgacc 11340
ccaaccccaa cacccaccgg cacacagacc ccaaccacga cacccatcac caccaccact 11400
acggtgaccc caaccccaac acccaccggc acacagaccc caaccacgac acccatcacc 11460
accaccacta cggtgacccc aaccccaaca cccaccggca cacagacccc aaccacgaca 11520
cccatcacca ccaccactac ggtgacccca accccaacac ccaccggcac acagacccca 11580
accacgacac ccatcaccac caccactacg gtgaccccaa ccccaacacc caccggcaca 11640
cagaccccaa ccacgacacc catcaccacc accactacgg tgaccccaac cccaacaccc 11700
accggcacac agaccccaac cacgacaccc atcaccacca ccactacggt gaccccaacc 11760
ccaacaccca ccggcacaca gaccccaacc acgacaccca tcaccaccac cactacggtg 11820
accccaaccc caacacccac cggcacacag accccaacca cgacacccat caccaccacc 11880
actacggtga ccccaacccc aacacccacc ggcacacaga ccccaaccac gacacccatc 11940
accaccacca ctacggtgac cccaacccca acacccaccg gcacacagac cccaaccacg 12000
acacccatca ccaccaccac tacggtgacc ccaaccccaa cacccaccgg cacacagacc 12060
ccaaccacga cacccatcac caccaccact acggtgaccc caaccccaac acccaccggc 12120
acacagaccc caaccacgac acccatcacc accaccacta cggtgacccc aaccccaaca 12180
cccaccggca cacagacccc aaccacgaca cccatcacca ccaccactac ggtgacccca 12240
accccaacac ccaccggcac acagacccca accacgacac ccatcaccac caccactacg 12300
gtgaccccaa ccccaacacc caccggcaca cagaccccaa ccacgacacc catcaccacc 12360
accactacgg tgaccccaac cccaacaccc accggcacac agaccccaac cacgacaccc 12420
atcaccacca ccactacggt gaccccaacc ccaacaccca ccggcacaca gaccccaacc 12480
acgacaccca tcaccaccac cactacggtg accccaaccc caacacccac cggcacacag 12540
accccaacca cgacacccat caccaccacc actacggtga ccccaacccc aacacccacc 12600
ggcacacaga ccgggccccc cacccacaca agcacagcac cgattgctga gttgaccaca 12660
tccaatcctc cgcctgagtc ctcaacccct cagacctctc ggtccacctc ttcccctctc 12720
acggagtcaa ccacccttct gagtacccta ccacctgcca ttgagatgac cagcacggcc 12780
ccaccctcca cacccacggc acccacgacc acgagcggag gccacacact gtctccaccg 12840
cccagcacca ccacgtcccc tccaggcacc cccactcgcg gtaccacgac tgggtcatct 12900
tcagccccca cccccagcac tgtgcagacg accaccacca gtgcctggac ccccacgccg 12960
accccactct ccacacccag catcatcagg accacaggcc tgaggcccta cccttcctct 13020
gtgcttatct gctgtgtcct gaacgacacc tactacgcac caggtgagga ggtgtacaac 13080
ggcacatacg gagacacctg ttatttcgtc aactgctcac tgagctgtac gttggagttc 13140
tataactggt cctgcccatc cacgccctcc ccaacaccca cgccctccaa gtcgacgccc 13200
acgccttcca agccatcgtc cacgccctcc aagccgacgc ccggcaccaa gccccccgag 13260
tgcccagact ttgatcctcc cagacaggag aacgagactt ggtggctgtg cgactgcttc 13320
atggccacgt gcaagtacaa caacacggtg gagatcgtga aggtggagtg tgagccgccg 13380
cccatgccca cctgctccaa cggcctccaa cccgtgcgcg tcgaggaccc cgacggctgc 13440
tgctggcact gggagtgcga ctgctactgc acgggctggg gcgacccgca ctatgtcacc 13500
ttcgacggac tctactacag ctaccagggc aactgcacct acgtgctggt ggaggagatc 13560
agcccctccg tggacaactt cggagtttac atcgacaact accactgcga tcccaacgac 13620
aaggtgtcct gcccccgcac cctcatcgtg cgccacgaga cccaggaggt gctgatcaag 13680
accgtgcata tgatgcccat gcaggtgcag gtgcaggtga acaggcaggc ggtggcactg 13740
ccctacaaga agtacgggct ggaggtgtac cagtctggca tcaactacgt ggtggacatc 13800
cccgagctgg gtgtcctcgt ctcctacaat ggcctgtcct tctccgtcag gctgccctac 13860
caccggtttg gcaacaacac caagggccag tgtggcacct gcaccaacac cacctccgac 13920
gactgcattc tgcccagcgg ggagatcgtc tccaactgtg aggctgcggc tgaccagtgg 13980
ctggtgaacg acccctccaa gccacactgc ccccacagca gctccacgac caagcgcccg 14040
gccgtcactg tgcccggggg cggtaaaacg accccacaca aggactgcac cccatctccc 14100
ctctgccagc tcatcaagga cagcctgttt gcccagtgcc acgcactggt gcccccgcag 14160
cactactacg atgcctgcgt gttcgacagc tgcttcatgc cgggctcgag cctggagtgc 14220
gccagtctgc aggcctacgc agccctctgt gcccagcaga acatctgcct cgactggcgg 14280
aaccacacgc atggggcctg cttggtggag tgcccatctc acagggagta ccaggcctgt 14340
ggccctgcag aagagcccac gtgcaaatcc agctcctccc agcagaacaa cacagtcctg 14400
gtggaaggct gcttctgtcc tgagggcacc atgaactacg ctcctggctt tgatgtctgc 14460
gtgaagacct gcggctgtgt gggacctgac aatgtgccca gagagtttgg ggagcacttc 14520
gagttcgact gcaagaactg tgtctgcctg gagggtggaa gtggcatcat ctgccaaccc 14580
aagaggtgca gccagaagcc cgttacccac tgcgtggaag acggcaccta cctcgccacg 14640
gaggtcaacc ctgccgacac ctgctgcaac attaccgtct gcaagtgcaa caccagcctg 14700
tgcaaagaga agccctccgt gtgcccgctg ggattcgaag tgaagagcaa gatggtgcct 14760
ggaaggtgct gtcctttcta ctggtgtgag tccaaggggg tgtgtgttca cgggaatgct 14820
gagtaccagc ccggttctcc agtttattcc tccaagtgcc aggactgcgt gtgcacggac 14880
aaggtggaca acaacaccct gctcaacgtc atcgcctgca cccacgtgcc ctgcaacacc 14940
tcctgcagcc ctggcttcga actcatggag gcccccgggg agtgctgtaa gaagtgtgaa 15000
cagacgcact gtatcatcaa acggcccgac aaccagcacg tcatcctgaa gcccggggac 15060
ttcaagagcg acccgaagaa caactgcaca ttcttcagct gcgtgaagat ccacaaccag 15120
ctcatctcgt ccgtctccaa catcacctgc cccaactttg atgccagcat ttgcatcccg 15180
ggctccatca cattcatgcc caatggatgc tgcaagacct gcacccctcg caatgagacc 15240
agggtgccct gctccaccgt ccccgtcacc acggaggttt cgtacgccgg ctgcaccaag 15300
accgtcctca tgaatcattg ctccgggtcc tgcgggacat ttgtcatgta ctcggccaag 15360
gcccaggccc tggaccacag ctgctcctgc tgcaaagagg agaaaaccag ccagcgtgag 15420
gtggtcctga gctgccccaa tggcggctcg ctgacacaca cctacaccca catcgagagc 15480
tgccagtgcc aggacaccgt ctgcgggctc cccaccggca cctcccgccg ggcccggcgc 15540
tcccctaggc atctggggag cgggtgagcg gggtgggcac agcccccttc actgccctcg 15600
acagctttac ctcccccgga ccctctgagc ctcctaagct cggcttcctc tcttcagata 15660
tttattgtct gagtctttgt tcagtccttg ctttccaata ataaactcag ggggacatgc 15720

<210> 31
<211> 324
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 31
Met Phe Pro Ser Pro Ala Leu Thr Pro Thr Pro Phe Ser Val Lys Asp
1 5 10 15
Ile Leu Asn Leu Glu Gln Gln Gln Arg Ser Leu Ala Ala Ala Gly Glu
20 25 30
Leu Ser Ala Arg Leu Glu Ala Thr Leu Ala Pro Ser Ser Cys Met Leu
35 40 45
Ala Ala Phe Lys Pro Glu Ala Tyr Ala Gly Pro Glu Ala Ala Ala Pro
50 55 60
Gly Leu Pro Glu Leu Arg Ala Glu Leu Gly Arg Ala Pro Ser Pro Ala
65 70 75 80
Lys Cys Ala Ser Ala Phe Pro Ala Ala Pro Ala Phe Tyr Pro Arg Ala
85 90 95
Tyr Ser Asp Pro Asp Pro Ala Lys Asp Pro Arg Ala Glu Lys Lys Glu
100 105 110
Leu Cys Ala Leu Gln Lys Ala Val Glu Leu Glu Lys Thr Glu Ala Asp
115 120 125
Asn Ala Glu Arg Pro Arg Ala Arg Arg Arg Arg Lys Pro Arg Val Leu
130 135 140
Phe Ser Gln Ala Gln Val Tyr Glu Leu Glu Arg Arg Phe Lys Gln Gln
145 150 155 160
Arg Tyr Leu Ser Ala Pro Glu Arg Asp Gln Leu Ala Ser Val Leu Lys
165 170 175
Leu Thr Ser Thr Gln Val Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Tyr Lys
180 185 190
Cys Lys Arg Gln Arg Gln Asp Gln Thr Leu Glu Leu Val Gly Leu Pro
195 200 205
Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ala Arg Arg Ile Ala Val Pro Val Leu Val
210 215 220
Arg Asp Gly Lys Pro Cys Leu Gly Asp Ser Ala Pro Tyr Ala Pro Ala
225 230 235 240
Tyr Gly Val Gly Leu Asn Pro Tyr Gly Tyr Asn Ala Tyr Pro Ala Tyr
245 250 255
Pro Gly Tyr Gly Gly Ala Ala Cys Ser Pro Gly Tyr Ser Cys Thr Ala
260 265 270
Ala Tyr Pro Ala Gly Pro Ser Pro Ala Gln Pro Ala Thr Ala Ala Ala
275 280 285
Asn Asn Asn Phe Val Asn Phe Gly Val Gly Asp Leu Asn Ala Val Gln
290 295 300
Ser Pro Gly Ile Pro Gln Ser Asn Ser Gly Val Ser Thr Leu His Gly
305 310 315 320
Ile Arg Ala Trp

<210> 32
<211> 1669
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 32
gctcctgtca tcgaggcccc tggcccaatg gcaggctgag tccccctcct ctggcctggt 60
cccgcctctc ctgccccttg tgctcagcgc tacctgctgc ccggacacat ccagagctgg 120
ccgacgggtg cgcgggcggg cggcggcacc atgcagggaa gctgccaggg gccgtgggca 180
gcgccgcttt ctgccgccca cctggcgctg tgagactggc gctgccacca tgttccccag 240
ccctgctctc acgcccacgc ccttctcagt caaagacatc ctaaacctgg aacagcagca 300
gcgcagcctg gctgccgccg gagagctctc tgcccgcctg gaggcgaccc tggcgccctc 360
ctcctgcatg ctggccgcct tcaagccaga ggcctacgct gggcccgagg cggctgcgcc 420
gggcctccca gagctgcgcg cagagctggg ccgcgcgcct tcaccggcca agtgtgcgtc 480
tgcctttccc gccgcccccg ccttctatcc acgtgcctac agcgaccccg acccagccaa 540
ggaccctaga gccgaaaaga aagagctgtg cgcgctgcag aaggcggtgg agctggagaa 600
gacagaggcg gacaacgcgg agcggccccg ggcgcgacgg cggaggaagc cgcgcgtgct 660
cttctcgcag gcgcaggtct atgagctgga gcggcgcttc aagcagcagc ggtacctgtc 720
ggcccccgaa cgcgaccagc tggccagcgt gctgaaactc acgtccacgc aggtcaagat 780
ctggttccag aaccggcgct acaagtgcaa gcggcagcgg caggaccaga ctctggagct 840
ggtggggctg cccccgccgc cgccgccgcc tgcccgcagg atcgcggtgc cagtgctggt 900
gcgcgatggc aagccatgcc taggggactc ggcgccctac gcgcctgcct acggcgtggg 960
cctcaatccc tacggttata acgcctaccc cgcctatccg ggttacggcg gcgcggcctg 1020
cagccctggc tacagctgca ctgccgctta ccccgccggg ccttccccag cgcagccggc 1080
cactgccgcc gccaacaaca acttcgtgaa cttcggcgtc ggggacttga atgcggttca 1140
gagccccggg attccgcaga gcaactcggg agtgtccacg ctgcatggta tccgagcctg 1200
gtagggaagg gacccgcgtg gcgcgaccct gaccgatccc acctcaacag ctccctgact 1260
ctcgggggga gaaggggctc ccaacatgac cctgagtccc ctggattttg cattcactcc 1320
tgcggagacc taggaacttt ttctgtccca cgcgcgtttg ttcttgcgca cgggagagtt 1380
tgtggcggcg attatgcagc gtgcaatgag tgatcctgca gcctggtgtc ttagctgtcc 1440
ccccaggagt gccctccgag agtccatggg cacccccggt tggaactggg actgagctcg 1500
ggcacgcagg gcctgagatc tggccgccca ttccgcgagc cagggccggg cgcccgggcc 1560
tttgctatct cgccgtcgcc cgcccacgca cccacccgta tttatgtttt tacctattgc 1620
tgtaagaaat gacgatcccc ttcccattaa agagagtgcg ttgaccccg 1669

<210> 33
<211> 356
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 33
Met Thr Lys Ser Tyr Ser Glu Ser Gly Leu Met Gly Glu Pro Gln Pro
1 5 10 15
Gln Gly Pro Pro Ser Trp Thr Asp Glu Cys Leu Ser Ser Gln Asp Glu
20 25 30
Glu His Glu Ala Asp Lys Lys Glu Asp Asp Leu Glu Ala Met Asn Ala
35 40 45
Glu Glu Asp Ser Leu Arg Asn Gly Gly Glu Glu Glu Asp Glu Asp Glu
50 55 60
Asp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Asp Asp Gln Lys
65 70 75 80
Pro Lys Arg Arg Gly Pro Lys Lys Lys Lys Met Thr Lys Ala Arg Leu
85 90 95
Glu Arg Phe Lys Leu Arg Arg Met Lys Ala Asn Ala Arg Glu Arg Asn
100 105 110
Arg Met His Gly Leu Asn Ala Ala Leu Asp Asn Leu Arg Lys Val Val
115 120 125
Pro Cys Tyr Ser Lys Thr Gln Lys Leu Ser Lys Ile Glu Thr Leu Arg
130 135 140
Leu Ala Lys Asn Tyr Ile Trp Ala Leu Ser Glu Ile Leu Arg Ser Gly
145 150 155 160
Lys Ser Pro Asp Leu Val Ser Phe Val Gln Thr Leu Cys Lys Gly Leu
165 170 175
Ser Gln Pro Thr Thr Asn Leu Val Ala Gly Cys Leu Gln Leu Asn Pro
180 185 190
Arg Thr Phe Leu Pro Glu Gln Asn Gln Asp Met Pro Pro His Leu Pro
195 200 205
Thr Ala Ser Ala Ser Phe Pro Val His Pro Tyr Ser Tyr Gln Ser Pro
210 215 220
Gly Leu Pro Ser Pro Pro Tyr Gly Thr Met Asp Ser Ser His Val Phe
225 230 235 240
His Val Lys Pro Pro Pro His Ala Tyr Ser Ala Ala Leu Glu Pro Phe
245 250 255
Phe Glu Ser Pro Leu Thr Asp Cys Thr Ser Pro Ser Phe Asp Gly Pro
260 265 270
Leu Ser Pro Pro Leu Ser Ile Asn Gly Asn Phe Ser Phe Lys His Glu
275 280 285
Pro Ser Ala Glu Phe Glu Lys Asn Tyr Ala Phe Thr Met His Tyr Pro
290 295 300
Ala Ala Thr Leu Ala Gly Ala Gln Ser His Gly Ser Ile Phe Ser Gly
305 310 315 320
Thr Ala Ala Pro Arg Cys Glu Ile Pro Ile Asp Asn Ile Met Ser Phe
325 330 335
Asp Ser His Ser His His Glu Arg Val Met Ser Ala Gln Leu Asn Ala
340 345 350
Ile Phe His Asp
355

<210> 34
<211> 3002
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 34
ggggaggagg ggagaacggg gagcgcacag cctggacgcg tgcgcaggcg tcaggcgcat 60
agacctgcta gcccctcagc tagcggcccc gcccgcgctt agcatcacta actgggctat 120
ataacctgag cgcccgcgcg gccacgacac gaggaattcg cccacgcagg aggcgcggcg 180
tccggaggcc ccagggttat gagactatca ctgctcagga cctactaaca acaaaggaaa 240
tcgaaacatg accaaatcgt acagcgagag tgggctgatg ggcgagcctc agccccaagg 300
tcctccaagc tggacagacg agtgtctcag ttctcaggac gaggagcacg aggcagacaa 360
gaaggaggac gacctcgaag ccatgaacgc agaggaggac tcactgagga acgggggaga 420
ggaggaggac gaagatgagg acctggaaga ggaggaagaa gaggaagagg aggatgacga 480
tcaaaagccc aagagacgcg gccccaaaaa gaagaagatg actaaggctc gcctggagcg 540
ttttaaattg agacgcatga aggctaacgc ccgggagcgg aaccgcatgc acggactgaa 600
cgcggcgcta gacaacctgc gcaaggtggt gccttgctat tctaagacgc agaagctgtc 660
caaaatcgag actctgcgct tggccaagaa ctacatctgg gctctgtcgg agatcctgcg 720
ctcaggcaaa agcccagacc tggtctcctt cgttcagacg ctttgcaagg gcttatccca 780
acccaccacc aacctggttg cgggctgcct gcaactcaat cctcggactt ttctgcctga 840
gcagaaccag gacatgcccc cccacctgcc gacggccagc gcttccttcc ctgtacaccc 900
ctactcctac cagtcgcctg ggctgcccag tccgccttac ggtaccatgg acagctccca 960
tgtcttccac gttaagcctc cgccgcacgc ctacagcgca gcgctggagc ccttctttga 1020
aagccctctg actgattgca ccagcccttc ctttgatgga cccctcagcc cgccgctcag 1080
catcaatggc aacttctctt tcaaacacga accgtccgcc gagtttgaga aaaattatgc 1140
ctttaccatg cactatcctg cagcgacact ggcaggggcc caaagccacg gatcaatctt 1200
ctcaggcacc gctgcccctc gctgcgagat ccccatagac aatattatgt ccttcgatag 1260
ccattcacat catgagcgag tcatgagtgc ccagctcaat gccatatttc atgattagag 1320
gcacgccagt ttcaccattt ccgggaaacg aacccactgt gcttacagtg actgtcgtgt 1380
ttacaaaagg cagccctttg ggtactactg ctgcaaagtg caaatactcc aagcttcaag 1440
tgatatatgt atttattgtc attactgcct ttggaagaaa caggggatca aagttcctgt 1500
tcaccttatg tattattttc tatagctctt ctatttaaaa aataaaaaaa tacagtaaag 1560
tttaaaaaat acaccacgaa tttggtgtgg ctgtattcag atcgtattaa ttatctgatc 1620
gggataacaa aatcacaagc aataattagg atctatgcaa tttttaaact agtaatgggc 1680
caattaaaat atatataaat atatattttt caaccagcat tttactactt gttacctttc 1740
ccatgctgaa ttattttgtt gtgattttgt acagaatttt taatgacttt ttataatgtg 1800
gatttcctat tttaaaacca tgcagcttca tcaattttta tacatatcag aaaagtagaa 1860
ttatatctaa tttatacaaa ataatttaac taatttaaac cagcagaaaa gtgcttagaa 1920
agttattgtg ttgccttagc acttctttcc tctccaattg taaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980
aaaaaaaaaa aaaaattgca caatttgagc aattcatttc actttaaagt ctttccgtct 2040
ccctaaaata aaaaccagaa tcataatttt caagagaaga aaaaattaag agatacattc 2100
cctatcaaaa catatcaatt caacacatta cttgcacaag cttgtatata catattataa 2160
ataaatgcca acataccctt ctttaaatca aaagctgctt gactatcaca tacaatttgc 2220
actgttactt tttagtcttt tactcctttg cattccatga ttttacagag aatctgaagc 2280
tattgatgtt tccagaaaat ataaatgcat gattttatac atagtcacaa aaatggtggt 2340
ttgtcatata ttcatgtaat aaatctgagc ctaaatctaa tcaggttgtt aatgttggga 2400
tttatatcta tagtagtcaa ttagtacagt agcttaaata aattcaaacc atttaattca 2460
taattagaac aatagctatt gcatgtaaaa tgcagtccag aataagtgct gtttgagatg 2520
tgatgctggt accactggaa tcgatctgta ctgtaatttt gtttgtaatc ctgtatatta 2580
tggtgtaatg cacaatttag aaaacattca tccagttgca ataaaatagt attgaaagtg 2640
agagcaattg ttgcatttct tcttaaaggg attctgtttt tatttttggg gaaagtagtt 2700
gcttttttgc tgagttaaaa aatactaaac actatatgta gaataaaaga aaagaaaaaa 2760
gtttaccttg gcatatgctc ttgtctgttt atcttgcaca gggagtcacc agttctatgt 2820
agataatgaa aagacctaac tgatatttca ttatttggaa tatgggactg gacggcagta 2880
caaacagtgt gtttttttct ttgttttaag tggcttagcc tttaggtttt ttatttccat 2940
ttttaaaaat gattgttaca tgttttcttc tatttctttt tttaaaaggt ggattttaat 3000
aa 3002

<210> 35
<211> 367
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 35
Met Leu Ala Val Gly Ala Met Glu Gly Thr Arg Gln Ser Ala Phe Leu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Pro Pro Leu Ala Ala Leu His Ser Met Ala Glu Met Lys
20 25 30
Thr Pro Leu Tyr Pro Ala Ala Tyr Pro Pro Leu Pro Ala Gly Pro Pro
35 40 45
Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Pro Ser Pro Pro Leu
50 55 60
Gly Thr His Asn Pro Gly Gly Leu Lys Pro Pro Ala Thr Gly Gly Leu
65 70 75 80
Ser Ser Leu Gly Ser Pro Pro Gln Gln Leu Ser Ala Ala Thr Pro His
85 90 95
Gly Ile Asn Asp Ile Leu Ser Arg Pro Ser Met Pro Val Ala Ser Gly
100 105 110
Ala Ala Leu Pro Ser Ala Ser Pro Ser Gly Ser Ser Ser Ser Ser Ser
115 120 125
Ser Ser Ala Ser Ala Ser Ser Ala Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
130 135 140
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ser Ser Pro Ala Gly Leu Leu Ala Gly Leu
145 150 155 160
Pro Arg Phe Ser Ser Leu Ser Pro Pro Pro Pro Pro Pro Gly Leu Tyr
165 170 175
Phe Ser Pro Ser Ala Ala Ala Val Ala Ala Val Gly Arg Tyr Pro Lys
180 185 190
Pro Leu Ala Glu Leu Pro Gly Arg Thr Pro Ile Phe Trp Pro Gly Val
195 200 205
Met Gln Ser Pro Pro Trp Arg Asp Ala Arg Leu Ala Cys Thr Pro His
210 215 220
Gln Gly Ser Ile Leu Leu Asp Lys Asp Gly Lys Arg Lys His Thr Arg
225 230 235 240
Pro Thr Phe Ser Gly Gln Gln Ile Phe Ala Leu Glu Lys Thr Phe Glu
245 250 255
Gln Thr Lys Tyr Leu Ala Gly Pro Glu Arg Ala Arg Leu Ala Tyr Ser
260 265 270
Leu Gly Met Thr Glu Ser Gln Val Lys Val Trp Phe Gln Asn Arg Arg
275 280 285
Thr Lys Trp Arg Lys Lys His Ala Ala Glu Met Ala Thr Ala Lys Lys
290 295 300
Lys Gln Asp Ser Glu Thr Glu Arg Leu Lys Gly Ala Ser Glu Asn Glu
305 310 315 320
Glu Glu Asp Asp Asp Tyr Asn Lys Pro Leu Asp Pro Asn Ser Asp Asp
325 330 335
Glu Lys Ile Thr Gln Leu Leu Lys Lys His Lys Ser Ser Ser Gly Gly
340 345 350
Gly Gly Gly Leu Leu Leu His Ala Ser Glu Pro Glu Ser Ser Ser
355 360 365

<210> 36
<211> 1116
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 36
cgtgggatgt tagcggtggg ggcaatggag ggcacccggc agagcgcatt cctgctcagc 60
agccctcccc tggccgccct gcacagcatg gccgagatga agaccccgct gtaccctgcc 120
gcgtatcccc cgctgcctgc cggccccccc tcctcctcgt cctcgtcgtc gtcctcctcg 180
tcgccctccc cgcctctggg cacccacaac ccaggcggcc tgaagccccc ggccacgggg 240
gggctctcat ccctcggcag ccccccgcag cagctctcgg ccgccacccc acacggcatc 300
aacgatatcc tgagccggcc ctccatgccc gtggcctcgg gggccgccct gccctccgcc 360
tcgccctccg gttcctcctc ctcctcttcc tcgtccgcct ctgcctcctc cgcctctgcc 420
gccgccgcgg ctgctgccgc ggccgcagcc gccgcctcat ccccggcggg gctgctggcc 480
ggactgccac gctttagcag cctgagcccg ccgccgccgc cgcccgggct ctacttcagc 540
cccagcgccg cggccgtggc cgccgtgggc cggtacccca agccgctggc tgagctgcct 600
ggccggacgc ccatcttctg gcccggagtg atgcagagcc cgccctggag ggacgcacgc 660
ctggcctgta cccctcatca aggatccatt ttgttggaca aagacgggaa gagaaaacac 720
acgagaccca ctttttccgg acagcagatc ttcgccctgg agaagacttt cgaacaaaca 780
aaatacttgg cggggcccga gagggctcgt ttggcctatt cgttggggat gacagagagt 840
caggtcaagg tctggttcca gaaccgccgg accaagtgga ggaagaagca cgctgccgag 900
atggccacgg ccaagaagaa gcaggactcg gagacagagc gcctcaaggg ggcctcggag 960
aacgaggaag aggacgacga ctacaataag cctctggatc ccaactcgga cgacgagaaa 1020
atcacgcagc tgttgaagaa gcacaagtcc agcagcggcg gcggcggcgg cctcctactg 1080
cacgcgtccg agccggagag ctcatcctga acgccg 1116

<210> 37
<211> 353
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 37
Met Ala Ala Glu Leu Ala Met Gly Ala Glu Leu Pro Ser Ser Pro Leu
1 5 10 15
Ala Ile Glu Tyr Val Asn Asp Phe Asp Leu Met Lys Phe Glu Val Lys
20 25 30
Lys Glu Pro Pro Glu Ala Glu Arg Phe Cys His Arg Leu Pro Pro Gly
35 40 45
Ser Leu Ser Ser Thr Pro Leu Ser Thr Pro Cys Ser Ser Val Pro Ser
50 55 60
Ser Pro Ser Phe Cys Ala Pro Ser Pro Gly Thr Gly Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Ala Gly Gly Gly Gly Gly Ser Ser Gln Ala Gly Gly Ala Pro Gly Pro
85 90 95
Pro Ser Gly Gly Pro Gly Ala Val Gly Gly Thr Ser Gly Lys Pro Ala
100 105 110
Leu Glu Asp Leu Tyr Trp Met Ser Gly Tyr Gln His His Leu Asn Pro
115 120 125
Glu Ala Leu Asn Leu Thr Pro Glu Asp Ala Val Glu Ala Leu Ile Gly
130 135 140
Ser Gly His His Gly Ala His His Gly Ala His His Pro Ala Ala Ala
145 150 155 160
Ala Ala Tyr Glu Ala Phe Arg Gly Pro Gly Phe Ala Gly Gly Gly Gly
165 170 175
Ala Asp Asp Met Gly Ala Gly His His His Gly Ala His His Ala Ala
180 185 190
His His His His Ala Ala His His His His His His His His His His
195 200 205
Gly Gly Ala Gly His Gly Gly Gly Ala Gly His His Val Arg Leu Glu
210 215 220
Glu Arg Phe Ser Asp Asp Gln Leu Val Ser Met Ser Val Arg Glu Leu
225 230 235 240
Asn Arg Gln Leu Arg Gly Phe Ser Lys Glu Glu Val Ile Arg Leu Lys
245 250 255
Gln Lys Arg Arg Thr Leu Lys Asn Arg Gly Tyr Ala Gln Ser Cys Arg
260 265 270
Phe Lys Arg Val Gln Gln Arg His Ile Leu Glu Ser Glu Lys Cys Gln
275 280 285
Leu Gln Ser Gln Val Glu Gln Leu Lys Leu Glu Val Gly Arg Leu Ala
290 295 300
Lys Glu Arg Asp Leu Tyr Lys Glu Lys Tyr Glu Lys Leu Ala Gly Arg
305 310 315 320
Gly Gly Pro Gly Ser Ala Gly Gly Ala Gly Phe Pro Arg Glu Pro Ser
325 330 335
Pro Pro Gln Ala Gly Pro Gly Gly Ala Lys Gly Thr Ala Asp Phe Phe
340 345 350
Leu

<210> 38
<211> 2058
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 38
gggtccttca ggtaggaggt cctgggtgac tttggaagtc cgtagtgtct cattgcagat 60
aatttttagc ttagggcctg gtggctaggt cggttctctc ctttccagtc ggagacctct 120
gccgcaaaca tgctccgcca gatcatcggt caggccaaga agcatccgag cttgatcccc 180
ctctttgtat ttattggaac tggagctact ggagcaacac tgtatctctt gcgtctggca 240
ttgttcaatc cagatgtttg ttgggacaga aataacccag agccctggaa caaactgggt 300
cccaatgatc aatacaagtt ctactcagtg aatgtggatt acagcaagct gaagaaggaa 360
cgtccagatt tctaaatgaa atgtttcact ataacgctgc tttagaatga aggtcttcca 420
gaagccacat ccgcacaatt ttccacttaa ccaggaaata tttctcctct aaatgcatga 480
aatcatgttg gagatctcta ttgtaatctc tattggagat tacaatgatt aaatcaataa 540
ataactgaaa cttgatatgt gtcacttttt tatgctgaaa gtatgctctg aactttagag 600
tataggaaat taactattag aatttaaaga atttcttgaa tttctgtagt ttgaaaatac 660
gactttaagc tgctttagta aaacacttcc attttgtgta tagactgttg gtaacttcac 720
tagagcatac ataacaactg gaactggaaa ttatacaaaa gtaaattggg aaggatactc 780
cagcatctga cactggcaaa atggaaacct ttgagtttct cttactggct gttgaagtgt 840
gtgcagtttt taacaatggt ttttacttgg catctctttg ttgtgatttt caaggttata 900
agttgctttg gtcctaggat tgaagttgaa atctgagttt atcagtgcta accatggtgc 960
tagtagtcaa gagatcttga gaattttggc tgctgagtct tggtgcaggg tgcaggtttt 1020
cttttctttt ttcttttttt tttttttgag atagtctctg tcacccaggc tggagtgcag 1080
tggtacaaac atggatcact gcagcctcta cctcccgggc ttaagtgatc ctcctgcctc 1140
agcccctaag tagccgggac tacaggtatg tgccaccatg cccagttaat ttttgtaatt 1200
ttttttagag acagggtttt gccatgttgc ccaggctggt ctcaaactct tgagctcaag 1260
cgatccattc tcctcagcct cccagggtgc tgggattaca ggcgtgagcc attgcgctta 1320
gccatggtgc aggttttcaa aggccaggaa gtatattcat aattttaaga tggggaatat 1380
agcaagtttt cacataggtg tgtgtaagtc atcacatcat agaaacttga ggaattcagt 1440
gacattaatt ttggattttc atacgtaagt atacaattaa atgtttacag ggtagtagaa 1500
gcacatttta aatgtcagga actgaactaa gtatttgaat tacgtggatt atctcaaaaa 1560
ttttgaaatt gttaaacgag ttgaattact tgaattcatt ctgttagtca aatggtggat 1620
atttacaccc atgtagtttt gaatttagag tgtgtagagt gttttcagtt accagactcc 1680
atgcttttac ctcctatgtg tcaggtataa tttgaacctc taagaacagg gtttctcaac 1740
cttgccactg ttgactattt ctgaaagaca gtttggttta gcagaccatc ccatgcgctt 1800
tagcttgttt agtagctaac ttgggctctg ccactacaga caaaaagcac tctttccctc 1860
caattcccac aggctatgag aagaatggag acattaccaa atgtccattg gtgggcaaaa 1920
ttgcttcatt cctacctctg ttgagaatta ctctagatcc tttggcacaa attacctcaa 1980
agtttaaaat tgtgtaaaca aacagtgtgt catgtaattg aaaaacatta agcaactcca 2040
aataaatgct acattaag 2058

<210> 39
<211> 343
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 39
Met Asn Gln Leu Gly Gly Leu Phe Val Asn Gly Arg Pro Leu Pro Leu
1 5 10 15
Asp Thr Arg Gln Gln Ile Val Arg Leu Ala Val Ser Gly Met Arg Pro
20 25 30
Cys Asp Ile Ser Arg Ile Leu Lys Val Ser Asn Gly Cys Val Ser Lys
35 40 45
Ile Leu Gly Arg Tyr Tyr Arg Thr Gly Val Leu Glu Pro Lys Gly Ile
50 55 60
Gly Gly Ser Lys Pro Arg Leu Ala Thr Pro Pro Val Val Ala Arg Ile
65 70 75 80
Ala Gln Leu Lys Gly Glu Cys Pro Ala Leu Phe Ala Trp Glu Ile Gln
85 90 95
Arg Gln Leu Cys Ala Glu Gly Leu Cys Thr Gln Asp Lys Thr Pro Ser
100 105 110
Val Ser Ser Ile Asn Arg Val Leu Arg Ala Leu Gln Glu Asp Gln Gly
115 120 125
Leu Pro Cys Thr Arg Leu Arg Ser Pro Ala Val Leu Ala Pro Ala Val
130 135 140
Leu Thr Pro His Ser Gly Ser Glu Thr Pro Arg Gly Thr His Pro Gly
145 150 155 160
Thr Gly His Arg Asn Arg Thr Ile Phe Ser Pro Ser Gln Ala Glu Ala
165 170 175
Leu Glu Lys Glu Phe Gln Arg Gly Gln Tyr Pro Asp Ser Val Ala Arg
180 185 190
Gly Lys Leu Ala Thr Ala Thr Ser Leu Pro Glu Asp Thr Val Arg Val
195 200 205
Trp Phe Ser Asn Arg Arg Ala Lys Trp Arg Arg Gln Glu Lys Leu Lys
210 215 220
Trp Glu Met Gln Leu Pro Gly Ala Ser Gln Gly Leu Thr Val Pro Arg
225 230 235 240
Val Ala Pro Gly Ile Ile Ser Ala Gln Gln Ser Pro Gly Ser Val Pro
245 250 255
Thr Ala Ala Leu Pro Ala Leu Glu Pro Leu Gly Pro Ser Cys Tyr Gln
260 265 270
Leu Cys Trp Ala Thr Ala Pro Glu Arg Cys Leu Ser Asp Thr Pro Pro
275 280 285
Lys Ala Cys Leu Lys Pro Cys Trp Gly His Leu Pro Pro Gln Pro Asn
290 295 300
Ser Leu Asp Ser Gly Leu Leu Cys Leu Pro Cys Pro Ser Ser His Cys
305 310 315 320
His Leu Ala Ser Leu Ser Gly Ser Gln Ala Leu Leu Trp Pro Gly Cys
325 330 335
Pro Leu Leu Tyr Gly Leu Glu
340

<210> 40
<211> 2010
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 40
caaagactca cccgtgagcc agctctcaaa gaaagcagct tgcgttgaca gcctgggggc 60
agcaaggatg cagtctccca ggagaggatg cactcggtgg tgggaagcca ggctggaggg 120
gcctgagtga ccctctccac aggcgggcag ggcagtggga gaggtggtgt gtggatacct 180
ctgtctcacg cccagggatc agcagcatga accagcttgg ggggctcttt gtgaatggcc 240
ggcccctgcc tctggatacc cggcagcaga ttgtgcggct agcagtcagt ggaatgcggc 300
cctgtgacat ctcacggatc cttaaggtat ctaatggctg tgtgagcaag atcctagggc 360
gttactaccg cacaggtgtc ttggagccaa agggcattgg gggaagcaag ccacggctgg 420
ctacaccccc tgtggtggct cgaattgccc agctgaaggg tgagtgtcca gccctctttg 480
cctgggaaat ccaacgccag ctttgtgctg aagggctttg cacccaggac aagactccca 540
gtgtctcctc catcaaccga gtcctgcggg cattacagga ggaccaggga ctaccgtgca 600
cacggctcag gtcaccagct gttttggctc cagctgtcct cactccccat agtggctctg 660
agactccccg gggtacccac ccagggaccg gccaccggaa tcggactatc ttctccccaa 720
gccaagcaga ggcactggag aaagagttcc agcgtgggca gtatcctgat tcagtggccc 780
gtggaaagct ggctactgcc acctctctgc ctgaggacac ggtgagggtc tggttttcca 840
acagaagagc caaatggcgt cggcaagaga agctcaagtg ggaaatgcag ctgccaggtg 900
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ctggcagtgt gcccacagca gccctgcctg ccctggaacc actgggtccc tcctgctatc 1020
agctgtgctg ggcaacagca ccagaaaggt gtctgagtga caccccacct aaagcctgtc 1080
tcaagccctg ctggggccac ttgcccccac agccgaattc cctggactca ggactgcttt 1140
gccttccttg cccttcctcc cactgtcacc tggccagtct tagtggctct caggccctgc 1200
tctggcctgg ctgcccacta ctgtatggct tggaatgagg caggagtggg aaggagatgg 1260
catagagaag atctaatacc atcctgccca ttgtccttac cgtcctgccc atacagactg 1320
tggctccttc ctccttcctg tgattgctcc ctcctgtgtg gacgttgcct ggccctgcct 1380
cgatgcctct ctggcgcatc acctgattgg aggggctggt aaagcaacac ccacccactt 1440
ctcacactag ccttaagagg cctccactca gcagtaataa aagctgtttt tattagcagt 1500
agttctgttg tccatcatgt tttccctatg agcaccccta tgcccactct aatattcaac 1560
aattatagac aatttgccct atcatttatt tacatctatg tatctaccat ctaatctatg 1620
catgtatgta ggcaatacat gtatctaaac aatgtatttg tcaatgcatc aatttaccta 1680
ctctatgtat gcatctatat gtgtattatg tatgcgtgca tgcgtgcgcg cacacacaca 1740
cacacacaca cacactgaca ttatatcatg gcattttatt cctaaatctt ccagcatgca 1800
tccccaaaaa acaagaaact tgtcttacat aatcacaata atatatccac atctaagaaa 1860
atttactgta acttcttaat ctaagaaaat tatgtatttt tgtcatatgt attttgtcat 1920
atgtattttg tatttgcata tgtattttgt atttgcatat gtatttttgt catagcagca 1980
aacagagtga aatgccattt ttcatattct 2010

<210> 41
<211> 286
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 41
Met Gly Ala Asp Gly Met Tyr Asp Lys Leu Arg Met Leu Asn Gly Gln
1 5 10 15
Thr Gly Ser Trp Gly Thr Arg Pro Gly Trp Tyr Pro Gly Thr Ser Val
20 25 30
Pro Gly Gln Pro Thr Gln Asp Gly Cys Gln Gln Gln Glu Gly Gly Gly
35 40 45
Glu Asn Thr Asn Ser Ile Ser Ser Asn Gly Glu Asp Ser Asp Glu Ala
50 55 60
Gln Met Arg Leu Gln Leu Lys Arg Lys Leu Gln Arg Asn Arg Thr Ser
65 70 75 80
Phe Thr Gln Glu Gln Ile Glu Ala Leu Glu Lys Glu Phe Glu Arg Thr
85 90 95
His Tyr Pro Asp Val Phe Ala Arg Glu Arg Leu Ala Ala Lys Ile Asp
100 105 110
Leu Pro Glu Ala Arg Ile Gln Val Trp Phe Ser Asn Arg Arg Ala Lys
115 120 125
Trp Arg Arg Glu Glu Lys Leu Arg Asn Gln Arg Arg Gln Ala Ser Asn
130 135 140
Thr Pro Ser His Ile Pro Ile Ser Ser Ser Phe Ser Thr Ser Val Tyr
145 150 155 160
Gln Pro Ile Pro Gln Pro Thr Thr Pro Val Ser Ser Phe Thr Ser Gly
165 170 175
Ser Met Leu Gly Arg Thr Asp Thr Ala Leu Thr Asn Thr Tyr Ser Ala
180 185 190
Leu Pro Pro Met Pro Ser Phe Thr Met Ala Asn Asn Leu Pro Met Gln
195 200 205
Pro Pro Val Pro Ser Gln Thr Ser Ser Tyr Ser Cys Met Leu Pro Thr
210 215 220
Ser Pro Ser Val Asn Gly Arg Ser Tyr Asp Thr Tyr Thr Pro Pro His
225 230 235 240
Met Gln Thr His Met Asn Ser Gln Pro Met Gly Thr Ser Gly Thr Thr
245 250 255
Ser Thr Gly Leu Ile Ser Pro Gly Val Ser Val Pro Val Gln Val Pro
260 265 270
Gly Ser Glu Pro Asp Met Ser Gln Tyr Trp Pro Arg Leu Gln
275 280 285

<210> 42
<211> 6732
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 42
cttttcaatt agccttccat gcatgatccg gagcgacttc cgcctatttc cagaaattaa 60
gctcaaactt gacgtgcagc tagttttatt ttaaagacaa atgtcagaga ggctcatcat 120
attttccccc ctcttctata tttggagctt atttattgct aagaagctca ggctcctggc 180
gtcaatttat cagtaggctc caaggagaag agaggagagg agaggagagc tgaacaggga 240
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aatcagctcg gtggtgtctt tgtcaacggg cggccactgc cggactccac ccggcagaag 360
attgtagagc tagctcacag cggggcccgg ccgtgcgaca tttcccgaat tctgcagacc 420
catgcagatg caaaagtcca agtgctggac aatcaaaacg tgtccaacgg atgtgtgagt 480
aaaattctgg gcaggtatta cgagactggc tccatcagac ccagggcaat cggtggtagt 540
aaaccgagag tagcgactcc agaagttgta agcaaaatag cccagtataa gcgggagtgc 600
ccgtccatct ttgcttggga aatccgagac agattactgt ccgagggggt ctgtaccaac 660
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caacagatgg gcgcagacgg catgtatgat aaactaagga tgttgaacgg gcagaccgga 780
agctggggca cccgccctgg ttggtatccg gggacttcgg tgccagggca acctacgcaa 840
gatggctgcc agcaacagga aggaggggga gagaatacca actccatcag ttccaacgga 900
gaagattcag atgaggctca aatgcgactt cagctgaagc ggaagctgca aagaaataga 960
acatccttta cccaagagca aattgaggcc ctggagaaag agtttgagag aacccattat 1020
ccagatgtgt ttgcccgaga aagactagca gccaaaatag atctacctga agcaagaata 1080
caggtatggt tttctaatcg aagggccaaa tggagaagag aagaaaaact gaggaatcag 1140
agaagacagg ccagcaacac acctagtcat attcctatca gcagtagttt cagcaccagt 1200
gtctaccaac caattccaca acccaccaca ccggtttcct ccttcacatc tggctccatg 1260
ttgggccgaa cagacacagc cctcacaaac acctacagcg ctctgccgcc tatgcccagc 1320
ttcaccatgg caaataacct gcctatgcaa cccccagtcc ccagccagac ctcctcatac 1380
tcctgcatgc tgcccaccag cccttcggtg aatgggcgga gttatgatac ctacaccccc 1440
ccacatatgc agacacacat gaacagtcag ccaatgggca cctcgggcac cacttcaaca 1500
ggactcattt cccctggtgt gtcagttcca gttcaagttc ccggaagtga acctgatatg 1560
tctcaatact ggccaagatt acagtaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaagg aaaggaaata 1620
ttgtgttaat tcagtcagtg actatgggga cacaacagtt gagctttcag gaaagaaaga 1680
aaaatggctg ttagagccgc ttcagttcta caattgtgtc ctgtattgta ccactgggga 1740
aggaatggac ttgaaacaag gacctttgta tacagaaggc acgatatcag ttggaacaaa 1800
tcttcatttt ggtatccaaa cttttattca ttttggtgta ttatttgtaa atgggcattt 1860
gtatgttata atgaaaaaaa gaacaatgta gactggatgg atgtttgatc tgtgttggtc 1920
atgaagttgt tttttttttt tttaaaaaga aaaccatgat caacaagctt tgccacgaat 1980
ttaagagttt tatcaagata tatcgaatac ttctacccat ctgttcatag tttatggact 2040
gatgttccaa gtttgtatca ttcctttgca tataattaaa cctggaacaa catgcactag 2100
atttatgtca gaaatatctg ttggttttcc aaaggttgtt aacagatgaa gtttatgtgc 2160
aaaaaagggt aagatataaa ttcaaggaag aaaaaaagtt gatagctaaa aggtagagtg 2220
tgtcttcgat ataatccaat ttgttttatg tcaaaatgta agtatttgtc ttccctagaa 2280
atcctcagaa tgatttctat aataaagtta atttcattta tatttgacaa gaatatagat 2340
gttttataca cattttcatg caatcatacg tttctttttt ggccagcaaa agttaattgt 2400
tcttagatat agttgtatta ctgttcacgg tccaatcatt ttgtgcatct agagttcatt 2460
cctaatcaat taaaagtgct tgcaagagtt ttaaacttaa gtgttttgaa gttgttcaca 2520
actacatatc aaaattaacc attgttgatt gtaaaaaacc atgccaaagc ctttgtattt 2580
cctttattat acagttttct ttttaacctt atagtgtggt gttacaaatt ttatttccat 2640
gttagatcaa cattctaaac caatggttac tttcacacac actctgtttt acatcctgat 2700
gatccttaaa aaataatcct tatagatacc ataaatcaaa aacgtgttag aaaaaaattc 2760
cacttacagc agggtgtaga tctgtgccca tttataccca caacatatat acaaaatggt 2820
aacatttccc agttagccat ttaattctaa agctcaaagt ctagaaataa tttaaaaatg 2880
caacaagcga ttagctagga attgtttttt gaattaggac tggcattttc aatctgggca 2940
gatttccatt gtcagcctat ttcaacaatg atttcactga agtatattca aaagtagatt 3000
tcttaaagga gactttctga aagctgttgc ctttttcaaa taggccctct cccttttctg 3060
tctccctccc ctttgcacaa gaggcatcat ttcccattga accactacag ctgttcccat 3120
ttgaatcttg ctttctgtgc ggttgtggat ggttggaggg tggagggggg atgttgcatg 3180
tcaaggaata atgagcacag acacatcaac agacaacaac aaagcagact gtgactggcc 3240
ggtgggaatt aaaggccttc agtcattggc agcttaagcc aaacattccc aaatctatga 3300
agcagggccc attgttggtc agttgttatt tgcaatgaag cacagttctg atcatgttta 3360
aagtggaggc acgcagggca ggagtgcttg agcccaagca aaggatggaa aaaaataagc 3420
ctttgttggg taaaaaagga ctgtctgaga ctttcatttg ttctgtgcaa catataagtc 3480
aatacagata agtcttcctc tgcaaacttc actaaaaagc ctgggggttc tggcagtcta 3540
gattaaaatg cttgcacatg cagaaacctc tggggacaaa gacacacttc cactgaatta 3600
tactctgctt taaaaaaatc cccaaaagca aatgatcaga aatgtagaaa ttaatggaag 3660
gatttaaaca tgaccttctc gttcaatatc tactgttttt tagttaagga attacttgtg 3720
aacagataat tgagattcat tgctccggca tgaaatatac taataatttt attccaccag 3780
agttgctgca catttggaga caccttccta agttgcagtt tttgtatgtg tgcatgtagt 3840
tttgttcagt gtcagcctgc actgcacagc agcacatttc tgcaggggag tgagcacaca 3900
tacgcactgt tggtacaatt gccggtgcag acatttctac ctcctgacat tttgcagcct 3960
acattccctg agggctgtgt gctgagggaa ctgtcagaga agggctatgt gggagtgcat 4020
gccacagctg ctggctggct tacttcttcc ttctcgctgg ctgtaatttc caccacggtc 4080
aggcagccag ttccggccca cggttctgtt gtgtagacag cagagacttt ggagacccgg 4140
atgtcgcacg ccaggtgcaa gaggtgggaa tgggagaaaa ggagtgacgt gggagcggag 4200
ggtctgtatg tgtgcacttg ggcacgtata tgtgtgctct gaaggtcagg attgccaggg 4260
caaagtagca cagtctggta tagtctgaag aagcggctgc tcagctgcag aagccctctg 4320
gtccggcagg atgggaacgg ctgccttgcc ttctgcccac accctaggga catgagctgt 4380
ccttccaaac agagctccag gcactctctt ggggacagca tggcaggctc tgtgtggtag 4440
cagtgcctgg gagttggcct tttactcatt gttgaaataa tttttgttta ttatttattt 4500
aacgatacat atatttatat atttatcaat ggggtatctg cagggatgtt ttgacaccat 4560
cttccaggat ggagattatt tgtgaagact tcagtagaat cccaggacta aacgtctaaa 4620
ttttttctcc aaacttgact gacttgggaa aaccaggtga atagaataag agctgaatgt 4680
tttaagtaat aaacgttcaa actgctctaa gtaaaaaaat gcattttact gcaatgaatt 4740
tctagaatat ttttccccca aagctatgcc tcctaaccct taaatggtga acaactggtt 4800
tcttgctaca gctcactgcc atttcttctt actatcatca ctaggtttcc taagattcac 4860
tcatacagta ttatttgaag attcagcttt gttctgtgaa tgtcatctta ggattgtgtc 4920
tatattcttt tgcttatttc tttttactct gggcctctca tactagtaag attttaaaaa 4980
gccttttctt ctctgtatgt ttggctcacc aaggcgaaat atatattctt ctctttttca 5040
tttctcaaga ataaacctca tctgcttttt tgtttttctg tgttttggct tggtactgaa 5100
tgactcaact gctcggtttt aaagttcaaa gtgtaagtac ttagggttag tactgcttat 5160
ttcaataatg ttgacggtga ctatctttgg aaagcagtaa catgctgtct tagaaatgac 5220
attaataatg ggcttaaaca aatgaatagg ggggtccccc cactctcctt ttgtatgcct 5280
atgtgtgtct gatttgttaa aagatggaca gggaattgat tgcagagtgt cgcttccttc 5340
taaagtagtt ttattttgtc tactgttagt atttaaagat cctggaggtg gacataagga 5400
ataaatggaa gagaaaagta gatattgtat ggtggctact aaaaggaaat tcaaaaagtc 5460
ttagaacccg agcacctgag caaactgcag tagtcaaaat atttatctca tgttaaagaa 5520
aggcaaatct agtgtaagaa atgagtacca tatagggttt tgaagttcat atactagaaa 5580
cacttaaaag atatcatttc agatattacg tttggcattg ttcttaagta tttatatctt 5640
tgagtcaagc tgataattaa aaaaaatctg ttaatggagt gtatatttca taatgtatca 5700
aaatggtgtc tatacctaag gtagcattat tgaagagaga tatgtttatg tagtaagtta 5760
ttaacataat gagtaacaaa taatgtttcc agaagaaagg aaaacacatt ttcagagtgc 5820
gtttttatca gaggaagaca aaaatacaca cccctctcca gtagcttatt tttacaaagc 5880
cggcccagtg aattagaaaa acaaagcact tggatatgat ttttggaaag cccaggtaca 5940
cttattattc aaaatgcact tttactgagt ttgaaaagtt tcttttatat ttaaaataag 6000
ggttcaaata tgcatattca atttttatag tagttatcta tttgcaaagc atatattaac 6060
tagtaattgg ctgttaattt tatagacatg gtagccaggg aagtatatca atgacctatt 6120
aagtattttg acaagcaatt tacatatctg atgacctcgt atctcttttt cagcaagtca 6180
aatgctatgt aattgttcca ttgtgtgttg tataaaatga atcaacacgg taagaaaaag 6240
gttagagtta ttaaaataat aaactgacta aaatactcat ttgaatttat tcagaatgtt 6300
cataatgctt tcaaaggaca tagcagagct tttgtggagt atccgcacaa cattatttat 6360
tatctatgga ctaaatcaat tttttgaagt tgctttaaaa tttaaaagca cctttgctta 6420
atataaagcc ctttaatttt aactgacaga tcaattctga aactttattt tgaaaagaaa 6480
atggggaaga atctgtgtct ttagaattaa aagaaatgaa aaaaataaac ccgacattct 6540
aaaaaaatag aataagaaac ctgattttta gtactaatga aatagcgggt gacaaaatag 6600
ttgtcttttt gattttgatc acaaaaaata aactggtagt gacaggatat gatggagaga 6660
tttgacatcc tggcaaatca ctgtcattga ttcaattatt ctaattctga ataaaagctg 6720
tatacagtaa aa 6732

<210> 43
<211> 283
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 43
Met Asn Gly Glu Glu Gln Tyr Tyr Ala Ala Thr Gln Leu Tyr Lys Asp
1 5 10 15
Pro Cys Ala Phe Gln Arg Gly Pro Ala Pro Glu Phe Ser Ala Ser Pro
20 25 30
Pro Ala Cys Leu Tyr Met Gly Arg Gln Pro Pro Pro Pro Pro Pro His
35 40 45
Pro Phe Pro Gly Ala Leu Gly Ala Leu Glu Gln Gly Ser Pro Pro Asp
50 55 60
Ile Ser Pro Tyr Glu Val Pro Pro Leu Ala Asp Asp Pro Ala Val Ala
65 70 75 80
His Leu His His His Leu Pro Ala Gln Leu Ala Leu Pro His Pro Pro
85 90 95
Ala Gly Pro Phe Pro Glu Gly Ala Glu Pro Gly Val Leu Glu Glu Pro
100 105 110
Asn Arg Val Gln Leu Pro Phe Pro Trp Met Lys Ser Thr Lys Ala His
115 120 125
Ala Trp Lys Gly Gln Trp Ala Gly Gly Ala Tyr Ala Ala Glu Pro Glu
130 135 140
Glu Asn Lys Arg Thr Arg Thr Ala Tyr Thr Arg Ala Gln Leu Leu Glu
145 150 155 160
Leu Glu Lys Glu Phe Leu Phe Asn Lys Tyr Ile Ser Arg Pro Arg Arg
165 170 175
Val Glu Leu Ala Val Met Leu Asn Leu Thr Glu Arg His Ile Lys Ile
180 185 190
Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp Lys Lys Glu Glu Asp Lys Lys
195 200 205
Arg Gly Gly Gly Thr Ala Val Gly Gly Gly Gly Val Ala Glu Pro Glu
210 215 220
Gln Asp Cys Ala Val Thr Ser Gly Glu Glu Leu Leu Ala Leu Pro Pro
225 230 235 240
Pro Pro Pro Pro Gly Gly Ala Val Pro Pro Ala Ala Pro Val Ala Ala
245 250 255
Arg Glu Gly Arg Leu Pro Pro Gly Leu Ser Ala Ser Pro Gln Pro Ser
260 265 270
Ser Val Ala Pro Arg Arg Pro Gln Glu Pro Arg
275 280

<210> 44
<211> 2573
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 44
gggtggcgcc gggagtggga acgccacaca gtgccaaatc cccggctcca gctcccgact 60
cccggctccc ggctcccggc tcccggtgcc caatcccggg ccgcagccat gaacggcgag 120
gagcagtact acgcggccac gcagctttac aaggacccat gcgcgttcca gcgaggcccg 180
gcgccggagt tcagcgccag cccccctgcg tgcctgtaca tgggccgcca gcccccgccg 240
ccgccgccgc acccgttccc tggcgccctg ggcgcgctgg agcagggcag ccccccggac 300
atctccccgt acgaggtgcc ccccctcgcc gacgaccccg cggtggcgca ccttcaccac 360
cacctcccgg ctcagctcgc gctcccccac ccgcccgccg ggcccttccc ggagggagcc 420
gagccgggcg tcctggagga gcccaaccgc gtccagctgc ctttcccatg gatgaagtct 480
accaaagctc acgcgtggaa aggccagtgg gcaggcggcg cctacgctgc ggagccggag 540
gagaacaagc ggacgcgcac ggcctacacg cgcgcacagc tgctagagct ggagaaggag 600
ttcctattca acaagtacat ctcacggccg cgccgggtgg agctggctgt catgttgaac 660
ttgaccgaga gacacatcaa gatctggttc caaaaccgcc gcatgaagtg gaaaaaggag 720
gaggacaaga agcgcggcgg cgggacagct gtcgggggtg gcggggtcgc ggagcctgag 780
caggactgcg ccgtgacctc cggcgaggag cttctggcgc tgccgccgcc gccgcccccc 840
ggaggtgctg tgccgcccgc tgcccccgtt gccgcccgag agggccgcct gccgcctggc 900
cttagcgcgt cgccacagcc ctccagcgtc gcgcctcggc ggccgcagga accacgatga 960
gaggcaggag ctgctcctgg ctgaggggct tcaaccactc gccgaggagg agcagagggc 1020
ctaggaggac cccgggcgtg gaccacccgc cctggcagtt gaatggggcg gcaattgcgg 1080
ggcccacctt agaccgaagg ggaaaacccg ctctctcagg cgcatgtgcc agttggggcc 1140
ccgcgggtag atgccggcag gccttccgga agaaaaagag ccattggttt ttgtagtatt 1200
ggggccctct tttagtgata ctggattggc gttgtttgtg gctgttgcgc acatccctgc 1260
cctcctacag cactccacct tgggacctgt ttagagaagc cggctcttca aagacaatgg 1320
aaactgtacc atacacattg gaaggctccc taacacacac agcggggaag ctgggccgag 1380
taccttaatc tgccataaag ccattcttac tcgggcgacc cctttaagtt tagaaataat 1440
tgaaaggaaa tgtttgagtt ttcaaagatc ccgtgaaatt gatgccagtg gaatacagtg 1500
agtcctcctc ttcctcctcc tcctcttccc cctccccttc ctcctcctcc tcttcttttc 1560
cctcctcttc ctcttcctcc tgctctcctt tcctccccct cctcttttcc ctcctcttcc 1620
tcttcctcct gctctccttt cctccccctc ctctttctcc tcctcctcct cttcttcccc 1680
ctcctctccc tcctcctctt cttccccctc ctctccctcc tcctcttctt ctccctcctc 1740
ttcctcttcc tcctcttcca cgtgctctcc tttcctcccc ctcctcttgc tccccttctt 1800
ccccgtcctc ttcctcctcc tcctcttctt ctccctcctc ttcctcctcc tctttcttcc 1860
tgacctcttt ctttctcctc ctcctccttc tacctcccct tctcatccct cctcttcctc 1920
ttctctagct gcacacttca ctactgcaca tcttataact tgcacccctt tcttctgagg 1980
aagagaacat cttgcaaggc agggcgagca gcggcagggc tggcttagga gcagtgcaag 2040
agtccctgtg ctccagttcc acactgctgg cagggaaggc aaggggggac gggcctggat 2100
ctgggggtga gggagaaaga tggacccctg ggtgaccact aaaccaaaga tattcggaac 2160
tttctattta ggatgtggac gtaattcctg ttccgaggta gaggctgtgc tgaagacaag 2220
cacagtggcc tggtgcgcct tggaaaccaa caactattca cgagccagta tgaccttcac 2280
atctttagaa attatgaaaa cgtatgtgat tggagggttt ggaaaaccag ttatcttatt 2340
taacatttta aaaattacct aacagttatt tacaaacagg tctgtgcatc ccaggtctgt 2400
cttcttttca aggtctgggc cttgtgctcg ggttatgttt gtgggaaatg cttaataaat 2460
actgataata tgggaagaga tgaaaactga ttctcctcac tttgtttcaa acctttctgg 2520
cagtgggatg attcgaattc acttttaaaa ttaaattagc gtgttttgtt ttg 2573

<210> 45
<211> 328
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 45
Met Asp Ala Val Leu Leu Glu His Phe Pro Gly Gly Leu Asp Ala Phe
1 5 10 15
Pro Ser Ser Tyr Phe Asp Glu Asp Asp Phe Phe Thr Asp Gln Ser Ser
20 25 30
Arg Asp Pro Leu Glu Asp Gly Asp Glu Leu Leu Ala Asp Glu Gln Ala
35 40 45
Glu Val Glu Phe Leu Ser His Gln Leu His Glu Tyr Cys Tyr Arg Asp
50 55 60
Gly Ala Cys Leu Leu Leu Gln Pro Ala Pro Pro Ala Ala Pro Leu Ala
65 70 75 80
Leu Ala Pro Pro Ser Ser Gly Gly Leu Gly Glu Pro Asp Asp Gly Gly
85 90 95
Gly Gly Gly Tyr Cys Cys Glu Thr Gly Ala Pro Pro Gly Gly Phe Pro
100 105 110
Tyr Ser Pro Gly Ser Pro Pro Ser Cys Leu Ala Tyr Pro Cys Ala Gly
115 120 125
Ala Ala Val Leu Ser Pro Gly Ala Arg Leu Arg Gly Leu Ser Gly Ala
130 135 140
Ala Ala Ala Ala Ala Arg Arg Arg Arg Arg Val Arg Ser Glu Ala Glu
145 150 155 160
Leu Gln Gln Leu Arg Gln Ala Ala Asn Val Arg Glu Arg Arg Arg Met
165 170 175
Gln Ser Ile Asn Asp Ala Phe Glu Gly Leu Arg Ser His Ile Pro Thr
180 185 190
Leu Pro Tyr Glu Lys Arg Leu Ser Lys Val Asp Thr Leu Arg Leu Ala
195 200 205
Ile Gly Tyr Ile Asn Phe Leu Ser Glu Leu Val Gln Ala Asp Leu Pro
210 215 220
Leu Arg Gly Gly Gly Ala Gly Gly Cys Gly Gly Pro Gly Gly Gly Gly
225 230 235 240
Arg Leu Gly Gly Asp Ser Pro Gly Ser Gln Ala Gln Lys Val Ile Ile
245 250 255
Cys His Arg Gly Thr Arg Ser Pro Ser Pro Ser Asp Pro Asp Tyr Gly
260 265 270
Leu Pro Pro Leu Ala Gly His Ser Leu Ser Trp Thr Asp Glu Lys Gln
275 280 285
Leu Lys Glu Gln Asn Ile Ile Arg Thr Ala Lys Val Trp Thr Pro Glu
290 295 300
Asp Pro Arg Lys Leu Asn Ser Lys Ser Ser Phe Asn Asn Ile Glu Asn
305 310 315 320
Glu Pro Pro Phe Glu Phe Val Ser
325

<210> 46
<211> 1339
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 46
atggacgcgg tgttgctgga gcacttcccc gggggcctag acgcctttcc ttcttcgtac 60
ttcgacgagg acgacttctt caccgaccag tcttcacggg accccctgga ggacggcgat 120
gagctgctgg cggacgagca ggccgaggtg gagttcctta gccaccagct ccacgagtac 180
tgctaccgcg acggggcgtg cctgctgctg cagcccgcgc ccccggccgc cccgctagcg 240
ctcgccccgc cgtcctcggg gggcctcggt gagccagacg acggcggcgg cggcggctac 300
tgctgcgaga cgggggcgcc cccaggcggc ttcccctact cgcccggctc gccgccctcg 360
tgcctggcct acccgtgcgc cggggcggca gtactgtctc ccggggcgcg gctgcgcggc 420
ctgagcggag cggcggctgc ggcggcgcgg cgccggcggc gggtgcgctc cgaggcggag 480
ctgcagcagc tgcggcaggc ggccaacgtg cgcgagcggc ggcgcatgca gtccatcaac 540
gacgccttcg aggggctgcg ctcgcacatc cccacgctgc cctacgagaa gcgcctctcc 600
aaggtggaca cgctgcgcct ggccatcggc tacatcaact tcctcagcga gctcgtgcag 660
gccgacctgc ccttgcgcgg cggtggcgcg ggcggctgcg gggggccggg cggcggcggg 720
cgcctgggcg gggacagccc gggcagccag gcccagaagg tcatcatctg ccatcggggc 780
acccggtccc cctcccccag cgaccctgat tatggcctcc ctcccctagc aggacactct 840
ctctcatgga ctgatgaaaa acaactcaag gaacaaaata ttatccgaac agccaaagtc 900
tggaccccag aggaccccag aaaactcaac agcaaatctt ccttcaacaa catagaaaac 960
gaaccaccat ttgagtttgt gtcctgagaa gtcccagact cggctgaaga tctgattatg 1020
tctctgtgca tattgtacat gtaaatatct ataatgtaaa tgtaatttaa gaatcaaatt 1080
tttcgaatgg caatcaactg tttattattt atctatttat tatcctgttg agttgatgaa 1140
atagatgatt tctttttaaa tatataattt atataactta tcctgatttt ctgaaaatat 1200
gcaatagcct atgattttcc tgaactctgt gttgttggga gaactctggc cagaaaacgt 1260
cctgcttatt tattgccaga tatggtttat ttctaagcgt tgtcaataaa tgctatttac 1320
accttttcct gaaaaaaaa 1339

<210> 47
<211> 1555
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 47
cggcgatggc cccactcgga tacttcttac tcctctgcag cctgaagcag gctctgggca 60
gctacccgat ctggtggtcg ctggctgttg ggccacagta ttcctccctg ggctcgcagc 120
ccatcctgtg tgccagcatc ccgggcctgg tccccaagca gctccgcttc tgcaggaact 180
acgtggagat catgcccagc gtggccgagg gcatcaagat tggcatccag gagtgccagc 240
accagttccg cggccgccgg tggaactgca ccaccgtcca cgacagcctg gccatcttcg 300
ggcccgtgct ggacaaagct accagggagt cggcctttgt ccacgccatt gcctcagccg 360
gtgtggcctt tgcagtgaca cgctcatgtg cagaaggcac ggccgccatc tgtggctgca 420
gcagccgcca ccagggctca ccaggcaagg gctggaagtg gggtggctgt agcgaggaca 480
tcgagtttgg tgggatggtg tctcgggagt tcgccgacgc ccgggagaac cggccagatg 540
cccgctcagc catgaaccgc cacaacaacg aggctgggcg ccaggccatc gccagccaca 600
tgcacctcaa gtgcaagtgc cacgggctgt cgggcagctg cgaggtgaag acatgctggt 660
ggtcgcaacc cgacttccgc gccatcggtg acttcctcaa ggacaagtac gacagcgcct 720
cggagatggt ggtggagaag caccgggagt cccgcggctg ggtggagacc ctgcggccgc 780
gctacaccta cttcaaggtg cccacggagc gcgacctggt ctactacgag gcctcgccca 840
acttctgcga gcccaaccct gagacgggct ccttcggcac gcgcgaccgc acctgcaacg 900
tcagctcgca cggcatcgac ggctgcgacc tgctgtgctg cggccgcggc cacaacgcgc 960
gagcggagcg gcgccgggag aagtgccgct gcgtgttcca ctggtgctgc tacgtcagct 1020
gccaggagtg cacgcgcgtc tacgacgtgc acacctgcaa gtaggcaccg gccgcggctc 1080
cccctggacg gggcgggccc tgcctgaggg tgggcttttc cctgggtgga gcaggactcc 1140
cacctaaacg gggcagtact cctccctggg ggcgggactc ctccctgggg gtggggctcc 1200
tacctggggg cagaactcct acctgaaggc agggctcctc cctggagcta gtgtctcctc 1260
tctggtggct gggctgctcc tgaatgaggc ggagctccag gatggggagg ggctctgcgt 1320
tggcttctcc ctggggacgg ggctcccctg gacagaggcg gggctacaga ttgggcgggg 1380
cttctcttgg gtgggacagg gcttctcctg cgggggcgag gcccctccca gtaagggcgt 1440
ggctctgggt gggcggggca ctaggtaggc ttctacctgc aggcggggct cctcctgaag 1500
gaggcggggc tctaggatgg ggcacggctc tggggtaggc tgctccctga gggcg 1555

<210> 48
<211> 385
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 48
Met Ala Pro Leu Gly Tyr Phe Leu Leu Leu Cys Ser Leu Lys Gln Ala
1 5 10 15
Leu Gly Ser Tyr Pro Ile Trp Trp Ser Leu Ala Val Gly Pro Gln Tyr
20 25 30
Ser Ser Leu Gly Ser Gln Pro Ile Leu Cys Ala Ser Ile Pro Gly Leu
35 40 45
Val Pro Lys Gln Leu Arg Phe Cys Arg Asn Tyr Val Glu Ile Met Pro
50 55 60
Ser Val Ala Glu Gly Ile Lys Ile Gly Ile Gln Glu Cys Gln His Gln
65 70 75 80
Phe Arg Gly Arg Arg Trp Asn Cys Thr Thr Val His Asp Ser Leu Ala
85 90 95
Ile Phe Gly Pro Val Leu Asp Lys Ala Thr Arg Glu Ser Ala Phe Val
100 105 110
His Ala Ile Ala Ser Ala Gly Val Ala Phe Ala Val Thr Arg Ser Cys
115 120 125
Ala Glu Gly Thr Ala Ala Ile Cys Gly Cys Ser Ser Arg His Gln Gly
130 135 140
Ser Pro Gly Lys Gly Trp Lys Trp Gly Gly Cys Ser Glu Asp Ile Glu
145 150 155 160
Phe Gly Gly Met Val Ser Arg Glu Phe Ala Asp Ala Arg Glu Asn Arg
165 170 175
Pro Asp Ala Arg Ser Ala Met Asn Arg His Asn Asn Glu Ala Gly Arg
180 185 190
Gln Ala Ile Ala Ser His Met His Leu Lys Cys Lys Cys His Gly Leu
195 200 205
Ser Gly Ser Cys Glu Val Lys Thr Cys Trp Trp Ser Gln Pro Asp Phe
210 215 220
Arg Ala Ile Gly Asp Phe Leu Lys Asp Lys Tyr Asp Ser Ala Ser Glu
225 230 235 240
Met Val Val Glu Lys His Arg Glu Ser Arg Gly Trp Val Glu Thr Leu
245 250 255
Arg Pro Arg Tyr Thr Tyr Phe Lys Val Pro Thr Glu Arg Asp Leu Val
260 265 270
Tyr Tyr Glu Ala Ser Pro Asn Phe Cys Glu Pro Asn Pro Glu Thr Gly
275 280 285
Ser Phe Gly Thr Arg Asp Arg Thr Cys Asn Val Ser Ser His Gly Ile
290 295 300
Asp Gly Cys Asp Leu Leu Cys Cys Gly Arg Gly His Asn Ala Arg Ala
305 310 315 320
Glu Arg Arg Arg Glu Lys Cys Arg Cys Val Phe His Trp Cys Cys Tyr
325 330 335
Val Ser Cys Gln Glu Cys Thr Arg Val Tyr Asp Val His Thr Cys Lys
340 345 350
Asn Pro Gly Ser Arg Ala Gly Asn Ser Ala His Gln Pro Pro His Pro
355 360 365
Gln Pro Pro Val Arg Phe His Pro Pro Leu Arg Arg Ala Gly Lys Val
370 375 380
Pro
385

<210> 49
<211> 1056
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 49
atgagtcccc gctcgtgcct gcgttcgctg cgcctcctcg tcttcgccgt cttctcagcc 60
gccgcgagca actggctgta cctggccaag ctgtcgtcgg tggggagcat ctcagaggag 120
gagacgtgcg agaaactcaa gggcctgatc cagaggcagg tgcagatgtg caagcggaac 180
ctggaagtca tggactcggt gcgccgcggt gcccagctgg ccattgagga gtgccagtac 240
cagttccgga accggcgctg gaactgctcc acactcgact ccttgcccgt cttcggcaag 300
gtggtgacgc aagggattcg ggaggcggcc ttggtgtacg ccatctcttc ggcaggtgtg 360
gcctttgcag tgacgcgggc gtgcagcagt ggggagctgg agaagtgcgg ctgtgacagg 420
acagtgcatg gggtcagccc acagggcttc cagtggtcag gatgctctga caacatcgcc 480
tacggtgtgg ccttctcaca gtcgtttgtg gatgtgcggg agagaagcaa gggggcctcg 540
tccagcagag ccctcatgaa cctccacaac aatgaggccg gcaggaaggc catcctgaca 600
cacatgcggg tggaatgcaa gtgccacggg gtgtcaggct cctgtgaggt aaagacgtgc 660
tggcgagccg tgccgccctt ccgccaggtg ggtcacgcac tgaaggagaa gtttgatggt 720
gccactgagg tggagccacg ccgcgtgggc tcctccaggg cactggtgcc acgcaacgca 780
cagttcaagc cgcacacaga tgaggacttg gtgtacttgg agcctagccc cgacttctgt 840
gagcaggaca tgcgcagcgg cgtgctgggc acgaggggcc gcacatgcaa caagacgtcc 900
aaggccatcg acggctgtga gctgctgtgc tgtggccgcg gcttccacac ggcgcaggtg 960
gagctggctg aacgctgcag ctgcaaattc cactggtgct gcttcgtcaa gtgccggcag 1020
tgccagcggc tcgtggagtt gcacacgtgc cgatga 1056

<210> 50
<211> 351
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 50
Met Ser Pro Arg Ser Cys Leu Arg Ser Leu Arg Leu Leu Val Phe Ala
1 5 10 15
Val Phe Ser Ala Ala Ala Ser Asn Trp Leu Tyr Leu Ala Lys Leu Ser
20 25 30
Ser Val Gly Ser Ile Ser Glu Glu Glu Thr Cys Glu Lys Leu Lys Gly
35 40 45
Leu Ile Gln Arg Gln Val Gln Met Cys Lys Arg Asn Leu Glu Val Met
50 55 60
Asp Ser Val Arg Arg Gly Ala Gln Leu Ala Ile Glu Glu Cys Gln Tyr
65 70 75 80
Gln Phe Arg Asn Arg Arg Trp Asn Cys Ser Thr Leu Asp Ser Leu Pro
85 90 95
Val Phe Gly Lys Val Val Thr Gln Gly Ile Arg Glu Ala Ala Leu Val
100 105 110
Tyr Ala Ile Ser Ser Ala Gly Val Ala Phe Ala Val Thr Arg Ala Cys
115 120 125
Ser Ser Gly Glu Leu Glu Lys Cys Gly Cys Asp Arg Thr Val His Gly
130 135 140
Val Ser Pro Gln Gly Phe Gln Trp Ser Gly Cys Ser Asp Asn Ile Ala
145 150 155 160
Tyr Gly Val Ala Phe Ser Gln Ser Phe Val Asp Val Arg Glu Arg Ser
165 170 175
Lys Gly Ala Ser Ser Ser Arg Ala Leu Met Asn Leu His Asn Asn Glu
180 185 190
Ala Gly Arg Lys Ala Ile Leu Thr His Met Arg Val Glu Cys Lys Cys
195 200 205
His Gly Val Ser Gly Ser Cys Glu Val Lys Thr Cys Trp Arg Ala Val
210 215 220
Pro Pro Phe Arg Gln Val Gly His Ala Leu Lys Glu Lys Phe Asp Gly
225 230 235 240
Ala Thr Glu Val Glu Pro Arg Arg Val Gly Ser Ser Arg Ala Leu Val
245 250 255
Pro Arg Asn Ala Gln Phe Lys Pro His Thr Asp Glu Asp Leu Val Tyr
260 265 270
Leu Glu Pro Ser Pro Asp Phe Cys Glu Gln Asp Met Arg Ser Gly Val
275 280 285
Leu Gly Thr Arg Gly Arg Thr Cys Asn Lys Thr Ser Lys Ala Ile Asp
290 295 300
Gly Cys Glu Leu Leu Cys Cys Gly Arg Gly Phe His Thr Ala Gln Val
305 310 315 320
Glu Leu Ala Glu Arg Cys Ser Cys Lys Phe His Trp Cys Cys Phe Val
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Lys Cys Arg Gln Cys Gln Arg Leu Val Glu Leu His Thr Cys Arg
340 345 350

<210> 51
<211> 1143
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 51
atgaagaagt ccattggaat attaagccca ggagttgctt tggggatggc tggaagtgca 60
atgtcttcca agttcttcct agtggctttg gccatatttt tctccttcgc ccaggttgta 120
attgaagcca attcttggtg gtcgctaggt atgaataacc ctgttcagat gtcagaagta 180
tatattatag gagcacagcc tctctgcagc caactggcag gactttctca aggacagaag 240
aaactgtgcc acttgtatca ggaccacatg cagtacatcg gagaaggcgc gaagacaggc 300
atcaaagaat gccagtatca attccgacat cgaaggtgga actgcagcac tgtggataac 360
acctctgttt ttggcagggt gatgcagata ggcagccgcg agacggcctt cacatacgcg 420
gtgagcgcag caggggtggt gaacgccatg agccgggcgt gccgcgaggg cgagctgtcc 480
acctgcggct gcagccgcgc cgcgcgcccc aaggacctgc cgcgggactg gctctggggc 540
ggctgcggcg acaacatcga ctatggctac cgctttgcca aggagttcgt ggacgcccgc 600
gagcgggagc gcatccacgc caagggctcc tacgagagtg ctcgcatcct catgaacctg 660
cacaacaacg aggccggccg caggacggtg tacaacctgg ctgatgtggc ctgcaagtgc 720
catggggtgt ccggctcatg tagcctgaag acatgctggc tgcagctggc agacttccgc 780
aaggtgggtg atgccctgaa ggagaagtac gacagcgcgg cggccatgcg gctcaacagc 840
cggggcaagt tggtacaggt caacagccgc ttcaactcgc ccaccacaca agacctggtc 900
tacatcgacc ccagccctga ctactgcgtg cgcaatgaga gcaccggctc gctgggcacg 960
cagggccgcc tgtgcaacaa gacgtcggag ggcatggatg gctgcgagct catgtgctgc 1020
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tag 1143

<210> 52
<211> 380
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 52
Met Lys Lys Ser Ile Gly Ile Leu Ser Pro Gly Val Ala Leu Gly Met
1 5 10 15
Ala Gly Ser Ala Met Ser Ser Lys Phe Phe Leu Val Ala Leu Ala Ile
20 25 30
Phe Phe Ser Phe Ala Gln Val Val Ile Glu Ala Asn Ser Trp Trp Ser
35 40 45
Leu Gly Met Asn Asn Pro Val Gln Met Ser Glu Val Tyr Ile Ile Gly
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Ala Gln Pro Leu Cys Ser Gln Leu Ala Gly Leu Ser Gln Gly Gln Lys
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Lys Leu Cys His Leu Tyr Gln Asp His Met Gln Tyr Ile Gly Glu Gly
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Trp Asn Cys Ser Thr Val Asp Asn Thr Ser Val Phe Gly Arg Val Met
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Gly Val Val Asn Ala Met Ser Arg Ala Cys Arg Glu Gly Glu Leu Ser
145 150 155 160
Thr Cys Gly Cys Ser Arg Ala Ala Arg Pro Lys Asp Leu Pro Arg Asp
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Trp Leu Trp Gly Gly Cys Gly Asp Asn Ile Asp Tyr Gly Tyr Arg Phe
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Ala Asp Phe Arg Lys Val Gly Asp Ala Leu Lys Glu Lys Tyr Asp Ser
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Ala Ala Ala Met Arg Leu Asn Ser Arg Gly Lys Leu Val Gln Val Asn
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Ser Arg Phe Asn Ser Pro Thr Thr Gln Asp Leu Val Tyr Ile Asp Pro
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Ser Pro Asp Tyr Cys Val Arg Asn Glu Ser Thr Gly Ser Leu Gly Thr
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Gln Gly Arg Leu Cys Asn Lys Thr Ser Glu Gly Met Asp Gly Cys Glu
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Leu Met Cys Cys Gly Arg Gly Tyr Asp Gln Phe Lys Thr Val Gln Thr
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Glu Arg Cys His Cys Lys Phe His Trp Cys Cys Tyr Val Lys Cys Lys
355 360 365
Lys Cys Thr Glu Ile Val Asp Gln Phe Val Cys Lys
370 375 380

Claims (91)

1. 膵島オルガノイドを作製する方法であって、ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞を培養する段階を含み、それによって膵島オルガノイドを作製する、方法。
2. iPSC由来β様細胞を脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞と共に培養する段階をさらに含む、請求項1記載の方法。
3. iPSC由来β様細胞をiPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、またはiPSC由来導管様細胞と共に培養する段階をさらに含む、請求項1または2記載の方法。
4. iPSC由来β様細胞、iPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、またはiPSC由来導管様細胞がヒトのものである、請求項1または3記載の方法。
5. 脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) である、請求項2記載の方法。
6. 内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、請求項2記載の方法。
7. ジェランガムを含む3次元マトリックス中にiPSC由来β様細胞を含む細胞培養物。
8. 脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含む、請求項7記載の細胞培養物。
9. iPSC由来β様細胞がヒトiPSC由来β様細胞である、請求項7または請求項8記載の細胞培養物。
10. 脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) である、請求項8または請求項9記載の細胞培養物。
11. 内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、請求項8～10のいずれか一項記載の細胞培養物。
12. ジェランガムを含む3次元マトリックス中にヒトiPSC由来β様細胞、ヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC)、およびヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) を含む、細胞培養物。
13. iPSC由来β様細胞を含む膵島オルガノイドであって、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、膵島オルガノイド。
14. iPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、またはiPSC由来導管様細胞をさらに含む、請求項13記載の膵島オルガノイド。
15. 脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含む、請求項13記載の膵島オルガノイド。
16. 脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) であり、かつ／または内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、請求項15記載の膵島オルガノイド。
17. KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、またはグルカゴン分泌をさらに示す、請求項14記載の膵島オルガノイド。
18. Pdx1、MafA、Pax4、Pax6、NeuroD1、Nkx6-1、Gata6、およびFoxa2からなる群より選択されるβ細胞転写因子を発現する、請求項13記載の膵島オルガノイド。
19. iPSC由来β様細胞、iPSC由来α細胞、iPSC由来δ細胞、iPSC由来導管細胞、脂肪由来幹細胞 (hADSC)、および内皮細胞を含む膵島オルガノイドであって、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS)、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、およびグルカゴン分泌を示す、膵島オルガノイド。
20. iPSC由来外分泌成分によって囲まれた請求項13～19のいずれか一項記載の膵島オルガノイドを含む、膵臓オルガノイド。
21. iPSC由来外分泌成分が、PDX1、Nkx6-1、およびPtf1からなる群より選択されるマーカーを発現する、請求項20記載の膵臓オルガノイド。
22. 請求項13～21のいずれか一項記載のオルガノイドを移植された非ヒト生物。
23. 哺乳動物である、請求項22記載の非ヒト生物。
24. マウスである、請求項23記載の非ヒト生物。
25. 膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質を同定する方法であって、
    (a) 候補作用物質を膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドと接触させる段階；および
    (b) 該候補作用物質と接触させたオルガノイドの活性を測定する段階
    を含み、オルガノイドの活性が参照と比較して変化した場合に、候補作用物質が、膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質として同定される、方法。
26. 膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質を同定する方法であって、
    (a) 膵島オルガノイドまたは膵臓オルガノイドが移植された非ヒト対象に候補作用物質を投与する段階；および
    (b) 該非ヒト対象の膵臓活性を測定する段階
    を含み、非ヒト対象の膵臓活性が参照と比較して変化した場合に、候補作用物質が、膵臓活性を調節しかつ／または膵臓疾患を処置する作用物質として同定される、方法。
27. オルガノイドまたは非ヒト対象において膵臓疾患を誘発または模倣する段階をさらに含む、請求項25または請求項26記載の方法。
28. 非ヒト対象が肝臓オルガノイドをさらに移植される、請求項25または請求項26記載の方法。
29. 以下の作用物質、すなわち遊離脂肪酸 (FFA)、グルコース、およびサイトカインのうちのいずれか1つまたは複数をオルガノイドと接触させることまたは非ヒト対象に投与することによって、疾患が誘発される、請求項27または請求項28記載の方法。
30. ヒト膵癌微小環境を創出するためにオルガノイドを膵癌細胞、星状細胞、および免疫細胞と共に培養することによって、疾患が模倣される、請求項27または請求項28記載の方法。
31. 膵臓活性が、インスリン分泌、β細胞アポトーシス、NDUFA4、ESRRG、G6PC2、MDH1、LDHA、KCNK3、またはMAFAポリペプチドまたはポリヌクレオチドの発現または活性、アミラーゼ分泌、外分泌成分のアポトーシス、コラーゲン合成、および星状細胞活性化からなる群より選択される、請求項25または26記載の方法。
32. 候補作用物質がインスリン分泌を増加させる、請求項25～31のいずれか一項記載の方法。
33. 膵臓活性を調節する作用物質として同定された候補作用物質が、膵臓疾患を処置する能力についてさらに試験される、請求項25～31のいずれか一項記載の方法。
34. 膵臓疾患が2型糖尿病または膵癌である、請求項25～33のいずれか一項記載の方法。
35. オルガノイドが、請求項13～20のいずれか一項記載のオルガノイドである、請求項25～34のいずれか一項記載の方法。
36. 非ヒト対象がマウスである、請求項26記載の方法。
37. 対象における膵臓疾患を処置する方法であって、膵島オルガノイドを対象に移植する段階を含み、該膵島オルガノイドが、iPSC由来β様細胞を含み、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、方法。
38. 対象における1型糖尿病を処置する方法であって、膵島オルガノイドを対象に移植する段階を含み、該膵島オルガノイドが、iPSC由来β様細胞を含み、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、方法。
39. 膵島オルガノイドが、iPSC由来α様細胞、iPSC由来δ様細胞、またはiPSC由来導管様細胞をさらに含む、請求項37または38記載の方法。
40. 膵島オルガノイドが、脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含む、請求項37または38記載の方法。
41. 脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) であり、かつ／または内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、請求項40記載の方法。
42. 膵島オルガノイドが、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、またはグルカゴン分泌をさらに示す、請求項37または38記載の方法。
43. 膵島オルガノイドが、Pdx1、MafA、Pax4、Pax6、NeuroD1、Nkx6-1、Gata6、およびFoxa2からなる群より選択されるβ細胞転写因子を発現する、請求項37～42のいずれか一項記載の方法。
44. 膵島オルガノイドが、iPSC由来β様細胞、iPSC由来α細胞、iPSC由来δ細胞、iPSC由来導管細胞、脂肪由来幹細胞 (hADSC)、および内皮細胞を含み、該オルガノイドが血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS)、KCl刺激インスリン分泌、GLP-1刺激インスリン分泌、ソマトスタチン分泌、およびグルカゴン分泌を示す、請求項37～43のいずれか一項記載の方法。
45. 膵島オルガノイドがiPSC由来外分泌成分によって囲まれている、請求項37～44のいずれか一項記載の方法。
46. iPSC由来外分泌成分が、PDX1、Nkx6-1、およびPtf1からなる群より選択されるマーカーを発現する、請求項45記載の方法。
47. 膵島オルガノイドが、請求項13～21のいずれか一項記載のオルガノイドである、請求項37～46のいずれか一項記載の方法。
48. 対象が免疫抑制剤を投与される、請求項37～47のいずれか一項記載の方法。
49. 対象がヒトである、請求項37～48のいずれか一項記載の方法。
50. 膵臓疾患が1型糖尿病または2型糖尿病である、請求項37～49のいずれか一項記載の方法。
51. ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞を培養することによって作製された膵島オルガノイド。
52. ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞およびiPSC由来外分泌成分細胞を培養することによって作製された膵臓オルガノイド。
53. ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来の肝細胞を培養することによって作製された肝臓オルガノイド。
54. ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来の心筋細胞を培養することによって作製された心臓オルガノイド。
55. ジェランガムを含む3次元マトリックス中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来の腸細胞を培養することによって作製された腸オルガノイド。
56. iPSC由来β様細胞、iPSC由来外分泌成分細胞、iPSC由来肝細胞、iPSC由来心筋細胞、またはiPSC由来腸細胞がヒトのものである、請求項51～55のいずれか一項記載の膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
57. 脂肪由来幹細胞および／または内皮細胞をさらに含む、請求項51～55のいずれか一項記載の膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
58. 脂肪由来幹細胞がヒト脂肪由来幹細胞 (hADSC) であり、かつ／または内皮細胞がヒト臍帯静脈内皮細胞 (HUVEC) である、請求項57記載の膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
59. 血管新生する、請求項51～55のいずれか一項記載の膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。
60. AFP、ALB、およびCyp3a7からなる群より選択されるマーカーを発現する、請求項53記載の肝臓オルガノイド。
61. インスリンシグナル伝達、パルミチン酸によるインスリン抵抗性、および脂質蓄積を示す、請求項53記載の肝臓オルガノイド。
62. hMlc2a、hNkx2-5、αMHC、およびKCNQ1からなる群より選択されるマーカーを発現する、請求項54記載の心臓オルガノイド。
63. 心拍動を示す、請求項54記載の心臓オルガノイド。
64. CDX2、Muc2、およびLgr5からなる群より選択されるマーカーを発現する、請求項55記載の腸オルガノイド。
65. R-スポンジンに応答して出芽を示す、請求項55記載の腸オルガノイド。
66. 膵島オルガノイドを作製する方法であって、Wnt4またはWnt5aタンパク質を含む培地中で人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞を培養する段階を含む、方法。
67. 人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のβ様細胞が3次元マトリックス中で培養される、請求項66記載の方法。
68. Wnt4またはWnt5aタンパク質が組換えヒトWnt4またはWnt5aタンパク質である、請求項66または請求項67記載の方法。
69. 培地が組換えヒトWnt4タンパク質を含む、請求項68記載の方法。
70. 培地が組換えヒトWnt5aタンパク質を含む、請求項68記載の方法。
71. ヒトiPSC由来β様細胞およびWnt4またはWnt5aタンパク質を含む、細胞培養物。
72. ヒトiPSC由来β様細胞が、ジェランガムを含む3次元マトリックス中に存在する、請求項71記載の細胞培養物。
73. Wnt4またはWnt5aタンパク質が組換えヒトWnt4またはWnt5aタンパク質である、請求項71または請求項72記載の細胞培養物。
74. 培地が組換えヒトWnt4タンパク質を含む、請求項73記載の細胞培養物。
75. 培地が組換えヒトWnt5aタンパク質を含む、請求項73記載の細胞培養物。
76. Wnt4またはWnt5aタンパク質を含む培地中で培養されたiPSC由来β様細胞を含む膵島オルガノイドであって、血管新生し、かつグルコース刺激インスリン分泌 (GSIS) を示す、膵島オルガノイド。
77. KCl刺激インスリン分泌またはグルコース刺激インスリン分泌をさらに示す、請求項76記載の膵島オルガノイド。
78. Fltp遺伝子およびEsrrg遺伝子を発現する、請求項76または請求項77記載の膵島オルガノイド。
79. Wnt4またはWnt5aタンパク質が組換えヒトWnt4またはWnt5aタンパク質である、請求項76～78のいずれか一項記載の膵島オルガノイド。
80. 培地が組換えヒトWnt4タンパク質を含む、請求項79記載の膵島オルガノイド。
81. 培地が組換えヒトWnt5aタンパク質を含む、請求項79記載の膵島オルガノイド。
82. 請求項76～81のいずれか一項記載のオルガノイドを移植された非ヒト生物。
83. 人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のオルガノイドを作製するために脂肪由来幹細胞 (ADSC) の自己組織化を増強する方法であって、Wnt5aタンパク質を含む3次元 (3D) 培養マトリックス培地中でADSCを培養する段階を含む、方法。
84. ADSCが、ジェランガムを含む3D培養マトリックス中で培養される、請求項83記載の方法。
85. ADSCの3D培養マトリックス培地が、iPSC由来β様細胞、iPSC由来外分泌成分細胞、iPSC由来肝細胞、iPSC由来心筋細胞、またはiPSC由来腸細胞より選択されるiPSC由来細胞を含む、請求項83または請求項84記載の方法。
86. iPSC由来のオルガノイドが、膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイドより選択される、請求項83～85のいずれか一項記載の方法。
87. 人工多能性幹細胞 (iPSC) 由来のオルガノイドがヒト人工多能性幹細胞 (hiPSC) 由来のオルガノイドである、請求項85または請求項86記載の方法。
88. Wnt5aタンパク質が組換えヒトWnt5aタンパク質である、請求項83～87のいずれか一項記載の方法。
89. 膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイドが、それぞれ、iPSC由来β様細胞、iPSC由来外分泌成分細胞、iPSC由来肝細胞、iPSC由来心筋細胞、またはiPSC由来腸細胞より選択されるiPSC由来細胞に由来する、請求項86～88のいずれか一項記載の方法。
90. iPSC由来細胞がヒトのものである、請求項89記載の方法。
91. 請求項83～90のいずれか一項記載の方法によって生成された、膵島オルガノイド、膵臓オルガノイド、肝臓オルガノイド、心臓オルガノイド、または腸オルガノイド。

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