JP2022096767A

JP2022096767A - TIPARP production promoter

Info

Publication number: JP2022096767A
Application number: JP2020209920A
Authority: JP
Inventors: 明日香蘇木; Asuka Sogi; 大気筒井; Daiki Tsutsui; 貴子柴田; Takako Shibata
Original assignee: Shiseido Co Ltd
Current assignee: Shiseido Co Ltd
Priority date: 2020-12-18
Filing date: 2020-12-18
Publication date: 2022-06-30

Abstract

To provide a novel TIPARP production promoter.SOLUTION: A TIPARP production promoter contains fermented Alteromonas macleodii extract and/or extract from flower buds of Lonicera japonica as an active ingredient.SELECTED DRAWING: Figure 1

Description

本発明はTIPARP産生促進剤を提供する。 The present invention provides a TIPARP production promoter.

TIPARPは、免疫、幹細胞の多能性、転写因子の調節等における重要な調節因子である。また、TIPARPは、薬物や環境中の危険因子による毒性作用等を媒介する転写因子であるアリール炭化水素受容体（AhR）等の転写抑制因子である。TIPARPの産生が促進できれば、TIPARP減少又はAhRの活性化に起因する各種疾患や状態を予防・改善することが期待されている。 TIPARP is an important regulator in immunity, stem cell pluripotency, and regulation of transcription factors. TIPARP is a transcriptional repressor such as the aryl hydrocarbon receptor (AhR), which is a transcription factor that mediates toxic effects by drugs and risk factors in the environment. If the production of TIPARP can be promoted, it is expected to prevent / ameliorate various diseases and conditions caused by the decrease of TIPARP or the activation of AhR.

特表2006-528239号公報Special Table 2006-528239 Gazette 特開2019-156752号公報Japanese Unexamined Patent Publication No. 2019-156752 特開平07-157412号公報Japanese Unexamined Patent Publication No. 07-157412 特開2012-246226号公報Japanese Unexamined Patent Publication No. 2012-246226

Cancer Management and Research 2019:11 8991-9004Cancer Management and Research 2019: 11 8991-9004 Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 2312; doi:10.3390/ijms20092312Int. J. Mol. Sci. 2019, 20, 2312; doi: 10.3390 / ijms20092312 Sci. STKE, 11 September 2007 Vol. 2007, Issue 403, p. pe49; DOI: 10.1126/stke.4032007pe49Sci. STKE, 11 September 2007 Vol. 2007, Issue 403, p. Pe49; DOI: 10.1126 / stke.4032007pe49

本発明の課題は、TIPARP産生促進剤の提供にある。 An object of the present invention is to provide a TIPARP production promoter.

本発明者らは、鋭意研究の結果、アルテロモナス発酵エキスおよび金銀花エキスに高いTIPARP産生促進効果があることを見出した。以上の発見により、以下の発明を完成するに至った：
（１）アルテロモナス発酵エキス及び／又は金銀花エキスを有効成分として含有するTIPARP産生促進剤。
（２）（１）に記載のTIPARP産生促進剤を含有する組成物。 As a result of diligent research, the present inventors have found that the fermented Alteromonas extract and the honeysuckle extract have a high effect of promoting TIPARP production. The above discoveries have led to the completion of the following inventions:
(1) A TIPARP production promoter containing an Alteromonas fermented extract and / or a honeysuckle extract as an active ingredient.
(2) A composition containing the TIPARP production promoter according to (1).

本発明によれば、TIPARP産生促進剤を含有する組成物や内服剤を提供することができる。 According to the present invention, it is possible to provide a composition or an internal preparation containing a TIPARP production promoter.

図１は、実験１において各濃度（0.10重量％、0.50重量％）のアルテロモナス発酵エキスを添加した場合の正常ヒト表皮角化細胞におけるTIPARP発現量を、陰性対照（1,3-BGのみ）を添加した場合を1.00とした相対値(ΔΔCt法)として示す。FIG. 1 shows the expression level of TIPARP in normal human epidermal keratinized cells when each concentration (0.10% by weight, 0.50% by weight) of Alteromonas fermented extract was added in Experiment 1, as a negative control (1,3-BG only). The case of addition is shown as a relative value (ΔΔCt method) with 1.00. 図２は、実験１において各濃度（0.10重量％、0.50重量％）の金銀花エキスを添加した場合の正常ヒト表皮角化細胞におけるTIPARP発現量を、陰性対照（エタノールのみ）を添加した場合を1.00とした相対値(ΔΔCt法)として示す。FIG. 2 shows the expression level of TIPARP in normal human epidermal keratinized cells when each concentration (0.10% by weight, 0.50% by weight) of gold and silver flower extract was added in Experiment 1, and the case where a negative control (ethanol only) was added. It is shown as a relative value (ΔΔCt method) set to 1.00.

本発明はアルテロモナス発酵エキス及び／又は金銀花エキスを有効成分として含有するTIPARP産生促進剤を提供する。TIPARP（TCDD(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin)-inducible poly-ADP-ribose polymerase）は、PARP7、ARTD14としても知られ、モノADPリボシルトランスフェラーゼ（mono-ADP-ribosyltransferases）およびアリール炭化水素受容体（AhR：Aryl hydrocarbon Receptor）の転写抑制因子である。TIPARPは、免疫、幹細胞の多能性、転写因子の調節等における重要な調節因子であり、TIPARPノックダウンにより肝臓脂肪が蓄積することや、乳癌においてTIPARPのメチル化が起こりその発現が減少することが知られている（非特許文献１、２）。本発明によりTIPARPの産生が促進できれば、免疫の改善、TIPARP減少に起因する各種疾患や状態を予防・改善することが期待される。 The present invention provides a TIPARP production promoter containing an Alteromonas fermented extract and / or a honeysuckle extract as an active ingredient. TIPARP (TCDD (2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin) -inducible poly-ADP-ribose polymerase), also known as PARP7, ARTD14, is mono-ADP-ribosyltransferases and aryl. It is a transcriptional repressor of the hydrocarbon receptor (AhR). TIPARP is an important regulator in immunity, pluripotency of stem cells, regulation of transcription factors, etc., and the accumulation of liver fat by TIPARP knockdown and the methylation of TIPARP in breast cancer, which reduces its expression. Is known (Non-Patent Documents 1 and 2). If the production of TIPARP can be promoted by the present invention, it is expected to improve immunity and prevent / ameliorate various diseases and conditions caused by a decrease in TIPARP.

本発明のTIPARP産生促進剤の一態様では、TIPARP産生を促進することによりAhRの活性化を抑制する。AhRは、薬物や環境中の危険因子による毒性作用等を媒介する転写因子である。AhRは、芳香族炭化水素類やダイオキシン類と結合し異物代謝を誘導すること、成長因子、抗酸化因子、炎症物質などを誘導すること等が報告されている(非特許文献３)。皮膚では、AhRの活性化により、活性酸素の発生、くすみ、メラニン産生といった悪影響を及ぼすことが知られており、これらの悪影響は紫外線の蓄積により悪化する。本発明のようなTIPARP産生促進を利用することにより、AhRの活性化を抑制し、AhRの活性化に起因する上述のような各種疾患や状態を予防・改善することが期待される。 In one aspect of the TIPARP production promoter of the present invention, the activation of AhR is suppressed by promoting TIPARP production. AhR is a transcription factor that mediates toxic effects by drugs and risk factors in the environment. It has been reported that AhR binds to aromatic hydrocarbons and dioxins to induce foreign body metabolism, induces growth factors, antioxidant factors, inflammatory substances, and the like (Non-Patent Document 3). In the skin, activation of AhR is known to have adverse effects such as generation of active oxygen, dullness, and melanin production, and these adverse effects are exacerbated by the accumulation of ultraviolet rays. By utilizing the promotion of TIPARP production as in the present invention, it is expected to suppress the activation of AhR and prevent / ameliorate various diseases and conditions as described above caused by the activation of AhR.

TIPARPの産生促進とは、例えばTIPARP遺伝子の発現はTIPARPタンパク質量を増加させること、例えば何も付与していない状態（コントロール）に比べて、TIPARP産生促進剤を付与した場合にTIPARP遺伝子の発現又はTIPARPタンパク質量が増加していることを意味し得る。本発明におけるTIPARPの産生促進とは、例えば何も付与していない状態（コントロール）に比べて、TIPARP産生促進剤を付与した場合に、TIPARP遺伝子の発現又はTIPARPタンパク質量が、例えば5％以上、10％以上、20％以上、30％以上、40％以上、50％以上、60％以、70％以上、80％以上、90％以上、100％以上、200％以上、300％以上、400％以上、又は500％以上亢進していることを意味し得る。TIPARP遺伝子の発現量は、任意の公知技術により求めることができる。 The promotion of TIPARP production means that, for example, the expression of the TIPARP gene increases the amount of TIPARP protein, for example, the expression of the TIPARP gene or the expression of the TIPARP gene when the TIPARP production promoting agent is given as compared with the state (control) in which nothing is given. It can mean that the amount of TIPARP protein is increased. The promotion of TIPARP production in the present invention means that the expression of the TIPARP gene or the amount of TIPARP protein is, for example, 5% or more when the TIPARP production promoting agent is given, as compared with the state (control) in which nothing is given. 10% or more, 20% or more, 30% or more, 40% or more, 50% or more, 60% or more, 70% or more, 80% or more, 90% or more, 100% or more, 200% or more, 300% or more, 400% It can mean that it is increased by 500% or more. The expression level of the TIPARP gene can be determined by any known technique.

このようなTIPARP産生促進作用は、in vivo、in vitro、ex vivo等を含む各種方法で測定できる。例えば、被験物質を肝細胞、乳腺細胞、脂肪細胞、皮膚細胞、といった細胞に投与し、その細胞におけるTIPARPのmRNA発現量をqPCRなどの方法により求める、あるいはタンパク量をウエスタンブロッティング等の方法により求める等により決定できる。しかしながら測定方法は上記方法に限定されず、他の任意の方法を採用してもよい。例えば、ヒト等の動物に投与した後に肝臓、乳房、脂肪、皮膚組織／モデルなどの試料におけるTIPARPのmRNA発現量又はTIPARPタンパク質量を測定するといったin vivoやex vivoの方法を採用してもよい。 Such TIPARP production promoting action can be measured by various methods including in vivo, in vitro, ex vivo and the like. For example, the test substance is administered to cells such as hepatocytes, mammary gland cells, adipocytes, and skin cells, and the mRNA expression level of TIPARP in the cells is determined by a method such as qPCR, or the protein amount is determined by a method such as western blotting. It can be determined by such factors. However, the measuring method is not limited to the above method, and any other method may be adopted. For example, in vivo or ex vivo methods such as measuring the mRNA expression level or TIPARP protein level of TIPARP in a sample such as liver, breast, fat, skin tissue / model after administration to an animal such as human may be adopted. ..

本発明は、アルテロモナス発酵エキス及び／又は金銀花エキスを有効成分として含有するTIPARP産生促進剤を提供する。本発明のTIPARP産生促進剤は、経口剤、あるいは経皮剤、注射剤と言った非経口剤等、任意の形態であってもよい。 The present invention provides a TIPARP production promoter containing an Alteromonas fermented extract and / or a honeysuckle extract as an active ingredient. The TIPARP production promoter of the present invention may be in any form such as an oral preparation, a transdermal preparation, a parenteral preparation such as an injection, and the like.

本発明で用いられるアルテロモナス発酵エキス（CAS番号:267233-41-0）は、深海に生息する微生物であるアルテロモナス（Alteromonas macleodii）から得られた発酵物のエキスであり、多糖類グルコシドの高分子である。抗炎症、皮膚刺激、敏感肌の症状を軽減させる作用などが知られている（特許文献１，２）。公知の方法により容易に発酵、精製、抽出等ができ、またUNIPEXIN NOVATIONS社のAbyssine PFといった市販品を容易に入手可能である。 The fermented Alteromonas extract (CAS number: 267233-41-0) used in the present invention is an extract of a fermented product obtained from Alteromonas macleodii, which is a microorganism living in the deep sea, and is a polymer of the polysaccharide glucoside. be. It is known to have anti-inflammatory, skin irritation, and action to reduce the symptoms of sensitive skin (Patent Documents 1 and 2). Fermentation, purification, extraction, etc. can be easily performed by a known method, and a commercial product such as Abyssine PF manufactured by UNIPEXIN NOVATIONS can be easily obtained.

本発明で用いられる金銀花エキスは、スイカズラ（Lonicera japonica）の花蕾の抽出物である。抗炎症、抗菌、鎮痙作用などが知られている（特許文献３，４）。公知の方法により容易に乾燥、精製、抽出等ができ、また市販品を容易に入手可能である。生のままでも乾燥したものでも使用することができるが、抽出物、乾燥物、乾燥粉末、原料の粉末物、搾汁液等として用いることもでき、いずれの形態を用いるかは適宜選択することができる。 The gold and silver flower extract used in the present invention is an extract of honeysuckle (Lonicera japonica) flower buds. Anti-inflammatory, antibacterial, antispasmodic effects and the like are known (Patent Documents 3 and 4). It can be easily dried, purified, extracted, etc. by a known method, and a commercially available product can be easily obtained. It can be used raw or dried, but it can also be used as an extract, dried product, dried powder, raw material powder, juice squeezed liquid, etc., and which form to use can be appropriately selected. can.

上記エキスの抽出は例えば溶媒抽出により行うことができる。溶媒抽出の場合には、発酵物又は植物の全体又は部分を必要に応じて乾燥させ、更に必要に応じて細断又は粉砕した後、水性抽出剤、水、例えば冷水、温水、又は沸点若しくはそれより低温の熱水、あるいは含水有機溶媒、有機溶媒、例えばエタノール、メタノール、エーテル、１，３－ブチレングリコール等を原料の性質や組成物の用途等により好ましい溶媒を適宜選択して常温で又は加熱して用いることにより抽出される。しかしながら、抽出方法は溶媒抽出に限定されず、当業界で知られている常用の手法によってもよく、本発明で用いる抽出物の抽出方法や抽出物の形態は、本発明の効果を損なわない限り任意である。上記抽出物の形態は、抽出液自体だけでなく、常用の手法により適宜希釈又は濃縮したものであってもよく、更に、抽出液を乾燥することによって得られる粉状あるいは塊状の固体であってもよい。 The above extract can be extracted, for example, by solvent extraction. In the case of solvent extraction, the whole or part of the fermented product or plant is dried as needed, shredded or crushed as needed, and then an aqueous extractant, water such as cold water, hot water, or boiling point or it. Hot water at a lower temperature, or a hydrous organic solvent, an organic solvent such as ethanol, methanol, ether, 1,3-butylene glycol, etc. is appropriately selected and heated at room temperature or by appropriately selecting a preferable solvent depending on the properties of the raw material and the use of the composition. It is extracted by using it. However, the extraction method is not limited to solvent extraction, and may be a conventional method known in the art, and the extraction method of the extract and the form of the extract used in the present invention are not limited to the effect of the present invention. Optional. The form of the extract may be not only the extract itself but also appropriately diluted or concentrated by a conventional method, and is a powdery or lumpy solid obtained by drying the extract. May be good.

含水有機溶媒の例として、含水エタノール等の含水低級アルコールを用いてもよく、その場合の含水率は、例えば0～10v/v％、10～40v/v％、20～30v/v％、30～50v/v％、50～80v/v％、80～99.5v/v％等であってもよい。 As an example of the water-containing organic solvent, a water-containing lower alcohol such as water-containing ethanol may be used, and the water content in that case is, for example, 0 to 10v / v%, 10 to 40v / v%, 20 to 30v / v%, 30. It may be ~ 50v / v%, 50-80v / v%, 80-99.5v / v%, or the like.

本発明のTIPARP産生促進剤は、経皮、経口、局所注入等各種投与経路で投与でき、本発明の有効成分をTIPARP産生促進の効果が十分発揮されるような量で適用することが好ましい。アルテロモナス発酵エキス及び／又は金銀花エキスの配合量は、それらの種類、目的、形態、利用方法などに応じて、適宜決めることができる。 The TIPARP production-promoting agent of the present invention can be administered by various administration routes such as transdermal, oral, and local injection, and it is preferable to apply the active ingredient of the present invention in an amount such that the effect of promoting TIPARP production is sufficiently exhibited. The blending amount of the Alteromonas fermented extract and / or the honeysuckle extract can be appropriately determined according to their types, purposes, forms, usage methods and the like.

本発明のTIPARP産生促進剤を経皮剤又は経口剤として利用する場合には、経皮剤又は経口剤全量に対して、アルテロモナス発酵エキス及び／又は金銀花エキスの乾燥重量が、0.00001～1.0重量%程度になるように調製することが好ましく、0.001～0.8重量%程程度、0.10～0.5重量%程度がより好ましい。 When the TIPARP production promoter of the present invention is used as a transdermal agent or an oral agent, the dry weight of the fermented Alteromonas extract and / or the honeysuckle extract is 0.00001 to 1.0 weight by weight with respect to the total amount of the transdermal agent or the oral agent. It is preferably prepared so as to be about%, more preferably about 0.001 to 0.8% by weight, and more preferably about 0.10 to 0.5% by weight.

また、投与頻度は、限定されないものの、一例によれば、例えば２週間に１回、１週間に１回、３日に１回、２日に１回、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回等の頻度で投与することができる。また、都度摂取するものであっても、継続的に摂取するものであっても、例えば数か月の間隔を空け断続的に投与するものであってもよい。 The frequency of administration is not limited, but according to one example, for example, once every two weeks, once a week, once every three days, once every two days, once a day, twice a day, etc. It can be administered at a frequency of 3 times a day, 4 times a day, or the like. In addition, it may be ingested each time, continuously ingested, or intermittently administered at intervals of several months, for example.

また、本発明のTIPARP産生促進剤は、経皮又は経口摂取用の組成物、例えば、医薬、化粧品、食品組成物に含有できる。本発明のTIPARP産生促進剤及び組成物の形態としては、例えば、粉末状、液体状、錠剤等の固形、顆粒、粒状、ペースト状、ゲル状、クリーム状など任意に選択することができる。 In addition, the TIPARP production promoter of the present invention can be contained in a composition for transdermal or oral ingestion, for example, a pharmaceutical, cosmetics, or food composition. As the form of the TIPARP production promoter and composition of the present invention, for example, powdery, liquid, solid such as tablets, granules, granules, paste, gel, cream and the like can be arbitrarily selected.

本発明のTIPARP産生促進剤及び組成物には、必要に応じて添加剤を任意に選択し併用することができる。添加剤としては賦形剤、着色剤、保存剤、増粘剤、結合剤、崩壊剤、分散剤、安定化剤、ゲル化剤、酸化防止剤、界面活性剤、保存剤、ｐＨ調整剤等については、公知のものを適宜選択して使用できる。 Additives can be arbitrarily selected and used in combination with the TIPARP production promoter and composition of the present invention, if necessary. Additives include excipients, colorants, preservatives, thickeners, binders, disintegrants, dispersants, stabilizers, gelling agents, antioxidants, surfactants, preservatives, pH regulators, etc. As for, a known one can be appropriately selected and used.

本発明は、アルテロモナス発酵エキス及び／又は金銀花エキスを例えば経皮、経口、局所注入経路で投与することにより肝細胞を含む肝臓組織、乳腺を含む乳房の組織、表皮又は真皮細胞を含む皮膚組織のTIPARP産生促進、TIPARP産生促進によるAhRの活性化を抑制を介する脂肪肝、乳癌、皮膚のくすみやメラニン生成といったTIPARPの抑制あるいはAhRの活性化により発症する疾患・状態を予防又は改善するための方法も提供する。本発明の方法は、美容を目的とする方法であり、医師や医療従事者による治療ではないことがある。 The present invention relates to liver tissue containing hepatocytes, breast tissue including mammary gland, skin tissue containing epidermis or dermal cells, for example, by administering Alteromonas fermented extract and / or gold and silver flower extract by transdermal, oral, or local infusion route. To prevent or ameliorate diseases / conditions caused by suppression of TIPARP such as fat liver, breast cancer, dull skin and melanin production through suppression of AhR activation by promotion of TIPARP production or activation of AhR. It also provides a method. The method of the present invention is a method for the purpose of cosmetology and may not be treated by a doctor or a medical professional.

さらに、本発明は、脂肪肝、乳癌、皮膚老化といったTIPARPの抑制あるいはAhRの活性化により発症する疾患・状態を予防又は改善するための経口剤又は経腸剤といった医薬の製造におけるアルテロモナス発酵エキス及び／又は金銀花エキスの使用も提供する。本発明は、例えば経口又は経皮投与により、肝臓、脂肪、皮膚組織のTIPARP産生促進することによる、脂肪肝、乳癌、皮膚のくすみやメラニン生成といったTIPARPが抑制されることにより発症する疾患・状態を予防又は改善するための方法に使用するためのアルテロモナス発酵エキス及び／又は金銀花エキスも提供する。 Furthermore, the present invention is an Alteromonas fermented extract in the production of pharmaceuticals such as oral or enteric agents for preventing or ameliorating diseases / conditions caused by suppression of TIPARP such as fatty liver, breast cancer and skin aging or activation of AhR. / Or the use of gold and silver flower extract is also provided. The present invention is a disease / condition caused by suppressing TIPARP such as fatty liver, breast cancer, dull skin and melanin production by promoting TIPARP production in liver, fat and skin tissue by, for example, oral or transdermal administration. Also provided are Alteromonas fermented extract and / or gold and silver flower extract for use in methods for preventing or ameliorating.

次に実施例によって本発明をさらに詳細に説明する。なお、本発明はこれにより限定されるものではない。 Next, the present invention will be described in more detail by way of examples. The present invention is not limited thereto.

実験１：試料の調製
TIPARP産生促進剤の候補試料として、アルテロモナス発酵エキス及び／又は金銀花エキスを以下の表のように調製した。 Experiment 1: Sample preparation
Alteromonas fermented extract and / or honeysuckle extract were prepared as candidate samples of TIPARP production promoter as shown in the table below.

その他動植物の抽出物といった天然由来成分や合成成分を含め、合計29種類の候補試料を調製した。試料は各エキスの溶媒(エタノール又はは1,3-BG(1,3-ブチレングリコール))を用いて培地中の終濃度が0.10重量%～0.5重量%となるように調整した。対照として何も含まない各エキスの溶媒を用いた。 A total of 29 candidate samples were prepared, including naturally derived and synthetic components such as animal and plant extracts. The sample was adjusted so that the final concentration in the medium was 0.10% by weight to 0.5% by weight using the solvent of each extract (ethanol or 1,3-BG (1,3-butylene glycol)). As a control, the solvent of each extract containing nothing was used.

実験２：qPCRによるTIPARP発現解析
本研究では、正常ヒト表皮角化細胞（クラボウ:KK-4009）を用いた。表皮細胞は、EpiLife Medium M-EPI-500-CAにHuman Keratinocyte Growth Supplement(HKGS)を添加した培地(Thermo Fisher Scientific)を用いて、細胞培養ディッシュにて、37℃、5% CO₂条件下で培養した。3.12x10⁵ cells/cm²の密度で細胞を播種し細胞が定着したのち、過酸化水素処理を行い老化誘導した。老化状態はSA-β-gal(Dojindo:SG03 Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal)の検出で確認した。さらに紫外線(UVB 400mJ/cm²,UVA 5J/cm²)を照射し6h培養した。各エキスおよび溶媒を添加し一晩培養後10nM FICZ(Aryl Hydrocarbon Receptor Agonist)を添加しAhRを活性化させた。24h培養後のtotal RNAを回収した。 Experiment 2: TIPARP expression analysis by qPCR In this study, normal human epidermal keratinized cells (Kurabo: KK-4009) were used. Epidermal cells were prepared in a cell culture dish using EpiLife Medium M-EPI-500-CA in a medium containing Human Keratinocyte Growth Supplement (HKGS) (Thermo Fisher Scientific) at 37 ° C. and 5% CO ₂ conditions. It was cultured. After seeding the cells at a density of 3.12x10 ⁵ cells / cm ² and establishing the cells, hydrogen peroxide treatment was performed to induce aging. The senescent state was confirmed by detection of SA-β-gal (Dojindo: SG03 Cellular Senescence Detection Kit --SPiDER-βGal). Further, it was irradiated with ultraviolet rays (UVB 400 mJ / cm ² , UVA 5J / cm ² ) and cultured for 6 hours. Each extract and solvent were added, and after culturing overnight, 10 nM FICZ (Aryl Hydrocarbon Receptor Agonist) was added to activate AhR. Total RNA after 24h culture was collected.

上記方法で培養した正常ヒト表皮角化細胞におけるtotal RNAよりcDNAを合成した(Takara: PrimeScript RT reagent kit)。本cDNAを用いSYBR Green(KAPA SYBR Fast qPCRキット（UniversalqPCRキット）)によりqPCRを行った。Internal controlはβ-actinとしTIPARPのmRNA産生増加能を評価した。また同時にAhRの下流にある活性酸素産生遺伝子であるCYPA1AおよびCYP1B1の遺伝子発現も評価し、これらについては産生増加させないことを確認した。各遺伝子に対応するプライマの具体的な配列を下記表２に示す。

CDNA was synthesized from total RNA in normal human epidermal keratinized cells cultured by the above method (Takara: PrimeScript RT reagent kit). Using this cDNA, qPCR was performed using SYBR Green (KAPA SYBR Fast qPCR kit (Universal qPCR kit)). The internal control was β-actin, and the ability of TIPARP to increase mRNA production was evaluated. At the same time, the gene expression of CYPA1A and CYP1B1, which are active oxygen-producing genes downstream of AhR, was also evaluated, and it was confirmed that the production of these genes was not increased. The specific sequences of the primers corresponding to each gene are shown in Table 2 below.

結果を図２に示す。図２に示すように、アルテロモナス発酵エキス及び金銀花エキスを投与すると、対照と比べて濃度依存的にTIPARPの発現量が有意に増加した。したがって、本発明のエキスは、優れたTIPARP産生促進効果があることがわかる。 The results are shown in FIG. As shown in FIG. 2, when Alteromonas fermented extract and honeysuckle extract were administered, the expression level of TIPARP was significantly increased in a concentration-dependent manner as compared with the control. Therefore, it can be seen that the extract of the present invention has an excellent effect of promoting TIPARP production.

Claims

A TIPARP production promoter containing an Alteromonas fermented extract and / or a honeysuckle extract as an active ingredient.

A composition containing the TIPARP production promoter according to claim 1.