JP2022081575A - ホスホロチオエート化オリゴデオキシヌクレオチドを含む化合物及び組成物、ならびにその使用方法 - Google Patents

ホスホロチオエート化オリゴデオキシヌクレオチドを含む化合物及び組成物、ならびにその使用方法 Download PDF

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Abstract

【課題】安定であり、播種性がんに対する全身投与に適した抗ｍｉＲ及びｍｉＲＮＡミミックを用いた、がん、例えばＡＭＬ、ＣＭＬ及び骨髄異形成症候群を治療する化合物を提供する。【解決手段】（ｉ）抗マイクロＲＮＡ（抗ｍｉＲ）核酸配列、又は（ｉｉ）マイクロＲＮＡ擬態（ｍｉＲＮＡ－ミミック）核酸配列、に結合した、ホスホロチオエート化ＣｐＧオリゴデオキシヌレオチド（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む、化合物を提供する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１５年１０月１５日に出願された米国仮出願第６２／２４２，１８９号の利益を主張するものであり、その全体があらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
配列表の参照による組み込み
２０１６年１０月１４日に作成され、１５，８７３バイトのサイズの４８４４０－５８８００１ＷＯ＿ＳＴ２５．ＴＸＴという名称のｔｘｔファイルの内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
急性骨髄性白血病は、未成熟骨髄前駆細胞の蓄積によって特徴付けられる。白血病誘発は、骨髄性細胞系統の分化、自己複製、及び／または増殖を制御する発癌遺伝子、腫瘍抑制因子または転写因子の調節解除に起因する。本開示は、安定であり、播種性がんに対する全身投与に適した抗ｍｉＲ及びｍｉＲＮＡミミックを用いた、がん、例えばＡＭＬ、ＣＭＬ及び骨髄異形成症候群を治療する化合物、組成物及び方法に関する。
一態様において、抗マイクロＲＮＡ（抗ｍｉＲ）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）－擬態核酸配列（ｍｉＲＮＡ－ミミック）に抱合された、ホスホロチオエート化ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物が本明細書で提供される。
別の態様において、抗ｍｉＲ配列が１つ以上のホスホロチオエート結合、及び１つ以上の化学的に修飾されたヌクレオチドを含有する抗マイクロＲＮＡ（抗ｍｉＲ）配列を含む化合物が本明細書に提供される。
別の態様において、薬学的に許容される賦形剤及び本明細書に記載される化合物を含む医薬組成物が本明細書に提供される。
別の態様において、疾患の治療を、それを必要とする対象において施す方法が本明細書に提供される。本方法は、本明細書に記載される化合物または本明細書に記載される医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む。
別の態様において、細胞中のマイクロＲＮＡの活性を低下させる方法が本明細書に提供される。本方法は、細胞を本明細書に記載される化合物の有効量と接触させることを含む。
本開示の他の特徴及び利点は、以下の詳細な記載及び特許請求の範囲から明らかになるであろう。
そうではない旨の断りがない限り、本明細書で参照される全ての刊行物、参考文献、特許及び／または特許出願は、あらゆる目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
化学的に安定化されたＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６ ＲＮＡオリゴヌクレオチドの設計を示す概略図である。アステリックス（＊）はホスホロチオエート結合を示しており、ｍＮは２’ＯＭｅ修飾ヌクレオチドを示す。 図２Ａ～２Ｄは正常、臍帯血、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）ＣＤ３４＋細胞における取り込み試験の結果を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。正常（ＮＬ）、臍帯血（ＣＢ）、ＡＭＬ及びＣＭＬ３４＋細胞を、ＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（５００ｎＭ）及びＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎｍ）で１６時間培養した。図２Ａは６００ＣｐＧ ｓｉＲＮＡによるＮＬ／ＣＢ細胞における取り込みを示すヒストグラムである。取り込みは、フローサイトメトリーによって、これらの細胞中のＣｙ３発現によって測定した。 図２Ａ～２Ｄは正常、臍帯血、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）ＣＤ３４＋細胞における取り込み試験の結果を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。正常（ＮＬ）、臍帯血（ＣＢ）、ＡＭＬ及びＣＭＬ３４＋細胞を、ＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（５００ｎＭ）及びＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎｍ）で１６時間培養した。図２Ｂは５００ＣｐＧ－ｓｉＲＮＡによるＮＬ／ＣＢ細胞を示すヒストグラムである。取り込みは、フローサイトメトリーによって、これらの細胞中のＣｙ３発現によって測定した。 図２Ａ～２Ｄは正常、臍帯血、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）ＣＤ３４＋細胞における取り込み試験の結果を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。正常（ＮＬ）、臍帯血（ＣＢ）、ＡＭＬ及びＣＭＬ３４＋細胞を、ＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（５００ｎＭ）及びＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎｍ）で１６時間培養した。図２ＣはＡＭＬ細胞における取り込みを示すヒストグラムである。取り込みは、フローサイトメトリーによって、これらの細胞中のＣｙ３発現によって測定した。 図２Ａ～２Ｄは正常、臍帯血、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）ＣＤ３４＋細胞における取り込み試験の結果を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。正常（ＮＬ）、臍帯血（ＣＢ）、ＡＭＬ及びＣＭＬ３４＋細胞を、ＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（５００ｎＭ）及びＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎｍ）で１６時間培養した。図２ＤはＣＭＬ細胞における取り込みを示すヒストグラムである。取り込みは、フローサイトメトリーによって、これらの細胞中のＣｙ３発現によって測定した。 図３Ａ～３ＧはＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株におけるＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６の取り込みの結果を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。細胞を、ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３－２００ｎＭ０）、ヒトＣＤ４５（Ａｂ－２００ｎＭ）、またはａｎｔａｇｏｍｉＲ１２６－Ｃｙ３、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ－Ｃｙ３－２００ｎＭ及び５００ｎＭ）を含有するトランスフェリン（ＴＦ－２００ｎＭ）－抱合ナノ粒子（ＮＰ）で４時間培養し、次いで、フローサイトメトリーによりこれらの細胞におけるＣｙ３発現を測定することにより、取り込みを分析した。図３Ａは、Ｋ５６２細胞における取り込みを示すヒストグラムである。 図３Ａ～３ＧはＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株におけるＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６の取り込みの結果を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。細胞を、ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３－２００ｎＭ０）、ヒトＣＤ４５（Ａｂ－２００ｎＭ）、またはａｎｔａｇｏｍｉＲ１２６－Ｃｙ３、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ－Ｃｙ３－２００ｎＭ及び５００ｎＭ）を含有するトランスフェリン（ＴＦ－２００ｎＭ）－抱合ナノ粒子（ＮＰ）で４時間培養し、次いで、フローサイトメトリーによりこれらの細胞におけるＣｙ３発現を測定することにより、取り込みを分析した。図３Ｂは、ＫＧ１Ａ ＡＭＬ細胞における取り込みを示すヒストグラムである。 図３Ａ～３ＧはＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株におけるＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６の取り込みの結果を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。細胞を、ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３－２００ｎＭ０）、ヒトＣＤ４５（Ａｂ－２００ｎＭ）、またはａｎｔａｇｏｍｉＲ１２６－Ｃｙ３、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ－Ｃｙ３－２００ｎＭ及び５００ｎＭ）を含有するトランスフェリン（ＴＦ－２００ｎＭ）－抱合ナノ粒子（ＮＰ）で４時間培養し、次いで、フローサイトメトリーによりこれらの細胞におけるＣｙ３発現を測定することにより、取り込みを分析した。図３Ｃは、ＭＶ４－１１ ＡＭＬ細胞における取り込みを示すヒストグラムである。 図３Ａ～３ＧはＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株におけるＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６の取り込みの結果を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。細胞を、ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３－２００ｎＭ０）、ヒトＣＤ４５（Ａｂ－２００ｎＭ）、またはａｎｔａｇｏｍｉＲ１２６－Ｃｙ３、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ－Ｃｙ３－２００ｎＭ及び５００ｎＭ）を含有するトランスフェリン（ＴＦ－２００ｎＭ）－抱合ナノ粒子（ＮＰ）で４時間培養し、次いで、フローサイトメトリーによりこれらの細胞におけるＣｙ３発現を測定することにより、取り込みを分析した。図３Ｄは、Ｍｏｌｍ１３ ＡＭＬ細胞における取り込みを示すヒストグラムである。 図３Ａ～３ＧはＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株におけるＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６の取り込みの結果を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。細胞を、ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３－２００ｎＭ０）、ヒトＣＤ４５（Ａｂ－２００ｎＭ）、またはａｎｔａｇｏｍｉＲ１２６－Ｃｙ３、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ－Ｃｙ３－２００ｎＭ及び５００ｎＭ）を含有するトランスフェリン（ＴＦ－２００ｎＭ）－抱合ナノ粒子（ＮＰ）で４時間培養し、次いで、フローサイトメトリーによりこれらの細胞におけるＣｙ３発現を測定することにより、取り込みを分析した。図３Ｅは、ＮＢ４ ＡＭＬ細胞における取り込みを示すヒストグラムである。 図３Ａ～３ＧはＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株におけるＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６の取り込みの結果を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。細胞を、ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３－２００ｎＭ０）、ヒトＣＤ４５（Ａｂ－２００ｎＭ）、またはａｎｔａｇｏｍｉＲ１２６－Ｃｙ３、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ－Ｃｙ３－２００ｎＭ及び５００ｎＭ）を含有するトランスフェリン（ＴＦ－２００ｎＭ）－抱合ナノ粒子（ＮＰ）で４時間培養し、次いで、フローサイトメトリーによりこれらの細胞におけるＣｙ３発現を測定することにより、取り込みを分析した。図３Ｆは、ＯＣＩ ＡＭＬ細胞における取り込みを示すヒストグラムである。 図３Ａ～３ＧはＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株におけるＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６の取り込みの結果を示すフローサイトメトリーヒストグラムである。細胞を、ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３－２００ｎＭ０）、ヒトＣＤ４５（Ａｂ－２００ｎＭ）、またはａｎｔａｇｏｍｉＲ１２６－Ｃｙ３、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ－Ｃｙ３－２００ｎＭ及び５００ｎＭ）を含有するトランスフェリン（ＴＦ－２００ｎＭ）－抱合ナノ粒子（ＮＰ）で４時間培養し、次いで、フローサイトメトリーによりこれらの細胞におけるＣｙ３発現を測定することにより、取り込みを分析した。図３Ｇは、ＨＬ６０ ＡＭＬ細胞における取り込みを示すヒストグラムである。 図４Ａ～４ＧはＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株におけるｍｉＲＮＡ１２６発現を示す棒グラフである。細胞を、ｍｉＲ１２６－阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３－２００ｎＭ０）、ヒトＣＤ４５（Ａｂ－２００ｎＭ）、またはａｎｔａｇｏｍｉＲ－１２６－Ｃｙ３、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ－Ｃｙ３－２００ｎＭ及び５００ｎＭ）を含有するトランスフェリン（ＴＦ－２００ｎＭ）で２４時間培養し、次いで、これらの細胞におけるｍｉＲ１２６及びＲＮＵ４４（対照）発現をｑ－ＲＴ ＰＣＲによって分析した。ｍｉＲ１２６発現レベルをＲＮＵ４４に対して正規化し、比較２－ΔΔＣｔ法を用いて計算した。図４Ａは、Ｋ５６２ ＣＭＬ細胞株におけるｍｉＲＮＡ１２６の発現を示す棒グラフである。 図４Ａ～４ＧはＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株におけるｍｉＲＮＡ１２６発現を示す棒グラフである。細胞を、ｍｉＲ１２６－阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３－２００ｎＭ０）、ヒトＣＤ４５（Ａｂ－２００ｎＭ）、またはａｎｔａｇｏｍｉＲ－１２６－Ｃｙ３、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ－Ｃｙ３－２００ｎＭ及び５００ｎＭ）を含有するトランスフェリン（ＴＦ－２００ｎＭ）で２４時間培養し、次いで、これらの細胞におけるｍｉＲ１２６及びＲＮＵ４４（対照）発現をｑ－ＲＴ ＰＣＲによって分析した。ｍｉＲ１２６発現レベルをＲＮＵ４４に対して正規化し、比較２－ΔΔＣｔ法を用いて計算した。図４Ｂは、ＫＧ１Ａ ＡＭＬ細胞株におけるｍｉＲＮＡ１２６発現を示す棒グラフである。 図４Ａ～４ＧはＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株におけるｍｉＲＮＡ１２６発現を示す棒グラフである。細胞を、ｍｉＲ１２６－阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３－２００ｎＭ０）、ヒトＣＤ４５（Ａｂ－２００ｎＭ）、またはａｎｔａｇｏｍｉＲ－１２６－Ｃｙ３、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ－Ｃｙ３－２００ｎＭ及び５００ｎＭ）を含有するトランスフェリン（ＴＦ－２００ｎＭ）で２４時間培養し、次いで、これらの細胞におけるｍｉＲ１２６及びＲＮＵ４４（対照）発現をｑ－ＲＴ ＰＣＲによって分析した。ｍｉＲ１２６発現レベルをＲＮＵ４４に対して正規化し、比較２－ΔΔＣｔ法を用いて計算した。図４Ｃは、ＭＶ４－１１ ＡＭＬ細胞株におけるｍｉＲＮＡ１２６発現を示す棒グラフである。 図４Ａ～４ＧはＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株におけるｍｉＲＮＡ１２６発現を示す棒グラフである。細胞を、ｍｉＲ１２６－阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３－２００ｎＭ０）、ヒトＣＤ４５（Ａｂ－２００ｎＭ）、またはａｎｔａｇｏｍｉＲ－１２６－Ｃｙ３、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ－Ｃｙ３－２００ｎＭ及び５００ｎＭ）を含有するトランスフェリン（ＴＦ－２００ｎＭ）で２４時間培養し、次いで、これらの細胞におけるｍｉＲ１２６及びＲＮＵ４４（対照）発現をｑ－ＲＴ ＰＣＲによって分析した。ｍｉＲ１２６発現レベルをＲＮＵ４４に対して正規化し、比較２－ΔΔＣｔ法を用いて計算した。図４Ｄは、Ｍｏｌｍ１３ ＡＭＬ細胞株におけるｍｉＲＮＡ１２６の発現を示す棒グラフである。 図４Ａ～４ＧはＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株におけるｍｉＲＮＡ１２６発現を示す棒グラフである。細胞を、ｍｉＲ１２６－阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３－２００ｎＭ０）、ヒトＣＤ４５（Ａｂ－２００ｎＭ）、またはａｎｔａｇｏｍｉＲ－１２６－Ｃｙ３、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ－Ｃｙ３－２００ｎＭ及び５００ｎＭ）を含有するトランスフェリン（ＴＦ－２００ｎＭ）で２４時間培養し、次いで、これらの細胞におけるｍｉＲ１２６及びＲＮＵ４４（対照）発現をｑ－ＲＴ ＰＣＲによって分析した。ｍｉＲ１２６発現レベルをＲＮＵ４４に対して正規化し、比較２－ΔΔＣｔ法を用いて計算した。図４Ｅは、ＮＢ４ ＡＭＬ細胞株におけるｍｉＲＮＡ１２６発現を示す棒グラフである。 図４Ａ～４ＧはＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株におけるｍｉＲＮＡ１２６発現を示す棒グラフである。細胞を、ｍｉＲ１２６－阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３－２００ｎＭ０）、ヒトＣＤ４５（Ａｂ－２００ｎＭ）、またはａｎｔａｇｏｍｉＲ－１２６－Ｃｙ３、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ－Ｃｙ３－２００ｎＭ及び５００ｎＭ）を含有するトランスフェリン（ＴＦ－２００ｎＭ）で２４時間培養し、次いで、これらの細胞におけるｍｉＲ１２６及びＲＮＵ４４（対照）発現をｑ－ＲＴ ＰＣＲによって分析した。ｍｉＲ１２６発現レベルをＲＮＵ４４に対して正規化し、比較２－ΔΔＣｔ法を用いて計算した。図４Ｆは、ＯＣＩ ＡＭＬ細胞株におけるｍｉＲＮＡ１２６発現を示す棒グラフである。 図４Ａ～４ＧはＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株におけるｍｉＲＮＡ１２６発現を示す棒グラフである。細胞を、ｍｉＲ１２６－阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３－２００ｎＭ０）、ヒトＣＤ４５（Ａｂ－２００ｎＭ）、またはａｎｔａｇｏｍｉＲ－１２６－Ｃｙ３、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ－Ｃｙ３－２００ｎＭ及び５００ｎＭ）を含有するトランスフェリン（ＴＦ－２００ｎＭ）で２４時間培養し、次いで、これらの細胞におけるｍｉＲ１２６及びＲＮＵ４４（対照）発現をｑ－ＲＴ ＰＣＲによって分析した。ｍｉＲ１２６発現レベルをＲＮＵ４４に対して正規化し、比較２－ΔΔＣｔ法を用いて計算した。図４Ｇは、ＨＬ６０ ＡＭＬ細胞株におけるｍｉＲＮＡ１２６発現を示す棒グラフである。 ＮＬ／ＣＢ、ＡＭＬ及びＣＭＬ ＣＤ３４＋細胞におけるｍｉＲＮＡ１２６の発現を示す棒グラフである。正常な臍帯血、ＡＭＬ、及びＣＭＬ ＣＤ３４＋細胞を、ＣｐＧスクランブルＲＮＡ（５００ｎＭ）及びＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で２４時間培養した。ｍｉＲ１２６及びＲＮＵ４４（対照）発現をｑ－ＲＴ－ＰＣＲによって分析した。ｍｉＲ１２６発現レベルをＲＮＵ４４に対して正規化し、比較２－ΔΔＣｔ法を用いて計算した。 ＣＭＬ ＣＤ３４＋ＣＤ３８－未分化前駆細胞におけるｍｉＲ１２６のより高い発現を、ＣＤ３４＋ＣＤ３８－系列決定前駆細胞と比較して示す棒グラフである。ＣＭＬ ＣＤ３４＋、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋系列決定前駆細胞、及びＣＤ３４＋ＣＤ３８－未分化前駆細胞を選別し、次いで、これらの細胞におけるｍｉＲ１２６及びＲＮＵ４４（ｃｔｒｌ）発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって分析した。ｍｉＲ１２６発現レベルをＲＮＵ４４に対して正規化し、比較２－ΔΔＣｔ法を用いて計算した。 ｍｉＲ１２６発現が、ＣｐＧ－ｍｉｒＲ１２６阻害剤で処置したＣＭＬ ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋系列決定前駆細胞、及びＣＤ３４＋ＣＤ３８－未分化前駆細胞において著しく減少したことを示す棒グラフである。ＣＭＬ ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋系列決定前駆細胞及びＣＤ３４＋ＣＤ３８－未分化前駆細胞を、ＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（５００ｎＭ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤（５００ｎＭ）で３６時間培養し、次いで、これらの細胞におけるｍｉＲ１２６及びＲＮＵ４４（対照）発現をｑ－ＲＴ－ＰＣＲによって分析した。ｍｉＲ１２６発現レベルをＲＮＵ４４に対して正規化し、比較２－ΔΔＣｔ法を用いて計算した。 ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤及びニロチニブ（ＮＩＬ）で処置したＣＭＬ ＣＤ３４＋、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋系列決定前駆細胞、及びＣＤ３４＋ＣＤ３８－未分化前駆細胞のアポトーシスの増加を示す一連のプロット図である。ＣＭＬ ＣＤ３４＋、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋系列決定前駆細胞、及びＣＤ３４＋ＣＤ３８－未分化前駆細胞を、ＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（５００ｎＭ）、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤（５００ｎＭ）、ＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（５００ｎＭ）＋ニロチニブ（５μＭ）、及びＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤（５００ｎＭ）＋ＮＩＬ（５μＭ）で７２時間培養し、次いで、アネキシンＶ／ＤＡＰＩ染色によりアポトーシスを分析した。 図９Ａ～９ＤはｍｉＲ－１２のノックダウン後のＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における細胞周期の増加を示す一連の細胞選別プロット図である。正常（ＮＬ、図９Ａ～９Ｂ）、及びＣＭＬヒトＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞（図９Ｃ～９Ｄ）を選別し、次いで、５００ｎｍ ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６ ｉｎｈ－Ｃｙ３またはＣｐＧ－ＳＣＲ対照で７２時間培養し、次いで、ＥＤＵ／ＤＡＰｉ染色により細胞周期を分析した。ｍｉＲ－１２６のノックダウン後のヒトＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞において、細胞周期の増加を確認した（図９Ｄ）。 図９Ａ～９ＤはｍｉＲ－１２のノックダウン後のＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における細胞周期の増加を示す一連の細胞選別プロット図である。正常（ＮＬ、図９Ａ～９Ｂ）、及びＣＭＬヒトＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞（図９Ｃ～９Ｄ）を選別し、次いで、５００ｎｍ ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６ ｉｎｈ－Ｃｙ３またはＣｐＧ－ＳＣＲ対照で７２時間培養し、次いで、ＥＤＵ／ＤＡＰｉ染色により細胞周期を分析した。ｍｉＲ－１２６のノックダウン後のヒトＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞において、細胞周期の増加を確認した（図９Ｄ）。 図９Ａ～９ＤはｍｉＲ－１２のノックダウン後のＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における細胞周期の増加を示す一連の細胞選別プロット図である。正常（ＮＬ、図９Ａ～９Ｂ）、及びＣＭＬヒトＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞（図９Ｃ～９Ｄ）を選別し、次いで、５００ｎｍ ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６ ｉｎｈ－Ｃｙ３またはＣｐＧ－ＳＣＲ対照で７２時間培養し、次いで、ＥＤＵ／ＤＡＰｉ染色により細胞周期を分析した。ｍｉＲ－１２６のノックダウン後のヒトＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞において、細胞周期の増加を確認した（図９Ｄ）。 図９Ａ～９ＤはｍｉＲ－１２のノックダウン後のＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における細胞周期の増加を示す一連の細胞選別プロット図である。正常（ＮＬ、図９Ａ～９Ｂ）、及びＣＭＬヒトＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞（図９Ｃ～９Ｄ）を選別し、次いで、５００ｎｍ ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６ ｉｎｈ－Ｃｙ３またはＣｐＧ－ＳＣＲ対照で７２時間培養し、次いで、ＥＤＵ／ＤＡＰｉ染色により細胞周期を分析した。ｍｉＲ－１２６のノックダウン後のヒトＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞において、細胞周期の増加を確認した（図９Ｄ）。 図１０Ａ～１０ＤはｍｉＲ－１２６のノックダウン後の正常（ＮＬ）及びＣＭＬ ＬＴＨＳＣにおける細胞周期の増加を示す一連の細胞選別プロット図である。正常（ＮＬ）及びＣＭＬマウスＬＴＨＳＣ（Ｌｉｎ－Ｓｃａ－１＋Ｋｉｔ＋Ｆｉｔ３ ＣＤ１５０＋ＣＤ４８－細胞）を選別し、次いで、５００ｎｍのＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤またはＣｐＧ－ＳＣＲで７２時間処置し、次いで、ＥＤＵ／ＤＡＰｉ染色により細胞周期を分析した。ｍｉＲ－１２６のノックダウン後のＮＬ及びＣＭＬ ＬＴＨＳＣにおいて、細胞周期の増加を認めた（図１０Ｄ）。 図１０Ａ～１０ＤはｍｉＲ－１２６のノックダウン後の正常（ＮＬ）及びＣＭＬ ＬＴＨＳＣにおける細胞周期の増加を示す一連の細胞選別プロット図である。正常（ＮＬ）及びＣＭＬマウスＬＴＨＳＣ（Ｌｉｎ－Ｓｃａ－１＋Ｋｉｔ＋Ｆｉｔ３ ＣＤ１５０＋ＣＤ４８－細胞）を選別し、次いで、５００ｎｍのＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤またはＣｐＧ－ＳＣＲで７２時間処置し、次いで、ＥＤＵ／ＤＡＰｉ染色により細胞周期を分析した。ｍｉＲ－１２６のノックダウン後のＮＬ及びＣＭＬ ＬＴＨＳＣにおいて、細胞周期の増加を認めた（図１０Ｄ）。 図１０Ａ～１０ＤはｍｉＲ－１２６のノックダウン後の正常（ＮＬ）及びＣＭＬ ＬＴＨＳＣにおける細胞周期の増加を示す一連の細胞選別プロット図である。正常（ＮＬ）及びＣＭＬマウスＬＴＨＳＣ（Ｌｉｎ－Ｓｃａ－１＋Ｋｉｔ＋Ｆｉｔ３ ＣＤ１５０＋ＣＤ４８－細胞）を選別し、次いで、５００ｎｍのＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤またはＣｐＧ－ＳＣＲで７２時間処置し、次いで、ＥＤＵ／ＤＡＰｉ染色により細胞周期を分析した。ｍｉＲ－１２６のノックダウン後のＮＬ及びＣＭＬ ＬＴＨＳＣにおいて、細胞周期の増加を認めた（図１０Ｄ）。 図１０Ａ～１０ＤはｍｉＲ－１２６のノックダウン後の正常（ＮＬ）及びＣＭＬ ＬＴＨＳＣにおける細胞周期の増加を示す一連の細胞選別プロット図である。正常（ＮＬ）及びＣＭＬマウスＬＴＨＳＣ（Ｌｉｎ－Ｓｃａ－１＋Ｋｉｔ＋Ｆｉｔ３ ＣＤ１５０＋ＣＤ４８－細胞）を選別し、次いで、５００ｎｍのＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤またはＣｐＧ－ＳＣＲで７２時間処置し、次いで、ＥＤＵ／ＤＡＰｉ染色により細胞周期を分析した。ｍｉＲ－１２６のノックダウン後のＮＬ及びＣＭＬ ＬＴＨＳＣにおいて、細胞周期の増加を認めた（図１０Ｄ）。 図１１Ａ～１１ＢはＳＣＲ＋ＮＩＬと比較して、著しく増加したアポトーシス及びＬＳＣの細胞増殖の有意な減少を示す、細胞選別実験の棒グラフである。マウスＣＭＬ白血病幹細胞（ＬＳＣ、Ｌｉｎ－Ｓｃａ－１＋ｃ－ｋｉｔ＋Ｆｉｔ３－ＣＤ１５０＋ＣＤ４８－）を選別して、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ－１２６阻害剤またはＣｐＧ－ＳＣＲ（５００ｎＭ）で４８時間処置し、次いで、ｍｉＲ１２６阻害剤＋ＮＩＬまたはＳＣＲ＋ＮＩＬで７２時間さらに処置し、次いで、アポトーシス及び細胞増殖を測定した。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤＋ＮＩＬは、ＳＣＲ＋ＮＩＬと比較して、ＬＳＣのアポトーシスを著しく増加させ（図１１Ａ）、かつＬＳＣの細胞増殖を有意に減少させた（図１１Ｂ）。 図１１Ａ～１１ＢはＳＣＲ＋ＮＩＬと比較して、著しく増加したアポトーシス及びＬＳＣの細胞増殖の有意な減少を示す、細胞選別実験の棒グラフである。マウスＣＭＬ白血病幹細胞（ＬＳＣ、Ｌｉｎ－Ｓｃａ－１＋ｃ－ｋｉｔ＋Ｆｉｔ３－ＣＤ１５０＋ＣＤ４８－）を選別して、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ－１２６阻害剤またはＣｐＧ－ＳＣＲ（５００ｎＭ）で４８時間処置し、次いで、ｍｉＲ１２６阻害剤＋ＮＩＬまたはＳＣＲ＋ＮＩＬで７２時間さらに処置し、次いで、アポトーシス及び細胞増殖を測定した。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤＋ＮＩＬは、ＳＣＲ＋ＮＩＬと比較して、ＬＳＣのアポトーシスを著しく増加させ（図１１Ａ）、かつＬＳＣの細胞増殖を有意に減少させた（図１１Ｂ）。 図１２Ａは、ＳＣＲ＋Ａｒａ－ｃ＋Ｄｏｘｏと比較して細胞周期及びアポトーシスが著しく増加して細胞増殖の減少をもたらすことを示す散布図であり、図１２Ｂ～１２Ｃは、ＳＣＲ＋Ａｒａ－ｃ＋Ｄｏｘｏと比較して細胞周期及びアポトーシスが著しく増加して、細胞増殖の減少をもたらすことを示す、棒グラフである。ＡＭＬ ＣＤ３４＋細胞をＣｐＧ－抗ｍｉＲ－１２６またはＣｐＧ－ＳＣＲ（５００ｎＭ）で４８時間培養し、次いで、ｍｉＲ１２６ ｉｎｈ＋Ａｒａ－ｃ＋ＤｏｘｏまたはＳＣＲ＋Ａ＋Ｄで７２時間さらに培養し、次いで、細胞周期、アポトーシス（図１２Ｂ）及び細胞増殖（図１２Ｃ）を分析した。Ａｒａ－ｃ及びＤｏｘｏと組み合わせたＣｐＧ－抗ｍｉＲ－１２６阻害剤は、ＳＣＲ＋Ａｒａ－ｃ＋Ｄｏｘｏと比較して細胞周期及びアポトーシスを著しく増加させて、細胞増殖の減少をもたらした。 図１２Ａは、ＳＣＲ＋Ａｒａ－ｃ＋Ｄｏｘｏと比較して細胞周期及びアポトーシスが著しく増加して細胞増殖の減少をもたらすことを示す散布図であり、図１２Ｂ～１２Ｃは、ＳＣＲ＋Ａｒａ－ｃ＋Ｄｏｘｏと比較して細胞周期及びアポトーシスが著しく増加して、細胞増殖の減少をもたらすことを示す、棒グラフである。ＡＭＬ ＣＤ３４＋細胞をＣｐＧ－抗ｍｉＲ－１２６またはＣｐＧ－ＳＣＲ（５００ｎＭ）で４８時間培養し、次いで、ｍｉＲ１２６ ｉｎｈ＋Ａｒａ－ｃ＋ＤｏｘｏまたはＳＣＲ＋Ａ＋Ｄで７２時間さらに培養し、次いで、細胞周期、アポトーシス（図１２Ｂ）及び細胞増殖（図１２Ｃ）を分析した。Ａｒａ－ｃ及びＤｏｘｏと組み合わせたＣｐＧ－抗ｍｉＲ－１２６阻害剤は、ＳＣＲ＋Ａｒａ－ｃ＋Ｄｏｘｏと比較して細胞周期及びアポトーシスを著しく増加させて、細胞増殖の減少をもたらした。 図１２Ａは、ＳＣＲ＋Ａｒａ－ｃ＋Ｄｏｘｏと比較して細胞周期及びアポトーシスが著しく増加して細胞増殖の減少をもたらすことを示す散布図であり、図１２Ｂ～１２Ｃは、ＳＣＲ＋Ａｒａ－ｃ＋Ｄｏｘｏと比較して細胞周期及びアポトーシスが著しく増加して、細胞増殖の減少をもたらすことを示す、棒グラフである。ＡＭＬ ＣＤ３４＋細胞をＣｐＧ－抗ｍｉＲ－１２６またはＣｐＧ－ＳＣＲ（５００ｎＭ）で４８時間培養し、次いで、ｍｉＲ１２６ ｉｎｈ＋Ａｒａ－ｃ＋ＤｏｘｏまたはＳＣＲ＋Ａ＋Ｄで７２時間さらに培養し、次いで、細胞周期、アポトーシス（図１２Ｂ）及び細胞増殖（図１２Ｃ）を分析した。Ａｒａ－ｃ及びＤｏｘｏと組み合わせたＣｐＧ－抗ｍｉＲ－１２６阻害剤は、ＳＣＲ＋Ａｒａ－ｃ＋Ｄｏｘｏと比較して細胞周期及びアポトーシスを著しく増加させて、細胞増殖の減少をもたらした。 図１３Ａ～１３ＤはＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスの脾臓重量の減少（図１３Ｂ）と、骨髄（ＢＭ）（図１３Ｃ）及び脾臓（図１３Ｄ）で観察されたＣＭＬ細胞の減少とを示す散布図である。ＳＣＬｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ、隔日、静脈内（ｉｖ）注射）、ＳＣＲ（５ｍｇ／ｋｇ、隔日、静脈内注射）、ＮＩＬ（５０ｍｇ／ｋｇ、強制飼養により毎日）＋ＳＣＲ、ＮＩＬ＋ｍｉＲ－１２６阻害剤で３週間処置し、次いで、ＰＢ（図１３Ａ）、ＢＭ（図１３Ｃ）及び脾臓（図１３Ｄ）における残りのＣＭＬ細胞を分析した。ＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスのＰＢにおけるＣＭＬ白血球の減少が見られた（図１３Ａ）。ＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスのＢＭ（図１３Ｃ）及び脾臓（図１３Ｄ）では、脾臓重量の減少（図１３Ｂ）及びＣＭＬ細胞の減少が観察された。 図１３Ａ～１３ＤはＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスの脾臓重量の減少（図１３Ｂ）と、骨髄（ＢＭ）（図１３Ｃ）及び脾臓（図１３Ｄ）で観察されたＣＭＬ細胞の減少とを示す散布図である。ＳＣＬｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ、隔日、静脈内（ｉｖ）注射）、ＳＣＲ（５ｍｇ／ｋｇ、隔日、静脈内注射）、ＮＩＬ（５０ｍｇ／ｋｇ、強制飼養により毎日）＋ＳＣＲ、ＮＩＬ＋ｍｉＲ－１２６阻害剤で３週間処置し、次いで、ＰＢ（図１３Ａ）、ＢＭ（図１３Ｃ）及び脾臓（図１３Ｄ）における残りのＣＭＬ細胞を分析した。ＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスのＰＢにおけるＣＭＬ白血球の減少が見られた（図１３Ａ）。ＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスのＢＭ（図１３Ｃ）及び脾臓（図１３Ｄ）では、脾臓重量の減少（図１３Ｂ）及びＣＭＬ細胞の減少が観察された。 図１３Ａ～１３ＤはＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスの脾臓重量の減少（図１３Ｂ）と、骨髄（ＢＭ）（図１３Ｃ）及び脾臓（図１３Ｄ）で観察されたＣＭＬ細胞の減少とを示す散布図である。ＳＣＬｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ、隔日、静脈内（ｉｖ）注射）、ＳＣＲ（５ｍｇ／ｋｇ、隔日、静脈内注射）、ＮＩＬ（５０ｍｇ／ｋｇ、強制飼養により毎日）＋ＳＣＲ、ＮＩＬ＋ｍｉＲ－１２６阻害剤で３週間処置し、次いで、ＰＢ（図１３Ａ）、ＢＭ（図１３Ｃ）及び脾臓（図１３Ｄ）における残りのＣＭＬ細胞を分析した。ＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスのＰＢにおけるＣＭＬ白血球の減少が見られた（図１３Ａ）。ＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスのＢＭ（図１３Ｃ）及び脾臓（図１３Ｄ）では、脾臓重量の減少（図１３Ｂ）及びＣＭＬ細胞の減少が観察された。 図１３Ａ～１３ＤはＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスの脾臓重量の減少（図１３Ｂ）と、骨髄（ＢＭ）（図１３Ｃ）及び脾臓（図１３Ｄ）で観察されたＣＭＬ細胞の減少とを示す散布図である。ＳＣＬｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ、隔日、静脈内（ｉｖ）注射）、ＳＣＲ（５ｍｇ／ｋｇ、隔日、静脈内注射）、ＮＩＬ（５０ｍｇ／ｋｇ、強制飼養により毎日）＋ＳＣＲ、ＮＩＬ＋ｍｉＲ－１２６阻害剤で３週間処置し、次いで、ＰＢ（図１３Ａ）、ＢＭ（図１３Ｃ）及び脾臓（図１３Ｄ）における残りのＣＭＬ細胞を分析した。ＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスのＰＢにおけるＣＭＬ白血球の減少が見られた（図１３Ａ）。ＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスのＢＭ（図１３Ｃ）及び脾臓（図１３Ｄ）では、脾臓重量の減少（図１３Ｂ）及びＣＭＬ細胞の減少が観察された。 図１４Ａ～１４ＤはＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスの骨髄（ＢＭ）（図１４Ａ、１４Ｃ）及び脾臓（図１４Ｂ、１４Ｄ）で観察されたＣＭＬ ＬＳＫ及びＬＳＣの減少を示す散布図である。ＳＣＬｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウスをＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤、ＳＣＲ、ＮＩＬ＋ＳＣＲ、ＮＩＬ＋ｍｉＲ－１２６阻害剤で３週間処置し、次いで、ＢＭ及び脾臓に残存するＣＭＬ ＬＳＫ未分化細胞及びＬＳＣを分析した。ＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスのＢＭ（図１４Ａ、１４Ｃ）及び脾臓（図１４Ｂ、１４Ｄ）において、ＣＭＬ ＬＳＫ及びＬＳＣの減少が観察された。 図１４Ａ～１４ＤはＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスの骨髄（ＢＭ）（図１４Ａ、１４Ｃ）及び脾臓（図１４Ｂ、１４Ｄ）で観察されたＣＭＬ ＬＳＫ及びＬＳＣの減少を示す散布図である。ＳＣＬｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウスをＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤、ＳＣＲ、ＮＩＬ＋ＳＣＲ、ＮＩＬ＋ｍｉＲ－１２６阻害剤で３週間処置し、次いで、ＢＭ及び脾臓に残存するＣＭＬ ＬＳＫ未分化細胞及びＬＳＣを分析した。ＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスのＢＭ（図１４Ａ、１４Ｃ）及び脾臓（図１４Ｂ、１４Ｄ）において、ＣＭＬ ＬＳＫ及びＬＳＣの減少が観察された。 図１４Ａ～１４ＤはＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスの骨髄（ＢＭ）（図１４Ａ、１４Ｃ）及び脾臓（図１４Ｂ、１４Ｄ）で観察されたＣＭＬ ＬＳＫ及びＬＳＣの減少を示す散布図である。ＳＣＬｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウスをＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤、ＳＣＲ、ＮＩＬ＋ＳＣＲ、ＮＩＬ＋ｍｉＲ－１２６阻害剤で３週間処置し、次いで、ＢＭ及び脾臓に残存するＣＭＬ ＬＳＫ未分化細胞及びＬＳＣを分析した。ＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスのＢＭ（図１４Ａ、１４Ｃ）及び脾臓（図１４Ｂ、１４Ｄ）において、ＣＭＬ ＬＳＫ及びＬＳＣの減少が観察された。 図１４Ａ～１４ＤはＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスの骨髄（ＢＭ）（図１４Ａ、１４Ｃ）及び脾臓（図１４Ｂ、１４Ｄ）で観察されたＣＭＬ ＬＳＫ及びＬＳＣの減少を示す散布図である。ＳＣＬｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウスをＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤、ＳＣＲ、ＮＩＬ＋ＳＣＲ、ＮＩＬ＋ｍｉＲ－１２６阻害剤で３週間処置し、次いで、ＢＭ及び脾臓に残存するＣＭＬ ＬＳＫ未分化細胞及びＬＳＣを分析した。ＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比較して、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスのＢＭ（図１４Ａ、１４Ｃ）及び脾臓（図１４Ｂ、１４Ｄ）において、ＣＭＬ ＬＳＫ及びＬＳＣの減少が観察された。 ＣｐＧ－抗ｍｉＲｓの安定性。５０％のヒト血清中の化学的に修飾されたＣｐＧ－抗ｍｉＲの半減期。ＣｐＧ－抗ｍｉＲをヒト血清中、３７℃で５０％の濃度で最長７日間インキュベートした。次いで、試料を７．５Ｍ尿素／２０％ＰＡＧＥゲルで分離し、臭化エチジウムを用いて染色した。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５の代表的なゲルを示す。３つの独立した実験から組み合わせたバンド強度の定量化を示すグラフであり、推定半減期は指示した通りである。 図１６Ａ～１６Ｂ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａの細胞選択的取り込み。図１６Ａ～１６Ｂ）いかなるトランスフェクション試薬もない状態の、標的免疫細胞及び白血病細胞によるＣｐＧ－ａｎｔｉｍｉＲ１４６ａの内在化の用量及び時間依存性。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａをＣｙ３標識して、フローサイトメトリーを用いて標的細胞による細胞内取り込みを検出した。図１６Ａ）ヒト免疫細胞を、示された濃度のＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａｃＹ３で１時間インキュベートした。フローサイトメトリーを用いて、ＣＤ１４＋単球、ＣＤ１ｃ＋ｍＤＣ、ＣＤ３＋Ｔ細胞及びＣＤ１９＋Ｂ細胞による取り込みを測定した。図１６Ｂ）培養ヒトＡＭＬ細胞ＫＧ１ａ、ＭＯＬＭ１３、及びＭＯＬＭ１４細胞は、低濃度でもＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａｃｏを迅速に内在化する。 図１６Ａ～１６Ｂ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａの細胞選択的取り込み。図１６Ａ～１６Ｂ）いかなるトランスフェクション試薬もない状態の、標的免疫細胞及び白血病細胞によるＣｐＧ－ａｎｔｉｍｉＲ１４６ａの内在化の用量及び時間依存性。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａをＣｙ３標識して、フローサイトメトリーを用いて標的細胞による細胞内取り込みを検出した。図１６Ａ）ヒト免疫細胞を、示された濃度のＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａｃＹ３で１時間インキュベートした。フローサイトメトリーを用いて、ＣＤ１４＋単球、ＣＤ１ｃ＋ｍＤＣ、ＣＤ３＋Ｔ細胞及びＣＤ１９＋Ｂ細胞による取り込みを測定した。図１６Ｂ）培養ヒトＡＭＬ細胞ＫＧ１ａ、ＭＯＬＭ１３、及びＭＯＬＭ１４細胞は、低濃度でもＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａｃｏを迅速に内在化する。 図１７Ａ～１７Ｆ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５の阻害効果。図１７Ａ～１７Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５処置は、ヒト及びマウスの骨髄細胞におけるｍｉＲ－１５５発現を低下させる。マウスＲＡＷ２６４．７（マクロファージ）（図１７Ａ）及びＤＣ２．４（樹状細胞）（図１７Ｂ）ならびにヒトＭＶ４－１１ ＡＭＬ細胞（図１７Ｃ）を１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５またはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌのＬＰＳで４時間処置した。ＫＧ１ａ（図１７Ｄ）、ＭＯＬＭ１３（図１７Ｅ）及びＭＯＬＭ１４（図１７Ｆ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５またはＣｐＧスクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１５５発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに標準化した。未処置試料中のｍｉＲ－１５５発現レベルを１．０とした。データは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１７Ａ～１７Ｆ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５の阻害効果。図１７Ａ～１７Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５処置は、ヒト及びマウスの骨髄細胞におけるｍｉＲ－１５５発現を低下させる。マウスＲＡＷ２６４．７（マクロファージ）（図１７Ａ）及びＤＣ２．４（樹状細胞）（図１７Ｂ）ならびにヒトＭＶ４－１１ ＡＭＬ細胞（図１７Ｃ）を１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５またはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌのＬＰＳで４時間処置した。ＫＧ１ａ（図１７Ｄ）、ＭＯＬＭ１３（図１７Ｅ）及びＭＯＬＭ１４（図１７Ｆ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５またはＣｐＧスクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１５５発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに標準化した。未処置試料中のｍｉＲ－１５５発現レベルを１．０とした。データは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１７Ａ～１７Ｆ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５の阻害効果。図１７Ａ～１７Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５処置は、ヒト及びマウスの骨髄細胞におけるｍｉＲ－１５５発現を低下させる。マウスＲＡＷ２６４．７（マクロファージ）（図１７Ａ）及びＤＣ２．４（樹状細胞）（図１７Ｂ）ならびにヒトＭＶ４－１１ ＡＭＬ細胞（図１７Ｃ）を１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５またはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌのＬＰＳで４時間処置した。ＫＧ１ａ（図１７Ｄ）、ＭＯＬＭ１３（図１７Ｅ）及びＭＯＬＭ１４（図１７Ｆ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５またはＣｐＧスクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１５５発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに標準化した。未処置試料中のｍｉＲ－１５５発現レベルを１．０とした。データは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１７Ａ～１７Ｆ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５の阻害効果。図１７Ａ～１７Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５処置は、ヒト及びマウスの骨髄細胞におけるｍｉＲ－１５５発現を低下させる。マウスＲＡＷ２６４．７（マクロファージ）（図１７Ａ）及びＤＣ２．４（樹状細胞）（図１７Ｂ）ならびにヒトＭＶ４－１１ ＡＭＬ細胞（図１７Ｃ）を１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５またはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌのＬＰＳで４時間処置した。ＫＧ１ａ（図１７Ｄ）、ＭＯＬＭ１３（図１７Ｅ）及びＭＯＬＭ１４（図１７Ｆ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５またはＣｐＧスクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１５５発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに標準化した。未処置試料中のｍｉＲ－１５５発現レベルを１．０とした。データは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１７Ａ～１７Ｆ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５の阻害効果。図１７Ａ～１７Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５処置は、ヒト及びマウスの骨髄細胞におけるｍｉＲ－１５５発現を低下させる。マウスＲＡＷ２６４．７（マクロファージ）（図１７Ａ）及びＤＣ２．４（樹状細胞）（図１７Ｂ）ならびにヒトＭＶ４－１１ ＡＭＬ細胞（図１７Ｃ）を１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５またはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌのＬＰＳで４時間処置した。ＫＧ１ａ（図１７Ｄ）、ＭＯＬＭ１３（図１７Ｅ）及びＭＯＬＭ１４（図１７Ｆ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５またはＣｐＧスクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１５５発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに標準化した。未処置試料中のｍｉＲ－１５５発現レベルを１．０とした。データは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１７Ａ～１７Ｆ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５の阻害効果。図１７Ａ～１７Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５処置は、ヒト及びマウスの骨髄細胞におけるｍｉＲ－１５５発現を低下させる。マウスＲＡＷ２６４．７（マクロファージ）（図１７Ａ）及びＤＣ２．４（樹状細胞）（図１７Ｂ）ならびにヒトＭＶ４－１１ ＡＭＬ細胞（図１７Ｃ）を１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５またはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌのＬＰＳで４時間処置した。ＫＧ１ａ（図１７Ｄ）、ＭＯＬＭ１３（図１７Ｅ）及びＭＯＬＭ１４（図１７Ｆ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５またはＣｐＧスクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１５５発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに標準化した。未処置試料中のｍｉＲ－１５５発現レベルを１．０とした。データは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１８Ａ～１８Ｆ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂの阻害効果。図１８Ａ～１８Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂ処置は、様々な細胞モデルにおいてｍｉＲ－１２５ｂ発現を低下させる。ＲＡＷ２６４．７（図１８Ａ）、ＤＣ２．４（図１８Ｂ）及びＭＶ４－１１（図１８Ｃ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌＰＳで４時間処置した。ヒトＡＭＬ細胞－ＫＧ１ａ（図１８Ｄ）、ＭＯＬＭ１３（図１８Ｅ）、及びＭＯＬＭ１４（図１８Ｆ）を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたは対照ＣｐＧスクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１２５ｂ発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに正規化した。未処置試料中のｍｉＲ－１２５ｂ発現レベルを１．０とした。データは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１８Ａ～１８Ｆ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂの阻害効果。図１８Ａ～１８Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂ処置は、様々な細胞モデルにおいてｍｉＲ－１２５ｂ発現を低下させる。ＲＡＷ２６４．７（図１８Ａ）、ＤＣ２．４（図１８Ｂ）及びＭＶ４－１１（図１８Ｃ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌＰＳで４時間処置した。ヒトＡＭＬ細胞－ＫＧ１ａ（図１８Ｄ）、ＭＯＬＭ１３（図１８Ｅ）、及びＭＯＬＭ１４（図１８Ｆ）を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたは対照ＣｐＧスクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１２５ｂ発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに正規化した。未処置試料中のｍｉＲ－１２５ｂ発現レベルを１．０とした。データは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１８Ａ～１８Ｆ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂの阻害効果。図１８Ａ～１８Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂ処置は、様々な細胞モデルにおいてｍｉＲ－１２５ｂ発現を低下させる。ＲＡＷ２６４．７（図１８Ａ）、ＤＣ２．４（図１８Ｂ）及びＭＶ４－１１（図１８Ｃ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌＰＳで４時間処置した。ヒトＡＭＬ細胞－ＫＧ１ａ（図１８Ｄ）、ＭＯＬＭ１３（図１８Ｅ）、及びＭＯＬＭ１４（図１８Ｆ）を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたは対照ＣｐＧスクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１２５ｂ発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに正規化した。未処置試料中のｍｉＲ－１２５ｂ発現レベルを１．０とした。データは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１８Ａ～１８Ｆ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂの阻害効果。図１８Ａ～１８Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂ処置は、様々な細胞モデルにおいてｍｉＲ－１２５ｂ発現を低下させる。ＲＡＷ２６４．７（図１８Ａ）、ＤＣ２．４（図１８Ｂ）及びＭＶ４－１１（図１８Ｃ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌＰＳで４時間処置した。ヒトＡＭＬ細胞－ＫＧ１ａ（図１８Ｄ）、ＭＯＬＭ１３（図１８Ｅ）、及びＭＯＬＭ１４（図１８Ｆ）を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたは対照ＣｐＧスクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１２５ｂ発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに正規化した。未処置試料中のｍｉＲ－１２５ｂ発現レベルを１．０とした。データは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１８Ａ～１８Ｆ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂの阻害効果。図１８Ａ～１８Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂ処置は、様々な細胞モデルにおいてｍｉＲ－１２５ｂ発現を低下させる。ＲＡＷ２６４．７（図１８Ａ）、ＤＣ２．４（図１８Ｂ）及びＭＶ４－１１（図１８Ｃ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌＰＳで４時間処置した。ヒトＡＭＬ細胞－ＫＧ１ａ（図１８Ｄ）、ＭＯＬＭ１３（図１８Ｅ）、及びＭＯＬＭ１４（図１８Ｆ）を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたは対照ＣｐＧスクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１２５ｂ発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに正規化した。未処置試料中のｍｉＲ－１２５ｂ発現レベルを１．０とした。データは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１８Ａ～１８Ｆ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂの阻害効果。図１８Ａ～１８Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂ処置は、様々な細胞モデルにおいてｍｉＲ－１２５ｂ発現を低下させる。ＲＡＷ２６４．７（図１８Ａ）、ＤＣ２．４（図１８Ｂ）及びＭＶ４－１１（図１８Ｃ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌＰＳで４時間処置した。ヒトＡＭＬ細胞－ＫＧ１ａ（図１８Ｄ）、ＭＯＬＭ１３（図１８Ｅ）、及びＭＯＬＭ１４（図１８Ｆ）を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたは対照ＣｐＧスクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１２５ｂ発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに正規化した。未処置試料中のｍｉＲ－１２５ｂ発現レベルを１．０とした。データは平均値±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１９Ａ～１９Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａの阻害効果。図１９Ａ～１９Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ヒト及びマウスの骨髄細胞におけるｍｉＲ－１４６ａ発現を低下させる。マウスＲＡＷ２６４．７（マクロファージ）（図１９Ａ）及びＤＣ２．４（樹状細胞）（図１９Ｂ）ならびにヒトＭＶ４－１１（図１９Ｃ）及びＫＧ１ａ ＡＭＬ（図１９Ｄ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌのＬＰＳで４時間処置した。ＫＧ１ａ、ＭＯＬＭ１３（図１９Ｅ）、及びＭＯＬＭ１４（図１９Ｆ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。図１９Ｇ～１９Ｈ）マウスＣＭＭ ＡＭＬ細胞（図１９Ｇ）及びＡ２０リンパ腫細胞（図１９Ｈ）を、１００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１４６ａ発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに正規化した。未処置試料中のｍｉＲ－１４６ａ発現レベルを１．０とした。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１９Ａ～１９Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａの阻害効果。図１９Ａ～１９Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ヒト及びマウスの骨髄細胞におけるｍｉＲ－１４６ａ発現を低下させる。マウスＲＡＷ２６４．７（マクロファージ）（図１９Ａ）及びＤＣ２．４（樹状細胞）（図１９Ｂ）ならびにヒトＭＶ４－１１（図１９Ｃ）及びＫＧ１ａ ＡＭＬ（図１９Ｄ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌのＬＰＳで４時間処置した。ＫＧ１ａ、ＭＯＬＭ１３（図１９Ｅ）、及びＭＯＬＭ１４（図１９Ｆ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。図１９Ｇ～１９Ｈ）マウスＣＭＭ ＡＭＬ細胞（図１９Ｇ）及びＡ２０リンパ腫細胞（図１９Ｈ）を、１００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１４６ａ発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに正規化した。未処置試料中のｍｉＲ－１４６ａ発現レベルを１．０とした。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１９Ａ～１９Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａの阻害効果。図１９Ａ～１９Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ヒト及びマウスの骨髄細胞におけるｍｉＲ－１４６ａ発現を低下させる。マウスＲＡＷ２６４．７（マクロファージ）（図１９Ａ）及びＤＣ２．４（樹状細胞）（図１９Ｂ）ならびにヒトＭＶ４－１１（図１９Ｃ）及びＫＧ１ａ ＡＭＬ（図１９Ｄ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌのＬＰＳで４時間処置した。ＫＧ１ａ、ＭＯＬＭ１３（図１９Ｅ）、及びＭＯＬＭ１４（図１９Ｆ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。図１９Ｇ～１９Ｈ）マウスＣＭＭ ＡＭＬ細胞（図１９Ｇ）及びＡ２０リンパ腫細胞（図１９Ｈ）を、１００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１４６ａ発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに正規化した。未処置試料中のｍｉＲ－１４６ａ発現レベルを１．０とした。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１９Ａ～１９Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａの阻害効果。図１９Ａ～１９Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ヒト及びマウスの骨髄細胞におけるｍｉＲ－１４６ａ発現を低下させる。マウスＲＡＷ２６４．７（マクロファージ）（図１９Ａ）及びＤＣ２．４（樹状細胞）（図１９Ｂ）ならびにヒトＭＶ４－１１（図１９Ｃ）及びＫＧ１ａ ＡＭＬ（図１９Ｄ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌのＬＰＳで４時間処置した。ＫＧ１ａ、ＭＯＬＭ１３（図１９Ｅ）、及びＭＯＬＭ１４（図１９Ｆ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。図１９Ｇ～１９Ｈ）マウスＣＭＭ ＡＭＬ細胞（図１９Ｇ）及びＡ２０リンパ腫細胞（図１９Ｈ）を、１００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１４６ａ発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに正規化した。未処置試料中のｍｉＲ－１４６ａ発現レベルを１．０とした。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１９Ａ～１９Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａの阻害効果。図１９Ａ～１９Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ヒト及びマウスの骨髄細胞におけるｍｉＲ－１４６ａ発現を低下させる。マウスＲＡＷ２６４．７（マクロファージ）（図１９Ａ）及びＤＣ２．４（樹状細胞）（図１９Ｂ）ならびにヒトＭＶ４－１１（図１９Ｃ）及びＫＧ１ａ ＡＭＬ（図１９Ｄ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌのＬＰＳで４時間処置した。ＫＧ１ａ、ＭＯＬＭ１３（図１９Ｅ）、及びＭＯＬＭ１４（図１９Ｆ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。図１９Ｇ～１９Ｈ）マウスＣＭＭ ＡＭＬ細胞（図１９Ｇ）及びＡ２０リンパ腫細胞（図１９Ｈ）を、１００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１４６ａ発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに正規化した。未処置試料中のｍｉＲ－１４６ａ発現レベルを１．０とした。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１９Ａ～１９Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａの阻害効果。図１９Ａ～１９Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ヒト及びマウスの骨髄細胞におけるｍｉＲ－１４６ａ発現を低下させる。マウスＲＡＷ２６４．７（マクロファージ）（図１９Ａ）及びＤＣ２．４（樹状細胞）（図１９Ｂ）ならびにヒトＭＶ４－１１（図１９Ｃ）及びＫＧ１ａ ＡＭＬ（図１９Ｄ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌのＬＰＳで４時間処置した。ＫＧ１ａ、ＭＯＬＭ１３（図１９Ｅ）、及びＭＯＬＭ１４（図１９Ｆ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。図１９Ｇ～１９Ｈ）マウスＣＭＭ ＡＭＬ細胞（図１９Ｇ）及びＡ２０リンパ腫細胞（図１９Ｈ）を、１００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１４６ａ発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに正規化した。未処置試料中のｍｉＲ－１４６ａ発現レベルを１．０とした。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１９Ａ～１９Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａの阻害効果。図１９Ａ～１９Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ヒト及びマウスの骨髄細胞におけるｍｉＲ－１４６ａ発現を低下させる。マウスＲＡＷ２６４．７（マクロファージ）（図１９Ａ）及びＤＣ２．４（樹状細胞）（図１９Ｂ）ならびにヒトＭＶ４－１１（図１９Ｃ）及びＫＧ１ａ ＡＭＬ（図１９Ｄ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌのＬＰＳで４時間処置した。ＫＧ１ａ、ＭＯＬＭ１３（図１９Ｅ）、及びＭＯＬＭ１４（図１９Ｆ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。図１９Ｇ～１９Ｈ）マウスＣＭＭ ＡＭＬ細胞（図１９Ｇ）及びＡ２０リンパ腫細胞（図１９Ｈ）を、１００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１４６ａ発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに正規化した。未処置試料中のｍｉＲ－１４６ａ発現レベルを１．０とした。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図１９Ａ～１９Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａの阻害効果。図１９Ａ～１９Ｆ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ヒト及びマウスの骨髄細胞におけるｍｉＲ－１４６ａ発現を低下させる。マウスＲＡＷ２６４．７（マクロファージ）（図１９Ａ）及びＤＣ２．４（樹状細胞）（図１９Ｂ）ならびにヒトＭＶ４－１１（図１９Ｃ）及びＫＧ１ａ ＡＭＬ（図１９Ｄ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（陰性対照）で１８時間インキュベートし、次いで、１ｖｇ／ｍｌのＬＰＳで４時間処置した。ＫＧ１ａ、ＭＯＬＭ１３（図１９Ｅ）、及びＭＯＬＭ１４（図１９Ｆ）細胞を、１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたはＣｐＧ－スクランブルＲＮＡで１８時間インキュベートした。図１９Ｇ～１９Ｈ）マウスＣＭＭ ＡＭＬ細胞（図１９Ｇ）及びＡ２０リンパ腫細胞（図１９Ｈ）を、１００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで１８時間インキュベートした。成熟ｍｉＲ－１４６ａ発現を、ＴＡＱＭＡＮ（登録商標）ｑＰＣＲアッセイを用いて測定し、ｓｎｏＲＮＡ２３４レベルに正規化した。未処置試料中のｍｉＲ－１４６ａ発現レベルを１．０とした。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）として示されている。＊Ｐ＜０．０５である。 図２０Ａ～２０Ｄ。下流標的に対するＣｐＧ－抗ｍｉＲＮＡの効果。図２０Ａ～２０Ｃ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲは、ｍｉＲ１５５、ｍｉＲ１２５ｂ、及びｍｉＲ１４６ａの下流標的を調節する。マウスＲＡＷ２６４．７またはヒトＭＶ４－１１細胞を、２５０ｎＭまたは５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたはＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたは５００ｎＭのＣｐＧ－スクランブルで４８時間インキュベートし、次いで、細胞溶解物を採集し、ＳＨＩＰ１（ｍｉＲ１５５標的）（図２０Ａ）、ＩＲＦ４（ｍｉＲ１２５ｂ標的）（図２０Ｂ）、またはＩＲＡＫ１（ｍｉＲ１４６ａ標的）（図２０Ｃ）に対する抗体によって電気泳動及び免疫ブロットした。バンド強度をβ－アクチンに対して正規化して定量化した。対照タンパク質レベルに対する誘導倍率は、ブロットの下に示される。図２０Ｄ）ＭＶ４－１１細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－アンチｍｉＲ１２５ｂ、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、またはＣｐＧ－スクランブルで２４時間インキュベートし、細胞溶解物を採集し、電気泳動し、免疫ブロットして、アポトーシスの誘導を示す活性化カスパ－ゼ３を検出した。 図２０Ａ～２０Ｄ。下流標的に対するＣｐＧ－抗ｍｉＲＮＡの効果。図２０Ａ～２０Ｃ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲは、ｍｉＲ１５５、ｍｉＲ１２５ｂ、及びｍｉＲ１４６ａの下流標的を調節する。マウスＲＡＷ２６４．７またはヒトＭＶ４－１１細胞を、２５０ｎＭまたは５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたはＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたは５００ｎＭのＣｐＧ－スクランブルで４８時間インキュベートし、次いで、細胞溶解物を採集し、ＳＨＩＰ１（ｍｉＲ１５５標的）（図２０Ａ）、ＩＲＦ４（ｍｉＲ１２５ｂ標的）（図２０Ｂ）、またはＩＲＡＫ１（ｍｉＲ１４６ａ標的）（図２０Ｃ）に対する抗体によって電気泳動及び免疫ブロットした。バンド強度をβ－アクチンに対して正規化して定量化した。対照タンパク質レベルに対する誘導倍率は、ブロットの下に示される。図２０Ｄ）ＭＶ４－１１細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－アンチｍｉＲ１２５ｂ、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、またはＣｐＧ－スクランブルで２４時間インキュベートし、細胞溶解物を採集し、電気泳動し、免疫ブロットして、アポトーシスの誘導を示す活性化カスパ－ゼ３を検出した。 図２０Ａ～２０Ｄ。下流標的に対するＣｐＧ－抗ｍｉＲＮＡの効果。図２０Ａ～２０Ｃ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲは、ｍｉＲ１５５、ｍｉＲ１２５ｂ、及びｍｉＲ１４６ａの下流標的を調節する。マウスＲＡＷ２６４．７またはヒトＭＶ４－１１細胞を、２５０ｎＭまたは５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたはＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたは５００ｎＭのＣｐＧ－スクランブルで４８時間インキュベートし、次いで、細胞溶解物を採集し、ＳＨＩＰ１（ｍｉＲ１５５標的）（図２０Ａ）、ＩＲＦ４（ｍｉＲ１２５ｂ標的）（図２０Ｂ）、またはＩＲＡＫ１（ｍｉＲ１４６ａ標的）（図２０Ｃ）に対する抗体によって電気泳動及び免疫ブロットした。バンド強度をβ－アクチンに対して正規化して定量化した。対照タンパク質レベルに対する誘導倍率は、ブロットの下に示される。図２０Ｄ）ＭＶ４－１１細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－アンチｍｉＲ１２５ｂ、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、またはＣｐＧ－スクランブルで２４時間インキュベートし、細胞溶解物を採集し、電気泳動し、免疫ブロットして、アポトーシスの誘導を示す活性化カスパ－ゼ３を検出した。 図２０Ａ～２０Ｄ。下流標的に対するＣｐＧ－抗ｍｉＲＮＡの効果。図２０Ａ～２０Ｃ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲは、ｍｉＲ１５５、ｍｉＲ１２５ｂ、及びｍｉＲ１４６ａの下流標的を調節する。マウスＲＡＷ２６４．７またはヒトＭＶ４－１１細胞を、２５０ｎＭまたは５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂまたはＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａまたは５００ｎＭのＣｐＧ－スクランブルで４８時間インキュベートし、次いで、細胞溶解物を採集し、ＳＨＩＰ１（ｍｉＲ１５５標的）（図２０Ａ）、ＩＲＦ４（ｍｉＲ１２５ｂ標的）（図２０Ｂ）、またはＩＲＡＫ１（ｍｉＲ１４６ａ標的）（図２０Ｃ）に対する抗体によって電気泳動及び免疫ブロットした。バンド強度をβ－アクチンに対して正規化して定量化した。対照タンパク質レベルに対する誘導倍率は、ブロットの下に示される。図２０Ｄ）ＭＶ４－１１細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－アンチｍｉＲ１２５ｂ、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、またはＣｐＧ－スクランブルで２４時間インキュベートし、細胞溶解物を採集し、電気泳動し、免疫ブロットして、アポトーシスの誘導を示す活性化カスパ－ゼ３を検出した。 図２１Ａ～２１Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲの阻害効果の比較。図２１Ａ～２１Ｄ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ＲＡＷ２６４．７（図２１Ａ、２１Ｃ）及びＡ２０細胞（図２１Ｂ、２１Ｄ）におけるｍｉＲ１５５またはｍｉＲ１４６ａ発現を低下させる。細胞を１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲまたはＧｐＣ－抗ｍｉＲと共に１８時間インキュベートした。図２１Ｅ～２１Ｈ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ処置は、ｍｉＲ１５５及びｍｉＲ１４６ａの下流標的を調節する。ＲＡＷ２６４．７（図２１Ｅ、２１Ｇ）またはＡ２０細胞（図２１Ｆ、２１Ｈ）を、５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１５５、またはＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａで４８時間インキュベートし、次いで、細胞溶解物を採集し、ＳＨＩＰ１（ｍｉＲ１５５標的）またはＩＲＡＫ１（ｍｉＲ１４６ａ標的）に対する抗体を用いて免疫ブロットした。 図２１Ａ～２１Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲの阻害効果の比較。図２１Ａ～２１Ｄ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ＲＡＷ２６４．７（図２１Ａ、２１Ｃ）及びＡ２０細胞（図２１Ｂ、２１Ｄ）におけるｍｉＲ１５５またはｍｉＲ１４６ａ発現を低下させる。細胞を１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲまたはＧｐＣ－抗ｍｉＲと共に１８時間インキュベートした。図２１Ｅ～２１Ｈ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ処置は、ｍｉＲ１５５及びｍｉＲ１４６ａの下流標的を調節する。ＲＡＷ２６４．７（図２１Ｅ、２１Ｇ）またはＡ２０細胞（図２１Ｆ、２１Ｈ）を、５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１５５、またはＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａで４８時間インキュベートし、次いで、細胞溶解物を採集し、ＳＨＩＰ１（ｍｉＲ１５５標的）またはＩＲＡＫ１（ｍｉＲ１４６ａ標的）に対する抗体を用いて免疫ブロットした。 図２１Ａ～２１Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲの阻害効果の比較。図２１Ａ～２１Ｄ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ＲＡＷ２６４．７（図２１Ａ、２１Ｃ）及びＡ２０細胞（図２１Ｂ、２１Ｄ）におけるｍｉＲ１５５またはｍｉＲ１４６ａ発現を低下させる。細胞を１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲまたはＧｐＣ－抗ｍｉＲと共に１８時間インキュベートした。図２１Ｅ～２１Ｈ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ処置は、ｍｉＲ１５５及びｍｉＲ１４６ａの下流標的を調節する。ＲＡＷ２６４．７（図２１Ｅ、２１Ｇ）またはＡ２０細胞（図２１Ｆ、２１Ｈ）を、５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１５５、またはＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａで４８時間インキュベートし、次いで、細胞溶解物を採集し、ＳＨＩＰ１（ｍｉＲ１５５標的）またはＩＲＡＫ１（ｍｉＲ１４６ａ標的）に対する抗体を用いて免疫ブロットした。 図２１Ａ～２１Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲの阻害効果の比較。図２１Ａ～２１Ｄ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ＲＡＷ２６４．７（図２１Ａ、２１Ｃ）及びＡ２０細胞（図２１Ｂ、２１Ｄ）におけるｍｉＲ１５５またはｍｉＲ１４６ａ発現を低下させる。細胞を１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲまたはＧｐＣ－抗ｍｉＲと共に１８時間インキュベートした。図２１Ｅ～２１Ｈ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ処置は、ｍｉＲ１５５及びｍｉＲ１４６ａの下流標的を調節する。ＲＡＷ２６４．７（図２１Ｅ、２１Ｇ）またはＡ２０細胞（図２１Ｆ、２１Ｈ）を、５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１５５、またはＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａで４８時間インキュベートし、次いで、細胞溶解物を採集し、ＳＨＩＰ１（ｍｉＲ１５５標的）またはＩＲＡＫ１（ｍｉＲ１４６ａ標的）に対する抗体を用いて免疫ブロットした。 図２１Ａ～２１Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲの阻害効果の比較。図２１Ａ～２１Ｄ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ＲＡＷ２６４．７（図２１Ａ、２１Ｃ）及びＡ２０細胞（図２１Ｂ、２１Ｄ）におけるｍｉＲ１５５またはｍｉＲ１４６ａ発現を低下させる。細胞を１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲまたはＧｐＣ－抗ｍｉＲと共に１８時間インキュベートした。図２１Ｅ～２１Ｈ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ処置は、ｍｉＲ１５５及びｍｉＲ１４６ａの下流標的を調節する。ＲＡＷ２６４．７（図２１Ｅ、２１Ｇ）またはＡ２０細胞（図２１Ｆ、２１Ｈ）を、５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１５５、またはＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａで４８時間インキュベートし、次いで、細胞溶解物を採集し、ＳＨＩＰ１（ｍｉＲ１５５標的）またはＩＲＡＫ１（ｍｉＲ１４６ａ標的）に対する抗体を用いて免疫ブロットした。 図２１Ａ～２１Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲの阻害効果の比較。図２１Ａ～２１Ｄ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ＲＡＷ２６４．７（図２１Ａ、２１Ｃ）及びＡ２０細胞（図２１Ｂ、２１Ｄ）におけるｍｉＲ１５５またはｍｉＲ１４６ａ発現を低下させる。細胞を１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲまたはＧｐＣ－抗ｍｉＲと共に１８時間インキュベートした。図２１Ｅ～２１Ｈ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ処置は、ｍｉＲ１５５及びｍｉＲ１４６ａの下流標的を調節する。ＲＡＷ２６４．７（図２１Ｅ、２１Ｇ）またはＡ２０細胞（図２１Ｆ、２１Ｈ）を、５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１５５、またはＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａで４８時間インキュベートし、次いで、細胞溶解物を採集し、ＳＨＩＰ１（ｍｉＲ１５５標的）またはＩＲＡＫ１（ｍｉＲ１４６ａ標的）に対する抗体を用いて免疫ブロットした。 図２１Ａ～２１Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲの阻害効果の比較。図２１Ａ～２１Ｄ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ＲＡＷ２６４．７（図２１Ａ、２１Ｃ）及びＡ２０細胞（図２１Ｂ、２１Ｄ）におけるｍｉＲ１５５またはｍｉＲ１４６ａ発現を低下させる。細胞を１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲまたはＧｐＣ－抗ｍｉＲと共に１８時間インキュベートした。図２１Ｅ～２１Ｈ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ処置は、ｍｉＲ１５５及びｍｉＲ１４６ａの下流標的を調節する。ＲＡＷ２６４．７（図２１Ｅ、２１Ｇ）またはＡ２０細胞（図２１Ｆ、２１Ｈ）を、５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１５５、またはＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａで４８時間インキュベートし、次いで、細胞溶解物を採集し、ＳＨＩＰ１（ｍｉＲ１５５標的）またはＩＲＡＫ１（ｍｉＲ１４６ａ標的）に対する抗体を用いて免疫ブロットした。 図２１Ａ～２１Ｈ。ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲの阻害効果の比較。図２１Ａ～２１Ｄ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａ処置は、ＲＡＷ２６４．７（図２１Ａ、２１Ｃ）及びＡ２０細胞（図２１Ｂ、２１Ｄ）におけるｍｉＲ１５５またはｍｉＲ１４６ａ発現を低下させる。細胞を１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲまたはＧｐＣ－抗ｍｉＲと共に１８時間インキュベートした。図２１Ｅ～２１Ｈ）ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ処置は、ｍｉＲ１５５及びｍｉＲ１４６ａの下流標的を調節する。ＲＡＷ２６４．７（図２１Ｅ、２１Ｇ）またはＡ２０細胞（図２１Ｆ、２１Ｈ）を、５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１５５、またはＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａで４８時間インキュベートし、次いで、細胞溶解物を採集し、ＳＨＩＰ１（ｍｉＲ１５５標的）またはＩＲＡＫ１（ｍｉＲ１４６ａ標的）に対する抗体を用いて免疫ブロットした。 図２２Ａ～２２Ｅ。ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックは、ＬＰＳ誘発炎症性シグナル伝達を弱める。図２２Ａ～２２Ｂ）ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックは、培養ＣＭＭ白血病（図２２Ａ）及びＡ２０リンパ腫細胞（図２２Ｂ）におけるｍｉＲ－１４６ａ発現を増加させる。細胞を１００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで１８時間インキュベートした。図２２Ｃ）ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックは、ｍｉＲ１４６ａの下流標的であるＩＲＡＫ１発現を阻害する。Ａ２０細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックまたはＬＰＳ（陽性対照として使用）で４８時間インキュベートした後、細胞溶解物を採集し、ＩＲＡＫ１特異的抗体を用いて免疫ブロットした。図２２Ｄ～２２Ｅ）ＮＦ－ＫＢ応答性レポーター遺伝子を発現するＲＡＷ－Ｂｌｕｅ細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで２４時間処置し、次いで１ｐｇ／ｍｌのＬＰＳでさらに２４時間処置した。培養培地を採取し、ＥＬＩＳＡを用いて培地中のＩＬ－６レベルに対してＱｕａｎｔｉ－Ｂｌｕｅアッセイキット（図２２Ｄ）を用いてＮＦ－ＫＢ活性について分析した（図２２Ｅ）。 図２２Ａ～２２Ｅ。ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックは、ＬＰＳ誘発炎症性シグナル伝達を弱める。図２２Ａ～２２Ｂ）ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックは、培養ＣＭＭ白血病（図２２Ａ）及びＡ２０リンパ腫細胞（図２２Ｂ）におけるｍｉＲ－１４６ａ発現を増加させる。細胞を１００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで１８時間インキュベートした。図２２Ｃ）ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックは、ｍｉＲ１４６ａの下流標的であるＩＲＡＫ１発現を阻害する。Ａ２０細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックまたはＬＰＳ（陽性対照として使用）で４８時間インキュベートした後、細胞溶解物を採集し、ＩＲＡＫ１特異的抗体を用いて免疫ブロットした。図２２Ｄ～２２Ｅ）ＮＦ－ＫＢ応答性レポーター遺伝子を発現するＲＡＷ－Ｂｌｕｅ細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで２４時間処置し、次いで１ｐｇ／ｍｌのＬＰＳでさらに２４時間処置した。培養培地を採取し、ＥＬＩＳＡを用いて培地中のＩＬ－６レベルに対してＱｕａｎｔｉ－Ｂｌｕｅアッセイキット（図２２Ｄ）を用いてＮＦ－ＫＢ活性について分析した（図２２Ｅ）。 図２２Ａ～２２Ｅ。ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックは、ＬＰＳ誘発炎症性シグナル伝達を弱める。図２２Ａ～２２Ｂ）ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックは、培養ＣＭＭ白血病（図２２Ａ）及びＡ２０リンパ腫細胞（図２２Ｂ）におけるｍｉＲ－１４６ａ発現を増加させる。細胞を１００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで１８時間インキュベートした。図２２Ｃ）ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックは、ｍｉＲ１４６ａの下流標的であるＩＲＡＫ１発現を阻害する。Ａ２０細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックまたはＬＰＳ（陽性対照として使用）で４８時間インキュベートした後、細胞溶解物を採集し、ＩＲＡＫ１特異的抗体を用いて免疫ブロットした。図２２Ｄ～２２Ｅ）ＮＦ－ＫＢ応答性レポーター遺伝子を発現するＲＡＷ－Ｂｌｕｅ細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで２４時間処置し、次いで１ｐｇ／ｍｌのＬＰＳでさらに２４時間処置した。培養培地を採取し、ＥＬＩＳＡを用いて培地中のＩＬ－６レベルに対してＱｕａｎｔｉ－Ｂｌｕｅアッセイキット（図２２Ｄ）を用いてＮＦ－ＫＢ活性について分析した（図２２Ｅ）。 図２２Ａ～２２Ｅ。ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックは、ＬＰＳ誘発炎症性シグナル伝達を弱める。図２２Ａ～２２Ｂ）ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックは、培養ＣＭＭ白血病（図２２Ａ）及びＡ２０リンパ腫細胞（図２２Ｂ）におけるｍｉＲ－１４６ａ発現を増加させる。細胞を１００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで１８時間インキュベートした。図２２Ｃ）ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックは、ｍｉＲ１４６ａの下流標的であるＩＲＡＫ１発現を阻害する。Ａ２０細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックまたはＬＰＳ（陽性対照として使用）で４８時間インキュベートした後、細胞溶解物を採集し、ＩＲＡＫ１特異的抗体を用いて免疫ブロットした。図２２Ｄ～２２Ｅ）ＮＦ－ＫＢ応答性レポーター遺伝子を発現するＲＡＷ－Ｂｌｕｅ細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで２４時間処置し、次いで１ｐｇ／ｍｌのＬＰＳでさらに２４時間処置した。培養培地を採取し、ＥＬＩＳＡを用いて培地中のＩＬ－６レベルに対してＱｕａｎｔｉ－Ｂｌｕｅアッセイキット（図２２Ｄ）を用いてＮＦ－ＫＢ活性について分析した（図２２Ｅ）。 図２２Ａ～２２Ｅ。ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックは、ＬＰＳ誘発炎症性シグナル伝達を弱める。図２２Ａ～２２Ｂ）ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックは、培養ＣＭＭ白血病（図２２Ａ）及びＡ２０リンパ腫細胞（図２２Ｂ）におけるｍｉＲ－１４６ａ発現を増加させる。細胞を１００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで１８時間インキュベートした。図２２Ｃ）ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックは、ｍｉＲ１４６ａの下流標的であるＩＲＡＫ１発現を阻害する。Ａ２０細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックまたはＬＰＳ（陽性対照として使用）で４８時間インキュベートした後、細胞溶解物を採集し、ＩＲＡＫ１特異的抗体を用いて免疫ブロットした。図２２Ｄ～２２Ｅ）ＮＦ－ＫＢ応答性レポーター遺伝子を発現するＲＡＷ－Ｂｌｕｅ細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａミミックで２４時間処置し、次いで１ｐｇ／ｍｌのＬＰＳでさらに２４時間処置した。培養培地を採取し、ＥＬＩＳＡを用いて培地中のＩＬ－６レベルに対してＱｕａｎｔｉ－Ｂｌｕｅアッセイキット（図２２Ｄ）を用いてＮＦ－ＫＢ活性について分析した（図２２Ｅ）。 図２３Ａ～２３Ｋ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。Ｋ５６２細胞にｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３、または裸のｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（図２３Ａ及びＢでは対照として標識されている）を含有するＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ）、Ａｂ－ＮＰ（Ａｂ－ＮＰ）またはＴＦ－ＮＰ（ＴＦ－ＮＰ）の添加の４時間後（図２３Ａ）及び２４時間後（図２３Ｂ）でのフローサイトメトリー分析によって測定した取り込み試験。実験は２回繰り返した。Ｋ５６２におけるｍｉＲ－１２６発現を２４時間目にＱ－ＲＴ－ＰＣＲにより測定した（ｎ＝３）（図２３Ｃ）。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）の添加の４時間後のＨＵＶＥＣ（図２３Ｄ）、ヒト正常（図２３Ｅ）、及びＣＭＬ（図２３Ｆ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における取り込みをフローサイトメトリーにより測定した。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で２４時間処置したＨＵＶＥＣ（図２３Ｇ）、正常（図２３Ｈ）、及びＣＭＬ（図２３Ｉ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を示す（ｎ＝４）。ＥＤＵ染色によってＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で処置した正常（図２３Ｊ）及びＣＭＬ（図２３Ｋ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における２つの細胞周期実験の１つを示す。略語：ａｂ－ＮＰ（ＣＤ４５抗体抱合ナノ粒子）、ＴＦ－ＮＰ（トランスフェリン（ＴＦ）抱合ナノ粒子）。 図２３Ａ～２３Ｋ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。Ｋ５６２細胞にｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３、または裸のｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（図２３Ａ及びＢでは対照として標識されている）を含有するＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ）、Ａｂ－ＮＰ（Ａｂ－ＮＰ）またはＴＦ－ＮＰ（ＴＦ－ＮＰ）の添加の４時間後（図２３Ａ）及び２４時間後（図２３Ｂ）でのフローサイトメトリー分析によって測定した取り込み試験。実験は２回繰り返した。Ｋ５６２におけるｍｉＲ－１２６発現を２４時間目にＱ－ＲＴ－ＰＣＲにより測定した（ｎ＝３）（図２３Ｃ）。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）の添加の４時間後のＨＵＶＥＣ（図２３Ｄ）、ヒト正常（図２３Ｅ）、及びＣＭＬ（図２３Ｆ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における取り込みをフローサイトメトリーにより測定した。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で２４時間処置したＨＵＶＥＣ（図２３Ｇ）、正常（図２３Ｈ）、及びＣＭＬ（図２３Ｉ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を示す（ｎ＝４）。ＥＤＵ染色によってＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で処置した正常（図２３Ｊ）及びＣＭＬ（図２３Ｋ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における２つの細胞周期実験の１つを示す。略語：ａｂ－ＮＰ（ＣＤ４５抗体抱合ナノ粒子）、ＴＦ－ＮＰ（トランスフェリン（ＴＦ）抱合ナノ粒子）。 図２３Ａ～２３Ｋ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。Ｋ５６２細胞にｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３、または裸のｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（図２３Ａ及びＢでは対照として標識されている）を含有するＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ）、Ａｂ－ＮＰ（Ａｂ－ＮＰ）またはＴＦ－ＮＰ（ＴＦ－ＮＰ）の添加の４時間後（図２３Ａ）及び２４時間後（図２３Ｂ）でのフローサイトメトリー分析によって測定した取り込み試験。実験は２回繰り返した。Ｋ５６２におけるｍｉＲ－１２６発現を２４時間目にＱ－ＲＴ－ＰＣＲにより測定した（ｎ＝３）（図２３Ｃ）。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）の添加の４時間後のＨＵＶＥＣ（図２３Ｄ）、ヒト正常（図２３Ｅ）、及びＣＭＬ（図２３Ｆ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における取り込みをフローサイトメトリーにより測定した。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で２４時間処置したＨＵＶＥＣ（図２３Ｇ）、正常（図２３Ｈ）、及びＣＭＬ（図２３Ｉ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を示す（ｎ＝４）。ＥＤＵ染色によってＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で処置した正常（図２３Ｊ）及びＣＭＬ（図２３Ｋ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における２つの細胞周期実験の１つを示す。略語：ａｂ－ＮＰ（ＣＤ４５抗体抱合ナノ粒子）、ＴＦ－ＮＰ（トランスフェリン（ＴＦ）抱合ナノ粒子）。 図２３Ａ～２３Ｋ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。Ｋ５６２細胞にｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３、または裸のｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（図２３Ａ及びＢでは対照として標識されている）を含有するＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ）、Ａｂ－ＮＰ（Ａｂ－ＮＰ）またはＴＦ－ＮＰ（ＴＦ－ＮＰ）の添加の４時間後（図２３Ａ）及び２４時間後（図２３Ｂ）でのフローサイトメトリー分析によって測定した取り込み試験。実験は２回繰り返した。Ｋ５６２におけるｍｉＲ－１２６発現を２４時間目にＱ－ＲＴ－ＰＣＲにより測定した（ｎ＝３）（図２３Ｃ）。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）の添加の４時間後のＨＵＶＥＣ（図２３Ｄ）、ヒト正常（図２３Ｅ）、及びＣＭＬ（図２３Ｆ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における取り込みをフローサイトメトリーにより測定した。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で２４時間処置したＨＵＶＥＣ（図２３Ｇ）、正常（図２３Ｈ）、及びＣＭＬ（図２３Ｉ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を示す（ｎ＝４）。ＥＤＵ染色によってＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で処置した正常（図２３Ｊ）及びＣＭＬ（図２３Ｋ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における２つの細胞周期実験の１つを示す。略語：ａｂ－ＮＰ（ＣＤ４５抗体抱合ナノ粒子）、ＴＦ－ＮＰ（トランスフェリン（ＴＦ）抱合ナノ粒子）。 図２３Ａ～２３Ｋ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。Ｋ５６２細胞にｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３、または裸のｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（図２３Ａ及びＢでは対照として標識されている）を含有するＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ）、Ａｂ－ＮＰ（Ａｂ－ＮＰ）またはＴＦ－ＮＰ（ＴＦ－ＮＰ）の添加の４時間後（図２３Ａ）及び２４時間後（図２３Ｂ）でのフローサイトメトリー分析によって測定した取り込み試験。実験は２回繰り返した。Ｋ５６２におけるｍｉＲ－１２６発現を２４時間目にＱ－ＲＴ－ＰＣＲにより測定した（ｎ＝３）（図２３Ｃ）。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）の添加の４時間後のＨＵＶＥＣ（図２３Ｄ）、ヒト正常（図２３Ｅ）、及びＣＭＬ（図２３Ｆ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における取り込みをフローサイトメトリーにより測定した。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で２４時間処置したＨＵＶＥＣ（図２３Ｇ）、正常（図２３Ｈ）、及びＣＭＬ（図２３Ｉ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を示す（ｎ＝４）。ＥＤＵ染色によってＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で処置した正常（図２３Ｊ）及びＣＭＬ（図２３Ｋ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における２つの細胞周期実験の１つを示す。略語：ａｂ－ＮＰ（ＣＤ４５抗体抱合ナノ粒子）、ＴＦ－ＮＰ（トランスフェリン（ＴＦ）抱合ナノ粒子）。 図２３Ａ～２３Ｋ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。Ｋ５６２細胞にｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３、または裸のｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（図２３Ａ及びＢでは対照として標識されている）を含有するＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ）、Ａｂ－ＮＰ（Ａｂ－ＮＰ）またはＴＦ－ＮＰ（ＴＦ－ＮＰ）の添加の４時間後（図２３Ａ）及び２４時間後（図２３Ｂ）でのフローサイトメトリー分析によって測定した取り込み試験。実験は２回繰り返した。Ｋ５６２におけるｍｉＲ－１２６発現を２４時間目にＱ－ＲＴ－ＰＣＲにより測定した（ｎ＝３）（図２３Ｃ）。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）の添加の４時間後のＨＵＶＥＣ（図２３Ｄ）、ヒト正常（図２３Ｅ）、及びＣＭＬ（図２３Ｆ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における取り込みをフローサイトメトリーにより測定した。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で２４時間処置したＨＵＶＥＣ（図２３Ｇ）、正常（図２３Ｈ）、及びＣＭＬ（図２３Ｉ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を示す（ｎ＝４）。ＥＤＵ染色によってＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で処置した正常（図２３Ｊ）及びＣＭＬ（図２３Ｋ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における２つの細胞周期実験の１つを示す。略語：ａｂ－ＮＰ（ＣＤ４５抗体抱合ナノ粒子）、ＴＦ－ＮＰ（トランスフェリン（ＴＦ）抱合ナノ粒子）。 図２３Ａ～２３Ｋ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。Ｋ５６２細胞にｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３、または裸のｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（図２３Ａ及びＢでは対照として標識されている）を含有するＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ）、Ａｂ－ＮＰ（Ａｂ－ＮＰ）またはＴＦ－ＮＰ（ＴＦ－ＮＰ）の添加の４時間後（図２３Ａ）及び２４時間後（図２３Ｂ）でのフローサイトメトリー分析によって測定した取り込み試験。実験は２回繰り返した。Ｋ５６２におけるｍｉＲ－１２６発現を２４時間目にＱ－ＲＴ－ＰＣＲにより測定した（ｎ＝３）（図２３Ｃ）。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）の添加の４時間後のＨＵＶＥＣ（図２３Ｄ）、ヒト正常（図２３Ｅ）、及びＣＭＬ（図２３Ｆ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における取り込みをフローサイトメトリーにより測定した。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で２４時間処置したＨＵＶＥＣ（図２３Ｇ）、正常（図２３Ｈ）、及びＣＭＬ（図２３Ｉ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を示す（ｎ＝４）。ＥＤＵ染色によってＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で処置した正常（図２３Ｊ）及びＣＭＬ（図２３Ｋ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における２つの細胞周期実験の１つを示す。略語：ａｂ－ＮＰ（ＣＤ４５抗体抱合ナノ粒子）、ＴＦ－ＮＰ（トランスフェリン（ＴＦ）抱合ナノ粒子）。 図２３Ａ～２３Ｋ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。Ｋ５６２細胞にｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３、または裸のｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（図２３Ａ及びＢでは対照として標識されている）を含有するＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ）、Ａｂ－ＮＰ（Ａｂ－ＮＰ）またはＴＦ－ＮＰ（ＴＦ－ＮＰ）の添加の４時間後（図２３Ａ）及び２４時間後（図２３Ｂ）でのフローサイトメトリー分析によって測定した取り込み試験。実験は２回繰り返した。Ｋ５６２におけるｍｉＲ－１２６発現を２４時間目にＱ－ＲＴ－ＰＣＲにより測定した（ｎ＝３）（図２３Ｃ）。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）の添加の４時間後のＨＵＶＥＣ（図２３Ｄ）、ヒト正常（図２３Ｅ）、及びＣＭＬ（図２３Ｆ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における取り込みをフローサイトメトリーにより測定した。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で２４時間処置したＨＵＶＥＣ（図２３Ｇ）、正常（図２３Ｈ）、及びＣＭＬ（図２３Ｉ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を示す（ｎ＝４）。ＥＤＵ染色によってＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で処置した正常（図２３Ｊ）及びＣＭＬ（図２３Ｋ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における２つの細胞周期実験の１つを示す。略語：ａｂ－ＮＰ（ＣＤ４５抗体抱合ナノ粒子）、ＴＦ－ＮＰ（トランスフェリン（ＴＦ）抱合ナノ粒子）。 図２３Ａ～２３Ｋ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。Ｋ５６２細胞にｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３、または裸のｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（図２３Ａ及びＢでは対照として標識されている）を含有するＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ）、Ａｂ－ＮＰ（Ａｂ－ＮＰ）またはＴＦ－ＮＰ（ＴＦ－ＮＰ）の添加の４時間後（図２３Ａ）及び２４時間後（図２３Ｂ）でのフローサイトメトリー分析によって測定した取り込み試験。実験は２回繰り返した。Ｋ５６２におけるｍｉＲ－１２６発現を２４時間目にＱ－ＲＴ－ＰＣＲにより測定した（ｎ＝３）（図２３Ｃ）。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）の添加の４時間後のＨＵＶＥＣ（図２３Ｄ）、ヒト正常（図２３Ｅ）、及びＣＭＬ（図２３Ｆ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における取り込みをフローサイトメトリーにより測定した。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で２４時間処置したＨＵＶＥＣ（図２３Ｇ）、正常（図２３Ｈ）、及びＣＭＬ（図２３Ｉ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を示す（ｎ＝４）。ＥＤＵ染色によってＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で処置した正常（図２３Ｊ）及びＣＭＬ（図２３Ｋ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における２つの細胞周期実験の１つを示す。略語：ａｂ－ＮＰ（ＣＤ４５抗体抱合ナノ粒子）、ＴＦ－ＮＰ（トランスフェリン（ＴＦ）抱合ナノ粒子）。 図２３Ａ～２３Ｋ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。Ｋ５６２細胞にｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３、または裸のｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（図２３Ａ及びＢでは対照として標識されている）を含有するＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ）、Ａｂ－ＮＰ（Ａｂ－ＮＰ）またはＴＦ－ＮＰ（ＴＦ－ＮＰ）の添加の４時間後（図２３Ａ）及び２４時間後（図２３Ｂ）でのフローサイトメトリー分析によって測定した取り込み試験。実験は２回繰り返した。Ｋ５６２におけるｍｉＲ－１２６発現を２４時間目にＱ－ＲＴ－ＰＣＲにより測定した（ｎ＝３）（図２３Ｃ）。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）の添加の４時間後のＨＵＶＥＣ（図２３Ｄ）、ヒト正常（図２３Ｅ）、及びＣＭＬ（図２３Ｆ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における取り込みをフローサイトメトリーにより測定した。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で２４時間処置したＨＵＶＥＣ（図２３Ｇ）、正常（図２３Ｈ）、及びＣＭＬ（図２３Ｉ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を示す（ｎ＝４）。ＥＤＵ染色によってＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で処置した正常（図２３Ｊ）及びＣＭＬ（図２３Ｋ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における２つの細胞周期実験の１つを示す。略語：ａｂ－ＮＰ（ＣＤ４５抗体抱合ナノ粒子）、ＴＦ－ＮＰ（トランスフェリン（ＴＦ）抱合ナノ粒子）。 図２３Ａ～２３Ｋ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。Ｋ５６２細胞にｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３、または裸のｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（図２３Ａ及びＢでは対照として標識されている）を含有するＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ）、Ａｂ－ＮＰ（Ａｂ－ＮＰ）またはＴＦ－ＮＰ（ＴＦ－ＮＰ）の添加の４時間後（図２３Ａ）及び２４時間後（図２３Ｂ）でのフローサイトメトリー分析によって測定した取り込み試験。実験は２回繰り返した。Ｋ５６２におけるｍｉＲ－１２６発現を２４時間目にＱ－ＲＴ－ＰＣＲにより測定した（ｎ＝３）（図２３Ｃ）。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）の添加の４時間後のＨＵＶＥＣ（図２３Ｄ）、ヒト正常（図２３Ｅ）、及びＣＭＬ（図２３Ｆ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における取り込みをフローサイトメトリーにより測定した。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で２４時間処置したＨＵＶＥＣ（図２３Ｇ）、正常（図２３Ｈ）、及びＣＭＬ（図２３Ｉ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を示す（ｎ＝４）。ＥＤＵ染色によってＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５００ｎＭ）で処置した正常（図２３Ｊ）及びＣＭＬ（図２３Ｋ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における２つの細胞周期実験の１つを示す。略語：ａｂ－ＮＰ（ＣＤ４５抗体抱合ナノ粒子）、ＴＦ－ＮＰ（トランスフェリン（ＴＦ）抱合ナノ粒子）。 図２４Ａ～２４Ｉ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤によるｍｉＲ－１２６のノックダウンは、インビボでのＮＩＬと組み合わせたマウスＣＭＬ ＬＳＣの排除を高める。ＳＣＬ－ｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウス（ＣＤ４５．２）由来のＢＭ細胞を類遺伝子Ｂ６マウス（ＣＤ４５．１、ｎ＝４０）に移植して、ＣＭＬ様疾患のマウスのコホ－トを作製した。移植４週間後のＣＭＬ発生の確認後、マウスを４群（各ｎ＝１０）に無作為に分け、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤＋ＮＩＬ（５０ｍｇ／ｋｇ、強制飼養により毎日）、及びＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ＋ＮＩＬを３週間処置した。末梢血（ＰＢ）（図２４Ａ）、脾臓（図２４Ｂ）及び骨髄（ＢＭ）（図２４Ｃ）のドナーＣＭＬ細胞の百分率、脾臓（２４Ｄ）及び及びＢＭ（図２４Ｅ）におけるドナーＣＭＬ ＬＳＫの数、ならびに３週間の処置後の脾臓（図２４Ｆ）及びＢＭ（図２４Ｇ）におけるドナーＣＭＬ長期造血幹細胞（ＬＴＨＳＣ）の数を測定した。マウスの別のコホ－トを３週間処置し、次いで処置の３週間後に生存試験を行った（各群でｎ＝１０）（図２４Ｈ）。処置した白血病マウス（３週間）からのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をプールし、４×１０６、２×１０６、１×１０６、及び５×１０５細胞／マウスを９００ｃＧｙで照射された二次類遺伝子系統ＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した（ｎ＝６マウス／用量／条件×４用量×４条件＝９６マウス）。レシピエントマウスを、血液中のＣＭＬ細胞生着及びＷＢＣカウントによって白血病発生について１６週間監視した。Ｌ－Ｃａｌｃソフトウェアを用いてＬＩＣの頻度を定量した（図２４Ｉ）。略語：ＮＩＬ（ニロチニブ）、ＰＢ（末梢血）、ＢＭ（骨髄）、ＬＴＨＳＣ（長期間の造血幹細胞）、ＬＩＣ（白血病開始細胞）、ＬＳＫ（系統：Ｓｃａ－１＋ｃ－ｋｉｔ＋細胞）。 図２４Ａ～２４Ｉ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤によるｍｉＲ－１２６のノックダウンは、インビボでのＮＩＬと組み合わせたマウスＣＭＬ ＬＳＣの排除を高める。ＳＣＬ－ｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウス（ＣＤ４５．２）由来のＢＭ細胞を類遺伝子Ｂ６マウス（ＣＤ４５．１、ｎ＝４０）に移植して、ＣＭＬ様疾患のマウスのコホ－トを作製した。移植４週間後のＣＭＬ発生の確認後、マウスを４群（各ｎ＝１０）に無作為に分け、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤＋ＮＩＬ（５０ｍｇ／ｋｇ、強制飼養により毎日）、及びＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ＋ＮＩＬを３週間処置した。末梢血（ＰＢ）（図２４Ａ）、脾臓（図２４Ｂ）及び骨髄（ＢＭ）（図２４Ｃ）のドナーＣＭＬ細胞の百分率、脾臓（２４Ｄ）及び及びＢＭ（図２４Ｅ）におけるドナーＣＭＬ ＬＳＫの数、ならびに３週間の処置後の脾臓（図２４Ｆ）及びＢＭ（図２４Ｇ）におけるドナーＣＭＬ長期造血幹細胞（ＬＴＨＳＣ）の数を測定した。マウスの別のコホ－トを３週間処置し、次いで処置の３週間後に生存試験を行った（各群でｎ＝１０）（図２４Ｈ）。処置した白血病マウス（３週間）からのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をプールし、４×１０６、２×１０６、１×１０６、及び５×１０５細胞／マウスを９００ｃＧｙで照射された二次類遺伝子系統ＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した（ｎ＝６マウス／用量／条件×４用量×４条件＝９６マウス）。レシピエントマウスを、血液中のＣＭＬ細胞生着及びＷＢＣカウントによって白血病発生について１６週間監視した。Ｌ－Ｃａｌｃソフトウェアを用いてＬＩＣの頻度を定量した（図２４Ｉ）。略語：ＮＩＬ（ニロチニブ）、ＰＢ（末梢血）、ＢＭ（骨髄）、ＬＴＨＳＣ（長期間の造血幹細胞）、ＬＩＣ（白血病開始細胞）、ＬＳＫ（系統：Ｓｃａ－１＋ｃ－ｋｉｔ＋細胞）。 図２４Ａ～２４Ｉ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤によるｍｉＲ－１２６のノックダウンは、インビボでのＮＩＬと組み合わせたマウスＣＭＬ ＬＳＣの排除を高める。ＳＣＬ－ｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウス（ＣＤ４５．２）由来のＢＭ細胞を類遺伝子Ｂ６マウス（ＣＤ４５．１、ｎ＝４０）に移植して、ＣＭＬ様疾患のマウスのコホ－トを作製した。移植４週間後のＣＭＬ発生の確認後、マウスを４群（各ｎ＝１０）に無作為に分け、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤＋ＮＩＬ（５０ｍｇ／ｋｇ、強制飼養により毎日）、及びＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ＋ＮＩＬを３週間処置した。末梢血（ＰＢ）（図２４Ａ）、脾臓（図２４Ｂ）及び骨髄（ＢＭ）（図２４Ｃ）のドナーＣＭＬ細胞の百分率、脾臓（２４Ｄ）及び及びＢＭ（図２４Ｅ）におけるドナーＣＭＬ ＬＳＫの数、ならびに３週間の処置後の脾臓（図２４Ｆ）及びＢＭ（図２４Ｇ）におけるドナーＣＭＬ長期造血幹細胞（ＬＴＨＳＣ）の数を測定した。マウスの別のコホ－トを３週間処置し、次いで処置の３週間後に生存試験を行った（各群でｎ＝１０）（図２４Ｈ）。処置した白血病マウス（３週間）からのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をプールし、４×１０６、２×１０６、１×１０６、及び５×１０５細胞／マウスを９００ｃＧｙで照射された二次類遺伝子系統ＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した（ｎ＝６マウス／用量／条件×４用量×４条件＝９６マウス）。レシピエントマウスを、血液中のＣＭＬ細胞生着及びＷＢＣカウントによって白血病発生について１６週間監視した。Ｌ－Ｃａｌｃソフトウェアを用いてＬＩＣの頻度を定量した（図２４Ｉ）。略語：ＮＩＬ（ニロチニブ）、ＰＢ（末梢血）、ＢＭ（骨髄）、ＬＴＨＳＣ（長期間の造血幹細胞）、ＬＩＣ（白血病開始細胞）、ＬＳＫ（系統：Ｓｃａ－１＋ｃ－ｋｉｔ＋細胞）。 図２４Ａ～２４Ｉ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤によるｍｉＲ－１２６のノックダウンは、インビボでのＮＩＬと組み合わせたマウスＣＭＬ ＬＳＣの排除を高める。ＳＣＬ－ｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウス（ＣＤ４５．２）由来のＢＭ細胞を類遺伝子Ｂ６マウス（ＣＤ４５．１、ｎ＝４０）に移植して、ＣＭＬ様疾患のマウスのコホ－トを作製した。移植４週間後のＣＭＬ発生の確認後、マウスを４群（各ｎ＝１０）に無作為に分け、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤＋ＮＩＬ（５０ｍｇ／ｋｇ、強制飼養により毎日）、及びＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ＋ＮＩＬを３週間処置した。末梢血（ＰＢ）（図２４Ａ）、脾臓（図２４Ｂ）及び骨髄（ＢＭ）（図２４Ｃ）のドナーＣＭＬ細胞の百分率、脾臓（２４Ｄ）及び及びＢＭ（図２４Ｅ）におけるドナーＣＭＬ ＬＳＫの数、ならびに３週間の処置後の脾臓（図２４Ｆ）及びＢＭ（図２４Ｇ）におけるドナーＣＭＬ長期造血幹細胞（ＬＴＨＳＣ）の数を測定した。マウスの別のコホ－トを３週間処置し、次いで処置の３週間後に生存試験を行った（各群でｎ＝１０）（図２４Ｈ）。処置した白血病マウス（３週間）からのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をプールし、４×１０６、２×１０６、１×１０６、及び５×１０５細胞／マウスを９００ｃＧｙで照射された二次類遺伝子系統ＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した（ｎ＝６マウス／用量／条件×４用量×４条件＝９６マウス）。レシピエントマウスを、血液中のＣＭＬ細胞生着及びＷＢＣカウントによって白血病発生について１６週間監視した。Ｌ－Ｃａｌｃソフトウェアを用いてＬＩＣの頻度を定量した（図２４Ｉ）。略語：ＮＩＬ（ニロチニブ）、ＰＢ（末梢血）、ＢＭ（骨髄）、ＬＴＨＳＣ（長期間の造血幹細胞）、ＬＩＣ（白血病開始細胞）、ＬＳＫ（系統：Ｓｃａ－１＋ｃ－ｋｉｔ＋細胞）。 図２４Ａ～２４Ｉ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤によるｍｉＲ－１２６のノックダウンは、インビボでのＮＩＬと組み合わせたマウスＣＭＬ ＬＳＣの排除を高める。ＳＣＬ－ｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウス（ＣＤ４５．２）由来のＢＭ細胞を類遺伝子Ｂ６マウス（ＣＤ４５．１、ｎ＝４０）に移植して、ＣＭＬ様疾患のマウスのコホ－トを作製した。移植４週間後のＣＭＬ発生の確認後、マウスを４群（各ｎ＝１０）に無作為に分け、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤＋ＮＩＬ（５０ｍｇ／ｋｇ、強制飼養により毎日）、及びＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ＋ＮＩＬを３週間処置した。末梢血（ＰＢ）（図２４Ａ）、脾臓（図２４Ｂ）及び骨髄（ＢＭ）（図２４Ｃ）のドナーＣＭＬ細胞の百分率、脾臓（２４Ｄ）及び及びＢＭ（図２４Ｅ）におけるドナーＣＭＬ ＬＳＫの数、ならびに３週間の処置後の脾臓（図２４Ｆ）及びＢＭ（図２４Ｇ）におけるドナーＣＭＬ長期造血幹細胞（ＬＴＨＳＣ）の数を測定した。マウスの別のコホ－トを３週間処置し、次いで処置の３週間後に生存試験を行った（各群でｎ＝１０）（図２４Ｈ）。処置した白血病マウス（３週間）からのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をプールし、４×１０６、２×１０６、１×１０６、及び５×１０５細胞／マウスを９００ｃＧｙで照射された二次類遺伝子系統ＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した（ｎ＝６マウス／用量／条件×４用量×４条件＝９６マウス）。レシピエントマウスを、血液中のＣＭＬ細胞生着及びＷＢＣカウントによって白血病発生について１６週間監視した。Ｌ－Ｃａｌｃソフトウェアを用いてＬＩＣの頻度を定量した（図２４Ｉ）。略語：ＮＩＬ（ニロチニブ）、ＰＢ（末梢血）、ＢＭ（骨髄）、ＬＴＨＳＣ（長期間の造血幹細胞）、ＬＩＣ（白血病開始細胞）、ＬＳＫ（系統：Ｓｃａ－１＋ｃ－ｋｉｔ＋細胞）。 図２４Ａ～２４Ｉ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤によるｍｉＲ－１２６のノックダウンは、インビボでのＮＩＬと組み合わせたマウスＣＭＬ ＬＳＣの排除を高める。ＳＣＬ－ｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウス（ＣＤ４５．２）由来のＢＭ細胞を類遺伝子Ｂ６マウス（ＣＤ４５．１、ｎ＝４０）に移植して、ＣＭＬ様疾患のマウスのコホ－トを作製した。移植４週間後のＣＭＬ発生の確認後、マウスを４群（各ｎ＝１０）に無作為に分け、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤＋ＮＩＬ（５０ｍｇ／ｋｇ、強制飼養により毎日）、及びＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ＋ＮＩＬを３週間処置した。末梢血（ＰＢ）（図２４Ａ）、脾臓（図２４Ｂ）及び骨髄（ＢＭ）（図２４Ｃ）のドナーＣＭＬ細胞の百分率、脾臓（２４Ｄ）及び及びＢＭ（図２４Ｅ）におけるドナーＣＭＬ ＬＳＫの数、ならびに３週間の処置後の脾臓（図２４Ｆ）及びＢＭ（図２４Ｇ）におけるドナーＣＭＬ長期造血幹細胞（ＬＴＨＳＣ）の数を測定した。マウスの別のコホ－トを３週間処置し、次いで処置の３週間後に生存試験を行った（各群でｎ＝１０）（図２４Ｈ）。処置した白血病マウス（３週間）からのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をプールし、４×１０６、２×１０６、１×１０６、及び５×１０５細胞／マウスを９００ｃＧｙで照射された二次類遺伝子系統ＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した（ｎ＝６マウス／用量／条件×４用量×４条件＝９６マウス）。レシピエントマウスを、血液中のＣＭＬ細胞生着及びＷＢＣカウントによって白血病発生について１６週間監視した。Ｌ－Ｃａｌｃソフトウェアを用いてＬＩＣの頻度を定量した（図２４Ｉ）。略語：ＮＩＬ（ニロチニブ）、ＰＢ（末梢血）、ＢＭ（骨髄）、ＬＴＨＳＣ（長期間の造血幹細胞）、ＬＩＣ（白血病開始細胞）、ＬＳＫ（系統：Ｓｃａ－１＋ｃ－ｋｉｔ＋細胞）。 図２４Ａ～２４Ｉ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤によるｍｉＲ－１２６のノックダウンは、インビボでのＮＩＬと組み合わせたマウスＣＭＬ ＬＳＣの排除を高める。ＳＣＬ－ｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウス（ＣＤ４５．２）由来のＢＭ細胞を類遺伝子Ｂ６マウス（ＣＤ４５．１、ｎ＝４０）に移植して、ＣＭＬ様疾患のマウスのコホ－トを作製した。移植４週間後のＣＭＬ発生の確認後、マウスを４群（各ｎ＝１０）に無作為に分け、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤＋ＮＩＬ（５０ｍｇ／ｋｇ、強制飼養により毎日）、及びＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ＋ＮＩＬを３週間処置した。末梢血（ＰＢ）（図２４Ａ）、脾臓（図２４Ｂ）及び骨髄（ＢＭ）（図２４Ｃ）のドナーＣＭＬ細胞の百分率、脾臓（２４Ｄ）及び及びＢＭ（図２４Ｅ）におけるドナーＣＭＬ ＬＳＫの数、ならびに３週間の処置後の脾臓（図２４Ｆ）及びＢＭ（図２４Ｇ）におけるドナーＣＭＬ長期造血幹細胞（ＬＴＨＳＣ）の数を測定した。マウスの別のコホ－トを３週間処置し、次いで処置の３週間後に生存試験を行った（各群でｎ＝１０）（図２４Ｈ）。処置した白血病マウス（３週間）からのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をプールし、４×１０６、２×１０６、１×１０６、及び５×１０５細胞／マウスを９００ｃＧｙで照射された二次類遺伝子系統ＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した（ｎ＝６マウス／用量／条件×４用量×４条件＝９６マウス）。レシピエントマウスを、血液中のＣＭＬ細胞生着及びＷＢＣカウントによって白血病発生について１６週間監視した。Ｌ－Ｃａｌｃソフトウェアを用いてＬＩＣの頻度を定量した（図２４Ｉ）。略語：ＮＩＬ（ニロチニブ）、ＰＢ（末梢血）、ＢＭ（骨髄）、ＬＴＨＳＣ（長期間の造血幹細胞）、ＬＩＣ（白血病開始細胞）、ＬＳＫ（系統：Ｓｃａ－１＋ｃ－ｋｉｔ＋細胞）。 図２４Ａ～２４Ｉ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤によるｍｉＲ－１２６のノックダウンは、インビボでのＮＩＬと組み合わせたマウスＣＭＬ ＬＳＣの排除を高める。ＳＣＬ－ｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウス（ＣＤ４５．２）由来のＢＭ細胞を類遺伝子Ｂ６マウス（ＣＤ４５．１、ｎ＝４０）に移植して、ＣＭＬ様疾患のマウスのコホ－トを作製した。移植４週間後のＣＭＬ発生の確認後、マウスを４群（各ｎ＝１０）に無作為に分け、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤＋ＮＩＬ（５０ｍｇ／ｋｇ、強制飼養により毎日）、及びＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ＋ＮＩＬを３週間処置した。末梢血（ＰＢ）（図２４Ａ）、脾臓（図２４Ｂ）及び骨髄（ＢＭ）（図２４Ｃ）のドナーＣＭＬ細胞の百分率、脾臓（２４Ｄ）及び及びＢＭ（図２４Ｅ）におけるドナーＣＭＬ ＬＳＫの数、ならびに３週間の処置後の脾臓（図２４Ｆ）及びＢＭ（図２４Ｇ）におけるドナーＣＭＬ長期造血幹細胞（ＬＴＨＳＣ）の数を測定した。マウスの別のコホ－トを３週間処置し、次いで処置の３週間後に生存試験を行った（各群でｎ＝１０）（図２４Ｈ）。処置した白血病マウス（３週間）からのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をプールし、４×１０６、２×１０６、１×１０６、及び５×１０５細胞／マウスを９００ｃＧｙで照射された二次類遺伝子系統ＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した（ｎ＝６マウス／用量／条件×４用量×４条件＝９６マウス）。レシピエントマウスを、血液中のＣＭＬ細胞生着及びＷＢＣカウントによって白血病発生について１６週間監視した。Ｌ－Ｃａｌｃソフトウェアを用いてＬＩＣの頻度を定量した（図２４Ｉ）。略語：ＮＩＬ（ニロチニブ）、ＰＢ（末梢血）、ＢＭ（骨髄）、ＬＴＨＳＣ（長期間の造血幹細胞）、ＬＩＣ（白血病開始細胞）、ＬＳＫ（系統：Ｓｃａ－１＋ｃ－ｋｉｔ＋細胞）。 図２４Ａ～２４Ｉ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤によるｍｉＲ－１２６のノックダウンは、インビボでのＮＩＬと組み合わせたマウスＣＭＬ ＬＳＣの排除を高める。ＳＣＬ－ｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウス（ＣＤ４５．２）由来のＢＭ細胞を類遺伝子Ｂ６マウス（ＣＤ４５．１、ｎ＝４０）に移植して、ＣＭＬ様疾患のマウスのコホ－トを作製した。移植４週間後のＣＭＬ発生の確認後、マウスを４群（各ｎ＝１０）に無作為に分け、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内に週４回）、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤＋ＮＩＬ（５０ｍｇ／ｋｇ、強制飼養により毎日）、及びＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ＋ＮＩＬを３週間処置した。末梢血（ＰＢ）（図２４Ａ）、脾臓（図２４Ｂ）及び骨髄（ＢＭ）（図２４Ｃ）のドナーＣＭＬ細胞の百分率、脾臓（２４Ｄ）及び及びＢＭ（図２４Ｅ）におけるドナーＣＭＬ ＬＳＫの数、ならびに３週間の処置後の脾臓（図２４Ｆ）及びＢＭ（図２４Ｇ）におけるドナーＣＭＬ長期造血幹細胞（ＬＴＨＳＣ）の数を測定した。マウスの別のコホ－トを３週間処置し、次いで処置の３週間後に生存試験を行った（各群でｎ＝１０）（図２４Ｈ）。処置した白血病マウス（３週間）からのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をプールし、４×１０６、２×１０６、１×１０６、及び５×１０５細胞／マウスを９００ｃＧｙで照射された二次類遺伝子系統ＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した（ｎ＝６マウス／用量／条件×４用量×４条件＝９６マウス）。レシピエントマウスを、血液中のＣＭＬ細胞生着及びＷＢＣカウントによって白血病発生について１６週間監視した。Ｌ－Ｃａｌｃソフトウェアを用いてＬＩＣの頻度を定量した（図２４Ｉ）。略語：ＮＩＬ（ニロチニブ）、ＰＢ（末梢血）、ＢＭ（骨髄）、ＬＴＨＳＣ（長期間の造血幹細胞）、ＬＩＣ（白血病開始細胞）、ＬＳＫ（系統：Ｓｃａ－１＋ｃ－ｋｉｔ＋細胞）。 図２５Ａ～２５Ｏ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの、取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。マウスＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞をＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いでＣｙ３＋細胞をフローサイトメトリーによって検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間後に採集し、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによってｍｉＲ－１２６発現を測定した（図２５Ｂ）。細胞周期は、ＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中にＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤を添加して７２時間後にＥＤＵ染色により測定した。２つの代表的なプロットの１つを（図２５Ｃ）に示す。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１回用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、処置から１６時間後に、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣにおけるＣｙ３の取り込みを、フローサイトメトリーによって測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスも、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内に毎日）で３日間処置し、大腿骨からのＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別し、ｍｉＲ－１２６発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスをＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）、及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示す。処置した正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭ及び脾臓（図２５Ｎ）におけるドナー細胞生着、ならびに１６週目でのＢＭにおけるドナーのＬＴＨＳＣ数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）、ＰＬＴ（血小板）。 図２５Ａ～２５Ｏ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの、取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。マウスＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞をＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いでＣｙ３＋細胞をフローサイトメトリーによって検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間後に採集し、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによってｍｉＲ－１２６発現を測定した（図２５Ｂ）。細胞周期は、ＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中にＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤を添加して７２時間後にＥＤＵ染色により測定した。２つの代表的なプロットの１つを（図２５Ｃ）に示す。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１回用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、処置から１６時間後に、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣにおけるＣｙ３の取り込みを、フローサイトメトリーによって測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスも、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内に毎日）で３日間処置し、大腿骨からのＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別し、ｍｉＲ－１２６発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスをＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）、及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示す。処置した正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭ及び脾臓（図２５Ｎ）におけるドナー細胞生着、ならびに１６週目でのＢＭにおけるドナーのＬＴＨＳＣ数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）、ＰＬＴ（血小板）。 図２５Ａ～２５Ｏ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの、取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。マウスＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞をＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いでＣｙ３＋細胞をフローサイトメトリーによって検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間後に採集し、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによってｍｉＲ－１２６発現を測定した（図２５Ｂ）。細胞周期は、ＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中にＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤を添加して７２時間後にＥＤＵ染色により測定した。２つの代表的なプロットの１つを（図２５Ｃ）に示す。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１回用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、処置から１６時間後に、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣにおけるＣｙ３の取り込みを、フローサイトメトリーによって測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスも、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内に毎日）で３日間処置し、大腿骨からのＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別し、ｍｉＲ－１２６発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスをＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）、及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示す。処置した正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭ及び脾臓（図２５Ｎ）におけるドナー細胞生着、ならびに１６週目でのＢＭにおけるドナーのＬＴＨＳＣ数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）、ＰＬＴ（血小板）。 図２５Ａ～２５Ｏ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの、取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。マウスＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞をＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いでＣｙ３＋細胞をフローサイトメトリーによって検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間後に採集し、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによってｍｉＲ－１２６発現を測定した（図２５Ｂ）。細胞周期は、ＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中にＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤を添加して７２時間後にＥＤＵ染色により測定した。２つの代表的なプロットの１つを（図２５Ｃ）に示す。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１回用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、処置から１６時間後に、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣにおけるＣｙ３の取り込みを、フローサイトメトリーによって測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスも、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内に毎日）で３日間処置し、大腿骨からのＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別し、ｍｉＲ－１２６発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスをＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）、及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示す。処置した正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭ及び脾臓（図２５Ｎ）におけるドナー細胞生着、ならびに１６週目でのＢＭにおけるドナーのＬＴＨＳＣ数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）、ＰＬＴ（血小板）。 図２５Ａ～２５Ｏ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの、取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。マウスＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞をＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いでＣｙ３＋細胞をフローサイトメトリーによって検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間後に採集し、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによってｍｉＲ－１２６発現を測定した（図２５Ｂ）。細胞周期は、ＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中にＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤を添加して７２時間後にＥＤＵ染色により測定した。２つの代表的なプロットの１つを（図２５Ｃ）に示す。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１回用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、処置から１６時間後に、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣにおけるＣｙ３の取り込みを、フローサイトメトリーによって測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスも、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内に毎日）で３日間処置し、大腿骨からのＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別し、ｍｉＲ－１２６発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスをＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）、及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示す。処置した正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭ及び脾臓（図２５Ｎ）におけるドナー細胞生着、ならびに１６週目でのＢＭにおけるドナーのＬＴＨＳＣ数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）、ＰＬＴ（血小板）。 図２５Ａ～２５Ｏ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの、取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。マウスＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞をＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いでＣｙ３＋細胞をフローサイトメトリーによって検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間後に採集し、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによってｍｉＲ－１２６発現を測定した（図２５Ｂ）。細胞周期は、ＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中にＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤を添加して７２時間後にＥＤＵ染色により測定した。２つの代表的なプロットの１つを（図２５Ｃ）に示す。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１回用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、処置から１６時間後に、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣにおけるＣｙ３の取り込みを、フローサイトメトリーによって測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスも、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内に毎日）で３日間処置し、大腿骨からのＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別し、ｍｉＲ－１２６発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスをＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）、及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示す。処置した正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭ及び脾臓（図２５Ｎ）におけるドナー細胞生着、ならびに１６週目でのＢＭにおけるドナーのＬＴＨＳＣ数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）、ＰＬＴ（血小板）。 図２５Ａ～２５Ｏ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの、取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。マウスＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞をＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いでＣｙ３＋細胞をフローサイトメトリーによって検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間後に採集し、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによってｍｉＲ－１２６発現を測定した（図２５Ｂ）。細胞周期は、ＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中にＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤を添加して７２時間後にＥＤＵ染色により測定した。２つの代表的なプロットの１つを（図２５Ｃ）に示す。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１回用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、処置から１６時間後に、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣにおけるＣｙ３の取り込みを、フローサイトメトリーによって測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスも、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内に毎日）で３日間処置し、大腿骨からのＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別し、ｍｉＲ－１２６発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスをＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）、及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示す。処置した正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭ及び脾臓（図２５Ｎ）におけるドナー細胞生着、ならびに１６週目でのＢＭにおけるドナーのＬＴＨＳＣ数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）、ＰＬＴ（血小板）。 図２５Ａ～２５Ｏ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの、取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。マウスＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞をＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いでＣｙ３＋細胞をフローサイトメトリーによって検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間後に採集し、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによってｍｉＲ－１２６発現を測定した（図２５Ｂ）。細胞周期は、ＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中にＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤を添加して７２時間後にＥＤＵ染色により測定した。２つの代表的なプロットの１つを（図２５Ｃ）に示す。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１回用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、処置から１６時間後に、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣにおけるＣｙ３の取り込みを、フローサイトメトリーによって測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスも、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内に毎日）で３日間処置し、大腿骨からのＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別し、ｍｉＲ－１２６発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスをＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）、及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示す。処置した正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭ及び脾臓（図２５Ｎ）におけるドナー細胞生着、ならびに１６週目でのＢＭにおけるドナーのＬＴＨＳＣ数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）、ＰＬＴ（血小板）。 図２５Ａ～２５Ｏ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの、取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。マウスＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞をＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いでＣｙ３＋細胞をフローサイトメトリーによって検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間後に採集し、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによってｍｉＲ－１２６発現を測定した（図２５Ｂ）。細胞周期は、ＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中にＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤を添加して７２時間後にＥＤＵ染色により測定した。２つの代表的なプロットの１つを（図２５Ｃ）に示す。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１回用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、処置から１６時間後に、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣにおけるＣｙ３の取り込みを、フローサイトメトリーによって測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスも、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内に毎日）で３日間処置し、大腿骨からのＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別し、ｍｉＲ－１２６発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスをＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）、及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示す。処置した正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭ及び脾臓（図２５Ｎ）におけるドナー細胞生着、ならびに１６週目でのＢＭにおけるドナーのＬＴＨＳＣ数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）、ＰＬＴ（血小板）。 図２５Ａ～２５Ｏ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの、取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。マウスＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞をＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いでＣｙ３＋細胞をフローサイトメトリーによって検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間後に採集し、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによってｍｉＲ－１２６発現を測定した（図２５Ｂ）。細胞周期は、ＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中にＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤を添加して７２時間後にＥＤＵ染色により測定した。２つの代表的なプロットの１つを（図２５Ｃ）に示す。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１回用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、処置から１６時間後に、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣにおけるＣｙ３の取り込みを、フローサイトメトリーによって測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスも、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内に毎日）で３日間処置し、大腿骨からのＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別し、ｍｉＲ－１２６発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスをＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）、及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示す。処置した正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭ及び脾臓（図２５Ｎ）におけるドナー細胞生着、ならびに１６週目でのＢＭにおけるドナーのＬＴＨＳＣ数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）、ＰＬＴ（血小板）。 図２５Ａ～２５Ｏ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの、取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。マウスＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞をＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いでＣｙ３＋細胞をフローサイトメトリーによって検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間後に採集し、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによってｍｉＲ－１２６発現を測定した（図２５Ｂ）。細胞周期は、ＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中にＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤を添加して７２時間後にＥＤＵ染色により測定した。２つの代表的なプロットの１つを（図２５Ｃ）に示す。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１回用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、処置から１６時間後に、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣにおけるＣｙ３の取り込みを、フローサイトメトリーによって測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスも、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内に毎日）で３日間処置し、大腿骨からのＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別し、ｍｉＲ－１２６発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスをＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）、及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示す。処置した正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭ及び脾臓（図２５Ｎ）におけるドナー細胞生着、ならびに１６週目でのＢＭにおけるドナーのＬＴＨＳＣ数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）、ＰＬＴ（血小板）。 図２５Ａ～２５Ｏ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの、取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。マウスＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞をＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いでＣｙ３＋細胞をフローサイトメトリーによって検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間後に採集し、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによってｍｉＲ－１２６発現を測定した（図２５Ｂ）。細胞周期は、ＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中にＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤を添加して７２時間後にＥＤＵ染色により測定した。２つの代表的なプロットの１つを（図２５Ｃ）に示す。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１回用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、処置から１６時間後に、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣにおけるＣｙ３の取り込みを、フローサイトメトリーによって測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスも、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内に毎日）で３日間処置し、大腿骨からのＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別し、ｍｉＲ－１２６発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスをＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）、及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示す。処置した正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭ及び脾臓（図２５Ｎ）におけるドナー細胞生着、ならびに１６週目でのＢＭにおけるドナーのＬＴＨＳＣ数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）、ＰＬＴ（血小板）。 図２５Ａ～２５Ｏ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの、取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。マウスＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞をＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いでＣｙ３＋細胞をフローサイトメトリーによって検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間後に採集し、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによってｍｉＲ－１２６発現を測定した（図２５Ｂ）。細胞周期は、ＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中にＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤を添加して７２時間後にＥＤＵ染色により測定した。２つの代表的なプロットの１つを（図２５Ｃ）に示す。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１回用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、処置から１６時間後に、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣにおけるＣｙ３の取り込みを、フローサイトメトリーによって測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスも、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内に毎日）で３日間処置し、大腿骨からのＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別し、ｍｉＲ－１２６発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスをＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）、及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示す。処置した正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭ及び脾臓（図２５Ｎ）におけるドナー細胞生着、ならびに１６週目でのＢＭにおけるドナーのＬＴＨＳＣ数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）、ＰＬＴ（血小板）。 図２５Ａ～２５Ｏ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの、取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。マウスＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞をＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いでＣｙ３＋細胞をフローサイトメトリーによって検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間後に採集し、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによってｍｉＲ－１２６発現を測定した（図２５Ｂ）。細胞周期は、ＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中にＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤を添加して７２時間後にＥＤＵ染色により測定した。２つの代表的なプロットの１つを（図２５Ｃ）に示す。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１回用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、処置から１６時間後に、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣにおけるＣｙ３の取り込みを、フローサイトメトリーによって測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスも、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内に毎日）で３日間処置し、大腿骨からのＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別し、ｍｉＲ－１２６発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスをＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）、及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示す。処置した正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭ及び脾臓（図２５Ｎ）におけるドナー細胞生着、ならびに１６週目でのＢＭにおけるドナーのＬＴＨＳＣ数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）、ＰＬＴ（血小板）。 図２５Ａ～２５Ｏ。ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤のインビトロ及びインビボでの、取り込みの効果及び遺伝子サイレンシング効果。マウスＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞をＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いでＣｙ３＋細胞をフローサイトメトリーによって検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間後に採集し、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによってｍｉＲ－１２６発現を測定した（図２５Ｂ）。細胞周期は、ＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中にＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤を添加して７２時間後にＥＤＵ染色により測定した。２つの代表的なプロットの１つを（図２５Ｃ）に示す。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１回用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、処置から１６時間後に、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣにおけるＣｙ３の取り込みを、フローサイトメトリーによって測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスも、ＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内に毎日）で３日間処置し、大腿骨からのＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別し、ｍｉＲ－１２６発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスをＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）、及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示す。処置した正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭ及び脾臓（図２５Ｎ）におけるドナー細胞生着、ならびに１６週目でのＢＭにおけるドナーのＬＴＨＳＣ数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭを表す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）、ＰＬＴ（血小板）。 図２６Ａ～２６Ｅ。ＣｐＧ、ＧｐＣ及びＰＳと抱合されたｍｉＲ－１２６阻害剤によるｍｉＲ－１２６の有効なノックダウン、及びＫ５６２及びＭＶ４－１１細胞におけるｍｉＲ－１２６ミミックによる効果的な過剰発現。Ｋ５６２及びＭＶ４－１１細胞を、ＣｐＧ、ＧｐＣ、ＰＳ（図２６Ａ～２６Ｂ）またはｍｉＲ－１２６ミミック（６１５、６１６及び６１７）（図２６Ｃ～２６Ｄ）（５００ｎＭ）と抱合されたｍｉＲ－１２６阻害剤で２４時間処置し、これらの細胞中のｍｉＲ－１２６発現を測定した。我々は、ここで、標的ＯＤＮ配列においてＣｐＧモチーフを省略できることを示した。ＧｐＣ及び完全にＰＳ修飾されたオリゴもｍｉＲ１２６のブロッキングで成功する。ｍｉＲ－１２６ミミック、特にＧＭ６１７とのインキュベ－ションは、Ｋ５６２及びＭＶ４－１１細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を著しく増加させた。細胞内のｍｉＲ－１２６を減少させるのに非常に有効なＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤と同じように、いずれの形質導入試薬も使用せずに細胞中のｍｉＲ－１２６レベルを増加させるのに非常に有効なｍｉＲ－１２６ミミックも設計した。図２６Ｅ）本明細書に記載された配列の表。 図２６Ａ～２６Ｅ。ＣｐＧ、ＧｐＣ及びＰＳと抱合されたｍｉＲ－１２６阻害剤によるｍｉＲ－１２６の有効なノックダウン、及びＫ５６２及びＭＶ４－１１細胞におけるｍｉＲ－１２６ミミックによる効果的な過剰発現。Ｋ５６２及びＭＶ４－１１細胞を、ＣｐＧ、ＧｐＣ、ＰＳ（図２６Ａ～２６Ｂ）またはｍｉＲ－１２６ミミック（６１５、６１６及び６１７）（図２６Ｃ～２６Ｄ）（５００ｎＭ）と抱合されたｍｉＲ－１２６阻害剤で２４時間処置し、これらの細胞中のｍｉＲ－１２６発現を測定した。我々は、ここで、標的ＯＤＮ配列においてＣｐＧモチーフを省略できることを示した。ＧｐＣ及び完全にＰＳ修飾されたオリゴもｍｉＲ１２６のブロッキングで成功する。ｍｉＲ－１２６ミミック、特にＧＭ６１７とのインキュベ－ションは、Ｋ５６２及びＭＶ４－１１細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を著しく増加させた。細胞内のｍｉＲ－１２６を減少させるのに非常に有効なＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤と同じように、いずれの形質導入試薬も使用せずに細胞中のｍｉＲ－１２６レベルを増加させるのに非常に有効なｍｉＲ－１２６ミミックも設計した。図２６Ｅ）本明細書に記載された配列の表。 図２６Ａ～２６Ｅ。ＣｐＧ、ＧｐＣ及びＰＳと抱合されたｍｉＲ－１２６阻害剤によるｍｉＲ－１２６の有効なノックダウン、及びＫ５６２及びＭＶ４－１１細胞におけるｍｉＲ－１２６ミミックによる効果的な過剰発現。Ｋ５６２及びＭＶ４－１１細胞を、ＣｐＧ、ＧｐＣ、ＰＳ（図２６Ａ～２６Ｂ）またはｍｉＲ－１２６ミミック（６１５、６１６及び６１７）（図２６Ｃ～２６Ｄ）（５００ｎＭ）と抱合されたｍｉＲ－１２６阻害剤で２４時間処置し、これらの細胞中のｍｉＲ－１２６発現を測定した。我々は、ここで、標的ＯＤＮ配列においてＣｐＧモチーフを省略できることを示した。ＧｐＣ及び完全にＰＳ修飾されたオリゴもｍｉＲ１２６のブロッキングで成功する。ｍｉＲ－１２６ミミック、特にＧＭ６１７とのインキュベ－ションは、Ｋ５６２及びＭＶ４－１１細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を著しく増加させた。細胞内のｍｉＲ－１２６を減少させるのに非常に有効なＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤と同じように、いずれの形質導入試薬も使用せずに細胞中のｍｉＲ－１２６レベルを増加させるのに非常に有効なｍｉＲ－１２６ミミックも設計した。図２６Ｅ）本明細書に記載された配列の表。 図２６Ａ～２６Ｅ。ＣｐＧ、ＧｐＣ及びＰＳと抱合されたｍｉＲ－１２６阻害剤によるｍｉＲ－１２６の有効なノックダウン、及びＫ５６２及びＭＶ４－１１細胞におけるｍｉＲ－１２６ミミックによる効果的な過剰発現。Ｋ５６２及びＭＶ４－１１細胞を、ＣｐＧ、ＧｐＣ、ＰＳ（図２６Ａ～２６Ｂ）またはｍｉＲ－１２６ミミック（６１５、６１６及び６１７）（図２６Ｃ～２６Ｄ）（５００ｎＭ）と抱合されたｍｉＲ－１２６阻害剤で２４時間処置し、これらの細胞中のｍｉＲ－１２６発現を測定した。我々は、ここで、標的ＯＤＮ配列においてＣｐＧモチーフを省略できることを示した。ＧｐＣ及び完全にＰＳ修飾されたオリゴもｍｉＲ１２６のブロッキングで成功する。ｍｉＲ－１２６ミミック、特にＧＭ６１７とのインキュベ－ションは、Ｋ５６２及びＭＶ４－１１細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を著しく増加させた。細胞内のｍｉＲ－１２６を減少させるのに非常に有効なＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤と同じように、いずれの形質導入試薬も使用せずに細胞中のｍｉＲ－１２６レベルを増加させるのに非常に有効なｍｉＲ－１２６ミミックも設計した。図２６Ｅ）本明細書に記載された配列の表。 図２６Ａ～２６Ｅ。ＣｐＧ、ＧｐＣ及びＰＳと抱合されたｍｉＲ－１２６阻害剤によるｍｉＲ－１２６の有効なノックダウン、及びＫ５６２及びＭＶ４－１１細胞におけるｍｉＲ－１２６ミミックによる効果的な過剰発現。Ｋ５６２及びＭＶ４－１１細胞を、ＣｐＧ、ＧｐＣ、ＰＳ（図２６Ａ～２６Ｂ）またはｍｉＲ－１２６ミミック（６１５、６１６及び６１７）（図２６Ｃ～２６Ｄ）（５００ｎＭ）と抱合されたｍｉＲ－１２６阻害剤で２４時間処置し、これらの細胞中のｍｉＲ－１２６発現を測定した。我々は、ここで、標的ＯＤＮ配列においてＣｐＧモチーフを省略できることを示した。ＧｐＣ及び完全にＰＳ修飾されたオリゴもｍｉＲ１２６のブロッキングで成功する。ｍｉＲ－１２６ミミック、特にＧＭ６１７とのインキュベ－ションは、Ｋ５６２及びＭＶ４－１１細胞におけるｍｉＲ－１２６発現を著しく増加させた。細胞内のｍｉＲ－１２６を減少させるのに非常に有効なＣｐＧ－ｍｉＲ－１２６阻害剤と同じように、いずれの形質導入試薬も使用せずに細胞中のｍｉＲ－１２６レベルを増加させるのに非常に有効なｍｉＲ－１２６ミミックも設計した。図２６Ｅ）本明細書に記載された配列の表。
本明細書において、とりわけ、抗マイクロＲＮＡ（抗ｍｉＲ）配列に、もしくはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）擬態核酸配列（ｍｉＲＮＡ－ミミック）に抱合されたホスホロチオエート化ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物または抗マイクロＲＮＡ（抗ｍｉＲ）配列を含む化合物が提供され、抗ｍｉＲ配列は、１つ以上のホスホロチオエート結合及び、１つ以上の化学的に修飾されたヌクレオチドを含む。実施形態において、本明細書に記載される化合物は、抗ｍｉＲ及び／またはｍｉＲＮＡ－ミミックの内在化を促進する。実施形態において、本明細書中で使用される修飾体／抱合体は、エンドソームからの本明細書に記載される化合物の離脱を容易にする。実施形態において、本明細書中で使用される修飾体／抱合体は、本明細書で使用される抗－ｍｉＲ及び／またはｍｉＲＮＡ－ミミックを安定化する。
定義
以下の定義は、本主題の理解及び添付の特許請求の範囲の構成の目的のために含まれる。本明細書で使用される略語は、化学的及び生物学的な技術分野内でのそれらの従来の意味を有する。
他に定義されない限り、本明細書で使用される技術及び科学用語は、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。例えば、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＤＩＣＴＩＯＮＡＲＹ ＯＦ ＭＩＣＲＯＢＩＯＬＯＧＹ ＡＮＤ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ ２ｎｄ ｅｄ．，Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ １９９４）、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ，Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇｓ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ １９８９）を参照されたい。本明細書に記載されたものと類似または等価な任意の方法、装置及び材料は、本開示の実施において使用され得る。以下の定義は、本明細書において頻繁に使用される特定の用語の理解を容易にするために提供され、本開示の範囲を限定することを意図するものではない。
「核酸」は、デオキシリボヌクレオチドまたはリボヌクレオチド、及びそれらの一本、二本または多重鎖形態のポリマー、もしくはそれらの相補体を指す。「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチドの直鎖配列を指す。「ヌクレオチド」という用語は、典型的にはポリヌクレオチドの単一単位、すなわちモノマ－を指す。ヌクレオチドは、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド、またはそれらの修飾変形型であり得る。本明細書で企図されるポリヌクレオチドの例には、一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ、一本鎖及び二本鎖ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡを含む）、ならびに一本鎖及び二本鎖ＤＮＡ及びＲＮＡの混合物を有するハイブリッド分子が含まれる。核酸は、直鎖であっても分枝鎖であってもよい。例えば、核酸は、ヌクレオチドの直鎖状であり得るか、または核酸は、例えば核酸が１つ以上のヌクレオチドのア－ムまたは分枝を含むように分枝状であり得る。任意に、分枝核酸は、繰り返して分岐して、例えばデンドリマ－などの高次構造を形成する。
ホスホチオエート主鎖を有する核酸を含む核酸は、１つ以上の反応性部分を含むことができる。本明細書で使用される場合、反応性部分という用語は、共有結合、非共有結合、または他の相互作用を介して、別の分子、例えば、核酸またはポリペプチドと反応することができる任意の基を含む。例として、核酸は、共有結合、非共有結合、または他の相互作用を通してタンパク質またはポリペプチド上のアミノ酸と反応するアミノ酸反応性部分を含むことができる。
本用語はまた、標準核酸と同様の結合特性を有し、かつ標準ヌクレオチドと同様の方法で代謝される、合成、天然由来、または非天然由来である、既知のヌクレオチド類似体または修飾された主鎖残基もしくは結合を含有する核酸を包含する。そのような類似体の例には、限定されないが、例えば、ホスホロアミデート、ホスホロジアミデート、ホスホロチオエート（ホスホチオエートとしても知られる）、ホスホロジチオエート、ホスホノカルボン酸、ホスホノカルボキシレート、ホスホノ酢酸、ホスホノギ酸、メチルホスホネート、ホウ素ホスホネート、またはＯ－メチルホスホロアミダイト結合（Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）を含むホスホジエステル誘導体、及びペプチド核酸主鎖また結合が含まれる。他の類似体核酸には、米国特許第５，２３５，０３３号及び第５，０３４，５０６号またＡＳＣ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ ５８０，Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓａｎｇｈｕｉ ＆ Ｃｏｏｋ，ｅｄｓのＣｈａｐｔｅｒ６及び７に記載されるものを含む、非イオン性主鎖、修飾された糖、及び非リボ－ス主鎖（例えば、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴマーまたはロックド核酸（ＬＮＡ））などの正の主鎖を有するものが含まれる。１つ以上の炭素環糖を含む核酸も、核酸の１つの定義内に含まれる。リボース－リン酸主鎖の修飾は、様々な理由のために、例えば、生理学的環境における、またはバイオチップ上のプローブとしてのそのような分子の安定性及び半減期を増加させるために、行うことができる。天然由来の核酸と類似体の混合物を作製することができ、あるいは、異なる核酸類似体の混合物、ならびに天然由来の核酸及び類似体の混合物を作製することができる。
本明細書で使用される場合、「核酸」、「核酸分子」、「核酸オリゴマー」、「オリゴヌクレオチド」、「核酸配列」、「核酸断片」、及び「ポリヌクレオチド」という用語は互換的に使用され、デオキシリボヌクレオチドもしくはリボヌクレオチド、またはそれらの類似体、誘導体もしくは修飾体のいずれかである、様々な長さを有することができる互いに共有結合したヌクレオチドのポリマー形態が含まれるよう意図しているが、これらに限定されない。異なるポリヌクレオチドは、異なる三次元構造を有してもよく、既知または未知の様々な機能を果たしてもよい。ポリヌクレオチドの非限定的な例には、遺伝子、遺伝子断片、エクソン、イントロン、遺伝子間ＤＮＡ（ヘテロクロマチン性ＤＮＡを含むが、これに限定されない）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ、リボソームＲＮＡ、リボザイム、ｃＤＮＡ、組換えポリヌクレオチド、分岐鎖ポリヌクレオチド、プラスミド、ベクタ－、配列の単離されたＤＮＡ、配列の単離されたＲＮＡ、核酸プロ－ブ、及びプライマ－が含まれる。本発明の方法において有用なポリヌクレオチドは、天然核酸配列及びその変異体、人工核酸配列、またはそのような配列の組み合わせを含み得る。
ポリヌクレオチドは、典型的には、４つのヌクレオチド塩基、アデニン（Ａ）、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、及びチミン（Ｔ）の特定の配列から構成される（ポリヌクレオチドがＲＮＡである場合は、チミン（Ｔ）に対してウラシル（Ｕ）である）。これにより、「ポリヌクレオチド配列」という用語は、ポリヌクレオチド分子のアルファベット表示であり、あるいは、本用語は、ポリヌクレオチド分子自体に適用することができる。このアルファベット表現は、中央処理装置を有するコンピュ－タのデータベ－スに入力することができ、ゲノム機能解析やホモロジー検索などのバイオインフォマティクス用途に使用することができる。ポリヌクレオチドは、任意に、１つ以上の非標準ヌクレオチド（複数可）、ヌクレオチド類似体（複数可）、及び／または修飾ヌクレオチドを含んでもよい。
別段の指示がない限り、以下の注釈は、本明細書に開示される核酸配列において使用され、＊＝ホスホロチオエート結合であり、ｘｘｘｘｘ＝本明細書に記載されている任意のリンカーであり、実施形態において、ｘｘｘｘｘ＝末端リン酸が任意に付加されている末端である以外は、両末端においてリン酸基に結合された－（ＣＨ２）ｎ－ＰＯ４－［（ＣＨ２）ｎ－ＰＯ４］ｚ－（ＣＨ２）ｎ）であってもよく、５’ｘがＯＨ末端を有し、３’ｘが最終のリン酸基に結合した－Ｃ６－ＮＨ２を有し、他の結合がホスホジエステルであり、ｍＮは２’ＯＭｅ修飾ヌクレオチドを示し、ｆＮは２’－フルオロ修飾ヌクレオチドを示し、ｒＮはリボヌクレオチドを示す。
本明細書で使用される場合、「抗マイクロＲＮＡ（抗ｍｉＲ）」または「抗マイクロＲＮＡ（抗ｍｉＲ）核酸配列」という用語は、その一般的かつ通常の意味に従って使用され、標的マイクロＲＮＡの発現及び／または活性を抑制もしくは低減することができるＲＮＡを指す。実施形態において、抗ｍｉＲオリゴマーは、２０～３０個の塩基の一本鎖オリゴマーであってもよい。実施形態において、抗ｍｉＲオリゴマーは、２０～３０個の塩基の二本鎖オリゴマーであってもよい。実施形態において、抗ｍｉＲオリゴマーは、一本鎖オーバーハングを有し、部分的に二本鎖であってもよい。実施形態において、オリゴマーは２’化学修飾を有し得る。実施形態において、オリゴマーは、血清安定性増強化学修飾、例えばホスホチオエートヌクレオチド間結合、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオチド、２’－デオキシ－２’フルオロリボヌクレオチド、２’－デオキシリボヌクレオチド、ユニバーサル塩基ヌクレオチド、５－Ｃメチルヌクレオチド、逆位デオキシ脱塩基残基結合、またはロックド核酸を有することができる。実施形態において、抗ｍｉＲ配列は、対応するｍｉＲ配列にハイブリダイズする。ハイブリダイゼ－ションを引き起こすのに十分な相補性があれば、完全相補性は必ずしも必要ではない。いくつかの実施形態において、抗ｍｉＲ配列とその対応するｍｉＲ配列との間の相補性の程度は、適切なアライメントアルゴリズムを使用して最適に整列された場合、約５０％、６０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％もしくはおよそそれらを超える。最適なアライメントは、配列を整列させるための任意の適切なアルゴリズムを使用して決定することができ、その非限定的な例にはＳｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈアルゴリズム、Ｂｕｒｒｏｗｓ－Ｗｈｅｅｌｅｒ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍ（例えばＢｕｒｒｏｗｓ Ｗｈｅｅｌｅｒ Ａｌｉｇｎｅｒ）に基づくアルゴリズム、ＣｌｕｓｔａｌＷ、ＣｌｕｓｔａｌＸ、ＢＬＡＴ、Ｎｏｖｏａｌｉｇｎ（Ｎｏｖｏｃｒａｆｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ＥＬＡＮＤ（Ｉｌｌｕｍｉｎａ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．））、ＳＯＡＰ（ｓｏａｐ．ｇｅｎｏｍｉｃｓ．ｏｒｇ．ｃｎで入手可能）、Ｍａｑ（ｍａｑ．ｓｏｕｒｃｅｆｏｒｇｅ．ｎｅｔで入手可能）が含まれる。実施形態において、抗ｍｉＲ配列は、標的ｍｉＲ配列の完全に相補的な配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有する。
本明細書で使用される場合、「マイクロＲＮＡ」、「マイクロＲＮＡ核酸配列」、「ｍｉＲ」、「ｍｉＲＮＡ」は、遺伝子発現のＲＮＡサイレンシング及び転写後調節において機能する核酸を指す。本用語には、ｍｉＲＮＡのｐｒｉ－（一次－）、ｐｒｅ－（未成熟－）、及び成熟形態など、全ての形態のｍｉＲＮＡが含まれる。実施形態において、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）は、ｍＲＮＡの安定性及び翻訳の両方に影響を与えることによって、多細胞生物における遺伝子発現の転写後調節に関与する短い（２０～２４個のヌクレオチド（ｎｔ））非コードＲＮＡである。ｍｉＲＮＡは、タンパク質コードまたは非コードのいずれかであり得る、キャッピングされ、かつポリアデニル化された一次転写物（ｐｒｉ－ｍｉＲＮＡ）の一部としてＲＮＡポリメラ－ゼＩＩによって転写される。一次転写物は、ドローシャ（Ｄｒｏｓｈａ）リボヌクレアーゼＩＩＩ酵素によって切断されて、約７０ｎｔステムル－プ前駆体ｍｉＲＮＡ（ｐｒｅ－ｍｉＲＮＡ）を産生し、細胞質ダイサー（Ｄｉｃｅｒ）リボヌクレアーゼによってさらに切断されて、成熟ｍｉＲＮＡ及びアンチセンスｍｉＲＮＡスター（ｍｉＲＮＡ＊）生成物を生成する。成熟ｍｉＲＮＡは、ｍｉＲＮＡとの不完全な塩基対形成を通して標的ｍＲＮＡを認識し、最も一般的に標的ｍＲＮＡの翻訳阻害または不安定化をもたらすＲＮＡ誘発サイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）に組み込まれる。実施形態において、本明細書に記載のｍｉＲＮＡ核酸配列は、約１０～８０個の長さのヌクレオチド（例えば、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０個のヌクレオチド）である。実施形態において、本明細書に記載のｍｉＲＮＡ核酸配列は、約１５～５０個の長さのヌクレオチド（例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０個のヌクレオチド）である。実施形態において、本明細書に記載のｍｉＲＮＡ核酸配列は、約１８～２５個の長さのヌクレオチド（例えば、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５個のヌクレオチド）である。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ１２６」または「ｍｉＲ１４２核酸配列」という用語は、ｍｉＲ１２６のｐｒｉ－、ｐｒｅ－及び成熟形態を含むｍｉＲ１２６の全ての形態、ならびにその変異体、相同体、修飾体及び誘導体（例えば、ネイティブｍｉＲ１２６と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性の範囲内）を含む。実施形態において、変異体または相同体または誘導体は、天然由来の形態と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。実施形態において、ｍｉＲ１２６は、ＮＣＢＩ基準配列ＮＲ＿０２９６９５．１、または下記の配列によって特定されるｍｉＲＮＡである。
１ ｃｇｃｔｇｇｃｇａｃ ｇｇｇａｃａｔｔａｔ ｔａｃｔｔｔｔｇｇｔ ａｃｇｃｇｃｔｇｔｇ ａｃａｃｔｔｃａａａ ｃｔｃｇｔａｃｃｇｔ ６１ ｇａｇｔａａｔａａｔ ｇｃｇｃｃｇｔｃｃａ ｃｇｇｃａ （配列番号３７）。
「抗ｍｉＲ１２６」または「抗ｍｉＲ１２６核酸配列」という用語は、上記で定義された標的ｍｉＲ１２６核酸と完全に相補的な配列と、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性である配列を指す。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ１４２」または「ｍｉＲ１４２核酸配列」という用語は、ｍｉＲ１４２のｐｒｉ－、ｐｒｅ－及び成熟形態を含むｍｉＲ１４２の全ての形態、ならびにその変異体、相同体、修飾体及び誘導体（例えば、ネイティブｍｉＲ１４２と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性内）を含む。実施形態において、変異体または相同体または誘導体は、天然由来の形態と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。実施形態において、ｍｉＲ１４２は、ＮＣＢＩ基準配列ＮＲ＿０２９６８３．１、または下記の配列によって特定されるｍｉＲＮＡである。
１ ｇａｃａｇｔｇｃａｇ ｔｃａｃｃｃａｔａａ ａｇｔａｇａａａｇｃ ａｃｔａｃｔａａｃａ ｇｃａｃｔｇｇａｇｇ ｇｔｇｔａｇｔｇｔｔ
６１ ｔｃｃｔａｃｔｔｔａ ｔｇｇａｔｇａｇｔｇ ｔａｃｔｇｔｇ （配列番号３８）。
「抗ｍｉＲ１４２」または「抗ｍｉＲ１４２核酸配列」という用語は、上記で定義された標的ｍｉＲ１４２核酸と完全に相補的な配列と、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性である配列を指す。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ１５５」または「ｍｉＲ１５５核酸配列」という用語は、ｍｉＲ１５５のｐｒｉ－、ｐｒｅ－及び成熟形態を含むｍｉＲ１５５の全ての形態、ならびにその変異体、相同体、修飾体及び誘導体（例えば、ネイティブｍｉＲ１５５と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性内）を含む。実施形態において、変異体または相同体または誘導体は、天然由来の形態と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。実施形態において、ｍｉＲ１５５は、ＮＣＢＩ基準配列ＮＲ＿０３０７８４．１、または下記の配列によって特定されるｍｉＲＮＡである。
１ ｃｔｇｔｔａａｔｇｃ ｔａａｔｃｇｔｇａｔ ａｇｇｇｇｔｔｔｔｔ ｇｃｃｔｃｃａａｃｔ ｇａｃｔｃｃｔａｃａ ｔａｔｔａｇｃａｔｔ
６１ ａａｃａｇ （配列番号３９）。
「抗ｍｉＲ１５５」または「抗ｍｉＲ１５５核酸配列」という用語は、上記で定義された標的ｍｉＲ１５５核酸と完全に相補的な配列と、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性である配列を指す。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ９」または「ｍｉＲ９核酸配列」という用語は、ｍｉＲ９のｐｒｉ－、ｐｒｅ－及び成熟形態を含むｍｉＲ９の全ての形態、ならびにその変異体、相同体、修飾体及び誘導体（例えば、ネイティブｍｉＲ９と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性内）を含む。実施形態において、変異体または相同体または誘導体は、天然由来の形態と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。実施形態において、ｍｉＲ９は、ＮＣＢＩ基準配列ＮＲ＿０２９６９１．１、ＮＣＢＩ参照配列ＮＲ＿０２９６９２．１、または下記の配列によって特定されるｍｉＲＮＡである。
１ ｃｇｇｇｇｔｔｇｇｔ ｔｇｔｔａｔｃｔｔｔ ｇｇｔｔａｔｃｔａｇ ｃｔｇｔａｔｇａｇｔ ｇｇｔｇｔｇｇａｇｔ ｃｔｔｃａｔａａａｇ
６１ ｃｔａｇａｔａａｃｃ ｇａａａｇｔａａａａ ａｔａａｃｃｃｃａ （配列番号４０）；
１ ｇｇａｇｇｃｃｃｇｔ ｔｔｃｔｃｔｃｔｔｔ ｇｇｔｔａｔｃｔａｇ ｃｔｇｔａｔｇａｇｔ ｇｃｃａｃａｇａｇｃ ｃｇｔｃａｔａａａｇ
６１ ｃｔａｇａｔａａｃｃ ｇａａａｇｔａｇａａ ａｔｇａｔｔｃｔｃａ （配列番号４１）。
「抗ｍｉＲ９」または「抗ｍｉＲ９核酸配列」という用語は、上記で定義された標的ｍｉＲ９核酸と完全に相補的な配列と、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性である配列を指す。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ１０ｂ」または「ｍｉＲ１０ｂ核酸配列」という用語は、ｍｉＲ１０ｂのｐｉ－、ｐｒｅ－及び成熟形態を含むｍｉＲ１０ｂの全ての形態、ならびにその変異体、相同体、修飾体及び誘導体（例えば、ネイティブｍｉＲ１０ｂと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性内）を含む。実施形態において、変異体または相同体または誘導体は、天然由来の形態と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。実施形態において、ｍｉＲ１０ｂは、ＮＣＢＩ基準配列ＮＲ＿０２９６０９．１、または下記の配列によって特定されるｍｉＲＮＡである。
１ ｃｃａｇａｇｇｔｔｇ ｔａａｃｇｔｔｇｔｃ ｔａｔａｔａｔａｃｃ ｃｔｇｔａｇａａｃｃ ｇａａｔｔｔｇｔｇｔ ｇｇｔａｔｃｃｇｔａ
６１ ｔａｇｔｃａｃａｇａ ｔｔｃｇａｔｔｃｔａ ｇｇｇｇａａｔａｔａ ｔｇｇｔｃｇａｔｇｃ ａａａａａｃｔｔｃａ （配列番号４２）。
「抗ｍｉＲ１０ｂ」または「抗ｍｉＲ１０ｂ核酸配列」という用語は、上記で定義された標的ｍｉＲ１０ｂ核酸と完全に相補的な配列と、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性である配列を指す。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ２１」または「ｍｉＲ２１核酸配列」という用語は、ｍｉＲ２１のｐｉ－、ｐｒｅ－及び成熟形態を含むｍｉＲ２１の全ての形態、ならびにその変異体、相同体、修飾体及び誘導体（例えば、ネイティブｍｉＲ２１と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性内）を含む。実施形態において、変異体または相同体または誘導体は、天然由来の形態と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。実施形態において、ｍｉＲ２１は、ＮＣＢＩ基準配列ＮＲ＿０２９４９３．１、または下記の配列によって特定されるｍｉＲＮＡである。
１ ｔｇｔｃｇｇｇｔａｇ ｃｔｔａｔｃａｇａｃ ｔｇａｔｇｔｔｇａｃ ｔｇｔｔｇａａｔｃｔ ｃａｔｇｇｃａａｃａ ｃｃａｇｔｃｇａｔｇ
６１ ｇｇｃｔｇｔｃｔｇａ ｃａ （配列番号４３）。
「抗ｍｉＲ２１」または「抗ｍｉＲ２１核酸配列」という用語は、上記で定義された標的ｍｉＲ２１核酸と完全に相補的な配列と、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性である配列を指す。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ１７」または「ｍｉＲ１７核酸配列」という用語は、ｍｉＲ１７のｐｉ－、ｐｒｅ－及び成熟形態を含むｍｉＲ１７の全ての形態、ならびにその変異体、相同体、修飾体及び誘導体（例えば、ネイティブｍｉＲ１７と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性内）を含む。実施形態において、変異体または相同体または誘導体は、天然由来の形態と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。実施形態において、ｍｉＲ１７は、ＮＣＢＩ基準配列ＮＲ＿０２９４８７．１、または下記の配列によって特定されるｍｉＲＮＡである。
１ ｇｔｃａｇａａｔａａ ｔｇｔｃａａａｇｔｇ ｃｔｔａｃａｇｔｇｃ ａｇｇｔａｇｔｇａｔ ａｔｇｔｇｃａｔｃｔ ａｃｔｇｃａｇｔｇａ
６１ ａｇｇｃａｃｔｔｇｔ ａｇｃａｔｔａｔｇｇ ｔｇａｃ （配列番号４４）。
「抗ｍｉＲ１７」または「抗ｍｉＲ１７核酸配列」という用語は、上記で定義された標的ｍｉＲ１７核酸と完全に相補的な配列と、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性である配列を指す。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ９２」または「ｍｉＲ９２核酸配列」という用語は、ｍｉＲ９２のｐｉ－、ｐｒｅ－及び成熟形態を含むｍｉＲ９２の全ての形態、ならびにその変異体、相同体、修飾体及び誘導体（例えば、ネイティブｍｉＲ９２と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性内）を含む。実施形態において、変異体または相同体または誘導体は、天然由来の形態と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。実施形態において、ｍｉＲ９２は、ＮＣＢＩ基準配列ＮＲ＿０２９５０８．１、または下記の配列によって特定されるｍｉＲＮＡである。
１ ｃｔｔｔｃｔａｃａｃ ａｇｇｔｔｇｇｇａｔ ｃｇｇｔｔｇｃａａｔ ｇｃｔｇｔｇｔｔｔｃ ｔｇｔａｔｇｇｔａｔ ｔｇｃａｃｔｔｇｔｃ
６１ ｃｃｇｇｃｃｔｇｔｔ ｇａｇｔｔｔｇｇ （配列番号４５）。
「抗ｍｉＲ９２」または「抗ｍｉＲ９２核酸配列」という用語は、上記で定義された標的ｍｉＲ９２核酸と完全に相補的な配列と、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性である配列を指す。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ１２５ｂ」または「ｍｉＲ１２５ｂ核酸配列」という用語は、ｍｉＲ１２５ｂのｐｉ－、ｐｒｅ－及び成熟形態を含むｍｉＲ１２５ｂの全ての形態、ならびにその変異体、相同体、修飾体及び誘導体（例えば、ネイティブｍｉＲ１２５ｂと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性内）を含む。実施形態において、変異体または相同体または誘導体は、天然由来の形態と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。実施形態において、ｍｉＲ１２５ｂは、ＮＣＢＩ基準配列ＮＲ＿０２９６７１．１、または下記の配列によって特定されるｍｉＲＮＡである。
１ ｔｇｃｇｃｔｃｃｔｃ ｔｃａｇｔｃｃｃｔｇ ａｇａｃｃｃｔａａｃ ｔｔｇｔｇａｔｇｔｔ ｔａｃｃｇｔｔｔａａ ａｔｃｃａｃｇｇｇｔ
６１ ｔａｇｇｃｔｃｔｔｇ ｇｇａｇｃｔｇｃｇａ ｇｔｃｇｔｇｃｔ （配列番号４６）。
「抗ｍｉＲ１２５ｂ」または「抗ｍｉＲ１２５ｂ核酸配列」という用語は、上記で定義された標的ｍｉＲ１２５ｂ核酸と完全に相補的な配列と、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性である配列を指す。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ１４６ａ」または「ｍｉＲ１４６ａ核酸配列」という用語は、ｍｉＲ１４６ａのｐｉ－、ｐｒｅ－及び成熟形態を含むｍｉＲ１４６ａの全ての形態、ならびにその変異体、相同体、修飾体及び誘導体（例えば、ネイティブｍｉＲ１４６ａと比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性内）を含む。実施形態において、変異体または相同体または誘導体は、天然由来の形態と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。実施形態において、ｍｉＲ１４６ａは、ＮＣＢＩ基準配列ＮＲ＿０２９７０１．１、または下記の配列によって特定されるｍｉＲＮＡである。
１ ｃｃｇａｔｇｔｇｔａ ｔｃｃｔｃａｇｃｔｔ ｔｇａｇａａｃｔｇａ ａｔｔｃｃａｔｇｇｇ ｔｔｇｔｇｔｃａｇｔ ｇｔｃａｇａｃｃｔｃ
６１ ｔｇａａａｔｔｃａｇ ｔｔｃｔｔｃａｇｃｔ ｇｇｇａｔａｔｃｔｃ ｔｇｔｃａｔｃｇｔ （配列番号４７）。
「抗ｍｉＲ１４６ａ」または「抗ｍｉＲ１４６ａ核酸配列」という用語は、上記で定義された標的ｍｉＲ１４６ａ核酸と完全に相補的な配列と、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性である配列を指す。
本明細書で使用される場合、「マイクロＲＮＡ－ミミック（ｍｉＲＮＡ－ミミック）」または「ｍｉＲＮＡ－ミミック核酸配列」という用語は、その一般的かつ通常の意味に従って使用され、マイクロＲＮＡと同様の生物学的機能を果たすことができる一本鎖、二本鎖、または三本鎖のオリゴヌクレオチドを指す。実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックは、非天然の二本鎖ｍｉＲ様ＲＮＡ断片であり得る。そのようなＲＮＡ断片は、標的遺伝子に特有の３’ＵＴＲ中の選択された配列に対して部分的に相補的なモチーフを持つその５’末端を有するように設計することができる。一旦細胞に導入されると、このＲＮＡ断片は、内因性ｍｉＲＮＡを擬態し、その標的遺伝子に特異的に結合し、遺伝子の転写後抑制、より具体的には翻訳阻害を生じる。内因性ｍｉＲＮＡとは異なり、ｍｉＲＮＡ－ミミックは遺伝子特異的な様式で作用し得る。実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックは、２０～３０個の塩基（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０個の塩基）の二本鎖オリゴマーであり得る。実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックは、２０～３０個の塩基（例えば、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０個の塩基）の三本鎖オリゴマーであり得る。実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックは、２’化学修飾を有し得る。実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックは、血清安定性増強化学修飾、例えば、ホスホチオエートヌクレオチド間結合、２’－Ｏ－メチルリボヌクレオチド、２’－デオキシ－２’－フルオロリボヌクレオチド、２’－デオキシリボヌクレオチド、ユニバーサル塩基ヌクレオチド、５－Ｃメチルヌクレオチド、逆位デオキシ脱塩基残基結合、またはロックド核酸を有し得る。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ１２６－ミミック」または「ｍｉＲ２６－ミミック核酸配列」という用語は、ｍｉＲ１２６と構造的に実質的に類似し、ｍｉＲ１２６と同様の生物学的機能を果たすことができるオリゴヌクレオチドを指す。実施形態において、ｍｉＲ１２６－ミミックは、ネイティブｍｉＲ１２６と比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性を有する。実施形態において、ｍｉＲ１２６－ミミックは、ネイティブｍｉＲ１２６と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ１４２－ミミック」または「ｍｉＲ１４２－ミミック核酸配列」という用語は、ｍｉＲ１４２と構造的に実質的に類似し、ｍｉＲ１４２と同様の生物学的機能を果たすことができるオリゴヌクレオチドを指す。実施形態において、ｍｉＲ１４２ミミックは、ネイティブｍｉＲ１４２と比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性を有する。実施形態において、ｍｉＲ１４２－ミミックは、ネイティブｍｉＲ１４２と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ１５５－ミミック」または「ｍｉＲ１５５－ミミック核酸配列」という用語は、ｍｉＲ１５５と構造的に実質的に類似し、ｍｉＲ１５５と同様の生物学的機能を果たすことができるオリゴヌクレオチドを指す。実施形態において、ｍｉＲ１５５－ミミックは、ネイティブｍｉＲ１５５と比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性を有する。実施形態において、ｍｉＲ１５５－ミミックは、ネイティブｍｉＲ１５５と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ９－ミミック」または「ｍｉＲ９－ミミック核酸配列」という用語は、ｍｉＲ９と構造的に実質的に類似し、ｍｉＲ９と同様の生物学的機能を果たすことができるオリゴヌクレオチドを指す。実施形態において、ｍｉＲ９－ミミックは、ネイティブｍｉＲ９と比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性を有する。実施形態において、ｍｉＲ９－ミミックは、ネイティブｍｉＲ９と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ１０ｂ－ミミック」または「ｍｉＲ１０ｂ－ミミック核酸配列」という用語は、ｍｉＲ１０ｂと構造的に実質的に類似し、ｍｉＲ１０ｂと同様の生物学的機能を達成することができるオリゴヌクレオチドを指す。実施形態において、ｍｉＲ１０ｂ－ミミックは、ネイティブｍｉＲ１０ｂと比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性を有する。実施形態において、ｍｉＲ１０ｂ－ミミックは、ネイティブｍｉＲ１０ｂと比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ２１－ミミック」または「ｍｉＲ２１－ミミック核酸配列」という用語は、ｍｉＲ２１と構造的に実質的に類似し、ｍｉＲ２１と同様の生物学的機能を果たすことができるオリゴヌクレオチドを指す。実施形態において、ｍｉＲ２１－ミミックは、ネイティブｍｉＲ２１と比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性を有する。実施形態において、ｍｉＲ２１－ミミックは、ネイティブｍｉＲ２１と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ１７－ミミック」または「ｍｉＲ１７－ミミック核酸配列」という用語は、ｍｉＲ１７と構造的に実質的に類似し、ｍｉＲ１７と同様の生物学的機能を果たすことができるオリゴヌクレオチドを指す。実施形態において、ｍｉＲ１７－ミミックは、ネイティブｍｉＲ１７と比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性を有する。実施形態において、ｍｉＲ１７－ミミックは、ネイティブｍｉＲ１７と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ９２－ミミック」または「ｍｉＲ９２－ミミック核酸配列」という用語は、ｍｉＲ９２と構造的に実質的に類似し、ｍｉＲ９２と同様の生物学的機能を果たすことができるオリゴヌクレオチドを指す。実施形態において、ｍｉＲ９２－ミミックは、ネイティブｍｉＲ９２と比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性を有する。実施形態において、ｍｉＲ９２－ミミックは、ネイティブｍｉＲ９２と比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。
本明細書で使用される場合、用語「ｍｉＲ１２５ｂ－ミミック」または「ｍｉＲ１２５ｂ－ミミック核酸配列」は、ｍｉＲ１２５ｂと構造的に実質的に類似し、ｍｉＲ１２５ｂと同様の生物学的機能を果たすことができるオリゴヌクレオチドを指す。実施形態において、ｍｉＲ１２５ｂ－ミミックは、ネイティブｍｉＲ１２５ｂと比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性を有する。実施形態において、ｍｉＲ１２５ｂ－ミミックは、ネイティブｍｉＲ１２５ｂと比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。
本明細書で使用される場合、「ｍｉＲ１４６ａ－ミミック」または「ｍｉＲ１４６ａ－ミミック核酸配列」という用語は、ｍｉＲ１４６ａと構造的に実質的に類似し、ｍｉＲ１４６ａと同様の生物学的機能を果たすことができるオリゴヌクレオチドを指す。実施形態において、ｍｉＲ１４６ａ－ミミックは、ネイティブｍｉＲ１４６ａと比較して、少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性を有する。実施形態において、ｍｉＲ１４６ａ－ミミックは、ネイティブｍｉＲ１４６ａと比較して、配列全体または配列の一部分（例えば、１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、または８０個の連続したヌクレオチド部分）に対して、少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％の配列同一性を有する。
本明細書で使用される場合、「ホスホロチオエート化オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）」という用語は、その中のいくつかのまたは全てのヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合を構成する核酸配列、例えば「ＣｐＧ核酸配列」または「ＧｐＣ核酸配列」を指す。実施形態において、ホスホロチオエート化オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）は、１５～３０個の塩基長であり、一本鎖であり、部分的にまたは完全にホスホロチオエート化されている。部分的にホスホロチオエート化されたＯＤＮは、その中で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、または２８個のヌクレオチド間結合がホスホロチオエート結合を構成するＯＤＮである。
実施形態において、核酸中の「ＣｐＧモチーフ」という用語は、その中で５’Ｃヌクレオチドが、ホスホジエステルヌクレオチド間結合またはホスホジエステル誘導体ヌクレオチド間結合を介して３’Ｇヌクレオチドに連結されている核酸を指す。実施形態において、核酸中の「ＣｐＧモチーフ」という用語は、その中で５’Ｇヌクレオチドが、ホスホジエステルヌクレオチド間結合またはホスホジエステル誘導体ヌクレオチド間結合を介して３’Ｃヌクレオチドに連結されている核酸を指す（「ＧｐＣ核酸配列としても知られる」）。実施形態において、ＣｐＧモチーフは、ホスホジエステルヌクレオチド間結合を含む。実施形態において、ＣｐＧモチーフには、ホスホジエステル誘導体ヌクレオチド間結合を含む。実施形態において、ＣｐＧモチーフは、ホスホロチオエート結合を含む。
本明細書で使用される場合、「クラスＡ ＣｐＧ ＯＤＮ」または「ＡクラスＣｐＧ ＯＤＮ」または「Ｄ型ＣｐＧ ＯＤＮ」または「クラスＡ ＣｐＧ ＤＮＡ配列」という用語は、化学的及び生物学的な科学におけるその一般的な意味に従って使用され、５’、３’または両方の末端にポリ－Ｇ配列のうちの１つ以上；ＣｐＧモチーフを含む内部パリンドロ－ム配列；またはデオキシヌクレオチドを連結する１つ以上のホスホジエステル誘導体を含むオリゴデオキシヌクレオチドを含むＣｐＧモチーフを指す。実施形態において、クラスＡ ＣｐＧ ＯＤＮは、５’、３’または両方の末端にポリ－Ｇ配列；ＣｐＧモチーフを含む内部パリンドロ－ム配列；及びデオキシヌクレオチドを連結する１つ以上のホスホジエステル誘導体を含む。実施形態において、ホスホジエステル誘導体はホスホロチオエートである。クラスＡ ＣｐＧ ＯＤＮの例には、ＯＤＮ Ｄ１９、ＯＤＮ １５８５、ＯＤＮ ２２１６、及びＯＤＮ ２３３６が含まれる。
本明細書で使用される場合、「クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮ」または「クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮ」または「Ｋ型ＣｐＧ ＯＤＮ」または「クラスＢ ＣｐＧ ＤＮＡ配列」という用語は、化学的及び生物学的な科学におけるその一般的な意味に従って使用され、ＣｐＧモチーフを含む６ｍｅｒモチーフのうちの１つ以上；全てのデオキシヌクレオチドを連結するホスホジエステル誘導体を含むオリゴデオキシヌクレオチドを含むＣｐＧモチーフを指す。実施形態において、６ｍｅｒモチーフは、５’－ＰｕＰｙＣＧＰｙＰｕ－３’（配列番号１５）を含み、式中、Ｐｕは核酸塩基（例えば、ＡまたはＧ）を含有するプリンを表し、Ｐｙは核酸塩基（例えば、Ｔ／ＵまたはＣ）を含有するピリミジンを表す。実施形態において、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮは、ＣｐＧモチーフを含む６ｍｅｒモチーフのうちの１つ以上のコピ－及び全てのデオキシヌクレオチドを連結するホスホジエステル誘導体を含む。実施形態において、ホスホジエステル誘導体はホスホロチオエートである。実施形態において、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮは、ＣｐＧモチーフを含む１つの６ｍｅｒモチーフを含む。実施形態において、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮは、ＣｐＧモチーフを含む６ｍｅｒモチーフの２つのコピ－を含む。実施形態において、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮは、ＣｐＧモチーフを含む６ｍｅｒモチーフの３つのコピ－を含む。実施形態において、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮは、ＣｐＧモチーフを含む６ｍｅｒモチーフの４つのコピ－を含む。クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮの例には、ＯＤＮ１６６８、ＯＤＮ１８２６、ＯＤＮ２００６、及びＯＤＮ２００７が含まれる。
本明細書で使用される場合、「クラスＣ ＣｐＧ ＯＤＮ」または「Ｃクラス ＣｐＧ ＯＤＮ」または「Ｃ型ＣｐＧ ＤＮＡ配列」という用語は、化学的及び生物学的な科学におけるその一般的な意味に従って使用され、ＣｐＧモチーフを含むパリンドロ－ム配列及び全てのデオキシヌクレオチドを連結するホスホジエステル誘導体（ホスホロチオエート）を含むオリゴデオキシヌクレオチドを指す。クラスＣ ＣｐＧ ＯＤＮの例には、ＯＤＮ ２３９５及びＯＤＮ Ｍ３６２が含まれる。
本明細書で使用される略語は、化学的及び生物学的な技術分野におけるそれらの従来の意味を有する。本明細書に記載される化学構造及び式は、化学技術分野において知られている化学原子価の標準規則に従って構築される。
置換基が、左から右へ書かれたそれらの従来の化学式によって特定される場合、構造を右から左へ書くことから生じる化学的に同一の置換基を等しく包含し、例えば－ＣＨ２Ｏ－は－ＯＣＨ２－と同等である。
「アルキル」という用語は、特に明記しない限り、それ自体が、または別の置換基の一部として、直鎖（すなわち、非分岐の）もしくは分岐鎖の非環状炭素鎖（または炭素）、またはこれらの組み合わせを意味し、アルキルは、完全に飽和された、モノまたはポリ不飽和であってもよく、表示された炭素原子の数（すなわち、Ｃ１～Ｃ１０は１～１０個の炭素を意味する）を有する二価及び多価のラジカルを含むことができる。飽和炭化水素ラジカルの例には、例えば、メチル、エチル、ｎ－プロピル、イソプロピル、ｎ－ブチル、ｔ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル、（シクロヘキシル）メチルなどの基、例えば、ｎ－ペンチル、ｎ－ヘキシル、ｎ－ヘプチル、ｎ－オクチルの相同体及び異性体等が含まれるが、これらに限定さない。不飽和アルキル基は、１つ以上の二重結合または三重結合を有するものである。不飽和アルキル基の例には、ビニル、２－プロペニル、クロチル、２－イソペンテニル、２－（ブタジエニル）、２，４－ペンタジエニル、３－（１，４－ペンタジエニル）、エチニル、１－及び３－プロピニル、３－ブチニル、及びより高次の相同体及び異性体が含まれるが、これらに限定されない。アルコキシは、酸素リンカー（－Ｏ－）を介して分子の残部に結合したアルキルである。
「アルキレン」という用語は、特に明記しない限り、それ自体が、または別の置換基の一部として、－ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２－で例示されるがこれに限定されないアルキルから誘導される二価の基を意味する。典型的には、アルキル（またはアルキレン）基は１～２４個の炭素原子を有するであろう。「低級アルキル」または「低級アルキレン」は、一般に８個以下の炭素原子を有する、より短い鎖のアルキルまたはアルキレン基である。「アルケニレン」という用語は、特に明記しない限り、それ自体が、または別の置換基の一部として、アルケンから誘導される二価の基を意味する。
「ヘテロアルキル」という用語は、特に明記しない限り、それ自体で、または別の用語と組み合わせて、少なくとも１つの炭素原子及びＯ、Ｎ、Ｐ、Ｓｉ、及びＳからなる群から選択される少なくとも１つのヘテロ原子を含む、安定した非環状の直鎖もしくは分枝鎖、またはそれらの組み合わせを意味し、窒素及びイオウ原子は任意に酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は任意に四級化されていてもよい。ヘテロ原子（複数可）Ｏ、Ｎ、Ｐ、Ｓ、及びＳｉは、ヘテロアルキル基の任意の内部位置に、またはアルキル基が分子の残部に結合している位置に配置されてもよい。例には、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｏ－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ３、－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２、－Ｓ（Ｏ）－ＣＨ３、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ（Ｏ）２－ＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ－Ｏ－ＣＨ３、－Ｓｉ（ＣＨ３）３、－ＣＨ２－ＣＨ＝Ｎ－ＯＣＨ３、－ＣＨ＝ＣＨ－Ｎ（ＣＨ３）－ＣＨ３、－Ｏ－ＣＨ３、－Ｏ－ＣＨ２－ＣＨ３、及び－ＣＮが含まれるが、これらに限定されない。例えば、－ＣＨ２－ＮＨ－ＯＣＨ３及び－ＣＨ２－Ｏ－Ｓｉ（ＣＨ３）３などの、最大２個または３個のヘテロ原子が連続しているものでもよい。
同様に、「ヘテロアルキレン」という用語は、特に明記しない限り、それ自体が、または別の置換基の一部として、－ＣＨ２－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ２－及び－ＣＨ２－Ｓ－ＣＨ２－ＣＨ２－ＮＨ－ＣＨ２－で例示されるがこれらに限定されないヘテロアルキルから誘導される二価の基を意味する。ヘテロアルキレン基の場合、ヘテロ原子は、鎖末端の一方または両方（例えば、アルキレンオキシ、アルキレンジオキシ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノなど）を占有することもできる。さらに、アルキレン及びヘテロアルキレン結合基の場合、結合基の配向は、結合基の式が書かれている方向によって示唆されていない。例えば、式－Ｃ（Ｏ）２Ｒ’－は、－Ｃ（Ｏ）２Ｒ’－及び－Ｒ’Ｃ（Ｏ）２－の両方を表す。上記のように、ヘテロアルキル基には、本明細書で使用される場合、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）ＮＲ’、－ＮＲ’Ｒ’’、－ＯＲ’、－ＳＲ’及び／または－ＳＯ２Ｒ’などのヘテロ原子を介して分子の残りに結合している基が含まれる。「ヘテロアルキル」が列挙され、続いて例えば－ＮＲ’Ｒ’’などの特定のヘテロアルキル基が列挙される場合、ヘテロアルキルという用語及び－ＮＲ’Ｒ’’は重複または相互排他的ではないことが理解されよう。むしろ、特定のヘテロアルキル基は、明らかにするために列挙される。これにより、「ヘテロアルキル」という用語は、例えば－ＮＲ’Ｒ’’などの特定のヘテロアルキル基を排除するものとして本明細書で解釈されるべきではない。
「シクロアルキル」及び「ヘテロシクロアルキル」という用語は、特に明記しない限り、単独でまたは他の用語と組み合わせて、それぞれ「アルキル」及び「ヘテロアルキル」の環式非芳香族変形型を意味し、ここで、環を構成する炭素は、非水素原子との結合に関与する全ての炭素原子価のために必ずしも水素に結合する必要はない。加えて、ヘテロシクロアルキルの場合、ヘテロ原子は、複素環が分子の残部に結合している位置を占有することができる。シクロアルキルの例には、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、１－シクロヘキセニル、３－シクロヘキセニル、シクロヘプチルなどが含まれるが、これらに限定されない。ヘテロシクロアルキルの例には、１－（１，２，５，６－テトラヒドロピリジル）、１－ピペリジニル、２－ピペリジニル、３－ピペリジニル、４モルホリニル、３－モルホリニル、テトラヒドロフラン－２－イル、テトラヒドロフラン－３－イル、テトラヒドロチエン－２－イル、テトラヒドロチエン－３－イル、１－ピペラジニル、２－ピペラジニルなどが含まれるが、これらに限定されない。「シクロアルキレン」及び「ヘテロシクロアルキレン」は、単独でまたは別の置換基の一部として、シクロアルキル及びヘテロシクロアルキルからそれぞれ誘導される二価のラジカルを意味する。
「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、特に明記しない限り、単独でまたは別の置換基の一部として、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を意味する。加えて、「ハロアルキル」などの用語は、モノハロアルキル及びポリハロアルキルを含むことを意味する。例えば、「ハロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキル」という用語には、フルオロメチル、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、２，２，２－トリフルオロエチル、４－クロロブチル、３－ブロモプロピルなどが含まれるが、これらに限定されない。
「アシル」という用語は、特に明記しない限り、－Ｃ（Ｏ）Ｒを意味し、ここで、Ｒは、置換または非置換アルキル、置換または非置換シクロアルキル、置換または非置換ヘテロアルキル、置換または非置換ヘテロシクロアルキル、置換または非置換アリール、または置換または非置換ヘテロアリールである。
「アリール」という用語は、特に明記しない限り、互いに縮合した（例えば、縮合環アリール）または共有結合した（例えば、ビフェニル）単環または多重環（好ましくは１～３環）とすることができる、ポリ不飽和、芳香族炭化水素置換基を意味する。縮合環アリールは、縮合した環のうちの少なくとも１つがアリール環である、互いに縮合した多環を指す。「ヘテロアリール」という用語は、Ｎ、Ｏ、またはＳなどの少なくとも１つのヘテロ原子を含有するアリール基（または環）を指し、ここでは窒素及びイオウ原子は任意に酸化され、窒素原子（複数可）は任意に四級化される。それゆえ、「ヘテロアリール」という用語は、縮合環ヘテロアリール基（すなわち、縮合環の少なくとも１つがヘテロ芳香環である複数の互いに縮合した環）を含む。５，６－縮合環ヘテロアリーレンは、互いに縮合した２つの環を指し、ここで、一方の環は５員環を有し、他方の環は６員環を有し、少なくとも１つの環はヘテロアリール環である。同様に、６，６－縮合環ヘテロアリーレンは、互いに縮合した２つの環を指し、ここで、一方の環は６員環を有し、他方の環は６員環を有し、少なくとも１つの環はヘテロアリール環である。また、６，５－縮合環ヘテロアリーレンは、互いに縮合した２つの環を指し、ここで、一方の環は６員環を有し、他方の環は５員環を有し、少なくとも１つの環はヘテロアリール環である。ヘテロアリール基は、炭素またはヘテロ原子を介して分子の残部に結合することができる。アリール及びヘテロアリール基の非限定的な例には、フェニル、１－ナフチル、２－ナフチル、４－ビフェニル、１－ピロリル、２－ピロリル、３－ピロリル、３－ピラゾリル、２－イミダゾリル、４－イミダゾリル、ピラジニル、２－オキサゾリル、４－オキサゾリル、２－フェニル－４－オキサゾリル、５－オキサゾリル、３－イソオキサゾリル、４－イソキサゾリル、５－イソキサゾリル、２－チアゾリル、４－チアゾリル、５－チアゾリル、２－フリル、３－フリル、２－チエニル、３－チエニル、２－ピリジル、３－ピリジル、４－ピリジル、２－ピリミジル、４－ピリミジル、５－ベンゾチアゾリル、プリニル、２－ベンズイミダゾリル、５－インドリル、１－イソキノリル、５－イソキノリル、２－キノキサリニル、５－キノキサリニル、３－キノリル、及び６－キノリルが含まれる。上記アリール及びヘテロアリール環系のそれぞれの置換基は、以下に記載される許容される置換基の群から選択される。「アリーレン」及び「ヘテロアリーレン」は、単独でまたは別の置換基の一部として、アリール及びヘテロアリールからそれぞれ誘導される二価のラジカルを意味する。ヘテロアリール基の非限定的な例には、ピリジニル、ピリミジニル、チオフェニル、チエニル、フラニル、インドリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾジオキサニル、チアナフタニル、ピロロピリジニル、インダゾリル、キノリニル、キノキサリニル、ピリドピラジニル、キナゾリノニル、ベンゾイソオキサゾリル、イミダゾピリジニル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンゾチオフェニル、フェニル、ナフチル、ビフェニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、ピラジニル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、フリルチエニル、ピリジル、ピリミジル、ベンゾチアゾリル、プリニル、ベンズイミダゾリル、イソキノリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、ピロリル、ジアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ベンゾチアジアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾロピリミジニル、ピロロピリミジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾオキサゾリルまたはキノリルが含まれる。上記の例は、置換または非置換であってもよく、上記の各ヘテロアリールの例の二価のラジカルは、ヘテロアリーレンの非限定的な例である。
縮合環ヘテロシクロアルキル－アリールは、ヘテロシクロアルキルに縮合したアリールである。縮合環ヘテロシクロアルキル－ヘテロアリールは、ヘテロシクロアルキルに縮合したヘテロアリールである。縮合環ヘテロシクロアルキル－シクロアルキルは、シクロアルキルに縮合したヘテロシクロアルキルである。縮合環ヘテロシクロアルキル－ヘテロシクロアルキルは別のヘテロシクロアルキルに縮合したヘテロシクロアルキルである。縮合環ヘテロシクロアルキル－アリール、縮合環ヘテロシクロアルキル－ヘテロアリール、縮合環ヘテロシクロアルキル－シクロアルキル、または縮合環ヘテロシクロアルキル－ヘテロシクロアルキルは、それぞれ独立して、非置換であるか、または本明細書に記載の置換基の１つ以上で置換されていてもよい。
本明細書で使用される場合、「オキソ」という用語は、炭素原子に二重結合している酸素を意味する。
本明細書で使用される場合、「アルキルスルホニル」という用語は、式－Ｓ（Ｏ２）－Ｒ’を有する部分を意味し、ここで、Ｒ’は、上記で定義されたような置換もしくは非置換アルキル基である。Ｒ’は、炭素の特定の数を有してもよい（例えば、「Ｃ１～Ｃ４アルキルスルホニル」）。
上記の用語（すなわち、「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「アリール」及び「ヘテロアリール」）のそれぞれは、示されたラジカルの置換型及び非置換型の両方を含む。各型のラジカルのための好ましい置換基は以下に提供される。
アルキル及びヘテロアルキルラジカル（アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、及びヘテロシクロアルケニルとしてしばしば言及される基を含む）の置換基は、０～（２ｍ’＋１）の範囲の数で（式中、ｍ’はそのようなラジカル中の炭素原子の総数である）、－ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ－ＯＲ’、－ＮＲ’Ｒ”、－ＳＲ’、－ハロゲン、－ＳｉＲ’Ｒ”Ｒ”’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＣＯ２Ｒ’、－ＣＯＮＲ’Ｒ”、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、－ＮＲ”Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＮＲ’－Ｃ（Ｏ）ＮＲ”Ｒ”’、－ＮＲ”Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、－ＮＲ－Ｃ（ＮＲ’Ｒ”Ｒ”’）＝ＮＲ””、－ＮＲ－Ｃ（ＮＲ’Ｒ”）＝ＮＲ”’、－Ｓ（Ｏ）Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ”、－ＮＲＳＯ２Ｒ’、ＮＲ’ＮＲ”Ｒ”’、ＯＮＲ’Ｒ”、ＮＲ’Ｃ＝（Ｏ）ＮＲ”ＮＲ”’Ｒ””、－ＣＮ、－ＮＯ２から選択されるがこれらに限定されない、様々な基の１つ以上であり得る。Ｒ’、Ｒ”、Ｒ”’、及びＲ””は、好ましくは、それぞれ独立して、水素、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリール（例えば、１～３個のハロゲンで置換されたアリール）、置換もしくは非置換のヘテロアリール、置換もしくは非置換のアルキル、アルコキシもしくはチオアルコキシ基、またはアリールアルキル基を指す。本発明の化合物が複数のＲ基を含むとき、例えば、これらの基の２つ以上が存在する場合、Ｒ基のそれぞれは、Ｒ’、Ｒ”、Ｒ’”、及びＲ””基のように独立して選択される。Ｒ’及びＲ”が同じ窒素原子に結合しているとき、それらは窒素原子と結合して４、５、６または７員環を形成することができる。例えば、－ＮＲ’Ｒ”には、１－ピロリジニル及び４－モルホリニルが含まれるが、これらに限定されない。置換基の上記の説明から、当業者であれば、「アルキル」という用語は、ハロアルキル（例えば、－ＣＦ３やＣＨ２ＣＦ３）及びアシル（例えば、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、－Ｃ（Ｏ）ＣＦ３、－Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ３など）などの、水素基以外の基に結合した炭素原子を含む基を含むことを意味することを理解するであろう。
アルキル基について記載した置換基と同様に、アリール及びヘテロアリール基の置換基は変化し、また、ゼロから芳香族環系上の空いた原子価の総数までの範囲の数で、例えば、－ＯＲ’、－ＮＲ’Ｒ”、－ＳＲ’、－ハロゲン、－ＳｉＲ’Ｒ”Ｒ”’、－ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、－Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＣＯ２Ｒ’、－ＣＯＮＲ’Ｒ”、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、－ＮＲ”Ｃ（Ｏ）Ｒ’、－ＮＲ’－Ｃ（Ｏ）ＮＲ”Ｒ”’、－ＮＲ”Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、－ＮＲ－Ｃ（ＮＲ’Ｒ”Ｒ”’）＝ＮＲ””、－ＮＲ－Ｃ（ＮＲ’Ｒ”）＝ＮＲ”’、－Ｓ（Ｏ）Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ”、－ＮＲＳＯ２Ｒ’、－ＮＲ’ＮＲ”Ｒ”’、－ＯＮＲ’Ｒ”、ＮＲ’Ｃ＝（Ｏ）ＮＲ”ＮＲ”’Ｒ””、－ＣＮ、－ＮＯ２、－Ｒ’、－Ｎ３、－ＣＨ（Ｐｈ）２、フルオロ（Ｃ１～Ｃ４）アルコキシ、及びフルオロ（Ｃ１～Ｃ４）アルキルから選択され、ここで、Ｒ’、Ｒ”、Ｒ”’、及びＲ””は、好ましくは、独立して、水素、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリール、及び置換もしくは非置換のヘテロアリールから選択される。本発明の化合物が２つ以上のＲ基を含むとき、例えば、Ｒ基のそれぞれは、Ｒ’、Ｒ”、Ｒ”’及びＲ””基がこれらの基の２つ以上存在するときのように独立して選択される。
２つ以上の置換基は、任意に結合してアリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、またはヘテロシクロアルキル基を形成してもよい。そのようないわゆる環形成置換基は、必ずしも必要ではないが、通常は、環状基本構造に結合していることが分かる。一実施形態において、環形成置換基は、基本構造の隣接するメンバーに結合している。例えば、環状基本構造の隣接するメンバーに結合した２つの環形成置換基は、縮合環構造を生成する。別の実施形態において、環形成置換基は、基本構造の単一の構成員に結合される。例えば、環状基本構造の単一構成員に結合した２つの環形成置換基は、スピロ環構造を生成する。さらに別の実施形態において、環形成置換基は、基本構造の隣接していない構成員に結合される。
アリールまたはヘテロアリール環の隣接する原子上の置換基のうちの２つは、任意に、式－Ｔ－Ｃ（Ｏ）－（ＣＲＲ’）ｑ－Ｕ－の環を形成することができ、式中、Ｔ及びＵは独立して－ＮＲ－、－Ｏ－、－ＣＲＲ’－、または単結合であり、またｑは０～３の整数である。あるいは、アリールまたはヘテロアリール環の隣接原子上の置換基の２つは、式－Ａ－（ＣＨ２）ｒ－Ｂ－で置換することができ、式中、Ａ及びＢは独立して－ＣＲＲ’－、－Ｏ－、－ＮＲ－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－、－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’－または単結合であり、またｒは１～４の整数である。そのようにして形成された新しい環の単結合のうちの１つは、任意に、二重結合で置換することができる。あるいは、アリールまたはヘテロアリール環の隣接原子上の置換基のうちの２つは、式－（ＣＲＲ’）ｓ－Ｘ’－（Ｃ”Ｒ”Ｒ”’）ｄ－の置換基で任意に置換することができ、式中、ｓ及びｄは独立して０～３の整数であり、またＸ’は、－Ｏ－、－ＮＲ’－、－Ｓ－、－Ｓ（Ｏ）－、－Ｓ（Ｏ）２－、または－Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’－である。置換基Ｒ、Ｒ’、Ｒ”及びＲ”’は、好ましくは、水素、置換もしくは非置換のアルキル、置換もしくは非置換のヘテロアルキル、置換もしくは非置換のシクロアルキル、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のアリール、及び置換もしくは非置換のヘテロアリールから独立して選択される。
本明細書で使用される場合、「ヘテロ原子」または「環ヘテロ原子」という用語は、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、イオウ（Ｓ）、リン（Ｐ）、及びケイ素（Ｓｉ）を含むことを意味する。
本明細書で使用される場合、「置換基」は、以下の部分から選択される基を意味する：
（Ａ）オキソ、ハロゲン、－ＣＦ３、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ２、－ＮＯ２、－ＳＨ、－ＳＯ２Ｃｌ、－ＳＯ３Ｈ、－ＳＯ４Ｈ、－ＳＯ２ＮＨ２、ＮＨＮＨ２、ＯＮＨ２、ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ２、－ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨ２、－ＮＨＳＯ２Ｈ、－ＮＨＣ＝（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）－ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＦ３、－ＯＣＨＦ２、－ＮＨＳＯ２ＣＨ３、－Ｎ３、非置換のアルキル、非置換のヘテロアルキル、非置換のシクロアルキル、非置換のヘテロシクロアルキル、非置換のアリール、非置換のヘテロアリールと、
（Ｂ）（ｉ）オキソ、ハロゲン、－ＣＦ３、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ２、－ＮＯ２、－ＳＨ、－ＳＯ２Ｃｌ、－ＳＯ３Ｈ、－ＳＯ４Ｈ、－ＳＯ２ＮＨ２、ＮＨＮＨ２、－ＯＮＨ２、－ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ２、－ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨ２、－ＮＨＳＯ２Ｈ、－ＮＨＣ＝（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）－ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＦ３、－ＯＣＨＦ２、－ＮＨＳＯ２ＣＨ３、－Ｎ３、非置換のアルキル、非置換のヘテロアルキル、非置換のシクロアルキル、非置換のヘテロシクロアルキル、非置換のアリール、非置換のヘテロアリール、及び
（ｉｉ）以下から選択される少なくとも１つの置換基で置換されたアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール：
（ａ）オキソ、ハロゲン、－ＣＦ３、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ２、－ＮＯ２、－ＳＨ、－ＳＯ２Ｃｌ、－ＳＯ３Ｈ、－ＳＯ４Ｈ、－ＳＯ２ＮＨ２、ＮＨＮＨ２、－ＯＮＨ２、－ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ２、－ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨ２、－ＮＨＳＯ２Ｈ、－ＮＨＣ＝（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）－ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＦ３、－ＯＣＨＦ２、－ＮＨＳＯ２ＣＨ３、－Ｎ３、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールと、
（ｂ）オキソ、ハロゲン、－ＣＦ３、－ＣＮ、－ＯＨ、－ＮＨ２、－ＣＯＯＨ、－ＣＯＮＨ２、－ＮＯ２、－ＳＨ、－ＳＯ２Ｃｌ、－ＳＯ３Ｈ、－ＳＯ４Ｈ、－ＳＯ２ＮＨ２、－ＮＨＮＨ２、－ＯＮＨ２、－ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨＮＨ２、－ＮＨＣ＝（Ｏ）ＮＨ２、－ＮＨＳＯ２Ｈ、－ＮＨＣ＝（Ｏ）Ｈ、－ＮＨＣ（Ｏ）－ＯＨ、－ＮＨＯＨ、－ＯＣＦ３、－ＯＣＨＦ２、ＮＨＳＯ２ＣＨ３、－Ｎ３、非置換のアルキル、非置換のヘテロアルキル、非置換のシクロアルキル、非置換のヘテロシクロアルキル、非置換のアリール、非置換のヘテロアリールから選択される少なくとも１つの置換基で置換されたアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリールと、から選択される少なくとも１つの置換基で置換されたアルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール。
本明細書で使用される場合、「サイズ制限置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）」または「サイズ制限置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ ｇｒｏｕｐ）」は、「置換基」について上記に記載された全ての置換基から選択される基を意味し、各置換もしくは非置換のアルキルは、置換もしくは非置換のＣ１～Ｃ２０アルキルであり、各置換もしくは非置換のヘテロアルキルは、置換もしくは非置換の２～２０員のヘテロアルキルであり、各置換もしくは非置換のシクロアルキルは、置換もしくは非置換のＣ３～Ｃ８シクロアルキルであり、各置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルは、置換もしくは非置換の３～８員のヘテロシクロアルキルであり、各置換もしくは非置換のアリールは、置換もしくは非置換のＣ６～Ｃ１０アリールであり、及び各置換もしくは非置換のヘテロアリールは、置換もしくは非置換の５～１０員のヘテロアリールである。
本明細書で使用される場合、「低級置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ）」または「低級置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｅｎｔ ｇｒｏｕｐ）」は、「置換基」について上記に記載された全ての置換基から選択される基を意味し、ここで、各置換もしくは非置換のアルキルは、置換もしくは非置換のＣ１～Ｃ８アルキル、各置換もしくは非置換のヘテロアルキルは、置換もしくは非置換の２～８員ヘテロアルキルであり、各置換もしくは非置換のシクロアルキルは、置換もしくは非置換のＣ３～Ｃ７Ｃシクロアルキルであり、各置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルは、置換もしくは非置換の３～７員ヘテロシクロアルキルであり、各置換もしくは非置換のアリールは、置換もしくは非置換のＣ６～Ｃ１０アリールであり、及び各置換もしくは非置換のヘテロアリールは、置換もしくは非置換の５～９員ヘテロアリールである。
いくつかの実施形態において、本明細書の化合物で記載される各置換基は、少なくとも１つの置換基で置換されている。より具体的には、いくつかの実施形態において、各置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換アルキレン、置換ヘテロアルキレン、置換シクロアルキレン、置換ヘテロシクロアルキレン、置換アリーレン及び／または置換ヘテロアリーレンは、少なくとも１つの置換基で置換されている。他の実施形態において、これらの基の少なくとも１つまたは全てが、少なくとも１つのサイズ制限置換基で置換されている。他の実施形態において、これらの基の少なくとも１つまたは全てが、少なくとも１つの低級置換基で置換されている。
本明細書の化合物の他の実施形態において、各置換もしくは非置換のアルキルは、置換もしくは非置換のＣ１～Ｃ２０アルキルであってもよく、各置換もしくは非置換のヘテロアルキルは、置換もしくは非置換の２～２０員ヘテロアルキルであり、各置換もしくは非置換のシクロアルキルは、置換もしくは非置換のＣ３～Ｃ８シクロアルキルであり、各置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルは、置換もしくは非置換の３～８員ヘテロシクロアルキルであり、各置換もしくは非置換のアリールは、置換もしくは非置換のＣ６～Ｃ１０アリールであり、及び／または各置換もしくは非置換のヘテロアリールは、置換もしくは非置換の５～１０員ヘテロアリールである。本明細書の化合物のいくつかの実施形態において、各置換もしくは非置換のアルキレンは、置換もしくは非置換のＣ１～Ｃ２０アルキレンであり、各置換もしくは非置換のヘテロアルキレンは、置換もしくは非置換の２～２０員ヘテロアルキレンであり、各置換もしくは非置換のシクロアルキレンは、置換もしくは非置換のＣ３～Ｃ８シクロアルキレンであり、各置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレンは、置換もしくは非置換の３～８員ヘテロシクロアルキレンであり、各置換もしくは非置換のアリーレンは、置換もしくは非置換のＣ６～Ｃ１０アリーレンであり、及び／または各置換もしくは非置換のヘテロアリーレンは、置換もしくは非置換の５～１０員ヘテロアリーレンである。
いくつかの実施形態において、各置換もしくは非置換のアルキルは、置換もしくは非置換のＣ１～Ｃ８アルキルであり、各置換もしくは非置換のヘテロアルキルは、置換もしくは非置換の２～８員ヘテロアルキルであり、各置換もしくは非置換のシクロアルキルは、置換もしくは非置換のＣ３～Ｃ７シクロアルキルであり、各置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキルは、置換もしくは非置換の３～７員ヘテロシクロアルキルであり、各置換もしくは非置換のアリールは、置換もしくは非置換のＣ６～Ｃ１０アリールであり、及び／または各置換もしくは非置換のヘテロアリールは、置換もしくは非置換の５～９員ヘテロアリールである。いくつかの実施形態において、各置換もしくは非置換のアルキレンは、置換もしくは非置換のＣ１～Ｃ８アルキレンであり、各置換もしくは非置換のヘテロアルキレンは、置換もしくは非置換の２～８員のヘテロアルキレンであり、各置換もしくは非置換のシクロアルキレンは、置換もしくは非置換のＣ３～Ｃ７シクロアルキレンであり、各置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレンは、置換もしくは非置換の３～７員ヘテロシクロアルキレンであり、各置換もしくは非置換のアリーレンは、置換もしくは非置換のＣ６～Ｃ１０アリーレンであり、及び／または各置換もしくは非置換のヘテロアリーレンは、置換もしくは非置換の５～９員ヘテロアリーレンである。いくつかの実施形態において、化合物は、以下の実施例の項に明示される化学種である。
本明細書で使用される場合、２つの部分を指すときの「抱合された」という用語は、２つの部分が結合されていることを意味し、２つの部分を結合する結合または結合（複数）は、共有結合または非共有結合であってもよい。実施形態において、２つの部分は、互いに（例えば、直接的に、または共有結合した中間体を介して）共有結合している。実施形態において、２つの部分は、非共有結合で（例えば、イオン結合（複数可）、ファンデルワールス結合（複数可）／相互作用、水素結合（複数可）、極性結合（複数可）、またはそれらの組合せまたは混合物を介して）結合される。
「標識」または「検出可能な部分」は、分光学的、光化学的、生化学的、免疫化学的、化学的方法、磁気共鳴画像法、または他の物理的手段によって検出可能な組成物である。例えば、有用な検出可能な部分には、３２Ｐ、蛍光染料、高電子密度試薬、酵素（例えば、ＥＬＩＳＡにおいて一般的に使用されるようなもの）、ビオチン、ジゴキシゲニン、常磁性分子、常磁性ナノ粒子、超小型超常磁性酸化鉄（「ＵＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＵＳＰＩＯナノ粒子凝集体、超常磁性酸化鉄（「ＳＰＩＯ」）ナノ粒子、ＳＰＩＯナノ粒子凝集体、単結晶ＳＰＩＯ、単結晶ＳＰＩＯ凝集体、単結晶酸化鉄ナノ粒子、単結晶酸化鉄、他のナノ粒子造影剤、リポソームまたはガドリニウムキレート（「Ｇｄ－キレート」）分子を含有する他の送達ビヒクル、ガドリニウム、放射性同位体、放射性核種（例えば、炭素１１、窒素１３、酸素１５、フッ素１８、ルビジウム８２）、フルオロデオキシグルコース（例えば、フッ素－１８標識）、放射性核種を放出する任意のγ線、陽電子放出型放射性核種、放射標識グルコ－ス、放射標識水、放射標識アンモニア、バイオコロイド、マイクロバブル（例えば、アルブミン、ガラクトース、脂質、及び／またはポリマーを含むマイクロバブルシェル、空気、重質ガス（複数可）、ペルフルオロカーボン、窒素、オクタフルオロプロパン、パーフレキシン脂質ミクロスフェア、ペルフルトレンなどを含むマイクロバブルガスコア）、ヨード造影剤（例えば、イオヘキソール、イオジキサノール、イオベルソール、イオパミドール、イオキシラン、イプロマイド、ジアリーゾアート、メトリゾエート、イオキサグラート）、硫酸バリウム、二酸化トリウム、金、金ナノ粒子、金ナノ粒子凝集体、フルオロフォア、二光子フルオロフォア、または、例えば、標的ペプチドと特異的に反応するペプチドまたは抗体に放射性標識を組み込むことによって検出可能にすることができるハプテン及びタンパク質または他の実在物が含まれる。検出可能な部分はまた、標的薬剤（例えば、本明細書に記載の化合物）への結合のために誘導体化された、追加の組成物でコーティングされたナノ粒子、粒子、凝集体中に封入された上記組成物のいずれかを含む。オリゴヌクレオチドまたはタンパク質を標識に抱合させるために、当該分野で周知の任意の方法を用いることができ、例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １９９６，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏに記載されている方法を使用することができる。
本明細書で使用される場合、「細胞」は、そのゲノムＤＮＡを保存または複製するために十分な代謝または他の機能を実行する細胞を指す。細胞は、例えば、無傷膜の存在、特定の染料による染色、子孫を産生する能力、または配偶子の場合には、生存可能な子孫を産生するために第２の配偶子と結合する能力を含む、当技術分野で周知の方法によって特定することができる。細胞は、原核細胞及び真核細胞を含み得る。原核細胞としては、細菌が含まれるが、これに限定されない。真核細胞には、酵母細胞ならびに植物及び動物由来の細胞、例えば哺乳動物、昆虫（例えば、ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ）及びヒト細胞が含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、「細胞」という用語はまた、そのような細胞に由来する個々の細胞、細胞株、または培養物を指す。「培養物」は、同一または異なる型の単離された細胞を含む組成物を指す。
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈における「同一の」または「同一性」パーセントという用語は、後述するデフォルトパラメ－タを有するＢＬＡＳＴまたはＢＬＡＳＴ ２．０配列比較アルゴリズムを使用して、または手作業によるアライメント及び目視検査（例えば、ＮＣＢＩウェブサイト等参照）によって測定した場合と同じ、または特定の百分率（例えば、比較ウィンドウまたは指定された領域にわたって最大に一致するように比較及び整列されたとき、特定の領域に対して、約６０％の同一性、好ましくは６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の同一性）の同じアミノ酸残基またはヌクレオチドを有する２つ以上の配列または部分配列を指す。このときそのような配列は、「実質的に同一」であると言われる。この定義はまた、試験配列の補体を指しても、または試験配列の補体に適用されてもよい。定義には、欠失及び／または付加を有する配列、ならびに置換基を有する配列も含まれる。後述するように、好ましいアルゴリズムは、ギャップ等を説明することができる。好ましくは、同一性は、少なくとも約１０個のアミノ酸または２０個のヌクレオチド長、またはより好ましくは１０～５０個のアミノ酸または２０～５０個のヌクレオチド長である領域に対して存在する。本明細書で使用される場合、核酸配列同一性パ－セント（％）は、配列を整列させ、最大の配列同一性パーセントを達成するために必要に応じてギャップを導入した後に、基準配列中のヌクレオチドと同一である候補配列中のヌクレオチドの百分率として定義される。配列同一性パ－セントを決定するためのアライメントは、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当業者の技術範囲内の様々な方法で達成することができる。比較される配列の全長に対して最大のアライメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、アライメントを測定するための適切なパラメ－タは、周知の方法によって決定することができる。
配列比較のために、典型的には、１つの配列は、試験配列が比較される基準配列として作用する。配列比較アルゴリズムを使用するとき、試験及び基準配列をコンピュータに入力し、必要に応じて部分配列座標を指定し、配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。好ましくは、デフォルトプログラムパラメ－タを使用することができ、または代替パラメータを指定することができる。次いで、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づいて、基準配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを計算する。
「相補的」または「相補性」という用語は、伝統的なワトソン・クリックまたは他の非伝統的な型のいずれかによって別の核酸配列と水素結合（複数可）を形成する核酸の能力を指す。例えば、配列Ａ－Ｇ－Ｔは、配列Ｔ－Ｃ－Ａに相補的である。相補性パーセントは、第２の核酸配列と水素結合（例えば、ワトソン・クリック塩基対形成）を形成することができる核酸分子中の残基の百分率（例えば、１０個中の５、６、７、８、９、１０個は、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、及び１００％相補的となる）を示す。「完全に相補的」とは、核酸配列の全ての隣接残基が、第２の核酸配列中の同数の連続残基と水素結合することを意味する。本明細書で使用される場合、「実質的に相補的」とは、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、３０、３５、４０、４５、５０個、またはそれ以上のヌクレオチドの領域に対して、少なくとも６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％または１００％である相補性の程度を指し、またはストリンジェントな条件下でハイブリダイズする２つの核酸を指す。
本明細書で使用される場合、ハイブリダイゼ－ションのための「ストリンジェントな条件」とは、標的配列に対して相補性を有する核酸が標的配列と優勢にハイブリダイズし、非標的配列に実質的にハイブリダイズしない条件を指す。ストリンジェントな条件は、概して配列依存性であり、いくつかの要因によって変化する。概して、配列が長いほど、配列がその標的配列に特異的にハイブリダイズする温度が高くなる。ストリンジェントな条件の非限定的な例は、Ｔｉｊｓｓｅｎ（１９９３），Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ Ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ－Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ Ｗｉｔｈ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｐｒｏｂｅｓ Ｐａｒｔ １，Ｓｅｃｏｎｄ Ｃｈａｐｔｅｒ“Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔｒａｔｅｇｙ ｏｆ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｐｒｏｂｅ ａｓｓａｙ”，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．に詳細に記載されている。
「ハイブリダイゼ－ション」は、１つ以上のポリヌクレオチドが反応して、ヌクレオチド残基の塩基間の水素結合を介して安定化される複合体を形成する反応を指す。水素結合は、ワトソン・クリック塩基対形成、フーグスティーン（Ｈｏｏｇｓｔｅｉｎ）結合、または任意の他の配列特異的な様式によって生じ得る。複合体は、二重鎖構造を形成する２本鎖、多重鎖複合体を形成する３本以上の鎖、単一の自己１７ハイブリタイズ鎖、またはこれらの任意の組み合わせを含み得る。ハイブリダイゼ－ション反応は、ＰＣＲの開始、または酵素によるポリヌクレオチドの開裂などの、より広範なプロセスにおける１ステップを構成し得る。所与の配列とハイブリダイズすることができる配列は、所与の配列の「補体」と称される。
「患者」、「対象」、「それを必要とする患者」及び「それを必要とする対象」は、本明細書では互換的に使用され、また本明細書で提供される方法及び組成物を使用して投与することによって治療することができる疾患または病態に、罹患しているかまたはその傾向がある生存生物を指す。非限定的な例には、ヒト、他の哺乳動物の、ウシ、ラット、マウス、イヌ、サル、ヤギ、ヒツジ、ウシ、シカ、及び他の非哺乳類動物が含まれる。いくつかの実施形態において、患者はヒトである。インビトロで得られたまたはインビトロで培養された生物学的実在物の組織、細胞及びそれらの子孫もまた企図される。
本明細書で使用される場合、「投与する」という用語は、経口投与、坐剤としての投与、局所接触、静脈内、非経口、腹腔内、筋肉内、病巣内、髄腔内、鼻腔内もしくは皮下投与、または徐放デバイス、例えばミニ浸透圧ポンプの対象への埋め込みを意味する。投与は、非経口及び経粘膜（例えば、頬、舌下、口蓋、歯肉、鼻、膣、直腸または経皮）を含む、任意の経路による。非経口投与には、例えば、静脈内、筋肉内、細動脈内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内及び頭蓋内が含まれる。他の送達様式には、リポソ－ム製剤の使用、静脈内注入、経皮パッチなどが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書で使用される場合、「治療する」、「治療すること」または「治療」及び他の文法的同等語は、疾患、病態または症状を緩和、軽減、改善または予防すること、追加症状を予防し、症状の代謝性の基礎原因を予防しもしくは改善し、疾患または状態を阻害し、例えば、疾患または状態の進行を停止し、疾患または病態を緩和すること、疾患または病態を退行させ、疾患または病態によって引き起こされる状態を緩和し、または疾患または病態の症状を休止させることを含み、予防法を含むことが意図される。本用語は、治療的有用性及び／または予防的有用性を達成することをさらに含む。治療的有用性とは、治療される基礎疾患の根絶または改善を意味する。また、治療的有用性は、患者が依然として基礎疾患に罹患している可能性があるにもかかわらず、患者に改善が観察されるように、基礎疾患に関連する１つ以上の生理学的症状の根絶または改善によって達成される。
本明細書で使用される場合、「予防する」、「予防すること」または「予防」という用語及び他の文法上の等価物には、疾患または病態症状の発症、発生を避けること、妨害または回避すること、ならびに症状の発生を減少させることが含まれる。治療がない場合に発症する可能性が高い症状よりも少ない症状が観察されるように、予防は完全（すなわち、検出可能な症状がない）、または部分的であってもよい。本用語には、予防的有用性がさらに含まれる。疾患または状態を予防するために、本組成物は、特定の疾患を発症するリスクのある患者、または疾患の１つ以上の生理学的症状を訴える患者に、この疾患の診断が下されない可能性があったとしても投与されてもよい。
「阻害すること」という用語はまた、本開示の化合物または組成物の非存在下での状態に対する効果（遺伝子／タンパク質／ｍＲＮＡの疾患状態または発現レベル）を低下させることを意味する。
本明細書で使用される場合、「試験化合物」は、特定の生物学的標的もしくは経路の活性、非活性、または他の調節を特定するためのスクリーニングプロセスにおいて使用される実験化合物を指す。
「対照」または「対照実験」は、その一般的な通常の意味で使用され、実験の対象もしくは試薬が、実験の手順、試薬、または変数の省略を除いては、並行実験のように処理される実験を指す。場合によっては、対照は、実験効果を評価する際の比較の基準として使用される。いくつかの実施形態において、対照は、本明細書に記載されるような化合物の非存在下でのタンパク質の活性の測定である（実施形態及び実施例を含む）。
「疾患」または「病態」は、本明細書で提供される化合物または方法で治療することができる患者または対象の病態もしくは健康状態を指す。場合によっては、「疾患」または「病態」は「がん」を指す。
本明細書で使用される場合、「がん」という用語は、白血病、癌腫及び肉腫を含む、哺乳動物に見られる全ての型のがん、新生物、悪性腫瘍または良性腫瘍を指す。例示的ながんには、乳癌、卵巣癌、大腸癌、肝臓癌、腎臓癌、及び膵臓癌が含まれる。追加の例には、白血病（例えば、急性骨髄性白血病（「ＡＭＬ」）または慢性骨髄性白血病（「ＣＭＬ」））、脳癌、肺癌、非小細胞肺癌、メラノ－マ、肉腫、及び前立腺癌、子宮頸癌、胃癌、頭頸部癌、子宮癌、中皮腫、転移性骨癌、髄芽腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、原発性血小板増加症、原発性マクログロブリン血症、原発性脳腫瘍、悪性膵臓インスリノ－マ、悪性カルチノイド、膀胱癌、前悪性皮膚病変、精巣癌、リンパ腫、甲状腺癌、神経芽細胞腫、食道癌、尿生殖器癌、悪性高カルシウム血症、子宮内膜癌、副腎皮質癌、膵臓内分部及び外分泌部の新生物が含まれる。
自己免疫疾患は、身体の免疫系が健康な細胞を攻撃する疾患を指す。自己免疫疾患の例には、リウマチ性関節炎、乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＩＩ型糖尿病、非アルコール性脂肪肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、多発性硬化症（ＭＳ）、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）及び炎症性腸疾患（ＩＢＤ）が含まれるが、これらに限定されない。
感染性疾患とは、体内の有害生物（例えば、細菌、ウイルス、真菌または寄生虫）の増殖及び拡散によって引き起こされる医学的状態を指す。感染性疾患の例には、結核、インフルエンザ、エボラ出血熱、ＨＩＶ、ＨＰＶ感染、及び肝炎が含まれるが、これらに限定されない。
「接触すること」は、その一般的な通常の意味に従って使用され、少なくとも２つの異なる種（例えば、生体分子または細胞を含む化学化合物）が、反応、相互作用、または物理的に触れるために十分に接近することを可能にするプロセスを指す。しかしながら、得られた反応生成物は、添加された試薬間の反応から、または反応混合物中で生成することができる１つ以上の添加された試薬に由来する中間体から直接的に生成することができることを理解されたい。いくつかの実施形態において、接触することは、本明細書に記載の化合物をタンパク質または酵素と相互作用させることを含む。
本明細書で使用される場合、「表現型」及び「表現型の」という用語は、疾患症状の発症もしくは進行、生化学的特性、または生理学的特性などの生物の観察可能な特徴を指す。
ＤＮＡ核酸配列（例えば、遺伝子）に関して本明細書で使用される場合、「発現」または「発現された」という単語は、その配列の転写産物及び／または翻訳産物を意味する。細胞内のＤＮＡ分子の発現レベルは、細胞内に存在する対応するｍＲＮＡの量、または細胞によって産生されるそのＤＮＡによってコードされるタンパク質の量のいずれかに基づいて決定することができる（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，１８．１－１８．８８）。ポリペプチドに関して使用されるとき、発現には、転写、転写後修飾、翻訳、翻訳後修飾、及び分泌を含むがこれらに限定されないポリペプチドの産生に関与する任意のステップが含まれる。発現は、タンパク質を検出するための従来の技術（例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット法、フローサイトメトリー、免疫蛍光、免疫組織化学法など）を用いて検出することができる。
「遺伝子」という用語は、タンパク質の産生に関与するＤＮＡのセグメントを意味し、それは、コード領域の前後の領域（リーダ及びトレーラ）ならびに個々のコードセグメント（エクソン）間の介在配列（イントロン）を含む。リーダ、トレーラならびにイントロンは、遺伝子の転写及び翻訳の間に必要な調節要素を含む。さらに、「タンパク質遺伝子産物」は、特定の遺伝子から発現されるタンパク質である。
本明細書に記載された特定のタンパク質（例えば、ＣＤ３４またはＣＤ３８）に関して、命名されたタンパク質は、タンパク質の天然由来の形態、変異体または相同体のいずれかを含む（例えば、ネイティブタンパク質と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性内）。いくつかの実施形態において、変異体または相同体は、天然由来の形態と比較して、配列全体または配列の一部（例えば、５０、１００、１５０または２００個の連続したアミノ酸部分）に対して少なくとも９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有する。他の実施形態において、タンパク質は、そのＮＣＢＩ配列基準によって特定されるタンパク質である。他の実施形態において、タンパク質は、そのＮＣＢＩ配列基準、その相同体または機能的断片によって特定されるタンパク質である。
「ＣＤ３４」という用語は、ヒトにおけるＣＤ３４遺伝子によってコードされるＣＤ３４抗原としても知られる造血性前駆細胞抗原ＣＤ３４を指す。それは細胞表面糖タンパク質であり、細胞－細胞接着因子として機能する。本明細書で提供される場合、「ＣＤ３４」という用語は、ＣＤ３４の活性を維持する天然由来のＣＤ３４タンパク質、相同体または変異体のいずれかを含む（例えば、ナイーブタンパク質と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性内）。実施形態において、変異体または相同体は、天然由来の形態と比較して、配列全体または配列の一部（例えば、５０、１００、１５０または２００個の連続したアミノ酸部分）に対して少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＣＤ３４タンパク質は、ＮＣＢＩ配列基準ＮＰ＿００１７６４またはＮＰ＿００１０２０２８０．１、その相同体または機能的断片によって特定されるタンパク質である。
「ＣＤ３８」という用語は、ヒトにおけるＣＤ３８遺伝子によってコードされる環状ＡＤＰリボ－ス加水分解酵素としても知られる分化抗原分類３８（ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ３８）を指す。それは細胞表面糖タンパク質であり、細胞－細胞接着及びシグナル伝達において機能する。本明細書で提供される場合、「ＣＤ３８」という用語は、ＣＤ３８の活性を維持する天然由来のＣＤ３８タンパク質、相同体または変異体のいずれかを含む（例えば、ネイティブタンパク質と比較して少なくとも５０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の活性内）。実施形態において、変異体または相同体は、天然由来の形態と比較して、配列全体または配列の一部（例えば、５０、１００、１５０または２００個の連続したアミノ酸部分）に対して少なくとも５０％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％のアミノ酸配列同一性を有する。実施形態において、ＣＤ３８タンパク質は、ＮＣＢＩ配列標準号ＮＰ＿００１７６６．２、その相同体または機能的断片によって特定されるタンパク質である。
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドに関して「～の量」という用語は、成分または要素が検出される量を指す。この量は、対照に対して測定することができ、例えば、対照と比較した特定のポリヌクレオチドまたはポリペプチドのレベルの増加は、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの富化を示す。これにより、実施形態において、増加した量は、本明細書に記載のＨＳＰＣを宿主（例えば、マウス）に移植するより高いレベルまたは効率を示す。本用語は、濃縮物の定量的測定ならびに対照と比較した増加または減少の定性的測定を指す。
本明細書の説明及び特許請求の範囲の全体にわたって、語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」及び「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」や「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」などの他の形態は、含むことを意味するがこれに限定されず、例えば、他の構成要素を排除することを意図するものではない。
「類似物（ａｎａｌｏｇ）」、「類似体（ａｎａｌｏｇｕｅ）」、または「誘導体」は、化学及び生物学の一般的な通常の意味に従って使用され、別の薬剤（すなわち、いわゆる「参照」薬剤）と構造的に類似している化学薬剤を指すが、例えば、１つの原子を異なる元素の原子で置換する場合、または特定の官能基が存在する場合、または１つの官能基を別の官能基で置換する場合、または参照薬剤のキラル中心の絶対立体化学である場合、組成が異なる。いくつかの実施形態において、誘導体は、薬学的に許容される薬剤、例えばリン酸塩またはホスホン酸塩と抱合されてもよい。
本明細書で使用される場合、「塩」という用語は、本明細書で使用される薬剤の酸または塩基塩を指す。許容される塩の例示的であるが非限定的な例は、鉱酸（塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸など）塩、有機酸（酢酸、プロピオン酸、グルタミン酸、クエン酸など）塩、及び第４級アンモニウム（ヨウ化メチル、ヨウ化エチルなど）塩である。
「薬学的に許容される塩」という用語は、本明細書に記載の化合物に見られる特定の置換基に応じて、比較的非毒性の酸または塩基で調製される活性化合物の塩を含むことを意味する。本開示の化合物が比較的酸性の官能基を含むとき、塩基付加塩は、そのような化合物の中性形態を、無溶媒で、または適切な不活性溶媒中で十分な量の所望の塩基と接触させることによって得ることができる。薬学的に許容される塩基付加塩の例には、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノ、またはマグネシウム塩、もしくは同様の塩が含まれる。本開示の化合物が比較的塩基性の官能基を含むとき、酸付加塩は、そのような化合物の中性形態を、無溶媒で、または適切な不活性溶媒中で十分な量の酸と接触させることによって得ることができる。薬学的に許容される酸付加塩の例には、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、一酸化炭素、リン酸、一水素リン酸、二水素リン酸、硫酸、一水素硫酸、ヨウ化水素酸、または亜リン酸などのような無機酸から誘導されるもの、ならびに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、乳酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などのような比較的無毒性の有機酸から誘導される塩が含まれる。また、例えばアルギン酸塩などのアミノ酸の塩、及びグルクロン酸またはガラクツロン酸などのような有機酸の塩も含まれる（例えば、Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ６６：１－１９（１９７７）を参照されたい）。本開示のある特定の化合物は、化合物が塩基または酸付加塩のいずれかに変換されることを可能にする塩基性官能基及び酸性官能基の両方を含む。当業者に周知の他の薬学的に許容される担体は、本開示に好適である。塩は、対応する遊離塩基形態である水性または他のプロトン性溶媒中により可溶性である傾向がある。他の場合には、調製物は、使用前に緩衝液と混合された、１ｍＭ～５０ｍＭヒスチジン、０．１％～２％スクロ－ス、ｐＨ範囲４．５～５．５の２％～７％マンニト－ル中の凍結乾燥粉末であってもよい。
したがって、本開示の化合物は、薬学的に許容される酸などの塩として存在し得る。本開示は、そのような塩を含む。そのような塩の例には、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、硝酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩（例えば、（＋）－酒石酸塩、（－）－酒石酸塩、またはラセミ混合物を含むそれらの混合物）、コハク酸塩、安息香酸塩、及びグルタミン酸などのアミノ酸との塩が含まれる。これらの塩は、当業者に既知の方法によって調製することができる。
「アジュバント」（補助する、という意味のラテン語のａｄｉｕｖａｒｅに由来）は、他の薬剤の効果を改変する薬理学的及び／または免疫学的薬剤である。
「希釈剤」（充填剤、賦形剤またはシンナーとも称される）は、希釈用薬剤である。特定の流体は簡単にポンプ圧送できないほど粘度が高いか、またはある特定の点から他の特定の点へ流れないほど高密度である。そのような流体をこの状態で移送することが経済的に実現可能でない可能性があるため、これは問題となり得る。この制限された動きを容易にするために、希釈剤が添加される。これは、流体の粘度を低下させ、それによって、ポンプ圧送／移送コストも減少させる。
「投与」または「投与する」という用語は、現行の実施形態の薬剤または現行の実施形態の薬剤を含む医薬組成物を、治療が必要な個体に提供する行為を指す。
「併用投与する」とは、本明細書に記載の組成物が、追加の療法の投与と同時に、直前に、または直後に投与されることを意味する。本開示の化合物または組成物は、患者に単独で投与することができるか、または併用投与することができる。併用投与は、化合物を個別にまたは（２つ以上の化合物または薬剤を）組み合わせて、同時にまたは逐次的に投与することを含むことを意味する。所望であれば、（例えば、代謝分解を減少させる）他の活性物質と組み合わせることもできる。
本明細書で使用される場合、「逐次投与」は、２つの薬剤（例えば、本明細書に記載の化合物または組成物）の投与が、同じ日に別々に行われるか、または同じ日には行われない（すなわち、連日に行われる）ことを含む。
本明細書で使用される場合、「同時投与」は、持続時間において少なくとも部分的には重複することを含む。例えば、２つの薬剤（例えば、生物活性を有する本明細書に記載されるいずれかの薬剤または薬剤の部類）が同時に投与されるとき、それらの投与は、ある特定の所望の特定の時間内に行われる。薬剤の投与は、同じ日に開始して終了してもよい。１つの薬剤の投与は、両方の薬剤が同じ日に少なくとも１回服用される限り、第２の薬剤の投与を１日（複数可）前に行うこともできる。同様に、１つの薬剤の投与は、両方の薬剤が同じ日に少なくとも１回服用される限り、第２の薬剤の投与を超えて延長することができる。生物活性剤／薬剤は、同時投与を含むために毎日同じ時間に服用する必要はない。
本明細書で使用される場合、「間欠投与」には、一定期間（「第１の投与期間」とみなすことができる）の薬剤の投与、その後の薬剤を摂取しないか、またはより低い維持量で摂取する時間（「オフ期間」とみなすことができる）、その後に薬剤が再度投与される期間（「第２の投与期間」とみなすことができる）が含まれる。概して、第２の投与段階の間、薬剤の投与量レベルは、投与の第１の期間中に投与される量と一致するが、医学的に必要な場合に増加または減少させることができる。
本明細書で使用される場合、「投与する」という用語は、経口投与、座剤としての投与、局所接触、静脈内、非経口、腹腔内、筋肉内、病巣内、髄腔内、鼻腔内または皮下投与、または徐放デバイス、例えばミニ浸透圧ポンプの対象への埋め込みを意味する。投与は、非経口及び経粘膜（例えば、頬側、舌下、口蓋、歯肉、鼻、膣、直腸または経皮）を含む、任意の経路による。非経口投与には、例えば、静脈内、筋肉内、細動脈内、皮内、皮下、腹腔内、脳室内及びが含まれる。他の送達様式には、リポソ－ム製剤の使用、静脈内注入、経皮パッチなどが含まれるが、これらに限定されない。
本明細書中に開示される組成物は、塗布棒、溶液、懸濁液、乳剤、ゲル、クリーム、軟膏、ペースト、ゼリー、塗料、粉末、及びエアロゾルとして製剤化されて、局所経路によって経皮的に送達され得る。経口製剤には、錠剤、丸剤、粉剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、トローチ剤、カシェ剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁液など、患者の摂取に適したものが含まれる。固形製剤には、粉剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤及び分散性顆粒剤が含まれる。液状製剤には、溶液、懸濁液、及び乳剤、例えば、水または水／プロピレングリコ－ル溶液が含まれる。本開示の組成物は、追加的に持続性放出及び／または快適さを提供する成分を含み得る。そのような成分には、高分子量、陰イオン性の粘液模倣剤ポリマー、ゲル化多糖類及び細分化された薬物担体基剤が含まれる。これらの成分は、米国特許第４，９１１，９２０号、同第５，４０３，８４１号、同第５，２１２，１６２号、及び同第４，８６１，７６０号にさらに詳細に論議されている。これらの特許の全内容は、全ての目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。本明細書に開示された組成物は、体内で徐放するための微細球として送達することもできる。例えば、微細球は、生分解性及び注射用ゲル製剤（例えば、Ｇａｏ Ｐｈａｎｎ．Ｒｅｓ．１２：８５７－８６３，１９９５を参照されたい）、または経口投与のための微細球として（例えば、Ｅｙｌｅｓ，Ｊ．Ｐｈａｎｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４９：６６９－６７４，１９９７を参照されたい）、皮下的に徐放する（Ｒａｏ，Ｊ．Ｂｉｏｎｉａｔｅｒ Ｓｃｉ．Ｐｏｌｙｍ．Ｅｄ．７：６２３－６４５，１９９５を参照されたい）薬物含有微細球の皮内注射を介して投与することができる。
本明細書で使用される場合、「有効量」または「治療有効量」は、臨床結果を含む有益な結果などの所望の生物学的効果に影響を及ぼすために十分な量である。かくして、「有効量」は、それが適用されている文脈に依存する。有効量は、治療される個体の疾患状態、年齢、性別、及び体重などの、当技術分野において既知の因子によって変化し得る。いくつかの分割用量を毎日投与してもよく、または治療状況の緊急性によって示されるように用量を比例的に減少させてもよい。加えて、本開示の組成物／製剤は、治療量を達成するために必要な頻度で投与することができる。
医薬組成物は、治療薬（例えば、実施形態または実施例を含む本明細書に記載の薬剤）が治療有効量で、すなわちその意図された目的を達成するための有効な量で含まれる組成物を含み得る。特定の用途のための有効な実際の量は、とりわけ、治療される病態に依存する。疾患を治療するための方法で投与されるとき、そのような組成物は、所望の結果、例えば、標的分子の活性を調節する、及び／または疾患症状の進行を軽減する、排除する、または遅らせることを達成するために有効な治療薬の量を含む。
哺乳動物に投与される投与量及び頻度（単回または複数回投与）は、様々な因子、例えば、哺乳動物が別の疾患及びその投与経路に患っているかどうか、レシピエントのサイズ、年齢、性別、健康状態、体重、体格指数、及び食事、治療される疾患の症状の性質及び程度、併用治療の種類、治療されている疾患の合併症または他の健康関連の問題に依存して変化し得る。他の治療レジメンまたは薬剤は、本開示の方法及び薬剤と併用することができる。確立された投薬量（例えば、頻度及び持続時間）の調節及び操作は、十分に当業者の能力の範囲内である。
本明細書中に記載される任意の治療薬剤について、治療有効量は、最初に、細胞培養アッセイから決定され得る。標的濃度は、本明細書に記載の、または当技術分野において既知の方法を用いて測定されるような、本明細書に記載の方法を達成することができる治療薬（複数可）の濃度である。
当技術分野において周知のように、ヒトにおいて使用するための治療有効量は、動物モデルから決定することもできる。例えば、ヒトのための用量は、動物において有効であることが分かっている濃度を達成するように製剤化することができる。ヒトの用量は、上記のように、薬剤の有効性を監視し、用量を上向きまたは下向きに調節することによって調整することができる。上記の方法及び他の方法に基づいて、ヒトにおいて最大の有効性を達成するために用量を調節することは、十分に当業者の能力の範囲内である。
投与量は、用いられる患者及び治療薬の必要条件に応じて変化し得る。患者に投与される用量は、時間の経過とともに患者に有益な治療応答をもたらすために十分であるべきである。用量のサイズはまた、任意の有害な副作用の存在、性質及び程度によって決定されよう。特定の状況のための適切な投与量の決定は、施術者の技術の範囲内である。概して、治療は、薬剤の最適用量よりも少ない、より少ない用量で開始される。その後、状況下で最適な効果に達するまで、用量は少しずつ増加される。投与量及び間隔は、治療される特定の臨床的適応に対して有効な、投与された薬剤のレベルを提供するために個々に調整することができる。これは、個体の疾患状態の重篤度に見合った治療レジメンを提供する。
成分の重量パ－セントは、特に断らない限り、成分が含まれる製剤または組成物の総重量に基づく。
「賦形剤」は、本明細書では、賦形剤が治療上または生物学的に活性な薬剤／薬剤ではない、開示された薬剤中に含まれるか、または開示された薬剤と組み合わせることができる他の薬剤を含むために使用される。したがって、賦形剤は、薬学的または生物学的に許容され得るかまたは関連しているべきである（例えば、賦形剤は概して個体にとって無毒であるべきである）。「賦形剤」は単一のそのような薬剤を含み、また複数の賦形剤も含むことが意図される。本開示の目的のために、「賦形剤」及び「担体」という用語は、本開示のいくつかの実施形態において互換的に使用され、該用語は、本明細書では、「安全かつ有効な医薬組成物の製剤化の実践において使用される成分」として定義される。
「約」という用語は、製剤の調製及び疾患または障害の治療において薬剤の有効性を変化させない薬剤の濃度または量における任意の最小限の変化を指す。本開示の薬剤（例えば、治療剤／活性剤）の濃度範囲に関する「約」という用語はまた、有効量または範囲である所定の量または範囲の任意の変化を指す。
範囲は、「約」１つの特定の値から、及び／または「約」別の特定の値までとして本明細書で表すことができる。そのように範囲が表される場合、別の態様は、特定の１つの値から、及び／または他の特定の値までを含む。同様に、値が近似値として表現されるとき、先行する「約」の使用によって、特定の値が別の態様を形成することが理解される。さらに、各範囲の終点は、他方の終点に関して重要であり、他方の終点とは独立していることがさらに理解される。また、本明細書に開示されているいくつかの値があり、各値は、値それ自体に加えてその特定の値について「約」として開示されていることも理解される。また、本出願全体にわたって、多数の異なる様式でデータが提供され、このデータは、データ点の任意の組み合わせに対する終点及び開始点及び範囲を表すことも理解される。例えば、特定のデータ点「１０」及び特定のデータ点「１５」が開示されている場合、１０及び１５を超える、それら以上、それら未満、それらより小さいか等しい、及び等しいとみなされ、ならびに１０から１５の間で開示されるとみなされる。２つの特定の単位間の各単位もまた開示されることも理解される。例えば、１０及び１５が開示されるならば、このときは、１１、１２、１３、及び１４もまた開示される。
化合物
一態様において、抗マイクロＲＮＡ（抗ｍｉＲ）またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）擬態核酸配列（ｍｉＲＮＡ－ミミック）に抱合されたホスホロチオエ－ト化ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物が本明細書で提供される。実施形態において、ＣｐＧ－ＯＤＮは、１５～３０個の塩基（核酸塩基）長の、一本鎖の、部分的または完全にホスホロチオエ－ト化されたオリゴデオキシヌクレオチドである。
一態様において、抗マイクロＲＮＡ（抗ｍｉＲ）配列を含む化合物が本明細書に提供され、抗ｍｉＲ配列は、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０個、またはそれ以上）のホスホロチオエ－ト結合と、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０個、またはそれ以上）の化学的に修飾されたヌクレオチドとを含む。
実施形態において、本化合物は、抗ｍｉＲに抱合された、配列番号１～１４のうちの１つの少なくとも１５個の核酸塩基連続配列と、約８０％～１００％（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有する核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む。実施形態において、本化合物は、抗ｍｉＲに抱合された、配列番号１～１４のうちの１つと約８０％～１００％（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有する核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む。実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合された配列番号１～１４のうちの１つの少なくとも１５個の核酸塩基連続配列と、約８０％～約１００％（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％）の配列同一性を有する核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物が本明細書で提供される。実施形態において、本化合物は、ｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合された配列番号１～１４の１つと約８０％～１００％（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の配列同一性を有する核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む。実施形態において、核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）は１５～３０個（例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個）の塩基長の、一本鎖の、部分的または完全にホスホロチオエ－ト化されたオリゴデオキシヌクレオチドである。
実施形態において、本開示の化合物は、抗ｍｉＲまたはｍｉＲＮＡ－ミミックと抱合された配列番号１～１４のうちの１つの少なくとも１５個の核酸塩基連続配列と、約８０～８５％、約８５～９０％、約９０～９５％、約９５～１００％の配列同一性を有する核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む。実施形態において、本開示の化合物は、抗ｍｉＲまたはｍｉＲＮＡ－ミミックと抱合された配列番号１～１４のうち１つと、約８０～８５％、約８５～９０％、約９０～９５％、約９５～１００％の配列同一性を有する核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む。実施形態において、核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）は１５～３０個（例えば、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、または３０個）の塩基長の、一本鎖の、部分的または完全にホスホロチオエート化されたオリゴデオキシヌクレオチドである。
実施形態において、抗ｍｉＲは抗ｍｉＲ１２６である。実施形態において、抗ｍｉＲは抗ｍｉＲ１５５である。実施形態において、抗ｍｉＲは抗Ｒ１２５ｂである。実施形態において、抗ｍｉＲは抗ｍｉＲ１４６ａである。実施形態において、抗ｍｉＲは抗ｍｉＲ９である。実施形態において、抗ｍｉＲは抗ｍｉＲ１４２である。実施形態において、抗ｍｉＲは抗ｍｉＲ１０ｂである。実施形態において、抗ｍｉＲは抗ｍｉＲ２１である。実施形態において、抗ｍｉＲは抗ｍｉＲ１７である。実施形態において、抗ｍｉＲは抗ｍｉＲ９２である。
実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックはｍｉＲ１２６－ミミックである。実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックはｍｉＲ１５５－ミミックである。実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックはＲ１２５ｂ－ミミックである。実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックは、ｍｉＲ１４６ａ－ミミックである。実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックはｍｉＲ９－ミミックである。実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックはｍｉＲ１４２－ミミックである。実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックはｍｉＲ１０ｂ－ミミックである。実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックはｍｉＲ２１－ミミックである。実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックはｍｉＲ１７－ミミックである。実施形態において、ｍｉＲＮＡ－ミミックはｍｉＲ９２－ミミックである。
配列番号１～１４の核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を表１に列挙する。
Figure 2022081575000001
実施形態において、抗ｍｉＲＮＡ配列は、抗ｍｉＲ１２６、抗ｍｉＲ１４２、抗ｍｉＲ１５５、抗ｍｉＲ１２５ｂ、抗ｍｉＲ１４６ａ、抗ｍｉＲ９、抗ｍｉＲ１０ｂ、抗ｍｉＲ１７、抗ｍｉＲ１８、抗ｍｉＲ１９、抗ｍｉＲ２０、抗ｍｉＲ２１、抗ｍｉＲ２２、抗ｍｉＲ２３、抗ｍｉＲ２４、抗ｍｉＲ２５、抗ｍｉＲ２６、抗ｍｉＲ２７、抗ｍｉＲ２８、抗ｍｉＲ２９、抗ｍｉＲ３０、抗ｍｉＲ３１、抗ｍｉＲ３２、抗ｍｉＲ３３、抗ｍｉＲ３４、抗ｍｉＲ３５、抗ｍｉＲ３６、抗ｍｉＲ３７、抗ｍｉＲ３８、抗ｍｉＲ３９、抗ｍｉＲ４０、抗ｍｉＲ４１、抗ｍｉＲ４２、抗ｍｉＲ４３、抗ｍｉＲ４４、抗ｍｉＲ４５、抗ｍｉＲ４６、抗ｍｉＲ４７、抗ｍｉＲ４８、抗ｍｉＲ４９、抗ｍｉＲ５０、抗ｍｉＲ５１、抗ｍｉＲ５２、抗ｍｉＲ５３、抗ｍｉＲ５４、抗ｍｉＲ５５、抗ｍｉＲ５６、抗ｍｉＲ５７、抗ｍｉＲ５８、抗ｍｉＲ５９、抗ｍｉＲ６０、抗ｍｉＲ６１、抗ｍｉＲ６２、抗ｍｉＲ６３、抗ｍｉＲ６４、抗ｍｉＲ６５、抗ｍｉＲ６６、抗ｍｉＲ６７、抗ｍｉＲ６８、抗ｍｉＲ６９、抗ｍｉＲ７０、抗ｍｉＲ７１、抗ｍｉＲ７２、抗ｍｉＲ７３、抗ｍｉＲ７４、抗ｍｉＲ７５、抗ｍｉＲ７６、抗ｍｉＲ７７、抗ｍｉＲ７８、抗ｍｉＲ７９、抗ｍｉＲ８０、抗ｍｉＲ８１、抗ｍｉＲ８２、抗ｍｉＲ８３、抗ｍｉＲ８４、抗ｍｉＲ８５、抗ｍｉＲ８６、抗ｍｉＲ８７、抗ｍｉＲ８８、抗ｍｉＲ８９、抗ｍｉＲ９０、抗ｍｉＲ９１、または抗ｍｉＲ９２核酸配列である。
実施形態において、本開示の化合物のミミックは、ｍｉＲ１２６－ミミック、ｍｉＲ１４２－ミミック、ｍｉＲ１５５－ミミック、ｍｉＲ１２５ｂ－ミミック、ｍｉＲ１４６ａ－ミミック、ｍｉＲ９－ミミック、ｍｉＲ１０ｂ－ミミック、ｍｉＲ１７－ミミック、ｍｉＲ１８－ミミック、ｍｉＲ１９－ミミック、ｍｉＲ２０－ミミック、ｍｉＲ２１－ミミック、ｍｉＲ２２－ミミック、ｍｉＲ２３－ミミック、ｍｉＲ２４－ミミック、ｍｉＲ２５－ミミック、ｍｉＲ２６－ミミック、ｍｉＲ２７－ミミック、ｍｉＲ２８－ミミック、ｍｉＲ２９－ミミック、ｍｉＲ３０－ミミック、ｍｉＲ３１－ミミック、ｍｉＲ３２－ミミック、ｍｉＲ３３－ミミック、ｍｉＲ３４－ミミック、ｍｉＲ３５－ミミック、ｍｉＲ３６－ミミック、ｍｉＲ３７－ミミック、ｍｉＲ３８－ミミック、ｍｉＲ３９－ミミック、ｍｉＲ４０－ミミック、ｍｉＲ４１－ミミック、ｍｉＲ４２－ミミック、ｍｉＲ４３－ミミック、ｍｉＲ４４－ミミック、ｍｉＲ４５－ミミック、ｍｉＲ４６－ミミック、ｍｉＲ４７－ミミック、ｍｉＲ４８－ミミック、ｍｉＲ４９－ミミック、ｍｉＲ５０－ミミック、ｍｉＲ５１－ミミック、ｍｉＲ５２－ミミック、ｍｉＲ５３－ミミック、ｍｉＲ５４－ミミック、ｍｉＲ５５－ミミック、ｍｉＲ５６－ミミック、ｍｉＲ５７－ミミック、ｍｉＲ５８－ミミック、ｍｉＲ５９－ミミック、ｍｉＲ６０－ミミック、ｍｉＲ６１－ミミック、ｍｉＲ６２－ミミック、ｍｉＲ６３－ミミック、ｍｉＲ６４－ミミック、ｍｉＲ６５－ミミック、ｍｉＲ６６－ミミック、ｍｉＲ６７－ミミック、ｍｉＲ６８－ミミック、ｍｉＲ６９－ミミック、ｍｉＲ７０ミミック、ｍｉＲ７１－ミミック、ｍｉＲ７２－ミミック、ｍｉＲ７３－ミミック、ｍｉＲ７４－ミミック、ｍｉＲ７５－ミミック、ｍｉＲ７６－ミミック、ｍｉＲ７７－ミミック、ｍｉＲ７８－ミミック、ｍｉＲ７９－ミミック、ｍｉＲ８０－ミミック、ｍｉＲ８１－ミミック、ｍｉＲ８２－ミミック、ｍｉＲ８３－ミミック、ｍｉＲ８４－ミミック、ｍｉＲ８５－ミミック、ｍｉＲ８６－ミミック、ｍｉＲ８７－ミミック、ｍｉＲ８８－ミミック、ｍｉＲ８９－ミミック、ｍｉＲ９０－ミミック、ｍｉＲ９１－ミミック、またはｍｉＲ９２－ミミック核酸配列である。
実施形態において、配列：５’Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１）ｘｘｘｘｘＣＧＣＡＵＵＡＵＵＡＣＵＣＡＣＧＧＵＡＣＧＡ（配列番号１６）３’であって、ｘｘｘｘｘが、本明細書に記載されている１つ以上のリンカーを示す配列を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１２６に連結する化合物が本明細書に提供される。実施形態において、配列：５’Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１）ｘｘｘｘｘｍＣｍＧｍＣｍＡｍＵｍＵｍＡｍＵｍＵｍＡｍＣｍＵｍＣｍＡｍＣｍＧｍＧｍＵｍＡｍＣｍＧｍＡ（配列番号１７）３’であって、ｘｘｘｘｘが、本明細書に記載されている１つ以上のリンカーを示す配列を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１２６に連結する化合物が、本明細書に提供される。
実施形態において、配列：５’Ｇ＊ＧＴＧＣＡＴＧＣＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号２）ｘｘｘｘｘＣＧＣＡＵＵＡＵＵＡＣＵＣＡＣＧＧＵＡＣＧＡ（配列番号１６）３’を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１２６に連結する化合物が本明細書に提供される。実施形態において、配列：５’Ｇ＊ＧＴＧＣＡＴＧＣＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号２）ｘｘｘｘｘｍＣｍＧｍＣｍＡｍＵｍＵｍＡｍＵｍＵｍＡｍＣｍＵｍＣｍＡｍＣｍＧｍＧｍＵｍＡｍＣｍＧｍＡ（配列番号１７）３’であって、式中ｘｘｘｘｘが、本明細書に記載されている１つ以上のリンカーを示す配列を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１２６に連結する化合物が本明細書に提供される。
実施形態において、配列：５’Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ａ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ａ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号３）ｘｘｘｘｘＣＧＣＡＵＵＡＵＵＡＣＵＣＡＣＧＧＵＡＣＧＡ（配列番号１６）３’を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１２６に連結する化合物が本明細書に提供される。実施形態において、配列：５’Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ａ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ａ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号３）ｘｘｘｘｘｍＣｍＧｍＣｍＡｍＵｍＵｍＡｍＵｍＵｍＡｍＣｍＵｍＣｍＡｍＣｍＧｍＧｍＵｍＡｍＣｍＧｍＡ（配列番号１７）３’であって、式中ｘｘｘｘｘが、本明細書に記載されている１つ以上のリンカーを示す配列を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１２６に連結する化合物が本明細書に提供される。実施形態において、配列：５’Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ａ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ａ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号３）ｘｘｘｘｘｍＣ＊ｍＧ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＵ＊ｍＵ＊ｍＡ＊ｍＵ＊ｍＵ＊ｍＡ＊ｍＣ＊ｍＵ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＣ＊ｍＧ＊ｍＧ＊ｍＵ＊ｍＡ＊ｍＣ＊ｍＧ＊ｍＡ（配列番号４８）３’であって、式中ｘｘｘｘｘが、本明細書に記載されている１つ以上のリンカーを示す配列を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１２６に連結する化合物が本明細書に提供される。
例示的なｍｉＲ１２６－ミミック配列を、表２に列挙する。
Figure 2022081575000002
実施形態において、本明細書に記載される（例えば、表２、３、及び４（下記））「ｘｘｘｘｘ」などで表されるリンカーは、結合、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換アルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアリーレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のシクロヘテロアルキレン、または－（ＣＨ２）ｎ－ＰＯ４－［（ＣＨ２）ｎ－ＰＯ４］ｚ－（ＣＨ２）ｎ（この中で、記号ｎは１～５（例えば、３）の整数であり、記号ｚは０～５０（例えば、０～２５、０～１０、または０～５）の整数である）である。実施形態において、ｎは３であり、ｚは０～５または１～５である。実施形態において、ｎは３であり、ｚは０～４または１～４である。実施形態において、ｎは３であり、ｚは０～３または１～３である。実施形態において、ｎは３であり、ｚは３である。２’ＯＭｅ（２’－Ｏ－メチルヌクレオシドは、２’－Ｏメチルで置き換えられた２’位のヒドロキシルであり；ＰＳはホスホロチオエ－ト化である。１つの非架橋酸素がイオウで置き換えられているＰＳ＋３は、修飾された配列中の３つのリン酸を表し、１つの非架橋酸素がイオウで置換されており；ＰＳ＋５は修飾された配列中の５個のリン酸を表し、１つの非架橋酸素がイオウで置き換えられている。
例えば、以下に示すように、実施形態において、本開示の配列のホスホロチオエート化オリゴヌクレオチド中の核酸塩基は、ホスホロチオエートヌクレオチド間結合を含み得る。そのようなホスホロチオエート化オリゴヌクレオチドの一部を以下に示す。
Figure 2022081575000003
リンカーは、以下の構造を有することができ、ここで、リンカーは一方の末端のグアニンの３’リン酸と他方の末端のチミジンの５’リン酸とに結合し、アンチセンス部分の核酸塩基は２’ＯＭｅで修飾されてもよい。
Figure 2022081575000004
上記の式は、アンチセンスＲＮＡの５’リン酸に連結する、（ＣＨ２）３リンカー（本明細書ではＣ３リンカーとも称される）で３’－ＯＨ末端に結合したＣｐＧ－ＯＤＮの一部を表す。
リンカーは、結合、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換アルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）または非置換のヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアリーレン、置換もしくは非置換のヘテロアリーレンであってもよい。
実施形態において、本開示は、配列：５’Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１）ｘｘｘｘｘＵＣＣＡＵＡＡＡＧＵＡＧＧＡＡＡＣＡＣＵＡＣＡ（配列番号２２）３’を有する、本開示のホスホロチオエ－ト化オリゴヌクレオチドを抗ｍｉＲ１４２に連結する組成物を含む。ｍｉＲ１４２－ミミックを表３に列挙する。
Figure 2022081575000005
実施形態において、配列：５’Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１）ｘｘｘｘｘＵＧＵＵＡＡＵＧＣＵＡＡＵＡＵＧＵＡＧＧＡＧ（配列番号２６）３’を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１５５に連結する組成物が本明細書に提供される。実施形態において、配列：５’Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１）ｘｘｘｘｘＡＣＣＣＣＴＡＴＣＡＣＡＡＴＴＡＧＣＡＴＴＡＡ（配列番号２７）３’を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１５５に連結する組成物が本明細書に提供され、配列番号２７におけるヌクレオチドＴは、ヌクレオチドＵで置換され得る。実施形態において、本明細書に記載される化合物は、配列：５’Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１）ｘｘｘｘｘｍＡ＊ｍＣ＊ｍＣ＊ｍＣ＊ｍＣ＊ｍＵ＊ｍＡ＊ｍＵ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＡ＊ｍＵ＊ｍＵ＊ｍＡ＊ｍＧ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＵ＊ｍＵ＊ｍＡ＊ｍＡ（配列番号２８）３’を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１５５に連結する組成物を含む。実施形態において、配列：５’Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号１１）ｘｘｘｘｘＡＣＣＣＣＴＡＴＣＡＣＡＡＴＴＡＧＣＡＴＴＡＡ（配列番号２７）３’を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１５５に連結する組成物が本明細書に提供される。実施形態において、配列：５’Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ（配列番号１１）ｘｘｘｘｘｍＡ＊ｍＣ＊ｍＣ＊ｍＣ＊ｍＣ＊ｍＵ＊ｍＡ＊ｍＵ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＡ＊ｍＵ＊ｍＵ＊ｍＡ＊ｍＧ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＵ＊ｍＵ＊ｍＡ＊ｍＡ（配列番号２８）３’を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１５５に連結する組成物が本明細書に提供される。ｍｉＲ１５５ミミックの配列を、表４に列記する。
Figure 2022081575000006
実施形態において、配列５’Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１）ｘｘｘｘｘｍＧｍＵｍＡｍＧｍＡｍＡｍＣｍＣｍＧｍＵｍＡｍＣｍＵｍＣｍＧｍＵｍＣｍＡｍＣｍＵｍＵｍＡ（配列番号３２）３’のＣｐＧ（Ｄ１９）－スクランブル化ＲＮＡは、対照ＯＤＮとして使用される（図１に含まれる）。
実施形態において、配列５’Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１）ｘｘｘｘｘＴＣＡＣＡＡＧＴＴＡＧＧＧＴＣＴＣＡＧＧＧＡ（配列番号３３）３’を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１２５ｂに連結する組成物が本明細書に提供され、配列番号３３におけるヌクレオチドＴは、ヌクレオチドＵで置換することができる。実施形態において、配列５’Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１）ｘｘｘｘｘｍＵ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＡ＊ｍＧ＊ｍＵ＊ｍＵ＊ｍＡ＊ｍＧ＊ｍＧ＊ｍＧ＊ｍＵ＊ｍＣ＊ｍＵ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＧ＊ｍＧ＊ｍＧ＊ｍＡ（配列番号３４）３’を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１２５ｂに連結する組成物が本明細書に提供される。
実施形態において、配列：５’Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１）ｘｘｘｘｘＣＣＣＡＴＧＧＡＡＴＴＣＡＧＴＴＣＴＣＡ（配列番号３５）３’を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１４６ａに連結する組成物が本明細書に提供され、配列番号３５におけるヌクレオチドＴは、ヌクレオチドＵで置換することができる。実施形態において、配列：５’Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１）ｘｘｘｘｘｍＣ＊ｍＣ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＴ＊ｍＧ＊ｍＧ＊ｍＡ＊ｍＡ＊ｍＴ＊ｍＴ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＧ＊ｍＴ＊ｍＴ＊ｍＣ＊ｍＴ＊ｍＣ＊ｍＡ（配列番号３６）３’を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１２５ｂに連結する組成物が本明細書に提供される。実施形態において、配列：５’Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＧＣＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号２）ｘｘｘｘｘＣＣＣＡＴＧＧＡＡＴＴＣＡＧＴＴＣＴＣＡ（配列番号３５）３’を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１４６ａに連結する組成物が本明細書に提供される。実施形態において、配列：Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＧＣＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号２）ｘｘｘｘｘｍＣ＊ｍＣ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＴ＊ｍＧ＊ｍＧ＊ｍＡ＊ｍＡ＊ｍＴ＊ｍＴ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＧ＊ｍＴ＊ｍＴ＊ｍＣ＊ｍＴ＊ｍＣ＊ｍＡ（配列番号３６）３’を有する、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲ１４６ａに連結する組成物が本明細書に提供される。
実施形態において、核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物は、本明細書に記載される１つ以上のリンカーで、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミック配列に抱合されている。
実施形態において、配列番号１～１４のうちの１つの少なくとも１５個の核酸塩基配列と約８０％～１００％（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の配列同一性を有する核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物は、本明細書に記載される１つ以上のリンカーで、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミック配列に抱合されている。
実施形態において、配列番号１～１４のうちの１つの少なくとも１５個の核酸塩基配列と約８０％～１００％（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の配列同一性を有する核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物は、配列番号１６～３１、３３～３６及び４８のうちの１つの少なくとも１５個の核酸塩基配列と約８０％～１００％（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の配列同一性を有する核酸配列に、本明細書に記載される１つ以上のリンカーで抱合されている。
実施形態において、配列番号１～１４のうちの１つの少なくとも１５個の核酸塩基配列と約８０％～１００％（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の配列同一性を有する核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物は、配列番号１６～３１、３３～３６及び４８のうちの１つの少なくとも１５個の核酸塩基配列と約８０％～１００％（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の配列同一性を有する第２の核酸配列に、本明細書に記載される１つ以上のリンカーで抱合されており、第２の核酸配列は、１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはそれより多くの）ホスホロチオエート結合を含有する。
実施形態において、配列番号１～１４のうちの１つの少なくとも１５個の核酸塩基配列と約８０％～１００％（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の配列同一性を有する核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物は、配列番号１６～３１、３３～３６及び４８のうちの１つの少なくとも１５個の核酸塩基配列と約８０％～１００％（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の配列同一性を有する第２の核酸配列に、本明細書に記載される１つ以上のリンカーで抱合されており、第２の核酸配列は、１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはそれより多くの）化学的に修飾されたヌクレオチドを含有する。実施形態において、化学修飾は、２’Ｏ－メチル、２’－デオキシ－２’－フルオロ、２’－デオキシ、ユニバーサル塩基、５－Ｃ－メチル、逆位デオキシ脱塩基残基結合、及びロックド核酸からなる群から選択される。
実施形態において、配列番号１～１４のうちの１つの少なくとも１５個の核酸塩基配列と約８０％～１００％（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の配列同一性を有する核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物は、配列番号１６～３１、３３～３６及び４８のうちの１つの少なくとも１５個の核酸塩基配列と約８０％～１００％（例えば、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％）の配列同一性を有する第２の核酸配列に、本明細書に記載される１つ以上のリンカーで抱合されており、第２の核酸配列は、１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはそれより多くの）ホスホロチオエート結合及び１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはそれより多くの）化学的に修飾されたヌクレオチドを含有する。実施形態において、化学修飾は、２’Ｏ－メチル、２’－デオキシ－２’－フルオロ、２’－デオキシ、ユニバーサル塩基、５－Ｃ－メチル、逆位デオキシ脱塩基残基結合、及びロックド核酸からなる群から選択される。
実施形態において、配列番号１～１４から選択される核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物は、本明細書に記載される１つ以上のリンカーで、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミック配列に抱合されている。
実施形態において、配列番号１～１４の１つから選択される核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物は、本明細書に記載される１つ以上のリンカーで、配列番号１６～３１、３３～３６及び４８から選択される核酸配列に抱合されている。
実施形態において、配列番号１～１４の１つから選択される核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物は、本明細書に記載される１つ以上のリンカーで、配列番号１６～３１、３３～３６及び４８から選択される第２の核酸配列に抱合されており、第２の核酸配列は、１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはそれより多くの）ホスホロチオエート結合を含有する。
実施形態において、配列番号１～１４の１つから選択される核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物は、本明細書に記載される１つ以上のリンカーで、配列番号１６～３１、３３～３６及び４８から選択される第２の核酸配列に抱合されており、第２の核酸配列は、１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはそれより多くの）化学的に修飾されたヌクレオチドを含有する。実施形態において、化学修飾は、２’Ｏ－メチル、２’－デオキシ－２’－フルオロ、２’－デオキシ、ユニバーサル塩基、５－Ｃ－メチル、逆位デオキシ脱塩基残基結合、及びロックド核酸からなる群から選択される。
実施形態において、配列番号１～１４の１つから選択される核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物は、本明細書に記載される１つ以上のリンカーで、配列番号１６～３１、３３～３６及び４８から選択される第２の核酸配列に抱合されており、第２の核酸配列は、１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはそれより多くの）ホスホロチオエート結合及び１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはそれより多くの）化学的に修飾されたヌクレオチドを含有する。実施形態において、化学修飾は、２’Ｏ－メチル、２’－デオキシ－２’－フルオロ、２’－デオキシ、ユニバーサル塩基、５－Ｃ－メチル、逆位デオキシ脱塩基残基結合、及びロックド核酸からなる群から選択される。
実施形態において、配列番号１～１４の１つから選択される核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物は、本明細書に記載される１つ以上のリンカーで、配列番号１６～３１、３３～３６及び４８から選択される第２の核酸配列に抱合されており、第２の核酸配列は、全てのヌクレオチド間結合に対してホスホロチオエート結合を含有する。
実施形態において、配列番号１～１４の１つから選択される核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物は、本明細書に記載される１つ以上のリンカーで、配列番号１６～３１、３３～３６及び４８から選択される第２の核酸配列に抱合されており、第２の核酸配列は、全てが化学的に修飾されているヌクレオチド（例えば、２’Ｏ－メチル）を含有する。
実施形態において、配列番号１～１４の１つから選択される核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む化合物は、本明細書に記載される１つ以上のリンカーで、配列番号１６～３１、３３～３６及び４８から選択される第２の核酸配列に抱合されており、第２の核酸配列は、全てのヌクレオチド間結合に対してホスホロチオエート結合を含有し、かつ全てが化学的に修飾されているヌクレオチド（例えば、２’Ｏ－メチル）を含有する。
実施形態において、化合物は抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミック配列の核酸配列を含み、核酸配列が、１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはそれより多くの）ホスホロチオエート結合及び／または１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはそれより多くの）化学的に修飾されたヌクレオチドを含有する。実施形態において、化学修飾は、２’Ｏ－メチル、２’－デオキシ－２’－フルオロ、２’－デオキシ、ユニバーサル塩基、５－Ｃ－メチル、逆位デオキシ脱塩基残基結合、及びロックド核酸からなる群から選択される。
実施形態において、化合物は、配列番号１６～３１、３３～３６及び４８から選択される抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミック配列の核酸配列を含み、核酸配列が、１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはそれより多くの）ホスホロチオエート結合及び／または１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、またはそれより多くの）化学的に修飾されたヌクレオチドを含有する。実施形態において、化学修飾は、２’Ｏ－メチル、２’－デオキシ－２’－フルオロ、２’－デオキシ、ユニバーサル塩基、５－Ｃ－メチル、逆位デオキシ脱塩基残基結合、及びロックド核酸からなる群から選択される。
実施形態において、リンカーは共有結合リンカー（すなわち、化合物の少なくとも２つ（例えば、２つの）部分で共有結合されたリンカー）である。実施形態において、リンカーは、置換の（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアルキレンまたはヘテロアルキレンリンカーであるか、またはこれらを含む。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合された核酸は２つ以上の置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）または非置換のヘテロアルキレンリンカーを含む。リンカーは、合成中に順番に添加され得る。実施形態において、ヘテロアルキレンリンカーは、介在するリン酸結合によって、互いに連結されている。実施形態において、共有結合リンカーは、置換の（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアルキレンリンカーである。
実施形態において、リンカーは、置換の（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアルキレン、または置換の（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のシクロヘテロアルキレンである。「シクロヘテロアルキレン」とは、本明細書で使用される場合、ヘテロアルキレン鎖内に、１つ以上の二価の環状部分を有するヘテロアルキレンである。環状部分は、置換の（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のシクロアルキレン、置換の（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換の（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアリーレン、または置換の（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアリーレンであってもよい。実施形態では、環状部分は、置換の（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のリボ－ス（例えば、ヌクレオシド）である。実施形態では、環状部分は、それによって分岐状リンカーを形成するためのリンカーの分岐点としての機能を果たす。環状部分の分岐点は、検出可能な部分、薬物部分または生体分子などの追加の官能部分を、本明細書に提供される抱合体に連結するために使用されてもよい。以下により詳細に説明するように、追加の官能部分は、当該技術分野において既知であるように、クリックケミストリー技術を用いて連結されてもよい。
実施形態において、リンカーは、式：
－（ＣＨ２）ｎ－ＰＯ４－［（ＣＨ２）ｎ－ＰＯ４］ｚ－（ＣＨ２）ｎ－を有する部分であるか、またはこれを含有する。
上記式において、符号ｎは、１～５の整数（例えば、３）であり、符号ｚは、０～５０の整数（例えば、０～２５、０～１０、または０～５）である。実施形態において、ｎは３であり、ｚは０～５、または１～５である。実施形態において、ｎは３であり、ｚは０～４、または１～４である。実施形態において、ｎは３であり、ｚは０～３、または１～３である。実施形態において、ｎは３であり、ｚは３である。
例えば、リンカーは、以下の構造を有してもよく、このリンカーは、一方の末端でグアニンの３’リン酸と連結し、他方の末端でチミジンの５’リン酸と連結する。
Figure 2022081575000007
実施形態において、上記グアニジンは、核酸配列（ＣｐＧ－ＯＤＮ）に連結されており、チミジンは、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミック配列に連結されている。
実施形態において、リンカーは、アジド基、保護アミノ基、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）基、及び保護スルフヒドリル基から選択される部分を含んでもよい。
実施形態において、ジビニルスルホン誘導体、アクリロイル誘導体、及び／またはマレイミド誘導体からなる群から選択される部分に抱合されている保護スルフヒドリル基を含んでもよい。実施形態において、アクリロイル誘導体は、塩化アクリロイルである。
実施形態において、リンカーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはビスホスホネート部分に抱合されてもよい。
実施形態において、リンカーは、非置換のＣ３ヘテロアルキレンを含み得る。
実施形態において、リンカーは、非置換のＣ６～Ｃ１２ヘテロアルキレンを含み得る。
実施形態において、リンカーは、反応性基（例えば、クリックケミストリー反応性基）または保護反応性基で置換されてもよい。反応性基は、ＣｐＧ－ＯＤＮを、抗ｍｉＲまたはｍｉＲ－ミミックに、及び／または検出可能部分または生体分子（例えば、標的化部分）に本明細書に記載される追加の官能部分に抱合させるために使用され得る。
したがって、リンカーは、追加の部分のさらなる修飾、抱合、または連結を含んでもよい。
ＣｐＧ－ＯＤＮを、追加の官能部分に至る抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミック化合物に抱合させるために使用される反応性基は、バイオコンジュゲ－ト化学で有用な任意の適用可能な反応性基であってもよい。Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １９９６，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏを参照されたい。
実施形態において、反応性基は、クリックケミストリー反応性基である。クリックケミストリーとは、速く、簡単に使え、精製が容易であり、多用途であり、位置特異性で、かつ高生成物収率をもたらす一群の反応を指す。４種の異なるクリック反応が可能である：（１）付加環化－これらは主として、１，３－双極子付加環化を指すが、ヘテロディールス・アルダー付加環化も含まれ；（２）求核的開環－これらは、アジリジン、エポキシド、環状硫酸エステル、アジリジニウムイオン、エピスルホニウムイオンなどの歪んだ複素環求電子物質の開環を指し；（３）非アルド－ル反応型のカルボニル化学－例として、尿素、チオ尿素、ヒドラゾン、オキシムエーテル、アミド、芳香族複素間の形成が挙げられ；（４）炭素－炭素多重結合の付加－例として、エポキシ化、アジリジン化、ジヒドロキシル化、ハロゲン化スルフェニル付加、ハロゲン化ニトロシル付加、及び特定のマイケル付加が含まれる。実施形態において、使用されるクリック反応は、１，２，３－トリアゾールを形成するための、アジドまたは末端アルキンのＣｕI触媒のヒュスゲン（Ｈｕｉｓｇｅｎ）１，３－双極子付加環化（ＨＤＣ）であってもよい。実施形態において、クリック反応は、銅フリー反応であってもよい。
実施形態では、クリックケミストリー反応性基は、アジド基、アルケン基、アミノ基、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド基、スルフヒドリル基、ジビニルスルホン誘導体、またはマレイミド誘導体であるか、またはこれらを含む。したがって、実施形態において、リンカーは、反応性基（例えば、クリックケミストリー反応性基）または例えば、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）化学による抱合に好適な保護アミノ基もしくはＮ－ヒドロキシスクシンイミド基；ジビニルスルホンと抱合され得るスルフヒドリル基；１－アルキル－３－メチルアクリロイル（アクリロイル）クロリドもしくはアクリロイル誘導体と抱合され得る保護スルフヒドリル基；マレイミド誘導体と抱合され得る保護スルフヒドリル基が含まれる、保護反応性基で置換される。
シクロヘテロアルキレン分岐状リンカーの構造例を以下に提供する。
Figure 2022081575000008
上で示したように、シクロヘテロアルキレン分岐状リンカーは、一方の末端でグアニンの３’リン酸と連結し、他方の末端でチミジンの５’リン酸と連結する。シクロヘテロアルキレン分岐状リンカーの部分は分岐点であり、５置換チミジンである。チミジンは、ＮＨＳ部分を含有する反応性基と５位で置換されており、これは、追加の官能部分へ連結するための反応性基としての機能を果たすことができる。
反応性官能基及び保護反応性官能基を含有する、部分の分岐点とし機能するために使用され得る化合物の追加の例を、以下に提供する。
Figure 2022081575000009
Figure 2022081575000010
Figure 2022081575000011
Figure 2022081575000012
実施形態において、リンカー分岐点は、非環状であってもよい。反応性官能基及び保護反応性官能基を含有するリンカー内の非環状部分の分岐点として機能するために使用され得る化合物の例が、以下に提供される。
Figure 2022081575000013
上述したように、反応性基は、ＣｐＧ－ＯＤＮを抗ｍｉＲまたはｍｉＲＮＡミミック核酸配列及び／または検出可能な部分、治療的部分（例えば、薬物部分）、標的化部分または生体分子などの追加の官能部分に抱合させるために使用されてもよい。追加の官能部分には、蛍光標識、標的化化合物（骨標的化ビスホスホネート）、薬物、または抗体が含まれる。実施形態において、追加の部分は、化学的反応性部分、検出可能な部分、治療的部分（例えば、抗癌剤または抗ウイルス剤）、核酸配列、ＤＮＡ配列、または核酸類似体である。実施形態では、検出可能な部分は、蛍光染料、電子高密度試薬、酵素、ビオチン、ジゴキシゲニン、常磁性分子、常磁性ナノ粒子、造影剤、磁気共鳴造影剤、Ｘ線造影剤、ガドリニウム、放射性同位体、放射性核種、フルオロデオキシグルコース、ガンマ線放出放射性核種、ポジトロン放出放射性核種、生体コロイド、マイクロバブル、ヨード造影剤、硫酸バリウム、二酸化トリウム、金、金ナノ粒子、金ナノ粒子凝集体、フルオロフォア、二光子フルオロフォア、ハプテン、タンパク質、または蛍光部分である。実施形態において、追加の部分は、治療的部分（例えば、抗癌剤または抗ウイルス剤）である。
実施形態において、追加の官能部分は、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のシクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアリール、または置換の（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態において、追加の部分は、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のＣ１～Ｃ４０アルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の２～４０員のヘテロアルキル、置換の（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のＣ３～Ｃ８シクロアルキル、置換もしくは非置換の３～８員のヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換のＣ６～Ｃ１０アリール、または置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の５～１０員のヘテロアリールである。実施形態において、追加の部分は、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）Ｃ１～Ｃ４０アルキル、置換２～４０員のヘテロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）３～８員のヘテロシクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）Ｃ６～Ｃ１０アリール、または置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）５～１０員のヘテロアリールである。実施形態において、追加の官能部分は、Ｒ１置換Ｃ１～Ｃ４０アルキル、Ｒ１置換２～４０員のヘテロアルキル、Ｒ１置換Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル、Ｒ１置換３～８員のヘテロシクロアルキル、Ｒ１置換Ｃ６～Ｃ１０アリール、またはＲ１置換５～１０員のヘテロアリールである。実施形態において、追加の官能部分は、Ｒ１置換Ｃ１～Ｃ４０アルキルである。実施形態において、追加の官能部分は、－（非置換のＣ１～Ｃ４０アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（非置換の直鎖Ｃ１～Ｃ４０アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（非置換のＣ３～Ｃ２１アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（非置換のＣ３～Ｃ１８アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（非置換の直鎖Ｃ３～Ｃ１５アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（非置換の直鎖Ｃ６～Ｃ２１アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（非置換の直鎖Ｃ９～Ｃ２１アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（非置換の直鎖Ｃ９～Ｃ１８アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（非置換の直鎖Ｃ９～Ｃ１５アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（非置換の直鎖Ｃ１２～Ｃ１５アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（非置換の直鎖Ｃ１２アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（非置換の直鎖Ｃ１３アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（非置換の直鎖Ｃ１４アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（非置換の直鎖Ｃ１５アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、Ｒ１置換２～４０員のヘテロアルキルである。実施形態において、追加の官能部分は、－（非置換２～４０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（置換の直鎖２～４０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（置換５～４０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（置換１０～４０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（置換１５～４０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（置換２０～４０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（置換３０～４０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（置換２～３５員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（置換２～３０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（置換２～２５員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（置換２～２０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（置換２～１０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（置換２～５０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、追加の官能部分は、－（置換２～６０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態では、追加の官能部分は、置換２～４０員のヘテロアルキルである。実施形態では、追加の官能部分は、置換１０～５０員のヘテロアルキルである。実施形態では、追加の官能部分は、置換２０～４０員のヘテロアルキルである。実施形態では、追加の官能部分は、置換２５～４０員のヘテロアルキルである。実施形態では、追加の官能部分は、置換３０～４０員のヘテロアルキルである。
Ｒ１は、オキソ、ハロゲン、－ＣＮ、－ＣＦ３、－ＮＨ２、－ＯＨ、－ＳＨ、Ｎ３、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のシクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアリール、または置換もしくは非置換のヘテロアリールである。実施形態において、追加の官能部分におけるＲ１は、検出可能な部分または治療的部分である。実施形態において、追加の官能部分におけるＲ１は、検出可能な部分である。実施形態において、検出可能な部分は、蛍光染料、電子高密度試薬、酵素、ビオチン、ジゴキシゲニン、常磁性分子、常磁性ナノ粒子、造影剤、磁気共鳴造影剤、Ｘ線造影剤、ガドリニウム、放射性同位体、放射性核種、フルオロデオキシグルコース、ガンマ線放出放射性核種、ポジトロン放出放射性核種、生体コロイド、マイクロバブル、ヨード造影剤、硫酸バリウム、二酸化トリウム、金、金ナノ粒子、金ナノ粒子凝集体、フルオロフォア、二光子フルオロフォア、ハプテン、タンパク質、または蛍光部分である。実施形態において、追加の官能部分におけるＲ１は、治療的部分（例えば、抗癌剤または抗ウイルス剤）である。実施形態において、追加の官能部分におけるＲ１は、Ｈである。実施形態において、追加の官能部分は、オキソである。実施形態において、追加の官能部分は、酸素である。実施形態において、追加の官能部分は、イオウである。実施形態において、追加の官能部分は、＝Ｓである。
実施形態において、さらなる連結置換基には、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアリーレン、または置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアリーレンが含まれる。さらなる連結置換基には、反応性基または追加の部分に連結したＰＥＧ部分が含まれてもよい。
実施形態において、リンカーには、非置換のＣ３アルキレン（例えば、上記のような）が含まれる。実施形態において、リンカーには、非置換のＣ１５アルキレンが含まれてもよい。実施形態において、リンカーは、非置換のＣ６～Ｃ１６アルキレンが含まれる。実施形態において、リンカーは、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアリーレン、または置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアリーレンであってもよい。実施形態において、リンカーは、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のＣ１～Ｃ４０アルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の２～４０員のヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のＣ３～Ｃ８シクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の３～８員のヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のＣ６～Ｃ１０アリーレン、または置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の５～１０員のヘテロアリーレンであってもよい。実施形態において、リンカーは、非置換のＣ１～Ｃ４０アルキレン、非置換の２～４０員のヘテロアルキレン、非置換のＣ３～Ｃ８シクロアルキレン、非置換の３～８員のヘテロシクロアルキレン、非置換のＣ６～Ｃ１０アリーレン、または非置換の５～１０員のヘテロアリーレンであってもよい。実施形態において、リンカーは、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）２～４０員のヘテロアルキレンであってもよい。
リンカーは、結合、核酸配列、２つの核酸配列、ＤＮＡ配列、２つのＤＮＡ配列、核酸類似体配列、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアリーレン、または置換（例えば、置換基、サイズ制限された置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアリーレンであってもよい。
実施形態において、リンカーは、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアリーレン、または置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアリーレンであるか、またはこれらを含有する。実施形態において、リンカーは、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のＣ１～Ｃ２０アルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の２～２０員のヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のＣ３～Ｃ８シクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の３～８員のヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のＣ６～Ｃ１０アリーレン、または置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の５～１０員のヘテロアリーレンである。実施形態において、リンカーは、非置換のＣ１～Ｃ２０アルキレン、非置換の２～２０員のヘテロアルキレン、非置換のＣ３～Ｃ８シクロアルキレン、非置換の３～８員のヘテロシクロアルキレン、非置換のＣ６～Ｃ１０アリーレン、または非置換の５～１０員のヘテロアリーレンである。実施形態において、リンカーは、非置換のＣ１～Ｃ２０アルキレンである。実施形態では、リンカーは、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のＣ１～Ｃ４０アルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の２～４０員のヘテロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のＣ３～Ｃ８シクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の３～８員のヘテロシクロアルキレン、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のＣ６～Ｃ１０アリーレン、または置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の５～１０員のヘテロアリーレンである。実施形態では、リンカーは、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のＣ１～Ｃ４０アルキレンである。実施形態において、リンカーは、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の２～４０員のヘテロアルキレンである。実施形態において、リンカーにはアルキルリン酸（例えば、プロピルリン酸）が含まれる。実施形態において、リンカーは、両末端においてリン酸によって、化合物の残部に結合されたアルキルリン酸（例えば、プロピルリン酸）を有する。実施形態において、リンカーは、両末端においてリン酸によって、化合物の残部に結合された１～５個のアルキルリン酸（例えば、プロピルリン酸）を有する。実施形態において、リンカーは、両末端においてリン酸によって、化合物の残部に結合された１～４個のアルキルリン酸（例えば、プロピルリン酸）を有する。実施形態において、リンカーは、両末端においてリン酸によって、化合物の残部に結合された４個のアルキルリン酸（例えば、プロピルリン酸）を有する。当業者であれば、両末端においてリン酸によって、化合物の残部に結合されているアルキルリン酸を有するリンカーが、アルキレン基よりも１つ多いリン酸を有するであろうこと（例えば、両末端においてリン酸によって、化合物の残部に結合されている４個のアルキルリン酸を有するリンカーが、交互のリン酸基及びアルキル基を伴って、５個のリン酸及び４個のアルキル基を有するであろうこと）を認識されよう。
実施形態において、抗ｍｉＲ及びｍｉＲＮＡミミックは、２’Ｏ－メチル、２’－デオキシ－２’－フルオロ、２’－デオキシ、ユニバーサル塩基、５－Ｃ－メチル、逆位デオキシ脱塩基残基結合、またはロックド核酸、もしくはこれらの任意の組み合わせ（複数可）などの修飾を含み得る。実施形態において、抗ｍｉＲ及びｍｉＲＮＡミミックは、抗ｍｉＲ及びｍｉＲＮＡミミックの末端核酸塩基に位置する修飾を有してもよい。実施形態において、抗ｍｉＲ及びｍｉＲＮＡミミックは、抗ｍｉＲ及びｍｉＲＮＡミミックの末端核酸塩基に位置する修飾を有さずともよい。実施形態において、抗ｍｉＲ及びｍｉＲＮＡミミックは、血清由来のヌクレアーゼに対して化合物を保護する（例えば、ヌクレアーゼ耐性である）。
実施形態において、抗ｍｉＲまたはｍｉＲＮＡミミック抱合（ＣｐＧ－ＯＤＮ）は、末端部分を有する。末端部分は、化学的反応性部分、検出可能部分、治療的部分（例えば、抗癌剤または抗ウイルス剤）、核酸配列、ＤＮＡ配列、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のシクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアリール、または置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアリールである。
実施形態において、末端部分は、化学的反応性部分、検出可能な部分、治療的部分（例えば、抗癌剤または抗ウイルス剤）、核酸配列、ＤＮＡ配列、核酸類似体、Ｒ１置換もしくは非置換のアルキル、Ｒ１置換もしくは非置換のヘテロアルキル、Ｒ１置換もしくは非置換のシクロアルキル、Ｒ１置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、Ｒ１置換もしくは非置換のアリール、またはＲ１置換もしくは非置換のヘテロアリールである。
実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮ核酸配列の抱合体は、末端部分を含み、この末端部分は、検出可能な部分である。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮは、蛍光染料、電子高密度試薬、酵素、ビオチン、ジゴキシゲニン、常磁性分子、常磁性ナノ粒子、造影剤、磁気共鳴造影剤、Ｘ線造影剤、ガドリニウム、放射性同位体、放射性核種、フルオロデオキシグルコース、ガンマ線放出放射性核種、ポジトロン放出放射性核種、生体コロイド、マイクロバブル、ヨード造影剤、硫酸バリウム、二酸化トリウム、金、金ナノ粒子、金ナノ粒子凝集体、フルオロフォア、二光子フルオロフォア、ハプテン、タンパク質、または蛍光部分などの末端の検出可能な部分を含む。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮは、治療的部分（例えば、抗癌剤または抗ウイルス剤）である末端部分を含む。
実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮは、オキソ、ハロゲン、－ＣＮ、－ＣＦ３、－ＮＨ２、－ＯＨ、－ＳＨ、Ｎ３、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のシクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロシクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のアリール、または置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のヘテロアリールである、末端部分を含む。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮは、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のＣ１～Ｃ４０アルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の２～４０員のヘテロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のＣ３～Ｃ８シクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の３～８員のヘテロシクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換のＣ６～Ｃ１０アリール、または置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）もしくは非置換の５～１０員のヘテロアリールである、末端部分を含む。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮは、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）Ｃ１～Ｃ４０アルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）２～４０員のヘテロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）３～８員のヘテロシクロアルキル、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）Ｃ６～Ｃ１０アリール、または置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）５～１０員のヘテロアリールである、末端部分を含む。実施形態において、末端部分は、Ｒ１置換Ｃ１～Ｃ４０アルキル、Ｒ１置換２～４０員のヘテロアルキル、Ｒ１置換Ｃ３～Ｃ８シクロアルキル、Ｒ１置換３～８員のヘテロシクロアルキル、Ｒ１置換Ｃ６～Ｃ１０アリール、またはＲ１置換５～１０員のヘテロアリールである。実施形態において、末端部分は、Ｒ１置換Ｃ１～Ｃ４０アルキルである。実施形態において、末端部分は、－（非置換のＣ１～Ｃ４０アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（非置換の直鎖Ｃ１～Ｃ４０アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（非置換のＣ３～Ｃ２１アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（非置換のＣ３～Ｃ１８アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（非置換の直鎖Ｃ３～Ｃ１５アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（非置換の直鎖Ｃ６～Ｃ２１アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（非置換の直鎖Ｃ９～Ｃ２１アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（非置換の直鎖Ｃ９～Ｃ１８アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（非置換の直鎖Ｃ９～Ｃ１５アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（非置換の直鎖Ｃ１２～Ｃ１５アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（非置換の直鎖Ｃ１２アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（非置換の直鎖Ｃ１３アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（非置換の直鎖Ｃ１４アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（非置換の直鎖Ｃ１５アルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、Ｒ１置換２～４０員のヘテロアルキルである。実施形態において、末端部分は、－（非置換２～４０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（置換直鎖２～４０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（置換５～４０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（置換１０～４０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（置換１５～４０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（置換２０～４０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（置換３０～４０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（置換２～３５員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（置換２～３０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（置換２～２５員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（置換２～２０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（置換２～１０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（置換２～５０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。実施形態において、末端部分は、－（置換２～６０員のヘテロアルキレン）－Ｒ１である。
実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮは、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）の２～４０員のヘテロアルキルである末端部分を含む。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮは、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）１０～５０員のヘテロアルキルである末端部分を含む。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮは、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）２０～４０員のヘテロアルキルである末端部分を含む。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮは、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）２５～４０員のヘテロアルキルである末端部分を含む。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮは、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）３０～４０員のヘテロアルキルである末端部分を含む。
実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮは、Ｒ１基を有する末端部分を含み、このＲ１は、検出可能な部分または治療的部分である。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮにおけるＲ１は、検出可能な部分である末端部分を含む。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮにおけるＲ１は、蛍光染料、電子高密度試薬、酵素、ビオチン、ジゴキシゲニン、常磁性分子、常磁性ナノ粒子、造影剤、磁気共鳴造影剤、Ｘ線造影剤、ガドリニウム、放射性同位体、放射性核種、フルオロデオキシグルコース、ガンマ線放出放射性核種、ポジトロン放出放射性核種、生体コロイド、マイクロバブル、ヨード造影剤、硫酸バリウム、二酸化トリウム、金、金ナノ粒子、金ナノ粒子凝集体、フルオロフォア、二光子フルオロフォア、ハプテン、タンパク質、または蛍光部分である、検出可能な部分を含む。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮにおけるＲ１は、治療的部分（例えば、抗癌剤または抗ウイルス剤）である末端部分を含む。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮにおけるＲ１は、Ｈである末端部分を含む。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮにおけるＲ１は、末端部分としてオキソを含む。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮにおけるＲ１は、末端部分として酸素を含む。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮにおけるＲ１は、末端部分としてイオウを含む。実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮにおけるＲ１は、末端部分として＝Ｓを含む。
実施形態において、本化合物のＣｐＧ－ＯＤＮ核酸配列は、非メチル化ＣｐＧモチーフ（例えば、ＣｐＧ核酸配列またはＧｐＣ核酸配列）を含む。実施形態において、ＣｐＧ－ＯＤＮ核酸配列は、クラスＡ ＣｐＧ核酸配列、クラスＢ ＣｐＧ核酸配列、またはクラスＣ ＣｐＧ核酸配列を含む。
実施形態において、本化合物は、その中のＣ及びＧが、ホスホジエステルヌクレオチド間結合によって連結されたヌクレオチドであるＣｐＧ－ＯＤＮを含む。実施形態において、本化合物は、その中のＣ及びＧが、ホスホジエステル誘導体ヌクレオチド間結合によって連結されたヌクレオチドであるＣｐＧを含む。実施形態において、ＣｐＧモチーフは、メチル化されていない。実施形態において、Ｃ及びＧは、５’Ｃ－Ｇ３’として連結されている。実施形態において、Ｃ及びＧは、５’Ｇ－Ｃ３’として連結されている。
実施形態において、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）結合ＤＮＡ置換基は、クラスＡ ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。実施形態において、ＴＬＲ結合ＤＮＡ置換基は、クラスＢ ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。実施形態において、ＴＬＲ結合ＤＮＡ置換基は、クラスＣ ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。実施形態において、ＴＬＲ結合ＤＮＡ置換基（例えば、ＴＬＲ９結合ＤＮＡ置換基）は、Ａ、Ｇ、Ｃ、またはＴ塩基と、ホスホジエステル結合及び／またはホスホジエステル誘導体結合（例えば、ホスホロチオエート結合（複数可））からなる。
実施形態において、本化合物は、エンドソームＴＬＲに結合する。実施形態において、本化合物は、エンドソームＴＬＲに他のＴＬＲに対して優先的に結合する。実施形態において、本化合物は、エンドソームＴＬＲに特異的に結合する。実施形態において、本化合物は、ＴＬＲ３に結合する。実施形態において、本化合物は、ＴＬＲ３に他のＴＬＲに対して優先的に結合する。実施形態において、本化合物は、ＴＬＲ３に特異的に結合する。実施形態において、本化合物は、ＴＬＲ７に結合する。実施形態において、本化合物は、ＴＬＲ７に他のＴＬＲに対して優先的に結合する。実施形態において、本化合物は、ＴＬＲ７に特異的に結合する。実施形態において、本化合物は、ＴＬＲ８に結合する。実施形態において、本化合物は、ＴＬＲ８に他のＴＬＲに対して優先的に結合する。実施形態において、本化合物は、ＴＬＲ８に特異的に結合する。実施形態において、本化合物は、ＴＬＲ９に結合する。実施形態において、本化合物は、ＴＬＲ９に他のＴＬＲに対して優先的に結合する。実施形態において、本化合物は、ＴＬＲ９に特異的に結合する。実施形態において、本化合物は、その中のＣ及びＧが、ホスホジエステルヌクレオチド間結合またはホスホジエステル誘導体ヌクレオチド間結合によって連結されたヌクレオチドである、ＣｐＧを含む。
実施形態において、ＴＬＲ結合ＤＮＡ置換基は、クラスＡ ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。実施形態において、ＴＬＲ結合ＤＮＡ置換基は、クラスＢ ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。実施形態において、ＴＬＲ結合ＤＮＡ置換基は、クラスＣ ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である。実施形態において、ＴＬＲ結合ＤＮＡ置換基は、ＯＤＮ １５８５、ＯＤＮ ２２１６、ＯＤＮ Ｄ１９、またはＯＤＮ ２３３６である。実施形態において、ＴＬＲ結合ＤＮＡ置換基は、ＯＤＮ １６６８、ＯＤＮ １８２６、ＯＤＮ ２００６、またはＯＤＮ ２００７である。実施形態において、ＴＬＲ結合ＤＮＡ置換基は、ＯＤＮ ２３９５またはＯＤＮ Ｍ３６２である。実施形態において、ＴＬＲ結合ＤＮＡ置換基は、ＯＤＮ １５８５、ＯＤＮ ２２１６、ＯＤＮ Ｄ１９、ＯＤＮ ２３３６、ＯＤＮ １６６８、ＯＤＮ １８２６、ＯＤＮ ２００６、ＯＤＮ ２００７、ＯＤＮ ２３９５、またはＯＤＮ Ｍ３６２の誘導体である。実施形態において、ＯＤＮ １５８５、ＯＤＮ ２２１６、ＯＤＮ Ｄ１９、ＯＤＮ ２３３６、ＯＤＮ １６６８、ＯＤＮ １８２６、ＯＤＮ ２００６、ＯＤＮ ２００７、ＯＤＮ ２３９５、またはＯＤＮ Ｍ３６２の誘導体は、１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の）ヌクレオチド置換（例えば、異なるヌクレオチドで置換されたＡ、Ｃ、Ｇ、またはＴ）を含む。実施形態において、ＯＤＮ １５８５、ＯＤＮ ２２１６、ＯＤＮ Ｄ１９、ＯＤＮ ２３３６、ＯＤＮ １６６８、ＯＤＮ １８２６、ＯＤＮ ２００６、ＯＤＮ ２００７、ＯＤＮ ２３９５、またはＯＤＮ Ｍ３６２の誘導体は、１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の）ヌクレオチド間結合置き換え（例えば、ホスホジエステル誘導体で置き換えられたホスホジエステルまたはホスホジエステルで置き換えられたホスホジエステル誘導体）を含む。実施形態において、ＯＤＮ １５８５、ＯＤＮ ２２１６、ＯＤＮ Ｄ１９、ＯＤＮ ２３３６、ＯＤＮ １６６８、ＯＤＮ １８２６、ＯＤＮ ２００６、ＯＤＮ ２００７、ＯＤＮ ２３９５、またはＯＤＮ Ｍ３６２の誘導体は、１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、または１００個の）ヌクレオチド欠失を含む。実施形態において、ＯＤＮ １５８５、ＯＤＮ ２２１６、ＯＤＮ Ｄ１９、ＯＤＮ ２３３６、ＯＤＮ １６６８、ＯＤＮ １８２６、ＯＤＮ ２００６、ＯＤＮ ２００７、ＯＤＮ ２３９５、またはＯＤＮ Ｍ３６２の誘導体は、１つ以上の（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の）ヌクレオチド付加を含む。
実施形態において、本化合物は、ホスホジエステル誘導体結合（例えば、ホスホロアミデート、ホスホロジアミデート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホノカルボン酸、ホスホノカルボキシレート、ホスホノ酢酸、ホスホノギ酸、メチルホスホネート、ホウ素ホスホネート、またはＯ－メチルホスホロアミダイト結合）を含む。実施形態において、本化合物は、複数のホスホジエステル誘導体結合（例えば、ホスホロアミデート、ホスホロジアミデート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホノカルボン酸、ホスホノカルボキシレート、ホスホノ酢酸、ホスホノギ酸、メチルホスホネート、ホウ素ホスホネート、Ｏ－メチルホスホロアミダイト結合、またはこれらの組み合わせ）を含む。実施形態において、本化合物は、ＴＬＲ９結合ＤＮＡ置換基中に、ホスホジエステル誘導体結合（例えば、ホスホロアミデート、ホスホロジアミデート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホノカルボン酸、ホスホノカルボキシレート、ホスホノ酢酸、ホスホノギ酸、メチルホスホネート、ホウ素ホスホネート、またはＯ－メチルホスホロアミダイト結合）を含む。実施形態において、本化合物は、ＴＬＲ結合核酸（例えば、エンドソームＴＬＲ－、ＴＬＲ３－、ＴＬＲ７、－ＴＬＲ８－、またはＴＬＲ９－結合核酸）置換基中に、ホスホジエステル誘導体結合（例えば、ホスホロアミデート、ホスホロジアミデート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホノカルボン酸、ホスホノカルボキシレート、ホスホノ酢酸、ホスホノギ酸、メチルホスホネート、ホウ素ホスホネート、またはＯ－メチルホスホロアミダイト結合）を含む。
実施形態において、本化合物中のホスホジエステル誘導体結合は、ホスホロアミデート結合、ホスホロジアミデート結合、ホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合、ホスホノカルボン酸結合、ホスホノカルボキシレート結合、ホスホノ酢酸結合、ホスホノギ酸結合、メチルホスホネート結合、ホウ素ホスホネート結合、またはＯ－メチルホスホロアミダイト結合であってもよい。
実施形態において、本化合物中の核酸ヌクレオチド間結合の内の１つ以上は、ホスホジエステル誘導体結合（例えば、ホスホロアミデート、ホスホロジアミデート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホノカルボン酸、ホスホノカルボキシレート、ホスホノ酢酸、ホスホノギ酸、メチルホスホネート、ホウ素ホスホネート、またはＯ－メチルホスホロアミダイト結合）である（例えば、本化合物中の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個、または全てのヌクレオチド間結合が、ホスホジエステル誘導体結合（例えば、ホスホロアミデート、ホスホロジアミデート、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホノカルボン酸、ホスホノカルボキシレート、ホスホノ酢酸、ホスホノギ酸、メチルホスホネート、ホウ素ホスホネート、Ｏ－メチルホスホロアミダイト結合、またはこれらの組み合わせ）である）。
実施形態において、ＣｐＧ－ＯＤＮを、ｍｉＲ－１２６を標的化する抗ｍｉＲに、またはｍｉＲ－１４２のｍｉＲＮＡ－ミミックに連結する化合物が本明細書に提供される。
実施形態において、ＣｐＧ－ＯＤＮを、ｍｉＲ－１５５を標的化する抗ｍｉＲに連結する化合物が本明細書に提供される。
実施形態において、ＣｐＧ－ＯＤＮを、ｍｉＲ－１２５ｂを標的化する抗ｍｉＲに連結する化合物が本明細書に提供される。
実施形態において、ＣｐＧ－ＯＤＮを、ｍｉＲ－１４６ａを標的化する抗ｍｉＲに、またはｍｉＲ－１４６ａのｍｉＲＮＡ－ミミックに連結する化合物が本明細書に提供される。
実施形態において、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮは、細胞質中（及び細胞核中）に存在する。
医薬組成物
一態様では、薬学的に許容される賦形剤と、本明細書に開示される化合物とを含む医薬組成物が本明細書に提供される。実施形態において、本組成物は、第２の治療薬を含む。実施形態において、第２の治療薬は、抗腫瘍もしくは抗癌剤、血管新生阻害剤、細胞傷害性薬剤、細胞増殖抑制剤、抗炎症剤、鎮痛剤、抗感染症薬、増殖阻害剤、免疫原性薬剤、免疫調節剤、またはケモカインである。実施形態において、本開示の医薬生成物中の抗腫瘍もしくは抗癌剤は、細胞死促進剤である。
実施形態において、本開示の医薬組成物中の第２の治療薬には、クチノマイシンＤ（ｃｔｉｎｏｍａｙｃｉｎ Ｄ）／ダクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ドキソルビシン（ペグ化リポソーム）、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、エトポシド、ドセタキセル、イリノテカン、パクリタキセル、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、シスプランチン（Ｃｉｓｐｌａｎｔｉｎ）、オキサリプラチン、アレムツザマブ（Ａｌｅｍｔｕｚａｍａｂ）、ＢＣＧ、ベバシズマブ、セツキシマブ、デノスマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、インターフェロン、イピリムマブ、ラパチニブ、モノメチルオリスタチンＥ（ＭＭＥＡ）、メルタンシン（ＤＭ１）、リツキシマブ、スニチニブ、ソラフェニブ、テムシロリムス、トラスツズマブ、またはこれらの任意の組み合わせ（複数可）が含まれる。
実施形態において、本開示は、本開示の化合物と、１つ以上の追加の抗癌剤治療剤、例えば、抗ＶＥＧＦ抗体、または抗ＳＴＡＴ剤との組み合わせの組成物を含む。
方法及び使用のいずれかの実施形態において、本開示は、本開示の化合物及び化学療法剤の有効量を、がんと診断された対象に投与することによって、がんを治療することを含む。様々な化学療法剤が、本開示の併用治療法及び使用で使用されてもよい。実施形態において、化学療法剤は、テモロゾロミド（ｔｅｍｏｌｏｚｏｌｏｍｉｄｅ）であってもよい。実施形態では、化学療法剤は、放射線療法と同時に投与されてもよい。
一例では、併用治療は、別個の製剤または単一の医薬製剤を用いる同時投与、及び両方の（または全ての）活性薬剤が同時にそれらの生物学的活性を及ぼす期間があり得る、いずれかの順序での連続投与を含む投与を伴い得る。このような化学療法剤についての調製及び投与スケジュ－ルは、製造元の指示書に従って用いられてもよく、または熟練した施術者によって経験的に決定されてもよい。化学療法についての調製及び投与スケジュ－ルは、Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｅｄ．，Ｍ．Ｃ．Ｐｅｒｒｙ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍｄ．（１９９２）にも記載されている。化学療法剤は、本開示の化合物もしくは組成物の投与の前であってもその後であってもよく、またはそれと同時に与えられてもよい。
方法及び使用のいずれかの実施形態において、本開示の化合物との併用腫瘍療法に有用な他の治療薬には、ＶＥＧＦ、ＥＧＦＲ、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＳＴＡＴまたはＴＮＦなどの腫瘍増殖に関与している他の因子のアンタゴニストが含まれる。時には、１つ以上のサイトカインを対象に投与することも有益な場合もある。実施形態において、本開示の化合物もしくは組成物は、増殖阻害剤と併用投与される。例えば、増殖阻害剤が最初に投与され、その後、本開示の化合物もしくは組成物が投与されてもよい。しかしながら、同時投与または本開示の化合物もしくは組成物の投与が最初に行われることが可能であり得る。増殖阻害剤の好適な投与量は、現在使用されている量であり、増殖阻害剤及び本開示の化合物の組み合わせ作用（相乗効果）のために低下させてもよい。
本明細書の組成物はまた、治療される特定の徴候、例えば、互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性によるものに対して、必要に応じて２つ以上の活性化合物を含有してもよい。例えば、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦ（例えば、ＶＥＧＦ上の異なるエピトープまたは同じエピトープに結合する抗体）、ＶＥＧＦＲ、またはＥｒｂＢ２に結合する薬剤１つの製剤中にさらに提供することが望ましい場合がある。このような分子は、意図された目的のために有効である量で組み合わせて適切に存在し得る。
方法及び使用の実施形態において、本開示の化合物もしくは組成物との併用癌療法に有用な他の治療薬には、他の血管新生阻害剤が含まれる。多くの血管新生阻害剤が特定されており、当該技術分野において既知であり、Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ ａｎｄ Ｊａｉｎ（２０００）によって列記されたものが含まれる。実施形態において、本開示の化合物もしくは組成物は、別のｍｉＲアンタゴニスト、ｍｉＲ複合体に対する中和抗体、ｍｉＲの低分子量阻害剤、及びこれらの任意の組み合わせと併用して使用される。
本開示は、有効用量の本開示の化合物を有する組成物を含む。有効用量は、薬剤中約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．００１、０．００５、０．０１、０．０５、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００ｍｇ／ｋｇ）であってもよい。
実施形態において、有効用量の、本開示の抗ｍｉＲ、例えば抗ｍｉＲ１２６を含む化合物は、疾患（例えば、がん、自己免疫疾患、または感染性疾患）を治療するために、それを必要とする対象に投与される。抗ｍｉＲは、細胞中のｍｉＲ（例えば、ｍｉＲ１２６）の発現／活性を抑制して、細胞周期を、がん細細胞（例えば、白血病幹細胞（ＬＳ））に誘導し、がん細胞（例えば、ＬＳ）に化学療法に対してより感受性を高めさせる。
実施形態において、本開示のｍｉＲ－ミミック、例えば抗ｍｉＲ１４２－ミミックを含む化合物の有効用量は、疾患（例えば、がん、自己免疫疾患、または感染性疾患）を治療するために、それを必要とする対象に投与される。ｍｉＲ－ミミックは、がん、例えば白血病の発症をブロックする。
本化合物は、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約０．０１ｍｇ／ｋｇの化合物、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約０．１ｍｇ／ｋｇの化合物、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約１．０ｍｇ／ｋｇの化合物、約１．０ｍｇ／ｋｇ～約５．０ｍｇ／ｋｇの化合物、約５．０ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇの化合物、約１０ｍｇ／ｋｇ～約１５ｍｇ／ｋｇの化合物、約１５ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇの化合物、約２０ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇの化合物、約２５ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇの化合物、約３０ｍｇ／ｋｇ～約３５ｍｇ／ｋｇの化合物、約３５ｍｇ／ｋｇ～約４０ｍｇ／ｋｇの化合物、約４０ｍｇ／ｋｇ～約４５ｍｇ／ｋｇの化合物、約４５ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇの化合物、約５０ｍｇ／ｋｇ～約５５ｍｇ／ｋｇの化合物、約５５ｍｇ／ｋｇ～約６０ｍｇ／ｋｇの化合物、約６０ｍｇ／ｋｇ～約６５ｍｇ／ｋｇの化合物、約６５ｍｇ／ｋｇ～約７０ｍｇ／ｋｇの化合物、約７０ｍｇ／ｋｇ～約７５ｍｇ／ｋｇの化合物、約７５ｍｇ／ｋｇ～約８０ｍｇ／ｋｇの化合物、約８０ｍｇ／ｋｇ～約８５ｍｇ／ｋｇの化合物、約８５ｍｇ／ｋｇ～約９０ｍｇ／ｋｇの化合物、約９０ｍｇ／ｋｇ～約９５ｍｇ／ｋｇの化合物、または約９５ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの化合物の用量で、それを必要とする対象に投与され得る。
実施形態において、本開示は、本化合物が、組成物の約０．１％～約２０重量／体積％であり得る、本開示の化合物の有効用量を含む組成物を含む。
例えば、本明細書に開示される化合物の有効用量は、組成物の重量／体積基準で約０．００１％～約０．００１％、約０．０１％～約０．１％、約０．１％～約１．０％、約１．０％～約２．０％、約２．０％～約３．０％、約３．０％～約４．０％、約４．０％～約５．０％、約５．０％～約６．０％、約６．０％～約７．０％、約７．０％～約８．０％、約８．０％～約９．０％、約９．０％～約１０．０％、約１０％～約１１％、約１１％～約１２％、約１２％～約１３％、約１３％～約１４％、約１４％～約１５％、約１５％～約１６％、約１６％～約１７％、約１７％～約１８％、約１８％～約１９％、または約１９％～約２０％であってもよい。
治療または使用方法
疾患の治療方法を、それを必要とする対象において施す方法が、本明細書で提供され、本方法は、化合物または本明細書に開示される化合物を含む医薬組成物の有効量を対象に投与することを含む。実施形態において、疾患は、がん、自己免疫疾患、または感染性疾患である。
実施形態において、がんは、造血細胞癌である。実施形態において、がんは、造血細胞癌ではない。実施形態において、がんは、骨髄腫または急性骨髄性白血病もしくは慢性骨髄性白血病である。実施形態において、がんは、前立腺癌、乳癌、神経膠芽腫、卵巣癌、肺癌、頭頸部癌、食道癌、皮膚癌、悪性黒色腫、脳癌、大腸癌、白血病、リンパ腫、または骨髄腫である。
実施形態において、自己免疫疾患は、リウマチ性関節炎、乾癬、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、ＩＩ型糖尿病、非アルコール性脂肪性肝疾患、非アルコール性脂肪性肝炎、多発性硬化症（ＭＳ）、パーキンソン病（ＰＤ）、アルツハイマー病（ＡＤ）または炎症性腸疾患（ＩＢＤ）である。
実施形態において、感染性疾患は、結核、インフルエンザ、エボラ出血熱、ＨＩＶ、ＨＰＶ感染症もしくは肝炎である。
実施形態において、化合物もしくは組成物は、静脈内、非経口、皮下、筋肉内、経皮、腹腔内、鼻腔内、エアロゾル、経口、または局所投与によって、対象に投与される。実施形態において、治療は、化合物もしくは組成物の用量依存性である。実施形態において、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇの化合物が対象に投与される。この範囲内の全ての数字及び様々な範囲も暗示される。
細胞中のｍｉＲ、例えばｍｉＲ１２６を抑制する方法が本明細書に提供され、本方法は、細胞を化合物または本明細書に開示される化合物の組成物の有効量と接触させることを含む。細胞を化合物または本明細書に開示される化合物の組成物の有効量と接触させることを含む細胞を阻害する方法が本明細書に提供される。
実施形態において、細胞は、がん細胞である。実施形態において、細胞は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞または慢性骨髄性白血病細胞（ＣＭＬ）である。実施形態において、ＡＭＬ細胞は、骨髄からのものである。実施形態において、細胞は、インビトロでの培養細胞であり、細胞は宿主中のｉｎ ｓｉｔｕのものであり、細胞は、ｅｘ ｖｉｖｏでの培養組織内にある。実施形態において、接触するステップは、ウイルス形質導入を含まない。実施形態において、接触するステップは、ウイルス形質導入を含まず、細胞は、本開示の化合物または本開示の化合物を含む医薬組成物と接触される。実施形態において、細胞は、約１ナノモル～約１００ナノモル（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００ｎｍ）の化合物と接触される。この範囲内の全ての数字及び様々な範囲も暗示される。
実施形態において、ヘテロアルキレンリンカーは、合成の完了後の追加の部分のさらなる修飾、抱合、または連結を可能にし、この間、オリゴヌクレオチドは支持体になお連結されている。
実施形態において、合成中及びオリゴヌクレオチドが支持体に連結している間の、さらなる修飾、抱合、または連結を可能にし得る、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）ヘテロアルキレンリンカーを有する、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮが本明細書に提供される。
実施形態において、置換（例えば、置換基、サイズ制限置換基、または低級置換基によって置換された）ヘテロアルキレンリンカーは、修飾され、抱合され、または置換基に連結されている。修飾には、元の置換基の異なる置換基への変換が含まれ得る。例えば、臭素－アルカン置換基が、アジド－アルカンに変換されてもよい。抱合は、２つの大きな部分の互いの結合をもたらし得る。例えば、ＮＨＳ誘導体は、ＰＥＧ－ＮＨ２と抱合されてもよい。ペプチドもオリゴヌクレオチドと抱合されてもよく、抗体は、オリゴヌクレオチドと抱合されてもよい。連結は、小分子の大分子への結合をもたらし得る。例えば、ビオチンのＮＨＳエステルは、オリゴのアミノ誘導体に連結されてもよい。
実施形態において、リンカーの複数の異なるリンカー、複数の同一のリンカー、または以下の群から選択されるリンカーの置換を有する、抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミックに抱合されたＣｐＧ－ＯＤＮが本明細書で提供される。
ＮＨＳエステル及びジビニルスルホンならびにその類似体と反応することにより、官能基化にさらに使用され得る、ＦｍｏｖアミノモディファイヤーＣ６ ｄＴ（アミノ基の導入）
Figure 2022081575000014
 ジビニルスルホン及びアクリル酸類似体と反応することにより、官能基化にさらに使用され得る、Ｓ－Ｂｚ－チオールモディファイヤーＣ６－ｄＴ（スルフヒドリル基の導入）
Figure 2022081575000015
 ＮＨＳエステル及びジビニルスルホンならびにその類似体と反応することにより、官能基化にさらに使用され得る、アミノモディファイヤーセリノールホスホルアミダイト（アミノ基の導入）
Figure 2022081575000016
 アジド反応物質による官能基化にさらに使用され得る、ＤＢＣＯ－ｄＴ（アルキンの導入、銅フリークリックケミストリー）
Figure 2022081575000017
 ＤＢＣＯ－スルホ－ＮＨＳエステル（アルキンの導入、アミノ基と反応させることによる銅フリークリックケミストリー）
Figure 2022081575000018
実施例１：正常、臍帯血、ＡＭＬ及びＣＭＬ ＣＤ３４＋細胞におけるＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤の取り込み
正常、臍帯血、ＡＭＬ及びＣＭＬ ＣＤ３４＋細胞を、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３または抗ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で１６時間培養し、取り込みを、フローサイトメトリーによって細胞中のＣｙ３発現により測定した（図２Ａ～２Ｄ）。全ての試験細胞は、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６－Ｃｙ３を高効率で内在化させたが、抗－ｍｉＲ１２６－Ｃｙ３は内在化させなかった。
実施例２：ＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株におけるＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤の取り込み及び発現
ＣＭＬ（Ｋ５６２）（図３Ａ）及びＡＭＬ細胞株（ＫＧ１Ａ、ＭＶ４－１１、Ｍｏｌｍ１３、ＮＢ４、ＯＣＩ及びＨＬ６０）（図３Ｂ～３Ｇ）を、抗ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３－２００ｎＭ）単独、抗ｍｉＲ１２６－Ｃｙ３を含有するヒトＣＤ４５（Ａｂ－２００ｎＭ）もしくはトランスフェリン（ＴＦ－２００ｎＭ）抱合ナノ粒子（ＮＰ）または２つの濃度での（２００ｎＭ及び５００ｎＭ）製剤化されていないＣｐＧ抗ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で４時間培養し、フローサイトメトリーによってこれらの細細胞中のＣｙ３発現を測定することによって、取り込みを分析した。骨髄性細胞に特異的なＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６抱合体は、インビトロにおいて様々なヒトＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株によって迅速かつ用量依存的に内在化された。いかなるトランスフェクション試薬も不在下でのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６内在化のレベルは、ＮＰ製剤化抗ｍｉＲ１２６阻害剤を含む全ての他のオリゴヌクレオチドのものを超えた。
ＡＭＬ及びＣＭＬ株におけるｍｉＲＮＡ１２６の発現を評価した。ＣＭＬ（Ｋ５６２）（図４Ａ）及びＡＭＬ細胞株（ＫＧ１Ａ、ＭＶ４－１１、Ｍｏｌｍ１３、ＮＢ４、ＯＣＩ及びＨＬ６０）（図４Ｂ～４Ｇ）を、抗ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（Ｃｙ３対照、２００ｎＭ）、ヒトＣＤ４５（Ａｂ－ＮＰ、２００ｎＭ）または抗ｍｉＲ１２６－Ｃｙ３を含有するトランスフェリン（ＴＦ－ＮＰ ２００ｎＭ）抱合ＮＰ、またはＣｐＧ抗ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（ＣｐＧ－２００ｎｍ及び５００ｎＭ）で２４時間培養し、次いで、これらの細胞中のｍｉＲ１２６及びＲＮＵ（対照）発現を、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによって分析した。骨髄性細胞に特異的なＣｐＧ抗ｍｉＲ１２６抱合体（５００ｎＭ）は、ＨＬ６０、Ｋ５６２、ＭＶ４－１１、ＭＯＬＭ１３及びＯＣＩ細胞中の標的ｍｉＲＮＡ発現を、５０％を超えて低減させた状態で、インビトロにおいて、全ての試験されたヒトＡＭＬ及びＣＭＬ細胞株において、ｍｉＲＮＡ１２６の最も有効なダウンレギュレーションをもたらした。
実施例３：ＮＬ／ＣＢ、ＡＭＬ及びＣＭＬ ＣＤ３４＋細胞中のｍｉＲＮＡ１２６の発現
正常、臍帯血、ＡＭＬ及びＣＭＬ ＣＤ３４＋細胞を、ＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（５００ｎＭ）及びＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で２４時間培養し、次いで、これらの細胞中のｍｉＲ１２６及びＲＮＵ４４（対照）発現を、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによって分析した（図５）。ｍｉＲ１２６の発現レベルをＲＮＵ４４に正規化し、比較２－ΔΔＣｔ法を用いて算出した。骨髄性細胞に特異的なＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６抱合体（５００ｎＭ）は、インビトロにおいて、様々な患者の一次ＡＭＬ及びＣＭＬ ＣＤ３４＋細胞によって迅速に内在化され、ｍｉＲ１２６の発現の有意な減少（６０％～９０％）を、これらの細胞で確認した。
実施例４：ＣＭＬ ＣＤ３４＋ＣＤ３８－未分化前駆細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋系統決定前駆細胞よりも高いｍｉＲ１２６発現を示した。
ＣＭＬ ＣＤ３４＋、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋系統決定前駆細胞及びＣＤ３４＋ＣＤ３８－未分化前駆細胞を選別し、次いで、これらの細胞中のｍｉＲＮＡ１２６及びＲＮＵ４４（対照）の発現を、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲによって分析した。ｍｉＲ１２６の発現レベルをＲＮＵ４４に正規化し、比較２－ΔΔＣｔ法を用いて算出した（図６）。ＣＭＬ ＣＤ３４＋ＣＤ３８－未分化前駆細胞は、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋系統決定前駆細胞よりも高いｍｉＲ１２６発現を示した。
実施例５：ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤及びＮＩＬで処置されたＣＭＬ ＣＤ３４＋、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋系統決定前駆細胞及びＣＤ３４＋ＣＤ３８－未分化前駆細胞のアポトーシスの増加
ＣＭＬ ＣＤ３４＋、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋系統決定前駆細胞及びＣＤ３４＋ＣＤ３８－未分化前駆細胞を、ＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（５００ｎＭ）、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤（５００ｎＭ）、ＣｐＧ－スクランブルＲＮＡ（５００ｎＭ）＋ニロチニブ（ＮＩＬ、５ｕＭ）、及びＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤（５００ｎＭ）＋ＮＩＬ（５ｕＭ）で７２時間培養し、次いで、細胞周期及びアポトーシスを、ＥＤＵ／ＤａＰｉ及びアネキシンＶ／ＤＡＰｉ染色によって分析した。９０％を超えるｍｉＲ１２６発現の減少を、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤処置細胞で確認した（図７）。ＣｐＧ－スクランブル及びＮＩＬで処置された細胞と比べて、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤及びＮＩＬで処置されたＣＭＬ ＣＤ３４＋、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋系統決定前駆細胞及びＣＤ３４＋ＣＤ３８－未分化前駆細胞の増加したアポトーシスを観察した（図８）。増加した細胞周期を、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤で処置された正常及びＣＭＬ ＣＤ３４＋ＣＤ３８未分化前駆細胞で確認した（図９）。
さらに、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤（５００ｎＭ）とのインキュベ－ションは、ＣｐＧ－Ｓｃｒと比べて、ＥＤＵ／ＤＡＰｉ染色によって測定された、正常及びＣＭＬマウスからの長期造血幹細胞（ＬＴＨＳＣ、Ｌｉｎ－Ｓｃａ－１＋ｃ－ｋｉｔ＋Ｆｉｔ３－ＣＤ１５０＋ＣＤ４８－）の増加した細胞周期開始をもたらした（図１０）。ＮＩＬと組み合わされたＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤もまた、ＣｐＧ－ＳＣＲ＋ＮＩＬ処置と比べて、ＬＳＣの著しく増加したアポトーシス（図１１Ａ）及び細胞増殖の有意な減少（図１１Ｂ）をもたらした。
実施例６：アラビノースｃ及びＤｏｘｏと組み合わされたＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤によるｍｉＲ１２６のサイレンシングは、各処置の単独と比べて、ＬＳＣのアポトーシスを著しく増加させた。
Ａｒａ－ｃ及びＤｏｘｏと組み合わされたＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６阻害剤（５００ｎＭ）によるヒトＡＭＬ ＣＤ３４＋細胞中のｍｉＲ１２６のサイレンシングは、Ａｒａ－ｃ及びＤｏｘｏ単独と比べて、細胞周期（図１２Ａ）及びアポトーシス（図１２Ｂ）を著しく増加させ、細胞増殖の低減をもたらした（図１２Ｃ）。
実施例７：一次ＡＭＬ及びＣＭＬ ＬＳＣの増殖に及ぼすＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６のインビボの効果ならびに治療応答
ＳＣＬｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウスをＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ、隔日、静脈内（ｉｖ）注射）、ＳＣＲ（５ｍｇ／ｋｇ、隔日、静脈内注射）、ＮＩＬ（５０ｍｇ／ｋｇ、毎日、強制飼養による）＋ＳＣＲ、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で３週間処置し、次いで、ＰＢ、ＢＭ及び脾臓中の残存するＣＭＬ細胞を分析した。ＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比べて、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害税で処置したマウスのＰＢにおける減少したＣＭＬ白血球細胞を確認した（図１３Ａ）。ＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比べて、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスの減少した脾臓重量を確認した（図１３Ｂ）。ＮＩＬ＋ＳＣＲで処置したマウスと比べて、ＮＩＬ＋ｍｉＲ１２６阻害剤で処置したマウスのＢＭ及び脾臓において、減少したＣＭＬ細胞、ＣＭＬ ＬＳＫ及びＣＭＬ ＬＴＨＳＣを観察した（図１３Ｃ～Ｄ、図１４Ａ～Ｄ）。インビボでのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６の一次ＡＭＬ ＬＳＣの増殖及び治療応答に及ぼす効果は、現在進行中である。これらの観察は、本開示の他の化合物の中でも、骨髄性細胞に特異的なＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２６ ＯＤＮ阻害剤によるｍｉＲ１２６のブロッキングは、非常に有効であり、したがって、白血病及び本明細書に開示される他の種類のがんにおけるｍｉＲＮＡを標的化する新規な治療方法を表している。
実施例８：ＣｐＧ－抗ｍｉＲＮＡの取り込み及び阻害効果
本試験において使用された例示の化合物の配列は、
ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５：
５’Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１）ｘｘｘｘｘｍＡ＊ｍＣ＊ｍＣ＊ｍＣ＊ｍＣ＊ｍＵ＊ｍＡ＊ｍＵ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＡ＊ｍＵ＊ｍＵ＊ｍＡ＊ｍＧ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＵ＊ｍＵ＊ｍＡ＊ｍＡ（配列番号２８）３’；
ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂ：
５’Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１）ｘｘｘｘｘｍＵ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＡ＊ｍＧ＊ｍＵ＊ｍＵ＊ｍＡ＊ｍＧ＊ｍＧ＊ｍＧ＊ｍＵ＊ｍＣ＊ｍＵ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＧ＊ｍＧ＊ｍＧ＊ｍＡ（配列番号３４）３’；及び
ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ：
５’Ｇ＊Ｇ＊ＴＧＣＡＴＣＧＡＴＧＣＡＧＧ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ（配列番号１）ｘｘｘｘｘｍＣ＊ｍＣ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＵ＊ｍＧ＊ｍＧ＊ｍＡ＊ｍＡ＊ｍＵ＊ｍＵ＊ｍＣ＊ｍＡ＊ｍＧ＊ｍＵ＊ｍＵ＊ｍＣ＊ｍＵ＊ｍＣ＊ｍＡ（配列番号３６）３’であり、
式中、＊は、ホスホロチオエート結合を示し、ｍＮは、２’ＯＭｅ修飾ヌクレオチドを示し、ｘは、本明細書に記載されるリンカーを示す。
ＣｐＧ－抗ｍｉＲＮＡをＣｙ３標識して、フローサイトメトリーを用いて、標的細胞による細胞内取り込みを検出した。ヒト免疫細胞を、指示した濃度のＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５またはＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂとインキュベートして、これらの化合物の取り込みを細胞中で観察した（図１６Ａ～１６Ｂ、１７Ａ～１７Ｆ、１８Ａ～１８Ｆ、１９Ａ～１９Ｈ）。これらの化合物の処置は、ヒト及びマウス骨髄性細胞中の対応するｍｉＲ発現を低減した（図１７Ａ～１７Ｆ、１８Ａ～１８Ｆ、１９Ａ～１９Ｈ）。
ＣｐＧ、ＧｐＣ及びＰＳと抱合されたｍｉＲ１２６阻害剤によるｍｉＲ１２６の効果的なノックダウンならびにＫ５６２及びＭＶ４－１１細胞中のｍｉＲ１２６－ミミックによる効果的な過剰発現。Ｋ５６２及びＭＶ４－１１細胞を、ＣｐＧ、ＧｐＣ及びＰＳと抱合されたｍｉＲ１２６阻害剤（図２６Ａ～２６Ｂ）またはｍｉＲ１２６－ミミック（６１５、６１６及び６１７）（図２６Ｃ～２６Ｄ）（５００ｎＭ）で２４時間処置し、これらの細胞中のｍｉＲ１２６の発現を測定した。我々は、ここで、ＣｐＧモチーフが、ＯＤＮ配列の標的化において省かれ得ることを示した。ＧｐＣ及び相補的ＰＳ修飾オリゴもまた、ｍｉＲ１２６のブロックに成功した。ｍｉＲ１２６－ミミック、特にＧＭ６１７とのインキュベ－ションは、Ｋ５６２及びＭＶ４－１１細胞中のｍｉＲ１２６の発現を著しく増加させた。細胞中のｍｉＲ１２６の低減において非常に有効であるＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤と同様に、我々はまた、ｍｉＲ１２６－ミミックを設計し、これらも、いかなる形質導入試薬を使用することなく、細胞中のｍｉＲ１２６レベルの増加において非常に有効である。
実施例９：ＣｐＧ－抗ｍｉＲＮＡの下流標的に及ぼす効果
ＣｐＧ－抗ｍｉＲは、ｍｉＲ１５５、ｍｉＲ１２５ｂ、及びｍｉＲ１４６ａの下流標的を調節する（図２０Ａ～Ｃ）。マウスＲＡＷ２６４．７またはヒトＭＶ４－１１細胞を、２５０ｎＭもしくは５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂ、またはＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ｂ、あるいは５００ｎＭのＣｐＧ－スクランブルでインキュベートし、次いで、細胞溶解物を採集し、電気泳動して、ＳＨＩＰ１（ｍｉＲ１５５標的）（図２０Ａ）、ＩＲＦ４（ｍｉＲ１２５ｂ標的）（図２０Ｂ）、またはＩＲＡＫ１（ｍｉＲ１４６ａ標的）（図２０Ｃ）に対する抗体によって、イムノブロットした。バンド強度をβ－アクチンに対して正規化し、定量化した。対照タンパク質レベルに対する誘導倍率を以下のブロットに示している（図２０）。ＭＶ４－１１細胞を５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１２５ｂ、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ｂ、またはＣｐＧ－スクランブルで２４時間インキュベートし、次いで細胞溶解物を採集し、電気泳動して、イムノブロットして、アポトーシスの誘導を示唆する活性化カスパ－ゼ３を検出した。ＳＨＩＰ１及びＩＲＡＫ１は、ＣｐＧ－抗ｍｉＲの処置後に、両方ともアップレギュレートされる。
実施例１０：ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲの阻害効果の比較
ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１５５、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａの処置は、ＲＡＷ２６４．７（図２１Ａ、２１Ｃ）及びＡ２０細胞（図２１Ｂ、２１Ｄ）中のｍｉＲ１５５またはｍｉＲ１４６ａの発現を低減する。細胞を１００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲまたはＧｐＣ－抗ｍｉＲで１８時間インキュベートした。図２１Ｅ～２１Ｈ）では、ＣｐＧ－抗ｍｉＲ及びＧｐＣ－抗ｍｉＲ処置は、ｍｉＲ１５５及びｍｉＲ１４６ａの下流標的を調節する。ＲＡＷ２６４．７（図２１Ｅ、２１Ｇ）またはＡ２０細胞（図２１Ｆ、２１Ｈ）を、５００ｎＭのＣｐＧ－抗ｍｉＲ１５５、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１５５、またはＣｐＧ－抗ｍｉＲ１４６ａ、ＧｐＣ－抗ｍｉＲ１４６ａで４８時間インキュベートし、次いで、細胞溶解物を採集して、ＳＨＩＰ１（ｍｉＲ１５５標的）またはＩＲＡＫ１（ｍｉＲ１４６ａ標的）に対する抗体を用いてイムノブロットした。これらの結果は、両ＣｐＧ及びＧｐＣ核酸配列が、本明細書に記載される化合物中で有効であることを裏付けている。
実施例１１：ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａ－ミミックは、ＬＰＳ誘導炎症シグナル伝達を弱める。
ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａ－ミミックは、培養されたＣＭＭ白血病細胞（図２２Ａ）及びＡ２０リンパ腫細胞（図２２Ｂ）中のｍｉＲ－１４６ａの発現を増加させる。細胞を１００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａ－ミミックと１８時間インキュベートした。図２２Ｃ）では、ＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａ－ミミックは、ｍｉＲ１４６ａの下流標的であるＩＲＡＫ１の発現を阻害する。Ａ２０細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａ－ミミックまたはＬＰＳ（陽性対照として使用）で４８時間インキュベートし、次いで、細胞溶解物を採集して、ＩＲＡＫ１特異的抗体を用いてイムノブロットした。図２２Ｄ～２２Ｅ）では、ＮＦ－ＫＢ応答性レポーター遺伝子を発現するＲＡＷ－Ｂｌｕｅ細胞を、５００ｎＭのＣｐＧ－ｍｉＲ１４６ａ－ミミックで２４時間処置し、次いで、１ｐｇ／ｍｌのＬＰＳでさらに２４時間処置した。培養培地を採集し、Ｑｕａｎｔｉ－Ｂｌｕｅアッセイキットを用いて、ＮＦ－ＫＢ活性について（図２２Ｄ）、ＥＬＩＳＡを用いて培地中のＩＬ－６レベルについて（図２２Ｅ）分析した。
実施例１２：ＣｐＧ－ｍｉＲ１２７阻害剤の有効なインビトロ及びインビボ取り込みならびに遺伝子サイレンシング効果
ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３、Ａｂ－ＮＰもしくはＴＦ－ＮＰ含有ｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３、または裸のｍｉＲ－１２６阻害剤－Ｃｙ３のＫ５６２細胞中の添加から４時間後（図２３Ａ）及び２４時間後（図２３Ｂ）において、取り込み試験をフローサイトメトリー分析によって測定した。実験を２回繰り返した。Ｋ５６２中のｍｉＲ１２６の発現を、２４時間目に、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲにより測定した（ｎ＝３）（図２３Ｃ）。ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３（５００ｎＭ）の添加から４時間後に、ＨＵＶＥＣ（図２３Ｄ）、ヒト正常細胞（図２３Ｅ）及びＣＭＬ（図２３Ｆ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における取り込みを、フローサイトメトリーにより測定した。ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤（５００ｎＭ）で２４時間処置された、ＨＵＶＥＣ（図２３Ｇ）、正常細胞（図２３Ｈ）、及びＣＭＬ（図２３Ｉ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞中のｍｉＲ１２６の発現を示す（ｎ＝４）。ＥＤＵ染色による、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤（５００ｎＭ）で処置された、正常細胞（図２３Ｊ）及びＣＭＬ（図２３Ｋ）ＣＤ３４＋ＣＤ３８－細胞における２つの細胞周期実験のうちの１つを示している。
ネズミＣＭＬ ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ細胞を、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害薬－Ｃｙ３（５００ｎＭ）で４時間処置し、次いで、Ｃｙ３＋細胞を、フローサイトメトリーにより検出した（図２５Ａ）。細胞をまた２４時間目に採集し、ｍｉＲ１２６発現を、Ｑ－ＲＴ－ＰＣＲにより決定した（図２５Ｂ）。ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤のＣＭＬ ＢＭ ＬＴＨＳＣ中への添加から７２時間後に、細胞周期を、ＥＤＵ染色によって測定した。２つの代表的なプロットのうちの１つを、（図２５Ｃ）に示している。ＣＭＬマウスを、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤－Ｃｙ３で、１つの用量（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内注射）で処置し、ＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣ中のＣｙ３取り込みを、処置から１６時間後にフローサイトメトリーにより測定した（図２５Ｄ）。正常及びＣＭＬマウスもまた、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内、毎日）で３日間処置し、大腿からＢＭ、ＬＴＨＳＣ及びＥＣを選別して、ｍｉＲ１２６の発現をＱ－ＲＴ－ＰＣＲによって決定した（図２５Ｅ～２５Ｆ）。野生型Ｂ６マウスを、ＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（ｓｃｒＲＮＡ）またはＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤（阻害剤）（５ｍｇ／ｋｇ／日、静脈内注射）で３週間処置し、ＢＭ細胞を採集して、分析した。赤血球（ＲＢＣ、図２５Ｇ）、ＷＢＣ（図２５Ｈ）、ＰＬＴ（図２５Ｉ）、ＢＭ単核細胞（図２５Ｊ）、ＬＴＨＳＣ（図２５Ｋ）及びＥＣ（図２５Ｌ）の数を示している。処置された正常マウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）を、ＣＤ４５．１類遺伝子系統レシピエントマウスに移植し、１６週目での血液中（図２５Ｍ）及びＢＭならびに脾臓のドナー細胞生着（図２５Ｎ）及び１６週目でのＢＭ中のドナーＬＴＨＳＣの数（図２５Ｏ）を監視した。示した結果は、平均値±ＳＥＭで表している。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、＊＊＊ｐ＜０．００１である。略語：ＥＣ（内皮細胞）；ＰＬＴ（血小板）である。
実施例１３：本明細書に記載される化合物及び別の治療薬との組み合わせ
ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤によるｍｉＲ１２６のノックダウンは、インビボでのＮＩＬとの組み合わせにおいてマウスのＣＭＬ ＬＳＣの排除を増強させる。ＳＬ－ｔＴＡ／ＢＣＲ－ＡＢＬマウスからのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）を、類遺伝子系統Ｂ６マウス中に移植し（ＣＤ４５．１、ｎ＝４０）、ＣＭＬ様疾患を有するマウスのコホ－トを生成した。移植から４週間後に、ＣＭＬ発症を確認した後、マウスを無作為に４つの群に分け（それぞれｎ＝１０）、ＣｐＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内、１週間に４回）、ＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡ（５ｍｇ／ｋｇ、静脈内、１週間に４回）、ＣＧ－ｍｉＲ１２６阻害剤に加えてＮＩＬ（５０ｍｇ／ｋｇ、強制飼養による）、及びＣｐＧ－ｓｃｒＲＮＡに加えてＮＩＬで３週間処置した。３週間の処置後に、末梢血（ＰＢ）（図２４Ａ）、脾臓（図２４Ｂ）、及び骨髄（ＢＭ）（図２４Ｃ）中のドナーＣＭＬ細胞の百分率、脾臓（図２４Ｄ）及びＢＭ（図２４Ｅ）中のドナーＣＭＬ ＬＳＫの数、脾臓（図２４Ｆ）及びＢＭ（図２４Ｇ）中のドナーＣＭＬの長期造血幹細胞（ＬＴＨＳＣ）の数を測定した。マウスの別のコホ－トを３週間処置し、次いで、処置の３週間後に生存研究を追った（各群においてｎ＝１０）（図２４Ｈ）。処置された白血病マウス（３週目）からのＢＭ細胞（ＣＤ４５．２）をプールし、４×１０６、２×１０６、１×１０６、及び５×１０５細胞／マウスを、９００ｃＧｙで照射した二次類遺伝子系統ＣＤ４５．１レシピエントマウスに移植した（ｎ＝６マウス／用量／状態×４用量×４状態＝９６マウス）。レシピエントマウスを、血液中のＣＭＬ細胞生着及び白血病の発症について、ＷＢＣ数によって１６週間監視した。ＬＩＣの頻度を、Ｌ－Ｃａｌｃソフトウェアを用いて定量化した（図２４Ｉ）。略語：ＮＩＬ（ニロチニブ）；ＰＢ（末梢血）；ＢＭ（骨髄）；ＬＴＨＳＣ（長期造血幹細胞）；ＬＩＣ（白血病開始細胞）；ＬＳＫ（分化抗原：Ｓｃａ－１＋ｃ－ｋｉｔ＋細胞）である。
他の実施形態
本開示が、その詳細な説明と併せて説明されてきたが、前述の説明は例示を意図しており、本開示の範囲を限定することを意図するものではなく、本開示の範囲は、添付の特許請求項の範囲によって規定されている。他の態様、利点、及び修正は、以下の請求項の範囲内である。
本明細書に開示される実施形態は、以下の実施形態Ｐ１～Ｐ５１を含む。
実施形態Ｐ１．抗マイクロＲＮＡ（抗ｍｉＲ）配列に抱合されたホスホロチオエート化オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を含む単離化合物。
実施形態Ｐ２．該抗ｍｉＲ配列が、抗ｍｉＲ１２６、抗ｍｉＲ１４２、抗ｍｉＲ１５５、抗ｍｉＲ９、抗ｍｉＲ１０ｂ、抗ｍｉＲ２１、抗ｍｉＲ１７、または抗ｍｉＲ９２核酸配列である、実施形態Ｐ１に記載の化合物。
実施形態Ｐ３．マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）擬態核酸配列（ｍｉＲＮＡ－ミミック）に抱合されたホスホロチオエート化オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を含む単離化合物。
実施形態Ｐ４．該擬態核酸配列が、ｍｉＲ１２６－ミミック、ｍｉＲ１４２－ミミック、ｍｉＲ１５５－ミミック、ｍｉＲ９－ミミック、ｍｉＲ１０ｂ－ミミック、ｍｉＲ２１－ミミック、ｍｉＲ１７－ミミック、またはｍｉＲ９２－ミミック核酸配列である、実施形態Ｐ３に記載の化合物。
実施形態Ｐ５．ＯＤＮと、それぞれ抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミック配列との間に１つ以上のリンカーをさらに含む、実施形態Ｐ１または実施形態Ｐ３のいずれかに記載の化合物。
実施形態Ｐ６．リンカーが、置換もしくは非置換のアルキレンまたはヘテロアルキレンリンカーを含む、実施形態Ｐ５に記載の化合物。
実施形態Ｐ７．置換アルキレンまたはヘテロアルキレンリンカーが、アジド基、保護アミノ基、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）基、及び保護スルフヒドリル基からなる群から選択される部分を含む、実施形態Ｐ６に記載の化合物。
実施形態Ｐ８．保護スルフヒドリル基を含む置換アルキレンまたはヘテロアルキレンリンカーが、ジビニルスルホン誘導体、アクリロイル誘導体、及びマレイミド誘導体からなる群から選択される部分に抱合されている、実施形態Ｐ７に記載の化合物。
実施形態Ｐ９．アクリロイル誘導体が、塩化アクリロイルである、実施形態Ｐ８に記載の化合物。
実施形態Ｐ１０．置換アルキレンまたはヘテロアルキレンリンカーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはビスホスホネート部分に抱合されている、実施形態Ｐ６に記載の化合物。
実施形態Ｐ１１．アルキレンまたはヘテロアルキレンリンカーが、非置換のＣ３ヘテロアルキレンを含む、実施形態Ｐ６に記載の化合物。
実施形態Ｐ１２．アルキレンまたはヘテロアルキレンリンカーが、非置換のＣ６～Ｃ１２ヘテロアルキレンを含む、実施形態Ｐ６に記載の化合物。
実施形態Ｐ１３．リンカーが、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、または置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである、実施形態Ｐ５に記載の化合物。
実施形態Ｐ１４．リンカーが、置換もしくは非置換のＣ１～Ｃ４０アルキレン、置換もしくは非置換の２～４０員のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のＣ３～Ｃ８シクロアルキレン、置換もしくは非置換の３～８員のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のＣ６～Ｃ１０アリーレン、または置換もしくは非置換の５～１０員のヘテロアリーレンである、実施形態Ｐ５に記載の化合物。
実施形態Ｐ１５．リンカーが、非置換のＣ１～Ｃ４０アルキレン、非置換の２～４０員のヘテロアルキレン、非置換のＣ３～Ｃ８シクロアルキレン、非置換の３～８員のヘテロシクロアルキレン、非置換のＣ６～Ｃ１０アリーレン、または非置換の５～１０員のヘテロアリーレンである、実施形態Ｐ５に記載の化合物。
実施形態Ｐ１６．リンカーが、置換２～４０員のヘテロアルキレンである、実施形態Ｐ５に記載の化合物。
実施形態Ｐ１７．該抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミック配列が、それぞれ、化学的に修飾されている、実施形態Ｐ１または実施形態Ｐ３のいずれかに記載の化合物。
実施形態Ｐ１８．該抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミック配列が、それぞれ、２’Ｏ－メチル、２’－デオキシ－２’－フルオロ、２’－デオキシ、ユニバーサル塩基、５－Ｃ－メチル、逆位デオキシ脱塩基残基結合、及びロックド核酸からなる群から選択される化学修飾を含む、実施形態Ｐ１７に記載の化合物。
実施形態Ｐ１９．該修飾が、該抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミック配列の末端核酸塩基に、それぞれ位置している、実施形態１８に記載の化合物。
実施形態Ｐ２０．修飾が、該抗ｍｉＲもしくはｍｉＲＮＡ－ミミック配列の末端核酸塩基には、それぞれ位置していない、実施形態Ｐ１８に記載の化合物。
実施形態Ｐ２１．該修飾が、血清由来のヌクレアーゼに対して保護する、実施形態Ｐ１８に記載の化合物。
実施形態Ｐ２２．該ＯＤＮ配列が、クラスＡＣｐＧ－ＯＤＮ核酸配列、クラスＢＣｐＧ－ＯＤＮ核酸配列、及びクラスＣＣｐＧ－ＯＤＮ核酸配列からなる群から選択される、ＣｐＧ－ＯＤＮ核酸配列を含む、実施形態Ｐ１に記載の化合物。
実施形態Ｐ２３．該ＯＤＮが、ホスホジエステル誘導体結合を含む、実施形態Ｐ１またはＰ３に記載の化合物。
実施形態Ｐ２４．該ＣｐＧ核酸配列中の該ホスホジエステル誘導体結合が、ホスホロアミデート結合、ホスホロジアミデート結合、ホスホロチオエート結合、ホスホロジチオエート結合、ホスホノカルボン酸結合、ホスホノカルボキシレート結合、ホスホノ酢酸結合、ホスホノギ酸結合、メチルホスホネート結合、ホウ素ホスホネート結合、及びＯ－メチルホスホロアミダイト結合からなる群から選択される、実施形態Ｐ２３に記載の化合物。
実施形態Ｐ２５．薬学的に許容される賦形剤と、実施形態Ｐ１または実施形態Ｐ３のいずれかに記載の化合物とを含む医薬組成物。
実施形態Ｐ２６．第２の治療薬をさらに含む、実施形態Ｐ２５に記載の医薬組成物。
実施形態Ｐ２７．第２の治療薬が、抗腫瘍もしくは抗癌剤、細胞傷害性薬剤、細胞増殖抑制剤、抗炎症剤、鎮痛剤、抗感染症薬、増殖阻害剤、免疫原性薬剤、免疫調節剤、及びケモカインからなる群から選択される、実施形態Ｐ２６に記載の医薬組成物。
実施形態Ｐ２８．該抗癌剤が、細胞死促進剤である、実施形態Ｐ２７に記載の医薬組成物。
実施形態Ｐ２９．該第２の治療薬が、アクチノマイシンＤ／ダクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ドキソルビシン（ペグ化リポソーム）、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、エトポシド、ドセタキセル、イリノテカン、パクリタキセル、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、アレムツザマブ（Ａｌｅｍｔｕｚａｍａｂ）、ＢＣＧ、ベバシズマブ、セツキシマブ、デノスマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、インターフェロン、イピリムマブ、ラパチニブ、モノメチルオリスタチンＥ（ＭＭＥＡ）、メルタンシン（ＤＭ１）、リツキシマブ、スニチニブ、ソラフェニブ、テムシロリムス、及びトラスツズマブ、またはこれらの任意の組み合わせ（複数可）からなる群から選択される、実施形態Ｐ２７に記載の医薬組成物。
実施形態Ｐ３０．がんの治療を、それを必要とする対象に施す方法であって、本方法が、実施形態Ｐ１もしくは実施形態Ｐ３のいずれかに記載の化合物または実施形態Ｐ２５に記載の医薬組成物の有効量を、該対象に投与することを含む、方法。
実施形態Ｐ３１．実施形態Ｐ１もしくは実施形態Ｐ３のいずれかに記載の化合物、または実施形態Ｐ２５に記載の医薬組成物が、それぞれ抗ｍｉＲ１２６配列またはｍｉＲ１４２－ミミックを含む、実施形態Ｐ３０に記載の方法。
実施形態Ｐ３２．がんが、造血細胞癌である、実施形態Ｐ３０に記載の方法。
実施形態Ｐ３３．がんが、造血細胞癌ではない、実施形態Ｐ３０に記載の方法。
実施形態Ｐ３４．がんが、骨髄腫または急性骨髄性白血病である、実施形態Ｐ３０に記載の方法。
実施形態Ｐ３５．がんが、前立腺癌、乳癌、神経膠芽腫、卵巣癌、肺癌、頭頸部癌、食道癌、皮膚癌、悪性黒色腫、脳癌、大腸癌、リンパ腫、もしくは骨髄腫、膵臓癌、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、実施形態Ｐ３０に記載の方法。
実施形態Ｐ３６．本化合物または本組成物が、静脈内、非経口、皮下、筋肉内、経皮、腹腔内、鼻腔内、エアロゾル、経口、または局所投与によって、対象に投与される、実施形態Ｐ３０～Ｐ３５のいずれか一項に記載の方法。
実施形態Ｐ３７．該治療が、該化合物もしくは組成物の用量に依存性である、実施形態Ｐ３０～Ｐ３６のいずれか一項に記載の方法。
実施形態Ｐ３８．該化合物の約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇが、該対象に投与される、実施形態Ｐ３０～Ｐ３６のいずれか一項に記載の方法。
実施形態Ｐ３９．該がんが、化学療法後の再発がんである、実施形態Ｐ３０～Ｐ３５のいずれか一項に記載の方法。
実施形態Ｐ４０．再発がんが、化学療法耐性である、実施形態Ｐ３９に記載の方法。
実施形態Ｐ４１．該化合物または該組成物が、がん幹細胞の細胞周期開始を促進し、これによって前記がんを治療する、実施形態Ｐ３０～Ｐ４０のいずれか一項に記載の方法。
実施形態Ｐ４２．該がん幹細胞が、白血病幹細胞（ＬＳＣ）である、実施形態Ｐ４１に記載の方法。
実施形態Ｐ４３．該ＬＳＣが、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋系統決定前駆細胞または未分化ＣＤ３４＋ＣＤ３８－前駆細胞である、実施形態Ｐ４２に記載の方法。
実施形態Ｐ４４．細胞中のマイクロＲＮＡの活性を低下させる方法であって、細胞を実施形態Ｐ１に記載の化合物の有効量と接触させることを含む、方法。
実施形態Ｐ４５．該細胞が、がん細胞である、実施形態Ｐ４４に記載の方法。
実施形態Ｐ４６．該細胞が、急性骨髄性リンパ系（ＡＭＬ）細胞、前立腺癌細胞、乳癌細胞、神経膠芽腫細胞、卵巣癌細胞、肺癌細胞、頭頸部癌細胞、食道癌細胞、皮膚癌細胞、悪性黒色腫細胞、脳癌細胞、大腸癌細胞、リンパ腫細胞、骨髄腫細胞、膵臓癌細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）細胞である、実施形態Ｐ４５に記載の方法。
実施形態Ｐ４７．該ＡＭＬ細胞が、骨髄からのものである、実施形態Ｐ４６に記載の方法。
実施形態Ｐ４８．該細胞が、インビトロで培養された細胞である、実施形態Ｐ４４～Ｐ４７のいずれか一項に記載の方法。
実施形態Ｐ４９．該細胞が、宿主中のｉｎ ｓｉｔｕにある、実施形態Ｐ４４～Ｐ４７のいずれか一項に記載の方法。
実施形態Ｐ５０．該細胞が、ｅｘ ｖｉｖｏで培養された組織内にある、実施形態Ｐ４４～Ｐ４７のいずれか一項に記載の方法。
実施形態Ｐ５１．該接触させるステップが、ウイルス形質導入を含まない、実施形態Ｐ４４～Ｐ４７のいずれか一項に記載の方法。
実施形態Ｐ５２．該接触させるステップが、ウイルス形質導入を含まず、前記細胞が、実施形態Ｐ１の前記化合物と接触される、実施形態Ｐ４４～Ｐ４７のいずれか一項に記載の方法。
実施形態Ｐ５３．該細胞が、該化合物の約１～１００ナノモル濃度と接触される、実施形態Ｐ４４～Ｐ５２のいずれか一項に記載の方法。

Claims (47)

  1. 抗マイクロＲＮＡ（抗ｍｉＲ）核酸配列に抱合されているか、またはマイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）擬態核酸配列（ｍｉＲＮＡ－ミミック）に抱合されているホスホロチオエート化ＣｐＧオリゴデオキシヌレオチド（ＣｐＧ－ＯＤＮ）を含む、化合物。
  2. 前記抗ｍｉＲ核酸配列が、抗ｍｉＲ１２６核酸配列、抗ｍｉＲ１４２核酸配列、抗ｍｉＲ１５５核酸配列、抗ｍｉＲ９核酸配列、抗ｍｉＲ１０ｂ核酸配列、抗ｍｉＲ２１核酸配列、抗ｍｉＲ１７核酸配列、抗ｍｉＲ９２核酸配列、抗ｍｉＲ１２５ｂ核酸配列、または抗ｍｉＲ１４６ａ核酸配列である、請求項１に記載の化合物。
  3. 前記擬態核酸配列が、ｍｉＲ１２６－ミミック核酸配列、ｍｉＲ１４２－ミミック核酸配列、ｍｉＲ１５５－ミミック核酸配列、ｍｉＲ９－ミミック核酸配列、ｍｉＲ１０ｂ－ミミック核酸配列、ｍｉＲ２１－ミミック核酸配列、ｍｉＲ１７－ミミック核酸配列、ｍｉＲ９２－ミミック核酸配列、ｍｉＲ１２５ｂ－ミミック核酸配列、またはｍｉＲ１４６ａ－ミミック核酸配列である、請求項１に記載の化合物。
  4. 前記ＣｐＧ－ＯＤＮと、それぞれ抗ｍｉＲ核酸配列またはｍｉＲＮＡ－ミミック核酸配列との間に共有結合リンカーをさらに含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の化合物。
  5. 前記リンカーが、置換もしくは非置換のアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のシクロアルキレン、置換もしくは非置換のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のアリーレン、または置換もしくは非置換のヘテロアリーレンである、請求項４に記載の化合物。
  6. 前記リンカーが、置換もしくは非置換のＣ１～Ｃ４０アルキレン、置換もしくは非置換の２～４０員のヘテロアルキレン、置換もしくは非置換のＣ３～Ｃ８シクロアルキレン、置換もしくは非置換の３～８員のヘテロシクロアルキレン、置換もしくは非置換のＣ６～Ｃ１０アリーレン、または置換もしくは非置換の５～１０員のヘテロアリーレンである、請求項４に記載の化合物。
  7. 前記リンカーが、非置換のＣ１～Ｃ４０アルキレン、非置換の２～４０員のヘテロアルキレン、非置換のＣ３～Ｃ８シクロアルキレン、非置換の３～８員のヘテロシクロアルキレン、非置換のＣ６～Ｃ１０アリーレン、または非置換の５～１０員のヘテロアリーレンである、請求項４に記載の化合物。
  8. 前記リンカーが、置換２～４０員のヘテロアルキレンである、請求項４に記載の化合物。
  9. 前記抗ｍｉＲ核酸配列またはｍｉＲＮＡ－ミミック核酸配列が、それぞれ、化学的に修飾されている、請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物。
  10. 前記抗ｍｉＲ核酸配列またはｍｉＲＮＡ－ミミック核酸配列が、それぞれ、２’Ｏ－メチル、２’－デオキシ－２’－フルオロ、２’－デオキシ、ユニバーサル塩基、５－Ｃ－メチル、逆位デオキシ脱塩基残基結合、及びロックド核酸からなる群から選択される化学修飾を含む、請求項９に記載の化合物。
  11. 前記修飾が、前記抗ｍｉＲ核酸配列またはｍｉＲＮＡ－ミミック核酸配列の末端核酸塩基に、それぞれ位置している、請求項１０に記載の化合物。
  12. 前記修飾が、前記抗ｍｉＲ核酸配列またはｍｉＲＮＡ－ミミック核酸配列の前記末端核酸塩基には、それぞれ位置していない、請求項１０に記載の化合物。
  13. 前記修飾が、血清由来のヌクレアーゼに対して保護する、請求項１０に記載の化合物。
  14. 前記ＣｐＧ－ＯＤＮ核酸配列が、クラスＡＣｐＧ－ＯＤＮ核酸配列、クラスＢＣｐＧ－ＯＤＮ核酸配列、及びクラスＣＣｐＧ－ＯＤＮ核酸配列からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
  15. 前記ＣｐＧ－ＯＤＮが、ホスホロアミデート結合、ホスホロジアミデート結合、ホスホロジチオエート結合、ホスホノカルボン酸結合、ホスホノカルボキシレート結合、ホスホノ酢酸結合、ホスホノギ酸結合、メチルホスホネート結合、ホウ素ホスホネート結合、及びＯ－メチルホスホロアミダイト結合からなる群から選択されるホスホジエステル誘導体結合を含む、請求項１に記載の化合物。
  16. 抗マイクロＲＮＡ（抗ｍｉＲ）核酸配列を含む化合物であって、前記抗ｍｉＲ核酸配列が、１つ以上のホスホロチオエート結合と、１つ以上の化学的に修飾されたヌクレオチドとを含む、前記化合物。
  17. 前記抗ｍｉＲ核酸配列が、抗ｍｉＲ１２６核酸配列、抗ｍｉＲ１４２核酸配列、抗ｍｉＲ１５５核酸配列、抗ｍｉＲ９核酸配列、抗ｍｉＲ１０ｂ核酸配列、抗ｍｉＲ２１核酸配列、抗ｍｉＲ１７核酸配列、抗ｍｉＲ９２核酸配列、抗ｍｉＲ１２５ｂ核酸配列、または抗ｍｉＲ１４６ａ核酸配列である、請求項１６に記載の化合物。
  18. 前記抗ｍｉＲ核酸配列が、２’Ｏ－メチル、２’－デオキシ－２’－フルオロ、２’－デオキシ、ユニバーサル塩基、５－Ｃ－メチル、逆位デオキシ脱塩基残基結合、及びロックド核酸からなる群から選択される化学修飾を含む、請求項１７に記載の化合物。
  19. 薬学的に許容される賦形剤と、請求項１～１８のいずれか一項に記載の前記化合物とを含む医薬組成物。
  20. 第２の治療薬をさらに含む、請求項１９に記載の医薬組成物。
  21. 前記第２の治療薬が、抗腫瘍もしくは抗癌剤、細胞傷害性薬剤、細胞増殖抑制剤、抗炎症剤、鎮痛剤、抗感染症薬、増殖阻害剤、免疫原性薬剤、免疫調節剤、及びケモカインからなる群から選択される、請求項２０に記載の医薬組成物。
  22. 前記抗癌剤が、細胞死促進剤である、請求項２１に記載の医薬組成物。
  23. 前記第２の治療薬が、アクチノマイシンＤ／ダクチノマイシン、ブレオマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ドキソルビシン（ペグ化リポソーム）、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、エトポシド、ドセタキセル、イリノテカン、パクリタキセル、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、カルボプラチン、シスプラチン、オキサリプラチン、アレムツザマブ（Ａｌｅｍｔｕｚａｍａｂ）、ＢＣＧ、ベバシズマブ、セツキシマブ、デノスマブ、エルロチニブ、ゲフィチニブ、イマチニブ、インターフェロン、イピリムマブ、ラパチニブ、モノメチルオリスタチンＥ（ＭＭＥＡ）、メルタンシン（ＤＭ１）、リツキシマブ、スニチニブ、ソラフェニブ、テムシロリムス、及びトラスツズマブ、またはこれらの任意の組み合わせ（複数可）からなる群から選択される、請求項２１に記載の医薬組成物。
  24. 疾患の治療を、それを必要とする対象に施す方法であって、前記方法が、請求項１～１８のいずれか一項に記載の前記化合物または請求項１９～２３のいずれか一項に記載の前記医薬組成物の有効量を、前記対象に投与することを含む、前記方法。
  25. 前記疾患が、がん、感染性疾患、または自己免疫疾患である、請求項２４に記載の方法。
  26. 前記がんが、造血細胞癌である、請求項２５に記載の方法。
  27. 前記がんが、造血細胞癌ではない、請求項２５に記載の方法。
  28. 前記がんが、骨髄腫または急性骨髄性白血病である、請求項２５に記載の方法。
  29. 前記がんが、前立腺癌、乳癌、神経膠芽腫、卵巣癌、肺癌、頭頸部癌、食道癌、皮膚癌、悪性黒色腫、脳癌、大腸癌、リンパ腫、もしくは骨髄腫、膵臓癌、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）である、請求項２５に記載の方法。
  30. 前記化合物または前記組成物が、静脈内、非経口、皮下、筋肉内、経皮、腹腔内、鼻腔内、エアロゾル、経口、または局所投与によって、前記対象に投与される、請求項２４～２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記治療が、前記化合物もしくは組成物の用量に依存性である、請求項２４～３０のいずれか一項に記載の方法。
  32. 前記化合物の約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇが、前記対象に投与される、請求項２４～３０のいずれか一項に記載の方法。
  33. 前記がんが、化学療法後の再発がんである、請求項２５～２９のいずれか一項に記載の方法。
  34. 前記再発がんが、化学療法耐性である、請求項３３に記載の方法。
  35. 前記化合物または前記組成物が、がん幹細胞の細胞周期開始を促進し、これによって前記がんを治療する、請求項２４～３４のいずれか一項に記載の方法。
  36. 前記がん幹細胞が、白血病幹細胞（ＬＳＣ）である、請求項３５に記載の方法。
  37. 前記ＬＳＣが、ＣＤ３４＋ＣＤ３８＋コミッテッド前駆細胞または未分化ＣＤ３４＋ＣＤ３８－前駆細胞である、請求項３６に記載の方法。
  38. 細胞中のマイクロＲＮＡの活性を低下させる方法であって、前記細胞を請求項１～１８のいずれか一項に記載の前記化合物の有効量と接触させることを含む、前記方法。
  39. 前記細胞が、がん細胞である、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記細胞が、急性骨髄性リンパ系（ＡＭＬ）細胞、前立腺癌細胞、乳癌細胞、神経膠芽腫細胞、卵巣癌細胞、肺癌細胞、頭頸部癌細胞、食道癌細胞、皮膚癌細胞、悪性黒色腫細胞、脳癌細胞、大腸癌細胞、リンパ腫細胞、骨髄腫細胞、膵臓癌細胞、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞、または骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）細胞である、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記ＡＭＬ細胞が、骨髄からのものである、請求項４０に記載の方法。
  42. 前記細胞が、インビトロで培養された細胞である、請求項３８～４１のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記細胞が、宿主中のｉｎ ｓｉｔｕにある、請求項３８～４１のいずれか一項に記載の方法。
  44. 前記細胞が、ｅｘ ｖｉｖｏで培養された組織内にある、請求項３８～４１のいずれか一項に記載の方法。
  45. 前記接触させるステップが、ウイルス形質導入を含まない、請求項３８～４１のいずれか一項に記載の方法。
  46. 前記接触させるステップが、ウイルス形質導入を含まず、前記細胞が、前記化合物と接触される、請求項３８～４１のいずれか一項に記載の方法。
  47. 前記細胞が、前記化合物の約１～１００ナノモル濃度と接触される、請求項３８～４６のいずれか一項に記載の方法。
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