JP2022041733A - 膵臓がん検出方法及び膵臓がん検出キット - Google Patents
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Abstract
Description
リキッド・バイオプシーで用いられる、既存の膵臓がん検出のための腫瘍マーカーとしては、糖鎖抗原としてCA19─9、Span─1、CA50、CA242、Dupan─2、TAG─72、尿中フコースなど、糖鎖以外の抗原としてCEA、POA、TPSなどが挙げられる(非特許文献1)。これらの腫瘍マーカーは、感度は良いが特異度はそれほど高くなく、偽陽性率が高いという課題がある。さらに、膵臓がんでの陽性的中率は進行がんを除けば一般的に低く、2cm以下の膵臓がんでもCA19─9の陽性的中率は52%と半数に過ぎない。そのため、腫瘍マーカーは、早期膵臓がんの検出に課題がある。
[1]被検体に由来する体液試料中の細胞外小胞を、1種以上のレクチンと接触させる工程(a)と、前記工程(a)後、前記1種以上のレクチンに結合した前記細胞外小胞の量を測定する工程(b)と、前記工程(b)で測定された前記細胞外小胞の量に基づいて、前記被検体における膵臓がんの存在を評価する工程(c)と、を含む、膵臓がん検出方法。
[2]前記工程(c)は、膵臓がんを有さないことが既知である被検体の体液試料を用いて測定された前記1種以上のレクチンに結合する細胞外小胞の量と比較して、前記工程(b)で測定された前記細胞外小胞の量が多い場合に、前記被検体に膵臓がんが存在すると評価することを含む、[1]に記載の膵臓がん検出方法。
[3]前記1種以上のレクチンが、DSA、STL、LEL、ACA、UDA、ABA、MAH、及びTJA-1からなる群より選択される少なくとも1種を含む、[1]又は[2]に記載の膵臓がん検出方法。
[4]前記工程(b)を、汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を用いて行う、[1]~[3]のいずれか一項に記載の膵臓がん検出方法。
[5]前記汎細胞外小胞膜タンパク質が、CD9、CD63、及びCD81からなる群より選択される、[4]に記載の膵臓がん検出方法。
[6]1種以上のレクチンが固定された固相担体と、汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片と、を含む、膵臓がん検出キット。
[7]前記1種以上のレクチンが、DSA、STL、LEL、ACA、UDA、ABA、MAH、及びTJA-1からなる群より選択される少なくとも1種を含む、[6]に記載の膵臓がん検出キット。
[8]前記汎細胞外小胞膜タンパク質が、CD9、CD63、及びCD81からなる群より選択される、[6]又は[7]に記載の膵臓がん検出キット。
[9]前記汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片が、固相担体粒子に固定されている、[6]~[8]のいずれか一項に記載の膵臓がん検出キット。
[10]前記膵臓がん検出キットは、細胞外小胞の計数に用いられる細胞外小胞計数器に使用される細胞外小胞捕捉ユニットを含み、前記固相担体が、前記細胞外小胞捕捉ユニットに備えられている、[6]~[9]いずれか一項に記載の膵臓がん検出キット。
一実施形態において、本発明は、膵臓がん検出方法を提供する。本実施形態の膵がん検出方法は、被検体に由来する体液試料中の細胞外小胞を、1種以上のレクチンと接触させる工程(a)と、前記工程(a)後、前記1種以上のレクチンに結合した前記細胞外小胞の量を測定する工程(b)と、前記工程(b)で測定された前記細胞外小胞の量に基づいて、前記被検体における膵臓がんの存在を評価する工程(c)と、を含む。
図1Aの固相担体1は、細胞外小胞を、レクチン10と接触させるために用いられる固相担体の一例である。固相担体1は、凹部2及び凸部3有しており、凹部2にはレクチン10が固定されている。固相担体1に、被検体に由来する体液試料を添加すると、前記体液試料中の細胞外小胞(E1、E2)をレクチン10に接触させることができる(工程(a):図1B)。
本実施形態の膵臓がん検出方法において、指標として用いる細胞外小胞は、好ましくはエクソソームである。エクソソームは、直径50~150nm程度の脂質二重膜で囲まれた膜小胞であり、エンドソーム内腔へ内向きに出芽した腔内膜小胞が、がん細胞を含む種々の細胞から、体液中に分泌されたものである。
工程(a)では、被検体に由来する体液試料中の細胞外小胞を、1種以上のレクチンと接触させる。工程(a)は、in vitroで行われる工程である。
被検体に由来する体液試料としては、血清又は血漿が好ましく、血清がより好ましい。
レクチンの変異体としては、例えば、
(1)元のレクチンのアミノ酸配列において、1個又は複数個のアミノ酸が変異したアミノ酸配列からなり、且つ元のレクチンの糖鎖結合性を有するタンパク質;並びに
(2)元のレクチンのアミノ酸配列と80%以上の配列同一性を有するアミノ酸配列からなり、且つ元のレクチンの糖鎖結合性を有するタンパク質、等が挙げられる。
前記(1)において、「複数個」は、例えば、2~20個、2~15個、2~10個、2~5個、2~4個、又は2個若しくは3個が挙げられる。前記(2)において、配列同一性は、85%以上が好ましく、90%以上がより好ましく、95%以上がさらに好ましく、96%以上、97%以上、98%以上又は99%以上が特に好ましい。なお、アミノ酸配列同士の配列同一性は、2つのアミノ酸配列を、対応するアミノ酸が最も多く一致するように、挿入及び欠失に当たる部分にギャップを入れながら並置し、得られたアラインメント中のギャップを除くアミノ酸配列全体に対する一致したアミノ酸の割合として求められる。アミノ酸配列同士の配列同一性は、当該技術分野で公知の各種相同性検索ソフトウェアを用いて求めることができる。例えば、アミノ酸配列の配列同一性の値は、公知の相同性検索ソフトウェアBLASTPにより得られたアライメントを元にした計算によって得ることができる。
好ましい変異体としては、元のレクチンを構成するアミノ酸の一部が保存的置換した変異体が挙げられる。「保存的置換」とは、類似した生化学的性質を有するアミノ酸への置換である。保存的置換としては、例えば、脂肪族側鎖を有するアラニン、バリン、ロイシン、及びイソロイシン間での置換;ヒドロキシ基側鎖を有するセリン及びトレオニン間での置換;酸性側鎖を有するアスパラギン酸及びグルタミン酸の間での置換;アミド基側鎖を有するアスパラギン及びグルタミンの間での置換;塩基性側鎖を有するリジン及びアルギニンの間での置換;並びに芳香族側鎖を有するフェニルアラニン及びトリプトファンの間での置換等が挙げられる。
固相担体1へのレクチン10の固定方法は、公知の方法を用いて行うことができる。例えば、レクチンを固定する面を、表面疎水的相互作用によりタンパク質が物理吸着されるように表面加工してもよく、アミノ基若しくはカルボキシル基等を有するように表面加工してもよい。あるいは、アビジン-ビオチン結合を利用して、凹部2にレクチン10を固定してもよい。
工程(b)では、工程(a)後、前記1種以上のレクチンに結合した前記細胞外小胞の量を測定する。工程(b)は、in vitroで行われる工程である。
抗体41は、汎細胞外小胞膜タンパク質を抗原として公知の抗体作製方法(ハイブリドーマ法、ファージディスプレイ法など)により作製することができる。抗体41は、ポリクローナル抗体であってもよく、モノクローナル抗体であってもよい。抗体41が由来する動物は、特に限定されず、抗体作製用に一般的に用いられる動物を用いることができ、例えば、ヤギ抗体、マウス抗体、ラット抗体、ウサギ抗体、サル抗体、ヒト抗体等が利用可能である。
抗体41は、インタクトな抗体である必要はなく、抗原結合断片であってもよい。「抗原結合断片」とは、抗体の一部を含むポリペプチドであって、元の抗体の抗原結合性を維持しているポリペプチドをいう。抗原結合断片としては、例えば、scFv、Fab、F(ab')2、Fv等が挙げられる。また、抗体41は、キメラ抗体等の改変抗体であってもよい。
標識分子のシグナルの検出は、使用する標識分子に応じた公知の方法により行うことができる。例えば、汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する標識抗体を、レクチン特異的細胞外小胞に結合させ、標識分子のシグナルを測定することにより、レクチン特異的細胞外小胞が発現する汎細胞外小胞膜タンパク質の量を測定することができる。前記汎細胞外小胞膜タンパク質の量を、レクチン特異的細胞外小胞の量とみなすことができる。更に、汎エクソソーム膜タンパク質とされるCD9、CD63、CD81等のタンパク質の量を測定することで、エクソソーム量を測定するようにしてもよい。
(1)レクチンを固定した固相担体、及び汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体を固定した固相担体粒子を用いて、細胞外小胞計測器により、レクチンに結合した細胞外小胞の量を測定する方法。
(2)レクチンを固定した固相担体、及び標識分子で標識化した汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体を用いて、サンドイッチELISA等の免疫学的計測法により、レクチンに結合した細胞外小胞の量を測定する方法。
(3)汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体を固定した固相担体、及びレクチンを固定した固相担体粒子を用いて、細胞外小胞計測器により、レクチンに結合した細胞外小胞の量を測定する方法。
(4)汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体を固定した固相担体、及び標識分子で標識化したレクチンを用いて、サンドイッチELISA等の免疫学的計測法により、レクチンに結合した細胞外小胞の量を測定する方法。
(5)標識分子で標識化したレクチンを用いて、フローサイトメトリーにより、レクチンに結合した細胞外小胞の量を測定する方法。
(6)レクチンを固定した磁気ビーズを用いてレクチンに結合した細胞外小胞を回収し、標識分子で標識化した汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体を用いて、フローサイトメトリーにより、レクチンに結合した細胞外小胞の量を測定する方法。
(7)汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体を固定した磁気ビーズを用いて細胞外小胞を回収し、標識分子で標識化したレクチンを用いて、フローサイトメトリーにより、レクチンに結合した細胞外小胞の量を測定する方法。
レクチンを固定した固相担体を用いてレクチンに結合したエクソソームを回収し、汎エクソソームタンパク質を標的としてELISA等の免疫学的計測法により、レクチンを用いて回収されたエクソソームにおける前記汎エクソソームタンパク質の量を測定する。
あるいは、レクチンを固定した固相担体上に捕捉されているエクソソーム上の汎エクソソームタンパク質を蛍光標識抗体で標識し、フローサイトメーターにより、その量を測定する。
工程(c)では、工程(b)で測定された細胞外小胞の量に基づいて、前記被検体における膵臓がんの存在を評価する。
より具体的には、非膵臓がん体液試料で測定されるレクチン特異的細胞外小胞の量と比較して、工程(b)で測定された細胞外小胞の量が多いか又は少ない場合、前記被検体に膵臓がんが存在する、と判定することができる。「非膵臓がん体液試料」とは、膵臓がんを有さないことが既知であるか、膵臓がんを有する可能性が極めて低い個体に由来する体液試料をいう。例えば、腹部超音波検査、CT検査、MRI検査、磁気共鳴胆管膵管造影検査(MRCP)、超音波内視鏡検査(EUS)、内視鏡的逆行性胆管膵管造影(ERCP)、陽電子放出断層撮影法(PET)等の各種画像診断により、膵臓がんであると診断されなかった個体に由来する体液試料を、「非膵臓がん体液試料」として用いることができる。非膵臓がん体液試料は、いわゆる健常者の体液試料であってもよい。また、膵臓がん以外のがん患者の体液試料であってもよい。
本実施形態の検出方法は、上記工程(a)~(c)に加えて、任意工程を含んでいてもよい。任意工程としては、工程(a)の前に固相担体1のブロッキング処理を行う工程(ブロッキング工程)、工程(c)の後に膵臓がんを治療する工程(治療工程)、等が挙げられる。
工程(a)の前に、レクチン10が固定された固相担体1のブロッキング処理を行ってもよい。ブロッキング処理を行うことにより、レクチン10に結合しない細胞外小胞が非特異的に固相担体1に結合することを抑制することができる。
ブロッキング処理は、公知のブロッキング液を用いて行うことができる。ブロッキング液、ELISA等で通常用いられるものを特に制限なく使用することができる。ブロッキング液としては、例えば、1~5%程度のスキムミルク又は牛血清アルブミン(BSA)を含む緩衝液等が挙げられる。前記ブロッキング液用の緩衝液は、特に限定されないが、例えば、PBS、PBS-T、トリス緩衝液、HEPES緩衝液等が挙げられる。
工程(c)において、被検体に膵臓がんが存在すると評価された場合には、膵臓がんを治療する工程を行ってもよい。
したがって、本発明は、
被検体に由来する体液試料中の細胞外小胞を、1種以上のレクチンと接触させる工程(a)と、
前記工程(a)後、前記1種以上のレクチンに結合した前記細胞外小胞の量を測定する工程(b)と、
前記工程(b)で測定された前記細胞外小胞の量に基づいて、前記被検体における膵臓がんの存在を評価する工程(c)と、
前記工程(c)で被検体に膵臓がんが存在すると評価された場合に、前記膵臓がんを治療する工程(d)
を含む、膵臓がん治療方法、もまた提供する。
一実施形態において、本発明は、1種以上のレクチンが固定された固相担体と、汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片と、を含む、膵臓がん検出キット、を提供する。
1種以上のレクチンが固定された固相担体としては、上記(膵臓がん検出方法)の[工程(a)]で説明したもの(例えば、図1Aに示す固相担体1)と同様のものを用いることができる。レクチンを2種以上用いる場合、1つの固相担体には、1種類のレクチンが固定されていることが好ましい。あるいは、1つの固相担体をレクチンの種類数に区画して、1区画には1種類のレクチンを固定するようにしてもよい。固相担体に固定されるレクチンは、DSA、STL、LEL、ACA、UDA、ABA、MAH、及びTJA-1からなる群より選択される少なくとも1種を含むことが好ましく、ACA及びABAからなる群より選択される少なくとも1種を含むことがより好ましい。
汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片としては、上記(膵臓がん検出方法)の[工程(b)]で説明したものと同様のものを用いることができる。汎細胞外小胞膜タンパク質は、汎エクソソーム膜タンパク質であってもよい。汎エクソソーム膜タンパク質としては、CD9、CD63、及びCD81等が挙げられる。
本実施形態の膵臓がん検出キットは、細胞外小胞計測器で用いられるものであってもよい。細胞外小胞計数器は、市販のものを用いることができ、例えば、ExoCounter(登録商標)(JVCケンウッド)等が挙げられる。細胞外小胞計測器で用いられる場合、1種以上のレクチンが固定された固相担体は、細胞外小胞計数器に使用される細胞外小胞捕捉ユニットに備えられるものであってもよい。また、汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片は、固相担体粒子に固定されたものを用いることができる。
細胞外小胞捕捉ユニットは、使用する細胞外小胞計数器に応じたものを使用することができる。細胞外小胞体捕捉ユニットに備えられる固相担体としては、例えば、図1Aの固相担体1のような形態のものが挙げられる。以下、図2A~2C及び図3A~3Bを参照して、固相担体1を備える細胞外小胞捕捉ユニットの例について説明する。
固相担体粒子は、使用する細胞外小胞計数器に応じたものを使用することができる。固相担体粒子としては、例えば、ポリスチレン、グリシジルメタクリレート等の樹脂粒子;並びに磁気ビーズ等が挙げられる。固相担体粒子には、汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体が固定されている。固相担体粒子としては、例えば、図1Cの抗体41が固定された固相担体粒子40が挙げられる。
Wb<Ra ・・・(1)
Ra<Wa<4×Ra ・・・(2)
Wb<Rc<Wa<2×Rc ・・・(3)
Ra<Rc ・・・(4)
(Ra+Rc)/8<H ・・・(5)
(Ra+Rc)/6<H ・・・(6)
本実施形態の膵臓がん検出キットは、上記構成に加えて、任意の構成を含んでいてもよい。任意の構成としては、例えば、体液試料を処理するための試薬(例えば、希釈液等)、洗浄液、ブロッキング液、緩衝液等の各種試薬類、及び使用説明症等が挙げられる。
本発明は、以下の態様も含み得る。
(1)被検体に由来する体液試料中の細胞外小胞を、1種以上のレクチンとin vitroで接触させる工程(a)と、前記工程(a)後、前記1種以上のレクチンに結合した前記細胞外小胞の量を測定する工程(b)と、前記工程(b)で測定された前記細胞外小胞の量に基づいて、前記被検体における膵臓がんの存在を評価する工程(c)と、を含む、膵臓がん診断方法。
(2)被検体に由来する体液試料中の細胞外小胞を、1種以上のレクチンとin vitroで接触させる工程(a)と、前記工程(a)後、前記1種以上のレクチンに結合した前記細胞外小胞の量を測定する工程(b)と、前記工程(b)で測定された前記細胞外小胞の量に基づいて、前記被検体における膵臓がんの存在を評価する工程(c)と、を含む、膵臓がんを有する被検体に由来する体液試料を特定する方法。
(3)被検体に由来する体液試料中の細胞外小胞を、1種以上のレクチンとin vitroで接触させる工程(a)と、前記工程(a)後、前記1種以上のレクチンに結合した前記細胞外小胞の量を測定する工程(b)と、前記工程(b)で測定された前記細胞外小胞の量に基づいて、前記被検体における膵臓がんの存在を評価する工程(c)と、を含む、膵臓がんを診断するためのデータを収集する方法。
(4)膵臓がん治療を受けた被検体に由来する体液試料中の細胞外小胞を、1種以上のレクチンとin vitroで接触させる工程(a)と、前記工程(a)後、前記1種以上のレクチンに結合した前記細胞外小胞の量を測定する工程(b)と、前記工程(b)で測定された前記細胞外小胞の量に基づいて、前記被検体における膵臓がんの存在を評価する工程(c)と、を含む、膵臓がん治療の効果のモニタリング方法。
(5)膵臓がん治療を受けた被検体に由来する体液試料中の細胞外小胞を、1種以上のレクチンとin vitroで接触させる工程(a)と、前記工程(a)後、前記1種以上のレクチンに結合した前記細胞外小胞の量を測定する工程(b)と、前記工程(b)で測定された前記細胞外小胞の量に基づいて、前記被検体における膵臓がんの存在を評価する工程(c)と、を含む、膵臓がん治療の効果を評価するためのデータを収集する方法。
(6)膵臓がんの診断キットを製造するための、レクチン、及び汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体の使用。
(7)膵臓がんを診断するための、レクチン、及び汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体の使用。
(8)膵臓がんの診断に用いるための、レクチン、及び汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体。
前記(1)~(8)において、レクチンは、DSA、STL、LEL、ACA、UDA、ABA、MAH、及びTJA-1からなる群より選択される少なくとも1種を含むことが好ましく、ABA及びACAからなる群より選択される少なくとも1種を含むことがより好ましい。前記(1)~(5)において、工程(a)~(c)は、上記と同様に行うことができる。前記(7)及び(8)において。汎細胞外小胞膜タンパク質としては、CD9、CD63、及びCD81等が挙げられる。
膵臓がん患者と健常者の血清から、Magcapture Exosome Isolation Kit(富士フィルム、東京、日本)を用いて、エクソソームを単離した。エクソソームをバッファ中に再分散し、Cy3-succimidyl ester(SE;Amersham Biosciences,Tokyo,Japan)でエクソソームを標識した。この試料を、45種類のレクチンを予め固定してあるレクチンアレイ(LecChip(登録商標)、GPバイオサイエンス、横浜、日本)と反応させ、各々のレクチンと結合できるエクソソームを固相化した。この固相化したエクソソームを、エバネッセント蛍光スキャナーを用いて解析した。
以降の試験において、ABA又はACAに結合する糖鎖を有するエクソソーム(以下、「ABA/ACA特異的エクソソーム」ともいう)の測定は、サンドイッチ・イムノアッセイにより行った。実施したサンドイッチ・イムノアッセイの手順を以下に示す。
1)表面をカルボキシル基で修飾された磁気ビーズに抗CD9抗体を共有結合させたものを準備する。具体的には、以下の手順に従った。
FGビーズ(COOHビーズ;多摩川精機)に、400mMの1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩(EDC・HCl)及びN-ヒドロキシスクシンイミドを含有するPBS(pH7.4)を添加し、4時間、室温で反応。
50mMの酢酸バッファー(pH5.2)でビーズを洗浄。
ビーズに、1.0g/Lの抗CD9抗体又は抗CD63抗体を含有する酢酸バッファー(pH5.2)を添加し、4℃で一晩反応させ、抗体を固定。
ビーズに0.1Mのエタノールアミンを含有するPBS(pH7.4)を添加し、4℃で5時間反応させて、未反応のカルボキシル基をマスキング。
150mM KCl、5mM EDTA及び0.1% Tween20を含むHEPESバッファー(10mM HEPES、pH7.9)で、洗浄し、4℃で保存。
2)ExoCounter(登録商標)(JVCケンウッド、横浜、日本)のディスク(細胞外小胞捕捉ユニット)にABA又はACAを結合させる。具体的には、5mg/mLのレクチンを含有する炭酸バッファー(pH9.6)をディスクに添加し、37℃で30分間静置する。
3)ディスクを0.05%PBS-T(pH7.4)で洗浄する。
4)がん細胞株培養上清又は被験者血清を、適宜、緩衝液(PBS又はPBS-T)で希釈して、ディスク上のABA又はACAと反応させる(37℃、2時間、1000-1500rpmで振盪)。
5)ディスクを0.05%PBS-T(pH7.4)で洗浄する。
6)抗CD9抗体を結合した磁気ビーズを0.05%PBS-T(pH7.4)に20μg/mLとなるように懸濁し、ディスク上のABA又はACに結合したエクソソームと反応させる(37℃、1.5時間)。この反応は、磁石を用いて、迅速に磁気をディスク表面に集め反応させる方法であっても良い。
7)ディスクをPBS-Tで洗浄する。最終洗浄は純水で実施する。
8)ディスクを乾燥させる。
9)ディスクをExoCounterにセットして、エクソソームを測定する。
≪ABA/ACA特異的クソソーム数の測定≫
各種がん細胞株(膵臓がん細胞株:BxPC33、Capan-1;乳がん細胞株:MCF7;大腸がん細胞株:HCT116;肺がん細胞株:A549)の培養上清を用いて、ABA/ACA特異的エクソソームの量に、がん種間で差があるかを検討した。ABA/ACA特異的エクソソームの定量は、上記<レクチンに結合するエクソソームの測定方法>に記載の方法により行った。
エクソソームの分泌量は、細胞株の種類によって異なる。そのため、総エクソソーム分泌量に対するABA/ACA特異的エクソソームの比率が重要になる。そこで、上記と同じ試料を用いて、CD63抗体を固定したディスクにエクソソームを捕捉し、CD9抗体を固定したビーズを用いてエクソソームを検出した。CD63は、CD9と同様にエクソソームにユビキタスに発現していると考えられている膜タンパク質である。そのため、この測定結果は試料中の総エクソソーム数を表していると言える。この測定値を用いて、図1に示す測定数をCD63・CD9の測定数で正規化することで、総エクソソームに対するABA又はACA特異的エクソソームの比率を評価した。
健常者と膵臓がん患者とのABA/ACA特異的エクソソーム数の比較
健常者血清、膵臓がん患者の手術前及び手術後血清を用いて、ABA/ACA特異的エクソソームの量に、前記血清間で差があるかを検討した。ABA/ACA特異的エクソソームの定量は、上記<レクチンに結合するエクソソームの測定方法>に記載の方法により行った。血清は、PBS-Tにより4倍に希釈して用いた。
膵臓がんと他のがん種とのABA/ACA特異的エクソソーム数の比較
健常者血清、膵臓がん患者、食道がん患者、大腸がん患者の各血清を用いて、ABA/ACA特異的エクソソームの量に、がん種間で差があるかを検討した。ABA/ACA特異的エクソソームの定量は、上記<レクチンに結合するエクソソームの測定方法>に記載の方法により行った。
ステージの異なる膵臓がん患者間のABA/ACA特異的エクソソーム数の比較
健常者血清、ステージI、II及びIIIの各膵臓がん患者血清を用いて、ABA/ACA特異的エクソソームの量に、前記血清間で差があるかを検討した。ABA/ACA特異的エクソソームの定量は、上記<レクチンに結合するエクソソームの測定方法>に記載の方法により行った。
Claims (10)
- 被検体に由来する体液試料中の細胞外小胞を、1種以上のレクチンと接触させる工程(a)と、
前記工程(a)後、前記1種以上のレクチンに結合した前記細胞外小胞の量を測定する工程(b)と、
前記工程(b)で測定された前記細胞外小胞の量に基づいて、前記被検体における膵臓がんの存在を評価する工程(c)と、
を含む、膵臓がん検出方法。 - 前記工程(c)は、
膵臓がんを有さないことが既知である被検体の体液試料を用いて測定された前記1種以上のレクチンに結合する細胞外小胞の量と比較して、前記工程(b)で測定された前記細胞外小胞の量が多い場合に、前記被検体に膵臓がんが存在すると評価することを含む、
請求項1に記載の膵臓がん検出方法。 - 前記1種以上のレクチンが、DSA、STL、LEL、ACA、UDA、ABA、MAH、及びTJA-1からなる群より選択される少なくとも1種を含む、請求項1又は2に記載の膵臓がん検出方法。
- 前記工程(b)を、汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片を用いて行う、請求項1~3のいずれか一項に記載の膵臓がん検出方法。
- 前記汎細胞外小胞膜タンパク質が、CD9、CD63、及びCD81からなる群より選択される、請求項4に記載の膵臓がん検出方法。
- 1種以上のレクチンが固定された固相担体と、
汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片と、
を含む、膵臓がん検出キット。 - 前記1種以上のレクチンが、DSA、STL、LEL、ACA、UDA、ABA、MAH、及びTJA-1からなる群より選択される少なくとも1種を含む、請求項6に記載の膵臓がん検出キット。
- 前記汎細胞外小胞膜タンパク質が、CD9、CD63、及びCD81からなる群より選択される、請求項6又は7に記載の膵臓がん検出キット。
- 前記汎細胞外小胞膜タンパク質に特異的に結合する抗体又はその抗原結合断片が、固相担体粒子に固定されている、請求項6~8のいずれか一項に記載の膵臓がん検出キット。
- 前記膵臓がん検出キットは、細胞外小胞の計数に用いられる細胞外小胞計数器に使用される細胞外小胞捕捉ユニットを含み、
前記固相担体が、前記細胞外小胞捕捉ユニットに備えられている、請求項6~9のいずれか一項に記載の膵臓がん検出キット。
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