JP2022023096A - 過リン酸化タウに特異的な抗体およびその使用方法 - Google Patents

過リン酸化タウに特異的な抗体およびその使用方法 Download PDF

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Abstract

【課題】アルツハイマー病およびタウオパチーの治療に有用な医薬組成物を提供する。【解決手段】モノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメントを含む医薬組成物であって、モノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、（ａ）特定のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；（ｂ）特定のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；（ｃ）特定のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；（ｄ）特定のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；（ｅ）特定のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および（ｆ）特定のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３を含む、医薬組成物である。【選択図】なし

Description

本発明は、病理学的過リン酸化（ＰＨＦ）タウにおけるリン酸化セリン３９６残基（ｐ
Ｓ３９６）に特異的に結合するモノクローナル抗体の新規な種類、ならびにアルツハイマ
ー病およびタウオパチーの治療にこれらの分子およびそれらのタウ結合フラグメントを使
用する方法に関する。
配列表の参照
本出願は、米国特許法施行規則（３７ Ｃ．Ｆ．Ｒ．）第１．８２１条に従う１つまた
は複数の配列表（以下参照）を含み、これは、コンピュータ可読媒体（ファイル名：１０
４９－ＷＯ－ＰＣＴ ＦＩＮＡＬ ＳＴ２５ １．ｔｘｔ、２０１７年６月１３日に作成
され、６５ｋＢのサイズを有する）で開示され、このファイルは、全体が参照により本明
細書に援用される。
アルツハイマー病（ＡＤ）および認知症などの加齢性神経変性疾患は、現在、最大の社
会的課題の１つである。世界保健機関（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔ
ｉｏｎ）は、高齢者の介護のコストが、今後増加し続け、診断される認知症事例の数が２
０５０年までに３倍になるであろうと推定している（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇ
ａｎｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｉｎｔｅｒｎ
ａｔｉｏｎａｌ－Ｓｔａｔｕｓ Ｒｅｐｏｒｔ（２０１２）ＤＥＭＥＮＴＩＡ：Ａ ｐｕ
ｂｌｉｃ ｈｅａｌｔｈ ｐｒｉｏｒｉｔｙ，ＷＨＯ）。ＡＤの最初の治療は、アセチル
コリンエステラーゼ阻害剤およびＮＭＤＡ調節剤などの神経伝達物質調節剤であった。こ
れらの治療は、世紀の変わり目に利用可能になり、依然として、認知症およびＡＤに関連
する記憶障害の症状緩和のための基礎を成すものである。しかしながら、これらの薬剤は
、ＡＤの根本原因である、アミロイド－β（Ａβ）ペプチドおよびタウタンパク質凝集体
の蓄積ならびにそれに関連する、ニューロンシナプス、最終的にはニューロンの喪失を標
的にしていない。
高齢者の長期的なコミュニティ規模の研究（Ｗｅｉｎｅｒ，Ｍ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．（２
０１４）ＡＤＮＩ ｏｎｌｉｎｅ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｄｎｉ－ｉｎｆｏ．ｏｒｇ
／；Ｂｒｅｔｅｌｅｒ，Ｍ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｎｅｕｒｏｅｐｉｄｅｍｉｏ
ｌｏｇｙ １１ Ｓｕｐｐｌ １，２３－２８；Ｌａｕｎｅｒ，Ｌ．Ｊ．（１９９２）Ｎ
ｅｕｒｏｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ １１ Ｓｕｐｐｌ １，２－１３）は、大規模なゲ
ノムワイド関連解析（Ｌａｍｂｅｒｔ，Ｊ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎａｔ．Ｇｅ
ｎｅｔ．４５，１４５２－１４５８）とともに、ＡＤが認知症の多様な混合であり、進行
したＡＤ患者の最大で１０パーセントに、アミロイド病変がないことを示した（Ｃｒａｒ
ｙ，Ｊ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．１２８，７
５５－７６６）。さらに、ＢｒａａｋおよびＢｒａａｋによる重要な病理学的研究（Ｂｒ
ａａｋ，Ｈ．ａｎｄ Ｂｒａａｋ，Ｅ．（１９９６）Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃａｎ
ｄ．Ｓｕｐｐｌ １６５，３－１２）は、解剖前の神経原線維変化病変の程度と認識状態
との間の明らかな相関関係を実証した。これらの観察は、幾人かの研究者（Ｎｅｌｓｏｎ
，Ｐ．Ｔ．ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏ
ｌ．７１，３６２－３８１）および最近の長期的なバイオマーカー研究によって裏付けら
れており、このバイオマーカー研究は、タウおよび過リン酸化タウの脳脊髄液（ＣＳＦ）
レベルが、疾患の初期および後期を通して増加することを示す（Ｊａｃｋ，Ｃ．Ｒ．，Ｊ
ｒ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｌａｎｃｅｔ Ｎｅｕｒｏｌ．１２，２０７－２１６）。
上に示されるように、微小管関連タンパク質タウ、およびその過リン酸化形態は、ＡＤ
の主な特徴の１つである細胞内神経原線維変化の主な構成要素である。さらに、タウの特
定の遺伝的変異体が、家族性の前頭側頭型認知症（ＦＴＤ）に関連している。ＡＤにおけ
るタウ病変の出現は、内嗅皮質から出発し、その後、海馬および皮質領域が続く明確な空
間的パターンで起こる（Ｂｒａａｋ，Ｈ．ａｎｄ Ｂｒａａｋ，Ｅ．（１９９６）Ａｃｔ
ａ Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｓｕｐｐｌ １６５，３－１２）。また、タウ病変の特
定の段階が、認知能力と深く関係している（Ｎｅｌｓｏｎ，Ｐ．Ｔ．ｅｔ ａｌ．（２０
１２）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．７１，３６２－３８１；Ｂ
ｒａａｋ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｅｕｒ．Ａｒｃｈ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ Ｃ
ｌｉｎ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２４９ Ｓｕｐｐｌ ３，１４－２２）。総合すると、この
エビデンスは、ＡＤについてのタウに基づく仮説の基礎となる。それは、タウの細胞内蓄
積が、微小管変性および脊柱崩壊をもたらすことを含む。結果として、ニューロン間の伝
達の機能不全および細胞死が続く。最近、タウ自体が、１つの細胞から次の細胞へと神経
変性を伝達し得る内因性病原性（ｅｎｄｏ－ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ）種となり得ることも
示された（Ｃｌａｖａｇｕｅｒａ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ Ｂ
ｉｏｌ．１１，９０９－９１３）。
Ｉ．内因性病原体としてのタウ
Ｃｌａｖａｇｕｅｒａおよび同僚は、タウ自体が内因性病原体（ｅｎｄｏ－ｐａｔｈｏｇｅｎ）として働き得ることを実証した（Ｃｌａｖａｇｕｅｒａ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１１，９０９－９１３）。低スピン（ｌｏｗ ｓｐｉｎ）脳抽出物を、Ｐ３０１Ｓタウトランスジェニックマウスから単離し（Ａｌｌｅｎ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２２，９３４０－９３５１）、希釈し、幼若ＡＬＺ１７マウスの海馬および皮質領域に注入した。ＡＬＺ１７マウスは、遅い病変（ｌａｔｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ）のみを発現するタウトランスジェニックマウス株である（Ｐｒｏｂｓｔ，Ａ．ｅｔ ａｌ．（２０００）Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．９９，４６９－４８１）。注入されたＡＬＺ１７マウスは、固体線維状病変を直ぐに発現し、Ｐ３０１Ｓマウスに由来するタウ免疫枯渇された脳抽出物または野生型マウスに由来する抽出物の投与は、タウ病変を誘発しなかった。可溶性（Ｓ１）およびサルコシル不溶性タウ（Ｐ３）中の脳抽出物の分別（Ｓａｈａｒａ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ．Ｄｉｓ．３３，２４９－２６３）およびＡＬＺ１７マウスへのこれらの注入は、Ｐ３画分が、病変の誘発に最も有効であることを実証した。それは、細胞内の過リン酸化線維状タウの大部分を含有する。病変の大部分は、Ｐ３０１Ｓ抽出物を野生型マウスの脳内に注入した場合にも誘発され得るが、ＮＦＴは形成されなかった。その後の研究において、Ｃｌａｖａｇｕｅｒａらは、他のタウオパチー（嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、および大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ））の死後脳組織から抽出されたヒトタウも、ＡＬＺ１７モデルにおいてタウ病変を誘発し得ることを示した（Ｃｌａｖａｇｕｅｒａ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１０，９５３５－９５４０）。これらのデータの提示以来、いくつかの他のタウシーディングおよび拡散モデルが報告されている（Ａｈｍｅｄ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．１２７，６６７－６８３；Ｗａｌｋｅｒ，Ｌ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）ＪＡＭＡ Ｎｅｕｒｏｌ．７０，３０４－３１０）。これらの研究からの主な結論は、細胞内封入体中の病原性タウが細胞から細胞周辺腔中へと分泌される機構を示す。次に、病理学的タウ材料は、順行および逆行方向の両方で、小胞の鞘に沿って輸送され、その後、バルクエンドサイトーシスによって、隣接する細胞によって取り込まれる。この機構は、ヒトの疾患において観察される病変の拡散が、明確な解剖学的パターンにしたがう理由を説明する。興味深いことに、病理学的タウの末梢投与は、ＡＬＺ１７マウスにおけるタウ病変の形成を加速させ得る（Ｃｌａｖａｇｕｅｒａ，Ｆ．ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ａｃｔａ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．１２７，２９９－３０１）。この拡散機構は、他のタンパク質症における疾患伝播を説明し得る（Ｇｏｅｄｅｒｔ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｔｒｅｎｄｓ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３３，３１７－３２５；Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎ，Ｅ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．８，４１１－４１３）。
ＩＩ．タウ種
タウタンパク質が、内因性病原体として働き得るという発見は、潜在的な介入治療にお
いて標的にされ得る「病原性種」への探求を引き起こした。
微小管関連タンパク質タウ遺伝子（ＭＡＰＴ）は、ヒトゲノムの１７番染色体に位置し
、成人ヒト脳においてタウタンパク質の６つのアイソフォームを発現する。これらのアイ
ソフォームは、ＭＡＰＴ遺伝子内の１６のエクソンのうちのエクソン２、３および１０の
選択的スプライシングから生じる。エクソン２および３は、２９のアミノ酸反復を発現し
、エクソン１０は、さらなる微小管結合領域を発現する。結果として、タウアイソフォー
ムは、０、１または２つのＮ末端反復および３または４つのＣ末端微小管結合領域（３Ｒ
または４Ｒタウ）を含有する。一般的に、タウの６つのアイソフォームが発現される。最
長（２Ｎ４Ｒ）および最短（０Ｎ３Ｒ）アイソフォームは、それぞれ４４１および３５２
アミノ酸からなる（Ｋｏｌａｒｏｖａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ａｌ
ｚｈｅｉｍｅｒｓ．Ｄｉｓ．２０１２，７３１５２６）。タウのＮ末端突出領域（２Ｎ４
Ｒ）は、４４のアミノ酸のグリシンに富むテイルからなり、残基４５～１０２は、２つの
強酸性領域を包含する（Ｎ１、Ｎ２ドメイン）。２つのプロリンに富む領域は、残基１５
１～２４３（Ｐ１、Ｐ２ドメイン）において見られる。タンパク質の残りの部分は、４つ
の微小管結合領域（Ｒ１～Ｒ４）、続いて、短いＣ末端領域によって構成される。
タウは、可溶性でかつ高リン酸化に不安定なタンパク質である。タウの最長アイソフォ
ーム中のアミノ酸残基のうちの約２０パーセントまたは８５個が、潜在的な（Ｓｅｒ、Ｔ
ｈｒまたはＴｙｒ）リン酸化部位である。これらのほぼ半分が、実験的にリン酸化され観
察され（Ｈａｎｇｅｒ，Ｄ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅ
ｄ．１５，１１２－１１９；Ｈａｓｅｇａｗａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７，１７０４７－１７０５４）、リン酸化部位が微小管結合領域の
末端残基の周りに集まる。タウは、細胞周期中に動的にリン酸化および脱リン酸化される
。タウは、減数分裂を起こさせるために微小管から解離しなければならない。有糸分裂後
細胞（分化したニューロン）におけるその主な役割は、最適な軸索輸送を可能にするよう
、微小管安定剤として働くことである。タウは、そのほぼ脱リン酸化された形態でのみ微
小管と結合することができ、したがって、リン酸化は、ニューロン内の直接の微小管結合
／解離スイッチとして働く。正常な条件下で、細胞質タウは、平均して２つのリン酸化部
位を含有する。対らせん状線維状材料において、少なくとも７～８つの部位が、リン酸化
されている（Ｈａｎｇｅｒ，Ｄ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ．
Ｍｅｄ．１５，１１２－１１９；Ｈａｓｅｇａｗａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７，１７０４７－１７０５４）。過リン酸化、対らせん状線維
状タウは、アルツハイマー病の主な特徴であり（Ｋｏｓｉｋ ｅｔ．ａｌ．（１９８６）
ＰＮＡＳ，８６，４０４４－４０４８）、過リン酸化タウの明確な移動度シフトが、ヒト
ＡＤ脳材料の免疫細胞化学分析において観察される。
Ｘ線結晶構造解析またはＮＭＲ分光法のような従来の構造法を用いてタウタンパク質を
研究することは、その準安定性を反映して難しかった。このような研究は、主に、非リン
酸化タンパク質のドメインフラグメントにおいて行われた。ＮＭＲ分光法を用いた、完全
長タウ（２Ｎ４Ｒ）に関するこれまでの構造研究のみが、タンパク質が、安定した二次構
造のごくわずかな伸長を含むことを明らかにしている（Ｍｕｋｒａｓｃｈ，Ｍ．Ｄ．ｅｔ
ａｌ．（２００９）ＰＬｏＳ．Ｂｉｏｌ．７，ｅ３４）。この分析は、ペプチド骨格の
二次構造が、βシート構造を取る傾向が高いことを示す。骨格の最初の２００残基は、微
小管結合領域を包含するＣ末端よりかなり秩序化されている。溶液中のタンパク質内の多
くの特定の長距離相互作用の存在は、それが非常に秩序化されたモルテングロビュール状
態で存在することを示す（Ｏｈｇｕｓｈｉ，Ｍ．ａｎｄ Ｗａｄａ，Ａ．（１９８３）Ｆ
ＥＢＳ Ｌｅｔｔ．１６４，２１－２４）。
特にカスパーゼおよびカルパイン（Ａｓｐ１３、Ｇｌｕ３９１およびＡｓｐ４２１）に
よって生成されるタウのプロテアーゼ産物は、もつれ材料（ｔａｎｇｌｅ ｍａｔｅｒｉ
ａｌ）中で同定された（Ｇａｍｂｌｉｎ，Ｔ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１００，１００３２－１００３７）。特に、
Ａｓｐ４２１における切断が、自由Ａｓｐ４２１末端に結合するタウＣ３抗体を用いて詳
細に研究された。この切断は、アポトーシスの誘発に関連するＡＤ発症の初期事象として
仮定された（ｄｅＣａｌｉｇｎｏｎ Ａ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ ４６
４，１２０１－１２０４）。Ａｓｐ１３におけるＮ末端切断およびＧｌｕ３９１における
Ｃ末端切断は、発症の後期事象とみなされる（ｄｅＣａｌｉｇｎｏｎ Ａ．ｅｔ ａｌ．
（２０１０）Ｎａｔｕｒｅ ４６４，１２０１－１２０４；Ｄｅｌｏｂｅｌ，Ｐ．ｅｔ
ａｌ．（２００８）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１７２，１２３－１３１）。最近、さらな
るＮ末端フラグメント（残基１～２２４）が、ＡＤおよびＰＳＰ患者に由来するＣＳＦに
おいて同定され、疾患および特に病原の初期マーカーであることが仮定された（米国特許
出願第１４／０９２５３９号明細書；Ｂｒｉｇｈｔ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｎｅ
ｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｅｉｎｇ，１－１７）。同様のカルパイン切断フラグメントが、他
のグループによって報告された（Ｆｅｒｒｅｉｒａ，Ａ．ａｎｄ Ｂｉｇｉｏ，Ｅ．Ｈ．
（２０１１）Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．１７，６７６－６８５；Ｒｅｉｎｅｃｋｅ，Ｊ．Ｂ．ｅｔ
ａｌ．（２０１１）ＰＬｏＳ．Ｏｎｅ．６，ｅ２３８６５）。
過リン酸化およびタウの分画のほか、翻訳後アセチル化（Ｃｏｈｅｎ，Ｔ．Ｊ．ｅｔ
ａｌ．（２０１１）Ｎａｔ．Ｃｏｍｍｕｎ．２，２５２；Ｍｉｎ，Ｓ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．
（２０１０）Ｎｅｕｒｏｎ ６７，９５３－９６６）およびＯ－ＧｌｃＮＡｃ化（Ｚｈｕ
，Ｙ．ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）が、ＡＤに関連するもつれ
病変の形成における病変規定過程であることが提示された。
ＩＩＩ．タウ免疫療法
免疫療法は、従来、受動および能動ワクチン手法に分けられる。能動ワクチン手法では
、病原因子または不活性化した病原因子が患者に注入され、免疫系が免疫応答を引き起こ
す。これは、投与された抗原に対する高親和性抗体または細胞応答を生成するＢ細胞の成
熟を誘発する。受動ワクチン手法では、免疫系の誘発は、抗原に対して特異的な抗体を注
入することによって回避される。次に、固有のクリアランス系が、抗体結合リガンドを除
去する。
ＡＣ免疫は、タウのリン酸化セリン４０９に対するマウスモノクローナル抗体を追跡す
る。抗体を、ヒトＡＤおよび対照脳組織に対してプロファイリングし、もつれ病変を認識
するそれらの能力に基づいて選択した。２つの抗体のヒト化形態、ｈＡＣＩ－３６－２Ｂ
６－Ａｂ１およびｈＡＣＩ－３６－３Ａ８－Ａｂ１は両方とも、アミノ酸４０１～４１８
内のタウエピトープに結合する（国際公開第２０１３／１５１７６２号パンフレット）。
Ｒｏｇｅｒ Ｎｉｔｓｃｈのグループは、変性タウオパチーの兆候を有さない高齢の健
常個体からタウ自己抗体を単離した。タウ特異的抗体を発見するために、いくつかの抗体
を、完全長組み換えヒトタウ（２Ｎ４Ｒ）を用いて単離した。次に、これらを、疾患およ
び健常個体に由来するタウ単離物を区別するそれらの能力についてスクリーニングした。
３つの主要な抗体、４Ｅ４、４Ａ３および２４Ｂ２が、特許文献に記載されている（国際
公開第２０１２０４９５７０号パンフレット；米国特許出願公開第２０１２０８７８６１
号明細書）。それらのエピトープマッピングは、全てが、位置Ｖ３３９～Ｋ３６９の、微
小管結合領域内およびそのＣ末端のアミノ酸を認識することを示す。これらの抗体は、リ
ン酸化特異性を示さない。
Ｃ２Ｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓは、主に、神経変性疾患の早期発見のための診断手段
の開発に重点を置いている。完全長ヒトおよびマウスタウタンパク質に対する抗体を生成
した。ヒトタウおよびマウスタウをそれぞれ認識する、８つおよび５つの抗体を同定した
（Ｙａｎａｍａｎｄｒａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｎｅｕｒｏｎ ８０，４０２－
４１４）。異なる結合反応速度を有する３つの抗体を、インビボの評価のために選択した
。すなわち、タウ残基３０６～３２０、７～１３および２５～３０をそれぞれ認識する、
ＨＪ９．３、ＨＪ９．４およびＨＪ８．５であり、最後のものは、ヒトタウに特異的であ
る。また、抗体を、タウの細胞間伝播の巧妙な機構的レポーターアッセイにおいて病変の
転移を防ぐそれらの能力に基づいて選択した（Ｓａｎｄｅｒｓ，Ｄ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．（
２０１４）Ｎｅｕｒｏｎ ８２，１２７１－１２８８；Ｋｆｏｕｒｙ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．
（２０１２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８７，１９４４０－１９４５１）。Ｐ３０１Ｓ
トランスジェニックマウスにおける長期の脳室内（ｉ．ｃ．ｖ．）注入試験におけるそれ
らの評価は、処理されたマウスの免疫組織化学的分析によって測定した際の過リン酸化タ
ウタンパク質のレベルを減少させるそれらの能力を実証した。
Ｐｅｔｅｒ Ｄａｖｉｅｓの抗体は、ＡＤおよび対照脳材料における病理学的タウと正
常なタウとを区別し得る診断手段として元々は開発された（Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ，Ｓ．Ｇ
．ａｎｄ Ｄａｖｉｅｓ，Ｐ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ
．Ｓ．Ａ．８７，５８２７－５８３１）。ＰＨＦ１およびＭＣ１抗体の治療的有用性の評
価を、Ｐ３０１ＳおよびＪＰＮＬ３において実証した（Ｐ３０１Ｌ）（Ｂｏｕｔａｊａｎ
ｇｏｕｔ，Ａ．ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．１１８，６５８－６
６７；Ｃｈａｉ，Ｘ．ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８６，３４
４５７－３４４６７；Ｄ’Ａｂｒａｍｏ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２０１３）ＰＬｏＳ．Ｏｎ
ｅ．８，ｅ６２４０２ ｍｉｃｅ）。ＰＨＦ１が、線状リン酸化タウエピトープ（ｐＳ３
９６、ｐＳ４０４）を認識する一方、ＭＣ１は、線状配列の２つの明確な部分を必要とす
る構造的タウエピトープ、残基４６～２０２内のエピトープおよび残基３１２～３４２間
のＣ末端エピトープを認識する立体配座依存性抗体である（Ｊｉｃｈａ，Ｇ．Ａ．ｅｔ
ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．４８，１２８－１３２）。長期の１
２～１３週間の免疫化試験におけるこれらの２つの抗体の注入は、他の脳領域の中でも特
に脊髄および脳幹病変のかなりの減少をもたらし、これは、これらのマウスにおいて観察
される運動障害の軽減に置き換えられる（Ｄ’Ａｂｒａｍｏ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２０１
３）ＰＬｏＳ．Ｏｎｅ．８，ｅ６２４０２）。
ｉＰｅｒｉａｎ／Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｅｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂは、誘導多能性幹細胞
に基づく神経培養において活動亢進を促進した、タウのＮ末端フラグメント（ｅｔａｕ：
残基１～２２４）から構成される仮定された病理学的タウ種に対するタウ抗体を開発した
。抗体のポートフォリオが開発されたが、特性決定は、残基９～１８内のＮ末端エピトー
プを認識する抗体ＩＰＮ００１およびＩＰＮ００２に重点を置いていた。したがって、こ
れらの抗体は、疾患の初期兆候であり得る、段階的なＡＤおよびＰＳＰ患者に由来するＣ
ＳＦにおける高いタウレベルを検出する。ＪＰＮＬ３（Ｐ３０１Ｌ）マウスにおける抗体
のインビボ注入は、進行性運動障害の部分的な回復をもたらした（米国特許出願第１４／
０９２５３９号明細書）。
Ｅｉｎａｒ Ｓｉｇｕｒｄｓｓｏｎは、タウに基づく免疫療法の有効性を実証する最初
のプログラムについて報告した。Ａｄｊｕ－Ｐｈｏｓ補助剤と一緒にタウペプチド３７９
～４０８［ｐＳ３９６、ｐＳ４０４］からなる能動ワクチンを用いて、ＪＰＮＬ３（Ｐ３
０１Ｌ）マウスを免疫した。この研究において、タウ病変の著しい減少が、対照動物と比
較したときに、ワクチンで処理されたマウスにおいて観察された。タウオパチー関連運動
表現型の軽減が、同様に検出された。その有効性が、突然変異体タウによって駆動されな
い異なるマウスモデル（ｈｔａｕ／ＰＳ１）において確認された（Ｂｏｕｔａｊａｎｇｏ
ｕｔ，Ａ．ｅｔ ａｌ．（２０１１）ＡＡＩＣ ２０１１（７，ｉｓｓｕｅ ４，Ｓｕｐ
ｐｌｅｍｅｎｔ ｅｄｎ）ｐ．ｓ４８０－ｓ４３１；Ｃｏｎｇｄｏｎ，Ｅ．Ｅ．ｅｔ ａ
ｌ．（２０１３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８８，３５４５２－３５４６５；Ｇｕ，Ｊ
．ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８８，３３０８１－３３０９５
）。
Ｐｒｏｔｈｅｎａは、Ｋ３６９Ｉ（Ｋ３）トランスジェニックタウマウスおよびＰ３０
１Ｌマウスモデルにおいて３つのタウ抗体を評価した。様々な特性を有する抗体を、イン
ビボの評価のために選択した。異なるアイソタイプ（ＩｇＧ１／ｋおよびＩｇＧ２ａ／ｋ
）を有する２つのｐＳ４０４特異的抗体または総（ｐａｎ）抗タウ抗体（ＩｇＧ１／ｋ）
を、長期のパラダイムで注入した。Ｋ３６９Ｉマウスを、３週齢から開始して２１週間に
わたって週に１回の注入で処理し、Ｐ３０１Ｌマウスを、４月齢から開始して７ヶ月間に
わたって週に１回の注入で処理した。タウ陽性の神経原線維封入体の減少が、ＩｇＧ２ａ
／ｋ ｐＳ４０４抗体を用いたＫ３マウスにおいて観察された。ｐＳ４０４特異的抗体の
両方が、ｐＳ４２２陽性タウのレベルを減少させることができた一方、ｐａｎ－タウ抗体
で処理されたマウスにおいて減少は観察されなかった。これらの研究は、１）タウクリア
ランスは、抗体アイソタイプ依存性であり得ること、および；２）総－抗タウ抗体が過リ
ン酸化タウを減少させることができなかったため、疾患に関連するタウ種を標的にするこ
とが重要であり得ることを示唆している（ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０２５０４４号明細書
）。
本発明の発明者らは、病気モデルに有効であるためにリン酸化タウセリン残基３９６（
ｐＳ３９６）に特異的な抗体を意外にも発見し；これは、先行技術と対照的に、主に、３
９６および４０４残基の両方においてリン酸化されるか、４０４残基のみまたはタウにお
ける他の残基においてリン酸化されるタウタンパク質を認識する抗体である。
本発明者らは、ヒト病理学的タウに対する著しい特異性および選択性をさらに有する抗
体を開発した。本発明の抗体は、国際公開第２０１３／０５０５６７号パンフレットの抗
体（国際公開第２０１３／０５０５６７号パンフレットの図１を参照）と比較して、非病
理学的タウよりヒト病理学的タウに対するはるかに高度な特異性および選択性を示す。特
異的結合を有することが報告された、国際公開第２０１２／０４５８８２号パンフレット
の抗体は、タウアミノ酸３９３～４０１、３９６～４０１、３９４～４００および３９３
～４００の６～９つの残基アミノ酸配列から誘導された。病原性過リン酸化タウに対して
誘導された、本発明の抗体からのこの構築物は、本明細書に記載されるより長いアミノ酸
配列を含む。
さらに、本発明の抗体、およびそのエピトープ結合フラグメントは、病理学的および非
病理学的ヒトタウタンパク質を区別し、特に、アルツハイマー病（ＡＤ）病変に関連する
タウに結合する能力などの多くの有利な特徴を示す。電気生理学的研究において、本発明
の抗体、およびそのエピトープ結合フラグメントはさらに、減少した二発刺激促通および
自発的な微小興奮性シナプス後電流（ｍＥＰＳＣ）を改善することができた。
本発明は、ヒト（２Ｎ４Ｒアイソフォーム）タウ（配列番号１）のリン酸化残基セリン
３９６に特異的に結合することが可能なモノクローナル抗体、およびそのエピトープ結合
フラグメントに関する。抗体は、それらがリン酸化４０４残基に実質的に結合しないよう
に、リン酸化残基３９６および４０４を区別することができるそれらの能力によってさら
に特徴付けられる。
本発明の抗体は、非病理学的であるが、リン酸化されたタウの存在下で、病理学的タウ
に対して選択的である。本発明の抗体は、正常なタウの存在下で、病理学的タウのタウも
つれ（ｔａｕ ｔａｎｇｌｅ）を除去することができる。特定の理論によって制約される
ものではないが、タウ位置３９６においてリン酸化されたタウタンパク質を含むタウのも
つれを除去することは、タウもつれへの病理学的タウのシーディングを防ぐものと考えら
れる。したがって、本発明の一態様は、分子がタウ位置４０４においてリン酸化されたタ
ウタンパク質の存在下にある場合でも、３９６－リン酸化タウに選択的に結合することが
可能な抗体に関する。本発明の関連する態様は、分子が非病原性タウの存在下にある場合
でも、３９６－リン酸化タウに選択的に結合することが可能な抗体に関する。さらに定義
される、本発明は、病理学的タウに対して選択的な抗体に関し、前記病理学的タウは、タ
ウのヒト２Ｎ４Ｒアイソフォームを過剰発現するトランスジェニックマウスにおいて（ウ
エスタンブロット分析によって）６４ｋＤａバンドとして現われる過リン酸化タウである
。
本発明の一態様は、トランスジェニックマウスに由来する免疫枯渇ｒＴｇ４５１０抽出
物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ６４ｋＤａおよび７０ｋＤａバンドを少なく
とも９０％だけ特異的に減少させる一方、５５ｋＤａタウバンドを１０％以下だけ減少さ
せる抗タウ抗体に関する。本発明のさらなる態様は、過リン酸化タウ６４および７０ｋＤ
ａバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、５５ｋＤａタウバンドを１０
％以下だけ減少させる抗タウ抗体；または、本明細書に記載されるようにヒトＡＤ死後脳
に由来する抽出物とともに使用されるとき、ｐＳ３９６過リン酸化タウバンドを少なくと
も９０％だけ特異的に減少させる一方、非リン酸化タウバンドを１０％超減少させない能
力に関する。
本発明の別の態様は、アルツハイマー病などのタウオパチーに罹患した患者を治療する
方法であって、もつれを除去するか、または前記もつれの進行を軽減する工程を含む方法
に関し、前記もつれは、過リン酸化タウを含み、前記方法は、もつれが除去され、過リン
酸化タウのその含有量が減少され、またはもつれ形成の進行が軽減されるように、過リン
酸化タウを本発明の抗体と接触させる工程を含む。
別に定義される、本発明は、アルツハイマー病などのタウオパチーに罹患した患者を治
療する方法に関し、前記方法は、もつれから過リン酸化タウが取り除かれるように、リン
酸化残基３９６を有するタウに対して選択的な抗体ともつれを接触させる工程を含む。
本発明の一態様は、
（ａ）配列番号３、配列番号３１；配列番号３２；配列番号３３；配列番号３４；配列
番号３５；配列番号３６；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；および配列番号
４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４；配列番号４１；および配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤ
Ｒ２；
（ｃ）配列番号５；配列番号４２；および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤ
Ｒ３；
（ｄ）配列番号６；配列番号４３；配列番号４９；配列番号５２；および配列番号５５
のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３０；配列番号４４；配列
番号５０；配列番号５３；および配列番号５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を
含む重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８、配列番号３９；配列番号４５；配列番号５１；配列番号５４；およ
び配列番号５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む、過リン酸化ヒトタウに対するモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメントに関する。
本発明の一態様は、
（ａ）配列番号１２；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１８；配列番号１９；配
列番号２０；配列番号２１；配列番号２２および配列番号２３からなる群から選択される
軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；配列番号２４；配
列番号２５；配列番号２６；および配列番号２７からなる群から選択される重鎖
を含む、過リン酸化ヒトタウに対するモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメントに関する。
本発明のさらなる態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、過リン酸化ヒトタウに対するモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメントに関する。
本発明の興味深い態様は、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、過リン酸化ヒトタウに対するモノクローナル抗体
、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の興味深い態様は、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、過リン酸化ヒトタウに対するモノクローナル抗体
、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の抗体、およびそのエピトープ結合フラグメントは、アルツハイマー病（ＡＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、ＴＢＩ（軽度、急性または慢性の外傷性脳損傷）、および慢性外傷性脳症（ＣＴＥ）などのタウオパチーを治療するのに使用され得る。
本発明の抗体、およびそのエピトープ結合フラグメントはさらに、精神病、特に、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、ＡＤに起因するアパシーまたはＡＤの患者におけるアパシー、の治療に使用することが意図される。
ヒト化Ｃ１０－２および変異体（Ｃ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ）を用いたＡＤ－Ｐ３捕捉についての流体相阻害アッセイ。実施例３Ａに記載されるように、Ｐ３９６特異的抗体ｈＣ１０－２（四角形）、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ（黒丸）およびｈＣ１０－２＿Ｎ３３２＿Ａ１０１Ｔ（白丸）によるＡＤ－Ｐ３捕捉の濃度に応じた阻害を調べた。ＡＤ－Ｐ３画分を、９６ウェルプレート上に固定化された２００ｎｇ／ｍｌのマウスＣ１０－２抗体とともにインキュベートする前に、増加する濃度の抗体（０～１０００ｎＭ）とともに、室温（ｒ／ｔ）で６０分間インキュベートした。捕捉されたＡＤ－Ｐ３抗原を、スルホタグ化抗総タウ抗体（ＭＳＤ）を用いて検出した。 ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ（黒丸）およびｈＣ１０－２＿Ｎ３３２＿Ａ１０１Ｔ（白丸）抗体のＩＣ５０を計算すると、それぞれ４４ｎＭおよび１４ｎＭである。これは、図１の曲線を比較した際に分かるように、ｈＣ１０－２と比べて著しい改善である。したがって、本発明の一態様において、ＡＤ－Ｐ３捕捉についての流体相阻害アッセイに基づいて、１００ｎＭ以下の抗体の濃度で、シグナルが５０％減少されるように、これらの抗体は、本明細書に記載される流体相阻害アッセイにおいてＡＤ－Ｐ３を阻害する。 ｈＣ１０－２および関連する変異体の見かけの親和性を示すペプチド阻害アッセイ。実施例３Ｂに記載されるように、流体相溶液中で、Ｐタウ３８６～４０８（ｐＳ３９６）ペプチドに結合する抗体の濃度に応じた阻害を、抗体ｈＣ１０－２（四角形）、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ（黒丸）およびｈＣ１０－２＿Ｎ３２＿Ａ１０１Ｔ（白丸）を用いて調べた。抗体を、１００ｎｇ／ｍｌのＰタウ３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）で被覆されたウェルにおけるインキュベーションの前に、増加する濃度（０～１００００ｎＭ）のＰタウ３８６～４０８（ｐＳ３９６）とともに室温で６０分間にわたって、１ｎｇ／ｍｌでプレインキュベートした。十分に結合された抗体が、スルホタグ化抗ヒトＩｇＧ抗体（ＭＳＤ）で検出された。 図２から分かるように、抗体ｈＣ－１０．２（ＩＣ５０＝２４ｎＭ）、抗体ｈＣ１０．２＿Ｎ３２Ｓ（ＩＣ５０＝５０ｎＭ）および抗体ｈＣ１０．２＿Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１Ｔ（ＩＣ５０＝３４ｎＭ）は、Ｐタウ（Ｐ３９６）３８６～４０８とともに流体相溶液を用いた見かけの親和性試験に基づいて、１００ｎＭ未満、さらには６０ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。 （パネルＡ～ＺおよびＡＡ～ＡＧ）。ＡＤを有するドナーからの死後脳およびｒＴｇ４５１０マウス脳における病理学的タウの免疫組織化学的検出。実施例４に記載されるように、３つの異なるＡＤドナーに由来する前頭前皮質において、ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔは、神経原線維変化、神経絨毛糸（ｎｅｕｒｏｐｉｌ ｔｈｒｅａｄ）およびジストロフィー性神経突起を標識した。最も強い染色強度が、最も高い濃度の抗体で検出された。対照脳切片には、免疫活性がない。全ての３つの抗体が、進行した病変を有するｒＴｇ４５１０脳においてリン酸化タウを標識した。 染色は、ｈＣ１０－２からｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓへと、およびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔへと増加した。最も強い染色強度が、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ、次に、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、次に、ｈＣ１０－２で検出された。１００ｎｇ／ｍＬ程度のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１ＴおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓの濃度で、アルツハイマー病の脳における病理学的タウの免疫組織化学的検出があった。 （パネルＡ～Ｆ）。ｈＣ１０－２で処理されたｒＴｇ４５１０マウスにおけるタウ構造の装飾。ｈＣ１０．２を静脈内（ｉ．ｖ．）投与した（パネルＡ、Ｃ、ＥおよびＦは、ｒＴｇ４５１０を表し；パネルＢおよびＤは、ｔＴＡを表す）。マウスは、８０ｍｇ／ｋｇの濃度で、１５０μＬの体積のｈＣ１０－２抗体の単回注射を受けた。脳切片を、実施例５に記載されるプロセスにしたがって３日後に採取した。ｈＣ１０－２は、ｒＴｇ４５１０脳の海馬および皮質においてインビボで標的構造を特異的に標識するが、対照ｔＴＡ脳においては標識しない。ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８およびＨｏｅｃｈｓｔシグナルについての対の画像が、海馬切片において示される。 （パネルＡ～Ｆ）。ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓで処理されたｒＴｇ４５１０マウスにおけるタウ構造の装飾（パネルＡ、ＣおよびＥは、ｒＴｇ４５１０を表し；パネルＢ、ＤおよびＦは、ｔＴＡを表す）。マウスは、８０ｍｇ／ｋｇの濃度で、１５０μＬの体積のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ抗体の単回注射を受けた。脳切片を、実施例５に記載されるプロセスにしたがって３日後に採取した。ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓは、ｒＴｇ４５１０脳の海馬および皮質においてインビボで標的構造を特異的に標識するが、対照ｔＴＡ脳においては標識しない。ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８およびＨｏｅｃｈｓｔシグナルについての対の画像が、海馬切片において示される。 （パネルＡ～Ｆ）。ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔの静脈内（ｉ．ｖ．）注射後のｒＴｇ４５１０マウスにおけるタウ構造の装飾（パネルＡ、ＣおよびＥは、ｒＴｇ４５１０を表し；パネルＢ、ＤおよびＦは、ｔＴＡを表す）。マウスは、８０ｍｇ／ｋｇの濃度で、１５０μＬの体積のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体の単回注射を受けた。脳切片を、実施例５に記載されるプロセスにしたがって３日後に採取した。ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔは、ｒＴｇ４５１０脳の海馬および皮質においてインビボで標的構造を特異的に標識するが、対照ｔＴＡ脳においては標識しない。ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８およびＨｏｅｃｈｓｔシグナルについての対の画像が、海馬切片において示される。 図４～６の比較により、ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔが、静脈注射後に血液脳関門を通過することが示される。この図は、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔが、ｈＣ１０－２と比較して改善された結果を有して、海馬および皮質におけるタウ構造を標識する（タウもつれ（ｔａｕ ｔａｎｇｌｅ）に対して免疫活性である）ことをさらに示す。 （パネルＡ～Ｄ）。アルツハイマー病（ＡＤ）の脳においてｐＳ３９６特異的抗体によって認識されるタウ種。実施例６に記載されるように、ＡＤ脳の切片において、タウもつれが、Ｅ１およびｐ３９６抗体によって共標識されるか（ｃｏ－ｌａｂｅｌｌｅｄ）、またはｐＳ３９６抗体のみに対して陽性であった（矢印）。切片を、蛍光顕微鏡によって分析した。多くのタウもつれが、ｈＣ１０－２およびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体のいずれかのみによって標識された（矢印）。ゴーストもつれ（ｇｈｏｓｔ ｔａｎｇｌｅ）が、Ｎ末端タウ抗体によって染色されないと仮定すると、ｈＣ１０－２またはｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体のみによって標識されるタウ種は、細胞外のゴーストもつれを表す可能性が高い。 ウエスタンブロットによる病理学的タウの検出。実施例６の「ウエスタンブロットによる病理学的タウの検出」の節に記載されるように、ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔを用いて病理学的タウを、ウエスタンブロットによって検出した。３２週齢で安楽死させた３匹のｒＴｇ４５１０マウスおよび非トランスジェニック（非ｔｇ）対照同腹仔からプールされた前脳および４匹のＡＤマウスおよび４匹の健常対照（ＨＣ）ドナーからプールされた皮質試験片をそれぞれ、可溶性（Ｓ１）、ＴＢＳ可溶性ペレット（Ｓ１ｐ）およびサルコシル不溶性（Ｐ３）画分へと分画し、１μｇ／ｍｌのｈＣ１０．２（Ａ）、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ（Ｂ）、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ（Ｃ）を用いて、ｐＳ３９６エピトープにおけるリン酸化タウについてウエスタンブロットによって分析した。ｒＴｇ４５１０では、正常なヒト４Ｒ０Ｎタウが、５５ｋＤａにおいて示される一方、過リン酸化タウ種が、６４ｋＤａおよび７０ｋＤａにおいて示される。ＡＤでは、可変量のＡＤの典型的塗抹標本（ｓｍｅａｒ）を用いて、過リン酸化タウ種が、５４、６４、６９ｋＤａ、および７４ｋＤａの４つのバンドとして示される。 ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔのそれぞれは、非トランスジェニックマウスよりｒＴｇ４５１０マウスのタウタンパク質に対して、および健常対照ドナーよりＡＤドナーに対して選択的である。さらに、可溶性（Ｓ１）、ＴＢＳ可溶性ペレット（Ｓ１ｐ）およびサルコシル不溶性（Ｐ３）画分において、ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔのそれぞれは、ｒＴｇ４５１０マウスの正常タウ５５ｋＤａタンパク質よりｒＴｇ４５１０マウスの病原性タウ６４ｋＤａタンパク質に対して選択的である。 ウエスタンブロットによる病理学的タウの検出。実施例６の「ウエスタンブロットによる病理学的タウの検出」の節に記載されるように、ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔを用いて病理学的タウを、ウエスタンブロットによって検出した。３２週齢で安楽死させた３匹のｒＴｇ４５１０マウスおよび非トランスジェニック（非ｔｇ）対照同腹仔からプールされた前脳および４匹のＡＤマウスおよび４匹の健常対照（ＨＣ）ドナーからプールされた皮質試験片をそれぞれ、可溶性（Ｓ１）、ＴＢＳ可溶性ペレット（Ｓ１ｐ）およびサルコシル不溶性（Ｐ３）画分へと分画し、１μｇ／ｍｌのｈＣ１０．２（Ａ）、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ（Ｂ）、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ（Ｃ）を用いて、ｐＳ３９６エピトープにおけるリン酸化タウについてウエスタンブロットによって分析した。ｒＴｇ４５１０では、正常なヒト４Ｒ０Ｎタウが、５５ｋＤａにおいて示される一方、過リン酸化タウ種が、６４ｋＤａおよび７０ｋＤａにおいて示される。ＡＤでは、可変量のＡＤの典型的塗抹標本（ｓｍｅａｒ）を用いて、過リン酸化タウ種が、５４、６４、６９ｋＤａ、および７４ｋＤａの４つのバンドとして示される。 ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔのそれぞれは、非トランスジェニックマウスよりｒＴｇ４５１０マウスのタウタンパク質に対して、および健常対照ドナーよりＡＤドナーに対して選択的である。さらに、可溶性（Ｓ１）、ＴＢＳ可溶性ペレット（Ｓ１ｐ）およびサルコシル不溶性（Ｐ３）画分において、ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔのそれぞれは、ｒＴｇ４５１０マウスの正常タウ５５ｋＤａタンパク質よりｒＴｇ４５１０マウスの病原性タウ６４ｋＤａタンパク質に対して選択的である。 ウエスタンブロットによる病理学的タウの検出。実施例６の「ウエスタンブロットによる病理学的タウの検出」の節に記載されるように、ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔを用いて病理学的タウを、ウエスタンブロットによって検出した。３２週齢で安楽死させた３匹のｒＴｇ４５１０マウスおよび非トランスジェニック（非ｔｇ）対照同腹仔からプールされた前脳および４匹のＡＤマウスおよび４匹の健常対照（ＨＣ）ドナーからプールされた皮質試験片をそれぞれ、可溶性（Ｓ１）、ＴＢＳ可溶性ペレット（Ｓ１ｐ）およびサルコシル不溶性（Ｐ３）画分へと分画し、１μｇ／ｍｌのｈＣ１０．２（Ａ）、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ（Ｂ）、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ（Ｃ）を用いて、ｐＳ３９６エピトープにおけるリン酸化タウについてウエスタンブロットによって分析した。ｒＴｇ４５１０では、正常なヒト４Ｒ０Ｎタウが、５５ｋＤａにおいて示される一方、過リン酸化タウ種が、６４ｋＤａおよび７０ｋＤａにおいて示される。ＡＤでは、可変量のＡＤの典型的塗抹標本（ｓｍｅａｒ）を用いて、過リン酸化タウ種が、５４、６４、６９ｋＤａ、および７４ｋＤａの４つのバンドとして示される。 ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔのそれぞれは、非トランスジェニックマウスよりｒＴｇ４５１０マウスのタウタンパク質に対して、および健常対照ドナーよりＡＤドナーに対して選択的である。さらに、可溶性（Ｓ１）、ＴＢＳ可溶性ペレット（Ｓ１ｐ）およびサルコシル不溶性（Ｐ３）画分において、ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔのそれぞれは、ｒＴｇ４５１０マウスの正常タウ５５ｋＤａタンパク質よりｒＴｇ４５１０マウスの病原性タウ６４ｋＤａタンパク質に対して選択的である。 ＡＤ脳に由来するタウの免疫沈降。実施例６の「病理学的タウの免疫沈降」の節に記載されるように、４つのＡＤおよび健常対照（ＨＣ）ドナーからプールされた皮質脳ホモジネートの５００μｇのプレクリアされた溶解物からのヒトＩｇＧ１対照（ｈＩｇＧ１）を用いた、１０μｇのｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔによるタウの免疫沈降を、ポリクローナルウサギ抗ｐＳ３９６タウ（ｐＳ３９６タウ）抗体を用いて、ウエスタンブロットによって分析した。ＡＤでは、過リン酸化タウ種が、可変量のＡＤの典型的塗抹標本を用いて、５４、６４、６９ｋＤａ、および７４ｋＤａの４つのバンドとして示される。 Ｃｉｓｂｉｏアッセイによるタウ凝集の定量化。野生型（Ｗｔ）シーディング材料（ＷＷ）は、シーディングを示さず、バックグラウンドシグナルを、全ての播種された試料から差し引いた。Ｔｇ４５１０ホモジネートを効率的に播種し、シーディング効果は、Ｂ１２による処理によって影響されなかったが、本発明のタウ抗体（ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ＞ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＞ｈＣ１０－２）による２０μｇ／ｍＬの濃度で行われたシーディング試験では処理によって様々な程度に影響された。グラフは、４つの独立した組の実験の結果を表し、相対タウ凝集としてプロットされ（総タンパク質に対して正規化されたバックグラウンドに対するシグナル倍数（ｆｏｌｄ ｓｉｇｎａｌ））、相対不溶性ｐ３９６タウを、ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ不溶性画分のウエスタンブロットの濃度測定によって定量化した（正規化されたバックグラウンドに対するシグナル倍数）。全ての試料を、アイソタイプ対照抗体Ｂ１２に対して正規化した。図１０Ｂ～Ｃは、Ｃｉｓｂｉｏアッセイによるタウ凝集の定量化を示す。播種されたｐｃＤＮＡ ＨＥＫ２９３細胞は、シグナルを示さず、これは、入力シーディング材料の検出がなかったことを確認する。Ｗｔ（野生型）シーディング材料（ＷＷ）は、シーディングを示さなかったが、対照的に、ｒＴｇ４５１０ホモジネート（ＣＣ）は、非播種と比較して、効率的に播種された。このシーディング効果は、ＨＥＬによる処理によって影響されなかったが、タウ抗体による処理によって部分的に改善された（Ｃ１０－２＞Ｄ１．２＞ｈＡＣＩ３６－２Ｂ６－Ａｂ１）。グラフは、３つの独立した組の試料を示し、相対タウ凝集としてプロットされる（総タンパク質に対して正規化されたバックグラウンドに対するシグナル倍数（ｆｏｌｄ ｓｉｇｎａｌ））。実施例６、「細胞および凝集アッセイ」の節は、後続のプロトコルを説明する。 Ｃｉｓｂｉｏアッセイによるタウ凝集の定量化。野生型（Ｗｔ）シーディング材料（ＷＷ）は、シーディングを示さず、バックグラウンドシグナルを、全ての播種された試料から差し引いた。Ｔｇ４５１０ホモジネートを効率的に播種し、シーディング効果は、Ｂ１２による処理によって影響されなかったが、本発明のタウ抗体（ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ＞ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＞ｈＣ１０－２）による２０μｇ／ｍＬの濃度で行われたシーディング試験では処理によって様々な程度に影響された。グラフは、４つの独立した組の実験の結果を表し、相対タウ凝集としてプロットされ（総タンパク質に対して正規化されたバックグラウンドに対するシグナル倍数（ｆｏｌｄ ｓｉｇｎａｌ））、相対不溶性ｐ３９６タウを、ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ不溶性画分のウエスタンブロットの濃度測定によって定量化した（正規化されたバックグラウンドに対するシグナル倍数）。全ての試料を、アイソタイプ対照抗体Ｂ１２に対して正規化した。図１０Ｂ～Ｃは、Ｃｉｓｂｉｏアッセイによるタウ凝集の定量化を示す。播種されたｐｃＤＮＡ ＨＥＫ２９３細胞は、シグナルを示さず、これは、入力シーディング材料の検出がなかったことを確認する。Ｗｔ（野生型）シーディング材料（ＷＷ）は、シーディングを示さなかったが、対照的に、ｒＴｇ４５１０ホモジネート（ＣＣ）は、非播種と比較して、効率的に播種された。このシーディング効果は、ＨＥＬによる処理によって影響されなかったが、タウ抗体による処理によって部分的に改善された（Ｃ１０－２＞Ｄ１．２＞ｈＡＣＩ３６－２Ｂ６－Ａｂ１）。グラフは、３つの独立した組の試料を示し、相対タウ凝集としてプロットされる（総タンパク質に対して正規化されたバックグラウンドに対するシグナル倍数（ｆｏｌｄ ｓｉｇｎａｌ））。実施例６、「細胞および凝集アッセイ」の節は、後続のプロトコルを説明する。 異なる量のｈＣ１０－２および２．１０．３抗体を用いたＡＤ脳抽出物の免疫枯渇後のタウ５ウエスタンブロットシグナルの定量化。実施例７に記載されるように、抗体は両方とも、アルツハイマー病の脳抽出物からの総タウのごく一部を除去した。 異なる量のｈＣ１０－２（菱形）および２．１０．３（三角形）抗体を用いたＡＤ脳抽出物の免疫枯渇後のＰ－Ｓ４２２タウウエスタンブロットシグナルの定量化。この図は、実施例７からの結果を示す。セリン４２２においてリン酸化されるタウは、ｈＣ１０－２または２．１０．３のいずれかを用いた免疫枯渇によって、ＡＤ脳抽出物から効率的に除去され得る。抗体は両方とも、９０％超のＰ－Ｓ４２２タウを除去したが、さらに多くの２．１０．３抗体が、同じ効果に達するのに必要とされた。 異なる量のｈＣ１０－２および２．１０．３抗体を用いたＡＤ脳抽出物の免疫枯渇後のｐＳ３９６タウウエスタンブロットシグナルの定量化。この図は、実施例７からの結果を示す。ｈＣ１０－２免疫枯渇は、セリン３９６においてリン酸化される８８％のタウを除去した一方、２．１０．３は、ＡＤ脳抽出物から５５％のｐＳ３９６タウを除去したに過ぎなかった。 異なる量のｈＣ１０－２および２．１０．３抗体を用いたＡＤ脳抽出物の免疫枯渇後のＰ－Ｓ１９９／２０２タウウエスタンブロットシグナルの定量化。この図は、実施例７からの結果を示す。ｈＣ１０－２免疫枯渇は、セリン１９９／２０２においてリン酸化される６９％のタウを取り除いた。２．１０．３抗体は、同じ用量依存的減少を示さなかった。 免疫枯渇の前後のウエスタンブロットにおけるアルツハイマー病の脳抽出物。この図は、実施例７からの結果を示す。セリン３９６においてリン酸化される２５ｋＤａのタウフラグメントがある。ｈＣ１０－２を用いた免疫枯渇により、２５ｋＤａのタウバンドの減少が生じた。２つの他のリン酸化特異的抗体２．１０．３およびＡＴ８は、この２５ｋＤａ種を除去しなかった。 異なる量のｈＣ１０－２変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３２Ｑ、Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ、Ｎ３２Ｑ＿Ａ１０１Ｔ、Ｎ３２Ｑ＿Ｄ５５ＥおよびＮ３２Ｓ＿Ｄ５５Ｅを用いたＡＤ脳抽出物の免疫枯渇後のｐＳ３９６タウウエスタンブロットシグナルの定量化。実施例８から結論付けられ得るように、ＡＤ脳ホモジネートからのセリン３９６においてリン酸化されるタウを除去する本発明の抗体の能力は相当であった。０．１μｇ未満の抗体（７５ｎｇにおけるデータ点）において、変異体が、（１６％であったＮ３２Ｑ、Ｄ５５Ｅを除いて）少なくとも２８％だけｐＳ３９６シグナルを減少させた一方、Ｃ１０．２は、ｐＳ３９６シグナルを６％未満減少させた。 （パネルＡ～Ｄ）。ＡＤ脳抽出物を注射することによって引き起こされる、海馬におけるタウもつれのシーディング。実施例８ａにおいて行われるように、１５ｍｇ／ｋｇの用量で、ｍＣ１０－２処理は、播種された海馬におけるもつれ病変を、５７％だけかなり減少させた（Ｐ＜０．０５）。ｈＣ１０－２も病変を減少させたことを示す明白な傾向があった。比較によると、２．１０．３は、同じ用量で効果を示すことができなかった。 残基Ｐ－Ｓｅｒ３９６およびＴｙｒ３９４は、抗原結合部位の中心にある。 Ｉｌｅ（３９２）－Ｖａｌ（３９３）－Ｔｙｒ（３９４）－Ｌｙｓ（３９５）－ｐＳｅｒ（３９６）－Ｐｒｏ（３９７）－Ｖａｌ（３９８）の構造が示される。本発明の抗体との主な相互作用は、タウペプチドの疎水性ポケット、ｐＳｅｒ３９６およびＹ３９４を必要とする。Ｙ（３９４）側鎖および骨格の間に、形成された広範囲の水素結合ネットワークおよびｐＳｅｒ３９６のホスフェートとの電荷／極性相互作用がある。本発明の抗体のＨＣ ＣＤＲ１は、パリンドローム（ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ）８－残基モチーフ極性ＡＡ－疎水性ＡＡ－極性ＡＡ－荷電ＡＡ－荷電ＡＡ－極性ＡＡ－疎水性ＡＡ－極性ＡＡ（Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ａｒｇ－Ｔｈｒ－Ｉｌｅ－Ｈｉｓ）を含む。荷電残基は、抗体およびタウタンパク質の間の、水素結合、電荷／電荷、および電荷／極性相互作用によって形成される広範囲の結合ネットワークを介して相互作用する。 治療パラダイムにおける抗体の有効性 実施例８ｂにおいて行われるように、ｈタウ－Ｐ３０１Ｌを発現するＨＥＫ２９３細胞に、示される抗体とともにプレインキュベートされたＴｇ４５１０ホモジネートを播種し、トリプシン処理し、２４時間後に再度播種し（抗体を再度加え）、シーディングの４８時間後に採取した。総細胞ホモジネートを、Ｃｉｓｂｉｏタウ凝集を用いて、凝集タウについて調べた。データは、ＣＣ＋Ｂ１２（ｔｇ４５１０）に対して正規化された、４つの独立した生物学的反復（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｒｅｐｌｉｃａｓ）のプールされたデータ＋／－Ｓ．Ｅ．Ｍ．である。 Ｐ３０１Ｌ－ｈタウ発現細胞に、６ウェル当たり抗体（２０μｇ／ｍｌ≒約１３３ｎＭ）とともに４℃で一晩プレインキュベートされた４０μｇのＴｇ４５１０脳ホモジネート（総タンパク質）を播種した。ＣＣ＋Ｂ１２のシーディングにより、大きなシーディング応答が得られた。ｈＣ１０．２は、約４０％の、凝集に対する影響を有していた。全ての他の抗体は、ｈＣ１０．２と少なくとも同等の効果を示した。特に、ｈＣ１０．２のＮ３２ＳおよびＮ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ変異体は、凝集タウの４５％および６２％の減少というより強い効果を示した。Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ変異体は、ｈＣ１０．２と比較して、凝集に対するかなり強い効果を示した。この図は、ヒト化Ｃ１０．２が、タウ誘発シーディングを行うのに有効であるが、Ｎ３２Ｓ、特に、Ｎ３２ＳおよびＡ１０１Ｔ二重突然変異が加わると、ｍＡｂの中和活性を増大させることを示す。 ストレス条件における変異体の脱アミド化試験 実施例８ｃにおいて行われるように、ＶＬ鎖の位置３２または３４におけるＡｓｎ残基の脱アミド化を、ＬＣ－ＭＳによってトリプシンペプチドＬＣ：Ｔ２［ＶＴＭＴＣＱＡＳＱＤＴＳＩＸＬＮＷＦＱＱＫＰＧＫ；配列番号５８］を分析することによって監視した。Ｘは、図２０に示されるそれぞれの変異体におけるＡｓｎ、ＧｌｎまたはＳｅｒのいずれかである。ＭＳ分析は、非脱アミド化ペプチドに対する脱アミド化ペプチドの相対含量の計算を可能にする。ＷＴ、Ａ１０１ＴおよびＤ５５Ｅ変異体において、ＬＣ：Ｔ２ペプチドにおける広範囲の脱アミド化が観察される。Ａｓｎ３２を、ＧｌｎまたはＳｅｒのいずれかに変更すると、他のＡｓｎ３４残基におけるペプチドの脱アミド化を完全に防ぐことも明らかである。また、本発明者らは、Ｇｌｎ３２変異体の脱アミド化を検出しない。同様の結果が、Ａｓｎ３４の変異体で観察された。 タウ抗体による皮質ニューロンにおけるタウシーディングおよび凝集の減少 ｒＴｇ４５１０マウス胚に由来する皮質神経細胞培養物におけるタウシーディングおよび凝集を、４０週齢のｒＴｇ４５１０マウスに由来するＰ３またはＳ１ｐ画分からの０．２ｎｇの病理学的タウによって誘発し、Ｃｉｓｂｉｏタウ凝集アッセイによって測定した。培養物中７日（ＤＩＶ）の時点で、ニューロンを、Ｐ３またはＳ１ｐおよび１０μｇの抗体またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）の混合物で処理した。完全な培地交換を、残りのＰ３およびＳ１ｐシードおよび抗体を除去するために、ＤＩＶ１１で行った。タウシーディングを、さらに４日間放置し、タウシーディングおよび凝集を測定するために、ニューロンをＤＩＶ１５で溶解させた。ＰＢＳおよびヒト対照ＩｇＧ抗体（ＩｇＧ ｃｏｎ ａｂ）は、タウシーディングおよび凝集に影響を与えなかった。タウシーディングおよび凝集は、タウ抗体（ｈＣ１０．２＿Ａ１０１Ｔ＿Ｎ３２Ｓ＞ｈＣ１０．２＿Ｎ３２Ｓ＞ｈＣ１０．２）による処理によって部分的に改善された。タウシーディングおよび凝集の以下の減少が測定された：ｈＣ１０．２により２３％、ｈＣ１０．２＿Ｎ３２Ｓにより４１～５３％、およびｈＣ１０．２＿Ａ１０１Ｔ＿Ｎ３２Ｓにより４８～６０％。棒グラフは、神経タンパク質に対して正規化されたタウ凝集の２つの独立した実験からのデータを平均±ＳＤとして表す。一元配置ＡＮＯＶＡニューマン・コイルス多重比較検定（ＰＢＳ／ＩｇＧ ｃｏｎ ａｂ対ｈＣ１０．２、ｈＣ１０．２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０．２＿Ａ１０１Ｔ＿Ｎ３２Ｓ ＊＊＊ｐ＜０．００１；ｈＣ１０．２対ｈＣ１０．２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０．２＿Ａ１０１Ｔ＿Ｎ３２Ｓ ＃＃＃ｐ＜０．００１）。 ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓの静脈内（ｉ．ｖ．）注射後のｒＴｇ４５１０マウスにおけるタウ構造の用量依存的装飾。 ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓは、ｒＴｇ４５１０脳の海馬および皮質においてインビボで標的構造を特異的に標識する。帯状皮質からの画像が示される。２０および８０ｍｇ／ｋｇにおいて最も強いシグナル、８ｍｇ／ｋｇにおいて弱いシグナル、０．８ｍｇ／ｋｇにおいて可視のシグナルなし。 海馬における播種されたタウ病変 播種された海馬におけるＧａｌｌｙａｓもつれ染色を有する細胞の数は、ｈＣ１０－２（５０％）、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ（４８％）およびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ（４７％）処理によって減少した。背側海馬を覆う６つ置きの切片で定量化を行い、動物につき合計８つの切片を使用した。細胞数は、８つの切片において特定された海馬の全てのサブ領域における陽性細胞の合計を反映する。一元配置ａｎｏｖａおよびダネットの多重比較検定を用いて、データを分析した。
参照により援用される配列
配列番号１：ヒトタウ（２Ｎ４Ｒ）
配列番号２：タウ残基３８６～４０８（ｐＳ３９６、ｐＳ４０４）
配列番号３：Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１
配列番号４：Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ２
配列番号５：Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ３
配列番号６：Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ１
配列番号７：Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２
配列番号８：Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３
配列番号９：マウスＣ１０－２軽鎖
配列番号１０：マウスＣ１０－２重鎖
配列番号１１：ヒト化Ｃ１０－２重鎖
配列番号１２：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖
配列番号１３：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｅ
配列番号１４：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｑ
配列番号１５：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｓ
配列番号１６：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｓ
配列番号１７：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｑ
配列番号１８：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３４Ｓ
配列番号１９：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３４Ｑ
配列番号２０：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｓ
配列番号２１：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｓ
配列番号２２：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｑ
配列番号２３：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｑ
配列番号２４：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号２５：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｅ、Ａ１０１Ｔ
配列番号２６：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｑ、Ａ１０１Ｔ
配列番号２７：ヒト化Ｃ１０－２重鎖変異体Ｄ５５Ｓ、Ａ１０１Ｔ
配列番号２８：ヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２変異体Ｄ５５Ｅ
配列番号２９：ヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２変異体Ｄ５５Ｑ
配列番号３０：ヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２変異体Ｄ５５Ｓ
配列番号３１：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｓ
配列番号３２：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｑ
配列番号３３：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３４Ｓ
配列番号３４：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３４Ｑ
配列番号３５：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｓ
配列番号３６：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｓ
配列番号３７：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｑ
配列番号３８：ヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｑ
配列番号３９：ヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号４０：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１
配列番号４１：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ２
配列番号４２：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ３
配列番号４３：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ１
配列番号４４：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２
配列番号４５：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３
配列番号４６：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ１変異体Ｎ３２Ｓ
配列番号４７：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ２変異体Ｎ３２Ｓ
配列番号４８：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２軽鎖ＣＤＲ３変異体Ｎ３２Ｓ
配列番号４９：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ１変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５０：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５１：ＩＭＧＴ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５２：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ１
配列番号５３：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２
配列番号５４：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３
配列番号５５：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ１変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５６：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ２変異体Ａ１０１Ｔ
配列番号５７：Ｃｈｏｔｉａ番号付けヒト化Ｃ１０－２重鎖ＣＤＲ３変異体Ａ１０１Ｔ
発明の詳細な説明
本明細書において使用される際、「タウ」という用語は、「タウタンパク質」と同義で
あり、タウタンパク質アイソフォーム（例えば、Ｐ１０６３６、１－９としてＵｎｉＰｒ
ｏｔにおいて同定される）のいずれかを指す。本明細書において使用されるタウのアミノ
酸の番号付けは、以下に示されるようにアイソフォーム２（配列番号１）に対して示され
、メチオニン（Ｍ）は、アミノ酸残基１である：
Figure 2022023096000001
本発明は、タウ、特に、ヒトタウに特異的に結合することが可能であり、一実施形態に
おいて、ヒトタウのリン酸化Ｓ３９６残基（ｐＳ３９６）に特異的に結合する能力を示す
抗体およびそのエピトープ結合フラグメントに関する。本発明の抗体およびそのエピトー
プ結合フラグメントは、例えば抗体制限または非飽和条件下で、ヒトタウにおけるリン酸
化セリン４０４（ｐＳ４０４）残基に特異的に結合することができないかまたは実質的に
できないことによってさらに特徴付けられる。さらに、ｐＳ４０４におけるリン酸化は、
エピトープを含むｐＳ３９６への特異的結合を妨げない。本明細書において使用される際
、「ｐＳ」および「｛ｐ｝Ｓ」という表記は、アミノ酸残基ホスホセリンを示し、後続の
番号は、配列番号１の配列に対する残基の位置を特定する。本明細書において使用される
際、抗体は、別のエピトープと比べて、このような結合が、このような他のエピトープで
観察される結合の２０％未満、１０％未満、５％未満、２％未満、より好ましくは、１％
未満である場合、エピトープに結合することが「実質的に」できない。
本発明の文脈における「抗体」（Ａｂ）という用語は、分子（「抗原」）のエピトープ
に特異的に結合する能力を有する、免疫グロブリン分子、または本発明のある実施形態に
よれば、免疫グロブリン分子のフラグメントを指す。天然抗体は、典型的に、通常、少な
くとも２つの重鎖（ＨＣ）および少なくとも２つの軽鎖（ＬＣ）から構成される四量体を
含む。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書においてＶＨと略記される）および、３つの領
域（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）から構成される重鎖定常領域から構成される。ヒト重
鎖は、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４サブタイプ）を含む任意の
アイソタイプのものであり得る。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書においてＶＬと略記
される）および軽鎖定常領域（ＣＬ）から構成される。ヒト軽鎖は、κ鎖およびλ鎖を含
む。重鎖および軽鎖可変領域が、典型的に、抗原認識に関与する一方、重鎖および軽鎖定
常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１
の成分（Ｃ１ｑ）を含む、宿主組織または宿主因子への免疫グロブリンの結合を仲介し得
る。ＶＨおよびＶＬ領域は、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保存される
配列の領域が散在する「相補性決定領域」と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分され得
る。各ＶＨおよびＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端へと以下の順序：ＦＲ１－ＣＤ
Ｒ１－ＦＲ２－ＣＤＲ２－ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４で配置される３つのＣＤＲ領域およ
び４つのＦＲ領域から構成される。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結
合領域を含有する。特に関連があるのは、自然界に存在し得るものと異なる物理的環境中
で存在するように「単離され」ているか、またはアミノ酸配列中の天然抗体またはそれら
のエピトープ結合フラグメントと異なるように修飾された抗体およびそれらのエピトープ
結合フラグメントである。
「エピトープ」という用語は、抗体への特異的結合が可能な抗原決定基を意味する。エ
ピトープは、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の表面基（ｓｕｒｆａｃｅ ｇｒｏ
ｕｐｉｎｇ）からなり、通常、特定の三次元構造特性、ならびに特定の電荷特性を有する
。立体配座エピトープおよび線状エピトープは、後者ではなく、前者への結合が、変性溶
媒の存在下で常に失われる点で区別される。エピトープは、特異的エピトープ結合ペプチ
ドによって有効に遮断されるアミノ酸残基（言い換えると、アミノ酸残基は、特異的エピ
トープ結合ペプチドのフットプリント内にある）などの、結合に直接関与するアミノ酸残
基および結合に直接関与しない他のアミノ酸残基を含み得る。
本明細書において使用される際、「抗体のエピトープ結合フラグメント」という用語は
、エピトープに特異的に結合することが可能な抗体のフラグメント、部分、領域（ｒｅｇ
ｉｏｎ）または領域（ｄｏｍａｉｎ）（それがどのように産生されるかにかかわらず（例
えば、切断により、組み換えにより、合成的になど））を意味する。エピトープ結合フラ
グメントは、このような抗体のＣＤＲ領域の１、２、３、４、５または６つ全てを含有し
てもよく、このようなエピトープに特異的に結合することが可能であるが、このような抗
体のものと異なるこのようなエピトープに対して特異性、親和性または選択性を示し得る
。しかしながら、好ましくは、エピトープ結合フラグメントは、このような抗体のＣＤＲ
領域の６つ全てを含有するであろう。抗体のエピトープ結合フラグメントは、単一のポリ
ペプチド鎖（例えば、ｓｃＦｖ）の一部であるか、もしくはそれを含んでもよく、または
アミノ末端およびカルボキシル末端（例えば、二重特異性抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆ
ａｂ２フラグメントなど）をそれぞれ有する２つ以上のポリペプチド鎖の一部であるか、
もしくはそれを含んでもよい。エピトープ結合能力を示す抗体のフラグメントは、例えば
、無傷の抗体のプロテアーゼ切断によって得られる。より好ましくは、Ｆｖフラグメント
の２つの領域、ＶＬおよびＶＨが、別個の遺伝子によって天然にコードされるが、または
このような遺伝子配列をコードするポリヌクレオチド（例えば、それらのコードｃＤＮＡ
）が、ＶＬおよびＶＨ領域が結合して一価エピトープ結合分子を形成する単一のタンパク
質鎖（単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，
（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａ
ｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８５：５８
７９－５８８３を参照）としてそれらが作製されるのを可能にするフレキシブルリンカー
によって、組み換え方法を用いて結合され得る。あるいは、単一のポリペプチド鎖のＶＬ
およびＶＨ領域が一緒に結合するのを可能にするには短すぎるフレキシブルリンカー（例
えば、約９個未満の残基）を用いることによって、二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉ
ｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）、二重特異性抗体（ｄｉａｂｏｄｙ）、または同様の分子（２つ
のこのようなポリペプチド鎖が一緒に結合して、二価エピトープ結合分子を形成する）を
形成することができる（二重特異性抗体の説明については、例えばＰＮＡＳ ＵＳＡ ９
０（１４），６４４４－８（１９９３）を参照）。本発明の範囲内に包含されるエピトー
プ結合フラグメントの例としては、（ｉ）Ｆａｂ’またはＦａｂフラグメント、ＶＬ、Ｖ
Ｈ、ＣＬおよびＣＨ１領域からなる一価フラグメント、または国際公開第２００７０５９
７８２号パンフレットに記載されている一価抗体；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２フラグメント
、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂフラグメントを
含む二価フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１領域から本質的になるＦｄフラグメ
ント；（ｉｖ）ＶＬおよびＶＨ領域から本質的になるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨ領域
から本質的になり、ドメイン抗体（Ｈｏｌｔ ｅｔ ａｌ；Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｔｅｃ
ｈｎｏｌ．２００３ Ｎｏｖ；２ｉ（ｌｌ）：４８４－９０）とも呼ばれるｄＡｂフラグ
メント（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４１，５４４－５４６（１９８９）
）；（ｖｉ）ラクダ科動物（ｃａｍｅｌｉｄ）またはナノボディ（Ｒｅｖｅｔｓ ｅｔ
ａｌ；Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ．２００５ Ｊａｎ；５＿（ｌ）：
ｌ ｌｌ－２４）および（ｖｉｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。
さらに、Ｆｖフラグメントの２つの領域、ＶＬおよびＶＨが、別個の遺伝子によってコー
ドされるが、それらは、ＶＬおよびＶＨ領域が組み合わされて、一価分子を形成する単一
のタンパク質鎖（単一鎖抗体または単一鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている、例えば
Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２，４２３－４２６（１９８８）および
Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８５，５８７９－５８８３（１９８８
）を参照）としてそれらが作製されるのを可能にする合成リンカーによって、組み換え方
法を用いて結合され得る。本発明の文脈におけるこれらのおよび他の有用な抗体フラグメ
ントは、本明細書においてさらに説明される。抗体という用語は、特に規定されない限り
、キメラ抗体およびヒト化抗体などの抗体様ポリペプチド、ならびに酵素的切断、ペプチ
ド合成、および組み換え技術などの任意の公知の技術によって提供される、抗原（エピト
ープ結合フラグメント）に特異的に結合する能力を保持する抗体フラグメントも含むこと
も理解されるべきである。生成される抗体は、任意のアイソタイプを有し得る。本明細書
において使用される際、「アイソタイプ」は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる
免疫グロブリンクラス（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）を指す。
このような抗体フラグメントは、当業者に公知の従来の技術を用いて得られ；所望のエピ
トープに結合することが可能な好適なフラグメントは、無傷の抗体と同じように有用性に
ついて容易にスクリーニングされ得る。一実施形態において、本発明の抗体のＦｃ領域は
、エフェクター機能を調節する突然変異を含む。
「二重特異性抗体」という用語は、それぞれ独立した標的を標的にする２つの独立した
エピトープ結合フラグメントを含有する抗体を指す。これらの標的は、異なるタンパク質
上に存在するエピトープ、または同じ標的上に存在する異なるエピトープであり得る。二
重特異性抗体分子は、親単一特異性二価抗体分子のＨＣの定常領域における補償的アミノ
酸改変を用いて作製され得る。得られるヘテロ二量体抗体は、２つの異なる親単一特異性
抗体から与えられる１つのＦａｂを含有する。Ｆｃ領域におけるアミノ酸改変は、時間を
経ても安定した二重特異性を有するヘテロ二量体抗体の向上した安定性をもたらす（Ｒｉ
ｄｇｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ９，６１７－６
２１（１９９６）、Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，ＪＢＣ ２８５，１９６３
７－１（２０１０）、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ３：６ ５４６－５５７（
２０１１）、Ｓｔｒｏｐ ｅｔ ａｌ．，ＪＭＢ ４２０，２０４－２１９（２０１２）
、Ｍｅｔｚ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ２５：１０ ５
７１－５８０（２０１２）、Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ １１０：１１３
，５１４５－５１５０（２０１３）、Ｓｐｒｅｔｅｒ Ｖｏｎ Ｋｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉ
ｎ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ５：５ ６４６－６５４（２０１３））。二重特異性抗体
は、ＳｃＦｖ融合を用いて生成される分子も含み得る。次に、２つの単一特異性ｓｃｆｖ
は、独立して、単一の二重特異性分子を生成するために安定したヘテロ二量体を形成する
ことが可能なＦｃ領域に結合される（Ｍａｂｒｙ ｅｔ ａｌ．，ＰＥＤＳ ２３：３
１１５－１２７（２０１０）。二重特異性分子は、二重の結合能を有する。例えば、ＣＮ
Ｓ疾患を治療するために血液脳関門を横切って治療用抗体を送達するために、治療標的お
よび経細胞輸送表面受容体の両方を標的にする。
本明細書および図において使用される際のＣ１０－２、ヒトＣ１０－２、ｈＣ１０－２
、ＨＣ１０－２、ｈＣ１０．２、ヒト化Ｃ１０－２およびヒト化Ｃ１０－２という用語は
、同義であることが意図され、抗体Ｃ１０－２として定義される。この用語は、
（ａ）配列番号１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ４；および
（ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ５
を有する抗体軽鎖可変領域；
ならびに
（ｄ）配列番号４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ６；
（ｅ）配列番号５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ７；および
（ｆ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ８
を有する抗体軽鎖可変ドメインを含むかまたはそれからなる抗体またはそのエピトープ結
合フラグメントを示すことが意図される。
抗体Ｃ１０－２は、配列番号１１の重鎖、配列番号１２の軽鎖、または両方を含むもの
として定義され得るヒト化抗体である。本発明の一実施形態は、配列番号１１の重鎖およ
び配列番号１２の軽鎖を含む抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本明細書および図において使用される際のｍＣ１０－２という用語は、マウス抗体Ｃ１
０－２を意味することが意図され、配列番号９および１０によって定義される。マウス抗
体Ｃ１０．２は、対照抗体として使用され、本発明の一部でない。
本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびＣ１０－２＿
Ｎ３２Ｓという用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮからＳにアミノ酸残基３２
の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｎ
３２Ｓとして定義される。本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３
２ＱおよびＣ１０－２＿Ｎ３２Ｑという用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮか
らＱにアミノ酸残基３２の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２
の変異体であり、抗体Ｎ３２Ｑとして定義される。
本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３４ＳおよびＣ１０－２＿
Ｎ３４Ｓという用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮからＳにアミノ酸残基３４
の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｎ
３４Ｓとして定義される。本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３
４ＱおよびＣ１０－２＿Ｎ３４Ｑという用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮか
らＱにアミノ酸残基３４の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２
の変異体であり、抗体Ｎ３４Ｑとして定義される。
本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ｎ３４ＳおよびＣ
１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ｎ３４Ｓという用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮから
Ｓにアミノ酸残基３２および３４の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ
１０－２の変異体であり、抗体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｓとして定義される。本明細書および図
において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｑ＿Ｎ３４ＳおよびＣ１０－２＿Ｎ３２Ｑ
＿Ｎ３４Ｓという用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮからＱにおよびＮからＳ
にそれぞれアミノ酸残基３２および３４の突然変異を少なくとも含むように変異された、
抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｓとして定義される。本明細書お
よび図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｑ＿Ｎ３４ＱおよびＣ１０－２＿Ｎ
３２Ｑ＿Ｎ３４Ｑという用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮからＱにアミノ酸
残基３２および３４の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変
異体であり、抗体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｑとして定義される。本明細書および図において使用
される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ｎ３４ＱおよびＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ｎ３４Ｑと
いう用語は、同義であることが意図され、軽鎖がＮからＳにおよびＮからＱにそれぞれア
ミノ酸残基３２および３４の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－
２の変異体であり、抗体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｑとして定義される。
本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｄ５５ＥおよびＣ１０－２＿
Ｄ５５Ｅという用語は、同義であることが意図され、重鎖がＤからＥにアミノ酸残基５５
の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｄ
５５Ｅとして定義される。本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｄ５
５Ｑ、Ｃ１０－２＿Ｄ５５Ｑという用語は、同義であることが意図され、重鎖がＤからＱ
にアミノ酸残基５５の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変
異体であり、抗体Ｄ５５Ｑとして定義される。本明細書および図において使用される際の
ｈＣ１０－２＿Ｄ５５Ｓ、Ｃ１０－２＿Ｄ５５Ｓという用語は、同義であることが意図さ
れ、重鎖がＤからＳにアミノ酸残基５５の突然変異を少なくとも含むように変異された、
抗体Ｃ１０－２の変異体であり、抗体Ｄ５５Ｓとして定義される。
本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ａ１０１ＴおよびＣ１０－２
＿Ａ１０１Ｔという用語は、同義であることが意図され、重鎖がＡからＴにアミノ酸残基
１０１の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の変異体であり、
抗体Ａ１０１Ｔとして定義される。
本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ、Ｃ１
０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ、ｈＣ１０－２＿Ａ１０１Ｔ＿Ｎ３２ＳおよびＣ１０－２
＿Ａ１０１Ｔ＿Ｎ３２Ｓという用語は、同義であることが意図され、重鎖がＡからＴにア
ミノ酸残基１０１の突然変異を少なくとも含むように変異されており、かつ軽鎖がＮから
Ｓにアミノ酸残基３２の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の
変異体であり、抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１Ｔとして定義される。
本明細書および図において使用される際のｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｑ＿Ａ１０１Ｔ、Ｃ１
０－２＿Ｎ３２Ｑ＿Ａ１０１Ｔ、ｈＣ１０－２＿Ａ１０１Ｔ＿Ｎ３２ＱおよびＣ１０－２
＿Ａ１０１Ｔ＿Ｎ３２Ｑという用語は、同義であることが意図され、重鎖がＡからＴにア
ミノ酸残基１０１の突然変異を少なくとも含むように変異されており、かつ軽鎖がＮから
Ｑにアミノ酸残基３２の突然変異を少なくとも含むように変異された、抗体Ｃ１０－２の
変異体であり、抗体Ｎ３２Ｑ、Ａ１０１Ｔとして定義される。
本明細書において使用される際の「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体
組成物」という用語は、単一の分子組成物の抗体分子の調製物を指す。従来のモノクロー
ナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す。特
定の実施形態において、モノクローナル抗体は、２つ以上のＦａｂ領域から構成され得、
それによって、２つ以上の標的に対する特異性を高める。「モノクローナル抗体」または
「モノクローナル抗体組成物」という用語は、任意の特定の産生方法（例えば、組み換え
、トランスジェニック、ハイブリドーマなど）によって限定されることは意図されていな
い。
本発明の抗体およびそのエピトープ結合フラグメントは、特に治療目的に用いられる場
合、好ましくは、「ヒト化」される。「ヒト化」という用語は、一般に組み換え技術を用
いて調製される、非ヒト種に由来する免疫グロブリンから得られるエピトープ結合部位、
およびヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づいた残りの免疫グロブリン構
造を有する分子を指す。エピトープ結合部位は、ヒト定常領域に融合された完全な非ヒト
抗体可変領域、またはヒト可変領域の適切なヒトフレームワーク領域に移植されたこのよ
うな可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）またはその部分のみのいずれかを含み得る。こ
のようなヒト化分子のフレームワーク残基は、野生型（例えば、完全ヒト）であってもよ
く、またはそれらは、配列がヒト化のための基盤として機能したヒト抗体に見られない１
つまたは複数のアミノ酸置換を含むように修飾され得る。ヒト化は、分子の定常領域がヒ
ト個体における免疫原として働く可能性を低下させるかまたはなくすが、外来（ｆｏｒｅ
ｉｇｎ）可変領域に対する免疫応答の可能性は残る（ＬｏＢｕｇｌｉｏ，Ａ．Ｆ．ｅｔ
ａｌ．（１９８９）“Ｍｏｕｓｅ／Ｈｕｍａｎ Ｃｈｉｍｅｒｉｃ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａ
ｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｉｎ Ｍａｎ：Ｋｉｎｅｔｉｃｓ Ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｅ Ｒｅ
ｓｐｏｎｓｅ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８６：４２
２０－４２２４）。別の手法は、ヒト由来の定常領域を提供することだけでなく、可変領
域を改変して、それらをヒト型にできる限り近くなるように再形成することにも焦点を当
てている。重鎖および軽鎖の両方の可変領域が、該当する抗原に対する応答が異なり、結
合能を決定する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、これらの相補性決定領域（ＣＤ
Ｒ）には、所与の種において比較的保存され、かつＣＤＲの足場を提供すると考えられる
４つのフレームワーク領域（ＦＲ）が隣接することが知られている。非ヒト抗体が、特定
の抗原に対して調製される場合、可変領域は、非ヒト抗体に由来するＣＤＲを、改変され
るヒト抗体中に存在するＦＲに移植することによって、「再形成」または「ヒト化」され
得る。様々な抗体に対するこの手法の適用は、Ｓａｔｏ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）
Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５３：８５１－８５６．Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．
（１９８８）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｆｏｒ Ｔｈ
ｅｒａｐｙ”，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ，Ｍ．ｅｔ
ａｌ．（１９８８）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｇｒ
ａｆｔｉｎｇ Ａｎ Ａｎｔｉｌｙｓｏｚｙｍｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ
２３９：１５３４－１５３６；Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈ，Ｃ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（
１９９１）“Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｍｏｕｓｅ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ
Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｂｙ ＣＤＲ－Ｇｒａｆｔｉｎｇ：Ｔｈｅ Ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ
Ｏｆ Ｆｒａｍｅｗｏｒｋ Ｒｅｓｉｄｕｅｓ Ｏｎ Ｌｏｏｐ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔ
ｉｏｎ”，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ４：７７３－３７８３；Ｍａｅｄ
ａ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）“Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ Ｏｆ Ｒｅｓｈａｐｅ
ｄ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｗｉｔｈ ＨＩＶ－Ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ
Ａｃｔｉｖｉｔｙ”，Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ２：
１２４－１３４；Ｇｏｒｍａｎ，Ｓ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）“Ｒｅｓｈａｐｉｎ
ｇ Ａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ＣＤ４ Ａｎｔｉｂｏｄｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８８：４１８１－４１８５；Ｔｅｍｐｅｓｔ，Ｐ．
Ｒ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）“Ｒｅｓｈａｐｉｎｇ Ａ Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｌｏ
ｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｏ Ｉｎｈｉｂｉｔ Ｈｕｍａｎ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒ
ｙ Ｓｙｎｃｙｔｉａｌ Ｖｉｒｕｓ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｖｉｖｏ”，Ｂｉｏ
／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６－２７１；Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９１
）“Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｆｏｒ Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｔｈｅ
ｒａｐｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．Ａ．）８８：２８６９
－２８７３；Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）“Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ
Ｏｆ Ａｎ Ａｎｔｉ－ｐ１８５ｈｅｒ２ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆｏｒ Ｈｕｍａｎ
Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．
Ａ．）８９：４２８５－４２８９；およびＣｏ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）“Ｃ
ｈｉｍｅｒｉｃ Ａｎｄ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｗｉｔｈ Ｓｐ
ｅｃｉｆｉｃｉｔｙ Ｆｏｒ Ｔｈｅ ＣＤ３３ Ａｎｔｉｇｅｎ”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１４８：１１４９－１１５４によって報告されている。ある実施形態において、ヒト
化抗体は、全てのＣＤＲ配列（例えば、マウス抗体に由来する全ての６つのＣＤＲを含む
ヒト化マウス抗体）を保存する。他の実施形態において、ヒト化抗体は、元の抗体に対し
て改変された１つまたは複数のＣＤＲ（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ）を有し、
これらは、元の抗体からの１つまたは複数のＣＤＲ「に由来する」１つまたは複数のＣＤ
Ｒとも呼ばれる。抗体をヒト化する能力は周知である（例えば、米国特許第５，２２５，
５３９号明細書；同第５，５３０，１０１号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；
同第５，８５９，２０５号明細書；同第６，４０７，２１３号明細書；同第６，８８１，
５５７号明細書を参照）。
抗体ＸＸという用語は、（ａ）そのそれぞれの配列番号によって定義される軽鎖および
重鎖、重鎖可変ドメイン、または重鎖可変ドメインＣＤＲ１～３のいずれか、または（ｂ
）そのそれぞれの配列番号によって定義される軽鎖可変ドメインおよび重鎖、重鎖可変ド
メイン、または重鎖可変ドメインＣＤＲ１～３のいずれか、または（ｃ）そのそれぞれの
配列番号によって定義される軽鎖可変ドメインＣＤＲ１～３、およびそのそれぞれの配列
番号によって定義される重鎖、重鎖可変ドメイン、または重鎖可変ドメインＣＤＲ１～３
のいずれかを含むかまたはそれからなる抗体またはそのエピトープ結合フラグメント（例
えば抗体「Ｃ１０－２」）を示すことが意図される。特定の実施形態において、抗体また
はそのエピトープ結合フラグメントは、それらの配列番号によって定義されるように含む
それらの全重鎖可変ドメインおよびそれらの配列番号によって定義されるそれらの軽鎖可
変ドメインによって定義される。
本明細書において特に規定されない限り、抗体のＦｃ領域または定常領域におけるアミ
ノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏ
ｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．米
国保健福祉省の国立衛生研究所（Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔ
ｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，
１９９１に記載されているように、ＥＵ ｉｎｄｅｘとも呼ばれるＥＵ番号付与体系にし
たがって行われる。
いくつかの抗体において、ＣＤＲのごく一部、すなわち、ＳＤＲと呼ばれる、結合に必
要とされるＣＤＲ残基のサブセットが、ヒト化抗体において結合を保持するのに必要とさ
れる。関連するエピトープに接触せず、ＳＤＲ中にないＣＤＲ残基が、過去の研究に基づ
いて（例えば、配列番号１１のＨＣの残基６０～６５に対応する残基Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｇ
ｌｎ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｇｌｎは、必要とされないことが多い）、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変
ループの外側にあるＫａｂａｔ ＣＤＲの領域から（これらは、ＨＣ ＣＤＲ２（配列番
号７）にも見られる（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９２）ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ
ＰＲＯＴＥＩＮＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ，Ｎａｔｉ
ｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ
．９１－３２４２；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９８７）“Ｃａｎｏｎｉｃａ
ｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ Ｆｏｒ Ｔｈｅ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏ
ｎｓ Ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０
１－９１７を参照）、分子モデリングによっておよび／または実験により、またはＧｏｎ
ｚａｌｅｓ，Ｎ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２００４）“ＳＤＲ Ｇｒａｆｔｉｎｇ Ｏｆ Ａ
Ｍｕｒｉｎｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｕｓｉｎｇ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｈｕｍａｎ Ｇｅ
ｒｍｌｉｎｅ Ｔｅｍｐｌａｔｅｓ Ｔｏ Ｍｉｎｉｍｉｚｅ Ｉｔｓ Ｉｍｍｕｎｏｇ
ｅｎｉｃｉｔｙ”，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４１：８６３－８７２に記載されるように
特定され得る。１つまたは複数のドナーＣＤＲ残基が存在しないかまたは全ドナーＣＤＲ
が省略される位置におけるこのようなヒト化抗体において、この位置を占めるアミノ酸は
、受容体抗体配列において（Ｋａｂａｔ番号付けによって）対応する位置を占めるアミノ
酸であり得る。含まれるＣＤＲ中のドナーアミノ酸に対する受容体のこのような置換の数
は、競合する考慮事項のバランスを反映する。このような置換は、ヒト化抗体中のマウス
アミノ酸の数を減少させ、結果として、潜在的な免疫原性を低下させるのに潜在的に有利
である。しかしながら、置換は、親和性の変化も引き起こすことがあり、親和性の著しい
低下は回避されるのが好ましい。ＣＤＲ内の置換の位置および置換するアミノ酸も、実験
により選択され得る。
抗体はまた、当該技術分野において明確に定義されたＩＭＧＴ番号付けシステムにした
がって特性評価される。（アミノ酸の数、すなわち、示される位置の数における）長さは
、ＩＭＧＴ－オントロジーの重要な本来の概念である（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ
．ｏｒｇ）。ＣＤＲ－ＩＭＧＴ長さは、生殖系列遺伝子のＩＧおよびＴＲ Ｖ－領域なら
びに再編成遺伝子、ｃＤＮＡおよびタンパク質のＶ－ドメインを特性評価する。
抗体は、例えばＣｈｏｔｈｉａ番号付けスキーム（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｂｉｏｉｎ
ｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／）にしたがって特性評価され得る。Ｃｈｏｔｈｉａ番号付け
スキームは、Ｋａｂａｔスキームと同一であるが、構造的に明確な位置におけるＣＤＲ－
Ｌ１およびＣＤＲ－Ｈ１への挿入を設置する。Ｃｈｏｔｈｉａ番号付けスキームは、構造
的ループ領域の位置に基づいている。これは、（Ｋａｂａｔスキームと異なり）これらの
ループにおける位相同形の残基が同じ標識を得ることを意味する。
ＣＤＲ残基の単一のアミノ酸改変が、機能的結合の喪失をもたらし得るということ（Ｒ
ｕｄｉｋｏｆｆ，Ｓ．ｅｔｃ．（１９８２）“Ｓｉｎｇｌｅ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓ
ｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ Ａｌｔｅｒｉｎｇ Ａｎｔｉｇｅｎ－Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｐｅ
ｃｉｆｉｃｉｔｙ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）７９（６）：
１９７９－１９８３）は、別の機能的ＣＤＲ配列を系統的に同定するための手段を提供す
る。このような変異体ＣＤＲを得るための１つの好ましい方法において、ＣＤＲをコード
するポリヌクレオチドが突然変異を起こされて（例えばランダム突然変異によって、また
は部位特異的方法（例えば、突然変異遺伝子座をコードするプライマーによるポリメラー
ゼ連鎖媒介性増幅）によって）、置換アミノ酸残基を有するＣＤＲを生成する。元の（機
能的）ＣＤＲ配列中の関連する残基の同一性を、置換される（非機能的）変異体ＣＤＲ配
列の同一性と比較することによって、その置換についてのＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換
スコアが特定され得る。ＢＬＯＳＵＭシステムは、信頼できるアラインメントについて配
列のデータベースを分析することによって作成されるアミノ酸置換のマトリックスを提供
する（Ｅｄｄｙ，Ｓ．Ｒ．（２００４）“Ｗｈｅｒｅ Ｄｉｄ Ｔｈｅ ＢＬＯＳＵＭ６
２ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｃｏｒｅ Ｍａｔｒｉｘ Ｃｏｍｅ Ｆｒｏｍ？”，Ｎａｔ
ｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２（８）：１０３５－１０３６；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ，Ｊ．Ｇ
．（１９９２）“Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ ｍａｔｒｉｃｅｓ
ｆｒｏｍ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｌｏｃｋｓ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．（ＵＳＡ）８９：１０９１５－１０９１９；Ｋａｒｌｉｎ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９
０）“Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ Ｔｈｅ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ
Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ Ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｆｅａｔ
ｕｒｅｓ Ｂｙ Ｕｓｉｎｇ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｃｈｅｍｅｓ”，Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８７：２２６４－２２６８；Ａｌｔｓ
ｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．（１９９１）“Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ
Ｍａｔｒｉｃｅｓ Ｆｒｏｍ Ａｎ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｔｈｅｏｒｅｔｉｃ Ｐ
ｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１９，５５５－５６５。現在、最先
端のＢＬＯＳＵＭデータベースは、ＢＬＯＳＵＭ６２データベース（ＢＬＯＳＵＭ６２．
ｉｉｊ）である。表１は、ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアを示す（スコアが高くな
るほど、置換がより保存的になり、ひいては置換が機能に影響を与えない可能性が高くな
る）。得られるＣＤＲを含むエピトープ結合フラグメントが、タウに結合できない場合、
例えば、ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアは、不十分に保存的であると見なされ、よ
り高い置換スコアを有する新たな置換候補が選択され、生成される。したがって、例えば
、元の残基がグルタメート（Ｅ）であり、非機能的置換残基がヒスチジン（Ｈ）である場
合、ＢＬＯＳＵＭ６２．ｉｉｊ置換スコアは０であり、より保存的な変化（アスパラギン
酸塩、アスパラギン、グルタミン、またはリジンなどへの）が好ましい。
Figure 2022023096000002
したがって、本発明は、改良されたＣＤＲを同定するためのランダム突然変異の使用を
想定している。本発明の文脈において、保存的置換は、表２、３、または４の１つまたは
複数に反映されているアミノ酸の種類の範囲内の置換によって定義され得る。
Figure 2022023096000003
Figure 2022023096000004
Figure 2022023096000005
より保存的な置換基（ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ ｇｒｏｕｐｉｎｇ）としては、バ
リン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リジン－アルギニン、ア
ラニン－バリン、およびアスパラギン－グルタミンが挙げられる。
アミノ酸のさらなる基はまた、例えば、Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ（１９８４）Ｐｒｏｔｅｉ
ｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ（２ｄ
Ｅｄ．１９９３），Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙに記載されてい
る原理を用いて配合され得る。
ファージディスプレイ技術が、ＣＤＲ親和性を増加させる（または低下させる）のに代
わりに使用され得る。親和性成熟と呼ばれるこの技術は、突然変異または「ＣＤＲウォー
キング（ｗａｌｋｉｎｇ）」を用い、再選択（ｒｅ－ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）は、標的抗原
またはその抗原性のエピトープ結合フラグメントを使用して、初期抗体または親抗体と比
較した際に、抗原に対するより高い（またはより低い）親和性で結合するＣＤＲを有する
抗体を同定する（例えばＧｌａｓｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ １４９：３９０３を参照）。単一のヌクレオチドではなくコドン全体の突然変異誘
発は、アミノ酸突然変異の半ランダム化レパートリーをもたらす。変異体クローンのプー
ルからなるライブラリーが構築され得、変異体クローンのそれぞれが、単一のＣＤＲ中の
単一のアミノ酸改変により異なり、各ＣＤＲ残基に対して各可能なアミノ置換を提示する
変異体を含む。抗原に対する増加した（または低下した）結合親和性を有する突然変異体
は、固定化突然変異体を標識抗原と接触させることによってスクリーニングされ得る。当
該技術分野において公知の任意のスクリーニング方法が、抗原に対する増加したまたは低
下した親和性を有する突然変異体抗体を同定するのに使用され得る（例えば、ＥＬＩＳＡ
）（Ｗｕ ｅｔ ａｌ．１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（Ｕ．Ｓ．
Ａ．）９５：６０３７；Ｙｅｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ １５５：１９９４を参照）。軽鎖をランダム化するＣＤＲウォーキングが、使用可
能であり得る（Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．２６３：
５５１を参照）。
このような親和性成熟を達成するための方法は、例えば：Ｋｒａｕｓｅ，Ｊ．Ｃ．ｅｔ
ａｌ．（２０１１）“Ａｎ Ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｔｈａｔ Ｄｉ
ｓｔｏｒｔｓ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉｔｅ Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒ
ｅ Ｅｎｈａｎｃｅｓ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ”
，ＭＢｉｏ．２（１）ｐｉｉ：ｅ００３４５－１０．ｄｏｉ：１０．１１２８／ｍＢｉｏ
．００３４５－１０；Ｋｕａｎ，Ｃ．Ｔ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ
－Ｍａｔｕｒｅｄ Ａｎｔｉ－Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ＮＭＢ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａ
ｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎｓ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ｍａｌｉｇｎａｎｔ Ｇｌｉｏ
ｍａｓ Ａｎｄ Ｍｅｌａｎｏｍａｓ”，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ １０．１００２／
ｉｊｃ．２５６４５；Ｈａｃｋｅｌ，Ｂ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２０１０）“Ｓｔａｂｉｌ
ｉｔｙ Ａｎｄ ＣＤＲ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ Ｂｉａｓｅｓ Ｅｎｒｉｃｈ Ｂｉ
ｎｄｅｒ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｔｙ Ｌａｎｄｓｃａｐｅｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏ
ｌ．４０１（１）：８４－９６；Ｍｏｎｔｇｏｍｅｒｙ，Ｄ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００
９）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔ
ｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ａｇａｉｎ
ｓｔ ＨＩＶ－１ ｇｐ４１”，ＭＡｂｓ １（５）：４６２－４７４；Ｇｕｓｔｃｈｉ
ｎａ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．（２００９）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｂｙ
Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｔｈｅ ＣＤＲ－Ｈ２
Ｌｏｏｐ Ｏｆ Ａ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｆａｂ Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｆｒｏｍ Ａ
Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｎａｉｖｅ Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｌｉｂｒａｒｙ Ａ
ｎｄ Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ａｇａｉｎｓｔ Ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒｎａｌ Ｔｒｉｍｅｒｉ
ｃ Ｃｏｉｌｅｄ－Ｃｏｉｌ Ｏｆ Ｇｐ４１ Ｙｉｅｌｄｓ Ａ Ｓｅｔ Ｏｆ Ｆａ
ｂｓ Ｗｉｔｈ Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ＨＩＶ－１ Ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｐｏ
ｔｅｎｃｙ Ａｎｄ Ｂｒｅａｄｔｈ”，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３９３（１）：１１２－１
１９；Ｆｉｎｌａｙ，Ｗ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２００９）“Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｕ
ｒａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ Ｒａｔ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｆｏｒ Ａ
ｎｔｉ－ＲＡＧＥ Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓ
ｉｓ Ｒｅｖｅａｌｓ Ａ Ｈｉｇｈ Ｌｅｖｅｌ Ｏｆ Ｍｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｐｌ
ａｓｔｉｃｉｔｙ Ｂｏｔｈ Ｉｎｓｉｄｅ Ａｎｄ Ｏｕｔｓｉｄｅ Ｔｈｅ Ｃｏｍ
ｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ－Ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ Ｒｅｇｉｏｎｓ”，Ｊ．Ｍｏｌ．
Ｂｉｏｌ．３８８（３）：５４１－５５８；Ｂｏｓｔｒｏｍ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．（２００
９）“Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ａ
ｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ Ｆｏｒ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅ
ｎｔ”，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５２５：３５３－３７６；Ｓｔｅｉｄｌ，
Ｓ．ｅｔ ａｌ．（２００８）“Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｍａｔｕｒａｔ
ｉｏｎ Ｏｆ Ｈｕｍａｎ ＧＭ－ＣＳＦ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｂｙ Ｔａｒｇｅｔ
ｅｄ ＣＤＲ－Ｄｉｖｅｒｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ”，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４６（１
）：１３５－１４４；およびＢａｒｄｅｒａｓ，Ｒ．ｅｔ ａｌ．（２００８）“Ａｆｆ
ｉｎｉｔｙ Ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａｓｓｉｓｔｅｄ
Ｂｙ Ｉｎ Ｓｉｌｉｃｏ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ”，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．（ＵＳＡ）１０５（２６）：９０２９－９０３４に記載されている。
したがって、包含される抗体またはそれらのエピトープ結合フラグメントのＣＤＲ変異
体の配列は、置換によって；例えば置換される４つのアミノ酸残基、３つのアミノ酸残基
、２つのアミノ酸残基または１つのアミノ酸残基によって、親抗体、Ｃ１０－２およびＣ
１０．２変異体のＣＤＲの配列と異なり得る。本発明の一実施形態によれば、ＣＤＲ領域
中のアミノ酸が、上記の３つの表において定義されるように、保存的置換で置換され得る
ことがさらに想定される。例えば、酸性残基Ａｓｐは、抗体の結合特性に実質的に影響を
与えずにＧｌｕで置換され得る。
本明細書において使用される際、抗体またはそのエピトープ結合フラグメントは、別の
エピトープと比べてそのエピトープと、より高頻度で、より迅速に、より長い期間および
／またはより高い親和性または結合活性で反応または会合する場合、別の分子（すなわち
、エピトープ）の領域に「特異的に」結合するといわれる。この定義を読むことによって
、例えば、第１の標的に特異的に結合する抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが
、第２の標的に特異的にまたは優先的に結合しなくてもまたは結合しなくてもよいことも
理解される。本明細書において使用される際、所定の抗原への抗体の結合の文脈における
「結合」という用語は、典型的に、抗原をリガンドとしておよび抗体を検体として用いて
ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）３０００機器において例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）
技術によって決定した際の約１０－７Ｍ以下、例えば約１０－８Ｍ以下、例えば約１０－
９Ｍ以下のＫＤに対応する親和性での結合を指し、所定の抗原または密接に関連している
抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合に対するその親和性より
少なくとも１０倍低い、例えば少なくとも１００倍低い、例えば少なくとも１，０００倍
低い、例えば少なくとも１０，０００倍低い、例えば少なくとも１００，０００倍低いＫ
Ｄに対応する親和性で所定の抗原に結合する。親和性がより低くなる量は、抗体のＫＤに
依存するため、抗体のＫＤが非常に低い（すなわち、抗体が非常に特異的である）場合、
抗原に対する親和性が、非特異的抗原に対する親和性より低くなる量は、少なくとも１０
，０００倍であり得る。
本明細書において使用される際の「ｋｄ」（秒－１または１／秒）という用語は、特定
の抗体－抗原相互作用の解離速度定数を指す。前記値は、ｋｏｆｆ値とも呼ばれる。
本明細書において使用される際の「ｋａ」（Ｍ－１×秒－１または１／Ｍ秒）という用
語は、特定の抗体－抗原相互作用の結合速度定数を指す。
本明細書において使用される際の「ＫＤ」（Ｍ）という用語は、特定の抗体－抗原相互
作用の解離平衡定数を指し、ｋｄをｋａで除算することによって得られる。
本明細書において使用される際の「ＫＡ」（Ｍ－１または１／Ｍ）という用語は、特定
の抗体－抗原相互作用の結合平衡定数を指し、ｋａをｋｄで除算することによって得られ
る。
一実施形態において、本発明は、以下の特性：
（ｉ）非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉ）Ｓ４０４においてリン酸化され、Ｓ３９６においてリン酸化されないタウに結
合することが実質的にできないこと；
（ｉｉｉ）Ｓ３９６においてリン酸化されるタウに結合する能力；
（ｉｖ）Ｓ３９６およびＳ４０４の両方においてリン酸化されるタウに結合する能力；
（ｖ）それがリン酸化４０４残基（ｐＳ４０４）に結合することが実質的にできないよ
うに、リン酸化タウ残基Ｓ３９６およびＳ４０４を選択的に区別する能力；
（ｖｉ）ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力；
（ｖｉｉ）病理学的および非病理学的ヒトタウタンパク質を区別する能力；および／ま
たは
（ｖｉｉｉ）本明細書に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫
枯渇されたｒＴｇ４５１０抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ６４ｋＤａお
よび７０ｋＤａバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、５５ｋＤａタウ
バンドを１０％超減少させない能力；または本明細書に記載されるように、ヒトＡＤ死後
脳に由来する抽出物とともに使用されるとき、Ｓ３９６リン酸化過リン酸化タウバンドを
少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、非過リン酸化タウバンドを１０％超減少
させない能力
の１つまたは複数を示す抗タウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明のさらなる実施形態は、高特異性、高親和性抗体を得るための方法であって、
（Ａ）免疫原を哺乳動物に注入して、それによって、前記哺乳動物を免疫する工程と；
（Ｂ）前記哺乳動物の前記免疫化を２回以上繰り返す工程と；
（Ｃ）他のタンパク質に結合する能力が実質的に低いが所望の高特異性、高親和性抗体
の存在について、前記繰り返し免疫された哺乳動物に由来する血清試料をスクリーニング
する工程と；
（Ｄ）前記高特異性、高親和性抗体を回収する工程と
を含む方法に関する。
したがって、本発明は、残基リン酸化Ｓ３９６を含む病原性過リン酸化タウに対して特
異的な高特異性、高親和性抗体に関する。このような抗体は、
（Ａ）２Ｎ４Ｒタウの残基３８６～４１０をカバーするＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ｛ｐ｝Ｓ
ＰＶＶＳＧＤＴ｛ｐ｝ＳＰＲＨＬ（配列番号２）を含む、１８～４０、例えば１８～３０
、例えば２０～３０連続アミノ酸残基を含む二リン酸化ペプチドを含む免疫原を哺乳動物
に注入して、それによって、前記哺乳動物を免疫する工程と；
（Ｂ）前記哺乳動物の前記免疫化を２回以上繰り返す工程と；
（Ｃ）残基リン酸化Ｓ３９６を含む病原性過リン酸化タウに結合することが可能である
が、非病原性タウに結合する能力が実質的に低い高特異性、高親和性抗体の存在について
、前記繰り返し免疫された哺乳動物に由来する血清試料をスクリーニングする工程と；
（Ｄ）前記高特異性、高親和性抗体を回収する工程と
によって、高特異性、高親和性抗体を生成するための上述される方法の適合によって生成
され得る。
本明細書において使用される際、タウ分子に結合することが「実質的にできないこと」
は、対照抗体によって仲介される検出可能な結合と比べて、機能性の２０％超の相違、４
０％超の相違、６０％超の相違、８０％超の相違、１００％超の相違、１５０％超の相違
、２倍超の相違、４倍超の相違、５倍超の相違、または１０倍超の相違を示す。
「選択的」および「免疫選択的」という用語は、２つのエピトープに対する抗タウ抗体
の結合能力に言及する場合、飽和条件下で観察される結合が、少なくとも８０％の相違、
少なくとも９５％の相違、最も好ましくは、１００％の相違（すなわち、１つのエピトー
プへの検出可能な結合なし）を示すことが意図される。「選択的」および「免疫選択的」
という用語は、タウ抗体に言及する場合、抗体が、ヒトアルツハイマー病の脳に由来する
過リン酸化タウに結合し、病理学的および非病理学的ヒトタウタンパク質を区別すること
ができることを意味することがさらに意図される。
ＴＢＳ－抽出可能（Ｓ１）、高塩／サルコシル－抽出可能（Ｓ３）、およびサルコシル
－不溶性（Ｐ３）画分という用語は、本明細書に記載されるタウ生化学的分画によって得
られる画分である。
「正常なタウ」という用語は、タンパク質のモル当たり２～３モルのホスフェートを含
有する正常な脳タウを指す。
「過リン酸化タウ」という用語は、ウエスタンブロットにおけるポリ－アニオン種に誘
発される移動度シフトと一致するタウのポリリン酸化種またはリン酸化された５つ、６つ
または７つ超のセリン、トレオニンまたはチロシン部位を有するタウ種を指す。
「リン酸化残基３９６を有するタウ」という用語は、残基３９６がリン酸化される過リ
ン酸化タウに関連する。
「トランスジェニック非ヒト動物」という用語は、１つまたは複数のヒト重鎖および／
または軽鎖導入遺伝子または導入染色体（ｔｒａｎｓ－ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）（動物の
天然ゲノムＤＮＡへと統合されるかまたは非統合のいずれか）を含み、完全ヒト抗体を発
現することが可能なゲノムを有する非ヒト動物を指す。例えば、トランスジェニックマウ
スは、マウスが、タウ抗原および／またはタウを発現する細胞で免疫されるときにヒト抗
タウ抗体を産生するように、ヒト軽鎖導入遺伝子およびヒト重鎖導入遺伝子またはヒト重
鎖導入染色体のいずれかを有し得る。ヒト重鎖導入遺伝子は、トランスジェニックマウス
、例えばＨｕＭＡｂマウス（ＨＣｏ７またはＨＣｏｌ２マウスなど）の場合と同様に、マ
ウスの染色体ＤＮＡへと統合され得、またはヒト重鎖導入遺伝子は、国際公開第０２／４
３４７８号パンフレットに記載されるように、導入染色体ＫＭマウスの場合と同様に、染
色体過剰に（ｅｘｔｒａ－ｃｈｒｏｍｏｓｏｍａｌｌｙ）維持され得る。このようなトラ
ンスジェニックおよび導入染色体マウス（本明細書においてまとめて「トランスジェニッ
クマウス」と呼ばれる）は、Ｖ－Ｄ－Ｊ組み換えおよびアイソタイプスイッチングを行う
ことによって、所与の抗原（ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよび／またはＩｇＥなど
）に対するヒトモノクローナル抗体の複数のアイソタイプを産生することが可能である。
トランスジェニック、非ヒト動物も、特定の抗体をコードする遺伝子を誘導することに
よって、例えば動物の乳汁中で発現される遺伝子間を作動可能に連結することによって、
特定の抗原に対する抗体の産生に使用され得る。
本明細書において使用される際の「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」または「治療するこ
と（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」という用語は、疾患または障害の進行または重症度を改善し、
遅らせ、軽減し、または抑制すること、またはこのような疾患または障害の１つまたは複
数の症状または副作用を改善し、遅らせ、軽減し、または抑制することを意味する。本発
明の趣旨では、「治療」または「治療すること」は、有益なまたは所望の臨床結果を得る
ための手法をさらに意味し、ここで、「有益なまたは所望の臨床結果」としては、限定は
されないが、部分的であるかまたは全体的であるかにかかわらず、症状の軽減、障害また
は疾患の程度の減少、安定した（すなわち、悪化していない）疾患または障害状態、疾患
または障害状態の進行の遅延または緩徐化、疾患または障害状態の改善または緩和、およ
び疾患または障害の寛解が挙げられる。
「有効量」は、本発明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに適用される場合
、意図される生物学的効果または所望の治療結果（限定はされないが臨床結果を含む）を
達成するのに、必要な投与量および期間にわたる、十分な量を指す。「治療的に有効な量
」という語句は、本発明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに適用される場合
、障害もしくは疾患の状態の進行、または障害もしくは疾患の症状の進行を改善し、緩和
し、安定させ、抑制し、遅らせ、軽減し、または遅延させるのに十分な、抗体、またはそ
のエピトープ結合フラグメントの量を表すことが意図される。一実施形態において、本発
明の方法は、他の化合物と組み合わせた、抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント
の投与を提供する。このような場合、「有効量」は、意図される生物学的効果を引き起こ
すのに十分な組合せの量である。
本発明の抗タウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメントの治療的に有効な量は、個
体の病状、年齢、性別、および体重、ならびに抗タウ抗体またはそのエピトープ結合フラ
グメントが個体における所望の応答を引き起こす能力などの要因に応じて変化し得る。治
療的に有効な量はまた、抗体または抗体部分の何らかの毒性または有害作用を、治療的に
有益な効果が上回る量である。
上に示されるように、本発明は、特に、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結
合フラグメント、およびこのような分子（ひいてはそのこのようなエピトープ結合フラグ
メント）を産生するための完全に新規な方法に関する。モノクローナル抗体を単離する新
規な方法のこの能力は、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基セリン３９６（Ｐ－Ｓ３
９６、ｐＳ３９６、｛ｐ｝Ｓ３９６）に特異的に結合することが可能なモノクローナル抗
体を単離するその使用によって本明細書において例示される。これらの抗体は、タウが残
基３９６においてもリン酸化されない限り、リン酸化セリン４０４でタウタンパク質に結
合しないように、リン酸化残基セリン３９６およびセリン４０４（Ｐ－Ｓ４０４、ｐＳ４
０４）を区別するそれらの能力によってさらに特徴付けられる。
本発明の抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントは、ｐＳ３９６特異的抗体の選
択に好ましい新規な方法の使用によって生成および単離された。さらに、この非常に厳密
な抗体クローン選択手順を適用することによって、Ｓ３９６に対して高度に特異的である
だけでなく、リン酸化ｐＳ３９６エピトープに対しても高度に選択的である抗体が得られ
た。これらの抗体は、アルツハイマー病の脳に由来するタウを独自に認識する。スクリー
ニング手順が、機能的および治療的有用性を有する抗体の同定を確実にすることも実証す
る。
抗体を、２Ｎ４Ｒタウの残基３８６～４０８をカバーする二リン酸化ペプチド：ＴＤＨ
ＧＡＥＩＶＹＫ｛ｐ｝ＳＰＶＶＳＧＤＴ｛ｐ｝ＳＰＲＨＬ（配列番号２）に対して誘導し
た。マウスをリン酸化ペプチドで免疫した。十分な抗体価が得られたら、マウスを殺処分
し、ハイブリドーマを生成した。ハイブリドーマを、ドットブロットおよび免疫化された
ヒト病理学的および非病理学的タウを用いたＭＳＤ ＥＬＩＳＡを用いてスクリーニング
した。ドットブロットおよびウエスタンブロットにおいて病理学的および非病理学的ヒト
タウタンパク質を区別する能力を、ハイブリドーマの選択に使用した。１６のクローンを
選択し、そのうちの４つのハイブリドーマクローンを回収し、それにより、ヒト病理学的
タウ材料に結合する目立った能力を示す抗体を産生した。
また、病理学的および非病理学的タウへの特異的結合を、罹患および非罹患ヒトＡＤ脳
に由来するタウの単離およびＭＳＤ ＥＬＩＳＡプレートにおけるこの材料の固定化によ
って決定した（実施例４）。
本発明のさらなる態様は、２Ｎ４Ｒタウの残基３８６～４１０をカバーするＴＤＨＧＡ
ＥＩＶＹＫ｛ｐ｝ＳＰＶＶＳＧＤＴ｛ｐ｝ＳＰＲＨＬ（配列番号２）内の少なくとも１８
、例えば少なくとも２０連続アミノ酸残基を含む二リン酸化ペプチドに対して誘導される
モノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。本発明のこの態様
において、モノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメントは、典型的に、２
Ｎ４Ｒタウの残基３８６～４１０をカバーするＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ｛ｐ｝ＳＰＶＶＳＧ
ＤＴ｛ｐ｝ＳＰＲＨＬ（配列番号２）を含む１８～４０、例えば１８～３０、例えば２０
～３０連続アミノ酸残基を含む二リン酸化ペプチドに対して誘導される。
本発明のさらなる態様は、月齢を健常にマッチさせた対照よりＡＤ罹患患者に由来する
リン酸化タウ（ｐタウ）に対する特異性を有する本発明のモノクローナル抗体またはその
エピトープ結合フラグメントであって、前記モノクローナル抗体またはそのエピトープ結
合フラグメントが、本明細書に記載されるように、リン酸化－および多量体特異的Ｓｅｔ
ｕｐ １ ＥＬＩＳＡまたはＭＳＤを用いて、ＡＤおよび健常対照被験体に由来する脳ホ
モジネート中のリン酸化タウ（ｐタウ）を検出するためのＥＬＩＳＡベースのアッセイに
おいて健常対照材料と比較したＡＤ疾患材料に対する特異性の５０倍超、例えば１００倍
超の増加の、月齢をマッチさせた健常対照に由来するタウよりＡＤ罹患患者に由来するリ
ン酸化タウ（ｐタウ）に対する特異性の差を有するようになっているモノクローナル抗体
またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明の関連する態様は、ＡＤ罹患タウに対する特異性を有する本発明のモノクローナ
ル抗体またはそのエピトープ結合フラグメントであって、前記モノクローナル抗体または
そのエピトープ結合フラグメントが、リン酸化－および多量体特異的Ｓｅｔｕｐ １ Ｅ
ＬＩＳＡを用いて、ＡＤおよび健常対照被験体に由来する脳ホモジネート中のリン酸化タ
ウ（ｐタウ）を検出するためのＥＬＩＳＡまたはＭＳＤベースのアッセイにおいて健常対
照材料と比較したＡＤ疾患材料に対する特異性の５０倍超、例えば１００倍超の増加の、
月齢を健常にマッチさせた対照よりＡＤに対する特異性の差を有するようになっているモ
ノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
Ｓｅｔｕｐ １ ＥＬＩＳＡまたはＭＳＤ方法は、工程Ａ）Ｃ１０－２被覆プレートを
用いたＡＤ脳に由来する病理学的ヒトタウ抗原の捕捉；Ｂ）増加する濃度のｐＳ３９６特
異的抗体ともにタウ抗原のインキュベーション；およびＣ）ＭＳＤからのスルホタグ化抗
ヒト（総）タウ抗体を用いた固定化Ｃ１０．２に捕捉された残余フリータウ抗原の検出を
含む。
さらに詳細には、工程Ａは、Ｃ１０－２抗体、典型的に、コーティング緩衝液中の０．
５μｇ／ｍｌ（捕捉抗体）によるＭＳＤプレート（典型的に、４℃で一晩）コーティング
、ブロッキング（典型的に、室温で１時間）および典型的に、３回の洗浄を含む。工程Ｂ
は、ＡＤ（３人の患者からプールされる）に由来するＰ３溶解物（典型的に、１：１００
０＝２～４μｇ／ｍｌの希釈された総タンパク質）および／またはＳ１（ｐ）（典型的に
、１：３００＝２０～４０ｎｇ／ｍｌの希釈された総タンパク質）の試料を、段階的な濃
度のｐＳ３９６ペプチドエピトープ特異的抗体と混合し、（典型的に、室温で１時間）イ
ンキュベートすることを含む。続いて、反応物を、工程Ａにおいて準備されたプレート上
で２時間インキュベートする。工程Ｃは、スルホタグ化ヒトタウを用いてＣ１０－２で捕
捉されたタウを検出することを含む。製造業者の指示にしたがって、ＭＳＤからのタウ抗
体（典型的に、１：５０）。プレートを、ＭＳＤ ＳＥＣＴＯＲ（登録商標）Ｓ６００に
おいて分析する。ＡＤ Ｐ３およびＡＤ Ｓ１（ｐ）を、同様の設備において試験する。
さらなる実施形態は、ヒト細胞株、非ヒト哺乳動物細胞株、昆虫、酵母または細菌細胞
株などの細胞株において生産または製造された、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化セリ
ン残基３９６に特異的に結合することが可能な抗体、またはその抗原結合フラグメントに
関する。
ＣＨＯ細胞株、ＨＥＫ細胞株、ＢＨＫ－２１細胞株、マウス細胞株（骨髄腫細胞株など
）、線維肉腫細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６細胞株、ＨＫＢ－１１細胞株、ＣＡＰ細胞株およびＨ
ｕＨ－７ヒト細胞株において生産される、ヒトタウ（配列番号１）のリン酸化残基３９６
に特異的に結合することが可能な抗体、またはその抗原結合フラグメント。
Ｃ１０－２およびＣ１０－２変異体の特異的親和性および結合特性が、位置３９６また
は４０４においてリン酸化されるかまたはリン酸化されないタウ３８６～４１０（２Ｒ４
Ｎ）ペプチドを用いて特性評価された。本出願において概略が示される特異的な免疫化お
よびスクリーニングプロトコルを用いると、高リン酸化セリン－３９６（ｐＳ３９６）特
異的抗体が産生される。
抗体が病理学的タウに対して特異的であることを実証するために、Ｃ１０－２抗体はま
た、免疫組織化学的分析によって特性評価された。抗体は、アルツハイマー病の脳（タウ
タングル）およびヒト（Ｐ３０１Ｌ）突然変異体タウを発現するＴｇ４５１０タウトラン
スジェニックマウスに由来する切片における神経原線維変化への高度に特異的な結合を示
す。ヒト対照脳および非トランスジェニックマウス脳に由来する組織への結合は観察され
ず、これは、抗体が、ヒトタウ、特に、アルツハイマー病病変に関連するタウに特異的に
結合することを実証している。
抗体Ｃ１０－２
本発明の一態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
本発明のさらなる態様は、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
ＩＭＧＴ定義を用いて別に定義される、本発明の一態様は、
（ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号４５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
Ｃｈｏｔｉａ定義を用いて別に定義される、本発明の一態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
疾患病変に関連するタウを認識する本発明の抗体の独自の能力が実証される。病理学的
タウ対非病理学的タウの結合を比較した。比較は、５つの公開されたタウ抗体：ｈＡＣＩ
－２Ｂ６、ＩＰＮ００２、ＨＪ８．５、２．１０．３、および４Ｅ４に対して行われる。
２．１０．３抗体は、セリン４２２（ｐＳ４２２）においてリン酸化されるタウに特異的
に結合する市販の組み換えモノクローナル抗体である。ＨＪ８．５は、Ｎ末端領域（残基
２５～３０ａａにおけるエピトープ）においてヒトタウのみを認識する市販のモノクロー
ナル抗体である。抗体は、ＩｇＧ２ｂアイソタイプのものである。抗タウ治療用抗体ＮＩ
－１０５－４Ｅ４は、市販の抗体である。表は、単離された抗体が、ヒト病理学的タウに
対する非常に高度な特異性および選択性を示すことを実証している。この選択性は、表５
に示されるように比較用抗体のいずれよりも優れている。
Figure 2022023096000006
飽和において、抗体Ｃ１０－２は、ヒトＡＤ脳から単離されたＰ３タウに対する１００
倍超の選択性を示す。
選択された抗体が、機能的および治療的有用性を有することを実証するために、抗体を
、インビトロおよび細胞内のタウ凝集アッセイにおいて試験した（実施例８）。これらの
アッセイは、抗体が、タウの病理学的凝集過程を妨げることができることを実証する機能
アッセイである。ＨＥＫ２９３細胞を、ヒトタウ－Ｐ３０１Ｌ－ＦＬＡＧ（４Ｒ０Ｎ）で
一過性にトランスフェクトする。続いて、細胞を、ヒトＡＤ脳またはトランスジェニック
Ｔｇ４５１０脳に由来するタウ抽出物に曝露する。病理学的タウへのこの曝露は、細胞へ
のタウの取り込みおよび細胞内凝集を促進する。抗体Ｃ１０－２を用いたタウ標本の免疫
枯渇、およびこれらの抗体による細胞の直接の処理は両方とも、タウ凝集体の形成を劇的
に減少させることができる。
抗体Ｃ１０－２の治療的有用性も、ヒトタウ／ＰＳ１マウスにおいて評価された。この
マウスモデルは、高齢期（１２～１８月齢）にのみＡＤ病変を生じるさらなるＡＤ疾患関
連動物モデルである。しかしながら、マウスは、固体もつれ病変の発生前にタウ過リン酸
化を示す。マウスに、１５ｍｇ／ｋｇの用量を週に２回、１３週間にわたって長期的に注
入した。抗体で処理されたマウスは、リン酸化タウの劇的な減少を示し、これは、抗体Ｃ
１０－２による長期治療が、もつれ病変、ひいてはその後のインビボの神経変性を減少さ
せることを示す。
本発明の抗体は、免疫枯渇方法によってｒＴｇ４５１０マウス脳抽出物から過リン酸化
タウを特異的に除去する。さらに、本発明の抗体は、ホモジネートから正常なタウを除去
しない一方、市販のタウ５抗体は正常なタウを除去する。残基４０４または残基４０４お
よび３９６の両方においてリン酸化されるタウタンパク質に結合する市販の抗体と対照的
に、本発明の抗体は、セリン３９６においてリン酸化される過リン酸化タウを９５％だけ
特異的に除去する。実験（実施例１２）は、本発明の抗体が、脳ホモジネート中の総タウ
のごくわずかな部分（８％）のみを除去するにもかかわらず、抗体は、過リン酸化タウを
（９０％だけ）特異的に除去することを実証する。したがって、本発明の一態様は、病原
性過リン酸化タウに特異的に結合することが可能なモノクローナル抗体、またはそのエピ
トープ結合フラグメントに関する。さらに、過リン酸化タウを、本発明の抗体を用いて除
去した実験において、シーディング活性がなくされた。ホモジネートから過リン酸化タウ
を除去することによって、ホモジネートは、タウ病変のシーディングをもはや誘発しない
。シーディングの減少は、もつれ形成の発生およびアルツハイマー病を含むタウオパチー
の進行を軽減することが提示されている。したがって、本発明のさらなる態様は、ＡＤま
たはＡＤの症状の進行の軽減に使用するための本発明の抗体に関する。
抗体Ｄ５５Ｅ
本発明の一態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｄ５５Ｅに関する。本発明のこ
の態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３。
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｅに関する本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖：
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｅに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｑ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｄ５５Ｑに関する。本発明の
この態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｑに関する本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｑに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｓ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｄ５５Ｓに関する。本発明の
この態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｓに関する本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖および
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｓに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｓ、抗体Ｄ５５Ｑ、抗体Ｄ５５Ｅを用いた試験は、この残基の突然変異が、
室温で長期間にわたる低ｐＨでの処理の前および後に前記抗体を比較した際に、改変され
ていない結合特性を有する抗体をもたらすことを示し、これは、低ｐＨで異性化が行われ
ないこと、または任意の異性化タンパク質が、処理前と比較して改変されていない結合特
性を有することを示す。
抗体Ｎ３２Ｓ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｎ３２Ｓに関する。本発明の
この態様は、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｓに関する本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｓに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合
フラグメントに関する。
ＩＭＧＴ定義を用いた抗体Ｎ３２Ｓの別の定義は、
（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号４３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号４５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントである。
Ｃｈｏｔｉａ定義を用いた抗体Ｎ３２Ｓのさらに別の定義は、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号５２のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号５３のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号５４のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントである。
図１から分かるように、抗体Ｎ３２Ｓ（黒丸）のＩＣ５０は、抗体Ｃ１０－２と比較し
て低下され：Ｎ３２ＳのＩＣ５０は、４４ｎＭであると計算された。Ｃ１０－２と比べた
この著しい改善は予測されなかった。図１によって裏付けられるように、本発明の一態様
は、シグナルが１００ｎＭ以下の抗体の濃度で５０％だけ減少されるように、本明細書に
記載される流体相阻害アッセイにおいてＡＤ－Ｐ３を阻害する抗体に関する。一実施形態
において、本発明の抗体は、ＡＤ－Ｐ３捕捉についての流体相阻害アッセイに基づいて、
例えば５０ｎＭ以下、例えば０．１ｎＭ～５０ｎＭの濃度で、０．１ｎＭ～１００ｎＭの
ＩＣ５０を有する。
抗体Ｎ３２Ｓを用いて生成されるデータは、セリンに対して、抗体Ｃ１０－２の軽鎖の
、または抗体Ｃ１０－２のＬＣ ＣＤＲ１の位置３２における突然変異が、ペプチド阻害
アッセイにおいて見かけの親和性（ＩＣ５０）を高めることを示す。さらに、セリンまた
はグルタミンに対して位置３２における突然変異（抗体Ｎ３２Ｓおよび抗体Ｎ３２Ｑ）は
、図２０に示されるように、位置３２および３４の両方において脱アミド化をなくす。イ
ンビトロシーディングおよび凝集試験に関して決定される際の有効性が、Ｎ３２Ｓおよび
Ｎ３２Ｑ変異体の両方において維持される。
タンパク質バッチの不均一性につながり得る位置におけるＣ １０－２において潜在的
に特定される潜在的な脱アミド化の可能性。Ｃ １０－２は、わずかな割合の高い見かけ
の親和性（２～５ｎＭ）および低い見かけの親和性での主要な結合（２００～１０００ｎ
Ｍ）によるＡＤ－Ｐ３抗原への不均一な結合を示した（図１）。不均一な結合は、脱アミ
ド化されたおよび脱アミド化されていないＣ １０－２の異なる亜集団（ｓｕｂｐｏｐｕ
ｌａｔｉｏｎ）を反映し得る。変異体が、置換（Ｎ３２Ｓ）によって生成され、これが、
脱アミド化を防止した。示されるように、Ｃ １０－２と比較して全体的に低下されたＩ
Ｃ５０（より高い見かけの親和性）によって示されるように、活性によって改善された結
合。高い見かけの親和性タイプの均一な結合をもたらすさらなる置換Ａ１０１Ｔを導入し
た。Ｎ３２ＳおよびＮ３２Ｓ－Ａ１０１Ｔの両方における改善された結合活性は、より安
定したかつ均一な抗体が、上述される突然変異によって得られたことを示唆する。
抗体Ｎ３２Ｑ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｎ３２Ｑに関する。本発明の
この態様は、
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｑに関する本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｑに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合
フラグメントに関する。
記載されるように、抗体Ｎ３２Ｓを用いて生成されたデータは、セリンに対する、抗体
Ｃ１０－２の軽鎖の、または抗体Ｃ１０－２のＬＣ ＣＤＲ１の位置３２における突然変
異が、見かけの親和性（ＩＣ５０）を高める一方、グルタミンに対する突然変異（抗体Ｎ
３２Ｑ）は、改変されていない結合活性をもたらすことを示す。しかしながら、セリンま
たはグルタミンに対する位置３２における突然変異（抗体Ｎ３２Ｓおよび抗体Ｎ３２Ｑ）
は、図２０に示されるように、位置３２および３４の両方において脱アミド化をなくす。
したがって、抗体Ｎ３２Ｓおよび抗体Ｎ３２Ｑの両方に対する利点がある。インビトロシ
ーディングおよび凝集試験に関して決定される際の有効性が、Ｎ３２ＳおよびＮ３２Ｑ変
異体の両方において維持される。
抗体Ｎ３４Ｓ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｎ３４Ｓに関する。本発明の
この態様は、
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３４Ｓに関する本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３４Ｓに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合
フラグメントに関する。
抗体Ｎ３４Ｑ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｎ３４Ｑに関する。本発明の
この態様は、
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３４Ｑに関する本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３４Ｑに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合
フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｓ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｓに関する
。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｓに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態
は、
（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｓに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態
は、
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合
フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｓ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｓに関する
。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｓに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態
は、
（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｓに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態
は、
（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合
フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｑ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｑに関する
。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｑに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態
は、
（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｑに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態
は、
（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合
フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｑ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｑに関する
。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｑに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態
は、
（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｑに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態
は、
（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合
フラグメントに関する。
抗体Ａ１０１Ｔ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ａ１０１Ｔに関する。本発明
のこの態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ａ１０１Ｔを用いて生成されたデータは、抗体Ｃ１０－２の重鎖のまたは抗体Ｃ１
０－２の重鎖ＣＲ３の突然変異が、２倍増加したペプチド結合およびＰ３材料への１０～
２０倍増加した結合をもたらすことを示す。さらに、Ａ１０１Ｔ突然変異を含む変異体は
、インビトロシーディングアッセイにおいて増加した有効性を有する。
抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１Ｔ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１Ｔに関す
る。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形
態は、
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形
態は、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合
フラグメントに関する。
ＩＭＧＴ定義を用いて、抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１Ｔは、
（ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号４８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号４９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号５０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号５１のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントである。
Ｃｈｏｔｉａ定義を用いて、抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１Ｔは、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号５５のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号５６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号５７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントである。
図１から分かるように、抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１Ｔ（白丸）のＩＣ５０は、抗体Ｃ１０
－２と比較して著しく低下され：Ｎ３２Ｓ Ａ１０１ＴのＩＣ５０は、１４ｎＭであると
計算された。Ｃ１０－２と比べたこの著しい改善は予測されなかった。図１に基づいて、
本発明の一態様は、１００ｎＭ以下の抗体、例えば１０ｎＭ～１００ｎＭの抗体の濃度で
、例えば５０ｎＭ以下、例えば１０ｎＭ～５０ｎＭの抗体の濃度で、シグナルが５０％だ
け減少されるように、本明細書に記載される流体相阻害アッセイにおいてＡＤ－Ｐ３を阻
害する抗体に関する。図２０に示されるように、抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１は、脱アミド化
に対して非常に安定している。図１９に示されるように、抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１Ｔは、
凝集のより強い減少を示した。
抗体Ｎ３２Ｑ、Ａ１０１Ｔ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｎ３２Ｑ、Ａ１０１Ｔに関す
る。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｑ、Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形
態は、
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｑ、Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形
態は、
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合
フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｓ、Ｄ５５Ｅ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｎ３２Ｓ、Ｄ５５Ｅに関する
。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｓ、Ｄ５５Ｅに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態
は、
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｓ、Ｄ５５Ｅに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態
は、
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合
フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｑ、Ｄ５５Ｅ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｎ３２Ｑ、Ｄ５５Ｅに関する
。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｑ、Ｄ５５Ｅに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態
は、
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３２Ｑ、Ｄ５５Ｅに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形態
は、
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合
フラグメントに関する。
抗体Ｎ３４Ｓ、Ａ１０１Ｔ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｎ３４Ｓ、Ａ１０１Ｔに関す
る。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３４Ｓ、Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形
態は、
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３４Ｓ、Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形
態は、
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合
フラグメントに関する。
抗体Ｎ３４Ｑ、Ａ１０１Ｔ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｎ３４Ｑ、Ａ１０１Ｔに関す
る。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３４Ｑ、Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形
態は、
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｎ３４Ｑ、Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形
態は、
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合
フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｅ、Ａ１０１Ｔ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｄ５５Ｅ、Ａ１０１Ｔに関す
る。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｅ、Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形
態は、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｅ、Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形
態は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｑ、Ａ１０１Ｔ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｄ５５Ｑ、Ａ１０１Ｔに関す
る。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｑ、Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形
態は、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｑ、Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形
態は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｓ、Ａ１０１Ｔ
本発明の別の態様は、抗体Ｃ１０－２の変異体抗体、抗体Ｄ５５Ｓ、Ａ１０１Ｔに関す
る。本発明のこの態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｓ、Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形
態は、
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
抗体Ｄ５５Ｓ、Ａ１０１Ｔに関する、別に定義される、本発明の態様のさらなる実施形
態は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
重鎖変異体および軽鎖変異体の組合せが予測され、例えば、軽鎖内の複数の変異体およ
び／または重鎖内の複数の変異体、軽鎖内の単一の変異体と、重鎖内の単一または複数の
変異体との組合せ、軽鎖内の複数の変異体と、重鎖内の複数の変異体との組合せが予測さ
れる。本発明の抗体は、好ましくは、
配列番号１２（軽鎖Ｃ１０－２）；配列番号１６（軽鎖変異体Ｎ３２Ｓ）；配列番号１７
（軽鎖変異体Ｎ３２Ｑ）；配列番号１８（軽鎖変異体Ｎ３４Ｓ）；配列番号１９（軽鎖変
異体Ｎ３４Ｑ）；配列番号２０（軽鎖変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｓ）；配列番号２１（軽鎖
変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｓ）；配列番号２２（軽鎖変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｑ）；および
配列番号２３（軽鎖変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｑ）からなる群から選択される軽鎖；および
配列番号１１（重鎖Ｃ１０－２）；配列番号１３（重鎖変異体Ｄ５５Ｅ）；配列番号１４
（重鎖変異体Ｄ５５Ｑ）；配列番号１５（重鎖変異体Ｄ５５Ｓ）；配列番号２４（重鎖変
異体Ａ１０１Ｔ）；配列番号２５（重鎖変異体Ｄ５５Ｅ、Ａ１０１Ｔ）；配列番号２６（
重鎖変異体Ｄ５５Ｑ、Ａ１０１Ｔ）、および配列番号２７（重鎖変異体Ｄ５５Ｓ、Ａ１０
１Ｔ）からなる群から選択される重鎖を含む。
一実施形態において、軽鎖が配列番号１２である場合、重鎖は、配列番号１３（重鎖変
異体Ｄ５５Ｅ）；配列番号１４（重鎖変異体Ｄ５５Ｑ）；配列番号１５（重鎖変異体Ｄ５
５Ｓ）；配列番号２４（重鎖変異体Ａ１０１Ｔ）；配列番号２５（重鎖変異体Ｄ５５Ｅ、
Ａ１０１Ｔ）；配列番号２６（重鎖変異体Ｄ５５Ｑ、Ａ１０１Ｔ）、および配列番号２７
（重鎖変異体Ｄ５５Ｓ、Ａ１０１Ｔ）からなる群から選択される。別の実施形態において
、重鎖が配列番号１１である場合、軽鎖は、配列番号１６（軽鎖変異体Ｎ３２Ｓ）；配列
番号１７（軽鎖変異体Ｎ３２Ｑ）；配列番号１８（軽鎖変異体Ｎ３４Ｓ）；配列番号１９
（軽鎖変異体Ｎ３４Ｑ）；配列番号２０（軽鎖変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｓ）；配列番号２
１（軽鎖変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｓ）；配列番号２２（軽鎖変異体Ｎ３２Ｑ、Ｎ３４Ｑ）
；および配列番号２３（軽鎖変異体Ｎ３２Ｓ、Ｎ３４Ｑ）からなる群から選択される。
モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントは、好適には、
（ａ）配列番号３、配列番号３１；配列番号３２；配列番号３３；配列番号３４；配列番
号３５；配列番号３６；配列番号３７；および配列番号３８からなる群から選択されるア
ミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列
を含む重鎖ＣＤＲ１；（ｅ）配列番号７；配列番号２８；配列番号２９；および配列番号
３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；および（ｆ）配列番号
８、および配列番号３９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３を含
む。
変異体の組合せの興味深い実施形態は、抗体が、抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１Ｔ；抗体Ｎ３
２Ｑ、Ａ１０１Ｔ；抗体Ｎ３２Ｓ、Ｄ５５Ｅ；および抗体Ｎ３２Ｑ、Ｄ５５Ｅ、好ましく
は、抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１Ｔからなる群から選択されるものを含む。実施例から分かる
ように、抗体Ｎ３２Ｓおよび抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１Ｔが、好ましい実施形態である。
全体で、実施例は、Ｃ１０－２を含む本発明の抗体が、ＡＤ－Ｐ３抗原被覆ＭＳＤプレ
ートに効率的に結合することを示す。比較すると、ＰＨＦ－１３などの市販の抗体は、低
い結合活性を有する。さらに、ＰＨＦ－１３は、本発明の抗体と比較してかなり高い程度
の非特異的結合を示した。Ｃ１０－２被覆プレートにおけるＰタウ抗原捕捉のＣ１０－２
流体相阻害が有効である一方（ＩＣ５０＝１０～２０ｎＭ）、ＰＨＦ－１３は有効でない
（ＩＣ５０＝５００～１０００ｎＭ）。
本発明の一態様は、
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；および
（ｄ）配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号２４、配
列番号２５、配列番号２６、および配列番号２７からなる群から選択される重鎖
を含む抗体に関する。
本発明の一態様は、
（ａ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３；および
（ｄ）配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配
列番号２１、配列番号２２、および配列番号２３からなる群から選択される軽鎖
を含む抗体に関する。
本発明のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントは、典型的に、
１００ｎＭ以下の抗体、例えば１０ｎＭ～１００ｎＭの抗体の濃度で、例えば５０ｎＭ以
下、例えば１０ｎＭ～５０ｎＭの抗体の濃度で、シグナルが５０％だけ減少されるように
、流体相阻害アッセイにおいてＡＤ－Ｐ３を阻害する。本発明のモノクローナル抗体、ま
たはそのエピトープ結合フラグメントは、典型的に、アルツハイマー病の脳抽出物におけ
る免疫枯渇試験後のｐＳ３９６タウのウエスタンブロットシグナルによれば、約７５ｎｇ
の抗体で、ＡＤ脳ホモジネートからセリン３９６においてリン酸化される少なくとも１５
％のタウを除去することが可能である。
抗体またはそのエピトープ結合フラグメントは、好ましくは、ヒトまたはヒト化抗体で
ある。
上述される抗体およびそのエピトープ結合フラグメントは、一実施形態によれば、この
ような軽鎖および／または重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３の変異体（４つ以下の
アミノ酸差、または３つ以下のアミノ酸差、または２つ以下のアミノ酸差、または１つ以
下のアミノ酸差を有する）をさらに含み得る。
図１８から分かるように、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３およびＬ
Ｃ ＣＤＲ３は、少なくとも一実施形態において、タウの３９２～３９８領域への結合の
ために重要である。本発明の一実施形態において、本発明の抗体、またはそのエピトープ
結合フラグメントは、本発明の一態様において、本発明は、タウペプチドのＹ３９４とと
もに、Ｌ３：Ｈ３、Ｌ３：Ｆ８＊、Ｈ１：Ｈ１３、Ｈ２：Ｙ１、Ｈ２：Ｙ３によって形成
される疎水性ポケットを形成する抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。
一実施形態において、本発明は、溶媒和｛ｐ｝Ｓ３９６およびＬ３：Ｔ４、Ｈ１：Ｒ１０
、Ｈ１：Ｔ１１、Ｈ３：Ｒ１、Ｈ３：Ｔ３間の水素結合ネットワークの形成について本明
細書にさらに記載される抗体と競合する抗体に関し；（＊）Ｌ３：Ｆ８は、ＣＤＲ Ｌ３
のフレームワーク残基に隣接するＣ末端である（図１１を参照）。
Ｘ線結晶構造から分かるように、本発明の抗体は、２つのレベルの選択性で結合する。
第１のレベルの選択性は、過リン酸化病理学的タウに対する選択性であり、第２のレベル
の選択性は、リン酸化セリン残基に対する選択性であり、ここで、前記リン酸化セリンの
ホスフェートが、前記リン酸化セリンからの１つの残基に分断されたチロシン残基の側鎖
に水素結合される。したがって、本発明の興味深い態様は、モチーフが単一の残基によっ
て隔てられたリン酸化セリン残基およびチロシン残基を含む過リン酸化タウのアミノ酸モ
チーフに対して選択的なモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに関
する。典型的に、アミノ酸モチーフは、配列：
Ｙ－Ｘ－Ｓ（リン酸化）－Ｐ－
を有し、ここで、Ｙがチロシンであり、Ｘが天然アミノ酸であり、Ｐがプロリンであり、
Ｓ（リン酸化）が、リン酸化ヒドロキシル側鎖を有するセリンである。
同様に、本発明の興味深い態様は、リン酸化タウ、好ましくは、過リン酸化タウに結合
する抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに関し、ここで、前記抗体またはそのエ
ピトープ結合フラグメントが、アミノ酸残基モチーフＩＡに対して選択的であり、ここで
、Ｒが、天然アミノ酸の側鎖である。
Figure 2022023096000007
特定の理論によって制約されるものではないが、アミノ酸モチーフＩＡが病理学的タウ
によって取られる立体配座にあるとき、本発明の抗体が、前記モチーフに対して選択的で
あると考えられる。したがって、アミノ酸モチーフＩＡは、典型的に、本発明の抗体によ
って選択的に認識される配列である。したがって、本発明の興味深い態様は、リン酸化タ
ウ、好ましくは、過リン酸化タウに結合する抗体またはそのエピトープ結合フラグメント
に関し、ここで、前記抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、アミノ酸残基モチ
ーフＩＡに対して選択的であり、ここで、Ｒが、天然アミノ酸の側鎖である。
本発明のこの態様の典型的な実施形態において、本発明は、リン酸化タウ、好ましくは
、過リン酸化タウに結合する抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに関し、ここで
、前記抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、アミノ酸残基モチーフＩＢに対し
て選択的であり、ここで、Ｒが、限定はされないがＩＣまたはＩＤなどの天然アミノ酸の
側鎖である。
Figure 2022023096000008
本発明の一態様において、本発明の抗体のＨＣ ＣＤＲ１領域、Ａｓｐ Ａｒｇ Ｔｈ
ｒ Ｉｌｅ Ｈｉｓ（配列番号７）は、過リン酸化タウのモチーフＩＡ～ＩＤと相互作用
する。
図１８から分かるように、本発明のこの態様において、ＨＣ ＣＤＲ１における２つの
連続する荷電残基、すなわち、アスパラギン酸およびアルギニンの存在は、標的化された
タウエピトープ内のモチーフとの水素結合において役割を果たし、ここで、抗体は、モチ
ーフが単一の残基によって隔てられたリン酸化セリン残基およびチロシン残基を含む過リ
ン酸化タウのアミノ酸モチーフに対して選択的である。したがって、本発明の一態様は、
リン酸化タウ、好ましくは、過リン酸化タウに結合する抗体またはそのエピトープ結合フ
ラグメントに関し、ここで、前記抗体またはそのエピトープ結合フラグメントは、アミノ
酸残基モチーフＩＡ～ＩＤに対して選択的であり、ここで、抗体は、アスパラギン酸およ
びアルギニンなどの２つの連続する荷電アミノ酸残基を含むＨＣ ＣＤＲ１領域を含む。
本発明のこの態様のさらなる代替例において、本発明の抗体またはそのエピトープ結合フ
ラグメントは、過リン酸化タウに結合し、ここで、前記抗体またはそのエピトープ結合フ
ラグメントは、セリン３９６およびチロシン３９４を含むエピトープに対して選択的であ
り、ここで、ＰＯ４基は、前記セリン３９６およびチロシン３９４のうちの一方とともに
共有結合を形成し、セリン３９６およびチロシン３９４のうちの他方とともに水素結合を
形成し、ここで、抗体は、アスパラギン酸およびアルギニンなどの２つの連続する荷電残
基を含むＨＣ ＣＤＲ１領域を含む。ＨＣ ＣＤＲ１領域の荷電アミノ酸残基は、アルギ
ニン、リジン、アスパラギン酸およびグルタミン酸からなる群から選択されてもよく、こ
こで、前記残基の少なくとも１つが、アスパラギン酸またはアルギニンであり、好ましく
は、一方の荷電残基がアルギニンであり、他方がアスパラギン酸である。
本発明のこの態様のさらなる実施形態において、２つの連続する荷電アミノ酸残基の一
方または両方が、好ましくは、トレオニンおよびチロシンから選択される極性アミノ酸残
基によって隣接される。さらに、２つの連続する荷電アミノ酸残基の一方または両方の一
方または両方が、極性残基－疎水性残基－極性残基の３－アミノ酸残基モチーフによって
隣接される。
一実施形態において、ＨＣ ＣＤＲ１は、５－残基モチーフ極性ＡＡ－疎水性ＡＡ－極
性ＡＡ－荷電ＡＡ－荷電ＡＡを含み、ここで、前記残基の少なくとも１つが、アスパラギ
ン酸またはアルギニンであり、好ましくは、一方の荷電残基がアルギニンであり、他方が
アスパラギン酸である。好ましくは、５－残基モチーフは、モチーフ極性ＡＡ－疎水性Ａ
Ａ－極性ＡＡ－Ａｓｐ－Ａｒｇを有する。より好ましくは、ＨＣ ＣＤＲ１の５－残基モ
チーフは、配列Ｔｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ａｒｇを有する。
本発明の抗体のＨＣ ＣＤＲ１が、Ｓ３９６およびＹ３９４の間の静電相互作用に関与
するリン酸基との水素結合に関与する２つの連続する荷電アミノ酸残基の両側にモチーフ
極性－疎水性－極性－荷電を含むことに留意するのが興味深い。したがって、好ましい実
施形態において、本発明のＨＣ ＣＤＲ１は、パリンドローム８－残基モチーフ極性ＡＡ
－疎水性ＡＡ－極性ＡＡ－荷電ＡＡ－荷電ＡＡ－極性ＡＡ－疎水性ＡＡ－極性ＡＡを含む
。好ましくは、ＨＣ ＣＤＲ１の８－残基モチーフは、モチーフＴｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ
－Ａｓｐ－Ａｒｇ－極性ＡＡ－疎水性ＡＡ－極性ＡＡを含む。より好ましくは、ＨＣ Ｃ
ＤＲ１の８－残基モチーフは、モチーフＴｈｒ－Ｐｈｅ－Ｔｈｒ－Ａｓｐ－Ａｒｇ－Ｔｈ
ｒ－Ｉｌｅ－Ｈｉｓを含む。
一実施形態において、抗体は、セリン３９６およびチロシン３９４を含む過リン酸化タ
ウの残基３９２～３９８内のエピトープを認識し、ここで、セリン３９６は、リン酸化さ
れ、抗体は、２つの連続する荷電アミノ酸残基を含むＨＣ ＣＤＲ１領域を含む。好まし
い実施形態において、抗体は、セリン３９６およびチロシン３９４を含む過リン酸化タウ
の残基３９２～３９８内のエピトープを認識し、ここで、セリン３９６は、リン酸化され
、抗体は、５－残基モチーフ極性ＡＡ－疎水性ＡＡ－極性ＡＡ－荷電ＡＡ－荷電ＡＡを含
むＨＣ ＣＤＲ１領域を含む。より好ましい実施形態において、抗体は、セリン３９６お
よびチロシン３９４を含む過リン酸化タウの残基３９２～３９８内のエピトープを認識し
、ここで、セリン３９６は、リン酸化され、抗体は、モチーフ極性ＡＡ－疎水性ＡＡ－極
性ＡＡ－荷電ＡＡ－荷電ＡＡ－極性ＡＡ－疎水性ＡＡ－極性ＡＡを含むＨＣ ＣＤＲ１領
域を含む。
さらなる好ましい実施形態において、抗体は、本明細書において定義されるＨＣ ＣＤ
Ｒ１領域および少なくとも２つの荷電残基を含む６－残基モチーフを含むＨＣ ＣＤＲ３
領域を含む。
本発明は、患者におけるタウもつれ形成を減少させる方法であって、このような治療を
必要とする患者に、治療的に有効な量の本発明の抗体、またはそのエピトープ結合フラグ
メントを投与する工程を含む方法も提供する。
本発明の一態様は、本発明の抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを用いてタウオパチーを治療する方法に関する。典型的に、タウオパチーは、アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、精神病、特に、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤまたはその変異型）、ＴＢＩ（急性または慢性外傷性脳損傷）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、ピック病、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、神経原線維変化優位型老年性認知症、拳闘家認知症、慢性外傷性脳症、脳卒中、脳卒中の回復、パーキンソン病に関連する神経変性、染色体に関連するパーキンソニズム、リティコ－ボディグ病（Ｌｙｔｉｃｏ－Ｂｏｄｉｇ ｄｉｓｅａｓｅ）（グアムパーキンソン認知症複合）、神経節膠腫および神経節細胞腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎、ハンチントン病、鉛脳症、結節性硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病およびリポフスチン沈着症からなる群から選択される。より典型的に、タウオパチーは、アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、精神病、特に、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤまたはその変異型）、ＴＢＩ（急性または慢性外傷性脳損傷）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、およびピック病からなる群から選択される。特に、タウオパチーは、アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、およびレビー小体型認知症の患者の精神医学的症状から選択され得る。
したがって、本発明のさらなる態様は、タウオパチーの治療に使用するための、本発明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。典型的に、タウオパチーは、アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、精神病、特に、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤまたはその変異型）、ＴＢＩ（急性または慢性外傷性脳損傷）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、ピック病、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、神経原線維変化優位型老年性認知症、拳闘家認知症、慢性外傷性脳症、脳卒中、脳卒中の回復、パーキンソン病に関連する神経変性、染色体に関連するパーキンソニズム、リティコ－ボディグ病（グアムパーキンソン認知症複合）、神経節膠腫および神経節細胞腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎、ハンチントン病、鉛脳症、結節性硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病およびリポフスチン沈着症からなる群から選択される。より典型的に、タウオパチーは、アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、精神病、特に、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、ＡＤに起因するアパシーまたはＡＤの患者におけるアパシー、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤまたはその変異型）、ＴＢＩ（急性または慢性外傷性脳損傷）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、およびピック病からなる群から選択される。特に、タウオパチーは、アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、ＡＤに起因するアパシーまたはアパシー、およびレビー小体型認知症の患者の精神医学的症状から選択され得る。
本発明の一態様は、ｉ）タウ抗体およびｉｉ）以下のものからなる群から選択される化
合物
ａ）ＢＡＣＥ阻害剤；
ｂ）能動または受動タウ免疫療法に有用な化合物；
ｃ）能動または受動Ａβペプチド免疫療法に有用な化合物；
ｄ）ＮＭＤＡ受容体拮抗薬；
ｅ）さらなるタウタンパク質凝集阻害剤；
ｅ）アセチルコリンエステラーゼ阻害剤；
ｆ）抗てんかん薬；
ｇ）抗炎症薬；および
ｈ）ＳＳＲＩ
の投与を含む治療法に関する。
本発明のさらなる態様は、ｉ）タウ抗体およびｉｉ）以下のものからなる群から選択さ
れる化合物
ａ）ＢＡＣＥ阻害剤；
ｂ）能動または受動タウ免疫療法に有用な化合物；
ｃ）能動または受動Ａβペプチド免疫療法に有用な化合物；
ｄ）ＮＭＤＡ受容体拮抗薬；
ｅ）さらなるタウタンパク質凝集阻害剤；
ｅ）アセチルコリンエステラーゼ阻害剤；
ｆ）抗てんかん薬；
ｇ）抗炎症薬；および
ｈ）ＳＳＲＩ
を含む組成物に関する。
本発明のさらなる態様は、ｉ）タウ抗体を含む組成物およびｉｉ）以下のものからなる
群から選択される化合物組成物
ａ）ＢＡＣＥ阻害剤；
ｂ）能動または受動タウ免疫療法に有用な化合物；
ｃ）能動または受動Ａβペプチド免疫療法に有用な化合物；
ｄ）ＮＭＤＡ受容体拮抗薬；
ｅ）さらなるタウタンパク質凝集阻害剤；
ｆ）アセチルコリンエステラーゼ阻害剤；
ｇ）抗てんかん薬；
ｈ）抗炎症薬；および
ｉ）抗うつ剤
を含むキットに関する。
ａ）ＢＡＣＥ １阻害剤と組み合わされるタウ抗体
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、ＢＡＣＥ １阻害剤と組
み合わされ得る。ＢＡＣＥ１阻害剤は、ＬＹ２８８６７２１、ＭＫ－８９３１、ＡＺＤ３
２９３、またはＥ２６０９などの小分子ＢＡＣＥ Ｉ阻害剤であり得る。
さらなる実施形態において、ＢＡＣＥ １阻害剤は、式Ｉ
Figure 2022023096000009
（式中、Ａｒが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾ
リル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリルからなる群から選択され、ここで、
Ａｒが、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アル
キニル、Ｃ１～Ｃ６フルオロアルキルまたはＣ１～Ｃ６アルコキシから選択される１つま
たは複数の置換基で任意選択的に置換され；Ｒ１が、１つまたは複数の水素、ハロゲン、
Ｃ１～Ｃ３フルオロアルキルまたはＣ１～Ｃ３アルキルであり；Ｒ２が、水素またはフル
オロを表す）のものである。
式Ｉの例示的な化合物としては、以下のものが挙げられる。
Figure 2022023096000010
（３Ｓ，６Ｓ）－６－（５－アミノ－２－フルオロフェニル）－３－フルオロ－３－（フ
ルオロメチル）－６－メチルピペリジン－２－チオン
Figure 2022023096000011
（３Ｒ，６Ｓ）－６－（５－アミノ－２－フルオロフェニル）－３－フルオロ－３－（フ
ルオロメチル）－６－メチルピペリジン－２－チオン
Figure 2022023096000012
（３Ｓ，６Ｓ）－６－（５－アミノ－２，３－ジフルオロフェニル）－３－フルオロ－３
－（フルオロメチル）－６－メチルピペリジン－２－チオン
Figure 2022023096000013
（３Ｒ，６Ｓ）－６－（５－アミノ－２，３－ジフルオロフェニル）－３－フルオロ－３
－（フルオロメチル）－６－メチルピペリジン－２－チオン
Figure 2022023096000014
（６Ｓ）－６－（５－アミノ－２－フルオロフェニル）－３－フルオロ－３，６－ビス（
フルオロメチル）ピペリジン－２－チオン
さらに、好適なＢＡＣＥ １阻害剤は、式ＩＩ
Figure 2022023096000015
（式中、Ａｒが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾ
リル、１，２，４－トリアゾリル、チオフェニル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキ
サゾリル、１，３，４－チアジアゾリル、イソチアゾリル、１，３，４－オキサジアゾリ
ル、１，２，４－オキサジアゾリル、フラザニルおよび１，２，４－チアジアゾリルから
なる群から選択され、ここで、Ａｒが、１つまたは複数のハロゲン、ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６ア
ルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ１～Ｃ６フルオロアルキルま
たはＣ１～Ｃ６アルコキシで任意選択的に置換され；Ｒ１が、Ｃ１～Ｃ３アルキルまたは
Ｃ１～Ｃ３フルオロアルキルであり；Ｒ２が、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３フルオロアル
キルまたはＣ１～Ｃ３アルキルであり；Ｒ３がＣ１～Ｃ３アルキルである）のものであり
得る。
式ＩＩのＢＡＣＥ １阻害剤の例示的な化合物としては、Ｎ－（３－（（２Ｒ，５Ｓ）
－６－アミノ－３，３，５－トリフルオロ－２，５－ジメチル－２，３，４，５－テトラ
ヒドロピリジン－２－イル）－４フルオロフェニル）－５－フルオロピコリンアミド；Ｎ
－（３－（（２Ｒ，５Ｓ）－６－アミノ－３，３，５－トリフルオロ－２，５－ジメチル
－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４フルオロフェニル）－５－メ
トキシピラジン－２－カルボキサミド；Ｎ－（３－（（２Ｒ，５Ｓ）－６－アミノ－３，
３，５－トリフルオロ－２，５－ジメチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２
－イル）－４－フルオロフェニル）－５－メトキシピコリンアミド；Ｎ－（３－（（２Ｒ
，５Ｓ）－６－アミノ－３，３，５－トリフルオロ－２，５－ジメチル－２，３，４，５
－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４フルオロフェニル）－５－シアノ－３－メチル
ピコリンアミド；およびＮ－（３－（（２Ｒ，５Ｒ）－６－アミノ－３，３，５－トリフ
ルオロ－２，５－ジメチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４フ
ルオロフェニル）－５－（ジフルオロメチル）ピラジン－２－カルボキサミドからなる群
から選択される化合物が挙げられる。
他のＢＡＣＥ阻害剤は、下式
Figure 2022023096000016
（式中、Ａｒが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾ
リル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリルからなる群から選択され、ここで、
Ａｒが、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アル
キニル、Ｃ１～Ｃ６フルオロアルキルまたはＣ１～Ｃ６アルコキシから選択される１つま
たは複数の置換基で任意選択的に置換され；
Ｒ１が、１つまたは複数の水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３フルオロアルキルまたはＣ１～Ｃ
３アルキルであり；
Ｒ２が、水素またはフルオロを表す）；
またはその薬学的に許容できる塩から選択され得る。
例えば、
Ｎ－（３－（（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル
）－５－メトキシピコリンアミド；
Ｎ－（３－（（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル
）－５－（メトキシ－ｄ３）ピコリンアミド；
Ｎ－（３－（（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル
）－５－シアノ－３－メチルピコリンアミド；
Ｎ－（３－（（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル
）－５－クロロピコリンアミド；
Ｎ－（３－（（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル
）－５－メトキシピラジン－２－カルボキサミド；
Ｎ－（３－（（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル
）－２－メチルオキサゾール－４－カルボキサミド；
Ｎ－（３－（（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル
）－４－ブロモ－１－メチル－１Ｈ－イミダゾール－２－カルボキサミド；
Ｎ－（３－（（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル
）－４－メチルチアゾール－２－カルボキサミド；
Ｎ－（３－（（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル
）－２－（ジフルオロメチル）オキサゾール－４－カルボキサミド；
Ｎ－（３－（（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル
）－１－（ジフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－３－カルボキサミド；
Ｎ－（３－（（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル
）－５－（ジフルオロメチル）ピラジン－２－カルボキサミド；
Ｎ－（３－（（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル
）－４－クロロベンズアミド；
Ｎ－（３－（（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル
）－５－フルオロピコリンアミド；
Ｎ－（３－（（２Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル
）－５－メトキシピコリンアミド；
Ｎ－［３－［（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－３，４－ジヒドロピリジン－２－イル］－４，５－ジフルオロ－フェニル］－
５－フルオロ－ピリジン－２－カルボキサミド；
Ｎ－［３－［（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－３，４－ジヒドロピリジン－２－イル］－４，５－ジフルオロ－フェニル］－
５－メトキシ－ピリジン－２－カルボキサミド；
Ｎ－［３－［（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－３，４－ジヒドロピリジン－２－イル］－４，５－ジフルオロ－フェニル］－
５－メトキシ－ピラジン－２－カルボキサミド；
Ｎ－［３－［（２Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－３，４－ジヒドロピリジン－２－イル］－４，５－ジフルオロ－フェニル］－
５－フルオロ－ピリジン－２－カルボキサミド；
Ｎ－［３－［（２Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－３，４－ジヒドロピリジン－２－イル］－４，５－ジフルオロ－フェニル］－
５－メトキシ－ピリジン－２－カルボキサミド；
Ｎ－［３－［（２Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－５－フルオロ－５－（フルオロメチル）－２
－メチル－３，４－ジヒドロピリジン－２－イル］－４，５－ジフルオロ－フェニル］－
５－メトキシ－ピラジン－２－カルボキサミド；
Ｎ－［３－［（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－２，５－ビス（フルオロメチ
ル）－３，４－ジヒドロピリジン－２－イル］－４－フルオロ－フェニル］－５－フルオ
ロ－ピリジン－２－カルボキサミド；
Ｎ－［３－［（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－２，５－ビス（フルオロメチ
ル）－３，４－ジヒドロピリジン－２－イル］－４－フルオロ－フェニル］－５－メトキ
シ－ピリジン－２－カルボキサミド；
Ｎ－［３－［（２Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－５－フルオロ－２，５－ビス（フルオロメチ
ル）－３，４－ジヒドロピリジン－２－イル］－４－フルオロ－フェニル］－５－メトキ
シ－ピラジン－２－カルボキサミド；
Ｎ－［３－［（２Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－５－フルオロ－２，５－ビス（フルオロメチ
ル）－３，４－ジヒドロピリジン－２－イル］－４－フルオロ－フェニル］－５－フルオ
ロ－ピリジン－２－カルボキサミド；
Ｎ－［３－［（２Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－５－フルオロ－２，５－ビス（フルオロメチ
ル）－３，４－ジヒドロピリジン－２－イル］－４－フルオロ－フェニル］－５－メトキ
シ－ピリジン－２－カルボキサミドおよび
Ｎ－［３－［（２Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－５－フルオロ－２，５－ビス（フルオロメチ
ル）－３，４－ジヒドロピリジン－２－イル］－４－フルオロ－フェニル］－５－メトキ
シ－ピラジン－２－カルボキサミド
などの化合物；
または前記化合物の薬学的に許容できる塩。
他のＢＡＣＥ阻害剤は、下式
Figure 2022023096000017
（式中、Ａｒが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾ
リル、オキサゾリル、チアゾリルおよびイソオキサゾリルからなる群から選択され、ここ
で、Ａｒが、１つまたは複数のハロゲン、ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケ
ニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ１～Ｃ６フルオロアルキルまたはＣ１～Ｃ６アルコキシ
で任意選択的に置換され；
Ｒ１およびＲ２が、独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３フルオロアルキルまたはＣ１
～Ｃ３アルキルである）のもの；
またはその薬学的に許容できる塩であり得る。
例えば、
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－クロロ
ピコリンアミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－フルオ
ロピコリンアミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－メトキ
シピラジン－２－カルボキサミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－１－（ジフ
ルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－３－カルボキサミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－２－（ジフ
ルオロメチル）オキサゾール－４－カルボキサミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－シアノ
ピコリンアミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－２－メチル
オキサゾール－４－カルボキサミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－メトキ
シピリミジン－２－カルボキサミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－（ジフ
ルオロメチル）ピラジン－２－カルボキサミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４，５－ジフルオロフェニル）－２－
メチルオキサゾール－４－カルボキサミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４，５－ジフルオロフェニル）－５－
メトキシピラジン－２－カルボキサミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４，５－ジフルオロフェニル）－５－
フルオロピコリンアミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４，５－ジフルオロフェニル）－５－
クロロピコリンアミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４，５－ジフルオロフェニル）－５－
シアノピコリンアミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４，５－ジフルオロフェニル）－５－
メトキシピコリンアミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４，５－ジフルオロフェニル）－５－
（メトキシ－ｄ３）ピコリンアミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４，５－ジフルオロフェニル）－５－
シアノ－３－メチルピコリンアミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－（メト
キシ－ｄ３）ピコリンアミド（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２
－（フルオロメチル）－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フル
オロフェニル）－５－ブロモピコリンアミド
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－３，３－ジフルオロ－２－（フルオロメチル）－２，
３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－ブロモ
ピコリンアミド
などの化合物
または前記化合物の薬学的に許容できる塩。
他のＢＡＣＥ化合物は、下式
Figure 2022023096000018
（式中、Ａｒが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾ
リル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリルからなる群から選択され、ここで、
Ａｒが、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アル
キニル、Ｃ１～Ｃ６フルオロアルキルまたはＣ１～Ｃ６アルコキシから選択される１つま
たは複数の置換基で任意選択的に置換され；
Ｒ１が、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３フルオロアルキルまたはＣ１～Ｃ３アルキルである
）；
またはその薬学的に許容できる塩からのものであり得る。
化合物は、
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－２－（ジフルオロメチル）－３，３－ジフルオロ－２
，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－クロ
ロピコリンアミド、
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－２－（ジフルオロメチル）－３，３－ジフルオロ－２
，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－フル
オロピコリンアミド、
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－２－（ジフルオロメチル）－３，３－ジフルオロ－２
，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－メト
キシピラジン－２－カルボキサミド、
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－２－（ジフルオロメチル）－３，３－ジフルオロ－２
，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－２－メチ
ルオキサゾール－４－カルボキサミド、
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－２－（ジフルオロメチル）－３，３－ジフルオロ－２
，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－メト
キシピコリンアミド、
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－２－（ジフルオロメチル）－３，３－ジフルオロ－２
，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－（ジ
フルオロメチル）ピラジン－２－カルボキサミド、
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－２－（ジフルオロメチル）－３，３－ジフルオロ－２
，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－シア
ノピコリンアミド、
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－２－（ジフルオロメチル）－３，３－ジフルオロ－２
，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－４－メチ
ルチアゾール－２－カルボキサミド、
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－２－（ジフルオロメチル）－３，３－ジフルオロ－２
，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－メト
キシピリミジン－２－カルボキサミド、
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－２－（ジフルオロメチル）－３，３－ジフルオロ－２
，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－メト
キシ－３－メチルピラジン－２－カルボキサミド、
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－２－（ジフルオロメチル）－３，３－ジフルオロ－２
，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－シア
ノ－３－メチルピコリンアミド、
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－２－（ジフルオロメチル）－３，３－ジフルオロ－２
，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－ブロ
モピコリンアミド、
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－２－（ジフルオロメチル）－３，３－ジフルオロ－２
，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－（メ
トキシ－ｄ３）ピコリンアミドおよび
（Ｓ）－Ｎ－（３－（６－アミノ－２－（ジフルオロメチル）－３，３－ジフルオロ－２
，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５－（メ
トキシ－ｄ３）ピラジン－２－カルボキサミド；
または前記化合物の薬学的に許容できる塩であり得る。
他のＢＡＣＥ阻害剤は、下式
Figure 2022023096000019
（式中、Ａｒが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾ
リル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリルからなる群から選択され、ここで、
Ａｒが、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アル
キニル、Ｃ１～Ｃ６フルオロアルキルまたはＣ１～Ｃ６アルコキシから選択される１つま
たは複数の置換基で任意選択的に置換され；
Ｒ１が、１つまたは複数の水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３フルオロアルキルまたはＣ１～Ｃ
３アルキルである）のもの；
またはその薬学的に許容できる塩であり得る。
化合物は、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－フルオロピコリンアミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－メトキシピラジン－２－カルボキサミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－メトキシピコリンアミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－フルオロピコリンアミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－メトキシピラジン－２－カルボキサミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－２
－メチルオキサゾール－４－カルボキサミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－メトキシピコリンアミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－（メトキシ－ｄ３）ピコリンアミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－クロロピコリンアミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－１
－メチル－１Ｈ－イミダゾール－２－カルボキサミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－（トリフルオロメチル）ピラジン－２－カルボキサミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－４
－メチルチアゾール－２－カルボキサミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－２
－（ジフルオロメチル）オキサゾール－４－カルボキサミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－１
－（ジフルオロメチル）－１Ｈ－ピラゾール－３－カルボキサミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－（ジフルオロメチル）ピラジン－２－カルボキサミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－４
－クロロベンズアミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－シアノピコリンアミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４，５－ジフルオロフェニル
）－５－（メトキシ－ｄ３）ピコリンアミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－（メトキシ－ｄ３）ピコリンアミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－（メトキシ－ｄ３）ピラジン－２－カルボキサミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－シアノ－３－メチルピコリンアミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４，５－ジフルオロフェニル
）－５－（メトキシ－ｄ３）ピコリンアミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｒ，５Ｓ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－（メトキシ－ｄ３）ピコリンアミド、
Ｎ－（３－（（２Ｒ，３Ｓ，５Ｓ）－６－アミノ－３，５－ジフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロフェニル）－５
－ブロモピコリンアミド
または前記化合物の薬学的に許容できる塩であり得る。
ｂ）Ｎ３ＰＧＬＵ Ａβ抗体と組み合わされるタウ抗体
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、Ｎ３ＰＧＬＵ Ａβ抗体
と組み合わされ得る。
ｃ）能動または受動Ａβペプチド免疫療法に有用な化合物と組み合わされるタウ抗体
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、能動または受動Ａβペプ
チド免疫療法に有用な化合物と組み合わされ得る。
ｄ）ＮＭＤＡ受容体拮抗薬と組み合わされるタウ抗体
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、ＮＭＤＡ受容体拮抗薬と
組み合わされ得る。ＮＭＤＡ受容体拮抗薬は、メマンチン、ナメンダ、ナムザリック（メ
マンチン／ドネペジル）、およびそのジェネリック形態からなる群から選択され得る。Ｎ
ＭＤＡ受容体拮抗薬は、抗精神病薬から選択され得る。シナプス前ニューロンは、ネガテ
ィブフィードバック機構を介して過剰なグルタメート放出を妨げるが、このような機構は
、ＡＤなどの、細胞ストレスの条件下で損なわれる。シナプス間隙における過剰なグルタ
メートは、シナプス後カルシウムチャネルを持続的に開かせて、ニューロン内の細胞内カ
ルシウムレベルの増加を招き、深刻な神経損傷および／または死を引き起こす。過剰なカ
ルシウム流入の条件下で、ＮＭＤＡ受容体に拮抗することによって、抗精神病薬は、ニュ
ーロン中へのカルシウムの過剰な流入を減少させて、細胞損傷を減少させ、正常な神経シ
グナル伝達、ひいては認知機能を改善する。
ｅ）さらなるタウタンパク質凝集阻害剤と組み合わされるタウ抗体；
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、タウタンパク質凝集阻害
剤と組み合わされ得る。
ｆ）アセチルコリンエステラーゼ阻害剤と組み合わされるタウ抗体
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、アセチルコリンエステラ
ーゼ阻害剤（ＡＣｈＥＩ）と組み合わされ得る。ＡＣｈＥＩは、軽度から中度のＡＤの認
知症状のための第一選択治療として使用されることが多い。この亜集団に認められるドネ
ペジルを含むＡＣｈＥＩはまた、中度から重度のＡＤを処置するために広く使用される。
ＡＣｈＥＩは、ＡＤ患者において観察されるコリン作動性欠損を軽減し、日常活動を行う
患者の能力を改善する。一実施形態において、本発明は、本明細書において定義されるタ
ウ抗体、およびアセチルコリンエステラーゼ阻害剤を含む治療法を含む。
一実施形態において、ＡＣｈＥＩは、ドネペジル、ガランタミンおよびリバスチグミン
からなる群から選択される。ＡＣｈＥＩは、経口錠剤、ゼリー、シロップ、または他の形
態の経口溶液製剤であり得る。ＡＣｈＥＩはまた、経皮投与用のパッチであり得る。
ｇ）抗てんかん薬と組み合わされるタウ抗体；
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、抗てんかん薬と組み合わ
され得る。
ｈ）抗炎症薬と組み合わされるタウ抗体；
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、抗炎症薬と組み合わされ
得る。
ｉ）抗うつ剤と組み合わされるタウ抗体
この治療法では、本発明の組成物またはキット、タウ抗体は、抗うつ剤と組み合わされ
得る。
うつ病は、ＡＤ認知症の一般的な初期の併存症状である。三環系抗うつ剤は、かつては
ＡＤの抑うつ症状のための好ましい治療であったが、ＳＳＲＩが、これらの薬剤に大部分
取って代わった。一実施形態において、エスシタロプラムが、その好ましい副作用プロフ
ァイルおよび最小の薬物相互作用のためＡＤのためによく処方されるため、抗うつ剤であ
る。さらなる実施形態において、シタロプラムまたはセルトラリンが、同様によく使用さ
れるため、抗うつ剤である。さらなる実施形態において、ボルチオキセチンが、ＭＤＤに
罹患している患者における認知能力の改善および神経系への効能（ｎｅｕｒａｌ ｅｆｆ
ｉｃａｃｙ）のイメージング証拠（ｉｍａｇｉｎｇ ｅｖｉｄｅｎｃｅ）に関連している
ため、抗うつ剤である。抗うつ剤は、エスシタロプラム、セルトラリン、シタロプラム、
パロキセチン、フルオキセチン、ベンラファクシン、トラゾドン、ミルタザピン、ボルチ
オキセチンおよびそのジェネリック形態からなる群から選択され得る。
本発明のさらなる態様は、薬学的に許容できる担体、希釈剤、補助剤および／または安定剤と一緒に組成物中の、本発明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントに関する。本発明の抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントは、タウオパチーの治療のための療法に使用され得る。典型的に、タウオパチーは、アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、精神病、特に、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、ＡＤに起因するアパシーまたはＡＤの患者におけるアパシー、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤまたはその変異型）、ＴＢＩ（急性または慢性外傷性脳損傷）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、ピック病、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、神経原線維変化優位型老年性認知症、拳闘家認知症、慢性外傷性脳症、脳卒中、脳卒中の回復、パーキンソン病に関連する神経変性、染色体に関連するパーキンソニズム、リティコ－ボディグ病（グアムパーキンソン認知症複合）、神経節膠腫および神経節細胞腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎、ハンチントン病、鉛脳症、結節性硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病およびリポフスチン沈着症からなる群から選択される。より典型的に、タウオパチーは、アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、精神病、特に、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、ＡＤに起因するアパシーまたはＡＤの患者におけるアパシー、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤまたはその変異型）、ＴＢＩ（急性または慢性外傷性脳損傷）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、およびピック病からなる群から選択される。特に、タウオパチーは、アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、ＡＤに起因するアパシーまたはＡＤの患者におけるアパシー、およびレビー小体型認知症の患者の精神医学的症状から選択され得る。
本発明によって想定される治療は、長期であってもよく、患者は、少なくとも２週間、
例えば少なくとも１ヶ月間、６ヶ月間、１年間またはそれ以上治療され得る。
本発明の抗体は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２５６，４９
５（１９７５）によって最初に記載されているハイブリドーマ方法によって産生されるモ
ノクローナル抗体であってもよく、または組み換えＤＮＡもしくは他の方法によって産生
されるモノクローナル抗体であってもよく、またはより好ましくは、本明細書に開示され
る新規な方法によって産生され得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、Ｃｌａｃｋｓ
ｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２，６２４－６２８（１９９１）およびＭａｒ
ｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．２２２，５８１－５９７（１９９１）に記
載されている技術を用いて、抗体ファージディスプレイライブラリーから単離され得る。
モノクローナル抗体は、任意の好適な源から得られる。したがって、例えば、モノクロー
ナル抗体は、例えば、表面において抗原を発現する細胞、または該当する抗原をコードす
る核酸の形態で、該当する抗原で免疫されたマウスから得られるマウス脾臓Ｂリンパ球細
胞から調製されるハイブリドーマから得られる。モノクローナル抗体はまた、免疫された
ヒトまたは非ヒト哺乳動物（ラット、ウサギ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、霊長類など）の抗体
発現細胞に由来するハイブリドーマから得られる。
一実施形態において、本発明の抗体は、ヒト抗体である。タウに対するヒトモノクロー
ナル抗体は、マウス系ではなくヒト免疫系の部分を有するトランスジェニックまたは導入
染色体マウスを用いて生成され得る。このようなトランスジェニックおよび染色体導入マ
ウスは、本明細書においてそれぞれＨｕＭＡｂ（ヒトモノクローナル抗体）マウスおよび
ＫＭマウスと呼ばれるマウスを含み、本明細書においてまとめて「トランスジェニックマ
ウス」と呼ばれる。
ＨｕＭＡｂマウスは、内因性μおよびＫ鎖遺伝子座を不活性化する標的突然変異と一緒
に、再配列されていないヒト重鎖可変および定常（μおよびＹ）ならびに軽鎖可変および
定常（κ）鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子のミニ遺伝子座
（ｍｉｎｉｌｏｃｕｓ）を含む（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３
６８，８５６－８５９（１９９４））。したがって、マウスは、マウスＩｇＭまたはＩｇ
Ｋの減少した発現を示し、免疫化に応答して、導入されたヒト重鎖および軽鎖導入遺伝子
が、クラススイッチおよび体細胞突然変異を起こして、高親和性ヒトＩｇＧ、κモノクロ
ーナル抗体を生成する（Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．（１９９４）、上記参照；Ｌ
ｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌｏｇｙ １１３，４９－１０１（１９９４）、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ａｎｄ Ｈ
ｕｓｚａｒ，Ｄ．，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．１３ ６５－９３
（１９９５）およびＨａｒｄｉｎｇ，Ｆ．ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．，Ａｎｎ．Ｎ．
Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ７６４ ５３６－５４６（１９９５）に概説されている）。Ｈｕ
ＭＡｂマウスの作製は、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０，６２８７－６２９５（１９９２）、Ｃｈｅｎ，Ｊ．ｅｔ ａ
ｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５，６４７－６５６（１９
９３）、Ｔｕａｉｌｌｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２，２９１２－２
９２０（１９９４）、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６，５７９－５９１（１９９４）、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．ｅｔ
ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８４５－８５１（１９９
６）に詳細に記載されている。米国特許第５，５４５，８０６号明細書、米国特許第５，
５６９，８２５号明細書、米国特許第５，６２５，１２６号明細書、米国特許第５，６３
３，４２５号明細書、米国特許第５，７８９，６５０号明細書、米国特許第５，８７７，
３９７号明細書、米国特許第５，６６１，０１６号明細書、米国特許第５，８１４，３１
８号明細書、米国特許第５，８７４，２９９号明細書、米国特許第５，７７０，４２９号
明細書、米国特許第５，５４５，８０７号明細書、国際公開第９８／２４８８４号パンフ
レット、国際公開第９４／２５５８５号パンフレット、国際公開第９３／１２２７号パン
フレット、国際公開第９２／２２６４５号パンフレット、国際公開第９２／０３９１８号
パンフレットおよび国際公開第０１／０９１８７号パンフレットも参照されたい。
ＨＣｏ７、ＨＣｏ１２、ＨＣｏ１７およびＨＣｏ２０マウスは、それらの内因性軽鎖（
κ）遺伝子におけるＪＫＤ破壊（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１２，８１１
－８２０（１９９３）に記載されているように）、それらの内因性重鎖遺伝子におけるＣ
ＭＤ破壊（国際公開第０１／１４４２４号パンフレットの実施例１に記載されているよう
に）、およびＫＣｏ５ヒトκ軽鎖導入遺伝子（Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ
ｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８４５－８５１（１９９６）に記載されて
いるように）を有する。さらに、ＨＣｏ７マウスは、ＨＣｏ７ヒト重鎖導入遺伝子（米国
特許第５，７７０，４２９号明細書に記載されているように）を有し、ＨＣｏ１２マウス
は、ＨＣｏ１２ヒト重鎖導入遺伝子（国際公開第０１／１４４２４号パンフレットの実施
例２に記載されているように）を有し、ＨＣｏ１７マウスは、ＨＣｏ１７ヒト重鎖導入遺
伝子（国際公開第０１／０９１８７号パンフレットの実施例２に記載されているように）
を有し、ＨＣｏ２０マウスは、ＨＣｏ２０ヒト重鎖導入遺伝子を有する。得られるマウス
は、内因性マウス重鎖およびκ軽鎖遺伝子座の破壊のためにバックグラウンドのホモ接合
体においてヒト免疫グロブリン重鎖およびκ軽鎖導入遺伝子を発現する。
ＫＭマウス株において、内因性マウスκ軽鎖遺伝子は、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭ
ＢＯ Ｊ．１２，８１１－８２０（１９９３）に記載されているようにホモ接合的に破壊
されており、内因性マウス重鎖遺伝子は、国際公開第０１／０９１８７号パンフレットの
実施例１に記載されているようにホモ接合的に破壊されている。このマウス株は、Ｆｉｓ
ｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８４５
－８５１（１９９６）に記載されているように、ヒトκ軽鎖導入遺伝子、ＫＣｏ５を保有
する。このマウス株は、国際公開第０２／４３４７８号パンフレットに記載されているよ
うに、染色体１４フラグメントｈＣＦ（ＳＣ２０）から構成されるヒト重鎖導入染色体も
保有する。ＨＣｏ１２－Ｂａｌｂ／ｃ、ＨＣｏ１７－Ｂａｌｂ／ｃおよびＨＣｏ２０－Ｂ
ａｌｂ／ｃマウスは、国際公開第０９／０９７００６号パンフレットに記載されているよ
うに、ＨＣｏ１２、ＨＣｏ１７およびＨＣｏ２０を、ＫＣｏ５［Ｊ／Ｋ］（Ｂａｌｂ）に
交差させることによって生成され得る。
ｒＴｇ４５１０マウスは、突然変異体タウ導入遺伝子発現に対する時間的および空間的
制御を提供する公知のタウオパチーモデルである。ＫＭマウス株において、内因性マウス
κ軽鎖遺伝子は、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．１２，８１１－８２０（１９
９３）に記載されているようにホモ接合的に破壊されており、内因性マウス重鎖遺伝子は
、国際公開第０１／０９１８７号パンフレットの実施例１に記載されているようにホモ接
合的に破壊されている。このマウス株は、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒ
ｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８４５－８５１（１９９６）に記載されている
ように、ヒトκ軽鎖導入遺伝子、ＫＣｏ５を保有する。このマウス株は、国際公開第０２
／４３４７８号パンフレットに記載されているように、染色体１４エピトープ結合フラグ
メントｈＣＦ（ＳＣ２０）から構成されるヒト重鎖導入染色体も保有する。
これらのトランスジェニックマウスに由来する脾細胞は、周知の技術にしたがって、ヒ
トモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを生成するのに使用され得る。本発明の
ヒトモノクローナルもしくはポリクローナル抗体、または他の種に由来する本発明の抗体
はまた、該当する免疫グロブリン重鎖および軽鎖配列についてトランスジェニックな別の
非ヒト哺乳動物または植物の生成、および回収可能な形態での抗体の産生によって遺伝子
導入的に生成され得る。哺乳動物におけるトランスジェニック産生に関連して、抗体は、
ヤギ、ウシ、または他の哺乳動物の乳汁中で産生され、それから回収され得る。例えば米
国特許第５，８２７，６９０号明細書、米国特許第５，７５６，６８７号明細書、米国特
許第５，７５０，１７２号明細書および米国特許第５，７４１，９５７号明細書を参照さ
れたい。
本発明の抗体は、任意のアイソタイプのものであり得る。アイソタイプの選択は、典型
的に、ＡＤＣＣ誘導などの所望のエフェクター機能によって導かれる。例示的なアイソタ
イプは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４である。ヒト軽鎖定常領域、κ
またはλのいずれかが使用され得る。必要に応じて、本発明の抗タウ抗体のクラスは、公
知の方法によってスイッチされ得る。例えば、元はＩｇＭであった本発明の抗体は、本発
明のＩｇＧ抗体にクラススイッチされ得る。さらに、クラススイッチ技術は、あるＩｇＧ
サブクラスを別のＩｇＧサブクラスに、例えばＩｇＧｌからＩｇＧ２に変換するのに使用
され得る。したがって、本発明の抗体のエフェクター機能は、様々な治療的使用のために
、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＤ、ＩｇＡ、ＩｇＥまたはＩ
ｇＭ抗体へのアイソタイプスイッチによって変更され得る。一実施形態において、本発明
の抗体は、ＩｇＧ１抗体、例えばＩｇＧ１、κである。抗体は、そのアミノ酸配列が、他
のアイソタイプと比べてそのアイソタイプに最も相同性が高い場合、特定のアイソタイプ
のものであるといわれる。
一実施形態において、本発明の抗体は、完全長抗体、好ましくは、ＩｇＧ抗体、特に、
ＩｇＧ１、κ抗体である。別の実施形態において、本発明の抗体は、抗体エピトープ結合
フラグメントまたは一本鎖抗体である。
抗体およびそのエピトープ結合フラグメントは、例えば従来の技術を用いたエピトープ
結合断片化によって得られ、エピトープ結合フラグメントは、全抗体について本明細書に
記載されるのと同じように有用性についてスクリーニングされ得る。例えば、Ｆ（ａｂ’
）２エピトープ結合フラグメントは、抗体をペプシンで処理することによって生成され得
る。得られるＦ（ａｂ’）２エピトープ結合フラグメントは、ジスルフィド架橋を還元す
るように処理されて、Ｆａｂ’エピトープ結合フラグメントを生成し得る。Ｆａｂエピト
ープ結合フラグメントはＩｇＧ抗体をパパインで処理することによって得られ；Ｆａｂ’
エピトープ結合フラグメントは、ＩｇＧ抗体のペプシン消化により得られる。Ｆ（ａｂ’
）エピトープ結合フラグメントはまた、チオエーテル結合またはジスルフィド結合により
、以下に記載されるＦａｂ’を結合することによって生成され得る。Ｆａｂ’エピトープ
結合フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２のヒンジ領域のジスルフィド結合を切断することに
よって得られる抗体エピトープ結合フラグメントである。Ｆａｂ’－エピトープ結合フラ
グメントは、Ｆ（ａｂ’）２エピトープ結合フラグメントを、ジチオスレイトールなどの
還元剤で処理することによって得られる。抗体エピトープ結合フラグメントはまた、組み
換え細胞におけるこのようなエピトープ結合フラグメントをコードする核酸の発現によっ
て生成され得る（例えばＥｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１
８４、１２３－３８（１９９５）を参照）。例えば、Ｆ（ａｂ’）２エピトープ結合フラ
グメントの一部をコードするキメラ遺伝子は、このような切断された抗体エピトープ結合
フラグメント分子を生成するために、Ｈ鎖のＣＨ１領域およびヒンジ領域をコードするＤ
ＮＡ配列、続いて翻訳停止コドンを含み得る。
一実施形態において、抗タウ抗体は、一価抗体、好ましくは、ヒンジ領域の欠失を有す
る国際公開第２００７０５９７８２号パンフレット（その全体が参照により本明細書に援
用される）に記載されている一価抗体である。したがって、一実施形態において、抗体は
、一価抗体であり、前記抗タウ抗体は、ｉ）前記一価抗体の軽鎖をコードする核酸構築物
を提供する工程であって、前記構築物が、選択された抗原特異的抗タウ抗体のＶＬ領域を
コードするヌクレオチド配列およびＩｇの定常ＣＬ領域をコードするヌクレオチド配列を
含み、ここで、選択された抗原特異的抗体のＶＬ領域をコードする前記ヌクレオチド配列
およびＩｇのＣＬ領域をコードする前記ヌクレオチド配列が、作動可能に一緒に連結され
、ＩｇＧ１サブタイプの場合、ＣＬ領域をコードするヌクレオチド配列は、ポリクローナ
ルヒトＩｇＧの存在下でまたは動物もしくはヒトに投与されるとき、ＣＬ領域の同一のア
ミノ酸配列を含む他のペプチドとともにジスルフィド結合または共有結合を形成すること
が可能なアミノ酸をＣＬ領域が含まないように修飾されている工程と；ｉｉ）前記一価抗
体の重鎖をコードする核酸構築物を提供する工程であって、前記構築物が、選択された抗
原特異的抗体のＶＨ領域をコードするヌクレオチド配列およびヒトＩｇの定常ＣＨ領域を
コードするヌクレオチド配列を含み、ここで、ＣＨ領域をコードするヌクレオチド配列は
、ヒンジ領域に対応する領域および、Ｉｇサブタイプによって必要とされるように、ＣＨ
３領域などのＣＨ領域の他の領域が、ポリクローナルヒトＩｇＧの存在下でまたは動物ヒ
トに投与されるとき、ヒトＩｇのＣＨ領域の同一のアミノ酸配列を含む他のペプチドとと
もに、ジスルフィド結合または共有結合または安定した非共有重鎖間結合の形成に関与す
るアミノ酸残基を含まないように修飾されており、選択された抗原特異的抗体のＶＨ領域
をコードする前記ヌクレオチド配列および前記ＩｇのＣＨ領域をコードする前記ヌクレオ
チド配列が、作動可能に一緒に連結される工程と；ｉｉｉ）前記一価抗体を生成するため
に細胞発現系を提供する工程と；ｉｖ）（ｉｉｉ）の細胞発現系の細胞内で（ｉ）および
（ｉｉ）の核酸構築物を共発現することによって、前記一価抗体を生成する工程とを含む
方法によって構築される。
同様に、一実施形態において、本発明の抗タウ抗体は、
（ｉ）本明細書に記載される本発明の抗体の可変領域または前記領域のエピトープ結合
部分、および
（ｉｉ）免疫グロブリンのＣＨ領域またはＣＨ２およびＣＨ３領域を含むその領域
を含む一価抗体であり、ここで、ＣＨ領域またはその領域は、ヒンジ領域に対応する領域
および、免疫グロブリンがＩｇＧ４サブタイプでない場合、ＣＨ３領域などのＣＨ領域の
他の領域が、ポリクローナルヒトＩｇＧの存在下で、同一のＣＨ領域とともにジスルフィ
ド結合を形成するか、または同一のＣＨ領域とともに他の共有結合または安定した非共有
重鎖間結合を形成することが可能なアミノ酸残基を含まないように修飾されている。
さらなる実施形態において、本発明の一価抗体の重鎖は、ヒンジ領域全体が欠失してい
るように修飾されている。
別のさらなる実施形態において、前記一価抗体の配列は、それがＮ結合型グリコシル化
のための受容体部位を含まないように修飾されている。
本発明は、抗タウ結合領域（例えば、抗タウモノクローナル抗体のタウ結合領域）が、
２つ以上のエピトープを標的にする二価または多価二重特異性骨格の一部である「二重特
異性抗体」も含む（例えば、第２のエピトープは、二重特異性抗体が、血液脳関門などの
生物学的障壁を越える改良されたトランスサイトーシスを示し得るように、活性な輸送受
容体のエピトープを含み得る）。したがって、別のさらなる実施形態において、抗タウ抗
体の一価Ｆａｂは、異なるタンパク質を標的にするさらなるＦａｂまたはｓｃｆｖに結合
されて、二重特異性抗体を生成し得る。二重特異性抗体は、二重機能、例えば抗タウ結合
領域によって与えられる治療機能、および血液脳関門などの生物学的障壁を越える輸送を
促進するために受容体分子に結合し得る輸送機能を有し得る。
本発明の抗体、およびそのエピトープ結合フラグメントは、一本鎖抗体も含む。一本鎖
抗体は、重鎖および軽鎖Ｆｖ領域が結合されたペプチドである。一実施形態において、本
発明は、本発明の抗タウ抗体のＦｖにおける重鎖および軽鎖が、ペプチド一本鎖において
（典型的に、約１０、１２、１５つまたはそれ以上のアミノ酸残基の）フレキシブルペプ
チドリンカーと結合される一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）を提供する。このような抗体を産生す
る方法が、例えば米国特許第４，９４６，７７８号明細書、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ
Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅ
ｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇ
ｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）、Ｂｉｒｄ
ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２，４２３－４２６（１９８８）、Ｈｕｓｔｏｎ
ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８５，５８７９－５８８３（１９８８）およびＭｃ
Ｃａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８，５５２－５５４（１９９０）
に記載されている。一本鎖抗体は、単一のＶＨおよびＶＬのみが使用される場合、一価で
あり、２つのＶＨおよびＶＬが使用される場合、二価であり、または３つ以上のＶＨおよ
びＶＬが使用される場合、多価であり得る。
本明細書に記載される抗体およびそのエピトープ結合フラグメントは、任意の好適な数
の修飾アミノ酸の包含によって修飾され得るおよび／またはこのような共役置換基との結
合によって修飾され得る。これに関連する適合性は、一般に、非誘導体化親抗タウ抗体に
関連するタウ選択性および／または抗タウ特異性を少なくとも実質的に保持する能力によ
って決定される。１つまたは複数の修飾アミノ酸の包含は、例えば、ポリペプチド血清半
減期を増加させ、ポリペプチド抗原性を低下させ、またはポリペプチド貯蔵安定性を増加
させるのに有利であり得る。アミノ酸は、例えば、組み換え産生の際に翻訳と同時に（ｃ
ｏ－ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌｌｙ）もしくは翻訳後に（ｐｏｓｔ－ｔｒａｎｓｌａｔ
ｉｏｎａｌｌｙ）修飾されるか（例えば、哺乳類細胞における発現の際のＮ－Ｘ－Ｓ／Ｔ
モチーフにおけるＮ結合型グリコシル化）または合成手段によって修飾される。修飾アミ
ノ酸の非限定的な例としては、グリコシル化アミノ酸、硫酸化アミノ酸、プレニル化（例
えば、ファルネシル化、ゲラニルゲラニル化）アミノ酸、アセチル化アミノ酸、アシル化
アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、カルボキシル化アミノ酸、リン酸化
アミノ酸などが挙げられる。アミノ酸の修飾の当業者の指針となるのに十分な言及は、文
献全体を通して十分にある。例のプロトコルが、Ｗａｌｋｅｒ（１９９８）Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｏｎ ＣＤ－Ｒｏｍ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗ
ａ，ＮＪに見られる。修飾アミノ酸は、例えば、グリコシル化アミノ酸、ＰＥＧ化アミノ
酸、ファルネシル化アミノ酸、アセチル化アミノ酸、ビオチン化アミノ酸、脂質部分にコ
ンジュゲートされたアミノ酸、または有機誘導化剤にコンジュゲートされたアミノ酸から
選択され得る。
本発明の抗体およびそのエピトープ結合フラグメントはまた、例えばそれらの血中半減
期を増加させるために、ポリマーへの共有結合によって化学修飾され得る。例示的なポリ
マー、およびそれらをペプチドに結合するための方法が、例えば米国特許第４，７６６，
１０６号明細書、米国特許第４，１７９，３３７号明細書、米国特許第４，４９５，２８
５号明細書および米国特許第４，６０９，５４６号明細書に示されている。さらなる例示
的なポリマーとしては、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリエチレングリコール（
ＰＥＧ）（例えば、約１，０００～約４０，０００、例えば約２，０００～約２０，００
０、例えば、約３，０００～１２，０００ｇ／ｍｏｌの分子量を有するＰＥＧ）が挙げら
れる。
本発明の抗体およびそのエピトープ結合フラグメントは、診断法においてまたは画像診
断用リガンドとしてさらに使用され得る。
一実施形態において、１つまたは複数の放射性標識アミノ酸を含む本発明の抗体および
そのエピトープ結合フラグメントが提供される。放射性標識抗タウ抗体は、診断および治
療目的の両方に使用され得る（放射性標識分子への結合は、別の考えられる特徴である）
。このような標識の非限定的な例としては、限定はされないが、ビスマス（２１３Ｂｉ）
、炭素（１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ）、クロム（５１Ｃｒ）、コバルト（５７Ｃｏ、６０Ｃ
ｏ）、銅（６４Ｃｕ）、ジスプロシウム（１６５Ｄｙ）、エルビウム（１６９Ｅｒ）、フ
ッ素（１８Ｆ）、ガドリニウム（１５３Ｇｄ、１５９Ｇｄ）、ガリウム（６８Ｇａ、６７
Ｇａ）、ゲルマニウム（６８Ｇｅ）、金（１９８Ａｕ）、ホルミウム（１６６Ｈｏ）、水
素（３Ｈ）、インジウム（１１１Ｉｎ、１１２Ｉｎ、１１３Ｉｎ、１１５Ｉｎ）、ヨウ素
（１２１Ｉ、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、イリジウム（１９２Ｉｒ）、鉄（５９Ｆ
ｅ）、クリプトン（８１ｍＫｒ）、ランタン（１４０Ｌａ）、ルテチウム（１７７Ｌｕ）
、マンガン（５４Ｍｎ）、モリブデン（９９Ｍｏ）、窒素（１３Ｎ、１５Ｎ）、酸素（１
５Ｏ）、パラジウム（１０３Ｐｄ）、リン（３２Ｐ）、カリウム（４２Ｋ）、プラセオジ
ム（１４２Ｐｒ）、プロメチウム（１４９Ｐｍ）、レニウム（１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ）
、ロジウム（１０５Ｒｈ）、ルビジウム（８１Ｒｂ、８２Ｒｂ）、ルテニウム（８２Ｒｕ
、９７Ｒｕ）、サマリウム（１５３Ｓｍ）、スカンジウム（４７Ｓｃ）、セレン（７５Ｓ
ｅ）、ナトリウム（２４Ｎａ）、ストロンチウム（８５Ｓｒ、８９Ｓｒ、９２Ｓｒ）、硫
黄（３５Ｓ）、テクネチウム（９９Ｔｃ）、タリウム（２０１Ｔｌ）、スズ（１１３Ｓｎ
、１１７Ｓｎ）、キセノン（１３３Ｘｅ）、イッテルビウム（１６９Ｙｂ、１７５Ｙｂ、
１７７Ｙｂ）、イットリウム（９０Ｙ）、亜鉛（６５Ｚｎ）およびジルコニウム（８９Ｚ
ｒ）が挙げられる。ジルコニウム（８９Ｚｒ）が特に興味深い。放射性標識アミノ酸およ
び関連するペプチド誘導体を調製するための方法は、当該技術分野において公知である（
例えばＪｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａ
ｎｄ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ ６５５－６８６（２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｈａｆｎｅ
ｒ ａｎｄ Ｌｏｎｇｏ，ｅｄｓ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｒａｖｅｎ（１９９６））
ならびに米国特許第４，６８１，５８１号明細書、米国特許第４，７３５，２１０号明細
書、米国特許第５，１０１，８２７号明細書、米国特許第５，１０２，９９０号明細書（
米国再発行特許第３５，５００号明細書）、米国特許第５，６４８，４７１号明細書およ
び米国特許第５，６９７，９０２号明細書を参照）。例えば、放射性同位体が、クロラミ
ンＴ法によって結合され得る（Ｌｉｎｄｅｇｒｅｎ，Ｓ．ｅｔ ａｌ．（１９９８）“Ｃ
ｈｌｏｒａｍｉｎｅ－Ｔ Ｉｎ Ｈｉｇｈ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ－Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｒａ
ｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ｕｓｉｎｇ Ｎ－Ｓｕｃｃ
ｉｎｉｍｉｄｙｌ－３－（Ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｓｔａｎｎｙｌ）Ｂｅｎｚｏａｔｅ Ａｓ
Ａｎ Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ”，Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．２５（７）：６５
９－６６５；Ｋｕｒｔｈ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９３）“Ｓｉｔｅ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ
Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ Ｐｈｅｎｅｔｈ
ｙｌａｍｉｎｅ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ Ｔｏ Ａ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂ
ｏｄｙ Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎ Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ Ｌ
ｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ Ｉｎ Ｔｕｍｏｒ”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３６（９）：１
２５５－１２６１；Ｒｅａ，Ｄ．Ｗ．ｅｔ ａｌ．（１９９０）“Ｓｉｔｅ－ｓｐｅｃｉ
ｆｉｃａｌｌｙ ｒａｄｉｏｉｏｄｉｎａｔｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｆｏｒ ｔａｒｇ
ｅｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒｓ”，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０（３ Ｓｕｐｐｌ）：８５７
ｓ－８６１ｓ）。
本発明は、蛍光標識（希土類キレート（例えば、ユウロピウムキレート）など）、フル
オレセイン型標識（例えば、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、５－
カルボキシフルオレセイン、６－カルボキシフルオレセイン、ジクロロトリアジニルアミ
ンフルオレセイン）、ローダミン型標識（例えば、ＡＬＥＸＡ ＦＬＵＯＲ（登録商標）
５６８（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ＴＡＭＲＡ（登録商標）またはダンシルクロリド）、
ＶＩＶＯＴＡＧ ６８０ ＸＬ ＦＬＵＯＲＯＣＨＲＯＭＥ（商標）（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅ
ｌｍｅｒ）、フィコエリトリン；ウンベリフェロン、Ｌｉｓｓａｍｉｎｅ；シアニン；フ
ィコエリトリン、Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ、ＢＯＤＩＰＹ ＦＬ－ＳＥ（登録商標）（Ｉｎｖ
ｉｔｒｏｇｅｎ）またはそれらの類似体（これらは全て、光学的検出に好適である）を用
いて検出可能に標識される抗タウ抗体およびそのエピトープ結合フラグメントも提供する
。化学発光標識が、用いられてもよい（例えば、ルミノール、ルシフェラーゼ、ルシフェ
リン、およびイクオリン）。このような診断および検出はまた、本発明の診断用分子を、
限定はされないが、様々な酵素、限定はされないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アル
カリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼを含む
酵素を含む検出可能な物質に、または限定はされないが、ストレプトアビジン／ビオチン
およびアビジン／ビオチンなどの補欠分子族複合体に結合することによって行われ得る。
化学発光標識が、用いられてもよい（例えば、ルミノール、ルシフェラーゼ、ルシフェ
リン、およびイクオリン）。このような診断および検出はまた、本発明の診断用分子を、
限定はされないが、様々な酵素、限定はされないが、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アル
カリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼを含む
酵素を含む検出可能な物質に、または限定はされないが、ストレプトアビジン／ビオチン
およびアビジン／ビオチンなどの補欠分子族複合体に結合することによって行われ得る。
常磁性標識も用いられ得、好ましくは、ポジトロン放出型断層撮影法（ＰＥＴ）または単
一光子放射コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ）を用いて検出される。このような常磁
性標識としては、限定はされないが、アルミニウム（Ａｌ）、バリウム（Ｂａ）、カルシ
ウム（Ｃａ）、セリウム（Ｃｅ）、ジスプロシウム（Ｄｙ）、エルビウム（Ｅｒ）、ユウ
ロピウム（Ｅｕ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、ホルミウム（Ｈｏ）、イリジウム（Ｉｒ）、
リチウム（Ｌｉ）、マグネシウム（Ｍｇ）、マンガン（Ｍｎ）、モリブデン（Ｍ）、ネオ
ジム（Ｎｄ）、オスミウム（Ｏｓ）、酸素（Ｏ）、パラジウム（Ｐｄ）、白金（Ｐｔ）、
ロジウム（Ｒｈ）、ルテニウム（Ｒｕ）、サマリウム（Ｓｍ）、ナトリウム（Ｎａ）、ス
トロンチウム（Ｓｒ）、テルビウム（Ｔｂ）、ツリウム（Ｔｍ）、スズ（Ｓｎ）、チタン
（Ｔｉ）、タングステン（Ｗ）、およびジルコニウム（Ｚｉ）、特に、Ｃｏ＋２、ＣＲ＋
２、Ｃｒ＋３、Ｃｕ＋２、Ｆｅ＋２、Ｆｅ＋３、Ｇａ＋３、Ｍｎ＋３、Ｎｉ＋２、Ｔｉ＋
３、Ｖ＋３、およびＶ＋４の常磁性イオン、様々なポジトロン放出型断層撮影法を用いた
ポジトロン放出金属、および非放射性常磁性金属イオンを含有する化合物が挙げられる。
したがって、一実施形態において、本発明の抗タウ抗体またはそのタウ結合フラグメン
トは、蛍光標識、化学発光標識、常磁性標識、放射性同位体標識または酵素標識で標識さ
れ得る。フラグメントの標識抗体は、被験体の脳における前記タウの存在または量を検出
または測定するのに使用され得る。この方法は、前記タウに結合された抗タウ抗体または
タウ結合フラグメントのインビボイメージングの検出または測定を含んでもよく、前記タ
ウに結合された前記抗タウ抗体またはタウ結合フラグメントのエクスビボイメージングを
含み得る。
さらなる態様において、本発明は、本発明の抗体またはそのタウ結合フラグメントの１
つまたは複数のポリペプチド鎖をコードする発現ベクターに関する。このような発現ベク
ターは、本発明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントの組み換え産生に使用され
得る。
本発明の文脈における発現ベクターは、染色体ベクター、非染色体ベクター、および合
成核酸ベクター（好適な組の発現制御要素を含む核酸配列）を含む、任意の好適なＤＮＡ
またはＲＮＡベクターであり得る。このようなベクターの例としては、ＳＶ４０の誘導体
、細菌プラスミド、ファージＤＮＡ、バキュロウイルス、酵母プラスミド、プラスミドお
よびファージＤＮＡの組合せに由来するベクター、およびウイルス核酸（ＲＮＡまたはＤ
ＮＡ）ベクターが挙げられる。一実施形態において、抗タウ抗体コード核酸は、例えば、
線形発現要素（ｌｉｎｅａｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｅｌｅｍｅｎｔ）（例えば、Ｓｙ
ｋｅｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ １２，３５５－５９（１
９９７）に記載されているように）、圧縮（ｃｏｍｐａｃｔｅｄ）核酸ベクター（例えば
米国特許第６，０７７，８３５号明細書および／または国際公開第００／７００８７号パ
ンフレットに記載されているように）、ｐＢＲ３２２、ｐＵＣ １９／１８、またはｐＵ
Ｃ １１８／１１９、「ミッジ（ｍｉｄｇｅ）」最小サイズ核酸ベクターなどのプラスミ
ドベクター（例えば、Ｓｃｈａｋｏｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，ＭｏＩ Ｔｈｅｒ ３，７
９３－８００（２００１）に記載されているように）を含む裸のＤＮＡまたはＲＮＡベク
ターにおいて、またはＣａＰＯ４沈殿構築物などの沈殿核酸ベクター構築物（例えば、国
際公開第００／４６１４７号パンフレット、Ｂｅｎｖｅｎｉｓｔｙ ａｎｄ Ｒｅｓｈｅ
ｆ，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８３，９５５１－５５（１９８６）、Ｗｉｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ
．，Ｃｅｌｌ １４，７２５（１９７８）、およびＣｏｒａｒｏ ａｎｄ Ｐｅａｒｓｏ
ｎ，Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２，６０３（１９８１）に記載され
ているように）として含まれる。このような核酸ベクターおよびその使用法は、当該技術
分野において周知である（例えば米国特許第５，５８９，４６６号明細書および米国特許
第５，９７３，９７２号明細書を参照）。
一実施形態において、ベクターは、細菌細胞における本発明の抗タウ抗体またはそのエ
ピトープ結合フラグメントの発現に好適である。このようなベクターの例としては、Ｂｌ
ｕｅＳｃｒｉｐｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）、ｐＩＮベクター（Ｖａｎ Ｈｅｅｋｅ ＆
Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２６４，５５０３－５５０９（１９８９
））、ｐＥＴベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）など）などの発現ベク
ターが挙げられる。
発現ベクターは、さらにまたは代わりに、酵母系における発現に好適なベクターであり
得る。酵母系における発現に好適な任意のベクターが用いられてもよい。好適なベクター
としては、例えば、α因子、アルコールオキシダーゼおよびＰＧＨなどの構成的または誘
導性プロモータを含むベクターが挙げられる（Ｆ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ
．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，
Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ ａｎｄ Ｗｉｌｅｙ ＩｎｔｅｒＳｃｉｅｎｃｅ
Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８７）、Ｇｒａｎｔ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏｌ １５３，５１６－５４４（１９８７）、Ｍａｔｔａｎｏｖｉｃｈ，Ｄ．
ｅｔ ａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．８２４，３２９－３５８（２０１２）
、Ｃｅｌｉｋ，Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ａｄｖ．３０（５），１１０８
－１１１８（２０１２）、Ｌｉ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｏｌ．１４２（２），１０５－１２４（２００７）、Ｂｏｅｅｒ，Ｅ．ｅｔ ａ
ｌ．Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７７（３），５１３－５２
３（２００７）、ｖａｎ ｄｅｒ Ｖａａｒｔ，Ｊ．Ｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉ
ｏｌ．１７８，３５９－３６６（２００２）、およびＨｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．Ｍｅｔｈｏ
ｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１７８，３４９－３５７（２００２）に概説されている）。
本発明の発現ベクターにおいて、抗タウ抗体コード核酸は、任意の好適なプロモータ、
エンハンサー、および他の発現促進要素を含むかまたはそれらと結合され得る。このよう
な要素の例としては、強力な発現プロモータ（例えば、ヒトＣＭＶ ＩＥプロモータ／エ
ンハンサーならびにＲＳＶ、ＳＶ４０、ＳＬ３－３、ＭＭＴＶ、およびＨＩＶ ＬＴＲプ
ロモータ）、有効なポリ（Ａ）終止配列、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）におけるプラスミド産
物の複製起点、選択可能なマーカーとしての抗生物質抵抗性遺伝子、および／または好都
合なクローニング部位（例えば、ポリリンカー）が挙げられる。核酸は、ＣＭＶ ＩＥな
どの構成的プロモータとは対照的に誘導性プロモータも含み得る（当業者は、このような
用語が、実際に、特定の条件下における遺伝子発現の程度の記述語であることを認識する
であろう）。
さらに他の態様において、本発明は、本明細書に定義される本発明の抗体またはそのエ
ピトープ結合フラグメントまたは本明細書に定義される本発明の二重特異性分子を産生す
るトランスフェクトーマ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａ）などの、組み換え真核生物または
原核生物宿主細胞に関する。宿主細胞の例としては、酵母、細菌、および哺乳類細胞（Ｃ
ＨＯまたはＨＥＫ細胞など）が挙げられる。例えば、一実施形態において、本発明は、本
発明の抗タウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメントの発現のための配列コードを含
む細胞ゲノムに安定に組み込まれた核酸を含む細胞を提供する。別の実施形態において、
本発明は、本発明の抗タウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメントの発現のための配
列コードを含む、プラスミド、コスミド、ファージミド、または線形発現要素などの、融
合されていない核酸を含む細胞を提供する。
さらなる態様において、本発明は、本発明の抗タウ抗体を産生するための方法であって
、ａ）本明細書において上述されるように本発明のハイブリドーマまたは宿主細胞を培養
する工程と、ｂ）培地から本発明の抗体を精製する工程とを含む方法に関する。
一実施形態において、本発明は、調製物であって、このような用語が本明細書において
使用される際、本明細書に定義される抗タウ抗体を含み、タウに結合することが可能でな
いかまたは調製物の抗タウ機能性を実質的に変更しない自然発生する抗体を実質的に含ま
ない調製物に関する。したがって、このような調製物は、自然発生する血清、またはこの
ような血清の精製誘導体を包含せず、抗タウ抗体と、調製物の抗タウ抗体の機能性を変更
しない別の抗体との混合物を含み、ここで、このような機能性は、
（ｉ）非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉ）Ｓ４０４においてリン酸化され、Ｓ３９６においてリン酸化されないタウに結
合することが実質的にできないこと；
（ｉｉｉ）Ｓ３９６においてリン酸化されるタウに結合する能力；
（ｉｖ）Ｓ３９６およびＳ４０４の両方においてリン酸化されるタウに結合する能力；
（ｖ）それがリン酸化４０４残基に結合することが実質的にできないように、リン酸化
タウ残基Ｓ３９６およびＳ４０４を選択的に区別する能力；
（ｖｉ）ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力；
（ｖｉｉ）病理学的および非病理学的ヒトタウタンパク質を区別する能力；および／ま
たは
（ｖｉｉｉ）本明細書に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫
枯渇されたｒＴｇ４５１０抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ６４ｋＤａお
よび７０ｋＤａバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、５５ｋＤａタウ
バンドを１０％超減少させない能力または本明細書に記載されるように、ヒトＡＤ死後脳
に由来する抽出物とともに使用されるとき、Ｓ３９６リン酸化過リン酸化タウバンドを少
なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、非過リン酸化タウバンドを１０％超減少さ
せない能力
である。
本発明は、特に、天然抗タウ抗体の構造と比べてそのアミノ酸配列の構造変化を（その
ＣＤＲ、可変領域、フレームワーク残基および／または定常領域のいずれかに）有するこ
のような抗タウ抗体の調製物であって、前記構造変化により、抗タウ抗体が、前記天然抗
タウ抗体によって示される機能性と比べて著しく変化した機能性（すなわち、機能性の２
０％超の相違、４０％超の相違、６０％超の相違、８０％超の相違、１００％超の相違、
１５０％超の相違、２倍超の相違、４倍超の相違、５倍超の相違、または１０倍超の相違
）を示し；ここで、このような機能性は、
（ｉ）非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉ）Ｓ４０４においてリン酸化され、Ｓ３９６においてリン酸化されないタウに結
合することが実質的にできないこと；
（ｉｉｉ）Ｓ３９６においてリン酸化されるタウに結合する能力；
（ｉｖ）Ｓ３９６およびＳ４０４の両方においてリン酸化されるタウに結合する能力；
（ｖ）それがリン酸化４０４残基に結合することが実質的にできないように、リン酸化
タウ残基Ｓ３９６およびＳ４０４を選択的に区別する能力；
（ｖｉ）ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力；
（ｖｉｉ）病理学的および非病理学的ヒトタウタンパク質を区別する能力；および／ま
たは
（ｖｉｉｉ）本明細書に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫
枯渇されたｒＴｇ４５１０抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ６４ｋＤａお
よび７０ｋＤａバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、５５ｋＤａタウ
バンドを１０％超減少させない能力；または本明細書に記載されるように、ヒトＡＤ死後
脳に由来する抽出物とともに使用されるとき、Ｓ３９６リン酸化過リン酸化タウバンドを
少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、非過リン酸化タウバンドを１０％超減少
させない能力
であり、特に、このような変化した機能性は、構造変化の結果であり、したがってそれと
切り離すことができない。
自然発生する抗体を「実質的に含まない」という用語は、このような調製物におけるこ
のような自然発生する抗体の、または調製物のタウ結合特性を実質的に変更しないこのよ
うな調製物におけるある濃度のこのような自然発生する抗体の包含の完全な非存在を指す
。抗体は、それが自然発生する対応物を有さないか、またはそれを自然に伴う成分から分
離もしくは精製されている場合、「単離」されているといわれる。
「自然発生する抗体」という用語は、それがこのような調製物に関する場合、生きたヒ
トまたは他の動物内で、それらの免疫系の機能の自然な結果として誘発される抗体（自然
発生する自己抗体を含む）を指す。
したがって、本発明の調製物は、抗タウ抗体およびタウによって保有されないエピトープに結合することが可能な意図的に加えられるさらなる抗体を含有するこのような調製物を除外せず、実際は明確にそれを包含する。このような調製物は、特に、調製物が、アルツハイマー病（ＡＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、および大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）を治療する際に向上した有効性を示すその実施形態を含む。さらに、本発明は、精神病、特に、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、ＡＤに起因するアパシーまたはＡＤの患者におけるアパシー、およびレビー小体型認知症の患者の精神医学的症状の治療に使用することが意図された、抗タウ抗体抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを含有する調製物に関する。さらに、本発明の調製物は、脳卒中、脳卒中の回復、パーキンソン病に関連する神経変性の治療に使用され得る、抗タウ抗体抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを含有する。
さらに他の態様において、本発明は、
（ｉ）本明細書に定義されるタウ抗体またはそのエピトープ結合フラグメント、または
調製物であって、このような用語が本明細書において定義される際、このような抗タウ抗
体またはそのエピトープ結合フラグメントを含む調製物、および
（ｉｉ）薬学的に許容できる担体
を含む医薬組成物に関する。
医薬組成物は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉ
ｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｅｄ．，
Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，２０１３に開示されて
いるものなどの従来の技術にしたがって、薬学的に許容できる担体または希釈剤ならびに
任意の他の公知の補助剤および賦形剤とともに製剤化され得る。
薬学的に許容できる担体または希釈剤ならびに任意の他の公知の補助剤および賦形剤は
、本発明の選択された化合物および選択された投与方法に好適であるべきである。医薬組
成物の担体および他の成分のための適合性は、本発明の選択された化合物または医薬組成
物の所望の生物学的特性に対する大きな悪影響がないことに基づいて決定される（例えば
、エピトープ結合に対するそれほど大きくない影響（１０％以下の相対的阻害、５％以下
の相対的阻害など））。
本発明の医薬組成物は、希釈剤、充填剤、塩、緩衝液、洗浄剤（例えば、Ｔｗｅｅｎ－
２０またはＴｗｅｅｎ－８０などの非イオン性洗浄剤）、安定剤（例えば、糖またはタン
パク質を含まないアミノ酸）、防腐剤、組織固定剤、可溶化剤、および／または医薬組成
物に含めるのに好適な他の材料も含み得る。希釈剤は、組合せの生物学的活性に影響を与
えないように選択される。このような希釈剤の例は、蒸留水、リン酸緩衝生理食塩水、リ
ンゲル液、デキストロース溶液、およびハンクス溶液である。さらに、医薬組成物または
製剤は、他の担体、または非毒性の、非治療的、非免疫原性安定剤なども含み得る。組成
物は、タンパク質、キトサンのような多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびコポリ
マー（例えば、ラテックス機能化（ｌａｔｅｘ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚｅｄ）セファ
ロース、アガロース、セルロースなど）、ポリマーアミノ酸、アミノ酸コポリマー、およ
び脂質凝集体（例えば、油滴またはリポソーム）などの、大型のゆっくりと代謝される高
分子も含み得る。
本発明の医薬組成物中の活性成分の実際の投与量レベルは、特定の患者、組成物、およ
び投与方法に対する所望の治療反応を達成するのに有効な活性成分の量を得るように変化
され得る。選択された投与量レベルは、用いられる本発明の特定の組成物の活性、または
そのアミド、投与経路、投与時期、用いられる特定の化合物の排せつ速度、治療期間、用
いられる特定の組成物と組み合わせて使用される他の薬剤、化合物および／または材料、
治療される患者の年齢、性別、体重、病態、全体的な健康および過去の病歴、ならびに医
療分野において周知の同様の要因を含む様々な薬物動態学的要因に応じて決まる。
医薬組成物は、予防的および／または治療的処置のための非経口、局所、経口または経
鼻手段を含む、任意の好適な経路および方法によって投与され得る。一実施形態において
、本発明の医薬組成物は、非経口的に投与される。本明細書において使用される際の「非
経口投与」および「非経口的に投与される」という語句は、通常、注射による、腸内およ
び局所投与以外の投与方法を意味し、表皮、静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼
窩内、心腔内、皮内、腹腔内、腱内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下
、脊髄内、頭蓋内、胸腔内、硬膜外および胸骨内注射および注入を含む。
インビボおよびインビトロで本発明の化合物を投与するさらなる好適な経路が、当該技
術分野において周知であり、当業者によって選択され得る。
一実施形態において、その医薬組成物は、静脈内または皮下注射または注入によって投
与される。
薬学的に許容できる担体としては、本発明の化合物と生理学的に適合性の、あらゆる好
適な溶媒、分散媒、コーティング、抗菌および抗真菌剤、等張剤、酸化防止剤および吸収
遅延剤などが挙げられる。
本発明の医薬組成物に用いられ得る好適な水性および非水性担体の例としては、水、生
理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、エタノール、デキストロース、ポリオール（グリセロ
ール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、およびそれらの好適な混
合物、オリーブ油、トウモロコシ油、ピーナッツ油、綿実油、およびゴマ油などの植物油
、カルボキシメチルセルロースコロイド溶液、トラガカントガムおよび注射可能な有機酸
エステル（オレイン酸エチルなど）、および／または様々な緩衝液が挙げられる。他の担
体が、医薬品分野において周知である。
薬学的に許容できる担体は、滅菌注射用溶液または分散体の即時調製用の滅菌水溶液ま
たは分散体および滅菌粉末を含む。薬学的に活性な物質のためのこのような媒体および薬
剤の使用は、当該技術分野において公知である。従来の媒体または薬剤が活性化合物と適
合しない場合を除いて、本発明の医薬組成物におけるそれらの使用が想定される。
適切な流動性が、例えば、レシチンなどのコーティング材料の使用によって、分散体の
場合、所要の粒度の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。
本発明の医薬組成物は、薬学的に許容できる酸化防止剤、例えば（１）水溶性酸化防止
剤（アスコルビン酸、システイン塩酸塩、重硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウム、
亜硫酸ナトリウムなど）；（２）油溶性酸化防止剤（パルミチン酸アスコルビル、ブチル
化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン
、没食子酸プロピル、α－トコフェロールなど）；および（３）金属キレート剤（クエン
酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸など）も含み
得る。
本発明の医薬組成物は、組成物中に糖類、ポリアルコール（マンニトール、ソルビトー
ル、グリセロールなど）または塩化ナトリウムなどの等張剤も含み得る。
本発明の医薬組成物は、医薬組成物の保存可能期間または有効性を向上させ得る、防腐
剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、防腐剤または緩衝液などの、選択された投与経路に適切な
１つまたは複数の補助剤も含有し得る。本発明の化合物は、インプラント、経皮パッチ、
およびマイクロカプセル化送達システムを含む、制御放出製剤などの速放性から化合物を
保護する担体とともに調製され得る。このような担体は、ゼラチン、モノステアリン酸グ
リセリル、ジステアリン酸グリセリル、生分解性、生体適合性ポリマー（エチレン酢酸ビ
ニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳
酸など）を単独でまたはワックスまたは当該技術分野において周知の他の材料とともに含
み得る。このような製剤の調製のための方法は、一般に、当業者に公知である。例えば、
Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅ
ｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄ
ｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。
一実施形態において、本発明の化合物は、インビボでの適切な分配を確実にするように
製剤化され得る。非経口投与用の薬学的に許容できる担体は、滅菌注射用溶液または分散
体の即時調製用の滅菌水溶液または分散体および滅菌粉末を含む。薬学的に活性な物質の
ためのこのような媒体および薬剤の使用は、当該技術分野において公知である。従来の媒
体または薬剤が活性化合物と適合しない場合を除いて、本発明の医薬組成物におけるそれ
らの使用が想定される。補助的な活性化合物も、組成物に組み込まれ得る。
注射用の医薬組成物は、典型的に、製造および貯蔵の条件下で、滅菌性かつ安定性でな
ければならない。組成物は、溶液、マイクロエマルション、リポソーム、または高い薬剤
濃度に好適な他の規則構造として製剤化され得る。担体は、例えば水、エタノール、ポリ
オール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなど）、および
それらの好適な混合物、植物油（オリーブ油など）、および注射可能な有機酸エステル（
オレイン酸エチルなど）を含有する、水性または非水性溶媒または分散媒であり得る。適
切な流動性が、例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散体の場合、所
要の粒度の維持によって、および界面活性剤の使用によって維持され得る。多くの場合、
組成物中に等張剤、例えば、糖類、ポリアルコール（グリセロール、マンニトール、ソル
ビトールなど）、または塩化ナトリウムを含むことが好ましいであろう。注射用組成物の
持続的吸収が、抗体の吸収を遅らせる物質、例えば、一ステアリン酸塩およびゼラチンを
組成物中に含むことによってもたらされ得る。滅菌注射用溶液は、例えば上に列挙される
ような成分の１つまたは組合せを含む適切な溶媒中に所要量の活性化合物を組み込むこと
、必要に応じて、その後の滅菌精密ろ過によって調製され得る。一般に、分散体は、塩基
性分散媒および例えば上に列挙される成分からの所要の他の成分を含む滅菌ビヒクル中に
活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末
の場合、調製方法の例は、予め滅菌ろ過されたそれらの溶液から活性成分および任意のさ
らなる所望の成分の粉末を得る真空乾燥およびフリーズドライ（凍結乾燥）である。
滅菌注射用溶液は、上に列挙されるような成分の１つまたは組合せを含む適切な溶媒中
に所要量の活性化合物を組み込むこと、必要に応じて、その後の滅菌精密ろ過によって調
製され得る。一般に、分散体は、塩基性分散媒および上に列挙される成分からの所要の他
の成分を含む滅菌ビヒクル中に活性化合物を組み込むことによって調製される。滅菌注射
用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、調製方法の例は、予め滅菌ろ過されたそれらの溶
液から活性成分および任意のさらなる所望の成分の粉末を得る真空乾燥およびフリーズド
ライ（凍結乾燥）である。
治療の上記の方法および本明細書に記載される使用における投与計画は、最適な望まし
い反応（例えば、治療反応）を提供するように調整される。例えば、単回ボーラスが投与
されてもよく、いくつかの分割量が、時間をかけて投与されてもよく、または用量が、治
療状況の要件によって示されるように比例的に減少または増加されてもよい。非経口組成
物は、投与のしやすさおよび投与の均一性のために単位剤形で製剤化され得る。本明細書
において使用される際の単位剤形は、治療される被験体のための統一された投与量として
適した物理的に別個の単位を指し；各単位は、所要の医薬担体に関連して所望の治療効果
を生じるように計算された所定の量の活性化合物を含有する。本発明の単位剤形の仕様は
、（ａ）活性化合物の独自の特性および得られる具体的な治療効果、ならびに（ｂ）個体
における敏感性（ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）の治療のためのこのような活性化合物の配合
の技術分野に固有の制限に左右され、それらに直接依存する。
本発明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントの有効投与量および投与計画は、
治療される疾患または病態に応じて決まり、当業者によって決定され得る。いずれの日も
所定の投与量が投与され、投与量は、約０．０００１～約１００ｍｇ／ｋｇ、より通常は
約０．０１～約５ｍｇ／ｋｇ宿主体重の範囲であり得る。例えば、投与量は、１ｍｇ／ｋ
ｇ体重または１０ｍｇ／ｋｇ体重または１～１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲内であり得る。し
たがって、例示的な投与量としては、約０．１～約１０ｍｇ／ｋｇ／体重、約０．１～約
５ｍｇ／ｋｇ／体重、約０．１～約２ｍｇ／ｋｇ／体重、約０．１～約１ｍｇ／ｋｇ／体
重、例えば約０．１５ｍｇ／ｋｇ／体重、約０．２ｍｇ／ｋｇ／体重、約０．５ｍｇ／ｋ
ｇ／体重、約１ｍｇ／ｋｇ／体重、約１．５ｍｇ／ｋｇ／体重、約２ｍｇ／ｋｇ／体重、
約５ｍｇ／ｋｇ／体重、または約１０ｍｇ／ｋｇ／体重が挙げられる。
当該技術分野において通常の技能を有する医師は、必要とされる医薬組成物の有効量を
容易に決定および処方することができる。例えば、医師は、医薬組成物に用いられる本発
明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントの用量を、所望の治療効果を得るために
必要とされるより少ないレベルから開始し、所望の効果が得られるまで投与量を徐々に増
加し得る。一般に、本発明の組成物の好適な１日用量は、治療効果を生じるのに有効な最
低用量である化合物の量であろう。このような有効用量は、一般に、上述される要因に応
じて決まる。投与は、例えば静脈内、筋肉内、腹腔内、または皮下投与であり得る。必要
に応じて、医薬組成物の有効１日用量は、任意選択的に単位剤形で、１日を通して適切な
間隔で、別々に投与される２回、３回、４回、５回、６回またはそれ以上の分割用量とし
て投与され得る。本発明の化合物は、単独で投与されることが可能であるが、上述される
ように医薬組成物として化合物を投与するのが好ましい。
本発明の標識抗体またはそのエピトープ結合フラグメントは、疾患または障害を検出、診断、または監視するために、診断目的で使用され得る。本発明は、限定はされないが、アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、および大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）を含む、神経変性または認知疾患または障害の検出または診断を提供し、（ａ）タウに特異的に結合する１つまたは複数の抗体を用いて、被験体の細胞または組織試料内のピログルタミル化Ａβフラグメントの存在を測定する工程と；（ｂ）抗原のレベルを、制御レベル、例えば正常な組織試料におけるレベルと比較し、それによって、抗原の制御レベルと比較した、抗原の測定レベルの増加が、疾患または障害を示すか、または疾患または障害の重症度を示す工程を含む。
本発明の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントは、当該技術分野において周知の
免疫組織化学法を用いて、生物学的試料内のタウまたはタウのフラグメントを測定するの
に使用され得る。タンパク質を検出するのに有用な他の抗体ベースの方法としては、酵素
結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）、放射免疫測定法（ＲＩＡ）およびメソスケールディスカ
バリープラットフォーム（ｍｅｓｏｓｃａｌｅ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｐｌａｔｆｏｒｍ
）ベースのアッセイ（ＭＳＤ）などの免疫測定法が挙げられる。好適な抗体標識が、この
ようなキットおよび方法に使用され得、当該技術分野において公知の標識としては、酵素
標識（アルカリホスファターゼおよびグルコースオキシダーゼなど）；放射性同位体標識
（ヨウ素（１２５Ｉ、１３１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、硫黄（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ
）、インジウム（１２１Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９ｍＴｃ）など）；および発光
標識（ルミノールおよびルシフェラーゼなど）；および蛍光標識（フルオレセインおよび
ローダミンなど）が挙げられる。
標識抗タウ抗体またはそれらのタウ結合フラグメントの存在は、診断目的で、インビボ
で検出され得る。一実施形態において、診断は、ａ）有効量のこのような標識分子を被験
体に投与する工程；ｂ）投与後、所定の時間間隔にわたって待機して、標識分子を、Ａβ
堆積の部位（もしあれば）で濃縮させ、非結合標識分子が、バックグラウンドレベルにな
るまで除去されるのを可能にする工程；ｃ）バックグラウンドレベルを決定する工程；お
よびｄ）バックグラウンドレベルを超える標識分子の検出が、被験体が疾患または障害に
罹患していることを示すか、または疾患または障害の重症度を示すように、被験体中の標
識分子を検出する工程を含む。このような実施形態によれば、分子は、当業者に公知の特
定のイメージングシステムを用いた検出に好適なイメージング部分で標識される。バック
グラウンドレベルは、検出された標識抗体の量を、特定のイメージングシステムのために
予め決定された標準値と比較することを含む、当該技術分野において公知の様々な方法に
よって決定され得る。本発明の診断法に使用され得る方法およびシステムとしては、限定
はされないが、コンピュータ断層撮影法（ＣＴ）、ポジトロン放出型断層撮影法（ＰＥＴ
）などの全身スキャン、磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）、および超音波検査法が挙げられる。
さらなる態様において、本発明は、治療に使用するための、本明細書に定義されるモノ
クローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを提供する。
さらなる態様において、本発明は、タウオパチーを治療、診断またはイメージングする
のに使用するための、本明細書に定義されるモノクローナル抗体、またはそのエピトープ
結合フラグメントを提供する。
さらなる態様において、本発明は、アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、および大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）を治療するのに使用するための、本明細書に定義されるモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを提供する。
さらなる態様において、本発明は、タウオパチーを治療、診断またはイメージングする
ための薬剤の製造に使用するための、本明細書に定義されるモノクローナル抗体、または
そのエピトープ結合フラグメントを提供する。
好ましくは、薬剤は、アルツハイマー病（ＡＤ）、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、および大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、最も好ましくは、アルツハイマー病（ＡＤ）を治療するためのものである。薬剤はまた、好ましくは、精神病、特に、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、ＡＤに起因するアパシーまたはＡＤの患者におけるアパシー、およびレビー小体型認知症の患者の精神医学的症状の治療のためのものである。
さらなる態様において、本発明は、被験体におけるアルツハイマー病または他のタウオ
パチーを治療、診断またはイメージングする方法であって、本明細書に定義される薬剤モ
ノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメントを、有効量で前記被験体に投与
する工程を含む方法を提供する。
好ましい実施形態において、治療は、長期であり、好ましくは、少なくとも２週間、例
えば少なくとも１ヶ月間、６ヶ月間、１年間またはそれ以上にわたる。
さらなる態様において、本発明は、治療に使用するための、本明細書に定義される抗体
、またはそのフラグメントを含むキットを提供する。
実施形態の一覧
１．抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、残基３９６がリン酸化されないとき
、残基４０４においてリン酸化される配列番号１に実質的に結合しないように、ヒトタウ
（配列番号１）のリン酸化残基３９６に特異的に結合することが可能なモノクローナル抗
体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
２．モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントが、例えば５０ｎＭ以
下、例えば０．１ｎＭ～５０ｎＭの濃度で、１００ｎＭ以下、例えば０．１ｎＭ～１００
ｎＭのＩＣ５０を有するように、流体相阻害アッセイにおいてＡＤ－Ｐ３を阻害する、実
施形態１に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
３．アルツハイマー病の脳抽出物における免疫枯渇試験後のｐＳ３９６タウのウエスタン
ブロットシグナルによれば、約７５ｎｇの抗体でアルツハイマー病の脳ホモジネートから
セリン３９６においてリン酸化される少なくとも１５％のタウを除去することが可能であ
る、実施形態１または２のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、またはそのエピト
ープ結合フラグメント。
４．
（ａ）配列番号３、配列番号３１；配列番号３２；配列番号３３；配列番号３４；配列
番号３５；配列番号３６；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；および配列番号
４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４；配列番号４１；および配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤ
Ｒ２；
（ｃ）配列番号５；配列番号４２；および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤ
Ｒ３；
（ｄ）配列番号６；配列番号４３；配列番号４９；配列番号５２；および配列番号５５
のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３０；配列番号４４；配列
番号５０；配列番号５３；および配列番号５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を
含む重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８、配列番号３９；配列番号４５；配列番号５１；配列番号５４；およ
び配列番号５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
５．
（ａ）配列番号１２；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１８；配列番号１９；配
列番号２０；配列番号２１；配列番号２２および配列番号２３からなる群から選択される
軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；配列番号２４；配
列番号２５；配列番号２６；および配列番号２７からなる群から選択される重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
６．
（ａ）軽鎖が配列番号１２であり；
（ｂ）重鎖が、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号２４、配列番号
２５、配列番号２６および配列番号２７からなる群から選択される、実施形態１または５
に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
７．
（ａ）軽鎖が、配列番号１６；配列番号１７；配列番号１８；配列番号１９；配列番号
２０；配列番号２１；配列番号２２および配列番号２３からなる群から選択され；
（ｂ）重鎖が配列番号１１である、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、
またはそのエピトープ結合フラグメント。
８．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
９．
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖：
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
１０．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ
結合フラグメント。
１１．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
１２．
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
１３．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ
結合フラグメント。
１４．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
１５．
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１５のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
１６．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ
結合フラグメント。
１７．
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
１８．
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
１９．
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体
、またはそのエピトープ結合フラグメント。
２０．
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
２１．
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
２２．
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体
、またはそのエピトープ結合フラグメント。
２３．
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
２４．
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
２５．
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体
、またはそのエピトープ結合フラグメント。
２６．
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
２７．
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
２８．
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体
、またはそのエピトープ結合フラグメント。
２９．
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
３０．
（ａ）配列番号２０のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
３１．
（ａ）配列番号３５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体
、またはそのエピトープ結合フラグメント。
３２．
（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
３３．
（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
３４．
（ａ）配列番号３６のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体
、またはそのエピトープ結合フラグメント。
３５．
（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
３６．
（ａ）配列番号２２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
３７．
（ａ）配列番号３７のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体
、またはそのエピトープ結合フラグメント。
３８．
（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
３９．
（ａ）配列番号２３のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
４０．
（ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態４に記載のモノクローナル抗体、または
そのエピトープ結合フラグメント。
４１．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
４２．
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
４３．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つを含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ
結合フラグメント。
４４．
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
４５．
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
４６．
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体
、またはそのエピトープ結合フラグメント。
４７．
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
４８．
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
４９．
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体
、またはそのエピトープ結合フラグメント。
５０．
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
５１．
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
５２．
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体
、またはそのエピトープ結合フラグメント。
５３．
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
５４．
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
５５．
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体
、またはそのエピトープ結合フラグメント。
５６．
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
５７．
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
５８．
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；および
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体
、またはそのエピトープ結合フラグメント。
５９．
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
６０．
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
６１．
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
のうちの少なくとも１つをさらに含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２
のうちの少なくとも１つをさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体
、またはそのエピトープ結合フラグメント。
６２．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
６３．
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
６４．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ
結合フラグメント。
６５．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
６６．
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２６のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
６７．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号２９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ
結合フラグメント。
６８．
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
６９．
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２７のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、実施形態１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
７０
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；および
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３
を含み；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号３０のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
をさらに含む、実施形態１または４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ
結合フラグメント。
７１．モチーフが単一の残基によって隔てられたリン酸化セリン残基およびチロシン残基
を含む過リン酸化タウのアミノ酸モチーフに対して選択的である、実施形態１～５のいず
れか１つに記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
７２．アミノ酸モチーフが、配列：
－Ｙ－Ｘ－Ｓ（リン酸化）－Ｐ－
を有し、ここで、Ｙがチロシンであり、Ｘが天然アミノ酸であり、Ｐがプロリンであり、
Ｓ（リン酸化）が、リン酸化ヒドロキシル側鎖を有するセリンである、実施形態７１に記
載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメント。
７３．Ｆｃ領域を含む、先行する実施形態のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体ま
たはそのエピトープ結合フラグメント。
７４．薬剤の生体内半減期を増加させるための部分をさらに含む、先行する実施形態のい
ずれか１つに記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメント。
７５．ｉ）抗体は、非リン酸化タウに実質的に結合しない；ｉｉ）抗体は、３９６がリン
酸化されないとき、４０４においてリン酸化されるタウに実質的に結合しない；ｉｉｉ）
抗体は、３９６においてリン酸化されるタウに結合する；およびｉｖ）抗体は、３９６お
よび４０４が両方ともリン酸化されるとき、タウに結合するという試験基準にしたがって
、リン酸化残基３９６を含むヒトタウに特異的に結合する、先行する実施形態のいずれか
１つに記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメント。
７６．２Ｎ４Ｒタウの残基３８６～４０８をカバーするＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ｛ｐ｝ＳＰ
ＶＶＳＧＤＴ｛ｐ｝ＳＰＲＨＬ（配列番号２）内の少なくとも１８連続アミノ酸残基、例
えば少なくとも２０連続アミノ酸残基を含む二リン酸化ペプチドに対して誘導される、先
行する実施形態のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フ
ラグメント。
７７．２Ｎ４Ｒタウの残基３８６～４１０をカバーするＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ｛ｐ｝ＳＰ
ＶＶＳＧＤＴ｛ｐ｝ＳＰＲＨＬ（配列番号２）を含む１８～４０、例えば１８～３０、例
えば２０～３０連続アミノ酸残基を含む二リン酸化ペプチドに対して誘導される、実施形
態７６に記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメント。
７８．月齢をマッチさせた健常対照よりＡＤ罹患患者に由来するリン酸化タウ（ｐタウ）
に対する特異性を有するモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメントであ
って、前記モノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、リン酸化－お
よび多量体特異的Ｓｅｔｕｐ １ ＥＬＩＳＡを用いて、ＡＤおよび健常対照被験体に由
来する脳ホモジネート中のリン酸化タウ（ｐタウ）を検出するためのＥＬＩＳＡベースの
アッセイにおいて健常対照材料と比較したＡＤ疾患材料に対する特異性の５０倍超、例え
ば１００倍超の増加の、月齢をマッチさせた健常対照に由来するタウよりＡＤ罹患患者に
由来するリン酸化タウ（ｐタウ）に対する特異性の差を有するようになっている、実施形
態１～７０のいずれかに記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメン
ト。
７９．ＡＤ罹患タウに対する特異性を有するモノクローナル抗体またはそのエピトープ結
合フラグメントであって、前記モノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメン
トが、リン酸化－および多量体特異的Ｓｅｔｕｐ １ ＥＬＩＳＡを用いて、ＡＤおよび
健常対照被験体に由来する脳ホモジネート中のリン酸化タウ（ｐタウ）を検出するための
ＥＬＩＳＡベースのアッセイにおいて健常対照材料と比較したＡＤ疾患材料に対する特異
性の５０倍超、例えば１００倍超の増加の、月齢をマッチさせた健常対照よりＡＤに対す
る特異性の差を有するようになっている、実施形態７８に記載のモノクローナル抗体また
はそのエピトープ結合フラグメント。
８０．ヒトタウのリン酸化残基３９６に特異的に結合することが可能な、２Ｎ４Ｒタウ、
またはそのエピトープ結合フラグメントの残基３８６～４１０をカバーする二リン酸化ペ
プチド：ＴＤＨＧＡＥＩＶＹＫ｛ｐ｝ＳＰＶＶＳＧＤＴ｛ｐ｝ＳＰＲＨＬ（配列番号２）
に対して誘導される、実施形態１～７０のいずれかに記載のモノクローナル抗体またはそ
のエピトープ結合フラグメント。
８１．ヒト細胞株、非ヒト哺乳動物細胞株、昆虫、酵母または細菌細胞株などの細胞株に
おいて、または組み換え技術によって生産または製造された、実施形態１～７０のいずれ
かに記載の抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
８２．ＣＨＯ細胞株、ＨＥＫ細胞株、ＢＨＫ－２１細胞株、マウス細胞株（骨髄腫細胞株
など）、線維肉腫細胞株、ＰＥＲ．Ｃ６細胞株、ＨＫＢ－１１細胞株、ＣＡＰ細胞株およ
びＨｕＨ－７ヒト細胞株において生産される、実施形態８１に記載の抗体、またはそのエ
ピトープ結合フラグメント。
８３．前記モノクローナル抗体が、ｉ）リン酸化エピトープＳ３９６に対して特異的であ
り、かつｉｉ）ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウを特異的に認識する
クローンを単離するために、ヒト病理学的および非病理学的タウでハイブリドーマをスク
リーニングすることによって単離されたハイブリドーマによって発現され、前記抗体また
はそのエピトープ結合フラグメントが、病理学的および非病理学的ヒトタウタンパク質を
区別することができる、実施形態１～７０のいずれかに記載のモノクローナル抗体または
そのエピトープ結合フラグメント。
８４．抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、検出可能な部分をさらに含む、実
施形態１～７０のいずれかに記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグ
メント。
８５．検出可能な部分が、蛍光標識、化学発光標識、常磁性標識、放射性同位体標識また
は酵素標識である、実施形態８４に記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合
フラグメント。
８６．実施形態１～７０のいずれかに記載の抗体またはそのエピトープ結合フラグメント
を含む調製物であって、前記調製物が、タウに結合することが可能でないかまたは調製物
の抗タウ機能性を実質的に変更しない自然発生する抗体を実質的に含まず、前記機能性が
、
（ｉ）非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉ）Ｓ４０４においてリン酸化され、Ｓ３９６においてリン酸化されないタウに結
合することが実質的にできないこと；
（ｉｉｉ）Ｓ３９６においてリン酸化されるタウに結合する能力；
（ｉｖ）Ｓ３９６およびＳ４０４の両方においてリン酸化されるタウを結合する能力；
（ｖ）それがリン酸化４０４残基に結合することが実質的にできないようにまたはそれ
がＳ３９６に優先的に結合するように、リン酸化タウ残基Ｓ３９６およびＳ４０４を選択
的に区別する能力；
（ｖｉ）ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力；
（ｖｉｉ）病理学的および非病理学的ヒトタウタンパク質を区別する能力；および／ま
たは
（ｖｉｉｉ）実施例に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫枯
渇されたｒＴｇ４５１０抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ６４ｋＤａおよ
び７０ｋＤａバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、５５ｋＤａタウバ
ンドを１０％超減少させない能力
からなる群から選択される調製物。
８７．実施形態１～７０に記載の抗体またはそのエピトープ結合フラグメントを含む調製
物であって、前記抗体または前記そのエピトープ結合フラグメントが、天然抗タウ抗体の
構造と比べて、そのアミノ酸配列の構造変化を有し、前記構造変化により、前記抗体また
は前記フラグメントが、前記天然抗タウ抗体によって示される機能性と比べて変化した機
能性を示し、前記機能性が、
（ｉ）非リン酸化タウに結合することが実質的にできないこと；
（ｉｉ）Ｓ４０４においてリン酸化され、Ｓ３９６においてリン酸化されないタウに結
合することが実質的にできないこと；
（ｉｉｉ）Ｓ３９６においてリン酸化されるタウに結合する能力；
（ｉｖ）Ｓ３９６およびＳ４０４の両方においてリン酸化されるタウに結合する能力；
（ｖ）それがリン酸化４０４残基に結合することが実質的にできないようにまたはそれ
がＳ３９６に優先的に結合するように、リン酸化タウ残基Ｓ３９６およびＳ４０４を選択
的に区別する能力；
（ｖｉ）ヒトアルツハイマー病の脳に由来する過リン酸化タウに結合する能力；
（ｖｉｉ）病理学的および非病理学的ヒトタウタンパク質を区別する能力；および／ま
たは
（ｖｉｉｉ）本明細書に記載されるように、トランスジェニックマウスに由来する免疫
枯渇されたｒＴｇ４５１０抽出物とともに使用されるとき、過リン酸化タウ６４ｋＤａお
よび７０ｋＤａバンドを少なくとも９０％だけ特異的に減少させる一方、５５ｋＤａタウ
バンドを１０％超減少させない能力
からなる群から選択される調製物。
８８．実施形態１～７０のいずれかに記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結
合フラグメント、または実施形態８６～８７のいずれかに記載の調製物、および薬学的に
許容できる担体を含む医薬組成物。
８９．実施形態１～７０のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体またはそのエピトー
プ結合フラグメントをコードするか、またはその構成鎖をコードする核酸。
９０．治療に使用するための、実施形態１～７０のいずれか１つに記載のモノクローナル
抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、または実施形態８６～８７のいずれか１
つに記載の調製物、または実施形態８８に記載の医薬組成物。
９１．タウオパチーを治療、診断またはイメージングするのに使用するための、実施形態
１～７０のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグ
メント、または実施形態８６～８７のいずれか１つに記載の調製物、または実施形態８８
に記載の医薬組成物。
９２．アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、精神病、特に、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、ＡＤに起因するアパシーまたはＡＤの患者におけるアパシー、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤまたはその変異型）、ＴＢＩ（急性または慢性外傷性脳損傷）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、ピック病、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、神経原線維変化優位型老年性認知症、拳闘家認知症、慢性外傷性脳症、脳卒中、脳卒中の回復、パーキンソン病に関連する神経変性、染色体に関連するパーキンソニズム、リティコ－ボディグ病（Ｌｙｔｉｃｏ－Ｂｏｄｉｇ ｄｉｓｅａｓｅ）（グアムパーキンソン認知症複合）、神経節膠腫および神経節細胞腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎、ハンチントン病、鉛脳症、結節性硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病およびリポフスチン沈着症からなる群から選択されるタウオパチーを治療するのに使用するための、実施形態１～７０のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、または実施形態８６～８７のいずれか１つに記載の調製物、または実施形態８８に記載の医薬組成物。
９３．アルツハイマー病の治療に使用するための、実施形態１～７０のいずれか１つに記
載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
９４．タウオパチーを治療、診断またはイメージングするための薬剤の製造に使用するた
めの、実施形態１～７０のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、またはそのエピト
ープ結合フラグメント、または実施形態８６～８７のいずれか１つに記載の調製物、また
は実施形態８８に記載の医薬組成物。
９５．アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、精神病、特に、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、ＡＤに起因するアパシーまたはＡＤの患者におけるアパシー、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤまたはその変異型）、ＴＢＩ（急性または慢性外傷性脳損傷）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、ピック病、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、神経原線維変化優位型老年性認知症、拳闘家認知症、慢性外傷性脳症、脳卒中、脳卒中の回復、パーキンソン病に関連する神経変性、染色体に関連するパーキンソニズム、リティコ－ボディグ病（グアムパーキンソン認知症複合）、神経節膠腫および神経節細胞腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎、ハンチントン病、鉛脳症、結節性硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病およびリポフスチン沈着症からなる群から選択される疾患を治療するための薬剤として使用するための、実施形態１～７０のいずれか１つに記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、または実施形態８６～８７のいずれか１つに記載の調製物、または実施形態８８に記載の医薬組成物。
９６．被験体におけるアルツハイマー病または他のタウオパチーを治療、診断またはイメ
ージングする方法であって、治療的に有効な量の実施形態１～７０のいずれか１つに記載
のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、実施形態８６～８７の
いずれか１つに記載の調製物、または実施形態８８に記載の医薬組成物を、前記被験体に
投与する工程を含む方法。
９７．治療が、長期である、実施形態９６に記載の方法。
９８．前記長期治療が、少なくとも２週間、例えば少なくとも１ヶ月間、少なくとも６ヶ
月間、または少なくとも１年間にわたる、実施形態９７に記載の方法。
９９．被験体がヒトである、実施形態９６～９８のいずれか１つに記載の方法。
１００．治療に使用するための、実施形態１～７０のいずれか１つに記載の抗体、または
そのフラグメント、実施形態８６～８７のいずれか１つに記載の調製物、または実施形態
８８に記載の医薬組成物を含むキット。
１０１．被験体の脳における前記タウの存在または量を検出または測定するのに使用する
ための、実施形態１～７０に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラ
グメント、または前記抗体またはフラグメントを含む調製物または医薬組成物。
１０２．前記検出または測定が、前記タウに結合された前記抗タウ抗体のインビボイメー
ジングを含む、実施形態８８に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フ
ラグメント、調製物または医薬組成物。
１０３．前記検出または測定が、前記タウに結合された、前記抗タウ抗体または前記その
フラグメントのエクスビボイメージングを含む、実施形態９９～１００に記載のモノクロ
ーナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント、調製物または医薬組成物。
１０４．過リン酸化タウを含むもつれから少なくとも９０％の過リン酸化タウを除去する
方法であって、過リン酸化タウを、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラ
グメントと接触させる工程を含み、前記抗体またはそのエピトープ結合フラグメントが、
リン酸化残基３９６を有するタウに対して選択的であり、実施形態１～７０のいずれか１
つに記載されるとおりである方法。
１０５．患者におけるアルツハイマー病の進行を遅らせる方法であって、モノクローナル
抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを投与することによって、前記患者におけ
る病理学的タウタンパク質の蓄積を減少させるかまたは軽減する工程を含み、前記抗体ま
たはそのエピトープ結合フラグメントが、リン酸化残基３９６を有するタウに対して選択
的であり、実施形態１～７０のいずれか１つに記載されるとおりである方法。
１０６．ｉ）実施形態１～７０、特に、実施形態１７、１８、４４または４５に記載のタ
ウ抗体およびｉｉ）以下のものからなる群から選択される化合物
ａ）ＢＡＣＥ阻害剤；
ｂ）能動または受動タウ免疫療法に有用な化合物；
ｃ）能動または受動Ａβペプチド免疫療法に有用な化合物；
ｄ）ＮＭＤＡ受容体拮抗薬；
ｅ）さらなるタウタンパク質凝集阻害剤；
ｅ）アセチルコリンエステラーゼ阻害剤；
ｆ）抗てんかん薬；
ｇ）抗炎症薬；および
ｈ）ＳＳＲＩ；および
ｉｉｉ）１つまたは複数の薬学的に許容できる賦形剤
を含む医薬組成物。
１０７．アルツハイマー病の治療、ＡＤの進行の軽減またはＡＤの症状の軽減の方法であ
って、ｉ）実施形態１～７０、特に、実施形態１７、１８、４４または４５に記載のタウ
抗体およびｉｉ）以下のものからなる群から選択される化合物
ａ）ＢＡＣＥ阻害剤；
ｂ）能動または受動タウ免疫療法に有用な化合物；
ｃ）能動または受動Ａβペプチド免疫療法に有用な化合物；
ｄ）ＮＭＤＡ受容体拮抗薬；
ｅ）さらなるタウタンパク質凝集阻害剤；
ｅ）アセチルコリンエステラーゼ阻害剤；
ｆ）抗てんかん薬；
ｇ）抗炎症薬；および
ｈ）ＳＳＲＩ
の投与を含む治療を含む方法。
１０８．ｉ）実施形態１～７０、特に、実施形態１７、１８、４４または４５に記載のタ
ウ抗体を含む組成物およびｉｉ）以下のものからなる群から選択される化合物を含む組成
物
ａ）ＢＡＣＥ阻害剤；
ｂ）能動または受動タウ免疫療法に有用な化合物；
ｃ）能動または受動Ａβペプチド免疫療法に有用な化合物；
ｄ）ＮＭＤＡ受容体拮抗薬；
ｅ）さらなるタウタンパク質凝集阻害剤；
ｆ）アセチルコリンエステラーゼ阻害剤；
ｇ）抗てんかん薬；
ｈ）抗炎症薬；および
ｉ）抗うつ剤
を含むキット。
１０９．前記ＢＡＣＥ１阻害剤が、ＬＹ２８８６７２１、ＭＫ－８９３１、ＡＺＤ３２９
３、またはＥ２６０９からなる群から選択される小分子ＢＡＣＥＩ阻害剤である、請求項
１０６に記載の組成物、請求項１０７に記載の方法、請求項１０８に記載のキット。
１１０．前記ＢＡＣＥ１阻害剤が、式Ｉ
Figure 2022023096000020
（式中、Ａｒが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾ
リル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリルからなる群から選択され、ここで、
Ａｒが、ハロゲン、ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アル
キニル、Ｃ１～Ｃ６フルオロアルキルまたはＣ１～Ｃ６アルコキシから選択される１つま
たは複数の置換基で任意選択的に置換され；Ｒ１が、１つまたは複数の水素、ハロゲン、
Ｃ１～Ｃ３フルオロアルキルまたはＣ１～Ｃ３アルキルであり；Ｒ２が、水素またはフル
オロを表す）のものである、請求項１０６に記載の組成物、請求項１０７に記載の方法、
請求項１０８に記載のキット。
１１１．式Ｉの化合物が、以下のものからなる群から選択される、請求項１１０に記載の
組成物、方法またはキット。
Figure 2022023096000021
（３Ｓ，６Ｓ）－６－（５－アミノ－２－フルオロフェニル）－３－フルオロ－３－（フ
ルオロメチル）－６－メチルピペリジン－２－チオン
Figure 2022023096000022
（３Ｒ，６Ｓ）－６－（５－アミノ－２－フルオロフェニル）－３－フルオロ－３－（フ
ルオロメチル）－６－メチルピペリジン－２－チオン
Figure 2022023096000023
（３Ｓ，６Ｓ）－６－（５－アミノ－２，３－ジフルオロフェニル）－３－フルオロ－３
－（フルオロメチル）－６－メチルピペリジン－２－チオン
Figure 2022023096000024
（３Ｒ，６Ｓ）－６－（５－アミノ－２，３－ジフルオロフェニル）－３－フルオロ－３
－（フルオロメチル）－６－メチルピペリジン－２－チオン
Figure 2022023096000025
（６Ｓ）－６－（５－アミノ－２－フルオロフェニル）－３－フルオロ－３，６－ビス（
フルオロメチル）ピペリジン－２－チオン
１１２．前記ＢＡＣＥ１阻害剤が、式ＩＩ
Figure 2022023096000026
（式中、Ａｒが、フェニル、ピリジル、ピリミジル、ピラジニル、イミダゾリル、ピラゾ
リル、１，２，４－トリアゾリル、チオフェニル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキ
サゾリル、１，３，４－チアジアゾリル、イソチアゾリル、１，３，４－オキサジアゾリ
ル、１，２，４－オキサジアゾリル、フラザニルおよび１，２，４－チアジアゾリルから
なる群から選択され、ここで、Ａｒが、１つまたは複数のハロゲン、ＣＮ、Ｃ１～Ｃ６ア
ルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ１～Ｃ６フルオロアルキルま
たはＣ１～Ｃ６アルコキシで任意選択的に置換され；Ｒ１が、Ｃ１～Ｃ３アルキルまたは
Ｃ１～Ｃ３フルオロアルキルであり；Ｒ２が、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ３フルオロアル
キルまたはＣ１～Ｃ３アルキルであり；Ｒ３がＣ１～Ｃ３アルキルである）のものである
、請求項１０６に記載の組成物、請求項１０７に記載の方法、請求項１０８に記載のキッ
ト。
１１３．前記ＢＡＣＥ１阻害剤が、Ｎ－（３－（（２Ｒ，５Ｓ）－６－アミノ－３，３，
５－トリフルオロ－２，５－ジメチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イ
ル）－４フルオロフェニル）－５－フルオロピコリンアミド；Ｎ－（３－（（２Ｒ，５Ｓ
）－６－アミノ－３，３，５－トリフルオロ－２，５－ジメチル－２，３，４，５－テト
ラヒドロピリジン－２－イル）－４フルオロフェニル）－５－メトキシピラジン－２－カ
ルボキサミド；Ｎ－（３－（（２Ｒ，５Ｓ）－６－アミノ－３，３，５－トリフルオロ－
２，５－ジメチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４－フルオロ
フェニル）－５－メトキシピコリンアミド；Ｎ－（３－（（２Ｒ，５Ｓ）－６－アミノ－
３，３，５－トリフルオロ－２，５－ジメチル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン
－２－イル）－４フルオロフェニル）－５－シアノ－３－メチルピコリンアミド；および
Ｎ－（３－（（２Ｒ，５Ｒ）－６－アミノ－３，３，５－トリフルオロ－２，５－ジメチ
ル－２，３，４，５－テトラヒドロピリジン－２－イル）－４フルオロフェニル）－５－
（ジフルオロメチル）ピラジン－２－カルボキサミドからなる群から選択される、請求項
１０６に記載の組成物、請求項１０７に記載の方法、請求項１０８に記載のキット。
１１４．前記ＮＭＤＡ受容体拮抗薬が、メマンチン、ナメンダ、ナムザリック（メマンチ
ン／ドネペジル）、およびそのジェネリック形態からなる群から選択される、請求項１０
６に記載の組成物、請求項１０７に記載の方法、請求項１０８に記載のキット。
１１５．前記アセチルコリンエステラーゼ阻害剤が、ドネペジル、ガランタミンおよびリ
バスチグミンからなる群から選択される、請求項１０６に記載の組成物、請求項１０７に
記載の方法、請求項１０８に記載のキット。
１１６．前記抗うつ剤が、エスシタロプラム、セルトラリン、シタロプラム、パロキセチ
ン、フルオキセチン、ベンラファクシン、トラゾドン、ミルタザピン、ボルチオキセチン
およびそのジェネリック形態からなる群から選択される、請求項１０６に記載の組成物、
請求項１０７に記載の方法、請求項１０８に記載のキット。
１１７．アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、精神病、特に、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤまたはその変異型）、ＴＢＩ（急性または慢性外傷性脳損傷）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、ピック病、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、神経原線維変化優位型老年性認知症、拳闘家認知症、慢性外傷性脳症、脳卒中、脳卒中の回復、パーキンソン病に関連する神経変性、染色体に関連するパーキンソニズム、リティコ－ボディグ病（グアムパーキンソン認知症複合）、神経節膠腫および神経節細胞腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎、ハンチントン病、鉛脳症、結節性硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病およびリポフスチン沈着症からなる群から選択されるタウオパチーを治療するのに使用するための、請求項１０６に記載の組成物、請求項１０７に記載の方法、請求項１０８に記載のキット。
１１８．タウオパチーを治療、診断またはイメージングするための薬剤の製造に使用する
ための、請求項１０６に記載の組成物、請求項１０７に記載の方法、請求項１０８に記載
のキット。
１１９．アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、およびレビー小体型認知症の患者の精神医学的症状を治療するための、請求項１０６に記載の組成物、請求項１０７に記載の方法、請求項１０８に記載のキット。
実施例１：タウリン酸化ペプチド３９６／４０４によるマウスの免疫化
Ｃ５６／ＢＬ６およびＦＶＢマウスを、ＴｉｔｅｒＭａｘ補助剤中で製剤化された１０
μｇのＰ３０コンジュゲートリン酸化タウペプチド３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４
０４）（配列番号２）で免疫した。
マウス（Ｃ５６／ＢＬ６およびＦＶＢ株、雌および雄、２～３月齢のマウス）を、ペプ
チドエピトープＰ３０コンジュゲートリン酸化タウ３８６～４０８で免疫した。
免疫原性Ｐ３０コンジュゲートリン酸化タウ３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４
）ペプチドを、ＴｉｔｅｒＭａｘ／供給業者のプロトコルにしたがって、ＴｉｔｅｒＭａ
ｘ（１：１ｖｏｌ：ｖｏｌで混合される４００μｇ／ｍｌのペプチド）中で製剤化し、マ
ウスに、２０μｇのペプチド（１００μｌ）の抗原を皮下注入した。対照マウスに、補助
剤のみを注入した。全てのペプチド免疫化マウスを、１ヶ月間隔で、０．５μｇのペプチ
ド／Ｔｉｔｅｒｍａｘ（上述されるように製剤化され、注入される１０μｇ／ｍｌのペプ
チド）で追加免疫した。最後に、マウスを、脾細胞の採取とそれに続く脾細胞とＳＰ－２
細胞との融合の３日前にＴｉｔｅｒｍａｘなしのＰ３０コンジュゲートリン酸化タウ３８
６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）で追加免疫した。リン酸化タウ３８６～４０８（
ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）への陽性結合を示し、ＡＤおよびＴＧ４５１０脳溶解物（実施
例２Ｂにおいて後述される）に由来するＳ１およびＰ３抗原に対する優先的結合活性を示
した後、最初に生成されたハイブリドーマを、再クローニングサイクルのために選択した
。ドットブロットおよび脳溶解物で被覆されたＥＬＩＳＡまたはＭＳＤプレートを用いて
、このような結合を、対照に由来する脳溶解物へのこのような抗体の結合活性と比較した
。
実施例２Ａ：ハイブリドーマ生成
マウスを、対応するマウスの脾細からの採取およびそれに続く脾細胞とＳＰ－２細胞と
の融合の３日前にＴｉｔｅｒｍａｘなしのＰ３０コンジュゲートリン酸化タウ３８６～４
０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）で追加免疫した。ＥＬＩＳＡに検出されたリン酸化タウ
３８６～４０８（ｐＳ３９６／ｐＳ４０４）への陽性結合、およびドットブロットおよび
脳溶解物で被覆されたＥＬＩＳＡまたはＭＳＤプレートを用いて、対照に由来する脳溶解
物と比較した、ＡＤおよびＴＧ４５１０脳溶解物に由来するＳ１およびＰ３抗原に対する
優先的結合活性の後、ハイブリドーマを、再クローニングサイクルのために選択した。
実施例２Ｂ 特定の抗体のウエスタンブロットおよびドットブロット分析
タウ生化学的分画
ヒトタウ突然変異Ｐ３０１Ｌを過剰発現するヒトまたはｒＴｇ４５１０マウスに由来す
る脳組織を、プロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含有する１０体積のトリス－緩
衝生理食塩水中で以下のように均質化した：５０ｍＭのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ７．４）；
２７４ｍＭのＮａＣｌ；５ｍＭのＫＣｌ；１％のプロテアーゼ阻害剤混合物（Ｒｏｃｈｅ
）；１％のホスファターゼ阻害剤混液ＩおよびＩＩ（Ｓｉｇｍａ）；および１ｍＭのフッ
化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ；Ｓｉｇｍａ）。ホモジネートを、４℃で２０分
間にわたって２７，０００×ｇで遠心分離して、上清（Ｓ１）およびペレット画分を得た
。ペレットを、５体積の高塩／スクロース緩衝液（０．８ＭのＮａＣｌ、１０％のスクロ
ース、１０ｍＭのトリス／ＨＣｌ、［ｐＨ７．４］、１ｍＭのＥＧＴＡ、１ｍＭのＰＭＳ
Ｆ）中で再度均質化し、上記のように遠心分離した。上清を収集し、３７℃で１時間にわ
たってサルコシル（１％の最終濃度；Ｓｉｇｍａ）とともにインキュベートした後、４℃
で１時間にわたって１５０，０００×ｇで遠心分離して、Ｐ３画分と呼ばれるサルコシル
不溶性ペレットを得た。Ｐ３ペレットを、脳ホモジネートに使用された元の体積の半分に
等しい体積になるまで、ＴＥ緩衝液（１０ｍＭのトリス／ＨＣｌ［ｐＨ８．０］、１ｍＭ
のＥＤＴＡ）中で再懸濁させた。
ウエスタンおよびドットブロット
分画された組織抽出物Ｓ１およびＰ３を、０．１ＭのＤＴＴを含有するＳＤＳ－試料緩
衝液に溶解させた。熱処理された試料（９５℃で１０分間）を、４～１２％のビス－トリ
スＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）におけるゲル電気泳動によって分離し
、ＰＶＤＦ膜（ＢｉｏＲａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）上
に移した。ドットブロット試料を、試料にわたって公知の濃度で、ニトロセルロース膜（
Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ）上に直接滴下した。ウエスタンおよび
ドットブロット膜の両方を、ＴＢＳ－Ｔｗｅｅｎ（０．５％）ｐＨ７．４中の５％の脱脂
粉乳中でブロックした後、１μｇ／ｍｌのＣ１０－２中で、４℃で一晩インキュベートし
た。膜を洗浄し、ペルオキシダーゼコンジュゲート抗マウスＩｇＧ（１：５０００；Ｊａ
ｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）とともにイ
ンキュベートした。結合抗体を、強化化学発光システム（ＥＣＬ ＰＬＵＳ ｋｉｔ；Ｐ
ｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いて検出した。定量化およびウエスタンおよびドットブロッ
ト免疫反応性の視覚分析を、コンピュータに接続されたＬＡＳ－４０００ ＢｉｏＩｍａ
ｇｉｎｇ Ａｎａｌｙｚｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｆｕｊｉｆｉｌｍ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａ
ｎ）およびＭｕｌｔｉ Ｇａｕｇｅ ｖ３．１ソフトウェア（Ｆｕｊｉｆｉｌｍ）を用い
て行った。タンパク質充填量を、元の画分の体積によって調整し、これは元の組織の湿重
量に換算され得る。
実施例３．ＡＤ－Ｐ３捕捉についての流体相阻害アッセイ
実施例３Ａの目的：マウスＣ１０．２に対するＡＤ－Ｐ３脳物質中のｐＳ３９６タウ抗
原に結合するヒトＣ１０－２および突然変異変異体の阻害を定量化するため。対象とする
Ｃ１０．２変異体とともにプレインキュベートされたＡＤ－Ｐ３またはＡＤ－Ｐ３とイン
キュベートする前に、ＭＳＤプレートをマウスＣ１０－２で被覆した。阻害の程度が、抗
原に結合する流体相抗体の見かけの親和性を反映するＩＣ５０値として示される。Ｇｒａ
ｐｈ Ｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて１または２部位結合モデルに適合させる
ことによって、ＩＣ５０値を得た。Ｐ（４０４）タウと反応性の陰性対照抗体（マウスＣ
１０－１）を、比較のために加えた（データは示されない）。
方法：ＭＳＤプレートを、室温で一晩、捕捉抗体（炭酸緩衝液ｐＨ８．５中の７５０ｎ
ｇ／ｍｌのマウスＣ１０－２）で被覆した後、ブロッキングし（ＰＢＳ、３％のＢＳＡ、
０．１％のＮＰ４０中で３０分間）、５回洗浄した（ＰＢＳ、０．１％のＢＳＡ、０．１
％のＮＰ４０）。段階的濃度（０～１０００ｎＭ）の抗体を、室温でＡＤ－Ｐ３材料とと
もに６０分間インキュベートし、続いて、上述されるようにマウスＣ１０－２で被覆され
たＭＳＤプレートにおいて、室温で１時間インキュベートした。プレートを、（ＰＢＳ、
０．１％のＢＳＡ、０～．１％のＮＰ４０）中で５回洗浄し、抗ヒト総タウ（ＭＳＤスル
ホタグ化１：５０）を、阻害されていない遊離タウ抗原を反映する捕捉されたタウを検出
するために加えた。
結果：データは、ヒトＣ１０－２および変異体を用いたタウ捕捉の用量依存的阻害を示
した（図１）。変異体Ｃ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ：Ａ１０１Ｔは
、より強く阻害するが（１部位結合モデルに適合された、それぞれＩＣ５０＝４４および
１４ｎＭ）、Ｃ１０－２は、２部位結合モデルへの最良適合によって反映される不均一な
阻害を示した（ＩＣ５０ １４ｎＭ／６３０ｎＭ）。高親和性抗体結合（ＩＣ５０＝１４
ｎＭ）が全結合の２５％未満を占めていたため、低親和性結合（ＩＣ５０＝６３０）が優
勢であった。結果が、図１に示される。
実施例３Ｂの目的：流体相阻害アッセイにおいてｐＳ３９６タウ３８６～４０８ペプチ
ドに結合するヒトＣ１０－２および突然変異変異体の阻害を定量化するため。阻害の程度
が、抗体結合の見かけの親和性を反映するＩＣ５０値として示される。Ｇｒａｐｈ Ｐａ
ｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いて、１または２部位結合モデルに適合させることによ
って、ＩＣ５０値を得た。Ｐ（４０４）タウと反応性の陰性対照抗体（マウスＣ１０－１
）を、比較のために加えた（データは示されない）。
方法：ＭＳＤプレートを、室温で一晩、炭酸緩衝液ｐＨ９．５中のｐＳ３９６タウ３８
６～４０８ペプチドで被覆した後、ブロッキングし（ＰＢＳ、３％のＢＳＡ、０．１％の
ＮＰ４０中で３０分間）、５回洗浄した（ＰＢＳ、０．１％のＢＳＡ、０．１％のＮＰ４
０）。段階的濃度（０～１０００ｎＭ）のｐＳ３９６タウ３８６～４０８を、室温で１ｎ
ｇ／ｍｌの抗体とともに６０分間インキュベートし、続いて、上述されるようにｐＳ３９
６タウ３８６～４０８で被覆されたＭＳＤプレートにおいて室温で１時間インキュベート
した。プレートを、（ＰＢＳ、０．１％のＢＳＡ、０．１％のＮＰ４０）中で５回洗浄し
、抗ヒト総タウ（ＭＳＤスルホタグ化１：５０）を、阻害されていない遊離抗体を反映す
る結合抗体を検出するために加えた。結果が、図２に示される。
実施例４．抗体の免疫組織化学的プロファイリング
組織
マウス：マウス脳組織を、８月齢のｒＴｇ４５１０マウスから採取した。これらのトラ
ンスジェニックマウスは、ＣａｍＫ２陽性ニューロン中、ｔｅｔ－ｏｆｆ応答因子下でヒ
ト変異タウ（Ｐ３０１Ｌ ０Ｎ４Ｒ）を発現し、６月齢以降に顕著なタウ過リン酸化およ
びもつれ形成を示す。非トランスジェニック同腹仔を対照として用いた。マウス脳を、４
％のパラホルムアルデヒドへの浸漬によって固定し、パラフィンに包埋した。ヒト：ホル
マリンで固定され、パラフィンで包埋された、前頭葉のヒト脳試料を、Ｔｉｓｓｕｅ Ｓ
ｏｌｕｔｉｏｎｓ（Ｇｌａｓｇｏｗ，ＵＫ）から取得した。末期と診断されたアルツハイ
マー病（ＡＤ；Ｂｒａａｋ段階Ｖ～ＶＩ）の３つのドナーに由来する組織を、月齢をマッ
チさせた、認知症でない対照ドナーと比較した。
免疫組織化学：
マウスおよびヒト組織の４μｍ厚の切片を、ミクロトームで切断し、脱パラフィン化し
、１０分間にわたって、１０ｍＭのクエン酸緩衝液、ｐＨ６中で切片をマイクロ波処理す
ることによって、抗原賦活化を行った。内因性ペルオキシダーゼを、１％の過酸化水素、
続いて、ＰＢＳ、１％のＢＳＡ、０．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（ＰＢＳ－ＢＴ）
中の５％の正常なブタ血清によりブロッキングした。切片を、図１に示される濃度の範囲
で、ＰＢＳ－ＢＴ中で希釈されたｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０
－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体とともに、４℃で一晩インキュベートした。切片を、Ｐ
ＢＳ、０．２５％のＢＳＡ、０．１％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００中で洗浄してから、１
時間にわたって１：２００でビオチン化二次ブタ抗ヒト抗体（＃Ｂ１１４０；Ｓｉｇｍａ
－Ａｌｄｒｉｃｈ）とともにインキュベートした。さらなる洗浄後、ストレプトアビジン
－ビオチン複合体キット（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａ
ｍｅ，ＣＡ）を適用し、最後に、免疫活性を、０．０５％のジアミノベンジジンで視覚化
した。切片を、核の位置を示すためにヘマトキシリンで対比染色した。
結果
ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔは
、３つのＡＤ脳内の病理学的タウ（すなわち、もつれ、神経絨毛糸、ジストロフィー性神
経突起）と一致する構造を標識した。免疫活性の強度は、濃度依存性であった。例えばグ
リア細胞または血管の明らかな標識は検出されなかった。対照脳に由来する切片で免疫活
性は検出されなかった。同様に、全ての３つの抗体は、ｒＴｇ４５１０脳の海馬および皮
質の両方においてリン酸化タウについて予測されるパターンを生じた。非トランスジェニ
ックマウスに由来する脳切片では、免疫活性は検出されなかった。
実施例５．静脈内（ｉ．ｖ．）注射後のｒＴｇ４５１０マウスにおけるタウ構造の装飾
方法
１０月齢のｒＴｇ４５１０マウス。これらのトランスジェニックマウスは、ＣａｍＫ２
陽性ニューロン中、ｔｅｔ－ｏｆｆ応答因子下でヒト変異タウ（Ｐ３０１Ｌ ０Ｎ４Ｒ）
を発現し、６月齢以降に顕著なタウ過リン酸化およびもつれ形成を示す。さらに、神経変
性が、強い病変を有する領域において、ｒＴｇ４５１０マウスの１０月齢の時点で存在す
る。単一トランスジェニックｔＴＡ同腹仔を対照として用いた。マウスに、８０ｍｇ／ｋ
ｇの濃度で、ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳまたはｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ
１０１Ｔ抗体のいずれかを、尾静脈を介して単回注射した。マウス１匹につき１５０μＬ
の体積を注射した。注射の３日後、マウスに、ＰＢＳを２分間灌流させた後、４％のパラ
ホルムアルデヒドを１０分間灌流させた。脳を、３０％のスクロース中で凍結防止し、４
０ミクロンの自由に浮遊する低温切開片に切り分けた。切片を、２０分間にわたってＰＢ
Ｓ／１％のＢＳＡ／０．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００中の５％の正常なブタ血清とと
もにインキュベートし、ＰＢＳで洗浄し、最後に、１：２００でＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４
８８コンジュゲート二次抗ヒトＩｇＧ（＃７０９－５４５－１４９；Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉ
ｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＵＳ
Ａ）とともにインキュベートした。Ｈｏｅｃｈｓｔを核染色に使用した。切片を、ＰＢＳ
中で洗浄し、取り付け、蛍光顕微鏡によって調べた。
結果
ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔの
静脈内（ｉ．ｖ．）注射により、老化したｒＴｇ４５１０マウス脳の海馬および皮質にお
ける標的構造へのインビボ結合が生じた（図４～７）。観察される陽性構造の数は、個々
のｒＴｇ４５１０動物によって異なっていた。ｔＴＡ対照マウスでは、３つの抗体のいず
れの注射の後も、特定の蛍光シグナルは検出されなかった（図４～７）。陰性対照として
用いる、対照ヒトＩｇＧの注射は、ｒＴｇ４５１０マウスにおいてシグナルを生じなかっ
た（データは示されない）。ｒＴｇ４５１０脳における陽性シグナルは、細胞内染色とし
て容易に見えず、神経変性の過程で放出される細胞外のタウ物質を表し得る。まとめると
、これらのデータは、ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３
２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体が、脳実質中に浸透することができ、インビボでｒＴｇ４５１０マ
ウスにおける標的を特異的に装飾することを示唆している。
実施例６．アルツハイマー病の脳におけるタウ免疫活性の特性評価
組織：
パラフィンで包埋された、前頭葉のヒト脳試料を、Ｔｉｓｓｕｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ
（Ｇｌａｓｇｏｗ，ＵＫ）から取得した。末期と診断されたアルツハイマー病（ＡＤ；Ｂ
ｒａａｋ段階Ｖ～ＶＩ）のドナーに由来する組織が含まれていた。
免疫組織化学
ヒト組織の４μｍ厚の切片を、ミクロトームで切断し、脱パラフィン化し、１０分間に
わたって、１０ｍＭのクエン酸緩衝液、ｐＨ６中で切片をマイクロ波処理することによっ
て、抗原賦活化を行った。切片を、ＰＢＳ、１％のＢＳＡ、０．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ
－１００（ＰＢＳ－ＢＴ）中の５％の正常なブタ血清とともにインキュベートした後、Ｐ
ＢＳ－ＢＴで希釈されたｈＣ１０－２またはｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体と
ともに、４℃で一晩インキュベートした。切片を、ＰＢＳ、０．２５％のＢＳＡ、０．１
％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１００中で洗浄した。免疫活性を、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８
コンジュゲート二次抗ヒトＩｇＧ（１：２００；＃７０９－５４５－１４９，Ｊａｃｋｓ
ｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖ
ｅ，ＵＳＡ）によって視覚化した。蛍光免疫二重染色のための、切片を、ＡＴ８（１：５
００；＃ＭＮ１０２０，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ ＵＳＡ）またはＥ
１総ヒトタウ抗体とともに共インキュベートし、特注のウサギ抗体が、Ｎ末端タウ１９－
３３に対して産生された（Ｃｒｏｗｅ ｅｔ ａｌ，１９９１）。ＡＴ８およびＥ１の免
疫活性をそれぞれ、抗マウスＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５６８（１：４００；＃Ａ１００３７
，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）および抗ウサギＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ５６８（１：４００
；＃Ａ１００４２，ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で視覚化した。切片を、蛍光顕微鏡によ
って分析した。
結果
Ｎ末端総タウおよびｐＳ３９６タウについて二重染色されたＡＤ切片において、もつれ
を有するニューロンの集団を、Ｅ１ならびにｈＣ１０－２およびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ
＿Ａ１０１Ｔ抗体のいずれかによって標識した（図７）。多くのタウもつれが、ｈＣ１０
－２およびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体のいずれかのみによって標識された
（図７、矢印）。細胞外タウ（ゴーストもつれ）は、Ｎ末端タウ抗体によって染色されな
いことが以前に示されている（例えばＢｏｎｄａｒｅｆｆ ｅｔ ａｌ，１９９０；Ｂｒ
ａａｋ ｅｔ ａｌ，１９９４；Ｆｌｏｒｅｓ－Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓ ｅｔ ａｌ，２０
１５）。したがって、ｈＣ１０－２またはｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ抗体のみ
によって標識されるタウ種は、細胞外のゴーストもつれを表す可能性が高い。
ウエスタンブロットおよび免疫沈降
実験手順および実験の説明
トランスジェニックｒＴｇ４５１０マウスを使用した：Ｐ３０１Ｌ突然変異を有するヒ
トタウｃＤＮＡ（４Ｒ０ＮタウＰ３０１Ｌ）を、テトラサイクリン－オペロン－レスポン
ダー（ＴＲＥ）構築物の下流に配置した。導入遺伝子を活性化するために、レスポンダー
は、テトラサイクリン調整遺伝子発現系（ｔＴＡ）からなるアクチベータ構築物と共発現
される必要がある。ｔＴＡアクチベータ系を、ＣａＭＫＩＩαプロモータの下流に配置し
、それによって、主に前脳構造に対するＴＲＥの発現を制限した。タウ導入遺伝子レスポ
ンダーは、ＦＶＢ／Ｎ（Ｔａｃｏｎｉｃ）マウス系統で発現され、ｔＴＡアクチベータ系
は、１２９Ｓ６（Ｔａｃｏｎｉｃ）マウス系統において維持された。それらのＦ１子孫は
、非トランスジェニック（非ｔｇ）および単一トランスジェニック同腹仔マウスとともに
レスポンダーおよびアクチベータ導入遺伝子（ｒＴｇ４５１０）を有していた。Ｆ１マウ
スのみを実験に使用した。全てのマウスを、Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｄｅｎｍａｒｋ）で飼育し
、ｔＴＡアクチベータ導入遺伝子についてはプライマー対の５’－ＧＡＴＴＡＡＣＡＧＣ
ＧＣＡＴＴＡＧＡＧＣＴＧ－３’および５’－ＧＣＡＴＡＴＧＡＴＣＡＡＴＴＣＡＡＧＧ
ＣＣＧＡＴＡＡＧ－３’、ならびに突然変異体タウレスポンダー導入遺伝子については５
’－ＴＧＡＡＣＣＡＧＧＡＴＧＧＣＴＧＡＧＣＣ－３’および５’－ＴＴＧＴＣＡＴＣＧ
ＣＴＴＣＣＡＧＴＣＣＣＣＧ－３’を用いた尾部ＤＮＡの分析によって、遺伝子型を同定
した。マウスを集団で飼育し、水および食物（Ｂｒｏｇａａｒｄｅｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）
を自由に与えるとともに栄養強化物質を与えた。明／暗サイクルは１２時間であり；室温
は２１±２℃であり、５５％±５％の相対湿度であった。実験動物（登録番号２０１４－
１５－０２０１－００３３９）についてのデンマークの法律にしたがって実験を行った。
脳の代謝環境を保存するため、およびタウの生化学的プロファイルを変化させ得る人為
的な影響を防ぐために、頸椎脱臼によってマウスを安楽死させた。マウス脳を、正中線で
矢状方向に２等分して、２つの脳半球を得た。各動物の右脳半球の皮質および海馬を、ド
ライアイス上で迅速に凍結させ、使用するまで－８０℃で貯蔵した。アルツハイマー病（
ＡＤ）患者および老化した健常対照（ＨＣ）ドナーに由来する凍結されたヒト皮質を、Ｔ
ｉｓｓｕｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｇｌａｓｇｏｗ，ＵＫ）から購入した。ヒト脳試験片は
、６時間未満の同様の死後処理時間を有しており、それをアミロイドおよびタウ病変につ
いて特性評価し、選択されたＡＤ試験片をＢｒａａｋ段階Ｖ～ＶＩとして分類した。
脳溶解物からタウタンパク質を免疫沈降させるために、Ｃｒｏｓｓｌｉｎｋ免疫沈降キ
ット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｐｉｅｒｃｅ ２６１４７）を、製造業者の指示に
したがって使用した。簡潔に述べると、抗体を、プロテインＡ／Ｇプラスアガロースに結
合した後、結合抗体をＤＳＳ（スベリン酸ジスクシンイミジル）で架橋した。脳ホモジネ
ートを、トリス緩衝液（２５ｍＭのトリス／ＨＣｌ ｐＨ７．６、１５０ｍＭのＮａＣｌ
、１ｍＭのＥＤＴＡ、１ｍＭのＥＧＴＡ、および完全なプロテアーゼおよびホスファター
ゼ阻害剤混合物）中で調製し、対照アガロース樹脂とともに４℃で一晩プレクリアした。
プレクリアされた溶解物を、抗体－架橋樹脂とともに４℃で一晩インキュベートした後、
５０μｌの溶出緩衝液（ｐＨ２．８）で抗原溶出を行い、５ μｌの１Ｍのトリス、ｐＨ
９．５を含む収集チューブ中に直ぐに遠心分離した。免疫沈降したタウを、ジチオスレイ
トール（ＤＴＴ、１００ｍＭ）を含むＳＤＳ－試料緩衝液に溶解させ、熱処理し（９５℃
で１０分間）、後述されるようにウエスタンブロット法に供した。
ヒトタウ濃度を、製造業者の指示（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にしたがって総ヒトタウに
ついてＥＬＩＳＡによって、脳ホモジネートおよびプレクリアされた溶解物中で測定した
。
組織を、以下のようにプロテアーゼおよびホスファターゼ阻害剤を含有する１０体積の
トリス－緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）中で均質化した：５０ｍＭのトリス／ＨＣｌ（ｐＨ７
．４）；２７４ｍＭのＮａＣｌ；５ｍＭのＫＣｌ；１％のプロテアーゼ阻害剤混合物（Ｒ
ｏｃｈｅ）；１％のホスファターゼ阻害剤混合物ＩおよびＩＩ（Ｓｉｇｍａ）；および１
ｍＭのフェニルメチルスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）。ホモジネートを、４℃で２０
分間にわたって２７，０００×ｇで遠心分離して、上清（Ｓ１）およびペレット画分を得
た。ペレットを、５体積の高塩／スクロース緩衝液（０．８ＭのＮａＣｌ、１０％のスク
ロース、１０ｍＭのトリス／ＨＣｌ、［ｐＨ７．４］、１ｍＭのＥＧＴＡ、１ｍＭのＰＭ
ＳＦ）中で再度均質化し、上記のように遠心分離した。上清を収集し、３７℃で１時間に
わたってサルコシル（１％の最終濃度；Ｓｉｇｍａ）とともにインキュベートした後、４
℃で１時間にわたって１５０，０００×ｇで遠心分離して、塩およびサルコシル抽出性（
Ｓ３）およびサルコシル不溶性（Ｐ３）画分を得た。Ｐ３ペレットを、ＴＥ緩衝液（１０
ｍＭのトリス／ＨＣｌ［ｐＨ８．０］、１ｍＭのＥＤＴＡ）中で、脳ホモジネートに使用
される元の体積の半分に等しい体積になるまで再度懸濁させた。過リン酸化タウ種につい
てＳ１画分を富化するために、Ｓ１画分の一部を、２０分間にわたる１５０，０００×ｇ
でのさらなる遠心分離によって、上清（Ｓ１ｓ）および沈殿物（Ｓ１ｐ）画分に分けた。
Ｓ１ｐペレットを、ＴＢＳ緩衝液中で、使用される元のＳ１体積の５分の１に等しい体積
になるまで再度懸濁させた。分画組織抽出物Ｓ１、Ｓ１ｐおよびＰ３を、ＤＴＴを含有す
るＳＤＳ－試料緩衝液（１００ｍＭ）に溶解させた。熱処理された試料（９５℃で１０分
間）を、４～１２％のビス－トリスＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にお
けるゲル電気泳動によって分離し、ＰＶＤＦ膜（ＢｉｏＲａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅ
ｓ，Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）上に移した。ＴＢＳ中の５％の無脂肪乳および０．１％の
Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ１００を含有するブロッキング溶液でブロッキングした後、膜を、１μ
ｇ／ｍｌのｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１
Ｔまたはウサギ抗ｐＳ３９６タウ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）とともにインキュベートした
。膜を洗浄し、ペルオキシダーゼコンジュゲート抗ヒトＩｇＧまたは抗ウサギ抗体（１：
５０００；Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，Ｐ
Ａ）とともにインキュベートした。結合抗体を、強化された化学発光システム（ＥＣＬ
ＰＬＵＳキット；Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いて検出した。ウエスタンブロット免
疫活性の定量化および視覚分析を、コンピュータに連結されたＬＡＳ－４０００ Ｂｉｏ
Ｉｍａｇｉｎｇ Ａｎａｌｙｚｅｒ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｆｕｊｉｆｉｌｍ、東京、日本）お
よびＭｕｌｔｉ Ｇａｕｇｅ ｖ３．１ソフトウェア（Ｆｕｊｉｆｉｌｍ）を用いて行っ
た。タウタンパク質を検出するために、マウスに由来する約２μｇのＳ１、ヒト脳に由来
する２０μｇのＳ１および等体積の異なる画分（Ｓ１、Ｓ１ｐ、およびＰ３）を、ＳＤＳ
ＰＡＧＥに充填した。
ウエスタンブロットによる病理学的タウの検出
３匹の３２週齢のｒＴｇ４５１０マウスおよび非トランスジェニック（非ｔｇ）対照同
腹仔からプールされた前脳ホモジネートならびに４匹のＡＤおよび４匹の健常対照（ＨＣ
）ドナーからプールされた皮質試験片を、可溶性（Ｓ１）、ＴＢＳ可溶性ペレット（Ｓ１
ｐ）およびサルコシル不溶性画分（Ｐ３）中に単離した。ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿
Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔを、ウエスタンブロットにおいて１μｇ
／ｍｌで使用し、ｒＴｇ４５１０マウスおよびＡＤから病理学的タウを検出した。本発明
者らは、３２週齢のｒＴｇ４５１０マウスに由来するＳ１において５５および６４ｋＤａ
タウ、およびＰ３およびＳ１ｐ画分において６４および７０ｋＤａタウの検出を観察した
。さらに、５０ｋＤａ未満の３つの切断された（ｔｒｕｎｃａｔｅｄ）タウバンドが、Ｐ
３画分において観察された。ヒト導入遺伝子タウを発現しない非ｔｇ対照同腹仔に由来す
るＳ１ｐおよびＰ３においてシグナルは検出されなかった。５０ｋＤａ前後の弱いシグナ
ルが、非ｔｇマウスに由来するＳ１画分において検出され、これは、Ｓ３９６残基におい
てリン酸化される内因性マウスタウを表す可能性が最も高い（図８Ａ～８Ｃ）。ｈＣ１０
．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔは、ｒＴｇ４５１
０マウスにおいて、ｐＳ３９６タウ、ならびに正常なリン酸化５５ｋＤａおよび過リン酸
化６４ｋＤａタウ種の両方を検出したことが要約される。最も強いシグナルが、ｈＣ１０
－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔで観察された。
ＡＤドナーに由来するＳ１、Ｓ１ｐおよびＰ３画分において、ｈＣ１０．２、ｈＣ１０
－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔは、典型的なＡＤタウ塗抹標本お
よび病理学的な４つのタウバンドパターン（５４、６４、６９および７４ｋＤａタウ）を
検出した。予測されるように、Ｐ３画分から単離されたサルコシル不溶性過リン酸化タウ
種が最も顕著であり、続いて、Ｓ１ｐ画分が富化された可溶性過リン酸化タウ種であった
。健常対照（ＨＣ）に由来するＰ３画分においてシグナルは検出されなかった。ＨＣに由
来するＳ１およびＳ１ｐ画分において、５５ｋＤａ前後の弱いシグナルが検出され、これ
は、Ｓ３９６残基における正常なリン酸化タウを表す可能性が高い（図８Ａ～８Ｃ）。ｈ
Ｃ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔが、過リン
酸化タウを表すＡＤおよび病理学的な４つのタウバンドパターンに特徴的な典型的なタウ
塗抹標本を検出したことが要約される。最も強いシグナルが、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿
Ａ１０１Ｔで観察された。
病理学的タウの免疫沈降
非変性条件下でタウに結合するｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０－２
＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔの能力を決定するために、タウ抗体をプロテインＡ／Ｇ樹脂上へ
と共有結合的に架橋し、それによって、抗体汚染のないＩＰを得るタウ免疫沈降（ＩＰ）
プロトコルを確立した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥによるタウ分析では、両方のタンパク質が５０
ｋＤａ前後で検出されるため、ＩＰに使用される抗体の重鎖の存在は、シグナルを邪魔し
得る。ヒト脳に由来する病理学的タウを破壊するｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ
、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔの有効性を調べた。抗原として、それぞれ０．１
μｇおよび０．１５μｇのヒトタウ（ヒトタウＥＬＩＳＡによって決定される）を含有す
る４匹のプールされたＡＤおよびＨＣドナーに由来する脳ホモジネートからの５００μｇ
のプレクリアされた溶解物を使用した。ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１
０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ（１０μｇ）は、ポリクローナルウサギ抗ｐＳ３９６タウ
抗体によって視覚化されるプレクリアされたＡＤホモジネート（抗原／ａｂ１：１００の
比率）からの５４、６４、６９および７４ｋＤａタウ種（４つの病理学的タウバンド）お
よびＡＤ塗抹標本を破壊した（図９）。ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１
０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔで破壊されたＡＤ脳に由来するタウバンドの強度を、対照
ヒトＩｇＧ抗体およびＨＣ脳と比較すると、ｈＣ１０．２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ、ｈ
Ｃ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔが、ＡＤ脳のみに由来するｐＳ３９６部位において過
リン酸化タウを免疫沈降し、１：１００の抗原／抗体比で有効であったことが要約され得
る。
細胞および凝集アッセイ
ＨＥＫ２９３細胞を、平板培養の２４時間後に、６ウェルプレートにおいてヒトタウ－
Ｐ３０１Ｌ－ＦＬＡＧで一過性にトランスフェクトし、続いて、２４時間後に、２４時間
にわたって脳ホモジネートとともにインキュベートした後、細胞を分割および再度平板培
養し、さらに２４時間後に収集した。細胞を溶解させ、１％のｔｒｉｔｏｎ Ｘ、Ｐｈｏ
ｓ－ｓｔｏｐおよび完全なホスファターゼおよびプロテアーゼ阻害剤（Ｒｏｃｈｅ）緩衝
液が補充されたＰＢＳ中で超音波処理し、３０分間にわたって１００，０００×ｇで超遠
心分離した。ペレットを、ＳＤＳ中で再懸濁させ、超音波処理し、３０分間にわたって１
００，０００×ｇで超遠心分離した。上清を、ウエスタンブロット法によって分析した。
ヒトタウ－Ｐ３０１Ｌを発現する細胞は、ｒＴｇ４５１０タウトランスジェニックマウス
に由来する総脳ホモジネートをシーディングすると、不溶性（ＳＤＳ画分、Ｅ１／ＦＬＡ
Ｇ検出）、過リン酸化（ｐＳ３９６検出）タウを示した。
ｔＴＡマウスに由来する対照脳ホモジネートで処理された細胞は、凝集過リン酸化ヒト
タウが存在しないことを示した。さらに、ＨＥＫ２９３細胞の総細胞溶解物を、Ｃｉｓｂ
ｉｏ製のタウ凝集アッセイを用いて分析した。このアッセイは、ＦＲＥＴにおいてドナー
（Ｔｂ３＋コンジュゲート）およびアクセプタ（ｄ２コンジュゲート）Ａｂの両方に同じ
抗体を用いた時間分解蛍光に基づくものである。１０μｌの試料を、１０μｌの抗体混合
物と混合し、２０時間インキュベートした。プレートをＰｈｅｒａｓｔａｒプレートリー
ダーで読み取って、時間分解蛍光（励起光のスイッチング後に測定／積分される（ｉｎｔ
ｅｇｒａｔｅｄ）ＦＲＥＴシグナル）を評価した。アッセイは、ヒト剖検材料、ｒＴｇ４
５１０マウスにおいて、および高い特異性および感度を有する播種されたＨＥＫ細胞にお
いて凝集タウを測定する。結果が図１０に示される。
実施例７．タウの免疫枯渇
アルツハイマー病の脳抽出物を、１０倍体積の滅菌冷ＰＢＳ中の凍結された死後前頭前
皮質から作製した。組織を、ナイフホモジザイナー（ｋｎｉｆｅ ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅ
ｒ）を用いて均質化した後、超音波処理し、出力２で５×０．９秒パルス（Ｂｒａｎｓｏ
ｎ ｓｏｎｉｆｉｅｒ）にかけた。次に、ホモジネートを、４℃で５分間にわたって３０
００ｇで遠心分離した。上清を分割し、急速凍結させ、使用するまで－８０℃で貯蔵した
。
２５μｇの抗体（ヒト化Ｃ１０－２変異体および２．１０．３、マウスＡＴ８、Ｔｈｅ
ｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｍｎ １０２０）を、１２５μｌのＭａｇｎｅｔｉｃ
ｄｙｎａｂｅａｄ懸濁液（免疫沈降キットＤｙｎａｂｅａｄｓ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｇ Ｎ
ｏｖｅｘ、Ｃａｔ ｎｏ １０００７Ｄ）に固定した。十分な洗浄の後、被覆ビーズを、
可変量の非被覆洗浄ビーズと混合した。５μｇの抗体に対応する１００％のＡｂ被覆ビー
ズから開始して、１００％の非被覆ビーズに到るまで。ビーズの総量は、全ての試料にお
いて同じであった。ビーズを、２０μｌのＡＤ抽出物と混合し、室温で１０分間インキュ
ベートした。電磁ビーズを、抽出物から分離し、抽出物を分割し、急速凍結させ、使用す
るまで－８０℃で保持した。
ウエスタンブロットを用いた枯渇の分析
試料を、１×ＳＤＳローディングバッファーおよび１００ｍＭのＤＴＴ中で沸騰させた
。３μｌの抽出物に対応する体積を、４～１２％のビス－トリスＮｕＰＡＧＥ Ｇｅｌ（
ＬｉｆｅＴｅｃｈ Ｎｏｖｅｘ）上に充填した。電気泳動の後、タンパク質を、Ｉｍｍｏ
ｂｉｌｏｎ－ＦＬ ＰＶＤＦ膜（０．４５μｍ、ＩＰＦＬ１０１００、Ｍｉｌｌｉｐｏｒ
ｅ）上にブロッティングした。膜を、ＳＥＡブロッキングバッファー（Ｐｒｏｄ＃３７５
２７、Ｔｈｅｒｍｏ）を用いてブロッキングした。タウおよびＰ－タウレベルを、タウ５
（タウ５は、エピトープがタウアミノ酸２１０～２４１の中にあることが記載される市販
の抗タウ抗体である）を用いて試料中で評価した。それは、タウに対するマウスモノクロ
ーナルである。Ａｂｃａｍ ａｂ８０５７９、１：２０００）マウスＣ１０－２（１μｇ
／ｍｌ）、Ｐ－Ｓ１９９／２０２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ４４７６８ Ｇ、１：１００
０）、Ｐ－Ｓ４２２（Ａｂｃａｍ ａｂ７９４１５、１：７５０）、ヒトＩＰＮ（１μｇ
／ｍｌ）。Ｇａｐｄｈおよびアクチンを、充填対照（Ａｂｃａｍ ａｂ９４８４、１：２
０００、Ｓｉｇｍａ Ａ５４４１、１：２００００）として使用した。二次フルオロフォ
アコンジュゲートＩｇＧ抗体を使用し（ＩＲＤｙｅ ８００ＣＷヤギ抗ヒト、ＩＲＤｙｅ
８００ＣＷ、ヤギ抗ウサギ、ＩＲＤｙｅ ６８０ヤギ抗マウス、ＬＩ－ＣＯＲ ｂｉｏ
ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、シグナルを、Ｏｄｙｓｓｅｙ ＣＬｘおよびＩｍａｇｅ ｓｔｕｄ
ｉｏソフトウェア（ＬＩ－ＣＯＲ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて定量化した。全レ
ーンにおける個々のバンドならびにシグナルの定量化を行い、これから、Ｓ字形用量反応
曲線をプロットし、可能であれば、最大効果およびＥＣ５０値を推定した。
結果
２．１０．３およびＣ１０－２抗体は両方とも、アルツハイマー病の脳の調製物からタ
ウのごく一部を除去する。これは、総タウタンパク質含量中のタウのサブセットに対する
選択性を示す。ｐＳ４２２タウに対する特異性を有するように設計された２．１０．３は
、総タウ量の最大で２４％を除去する一方、Ｃ１０－２は、総タウの最大で１５％を除去
する（図１１を参照）。これは、ｐＳ３９６サブセットが、全ての他の因子が等しいタウ
のより小さいサブセットであると解釈され得る。あるいは、データは、２．１０．３抗体
がｐＳ４２２に対して選択的であるより、Ｃ１０－２抗体がｐＳ３９６に対して選択的で
あると解釈され得る。
２．１０．３およびＣ１０－２は両方とも、セリン４２２においてリン酸化されるタウ
の９０％超を除去するが、ｐＳ４２２タウの５０％を除去するのに必要な抗体の量は異な
り、２．１０．３については、０．４２μｇの抗体およびＣ１０－２については、０．２
７μｇが同じ効果のために必要とされた（図１２を参照）。本発明の一実施形態において
、抗体は、３８６～４０４内のエピトープに対して特異的であり、ここで、ヒトタウのセ
リン残基３９６がリン酸化され、１μｇ未満の抗体を用いて、ｐＳ４２２タウの８０％が
除去される（ウエスタンブロット分析による免疫枯渇試験において）。
Ｃ１０－２は、セリン３９６においてリン酸化されるタウを効率的に除去する（最大効
果：効果の８８％および半分に、０．３０μｇの抗体を用いて達する）。２．１０．３は
、セリン３９６においてリン酸化されるタウをより少ない割合で除去する（最大効果：そ
の効果の６０％および半分に、０．６３μｇの抗体を用いたときに達する）（図１３を参
照）。これは、セリン４２２においてリン酸化される全てのタウが、セリン３９６におい
てもリン酸化されるが、過リン酸化タウの一部は、セリン３９６においてリン酸化され、
ここで、位置４２２におけるリン酸化セリンが存在しないことを示す。本発明の一実施形
態において、抗体は、３８６～４０４内のエピトープに対して特異的であり、ここで、ヒ
トタウの残基３９６がリン酸化され、１μｇ未満の抗体を用いて、ｐＳ３９６タウの８０
％が除去される（ウエスタンブロット分析による免疫枯渇試験において）。
Ｃ１０－２によって除去されるタウの大部分は、セリン１９９／２０２においてもリン
酸化され、これは、そのリン酸化を有するタウの６９％が免疫枯渇によって影響されるた
めである（０．３４μｇの抗体を用いたときの効果の５０％）。２．１０．３免疫枯渇は
、ｐＳ１９９／２０２タウにおいてＳ字形用量反応を示さないが、シグナルの低下が、増
加する量の抗体で見られる（最大量の抗体（５μｇ）を用いたときに最大５２％の低下（
図１４を参照）。本発明の一実施形態において、抗体は、３８６～４０４内のエピトープ
に対して特異的であり、ここで、ヒトタウのセリン残基３９６がリン酸化され、１μｇ未
満の抗体を用いて、Ｐ－Ｓ１９９／２０２タウの８０％が除去される（ウエスタンブロッ
ト分析による免疫枯渇試験において）。
これらの結果は、リン酸化セリン３９６を標的にするＣ１０－２抗体が、４２２位置に
おけるリン酸化セリンを標的にする２．１０．３抗体より大きいプールの過リン酸化タウ
に結合することを示す。
免疫枯渇後のウエスタンブロットにおける個々のバンドを調べる際、２５ｋＤａバンド
が、セリン３９６においてリン酸化されるものと同定された。このフラグメントは、Ｃ１
０－２によって免疫枯渇されたが、２．１０．３およびＡＴ８は、このフラグメントを枯
渇しなかった（図１５を参照）。したがって、Ｃ１０－２は、アルツハイマー病の脳抽出
物に由来するこの切断型のタウを除去する独自の特徴を有する。
実施例８．Ｃ１０－２変異体の比較
全てのＣ１０－２変異体は、免疫枯渇アッセイにおいて同じ効率を有していた（図１６
を参照）。これらの結果は、導入された突然変異が、アルツハイマー病の脳に特有のタウ
への機能的結合を変化させていないことを示す。
８ａ．播種されたｒＴｇ４５１０マウスにおける抗体処理
ＣａｍＫ２陽性ニューロン（ｒＴｇ４５１０）中、ｔｅｔ－ｏｆｆ応答因子下でヒト突
然変異タウ（Ｐ３０１Ｌ ０Ｎ４Ｒ）を発現するトランスジェニックマウスを使用した。
このモデルは、通常、３月齢でタウ病変を発生し始めるが、妊娠中および子が生まれてか
ら最初の３週間にわたって母親にドキシサイクリンを供給することによって、病変は、よ
り遅い段階で発生する（６月齢後に開始する）。ドキシサイクリンで予め処理されたマウ
スを、２月齢から開始して、１５ｍｇ／ｋｇ／週で、ｍＣ１０－２、ｈＣ１０－２、２．
１０．３または対照抗体で長期的に処理した。２．５ヶ月の時点で、アルツハイマー病の
脳抽出物を、海馬に注入した。マウス２０匹に、吸入剤の吸入によって麻酔をかけ、定位
フレームに固定した。頭蓋骨を露出させ、ブレグマおよびラムダが水平になるまで調整し
た。ブレグマの２ｍｍ側方（右）および２．４ｍｍ後方で、頭蓋骨に孔を空けた。１０μ
ｌのシリンジのベベルチップ（ＳＧＥ）を用いて、シーディング材料を、上記の配置で、
脳表面の１．４ｍｍ前面に注入した。２μｌの、実施例７に記載される抽出物を、その部
位（１μｌ／分）にゆっくりと注入し、シリンジを５分間そのままにして置いてから、そ
れを取り出した。創傷を縫うことによって閉じ、目を覚ますまでマウスを加熱した。マウ
スを３ヶ月間飼育してから殺処分し、かん流を４％で固定。マウスを、シーディングの３
ヵ月後に殺処分するまで、抗体で処理した。
免疫組織化学
固定された脳を、ＮＳＡ３０において３５μｍの冠状断面へと切断し、６つ置きの切片
を、タウもつれ（ガリアス銀染色）について染色した。陽性染色されたニューロン（細胞
体）を、全ての脳の海馬の同側および反対側で計数した。海馬の全てのサブ領域が含まれ
ていた。脳当たり８つの切片を計数した。結果は、８つの切片からの陽性ニューロンの合
計を反映する。
統計分析：群を比較すると、差異は、有意に異なっている。ここでは、ノンパラメトリ
ック検定、クラスカル・ウォリス検定およびダンの多重比較検定を使用した。
結果：抽出物は、同側海馬におけるもつれ病変のシーディングをもたらした。ｍＣ１０
－２処理は、播種された海馬のもつれ病変を５７％だけ有意に減少させた（Ｐ＜０．０５
）。ｈＣ１０－２が病変を減少させたことを示す明らかな傾向があった。２．１０．３は
、効果を示すことができなかった（図１７を参照）。
実施例８ｂ．Ｃ１０．２変異体の抗シーディング効果
試験の目的
タウ凝集体の細胞間伝播は、ＣＮＳ内のアルツハイマー病の病変の発達および位相的な
拡大に寄与することが示唆されている。インビトロシーディングモデルを確立し、それに
よって、ＨＥＫ２９３細胞において発現された細胞内ヒトタウに、細胞外で適用された病
理学的タウ凝集体を播種する。この試験の目的は、治療パラダイムにおいてシーディング
した後のモノクローナルヒトＣ１０．２および変異体の治療効果を評価および比較するこ
とであった。シーディングは、細胞内で発現されたタウの過リン酸化／ミスフォールディ
ングを開始させる量の過リン酸化タウ（シード）の導入を意味することが意図される。
試験の関連性を確立する背景
Ａβの細胞外プラークおよびタウの神経内の対になったらせん状フィラメントの堆積は
、アルツハイマー病の特徴である。タウの神経内封入体は、洗浄剤に不溶性の、過リン酸
化された、アミロイド形態のタウから主に構成され、ＡＤ患者において、ＣＮＳ内で凝集
体の拡大を示唆する空間時間的パターンで堆積される。タウ凝集体は、プリオン様の機構
で、インビボおよびインビトロの両方で、細胞間で伝播することが実験的に示されている
。疾患の伝播に影響を与える細胞外の拡大のこの存在は、ＣＮＳ浸透抗体を用いた免疫療
法のための道を切り開くものである。
タウ凝集体／シードの適用は、インビトロの細胞内タウの凝集をもたらすことが示され
ている（Ｆｒｏｓｔ ｅｔ ａｌ．，２００９、Ｇｕｏ ａｎｄ Ｌｅｅ ２０１１、Ｙ
ａｎａｍａｎｄｒａ ｅｔ ａｌ．，２０１３）。本発明者らは、インビトロシーディン
グモデルを確立し、それによって、Ｔｇ４５１０マウスに由来する粗脳ホモジネート（凝
集したヒトタウを含む）を用いて、ヒト０Ｎ４Ｒタウに、ＨＥＫ２９３細胞において一時
的に発現されたＰ３０１Ｌ突然変異を播種する。重要なことには、残留タウ凝集体（シー
ド）を、播種されたｐｃＤＮＡ対照細胞において検出することができないため、全ての読
み取りは、細胞内タウの変換を検出しており、外因性シーディング材料からの何らのシグ
ナルも検出しない。ｈＣ１０．２の異なる変異体の抗シーディング効果を、このアッセイ
において決定した。
変異体
抗体Ｃ１０－２（ｈＣ１０．２）
抗体Ｎ３２Ｓ（ｈＣ１０．２ Ｎ３２Ｓ）
抗体Ｎ３２Ｑ（ｈＣ１０．２ Ｎ３２Ｑ）
抗体Ｎ３２Ｓ、Ｄ５５Ｅ（ｈＣ１０．２ Ｎ３２Ｓ Ｄ５５Ｅ）
抗体Ｎ３２Ｑ、Ｄ５５Ｅ（ｈＣ１０．２ Ｎ３２Ｑ Ｄ５５Ｅ）
抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１Ｔ（ｈＣ１０．２ Ｎ３２Ｓ Ａ１０１Ｔ）
参照品
対照ｈＩｇＧ１（Ｂ１２）
試験システム／動物
ＨＥＫ２９３細胞に、ｈタウ－Ｐ３０１Ｌ（０Ｎ４Ｒ）を一過性にトランスフェクトし
た。
実験設計
シーディング材料：１２月齢のマウスに由来するＴｇ４５１０ホモジネート（および対
照）を、ビーズ均質化（ｂｅａｄ ｈｏｍｏｇｅｎｉｚａｔｉｏｎ）によって阻害剤なし
でＴＢＳ中の１０％のホモジネートとして均質化し、超音波処理した。ホモジネートを、
１５分間にわたって２１０００×ｇで回転させ、可溶性画分をシーディングに使用した。
ＨＥＫ２９３シーディングアッセイ：このアッセイにおいて、６００，０００個のＨＥ
Ｋ２９３細胞を、０日目に６ウェルプレート中でウェルごとに平板培養する。１日目に、
製造業者のプロトコルにしたがって、１０μｌのｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００を
用いて、細胞に、４μｇのプラスミドＤＮＡをトランスフェクトする。培地を４時間後に
交換する。２日目に、細胞に、１２月齢のＴｇ４５１０またはｔＴａマウスに由来する粗
脳ホモジネートを播種する。４０μｇの総タンパク質を含有するホモジネート（ｔｇ４５
１０ホモジネートについて約６５ｎｇの総ヒトタウ）を、各ウェルの培地に適用する。抗
体処理のために、実験ホモジネートを、４℃で一晩、抗体とともにまたは抗体なしでプレ
インキュベートする。シーディングの６時間後、細胞増殖を減少させるために、培地を低
血清培地に交換し、抗体を再度適用する。
３日目（シーディングの２４時間後）に、細胞外シードを分解するために、細胞を３分
間にわたってトリプシン処理し、分画実験のために６ウェルプレートにおいてウェル当た
り８００，０００個の細胞で、Ｃｉｓｂｉｏタウ凝集アッセイのために９６ウェル当たり
２０，０００個の細胞で、および高含量イメージングによる抗体取り込み評価のために９
６ウェル当たり１０，０００個で、再度平板培養する。抗体を、各ウェルに再度適用する
。
細胞分画：シーディングの４８時間後、分画のための細胞を、冷ＰＢＳ中で擦ることに
よって採取し、ペレット化し、ホスファターゼおよびプロテアーゼ阻害剤とともに１％の
ｔｒｉｔｏｎ－Ｘを含むＴＢＳに溶解させ、超音波処理する。超遠心分離（４℃で３０分
間にわたって１００，０００×ｇ）の後、ペレットを、１％のＳＤＳ中で再度懸濁させ、
超音波処理し、もう一度超遠心分離する。Ｔｒｉｔｏｎ－ＸおよびＳＤＳ可溶性画分を、
総タウ（Ｅ１）およびＳ３９６（Ｄ１．２）におけるタウのリン酸化について、ウエスタ
ンブロット法によって分析する。Ｄ１．２シグナルを、Ｏｄｙｓｓｅｙイメージング機械
において免疫蛍光によって定量化する。
Ｃｉｓｂｉｏタウ凝集アッセイ：シーディングの４８時間後、Ｃｉｓｂｉｏ凝集アッセ
イのための細胞を、氷冷ＰＢＳ中で洗浄し、凍結乾燥させる。細胞を、ホスファターゼ／
プロテアーゼ阻害剤およびベンゾナーゼ（ｂｅｎｚｏｎａｓｅ）（ＲＮａｓｅおよびＤＮ
ａｓｅ）を含む１％のｔｒｉｔｏｎ－Ｘに溶解させ、オービタルシェーカーにおいて、４
℃で４０分間にわたって６５０ＲＰＭでインキュベートする。均一性時間分解蛍光（ＨＴ
ＲＦ（登録商標）、Ｃｉｓｂｉｏ）を用いたＦＲＥＴ測定のためにドナーおよびアクセプ
タに結合される同じ抗体を用いることに基づいたアッセイである、Ｃｉｓｂｉｏタウ凝集
アッセイによって、総細胞溶解物を、タウ凝集体について分析する。モノマータウは、同
じ結合エピトープについて競合する際、アクセプタまたはドナー抗体のいずれかのみに結
合し得る（＝ＦＲＥＴなし）。これに対し、オリゴマータウは、ドナーおよびアクセプタ
の両方に結合し得る（＝ＦＲＥＴシグナル）。総タンパク質が、ＢＣＡによって全ての試
料について決定され、試料の信号対雑音比が、タンパク質に対して正規化され、８つの技
術的反復（ｔｅｃｈｎｉｃａｌ ｒｅｐｌｉｃａｔｅ）を用いて、相対タウ凝集としてプ
ロットされる。
抗体取り込み：シーディングの４８時間後、抗体取り込みのためのプレートを、４％の
パラホルムアルデヒドおよび４％のスクロース中で固定し、抗ヒト二次抗体で染色した。
抗体取り込みを、Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓを用いて確認した。
データ分析／統計
データは、異なる２週間にわたって行われ、分析された４つの独立した生物学的反復の
プールされたデータ＋／－Ｓ．Ｅ．Ｍ．として表される。データは、テューキーの多重比
較検定とともに一元配置ＡＮＯＶＡを用いて分析される（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．
０１、＊＊＊Ｐ＜０．００１）。
結果
ｈＣ１０．２は、対照と比較して約４０％だけ、シーディングおよび不溶性過リン酸化
タウに対する減少の影響を有していた。全ての他の抗体は、同様またはｈＣ１０．２より
優れた効果を示した。特に、ｈＣ１０．２のＮ３２ＳおよびＮ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ変異体
は、より強い効果、凝集タウの４５％および６２％の減少を示した。Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１
Ｔ変異体は、ｈＣ１０．２と比較して、凝集に対して大幅に強い効果を示した。
実施例８Ｃ：本発明のｈＣ１０．２および変異体における安定性試験
試験の目的
この試験は、変異体の電位差を明らかにするためにストレス条件に焦点を合わせて、本
発明の抗体の基本的安定性の問題を評価するために行った。
試験設計
全ての試料を、同一の出発条件（緩衝液、濃度および凝集体レベル）になるように最初
に調製した。これは、試料の挙動のその後の発生に潜在的に影響し得る初期特性の差をな
くし得る。対照を－８０℃に保持し、ストレスを加えた試料（４０℃）と並行して分析し
た。試料を、異なる時点で４０℃から取り出し、ＳＥＣ－ｕｐｌｃ、液体クロマトグラフ
ィー－質量分析法（ＬＣＭＳ）によるペプチドマッピングおよび示差走査蛍光定量法（Ｄ
ＳＦ）によって、最後に同時に分析した。
変異体
抗体Ｃ１０－２（ｈＣ１０．２）
抗体Ｎ３２Ｓ（ｈＣ１０．２ Ｎ３２Ｓ）
抗体Ｎ３２Ｑ（ｈＣ１０．２ Ｎ３２Ｑ）
抗体Ｎ３２Ｓ、Ｄ５５Ｅ（ｈＣ１０．２ Ｎ３２Ｓ Ｄ５５Ｅ）
抗体Ｎ３２Ｑ、Ｄ５５Ｅ（ｈＣ１０．２ Ｎ３２Ｑ Ｄ５５Ｅ）
抗体Ｎ３２Ｓ、Ａ１０１（ｈＣ１０．２ Ｎ３２Ｓ Ａ１０１Ｔ）
抗体Ａ１０１Ｔ（ｈＣ１０．２ Ａ１０１Ｔ）
抗体Ｄ５５Ｅ（ｈＣ１０．２ Ｄ５５Ｅ）
抗体Ｎ３２Ｑ、Ａ１０１Ｔ（ｈＣ１０．２ Ｎ３２Ｑ Ａ１０１Ｔ）
参照品
試験の期間にわたって－８０℃で貯蔵された抗体試料を、参照用に使用した。
背景情報
モノクローナル抗体の安定性の側面は、製剤原料の製造、最終的な貯蔵および製剤化の
側面のために重要である。この試験では、本発明者らは、明白な問題が候補のいずれかに
おいて明らかであるかどうかを明らかにするために、凍結融解サイクル、高温および低ｐ
Ｈによって抗体にストレスを与えた。
材料および方法
脱アミド化試験のために、試料を、１ｍｌの試料中でバイアルに入れ、４０℃でインキ
ュベートする。所定の時点で、試料を－８０℃にし、分析するまで貯蔵する。
脱アミド化試験
該当する実際の残基についての詳細な情報を得るために、Ａｓｎ残基の脱アミド化を、
ペプチドレベルで試験する。したがって、標準的プロトコルを用いた還元およびアルキル
化（ヨード酢酸）の後、ｍＡｂをブタトリプシンで消化する。ペプチドを、ＣＳＨＴ１３
０ Ｃ１８ １．７μｍのカラムにおいて分離し、ＭＳｅモードで動作するＸＥＶＯ Ｑ
ＴＯＦ（Ｗａｔｅｒｓ）ＭＳ機器に導入した。一連の試験を通して、同一のパラメータを
使用した。全ての時点からのペプチドマップを、ＢｉｏｐｈａｒｍａＬｙｎｘにおいて分
析し、以下の制限を有して定量化した：明白に識別された脱アミド化ペプチドのみが含ま
れ、インソースフラグメントは含まれない。それぞれの識別されたペプチドの脱アミド化
％を、経時的に監視する。
ＳＥＣ方法の概要
ＴＵＶ検出器を備えたＡｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ（ｗａｔｅｒｓ）においてＡＣＱＵＩ
ＴＹ ＵＰＬＣ（登録商標）ＢＥＨ２００ ＳＥＣ １．７μｍ ４．６×１５０ｍＭの
カラム上で、ＳＥＣクロマトグラフィーによって、凝集を決定した。（泳動用緩衝液：Ｇ
ｉｂｃｏ ＰＢＳ－Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃１４１９０－０９４＋０．１ＭのＮａＣｌ
で希釈された）１００μｇ／ｍｌに調整された２０μｌの試料を、０．４ｍｌ／分でカラ
ムに適用し、定組成溶離によって６分間にわたって分離した。
データを、ＭａｓｓＬｙｎｘによって分析し、ＡＵＣを用いて、凝集のレベルを定量化
する。
低ｐＨ実験
ｈＣ１０．２を、プロテインＧカラムに適用し、標準条件を用いてｐＨ２．８で溶離し
た。試料をｐＨ２．８に保持し、アリコートを、時間０、１５、３０、６０、１２０およ
び１８０分の時点で取り出し、中和してから、ＰＢＳ中で脱塩した。試料を、結合親和性
、凝集および脱アミド化について分析した。
ストレス条件：４０℃および２８日間の脱アミド化におけるｈＣ１０．２の特性評価
Ａｓｎの脱アミド化が、ペプチドＬＣ：Ｔ２、ＨＣ：Ｔ３６およびＨＣ：Ｔ２５によっ
てカバーされるいくつかの主要でない部位および３つの主要な部位において観察される。
これらにおいて、脱アミド化が時間とともに増加し、それぞれ７５％、３８％および２８
％で終了する。ペプチドＨＣ：Ｔ３６およびＴ２５と対照的に、ＬＣ：Ｔ２ペプチドにお
けるＡｓｎ残基（ＬＣ Ｎ３２およびＮ３４）は、インシリコ分析（配列モチーフ）に基
づいて、脱アミド化しやすいと予測されなかったが、意外なことに、実際の実験では、そ
れらは、ｈＣ１０．２における他のＡｓｎ残基と明らかに区別される。このペプチドの増
加した脱アミド化は、二重リン酸化ペプチドに対する結合活性の低下と相関し、脱アミド
化およびＩＣ５０の間の機械的関係を示唆する。この観察は、ｈＣ１０．２ ＬＣにおけ
るＡｓｎ 残基３２および／または３４を変更すると、これらの部位における脱アミド化
を減少させ得ることも示唆している。
変異体の分析では、単に、Ａｓｎ３２を、ＳｅｒまたはＧｌｎのいずれかに変更すると
、Ａｓｎ３４における脱アミド化反応を完全に防ぐことが明らかである（図２０）。また
、本発明者らは、この突然変異を有する変異体におけるＧｌｎ３２の脱アミド化を検出し
ない。
低ｐＨにおける脱アミド化
この試験では、本発明者らは、４０℃安定性試験について上述されるのと同じ方法でｈ
Ｃ１０．２を分析した。この場合のみ、トリプシンおよびＬｙｓ－Ｃの混合物を用いて（
Ｐｒｏｍｅｇａ製品）、リジン残基における切断を最適化した。脱アミド化のさらなる部
位または程度は観察されず、ここでも、最も顕著なペプチドは、ＬＣ－Ｔ２、ＨＣ－Ｔ２
５およびＨＣ－Ｔ３６であった。さらに、低ｐＨで処理された試料においてＩＣ５０の変
化は観察されなかった。
ＳＥＣ分析
凝集のレベルは、全ての調製物において３％未満であり、凝集の程度の変化は、４０℃
で２８日間にわたって観察されなかった。
実施例９
ｒＴｇ４５１０マウスからのタウシードの単離
ｒＴｇ４５１０マウスは、テトラサイクリン－オペロン－レスポンダー（ＴＲＥ）およ
びテトラサイクリン調整遺伝子発現系（ｔＴＡ）からなるアクチベータ構築物の下流のヒ
トＭＡＰＴ遺伝子におけるＰ３０１Ｌ突然変異を有する４Ｒ０Ｎタウを共発現する二重ト
ランスジェニックマウスである。Ｐ３０１Ｌ突然変異は、染色体に関連するパーキンソニ
ズム１７（ＦＴＤＰ－１７）を伴う前頭側頭型認知症を招く優性突然変異である。ｒＴｇ
４５１０マウスにおいて、Ｐ３０１Ｌ ｈタウの発現は、年齢に依存して、プレタングル
（ｐｒｅ－ｔａｎｇｌｅ）および神経原線維変化（ＮＦＴ）形成、ニューロンの損失およ
び行動異常を含むタウ病変を誘発する。ＮＦＴは、対になったらせん状フィラメント（Ｐ
ＨＦ）、ねじれたリボン（ｔｗｉｓｔｅｄ ｒｉｂｂｏｎ）から構成される神経内タウ凝
集体であり、または直線フィラメントは、洗浄剤に不溶性であり、主に、過リン酸化タウ
を含有する。過リン酸化は、タウが、成人健常脳に由来するタウより多くの部位において
リン酸化されること、および所与の部位について、通常のパーセンテージより高いタウ分
子がリン酸化される（＞８のリン酸化モル／タウモル）ことを意味する。ＮＦＴの解剖学
的分布は、アルツハイマー病（ＡＤ）における認知低下ならびに正常な老化および軽度の
認知機能障害における記憶力低下と相関する死後の病理組織学的特徴である。ＡＤ患者の
脳におけるＮＦＴの分布パターンは、非常に階層的であり、６つの段階に分けられている
。ＮＦＴ変化による脳における段階的な浸潤はまた、生化学的に確認されており、罹患領
域にしたがって１０段階に分類されている。ＡＤ脳に由来する異なるタウ種の生化学的特
性評価は、元々、不溶性タウの単離のための１％のサルコシルを用いた分画プロトコルに
基づいていた。この方法に基づいて、サルコシル不溶性ペレット（Ｐ３）画分において単
離されるサルコシル不溶性過リン酸化タウ種が、ＰＨＦ－タウとして定義され、生化学的
なＮＦＴ同等物と見なされる。可溶性画分（Ｓ１）において単離される緩衝液可溶性過リ
ン酸化タウ種は、非原線維オリゴマータウ種として定義され、生化学的なプレタングルタ
ウ同等物と見なされる。ｒＴｇ４５１０マウスにおいて、正常なモノマーリン酸化および
非リン酸化ヒト４Ｒ０Ｎトランスジェニックタウが、可溶性画分（Ｓ１）中に存在し、Ｓ
ＤＳ ｐａｇｅにおいて５５ｋＤａタウ種として視覚化される。Ｐ３０１Ｌ突然変異を有
する過リン酸化４Ｒ０Ｎタウが、可溶性（Ｓ１）画分において、ならびにトリス－緩衝生
理食塩水（ＴＢＳ）可溶性沈殿物（Ｓ１ｐ）およびサルコシル不溶性ペレット（Ｐ３）画
分のみにおいて、６４ｋＤａおよび７０ｋＤａの移動度がシフトされたタウとして示され
る。Ｐ３において単離されるサルコシル不溶性６４ｋＤａおよび７０ｋＤａタウ種は、タ
ウ原線維（ＰＨＦ－タウ）および生化学的なＮＦＴ同等物である。Ｓ１におけるおよびＴ
ＢＳ可溶性沈殿物画分（Ｓ１ｐ）が富化された緩衝液可溶性６４ｋＤａおよび７０ｋＤａ
タウ種は、オリゴマータウであり、生化学的なプレタングルタウ同等物である。７０ｋＤ
ａタウ種は、Ｐ３０１Ｌ突然変異体に対して特異的であり、ＦＴＤＰ－１７患者の脳にお
いても見られる。４０週齢のｒＴｇ４５１０マウスに由来する脳組織を、５０ｍＭのトリ
ス／ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、２７４ｍＭのＮａＣｌ、および５ｍＭのＫＣｌを含有する１
０体積のＴＢＳ中で均質化した。ホモジネートを、４℃で２０分間にわたって２７，００
０×ｇで遠心分離して、上清（Ｓ１）およびペレット（Ｐ１）画分を得た。ＴＢＳ抽出性
Ｓ１画分を、４℃で１時間にわたる１５０，０００×ｇでの遠心分離によって、上清（Ｓ
１ｓ）および沈殿物（Ｓ１ｐ）画分に分けた。Ｓ１ｐペレットを、１０ｍＭのトリス／Ｈ
Ｃｌ［ｐＨ８．０］中で、元のＳ１体積の５分の１に等しい体積になるまで再度懸濁させ
た。Ｐ１ペレットを、５体積の高塩／スクロース緩衝液（０．８ＭのＮａＣｌ、１０％の
スクロース、１０ｍＭのトリス／ＨＣｌ、［ｐＨ７．４］）中で再度均質化し、４℃で２
０分間にわたって２７，０００×ｇで遠心分離した。上清を収集し、３７℃で１時間にわ
たってサルコシル（１％の最終濃度；Ｓｉｇｍａ）とともにインキュベートした後、４℃
で１時間にわたって１５０，０００×ｇで遠心分離して、Ｐ３画分と呼ばれるサルコシル
不溶性ペレットを得た。Ｐ３ペレットを、１０ｍＭのトリス／ＨＣｌ［ｐＨ８．０］中で
、脳ホモジネートに使用される元の体積の半分に等しい体積になるまで再度懸濁させた。
ＳＤＳ－ｐａｇｅにおいて６４および７０ｋＤａの過リン酸化タウとして特性評価される
ｒＴｇ４５１０マウス脳に由来する病理学的タウは、それぞれＴＢＳ可溶性オリゴマーお
よびサルコシル不溶性原線維タウとして、Ｓ１ｐおよびＰ３画分のみに存在していた。Ｓ
１ｓ画分は、ＳＤＳ－ｐａｇｅにおいて５５ｋＤａタウとして示される正常な非リン酸化
およびリン酸化タウを含有する。病理学的タウ、それぞれＳ１ｐおよびＰ３画分において
単離される可溶性オリゴマーおよび不溶性原線維を、過リン酸化タウシードとして用いて
、内因性モノマーヒトタウを、凝集タウの封入体中に動員し、ｒＴｇ４５１０マウスから
単離される初代皮質培養物におけるタウシーディングを誘導した。
ｒＴｇ４５１０マウスから単離される初代神経培養物におけるシーディングアッセイ
マウス皮質ニューロン（ＣＴＸ）を、Ｅ１４～１６日目に、ｒＴｇ４５１０マウス胚か
ら単離した。単一トランスジェニックｔＴＡアクチベータマウスを、単一トランスジェニ
ック突然変異体タウレスポンダーマウスと交配期を合わせた（ｔｉｍｅ－ｍａｔｅｄ）。
妊娠した雌を、受胎後１４～１６日の時点で安楽死させ、胚は、ｔＴＡアクチベータ導入
遺伝子についてプライマー対の５’－ＧＡＴＴＡＡＣＡＧＣＧＣＡＴＴＡＧＡＧＣＴＧ－
３’および５’－ＧＣＡＴＡＴＧＡＴＣＡＡＴＴＣＡＡＧＧＣＣＧＡＴＡＡＧ－３’、な
らびに突然変異体タウレスポンダー導入遺伝子について５’－ＴＧＡＡＣＣＡＧＧＡＴＧ
ＧＣＴＧＡＧＣＣ－３’および５’－ＴＴＧＴＣＡＴＣＧＣＴＴＣＣＡＧＴＣＣＣＣＧ－
３’を用いた脳ＤＮＡを有する遺伝子型であった一方、単離された胚皮質を、４℃で塩化
カルシウム（ＢｒａｉｎＢｉｔｓ ＬＬＣ）なしでＨｉｂｅｒｎａｔｅ Ｅ中に保持した
。ｒＴｇ４５１０マウス胚に由来する皮質を選択し、溶解されたニューロンを、０．１３
×１０６個の細胞／ｃｍ２（４２０，０００個の細胞／ｍｌ、１００μｌ／ウェル、９６
ウェルプレート）の密度で１００μｇ／ｍｌのポリ－Ｌ－リジン被覆皿において平板培養
し、酸化防止剤、０．５ｍＭのＬ－グルタミン、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン、０．１ｍ
ｇ／ｍｌのストレプトマイシン（全ての溶液はＧｉｂｃｏ－ＢＲＬ Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ製）とともに２％のＢ－２７補給剤が補充されたグリア調整Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地
中で培養した。グリア調整Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地を、２４時間のインキュベーション
の後、コンフルエントおよび非増殖性初代マウス星状膠細胞培養物によって生成した。ニ
ューロンを、培地の半分を新鮮なグリア調整Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地と交換することに
よってインビトロで４日（ＤＩＶ）の時点で供給し、その後、供給を、７日置きに行った
。供給後ＤＩＶ４で、神経培養物を、１μＭのシトシンアラビノシドで処理して、細胞の
増殖を停止させた。培養物中のグリア細胞の割合は、ＤＩＶ１５でグリア原線維酸性タン
パク質（ＧＦＡＰ）に対する抗体によって評価した際、１０％未満であった。ｒＴｇ４５
１０マウスに由来するＣＴＸは、内因性マウスタウおよびトランスジェニックヒトタウ４
Ｒ０Ｎを発現する。ｒＴｇ４５１０マウスに由来するＣＴＸは、ＳＤＳ－ｐａｇｅにおい
て５５ｋＤａタウバンドとして示される正常なヒトモノマー非リン酸化およびリン酸化タ
ウのみを含有し；過リン酸化タウ種（６４および７０ｋＤａ）は、ｒＴｇ４５１０マウス
に由来する未処理のＣＴＸ中に存在しない。ＤＩＶ７で、病理学的タウシード、それぞれ
Ｓ１ｐおよびＰ３画分において単離される可溶性オリゴマーまたは不溶性原線維過リン酸
化タウのいずれかとともにＣＴＸをインキュベートすることによって、タウシーディング
を誘発した。完全な培地交換を、ＤＩＶ１１で導入して、病理学的タウシードの連続的な
取り込みを防ぎ、ＣＴＸにおけるタウシーディングを、ＤＩＶ１５で測定した。タウシー
ディングは、ＳＤＳ ｐａｇｅにおける６４、７０および１４０ｋＤａのより高い分子量
における移動度がシフトされたタウバンドとして示される凝集および過リン酸化タウの封
入体中へのモノマー可溶性ヒトタウの動員によって特徴付けられた。過リン酸化タウシー
ド、それぞれＳ１ｐおよびＰ３画分からの可溶性オリゴマーまたは不溶性原線維は、ＣＴ
Ｘにおいて同等にタウシーディングを誘発した。タウシーディングに対するタウ抗体の効
果を調べるために、ＣＴＸを、４０週齢のｒＴｇ４５１０マウスから単離される０．１μ
ｌのＰ３または０．２μｌのＳ１ｐ画分（０．２ｎｇの総ヒトタウを含有する）および１
０μｇの抗体（ｈＣ１０．２、ｈＣ１０．２＿Ｎ３２Ｓ、ｈＣ１０．２＿Ａ１０１Ｔ＿Ｎ
３２Ｓ、ヒトＩｇＧ対照）またはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）の混合物で処理した。
タウシード抗体混合物を、ＣＴＸへの添加の前に４℃で２時間プレインキュベートした。
ＤＩＶ１１で、新鮮なグリア調整Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ培地への完全な培地交換を行った
。ＤＩＶ１５で、４℃で４５分間にわたって２００ｒｐｍで振とうしながら、ニューロン
を、１％のプロテアーゼ阻害剤混合物（Ｒｏｃｈｅ）、１％のホスファターゼ阻害剤混合
物ＩおよびＩＩ（Ｓｉｇｍａ）、および０．２％のＢｅｎｚｏｎａｓｅ（Ｓｉｇｍａ））
を含む氷冷ｔｒｉｔｏｎ溶解緩衝液（５０ｍＭのトリス、１５０ｍＭのＮａＣｌ中１％の
ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００（ｐＨ７．６）に溶解させ、溶解物を、Ｃｉｓｂｉｏインビト
ロ凝集アッセイにおいて使用し、タンパク質含量を、製造業者の指示にしたがって、ビシ
ンコニン酸（ＢＣＡ）アッセイによって決定した。Ｃｉｓｂｉｏ製のタウ凝集アッセイは
、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）においてドナー（Ｔｂ３＋コンジュゲート）およ
びアクセプタ（ｄ２コンジュゲート）抗体の両方について同じ抗体を用いた時間分解蛍光
に基づいており、製造業者の指示にしたがって行った。簡潔に述べると、９μｌの試料を
、９μｌの抗体混合物と混合し、２０時間インキュベートした。プレートを、Ｐｈｅｒａ
ｓｔａプレートリーダーで読み取って、時間分解蛍光（励起光のスイッチング後に測定／
積分される（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ）ＦＲＥＴシグナル）を評価した。アッセイは、ｒＴ
ｇ４５１０マウスに由来する脳物質において、および高い特異性および感度でｒＴｇ４５
１０胚から単離されるタウ播種ＣＴＸに由来するニューロン溶解物において、タウオリゴ
マーおよび原線維の両方のタウ凝集を測定する。結果が図２１に見られる。ヒトＩｇＧ対
照抗体とのＰ３またはＳ１ｐシードのインキュベーションは、播種ＣＴＸから、ＰＢＳと
のＰ３またはＳ１ｐシードのインキュベーションと同様のタウ凝集シグナルをもたらした
。ＰＢＳおよびヒトＩｇＧ対照抗体からのシグナルを平均し、１００％タウ凝集として設
定した。タウ抗体ｈＣ１０．２、ｈＣ１０．２Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０．２Ａ１０１Ｔ－
Ｎ３２Ｓは、ＤＩＶ１５で、Ｐ３およびＳ１ｐ誘発タウシーディングの両方からのタウ凝
集シグナルを著しく減少させた。２つの個々の実験からの結果を要約した。ｈＣ１０．２
抗体は、Ｐ３およびＳ１ｐ誘発タウシーディングを２３％だけ減少させた。変異体ｈＣ１
０．２Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０．２Ａ１０１Ｔ－Ｎ３２Ｓは、Ｐ３およびＳ１ｐ誘発タウ
シーディングを、それぞれ４１～５３％および４８～６０％だけ減少させた。変異体ｈＣ
１０．２Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０．２Ａ１０１Ｔ－Ｎ３２Ｓは、それぞれオリゴマーまた
は原線維タウからなるＳ１ｐまたはＰ３からの過リン酸化タウシードによって誘発される
ｒＴｇ４５１０に由来するＣＴＸにおけるタウシーディングを減少させる際に、ｈＣ１０
．２と比較して優れていた。
実施例１０
ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔの静脈内（ｉ．ｖ．）注射後のｒＴｇ４５１０マウ
スにおけるタウ構造の用量依存的装飾
方法：
１２月齢のｒＴｇ４５１０マウス。これらのトランスジェニックマウスは、ＣａｍＫ２
陽性ニューロン中、ｔｅｔ－ｏｆｆ応答因子下でヒト変異タウ（Ｐ３０１Ｌ ０Ｎ４Ｒ）
を発現し、６月齢以降に顕著なタウ過リン酸化およびもつれ形成を示す。さらに、神経変
性が、強い病変を有する領域において、ｒＴｇ４５１０マウスの１２月齢の時点で存在す
る。マウスに、８０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、８ｍｇ／ｋｇおよび０．８ｍｇ／ｋｇ
の用量でｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ抗体を、尾静脈を介して単回静脈内（ｉ．ｖ．）注射し
た。マウス１匹につき１００μＬの体積を注射した。注射の３日後、マウスに、ＰＢＳを
２分間灌流させた後、４％のパラホルムアルデヒドを１０分間灌流させた。脳を、３０％
のスクロース中で凍結防止し、４０ミクロンの自由に浮遊する低温切開片に切り分けた。
切片を、２０分間にわたってＰＢＳ／１％のＢＳＡ／０．３％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ－１０
０中の５％の正常なブタ血清とともにインキュベートし、ＰＢＳ中で洗浄し、最後に、１
：２００でＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８コンジュゲート二次抗ヒトＩｇＧ（＃７０９－５
４５－１４９；Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉ
ｅｓ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＵＳＡ）とともにインキュベートした。切片を、ＰＢＳ中
で洗浄し、取り付け、蛍光顕微鏡によって調べた。
結果：
ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓの静脈内（ｉ．ｖ．）注射により、老化したｒＴｇ４５１０マ
ウス脳の主に海馬および皮質において標的構造へのインビボ結合が生じた（図１）。観察
される陽性構造の数は、個々のｒＴｇ４５１０動物によって異なっていた。ｒＴｇ４５１
０脳における陽性シグナルは、細胞内染色として容易に見えず、神経変性の過程で放出さ
れる細胞外のタウ物質を表し得る。半定量的採点によって、最も高いシグナル（蛍光強度
および陽性構造の数）が、２０および８０ｍｇ／ｋｇで投与された全てのマウスにおいて
検出された（表６）。標識された構造が、４匹中３匹のマウスにおいて８ｍｇ／ｋｇで存
在したが、２０および８０ｍｇ／ｋｇにおけるより明らかに低いレベルであった。０．８
ｍｇ／ｋｇの静脈注射は、適用される視覚化方法を用いてバックグラウンド上にシグナル
を生じなかった。まとめると、これらのデータは、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ抗体が、用量
依存的に、脳実質中に浸透することができ、インビボでｒＴｇ４５１０マウスにおける標
的を特異的に装飾することを示唆している。図２２。
Figure 2022023096000027
実施例１１ タウにおけるシードタウ病変
シードの調製
ＡＤドナーに由来する凍結された皮質組織試料を、Ｔｉｓｓｕｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ
（Ｇｌａｓｇｏｗ，ＵＫ）から入手した。脳組織を秤量し、滅菌冷ＰＢＳ（脳試料の１０
倍の体積）中でナイフホモジザイナーを用いて均質化した。次に、ホモジネートを、出力
２に設定されたＢｒａｎｓｏｎ ｓｏｎｉｆｉｅｒにおいて５×０．９秒パルスによって
超音波処理した。ホモジネートを、４℃で５分間にわたって３０００ｇで遠心分離し、上
清を分割し、ドライアイス上で急速凍結させ、使用するまで－８０℃で貯蔵した。
試験に使用される動物
ＣａｍＫＩＩ陽性ニューロン（ｒｔｇ４５１０）中で、テトラサイクリン制御性トラン
ス活性化因子下でヒト変異タウ（Ｐ３０１Ｌ ０Ｎ４Ｒ）を発現するトランスジェニック
マウスを使用した。このモデルは、通常、３～４月齢でタウ病変を発生し始める。妊娠中
の母親および子が生まれてから最初の３週間にわたってドキシサイクリンを供給すること
によって、病変は、より遅い段階（６月齢後）で発生する。試験に使用される、ドキシサ
イクリンで予め処理されたマウスは、シーディングの時点で２．５月齢であった。
抗体の処理
抗体を、滅菌ＰＢＳ中１．５ｍｇ／ｍｌの濃度で調製し、１つの投与時点に十分な抗体
を含むアリコートにした。アリコートを、使用されるまで４℃で貯蔵した。２月齢から５
．５月齢で殺処分されるまで、マウスに、抗体（１０ｍｌ／ｋｇに等しい１５ｍｇ／ｋｇ
）の腹腔内（ＩＰ）投与を週に１回与えた。以下の抗体を使用した：対照ヒトＢ１２－Ｉ
ｇＧＩ、ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０
１Ｔ。
定位固定注入
３回目の抗体投与を与えた直後に、イソフルラン吸入によってマウスに麻酔をかけ、定
位フレームに固定した。頭蓋骨を露出させ、ブレグマおよびラムダが水平になるまで位置
を調整した。ブレグマの２ｍｍ側方（右）および２．４ｍｍ後方で、頭蓋骨に孔を空けた
。２６ゲージのベベルチップ（ＳＧＥ）を備えた１０μｌのシリンジのを用いて、シーデ
ィング材料を、脳表面の１．４ｍｍ前面に注入した。
２μｌの材料を、その部位にゆっくりと（０．５μｌ／分）注入し、その後、シリンジ
をさらに５分間そのままにして置いてから、それを取り出した。創傷を縫うことによって
閉じ、マウスを、麻酔からの回復中に加熱によって支援した。次に、マウスを３ヶ月間飼
育してから、４％のパラホルムアルデヒドで灌流固定した。
組織学
固定された脳を、ＭｕｌｔｉＢｒａｉｎ（登録商標）技術を用いてＮｅｕｒｏｓｃｉｅ
ｎｃｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ（Ｋｎｏｘｖｉｌｌｅ，ＴＮ）で処理した。ブロック当た
り最大で２５のマウス脳を一緒に埋め込み、脳全体を通して冠状面において３５μｍの凍
結切片にした。６つ置きの切片を、Ｇａｌｌｙａｓ銀染色で染色して、神経原線維変化を
明らかにした。切片を取り付け、カバースリップし、Ｇａｌｌｙａｓ銀陽性ニューロン（
細胞体）を、全ての脳の海馬の注入側で計数した。海馬の全てのサブ領域が含まれていた
。脳当たり８つの切片を計数した。結果は、８つの切片からの陽性ニューロンの合計を反
映する。
結果
ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔは
全て、注射された海馬においてタウもつれのシーディングを著しく減少させた（一元配置
ａｎｏｖａおよびテューキーの多重比較検定）。対照処理マウスと比較して、ｈＣ１０－
２：５０％、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ：４７％およびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１
Ｔ：６０％。図２３。
結果
ｈＣ１０－２、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２ＳおよびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔは全て、注射された海馬においてタウもつれのシーディングを著しく減少させた（一元配置ａｎｏｖａおよびテューキーの多重比較検定）。対照処理マウスと比較して、ｈＣ１０－２：５０％、ｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ：４７％およびｈＣ１０－２＿Ｎ３２Ｓ＿Ａ１０１Ｔ：６０％。図２３。

本発明は以下の態様を含み得る。
［１］
（ａ）配列番号３、配列番号３１；配列番号３２；配列番号３３；配列番号３４；配列番号３５；配列番号３６；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；および配列番号４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４；配列番号４１；および配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５；配列番号４２；および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６；配列番号４３；配列番号４９；配列番号５２；および配列番号５５のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３０；配列番号４４；配列番号５０；配列番号５３；および配列番号５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８、配列番号３９；配列番号４５；配列番号５１；配列番号５４；および配列番号５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［２］
（ａ）配列番号１２；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１８；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２１；配列番号２２および配列番号２３からなる群から選択される軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；配列番号２４；配列番号２５；配列番号２６；および配列番号２７からなる群から選択される重鎖
を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［３］
（ａ）前記軽鎖が配列番号１２であり；
（ｂ）前記重鎖が、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６および配列番号２７からなる群から選択される、請求項１または２に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［４］
（ａ）前記軽鎖が、配列番号１６；配列番号１７；配列番号１８；配列番号１９；配列番号２０；配列番号２１；配列番号２２および配列番号２３からなる群から選択され；
（ｂ）前記重鎖が配列番号１１である、先行請求項のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［５］
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［６］
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［７］
（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、請求項１～４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［８］
（ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項７に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［９］
（ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、請求項１～４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１０］
（ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項９に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１１］
（ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、請求項１～４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１２］
（ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項１１に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１３］
（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、請求項１～４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１４］
（ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項１３に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１５］
（ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
（ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
（ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
（ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
（ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
（ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
を含む、請求項１～４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１６］
（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；
（ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
を含む、請求項１５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１８］
請求項１～１６のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合フラグメントと、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
［１７］
アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、精神病、特に、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、ＡＤに起因するアパシーまたはＡＤの患者におけるアパシー、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤまたはその変異型）、ＴＢＩ（急性または慢性外傷性脳損傷）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、ピック病、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、神経原線維変化優位型老年性認知症、拳闘家認知症、慢性外傷性脳症、脳卒中、脳卒中の回復、パーキンソン病に関連する神経変性、染色体に関連するパーキンソニズム、リティコ－ボディグ病（グアムパーキンソン認知症複合）、神経節膠腫および神経節細胞腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎、ハンチントン病、鉛脳症、結節性硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病およびリポフスチン沈着症からなる群から選択されるタウオパチーを治療するのに使用するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１８］
アルツハイマー病の治療に使用するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［１９］
アルツハイマー病、嗜銀顆粒病（ＡＧＤ）、精神病、特に、ＡＤに起因する精神病またはＡＤの患者における精神病、ＡＤに起因するアパシーまたはＡＤの患者におけるアパシー、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、前頭側頭型認知症（ＦＴＤまたはその変異型）、ＴＢＩ（急性または慢性外傷性脳損傷）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、ピック病、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）、神経原線維変化優位型老年性認知症、拳闘家認知症、慢性外傷性脳症、脳卒中、脳卒中の回復、パーキンソン病に関連する神経変性、染色体に関連するパーキンソニズム、リティコ－ボディグ病（グアムパーキンソン認知症複合）、神経節膠腫および神経節細胞腫、髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎、ハンチントン病、鉛脳症、結節性硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病およびリポフスチン沈着症からなる群から選択される疾患を治療するための薬剤として使用するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
［２０］
被験体におけるアルツハイマー病または他のタウオパチーを治療、診断またはイメージングする方法であって、治療的に有効な量の請求項１～１６のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを、前記被験体に投与する工程を含む方法。
［２１］
前記治療が、長期である、請求項２０に記載の方法。

Claims (22)

  1. （ａ）配列番号３、配列番号３１；配列番号３２；配列番号３３；配列番号３４；配列
    番号３５；配列番号３６；配列番号３７；配列番号３８；配列番号４０；および配列番号
    ４６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１；
    （ｂ）配列番号４；配列番号４１；および配列番号４７のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤ
    Ｒ２；
    （ｃ）配列番号５；配列番号４２；および配列番号４８のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤ
    Ｒ３；
    （ｄ）配列番号６；配列番号４３；配列番号４９；配列番号５２；および配列番号５５
    のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１；
    （ｅ）配列番号７；配列番号２８；配列番号２９；配列番号３０；配列番号４４；配列
    番号５０；配列番号５３；および配列番号５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を
    含む重鎖ＣＤＲ２；および
    （ｆ）配列番号８、配列番号３９；配列番号４５；配列番号５１；配列番号５４；およ
    び配列番号５７からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ３
    を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
  2. （ａ）配列番号１２；配列番号１６；配列番号１７；配列番号１８；配列番号１９；配
    列番号２０；配列番号２１；配列番号２２および配列番号２３からなる群から選択される
    軽鎖；および
    （ｂ）配列番号１１；配列番号１３；配列番号１４；配列番号１５；配列番号２４；配
    列番号２５；配列番号２６；および配列番号２７からなる群から選択される重鎖
    を含む、モノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
  3. （ａ）前記軽鎖が配列番号１２であり；
    （ｂ）前記重鎖が、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号２４、配列
    番号２５、配列番号２６および配列番号２７からなる群から選択される、請求項１または
    ２に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
  4. （ａ）前記軽鎖が、配列番号１６；配列番号１７；配列番号１８；配列番号１９；配列
    番号２０；配列番号２１；配列番号２２および配列番号２３からなる群から選択され；
    （ｂ）前記重鎖が配列番号１１である、先行請求項のいずれか一項に記載のモノクロー
    ナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
  5. （ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
    （ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
    （ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    （ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
    （ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
    （ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
    を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ
    結合フラグメント。
  6. （ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
    （ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
    を含む、請求項１または５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラ
    グメント。
  7. （ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
    （ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
    （ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    （ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
    （ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
    （ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
    を含む、請求項１～４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメ
    ント。
  8. （ａ）配列番号１７のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
    （ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
    を含む、請求項７に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント
    。
  9. （ａ）配列番号３３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
    （ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
    （ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    （ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
    （ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
    （ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
    を含む、請求項１～４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメ
    ント。
  10. （ａ）配列番号１８のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
    （ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
    を含む、請求項９に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント
    。
  11. （ａ）配列番号３４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
    （ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
    （ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    （ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
    （ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
    （ｆ）配列番号８のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
    を含む、請求項１～４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメ
    ント。
  12. （ａ）配列番号１９のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
    （ｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含む重鎖
    を含む、請求項１１に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメン
    ト。
  13. （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
    （ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
    （ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    （ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
    （ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
    （ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
    を含む、請求項１～４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメ
    ント。
  14. （ａ）配列番号１２のアミノ酸配列を含む軽鎖；および
    （ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
    を含む、請求項１３に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメン
    ト。
  15. （ａ）配列番号３１のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ１；
    （ｂ）配列番号４のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ２；
    （ｃ）配列番号５のアミノ酸配列を有する軽鎖ＣＤＲ３；
    （ｄ）配列番号６のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ１；
    （ｅ）配列番号７のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ２；および
    （ｆ）配列番号３９のアミノ酸配列を有する重鎖ＣＤＲ３
    を含む、請求項１～４に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメ
    ント。
  16. （ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含む軽鎖；
    （ｂ）配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖
    を含む、請求項１５に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメン
    ト。
  17. 請求項１～１６のいずれか一項に記載のモノクローナル抗体またはそのエピトープ結合
    フラグメントと、薬学的に許容できる担体とを含む医薬組成物。
  18. アルツハイマー病、嗜銀顆粒性認知症（ＡＧＤ）、精神病、特に、ＡＤに起因する精神
    病またはＡＤの患者における精神病、ＡＤに起因する無気力症またはＡＤの患者における
    無気力症、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、
    前頭側頭型認知症（ＦＴＤまたはその変異型）、ＴＢＩ（急性または慢性外傷性脳損傷）
    、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、ピック病、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）
    、神経原線維変化優位型老年性認知症、拳闘家認知症、慢性外傷性脳症、脳卒中、脳卒中
    の回復、パーキンソン病に関連する神経変性、染色体に関連するパーキンソニズム、リテ
    ィコ－ボディグ病（グアムパーキンソン認知症複合）、神経節膠腫および神経節細胞腫、
    髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎、ハンチントン病、鉛脳症
    、結節性硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病およびリポフスチン沈着症からなる群か
    ら選択されるタウオパチーを治療するのに使用するための、請求項１～１６のいずれか一
    項に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
  19. アルツハイマー病の治療に使用するための、請求項１～１６のいずれか一項に記載のモ
    ノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
  20. アルツハイマー病、嗜銀顆粒性認知症（ＡＧＤ）、精神病、特に、ＡＤに起因する精神
    病またはＡＤの患者における精神病、ＡＤに起因する無気力症またはＡＤの患者における
    無気力症、レビー小体型認知症の患者の精神医学的症状、進行性核上性まひ（ＰＳＰ）、
    前頭側頭型認知症（ＦＴＤまたはその変異型）、ＴＢＩ（急性または慢性外傷性脳損傷）
    、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）、ピック病、原発性加齢性タウオパチー（ＰＡＲＴ）
    、神経原線維変化優位型老年性認知症、拳闘家認知症、慢性外傷性脳症、脳卒中、脳卒中
    の回復、パーキンソン病に関連する神経変性、染色体に関連するパーキンソニズム、リテ
    ィコ－ボディグ病（グアムパーキンソン認知症複合）、神経節膠腫および神経節細胞腫、
    髄膜血管腫症、脳炎後パーキンソニズム、亜急性硬化性全脳炎、ハンチントン病、鉛脳症
    、結節性硬化症、ハレルフォルデン・スパッツ病およびリポフスチン沈着症からなる群か
    ら選択される疾患を治療するための薬剤として使用するための、請求項１～１６のいずれ
    か一項に記載のモノクローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメント。
  21. 被験体におけるアルツハイマー病または他のタウオパチーを治療、診断またはイメージ
    ングする方法であって、治療的に有効な量の請求項１～１６のいずれか一項に記載のモノ
    クローナル抗体、またはそのエピトープ結合フラグメントを、前記被験体に投与する工程
    を含む方法。
  22. 前記治療が、長期である、請求項２０に記載の方法。
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