JP2022017384A - 新規ulk1阻害剤およびそれを使用する方法 - Google Patents

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F Egan Daniel
ニコラス コスフォード、
Cosford Nicholas
ベンジャミン ターク、
Turk Benjamin
ミッチェル バモス、
Vamos Mitchell
ダンニャ ラビーンドラ パニッカー、
Raveendra Panickar Dhanya
マシュー チュン、
chun Matthew
ダグ シェフラー、
Sheffler Doug
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Abstract

【課題】ULK1(unc-51様キナーゼ1)を阻害し、ULK1関連疾患または障害を治療するために使用できる、新規化合物を提供する。【解決手段】例えば、下記の化合物が示される。JPEG2022017384000442.jpg35170【選択図】なし

Description

(関連出願の相互参照)
本出願は、米国特許法第119条(e)項に基づき、2014年8月25日に出願され
た米国仮特許出願第62/041,559号および2015年6月24日に出願された同
第62/184,212号の優先権を主張するものであり、これらの出願のすべては、参
照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
(連邦政府による資金提供を受けた研究開発の記載)
本発明は、国立衛生研究所により付与された補助金R01 CA172,229および
R01 CA188,694ならびに国防総省により付与されたW81XWH-13-1
-0043のもとで政府支援によりなされた。政府は、本発明についてある一定の権利を
有する。
オートファジーは、損傷したタンパク質、タンパク質複合体および細胞小器官の排除の
ための中心的な細胞機構である。この保存されたプロセスは、胚発生中の適正な細胞およ
び組織の恒常性のためならびに病原体に対する防御において必要とされているのに加えて
、栄養枯渇および他のストレスに対する細胞応答において重大な役割を果たす。オートフ
ァジー経路における欠陥は、感染性疾患、神経変性障害およびがんを含むある特定のヒト
病理に関連する。これらの高度に保存された基本的な細胞機能にもかかわらず、オートフ
ァジーが異なる貨物についてどのように開始されるかという分子のおよび生化学的詳細、
ならびにリソソームとの最終的な融合のためのオートファゴソーム開始から始まるステッ
プの協調は、あまり理解されないままである。
出芽酵母における先駆的研究において、そのほとんどが哺乳動物で保存されている、こ
のプロセスに必要とされる36のコアオートファジー(「ATG」)遺伝子が最初に定義
された。酵母における経路の最も上流の構成要素の1つはAtg1遺伝子であり、これは
、セリン/スレオニンキナーゼをコードするための唯一のコアATG遺伝子であることで
知られている。Atg1は、Atg13およびAtg17を含む複数の調節サブユニット
と複合体を形成する。哺乳動物において、2つのAtg1ホモログ、ULK1(unc-
51様キナーゼ1)およびULK2があるように思われ、これらは、同様に、Atg13
ホモログおよびAtg17様タンパク質、FIP200と結合している。ULK1キナー
ゼ複合体は、栄養枯渇に応答して活性化し、飢餓誘発性オートファジーの重要なイニシエ
ーターとして役立つと考えられている。いくつかの細胞型が受けるバルク定常状態オート
ファジーにULK1複合体が必要とされるか否か、ならびに選択的オートファジーのある
特定の形態がULK1複合体の関与なしでも進行し得るか否かは、依然として不明である
。飢餓誘発性オートファジーの文脈において、ULK1は、グルコースまたは酸素枯渇を
含む細胞内ATPレベルを低下させる細胞ストレス後およびミトコンドリア損傷後に活性
化する、細胞エネルギーセンサーAMP活性化タンパク質キナーゼ(AMPK)からのイ
ンプットを受け取る。ULK1への別の重要なインプットは、ラパマイシン複合体の機械
的標的1(mTORC1)である。アミノ酸離脱等のいくつかの栄養素ストレスは、急性
AMPK活性化をもたらさないが、急速なmTORC1不活性化を引き起こし、それによ
り、AMPKからの刺激インプットがない場合であっても、ULK1活性化をもたらす。
ULK1は、少なくとも1つのセリン、Ser757上でmTORC1によって直接リン
酸化され、少なくとも4つの異なるセリン上でAMPKによってリン酸化されて、それを
活性化する。前述のストレスのほとんどがAMPK活性化およびmTOR阻害の両方をも
たらすため、飢餓は、ULK1におけるAMPK部位のリン酸化の増大およびmTORC
1部位の損失をもたらすはずである。加えて、最近の研究は、AMPKが、オートファゴ
ソーム生合成に必要とされる局在するPI3P生成を司るVps34/ベクリン複合体の
2つの中心的構成要素であるベクリン-1およびVps34の両方を直接リン酸化するこ
とができ、故に、オートファジーの流れを積極的に媒介することを示唆している。種々の
形態のオートファジーにおけるベクリン複合体の構成要素のAMPKリン酸化対Ulk1
複合体のリン酸化のための相対的な要件は、依然として調査中である。
ULK1を阻害し、ULK1関連疾患または障害を治療するために使用できる、新規化
合物が当技術分野において必要である。本発明は、この必要性に取り組むものである。
本明細書において開示されている通り、本発明は、対象における疾患または状態を治療
するための化合物および方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、式Aの
構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩と、治療有効量のmTOR阻害剤
とを共投与するステップを含む、方法を提供する。
本発明はさらに、対象における抗がん剤耐性疾患を治療する方法であって、抗がん剤耐
性疾患を有する対象を選択するステップと、対象に、治療有効量の、式Aの構造を有する
化合物、または薬学的に許容されるその塩を投与するステップとを含む、方法を提供する
加えて、本発明は、対象におけるオートファジー媒介性疾患または状態を治療する方法
であって、それを必要とする対象に、治療有効量の、式Aの構造を有する化合物、または
薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含み、ここで、オートファジー媒介性疾
患または状態は、遺伝子STK11、PTEN、TSC1、TSC2および/もしくはP
IK3CAにおける突然変異から生じる疾患もしくは状態、またはmTOR基質バイオマ
ーカーであるホスホ-S6Kもしくはホスホ-4ebp1によって示される疾患もしくは
状態を含む、方法を提供する。
ある特定の実施形態では、式Aの化合物は、
Figure 2022017384000001
[式A中、R10は、ハロゲン;-OR11(ここで、R11は、H、任意選択で置換さ
れているアリール、または任意選択で置換されているヘテロアリールである);-NR
(ここで、RおよびRは、H、任意選択で置換されているアリール、任意選択で
置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているシクロアルキル、および任意
選択で置換されているアルキルからなる群からそれぞれ独立に選択されるか、またはNR
は、一緒になって、ヘテロ環を形成する)からなる群から選択されるか;またはR
およびR10は、一緒になって、環式構造を形成し;Rは、任意選択で置換されてい
るアミノ、任意選択で置換されているアリールオキシ、任意選択で置換されているヘテロ
アリールオキシ、任意選択で置換されているアルコキシ、N-ヘテロ環式、任意選択で置
換されているチオール、任意選択で置換されているアルキル、ヒドロキシルおよびハロゲ
ンからなる群から選択され;Rは、H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアル
キル、ハロ、任意選択で置換されているアルコキシ、もしくは任意選択で置換されている
アリール、任意選択で置換されているカルボキシル、シアノおよびニトロからなる群から
選択されるか、またはRおよびRは、一緒になって、環式構造を形成し;Rは、H
またはハロアルキルである]
または薬学的に許容されるその塩である。
本発明はさらに、対象における疾患または状態を治療する方法であって、それを必要と
する対象に、治療有効量の、式Iの構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその
塩と、治療有効量のmTOR阻害剤とを共投与するステップを含む、方法を提供する。
本発明はさらに、対象における疾患または状態を治療する方法であって、それを必要と
する対象に、治療有効量の、2-(置換)アミノ-4-(置換)アミノ-5-ハロ-ピリ
ミジン、2-(置換)アミノ-4-(置換)アミノ-5-(ハロ)アルキル-ピリミジン
、2-(置換)アミノ-4-(置換)オキソ-5-ハロ-ピリミジン、2-(置換)アミ
ノ-4-(置換)オキソ-5-(ハロ)アルキル-ピリミジン、2-(置換)アミノ-4
-(置換)チオ-5-ハロ-ピリミジン、および2-(置換)アミノ-4-(置換)チオ
-5-(ハロ)アルキル-ピリミジンからなる群から選択されるULK1阻害剤と;治療
有効量のmTOR阻害剤とを共投与するステップを含む、方法を提供する。
本発明はさらに、対象における抗がん剤耐性疾患を治療する方法であって、抗がん剤耐
性疾患を有する対象を選択するステップと、対象に、治療有効量の、式Iの構造を有する
化合物、または薬学的に許容されるその塩を投与するステップとを含む、方法を提供する
本発明はさらに、対象におけるオートファジー媒介性疾患または状態を治療する方法で
あって、それを必要とする対象に、治療有効量の、式Iの構造を有する化合物、または薬
学的に許容されるその塩を投与するステップを含み、ここで、オートファジー媒介性疾患
または状態は、遺伝子STK11、PTEN、TSC1、TSC2および/もしくはPI
K3CAにおける突然変異から生じる疾患もしくは状態、またはmTOR基質バイオマー
カーであるホスホ-S6Kもしくはホスホ-4ebp1によって示される疾患もしくは状
態を含む、方法を提供する。
ある特定の実施形態では、式Iの化合物は、
Figure 2022017384000002
[式I中、RおよびRは、H、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換
されているヘテロアリール、任意選択で置換されているシクロアルキル、および任意選択
で置換されているアルキルからなる群からそれぞれ独立に選択されるか、またはNR
は、一緒になって、ヘテロ環を形成し;Rは、任意選択で置換されているアミノ、任
意選択で置換されているアリールオキシ、任意選択で置換されているヘテロアリールオキ
シ、任意選択で置換されているアルコキシ、N-ヘテロ環式、任意選択で置換されている
チオール、および任意選択で置換されているアルキルからなる群から選択され;Rは、
H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置換されてい
るアルコキシ、および任意選択で置換されているアリールからなる群から選択され;R
は、Hである];または薬学的に許容されるその塩である。
本発明はさらに、mTOR阻害剤治療の有効性を決定する方法であって、mTOR阻害
剤を投与した対象由来の生物学的試料におけるmTOR基質であるホスホ-S6Kおよび
ホスホ-4ebp1の少なくとも一方のレベルを検出する1つまたは複数のアッセイを実
施するステップと;mTOR基質であるホスホ-S6Kおよびホスホ-4ebp1の少な
くとも一方のレベルを、正常組織において見られるそれぞれの対照レベルと比較するステ
ップとを含む、方法を提供する。
本発明はさらに、構造
Figure 2022017384000003
[式中、Rは、Hであり;Rは、
Figure 2022017384000004
からなる群から選択され;Rは、任意選択で置換されているアミノ、任意選択で置換さ
れているアリールオキシ、任意選択で置換されているヘテロアリールオキシ、任意選択で
置換されているアルコキシ、N-ヘテロ環式、任意選択で置換されているチオール、およ
び任意選択で置換されているアルキルからなる群から選択され;Rは、H、ヒドロキシ
、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置換されているアルコキシ、お
よび任意選択で置換されているアリールからなる群から選択され;Rは、Hである]
を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩を提供する。
本発明はさらに、
Figure 2022017384000005
[式中、Rは、Hであり;Rは、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置
換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているシクロアルキル、および任意選
択で置換されているアルキルからなる群から選択されるか、またはNRは、一緒に
なって、ヘテロ環を形成し;Rは、任意選択で置換されているアリールオキシ、任意選
択で置換されているヘテロアリールオキシ、および任意選択で置換されているアルコキシ
からなる群から選択され;Rは、H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアルキ
ル、ハロ、任意選択で置換されているアルコキシ、および任意選択で置換されているアリ
ールからなる群から選択され;Rは、Hである]
の構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩を提供する。
本発明はさらに、構造
Figure 2022017384000006
[式中、Rは、Hであり;Rは、任意選択で置換されているヘテロアリール縮合環で
あり;Rは、-NRであり、ここで、Rは、Hであり、Rは、任意選択で置
換されているヘテロアリール縮合環であり;Rは、H、ヒドロキシル、任意選択で置換
されているアルキル、ハロ、任意選択で置換されているアルコキシ、または任意選択で置
換されているアリールであり;Rは、Hである]を有する化合物、または薬学的に許容
されるその塩を提供する。
本発明はさらに、構造
Figure 2022017384000007
[式中、Rは、Hであり;Rは、
Figure 2022017384000008
からなる群から選択され;Rは、任意選択で置換されているアミノ、任意選択で置換さ
れているアリールオキシ、任意選択で置換されているヘテロアリールオキシ、任意選択で
置換されているアルコキシ、N-ヘテロ環式、任意選択で置換されているチオール、およ
び任意選択で置換されているアルキルからなる群から選択され;Rは、H、ヒドロキシ
、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置換されているアルコキシ、お
よび任意選択で置換されているアリールからなる群から選択され;Rは、Hである]
を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩を提供する。
本発明はさらに、
(a)式I:
Figure 2022017384000009
[式I中、RおよびRは、H、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換
されているヘテロアリール、任意選択で置換されているシクロアルキル、および任意選択
で置換されているアルキルからなる群からそれぞれ独立に選択されるか、またはNR
は、一緒になって、ヘテロ環を形成し;Rは、任意選択で置換されているアミノ、任
意選択で置換されているアリールオキシ、任意選択で置換されているヘテロアリールオキ
シ、任意選択で置換されているアルコキシ、N-ヘテロ環式、任意選択で置換されている
チオール、および任意選択で置換されているアルキルからなる群から選択され;Rは、
H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置換されてい
るアルコキシ、および任意選択で置換されているアリールからなる群から選択され;R
は、Hである]
の構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩と;
(b)mTOR阻害剤と;
(c)少なくとも1つの薬学的に許容される添加物と
を含む、医薬組成物を提供する。
本発明はさらに、配列YANWLAASIYLDGKKK(配列番号1)を含む組換え
ペプチドを提供する。
本発明はさらに、ULK1のキナーゼ活性を阻害する化合物を同定するためのスクリー
ニング方法であって、候補化合物、ULK1および本発明の組換えペプチドを接触させる
ステップと;候補化合物の存在下および非存在下で、組換えペプチドのリン酸化を検出す
るステップと;候補化合物の非存在下と比較して候補化合物の存在下で組換えペプチドの
リン酸化が減少している場合に、ULK1のキナーゼ活性を阻害する化合物を同定するス
テップとを含む、方法を提供する。
上述の実施形態、ならびに他の特色および利点は、付属の図を参照して進行する下記の
詳細な説明から明らかとなると予想される。
種々の腫瘍抑制因子および発癌遺伝子からのシグナルが、TSC1-TSC2複合体上でおよびmTOR-raptor(mTORC1)複合体上に集合して、その中に示されている基質を介して細胞増殖およびオートファジーを制御することを例証する例示的なスキームである。 ULK1機能を分析するために開発されたアッセイを例証する図である。GST-Atg101を基質として使用するIP-キナーゼアッセイを例証する一連の画像である。 ULK1機能を分析するために開発されたアッセイを例証する図である。内因性LC3斑点形成を例証する一連の画像である。 ULK1機能を分析するために開発されたアッセイを例証する図である。p62およびLC3プロセシングのオートファジーの流れおよび調節を例証する一連の画像である。 ULK1機能を分析するために開発されたアッセイを例証する図である。ミトコンドリア含有量のTEM定量化を例証する一連の画像である。 ULK1機能を分析するために開発されたアッセイを例証する図である。AnnexinV FACSによって検出されたアポトーシスに対する効果を例証する一連の画像である。ULK1/2またはAtg5 RNAiは、栄養枯渇の条件下で細胞死を増大させる。 ULK1阻害剤の例示的な使用についてのカスケードを例証する図である。新たに同定されたULK1基質部位が、mTOR阻害剤によるTSC細胞およびTSC患者の治療後に増大し、mTOR阻害の効能のマーカーとして試験され得るという仮説を例証するスキームである。 ULK1阻害剤の例示的な使用についてのカスケードを例証する図である。mTOR阻害剤と組み合わせたULK1阻害が、細胞増殖抑制応答を細胞毒性応答に変換するという仮説を例証するスキームである。 ULK1基質モチーフ配列特異性を例証する画像のセットである。 ULK1に対する位置特異的選択性を例証するマトリックスである。 in vitroでのULK1キナーゼ活性を例証するグラフである(ULKtideは配列番号1である)。 残基置換を例証するグラフである(-7E、+5K、-3M、-3R、+1Dおよび+2Dは、それぞれ、配列番号2~7である)。 in vivoでの新規ULK1依存性リン酸化部位の同定を例証する図である。Mycタグ付きWT ULK1(WT ULK1;上)またはMycタグ付きキナーゼ不活性ULK1(KI ULK1;下)を、WT Flagタグ付きAtg101(Flag-Atg101)とともにHEK293T細胞にトランスフェクトし、M2アガロースで免疫沈降させた。免疫沈降物をSDS-PAGEゲル上で泳動させ、クマシーで染色し、Flag-Atg101に対応するバンドを切り取り、単離し、トリプシン消化およびLC/MS/MS分析に供した。この分析によって同定された最適なULK1リン酸化モチーフに適合する、リン酸化された部位が取り囲まれている。(G)として示される緑色のバーは、ペプチド被覆率を示し、(P)として示される紫色のハイライトは、リン酸化事象を示す。(Y)=黄色。 in vivoでの新規ULK1依存性リン酸化部位の同定を例証する図である。WT ULK1またはKI ULK1を、Flag-Atg101またはFlag-Atg101セリンからアラニンへの点突然変異体とともに、HEK293T細胞にトランスフェクトした。この分析において使用した特異的な突然変異体を、置換されているアミノ酸の位置によって示す(上)。細胞溶解物をトランスフェクションの24時間後に単離し、Phos-Tag試薬を含有するSDS-PAGEゲル(中)またはPhos-Tag試薬を欠く標準的なSDS-PAGEゲル(下)上で泳動させ、PVDF膜に移し、これをその後、示されている抗体でイムノブロットした。 in vivoでの新規ULK1依存性リン酸化部位の同定を例証する図である。WT Flagタグ付きベクリン1を基質として使用したことを除き、図5Aと同じである。(Y)=黄色;(G)=緑色;(P)=紫色;(B)=青色;(R)=赤色。 in vivoでの新規ULK1依存性リン酸化部位の同定を例証する図である。WT Flagタグ付きアンブラ1を基質として使用したことを除き、図5Aと同じである。(B)=青色;(P)=紫色。 in vivoでの新規ULK1依存性リン酸化部位の同定を例証する図である。WT Flagタグ付きシンテニン-1(Flag-シンテニン-1)またはFlagタグ付きシンテニン-1セリンからアラニンへの点突然変異体を使用したことを除き、図5Bと同じである。この分析において使用した特異的な突然変異体を、置換されているアミノ酸の位置によって示す(上)。細胞溶解物をトランスフェクションの24時間後に単離し、Phos-Tag試薬を含有するSDS-PAGEゲル(中)またはPhos-Tag試薬を欠く標準的なSDS-PAGEゲル(下)上で泳動させ、PVDF膜に移し、これをその後、示されている抗体でイムノブロットした。(B)=青色;(Y)=黄色;(G)=緑色;(R)=赤色。 in vivoでの新規ULK1依存性リン酸化部位の同定を例証する図である。ULK1部位であるSTINGリン酸化部位と並んだ、この分析において同定されたすべての新規ULK1リン酸化部位のアライメントである。-3(緑色)、+1(緑色)、および+2(黄色)位における最適なULK1リン酸化モチーフに適合する残基を含有するリン酸化部位は、ハイライトされている。位置aについて:(B)Atg13(Ser389)、ベクリン1(Ser96)、ベクリン1(ser337)を除いてすべてのハイライトされた位置について(G)。位置bについて:Atg13(Ser389)、Atg101(ser11)、Atg101(Ser203)、FIP200(Ser1323)、シンテニン1(ser6)、シンテニン1(Ser61)について(G)、および残りのハイライトされた位置について(P)。(G)=緑色;(P)=紫色。 Vps34 Ser249がin vivoでの新規ULK1リン酸化部位であるという所見を例証する図である。Mycタグ付きWT ULK1(WT ULK1;右)またはMycタグ付きキナーゼ不活性ULK1(KI ULK1;左)のいずれかを、WT Flagタグ付きVps34(WT Vps34)とともにHEK293T細胞にトランスフェクトし、M2アガロースで免疫沈降させた。免疫沈降物をSDS-PAGEゲル上で泳動させ、クマシーで染色し、WT Vps34に対応するバンドを切り取り、単離し、トリプシン消化およびLC/MS/MS分析に供した。緑色のバーはペプチド被覆率を示し、紫色ハイライトはリン酸化事象を示す。矢印はセリン249を示す。 Vps34 Ser249がin vivoでの新規ULK1リン酸化部位であるという所見を例証する図である。生物種間のVps34セリン249のClustalアライメントは、それが進化を通して保存され、最適なULK1リン酸化モチーフに適合することを示す。(B)=青色;(G)=緑色;(Y)=黄色。 Vps34 Ser249がin vivoでの新規ULK1リン酸化部位であるという所見を例証する図である。in vitroキナーゼアッセイは、Flagタグ付きWT Vps34(Vps34 WT)またはFlagタグ付きセリンからアラニンへの点突然変異体Vps34(Vps34 S249A)を、WT ULK1またはKI ULK1のいずれかのための基質として使用して実施した。in vitroキナーゼアッセイは、放射性標識されたγ-32P-ATPの存在下で実施した(上)。Vps34 WT、Vps34 S249A、WT ULK1、およびKI ULK1は、HEK293T細胞中で生成した(下)。 Vps34 Ser249がin vivoでの新規ULK1リン酸化部位であるという所見を例証する図である。Vps34 WTまたはVps34 S249AおよびWT ULK1またはKI ULK1を、HEK293T細胞にトランスフェクトした。細胞溶解物をトランスフェクションの24時間後に単離し、SDS-PAGEゲル上で泳動させ、PVDF膜に移し、これをその後、示されている抗体でプローブした。矢印は、Vps34 WTおよびWT ULK1組合せでのみ発生するリン酸化を代表する移動度シフトを示す。 Vps34 Ser249がin vivoでの新規ULK1リン酸化部位であるという所見を例証する図である。HEK293T細胞に、Vps34 WTまたはVps34 S249AおよびWT ULK1、WT Mycタグ付きULK2(ULK2)、またはWT Mycタグ付きULK3(ULK3)をトランスフェクトした。細胞溶解物をトランスフェクションの24時間後に単離し、示されている抗体でイムノブロットした。 Vps34 Ser249がin vivoでの新規ULK1リン酸化部位であるという所見を例証する図である。キナーゼではなく野生型ULK1がHEK293T細胞において共発現された場合の各部位の並行誘導を実証する、ホスホ-Ser249 Vps34抗体対市販のホスホ-Ser15ベクリン抗体の比較を示す図である。(P)=紫色;(G)=緑色;(Y)=黄色;(R)=赤色。 その下流基質リン酸化部位に対する強力なULK1キナーゼ阻害剤としての化合物14のin celluloスクリーニング同定を例証する図である。WT ULK1およびULK2に対する化合物14のIC50値は、in vitroキナーゼアッセイを使用して決定した(ULK1については107nMおよびULK2については711nMのIC50)。WT ULK1(左)およびWT ULK2(右)は、30μMの放射性標識されたγ-32P-ATPの存在下、10μMのMBPを使用してアッセイした。化合物14を、10用量IC50モードで、3倍連続希釈および1μMの開始用量を用い、3連で試験した。 その下流基質リン酸化部位に対する強力なULK1キナーゼ阻害剤としての化合物14のin celluloスクリーニング同定を例証する図である。ヒト胎児腎臓細胞(HEK293T)に、WTまたはキナーゼ不活性(KI)Mycタグ付きULK1およびWT Flagタグ付きVps34(WT Vps34)をトランスフェクトした。トランスフェクション後24時間で、細胞を、推定上のULK1競合性阻害剤のパネルで、用量応答様式にて処理した(1、10、50μM)。細胞溶解物を処理の1時間後に単離し、示されている抗体でイムノブロットした。化合物14についての代表的結果を示す。 その下流基質リン酸化部位に対する強力なULK1キナーゼ阻害剤としての化合物14のin celluloスクリーニング同定を例証する図である。HEK293T細胞に、WTまたはKI ULK1およびWT Vps34(左)またはWT Flagタグ付きベクリン1(WTベクリン1;右)をトランスフェクトした。トランスフェクション後24時間で、細胞を、化合物14(10μM)またはDMSOで処理した。細胞溶解物を処理の1時間後に単離し、示されている抗体でイムノブロットした。 その下流基質リン酸化部位に対する強力なULK1キナーゼ阻害剤としての化合物14のin celluloスクリーニング同定を例証する図である。WTまたはUlk1/Ulk2ダブルノックアウトマウス胚線維芽細胞(MEF)を、10μMの化合物14の存在下および非存在下、1μMのINK128、1μMのAZD8055、またはDMSOを含有する新鮮な培地(10%FBSを含有するダルベッコ改変イーグル培地[DMEM])で、または飢餓培地(EBSS)で処理した。細胞溶解物を処理の1時間後に単離し、示されている抗体でイムノブロットした。アスタリスクは、非特異的なバンドを表す。 その下流基質リン酸化部位に対する強力なULK1キナーゼ阻害剤としての化合物14のin celluloスクリーニング同定を例証する図である。(上)化合物14についてのキナーゼ選択性プロファイルは、DiscoveRx KINOMEscanプロファイリングサービスを使用して決定した。簡潔に述べると、化合物14を、in vitro結合アッセイにおいて、1μMの用量で、456キナーゼのパネルの基質との結合を弱めるその能力についてスクリーニングした。一次スクリーニングのヒットについてのスコアは、DMSO対照のパーセント(%対照)として報告されている。より低いスコアは、標的キナーゼに対する化合物14のより強い阻害効果を反映している。化合物14は、非常に選択的であり、10μMで試験した場合、95%超の8つのキナーゼおよび90%超の19のキナーゼのみを阻害した。(下)In vitroキナーゼアッセイを、選択されたキナーゼについて実施した。これらのアッセイを、化合物14の存在下、用量応答様式にて実施して、これらの個々のキナーゼのそれぞれについて、化合物14のIC50値を同定した。IC50値がULK1と1倍未満の差であるキナーゼは、黄色でハイライトされている。残りのキナーゼのうち、IC50値がULK2について同定されたもの未満であったキナーゼは、褐色でハイライトされている。 その下流基質リン酸化部位に対する強力なULK1キナーゼ阻害剤としての化合物14のin celluloスクリーニング同定を例証する図である。TREEspot相互作用マップを生成して、5Aにおいて試験したキナーゼのパネルに対し、化合物14についての選択性プロファイルを視覚的に表した。その結合が化合物14によって阻害されたキナーゼには赤色丸印が付けられており、より大きい丸印はより強い阻害効果を示す。この分析において試験したキナーゼを、ヒトキノームにおけるそれらの系統発生群分類に従って配置する。 アミノ酸枯渇後24時間で、ビヒクル処理したMEFの20%が、伝統的なアポトーシスマーカーであるAnnexinVに対して陽性であったのに対し、化合物14で処理した細胞の50%がAnnexinV陽性であったことを示す、画像のセットである。 アミノ酸飢餓細胞のイムノブロット経時分析が、活性開裂カスパーゼ-3およびその標的PARPの開裂は、飢餓化合物14で共処理された細胞においてのみかなり観察されたことを明らかにしたことを示す画像のセットであり、これは、免疫細胞化学によるアポトーシスマーカーと並行していた(図8C)。 U87MG膠芽細胞腫細胞およびネズミKras p53肺癌細胞において、化合物14が、栄養飢餓状態で選択的にアポトーシス(AnnexinV+細胞)を促進したことを示す、画像のセットである。 ULK1阻害剤と組み合わせた栄養枯渇のあるMEFにおいて観察された通り、イムノブロット分析は、細胞死のFACS分析と並行して、ULK1およびmTOR阻害剤の組合せのみが、A549細胞においてカスパーゼ活性化を引き起こすことを明らかにしたことを示す、画像のセットである。 Annexin-V+アポトーシスA549細胞の誘導が、化合物14の10または20μM投薬時にさらに一層劇的に高められたことを示す、画像のセットである。 ULK1に対するRNAiは、LC3斑点を誘発するAZD8055の能力を完全に取り除いたのに対し、FAK、Src、AuroraAまたはJAK3に対するRNAiは、効果を有さなかったことを示す表である。緑色蛍光タンパク質と融合しているLC3(GFP-LC3)をコードする構築物を安定的に発現しているPC3ヒト前立腺細胞に、その結合が化合物14によって阻害されることが示された最上位の18のキナーゼに対して、siRNAをトランスフェクトした。RNAiトランスフェクション後48時間で、細胞を、1μMの触媒mTOR阻害剤AZD8055またはINK128で4時間にわたって処理し、GFP-LC3斑点の存在について評価した。各siRNAについてGFPLC3斑点およびSDの平均数ならびに薬物処理を示す。SRC、c-Src;c-Srcキナーゼ、CSK。 5μMの化合物14の存在下または非存在下で2時間にわたって、続いて、4μMのmTOR触媒阻害剤AZD8055の存在下または非存在下で24時間にわたって処理した、A549細胞の免疫蛍光撮像である。Cyto-IDオートファジー検出キットを使用してオートファジー液胞を検出し、緑色で可視化し、一方、DAPIによって細胞核を対比染色し、青色で可視化している。 図9Dに示されているデータについての代表的な免疫蛍光画像である。GFP-LC3斑点を緑色で可視化し、DAPIで対比染色した細胞核を青色で可視化している。 そのリン酸化がin vivoで過剰発現されたULK1によって誘発されたULK1基質コンセンサスを有するFIP200およびAtg13における複数のセリン部位の発見を例証する、一連の配列アライメントである。 HEK293Tにおいて、化合物14が、野生型ULK1と共発現させた場合に過剰発現されたシンテニン-1およびAtg13が受けるバンドシフトを崩壊させることを示す図である。 対照の35%未満を阻害したキノームの%によって測定した場合、化合物14のS(35)選択指数=0.123であり、ここで、S(35)=(35未満の%対照を有する非変異キナーゼの数)/(試験された非変異キナーゼの数)であることを例証する図である。
オートファジーは、細胞が種々のタンパク質および細胞小器官を異化して、細胞生存に
必要なビルディングブロックおよび重要な代謝物を提供する、栄養素の損失に対する細胞
応答である。加えて、オートファジーは、長期にわたる細胞損傷に伴い蓄積するタンパク
質凝集体および欠陥のある細胞小器官を除去することにより、多くの組織において重要な
恒常的役割を果たす。遺伝学では、すべての真核生物にわたって保存されているオートフ
ァジーのコア構成要素を最初に定義したが、異なるオートファジー複合体が互いをどのよ
うに調節するか、ならびに生化学的事象の正確な時間的および空間的順序がオートファジ
ー誘導にどのように関与するかという分子の詳細は、現在のところあまり理解されていな
い。
結節性硬化症を有する患者の腫瘍および病変において不活性化した遺伝子によってコー
ドされているTSC1-TSC2複合体の分子機能を解読することにおいては、多くの進
歩がなされてきた。TSC腫瘍抑制タンパク質は、ラパマイシンの哺乳動物標的(mTO
R)キナーゼおよびその調節サブユニットRaptorならびに他の構成要素(mTOR
C1)から構成されるキナーゼ複合体に対する効果を介する細胞増殖の中心的調節因子で
ある。TSC複合体は、NF1、PTENおよびLKB1腫瘍抑制因子からを含む様々な
細胞インプットからのシグナルを受け取り、それに応答して、TSC複合体はmTORC
1を下方調節する。TSC1またはTSC2遺伝子において突然変異を継承しているまた
は取得している患者は、mTORC1活性の上昇を呈し、これが細胞の過剰増殖を駆動す
る。LKB1腫瘍抑制因子およびその下流標的、AMP活性化タンパク質キナーゼ(AM
PK)は、TSC2腫瘍抑制因子およびRaptorのリン酸化を直接調節して、栄養枯
渇後等、細胞内エネルギーが低い場合の条件下で、mTORC1活性を下方調節する。
mTORC1活性の最もよく研究されているアウトプットは細胞増殖の制御であり、こ
れは、翻訳調節因子6K1および4ebp1を含む下流基質のmTORC1リン酸化によ
って実現される。細胞増殖におけるmTORC1の役割は広く認められており、より最近
では、オートファジーの細胞プロセスにおけるmTORC1の保存された役割が認められ
てきた。遺伝学的研究は、オートファジーに関与する遺伝子およびオートファジーの開始
を制御する最も上流の複合体が、出芽酵母においてはキナーゼATG1(哺乳動物におい
てはULK1)から構成され、その活性は、栄養素が低い場合に刺激されることを最初に
定義した。
ULK1は数個の残基上で、ULK1(Ser467、Ser555、Thr575、
Ser638)を活性化させるAMPKによって直接リン酸化される。対照的に、固有の
部位(Ser757)上でのmTORC1によるULK1の直接リン酸化は、ULK1不
活性化をもたらし(図1)、TORが下等真核生物においてUlk1/Atg1オルソロ
グをどのように阻害するかと並行して、mTORC1が哺乳動物細胞においてULK1複
合体を阻害することを実証する研究と一致する。いかなる理論によっても限定されること
を望まないが、TSC突然変異および高活性mTORC1を有する細胞および腫瘍におい
て、ULK1は、セリン757上でmTORC1によって高度にリン酸化され、不活性状
態に保持されていてよい。ある特定の実施形態では、TSC欠損細胞において、オートフ
ァジーのプロセスは抑制される。ULK1のAMPKリン酸化は飢餓後の適正なオートフ
ァジーに必要とされるのに対し、mTOR阻害剤での細胞の処理によるオートファジーの
誘導はAMPKを必要とせず、ULK1およびULK1のmTOR調節を必要とする。こ
れは、薬理学的なmTOR阻害がULK1を活性化するために十分であること、およびA
MPKが働いていない場合であっても、mTOR阻害剤による処理後はULK1が実際に
活性化していることを示している。
これらの所見は、TSCの起源および治療にとって重要な意味合いを有している。UL
K1機能およびULK1依存性オートファジーの回復は、TSCに関与する異なる病理に
おいて有意な有益性を有し得る。したがって、TSC欠損細胞および腫瘍のmTOR阻害
剤治療は、ULK1活性およびオートファジーの上方調節をもたらす。オートファジーは
概して有益であるが、腫瘍を治療するという文脈において、細胞生存も促進する両刃の剣
である。ULK1および他のコアオートファジー構成要素は、細胞ストレスの条件下で細
胞生存を促進する(図2)。この細胞生物学的予測(mTOR阻害剤による処理は細胞増
殖を抑えるが、オートファジーの上昇により処理された細胞の細胞生存も促進する)は、
最近の臨床観察と一致する。ラパログはTSCの特異的な臨床徴候に対していくらかの効
能を呈するが、離脱時に腫瘍は急速にそれらの治療前の大きさに戻るため、薬物の効果は
一過性に思われる。これは、これらの作用物質が大いに細胞増殖抑制性であり、腫瘍細胞
の退行および収縮を引き起こしながら、腫瘍細胞の死滅および排除につながらないことを
示唆している。
mTOR阻害がULK1を直接調節していることを考慮すると、ラパログおよび他のm
TOR阻害剤によるオートファジーの誘導および細胞生存は、部分的に、ULK1活性化
によるものであってよい。1つの結果は、ULK1の阻害をラパログ治療と組み合わせる
ことにより、ULK1-オートファジーから生存有益性が除去されると、ラパマイシンの
標準的な細胞増殖抑制効果を細胞毒性効果に変換することである。この結果は、本明細書
において記載されているULK1 siRNAおよび新たに開発された直接的なULK1
キナーゼ阻害剤を使用する細胞培養において実証されている。mTOR阻害剤による処理
の文脈におけるULK1の阻害は、実際に、腫瘍細胞の細胞死の劇的な増大につながり、
mTOR阻害剤からのより多くの細胞増殖抑制応答を細胞死に変換した。ある特定の実施
形態では、ULK1の触媒阻害剤は、TSCの治療において臨床的に有用である。
ULK1は、セリン/スレオニンキナーゼであるオートファジー経路の唯一のコアが保
存された構成要素であることから、オートファジー、より具体的にはmTOR依存性オー
トファジーを制御する化合物を開発する機会にとって特にユニークな標的となっている。
ULK1を阻害する作用物質の臨床治療指数と同じく重要なことに、ULK1を完全に欠
くように遺伝子改変されたマウスは、有意な病理なしに生存可能である。
故に、ULK1選択的キナーゼ阻害剤は、正常組織による耐容性は良好となり得るが、
オートファジー誘導の治療施行に直面して生存のためのオートファジーに依存するように
なった腫瘍細胞による耐容性は良好となり得ない。
オートファジーの全プロセスは細胞生存を促進するが、現在、オートファジーを薬理学
的に阻害するための最もよく確立された作用物質は、クロロキンまたはバフィロマイシン
等のリソトロピック剤(lysotropic agent)である。実際に、クロロキンは、TSC欠損
の文脈において、標的化治療薬と組み合わせた場合に抗腫瘍活性を有する。しかしながら
、すべての組織においてリソソームの流れを変更するそのような作用物質への長期曝露は
、ULK1選択的キナーゼ阻害剤で潜在的に観察されるよりも多くの臨床的合併症を有し
得、mTOR活性化が病理の中核を成す場合、ULK1阻害をTSC腫瘍の極めて選択的
で特に魅力的な標的としている。
保存されたオートファジーカスケードの最も上流の構成要素はカスケードにおいてセリ
ン/スレオニンキナーゼのみをコードすることを考慮すると、経路の他の構成要素のUL
K1依存性リン酸化は、適正な時間的および空間的キューを指示および提供し得る。AM
PKおよびmTORC1によるリン酸化事象を妨害することによってULK1がどのよう
に制御されるかという詳細な理解は認められてきたが、異なる形態の哺乳動物オートファ
ジーにおけるULK1/2のための絶対的要件は、AMPKおよびmTORが、オメガソ
ームに組み込むPI3P脂質形成を直接開始し、オートファゴソームの直接の物理的な開
始を表すように保持される、下流ベクリン-Vps34複合体の複数の構成要素も調節す
るという最近の所見を考慮すると、不明確になってきた。
触媒mTORC1阻害単独(図7D)の後のULK1キナーゼ活性の誘導は、ULK1
キナーゼ活性のアミノ酸枯渇誘導と一致し、これは、AMPKを伴わないと思われる。m
TORC1は、ULK1における少なくとも1つのよく確立されたセリン部位、Ser7
57を介して、ULK1をリン酸化し、阻害する。mTOR阻害剤は、臨床試験において
、腫瘍学について広く試験しており、ラパマイシン類似体は、進行性腎臓がんおよび他の
固形腫瘍のケアの承認された標準である。ULK1がmTORC1によって阻害されるキ
ナーゼであることを考慮すると、ULK1基質リン酸化部位のさらなる描写は、それらの
シグナルが、mTORC1基質リン酸化が減少している場合の正確な条件下で増大すると
予想されることから、mTOR阻害剤の重要なバイオマーカーを産出し得る。
その上、オートファジーは、mTORC1阻害に直面して細胞に生存シグナルを提供し
、この効果は、ULK1依存性およびULK1非依存性手段(AMPKおよびp38のよ
うなストレスキナーゼによるベクリン-Vps34複合体の直接リン酸化等を含む)を介
してオートファジー経路に関わり得るボードの栄養素損失とは異なり、mTORC1がオ
ートファジーを抑制する一次機構としてULK1に大幅に依存し得る。ULK1阻害は、
A549 NSCLC細胞において実証されている通り、mTOR阻害に対する細胞増殖
抑制応答を、細胞生存を促進するオートファジーの能力の損失により、細胞毒性応答に変
換する(図9C)。
mTORC1およびAMPKからの効果を妨害することを介して栄養素がどのようにU
LK1を調節するかという分子の詳細を同定する相次ぐ研究にもかかわらず、オートファ
ジーの開始におけるULK1キナーゼ複合体の重要な標的は、大部分が依然として未知で
ある。ULK1がどのようにオートファジーの開始を媒介するかという分子の詳細の欠如
にもかかわらず、ULK1の遺伝子破壊は、任意のコアオートファジー遺伝子の遺伝子破
壊と同様に、貧栄養条件下で細胞生存能力の損失をもたらす。様々な細胞ストレス後に細
胞生存を促進するオートファジーの能力は、がんの治療のためのオートファジー阻害剤の
直接的検査につながった。しかしながら、これまでのところ、コアオートファジータンパ
ク質のほとんどがドラッガブルな酵素ではないことから、強力かつ選択的なオートファジ
ー阻害剤は、捉えどころがないままである。ULK1は、オートファジー経路における唯
一の保存されたセリン/スレオニンキナーゼであるため、本明細書において開示されてい
るのは、ULK1に対する第1の小分子ATP競合性キナーゼ阻害剤である。本明細書に
おいて記載されているのは、がん細胞の治療的処置を含む異なるストレス後の細胞生存を
改善する、これらの化合物の能力である。
ULK1がオートファジーカスケードにおける唯一の保存されたセリン/スレオニンキ
ナーゼであるという事実は、ULK1を治療薬開発のための非常に独自の魅力的な標的に
している。本明細書において開示されている、化合物14が栄養枯渇と強力に相乗作用し
て腫瘍細胞における細胞死を引き起こすという所見は、完全培地中で増殖している細胞に
対して最小効果をまだ有し、ULK1/2の遺伝的損失とともに所見を裏付けている。U
LK1およびその結合パートナーAtg13が、飢餓および化合物14の共処理によって
選択的に分解されるが、いずれか単独の後にはされないという所見は、ULK1キナーゼ
複合体の活性プールが、化合物14誘発性分解に対して比類なく感受性となり得ることを
示している。これは、細胞が生存をULK1に依存している場合、それらのULK1は、
標的となるATP競合性阻害剤によって有効に阻害された場合に分解されると予想される
ことを示唆しているため、in vivoでのULK1阻害のためのさらなるバイオマー
カーを提供する。ある特定の実施形態では、総ULK1または総Atg13レベルは、生
存促進機構として作用させられる文脈において、ULK1の有効な標的化および抑制を表
すバイオマーカーとして役立つことができる。
まとめると、データは、ULK1の化学的抑制が、オートファジーを誘発するmTOR
阻害剤の能力のブロックにつながり、これが、Pten、LKB1、TSC1、TSC2
もしくはNF1を欠いている、またはKras、Rheb、p110a、もしくはPi3
K-mTOR経路の他の構成要素における発癌性突然変異を有する腫瘍等の、mTORシ
グナル伝達に集中している腫瘍細胞における急速なアポトーシスを引き起こすことを示し
ている。mTORキナーゼ阻害剤またはラパログは広範囲に及ぶ臨床腫瘍学の試験中であ
ることから、データは、化合物14のようなULK1阻害剤をmTOR阻害剤と組み合わ
せることにより、診療所において観察されるそれらの大いに細胞増殖抑制効果をより細胞
毒性効果に変換し、ULK1阻害を、mTOR阻害剤で治療された多くの患者における治
療抵抗性を回避するための心躍る新たな治療ルートとすることを示唆している。
TSC患者において変更された細胞中で混乱する生化学的シグナルの新たなセットも本
明細書において開示されている。シグナルは、ULK1シグナルと呼ばれる回路を形成し
、これは、細胞部分の健康および再生利用を確実にするための品質制御機構を提供するた
めに、我々の体の細胞において通常は活性である。TSC患者の病変、結節および腫瘍に
おいて見られるもの等のTSC遺伝子に欠陥がある細胞において、このULK1シグナル
は、mTORC1と呼ばれるタンパク質複合体の活性の上昇によってブロックされ、これ
は、TSC遺伝子が細胞中で役立つ主要なこと:mTORC1を遮断することである。そ
のため、TSC遺伝子に欠陥がある場合、mTORC1活性は高く、ULK1を遮断する
。これは、TSC欠損細胞の異常な増殖および細胞挙動に寄与する、細胞品質制御および
再生利用の損失をもたらす。これらの新たな所見は、mTOR阻害剤の現在の使用からそ
れらのULK1阻害剤との組合せまで、療法中、TSC患者において、いつどこでmTO
Rが有効に遮断するようになるかを決定するためにULK1活性のマーカーを使用する、
TSCを治療および診断するためのより良い手法について、多数の予測を行う。
現在、TSCの利用可能な最良の治療は、薬物ラパマイシンおよびその類似体(「ラパ
ログ」と呼ばれる)等、これらの患者の細胞において見られるmTORの上昇を抑制する
ことができる薬物である。ラパログおよびより新しい直接的なmTOR阻害薬による治療
は、mTORによるその封鎖が軽減されたら、ULK1の活性化につながると予想される
。これは、ULK1活性のマーカーを生検において使用することができ、mTORがラパ
ログまたは他のmTOR阻害剤からいかによく封鎖するかを決定するためのTSC患者由
来の血液試料が、ULK1からのシグナルが「向上」するのに伴ってmTORがどの程度
下落するかに比例することを意味する。
本明細書において開示されているのは、mTORが療法から有効にブロックされている
場合に増大するマーカーである。現在のマーカーはいずれも、mTORがブロックされる
とすべて低下するが、出発状態では低く、次いで、いかに有効な治療であるかに比例して
、治療とともに増大するシグナルを定量化することは、より容易となり得る。ULK1お
よびmTOR阻害剤の治療組合せについて、有益性は、はるかに恒久的かつ持続的な応答
となることができ、これは、患者が生涯にわたってラパマイシンを継続することを必要と
しない、腫瘍細胞の完全な根絶または腫瘍性ではないTSC欠損細胞型(例えば、脳結節
)に対する機能回復を意味する。
ULK1がリン酸化によってどのように調節されるかを解読するプロセスにおいて、U
LK1機能の多数のアッセイが開発されている。最初に、内因性ULK1を免疫沈降させ
ることができるULK1抗体を特徴付けて、この方式で細胞から単離されたULK1に対
してキナーゼ活性アッセイを実施することを可能にした(図5A)。ULK1機能が無秩
序である場合の異なる細胞型におけるオートファジーおよびオートファジーの流れの調節
も特徴付けた。ULK1欠損の効果を特徴付けた、最もよく確立されたマーカーおよびア
ッセイは、オートファゴソーム構成要素LC3bであり、これは、オートファジー誘導時
に凝集した斑点を形成し、成熟したオートファゴソーム中に局在する際に共有結合性脂質
化およびプロセシングを受ける。故に、イムノブロッティングによって内因性LC3b脂
質化を、形態計測ソフトウェアおよびNIH画像Jを使用する内因性LC3bおよび斑点
の定量化に対する間接免疫蛍光(immunoflourescence)によって斑点形成をモニターする
ことができる(図5C、図5E)。オートファゴソームの市販の親油性色素(CytoI
D autophagy、Enzo Lifesciences)は、オートファゴソー
ムの信頼性の高い読み出しであるとして検証されている(図10)。オートファジーの別
の広く使用されているマーカーは、p62 Sequestrosome-1タンパク質
であり、その代謝回転は、オートファジーによって選択的に誘発される。故に、オートフ
ァジーの薬理学的または遺伝的封鎖の条件下で、p62レベルは上昇する(図5C)。損
傷時の選択的除去をオートファジーに決定的に依存している細胞小器官の1つは、ミトコ
ンドリアである。損傷したミトコンドリアのオートファジー破壊はマイトファジーとして
既知であり、マイトファジーにおける欠陥は、透過電子顕微鏡法(TEM)により、分子
色素JC-1によってアッセイされた際のミトコンドリア膜電位において、外観に欠陥が
あるミトコンドリアの蓄積によって特徴付けられる。
細胞ストレスの条件下でULK1によって制御される別の細胞プロセスは、細胞生存で
ある。RNAiによるULK機能の抑制は、栄養枯渇に供した細胞におけるアポトーシス
の率上昇をもたらす。
ULK1機能のこれらのアッセイに加えて、in vitroキナーゼアッセイにおい
てリン酸化されたペプチド基質中でどのアミノ酸をULK1が好むかという配列特異性を
プロファイルした。この方法は、ULK1が、任意の特定の位置において荷電残基を好ま
ず、いくつかの位置、最も顕著には、ホスホ-アクセプター部位に関して、-3、+1お
よび+3位において疎水性残基をむしろ選ぶ、奇異なキナーゼであることを明らかにした
(図6A)。他のコアオートファジー構成要素とのULK1相互作用を評価する過程で、
Vps34/ベクリン複合体によるキナーゼデッドではなく野生型ULK1の過剰発現は
、SDS-PAGE上におけるこれらの複合体構成要素の劇的な移動度シフトにつながる
ことが発見された。Vps34の配列の分析は、最適なULK1基質モチーフと合致した
Vps34における高度に保存されたセリンの同定につながった(図6B)。ULK1の
直接基質に役立つVps34と一致して、漸増量の精製したULK1キナーゼは、in
vitroキナーゼアッセイ後のVps34の移動度シフトにつながった(図6B)。野
生型またはキナーゼ不活性ULK1を発現している細胞から精製したVps34について
の質量分析を利用して、その存在量がULK1依存性様式にてin vivoで調節され
たリン酸化事象を同定した。Vps34セリン249は、野生型ULK1を発現している
細胞から単離した試料においては完全にリン酸化されていたが、キナーゼデッドULK1
ではされていなかった(図6E)。加えて、これは、ULK1活性化細胞において化学量
論的にリン酸化された唯一の部位であり、Vps34 Ser249リン酸化は、Vps
34における他の部位と比べて、ULK1キナーゼ活性に対してin vivoで極めて
感受性であることを示唆していた。最後に、Vps34が受けるバンドシフトにSer2
49リン酸化が関与しているか否かを、SDS-PAGEで試験した。実際に、リン酸化
不可能なVps34 Ser249Ala突然変異体は、活性ULK1の存在下では移動
度シフトを受けることができない(図6D)。まとめると、これらのデータは、Vps3
4 Ser249がULK1リン酸化の直接標的であることを示唆している。
ULK1による、Vps34、ベクリンおよびアンブラ1における特異的部位のリン酸
化は、mTOR阻害の治療効能のバイオマーカーとして役立つことができる。これらの部
位は、Vps34セリン249、ベクリンセリン15、30、96および337、ならび
にアンブラ1セリン465および635である(図5F)。mTOR活性の現在のマーカ
ーはすべて、mTORがブロックされた場合に低下する(ホスホ-S6、ホスホ-S6K
1、ホスホ-4ebp1)のに対し、ULK1のこれらの基質のリン酸化は、mTORが
阻害された場合に増大し、故に、mTOR活性の有用な代替的読み出しとして役立つはず
である。
(定義)
特に定義しない限り、本明細書において使用されるすべての技術および科学用語は、概
して、本発明が属する分野の当業者によって一般に理解されているものと同じ意味を有す
る。下記の参考文献は、本発明において使用される用語の多くの一般的定義を当業者に提
供するものである:Singletonら、Dictionary of Microb
iology and Molecular Biology(第2版、1994);T
he Cambridge Dictionary of Science and T
echnology(Walker編、1988);The Glossary of
Genetics、第5版、R.Riegerら(編)、Springer Verla
g(1991);およびHaleおよびMarham、The Harper Coll
ins Dictionary of Biology(1991)。全体的に、本明細
書において使用される命名、ならびに薬、有機化学およびポリマー化学における実験手順
は、当技術分野において周知であり、一般的に用いられるものである。
本明細書において使用される場合、冠詞「1つの(a)」および「1つの(an)」は
、その冠詞の文法的目的語が1つまたは1つ超(すなわち、少なくとも1つ)であること
を指す。例として、「エレメント(an element)」は、1つのエレメントまた
は1つを超えるエレメントを意味する。
本明細書において使用される場合、用語「約」は、当業者によって理解されると予想さ
れ、それが使用される文脈に応じてある程度まで変動すると予想される。本明細書におい
て使用される場合、量、持続時間等の測定可能な値を指す際、用語「約」は、指定された
値から、±20%または±10%、より好ましくは±5%,さらに一層好ましくは±1%
、なお一層好ましくは±0.1%の変動を包括するようになっており、そのため、そのよ
うな変動は、開示されている方法を実施するために適切である。
「アシル」は、構造-C(O)Rを有する基を指し、ここで、Rは、例えば、任意選択
で置換されているアルキル、任意選択で置換されているアリール、または任意選択で置換
されているヘテロアリールであってよい。「低級アシル」基は、1から6個の炭素原子を
含有するものである。
「アシルオキシ」は、構造-OC(O)R-を有する基を指し、ここで、Rは、例えば
、任意選択で置換されているアルキル、任意選択で置換されているアリール、または任意
選択で置換されているヘテロアリールであってよい。「低級アシルオキシ」基は、1から
6個の炭素原子を含有する。
用語「付加塩」は、以上で使用される場合、本明細書において記載されている化合物が
形成できる溶媒和物も含む。そのような溶媒和物は、例えば、水和物、アルコレート等で
ある。
「投与」は、本明細書において使用される場合、別の人物による対象への投与または対
象による自己投与を含む。
用語「アルコキシ」は、結合点に酸素原子を含む、1から20個までの炭素原子、好ま
しくは1から6個までの炭素原子(「低級アルコキシ」と称される)、より好ましくは1
から4個までの炭素原子を含む、直鎖、分枝鎖または環式炭化水素配置およびそれらの組
合せを指す。「アルコキシ基」の例は、式-ORによって表され、式中、Rは、アルケニ
ル、アルキニル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキル、アルコ
キシまたはヘテロシクロアルキル基で、任意選択で置換されている、アルキル基であって
よい。好適なアルコキシ基は、メトキシ、エトキシ、n-プロポキシ、i-プロポキシ、
n-ブトキシ、i-ブトキシ、sec-ブトキシ、tert-ブトキシシクロプロポキシ
、シクロヘキシルオキシ等を含む。
「アルコキシカルボニル」は、アルコキシ置換カルボニルラジカル、-C(O)ORを
指し、ここで、Rは、任意選択で置換されているアルキル、アリール、アラルキル、シク
ロアルキル、シクロアルキルアルキルまたは同様の部分を表す。
用語「アルキル」は、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イ
ソブチル、t-ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、デシル、テトラデシ
ル、ヘキサデシル、エイコシル、テトラコシル等の、1から24個の炭素原子の分枝鎖ま
たは非分枝鎖飽和炭化水素基を指す。「低級アルキル」基は、1から6個までの炭素原子
を有する飽和分枝鎖または非分枝鎖炭化水素である。好ましいアルキル基は、1から4個
の炭素原子を有する。アルキル基は、1個または複数の水素原子が、ハロゲン、シクロア
ルキル、アルコキシ、アミノ、ヒドロキシル、アリール、アルケニルまたはカルボキシル
等の置換基で置換されている、「置換アルキル」であってよい。例えば、低級アルキルま
たは(C~C)アルキルは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イ
ソ-ブチル、sec-ブチル、ペンチル、3-ペンチル、またはヘキシルであってよく;
(C~C)シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、ま
たはシクロヘキシルであってよく;(C~C)シクロアルキル(C~C)アルキ
ルは、シクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シクロペンチルメチル、シクロヘキ
シルメチル、2-シクロプロピルエチル、2-シクロブチルエチル、2-シクロペンチル
エチル、または2-シクロヘキシルエチルであってよく;ハロ(C~C)アルキルは
、ヨードメチル、ブロモメチル、クロロメチル、フルオロメチル、トリフルオロメチル、
2-クロロエチル、2-フルオロエチル、2,2,2-トリフルオロエチル、またはペン
タフルオロエチルであってよく;あるいは、ヒドロキシ(C~C)アルキルは、ヒド
ロキシメチル、1-ヒドロキシエチル、2-ヒドロキシエチル、1-ヒドロキシプロピル
、2-ヒドロキシプロピル、3-ヒドロキシプロピル、1-ヒドロキシブチル、4-ヒド
ロキシブチル、1-ヒドロキシペンチル、5-ヒドロキシペンチル、1-ヒドロキシヘキ
シル、または6-ヒドロキシヘキシルであってよい。
本明細書において使用される場合、疾患または病態に関連する用語「改善」は、治療の
任意の観察可能な有益な効果を指す。有益な効果は、例えば、感受性対象における疾患の
臨床症状の発症遅延、疾患の一部またはすべての臨床症状の重症度における低減、疾患の
より緩徐な進行、対象の健康全般または幸福の向上によって、あるいは、特定の疾患に特
異的である当技術分野において周知の他のパラメーターによって、証明することができる
用語「アミド(amide)」または「アミド(amido)」は、式-C(O)NRR’によっ
て表され、ここで、RおよびR’は、独立に、水素、アルキル、アルケニル、アルキニル
、アリール、アラルキル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキル、またはヘテロシクロア
ルキル基であってよい。
用語「アミン」または「アミノ」は、式-NRR’の基を指し、式中、RおよびR’は
、独立に、水素、またはアルキル、アシル、アルケニル、アルキニル、アリール、アラル
キル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキル、もしくはヘテロシクロアルキル基であって
よい。例えば、「アルキルアミノ」または「アルキル化アミノ」は、-NRR’を指し、
ここで、RまたはR’の少なくとも一方はアルキルである。カルボニルアミノ基は、-N
(R)-C(O)-R(ここで、Rは、置換されている基またはHである)であってよい
。好適なアミノ基は、アセトアミドである。
本明細書において使用される場合、「アミノ酸」は、下記の表において示される通り、
そのフルネームによって、3文字表記およびそれに対応する1文字表記によって表される
。アミノ酸の構造およびそれらの略称は、Stryer、1988、「Biochemi
stry」、第3版、W.H.Freeman and Co.、New York等の
化学文献において見ることもできる。
用語「アミノアルキル」は、少なくとも1個の水素原子がアミノ基で置き換えられてい
る、上記で定義された通りのアルキル基(例えば、-CH-NH)を指す。
「アミノカルボニル」は、単独でまたは組み合わせて、アミノ置換カルボニル(カルバ
モイル)ラジカルを意味し、ここで、アミノラジカルは、任意選択で、アルキル、アリー
ル、アラルキル、シクロアルキル、シクロアルキルアルキル、アルカノイル、アルコキシ
カルボニル、アラルコキシカルボニル等で一または二置換されていてよい。
「類似体」は、化学構造が親化合物と異なる分子、例えば、ホモログ(アルキル鎖の長
さにおける差異またはより多くの同位体の1つの包含等、化学構造または質量における増
分によって異なる)、分子断片、1つもしくは複数の官能基によって異なる構造、または
イオン化の変化である。類似体は、必ずしも親化合物から合成されるとは限らない。誘導
体は、基盤構造から誘導された分子である。
「動物」は、生きている多細胞脊椎生物、例えば、哺乳動物および鳥類を含むカテゴリ
ーを指す。哺乳動物という用語は、ヒトおよび非ヒト哺乳動物の両方を含む。同様に、用
語「対象」は、非ヒト霊長類、コンパニオンアニマル(イヌおよびネコ等)、家畜(ブタ
、ヒツジ、雌ウシ等)、および大型の猫科動物等の飼いならされていない動物等の、鳥類
および非ヒト哺乳動物を含む、ヒトおよび非ヒト対象の両方を含む。対象という用語は、
生物のライフサイクルにおける段階にかかわらず当てはまる。故に、対象という用語は、
生物(すなわち、生物が、哺乳動物であるか、家禽または野鳥等の鳥類であるか)に応じ
て、in uteroまたはin ovoの生物に当てはまる。
用語「アラルキル」は、アリール基がアルキル基の水素を置換しているアルキル基を指
す。アラルキル基の例は、ベンジル基である。
「アリール」は、任意選択で非置換であっても置換されていてもよい、単環(例えば、
フェニル)または多重融合もしくは縮合環(例えば、ナフチルまたはアントリル)を有す
る一価不飽和芳香族炭素環式基を指す。「ヘテロアリール基」は、芳香族基の環または縮
合環内に組み込まれた少なくとも1個のヘテロ原子を有する芳香族基として定義される。
ヘテロ原子の例は、窒素、酸素、硫黄およびリンを含むがこれらに限定されない。ヘテロ
アリールは、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾ
リル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリ
ル、チオフェニル、フラニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベン
ゾオキサゾリル、キノキサリニル等を含むがこれらに限定されない。アリールまたはヘテ
ロアリール基は、アルキル、アルキニル、アルケニル、アリール、ハライド、ニトロ、ア
ミノ、エステル、ケトン、アルデヒド、ヒドロキシ、カルボン酸、またはアルコキシを含
むがこれらに限定されない1つまたは複数の基で置換されていてよく、あるいは、アリー
ルまたはヘテロアリール基は、非置換であってよい。
「アリールオキシ」または「ヘテロアリールオキシ」は、式-OArの基を指し、式中
、Arは、それぞれアリール基またはヘテロアリール基である。
本明細書において使用される場合、用語「AZD8055」は、(5-(2,4-ビス
((S)-3-メチルモルホリノ)ピリド[2,3-d]ピリミジン-7-イル)-2-
メトキシフェニル)メタノール、またはその塩もしくは溶媒和物を指す。
用語「カルボキシレート」または「カルボキシル」は、基-COOまたは-COOH
を指す。カルボキシル基は、カルボン酸を形成することができる。「置換カルボキシル」
は、-COORを指し、ここで、Rは、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、
アラルキル、シクロアルキル、ハロゲン化アルキル、またはヘテロシクロアルキル基であ
る。例えば、置換カルボキシル基は、カルボン酸エステルまたはその塩(例えば、カルボ
キシレート)であり得る。
用語「共投与」または「共投与すること」は、本明細書において開示されている化合物
の、少なくとも1つの他の治療または診断剤との、同じ一般的な期間内の投与を指し、時
間的にまったく同じ瞬間の投与を必要としない(が、共投与は、時間的にまったく同じ瞬
間に投与することを含む)。故に、共投与は、同じ日であっても異なる日であっても、ま
たは同じ週内または異なる週内であってもよい。ある特定の実施形態では、複数の治療お
よび/または診断剤を、単一投薬単位または形態中に作用物質を組み合わせることによっ
て共投与してよい。用語「コンジュゲートしている」は、例えば共有結合によって一緒に
結合している2つの分子を指す。コンジュゲートの例は、フルオロフォア等の検出可能な
標識とコンジュゲートしている分子(ペプチド等)である。
本明細書において使用される場合、用語「化合物14」、「SBI-0,206,96
5」、「0,206,965」、「SBI-6965」および「6965」は、化合物2
-(5-ブロモ-2-(3,4,5-トリメトキシフェニルアミノ)ピリミジン-4-イ
ルアミノ)-N-メチルベンズアミド、またはその塩もしくは溶媒和物(表1)を指すた
めに、交換可能に使用される。
用語「接触させること」は、直接的な物理的会合での配置を指し;固体および液体形態
での両方を含む。
用語「シクロアルキル」は、少なくとも3個の炭素原子から構成される非芳香族炭素ベ
ースの環を指す。シクロアルキル基の例は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペン
チル、シクロヘキシル等を含むがこれらに限定されない。用語「ヘテロシクロアルキル基
」は、環の炭素原子の少なくとも1個が、窒素、酸素、硫黄、またはリン等であるがこれ
らに限定されないヘテロ原子で置換されている、上記で定義された通りのシクロアルキル
基である。
「減少する」は、少なくとも約10%、25%、50%、75%、100%、またはそ
れ以上の負の変更を意味する。
「検出可能な標識」は、別の分子(オリゴヌクレオチド等)と直接的にまたは間接的に
コンジュゲートして、該分子の検出を容易にする、化合物または組成物である。標識の具
体的な非限定的例は、放射活性同位体、酵素基質、補助因子、リガンド、化学発光剤、フ
ルオロフォア、ハプテン、酵素、およびそれらの組合せを含むがこれらに限定されない。
標識付けのための方法および種々の目的に適切な標識の選択における指針は、例えば、S
ambrookら(Molecular Cloning:A Laboratory
Manual、Cold Spring Harbor、New York、1989)
およびAusubelら(In Current Protocols in Mole
cular Biology、John Wiley&Sons、New York、1
998)において考察されている。
「疾患」または「障害」は、細胞、組織または臓器の正常機能を損傷するまたは妨げる
任意の状態を意味する。
「有効量」は、未治療患者に関して疾患の症状を改善するために必要とされる化合物の
量を意味する。疾患の治療的処置のための本発明を実践するために使用される活性化合物
の有効量は、投与様式、対象の年齢、体重および全身の健康に応じて変動する。最終的に
は、主治医または獣医が、適切な量および投薬レジメンを決めることになる。そのような
量を、「有効」量と称する。
用語「エステル」は、水素が、例えば、C1~6アルキル基(「カルボキシルC1~6
アルキル」または「アルキルエステル」)、アリールまたはアラルキル基(「アリールエ
ステル」または「アラルキルエステル」)等で置き換えられた、カルボキシル基含有部分
を指す。例えば、メチルエステル(COMe)、エチルエステル(COEt)および
プロピルエステル(COPr)等のCO1~3アルキル基が好ましく、その逆エス
テル(例えば、-OCOMe、-OCOEtおよび-OCOPr)を含む。
「断片」は、ポリペプチドまたは核酸分子の一部を意味する。この部分は、好ましくは
、基準核酸分子またはポリペプチドの全長の少なくとも約10%、20%、30%、40
%、50%、60%、70%、80%、または90%を含有する。断片は、約10、20
、30、40、50、60、70、80、90、または100、200、300、400
、500、600、700、800、900、または1,000ヌクレオチドまたはアミ
ノ酸を含有してよい。
用語「ハロゲン化アルキル」または「ハロアルキル基」は、ハロゲン(F、Cl、Br
、I)で置換されているこれらの基上に存在している1個または複数の水素原子を有する
アルキル基を指す。
用語「ヒドロキシル」は、式-OHによって表される。
用語「ヒドロキシアルキル」は、ヒドロキシル基で置換されている少なくとも1個の水
素原子を有するアルキル基を指す。用語「アルコキシアルキル基」は、上述した通りのア
ルコキシ基で置換されている少なくとも1個の水素原子を有するアルキル基として定義さ
れる。
「同一性」は、目的の配列と参照配列との間でのアミノ酸または核酸配列同一性を意味
する。配列同一性は、典型的に、配列分析ソフトウェア(例えば、Sequence A
nalysis Software Package of the Genetics
Computer Group、University of Wisconsin
Biotechnology Center、1710 University Ave
nue、Madison、Wis.53,705、BLAST、BESTFIT、GAP
、またはPILEUP/PRETTYBOXプログラム)を使用して測定される。そのよ
うなソフトウェアは、相同性の程度を、種々の置換、欠失、および/または他の修飾に割
り当てることによって、同一または同様の配列と合致させる。保存的置換は、典型的に、
下記の群内での置換を含む:グリシン、アラニン;バリン、イソロイシン、ロイシン;ア
スパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン;セリン、スレオニン;リシン
、アルギニン;およびフェニルアラニン、チロシン。同一性の程度を決定するための例示
的なアプローチにおいて、BLASTプログラムを使用してよく、e-3からe-100
の間の確率スコアは、密接に関係している配列を示す。
「阻害すること」は、疾患または状態の完全な発病を阻害することを指す。「阻害する
こと」は、対照と比べた、生物学的活性または結合における任意の定量的または定性的低
減も指す。
本明細書において使用される場合、用語「INK128」は、3-(2-アミノ-5-
ベンゾオキサゾリル)-1-(1-メチルエチル)-1H-ピラゾロ[3,4-d]ピリ
ミジン-4-アミン、またはその塩もしくは溶媒和物を指す。
本明細書において使用される場合、用語「指示資料」は、刊行物、録音、図表、または
本発明の組成物および方法の有用性を伝えるために使用され得る任意の他の表現媒体を含
む。キットの指示資料は、例えば、本発明の組成物を含有する容器に貼付されていてもよ
いし、組成物を含有する容器と一緒に発送されてもよい。代替的に、指示資料は、レシピ
エントが指示資料および組成物を協調的に使用することを意図して、容器とは別個に発送
されてよい。例えば、指示資料は、キットの使用についてのもの;組成物の使用について
の指示;または組成物の製剤の使用についての指示である。
「単離された」生物学的構成要素は、該構成要素が自然に発生する生物の細胞内の他の
生物学的構成要素、すなわち、他の染色体のおよび染色体外のDNAおよびRNA、タン
パク質、脂質、ならびに細胞小器官から実質的に分離されたまたは精製除去された構成要
素である。「単離された」は、絶対的な純度を必要としない。例えば、所望の単離された
生物学的構成要素は、調製物の総含有量の、少なくとも50%、特に少なくとも約75%
、より特定すれば少なくとも約90%、最も特定すれば少なくとも約98%を表し得る。
本明細書で記載される通りの単離された生物学的構成要素は、塩による分画、フェノール
抽出、有機溶媒(例えば、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウムまたはエタノール)
による沈殿、親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマ
トグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、ゲル濾過、等電点電気泳動、物理的分離(
例えば、遠心分離または撹拌)等、多くの方法によって単離することができる。
「N-ヘテロ環式」は、少なくとも1個の窒素ヘテロ原子を含む単または二環式環また
は環系を指す。環または環系は概して、ヘテロ原子に加えて1から9個の炭素原子を含み
、飽和、不飽和または芳香族(擬似芳香族を含む)であってよい。用語「擬似芳香族」は
、厳密には芳香族ではないが、電子の非局在化を利用して安定し、芳香族環と同様の様式
で挙動する、環系を指す。芳香族は、ピロリル環等の擬似芳香族環系を含む。
5員単環式N-ヘテロ環の例は、ピロリル、H-ピロリル、ピロリニル、ピロリジニル
、オキサゾリル、オキサジアゾリル、(1,2,3および1,2,4オキサジアゾリルを
含む)イソオキサゾリル、フラザニル、チアゾリル、イソチアゾリル、ピラゾリル、ピラ
ゾリニル、ピラゾリジニル、イミダゾリル、イミダゾリニル、トリアゾリル(1,2,3
および1,3,4トリアゾリルを含む)、テトラゾリル、チアジアゾリル(1,2,3お
よび1,3,4チアジアゾリルを含む)、およびジチアゾリルを含む。6員単環式N-ヘ
テロ環の例は、ピリジル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピラジニル、ピペリジニル、モ
ルホリニル、チオモルホリニル、ピペラジニル、およびトリアジニルを含む。ヘテロ環は
、幅広い置換基で、好ましくは、C1~6アルキル、C1~6アルコキシ、C2~6アル
ケニル、C2~6アルキニル、ハロ、ヒドロキシ、メルカプト、トリフルオロメチル、ア
ミノ、シアノまたはモノもしくはジ(C1~6アルキル)アミノで、任意選択で置換され
ていてよい。N-ヘテロ環式基は、フェニル、ナフチル、インデニル、アズレニル、フル
オレニル、およびアントラセニル等の炭素環と縮合していてよい。
8、9および10員二環式ヘテロ環の例は、1Hチエノ[2,3-c]ピラゾリル、イ
ンドリル、イソインドリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンズイソオキサ
ゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンズイミダゾリル、インダゾリル、イソキノリニル、
キノリニル、キノキサリニル、プリニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、
キノキサリニル、ベンゾトリアジニル等を含む。これらのヘテロ環は、例えば、C1~6
アルキル、C1~6アルコキシ、C2~6アルケニル、C2~6アルキニル、ハロ、ヒド
ロキシ、メルカプト、トリフルオロメチル、アミノ、シアノまたはモノもしくはジ(C
~6アルキル)アミノで、任意選択で置換されていてよい。別段の定義がない限り、任意
選択で置換されているN-ヘテロ環式は、ピリジニウム塩および好適な環窒素のN-オキ
シド形態を含む。
本明細書において使用される場合、用語「ペプチド」、「ポリペプチド」または「タン
パク質」は、交換可能に使用され、ペプチド結合によって共有結合しているアミノ酸残基
で構成される化合物を指す。タンパク質またはペプチドは、少なくとも2つのアミノ酸を
含有していなくてはならず、タンパク質またはペプチドの配列を含むことができるアミノ
酸の最大数には、制限がかけられていない。ポリペプチドは、ペプチド結合によって互い
に接合している2つ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまたはタンパク質を含む。本明
細書において使用される場合、該用語は、当技術分野において、例えば、ペプチド、オリ
ゴペプチドおよびオリゴマーとも一般に称される、短鎖、ならびに当技術分野において、
概して、多くの種類があるタンパク質と称される、長鎖の両方を指す。「ポリペプチド」
は、中でも、例えば、生物学的活性断片、実質的に相同のポリペプチド、オリゴペプチド
、ホモ二量体、ヘテロ二量体、ポリペプチドの変異体、修飾されたポリペプチド、誘導体
、類似体および融合タンパク質を含む。ポリペプチドは、天然ペプチド、組換えペプチド
、合成ペプチドまたはそれらの組合せを含む。環式ではないペプチドは、N末端およびC
末端を有する。N末端は、アミノ基を有し、これは、遊離(すなわち、NH基として)
していてもよいし、適切に保護(例えば、BOCまたはFmoc基で)されていてもよい
。C末端は、カルボン基を有し、これは、遊離(すなわち、COOH基として)していて
もよいし、適切に保護(例えば、ベンジルまたはメチルエステルとして)されていてもよ
い。環式ペプチドは、アミド結合を介して共有結合して環式構造を形成することから、遊
離しているNまたはC末端を必ずしも有するわけではない。
「医薬組成物」は、ある量(例えば、単位投薬量)の、開示化合物の1つまたは複数を
、担体、賦形剤、および/またはアジュバントを含む1つまたは複数の非毒性薬学的に許
容される添加物、ならびに任意選択で他の生物学的活性成分と一緒に含む組成物である。
そのような医薬組成物は、Remington’s Pharmaceutical S
ciences、Mack Publishing Co.、Easton、PA(第1
9版)において開示されているもの等の標準的な医薬製剤技術によって調製することがで
きる。
用語「薬学的に許容される塩またはエステル」は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸ま
たはリン酸、有機カルボン酸、スルホン酸、スルホ酸(sulfo acids)またはホスホ酸(p
hospho acids)またはN置換スルファミン酸、例えば酢酸、プロピオン酸、グリコール酸
、コハク酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、メチルマレイン酸、フマル酸、リンゴ
酸、酒石酸、グルコン酸、グルカル酸、グルクロン酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マ
ンデル酸、サリチル酸、4-アミノサリチル酸、2-フェノキシ安息香酸、2-アセトキ
シ安息香酸、エンボン酸、ニコチン酸またはイソニコチン酸を含むがこれらに限定されな
い無機および有機酸、加えて、アミノ酸との、例えばα-アミノ酸との、また、メタンス
ルホン酸、エタンスルホン酸、2-ヒドロキシメタンスルホン酸、エタン-1,2-ジス
ルホン酸、ベンゼンジスルホン酸、4-メチルベンゼンスルホン酸、ナフタレン-2-ス
ルホン酸、2-もしくは3-ホスホグリセリン酸塩、グルコース-6-リン酸またはN-
シクロヘキシルスルファミン酸(チクロの形成を伴う)との、あるいはアスコルビン酸等
の他の酸性有機化合物との塩を含む、従来の手段によって調製された塩またはエステルを
指す。
現在開示されている化合物の「薬学的に許容される塩」は、ナトリウム、カリウム、ア
ルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、亜鉛等のカチオンから、ならびにア
ンモニア、エチレンジアミン、N-メチル-グルタミン、リシン、アルギニン、オルニチ
ン、コリン、N,N’-ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、ジエタノール
アミン、プロカイン、N-ベンジルフェネチルアミン、ジエチルアミン、ピペラジン、ト
リス(ヒドロキシメチル)アミノメタン、および水酸化テトラメチルアンモニウム等の塩
基から形成されたものも含む。本発明の化合物における使用に好適なアミン塩基(および
それらの対応するアンモニウムイオン)の特定の例は、限定されないが、ピリジン、N,
N-ジメチルアミノピリジン、ジアザビシクロノナン、ジアザビシクロウンデセン、N-
メチル-N-エチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチル
アミン、モノ-、ビス-またはトリス-(2-ヒドロキシエチル)アミン、2-ヒドロキ
シ-tert-ブチルアミン、トリス(ヒドロキシメチル)メチルアミン、N,N-ジメ
チル-N-(2-ヒドロキシエチル)アミン、トリ-(2-ヒドロキシエチル)アミンお
よびN-メチル-D-グルカミンを含む。「薬理学的に許容される塩」のさらなる例につ
いては、Bergeら、J.Pharm.Sci.66:1(1977)を参照されたい
。これらの塩は、標準的な手順によって、例えば、遊離酸を好適な有機または無機塩基と
反応させることによって、調製され得る。本明細書において列挙されている任意の化学化
合物を、代替的に、薬学的に許容されるその塩として投与してもよい。
「薬学的に許容される塩」は、遊離酸、塩基、および両性イオン形態も含む。好適な薬
学的に許容される塩の記載は、Handbook of Pharmaceutical
Salts,Properties,Selection and Use、Wile
y VCH(2002)において見ることができる。本明細書において開示されている化
合物がカルボキシ基等の酸性官能基を含む場合、カルボキシ基に好適な薬学的に許容され
るカチオン対は、当業者に周知であり、アルカリ、アルカリ土類、アンモニウム、第4級
アンモニウムカチオン等を含む。そのような塩は、当業者に既知である。「薬理学的に許
容される塩」のさらなる例については、Bergeら、J.Pharm.Sci.66:
1(1977)を参照されたい。
「薬学的に許容されるエステル」は、カルボキシル基を含むように修飾された、本明細
書において記載されている化合物から誘導されたものを含む。in vivo加水分解可
能なエステルは、ヒトまたは動物体内で加水分解されて親酸またはアルコールを生成する
エステルである。故に、代表的なエステルは、エステル群のカルボン酸部分の非カルボニ
ル部分が、直鎖または分枝鎖アルキル(例えば、メチル、n-プロピル、t-ブチル、ま
たはn-ブチル)、シクロアルキル、アルコキシアルキル(例えば、メトキシメチル)、
アラルキル(例えば、ベンジル)、アリールオキシアルキル(例えば、フェノキシメチル
)、アリール(例えば、ハロゲン、C1~4アルキルもしくはC1~4アルコキシによっ
て任意選択で置換されている、例えば、フェニル)またはアミノ);アルキル-またはア
ラルキルスルホニル(例えば、メタンスルホニル)等のスルホン酸エステル;あるいはア
ミノ酸エステル(例えば、L-バリルまたはL-イソロイシル)から選択される、カルボ
ン酸エステルを含む。「薬学的に許容されるエステル」は、モノ-、ジ-またはトリ-リ
ン酸エステル等の無機エステルも含む。そのようなエステルにおいて、別段の指定がない
限り、存在する任意のアルキル部分は、有利に、1から18個までの炭素原子、特に1か
ら6個までの炭素原子、より特定すれば1から4個までの炭素原子を含有する。そのよう
なエステル中に存在する任意のシクロアルキル部分は、有利に、3から6個までの炭素原
子を含有する。そのようなエステル中に存在する任意のアリール部分は、有利に、上記の
カルボシクリルの定義において示される通りに任意選択で置換されている、フェニル基を
含む。薬学的に許容されるエステルは、故に、アセチル、t-ブチル、またはパルモイル
(palmoyl)、ステアロイル等の長鎖直鎖もしくは分枝鎖不飽和もしくはオメガ-6一価
不飽和脂肪酸等、C~C22脂肪酸エステルを含む。代替的なアリールまたはヘテロア
リールエステルは、ベンゾイル、ピリジルメチロイル(pyridylmethyloyl)等を含み、そ
のうちのいずれかは、上記のカルボシクリルにおいて定義した通り、置換されていてよい
。さらなる薬学的に許容されるエステルは、ロイシル、イソロイシルおよびとりわけバリ
ル等の脂肪族L-アミノ酸エステルを含む。
治療的使用では、化合物の塩は、対イオンが薬学的に許容されるものである。しかしな
がら、非薬学的に許容される酸および塩基の塩は、例えば、薬学的に許容される化合物の
調製または精製における使用も見出し得る。以上で言及した通りの薬学的に許容される酸
付加塩および塩基付加塩は、化合物が形成することのできる治療的に活性な非毒性の酸付
加塩形態および塩基付加塩形態を含むようになっている。薬学的に許容される酸付加塩は
、好都合に、塩基形態をそのような適切な酸で処理することによって取得することができ
る。適切な酸は、例えば、ハロゲン化水素酸、例えば、塩酸もしくは臭化水素酸、硫酸、
硝酸、リン酸等の無機酸;または例えば、酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、乳酸、ピ
ルビン酸、シュウ酸(すなわち、エタン二酸)、マロン酸、コハク酸(すなわち、ブタン
二酸)、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸(すなわち、ヒドロキシブタン二酸)、酒石酸
、クエン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、p-トルエン
スルホン酸、シクラミン酸、サリチル酸、p-アミノサリチル酸、パモ酸等の有機酸を含
む。逆に、前記塩形態は、適切な塩基での処理によって、遊離塩基形態に変換することが
できる。酸性プロトンを含有する化合物を、適切な有機塩基および無機塩基での処理によ
って、それらの非毒性金属またはアミン付加塩形態に変換してもよい。適切な塩基塩形態
は、例えば、アンモニウム塩、アルカリおよびアルカリ土類金属塩、例えば、リチウム塩
、ナトリウム塩、カリウム塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等、有機塩基との塩、例え
ば、ベンザチン塩、N-メチル-D-グルカミン塩、ヒドラバミン塩、および例えば、ア
ルギニン、リシン等のアミノ酸との塩を含む。
疾患または状態を「予防すること」は、疾患の兆候を呈していないまたは初期の兆候の
みを呈している対象に、病理もしくは状態を発病するリスクを減少させることまたは病理
もしくは状態の重症度を和らげることを目的として、組成物を予防的投与することを指す
用語「精製された」は、絶対的な純度を必要とせず、むしろ、相対的な用語として意図
されている。故に、例えば、精製されたペプチド調製物は、ペプチドまたはタンパク質が
細胞内のその自然環境にある場合よりも、ペプチドまたはタンパク質が富化されたもので
ある。例えば、化合物調製物は、所望の多糖タンパク質コンジュゲートが、調製物の総含
有量の少なくとも50%、より特定すれば少なくとも約90%、最も特定すれば少なくと
も約98%を表すように精製されている。
用語「第4級アミン」は、以上で使用した通り、化合物の塩基性窒素と、例えば、任意
選択で置換されているアルキルハライド、アリールハライドまたはアリールアルキルハラ
イド、例えば、ヨウ化メチルまたはヨウ化ベンジル等の適切な四級化剤との間の反応によ
って、化合物を形成することができる、第4級アンモニウム塩を定義するものである。ト
リフルオロメタンスルホン酸アルキル、メタンスルホン酸アルキル、およびp-トルエン
スルホン酸アルキル等、良好な脱離基を有する他の反応物質を使用してもよい。第4級ア
ミンは、正に帯電した窒素を有する。薬学的に許容される対イオンは、クロロ、ブロモ、
ヨード、トリフルオロ酢酸塩および酢酸塩を含む。最適な対イオンは、イオン交換樹脂を
使用して導入することができる。
「組換え」タンパク質は、自然発生ではない配列を有する、または配列のそうでなけれ
ば分離している2つのセグメントの人工的な組合せによって作製された配列を有するもの
である。
用語「対象」は、非ヒト霊長類、コンパニオンアニマル(イヌおよびネコ等)、家畜(
ブタ、ヒツジ、雌ウシ等)、および大型の猫科動物等の飼いならされていない動物等の、
鳥類および非ヒト哺乳動物を含む、ヒトおよび非ヒト対象の両方を含む。対象という用語
は、生物のライフサイクルにおける段階にかかわらず当てはまる。故に、対象という用語
は、生物(すなわち、生物が、哺乳動物であるか、家禽または野鳥等の鳥類であるか)に
応じて、in uteroまたはin ovoの生物に当てはまる。
「置換されている」または「置換」は、1つまたは複数のさらなるR基による、分子ま
たはR基の水素原子の置き換えを指す。別段の定義がない限り、用語「任意選択で置換さ
れている」または「任意選択の置換基」は、本明細書において使用される場合、1、2、
3、4つまたはそれ以上の基、好ましくは1、2または3つ、より好ましくは1または2
つの基でさらに置換されていてもされていなくてもよい基を指す。置換基は、例えば、C
1~6アルキル、C2~6アルケニル、C2~6アルキニル、C3~8シクロアルキル、
ヒドロキシル、オキソ、C1~6アルコキシ、アリールオキシ、C1~6アルコキシアリ
ール、ハロ、C1~6アルキルハロ(CFおよびCHF等)、C1~6アルコキシハ
ロ(OCFおよびOCHF等)、カルボキシル、エステル、シアノ、ニトロ、アミノ
、置換アミノ、二置換アミノ、アシル、ケトン、アミド、アミノアシル、置換アミド、二
置換アミド、チオール、アルキルチオ、チオキソ、サルフェート、スルホネート、スルフ
ィニル、置換スルフィニル、スルホニル、置換スルホニル、スルホニルアミド、置換スル
ホンアミド、二置換スルホンアミド、アリール、アルC1~6アルキル、ヘテロシクリル
およびヘテロアリールから選択されてよく、ここで、各アルキル、アルケニル、アルキニ
ル、シクロアルキル、アリールおよびヘテロシクリル、ならびにそれらを含有する基は、
さらに任意選択で置換されていてよい。N-ヘテロ環の場合の任意選択の置換基は、C
~6アルキル、すなわち、N-C1~3アルキル、より好ましくはメチル、特にN-メチ
ルも含んでよいがこれらに限定されない。
「治療有効量」は、指定された作用物質の、該作用物質で治療されている対象において
所望の効果を実現するために十分な分量を指す。例えば、治療量は、対象の所望の細胞に
おいてオートファジーを阻害するために十分な、ULK1阻害剤の量であってよい。理想
的には、作用物質の治療有効量は、対象において、実質的な細胞毒性または他の実質的に
有害な効果を引き起こすことなく、疾患または状態を阻害するまたは治療するために十分
な量である。作用物質の治療有効量は、治療されている対象、苦痛の重症度、および治療
組成物の投与様式に依存することになる。
「チオール」は、-SH基を指す。用語「置換チオール」は、水素が、例えば、C1~
アルキル基(「-S(C1~6アルキル)」)、アリール(「-S(アリール)」)、
またはアラルキル(「-S(アルキル)(アリール)」)等で置き換えられた、チオール
基を指す。
語句「疾患を治療すること」は、例えば、糖尿病等の疾患のリスクがある対象において
、疾患の完全な発病を阻害することを指す。
「治療」は、発病し始めた後に、疾患または病態の兆候または症状を改善する治療的介
入、あるいは、疾患の兆候を呈していないまたは初期の兆候のみを呈している対象に、病
理もしくは状態を発病するリスクを減少させることまたは病理もしくは状態の重症度を和
らげることを目的として、化合物または組成物を投与することを指す。
(化合物)
一態様では、本明細書において開示されているのは、ULK1阻害剤として機能する化
合物である。
ある特定の実施形態では、ULK1阻害剤は、2-(置換)アミノ-4-(置換)アミ
ノ-5-ハロ-ピリミジン;2-(置換)アミノ-4-(置換)アミノ-5-(ハロ)ア
ルキル-ピリミジン;2-(置換)アミノ-4-(置換)オキソ-5-ハロ-ピリミジン
;2-(置換)アミノ-4-(置換)オキソ-5-(ハロ)アルキル-ピリミジン;2-
(置換)アミノ-4-(置換)チオ-5-ハロ-ピリミジン;および2-(置換)アミノ
-4-(置換)チオ-5-(ハロ)アルキル-ピリミジンからなる群から選択される少な
くとも1つ;または薬学的に許容されるその塩である。
Figure 2022017384000010
[式A中、
10は、ハロゲン;-OR11(ここで、R11は、H、任意選択で置換されているア
リール、または任意選択で置換されているヘテロアリールである);-NR(ここ
で、RおよびRは、H、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されて
いるヘテロアリール、任意選択で置換されているシクロアルキル、および任意選択で置換
されているアルキルからなる群からそれぞれ独立に選択されるか、またはNRは、
一緒になって、ヘテロ環を形成する)からなる群から選択されるか;またはRおよびR
10は、一緒になって、環式構造を形成し;
は、任意選択で置換されているアミノ、任意選択で置換されているアリールオキシ、
任意選択で置換されているヘテロアリールオキシ、任意選択で置換されているアルコキシ
、N-ヘテロ環式、任意選択で置換されているチオール、任意選択で置換されているアル
キル、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群から選択され;
は、H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置換
されているアルコキシ、または任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換され
ているカルボキシル、シアノおよびニトロからなる群から選択されるか、またはRおよ
びRは、一緒になって、環式構造を形成し;
は、Hまたはハロアルキルである]
の構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩も、本明細書において開示され
ている。
Figure 2022017384000011
[式I中、
およびRは、H、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されている
ヘテロアリール、任意選択で置換されているシクロアルキル、および任意選択で置換され
ているアルキルからなる群からそれぞれ独立に選択されるか、またはNRは、一緒
になって、ヘテロ環を形成し;
は、任意選択で置換されているアミノ、任意選択で置換されているアリールオキシ、
任意選択で置換されているヘテロアリールオキシ、任意選択で置換されているアルコキシ
、N-ヘテロ環式、任意選択で置換されているチオール、および任意選択で置換されてい
るアルキルからなる群から選択され;
は、H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置換
されているアルコキシ、および任意選択で置換されているアリールからなる群から選択さ
れ;
は、Hである]
の構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩
も、本明細書において開示されている。
ある特定の実施形態では、Rは、Hであり、Rは、Hではない。他の実施形態では
、Rは、Hであり、Rは、任意選択で置換されている縮合ヘテロアリールまたは任意
選択で置換されているアリールである。任意選択で置換されている縮合ヘテロアリールは
、例えば、少なくとも1個の窒素ヘテロ原子を含む二環式縮合環系であってよい。ある特
定の実施形態では、Rは、Hであり、Rは、少なくとも1個のヘテロ原子を含む任意
選択で置換されている二環式縮合環系である。ある特定の実施形態では、Rは、Hであ
り、Rは、少なくとも1個の窒素ヘテロ原子を含む任意選択で置換されている二環式縮
合環系である。ある特定の実施形態では、Rは、Hであり、Rは、少なくとも2個の
窒素ヘテロ原子を含む任意選択で置換されている二環式縮合環系である。ある特定の実施
形態では、Rは、Hであり、Rは、少なくとも2個の酸素ヘテロ原子を含む任意選択
で置換されている二環式縮合環系である。任意選択で置換されているアリールは、例えば
、置換または非置換フェニルであってよい。フェニルは、例えば、少なくとも1つのアル
コキシ、好ましくは(C~C)アルコキシで置換されていてよい。
ある特定の実施形態では、Rは、Hであり、Rは、
Figure 2022017384000012
からなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、Rは、任意選択で置換されているアミノ、任意選択で置換
されているアリールオキシ、任意選択で置換されているヘテロアリールオキシ、および任
意選択で置換されているアルコキシからなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、Rは、任意選択で置換されているアリールオキシ、任意選
択で置換されているヘテロアリールオキシ、および任意選択で置換されているアルコキシ
からなる群から選択される。特定の実施形態では、Rは、任意選択で置換されているフ
ェノキシおよび任意選択で置換されているアルコキシからなる群から選択される。特定の
実施形態では、Rは、フェノキシ、(C~C)アルコキシ、および-O-(N-ア
ルキルベンズアミド)、特に-O-(N-(C~C)アルキルベンズアミド)からな
る群から選択される。特定の実施形態では、Rは、
Figure 2022017384000013
である。
ある特定の実施形態では、Rは、-NRであり、ここで、RおよびRは、
H、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロアリール、シ
クロアルキル、および任意選択で置換されているアルキルからなる群からそれぞれ独立に
選択されるか、またはNRは、一緒になって、ヘテロ環を形成する。ある特定の実
施形態では、Rは、Hであり、Rは、N-アルキルベンズアミド、特にN-(C
)アルキルベンズアミドである。ある特定の実施形態では、Rは、Hであり、R
は、フェニルである。ある特定の実施形態では、Rは、Hであり、Rは、アルコキシ
置換フェニル、特に(C~C)アルコキシである。ある特定の実施形態では、R
、Hであり、Rは、シクロプロピルである。ある特定の実施形態では、Rは、Hであ
り、Rは、シクロブチルである。ある特定の実施形態では、Rは、Hであり、R
、アルコキシアルキル、特に(C~C)アルコキシ(C~C)アルキルである。
ある特定の実施形態では、Rは、Hであり、Rは、ハロアルキルである。ある特定の
実施形態では、Rは、Hであり、Rは、任意選択で置換されているアシルである。あ
る特定の実施形態では、Rは、-NHである。ある特定の実施形態では、Rは、-
OHである。
ある特定の実施形態では、Rは、ハロアルキル、特にCFである。ある特定の実施
形態では、Rは、Brである。ある特定の実施形態では、Rは、Clである。
ある特定の実施形態では、Rは、縮合ヘテロアリール環であり、Rは、-NR
であり、ここで、Rは、Hであり、Rは、縮合ヘテロアリール環である。特定の実
施形態では、Rは、
Figure 2022017384000014
からなる群から選択される。特定の実施形態では、Rは、
Figure 2022017384000015
である。
例証的な化合物を表1に示す(ULK1阻害アッセイのためにそれらのそれぞれのIC
50値とともに)。IC50は、μMで提示され、AはIC50<0.2μMを表し、B
は0.2μM<IC50<2μMを表し、CはIC50>2μMを表す。*注記は位置異
性体の混合物として試験した。
Figure 2022017384000016
Figure 2022017384000017
Figure 2022017384000018
Figure 2022017384000019
Figure 2022017384000020
Figure 2022017384000021
Figure 2022017384000022
Figure 2022017384000023
Figure 2022017384000024
Figure 2022017384000025
Figure 2022017384000026
Figure 2022017384000027
Figure 2022017384000028
Figure 2022017384000029
Figure 2022017384000030
Figure 2022017384000031
Figure 2022017384000032
Figure 2022017384000033
Figure 2022017384000034
Figure 2022017384000035
Figure 2022017384000036
Figure 2022017384000037
Figure 2022017384000038
Figure 2022017384000039
Figure 2022017384000040
Figure 2022017384000041
Figure 2022017384000042
Figure 2022017384000043
Figure 2022017384000044
Figure 2022017384000045
Figure 2022017384000046
Figure 2022017384000047
Figure 2022017384000048
Figure 2022017384000049
Figure 2022017384000050
Figure 2022017384000051
Figure 2022017384000052
Figure 2022017384000053
Figure 2022017384000054
Figure 2022017384000055
Figure 2022017384000056
Figure 2022017384000057
Figure 2022017384000058
Figure 2022017384000059
Figure 2022017384000060
Figure 2022017384000061
Figure 2022017384000062
Figure 2022017384000063
Figure 2022017384000064
Figure 2022017384000065
Figure 2022017384000066
Figure 2022017384000067
Figure 2022017384000068
Figure 2022017384000069
Figure 2022017384000070
Figure 2022017384000071
Figure 2022017384000072
Figure 2022017384000073
Figure 2022017384000074
Figure 2022017384000075
Figure 2022017384000076
Figure 2022017384000077
例示的な化合物を、非限定的な様式で以下に例証する。
Figure 2022017384000078
Figure 2022017384000079
現在開示されている化合物の特定の例は、1つまたは複数の不斉中心を含み、故に、こ
れらの化合物は、異なる立体異性形態で存在し得る。したがって、化合物および組成物は
、個々の純粋な鏡像異性体として、またはラセミ混合物を含む立体異性混合物として提供
され得る。ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物は、90%
の鏡像体過剰率、95%の鏡像体過剰率、97%の鏡像体過剰率で、またはさらに、エナ
ンチオピュアな形態等の99%より大きい鏡像体過剰率等で、実質的にエナンチオピュア
な形態となるように、合成されるまたは精製される。
「ULKtide」と称される、ULK1酵素のための基質として役立つ組換えペプチ
ドも本明細書において提供される。ULKtideペプチドは、ULK1キナーゼ活性の
ための代理マーカーとしてin vitroで使用することができる。ある特定の実施形
態では、アミノ酸配列YANWLAASIYLDGKKK(配列番号1)を含む組換えペ
プチドが提供される。一部の実施形態では、ULKtideペプチドの変異体が提供され
る。例えば、変異体ペプチドは、ロイシン等、-3位(配列番号1の残基5に対応する)
に任意の疎水性残基を有する。他の例において、ペプチドは、フェニルアラニンまたはチ
ロシン等、+1位(配列番号1の残基9に対応する)に任意の疎水性残基を有する。ある
特定の実施形態では、ペプチドは、+2位(配列番号1の残基10に対応する)に任意の
疎水性残基を有する。ある特定の実施形態では、組換えペプチドは、下記の配列の1つを
含む:
EANWLAASIYLDGKKK(配列番号2)
YANWLAASIYLDKKKK(配列番号3)
YANWMAASIYLDGKKK(配列番号4)
YANWRAASIYLDGKKK(配列番号5)
YANWLAASDYLDGKKK(配列番号6)
YANWLAASIDLDGKKK(配列番号7)。
ある特定の実施形態では、組換えペプチドは、フルオロフォアまたは放射性同位体等で
あるがこれらに限定されない検出可能な標識とコンジュゲートされている。
現在開示されている化合物は、少なくとも1つの不斉中心または幾何学的中心、cis
-trans中心(C=C、C=N)を有し得る。該構造のすべてのキラル、ジアステレ
オマー、ラセミ、メソ、回転および幾何異性体は、別段の指定がない限り、意図されてい
る。化合物は、単一の異性体として、または異性体の混合物として単離することができる
。化合物のすべての互変異性体も、本開示の一部とみなされる。現在開示されている化合
物は、化合物中に存在する原子のすべての同位体も含み、これは、重水素、トリチウム、
18F等を含むことができるがそれらに限定されない。
開示化合物の「プロドラッグ」も本明細書において企図されている。プロドラッグは、
対象へのプロドラッグの投与後に、加水分解、代謝等のin vivo生理作用を介して
化学的に修飾されて活性化合物となる、活性または不活性化合物である。用語「プロドラ
ッグ」は、本文全体を通して使用される場合、エステル、アミドおよびリン酸塩等の薬理
学的に許容される誘導体を意味し、そのため、誘導体の得られたin vivo生体内変
化生成物は、本明細書において記載されている化合物において定義されている通りの活性
薬物である。プロドラッグは、好ましくは、優れた水溶解度、バイオアベイラビリティー
の増大を有し、活性阻害剤にin vivoで容易に代謝される。本明細書において記載
されている化合物のプロドラッグは、修飾が日常的操作またはin vivoのいずれか
によって親化合物に開裂されるような手法で、化合物中に存在する官能基を修飾すること
によって、調製され得る。プロドラッグを作製し使用することに関与する適合性および技
術は、当業者に周知である。エステルを伴うプロドラッグの一般的考察については、Sv
enssonおよびTunek、Drug Metabolism Reviews 1
65(1988)ならびにBundgaard、Design of Prodrugs
、Elsevier(1985)を参照されたい。
用語「プロドラッグ」は、プロドラッグが対象に投与されると本発明の活性な親薬物を
in vivoで放出する任意の共有結合した担体を含むことも意図されている。プロド
ラッグは、溶解度およびバイオアベイラビリティー等の活性剤医薬品に関する特性を頻繁
に増強されてきたため、本明細書において開示されている化合物を、プロドラッグ形態で
送達することができる。故に、現在開示されている化合物のプロドラッグ、プロドラッグ
を送達する方法およびそのようなプロドラッグを含有する組成物も企図されている。開示
化合物のプロドラッグは、典型的には、修飾が日常的操作またはin vivoのいずれ
かによって開裂されて親化合物を産出するような手法で、化合物中に存在する1つまたは
複数の官能基を修飾することによって、調製される。プロドラッグは、in vivoで
開裂されて対応するアミノおよび/またはホスホン酸基をそれぞれ産出する任意の基で官
能化された、ホスホン酸および/またはアミノ基を有する化合物を含む。プロドラッグの
例は、限定されないが、アシル化アミノ基および/またはホスホン酸エステルもしくはホ
スホン酸アミド基を有する化合物を含む。特定の例において、プロドラッグは、イソプロ
ピルホスホン酸エステル等の低級アルキルホスホン酸エステルである。
開示化合物の保護された誘導体も企図されている。開示化合物とともに使用するための
様々な好適な保護基は、GreeneおよびWuts、Protective Grou
ps in Organic Synthesis;第3版;John Wiley&S
ons、New York、1999において開示されている。
概して、保護基は、分子の残りの部分に影響を及ぼさないと予想される条件下で除去さ
れる。これらの方法は、当業者に周知であり、酸加水分解、水素化分解等を含む。1つの
好ましい方法は、遊離ホスホネートを産出するための、TMS-Br媒介性エステル開裂
におけるもの等の、Lewis酸性条件を使用するホスホン酸エステルの開裂等、エステ
ルの除去を伴う。第2の好ましい方法は、アルコール、酢酸等またはそれらの混合物等の
好適な溶媒系中、パラジウム炭素を利用する水素化分解によるベンジル基の除去等、保護
基の除去を伴う。t-ブトキシカルボニル保護基を含むt-ブトキシベースの基は、水、
ジオキサンおよび/または塩化メチレン等の好適な溶媒系中、HClまたはトリフルオロ
酢酸等の無機または有機酸を利用して、除去することができる。アミノおよびヒドロキシ
官能基のアミノを保護するのに好適な別の例示的な保護基は、トリチルである。他の従来
の保護基が既知であり、好適な保護基は、当業者によって、GreeneおよびWuts
、Protective Groups in Organic Synthesis;
第3版;John Wiley&Sons、New York、1999を参考にして選
択することができる。アミンが脱保護されたら、得られた塩を容易に中和して、遊離アミ
ンを産出することができる。同様に、ホスホン酸部分等の酸部分の覆いが外されたら、化
合物を酸化合物またはその塩として単離してよい。
本明細書において開示されている化合物を、結晶化することができ、単結晶性形態で、
または異なる結晶多形の組合せとして提供することができる。そのため、化合物を、異な
る結晶形態、結晶性、液晶性または非結晶性(アモルファス)形態等、1つまたは複数の
物理的形態で提供することができる。化合物のそのような異なる物理的形態は、例えば、
異なる溶媒または溶媒の異なる混合物を再結晶に使用して、調製することができる。代替
的にまたは付加的に、異なる多形は、例えば、異なる温度で再結晶を実施することによっ
て、および/または再結晶中に冷却速度を変更することによって、調製することができる
。多形の存在は、X線結晶学によって、または一部の場合において、固相NMR分光法、
IR分光法等の別の分光技術によって、または示差走査熱量測定によって、決定すること
ができる。
(方法)
本明細書において開示されている化合物は、異常なまたは正常でないオートファジーに
よって媒介される疾患を治療するまたは阻害する際に有用となり得る。そのような疾患に
おいて、本明細書において開示されている化合物は、過度のまたは望ましくないオートフ
ァジー、すなわち、疾患を誘発すること、悪化させること、または維持することを、阻害
することができる。例証的な疾患は、遺伝子STK11、PTEN、TSC1、TSC2
および/またはPIK3CAにおける突然変異から生じる、あるいは、mTOR基質バイ
オマーカーであるホスホ-S6Kまたはホスホ-4ebp1によって示される、疾患また
は状態を含む。例証的な疾患は、結節性硬化症(TSC)、がん、新生物、クローン病、
パーキンソン病、アルツハイマー病、および成人期神経変性を伴う小児期非進行性脳症(
SENDA)を含むがこれらに限定されない。例証的ながんは、膠芽細胞腫、転移性固形
腫瘍、乳がん、前立腺がん、非小細胞肺がん、結腸直腸がん、膵臓がん、腎細胞癌、B細
胞慢性リンパ性白血病、黒色腫、腺癌、結腸直腸、および腎臓がんを含むがこれらに限定
されない。
ある特定の実施形態では、化合物は、望ましくないオートファジーが治療的に開始また
は増強された状態または疾患を改善する。そのような疾患または状態において、組合せ療
法におけるULK1阻害剤の投与は、望ましくないオートファジーを阻害する。そのよう
な療法は、mTOR阻害剤投与を含む。非限定的な例証的なmTOR阻害剤は、ラパマイ
シン、シロリムス、テムシロリムス、エベロリムス、リダフォロリムス、NVPBEZ2
35、BGT226、XL765、GDC0980、SF1126、PKI587、PF
O469,1502、GSK2,126,458、INK128、TORKiCC223
、OSI027、AZD8055、AZD2014、およびPalomid 529を含
む。例証的な間接的mTOR阻害剤は、メトホルミンおよびAICAR(5-アミノ-1
-β-D-リボフラノシル-イミダゾール-4-カルボキサミド)を含む。mTOR阻害
剤による治療のための、故に、ULK1阻害剤との共投与治療に適している例証的な疾患
または状態は、免疫抑制(移植片拒絶を予防するため等)、抗再狭窄(例えば、血管形成
術後)、がん(例えば、腎細胞癌、膵臓、TSC、リンパ腫、子宮内膜、乳房、結腸、前
立腺、膠芽細胞腫、星状細胞腫、多発性骨髄腫、肝細胞癌)、コーデン症候群、ポイツ・
ジェガーズ症候群、結節性硬化症、LAM(リンパ脈管筋腫症)、および加齢黄斑変性を
含む。
本明細書において開示されている化合物は、例えば、mTOR阻害剤耐性疾患等の難治
性疾患を有する対象に投与してもよい。非限定的な例証的な難治性疾患は、膠芽細胞腫、
転移性固形腫瘍、乳がん、前立腺がん、非小細胞肺がん、結腸直腸がん、膵臓がん、腎細
胞癌、B細胞慢性リンパ性白血病、黒色腫、腺癌、結腸直腸、および腎臓がんを含む。
ある特定の実施形態では、対象は、ULK1阻害剤による治療を必要とする、または必
要とすると認識されている。対象は、ULK1阻害剤による治療に適しているとして選択
され得る。例えば、対象は、mTOR阻害剤の投与によって引き起こされた腫瘍細胞にお
ける望ましくないオートファジーを阻害する作用物質を必要としていてよい。
ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物によって提供される
オートファジー阻害が、損傷細胞の浄化を刺激し、損傷および造腫瘍性細胞の消散を早め
る。
現在TSCに利用可能な治療は、薬物ラパマイシン、その類似体(「ラパログ」と呼ば
れる)および他のmTOR阻害剤等、これらの患者の細胞において見られるmTOR上昇
を抑制することができる薬物である。ラパログおよびより新しい直接的なmTOR阻害薬
による治療は、mTORによるその封鎖が軽減されると、ULK1の活性化につながる。
その上、ULK1は通常、細胞に、それら自体の一部および代謝物を再生利用させること
によってストレス時に生き続けるように、生存シグナルを提供する。これらの所見は、ラ
パマイシンまたは他のmTOR阻害剤で治療された患者において、これらの薬物によるU
LK1の活性化が、腫瘍細胞および他のTSC欠損細胞を治療中実際に生きさせ、腫瘍細
胞の完全な根絶を予防することを示唆している。mTOR阻害剤を、本明細書で記載され
る通りのULK1阻害剤と組み合わせることにより、mTOR阻害剤によりTSCおよび
リンパ脈管筋腫症(「LAM」)において見られる控えめであるがプラスの効果を、はる
かに持続性が高く強固な応答に変換することができる。実際に、LKB1欠損腫瘍細胞に
おける培養中の相乗的な組合せは、治療的殺傷について劇的な相乗効果を示した。ある特
定の実施形態では、本明細書において開示されているULK1阻害剤は、すべてのTSC
患者およびLAMまたはAML(血管筋脂肪腫)が自発的に生じている任意の患者の助け
となる。ULK1構成要素は体のすべての細胞において発現されるため、ULK1および
mTOR薬を組み合わせることにより、TSCによって影響を受けるすべての臓器:脳(
結節、SEGA)、腎臓(AML)、皮膚線維腫、心臓横紋筋肉腫、および肺LAM病変
に有益となる。
ある特定の実施形態では、ULK1およびmTOR阻害剤の治療組合せは、より恒久的
かつ持続的な応答を提供し、これは、患者が生涯にわたってmTOR阻害剤を服用し続け
る必要のない、腫瘍細胞の完全な根絶または腫瘍性ではないTSC欠損細胞型(例えば、
脳結節)に対する機能回復を意味し得る。ULK1がすべての細胞型においてmTORに
よってブロックされるという発見およびULK1小分子阻害剤が発見されたという事実は
、これを、mTOR薬と合理的に組み合わせるための可能な眼り幅広い新たな治療選択肢
の1つにしている。
ラパログおよびより新しい直接的なmTOR阻害薬による治療は、mTORによるその
阻害が軽減されると、ULK1の活性化につながる。これは、ULK1活性のマーカーを
生検において使用することができ、ラパログまたは他のmTOR阻害剤からのmTOR封
鎖の効能を決定するためのTSC患者由来の血液試料が、ULK1からのシグナルが「向
上」するのに伴ってmTORがどの程度下落するかに比例することを意味する。重要なこ
とに、mTOR阻害はULK1を活性化するために十分であり、ULK1のAMPKリン
酸化はこの状態において必要ではない。
mTOR活性の現在のマーカーはすべて、mTORがブロックされた場合に低下し(ホ
スホ-S6、ホスホ-S6K1、ホスホ-4ebp1)、これも有用であるが、時に、基
本的に低く、次いで、いかに有効な治療であるかに比例して、治療とともに増大するシグ
ナルを定量化することは、より容易である。故に、2セットの抗体の組合せ(mTOR基
質リン酸化部位およびULK1基質リン酸化部位)を使用することは、次いで、ヒト臨床
試料に対して試験することができる抗体の有意義なパネルを提供するはずである。
mTOR阻害剤が疾患の治療に有効である可能性を決定するための方法も開示されてい
る。一部の実施形態では、方法は、mTOR阻害剤を投与した対象由来の生物学的試料に
おけるmTOR基質であるホスホ-S6Kまたはホスホ-4ebp1の少なくとも一方の
レベルを検出する1つまたは複数のアッセイを実施するステップと、mTOR基質である
ホスホ-S6Kまたはホスホ-4ebp1の少なくとも一方のレベルを、正常な対応する
組織のそれぞれの対照レベルと比較するステップとを含む。それぞれの対照と比較した場
合の、mTOR基質であるホスホ-S6Kまたはホスホ-4ebp1の少なくとも一方の
レベルにおける増大の検出は、mTOR阻害剤が、対象における疾患の治療に有効である
ことを示している。
ある特定の実施形態では、阻害剤は、クロロキンおよびクロロキン誘導体のようなリソ
ソーム作用剤のはるかに広範な使用と比較した場合に、オートファジー経路におけるAT
G遺伝子を阻害するという意味で、選択的オートファジーメディエーターであり、これら
は、リソソーム機能を破壊することによりオートファジーを停止させるが、オートファジ
ーに非常に非特異的であることから、他の潜在的な合併症も引き起こすものである。
ある特定の実施形態では、本明細書において開示されている化合物は、ULK1の触媒
ATP結合ポケットと結合するATP競合性結合剤である。ある特定の実施形態では、本
明細書において開示されている化合物は、可逆的阻害剤である。
ULKtideペプチドを使用してULK1のキナーゼ活性を阻害する化合物を同定す
るためのスクリーニングアッセイがさらに提供される。一部の実施形態では、方法は、候
補化合物、ULK1および組換えULKtideペプチド(またはその変異体)を接触さ
せるステップと;候補化合物の存在下および非存在下で、組換えペプチドのリン酸化を検
出するステップと;候補化合物の非存在下と比較して候補化合物の存在下で組換えペプチ
ドのリン酸化が減少している場合に、ULK1のキナーゼ活性を阻害する化合物を同定す
るステップとを含む。
(組成物)
本開示の別の態様は、対象への投与のために調製された、治療有効量の、本明細書にお
いて開示されている化合物の1つまたは複数を含む、医薬組成物を含む。開示化合物の治
療有効量は、投与ルート、対象の種および治療されている対象の物理的特徴によって決ま
ることになる。考慮に入れることができる具体的な要因は、疾患の重症度および段階、体
重、食習慣ならびに併用薬剤を含む。開示化合物の治療有効量を決定するためのこれらの
要因の関係は、当業者によって理解されている。医薬組成物は、ULK1阻害剤およびm
TOR阻害剤の両方を、単一投薬単位または形態で含んでよい。
対象への投与のための医薬組成物は、最適な分子に加えて、担体、増粘剤、賦形剤、緩
衝剤、保存剤、表面活性剤等、少なくとも1つのさらなる薬学的に許容される添加物を含
むことができる。医薬組成物は、抗菌剤、抗炎症剤、麻酔薬等、1つまたは複数のさらな
る活性成分も含むことができる。これらの製剤に有用な薬学的に許容される担体は、従来
のものである。Remington’s Pharmaceutical Scienc
es、E.W.Martin著、Mack Publishing Co.、Easto
n、PA、第19版(1995)は、本明細書において開示されている化合物の薬学的送
達に好適な組成物および製剤について記載している。
概して、担体の性質は、用いられている特定の投与モードによって決まることになる。
例えば、非経口製剤は、通例、水、生理食塩水、平衡塩類溶液、デキストロース水溶液、
グリセロール等の、薬学的かつ生理学的に許容される流体をビヒクルとして含む、注射用
流体を含有する。固体組成物(例えば、散剤、丸剤、錠剤、またはカプセル剤形態)では
、従来の非毒性固体担体は、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デン
プン、またはステアリン酸マグネシウムを含むことができる。生物学的に中性の担体に加
えて、投与される医薬組成物は、湿潤または乳化剤、保存剤、およびpH緩衝剤等、例え
ば酢酸ナトリウムまたはモノラウリン酸ソルビタン等の、少量の非毒性補助物質を含有す
ることができる。
本明細書において開示されている医薬組成物は、開示化合物の薬学的に許容される塩お
よび/または溶媒和物から形成されたものを含む。医薬組成物は、経口、経直腸、鼻腔内
、肺内、もしくは経皮送達を含む様々な粘膜投与モードによって、または他の表面への局
所送達によって、対象に投与することができる。任意選択で、組成物は、筋肉内、皮下、
静脈内、動脈内、関節内、腹腔内、髄腔内、脳室内、または非経口ルートによるものを含
む非粘膜ルートによって、投与することができる。他の代替的な実施形態では、化合物を
、対象を起源とする細胞、組織または臓器への直接曝露によって、ex vivoで投与
することができる。
医薬組成物を製剤化するために、化合物を、種々の薬学的に許容される添加物、および
化合物の分散のための基剤またはビヒクルと組み合わせることができる。所望の添加物は
、アルギニン、水酸化ナトリウム、グリシン、塩酸、クエン酸等のpH制御剤を含むがこ
れらに限定されない。加えて、局所麻酔薬(例えば、ベンジルアルコール)、等張化剤(
例えば、塩化ナトリウム、マンニトール、ソルビトール)、吸着阻害剤(例えば、Twe
en 80またはMiglyol 812)、溶解度増強剤(例えば、シクロデキストリ
ンおよびその誘導体)、安定剤(例えば、血清アルブミン)、および還元剤(例えば、グ
ルタチオン)を含むことができる。当技術分野において周知である多くの他の好適なアジ
ュバントの中でも、水酸化アルミニウム(例えば、Amphogel、Wyeth La
boratories、Madison、NJ)、フロイントアジュバント、MPL(商
標)(3-O-脱アシル化モノホスホリル脂質A;Corixa、Hamilton、I
N)およびIL-12(Genetics Institute、Cambridge、
MA)等のアジュバントを、組成物に含むことができる。組成物が液体である場合、製剤
の張度は、単一とみなされる0.9%(w/v)の生理食塩水の張度を参照して測定した
場合、典型的に、実質的、不可逆的な組織損傷が投与部位において誘発されないと予想さ
れる値に調整される。概して、溶液の張度は、約0.5から約2.0、または約0.8か
ら約1.7等、約0.3から約3.0の値に調整される。
化合物を基剤またはビヒクルに分散させることができ、これらは、化合物を分散させる
能力を有する親水性化合物、および任意の所望の添加物を含むことができる。基剤は、ポ
リカルボン酸またはその塩、カルボン酸無水物(例えば、無水マレイン酸)と他のモノマ
ー(例えば、メチル(メタ)アクリレート、アクリル酸等)とのコポリマー、ポリ酢酸ビ
ニル、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等の親水性ビニルポリマー、ヒドロ
キシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース等のセルロース誘導体、ならびに
キトサン、コラーゲン、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、ヒアルロン酸、およびそれら
の非毒性金属塩等の天然ポリマーを含むがこれらに限定されない、幅広い好適な化合物か
ら選択することができる。多くの場合、生分解性ポリマーは、基剤またはビヒクルとして
選択され、例えば、ポリ乳酸、ポリ(乳酸-グリコール酸)コポリマー、ポリヒドロキシ
酪酸、ポリ(ヒドロキシ酪酸-グリコール酸)コポリマーおよびそれらの混合物である。
代替的にまたは付加的に、ポリグリセリン脂肪酸エステル、スクロース脂肪酸エステル等
の合成脂肪酸エステルをビヒクルとして用いることができる。親水性ポリマーおよび他の
ビヒクルを単独でまたは組み合わせて使用することができ、部分結晶化、イオン結合、架
橋結合等によって、増強された構造的完全性をビヒクルに付与することができる。ビヒク
ルは、流体または粘性溶液、ゲル、ペースト、粉末、マイクロスフィア、および粘膜表面
への直接適用のためのフィルムを含む様々な形態で、提供され得る。
化合物を、基剤またはビヒクルと、様々な方法に従って組み合わせることができ、化合
物の放出は、拡散、ビヒクルの崩壊、または水チャネルの関連形成によってできる。一部
の状況では、化合物は、好適なポリマー、例えば、イソブチル2-シアノアクリレート(
例えば、Michaelら、J.Pharmacy Pharmacol.43:1~5
、1991を参照)から調製されたマイクロカプセル(マイクロスフィア)またはナノカ
プセル(ナノスフィア)中に分散され、生体適合性分散媒中に分散されて、長期間にわた
って、持続送達および生物学的活性を産出する。
本開示の組成物は、生理的条件に近似するために必要とされる場合、薬学的に許容され
るビヒクル物質として、pH調整および緩衝剤、張度調整剤、湿潤剤等、例えば、酢酸ナ
トリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、モノラウ
リン酸ソルビタン、およびオレイン酸トリエタノールアミンの物質を代替的に含有するこ
とができる。固体組成物では、例えば、医薬品グレードの、マンニトール、ラクトース、
デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、
グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム等を含む、従来の非毒性の薬学的に許容され
るビヒクルを使用することができる。
化合物を投与するための医薬組成物は、溶液、マイクロエマルション、または高濃度の
活性成分に好適な他の秩序構造として製剤化することもできる。ビヒクルは、例えば、水
、エタノール、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエ
チレングリコール等)、およびそれらの好適な混合物を含有する、溶媒または分散媒であ
ってよい。溶液に適正な流動性は、例えば、レシチン等のコーティングの使用によって、
分散性製剤の場合には所望の粒径の維持によって、および界面活性剤の使用によって、維
持することができる。多くの場合において、組成物中に、等張剤、例えば、砂糖、マンニ
トールおよびソルビトール等の多価アルコール、または塩化ナトリウムを含むことが望ま
しいと予想される。化合物の長期的吸収は、組成物中に、吸収を遅延させる作用物質、例
えば、モノステアリン酸塩およびゼラチンを含むことによって、もたらすことができる。
ある特定の実施形態では、化合物を、時間放出製剤で、例えば、徐放性ポリマーを含む
組成物で、投与することができる。これらの組成物は、急速な放出から保護するビヒクル
、例えば、ポリマー、マイクロカプセル化送達系または生体接着性ゲル等の制御放出ビヒ
クルを用いて調製することができる。本開示の種々の組成物における長期的送達は、吸収
を遅延させる組成物剤中に、例えば、モノステアリン酸アルミニウムヒドロゲルおよびゼ
ラチンを含むことによって、もたらすことができる。制御放出製剤が所望される場合、本
開示に従って使用するために好適な制御放出結合剤は、活性剤に対して不活性であり、化
合物および/または他の生物学的活性剤を組み込むことができる、任意の生体適合性制御
放出材料を含む。多数のそのような材料が当技術分野において既知である。有用な制御放
出結合剤は、それらの送達後に、生理的条件下で(例えば、粘膜表面で、または体液の存
在下で)、ゆっくり代謝される材料である。適切な結合剤は、持続放出製剤において使用
するために当技術分野において周知の生体適合性ポリマーおよびコポリマーを含むがこれ
らに限定されない。そのような生体適合性化合物は、周辺組織に対して非毒性かつ不活性
であり、鼻の刺激、免疫応答、炎症等の有意な有害副作用を引き起こさない。これらは、
生体適合性でもあり、体内から簡単に排除される、代謝生成物に代謝される。
本開示において使用するための例示的なポリマー性材料は、加水分解性エステル結合を
有するコポリマーおよびホモポリマーポリエステルに由来するポリマーマトリックスを含
むがこれらに限定されない。これらのうち若干数は、生分解性であり、毒性がないまたは
低い分解生成物につながることが当技術分野において既知である。例示的なポリマーは、
ポリグリコール酸およびポリ乳酸、ポリ(DL-乳酸-co-グリコール酸)、ポリ(D
-乳酸-co-グリコール酸)、ならびにポリ(L-乳酸-co-グリコール酸)を含む
。他の有用な生分解性または生体内分解性ポリマーは、ポリ(イプシロン-カプロラクト
ン)、ポリ(イプシロン-アプロラクトン-CO-乳酸)、ポリ(イプシロン.-アプロ
ラクトン-CO-グリコール酸)、ポリ(ベータ-ヒドロキシ酪酸)、ポリ(アルキル-
2-シアノアクリレート)等のポリマー、ポリ(メタクリル酸ヒドロキシエチル)、ポリ
アミド、ポリ(アミノ酸)(例えば、L-ロイシン、グルタミン酸、L-アスパラギン酸
等)、ポリ(エステル尿素)、ポリ(2-ヒドロキシエチルDL-アスパルタミド)等の
ヒドロゲル、ポリアセタールポリマー、ポリオルトエステル、ポリカーボネート、ポリマ
レアミド、多糖、ならびにそれらのコポリマーを含むがこれらに限定されない。そのよう
な製剤を調製するための多くの方法が、当業者に周知である(例えば、Sustaine
d and Controlled Release Drug Delivery S
ystems、J.R.Robinson編、Marcel Dekker,Inc.、
New York、1978を参照)。他の有用な製剤は、制御放出マイクロカプセル(
米国特許第4,652,441号および同第4,917,893号)、マイクロカプセル
および他の製剤を作製する際に有用な乳酸-グリコール酸コポリマー(米国特許第4,6
77,191号および同第4,728,721号)および水溶性ペプチド用の持続放出組
成物(米国特許第4,675,189号)を含む。
本開示の医薬組成物は、典型的には、製造、貯蔵および使用の条件下で、無菌かつ安定
である。無菌溶液は、化合物を、必要とされる量で、適切な溶媒中、本明細書において挙
げられている成分の1つまたは組合せとともに組み込むことによって、必要に応じて、続
いて、濾過滅菌によって、調製することができる。概して、分散液は、化合物および/ま
たは他の生物学的活性剤を、塩基性分散媒および本明細書において挙げられているものか
ら必要とされる他の成分を含有する無菌ビヒクルに組み込むことによって、調製される。
無菌粉末の場合、調製方法は、予め滅菌濾過したその溶液から化合物プラス任意のさらな
る所望の成分の粉末を産出する、真空乾燥およびフリーズドライを含む。微生物の作用の
予防は、種々の抗菌および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール
、ソルビン酸、チメロサール等によって遂行することができる。
本開示の種々の治療方法に従って、化合物を、対象に、治療または予防が求められる障
害の管理に関連する従来の方法論と一致する様式で、送達することができる。本明細書に
おける開示に従って、予防または治療有効量の化合物および/または他の生物学的活性剤
は、そのような治療を必要とする対象に、選択された疾患もしくは状態またはその1つも
しくは複数の症状を、予防する、阻害する、および/または改善するために十分な時間に
わたっておよび条件下で、投与される。
本開示の化合物の投与は、予防的または治療的目的のいずれかのためであってよい。予
防的に提供される場合、化合物は、あらゆる症状の前に提供される。化合物の予防的投与
は、任意のその後の疾患プロセスを予防するまたは改善するために役立つ。治療的に提供
される場合、化合物は、疾患または感染症の症状の発症時(または直後)に提供される。
予防的および治療的目的のために、化合物を、対象に、経口ルートによってまたは単一
ボーラス送達で、連続的な送達(例えば、連続的な経皮、粘膜または静脈内送達)を介し
て、長期間にわたって、あるいは、反復投与プロトコールで(例えば、毎時、毎日または
毎週、反復投与プロトコールによって)、投与することができる。化合物の治療有効投薬
量は、本明細書で説明されている通りの標的とされる疾患または状態に関連する1つまた
は複数の症状または検出可能な状態を緩和するための臨床的に有意な結果を産出すると予
想される長期の予防または治療レジメン内の反復用量として、提供することができる。こ
の文脈における有効投薬量の決定は、典型的には、ヒト臨床試験によって追跡調査した動
物モデル研究に基づき、対象において標的とされる疾患の症状または状態の発生または重
症度を有意に低減させる投与プロトコールによってガイドされる。この点で好適なモデル
は、例えば、ネズミ、ラット、鳥、イヌ、ヒツジ、ブタ、ネコ、非ヒト霊長類、および当
技術分野において既知である他の認められている動物モデル対象を含む。代替的に、有効
投薬量は、in vitroモデルを使用して決定することができる。そのようなモデル
を使用すると、治療有効量の化合物を投与するための適切な濃度および用量(例えば、標
的とされる疾患の1つまたは複数の症状を緩和するために有効な量)を決定するために必
要とされるのは、普通の計算および調整のみである。代替的な実施形態では、有効量また
は有効用量の化合物は、治療的または診断的目的いずれかのために、本明細書で説明され
ている通りの、疾患または状態と相関する1つまたは複数の選択された生物学的活性を単
純に阻害または増強し得る。
化合物の実際の投薬量は、対象の疾患の兆しおよび特定の状況(例えば、対象の年齢、
大きさ、体の調子、症状の程度、感受性因子等)、投与の時間およびルート、同時発生的
に投与されている他の薬物または治療、ならびに対象において所望の活性または生物学的
応答を誘起するための化合物の特異的な薬理学等の要因に従って変動することになる。投
薬レジメンは、最適な予防的または治療的応答を提供するために調整することができる。
治療有効量はまた、化合物および/または他の生物学的活性剤の任意の毒性または有害な
副作用を、臨床面で、治療的に有益な効果が上回るものでもある。本開示の方法および製
剤内の治療有効量の化合物および/または他の生物学的活性剤の非限定的範囲は、約0.
05mg/kgから約5mg/kg体重、または約0.2mg/kgから約2mg/kg
体重等、約0.01mg/kg体重から約20mg/kg体重である。
投薬量は、標的部位(例えば、肺または体循環)における所望の濃度を維持するために
、担当臨床医によって変動させることができる。送達モード、例えば、経表皮、経直腸、
経口、肺内、骨内、または鼻腔内送達対静脈内もしくは皮下もしくは筋肉内送達に基づい
て、より高いまたはより低い濃度を選択することができる。投薬量は、投与される製剤、
例えば、肺内スプレー対粉末、持続放出経口対注射された粒子または経皮送達製剤等の放
出速度に基づいて調整することもできる。
本明細書において開示されている化合物を、さらなる治療剤、特に、上述した通りのm
TOR阻害剤と、共投与してもよい。共投与のためのさらなる作用物質は、抗糖尿病剤、
コレステロール低下剤、抗炎症剤、抗菌剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、リ
ポキシゲナーゼ阻害剤、サイトカインアンタゴニスト、免疫抑制薬、抗がん剤、抗ウイル
ス剤、サイトカイン、増殖因子、免疫調節薬、プロスタグランジンまたは抗血管過剰増殖
化合物を含むがこれらに限定されない。
本開示は、本明細書において記載されている医薬組成物、活性成分、ならびに/または
哺乳動物対象における疾患および他の状態の予防および治療において使用するためにそれ
らを投与するための手段を含有する、キット、包装およびマルチ容器ユニットも含む。診
断的使用のためのキットも提供される。ある特定の実施形態では、これらのキットは、本
明細書において記載されている化合物の1つまたは複数を含有する、容器または製剤を含
む。一例において、この構成要素は、対象への送達のための医薬調製物に製剤化される。
化合物は、任意選択で、バルク分注容器もしくはユニットまたはマルチユニット剤形に含
有される。任意選択の分注手段、例えば、肺内または鼻腔内スプレーアプリケーターを提
供することができる。包装材料は、任意選択で、治療目的および/または包装された医薬
品作用物質を使用することができる様式を示すための標識または指示を含む。
別段の指示がない限り、本明細書および請求項において使用される、成分の分量、分子
量等の特性、反応条件等を表現するすべての数字は、いずれの場合も用語「約」によって
修飾されているものとして理解すべきである。したがって、それに反する指示がない限り
、下記の明細書および添付の請求項において説明されている数値パラメーターは、本発明
によって取得されることが求められる所望の特性に応じて変動し得る近似である。少なく
とも、同等物の教義の適用を請求項の範囲に限定しようとする試みとしてではなく、各数
値パラメーターは、少なくとも、報告された有効桁の数を考慮し、普通の丸め技術を適用
することにより、解釈されるべきである。
本発明の広い範囲を説明している数値範囲およびパラメーターは近似であるにもかかわ
らず、具体例において説明されている数値は、可能な限り正確に報告されている。しかし
ながら、任意の数値は、それらのそれぞれの試験測定において見られる標準偏差に必然的
に起因する、ある特定の誤差を本質的に含有する。
本明細書においてどのような値および範囲が提供されていても、これらの値および範囲
によって包括されるすべての値および範囲は、本発明の範囲内に包括されるようになって
いることを理解すべきである。その上、これらの範囲内に収まるすべての値、および値の
範囲の上限または下限も、本出願によって企図されている。
当業者ならば、日常実験以上のものを使用することなく、本明細書において記載されて
いる、具体的な手順、実施形態、請求項および実施例の、多数の同等物を認識すると予想
され、または解明できると予想される。そのような同等物は、本発明の範囲内とみなされ
、それに添付する請求項によって網羅された。例えば、反応時間、反応の大きさ/体積、
ならびに溶媒、触媒、圧力、大気条件、例えば、窒素雰囲気、および還元/酸化剤等の実
験試薬を含むがこれらに限定されない、当技術分野で認識されている代替物を用い、日常
実験以上のものを使用することのない、反応条件における修正は、本出願の範囲内である
ことを理解すべきである。
下記の実施例は、本発明のアッセイ、スクリーニング、および治療方法をどのように作
製し使用するかという完全な開示および記載を当業者に提供するように提案するものであ
り、本発明者らが本発明とみなすものの範囲を制限することを意図するものではない。
本発明はここで、以下の実施例を参照して記載される。これらの実施例は、例証のみの
目的のために提供されるものであり、本発明は、これらの実施例に限定されるわけではな
く、むしろ本明細書において提供される教示の結果として明白であるすべての変動を包含
する。別段明記しない限り、本明細書に記載される合成のための出発物は、市販品または
既知の合成手順により得て、更には精製せずに使用した。全溶媒は市販品を購入して使用
した。
(方法)
マイクロ波照射下で実施した反応は、CEM10mL反応容器またはChem Gla
ss厚壁圧力容器(100mL、38mm×190mm)の何れかを使用し、CEM D
iscoverマイクロ波反応器中で行った。反応の進行は、逆相HPLCおよび/また
は薄層クロマトグラフィー(TLC)によりモニターした。液体クロマトグラフィー-質
量分析は、水および0.1%ギ酸でドープしたアセトニトリルまたはメタノールを使用し
、WatersまたはShimadzu HPLC機器の何れかを使用して行った。逆相
精製は、水および0.1%ギ酸でドープしたアセトニトリルまたはメタノールを使用して
行った。TLCは、シリカゲル60 F254コーティング済みプレート(0.25mm
)を使用して行った。フラッシュクロマトグラフィーは、シリカゲル(粒径32~63μ
m)または酸化アルミニウム(活性化、塩基性、約150メッシュサイズ)を使用して行
った。全ての生成物は、UVランプおよび/もしくはヨウ素および/もしくはCAMまた
は塩基性KMnOを検出目的で使用し、TLC分析(単一スポット、特に明記しない限
り)により均一になるよう精製した。NMRスペクトルは、周囲温度にて400MHz分
光器上で記録した。Hおよび13C NMRの化学シフトは、内部標準として残留する
溶媒を使用し、δとして報告する;CDCl:7.26、77.16ppm;CD
D:3.31、49.00ppm;DMSO-d6:2.50、39.52ppm、CD
CN:1.94(H)、1.32(13C)ppm。略語を使用した:質量分析(M
S)、炭素担持パラジウム(Pd-C)、アセトニトリル(MeCN)、ジクロロメタン
(DCM)、ジエチルエーテル(EtO)、酢酸エチル(EtOAc)、エタノール(
EtOH)、メタノール(MeOH)、テトラヒドロフラン(THF)。
(実施例1)
5-ハロ-2,4-(ジアリールアミノ/オキソ/チオ)-ピリミジン誘導体の合成
Figure 2022017384000080
(実施例2)
5-ハロ-N,N-ジアリールピリミジン-2,4-ジアミン誘導体の合成(反応条
件AおよびC、方法1を使用)
適切なアミン(10mmol、1当量)のDMF(30mL)中溶液に、2,4,5-
トリクロロピリミジン(13mmol、1.3当量)およびKCO(13mmol、
1.3当量)を加えた。反応混合物を75℃で5時間撹拌した。次いでこれを室温に冷却
し、水(300mL)中に注ぎ入れた。得られた沈殿物を濾過し集め、続いて50%アセ
トニトリル水溶液で洗浄し、乾燥して、所望の2,5-ジハロ-N-アリールピリミジン
-4-アミン誘導体を得た。粗生成物を更には精製せずに次のステップに使用した(方法
1a)。2,5-ジクロロ-N-アリールピリミジン-4-アミン(1mmol、1当量
)および適切なアニリン(2mmol、2当量)の混合物をBuOH(10mL)に溶
解し、110℃で12時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、過剰の溶媒を減圧下で
減少させた。粗製の残留物は自動分取HPLCを使用して精製して、所望の5-ハロ-N
,N-ジアリールピリミジン-2,4-ジアミン誘導体を得た(方法1b)。
(実施例3)
2,5-ジクロロ-N-アリールピリミジン-4-アミン誘導体の合成(反応条件Bおよ
びC、方法2を使用)
適切なアミン(1mmol、1当量)のBuOH(10mL)中溶液に、2,4,5
-トリクロロピリミジン(1mmol、1当量)およびDIPEA(1mmol、1当量
)を加えた。得られた混合物を110℃で4~5時間撹拌した(方法2a)。反応混合物
を室温に冷却し、同じ反応混合物に適切なアニリン(1mmol、1当量)およびDIP
EA(1mmol、1当量)を加え、110℃で12時間加熱した。反応混合物を室温に
冷却し、過剰の溶媒を減圧下で減少させた。粗製の残留物を自動分取HPLCを使用して
精製して、所望の5-ハロ-N,N-ジアリールピリミジン-2,4-ジアミン誘導
体を得た(方法2b)。
(実施例4)
2,5-ジクロロ-N-アリールピリミジン-4-アミン誘導体の合成(反応条件Aまた
はB、方法3を使用して得られた中間体から、反応条件Dを使用)
2,5-ジハロ-N-アリールピリミジン-4-アミン誘導体(1mmol、1当量)
のEtOH(10mL)中溶液に、適切なアミン(1mmol、1当量)および数滴のH
Clを加えた。反応混合物を60℃で4~5時間撹拌した(方法3a)。次いで反応混合
物を室温に冷却し、水(25mL)で希釈し、1N NaOH溶液で中和し、酢酸エチル
(3×20mL)で抽出した。合わせた有機層を水、ブラインで洗浄し、無水NaSO
で乾燥した。減圧下で溶媒を除去して、粗生成物を得た。粗製の残留物を自動分取HP
LCを使用して精製して、所望の5-ハロ-N,N-ジアリールピリミジン-2,4
-ジアミン誘導体を得た(方法3b)。
(実施例5)
2-(5-トリフルオロメチル-2-(アリールアミノ/オキソ/チオ)ピリミジン-4
-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド誘導体の合成
Figure 2022017384000081
(実施例6)
,N-ジアリール-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン誘
導体の合成(反応条件EおよびF、方法4を使用)
5-トリフルオロメチル-2,4-ジクロロピリミジン(4.6mmol、1当量)の
DCE:BuOH(1:1、40mL)中溶液に、ZnCl(5.5mmol、1.
2当量)を0℃で加えた。1時間後、DCE:BuOH(4mL)中の適切なアニリン
(1当量)およびトリエチルアミン(4.6mmol、1.2当量)を反応混合物に加え
た。1.5時間撹拌した後、反応混合物を濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物をMeO
Hで摩砕し、濾過し、乾燥して、所望の5-トリフルオロメチル-4-クロロ-N-アリ
ールピリミジン-2-アミン誘導体を得た(方法4a)。5-トリフルオロメチル-4-
クロロ-N-アリールピリミジン-2-アミン誘導体(1mmol、1当量)のBuO
H(10mL)中溶液に、適切なアニリン(1mmol、1当量)およびDIPEA(1
mmol、1当量)を加えた。反応混合物を100℃で16時間撹拌した。次いでこれを
室温に冷却し、過剰の溶媒を減圧下で減少させた。粗製の残留物を自動分取HPLCを使
用して精製して、所望の5-トリフルオロメチル-N,N-ジアリールピリミジン-
2,4-ジアミン誘導体を得た(方法4b)。
(実施例7)
2-(2,5-ジクロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000082
2-アミノ-N-メチルベンズアミド(1.5g、10mmol)、2,4,5-トリ
クロロピリミジン(2.38g、13mmol)およびKCO(1.79g、13m
mol)を使用し、方法1aに従って調製した。白色固体(2.6g、89%)。
NMR(400MHz,DMSO-d):δ12.15(s,1H)、8.82(br
s,1H)、8.48(d,J=7.3Hz,1H)、8.43(s,1H)、7.76
(d,J=7.3Hz,1H)、7.57(t,J=8.2Hz,1H)、7.18(t
,J=7.8Hz,1H)、2.76(d,J=2.3Hz,3H)。LC-MS(ES
I)C1210ClO[M+H]の計算値:297.02;実測値:297.
00。
(実施例8)
2-(5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド
の調製
Figure 2022017384000083
2-アミノ-N-メチルベンズアミド(1.5g、10mmol)、5-ブロモ-2,
4-ジクロロピリミジン(2.75g、13mmol)およびKCO(1.79g、
13mmol)を使用し、方法1aに従って調製した。黄色固体(4.5g、66%)。
H NMR(400MHz,DMSO-d):δ11.93(s,1H)、8.50
(brs,1H)、8.48(d,J=7.3Hz,1H)、8.41(s,1H)、7
.75(d,J=7.3Hz,1H)、7.54(t,J=8.2Hz,1H)、7.1
7(t,J=7.8Hz,1H)、2.76(d,J=2.3Hz,3H)。LC-MS
(ESI)C1210BrClNO[M+H]の計算値:342.97;実測値:
342.85。
(実施例9)
6-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ)-3,4
-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製(方法4a)
Figure 2022017384000084
5-トリフルオロメチル-2,4-ジクロロピリミジン(1g、4.6mmol)のD
CE:BuOH(1:1、40mL)中溶液に、ZnCl(5.5mL、5.5mm
ol)を0℃で加えた。1時間後、DCE:BuOH(4mL)中の6-アミノ-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン塩酸塩(0.938g、4.6mmol)およ
びトリエチルアミン(1g、5.5mmol)を反応混合物に加えた。1.5時間撹拌し
た後、反応混合物を濃縮して、粗生成物を得た。粗生成物をメタノールで摩砕し、濾過し
、真空で乾燥して、化合物を得た。黄色固体(1g、64%)。H NMR(400M
Hz,DMSO-d):δ10.51(s,1H)、10.04(s,1H)、8.7
9(s,1H)、7.40(s,1H)、7.39(d,J=8.2Hz,1H)、6.
82(d,J=12.6Hz,1H)、2.76(t,J=7.2Hz,2H)、2.3
9(t,J=7.3Hz,2H)。LC-MS(ESI)C1410ClFO[
M+H]の計算値:343.05;実測値:342.90。
(実施例10)
4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)
ピリミジン-2-アミンの調製
Figure 2022017384000085
方法4aに従い、5-トリフルオロメチル-2,4-ジクロロピリミジン(1g、4.
6mmol)、ZnCl(5.5mL、5.5mmol)、3,4,5-トリメトキシ
アニリン(0.841g、4.6mmol)およびトリエチルアミン(1g、5.5mm
ol)の反応により標題化合物を調製した。淡黄色固体(1.38g、82%)。
NMR(400MHz,DMSO-d):δ10.45(s,1H)、8.75(s,
1H)、7.06(s,2H)、3.85(s,6H)、3.68(s,3H)。LC-
MS(ESI)C1413ClF[M+H]の計算値:364.06;実
測値:363.95。
(実施例11)
4-クロロ-N-(5-メトキシ-2-メチルフェニル)-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-2-アミンの調製
Figure 2022017384000086
方法4aに従い、5-トリフルオロメチル-2,4-ジクロロピリミジン(1g、4.
6mmol)、ZnCl(5.5mL、5.5mmol)、5-メトキシ-2-メチル
アニリン(0.60g、4.6mmol)およびトリエチルアミン(1g、5.5mmo
l)の反応により標題化合物を調製した。無色固体(0.800g、53%)。H N
MR(400MHz,DMSO-d):δ8.04(s,1H)、7.20(d,J=
2.8Hz,1H)、7.19(d,J=8.2Hz,1H)、6.68(dd,J=8
.9Hz,2.8Hz,1H)、3.70(s,3H)、2.11(s,3H)。LC-
MS(ESI)C1311ClFO[M+H]の計算値:318.05;実測
値:318.00。
(実施例12)
2-(5-クロロ-2-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニルアミノ)ピリミジン-
4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000087
2-(2,5-ジクロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド(0
.148g、0.5mmol)、2-メトキシ-4-モルホリノアニリン(0.208g
、1mmol)および数滴のHClを方法3に従って処理した。茶褐色固体(0.150
g、64%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):11.56(s,1H
)、8.68(d,J=4.6Hz,2H)、8.56(d,J=7.8Hz,1H)、
8.14(s,1H)、7.68(d,J=9.2Hz,1H)、7.39(d,J=8
.7Hz,1H)、7.29(t,J=7.8Hz,1H)、7.03(t,J=15.
0Hz,1H)、6.61(d,J=2.3Hz,1H)、6.46(dd,J=11.
5,2.8Hz,1H)、3.73~3.64(重複する一重線および三重線,7H)、
3.09(t,J=4.6Hz,4H)、2.75(d,J=4.6Hz,3H)。LC
-MS(ESI)C2325ClN[M+H]の計算値:469.17;実測
値:469.10。HRMS(ESI)C2325ClN[M+H]の計算値
:469.1749;実測値:469.1749。
(実施例13)
2-(5-ブロモ-2-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニルアミノ)ピリミジン-
4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000088
2-(5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミ
ド(0.341g、1mmol)、2-メトキシ-4-モルホリノアニリン(0.208
g、1mmol)およびHClを方法3に従って処理した。黄褐色固体(0.258g、
50%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ11.33(s,1H)
、8.80(brs,1H)、8.50(brs,1H)、8.01(s,1H)、7.
64(d,J=7.3Hz,1H)、7.34(d,J=8.2Hz,1H)、7.27
(t,J=7.2Hz,1H)、7.03(t,J=7.3Hz,1H)、6.61(s
,1H)、6.43(d,J=8.7Hz,1H)、5.71(s,1H)、3.72~
3.68(重複する一重線および三重線,7H)、3.06(t,J=7.3Hz,4H
)、2.75(d,J=4.3Hz,3H)。LC-MS(ESI)C2325BrN
[M+H]の計算値:515.12;実測値:515.05。HRMS(ESI
)C2325BrN[M+H]の計算値:515.1227;実測値:515
.1226。
(実施例14)
2-(5-ブロモ-2-(3,4,5-トリメトキシフェニルアミノ)ピリミジン-4-
イルアミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000089
2-(5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミ
ド(0.341g、1mmol)および3,4,5-トリメトキシアニリン(0.366
g、2mmol)を方法1bに従って処理した。黄褐色固体(0.325g、67%)。
H NMR(400MHz,DMSO-d):δ11.39(s,1H)、9.26
(s,1H)、8.69~8.65(m,2H)、8.25(s,1H)、7.68(d
,J=7.8Hz,1H)、7.37(t,J=7.8Hz,1H)、7.08(t,J
=7.8Hz,1H)、6.97(s,2H)、3.61(s,6H)、3.59(s,
3H)、7.76(d,J=4.4Hz,3H)。LC-MS(ESI)C2122
rN[M+H]の計算値:490.09;実測値:490.00。HRMS(E
SI)C2122BrN[M+H]の計算値:490.0910;実測値:4
90.0912。
(実施例15)
2-(5-クロロ-2-(3,4,5-トリメトキシフェニルアミノ)ピリミジン-4-
イルアミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000090
2-(2,5-ジクロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド(0
.296g、1mmol)および3,4,5-トリメトキシアニリン(0.366g、2
mmol)の混合物を方法1bに従って処理した。無色固体(0.160g、73%)。
H NMR(400MHz,DMSO-d):δ11.63(s,1H)、9.27
(s,1H)、8.27~8.71(m,2H)、8.18(s,1H)、7.70(d
,J=9.2Hz,1H)、7.69(t,J=7.8Hz,1H)、7.08(t,J
=7.3Hz,1H)、6.98(s,2H)、3.62(s,3H)、3.59(s,
6H)、2.76(d,J=4.6Hz,3H)。LC-MS(ESI)C2122
lN[M+H]の計算値:444.13;実測値:444.05。HRMS(E
SI)C2122ClN[M+H]の計算値:444.1433;実測値:4
44.1431。
(実施例16)
2-(5-クロロ-2-(5-メトキシ-2-メチルフェニルアミノ)ピリミジン-4-
イルアミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000091
2-(2,5-ジクロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド(0
.296g、1mmol)および5-メトキシ-2-メチルアニリン(0.274g、2
mmol)を方法1bに従って処理した。黄色固体(0.232g、58%)。H N
MR(400MHz,DMSO-d):δ11.44(s,1H)、8.48(s,1
H)、8.66(d,J=8.7Hz,1H)、(d,J=8.7Hz,1H)、8.1
6(s,1H)、7.64(d,J=7.8Hz,1H)、7.09~7.04(m,4
H)、6.65(d,J=8.2Hz,1H)、3.65(s,3H)、2.77(d,
J=4.6Hz,3H)、2.11(s,3H)。LC-MS(ESI)C2020
lN[M+H]の計算値:398.13;実測値:398.00。HRMS(E
SI)C2020ClN[M+H]の計算値:398.1378;実測値:3
98.1366。
(実施例17)
2-(5-ブロモ-2-(5-メトキシ-2-メチルフェニルアミノ)ピリミジン-4-
イルアミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000092
2-(5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミ
ド(0.341g、1mmol)および5-メトキシ-2-メチルアニリン(0.274
g、2mmol)を方法1bに従って処理した。黄褐色固体(0.298g、67%)。
H NMR(400MHz,DMSO-d):δ11.61(s,1H)、9.40
(s,1H)、8.73~8.72(m,2H)、8.20(s,1H)、7.72(d
,J=7.8Hz,1H)、7.44(t,J=7.4Hz,1H)、7.30~7.1
0(m,3H)、6.51(d,J=7.8Hz,1H)、3.65(s,3H)、2.
77(d,J=4.1Hz,3H)、2.11(s,3H)。LC-MS(ESI)C
20BrN[M+H]の計算値:444.08; 実測値:443.95。
HRMS(ESI)C2020BrN[M+H]の計算値:444.0855
;実測値:444.0849。
(実施例18)
2-(2-(1H-インドール-5-イルアミノ)-5-クロロピリミジン-4-イルア
ミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000093
標題化合物を2-(2,5-ジクロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベン
ズアミド(0.148g、0.5mmol)および1H-インドール-5-アミン(0.
132g、1mmol)から調製し、方法1bに従って処理した。黄褐色固体(0.17
2g、84%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ11.03(s,
1H)、9.66(s,1H)、8.63~8.51(m,1H)、7.85(s,1H
)、7.70(s,1H)、7.53~7.38(m,1H)、7.14(d,J=7.
8Hz,1H)、7.24(s,1H)、7.15~7.09(m,3H)、7.00~
6.96(m,1H)、6.81(t,J=7.8Hz,1H)、6.21(s,1H)
、2.77(d,J=4.2Hz,3H)。LC-MS(ESI)C2017ClN
O[M+H]の計算値:393.12;実測値:392.95。HRMS(ESI)C
2017ClNO[M+H]の計算値:393.1152;実測値:393.12
13。
(実施例19)
2-(5-クロロ-2-(2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6-イ
ルアミノ)ピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000094
2-(2,5-ジクロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド(0
.148g、0.5mmol)および6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H
)-オン(0.162g、1mmol)を方法1bに従って処理して、所望の化合物を黄
褐色固体として得た(0.154g、73%)。H NMR(400MHz,DMSO
-d):δ11.87(s,1H)、9.99(s,1H)、9.74(s,1H)、
8.80(d,J=4.1Hz,1H)、8.56(brs,1H)、8.22(s,1
H)、7.74(d,J=7.3Hz,1H)、7.40~7.38(m,2H)、7.
24(d,J=7.8Hz,1H)、7.15(t,J=7.3Hz,1H)、6 77
(d,J=8.7Hz,1H)、2.72~2.76(重複する二重線および三重線,5
H)、2.39(t,J=7.3Hz,2H)。LC-MS(ESI)C2119Cl
[M+H]の計算値:423.13;実測値:423.00。HRMS(ES
I)C2119ClN[M+H]の計算値:423.1331;実測値:42
3.1303。
(実施例20)
2-((5-ブロモ-2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6
-イル)アミノ)ピリミジン-4-イル)アミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000095
2-(5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミ
ド(0.171g、0.5mmol)および6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2
(1H)-オン(0.162g、1mmol)を方法1bに従って処理して、所望の化合
物を得た。黄色固体(0.193g、83%)。H NMR(400MHz,DMSO
-d):δ11.27(s,1H)、9.90(s,1H)、9.27(s,1H)、
8.68(d,J=4.1Hz,1H)、8.56(s,1H)、8.20(s,1H)
、7.67(d,J=7.3Hz,1H)、7.44~7.08(m,4H)、6 72
(d,J=8.7Hz,1H)、2.72~2.76(重複する二重線および三重線,5
H)、2.39(t,J=7.3Hz,2H)。LC-MS(ESI)C2119Br
[M+H]の計算値:467.08;実測値:467.00。
(実施例21)
2-(5-クロロ-2-(2-オキソインドリン-5-イルアミノ)ピリミジン-4-イ
ルアミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000096
2-(2,5-ジクロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド(0
.148g、0.5mmol)および5-アミノインドリン-2-オン(0.148g、
1mmol)をBuOHに溶解した。次いでこれを一般手順(方法1b)に従って処理
して、所望の化合物を黄褐色固体として得た(0.147g、73%)。H NMR(
400MHz,DMSO-d):δ11.50(s,1H)、10.23(s,1H)
、9.29(s,1H)、8.71~8.70(重複する一重線および二重線,2H)、
8.13(s,1H)、7.70(d,J=7.8Hz,1H)、7.56(s,1H)
、7.43(t,J=7.3Hz,1H)、7.30(d,J=7.8Hz,1H)、7
.10(t,J=7.3Hz,1H)、6.70(d,J=8.2Hz,1H)、3.3
9(s,2H)、2.76(d,J=3.2Hz,3H)。LC-MS(ESI)C20
17ClN[M+H]の計算値:409.11;実測値:409.05。
(実施例22)
ブロモ-N-(ピリジン-2-イル)-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)
ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000097
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.227g、1mmol)、2-アミノ
ピリジン(0.094g、1mmol)、3,4,5-トリメトキシアニリン(0.18
3g、1mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0.258g、2mmol)を
方法2に従って処理して、所望の化合物を無色固体として得た(0.240g、56%)
H NMR(400MHz,DMSO-d):δ9.37(s,1H)、8.30
~8.29(重複する一重線および多重線,4H)、8.16(s,1H)、7.71(
t,J=6.9Hz,1H)、7.10(t,J=6.4Hz,1H)、6.98(s,
1H)、3.70(s,3H)、3.63(s,6H)。LC-MS(ESI)C18
18BrN[M+H]の計算値:434.05;実測値:433.95。HRM
S(ESI)C1818BrN[M+H]の計算値:434.0647;実測
値:434.0650。
(実施例23)
2-(2-(1H-インドール-5-イルアミノ)-5-ブロモピリミジン-4-イルア
ミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000098
2-(5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミ
ド(0.341g、1mmol)、1H-インドール-5-アミン(0.264g、2m
mol)を方法1bに従って処理して、所望の化合物を黄褐色固体として得た(0.29
6g、68%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ11.28(s,
1H)、10.91(s,1H)、9.18(s,1H)、8.68~8.67(m,2
H)、8.19(s,1H)、7.83(s,1H)、7.66(d,J=7.8Hz,
1H)、7.27~7.18(m,4H)、7.06(t,J=7.3Hz,1H)、6
.29(s,1H)、2.76(d,J=4.6Hz,3H)。LC-MS(ESI)C
2017BrNO[M+H]の計算値:439.06;実測値:439.00。H
RMS(ESI)C2017BrNO[M+H]の計算値:439.0702;実
測値:439.0693。
(実施例24)
5-クロロ-N-(6-メトキシピリジン-3-イル)-N-(3,4,5-トリメ
トキシフェニル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000099
5-クロロ-2,4-ジクロロピリミジン(0.183g、1mmol)、6-メトキ
シ-ピリジン-3-アミン(0.124g、1mmol)、3,4,5-トリメトキシア
ニリン(0.183g、1mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0.258g
、2mmol)を方法2に従って処理して、所望の化合物を無色固体として得た(0.2
72g、65%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ9.13(s,
1H)、8.84(s,1H)、8.37(s,1H)、8.08(s,1H)、7.8
2(dd,J=8.7Hz,2.8Hz,1H)、6.91(s,2H)、6.75(d
,J=8.7Hz,1H)、3.98(s,3H)、3.72(s,6H)、3.54(
s,3H)。LC-MS(ESI)C1920ClN[M+H]の計算値:4
18.12;実測値:418.00。HRMS-MS(ESI)C1920ClN
[M+H]の計算値:418.1277;実測値:418.1275。
(実施例25)
5-ブロモ-N-(6-メトキシピリジン-3-イル)-N-(3,4,5-トリメ
トキシフェニル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000100
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.227g、1mmol)、6-メトキ
シピリジン-3-アミン(0.124g、1mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(
0.258g、2mmol)および3,4,5-トリメトキシアニリン(0.183g、
1mmol)を一般手順(方法2)に従って処理して、所望の化合物を無色固体として得
た(0.232g、50%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ9.
10(s,1H)、8.60(s,1H)、8.33(s,1H)、8.16(s,1H
)、7.79(d,J=8.7Hz,1H)、6.89(s,1H)、6.74(d,J
=8.8Hz,1H)、3.81(s,3H)、3.54(s,3H)、3.49(s,
3H)、3.31(s,3H)。LC-MS(ESI)C1920BrN[M+
H]の計算値:463.07;実測値:463.15。
(実施例26)
5-ブロモ-N-(5-メトキシ-2-メチルフェニル)-N-(ピリジン-2-イ
ル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000101
2-アミノ-ピリジン(0.094g、1mmol)、5-ブロモ-2,4-ジクロロ
ピリミジン(0.227g、1mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(0.258g
、2mmol)および5-メトキシ-2-メチルアニリン(0.137g、2mmol)
BuOH(10mL)に溶解した。次いでこれを方法2に従って処理して、所望の化
合物を無色固体として得た(0.120g、31%)。H NMR(400MHz,D
MSO-d):δ8.86(s,1H)、8.25~8.24(m,1H)、8.23
(s,1H)、8.01(d,J=8.2Hz,1H)、7.97(s,1H)、7.8
8(t,J=8.7Hz,1H)、7.11(d,J=8.7Hz,1H)、7.03~
7.00(m,1H)、6.96(s,1H)、6.70(d,J=2.8Hz,1H)
、3.65(s,3H)、2.08(s,3H)。LC-MS(ESI)C1716
rNO[M+H]の計算値:386.05;実測値:385.85。
(実施例27)
5-クロロ-N-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニル)-N-(6-メトキシ
ピリジン-3-イル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000102
6-メトキシピリジン-3-アミン(0.124g、1mmol)、2,4,5-トリ
クロロピリミジン(0.208g、1mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(0.2
58g、2mmol)および2-メトキシ-4-モルホリノアニリン(0.127g、1
mmol)をBuOH(10mL)に溶解した。次いでこれを方法2に従って処理して
、所望の化合物を無色固体として得た(0.289g、65%)。H NMR(400
MHz,DMSO-d):δ8.76(s,1H)、8.28(s,1H)、7.98
(s,1H)、7.67~7.72(m,2H)、7.86(d,J=6.9Hz,1H
)、7.74(s,1H)、7.43(d,J=8.2Hz,1H)、6.70(d,J
=8.2Hz,1H)、6.30(s,1H)、7.43(d,J=7.8Hz,1H)
、3.80(s,3H)、3.73~3.72(重複する一重線および三重線,8H)、
3.02(t,J=4.6Hz,4H)。LC-MS(ESI)C2123ClN
[M+H]の計算値:443.15;実測値:443.05。
(実施例28)
5-ブロモ-N-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニル)-N-(6-メトキシ
ピリジン-3-イル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000103
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.227g、1mmol)、6-メトキ
シピリジン-3-アミン(0.124g、1mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(
0.258g、2mmol)および2-メトキシ-4-モルホリノアニリン(0.208
g、1mmol)を方法2に従って処理して、所望の化合物を無色固体として得た(0.
258g、53%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ8.53(s
,1H)、8.24(s,1H)、8.05(s,1H)、7.83(d,J=8.7H
z,1H)、7.73(s,1H)、7.41(d,J=8.7Hz,1H)、6.71
(d,J=8.7Hz,1H)、6.56(s,1H)、6.28(d,J=8.7Hz
,1H)、3.80(s,3H)、3.72(s,3H)、3.60(t,J=4.6H
z,4H)、3.02(t,J=5.0Hz,4H)。LC-MS(ESI)C21
BrN[M+H]の計算値:487.11、実測値:487.00。
(実施例29)
5-クロロ-N-(1H-インドール-5-イル)-N-(6-メトキシピリジン-
3-イル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000104
5-クロロ-2,4-ジクロロピリミジン(0.183g、1mmol)、6-メトキ
シピリジン-3-アミン(0.124g、1mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(
0.258g、2mmol)および1H-インドール-5-アミン(0.132g、1m
mol)を方法2に従って処理した。淡黄色固体(0.158g、42%)。H NM
R(400MHz,DMSO-d):δ10.77(s,1H)、8.99(s,1H
)、8.47(s,1H)、8.07(s,1H)、7.86(s,1H)、7.83(
d,J=8.4Hz,1H)、7.72(s,1H)、7.16~7.12(m,3H)
、6.73(d,J=8.7Hz,1H)、6.15(s,1H)、3.84(s,3H
)。LC-MS(ESI)C1815ClNO[M+H]の計算値:367.10
;実測値:367.45。
(実施例30)
5-ブロモ-N-(1H-インドール-5-イル)-N-(6-メトキシピリジン-
3-イル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000105
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.227g、1mmol)、6-メトキ
シピリジン-3-アミン(0.124g、1mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(
0.258g、2mmol)および1H-インドール-5-アミン(0.132g、1m
mol)を一般方法2に従って処理した。無色固体(0.172g、42%)。H N
MR(400MHz,DMSO-d):δ10.77(s,1H)、8.99(s,1
H)、8.47(s,1H)、8.07(s,1H)、7.86(s,1H)、7.83
(d,J=8.4Hz,1H)、7.72(s,1H)、7.16~7.12(m,3H
)、6.73(d,J=8.7Hz,1H)、6.15(s,1H)、3.84(s,3
H)。LC-MS(ESI)C1815BrNO[M+H]の計算値:411.0
5;実測値:411.00。
(実施例31)
-(3-(メチルスルホニル)ベンジル)-5-(トリフルオロメチル)-N-(
3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000106
4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル
)ピリミジン-2-アミン(0.036g、0.1mmol)、(3-(メチルスルホニ
ル)フェニル)メタンアミン塩酸塩(0.022g、0.1mmol)およびジイソプロ
ピルエチルアミン(0.013g、0.1mmol)を方法4bに従って処理した。無色
固体(0.039g、76%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ9
.44(s,1H)、8.42(s,1H)、7.84(s,1H)、7.76(d,J
=6.8HZ,1H)、7.55~7.52(m,2H)、6.99(s,2H)、4.
78(d,J=5.5Hz,2H)、3.56(s,3H)、3.54(s,6H)、3
.10(s,3H)。LC-MS(ESI)C2223S[M+H]
計算値:513.14;実測値:513.10。HRMS(ESI)C2223
S[M+H]の計算値:513.1414;実測値:513.1405。
(実施例32)
6-(4-(3-(メチルスルホニル)ベンジルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-2-イルアミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000107
6-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.034g、0.1mmol)、(3-(
メチルスルホニル)フェニル)メタンアミン塩酸塩(0.022g、0.1mmol)お
よびジイソプロピルエチルアミン(0.013g、0.1mmol)を方法4bに従って
処理した。無色固体(0.035g、71%)。H NMR(400MHz,DMSO
-d):δ9.89(s,1H)、9.43(brs,1H)、8.16(s,1H)
、7.82~7.75(m,3H)、7.56~7.54(m,2H)、7.34(s,
1H)、7.19(d,J=7.3Hz,1H)、6.64(d,J=8.7Hz,1H
)、4.70(d,J=5.5Hz,2H)、3.34(s,3H)、2.63(t,J
=7.3Hz,2H)、2.34(t,J=11.0Hz,2H)。LC-MS(ESI
)C2220S[M+H]の計算値:492.12;実測値:492.
05。HRMS(ESI)C2220S[M+H]の計算値:492.
1312;実測値:492.1197。
(実施例33)
5-((4-((3-(メチルスルホニル)ベンジル)アミノ)-5-(トリフルオロメ
チル)ピリミジン-2-イル)アミノ)インドリン-2-オンの調製
Figure 2022017384000108
5-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)イ
ンドリン-2-オン(0.164g、0.5mmol)、(3-(メチルスルホニル)フ
ェニル)メタンアミン塩酸塩(0.100g、0.5mmol)およびジイソプロピルエ
チルアミン(0.065g、0.5mmol)を方法4bに従って処理した。無色固体(
0.190g、80%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ10.2
3(s,1H)、9.45(s,1H)、8.08(s,1H)、7.84~7.56(
m,5H)、7.42(s,1H)、7.26(d,J=8.2Hz,1H)、6.64
(d,J=8.2Hz,1H)、4.71(d,J=5.5Hz,2H)、3.36(s
,2H)、3.10(s,3H)。LC-MS(ESI)C2218S[
M+H]の計算値:478.11;実測値:477.60。
(実施例34)
5-クロロ-N-(5-メトキシ-2-メチルフェニル)-N-(6-メトキシピリ
ジン-3-イル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000109
5-クロロ-2,4-ジクロロピリミジン(0.183g、1mmol)、6-メトキ
シピリジン-3-アミン(0.124g、1mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(
0.258g、2mmol)および5-メトキシ-2-メチルアニリン(0.137g、
1mmol)を方法2に従って処理した。無色固体(0.171g、46%)。H N
MR(400MHz,DMSO-d):δ8.74(s,1H)、8.40(s,1H
)、8.29(s,1H)、8.00(s,1H)、7.82(d,J=8.7Hz,1
H)、6.99(d,J=8.2Hz,1H)、6.95(d,J=2.8Hz,1H)
、6.60(d,J=9.2Hz,1H)、6.56(d,J=8.2Hz,1H)、3
.82(s,3H)、3.57(s,3H)、2.05(s,3H)。LC-MS(ES
I)C1818ClN[M+H]の計算値:372.11;実測値:372.
00。
(実施例35)
5-ブロモ-N-(5-メトキシ-2-メチルフェニル)-N-(6-メトキシピリ
ジン-3-イル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000110
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.227g、1mmol)、6-メトキ
シピリジン-3-アミン(0.124g、1mmol)、ジイソプロピルエチルアミン(
0.258g、2mmol)および5-メトキシ-2-メチルアニリン(0.137g、
1mmol)を方法2に従って処理した。無色固体(0.241g、58%)。H N
MR(400MHz,DMSO-d):δ8.51(s,1H)、8.39(s,1H
)、8.26(s,1H)、8.07(s,1H)、7.82(d,J=8.7Hz,1
H)、6.99(d,J=8.2Hz,1H)、6.95(d,J=2.8Hz,1H)
、6.60(d,J=9.2Hz,1H)、6.56(d,J=8.2Hz,1H)、3
.77(s,3H)、3.57(s,3H)、2.05(s,3H)。LC-MS(ES
I)C1818BrN[M+H]の計算値:417.06;実測値:417.
00。
(実施例36)
N-メチル-2-(5-(トリフルオロメチル)-2-(3,4,5-トリメトキシフェ
ニルアミノ)ピリミジン-4-イルアミノ)ベンズアミドの調製
Figure 2022017384000111
4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル
)ピリミジン-2-アミン(0.363g、1mmol)、2-アミノ-N-メチルベン
ズアミドおよびジイソプロピルエチルアミン(0.129g、1mmol)を方法4bに
従って処理して、標題化合物を無色固体として得た(0.232g、59%)。H N
MR(400MHz,DMSO-d):δ11.43(s,1H)、9.65(s,1
H)、8.72(d,J=4.0Hz,1H)、8.42~8.40(2H)、7.67
(d,J=7.8Hz,1H)、7.31(s,1H)、7.10(t,J=7.3H
z,1H)、6.95(s,2H)、3.68(s,6H)、3.58(s,3H)、2
.75(d,J=4.6Hz,3H)。LC-MS(ESI)C2222
[M+H]の計算値:478.16;実測値:478.10。HRMS(ESI)C
22[M+H]の計算値:478.1683;実測値:478.16
83。
(実施例37)
-(6-メトキシピリジン-3-イル)-5-(トリフルオロメチル)-N-(3
,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000112
4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル
)ピリミジン-2-アミン(0.363g、1mmol)、6-メトキシ-ピリジン-3
-アミン(0.124g、1mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0.129
g、1mmol)を方法4bに従って処理して、標題化合物を得た。黄色固体(0.33
0g、73%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ8.30(s,1
H)、8.22(s,1H)、7.66(dd,J=8.4Hz,2.8Hz,1H)、
7.56(brs,1H)、6.72~6.65(m,4H)、3.92(s,3H)、
3.79(s,3H)、3.61(s,6H)。LC-MS(ESI)C2020
[M+H]の計算値:452.15;実測値:452.05。HRMS(ES
I)C2020[M+H]の計算値:452.1540;実測値:45
2.1526。
(実施例38)
-(ピリジン-2-イル)-5-(トリフルオロメチル)-N-(3,4,5-ト
リメトキシフェニル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000113
4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル
)ピリミジン-2-アミン(0.181g、0.5mmol)、2-アミノピリジン(0
.047g、0.5mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0.065g)を方
法4bに従って処理して、標題化合物を無色固体として得た(0.132g、63%)。
H NMR(400MHz,DMSO-d):δ11.83(s,1H)、10.2
0(s,1H)、8.86(d,J=4.6Hz,2H)、8.47(s,1H)、7.
73(d,J=6.9Hz,1H)、7.17(t,J=7.8Hz,1H)、6.99
(s,2H)、3.77(s,6H)、3.60(s,3H)。LC-MS(ESI)C
1918[M+H]の計算値:422.37;実測値:422.05。
(実施例39)
2-(2-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニルアミノ)-5-(トリフルオロメチ
ル)ピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000114
4-クロロ-N-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニル)-5-(トリフルオロメ
チル)ピリミジン-2-アミン(0.194g、0.5mmol)、2-アミノ-N-メ
チルベンズアミドおよびジイソプロピルエチルアミン(0.065g、0.5mmol)
を方法4bに従って処理して、標題化合物を無色固体として得た(0.125g、50%
)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ11.40(s,1H)、8.
65(s,1H)、8.64(s,2H)、8.27(s,1H)、7.62(d,J=
7.8Hz,1H)、7.26~7.24(m,2H)、7.03(t,J=7.7Hz
,1H)、6.62(d,J=2.3Hz,1H)、6.45(dd,J=10.0Hz
,J=2.8Hz,1H)、3.73~3.71(重複する一重線および三重線,7H)
、3.09(t,J=5.2Hz,4H)、2.73(d,J=4.6Hz,3H)。L
C-MS(ESI)C2425[M+H]の計算値:503.19;実
測値:503.05。HRMS(ESI)C2425[M+H]の計算
値:503.2013;実測値:503.2001。
(実施例40)
-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニル)-N-(6-メトキシピリジン-3
-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000115
4-クロロ-N-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニル)-5-(トリフルオロメ
チル)ピリミジン-2-アミン(0.194g、0.5mmol)、6-メトキシピリジ
ン-3-アミン(0.062g、0.5mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(
0.065g、0.5mmol)を一般方法2に従って処理した。黄褐色固体(0.12
5g、50%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ8.55(s,1
H)、8.21~8.11(m,3H)、7.17(s,1H)、7.25(s,1H)
、6.70(d,J=6.9Hz,1H)、6.54(s,1H)、6.24(s,1H
)、3.80(s,3H)、3.72(s,3H)、3.32(t,J=4.2Hz,4
H)、3.03(t,J=4.6Hz,4H)。LC-MS(ESI)C2223
[M+H]の計算値:477.45;実測値:477.00。
(実施例41)
5-クロロ-N-(5-メトキシ-2-メチルフェニル)-N-(3-(メチルスル
ホニル)ベンジル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000116
5-クロロ-2,4-ジクロロピリミジン(0.109g、0.6mmol)、(3-
(メチルスルホニル)フェニル)メタンアミン塩酸塩(0.110g、0.5mmol)
、6-メトキシピリジン-3-アミン(0.082g、0.6mmol)およびジイソプ
ロピルエチルアミン(0.129g、1mmol)を一般方法2に従って処理した。黄色
固体(0.100g、46%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ9
.35(s,1H)、8.77(s,1H)、8.04(s,1H)、7.81(s,1
H)、7.76(d,J=7.8Hz,2H)、7.75(d,J=8.7Hz,1H)
、7.46~7.43(m,1H)、7.12(d,J=10.1Hz,1H)、6.9
8(s,1H)、4.53(d,J=5.9Hz,2H)、3.67(s,3H)、3.
12(s,3H)、2.02(s,3H)。LC-MS(ESI)C2021ClN
S[M+H]の計算値:433.10;実測値:433.00。
(実施例42)
2-(2-(5-メトキシ-2-メチルフェニルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000117
4-クロロ-N-(5-メトキシ-2-メチルフェニル)-5-(トリフルオロメチル
)ピリミジン-2-アミン(0.158g、0.5mmol)、2-アミノ-N-メチル
ベンズアミド(0.075g、0.5mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0
.065g、0.5mmol)を方法4bに従って処理して、標題化合物を無色固体とし
て得た(0.186g、86%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ
11.53(s,1H)、9.26(s,2H)、8.67~8.66(m,2H)、8
.32(s,1H)、7.63(dd,J=7.8Hz,1.7Hz,1H)、7.11
(d,J=8.2Hz,1H)、7.01(t,J=7.3Hz,1H)、6.92(d
,J=2.3Hz,1H)、6.73(dd,J=8.2Hz,2.8Hz,1H)、3
.62(s,3H)、2.71(d,J=4.6Hz,3H)、2.05(s,3H)。
LC-MS(ESI)C2120[M+H]の計算値:432.15;
実測値:432.05。HRMS(ESI)C2120[M+H]の計
算値:432.1642;実測値:432.1631。
(実施例43)
6-(4-(ベンジルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミ
ノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000118
6-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.050g、0.15mmol)、ベンジ
ルアミン(0.031g、0.29mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0.
019g、0.15mmol)を方法4bに従って処理した。無色固体(0.038g、
62%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ9.95(s,1H)、
8.21(s,1H)、8.01(s,1H)、7.25~7.17(m,7H)、6.
68(J=8.8Hz,1H)、4.36(d,J=5.9Hz,2H)、2.65(t
,J=7.0Hz,2H)、2.33(t,J=7.3Hz,2H)。LC-MS(ES
I)C2118O[M+H]の計算値:414.15;実測値:414.0
0。
(実施例44)
2-(5-クロロ-2-(3-メトキシフェニルアミノ)ピリミジン-4-イルアミノ)
-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000119
2-(2,5-ジクロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド(0
.297g、1mmol)および3-メトキシアニリン(0.246g、2mmol)を
BuOH(10mL)に溶解した。次いでこれを一般方法1bに従って処理して、所望
の化合物を無色固体として得た(0.253g、66%)。H NMR(400MHz
,DMSO-d):δ11.6(s,1H)、9.40(s,1H)、8.73~8.
72(m,2H)、8.19(s,1H)、7.29(d,J=8.8Hz,1H)、7
.14(t,J=7.3Hz,1H)、7.12~7.10(m,4H)、6.51(d
,J=7.8Hz,1H)、3.65(s,3H)、2.77(d,J=4.1Hz,3
H)。LC-MS(ESI)C1918ClN[M+H]の計算値:384.
11;実測値:384.00。HRMS(ESI)C1918ClN[M+H]
の計算値:384.1222;実測値:384.1210。
(実施例45)
2-(5-クロロ-2-(5-メトキシ-2-メチルフェニルアミノ)ピリミジン-4-
イルアミノ)-N,N-ジメチルベンゼンスルホンアミドの調製
Figure 2022017384000120
5-クロロ-2,4-ジクロロピリミジン(0.92g、0.5mmol)、3-アミ
ノ-N,N-ジメチルベンゼンスルホンアミド(0.100g、0.5mmol)、ジイ
ソプロピルエチルアミン(0.129g、1mmol)および5-メトキシ-2-メチル
アニリン(0.068g、0.5mmol)を一般方法2に従って処理して、所望の化合
物を黄色固体として得た(0.098g、44%)。H NMR(400MHz,DM
SO-d):δ9.14(s,1H)、8.66(s,1H)、8.21~8.18(
m,1H)、8.18(s,1H)、7.85~7.84(m,1H)、7.33~7.
27(m,2H)、7.06(d,J=8.7Hz,1H)、6.98(d,J=2.3
Hz,1H)、6.65(d,J=8.7Hz,1H)、3.53(s,3H)、2.4
5(s,6H)、2.39(s,3H)。LC-MS(ESI)C2022ClN
S[M+H]の計算値:448.11;実測値:448.00。
(実施例46)
-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニル)-N-(ピリジン-2-イル)-5
-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000121
4-クロロ-N-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニル)-5-(トリフルオロメ
チル)ピリミジン-2-アミン(0.097g、0.25mmol)、2-アミノピリジ
ン(0.023g、0.25mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0.032
g、0.25mmol)を一般方法2bに従って処理した。茶褐色固体(0.045g、
41%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ8.93(s,1H)、
8.33(s,1H)、8.24(s,1H)、8.05(s,1H)、7.90~7.
85(m,1H)、7.23(s,1H)、7.11~6.92(m,1H)、6.98
~6.94(m,1H)、6.84(t,J=6.9Hz,1H)、6.46(dd,J
=2.3Hz,8.7Hz,1H)、3.79~3.70(重複する一重線および二重線
,7H)、3.11(t,J=5.6Hz,4H)。LC-MS(ESI)C2121
[M+H]の計算値:447.17;実測値:447.00。
(実施例47)
-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニル)-N-(ピリジン-3-イル)-5
-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000122
4-クロロ-N-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニル)-5-(トリフルオロメ
チル)ピリミジン-2-アミン(0.097g、0.25mmol)、3-アミノピリジ
ン(0.023g、0.25mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0.032
g、0.25mmol)を一般方法4bに従って処理した。茶褐色固体(0.037g、
33%)。LC-MS(ESI)C2121[M+H]の計算値:44
7.12;実測値:447.00。
(実施例48)
6-(4-(フェニルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミ
ノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000123
6-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.050g、0.15mmol)、アニリ
ン(0.014g、0.15mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0.019
g、0.15mmol)を方法4bに従って処理した。無色固体(0.022g、37%
)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ9.58(s,1H)、9.5
1(brs,1H)、8.57(brs,1H)、8.26(s,1H)7.42~7.
12(m,7H)、6.75(d,J=8.2Hz,1H)、3.31(t,J=7.3
Hz,2H)、2.46(t,J=6.9Hz,2H)。LC-MS(ESI)C20
16O[M+H]の計算値:400.13;実測値:400.00。
(実施例49)
2-(2-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イルアミノ)-5-クロロピリ
ミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000124
2-(2,5-ジクロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド(0
.296g、1mmol)およびベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(0
.274g、2mmol)をBuOH(10mL)に溶解した。次いでこれを方法1b
に従って処理して、所望の化合物を黄褐色固体として得た(0.162g、41%)。
H NMR(400MHz,DMSO-d):δ11.70(s,1H)、9.47(
s,1H)、8.73(d,J=4.2Hz,1H)、8.64(d,J=7.8Hz,
1H)、8.17(s,1H)、7.39(dd,J=8.2Hz,J=1.3Hz,1
H)、7.43(t,J=8.2Hz,1H)、7.28(d,J=1.8Hz,1H)
、7.13(t,J=7.3Hz,1H)、6.96~6.94(m,1H)、6.8(
d,J=8.4Hz,1H)、5.99(s,2H)、2.77(d,J=4.6Hz,
3H)。LC-MS(ESI)C1916ClN[M+H]の計算値:398
.09;実測値:398.00。
(実施例50)
N2-(2-メトキシ-5-メチルフェニル)-N4-(3-(メチルスルホニル)ベン
ジル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000125
4-クロロ-N-(5-メトキシ-2-メチルフェニル)-5-(トリフルオロメチル
)ピリミジン-2-アミン(0.080g、0.25mmol)、(3-(メチルスルホ
ニル)フェニル)メタンアミン塩酸塩(0.110g、0.5mmol)およびジイソプ
ロピルエチルアミン(0.065g、0.5mmol)を方法4bに従って処理して、標
題化合物を得た。黄色固体(0.046g、39%)。H NMR(400MHz,D
MSO-d):δ8.85(s,1H)、8.38(s,1H)、8.14(s,1H
)、7.83(s,1H)、7.76(d,J=7.8Hz,2H)、7.75(d,J
=8.7Hz,1H)、7.46~7.43(m,1H)、7.12(d,J=10.1
Hz,1H)、6.95(s,1H)、4.53(d,J=5.5Hz,2H)、3.6
5(s,3H)、3.15(s,3H)、2.04(s,3H)。LC-MS(ESI)
2121S[M+H]の計算値:467.14;実測値:467.0
0。HRMS(ESI)C2121S[M+H]の計算値:467.1
359;実測値:467.1348。
(実施例51)
2-(5-クロロ-2-(2,3-ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン-6-イ
ルアミノ)ピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000126
2-(2,5-ジクロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド(0
.148g、0.5mmol)および2,3-ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシ
ン-6-アミン(0.151g、1mmol)をBuOHに溶解した。次いでこれを方
法1bに従って処理して、所望の化合物を黄褐色固体として得た(0.172g、84%
)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ11.56(s,1H)、9.
22(s,1H)、8.71~8.70(m,2H)、8.14(s,1H)、7.70
(d,J=7.3Hz,1H)、7.43(t,J=7.8Hz,1H)、7.23(s
,1H)、7.08(t,J=7.3Hz,1H)、7.00(s,1H)、6.71(
d,J=8.7Hz,1H)、4.18(t,J=5.5Hz,4H)、2.77(d,
J=4.6Hz,3H)。LC-MS(ESI)C2018ClN[M+H]
の計算値:412.11;実測値:412.00。HRMS(ESI)C2018Cl
[M+H]の計算値:412.1171;実測値:412.1151。
(実施例52)
-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニル)-N-(3-(メチルスルホニル)
ベンジル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000127
4-クロロ-N-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニル)-5-(トリフルオロメ
チル)ピリミジン-2-アミン(0.097g、0.25mmol)、(3-(メチルス
ルホニル)フェニル)メタンアミン塩酸塩(0.066g、0.3mmol)およびジイ
ソプロピルエチルアミン(0.040g、0.3mmol)を一般方法2bに従って処理
した。黄色固体(0.068g、51%)。H NMR(400MHz,DMSO-d
):δ9.01(s,1H)、8.56(s,1H)、8.21(s,1H)、7.8
5(s,1H)、7.78(d,J=7.3Hz,2H)、7.53(t,J=7.8H
z,1)、7.51(s,1H)、6.61(s,1H)、6.42(d,J=8.2H
z,1H)、4.62(s,2H)、3.75(s,3H)、3.70(t,J=5.0
Hz,4H)、3.23(s,3H)、3.10(t,J=7.3Hz,4H)。LC-
MS(ESI)C2426S[M+H]の計算値:538.16;実測
値:538.00。
(実施例53)
2-(5-クロロ-2-(o-トリルアミノ)ピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチ
ルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000128
2-(2,5-ジクロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド(0
.148g、0.5mmol)および2-メチルアニリン(0.107g、1mmol)
BuOH(5mL)に溶解した。次いでこれを方法1bに従って処理して、所望の化
合物を黄褐色固体として得た(0.159g、88%)。H NMR(400MHz,
DMSO-d):δ11.76(s,1H)、8.92(s,1H)、8.70(br
s,1H)、8.44(d,J=8.7Hz,1H)、8.11(s,1H)、7.68
(d,J=7.8Hz,1H)、7.36(d,J=6.9Hz,1H)、7.23~7
.08(m,4H)、6.99(t,J=6.9Hz,1H)、2.75(d,J=4.
6Hz,3H)、2.16(s,3H)。LC-MS(ESI)C1918ClN
[M+H]の計算値:368.12;実測値:368.00。HRMS(ESI)C
18ClNO[M+H]の計算値:368.1273;実測値:368.126
8。
(実施例54)
2-(3-(5-クロロ-2-(5-メトキシ-2-メチルフェニルアミノ)ピリミジン
-4-イルアミノ)フェニル)アセトニトリルの調製
Figure 2022017384000129
5-クロロ-2,4-ジクロロピリミジン(0.183g、1mmol)、2-(3-
アミノフェニル)アセトニトリル(0.130g、1mmol)、ジイソプロピルアミン
(0.258g、1mmol)および5-メトキシ-2-メチルアニリン(0.136g
、1mmol)を方法2に従って処理して、所望の化合物を黄褐色固体として得た(0.
168g、44%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ8.97(s
,1H)、8.77(s,1H)、8.14(s,1H)、7.60~7.58(m,2
H)、7.16(t,J=7.3Hz,1H)、7.08(d,J=8.2Hz,1H)
、6.98~6.96(m,2H)、6.66(dd,J=8.3Hz,2.8Hz,1
H)、3.99(2H)、3.66(s,3H)、2.07(s,3H)。LC-MS(
ESI)C2018ClNO[M+H]の計算値:381.12;実測値:381
.00。
(実施例55)
5-クロロ-N-(5-メトキシ-2-メチルフェニル)-N-(4-メチルピリミ
ジン-2-イル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000130
2,4,5-トリクロロピリミジン(0.091g、0.5mmol)、4-メチルピ
リミジン-2-アミン(0.055g、0.5mmol)、2-メトキシ-5-メチルア
ニリン(0.069g、0.5mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0.12
9g、1mmol)を方法2に従って処理して、所望の化合物を得た。黄色固体(0.0
20g、11%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ。LC-MS(
ESI)C1717ClNO[M+H]の計算値:357.12;実測値:357
.00。
(実施例56)
6-((5-フルオロ-4-((3-(メチルスルホニル)ベンジル)アミノ)ピリミジ
ン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000131
2,4-ジクロロ-5-フルオロピリミジン(0.091g、0.5mmol)、(3
-(メチルスルホニル)フェニル)メタンアミン塩酸塩(0.110g、0.5mmol
)、6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.075g、0.5
5mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0.129g、1mmol)を方法2
に従って処理して、所望の化合物を得た。黄褐色固体(0.128g、58%)。
NMR(400MHz,DMSO-d):δ10.00(s,1H)、9.71(s,
1H)、9.09(s,1H)、8.04~8.03(m,1H)、7.86(s,1H
)、7.82(d,J=7.8Hz,1H)、7.64~7.57(m,2H)、7.2
9(s,1H)、7.17(d,J=8.2Hz,1H)、6.75(dd,J=2.3
Hz,8.7Hz,1H)、4.69(d,J=5.0Hz,2H)、3.10(s,3
H)、2.72(t,J=7.8Hz,2H)、2.39(t,J=8.2Hz,2H)
。LC-MS(ESI)C2120FNS[M+H]の計算値:442.13
;実測値:442.00。
(実施例57)
2-(5-クロロ-2-(6-メチルベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イルア
ミノ)ピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000132
2-(5-クロロ-2-クロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミ
ド(0.296g、1mmol)および6-メチルベンゾ[d][1,3]ジオキソール
-5-アミン(0.151g、1mmol)を方法2bに従って処理した。茶褐色固体(
0.286g、69%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ11.6
2(s,1H)、8.68~8.67(m,1H)、8.62(s,1H)、8.52(
d,J=6.4Hz,1H)、8.05(s,1H)、7.65(dd,J=7.8Hz
,1.8Hz,1H)、7.20(t,J=8.7Hz,1H)、7.02(t,J=7
.8Hz,1H)、6.89(s,1H)、6.79(s,1H)、5.90(s,2H
)、2.75(d,J=4.6Hz,3H)、2.10(s,3H)。HRMS(ESI
)C2018ClN[M+H]の計算値:412.1171;実測値:413
.1158。
(実施例58)
6-(4-(チアゾール-2-イルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-
2-イルアミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000133
6-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.086g、0.25mmol)、チアゾ
ール-2-アミン(0.025g、0.25mmol)およびジイソプロピルエチルアミ
ン(0.033g、0.25mmol)を方法4bに従って処理した。黄色固体(0.0
35g、32%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ10.47(s
,1H)、10.02(s,1H)、8.69(s,1H)、7.37~7.35(m,
3H)、6.78(d,J=8.7Hz,1H)、2.79(t,J=7.8Hz,2H
)、2.39(t,J=7.6Hz,2H)。LC-MS(ESI)C1713
OS[M+H]の計算値:407.08;実測値:407.00。
(実施例59)
N-メチル-2-(2-(3,4,5-トリメトキシフェニルアミノ)ピリミジン-4-
イルアミノ)ベンズアミドを合成するための一般スキーム
Figure 2022017384000134
(実施例60)
N-メチル-2-(2-(3,4,5-トリメトキシフェニルアミノ)ピリミジン-4-
イルアミノ)ベンズアミドの調製
Figure 2022017384000135
2-(5-ブロモ-2-(3,4,5-トリメトキシフェニルアミノ)ピリミジン-4
-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド(0.050g、0.1mmol)をメタノー
ルに溶解し、Pd/C(触媒)をこれに加え、Hの雰囲気下室温で1時間撹拌した。次
いで反応混合物をセライトのショートパッドに通し、メタノールで洗浄した。減圧下で溶
媒を除去して粗生成物を得、次いでこれを自動分取HPLCにより精製して、標題化合物
を無色固体として得た(0.036g、88%)。H NMR(400MHz,DMS
O-d):δ11.55(s,1H)、10.11(brs,1H)、8.55(d,
J=4.6Hz,1H)、8.08(d,J=7.8Hz,1H)、7.93(d,J=
6.5Hz,1H)、7.63(d,J=7.8Hz,1H)、7.36(t,J=7.
8Hz,1H)、7.20(t,J=8.6Hz,1H)、6.42(d,J=6.5H
z,1H)、3.63(s,3H)、3.61(s,9H)、2.73(d,J=4.6
Hz,3H)。LC-MS(ESI)C2123[M+H]の計算値:41
0.18;実測値:410.05。HRMS(ESI)C2123[M+H]
の計算値:410.1823;実測値:410.1813。
(実施例61)
2-(3-(2-(2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6-イルアミ
ノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イルアミノ)フェニル)アセトニト
リルの調製
Figure 2022017384000136
6-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.342、1mmol)、2-(3-アミ
ノフェニル)アセトニトリル(0.168g、1mmol)およびジイソプロピルエチル
アミン(0.129g、1mmol)を方法4bに従って処理して、標題化合物を淡黄色
固体として得た(0.289g、66%)。H NMR(400MHz,DMSO-d
):δ9.87(s,1H)、9.63(brs,1H)、8.86(brs,1H)
、8.32(s,1H)、7.37~7.15(m,6H)、6.60(d,J=7.8
Hz,1H)、3.98(s,2H)、2.62(t,J=7.3Hz,2H)、2.4
5(t,J=7.4Hz,2H)。LC-MS(ESI)C2217O[M+
H]の計算値:439.14;実測値:439.09。HRMS(ESI)C22
O[M+H]の計算値:439.1489;実測値:439.1484。
(実施例62)
6-(4-(ベンジルチオ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ
)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000137
6-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.162g、0.5mmol)、フェニル
メタンチオール(0.062g、0.5mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(
0.065g、0.5mmol)を方法4bに従って処理して、標題化合物を得た。淡黄
色固体(0.136g、63%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ
10.04(s,1H)、9.98(s,1H)、8.45(s,1H)、7.45(s
,1H)、7.34~7.20(m,6H)、6.76(d,J=8.7Hz,1H)、
4.51(s,2H)、2.48(t,J=6.9Hz,2H)、2.34(t,J=6
.9Hz,2H)。LC-MS(ESI)C2117OS[M+H]の計算
値:431.10;実測値:431.00。
(実施例63)
6-(4-(フェニルエチニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルア
ミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンを合成するための一般スキーム
Figure 2022017384000138
(実施例64)
6-(4-(フェニルエチニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルア
ミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000139
6-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.171g、0.5mmol)の乾燥DM
F(2.5mL)中溶液に、ビストリフェニルホスフィンパラジウムジクロリド(0.0
18g、0.025mmol)、ヨウ化銅(I)(0.005g、0.025mmol)
およびトリエチルアミン(0.202g、2mmol)を加えた。得られた混合物をN
の雰囲気下100℃で1時間加熱した。セライトのショートパッドに通して濾過し、溶媒
を蒸発させた後粗生成物を得、これを逆相HPLCにより精製した。黄色固体(0.18
8g、92%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ10.28(s,
1H)、10.00(s,1H)、8.74(s,1H)、7.57~7.48(m,7
H)、6.68(d,J=8.7Hz,1H)、2.82(t,J=7.3Hz,2H)
、2.40(t,J=7.4Hz,2H)。LC-MS(ESI)C2215
O[M+H]の計算値:409.12;実測値:409.00。
(実施例65)
6-((4-フェネチル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)
-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンを合成するための一般スキーム
Figure 2022017384000140
(実施例66)
6-((4-フェネチル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)
-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000141
6-(4-(フェニルエチニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル
アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.010g、0.025m
mol)をMeOH(2mL)に溶解した。Pd/C(触媒)をこれに加え、Hの雰囲
気下室温で1時間撹拌した。次いで反応混合物をセライトのショートパッドに通し、メタ
ノールで洗浄した。減圧下で溶媒を除去して粗生成物を得、これを自動分取HPLCによ
り精製して、標題化合物を無色固体として得た(0.008g、80%)。H NMR
(400MHz,DMSO-d):δ10.04(s,1H)、9.97(s,1H)
、8.58(s,1H)、7.52(s,1H)、7.42(dd,J=2.8Hz,8
.7Hz,1H)、7.27~7.13(m,5H)、6.77(d,J=8.2Hz,
1H)、3.01~3.00(m,4H)、2.81(t,J=6.8Hz,2H)、2
.39(t,J=7.8Hz,2H)。LC-MS(ESI)C2219O[
M+H]の計算値:413.41;実測値:413.00。
(実施例67)
6-((5-メチル-4-((3-(メチルスルホニル)ベンジル)アミノ)ピリミジン
-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000142
2,4-ジクロロ-5-メチルピリミジン(0.089g、0.55mmol)、6-
アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.081g、0.5mmol
)、(3-(メチルスルホニル)フェニル)メタンアミン塩酸塩(0.111g、0.5
mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0.129g、1mmol)を方法2に
従って処理して、所望の化合物を黄褐色固体として得た(0.153g、70%)。
NMR(400MHz,DMSO-d):δ10.12(s,1H)、10.03(
s,1H)、8.87(s,1H)、7.82(s,1H)、7.78(d,J=6.9
Hz,1H)、7.70(s,1H)、7.56~7.55(m,2H)、7.20(s
,1H)、7.11(d,J=8.2Hz,1H)、6.73(d,J=8.2Hz,1
H)、4.69(d,J=5.5Hz,2H)、3.10(s,3H)、2.67(t,
J=7.3Hz,2H)、2.35(t,J=7.3Hz,2H)、2.10(s,3H
)。LC-MS(ESI)C2223OS[M+H]の計算値:438.15;
実測値:438.00。
(実施例68)
(E)-6-(4-アリール-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ
)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンを合成するための一般スキーム
Figure 2022017384000143
(実施例69)
(E)-6-(4-スチリル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ
)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000144
還流冷却器、窒素注入口および撹拌子を装着した2ツ口フラスコに、乾燥DME(3m
L)中の6-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ)
-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.171g、0.5mmol)およ
びパラジウムテトラキストリフェニルホスフィン(0.023g、0.02mmol)を
仕込んだ。得られた混合物を室温で20分間撹拌した。これに水(1.2mL)に溶解し
た炭酸カリウム(0.138g、1mmol)を加え、続いてtrans-フェニルビニ
ルボロン酸(0.088g、0.6mmol)を加えた。混合物を24時間加熱還流し、
冷却し、水(10mL)で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層をブラインで
洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を蒸発させ、続いて逆相HPLC
により、標題化合物を得た。黄色固体(0.098g、48%)。H NMR(400
MHz,DMSO-d):δ10.03(s,1H)、9.98(s,1H)、8.6
7(s,1H)、8.02(d,J=15.0Hz,1H)、7.65~7.63(m,
3H)、7.62~7.42(m,4H)、7.19(d,J=17.0Hz,1H)、
6.80(d,J=8.4Hz,1H)、2.71(t,J=7.3Hz,2H)、2.
45(t,J=7.3Hz,2H)。LC-MS(ESI)C2217O[M
+H]の計算値:411.14;実測値:411.00。
(実施例70)
(E)-N-メチル-2-((アリール-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)
アミノ)ピリミジン-4-イル)アミノ)ベンズアミドを合成するための一般スキーム
Figure 2022017384000145
(実施例71)
(E)-N-メチル-2-((5-スチリル-2-((3,4,5-トリメトキシフェニ
ル)アミノ)ピリミジン-4-イル)アミノ)ベンズアミドの調製
Figure 2022017384000146
還流冷却器、窒素注入口および撹拌子を装着した2ツ口フラスコに、乾燥DME(2m
L)中の2-(5-ブロモ-2-(3,4,5-トリメトキシフェニルアミノ)ピリミジ
ン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド(0.048g、0.1mmol)およ
びパラジウムテトラキストリフェニルホスフィン(0.005g、0.004mmol)
を仕込んだ。得られた混合物を室温で20分間撹拌した。これに水(0.5mL)中の炭
酸カリウム(0.0276g、0.2mmol)を加え、続いてtrans-フェニルビ
ニルボロン酸(0.018g、0.12mmol)を加えた。混合物を12時間加熱還流
し、冷却し、水(5mL)で希釈し、酢酸エチル(3×10mL)で抽出した。合わせた
有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を蒸発させ、
続いて逆相HPLCにより、標題化合物を得た。白色固体(0.024g、47%)。L
C-MS(ESI)C2929[M+H]の計算値:512.22;実測値
:512.10。
(実施例72)
6-(4-フェニル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000147
適切な出発物を使用し、(E)-6-(4-スチリル-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-2-イルアミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンにて記載し
た同様の手順に従って調製した(スキーム5)。黄色固体(0.122g、63%)。
H NMR(400MHz,DMSO-d):δ10.19(s,1H)、9.97(
s,1H)、8.78(s,1H)、7.49~7.48(m,7H)、6.75(d,
J=8.2Hz,1H)、2.79(t,J=7.3Hz,2H)、2.38(t,J=
6.9Hz,2H)。LC-MS(ESI)C2015O[M+H]の計算
値:385.11;実測値:384.96。
(実施例73)
N-メチル-2-(5-フェニル-2-(3,4,5-トリメトキシフェニルアミノ)ピ
リミジン-4-イルアミノ)ベンズアミドの調製
Figure 2022017384000148
適切な出発物を使用し、(E)-N-メチル-2-((5-スチリル-2-((3,4
,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン-4-イル)アミノ)ベンズアミドに
て記載した同様の手順に従って調製した。黄色固体(0.041g、85%)。H N
MR(400MHz,DMSO-d):δ11.01(s,1H)、9.79(s,1
H)、8.55(d,J=4.1Hz,1H)、8.48(d,J=7.3Hz,1H)
、7.94(s,1H)、7.58(dd,J=1.4Hz,7.8Hz,1H)、7.
51~7.42(m,5H)、7.30(t,J=8.2Hz,1H)、7.30(t,
J=7.3Hz,1H)、6.91(s,2H)、3.62(s,3H)、3.61(s
,6H)、2.58(d,J=4.6Hz,3H)。LC-MS(ESI)C2727
[M+H]の計算値:486.20;実測値:486.00。
(実施例74)
2-(5-クロロ-2-(2-クロロフェニルアミノ)ピリミジン-4-イルアミノ)-
N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000149
2-(2,5-ジクロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド(0
.148g、0.5mmol)および2-クロロアニリン(0.127g、1mmol)
BuOH(5mL)に溶解した。次いでこれを一般手順(方法1b)に従って処理し
て、所望の化合物を黄褐色固体として得た(0.109g、56%)。H NMR(4
00MHz,DMSO-d):δ11.7(s,1H)、8.9(s,1H)、8.6
9(d,J=4.5Hz,1H)、8.43(d,J=7.8Hz,1H)、8.1(s
,1H)、7.68(d,J=9.6Hz,1H)、7.61(d,J=9.6Hz,1
H)、7.50(d,J=9.6Hz,1H)、7.32~7.18(m,3H)、7.
02(t,J=7.8Hz,1H)、2.75(d,J=4.6Hz,3H)。LC-M
S(ESI)C1815ClO[M+H]の計算値:388.06;実測値:
386.00。
(実施例75)
2-(5-ブロモ-2-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニルアミノ)ピリミジン-
4-イルアミノ)-N-メチルベンゼンスルホンアミドの調製
Figure 2022017384000150
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.227g、1mmol)、2-アミノ
-N-メチルベンゼンスルホンアミド(0.186g、1mmol)、2-メトキシ-4
-モルホリノアニリン(0.202g、1mmol)およびジイソプロピルエチルアミン
(0.258g、2mmol)を方法2に従って処理して、所望の化合物を黄褐色固体と
して得た(0.220g、40%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):
δ9.44(s,1H)、8.75~8.73(m,1H)、8.27~8.22(重複
する一重線および多重線,2H)、7.67~7.72(m,2H)、7.49(t,J
=7.8Hz,1H)、7.30~7.27(m,2H)、6.64(s,1H)、6.
42(d,J=8.2Hz,1H)、3.73~3.72(重複する一重線および三重線
,7H)、3.10(t,J=4.6Hz,4H)、2.39(s,3H)。LC-MS
(ESI)C2225BrNS[M+H]の計算値:551.08;実測値:
551.10。HRMS(ESI)C2225BrNS[M+H]の計算値:
551.0896;実測値:551.0895。
(実施例76)
N-メチル-2-(2-(2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6-イ
ルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イルアミノ)ベンズアミドの
調製
Figure 2022017384000151
6-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.085g、0.25mmol)、2-ア
ミノ-N-メチルベンズアミド(0.037g、0.25mmol)およびジイソプロピ
ルエチルアミンを方法4bに従って処理して、標題化合物を無色固体として得た(0.0
85g、75%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ11.32(s
,1H)、9.95(s,1H)、9.73(s,1H)、8.70(s,1H)、8.
37(s,1H)、7.67(d,J=7.8Hz,1H)、7.52~7.23(m,
4H)、7.12(t,J=7.8Hz,1H)、)、6.72(d,J=8.7Hz,
1H)、2.74~2.73(重複する二重線および三重線,5H)、2.46(t,J
=7.3H,2H)。LC-MS(ESI)C2219[M+H]の計
算値:457.15;実測値:457.05。HRMS(ESI)C2219
[M+H]の計算値:457.1594;実測値:457.1585。
(実施例77)
N-メチル-2-((2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6
-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)ベンゼ
ンスルホンアミドの調製
Figure 2022017384000152
6-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.085g、0.25mmol)、2-ア
ミノベンゼンスルホンアミド(0.051g、0.275mmol)およびジイソプロピ
ルエチルアミン(0.035g、0.275mmol)を方法4bに従って処理して、標
題化合物を無色固体として得た(0.068g、55%)。LC-MS(ESI)C21
19S[M+H]の計算値:493.12;実測値:493.00。
(実施例78)
2-(5-クロロ-2-(3,5-ジモルホリノフェニルアミノ)ピリミジン-4-イル
アミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000153
2-(2,5-ジクロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド(0
.148g、0.5mmol)および3,5-ジモルホリノアニリン(0.263g、2
mmol)を方法3に従って処理して、標題化合物を茶褐色がかった固体として得た(0
.170g、65%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ11.77
(s,1H)、9.35(s,1H)、8.77~8.76(m,2H)、8.22(s
,1H)、7.72(dd,J=8.2Hz,1.3Hz,1H)、7.41(t,J=
7.3Hz,1H)、7.10(t,J=7.8Hz,1H)、6.78(s,2H)、
6.23(s,1H)、3.71(t,J=4.6Hz,8H)、3.01(t,J=5
.0Hz,8H)、2.77(d,J=4.6Hz,3H)。LC-MS(ESI)C
30ClN[M+H]の計算値:524.20;実測値:524.20。H
RMS(ESI)C2630ClN[M+H]の計算値:524.2171;
実測値:524.2158。
(実施例79)
2-(5-ブロモ-2-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニルアミノ)ピリミジン-
4-イルアミノ)-N,N-ジメチルベンゼンスルホンアミドを合成するための一般スキ
ーム
Figure 2022017384000154
(実施例80)
2-(5-ブロモ-2-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニルアミノ)ピリミジン-
4-イルアミノ)-N,N-ジメチルベンゼンスルホンアミドの調製
Figure 2022017384000155
2-(5-ブロモ-2-(2-メトキシ-4-モルホリノフェニルアミノ)ピリミジン
-4-イルアミノ)-N-メチルベンゼンスルホンアミド(0.055g、0.1mmo
l)のDMF中溶液に、炭酸カリウム(0.069g、0.15mmol)およびヨウ化
メチル(0.021g、0.15mmol)を加えた。得られた混合物を50℃で1時間
撹拌した。冷却し、粗製の混合物をセライトのショートパッドに通し、メタノールで洗浄
した。減圧下で溶媒を除去して粗生成物を得、これを自動分取HPLCにより精製して、
標題化合物を茶褐色固体として得た(0.039g、72%)。H NMR(400M
Hz,DMSO-d):δ9.36(s,1H)、8.53(s,1H)、8.38(
d,J=,6.0Hz,1H)、8.22(s,1H)、7.75(dd,J=9.6H
z,1.8Hz,1H)、7.53(t,J=8.2Hz,1H)、7.31~7.26
(m,2H)、6.62(d,J=2.2Hz,1H)、6.44(dd,J=11.4
Hz,5.7Hz,1H)、3.73~3.69(重複する三重線および一重線,7H)
、3.10(t,J=7.3Hz,4H)、2.60(s,6H)。LC-MS(ESI
)C2327BrNS[M+H]の計算値:565.10;実測値:565.
10。HRMS(ESI)C2630ClN[M+H]の計算値:565.1
053;実測値:565.1048。
(実施例81)
6-(4-(ベンジルオキシ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミ
ノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000156
6-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.103g、0.3mmol)、ベンジル
アルコール(0.065g、0.6mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0.
077g、0.6mmol)を方法4bに従って処理して、標題化合物を得た。黄色固体
(0.081g、65%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ9.9
9(s,1H)、8.47(s,1H)、7.37~7.29(m,8H)、6.76(
d,J=8.7Hz,1H)、5.49(s,2H)、2.79(t,J=7.3Hz,
2H)、2.41(t,J=6.8Hz,2H)。LC-MS(ESI)C2117
[M+H]の計算値:415.13;実測値:415.00。
(実施例82)
6-((4-(((4-メトキシ-3,5-ジメチルピリジン-2-イル)メチル)アミ
ノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロ
キノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000157
6-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.103g、0.3mmol)、(2,6
-ジメチルピリジン-4-イル)メタンアミン(0.050g、0.3mmol)および
ジイソプロピルエチルアミン(0.039g、0.3mmol)を方法4bに従って処理
して、標題化合物を得た。白色固体(0.083g、58%)。LC-MS(ESI)C
2323[M+H]の計算値:473.18;実測値:473.00。
(実施例83)
6-((4-(2,3-ジメチルフェノキシ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン
-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000158
6-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イルアミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.171g、0.5mmol)、2,3-
ジメチルフェノール(0.122g、1mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(
0.129g、1mmol)を方法4bに従って処理して、標題化合物を得た。黄色固体
(0.128g、60%)。LC-MS(ESI)C2219[M+H]
の計算値:429.15;実測値:429.05。
(実施例84)
N-メチル-2-((5-(フェニルエチニル)-2-((3,4,5-トリメトキシフ
ェニル)アミノ)ピリミジン-4-イル)アミノ)ベンズアミドを合成するための一般ス
キーム
Figure 2022017384000159
(実施例85)
N-メチル-2-((5-(フェニルエチニル)-2-((3,4,5-トリメトキシフ
ェニル)アミノ)ピリミジン-4-イル)アミノ)ベンズアミドの調製
Figure 2022017384000160
ビストリフェニルホスフィンパラジウムジクロリド(0.018g、0.025mmo
l)、2-(5-ブロモ-2-(3,4,5-トリメトキシフェニルアミノ)ピリミジン
-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド(0.244g、0.5mmol)および
トリエチルアミン(0.202g、2mmol)の乾燥DMF(3mL)中撹拌混合物に
、Cu(I)I(0.005g、0.25mmol)を加えた。フェニルアセチレン(0
.056g、0.55mmol)を上記反応混合物に加え、100℃で12時間加熱した
。反応混合物を室温に冷却し、水(20mL)で希釈し、酢酸エチル(3×20mL)で
抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を
蒸発させ、続いて粗製物を逆相HPLC精製して、所望の化合物を得た。白色固体(0.
050g、19%)。LC-MS(ESI)C2927[M+H]の計算値
:510.21;実測値:510.00。
(実施例86)
N-メチル-2-((5-フェネチル-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)ア
ミノ)ピリミジン-4-イル)アミノ)ベンズアミドを合成するための一般スキーム
Figure 2022017384000161
(実施例87)
N-メチル-2-((5-フェネチル-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)ア
ミノ)ピリミジン-4-イル)アミノ)ベンズアミドの調製
Figure 2022017384000162
N-メチル-2-((5-(フェニルエチニル)-2-((3,4,5-トリメトキシ
フェニル)アミノ)ピリミジン-4-イル)アミノ)ベンズアミド(0.030g、0.
059mmol)をMeOH(2mL)に溶解した。Pd/C(触媒)をこれに加え、得
られた混合物をHの雰囲気下室温で1時間撹拌した。次いで反応混合物をセライトのシ
ョートパッドに通し、メタノールで洗浄した。減圧下で溶媒を除去して粗生成物を得、こ
れを自動分取HPLCにより精製して、標題化合物を無色固体として得た(0.026g
、87%)。LC-MS(ESI)C2931[M+H]の計算値:514
.24;実測値:514.20。
(実施例88)
2-(5-ブロモ-2-(3,4,5-トリメトキシフェニルアミノ)ピリミジン-4-
イルオキシ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000163
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.227g、1mmol)、2-ヒドロ
キシ-N-メチルベンズアミド(0.151g、1mmol)、3,4,5-トリメトキ
シアニリン(0.183g、1mmol)およびジイソプロピルエチルアミン(0.25
8g、2mmol)を方法2に従って処理して、所望の化合物を茶褐色固体として得た(
0.100g、20%)。H NMR(400MHz,DMSO-d):δ9.41
(s,1H)、8.47(s,1H)、8.50~8.03(m,1H)、7.56(d
d,J=7.8Hz,1.8Hz,1H)、7.50(t,J=7.8Hz,1H)、7
.32~7.29(m,2H)、6.80(s,2H)、3.62(s,9H)、2.6
0(d,J=4.5Hz,3H)。LC-MS(ESI)C2121BrN[M
+H]の計算値:491.07;実測値:491.0。HRMS(ESI)C21
BrN[M+H]の計算値:491.0751;実測値:491.0761。
(実施例89)
N-メチル-2-((2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6
-イル)アミノ)-5-フェニルピリミジン-4-イル)アミノ)ベンズアミドの調製
Figure 2022017384000164
還流冷却器、窒素注入口および撹拌子を装着した2ツ口フラスコに、乾燥DME(5m
L)中の2-(5-ブロモ-2-(3,4,5-トリメトキシフェニルアミノ)ピリミジ
ン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミド(0.100g、0.21mmol)お
よびパラジウムテトラキストリフェニルホスフィン(0.010g、0.0084mmo
l)を仕込んだ。得られた混合物を室温で20分間撹拌した。これに水(1mL)中の炭
酸カリウム(0.056g、0.42mmol)を、続いてフェニルボロン酸(0.03
2g、0.25mmol)を加えた。混合物を12時間加熱還流し、冷却し、水(5mL
)で希釈し、酢酸エチル(3×10mL)で抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄
し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。減圧下で溶媒を蒸発させ、続いて逆相HPLCによ
り、標題化合物を得た。淡黄色固体(0.030g、31%)。LC-MS(ESI)C
2724[M+H]の計算値:465.20;実測値:465.15。
(実施例90)
2-(2-(3,5-ジモルホリノフェニルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリ
ミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000165
4-クロロ-N-(3,5-ジモルホリノフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-2-アミン(0.110g、0.25mmol)、2-アミノ-N-メチルベ
ンズアミドおよびHCl(0.041g、0.275mmol)を方法3に従って処理し
て、標題化合物を茶褐色固体として得た(0.097g、70%)。H NMR(40
0MHz,DMSO-d):δ11.48(s,1H)、9.60(s,1H)、8.
71(s,1H)、8.40(s,1H)、7.69(d,J=7.8Hz,2H)、7
.36(s,1H)、7.10(t,J=7.3Hz,1H)、6.77(s,1H)、
6.24(s,2H)、3.63(brs,8H)、2.96(brs,8H)、2.7
5(d,J=4.7Hz,3H)。LC-MS(ESI)C2730[M
+H]の計算値:558.24;実測値:558.20。HRMS(ESI)C27
30[M+H]の計算値:558.2435;実測値:558.2424
(実施例91)
2-((5-ブロモ-2-((3,5-ジモルホリノフェニル)アミノ)ピリミジン-4
-イル)アミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000166
2-(5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イルアミノ)-N-メチルベンズアミ
ド(0.071g、0.21mmol)および3,5-ジモルホリノアニリン(0.05
5g、0.21mmol)を方法3に従って処理して、標題化合物を茶褐色がかった固体
として得た(0.081g、68%)。LC-MS(ESI)C2630BrN
[M+H]の計算値:568.16;実測値:5678.00。
(実施例92)
N-メチル-2-(5-(トリフルオロメチル)-2-(3,4,5-トリメトキシフェ
ニルアミノ)ピリミジン-4-イルオキシ)ベンズアミドの調製
Figure 2022017384000167
4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル
)ピリミジン-2-アミン(0.1g、0.3mmol)、2-ヒドロキシ-N-メチル
ベンズアミド(0.054g、0.36mmol)およびジイソプロピルエチルアミンを
方法4bに従って処理して、標題化合物を得た。白色固体(0.075g、76%)。
H NMR(400MHz,DMSO-d):δ10.06(brs,1H)、8.6
6(s,1H)、8.08(d,J=4.6Hz,1H)、7.62~7.55(m,2
H)、7.37~7.35(m,2H)、6.87(s,2H)、3.66(s,6H)
、3.64(s,3H)、2.62(d,J=4.6Hz,3H)。LC-MS(ESI
)C2426S[M+H]の計算値:479.15;実測値:479.
00。HRMS(ESI)C2221[M+H]の計算値:479.1
537;実測値:479.1541。
(実施例93)
2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000168
サリチル酸メチル(8.7g、57.2mmol、1.0当量)およびメチルアミン(
エタノール中33重量%、37.37mL、300mmol、5.25当量)を0℃で撹
拌した。混合物を3時間かけて21℃に加温し、次いでこの温度で14時間撹拌した。混
合物を真空で濃縮し、次いで熱MeOHから再結晶化して、生成物7.08gを得た。M
S[CNO+H]の計算値:152.07、実測値152.16。
(実施例94)
3-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000169
サリチル酸メチル(8.7g、57.2mmol、1.0当量)およびメチルアミン(
エタノール中33重量%、12.36mL、171.6mmol、3.0当量)を21℃
で撹拌した。混合物を35℃に14時間加熱した。更にEtOH中のメチルアミン6mL
を加え、50℃で5時間加熱を続けた。混合物を真空で濃縮し、次いでフラッシュクロマ
トグラフィー(30分かけてDCM中10%EtOAc~DCM中100%EtOAc濃
度勾配)により精製して、生成物6.09gを得た。MS[CNO+H]の計
算値:152.07、実測値152.22。
(実施例95)
2-メルカプト-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000170
チオサリチル酸メチル(5.07g、30.1mmol、1.0当量)およびメチルア
ミン(エタノール中33重量%、19.69mL、158mmol、5.25当量)を0
℃で撹拌した。混合物を3時間かけて21℃に加温し、次いでこの温度で14時間撹拌し
た。混合物を真空で濃縮し、次いで2-プロパノールを加え、これを冷却した。得られた
固体を濾過し、集めて、ジスルフィド4.56gを得た。次いでこのジスルフィド(18
7mg、0.563mmol、1.0当量)をMeOH(5mL)に溶解し、新たに砕い
たマグネシウム金属の削り状物(68mg、2.81mmol、5.0当量)を加えた。
混合物を40℃に14時間加熱した。混合物をMeOHと共にセライトに通して濾過して
、生成物92mgを得、これを更には精製せずにその後の反応に使用した。MS[C
NOS+H]の計算値:168.05、実測値168.17。
(実施例96)
6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000171
6-ニトロ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(2.53g、13.1m
mol、1.0当量)および炭素担持パラジウム(100mg)をEtOH(40mL)
中で混合した。水素ガスの風船を8時間適用し、次いで混合物をDCMと共にセライトに
通して濾過し、真空で濃縮した。得られた茶褐色固体(2.02g)を更には精製せずに
使用した。この化合物は容易にはイオン化しないので、生成物のMSピークは無い。
NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:9.65(s,1H)、6.54(d,
1H,J=8.4Hz)、6.39(d,1H,J=2.4Hz)、6.35(dd,1
H,J=2.8,8.4Hz)、4.73(bs,2H)、2.70(t,2H,J=8
.0Hz)、2.33(t,2H,J=7.2Hz)。
(実施例97)
1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-アミンの調製
Figure 2022017384000172
5-ニトロ-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン(1.0g、6.13mmol、1
.0当量)および炭素担持パラジウム(75mg)をEtOAc(20mL)中で混合し
た。水素ガスの風船を18時間適用し、次いで混合物をDCMと共にセライトに通して濾
過し、真空で濃縮した。得られた茶褐色固体(800mg)を更には精製せずに使用した
。MS[C+H]の計算値:134.07、実測値134.16。
(実施例98)
三置換ピリミジンの調製に関する一般的合成スキーム:
Figure 2022017384000173
(実施例99)
N-メチル-2-((2-(フェニルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン
-4-イル)オキシ)ベンズアミドの調製
Figure 2022017384000174
2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(100mg、0.461
mmol、1.0当量)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(69mg、0.4
61mmol、1.0当量)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.08mL
、0.461mmol、1.0当量)のアセトニトリル(3mL)中溶液を、100℃で
10分間マイクロ波照射した。混合物を真空で濃縮し、次いでアニリン(0.042mL
、0.461mmol、1.0当量)および酢酸(2mL)を加えた。この混合物を12
0℃で10分間マイクロ波照射し、次いで真空で濃縮した。粗生成物のフラクションを逆
相HPLCにより精製して、生成物(13mg)を得た。MS[C1915
+H]の計算値:389.12、実測値389.32。
(実施例100)
2-((2-((5-ブロモ-2-メチルフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチ
ル)ピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000175
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(69mg)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて5-ブロ
モ-2-メチルアニリン(86mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様
の手順。生成物10mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2016BrF
+H]の計算値:481.05、実測値481.26。
(実施例101)
2-((2-((5-メトキシ-2-メチルフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメ
チル)ピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000176
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(69mg)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて5-メト
キシ-2-メチルアニリン(63mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同
様の手順。生成物14mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2119
+H]の計算値:433.15、実測値433.41。
(実施例102)
2-((2-((3-ブロモ-4-メチルフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチ
ル)ピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000177
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(69mg)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて3-ブロ
モ-4-メチルアニリン(63mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様
の手順。生成物8mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2016BrF
+H]の計算値:481.05、実測値481.26。
(実施例103)
2-((2-((2-メトキシフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミ
ジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000178
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(69mg)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて2-メト
キシアニリン(57mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順。生
成物46mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2017+H]
計算値:419.13、実測値419.35。
(実施例104)
2-((2-((2,5-ジメチルフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000179
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(69mg)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて2,5-
ジメチルアニリン(56mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順
。生成物36mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2119+H]
の計算値:417.15、実測値417.40。
(実施例105)
2-((2-((4-メトキシフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミ
ジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドおよび2-((4-メトキシフェニ
ル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-オールの調製。
Figure 2022017384000180
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
150mg)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(104mg)およびN,N-
ジイソプロピルエチルアミン(0.12mL)を、続いて第2のステップにおいて4-メ
トキシアニリン(85mg)および酢酸(3mL)を使用し、実施例99と同様の手順。
2-((2-((4-メトキシフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミ
ジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミド10mgおよび2-((4-メトキ
シフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-オール7mgを逆
相HPLC後に回収した。MS[C2017+H]の計算値:419.
13、実測値419.35。MS[C1210+H]の計算値:286
.08、実測値286.25。
(実施例106)
2-((2-((3,4-ジメチルフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000181
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(69mg)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて3,4-
ジメチルアニリン(56mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順
。生成物13mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2119+H]
の計算値:417.15、実測値417.40。
(実施例107)
2-((2-((2-クロロ-4-メチルフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチ
ル)ピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000182
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(69mg)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて2-クロ
ロ-4-メチルアニリン(65mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様
の手順。生成物13mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2016ClF
+H]の計算値:437.10、実測値437.35。
(実施例108)
2-((2-((3,4-ジクロロフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドおよび2-((3,4-ジクロ
ロフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-オールの調製
Figure 2022017384000183
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(70mg)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて4-メト
キシアニリン(75mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順。2
-((2-((3,4-ジクロロフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリ
ミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミド27mgおよび2-((3,4-
ジクロロフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-オール14
mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C1913Cl+H]の計
算値:457.04、実測値457.28。MS[C11ClO+H]
の計算値:323.99、実測値323.70。
(実施例109)
2-((2-((2,5-ジメトキシフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドおよび2-((2,5-ジメ
トキシフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-オールの調製
Figure 2022017384000184
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(70mg)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて2,5-
ジメトキシアニリン(71mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手
順。2-((2-((2,5-ジメトキシフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチ
ル)ピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミド45mgおよび2-((
2,5-ジメトキシフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-
オール6mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2119+H]
計算値:449.14、実測値449.35。MS[C1414+H]
の計算値:316.09、実測値315.90
(実施例110)
N-メチル-2-((2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6
-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)オキシ)ベンズ
アミドの調製
Figure 2022017384000185
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(69mg)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミ
ノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(75mg)および酢酸(2mL)を
使用し、実施例99と同様の手順。生成物28mgを逆相HPLC後に回収した。MS[
2218+H]の計算値:458.14、実測値458.40。
(実施例111)
2-((5-ブロモ-2-(フェニルアミノ)ピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メ
チルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000186
第1のステップにおいて5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(105mg)、2
-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(70mg)およびN,N-ジイソプロピルエチ
ルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいてアニリン(43mg)およ
び酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順。生成物12mgを逆相HPLC後
に回収した。MS[C1815BrN+H]の計算値:399.05、実測値
399.29。
(実施例112)
2-((5-ブロモ-2-((5-ブロモ-2-メチルフェニル)アミノ)ピリミジン-
4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000187
第1のステップにおいて5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(105mg)、2
-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(70mg)およびN,N-ジイソプロピルエチ
ルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて5-ブロモ-2-メチルア
ニリン(86mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順。生成物6
mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C1916Br+H]の計算値
:492.97、実測値492.80。
(実施例113)
2-((2-((2,3-ジフルオロフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000188
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(69mg)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて2,3-
ジフルオロアニリン(59mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手
順。生成物32mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C1913+H
の計算値:425.10、実測値425.35。
(実施例114)
5-クロロ-N,N-ジフェニルピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000189
第1のステップにおいて2,4,5-トリクロロピリミジン(100mg)、2-ヒド
ロキシ-N-メチルベンズアミド(82mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミ
ン(0.095mL)を、続いて第2のステップにおいてアニリン(59mg)および酢
酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順。所望していなかった生成物5mgを逆
相HPLC後に回収した。MS[C1613ClN+H]の計算値:297.09
、実測値297.30。
(実施例115)
2-((2-((2,3-ジメトキシフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドおよび2-((2,3-ジメ
トキシフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-オールの調製
Figure 2022017384000190
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(70mg)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて2,3-
ジメトキシアニリン(70mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手
順。2-((2-((2,3-ジメトキシフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチ
ル)ピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミド15mgおよび2-((
2,3-ジメトキシフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-
オール6mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2119+H]
計算値:449.14、実測値449.39。MS[C1312+H]
の計算値:316.09、実測値316.05。
(実施例116)
N-メチル-2-((2-((2-(メチルチオ)フェニル)アミノ)-5-(トリフル
オロメチル)ピリミジン-4-イル)オキシ)ベンズアミドおよびN,N-ビス(2
-(メチルチオ)フェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミ
ンの調製
Figure 2022017384000191
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(70mg)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて2-(メ
チルチオ)アニリン(78mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手
順。N-メチル-2-((2-((2-(メチルチオ)フェニル)アミノ)-5-(トリ
フルオロメチル)ピリミジン-4-イル)オキシ)ベンズアミド12mgおよびN,N
-ビス(2-(メチルチオ)フェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2
,4-ジアミン5mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2017
+H]の計算値:435.11、実測値435.36。MS[C1917
+H]の計算値:423.09、実測値422.95。
(実施例117)
2-((2-((5-メトキシ-2-メチルフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメ
チル)ピリミジン-4-イル)チオ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000192
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-メルカプト-N-メチルベンズアミド(92mg)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて5-メト
キシ-2-メチルアニリン(63mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同
様の手順。生成物18mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2119
S+H]の計算値:449.13、実測値449.38。
(実施例118)
6-((4-((2-モルホリノフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリ
ミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-
((2-((2-モルホリノフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジ
ン-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび4-((
2-モルホリノフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-オー
ルの調製
Figure 2022017384000193
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-モルホリノアニリン(82mg)およびN,N-ジイソプロピルエチ
ルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-3,4-ジヒ
ドロキノリン-2(1H)-オン(75mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例9
9と同様の手順。6-((4-((2-モルホリノフェニル)アミノ)-5-(トリフル
オロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)
-オン13mg、6-((2-((2-モルホリノフェニル)アミノ)-5-(トリフル
オロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)
-オン13mgおよび4-((2-モルホリノフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロ
メチル)ピリミジン-2-オール9mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C24
+H]の計算値:485.19、実測値485.45。MS[C24
23+H]の計算値:485.19、実測値485.45。MS[C15
15+H]の計算値:341.12、実測値341.32。
(実施例119)
6-((4-((3-メトキシフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミ
ジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000194
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、3-メトキシアニリン(57mg)およびN,N-ジイソプロピルエチル
アミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-3,4-ジヒド
ロキノリン-2(1H)-オン(75mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99
と同様の手順。生成物45mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2118
+H]の計算値:430.15、実測値430.43。
(実施例120)
6-((4-((2-(ジフルオロメトキシ)フェニル)アミノ)-5-(トリフルオロ
メチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オ
ンおよびN,N-ビス(2-(ジフルオロメトキシ)フェニル)-5-(トリフルオ
ロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよび6,6’-((5-(トリフルオロメチ
ル)ピリミジン-2,4-ジイル)ビス(アザンジイル))ビス(3,4-ジヒドロキノ
リン-2(1H)-オン)の調製。
Figure 2022017384000195
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-(ジフルオロメトキシ)アニリン(73mg)およびN,N-ジイソ
プロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(75mg)および酢酸(2mL)を使用
し、実施例99と同様の手順。6-((4-((2-(ジフルオロメトキシ)フェニル)
アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒ
ドロキノリン-2(1H)-オン27mg、N,N-ビス(2-(ジフルオロメトキ
シ)フェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン9mgおよ
び6,6’-((5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジイル)ビス(アザ
ンジイル))ビス(3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン)14mgを逆相HP
LC後に回収した。MS[C2116+H]の計算値:466.13、
実測値466.39。MS[C1913+H]の計算値:463.10
、実測値463.34。MS[C2319+H]の計算値:469.1
6、実測値469.41。
(実施例121)
6-((4-((3-(ベンジルオキシ)フェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチ
ル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの
調製
Figure 2022017384000196
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、3-(ベンジルオキシ)アニリン(92mg)およびN,N-ジイソプロ
ピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(75mg)および酢酸(2mL)を使用し、
実施例99と同様の手順。生成物57mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C27
22+H]の計算値:506.18、実測値506.47。
(実施例122)
N-メチル-3-((2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6
-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)オキシ)ベンズ
アミドの調製
Figure 2022017384000197
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、3-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(70mg)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミ
ノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(75mg)および酢酸(2mL)を
使用し、実施例99と同様の手順。生成物18mgを逆相HPLC後に回収した。MS[
2218+H]の計算値:458.14、実測値458.40。
(実施例123)
6-((4-((2-メトキシ-4-モルホリノフェニル)アミノ)-5-(トリフルオ
ロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-
オンおよび6-((2-((2-メトキシ-4-モルホリノフェニル)アミノ)-5-(
トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2
(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000198
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2-メトキシ-4-モルホリノアニリン(96mg)およびN,N-ジイ
ソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ
-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(75mg)および酢酸(2mL)を使
用し、実施例99と同様の手順。6-((4-((2-メトキシ-4-モルホリノフェニ
ル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-
ジヒドロキノリン-2(1H)-オン20mgおよび6-((2-((2-メトキシ-4
-モルホリノフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)
アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン2.7mgを逆相HPLC後に
回収した。MS[C2525+H]の計算値:515.20、実測値5
15.52。MS[C2525+H]の計算値:515.52、実測値
515.52。
(実施例124)
6-((4-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イルアミノ)-5-(トリフ
ルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H
)-オンおよび6-((2-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イルアミノ)
-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノ
リン-2(1H)-オンおよびN,N-ビス(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール
-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製。
Figure 2022017384000199
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg)およびN,
N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて
6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(63mg)および酢酸(2
mL)を使用し、実施例99と同様の手順。6-((4-(ベンゾ[d][1,3]ジオ
キソール-5-イルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミ
ノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-((2-(ベンゾ[d]
[1,3]ジオキソール-5-イルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-
4-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの混合物9mgなら
びにN,N-ビス(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-5-(トリ
フルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン10mgを逆相HPLC後に回収した。
MS[C2116+H]の計算値:444.13、実測値444.38
。MS[C1913+H]の計算値:419.10、実測値419.3
5。
(実施例125)
6-((4-((3,4-ジメチルフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000200
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、3,4-ジメチルアニリン(47mg)およびN,N-ジイソプロピルエ
チルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-3,4-
ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(63mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施
例99と同様の手順。生成物31mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2220
O+H]の計算値:428.17、実測値428.44。
(実施例126)
6-((4-(ナフタレン-1-イルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン
-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよびN,N
-ジ(ナフタレン-1-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジア
ミンの調製
Figure 2022017384000201
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ナフタレン-1-アミン(56mg)およびN,N-ジイソプロピルエチル
アミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-3,4-ジヒ
ドロキノリン-2(1H)-オン(63mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例9
9と同様の手順。6-((4-(ナフタレン-1-イルアミノ)-5-(トリフルオロメ
チル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン
22mgおよびN,N-ジ(ナフタレン-1-イル)-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-2,4-ジアミン4.5mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C24
18O+H]の計算値:450.15、実測値450.38。MS[C25
17+H]の計算値:431.15、実測値431.35。
(実施例127)
6-((4-((5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-1-イル)アミノ)-5-
(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-
2(1H)-オンおよび6-((2-((5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-1
-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000202
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-1-アミン(58mg)および
N,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにお
いて6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(63mg)および酢酸
(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順。6-((4-((5,6,7,8-テト
ラヒドロナフタレン-1-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2
-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-((2-(
(5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-1-イル)アミノ)-5-(トリフルオロ
メチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オ
ンの混合物37mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2422O+H]
の計算値:454.19、実測値454.43。MS[C2422O+H]
の計算値:454.19、実測値4454.43。
(実施例128)
N-メチル-3-((2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6
-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)ベンズ
アミドの調製
Figure 2022017384000203
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、3-アミノ-N-メチルベンズアミド(58mg)およびN,N-ジイソプ
ロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(63mg)および酢酸(2mL)を使用
し、実施例99と同様の手順。生成物110mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C
2219+H]の計算値:457.16、実測値457.41。
(実施例129)
6-((4-((2,3-ジヒドロ-1H-インデン-5-イル)アミノ)-5-(トリ
フルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1
H)-オンの調製
Figure 2022017384000204
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、2,3-ジヒドロ-1H-インデン-5-アミン(52mg)およびN,N
-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて6
-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(63mg)および酢酸(2m
L)を使用し、実施例99と同様の手順。生成物7mgを逆相HPLC後に回収した。M
S[C2320O+H]の計算値:440.17、実測値440.40。
(実施例130)
6-((4-((2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル)アミノ)-5-(トリ
フルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1
H)-オンおよび6-((2-((2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル)アミ
ノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロ
キノリン-2(1H)-オンの調製。
Figure 2022017384000205
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-アミン(52mg)およびN,N
-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて6
-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(63mg)および酢酸(2m
L)を使用し、実施例99と同様の手順。6-((4-((2,3-ジヒドロ-1H-イ
ンデン-2-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミ
ノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン8mgおよび6-((2-((2,
3-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリ
ミジン-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン9mgを逆
相HPLC後に回収した。LRMS[C2320O+H]の計算値:440
.17、実測値440.40。MS[C2320O+H]の計算値:440
.40、実測値440.40。
(実施例131)
6-((4-(シクロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-
イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-((2-(シ
クロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000206
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、シクロプロパンアミン(22mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルア
ミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-3,4-ジヒド
ロキノリン-2(1H)-オン(63mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99
と同様の手順。6-((4-(シクロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン12mg
および6-((2-(シクロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン
-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン15mgを逆相H
PLC後に回収した。MS[C1716O+H]の計算値:364.14、
実測値364.36。MS[C1716O+H]の計算値:364.14、
実測値364.36。
(実施例132)
N-(4-((2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6-イル
)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)フェニル)ア
セトアミドの調製
Figure 2022017384000207
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、N-(4-アミノフェニル)アセトアミド(59mg)およびN,N-ジイ
ソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミ
ノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(63mg)および酢酸(2mL)を
使用し、実施例99と同様の手順。生成物62mgを逆相HPLC後に回収した。MS[
2219+H]の計算値:457.16、実測値457.41。
(実施例133)
-(2,3-ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン-6-イル)-N-(3
-メトキシフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調
Figure 2022017384000208
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、3-メトキシアニリン(48mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルア
ミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて2,3-ジヒドロベンゾ[b
][1,4]ジオキシン-6-アミン(59mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施
例99と同様の手順。生成物31mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2017
+H]の計算値:419.13、実測値419.39。
(実施例134)
6,6’-((5-クロロピリミジン-2,4-ジイル)ビス(アザンジイル))ビス(
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン)の調製
Figure 2022017384000209
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
46mg)、6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(41mg)お
よびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.044mL)を、続いて第2のステップ
において6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(41mg)および
酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順。粗製の固体をアセトニトリル、アセ
トン、ジクロロメタンおよび酢酸エチル各10mLで洗浄して、部分的に純粋な生成物6
4mgを得、これをメタノール10mLで更に洗浄して、生成物46mgを得た。MS[
2219ClN+H]の計算値:435.13、実測値435.43。
(実施例135)
6,6’-((5-メトキシピリミジン-2,4-ジイル)ビス(アザンジイル))ビス
(3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン)の調製
Figure 2022017384000210
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
46mg)、6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(41mg)お
よびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップ
において6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(41mg)および
酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順。粗製の固体をジクロロメタン10m
Lで洗浄して、純粋な生成物11mgを得た。更に生成物11mgを、上記濾液の逆相H
PLC精製後に回収した。MS[C2322+H]の計算値:431.18
、実測値431.42。
(実施例136)
-(3-クロロ-4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-N-(3-メトキシ
フェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN-(
3-クロロ-4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-N-(3-メトキシフェニル
)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000211
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、3-メトキシアニリン(48mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルア
ミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて3-クロロ-4-(トリフル
オロメトキシ)アニリン(83mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様
の手順。N-(3-クロロ-4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-N-(3-
メトキシフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよび
-(3-クロロ-4-(トリフルオロメトキシ)フェニル)-N-(3-メトキシ
フェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの混合物26m
gを逆相HPLC後に回収した。MS[C1913ClF+H]の計算値
:479.07、実測値479.35。MS[C1913ClF+H]
計算値:479.07、実測値479.35。
(実施例137)
3-((4-((3-メトキシフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミ
ジン-2-イル)アミノ)ナフタレン-2-オールおよび3-((2-((3-メトキシ
フェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)ナフ
タレン-2-オールの調製
Figure 2022017384000212
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、3-メトキシアニリン(48mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルア
ミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて3-アミノナフタレン-2-
オール(62mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順。3-((
4-((3-メトキシフェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2
-イル)アミノ)ナフタレン-2-オールおよび3-((2-((3-メトキシフェニル
)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)ナフタレン-
2-オールの混合物25mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2217
+H]の計算値:427.14、実測値427.44。MS[C2217
+H]の計算値:427.14、実測値427.44。
(実施例138)
3-((4-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イルアミノ)-5-(トリフ
ルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)ベンズアミドおよび3-((2-(ベン
ゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリ
ミジン-4-イル)アミノ)ベンズアミドの調製
Figure 2022017384000213
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg)およびN,
N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて
3-アミノベンズアミド(53mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様
の手順。3-((4-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イルアミノ)-5-
(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)ベンズアミドおよび3-((2
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イルアミノ)-5-(トリフルオロメチ
ル)ピリミジン-4-イル)アミノ)ベンズアミドの混合物34mgを逆相HPLC後に
回収した。MS[C1914+H]の計算値:418.11、実測値4
18.36。MS[C1914+H]の計算値:418.11、実測値
418.36。
(実施例139)
-(4-(1H-ピロール-1-イル)フェニル)-N-(ベンゾ[d][1,3
]ジオキソール-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミ
ンおよびN-(4-(1H-ピロール-1-イル)フェニル)-N-(ベンゾ[d]
[1,3]ジオキソール-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4
-ジアミンの調製
Figure 2022017384000214
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg)およびN,
N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて
4-(1H-ピロール-1-イル)アニリン(62mg)および酢酸(2mL)を使用し
、実施例99と同様の手順。N-(4-(1H-ピロール-1-イル)フェニル)-N
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN-(4-(1H-ピロール-1-イル)フェニ
ル)-N-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-5-(トリフルオロ
メチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの混合物22mgを逆相HPLC後に回収した。
MS[C2216+H]の計算値:440.13、実測値440.40
。MS[C2216+H]の計算値:440.13、実測値440.4
0。
(実施例140)
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(2,3-ジヒドロ
-1H-インデン-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジア
ミンおよびN-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(2,3
-ジヒドロ-1H-インデン-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2
,4-ジアミンの調製。
Figure 2022017384000215
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg)およびN,
N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて
2,3-ジヒドロ-1H-インデン-5-アミン(52mg)および酢酸(2mL)を使
用し、実施例99と同様の手順。N-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イ
ル)-N-(2,3-ジヒドロ-1H-インデン-5-イル)-5-(トリフルオロメ
チル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソー
ル-5-イル)-N-(2,3-ジヒドロ-1H-インデン-5-イル)-5-(トリ
フルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの混合物7mgを逆相HPLC後に回収
した。MS[C2117+H]の計算値:415.14、実測値415
.41。MS[C2117+H]の計算値:415.14、実測値41
5.41。
(実施例141)
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(2-フルオロ-3
-(トリフルオロメチル)フェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4
-ジアミンおよびN-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(
2-フルオロ-3-(トリフルオロメチル)フェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000216
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg)およびN,
N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて
2-フルオロ-3-(トリフルオロメチル)アニリン(70mg)および酢酸(2mL)
を使用し、実施例99と同様の手順。N-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5
-イル)-N-(2-フルオロ-3-(トリフルオロメチル)フェニル)-5-(トリ
フルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン14mgおよびN-(ベンゾ[d][
1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(2-フルオロ-3-(トリフルオロメチル
)フェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン6mgを逆相
HPLC後に回収した。MS[C1911+H]の計算値:461.0
8、実測値461.38。MS[C1911+H]の計算値:461.
08、実測値461.38。
(実施例142)
6-((5-ブロモ-4-((3-メトキシフェニル)アミノ)ピリミジン-2-イル)
アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000217
第1のステップにおいて5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(93mg)、3-
メトキシアニリン(50mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.071
mL)を、続いて2番目のステップにおいて6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2
(1H)-オン(66mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順。
生成物15mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2018BrN+H]
の計算値:440.07、実測値440.33。
(実施例143)
6-((5-クロロ-4-((3-メトキシフェニル)アミノ)ピリミジン-2-イル)
アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび5-クロロ-N,N
-ビス(3-メトキシフェニル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000218
第1のステップにおいて2,4,5-トリクロロピリミジン(74mg)、3-メトキ
シアニリン(50mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.077mL)
を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)
-オン(59mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順。6-((
5-クロロ-4-((3-メトキシフェニル)アミノ)ピリミジン-2-イル)アミノ)
-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン18mgおよび5-クロロ-N,N
-ビス(3-メトキシフェニル)ピリミジン-2,4-ジアミン1.2mgを逆相HPL
C後に回収した。MS[C2018ClN+H]の計算値:396.12、実
測値396.34。MS[C1817ClN+H]の計算値:357.11、
実測値357.33。
(実施例144)
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(4-メトキシフェ
ニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN-(ベン
ゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(4-メトキシフェニル)-5-
(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000219
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg)およびN,
N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて
4-メトキシアニリン(48mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の
手順。N-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(4-メトキ
シフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN
(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(4-メトキシフェニル)
-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの混合物29mgを逆相H
PLC後に回収した。MS[C1915+H]の計算値:405.12
、実測値405.36。MS[C1915+H]の計算値:405.1
2、実測値405.36。
(実施例145)
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(5-メトキシ-2
-メチルフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよび
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(5-メトキシ-2
-メチルフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000220
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg)およびN,
N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて
5-メトキシ-2-メチルアニリン(53mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例
99と同様の手順。N-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N
(5-メトキシ-2-メチルフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,
4-ジアミンおよびN-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N
(5-メトキシ-2-メチルフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,
4-ジアミンの混合物25mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C2017
+H]の計算値:419.13、実測値419.39。MS[C2017
+H]の計算値:419.13、実測値419.39。
(実施例146)
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(3,4-ジメチル
フェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN-(
ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(3,4-ジメチルフェニル
)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製。
Figure 2022017384000221
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg)およびN,
N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて
3,4-ジメチルアニリン(47mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同
様の手順。N-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(3,4
-ジメチルフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよ
びN-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(3,4-ジメチ
ルフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの混合物9m
gを逆相HPLC後に回収した。MS[C2017+H]の計算値:4
03.14、実測値403.37。
(実施例147)
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(2,3-ジクロロ
フェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN-(
ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(2,3-ジクロロフェニル
)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000222
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg)およびN,
N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて
2,3-ジクロロアニリン(63mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同
様の手順。N-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(2,3
-ジクロロフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよ
びN-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(2,3-ジクロ
ロフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの混合物12
mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C1811Cl+H]の計
算値:443.03、実測値443.28。MS[C1811Cl+H
の計算値:443.03、実測値443.28。
(実施例148)
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(3-クロロ-4-
フルオロフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよび
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(3-クロロ-4-
フルオロフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000223
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg)およびN,
N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて
3-クロロ-4-フルオロアニリン(57mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例
99と同様の手順。N-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N
(3-クロロ-4-フルオロフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,
4-ジアミンおよびN-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N
(3-クロロ-4-フルオロフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,
4-ジアミンの混合物36mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C1811ClF
+H]の計算値:427.06、実測値427.30。MS[C1811
ClF+H]の計算値:427.06、実測値427.30。
(実施例149)
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(3-フェノキシフ
ェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN-(ベ
ンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(3-フェノキシフェニル)-
5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000224
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg)およびN,
N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて
3-フェノキシアニリン(73mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様
の手順。N-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(3-フェ
ノキシフェニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(3-フェノキシフェ
ニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの混合物36mgを
逆相HPLC後に回収した。MS[C2417+H]の計算値:467
.13、実測値467.41。MS[C2417+H]の計算値:46
7.13、実測値467.41。
(実施例150)
6-((4-(シクロブチルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イ
ル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-((2-(シク
ロブチルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000225
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
70mg)、シクロブタンアミン(23mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミ
ン(0.056mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-3,4-ジヒドロ
キノリン-2(1H)-オン(52mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と
同様の手順。6-((4-(シクロブチルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミ
ジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン12mgおよ
び6-((2-(シクロブチルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-
イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン18mgを逆相HPLC
後に回収した。MS[C1818O+H]の計算値:378.15、実測値
378.35。
(実施例151)
6-((4-((2-メトキシエチル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジ
ン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-((
2-((2-メトキシエチル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-
イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000226
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
70mg)、2-メトキシエタン-1-アミン(24mg)およびN,N-ジイソプロピ
ルエチルアミン(0.062mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(52mg)および酢酸(2mL)を使用し、
実施例99と同様の手順。6-((4-((2-メトキシエチル)アミノ)-5-(トリ
フルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1
H)-オン11mgおよび6-((2-((2-メトキシエチル)アミノ)-5-(トリ
フルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1
H)-オン20mgを逆相HPLC後に回収した。LRMS[C1718
+H]の計算値:382.15、実測値382.33。MS[C1718
+H]の計算値:382.15、実測値382.33。
(実施例152)
-シクロプロピル-N-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)-5
-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN-シクロプロピル-
-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)-5-(トリフルオロメチル
)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000227
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、シクロプロパンアミン(22mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルア
ミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて1H-ピロロ[2,3-b]
ピリジン-5-アミン(52mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の
手順。N-シクロプロピル-N-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル
)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン13mgおよびN-シ
クロプロピル-N-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)-5-(トリ
フルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン9mgを逆相HPLC後に回収した。M
S[C1513+H]の計算値:335.12、実測値335.25。MS
[C1513+H]の計算値:335.12、実測値335.25。
(実施例153)
5-ブロモ-N-(1H-インドール-5-イル)-N-(3-(メチルスルホニル
)ベンジル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000228
第1のステップにおいて5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(150mg)、(
3-(メチルスルホニル)フェニル)メタンアミン、HCl塩(50mg)およびN,N
-ジイソプロピルエチルアミン(0.229mL)を、続いて第2のステップにおいて1
H-インドール-5-アミン(87mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と
同様の手順。生成物41mgを逆相C18シリカゲルを使用するフラッシュクロマトグラ
フィー後に回収した。MS[C2018BrNS+H]の計算値:472.0
4、実測値472.25。
(実施例154)
5-ブロモ-N-(1H-インドール-5-イル)-N-(ピリジン-2-イル)ピ
リミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000229
第1のステップにおいて5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(150mg)、ピ
リジン-2-アミン(62mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.11
7mL)を、続いて第2のステップにおいて1H-インドール-5-アミン(87mg)
および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順。生成物14mgを逆相C18
シリカゲルを使用するフラッシュクロマトグラフィー後に回収した。MS[C1713
BrN+H]の計算値:381.05、実測値381.19。
(実施例155)
6-((5-ブロモ-4-(ピリジン-2-イルアミノ)ピリミジン-2-イル)アミノ
)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000230
第1のステップにおいて5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(150mg)、ピ
リジン-2-アミン(62mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.11
7mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2
(1H)-オン(107mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順
。生成物12mgを逆相C18シリカゲルを使用するフラッシュクロマトグラフィー後に
回収した。MS[C1815BrNO+H]の計算値:411.06、実測値41
1.22。
(実施例156)
6-((5-ブロモ-4-((6-メトキシピリジン-3-イル)アミノ)ピリミジン-
2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000231
第1のステップにおいて5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(150mg)、6
-メトキシピリジン-3-アミン(82mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミ
ン(0.117mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-3,4-ジヒドロ
キノリン-2(1H)-オン(107mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99
と同様の手順。生成物8mgを逆相C18シリカゲルを使用するフラッシュクロマトグラ
フィー後に回収した。MS[C1917BrN+H]の計算値:441.07
、実測値441.15。
(実施例157)
6-((4-(フェニルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)
アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-((2-(フェニル
アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒ
ドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000232
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、アニリン(36mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.0
68mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-
2(1H)-オン(64mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順
。6-((4-(フェニルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル
)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-((2-(フェニ
ルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-3,4-ジ
ヒドロキノリン-2(1H)-オンの混合物23mgを逆相HPLC後に回収した。MS
[C2016O+H]の計算値:400.14、実測値400.36。MS
[C2016O+H]の計算値:400.14、実測値400.36。
(実施例158)
-シクロプロピル-N-(2,3-ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン-
6-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN-シ
クロプロピル-N-(2,3-ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン-6-イル
)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000233
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、シクロプロパンアミン(22mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルア
ミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて2,3-ジヒドロベンゾ[b
][1,4]ジオキシン-6-アミン(59mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施
例99と同様の手順。N-シクロプロピル-N-(2,3-ジヒドロベンゾ[b][
1,4]ジオキシン-6-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジ
アミン15mgおよびN-シクロプロピル-N-(2,3-ジヒドロベンゾ[b][
1,4]ジオキシン-6-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジ
アミン8mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C1615+H]
計算値:353.12、実測値353.31。MS[C1615+H]
の計算値:353.12、実測値353.31。
(実施例159)
6-((5-ブロモ-4-(シクロプロピルアミノ)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000234
第1のステップにおいて5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(80mg)、シク
ロプロパンアミン(26mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.092
mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(
1H)-オン(57mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順。粗
製の固体を濾過し、アセトニトリルで濯ぐことにより、生成物10mgを単離した。MS
[C1616BrNO+H]の計算値:374.06、実測値374.26。
(実施例160)
6-((4-(シクロペンチルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-
イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-((2-(シ
クロペンチルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000235
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
120mg)、シクロペンタンアミン(47mg)およびN,N-ジイソプロピルエチル
アミン(0.096mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-3,4-ジヒ
ドロキノリン-2(1H)-オン(90mg)および酢酸(2mL)を使用し、実施例9
9と同様の手順。6-((4-(シクロペンチルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン65m
gおよび6-((2-(シクロペンチルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジ
ン-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン86mgを逆相
HPLC後に回収した。MS[C1920O+H]の計算値:392.17
、実測値392.40。MS[C1920O+H]の計算値:392.17
、実測値392.35。
(実施例161)
-シクロブチル-N-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)-5-
(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN-シクロブチル-N
-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000236
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
120mg)、シクロブタンアミン(49mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルア
ミン(0.120mL)を、続いて第2のステップにおいて1H-ピロロ[2,3-b]
ピリジン-5-アミン(92mg)および酢酸(3mL)を使用し、実施例99と同様の
手順。N-シクロブチル-N-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)
-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン50mgおよびN-シク
ロブチル-N-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)-5-(トリフル
オロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびその位置異性体の混合物(60:40
比)60mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C1615+H]の計算
値:349.14、実測値349.35。MS[C1615+H]の計算値
:349.14、実測値349.25。
(実施例162)
以下に記載した三置換ピリミジンの調製に関する一般合成スキーム:
Figure 2022017384000237
(実施例163)
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(2,3-ジヒドロ
-1H-インデン-2-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジア
ミンおよびN-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(2,3
-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2
,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000238
2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(85mg、0.392m
mol、1.0当量)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg、
0.392mmol、1.0当量)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.0
68mL、0.392mmol、1.0当量)のアセトニトリル(3mL)中溶液を、1
00℃で10分間マイクロ波照射した。次いで2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-
アミン(52mg、0.392mmol、1.0当量)およびN,N-ジイソプロピルエ
チルアミン(0.068mL、0.392mmol、1.0当量)を加えた。この混合物
を100℃で10分間マイクロ波照射し、次いで真空で濃縮した。粗生成物のフラクショ
ンを逆相HPLCにより精製して、N-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-
イル)-N-(2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル)-5-(トリフルオロ
メチル)ピリミジン-2,4-ジアミン5.3mgおよびN-(ベンゾ[d][1,3
]ジオキソール-5-イル)-N-(2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル)
-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン3.5mgを得た。MS[
2117+H]の計算値:415.14、実測値415.34。MS
[C2117+H]の計算値:415.14、実測値415.34。
(実施例164)
N-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-2-(ピロリジン-1-イル
)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミンおよびN-(ベンゾ[d][1
,3]ジオキソール-5-イル)-4-(ピロリジン-1-イル)-5-(トリフルオロ
メチル)ピリミジン-2-アミンの調製
Figure 2022017384000239
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg)およびN,
N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて
ピロリジン(28mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)
を使用し、実施例163と同様の手順。N-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5
-イル)-2-(ピロリジン-1-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4
-アミン2mgおよびN-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-4-(
ピロリジン-1-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-アミン1.4m
gを逆相HPLC後に回収した。MS[C1615+H]の計算値:3
53.12、実測値353.33。MS[C1615+H]の計算値:
353.12、実測値353.34。
(実施例165)
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-5-(トリフルオロメチル
)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-
5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000240
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg)およびN,
N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて
アンモニア(MeOH中7M溶液0.224mL)およびN,N-ジイソプロピルエチル
アミン(0.068mL)を使用し、実施例163と同様の手順。N-(ベンゾ[d]
[1,3]ジオキソール-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4
-ジアミン15mgおよびN-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-
5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン15mgを逆相HPLC後に
回収した。MS[C12+H]の計算値:299.08、実測値29
9.28。MS[C12+H]の計算値:299.08、実測値29
9.28。
(実施例166)
2-(アゼチジン-1-イル)-N-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル
)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミンおよび4-(アゼチジン-1-
イル)-N-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-5-(トリフルオロ
メチル)ピリミジン-2-アミンの調製
Figure 2022017384000241
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg)およびN,
N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて
アゼチジン、HCl塩(37mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.1
37mL)を使用し、実施例163と同様の手順。2-(アゼチジン-1-イル)-N-
(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリ
ミジン-4-アミン2.5mgおよび4-(アゼチジン-1-イル)-N-(ベンゾ[d
][1,3]ジオキソール-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-
アミン1.4mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C1513+H]
の計算値:339.11、実測値339.29。MS[C1513+H
の計算値:339.11、実測値339.29。
(実施例167)
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(シクロプロピルメ
チル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN-(ベン
ゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-(シクロプロピルメチル)-5-
(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製。
Figure 2022017384000242
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(54mg)およびN,
N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のステップにおいて
シクロプロピルメタンアミン(56mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(
0.068mL)を使用し、実施例163と同様の手順。N-(ベンゾ[d][1,3
]ジオキソール-5-イル)-N-(シクロプロピルメチル)-5-(トリフルオロメ
チル)ピリミジン-2,4-ジアミン10mgおよびN-(ベンゾ[d][1,3]ジ
オキソール-5-イル)-N-(シクロプロピルメチル)-5-(トリフルオロメチル
)ピリミジン-2,4-ジアミン10mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C16
15+H]の計算値:353.12、実測値353.32。MS[C16
15+H]の計算値:353.12、実測値353.32。
(実施例168)
-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-シクロブチル-5-
(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン、N-(ベンゾ[d][1,3
]ジオキソール-5-イル)-N-シクロブチル-5-(トリフルオロメチル)ピリミ
ジン-2,4-ジアミンおよびN,N-ジシクロブチル-5-(トリフルオロメチル
)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000243
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
85mg)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(48mg、0.89当
量)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.068mL)を、続いて第2のス
テップにおいてシクロブタンアミン(56mg、2当量)およびN,N-ジイソプロピル
エチルアミン(0.068mL)を使用し、実施例163と同様の手順。N-(ベンゾ
[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N-シクロブチル-5-(トリフルオロ
メチル)ピリミジン-2,4-ジアミン13mg、N-(ベンゾ[d][1,3]ジオ
キソール-5-イル)-N-シクロブチル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-
2,4-ジアミン18mgおよびN,N-ジシクロブチル-5-(トリフルオロメチ
ル)ピリミジン-2,4-ジアミン4.5mgを逆相HPLC後に回収した。LRMS[
1615+H]の計算値:353.12、実測値353.32。MS
[C1615+H]の計算値:353.12、実測値353.32。M
S[C1317+H]の計算値:287.15、実測値287.32。
(実施例169)
,N-ジシクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジア
ミンの調製
Figure 2022017384000244
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
60mg)、シクロプロパンアミン(16mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルア
ミン(0.035mL)を、続いて第2のステップにおいてシクロプロパンアミン(16
mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.035mL)を使用し、実施例
163と同様の手順。N,N-ジシクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリ
ミジン-2,4-ジアミン29mgを逆相HPLC後に回収した。MS[C1113
+H]の計算値:259.12、実測値259.24。
(実施例170)
2-((5-ブロモ-2-((5-メトキシ-2-メチルフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000245
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(53mg、0.232mmol、1.0当
量)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(35mg、0.232mmol、1.
0当量)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.048mL、0.276mm
ol、1.2当量)の1-ブタノール(3mL)中溶液を0℃で20分間、次いで21℃
で16時間撹拌した。混合物を真空で濃縮し、次いで5-メトキシ-2-メチルアニリン
(32mg、0.232mmol、1.0当量)、塩化亜鉛(エーテル中1M溶液、0.
232mL、0.232mmol、1当量)および酢酸(2mL)を加えた。この混合物
を120℃で10分間マイクロ波照射し、次いで真空で濃縮した。粗生成物を逆相HPL
Cにより精製して、2-((5-ブロモ-2-((5-メトキシ-2-メチルフェニル)
アミノ)ピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミド8mgを得た。MS
[C2019BrN+H]の計算値:443.07、実測値443.35。
(実施例171)
2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドおよびN-(5-ブロモ-2-((3,
4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン-4-イル)-2-ヒドロキシ-N
-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000246
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(1.809g、7.94mmol、1.0
当量)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(1.2g、7.94mmol、1.
0当量)、銅金属粉体(50mg、0.794mmol、0.1当量)およびN,N-ジ
イソプロピルエチルアミン(1.383mL、7.94mmol、1.0当量)のDMF
(10mL)中溶液を、50℃に2時間加熱した。EtOAc(100mL)を加え、ブ
ライン(4×50mL)、次いで水(3×50mL)で洗浄し、有機物を硫酸ナトリウム
で乾燥し、真空で濃縮して、2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オ
キシ)-N-メチルベンズアミドを得た。中間体生成物の収率を80%と仮定して、次の
ステップにおける試薬の量を計算した。次に、1,2-DCE(15mL)およびt-ブ
タノール(15mL)中の粗製の中間体に、塩化亜鉛(1.05g、7.71mmol、
1.2当量)を加えた。この混合物を超音波処理して、試薬の溶解性を高めた。3,4,
5-トリメトキシアニリン(1.177g、6.42mmol、1.0当量)およびトリ
エチルアミン(1.074mL、7.71mmol、1.2当量)を加え、混合物を45
℃に7時間加熱し、次いで真空で濃縮した。粗生成物にDCM(300mL)を加え、こ
れを水(1×50mL)およびブライン(6×30mL)で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾
燥し、真空で濃縮した。粗生成物をC18逆相フラッシュクロマトグラフィー(水/Me
CN濃度勾配、40分かけて22%~44%MeCN)により精製して、2-((5-ブ
ロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン-4-イル)オ
キシ)-N-メチルベンズアミド560mgおよびN-(5-ブロモ-2-((3,4,
5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン-4-イル)-2-ヒドロキシ-N-メ
チルベンズアミド64mgを得た。MS[C2121BrN+H]の計算値:
489.08、実測値489.37。
(実施例172)
5-ブロモ-N-(2-フルオロ-3-(トリフルオロメチル)フェニル)-4-メトキ
シピリミジン-2-アミンの調製
Figure 2022017384000247
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(105mg、0.461mmol、1.0
当量)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(70mg、0.461mmol、1
.0当量)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.096mL、0.553m
mol、1.2当量)の1-ブタノール(3mL)中溶液を、0℃で20分間、次いで2
1℃で16時間撹拌した。混合物を真空で濃縮し、次いで2-フルオロ-3-(トリフル
オロメチル)アニリン(82mg、0.461mmol、1.0当量)、塩化亜鉛(エー
テル中1M溶液、0.461mL、0.461mmol、1当量)および酢酸(2mL)
を加えた。この混合物を120℃で10分間マイクロ波照射し、次いで真空で濃縮した。
粗生成物を逆相HPLC(水/MeOH溶出液)により精製して、5-ブロモ-N-(2
-フルオロ-3-(トリフルオロメチル)フェニル)-4-メトキシピリミジン-2-ア
ミン6mgを得た。MS[C12BrFO+H]の計算値:365.99、
実測値365.25。
(実施例173)
5-ブロモ-4-ブトキシ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2
-アミンの調製
Figure 2022017384000248
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(170mg、0.748mmol、1.0
当量)、2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(113mg、0.748mmol、
1.0当量)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.130mL、0.748
mmol、1.0当量)の1-ブタノール(6mL)中溶液を、21℃で22時間撹拌し
た。次いで3,4,5-トリメトキシアニリン(137mg、0.748mmol、1.
0当量)、塩化亜鉛(エーテル中1M溶液、0.748mL、0.748mmol、1当
量)を加えた。この混合物を100℃で10分間マイクロ波照射し、次いで真空で濃縮し
た。粗製の白色固体を濾過し、MeCN(20mL)で洗浄して、2-((5-ブロモ-
2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン-4-イル)オキシ)
-N-メチルベンズアミド80mgを得た。MS[C1722BrN+H]
計算値:412.09、実測値412.32。
(実施例174)
5-ブロモ-N4-シクロプロピル-N2-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5
-イル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000249
第1のステップにおいて5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(200mg)、シ
クロプロパンアミン(50mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.15
3mL)を、続いて第2のステップにおいて1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-
アミン(117mg)および酢酸(4mL)を使用し、実施例99と同様の手順。生成物
54mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に単離した。MS[C
1413BrN+H]の計算値:345.05、実測値344.80。
(実施例175)
6-((4-シクロブトキシ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミ
ノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000250
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、シクロブタノール(33mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミ
ン(0.080mL)を、続いて第2のステップにおいて6-アミノ-3,4-ジヒドロ
キノリン-2(1H)-オン(75mg)および酢酸(3mL)を使用し、実施例99と
同様の手順。6-((4-シクロブトキシ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2
-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン14mgを自動逆相ク
ロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に単離した。MS[C1817
+H]の計算値:379.14、実測値379.10。
(実施例176)
N-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)-1H-ピロロ
[2,3-b]ピリジン-5-アミンおよびN-(2-クロロ-5-(トリフルオロメチ
ル)ピリミジン-4-イル)-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-アミンの調製
Figure 2022017384000251
ジクロロメタン(5ml)およびt-ブタノール(5.00ml)中の2,4-ジクロ
ロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(0.4g、1.844mmol)に、窒素
下-10℃で塩化亜鉛(II)(0.502g、3.69mmol)を加えた。-10~
0℃で1時間維持した。次いで1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-アミン(0.
245g、1.844mmol)およびトリエチルアミン(0.283ml、2.028
mmol)を加えた。冷却浴を21℃に加温した。濃縮してDCMを除去し、次いで固体
を濾過し、水で洗浄した。異性体の70:30混合物(主にはN-(4-クロロ-5-(
トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)-1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-
5-アミン)620mgを単離した。MS[C12ClF+H]の計算値:
314.04、実測値313.80。
(実施例177)
N4-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N2-(1H-ピロロ[2
,3-b]ピリジン-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジ
アミンの調製
Figure 2022017384000252
N-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)-1H-ピロ
ロ[2,3-b]ピリジン-5-アミン(0.100g、0.319mmol、位置異性
体30%を含む)、ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(0.044g、
0.319mmol)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.
111ml、0.638mmol)をDMF(3mL)中で混合した。混合物を130℃
で30分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物5mgを自動逆相クロマトグラフ
ィー(水-MeCN溶出液)後に単離した。MS[C1913+H]
計算値:415.12、実測値415.20。
(実施例178)
6-((4-((2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)
アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒ
ドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-((2-((2,2-ジフルオロベンゾ[d
][1,3]ジオキソール-5-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジ
ン-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000253
第1のステップにおいて2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(
100mg)、2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-アミン(
80mg)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.08mL)を、続いて第2
のステップにおいて6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(60m
g)および酢酸(2mL)を使用し、実施例99と同様の手順。6-((4-((2,2
-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)アミノ)-5-(トリフ
ルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H
)-オン24mgおよび6-((2-((2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジ
オキソール-5-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)
アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン94mgを、自動逆相クロマト
グラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収した。MS[C2114+H
の計算値:480.11、実測値480.35。
(実施例179)
N4-(2-メトキシエチル)-N2-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イ
ル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000254
N-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)-1H-ピロ
ロ[2,3-b]ピリジン-5-アミン(0.100g、0.319mmol、位置異性
体30%を含む)、2-メトキシエタン-1-アミン(24mg)およびN,N-ジイソ
プロピルエチルアミン(0.111mL)をDMF(2mL)中で混合した。混合物を1
00℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。N4-(2-メトキシエチル)-
N2-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)-5-(トリフルオロメチル
)ピリミジン-2,4-ジアミン13mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN
溶出液)後に回収した。MS[C1515O+H]の計算値:353.14
、実測値353.25。
(実施例180)
N4-(2-メトキシエチル)-N2-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イ
ル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000255
2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(0.100g、0.46
1mmol)、2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-オール(0.065g、0.4
84mmol)および水素化ナトリウム(0.028g、0.691mmol)をアセト
ニトリル(2ml)中で混合した。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射した。濃
縮し、次いで6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.075g
、0.461mmol)および酢酸(0.527ml、9.22mmol)を加えた。混
合物を120℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。6-((4-((2,3
-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル)オキシ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミ
ジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン15mgおよ
び6-((2-((2,3-ジヒドロ-1H-インデン-2-イル)オキシ)-5-(ト
リフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(
1H)-オン9mgを、自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収し
た。MS[C2319+H]の計算値:441.16、実測値441.
15。
(実施例181)
N4-フェニル-N2-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)-5-(ト
リフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN4-(1H-ピロロ[2,3
-b]ピリジン-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミ
ンの調製
Figure 2022017384000256
N-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)-1H-ピロ
ロ[2,3-b]ピリジン-5-アミン(0.100g、0.319mmol、位置異性
体30%を含む)、アニリン(0.029ml、0.319mmol)およびN-エチル
-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.111ml、0.638mmol)をア
セトニトリル(2ml)中で混合した。混合物を130℃で20分間マイクロ波照射し、
次いで濃縮した。少量の未反応出発物異性体を低減するため、アンモニア(455mL、
MeOH中7M)を加え、混合物を120℃で20分間マイクロ波照射した。N4-フェ
ニル-N2-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)-5-(トリフルオロ
メチル)ピリミジン-2,4-ジアミン19mgおよびN4-(1H-ピロロ[2,3-
b]ピリジン-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン
15mgを、自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収した。MS[
1813+H]の計算値:371.13、実測値371.10。MS[C
12+H]の計算値:295.09、実測値294.85。
(実施例182)
N4-メチル-N2-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)-5-(トリ
フルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN2-メチル-N4-(1H-ピ
ロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2
,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000257
N-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)-1H-ピロ
ロ[2,3-b]ピリジン-5-アミン(0.100g、0.319mmol、位置異性
体30%を含む)およびメタンアミン(0.119ml、0.956mmol)をDMF
(2mL)中で混合した。混合物を100℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮し
た。N4-メチル-N2-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)-5-(
トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン20mgおよびN2-メチル-N4
-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-2,4-ジアミン11mgを、自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶
出液)後に回収した。MS[C1311+H]の計算値:309.11、実
測値308.95。
(実施例183)
6-((4-(2-メチルアジリジン-1-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミ
ジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-(
(4-((2-クロロプロピル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2
-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンならびに6-((4-
((1-クロロプロパン-2-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン
-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000258
2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(0.100g、0.46
1mmol)、2-メチルアジリジン(0.033ml、0.461mmol)およびN
-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.060g、0.461mmol
)をアセトニトリル(2ml)中で混合した。混合物を70℃で10分間マイクロ波照射
した。濃縮し、6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.071
g、0.438mmol)および酢酸(2mL)を加えた。混合物を120℃で10分間
マイクロ波照射し、次いで濃縮した。6-((4-(2-メチルアジリジン-1-イル)
-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノ
リン-2(1H)-オン16mg、6-((4-((2-クロロプロピル)アミノ)-5
-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン
-2(1H)-オン10mgおよび6-((4-((1-クロロプロパン-2-イル)ア
ミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒド
ロキノリン-2(1H)-オン12mgを、自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN
溶出液)後に回収した。MS[C1716O+H]の計算値:364.14
、実測値364.05。MS[C1717ClFO+H]の計算値:400.
12、実測値400.10。
(実施例184)
6-((4-(メチル(フェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-
2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-((2-
(メチル(フェニル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)ア
ミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000259
2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(0.100g、0.46
1mmol)、N-メチルアニリン(0.050ml、0.461mmol)およびN-
エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.080ml、0.461mmol
)をアセトニトリル(2ml)中で混合した。混合物を90℃で10分間マイクロ波照射
し、次いで濃縮した。6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.
075g、0.461mmol)および酢酸(2mL)を加えた。混合物を120℃で1
0分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。6-((4-(メチル(フェニル)アミノ)
-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノ
リン-2(1H)-オン48mgおよび6-((2-(メチル(フェニル)アミノ)-5
-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン
-2(1H)-オン30mgを、自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後
に回収した。MS[C2118O+H]の計算値:414.16、実測値4
14.35。
(実施例185)
6-((4-((1H-インダゾール-5-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル
)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調
Figure 2022017384000260
2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(0.100g、0.46
1mmol)、1H-インダゾール-5-アミン(0.061g、0.461mmol)
およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.080ml、0.46
1mmol)をアセトニトリル(2ml)中で混合した。混合物を90℃で10分間マイ
クロ波照射し、次いで濃縮した。6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-
オン(0.075g、0.461mmol)および酢酸(2mL)を加えた。混合物を1
20℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。6-((4-((1H-インダゾ
ール-5-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ
)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン30mgを自動逆相クロマトグラフィ
ー(水-エタノール溶出液)後に回収した。MS[C2116O+H]の計
算値:440.15、実測値440.20。
(実施例186)
5-ブロモ-N4-シクロプロピル-N2-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリ
ミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000261
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.125g、0.549mmol)およ
びシクロプロパンアミン(0.038ml、0.549mmol)をアセトニトリル(2
ml)中で5℃にて混合した。2分後、N-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-ア
ミン(0.096ml、0.549mmol)を加え、21℃に加温した。混合物を70
℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。3,4,5-トリメトキシアニリン(
0.100g、0.549mmol)および酢酸(2ml)を加えた。混合物を100℃
で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。アセトンを加え、固体を濾過して、5-
ブロモ-N4-シクロプロピル-N2-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジ
ン-2,4-ジアミン120mgを得た。MS[C1619BrN+H]の計
算値:395.07、実測値394.90。
(実施例187)
5-ブロモ-N4-シクロプロピル-N2-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリ
ミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000262
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.090g、0.379mmol)および3,4,5-トリメトキシアニリン(0
.069g、0.379mmol)を酢酸(2ml)中で混合した。混合物を100℃で
10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。アセトンを加え、白色固体を濾過して、5
-ブロモ-N4-シクロプロピル-N2-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミ
ジン-2,4-ジアミン80mgを得た。MS[C1719+H]の計
算値:385.15、実測値385.40。
(実施例188)
N2-(1H-ベンゾ[d][1,2,3]トリアゾール-6-イル)-N4-シクロプ
ロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000263
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.090g、0.379mmol)および1H-ベンゾ[d][1,2,3]トリ
アゾール-5-アミン(0.051g、0.379mmol)を酢酸(2ml)中で混合
した。混合物を110℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。アセトンを加え
、白色固体を濾過して、N2-(1H-ベンゾ[d][1,2,3]トリアゾール-6-
イル)-N4-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジア
ミン97mgを得た。MS[C1412+H]の計算値:336.12、実
測値336.20。
(実施例189)
4-(シクロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-オールの
調製
Figure 2022017384000264
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.099g、0.417mmol)および6-アミノオキサゾロ[4,5-b]ピ
リジン-2(3H)-オン(0.063g、0.417mmol)を酢酸(2ml)中で
混合した。混合物を120℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。所望の生成
物は生成しなかった。4-(シクロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリ
ミジン-2-オールを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収した
。MS[CO+H]の計算値:220.07、実測値219.85。
(実施例190)
N4-シクロプロピル-N2-(3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b][1,4]ジオ
キセピン-7-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調
Figure 2022017384000265
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.080g、0.337mmol)および3,4-ジヒドロ-2H-ベンゾ[b]
[1,4]ジオキセピン-7-アミン(0.056g、0.337mmol)を酢酸(2
ml)中で混合した。混合物を110℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。
生成物を自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収した。MS[C
17+H]の計算値:367.14、実測値367.30。
(実施例191)
6-アミノオキサゾロ[4,5-b]ピリジン-2(3H)-オンの調製
Figure 2022017384000266
オキサゾロ[4,5-b]ピリジン-2(3H)-オン(1.0g、7.35mmol
)およびテトラフルオロホウ酸ニトロニウム(1.464g、11.02mmol)をス
ルホラン(4ml)中で混合した。100℃に14時間加熱した。粗製の混合物を50:
40:10DCM/EtOAc/MeOH溶媒混合物と共にショートシリカカラムに通し
てフラッシングした。スルホランがまだ残留したまま、生成物を濃縮した。次いで亜鉛(
1.083g、16.56mmol)および塩化アンモニウム(1.184g、16.5
6mmol)を加えた。EtOAcおよびMeOH(1:1)と共にセライトに通して濾
過し、次いで濃縮した。生成物を自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後
に回収した。スルホランが共溶出し、それゆえ収率の計算は出来なかった。物質をそのま
ま使用した。低いイオン化のため、生成物のマスはLCMSにより観測されなかった。
(実施例192)
6-((5-ブロモ-2-((2,3-ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン-6
-イル)アミノ)ピリミジン-4-イル)アミノ)オキサゾロ[4,5-b]ピリジン-
2(3H)-オンの調製
Figure 2022017384000267
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.040g、0.176mmol)、6
-アミノオキサゾロ[4,5-b]ピリジン-2(3H)-オン(0.027g、0.1
76mmol)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.031
ml、0.176mmol)をスルホラン(2ml)中で混合した。混合物を100℃で
10分間マイクロ波照射した。次いで2,3-ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシ
ン-6-アミン(0.022ml、0.176mmol)および酢酸(1mL)を加えた
。混合物を120℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した(スルホランが残留)
。生成物12mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収した。
MS[C1813BrN+H]の計算値:457.03、実測値456.90
(実施例193)
6-((4-(オキセタン-3-イルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン
-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000268
2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(0.090g、0.41
5mmol)、オキセタン-3-アミン(0.030g、0.415mmol)およびN
-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.072ml、0.415mmo
l)をアセトニトリル(1ml)中で混合した。混合物を70℃で10分間マイクロ波照
射し、次いで濃縮した。6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0
.067g、0.415mmol)および酢酸(2mL)を加えた。混合物を100℃で
10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物14mgを自動逆相クロマトグラフ
ィー(水-MeCN溶出液)後に回収した。MS[C1716+H]
計算値:380.14、実測値379.90。
(実施例194)
N4-(オキセタン-3-イル)-N2-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-
イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000269
N-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)-1H-ピロ
ロ[2,3-b]ピリジン-5-アミン(0.100g、0.319mmol、位置異性
体30%を含む)、オキセタン-3-アミン(0.016g、0.223mmol)およ
びN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.039ml、0.223m
mol)をDMF(1ml)中で混合した。混合物を100℃で10分間マイクロ波照射
し、次いで濃縮した。生成物13mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出
液)後に回収した。MS[C1513O+H]の計算値:351.12、実
測値350.95。
(実施例195)
N4-シクロプロピル-N2-(1H-インダゾール-5-イル)-5-(トリフルオロ
メチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000270
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.080g、0.337mmol)および1H-インダゾール-5-アミン(0.
045g、0.337mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を110℃で1
0分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。アセトンを加え、固体を濾過して、生成物7
0mgを得た。MS[C1513+H]の計算値:335.13、実測値3
35.15。
(実施例196)
N4-シクロプロピル-N2-(ピリジン-3-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000271
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.080g、0.337mmol)およびピリジン-3-アミン(0.032g、
0.337mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を110℃で10分間マイ
クロ波照射し、次いで濃縮した。生成物27mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-M
eCN溶出液)後に回収した。MS[C1312+H]の計算値:296.
11、実測値295.95。
(実施例197)
6-((4-((2-ヒドロキシエチル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミ
ジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000272
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.070g、0.204mmol)、
2-アミノエタン-1-オール(0.012g、0.204mmol)およびN-エチル
-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.036ml、0.204mmol)をア
セトニトリル(1ml)中で混合した。混合物を100℃で10分間マイクロ波照射し、
次いで濃縮した。アセトンを加え、固体を濾過して、生成物53mgを得た。MS[C
16+H]の計算値:368.14、実測値368.10。
(実施例198)
6-((4-(アゼチジン-3-イルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン
-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-((4
-(3-((2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6-イル)
アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)アゼチジン-1
-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒ
ドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000273
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.070g、0.204mmol)、
アゼチジン-3-アミン・2HCl(0.030g、0.204mmol)およびN-エ
チル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.107ml、0.613mmol)
をDMF(1ml)中で混合した。混合物を90℃で30分間マイクロ波照射し、次いで
濃縮した。水およびMeCNを加え、固体(副生成物)を濾過し、メタノールおよびアセ
トンで洗浄して、6-((4-(3-((2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラ
ヒドロキノリン-6-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イ
ル)アミノ)アゼチジン-1-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イ
ル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン41mgを得た。6-((
4-(アゼチジン-3-イルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イ
ル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン30mgを自動逆相クロマ
トグラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収した。MS[C1717O+H
の計算値:379.15、実測値379.05。MS[C312610
+H]の計算値:685.22、実測値685.40。
(実施例199)
6-((4-(2-エチルヒドラジニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2
-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000274
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.070g、0.204mmol)、
エチルヒドラジンシュウ酸(0.031g、0.204mmol)およびN-エチル-N
-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.107ml、0.613mmol)をアセト
ニトリル(1ml)中で混合した。混合物を100℃で10分間マイクロ波照射し、次い
で濃縮した。アセトンを加え、固体を濾過して、生成物61mgを得た。MS[C16
17O+H]の計算値:367.15、実測値367.30。
(実施例200)
6-((4-(2-エチルヒドラジニル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2
-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000275
2-クロロ-N-シクロプロピルピリミジン-4-アミン(0.060g、0.354
mmol)および6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.05
7g、0.354mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を110℃で10分
間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物85mgを自動逆相クロマトグラフィー(
水-MeCN溶出液)後に回収した。MS[C1617O+H]の計算値:29
6.15、実測値296.00。
(実施例201)
2-((2-((1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)アミノ)-5-(ト
リフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000276
2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(0.085g、0.39
2mmol)、2-アミノ-N-メチルベンズアミド(0.059g、0.392mmo
l)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.068ml、0.
392mmol)をアセトニトリル(1ml)中で混合した。混合物を90℃で10分間
マイクロ波照射し、次いで濃縮した。1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-アミン
(0.052g、0.392mmol)および酢酸(0.024g、0.392mmol
)を加えた。混合物を110℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。メタノー
ルを加え、固体を濾過し、次いでTHFで洗浄した。生成物34mgを単離した。MS[
2016O+H]の計算値:428.15、実測値428.15。
(実施例202)
6-((4-(シクロプロピル(メチル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミ
ジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000277
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.075g、0.219mmol)、
N-メチルシクロプロパンアミン・HCl(0.024g、0.219mmol)および
N-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.076ml、0.438mm
ol)をアセトニトリル(1ml)中で混合した。混合物を90℃で10分間マイクロ波
照射し、次いで濃縮した。EtOAcを加え、固体を濾過した。MS[C1818
O+H]の計算値:378.16、実測値378.30。
(実施例203)
N4-シクロプロピル-N2-(ピリミジン-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000278
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.070g、0.295mmol)およびピリミジン-5-アミン(0.028g
、0.295mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を120℃で10分間マ
イクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物3mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-M
eCN溶出液)後に回収した。MS[C1211+H]の計算値:297.
11、実測値296.90。
(実施例204)
N4-シクロプロピル-N2-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)ピリ
ミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000279
2-クロロ-N-シクロプロピルピリミジン-4-アミン(0.070g、0.413
mmol)および1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-アミン(0.055g、0
.413mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を120℃で10分間マイク
ロ波照射し、次いで濃縮した。生成物18mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-Me
CN溶出液)後に回収した。MS[C1414+H]の計算値:267.14、
実測値266.80。
(実施例205)
N4-シクロプロピル-N2-(ピラジン-2-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000280
フラスコをフレーム乾燥し、また加熱前、試薬および溶媒に窒素を吹き込んだ。2-ク
ロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミン(0.
075g、0.316mmol)、(9,9-ジメチル-9H-キサンテン-4,5-ジ
イル)ビス(ジフェニルホスファン)(0.018g、0.032mmol)、ジアセト
キシパラジウム(3.54mg、0.016mmol)、ピラジン-2-アミン(0.0
30g、0.316mmol)および炭酸セシウム(0.206g、0.631mmol
)を1,4-ジオキサン(1ml)中で混合した。混合物を160℃で40分間マイクロ
波照射した。メタノールと共にセライトに通して濾過した。濃縮した。2:1水/MeC
Nを加え、固体を濾過した。MeCNを固体に再度加え、得られた固体を濾過して、生成
物33mgを得た。MS[C1211+H]の計算値:297.11、実測
値296.95。
(実施例206)
N4-シクロプロピル-N2-(1H-インドール-5-イル)-5-(トリフルオロメ
チル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000281
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.070g、0.295mmol)、1H-インドール-5-アミン(0.039
g、0.295mmol)および酢酸(0.017ml、0.295mmol)を酢酸(
1ml)中で混合した。混合物を110℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮して
、生成物72mgを得た。MS[C1614+H]の計算値:334.13
、実測値334.15。
(実施例207)
N2-(2-アミノピリジン-3-イル)-N4-シクロプロピル-5-(トリフルオロ
メチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000282
フラスコをフレーム乾燥し、また加熱前、試薬および溶媒に窒素を吹き込んだ。2-ク
ロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミン(0.
075g、0.316mmol)、ピリジン-2,3-ジアミン(0.034g、0.3
16mmol)、(9,9-ジメチル-9H-キサンテン-4,5-ジイル)ビス(ジフ
ェニルホスファン)(0.018g、0.032mmol)、炭酸セシウム(0.206
g、0.631mmol)およびジアセトキシパラジウム(3.54mg、0.016m
mol)を1,4-ジオキサン(1ml)中で混合した。混合物を140℃で20分間マ
イクロ波照射した。MeOHと共にセライトに通して濾過し、次いで濃縮した。MeCN
を粗製物に加え、固体を濾過した。生成物19mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-
MeCN溶出液)後に回収した。MS[C1313+H]の計算値:311
.13、実測値310.80。
(実施例208)
N2-(ベンゾ[d]オキサゾール-6-イル)-N4-シクロプロピル-5-(トリフ
ルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよび6-((4-(シクロプロピルアミ
ノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-2,3-ジヒドロ
ベンゾ[d]オキサゾール-2-オールの調製
Figure 2022017384000283
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.065g、0.274mmol)およびベンゾ[d]オキサゾール-6-アミン
(0.037g、0.274mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を130
℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。アセトンを加え、固体を濾過した。N
2-(ベンゾ[d]オキサゾール-6-イル)-N4-シクロプロピル-5-(トリフル
オロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン4mgおよび6-((4-(シクロプロピル
アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-2,3-ジヒ
ドロベンゾ[d]オキサゾール-2-オール14mgを、濾液の自動逆相クロマトグラフ
ィー(水-MeCN溶出液)後に回収した。MS[C1512O+H]の計
算値:336.11、実測値335.95。MS[C1514+H]
計算値:354.12、実測値353.90。
(実施例209)
6-((4-アミノ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3
,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000284
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.070g、0.204mmol)、
2,2-ジフルオロシクロプロパン-1-アミン・HCl(0.026g、0.204m
mol)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.036ml、
0.204mmol)をアセトニトリル(1ml)中で混合した。混合物を100℃で1
0分間マイクロ波照射した。10%Pd-C(約20mg)を加え、混合物を140℃で
20分間マイクロ波照射した。MeOHを加え、固体を濾過した。副生成物12mgを自
動逆相クロマトグラフィー(水-MeOH溶出液)後に回収した。MS[C1412
O+H]の計算値:324.11、実測値323.80。
(実施例210)
N2-(4-アミノピリジン-3-イル)-N4-シクロプロピル-5-(トリフルオロ
メチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000285
フラスコをフレーム乾燥した。加熱前、試薬および溶媒に窒素を吹き込んだ。2-クロ
ロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミン(0.0
70g、0.295mmol)、ピリジン-3,4-ジアミン(0.032g、0.29
5mmol)、(9,9-ジメチル-9H-キサンテン-4,5-ジイル)ビス(ジフェ
ニルホスファン)(0.017g、0.029mmol)およびジアセトキシパラジウム
(3.31mg、0.015mmol)を1,4-ジオキサン(1ml)中で混合した。
混合物を140℃で20分間マイクロ波照射した。MeOHと共にセライトに通して濾過
し、次いで濃縮した。生成物16mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出
液)後に回収した。MS[C1313+H]の計算値:311.13、実測
値310.90。
(実施例211)
N2-(1H-ベンゾ[d]イミダゾール-6-イル)-N4-シクロプロピル-5-(
トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000286
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.065g、0.274mmol)および1H-ベンゾ[d]イミダゾール-6-
アミン(0.036g、0.274mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を
130℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物41mgを自動逆相クロ
マトグラフィー(水-MeOH溶出液)後に回収した。MS[C1513+H
の計算値:335.13、実測値335.00。
(実施例212)
6-((4-(ビス(2-ヒドロキシエチル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6
-((4-(2-((2-ヒドロキシエチル)アミノ)エトキシ)-5-(トリフルオロ
メチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オ
ンの調製
Figure 2022017384000287
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.070g、0.204mmol)、
2,2’-アザンジイルビス(エタン-1-オール)(0.020ml、0.204mm
ol)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.036ml、0
.204mmol)をアセトニトリル(1ml)中で混合した。混合物を110℃で10
分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。6-((4-(ビス(2-ヒドロキシエチル)
アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒ
ドロキノリン-2(1H)-オン18mgおよび6-((4-(2-((2-ヒドロキシ
エチル)アミノ)エトキシ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミ
ノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン20mgを、自動逆相クロマトグラ
フィー(水-MeOH溶出液)後に回収した。MS[C1820+H]
の計算値:412.16、実測値412.10。
(実施例213)
N2-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-N4-シクロプロピル-5
-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000288
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.060g、0.253mmol)およびベンゾ[d][1,3]ジオキソール-
5-アミン(0.035g、0.253mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合
物を110℃で10分間マイクロ波照射した。生成物56mgを自動逆相クロマトグラフ
ィー(水-MeCN溶出液)後に回収した。MS[C1513+H]
計算値:339.11、実測値339.00。
(実施例214)
N4-シクロプロピル-N2-(イソオキサゾール-3-イル)-5-(トリフルオロメ
チル)ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN-シクロプロピル-2-(3-イミノイソ
オキサゾール-2(3H)-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ンの調製
Figure 2022017384000289
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.070g、0.295mmol)およびイソオキサゾール-3-アミン(0.0
25g、0.295mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を120℃で10
分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。N4-シクロプロピル-N2-(イソオキサゾ
ール-3-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン3mgお
よびN-シクロプロピル-2-(3-イミノイソオキサゾール-2(3H)-イル)-5
-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミン3mgを、自動逆相クロマトグラフィ
ー(水-MeCN溶出液)後に回収した。MS[C1110O+H]の計算
値:286.09、実測値285.85。
(実施例215)
6-((4-(3,3-ジフルオロアゼチジン-1-イル)-5-(トリフルオロメチル
)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調
Figure 2022017384000290
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.070g、0.204mmol)、
3,3-ジフルオロアゼチジン、HCl(0.026g、0.204mmol)およびN
-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.071ml、0.409mmo
l)をアセトニトリル(1ml)中で混合した。混合物を100℃で10分間マイクロ波
照射し、次いで濃縮した。アセトンを加え、固体を濾過して、生成物62mgを得た。M
S[C1714O+H]の計算値:400.12、実測値400.20。
(実施例216)
6-((4-((シクロプロピルメチル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミ
ジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000291
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.070g、0.204mmol)、
シクロプロピルメタンアミン(0.015g、0.204mmol)およびN-エチル-
N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.036ml、0.204mmol)をアセ
トニトリル(1ml)中で混合した。混合物を110℃で10分間マイクロ波照射し、次
いで濃縮した。MeCNを加え、固体を濾過した。その上アセトンで濯いで、生成物57
mgを得た。MS[C1818O+H]の計算値:378.16、実測値3
78.30。
(実施例217)
N2-(1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)-5-(トリフルオロメチル
)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000292
2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(0.060g、0.27
7mmol)、2,2-ジフルオロシクロプロパン-1-アミン・HCl(0.036g
、0.277mmol)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0
.096ml、0.553mmol)をアセトニトリル(1ml)中で混合した。混合物
を70℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。1H-ピロロ[2,3-b]ピ
リジン-5-アミン(0.037g、0.277mmol)および酢酸(0.016ml
、0.277mmol)を加えた。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次い
で濃縮した。副生成物9mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に
回収した。MS[C12+H]の計算値:295.09、実測値294.
90。
(実施例218)
メチル(2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6-イル)アミ
ノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)グリシネートの調製
Figure 2022017384000293
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.070g、0.204mmol)、
メチルグリシネート・HCl(0.026g、0.204mmol)およびN-エチル-
N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.071ml、0.409mmol)をDM
F(1ml)中で混合した。混合物を130℃で30分間マイクロ波照射し、次いで濃縮
した。MeCNを加え、濾過して、生成物38mgを固体として得た。MS[C17
+H]の計算値:396.13、実測値396.05。
(実施例219)
6-((4-(エトキシアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)
アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000294
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.070g、0.204mmol)、
O-エチルヒドロキシルアミン・HCl(0.020g、0.204mmol)およびN
-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.071ml、0.409mmo
l)をDMF(1ml)中で混合した。混合物を130℃で30分間マイクロ波照射し、
次いで濃縮した。生成物29mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)
後に回収した。MS[C1616+H]の計算値:368.14、実測
値368.05。
(実施例220)
6-((4-((3-メチルオキセタン-3-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチ
ル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン、
6-((4-(ジメチルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)
アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-((4-((2-(
ジメチルアミノ)-1-メトキシプロパン-2-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメ
チル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン
の調製
Figure 2022017384000295
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.070g、0.204mmol)、
3-メチルオキセタン-3-アミン(0.018g、0.204mmol)およびN-エ
チル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.036ml、0.204mmol)
をDMF(1ml)中で混合した。混合物を130℃で30分間マイクロ波照射し、次い
で濃縮した。MeOH-水を加え、固体を濾別した。固体および濾液を2つ別々に逆相カ
ラムに通した(水-MeCN溶出液)。6-((4-((3-メチルオキセタン-3-イ
ル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-
ジヒドロキノリン-2(1H)-オン8mg、6-((4-(ジメチルアミノ)-5-(
トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2
(1H)-オン3mgおよび6-((4-((2-(ジメチルアミノ)-1-メトキシプ
ロパン-2-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミ
ノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン3mgを、自動逆相クロマトグラフ
ィー(水-MeCN溶出液)後に回収した。MS[C1818+H]
計算値:394.15、実測値394.10。MS[C1616O+H]
計算値:352.14、実測値352.25。MS[C2025+H]
の計算値:439.21、実測値439.00。
(実施例221)
N4-シクロプロピル-N2-(ピリダジン-4-イル)-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-2,4-ジアミンおよびN4-シクロプロピル-N2-(4-(シクロプロ
ピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)-N2-(ピリダジ
ン-4-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000296
フラスコおよび撹拌子をフレーム乾燥した。加熱前、試薬および溶媒に窒素を吹き込ん
だ。2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-ア
ミン(0.070g、0.295mmol)、ピリダジン-4-アミン(0.028g、
0.295mmol)、(9,9-ジメチル-9H-キサンテン-4,5-ジイル)ビス
(ジフェニルホスファン)(0.017g、0.029mmol)、ジアセトキシパラジ
ウム(3.31mg、0.015mmol)および炭酸セシウム(0.192g、0.5
89mmol)を1,4-ジオキサン(1ml)中で混合した。混合物を140℃で20
分間マイクロ波照射した。メタノールと共にセライトに通して濾過し、濃縮した。N4-
シクロプロピル-N2-(ピリダジン-4-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミ
ジン-2,4-ジアミン5mgおよびN4-シクロプロピル-N2-(4-(シクロプロ
ピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)-N2-(ピリダジ
ン-4-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン6mgを、
自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収した。MS[C1211
+H]の計算値:297.11、実測値296.75。MS[C2017
+H]の計算値:498.16、実測値498.35。
(実施例222)
6-((4-((2,2,2-トリフルオロエチル)アミノ)-5-(トリフルオロメチ
ル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの
調製
Figure 2022017384000297
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.070g、0.204mmol)、
2,2,2-トリフルオロエタン-1-アミン・HCl(0.028g、0.204mm
ol)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.071ml、0
.409mmol)をDMF(1ml)中で混合した。混合物を130℃で20分間マイ
クロ波照射し、次いで濃縮した。生成物22mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-M
eCN中10%THF溶出液)後に回収した。MS[C1613O+H]
計算値:406.11、実測値406.30。
(実施例223)
N-(2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6-イル)アミノ
)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アセトアミドの調製
Figure 2022017384000298
フラスコおよび撹拌子をフレーム乾燥した。加熱前、試薬および溶媒に窒素を吹き込ん
だ。6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)
-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.070g、0.204mmol)
、アセトアミド(0.012g、0.204mmol)、(9,9-ジメチル-9H-キ
サンテン-4,5-ジイル)ビス(ジフェニルホスファン)(0.012g、0.020
mmol)、ジアセトキシパラジウム(2.293mg、10.21μmol)および炭
酸セシウム(0.100g、0.306mmol)をDMF(1ml)中で混合した。混
合物を140℃で20分間マイクロ波照射した。メタノールと共にセライトに通して濾過
し、次いで濃縮した。自動逆相クロマトグラフィーを行った(水-MeOH溶出液)。分
取TLCを使用して更に精製後、生成物1mgを単離した。MS[C1614
+H]の計算値:366.12、実測値366.00。
(実施例224)
N4-シクロプロピル-N2-(2,3-ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン-
6-イル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000299
2-クロロ-N-シクロプロピルピリミジン-4-アミン(0.060g、0.354
mmol)および2,3-ジヒドロベンゾ[b][1,4]ジオキシン-6-アミン(0
.053g、0.354mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を130℃で
10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物64mgを自動逆相クロマトグラフ
ィー(水-MeOH溶出液)後に回収した。MS[C1516+H]の計算
値:285.14、実測値284.90。
(実施例225)
6-((4-(シクロプロピルアミノ)-1,3,5-トリアジン-2-イル)アミノ)
-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000300
2,4-ジクロロ-1,3,5-トリアジン(0.055g、0.367mmol)、
6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.059g、0.367
mmol)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.064ml
、0.367mmol)をDMF(1ml)中で混合した。混合物を120℃で10分間
マイクロ波照射した。MeOHを加え、固体を濾過した。生成物を含む濾液を濃縮した。
生成物7mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeOH中2%DMF溶出液)後に回
収した。MS[C1516O+H]の計算値:297.15、実測値296.9
0。
(実施例226)
N-(2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6-イル)アミノ
)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)メタンスルホンアミドの調製
Figure 2022017384000301
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.070g、0.204mmol)、
メタンスルホンアミド(0.019g、0.204mmol)および水素化ナトリウム(
0.016g、0.409mmol)をDMF(1ml)中で混合した。混合物を130
℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。自動逆相クロマトグラフィー(水-M
eOH中2%DMF溶出液)を使用して、部分的に純粋な生成物を得た。濃縮後、固体を
エタノールで洗浄して、生成物2mgを得た。MS[C1514S+H]
の計算値:402.09、実測値402.10。
(実施例227)
メチル(2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6-イル)アミ
ノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)-L-プロリネートの調製
Figure 2022017384000302
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.070g、0.204mmol)、
メチルL-プロリネート・HCl(0.034g、0.204mmol)およびN-エチ
ル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.071ml、0.409mmol)を
DMF(1ml)中で混合した。混合物を100℃で20分間マイクロ波照射し、次いで
濃縮した。自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN中10%THF溶出液)を使用し
て、部分的に純粋な生成物を得た。濃縮後、物質をシリカゲル上での順相クロマトグラフ
ィー(3%MeOH/DCM溶出液)により更に精製して、生成物18mgを得た。MS
[C2020+H]の計算値:436.16、実測値436.15。
(実施例228)
N-シクロプロピル-2-(2-(ピリジン-3-イル)ピロリジン-1-イル)-5-
(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミンの調製
Figure 2022017384000303
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.064g、0.269mmol)および3-(ピロリジン-2-イル)ピリジン
(0.040g、0.269mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を110
℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物3mgを自動逆相クロマトグラ
フィー(水-MeCN溶出液)後に回収した。MS[C1718+H]の計
算値:350.16、実測値349.90。
(実施例229)
N4-シクロプロピル-N2-(6-メトキシピリジン-2-イル)-5-(トリフルオ
ロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000304
フラスコおよび撹拌子をフレーム乾燥した。加熱前、試薬および溶媒に窒素を吹き込ん
だ。2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-ア
ミン(0.065g、0.274mmol)、6-メトキシピリジン-2-アミン(0.
034g、0.274mmol)、(9,9-ジメチル-9H-キサンテン-4,5-ジ
イル)ビス(ジフェニルホスファン)(0.016g、0.027mmol)、ジアセト
キシパラジウム(3.07mg、0.014mmol)および炭酸セシウム(0.134
g、0.410mmol)を1,4-ジオキサン(1ml)中で混合した。混合物を14
0℃で20分間マイクロ波照射した。MeOHと共にセライトに通して濾過し、濃縮した
。生成物9mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN中10%THF溶出液)後
に回収した。MS[C1414O+H]の計算値:326.13、実測値3
26.10。
(実施例230)
N4-シクロプロピル-N2-(5-メトキシピリジン-3-イル)-5-(トリフルオ
ロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000305
フラスコおよび撹拌子をフレーム乾燥した。加熱前、試薬および溶媒に窒素を吹き込ん
だ。2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-ア
ミン(0.065g、0.274mmol)、5-メトキシピリジン-3-アミン(0.
034g、0.274mmol)、(9,9-ジメチル-9H-キサンテン-4,5-ジ
イル)ビス(ジフェニルホスファン)(0.016g、0.027mmol)、ジアセト
キシパラジウム(3.07mg、0.014mmol)および炭酸セシウム(0.134
g、0.410mmol)を1,4-ジオキサン(1ml)中で混合した。混合物を14
0℃で20分間マイクロ波照射した。MeOHと共にセライトに通して濾過し、濃縮した
。生成物9mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収した。M
S[C1414O+H]の計算値:326.13、実測値325.90。
(実施例231)
6-((4-(オキセタン-3-イルオキシ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン
-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-((4
-ヒドロキシ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-
ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000306
反応フラスコおよび撹拌子をフレーム乾燥した。6-((4-クロロ-5-(トリフル
オロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)
-オン(0.070g、0.204mmol)、オキセタン-3-オール(0.015g
、0.204mmol)および水素化ナトリウム(6.37mg、0.266mmol)
をDMF(1ml)中で混合した。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次い
で濃縮した。6-((4-(オキセタン-3-イルオキシ)-5-(トリフルオロメチル
)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン11
mgおよび6-((4-ヒドロキシ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル
)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン2mgを、自動逆相クロマト
グラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収した。MS[C1715+H
の計算値:381.12、実測値381.00。MS[C1411
H]の計算値:325.09、実測値324.80。
(実施例232)
5-((4-(シクロプロピルアミノ)ピリミジン-2-イル)アミノ)-1,3-ジヒ
ドロ-2H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-オンの調製
Figure 2022017384000307
反応フラスコおよび撹拌子をフレーム乾燥した。2-クロロ-N-シクロプロピルピリ
ミジン-4-アミン(0.060g、0.354mmol)および5-アミノ-1,3-
ジヒドロ-2H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-オン(0.053g、0.354mm
ol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を110℃で10分間マイクロ波照射し、
次いで濃縮した。アセトンを加え、固体を濾過して、生成物67mgを得た。MS[C
14O+H]の計算値:283.13、実測値282.85。
(実施例233)
5,5’-((5-ブロモピリミジン-2,4-ジイル)ビス(アザンジイル))ビス(
1,3-ジヒドロ-2H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-オン)の調製
Figure 2022017384000308
反応フラスコおよび撹拌子をフレーム乾燥した。5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミ
ジン(0.100g、0.439mmol)および5-アミノ-1,3-ジヒドロ-2H
-ベンゾ[d]イミダゾール-2-オン(0.065g、0.439mmol)を酢酸(
1ml)中で混合した。混合物を110℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した
。アセトニトリルを加え、固体を濾過して、生成物40mgを得た。MS[C1813
BrN+H]の計算値:453.04、実測値452.90。
(実施例234)
2-((5-クロロ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドおよびN-(5-クロロ-2-((3,
4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン-4-イル)-2-ヒドロキシ-N
-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000309
2-((2,5-ジクロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミド
(0.325g、1.090mmol)、3,4,5-トリメトキシアニリン(0.20
0g、1.090mmol)、塩化亜鉛(II)(0.178g、1.308mmol)
およびトリエチルアミン(0.280ml、1.308mmol)を1,2-ジクロロエ
タン(2ml)およびt-ブタノール(2mL)中で混合した。60℃に8時間加熱し、
次いで混合物を100℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。2-((5-ク
ロロ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン-4-イル)オ
キシ)-N-メチルベンズアミド10mgおよびN-(5-クロロ-2-((3,4,5
-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン-4-イル)-2-ヒドロキシ-N-メチ
ルベンズアミド5mgを、自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収
した。MS[C2121ClN+H]の計算値:445.13、実測値445
.25。
(実施例235)
6-((4-(1H-ピロール-1-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-
2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000310
フラスコおよび撹拌子をフレーム乾燥した。加熱前、試薬および溶媒に窒素を吹き込ん
だ。6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)
-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.070g、0.204mmol)
、1H-ピロール(0.015g、0.225mmol)、(9,9-ジメチル-9H-
キサンテン-4,5-ジイル)ビス(ジフェニルホスファン)(7.09mg、0.01
2mmol)、ジアセトキシパラジウム(1.376mg、6.13μmol)および炭
酸セシウム(0.087g、0.266mmol)をDMF(1ml)中で混合した。混
合物を140℃で20分間マイクロ波照射した。MeCNを加え、固体を濾過した。濾液
を濃縮し、生成物2mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収
した。MS[C1814O+H]の計算値:374.13、実測値373.
85。
(実施例236)
5-((5-ブロモ-4-(シクロプロピルアミノ)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
1,3-ジヒドロ-2H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-オンの調製
Figure 2022017384000311
反応フラスコおよび撹拌子をフレーム乾燥した。5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミ
ジン(0.100g、0.439mmol)、シクロプロパンアミン(0.030ml、
0.439mmol)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.
076ml、0.439mmol)をアセトニトリル(2ml)中で混合した。混合物を
60℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。5-アミノ-1,3-ジヒドロ-
2H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-オン(0.065g、0.439mmol)を加
えた。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。MeCNを加え
、固体を濾過して、生成物112mgを得た。MS[C1413BrNO+H]
計算値:361.04、実測値360.80。
(実施例237)
2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)アミノ)-N-メチルベンゼンスルホンアミドの調製
Figure 2022017384000312
反応フラスコおよび撹拌子をフレーム乾燥した。5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミ
ジン(0.080g、0.351mmol)、2-アミノ-N-メチルベンゼンスルホン
アミド(0.065g、0.351mmol)およびN-エチル-N-イソプロピルプロ
パン-2-アミン(0.061ml、0.351mmol)をアセトニトリル(2ml)
中で混合した。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。3,4
,5-トリメトキシアニリン(0.064g、0.351mmol)および酢酸(0.0
21g、0.351mmol)を加えた。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し
、次いで濃縮した。生成物31mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液
)後に回収した。MS[C2022BrNS+H]の計算値:524.06、
実測値524.30。
(実施例238)
2-((2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000313
2,4-ジクロロピリミジン(1g、6.71mmol)、2-ヒドロキシ-N-メチ
ルベンズアミド(1.015g、6.71mmol)、N-エチル-N-イソプロピルプ
ロパン-2-アミン(1.169ml、6.71mmol)および銅(0.043g、0
.671mmol)をDMF(10ml)中で混合した。混合物をマイクロ波照射すると
7分で140℃に達し、次いで操作を止めた。混合物を濃縮し、そのまま使用した。MS
[C1210ClN+H]の計算値:264.06、実測値263.70。
(実施例239)
N-メチル-2-((2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)オキシ)ベンズアミドの調製
Figure 2022017384000314
2-((2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミド(1.
529g、5.8mmol)および塩化亜鉛(II)(0.790g、5.80mmol
)を1,2-ジクロロエタン(4mL)およびt-ブタノール(4mL)中で混合した。
1時間撹拌し、次いで3,4,5-トリメトキシアニリン(1.063g、5.80mm
ol)およびトリエチルアミン(0.808mL、5.80mmol)を加えた。密封管
中100℃で20分間マイクロ波照射した。フラスコに移し、油浴中80℃に合計24時
間加熱し、次いで濃縮した。生成物74mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeC
N溶出液)後に回収した。MS[C2122+H]の計算値:411.17
、実測値411.20。
(実施例240)
5-((4-(シクロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-
イル)アミノ)インドリン-2-オンの調製
Figure 2022017384000315
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.060g、0.253mmol)および5-アミノインドリン-2-オン(0.
037g、0.253mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を110℃で1
0分間マイクロ波照射した。固体を濾過し、アセトニトリルで洗浄して、生成物18mg
を得た。MS[C1614O+H]の計算値:350.13、実測値350
.10。
(実施例241)
3-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズア
ミドの調製。
Figure 2022017384000316
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.100g、0.439mmol)、3
-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(0.066g、0.439mmol)、N-エ
チル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.076ml、0.439mmol)
および銅(2.79mg、0.044mmol)をDMF(2ml)中で混合した。混合
物を80℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。これをそのまま使用した。M
S[C12BrClN+H]の計算値:341.97、実測値341.65
(実施例242)
3-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000317
3-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズ
アミド(0.147g、0.43mmol)および3,4,5-トリメトキシアニリン(
0.079g、0.430mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を110℃
で10分間マイクロ波照射した。塩化亜鉛(II)(0.059g、0.430mmol
)を加えた。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物1
3mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収した。MS[C
21BrN+H]の計算値:489.08、実測値488.95。
(実施例243)
6-((4-((3-アミノ-1H-1,2,4-トリアゾール-5-イル)アミノ)-
5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリ
ン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000318
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.072g、0.210mmol)、
1H-1,2,4-トリアゾール-3,5-ジアミン(0.021g、0.210mmo
l)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.037ml、0.
210mmol)をDMF(2ml)中で混合した。混合物を110℃で20分間マイク
ロ波照射した。銅(6.68mg、0.105mmol)および更に塩基を加え、混合物
を130℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物7mgを自動逆相クロ
マトグラフィー(水-MeCN中3%DMF溶出液)後に回収した。MS[C1614
O+H]の計算値:406.14、実測値406.10。
(実施例244)
2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N,N-ジメチルベ
ンズアミドの調製
Figure 2022017384000319
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、2
-ヒドロキシ-N,N-ジメチルベンズアミド(0.109g、0.658mmol)、
N-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.115ml、0.658mm
ol)および銅(4.18mg、0.066mmol)をDMF(3ml)中で混合した
。混合物を60℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮し、そのまま使用した。MS
[C1311BrClN+H]の計算値:355.98、実測値355.70
(実施例245)
2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)オキシ)-N,N-ジメチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000320
2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N,N-ジメチル
ベンズアミド(0.203g、0.57mmol)および塩化亜鉛(II)(0.078
g、0.570mmol)を1,2-ジクロロエタン(2ml)およびt-ブタノール(
2.000ml)中で混合した。15分間撹拌し、次いで3,4,5-トリメトキシアニ
リン(0.104g、0.570mmol)およびトリエチルアミン(0.079ml、
0.570mmol)を加えた。混合物を80℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃
縮した。生成物29mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収
した。MS[C2223BrN+H]の計算値:503.10、実測値503
.00。
(実施例246)
4-(2-((4-(シクロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン
-2-イル)アミノ)エチル)フェノールの調製
Figure 2022017384000321
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.055g、0.231mmol)、4-(2-アミノエチル)フェノール(0.
032g、0.231mmol)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-ア
ミン(0.040ml、0.231mmol)をDMF(1ml)中で混合した。混合物
を120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。アセトンを加え、セライトに
通して濾過した。濾液を濃縮して、生成物60mgを得た。MS[C1617
O+H]の計算値:339.15、実測値339.20。
(実施例247)
(R)-6-((4-(3-メチルモルホリノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジ
ン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000322
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.055g、0.160mmol)、
(R)-3-メチルモルホリン(0.016g、0.160mmol)およびN-エチル
-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.028ml、0.160mmol)をD
MF(1ml)中で混合した。混合物を130℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃
縮した。生成物6mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeOH溶出液)後に回収し
た。MS[C1920+H]の計算値:408.17、実測値408.
35。
(実施例248)
2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メトキシベンズ
アミドの調製
Figure 2022017384000323
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、2
-ヒドロキシ-N-メトキシベンズアミド(0.110g、0.658mmol)、N-
エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.115ml、0.658mmol
)および銅(4.18mg、0.066mmol)をDMF(3ml)中で混合した。混
合物を60℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮し、そのまま使用した。MS[C
12BrClN+H]の計算値:357.96、実測値357.70。
(実施例249)
2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)オキシ)ベンズアミドの調製
Figure 2022017384000324
2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メトキシベン
ズアミド(0.179g、0.500mmol)および塩化亜鉛(II)(0.075g
、0.550mmol)を1,2-ジクロロエタン(1ml)およびt-ブタノール(1
.000ml)中で混合した。1時間後、3,4,5-トリメトキシアニリン(0.09
2g、0.500mmol)およびトリエチルアミン(0.070ml、0.500mm
ol)を加え、80℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。副生成物19mg
を自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収した。MS[C20
BrN+H]の計算値:475.06、実測値474.90。
(実施例250)
N4-シクロプロピル-N2-(ピリミジン-4-イル)-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000325
フラスコおよび撹拌子をフレーム乾燥した。加熱前、試薬および溶媒に窒素を吹き込ん
だ。2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-ア
ミン(0.070g、0.295mmol)、ピリミジン-4-アミン(0.028g、
0.295mmol)、(9,9-ジメチル-9H-キサンテン-4,5-ジイル)ビス
(ジフェニルホスファン)(0.017g、0.029mmol)、ジアセトキシパラジ
ウム(3.31mg、0.015mmol)および炭酸セシウム(0.144g、0.4
42mmol)を1,4-ジオキサン(2ml)中で混合した。混合物を140℃で20
分間マイクロ波照射した。MeOHと共にセライトに通して濾過し、次いで濃縮した。生
成物13mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeOH溶出液)後に回収した。MS
[C1211+H]の計算値:297.11、実測値297.05。
(実施例251)
2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-3-メトキシ-N-
メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000326
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、2
-ヒドロキシ-3-メトキシ-N-メチルベンズアミド(0.119g、0.658mm
ol)、N-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.115ml、0.6
58mmol)および銅(4.18mg、0.066mmol)をDMF(3ml)中で
混合した。混合物を60℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮し、そのまま使用し
た。MS[C1311BrClN+H]の計算値:371.98、実測値37
1.70。
(実施例252)
2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)オキシ)-3-メトキシ-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000327
2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-3-メトキシ-N
-メチルベンズアミド(0.220g、0.590mmol)および塩化亜鉛(II)(
0.080g、0.590mmol)を1,2-ジクロロエタン(2ml)およびt-ブ
タノール(2.000ml)中で混合した。90分後、3,4,5-トリメトキシアニリ
ン(0.108g、0.590mmol)およびトリエチルアミン(0.082ml、0
.590mmol)を加えた。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃
縮した。生成物57mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)後に回収
した。MS[C2223BrN+H]の計算値:519.09、実測値519
.05。
(実施例253)
N-(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)アセ
トアミドの調製
Figure 2022017384000328
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、N
-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.117ml、0.658mmo
l)およびN-(2-ヒドロキシフェニル)アセトアミド(0.100g、0.658m
mol)をアセトニトリル(3ml)中で混合した。混合物を100℃で10分間マイク
ロ波照射し、次いで濃縮し、そのまま使用した。MS[C12BrClN+H
の計算値:341.97、実測値341.60。
(実施例254)
N-(2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリ
ミジン-4-イル)オキシ)フェニル)アセトアミドおよび4-(2-アミノフェノキシ
)-5-ブロモ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2-アミンの
調製
Figure 2022017384000329
N-(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)ア
セトアミド(0.220g、0.642mmol)および塩化亜鉛(II)(0.088
g、0.642mmol)を1,2-ジクロロエタン(2ml)およびt-ブタノール(
2.000ml)中で混合した。1時間撹拌した。トリエチルアミン(0.090ml、
0.642mmol)および3,4,5-トリメトキシアニリン(0.118g、0.6
42mmol)を加えた。混合物を100℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮し
、最初にシリカゲル上での順相クロマトグラフィー(DCM-EtOAc)により、次い
で自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN溶出液)により精製して、N-(2-((
5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン-4-イ
ル)オキシ)フェニル)アセトアミド43mgおよび4-(2-アミノフェノキシ)-5
-ブロモ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2-アミン39mg
を得た。MS[C2121BrN+H]の計算値:489.08、実測値48
8.95。MS[C1919BrN+H]の計算値:447.07、実測値4
46.90。
(実施例255)
2-((4-(シクロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-
イル)アミノ)フェノールの調製
Figure 2022017384000330
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.060g、0.253mmol)および2-アミノフェノール(0.028g、
0.253mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を110℃で20分間マイ
クロ波照射し、次いで濃縮した。EtOAcを加え、固体を濾過して、生成物57mgを
得た。MS[C1413O+H]の計算値:311.11、実測値311.
15。
(実施例256)
2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-6-ヒドロキシ-N
-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000331
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、N
-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.115ml、0.658mmo
l)および2,6-ジヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(0.110g、0.658
mmol)をアセトニトリル(2ml)中で混合した。混合物を100℃で10分間マイ
クロ波照射し、次いで濃縮し、そのまま使用した。MS[C12BrClN
H]の計算値:357.96、実測値357.70。
(実施例257)
2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)オキシ)-6-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000332
2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-6-ヒドロキシ-
N-メチルベンズアミド(0.143g、0.400mmol)および塩化亜鉛(II)
(0.055g、0.400mmol)を1,2-ジクロロエタン(1ml)およびt-
ブタノール(1.000ml)中で混合した。1時間後、トリエチルアミン(0.056
ml、0.400mmol)および3,4,5-トリメトキシアニリン(0.073g、
0.400mmol)を加えた。混合物を100℃で10分間マイクロ波照射し、次いで
濃縮し、最初にシリカゲル上での順相クロマトグラフィー(DCM-EtOAc)により
、次いで自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN中10%THF)により精製して、
生成物41mgを得た。MS[C2121BrN+H]の計算値:505.0
7、実測値504.95。
(実施例258)
N4-シクロプロピル-N2-(2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,3]ジオキソー
ル-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000333
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.050g、0.210mmol)および2,2-ジフルオロベンゾ[d][1,
3]ジオキソール-5-アミン(0.036g、0.210mmol)を酢酸(1ml)
中で混合した。混合物を110℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物
35mgをシリカゲル上での順相クロマトグラフィー(DCM)後に回収した。MS[C
1511+H]の計算値:375.09、実測値375.20。
(実施例259)
1-(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)プロ
パン-1-オンの調製
Figure 2022017384000334
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、1
-(2-ヒドロキシフェニル)プロパン-1-オン(0.099g、0.658mmol
)、N-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.115ml、0.658
mmol)および銅(4.18mg、0.066mmol)をDMF(3ml)中で混合
した。混合物を80℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮し、そのまま使用した。
MS[C1310BrClN+H]の計算値:340.97、実測値340.
65。
(実施例260)
1-(2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリ
ミジン-4-イル)オキシ)フェニル)プロパン-1-オンの調製
Figure 2022017384000335
1-(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)プ
ロパン-1-オン(0.200g、0.585mmol)および塩化亜鉛(II)(0.
080g、0.585mmol)を1,2-ジクロロエタン(2ml)およびt-ブタノ
ール(1ml)中で混合した。混合物を100℃で10分間マイクロ波照射した。生成物
34mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-10%THF/MeCN)後に回収した。
MS[C2222BrN+H]の計算値:488.08 実測値487.90
(実施例261)
ベンジル(2-((2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6-
イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)オキシ)エチル)
カルバメートの調製
Figure 2022017384000336
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.120g、0.350mmol)、
ベンジル(2-ヒドロキシエチル)カルバメート(0.068g、0.350mmol)
および水素化ナトリウム(0.017g、0.420mmol)をDMF(2ml)中で
混合した。混合物を100℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物4m
gを逆相HPLC(水-MeCN)後に回収した。MS[C2422+H
の計算値:502.17 実測値502.30。
(実施例262)
N4-シクロプロピル-N2-(ナフタレン-1-イルメチル)-5-(トリフルオロメ
チル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000337
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.055g、0.231mmol)、ナフタレン-1-イルメタンアミン(0.0
36g、0.231mmol)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミ
ン(0.044ml、0.255mmol)をDMF(2ml)中で混合した。混合物を
130℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。水中50%MeCNを加え、固
体を濾過して、生成物32mgを得た。MS[C1917+H]の計算値:
359.15 実測値359.40。
(実施例263)
6-((4-(シクロプロピルアミノ)キナゾリン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒ
ドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000338
2-クロロ-N-シクロプロピルキナゾリン-4-アミン(0.055g、0.250
mmol)および6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.04
1g、0.250mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を110℃で10分
間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。アセトンを加え、固体を濾過して、生成物80m
gを得た。MS[C2019O+H]の計算値:346.17 実測値346.
30。
(実施例264)
N4-シクロプロピル-N2-(キノリン-6-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000339
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.060g、0.253mmol)、銅(1.605mg、0.025mmol)
およびキノリン-6-アミン(0.036g、0.253mmol)を酢酸(2ml)中
で混合した。混合物を120℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。アセトン
を加え、固体を濾過した。生成物7mgを濾液の自動逆相クロマトグラフィー(水-Me
CN)後に回収した。MS[C1714+H]の計算値:346.13 実
測値345.95。
(実施例265)
5-ブロモ-2-クロロ-4-フェノキシピリミジンの調製
Figure 2022017384000340
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、フ
ェノール(0.062g、0.658mmol)およびN-エチル-N-イソプロピルプ
ロパン-2-アミン(0.126ml、0.724mmol)をDMF(3ml)中で混
合した。混合物を100℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮し、そのまま使用し
た。MS[C10BrClNO+H]の計算値:284.95 実測値284.
50。
(実施例266)
5-ブロモ-4-フェノキシ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-
2-アミンの調製。
Figure 2022017384000341
5-ブロモ-2-クロロ-4-フェノキシピリミジン(0.180g、0.630mm
ol)および塩化亜鉛(II)(0.086g、0.630mmol)を1,2-ジクロ
ロエタン(2ml)およびt-ブタノール(1ml)中で混合した。40分後、トリエチ
ルアミン(0.097ml、0.693mmol)および3,4,5-トリメトキシアニ
リン(0.115g、0.630mmol)を加えた。混合物を100℃で10分間マイ
クロ波照射し、次いで濃縮した。生成物78mgをシリカゲル上での順相クロマトグラフ
ィー(EtOAc-DCM)後に回収した。MS[C1918BrN+H]
計算値:432.06、実測値431.90。
(実施例267)
3-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズア
ミドの調製
Figure 2022017384000342
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、3
-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(0.100g、0.658mmol)およびN
-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.126ml、0.724mmo
l)をアセトニトリル(3ml)中で混合した。混合物を100℃で10分間マイクロ波
照射し、次いで濃縮し、そのまま使用した。MS[C12BrClN+H]
の計算値:341.97、実測値341.70。
(実施例268)
3-((5-ブロモ-2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6
-イル)アミノ)ピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000343
3-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズ
アミド(0.075g、0.219mmol)および塩化亜鉛(II)(0.030g、
0.219mmol)を1,2-ジクロロエタン(4ml)およびt-ブタノール(1m
l)中で混合した。30分後、トリエチルアミン(0.034ml、0.241mmol
)および6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.036g、0
.219mmol)を加えた。混合物を140℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃
縮した。生成物11mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN)後に回収した。
MS[C2118BrN+H]の計算値:468.07 実測値467.90
(実施例269)
2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N-シクロプロピル
ベンズアミドの調製
Figure 2022017384000344
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、N
-シクロプロピル-2-ヒドロキシベンズアミド(0.117g、0.658mmol)
およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.126ml、0.72
4mmol)をアセトニトリル(3ml)中で混合した。混合物を100℃で10分間マ
イクロ波照射し、次いで濃縮し、そのまま使用した。MS[C1411BrClN
+H]の計算値:367.98 実測値367.70。
(実施例270)
2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)オキシ)-N-シクロプロピルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000345
2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N-シクロプロピ
ルベンズアミド(0.230g、0.624mmol)および塩化亜鉛(II)(0.0
85g、0.624mmol)を1,2-ジクロロエタン(3ml)およびt-ブタノー
ル(0.5ml)中で混合した。トリエチルアミン(0.096ml、0.686mmo
l)および3,4,5-トリメトキシアニリン(0.114g、0.624mmol)を
加えた。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物67m
gを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN)後に回収した。MS[C2323
rN+H]の計算値:515.10 実測値515.05。
(実施例271)
6-((4-((5-シクロブチル-1H-ピラゾール-3-イル)アミノ)-5-(ト
リフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(
1H)-オンの調製。
Figure 2022017384000346
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.060g、0.175mmol)、
5-シクロブチル-1H-ピラゾール-3-アミン(0.024g、0.175mmol
)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.034ml、0.1
93mmol)をDMF(2ml)中で混合した。混合物を130℃で30分間マイクロ
波照射し、次いで濃縮した。生成物14mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeC
N中10%THF)後に回収した。MS[C2120O+H]の計算値:4
44.18 実測値444.15。
(実施例272)
5-ブロモ-4-クロロ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2-
アミンの調製
Figure 2022017384000347
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(1.5g、6.58mmol)および塩化
亜鉛(II)(0.897g、6.58mmol)を1,2-ジクロロエタン(8ml)
およびt-ブタノール(2ml)中で混合した。30分後、トリエチルアミン(1.00
9ml、7.24mmol)および3,4,5-トリメトキシアニリン(1.206g、
6.58mmol)を加えた。混合物を80℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮
し、そのまま使用した。MS[C1313BrClN+H]の計算値:373
.99、実測値373.75。
(実施例273)
5-ブロモ-2-クロロ-4-(2-(メトキシメチル)フェノキシ)ピリミジンの調製
Figure 2022017384000348
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、2
-(メトキシメチル)フェノール(0.091g、0.658mmol)およびN-エチ
ル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.115ml、0.658mmol)を
アセトニトリル(3ml)中で混合した。混合物を80℃で10分間マイクロ波照射し、
次いで濃縮し、そのまま使用した。MS[C1210BrClN+H]の計算
値:328.97、実測値328.70。
(実施例274)
5-ブロモ-4-(2-(メトキシメチル)フェノキシ)-N-(3,4,5-トリメト
キシフェニル)ピリミジン-2-アミンの調製
Figure 2022017384000349
5-ブロモ-2-クロロ-4-(2-(メトキシメチル)フェノキシ)ピリミジン(0
.200g、0.607mmol)および塩化亜鉛(II)(0.083g、0.607
mmol)を1,2-ジクロロエタン(3ml)およびt-ブタノール(1.00ml)
中で混合した。15分後、トリエチルアミン(0.093ml、0.668mmol)お
よび3,4,5-トリメトキシアニリン(0.111g、0.607mmol)を加えた
。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物27mgを自
動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN中10%THF)後に回収した。MS[C21
22BrN+H]の計算値:476.08 実測値475.95。
(実施例275)
N4-シクロプロピル-N2-(キノリン-3-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000350
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.060g、0.253mmol)およびキノリン-3-アミン(0.036g、
0.253mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を120℃で20分間マイ
クロ波照射し、次いで濃縮した。アセトンを加え、固体不純物を濾過した。生成物8mg
を濾液の自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN)後に回収した。MS[C17
FN+H]の計算値:346.13 実測値345.80。
(実施例276)
(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)(ピロリ
ジン-1-イル)メタノンの調製
Figure 2022017384000351
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、(
2-ヒドロキシフェニル)(ピロリジン-1-イル)メタノン(0.126g、0.65
8mmol)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.126m
l、0.724mmol)をアセトニトリル(3ml)中で混合した。混合物を100℃
で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮し、そのまま使用した。MS[C1513
rClN+H]の計算値:382.00、実測値381.70。
(実施例277)
(2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジ
ン-4-イル)オキシ)フェニル)(ピロリジン-1-イル)メタノンの調製
Figure 2022017384000352
(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)(ピロ
リジン-1-イル)メタノン(0.200g、0.523mmol)および塩化亜鉛(I
I)(0.071g、0.523mmol)を1,2-ジクロロエタン(3ml)および
t-ブタノール(1ml)中で混合した。トリエチルアミン(0.080ml、0.57
5mmol)および3,4,5-トリメトキシアニリン(0.096g、0.523mm
ol)を加えた。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成
物66mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN)後に回収した。MS[C24
25BrN+H]の計算値:529.11 実測値529.00。
(実施例278)
N4-シクロプロピル-N2-(キノリン-5-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000353
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.060g、0.253mmol)、キノリン-5-アミン(0.036g、0.
253mmol)および酢酸(0.015g、0.253mmol)を酢酸(1ml)中
で混合した。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。アセトン
を加え、固体を濾過して、生成物42mgを得た。MS[C1714+H]
の計算値:346.13 実測値345.80。
(実施例279)
N-(2-ヒドロキシフェニル)シクロプロパンカルボキサミドの調製
Figure 2022017384000354
2-アミノフェノール(3g、27.5mmol)、シクロプロパンカルボニルクロリ
ド(2.87g、27.5mmol)およびトリエチルアミン(4.21ml、30.2
mmol)をテトラヒドロフラン(30ml)中で混合した。40℃に8時間加熱し、次
いで濃縮した。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(ヘキサン-EtOAc
/DCM)を使用して、物質を精製した。精製後二重にアシル化された化合物(245a
mu)が所望の生成物に不純物として含まれていた。この不純物にも関わらず、物質を使
用した。MS[C1011NO+H]の計算値:178.09 実測値177.8
5。
(実施例280)
N-(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)シク
ロプロパンカルボキサミドの調製
Figure 2022017384000355
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、N
-(2-ヒドロキシフェニル)シクロプロパンカルボキサミド(0.117g、0.65
8mmol)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.126m
l、0.724mmol)をアセトニトリル(3ml)中で混合した。混合物を100℃
で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮し、そのまま使用した。MS[C1411
rClN+H]の計算値:367.98 実測値367.70。
(実施例281)
N-(2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリ
ミジン-4-イル)オキシ)フェニル)シクロプロパンカルボキサミドの調製
Figure 2022017384000356
N-(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)シ
クロプロパンカルボキサミド(0.220g、0.597mmol)および塩化亜鉛(I
I)(0.081g、0.597mmol)を1,2-ジクロロエタン(3ml)および
t-ブタノール(1ml)中で混合した。2時間後、トリエチルアミン(0.092ml
、0.657mmol)および3,4,5-トリメトキシアニリン(0.109g、0.
597mmol)を加えた。混合物を130℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮
した。MS[C2323BrN+H]の計算値:515.10 実測値515
.00。
(実施例282)
1-(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)-N
,N-ジメチルメタンアミンの調製
Figure 2022017384000357
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、2
-((ジメチルアミノ)メチル)フェノール(0.100g、0.658mmol)およ
びN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.126ml、0.724m
mol)をアセトニトリル(3ml)中で混合した。混合物を70℃で10分間マイクロ
波照射し、次いで濃縮し、そのまま使用した。MS[C1313BrClNO+H]
の計算値:342.00 実測値341.65。
(実施例283)
5-ブロモ-4-(2-((ジメチルアミノ)メチル)フェノキシ)-N-(3,4,5
-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2-アミンの調製
Figure 2022017384000358
1-(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)-
N,N-ジメチルメタンアミン(0.170g、0.496mmol)および塩化亜鉛(
II)(0.068g、0.496mmol)を1,2-ジクロロエタン(3ml)およ
びt-ブタノール(1ml)中で混合した。20分後、トリエチルアミン(0.076m
l、0.546mmol)および3,4,5-トリメトキシアニリン(0.091g、0
.496mmol)を加えた。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃
縮した。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(DCM)を最初に使用して物
質を部分的に精製し、次いでこの部分的に純粋な物質の自動逆相クロマトグラフィー(水
-MeCN)後に5mgを回収した。MS[C2425BrN+H]の計算値
:529.11 実測値529.00。
(実施例284)
5-ブロモ-4-エトキシ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2
-アミンの調製
Figure 2022017384000359
5-ブロモ-4-クロロ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2
-アミン(2.3g、6.14mmol)および水酸化ナトリウム(10.23mL、3
0.7mmol)を水(1mL)およびエタノール(10ml)中で混合した。100℃
に8時間加熱し、次いで23℃で6日間維持した。塩化アンモニウム溶液を加えて中和し
、次いで回転蒸発器により有機溶媒を除去した。固体を濾過し、水で洗浄した。固体60
mgをシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(DCM-EtOAc)により精
製して、生成物41mgを得た。MS[C1518BrN+H]の計算値:3
84.06 実測値383.90。
(実施例285)
2-クロロ-4-(シクロプロピルアミノ)ピリミジン-5-カルボン酸の調製
Figure 2022017384000360
2,4-ジクロロピリミジン-5-カルボン酸(0.100g、0.518mmol)
、シクロプロパンアミン(0.036ml、0.518mmol)およびN-エチル-N
-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.099ml、0.570mmol)をDMF
(2ml)中で混合した。混合物を70℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮し、
そのまま使用した。MS[CClN+H]の計算値:214.04 実測
値213.65。
(実施例286)
4-(シクロプロピルアミノ)-2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキ
ノリン-6-イル)アミノ)ピリミジン-5-カルボン酸の調製
Figure 2022017384000361
2-クロロ-4-(シクロプロピルアミノ)ピリミジン-5-カルボン酸(0.100
g、0.468mmol)および6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-
オン(0.076g、0.468mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を1
20℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。アセトンを加え、固体を濾過した
。その固体にMeOHを加え、濾過して、最終生成物74mgを得た。MS[C17
+H]の計算値:340.14 実測値340.00。
(実施例287)
4-(シクロプロピルアミノ)-2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキ
ノリン-6-イル)アミノ)ピリミジン-5-カルボニトリルおよび2-(シクロプロピ
ルアミノ)-4-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6-イル)
アミノ)ピリミジン-5-カルボニトリルの調製。
Figure 2022017384000362
2,4-ジクロロピリミジン-5-カルボニトリル(0.100g、0.575mmo
l)、シクロプロパンアミン(0.040ml、0.575mmol)およびN-エチル
-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.110ml、0.632mmol)をア
セトニトリル(2ml)中で混合した。混合物を70℃で10分間マイクロ波照射し、次
いで濃縮した。6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.093
g、0.575mmol)および酢酸(0.035g、0.575mmol)を加えた。
混合物を110℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。4-(シクロプロピル
アミノ)-2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6-イル)ア
ミノ)ピリミジン-5-カルボニトリル14mgおよび2-(シクロプロピルアミノ)-
4-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6-イル)アミノ)ピリ
ミジン-5-カルボニトリル14mgを、自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN)
後に回収した。MS[C1716O+H]の計算値:321.15 実測値32
1.00。
(実施例288)
N2-(1H-ベンゾ[d]イミダゾール-2-イル)-N4-シクロプロピル-5-(
トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製。
Figure 2022017384000363
フラスコおよび撹拌子をフレーム乾燥した。加熱前、試薬および溶媒に窒素を吹き込ん
だ。2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-ア
ミン(0.065g、0.274mmol)、(9,9-ジメチル-9H-キサンテン-
4,5-ジイル)ビス(ジフェニルホスファン)(0.016g、0.027mmol)
、ジアセトキシパラジウム(3.07mg、0.014mmol)、1H-ベンゾ[d]
イミダゾール-2-アミン(0.036g、0.274mmol)および炭酸セシウム(
0.107g、0.328mmol)を1,4-ジオキサン(2ml)中で混合した。混
合物を140℃で20分間マイクロ波照射した。MeOHと共にセライトに通して濾過し
、次いで濃縮した。アセトンを加え、固体を濾過して、生成物13mgを得た。MS[C
1513FN+H]の計算値:335.13 実測値335.10。
(実施例289)
2-(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)-4
-メチルオキサゾールの調製
Figure 2022017384000364
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、2
-(4-メチルオキサゾール-2-イル)フェノール(0.115g、0.658mmo
l)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.126ml、0.
724mmol)をアセトニトリル(2ml)中で混合した。混合物を120℃で20分
間マイクロ波照射し、次いで濃縮し、そのまま使用した。MS[C14BrClN
+H]の計算値:365.97 実測値365.70。
(実施例290)
5-ブロモ-4-(2-(4-メチルオキサゾール-2-イル)フェノキシ)-N-(3
,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2-アミンの調製
Figure 2022017384000365
2-(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)-
4-メチルオキサゾール(0.230g、0.627mmol)および塩化亜鉛(II)
(0.094g、0.690mmol)を1,2-ジクロロエタン(3ml)中で混合し
た。30分後、トリエチルアミン(0.105ml、0.753mmol)および3,4
,5-トリメトキシアニリン(0.115g、0.627mmol)を加えた。混合物を
120℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。シリカゲル上でのフラッシュク
ロマトグラフィー(DCM)を使用して、部分的に純粋な生成物を単離した。生成物18
mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN中10%THF)後に回収した。MS
[C2321BrN+H]の計算値:513.08 実測値512.95。
(実施例291)
6-((4-(シクロプロピルアミノ)-5-ニトロピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよびN2,N4-ジシクロプロピル-5
-ニトロピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000366
アセトニトリル(2ml)中の2,4-ジクロロ-5-ニトロピリミジン(0.070
g、0.361mmol)に、0℃でシクロプロパンアミン(0.025ml、0.36
1mmol)を加えた。5分後、N-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(
0.069ml、0.397mmol)を加えた。混合物を60℃で10分間マイクロ波
照射し、次いで濃縮した。6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(
0.059g、0.361mmol)および酢酸(0.022g、0.361mmol)
を加えた。混合物を100℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。アセトンを
加え、固体を濾過して、6-((4-(シクロプロピルアミノ)-5-ニトロピリミジン
-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン17mgを、濃縮
後にN2,N4-ジシクロプロピル-5-ニトロピリミジン-2,4-ジアミン20mg
を含む濾液と共に得た。MS[C1616+H]の計算値:341.14
実測値341.00。MS[C1013+H]の計算値:236.12 実
測値236.00。
(実施例292)
5-ブロモ-2-クロロ-N-フェニルピリミジン-4-アミンの調製
Figure 2022017384000367
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、ア
ニリン(0.060ml、0.658mmol)およびN-エチル-N-イソプロピルプ
ロパン-2-アミン(0.126ml、0.724mmol)をアセトニトリル(2ml
)中で混合した。混合物を100℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮し、そのま
ま使用した。MS[C10BrClN+H]の計算値:283.96 実測値2
83.55。
(実施例293)
5-ブロモ-N4-フェニル-N2-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン
-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000368
5-ブロモ-2-クロロ-N-フェニルピリミジン-4-アミン(0.175g、0.
615mmol)および塩化亜鉛(II)(0.101g、0.738mmol)を1,
2-ジクロロエタン(3ml)中で混合した。30分後、混合物を140℃で20分間マ
イクロ波照射した。メタノール中アンモニア(200μL、7M)を加えた。混合物を1
40℃で20分間マイクロ波照射して出発物を消費し、精製を容易にした。シリカゲル上
でのフラッシュクロマトグラフィー(DCM)を使用して部分的に純粋な物質を得、次い
で生成物40mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN中10%THF)後に回
収した。MS[C1919BrN+H]の計算値:431.07 実測値43
0.90。
(実施例294)
6-((4-((1H-1,2,4-トリアゾール-3-イル)アミノ)-5-(トリフ
ルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H
)-オンの調製
Figure 2022017384000369
フラスコおよび撹拌子をフレーム乾燥した。加熱前、試薬および溶媒に窒素を吹き込ん
だ。6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)
-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.085g、0.248mmol)
、ジアセトキシパラジウム(1.671mg、7.44μmol)、1H-1,2,4-
トリアゾール-3-アミン(0.023g、0.273mmol)および炭酸セシウム(
0.105g、0.322mmol)をDMF(2ml)中で混合した。混合物を140
℃で20分間マイクロ波照射した。MeOHと共にセライトに通して濾過し、次いで濃縮
した。MeOHを加え、黄色固体を濾過した。アセトンおよびDCMで洗浄して非極性不
純物を除去し、生成物35mgを得た。MS[C1613O+H]の計算値
:391.13 実測値391.00。
(実施例295)
メチル(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)カ
ルバメートの調製
Figure 2022017384000370
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、メ
チル(2-ヒドロキシフェニル)カルバメート(0.110g、0.658mmol)お
よびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.126ml、0.724
mmol)をアセトニトリル(2ml)中で混合した。混合物を120℃で20分間マイ
クロ波照射し、次いで濃縮し、そのまま使用した。MS[C12BrClN
H]の計算値:357.96 実測値357.70。
(実施例296)
メチル(2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピ
リミジン-4-イル)オキシ)フェニル)カルバメートの調製
Figure 2022017384000371
メチル(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)
カルバメート(0.220g、0.614mmol)および塩化亜鉛(II)(0.10
0g、0.736mmol)を1,2-ジクロロエタン(3ml)中で混合した。1時間
後、トリエチルアミン(0.103ml、0.736mmol)および3,4,5-トリ
メトキシアニリン(0.112g、0.614mmol)を加えた。混合物を120℃で
20分間マイクロ波照射した。酢酸(0.037g、0.614mmol)および3,4
,5-トリメトキシアニリン(0.112g、0.614mmol)を加えた。混合物を
130℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。シリカゲル上でのフラッシュク
ロマトグラフィー(DCM-EtOAc)を使用して部分的に純粋な物質を得、次いで生
成物36mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN中10%THF)後に回収し
た。MS[C2121BrN+H]の計算値:505.07、実測値504.
95。
(実施例297)
N2-(1H-ベンゾ[d]イミダゾール-6-イル)-N4-(5-シクロブチル-1
H-ピラゾール-3-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミ
ンの調製
Figure 2022017384000372
2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(0.087g、0.40
1mmol)、5-シクロブチル-1H-ピラゾール-3-アミン(0.055g、0.
401mmol)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.07
7ml、0.441mmol)をアセトニトリル(2ml)中で混合した。混合物を80
℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。1H-ベンゾ[d]イミダゾール-6
-アミン(0.053g、0.401mmol)および酢酸(0.024g、0.401
mmol)を加えた。混合物を110℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。
生成物14mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN)後に回収した。MS[C
1917+H]の計算値:415.16、実測値415.20。
(実施例298)
5-ブロモ-2-クロロ-4-(2-(トリフルオロメチル)フェノキシ)ピリミジンの
調製
Figure 2022017384000373
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.150g、0.658mmol)、2
-(トリフルオロメチル)フェノール(0.117g、0.724mmol)およびN-
エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.138ml、0.790mmol
)をアセトニトリル(3ml)中で混合した。混合物を120℃で20分間マイクロ波照
射し、次いで濃縮し、そのまま使用した。MS[C11BrClFO+H]
の計算値:352.93、実測値352.60。
(実施例299)
5-ブロモ-4-(2-(トリフルオロメチル)フェノキシ)-N-(3,4,5-トリ
メトキシフェニル)ピリミジン-2-アミンの調製
Figure 2022017384000374
5-ブロモ-2-クロロ-4-(2-(トリフルオロメチル)フェノキシ)ピリミジン
(0.220g、0.622mmol)および塩化亜鉛(II)(0.110g、0.8
09mmol)を1,2-ジクロロエタン(3ml)中で混合した。30分後、トリエチ
ルアミン(0.121ml、0.871mmol)および3,4,5-トリメトキシアニ
リン(0.114g、0.622mmol)を加えた。混合物を120℃で20分間マイ
クロ波照射し、次いで濃縮した。生成物45mgをシリカゲル上でのフラッシュクロマト
グラフィー(DCM-EtOAc)後に回収した。MS[C2017BrF
+H]の計算値:500.05、実測値500.00。
(実施例300)
6-((4-フェノキシ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)
-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンおよび6-((2-フェノキシ-5-(
トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2
(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000375
2,4-ジクロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン(0.080g、0.36
9mmol)、フェノール(0.035g、0.369mmol)およびN-エチル-N
-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.071ml、0.406mmol)をアセト
ニトリル(2ml)中で混合した。混合物を100℃で10分間マイクロ波照射し、次い
で濃縮した。6-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.060g
、0.369mmol)および酢酸(0.022g、0.369mmol)を加えた。混
合物を110℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。50:50MeCN-水
混合物を加え、固体を濾過した。この固体にアセトンを加え、この固体を濾過して、6-
((4-フェノキシ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3
,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン23mgを得た。上記からのMeCN-水濾
液を自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN)を使用して精製して、6-((2-フ
ェノキシ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)-3,4-ジヒ
ドロキノリン-2(1H)-オン8mgを得た。MS[C2015+H]
の計算値:401.12、実測値401.20。
(実施例301)
6-((4-(シクロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-
イル)アミノ)-3,4-ジヒドロナフタレン-1(2H)-オンの調製
Figure 2022017384000376
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.060g、0.253mmol)および6-アミノ-3,4-ジヒドロナフタレ
ン-1(2H)-オン(0.041g、0.253mmol)を酢酸(1ml)中で混合
した。混合物を110℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。DCM-EtO
Acを加え、固体を濾過して、生成物61mgを得た。MS[C1817O+
H]の計算値:363.15、実測値363.15。
(実施例302)
(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)アミノ)フェニル)メタノー
ルの調製
Figure 2022017384000377
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.100g、0.439mmol)、(
2-アミノフェニル)メタノール(0.054g、0.439mmol)およびN-エチ
ル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.084ml、0.483mmol)を
アセトニトリル(2ml)中で混合した。混合物を100℃で20分間マイクロ波照射し
、次いで濃縮し、そのまま使用した。MS[C11BrClNO+H]の計算値
:313.97、実測値313.60。
(実施例303)
(2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジ
ン-4-イル)アミノ)フェニル)メタノールの調製
Figure 2022017384000378
(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)アミノ)フェニル)メタノ
ール(0.125g、0.397mmol)および塩化亜鉛(II)(0.065g、0
.477mmol)を1,2-ジクロロエタン(2ml)中で混合した。30分後、トリ
エチルアミン(0.072ml、0.517mmol)および3,4,5-トリメトキシ
アニリン(0.073g、0.397mmol)を加えた。混合物を140℃で20分間
マイクロ波照射し、次いで濃縮した。物質を自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN
中10%THF)を使用して精製して、部分的に純粋な物質を得た。これをシリカゲル上
でのフラッシュクロマトグラフィー(DCM-EtOAc)により更に精製して、生成物
22mgを得た。MS[C2021BrN+H]の計算値:461.08、実
測値460.90。
(実施例304)
N2-(4-アミノフェニル)-N4-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピ
リミジン-2,4-ジアミンおよびN2,N2’-(1,4-フェニレン)ビス(N4-
シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン)の調製
Figure 2022017384000379
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.060g、0.253mmol)およびベンゼン-1,4-ジアミン(0.05
5g、0.505mmol)をブタン-1-オール(1ml)中で混合した。混合物を1
20℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。アセトンを加え、固体を濾過して
、N2,N2’-(1,4-フェニレン)ビス(N4-シクロプロピル-5-(トリフル
オロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン)36mgを得た。濾液を濃縮して、N2-
(4-アミノフェニル)-N4-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジ
ン-2,4-ジアミン92mgを得た。MS[C1414+H]の計算値:
310.13、実測値310.00。MS[C2220+H]の計算値:5
11.18、実測値511.30。
(実施例305)
N4-シクロプロピル-N2-(キノキサリン-6-イル)-5-(トリフルオロメチル
)ピリミジン-2,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000380
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.060g、0.253mmol)およびキノキサリン-6-アミン(0.037
g、0.253mmol)を酢酸(1ml)中で混合した。混合物を120℃で20分間
マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物17mgを自動逆相クロマトグラフィー(水
-MeCN)後に回収した。MS[C1613+H]の計算値:347.1
3、実測値347.10。
(実施例306)
6-((4-(シクロプロピルアミノ)-6-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-
イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000381
2,4-ジクロロ-6-(トリフルオロメチル)ピリミジン(0.110g、0.50
7mmol)、シクロプロパンアミン(0.035ml、0.507mmol)およびN
-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.088ml、0.507mmo
l)をエタノール(3ml)中で混合した。23℃で3時間撹拌し、次いで濃縮した。6
-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.082g、0.507m
mol)および酢酸(0.030g、0.507mmol)を加えた。混合物を130℃
で20分間マイクロ波照射した。中間体はまだ存在していた。反応混合物を濃縮し、1,
2-ジクロロエタン(4mL)および塩化亜鉛(II)(0.069g、0.507mm
ol)を加えた。混合物を110℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成
物20mgをシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(DCM-EtOAc)後
に単離した。MS[C1716O+H]の計算値:364.14、実測値3
64.20。
(実施例307)
N-(2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6-イル)アミノ
)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)シクロプロパンカルボキサミド
の調製
Figure 2022017384000382
フラスコおよび撹拌子をフレーム乾燥した。加熱前、試薬および溶媒に窒素を吹き込ん
だ。6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)
-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.080g、0.233mmol)
、ジアセトキシパラジウム(1.572mg、7.00μmol)、シクロプロパンカル
ボキサミド(0.022g、0.257mmol)および炭酸セシウム(0.099g、
0.303mmol)をDMF(2ml)中で混合した。混合物を130℃で20分間マ
イクロ波照射した。MeOHと共にセライトに通して濾過し、次いで濃縮した。生成物4
mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN)後に単離した。MS[C1816
+H]の計算値:392.14、実測値392.05。
(実施例308)
tert-ブチル6-((4-(シクロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロイソキノリン-2(1H)-カルボ
キシレートの調製
Figure 2022017384000383
フラスコおよび撹拌子をフレーム乾燥した。加熱前、試薬および溶媒に窒素を吹き込ん
だ。2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-ア
ミン(0.100g、0.421mmol)、ジアセトキシパラジウム(2.83mg、
0.013mmol)、tert-ブチル6-アミノ-3,4-ジヒドロイソキノリン-
2(1H)-カルボキシレート(0.115g、0.463mmol)および炭酸セシウ
ム(0.178g、0.547mmol)を1,4-ジオキサン(2ml)中で混合した
。混合物を130℃で20分間マイクロ波照射した。MeOHと共にセライトに通して濾
過し、次いで濃縮した。アセトンを加え、固体を濾過すると、生成物は濾液中であり、こ
れを濃縮した。生成物166mgをシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(D
CM-EtOAc)後に単離した。MS[C2226+H]の計算値:
450.21、実測値450.55。
(実施例309)
N4-シクロプロピル-N2-(1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-6-イル
)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン・HClの調製
Figure 2022017384000384
tert-ブチル6-((4-(シクロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル
)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロイソキノリン-2(1H)-カル
ボキシレート(0.132g、0.294mmol)および水中塩化水素(0.489m
l、1.468mmol、水中3M)をメタノール(1ml)中で混合した。60℃に1
6時間加熱し、次いで濃縮した。固体をDCMで洗浄して、生成物109mgを得た。M
S[C1718+H]の計算値:350.16、実測値350.05。
(実施例310)
tert-ブチル(3-((2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリ
ン-6-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)
プロピル)カルバメートの調製
Figure 2022017384000385
6-((4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)-
3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.200g、0.584mmol)、
tert-ブチル5-アミノペンタノエート(0.101g、0.584mmol)およ
びN-エチル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.102ml、0.584m
mol)をDMF(5ml)中で混合した。混合物を100℃で20分間マイクロ波照射
し、次いで濃縮した。生成物242mgをシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィ
ー(DCM-MeOH)後に単離した。MS[C2227+H]の計算
値:481.22、実測値481.55。
(実施例311)
N-(シクロプロパンカルボニル)-N-(4-((4-(シクロプロピルアミノ)-5
-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパンカ
ルボキサミドの調製
Figure 2022017384000386
N2-(4-アミノフェニル)-N4-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-2,4-ジアミン(0.043g、0.139mmol)、シクロプロパン
カルボニルクロリド(0.016g、0.153mmol)およびN-エチル-N-イソ
プロピルプロパン-2-アミン(0.029ml、0.167mmol)をDMF(1m
l)中で混合した。混合物を60℃で10分間マイクロ波照射した。更にシクロプロパン
カルボニルクロリド(0.016g、0.153mmol)を加えた。混合物を60℃で
10分間マイクロ波照射した。生成物10mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-Me
CN)後に単離した。MS[C2222+H]の計算値:446.18
、実測値446.35。
(実施例312)
N-(4-((4-(シクロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン
-2-イル)アミノ)フェニル)シクロプロパンカルボキサミドの調製
Figure 2022017384000387
N2-(4-アミノフェニル)-N4-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-2,4-ジアミン(0.020g、0.065mmol)、シクロプロパン
カルボニルクロリド(6.16μl、0.068mmol)およびトリエチルアミン(0
.012ml、0.084mmol)をDMF(1ml)中で混合した。混合物を60℃
で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物3mgを自動逆相クロマトグラフ
ィー(水-MeCN)後に単離した。MS[C1818O+H]の計算値:
378.16、実測値378.00。
(実施例313)
6-((4-((3-アミノプロピル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジ
ン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン・HClの調製
Figure 2022017384000388
tert-ブチル(3-((2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノ
リン-6-イル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ
)プロピル)カルバメート(0.232g、0.483mmol)および塩化水素、H
O(0.644ml、1.931mmol)をメタノール(2ml)中で混合した。濃縮
して、生成物195mgを得た。MS[C1719O+H]の計算値:38
1.17、実測値381.10。
(実施例314)
5-((4-(シクロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-
イル)アミノ)イソインドリン-1,3-ジオンの調製
Figure 2022017384000389
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.060g、0.253mmol)および5-アミノイソインドリン-1,3-ジ
オン(0.041g、0.253mmol)を酢酸(2ml)中で混合した。混合物を1
20℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物1mgを自動逆相クロマト
グラフィー(水-MeCN中3%DMF)後に単離した。MS[C1612
+H]の計算値:364.10、実測値364.00。
(実施例315)
3-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルプロパン
アミドの調製
Figure 2022017384000390
3-ヒドロキシ-N-メチルプロパンアミド(0.068g、0.658mmol)お
よび水素化ナトリウム(0.026g、0.658mmol)をDMF(1ml)中で混
合した。混合物を80℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮し、そのまま使用した
。MS[CBrClN+H]の計算値:293.97、実測値293.6
0。
(実施例316)
3-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)オキシ)-N-メチルプロパンアミドの調製
Figure 2022017384000391
3-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルプロパ
ンアミド(0.175g、0.594mmol)および塩化亜鉛(II)(0.105g
、0.772mmol)を1,2-ジクロロエタン(3ml)中で混合した。30分後、
トリエチルアミン(0.083ml、0.594mmol)および3,4,5-トリメト
キシアニリン(0.109g、0.594mmol)を加えた。混合物を120℃で20
分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物31mgを自動逆相クロマトグラフィー
(水-MeCN)後に単離した。MS[C1721BrN+H]の計算値:4
41.08、実測値440.85。
(実施例317)
2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)アミノ)フェノールの調製
Figure 2022017384000392
2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)アミノ)フェノール(0.1
80g、0.599mmol)および塩化亜鉛(II)(0.098g、0.719mm
ol)を1,2-ジクロロエタン(4ml)中で混合した。トリエチルアミン(0.10
0ml、0.719mmol)および3,4,5-トリメトキシアニリン(0.110g
、0.599mmol)を加えた。混合物を130℃で20分間マイクロ波照射し、次い
で濃縮した。シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(DCM-EtOAc)を
使用して部分的に純粋な物質を得、次いで生成物19mgを自動逆相クロマトグラフィー
(水-MeCN中10%THF)後に回収した。MS[C1919BrN+H]
の計算値:447.07、実測値446.85。
(実施例318)
2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)オキシ)-4-メトキシ-N-メチルベンズアミドおよび2-((5-ブロ
モ-4-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン-2-イル)オキ
シ)-4-メトキシ-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000393
2-ヒドロキシ-4-メトキシ-N-メチルベンズアミド(0.048g、0.267
mmol)および水素化ナトリウム(0.014g、0.347mmol)をDMF(3
ml)中で混合した。次いで5-ブロモ-4-クロロ-N-(3,4,5-トリメトキシ
フェニル)ピリミジン-2-アミン(0.100g、0.267mmol)を加えた。混
合物を110℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃塩化アンモニウム溶液を加えた。
有機物をDCMで抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮した。2-((5-ブロモ-2
-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン-4-イル)オキシ)-
4-メトキシ-N-メチルベンズアミド12mgおよび2-((5-ブロモ-4-((3
,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン-2-イル)オキシ)-4-メト
キシ-N-メチルベンズアミド6mgを、自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN中
10%THF)後に回収した。MS[C2223BrN+H]の計算値:51
9.09、実測値519.05。
(実施例319)
N-(2-ヒドロキシフェニル)ピバルアミドの調製
Figure 2022017384000394
2-アミノフェノール(2g、18.33mmol)、塩化ピバロイル(2.483m
l、20.16mmol)および炭酸水素ナトリウム(4.62g、55.0mmol)
を水(60ml)および酢酸エチル(50ml)中で混合した。1M HClを加え、E
tOAcで1回およびDCMで1回抽出した。混合物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し
、真空で濃縮した。ニ重にアシル化された生成物も生成した。ヘキサンで洗浄して不純物
を除去し、そのまま使用した。MS[C1115NO+H]の計算値:194.1
2、実測値194.00。
(実施例320)
N-(2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリ
ミジン-4-イル)オキシ)フェニル)ピバルアミドの調製
Figure 2022017384000395
N-(2-ヒドロキシフェニル)ピバルアミド(0.062g、0.320mmol)
および水素化ナトリウム(9.99mg、0.416mmol)をDMF(3ml)中で
混合した。次いで5-ブロモ-4-クロロ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)
ピリミジン-2-アミン(0.120g、0.320mmol)を加えた。混合物を11
0℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物16mgを自動逆相クロマト
グラフィー(水-MeCN中10%THF)後に回収した。MS[C2427BrN
+H]の計算値:531.13、実測値531.05。
(実施例321)
N-(2-((2-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イルアミノ)-5-ブ
ロモピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)アセトアミドおよび4-(2-アミノフ
ェノキシ)-N-(ベンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-5-ブロモピリ
ミジン-2-アミンの調製
Figure 2022017384000396
N-(2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ)フェニル)ア
セトアミド(0.170g、0.496mmol)および塩化亜鉛(II)(0.081
g、0.595mmol)を1,2-ジクロロエタン(3ml)中で混合した。15分後
、トリエチルアミン(0.069ml、0.496mmol)およびベンゾ[d][1,
3]ジオキソール-5-アミン(0.068g、0.496mmol)を加えた。混合物
を120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。N-(2-((2-(ベンゾ
[d][1,3]ジオキソール-5-イルアミノ)-5-ブロモピリミジン-4-イル)
オキシ)フェニル)アセトアミド8mgおよび4-(2-アミノフェノキシ)-N-(ベ
ンゾ[d][1,3]ジオキソール-5-イル)-5-ブロモピリミジン-2-アミン2
6mgを、自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN中10%THF)後に回収した。
MS[C1915BrN+H]の計算値:443.04、実測値442.85
。MS[C1713BrN+H]の計算値:401.03、実測値400.8
0。
(実施例322)
2-((2,5-ジクロロピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドの
調製
Figure 2022017384000397
2,4,5-トリクロロピリミジン(0.170g、0.927mmol)、N-エチ
ル-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.161ml、0.927mmol)お
よび2-ヒドロキシ-N-メチルベンズアミド(0.140g、0.927mmol)を
n-ブタノール(5ml)中で混合した。60℃に16時間加熱し、次いで濃縮し、その
まま使用した。MS[C12Cl+H]の計算値:298.02、実測
値297.65。
(実施例323)
N-(2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリ
ミジン-4-イル)オキシ)フェニル)-2,2,2-トリフルオロアセトアミドの調製
Figure 2022017384000398
4-(2-アミノフェノキシ)-5-ブロモ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニ
ル)ピリミジン-2-アミン(0.190g、0.425mmol)、トリエチルアミン
(0.065ml、0.467mmol)および2,2,2-トリフルオロ酢酸無水物(
0.059ml、0.425mmol)をアセトニトリル(4.00ml)中で混合した
。混合物を130℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物10mgをシ
リカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(DCM)後に回収した。MS[C19
15BrN+H]の計算値:443.04、実測値442.85。MS[C21
18BrF+H]の計算値:543.05、実測値543.00。
(実施例324)
5-ブロモ-4-(キノリン-8-イルオキシ)-N-(3,4,5-トリメトキシフェ
ニル)ピリミジン-2-アミンおよび5-ブロモ-2-(キノリン-8-イルオキシ)-
N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-4-アミンの調製
Figure 2022017384000399
キノリン-8-オール(0.046g、0.320mmol)および水素化ナトリウム
(0.017g、0.416mmol)をDMF(2ml)中で混合した。次いで5-ブ
ロモ-4-クロロ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2-アミン
(0.120g、0.320mmol)を加えた。混合物を120℃で20分間マイクロ
波照射し、次いで濃縮した。5-ブロモ-4-(キノリン-8-イルオキシ)-N-(3
,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2-アミン28mgおよび5-ブロモ-
2-(キノリン-8-イルオキシ)-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミ
ジン-4-アミン24mgを、自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN中10%TH
F)後に回収した。MS[C2219BrN+H]の計算値:483.07、
実測値482.90。
(実施例325)
2-((5-ブロモ-2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6
-イル)アミノ)ピリミジン-4-イル)オキシ)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000400
上記の通りに調製した2-((5-ブロモ-2-クロロピリミジン-4-イル)オキシ
)-N-メチルベンズアミド(0.140g、0.409mmol)および塩化亜鉛(I
I)(0.067g、0.490mmol)を1,2-ジクロロエタン(3ml)中で混
合した。30分後、トリエチルアミン(0.063ml、0.450mmol)および6
-アミノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.066g、0.409m
mol)を加えた。混合物を130℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生
成物32mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN中10%THF)後に回収し
た。MS[C2118BrN+H]の計算値:468.07、実測値467.
95。
(実施例326)
2-((1H-ピロロ[2,3-b]ピリジン-5-イル)アミノ)-5-(トリフルオ
ロメチル)ピリミジン-4-オールの調製
Figure 2022017384000401
N-(4-クロロ-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-イル)-1H-ピロ
ロ[2,3-b]ピリジン-5-アミン(0.102g、0.325mmol)、2-ア
ミノ-N-メチルベンズアミド(0.029g、0.195mmol)およびN-エチル
-N-イソプロピルプロパン-2-アミン(0.057ml、0.325mmol)をD
MF(1ml)中で混合した。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃
縮した。2:1水/MeCNを加えて固体が沈殿し、これを濾過した。濾液を濃縮し、副
生成物20mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN)後に回収した。MS[C
12O+H]の計算値:296.08、実測値295.85。
(実施例327)
2-(2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリ
ミジン-4-イル)オキシ)フェニル)-N-メチルアセトアミドの調製
Figure 2022017384000402
2-(2-ヒドロキシフェニル)-N-メチルアセトアミド(0.044g、0.26
7mmol)および水素化ナトリウム(8.33mg、0.347mmol)をDMF(
2ml)中で混合した。5分後、5-ブロモ-4-クロロ-N-(3,4,5-トリメト
キシフェニル)ピリミジン-2-アミン(0.100g、0.267mmol)を加えた
。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物50mgを自
動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN中10%THF)後に回収した。MS[C22
23BrN+H]の計算値:503.10、実測値503.00。
(実施例328)
N-(2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリ
ミジン-4-イル)オキシ)ベンジル)アセトアミドの調製
Figure 2022017384000403
5-ブロモ-4-クロロ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2
-アミン(0.110g、0.294mmol)、N-(2-ヒドロキシベンジル)アセ
トアミド(0.049g、0.294mmol)および水素化ナトリウム(0.015g
、0.382mmol)をDMF(2ml)中で混合した。混合物を120℃で20分間
マイクロ波照射し、次いで濃縮した。生成物31mgを自動逆相クロマトグラフィー(水
-MeCN中10%THF)後に回収した。MS[C2223BrN+H]
計算値:503.10、実測値503.05。
(実施例329)
4-((1H-インドール-7-イル)オキシ)-5-ブロモ-N-(3,4,5-トリ
メトキシフェニル)ピリミジン-2-アミンおよび2-((1H-インドール-7-イル
)オキシ)-5-ブロモ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-4-
アミンの調製
Figure 2022017384000404
1H-インドール-7-オール(0.039g、0.294mmol)および水素化ナ
トリウム(0.015g、0.382mmol)をDMF(3ml)中で混合した。次い
で5-ブロモ-4-クロロ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2
-アミン(0.110g、0.294mmol)を加えた。混合物を120℃で20分間
マイクロ波照射し、次いで濃縮した。4-((1H-インドール-7-イル)オキシ)-
5-ブロモ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2-アミン44m
gおよび2-((1H-インドール-7-イル)オキシ)-5-ブロモ-N-(3,4,
5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-4-アミン6mgを、自動逆相クロマトグラフ
ィー(水-MeCN中10%THF)後に回収した。MS[C2119BrN
H]の計算値:471.07、実測値470.95。
(実施例330)
5-ブロモ-4-((5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-1-イル)オキシ)-
N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2-アミンおよび5-ブロモ-
2-((5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-1-イル)オキシ)-N-(3,4
,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-4-アミンの調製
Figure 2022017384000405
5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-1-オール(0.044g、0.294m
mol)および水素化ナトリウム(0.015g、0.382mmol)をDMF(3m
l)中で混合した。5分後、5-ブロモ-4-クロロ-N-(3,4,5-トリメトキシ
フェニル)ピリミジン-2-アミン(0.110g、0.294mmol)を加えた。混
合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。5-ブロモ-4-((5
,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-1-イル)オキシ)-N-(3,4,5-トリ
メトキシフェニル)ピリミジン-2-アミン66mgおよび5-ブロモ-2-((5,6
,7,8-テトラヒドロナフタレン-1-イル)オキシ)-N-(3,4,5-トリメト
キシフェニル)ピリミジン-4-アミン14mgを、自動逆相クロマトグラフィー(水-
MeCN中10%THF)後に回収した。MS[C2324BrN+H]の計
算値:486.11、実測値486.05。
(実施例331)
4-(1H-ベンゾ[d][1,2,3]トリアゾール-1-イル)-5-ブロモ-N-
(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2-アミンおよび2-(1H-ベン
ゾ[d][1,2,3]トリアゾール-1-イル)-5-ブロモ-N-(3,4,5-ト
リメトキシフェニル)ピリミジン-4-アミンの調製
Figure 2022017384000406
1H-ベンゾ[d][1,2,3]トリアゾール(0.035g、0.294mmol
)および水素化ナトリウム(0.015g、0.382mmol)をDMF(3ml)中
で混合した。5分後、5-ブロモ-4-クロロ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニ
ル)ピリミジン-2-アミン(0.110g、0.294mmol)を加えた。混合物を
120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。4-(1H-ベンゾ[d][1
,2,3]トリアゾール-1-イル)-5-ブロモ-N-(3,4,5-トリメトキシフ
ェニル)ピリミジン-2-アミン70mgおよび2-(1H-ベンゾ[d][1,2,3
]トリアゾール-1-イル)-5-ブロモ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)
ピリミジン-4-アミン28mgを、シリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(
DCM-EtOAc)後に回収した。MS[C2324BrN+H]の計算値
:486.11、実測値486.05。
(実施例332)
シクロプロピル(6-((4-(シクロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)
ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロイソキノリン-2(1H)-イル)
メタノンの調製
Figure 2022017384000407
N4-シクロプロピル-N2-(1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-6-イ
ル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2,4-ジアミン・HCl(0.018
g、0.047mmol)、シクロプロパンカルボニルクロリド(4.23μl、0.0
47mmol)およびトリエチルアミン(0.026ml、0.187mmol)をDM
F(3ml)中で混合した。60℃に8時間加熱した。MeOHを加え、濃縮した。生成
物8mgをシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(DCM-EtOAc)後に
回収した。MS[C2122O+H]の計算値:418.19、実測値41
8.00。
(実施例333)
N-(3-((2-((2-オキソ-1,2,3,4-テトラヒドロキノリン-6-イル
)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-イル)アミノ)プロピル)シ
クロプロパンカルボキサミドの調製
Figure 2022017384000408
6-((4-((3-アミノプロピル)アミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミ
ジン-2-イル)アミノ)-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン・HCl(0
.024g、0.058mmol)、シクロプロパンカルボニルクロリド(5.22μl
、0.058mmol)およびトリエチルアミン(0.020ml、0.144mmol
)をDMF(1ml)中で混合した。MeOHを加え、1時間撹拌し、次いで濃縮した。
生成物19mgをシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー(DCM-MeOH)
後に回収した。MS[C2123+H]の計算値:449.19、実測
値449.00。
(実施例334)
6-((4-(シクロプロピルアミノ)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2-
イル)アミノ)-2,3-ジヒドロフタラジン-1,4-ジオンの調製
Figure 2022017384000409
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.055g、0.231mmol)および6-アミノ-2,3-ジヒドロフタラジ
ン-1,4-ジオン(0.041g、0.231mmol)を酢酸(2ml)中で混合し
た。混合物を110℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。MeOHおよび5
%DMFを加え、固体を濾過して、生成物35mgを得た。MS[C1613
+H]の計算値:379.12、実測値379.00。
(実施例335)
1-(8-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリ
ミジン-4-イル)オキシ)-3,4-ジヒドロキノリン-1(2H)-イル)エタン-
1-オンおよび1-(8-((5-ブロモ-4-((3,4,5-トリメトキシフェニル
)アミノ)ピリミジン-2-イル)オキシ)-3,4-ジヒドロキノリン-1(2H)-
イル)エタン-1-オンの調製
Figure 2022017384000410
5-ブロモ-4-クロロ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2
-アミン(0.100g、0.267mmol)、1-(8-ヒドロキシ-3,4-ジヒ
ドロキノリン-1(2H)-イル)エタン-1-オン(0.051g、0.267mmo
l)および水素化ナトリウム(0.014g、0.347mmol)をDMF(2ml)
中で混合した。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。1-(
8-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)オキシ)-3,4-ジヒドロキノリン-1(2H)-イル)エタン-1-オ
ン52mgおよび1-(8-((5-ブロモ-4-((3,4,5-トリメトキシフェニ
ル)アミノ)ピリミジン-2-イル)オキシ)-3,4-ジヒドロキノリン-1(2H)
-イル)エタン-1-オン36mgを、自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN中1
0%THF)後に回収した。MS[C2425BrN+H]の計算値:529
.11、実測値529.10。
(実施例336)
2-((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジン
-4-イル)オキシ)フェノールの調製
Figure 2022017384000411
ピロカテコール(0.032g、0.294mmol)および水素化ナトリウム(0.
015g、0.382mmol)をDMF(2ml)中で混合した。次いで5-ブロモ-
4-クロロ-N-(3,4,5-トリメトキシフェニル)ピリミジン-2-アミン(0.
110g、0.294mmol)を加えた。混合物を120℃で10分間マイクロ波照射
し、次いで濃縮した。生成物31mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN中1
0%THF)後に回収した。MS[C1918BrN+H]の計算値:448
.05、実測値447.95。
(実施例337)
2-(ヒドロキシメチル)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000412
2-メチルイソインドリン-1,3-ジオン(1.08g、6.70mmol)および
水素化ホウ素ナトリウム(0.761g、20.10mmol)を2-プロパノール(1
5ml)、トルエン(2.500ml)および水(2.500ml)中で混合した。1M
HClを加えて試薬をクエンチし、次いで濃縮して、2-プロパノールを除去した。E
tOAcで2回抽出し、硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し、生成物をそのまま使用した。
データはTetrahedron Letters 39、(1998)、5017-5018に報告されているデータと一致し
た。
(実施例338)
2-(((5-ブロモ-2-((3,4,5-トリメトキシフェニル)アミノ)ピリミジ
ン-4-イル)オキシ)メチル)-N-メチルベンズアミドの調製
Figure 2022017384000413
2-(ヒドロキシメチル)-N-メチルベンズアミド(0.044g、0.267mm
ol)および水素化ナトリウム(0.014g、0.347mmol)をDMF(3ml
)中で混合した。次いで5-ブロモ-4-クロロ-N-(3,4,5-トリメトキシフェ
ニル)ピリミジン-2-アミン(0.100g、0.267mmol)を加えた。混合物
を150℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。物質をシリカゲル上でのフラ
ッシュクロマトグラフィー(DCM-MeOH)に供して部分的に純粋な固体を得、次い
でこれをアセトンで洗浄して、生成物18mgを得た。MS[C2223BrN
+H]の計算値:503.10、実測値503.00。
(実施例339)
5-クロロ-N2-(5-メトキシ-2-メチルフェニル)-N4-(2-(5-メチル
-1,2,4-オキサジアゾール-3-イル)フェニル)ピリミジン-2,4-ジアミン
の調製
Figure 2022017384000414
2,5-ジクロロ-N-(2-(5-メチル-1,2,4-オキサジアゾール-3-イ
ル)フェニル)ピリミジン-4-アミン(0.161g、0.5mmol)および5-メ
トキシ-2-メチルアニリン(0.137g、1mmol)をBuOH(5mL)に溶
解し、一般方法1bに従って処理した。淡黄色固体(0.122g、58%)。LCMS
2119ClN[M+H]+の計算値:423.13。実測値:423.0
0。
(実施例340)
2-((3-ブロモ-5-ニトロピリジン-2-イル)(エチル)アミノ)エタン-1-
オールの調製
Figure 2022017384000415
3-ブロモ-2-クロロ-5-ニトロピリジン(2g、8.42mmol)、トリエチ
ルアミン(1.174ml、8.42mmol)および2-(エチルアミノ)エタン-1
-オール(0.751g、8.42mmol)をアセトニトリル(30ml)中で混合し
た。80℃に14時間加熱し、次いで濃縮した。生成物1.76gをシリカゲル上での自
動クロマトグラフィー(DCM-EtOAc)後に回収した。
(実施例341)
4-エチル-7-ニトロ-3,4-ジヒドロ-2H-ピリド[3,2-b][1,4]オ
キサジンの調製
Figure 2022017384000416
2-((3-ブロモ-5-ニトロピリジン-2-イル)(エチル)アミノ)エタン-1
-オール(0.182g、0.627mmol)、2’-(ジ-tert-ブチルホスフ
ァニル)-N,N-ジメチル-[1,1’-ビフェニル]-2-アミン(0.013g、
0.038mmol)、Pd(dba)(0.017g、0.019mmol)およ
びナトリウム2-メチルプロパン-2-オレート(0.090g、0.941mmol)
をトルエン(5ml)中で混合した。100℃に16時間加熱し、次いで濃縮した。水を
加え、DCMで3回およびEtOAcで1回抽出した。硫酸ナトリウムで乾燥し、濃縮し
た。物質をアルミナ上でのフラッシュクロマトグラフィー(DCM)に供して、生成物5
1mgを得た。LCMS[C11+H]の計算値:210.09、実測値
:210.21。
(実施例342)
4-エチル-3,4-ジヒドロ-2H-ピリド[3,2-b][1,4]オキサジン-7
-アミンの調製
Figure 2022017384000417
4-エチル-7-ニトロ-3,4-ジヒドロ-2H-ピリド[3,2-b][1,4]
オキサジン(0.051g、0.244mmol)およびパラジウム(2.59mg、0
.024mmol)をメタノール(3ml)中で混合した。水素風船を加え、2日間撹拌
し、次いでDCMおよびMeOHと共にセライトに通して濾過し、濃縮して生成物47m
gを得、これをそのまま使用した。LCMS[C11+H]の計算値:2
10.09、実測値:210.21。
(実施例343)
6-((5-ブロモ-4-((4-エチル-3,4-ジヒドロ-2H-ピリド[3,2-
b][1,4]オキサジン-7-イル)アミノ)ピリミジン-2-イル)アミノ)-3,
4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オンの調製
Figure 2022017384000418
5-ブロモ-2,4-ジクロロピリミジン(0.051g、0.223mmol)、4
-エチル-3,4-ジヒドロ-2H-ピリド[3,2-b][1,4]オキサジン-7-
アミン(0.04g、0.223mmol)およびN-エチル-N-イソプロピルプロパ
ン-2-アミン(0.039ml、0.223mmol)をアセトニトリル(2ml)中
で混合した。混合物を100℃で10分間マイクロ波照射し、次いで濃縮した。6-アミ
ノ-3,4-ジヒドロキノリン-2(1H)-オン(0.032g、0.200mmol
)を酢酸(1ml)と共に加えた。混合物を120℃で20分間マイクロ波照射し、次い
で濃縮した。生成物5mgを逆相HPLC(水-MeCN)後に回収した。MS[C22
22BrN+H]の計算値:496.11、実測値496.32。
(実施例344)
N4-シクロプロピル-N2-(4-エチル-3,4-ジヒドロ-2H-ピリド[3,2
-b][1,4]オキサジン-7-イル)-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-2
,4-ジアミンの調製
Figure 2022017384000419
2-クロロ-N-シクロプロピル-5-(トリフルオロメチル)ピリミジン-4-アミ
ン(0.120g、0.505mmol)および4-エチル-3,4-ジヒドロ-2H-
ピリド[3,2-b][1,4]オキサジン-7-アミン(0.091g、0.505m
mol)を酢酸(2ml)中で混合した。混合物を110℃で10分間マイクロ波照射し
、次いで濃縮した。生成物76mgを自動逆相クロマトグラフィー(水-MeCN)後に
回収した。MS[C1719O+H]の計算値:381.17、実測値38
1.33。
更なる実施例を以下に提供する:
Figure 2022017384000420
Figure 2022017384000421
Figure 2022017384000422
(実施例357)
(方法)
(プラスミド)
ヒトAtg13をコードするcDNA(KIAA0652/AB014,552)は、
日本のかずさDNA研究所から入手した。ヒトFIP200、マウスULK1、およびマ
ウスULK2構築物のcDNAは、Open Biosystemsから入手した(それ
ぞれ、クローン3,908,134、6,834,534、および5,709,559)
。ヒトAtg101、ヒトVPS34、ヒトアンブラ1およびヒトベクリン-1は、In
vitrogenから入手した。マウスシンテニン-1のcDNAは、マウス胚線維芽細
胞(MEF)から調製したcDNAライブラリーからクローニングし、マウスシンテニン
-1の転写変異体1(NM_001,098,227.1)の配列と合致するように配列
を検証した。
FlagタグおよびattL1部位(BP反応のため)を、標準的な手順を使用してP
CR増幅した。cDNAをBP clonase(Invitrogen)でpDONR
221中にサブクローニングし、QuikChange II XL(Stratage
ne)を使用して部位特異的突然変異誘発法を実施した。キナーゼデッドULK1は、K
46I突然変異によって実現した。キナーゼデッドVPS34は、D747N/N748
K二重突然変異によって実現した。pDONR221における野生型および突然変異対立
遺伝子の全体を配列決定して、PCRまたは突然変異誘発ステップ中にさらなる突然変異
が導入されなかったことを検証し、次いで、LR反応(Invitrogen)によって
、pcDNA3 MycもしくはFlag哺乳動物発現ベクター、またはpcDNA6.
2 V5 dest(Invitrogen)、またはpQCXINレトロウイルスデス
ティネーションベクター(Addgene 17,399)のいずれかに入れた。pMX
spuro-GFP-DFCP1はNoboru Mizushimaから寄贈されたも
のであり、pEGFP-p40PXはSeth Field(UCSD)から寄贈された
ものであった。
(抗体および試薬)
使用した細胞シグナル伝達抗体:総4EBP-1(9452番)、総ベクリン(349
5番)、Parp(9542番)、総Atg13(6940番)、pAMPK Thr1
72(2535番)、総AMPKアルファ1(2532番)、pACC Ser79(3
661番)、総ACC(4190番)、pAurora(2914番)、pRaptor
Ser792(2083番)、総raptor(4978番)、ホスホULK1 se
r555(5869番)、pS6(4858番)、Myc(2278番)、LC3B(3
868番)、総VPS34(4263番)、pJak2(4406番)。ホスホVPS3
4 ser249抗体は、Cell Signaling TechnologyのGa
ry Kasofと共同で開発した。
使用したAbgent抗体:gabarap(PM037)。Abcam製pFAK
Y397(ab4803)。Epitomics製総FAK(2146-1)。使用した
Sigma抗体:総ULK1(A7481)チューブリン(T5168)、およびFla
gポリクローナル(F7425)。Progen、Heidelberg German
y製モルモット抗p62セクエストソーム抗体(03-GPP62-C)。Abbiot
ec製pベクリン-1 ser15(254,515)。
Gibco/Life Technologies製EBSS(14,155-063
)および無グルコース培地(11,966-025)。Sigma製クロロキン。Act
ive Biochem製AZD-8055(A-1008)。BD Bioscien
ces製Annexin V-PEアポトーシス検出キット。NARD製Phos-ta
g(商標)AAL-107(304-93,521番)。University of
Iowa adenoviral coreから購入したAd5-CMV-Cre。
(細胞培養、一過性トランスフェクション、細胞溶解およびPhos-tag(商標)
移動度シフト分析)
HEK293T、U87MG、PC3、A549およびSV40不死化野生型マウス胚
線維芽細胞(MEF)細胞を、10%ウシ胎仔血清(Hyclone、Thermo S
cientific)およびペニシリン/ストレプトマイシンを含有するDMEM(Me
diatech、Manassas、VA)中、37℃、10%CO中で培養した。F
AK MEはDavid Schlaepfer(UCSD)から、ULK1 KOおよ
びULK1/2 DKO MEFはCraig Thompson(MSKCC)から、
VPS34flox/floxMEFはWei-Xing Zong(SUNYSB)か
ら、Atg5 MEFはJay Debnath(UCSF)から、寄贈されたものであ
る。
HEK293T細胞における一過性発現のために、Lipofectamine 20
00(Invitrogen)を使用し、製造業者のプロトコールに準拠して、6cmの
培養皿当たり2ugずつのDNAプラスミドをトランスフェクトした。細胞をトランスフ
ェクション24時間後に収穫し、氷冷PBSで1回すすぎ、沸騰しているSDS溶解緩衝
剤(10mM Tris pH7.5、100mM NaCl、1%SDS)中で溶解さ
せた。粉砕後、BCA方法(Pierce)を使用して溶解物をタンパク質レベルに対し
て平衡化し、製造業者の指示に従って、8から15%SDS-PAGE Phos-ta
g(商標)ゲルで分割した。簡潔に述べると、Phos-tag(商標)AAL-107
(NARD 304-93,521番)を、SDS-PAGEアクリアミド混合物に、5
0μMの最終濃度で、100μMの最終濃度のMnClとともに添加した。移動前に、
ゲルを、1mmol/L EDTAを含有する移動緩衝剤に30分間にわたって穏やかに
かき混ぜながら浸漬して、ゲルからマンガンイオンを排除する。ゲルをPVDF膜に移し
、製造業者の指示に従って、指示されている抗体でプローブする。
(レンチおよびレトロウイルス調製ならびにウイルス感染症)
レンチウイルスshRNA形質導入およびレトロウイルス遺伝子発現は、前述した通り
に実施した。簡潔に述べると、pQCXIN Flag ULK1構築物を、アンホパッ
ケージングプラスミドとともに、増殖している293T中にトランスフェクトした。ウイ
ルス含有上清をトランスフェクション48時間後に収集し、濾過して細胞を排除し、標的
ULK1-/-MEFまたはA549を、ポリブレンの存在下で感染させた。24時間後
、細胞をネオマイシンで選択した。shRNAをコードするpLKO shRNAベクタ
ーを、レンチウイルスパッケージングプラスミドvsvg、GAG/pol、およびRE
Vとともに、Lipofectamine 2000を使用してHEK293T細胞中に
トランスフェクトした。トランスフェクション48時間後にウイルスを収集し、Myc
ULK1を既に安定的に発現しているMEF(mULK2に対するshRNA 93番)
およびU2OS(それぞれhULK1およびhULK2に対するshRNA 8番および
91番)に、ポリブレンの存在下、4時間にわたって、収集したウイルスを感染させて、
マウスであるMyc ULK1ではなく、内因性ヒトタンパク質をノックダウンした。
(ULK1キナーゼアッセイ)
ULK1キナーゼ活性を測定するためのガンマ-32Pアッセイは、前述した通りに実
施した。簡潔に述べると、Flag ULK1をHEK293T細胞中にトランスフェク
トし、20時間後、示されている通りに処理した。免疫沈降物をIP緩衝剤で3回洗浄し
、キナーゼ緩衝剤(25mM MOPS、pH7.5、1mM EGTA、0.1mM
NaVO、15mM MgCl)中で洗浄した。熱および冷ATPを、100μM
の最終濃度で添加した。基質として、大腸菌(E. coli)から精製されたGSTまたは組
換えタンパク質GST-Atg101を、各反応につき1μgで使用した。反応物を沸騰
させ、SDS pageゲル上で泳動させた。ゲルを乾燥させ、PhosphoImag
erソフトウェアを使用して撮像した。ULK1を評価するための冷アッセイでは、Fl
ag ULK1を一時的に過剰発現させ、HEK293T細胞から免疫沈降させた。次い
で、反応物をSDS pageゲル上で泳動させ、PVDF膜に移し、総レベルについて
ブロットした。
(蛍光顕微鏡検査法)
Vps34flox/floxMEFを、Flag-VPS34およびp40FXまた
はGFP-DFCP1のいずれかで再構成させた。Creリコンビナーゼを発現している
アデノウイルス(100のMOI)の感染48時間後、細胞を、ガラスカバースリップ上
、6ウェル組織培養プレート中ウェル当たり3×10細胞の密度で平板培養した。18
時間後、細胞をPBS中4%PFA中で10分間にわたって固定し、PBS中0.2%T
riton中で10分間にわたって透過化した。下記の一次抗体を使用した:マウス抗M
ycエピトープおよびLC3B XP抗体(それぞれ2276および3868、Cell
Signaling Technologies)。二次抗体は、抗ウサギAlexa
488および抗マウスAlexa594(Molecular Probes、1:10
00)であった。次いで、細胞を固定し、DAPIで対比染色した。カバースリップをF
luoromountG(SouthernBiothech)に載置した。Openl
abソフトウェアと連結されたZeiss Axioplan2落射蛍光顕微鏡で画像を
獲得した。mitotrackerの共焦点像を、Zeiss LSM 710レーザー
走査型共焦点顕微鏡で撮影した。100倍対物レンズおよび示されている代表的な画像を
使用して、条件当たり10ランダムフィールドを獲得した。ガラスカバースリップをFl
uoromountGとともにプレート上に直接載置し、Zeiss Axioplan
2落射蛍光顕微鏡で画像を撮影した。
(ペプチドライブラリースクリーニング)
ペプチド混合物(50mM)を、マルチウェルプレート中、50mM HEPES、p
H7.4、25mM MgCl2、0.25mM DTT、12.5mM b-グリセロ
リン酸塩、5mM EGTA、2mM EDTA、0.1%Tween20、および50
mM ATP(0.03mCi/ml)中の示されているキナーゼの存在下、30℃で2
時間にわたってインキュベートした。各反応物のアリコートを、ストレプトアビジンでコ
ーティングされた膜(Promega)に移し、これを、前述した通りに、クエンチし、
洗浄し、乾燥させた。膜をホスホイメージャースクリーンに曝露して、放射性標識の組込
みを定量化した。Microsoft Excelを使用して、ヒートマップを生成した
(質量分析)
293T細胞において過剰発現されているMyc ULK1を、抗Myc抗体(Cel
l Signaling)とともに腹腔内注射した、ビヒクル、A769,662、また
はフェンホルミンのいずれかで処理し、SDS pageゲル上で泳動させ、クマシー染
色した。ULK1に対応するゲル上のバンドを切り取り、ジチオスレイトールによる還元
、ヨードアセトアミドによるアルキル化、およびトリプシンまたはキモトリプシンによる
pH8.3で終夜のゲル内消化、続いて、逆相マイクロキャピラリー/タンデム質量分析
(LC/MS/MS)に供した。LC/MS/MSは、Easy-nLC nanofl
ow HPLC(Proxeon Biosciences)を、LTQ-Orbitr
ap XL質量分析計と連結された自己充填内径75μm×15cmのC18カラム(T
hermo Scientific)とともに使用して、データ依存性獲得および陽イオ
ンモードにて、300nL/分で実施した。AMPK予測リン酸化部位からのペプチドイ
オンは、定量的分析のためのMS/MSモードにおいても標的となった。イオントラップ
における衝突誘起解離を介して収集されたMS/MSスペクトルは、Sequest(P
roteomics Browser Software、Thermo Scient
ific)を、Ser/Thr/Tyrリン酸化(+79.97)および試料処理アーチ
ファクトMet酸化(+15.99)、AsnおよびGlnの脱アミド(+0.984)
ならびにCysアルキル化(+57.02)のための差示的な修飾とともに使用して、連
接した標的およびデコイ(逆)単一のエントリULK1および完全なSwiss-Pro
tタンパク質データベースに対して探索した。リン酸化および非リン酸化ペプチド配列は
、下記のSequestスコアリング閾値を最初に渡した場合に同定した:標的データベ
ースに対して、1+イオン、Xcorr≧2.0Sf≧0.4、P≧5;2+イオン、X
corr≧2.0、Sf≧0.4、P≧5;標的タンパク質データベースに対して、3+
イオン、Xcorr≧2.60、Sf≧0.4、P≧5。通過するMS/MSスペクトル
を手動で検査して、すべてのb-およびy-断片イオンが、割り当てられた配列および修
飾部位とアラインしていることを確かめた。リン酸化の正確な部位の決定は、Fuzzy
IonsおよびGraphModを使用して補助し、リン酸化部位マップは、Prote
inReportソフトウェア(Proteomics Browser Softwa
re一式、Thermo Scientific)を使用して作成した。ペプチドヒット
(リン酸化および非リン酸化)の偽発見率(FDR)は、逆データベースヒットに基づき
、1.5%未満であると推測された。
(アポトーシス分析-ウエスタンブロットおよびフローサイトメトリー)
A549細胞(ATCC CCL185番)およびMEFを、2.5×10細胞/m
L(すなわち、6cmの培養皿当たり750,000個の細胞)の濃度で播種し、終夜増
殖させ(18時間)、図の説明文において示されている通りに処理した。別段の指示がな
い限り、「飢餓」はEBSSであり、「対照」は示された時点に完全血清を加えたDME
Mである。ウエスタンブロットのための試料を、1×氷冷PBSで1回洗浄し、沸騰して
いるSDS溶解緩衝剤(10mM Tris pH7.5、100mM NaCl、1%
SDS)中で溶解させた。粉砕後、BCA方法(Pierce)を使用して溶解物をタン
パク質レベルに対して平衡化し、タンパク質の大きさに応じて、8から15%SDS-P
AGEゲルで分割した。PVDF膜を、製造業者の指示に従って、示されている抗体で終
夜プローブした。
フローサイトメトリー分析のために、細胞を適切な時点で収集し、PBS中で1回洗浄
し、トリプシン処理し、ペレット化した。Annexin V染色のために、細胞を、1
×Annexin V緩衝剤中で洗浄し、Annexin V染色プロトコール(BD
Pharmingen、San Diego、CA)によって記載した通りに処理した。
簡潔に述べると、細胞をAnnexin V緩衝剤に1mL当たり100万の濃度になる
まで再懸濁し、次いで、100,000個の細胞を、5μLのフィコエリトリン(PE)
がコンジュゲートされたAnnexin V抗体(BD Pharmingen、San
Diego、CA)および5μLの7-アミノ-アクチノマイシンD(7AAD)で染
色し、次いで、室温で15分間にわたってインキュベートした。次いで、400μLのA
nnexin V緩衝剤を、穏やかに混合しながら各試料に添加した。染色した細胞を、
FACScanフローサイトメーター(Becton Dickinson、San J
ose、CA)を使用して分析した。フローサイトメトリーデータを、FlowJo 8
.6ソフトウェア(Tree Star Inc.、Ashland、OR)を使用して
分析した。
(選択性プロファイリング)
キナーゼ阻害剤特異性プロファイリングアッセイは、最初に、1μMの化合物14を使
用する456キナーゼのパネル(www dot discoverx dot com
)に対するDiscoveRx KINOMEscan競合結合アッセイを使用して行っ
た。次いで、化合物14と潜在的に相互作用するキナーゼ(10%未満DMSO対照まで
阻害した)を、化合物14の用量曲線を用いる伝統的なin vitroキナーゼアッセ
イにおいて試験して、酵素活性をモニターし、Reaction Biologyを使用
してIC50曲線を決定した。
(考察)
(ULK1キナーゼコンセンサスリン酸化部位の決定)
その機能に重要となり得るULK1の新規基質を同定するために、本発明者らは、AM
PKについて以前に行った通り、配置された縮退ペプチドライブラリーを使用して最適な
ULK1リン酸化部位コンセンサスモチーフを同定した。これらの実験のための活性UL
K1を生成するために、エピトープタグ付きULK1を、HEK293T細胞および親和
性樹脂から溶離したペプチド中、そのサブユニットFIP200およびAtg13と共発
現させた。過去の研究は、適正なULK1活性にはFIP200およびAtg13の会合
が必要とされることを実証した。本発明者らの免疫沈降したULK1/FIP200/A
tg13複合体のin vitroキナーゼ活性を検査するために、本発明者らは、進化
を越えて保存されたULK1基質であることからin vitroキナーゼ基質としてA
tg13を、および哺乳動物細胞において報告されている最古のULK1基質の1つを利
用した。精製されたULK1複合体は、用量応答方式でAtg13に対して強固なキナー
ゼ活性を呈した。精製されたULK1複合体のこの供給源を、配置された縮退ペプチドラ
イブラリー上でのin vitroキナーゼアッセイに供して、その基質に対するULK
1の配列優先性を反映している特異的なペプチドライブラリーへの32γ-ATPの選択
的移動を明らかにした。
本発明者らが決定したULK1基質モチーフ配列特異性(図4A)は、ULK1の酵母
オルソログであるAtg1についての最近のデータと極めてよく合致したが、これまでに
研究されたほとんどのキナーゼと比較して非常に独特である。特に、ULK1は、-3位
の疎水性残基、特にメチオニンおよびロイシンを好む。加えて、疎水性残基、とりわけフ
ェニルアラニンおよびチロシンのようなバルキーな残基は、+1位が富化されており、A
tg1最適モチーフとよく相関している(図4B)。本発明者らは、最適なULK1基質
コンセンサス配列に基づいて、最適なペプチド、Ulktideを生成し、その効率的な
使用を、in vitroでのULK1キナーゼ活性のための代理として検証した(図4
B)。このペプチドから出発して、-3および+1位を含むキー残基における置換を、i
n vitroキナーゼアッセイにおける基質としての活性について試験して、両方の位
置が最適な配列特異性に重要であることを明らかにした(図4D)。
(新規ULK1基質の同定)
ULK1の位置特異的選択性のマトリックス(図4B)を使用して、ULK1基質コン
センサスと密接に合致している部位についてヒトプロテオームをバイオインフォマティク
ス的に探索した。本発明者らは、オートファジーにおいてよく確立された高度に保存され
た役割を有するこれらの候補基質に最初に焦点を合わせることを選択した。ULK1リン
酸化部位をin vivoで定義するために、本発明者らは、野生型ULK1が過剰発現
された場合に構成的に活性であるという事実を活用し、故に、本発明者らは、HEK29
3T細胞において野生型またはキナーゼデッドULK1と共発現させた場合のエピトープ
タグ付き候補標的について、グローバルなリン酸化事象を比較した。これらの条件下で候
補タンパク質におけるすべてのホスホ-ペプチドを決定するための質量分析を使用するこ
とにより、複数のULK1コンセンサス部位を有する数個の候補タンパク質が、キナーゼ
デッドではなく野生型ULK1の存在下で高度にリン酸化されたペプチドを含有している
ことを明らかにした。コンセンサス候補ULK1リン酸化部位を有するコアオートファジ
ータンパク質に焦点を合わせると、下流ATG構成要素のいずれもこのコンセンサスを含
有していなかった(例えば、ATG5、ATG7、ATG3、ATG12)が、上流構成
要素の多く(FIP200、ATG13、ATG14、ベクリン)がそのような配列を有
していたことは、注目すべきことであった。本発明者らは、FIP200、ATG13お
よびATG101を含むULK1キナーゼ複合体自体の構成要素に最初に焦点を合わせた
Atg101は、ULK1に対する質量分析によって最初に同定され、哺乳動物細胞免
疫沈降において、ULK1-AT13-FIP200複合体の高度に保存された不可欠な
構成要素をコードすることが分かった。ATG101は、Atg13と直接結合している
ことが分かり、ULK1キナーゼ活性のAtg13安定化およびその結果として得られる
刺激のために重要である。Atg101における潜在的なULK1依存性リン酸化事象を
マッピングするために、本発明者らは、FLAGタグ付きATG101を野生型またはキ
ナーゼデッドULK1と共発現させ、FLAG-Atg101免疫沈降物における総ペプ
チドのMS/MS分析を実施して、2つの条件下でAtg101における総リン酸化部位
をマッピングした。本発明者らは、ヒトAtg101内の2つの特異的セリン部位(Se
r11、Ser203)が、キナーゼデッドULK1を共発現している細胞中ではなく野
生型ULK1を有する細胞中において、化学量論的にリン酸化されていることを観察した
(図5A)。顕著には、これらの2つのULK1依存性リン酸化部位は、最適なULK1
基質モチーフによく適合しており、これらがin vivoでの直接的なULK1基質で
あってよいことを示唆している。in vivoでのULK1リン酸化をさらに探究する
ために、本発明者らは、Phos-tag SDS-PAGEゲル上におけるそのマイグ
レーションを検査し、これにより、リン酸結合複核金属複合体を使用して、リン酸化事象
を含有するタンパク質上での移動度シフトを強調した。HEK293細胞において過剰発
現された場合のPhostag含有ゲル上でのATG101のパターンを、野生型もしく
はキナーゼデッドULK1またはベクター対照と比較することにより、リン酸化を示す強
固な移動度変化が明らかになった(図5A、下パネル)。ATG101 Ser11の突
然変異は、移動度変化の大部分を消失させ、これがSer11/Ser203二重突然変
異体においてさらに増強され、故に、質量分析によって潜在的なULK1依存性部位とし
てのそれらの同定を裏付けた。本発明者らは、次に、FIP200およびATG13リン
酸化事象の同様の分析を実施して、そのリン酸化が過剰発現されたULK1によってin
vivoで誘発された、ULK1基質コンセンサスを有するFIP200およびAtg
13において、複数のセリン部位を発見した(図10A~図10C)。
次に、本発明者らは、オートファジー開始時にULK1複合体の下流にあるベクリン/
Vps34複合体の構成要素を検査した。ここで、本発明者らは、ベクリンにおいて、最
適なUlk1コンセンサスに適合し、Phostagゲル上でのベクリン移動度変化に寄
与する、複数のセリンを同定した(図5C)。これらの部位の1つ、Ser15は、最近
発見され、オートファジー誘導において保存された役割を果たすことが報告された。Ph
ostagゲル上でのベクリン移動度を検査する本発明者らのデータは、活性ULK1と
共発現させた際に、3つのセリン(Ser15、Ser30、Ser337)が消失した
場合に限り、移動度を対照レベルまで低減させないことを示唆している。ベクリン複合体
の別の構成要素、アンブラ1の検査は、in vivoでの複数のULK1依存性リン酸
化事象を明らかにし、ベクリン-Vps34複合体の多くの構成要素がULK1によって
標的とされ得ることを示唆していた(図10C)。最後に、本発明者らは、ULK1基質
として同じく最近報告された、既知のULK1インタラクター、シンテニン-1を検査し
た。ここで、本発明者らは、以前に報告されたin vitroリン酸化部位、Ser6
が、第2の部位Ser61とともに、ULK1の存在下、in vivoでのシンテニン
-1の変更された移動度の原因であることを見出す(図5E)。顕著には、これらの部位
はいずれも、ペプチドライブラリーを使用して本発明者らが定義したULK1コンセンサ
スと合致する。
2および4ULK1依存性リン酸化部位の間に含有するこれらの基質のすべてとは対照
的に、本発明者らは、調節された見かけの単一部位:Vps34を有する単一タンパク質
のみを見出した。Vps34の高度に保存されたSer249は、野生型と共発現させた
場合にはHEK293細胞において化学量論的にリン酸化されたが、キナーゼデッドUL
K1ではされなかった(図6A~図6B)。キナーゼデッドVps34を基質として使用
するIn vitroキナーゼアッセイは、Ser249における単一のセリンのアラニ
ンへの置換が、ULK1によるVps34のin vitroリン酸化を消失させること
を明らかにし(図6C)、これは、ULK1と共発現させた場合、通常のSDS-PAG
Eゲル上であってもSer249Ala突然変異体を有するVps34タンパク質の有意
な移動度シフトの消失と並行していた(図6D)。
本発明者らは、リン酸化不可能な(Ser249Ala)またはリン酸化模倣(Ser
49Asp)突然変異体をコンディショナルVps34 floxedネズミ胚線維芽細
胞に導入することによって、ULK1によるVps34リン酸化の潜在的な機能を探究し
た。適正なオートファジーおよび最終的な細胞生存能力のためのVps34の要件を最初
に裏付けた後、本発明者らは、オートファジーにおけるVps34機能の4つのアッセイ
において、突然変異体の効果を試験した:飢餓後のMEFにおけるLC3およびp62代
謝回転、p40FX-GFP免疫学的局在決定によって検出される場合のin vivo
でのPI3P生成、in vivoでのGFP-DFCP1免疫学的局在決定によって検
出される場合のオートファゴソーム形成、飢餓後の細胞生存能力、ならびにオートファジ
ーと無関係な一般的Vps34機能の測定としてのEGFR代謝回転。Vps34 Se
r249は、本発明者らが検査した条件下では、これらの活性のいずれも制御しないよう
に思われた。ULK1がSer249を誘発すると同時にベクリンおよびアンブラ1にお
ける複数のリン酸化事象も調節していることを考慮すると、これは、異なるベクリン-V
ps34サブ複合体に対するUlk1の加算効果が、さらなる研究を必要とする高度に調
節された一連の事象となると予想されることを示唆している。
本発明者らは、次に、Vps34 Ser249に対するホスホ特異的抗体を開発し、
そのシグナルは、ULK3ではなくULK1またはULK2を、HEK293T細胞にお
けるSer-249Alaではなく野生型突然変異体と共発現させた場合に増大した(図
6E)。このホスホ-Ser249 Vps34抗体を使用して、本発明者らは、次に、
その感受性を市販のホスホ-Ser15ベクリン抗体と直接比較して、キナーゼではなく
野生型ULK1がHEK293T細胞において共発現された場合の各部位の並行誘導を実
証した(図6F)。顕著には、ベクリンのSer15およびVps34のSer249の
側面に位置する残基は、-3および+1におけるULK1選択的部位を越えて、広範囲に
わたる配列相同性を共有する(図6F)。
(ULK1の新規ATP競合性阻害剤の開発)
ULK1がオートファジーをどのようにして調節するかをさらに検査するために、本発
明者らは、ULK1の小分子ATP競合性キナーゼ阻害剤を同定することを求めた。in
vitroでのULK1キナーゼ活性の阻害剤用の化学化合物のライブラリーをスクリ
ーニングして、本発明者らは、化合物14を生成するための医薬品化学の努力を介してさ
らに精巧になるリード化合物を同定した。化合物14の用量応答分析は、ULK1につい
ては107nMおよびULK2キナーゼ活性については711nMのin vitro
IC50を明らかにした(図7A)。細胞においてULK1を阻害する化合物14および
関連誘導体の能力をさらに特徴付けるために、本発明者らは、エピトープタグ付きVps
34をHEK293T細胞において野生型ULK1 cDNAと共発現させた場合に、V
ps34 Ser249のリン酸化を阻害するこれらの化合物の能力を試験した。40の
化合物をスクリーニングして、本発明者らは、約5μMで使用した場合に過剰発現された
Vps34上のP-Vps34を阻害する化合物14を見出した(図7B)。本発明者ら
は、次に、2つの構造的に異なったULK1阻害剤に対する、それぞれを有するcDNA
をHEK293T細胞に導入した場合の、Vps34セリン249対ベクリンセリン15
のリン酸化の感受性を検査した。本発明者らは、HEK293Tにおいて、化合物14が
ベクリンSer15およびVps34 Ser249を匹敵する程度まで阻害したこと(
図7C)、また、野生型ULK1と共発現させた場合に過剰発現されたシンテニン-1お
よびAtg13が受けるバンドシフトを崩壊させること(図11A)を見出した。
本発明者らは、次に、化合物14が内因性ULK1活性を阻害するか否かを検査した。
内因性ULK1を活性化するために、本発明者らは、MEFを、アミノ酸飢餓培地(アー
ル平衡塩類溶液[EBSS])またはmTOR ATP競合性阻害剤INK128もしく
はAZD8055のいずれかで処理した。WT MEFにおいて、本発明者らは、EBS
S飢餓培地またはmTOR触媒阻害剤に応答した内因性ベクリン1およびAtg13にお
ける移動度シフトを観察し、これは、Ulk1/2欠損MEFにおいては消失した(図7
D)。EBSSおよびmTOR阻害剤は、ベクリン1における移動度シフトを誘発し、A
tg13は、WT MEFにおける6965共処理によって阻害された(図7D)。ベク
リン1またはAtg13のいずれも、Ulk1/2欠損MEFにおけるEBSSまたはm
TOR触媒阻害剤いずれかによる処理時に移動度シフトを受けず、6965共処理で、そ
れらの基本的な移動度におけるさらなる減少は観察されなかった。ある特定の実施形態で
は、mTOR阻害剤および飢餓培地によって誘発された、内因性ベクリン1およびAtg
13において観察された移動度シフトは、WTにおいてのみ発生しUlk1/2欠損ME
Fにおいてはしないため、内因性ULK1/2による内因性ベクリン1/Atg13のリ
ン酸化を反映している。
(化合物14は高度に選択的なULK1阻害剤である)
本発明者らは、次に、456の精製したヒトキナーゼのDiscoveRx KINO
MEscanパネルおよびその後の競合結合アッセイを使用して、化合物14の特異性を
検査した。図7Dに見られる通り、化合物14は、非常に選択的であり、10μMで試験
した場合、95%超の8つのキナーゼおよび90%超の19のキナーゼのみを阻害した。
対照の35%未満を阻害したキノームの%によって測定した場合、化合物14のS(35
)選択指数=0.123であり、ここで、S(35)=(35未満の%対照を有する非変
異キナーゼの数)/(試験された非変異キナーゼの数)であり(図11B)、これは、G
leevec(登録商標)およびラパチニブを含む臨床腫瘍学における広範な使用でのい
くつかのキナーゼ阻害剤に匹敵し、エルロチニブ、ソラフェニブ、およびダサチニブを含
む、臨床腫瘍学の使用におけるいくつかの他のキナーゼ阻害剤よりも選択的である。顕著
には、このATP結合ポケット競合アッセイによって、化合物14は、FAK、Src、
Abl、およびJak3を、Ulk1と同様のIC50で阻害し(図7D)、これは、U
LK1以外として顕著であり、該化合物がヒットする他のキナーゼはすべて、チロシン残
基に対して作用する。
その最上位の結合キナーゼに対する化合物14の選択性のよりよく確立された測定を使
用するために、本発明者らは、伝統的なin vitroキナーゼアッセイにおいてこれ
らのキナーゼのその阻害に関する用量応答曲線を検査した。ここで、本発明者らは、化合
物14によって最も抑制された10のキナーゼをATP結合アッセイによって試験した。
この分析から、ULK1、FAK、JAK2、およびAuroraAキナーゼが、化合物
14によって同等に阻害されたとして出現した。化合物14が、これらの4つのキナーゼ
を、本発明者らが検査した異なるアッセイのすべてにわたってまったく同等に阻害したと
しても、これは、臨床腫瘍学において今日広く使用されているATP競合性キナーゼ阻害
剤の一握りを除いてすべてよりもなお一層大きい選択性であることに留意することが重要
である。本発明者らは、次に、培養中の細胞における種々のキナーゼの下流のシグナル伝
達を抑制する化合物14の能力を検査した。本発明者らは、1μMにおいて、化合物14
が、HEK293細胞においてUlk1の阻害に匹敵する程度までFAKおよびAuro
raAキナーゼシグナル伝達を低減させることを見出した。同様に、化合物14は、ME
FにおいてULK1と匹敵するほどにFAKおよびAuroraAも阻害した。
(SBI-0,206,965はmTOR阻害によって誘発されたオートファジーを抑
制し、これはULK1 siRNAによって表現型模写される)
オートファジーおよび細胞生存をブロックする化合物14の能力を試験するために、最
初の研究を、mTOR阻害に対して高度に感受性である、A549肺がん細胞において実
施した。本発明者らは、触媒ATP競合性mTORキナーゼ阻害剤AZD8055が、C
yto-IDオートファジー色素の蓄積によって可視化されている通りの強固なオートフ
ァジーを誘発し、この効果は5μMの6965による処理によって強く抑制されたことを
観察した(図9E)。次に、本発明者らは、ULK1対化合物14によって阻害された他
のキナーゼについて要件を遺伝的に評価して、薬理学的なmTOR阻害後にオートファジ
ーを誘発した。GFP-LC3斑点を定量化するための強固なハイスループット顕微鏡法
は、GFP-LC3構築物を安定的に発現しているPC3前立腺がん細胞株を使用して確
立された。このアッセイを使用して、本発明者らは、化合物14との最良の結合としてD
iscovRxスクリーニングにおいて同定された最上位20のキナーゼの集中RNAi
分析を実施した。対照siRNAをトランスフェクトした細胞のウェルに対する定量的測
定は、mTOR触媒阻害剤INK128またはAZD8055のいずれかによる処理後の
GFP-LC3斑点形成における、一致する2倍の誘導を明らかにした(図9Dおよび図
9F)。18の試験されたキナーゼのうち、際立って、唯一のキナーゼsiRNA、UL
K1が、mTOR阻害剤によって誘発されたLC3斑点をほぼ完全に消失させた(図9D
)。mTOR阻害によって誘発されたオートファジー応答をほぼ完全に取り除くULK1
siRNAの能力は、少なくともこの細胞株において、ULK1が、mTOR抑制に応
答してオートファジーを刺激するために必須であることを示唆している。
(栄養枯渇後の化合物14はULK1依存性細胞生存を予防する)
オートファジーの最もよく確立された機能の1つは、栄養枯渇の条件下で細胞生存を促
進することである。例えば、MEFにおけるATG5の遺伝的除去は通常の培地条件では
細胞の細胞生存に効果を有さないが、そのような細胞が飢餓培地に入れられると、対照細
胞と比較して大幅に加速された速度でアポトーシスを受ける。同様に、本発明者らは、U
LK1およびULK2に対するRNAiが、栄養枯渇条件下での細胞生存能力の損失にお
いて、ATG5に対するRNAiを表現型模写することを以前に実証した。本発明者らの
小分子ULK1阻害剤が栄養枯渇条件下で細胞生存を同様に制御するか否かを検査するた
めに、本発明者らは、通常の培地、アミノ酸枯渇培地、またはグルコース枯渇培地という
状況において、MEFを化合物14で処理した。アミノ酸枯渇後24時間で、ビヒクル処
理したMEFの20%が、伝統的なアポトーシスマーカーであるAnnexinVに対し
て陽性であった(図8A)のに対し、化合物14で処理した細胞の50%がAnnexi
nV陽性であった。同様の効果がグルコース枯渇MEFにおいても見られ、ここで、化合
物14は、細胞死も促進した。アミノ酸飢餓細胞のイムノブロット経時分析は、活性開裂
カスパーゼ-3およびその標的PARPの開裂が、飢餓化合物14で共処理された細胞に
おいてのみかなり観察されたことを明らかにし(図8B)、これは、免疫細胞化学による
アポトーシスマーカーと並行していた(図8C)。興味深いことに、イムノブロット分析
は、化合物14処理が、ULK1およびAtg13タンパク質レベルの損失を誘発したが
、栄養枯渇条件においてのみであり、栄養豊富条件ではしなかったことを明らかにした。
おそらくULK1が活性化されているこの状況においてのみ、化合物14の直接結合がU
LK1代謝回転を刺激する(図8B)。
(小分子ULK1阻害剤は触媒mTOR阻害剤に対する細胞増殖抑制応答を細胞毒性応
答に変換する)
腫瘍細胞、特に、化学療法または標的治療薬からの代謝的ストレスに直面している腫瘍
細胞の生存におけるオートファジーの役割には、大きな関心が寄せられてきた。本発明者
らは、次に、化合物14が、オートファジーが積極的に関わっている条件下で選択的に、
腫瘍細胞においてMEFと同様にアポトーシスを促進するか否かを検査した。U87MG
膠芽細胞腫細胞およびネズミKras p53肺癌細胞において、化合物14は、栄養飢
餓状態で選択的にアポトーシス(AnnexinV+細胞)を促進した(図9A)。mT
OR活性がULK1活性の支配的調節因子であること、および本発明者らが以前にmTO
R触媒阻害剤による細胞の処理がULK1活性を誘発するために十分であることに留意し
ていたことを考慮して、本発明者らは、mTOR触媒阻害剤による治療の文脈において、
ULK1阻害剤に付加する効果を検査した。mTORC1阻害に対して感受性であるよう
によく確立された細胞株、A549肺がん細胞を使用して、本発明者らは、一定の細胞増
殖抑制成長の停止を誘発する1マイクロモル用量のmTOR触媒阻害剤AZD8055を
保ちながら、漸増用量のULK1阻害剤で処理した。本発明者らは、AZD8055と組
み合わせた5μMの化合物14が、5μMの化合物14単独の9%またはAZD8055
単独で処理したそれらの細胞の6%と比較して、A549細胞の22%においてアポトー
シスを引き起こしたことを観察した。Annexin-V+アポトーシスA549細胞の
誘導は、化合物14の10または20μM投薬時にさらに一層劇的に高められた(図9C
)。ULK1阻害剤と組み合わせた栄養枯渇のあるMEFにおいて観察された通り、イム
ノブロット分析は、細胞死のFACS分析と並行して、ULK1およびmTOR阻害剤の
組合せのみが、A549細胞においてカスパーゼ活性化を引き起こすことを明らかにした
(図9B)。総ULK1レベルおよびAtg13レベルの分解は、オートファジー活性化
刺激(AZD8055)およびULK1阻害剤の存在下でのみ、先の通りに観察された。
ULK1がmTOR阻害後にその効果を媒介する化合物14の重要な標的であることを
実証するための別の検査として、mTOR阻害剤AZD8055による処理後にLC3斑
点形成を調節する、化合物14の最上位の5つのキナーゼ標的のそれぞれのRNAi媒介
性抑制の能力を検査した。図9Dに見られる通り、ULK1に対するRNAiは、LC3
斑点を誘発するAZD8055の能力を完全に取り除いたのに対し、FAK、Src、A
uroraAまたはJAK3に対するRNAiは、効果を有さなかった。これらの所見は
、細胞増殖をmTORに依存している腫瘍細胞が、mTOR阻害時にULK1を誘発し、
これが細胞生存機構の役割を果たすという、本発明者らの仮説を支持するものである。腫
瘍細胞をULK1阻害剤で前処理する場合、ULK1のmTOR依存性活性化および付随
する生存有益性を予防する。本発明者らは、ULK1小分子阻害剤が、高レベルのmTO
R活性に集中している腫瘍において最も有効であると期待している(図3)。
開示化合物、組成物および方法の原理が適用され得る多くの可能な実施形態を考慮して
、例証されている実施形態は本発明の好ましい例に過ぎず、本発明の範囲を限定するもの
として解釈されるべきではないことを認識すべきである。
種々の腫瘍抑制因子および発癌遺伝子からのシグナルが、TSC1-TSC2複合体上でおよびmTOR-raptor(mTORC1)複合体上に集合して、その中に示されている基質を介して細胞増殖およびオートファジーを制御することを例証する例示的なスキームである。 ULK1機能を分析するために開発されたアッセイを例証する図である。GST-Atg101を基質として使用するIP-キナーゼアッセイを例証する一連の画像である。 ULK1機能を分析するために開発されたアッセイを例証する図である。内因性LC3斑点形成を例証する一連の画像である。 ULK1機能を分析するために開発されたアッセイを例証する図である。p62およびLC3プロセシングのオートファジーの流れおよび調節を例証する一連の画像である。 ULK1機能を分析するために開発されたアッセイを例証する図である。ミトコンドリア含有量のTEM定量化を例証する一連の画像である。 ULK1機能を分析するために開発されたアッセイを例証する図である。AnnexinV FACSによって検出されたアポトーシスに対する効果を例証する一連の画像である。ULK1/2またはAtg5 RNAiは、栄養枯渇の条件下で細胞死を増大させる。 ULK1阻害剤の例示的な使用についてのカスケードを例証する図である。新たに同定されたULK1基質部位が、mTOR阻害剤によるTSC細胞およびTSC患者の治療後に増大し、mTOR阻害の効能のマーカーとして試験され得るという仮説を例証するスキームである。 ULK1阻害剤の例示的な使用についてのカスケードを例証する図である。mTOR阻害剤と組み合わせたULK1阻害が、細胞増殖抑制応答を細胞毒性応答に変換するという仮説を例証するスキームである。 ULK1基質モチーフ配列特異性を例証する画像のセットである。 ULK1に対する位置特異的選択性を例証するマトリックスである。 in vitroでのULK1キナーゼ活性を例証するグラフである(ULKtideは配列番号1である)。 残基置換を例証するグラフである(-7E、+5K、-3M、-3R、+1Dおよび+2Dは、それぞれ、配列番号2~7である)。 in vivoでの新規ULK1依存性リン酸化部位の同定を例証する図である。Mycタグ付きWT ULK1(WT ULK1;上)またはMycタグ付きキナーゼ不活性ULK1(KI ULK1;下)を、WT Flagタグ付きAtg101(Flag-Atg101)とともにHEK293T細胞にトランスフェクトし、M2アガロースで免疫沈降させた。免疫沈降物をSDS-PAGEゲル上で泳動させ、クマシーで染色し、Flag-Atg101に対応するバンドを切り取り、単離し、トリプシン消化およびLC/MS/MS分析に供した。この分析によって同定された最適なULK1リン酸化モチーフに適合する、リン酸化された部位が取り囲まれている。(G)として示される緑色のバーは、ペプチド被覆率を示し、(P)として示される紫色のハイライトは、リン酸化事象を示す。(Y)=黄色。 in vivoでの新規ULK1依存性リン酸化部位の同定を例証する図である。WT ULK1またはKI ULK1を、Flag-Atg101またはFlag-Atg101セリンからアラニンへの点突然変異体とともに、HEK293T細胞にトランスフェクトした。この分析において使用した特異的な突然変異体を、置換されているアミノ酸の位置によって示す(上)。細胞溶解物をトランスフェクションの24時間後に単離し、Phos-Tag試薬を含有するSDS-PAGEゲル(中)またはPhos-Tag試薬を欠く標準的なSDS-PAGEゲル(下)上で泳動させ、PVDF膜に移し、これをその後、示されている抗体でイムノブロットした。 in vivoでの新規ULK1依存性リン酸化部位の同定を例証する図である。WT Flagタグ付きベクリン1を基質として使用したことを除き、図5Aと同じである。(Y)=黄色;(G)=緑色;(P)=紫色;(B)=青色;(R)=赤色。 in vivoでの新規ULK1依存性リン酸化部位の同定を例証する図である。WT Flagタグ付きアンブラ1を基質として使用したことを除き、図5Aと同じである。(B)=青色;(P)=紫色。 in vivoでの新規ULK1依存性リン酸化部位の同定を例証する図である。WT Flagタグ付きシンテニン-1(Flag-シンテニン-1)またはFlagタグ付きシンテニン-1セリンからアラニンへの点突然変異体を使用したことを除き、図5Bと同じである。この分析において使用した特異的な突然変異体を、置換されているアミノ酸の位置によって示す(上)。細胞溶解物をトランスフェクションの24時間後に単離し、Phos-Tag試薬を含有するSDS-PAGEゲル(中)またはPhos-Tag試薬を欠く標準的なSDS-PAGEゲル(下)上で泳動させ、PVDF膜に移し、これをその後、示されている抗体でイムノブロットした。(B)=青色;(Y)=黄色;(G)=緑色;(R)=赤色。 in vivoでの新規ULK1依存性リン酸化部位の同定を例証する図である。ULK1部位であるSTINGリン酸化部位と並んだ、この分析において同定されたすべての新規ULK1リン酸化部位のアライメントである。-3(緑色)、+1(緑色)、および+2(黄色)位における最適なULK1リン酸化モチーフに適合する残基を含有するリン酸化部位は、ハイライトされている。位置aについて:(B)Atg13(Ser389)、ベクリン1(Ser96)、ベクリン1(ser337)を除いてすべてのハイライトされた位置について(G)。位置bについて:Atg13(Ser389)、Atg101(ser11)、Atg101(Ser203)、FIP200(Ser1323)、シンテニン1(ser6)、シンテニン1(Ser61)について(G)、および残りのハイライトされた位置について(P)。(G)=緑色;(P)=紫色。 Vps34 Ser249がin vivoでの新規ULK1リン酸化部位であるという所見を例証する図である。Mycタグ付きWT ULK1(WT ULK1;右)またはMycタグ付きキナーゼ不活性ULK1(KI ULK1;左)のいずれかを、WT Flagタグ付きVps34(WT Vps34)とともにHEK293T細胞にトランスフェクトし、M2アガロースで免疫沈降させた。免疫沈降物をSDS-PAGEゲル上で泳動させ、クマシーで染色し、WT Vps34に対応するバンドを切り取り、単離し、トリプシン消化およびLC/MS/MS分析に供した。緑色のバーはペプチド被覆率を示し、紫色ハイライトはリン酸化事象を示す。矢印はセリン249を示す。 Vps34 Ser249がin vivoでの新規ULK1リン酸化部位であるという所見を例証する図である。生物種間のVps34セリン249のClustalアライメントは、それが進化を通して保存され、最適なULK1リン酸化モチーフに適合することを示す。(B)=青色;(G)=緑色;(Y)=黄色。 Vps34 Ser249がin vivoでの新規ULK1リン酸化部位であるという所見を例証する図である。in vitroキナーゼアッセイは、Flagタグ付きWT Vps34(Vps34 WT)またはFlagタグ付きセリンからアラニンへの点突然変異体Vps34(Vps34 S249A)を、WT ULK1またはKI ULK1のいずれかのための基質として使用して実施した。in vitroキナーゼアッセイは、放射性標識されたγ-32P-ATPの存在下で実施した(上)。Vps34 WT、Vps34 S249A、WT ULK1、およびKI ULK1は、HEK293T細胞中で生成した(下)。 Vps34 Ser249がin vivoでの新規ULK1リン酸化部位であるという所見を例証する図である。Vps34 WTまたはVps34 S249AおよびWT ULK1またはKI ULK1を、HEK293T細胞にトランスフェクトした。細胞溶解物をトランスフェクションの24時間後に単離し、SDS-PAGEゲル上で泳動させ、PVDF膜に移し、これをその後、示されている抗体でプローブした。矢印は、Vps34 WTおよびWT ULK1組合せでのみ発生するリン酸化を代表する移動度シフトを示す。 Vps34 Ser249がin vivoでの新規ULK1リン酸化部位であるという所見を例証する図である。HEK293T細胞に、Vps34 WTまたはVps34 S249AおよびWT ULK1、WT Mycタグ付きULK2(ULK2)、またはWT Mycタグ付きULK3(ULK3)をトランスフェクトした。細胞溶解物をトランスフェクションの24時間後に単離し、示されている抗体でイムノブロットした。 Vps34 Ser249がin vivoでの新規ULK1リン酸化部位であるという所見を例証する図である。キナーゼではなく野生型ULK1がHEK293T細胞において共発現された場合の各部位の並行誘導を実証する、ホスホ-Ser249 Vps34抗体対市販のホスホ-Ser15ベクリン抗体の比較を示す図である。(P)=紫色;(G)=緑色;(Y)=黄色;(R)=赤色。 その下流基質リン酸化部位に対する強力なULK1キナーゼ阻害剤としての化合物14のin celluloスクリーニング同定を例証する図である。WT ULK1およびULK2に対する化合物14のIC50値は、in vitroキナーゼアッセイを使用して決定した(ULK1については107nMおよびULK2については711nMのIC50)。WT ULK1(左)およびWT ULK2(右)は、30μMの放射性標識されたγ-32P-ATPの存在下、10μMのMBPを使用してアッセイした。化合物14を、10用量IC50モードで、3倍連続希釈および1μMの開始用量を用い、3連で試験した。 その下流基質リン酸化部位に対する強力なULK1キナーゼ阻害剤としての化合物14のin celluloスクリーニング同定を例証する図である。ヒト胎児腎臓細胞(HEK293T)に、WTまたはキナーゼ不活性(KI)Mycタグ付きULK1およびWT Flagタグ付きVps34(WT Vps34)をトランスフェクトした。トランスフェクション後24時間で、細胞を、推定上のULK1競合性阻害剤のパネルで、用量応答様式にて処理した(1、10、50μM)。細胞溶解物を処理の1時間後に単離し、示されている抗体でイムノブロットした。化合物14についての代表的結果を示す。 その下流基質リン酸化部位に対する強力なULK1キナーゼ阻害剤としての化合物14のin celluloスクリーニング同定を例証する図である。HEK293T細胞に、WTまたはKI ULK1およびWT Vps34(左)またはWT Flagタグ付きベクリン1(WTベクリン1;右)をトランスフェクトした。トランスフェクション後24時間で、細胞を、化合物14(10μM)またはDMSOで処理した。細胞溶解物を処理の1時間後に単離し、示されている抗体でイムノブロットした。 その下流基質リン酸化部位に対する強力なULK1キナーゼ阻害剤としての化合物14のin celluloスクリーニング同定を例証する図である。WTまたはUlk1/Ulk2ダブルノックアウトマウス胚線維芽細胞(MEF)を、10μMの化合物14の存在下および非存在下、1μMのINK128、1μMのAZD8055、またはDMSOを含有する新鮮な培地(10%FBSを含有するダルベッコ改変イーグル培地[DMEM])で、または飢餓培地(EBSS)で処理した。細胞溶解物を処理の1時間後に単離し、示されている抗体でイムノブロットした。アスタリスクは、非特異的なバンドを表す。 その下流基質リン酸化部位に対する強力なULK1キナーゼ阻害剤としての化合物14のin celluloスクリーニング同定を例証する図である。(上)化合物14についてのキナーゼ選択性プロファイルは、DiscoveRx KINOMEscanプロファイリングサービスを使用して決定した。簡潔に述べると、化合物14を、in vitro結合アッセイにおいて、1μMの用量で、456キナーゼのパネルの基質との結合を弱めるその能力についてスクリーニングした。一次スクリーニングのヒットについてのスコアは、DMSO対照のパーセント(%対照)として報告されている。より低いスコアは、標的キナーゼに対する化合物14のより強い阻害効果を反映している。化合物14は、非常に選択的であり、10μMで試験した場合、95%超の8つのキナーゼおよび90%超の19のキナーゼのみを阻害した。(下)In vitroキナーゼアッセイを、選択されたキナーゼについて実施した。これらのアッセイを、化合物14の存在下、用量応答様式にて実施して、これらの個々のキナーゼのそれぞれについて、化合物14のIC50値を同定した。IC50値がULK1と1倍未満の差であるキナーゼは、黄色でハイライトされている。残りのキナーゼのうち、IC50値がULK2について同定されたもの未満であったキナーゼは、褐色でハイライトされている。 その下流基質リン酸化部位に対する強力なULK1キナーゼ阻害剤としての化合物14のin celluloスクリーニング同定を例証する図である。TREEspot相互作用マップを生成して、5Aにおいて試験したキナーゼのパネルに対し、化合物14についての選択性プロファイルを視覚的に表した。その結合が化合物14によって阻害されたキナーゼには赤色丸印が付けられており、より大きい丸印はより強い阻害効果を示す。この分析において試験したキナーゼを、ヒトキノームにおけるそれらの系統発生群分類に従って配置する。 アミノ酸枯渇後24時間で、ビヒクル処理したMEFの20%が、伝統的なアポトーシスマーカーであるAnnexinVに対して陽性であったのに対し、化合物14で処理した細胞の50%がAnnexinV陽性であったことを示す、画像のセットである。 アミノ酸飢餓細胞のイムノブロット経時分析が、活性開裂カスパーゼ-3およびその標的PARPの開裂は、飢餓化合物14で共処理された細胞においてのみかなり観察されたことを明らかにしたことを示す画像のセットであり、これは、免疫細胞化学によるアポトーシスマーカーと並行していた(図8C)。 図8Bのアミノ酸飢餓細胞のイムノブロット経時分析は、免疫細胞化学によるアポトーシスマーカーと並行していた。 U87MG膠芽細胞腫細胞およびネズミKras p53肺癌細胞において、化合物14が、栄養飢餓状態で選択的にアポトーシス(AnnexinV+細胞)を促進したことを示す、画像のセットである。 ULK1阻害剤と組み合わせた栄養枯渇のあるMEFにおいて観察された通り、イムノブロット分析は、細胞死のFACS分析と並行して、ULK1およびmTOR阻害剤の組合せのみが、A549細胞においてカスパーゼ活性化を引き起こすことを明らかにしたことを示す、画像のセットである。 Annexin-V+アポトーシスA549細胞の誘導が、化合物14の10または20μM投薬時にさらに一層劇的に高められたことを示す、画像のセットである。 ULK1に対するRNAiは、LC3斑点を誘発するAZD8055の能力を完全に取り除いたのに対し、FAK、Src、AuroraAまたはJAK3に対するRNAiは、効果を有さなかったことを示す表である。緑色蛍光タンパク質と融合しているLC3(GFP-LC3)をコードする構築物を安定的に発現しているPC3ヒト前立腺細胞に、その結合が化合物14によって阻害されることが示された最上位の18のキナーゼに対して、siRNAをトランスフェクトした。RNAiトランスフェクション後48時間で、細胞を、1μMの触媒mTOR阻害剤AZD8055またはINK128で4時間にわたって処理し、GFP-LC3斑点の存在について評価した。各siRNAについてGFPLC3斑点およびSDの平均数ならびに薬物処理を示す。SRC、c-Src;c-Srcキナーゼ、CSK。 5μMの化合物14の存在下または非存在下で2時間にわたって、続いて、4μMのmTOR触媒阻害剤AZD8055の存在下または非存在下で24時間にわたって処理した、A549細胞の免疫蛍光撮像である。Cyto-IDオートファジー検出キットを使用してオートファジー液胞を検出し、緑色で可視化し、一方、DAPIによって細胞核を対比染色し、青色で可視化している。 図9Dに示されているデータについての代表的な免疫蛍光画像である。GFP-LC3斑点を緑色で可視化し、DAPIで対比染色した細胞核を青色で可視化している。 そのリン酸化がin vivoで過剰発現されたULK1によって誘発されたULK1基質コンセンサスを有するFIP200およびAtg13における複数のセリン部位の発見を例証する、一連の配列アライメントである。 HEK293Tにおいて、化合物14が、野生型ULK1と共発現させた場合に過剰発現されたシンテニン-1およびAtg13が受けるバンドシフトを崩壊させることを示す図である。 対照の35%未満を阻害したキノームの%によって測定した場合、化合物14のS(35)選択指数=0.123であり、ここで、S(35)=(35未満の%対照を有する非変異キナーゼの数)/(試験された非変異キナーゼの数)であることを例証する図である。

Claims (37)

  1. それを必要とする対象における疾患または状態を治療するための方法であって、それを
    必要とする対象に、
    治療有効量の、式A:
    Figure 2022017384000423
    [式A中、
    10は、ハロゲン;-OR11(ここで、R11は、H、任意選択で置換されている
    アリール、および任意選択で置換されているヘテロアリールからなる群から選択される)
    ;-NR(ここで、RおよびRはそれぞれ独立に、H、任意選択で置換されて
    いるアリール、任意選択で置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているシ
    クロアルキル、および任意選択で置換されているアルキルからなる群から選択されるか、
    またはNRは、一緒になって、ヘテロ環を形成する)からなる群から選択されるか

    またはRおよびR10は、一緒になって、環式構造を形成し;
    は、任意選択で置換されているアミノ、任意選択で置換されているアリールオキシ
    、任意選択で置換されているヘテロアリールオキシ、任意選択で置換されているアルコキ
    シ、N-ヘテロ環式、任意選択で置換されているチオール、任意選択で置換されているア
    ルキル、ヒドロキシル、およびハロゲンからなる群から選択され;
    は、H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置
    換されているアルコキシ、もしくは任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換
    されているカルボキシル、シアノ、およびニトロからなる群から選択されるか、
    またはRおよびRは、一緒になって、環式構造を形成し;
    は、Hまたはハロアルキルである]
    の構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩と、
    治療有効量のmTOR阻害剤
    とを共投与するステップを含む、方法。
  2. それを必要とする対象における疾患または状態を治療するための方法であって、対象に

    治療有効量の、
    2-(置換)アミノ-4-(置換)アミノ-5-ハロ-ピリミジン、
    2-(置換)アミノ-4-(置換)アミノ-5-(ハロ)アルキル-ピリミジン、
    2-(置換)アミノ-4-(置換)オキソ-5-ハロ-ピリミジン、
    2-(置換)アミノ-4-(置換)オキソ-5-(ハロ)アルキル-ピリミジン、
    2-(置換)アミノ-4-(置換)チオ-5-ハロ-ピリミジン、および
    2-(置換)アミノ-4-(置換)チオ-5-(ハロ)アルキル-ピリミジン
    からなる群から選択される少なくとも1つのULK1阻害剤と、
    治療有効量のmTOR阻害剤
    とを共投与するステップを含む、方法。
  3. 疾患または状態が、免疫抑制、抗再狭窄、がん、コーデン症候群、ポイツ・ジェガーズ
    症候群、結節性硬化症(TSC)、LAM(リンパ脈管筋腫症)、および加齢黄斑変性か
    らなる群から選択される少なくとも1つである、請求項1または2に記載の方法。
  4. 疾患または状態が、腎細胞癌、膵臓癌、結節性硬化症(TSC)、リンパ腫、子宮内膜
    癌、乳癌、結腸癌、前立腺癌、膠芽細胞腫、星状細胞腫、多発性骨髄腫、および肝細胞癌
    からなる群から選択される少なくとも1つである、請求項3に記載の方法。
  5. 疾患または状態が、結節性硬化症(TSC)である、請求項1に記載の方法。
  6. 疾患または状態が、mTOR依存性である、請求項1から5のいずれか一項に記載の方
    法。
  7. それを必要とする対象における抗がん剤耐性疾患を治療するための方法であって、抗が
    ん剤耐性疾患を有する対象に、治療有効量の、式A:
    Figure 2022017384000424
    [式A中、
    10は、ハロゲン;-OR11(ここで、R11は、H、任意選択で置換されている
    アリール、または任意選択で置換されているヘテロアリールである);-NR(こ
    こで、RおよびRはそれぞれ独立に、H、任意選択で置換されているアリール、任意
    選択で置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているシクロアルキル、およ
    び任意選択で置換されているアルキルからなる群から選択されるか、またはNR
    、一緒になって、ヘテロ環を形成する)からなる群から選択されるか;
    またはRおよびR10は、一緒になって、環式構造を形成し;
    は、任意選択で置換されているアミノ、任意選択で置換されているアリールオキシ
    、任意選択で置換されているヘテロアリールオキシ、任意選択で置換されているアルコキ
    シ、N-ヘテロ環式、任意選択で置換されているチオール、任意選択で置換されているア
    ルキル、ヒドロキシル、およびハロゲンからなる群から選択され;
    は、H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置
    換されているアルコキシ、もしくは任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換
    されているカルボキシル、シアノ、およびニトロからなる群から選択されるか、
    またはRおよびRは、一緒になって、環式構造を形成し;
    は、Hまたはハロアルキルである]
    の構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含む、方
    法。
  8. 抗がん剤耐性疾患が、mTOR阻害剤耐性がんを含む、請求項7に記載の方法。
  9. mTOR阻害剤耐性がんが、膠芽細胞腫、転移性固形腫瘍、乳がん、前立腺がん、非小
    細胞肺がん、結腸直腸がん、膵臓がん、腎細胞癌、B細胞慢性リンパ性白血病、黒色腫、
    腺癌、結腸直腸、および腎臓がんからなる群から選択される少なくとも1つである、請求
    項8に記載の方法。
  10. それを必要とする対象におけるオートファジー媒介性の疾患または状態を治療するため
    の方法であって、対象に、治療有効量の、式A:
    Figure 2022017384000425
    [式A中、
    10は、ハロゲン;-OR11(ここで、R11は、H、任意選択で置換されている
    アリールおよび任意選択で置換されているヘテロアリールからなる群から選択される);
    -NR(ここで、RおよびRはそれぞれ独立に、H、任意選択で置換されてい
    るアリール、任意選択で置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているシク
    ロアルキル、および任意選択で置換されているアルキルからなる群から選択されるか、ま
    たはNRは、一緒になって、ヘテロ環を形成する)からなる群から選択されるか;
    またはRおよびR10は、一緒になって、環式構造を形成し;
    は、任意選択で置換されているアミノ、任意選択で置換されているアリールオキシ
    、任意選択で置換されているヘテロアリールオキシ、任意選択で置換されているアルコキ
    シ、N-ヘテロ環式、任意選択で置換されているチオール、任意選択で置換されているア
    ルキル、ヒドロキシル、およびハロゲンからなる群から選択され;
    は、H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置
    換されているアルコキシ、または任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換さ
    れているカルボキシル、シアノ、およびニトロからなる群から選択されるか、
    またはRおよびRは、一緒になって、環式構造を形成し;
    は、Hまたはハロアルキルである]
    の構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩を投与するステップを含み、
    オートファジー媒介性の疾患または状態は、遺伝子STK11、PTEN、TSC1、
    TSC2、および/もしくはPIK3CAにおける突然変異から生じる疾患もしくは状態
    、またはmTOR基質バイオマーカーであるホスホ-S6Kもしくはホスホ-4ebp1
    に関連する疾患もしくは状態を含む、方法。
  11. 疾患または状態が、結節性硬化症(TSC)、がん、新生物、クローン病、パーキンソ
    ン病、アルツハイマー病、および成人期神経変性を伴う小児期非進行性脳症(SENDA
    )からなる群から選択される少なくとも1つを含む、請求項10に記載の方法。
  12. それを必要とする対象におけるオートファジー媒介性状態を治療するための方法であっ
    て、対象に、治療有効量の、少なくとも1つのULK1阻害剤を投与するステップを含む
    、方法。
  13. 化合物が、式I:
    Figure 2022017384000426
    [式I中、
    およびRはそれぞれ独立に、H、任意選択で置換されているアリール、任意選択
    で置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているシクロアルキル、および任
    意選択で置換されているアルキルからなる群から選択されるか、またはNRは、一
    緒になって、ヘテロ環を形成し;
    は、任意選択で置換されているアミノ、任意選択で置換されているアリールオキシ
    、任意選択で置換されているヘテロアリールオキシ、任意選択で置換されているアルコキ
    シ、N-ヘテロ環式、任意選択で置換されているチオール、および任意選択で置換されて
    いるアルキルからなる群から選択され;
    は、H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置
    換されているアルコキシ、および任意選択で置換されているアリールからなる群から選択
    され;
    は、Hである]
    の構造を有する、請求項1から12のいずれか一項に記載の方法。
  14. 化合物が、
    (i)
    Figure 2022017384000427
    [式中、
    は、Hであり;
    は、
    Figure 2022017384000428
    からなる群から選択され;
    は、任意選択で置換されているアミノ、任意選択で置換されているアリールオキシ
    、任意選択で置換されているヘテロアリールオキシ、任意選択で置換されているアルコキ
    シ、N-ヘテロ環式、任意選択で置換されているチオール、および任意選択で置換されて
    いるアルキルからなる群から選択され;
    は、H、ヒドロキシ、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置換
    されているアルコキシ、および任意選択で置換されているアリールからなる群から選択さ
    れ;
    は、Hである]
    の構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩;
    (ii)
    Figure 2022017384000429
    [式中、
    は、Hであり;
    は、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロアリー
    ル、任意選択で置換されているシクロアルキル、および任意選択で置換されているアルキ
    ルからなる群から選択されるか、またはNRは、一緒になって、ヘテロ環を形成し

    は、任意選択で置換されているアリールオキシ、任意選択で置換されているヘテロ
    アリールオキシ、および任意選択で置換されているアルコキシからなる群から選択され;
    は、H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置
    換されているアルコキシ、および任意選択で置換されているアリールからなる群から選択
    され;
    は、Hである]
    の構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩;
    (iii)
    Figure 2022017384000430
    [式中、
    は、Hであり;
    は、任意選択で置換されているヘテロアリール縮合環であり;
    は、-NRであり、ここで、Rは、Hであり、Rは、任意選択で置換さ
    れているヘテロアリール縮合環であり;
    は、H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置
    換されているアルコキシ、および任意選択で置換されているアリールからなる群から選択
    され;
    は、Hである]
    の構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩
    からなる群から選択される、請求項1から13のいずれか一項に記載の方法。
  15. それを必要とする対象におけるmTOR阻害剤治療の有効性を決定するための方法であ
    って、
    mTOR阻害剤が投与されているかまたは投与される予定の対象由来の生物学的試料に
    おけるmTOR基質であるホスホ-S6Kおよびホスホ-4ebp1の少なくとも一方の
    レベルを検出する少なくとも1つのアッセイを実施するステップと;
    mTOR基質であるホスホ-S6Kおよびホスホ-4ebp1の少なくとも一方のレベ
    ルを、正常組織において見られるそれぞれの対照レベルと比較するステップ
    とを含む方法。
  16. Figure 2022017384000431
    [式中、
    は、Hであり;
    は、
    Figure 2022017384000432
    からなる群から選択され;
    は、任意選択で置換されているアミノ、任意選択で置換されているアリールオキシ
    、任意選択で置換されているヘテロアリールオキシ、任意選択で置換されているアルコキ
    シ、N-ヘテロ環式、任意選択で置換されているチオール、および任意選択で置換されて
    いるアルキルからなる群から選択され;
    は、H、ヒドロキシ、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置換
    されているアルコキシおよび任意選択で置換されているアリールからなる群から選択され

    は、Hである]
    の構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩。
  17. が、
    Figure 2022017384000433
    からなる群から選択される、請求項16に記載の化合物。
  18. Figure 2022017384000434
    [式中、
    は、Hであり、
    は、任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロアリー
    ル、任意選択で置換されているシクロアルキル、および任意選択で置換されているアルキ
    ルからなる群から選択されるか、またはNRは、一緒になって、ヘテロ環を形成し

    は、任意選択で置換されているアリールオキシ、任意選択で置換されているヘテロ
    アリールオキシ、および任意選択で置換されているアルコキシからなる群から選択され;
    は、H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置
    換されているアルコキシ、および任意選択で置換されているアリールからなる群から選択
    され;
    は、Hである]
    の構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩。
  19. Figure 2022017384000435
    [式中、
    は、Hであり;
    は、任意選択で置換されているヘテロアリール縮合環であり;
    は、-NRであり、ここで、Rは、Hであり、Rは、任意選択で置換さ
    れているヘテロアリール縮合環であり;
    は、H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置
    換されているアルコキシ、および任意選択で置換されているアリールからなる群から選択
    され;
    は、Hである]
    の構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩。
  20. が、-NRであり、ここで、RおよびRはそれぞれ独立に、H、任意選
    択で置換されているアリール、任意選択で置換されているヘテロアリール、シクロアルキ
    ル、任意選択で置換されているアルキル、および任意選択で置換されているアシルからな
    る群から選択される、請求項16に記載の化合物。
  21. が、Hであり、Rが、N-アルキルベンズアミド、フェニル、アルコキシ置換フ
    ェニル、シクロプロピル、シクロブチル、アルコキシアルキル、およびハロアルキルから
    なる群から選択される、請求項20に記載の化合物。
  22. が、フェノキシ、(C~C)アルコキシ、および-O-(N-アルキルベンズ
    アミド)からなる群から選択される、請求項18に記載の化合物。
  23. が、
    Figure 2022017384000436
    である、請求項18に記載の化合物。
  24. が、アルコキシ置換フェニルである、請求項18に記載の化合物。
  25. が、
    Figure 2022017384000437
    である、請求項18に記載の化合物。
  26. が、少なくとも1個のヘテロ原子を含む、任意選択で置換されている二環式縮合環
    である、請求項18または19に記載の化合物。
  27. が、ハロアルキルおよびハロからなる群から選択される、請求項16から26のい
    ずれか一項に記載の化合物。
  28. が、CF、Br、およびClからなる群から選択される、請求項16から26の
    いずれか一項に記載の化合物。
  29. 請求項16から28のいずれかに記載の化合物と、少なくとも1つの薬学的に許容され
    る添加物とを含む、医薬組成物。
  30. 少なくとも1つのmTOR阻害剤をさらに含む、請求項29に記載の医薬組成物。
  31. 式A:
    Figure 2022017384000438
    [式A中、
    10は、ハロゲン;-OR11(ここで、R11は、H、任意選択で置換されている
    アリール、または任意選択で置換されているヘテロアリールである);-NR(こ
    こで、RおよびRはそれぞれ独立に、H、任意選択で置換されているアリール、任意
    選択で置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているシクロアルキル、およ
    び任意選択で置換されているアルキルからなる群から選択されるか、またはNR
    、一緒になって、ヘテロ環を形成する)からなる群から選択されるか;またはRおよび
    10は、一緒になって、環式構造を形成し;
    は、任意選択で置換されているアミノ、任意選択で置換されているアリールオキシ
    、任意選択で置換されているヘテロアリールオキシ、任意選択で置換されているアルコキ
    シ、N-ヘテロ環式、任意選択で置換されているチオール、任意選択で置換されているア
    ルキル、ヒドロキシル、およびハロゲンからなる群から選択され;
    は、H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置
    換されているアルコキシもしくは任意選択で置換されているアリール、任意選択で置換さ
    れているカルボキシル、シアノ、およびニトロからなる群から選択されるか、またはR
    およびRは、一緒になって、環式構造を形成し;
    は、Hまたはハロアルキルである]
    の構造を有する化合物、または薬学的に許容されるその塩と;
    mTOR阻害剤と;
    少なくとも1つの薬学的に許容される添加物
    とを含む、医薬組成物。
  32. 化合物が、式I:
    Figure 2022017384000439
    [式I中、
    およびRはそれぞれ独立に、H、任意選択で置換されているアリール、任意選択
    で置換されているヘテロアリール、任意選択で置換されているシクロアルキル、および任
    意選択で置換されているアルキルからなる群から選択されるか、またはNRは、一
    緒になって、ヘテロ環を形成し;
    は、任意選択で置換されているアミノ、任意選択で置換されているアリールオキシ
    、任意選択で置換されているヘテロアリールオキシ、任意選択で置換されているアルコキ
    シ、N-ヘテロ環式、任意選択で置換されているチオール、および任意選択で置換されて
    いるアルキルからなる群から選択され;
    は、H、ヒドロキシル、任意選択で置換されているアルキル、ハロ、任意選択で置
    換されているアルコキシ、および任意選択で置換されているアリールからなる群から選択
    され、
    は、Hである]
    の構造を有する、請求項31に記載の医薬組成物。
  33. YANWLAASIYLDGKKK(配列番号1)を含む、組換えペプチド。
  34. 検出可能な標識とさらにコンジュゲートしている、請求項33に記載の組換えペプチド
  35. 検出可能な標識が、フルオロフォアまたは放射性同位体を含む、請求項34に記載の組
    換えペプチド。
  36. ULK1のキナーゼ活性を阻害する化合物を同定するスクリーニング方法であって、
    候補化合物、ULK1、および請求項33から35のいずれか一項に記載の組換えペプ
    チドを接触させるステップと;
    候補化合物の存在下および非存在下で、組換えペプチドのリン酸化を検出するステップ
    と;
    候補化合物の非存在下と比較して候補化合物の存在下で組換えペプチドのリン酸化が減
    少している場合に、ULK1のキナーゼ活性を阻害する化合物を同定するステップ
    とを含む、方法。
  37. Figure 2022017384000440
    Figure 2022017384000441
    からなる群から選択される化合物、または薬学的に許容されるその塩。
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