JP2022006774A - 抗vegf-a抗体による癌に対する治療応答性を予測又は決定するための方法 - Google Patents
抗vegf-a抗体による癌に対する治療応答性を予測又は決定するための方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022006774A JP2022006774A JP2020109239A JP2020109239A JP2022006774A JP 2022006774 A JP2022006774 A JP 2022006774A JP 2020109239 A JP2020109239 A JP 2020109239A JP 2020109239 A JP2020109239 A JP 2020109239A JP 2022006774 A JP2022006774 A JP 2022006774A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- vegf
- antibody
- seq
- concentration
- chain variable
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 75
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 50
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 40
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 title claims abstract description 33
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 title claims abstract description 14
- 102000009524 Vascular Endothelial Growth Factor A Human genes 0.000 claims abstract description 94
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 claims abstract description 94
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 66
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims abstract description 49
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 claims abstract description 32
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 11
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims abstract 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 68
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 48
- 229960000397 bevacizumab Drugs 0.000 claims description 30
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 27
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 25
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 22
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 16
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 16
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 16
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 15
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 11
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 9
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 9
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 8
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 7
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 7
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 claims description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims description 3
- 208000029824 high grade glioma Diseases 0.000 claims description 2
- 201000011614 malignant glioma Diseases 0.000 claims description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 7
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 7
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 7
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 238000010837 poor prognosis Methods 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 5
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 3
- 101000808011 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor A Proteins 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 3
- 238000011394 anticancer treatment Methods 0.000 description 3
- RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N benzene-1,2-diamine;hydron;dichloride Chemical compound Cl.Cl.NC1=CC=CC=C1N RIIWUGSYXOBDMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 3
- 102000058223 human VEGFA Human genes 0.000 description 3
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 108010054624 red fluorescent protein Proteins 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 2
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 2
- BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N pyrene Chemical compound C1=CC=C2C=CC3=CC=CC4=CC=C1C2=C43 BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 2
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- YMHOBZXQZVXHBM-UHFFFAOYSA-N 2,5-dimethoxy-4-bromophenethylamine Chemical compound COC1=CC(CCN)=C(OC)C=C1Br YMHOBZXQZVXHBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQUPABOKLQSFBK-UHFFFAOYSA-N 2-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O IQUPABOKLQSFBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-benzimidazol-2-yl)-7-(diethylamino)chromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2NC(C3=CC4=CC=C(C=C4OC3=O)N(CC)CC)=NC2=C1 GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZTOJFFHGPLIVKC-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2-[(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound S1C2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N(CC)C1=NN=C1SC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N1CC ZTOJFFHGPLIVKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000001342 Fallopian tube cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018341 Gliosis Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010029660 Intrinsically Disordered Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000033724 Malignant tumor of fallopian tubes Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000034038 Pathologic Neovascularization Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 208000026149 Primary peritoneal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010038111 Recurrent cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108091008605 VEGF receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010073925 Vascular Endothelial Growth Factor B Proteins 0.000 description 1
- 108010073923 Vascular Endothelial Growth Factor C Proteins 0.000 description 1
- 108010073919 Vascular Endothelial Growth Factor D Proteins 0.000 description 1
- 102000009484 Vascular Endothelial Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 1
- 208000024248 Vascular System injury Diseases 0.000 description 1
- 102100038217 Vascular endothelial growth factor B Human genes 0.000 description 1
- 102100038232 Vascular endothelial growth factor C Human genes 0.000 description 1
- 102100038234 Vascular endothelial growth factor D Human genes 0.000 description 1
- 208000012339 Vascular injury Diseases 0.000 description 1
- 241000545067 Venus Species 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 229940120638 avastin Drugs 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000009460 calcium influx Effects 0.000 description 1
- 238000002619 cancer immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 210000000748 cardiovascular system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- IZJPDMAOXFNGNK-UHFFFAOYSA-N cyclopenta[d]triazole Chemical compound N1=NC2=CC=CC2=N1 IZJPDMAOXFNGNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001295 dansyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(N(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=C2C([H])=C([H])C([H])=C(C2=C1[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000010339 dilation Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 description 1
- -1 etc.) Proteins 0.000 description 1
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N fluoranthrene Natural products C1=CC(C2=CC=CC=C22)=C3C2=CC=CC3=C1 GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010021843 fluorescent protein 583 Proteins 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000007387 gliosis Effects 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N iodine Chemical compound II PNDPGZBMCMUPRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000001365 lymphatic vessel Anatomy 0.000 description 1
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N phenyl 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000000250 revascularization Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229910052713 technetium Inorganic materials 0.000 description 1
- GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N technetium atom Chemical compound [Tc] GKLVYJBZJHMRIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical class [H]S* 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 210000003556 vascular endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005957 yellow fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
Description
[1]抗VEGF-A抗体による治療を受ける又は受けた癌患者における治療応答性をin vitroで予測又は決定するための方法であって、上記患者の抗VEGF-A抗体投与前及び投与後の血清検体中の全VEGF-A、VEGF-A121濃度及び/又はVEGF-A165濃度をそれぞれ、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A121抗体及び/又は抗VEGF-A165抗体を用いて測定し、決定された濃度に基づいて、VEGFアイソフォームインデックスを投与前の血清中VEGF-A165濃度/血清中VEGF-A121の変化率と定義し、ここで血清中VEGF-A121の変化率を(投与後VEGF-A121濃度-投与前VEGF-A121濃度)/投与前VEGF-A121濃度と定義するとき、VEGFアイソフォームインデックスが1000を超えないとき、或いは、VEGF-A濃度が6000pg/mLを超えないとき、VEGF-A121濃度が1000pg/mLを超えないとき、VEGF-A165濃度が800pg/mLを超えないとき、又はVEGF-A121濃度で(投与後VEGF-A121濃度/投与前VEGF-A121濃度)が2を超えるとき、前記患者は、抗VEGF-A抗体に対し治療応答性があると予測又は決定することを含む、上記方法。
(1)上記患者の抗VEGF-A抗体投与前及び投与後の血清検体と、固相化した抗VEGFポリクローナル抗体及び/又は抗VEGFモノクローナル抗体とを接触させて、上記検体中のVEGF-A121及び/又はVEGF-A165を上記抗体と結合させる工程、
(2)上記工程(1)の固相を、ラベル化した抗VEGF-A抗体、ラベル化した抗VEGF-A121抗体、及び/又はラベル化した抗VEGF-A165抗体と接触させる工程であって、ただし、上記抗VEGF-A抗体はすべてのVEGF-Aに結合する抗体であり、上記抗VEGF-A121抗体はVEGF-A121と特異的に結合する抗体であり、及び抗VEGF-A165抗体はVEGF-A165と特異的に結合する抗体である、上記工程、
(3)上記工程(2)の固相を洗浄し、及び、上記ラベルからのシグナルを測定して、上記検体中の全VEGF-A、VEGF-A121、及び/又はVEGF-A165の各濃度を決定する工程、並びに、
(4)上記工程(3)で決定された濃度に基づいて、VEGFアイソフォームインデックスを投与前の血清中VEGF-A165濃度/血清中VEGF-A121の変化率と定義し、ここで血清中VEGF-A121の変化率を(投与後VEGF-A121濃度-投与前VEGF-A121濃度)/投与前VEGF-A121濃度と定義するとき、VEGFアイソフォームインデックスが1000を超えないとき、或いは、VEGF-A濃度が6000pg/mLを超えないとき、VEGF-A121濃度が1000pg/mLを超えないとき、VEGF-A165濃度が800pg/mLを超えないとき、又はVEGF-A121濃度で(投与後VEGF-A121濃度/投与前VEGF-A121濃度)が2を超えるとき、上記患者は、抗VEGF-A抗体に対し治療応答性があると予測又は決定する工程を含む、上記方法。
(1’)上記患者の抗VEGF-A抗体投与前及び投与後の血清検体と、固相化した抗VEGF-A121抗体、及び/又は抗VEGF-A165抗体とを接触させて、上記検体中のVEGF-A121又はVEGF-A165を上記抗体と結合させる工程であって、ただし、上記抗VEGF-A121抗体はVEGF-A121と特異的に結合する抗体であり、かつ抗VEGF-A165抗体はVEGF-A165と特異的に結合する抗体である、上記工程、
(2’)上記工程(1’)の固相を、ラベル化した抗VEGF-A抗体と接触させる工程、
(3’)上記工程(2’)の固相を洗浄し、及び、上記ラベルからのシグナルを測定して、上記検体中の全VEGF-A、VEGF-A121及び/又はVEGF-A165の各濃度を決定する工程、並びに、
(4’)上記工程(3’)で決定された濃度に基づいて、VEGFアイソフォームインデックスを投与前の血清中VEGF-A165濃度/血清中VEGF-A121の変化率と定義し、ここで血清中VEGF-A121の変化率を(投与後VEGF-A121濃度-投与前VEGF-A121濃度)/投与前VEGF-A121濃度と定義するとき、VEGFアイソフォームインデックスが1000を超えないとき、或いは、VEGF-A濃度が6000pg/mLを超えないとき、VEGF-A121濃度が1000pg/mLを超えないとき、VEGF-A165濃度が800pg/mLを超えないとき、又はVEGF-A121濃度で(投与後VEGF-A121濃度/投与前VEGF-A121濃度)が2を超えるとき、上記患者は、抗VEGF-A抗体に対し治療応答性があると予測又は決定する工程、
を含む、上記方法。
[5]上記濃度の決定を、免疫学的アッセイによって行う、上記[1]~[4]のいずれかに記載の方法。
[6]上記抗VEGF-A抗体が、ベバシズマブである、上記[1]~[5]のいずれかに記載の方法。
[7]上記癌が、結腸直腸癌、大腸癌、乳癌、肺癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、子宮頸癌及び悪性神経膠腫からなる群から選択される、上記[1]~[6]のいずれかに記載の方法。
[8]上記ラベル化した抗VEGF-A121抗体及びラベル化した抗VEGF-A165抗体のラベルが、互いに波長域の異なる蛍光ラベルである、上記[2]~[7]のいずれかに記載の方法。
[9]上記抗VEGF-A121抗体が、下記の(a)~(c)に示す抗体からなる群から選択される抗体である、[1]~[8]のいずれかに記載の方法。
(a)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号1(CDR1)、配列番号2(CDR2)及び配列番号3(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号6(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体
(b)配列番号7の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号8の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体
(c)配列番号9のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号10のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体
[10]上記抗VEGF-A165抗体が、下記の(d)~(f)に示す抗体からなる群から選択される抗体である、[1]~[8]のいずれかに記載の方法。
(d)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号11(CDR1)、配列番号12(CDR2)及び配列番号13(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号14(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体
(e)配列番号15の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号16の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体
(f)配列番号17のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号18のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体
[12]上記方法のための使用説明書をさらに含む、上記[11]に記載のキット。
[13]上記ラベルが、蛍光ラベル、放射性同位体ラベル、化学発光、又は酵素ラベルである、上記[11]又は[12]に記載のキット。
[14]上記酵素ラベルが、ペルオキシダーゼ又はアルカリホスファターゼである、上記[13]に記載のキット。
[15]上記抗VEGF-A121抗体が、下記の(a)~(c)に示す抗体からなる群から選択される抗体である、上記[11]~[14]のいずれかに記載のキット。
(a)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号1(CDR1)、配列番号2(CDR2)及び配列番号3(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号6(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体
(b)配列番号7の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号8の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体
(c)配列番号9のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号10のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体
[16]上記抗VEGF-A165抗体が、下記の(d)~(f)に示す抗体からなる群から選択される抗体である、[11]~[14]のいずれかに記載のキット。
(d)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号11(CDR1)、配列番号12(CDR2)及び配列番号13(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号14(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体
(e)配列番号15の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号16の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体
(f)配列番号17のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号18のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体
[17]上記方法が、免疫学的アッセイを使用するものである、上記[11]~[16]のいずれかに記載のキット。
(a)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号1(CDR1)、配列番号2(CDR2)及び配列番号3(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号6(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体
(b)配列番号7の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号8の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体
(c)配列番号9のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号10のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体
[19]下記の(d)~(f)に示す抗体からなる群から選択される抗VEGF-A165抗体。
(d)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号11(CDR1)、配列番号12(CDR2)及び配列番号13(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号14(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体
(e)配列番号15の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号16の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体
(f)配列番号17のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号18のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体
[20]ラベル化されている、上記[18]又は[19]に記載の抗体。
[21]上記ラベルが、蛍光ラベル、放射性同位体ラベル、化学発光、又は酵素ラベルである、上記[20]に記載の抗体。
本発明は、第一の態様により、抗VEGF-A抗体による治療を受ける又は受けた癌患者における治療応答性をin vitroで予測又は決定(もしくは、判定支援)するための方法であって、上記患者の抗VEGF-A抗体投与前及び投与後の血清検体中の全VEGF-A、VEGF-A121濃度及び/又はVEGF-A165濃度をそれぞれ、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A121抗体及び/又は抗VEGF-A165抗体を用いて測定し、決定された濃度に基づいて、VEGFアイソフォームインデックスを投与前の血清中VEGF-A165濃度/血清中VEGF-A121の変化率と定義し、ここで血清中VEGF-A121の変化率を(投与後VEGF-A121濃度-投与前VEGF-A121濃度)/投与前VEGF-A121濃度と定義するとき、VEGFアイソフォームインデックスが1000を超えないとき、VEGF-A濃度が6000pg/mLを超えないとき、VEGF-A121濃度が1000pg/mLを超えないとき、或いは、VEGF-A165濃度が800pg/mLを超えないとき、又はVEGF-A121濃度で(投与後VEGF-A121濃度/投与前VEGF-A121濃度)が2を超えるとき、上記患者は、抗VEGF-A抗体に対し治療応答性があると予測又は決定することを含む、上記方法。
(1)上記患者の抗VEGF-A抗体投与前及び投与後の血清検体と、固相化した抗VEGF-A抗体とを接触させて、上記検体中のVEGF-A121及び/又はVEGF-A165を上記抗体と結合させる工程、
(2)上記工程(1)の固相を、ラベル化した抗VEGF-A抗体、ラベル化した抗VEGF-A121抗体、及び/又はラベル化した抗VEGF-A165抗体と接触させる工程であって、ただし、上記抗VEGF-A抗体はすべてのVEGF-Aに結合する抗体であり、抗VEGF-A121抗体はVEGF-A121と特異的に結合する抗体であり、かつ抗VEGF-A165抗体はVEGF-A165と特異的に結合する抗体である、上記工程、
(3)上記工程(2)の固相を洗浄し、及び、上記ラベルからのシグナルを測定して、上記検体中の全VEGF-A、VEGF-A121、及び/又はVEGF-A165の各濃度を決定する工程、並びに、
(4)上記工程(3)で決定された濃度に基づいて、VEGFアイソフォームインデックスを投与前の血清中VEGF-A165濃度/血清中VEGF-A121の変化率と定義し、及び、血清中VEGF-A121の変化率を(投与後VEGF-A121濃度-投与前VEGF-A121濃度)/投与前VEGF-A121濃度と定義するとき、VEGFアイソフォームインデックスが1000を超えないとき、或いは、VEGF-A濃度が6000pg/mLを超えないとき、VEGF-A121濃度が1000pg/mLを超えないとき、VEGF-A165濃度が800pg/mLを超えないとき、又はVEGF-A121濃度で(投与後VEGF-A121濃度/投与前VEGF-A121濃度)が2を超えるとき、上記患者は、抗VEGF-A抗体に対し治療応答性があると予測又は決定する工程、
を含む、上記方法を提供する。
(1’)上記患者の抗VEGF-A抗体投与前及び投与後の血清検体と、固相化した抗VEGF-A121抗体及び/又は抗VEGF-A165抗体とを接触させて、上記検体中のVEGF-A121又はVEGF-A165を上記抗体と結合させる工程であって、ただし、上記抗VEGF-A121抗体はVEGF-A121と特異的に結合する抗体であり、かつ抗VEGF-A165抗体はVEGF-A165と特異的に結合する抗体である、上記工程、
(2’)上記工程(1’)の固相を、ラベル化した抗VEGF-A抗体と接触させる工程、
(3’)上記工程(2’)の固相を洗浄し、及び、上記ラベルからのシグナルを測定して、上記検体中の全VEGF-A、VEGF-A121及び/又はVEGF-A165の各濃度を決定する工程、並びに、
(4’)上記工程(3’)で決定された濃度に基づいて、VEGFアイソフォームインデックスを投与前の血清中VEGF-A165濃度/血清中VEGF-A121の変化率と定義し、ここで血清中VEGF-A121の変化率を(投与後VEGF-A121濃度-投与前VEGF-A121濃度)/投与前VEGF-A121濃度と定義するとき、VEGFアイソフォームインデックスが1000を超えないとき、或いは、VEGF-A濃度が6000pg/mLを超えないとき、VEGF-A121濃度が1000pg/mLを超えないとき、VEGF-A165濃度が800pg/mLを超えないとき、又はVEGF-A121濃度で(投与後VEGF-A121濃度/投与前VEGF-A121濃度)が2を超えるとき、上記患者は、抗VEGF-A抗体に対し治療応答性があると予測又は決定する工程、
を含む、上記方法を提供する。
この工程では、癌患者の抗VEGF-A抗体投与前及び投与後(例えば投与開始後2週間目)の血清検体と、固相化した抗VEGF-A抗体とを接触させて、上記検体中の全VEGF-Aを上記抗体と結合させる。
この工程では、上記工程(1)の固相を、ラベル化した抗VEGF-A抗体、ラベル化した抗VEGF-A121抗体又はラベル化した抗VEGF-A165抗体と接触させる。
(a)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号1(CDR1)、配列番号2(CDR2)及び配列番号3(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号6(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体。
(b)配列番号7の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号8の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体。
(c)配列番号9のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号10のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体。
(d)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号11(CDR1)、配列番号12(CDR2)及び配列番号13(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号14(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体。
(e)配列番号15の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号16の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む工程。
(f)配列番号17のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号18のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体。
この工程では、上記工程(2)の固相を洗浄し、及び、上記ラベルからのシグナルを測定して、上記検体中の全VEGF-A、VEGF-A121及び/又はVEGF-A165の各濃度を決定する。
この工程では、上記工程(3)で決定された抗VEGF抗体による治療前後の血清中の全VEGF-A、VEGF-A121又はVEGF-A165の濃度に基づいて、上記癌患者の、抗VEGF-A抗体に対する治療応答性を決定する。
(1)ベバシズマブ治療後は、血清中の全VEGF-A、VEGF-A165は低下し、一方、VEGF-A121は上昇する。
(2)ベバシズマブ治療後は、血清又は血漿中のVEGF-A121が上昇する。
(3)ベバシズマブ治療予後不良症例(PD)では、ベバシズマブ治療予後良好症例(non-PD)と比較して、ベバシズマブ治療前の血清において全VEGF-A、VEGF-A121、VEGF-A165は高値である。この現象は血漿では確認できない。つまり血清中のVEGF-Aを測定することが非常に重要であることが明らかとなった。
(4)ベバシズマブ治療予後不良症例(PD)では、ベバシズマブ治療予後良好症例(non-PD)と比較して、ベバシズマブ治療後の血清中VEGF-A121濃度がベバシズマブ治療前の血清中VEGF-A121濃度からの上昇の程度が小さい。
(5)ベバシズマブ治療予後不良症例(PD;患者3,8)では、VEGFアイソフォームインデックスが1000を超えて大きいが、一方、ベバシズマブ治療予後良好症例(non-PD)では、VEGFアイソフォームインデックスが1000を超えず小さい。
(6)上記の知見から、VEGFアイソフォームインデックスは投与前の血清中VEGF-A165濃度/血清中VEGF-A121の変化率と定義するとき、ここで血清中VEGF-A121の変化率を(投与後VEGF-A121濃度-投与前VEGF-A121濃度)/投与前VEGF-A121濃度と定義するとき、VEGFアイソフォームインデックスが1000を超えないとき、或いは、VEGF-A濃度が6000pg/mLを超えないとき、VEGF-A121濃度が1000pg/mLを超えないとき、VEGF-A165濃度が800pg/mLを超えないとき、又はVEGF-A121濃度で(投与後VEGF-A121濃度/投与前VEGF-A121濃度)が2を超えるとき、上記患者は、抗VEGF-A抗体に対し治療応答性(もしくは、治療効果)があると予測又は決定(もしくは、判定支援)することができる。
本発明は、第四の態様により、上記1に記載の方法で使用するためのキットであって、(好ましくは固相化した)VEGFポリクローナル抗体、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A121抗体、及び抗VEGF-A165抗体を含むキットを提供する。これらの抗体は、必要に応じてラベル化されていてもよい。
(a)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号1(CDR1)、配列番号2(CDR2)及び配列番号3(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号6(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体。
(b)配列番号7の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号8の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体。
(c)配列番号9のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号10のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体。
(d)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号11(CDR1)、配列番号12(CDR2)及び配列番号13(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号14(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体。
(e)配列番号15の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号16の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体。
(f)配列番号17のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号18のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体。
<進行性大腸癌患者における分子標的薬(抗VEGF-A抗体であるベバシズマブ)による治療応答性の判別>
[1]測定
ベバシズマブによる抗癌治療を受けた進行性大腸癌患者12例について、当該患者からの薬剤投与前及び投与後(投与開始後2週間目)の血清及び血漿中の全VEGF-A、VEGF-A121及びVEGF-A165の各濃度を、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A121モノクローナル抗体「5A6G4C8」及び抗VEGF-A165モノクローナル抗体「4F9A9G9」を使用するサンドイッチELISAアッセイ手順に従って測定した。
ヤギ抗ヒトVEGFポリクローナル抗体(R&D社)100μL(1μg/mL-PBS)を5℃で一晩、固相(Thermo Fisher)に結合させた。
上記固相に、50mM Tris、150M NaCl、0.5%カゼイン、を含むブロッキング溶液100μLを重層し、37℃で2時間静置しブロッキングしたのち、PBST(Tween-20を含むリン酸緩衝生理食塩水)で5回洗浄した。
患者から採血し遠心分離(3500rpm)等によって処理して得られた血清及び血漿試料50μL及びバッファ50μL(50mM Tris、150mM NaCl、0.5%カゼイン)を上記固相に添加し、25℃で一晩インキュベーションし、その後、PBSTで5回洗浄した。
ペルオキシダーゼ(POD)標識抗VEGF-A抗体、POD標識抗VEGF-A121モノクローナル抗体「5A6G4C8」又はPOD標識抗VEGF-A165モノクローナル抗体「4F9A9G9」の各々100μL(POD標識抗VEGF-A抗体濃度0.016μg/mL-バッファ、POD標識モノクローナル抗体「5A6G4C8」及び「4F9A9G9」の各濃度0.25/mL-バッファ)(バッファ:50mM Tris、150mM NaCl、0.5%カゼイン)を二次抗体として上記固相に添加し、25℃で2時間インキュベーションしたのち、PBSTで5回洗浄した。
ペルオキシダーゼ用発色基質TMBZ(3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine;同仁化学)100μLを上記固相に添加して室温で30分間静置した。
工程5の上記固相に硫酸(0.1M)100μLを添加して発色反応を停止した。
工程6の発色を、吸光光度計(バイオラッド社)を用いて450nm/570nmで測定した。
上記工程4で使用した抗VEGF-A121モノクローナル抗体「5A6G4C8」又は抗VEGF-A165モノクローナル抗体「4F9A9G9」は、マウスよって作製された。
進行性大腸癌と診断されベバシズマブ投与を受けた患者12例における投与前(T0)と投与後(T1;投与開始後2週間目)の血清及び血漿中のVEGF-A121、VEGF-A165及び全VEGF-AをELISAにより測定した結果を図2A(血清)及び図2B(血漿)に示した。
(1)ベバシズマブ治療後は、血清中の全VEGF-A、VEGF-A165は低下し、一方、VEGF-A121は上昇した(図2A)。
(2)ベバシズマブ治療後は、血清又は血漿中のVEGF-A121が上昇した(図2A、図2B)。
(3)ベバシズマブ治療予後不良症例(PD;患者3,8)では、ベバシズマブ治療予後良好症例(non-PD)と比較して、ベバシズマブ治療前の血清において全VEGF-A、VEGF-A121、VEGF-A165は高値である。この現象は血漿では確認できない。つまり血清中のVEGF-Aを測定することが非常に重要であることが明らかとなった(表1~表3、図2A、図2B)。
(4)ベバシズマブ治療予後不良症例(PD;患者3,8)では、ベバシズマブ治療予後良好症例(non-PD)と比べて、ベバシズマブ治療後の血清中VEGF-A121濃度がベバシズマブ治療前の血清中VEGF-A121濃度からの上昇の程度が小さかった(表1、図2A)。
(5)ベバシズマブ治療予後不良症例(PD;患者3,8)では、VEGFアイソフォームインデックスが1000を超えて大きくなるが、一方、ベバシズマブ治療予後良好症例(non-PD)では、VEGFアイソフォームインデックスが1000を超えず小さくなった(図3)。
Claims (21)
- 抗VEGF-A抗体による治療を受ける又は受けた癌患者における治療応答性をin vitroで予測又は決定するための方法であって、前記患者の抗VEGF-A抗体投与前及び投与後の血清検体中の全VEGF-A、VEGF-A121濃度及び/又はVEGF-A165濃度をそれぞれ、抗VEGF-A抗体、抗VEGF-A121抗体及び/又は抗VEGF-A165抗体を用いて測定し、決定された濃度に基づいて、VEGFアイソフォームインデックスを投与前の血清中VEGF-A165濃度/血清中VEGF-A121の変化率と定義し、ここで血清中VEGF-A121の変化率を(投与後VEGF-A121濃度-投与前VEGF-A121濃度)/投与前VEGF-A121濃度と定義するとき、VEGFアイソフォームインデックスが1000を超えないとき、或いは、VEGF-A濃度が6000pg/mLを超えないとき、VEGF-A121濃度が1000pg/mLを超えないとき、VEGF-A165濃度が800pg/mLを超えないとき、又はVEGF-A121濃度で(投与後VEGF-A121濃度/投与前VEGF-A121濃度)が2を超えるとき、前記患者は、抗VEGF-A抗体に対し治療応答性があると予測又は決定することを含む、前記方法。
- 抗VEGF-A抗体による治療を受ける又は受けた癌患者における治療応答性をin vitroで予測又は決定するための方法であって、下記の工程(1)~(4)、
(1)前記患者の抗VEGF-A抗体投与前及び投与後の血清検体と、固相化した抗VEGF-A抗体とを接触させて、前記検体中のVEGF-A121及び/又はVEGF-A165を前記抗体と結合させる工程、
(2)前記工程(1)の固相を、ラベル化した抗VEGF-A抗体、ラベル化した抗VEGF-A121抗体、及び/又はラベル化した抗VEGF-A165抗体と接触させる工程であって、ただし、前記抗VEGF-A抗体はすべてのVEGF-Aに結合する抗体であり、前記抗VEGF-A121抗体はVEGF-A121と特異的に結合する抗体であり、及び前記抗VEGF-A165抗体はVEGF-A165と特異的に結合する抗体である、前記工程、
(3)前記工程(2)の固相を洗浄し、及び、前記ラベルからのシグナルを測定して、前記検体中の全VEGF-A、VEGF-A121、及び/又はVEGF-A165の各濃度を決定する工程、並びに、
(4)前記工程(3)で決定された濃度に基づいて、VEGFアイソフォームインデックスを投与前の血清中VEGF-A165濃度/血清中VEGF-A121の変化率と定義し、ここで血清中VEGF-A121の変化率を(投与後VEGF-A121濃度-投与前VEGF-A121濃度)/投与前VEGF-A121濃度と定義するとき、VEGFアイソフォームインデックスが1000を超えないとき、或いは、VEGF-A濃度が6000pg/mLを超えないとき、VEGF-A121濃度が1000pg/mLを超えないとき、VEGF-A165濃度が800pg/mLを超えないとき、又はVEGF-A121濃度で(投与後VEGF-A121濃度/投与前VEGF-A121濃度)が2を超えるとき、前記患者は、抗VEGF-A抗体に対し治療応答性があると予測又は決定する工程、
を含む、前記方法。 - 抗VEGF-A抗体による治療を受ける又は受けた癌患者における治療効果をin vitroで予測又は決定するための方法であって、下記の工程(1’)~(4’)、
(1’)上記患者の抗VEGF-A抗体投与前及び投与後の血清検体と、固相化した、抗VEGF-A121抗体及び/又は抗VEGF-A165抗体とを接触させて、上記検体中のVEGF-A121又はVEGF-A165を上記抗体と結合させる工程であって、ただし、上記抗VEGF-A121抗体はVEGF-A121と特異的に結合する抗体であり、かつ抗VEGF-A165抗体はVEGF-A165と特異的に結合する抗体である、上記工程、
(2’)上記工程(1’)の固相を、ラベル化した抗VEGF-A抗体と接触させる工程、
(3’)上記工程(2’)の固相を洗浄し、及び、上記ラベルからのシグナルを測定して、上記検体中の全VEGF-A、VEGF-A121及び/又はVEGF-A165の各濃度を決定する工程、並びに、
(4’)前記工程(3’)で決定された濃度に基づいて、VEGFアイソフォームインデックスを投与前の血清中VEGF-A165濃度/血清中VEGF-A121の変化率と定義し、ここで血清中VEGF-A121の変化率を(投与後VEGF-A121濃度-投与前VEGF-A121濃度)/投与前VEGF-A121濃度と定義するとき、VEGFアイソフォームインデックスが1000を超えないとき、或いは、VEGF-A濃度が6000pg/mLを超えないとき、VEGF-A121濃度が1000pg/mLを超えないとき、VEGF-A165濃度が800pg/mLを超えないとき、又はVEGF-A121濃度で(投与後VEGF-A121濃度/投与前VEGF-A121濃度)が2を超えるとき、上記患者は、抗VEGF-A抗体に対し治療応答性があると予測又は決定する工程、
を含む、上記方法。 - 前記ラベルが、蛍光ラベル、放射性同位体ラベル、化学発光、及び酵素ラベルからなる群から選択される、請求項2又は3に記載の方法。
- 前記濃度の決定を、免疫学的アッセイによって行う、請求項1~4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗VEGF-A抗体が、ベバシズマブである、請求項1~5のいずれか1項に記載の方法。
- 前記癌が、結腸直腸癌、大腸癌、乳癌、肺癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、子宮頸癌及び悪性神経膠腫からなる群から選択される、請求項1~6のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ラベル化した抗VEGF-A121抗体及びラベル化した抗VEGF-A165抗体のラベルが、互いに波長域の異なる蛍光ラベルである、請求項2~7のいずれか1項に記載の方法。
- 前記抗VEGF-A121抗体が、下記の(a)~(c)に示す抗体からなる群から選択される抗体である、請求項1~8のいずれか1項に記載の方法。
(a)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号1(CDR1)、配列番号2(CDR2)及び配列番号3(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号6(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体
(b)配列番号7の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号8の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体
(c)配列番号9のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号10のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体 - 前記抗VEGF-A165抗体が、下記の(d)~(f)に示す抗体からなる群から選択される抗体である、請求項1~8のいずれか1項に記載の方法。
(d)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号11(CDR1)、配列番号12(CDR2)及び配列番号13(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号14(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体
(e)配列番号15の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号16の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体
(f)配列番号17のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号18のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体 - 請求項1~10のいずれか1項に記載の方法で使用するためのキットであって、固相化したVEGFポリクローナル抗体及び/又は抗VEGFモノクローナル抗体、ラベル化した抗VEGF-A121抗体、及びラベル化した抗VEGF-A165抗体を含む前記キット。
- 前記方法のための使用説明書をさらに含む、請求項11に記載のキット。
- 前記ラベルが、蛍光ラベル、放射性同位体ラベル、化学発光、又は酵素ラベルである、請求項11又は12に記載のキット。
- 前記酵素ラベルが、ペルオキシダーゼ又はアルカリホスファターゼである、請求項13に記載のキット。
- 前記抗VEGF-A121抗体が、下記の(a)~(c)に示す抗体からなる群から選択される抗体である、請求項11~14のいずれか1項に記載のキット。
(a)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号1(CDR1)、配列番号2(CDR2)及び配列番号3(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号6(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体
(b)配列番号7の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号8の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体
(c)配列番号9のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号10のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体 - 前記抗VEGF-A165抗体が、下記の(d)~(f)に示す抗体からなる群から選択される抗体である、請求項11~14のいずれか1項に記載のキット。
(d)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号11(CDR1)、配列番号12(CDR2)及び配列番号13(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号14(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体
(e)配列番号15の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号16の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体
(f)配列番号17のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号18のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体 - 前記方法が、免疫学的アッセイを使用するものである、請求項11~16のいずれか1項に記載のキット。
- 下記の(a)~(c)に示す抗体からなる群から選択される抗VEGF-A121抗体。
(a)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号1(CDR1)、配列番号2(CDR2)及び配列番号3(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号6(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体
(b)配列番号7の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号8の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体
(c)配列番号9のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号10のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体 - 下記の(d)~(f)に示す抗体からなる群から選択される抗VEGF-A165抗体。
(d)重鎖可変領域の相補性決定領域(CDR)の配列として、配列番号11(CDR1)、配列番号12(CDR2)及び配列番号13(CDR3)のアミノ酸配列、並びに、軽鎖可変領域のCDR配列として、配列番号4(CDR1)、配列番号5(CDR2)及び配列番号14(CDR3)のアミノ酸配列をそれぞれ含む抗体
(e)配列番号15の重鎖可変領域のアミノ酸配列、及び、配列番号16の軽鎖可変領域のアミノ酸配列を含む抗体
(f)配列番号17のヌクレオチド配列によってコードされる重鎖可変領域、及び配列番号18のヌクレオチド配列によってコードされる軽鎖可変領域を含む抗体 - ラベル化されている、請求項18又は19に記載の抗体。
- 前記ラベルが、蛍光ラベル、放射性同位体ラベル、化学発光、又は酵素ラベルである、請求項20に記載の抗体。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2020109239A JP7485273B2 (ja) | 2020-06-25 | 2020-06-25 | 抗vegf-a抗体による癌に対する治療応答性を予測又は決定するための方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2020109239A JP7485273B2 (ja) | 2020-06-25 | 2020-06-25 | 抗vegf-a抗体による癌に対する治療応答性を予測又は決定するための方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022006774A true JP2022006774A (ja) | 2022-01-13 |
JP7485273B2 JP7485273B2 (ja) | 2024-05-16 |
Family
ID=80110589
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020109239A Active JP7485273B2 (ja) | 2020-06-25 | 2020-06-25 | 抗vegf-a抗体による癌に対する治療応答性を予測又は決定するための方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP7485273B2 (ja) |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU774575C (en) | 1999-11-16 | 2005-09-08 | Genentech Inc. | Elisa for VEGF |
EP2309271A1 (en) | 2009-09-25 | 2011-04-13 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Medicale) | Methods for predicting the responsiveness of a patient affected with a tumor to a treatment with a tyrosine kinase inhibitor |
KR20130091745A (ko) | 2010-07-19 | 2013-08-19 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 항암요법에 반응할 가능성이 증가된 환자를 확인하는 방법 |
JP6925981B2 (ja) | 2016-01-06 | 2021-08-25 | 株式会社オーダーメードメディカルリサーチ | Vegfとnrp1との結合を阻害する抗体 |
CA3034576A1 (en) | 2016-08-23 | 2018-03-01 | Medimmune Limited | Anti-vegf-a antibodies and uses thereof |
-
2020
- 2020-06-25 JP JP2020109239A patent/JP7485273B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP7485273B2 (ja) | 2024-05-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6183809B2 (ja) | ペリオスチンの特定領域に結合する抗体及びこれを用いたペリオスチンの測定方法 | |
RU2016109642A (ru) | Антитела и методы анализа для обнаружения рецептора фолиевой кислоты 1 | |
JP5078015B2 (ja) | 尿路上皮ガンの検出用キットおよび方法 | |
ES2803217T3 (es) | Antígeno de superficie de células de cáncer de próstata para el diagnóstico | |
JP2009020049A (ja) | 脳血管疾患の診断方法 | |
JP2021513658A (ja) | 大腸癌のバイオマーカとしてのbmmf1 repタンパク質の使用 | |
US20190137523A1 (en) | Method and means for detecting the level of total vegf-a | |
WO2013031756A1 (ja) | 大腸癌または食道癌の検出用マーカー及び検査方法 | |
JP2012058048A (ja) | ペリオスチン測定の正確性の改善方法 | |
CN107266567B (zh) | Lcrmp4单克隆抗体及其制备方法与应用 | |
JP5137015B2 (ja) | Ptx3高感度測定法 | |
RU2745060C2 (ru) | Биомаркеры для комбинированной терапии, включающей ленватиниб и эверолимус | |
JP7485273B2 (ja) | 抗vegf-a抗体による癌に対する治療応答性を予測又は決定するための方法 | |
JP6975424B2 (ja) | 活性構造のREIC/Dkk−3タンパク質を特異的に認識して結合する抗体、及び該抗REIC/Dkk−3抗体を用いた癌治療のモニタリング | |
JP5280214B2 (ja) | 炎症性腸疾患の診断方法 | |
JPWO2014147873A1 (ja) | Hmgb1の分解産物と特異的に結合する抗体、並びにhmgb1の分解産物の測定方法及び測定試薬 | |
JP2009276153A (ja) | 胃癌の判定方法 | |
WO2021030450A1 (en) | Novel lox-1 antibody compositions, lox1 neutralization assay and methods of treatment using same | |
WO2023061388A1 (zh) | 半乳糖凝集素-3的免疫测定 | |
JP6407990B2 (ja) | アウグリン免疫学的検定 | |
EP1627916B1 (en) | Anti-BAMBI antibodies or RNA for diagnosis and therapy of colon or liver cancer | |
JP2012018119A (ja) | 大腸癌検出用マーカーおよびそれを用いた大腸癌検出方法 | |
WO2022153907A1 (ja) | ネフローゼ症候群の診断を補助するためのマーカー及びその使用 | |
WO2013176070A1 (ja) | 癌の検出方法 | |
JP2021092555A (ja) | 動脈硬化病変の検出方法、検出試薬及び検出キット |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230512 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20240124 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240130 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240325 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20240402 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20240422 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7485273 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |