JP2022002541A - 抗Ｋｖ１．３抗体ならびにその産生方法および使用方法 - Google Patents

Abstract

【課題】抗Ｋｖ１．３抗体（ｍＡｂ）、特に、高い親和性でＫｖ１．３に特異的に結合し、かつ／またはＫｖ１．３機能を阻害するｍＡｂを提供すること。【解決手段】これらの抗Ｋｖ１．３ ｍＡｂの軽鎖および重鎖のＣＤＲのアミノ酸配列ならびにこれらのＣＤＲのコンセンサス配列が提供される。さらに、抗Ｋｖ１．３抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域内のＣＤＲの基準構造が提供される。本開示は、抗Ｋｖ１．３ ｍＡｂをコードする核酸分子、発現ベクター、宿主細胞、抗Ｋｖ１．３ ｍＡｂを作製するための方法、および抗Ｋｖ１．３ ｍＡｂを発現させるための方法も提供する。最後に、例えば自己免疫障害の防止または処置のための治療薬として抗Ｋｖ１．３ ｍＡｂを使用する方法が開示される。【選択図】なし

Description

参考としての援用
この出願は、２０１６年５月２日に出願された米国出願第６２／３３０，４２０号および２０１６年１１月２日に出願された米国出願第６２／４１６，４４７号（これら各々の内容は、その全体が参考として本明細書に援用される）に対する優先権の利益を主張する。

本開示は概して、抗体、抗体の産生および使用に関する。特定すると、本開示は、ヒトＫｖ１．３タンパク質に特異的に結合し、ヒトＫｖ１．３タンパク質の活性を調整する抗体、かかる抗体を産生する方法、ならびにかかる抗体を使用した診断方法、治療方法、および臨床的方法に関する。

Ｋｖ１．３タンパク質とは、生体膜を通したカリウムイオンの移送を行い、興奮性および非興奮性の両方の細胞型の膜電位を調節する電位開口型イオンチャネルである。特に、Ｋｖ１．３は、活性化されたＴエフェクターメモリー（Ｔ_ＥＭ）および他のＴ細胞サブセットにおけるＣａ^２＋シグナル伝達を調節するにあたって十分に特徴付けられた役割を果たす（Ｗｕｌｆｆら（２００３年）、Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ．、１１１巻：１７０３〜１７１３頁；Ｂｅｅｔｏｎら（２００６年）、ＰＮＡＳ．、１０３巻：１７４１４〜１９頁）。Ｔ_ＥＭ細胞内のＫｖ１．３の上方調節は、自己免疫疾患における炎症部位に関連し（Ｒｕｓら（２００５年）、ＰＮＡＳ、１０２巻：１１０９４〜９９頁；Ｂｅｅｔｏｎ、２００６年）、特定のＫｖ１．３遮断薬は炎症のいくつかの動物モデルにおいて有効であることが調査により示されている（Ｂｅｅｔｏｎら（２００１年）、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６６巻：９３６〜４４頁）；Ｂｅｅｔｏｎら、２００６年；Ｋｏｏら（１９９７年）、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５８巻、５２１０〜２８頁；Ｍａｔｈｅｕら（２００８年）、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、２９巻、６０２〜１４頁；Ａｚａｍら（２００７年）、Ｊ． Ｉｎｖｅｓｔ． Ｄｅｒａｔｏｌ．、１２７巻、１４１９〜２９頁；Ｃｈｅｏｎｇら（２０１１年）、Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ． Ｒｅｓ．、８９巻、２８２〜８９頁；Ｈｙｏｄｏら（２０１０年）、Ａｍ． Ｊ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．、２９９巻、１２５８〜６９頁；Ｇｉｌｈａｒら（２０１１年）、Ｊ． Ｉｎｖｅｓｔ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、１３１巻、１１８〜２４頁）。マウスにおいてＫｖ１．３活性の遮断は、抗原に応答してＴ細胞の表現型を変化させ、それらを抑制状態に変換する場合がある（Ｇｏｃｋｅら（２０１２年）、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１８８巻、５８７７〜５８８６頁；Ｇｒｉｓｈｋａｎら（２０１５年）、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９５巻、１３９９〜１４０７頁；Ｈｕら（２０１１年）、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、２８７巻、１２６１〜１２６８頁）。

自己免疫疾患の処置のためにＫｖ１．３機能を阻害する治療剤として、ペプチド毒素およびそれらの誘導体が開発されている。例えば、イソギンチャクのＳｔｉｃｈｏｄａｃｔｙｌａ ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓに由来するペプチド毒素であるＳｈＫは、Ｋｖ１．３四量体の前腔（ｏｕｔｅｒ ｖｅｓｔｉｂｕｌｅ）に高い親和性で結合し、細孔を通るイオン伝導を妨げる（Ｂｅｅｔｏｎら（２００３年）、Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、２７８巻、９９２８〜３７頁）。

Ｋｖ１．３の機能を調整する治療用抗体は、多様なＴ_ＥＭ媒介性自己免疫疾患を処置するために開発され得る生物製剤の代替的なクラスを表す。細胞内エピトープおよび細胞外エピトープの両方を認識するいくつかの抗Ｋｖ１．３抗体が市販されているが（例えばＡｌｏｍｏｎｅ Ｌａｂｓ、Ｊｅｒｕｓａｌｅｍ、Ｉｓｒａｅｌ：抗Ｋｖ１．３（細胞外）、カタログ番号ＡＰＣ１０１；抗Ｋｖ１．３（細胞内）、カタログ番号ＡＰＣ００２）、これらは機能的に活性ではなく、Ｋｖ１．３活性を調整しない。しかしながら、ヒトＫｖ１．３細孔領域の外部末端に位置する１４個のアミノ酸からなるペプチドで免疫化したウサギは、Ｋｖ１．３活性を機能的に阻害する能力があるポリクローナル抗体を産生し（Ｙａｎｇら（２０１２年）、ＰＬｏＳ Ｏｎｅ、７巻、ｅ３６３７９頁）、機能的な抗Ｋｖ１．３免疫グロブリンが実現可能であることを示した。

Ｇｏｃｋｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１２年）１８８巻、５８７７〜５８８６頁 Ｇｒｉｓｈｋａｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２０１５年）１９５巻、１３９９〜１４０７頁 Ｈｕら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２０１１年）２８７巻、１２６１〜１２６８頁

とはいえ、Ｋｖ１．３、そして特にＫｖ１．３活性に対して調整効果を発揮するのに重要であると予想される細胞外ループ領域を認識する、高親和性モノクローナル抗体（ｍＡｂ）の特定および開発が、依然として必要とされている。

本発明は、ヒトＫｖ１．３タンパク質の改善された免疫原性調製物の開発に部分的に基づき、これにより、四量体Ｋｖ１．３イオンチャネルの細胞外ドメインを対象とし、かつＫｖ１．３に対する優れた親和性および特異性を有する、抗Ｋｖ１．３モノクローナル抗体の産生が可能になった。こうした抗体は、治療および診断の両方における有用性を有する。

したがって、一態様では、本発明は、抗Ｋｖ１．３モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、特にＫｖ１．３の機能的活性を調整するｍＡｂを提供する。特に本発明は、軽鎖および重鎖のＣＤＲのアミノ酸配列、ならびにこれらのＣＤＲのコンセンサス配列を提供し、これらのＣＤＲを含む多様な抗体および他の免疫グロブリンベースの分子の産生を可能にする。さらに本発明は、軽鎖および重鎖の可変ドメイン内のＣＤＲに関して予測される基準構造を提供することにより、Ｋｖ１．３に特異的に結合するさらなる抗体および他の免疫グロブリンベースの分子の産生を可能にする。

別の態様では、本発明は、抗Ｋｖ１．３ ｍＡｂおよび他の免疫グロブリンベースの分子をコードする核酸分子、かかる核酸を含む発現ベクター、かかる核酸またはベクターを含む宿主細胞、抗Ｋｖ１．３ ｍＡｂおよび他の免疫グロブリンベースの分子を作製するための方法、ならびに抗Ｋｖ１．３ ｍＡｂおよび他の免疫グロブリンベースの分子を発現させるための方法を提供する。最後に、抗Ｋｖ１．３ ｍＡｂおよび他の免疫グロブリンベースの分子を治療薬または診断試薬として使用する方法が提供される。

別の態様では、本発明は、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む、ヒトＫｖ１．３タンパク質に特異的に結合する抗体であって、軽鎖の可変領域が、（ｉ）配列番号４３〜６９、２４９〜２６７、３８１〜３８６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、（ｉｉ）配列番号７０〜８８、２６８〜２８０、３８７〜３９１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域、および／または（ｉｉｉ）配列番号８９〜１１２、２８１〜２９７、３９２〜３９８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む、抗体を提供する。

別の態様では、本発明は、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む、ヒトＫｖ１．３タンパク質に特異的に結合する抗体であって、重鎖の可変領域が、（ｉ）配列番号１６５〜１７７、３１７〜３３４、４０９〜４１５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、（ｉｉ）配列番号１７８〜２０２、３３５〜３５２、４１６〜４２２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域、および／または（ｉｉｉ）配列番号２０３〜２２９、３５３〜３７０、４２３〜４２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む、抗体を提供する。

別の態様では、本発明は、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む、ヒトＫｖ１．３タンパク質に特異的に結合する抗体であって、軽鎖の可変領域が、（ｉ）ＶＬ
ＣＤＲ１モチーフ１〜６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、（ｉｉ）ＶＬ ＣＤＲ２モチーフ１〜６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域、および／または（ｉｉｉ）ＶＬ ＣＤＲ３モチーフ１〜６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む、抗体を提供する。

別の態様では、本発明は、免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む、ヒトＫｖ１．３タンパク質に特異的に結合する抗体であって、重鎖の可変領域が、（ｉ）ＶＨ
ＣＤＲ１モチーフ１〜６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、（ｉｉ）ＶＨ ＣＤＲ２モチーフ１〜６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域、および／または（ｉｉｉ）ＶＨ ＣＤＲ３モチーフ１〜６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域を含む、抗体を提供する。

一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗体を含む抗体調製物を提供する。一部の実施形態では、本発明は、モノクローナル抗体調製物である抗体調製物を提供する。一部の実施形態では、本発明は、少なくとも２つのモノクローナル抗体調製物の混合物である抗体調製物を提供する。

別の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体のいずれか１つの重鎖または軽鎖をコードする、単離された核酸分子を提供する。一部の実施形態では、本発明は、クローニングベクター、発現ベクター、異種組換えベクター、およびウイルス組込みベクターからなる群より選択される、単離された核酸分子を提供する。一部の実施形態では、本発明は、核酸で形質転換された細胞を提供する。一部の実施形態では、前記細胞は、哺乳動物細胞である。一部の実施形態では、前記細胞は、齧歯類細胞である。一部の実施形態では、前記細胞は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。一部の実施形態では、前記細胞は、ヒト細胞である。

別の態様では、本発明は、Ｋｖ１．３タンパク質を発現する細胞を単離する方法であって、（ａ）細胞の集団を得るステップと、（ｂ）細胞の前記集団を、本明細書に記載の複数の抗体と接触させるステップと、（ｃ）集団中の抗体に特異的に結合する細胞を、集団中の抗体に特異的に結合しない細胞から分離するステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、細胞は、蛍光活性化細胞ソーティングによって分離される。一部の実施形態では、細胞は、蛍光活性化細胞ソーティングによって、固定化された二次抗体を使用して分離される。

別の態様では、本発明は、ヒト被験体の自己免疫障害を防止または処置するための方法であって、治療有効量の本明細書に記載の抗体調製物を被験体に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、抗体調製物はＫｖ１．３カリウムチャネルを阻害することにより、自己免疫障害を防止または処置する。一部の実施形態では、被験体の自己反応性エフェクターメモリーＴ細胞を枯渇させることにより、自己免疫障害を防止または処置する。一部の実施形態では、自己免疫障害は、多発性硬化症、重症筋無力症、自己免疫性神経障害、ギランバレー症候群、自己免疫性ぶどう膜炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎、自己免疫性血小板減少症、１型真性糖尿病、アジソン病、グレーブス病、橋本甲状腺炎、自己免疫性精巣炎、ベーチェット病、関節リウマチ、歯周病に関連する骨吸収、全身性エリテマトーデス、強皮症多発性筋炎（Ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ Ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ）、皮膚筋炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓｉｓ）、尋常性天疱瘡、脊椎関節症、強直性脊椎炎、およびシェーグレン症候群からなる群より選択される。

別の態様では、本発明は、被験体の移植片対宿主病を防止または処置するための方法であって、治療有効量の本明細書に記載の抗体調製物を被験体に投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、抗体調製物はＫｖ１．３カリウムチャネルを阻害することにより、移植片対宿主病を防止または処置する。一部の実施形態では、被験体の自己反応性エフェクターメモリーＴ細胞を枯渇させることにより、移植片対宿主病を防止または処置する。

本発明のこれらおよび他の態様および実施形態を以下に例示および記載する。以下の図面および詳細な記載を考察すれば、当業者には他の組成物、方法、および特色が明らかとなるであろう。そのようなさらなる組成物および方法および特色は全て、本発明の範囲内に含まれることが意図される。
本発明の実施形態において、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む、ヒトＫｖ１．３タンパク質に特異的に結合する抗体であって、
前記軽鎖の可変領域が、
（ｉ）配列番号４３〜６９、２４９〜２６７、３８１〜３８６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、
（ｉｉ）配列番号７０〜８８、２６８〜２８０、３８７〜３９１からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域、および／または
（ｉｉｉ）配列番号８９〜１１２、２８１〜２９７、３９２〜３９８からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域
を含む、抗体。
（項目２）
免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む、ヒトＫｖ１．３タンパク質に特異的に結合する抗体であって、
前記重鎖の可変領域が、
（ｉ）配列番号１６５〜１７７、３１７〜３３４、４０９〜４１５からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、
（ｉｉ）配列番号１７８〜２０２、３３５〜３５２、４１６〜４２２からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域、および／または
（ｉｉｉ）配列番号２０３〜２２９、３５３〜３７０、４２３〜４２９からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域
を含む、抗体。
（項目３）
免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む、ヒトＫｖ１．３タンパク質に特異的に結合する抗体であって、
前記軽鎖の可変領域が、
（ｉ）ＶＬ ＣＤＲ１モチーフ１〜６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、
（ｉｉ）ＶＬ ＣＤＲ２モチーフ１〜６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域、および／または
（ｉｉｉ）ＶＬ ＣＤＲ３モチーフ１〜６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域
を含む、抗体。
（項目４）
免疫グロブリン重鎖および免疫グロブリン軽鎖を含む、ヒトＫｖ１．３タンパク質に特異的に結合する抗体であって、
前記重鎖の可変領域が、
（ｉ）ＶＨ ＣＤＲ１モチーフ１〜６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ１領域、
（ｉｉ）ＶＨ ＣＤＲ２モチーフ１〜６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ２領域、および／または
（ｉｉｉ）ＶＨ ＣＤＲ３モチーフ１〜６からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むＣＤＲ３領域
を含む、抗体。
（項目５）
項目１から４のいずれか一項に記載の抗体を含む抗体調製物。
（項目６）
モノクローナル抗体調製物である、項目５に記載の抗体調製物。
（項目７）
少なくとも２つのモノクローナル抗体調製物の混合物である、項目５に記載の抗体調製物。
（項目８）
項目１から４のいずれか一項に記載の重鎖または軽鎖をコードする、単離された核酸分子。
（項目９）
クローニングベクター、発現ベクター、異種組換えベクター、およびウイルス組込みベクターからなる群より選択される、項目８に記載の単離された核酸分子。
（項目１０）
項目８から９のいずれか一項に記載の核酸で形質転換された細胞。
（項目１１）
哺乳動物細胞である、項目１０に記載の細胞。
（項目１２）
齧歯類細胞である、項目１１に記載の細胞。
（項目１３）
チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である、項目１１に記載の細胞。
（項目１４）
ヒト細胞である、項目１１に記載の細胞。
（項目１５）
Ｋｖ１．３タンパク質を発現する細胞を単離する方法であって、
（ａ）細胞の集団を得るステップと、
（ｂ）細胞の前記集団を、項目１から４のいずれか一項に記載の複数の抗体と接触させるステップと、
（ｃ）前記集団中の前記抗体に特異的に結合する細胞を、前記集団中の前記抗体に特異的に結合しない細胞から分離するステップと
を含む、方法。
（項目１６）
前記細胞が、蛍光活性化細胞ソーティングによって分離される、項目１５に記載の方法。
（項目１７）
前記細胞が、蛍光活性化細胞ソーティングによって、固定化された二次抗体を使用して分離される、項目１５に記載の方法。
（項目１８）
被験体の自己免疫障害を防止または処置するための方法であって、治療有効量の項目５から７のいずれか一項に記載の抗体調製物を前記被験体に投与することを含む、方法。
（項目１９）
前記抗体調製物がＫｖ１．３カリウムチャネルを阻害することにより、前記自己免疫障害を防止または処置する、項目１８に記載の方法。
（項目２０）
前記被験体の自己反応性エフェクターメモリーＴ細胞を枯渇させることにより、前記自己免疫障害を防止または処置する、項目１８に記載の方法。
（項目２１）
前記自己免疫障害が、多発性硬化症、重症筋無力症、自己免疫性神経障害、ギランバレー症候群、自己免疫性ぶどう膜炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎、自己免疫性血小板減少症、１型真性糖尿病、アジソン病、グレーブス病、橋本甲状腺炎、自己免疫性精巣炎、ベーチェット病、関節リウマチ、歯周病に関連する骨吸収、全身性エリテマトーデス、強皮症多発性筋炎（Ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ Ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ）、皮膚筋炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓｉｓ）、尋常性天疱瘡、脊椎関節症、強直性脊椎炎、およびシェーグレン症候群からなる群より選択される、項目１８から２０のいずれか一項に記載の方法。
（項目２２）
被験体の移植片対宿主病を防止または処置するための方法であって、治療有効量の項目５から７のいずれか一項に記載の抗体調製物を前記被験体に投与することを含む、方法。（項目２３）
前記抗体調製物がＫｖ１．３カリウムチャネルを阻害することにより、移植片対宿主病を防止または処置する、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
前記被験体の自己反応性エフェクターメモリーＴ細胞を枯渇させることにより、移植片対宿主病を防止または処置する、項目２２に記載の方法。

以下の図面は本発明の実施形態を例示するものであり、特許請求の範囲に包含される本発明の範囲を限定する意図はない。

図１Ａは、ヒトＫｖ１．３タンパク質のアミノ酸配列（受託番号Ｐ２２００１．３）（配列番号１）を提供する。図１Ｂは、Ｃ末端ＦＬＡＧタグ（太字イタリック体）および１０Ｘ Ｈｉｓタグ（下線）で修飾されたＫｖ１．３アミノ酸配列（配列番号２）を示す。 図１Ａは、ヒトＫｖ１．３タンパク質のアミノ酸配列（受託番号Ｐ２２００１．３）（配列番号１）を提供する。図１Ｂは、Ｃ末端ＦＬＡＧタグ（太字イタリック体）および１０Ｘ Ｈｉｓタグ（下線）で修飾されたＫｖ１．３アミノ酸配列（配列番号２）を示す。

図２は、ヒトＫｖ１．３コード遺伝子（ＫＣＮＡ３）をＴｅｔｒａｈｙｍｅｎａ ＭＴＴ５プロモーターの制御下におく発現構築物デザイン、およびＴｅｔｒａｈｙｍｅｎａリボソームＤＮＡベクターであるｐＴＲＡＳ１のＮｏｔＩ制限部位における発現構築物全体の配置を示す。

図３は、Ｋｖ１．３プロテオリポソーム免疫原調製物のＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタン分析を示す。左のパネルは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分解し、クーマシー染料によって検出したＫｖ１．３を示す。右のパネルは、抗Ｋｖ１．３細胞外ループ抗体を使用した抗Ｋｖ１．３のウェスタン分析を示す。Ｋｖ１．３は、予測された分子量（約６６ｋＤａ）に対応する単量体と、より高い分子量（＞２５０ｋＤａ）の種との、２つの別個の種として分解することに留意されたい。

図４は、免疫化したニワトリの血清中の抗Ｋｖ１．３抗体価のＦＡＣＳ分析を示す。ＦＡＣＳ分析は、Ｋｖ１．３磁性ビーズを用いて行った。左のパネルは、市販の抗Ｋｖ１．３抗体ありまたはなしでインキュベートしたビーズの分布を示す対照分析である。中央のパネルは、免疫前の血清またはＫｖ１．３で免疫化したニワトリの血清（３回目の抽出）のいずれかと共にインキュベートしたＫｖ１．３ビーズの分布を示す。右のパネルは、免疫前の血清または無関係のイオンチャネルで免疫化したニワトリの血清（３回目の抽出）のいずれかと共にインキュベートしたＫｖ１．３ビーズの分布を示す。

図５Ａ〜図５Ｂは、抗Ｋｖ１．３抗体を単離するためにグルカン酵素方法（ＧＥＭ：Ｇｌｕｃａｎ Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ）アッセイにおいて使用したＫｖ１．３製剤を示す。図５Ａは、Ｋｖ１．３プロテオリポソームを例示する（ブロックはリン脂質二重層中のＫｖ１．３タンパク質を表す）。図５Ｂは、市販の抗Ｋｖ１．３抗体で標識されたＫｖ１．３磁性ビーズを示す。

図６は、ＨＥＫ２９３細胞内で発現する二価ｓｃＦｖ−Ｆｃ抗体のデザインを例示する。この構築物は、リーダー配列（Ｌｅ）、可変軽鎖（ＶＬ）、リンカー領域（Ｌｉ）、可変重鎖（ＶＨ）、およびヒトＩｇＧ１のＦｃドメイン（ｈＩｇＧ１−Ｆｃ）を含む。

図７Ａは、ニワトリ由来（ｃｈ＿）の抗体（ｐ１Ａ１、ｐ１Ａ１１、ｐ１Ｆ８、ｐ１Ｄ８、ｐ１Ｈ４、ｐ２Ａ３、ｐ２Ｇ９、ｐ１Ｈ７、およびｐ１Ｅ６）によるＫｖ１．３活性の機能的阻害を示す。図７Ｂは、ラマ由来（Ｌ）の抗体（１Ａ３）によるＫｖ１．３活性の機能的阻害を示す。図７Ｃは、Ｋｖ１．３活性を機能的に阻害しないニワトリ由来の特定の抗Ｋｖ１．３抗体の例（ｐ２Ｄ９）を示す。Ｋｖ１．３の活性は、ヒトＫｖ１．３を一過性に発現するＬ９２９ヒト線維芽細胞において、ホールセルパッチクランプ法による電気生理学によって決定した。上の線は、抗体の非存在下における細胞の対照の電気生理学記録を示す。下の線は、４００ｎＭの抗体と共にインキュベートした細胞の電気生理学記録を示す。

図８Ａは、Ｋｖ１．３活性を遮断するニワトリ由来（ｃｈ＿）の３個の抗体（ｐ１Ｅ６、Ｌ１Ａ３、およびｐ２Ｇ９）の用量応答分析を示す。１０倍希釈の抗体と共にインキュベートした細胞の電流記録が示されている。図８Ｂは、抗体ｐ１Ｅ６の抗体Ｌ１Ａ３との比較（上パネル）そしてｐ２Ｇ９との比較（下パネル）を行った用量−応答曲線を示す。各抗体のＩＣ_５０値は、６ｎＭ（ｐ１Ｅ６）、４６ｎＭ（ｐ２Ｇ９）、および１０９ｎＭ（Ｌ１Ａ３）と算出された。

図９は、他のＫｖファミリーメンバーであるＫｖ１．５およびＫｖ１１．１（ｈＥＲＧ）と比較した、Ｋｖ１．３活性の遮断に関する抗体ｐ１Ａ１の選択性を示す。

図１０は、ＣＤ３／ＣＤ２８活性化サルＴ細胞において天然Ｋｖ１．３の機能を抗体Ｌ１Ａ３が阻害したことを示す。

図１１Ａ〜図１１Ｂは、本発明に従ってニワトリで産生された抗Ｋｖ１．３抗体の軽鎖可変領域（配列番号３〜４２）のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。 図１１Ａ〜図１１Ｂは、本発明に従ってニワトリで産生された抗Ｋｖ１．３抗体の軽鎖可変領域（配列番号３〜４２）のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。 図１１Ａ〜図１１Ｂは、本発明に従ってニワトリで産生された抗Ｋｖ１．３抗体の軽鎖可変領域（配列番号３〜４２）のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。 図１１Ａ〜図１１Ｂは、本発明に従ってニワトリで産生された抗Ｋｖ１．３抗体の軽鎖可変領域（配列番号３〜４２）のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。

図１２は、本発明に従ってニワトリで産生されたユニークな軽鎖ＣＤＲ配列（配列番号４３〜１１２）のアラインメントを示す。

図１３Ａ〜図１３Ｃは、本発明に従ってニワトリで産生された抗Ｋｖ１．３抗体の重鎖可変領域（配列番号１２５〜１６４）のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。 図１３Ａ〜図１３Ｃは、本発明に従ってニワトリで産生された抗Ｋｖ１．３抗体の重鎖可変領域（配列番号１２５〜１６４）のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。 図１３Ａ〜図１３Ｃは、本発明に従ってニワトリで産生された抗Ｋｖ１．３抗体の重鎖可変領域（配列番号１２５〜１６４）のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。 図１３Ａ〜図１３Ｃは、本発明に従ってニワトリで産生された抗Ｋｖ１．３抗体の重鎖可変領域（配列番号１２５〜１６４）のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。 図１３Ａ〜図１３Ｃは、本発明に従ってニワトリで産生された抗Ｋｖ１．３抗体の重鎖可変領域（配列番号１２５〜１６４）のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。 図１３Ａ〜図１３Ｃは、本発明に従ってニワトリで産生された抗Ｋｖ１．３抗体の重鎖可変領域（配列番号１２５〜１６４）のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。

図１４は、本発明に従ってニワトリで産生されたユニークな重鎖ＣＤＲ配列（配列番号１６５〜２２９）のアラインメントを示す。 図１４は、本発明に従ってニワトリで産生されたユニークな重鎖ＣＤＲ配列（配列番号１６５〜２２９）のアラインメントを示す。

図１５は、本発明に従ってラマで産生された抗Ｋｖ１．３抗体の軽鎖可変領域（配列番号２３０〜２４８）のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。 図１５は、本発明に従ってラマで産生された抗Ｋｖ１．３抗体の軽鎖可変領域（配列番号２３０〜２４８）のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。

図１６は、本発明に従ってラマで産生されたユニークなラマ軽鎖ＣＤＲ配列（配列番号２４９〜２９７）のアラインメントを示す。

図１７は、本発明に従ってラマで産生された抗Ｋｖ１．３抗体の重鎖可変領域（配列番号２９８〜３１６）のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。 図１７は、本発明に従ってラマで産生された抗Ｋｖ１．３抗体の重鎖可変領域（配列番号２９８〜３１６）のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。 図１７は、本発明に従ってラマで産生された抗Ｋｖ１．３抗体の重鎖可変領域（配列番号２９８〜３１６）のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。

図１８は、本発明に従ってラマで産生されたユニークなラマ重鎖ＣＤＲ配列（配列番号３１７〜３７０）のアラインメントを示す。 図１８は、本発明に従ってラマで産生されたユニークなラマ重鎖ＣＤＲ配列（配列番号３１７〜３７０）のアラインメントを示す。

図１９は、本発明に従ってニワトリで産生され（配列番号３７１〜３８０）、図１１Ａ〜１１Ｂに示されるものとは異なる抗Ｋｖ１．３抗体の軽鎖可変領域のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。

図２０は、図１９に示される通りであり、本発明に従って産生されたユニークな軽鎖ＣＤＲ配列（配列番号３８１〜３９８）のアラインメントを示す。

図２１は、本発明に従ってニワトリで産生され（配列番号３９９〜４０８）、図１３Ａ〜１３Ｃに示されるものとは異なる抗Ｋｖ１．３抗体の重鎖可変領域のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。 図２１は、本発明に従ってニワトリで産生され（配列番号３９９〜４０８）、図１３Ａ〜１３Ｃに示されるものとは異なる抗Ｋｖ１．３抗体の重鎖可変領域のアラインメントを示す。ＣＤＲ１、２、および３のおよその位置は、太字で下線のある文字によって強調されている。

図２２は、図２１に示される通りであり、本発明に従って産生されたユニークな重鎖ＣＤＲ配列（配列番号４０９〜４２９）のアラインメントを示す。

本開示は、単離された抗体（Ａｂ）、特にヒトＫｖ１．３に高い親和性で特異的に結合するＡｂ、およびＫｖ１．３の機能的活性を調整するＡｂに関する。ある特定の実施形態では、抗Ｋｖ１．３ Ａｂは、特定の重鎖配列および軽鎖配列に由来し、かつ／または、特定のアミノ酸配列を含むＣＤＲ領域などの特定の構造的特色を含む。本開示は、単離された抗Ｋｖ１．３ Ａｂ、かかる抗Ｋｖ１．３ Ａｂを作製する方法、かかる抗Ｋｖ１．３ Ａｂを含むイムノコンジュゲートおよび二重特異性分子、ならびにかかる抗Ｋｖ１．３ Ａｂを発現させる方法を提供する。本開示は、自己免疫疾患のための治療処置または診断試薬として抗Ｋｖ１．３ Ａｂを使用する方法にも関する。

定義

本明細書で使用される科学用語および技術用語は全て、以下に別途定義されない限り、当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有するよう意図される。本明細書において用いられる技術の参照は、当技術分野で一般的に理解されている技術を、当業者には明らかであろう当該技術のバリエーションまたは均等な技術もしくは後に開発される技術の代用を含めて指すよう意図される。加えて、本発明である主題をより明確かつ簡潔に記載するために、本明細書および添付の特許請求の範囲で使用されているある特定の用語に関して以下の定義を提供する。

本明細書で使用される「抗体」という用語または「Ａｂ」という略語は、天然のグリコシル化の有無にかかわらず、全抗体およびその任意の抗原結合性断片（すなわち「抗原結合性部分」）または単鎖を含む。完全「抗体」とは、ジスルフィド結合によって相互接続した少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖またはそれらの抗原結合性部分を含む糖タンパク質を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（Ｖ_Ｈ）および重鎖定常領域を含む。重鎖定常領域は、３つのドメイン、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、およびＣ_Ｈ３を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（Ｖ_Ｌ）および１つのドメインＣ_Ｌを有する軽鎖定常領域を含む。Ｖ_Ｈ領域およびＶ_Ｌ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）およびフレームワーク領域（ＦＲ）にさらに細分され得る。Ｖ_Ｈ領域およびＶ_Ｌ領域はそれぞれ、抗原（例えばＫｖ１．３）と相互作用する、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３と表記される３つのＣＤＲを含む。

本明細書で使用される、抗体の「抗原結合性部分」という用語は、抗原（例えばＫｖ１．３）に特異的に結合する能力を保持する、抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体の「抗原結合性部分」という用語に包含される結合性断片の例としては、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）_２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ｓｃＦｖ断片、ｄＡｂ断片、および単離されたＣＤＲが挙げられる。

本明細書で使用される「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体調製物」という用語は、単一の重鎖アミノ酸配列および単一の軽鎖アミノ酸配列を有する（しかし不均一にグリコシル化していてもよい）抗体から本質的になる抗体分子の調製物を指す。

本明細書で使用される「ヒト化抗体」という用語は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列由来の定常領域および可変領域フレームワーク領域（ＦＲ）を有するがＣＤＲは有しない抗体を含む。

本明細書で使用される「組換え抗体」という用語は、組換え手段によって調製、発現、作出、または単離された全ての抗体を含む。ある特定の実施形態では、組換え抗体は、抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から（例えば、トランスフェクトーマ（ｔｒａｎｓｆｅｃｔｏｍａ）から）単離される。他の実施形態では、組換え抗体は、ファージディスプレイライブラリなどの組換え型コンビナトリアル抗体ライブラリーから単離される。組換え抗体は、他のＤＮＡ配列に対するヒト免疫グロブリン遺伝子配列のスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作出、または単離される場合もある。

本明細書で使用される「アイソタイプ」という用語は、定常領域遺伝子によってコードされる重鎖クラス（例えば、ヒト抗体ではＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭ）または軽鎖クラス（例えば、ヒトのカッパまたはラムダ）を指す。「サブタイプ」という用語は、サブタイプ内のサブクラス（例えば、ヒトのＩｇＡ_１、ＩｇＡ_２、ＩｇＧ_１、ＩｇＧ_２、ＩｇＧ_３、ＩｇＧ_４）を指す。

本明細書において、特定した抗原「に対して特異的な抗体」という語句は、特定した抗原「に特異的に結合する抗体」という語句と互換的に使用される。本明細書で使用される場合、「Ｋ_ａ」という用語は、特定の抗体−抗原複合体の会合速度を指し、「Ｋ_ｄ」という用語は、その解離速度を指す。「Ｋ_Ｄ」という用語は、Ｋ_ｄ対Ｋ_ａの比から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される、解離定数を指す。一部の実施形態によると、「ヒトＫｖ１．３に特異的に結合する」抗体とは、５×１０^−８Ｍまたはそれよりも小さい、より好ましくは１×１０^−８Ｍまたはそれよりも小さいＫ_ＤでヒトＫｖ１．３に結合する抗体を指すよう意図される。

別途定義されない限り、本明細書で使用される技術用語および科学用語は全て、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと同様または均等な方法および材料を本発明の実践または試験に使用することができるが、好適な方法および材料を以下に記載する。本明細書において言及される公開文献、特許出願、特許、および他の参考文献は全て、参照によりその全体が組み込まれる。矛盾する場合、定義を含め、本明細書が優先する。加えて、材料、方法、および実施例は単なる例示であり、限定を意図するものではない。

本明細書において参照される特許、科学文献および技術文献は、出願時の当業者に利用可能であった知識を立証する。本明細書において引用される交付済み米国特許、公開済みおよび係属中の特許出願、ならびに他の公開文献の全開示内容は、あたかもそれぞれが参照により組み込まれることが明確かつ個々に示されているかのように、参照により本明細書に組み込まれる。何らかの矛盾がある場合は、本開示が優先する。

抗Ｋｖ１．３抗体

本発明は、ヒトＫｖ１．３タンパク質、特に細胞外ループ上のエピトープに対する親和性が高く、かつＫｖ１．３機能の活性を調整する、多様な新しい抗体を提供する。本抗体は、本明細書において開示される完全なＶＨ領域およびＶＬ領域を含んでもよいし、あるいは、本明細書において開示されるＣＤＲ配列のみを公知のヒトもしくは他の哺乳動物（例えばヒト）またはトリ（例えばニワトリ）のフレームワーク領域と組み合わせて含んでもよい。加えて、本明細書において開示される特定のＣＤＲ配列に基づき、コンセンサスＣＤＲ配列の配列モチーフが提供され、また、これらのモチーフによって定義されるＣＤＲ配列を公知のヒトもしくは他の哺乳動物またはトリのフレームワーク領域と組み合わせて含む抗体も提供される。さらに、ＶＬ領域およびＶＨ領域の各ＣＤＲに関して可能性のある基準構造が割り当てられ、開示される構造的モチーフに属するＣＤＲを公知のヒトもしくは他の哺乳動物またはトリのフレームワーク領域と組み合わせて含む抗体も提供される。

本発明のＣＤＲ配列（図１１〜図２２に開示されるＣＤＲおよび本明細書において開示される配列モチーフによって定義されるＣＤＲの両方を含む）を、当技術分野で周知の方法により他の免疫グロブリン配列と組み合わせると、本発明のＣＤＲによって決定される抗原結合特異性を有する免疫グロブリン分子を産生することができる。

一部の実施形態では、本発明のＣＤＲは、他の抗体のフレームワーク領域（ＦＲ）および定常ドメイン（ＣＨまたはＣＬ）配列と組み合わされる。例えば、本明細書において開示されるＣＤＲの一部はニワトリＢ細胞に由来し、ニワトリのＦＲおよび定常ドメイン配列を有するが、それらをヒトもしくは他の哺乳動物またはトリのＦＲおよび定常ドメイン配列と組換えて、ヒト化抗体または他の組換え抗体を産生することができる。同様に、本明細書において開示されるラマ由来のＣＤＲをヒトまたは他の哺乳動物の定常ドメイン配列と組換えて、ヒト化抗体または他の組換え抗体を産生することができる。そのような組換え抗体の産生は当業者に周知であり、慣例的な実験しか必要としない。

そのような組換え抗体に含まれる定常領域の種類は、それらの意図される使用によって選択することができる。例えば、抗体が、Ｋｖ１．３発現細胞を標的として破壊するための治療上の使用のために意図される場合、ＩｇＧサブタイプの重鎖定常ドメイン（すなわち、Ｆｃ領域）が使用され得る。抗体が細胞を標識するため（例えば、蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）のため）の試薬としてのみ意図される場合、完全抗体、抗原結合性断片（Ｆａｂ）、単鎖可変断片（ｓｃＦＶ）、単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、またはさらには非抗体免疫グロブリン分子（例えば、ＭＨＣ受容体細胞外ドメイン）を本発明のＣＤＲと共に使用してもよい。

本発明のＣＤＲは、所与の可変軽（ＶＬ）鎖または可変重（ＶＨ）鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３配列が、異なる元のＶＬおよびＶＨ鎖から、異なるＶＬおよびＶＨ
ＣＤＲモチーフから、または開示されるＣＤＲおよびモチーフの組み合わせから選択され得るように、独立して選択することができる。しかしながら、軽鎖ＣＤＲの配列は、開示されるＶＬ ＣＤＲまたはＶＬ ＣＤＲモチーフから選択されるべきであり、重鎖ＣＤＲの配列は、開示されるＶＨ ＣＤＲまたはＶＨ ＣＤＲモチーフから選択されるべきである。同様に、必要に応じてＶＬ鎖またはＶＨ鎖につき、ＣＤＲ１領域の配列は、開示されるＣＤＲ１またはＣＤＲ１モチーフ配列から選択されるべきであり、ＣＤＲ２領域の配列は、開示されるＣＤＲ２またはＣＤＲ２モチーフ配列から選択されるべきであり、ＣＤＲ３領域の配列は、開示されるＣＤＲ３またはＣＤＲ３モチーフ配列から選択されるべきである。

ある特定の態様では、本発明は、図１１〜図２２に記載の抗体のうちのいずれか１つの結合特異性を有するＫｖ１．３結合抗体またはその抗原結合性部分を提供する。

ある特定の態様では、本発明は、Ｋｖ１．３結合抗体またはその抗原結合性部分であって、図１３、図１７、または図２１の抗体のＶＨ鎖と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるＶＨ鎖と、図１１、図１５、または図１９の抗体のＶＬ鎖と９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、または１００％同一であるＶＬ鎖とを含む、抗体またはその抗原結合性部分を提供する。

ある特定の態様では、本発明は、Ｋｖ１．３結合抗体またはその抗原結合性部分であって、図１３、図１７、または図２１の抗体のＶＨ鎖と、図１１、図１５、または図１９の抗体のＶＬ鎖とを含む、抗体またはその抗原結合性部分を提供する。

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、完全にヒト化されかつ組換え産生されたものである。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、天然に存在しない。ある特定の実施形態では、抗体は、Ｋｖ１．３で免疫化された動物から単離されたＶＨ鎖およびＶＬ鎖の対形成（ｐａｉｒｉｎｇ）を含む。ある特定の実施形態では、抗体は、Ｋｖ１．３で免疫化された動物から単離されたＶＨ鎖およびＶＬ鎖の対形成を含み、抗体のＦｃ部分は、免疫化された動物から単離されたＶＨ鎖およびＶＬ鎖の対のアイソタイプまたは一部分ではない。ある特定の実施形態では、抗体は、ＶＨ鎖およびＶＬ鎖の対形成を含み、ＶＨまたはＶＬは、免疫化された動物から個々に単離され得る。一部の実施形態では、抗体は、１つのクローン細胞株のＶＨ鎖またはＶＨ鎖のＣＤＲと、別のクローン細胞株のＶＬまたはＣＤＲとを含む。ある特定の実施形態では、抗体は、１個または複数のアミノ酸を置換することによって修飾されたＫｖ１．３で免疫化された動物から単離されたＶＨ鎖およびＶＬ鎖の対形成を含む。

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、図１３、図１７、または図２１の抗体のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨを含む。ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、図１１、図１５、または図１９の抗体のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＬを含む。

ある特定の実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、図１３、図１７、または図２１の抗体のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含むＶＨを含み、図１１、図１５、または図１９の抗体のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３を含む相補的ＶＬをさらに含む。

ある特定の態様では、本発明は、本発明の抗体のうちのいずれか１つもしくはその抗原結合性部分またはそれらの任意の組み合わせを含む医薬組成物を提供する。ある特定の態様では、本発明は、本発明の抗体のうちのいずれか１つまたはその抗原結合性部分と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。

当業者であれば、抗体の配列ならびにそれらのＫｖ１．３の親和性および阻害を比較することで、配列同一性の決定、配列長の比較、そしてＣＤＲにおける配列同一性パーセントおよび／または変化を含む、ＶＨ配列およびＶＬ配列における配列同一性パーセントおよび／または変化を含む、配列同一性パーセントおよび／または変化、ならびにＫｖ１．３の親和性および阻害を維持しながら許容され得る置換の特定の位置および種類の決定を容易に行うことができる。

ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗体のＶＨおよびＶＬのアミノ酸配列と９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％同一である抗体であって、Ｋｖ１．３に結合しこれを阻害する抗体を提供する。ある特定の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗体のＶＨのＣＤＲ１、２、および／または３ならびにＶＬのＣＤＲ１、２、および／または３のアミノ酸配列と９９％、９８％、９７％、９６％、９５％、９４％、９３％、９２％、９１％、９０％、８９％、８８％、８７％、８６％、８５％、８４％、８３％、８２％、８１％、８０％同一である抗体であって、Ｋｖ１．３に結合しこれを阻害する抗体を提供する。

抗Ｋｖ１．３抗体を使用する方法

本発明の抗Ｋｖ１．３抗体は、免疫親和性精製、免疫組織化学、および免疫療法の標準的な方法において使用することができるが、Ｋｖ１．３タンパク質を発現する細胞および組織に対する特異的な適用で使用される。

例えば、本発明の抗Ｋｖ１．３抗体を使用すると、Ｋｖ１．３を発現する細胞をごく一部しか含まない細胞の混合集団から、Ｋｖ１．３を発現する細胞を単離することができる。例えば、個々の細胞は、蛍光標識された抗Ｋｖ１．３抗体を使用するＦＡＣｓまたは固定化された抗Ｋｖ１．３抗体を使用する免疫親和性精製などの技術に供され得る。

同様に、固定化された抗Ｋｖ１．３抗体は、Ｋｖ１．３発現細胞に由来する溶解物からのＫｖ１．３タンパク質の精製のために使用され得る。Ｋｖ１．３タンパク質は、細胞膜断片と会合した状態のまま精製されてもよいし、または、例えば多様な界面活性剤で処理した後の、生体膜からの解離後に精製されてもよい。さらに、Ｋｖ１．３は、Ｋｖ１．３に特異的に結合する小分子または生物製剤（例えばペプチド、ｍＡｂなど）と会合しながら、そのような様式で精製されてもよい。そのような精製されたＫｖ１．３調製物は、結合した分子の有無を問わずＫｖ１．３に関する構造的情報を決定するために使用される技術（例えば結晶学、ｃｒｙｏＥＭ）における有用性を有する。さらに、そのような調製物は、Ｋｖ１．３と特異的に相互作用する分子のための多様なライブラリ（例えば小分子、ｍＡｂ）のスクリーニングにおいて有用性を有する。

代替的に、Ｋｖ１．３を発現する細胞もしくは組織を特定するため、および／またはそのような細胞におけるＫｖ１．３の発現を定量化するために、本発明の抗Ｋｖ１．３抗体を使用して免疫組織化学を行ってもよい。

加えて、本発明の抗Ｋｖ１．３抗体は、Ｋｖ１．３発現細胞、特にＴ_ＥＭ細胞を標的とし、かつ／またはそのような細胞におけるＫｖ１．３の機能を阻害するために、治療上使用することができる。さらに、Ｋｖ１．３に結合し、かつＫｖ１．３活性を阻害する場合も、しない場合もある本発明の抗Ｋｖ１．３抗体は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの細胞傷害性Ｆｃ媒介性エフェクター機能を介して、標的Ｋｖ１．３発現細胞、特にＴ_ＥＭ細胞を枯渇させ得る。さらに、Ｋｖ１．３機能を阻害する部分とコンジュゲートされた本発明の抗Ｋｖ１．３抗体も治療上使用され得る。本発明の抗Ｋｖ１．３抗体の抗体−薬物コンジュゲートを使用して、治療薬をＫｖ１．３発現細胞に送達することもできる。

自己免疫疾患では、特定の自己反応性Ｔ細胞は、炎症組織に遊走しサイトカインを分泌することにより病原に寄与する、慢性的に活性化されたメモリーＴ細胞に分化し得る。いずれの作用機序にも拘束されないが、一部の実施形態では、Ｋｖ１．３活性の遮断は、抗原に応答してＴ細胞の表現型を変化させ、自己免疫疾患を処置するにあたって有益な抑制状態へとＴ細胞を変換し得る。慢性自己免疫疾患では、Ｔエフェクターメモリー（ＴＥＭ）細胞のクローン増殖がある。Ｋｖ１．３機能喪失変異を有する細胞においては、Ｔセントラルメモリー（ＴＣＭ）細胞はＴエフェクターメモリー（ＴＥＭ）細胞に分化できず、ＴＥＭ細胞はＴＣＭ細胞に復帰しさえすることが示されている。（Ｈｕら（２０１２年）、Ｊ． ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２８７巻（２号）、１２６１〜６８頁）。このように一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、Ｋｖ１．３機能を阻害して自己免疫性免疫障害を処置する。したがって、本発明のＫｖ１．３結合抗体またはその抗原結合性部分は、被験体の自己免疫障害を防止または処置するための方法において使用することができる。本方法は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分の治療有効量を被験体に投与することを含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、Ｋｖ１．３カリウムチャネルを阻害する。一部の実施形態では、被験体の自己反応性エフェクターメモリーＴ細胞が枯渇または低減する。一部の実施形態では、被験体は、自己免疫疾患を有することが疑われるか、または自己免疫疾患を有することについて評価される。一部の実施形態では、被験体はヒトである。

一部の実施形態では、自己免疫障害は、多発性硬化症、重症筋無力症、自己免疫性神経障害、ギランバレー症候群、自己免疫性ぶどう膜炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎、自己免疫性血小板減少症、１型真性糖尿病、アジソン病、グレーブス病、橋本甲状腺炎、自己免疫性精巣炎、ベーチェット病、関節リウマチ、歯周病に関連する骨吸収、全身性エリテマトーデス、強皮症多発性筋炎（Ｓｃｌｅｒｏｄｅｒｍａ Ｐｏｌｙｍｙｏｓｉｔｉｓ）、皮膚筋炎（ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓｉｓ）、尋常性天疱瘡、脊椎関節症、強直性脊椎炎、またはシェーグレン症候群である。

移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）は、ドナーからレシピエントへの組織の移植後に起こり得る。ＧｖＨＤは、ＭＨＣ不適合の宿主組織を認識し破壊する、ドナー臓器由来のレシピエント反応性Ｔ細胞によって引き起こされる。したがって、本発明のＫｖ１．３結合抗体またはその抗原結合性部分は、被験体のＧｖＨＤを防止または処置するための方法において使用することができる。本方法は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分の治療有効量を被験体に投与することを含む。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性部分は、Ｋｖ１．３カリウムチャネルを阻害する。一部の実施形態では、被験体の自己反応性エフェクターメモリーＴ細胞が枯渇または低減する。一部の実施形態では、被験体は、遺伝学的に同一でないドナーから臓器移植を受けたことがある。一部の実施形態では、被験体はヒトである。

一部の実施形態では、本発明のＫｖ１．３結合抗体またはその抗原結合性部分は、被験体のＫｖ１．３カリウムチャネルを阻害するための方法において使用することができる。本方法は、Ｋｖ１．３カリウムチャネルを阻害するのに有効な量で本明細書に記載の抗体を被験体に投与することを含む。一部の実施形態では、被験体はヒトである。

抗Ｋｖ１．３抗体をコードする核酸分子

本発明は、本発明の抗Ｋｖ１．３抗体をコードする核酸分子も提供する。そのような核酸は、所望のアミノ酸配列をコードするコドンを選択するために普遍的な遺伝コードの標準的な表を使用してデザインしてもよいし、または異なる生物に特徴的なコドンバイアスを反映する特化したコドン表を使用してもよい。したがって、例えば、ＣＨＯ細胞における本発明の抗Ｋｖ１．３抗体の発現を最適化するためには、ＣＨＯ細胞のために最適化されたコドン表を使用して、所望の抗体をコードする核酸をデザインすることができる。

本発明の抗Ｋｖ１．３抗体をコードする核酸は、クローニングベクター（例えば、細菌または哺乳動物のクローニングベクター）、形質転換ベクター（例えば、相同組換えベクター、ウイルス組込みベクター、または自己複製ベクター）、および発現ベクター（例えば、高コピー数、誘導性、または構成的な哺乳動物発現ベクター）をはじめとする、当技術分野で公知の多種多様なベクターに含めることができる。

抗Ｋｖ１．３抗体を発現する細胞

本発明の抗Ｋｖ１．３抗体をコードする異種配列を発現する宿主細胞も提供される。そのような宿主細胞は、本発明の抗Ｋｖ１．３抗体の商業的産生のために有用であり得、上述の発現ベクターで適切な宿主細胞を形質転換することによって産生することができる。

一部の実施形態では、本発明は、ＣＨＯ細胞を含め、本発明の抗Ｋｖ１．３抗体を発現する哺乳動物細胞を提供する。しかしながら、当業者であれば、細菌系、酵母系、昆虫系、および哺乳動物系をはじめとする多様な宿主細胞において抗体を発現させることができる。例えば、参照により本明細書に全体が組み込まれる、Ｖｅｒｍａら（１９９８年）、Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈｏｄｓ、２１６巻（１〜２号）：１６５〜８１頁を参照されたい。

医薬組成物

ある特定の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体を含む医薬組成物を提供し、組成物は、限定されないが、自己免疫疾患またはＧｖＨＤの処置および／または防止などの治療目的に使用される。ある特定の態様では、本発明は、自己免疫疾患またはＧｖＨＤを処置および／または防止するための、任意の他の好適な抗体または組成物と組み合わせた、本明細書に記載の抗体を含む医薬組成物を提供する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、本明細書に記載の抗体をコードする１つまたは複数の核酸を含む。ある特定の実施形態では、これらの核酸は、抗体の発現のための任意の好適なベクターによって発現させることができる。

医薬組成物を作製する種々の方法が当技術分野で公知であり、本発明により想定される。一部の実施形態では、組成物は、本明細書に記載の抗体などの生体分子に好適な賦形剤を含む。一部の実施形態では、抗体は、抗体のグリコシル化を制御するために、特定の細胞株および条件において産生される場合がある。

ある特定の態様では、本発明は、本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分が組成物（例えば医薬組成物）として製剤化され得ることを提供する。好適な組成物は、薬学的に許容される担体（例えば水性媒体）中に溶解または分散した抗体またはその抗原結合性部分を含み得る。組成物は無菌であってもよく、また静脈内によって、例えばボーラスとして、または持続注入によって投与される場合がある。投与は、筋肉内、腹腔内、脳脊髄内、皮下、関節内、関節滑液嚢内、髄腔内、経口局所、または吸入によるものであり得る。抗体またはその抗原結合性部分は、皮膚または粘膜への局所投与に適切な組成物として製剤化することもできる。そのような組成物は、液体、軟膏、クリーム、ゲル、およびペーストの形態をとることができる。好適な組成物の調製には、標準的な製剤化技術を使用することができる。

本明細書に記載の抗体またはその抗原結合性部分は、自己免疫疾患および／または移植片対宿主病を有する被験体に投与すること、ならびに、Ｋｖ１．３細胞を発現するＴ細胞の表面に抗体またはその抗原結合性部分が結合することによってＴ細胞を殺傷するために使用することができる。

好適な用量範囲は、抗体またはその抗原結合性部分ならびに製剤の性質および投与経路に依存し得る。当業者であれば、過度の実験を行うことなく最適な用量を決定することができる。

Ｋｖ１．３免疫原およびＢ細胞およびファージスクリーニング試薬の調製

ヒトＫｖ１．３タンパク質をコードする遺伝子（図１Ａ；配列番号１）を、Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａにおける発現のために最適化した。最適化したＫｖ１．３遺伝子を、Ｋｖ１．３のＣ末端における二重親和性のＦＬＡＧ（ＤＹＫＤＤＤＤＫ）および１０ＸＨｉｓタグをコードするヌクレオチドの組み込みによってさらに修飾した（図１Ｂ：配列番号２）。最適化したＫｖ１．３遺伝子を合成し、Ｋｖ１．３遺伝子発現を誘導性Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａメタロチオネインプロモーターの制御下におく発現カセットにクローニングした（図２）。その後、Ｋｖ１．３遺伝子を含有する発現カセット全体を、Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌａ高コピー数リボソームＤＮＡ発現ベクター、ｐＴＲＡＳ１（図２；米国特許第８，６６４，３７４号）にクローニングした。交配するＴｅｔｒａｈｙｍｅｎａ細胞をＫｖ１．３含有ｐＴＲＡＳ１で形質転換し、形質転換体の選択剤を含有する培地中で生存可能な形質転換体を選択した。遺伝子発現の誘導後にＫｖ１．３を発現する細胞を、Ｋｖ１．３免疫原の調製のために選択した。形質転換体Ｔｅｔｒａｈｙｍｅｎａ細胞の培養物（＞１Ｌ）を増殖させ、Ｋｖ１．３の発現を誘導し、採取し、微小流動化（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚａｔｉｏｎ）によって溶解した。膜画分を遠心分離によって収集してから、後の精製のために冷凍した。

Ｆｏｓ−Ｃｈｏｌｉｎｅ界面活性剤を含有する緩衝液中でＴｅｔｒａｈｙｍｅｎａの膜からＫｖ１．３を抽出し、その後、ＮｉＮＴＡクロマトグラフィーによって精製した。精製したＫｖ１．３を１０ｍｇ／ｍｌのホスファチジルコリンからなるリポソームに再構成して、Ｋｖ１．３プロテオリポソームを産生した。図３は、Ｋｖ１．３プロテオリポソーム免疫原試料のＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウェスタン分析を示す。

抗体の生成

ニワトリ由来抗体：Ｋｖ１．３プロテオリポソームを使用してニワトリを免疫化し、追加刺激（ｂｏｏｓｔｉｎｇ）によって免疫応答を増大させた。血清中の特異的抗Ｋｖ１．３抗体価が増大した期間の後、動物を屠殺し、脾細胞を採取した。表１は、抗Ｋｖ１．３抗体価の結果を示す。特異性は、Ｋｖ１．３または無関係のイオンチャネルＮａｖ１．８のいずれかで被覆されたウェルにおけるＥＬＩＳＡシグナルを比較することによって決定した。さらに、図４は、Ｋｖ１．３被覆磁性ビーズを使用したＦＡＣＳ分析による血清中の特異的抗Ｋｖ１．３抗体価を示す。無関係のイオンチャネル、すなわちＮａｖ１．８で免疫化した動物に由来する血清からは、Ｋｖ１．３磁性ビーズを使用したＦＡＣＳによって特異的なシグナルは観察されなかった。Ｋｖ１．３プロテオリポソームまたは磁性ビーズに結合したＫｖ１．３のいずれか（図５Ａおよび図５Ｂ）を組み込んだＧＥＭアッセイ（米国特許第８，０３０，０９５号および米国特許第８，４１５，１７３号）を使用した蛍光により、抗Ｋｖ１．３抗体を産生する脾臓Ｂ細胞が特定された。

ＧＥＭアッセイにより特定された個々のＢ細胞に由来する可変軽鎖および重鎖遺伝子をＰＣＲにより増幅し、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃとの融合物として哺乳動物発現ベクターにクローニングして、二価ｓｃＦｖ−Ｆｃ抗体をコードする遺伝子を生成した（図６）。抗体をＨＥＫ２９３細胞において発現させ、ＥＬＩＳＡにより上清をアッセイして、無関係のイオンチャネル（Ｎａｖ１．８）と比較したＫｖ１．３への特異的結合を確かめた。以下の表２は、Ｋｖ１．３プロテオリポソームを使用したＧＥＭアッセイにおいて特定された、クローニングされたｓｃＦｖ−Ｆｃ抗体のＥＬＩＳＡ結果を示す。以下の表３は、Ｋｖ１．３磁性ビーズを使用したＧＥＭアッセイにおいて特定された、クローニングされたｓｃＦｖ−Ｆｃ抗体のＥＬＩＳＡ結果を示す。

ラマ由来抗体：ヒトＫｖ１．３をコードするＤＮＡでラマを免疫化し、Ｋｖ１．３プロテオリポソームで追加刺激した。特異的な抗Ｋｖ１．３抗体価が検出されたら、ファージライブラリを構築し、Ｋｖ１．３磁性ビーズを使用してファージのパニングを行った。陽性クローンの配列決定を行い、精製されたｓｃＦｖ−Ｆｃ抗体がＫｖ１．３に特異的に結合することをＥＬＩＳＡによって確かめた。

抗Ｋｖ１．３抗体の分析

抗Ｋｖ１．３抗体クローンを、（ｉ）ヒトＴ細胞株の天然Ｋｖ１．３に結合するそれらの能力、および／または（ｉｉ）Ｋｖ１．３活性の機能性を調整するそれらの能力について試験した（表４および表７）。

ヒト白血病Ｔ細胞株Ｊｕｒｋａｔは、細胞表面でＫｖ１．３を発現する（Ｇａｓｉｏｒｏｗｓｋａら（２０１２年）、Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｌｅｔｔ．、１７巻：５５９〜５７０頁）。ＧＥＭによって発見された各抗体のＪｕｒｋａｔ細胞に結合する能力をＦＡＣＳによって分析した。表４は、６個のクローン（１９７２４ｐ１．Ａ１１、１９７２４ｐ１．Ｄ８、１９７２４ｐ１．Ｈ７、１９７２４ｐ１．Ｅ６、１９７２４ｐ２．Ａ３、１９７２４ｐ２．Ｇ９）が、他の抗体に関連するバックグラウンドレベル（平均シグナルおよそ１９３）よりも著しく高いシグナル（平均シグナルおよそ３，３７０）でＪｕｒｋａｔ細胞に結合したことを示す。さらに３個のクローン（１９７２４ｐ２．Ｄ２、１９７２４ｐ２．Ｄ９、および１９７２４ｐ２．Ｅ６）は、バックグラウンドレベルよりもわずかに高いシグナル（平均シグナルおよそ３１４）を示す。Ｊｕｒｋａｔ結合に関してＦＡＣＳ陽性である抗体のうち１個のクローン（１９７２４ｐ１．Ｅ６）は、ＥＬＩＳＡによってＫｖ１．３への結合を示さない。この結果は、この抗体が、最初のＧＥＭ選択に使用したＫｖ１．３プロテオリポソームにおいて、そしてＪｕｒｋａｔ細胞表面に存在する天然のＫｖ１．３チャネルにおいては維持されるが、ＥＬＩＳＡ手順の間、おそらくＫｖ１．３がＥＬＩＳＡプレートのウェルに結合するときに失われる、コンフォメーション依存性Ｋｖ１．３エピトープを認識することを示し得る。

Ｌ９２９ヒト線維芽細胞において一過性に発現するヒトＫｖ１．３チャネルの阻害について、抗Ｋｖ１．３抗体を試験した。ＥＰＣ−１０ ＨＥＫＡ増幅器を使用したホールセルパッチクランプのため、トランスフェクションの２４時間後、ポリ−Ｌ−リシンで被覆されたカバースリップに細胞を播種した。１６０ｍＭ ＮａＣｌ、４．５ｍＭ ＫＣｌ、２ｍＭ ＣａＣｌ_２、１ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳを含有する通常のリンゲル液（ｐＨ７．４および２９０〜３１０ｍＯｓｍに調整した）中で対照電流を記録した。ソーダ石灰ガラス（ミクロヘマトクリット管、Ｋｉｍｂｌｅ Ｃｈａｓｅ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、ＮＹ）から２〜３ＭΩの抵抗までパッチピペットを引き、４５ｍＭ ＫＦ、２ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＥＧＴＡを含有するピペット内溶液（ｐＨ７．２、２９０〜３１０ｍＯｓｍ）で満たした。３０秒毎に２００ミリ秒間にわたって印加した４０ｍＶまでの脱分極パルスを使用して電流を記録した。抗体は、浴での灌流の直前に通常のリンゲル液に新たに希釈した。細胞表面積の直接的尺度である細胞キャパシタンス、およびアクセス抵抗を記録中継続的にモニタリングし、電流のランダウンが最小限であることを確実にした。図７は、１０個の抗体クローン（ニワトリ抗体ｐ１Ａ１１、ｐ１Ｄ８、ｐ１Ｈ７、Ｐ１Ｅ６、ｐ２Ａ３、ｐ２Ｇ９、ｐ１Ａ１、ｐ１Ｆ８、ｐ１Ｈ４、およびラマ抗体Ｌ１Ａ３）がＫｖ１．３活性を機能的に阻害することを示す。用量−応答分析は、最も強力な抗体が、６ｎＭ（ｐ１Ｅ６）、４６ｎＭ（ｐ２Ｇ９）、および１０９ｎＭ（Ｌ１Ａ３）のＩＣ_５０値を有することを示す（図８）。さらに、抗体は、他のＫｖファミリーメンバーと比べたＫｖ１．３の選択的阻害（図９）および活性化されたアカゲザルＴ細胞におけるＫｖ１．３の阻害（図１０）を示し、これらがヒトＴ細胞におけるＫｖ１．３に対して同様の活性を実証することが示された。

抗体配列分析

ニワトリ由来の抗体：有用な可能性がある抗Ｋｖ１．３抗体を産生するＢ細胞クローンをＤＮＡ配列決定に供し、対応する軽鎖および重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を推定した。上述のＧＥＭスクリーニングから得られた４０個の抗体に関する配列を開示する。

可変軽鎖配列

ＶＬ配列アラインメント。上述のＶＬ配列の全てのアラインメントを図１１Ａ〜図１１Ｂに示す。この図は、３つのＣＤＲ領域のおよその位置（太字、下線）および各配列に対応する配列番号を示す。

ユニークなＶＬ ＣＤＲ配列。図１１Ａ〜図１１ＢのＶＬのユニークなＣＤＲ配列のアラインメントを図１２に示す。図１２に示されるように、４０個のＶＬ配列には、２７個のユニークなＣＤＲ１配列、１９個のユニークなＣＤＲ２配列、および２４個のユニークなＣＤＲ３配列がある。

ＶＬ ＣＤＲコンセンサス配列。図１２に開示される配列、ならびに天然に存在するアミノ酸の構造／機能の特徴に基づいて、ＶＬ ＣＤＲのコンセンサス配列を決定することができる。

１つのコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ１モチーフ１：
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３（配列番号１１３）
であり、ここで、Ｘ_１はＳ、ＴまたはＣであり；Ｘ_２はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｒ、ＫまたはＨであり；Ｘ_３Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、ＴまたはＣ；Ｘ_４はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｓ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｘ_５はＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｆ、Ｗまたは非存在であり；Ｘ_６はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｄ、Ｅまたは非存在であり；Ｘ_７はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｄ、Ｅまたは非存在であり；Ｘ_８はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍまたは非存在であり；Ｘ_９はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｗ、Ｆ、Ｙまたは非存在であり；Ｘ_１０はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｆ、Ｗ、Ｎ、Ｑ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｒ、Ｋ、Ｈまたは非存在であり；Ｘ_１１はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｔ、Ｓ、Ｃ、Ｎ、Ｑまたは非存在であり；Ｘ_１２はＹ、ＦまたはＷであり、Ｘ_１３はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｓ、ＴまたはＣである。一部の実施形態では、Ｘ_１はＳに限定され；かつ／またはＸ_２はＧまたはＲに限定され；かつ／またはＸ_３はＧ、ＤまたはＳに限定され；かつ／またはＸ_４はＹ、Ｒ、Ｄ、Ｇ、Ｓまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_５はＮ、Ｓ、Ｙまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_６はＹ、Ｖ、Ｄまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_７はＡ、Ｓ、Ｄまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_８はＳ、Ｇまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_９はＧ、Ｓ、Ｄ、Ｒ、Ｗまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_１０はＳ、Ｙ、Ｎ、Ｇ、Ｒまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_１１はＹ、Ｇ、Ｔ、Ｓ、Ｆ、Ｎまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_１２はＹまたはＦに限定され；かつ／またはＸ_１３は、ＧまたはＳに限定される。一部の実施形態では、部分配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３はＳＧＧに限定され；一部の実施形態では、部分配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３はＳＧＳに限定され；一部の実施形態では、部分配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３はＳＲＤに限定され；一部の実施形態では、部分配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３は、ＳＧＤに限定される。

配列番号３、２１、２２、２３、２４、３７、３８、３９および４２のＶＬ ＣＤＲ１配列は、図１１Ａ〜１１Ｂ中の他のものとは明確に異なり、Ｋｖ１．３機能を阻害する抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ１モチーフ２：
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３（配列番号１１４）
であり、ここで、Ｘ_１はＳ、ＴまたはＣであり；Ｘ_２はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｘ_３はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｘ_４はＹ、Ｆ、Ｗまたは非存在であり；Ｘ_５はＳ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｘ_６はＤ、Ｅまたは非存在であり；Ｘ_７はＤ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｘ_８はＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｘ_９はＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｘ_１０はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｋ、ＲまたはＨであり；Ｘ_１１はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、ＭまたはＡであり；Ｘ_１２はＹ、ＦまたはＷであり、Ｘ_１３はＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、ＭまたはＡである。一部の実施形態では、Ｘ_１はＳに限定され；かつ／またはＸ_２はＧに限定され；かつ／またはＸ_３はＧまたはＳに限定され；かつ／またはＸ_４はＹまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_５はＳまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_６はＤまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_７はＤ、Ｓまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_８はＧ、Ｓまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_９はＳ、ＧまたはＶに限定され；かつ／またはＸ_１０はＹ、ＳまたはＲに限定され；かつ／またはＸ_１１はＹ、ＦまたはＧに限定され；かつ／またはＸ_１２はＹまたはＦに限定され；かつ／またはＸ_１３はＧに限定される。一部の実施形態では、部分配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３はＳＧＧに限定され；一部の実施形態では、部分配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３は、ＳＧＳに限定される。

配列番号２１、２２、２３、２４、３９および４２のＶＬ ＣＤＲ１配列は、図１１Ａ〜１１Ｂ中の他のものとは明確に異なり、Ｊｕｒｋａｔ細胞結合に関してＦＡＣＳ陽性である抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ１モチーフ３：
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３（配列番号１１５）
であり、ここで、Ｘ_１はＳ、ＴまたはＣであり；Ｘ_２はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｘ_３はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｘ_４はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、ＦまたはＷであり；Ｘ_５はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｘ_６はＶ、Ａ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｇ、Ｄ、Ｅまたは非存在であり；Ｘ_７はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｄ、Ｅまたは非存在であり；Ｘ_８はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍまたは非存在であり；Ｘ_９はＳ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｘ_１０はＹ、Ｆ、Ｗまたは非存在であり；Ｘ_１１はＦ、Ｙ、Ｗまたは非存在であり；Ｘ_１２はＦ、ＹまたはＷであり、Ｘ_１３はＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、ＭまたはＡである。一部の実施形態では、Ｘ_１はＳに限定され；かつ／またはＸ_２はＧに限定され；かつ／またはＸ_３はＧに限定され；かつ／またはＸ_４はＳまたはＹに限定され；かつ／またはＸ_５はＳまたはＧに限定され；かつ／またはＸ_６はＤ、Ｖまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_７はＳ、Ｄまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_８はＧまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_９はＳまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_１０はＹまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_１１はＦ、Ｙまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_１２はＦまたはＹに限定され；かつ／またはＸ_１３は、Ｇに限定される。一部の実施形態では、部分配列Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３は、ＳＧＧに限定される。

配列番号４２のＶＬ ＣＤＲ１配列は、図１１Ａ〜１１Ｂ中の他のものとは明確に異なり、コンフォメーショナルＫｖ１．３エピトープを認識し得る抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ１モチーフ４：
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３（配列番号１１６）
であり、ここで、Ｘ_１はＳ、ＴまたはＣであり；Ｘ_２はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｘ_３はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｘ_４はＹ、ＦまたはＷであり；Ｘ_５はＳ、ＴまたはＣであり；Ｘ_６はＤまたはＥであり；Ｘ_７はＤまたはＥであり；Ｘ_８はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｘ_９はＳ、ＴまたはＣであり；Ｘ_１０はＹ、ＦまたはＷであり；Ｘ_１１はＹ、ＦまたはＷであり；Ｘ_１２はＹ、ＦまたはＷであり；Ｘ_１３はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭである。一部の実施形態では、Ｘ_１はＳに限定され；かつ／またはＸ_２はＧに限定され；かつ／またはＸ_３はＧに限定され；かつ／またはＸ_４はＹに限定され；かつ／またはＸ_５はＳに限定され；かつ／またはＸ_６はＤに限定され；かつ／またはＸ_７はＤに限定され；かつ／またはＸ_８はＧに限定され；かつ／またはＸ_９はＳに限定され；かつ／またはＸ_１０はＹに限定され；かつ／またはＸ_１１はＹに限定され；かつ／またはＸ_１２はＹに限定され；かつ／またはＸ_１３は、Ｇに限定される。

ＶＬ ＣＤＲ２について、１つのコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ２モチーフ１：
Ｙ_１Ｙ_２Ｙ_３Ｙ_４Ｙ_５Ｙ_６Ｙ_７（配列番号１１７）
であり、ここで、Ｙ_１はＤ、Ｅ、Ｎ、Ｑ、Ｙ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｒ、ＫまたはＨであり；Ｙ_２はＮ、Ｑ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｙ_３はＴ、Ｓ、Ｃ、Ｎ、Ｑ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、ＲまたはＨであり；Ｙ_４はＮ、Ｑ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、ＥまたはＤであり；Ｙ_５はＲ、ＫまたはＨであり；Ｙ_６はＰであり、Ｙ_７はＳ、ＴまたはＣである。一部の実施形態では、Ｙ_１はＤ、Ｎ、Ｅ、Ｙ、Ｓ、Ｗ、ＲまたはＨに限定され；かつ／またはＹ_２はＮ、ＤまたはＳに限定され；かつ／またはＹ_３はＴ、Ｎ、Ｄ、ＫまたはＳに限定され；かつ／またはＹ_４はＮ、Ｋ、ＱまたはＥに限定され；かつ／またはＹ_５はＲまたはＫに限定され；かつ／またはＹ_６はＰに限定され；かつ／またはＹ_７は、Ｓに限定される。

配列番号３、２１、２２、２３、２４、３７、３８、３９および４２のＶＬ ＣＤＲ２配列は、図１１Ａ〜１１Ｂ中の他のものとは明確に異なり、Ｋｖ１．３機能を阻害する抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ２モチーフ２：
Ｙ_１Ｙ_２Ｙ_３Ｙ_４Ｙ_５Ｙ_６Ｙ_７（配列番号１１８）
であり、ここで、Ｙ_１はＤ、Ｅ、Ｙ、ＦまたはＷであり；Ｙ_２はＮ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｙ_３はＴ、Ｓ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＮまたはＱであり；Ｙ_４はＫ、Ｒ、Ｈ、ＮまたはＱであり；Ｙ_５はＲ、ＫまたはＨであり；Ｙ_６はＰであり、Ｙ_７はＳ、ＴまたはＣである。一部の実施形態では、Ｙ_１はＤ、ＥまたはＹに限定され；かつ／またはＹ_２はＮまたはＳに限定され；かつ／またはＹ_３はＴ、ＤまたはＮに限定され；かつ／またはＹ_４は、ＫまたはＮに限定される。かつ／またはＹ_５はＲまたはＫに限定され；かつ／またはＹ_６はＰに限定され；かつ／またはＹ_７は、Ｓに限定される。

配列番号２１、２２、２３、２４、３９および４２のＶＬ ＣＤＲ２配列は、図１１Ａ〜１１Ｂ中の他のものとは明確に異なり、Ｊｕｒｋａｔ細胞結合に関してＦＡＣＳ陽性である抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ２モチーフ３：
Ｙ_１Ｙ_２Ｙ_３Ｙ_４Ｙ_５Ｙ_６Ｙ_７（配列番号１１９）
であり、ここで、Ｙ_１はＹ、Ｆ、Ｗ、ＤまたはＥであり；Ｙ_２はＮ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｙ_３はＤ、Ｅ、ＮまたはＱであり；Ｙ_４はＫ、ＲまたはＨであり；Ｙ_５はＲ、ＫまたはＨであり；Ｙ_６はＰであり；Ｙ_７はＳ、ＴまたはＣである。一部の実施形態では、Ｙ_１はＹまたはＥに限定され；かつ／またはＹ_２はＮまたはＳに限定され；かつ／またはＹ_３はＤまたはＮに限定され；かつ／またはＹ_４はＫに限定され；かつ／またはＹ_５はＲまたはＫに限定され；かつ／またはＹ_６はＰに限定され；かつ／またはＹ_７は、Ｓに限定される。

配列番号４２のＶＬ ＣＤＲ２配列は、図１１Ａ〜１１Ｂ中の他のものとは明確に異なり、コンフォメーショナルＫｖ１．３エピトープを認識し得る抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ２モチーフ４：
Ｙ_１Ｙ_２Ｙ_３Ｙ_４Ｙ_５Ｙ_６Ｙ_７（配列番号１２０）
であり、ここで、Ｙ_１はＥまたはＤであり；Ｙ_２はＮまたはＱであり；Ｙ_３はＮまたはＱであり；Ｙ_４はＫ、ＲまたはＨであり；Ｙ_５はＲ、ＫまたはＨであり；Ｙ_６はＰであり；Ｙ_７はＳ、ＴまたはＣである。一部の実施形態では、Ｙ_１はＥに限定され；かつ／またはＹ_２はＮに限定され；かつ／またはＹ_３はＮに限定され；かつ／またはＹ_４はＫに限定され；かつ／またはＹ_５はＲに限定され；かつ／またはＹ_６はＰに限定され；かつ／またはＹ_７は、Ｓに限定される。

ＶＬ ＣＤＲ３について、１つのコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ３モチーフ１：
Ｚ_１Ｚ_２Ｚ_３Ｚ_４Ｚ_５Ｚ_６Ｚ_７Ｚ_８Ｚ_９Ｚ_１０（配列番号１２１）
であり、ここで、Ｚ_１はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｃ、ＳまたはＴであり；Ｚ_２はＧ、Ａ、Ｎ、Ｑ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｚ_３はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｅ、Ｄ、Ｔ、Ｓ、Ｃ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｒ、ＫまたはＨであり；Ｚ_４はＤ、Ｅ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｍ、ＧまたはＡであり；Ｚ_５はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｎ、Ｑ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｍ、Ｋ、ＲまたはＨであり；Ｚ_６はＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｍ、ＧまたはＡであり；Ｚ_７はＴ、Ｓ、Ｃ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｙ、Ｆ、Ｗ、Ｄ、Ｅ、ＮまたはＱであり；Ｚ_８はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｎ、Ｑ、Ｔ、Ｓ、Ｃ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｇまたは非存在であり；Ｚ_９はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｄ、Ｅまたは非存在であり；Ｚ_１０はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｔ、Ｓ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｙ、Ｆ、Ｗまたは非存在である。一部の実施形態では、Ｚ_１はＧまたはＣに限定され；かつ／またはＺ_２はＧ、Ｎ、Ａ、ＳまたはＴに限定され；かつ／またはＺ_３はＹ、Ｅ、Ｗ、Ｔ、Ｆ、Ｉ、Ｓ、ＡまたはＲに限定され；かつ／またはＺ_４はＤ、ＥまたはＩに限定され；かつ／またはＺ_５はＳ、Ｇ、Ｄ、Ｎ、ＩまたはＫに限定され；かつ／またはＺ_６はＮ、Ｓ、ＴまたはＩに限定され；かつ／またはＺ_７はＴ、Ｉ、Ｇ、Ｒ、Ｙ、Ｅ、Ｓ、ＡまたはＮに限定され；かつ／またはＺ_８はＹ、Ｎ、Ｔ、Ｖ、Ｄ、Ｇまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_９はＶ、Ｄまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１０は、Ａ、Ｔ、Ｄ、Ｓ、Ｙまたは非存在に限定される。

配列番号３、２１、２２、２３、２４、３７、３８、３９および４２のＶＬ ＣＤＲ３配列は、図８Ａ〜８Ｂ中の他のものとは明確に異なり、Ｋｖ１．３機能を阻害する抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ３モチーフ２：
Ｚ_１Ｚ_２Ｚ_３Ｚ_４Ｚ_５Ｚ_６Ｚ_７Ｚ_８Ｚ_９（配列番号１２２）
であり、ここで、Ｚ_１はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｚ_２はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｚ_３はＹ、ＦまたはＷであり；Ｚ_４はＤまたはＥであり；Ｚ_５はＳ、ＴまたはＣであり；Ｚ_６はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｎ、Ｑ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｚ_７はＮ、Ｑ、Ｔ、Ｓ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｉ、Ｖ、Ｌ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｚ_８はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｙ、ＦまたはＷであり；Ｚ_９はＦ、Ｙ、Ｗ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｇまたは非存在である。一部の実施形態では、Ｚ_１はＧに限定され；かつ／またはＺ_２はＧ、ＴまたはＳに限定され；かつ／またはＺ_３はＹまたはＷに限定され；かつ／またはＺ_４はＤに限定され；かつ／またはＺ_５はＳに限定され；かつ／またはＺ_６はＳ、ＮまたはＩに限定され；かつ／またはＺ_７はＮ、Ｔ、ＥまたはＡに限定され；かつ／またはＺ_８はＧ、ＹまたはＡであり；かつ／またはＺ_９は、Ｙ、Ａまたは非存在に限定される。

配列番号２１、２２、２３、２４、３９および４２のＶＬ ＣＤＲ３配列は、図１１Ａ〜１１Ｂ中の他のものとは明確に異なり、Ｊｕｒｋａｔ細胞結合に関してＦＡＣＳ陽性である抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ３モチーフ３：
Ｚ_１Ｚ_２Ｚ_３Ｚ_４Ｚ_５Ｚ_６Ｚ_７Ｚ_８Ｚ_９（配列番号１２３）
であり、ここで、Ｚ_１はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｚ_２はＴ、ＳまたはＣであり；Ｚ_３はＹ、ＦまたはＷであり；Ｚ_４はＤまたはＥであり；Ｚ_５はＳ、ＴまたはＣであり；Ｚ_６はＩ、Ｖ、Ｌ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｚ_７はＥ、Ｄ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｚ_８はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｚ_９はＹ、Ｆ、Ｗまたは非存在である。一部の実施形態では、Ｚ_１はＧに限定され；かつ／またはＺ_２は、ＴまたはＳに限定される。かつ／またはＺ_３はＹまたはＷに限定され；かつ／またはＺ_４はＤに限定され；かつ／またはＺ_５はＳに限定され；かつ／またはＺ_６はＩまたはＳに限定され；かつ／またはＺ_７は、ＥまたはＡに限定される。かつ／またはＺ_８はＡまたはＧに限定され；かつ／またはＺ_９はＹまたは非存在．

配列番号４２のＶＬ ＣＤＲ３配列は、図１１Ａ〜１１Ｂ中の他のものとは明確に異なり、コンフォメーショナルＫｖ１．３エピトープを認識し得る抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ３モチーフ４：
Ｚ_１Ｚ_２Ｚ_３Ｚ_４Ｚ_５Ｚ_６Ｚ_７Ｚ_８（配列番号１２４）
であり、ここで、Ｚ_１はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭに限定され；Ｚ_２はＳ、ＴまたはＣであり；Ｚ_３はＷ、ＦまたはＹであり；Ｚ_４はＤまたはＥであり；Ｚ_５はＳ、ＴまたはＣであり；Ｚ_６はＳ、ＴまたはＣであり；Ｚ_７はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｚ_８はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭである。一部の実施形態では、Ｚ_１はＧに限定され；かつ／またはＺ_２は、Ｓに限定される。かつ／またはＺ_３は、Ｗに限定される。かつ／またはＺ_４はＤに限定され；かつ／またはＺ_５はＳに限定され；かつ／またはＺ_６はＳに限定され；かつ／またはＺ_７はＡに限定され；かつ／またはＺ_８は、Ｇに限定される。

可変重鎖配列

ＶＨ配列アラインメント。上述のＶＨ配列の全てのアラインメントを図１３Ａ〜図１３Ｃに示す。この図は、３つのＣＤＲ領域のおよその位置（太字、下線）および各配列に対応する配列番号を示す。

ユニークなＶＨ ＣＤＲ配列。図１３Ａ〜図１３ＣのＶＨのユニークなＣＤＲ配列のアラインメントを図１４に示す。図１４に示されるように、４０個のＶＨ配列には、１３個のユニークなＣＤＲ１配列、２５個のユニークなＣＤＲ２配列、および２７個のユニークなＣＤＲ３配列がある。

ＶＬ ＣＤＲコンセンサス配列。図１４に開示される配列、ならびに天然に存在するアミノ酸の構造／機能の特徴に基づいて、ＶＨ ＣＤＲのコンセンサス配列を決定することができる。

ＶＨ ＣＤＲ１について、１つのコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ１モチーフ１：
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５（配列番号４４２）
であり、ここで、Ｘ_１はＮ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｘ_２はＤ、Ｅ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｘ_３はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｈ、ＫまたはＲであり；Ｘ_４はＧ、Ａ、Ｎ、Ｑ、Ｖ、Ｌ、Ｍ、Ｉ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｘ_５はＭ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、ＧまたはＡである。一部の実施形態では、Ｘ_１はＮまたはＳに限定され；かつ／またはＸ_２はＤ、ＳまたはＴに限定され；かつ／またはＸ_３はＹ、Ｈ、ＲまたはＦに限定され；かつ／またはＸ_４はＧ、Ｎ、Ａ、Ｑ、ＳまたはＴに限定され；かつ／またはＸ_５は、ＭまたはＶに限定される。

配列番号１２５、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１４１、１５９および１６０のＶＨ ＣＤＲ１配列は、図１３Ａ〜１３Ｃ中の他のものとは明確に異なり、Ｋｖ１．３機能を阻害する抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ１モチーフ２：
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５（配列番号４４３）
であり、ここで、Ｘ_１はＳ、Ｔ、Ｃ、ＮまたはＱであり；Ｘ_２はＳ、Ｔ、Ｃ、ＤまたはＥであり；Ｘ_３はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｋ、ＲまたはＨであり；Ｘ_４はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｘ_５はＭ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＧまたはＩである。一部の実施形態では、Ｘ_１はＳまたはＮに限定され；かつ／またはＸ_２はＳまたはＤに限定され；かつ／またはＸ_３はＹ、ＲまたはＨに限定され；かつ／またはＸ_４はＡまたはＧに限定され；かつ／またはＸ_５は、Ｍに限定される。

配列番号１２９、１３０、１３１、１３２、１３３および１４１のＶＨ ＣＤＲ１配列は、図１３Ａ〜１３Ｃ中の他のものとは明確に異なり、Ｊｕｒｋａｔ細胞結合に関してＦＡＣＳ陽性である抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ１モチーフ３：
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５（配列番号４４４）
であり、ここで、Ｘ_１はＳ、ＴまたはＣであり；Ｘ_２はＤ、Ｅ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｘ_３はＲ、Ｋ、Ｈ、Ｙ、ＦまたはＷであり；Ｘ_４はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＮまたはＱであり；Ｘ_５はＭ、Ａ、Ｇ、Ｖ、ＬまたはＩである。一部の実施形態では、Ｘ_１はＳに限定され；かつ／またはＸ_２はＤまたはＳに限定され；かつ／またはＸ_３はＲ、ＹまたはＨに限定され；かつ／またはＸ_４はＧまたはＱに限定され；かつ／またはＸ_５は、Ｍに限定される。

配列番号１２９のＶＨ ＣＤＲ１配列は、図１０〜１０Ｃ中の他のものとは明確に異なり、コンフォメーショナルＫｖ１．３エピトープを認識し得る抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ１モチーフ４：
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５（配列番号４４５）
であり、ここで、Ｘ_１はＳ、ＴまたはＣであり；Ｘ_２はＳ、ＴまたはＣであり；Ｘ_３はＨ、ＲまたはＫであり；Ｘ_４はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｘ_５はＭ、Ａ、Ｇ、Ｉ、ＬまたはＶである。一部の実施形態では、Ｘ_１はＳに限定され；かつ／またはＸ_２はＳに限定され；かつ／またはＸ_３はＨに限定され；かつ／またはＸ_４はＧに限定され；かつ／またはＸ_５は、Ｍに限定される。

ＶＨ ＣＤＲ２について、コンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ２モチーフ１：
Ｙ_１Ｙ_２Ｙ_３Ｙ_４Ｙ_５Ｙ_６Ｙ_７Ｙ_８Ｙ_９Ｙ_１０Ｙ_１１Ｙ_１２Ｙ_１３Ｙ_１４Ｙ_１５Ｙ_１６Ｙ_１７（配列番号４４６）
であり、ここで、Ｙ_１はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｅ、Ｄ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｙ_２はＩ、Ｖ、Ｌ、ＭまたはＡであり；Ｙ_３はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＮまたはＱであり；Ｙ_４はＳ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｙ_５はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＤまたはＥであり；Ｙ_６はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｆ、ＹまたはＷであり；Ｙ_７はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＤまたはＥであり；Ｙ_８はＲ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｙ_９はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｅ、Ｄ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍまたは非存在であり；Ｙ_１０はＴ、Ｓ、Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｙ_１１はＹ、Ｆ、Ｗ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、ＮまたはＱであり；Ｙ_１２はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｈ、Ｋ、ＲまたはＰであり；Ｙ_１３Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｔ、ＳまたはＣ；Ｙ_１４はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、ＣまたはＰであり；Ｙ_１５はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｙ_１６はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｙ_１７はＱ、Ｎ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、ＤまたはＥである。一部の実施形態では、Ｙ_１はＧ、Ａ、Ｅ、Ｋ、ＶまたはＳに限定され；かつ／またはＹ_２はＩまたはＶに限定され；かつ／またはＹ_３はＹ、Ｓ、Ｄ、Ｎ、ＥまたはＴに限定され；かつ／またはＹ_４はＳまたは非存在に限定され；かつ／またはＹ_５は非存在、Ｎ、Ｒ、Ａ、Ｄ、ＫまたはＶに限定され；かつ／またはＹ_６はＳ、Ｄ、Ａ、Ｖ、Ｔ、ＦまたはＧに限定され；かつ／またはＹ_７はＧ、ＡまたはＤに限定され；かつ／またはＹ_８はＲ、Ｎ、Ｓ、ＧまたはＴに限定され；かつ／またはＹ_９はＹ、Ｆ、Ｓ、Ｒ、Ｔ、Ｅ、Ｇ、Ｄまたは非存在に限定され；かつ／またはＹ_１０はＴまたはＡに限定され；かつ／またはＹ１１はＹ、Ａ Ｒ、Ｇ、Ｓ、Ｌ、Ｄ、ＮまたはＨに限定され；かつ／またはＹ１２はＹ、ＨまたはＰに限定され；かつ／またはＹ１３はＧ、ＴまたはＡに限定され；かつ／またはＹ１４はＡ、ＳまたはＰに限定され；かつ／またはＹ１５はＡに限定され；かつ／またはＹ１６はＶに限定され；かつ／またはＹ１７は、Ｑ、Ｋ、Ｒ、ＤまたはＥに限定される。

配列番号１２５、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１４１，１５９および１６０のＶＨ ＣＤＲ２配列は、図１３Ａ〜１３Ｃ中の他のものとは明確に異なり、Ｋｖ１．３機能を阻害する抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ２モチーフ２：
Ｙ_１Ｙ_２Ｙ_３Ｙ_４Ｙ_５Ｙ_６Ｙ_７Ｙ_８Ｙ_９Ｙ_１０Ｙ_１１Ｙ_１２Ｙ_１３Ｙ_１４Ｙ_１５Ｙ_１６Ｙ_１７（配列番号４４７）
であり、ここで、Ｙ_１はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍまたは非存在であり；Ｙ_２はＩ、Ｖ、Ｌ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｙ_３はＩ、Ｖ、Ｌ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、ＦまたはＷであり；Ｙ_４はＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｙ_５はＡ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｒ、ＫまたはＨであり；Ｙ_６はＤ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｙ_７はＤ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、ＡまたはＭであり；Ｙ_８はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｎ、Ｑ、Ｒ、ＫまたはＨであり；Ｙ_９はＴ、Ｓ、Ｃ、Ｙ、Ｆ、Ｗ、Ｒ、ＫまたはＨであり；Ｙ_１０はＳ、Ｔ、Ｃ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、ＭまたはＧであり；Ｙ_１１はＹ、Ｆ、Ｗ Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、ＭまたはＡであり；Ｙ_１２はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｋ、ＲまたはＨであり；Ｙ_１３はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｙ_１４はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｙ_１５はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｙ_１６はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり、Ｙ_１７はＫ、Ｒ、Ｈ、ＱまたはＮである。一部の実施形態では、Ｙ_１はＳ、Ｇまたは非存在に限定され；かつ／またはＹ_２はＩ、ＡまたはＧに限定され；かつ／またはＹ_３はＳ、ＹまたはＩに限定され；かつ／またはＹ_４はＮ、Ｓまたは非存在に限定され；かつ／またはＹ_５はＶ、ＳまたはＲに限定され；かつ／またはＹ_６はＤ、Ａ、ＦまたはＳに限定され；かつ／またはＹ_７はＤまたはＧに限定され；かつ／またはＹ_８はＳ、ＮまたはＲに限定され；かつ／またはＹ_９はＳ、ＹまたはＲに限定され；かつ／またはＹ_１０はＴまたはＡに限定され；かつ／またはＹ_１１はＹ、Ｈ、Ｇ、ＲまたはＡに限定され；かつ／またはＹ_１２はＹまたはＨに限定され；かつ／またはＹ_１３はＧに限定され；かつ／またはＹ_１４はＡに限定され；かつ／またはＹ_１５はＡに限定され；かつ／またはＹ_１６はＶに限定され；かつ／またはＹ_１７はＫまたはＱである。

配列番号１２９、１３０、１３１、１３２、１３３および１４１のＶＨ ＣＤＲ２配列は、図１３Ａ〜１３Ｃ中の他のものとは明確に異なり、Ｊｕｒｋａｔ細胞結合に関してＦＡＣＳ陽性である抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ２モチーフ３：
Ｙ_１Ｙ_２Ｙ_３Ｙ_４Ｙ_５Ｙ_６Ｙ_７Ｙ_８Ｙ_９Ｙ_１０Ｙ_１１Ｙ_１２Ｙ_１３Ｙ_１４Ｙ_１５Ｙ_１６（配列番号４４８）
であり、ここで、Ｙ_１はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｙ_２はＩ、Ｖ、Ｌ、Ａ、ＧまたはＭであり；Ｙ_３はＳ、Ｔ、Ｃ、ＮまたはＱであり；Ｙ_４はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｒ、ＫまたはＨであり；Ｙ_５はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、ＤまたはＥであり；Ｙ_６はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｙ_７はＲ、Ｋ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｙ_８はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｒ、ＫまたはＨであり；Ｙ_９はＳ、Ｔ、Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｙ_１０はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｒ、ＫまたはＨであり；Ｙ_１１はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｈ、ＲまたはＫであり；Ｙ_１２はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｙ_１３はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｙ_１４はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｙ_１５はＶ、Ａ、Ｇ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｙ_１６はＫ、ＲまたはＨである。一部の実施形態では、Ｙ_１はＧまたはＡに限定され；かつ／またはＹ_２はＩに限定され；かつ／またはＹ_３はＳまたはＮに限定され；かつ／またはＹ_４はＳまたはＲに限定され；かつ／またはＹ_５はＳ、ＦまたはＤに限定され；かつ／またはＹ_６はＧに限定され；かつ／またはＹ_７はＲ、ＮまたはＳに限定され；かつ／またはＹ_８はＳまたはＲに限定され；かつ／またはＹ_９はＡまたはＴに限定され；かつ／またはＹ_１０はＡ、ＧまたはＲに限定され_；かつ／またはＹ_１１はＹまたはＨに限定され；かつ／またはＹ_１２はＧに限定され；かつ／またはＹ_１３はＡに限定され；かつ／またはＹ_１４はＡに限定され；かつ／またはＹ_１５はＶに限定され；かつ／またはＹ_１６は、Ｋに限定される。

配列番号１２９のＶＨ ＣＤＲ２配列は、図１３Ａ〜１３Ｃ中の他のものとは明確に異なり、コンフォメーショナルＫｖ１．３エピトープを認識し得る抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ２モチーフ４：
Ｙ_１Ｙ_２Ｙ_３Ｙ_４Ｙ_５Ｙ_６Ｙ_７Ｙ_８Ｙ_９Ｙ_１０Ｙ_１１Ｙ_１２Ｙ_１３Ｙ_１４Ｙ_１５Ｙ_１６（配列番号４４９）
であり、ここで、Ｙ_１はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｙ_２はＩ、Ｖ、Ｌ、Ｍ、ＧまたはＡであり；Ｙ_３はＳ、ＴまたはＣであり；Ｙ_４はＲ、ＫまたはＨであり；Ｙ_５はＤまたはＥであり；Ｙ_６はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｙ_７はＳ、ＴまたはＣであり；Ｙ_８はＲ、ＫまたはＨであり；Ｙ_９はＴ、ＳまたはＣであり；Ｙ_１０はＲ、ＫまたはＨであり；Ｙ_１１はＹ、ＦまたはＷであり；Ｙ_１２はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｙ_１３はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｙ_１４はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｙ_１５はＶ、Ｇ、Ａ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｙ_１６はＫ、ＲまたはＨである。一部の実施形態では、Ｙ_１はＧに限定され；かつ／またはＹ_２はＩに限定され；かつ／またはＹ_３はＳに限定され；かつ／またはＹ_４はＲに限定され；かつ／またはＹ_５はＤに限定され；かつ／またはＹ_６はＧに限定され；かつ／またはＹ_７はＳに限定され；かつ／またはＹ_８はＲに限定され；かつ／またはＹ_９はＴに限定され；かつ／またはＹ_１０はＲに限定され；かつ／またはＹ_１１はＹに限定され；かつ／またはＹ_１２はＧに限定され；かつ／またはＹ_１３はＡに限定され；かつ／またはＹ_１４はＡに限定され；かつ／またはＹ_１５はＶに限定され；かつ／またはＹ_１６は、Ｋに限定される。

ＶＨ ＣＤＲ３について、１つのコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ３モチーフ１：
Ｚ_１Ｚ_２Ｚ_３Ｚ_４Ｚ_５Ｚ_６Ｚ_７Ｚ_８Ｚ_９Ｚ_１０Ｚ_１１Ｚ_１２Ｚ_１３Ｚ_１４Ｚ_１５Ｚ_１６Ｚ_１７Ｚ_１８Ｚ_１９Ｚ_２０Ｚ_２１Ｚ_２２Ｚ_２３Ｚ_２４Ｚ_２５Ｚ_２６Ｚ_２７（配列番号４５０）
であり、ここで、Ｚ_１はＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＤまたはＥであり；Ｚ_２はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｆ、Ｗ、ＮまたはＱであり；Ｚ_３はＤ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｙ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｈ、Ｒ、Ｋまたは非存在であり；Ｚ_４はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｅ、Ｄ、Ｎ、Ｑ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｋ、Ｈまたは非存在であり；Ｚ_５はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｃ、Ｓ、Ｔまたは非存在であり；Ｚ_６はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｃ、Ｓ、Ｔ、Ｒ、Ｋ、Ｈまたは非存在であり；Ｚ_７はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｎ、Ｑ、Ｃ、Ｓ、Ｔまたは非存在であり；Ｚ_８はＷ、Ｆ、Ｙまたは非存在であり；Ｚ_９はＮ、Ｑまたは非存在であり；Ｚ_１０はＴ、Ｓ、Ｃまたは非存在であり；Ｚ_１１はＣ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｆ、Ｗ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍまたは非存在であり；Ｚ_１２はＴ、Ｓ、Ｃ、Ｎ、Ｑ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｄ、Ｅ、Ｙ、Ｆ、Ｗまたは非存在であり；Ｚ_１３はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｃ、Ｓ、Ｔ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、Ｒ、Ｈまたは非存在であり；Ｚ_１４はＹ、Ｆ、Ｗ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｐ、Ｄ、Ｅまたは非存在であり；Ｚ_１５はＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｒ、Ｋ、Ｈまたは非存在であり；Ｚ_１６はＣ、Ｓ、Ｔ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍまたは非存在であり；Ｚ_１７はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ
Ｍ、Ｗ、Ｆ、Ｙ、Ｔ、Ｓ、Ｃ、Ｄ、Ｅまたは非存在であり；Ｚ_１８はＤ、Ｅ、Ｔ、Ｓ、Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｐ、Ｗ、Ｆ、Ｙまたは非存在であり；Ｚ_１９はＹ、Ｆ、Ｗ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｚ_２０はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｔ、Ｓ、Ｃまたは非存在であり；Ｚ_２１はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｐ、Ｙ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｚ_２２はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｆ、Ｗまたは非存在であり；Ｚ_２３はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｅ、Ｄ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｎ、Ｑ、Ｌ、Ａ、Ｇ、Ｖ、ＩまたはＭであり；Ｚ_２４はＩ、Ｖ、Ｌ、Ａ、ＧまたはＭであり；Ｚ_２５はＤまたはＥであり、Ｚ_２６はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｚ_２７はＷ、ＦまたはＹである。一部の実施形態では、Ｚ_１はＮ、Ｓ、Ｃ、Ａ、Ｇ、ＤまたはＴに限定され；かつ／またはＺ_２はＡ、Ｓ、Ｔ、Ｙ、Ｎ、Ｇ、ＶまたはＦに限定され；かつ／またはＺ_３はＤ、Ｇ、Ｙ、Ｓ、Ｈ、Ｌまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_４はＳ、Ｔ、Ｅ、Ｎ、Ｄ、Ｇ、Ｒ、Ｃ、Ｑまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_５はＧ、Ｃまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_６はＹ、Ｃ、Ｒまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_７はＹ、Ｎ、Ｃまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_８はＷまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_９はＮまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１０はＴまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１１はＣ、Ｙ、Ａまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１２はＴ、Ｎ、Ｇ、Ｄ、Ｙ、Ａ、Ｃ、Ｓまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１３はＧ、Ｃ、Ｄ、Ｋ、Ａまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１４はＹ、Ａ、Ｓ、Ｐ、Ｔ、Ｄまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１５はＮ、Ｓ、Ｇ、Ｉ、Ｒ、Ｔまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１６はＣ、Ｇ、Ｓまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１７はＡ、Ｗ、Ｙ、Ｇ、Ｔ、Ｉ、Ｄ、Ｖまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１８はＤ、Ｔ、Ｃ、Ａ、Ｇ、Ｐ、Ｗまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１９はＹ、Ｆ、Ａ、Ｎ、Ｓ、Ｇまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_２０はＧ、Ｔ、Ａ、Ｉまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_２１はＡ、Ｐ、Ｙ、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｌまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_２２はＧ、Ａ、Ｈ、Ｄ、Ｓ、Ｙまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_２３はＹ、Ｅ、Ｓ、Ｎ、Ｌ、Ｔ、Ｄ、Ｃ、Ｉ、ＧまたはＡに限定され；かつ／またはＺ_２４はＩまたはＭに限定され；かつ／またはＺ_２６はＡ、ＳまたはＴに限定され；かつ／またはＺ_２７は、Ｗに限定される。

配列番号１２５、１２９、１３０、１３１、１３２、１３３、１４１、１５９および１６０のＶＨ ＣＤＲ３配列は、図１３Ａ〜１３Ｃ中の他のものとは明確に異なり、Ｋｖ１．３機能を阻害する抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ３モチーフ２：
Ｚ_１Ｚ_２Ｚ_３Ｚ_４Ｚ_５Ｚ_６Ｚ_７Ｚ_８Ｚ_９Ｚ_１０Ｚ_１１Ｚ_１２Ｚ_１３Ｚ_１４Ｚ_１５Ｚ_１６Ｚ_１７Ｚ_１８Ｚ_１９Ｚ_２０Ｚ_２１（配列番号４５１）
であり、ここで、Ｚ_１はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧまたは非存在であり；Ｚ_２はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧまたは非存在であり；Ｚ_３はＹ、Ｆ、Ｗまたは非存在であり；Ｚ_４はＱ、Ｎ、Ｄ、Ｅ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇまたは非存在であり；Ｚ_５はＣ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｙ、Ｆ、Ｗまたは非存在であり；Ｚ_６はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＤまたはＥであり；Ｚ_７はＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｚ_８はＤ、Ｅ、Ｙ、Ｆ、Ｗ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｚ_９はＣ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、ＭまたはＡであり；Ｚ_１０はＣ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、ＭまたはＡであり；Ｚ_１１はＦ、ＹまたはＷであり；Ｚ_１２はＴ、Ｓ、Ｃまたは非存在であり；Ｚ_１３はＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｚ_１４はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、ＭまたはＡであり；Ｚ_１５はＰ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｚ_１６はＦ、Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、ＭまたはＡであり；Ｚ_１７はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、ＹまたはＷであり；Ｚ_１８はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｚ_１９はＤまたはＥであり；Ｚ_２０はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｚ_２１はＷ、ＦまたはＹである。一部の実施形態では、Ｚ１はＳ、Ｇまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ２はＳ、Ａまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ３はＹまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ４はＱ、Ｅ、Ｇまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ５はＣ、Ｙ、Ｎまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ６はＡ、Ｄ、Ｓ、ＣまたはＡに限定され；かつ／またはＺ７はＧ、Ｔ、Ｄまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ８はＤ、Ｙ、ＧまたはＳに限定され；かつ／またはＺ９はＮ、Ｓ、ＴまたはＧに限定され；かつ／またはＺ１０はＣ、Ｇ、ＳまたはＹに限定され；かつ／またはＺ１１はＷまたはＹに限定され；かつ／またはＺ１２は、Ｔまたは非存在に限定される。かつ／またはＺ１３はＧ、Ｆ、ＣまたはＴに限定され；かつ／またはＺ１４はＹ、Ｉ ＧまたはＡに限定され；かつ／またはＺ１５はＰ、ＡまたはＶに限定され；かつ／またはＺ１６はＹまたはＧに限定され；かつ／またはＺ１７はＧ、Ｓ、Ｅ、ＬまたはＹに限定され；かつ／またはＺ１８はＩに限定され；かつ／またはＺ１９はＤに限定され；かつ／またはＺ２０はＴまたはＡに限定され；かつ／またはＺ２１は、Ｗに限定される。

配列番号１２９、１３０、１３１、１３２、１３３および１４１のＶＨ ＣＤＲ３配列は、図１３Ａ〜１３Ｃ中の他のものとは明確に異なり、Ｊｕｒｋａｔ細胞結合に関してＦＡＣＳ陽性である抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ３モチーフ３：
Ｚ_１Ｚ_２Ｚ_３Ｚ_４Ｚ_５Ｚ_６Ｚ_７Ｚ_８Ｚ_９Ｚ_１０Ｚ_１１Ｚ_１２Ｚ_１３Ｚ_１４Ｚ_１５Ｚ_１６Ｚ_１７Ｚ_１８Ｚ_１９Ｚ_２０Ｚ_２１（配列番号４５２）
であり、ここで、Ｚ_１はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｓ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｚ_２はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍまたは非存在であり；Ｚ_３はＹ、Ｆ、Ｗまたは非存在であり；Ｚ_４はＤ、Ｅ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍまたは非存在であり；Ｚ_５はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、Ｆ、Ｗまたは非存在であり；Ｚ_６はＤ、Ｅ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｚ_７はＴ、Ｓ、Ｃ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｚ_８はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｚ_９はＴ、Ｓ、Ｃ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｚ_１０はＳ、ＴまたはＣであり；Ｚ_１１はＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｙ、ＦまたはＷであり；Ｚ_１２はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｙ、ＦまたはＷであり；Ｚ_１３はＦ、Ｙ、Ｗ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｉ、Ｌ、Ｍまたは非存在であり；Ｚ_１４はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｚ_１５はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｚ_１６はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｚ_１７はＥ、Ｄ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｚ_１８はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｚ_１９はＤまたはＥであり；Ｚ_２０はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｚ_２１はＷ、ＦまたはＹである。一部の実施形態では、Ｚ_１はＧ、Ｓまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_２はＡまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_３はＹまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_４はＧ、Ｅまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_５はＹ、Ｃまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_６はＤ、Ｃまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_７はＳまたはＧに限定され；かつ／またはＺ_８はＴ、ＳまたはＹに限定され；かつ／またはＺ_９はＳまたはＧに限定され；かつ／またはＺ_１０はＴ、ＣまたはＳに限定され；かつ／またはＺ_１１はＧまたはＷに限定され；かつ／またはＺ_１２はＹ、ＣまたはＴに限定され；かつ／またはＺ_１３はＧ、Ｆまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１４はＧ、ＡまたはＩに限定され；かつ／またはＺ_１５はＶまたはＡに限定され；かつ／またはＺ_１６はＧであり；かつ／またはＺ_１７はＥ、ＬまたはＳに限定され；かつ／またはＺ_１８はＩに限定され；かつ／またはＺ_１９はＤに限定され；かつ／またはＺ_２０はＡに限定され；かつ／またはＺ_２１は、Ｗに限定される。

配列番号１２９のＶＨ ＣＤＲ３配列は、図１０Ａ〜１０Ｃ中の他のものとは明確に異なり、コンフォメーショナルＫｖ１．３エピトープを認識し得る抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ３モチーフ４：
Ｚ_１Ｚ_２Ｚ_３Ｚ_４Ｚ_５Ｚ_６Ｚ_７Ｚ_８Ｚ_９Ｚ_１０Ｚ_１１Ｚ_１２Ｚ_１３Ｚ_１４Ｚ_１５Ｚ_１６Ｚ_１７Ｚ_１８Ｚ_１９Ｚ_２０Ｚ_２１（配列番号４５３）
であり、ここで、Ｚ_１はＳ、ＴまたはＣであり；Ｚ_２はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｚ_３はＹ、ＦまたはＷであり；Ｚ_４はＥまたはＤであり；Ｚ_５はＣ、ＳまたはＴであり；Ｚ_６はＤまたはＥであり；Ｚ_７はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｚ_８はＹ、ＦまたはＷであり；Ｚ_９はＳ、ＴまたはＣであり；Ｚ_１０はＳ、ＴまたはＣであり；Ｚ_１１はＷ、ＦまたはＹであり；Ｚ_１２はＴ、ＳまたはＣであり；Ｚ_１３はＥまたはＤであり；Ｚ_１４はＩ、Ａ、Ｇ、Ｖ、ＬまたはＭであり；Ｚ_１５はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｚ_１６はＧ、Ａ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｚ_１７はＳ、ＴまたはＣであり；Ｚ_１８はＩ、Ｇ、Ａ、Ｖ、ＬまたはＭであり；Ｚ_１９はＤまたはＥであり；Ｚ_２０はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｉ、ＬまたはＭであり；Ｚ_２１はＷ、ＦまたはＹである。別の実施形態では、Ｚ_１はＳに限定され；かつ／またはＺ_２はＡに限定され；かつ／またはＺ_３はＹに限定され；かつ／またはＺ_４はＥに限定され；かつ／またはＺ_５はＣに限定され；かつ／またはＺ_６はＤに限定され；かつ／またはＺ_７はＧに限定され；かつ／またはＺ_８はＹに限定され；かつ／またはＺ_９はＳに限定され；かつ／またはＺ_１０はＣ_{に限定され；}かつ／またはＺ_１１はＷに限定され；かつ／またはＺ_１２はＴに限定され；かつ／またはＺ_１３はＥに限定され；かつ／またはＺ_１４はＩに限定され；かつ／またはＺ_１５はＡに限定され；かつ／またはＺ_１６はＧに限定され；かつ／またはＺ_１７はＳに限定され；かつ／またはＺ_１８はＩに限定され；かつ／またはＺ_１９はＤに限定され；かつ／またはＺ_２０はＡに限定され；かつ／またはＺ_２１は、Ｗに限定される。

ＣＤＲの基準構造

軽鎖および重鎖可変領域内のＣＤＲ構造の予測は、Ｃｈｏｔｈｉａおよび共同研究者らの研究（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７年）、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、１９６巻：９０１〜１７頁；Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉら（１９９７年）、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、２７３巻：９２７〜４８頁）に基づき、免疫グロブリン超可変領域により提示される保存された基準ＣＤＲ構造に注目する（Ｎｏｒｔｈら（２０１１年）、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．、４０６巻（２号）：２２８〜５６頁）。開示されるニワトリ由来の抗Ｋｖ１．３抗体（表４）に関連する可能性のある基準構造を決定するために、各抗Ｋｖ１．３クローンの軽鎖および重鎖可変領域を、「ＳＡｂＤＡｂ」構造抗体データベース（Ｄｕｎｂａｒら（２０１４年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、４２巻：Ｄ１１４０〜Ｄ１１４６頁）における配列分析に提出した。ＲＳＣＢ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）で最も高い同一性パーセンテージを有する構造をＰｙＩｇＣｌａｓｓｉｆｙデータベースにおいてさらに分析して、関連するＣＤＲループのコンフォメーションを特定した。一部の事例において、同一性パーセントが同じである１つを超えるＰＤＢ構造がＳＡｂＤＡｂ分析によって特定された。こうした場合は、ＰｙＩｇＣｌａｓｓｉｆｙデータベースを用いて、各ＰＤＢヒットに関する基準構造を決定した（表５）。

この分析に基づくと、抗Ｋｖ１．３抗体は、次のＰＤＢ構造：５ｄ７２、５ｄ７０、４ｑｃｉ、５ｄ７ｓ、５ｃ７ｘ、５ｄ７１、および４ｑｈｕを含み得る。

ＰＤＢ構造に基づくと、抗Ｋｖ１．３抗体は、以下の基準ＣＤＲ構造を有し得る：Ｈ１
ＣＤＲはＨ１−１３−１であり；Ｈ２ ＣＤＲはＨ２−１２−１、Ｈ２−１０−２またはＨ２−１０−＊であり；Ｈ３ ＣＤＲはＨ３−８−２またはＨ３−１３−＊であり；Ｌ１ ＣＤＲはＬ１−１１−３であり；Ｌ２ ＣＤＲはＬ２−６−＊またはＬ２−８−１であり；Ｌ３ ＣＤＲはＬ３−９−＊またはＬ３−１１−１である。

抗Ｋｖ１．３抗体クローン１９７２４ｐ１＿Ｆ８、１９７２４ｐ１＿Ａ１、１９７２４ｐ２＿Ａ３、１９７２４ｐ２＿Ｇ９、１９７２４ｐ１＿Ａ１１、１９７２４ｐ１＿Ｄ８、１９７２４ｐ１＿Ｅ６、１９７２４ｐ１＿Ｈ４、および１９７２４ｐ１＿Ｈ７が、発見された他の抗体と明確に異なり、Ｋｖ１．３活性を阻害することに特に注目すると、抗Ｋｖ１．３抗体の関連するＰＤＢ構造は、５ｄ７２、５ｄ７０、および４ｑｈｕを含み得る（表６）。これらのＰＤＢ構造の割り当てに基づくと、機能的に阻害するＫｖ１．３抗体は、次の基準ＣＤＲ配列を含み得る：Ｈ１ ＣＤＲはＨ１−１３−１であり；Ｈ２ ＣＤＲはＨ２−１２−１、Ｈ２−１０−２またはＨ２−１０−＊であり；Ｈ３ ＣＤＲはＨ３−８−２であり；Ｌ１ ＣＤＲはＬ１−１１−３であり；Ｌ２ ＣＤＲはＬ２−６−＊またはＬ２−８−１であり、Ｌ３ ＣＤＲはＬ３−９−＊またはＬ３−１１−１である。

抗Ｋｖ１．３抗体クローン１９７２４ｐ１＿Ａ１１、１９７２４ｐ１＿Ｈ７、１９７２４ｐ２．Ｇ９、１９７２４ｐ２．Ａ３、１９７２４ｐ１．Ｅ６および１９７２４＿Ｄ８が、発見された他の抗体と明確に異なり、Ｊｕｒｋａｔ結合に関してＦＡＣＳ陽性であることに特に注目すると、抗Ｋｖ１．３抗体の関連するＰＤＢ構造は、５ｄ７０、および５ｄ７２を含み得る（表６）。これらのＰＤＢ構造の割り当てに基づくと、ＦＡＣＳ陽性Ｊｕｒｋａｔ結合Ｋｖ１．３抗体は、次の基準ＣＤＲ配列を含み得る：Ｈ１ ＣＤＲはＨ１−１３−１であり；Ｈ２ ＣＤＲはＨ２−１０−２またはＨ２−１２−１であり；Ｈ３ ＣＤＲはＨ３−８−２であり；Ｌ１ ＣＤＲはＬ１−１１−３であり；Ｌ２ ＣＤＲはＬ２−６−＊であり、Ｌ３ ＣＤＲはＬ３−９−＊である。

抗Ｋｖ１．３抗体クローン１９７２４ｐ１＿Ｅ６が、発見された他の抗体と明確に異なり、コンフォメーショナルＫｖ１．３エピトープを認識し得ることに特に注目すると、抗Ｋｖ１．３抗体の関連するＰＤＢ構造は、５ｄ７０から構成され得る（表６）。このＰＤＢ構造の割り当てに基づくと、コンフォメーショナルＫｖ１．３抗体は、次の基準ＣＤＲ配列を含み得る：Ｈ１ ＣＤＲはＨ１−１３−１であり；Ｈ２ ＣＤＲはＨ２−１０−２であり；Ｈ３ ＣＤＲはＨ３−８−２であり；Ｌ１ ＣＤＲはＬ１−１１−３であり；Ｌ３ ＣＤＲはＬ３−９−＊である。

有用な可能性がある抗Ｋｖ１．３抗体を産生するさらなるクローンのＤＮＡ配列決定を行い、対応する軽鎖および重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を推定した。上述のＧＥＭスクリーニングから得られた１０個の抗体に関する配列を開示する。

可変軽鎖配列

ＶＬ配列アラインメント。上述のＶＬ配列の全てのアラインメントを図１９に示す。この図は、３つのＣＤＲ領域のおよその位置（太字、下線）および各配列に対応する配列番号を示す。

ユニークなＶＬ ＣＤＲ配列。図１９のＶＬのユニークなＣＤＲ配列のアラインメントを図２０に示す。図２０に示されるように、１０個のＶＬ配列には、６個のユニークなＣＤＲ１配列、５個のユニークなＣＤＲ２配列、および７個のユニークなＣＤＲ３配列がある。

可変重鎖配列

ＶＨ配列アラインメント。上述のＶＨ配列の全てのアラインメントを図２１に示す。この図は、３つのＣＤＲ領域のおよその位置（太字、下線）および各配列に対応する配列番号を示す。

ユニークなＶＨ ＣＤＲ配列。図２１のＶＨのユニークなＣＤＲ配列のアラインメントを図２２に示す。図２２に示されるように、１０個のＶＨ配列には、７個のユニークなＣＤＲ１配列、７個のユニークなＣＤＲ２配列、および７個のユニークなＣＤＲ３配列がある。

ラマ由来の抗体：有用な可能性がある抗Ｋｖ１．３抗体を産生するクローンのＤＮＡ配列決定を行い、対応する軽鎖および重鎖可変ドメインのアミノ酸配列を推定した。上述のようにＫｖ１．３免疫化ラマに由来する１９個の抗体に関する配列を開示する。

可変軽鎖配列

ＶＬ配列アラインメント。上述のＶＬ配列の全てのアラインメントを図１５に示す。この図は、３つのＣＤＲ領域のおよその位置（太字、下線）および各配列に対応する配列番号を示す。

ユニークなＶＬ ＣＤＲ配列。図１５のＶＬのユニークなＣＤＲ配列のアラインメントを図１６に示す。図１６に示されるように、１９個のＶＬ配列には、１９個のユニークなＣＤＲ１配列、１３個のユニークなＣＤＲ２配列、および１７個のユニークなＣＤＲ３配列がある。

ＶＬ ＣＤＲコンセンサス配列。図１６に開示される配列、ならびに天然に存在するアミノ酸の構造／機能の特徴に基づいて、ＶＬ ＣＤＲのコンセンサス配列を決定することができる。

１つのコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ１モチーフ５：
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３Ｘ_１４Ｘ_１５Ｘ_１６Ｘ_１７（配列番号４３０）
であり、ここで、Ｘ_１はＫ、Ｒ、Ｈ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｘ_２はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、ＭまたはＡであり；Ｘ_３はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｋ、ＲまたはＨであり；Ｘ_４はＱ、Ｎ、Ｅ、Ｄ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｘ_５はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、ＭまたはＡであり；Ｘ_６はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｘ_７はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、ＩまたはＭであり；Ｘ_８はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｈ、Ｋ、Ｒ、Ｆ、Ｗ、Ｙ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、ＭまたはＡであり；Ｘ_９はＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍまたは非存在であり；Ｘ_１０はＳ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｘ_１１はＮ、Ｑ、Ｄ、Ｅまたは非存在であり；Ｘ_１２はＱ、Ｎ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｅ、Ｄ、Ｙ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｘ_１３はＫ、Ｒ、Ｈ、Ｎ、Ｑ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｘ_１４はＴ、Ｓ、Ｃ、ＮまたはＱであり；Ｘ_１５はＦ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｘ１６はＧ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｆ、Ｙ、ＷまたはＰであり、Ｘ_１７はＮ、Ｑ、Ｙ、Ｆ、Ｗ、Ｔ、Ｓ、Ｃ、ＤまたはＥである。一部の実施形態では、Ｘ_１はＫ、Ａ、ＴまたはＧに限定され；かつ／またはＸ_２はＳ、Ａ、Ｔ、ＧまたはＬに限定され；かつ／またはＸ_３はＳ、ＴまたはＲに限定され；かつ／またはＸ_４はＱ、ＥまたはＳに限定され；かつ／またはＸ_５はＳ、ＴまたはＧに限定され；かつ／またはＸ_６はＶ、Ｌ、ＤまたはＳに限定され；かつ／またはＸ_７はＬ、Ｖ、ＭまたはＩに限定され；かつ／またはＸ_８はＳ、Ｈ、Ｒ、Ｆ、ＧまたはＴに限定され；かつ／またはＸ_９はＧ、Ａまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_１０はＳ、Ｔまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_１１はＮ、Ｄまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_１２はＱ、Ｇ、Ｅ、ＹまたはＳに限定され；かつ／またはＸ_１３はＫ、Ｎ、Ｇ、ＹまたはＳに限定され；かつ／またはＸ_１４はＴ、ＳまたはＮに限定され；かつ／またはＸ_１５はＹまたはＳに限定され；かつ／またはＸ_１６はＬ、Ａ、Ｆ、ＶまたはＰに限定され；かつ／またはＸ_１７は、Ｎ、Ｙ、Ｔ、ＳまたはＤに限定される。

配列番号２３１のＶＬ ＣＤＲ１配列は、図１５中の他のものとは明確に異なり、Ｋｖ１．３機能を阻害する抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ１モチーフ６：
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７Ｘ_８Ｘ_９Ｘ_１０Ｘ_１１Ｘ_１２Ｘ_１３Ｘ_１４Ｘ_１５Ｘ_１６Ｘ_１７（配列番号４３１）
であり、ここで、Ｘ_１はＫ、ＲまたはＨであり；Ｘ_２はＳ、ＴまたはＣであり；Ｘ_３はＳ、ＴまたはＣであり；Ｘ_４はＱまたはＮであり；Ｘ_５はＳ、ＴまたはＣであり；Ｘ_６はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｘ_７はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｘ_８はＳ、ＴまたはＣであり；Ｘ_９はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｘ_１０はＳ、ＴまたはＣであり；Ｘ_１１はＮまたはＱであり；Ｘ_１２はＮまたはＱであり；Ｘ_１３はＫ、ＲまたはＨであり；Ｘ_１４はＳ、ＴまたはＣであり；Ｘ_１５はＹ、ＦまたはＷであり；Ｘ_１６はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｘ_１７はＮまたはＱである。一部の実施形態では、Ｘ_１はＫに限定され；かつ／またはＸ_２はＳに限定され；かつ／またはＸ_３はＳに限定され；かつ／またはＸ_４はＱに限定され；かつ／またはＸ_５はＳに限定され；かつ／またはＸ_６はＶに限定され；かつ／またはＸ_７はＶに限定され；かつ／またはＸ_８はＳに限定され；かつ／またはＸ_９はＡに限定され；かつ／またはＸ_１０はＳに限定され；かつ／またはＸ_１１はＮに限定され；かつ／またはＸ_１２はＱに限定され；かつ／またはＸ_１３はＫに限定され；かつ／またはＸ_１４はＳに限定され；かつ／またはＸ_１５はＹに限定され；かつ／またはＸ_１６はＬに限定され；かつ／またはＸ_１７は、Ｎに限定される。

ＶＬ ＣＤＲ２について、１つのコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ２モチーフ５：
Ｙ_１Ｙ_２Ｙ_３Ｙ_４Ｙ_５Ｙ_６Ｙ_７（配列番号４３２）
であり、ここで、Ｙ_１はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｑ、Ｎ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、ＥまたはＤであり；Ｙ_２はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｙ_３はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、ＮまたはＱであり；Ｙ_４はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｎ、Ｑ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｙ_５はＲ、Ｋ、Ｈ、ＱまたはＮであり；Ｙ_６はＥ、Ｄ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｋ、ＲまたはＨであり、Ｙ_７はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｓ、ＴまたはＣである。一部の実施形態では、Ｙ_１はＹ、Ｑ、Ｒ、Ｅ、ＫまたはＮに限定され；かつ／またはＹ_２はＡ、Ｖ、ＤまたはＴに限定され；かつ／またはＹ_３はＳ、Ａ、ＴまたはＮに限定され；かつ／またはＹ_４はＴ、Ｎ、Ｋ、ＳまたはＩに限定され；かつ／またはＹ_５はＲ、ＱまたはＨに限定され；かつ／またはＹ_６はＥ、Ｓ、Ｄ、Ｇ、ＡまたはＨに限定され；かつ／またはＹ_７は、ＬまたはＳに限定される。

配列番号２３１のＶＬ ＣＤＲ２配列は、図１５中の他のものとは明確に異なり、Ｋｖ１．３機能を阻害する抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ２モチーフ６：
Ｙ_１Ｙ_２Ｙ_３Ｙ_４Ｙ_５Ｙ_６Ｙ_７（配列番号４３３）
であり、ここで、Ｙ_１はＹ、ＦまたはＷであり；Ｙ_２はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｙ_３はＳ、ＴまたはＣであり；Ｙ_４はＳ、ＴまたはＣであり；Ｙ_５はＱまたはＮであり；Ｙ_６はＥまたはＤであり；Ｙ_７はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧである。一部の実施形態では、Ｙ_１はＹに限定され；かつ／またはＹ_２はＡに限定され；かつ／またはＹ_３はＳに限定され；かつ／またはＹ_４は、Ｔに限定される。かつ／またはＹ_５はＱに限定され；かつ／またはＹ_６はＥに限定され；かつ／またはＹ_７は、Ｌに限定される。

ＶＬ ＣＤＲ３について、１つのコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ３モチーフ５：
Ｚ_１Ｚ_２Ｚ_３Ｚ_４Ｚ_５Ｚ_６Ｚ_７Ｚ_８Ｚ_９Ｚ_１０Ｚ_１１Ｚ_１２（配列番号４３４）
であり、ここで、Ｚ_１はＱ、Ｎ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｚ_２はＱ、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｚ_３はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｆ、Ｙ、Ｗまたは非存在であり；Ｚ_４はＫ、Ｒ、Ｈ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇまたは非存在であり；Ｚ_５はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｒ、Ｋ、Ｈまたは非存在であり；Ｚ_６はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｚ_７はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、ＮまたはＱであり；Ｚ_８はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｙ、Ｆ、Ｗまたは非存在であり；Ｚ_９はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｙ、Ｆ、Ｗまたは非存在であり；Ｚ_１０はＰ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＮまたはＱであり；Ｚ_１１はＦ、Ｙ、Ｗ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｚ_１２はＮ、Ｑ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧである。一部の実施形態では、Ｚ_１はＱまたはＡに限定され；かつ／またはＺ_２はＱ、ＳまたはＬに限定され；かつ／またはＺ_３はＡ、Ｇ、Ｖ、Ｙまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_４はＲ、Ｉまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_５はＴ、Ｓ、Ｈまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_６はＧ、Ｒ、Ｉ、Ｋ、Ｓまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_７はＹ、Ｔ、Ｇ、ＳまたはＮに限定され；かつ／またはＺ_８はＳ、Ｈ、Ｙまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_９はＡ、Ｙ、Ｆまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１０はＰ、ＴまたはＮに限定され；かつ／またはＺ_１１はＹ、Ｗ、Ｉ、Ｌ、Ｍ、Ｖ、ＴまたはＡに限定され；かつ／またはＺ_１２は、Ｎ、Ｓ、Ｔ、Ａ、ＩまたはＶに限定される。

配列番号２３１のＶＬ ＣＤＲ３配列は、図１５中の他のものとは明確に異なり、Ｋｖ１．３機能を阻害する抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＬ ＣＤＲ３モチーフ６：
Ｚ_１Ｚ_２Ｚ_３Ｚ_４Ｚ_５Ｚ_６Ｚ_７Ｚ_８Ｚ_９（配列番号４３５）
であり、ここで、Ｚ_１はＱまたはＮであり；Ｚ_２はＱまたはＮであり；Ｚ_３はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｚ_４はＹ、ＦまたはＷであり；Ｚ_５はＳ、ＴまたはＣであり；Ｚ_６はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｚ_７はＰであり；Ｚ_８はＹ、ＦまたはＷであり；Ｚ_９はＮまたはＱである。一部の実施形態では、Ｚ_１はＱに限定され；かつ／またはＺ_２はＱに限定され；かつ／またはＺ_３はＡに限定され；かつ／またはＺ_４はＹに限定され；かつ／またはＺ_５はＳに限定され；かつ／またはＺ_６はＡに限定され；かつ／またはＺ_７はＰに限定され；かつ／またはＺ_８はＹであり；かつ／またはＺ_９は、Ｎに限定される。

可変重鎖配列

ＶＨ配列アラインメント。上述のＶＨ配列の全てのアラインメントを図１７に示す。この図は、３つのＣＤＲ領域のおよその位置（太字、下線）および各配列に対応する配列番号を示す。

ユニークなＶＨ ＣＤＲ配列。図１７のＶＨのユニークなＣＤＲ配列のアラインメントを図１８に示す。図１８に示されるように、１９個のＶＨ配列には、１８個のユニークなＣＤＲ１配列、１８個のユニークなＣＤＲ２配列、および１８個のユニークなＣＤＲ３配列がある。

ＶＬ ＣＤＲコンセンサス配列。図１８に開示される配列、ならびに天然に存在するアミノ酸の構造／機能の特徴に基づいて、ＶＨ ＣＤＲのコンセンサス配列を決定することができる。

ＶＨ ＣＤＲ１について、１つのコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ１モチーフ５：
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５Ｘ_６Ｘ_７（配列番号４３６）
であり、ここで、Ｘ_１はＳ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｘ_２はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｎ、Ｑまたは非存在であり；Ｘ_３はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｇ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＮまたはＱであり；Ｘ_４はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＮまたはＱであり；Ｘ_５はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｘ６はＦ、Ｙ、Ｗ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｘ７はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｋ、ＲまたはＨである。一部の実施形態では、Ｘ_１はＴまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_２はＴ、Ｓ、Ｎまたは非存在に限定され；かつ／またはＸ_３はＹ、Ｇ、Ｋ、Ｄ、Ｉ、Ａ、ＳまたはＮに限定され；かつ／またはＸ_４はＹ、Ｓ、Ｆ、ＮまたはＳに限定され；かつ／またはＸ_５はＹ、Ａ、Ｇ、Ｔ、ＷまたはＳに限定され；かつ／またはＸ６はＷ、ＩまたはＭに限定され；かつ／またはＸ７は、Ｔ、Ｓ、Ｇ、Ｎ、Ｅ、Ａ、ＹまたはＨに限定される。

配列番号３０６のＶＨ ＣＤＲ１配列は、図１７中の他のものとは明確に異なり、Ｋｖ１．３機能を阻害する抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ１モチーフ６：
Ｘ_１Ｘ_２Ｘ_３Ｘ_４Ｘ_５（配列番号４３７）
であり、ここで、Ｘ_１はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｘ_２はＮまたはＱであり；Ｘ_３はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｘ_４はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｘ_５はＳ、ＴまたはＣである。一部の実施形態では、Ｘ_１はＩに限定され；かつ／またはＸ_２はＮに限定され；かつ／またはＸ_３はＧに限定され；かつ／またはＸ_４はＭに限定され；かつ／またはＸ_５は、Ｓに限定される。

ＶＨ ＣＤＲ２について、１つのコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ２モチーフ５：
Ｙ_１Ｙ_２Ｙ_３Ｙ_４Ｙ_５Ｙ_６Ｙ_７Ｙ_８Ｙ_９Ｙ_１０Ｙ_１１Ｙ_１２Ｙ_１３Ｙ_１４Ｙ_１５Ｙ_１６Ｙ_１７（配列番号４３８）
であり、ここで、Ｙ_１はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｙ_２はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｆ、ＷまたはＹであり；Ｙ_３はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｐ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、ＮまたはＱであり；Ｙ_４はＦ、Ｙ、Ｗ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｐ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｙ_５はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｙ、Ｆ、Ｗ、Ｄ、Ｅ、Ｋ、ＲまたはＨであり；Ｙ_６はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｙ_７はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｙ_８はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｎ、Ｑ、Ｄ、Ｅ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｎ、Ｑまたは非存在であり；Ｙ_９はＦ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｎ、Ｑ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｙ_１０はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｄ、Ｅ、Ｎ、Ｑ、Ｓ、ＴまたはＣであり；Ｙ_１１はＹ、ＦまたはＷであり；Ｙ_１２はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｎ、Ｑ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、ＤまたはＥであり；Ｙ_１３はＰ、Ｎ、Ｑ、ＥまたはＤであり；Ｙ_１４はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｋ、ＲまたはＨであり；Ｙ_１５はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｆ、ＹまたはＷであり；Ｙ_１６はＫ、Ｒ、Ｈ、ＮまたはＱであり；Ｙ_１７はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧである。一部の実施形態では、Ｙ_１はＡ、Ｖ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、ＧまたはＱに限定され；かつ／またはＹ_２はＩ、ＶまたはＦに限定され；かつ／またはＹ_３はＡ、Ｐ、Ｓ、Ｇ、ＬまたはＮに限定され；かつ／またはＹ_４はＹ、Ｇ、Ｎ、Ｐ、Ｗ、ＳまたはＴに限定され；かつ／またはＹ_５はＳ、Ａ、Ｙ、Ｄ、Ｅ、ＫまたはＧに限定され；かつ／またはＹ_６はＧ、ＤまたはＳに限定され；かつ／またはＹ_７はＧ、Ｄ、Ｅ、Ｖ、Ｓまたは非存在に限定され；かつ／またはＹ_８はＳ、Ｎ、Ｄ、Ｒ、Ｔ、Ａ、Ｇ、Ｉ、Ｎまたは非存在に限定され；かつ／またはＹ_９はＦ、Ｔ、ＮまたはＡに限定され；かつ／またはＹ_１０はＹ、Ｄ、Ｎ、Ｓ、ＷまたはＴに限定され；かつ／またはＹ１１はＹまたはＦに限定され；かつ／またはＹ１２はＳ、Ｔ、Ｎ、Ａ、ＲまたはＥに限定され；かつ／またはＹ１３はＰ、Ｑ、ＥまたはＤに限定され；かつ／またはＹ１４はＳ、ＡまたはＫに限定され；かつ／またはＹ１５はＬ、Ｆ、ＭまたはＶに限定され；かつ／またはＹ１６はＫまたはＱに限定され；かつ／またはＹ１７は、ＳまたはＧに限定される。

配列番号３０６のＶＨ ＣＤＲ２配列は、図１７中の他のものとは明確に異なり、Ｋｖ１．３機能を阻害する抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ２モチーフ６：
Ｙ_１Ｙ_２Ｙ_３Ｙ_４Ｙ_５Ｙ_６Ｙ_７Ｙ_８Ｙ_９Ｙ_１０Ｙ_１１Ｙ_１２Ｙ_１３Ｙ_１４Ｙ_１５Ｙ_１６Ｙ_１７（配列番号４３９）
であり、ここで、Ｙ_１はＳ、ＴまたはＣであり；Ｙ_２はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｙ_３はＮまたはＱであり；Ｙ_４はＳ、ＴまたはＣであり；Ｙ_５はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｙ_６はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｙ_７はＥまたはＤであり；Ｙ_８はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｙ_９はＳ、ＴまたはＣであり；Ｙ_１０はＮまたはＱであり；Ｙ_１１はＹ、ＦまたはＷであり；Ｙ_１２はＲ、ＫまたはＨであり；Ｙ_１３はＤまたはＥであり；Ｙ_１４はＳ、ＴまたはＣであり；Ｙ_１５はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ ＡまたはＧであり；Ｙ_１６はＫ、ＲまたはＨであり；Ｙ_１７はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧである。一部の実施形態では、Ｙ_１はＳに限定され；かつ／またはＹ_２はＩに限定され；かつ／またはＹ_３はＮに限定され；かつ／またはＹ_４はＳに限定され；かつ／またはＹ_５はＧに限定され；かつ／またはＹ_６はＧに限定され；かつ／またはＹ_７はＥに限定され；かつ／またはＹ_８はＩに限定され；かつ／またはＹ_９はＴに限定され；かつ／またはＹ_１０はＮに限定され；かつ／またはＹ_１１はＹに限定され；かつ／またはＹ_１２はＲに限定され；かつ／またはＹ_１３はＤに限定され；かつ／またはＹ_１４はＳに限定され；かつ／またはＹ_１５はＶに限定され；かつ／またはＹ_１６はＫに限定され；かつ／またはＹ_１７は、Ｇに限定される。

ＶＨ ＣＤＲ３について、１つのコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ３モチーフ５：
Ｚ_１Ｚ_２Ｚ_３Ｚ_４Ｚ_５Ｚ_６Ｚ_７Ｚ_８Ｚ_９Ｚ_１０Ｚ_１１Ｚ_１２Ｚ_１３Ｚ_１４Ｚ_１５Ｚ_１６（配列番号４４０）
であり、ここで、Ｚ_１はＮ、Ｑ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｒ、Ｋ、Ｈ、Ｄ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｚ_２はＲ、Ｋ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｐ、Ｆ、Ｙ、Ｗまたは非存在であり；Ｚ_３はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｐ、Ｒ、Ｋ、Ｈまたは非存在であり；Ｚ_４はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｄ、Ｅ、Ｎ、Ｑまたは非存在であり；Ｚ_５はＦ、Ｙ、Ｗ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｚ_６はＦ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇまたは非存在であり；Ｚ_７はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｋ、Ｒ、Ｈまたは非存在であり；Ｚ_８はＳ、Ｔ、Ｃ、Ｆ、Ｙ、Ｗまたは非存在であり；Ｚ_９はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｐ、Ｆ、Ｙ、Ｗ、Ｑ、Ｎまたは非存在であり；Ｚ_１０はＦ、Ｙ、Ｗ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｚ_１１はＰ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｚ_１２はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｐ、Ｆ、Ｙ、Ｗまたは非存在であり；Ｚ_１３はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｄ、Ｓ、Ｔ、Ｃまたは非存在であり；Ｚ_１４はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇまたは非存在であり；Ｚ_１５はＥ、Ｄ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｑ、Ｎまたは非存在であり；Ｚ_１６はＦ、Ｙ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｃ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ａ、Ｇ、ＤまたはＥである。一部の実施形態では、Ｚ_１はＮ、Ａ、Ｒ、Ｄ、Ｇ、Ｓまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_２はＲ、Ｓ、Ｖ、Ｔ、Ｐ、Ｗまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_３はＧ、Ｔ、Ｌ、Ｐ、Ｒまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_４はＡ、Ｗ、Ｙ、Ｄ、Ｎまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_５はＹ、Ｌ、Ｇ、Ｔまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_６はＹ、Ｓ、Ｇ、Ｌまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_７はＳ、Ｔ、Ｋ、Ｒまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_８はＴ、Ｙ、Ｗまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_９はＧ、Ｐ、Ｙ、Ｑまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１０はＹ、Ｌ、Ｉ、Ｔ、Ｓ、Ｇまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１１はＰ、Ａ、Ｇ、Ｖ、Ｔ、Ｉ、Ｓまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１２はＧ、Ｓ、Ｐ、Ｖ、Ｆ、Ａ、Ｔまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１３はＧ、Ｎ、Ｅ、Ｄ、Ｔ、Ａ、Ｓまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１４はＹ、Ｆ、Ｗ、Ｌまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１５はＥ、Ｄ、Ｇ、Ｓ、Ｑ、Ｉまたは非存在に限定され；かつ／またはＺ_１６は、Ｙ、Ｓ、ＭまたはＤに限定される。

配列番号３０６のＶＨ ＣＤＲ３配列は、図１７中の他のものとは明確に異なり、Ｋｖ１．３機能を阻害する抗体に由来することに特に注目すると、代替的なコンセンサス配列は、ＶＨ ＣＤＲ３モチーフ６：
Ｚ_１Ｚ_２Ｚ_３Ｚ_４Ｚ_５Ｚ_６Ｚ_７（配列番号４４１）
であり、ここで、Ｚ_１はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｚ_２はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｚ_３はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｚ_４はＶ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、ＡまたはＧであり；Ｚ_５はＹ、ＦまたはＷであり；Ｚ_６はＤまたはＥであり；Ｚ_７はＹ、ＦまたはＷである。一部の実施形態では、Ｚ１はＧに限定され；かつ／またはＺ２はＩに限定され；かつ／またはＺ３はＶに限定され；かつ／またはＺ４はＡに限定され；かつ／またはＺ５はＹに限定され；かつ／またはＺ６はＤに限定され；かつ／またはＺ７は、Ｙに限定される。

ＣＤＲの基準構造

開示されるラマ由来の抗Ｋｖ１．３抗体（表７）に関連する可能性のある基準構造を決定するために、各抗Ｋｖ１．３クローンの軽鎖および重鎖可変領域を、「ＳＡｂＤＡｂ」構造抗体データベース（Ｄｕｎｂａｒら（２０１４年）、Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、４２巻：Ｄ１１４０〜Ｄ１１４６頁）における配列分析に提出した。ＲＳＣＢ
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ（ＰＤＢ）で最も高い同一性パーセンテージを有する構造をＰｙＩｇＣｌａｓｓｉｆｙデータベースにおいてさらに分析して、関連するＣＤＲループのコンフォメーションを特定した。一部の事例において、同一性パーセントが同じである１つを超えるＰＤＢ構造がＳＡｂＤＡｂ分析によって特定された。こうした場合は、ＰｙＩｇＣｌａｓｓｉｆｙデータベースを用いて、各ＰＤＢヒットに関する基準構造を決定した（表８）。

この分析に基づくと、抗Ｋｖ１．３抗体は、以下のＰＤＢ構造で構成され得る：５ｉ１ｄ、３ｑｏｓ、５ｋｎａ、５ｋｍｖ、５ｔｚｔ、４ｌｋｘ、４ｏｊｆ、４ｈｉｘ、４ｚｓ７、５ｆ６ｉ、４ｒａｖおよび４ｏ９ｈ．

ＰＤＢ構造に基づくと、抗Ｋｖ１．３抗体は、以下の基準ＣＤＲ構造を有し得る：Ｈ１
ＣＤＲはＨ１−１３−１、Ｈ１−１４−１またはＨ１−１５−ｃｉｓ１１−＊であり；Ｈ２ ＣＤＲはＨ２−１０−１２、Ｈ２−９−１、Ｈ２−１０−２またはＨ２−１０−６であり；Ｈ３ ＣＤＲはＨ３−１２−＊、Ｈ３−１０−＊、Ｈ３−１１−＊、Ｈ３−１４−＊またはＨ３−８−２であり；Ｌ１ ＣＤＲはＬ１−１７−１、Ｌ１−１６−１、Ｌ１−１４−２またはＬ１−１４−１であり；Ｌ２ ＣＤＲはＬ２−８−１またはＬ２−８−２であり；Ｌ３ ＣＤＲはＬ３−９−ｃｉｓ７−１、Ｌ３−１０−ｃｉｓ６−＊、Ｌ３−９−＊またはＬ３−１０−＊である。

抗Ｋｖ１．３抗体クローン１Ａ３が、発見された他の抗体とは明確に異なり、Ｋｖ１．３活性を阻害することに特に注目すると、抗Ｋｖ１．３抗体の関連するＰＤＢ構造は、５ｉ１ｄまたは３ｑｏｓを含み得る（表８）。これらのＰＤＢ構造の割り当てに基づくと、機能的に阻害するＫｖ１．３抗体は、以下の基準ＣＤＲ配列を含み得る：Ｈ１ ＣＤＲはＨ１−１３−１であり；Ｈ２ ＣＤＲはＨ２−１０−１２であり；Ｈ３ ＣＤＲはＨ３−１２−＊であり；Ｌ１ ＣＤＲはＬ１−１７−１であり；Ｌ２ ＣＤＲはＬ２−８−１であり、Ｌ３ ＣＤＲはＬ３−９−ｃｉｓ７−１である。

本開示の主題を前述の例証的な実施形態において記載および例示したが、本開示はほんの一例としてなされたこと、そして本開示の主題の実施に関する詳細には、以下の特許請求の範囲によってのみ限定される本開示の主題の趣旨および範囲から逸脱することなく多数の変更が行われ得ることが理解される。

Claims (1)

1. 本明細書に記載の発明。
   

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