JP2021535409A - 核酸に基づく検出方法 - Google Patents
核酸に基づく検出方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021535409A JP2021535409A JP2021534832A JP2021534832A JP2021535409A JP 2021535409 A JP2021535409 A JP 2021535409A JP 2021534832 A JP2021534832 A JP 2021534832A JP 2021534832 A JP2021534832 A JP 2021534832A JP 2021535409 A JP2021535409 A JP 2021535409A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- nucleic acid
- molecule
- region
- immobilized
- oligonucleotide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 277
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 203
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 203
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 50
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 86
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims abstract description 70
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 269
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 claims description 215
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 114
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 78
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 77
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 47
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 45
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 40
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 35
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 35
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 30
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical group N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 29
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 28
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 26
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 22
- -1 polyethylene Polymers 0.000 claims description 22
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims description 21
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 19
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 18
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 15
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 15
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 15
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 14
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 13
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 13
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 13
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 12
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 11
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims description 10
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 10
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 10
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 8
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 8
- 239000002923 metal particle Substances 0.000 claims description 8
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 claims description 8
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims description 7
- 239000011324 bead Substances 0.000 claims description 7
- 239000010408 film Substances 0.000 claims description 7
- 239000002071 nanotube Substances 0.000 claims description 7
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 claims description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 7
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 claims description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 6
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 claims description 6
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 6
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 6
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 6
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 claims description 6
- 229920002239 polyacrylonitrile Polymers 0.000 claims description 6
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 claims description 6
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 claims description 6
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 claims description 6
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 claims description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 6
- 229910052814 silicon oxide Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 5
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 claims description 5
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 5
- RVTZCBVAJQQJTK-UHFFFAOYSA-N oxygen(2-);zirconium(4+) Chemical compound [O-2].[O-2].[Zr+4] RVTZCBVAJQQJTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 5
- 229910001928 zirconium oxide Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 4
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 4
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 claims description 4
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims description 4
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims description 4
- 239000002121 nanofiber Substances 0.000 claims description 4
- 229910052755 nonmetal Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 4
- AUTOLBMXDDTRRT-JGVFFNPUSA-N (4R,5S)-dethiobiotin Chemical group C[C@@H]1NC(=O)N[C@@H]1CCCCCC(O)=O AUTOLBMXDDTRRT-JGVFFNPUSA-N 0.000 claims description 3
- 229920003043 Cellulose fiber Polymers 0.000 claims description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 3
- 229920012266 Poly(ether sulfone) PES Polymers 0.000 claims description 3
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 claims description 3
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 claims description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 3
- 150000001540 azides Chemical group 0.000 claims description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims description 3
- 238000000835 electrochemical detection Methods 0.000 claims description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 3
- 230000000762 glandular Effects 0.000 claims description 3
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 claims description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000000693 micelle Substances 0.000 claims description 3
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 claims description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 claims description 3
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 claims description 3
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 3
- 229920000049 Carbon (fiber) Polymers 0.000 claims description 2
- 229920001410 Microfiber Polymers 0.000 claims description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000004917 carbon fiber Substances 0.000 claims description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000003658 microfiber Substances 0.000 claims description 2
- 239000002557 mineral fiber Substances 0.000 claims description 2
- 229920005594 polymer fiber Polymers 0.000 claims description 2
- HBMJWWWQQXIZIP-UHFFFAOYSA-N silicon carbide Chemical compound [Si+]#[C-] HBMJWWWQQXIZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910010271 silicon carbide Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 claims description 2
- MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N Zirconium dioxide Chemical compound O=[Zr]=O MCMNRKCIXSYSNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 108091029845 Aminoallyl nucleotide Chemical group 0.000 claims 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 claims 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims 1
- 210000004880 lymph fluid Anatomy 0.000 claims 1
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 abstract description 33
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 34
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 22
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 19
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 19
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 18
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 description 16
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 15
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 15
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 230000008859 change Effects 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 10
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 10
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 10
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 10
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 8
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 8
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 8
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 8
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001349468 Elona Species 0.000 description 6
- 101710148592 PTS system fructose-like EIIA component Proteins 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 6
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108091008102 DNA aptamers Proteins 0.000 description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 5
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 5
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IIRDTKBZINWQAW-UHFFFAOYSA-N hexaethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCCOCCO IIRDTKBZINWQAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 5
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 5
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 4
- 101100245381 Caenorhabditis elegans pbs-6 gene Proteins 0.000 description 4
- 101000617478 Escherichia coli (strain K12) PTS system fructose-like EIIA component Proteins 0.000 description 4
- 101000617479 Escherichia coli (strain K12) PTS system fructose-like EIIA component Proteins 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004642 Polyimide Substances 0.000 description 4
- 108091008103 RNA aptamers Proteins 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 238000002820 assay format Methods 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 4
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 4
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 4
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 4
- 229920001721 polyimide Polymers 0.000 description 4
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 239000005517 L01XE01 - Imatinib Substances 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 3
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 3
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000003271 compound fluorescence assay Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- KTUFNOKKBVMGRW-UHFFFAOYSA-N imatinib Chemical compound C1CN(C)CCN1CC1=CC=C(C(=O)NC=2C=C(NC=3N=C(C=CN=3)C=3C=NC=CC=3)C(C)=CC=2)C=C1 KTUFNOKKBVMGRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002411 imatinib Drugs 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 108091008104 nucleic acid aptamers Proteins 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 2
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 2
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 2
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 2
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 2
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 2
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical group C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920000592 inorganic polymer Polymers 0.000 description 2
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- FABPRXSRWADJSP-MEDUHNTESA-N moxifloxacin Chemical compound COC1=C(N2C[C@H]3NCCC[C@H]3C2)C(F)=CC(C(C(C(O)=O)=C2)=O)=C1N2C1CC1 FABPRXSRWADJSP-MEDUHNTESA-N 0.000 description 2
- 229960003702 moxifloxacin Drugs 0.000 description 2
- FSVCQIDHPKZJSO-UHFFFAOYSA-L nitro blue tetrazolium dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 FSVCQIDHPKZJSO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000005424 photoluminescence Methods 0.000 description 2
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000010970 precious metal Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 2
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000004065 semiconductor Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 108091069025 single-strand RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-L (5-bromo-4-chloro-1h-indol-3-yl) phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP([O-])(=O)[O-])=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- ZTOJFFHGPLIVKC-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2-[(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound S1C2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N(CC)C1=NN=C1SC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=C2N1CC ZTOJFFHGPLIVKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YBJHBAHKTGYVGT-ZXFLCMHBSA-N 5-[(3ar,4r,6as)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoic acid Chemical compound N1C(=O)N[C@H]2[C@@H](CCCCC(=O)O)SC[C@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZXFLCMHBSA-N 0.000 description 1
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 1
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP(O)(=O)O)=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 5-bromouracil Chemical compound BrC1=CNC(=O)NC1=O LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KSNXJLQDQOIRIP-UHFFFAOYSA-N 5-iodouracil Chemical compound IC1=CNC(=O)NC1=O KSNXJLQDQOIRIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 229920000297 Rayon Polymers 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 108091027076 Spiegelmer Proteins 0.000 description 1
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 1
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- BWNWNEWZNHNYHH-UHFFFAOYSA-N aminophosphonic acid;morpholine Chemical compound NP(O)(O)=O.C1COCCN1 BWNWNEWZNHNYHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000002041 carbon nanotube Substances 0.000 description 1
- 229910021393 carbon nanotube Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- VYXSBFYARXAAKO-WTKGSRSZSA-N chembl402140 Chemical compound Cl.C1=2C=C(C)C(NCC)=CC=2OC2=C\C(=N/CC)C(C)=CC2=C1C1=CC=CC=C1C(=O)OCC VYXSBFYARXAAKO-WTKGSRSZSA-N 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- HGCIXCUEYOPUTN-UHFFFAOYSA-N cis-cyclohexene Natural products C1CCC=CC1 HGCIXCUEYOPUTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- PGUYAANYCROBRT-UHFFFAOYSA-N dihydroxy-selanyl-selanylidene-lambda5-phosphane Chemical compound OP(O)([SeH])=[Se] PGUYAANYCROBRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000003891 environmental analysis Methods 0.000 description 1
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000010429 evolutionary process Effects 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000004186 food analysis Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000005283 ground state Effects 0.000 description 1
- 239000003673 groundwater Substances 0.000 description 1
- ACCCMOQWYVYDOT-UHFFFAOYSA-N hexane-1,1-diol Chemical class CCCCCC(O)O ACCCMOQWYVYDOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000012804 iterative process Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 238000012125 lateral flow test Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M malachite green Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940107698 malachite green Drugs 0.000 description 1
- 229910001437 manganese ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004001 molecular interaction Effects 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 238000010397 one-hybrid screening Methods 0.000 description 1
- 238000004204 optical analysis method Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 1
- CMPQUABWPXYYSH-UHFFFAOYSA-N phenyl phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=CC=C1 CMPQUABWPXYYSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L phosphoramidate Chemical compound NP([O-])([O-])=O PTMHPRAIXMAOOB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N pibenzimol Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(N=C(N2)C=3C=C4NC(=NC4=CC=3)C=3C=CC(O)=CC=3)C2=C1 INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000003345 scintillation counting Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
- 238000004457 water analysis Methods 0.000 description 1
- 235000008939 whole milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000002759 woven fabric Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
- B01L3/5023—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures with a sample being transported to, and subsequently stored in an absorbent for analysis
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
- B01L3/5027—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip
- B01L3/502761—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures by integrated microfluidic structures, i.e. dimensions of channels and chambers are such that surface tension forces are important, e.g. lab-on-a-chip specially adapted for handling suspended solids or molecules independently from the bulk fluid flow, e.g. for trapping or sorting beads, for physically stretching molecules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase
- C12Q1/6837—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase using probe arrays or probe chips
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2200/00—Solutions for specific problems relating to chemical or physical laboratory apparatus
- B01L2200/06—Fluid handling related problems
- B01L2200/0647—Handling flowable solids, e.g. microscopic beads, cells, particles
- B01L2200/0663—Stretching or orienting elongated molecules or particles
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
- B01L2300/0627—Sensor or part of a sensor is integrated
- B01L2300/0636—Integrated biosensor, microarrays
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
- B01L2300/0627—Sensor or part of a sensor is integrated
- B01L2300/0663—Whole sensors
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/06—Auxiliary integrated devices, integrated components
- B01L2300/069—Absorbents; Gels to retain a fluid
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
- B01L2300/0825—Test strips
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/12—Specific details about materials
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2563/00—Nucleic acid detection characterized by the use of physical, structural and functional properties
- C12Q2563/107—Nucleic acid detection characterized by the use of physical, structural and functional properties fluorescence
Abstract
Description
本発明は、支持体からの核酸分子(例えば、アプタマー)の変位と、相補的オリゴヌクレオチド(例えば、捕捉オリゴヌクレオチド)へのハイブリッド形成による前記核酸分子の続いて起こる再捕捉との組合わせを活用するアッセイに関する。
a)i)支持体;及び
ii)固定化オリゴヌクレオチド;及び
iii)標的分子と複合体を形成するように構成されている、標的分子に結合親和性を有する核酸分子
を含む第1の領域であって、
固定化オリゴヌクレオチド又は核酸分子は、支持体に直接的又は間接的に付着し、更に、固定化オリゴヌクレオチドは、核酸分子の核酸配列に少なくとも部分的に相補的である核酸配列を含み、核酸分子は、固定化オリゴヌクレオチドにハイブリダイズすることができる、第1の領域を含み、更に:
b)i)支持体;及び
ii)支持体に直接的又は間接的に付着した捕捉オリゴヌクレオチド
を含む更なる領域であって、
捕捉オリゴヌクレオチドは:
(1)捕捉オリゴヌクレオチドが、標的分子との複合体にある場合での核酸分子の核酸配列にハイブリダイズして核酸-分子-標的分子複合体を捕捉するように構成されている、核酸分子の核酸配列;又は
(2)捕捉オリゴヌクレオチドが、固定化オリゴヌクレオチドにハイブリダイズして固定化オリゴヌクレオチドを捕捉するように構成されている、固定化オリゴヌクレオチドの核酸配列
のいずれかに相補的である核酸配列を含む、更なる領域を含む、装置が提供される。
a)吸光パッド、
b)膜、例えばニトロセルロース膜;
c)1つ又は複数のコンペティター分子(competitor molecule);及び
d)1つ又は複数のコントロール分子。
a)試料を、複合体と相互作用させる工程であって、複合体は、
i)固定化オリゴヌクレオチド;及び
ii)核酸分子
を含み、固定化オリゴヌクレオチド及び/又は核酸分子は、支持体に直接的又は間接的に付着されており、固定化オリゴヌクレオチドは、核酸分子の核酸配列に少なくとも部分的に相補的である核酸配列を含み、核酸分子は、固定化オリゴヌクレオチドの一部にハイブリダイズすることができ、
核酸分子は、標的分子への結合親和性を有し、更に、核酸分子は、標的分子と複合体を形成するように構成されている、工程と:
b)標的分子が試料中に存在する場合、核酸分子を固定化オリゴヌクレオチドとの複合体から解離させて、標的分子-核酸分子複合体を形成する工程と;
c)核酸分子の核酸配列に相補的であるか、又は固定化オリゴヌクレオチドの核酸配列に少なくとも部分的に相補的である、核酸配列を含む捕捉オリゴヌクレオチドを用意する工程であって、核酸分子又は固定化オリゴヌクレオチドは。捕捉オリゴヌクレオチドの一部にハイブリダイズすることができる、工程と;
d)標的分子の存在又は非存在を検出する工程と
を含む、方法が提供される。
本発明のある特定の実施形態の詳細な説明
本発明のある特定の実施形態を、添付の図を参照して下でより詳細に説明する。
a)i)支持体;及び
ii)固定化オリゴヌクレオチド;及び
iii)標的分子と複合体を形成するように構成されている、標的分子に結合親和性を有する核酸分子
を含む第1の領域であって、
固定化オリゴヌクレオチド又は核酸分子は、支持体に直接的又は間接的に付着し、更に、固定化オリゴヌクレオチドは、核酸分子の核酸配列に少なくとも部分的に相補的である核酸配列を含み、核酸分子は固定化オリゴヌクレオチドにハイブリダイズすることができる、第1の領域を含み、更に:
b)i)支持体;及び
ii)支持体に直接的又は間接的に付着した捕捉オリゴヌクレオチド
を含む更なる領域であって、
捕捉オリゴヌクレオチドは:
(1)捕捉オリゴヌクレオチドが、標的分子との複合体にある場合での核酸分子の核酸配列にハイブリダイズして核酸-分子-標的分子複合体を捕捉するように構成されている、核酸分子の核酸配列;又は
(2)捕捉オリゴヌクレオチドが、固定化オリゴヌクレオチドにハイブリダイズして固定化オリゴヌクレオチドを捕捉するように構成されている、固定化オリゴヌクレオチドの核酸配列、
のいずれかに相補的である核酸配列を含む、更なる領域を含む、装置が提供される。
a)試料を、
i)固定化オリゴヌクレオチド;及び
ii)核酸分子であって、ここで、
固定化オリゴヌクレオチド及び/又は該核酸分子が支持体に直接的又は間接的に付着し、固定化オリゴヌクレオチドは、該核酸分子の核酸配列に少なくとも部分的に相補的である核酸配列を含み、
該核酸分子は固定化オリゴヌクレオチドの一部にハイブリダイズすることができ、
標的分子への結合親和性を有し、更に、
標的分子と複合体を形成するように構成されている、核酸分子
を含む複合体と、相互作用させる工程と:
b)標的分子が試料中に存在する場合、核酸分子を固定化オリゴヌクレオチドとの複合体から解離させて、標的分子-核酸分子複合体を形成する工程と;
c)核酸分子の核酸配列に相補的であるか、又は固定化オリゴヌクレオチドの核酸配列に少なくとも部分的に相補的である、核酸配列を含む捕捉オリゴヌクレオチドを用意する工程であって、
核酸分子又は固定化オリゴヌクレオチドは捕捉オリゴヌクレオチドの一部にハイブリダイズすることができる、
用意する工程と;
d)標的分子の存在又は非存在を検出する工程と、
を含む、方法が提供される。
それぞれのアプタマー選択サイクルは、以下のサブ工程を本質的に含む:
a)核酸分子ライブラリーの標的への結合工程;
b)標的結合核酸分子を標的未結合核酸分子から分離する工程;
c)標的結合核酸分子の回収;
d)回収核酸分子の増幅(例えば、DNA分子のPCR、RNA分子の逆転写PCR);及び
e)増幅産物からの関連する単鎖核酸の調製(例えば、ssDNA精製、in vitro RNA転写)。
本明細書に記載の装置及び方法は、試料中の標的分子の存在又は非存在を検出するのに及び/又は標的分子の量を定量化するのに使用するためのものである。本明細書で使用する場合「標的分子」という用語は、試験試料中に見いだすことができ、本明細書に記載の核酸分子に結合することができる分子を表す。
標的分子は試料中に含まれてもよい。試料は、全血、白血球、末梢血単核細胞、血漿、血清、痰、呼気、尿、精液、唾液、髄膜液、羊水、腺液、リンパ液、乳頭吸引物、気管支吸引物、滑液、関節吸引物、細胞、細胞抽出物、便、組織、組織生検、及び脳脊髄液を含むことができる。
適切には、固定化オリゴヌクレオチドは、その長さの少なくとも一部にわたって核酸分子の核酸配列にハイブリダイズするように構成されている核酸配列を含む。
ある特定の実施形態の装置は、支持体を含む第1の領域を含む。支持体は、膜又はビーズなどの固体状態の支持体を含むことができる。支持体は、二次元支持体、例えばマイクロプレート、又は三次元支持体、例えばビーズとすることができる。したがって、ある特定の実施形態では、支持体は、少なくとも1つの磁気ビーズを含むことができる。代替の実施形態では、支持体は、少なくとも1つのナノ粒子、例えば金ナノ粒子等を含むことができる。更に別の実施形態では、第1の領域の支持体は、マイクロタイター又はその他のアッセイプレート、ストリップ、膜、フィルム、ゲル、チップ、微粒子、ナノファイバー、ナノチューブ、ミセル、ミクロポア、ナノポア、及びバイオセンサー表面を含む。ある特定の実施形態では、バイオセンサー表面は、プローブチップ表面、バイオセンサーフローチャネル又は同様のものとすることができる。ある特定の実施形態では、更なる領域は支持体を含む。第1の領域及び更なる領域の支持体は、連続性の要素とすることができる。或いは、第1の領域及び更なる領域の支持体は、別々の要素とすることができる。
装置はまた、支持体を含む更なる領域を含む。更なる領域の支持体は、第1の領域の支持体と同一であっても異なっていてもよい。更なる領域は、第1の領域とは異なる容器又は装置に含まれてもよい。
ある特定の実施形態では、核酸分子は検出可能な標識を含む。ある特定の実施形態では、捕捉オリゴヌクレオチドは検出可能な分子を含む。ある特定の実施形態では、検出可能な標識は、蛍光基、例えば、蛍光/消光剤化合物である。蛍光/消光剤化合物は当技術分野で知られており、例えば、Mary Katherine Johansson、Methods in Molecular Biol. 335:Fluorescent Energy Transfer Nucleic Acid Probes: Designs and Protocols、2006年、Didenko、編、Humana Press、Totowa、NJ及びMarrasら、2002年、Nucl. Acids Res. 30、el22を参照されたい(両方とも参照により本明細書に組み込まれる)。
a)1つ又は複数のコンペティター分子;及び
b)1つ又は複数のコントロール分子、
を更に含むことができる。
本発明の第1の態様による装置は、いくつかの異なる形式で提供することができる。ある特定の実施形態では、装置はバイオセンサーとすることができる。バイオセンサーは多くの様々なフォーマットで見られる。更なる態様では、本発明は、本発明によるアプタマーを含むバイオセンサーに関する。
バイオセンサーアッセイ(バイオレイヤー干渉法- BLIを使用して小分子を検出するアプタマーベースのアッセイ)
オリゴヌクレオチド及びアプタマー
化学療法薬イマチニブに特異的な核酸分子(DNAアプタマー)を使用して、アッセイを実施した。アプタマーAは100ヌクレオチド長で、5'FAM(フルオレセイン)標識を含む。アプタマーAのヌクレオチド配列を下に示す:
捕捉オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列を下に示す:
revFOR-5'-GGAGAAAAAGAGCGTGGAT-3'(配列番号3)
REV-5'-CCTATGTCACCCTCAATGC-3'(配列番号4)。
バッファーBB(20mM Tris-HCl pH7.6、100mM NaCl、5mM KCl、2mM MgCl2、1mM CaCl2、0.01%Tween 20)をハイブリッド形成バッファーとして利用した。バッファーB&W(5mM Tris-HCl pH7.5、0.5mM EDTA、1M NaCl、0.01%Tween 20)を使用して、ビオチン化オリゴヌクレオチドをストレプトアビジンコーティング表面上へと固定化した。バッファーPBS6(10mM Na2HPO4/2mM KH2PO4、pH6.0、137mM NaCl、2.7mM KCl、2mM MgCl2、1mM CaCl2、0.01%Tween 20)をアッセイ中に結合バッファー及び洗浄バッファーとして利用した。標的分子は、がん処置に使用される化学療法剤(イマチニブ)である。ストック溶液1mg/mLをDMSOで調製し、-20℃で使用するまで保存した。
BLIとは、生体分子の相互作用を測定するための標識フリーの技術である。これは、2つの面:バイオセンサーチップ上の固定化リガンドの層と内部参照層から反射された白色光の干渉パターンの変化を分析する、光学分析技法である。バイオセンサーチップに結合した分子の数の任意の変化によって、リアルタイムで測定することができる干渉パターンのシフトが生じる。バイオセンサーに結合する又はこれから解離する分子のみが干渉パターンをシフトし、BLIセンサー上で反応プロファイルを生じることができる。非結合分子、周囲の媒体の屈折率の変化、又は流速の変化は、干渉パターンに影響を与えない。変位選択基準は、選択されたアプタマーの固定化配列と固定化オリゴヌクレオチドとの間の二重鎖形成に基づいた検出アッセイを開発する可能性を提供している。標的依存性の立体構造の変化は、二重構造からのアプタマーの放出につながる。ハイブリダイズした二重鎖からアプタマーの変位段階へのこういったスイッチを使用して、記録可能なシグナルを生じることができる。本明細書に記載の実験は、BLItz又はOctet QK instruments(ForteBio社、Pall Life Sciences社、米国)のいずれかを使用して行われた。
バイオセンサープローブ(Streptavidin-SA Dip&Read Biosensors、ForteBio社、Pall Life Sciences社、米国)上へのアプタマー固定化については、1.5μMアプタマーと1μM固定化オリゴヌクレオチドを、この混合物を95℃で10分間加熱し、即座に4℃に5分間冷却することによってバッファーBB中でプレハイブリダイズさせ、その後に、2×B&Wバッファーと1:1の比率で混合した。ストレプトアビジンコーティングプローブを、このプレハイブリッド形成混合物とともに5分間インキュベートした。バッファーPBS6で3回の洗浄工程(30秒、120秒、30秒)を実行して、緩く固定化したDNA物質を除去した。次いで、プローブを標的溶液(PBS6中20μM)とともに5分間インキュベートした。標的結合は、シグナルの減少として見られるアプタマー変位を引き起こす。溶出したアプタマー-標的複合体を、「再捕捉アッセイ」での後続の工程向けに回収した。
ビオチン化捕捉オリゴヌクレオチド「revFOR」及び「REV」を、ストレプトアビジンコーティングプローブを、それぞれ、オリゴヌクレオチドrevFOR及びREV(バッファーB&W中に1μM)と3分間インキュベートすることにより、別々のバイオセンサープローブ上へと固定化した。バッファーPBS6で3回の洗浄工程(30秒、60秒、30秒)を実行して、緩く固定化したオリゴヌクレオチド物質を除去した。次いで、プローブを、アプタマー変位アッセイ(上を参照)から得られた標的-溶出物質(アプタマー-標的複合体)とともに5分間インキュベートした。アプタマー-標的複合体が固定化捕捉オリゴヌクレオチド上で再捕捉される度に、陽性反応が記録される。
アプタマーを使用して様々なマトリックス/基質中の小分子を検出するマイクロタイタープレートベースの蛍光アッセイ(ELISA系アッセイ)
オリゴヌクレオチド及びアプタマー:
抗生物質モキシフロキサシンに特異的な核酸分子(DNAアプタマー)を使用して、アッセイを実施した。
バッファーBB(20mM Tris-HCl pH7.6、100mM NaCl、2mM MgCl2、1mM CaCl2、0.01%Tween 20)を、アッセイ中の結合、洗浄、及びハイブリッド形成のバッファーとして利用した。バッファーB&W(5mM Tris-HCl pH7.5、0.5mM EDTA、1M NaCl、0.01%Tween 20)を使用して、ビオチン化オリゴヌクレオチドをストレプトアビジンコーティング表面上へと固定化した。標的分子である抗生物質は、Sigma-Aldrich社、米国から入手した。5mM抗生物質のストック溶液をDMSOで調製し、-20℃で使用するまで保存した。試験は異なる4つの基質/マトリックスで実行した:ヒト血漿(HUMANPL32NCU2N、BiolVT社、英国);牛乳(有機全脂ミルク、Sainsbury's Supermarket)、河川水-フィルター滅菌済み、フィルター0.22μm、ESF-PV-25-022、CM Scientific社、英国);模擬尿(151.5mM尿素、64mM NaCl、30mM NaH2PO4、8.85mMクレアチニン、50mg/L BSA)。
アプタマーに一体化された蛍光マーカーを用いると、蛍光プレートリーダーアッセイによって、プロセスの様々な工程の後にアプタマーDNAの定量化が可能になる。
ストレプトアビジンコーティングMTP(Pierce Streptavidin Coated、HBC社、SuperBlock Blocking Bufferを含むBlack96-Wellプレート、Thermo Scientific社、米国)上へのアプタマー固定化については、0.75μMアプタマーと0.5μM固定化オリゴヌクレオチドを、この混合物を95℃で10分間加熱し、即座に4℃に5分間冷却することによってバッファーBB中でプレハイブリダイズさせ、その後に、2×B&Wバッファーと1:1の比率で混合した。MTPシェーカー(IKA SchuttlerMTS 4、IKA Werke GmbH & Co. KG社、ドイツ)で1000rpmで振とうしながら、室温で1時間、このプレハイブリッド形成混合物とともに、マイクロタイタープレートMTP 1をインキュベートした。固定化効率を、インキュベーション前後の入力蛍光及び出力蛍光をそれぞれ比較することによって決定した。これにより、ロードされたアプタマーのおおよその量を蛍光測定によって計算できる。
血漿と牛乳の両方の補正データが示すところは、良好な抗生物質濃度依存反応である。マトリックスのより高濃度の状態で潜在的に非特異的な結合の要素も観察された。このことは、アッセイ又はデータの正当性に影響しない:しかし、アッセイを使用して、これらのマトリックス中の残留物を正確に定量する場合は、正しい較正標準が必要となることを指示する。データはまた、河川水の異なる濃度についてシグナルの差がほとんどないことを示すが;アッセイにまったく影響がないことを示唆する。模擬尿の補正データは、抗生物質依存のシグナル上昇を示すが、試料の濃度が上昇するにつれてシグナルが減少することを示す。正しい較正標準が調製されている場合、これはアッセイの正当性に影響を与えない。
ビオチン化捕捉オリゴヌクレオチド「revFOR」を、固定化バッファー中、0.5μM捕捉オリゴヌクレオチドrevFORとともにMTPシェーカーで1000rpmで振とうしながら、室温で1時間インキュベートすることにより、MTP 2のストレプトアビジンコーティング表面上へと固定化した。捕捉オリゴヌクレオチドをロードしたプレート(MTP 2)をバッファーBBで広範囲に洗浄して、緩く固定化したDNAを除去した。MTP 1からの標的-溶出物質を、アプタマー変位アッセイ(上を参照)の後に、MTP 2(捕捉オリゴヌクレオチドで固定化)に移し、MTPシェーカーで1000rpmで振とうしながら室温で1時間インキュベートした。非捕捉物質をMTP 2から除去し、再捕捉アプタマーの量を蛍光測定によって決定した(洗浄して放出アプタマー及び任意の残留マトリックスを除去した後)。
データが示すところは、インプット物質と同じ標的濃度依存の傾向に従って、各マトリックスでアプタマーが再捕捉されたことである。血漿と牛乳では、明確なマトリックス濃度効果が見られる。アプタマーは、マトリックス濃度がより高い場合にはより少ない量において再捕捉された。このことは、アッセイ又はデータの正当性には影響しない;このことは、アッセイを使用して、これらのマトリックスの残留物を正確に定量する場合は、正しい較正標準曲線が必要となることを、単に示す。
上記のように、ビオチン標識モキシフロキサシンアプタマー(1500pmol)及び再捕捉オリゴヌクレオチド(revFOR又はREV、3400pmol)を使用して、アッセイを実施した。
データをプロットして、事前固定化ビオチン化オリゴの上昇がアプタマー結合の量(蛍光)へ及ぼす影響を実証した。図8に、固定化したフォワードオリゴと逆方向オリゴの両方ともが、それぞれ、5'末端又は3'末端のいずれかによってFAM標識アプタマーを捕捉できることを示す。図8に、ハイブリッド形成バッファーのpHがほとんど影響を与えないことも示す。各プロットは、プレートが「飽和点」に到達していることも示す。例えば、FAM標識アプタマー50pmolを添加すると、ビオチン化オリゴ50pmolまでローディングの増加が見られる。これ超では、更なるアプタマーは結合されない。インプットアプタマー2pmolは傾向を見るには不十分である。
・アプタマーの再捕捉は、pH6.8とpH7.4の両方にて選択バッファー(小分子選択に使用される最も一般的なバッファー)において可能である。
・ウェルあたりビオチン化捕捉オリゴ50pmolを使用する場合、再捕捉は濃度依存で線形である。
・必要に応じて、更なる最適化を行って、ローディングを改善することができる。
変位及び再捕捉アッセイ
変位アッセイと再捕捉アッセイを組み合わせて、単一アッセイで両方の要素を実証した。この実験では、アプタマーを固定化オリゴにハイブリダイズさせ、マイクロタイタープレート表面(プレートA)上へと固定化した。次いで、アプタマーを、第1のプレート(A)から変位させ、次いで、ビオチン化「捕捉オリゴ」で事前固定化した第2のプレート(B)上で再捕捉した。同じアプタマーと標的を様々な一般的なマトリックス(血漿、河川水、牛乳及び尿)で試験して、このプラットフォームの多様性を実証した。
このアッセイでは、プレート上に保持された蛍光標識アプタマーの量(標的-誘導変位後)を定量化し、標的濃度に対してプロットする(図11)。データは、第1のプレート(A)からの明確な標的濃度依存性の蛍光シグナルの損失を示し、アプタマーが標的によって変位されたことを示す(異なるマトリックスのそれぞれで)。
・アプタマー変位は、異なるいくつかのマトリックスにおいて濃度依存性の反応を示す。
・変位アプタマーを、ビオチン化「捕捉オリゴ」で事前固定化された第2のELISAプレート上で続いて再捕捉することができる。
・マトリックス(血漿等)又は標的分子の存在は、再捕捉を妨害しない。
3 アプタマー
5 固定化オリゴヌクレオチド
7 支持体
9 標的分子
11 標的分子-アプタマー複合体
13 第1の領域
15 更なる領域
100 装置
110 第1の領域
120 容器
120 更なる領域
130 更なる容器
140 検出分子
150 核酸分子
160 固定化オリゴヌクレオチド
170 標的分子
Claims (35)
- 試料中の標的分子の存在、非存在又はレベルを検出するための装置であって、
a)i)支持体;及び
ii)固定化オリゴヌクレオチド;及び
iii)標的分子と複合体を形成するように構成されている、標的分子に結合親和性を有する核酸分子
を含む第1の領域であって、
固定化オリゴヌクレオチド又は核酸分子は、支持体に直接的又は間接的に付着し、更に、固定化オリゴヌクレオチドは、核酸分子の核酸配列に少なくとも部分的に相補的である核酸配列を含み、核酸分子は、固定化オリゴヌクレオチドにハイブリダイズすることができる、第1の領域を含み、更に:
b)i)支持体;及び
ii)支持体に直接的又は間接的に付着した捕捉オリゴヌクレオチド
を含む更なる領域であって、
捕捉オリゴヌクレオチドが、核酸分子の核酸配列に少なくとも部分的に相補的である核酸配列を含み、ここで、捕捉オリゴヌクレオチドは、標的分子との複合体にある場合での核酸分子の核酸配列にハイブリダイズして核酸-分子-標的分子複合体を捕捉するように構成されている、更なる領域を含む、装置。 - 捕捉オリゴヌクレオチドが、標的分子との複合体にある場合での核酸分子の核酸配列にハイブリダイズして核酸-分子-標的分子複合体を捕捉するように構成されている、請求項1に記載の装置。
- 捕捉オリゴヌクレオチドとの複合体にある場合での核酸分子を検出するための検出手段を更に含む、請求項2に記載の装置。
- 核酸分子が、少なくとも1つの固定核酸配列の領域を含み、捕捉オリゴヌクレオチドが、核酸分子の固定核酸配列の領域に相補的である核酸配列を含む、請求項1に記載の装置。
- 核酸分子が、第1の固定核酸配列の領域及び第2の核酸配列領域を含み、任意選択で、第1の固定核酸配列の領域は、核酸分子の5'末端領域に位置し、第2の固定核酸配列の領域は、核酸分子の3'末端領域に位置する、請求項4に記載の装置。
- 支持体に付着したリンカー分子を含み、ここで、
リンカー分子は、核酸分子にハイブリダイズするように構成されており、更に、核酸分子をリンカー分子にハイブリダイズさせる場合、固定化オリゴヌクレオチドは、核酸分子にハイブリダイズするように構成されているか、又は
リンカー分子は、固定化オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするように構成されており、更に、固定化オリゴヌクレオチドをリンカー分子にハイブリダイズさせる場合、核酸分子は、固定化オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするように構成されている、請求項1に記載の装置。 - 捕捉オリゴヌクレオチド及び固定化オリゴヌクレオチド又は核酸分子を含む複合体の形成を検出するための検出手段を更に含む、請求項6に記載の装置。
- リンカー分子が、DNA分子又はRNA分子又は混合DNA/RNA分子であり、任意選択で、リンカー分子は、1つ又は複数の修飾ヌクレオチドを含む、請求項6又は7に記載の装置。
- ラテラルフローアッセイデバイスを含む、請求項1から8のいずれか一項に記載の装置。
- 第1の領域が、試料受容領域を含む、請求項1から9のいずれか一項に記載の装置。
- 第1の領域と更なる領域との間に流路を更に含み、任意選択で、流路は、膜、例えば、ニトロセルロース、ポリエチレン(PE)、ポリテトラフルオロエチレン(PTFE)、ポリプロピレン(PP)、酢酸セルロース(CA)、ポリアクリロニトリル(PAN)、ポリイミド(PI)、ポリスルホン(PS)、ポリエーテルスルホン(PES)の各膜又は酸化アルミニウム(Al2O3)、酸化シリコン(SiO2)及び/若しくは酸化ジルコニウム(ZrO2)を含む無機膜を含む、請求項1から10のいずれか一項に記載の装置。
- 第1の領域が、試料塗布ゾーンを含み、任意選択で、試料塗布ゾーンは、試料塗布パッドを含む、請求項1から11のいずれか一項に記載の装置。
- 第1の領域の支持体が、直接的又は間接的に付着した固定化オリゴヌクレオチド又は核酸分子を含む固定化ゾーンを含み、任意選択で、固定化ゾーンは、織合わせ繊維又は不織繊維を含み、任意選択で、不織布繊維は、セルロース繊維、ガラス繊維、炭化ケイ素繊維、ポリマー繊維、動物繊維(例えば、羊毛、絹)、炭素繊維、鉱物繊維、及び/又はマイクロ繊維から選択される、請求項1から12のいずれか一項に記載の装置。
- 第1の領域が、更なる領域から上流に提供される、請求項1から13のいずれか一項に記載の装置。
- 更なる領域が、捕捉オリゴヌクレオチドが間接的又は直接的に支持体に付着している捕捉ゾーンを含み、任意選択で、更なる領域が、複数の捕捉ゾーンを含み、それぞれの捕捉ゾーンは、支持体に直接的又は間接的に付着した捕捉オリゴヌクレオチドを含み、それぞれの捕捉オリゴヌクレオチドは、同一であっても異なっていてもよい、請求項1から14のいずれか一項に記載の装置。
- 第1の領域から下流に位置するコントロールゾーンを更に含み、コントロールゾーンは、更なる捕捉オリゴヌクレオチドを含み、任意選択で、複数のコントロールゾーンを含み、それぞれのコントロールゾーンは、捕捉オリゴヌクレオチドを含み、それぞれの捕捉オリゴヌクレオチドは、同一か又は異なる、請求項1から15のいずれか一項に記載の装置。
- 各コントロールゾーンのそれぞれの捕捉オリゴヌクレオチドが、異なる分子に結合するように構成されている、請求項16に記載の装置。
- 第1の領域及び更なる領域を囲むハウジングを更に含み、任意選択で、ハウジングは、試料導入ポートを更に含み、更に任意選択で、ハウジングは、検出ゾーン及び任意選択でコントロールゾーンに隣接する窓を更に含む、請求項1から17のいずれか一項に記載の装置。
- 第1の領域及び/又は更なる領域の支持体が、ビーズ、マイクロタイター又は他のアッセイプレート、ストリップ、膜、フィルム、ゲル、チップ、微粒子、ナノ粒子、ナノファイバー、ナノチューブ、ミセル、マイクロポア、ナノポア、及びバイオセンサー表面から独立して選択され、任意選択で、
第1の領域は第1の容器に含まれ、更なる領域は更なる容器に含まれる、請求項1から8のいずれか一項に記載の装置。 - 第1の領域及び更なる領域の固相がストリップ上に含まれ、任意選択で、
ストリップは、第1の領域と更なる領域との間に流路を更に含む、請求項19に記載の装置。 - a)吸光パッド、
b)膜、例えばニトロセルロース膜;
c)1つ又は複数のコンペティター分子;及び
d)1つ又は複数のコントロール分子
のうちの1つ又は複数を更に含む、請求項20に記載の装置。 - ストリップの少なくとも1つの端部及び試料を収容するように構成された容器を更に含み、任意選択で、
容器は試料導入領域を含む、請求項19から21のいずれか一項に記載の装置。 - 固定化オリゴヌクレオチド及び/又は捕捉オリゴヌクレオチドが、DNA分子、RNA分子、混合DNA/RNA分子、修飾DNA分子及び修飾RNA分子から選択される、請求項1から22のいずれか一項に記載の装置。
- 複数の固定化オリゴヌクレオチド、複数の捕捉オリゴヌクレオチド及び複数の核酸分子を含む、請求項1から23のいずれか一項に記載の装置。
- 核酸分子が、アプタマーであり、二本鎖アプタマー、単鎖アプタマー、及びその長さの少なくとも一部にわたって二本鎖であるアプタマーから任意選択で選択される、請求項1から24のいずれか一項に記載の装置。
- 核酸分子及び/又は固定化分子は検出可能な標識を含み、
任意選択で、検出可能な標識は、フルオロフォア、ナノ粒子、量子ドット、酵素、放射性同位体、予め定義された配列部分、ビオチン、デスチオビオチン、チオール基、アミン基、アジド、アミノアリル基、ジゴキシゲニン、抗体、触媒、コロイド状金属粒子、コロイド状非金属粒子、有機ポリマー、ラテックス粒子、ナノファイバー、ナノチューブ、デンドリマー、タンパク質、及びリポソームから選択され、
更に任意選択で、検出可能な標識は酵素であり、前記酵素は、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ウレアーゼ及びβ-ガラクトシダーゼから選択される、請求項1から25のいずれか一項に記載の装置。 - 試料が、全血、白血球、末梢血単核細胞、血漿、血清、痰、呼気、尿、精液、唾液、髄膜液、羊膜液、腺液、リンパ液、乳頭吸引物、気管支吸引物、滑液、関節吸引物、細胞、細胞抽出物、便、組織、組織生検、及び脳脊髄液から選択される生体試料である、請求項1から26のいずれか一項に記載の装置。
- 試料が、農業製品若しくは工業製品又は副産物、環境試料、水、食品、製造プロセスの試料、動物性産物、植物性産物及び細菌性産物に由来する、請求項1から27のいずれか一項に記載の装置。
- 標的分子が、有機又は無機の小分子、細胞、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、炭水化物、脂質、ウイルス、微生物、組織切片、イオン、ヌクレオチド、ヌクレオチド誘導体及び核酸から選択される、請求項1から28のいずれか一項に記載の装置。
- 試料中の標的分子の存在、非存在又は量を検出する方法であって、
a)試料を、複合体と相互作用させる工程であって、複合体は、
i)固定化オリゴヌクレオチド;及び
ii)核酸分子
を含み、固定化オリゴヌクレオチド及び/又は核酸分子は、支持体に直接的又は間接的に付着されており、固定化オリゴヌクレオチドは、核酸分子の核酸配列に少なくとも部分的に相補的である核酸配列を含み、核酸分子は、固定化オリゴヌクレオチドの一部にハイブリダイズすることができ、
核酸分子は、標的分子への結合親和性を有し、更に、核酸分子は、標的分子と複合体を形成するように構成されている、工程と:
b)標的分子が試料中に存在する場合、核酸分子を固定化オリゴヌクレオチドとの複合体から解離させて、標的分子-核酸分子複合体を形成する工程と;
c)核酸分子の核酸配列に少なくとも部分的に相補的である核酸配列を含む捕捉オリゴヌクレオチドを用意する工程であって、核酸分子は、捕捉オリゴヌクレオチドの一部にハイブリダイズすることができる、工程と;
d)標的分子の存在又は非存在を検出する工程と
を含む、方法。 - 標的分子が試料中に存在する場合、標的分子-核酸分子-捕捉オリゴヌクレオチド複合体を形成する工程を更に含む、請求項30に記載の方法。
- 試料中の標的分子の量を定量化する工程を更に含む、請求項30又は31に記載の方法。
- 標的分子の検出が、光子検出、電子検出、音響検出、電気化学検出、電気光学検出、酵素的検出、化学検出、生化学検出又は物理検出を含む、請求項30又は31に記載の方法。
- 工程(a)が、標的分子と核酸分子との間の結合を可能にするのに効果的な条件下で実施される、請求項30から33のいずれか一項に記載の方法。
- 標的分子の存在又は非存在を検出する工程が、核酸分子の捕捉オリゴヌクレオチドへのハイブリッド形成を検出する工程を含む、請求項30から34のいずれか一項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB1813789.3 | 2018-08-23 | ||
GBGB1813789.3A GB201813789D0 (en) | 2018-08-23 | 2018-08-23 | Nucleic acid based detection methods |
PCT/GB2019/052361 WO2020039201A1 (en) | 2018-08-23 | 2019-08-22 | Nucleic acid based detection methods |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021535409A true JP2021535409A (ja) | 2021-12-16 |
JPWO2020039201A5 JPWO2020039201A5 (ja) | 2022-06-15 |
Family
ID=63715252
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021534832A Pending JP2021535409A (ja) | 2018-08-23 | 2019-08-22 | 核酸に基づく検出方法 |
Country Status (13)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20220119883A1 (ja) |
EP (1) | EP3841218A1 (ja) |
JP (1) | JP2021535409A (ja) |
KR (1) | KR20210046747A (ja) |
CN (1) | CN113056564A (ja) |
AU (1) | AU2019323754A1 (ja) |
BR (1) | BR112021003226A2 (ja) |
CA (1) | CA3110399A1 (ja) |
GB (1) | GB201813789D0 (ja) |
MX (1) | MX2021002166A (ja) |
SG (1) | SG11202101573SA (ja) |
WO (1) | WO2020039201A1 (ja) |
ZA (1) | ZA202101530B (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP4080210A1 (en) * | 2021-04-20 | 2022-10-26 | Denso Corporation | Detection method |
EP4080219A1 (en) * | 2021-04-20 | 2022-10-26 | Denso Corporation | Conjugate |
CN114437709B (zh) * | 2021-09-15 | 2023-07-14 | 中国科学院海洋研究所 | 一种核酸功能化mof材料及其制备和应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006524993A (ja) * | 2003-05-07 | 2006-11-09 | コリス バイオコンセプト エスピーアールエル | 一ステップオリゴクロマトグラフィー装置及びその使用方法 |
WO2007109500A1 (en) * | 2006-03-16 | 2007-09-27 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Lateral flow devices |
WO2008038696A1 (fr) * | 2006-09-27 | 2008-04-03 | National University Corporation Tokyo University Of Agriculture And Technology | Procédé de dosage d'une substance cible dans un échantillon, aptamère et son procédé de fabrication |
WO2013147217A1 (ja) * | 2012-03-30 | 2013-10-03 | 国立大学法人九州大学 | センサ、検出方法、検出システム、及び、検出装置 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6242246B1 (en) * | 1997-12-15 | 2001-06-05 | Somalogic, Inc. | Nucleic acid ligand diagnostic Biochip |
DE10336809B4 (de) | 2003-08-07 | 2007-08-02 | Charité - Universitätsmedizin Berlin | EKG-System zur grossflächigen Messung von EKG-Signalen |
WO2012034177A1 (en) * | 2010-09-16 | 2012-03-22 | Australian Centre For Plant Functional Genomics Pty Ltd | Capture based nucleic acid detection |
WO2012172546A1 (en) * | 2011-06-15 | 2012-12-20 | Zak Naomi B | Target-recognition compositions comprising novel synthetic conjugates for trapping and diagnosis of a target molecule |
-
2018
- 2018-08-23 GB GBGB1813789.3A patent/GB201813789D0/en not_active Ceased
-
2019
- 2019-08-22 JP JP2021534832A patent/JP2021535409A/ja active Pending
- 2019-08-22 CN CN201980070011.8A patent/CN113056564A/zh active Pending
- 2019-08-22 SG SG11202101573SA patent/SG11202101573SA/en unknown
- 2019-08-22 US US17/270,318 patent/US20220119883A1/en active Pending
- 2019-08-22 EP EP19759021.9A patent/EP3841218A1/en active Pending
- 2019-08-22 KR KR1020217008692A patent/KR20210046747A/ko unknown
- 2019-08-22 CA CA3110399A patent/CA3110399A1/en active Pending
- 2019-08-22 AU AU2019323754A patent/AU2019323754A1/en not_active Abandoned
- 2019-08-22 BR BR112021003226-6A patent/BR112021003226A2/pt unknown
- 2019-08-22 MX MX2021002166A patent/MX2021002166A/es unknown
- 2019-08-22 WO PCT/GB2019/052361 patent/WO2020039201A1/en unknown
-
2021
- 2021-03-05 ZA ZA2021/01530A patent/ZA202101530B/en unknown
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006524993A (ja) * | 2003-05-07 | 2006-11-09 | コリス バイオコンセプト エスピーアールエル | 一ステップオリゴクロマトグラフィー装置及びその使用方法 |
WO2007109500A1 (en) * | 2006-03-16 | 2007-09-27 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Lateral flow devices |
WO2008038696A1 (fr) * | 2006-09-27 | 2008-04-03 | National University Corporation Tokyo University Of Agriculture And Technology | Procédé de dosage d'une substance cible dans un échantillon, aptamère et son procédé de fabrication |
WO2013147217A1 (ja) * | 2012-03-30 | 2013-10-03 | 国立大学法人九州大学 | センサ、検出方法、検出システム、及び、検出装置 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
SHENG GONG ET AL: "Immunochromatographic strip biosensor for the rapid detection of N-glycolylneuraminic acid based on", ANALYTICAL BIOCHEMISTRY, vol. vol.561-562, JPN6023022814, 20 July 2018 (2018-07-20), pages 52 - 58, ISSN: 0005081050 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA3110399A1 (en) | 2020-02-27 |
WO2020039201A1 (en) | 2020-02-27 |
MX2021002166A (es) | 2021-04-28 |
US20220119883A1 (en) | 2022-04-21 |
KR20210046747A (ko) | 2021-04-28 |
GB201813789D0 (en) | 2018-10-10 |
SG11202101573SA (en) | 2021-03-30 |
AU2019323754A1 (en) | 2021-04-08 |
EP3841218A1 (en) | 2021-06-30 |
BR112021003226A2 (pt) | 2021-05-18 |
ZA202101530B (en) | 2022-10-26 |
CN113056564A (zh) | 2021-06-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2604764T3 (es) | Análisis de muestras de ensayo | |
US7795009B2 (en) | Three-component biosensors for detecting macromolecules and other analytes | |
US7811809B2 (en) | Molecular biosensors for use in competition assays | |
JP2007525661A5 (ja) | ||
CN101208437A (zh) | 检测大分子和其它分析物的生物传感器 | |
JP2021535409A (ja) | 核酸に基づく検出方法 | |
WO2007142713A2 (en) | Methods for the production of highly sensitive and specific cell surface probes | |
EP2046998B1 (en) | Molecular biosensors for detecting macromolecules and other analytes | |
EP3907508A1 (en) | Lateral flow assay for detecting the presence of a specific mammalian cell or bacteria in a biological sample | |
US11231420B2 (en) | Selection and optimization of aptamers to recognize ebola markers | |
DE102011006612B3 (de) | Aminoglykosid-spezifische Aptamere | |
DE102011006610B3 (de) | Aptamere, die spezifisch sind für Immunoglobulin bindende Zellwandproteine | |
EP2774988B1 (de) | Fluorchinolone-spezifische Aptamere | |
CN113710803A (zh) | 针对伊马替尼的适体 | |
US20220049258A1 (en) | Aptamer against irinotecan | |
KR100607901B1 (ko) | 분자비콘을 이용한 특정물질의 동정 및 분석방법 | |
US9353421B2 (en) | Aptamers that are specific for immunoglobulin-binding cell wall proteins | |
Chovelon et al. | Noncompetitive Determination of Small Analytes by Sandwich-Type Lateral Flow Assay Based on an Aptamer Kissing Complex | |
CN112424371A (zh) | 蛋白质-多核苷酸缀合物的检测测定 | |
TWI454575B (zh) | 抗凝血蛋白原之適體、包含其之檢測套組與方法及其最適化篩選方法 | |
WO2023037016A1 (en) | Polypurine reverse hoogsteen hairpins and parallel clamps and their use as biosensors | |
Conforti et al. | Aptamer-Based Technologies as New Tools for Proteomics in Diagnosis and Therapy |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220607 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220607 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20230530 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230612 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230907 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20231129 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240115 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240415 |