JP2021523193A - 骨髄由来抑制細胞関連疾患の予防および治療用途 - Google Patents
骨髄由来抑制細胞関連疾患の予防および治療用途 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2021523193A JP2021523193A JP2020564084A JP2020564084A JP2021523193A JP 2021523193 A JP2021523193 A JP 2021523193A JP 2020564084 A JP2020564084 A JP 2020564084A JP 2020564084 A JP2020564084 A JP 2020564084A JP 2021523193 A JP2021523193 A JP 2021523193A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- mdsc
- cancer
- seq
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 54
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 54
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 title claims description 10
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title description 12
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title description 6
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 title description 2
- 102100025473 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Human genes 0.000 claims abstract description 136
- 101000914326 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Proteins 0.000 claims abstract description 136
- 238000001565 modulated differential scanning calorimetry Methods 0.000 claims abstract description 52
- 210000004985 myeloid-derived suppressor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 52
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 claims abstract description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 157
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 108
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 105
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 97
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 97
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 97
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 92
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 91
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 44
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 34
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 33
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 28
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 25
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 19
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 19
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 19
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 16
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 claims description 15
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 claims description 15
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 claims description 15
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 claims description 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 15
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 14
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 14
- 244000000013 helminth Species 0.000 claims description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 12
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 10
- 102100025470 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 8 Human genes 0.000 claims description 9
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 claims description 9
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 claims description 9
- 101000914320 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 8 Proteins 0.000 claims description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 9
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 claims description 9
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 8
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 claims description 6
- 230000030833 cell death Effects 0.000 claims description 6
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 claims description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 5
- 206010000871 Acute monocytic leukaemia Diseases 0.000 claims description 5
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000035489 Monocytic Acute Leukemia Diseases 0.000 claims description 5
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 5
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 claims description 4
- 241000222732 Leishmania major Species 0.000 claims description 4
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 claims description 4
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 4
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 claims description 4
- 241000223109 Trypanosoma cruzi Species 0.000 claims description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 claims description 4
- 210000005008 immunosuppressive cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000013223 septicemia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 4
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 241000605862 Porphyromonas gingivalis Species 0.000 claims description 3
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 claims description 3
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 claims description 3
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims description 2
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 claims description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims 11
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 claims 5
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 claims 4
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 claims 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims 2
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 claims 2
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 claims 2
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 claims 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 claims 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 claims 2
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 claims 2
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 claims 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims 2
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 claims 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 claims 2
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 claims 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 claims 2
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 claims 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 claims 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 24
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 abstract description 5
- 230000008685 targeting Effects 0.000 abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 39
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 38
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 25
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 25
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 24
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 24
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 23
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 21
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 21
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 20
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 230000006870 function Effects 0.000 description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 12
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 12
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 12
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 11
- 230000008859 change Effects 0.000 description 11
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 11
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 9
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 9
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 9
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 9
- 230000008569 process Effects 0.000 description 9
- 102100024533 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 8
- 108010062802 CD66 antigens Proteins 0.000 description 7
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 7
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 6
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 6
- 230000015861 cell surface binding Effects 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 102100035361 Cerebellar degeneration-related protein 2 Human genes 0.000 description 5
- 101000737796 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related protein 2 Proteins 0.000 description 5
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000000091 immunopotentiator Effects 0.000 description 5
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 5
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 5
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 4
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101000981093 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 101100182935 Penicillium citrinum MSDC gene Proteins 0.000 description 3
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 3
- 230000001926 lymphatic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 3
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 3
- HOZCHTFDGMSKNK-UHFFFAOYSA-N 6-methylspiro[4.5]dec-9-ene-10-carboxylic acid Chemical compound CC1CCC=C(C(O)=O)C11CCCC1 HOZCHTFDGMSKNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 2
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000005880 cancer cell killing Effects 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 2
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 2
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 2
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002501 natural regulatory T cell Anatomy 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229960003301 nivolumab Drugs 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 2
- 238000005549 size reduction Methods 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 2
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 2
- 210000004981 tumor-associated macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGJBKFAPBKOEGA-UHFFFAOYSA-M 2-methoxyethylmercury(1+);acetate Chemical compound COCC[Hg]OC(C)=O AGJBKFAPBKOEGA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PHKJVUUMSPASRG-UHFFFAOYSA-N 4-[4-chloro-5-(2,6-dimethyl-8-pentan-3-ylimidazo[1,2-b]pyridazin-3-yl)-1,3-thiazol-2-yl]morpholine Chemical compound CC=1N=C2C(C(CC)CC)=CC(C)=NN2C=1C(=C(N=1)Cl)SC=1N1CCOCC1 PHKJVUUMSPASRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWEOQOXTVHGIFQ-UHFFFAOYSA-N 8-anilinonaphthalene-1-sulfonic acid Chemical compound C=12C(S(=O)(=O)O)=CC=CC2=CC=CC=1NC1=CC=CC=C1 FWEOQOXTVHGIFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- 102000004452 Arginase Human genes 0.000 description 1
- 108700024123 Arginases Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 101100191768 Caenorhabditis elegans pbs-4 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 231100000023 Cell-mediated cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 206010057250 Cell-mediated cytotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102100021752 Corticoliberin Human genes 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 208000035859 Drug effect increased Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101000690301 Homo sapiens Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 1
- 101000895481 Homo sapiens Corticoliberin Proteins 0.000 description 1
- 101001116548 Homo sapiens Protein CBFA2T1 Proteins 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 241000219739 Lens Species 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 229940044665 STING agonist Drugs 0.000 description 1
- 229940126530 T cell activator Drugs 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-KCDKBNATSA-N aldehydo-L-fucose Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-KCDKBNATSA-N 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011394 anticancer treatment Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- -1 asparagine amino acid Chemical class 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 229940030156 cell vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000005890 cell-mediated cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000005713 exacerbation Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009033 hematopoietic malignancy Effects 0.000 description 1
- 102000054751 human RUNX1T1 Human genes 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000012308 immunohistochemistry method Methods 0.000 description 1
- 230000002434 immunopotentiative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 108010034897 lentil lectin Proteins 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 239000012516 mab select resin Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007310 pathophysiology Effects 0.000 description 1
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000013492 plasmid preparation Methods 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 1
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 description 1
- 230000006333 protein structural change Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
- C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Abstract
Description
(a)前記核酸分子または前記組換えベクターに形質転換された組換え細胞を準備する段階;
(b)前記核酸分子の十分な発現のための条件および/または期間で前記組換え細胞を培養する段階;および
(c)前記(b)段階で得られた培養物から抗−CD66c抗体またはその抗原結合断片を分離および/または精製する段階。
具体的な一例で、前記製造方法は、MDSCで発現するCD66cに結合する抗体およびその抗原結合断片を含む免疫増強剤、免疫活性化剤、またはMDSCによる免疫抑制能を減少または除去するための組成物に関するものである。
配列番号1または配列番号9のアミノ酸配列を含むCDR−H1、
配列番号2または配列番号10のアミノ酸配列を含むCDR−H2、
配列番号3のアミノ酸配列を含むCDR−H3、
配列番号4、配列番号11または配列番号12のアミノ酸配列を含むCDR−L1、
配列番号5のアミノ酸配列を含むCDR−L2、および
配列番号6または配列番号13のアミノ酸配列を含むCDR−L3である。
[数式]
蛍光値変異率=(高温条件で測定した蛍光値−低温条件で測定した蛍光値)/(低温条件で測定した蛍光値)
1.1. 抗−CD66c抗体遺伝子配列クローニング
8F5抗体遺伝子は、Mouse Ig−Primer Set(Millipore、Cat.#:69831)を用いてクローニングした。8F5ハイブリードマから分離したRNAからMouse Ig−Primer Setを用いてPCRを行い、これをpGem−Tベクター(Promega、Cat.#:A3600)に挿入した後、シーケンシングを通じてDNA塩基配列を確認し、IMGT site(www.imgt.org)を通じてマウス抗体遺伝子を確認した。分析された8F5抗体の重鎖および軽鎖可変領域配列は次の通りである。
前記製作された抗−CD66cマウス抗体8F5のアミノ酸配列に基づいて、抗−CD66cキメラ抗体を製作した。
抗−CD66cキメラ抗体の発現のために、重鎖発現用プラスミドと軽鎖発現用プラスミドをそれぞれ製作した。軽鎖発現用プラスミドはpOptiVEC(Invitrogen社)ベクターを使用し、重鎖発現用プラスミドはpcDNA3.3(Invitrogen社)ベクターを使用した。
前記製作されたpcDNA3.3−anti−CD66c重鎖発現プラスミドとpOptiVEC−anti−CD66c軽鎖発現プラスミドをCHO細胞由来のDG44細胞(Invitrogen)にトランスフェクション(transfection)させて形質転換過程を行った。
2.1 In silico Humanizationによる組換え抗体配列選定
マウスCD66c抗体、8F5(重鎖アミノ酸配列:7重鎖コーディングDNA:SEQ ID NO:62;軽鎖アミノ酸配列:SEQ ID NO:8;軽鎖コーディングDNA:SEQ ID NO:63)の重鎖、軽鎖それぞれのCDR部位配列(CDRH1:ASGYSFTDYTMN)SEQ ID NO:1、CDRH2:SEQ ID NO:2(LINPFHGGTVSNQRFKV);CDRH3:SEQ ID NO:3(VRGDPVRHYYALAY);CDRL1:SEQ ID NO:4(GASENVYGTL);CDRL2:SEQ ID NO:5(GATNLAD);CDRL3:SEQ ID NO:6(VATYYCQNVLSAPYT)をできるだけ類似するように維持して抗原結合力が同等であるか優れていれば、ヒト抗体遺伝子をコーディングしている生殖細胞系列(germline)の配列を基盤にしてフレームワーク領域(Framework region)に対する部位配列を組換えたヒト化抗体配列をin silico方法で選別した。マウスCD66c抗体8F5の重鎖、軽鎖のそれぞれ配列と最も類似性が高くてヒト化組換え抗体配列の主鎖(backbone)で使用したヒト抗体生殖細胞系列(germline)遺伝子は下表5の通りである。前記マウスCD66c抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域のアミノ酸配列と核酸配列、そして重鎖可変領域と軽鎖可変領域のCDR配列を下記表6に示す。
選別された抗体配列は、それぞれヒトIgG1重鎖不変領域とカッパ(kappa)軽鎖不変領域と連結してヒトIgG1形態に293T細胞で発現させた。トランスフェクション(transfection)した後、7日後に培養液はKanCap A resin(Kaneca社)を用いてヒト化組換え抗体を精製した。
2−3−1 細胞結合分析
発現させた96種のヒト化組換え抗体をそれぞれ同量(1ug)をCD66c陽性細胞であるA549非小細胞肺癌細胞株が入っている試験管に入れて4℃で30分間反応させた後にPBSで水洗し、FITC−conjugated goat anti−Human IgG(DiNona Inc、Korea)を入れて4℃で15分間反応した。再びPBSで水洗した後、フローサイトメーター(Stratedigm、S1000EXi)で分析してその結果を下記に記載した。
前記のように選定した8種のヒト化組換え抗体の中から、キメラ抗体に比べて細胞結合力を基準にして高い結合力を示す5種類のヒト化組換え抗体を選択し、これらをELISA方法でCD66c抗原および類似CD66抗原に対する結合力分析を実施した。
前記抗原および細胞結合様相を通じて選定した、前記実施例3.3の5種のヒト化組換え抗体を高い温度条件に放置して抗体の安定性を分析する実験を行った。
蛍光値変異率=(高温条件で測定した蛍光値−低温条件で測定した蛍光値)/(低温条件で測定した蛍光値)
前記実施例2.3で選定された5種のヒト化組換え抗体を実際大部分の治療用抗体を発現させるために使用するCHO細胞に発現させて分析した。選定された5種のヒト化組換え抗体を構成するための軽鎖および重鎖可変領域DNA配列をコドン最適化過程を経た後、合成してヒトIgG1不変領域遺伝子とoverlay PCR方法で連結してXhoIとEcoRI遺伝子切片でpcDNA3.4ベクター(Life Technology社)にクローニングした。前記表11は、CHO細胞発現のために選別されたヒト化抗体の軽鎖および重鎖組み合わせを示す。
大部分の治療用抗体を発現させるために使用するCHO細胞で抗CD66cに対するヒト化抗体であるDNP002を発現させて分析した。DNP002抗体の亜型による機能差を確認するためにIgG1タイプとIgG2タイプの抗体を製造した。
MDSCに対するDNP002抗体の反応性をフローサイトメトリー分析(flow cytometric analysis)を通じて確認した。
5.1.全体血液細胞(whole blood)内DNP002によるMDSC溶解効果
DNP002によるMDSC殺害効果を確認するために5人の胃癌患者血液に赤血球溶解バッファー1X RBC Lysis Buffer(ThermoFisher、Cat#:00−4333−57)を添加して赤血球を溶解させた後、12ウェルプレート(well plate)にウェル当たり1X105ずつ分注して準備した。DNP002抗体を各ウェルに10ug/mLになるように添加し、37℃インキュベータで一日培養した。培養後、PBSで洗浄し、各蛍光が異なって結合されたMDSC標識抗原に対する抗体(抗HLA−DR、CD11b、CD33抗体)と20分間4℃で反応させた。PBSで水洗した後、フローサイトメトリー分析を施行した。染色強度は蛍光強度に対するlogで測定し、10乗単位で表示した。
DNP002抗体のMDSCターゲット殺害能力をより明確にするために、成熟した好中球(neutrophil)を除いてMDSCのみを得て、好中球による影響なくDNP002抗体のMDSC死滅効果を確認した。
DNP002抗体のMDSCターゲット殺害能力を確認するために3つの類型のDNP002抗体製剤を準備した。抗体はisotypeによりNK細胞に発現したFcrRIII(CD16)の親和度に差が発生し、親和度に比例して抗体依存性細胞介在性細胞毒性(ADCC)が増加する。IgG2 isotypeはFcrRIIIに対する親和度が非常に低いため、ADCC効能がない反面、IgG1 isotypeはFcrRIIIに対する親和度が高いため、ADCC効能に優れている。抗体のADCC効能はisotypeだけでなく、抗体297番目アスパラギンアミノ酸に連結された糖鎖構造により変わるとみており、特に糖鎖にフコースがない場合、ADCC効能が増加する(Shitara K., et al, J Immunol Mehtods. 2005 Nov 30;306(1−2) IgG subclass−independent improvement of antibody−dependent cellular cytotoxicity by fucose removal from Asn297−linked oligosaccharides)。
DNP002抗体とナチュラルキラー細胞(Natural killer cell)の併用効果を確認するためにin vitro試験を行った。3人の正常血液からFicoll−Paque PLUS(Ge healthcare、Cat#:17−1440−02)溶液を用いてPBMCを分離した後、CD56 micro bead(Miltenyi Biotec、Cat#:130−050−401)を用いてCD56陽性ナチュラルキラー細胞のみを分離した。図12aおよび図12bで横軸はそれぞれ前記ナチュラルキラー細胞の起源である血液の供与者(donor)3人を意味する。
CEACAM6抗原は癌細胞だけでなく、MDSCにも発現するため、DNP002抗体を用いて癌細胞だけでなく、MDSCを検出することができる。これを確認するためにCEACAM6抗原が陽性であるか陰性である癌患者組織で癌細胞でなく、MDSCが検出されるのかを免疫組織化学染色(Immunohistochemistry)法で確認した。
Claims (26)
- 骨髄由来免疫抑制細胞(myeloid−derived suppressor cell、MDSC)で発現するCD66cに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含む、免疫活性増強剤。
- 前記免疫活性増強剤が、MDSCの活性、生成または死滅を調節することによってMDSCの免疫抑制能を除去または減少させるものである、請求項1に記載の免疫活性増強剤。
- 前記免疫活性増強剤が、MDSCの細胞死滅を誘導することによって免疫抑制能を除去または減少させるものである、請求項1に記載の免疫活性増強剤。
- 前記免疫活性増強剤が、T細胞、NK細胞、または制御性T細胞(regulatory T cell)の活性に対するMDSCの抑制能を調節するものである、請求項1に記載の免疫活性増強剤。
- 前記抗体が、マウス抗体、キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項1に記載の免疫活性増強剤。
- 前記抗体が、IgG1、IgG2、IgG3またはIgG4 Fcドメインを含むものである、請求項1に記載の免疫活性増強剤。
- 前記抗体が脱フコース化抗体である、請求項1に記載の免疫活性増強剤。
- 前記抗体が、以下の相補性決定領域(complementarity determining region;CDRs)を含む、抗−CD66c抗体またはその抗原結合断片である、請求項1に記載の免疫活性増強剤:
配列番号1または配列番号9のアミノ酸配列を含むCDR−H1、
配列番号2または配列番号10のアミノ酸配列を含むCDR−H2、
配列番号3のアミノ酸配列を含むCDR−H3、
配列番号4、配列番号11または配列番号12のアミノ酸配列を含むCDR−L1、
配列番号5のアミノ酸配列を含むCDR−L2、および
配列番号6または配列番号13のアミノ酸配列を含むCDR−L3。 - 前記抗体の重鎖可変領域が、配列番号22、23、24、25、26または27のアミノ酸配列を含むフレームワーク(V−FR1)、配列番号32、33、34、35、36または37のアミノ酸配列を含むフレームワーク(V−FR2)、配列番号42、43、44、45、46または47のアミノ酸配列を含むフレームワーク(V−FR3)、および配列番号52、53、54、55、56または57のアミノ酸配列を含むフレームワーク(V−FR4)からなる群より選択された少なくとも一つのフレームワークを含むものである、請求項1に記載の免疫活性増強剤。
- 前記抗体の軽鎖可変領域が、配列番号28、29、30または31のアミノ酸配列を含むフレームワーク(L−FR1)、配列番号38、39、40または41のアミノ酸配列を含むフレームワーク(L−FR2)、配列番号48、49、50、または51のアミノ酸配列を含むフレームワーク(L−FR3)、および配列番号58、59、60または61のアミノ酸配列を含むフレームワーク(L−FR4)からなる群より選択された少なくとも一つのフレームワークを含むものである、請求項1に記載の免疫活性増強剤。
- 前記抗体が、配列番号7、14、15、16、17または18のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域;および配列番号8、19、20、または21のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項1に記載の免疫活性増強剤。
- 前記抗体が、温度62℃でANS結合による蛍光値変異率が200%未満である、請求項1に記載の免疫活性増強剤。
- 前記抗原結合断片が、前記抗−CD66c抗体のscFv、(scFv)2、Fab、Fab’またはF(ab’)2である、請求項1に記載の免疫活性増強剤。
- 請求項1〜13のいずれか一項に記載の免疫活性増強剤を含む、MDSC関連疾患または症状の予防、治療または改善用の薬学組成物。
- 前記MDSC関連疾患が、リンパ球を除いたHLA−DR Low/(−)、CD11b+、CD33+表現型を示し、CD66cが陽性であるMDSCの細胞数が正常細胞に比べて増加された疾患である、請求項14に記載の薬学組成物。
- 前記T細胞、NK細胞(natural killer cell)、または制御性T細胞(regulatory T cell)の活性に対するMDSCの抑制能を調節するものである、請求項14に記載の薬学組成物。
- 前記MDSC関連疾患が、癌または炎症性疾患である、請求項14に記載の薬学組成物。
- 前記MDSC関連疾患が、クルーズ・トリパノソーマ(Trypanosoma cruzi)、リステリア・モノサイトゲネス(Listeria monocytogenes)、リーシュマニア・メジャ(Leishmania major)、ヘルミンス(helminths)、カンジダ・アルビカンス(Candida albicans)、またはポルフィロモナス・ジンジバリス(Porphyromonas gingivalis)の感染、トキソプラズマ症、または多菌性敗血症である、請求項14に記載の薬学組成物。
- 前記MDSC関連疾患が、胃癌、乳癌、肺癌、大腸癌、肝癌、胆嚢癌、腎臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頚癌、膀胱癌、急性骨髄性白血病(acute myeloid leukemia)、急性リンパ性白血病(acute lymphoblastic leukemia)、急性単球性白血病(acute monocytic leukemia)、またはホジキンリンパ腫(Hodgkin’s lymphoma)、または非ホジキンリンパ腫である、請求項14に記載の薬学組成物
- 前記癌細胞の成長または癌転移誘導を抑制するものである、請求項19に記載の薬学組成物。
- 前記抗体が、MDSCで発現するCD66cおよびCD66bを認知するIgG1タイプ抗体である、請求項14に記載の薬学組成物。
- 前記薬学組成物が、MDSCで発現するCD66cに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片に加えて、NK細胞またはNK細胞由来細胞治療剤を追加的に含むものである、請求項14に記載の薬学組成物。
- 骨髄由来免疫抑制細胞(myeloid−derived suppressor cell、MDSC)で発現するCD66cに特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片を含み、CD66cが陽性であるMDSCを探知する、MDSC関連疾患の診断用組成物。
- 前記診断の試料が、対象の生体試料である、請求項23に記載の組成物。
- 前記MDSC関連疾患が、リンパ球を除いたHLA−DR Low/(−)、CD11b+、CD33+表現型を示し、CD66cが陽性であるMDSCが増加された疾患である、請求項23に記載の組成物。
- 前記MDSC関連疾患が、クルーズ・トリパノソーマ(Trypanosoma cruzi)、リステリア・モノサイトゲネス(Listeria monocytogenes)、リーシュマニア・メジャ(Leishmania major)、ヘルミンス(helminths)、カンジダ・アルビカンス(Candida albicans)、またはポルフィロモナス・ジンジバリス(Porphyromonas gingivalis)の感染、トキソプラズマ症、多菌性敗血症、胃癌、乳癌、肺癌、大腸癌、肝癌および胆嚢癌、腎臓癌、膵臓癌、甲状腺癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頚癌、膀胱癌、急性骨髄性白血病(acute myeloid leukemia)、急性リンパ性白血病(acute lymphoblastic leukemia)、急性単球性白血病(acute monocytic leukemia)、ホジキンリンパ腫(Hodgkin’s lymphoma)、または非ホジキンリンパ腫である、請求項23に記載の組成物。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR20180054977 | 2018-05-14 | ||
KR10-2018-0054977 | 2018-05-14 | ||
KR10-2019-0055950 | 2019-05-13 | ||
KR1020190055950A KR102373502B1 (ko) | 2018-05-14 | 2019-05-13 | 골수유래억제세포 관련 질환의 예방 및 치료 용도 |
PCT/KR2019/006007 WO2019221574A1 (ko) | 2018-05-14 | 2019-05-14 | 골수유래억제세포 관련 질환의 예방 및 치료 용도 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021523193A true JP2021523193A (ja) | 2021-09-02 |
JP7165855B2 JP7165855B2 (ja) | 2022-11-07 |
Family
ID=68730776
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020564084A Active JP7165855B2 (ja) | 2018-05-14 | 2019-05-14 | 骨髄由来抑制細胞関連疾患の予防および治療用途 |
Country Status (12)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20220119518A1 (ja) |
EP (1) | EP3795175A4 (ja) |
JP (1) | JP7165855B2 (ja) |
KR (1) | KR102373502B1 (ja) |
CN (1) | CN112118868A (ja) |
AU (1) | AU2019268959B2 (ja) |
BR (1) | BR112020023265A2 (ja) |
CA (1) | CA3099968A1 (ja) |
IL (1) | IL278581B1 (ja) |
MX (1) | MX2020012247A (ja) |
PH (1) | PH12020551912A1 (ja) |
SG (1) | SG11202010948XA (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2022340907A1 (en) * | 2021-09-02 | 2024-03-07 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Anti-cecam6 antibodies with reduced side-effects |
CN114306618B (zh) * | 2022-01-14 | 2024-03-29 | 中山大学 | 一种聚酯酰胺类化合物在制备预防和/或治疗血液系统疾病药物中的应用 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007530679A (ja) * | 2004-03-27 | 2007-11-01 | ジ・アリゾナ・ボード・オブ・リージェンツ・オン・ビハーフ・オブ・ザ・ユニバーシティー・オブ・アリゾナ | 癌治療のための組成物および方法 |
US20110212095A1 (en) * | 2010-02-26 | 2011-09-01 | Dinona Inc. | Epitope of cd66c specific to lung adenocarcinoma and antibody recognizing the same |
JP2016520548A (ja) * | 2013-04-03 | 2016-07-14 | アイビーシー ファーマスーティカルズ,インコーポレイテッド | 疾患に対する免疫反応を誘導するための併用療法 |
JP2018502114A (ja) * | 2014-12-31 | 2018-01-25 | アントフロゲネシス コーポレーション | ナチュラルキラー細胞を用いて血液障害、固形腫瘍、又は感染性疾患を治療する方法 |
WO2018067825A1 (en) * | 2016-10-05 | 2018-04-12 | University Of Central Florida Research Foundation, Inc. | Methods and compositions related to nk cell and anti-pdl1 cancer therapies |
JP2018510636A (ja) * | 2015-03-23 | 2018-04-19 | バイエル ファーマ アクチエンゲゼルシャフト | 抗ceacam6抗体およびその使用 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2876798A1 (fr) * | 2004-10-14 | 2006-04-21 | Univ Clermont Auvergne | Diagnostic et traitement de la maladie de crohn |
KR101214177B1 (ko) * | 2010-02-26 | 2012-12-21 | 다이노나(주) | CD66c의 폐선암 특이적 에피토프 및 이를 인식하는 항체 |
KR101783907B1 (ko) * | 2016-03-15 | 2017-10-10 | 다이노나(주) | CD66c에 대한 항체와 화학치료제를 포함하는 폐암 예방 또는 치료용 약학조성물 |
WO2018070936A1 (en) * | 2016-10-10 | 2018-04-19 | Singhealth Services Pte Ltd | Anti-ceacam6 antibodies and methods of use |
CN110382533B (zh) * | 2016-11-14 | 2023-09-22 | 锦湖Ht株式会社 | 特异性结合CD66c的抗体及其用途 |
-
2019
- 2019-05-13 KR KR1020190055950A patent/KR102373502B1/ko active IP Right Grant
- 2019-05-14 BR BR112020023265-3A patent/BR112020023265A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2019-05-14 CA CA3099968A patent/CA3099968A1/en not_active Abandoned
- 2019-05-14 EP EP19802548.8A patent/EP3795175A4/en active Pending
- 2019-05-14 MX MX2020012247A patent/MX2020012247A/es unknown
- 2019-05-14 IL IL278581A patent/IL278581B1/en unknown
- 2019-05-14 SG SG11202010948XA patent/SG11202010948XA/en unknown
- 2019-05-14 US US17/052,591 patent/US20220119518A1/en active Pending
- 2019-05-14 CN CN201980031966.2A patent/CN112118868A/zh active Pending
- 2019-05-14 JP JP2020564084A patent/JP7165855B2/ja active Active
- 2019-05-14 AU AU2019268959A patent/AU2019268959B2/en active Active
-
2020
- 2020-11-10 PH PH12020551912A patent/PH12020551912A1/en unknown
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007530679A (ja) * | 2004-03-27 | 2007-11-01 | ジ・アリゾナ・ボード・オブ・リージェンツ・オン・ビハーフ・オブ・ザ・ユニバーシティー・オブ・アリゾナ | 癌治療のための組成物および方法 |
US20110212095A1 (en) * | 2010-02-26 | 2011-09-01 | Dinona Inc. | Epitope of cd66c specific to lung adenocarcinoma and antibody recognizing the same |
JP2016520548A (ja) * | 2013-04-03 | 2016-07-14 | アイビーシー ファーマスーティカルズ,インコーポレイテッド | 疾患に対する免疫反応を誘導するための併用療法 |
JP2018502114A (ja) * | 2014-12-31 | 2018-01-25 | アントフロゲネシス コーポレーション | ナチュラルキラー細胞を用いて血液障害、固形腫瘍、又は感染性疾患を治療する方法 |
JP2018510636A (ja) * | 2015-03-23 | 2018-04-19 | バイエル ファーマ アクチエンゲゼルシャフト | 抗ceacam6抗体およびその使用 |
WO2018067825A1 (en) * | 2016-10-05 | 2018-04-12 | University Of Central Florida Research Foundation, Inc. | Methods and compositions related to nk cell and anti-pdl1 cancer therapies |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
CLINICAL CANCER DRUGS, JPN6021048828, 2015, pages 2 - 100, ISSN: 0004657825 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA3099968A1 (en) | 2019-11-21 |
AU2019268959B2 (en) | 2023-08-17 |
JP7165855B2 (ja) | 2022-11-07 |
EP3795175A4 (en) | 2022-03-02 |
PH12020551912A1 (en) | 2021-06-14 |
CN112118868A (zh) | 2020-12-22 |
EP3795175A1 (en) | 2021-03-24 |
IL278581A (ja) | 2021-03-01 |
SG11202010948XA (en) | 2020-12-30 |
KR102373502B1 (ko) | 2022-03-11 |
IL278581B1 (en) | 2024-02-01 |
BR112020023265A2 (pt) | 2021-02-23 |
KR20190130506A (ko) | 2019-11-22 |
MX2020012247A (es) | 2021-01-29 |
AU2019268959A1 (en) | 2020-12-03 |
US20220119518A1 (en) | 2022-04-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR102384845B1 (ko) | 항-pd-l1 항체 및 그의 용도 | |
EP3604338A1 (en) | Anti-ox40 antibody and use thereof | |
US8557964B2 (en) | Anti CXCR4 antibodies and their use for the treatment of cancer | |
US11220543B2 (en) | Antibody binding specifically to CD66c and use thereof | |
TW202116807A (zh) | 用於治療特定患者之癌症的抗體組合 | |
JP2020125352A (ja) | 抗−cd43抗体およびその癌治療用途 | |
JP2022511337A (ja) | 免疫チェックポイント治療に抵抗性のある癌の治療のための方法および医薬組成物 | |
JP7165855B2 (ja) | 骨髄由来抑制細胞関連疾患の予防および治療用途 | |
CN108752475B (zh) | 抗人cd38抗体及其用途 | |
US20230312709A1 (en) | Antibody targeting CD47 and application thereof | |
CN111918878A (zh) | 抗gitr抗体及其用途 | |
KR20190034238A (ko) | 종양 관련 대식세포를 표적화하는 항체 및 이의 용도 | |
WO2019221574A1 (ko) | 골수유래억제세포 관련 질환의 예방 및 치료 용도 | |
TWI703155B (zh) | 特異性結合至pauf蛋白質的抗體及其用途 | |
WO2020171171A1 (ja) | 抗hla-dr抗体、およびそのがん治療用途 | |
WO2023145844A1 (ja) | 抗ヒトcxcl1抗体 | |
TW202302635A (zh) | Il-38專一性抗體 | |
CN114907478A (zh) | 结合lag-3的抗体及其用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20201113 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20211207 |
|
A603 | Late request for extension of time limit during examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A603 Effective date: 20220428 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220509 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20220916 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20220930 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20221004 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20220930 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7165855 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |