JP2021521202A - 固形腫瘍の治療のための標的化されたアマトキシン複合体 - Google Patents

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Abstract

本発明は、固形腫瘍の治療のための結合部分−毒素複合体の製造に使用するための、式（Ｉ）に記載のアマトキシンを含む、アマトキシン−リンカー構築物、および固形腫瘍の治療のためのそれぞれの結合部分−毒素複合体に関する（図１）。ここで、Ｒ1およびＲ2が、それぞれ−ＯＨであり、Ｒ3が、ＮＨ2であるか、または前記アマトキシンを標的結合部分に連結するための反応性基Ｙを担持するリンカーであり、Ｒ4が、Ｈであるか、または前記アマトキシンを標的結合部分に連結するための反応性基Ｙを担持するリンカーであり、Ｒ5が存在しないか、または＝Ｏであり、ここで、Ｒ３およびＲ４は、同一ではない。

Description

発明の分野
本出願は、固形腫瘍の治療のための標的化されたアマトキシン複合体に関する。
発明の背景
固形腫瘍の治療は進行中の課題であり、過去数十年間の進歩はほとんどない。
近年、きわめて少数の新しい治療法が開発されているが、固形腫瘍に罹患した患者の生存率を高め、彼らの生活の質を改善するためにはさらなる改善が依然として必要である。
１つの有望な治療法は抗体薬物複合体であり、ここで、細胞を殺す能力を有する高度に毒性の実体は、疾患の部位に毒素を送達させる（ｓｈｕｔｔｌｅｓ）標的結合実体に結合される。
本出願人は過去に、いわゆるＡＴＡＣ、すなわち、アマニチン毒素が高度に標的特異的な抗体に結合されている、抗体標的化アマニチン複合体（Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ａｍａｎｉｔｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）を開発した。
アマニチンはキノコのＡｍａｎｉｔａ属のいくつかの種において天然に存在する８アミノ酸の二環式ペプチドであり、１つはタマゴテングダケ（デスキャップｄｅａｔｈ ｃａｐ）（Ａｍａｎｉｔａ ｐｈａｌｌｏｉｄｅｓ）である。
アマニチンは、以下の一般構造を有する：
Figure 2021521202
アマトキシンは非常に高い親和性でＲＮＡポリメラーゼＩＩに結合し、その結果、分裂細胞と休止細胞の両方でタンパク質合成が劇的に減少し、最終的にアポトーシスが起こる（Ｃｏｃｈｅｔ−ＭｅｉｌｈａｃおよびＣｈａｍｂｏｎ １９７４； Ｃｏｃｈｅｔ−Ｍｅｉｌｈａｃら、１９７４）。
α−アマニチンは、ＲＮＡポリメラーゼＩＩＩにわずかしか結合せず、そして、ＲＮＡポリメラーゼＩに結合しない。
ＲＮＡポリマーゼＩＩに結合するとき、アマニチンはＲＮＡとＤＮＡに対する、酵素のトランスロケーションを阻害し、そして、したがって、転写速度が１０００倍以上低下し、最終的には、細胞のアポトーシスをもたらす。
現在開発中の１つのＡＴＡＣは、ＨＤＰ １０１と呼ばれ、そして、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０８４４３１に開示されている。
これは、６'−デオキシ位を有するアミノ酸４（上記の図において＝Ｒ４）；および、Ｓ−デオキシ位を有するアミノ酸８を有するアマトキシンを含む。
リンカーは、ＰＡＢ Ｖａｌ Ａｌａリンカーである。
このアマトキシンは、アミノ酸１およびそれに結合された切断可能なリンカーを介して、Ｊ２２．９−ＩＳＹと呼ばれる抗ＢＣＭＡ結合抗体に結合する。
ＨＤＰ１０１において使用されるアマトキシンリンカー複合体の構造は、３０．２１１５と呼ばれ、以下の表に示される。
このＡＴＡＣは、血液悪性腫瘍、特にリンパ腫の治療において非常に良好な有効性を示した。
このような血液学的悪性腫瘍は、本明細書では「液性腫瘍」とも呼ばれる。
しかしながら、出願人は、液性腫瘍よりも、ＡＴＡＣａのより困難な標的となる固形腫瘍の治療にはまだ改善の余地があることを認識している。
したがって、本発明の１つの目的は、固形腫瘍の新しい治療選択肢を提供することである。
本発明のさらなる１つの目的は、固形腫瘍におけるＡＴＡＣの効力を改善することである。
これらおよびさらなる目的は、本発明の独立請求項に記載の方法および手段によって達成される。
従属請求項は、特定の実施形態に関連する。
発明の概要
本発明は、固形腫瘍の治療のための標的化されたアマトキシン複合体を提供する。
本発明及びその特徴の一般的な利点を以下に詳細に説明する。
以下のリストに、図面およびそれらの内容の概要を示す：
Figure 2021521202
発明の詳細な説明
本発明を詳細に説明する前に、本発明は、そのようなデバイスおよび方法は変化し得るので、説明されたデバイスの特定の構成要素部分に限定されず、説明された方法のプロセスステップに限定されないことを理解されたい。
また、本明細書で使用される用語は特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定することを意図していないことを理解されたい。
明細書及び付属のクレームで使用されているように、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は文脈が明瞭に他のことを指示しない限り、単数及び／又は複数の引例を含むことに留意されたい。
さらに、数値で区切られたパラメータ範囲が与えられた場合、その範囲はこれらの制限値を含むものとみなされることも理解されるべきである。
さらに、本明細書に開示される実施形態は、互いに関連しない個々の実施形態として理解されることを意味しないことを理解されたい。
一実施形態で論じられた特徴は、本明細書に示された他の実施形態に関連しても開示されることが意図される。
１つの場合において、特定の特徴が１つの実施形態で開示されず、別の実施形態で開示される場合、当業者は、前記特徴が前記他の実施形態で開示されることを意味しないことを必ずしも意味しないことを理解するのであろう。
他の実施形態についても前記特徴を開示することが本出願の要旨であるが、明確にするために、および明細書を管理可能なボリュームに保つために、これは行われていないことを、当業者は、理解するのであろう。
さらに、本明細書で記載される先行技術文献の内容は、参照により組み込まれる。
これは、特に、標準的または日常的な方法を開示する先行技術文献を指す。
その場合、参照による組み入れは、主に、十分な可能な開示を提供し、長い繰り返しを回避する目的を有する。
第一の態様によれば、式（Ｉ）に記載のアマトキシンを含むアマトキシン−リンカー構築物が提供される：
Figure 2021521202
ここで、
Ｒ1とＲ2は、それぞれ−ＯＨ
Ｒ3は、ＮＨ2であるか、または、前記アマトキシンを標的結合部分に結合するための反応性基Ｙを有するリンカーであり、
Ｒ4は、Ｈであるか、または、前記アマトキシンを標的結合部分に結合するための反応性基Ｙを有するリンカーであり、
Ｒ5は、存在しないか、または＝Ｏであり、ここで、
Ｒ3およびＲ4は、同じであってはならない。
前記構築物は、固形腫瘍の治療のための結合部分−毒素の複合体の製造における使用のために提供される。
これらの構築物の重要な特徴の１つは、分子のアミノ酸４（Ｔｒｐ）のインドール環の４位の−ＯＲ4置換基である。
本発明者らは驚くべきことに、このようなアマトキシンリンカー構築物を含む結合部分−毒素複合体が、固形腫瘍またはその中に含まれる細胞に対して優れた効力を有することを示した。
これは、４位に−ＯＲ4を有さないが、代わりに水素置換基を有する構造的に類似の結合部分−毒素複合体と比較した場合に、とりわけ真実である。
興味深いことに、液性腫瘍の治療においては、ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＥＰ２０１７／０８４４３１で開示されているように、両者の変異体が同等の有効性を有していたので、そのような明白な相違は観察できなかった。
本明細書で使用される用語「固形腫瘍」は、血液、骨髄、およびリンパ系を除いて、身体組織または器官に影響を及ぼすすべての癌型に関する。
用語「液性腫瘍」は本明細書中で使用される場合、患者の体液（例えば、血液、骨髄またはリンパ（白血病、リンパ腫および骨髄腫を含む））において生じる任意の癌または悪性腫瘍に関する。
−ＯＲ４は、−ＯＨまたは−Ｏ−リンカーであることを理解することが重要である。
特に、リンカーが切断可能なリンカーまたは自壊性（ｓｅｌｆ ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）リンカーである場合、リンカーは時間の経過で分解し、壊滅（ｉｍｍｏｌａｔｉｏｎ）の最終段階は−Ｏ−リンカー結合の加水分解をもたらし、したがって−ＯＨを放出する。
この理由のために、切断／壊滅（ｉｍｍｏｌａｔｉｏｎ）は、６−ＯＨ−Ｔｒｐを送達する。
一実施形態によれば、リンカーは、切断可能なリンカーおよび／または自壊性リンカー（ｓｅｌｆ ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ ｌｉｎｋｅｒ）である。
用語「切断可能なリンカー」は本明細書中で使用される場合、典型的には細胞内条件下で切断されやすいリンカーに関する。
適切な切断可能なリンカーとしては、例えば、細胞内プロテアーゼ（例えば、リソソーマルプロテアーゼまたはエンドソーマルプロテアーゼ）によって切断可能なペプチドリンカーが挙げられる。
例示的な実施形態では、リンカーは、
バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ）、
バリン−アラニン（ｖａｌ−ａｌａ）、
フェニルアラニン−リジン（ｐｈｅ−ｌｙｓ）リンカー、またはマレイミドカプロニック「バリン−シトルリン−ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ｍｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＡ）リンカー」などのジペプチドリンカーであり得る。
このようなリンカーは、例えば、米国特許第６２１４３４５号に開示されている。
別のリンカーは、スルホスクシンイミジル−４４Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ｓｍｃｃ）である。
スルホ−ｓｍｃｃ複合化はスルフヒドリル（チオール、−ＳＨ）と反応するマレイミド基を介して起こり、一方、そのスルホ−ＮＨＳエステルは、（リジンおよびタンパク質またはペプチドＮ末端に見られるように）第一級アミンに対して反応性である。
さらに別のリンカーは、マレイミドカプロイル（ｍｃ）である。
他の適当なリンカーとしては、特定のｐＨまたはｐＨ範囲で加水分解可能なリンカー、例えばヒドラゾンリンカーが挙げられる。
さらなる適切な切断可能なリンカーとしては、ジスルフィドリンカーが挙げられる。
リンカーは、薬物が放出されるために、抗体が、細胞内で分解されなければならない程度に、例えばｍｃリンカーなどのように、抗体に共有結合されてもよい。
環状ベンジリデンアセタールリンカーを含む他のｐＨ感受性切断可能リンカーは、ＥＰ３１３０５８７に開示されている。
用語「自壊性リンカー（ｓｅｌｆ ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ ｌｉｎｋｅｒ）」は、本明細書中で使用される場合、最初の反応が起こった後に自発的に分解するリンカーに関する。
自壊性リンカー（ｓｅｌｆ ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ ｌｉｎｋｅｒ）の一例は、ｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）であり、これは、しばしば、芳香族アミン基を介して、そしてカルバメート基を介して、毒素の第一級または第二級アミンに、バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ）またはバリン−アラニン（ｖａｌ−ａｌａ）のような切断可能なジペプチドに結合される。
適切なプロテアーゼによるジペプチドの切断は、ＰＡＢおよびＰＡＢの二酸化炭素の１，６−切断および遊離毒素の同時放出を誘発する。
ｐ−アミノベンジル部分はまた、毒素のアミノ−、ヒドロキシ−またはフェノール−基へのアルキル化によって直接結合され得る。
次いで、ジペプチドの切断は、１，６−切断（１，６−ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ）による、ベンジルアミンまたはベンジルエーテル結合の断片化を齎し、同時に毒素が放出される。
このＰＡＢベースの自壊性システムのための他のプロテアーゼトリガーは、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ ＩＩ）によって切断可能なグリシン−プロリン−ロイシン−グリシン（ｇｌｙ−ｐｒｏ−ｌｅｕ−ｇｌｙ）モチーフ（ｍｏｔｉｖｅ）、またはエラスターゼによって切断可能なアラニン−アラニン−プロリン−バリン（ａｌａ−ａｌａ−ｐｒｏ−ｖａｌ）モチーフ（ｍｏｔｉｖｅ）によって例示されるが、これらに限定されない。
自壊性のリンカーの別の実施例は、ｐ−ヒドロキシベンズルアルコールとグルクロン酸とのβ−グリコシドによって表される。
毒素は、芳香環のメタ位を介して、上記の基および標的結合部分によってベンジリック炭素原子に結合され得る。
β−グルクロニダーゼによってグリオシド結合が切断されると、毒素は１，６−脱離過程によって遊離される。
一実施形態によれば、リンカーは、以下からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤によって切断可能である
・システインプロテアーゼ
・メタロプロテアーゼ
・セリンプロテアーゼ
・トレオニンプロテアーゼ
・アスパラギン酸プロテアーゼ
チオールプロテアーゼとしても知られるシステインプロテアーゼは、タンパク質を分解する酵素である。
これらのプロテアーゼは、触媒トリアドまたはダイアド（ｔｒｉａｄ ｏｒ ｄｙａｄ）中の求核性システインチオールを含む共通の触媒機構を共有する。
システインプロテアーゼは、パパイヤ、パイナップル、イチジク、およびキウイフルーツを含むフルーツにおいて一般によく見られる。
ＭＥＲＯＰＳプロテアーゼ分類システムは、Ｃの下にシステインプロテアーゼを有する。メタロプロテアーゼは、触媒機構が金属を含むプロテアーゼ酵素である。
ほとんどのメタロプロテアーゼは亜鉛を必要とするが、コバルトを使用するものもある。
金属イオンは、３つのリガンドを介してタンパク質に配位する。
金属イオンを配位するリガンドは、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、およびアルギニンによって変化し得る。
第４の配位位置は、不安定な水分子によって取り込まれる。
セリンプロテアーゼはタンパク質中のペプチド結合を切断する酵素であり、セリンは（酵素の）活性部位で求核アミノ酸として働く。
それらは、真核生物でも原核生物でも普遍的に見られる。
セリンプロテアーゼは、その構造に基づいて、キモトリプシン様（トリプシン様）またはスブチリシン様の２つの広いカテゴリーに分類される。
ＭＥＲＯＰＳプロテアーゼ分類システムは、Ｓの下に、システインプロテアーゼを有する。スレオニンプロテアーゼが、活性部位内にトレオニン（Ｔｈｒ）残基を有するタンパク質分解酵素のファミリーである。
このクラスの酵素のプロトタイプメンバーはプロテアソームの触媒サブユニットであるが、アシルトランスフェラーゼは同じ活性部位の形状とメカニズムを収束的に（ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｔｌｙ）進化させた。
アスパラギン酸プロテアーゼは、それらのペプチド基質の触媒作用のために、１つ以上のアスパラギン酸残基に結合した活性化水分子を使用する触媒型のプロテアーゼ酵素である。
一般に、それらは活性部位に２つの高度に保存された（ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ）アスパラギン酸を持ち、酸性ｐＨで最適に活性を示す。
ほとんど全ての既知のアスパルチルプロテアーゼは、ペプスタチンによって阻害される。
ＭＥＲＯＰＳプロテアーゼ分類システムは、Ａの下にシステインプロテアーゼを有する。
特定の実施形態では、リンカーは、以下からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤によって切断可能である
・カテプシンＡまたはカテプシンＢ
・マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）
・エラスターゼ
・β−グルクロニダーゼ
・β−ガラクトシダーゼ
さらなる一実施形態によれば、リンカーは、以下からなる群から選択されるモチーフを含む
・Ｖａｌ Ａｌａ
・Ｖａｌ Ｃｉｔ
・Ｖａｌ Ｌｙｓ
・Ｖａｌ Ａｒｇ
・Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｇｌｙ
・Ａｌａ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｖａｌ
・β−グルクロニド
・β−ガラクトシド
さらなる一実施形態によれば、リンカー中の反応性基Ｙは、以下からなる群から選択される少なくとも１つである：
Figure 2021521202
さらなる一実施形態によれば、リンカーは、パラアミノベンゾール Ｖａｌ Ａｌａ マレイミドプロピルモチーフを含む。
Figure 2021521202
さらなる一実施形態によれば、アマトキシン−リンカー構築物中のリンカーは、非切断可能性リンカーである。
用語「安定なリンカー」および「非切断可能性リンカー」は、本明細書中で交換可能に使用される。
典型的には、非切断可能性リンカーが、結合部分、すなわち、毒素リンカー構築物が結合されるモノクローナル抗体、が細胞内、例えば、リソソーム中で分解された後に薬物を放出する。
典型的な非切断可能性リンカーは、マレイミドアルカンリンカーである：
Figure 2021521202
もう一つの典型的な非切断可能性リンカーは、Ａｄｏ−トラスツズマブ エムタンシン（Ｔ−ＤＭ１）で使用されているＳＭＣＣリンカーである
Figure 2021521202
一実施形態では、Ｒ3は、非切断可能性リンカーではない。
別の実施形態において、Ｒ3は、切断可能なリンカー、好ましくは自壊性（ｓｅｌｆｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）リンカーである。
別の実施形態では、Ｒ4は、非切断可能性、切断可能性、または自壊性リンカーである。
さらなる一実施形態によれば、アマトキシン−リンカー構築物は、以下からなる群から選択される式を有する：
Figure 2021521202
Figure 2021521202
さらなる一実施形態によれば、固形腫瘍の治療のための、結合部分−毒素複合体の作製に使用するために提供されるアマトキシン−リンカー構築物であって、ここで、前記固形腫瘍は、そのアマトキシンがインドールの６'位に−ＯＲ4置換基を含まない結合部分−毒素複合体に耐性である。
本発明の別の態様によれば、
（ｉ）固形腫瘍と診断された、
（ｉｉ）固形腫瘍に罹患している、または
（ｉｉｉ）固形腫瘍を発症する危険性がある、ヒトまたは動物の被験体の治療に使用するために、結合部分−毒素複合体が提供され、その複合体は、
（ａ）上記記載のアマトキシン−リンカー構築物、および
（ｂ）標的結合部分；
を含み、および
ここで、リンカーは、前記アマトキシンおよび前記標的結合部分を連結する。
本発明の別の態様によれば、このような結合部分−毒素複合体は、
（ｉ）固形腫瘍と診断された、
（ｉｉ）固形腫瘍に罹患している、または
（ｉｉｉ）固形腫瘍を発症する危険性がある、ヒトまたは動物の被験体の治療のための薬剤の製造における使用のために提供される。
本発明の別の態様によれば、固形腫瘍を治療または予防するための方法が提供され、前記方法はそれを必要とする被験体に、有効量のそのような結合部分−毒素複合体を投与する工程を包含する。
本発明の一実施形態によれば、標的結合部分は抗体、抗体断片、抗体ベースの結合タンパク質、または抗体模倣物であり、これらはすべて標的結合特性を保持する。
本明細書で使用される「抗体」は、好ましくはモノクローナル抗体である。
本明細書中で使用される場合、用語「モノクローナル抗体（ｍＡｂ）」は均質な抗体集団、すなわち、全免疫グロブリン、または標的結合能を保持するその断片もしくは誘導体からなる均質な集団を有する抗体組成物をいう。
特に好ましくは、このような抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡおよび／またはＩｇＭ、または標的結合能を保持するその断片もしくは誘導体からなる群より選択される。
本明細書中で使用される場合、用語「抗体フラグメント」は、例えば、標的結合能力を保持するこのような抗体のフラグメントをいう。
・ＣＤＲ（相補性決定領域）、
・超可変領域（ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ）
・可変ドメイン（Ｆｖ）、
・ＩｇＧ重鎖（ＶＨ、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域からなる）、
・ＩｇＧ軽鎖（ＶＬおよびＣＬ領域からなる）、および／または
・Ｆａｂおよび／またはＦ（ａｂ）2。
他の実施形態は、
ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなる、Ｃａｍｅｌｉｄ抗体、シャーク抗体、Ｆａｂ（Ｆｄ）断片の重鎖部分；
可変断片（Ｆｖ）断片；
単一可変ドメイン、一本鎖Ｆｖ Ｆｒａｇｍｅｎｔ（ｓｃＦｖ）を含む、ドメイン抗体（ｄＡｂ）断片；
（ｖｉｉｉ）ダイアボディ；
相補性軽鎖ポリペプチドと一緒になって、一対の抗原結合領域を形成する一対のタンデムＦｖセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）を含む線状抗体；および
免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖の他の非全長部分、またはそれらの変異体、変異体、または誘導体を、単独または任意の組み合わせ、
を含む。
本明細書で使用される抗体ベースの結合タンパク質は、他の非免疫グロブリンまたは非抗体由来成分との関連で、少なくとも１つの抗体由来のＶＨ、ＶＬ、またはＣＨ免疫グロブリンドメインを含む。
本明細書で使用される、抗体模倣体は、抗体のように、抗原に特異的に結合することができるが、しかし、構造的には抗体と関連していない、有機化合物である。
この定義は、例えば、
アンキリン反復タンパク質、
Ｃ型レクチン、
Ｓ．ａｕｒｅｕｓのＡ−ドメインタンパク質、
トランスフェリン、
リポカリン、
フィブロネクチンの１０番目のＩＩＩ型ドメイン、
クニッツドメインプロテアーゼ阻害剤、
ユビキチン由来結合剤、
ガンマクリスタリン由来結合剤、
システインノットまたはノッチン、
チオレドキシンＡスキャフォールドベース結合剤、
核酸アプタマー、
ポリマーの分子インプリンティングによって産生される人工抗体、
細菌ゲノム由来ペプチドライブラリー、
ＳＨ−３ドメイン、
ストラドボディー、ジスルフィド結合およびＣａ２＋によって安定化される膜受容体の「Ａドメイン」、
ＣＴＬＡ４ベース化合物、
Ｆｙｎ ＳＨ３、および
アプタマー
を包含する。
一実施形態によれば、前記標的結合部分は、以下からなる群から選択される少なくとも１つの標的に結合する
・Ｈｅｒ２、および／または
・ＰＳＭＡ。
本発明の一実施形態によれば、前記標的結合部分は、以下からなる群から選択される少なくとも１つの抗体である。
・トラスツズマブ、および／または
・ｈ３／Ｆ１１。
本発明者らは、ＲａｊｉまたはＲａｊｉ−Ｌｕｃのような腫瘍細胞が、皮下に適用される場合、明確な構造および結合組織を有する均一な固形腫瘍として増殖することを見出した。
これらの皮下に移植された腫瘍細胞は、固形腫瘍の重要な特性（例えば、浸透障害および拡散障害）が与えられるので、固形腫瘍を示す。
また、がんの治療を目的とした新薬の前臨床開発には、一般に皮下モデルが必須である。
しかし、静脈内に注射すると、ＲａｊｉまたはＲａｊｉ−Ｌｕｃは、液性腫瘍、例えば白血病の表現型を発現する。
この理由のために、ＲａｊｉまたはＲａｊｉ−Ｌｕｃは、固形腫瘍対液性腫瘍の治療における、クレームされている毒素リンカー複合体の異なる効果を示すための適切なモデルである。
抗体ｈ３／Ｆ１１のＣＤＲ配列は、ＥＰ２３６３４８６に開示されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
本発明の一実施形態によれば、固形腫瘍は、以下からなる群から選択される少なくとも１つである。
a)肉腫，
b)芽腫、および／または
c)癌．
本発明の一実施形態によれば、前記固形腫瘍は、そのアマトキシンがインドールの６'位に、−ＯＲ4置換基を含まない結合部分−毒素複合体に対して抵抗性である。
本発明の一実施形態によれば、抗体またはその断片もしくは誘導体は、操作されたシステイン残基を含む。
一実施形態では、リンカーは、前記システインの遊離ＳＨ基に結合されている。
システインは抗体のアミノ酸配列に人工的に導入されるので、複合部位としてのその使用は、抗体の鎖内および鎖間ジスルフィド架橋の形成に影響を及ぼさず、したがって、その安定性は影響を受けないままである。
好ましくは、このようなシステインは、抗体の標的結合に影響を及ぼさないように、抗体の定常ドメインに導入される。
この複合方法の原理は、Ｊｕｎｕｔｕｌａら（２００８）に開示されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明の一実施形態によれば、前記システイン残基は、Ｅｄｅｌｍａｎら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ； ６３ （１９６９） ７８−８５に従ったＥＵ番号付けシステムに従い、
重鎖１１８Ｃｙｓ、
重鎖２３９Ｃｙｓおよび
重鎖２６５Ｃｙｓ
からなる群から選択される。
本実験で用いた抗体は、そのような遊離のＳＨ基を有するシステイン残基を提供するために、両ＦｃドメインにおけるＤ２６５Ｃ置換を含む。
それぞれの技術は、本出願人に譲渡されたＷＯ２０１６１４２０４９ Ａ１に開示されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれ、「２」の固定された薬物対抗体比（「ＤＡＲ」）および部位特異的複合化を有する、均質な生成物を送達する。
本発明者らは、Ｄ２６５Ｃを複合体として使用すると、Ｄ２６５は１つ以上のＦｃ［γ］受容体への抗体Ｆｃ領域の結合相互作用に関与するので、１つ以上のＦｃ［γ］受容体への結合の障害を生じる、という、さらなる効果を有することをさらに示した。
そのような抗体、または抗体アマトキシン複合体は、被験体において低減した免疫調節応答（Ｆｃ［γ］受容体への抗体結合によって誘発される、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰおよび／またはＣＤＣ応答のような）を示し得、したがって、望ましくない副作用を減少させることに寄与し得る。
本発明の一実施形態によれば、
複合体は
（ｉ）固形腫瘍と診断された、
（ｉｉ）固形腫瘍に罹患している、または
（ｉｉｉ）固形腫瘍を発症する危険性がある、ヒトまたは動物の被験体の治療における使用のために提供され、ここで、前記固形腫瘍はそのアマトキシンがインドールの６'位に−ＯＲ4置換基を含まない結合部分−毒素複合体に抵抗性である。
本発明の１つのさらなる態様によれば、
（ｉ）固形腫瘍と診断された、
（ｉｉ）固形腫瘍に罹患している、または
（ｉｉｉ）固形腫瘍を発症する危険性がある、ヒトまたは動物の被験体の治療に使用される医薬組成物が提供され、その組成物は、上述のように、結合部分―毒素複合体を含む。
本発明の別の態様によれば、このような組成物は、
（ｉ）固形腫瘍と診断された、
（ｉｉ）固形腫瘍に罹患している、または
（ｉｉｉ）固形腫瘍を発症する危険性がある、ヒトまたは動物の被験体の治療のための医薬の製造における使用に提供される。
本発明の別の態様によれば、固形腫瘍を治療または予防するための方法が提供され、前記方法はそれを必要とする被験体に、有効量のこのような組成物を投与することを包含する。
実施例
本発明は図面および前記の説明において詳細に図示および説明されてきたが、そのような図示および説明は例示的または例示的であり、限定的ではないと考えられるべきであり、本発明は開示された実施形態に限定されない。
開示された実施形態に対する他の変形は、図面、開示、および添付の特許請求の範囲の研究から、特許請求された発明を実施する際に当業者によって理解され、実施されることができる。
特許請求の範囲において、単語「有する」は他の要素又はステップを排除するものではなく、不定冠詞「ａ」又は「ａｎ」は複数を排除するものではない。
特定の手段が相互に異なる従属請求項に記載されているという単なる事実は、これらの手段の組み合わせが有利に使用されることができないことを示すものではない。
特許請求の範囲におけるいかなる引用符号も、範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
本明細書中に開示される全てのアミノ酸配列は、Ｎ末端からＣ末端へと示され；本明細書中に開示される全ての核酸配列は、５'−＞３'で示される。
材料及び方法
1.アマトキシンリンカー複合体
本明細書中に記載される実験において、本発明の範囲に該当する４つの標的化アマトキシンリンカー複合体が使用され、これは、式（ｉ）のＲ4の下で言及されるように、それらが非複合体化またはリンカーに複合体化された、いずれかの６−ＯＨ Ｔｒｐ残基を有することを意味する。
さらに、６−ＯＲ置換基を欠くＴｒｐを含むので、本発明の範囲に含まれない、２つの標的化されたアマトキシンリンカー複合体が使用される。
これらの分子は、固形腫瘍の治療において、特許請求される構築物および複合体の力価の増加を実証するためのベンチマークとして使用されている。
本試験で使用した６つのアマトキシンリンカー複合体を以下に示す：
Figure 2021521202
Figure 2021521202
２．抗体
以下の抗体を、アマトキシンリンカー複合体に複合させた
Figure 2021521202
トラスツズマブおよびｈ３／Ｆ１１は既に上記に記載されている。
ｃｈｉＢＣＥ１９は、Ｌuｔｔｇａｕら、２０１３に実施可能に開示されている。
３．コンジュゲーション技術
抗体を、いわゆるチオマブテクノロジー（Ｔｈｉｏｍａｂ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）の手段によって、アマトキシンリンカー複合体に複合させた。
この方法では、以下の反応式に示されるように、複合は、毒素リンカー構築物のマレイミド残基の、抗体におけるシステイン残基の遊離ＳＨ基への複合によって起こる。
Figure 2021521202
この複合法の原理は、Ｊｕｎｕｔｕｌａら（２００８）に開示されており、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本実験において使用される抗体は、このような遊離ＳＨ基を有するシステイン残基を提供するために、両方のＦｃドメインにおけるＤ２６５Ｃ置換を含む。
それぞれの技術は、本出願人に譲渡されたＷＯ２０１６１４２０４９ Ａ１に開示されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれ、「２」の固定された薬物対抗体比率（「ＤＡＲ」）および部位特異的複合体を有する均質な生成物を送達する。
３．アッセイ
３．１．細胞生存率測定試験
抗ＰＳＭＡおよび抗Ｈｅｒ２アマトキシン複合体の細胞毒性活性を、標的陽性腫瘍細胞株および化学発光ＢｒｄＵ取り込みアッセイ（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を用いてｉｎ ｖｉｔｒｏで評価した。
細胞生存率は、３７℃および５％ ＣＯ2での種々の濃度の複合体との９６時間のインキュベーション後に、ＢＭＧラボテック オプティマ マイクロプレートリーダー中の抗ＢｒｄＵ−ＨＲＰ抗体を用いた固定および透過化細胞の計測によって決定した。
用量反応曲線のＥＣ50値は、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍ ４．０ソフトウエアによって計算した。
標的陽性細胞に対する抗ＣＤ１９アマトキシン複合体の細胞毒性活性を、９６ウェル組織培養プレートにおいて、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ ２．０発光細胞生存率アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）によって評価した。
３７℃および５％ ＣＯ2で種々の濃度の複合体と９６時間インキュベートした後、細胞生存率を測定した。
データ分析は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ、Ｉｎｃ、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、ＣＡ）ソフトウェアで行い、曲線適合をプロット（ｐｌｏｔ ｃｕｒｖｅ ｆｉｔｓ）し、統計的分析を行った。
非線形可変勾配曲線適合は、ｌｏｇ［ＡＤＣ］対応答としてプロットし、そして、ＥＣ50値が生成された。
３．２．異種移植片／腫瘍容積
ＬｎＣａｐ異種移植片モデル：雄ＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスに、マウス１匹当たり、２．５×１０6のＬＮＣａｐ前立腺癌細胞を、右側腹部皮下（ｒｉｇｈｔ ｆｌａｎｋ）に接種した。
平均腫瘍体積、約１５０ ｍｍ3の動物を０日目に群に割り付けた。
同日に、動物に、アマニチンベースの抗ＰＳＭＡ抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を単回静脈内投与し、腫瘍容積および体重を週２回測定した。
Ｊｉｍｔ−１異種移植片モデル：雌ＮＭＲＩヌードマウスに、マウス１匹当たり、５×１０6のＪｉｍｔ−１乳癌細胞を、右側腹部皮下接種した。
平均腫瘍体積、約１２０ ｍｍ3の動物を０日目に群に割り付けた。
同日に、動物に、アマニチンベースの抗Ｈｅｒ２抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を単回静脈内投与し、腫瘍容積および体重を週２回測定した。
Ｒａｊｉ異種移植片モデル：雌ＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスに、マウス当たり、２．５×１０6のＲａｊｉ Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫細胞を、右側腹部に皮下接種した。
平均腫瘍体積、約８０ ｍｍ3の動物を０日目に群に割り付けた。
同日に、動物に、アマニチンベースの抗ＣＤ１９抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を単回静脈内投与し、腫瘍容積および体重を週２回測定した。
腫瘍成長をカリパス測定によってモニターした。
腫瘍の大きさは以下の式に従って計算した：体積＝Ｗ2×Ｌ×０．５（Ｌ＝長さおよびＷ＝腫瘍の垂直幅、Ｌ＞Ｗ）。
３．３．異種移植片／生存
静脈内Ｎａｌｍ−６異種移植片モデル：雌ＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスに、マウス当たり、２．５×１０6のＲａｊｉ Ｂｕｒｋｉｔｔリンパ腫細胞を尾静脈に接種した。
０日目に動物を群に割り付けた。
腫瘍細胞注射後３日目に、動物は、アマニチンベースの抗ＣＤ１９抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の単回静脈内投与を受けた。
体重は週２回測定した。生存を毎日モニターした。
静脈内Ｒａｊｉ異種移植片モデル：雌ＣＢ１７ ＳＣＩＤマウスに、マウス当たり、５×１０6 Ｎａｌｍ−６ Ｂ細胞前駆白血病細胞を尾静脈に接種した。
０日目に動物を群に割り付けた。
腫瘍細胞注射後３日目に、動物は、アマニチンベースの抗ＣＤ１９抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の単回静脈内投与を受けた。
体重は、週２回測定した。生存を毎日モニターした。
３．４．複合体ｃｈｉＢＣＥ１９−Ｄ２６５Ｃ−３０．２１１５の合成
３．４．１．１０ｍｇのｃｈｉＢＣＥ１９−Ｄ２６５ＣへのＨＤＰ ３０．２０６０の複合化
ＰＢＳ緩衝液中の１０ｍｇのＴｈｉｏｍａｂ ｃｈｉＢＣＥ１９−Ｄ２６５Ｃを、ＨＤＰ ３０．２０６０への結合のために使用する。
＃抗体溶液を、１ｍＭ ＥＤＴＡに調整する：
＊２ｍＬの抗体溶液（１０．０ｍｇ）＋２０μＬの１００ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ ８．０
＊抗体量：１０ｍｇ＝ ６．８×１０-8モル
３．４．２．抗体と４０当量のＴＣＥＰとの反応によるシステインのキャップ解除（Ｕｎｃａｐｐｉｎｇ）：
＃２ｍＬの抗体溶液（６．８×１０-8 ｍｏｌ）＋５４．５μＬの５０ｍＭ ＴＣＥＰ溶液（２．７２×１０-6 ｍｏｌ）
＃シェーカー機上で、３７℃で、３時間インキュベートする。
＃Ｓｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｃａｓｓｅｔｔｅ ２０'０００ ＭＷＣＯ中、２．０ Ｉ １ｘ ＰＢＳ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ ７．４中、４℃での２回の連続透析、
最初の透析は約４時間、２回目の透析は一晩。
＃Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｆｉｌｔｅｒｓ ５０'０００ ＭＷＣＯを用いて、約４．０ｍＬに濃縮する。
３．４．３．抗体と２０当量のデヒドロアスコルビン酸（ｄｈＡＡ）との反応による酸化：
＃約２ｍＬの抗体溶液（６．８×１０-8モル）＋２７．２μＬの新鮮な５０ｍＭ ｄｈＡＡ溶液（１．３６×１０-6モル）
＃シェーカー機上で、室温で、３時間インキュベートする。
３．４．４．６当量のＨＤＰ ３０．２０６０を用いて、アマニチンとの結合と、２５当量のＮ−アセチル−Ｌ−システインとのクエンチング：
＃７０μＬのＤＭＳＯ中に０．７ｍｇのＨＤＰ ３０．２０６０を可溶化する＝１０μｇ／μＬ
＊約２ｍＬの抗体溶液（＝９．５ｍｇ：６．４６×１０-8モル）＋５０．９μＬ ＨＤＰ ３０．２０６０（＝５０９μｇ：３．８８ｘ１０-7 ｍｏｌ）。
＊室温で１時間インキュベートする。
＊１６μＬの１００ｍＭ Ｎ−アセチル−Ｌ−システイン（１．６２×１０-6モル）を加えてクエンチする。
＊室温で１５分間（または４℃で一晩）インキュベートする。
＊１×ＰＢＳ、ｐＨ ７．４で平衡化したＰＤ−１０カラムで各反応混合物を精製する。パラフィルム上でブラッドフォード試薬を用いてタンパク質含有画分を同定し、タンパク質含有画分を合わせる。
＊２．０ Ｉ ＰＢＳ、ｐＨ ７．４およびＳｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ Ｄｉａｌｙｓｉｓ Ｃａｓｓｅｔｔｅｓ ２０'０００ ＭＷＣＯ中、各抗体溶液を４℃で一晩透析する。
３．４．５．同一のタンパク質濃度に調整した、通常の抗体（ｎａｋｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ）対ＡＤＣを用いた、ＵＶスペクトル（２８０ｎｍおよび３１０ｎｍでの吸収）による、タンパク質濃度および薬物−抗体比（ＤＡＲ）の決定
蛋白質濃度を５．０ｍｇ／ｍＬ（３．４×１０-5 Ｍ）に調整し、濾過により滅菌状態にする。４℃で保存する。
４．細胞株
以下の細胞株を使用した
Figure 2021521202
使用される細胞株は、Ｒａｊｉ、Ｎａｌｍ−６およびＭＥＣ−２細胞株を除き、固形腫瘍から由来するのに対し、Ｒａｊｉは、造血起源の最初の継代ヒト細胞株である。
マウスに静脈内注射するとＣＤ１９陽性であるＲａｊｉ細胞が白血病表現型を発現し、一方マウスに皮下注射すると固形腫瘍表現型を発現することを理解することは極めて重要である。
結果
１． トラスツズマブに結合した毒素リンカー構築物
細胞生存率アッセイは、ＦｃドメインにＤ２６５Ｃ置換を有するトラスツズマブ（ｄｒｕｇｂａｎｋ ｅｎｔｒｙ： ＤＢ０００７２）に結合させた、上記の毒素−リンカー構築物で処理したＪＩＭＴ−１細胞を使用した。
ＪＩＭＴ−１は乳管腺癌（ｂｒｅａｓｔ ｄｕｃｔａｌ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ）由来の固形がん細胞株である。
結果を図１に示す。
６'−ヒドロキシ−Ｔｒｐ変異体（ここで、式（ｉ）のＲ4は、Ｈであるか、または前記アマトキシンを標的結合部分に連結するための反応性基Ｙを有するリンカーである）、
３０．１６９９、
３０．２３７１、
３０．２０６０および
３０．２３４７
は、同等の効力を示し、一方、Ｔｒｐ変異体３０．２１１５はわずかに低減した効力を示し、Ｔｒｐ変異体３０．２１８３は、強く低減した効力を示す。
図１に示した実験は、固形腫瘍由来の他の３つのがん細胞株を用いて繰り返され、すべて異なる程度のＨＥＲ２を発現した（ＳＫＢＲ−３、ＢＴ４７４およびＮＣＩ−Ｎ８７）。
ほぼ同じパターンが全ての細胞株で観察された。
すべての場合において、６'−ヒドロキシ−Ｔｒｐ変異体（ここで、式（ｉ）のＲ4は、Ｈであるか、または前記アマトキシンを標的結合部分に連結するための反応性基Ｙを有するリンカーである）は、Ｔｒｐ変異体（ここで、アマニチンのＴｒｐ残基における６位は、Ｈ残基で置換されている）よりも高い細胞毒性能力を示した。
Figure 2021521202
太字：最高の細胞毒性の能力；
イタリック体：最低の細胞毒性の能力。
「ＳＯ」は、式（ｉ）のアマニチンにおけるＲ5＝Ｏを意味し、
「Ｓ」は、式（ｉ）のアマニチンにおけるＲ5が存在しないことを意味し、
「６−ＯＨ−Ｗ」は、ＯＲ4を有する式（ｉ）に示される、実施形態を指し、
「Ｗ」は、アマニチンのＴｒｐ残基の６位がＨ残基で置換されている本発明に従わない実施形態を指し、そして、
「ＡＡ４／ＡＡ１」は、リンカーが結合するアマニチンのアミノ酸残基を意味する。
「ｎｆｂ」は、＞５０％の残存細胞生存率を有する本格的な（ｆｕｌｌ−ｂｌｏｗｎ）細胞毒性の効果がないことを意味する
次いで、増殖阻害実験を、ＦｃドメインにＤ２６５Ｃ置換を有するトラスツズマブ（ｄｒｕｇｂａｎｋ ｅｎｔｒｙ： ＤＢ０００７２）に結合した、上記の毒素−リンカー構築物で処理したＪＩＭＴ細胞の腫瘍異種移植片を用いて行った。
結果を図２に示す。
６'−ヒドロキシ−Ｔｒｐ変異体（ここで、式（ｉ）のＲ4は、Ｈであるか、または前記アマトキシンを標的結合部分に連結するための反応性基Ｙを有するリンカーである）、
３０．１６９９、
３０．２３７１、
３０．２０６０および
３０．２３４７
は、強力な腫瘍縮小活性を示し（図２Ａ）、一方、Ｔｒｐ変異体３０．２１１５および３０．２１８３は有意に低減した腫瘍縮小活性を示す（図２Ｂ）。
２．抗ＰＳＭＡ抗体に結合した毒素リンカー構築物
Ｆｃドメインに、Ｄ２６５Ｃ置換を有する、抗ＰＳＭＡ抗体ｈ３／Ｆ１１に結合した、上述の毒素リンカー構築物を用いて処理されたＬＮＣａＰ細胞を用いて、細胞生存率アッセイを行った。
ＬＮＣａＰは左鎖骨上リンパ節転移（ｌｅｆｔ ｓｕｐｒａｃｌａｖｉｃｕｌａｒ ｌｙｍｐｈ ｎｏｄｅ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ）に由来する固体前立腺腺癌細胞株である。
結果を図３に示す。
６'−ヒドロキシ−Ｔｒｐ変異体（ここで、式（ｉ）のＲ4は、Ｈであるか、または前記アマトキシンを標的結合部分に連結するための反応性基Ｙを有するリンカーである）、
３０．１６９９、
３０．２３７１、
３０．２０６０および
３０．２３４７
は同等の効力を示し、一方、Ｔｒｐ変異体３０．２１１５および３０．２１８３は、強く低減した効力を示す。
図３に示される実験は、３つの他の固形がん細胞株で繰り返され、全てが異なる程度のＰＳＭＡを発現した（２２ＲＶ１、ＭＤＡ−ＰＣａ２ｂ、およびＣ４．２）。
ほぼ同じパターンが全ての細胞株で観察された。
すべての場合において、６'−ヒドロキシ−Ｔｒｐ変異体（ここで、式（ｉ）のＲ4は、Ｈであるか、または前記アマトキシンを標的結合部分に連結するための反応性基Ｙを有するリンカーである。）は、Ｔｒｐ変異体（ここで、アマニチンのＴｒｐ残基の６位がＨ残基で置換されている）よりもわずかに高い細胞毒性能力を示す。
Figure 2021521202
太字：最高の細胞毒性の能力；
イタリック体：最低の細胞毒性の能力。
「ＳＯ」は、式（ｉ）のアマニチンにおけるＲ5＝Ｏを意味し、
「Ｓ」は、式（ｉ）のアマニチンにおけるＲ5が存在しないことを意味し、
「６−ＯＨ−Ｗ」は、ＯＲ4を有する式（ｉ）に示される、実施形態を指し、
「Ｗ」は、アマニチンのＴｒｐ残基の６位がＨ残基で置換されている本発明に従わない実施形態を指し、そして、
「ＡＡ４／ＡＡ１」は、リンカーが結合するアマニチンのアミノ酸残基を意味する。
「Ｎｆｂ」は、＞５０％の残存細胞生存率を有する本格的な細胞毒性の能力がないことを意味する。
（Ｘ％）残存生存率を意味する。
次いで、増殖阻害実験を、ＦｃドメインにＤ２６５Ｃ置換を有する抗ＰＳＭＡ抗体ｈ３／Ｆ１に結合した、上述した毒素リンカー構築物を用いて処理されたＬｎＣａＰ細胞の腫瘍異種移植片を用いて行った。
結果を図４に示す。
６'−ヒドロキシ−Ｔｒｐ変異体（ここで、式（ｉ）のＲ4は、Ｈであるか、または前記アマトキシンを標的結合部分に連結するための反応性基Ｙを有するリンカーである）、
３０．１６９９、
３０．２３７１、
３０．２０６０および
３０．２３４７
は強力な腫瘍縮小活性を示し（図４Ａ、Ｂ）、一方、Ｔｒｐ変異体３０．２１１５および３０．２１８３は有意に低減した腫瘍縮小活性を示す（図４Ｃ）。
３．抗ＣＤ１９抗体に結合したトキシン−リンカー構築物
細胞生存率アッセイは、ＦｃドメインにＤ２６５Ｃ置換を有する抗ＣＤ１９抗体ｃｈｉＢＣＥ１９に結合した、上記の毒素−リンカー構築物で処理したＲａｊｉ細胞を使用した。
Ｒａｊｉはバーキットリンパ腫（Ｂｕｒｋｉｔｔ'ｓ ｌｙｍｐｈｏｍａ）由来の細胞株である。
このケースでは、両方の、６'−ヒドロキシ−Ｔｒｐ変異体（ここで、式（ｉ）のＲ4は、Ｈであるか、または前記アマトキシンを標的結合部分に連結するための反応性基Ｙを有するリンカーである）、
３０．１６９９、
３０．２３７１、
３０．２０６０および
３０．２３４７、ならびに
Ｔｒｐ変異体３０．２１１５および３０．２１８３は同等の効力を示す。
図５に示される実験は、２つの他のがん細胞株を用いて繰り返され、全て異なる程度のＣＤ１９を発現した（Ｒａｊｉ−ＬｕｃおよびＭＥＣ−２）。
ほぼ同じパターンが全ての細胞株で観察された。
すべての場合において、６'−ヒドロキシ−Ｔｒｐ変異体（ここで、式（ｉ）のＲ4は、Ｈであるか、または前記アマトキシンを標的結合部分に連結するための反応性基Ｙを有するリンカーである）は、Ｔｒｐ変異体（ここで、アマニチンのＴｒｐ残基の６位がＨ残基で置換されている）と同等の細胞毒性能力を示す。
Figure 2021521202
太字：最高の細胞毒性の能力；
イタリック体：最低の細胞毒性の能力。
「ＳＯ」は、式（ｉ）のアマニチンにおけるＲ5＝Ｏを意味し、
「Ｓ」は、式（ｉ）のアマニチンにおけるＲ5が存在しないことを意味し、
「６−ＯＨ−Ｗ」は、ＯＲ4を有する式（ｉ）に示される、実施形態を指し、
「Ｗ」は、アマニチンのＴｒｐ残基の６位がＨ残基で置換されている本発明に従わない実施形態を指し、そして、
「ＡＡ４／ＡＡ１」は、リンカーが結合するアマニチンのアミノ酸残基を意味する。
「ｎｆｂ」は、＞５０％の残存細胞生存率を有する、本格的な細胞毒性の能力がないことを意味する。
（Ｘ％）は、残存生存率を示す。
次いで、生存率は、Ｒａｊｉ細胞の腫瘍異種移植片（トランスフェクトされたルシフェラーゼを伴うかまたは伴わない）またはそれぞれの細胞の静脈内投与によって得られたＮａｌｍ−６細胞を用いて調査した。
次いで、マウスを、ＦｃドメインにおいてＤ２６５Ｃ置換を有する、抗ＣＤ１９抗体ｃｈｉＢＣＥ１９に結合した、上記の毒素−リンカー構築物の単回静脈内投与で治療した。
Ｒａｊｉはバーキットリンパ腫由来の細胞株であり、Ｎａｌｍ−６は急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）由来の細胞株である。
結果を図６のカプランマイヤー曲線に示す。
静脈内投与されると、ＲａｊｉならびにＮａｌｍ−６細胞は、白血病、すなわち液性腫瘍の表現型を模倣する表現型を発達させ、一方、皮下注射されると、Ｒａｊｉ細胞のみが固形腫瘍の表現型を模倣する表現型を発達させ、一方、Ｎａｌｍ−６細胞はなお液性腫瘍を発達させる。
生存実験を、静脈内注射したＲａｊｉ Ｌｕｃ（図６Ａ）またはＮＡＬＭ６（図６Ｂ）細胞を用いて行った。
全ての場合において、６−ＯＨ Ｔｒｐ（３０．１６９９）を有する変異体は、Ｔｒｐ変異体３０．２１１５よりも低い力価を有することが判明した。
その後、マウスに皮下注射したＲａｊｉ細胞の腫瘍異種移植片を用いて増殖阻害実験を行った。
このアプローチは、固形腫瘍の表現型を模倣する腫瘍を導く。
治療は、ＦｃドメインにおいてＤ２６５Ｃ置換を有する、抗ＣＤ１９抗体ｃｈｉＢＣＥ１９に結合した、上記の毒素−リンカー構築物を用いて行った。
６'−ヒドロキシ−Ｔｒｐ変異体（ここで、式（ｉ）のＲ4がＨであるか、または前記アマトキシンを標的結合部分に連結するための反応性基Ｙを有するリンカーである）３０．１６９９、３０．２３７１、３０．２０６０および３０．２３４７は強力な腫瘍縮小活性を示し（図７Ａ）、一方、Ｔｒｐ変異体３０．２１１５および３０．２１８３は有意に低減した腫瘍縮小活性を示す（図７Ｂ）。
Figure 2021521202
＊発明によらない、アマトキシンリンカー構築物である。
ＭＴＤ：最大耐容用量、
ＨＮＳＴＤ：最高非重度毒性容量、
Ｃｙｎｏ：カニクイザル、
ＤＩＧ：宿主標的と交差反応しないジゴキシゲニン抗体
引用文献：
Ｊｕｎｕｔｕｌａら、Ｎａｔ． Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２６（８），９２５−９３２（２００８）
Ｌuｔｔｇａｕら、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（２０１３） ２，３３８−３５２

Claims (17)

  1. 固形腫瘍の治療のための結合部分−毒素複合体の製造に使用するための、式（Ｉ）に記載のアマトキシンを含むアマトキシン−リンカー構築物：
    Figure 2021521202
    ここで、
    Ｒ1とＲ2は、それぞれ−ＯＨ；
    Ｒ3は、ＮＨ2であるか、または前記アマトキシンを標的結合部分に結合するための反応性基Ｙを有するリンカーであり；
    Ｒ4は、Ｈまたは前記アマトキシンを標的結合部分に結合するための反応性基Ｙを有するリンカーであり；
    Ｒ5は、存在しないか、または＝Ｏであり、ここで、
    Ｒ3およびＲ4は、同一ではない。
  2. リンカーが切断可能なリンカーおよび／または自壊性リンカーである、請求項１に記載のアマトキシン−リンカー構築物。
  3. リンカーが、以下からなる群から選択される少なくとも１つの薬剤によって切断可能である、前記請求項のいずれか一項に記載のアマトキシン−リンカー構築物：
    ・システインプロテアーゼ
    ・メタロプロテアーゼ
    ・セリンプロテアーゼ
    ・トレオニンプロテアーゼ、および（または）
    ・アスパラギン酸プロテアーゼ。
  4. リンカーが、以下からなる群から選択されるモチーフを含む、前記請求項のいずれか１項に記載のアマトキシン−リンカー構築物。
    ・Ｖａｌ Ａｌａ
    ・Ｖａｌ Ｃｉｔ
    ・Ｖａｌ Ｌｙｓ
    ・Ｖａｌ Ａｒｇ
    ・Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｇｌｙ
    ・Ａｌａ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｖａｌ
    ・β−グルクロニド、および／または
    ・β−ガラクトシド。
  5. リンカー中の反応性基Ｙが、以下からなる群から選択される少なくとも１つで上記請求項のいずれか１項に記載のアマトキシン−リンカー構築物：
    Figure 2021521202
  6. リンカーＲ3が、パラアミノベンゾ−ル Ｖａｌ Ａｌａ マレイミドプロピルモチーフを含む、上記請求項のいずれか１項に記載のアマトキシン−リンカー構築物。
    Figure 2021521202
  7. リンカーが非切断可能性リンカーである、請求項１に記載のアマトキシン−リンカー構築物。
  8. 以下からなる群から選択される式を有する、前記請求項のいずれか１項に記載のアマトキシン−リンカー構築物：
    Figure 2021521202
  9. 前記固形腫瘍が、そのアマトキシンがインドールの６'位に前記−ＯＲ4置換基を含まない、結合部分−毒素複合体に対して抵抗性である、上記請求項のいずれか１項に記載のアマトキシン−リンカー構築物。
  10. （ｉ）固形腫瘍と診断された、
    （ｉｉ）固形腫瘍に罹患している、または
    （ｉｉｉ）固形腫瘍を発症する危険性がある、ヒトまたは動物の被験体の治療において使用するための結合部分−毒素複合体であって、以下を含む複合体：
    （ａ）請求項１〜９のいずれか１項に記載のアマトキシン−リンカー構築物、および
    （ｂ）標的結合部分；および
    ここで、リンカーは、前記アマトキシンおよび前記標的結合部分を連結する。
  11. 標的結合部分が、抗体、抗体断片、抗体ベースの結合タンパク質、または抗体模倣物であり、それらの全てが標的結合特性を保持する、請求項１０に記載の使用のための複合体。
  12. 前記標的結合部分が、以下からなる群から選択される少なくとも１つの標的に結合する、請求項１０〜１１のいずれか１項に記載の使用のための複合体：
    ・Ｈｅｒ２、および／または
    ・ＰＳＭＡ。
  13. 固形腫瘍が、以下からなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の使用のための複合体：
    a)肉腫，
    b)芽腫、および／または
    c)癌。
  14. 抗体またはその断片もしくは誘導体が、操作されたシステイン残基を含む、請求項１０〜１３のいずれか１項に記載の使用のための複合体。
  15. 前記システイン残基が、ＥＵ番号付けシステムによる、重鎖１１８Ｃｙｓ、重鎖２３９Ｃｙｓ、および重鎖２６５Ｃｙｓからなる群から選択される、請求項１４に記載の使用のための複合体。
  16. 前記固形腫瘍が、そのアマトキシンがインドールの６'位に前記−ＯＲ4置換基を含まない、結合部分−毒素複合体に対して抵抗性である、請求項１０〜１５のいずれか１項に記載の使用のための複合体。
  17. （ｉ）固形腫瘍と診断された、
    （ｉｉ）固形腫瘍を患っている、または
    （ｉｉｉ）固形腫瘍を発症する危険性がある、ヒトまたは動物の被験体の治療において使用するための医薬組成物であって、請求項１０〜１６のいずれか１項に記載の複合体を含む、医薬組成物。

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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2021012961A (es) 2019-04-24 2021-11-25 Heidelberg Pharma Res Gmbh Conjugados de anticuerpo y farmaco de amatoxina y usos de los mismos.
IL302034A (en) * 2020-11-04 2023-06-01 Heidelberg Pharma Res Gmbh The composition includes a combination of an immune control inhibitor and a conjugated amatoxin antibody for use in cancer treatment
WO2022187591A1 (en) 2021-03-05 2022-09-09 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-cd44 antibodies and their uses
EP4380604A1 (en) 2021-08-05 2024-06-12 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-muc4 antibodies and their uses
US20240165257A1 (en) 2022-11-01 2024-05-23 Heidelberg Pharma Research Gmbh Anti-gucy2c antibody and uses thereof

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013544231A (ja) * 2010-09-30 2013-12-12 ハイデルベルク ファルマ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 改良されたリンカーを有するアマトキシン複合体
WO2014043403A1 (en) * 2012-09-12 2014-03-20 Agensys, Inc. Amatoxin derivatives and cell-permeable conjugates thereof as inhibitors of rna polymerase
WO2016142049A1 (en) * 2015-03-09 2016-09-15 Heidelberg Pharma Gmbh Amatoxin-antibody conjugates
WO2017149077A1 (en) * 2016-03-03 2017-09-08 Heidelberg Pharma Gmbh Amanitin conjugates
WO2017210288A1 (en) * 2016-05-31 2017-12-07 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody drug conjugates having derivatives of amatoxin as the drug

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
EP1726650A1 (en) 2005-05-27 2006-11-29 Universitätsklinikum Freiburg Monoclonal antibodies and single chain antibody fragments against cell-surface prostate specific membrane antigen
EP2774624A1 (en) * 2013-03-04 2014-09-10 Heidelberg Pharma GmbH Amatoxin derivatives
US20170107325A1 (en) 2014-03-31 2017-04-20 Nof Corporation Hydrophilic polymer derivative having cyclic benzylidene acetal linker
WO2018115466A1 (en) * 2016-12-23 2018-06-28 Heidelberg Pharma Research Gmbh Amanitin antibody conjugates
AU2018314668B2 (en) * 2017-08-07 2022-06-02 Heidelberg Pharma Research Gmbh Novel method for synthesizing amanitins
ES2943335T3 (es) * 2017-09-22 2023-06-12 Heidelberg Pharma Res Gmbh Conjugados de amanitina dirigidos a PSMA

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013544231A (ja) * 2010-09-30 2013-12-12 ハイデルベルク ファルマ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 改良されたリンカーを有するアマトキシン複合体
WO2014043403A1 (en) * 2012-09-12 2014-03-20 Agensys, Inc. Amatoxin derivatives and cell-permeable conjugates thereof as inhibitors of rna polymerase
WO2016142049A1 (en) * 2015-03-09 2016-09-15 Heidelberg Pharma Gmbh Amatoxin-antibody conjugates
WO2017149077A1 (en) * 2016-03-03 2017-09-08 Heidelberg Pharma Gmbh Amanitin conjugates
WO2017210288A1 (en) * 2016-05-31 2017-12-07 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody drug conjugates having derivatives of amatoxin as the drug

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