JP2021515584A - 産生バイオリアクターにおける細胞生存度を改善するための方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2018年3月16日出願の米国仮特許出願第62/644,339号および2018年3月20日出願の米国仮特許出願第62/645,755号に対する優先権を主張する;これらの出願の各々の全内容は、参照によって本明細書に組み入れられる。
(a)約125RPM〜約400RPMの回転式撹拌;
(b)約0ppm〜約5000ppmの感作剤の濃度;および
(c)約1g/L〜約10g/Lである保護剤の濃度
のうち1つまたはそれ以上を含む。
(a)試験培養容器における複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程であって、複数の条件は、パラメーターのセットによって規定される、工程;
(b)試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度にとって最適な条件を選択する工程;および
(c)選択された条件下で、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程
を含む。
(a)約125RPM〜約400RPMの回転式撹拌;
(b)約0ppm〜約5000ppmの感作剤の濃度;および
(c)約1g/L〜約10g/Lである保護剤の濃度
のうち1つまたはそれ以上を含む。
(a)少なくとも2つのパラメーターを含むパラメーターのセットを選択する工程;
(b)試験培養容器におけるパラメーターのセットによって規定される複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程;および
(c)試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を予測する工程
を含む。
(a)約125RPM〜約400RPMの回転式撹拌;
(b)約0ppm〜約5000ppmの感作剤の濃度;および
(c)約1g/L〜約10g/Lである保護剤の濃度
のうち1つまたはそれ以上を含む。
a)産生バイオリアクターは、約1.0〜約110.0(例えば、約10.0〜約100.0、約20.0〜約80.0、約40.0〜約60.0、または約6.0)のP/V(W/m3)を有する;
b)産生バイオリアクターは、約0.01〜約0.10(例えば、約0.02〜約0.08、約0.04〜約0.06、または約0.06)の空気容量/液体容量/分(VVM)(分−1)を有する;
c)培地は、約0ppm〜約5000ppm(例えば、約50ppm〜約4000ppm、約1000ppm〜約2000ppm、または約100ppm)の濃度を有する感作剤を含む;および
d)液体培養培地は、約1g/L〜約15g/L(例えば、約2g/L〜約10g/L、約3g/L〜約7g/L、約4g/L〜約6g/L、または約5g/L)である濃度を有する保護剤を含む
のうち1つまたはそれ以上の下で、液体培養培地において細胞を培養する工程を含む、方法もまた提供する。
本開示は、タンパク質またはポリペプチドの産生のためにプロセス強化を最適化する方法に関する。一態様では、本開示は、種々の運転パラメーター、例えば、保護剤(例えば、ポロクサマー−188)濃度、感作剤(例えば、消泡剤)、剪断応力(例えば、撹拌速度または酸素スパージ速度)、培地成分および添加剤、pHおよび時間などによって規定される、運転空間を特徴付けることができる小規模試験培養容器(例えば、バッフル付き振盪フラスコ)モデルに関する。特に、本明細書に記載される方法は、産生バイオリアクターにおける細胞培養物の成長および生存度に対するこれらの運転パラメーターの影響を予測するために使用することができる。直交アプローチが、小規模モデルとより大規模なモデルとの間で剪断応力を相関付けるために使用され、予測された運転空間が、ベンチトップ規模および産生規模におけるデータによって検証されている。
プロセス強化は、製造プロセスがより正確かつより効率的になるように既存の運転スキームを最適化することによる、製造および加工における改善を指す。これらの改善は、種々の利点、例えば、バイオマスの増加、容量生産性の改善、施設稼働率の最適化、商品原価の低減、製品品質一貫性の維持もしくは改善、施設設置面積の低減、および/またはユニット運転の低減をもたらすことができる。分子レベルでは、プロセス強化は、混合を増強すること、反応速度論を改善すること、ならびに/または収量および特異性を増加させることも含み得る。
産生規模(産生バイオリアクター規模)における種々の運転パラメーターの影響を試験することはひどく費用がかかるので、パイロット実験が通常、試験培養容器(例えば、振盪フラスコ、実験室発酵槽またはパイロット発酵槽)において最初に実施される。これらの試験培養容器は、小規模における種々のパラメーター、例えば、撹拌、感作剤濃度、保護剤濃度、温度、pH、栄養素組成、バイオマス負荷および供給戦略の影響を試験し、観察された影響を産生規模(産生バイオリアクター規模)における影響と相関付けるために運転される。多くの伝統的な方法では、仕事率/容量(P/V)、物質移動容量係数(kLa)、羽先端速度、混合時間、数値流体力学(CFD)モデル化が、試験培養容器における結果を産生規模(産生バイオリアクター規模)における影響と相関付けるためにしばしば使用される。
本開示は、試験培養容器モデルからの結果に基づいて、任意の規模においてリアクターを最適化することを目的とした、種々の運転パラメーター、例えば、保護剤(培地成分/添加剤、例えば、プルロニック)、感作剤(例えば、消泡剤)および剪断応力(撹拌)の影響(例えば、細胞生存度、細胞死亡率、組換え治療タンパク質産生または収量)を捕捉するためのモデル化方法を提供する。
約400mL〜約4.5L、約400mL〜約4.0L、約400mL〜約3.5L、約400mL〜約3.0L、約400mL〜約2.5L、約400mL〜約2L、約400mL〜約1.5L、約400mL〜約1L、約400mL〜約900mL、約400mL〜約800mL、約400mL〜約700mL、約400mL〜約600mL、約400mL〜約500mL、約400mL〜約450mL、約450mL〜約5L、約450mL〜約4.5L、約450mL〜約4.0L、約450mL〜約3.5L、約450mL〜約3.0L、約450mL〜約2.5L、約450mL〜約2L、約450mL〜約1.5L、約450mL〜約1L、約450mL〜約900mL、約450mL〜約800mL、約450mL〜約700mL、約450mL〜約600mL、約450mL〜約500mL、約500mL〜約5L、約500mL〜約4.5L、約500mL〜約4.0L、約500mL〜約3.5L、約500mL〜約3.0L、約500mL〜約2.5L、約500mL〜約2L、約500mL〜約1.5L、約500mL〜約1L、約500mL〜約900mL、約500mL〜約800mL、約500mL〜約700mL、約500mL〜約600mL、約600mL〜約5L、約600mL〜約4.5L、約600mL〜約4.0L、約600mL〜約3.5L、約600mL〜約3.0L、約600mL〜約2.5L、約600mL〜約2L、約600mL〜約1.5L、約600mL〜約1L、約600mL〜約900mL、約600mL〜約800mL、約600mL〜約700mL、約700mL〜約5L、約700mL〜約4.5L、約700mL〜約4.0L、約700mL〜約3.5L、約700mL〜約3.0L、約700mL〜約2.5L、約700mL〜約2L、約700mL〜約1.5L、約700mL〜約1L、約700mL〜約900mL、約700mL〜約800mL、約800mL〜約5L、約800mL〜約4.5L、約800mL〜約4.0L、約800mL〜約3.5L、約800mL〜約3.0L、約800mL〜約2.5L、約800mL〜約2L、約800mL〜約1.5L、約800mL〜約1L、約800mL〜約900mL、約900mL〜約5L、約900mL〜約4.5L、約900mL〜約4.0L、約900mL〜約3.5L、約900mL〜約3.0L、約900mL〜約2.5L、約900mL〜約2L、約900mL〜約1.5L、約900mL〜約1L、約1L〜約5L、約1L〜約4.5L、約1L〜約4.0L、約1L〜約3.5L、約1L〜約3.0L、約1L〜約2.5L、約1L〜約2L、約1L〜約1.5L、約1.5L〜約5L、約1.5L〜約4.5L、約1.5L〜約4.0L、約1.5L〜約3.5L、約1.5L〜約3.0L、約1.5L〜約2.5L、約1.5L〜約2L、約2L〜約5L、約2L〜約4.5L、約2L〜約4.0L、約2L〜約3.5L、約2L〜約3.0L、約2L〜約2.5L、約2.5L〜約5L、約2.5L〜約4.5L、約2.5L〜約4.0L、約2.5L〜約3.5L、約2.5L〜約3.0L、約3.0L〜約5L、約3.0L〜約4.5L、約3.0L〜約4.0L、約3.0L〜約3.5L、約3.5L〜約5L、約3.5L〜約4.5L、約3.5L〜約4.0L、約4.0L〜約5L、約4.0L〜約4.5L、または約4.5L〜約5.0Lの容量(内部容量)を有し得る。一部の実施形態では、試験培養容器の高さと幅との比は、産生バイオリアクターの高さと幅との比とおよそ同じである。
約300ppm〜約3,500ppm、約300ppm〜約3,000ppm、約300ppm〜約2,500ppm、約300ppm〜約2,000ppm、約300ppm〜約1,500ppm、約300ppm〜約1,000ppm、約300ppm〜約800ppm、約300ppm〜約600ppm、約300ppm〜約500ppm、約300ppm〜約450ppm、約300ppm〜約400ppm、約300ppm〜約350ppm、約350ppm〜約5,000ppm、約350ppm〜約4,500ppm、約350ppm〜約4,000ppm、約350ppm〜約3,500ppm、約350ppm〜約3,000ppm、約350ppm〜約2,500ppm、約350ppm〜約2,000ppm、約350ppm〜約1,500ppm、約350ppm〜約1,000ppm、約350ppm〜約800ppm、約350ppm〜約600ppm、約350ppm〜約500ppm、約350ppm〜約450ppm、約350ppm〜約400ppm、約400ppm〜約5,000ppm、約400ppm〜約4,500ppm、約400ppm〜約4,000ppm、約400ppm〜約3,500ppm、約400ppm〜約3,000ppm、約400ppm〜約2,500ppm、約400ppm〜約2,000ppm、約400ppm〜約1,500ppm、約400ppm〜約1,000ppm、約400ppm〜約800ppm、約400ppm〜約600ppm、約400ppm〜約500ppm、約400ppm〜約450ppm、約450ppm〜約5,000ppm、約450ppm〜約4,500ppm、約450ppm〜約4,000ppm、約450ppm〜約3,500ppm、約450ppm〜約3,000ppm、約450ppm〜約2,500ppm、約450ppm〜約2,000ppm、約450ppm〜約1,500ppm、約450ppm〜約1,000ppm、約450ppm〜約800ppm、約450ppm〜約600ppm、約450ppm〜約500ppm、約500ppm〜約5,000ppm、約500ppm〜約4,500ppm、約500ppm〜約4,000ppm、約500ppm〜約3,500ppm、約500ppm〜約3,000ppm、約500ppm〜約2,500ppm、約500ppm〜約2,000ppm、約500ppm〜約1,500ppm、約500ppm〜約1,000ppm、約500ppm〜約800ppm、約500ppm〜約600ppm、約600ppm〜約5,000ppm、約600ppm〜約4,500ppm、約600ppm〜約4,000ppm、約600ppm〜約3,500ppm、約600ppm〜約3,000ppm、約600ppm〜約2,500ppm、約600ppm〜約2,000ppm、約600ppm〜約1,500ppm、約600ppm〜約1,000ppm、約600ppm〜約800ppm、約800ppm〜約5,000ppm、約800ppm〜約4,500ppm、約800ppm〜約4,000ppm、約800ppm〜約3,500ppm、約800ppm〜約3,000ppm、約800ppm〜約2,500ppm、約800ppm〜約2,000ppm、約800ppm〜約1,500ppm、約800ppm〜約1,000ppm、約1,000ppm〜約5,000ppm、約1,000ppm〜約4,500ppm、約1,000ppm〜約4,000ppm、約1,000ppm〜約3,500ppm、約1,000ppm〜約3,000ppm、約1,000ppm〜約2,500ppm、約1,000ppm〜約2,000ppm、約1,000ppm〜約1,500ppm、約1,500ppm〜約5,000ppm、約1,500ppm〜約4,500ppm、約1,500ppm〜約4,000ppm、約1,500ppm〜約3,500ppm、約1,500ppm〜約3,000ppm、約1,500ppm〜約2,500ppm、約1,500ppm〜約2,000ppm、約2,000ppm〜約5,000ppm、約2,000ppm〜約4,500ppm、約2,000ppm〜約4,000ppm、約2,000ppm〜約3,500ppm、約2,000ppm〜約3,000ppm、約2,000ppm〜約2,500ppm、約2,500ppm〜約5,000ppm、約2,500ppm〜約4,500ppm、約2,500ppm〜約4,000ppm、約2,500ppm〜約3,500ppm、約2,500ppm〜約3,000ppm、約3,000ppm〜約5,000ppm、約3,000ppm〜約4,500ppm、約3,000ppm〜約4,000ppm、約3,000ppm〜約3,500ppm、約3,500ppm〜約5,000ppm、約3,500ppm〜約4,500ppm、約3,500ppm〜約4,000ppm、約4,000ppm〜約5,000ppm、約4,000ppm〜約4,500ppm、または約4,500ppm〜約5,000ppmの感作剤(例えば、消泡剤、例えば、本明細書に記載される消泡剤のいずれか)の濃度を有し得る(感作剤が、例えば、培養の間の期間にわたって、試験培養容器中に配置された液体培養培地中に存在する場合)。
約300L〜約7,000L、約300L〜約6,500L、約300L〜約6,000L、約300L〜約5,500L、約300L〜約5,000L、約300L〜約4,500L、約300L〜約4,000L、約300L〜約3,500L、約300L〜約3,000L、約300L〜約2,500L、約300L〜約2,000L、約300L〜約1,500L、約300L〜約1,000L、約300L〜約900L、約300L〜約800L、約300L〜約700L、約300L〜約600L、約300L〜約500L、約300L〜約400L、約400L〜約20,000L、約400L〜約18,000L、約400L〜約16,000L、約400L〜約14,000L、約400L〜約12,000L、約400L〜約10,000L、約400L〜約9,500L、約400L〜約9,000L、約400L〜約8,500L、約400L〜約8,000L、約400L〜約7,500L、約400L〜約7,000L、約400L〜約6,500L、約400L〜約6,000L、約400L〜約5,500L、約400L〜約5,000L、約400L〜約4,500L、約400L〜約4,000L、約400L〜約3,500L、約400L〜約3,000L、約400L〜約2,500L、約400L〜約2,000L、約400L〜約1,500L、約400L〜約1,000L、約400L〜約900L、約400L〜約800L、約400L〜約700L、約400L〜約600L、約400L〜約500L、約500L〜約20,000L、約500L〜約18,000L、約500L〜約16,000L、約500L〜約14,000L、約500L〜約12,000L、約500L〜約10,000L、約500L〜約9,500L、約500L〜約9,000L、約500L〜約8,500L、約500L〜約8,000L、約500L〜約7,500L、約500L〜約7,000L、約500L〜約6,500L、約500L〜約6,000L、約500L〜約5,500L、約500L〜約5,000L、約500L〜約4,500L、約500L〜約4,000L、約500L〜約3,500L、約500L〜約3,000L、約500L〜約2,500L、約500L〜約2,000L、約500L〜約1,500L、約500L〜約1,000L、約500L〜約900L、約500L〜約800L、約500L〜約700L、約500L〜約600L、約600L〜約20,000L、約600L〜約18,000L、約600L〜約16,000L、約600L〜約14,000L、約600L〜約12,000L、約600L〜約10,000L、約600L〜約9,500L、約600L〜約9,000L、約600L〜約8,500L、約600L〜約8,000L、約600L〜約7,500L、約600L〜約7,000L、約600L〜約6,500L、約600L〜約6,000L、約600L〜約5,500L、約600L〜約5,000L、約600L〜約4,500L、約600L〜約4,000L、約600L〜約3,500L、約600L〜約3,000L、約600L〜約2,500L、約600L〜約2,000L、約600L〜約1,500L、約600L〜約1,000L、約600L〜約900L、約600L〜約800L、約600L〜約700L、約700L〜約20,000L、約700L〜約18,000L、約700L〜約16,000L、約700L〜約14,000L、約700L〜約12,000L、約700L〜約10,000L、約700L〜約9,500L、約700L〜約9,000L、約700L〜約8,500L、約700L〜約8,000L、約700L〜約7,500L、約700L〜約7,000L、約700L〜約6,500L、約700L〜約6,000L、約700L〜約5,500L、約700L〜約5,000L、約700L〜約4,500L、約700L〜約4,000L、約700L〜約3,500L、約700L〜約3,000L、約700L〜約2,500L、約700L〜約2,000L、約700L〜約1,500L、約700L〜約1,000L、約700L〜約900L、約700L〜約800L、約800L〜約20,000L、約800L〜約18,000L、約800L〜約16,000L、約800L〜約14,000L、約800L〜約12,000L、約800L〜約10,000L、約800L〜約9,500L、約800L〜約9,000L、約800L〜約8,500L、約800L〜約8,000L、約800L〜約7,500L、約800L〜約7,000L、約800L〜約6,500L、約800L〜約6,000L、約800L〜約5,500L、約800L〜約5,000L、約800L〜約4,500L、約800L〜約4,000L、約800L〜約3,500L、約800L〜約3,000L、約800L〜約2,500L、約800L〜約2,000L、約800L〜約1,500L、約800L〜約1,000L、約800L〜約900L、約900L〜約20,000L、約900L〜約18,000L、約900L〜約16,000L、約900L〜約14,000L、約900L〜約12,000L、約900L〜約10,000L、約900L〜約9,500L、約900L〜約9,000L、約900L〜約8,500L、約900L〜約8,000L、約900L〜約7,500L、約900L〜約7,000L、約900L〜約6,500L、約900L〜約6,000L、約900L〜約5,500L、約900L〜約5,000L、約900L〜約4,500L、約900L〜約4,000L、約900L〜約3,500L、約900L〜約3,000L、約900L〜約2,500L、約900L〜約2,000L、約900L〜約1,500L、約900L〜約1,000L、約1,000L〜約20,000L、約1,000L〜約18,000L、約1,000L〜約16,000L、約1,000L〜約14,000L、約1,000L〜約12,000L、約1,000L〜約10,000L、約1,000L〜約9,500L、約1,000L〜約9,000L、約1,000L〜約8,500L、約1,000L〜約8,000L、約1,000L〜約7,500L、約1,000L〜約7,000L、約1,000L〜約6,500L、約1,000L〜約6,000L、約1,000L〜約5,500L、約1,000L〜約5,000L、約1,000L〜約4,500L、約1,000L〜約4,000L、約1,000L〜約3,500L、約1,000L〜約3,000L、約1,000L〜約2,500L、約1,000L〜約2,000L、約1,000L〜約1,500L、約1,500L〜約20,000L、約1,500L〜約18,000L、約1,500L〜約16,000L、約1,500L〜約14,000L、約1,500L〜約12,000L、約1,500L〜約10,000L、約1,500L〜約9,500L、約1,500L〜約9,000L、約1,500L〜約8,500L、約1,500L〜約8,000L、約1,500L〜約7,500L、約1,500L〜約7,000L、約1,500L〜約6,500L、約1,500L〜約6,000L、約1,500L〜約5,500L、約1,500L〜約5,000L、約1,500L〜約4,500L、約1,500L〜約4,000L、約1,500L〜約3,500L、約1,500L〜約3,000L、約1,500L〜約2,500L、約1,500L〜約2,000L、約2,000L〜約20,000L、約2,000L〜約18,000L、約2,000L〜約16,000L、約2,000L〜約14,000L、約2,000L〜約12,000L、約2,000L〜約10,000L、約2,000L〜約9,500L、約2,000L〜約9,000L、約2,000L〜約8,500L、約2,000L〜約8,000L、約2,000L〜約7,500L、約2,000L〜約7,000L、約2,000L〜約6,500L、約2,000L〜約6,000L、約2,000L〜約5,500L、約2,000L〜約5,000L、約2,000L〜約4,500L、約2,000L〜約4,000L、約2,000L〜約3,500L、約2,000L〜約3,000L、約2,000L〜約2,500L、約2,500L〜約20,000L、約2,500L〜約18,000L、約2,500L〜約16,000L、約2,500L〜約14,000L、約2,500L〜約12,000L、約2,500L〜約10,000L、約2,500L〜約9,500L、約2,500L〜約9,000L、約2,500L〜約8,500L、約2,500L〜約8,000L、約2,500L〜約7,500L、約2,500L〜約7,000L、約2,500L〜約6,500L、約2,500L〜約6,000L、約2,500L〜約5,500L、約2,500L〜約5,000L、約2,500L〜約4,500L、約2,500L〜約4,000L、約2,500L〜約3,500L、約2,500L〜約3,000L、約3,000L〜約20,000L、約3,000L〜約18,000L、約3,000L〜約16,000L、約3,000L〜約14,000L、約3,000L〜約12,000L、約3,000L〜約10,000L、約3,000L〜約9,500L、約3,000L〜約9,000L、約3,000L〜約8,500L、約3,000L〜約8,000L、約3,000L〜約7,500L、約3,000L〜約7,000L、約3,000L〜約6,500L、約3,000L〜約6,000L、約3,000L〜約5,500L、約3,000L〜約5,000L、約3,000L〜約4,500L、約3,000L〜約4,000L、約3,000L〜約3,500L、約3,500L〜約20,000L、約3,500L〜約18,000L、約3,500L〜約16,000L、約3,500L〜約14,000L、約3,500L〜約12,000L、約3,500L〜約10,000L、約3,500L〜約9,500L、約3,500L〜約9,000L、約3,500L〜約8,500L、約3,500L〜約8,000L、約3,500L〜約7,500L、約3,500L〜約7,000L、約3,500L〜約6,500L、約3,500L〜約6,000L、約3,500L〜約5,500L、約3,500L〜約5,000L、約3,500L〜約4,500L、約3,500L〜約4,000L、約4,000L〜約20,000L、約4,000L〜約18,000L、約4,000L〜約16,000L、約4,000L〜約14,000L、約4,000L〜約12,000L、約4,000L〜約10,000L、約4,000L〜約9,500L、約4,000L〜約9,000L、約4,000L〜約8,500L、約4,000L〜約8,000L、約4,000L〜約7,500L、約4,000L〜約7,000L、約4,000L〜約6,500L、約4,000L〜約6,000L、約4,000L〜約5,500L、約4,000L〜約5,000L、約4,000L〜約4,500L、約4,500L〜約20,000L、約4,500L〜約18,000L、約4,500L〜約16,000L、約4,500L〜約14,000L、約4,500L〜約12,000L、約4,500L〜約10,000L、約4,500L〜約9,500L、約4,500L〜約9,000L、約4,500L〜約8,500L、約4,500L〜約8,000L、約4,500L〜約7,500L、約4,500L〜約7,000L、約4,500L〜約6,500L、約4,500L〜約6,000L、約4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本明細書で提供される方法は、種々の異なる細胞(例えば、哺乳動物細胞、細菌細胞および酵母細胞)を培養するために使用することができる。
組換え治療タンパク質は、細胞(例えば、哺乳動物細胞)によって細胞培養物の液体培養培地中に放出される分泌されるタンパク質であり得る。例えば、可溶性組換えタンパク質をコードする核酸配列は、組換えタンパク質のN末端またはC末端に分泌シグナルペプチドをコードする配列を含むことができ、この組換えタンパク質は、細胞(例えば、哺乳動物細胞)中に存在する酵素によって切断され、細胞培養物の液体培養培地中に引き続いて放出される。他の例では、組換えタンパク質は、分泌されない可溶性タンパク質であり、組換えタンパク質は、細胞(例えば、哺乳動物細胞)内から回収される。
液体培養培地は、当該分野で公知である。液体培養培地には、哺乳動物血清(例えば、胎仔ウシ血清およびウシ血清)および/または成長ホルモンもしくは増殖因子(例えば、インスリン、トランスフェリンおよび上皮増殖因子)を補充することができる。あるいはまたはさらに、液体培養培地は、化学的に規定された液体培養培地、動物由来成分なしの液体培養培地、無血清液体培養培地または血清含有液体培養培地であり得る。化学的に規定された液体培養培地、動物由来成分なしの液体培養培地、無血清液体培養培地および血清含有液体培養培地の非限定的な例は、市販されている。
細胞の培養は、灌流培養を使用して実施することができる。容器における細胞(例えば、哺乳動物細胞)の灌流培養は、第1の容量の第1の液体培養培地(例えば、任意の濃度の哺乳動物細胞を含む、例えば、細胞を実質的に含まない第1の容量の第1の液体培養培地)の容器からの除去、および第1の液体培養培地への第2の容量の第2の液体培養培地の添加を含む。除去および添加は、同時にもしくは順次、またはそれら2つの組み合わせで実施することができる。さらに、除去および添加は、(例えば、任意の所与の期間にわたり(例えば、24時間の期間にわたり、約1時間〜約24時間の増分期間にわたり、または24時間よりも長い増分期間にわたり)、容器の容量または第1の液体培養培地容量の0.1%〜800%の間(例えば、1%と700%との間、1%と600%との間、1%と500%との間、1%と400%との間、1%と350%との間、1%と300%との間、1%と250%との間、1%と100%との間、100%と200%との間、5%と150%との間、10%と50%との間、15%と40%との間、8%と80%との間および4%と30%との間)の容量を除去および置換する速度で)継続的に、もしくは周期的に(例えば、3日に1回、1日おきに一回、1日1回、1日2回、1日3回、1日4回または1日5回)、またはそれらの任意の組み合わせで実施することができる。周期的に実施される場合、(例えば、約24時間の期間以内、約1時間〜約24時間の増分期間以内、または24時間よりも長い増分期間以内に)除去または置換される容量は、例えば、容器の容量または第1の液体培養培地容量の0.1%〜800%の間(例えば、1%と700%との間、1%と600%との間、1%と500%との間、1%と400%との間、1%と300%との間、1%と200%との間、1%と100%との間、100%と200%との間、5%と150%との間、10%と50%との間、15%と40%との間、8%と80%との間および4%と30%との間)であり得る。除去される第1の液体培養培地の第1の容量および添加される第2の液体培養培地の第2の容量は、一部の場合には、培養期間の全体または一部にわたって、各24時間の期間(またはあるいは、約1時間〜約24時間の増分期間もしくは24時間よりも長い増分期間)にわたっておよそ同じに維持することができる。当該分野で公知のように、第1の容量の第1の液体培養培地が除去される速度(容量/時間の単位)および第2の容量の第2の液体培養培地が添加される速度(容量/時間の単位)は、変動させることができる。第1の容量の第1の液体培養培地が除去される速度(容量/時間の単位)および第2の容量の第2の液体培養培地が添加される速度(容量/時間の単位)は、おおよそ同じであり得る、または異なり得る。
細胞(例えば、哺乳動物細胞)の培養は、流加培養を使用して実施することができる。細胞(例えば、哺乳動物細胞)の流加培養は、培養期間の大部分にわたる、第1の液体培養培地への第2の容量の第2の液体培養培地の添加(例えば、周期的または継続的な添加)を含む。第2の液体培養培地の添加は、(例えば、任意の所与の期間にわたり(例えば、24時間の期間にわたり、約1時間〜約24時間の増分期間にわたり、または24時間よりも長い増分期間にわたり)、容器の容量または第1の液体培養培地容量の0.1%〜300%の間(例えば、1%と250%との間、1%と100%との間、100%と200%との間、5%と150%との間、10%と50%との間、15%と40%との間、8%と80%との間および4%と30%との間)の容量を添加する速度で)継続的に、もしくは周期的に(例えば、3日に1回、1日おきに一回、1日1回、1日2回、1日3回、1日4回または1日5回)、またはそれらの任意の組み合わせで実施することができる。周期的に実施される場合、(例えば、約24時間の期間以内、約1時間〜約24時間の増分期間以内、または24時間よりも長い増分期間以内に)添加される容量は、例えば、容器の容量または第1の液体培養培地容量の0.1%〜300%の間(例えば、1%と200%との間、1%と100%との間、100%と200%との間、5%と150%との間、10%と50%との間、15%と40%との間、8%と80%との間および4%と30%との間)であり得る。添加される第2の液体培養培地の第2の容量は、一部の場合には、培養期間の全体または一部にわたって、各24時間の期間(またはあるいは、約1時間〜約24時間の増分期間もしくは24時間よりも長い増分期間)にわたっておよそ同じに維持することができる。当該分野で公知のように、第2の容量の第2の液体培養培地が添加される速度(容量/時間の単位)は、培養期間の全体または一部にわたって変動させることができる。例えば、添加される第2の液体培養培地の容量は、培養期間の間に、各24時間の期間(またはあるいは、1時間と約24時間との間の増分期間もしくは24時間よりも長い増分期間)にわたって変化(例えば、徐々に増加)し得る。例えば、培養期間にわたる各24時間の期間(またはあるいは、約1時間と24時間超との間の増分期間もしくは24時間よりも長い増分期間)以内に添加される第2の液体培養培地の容量は、容器容量または第1の液体培養培地容量の0.5%〜約20%から容器容量または第1の液体培養培地容量の約25%〜約150%までの間の容量から、培養期間にわたって増加(例えば、徐々にまたはずれた増分を介して)させることができる。第2の容量の第2の液体培養培地が添加される速度(容量/時間の単位)は、培養期間の全体または一部にわたって、およそ同じであり得る。
培養は、32℃〜約39℃の温度、例えば、約32℃〜約37℃の温度で実施することができる。当業者は、温度を、培養方法における(例えば、第1の期間、第2の期間および第3の期間のうち1つまたはそれ以上の間の)特定の時点(複数可)において、例えば、1時間毎にまたは毎日、変化させることができることを理解する。例えば、温度は、振盪フラスコへの哺乳動物細胞の最初の播種の約1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日、11日、12日、14日、15日、16日、17日、18日、19日、もしくは約20日もしくはそれ以上後に、または本明細書に記載される第1、第2および/もしくは第3の期間内の任意の時点において、変化またはシフト(例えば、増加または減少)させることができる。例えば、温度は、上にシフトさせることができる(例えば、最大で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5もしくは10.0℃または約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5もしくは10.0℃の変化)。例えば、温度は、下にシフトさせることができる(例えば、最大で0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5もしくは10℃または約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5もしくは10℃の変化)。
培養は、多くてもまたは約1%〜15%のCO2(例えば、多くてももしくは約14%のCO2、12%のCO2、10%のCO2、8%のCO2、6%のCO2、5%のCO2、4%のCO2、3%のCO2、2%のCO2、または多くてももしくは約1%のCO2)を含む大気中で細胞培養物を培養することを含み得る。培養は、加湿大気(例えば、少なくとももしくは約20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、もしくは少なくとももしくは約95%の湿度、または約100%の湿度)中で細胞培養物をインキュベートすることを含み得る。
細胞培養物(例えば、哺乳動物細胞培養物)の細胞生存度を決定するために使用することができる種々の方法およびアッセイは、当該分野で公知である。例えば、乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)が、細胞培養物の液体培養培地中で検出される。細胞培養物の液体培養培地中のLDHの検出のための市販のキットは、当該分野で公知である。
産生バイオリアクターにおける細胞生存度に対する感作剤(例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の感作剤のいずれか)の濃度の影響を予測する方法であって、(a)試験培養容器(例えば、本明細書に記載される試験培養容器のいずれか)における複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程であって、複数の試験条件は、パラメーターのセットによって規定される、工程;および(b)試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクター(例えば、本明細書に記載される産生バイオリアクターのいずれか)における細胞生存度に対する感作剤の濃度の影響を予測する工程、を含む方法が、本明細書で提供される。
特異的細胞死亡率=(特異的LDH産生)/(細胞1つ当たりのLDH含量)。
約20%〜約30%/日、約20%〜約28%/日、約20%〜約26%/日、約20%〜約24%/日、約20%〜約22%/日、約22%〜約40%/日、約22%〜約38%/日、約22%〜約36%/日、約22%〜約34%/日、約22%〜約32%/日、約22%〜約30%/日、約22%〜約28%/日、約22%〜約26%/日、約22%〜約24%/日、約24%〜約40%/日、約24%〜約38%/日、約24%〜約36%/日、約24%〜約34%/日、約24%〜約32%/日、約24%〜約30%/日、約24%〜約28%/日、約24%〜約26%/日、約26%〜約40%/日、約26%〜約38%/日、約26%〜約36%/日、約26%〜約34%/日、約26%〜約32%/日、約26%〜約30%/日、約26%〜約28%/日、約28%〜約40%/日、約28%〜約38%/日、約28%〜約36%/日、約28%〜約34%/日、約28%〜約32%/日、約28%〜約30%/日、約30%〜約40%/日、約30%〜約38%/日、約30%〜約36%/日、約30%〜約34%/日、約30%〜約32%/日、約32%〜約40%/日、約32%〜約38%/日、約32%〜約36%/日、約32%〜約34%/日、約34%〜約40%/日、約34%〜約38%/日、約34%〜約36%/日、約36%〜約40%/日、約36%〜約38%/日、または約38%〜約40%/日の特異的細胞死亡率を有すると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞(例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか)を培養する工程をさらに含む。
約30nU/細胞/日〜約95nU/細胞/日、約30nU/細胞/日〜約90nU/細胞/日、約30nU/細胞/日〜約85nU/細胞/日、約30nU/細胞/日〜約80nU/細胞/日、約30nU/細胞/日〜約75nU/細胞/日、約30nU/細胞/日〜約70nU/細胞/日、約30nU/細胞/日〜約65nU/細胞/日、約30nU/細胞/日〜約60nU/細胞/日、約30nU/細胞/日〜約55nU/細胞/日、約30nU/細胞/日〜約50nU/細胞/日、約30nU/細胞/日〜約45nU/細胞/日、約30nU/細胞/日〜約40nU/細胞/日、約30nU/細胞/日〜約35nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約120nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約110nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約100nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約95nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約90nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約85nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約80nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約75nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約70nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約65nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約60nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約55nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約50nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約45nU/細胞/日、約35nU/細胞/日〜約40nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約120nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約110nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約100nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約95nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約90nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約85nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約80nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約75nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約70nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約65nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約60nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約55nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約50nU/細胞/日、約40nU/細胞/日〜約45nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約120nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約110nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約100nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約95nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約90nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約85nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約80nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約75nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約70nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約65nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約60nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約55nU/細胞/日、約45nU/細胞/日〜約50nU/細胞/日、約50nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約50nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約50nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約50nU/細胞/日〜約120nU/細胞/日、約50nU/細胞/日〜約110nU/細胞/日、約50nU/細胞/日〜約100nU/細胞/日、約50nU/細胞/日〜約95nU/細胞/日、約50nU/細胞/日〜約90nU/細胞/日、約50nU/細胞/日〜約85nU/細胞/日、約50nU/細胞/日〜約80nU/細胞/日、約50nU/細胞/日〜約75nU/細胞/日、約50nU/細胞/日〜約70nU/細胞/日、約50nU/細胞/日〜約65nU/細胞/日、約50nU/細胞/日〜約60nU/細胞/日、約50nU/細胞/日〜約55nU/細胞/日、約55nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約55nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約55nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約55nU/細胞/日〜約120nU/細胞/日、約55nU/細胞/日〜約110nU/細胞/日、約55nU/細胞/日〜約100nU/細胞/日、約55nU/細胞/日〜約95nU/細胞/日、約55nU/細胞/日〜約90nU/細胞/日、約55nU/細胞/日〜約85nU/細胞/日、約55nU/細胞/日〜約80nU/細胞/日、約55nU/細胞/日〜約75nU/細胞/日、約55nU/細胞/日〜約70nU/細胞/日、約55nU/細胞/日〜約65nU/細胞/日、約55nU/細胞/日〜約60nU/細胞/日、約60nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約60nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約60nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約60nU/細胞/日〜約120nU/細胞/日、約60nU/細胞/日〜約110nU/細胞/日、約60nU/細胞/日〜約100nU/細胞/日、約60nU/細胞/日〜約95nU/細胞/日、約60nU/細胞/日〜約90nU/細胞/日、約60nU/細胞/日〜約85nU/細胞/日、約60nU/細胞/日〜約80nU/細胞/日、約60nU/細胞/日〜約75nU/細胞/日、約60nU/細胞/日〜約70nU/細胞/日、約60nU/細胞/日〜約65nU/細胞/日、約65nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約65nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約65nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約65nU/細胞/日〜約120nU/細胞/日、約65nU/細胞/日〜約110nU/細胞/日、約65nU/細胞/日〜約100nU/細胞/日、約65nU/細胞/日〜約95nU/細胞/日、約65nU/細胞/日〜約90nU/細胞/日、約65nU/細胞/日〜約85nU/細胞/日、約65nU/細胞/日〜約80nU/細胞/日、約65nU/細胞/日〜約75nU/細胞/日、約65nU/細胞/日〜約70nU/細胞/日、約70nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約70nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約70nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約70nU/細胞/日〜約120nU/細胞/日、約70nU/細胞/日〜約110nU/細胞/日、約70nU/細胞/日〜約100nU/細胞/日、約70nU/細胞/日〜約95nU/細胞/日、約70nU/細胞/日〜約90nU/細胞/日、約70nU/細胞/日〜約85nU/細胞/日、約70nU/細胞/日〜約80nU/細胞/日、約70nU/細胞/日〜約75nU/細胞/日、約75nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約75nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約75nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約75nU/細胞/日〜約120nU/細胞/日、約75nU/細胞/日〜約110nU/細胞/日、約75nU/細胞/日〜約100nU/細胞/日、約75nU/細胞/日〜約95nU/細胞/日、約75nU/細胞/日〜約90nU/細胞/日、約75nU/細胞/日〜約85nU/細胞/日、約75nU/細胞/日〜約80nU/細胞/日、約80nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約80nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約80nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約80nU/細胞/日〜約120nU/細胞/日、約80nU/細胞/日〜約110nU/細胞/日、約80nU/細胞/日〜約100nU/細胞/日、約80nU/細胞/日〜約95nU/細胞/日、約80nU/細胞/日〜約90nU/細胞/日、約80nU/細胞/日〜約85nU/細胞/日、約85nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約85nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約85nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約85nU/細胞/日〜約120nU/細胞/日、約85nU/細胞/日〜約110nU/細胞/日、約85nU/細胞/日〜約100nU/細胞/日、約85nU/細胞/日〜約95nU/細胞/日、約85nU/細胞/日〜約90nU/細胞/日、約90nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約90nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約90nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約90nU/細胞/日〜約120nU/細胞/日、約90nU/細胞/日〜約110nU/細胞/日、約90nU/細胞/日〜約100nU/細胞/日、約90nU/細胞/日〜約95nU/細胞/日、約95nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約95nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約95nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約95nU/細胞/日〜約120nU/細胞/日、約95nU/細胞/日〜約110nU/細胞/日、約95nU/細胞/日〜約100nU/細胞/日、約100nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約100nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約100nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約100nU/細胞/日〜約120nU/細胞/日、約100nU/細胞/日〜約110nU/細胞/日、約110nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約110nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約110nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約110nU/細胞/日〜約120nU/細胞/日、約120nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約120nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、約120nU/細胞/日〜約130nU/細胞/日、約130nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日、約130nU/細胞/日〜約140nU/細胞/日、または約140nU/細胞/日〜約150nU/細胞/日の細胞特異的LDH産生を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクター(例えば、本明細書に記載される産生バイオリアクターのいずれか)において細胞(例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか)を培養する工程をさらに含む。
式中、kは成長定数であり、tは日数での時間である。
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約10%/日〜約16%/日、約10%/日〜約14%/日、約10%/日〜約12%/日、約12%/日〜約140%/日、約12%/日〜約135%/日、
約12%/日〜約130%/日、約12%/日〜約125%/日、約12%/日〜約120%/日、約12%/日〜約115%/日、約12%/日〜約110%/日、約12%/日〜約105%/日、約12%/日〜約100%/日、約12%/日〜約95%/日、約12%/日〜約90%/日、約12%/日〜約85%/日、約12%/日〜約80%/日、約12%/日〜約75%/日、約12%/日〜約70%/日、約12%/日〜約65%/日、約12%/日〜約60%/日、約12%/日〜約55%/日、約12%/日〜約50%/日、約12%/日〜約45%/日、約12%/日〜約40%/日、約12%/日〜約35%/日、約12%/日〜約30%/日、約12%/日〜約25%/日、約12%/日〜約20%/日、約12%/日〜約18%/日、約12%/日〜約16%/日、約12%/日〜約14%/日、約14%/日〜約140%/日、約14%/日〜約135%/日、約14%/日〜約130%/日、約14%/日〜約125%/日、約14%/日〜約120%/日、約14%/日〜約115%/日、約14%/日〜約110%/日、約14%/日〜約105%/日、約14%/日〜約100%/日、約14%/日〜約95%/日、約14%/日〜約90%/日、約14%/日〜約85%/日、約14%/日〜約80%/日、約14%/日〜約75%/日、約14%/日〜約70%/日、約14%/日〜約65%/日、約14%/日〜約60%/日、約14%/日〜約55%/日、約14%/日〜約50%/日、約14%/日〜約45%/日、約14%/日〜約40%/日、約14%/日〜約35%/日、約14%/日〜約30%/日、約14%/日〜約25%/日、約14%/日〜約20%/日、約14%/日〜約18%/日、約14%/日〜約16%/日、約16%/日〜約140%/日、約16%/日〜約135%/日、約16%/日〜約130%/日、約16%/日〜約125%/日、約16%/日〜約120%/日、約16%/日〜約115%/日、約16%/日〜約110%/日、約16%/日〜約105%/日、約16%/日〜約100%/日、約16%/日〜約95%/日、約16%/日〜約90%/日、約16%/日〜約85%/日、約16%/日〜約80%/日、約16%/日〜約75%/日、約16%/日〜約70%/日、約16%/日〜約65%/日、約16%/日〜約60%/日、約16%/日〜約55%/日、約16%/日〜約50%/日、約16%/日〜約45%/日、約16%/日〜約40%/日、約16%/日〜約35%/日、約16%/日〜約30%/日、約16%/日〜約25%/日、約16%/日〜約20%/日、約16%/日〜約18%/日、約18%/日〜約140%/日、約18%/日〜約135%/日、約18%/日〜約130%/日、約18%/日〜約125%/日、約18%/日〜約120%/日、約18%/日〜約115%/日、約18%/日〜約110%/日、約18%/日〜約105%/日、約18%/日〜約100%/日、約18%/日〜約95%/日、約18%/日〜約90%/日、約18%/日〜約85%/日、約18%/日〜約80%/日、約18%/日〜約75%/日、約18%/日〜約70%/日、約18%/日〜約65%/日、約18%/日〜約60%/日、約18%/日〜約55%/日、約18%/日〜約50%/日、約18%/日〜約45%/日、約18%/日〜約40%/日、約18%/日〜約35%/日、約18%/日〜約30%/日、約18%/日〜約25%/日、約18%/日〜約20%/日、約20%/日〜約140%/日、約20%/日〜約135%/日、約20%/日〜約130%/日、約20%/日〜約125%/日、約20%/日〜約120%/日、約20%/日〜約115%/日、約20%/日〜約110%/日、約20%/日〜約105%/日、約20%/日〜約100%/日、約20%/日〜約95%/日、約20%/日〜約90%/日、約20%/日〜約85%/日、約20%/日〜約80%/日、約20%/日〜約75%/日、約20%/日〜約70%/日、約20%/日〜約65%/日、約20%/日〜約60%/日、約20%/日〜約55%/日、約20%/日〜約50%/日、約20%/日〜約45%/日、約20%/日〜約40%/日、約20%/日〜約35%/日、約20%/日〜約30%/日、約20%/日〜約25%/日、約25%/日〜約140%/日、約25%/日〜約135%/日、約25%/日〜約130%/日、約25%/日〜約125%/日、約25%/日〜約120%/日、約25%/日〜約115%/日、約25%/日〜約110%/日、約25%/日〜約105%/日、約25%/日〜約100%/日、約25%/日〜約95%/日、約25%/日〜約90%/日、約25%/日〜約85%/日、約25%/日〜約80%/日、約25%/日〜約75%/日、約25%/日〜約70%/日、約25%/日〜約65%/日、約25%/日〜約60%/日、約25%/日〜約55%/日、約25%/日〜約50%/日、約25%/日〜約45%/日、約25%/日〜約40%/日、約25%/日〜約35%/日、約25%/日〜約30%/日、約30%/日〜約140%/日、約30%/日〜約135%/日、約30%/日〜約130%/日、約30%/日〜約125%/日、約30%/日〜約120%/日、約30%/日〜約115%/日、約30%/日〜約110%/日、約30%/日〜約105%/日、約30%/日〜約100%/日、約30%/日〜約95%/日、約30%/日〜約90%/日、約30%/日〜約85%/日、約30%/日〜約80%/日、約30%/日〜約75%/日、約30%/日〜約70%/日、約30%/日〜約65%/日、約30%/日〜約60%/日、約30%/日〜約55%/日、約30%/日〜約50%/日、約30%/日〜約45%/日、約30%/日〜約40%/日、約30%/日〜約35%/日、約35%/日〜約140%/日、約35%/日〜約135%/日、約35%/日〜約130%/日、約35%/日〜約125%/日、約35%/日〜約120%/日、約35%/日〜約115%/日、約35%/日〜約110%/日、約35%/日〜約105%/日、約35%/日〜約100%/日、約35%/日〜約95%/日、約35%/日〜約90%/日、約35%/日〜約85%/日、約35%/日〜約80%/日、約35%/日〜約75%/日、約35%/日〜約70%/日、約35%/日〜約65%/日、約35%/日〜約60%/日、約35%/日〜約55%/日、約35%/日〜約50%/日、約35%/日〜約45%/日、約35%/日〜約40%/日、約40%/日〜約140%/日、約40%/日〜約135%/日、約40%/日〜約130%/日、約40%/日〜約125%/日、約40%/日〜約120%/日、約40%/日〜約115%/日、約40%/日〜約110%/日、約40%/日〜約105%/日、約40%/日〜約100%/日、約40%/日〜約95%/日、約40%/日〜約90%/日、約40%/日〜約85%/日、約40%/日〜約80%/日、約40%/日〜約75%/日、約40%/日〜約70%/日、約40%/日〜約65%/日、約40%/日〜約60%/日、約40%/日〜約55%/日、約40%/日〜約50%/日、約40%/日〜約45%/日、約45%/日〜約140%/日、約45%/日〜約135%/日、約45%/日〜約130%/日、約45%/日〜約125%/日、約45%/日〜約120%/日、約45%/日〜約115%/日、約45%/日〜約110%/日、約45%/日〜約105%/日、約45%/日〜約100%/日、約45%/日〜約95%/日、約45%/日〜約90%/日、約45%/日〜約85%/日、約45%/日〜約80%/日、約45%/日〜約75%/日、約45%/日〜約70%/日、約45%/日〜約65%/日、約45%/日〜約60%/日、約45%/日〜約55%/日、約45%/日〜約50%/日、約50%/日〜約140%/日、約50%/日〜約135%/日、約50%/日〜約130%/日、約50%/日〜約125%/日、約50%/日〜約120%/日、約50%/日〜約115%/日、約50%/日〜約110%/日、約50%/日〜約105%/日、約50%/日〜約100%/日、約50%/日〜約95%/日、約50%/日〜約90%/日、約50%/日〜約85%/日、約50%/日〜約80%/日、約50%/日〜約75%/日、約50%/日〜約70%/日、約50%/日〜約65%/日、約50%/日〜約60%/日、約50%/日〜約55%/日、約55%/日〜約140%/日、約55%/日〜約135%/日、約55%/日〜約130%/日、約55%/日〜約125%/日、約55%/日〜約120%/日、約55%/日〜約115%/日、約55%/日〜約110%/日、約55%/日〜約105%/日、約55%/日〜約100%/日、約55%/日〜約95%/日、約55%/日〜約90%/日、約55%/日〜約85%/日、約55%/日〜約80%/日、約55%/日〜約75%/日、約55%/日〜約70%/日、約55%/日〜約65%/日、約55%/日〜約60%/日、約60%/日〜約140%/日、約60%/日〜約135%/日、約60%/日〜約130%/日、約60%/日〜約125%/日、約60%/日〜約120%/日、約60%/日〜約115%/日、約650%/日〜約110%/日、約60%/日〜約105%/日、約60%/日〜約100%/日、約60%/日〜約95%/日、約60%/日〜約90%/日、約60%/日〜約85%/日、約60%/日〜約80%/日、約60%/日〜約75%/日、約60%/日〜約70%/日、約60%/日〜約65%/日、約65%/日〜約140%/日、約65%/日〜約135%/日、約65%/日〜約130%/日、約65%/日〜約125%/日、約65%/日〜約120%/日、約65%/日〜約115%/日、約65%/日〜約110%/日、約65%/日〜約105%/日、約65%/日〜約100%/日、約65%/日〜約95%/日、約65%/日〜約90%/日、約65%/日〜約85%/日、約65%/日〜約80%/日、約65%/日〜約75%/日、約65%/日〜約70%/日、約70%/日〜約140%/日、約70%/日〜約135%/日、約70%/日〜約130%/日、約70%/日〜約125%/日、約70%/日〜約120%/日、約70%/日〜約115%/日、約70%/日〜約110%/日、約70%/日〜約105%/日、約70%/日〜約100%/日、約70%/日〜約95%/日、約70%/日〜約90%/日、約70%/日〜約85%/日、約70%/日〜約80%/日、約70%/日〜約75%/日、約75%/日〜約140%/日、約75%/日〜約135%/日、約75%/日〜約130%/日、約75%/日〜約125%/日、約75%/日〜約120%/日、約75%/日〜約115%/日、約75%/日〜約110%/日、約75%/日〜約105%/日、約75%/日〜約100%/日、約75%/日〜約95%/日、約75%/日〜約90%/日、約75%/日〜約85%/日、約75%/日〜約80%/日、約80%/日〜約140%/日、約80%/日〜約135%/日、約80%/日〜約130%/日、約80%/日〜約125%/日、約80%/日〜約120%/日、約80%/日〜約115%/日、約80%/日〜約110%/日、約80%/日〜約105%/日、約80%/日〜約100%/日、約80%/日〜約95%/日、約80%/日〜約90%/日、約80%/日〜約85%/日、約85%/日〜約140%/日、約85%/日〜約135%/日、約85%/日〜約130%/日、約85%/日〜約125%/日、約85%/日〜約120%/日、約85%/日〜約115%/日、
約85%/日〜約110%/日、約85%/日〜約105%/日、約85%/日〜約100%/日、約85%/日〜約95%/日、約85%/日〜約90%/日、約90%/日〜約140%/日、約90%/日〜約135%/日、約90%/日〜約130%/日、約90%/日〜約125%/日、約90%/日〜約120%/日、
約90%/日〜約115%/日、約90%/日〜約110%/日、約90%/日〜約105%/日、約90%/日〜約100%/日、約90%/日〜約95%/日、約95%/日〜約140%/日、約95%/日〜約135%/日、約95%/日〜約130%/日、約95%/日〜約125%/日、約95%/日〜約120%/日、約95%/日〜約115%/日、約95%/日〜約110%/日、約95%/日〜約105%/日、約95%/日〜約100%/日、約100%/日〜約140%/日、約100%/日〜約135%/日、約100%/日〜約130%/日、約100%/日〜約125%/日、約100%/日〜約120%/日、約100%/日〜約115%/日、約100%/日〜約110%/日、約100%/日〜約105%/日、約105%/日〜約140%/日、約105%/日〜約135%/日、約105%/日〜約130%/日、約105%/日〜約125%/日、約105%/日〜約120%/日、約105%/日〜約115%/日、約105%/日〜約110%/日、約110%/日〜約140%/日、約110%/日〜約135%/日、約110%/日〜約130%/日、約110%/日〜約125%/日、約110%/日〜約120%/日、約110%/日〜約115%/日、約115%/日〜約140%/日、約115%/日〜約135%/日、約115%/日〜約130%/日、約115%/日〜約125%/日、約115%/日〜約120%/日、約120%/日〜約140%/日、約120%/日〜約135%/日、約120%/日〜約130%/日、約120%/日〜約125%/日、約125%/日〜約140%/日、約125%/日〜約135%/日、約125%/日〜約130%/日、約130%/日〜約140%/日、約130%/日〜約135%/日、または約135%/日〜約140%/日の見かけの成長速度を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクター(例えば、本明細書に記載される産生バイオリアクターのいずれか)において細胞(例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか)を培養する工程をさらに含む。
産生バイオリアクター(例えば、本明細書に記載される産生バイオリアクターのいずれか)における細胞生存度を改善する方法であって、(a)試験培養容器における複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程であって、複数の条件は、パラメーターのセットによって規定される、工程;(b)試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度にとって最適な条件を選択する工程;および(c)選択された条件下で、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程、を含む方法もまた、本明細書で提供される。
産生バイオリアクター(例えば、本明細書に記載される産生バイオリアクターのいずれか)における細胞生存度を予測する方法であって、(a)少なくとも2つ(例えば、2つ、3つ、4つ、5つまたは6つ)のパラメーターを含むパラメーターのセットを選択する工程;(b)試験培養容器(例えば、本明細書に記載される試験培養容器のいずれか)におけるパラメーターのセットによって規定される複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程;および(c)試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を予測する工程、を含む方法もまた、本明細書で提供される。
産生バイオリアクターにおいて細胞(例えば、本明細書に記載される細胞のいずれか)を培養する方法であって、以下の条件:
(a)産生バイオリアクターは、約1.0〜約110(例えば、約3.0〜約7.0、約4.0〜約6.0、約5.0〜約6.0、または約6.0)(例えば、約1.0〜約110、約1.0〜約95、約1.0〜約90、約1.0〜約85、約1.0〜約80、約1.0〜約75、約1.0〜約70、約1.0〜約65、約1.0〜約60、約1.0〜約55、約1.0〜約50、約1.0〜約45、約1.0〜約40、約1.0〜約35、約1.0〜約30、約1.0〜約25、約1.0〜約20、約1.0〜約18、約1.0〜約16、約1.0〜約14、約1.0〜約12、約1.0〜約10、約1.0〜約9.0、約1.0〜約8.0、約1.0〜約7.0、約1.0〜約6.0、約1.0〜約5.0、約1.0〜約4.0、約1.0〜約3.0、約1.0〜約2.0、約2.0〜約110、約2.0〜約95、約2.0〜約90、約2.0〜約85、約2.0〜約80、約2.0〜約75、約2.0〜約70、約2.0〜約65、約2.0〜約60、約2.0〜約55、約2.0〜約50、約2.0〜約45、約2.0〜約40、約2.0〜約35、約2.0〜約30、約2.0〜約25、約2.0〜約20、約2.0〜約18、約2.0〜約16、約2.0〜約14、約2.0〜約12、約2.0〜約10、約2.0〜約9.0、約2.0〜約8.0、約2.0〜約7.0、約2.0〜約6.0、約2.0〜約5.0、約2.0〜約4.0、約2.0〜約3.0、約3.0〜約110、約3.0〜約95、約3.0〜約90、約3.0〜約85、約3.0〜約80、約3.0〜約75、約3.0〜約70、約3.0〜約65、約3.0〜約60、約3.0〜約55、約3.0〜約50、約3.0〜約45、約3.0〜約40、約3.0〜約35、約3.0〜約30、約3.0〜約25、約3.0〜約20、約3.0〜約18、約3.0〜約16、約3.0〜約14、約3.0〜約12、約3.0〜約10、約3.0〜約9.0、約3.0〜約8.0、約3.0〜約7.0、約3.0〜約6.0、約3.0〜約5.0、約3.0〜約4.0、約4.0〜約110、約4.0〜約95、約4.0〜約90、約4.0〜約85、約4.0〜約80、約4.0〜約75、約4.0〜約70、約4.0〜約65、約4.0〜約60、約4.0〜約55、約4.0〜約50、約4.0〜約45、約4.0〜約40、約4.0〜約35、約4.0〜約30、約4.0〜約25、約4.0〜約20、約4.0〜約18、約4.0〜約16、約4.0〜約14、約4.0〜約12、約4.0〜約10、約4.0〜約9.0、約4.0〜約8.0、約4.0〜約7.0、約4.0〜約6.0、約4.0〜約5.0、約5.0〜約110、約5.0〜約95、約5.0〜約90、約5.0〜約85、約5.0〜約80、約5.0〜約75、約5.0〜約70、約5.0〜約65、約5.0〜約60、約5.0〜約55、約5.0〜約50、約5.0〜約45、約5.0〜約40、約5.0〜約35、約5.0〜約30、約5.0〜約25、約5.0〜約20、約5.0〜約18、約5.0〜約16、約5.0〜約14、約5.0〜約12、約5.0〜約10、約5.0〜約9.0、約5.0〜約8.0、約5.0〜約7.0、約5.0〜約6.0、約6.0〜約110、約6.0〜約95、約6.0〜約90、約6.0〜約85、約6.0〜約80、約6.0〜約75、約6.0〜約70、約6.0〜約65、約6.0〜約60、約6.0〜約55、約6.0〜約50、約6.0〜約45、約6.0〜約40、約6.0〜約35、約6.0〜約30、約6.0〜約25、約6.0〜約20、約6.0〜約18、約6.0〜約16、約6.0〜約14、約6.0〜約12、約6.0〜約10、約6.0〜約9.0、約6.0〜約8.0、約6.0〜約7.0、約7.0〜約110、約7.0〜約95、約7.0〜約90、約7.0〜約85、約7.0〜約80、約7.0〜約75、約7.0〜約70、約7.0〜約65、約7.0〜約60、約7.0〜約55、約7.0〜約50、約7.0〜約45、約7.0〜約40、約7.0〜約35、約7.0〜約30、約7.0〜約25、約7.0〜約20、約7.0〜約18、約7.0〜約16、約7.0〜約14、約7.0〜約12、約7.0〜約10、約7.0〜約9.0、約7.0〜約8.0、約8.0〜約110、約8.0〜約95、約8.0〜約90、約8.0〜約85、約8.0〜約80、約8.0〜約75、約8.0〜約70、約8.0〜約65、約8.0〜約60、約8.0〜約55、約8.0〜約50、約8.0〜約45、約8.0〜約40、約8.0〜約35、約8.0〜約30、約8.0〜約25、約8.0〜約20、約8.0〜約18、約8.0〜約16、約8.0〜約14、約8.0〜約12、約8.0〜約10、約8.0〜約9.0、約9.0〜約110、約9.0〜約95、約9.0〜約90、約9.0〜約85、約9.0〜約80、約9.0〜約75、約9.0〜約70、約9.0〜約65、約9.0〜約60、約9.0〜約55、約9.0〜約50、約9.0〜約45、約9.0〜約40、約9.0〜約35、約9.0〜約30、約9.0〜約25、約9.0〜約20、約9.0〜約18、約9.0〜約16、約9.0〜約14、約9.0〜約12、約9.0〜約10、約10〜約110、約10〜約95、約10〜約90、約10〜約85、約10〜約80、約10〜約75、約10〜約70、約10〜約65、約10〜約60、約10〜約55、約10〜約50、約10〜約45、約10〜約40、約10〜約35、約10〜約30、約10〜約25、約10〜約20、約10〜約18、約10〜約16、約10〜約14、約10〜約12、約12〜約110、約12〜約95、約12〜約90、約12〜約85、約12〜約80、約12〜約75、約12〜約70、約12〜約65、約12〜約60、約12〜約55、約12〜約50、約12〜約45、約12〜約40、約12〜約35、約12〜約30、約12〜約25、約12〜約20、約12〜約18、約12〜約16、約12〜約14、約14〜約110、約14〜約95、約14〜約90、約14〜約85、約14〜約80、約14〜約75、約14〜約70、約14〜約65、約14〜約60、約14〜約55、約14〜約50、約14〜約45、約14〜約40、約14〜約35、約14〜約30、約14〜約25、約14〜約20、約14〜約18、約14〜約16、約16〜約110、約16〜約95、約16〜約90、約16〜約85、約16〜約80、約16〜約75、約16〜約70、約16〜約65、約16〜約60、約16〜約55、約16〜約50、約16〜約45、約16〜約40、約16〜約35、約16〜約30、約16〜約25、約16〜約20、約16〜約18、約18〜約110、約18〜約95、約18〜約90、約18〜約85、約18〜約80、約18〜約75、約18〜約70、約18〜約65、約18〜約60、約18〜約55、約18〜約50、約18〜約45、約18〜約40、約18〜約35、約18〜約30、約18〜約25、約18〜約20、約20〜約110、約20〜約95、約20〜約90、約20〜約85、約20〜約80、約20〜約75、約20〜約70、約20〜約65、約20〜約60、約20〜約55、約20〜約50、約20〜約45、約20〜約40、約20〜約35、約20〜約30、約20〜約25、約25〜約110、約25〜約95、約25〜約90、約25〜約85、約25〜約80、約25〜約75、約25〜約70、約25〜約65、約25〜約60、約25〜約55、約25〜約50、約25〜約45、約25〜約40、約25〜約35、約25〜約30、約30〜約110、約30〜約95、約30〜約90、約30〜約85、約30〜約80、約30〜約75、約30〜約70、約30〜約65、約30〜約60、約30〜約55、約30〜約50、約30〜約45、約30〜約40、約30〜約35、約35〜約110、約35〜約95、約35〜約90、約35〜約85、約35〜約80、約35〜約75、約35〜約70、約35〜約65、約35〜約60、約35〜約55、約35〜約50、約35〜約45、約35〜約40、約40〜約110、約40〜約95、約40〜約90、約40〜約85、約40〜約80、約40〜約75、約40〜約70、約40〜約65、約40〜約60、約40〜約55、約40〜約50、約40〜約45、約45〜約110、約45〜約95、約45〜約90、約45〜約85、約45〜約80、約45〜約75、約45〜約70、約45〜約65、約45〜約60、約45〜約55、約45〜約50、約50〜約110、約50〜約95、約50〜約90、約50〜約85、約50〜約80、約50〜約75、約50〜約70、約50〜約65、約50〜約60、約50〜約55、約55〜約110、約55〜約95、約55〜約90、約55〜約85、約55〜約80、約55〜約75、約55〜約70、約55〜約65、約55〜約60、約60〜約110、約60〜約95、約60〜約90、約60〜約85、約60〜約80、約60〜約75、約60〜約70、約60〜約65、約65〜約110、約65〜約95、約65〜約90、約65〜約85、約65〜約80、約65〜約75、約65〜約70、約70〜約110、約70〜約95、約70〜約90、約70〜約85、約70〜約80、約70〜約75、約75〜約110、約75〜約95、約75〜約90、約75〜約85、約75〜約80、約80〜約110、約80〜約95、約80〜約90、約80〜約85、約85〜約110、約85〜約95、約85〜約90、約90〜約110、約90〜約95、約95〜約110、約95〜約105、約95〜約100、約100〜約110、約100〜約105、または約105〜約110)のP/V(W/m3)を有する;
(b)産生バイオリアクターは、約0.01〜約0.10(例えば、約0.02〜約0.08、約0.04〜約0.06、または約0.06)(例えば、約0.01〜約0.10、約0.01〜約0.09、約0.01〜約0.08、約0.01〜約0.07、約0.01〜約0.06、約0.01〜約0.05、約0.01〜約0.04、約0.01〜約0.03、約0.01〜約0.02、約0.02〜約0.10、約0.02〜約0.09、約0.02〜約0.08、約0.02〜約0.07、約0.02〜約0.06、約0.02〜約0.05、約0.02〜約0.04、約0.02〜約0.03、約0.03〜約0.10、約0.03〜約0.09、約0.03〜約0.08、約0.03〜約0.07、約0.03〜約0.06、約0.03〜約0.05、約0.03〜約0.04、約0.04〜約0.10、約0.04〜約0.09、約0.04〜約0.08、約0.04〜約0.07、約0.04〜約0.06、約0.04〜約0.05、約0.05〜約0.10、約0.05〜約0.09、約0.05〜約0.08、約0.05〜約0.07、約0.05〜約0.06、約0.06〜約0.10、約0.06〜約0.09、約0.06〜約0.08、約0.06〜約0.07、約0.07〜約0.10、約0.07〜約0.09、約0.07〜約0.08、約0.08〜約0.10、約0.08〜約0.09または約0.09〜約0.10)の空気容量/液体容量/分(VVM)(分−1)を有する;
(c)培地は、約0ppm〜約5,000ppm(または本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか)の濃度を有する感作剤(例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の感作剤のいずれか)を含む;および
(d)液体培養培地は、約1g/L〜約15g/L(例えば、本明細書に記載されるこの範囲の下位範囲のいずれか、例えば、約1g/L〜約15g/L、約1g/L〜約14g/L、約1g/L〜約13g/L、約1g/L〜約12g/L、約1g/L〜約11g/L、約2g/L〜約15g/L、約2g/L〜約14g/L、約2g/L〜約13g/L、約2g/L〜約12g/L、約2g/L〜約11g/L、約3g/L〜約15g/L、約3g/L〜約14g/L、約3g/L〜約13g/L、約3g/L〜約12g/L、約3g/L〜約11g/L、約4g/L〜約15g/L、約4g/L〜約14g/L、約4g/L〜約13g/L、約4g/L〜約12g/L、約4g/L〜約11g/L、約5g/L〜約15g/L、約5g/L〜約14g/L、約5g/L〜約13g/L、約5g/L〜約12g/L、約5g/L〜約11g/L、約6g/L〜約15g/L、約6g/L〜約14g/L、約6g/L〜約13g/L、約6g/L〜約12g/L、約6g/L〜約11g/L、約7g/L〜約15g/L、約7g/L〜約14g/L、約7g/L〜約13g/L、約7g/L〜約12g/L、約7g/L〜約11g/L、約8g/L〜約15g/L、約8g/L〜約14g/L、約8g/L〜約13g/L、約8g/L〜約12g/L、約8g/L〜約11g/L、約9g/L〜約15g/L、約9g/L〜約14g/L、約9g/L〜約13g/L、約9g/L〜約12g/L、約9g/L〜約11g/L、約10g/L〜約15g/L、約10g/L〜約14g/L、約10g/L〜約13g/L、約10g/L〜約12g/L、約10g/L〜約11g/L、約11g/L〜約15g/L、約11g/L〜約14g/L、約11g/L〜約13g/L、約11g/L〜約12g/L、約12g/L〜約15g/L、約12g/L〜約14g/L、約12g/L〜約13g/L、約13g/L〜約15g/L、約13g/L〜約14g/L、または約14g/L〜約15g/L)である濃度を有する保護剤(例えば、本明細書に記載されるまたは当該分野で公知の保護剤のいずれか)を含む
のうち1つまたはそれ以上(例えば、2つ、3つまたは4つ)の下で、液体培養培地において細胞を培養する工程を含む、方法もまた、本明細書で提供される。
本発明は、特許請求の範囲に記載される本発明の範囲を限定しない、以下の実施例にさらに記載される。
回転式撹拌(RPM3)、感作剤の濃度および保護剤の濃度を、パラメーターとして選択した。内接中心複合計画と組み合わせた完全実施要因計画を使用して、試験条件のセットを決定した(図7)。特異的LDH産生値を、各試験条件において測定した。結果を使用して、選択されたパラメーターの推定された等高線を提供した。劣った成績の領域および運転失敗の領域を同定した(図9)。
概念実証実験をベンチトップ規模で実施して、本明細書に記載される予測方法の精度を決定した。
実験を産生規模で実施して、本明細書に記載されるモデルの精度を決定した。
その詳細な説明と併せて本発明を記載してきたが、上述の説明は例示を意図し、添付の特許請求の範囲によって規定される本発明の範囲を限定しない意図であることを理解すべきである。他の態様、利点および改変は、以下の特許請求の範囲の範囲内である。
Claims (110)
- 産生バイオリアクターにおける細胞生存度に対する感作剤の濃度の影響を予測する方法であって、
(a)試験培養容器における複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程であって、複数の試験条件は、パラメーターのセットによって規定される、工程;および
(b)試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度に対する感作剤の濃度の影響を予測する工程
を含む、前記方法。 - パラメーターのセットは、剪断応力、感作剤の濃度および保護剤の濃度を含む、請求項1に記載の方法。
- 複数の試験条件は、完全実施要因スクリーニングおよび/または内接中心複合計画に基づいて選択される、請求項1または2に記載の方法。
- 感作剤は、消泡剤である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 消泡剤は、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤である、請求項4に記載の方法。
- 消泡剤は、シメチコンである、請求項4に記載の方法。
- 試験培養容器は、約5mL〜約5Lの容量を有する、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 試験培養容器は、約10mL〜約500mLの容量を有する、請求項7に記載の方法。
- 試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコである、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、約5L〜約20,000Lの容量を有する、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、約50L〜約10,000Lの容量を有する、請求項10に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターである、請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、流加バイオリアクターである、請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、40%/日未満の特異的細胞死亡率を有すると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、20%/日未満の特異的細胞死亡率を有すると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、150nU/細胞/日未満の細胞特異的LDH産生を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、100nU/細胞/日未満の細胞特異的LDH産生を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、1%/日よりも大きい見かけの成長速度を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、5%/日よりも大きい見かけの成長速度を生じると予測される感作剤の濃度を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
- 細胞は、組換え治療タンパク質をコードする核酸を含む、請求項14〜19のいずれか1項に記載の方法。
- 組換え治療タンパク質を収集する工程をさらに含む、請求項20に記載の方法。
- 組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む、請求項21に記載の方法。
- 精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む、請求項22に記載の方法。
- 細胞は、細菌、酵母または哺乳動物細胞である、請求項1〜23のいずれか1項に記載の方法。
- 細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)の濃度を測定することによって決定される、請求項1〜24のいずれか1項に記載の方法。
- 試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコであり、複数の試験条件は、
(a)約125RPM〜約400RPMの回転式撹拌;
(b)約0ppm〜約120ppmの感作剤の濃度;および
(c)約1g/L〜約10g/Lである保護剤の濃度
のうち1つまたはそれ以上を含む、請求項1〜8および10〜25のいずれか1項に記載の方法。 - 保護剤は、ポロクサマー、ポロキサミンまたはプルロニックポリオールである、請求項2または26に記載の方法。
- ポロクサマーは、ポロクサマー−188、ポロクサマー−401、ポロクサマー−402またはポロクサマー−407である、請求項27に記載の方法。
- ポロキサミンは、ポロキサミン−904またはポロキサミン−908である、請求項27に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞生存度を改善する方法であって、
(a)試験培養容器における複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程であって、複数の条件は、パラメーターのセットによって規定される、工程;
(b)試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度にとって最適な条件を選択する工程;および
(d)選択された条件下で、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程
を含む、前記方法。 - パラメーターのセットは、剪断応力、感作剤の濃度および保護剤の濃度を含む、請求項30に記載の方法。
- 複数の試験条件は、完全実施要因スクリーニングおよび/または内接中心複合計画に基づいて選択される、請求項30または31に記載の方法。
- 感作剤は、消泡剤である、請求項31または32に記載の方法。
- 消泡剤は、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤である、請求項33に記載の方法。
- 消泡剤は、シメチコンである、請求項33に記載の方法。
- 試験培養容器は、約5mL〜約5Lの容量を有する、請求項30〜35のいずれか1項に記載の方法。
- 試験培養容器は、約10mL〜約500mLの容量を有する、請求項36に記載の方法。
- 試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコである、請求項30〜37のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、約5L〜約20,000Lの容量を有する、請求項30〜38のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、約50L〜約10,000Lの容量を有する、請求項39に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターである、請求項30〜40のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、流加バイオリアクターである、請求項30〜40のいずれか1項に記載の方法。
- 工程(c)は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、40%/日未満の特異的細胞死亡率を生じる、請求項30〜42のいずれか1項に記載の方法。
- 工程(c)は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、20%/日未満の特異的細胞死亡率を生じる、請求項30〜42のいずれか1項に記載の方法。
- 工程(c)は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、150nU/細胞/日未満の細胞特異的LDH産生を生じる、請求項30〜42のいずれか1項に記載の方法。
- 工程(c)は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、100nU/細胞/日未満の細胞特異的LDH産生を生じる、請求項30〜42のいずれか1項に記載の方法。
- 工程(c)は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、1%/日よりも大きい見かけの成長速度を生じる、請求項30〜42のいずれか1項に記載の方法。
- 工程(c)は、産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、5%/日よりも大きい見かけの成長速度を生じる、請求項30〜42のいずれか1項に記載の方法。
- 細胞は、組換え治療タンパク質をコードする核酸を含む、請求項30〜48のいずれか1項に記載の方法。
- 組換え治療タンパク質を収集する工程をさらに含む、請求項49に記載の方法。
- 組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む、請求項50に記載の方法。
- 精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む、請求項51に記載の方法。
- 細胞は、細菌、酵母または哺乳動物細胞である、請求項30〜52のいずれか1項に記載の方法。
- 細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)の濃度を測定することによって決定される、請求項30〜53のいずれか1項に記載の方法。
- 試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコであり、複数の試験条件は、
(a)約125RPM〜約400RPMの回転式撹拌;
(b)約0ppm〜約120ppmの感作剤の濃度;および
(c)約1g/L〜約10g/Lである保護剤の濃度
のうち1つまたはそれ以上を含む、請求項30〜37および39〜54のいずれか1項に記載の方法。 - 保護剤は、ポロクサマー、ポロキサミンまたはプルロニックポリオールである、請求項31または55に記載の方法。
- ポロクサマーは、ポロクサマー−188、ポロクサマー−401、ポロクサマー−402またはポロクサマー−407である、請求項56に記載の方法。
- ポロキサミンは、ポロキサミン−904またはポロキサミン−908である、請求項56に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞生存度を予測するための方法であって、
(a)少なくとも2つのパラメーターを含むパラメーターのセットを選択する工程;
(b)試験培養容器におけるパラメーターのセットによって規定される複数の試験条件下での細胞生存度を決定する工程;および
(c)試験培養容器における複数の条件下での細胞生存度に基づいて、産生バイオリアクターにおける細胞生存度を予測する工程
を含む、前記方法。 - パラメーターのセットは、剪断応力、感作剤の濃度および保護剤の濃度を含む、請求項59に記載の方法。
- 複数の試験条件は、完全実施要因スクリーニングおよび/または内接中心複合計画に基づいて選択される、請求項59または60に記載の方法。
- 感作剤は、消泡剤である、請求項60または61に記載の方法。
- 消泡剤は、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤である、請求項62に記載の方法。
- 消泡剤は、シメチコンである、請求項62に記載の方法。
- 試験培養容器は、約5mL〜約5Lの容量を有する、請求項59〜64のいずれか1項に記載の方法。
- 試験培養容器は、約10mL〜約500mLの容量を有する、請求項65に記載の方法。
- 試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコである、請求項59〜66のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、約5L〜約20,000Lの容量を有する、請求項59〜67のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、約50L〜約10,000Lの容量を有する、請求項68に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターである、請求項59〜69のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、流加バイオリアクターである、請求項59〜69のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、40%/日未満の特異的細胞死亡率を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項59〜71のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、20%/日未満の特異的細胞死亡率を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項59〜71のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、150nU/細胞/日未満の細胞特異的LDH産生を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項59〜71のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、100nU/細胞/日未満の細胞特異的LDH産生を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項59〜71のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、1%/日よりも大きい見かけの成長速度を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項59〜71のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、5%/日よりも大きい見かけの成長速度を生じると予測される条件を使用して、産生バイオリアクターにおいて細胞を培養する工程をさらに含む、請求項59〜71のいずれか1項に記載の方法。
- 細胞は、組換え治療タンパク質をコードする核酸を含む、請求項72〜77のいずれか1項に記載の方法。
- 組換え治療タンパク質を収集する工程をさらに含む、請求項78に記載の方法。
- 組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む、請求項79に記載の方法。
- 精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む、請求項80に記載の方法。
- 細胞は、細菌、酵母または哺乳動物細胞である、請求項59〜81のいずれか1項に記載の方法。
- 細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)の濃度を測定することによって決定される、請求項59〜82のいずれか1項に記載の方法。
- 試験培養容器は、バッフル付き振盪フラスコであり、複数の試験条件は、
(a)約125RPM〜約400RPMの回転式撹拌;
(b)約0ppm〜約120ppmの感作剤の濃度;および
(c)約1g/L〜約10g/Lである保護剤の濃度
のうち1つまたはそれ以上を含む、請求項59〜66および68〜83のいずれか1項に記載の方法。 - 保護剤は、ポロクサマー、ポロキサミンまたはプルロニックポリオールである、請求項60または84に記載の方法。
- ポロクサマーは、ポロクサマー−188、ポロクサマー−401、ポロクサマー−402またはポロクサマー−407である、請求項85に記載の方法。
- ポロキサミンは、ポロキサミン−904またはポロキサミン−908である、請求項85に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおいて細胞を培養するための方法であって、以下の条件:
e)産生バイオリアクターは、約1.0〜約110(例えば、約3.0〜約8.0、約3.0〜約7.0、約4.0〜約6.0、約5.0〜約6.0、または約6.0)のP/V(kW/m3)を有する;
f)産生バイオリアクターは、約0.01〜約0.10(例えば、約0.02〜約0.08、約0.04〜約0.06、または約0.06)の空気容量/液体容量/分(VVM)(分−1)を有する;
g)培地は、約0ppm〜約5,000ppm(例えば、約0ppm〜約120ppm、約50ppm〜約110ppm、約80ppm〜約100ppm、または約100ppm)の濃度を有する感作剤を含む;および
h)液体培養培地は、約1g/L〜約15g/L(例えば、約2g/L〜約10g/L、約3g/L〜約7g/L、約4g/L〜約6g/L、または約5g/L)である濃度を有する保護剤を含む
のうち1つまたはそれ以上の下で、液体培養培地において細胞を培養する工程を含む、前記方法。 - 感作剤は、消泡剤である、請求項88に記載の方法。
- 消泡剤は、ポリジメチルシロキサンベースの消泡剤である、請求項89に記載の方法。
- 消泡剤は、シメチコンである、請求項89に記載の方法。
- 保護剤は、ポロクサマー、ポロキサミンまたはプルロニックポリオールである、請求項88〜91のいずれか1項に記載の方法。
- ポロクサマーは、ポロクサマー−188、ポロクサマー−401、ポロクサマー−402またはポロクサマー−407である、請求項92に記載の方法。
- ポロキサミンは、ポロキサミン−904またはポロキサミン−908である、請求項92に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、約5L〜約20,000Lの容量を有する、請求項88〜94のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、約50L〜約10,000Lの容量を有する、請求項95に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、灌流バイオリアクターである、請求項88〜96のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターは、流加バイオリアクターである、請求項88〜96のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、40%/日未満の特異的細胞死亡率を生じる、請求項88〜98のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、20%/日未満の特異的細胞死亡率を生じる、請求項88〜98のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、150nU/細胞/日未満の細胞特異的LDH産生を生じる、請求項88〜98のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、100nU/細胞/日未満の細胞特異的LDH産生を生じる、請求項88〜98のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、1%/日よりも大きい見かけの成長速度を生じる、請求項88〜98のいずれか1項に記載の方法。
- 産生バイオリアクターにおける細胞の培養の間に、5%/日よりも大きい見かけの成長速度を生じる、請求項88〜98のいずれか1項に記載の方法。
- 細胞は、組換え治療タンパク質をコードする核酸を含む、請求項88〜98のいずれか1項に記載の方法。
- 組換え治療タンパク質を収集する工程をさらに含む、請求項105に記載の方法。
- 組換え治療タンパク質を精製する工程をさらに含む、請求項106に記載の方法。
- 精製された組換え治療タンパク質を製剤化する工程をさらに含む、請求項107に記載の方法。
- 細胞は、細菌、酵母または哺乳動物細胞である、請求項88〜108のいずれか1項に記載の方法。
- 細胞生存度は、試験培養容器中の乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)の濃度を測定することによって決定される、請求項88〜109のいずれか1項に記載の方法。
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