JP2021509475A - 外傷性脳損傷を診断及び査定するための、新規のバイオマーカー及び方法 - Google Patents

外傷性脳損傷を診断及び査定するための、新規のバイオマーカー及び方法 Download PDF

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Abstract

本開示は、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）など、頭部への損傷を負っている又はこれを負った可能性がある対象を診断及び査定するための方法に関する。特に、本開示は、それらの検出及び／又は示差的発現が、対象における、ＴＢＩの存在又は非存在を評価するのに使用される場合があり、対象を、特定の種類のＴＢＩ（例えば、重度ＴＢＩ又は軽度ＴＢＩのサブクラス）を有するものとして診断するためのベースとして使用されうる、多様なバイオマーカーを同定する。多様なＴＢＩバイオマーカーは、個別に又は組合せで検出される場合があり、対象のＴＢＩ状態を評価することの一部としての、重要な診断ツール、予後診断ツール及び／又はＴＢＩ危険性層別化ツールとして使用されうる。

Description

本出願は、それらの内容の全てが、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれている、２０１７年１２月２９日に出願された、米国仮出願第６２／６１１，７７８号、２０１８年２月１４日に出願された、米国仮出願第６２／６３０，７０４号に対する優先権を主張する。
本開示は、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）など、頭部への損傷を負っている又はこれを負った可能性がある対象を診断及び査定するための方法に関する。特に、本開示は、それらの検出及び／又は示差的発現が、対象における、ＴＢＩの存在又は非存在を評価するのに使用される場合があり、対象を、特定の種類のＴＢＩ（例えば、重度ＴＢＩ又は軽度ＴＢＩのサブクラス）を有するものとして診断するためのベースとして使用されうる、多様なバイオマーカーを同定する。多様なＴＢＩバイオマーカーは、個別に又は組合せで検出される場合があり、対象のＴＢＩ状態を評価することの一部としての、重要な診断ツール、予後診断ツール及び／又はＴＢＩ危険性層別化ツールとして使用されうる。
米国におけるだけで、毎年５００万例を超える軽度外傷性脳損傷（ｍＴＢＩ）が生じている。現在のところ、患者評価の一助とするのに利用可能である、簡単、客観的で、正確な測定法は存在しない。実際、ＴＢＩの査定及び診断の多くは、主観的データに基づく。残念ながら、頭部ＣＴ及びＧｌａｓｇｏｗ昏睡スコア（ＧＣＳ）などの客観的測定法は、軽度ＴＢＩの査定において、それほど総合的又は高感度ではない。さらに、頭部ＣＴは、ｍＴＢＩについて、ほとんどの場合何も明らかにせず、高価であり、患者を、不要な放射線へと曝露する。加えて、陰性の頭部ＣＴは、患者が、脳振盪を有さないことが明確になったこと意味するわけではなく、手術などの、ある特定の介入が正当ではないことを指し示すに過ぎない。医師及び患者は、この状態を正確に査定して、適切なトリアージ及び回復を促進するために、客観的かつ信頼できる情報を必要とする。現在、患者の診断、査定及び管理の一助となるバイオマーカーの使用に利用可能なデータは、限定されている。
ＴＢＩの大半は、軽度であるが、異なるＴＢＩの疾患状態又は「疾患シグネチャー」を、正確に特徴付ける能力が欠如しているため、ｍＴＢＩを診断及び処置する能力は、大部分において、不十分である。この不十分性は、一般に、臨床的に提示された症状の両義性及びイメージング法の無効性と関連する難題から生じる。したがって、研究者は、診断及び予後診断の両方を改善するように、細胞ベースの手法及び分子ベースの手法を探索し始めている。これは、生物学的マーカーを、目下の臨床症状と関連づけ、ｍＴＢＩの病態生理についての根底的な理解の欠如を克服する困難を含む、様々な難題と遭遇している。しかし、ハイスループット技術及びコンピュータ生物学など、近年における技法の採用は、ＴＢＩの疾患状態を、より正確に決定し、特徴付けるための手段をもたらしている。
ＴＢＩの根底的病態生理が、依然として決定されていないため、有効かつ効率的な診断ツール、予後診断ツール、危険性の層別化ツール及び／又は治療ツールは、とりわけ、臨床状況において、いまだ利用可能ではない。現行の脳イメージング法の欠点及び臨床的診断法の不備が、末梢血を用いて、免疫及びダメージに関連する、脳と末梢との間のシグナル伝達を同定することの訴求力を増大させているので、研究者らは、ＴＢＩを、細胞レベル及び分子レベルにおいて探索し始めている。この手法の最終目標は、早期の検出及び診断の一助となる、単一のＴＢＩバイオマーカー又はバイオマーカーパネルを発見し、多様なＴＢＩの疾患状態（例えば、重度ＴＢＩ又はｓＴＢＩと対比したｍＴＢＩ）を効果的に識別し、患者の転帰を予測する一助となることである。さらに、これらの手法は、根底的な生物学的機構を解明し、治療戦略へのより遠大な見通しをもたらす一助ともなりうる。
（発明の要旨）
本開示の複数の実施形態は、少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法を含む。これらの実施形態に従い、方法は、実際の頭部損傷又は推測される頭部損傷の後において、対象から試料を得るステップ；並びに試料中の、ＡＬ９Ａ１、ＡＴＰＧ、Ｃ１ＲＬ、ＣＡＮＤ１、ＥＰＩＰＬ、ＧＬＯ２、ＩＧＨＡ２、ＰＺＰ、ＳＹＴＣ、ＳＹＹＣ若しくはこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー若しくはこの断片を測定若しくは検出するステップ；及び／又は試料中の、ＡＢＨＥＢ、ＡＬ９Ａ１、ＤＮＭ１Ｌ、ＦＣＮ２、ＩＮＦ２、Ｋ２２Ｅ、Ｍ３Ｋ５、ＮＣＯＲ１、ＳＢＳＮ、ＳＹＥＰ、ＴＰＰ２若しくはこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー若しくはこの断片を測定若しくは検出するステップを含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出は、対象が外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負った又は負った可能性があることを指し示す。
本開示の複数の実施形態はまた、少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、実際の頭部損傷又は推測される頭部損傷の後において、対象から試料を得るステップ；及び試料中の、１４３３Ｇ、ＡＣＫ１、ＡＣＹ１、ＡＫＡ１２、ＡＲＧＩ１、ＣＡＤＨ５、ＣＬＨ１、ＣＯＰＧ２、ＤＰＯＤ２、ＤＳＧ２、ＨＶ３０７、ＩＱＧＡ２、Ｋ１Ｃ１４、Ｋ１Ｃ１９、ＫＶ１０５、ＬＡＭＣ１、ＭＤＨＭ、ＮＱＯ２、ＰＥＲＭ、ＰＬＳＴ、ＰＮＣＢ、ＰＴＰＲＣ、ＳＥＰＴ７、ＳＹＲＣ、ＴＲＸＲ２、ＴＸＮＬ１、ＵＧＧＧ１、ＷＤＲ１又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこの断片を測定又は検出するステップを含む方法も含む。一部の実施形態において、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出は、対象が軽度外傷性脳損傷（ｍＴＢＩ）を負った又は負った可能性があることを指し示す。
本開示の複数の実施形態はまた、対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルも含む。これらの実施形態に従い、パネルは、以下のバイオマーカー：ＴＰＰ２、ＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＬ９Ａ１、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＩＮＦ２又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み；この場合、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出は、対象がサブクラス４の軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示す。
本開示の複数の実施形態はまた、対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＴＰＰ２、ＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＮＦ２、ＩＧＨＤ、ＣＫ０５４、Ｍ３Ｋ５、ＡＢＨＥＢ、ＡＬ９Ａ１、ＤＮＭ１Ｌ又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス３の軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示すパネルも含む。
本開示の複数の実施形態はまた、対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＮＣＯＲ１、ＴＰＰ２、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＩＮＦ２、ＳＢＳＮ、ＡＬ９Ａ１、ＭＡ２Ｂ２又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス２の軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示すパネルも含む。
本開示の複数の実施形態はまた、対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：Ｋ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ、ＫＶ１３３、ＡＬ９Ａ１、ＥＰＨＢ４又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス１の軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示すパネルも含む。
本開示の複数の実施形態はまた、対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＳＢＳＮ、ＧＬＯ２、ＳＹＥＰ又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、健常対象における少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、対象における少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、対象がサブクラス４の軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示すパネルも含む。
本開示の複数の実施形態はまた、対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＡＬＢＵ、ＴＨＩＭ、ＩＧＨＡ２、ＫＶ１３９又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、健常対象における少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、対象における少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、対象がサブクラス３の軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示すパネルも含む。
本開示の複数の実施形態はまた、対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＳＢＳＮ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＤＹＬ１、ＰＳＡ、ＥＰＨＢ４又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、健常対象における少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、対象における少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、対象がサブクラス２の軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示すパネルも含む。
本開示の複数の実施形態はまた、対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：Ｋ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ、ＥＰＨＢ４、ＦＢＬＮ３又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、健常対象における少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、対象における少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、対象がサブクラス１の軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示すパネルも含む。
本開示の複数の実施形態はまた、対象が外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っていないことを決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＡＣＴＢＬ、ＡＬＤＨ２、ＡＮＸＡ５、ＣＡＭＰ、ＣＰＮＥ３、ＣＲＡＣ１、ＣＹＴＣ、ＤＮＰＥＰ、ＥＩＦ３Ｉ、ＧＳＨＢ、ＩＣＡＭ１、ＨＶ３２３、ＨＮＲＰＤ、ＫＶＤ３３、ＦＡ９、ＦＨＲ４、ＦＲＰＤ１、ＨＳ９０Ｂ、ＭＡ２Ａ１、ＰＣＹＯＸ、ＰＮＰＨ、ＰＲＯＣ、ＲＬ３、ＳＨ３Ｌ３、ＳＲＲＭ２、ＴＢＢ１、ＴＥＮＡ、ＴＲＡＰ１又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの、対象における測定又は検出が、対象がＴＢＩを負っていないことを指し示すパネルも含む。
臨床生理学的情報に基づき、健常又は軽度ＴＢＩを有すると分類された対象から得られた血漿試料並びに重度（すなわち、ＣＴ陽性）対象からプールされた血漿に由来する、定量的質量分析によるプロテオーム発見データについての教師なしのクラスター化解析から得られた代表的グラフを含む図である。全てのデータ点は、図１Ａにおける、それらのクラスター位置に従い表示される。図１Ａは、事後的に抽出された、関連する患者特徴及び試料特徴であって、年齢；性別；正規化ＧＦＡＰ ＭＳピーク面積（個々のプロトタイプペプチドの定量に基づく、ターゲティングされた質量分析ベースのＧＦＡＰアッセイを使用する）；ＣＴスキャン（陽性／陰性；グレーは、データなしを指し示す。）及びＥＬＩＳＡベースのＧＦＡＰバイオマーカースコア（陽性／陰性；グレーは、データなしを指し示す。）を含む患者特徴及び試料特徴を伴う、２つの主要なクラスター（対照クラスター及びＴＢＩクラスター（ＴＢＩサブクラス１＝ＴＢＩ−１；ＴＢＩサブクラス２＝ＴＢＩ−２；ＴＢＩサブクラス３＝ＴＢＩ−３及びＴＢＩサブクラス４＝複合ＴＢＩ））を示す全プロテオームプロファイルデータについての、教師なしのクラスター化解析から得られる、代表的系統発生プロットである。軽度ＴＢＩサブクラスの、主要な病理学的クラスターは、サブクラス１（ＴＢＩ−１）、サブクラス２（ＴＢＩ−２）、サブクラス３（ＴＢＩ−３）及び本明細書において、「合併軽度ＴＢＩ」ともまた称されるサブクラス４（複合ＴＢＩ）を含む。 臨床生理学的情報に基づき、健常又は軽度ＴＢＩを有すると分類された対象から得られた血漿試料並びに重度（すなわち、ＣＴ陽性）対象からプールされた血漿に由来する、定量的質量分析によるプロテオーム発見データについての教師なしのクラスター化解析から得られた代表的グラフを含む図である。全てのデータ点は、図１Ａにおける、それらのクラスター位置に従い表示される。図１Ｂは、全プロテオームプロファイルについての主成分分析の結果を含む。 臨床生理学的情報に基づき、健常又は軽度ＴＢＩを有すると分類された対象から得られた血漿試料並びに重度（すなわち、ＣＴ陽性）対象からプールされた血漿に由来する、定量的質量分析によるプロテオーム発見データについての教師なしのクラスター化解析から得られた代表的グラフを含む図である。全てのデータ点は、図１Ａにおける、それらのクラスター位置に従い表示される。図１Ｃは、コンスタレーションプロットとして描示された、代表的な系統発生クラスター化を含む。 教師なしの解析に基づき、試料クラスターの間の、共通タンパク質及び／又は固有タンパク質についての、代表的クラスター化を含む図である。軽度ＴＢＩサブクラスの、主要な病理学的クラスターは、サブクラス１（ＴＢＩ−１）、サブクラス２（ＴＢＩ−２）、サブクラス３（ＴＢＩ−３）及びサブクラス４又は合併軽度ＴＢＩ（複合ＴＢＩ）を含み；健常対照クラスター（対照）もまた示される。教師なしのクラスター化解析から導出された、５つの主な試料サブクラスターの各々は、最小で５つの、固有に発現したタンパク質を有する。図２Ａは、５つの同定されたサブグループクラスターの間の、共通タンパク質及び／又は固有タンパク質を含む、代表的ベン図である。 教師なしの解析に基づき、試料クラスターの間の、共通タンパク質及び／又は固有タンパク質についての、代表的クラスター化を含む図である。軽度ＴＢＩサブクラスの、主要な病理学的クラスターは、サブクラス１（ＴＢＩ−１）、サブクラス２（ＴＢＩ−２）、サブクラス３（ＴＢＩ−３）及びサブクラス４又は合併軽度ＴＢＩ（複合ＴＢＩ）を含み；健常対照クラスター（対照）もまた示される。教師なしのクラスター化解析から導出された、５つの主な試料サブクラスターの各々は、最小で５つの、固有に発現したタンパク質を有する。図３Ｂは、各サブグループクラスター内において定量された、全タンパク質及び／又は固有タンパク質についての数値カウントを含む。 教師なしの解析に基づき、試料クラスターの間の、共通タンパク質及び／又は固有タンパク質についての、代表的クラスター化を含む図である。軽度ＴＢＩサブクラスの、主要な病理学的クラスターは、サブクラス１（ＴＢＩ−１）、サブクラス２（ＴＢＩ−２）、サブクラス３（ＴＢＩ−３）及びサブクラス４又は合併軽度ＴＢＩ（複合ＴＢＩ）を含み；健常対照クラスター（対照）もまた示される。教師なしのクラスター化解析から導出された、５つの主な試料サブクラスターの各々は、最小で５つの、固有に発現したタンパク質を有する。図３Ｃは、各サブグループクラスター内において定量された固有タンパク質についての、Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ及び簡略名の表記を含む。 健常試料（左丸）と、ＴＢＩ患者試料（プールされた重度試料を含む；右丸）との間において、共通又は固有であるタンパク質についての代表的ベンプロットを含む図である。各群内の全ての試料中において検出されたタンパク質だけを、この解析に組み入れた（図３Ａ）。図３Ｂは、全てのＴＢＩ試料中において固有に発現した、８つのタンパク質についてのリストであって、それらのＵｎｉｐｒｏｔ ＩＤ及びタンパク質名を含むリストを含む。ＡＬ９Ａ１及びＳＹＴＣが、脳において発現されるのに対し、ＦＡ５は、凝固に関する（いずれの表記も、ＵｎｉＰｒｏｔによる注釈付き情報（ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）に基づく。）。 定量的非依存型取得質量分析（ＤＩＡ−ＭＳ）データについての、従来の教師ありの解析に対する代替的手法としての、ブートストラップフォレスト解析についての、代表的概略図を含む図である。個々のタンパク質の寄与を解析し、予測モデルの基準を満たす、５つの個別の決定木にまとめた（図４Ａ〜４Ｅ）。この解析は、所与のタンパク質が、ＴＢＩを伴う患者を、それらの健常対応物から識別することが可能なバイオマーカーとして用いられる能力についての定量的カットオフを、関連する診断確率と共に定めた。単一のタンパク質が、この区別を行うことが十分に可能ではない場合、複数のタンパク質の組合せを、同定及び規定した。 定量的非依存型取得質量分析（ＤＩＡ−ＭＳ）データについての、従来の教師ありの解析に対する代替的手法としての、ブートストラップフォレスト解析についての、代表的概略図を含む図である。個々のタンパク質の寄与を解析し、予測モデルの基準を満たす、５つの個別の決定木にまとめた（図４Ａ〜４Ｅ）。この解析は、所与のタンパク質が、ＴＢＩを伴う患者を、それらの健常対応物から識別することが可能なバイオマーカーとして用いられる能力についての定量的カットオフを、関連する診断確率と共に定めた。単一のタンパク質が、この区別を行うことが十分に可能ではない場合、複数のタンパク質の組合せを、同定及び規定した。 定量的非依存型取得質量分析（ＤＩＡ−ＭＳ）データについての、従来の教師ありの解析に対する代替的手法としての、ブートストラップフォレスト解析についての、代表的概略図を含む図である。個々のタンパク質の寄与を解析し、予測モデルの基準を満たす、５つの個別の決定木にまとめた（図４Ａ〜４Ｅ）。この解析は、所与のタンパク質が、ＴＢＩを伴う患者を、それらの健常対応物から識別することが可能なバイオマーカーとして用いられる能力についての定量的カットオフを、関連する診断確率と共に定めた。単一のタンパク質が、この区別を行うことが十分に可能ではない場合、複数のタンパク質の組合せを、同定及び規定した。 定量的非依存型取得質量分析（ＤＩＡ−ＭＳ）データについての、従来の教師ありの解析に対する代替的手法としての、ブートストラップフォレスト解析についての、代表的概略図を含む図である。個々のタンパク質の寄与を解析し、予測モデルの基準を満たす、５つの個別の決定木にまとめた（図４Ａ〜４Ｅ）。この解析は、所与のタンパク質が、ＴＢＩを伴う患者を、それらの健常対応物から識別することが可能なバイオマーカーとして用いられる能力についての定量的カットオフを、関連する診断確率と共に定めた。単一のタンパク質が、この区別を行うことが十分に可能ではない場合、複数のタンパク質の組合せを、同定及び規定した。 定量的非依存型取得質量分析（ＤＩＡ−ＭＳ）データについての、従来の教師ありの解析に対する代替的手法としての、ブートストラップフォレスト解析についての、代表的概略図を含む図である。個々のタンパク質の寄与を解析し、予測モデルの基準を満たす、５つの個別の決定木にまとめた（図４Ａ〜４Ｅ）。この解析は、所与のタンパク質が、ＴＢＩを伴う患者を、それらの健常対応物から識別することが可能なバイオマーカーとして用いられる能力についての定量的カットオフを、関連する診断確率と共に定めた。単一のタンパク質が、この区別を行うことが十分に可能ではない場合、複数のタンパク質の組合せを、同定及び規定した。
本開示は、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）など、頭部への損傷を負っている又はこれを負った可能性がある対象を診断及び査定するための方法に関する。特に、本開示は、それらの検出及び／又は示差的発現が、対象における、ＴＢＩの存在又は非存在を評価するのに使用される場合があり、対象を、特定の種類のＴＢＩ（例えば、重度ＴＢＩ又はｍＴＢＩのサブクラス）を有するものとして診断するためのベースとして使用されうる、多様なバイオマーカーを同定する。多様なＴＢＩバイオマーカーは、個別に又は組合せで検出される場合があり、対象のＴＢＩ状態を評価するための、重要な診断的ツール及び治療的ツールとして使用されうる。
本明細書の本節及び全開示において使用された節の小見出しは、構成上の目的だけのものであり、限定的であることを意図するものではない。
定義
そうでないことが規定されない限りにおいて、本明細書において使用された、全ての技術用語及び科学用語は、当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有する。齟齬が生じる場合は、定義を含む本文献に従う。本開示の実施又は試験において、本明細書において記載された方法及び材料と同様又は同等な方法及び材料も使用されうるが、下記において、好ましい方法及び材料について記載される。本明細書において言及された、全ての刊行物、特許出願、特許及び他の参考文献は、参照によりそれらの全体において組み込まれる。本明細書において開示された材料、方法及び例は、例示的なものであるに過ぎず、限定を意図するものではない。
本明細書において使用された「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ（ｓ））」、「〜を含む（ｉｎｃｌｕｄｅ（ｓ））」「〜を有すること」、「〜を有する」、「〜でありうる」、「〜を含有する」という用語及びその変形は、さらなる行為又は構造の可能性を除外しない、オープンエンドな移行句、移行用語又は移行語であることが意図される。単数形の「ある」及び「その」は、文脈によりそうでないことが明らかに指示されない限りにおいて、複数の指示対象を含む。本開示はまた、明示されているのであれ、そうでないのであれ、本明細書において提示された実施形態又は要素「を含み」、これら「からなり」、これら「から本質的になる」、他の実施形態も想定する。
本明細書において、数値範囲を列挙するために、それらの間に介在する、同じ精度を伴う各数が明示的に想定される。例えば、６〜９の範囲について、６及び９に加えて、７及び８の数も想定され、６．０〜７．０の範囲について、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９及び７．０の数が、明示的に想定される。
本明細書において使用された「絶対量」とは、異なる時点において採取又はサンプリングされ、基準レベルと同様に、本明細書において、多様な臨床パラメータ（例えば、疾患の存在、疾患の病期、疾患の重症度、疾患の進行、非進行又は改善など）と連関づけられた又は関連づけられた、少なくとも２つのアッセイ結果の間の変化又は差違の絶対値を指す。本明細書において使用された「絶対値」とは、その符号に関わらず、すなわち、それが正であるのか、負であるのかに関わらず、実数の大きさ（例えば、２つの比較されたレベル（第１の時点において採取されたレベル及び第２の時点において採取されたレベルなど）の間の差違などの大きさ）を指す。
本開示は、例示的な基準レベル及び絶対量（例えば、異なる時点における基準レベルを比較することにより計算された）を提示する。しかし、基準レベル及び絶対量は、イムノアッセイの性格（例えば、援用された抗体、反応条件、試料の純度など）に応じて、変動する場合があり、アッセイは、比較及び標準化されうることが周知である。さらに、本明細書における本開示を、他のイムノアッセイに適合させて、本開示により提示された記載に基づき、これらの他のイムノアッセイについて、イムノアッセイ特異的な基準レベル及び絶対量を得ることは、十分に、当業者の技術の範囲内にある。基準レベル及び絶対量の正確な値は、アッセイ間において変動しうるが、本明細書において記載された知見は、一般に、適用可能であり、他のアッセイへの外挿が可能であるものとする。
本明細書において「アフィニティー成熟抗体」とは、標的抗原に対する抗体のアフィニティー（すなわち、ＫＤ、ｋｄ又はｋａ）の、変更を有さない親抗体と比較した改善を結果としてもたらす、１つ以上のＣＤＲ内の、１カ所以上の変更を伴う抗体を指すように使用される。例示的なアフィニティー成熟抗体は、標的抗原に対する、ナノモル単位なお又はピコモル単位のアフィニティーを有する。バイオディスプレイ法を使用して調製されたコンビナトリアル抗体ライブラリーのスクリーニングを含め、アフィニティー成熟抗体を作製するための様々な手順が当技術分野において公知である。例えば、Ｍａｒｋｓら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９〜７８３（１９９２）は、ＶＨとＶＬとのドメインシャッフリングによるアフィニティー成熟について記載している。ＣＤＲ残基及び／又はフレームワーク残基のランダム突然変異誘発については、Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９１：３８０９〜３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７〜１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：１９９４〜２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４（７）：３３１０〜３３１９（１９９５）及びＨａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９〜８９６（１９９２）により記載されている。選択的突然変異誘発位置及び活性増強アミノ酸残基を伴う接触位置はたは超変異位置における選択的突然変異については、米国特許第６，９１４，１２８Ｂ１号において記載されている。
本明細書において使用された「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）」及び「抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」とは、モノクローナル抗体、単一特異的抗体（例えば、モノクローナル抗体でありうる又は一般的な生殖細胞系列細胞からそれらを作製する手段以外の手段によってもまた作製されうる）、多特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体（完全ヒト化抗体又は部分的ヒト化抗体）、鳥類（例えば、アヒル又はガチョウ）抗体、サメ抗体、クジラ抗体及び非霊長動物（例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、マウスなど）抗体又は非ヒト霊長動物（例えば、サル、チンパンジーなど）抗体を含む哺乳動物抗体などであるがこれらに限定されない動物抗体、組換え抗体、キメラ抗体、単鎖Ｆｖ（「ｓｃＦｖ」）、単鎖抗体、単一ドメイン抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、ジスルフィド連結型Ｆｖ（「ｓｄＦｖ」）及び抗イディオタイプ（「抗Ｉｄ」）抗体、二重ドメイン抗体、二重可変ドメイン（ＤＶＤ）又は三重可変ドメイン（ＴＶＤ）抗体（二重可変ドメイン免疫グロブリン及びそれらを作り出すための方法について、それらの各々の内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｗｕ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２５（１１）：１２９０〜１２９７（２００７）及びＰＣＴ国際出願第ＷＯ２００１／０５８９５６号において記載されている）又はドメイン抗体（ｄＡｂ）（例えば、Ｈｏｌｔら（２０１４）、Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２１：４８４〜４９０において記載されているｄＡｂなど）を指し、例えば、軟骨魚類及びラクダ科動物における、自然発生の単一ドメイン抗体であるｓｄＡｂ、若しくは合成、例えば、ナノボディーであるｓｄＡｂ、ＶＨＨ又は他のドメイン構造及び上記のうちのいずれかの、機能的に活性なエピトープ結合性断片を含む。特に、抗体は、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫活性断片、すなわち、解析物結合性部位を含有する分子を含む。免疫グロブリン分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）でありうる。
本明細書において使用された「抗体断片」とは、抗原結合性部位又は可変領域を含む、無傷抗体の部分を指す。部分は、無傷抗体のＦｃ領域の重鎖定常ドメイン（すなわち、抗体アイソタイプに応じて、ＣＨ２、ＣＨ３又はＣＨ４）を含まない。抗体断片の例は、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆａｂ’−ＳＨ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、ダイアボディー、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子、１つだけの軽鎖可変ドメインを含有する単鎖ポリペプチド、軽鎖可変ドメインの３つのＣＤＲを含有する単鎖ポリペプチド、１つだけの重鎖可変領域を含有する単鎖ポリペプチド及び重鎖可変領域の３つのＣＤＲを含有する単鎖ポリペプチドを含むがこれらに限定されない。
本明細書において、「ビーズ」と「粒子」とは、互換的に使用され、実質的に球形の固体支持体を指す。ビーズ又は粒子の一例は、マイクロ粒子である。本明細書において使用されうるマイクロ粒子は、当技術分野において公知である、任意の種類でありうる。例えば、ビーズ又は粒子は、磁気ビーズ又は磁気粒子でありうる。磁気ビーズ／粒子は、強磁性、フェリ磁性、常磁性、超常磁性又は磁性流体でありうる。例示的な強磁性材料は、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｇｄ、Ｄｙ、ＣｒＯ２、ＭｎＡｓ、ＭｎＢｉ、ＥｕＯ及びＮｉＯ／Ｆｅを含む。フェリ磁性材料の例は、ＮｉＦｅ２Ｏ４、ＣｏＦｅ２Ｏ４、Ｆｅ３Ｏ４（又はＦｅＯ・Ｆｅ２Ｏ３）を含む。ビーズは、磁性であり、１つ以上の非磁性層により取り囲まれた、固体コア部分を有しうる。代替的に、磁性部分は、非磁性コアの周囲の層でありうる。マイクロ粒子は、本明細書において記載された方法において働く、任意のサイズ、例えば、約０．７５〜約５ｎｍ又は約１〜約５ｎｍ又は約１〜約３ｎｍでありうる。
本明細書において、「結合性タンパク質」とは、例えば、ポリペプチド、抗原、化合物若しくは他の分子又は任意の種類の基質などの結合パートナーに結合し、これと共に複合体を形成する、単量体又は多量体のタンパク質を指すように使用される。結合性タンパク質は、結合パートナーに特異的に結合する。結合性タンパク質は、抗体のほか、当技術分野において公知であり、本明細書の下記において記載される、これらの抗原結合性断片及びこれらの他の多様な形態及び誘導体並びに抗原分子又は抗原分子上の特定の部位（エピトープ）に結合する、１つ以上の抗原結合性ドメインを含む他の分子を含む。したがって、結合性タンパク質は、四量体の免疫グロブリンである抗体、ＩｇＧ分子、ＩｇＧ１分子、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、アフィニティー成熟抗体及び抗原に結合する能力を保持する、任意のこのような抗体の断片を含むがこれらに限定されない。
本明細書において、「二特異性抗体」とは、それらのうちの１つだけが機能的な二特異性抗体である、複数の異なる免疫グロブリン分子種を結果としてもたらしながら、クァドローマ技術（Ｍｉｌｓｔｅｉｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３０５（５９３４）：５３７〜５４０（１９８３）を参照されたい。）、２つの異なるモノクローナル抗体の化学的コンジュゲーション（Ｓｔａｅｒｚら、Ｎａｔｕｒｅ、３１４（６０１２）：６２８〜６３１（１９８５）を参照されたい。）又はＦｃ領域内の突然変異を導入するノブ−イントゥー−ホール法若しくは同様の手法（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０（１４）：６４４４〜６４４８（１９９３）を参照されたい。）により作出された全長抗体を指すように使用される。二特異性抗体は、その２つの結合性アーム（ＨＣ／ＬＣの１つの対）のうちの１つにおける、１つの抗原（又はエピトープ）に結合し、その第２のアーム（ＨＣ／ＬＣの異なる対）における、異なる抗原（又はエピトープ）に結合する。この定義により、二特異性抗体は、２つの顕著に異なる抗原結合性アーム（特異性配列及びＣＤＲ配列の両方）を有し、それが結合する各抗原について一価である。
本明細書において、「ＣＤＲ」とは、抗体の可変配列内の「相補性決定領域」を指すように使用される。重鎖及び軽鎖の可変領域の各々において、３つずつのＣＤＲが存在する。重鎖又は軽鎖のＮ末端から順に、これらの領域は、可変領域の各々について、「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」及び「ＣＤＲ３」と表記されている。本明細書において使用された「ＣＤＲセット」という用語は、単一の可変領域において生じる、３つのＣＤＲの群であって、抗原に結合するＣＤＲの群を指す。したがって、抗原結合性部位は、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域の各々に由来するＣＤＲセットを含む、６つのＣＤＲを含みうる。単一のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２又はＣＤＲ３）を含むポリペプチドは、「分子認識単位」と称されうる。抗原−抗体複合体についての結晶構造解析は、ＣＤＲのアミノ酸残基が、結合した抗原との、広範な接触部を形成し、この場合、最も広範な抗原の接触部は、重鎖ＣＤＲ３との接触部であることを裏付けている。したがって、分子認識単位は、主に、抗原結合性部位の特異性の一因となりうる。一般に、ＣＤＲ残基は、抗原への結合に対する影響に、直接、かつ、極めて実質的に関与する。
これらのＣＤＲの正確な境界は、異なるシステムに従い、異なる形で規定されている。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔら、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７）及び（１９９１））により記載されているシステムは、抗体の任意の可変領域へと適用可能である、明確な残基番号付けシステムを提示するだけではなく、また、３つのＣＤＲを規定する、正確な残基の境界も提示している。これらのＣＤＲは、「Ｋａｂａｔ ＣＤＲ」と称されうる。Ｃｈｏｔｈｉａ及び同僚（Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６：９０１〜９１７（１９８７）；並びにＣｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ、３４２：８７７〜８８３（１９８９））は、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ内の、ある特定の下位部分が、アミノ酸配列のレベルにおいて、大きな多様性を有するにもかかわらず、ほぼ同一なペプチド骨格のコンフォメーションを取ることを見出した。これらの下位部分は、「Ｌ」及び「Ｈ」が、それぞれ、軽鎖領域及び重鎖領域を名指す、「Ｌ１」、「Ｌ２」及び「Ｌ３」又は「Ｈ１」、「Ｈ２」及び「Ｈ３」と名指された。これらの領域は、「Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲ」と称される場合があり、これらは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複するＣＤＲを規定する他の境界について、Ｐａｄｌａｎ、ＦＡＳＥＢ Ｊ．、９：１３３〜１３９（１９９５）；及びＭａｃＣａｌｌｕｍ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２６２（５）：７３２〜７４５（１９９６）により記載されている。さらに他のＣＤＲの境界の定義は、本明細書のシステムの定義に厳密に従わない場合もあり、特定の残基若しくは残基群なお又は全ＣＤＲが、抗原への結合に、著明な影響を及ぼさないという予測又は実験による知見に照らして、短くなる場合もあり、長くなる場合もあるが、それでも、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複する。本明細書において使用された方法は、これらのシステムのうちのいずれに従い規定されたＣＤＲも用いうるが、ある特定の実施形態は、Ｋａｂａｔより規定されたＣＤＲ又はＣｈｏｔｈｉａにより規定されたＣＤＲを使用する。
「相対的ばらつき」としてもまた公知の「変動係数」（ＣＶ）は、その平均値により除された、分布の標準偏差と同義である。
「構成要素（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）」、「構成要素（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ）」又は「少なくとも１つの構成要素」とは、一般に、本明細書において記載された方法及び当技術分野において公知である他の方法に従う、患者の尿試料、全血試料、血清試料又は血漿試料などの被験試料についてのアッセイのためのキット内に含まれうる捕捉抗体、検出又はコンジュゲート、較正物質、対照、感度パネル、容器、緩衝液、希釈剤、塩、酵素、酵素に対する補因子、検出試薬、前処理試薬／溶液、基質（例えば、溶液としての）、停止溶液などを指す。一部の構成要素は、溶液でありうる又はアッセイにおける使用のための復元のために、凍結乾燥させうる。
本明細書において使用された「対照」とは、一般に、その目的が、測定システムが、許容可能な境界（例えば、一方の末端における、調査研究使用のためのアッセイに適切な尺度から、他方の末端における、市販のアッセイのための品質仕様により確立された解析的境界にわたる範囲の境界）内の結果をもたらし続けることを確認するために、測定システムの性能を査定することである試薬を指す。これを達成するために、対照は、患者結果を示すべきであり、任意選択的に、エラー（例えば、試薬の安定性、較正物質のばらつき、測定器のばらつきに起因するエラーなど）の、測定に対する影響を、何らかの形で評価すべきである。本明細書において使用された、「対照の対象」は、外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っていない、１例以上の対象に関する。本明細書において使用された「整形外科的対照」は、整形外科損傷を負っているが、見かけのＴＢＩを負っていない、１例以上の対象に由来する試料又は情報に関する（例えば、これに基づく）。本明細書において使用された、「整形外科的対照の対象」は、整形外科損傷を負っているが、見かけのＴＢＩを負っていない、１例以上の対象に関する。場合によって、「整形外科的対照の対象」とは、それらの四肢損傷及び／又は骨盤損傷及び／又は肋骨骨折について、≦４（致死性ではない）の略式損傷スコアを有する成人整形外科患者である。本明細書において使用された「健常対照」は、健常であると考えられ、見かけのＴＢＩ又は整形外科損傷を負っていない、１例以上の対象に由来する試料又は情報に関する（例えば、これに基づく）。本明細書において使用された「健常対照の対象」は、健常であると考えられ、見かけのＴＢＩ又は整形外科損傷を負っていない、１例以上の対象に関する。本明細書において使用された「ＴＢＩ対照」は、頭部損傷を負っているが、見かけのＴＢＩを負っていない、１例以上の対象に由来する試料又は情報に関する（例えば、これに基づく）。本明細書において使用された「ＴＢＩ対照の対象」は、頭部損傷を負っているが、見かけのＴＢＩを負っていない、１例以上の対象に関する。
本明細書において使用された「〜と相関した」とは、〜と比較したを指す。
本明細書において使用された「ＣＴスキャン」とは、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンを指す。ＣＴスキャンは、異なる角度から得られた、一連のＸ線画像を組み合わせ、コンピュータ処理を使用して、体内の骨、血管及び軟部組織についての断面画像又は切片を創出する。ＣＴスキャンは、Ｘ線ＣＴ、ポジトロン放射断層撮影（ＰＥＴ）、単一光子放射コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）、コンピュータ軸方向断層撮影（ＣＡＴスキャン）又はコンピュータ支援断層撮影を使用しうる。ＣＴスキャンは、従来のＣＴスキャン又は渦巻き状／らせん状ＣＴスキャンでありうる。従来のＣＴスキャンにおいて、スキャンは、切片ごとに得られ、各切片のスキャンの後、停止及び次の切片への移動、例えば、腹部の上方から、骨盤への移動がなされる。従来のＣＴスキャンは、動きによるアーチファクトを回避するために、患者が息を止めることを要求する。渦巻き状／らせん状ＣＴスキャンは、連続スキャンであり、渦巻き状に得られ、スキャンされた画像が連続的であるので、工程がはるかに迅速である。
本明細書において使用された、抗体の「誘導体」とは、純正抗体又は親抗体と比較した場合、そのアミノ酸配列に対する、１つ以上の修飾を有する抗体を指す場合があり、修飾ドメイン構造を呈しうる。誘導体は、標的（抗原）に特異的に結合することが可能なアミノ酸配列を採用するだけでなく、天然抗体内で見出された、典型的なドメイン構成を採用することもさらに可能でありうる。抗体誘導体の典型的な例は、他のポリペプチドへとカップリングさせた抗体、再配列された抗体ドメイン又は抗体の断片である。誘導体はまた、少なくとも１つのさらなる化合物、例えば、タンパク質ドメインも含むことが可能であり、前記タンパク質ドメインは、共有結合又は非共有結合により連結されている。連結は、当技術分野において公知の方法に従う遺伝子融合に基づきうる。抗体を含む融合タンパク質内に存在するさらなるドメインは、ペプチドリンカーであると有利な、可動性リンカーにより連結されることが好ましい場合があり、この場合、前記ペプチドリンカーは、さらなるタンパク質ドメインのＣ末端及び抗体のＮ末端又はこの逆の間の距離にわたるのに十分な長さである、複数の、親水性で、ペプチド結合されたアミノ酸を含む。抗体は、生物学的活性に適するコンフォメーションを有する又は、例えば、固体支持体、生物学的活性物質（例えば、サイトカイン又は成長ホルモン）、化学的薬剤、ペプチド、タンパク質若しくは薬物に選択的に結合する、エフェクター分子へと連結されうる。
本明細書において、「ＤＩＡ−ＭＳ」又は「データ非依存型取得質量分析」とは、選択されたｍ／ｚ範囲内の全てのイオンが、タンデム質量分析の第２段において、フラグメント化及び解析される、分子構造決定法を指すのに使用される。典型的に、複雑なタンパク質混合物（例えば、血漿試料）は、ペプチドへと消化され、ペプチドは、質量分析計により解析される。タンデム質量スペクトルは、一般に、各ペプチドについて、所与の時点において、質量分析計に進入する全てのイオンをフラグメント化すること（すなわち、ＤＩＡ−ＭＳ）又は逐次的に単離し、ｍ／ｚの範囲をフラグメント化すること（すなわち、データ依存型取得−ＭＳ又はＤＤＡ−ＭＳ）により収集される。ＤＩＡ−ＭＳは、ＤＤＡ−ＭＳに対する代替法であり、一定数の前駆体イオンが、タンデム質量分析により選択及び解析されるが、同じタンパク質情報をもたらしうることが極めて多い。プロトタイプペプチド（特殊なタンパク質の識別に固有のペプチド）は、各タンパク質を定量するために使用される（Ｈｏｌｅｗｉｎｓｋｉ，Ｒ．Ｊ．ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．、２０１６；１４１０：１６５〜２７９；Ｋｉｒｋ，Ｊ．Ａ．ら、Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．、２０１５年１２月２３日；７（３１９）、３１９ｒａ及びＰａｒｋｅｒ，Ｓ．Ｊ．ら、Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ．、２０１６年８月；１６（１５〜１６）：２２２１〜２２３７を参照されたい。）。
本明細書において、「二重特異性抗体」とは、その２つの結合性アーム（ＨＣ／ＬＣの対）の各々において、２つの異なる抗原（又はエピトープ）に結合しうる全長抗体（ＰＣＴ公開ＷＯ０２／０２７７３号を参照されたい。）を指すように使用される。したがって、二重特異性結合性タンパク質は、同一な特異性及び同一なＣＤＲ配列を伴う、２つの同一な抗原結合性アームを有し、それが結合する各抗原について二価である。
本明細書において、「二重可変ドメイン」とは、二価結合性タンパク質（２つの抗原結合性部位）、四価結合性タンパク質（４つの抗原結合性部位）又は多価結合性タンパク質でありうる結合性タンパク質上の、２つ以上の抗原結合性部位を指すように使用される。ＤＶＤは、単一特異性、すなわち、１つの抗原（又は１つの特異性エピトープ）に結合することが可能な場合もあり、多特異性、すなわち、２つ以上の抗原（例えば、同じ標的抗原分子の２つ以上のエピトープ又は異なる標的抗原２つ以上のエピトープ）に結合することが可能な場合もある。好ましいＤＶＤ結合性タンパク質は、２つの重鎖ＤＶＤポリペプチド及び２つの軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含み、「ＤＶＤ免疫グロブリン」又は「ＤＶＤ−Ｉｇ」と称される。したがって、このようなＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質は、四量体であり、ＩｇＧ分子と類似するが、ＩｇＧ分子より多くの抗原結合性部位をもたらす。したがって、四量体ＤＶＤ−Ｉｇ分子の各半分は、ＩｇＧ分子の半分と類似し、重鎖ＤＶＤポリペプチド及び軽鎖ＤＶＤポリペプチドを含むが、単一の抗原結合性ドメインをもたらす、ＩｇＧ分子の重鎖及び軽鎖の対と異なり、ＤＶＤ−Ｉｇの重鎖及び軽鎖の対は、２つ以上の抗原結合性部位をもたらす。
ＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質の各抗原結合性部位は、ドナー（「親」）モノクローナル抗体に由来しうるので、抗原結合性部位１つ当たり、合計６つのＣＤＲであって、抗原への結合に関与するＣＤＲを伴う、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含みうる。したがって、２つの異なるエピトープ（例えば、２つの異なる抗原分子の、２つの異なるエピトープ又は同じ抗原分子の、２つの異なるエピトープ）に結合するＤＶＤ−Ｉｇ結合性タンパク質は、第１の親モノクローナル抗体に由来する抗原結合性部位及び第２の親モノクローナル抗体の抗原結合性部位を含む。
ＤＶＤ−Ｉｇ結合性分子のデザイン、発現及び特徴付けについての記載は、ＰＣＴ公開ＷＯ２００７／０２４７１５号、米国特許第７，６１２，１８１号及びＷｕら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．、２５：１２９０〜１２９７（２００７）においてなされている。このようなＤＶＤ−Ｉｇ分子の好ましい例は、構造式：ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、ＶＤ１は、第１の重鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の重鎖可変ドメインであり、Ｃは、重鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、それがＣＨ１ではないことを条件として、リンカーであり、Ｘ２は、Ｆｃ領域であり、ｎは、０又は１であるが、好ましくは１である］を含む重鎖；及び構造式：ＶＤ１−（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−Ｃ−（Ｘ２）ｎ［式中、ＶＤ１は、第１の軽鎖可変ドメインであり、ＶＤ２は、第２の軽鎖可変ドメインであり、Ｃは、軽鎖定常ドメインであり、Ｘ１は、これがＣＨ１ではないことを条件として、リンカーであり、Ｘ２は、Ｆｃ領域を含まず、ｎは、０又は１であるが、好ましくは１である］を含む軽鎖を含む。このようなＤＶＤ−Ｉｇは、２つのこのような重鎖及び２つのこのような軽鎖を含むことが可能であり、この場合、各鎖は、可変領域の間に介在する定常領域を伴わずに、タンデムにより連結された可変ドメインを含み、重鎖及び軽鎖は、会合して、タンデムの機能的抗原結合性部位を形成し、重鎖及び軽鎖の対は、重鎖及び軽鎖の別の対と会合して、４つの機能的な抗原結合性部位を伴う、四量体の結合性タンパク質を形成しうる。別の例において、ＤＶＤ−Ｉｇ分子は、各々が可変ドメインの間に介在する定常領域を伴わずに、タンデムに連結された、３つの可変ドメイン（ＶＤ１、ＶＤ２、ＶＤ３）を含む重鎖及び軽鎖を含むことが可能であり、この場合、重鎖及び軽鎖の対は、会合して、３つの抗原結合性部位を形成することが可能であり、重鎖及び軽鎖の対は、重鎖及び軽鎖の別の対と会合して、６つの抗原結合性部位を伴う、四量体の結合性タンパク質を形成しうる。
本明細書において使用された「ダイナミックレンジ」とは、アッセイのリードアウトが、解析される試料中の標的分子又は解析物の量と比例する範囲を指す。ダイナミックレンジは、検量線の直線性の範囲でありうる。
「エピトープ（ｅｐｉｔｏｐｅ）」又は「エピトープ（ｅｐｉｔｏｐｅｓ）」又は「目的のエピトープ」とは、認識され、その特異的結合パートナー上の相補的な部位に結合しうる、任意の分子上の部位を指す。分子及び特異的結合パートナーは、特異的結合対の一部である。例えば、エピトープは、ポリペプチド、タンパク質、ハプテン、炭水化物抗原（糖脂質、糖タンパク質又はリポ多糖などであるがこれらに限定されない）又は多糖の上にありうる。その特異的結合パートナーは、抗体でありうるがこれに限定されない。
本明細書において使用された、「断片」、「バイオマーカー断片」又は「バイオマーカーペプチド」は、本明細書において同定及び記載されたＴＢＩバイオマーカーのうちのいずれかの断片に対する、任意の同定を含む。「断片（複数可）」は、本明細書において同定及び記載された、任意のＴＢＩバイオマーカーの、ペプチド、プロトタイプペプチド、タンパク質分解性ペプチド、ＳＮＰ又は翻訳後修飾形態を含むアイソフォーム及び任意の内因性誘導形態又は外因性誘導形態を含む。バイオマーカーペプチドは、ＤＩＡ−ＭＳ、ＤＤＡ−ＭＳ、多重反応モニタリング（ＭＲＭ；選択的反応モニタリング又はＳＲＭとしてもまた公知である）質量分析アッセイ又は並列反応モニタリング（ＰＲＭ）質量分析アッセイにおいて、それらの代表的タンパク質の数量を表すのに使用されうる。タンパク質分解性ペプチド（複数可）は、ＭＳ定量のために、個別に又は内部標準物質と共にターゲティングされうる（Ｆｕ，Ｑ．ら、Ｊ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｒｅｓ．、２０１７年１１月（ｄｏｉ：１０．１０２１／ａｃｓ．ｊｐｒｏｔｅｏｍｅ．７ｂ００６２３）；Ｆｕ，Ｑ．ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．、２０１６；１４１０：２４９〜２６４及びＬｉｕ，Ｘ．ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ．、２０１３年６月１５日；６１（３）：３０４〜３１２を参照されたい。）。
本明細書において使用された「フレームワーク」（ＦＲ）又は「フレームワーク配列」とは、ＣＤＲを除いた、可変領域の残りの配列を意味しうる。ＣＤＲ配列の正確な定義は、異なるシステム（例えば、上記を参照されたい。）により決定されうるため、フレームワーク配列の意味は、これに応じて異なる解釈を受ける。６つのＣＤＲ（軽鎖のＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２及びＣＤＲ−Ｌ３並びに重鎖のＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３）はまた、軽鎖上及び重鎖上のフレームワーク領域を、各鎖上の４つの部分領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）へも分割するが、ここで、ＣＤＲ１は、ＦＲ１及びＦＲ２の間に位置し、ＣＤＲ２は、ＦＲ２及びＦＲ３の間に位置し、ＣＤＲ３は、ＦＲ３及びＦＲ４の間に位置する。他の研究者により言及される通りに、特定の部分領域を、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３又はＦＲ４と指定しない場合、フレームワーク領域は、単一の、天然の免疫グロブリン鎖の可変領域内の、ＦＲの組合せを表す。本明細書において使用されたＦＲは、４つの部分領域のうちの１つを表し、ＦＲは、フレームワーク領域を構成する、４つの部分領域のうちの２つ以上を表す。
当技術分野において公知の技法を使用して、非ヒト抗体をヒト化するのに、重鎖及び軽鎖の「アクセプター」フレームワーク配列（又は、単に、「アクセプター」配列）として使用されうる、ヒト重鎖及びヒト軽鎖のＦＲ配列は、当技術分野において公知である。一実施形態において、ヒト重鎖及びヒト軽鎖のアクセプター配列は、Ｖ−ｂａｓｅ（ｈｙｐｅｒｔｅｘｔ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｐｒｏｔｏｃｏｌ：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／）又は国際的なＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（登録商標）（ＩＭＧＴ（登録商標））情報システム（ｈｙｐｅｒｔｅｘｔ ｔｒａｎｓｆｅｒｐｒｏｔｏｃｏｌ：／／ｉｍｇｔ．ｃｉｎｅｓ．ｆｒ／ｔｅｘｔｓ／ＩＭＧＴｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅ／ＬｏｃｕｓＧｅｎｅｓ／）などの、一般に公開されているデータベースにおいて列挙されたフレームワーク配列から選択される。
本明細書において使用された「機能的な抗原結合性部位」とは、標的抗原に結合することが可能な、結合性タンパク質（例えば、抗体）上の部位を意味しうる。抗原結合性部位の抗原結合アフィニティーは、抗原結合性部位が由来する、親の結合性タンパク質、例えば、親抗体ほど強くない場合があるが、抗原に結合する能力は、抗原に結合するタンパク質、例えば、抗体を査定するための、公知の様々な方法のうちのいずれか１つを使用して測定可能でなければならない。さらに、多価タンパク質、例えば、本明細書の多価抗体の抗原結合性部位の各々の抗原結合アフィニティーは、定量的に同じである必要はない。
本明細書において、「ＧＦＡＰ」は、グリア原線維性酸性タンパク質について記載するのに使用されている。ＧＦＡＰとは、ヒトにおいて、ＧＦＡＰ遺伝子によりコードされ、作製されうる（例えば、組換え手段により、他の種において）タンパク質である。「ＧＦＡＰ状態」とは、ある時点（ＧＦＡＰの単一の測定値を伴う時点など）における、循環しているＧＦＡＰのレベル若しくは量、モニタリング（対象において、ＧＦＡＰ量の上昇又は低下を同定する反復検査を伴うモニタリングなど）と関連する、ＧＦＡＰのレベル若しくは量、外傷性脳損傷（一次脳損傷であれ、かつ／又は二次脳損傷であれ）のための処置と関連する、ＧＦＡＰのレベル若しくは量又はこれらの組合せを意味しうる。ＧＦＡＰは、ＧＦＡＰに固有の、特殊なペプチドに対する、ＥＬＩＳＡ及びターゲティング質量分析により測定された。
本明細書において使用された「Ｇｌａｓｇｏｗ昏睡スケール」又は「ＧＣＳ」とは、全般的な社会的能力又は他者への依存に基づき、脳損傷の転帰を推定及び類別するための、１５点のスケールを指す。検査は、運動応答、言語応答及び開眼応答を、これらの値：Ｉ．運動応答（６：指示に完全に従う；５：侵害刺激を位置特定する；４：侵害刺激から身を引く；３：異常屈曲、すなわち、除皮質姿勢；２：伸長応答、すなわち、除脳姿勢及び１：応答なし）；ＩＩ．言語応答（５：意識清明で見当識がある；４：混乱しているが、一貫した発話；３：不適切な単語及び単語からなる支離滅裂な語句；２：理解不可能な音声及び１：音声なし）及びＩＩＩ．開眼（４：自発的開眼；３：発話に応じた開眼；２：疼痛に応じた開眼及び１：開眼なし）により測定する。最終的なスコアは、Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩの値を足し合わせることにより決定される。最終的なスコアは、生存についての４つの可能なレベルへと類別される場合があり、数が小さいほど、より重度損傷及び予後不良を指し示す：軽度（１３〜１５）；中等度身体障害（９〜１２）（３０分間を超える意識の喪失；消失する場合もあり、消失しない場合もある、身体機能障害又は認知機能障害；リハビリから利益を得る）；重度身体障害（３〜８）（昏迷：意識不明状態：有意味な応答なし、自発的な活動なし）；及び植物状態（３未満）（睡眠覚醒周期；目覚めるが、環境との相互作用なし；疼痛に対する、位置特定されない応答）。中等度脳損傷とは、２０分間〜６時間の意識喪失及び９〜１２のＧｌａｓｇｏｗ昏睡スケールを結果としてもたらす脳損傷と規定される。重度脳損傷とは、６時間を超える意識喪失及び３〜８のＧｌａｓｇｏｗ昏睡スケールを結果としてもたらす脳損傷と規定される。
本明細書において使用された「Ｇｌａｓｇｏｗ転帰スケール」とは、機能的転帰についてのグローバルスケールであって、患者の状態を、５つの類型：死、植物状態、重度身体障害、中等度身体障害又は回復良好のうちの１つへと評価するグローバルスケールを指す。
本明細書において互換的に使用された「拡張版Ｇｌａｓｇｏｗ転帰スケール」又は「ＧＯＳＥ」は、重度身体障害、中等度身体障害及び回復良好の類型を、表１において示される、上下の類型へと細分することによる、８つの類型への、より詳細な類別を提示する。
Figure 2021509475
本明細書において、「ヒト化抗体」は、非ヒト種（例えば、マウス）に由来する重鎖可変領域配列及び軽鎖可変領域配列を含むが、ＶＨ配列及び／又はＶＬ配列の少なくとも一部が、より「ヒト様」となる、すなわち、ヒト生殖細胞系列可変配列と、より類似するように変更された抗体について記載するのに使用される。「ヒト化抗体」とは、目的の抗原に免疫特異的に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク（ＦＲ）領域及び非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、抗体又はこの変異体、誘導体、類似体若しくは断片である。本明細書において使用された、ＣＤＲの文脈における「実質的に」という用語は、非ヒト抗体ＣＤＲのアミノ酸配列と、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一なアミノ酸配列を有するＣＤＲを指す。ヒト化抗体は、少なくとも１つであるが、典型的に２つの可変ドメイン（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、ＦａｂＣ、Ｆｖ）であって、ＣＤＲ領域の全て又は実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリン（すなわち、ドナー抗体）のＣＤＲ領域に対応し、フレームワーク領域の全て又は実質的に全てが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である可変ドメインの実質的に全てを含む。ある実施形態において、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的に、ヒト免疫グロブリンのＦｃ領域の少なくとも一部も含む。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖のほか、重鎖の、少なくとも可変ドメインを含有する。抗体はまた、重鎖の、ＣＨ１領域、ヒンジ領域、ＣＨ２領域、ＣＨ３領域及びＣＨ４領域も含みうる。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖だけを含有する。一部の実施形態において、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖だけを含有する。具体的な実施形態において、ヒト化抗体は、軽鎖及び／又はヒト化重鎖のヒト化可変ドメインだけを含有する。
ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを含む、免疫グロブリンの任意のクラス並びに、限定なしに述べると、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４を含む、任意のアイソタイプから選択されうる。ヒト化抗体は、１つを超えるクラス又はアイソタイプに由来する配列を含むことが可能であり、特定の定常ドメインは、当技術分野において周知の技法を使用して、所望のエフェクター機能を最適化するように選択されうる。
ヒト化抗体のフレームワーク領域及びＣＤＲは、親配列に正確に対応する必要がない、例えば、ドナー抗体のＣＤＲ又はコンセンサスフレームワークは、この部位におけるＣＤＲ残基又はフレームワーク残基が、ドナー抗体又はコンセンサスフレームワークに対応しないように、少なくとも１つのアミノ酸残基の置換、挿入及び／又は欠失により突然変異誘発されてもよい。しかし、好ましい実施形態において、このような突然変異は、広範にわたる突然変異ではない。通例、ヒト化抗体残基のうちの、少なくとも８０％、好ましくは、少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％であり、最も好ましくは、少なくとも９５％は、親のＦＲ配列及びＣＤＲ配列の残基に対応する。本明細書において使用された「コンセンサスフレームワーク」という用語は、コンセンサスの免疫グロブリン配列内のフレームワーク領域を指す。本明細書において使用された「コンセンサスの免疫グロブリン配列」という用語は、類縁の免疫グロブリン配列のファミリーにおいて、最も高頻度で発生するアミノ酸（又はヌクレオチド）から形成された配列（例えば、Ｗｉｎｎａｋｅｒ、「Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ」（Ｖｅｒｌａｇｓｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ、Ｗｅｉｎｈｅｉｍ、１９８７）を参照されたい。）を指す。したがって、「コンセンサスの免疫グロブリン配列」は、「コンセンサスフレームワーク領域」及び／又は「コンセンサスＣＤＲ」を含みうる。免疫グロブリンのファミリーにおいて、コンセンサス配列内の各位置は、ファミリー内のこの位置において、最も高頻度で発生するアミノ酸により占有されている。２つのアミノ酸が、同等に高頻度で発生する場合、いずれもが、コンセンサス配列内に含まれうる。
本明細書の、２つ以上のポリペプチド配列又はポリヌクレオチド配列の文脈において使用された「同一な」又は「同一性」とは、アミノ酸又はヌクレオチド配列が、指定された領域にわたり同じである、指定された百分率の残基を有することを意味しうる。百分率は、２つの配列を、最適にアライメントし、２つの配列を、指定された領域にわたり比較し、両方の配列内において、同一な残基が生じる位置の数を決定して、マッチした位置の数を求め、マッチした位置の数を、指定された領域内の位置の総数により除し、結果を、１００により乗じて、配列同一性の百分率を求めることにより計算されうる。２つの配列の長さが異なる又はアライメントが１つ以上の粘着末端をもたらし、指定された比較領域が、単一の配列だけを含む場合、単一の配列の残基は、計算の分母に組み入れられるが、分子に組み入れられない。
本明細書において使用された「イメージング手順」とは、健康状態を診断、処置及びモニタリングするために、体内が見られるようにする医学的検査を指す。イメージング手順は、侵害性とならずに、疾患及び損傷の診断を可能とする、非侵襲性手順でありうる。イメージング手順の例は、ＭＲＩ、ＣＴスキャン、Ｘ線、ポジトロン放射断層撮影（ＰＥＴ）スキャン、単一光子放射コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）及び拡散テンソルイメージング（ＤＴＩ）スキャンを含む。
本明細書において互換的に使用された「頭部への損傷」又は「頭部損傷」とは、頭皮、頭蓋骨又は脳への、任意の外傷を指す。このような損傷は、頭蓋骨上の軽症の瘤だけを含みうる又は重篤な脳損傷でありうる。このような損傷は、脳への一次損傷及び／又は脳への二次損傷を含む。一次脳損傷は、初期傷害時に生じ、脳の物理的構造のずれの結果としてもたらされる。より具体的に、一次脳損傷は、外傷性事象時に生じる、実質（組織、血管）への物理的ダメージであり、周囲の脳組織のせん断及び圧迫を結果としてもたらす。二次脳損傷は、一次損傷に後続して生じ、一連の細胞過程を伴いうる。より具体的に、二次脳損傷は、一次脳損傷の後、ある期間（数時間〜数日間）にわたり発展する変化を指す。二次脳損傷は、脳内の、細胞、化学物質、組織又は血管の変化の全体のカスケードであって、脳組織のさらなる破壊に寄与するカスケードを含む。
頭部への損傷は、閉鎖性又は開放性（穿通性）でありうる。閉鎖性頭部損傷とは、頭皮、頭蓋骨又は脳への外傷であって、ぶつかる物体による頭蓋骨への貫通が見られない外傷を指す。開放性頭部損傷とは、頭皮、頭蓋骨又は脳への外傷であって、ぶつかる物体による頭蓋骨への貫通が見られる外傷を指す。頭部への損傷は、人の物理的振盪、閉鎖性頭部外傷若しくは開放性頭部外傷を結果としてもたらす外部の機械的力又は他の力による鈍的打撃（例えば、自動車、航空機、列車などによる車両事故などの車両事故；野球のバットによる痛撃又は火器からの痛撃などの頭部への痛撃）、脳血管発作（例えば、脳卒中）、１回以上の転倒（例えば、スポーツ又は他の活動における）、爆発若しくは爆破（まとめて、「爆破損傷」）及び他の種類の鈍的外傷により引き起こされうる。代替的に、頭部への損傷は、化学物質、毒素又は化学物質と毒素との組合せの摂取及び／又はこれらへの曝露により引き起こされうる。このような化学物質及び／又は毒素の例は、火、カビ、アスベスト、害虫駆除剤、殺虫剤、有機溶剤、塗料、糊、ガス（一酸化炭素、硫化水素及びシアン化物など）、有機金属（メチル水銀、テトラエチル鉛及び有機スズなど）及び／又は１つ以上の乱用薬物を含む。代替的に、頭部への損傷は、自己免疫疾患、代謝性障害、脳腫瘍、１つ以上のウイルス、髄膜炎、水頭症、低酸素症又はこれらの組合せを対象が患うことの結果として引き起こされうる。場合によって、任意のこのような事象又は損傷が生じた又は起こったのかどうかを確認することは不可能である。例えば、患者又は対象において、病歴が見られない場合があり、対象は、発話が不可能な場合があり、対象は、どのような事象に曝露されたのか気づいていないか、これについての十分な情報を有さない場合があるなどである。本明細書において、このような状況は、対象「が、頭部への損傷を負った可能性がある」と記載される。本明細書の、ある特定の実施形態において、閉鎖性頭部損傷は、脳卒中などの脳血管発作を含まず、明確にこれを除外する。
本明細書において使用された「頭蓋内病変」とは、脳内の損傷領域を指す。頭蓋内病変は、ＭＲＩスキャン又はＣＴスキャンなどの、イメージング手順又は脳イメージング検査において見られる異常でありうる。ＣＴスキャン又はＭＲＩスキャンにおいて、脳病変は、正常な脳組織のように見えない、暗色又は明色の斑点として現れうる。
本明細書において使用された「単離ポリヌクレオチド」とは、その由来において、「単離ポリヌクレオチド」が天然において共に見出されるポリヌクレオチドの全部若しくは一部に付随していない；それが天然において連結されてないポリヌクレオチドと作動可能に連結されている；又は天然において、より大きな配列の一部として存在していないようなポリヌクレオチド（例えば、ゲノム、ｃＤＮＡ若しくは合成由来又はこれらの組合せによる）を意味しうる。
本明細書において使用された「標識」及び「検出可能な標識」とは、抗体と解析物との反応を検出可能とするように、抗体又は解析物へと接合された部分を指し、このように標識された抗体又は解析物は、「検出可能に標識された」と称される。標識は、視覚手段又は計測手段により検出可能なシグナルをもたらしうる。多様な標識は、色原体、蛍光化合物、化学発光化合物、放射性化合物などのシグナル発生物質を含む。標識の代表例は、光をもたらす部分、例えば、アクリジニウム化合物及び蛍光をもたらす部分、例えば、フルオレセインを含む。他の標識も、本明細書において記載されている。この点において、部分自体は、検出可能でない場合もあるが、さらに別の部分と反応すると、検出可能となりうる。「検出可能に標識された」という用語は、このような標識を包含することが意図される。
当技術分野において公知である、任意の適切な、検出可能な標識が使用されうる。例えば、検出可能な標識は、放射性標識（３Ｈ、１４Ｃ、３２Ｐ、３３Ｐ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、１７７Ｌｕ、１６６Ｈｏ及び１５３Ｓｍなど）、酵素標識（西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリペルオキシダーゼ、グルコース６−リン酸デヒドロゲナーゼなど）、化学発光標識（アクリジニウムエステル、チオエステル又はスルホンアミド；ルミノール、イソルミノール、フェナントリジニウムエステルなど）、蛍光標識（フルオレセインなど（例えば、５−フルオレセイン、６−カルボキシフルオレセイン、３’６−カルボキシフルオレセイン、５（６）−カルボキシフルオレセイン、６−ヘキサクロロフルオレセイン、６−テトラクロロフルオレセイン、イソチオシアン酸フルオレセインなど））、ローダミン、フィコビリタンパク質、Ｒ−フィコエリトリン、量子ドット（例えば、硫化亜鉛によりキャッピングされたセレン化カドミウム）、測熱標識又はイムノポリメラーゼ連鎖反応標識でありうる。標識、標識手順及び標識の検出への導入は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．、Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇｏｎにより公刊された、ハンドブックとカタログとの組合せである、Ｐｏｌａｋ及びＶａｎ Ｎｏｏｒｄｅｎ、「Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、２版、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、Ｎ．Ｙ．（１９９７）並びにＨａｕｇｌａｎｄ、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ」（１９９６）において見出される。蛍光標識は、ＦＰＩＡ（例えば、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれている、米国特許第５，５９３，８９６号、同第５，５７３，９０４号、同第５，４９６，９２５号、同第５，３５９，０９３号及び同第５，３５２，８０３号を参照されたい。）において使用されうる。アクリジニウム化合物は、同種化学発光アッセイにおける検出可能な標識（例えば、Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１６：１３２４〜１３２８（２００６）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、４：２３１３〜２３１７（２００４）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１４：３９１７〜３９２１（２００４）及びＡｄａｍｃｚｙｋら、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、５：３７７９〜３７８２（２００３）を参照されたい。）として使用されうる。
一態様において、アクリジニウム化合物は、アクリジニウム−９−カルボキサミドである。アクリジニウム９−カルボキサミドを調製するための方法については、Ｍａｔｔｉｎｇｌｙ、Ｊ．Ｂｉｏｌｕｍｉｎ．Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎ．、６：１０７〜１１４（１９９１）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、６３：５６３６〜５６３９（１９９８）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ、５５：１０８９９〜１０９１４（１９９９）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、１：７７９〜７８１（１９９９）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、１１：７１４〜７２４（２０００）；Ｍａｔｔｉｎｇｌｙら、「Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ｄｙｋｅ，Ｋ．Ｖ．編、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ：Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、７７〜１０５（２００２）；Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．、５：３７７９〜３７８２（２００３）；並びに米国特許第５，４６８，６４６号、同第５，５４３，５２４号及び同第５，７８３，６９９号（それらの各々が、参照によりその全体において、これについてのその教示について、本明細書に組み込まれる）において記載されている。
アクリジニウム化合物の別の例は、アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルである。式ＩＩのアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルの例は、１０−メチル−９−（フェノキシカルボニル）アクリジニウムフルオロスルホネート（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、Ａｎｎ Ａｒｂｏｒ、ＭＩから市販されている）である。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルを調製するための方法については、ＭｃＣａｐｒａら、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍ．Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．、４：１１１１〜２１（１９６５）；Ｒａｚａｖｉら、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、１５：２４５〜２４９（２０００）；Ｒａｚａｖｉら、Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ、１５：２３９〜２４４（２０００）及び米国特許第５，２４１，０７０号（それらの各々が、参照によりその全体において、これについてのその教示について、本明細書に組み込まれる）において記載されている。このようなアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルは、シグナルの強度及び／又はシグナルの迅速性の点において、少なくとも１つのオキシダーゼによる、解析物の酸化において生成された過酸化水素についての、有効な化学発光指示薬である。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルの化学発光過程は、迅速に、すなわち、１秒間未満において完了されるが、アクリジニウム−９−カルボキサミドの化学発光は、２秒間を超えて遷延する。しかし、アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルは、タンパク質の存在下において、その化学発光特性を失う。したがって、その使用は、シグナルの発生時及び検出時における、タンパク質の非存在を要求する。試料中のタンパク質を分離又は除去するための方法は、当業者に周知であり、限外濾過、抽出、沈殿、透析、クロマトグラフィー及び／又は消化（例えば、Ｗｅｌｌｓ、「Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｂｉｏａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓａｍｐｌｅ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ」、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（２００３）を参照されたい。）を含むがこれらに限定されない。被験試料から除去又は分離されるタンパク質の量は、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％又は約９５％でありうる。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステル及びその使用に関する、さらなる詳細については、２００７年４月９日において出願された、米国特許出願第１１／６９７，８３５号において明示されている。アクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステルは、脱気無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）又は含水コール酸ナトリウムなどの、任意の適切な溶媒中に溶解されうる。
本明細書において使用された、「ブランク限界（ＬｏＢ）」とは、解析物を含有しない、多連のブランク試料を調べた場合に見出されることが期待される、見かけの最高解析物濃度を指す。
本明細書において使用された、「検出限界（ＬＯＤ）」とは、指定された信頼水準において検出されうる、測定された対象物の最低濃度（すなわち、測定されることが意図される数量）を指す。信頼水準は、典型的に、偽陰性の測定の可能性を５％として、９５％である。ＬｏＤは、ＬｏＢと信頼できる形で区別される可能性が高く、検出が実現可能である最低の解析物濃度である。ＬｏＤは、測定されたＬｏＢ及び低濃度の解析物を含有することが既知である試料についての多連の試験の両方を用いることにより決定されうる。本明細書において使用されたＬｏＤという用語は、Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＣＬＳＩ）のプロトコールＥＰ１７−Ａ２（「Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｉｍｉｔｓ ｏｆ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｌｉｍｉｔｓ ｏｆ Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ａｐｐｒｏｖｅｄ Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅ、２版」、ＥＰ１７Ａ２Ｅ、Ｊａｍｅｓ Ｆ．Ｐｉｅｒｓｏｎ−Ｐｅｒｒｙら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、２０１２年６月１日）による定義に基づく。
本明細書において使用された、「定量限界（ＬｏＱ）」とは、解析物が、信頼できる形で検出できるだけでなく、バイアス及び不正確さについての、何らかの所定の目標が満たされる最低濃度を指す。ＬｏＱは、ＬｏＤと同等の場合もあり、はるかに高濃度の場合もある。
「直線性」とは、方法又はアッセイの実際の性能が、指定された作動範囲にわたり、どのくらい良好に直線を近似するのかを指す。直線性は、理想的な直線からの、偏差又は非直線性に関して測定されうる。「直線性からの偏差」は、フルスケールに対するパーセントに関して表されうる。本明細書において開示された方法の一部において、アッセイのダイナミックレンジにわたり、１０％未満の、直線性からの偏差（ＤＬ）が達成される。「直線の」とは、列挙された、例示的な範囲又は値にわたる（ｆｏｒ又はｏｖｅｒ）約２０％、約１９％、約１８％、約１７％、約１６％、約１５％、約１４％、約１３％、約１２％、約１１％、約１０％、約９％又は約８％以下の変動が見られることを意味する。
「連結配列」又は「連結ペプチド配列」とは、１つ以上の、目的のポリペプチド配列（例えば、全長配列、配列断片など）へと接続された、天然又は人工のポリペプチド配列を指す。「接続された」という用語は、連結配列の、目的のポリペプチド配列への接合を指す。このようなポリペプチド配列は、１つ以上のペプチド結合により接合されることが好ましい。連結配列は、約４〜約５０アミノ酸の長さを有しうる。好ましくは、連結配列の長さは、約６〜約３０アミノ酸である。天然の連結配列は、人工の連結配列を創出するように、アミノ酸の置換、付加又は欠失により修飾されうる。連結配列は、組換えＦａｂ内の使用を含む、多くの目的で使用されうる。例示的な連結配列は、以下を含むがこれらに限定されない：（ｉ）ＨＨＨＨＨＨ（配列番号２）のアミノ酸配列を有する、６×Ｈｉｓタグなどのヒスチジン（Ｈｉｓ）タグは、目的のポリペプチド及び抗体の単離及び精製を容易とする連結配列として有用である；（ｉｉ）Ｈｉｓタグなどのエンテロキナーゼ切断部位は、目的のタンパク質及び抗体の単離及び精製において使用される。エンテロキナーゼ切断部位は、Ｈｉｓタグと併せて、目的のタンパク質及び抗体の単離及び精製において使用されることが多い。当技術分野において、多様なエンテロキナーゼ切断部位が公知である。エンテロキナーゼ切断部位の例は、ＤＤＤＤＫ（配列番号２）のアミノ酸配列及びその誘導体（例えば、ＡＤＤＤＤＫ（配列番号３）など）を含むがこれらに限定されない；（ｉｉｉ）その他の配列も、単鎖可変領域断片の軽鎖可変領域及び／又は重鎖可変領域を連結又は接続するのに使用されうる。他の連結配列の例は、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３〜４２６（１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎら、ＰＮＡＳ ＵＳＡ８５：５８７９〜５８８３（１９８８）及びＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２〜５５４（１９９０）において見出されうる。連結配列はまた、薬物の接合又は固体支持体への接合などの、さらなる機能のためにも修飾されうる。本開示の文脈において、モノクローナル抗体は、例えば、Ｈｉｓタグ、エンテロキナーゼ切断部位又はこれらの両方などの連結配列を含有しうる。
本明細書において互換的に使用された「磁気共鳴イメージング」又は「ＭＲＩ」とは、健常及び疾患両方の体内における解剖学及び生理学的過程についての描像を形成するように、放射線医学において使用される医学的イメージング法を指す。ＭＲＩは、強力な磁界内に置かれた場合の、体内組織の原子核の、高周波数のラジオ波に対する応答を測定し、内臓についての画像を作成する、医学的イメージングの形態である。核磁気共鳴（ＮＭＲ）学に基づくＭＲＩスキャナーは、強力な磁界、ラジオ波及び磁界勾配を使用して、体内についての画像を作成する。
本明細書において使用された「モノクローナル抗体」とは、実質的に同種である抗体の集団から得られた抗体を指す、すなわち、集団を構成する個別の抗体は、少量で存在しうる、可能な天然の突然変異を除き、同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原に対して方向付けられている。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して方向付けられた、異なる抗体を含むことが典型的な、ポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して方向付けられている。本明細書におけるモノクローナル抗体は、とりわけ、重鎖及び／又は軽鎖の一部が、特定の種に由来する又は特定の抗体クラス若しくは抗体サブクラスに属する抗体内の、対応する配列と同一又は相同である一方、鎖の残りの部分は、別の種に由来する又は別の抗体クラス若しくは抗体サブクラスに属する抗体内の、対応する配列と同一又は相同である「キメラ」抗体のほか、それらが、所望の生物学的活性を呈する限りにおいて、このような抗体の断片も含む。
本明細書において、「多価結合性タンパク質」とは、２つ以上の抗原結合性部位（本明細書において、「抗原結合性ドメイン」ともまた称される）を含む結合性タンパク質を指すように使用される。多価結合性タンパク質は、３つ以上の抗原結合性部位を有するように操作されていることが好ましく、一般に、天然の抗体ではない。「多特異性結合性タンパク質」という用語は、同じ標的分子の２つ以上の異なるエピトープに結合することが可能な結合性タンパク質を含む、２つ以上の関連する又は関連しない標的に結合しうる結合性タンパク質を指す。
「ポイントオブケアデバイス」とは、ポイントオブケア（すなわち、検査室の外部）又はこの近傍の、患者ケアの時間及び場所（病院、診療所、救急ケア施設又は他の医療ケア施設、患者の自宅、介護施設及び／又は長期ケア施設及び／又はホスピス施設など）において、医学的診断検査を提供するのに使用されるデバイスを指す。ポイントオブケアデバイスの例は、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ）（例えば、ｉ−ＳＴＡＴ及びｉ−ＳＴＡＴ Ａｌｉｎｉｔｙ）、Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒｓ（Ｒｏｗｖｉｌｌｅ、Ａｕｓｔｒａｌｉａ）（ＵＳ２００６／０１３４７１３を参照されたい。）、Ａｘｉｓ−Ｓｈｉｅｌｄ ＰｏＣ ＡＳ（Ｏｓｌｏ、Ｎｏｒｗａｙ）及びＣｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ、ＵＳＡ）により作製されたポイントオブケアデバイスを含む。
本明細書において記載されたイムノアッセイ及びキットの文脈における「品質管理試薬」は、較正物質、対照及び感度パネルを含むがこれらに限定されない。「較正物質」又は「標準物質」（例えば、複数など、１つ以上の）は、抗体又は解析物などの、解析物の濃度を内挿するための、較正曲線（検量線）を確立するために使用されることが典型的である。代替的に、基準レベル又は対照レベルの近傍（例えば、「低」レベル、「中」レベル又は「高」レベル）にある、単一の較正物質も使用されうる。「感度パネル」を含むように、複数の較正物質（すなわち、１つを超える較正物質又は変動量の較正物質）が併用されうる。
「組換え抗体（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｙ）」及び「組換え抗体（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）」とは、組換え法により、１つ以上のモノクローナル抗体の全部又は一部をコードする核酸配列を、適切な発現ベクターへとクローニングし、その後、抗体を、適切な宿主細胞において発現させるステップを含む、１つ以上のステップにより調製された抗体を指す。用語は、組換えにより作製されたモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体（完全ヒト化抗体又は部分的ヒト化抗体）、抗体断片から形成された多特異性構造又は多価構造、二官能性抗体、ヘテロコンジュゲートＡｂ、ＤＶＤ−Ｉｇ（登録商標）及び本明細書の（ｉ）において記載された他の抗体（二重可変ドメイン免疫グロブリン及びそれらを作り出すための方法について、Ｗｕ，Ｃ．ら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２５：１２９０〜１２９７（２００７）において記載されている。）を含むがこれらに限定されない。本明細書において使用された「二官能性抗体」という用語は、１つの抗原性部位に対する特異性を有する第１のアーム及び異なる抗原性部位に対する特異性を有する第２のアームを含む抗体を指す、すなわち、二官能性抗体は、二重特異性を有する。
本明細書において使用された「基準レベル」とは、診断的有効性、予後診断的有効性又は治療的有効性を評価するのに使用され、本明細書において、多様な臨床パラメータ（例えば、疾患の存在、疾患の病期、疾患の重症度、疾患の進行、非進行又は改善など）と連関づけられた又は関連づけられた、アッセイカットオフ値を指す。本開示は、例示的な基準レベルを提示する。しかし、基準レベルは、イムノアッセイの性質（例えば、利用された抗体、反応条件、試料の純度など）に応じて、変動する場合があり、アッセイは、比較及び標準化されうることが周知である。さらに、本明細書における本開示を、他のイムノアッセイに適合させて、本開示により提示された記載に基づき、これらの他のイムノアッセイについて、イムノアッセイ特異的な基準レベルを得ることは、十分に、当業者の技術の範囲内にある。基準レベルの正確な値は、アッセイ間において変動しうるが、本明細書において記載された知見は、一般に、適用可能であり、他のアッセイへの外挿が可能であるものとする。
本明細書において使用された、対象（例えば、患者）についての「危険性の評価」、「危険性の分類」、「危険性の同定」又は「危険性の層別化」とは、対象に関する処置決定が、より情報を得た状態ベースにおいてなされうるように、疾患の発生又は疾患の進行を含む将来の事象の発生の危険性を予測するためのバイオマーカーを含む因子についての査定を指す。
本明細書において使用された「試料」、「被験試料」、「検体」、「対象に由来する試料」及び「患者試料」は、互換的に使用される場合があり、全血、組織、尿、血清、血漿、羊水、脳脊髄液、胎盤細胞又は胎盤組織、内皮細胞、白血球又は単球などの血液試料でありうる。試料は、患者から得られた通りに直接使用されうる又は濾過、蒸留、抽出、濃縮、遠心分離、干渉成分の不活化、試薬の添加など、本明細書において論じられている、何らかの形において又は当技術分野において公知である、別の形において、試料の特徴を改変するように前処置されうる。
試料を得るのに、様々な細胞型、組織又は体液が利用されうる。このような細胞型、組織及び体液は、生検試料及び剖検試料などの組織切片、組織学的目的のために採取された凍結切片、血液（全血など）、血漿、血清、赤血球、血小板、間質液、脳脊髄液などを含みうる。細胞型及び組織はまた、リンパ液、脳脊髄液、により回収された体液も含みうる。組織又は細胞型は、細胞試料を、ヒト及び非ヒト動物から摘出することにより用意されうるが、また、あらかじめ単離された細胞（例えば、別の者により、別の時間において、かつ／又は別の目的のために単離された）を使用することによっても達せられうる。並びに、固体に由来する、ＩＰＳＣ又はＩＰＳＣ由来の細胞型（例えば、運動ニューロン）も使用されうる。処置履歴又は転帰履歴を有する組織などのアーカイブ組織もまた、使用されうる。タンパク質又はヌクレオチドの単離及び／又は精製は、必要でない場合もある。
本明細書において互換的に使用された、「固相」又は「固体支持体」とは、（１）１つ以上の捕捉剤若しくは捕捉のための特異的結合パートナー又は（２）１つ以上の検出剤若しくは検出のための特異的結合パートナーを接合させ、かつ／又は誘引し、固定化させるために使用されうる、任意の材料を指す。固相は、捕捉剤を誘引し、固定化させる、その内因性の能力について選択されうる。代替的に、固相は、（１）捕捉剤若しくは捕捉のための特異的結合パートナー又は（２）検出剤若しくは検出のための特異的結合パートナーを誘引し、固定化させる能力を有する、連結剤を付加されている。例えば、連結剤は、捕捉剤（例えば、捕捉のための特異的結合パートナー）又は検出剤（例えば、検出のための特異的結合パートナー）自体若しくは（１）捕捉剤若しくは捕捉のための特異的結合パートナー又は（２）検出剤若しくは検出のための特異的結合パートナーへとコンジュゲートされた帯電物質に対して、逆向きに帯電した帯電物質を含みうる。一般に、連結剤は、固相上に固定化され（固相へと接合され）、結合反応を介して、（１）捕捉剤若しくは捕捉のための特異的結合パートナー又は（２）検出剤若しくは検出のための特異的結合パートナーを固定化させる能力を有する、任意の結合パートナー（好ましくは特異的結合パートナー）でありうる。連結剤は、アッセイの実施前に又はアッセイの実施時に、捕捉剤の、固相材料への間接的結合を可能とする。例えば、固相は、例えば、試験管、マイクロ滴定ウェル、シート、ビーズ、微粒子、チップ及び当業者に公知の他の構成を含む、プラスチック、誘導体化プラスチック、磁性金属又は非磁性金属、ガラス又はシリコンでありうる。
本明細書において使用された「特異的結合」又は「〜に特異的に結合すること」とは、抗体、タンパク質又はペプチドの、第２の化学的分子種との相互作用を指す場合があり、この場合、相互作用は、化学的分子種上の特定の構造（例えば、抗原性決定基又はエピトープ）の存在に依存する；例えば、抗体は、タンパク質一般ではなく、特異的なタンパク質構造を認識し、これに結合する。抗体が、エピトープ「Ａ」に対して特異的である場合、エピトープＡ（又は遊離のＡ、非標識Ａ）を含有する分子の、標識「Ａ」及び抗体を含有する反応物中の存在は、抗体に結合した標識Ａの量を低減する。
「特異的結合パートナー」とは、特異的結合対のメンバーである。特異的結合対は、化学手段又は物理的手段を介して、互いと特異的に結合する、２つの異なる分子を含む。したがって、一般的なイムノアッセイの、抗原と抗体との特異的結合対に加えて、他の特異的結合対は、ビオチン及びアビジン（又はストレプトアビジン）、炭水化物及びレクチン、相補的なヌクレオチド配列、エフェクター分子及び受容体分子、補因子及び酵素、酵素及び酵素阻害剤、アプタマー（例えば、ＲＮＡアプタマー及びＤＮＡアプタマー）などを含みうる。さらに、特異的結合対は、元の特異的結合メンバーの類似体、例えば、解析物類似体であるメンバーを含みうる。免疫反応性の特異的結合メンバーは、抗原、抗原断片並びにモノクローナル抗体及びポリクローナル抗体のほか、単離されたものであれ、組換えにより作製されたものであれ、これらの複合体及び断片を含む抗体を含む。
本明細書において互換的に使用された、「対象」及び「患者」とは、哺乳動物及びヒトを含むがこれらに限定されない、任意の脊椎動物を指す。一部の実施形態において、対象は、ヒト又は非ヒトでありうる。対象又は患者は、他の形態の処置を受けている最中である場合がある。一部の実施形態において、対象がヒトである場合、対象は、脳血管発作（例えば、脳卒中）を患っているヒトを含まない。一部の実施形態において、対象は、頭部への損傷を負ったと推測される。一部の実施形態において、対象は、頭部への損傷を負ったことが既知である。一部の実施形態において、対象は、軽度、中等度又は重度のＴＢＩを患っていると推測される。一部の実施形態において、対象は、軽度ＴＢＩを患っていると推測される。一部の実施形態において、対象は、中等度ＴＢＩを患っていると推測される。一部の実施形態において、対象は、重度ＴＢＩを患っていると推測される。
本明細書において使用された、「哺乳動物」とは、限定せずに述べると、ヒト並びにチンパンジー及び他の類人猿並びにサル種などの非ヒト霊長動物；ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ラマ、ラクダ及びウマなどの農場動物；イヌ及びネコなどのペット哺乳動物；マウス、ラット、ウサギ、モルモットなどの齧歯動物を含む実験室動物を含む、Ｍａｍｍａｌｉａ綱の任意のメンバーを指す。用語は、特定の年齢又は性別を描示しない。したがって、雄であれ、雌であれ、成体対象及び新生仔対象並びに胎仔対象が、この用語の範囲内に含まれることが意図される。
本明細書において、「〜を処置する」、「〜を処置すること」又は「処置」は各々、疾患及び／若しくは損傷又はこのような用語が適用される、このような疾患の、１つ以上の症状を阻止、緩和すること又はこれらの進行を阻害することについて記載するのに、互換的に使用される。対象の状態に依存して、用語はまた、疾患を予防することも指し、疾患の発生を予防すること又は疾患と関連する症状を予防することを含む。処置は、急性的に又は慢性的に実施されうる。用語はまた、疾患への罹患の前における、疾患又はこのような疾患と関連する症状の重症度を軽減することも指す。罹患の前における、疾患のこのような予防又は重症度の低減は、医薬組成物の、投与時において疾患に罹患していない対象への投与を指す。「〜を予防すること」はまた、疾患又はこのような疾患と関連する、１つ以上の症状の再発を予防することも指す。「処置」及び「治療的に」とは、「〜を処置すること」が、上記において規定された通りである場合の、処置する行為を指す。
本明細書において使用された「単一分子の検出」という用語は、濃度が極めて低レベルの（ｐｇ／ｍＬ又は１ｍＬ当たりフェムトグラムのレベルなど）被験試料中の解析物の単一分子の検出及び／又は測定を指す。当技術分野において、多数の異なる単一分子の解析器又はデバイスが公知であり、ナノポア及びナノウェルデバイスを含む。ナノポアデバイスの例については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれている、国際特許公開第ＷＯ２０１６／１６１４０２号において記載されている。ナノウェルデバイスの例については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれている、国際特許公開第ＷＯ２０１６／１６１４００号において記載されている。
本明細書において互換的に使用された「外傷性脳損傷」又は「ＴＢＩ」とは、広範囲にわたる症状及び身体障害を伴う複合損傷を指す。ＴＢＩは、他の損傷と同様の、急性事象であることが最も多い。ＴＢＩは、「軽度」、「中等度」又は「重度」と分類されうる。本明細書において、単に、「ＴＢＩ」と言及される場合、これは、一般に、ＴＢＩの任意の類型（例えば、軽度、中程度の又は重度）を意味する。ＴＢＩの原因は、多様であり、例えば、人力による物理的振盪、自動車事故、火器による損傷、脳血管発作（例えば、脳卒中）、転倒、爆発又は爆破及び他の種類の鈍的外傷を含む。ＴＢＩの他の原因は、１つ以上の化学物質又は毒素（火、カビ、アスベスト、害虫駆除剤及び殺虫剤、有機溶剤、塗料、糊、ガス（一酸化炭素、硫化水素及びシアン化物など）、有機金属（メチル水銀、テトラエチル鉛及び有機スズなど）、１つ以上の乱用薬物又はこれらの組合せなど）の摂取及び／又はこれらへの曝露を含む。代替的に、ＴＢＩは、自己免疫疾患、代謝性障害、脳腫瘍、低酸素症、１つ以上のウイルス、髄膜炎、水頭症又はこれらの組合せを患う対象において生じうる。若年成人及び老齢者は、ＴＢＩの危険性が最も高い年齢群である。本明細書の、ある特定の実施形態において、外傷性脳損傷又はＴＢＩは、脳卒中などの脳血管発作を含まず、明確にこれを除外する。
本明細書において使用された「軽度ＴＢＩ」とは、意識喪失が短時間であり、通例数秒間若しくは数分間であり、かつ／又は意識混濁及び見当識の喪失が、１時間より短い脳損傷を指す。軽度ＴＢＩはまた、脳振盪、軽症の頭部外傷、軽症のＴＢＩ、軽症の脳損傷及び軽症の頭部損傷とも称される。ＭＲＩ及びＣＴスキャンは、正常であることが多いが、軽度ＴＢＩを伴う個体は、頭痛、思考困難、記憶問題、注意欠陥、気分変動及び欲求不満などの認知問題を有しうる。
軽度ＴＢＩは、最も高頻度のＴＢＩであり、初期損傷時に、見逃されることが多い。典型的に、対象は、１３〜１５（１３〜１５又は１４〜１５など）の間のＧｌａｓｇｏｗ昏睡スケール数を有する。軽度ＴＢＩを伴う人々のうち、１５パーセント（１５％）は、３カ月間以上にわたり持続する症状を有する。軽度ＴＢＩは、頭部の強制的な運動又は精神状態の短い変化（意識混濁、見当識の喪失又は記憶喪失）を引き起こす衝撃又は３０分間未満にわたる意識喪失の結果として規定される。軽度ＴＢＩの一般的な症状は、疲労感、頭痛、視覚障害、記憶喪失、注意／集中力の低下、睡眠障害、めまい／平衡感覚の喪失、易刺激性（感情障害）、抑うつ感覚及び発作を含む。軽度ＴＢＩと関連する他の症状は、悪心、嗅覚喪失、光及び音への過敏性、気分の変化、迷子若しくは意識混濁及び／又は思考遅滞を含む。
「軽度ＴＢＩサブクラス１」（ＴＢＩ−１）とは、軽度ＴＢＩを有すると分類され、また、サブクラス２、３又は４の各々のうちの、対照（例えば、健常対照又はＴＢＩを負っていない対照）と異なり、中等度〜重度のＴＢＩを伴う対象と異なり、軽度ＴＢＩを伴う対象と異なる血漿プロテオームシグネチャーも呈する対象を指す。
「軽度ＴＢＩサブクラス２」（ＴＢＩ−２）とは、軽度ＴＢＩを有すると分類され、また、サブクラス１、３又は４の各々のうちの、対照（例えば、健常対照又はＴＢＩを負っていない対照）と異なり、中等度〜重度のＴＢＩを伴う対象と異なり、軽度ＴＢＩを伴う対象と異なる血漿プロテオームシグネチャーも呈する対象を指す。
「軽度ＴＢＩサブクラス３」（ＴＢＩ−３）とは、軽度ＴＢＩを有すると分類され、また、サブクラス１、２又は４の各々のうちの、対照（例えば、健常対照又はＴＢＩを負っていない対照）と異なり、中等度〜重度のＴＢＩを伴う対象と異なり、軽度ＴＢＩを伴う対象と異なる血漿プロテオームシグネチャーも呈する対象を指す。
本明細書において、「合併軽度ＴＢＩ」ともまた言及された、「軽度ＴＢＩサブクラス４」（複合型ＴＢＩ）は、軽度ＴＢＩを有すると分類され、また、サブクラス１、２又は３の各々のうちの、対照（例えば、健常対照又はＴＢＩを負っていない対照）と異なり、中等度〜重度のＴＢＩを伴う対象と異なり、軽度ＴＢＩを伴う対象と異なる血漿プロテオームシグネチャーも呈する対象を指す。加えて、軽度ＴＢＩサブクラス４を伴う対象は、重度ＴＢＩを有する対象の、プールされた試料から得られたプロテオームシグネチャーに相似するプロテオームシグネチャーを呈する。本明細書において開示されたデータにおいて、軽度ＴＢＩサブクラス４クラスターは、最大数の、ＧＦＡＰレベル（ＥＬＩＳＡベースのＧＦＡＰアッセイ及びＧＦＡＰ質量分析に基づく）が上昇した対象を含有し、ＣＴスキャンが陽性である対象だけを含有した。
本明細書において使用された「重度ＴＢＩ」とは、意識喪失及び／又は意識混濁並びに見当識の喪失が、１〜２４時間の間であり、対象が、９〜１２の間のＧｌａｓｇｏｗ昏睡スケール数を有する脳損傷を指す。中等度ＴＢＩを伴う個体は、脳イメージング結果の異常を有する。本明細書において使用された「重度ＴＢＩ」とは、意識喪失が、２４時間を超え、損傷又は穿通性頭蓋骨損傷後の記憶喪失が、２４時間より長く、対象が、３〜８の間のＧｌａｓｇｏｗ昏睡スケール数を有する脳損傷を指す。欠損は、高レベルの認知機能の機能障害〜昏睡状態の範囲にわたる。生存者は、腕部又は脚部の機能の限定、発話又は言語の異常、思考能力の喪失又は感情問題を有しうる。重度損傷を伴う個体は、長期にわたる不応状態に置かれたままになりうる。重度ＴＢＩを伴う多くの人々の場合、機能及び自立を最大化するために、長期にわたるリハビリが必要となることが多い。
中等度〜重度のＴＢＩの一般的な症状は、注意、集中力、散漫性、記憶、処理速度、混乱、固執、衝動性、言語処理及び／又は「実行機能」に関する困難、発話された単語の無理解（受容失語症）、発話及び理解されることの困難（表現失語症）、発話の不明瞭、発話が極めて速い又は極めて遅い、読むときの問題、書くときの問題、接触、温度、運動の解釈、下肢の位置及び微細な識別、感覚的印象の、心理学的に有意味なデータへの統合又はパターン化に関する困難、部分的又は全体的な視覚の喪失、眼筋力の低下及び二重視覚（複視）、かすみ目、距離を判断するときの問題、非自発的な眼運動（眼振）、光不耐性（羞明）、聴力の低下又は喪失などの聴覚問題、耳が鳴ること（耳鳴り）、音に対する過敏性、嗅覚の喪失又は低下（無嗅覚）、味覚の喪失又は低下、てんかんと関連する痙攣であって、いくつかの種類であることが可能であり、意識、感覚的認知又は運動、腸及び膀胱の制御の破壊を伴いうる痙攣、睡眠障害、気力の喪失、食欲の変化、体温の調節、月経困難、依存性行動、感情能力、意欲の欠如、易刺激性、攻撃、抑うつ、脱抑制又は意識の否認／欠如を含む認知欠損を含む。
本明細書において、「変異体」は、アミノ酸の挿入、欠失又は保存的置換により、アミノ酸配列が異なるが、少なくとも１つの生物学的活性を保持するペプチド又はポリペプチドについて記載するのに使用される。「ＳＮＰ」とは、一塩基多型である変異体を指す。「生物学的活性」の代表例は、特異的抗体による結合を受ける能力又は免疫反応を促進する能力を含む。本明細書において、変異体はまた、少なくとも１つの生物学的活性を保持するアミノ酸配列を伴う基準タンパク質と実質的に同一なアミノ酸配列を伴うタンパク質について記載するのにも使用される。当技術分野において、アミノ酸の保存的置換、すなわち、アミノ酸を、類似の特性（例えば、親水性、帯電の程度及び帯電領域の分布）を有する、異なるアミノ酸により置き換えることは、典型的に、小さな変化を伴うこととして当技術分野において認識されている。当技術分野において理解された通り、これらの小さな変化は、部分的に、アミノ酸の疎水性指数を検討することにより同定されうる（Ｋｙｔｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５７：１０５〜１３２（１９８２））。アミノ酸の疎水性指数は、その疎水性及び電荷の検討に基づく。当技術分野において、同様の疎水性指数を有するアミノ酸は、置換される場合があるが、なおも、タンパク質の機能を保持することが公知である。一態様において、±２の疎水性指数を有するアミノ酸は、置換される。アミノ酸の親水性もまた、生物学的機能を保持するタンパク質を結果としてもたらす置換を明らかにするのに使用されうる。ペプチドの文脈における、アミノ酸の親水性についての検討は、抗原性及び免疫原性とよく相関することが報告されている、有用な尺度である、このペプチドの局所平均親水性の最大値の計算を可能とする（参照により全体が本明細書に組み込まれる、米国特許第４，５５４，１０１号）。同様の親水性値を有するアミノ酸による置換は、生物学的活性、例えば、当技術分野において理解された免疫原性を保持するペプチドを結果としてもたらしうる。置換は、互いから±２以内の親水性値を有するアミノ酸により実施されうる。アミノ酸の疎水性指数及び親水性値のいずれも、このアミノ酸の特定の側鎖の影響を受ける。生物学的機能と適合性であるアミノ酸置換が、疎水性、親水性、電荷、サイズ及び他の特性により明らかにされる通り、アミノ酸の相対的類似性に依存し、特に、これらのアミノ酸の側鎖に依存すると理解されることは、この観察と符合する。
本明細書において、「ベクター」とは、連結された別の核酸を運びうる核酸分子について記載するのに使用される。ベクターの１つの種類は、さらなるＤＮＡセグメントがライゲーションされうる、環状二本鎖ＤＮＡループを指す、「プラスミド」である。ベクターの別の種類は、さらなるＤＮＡセグメントが、ウイルスゲノムへとライゲーションされうる、ウイルスベクターである。ある特定のベクターは、これらが導入される宿主細胞内の自己複製が可能である（例えば、細菌の複製起点及び哺乳動物のエピソームベクターを有する細菌ベクター）。他のベクター（例えば、哺乳動物の非エピソームベクター）は、宿主細胞へと導入されると、宿主細胞のゲノムへと組み込まれ、これにより、宿主ゲノムと共に複製されうる。さらに、ある特定のベクターは、作動的に連結される遺伝子の発現を方向付けることが可能である。本明細書において、このようなベクターは、「組換え発現ベクター」（又は、単に、「発現ベクター」）と称される。一般に、組換えＤＮＡ法において有用な発現ベクターは、プラスミドの形態にあることが多い。プラスミドは、最も一般に使用されるベクターの形態であるので、「プラスミド」と「ベクター」とは、互換的に使用されうる。しかし、ウイルスベクター（例えば、複製欠損性のレトロウイルス、アデノウイルス及びアデノ随伴ウイルス）など、同等な機能を果たす、発現ベクターの他の形態も使用されうる。この点で、ベクターのＲＮＡ形（ウイルス性ＲＮＡベクターを含む）もまた、本開示の文脈において使用されうる。
本明細書にそうでないことが規定されない限りにおいて、本開示に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者により一般に理解される意味と同じ意味を有するものとする。例えば、本明細書において記載された、細胞培養法及び組織培養法、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学並びにタンパク質化学及び核酸化学及びハイブリダイゼーションとの関連において使用された用語法、並びにこれらについての技法は、周知の用語法及び技法であり、当技術分野において一般的に使用されている用語法及び技法である。用語の意味及び範囲は、明確であるものとするが、万一、なんらかの潜在的な曖昧さが生じた場合、本明細書において提示された定義が、任意の辞書又は外部の定義に対して優先される。さらに、文脈により、そうでないことが要求されない限りにおいて、単数形の用語は、複数形を含み、複数形の用語は、単数形を含むものとする。
２．対象が外傷性脳損傷を負ったのかどうかの診断及び査定
本開示は、対象がＴＢＩ又は各種の軽度ＴＢＩを負ったのかどうかを含む、対象が頭部への損傷を負っている又はこれを負った可能性があるのかどうかについての診断、予後診断、危険性層別化及び査定の一助となる方法に関する。これらの方法は、推測される頭部への損傷を伴うヒト対象におけるＴＢＩの程度及び／又は重症度を決定することであって、例えば、対象が軽度ＴＢＩを負っているのかどうかを決定することであり、そうである場合、負われた、軽度ＴＢＩのサブクラス、対象が中等度〜重度のＴＢＩを負っているのかどうか又は対象がＴＢＩを負っていないのかどうかを決定することを含む、決定することの一助となりうる。より具体的に、本開示のバイオマーカーは、診断検査において、脳損傷状態を決定、定量及び／又は評価する、例えば、個々の対象又は患者において、ＴＢＩを診断するのに使用されうる。一部の実施形態において、ＴＢＩ状態は、患者の無症候性脳損傷状態又はＳＣＩ状態を決定して、例えば、個々の対象又は患者において、ＳＣＩを診断することを含みうる。本開示のバイオマーカーを検出又は測定することは、ＴＢＩを診断することの一助となることが可能であり、例えば、軽度ＴＢＩのサブクラスについて、ＴＢＩシグネチャーを生成することの一助となりうる。
対象が軽度ＴＢＩ（又はｍＴＢＩのサブクラス）又は中等度〜重度のＴＢＩを有するのかどうかを決定することは、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーを測定又は検出し、この情報を、他の情報（例えば、臨床評価データ）と統合して、対象がＴＢＩを負った可能性が、ＴＢＩを負わなかった可能性より高いことを決定し、そうである場合、どの種類のＴＢＩが負われたのかを決定することを含みうる。方法は、推測される頭部への損傷後約２時間以内など、約２４時間以内に、ヒト対象から得られた試料に対して、アッセイを実施して、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーの、試料中レベルを測定又は検出するステップ；及び対象が軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷（ｓＴＢＩ）を負っているのかどうかを決定するステップを含みうる。一部の実施形態において、対象は、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーの、試料中レベルが、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーの基準レベル（例えば、ＴＢＩバイオマーカーの、対照試料中レベル）と比較して変更されている（例えば、高発現レベル又は低発現レベルである）場合に、ＴＢＩ及び／又は軽度ＴＢＩのサブクラスを有すると決定される。他の実施形態において、対象は、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーの、試料中レベルが検出される場合に、バイオマーカーレベルを確認する必要又は基準試料若しくは対照試料と比較する必要を伴わずに、ＴＢＩ及び／又は軽度ＴＢＩのサブクラスを有すると決定される。
試料は、生物学的試料でありうる。本明細書において使用された「試料」は、互換的に使用される（例えば、試料、被験試料又は生物学的試料）場合があり、全血などの血液、組織、尿、血清、血漿、羊水、脳脊髄液、胎盤細胞若しくは胎盤組織、内皮細胞、リンパ球又は単球の試料でありうる。一部の実施形態において、方法は、対象に由来する試料を、対象への、推測される損傷から約４８時間以内に得るステップ及び試料を、ＴＢＩバイオマーカーに対する抗体と接触させて、抗体とＴＢＩバイオマーカーとの複合体の形成を可能とするステップを含みうる。方法はまた、結果として得られる抗体−ＴＢＩバイオマーカー複合体を検出するステップも含む。
一部の実施形態において、対象は、ＴＢＩバイオマーカーのレベルが、１つ以上の時点において、決定される前に又は決定された後において、Ｇｌａｓｇｏｗ昏睡スケールスコアを受けている場合がある。ある特定の実施形態において、対象は、Ｇｌａｓｇｏｗ昏睡スケールスコアに基づき、軽度ＴＢＩを有することが推測されうる。ある特定の実施形態において、対象は、異常な頭部ＣＴに基づき、軽度ＴＢＩを有することが推測されうる。一部の実施形態において、対象は、アッセイが実施される前に又は実施された後において、ＣＴスキャンを受けている。一部の実施形態において、対象は、正常な頭部ＣＴを有する。一部の実施形態において、ＴＢＩバイオマーカーの基準レベルは、ＴＢＩを有する対象と相関する。一部の実施形態において、ＴＢＩバイオマーカーの基準レベルは、Ｇｌａｓｇｏｗ昏睡スケールスコアと相関する。
一般に、ＴＢＩバイオマーカーの基準レベルはまた、被験試料を、ＴＢＩバイオマーカーについてアッセイしたときに得られた結果を評価するためのベンチマークとしても利用されうる。一般に、このような比較を行う場合に、ＴＢＩバイオマーカーの基準レベルは、解析物の存在、量又は濃度の、ＴＢＩの特定の病期若しくはエンドポイント又は特定の徴候との連関又は関連を成立させるような、十分な回数及び適切な条件下において、特定のアッセイを行うことにより得られる。典型的に、ＴＢＩバイオマーカーの基準レベルは、基準対象（又は対象の集団）についてのアッセイにより得られる。測定されるＴＢＩバイオマーカーは、この断片、この分解産物及び／又は酵素によるこの切断産物を含みうる。ある特定の実施形態において、基準レベルは、頭部損傷を負っていない対照の対象と相関しうる。
本明細書において記載された方法において利用されたアッセイの性質は、それほど重要ではなく、検査は、例えば、イムノアッセイ、タンパク質免疫沈降、免疫電気泳動、ウェスタンブロット若しくはタンパク質免疫染色又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）若しくは液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）、ＤＩＡ−ＭＳ、ＤＤＡ−ＭＳ、ＰＲＭ−ＭＳ若しくはＳＲＭ／ＭＲＭ−ＭＳによる質量分析アッセイ直接又は富化（例えば、富化は、標的タンパク質（複数可）に対する抗体を介しうる。）などの、分光法など、当技術分野において公知である、任意のアッセイでありうる。質量分析の前に、試料を、候補バイオマーカータンパク質について、選択的に富化するのに使用された捕捉試薬は、アプタマー、抗体、核酸プローブ、キメラ体、低分子、Ｆ（ａｂ’）２断片、単鎖抗体断片、Ｆｖ断片、単鎖Ｆｖ断片、核酸、レクチン、リガンド結合性受容体、アフィボディー、ナノボディー、アンキリン、ドメイン抗体、代替的抗体足場（例えば、ダイアボディーなど）インプリントポリマー、アビマー、ペプチド模倣体、ペプトイド、ペプチド核酸、トレオース核酸、ホルモン受容体、サイトカイン受容体及び合成受容体並びにこれらの修飾及び断片を含むがこれらに限定されない。富化と共に、マトリックス支援レーザー脱着／イオン化飛行時間（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ又はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）もまた使用されうる。当業者に公知の、臨床化学フォーマットにおけるアッセイもまた利用されうる。
３．ＴＢＩバイオマーカーパネル
本開示のバイオマーカーは、ＴＢＩ状態など、患者における脳損傷状態を評価、決定及び／又は定量する（本明細書において互換的に使用された）診断検査において使用されうる。「脳損傷状態」という語句は、脳損傷を有さないことを含む、任意の識別可能な状態の顕示を含む。例えば、脳損傷状態は、限定せずに述べると、患者における脳損傷の存在又は非存在、脳損傷を発症する危険性、脳損傷の病期又は重症度、脳損傷の進行（例えば、脳損傷の時間経過にわたる進行）、脳損傷の処置の有効性又はこれに対する応答（例えば、処置の後における、脳損傷の臨床追跡及び臨床監視）及びＴＢＩ又はＴＢＩのサブクラスなど、脳損傷の種類を含む。この状態に基づき、さらなる診断検査又は治療手順又はレジメンを含む、さらなる手順が指し示されうる。
診断的検査が、状態を正しく予測する力は、一般に、アッセイの感度、アッセイの特異度又は受信者動作特性（「ＲＯＣ」）曲線下面積として測定される。感度が、検査により、陽性であることが予測された、真陽性の百分率であるのに対し、特異度とは、検査により、陰性であることが予測された、真陰性の百分率である。ＲＯＣ曲線は、検査の感度を、１−特異度の関数として提示する。ＲＯＣ曲線下面積が大きいほど、検査の予測値が強力となる。検査の有用性についての、他の有用な尺度は、陽性予測値及び陰性予測値である。陽性予測値とは、検査により陽性とされた人が、実際に陽性である百分率である。陰性予測値とは、検査により陰性とされた人が、実際に陰性である百分率である。
本開示に記載されたデータ並びにＴＢＩ患者及び対照患者のコホートに由来する臨床的データの解析は、対象における脳損傷を診断及び／又は査定するのに、個別に又は互いと組み合わせて、かつ、パネルの形態にある、他のバイオマーカーと組み合わせて使用されうる、多様なＴＢＩバイオマーカーの生成を結果としてもたらした。ＴＢＩバイオマーカーパネルは、本明細書において開示されたＴＢＩバイオマーカーのうちのいずれか１つを含むことが可能であり、顕著に異なるタンパク質に対応する、１つを超え、かつ、最大で２０の、異なるバイオマーカーを含みうる。ＴＢＩバイオマーカーパネルはまた、非ＴＢＩバイオマーカー（例えば、アッセイ対照バイオマーカー）及びＴＢＩと関連することが既に同定されたバイオマーカー（例えば、ＧＦＡＰ及び／又はＵＣＨ−Ｌ１及び／又はＮＳＥ）も含みうる。本開示の一部の実施形態においてバイオマーカーパネルは、異なるＴＢＩ状態における統計学的差違を示しうる。これらのバイオマーカーを使用する診断検査は、少なくとも０．６、少なくとも約０．７、少なくとも約０．８又は少なくとも約０．９のＲＯＣを示しうる。
ＴＢＩバイオマーカーは、ＴＢＩの種類又はサブクラス（例えば、ＴＢＩシグネチャー）に応じて、示差的に存在しうる／発現しうるので、１つを超えるＴＢＩバイオマーカーのパネルは、脳損傷状態の決定の一助となることにおいて有用でありうる。一部の実施形態において、バイオマーカーは、本明細書において記載された方法を使用して、患者試料中において測定し、例えば、所定のバイオマーカーレベルと比較し、ＴＢＩ状態と相関させる。一部の実施形態において、次いで、測定値（複数可）は、陽性ＴＢＩ状態を、陰性ＴＢＩ状態から識別する、関与性の診断量（複数可）、カットオフ（複数可）又は多変量モデルスコアと比較されうる。診断量（複数可）は、それを上回る又は下回る患者が、特定のＴＢＩ状態を有すると分類される、バイオマーカー（複数可）の測定量を表す。例えば、バイオマーカー（複数可）が、脳損傷時に、対照の対象（例えば、ＴＢＩを負っていない対象）と比較して上方調節された場合、診断カットオフ（複数可）を上回る測定量（複数可）は、ＴＢＩの診断を提示しうる。加えて、バイオマーカー（複数可）が、脳損傷時に存在し、かつ、対照において、検出可能でない場合、任意の検出可能な測定量（複数可）は、脳損傷の診断を提示しうる。代替的に、バイオマーカー（複数可）が、脳損傷時に、下方調節された場合、診断カットオフ（複数可）における又はこれを下回る測定量（複数可）は、非脳損傷の診断を提示しうる。加えて、バイオマーカー（複数可）が、脳損傷時に存在せず、かつ、対照において、検出可能である場合、任意の検出可能な測定量（複数可）は、非脳損傷の診断を提示しうる。当技術分野において、十分に理解される通り、アッセイにおいて使用された、特定の診断カットオフ（複数可）を調整することにより、診断者の優先に応じて、診断アッセイの感度又は特異度を増大させることができる。特定の実施形態において、特定の診断カットオフは、例えば、バイオマーカーの、異なる脳損傷状態を伴う患者に由来する、統計学的に有意な数の試料中の量を測定し、所望される特異度及び感度レベルに適するカットオフを引き出すことにより決定されうる。
実際、当業者が理解する通り、探索下にある診断問題を改善するために、２つ以上のバイオマーカーの測定値を使用する、多くの方式が存在する。極めて単純であるが、にもかかわらず、しばしば有効な手法において、試料が、探索されたマーカーのうちの少なくとも１つについて陽性である場合、陽性結果が仮定される。
さらに、ある特定の実施形態において、バイオマーカーパネルのマーカーについて測定された値は、数学的に組み合わされ、組み合わされた値は、根底的な診断問題と相関させる。バイオマーカー値は、任意の適切な最新の数学的方法により組み合わされうる。マーカーの組合せを、疾患状態と相関させるための、周知の数学的方法は、判別分析（ＤＡ）（例えば、線形ＤＡ、二次ＤＡ、正規化ＤＡ）、判別関数分析（ＤＦＡ）、カーネル法（例えば、ＳＶＭ）、多次元スケーリング（ＭＤＳ）、ノンパラメトリック法（例えば、ｋ近傍分類器）、ＰＬＳ（部分最小二乗法）、ツリーベースの方法（例えば、論理回帰、ＣＡＲＴ、ランダムフォレスト法、ブースティング／バギング法）、一般化線型モデル（例えば、ロジスティック回帰）、主成分ベースの方法（例えば、ＳＩＭＣＡ）、一般化加法モデル、ファジー論理ベースの方法、ニューラルネットワーク及び遺伝子アルゴリズムベースの方法などの方法を利用する。当業者は、本発明のバイオマーカーの組合せを査定するのに適切な方法を選択するのに問題を有さない。一実施形態において、本発明のバイオマーカーの組合せを相関させて、例えば、脳損傷を診断するのに使用される方法は、ＤＡ（例えば、線形判別解析、二次判別解析、正規化判別解析）、ＤＦＡ、カーネル法（例えば、ＳＶＭ）、ＭＤＳ、ノンパラメトリック法（例えば、ｋ近傍分類器）、ＰＬＳ（部分最小二乗法）、ツリーベースの方法（例えば、論理回帰、ＣＡＲＴ、ランダムフォレスト法、ブースティング法）又は一般化線型モデル（例えば、ロジスティック回帰）及び主成分分析から選択される。これらの統計学的方法に関する詳細は、以下の参考文献：Ｒｕｃｚｉｎｓｋｉら、Ｊ．ＯＦ ＣＯＭＰＵＴＡＴＩＯＮＡＬ ＡＮＤ ＧＲＡＰＨＩＣＡＬ ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＳ、４７５〜５１１（２００３）；Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ｊ．Ｈ．、Ｊ．ＯＦ ＴＨＥ ＡＭＥＲＩＣＡＮ ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＡＬ ＡＳＳＯＣＩＡＴＩＯＮ、１６５〜７５（１９８９）；Ｈａｓｔｉｅ、Ｔｒｅｖｏｒ、Ｔｉｂｓｈｉｒａｎｉ、Ｒｏｂｅｒｔ、Ｆｒｉｅｄｍａｎ、Ｊｅｒｏｍｅ、「Ｔｈｅ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｏｆ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｌｅａｒｎｉｎｇ」、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｓｅｒｉｅｓ ｉｎ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ（２００１）；Ｂｒｅｉｍａｎ，Ｌ．、Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ｊ．Ｈ．、Ｏｌｓｈｅｎ，Ｒ．Ａ．、Ｓｔｏｎｅ，Ｃ．Ｊ．、「Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｔｒｅｅｓ」、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ：Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ（１９８４）；Ｂｒｅｉｍａｎ，Ｌ．、「ＭＡＣＨＩＮＥ ＬＥＡＲＮＩＮＧ」、５〜３２（２００１）；Ｐｅｐｅ，Ｍ．Ｓ．、「Ｔｈｅ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｓｔｓ ｆｏｒ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ」、Ｏｘｆｏｒｄ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｓｅｒｉｅｓ、２８（２００３）及びＤｕｄａ，Ｒ．Ｏ．、Ｈａｒｔ，Ｐ．Ｅ．、Ｓｔｏｒｋ，Ｄ．Ｇ．、「Ｐａｔｔｅｒｎ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ」、Ｗｉｌｅｙ Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、２版（２００１）において見出される。
４．バイオマーカーを使用する、ＴＢＩの特徴の評価
一部の実施形態において、本開示は、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーの検出、非検出及び／又は検出レベルに基づき、ＴＢＩの重症度、異なる種類のＴＢＩを特徴付けることなど、ＴＢＩを特徴付け、かつ／又は類別するための方法を提示する。ＴＢＩの各クラス又は各サブクラスは、特徴的レベルのバイオマーカー又は相対レベルのバイオマーカー（シグネチャー）のセットを有する可能性が高い。一実施形態において、本開示は、患者における、進行（増悪）及び退縮（改善）を含む、ＴＢＩ状態の進行を、時間経過にわたり査定するための方法を提示する。時間経過にわたり、ＴＢＩバイオマーカーの量又は相対量（例えば、パターン又はシグネチャー）は変化しうる。例えば、バイオマーカー「Ｘ」が、脳損傷と共に増大しうるのに対し、バイオマーカー「Ｙ」は、脳損傷と共に減少しうる。したがって、これらのバイオマーカーが、時間経過にわたり、増大又は減少して、脳損傷又は非脳損傷への傾向を示すことは、状態の経過を指し示す。したがって、この方法は、患者における、１つ以上のバイオマーカーのレベルを、少なくとも２つの異なる時点において測定するステップ（例えば、第１の時点及び第２の時点であり、変化があれば、これを比較するステップ）を伴う。
一部の実施形態において、ＴＢＩのクラス又はサブクラスは、関与性のバイオマーカーを測定し、次いで、それらを、分類アルゴリズムにかける又はそれらを、基準量（例えば、特定のクラス又はサブクラスと関連する、バイオマーカーの所定のレベル又はパターン）と比較することにより特徴付けられうる。
一部の実施形態において、次いで、「既知の試料」などの試料を使用して生成されたデータは、分類モデルを「トレーニングする」のに使用されうる。「既知の試料」とは、あらかじめ分類された試料である。分類モデルを形成するのに使用されたデータは、「トレーニングデータセット」と称されうる。分類モデルを形成するのに使用されたトレーニングデータセットは、生データ又は前処理データを含みうる。トレーニングされたら、分類モデルは、未知の試料を使用して生成されたデータ内のパターンを認識しうる。次いで、分類モデルは、未知の試料を、クラスへと分類するのに使用されうる。これは、例えば、特定の生物学的試料が、ある特定の生物学的状態（例えば、非罹患状態と対比した罹患状態）と関連するのかどうかを予測するのに有用でありうる。
分類モデルは、データ内に存在する客観的パラメータに基づき、データの本体を、クラスへと分別しようと試みる、任意の適切な統計学的分類法又は学習法を使用して形成されうる。分類法は、教師ありの場合もあり、教師なしの場合もある。教師ありの分類工程及び教師なしの分類工程の例について、その教示が、参照により組み込まれている、Ｊａｉｎ、「Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｐａｔｔｅｒｎ Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ：Ａ Ｒｅｖｉｅｗ」、ＩＥＥＥ Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ｏｎ Ｐａｔｔｅｒｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｍａｃｈｉｎｅ Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ、２２巻、１号、２０００年１月において記載されている。
教師ありの分類において、既知の類別の例を含有するトレーニングデータを、既知のクラスの各々を規定する、１つ以上の関係のセットを学習する、学習機構へと提示する。次いで、新たなデータを、学習機構へと適用することができ、次いで、これが、学習された関係を使用して新たなデータを分類する。教師ありの分類工程の例は、線形回帰工程（例えば、多重線形回帰（ＭＬＲ）、部分最小平方（ＰＬＳ）回帰及び主成分回帰（ＰＣＲ））、二分決定木（例えば、ＣＡＲＴなどの再帰分割工程）、バックプロパゲーションネットワークなどの人工ニューラルネットワーク、判別分析（例えば、ベイズ分類器又はフィッシャー解析）、ロジスティック分類器及びサポートベクター分類器（サポートベクターマシン）を含む。
別の教師ありの分類法は、再帰分割工程である。再帰分割工程は、再帰分割木を使用して、未知の試料に由来するデータを分類する。再帰分割工程についてのさらなる詳細は、Ｐａｕｌｓｅらによる、米国特許出願公開第２００２／０１３８２０８Ａ１号、「Ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ａｎａｌｙｚｉｎｇ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒａ」において提示されている。
他の実施形態において、創出される分類モデルは、教師なしの学習法を使用して形成されうる。教師なしの分類は、トレーニングデータセットが導出されたスペクトルを、あらかじめ分類せずに、トレーニングデータセット内の類似性に基づき、分類を学習しようと試みる。教師なしの学習法は、クラスター解析を含む。クラスター解析は、データを、理想的に、互いと極めて類似し、他のクラスターのメンバーと極めて相違するメンバーを有する、「クラスター」又は群へと分けようと試みる。次いで、データ項目間の距離を測定し、互いと近接するデータ項目を、一体にクラスター化する、何らかの距離計量を使用して、類似性が測定される。クラスター化法は、マクイーンのＫ平均アルゴリズム及びコホネンの自己組織化写像アルゴリズムを含む。
生物学的情報の分類における使用のために実行された学習アルゴリズムについては、例えば、ＰＣＴ国際公開第ＷＯ０１／３１５８０号（Ｂａｒｎｈｉｌｌら、「Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ｄｅｖｉｃｅｓ ｆｏｒ ｉｄｅｎｔｉｆｙｉｎｇ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｉｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｙｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｕｓｅ ｔｈｅｒｅｏｆ」）、米国特許出願公開第２００２／０１９３９５０号（Ｇａｖｉｎら、「Ｍｅｔｈｏｄ ｏｒ ａｎａｌｙｚｉｎｇ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒａ」）、米国特許出願公開第２００３／０００４４０２号（Ｈｉｔｔら、「Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｄｉｓｃｒｉｍｉｎａｔｉｎｇ ｂｅｔｗｅｅｎ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｔａｔｅｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｈｉｄｄｅｎ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｆｒｏｍ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｄａｔａ」）及び米国特許出願公開第２００３／００５５６１５号（Ｚｈａｎｇ及びＺｈａｎｇ、「Ｓｙｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄａｔａ」）において記載されている。
分類モデルは、任意の適切なデジタルコンピュータ上における形成が可能であり、この上において使用されうる。適切なデジタルコンピュータは、Ｕｎｉｘ、Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）又はＬｉｎｕｘ（商標）ベースのオペレーティングシステムなど、任意の標準的又は専門的オペレーティングシステムを使用する、マイクロコンピュータ、小型コンピュータ又は大型コンピュータを含む。質量分析計を用いる実施形態において、使用されるデジタルコンピュータは、目的のスペクトルを創出するのに使用される質量分析計から、物理的に分離されている場合もあり、質量分析計へとカップリングされている場合もある。
本発明の実施形態に従うトレーニングデータセット及び分類モデルは、デジタルコンピュータにより実行又は使用されるコンピュータコードにより実施されうる。コンピュータコードは、光学ディスク又は磁気ディスク、スティック、テープなどを含む、任意の適切なコンピュータ読取り可能媒体上の保存が可能であり、Ｒ、Ｃ、Ｃ＋＋、ビジュアルベーシックなどを含む、任意の適切なコンピュータプログラミング言語により書き込まれうる。
上記において記載した学習アルゴリズムは、既に発見されたバイオマーカーについての分類アルゴリズムの開発及び新たなバイオマーカーの発見の両方に有用である。分類アルゴリズムは、単独で又は組合せで使用されるバイオマーカーについての診断値（例えば、カットオフ点）をもたらすことにより、診断検査のためのベースを形成する。
５．ＴＢＩを患う対象の処置及びモニタリング
ＴＢＩを有すると同定又は評価された対象は、多様なＴＢＩバイオマーカーを検出又は測定することを含みうる評価に基づき、処置又はモニタリングされうる。一部の実施形態において、方法は、ＴＢＩを有すると評価されたヒト対象を、頭部への損傷の重症度に応じて、様々な形態を取りうる処置により処置するステップをさらに含む。例えば、軽度ＴＢＩを患う対象の場合、処置は、休息、スポーツなどの、身体活動の抑制、日向に出るときの、光線の回避又はサングラスの着用、頭痛又は偏頭痛を緩和するための薬物、抗悪心薬などのうちの１つ以上を含みうる。重度ＴＢＩを患う患者のための処置は、１つ以上の適切な薬物（例えば、利尿剤、抗痙攣薬物、個体を鎮静させ、薬物誘導性昏睡へと導く薬物など）又は他の医薬若しくは生物医薬（ＴＢＩの処置のために公知の医薬又は将来開発される医薬）の投与、１つ以上の手術手順（例えば、血腫の除去、頭蓋骨骨折の修復、減圧開頭術など）、１つ以上の治療（例えば、１つ以上のリハビリ、認知行動療法、アンガーマネージメント、心理カウンセリングなど）を含みうる。一部の実施形態において、方法は、外傷性脳損傷（例えば、軽度又は中等度〜重度の外傷性脳損傷）を有すると評価されたヒト対象をモニタリングするステップをさらに含む。一部の実施形態において、軽度外傷性脳損傷又は重度外傷性脳損傷などの外傷性脳損傷を有すると同定された対象は、ＣＴスキャン又はＭＲＩによりモニタリングされうる。
一実施形態において、本開示は、患者において、ＴＢＩを発症する危険性を決定するための方法を提示する。ＴＢＩバイオマーカーの百分率、量又はパターンは、多様な危険性状態（例えば、高度、中程度又は低度）に特徴的である。ＴＢＩを発症する危険性は、関与性のバイオマーカーを測定し、次いで、それらを、分類アルゴリズムにかける又はそれらを、基準量（例えば、特定の危険性レベルと関連する、バイオマーカーの所定のレベル又はシグネチャー）と比較することにより、決定されうる。
一部の実施形態において、ＴＢＩを負っている対象を処置することは、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーを使用して確立されたＴＢＩ状態に基づき、患者の処置を管理することを含みうる。このような管理は、ＴＢＩ状態の決定に後続する、医師又は臨床医の措置を含みうる。例えば、医師が、軽度ＴＢＩの診断を下す場合、ある特定のモニタリングするレジメが後続する。次いで、本開示の方法を使用する、ＴＢＩの経過の評価は、ある特定のＴＢＩ治療レジメンを要求しうる。代替的に、非ＴＢＩの診断に、患者が患いうる、特殊な疾患を決定する、さらなる検査が後続しうる。診断検査が、ＴＢＩ状態について、確定的でない結果を示す場合、さらなる検査もまた要求されうる。
別の実施形態において、本開示は、医薬の治療有効性を、ＴＢＩ処置の文脈において決定するための方法を提示する。これらの方法は、薬物についての臨床試験を実施することのほか、患者の進行を、薬物についてモニタリングすることにも有用でありうる。治療又は臨床試験は、特定のレジメンにおける薬物の投与を伴う。レジメンは、時間経過にわたる、薬物の単回投与又は薬物の複数回投与を伴いうる。医者又は臨床研究者は、薬物の、患者又は対象に対する効果を、投与経過にわたりモニタリングする。薬物が、状態に対して、薬理学的影響を及ぼす場合、本発明のＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の量又は相対量（例えば、パターン又はシグネチャー）は、非脳損傷プロファイルへと変化しうる。したがって、処置の経過中の、患者における、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーの経過を追跡することができる。
したがって、この方法は、薬物療法を施される患者における、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーを測定するステップ及びバイオマーカーレベルを、患者のＴＢＩ状態と相関させるステップ（例えば、異なる脳損傷状態に対応する、バイオマーカーの所定のレベルに対する比較により）を伴いうる。この方法の一実施形態は、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーのレベルを、薬物療法の経過中の、少なくとも２つの異なる時点において決定するステップ（例えば、第１の時点及び第２の時点であり、バイオマーカーのレベルの変化があれば、これを比較するステップ）を伴いうる。例えば、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーのレベルは、薬物投与の前及び後に又は薬物投与中の、２つの異なる時点において測定されうる。治療の効果は、これらの比較に基づき決定される。処置が有効である場合、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーは、正常への傾向を示すが、処置が無効である場合、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーは、脳損傷徴候への傾向を示す。
６．ＴＢＩについてのバイオマーカー
本明細書において記載された方法は、ＴＢＩを負った可能性がある対象の診断及び査定の一助となりうる、１つ以上のＴＢＩバイオマーカー又は候補ＴＢＩバイオマーカーを同定するのに使用されうる。下記に、例示的なＴＢＩバイオマーカーについて記載される。
ａ．組入れのためのＴＢＩバイオマーカー
下記において記載される、以下のＴＢＩバイオマーカーは、単独又は組合せで検出された場合に、健常対象を、ＴＢＩを負っている対象から識別することが可能であると同定された。
エズリン（ＥＺＲ）
ＥＺＲはまた、サイトビリン又はビリン２としても公知であり、ヒトにおいて、ＥＺＲ遺伝子によりコードされたタンパク質をコードする。エズリンのＮ末端は、ＦＥＲＭドメインを含有し、これは、３つのサブドメインへと、さらに細分される。Ｃ末端は、ＥＲＭドメインを含有する。エズリンは、主要な細胞骨格構造の、細胞膜への接続に関与すると考えられる。上皮細胞内において、エズリンは、頂端極における、微絨毛及び膜ひだの形成に要求される。エズリンは、ＰＬＥＫＨＧ６と共に、正常な微飲作用に要求される（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ１５３１１）。
４−トリメチルアミノブチルアルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ９Ａ１又はＡＬ９Ａ１）
ＡＬ９Ａ１は、４−トリメチルアミノブチルアルデヒドデヒドロゲナーゼ、ＴＭＡＢＡＤＨ、アルデヒドデヒドロゲナーゼＥ３アイソザイム、アルデヒドデヒドロゲナーゼファミリー９メンバーＡ１、ガンマ−アミノブチルアルデヒドデヒドロゲナーゼ、Ｒ−アミノブチルアルデヒドデヒドロゲナーゼとしてもまた公知である。ＡＬＤＨ９Ａ１又はＡＬ９Ａ１は、ガンマ−トリメチルアミノブチルアルデヒドを、ガンマ−ブチロベタインへと転換し、ＮＡＤ依存性反応における、広範にわたるアルデヒドの、対応する酸への不可逆的酸化を触媒する。ＡＬＤＨ９Ａ１又はＡＬ９Ａ１は、成人の肝臓、骨格筋及び腎臓において、高度に発現され、心臓、膵臓、肺及び脳において、低レベルで発現され、脳全ての領域内において発現される。発現レベルは、異なる脳領域内において可変的であり、脊髄において最高レベルであり、後頭極において最低レベルである（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ４９１８９）。
ミトコンドリアＡＴＰシンターゼサブユニットガンマ（ＡＴＰＧ）
ミトコンドリア膜ＡＴＰシンターゼ（Ｆ１Ｆ０ ＡＴＰシンターゼ又は複合体Ｖ）は、呼吸鎖の電子輸送複合体により発生した、膜にわたるプロトン勾配の存在下において、ＡＤＰから、ＡＴＰを生成させる。Ｆ型ＡＴＰアーゼは、中心ストーク及び外周ストークにより、一体に連結された、２つの構造的ドメインである、膜外触媒性コアを含有するＦ１及び膜プロトンチャネルを含有するＦ０からなる。触媒時に、Ｆ１の触媒性ドメイン内のＡＴＰ合成は、中心ストークサブユニットの回転機構を介して、プロトン転移へとカップリングされる。ＡＴＰＧは、複合体のＦ１ドメインの一部及び複合体の回転要素の一部である、中心ストークである。ガンマサブユニットは、アルファ３ベータ３からなる触媒性ドメインへと突出している。中心ストークの、周囲のアルファ３ベータ３サブユニットに対する回転は、ベータサブユニット上の、３つの個別の触媒性部位内の、ＡＴＰの加水分解をもたらす（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ３６５４２）。
補体Ｃ１ｒサブコンポーネント様タンパク質（Ｃ１ＲＬ）
Ｃ１ＲＬは、小胞体内の、ＨＰ／ハプトグロビンのタンパク質分解性切断を媒介する。Ｃ１ＲＬと関連する疾患は、卵巣腺癌を含む（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９ＮＺＰ８）。
カリン関連ＮＥＤＤ８解離タンパク質１（ＣＡＮＤ１）
ＣＡＮＤ１は、ＳＣＦ複合体内の、基質認識Ｆボックスサブユニットの交換を促進し、これにより、ＳＣＦ複合体の、細胞内レパートリーにおいて、鍵となる役割を果たす、ＳＣＦ（ＳＫＰ１−ＣＵＬ１−Ｆボックスタンパク質）Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体の、鍵となるアセンブリー因子である。ＣＡＮＤ１は、Ｆボックスタンパク質交換因子として作用する。ＣＡＮＤ１の交換活性は、ＮＥＤＤ８化によるコンジュゲーションのサイクルとカップリングしている：脱ＮＥＤＤ８化状態において、カリン結合ＣＡＮＤ１は、ＣＵＬ１−ＲＢＸ１に結合し、ＳＣＦ複合体の解離を増大させ、Ｆボックスタンパク質の交換を促進する。ＣＡＮＤ１は、おそらく、他のカリン−ＲＩＮＧ Ｅ３ユビキチンリガーゼ複合体内においても、同様の役割を果たす（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ８６ＶＰ６）。
エピプラキン（ＥＰＩＰＬ又はＥＰＰＫ１）
ＥＰＩＰＬは、ストレスに応答して、中間径フィラメントに接続し、それらの再組織化を制御する、細胞骨格リンカータンパク質である。創傷治癒などの機械的ストレスに応答して、ＥＰＩＰＬは、角化細胞の遊走及び増殖を緩徐化させ、角化細胞の増殖におけるケラチンのバンドル化を加速化させることにより、細胞の運動性機構と関連し、これにより、組織のアーキテクチャに寄与する。しかし、角膜上皮の創傷治癒において、ＥＰＩＰＬはまた、細胞の分化及び増殖を正に調節し、遊走を負に調節し、これにより、角膜上皮の形態形成及び完全性も制御する。細胞ストレスに応答して、ＥＰＩＰＬは、おそらく、ケラチンフィラメントを、破壊に対して保護することにより、ケラチンフィラメントの再組織化において役割を果たす。肝臓及び膵臓の損傷時に、ＥＰＩＰＬは、疾患誘導性の中間径フィラメントの再組織化をシャペロニングすることにより、保護の役割を果たす（類似性による）（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ５８１０７）。
ミトコンドリアヒドロキシアシルグルタチオンヒドロラーゼ（ＧＬＯ２又はＨＡＧＨ）
ＧＬＯ２は、グルタチオン及びＤ−乳酸を形成する、Ｓ−Ｄ−ラクトイル−グルタチオンの加水分解を触媒する、チオールエステラーゼである（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ１６７７５）。
免疫グロブリン定常重鎖アルファ２（ＩＧＨＡ２）
ＩＧＨＡ２は、免疫グロブリン重鎖の定常領域である。抗体としてもまた公知の免疫グロブリンは、Ｂリンパ球により産生された、膜結合型又は分泌型の糖タンパク質である。体液性免疫の認識相において、膜結合型免疫グロブリンは、特異的な抗原が結合すると、Ｂリンパ球の、免疫グロブリンを分泌する血漿細胞への、クローン性の拡大及び分化を誘発する受容体として用いられる。分泌された免疫グロブリンは、体液性免疫のエフェクター相を媒介し、この結果として、結合した抗原の消失をもたらす。抗原結合性部位は、その会合する軽鎖の可変ドメインと併せた、１つの重鎖の可変ドメインにより形成される。したがって、各免疫グロブリンは、特定の抗原に対する、顕著なアフィニティーを伴う、２つの抗原結合性部位を有する。可変ドメインは、Ｖ−（Ｄ）−Ｊ再配列と呼ばれる過程によりアセンブルされ、次いで、体細胞超突然変異にかけられるが、これが、抗原への曝露及び選択の後、特定の抗原に対するアフィニティー成熟を可能とする。Ｉｇアルファは、体内分泌において、主要な免疫グロブリンクラスである（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０１８７７）。
妊娠関連タンパク質（ＰＺＰ）
ＰＺＰは、固有の「トラッピング」機構により、４つのクラス全てのプロテイナーゼを阻害することが可能である。ＰＺＰは、異なるプロテイナーゼに対する、特異的な切断部位を含有する、「ベイト領域」と呼ばれる、ペプチドの連なりを有する。プロテイナーゼが、ベイト領域を切断すると、プロテイナーゼをトラッピングするＰＺＰ内において、コンフォメーション変化が誘導される。取り込まれた酵素は、低分子量基質に対する活性を維持する（高分子量基質に対する活性は、大幅に低減される。）。ベイト領域内の切断後、チオエステル結合は加水分解され、ＰＺＰの、プロテイナーゼへの共有結合を媒介する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ２０７４２）。
細胞質トレオニン−ｔＲＮＡリガーゼ（ＳＹＴＣ又はＴＡＲＳ）
ＳＹＴＣは、反応：ＡＴＰ＋Ｌ−トレオニン＋ｔＲＮＡ（Ｔｈｒ）＝ＡＭＰ＋二リン酸＋Ｌ−トレオニル−ｔＲＮＡ（Ｔｈｒ）を触媒する。ＳＹＴＣは、タンパク質内の、４つの顕著に異なるサブサイトに結合し、３つの基質全ての結合を防止する、ボレリジン（ＢＮ；ＩＣ５０は、７ｎＭである。）により阻害される（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ２６６３９）。
細胞質チロシン−ｔＲＮＡリガーゼ（ＳＹＹＣ又はＹＡＲＳ）
ＳＹＹＣは、２ステップの反応において、チロシンの、ｔＲＮＡ（Ｔｙｒ）への接合を触媒する：チロシンは、まず、ＡＴＰにより活性化して、Ｔｙｒ−ＡＭＰを形成し、次いで、ｔＲＮＡ（Ｔｙｒ）のアクセプター末端へと転移される（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ５４５７７）。
タンパク質ＡＢＨＤ１４Ｂ（ＡＢＨＥＢ又はＡＢＨＤ１４Ｂ）
ＡＢＨＥＢは、酪酸ｐ−ニトロフェニルに対するヒドロラーゼ活性を呈し（インビトロ）、転写を活性化させうる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９６ＩＵ４）。
ジナミン１様タンパク質（ＤＮＭ１Ｌ）
ＤＮＭ１Ｌは、ミトコンドリア及びペルオキシソームの分裂において機能する。ＤＮＭ１Ｌは、分離部位を包み込み、ミトコンドリア膜を締め付け、ＧＴＰ加水分解依存性機構を介して切り離す、膜会合型管状構造へのオリゴマー化を介する、膜分裂を媒介する。ミトコンドリア分裂におけるその機能を介して、ＤＮＭ１Ｌは、酸化ダメージを抑制することにより、プルキンエ細胞を含む、少なくとも一部の種類の、有糸分裂後ニューロンの生存を確保する。ＤＮＭ１Ｌは、小脳の発生を含む、正常な脳の発生に要求される。ＤＮＭ１Ｌは、神経管形成時における、発生調節型アポトーシスを容易とする。ＤＮＭ１Ｌは、アポトーシス時における、正常速度のチトクロームｃ放出及びカスパーゼの活性化に要求され、この要件は、細胞型及び生理学的アポトーシスキューに依存する。ＤＮＭ１Ｌは、有糸分裂時の、ミトコンドリア分裂において、重要な役割を果たす。ＤＮＭ１Ｌは、エンドサイトーシス小胞の形成に要求される。ＤＮＭ１Ｌは、シナプス小胞内の、そのＧＴＰアーゼ活性を刺激する、ＢＣＬ２Ｌ１のアイソフォームである、Ｂｃｌ−Ｘ（Ｌ）との会合を介して、シナプス小胞膜動態を調節することが提起されており、機能は、ＭＦＦにより、クラスリン含有小胞へと、その動員を要求しうる。そして、ＤＮＭ１Ｌは、プログラム壊死の実行に要求される（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：０００４２９）。
フィコリン２（ＦＣＮ２）
ＦＣＮ２は、自然免疫において、レクチン補体経路の活性化を介して機能しうる。ＦＣＮ２は、レクチンへの、カルシウム依存性の、ＧｌｃＮＡｃ結合を呈する。ＦＣＮ２は、好中球による、Ｓ．チフィムリウム（Ｓ．ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）の食作用を増強することから、コラーゲン領域を介するオプソニン効果が示唆される（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ１５４８５）。
反転フォルミン２（ＩＦＮ２）
ＩＦＮ２は、アクチンフィラメントの切離しに関与し、それらの重合及び脱重合を加速化させる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ２７Ｊ８１）。
表皮ケラチンＩＩ型細胞骨格２（Ｋ２２Ｅ又はＫＲＴ２）
Ｋ２２Ｅは、中間タンパク質であり、末端の角化に寄与すると考えられる。Ｋ２２Ｅは、角化細胞の活性化、増殖及びケラチン化と関連する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ３５９０８）。
マイトジェン活性化タンパク質キナーゼキナーゼキナーゼ５（Ｍ３Ｋ５又はＭＡＰ３Ｋ５）
Ｍ３Ｋ５は、ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路の不可欠の構成要素として作用する、セリン／トレオニンキナーゼである。Ｍ３Ｋ５は、環境の変化により惹起される細胞応答のカスケードにおいて、重要な役割を果たす。Ｍ３Ｋ５は、分化及び生存など、細胞運命の決定のためのシグナル伝達を媒介する。Ｍ３Ｋ５は、ミトコンドリア依存性のカスパーゼ活性化を介する、アポトーシスシグナル伝達経路において、極めて重要な役割を果たす。ＭＡＰ３Ｋ５／ＡＳＫ１は、広範にわたる病原体に対する宿主防御に不可欠の自然免疫応答に要求される。Ｍ３Ｋ５は、酸化ストレスなどの多様なストレス因子のシグナル伝達ほか、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）又はリポ多糖（ＬＰＳ）などの受容体媒介性炎症性シグナルによるシグナル伝達を媒介する。活性化すると、Ｍ３Ｋ５は、ＭＡＰ２Ｋ４／ＳＥＫ１、ＭＡＰ２Ｋ３／ＭＫＫ３、ＭＡＰ２Ｋ６／ＭＫＫ６及びＭＡＰ２Ｋ７／ＭＫＫ７など、いくつかのＭＡＰキナーゼキナーゼのリン酸化及び活性化を介する、ＭＫＫ／ＪＮＫシグナル伝達カスケード及びｐ３８ＭＡＰＫシグナル伝達カスケードの、上流の活性化因子として作用する。これらのＭＡＰ２Ｋは、ｐ３８ＭＡＰＫ及びｃ−ｊｕｎＮ末端キナーゼ（ＪＮＫ）を活性化させる。ｐ３８ＭＡＰＫ及びＪＮＫのいずれも、転写因子活性化因子タンパク質１（ＡＰ−１）を制御する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９９６８３）。
核内受容体コリプレッサー１（ＮＣＯＲ１）
ＮＣＯＲ１は、ある特定の核内受容体による、転写の抑制を媒介する。ＮＣＯＲ１は、ヒストンの脱アセチル化及び基底転写因子の接近を妨げる、抑制性クロマチン構造の形成を促進する複合体の一部である。ＮＣＯＲ１は、ＢＣＬ６によりもたらされる、転写リプレッサー活性に参与する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：０７５３７６）。
スプラバシン（ＳＢＳＮ）
ＳＢＳＮは、マウス及びヒトにおいて発現される、新規の遺伝子であって、角化細胞を分化させる遺伝子である。ＳＢＳＮは、層別化された上皮の有棘層から分泌されると考えられ、第２染色体上に、ダーモカインアルファ／ダーモカインベータ及びＫｄａｐと共に、新規の遺伝子複合体を形成しうる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ６ＵＷＰ８）。
二官能性グルタミン酸／プロリン−ｔＲＮＡリガーゼ（ＳＹＥＰ又はＥＰＲＳ）
ＳＹＥＰは、２ステップの反応において、コグネイトアミノ酸の、対応するｔＲＮＡへの接合を触媒する：チロシンは、まず、ＡＴＰにより活性化して、共有結合中間体を形成し、次いで、コグネイトｔＲＮＡのアクセプター末端へと転移される。ＳＹＥＰは、炎症過程において、インターフェロンガンマ誘導転写物選択的翻訳阻害を媒介する、ＧＡＩＴ（ｇａｍｍａ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ａｃｔｉｖａｔｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）複合体の構成要素である。インターフェロンガンマの活性化及び後続のリン酸化がなされると、ＳＹＥＰは、マルチシンセターゼ複合体から解離し、ＧＡＩＴ複合体へとアセンブルされ、これは、多様な炎症性ｍＲＮＡの３’−ＵＴＲ内の、ステムループ含有ＧＡＩＴエレメント（セルロプラスミンなど）に結合し、それらの翻訳を抑制する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０７８１４）。
トリペプチジルペプチダーゼ２（ＴＰＰ２）
ＴＰＰ２は、ユビキチン−プロテアソーム経路内の、２６Ｓプロテアソームの下流において作用するタンパク質分解性カスケードの構成要素である。ＴＰＰ２は、２６Ｓプロテアソームが阻害されるという条件下において、２６Ｓプロテアソーム機能を、ある程度補完することが可能でありうる。ＴＰＰ２は、脂質生成を刺激する（類似性による）（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ２９１４４）。
アネキシンＡ６（ＡＮＸＡ６）
ＡＮＸＡ６は、ＣＤ２１と会合することが可能であり、細胞内貯蔵部からの、Ｃａ２＋の放出を調節しうる。ＡＮＸＡ６は、分泌されうる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０８１３３）。
小胞体アミノペプチダーゼ１（ＥＲＡＰ１）
ＥＲＡＰ１は、大半のＨＬＡクラスＩ結合ペプチドの生成に要求されるステップである、ペプチドトリミングにおいて中心的役割を果たす、アミノペプチダーゼである。ペプチドトリミングは、ＭＨＣクラスＩ分子上の提示に要求される、適正な長さへと、それらを適合させるように、より長い前駆体ペプチドをカスタマイズするのに不可欠である。９〜１６残基の長さの基質が、ＥＲＡＰ１に強く好適である。ＥＲＡＰ１は、１３マー〜９マーへと、急速に分解し、次いで、停止する。ＥＲＡＰ１は、残基であるＬｅｕ及び疎水性のＣ末端を伴うペプチドを優先的に加水分解する一方、帯電Ｃ末端を伴うペプチドに対する活性は弱い。ＥＲＡＰ１は、ペプチドホルモンの不活化において、役割を果たしうる。ＥＲＡＰ１は、腎臓内の、アンジオテンシンＩＩの不活化及び／又はブラジキニンの生成を介して、血圧の調節に関与しうる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９ＮＺ０８）。
第Ｖ凝固因子（ＦＡ５又はＦ５）
ＦＡ５は、止血の中心的調節因子である。ＦＡ５は、プロトロンビンの、トロンビンへの活性化を結果としてもたらす、第Ｘａ因子のプロトロンビナーゼ活性に対する、極めて重要な補因子として用いられる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ１２２５９）。
グルコース−６−リン酸イソメラーゼ（Ｇ６ＰＩ又はＧＰＩ）
Ｇ６ＰＩは、解糖酵素であり、哺乳動物Ｇ６ＰＩは、内皮細胞の運動性を刺激する、腫瘍分泌サイトカイン及び血管新生因子（ＡＭＦ）として機能しうる。細胞質において、Ｇ６ＰＩ遺伝子産物は、グルコース−６−リン酸（Ｇ６Ｐ）と、果糖−６−リン酸（Ｆ６Ｐ）とを相互転換する、解糖酵素（グルコース−６−リン酸イソメラーゼ）として機能する。細胞外において、コードされたＧ６ＰＩタンパク質（ニューロロイキンともまた称する）は、骨格系運動ニューロン及び感覚ニューロンの生存を促進する、神経栄養因子として、かつ、免疫グロブリンの分泌を誘導するリンホカインとして機能する。コードされたＧ６ＰＩタンパク質はまた、腫瘍分泌サイトカイン及び血管新生因子としてのさらなる機能に基づき、自己分泌性運動性因子（ＡＭＦ）とも称される。この遺伝子の欠損は、非球状赤血球性溶血性貧血の原因であり、重度の酵素不全は、胎児水症、新生児の即死及び神経機能障害と関連しうる。代替的スプライシングは、複数の転写物変異体を結果としてもたらす（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０６７４４）。
平滑筋ミオシン軽鎖キナーゼ（ＭＹＬＫ）
ＭＹＬＫは、ミオシン軽鎖（ＭＬＣ）のリン酸化を介する平滑筋収縮に関与する、カルシウム／カルモジュリン依存性ミオシン軽鎖キナーゼである。ＭＹＬＫはまた、非キナーゼ活性を介する、アクチン−ミオシン間相互作用も調節する。ＭＹＬＫは、ＰＴＫ２Ｂ／ＰＹＫ２及びミオシン軽鎖をリン酸化する。ＭＹＬＫは、炎症性応答（例えば、アポトーシス、血管透過性、リンパ球の漏出）、細胞の運動性及び形態、気道過敏性並びに喘息と関与性の他の活性に関与している。ＭＹＬＫは、生理学的気道抵抗及び喘息性気道抵抗に必要な、緊張性の気道平滑筋収縮に要求される。ＭＹＬＫは、消化管の運動性に必要である。ＭＹＬＫは、おそらく、細胞骨格再配列の調節を介して、内皮透過性のほか、血管の透過性の調節に関与している。神経系において、ＭＹＬＫは、培養物中の星状細胞の増殖過程の誘発を制御し、培養された交感神経節細胞の間に形成されたシナプスにおける、伝達物質の放出に関与することが示されている。ＭＹＬＫは、線維芽細胞のアポトーシスを結果としてもたらす、シグナル伝達の連鎖における、極めて重要な参与物質である。ＭＹＬＫは、上皮細胞の生存の調節において、役割を果たす。ＭＹＬＫは、上皮創傷治癒、とりわけ、巾着縫合による創傷閉止の、アクトミオシン環収縮時に要求される。ＭＹＬＫは、ＲｈｏＡ依存性の膜ブレブ形成を媒介する。ＭＹＬＫは、細胞膜における、その細胞内局在化を誘導することにより、カルシウム依存性シグナル伝達におけるＴＲＰＣ５チャネル活性を誘発する。ＭＹＬＫは、細胞の遊走（腫瘍細胞を含む）及び腫瘍の転移を促進する。リン酸化によるＰＴＫ２Ｂ／ＰＹＫ２の活性化は、ＩＴＧＢ２の活性化を媒介し、このため、急性肺損傷（ＡＬＩ）時における、好中球の移行を誘発するのに不可欠である。ＭＹＬＫは、視神経頭の星状細胞の遊走を調節しうる。ＭＹＬＫは、おそらく、細胞骨格における有糸分裂の調節に関与している。ＭＹＬＫは、おそらく、傍接合部のアクトミオシン環内のＺＯ−１交換をモジュレートすることにより、密着結合を調節する。ＭＹＬＫは、火傷誘導性の微小血管障壁の損傷を媒介し、ＭＬＣをリン酸化することにより、微小血管の透過性亢進の発生における内皮収縮を誘発する。ＭＹＬＫは、腸障壁の機能不全に不可欠である。ＭＹＬＫは、細胞骨格におけるＦ−アクチン及び密着結合におけるＺＯ−１の再組織化を介する、ランブル鞭毛虫症腸感染時における、ジアルディア属種媒介性の、上皮障壁機能の低減を媒介する。ＭＹＬＫは、子宮頸がん細胞内の、低張性誘導性Ｃａ２＋進入及び後続の容量感受性有機オスモライト／アニオンチャネル（ＶＳＯＡＣ）の活性化に必要である。ＭＹＬＫは、抗アポトーシスを介する、乳がん細胞の高増殖能の一因となる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ１５７４６）。
血清アミロイドＰ成分（ＳＡＭＰ又はＡＰＣＳ）
ＳＡＭＰは、ＤＮＡ及びヒストンと相互作用することが可能であり、ダメージを受けた循環細胞から放出された核内素材をスカベンジャリングしうる。ＳＡＭＰはまた、カルシウム依存性レクチンとしても機能しうる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０２７４３）。
一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対象に由来する試料中の検出及び１つ以上のＴＢＩバイオマーカーの、対照の対象（例えば、ＴＢＩを負っていない対象）における検出の欠如に基づき、対象がＴＢＩを負っていることを決定するのに使用されうる。これらのＴＢＩバイオマーカーは、ＡＬ９Ａ１、ＡＴＰＧ、Ｃ１ＲＬ、ＥＰＩＰＬ、ＩＧＨＡ２、ＰＺＰ、ＳＹＴＣ、ＳＹＹＣ、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＦＣＮ２、ＩＮＦ２、Ｋ２２Ｅ、Ｍ３Ｋ５、ＮＣＯＲ１、ＳＢＳＮ、ＳＹＥＰ、ＴＰＰ２、ＡＮＸＡ６、ＥＲＡＰ１、ＥＺＲＩ、ＦＡ５、Ｇ６ＰＩ、ＭＹＬＫ、ＳＡＭＰ又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上を含みうる。これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対象における測定又は検出は、対象がＴＢＩを負っていることを、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーの、対照の対象における量、濃度及び／又は発現レベルを検出、測定、比較及び／又は定量する必要から独立して指し示すのに十分でありうる。これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、対照の対象又はＴＢＩを負っていない対象において存在しうるが、これは一般に、本明細書において記載された、従来の手段を介する検出が可能ではない量において存在する。したがって、場合によって、これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対象における検出は、対象がＴＢＩを負っていることを指し示す。
一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、対象が重度ＴＢＩを負っていることを、これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対象に由来する試料中の検出及び１つ以上のＴＢＩバイオマーカーの、対照の対象（例えば、ＴＢＩを負っていない対象）における検出の欠如又は軽度ＴＢＩを負っている対象における検出の欠如に基づき決定するのに使用されうる。これらのＴＢＩバイオマーカーは、ＡＴＰＧ、Ｃ１ＲＬ、ＳＹＹＣ又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上を含みうる。これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対象における測定又は検出は、対象が重度ＴＢＩを負っていることを、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーの、対照の対象又は軽度ＴＢＩを負っている対象における量、濃度又は発現レベルを検出、測定、比較又は定量する必要から独立して指し示すのに十分でありうる。
一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、対象がＴＢＩを負っていることを、これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対象に由来する試料中の、対照の対象における、対応するＴＢＩバイオマーカーの、量、濃度及び／又は発現レベルより高度の量、濃度及び／又は発現レベルにおける検出に基づき決定するのに使用されうる。これらのＴＢＩバイオマーカーは、ＣＡＮＤ１及びＧＬＯ２又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上を含みうる。これらのＴＢＩバイオマーカーのレベルのうちの１つ以上の、対照の対象（例えば、ＴＢＩを負っていない対象）と比較した増大の、対象における測定又は検出は、対象がＴＢＩを負っていることを指し示すのに十分であることが可能であり、場合によって、対象が重度ＴＢＩを負っていることを指し示すのに十分でありうる。
一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、対象がＴＢＩを負っていることを、これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対象に由来する試料中の、対照の対象における、対応するＴＢＩバイオマーカーの、量、濃度及び／又は発現レベルより高度又は低度の量、濃度及び／又は発現レベルにおける検出に基づき決定するのに使用されうる。これらのＴＢＩバイオマーカーは、ＡＢＨＥＢ、ＡＬ９Ａ１、ＤＮＭ１Ｌ又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上を含みうる。これらのＴＢＩバイオマーカーのレベルのうちの１つ以上の、対照の対象（例えば、ＴＢＩを負っていない対象）と比較した増大又は減少の、対象における測定又は検出は、対象がＴＢＩを負っていることを指し示すのに十分であることが可能であり、場合によって、対象が重度ＴＢＩを負っていることを指し示すのに十分でありうる。例えば、対照の対象によるレベルと比較して、高レベルのＡＢＨＥＤ並びに／又は低レベルのＡＬ９Ａ１及び／若しくはＤＮＭ１Ｌの、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。これらのＴＢＩバイオマーカーのレベルは、単独で又はＴＢＩのパネル若しくはシグネチャーの一部として組み合わせて検出又は測定されうる。
一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、対象が軽度ＴＢＩを負っていることを、対象に由来する試料中のこれらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対照の対象における対応するＴＢＩバイオマーカーの量、濃度及び／又は発現レベルより高度又は低度の量、濃度及び／又は発現レベルにおける検出に基づき決定するのに使用されうる。これらのＴＢＩバイオマーカーは、Ｍ３Ｋ５、ＳＢＳＮ、ＳＹＥＰ又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上を含みうる。これらのＴＢＩバイオマーカーのレベルのうちの１つ以上の、対照の対象（例えば、ＴＢＩを負っていない対象）と比較した増大又は減少の、対象における測定又は検出は、対象がＴＢＩを負っていることを指し示すのに十分であることが可能であり、場合によって、対象が軽度ＴＢＩを負っていることを指し示すのに十分でありうる。例えば、対照の対象によるレベルと比較して、高レベルのＳＢＳＮ及び／又はＳＹＥＰ、並びに／又は低レベルのＭ３Ｋ５の、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象が軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。これらのＴＢＩバイオマーカーのレベルは、単独で又はＴＢＩのパネル若しくはシグネチャーの一部として組み合わせて検出又は測定されうる。
一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、ＴＢＩバイオマーカーとして同定されている場合もあり、同定されていない場合もある、他のバイオマーカーと共に含まれうる。例えば、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、ＡＮＸＡ６、ＥＲＡＰ１、ＥＺＲＩ、ＦＡ５、Ｇ６ＰＩ、ＭＹＬＫ、ＳＡＭＰ又はこれらの組合せのうちの１つ以上を含みうる、バイオマーカーのパネル内に含まれうる。場合によって、他のＴＢＩバイオマーカー及び非ＴＢＩバイオマーカーを伴う、ＴＢＩバイオマーカーのパネルは、個々のバイオマーカー単独より大きな程度において、ＴＢＩの診断の一助となりうる。
ｂ．組入れのための軽度ＴＢＩバイオマーカー
下記において記載される、以下のＴＢＩバイオマーカーは、単独又は組合せで検出された場合に、健常対象を、軽度ＴＢＩを負っている対象から識別することが可能であると同定された。
ポリ（ｒＣ）結合性タンパク質２（アルファ−ＣＰ２）（ＰＣＢＰ２）
ポリ（ｒＣ）結合性タンパク質２は、ヒトにおいて、ＰＣＢＰ２遺伝子によりコードされたタンパク質である。この遺伝子によりコードされたタンパク質は、多機能性であると考えられる。ＰＣＢＰ２は、ＰＣＢＰ−１及びｈｎＲＮＰＫと共に、主要な細胞ポリ（ｒＣ）結合性タンパク質に対応する。ＰＣＢＰ２は、ＲＮＡへの結合に関与しうる、３つのＫ相同（ＫＨ）ドメインを含有する。コードされたこのタンパク質はまた、ＰＣＢＰ−１と併せて、ＩＲＥＳのステムループＩＶとの配列特異的相互作用を介して、ポリオウイルスＲＮＡの翻訳共活性化因子としても機能し、その５’末端のクローバーリーフ構造への結合により、ポリオウイルスＲＮＡの複製を促進する。ＰＣＢＰ２はまた、１５−リポキシゲナーゼｍＲＮＡ、１６Ｌ２型ヒトパピローマウイルスｍＲＮＡ及びＡ型肝炎ウイルスＲＮＡの翻訳の制御にも関与している。コードされたタンパク質はまた、アルファ−グロビンｍＲＮＡの安定性と関連する、配列特異的アルファ−グロビンｍＲＮＰ複合体の形成において役割を果たすことも示唆されている。このマルチエクソン構造のｍＲＮＡは、レトロトランスポーズされて、同様の機能を有する、ＰＣＢＰ−１イントロン非含有遺伝子を生成させると考えられる。この遺伝子及びＰＣＢＰ−１は、全遺伝子の複製イベントの結果として発生したと考えられるパラログである、ＰＣＢＰ３及びＰＣＢＰ４を有する。ＰＣＢＰ２はまた、２つのプロセシングされた偽遺伝子である、ＰＣＢＰ２Ｐ１及びＰＣＢＰ２Ｐ２も有する。現在、この遺伝子について、２つの代替的にスプライシングされた転写物変異体が記載されている。ヒトにおいて、ＰＣＢＰ２遺伝子は、肝細胞癌に関与する、転写された超保存性エレメントである、ＴＵＣ３３８と重複する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ１５３６６）。
ミトコンドリアチオレドキシンレダクターゼ２（ＴＲＸＲ２）
チオレドキシンレダクターゼ（ＴＲ、ＴｒｘＲ）（ＥＣ１．８．１．９）は、チオレドキシン（Ｔｒｘ）を還元することが公知である、唯一の酵素である。チオレドキシンレダクターゼの２つのクラス：細菌及び一部の真核生物における、１つのクラス並びに動物における１つのクラスが同定されている。いずれのクラスも、ホモ二量体として機能する、フラボタンパク質である。各単量体は、ＦＡＤ補欠分子族、ＮＡＤＰＨ結合ドメイン及び酸化還元活性型ジスルフィド結合を含有する活性部位を含有する。チオレドキシンレダクターゼは、チオレドキシンの還元を触媒することが公知である、唯一の酵素であり、よって、チオレドキシン系における、中心的構成要素である。チオレドキシン（Ｔｒｘ）及びＮＡＤＰＨと併せて、この系についての最も一般的な記載は、細胞内の、還元されたジスルフィド結合を形成する方法としての記載である。電子は、ＴｒｘＲを介して、ＮＡＤＰＨから得られ、Ｔｒｘの活性部位へと移動し、タンパク質のジスルフィド又は他の基質の還元へと進む。Ｔｒｘ系は、全ての生細胞内に存在し、遺伝子素材としてのＤＮＡと結びついた進化歴を有し、酸素による代謝に起因する酸化ダメージに対する防御、過酸化水素及び一酸化窒素などの分子を使用する、酸化還元シグナル伝達を行う（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９ＮＮＷ７）。
１４−３−３タンパク質ガンマ（１４３３Ｇ又はＹＷＨＡＧ）
１４３３Ｇは、一般的なシグナル伝達経路及び特化したシグナル伝達経路の両方にわたる、広範なスペクトルの調節に関与している、アダプタータンパク質である。１４３３Ｇは、通例、ホスホセリンモチーフ又はホスホトレオニンモチーフの認識により、多数のパートナーに結合する。結合は、一般に、結合パートナーの活性のモジュレーションを結果としてもたらす（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ６１９８１）。
活性化ＣＤＣ４２キナーゼ１（ＡＣＫ１又はＴＫＮ２）
ＡＣＫ１は、細胞の拡散及び遊走、細胞の生存、細胞の増殖（ｇｒｏｗｔｈ及びｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）に関与する、非受容体チロシン−タンパク質及びセリン／トレオニン−タンパク質キナーゼである。ＡＣＫ１は、細胞外シグナルを、細胞質ゾル及び核内エフェクターへと伝達する。ＡＣＫ１は、ＡＫＴ１、ＡＲ、ＭＣＦ２、ＷＡＳＬ及びＷＷＯＸをリン酸化する。ＡＣＫ１は、表皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）及びクラスリンへの結合を介する、トラフィッキング及びクラスリン媒介性エンドサイトーシスに関与している。ＡＣＫ１は、ポリユビキチン及びモノユビキチンの両方に結合し、ＥＧＦＲのリガンド誘導性分解を調節し、これにより、早期エンドソームの境界膜における、ＥＧＦＲの蓄積に寄与する。ＡＣＫ１は、ＢＣＡＲ１のリン酸化を介する、ＣＤＣ４２依存性細胞遊走を媒介する、ＣＤＣ４２の、下流のエフェクターである。ＡＣＫ１は、成人シナプスの機能及び可塑性並びに脳の発生の両方に関与しうる。ＡＫＴ１を、「Ｔｙｒ−１７６」上においてリン酸化することにより活性化させる。ＡＣＫ１は、「Ｔｙｒ−２６７」上及び「Ｔｙｒ−３６３」上のＡＲをリン酸化し、これにより、アンドロゲン応答性エンハンサー（ＡＲＥ）に対する、その動員を促進する。ＡＣＫ１は、「Ｔｙｒ−２８７」上のＷＷＯＸをリン酸化する。ＡＣＫ１は、ＭＣＦ２をリン酸化し、これにより、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）としてのその活性を、Ｒｈｏファミリータンパク質へと増強する。ＡＣＫ１は、ＡＸＬ受容体レベルの制御に寄与する。ＡＣＫ１は、がん細胞に、転移特性を付与し、ＷＷＯＸなどの腫瘍サプレッサーを負に調節し、ＡＫＴ１及びＡＲなどの生存促進因子を正に調節することにより、腫瘍の増殖を促進する。ＡＣＫ１は、ＷＡＳＰをリン酸化する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ０７９１２）。
アミノアシラーゼ１（ＡＣＹ１）
ＡＣＹ１は、Ｎ−アシル化アミノ酸又はＮ−アセチル化アミノ酸（Ｌ−アスパラギン酸を除く）の加水分解に関与している（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ０３１５４）。
Ａキナーゼアンカータンパク質１２（ＡＫＡ１２又はＡＫＡＰ１２）
ＡＫＡ１２は、タンパク質キナーゼＡ（ＰＫＡ）及びタンパク質キナーゼＣ（ＰＫＣ）の細胞内区画化を媒介する、アンカリングタンパク質である（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ０２９５２）。
アルギナーゼ１（ＡＲＧＩ１又はＡＲＧ１）
ＡＲＧＩ１は、Ｌ−アルギニンを、尿素及びＬ−オルニチンへと転換する尿素サイクルの、鍵となる要素であり、尿素及びＬ−オルニチンは、さらに、代謝物である、プロリン及びポリアミドへと代謝され、プロリン及びポリアミドは、それぞれ、細胞増殖に極めて重要な、コラーゲンの合成及び生体エネルギー経路を駆動するが；尿素サイクルは、主に、肝臓において生じ、より小さな程度において、腎臓において生じる。ＡＲＧＩ１は、一酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）と、利用可能な細胞内基質であるアルギナーゼとの競合により特徴付けられた、肝臓以外の組織内のＬ−アルギニンのホメオスタシスにおいて機能する。アルギニンの代謝は、自然免疫応答及び獲得免疫応答の、極めて重要な調節因子である。ＡＲＧＩ１は、多形核顆粒球（ＰＭＮ）内の、抗微生物性エフェクター経路に関与している。ＰＭＮの細胞死において、ＡＲＧＩ１は、ファゴリソソームから遊離し、微小環境内のアルギニンを枯渇させ、Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の増殖並びにサイトカイン分泌の抑制をもたらす。２群自然リンパ球（ＩＬＣ２）のＡＲＧＩ１は、肺において、急性２型炎症を促進し、最適のＩＬＣ２増殖に関与しているが、生存に関与していない（類似性による）（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０５０８９）。
カドヘリン５（ＣＡＤＨ５又はＣＤＨ５）
ＣＡＤＨ５は、カドヘリンであり；カドヘリンは、カルシウム依存性細胞接着タンパク質である。カドヘリンは、細胞を接続するときに、互いと優先的に、同種親和的に相互作用し、したがって、異種細胞型の分取に寄与する。このカドヘリンは、細胞間結合の密着及び組織化の制御を介して、内皮細胞生物学において、重要な役割を果たしうる。ＣＡＤＨ５は、アルファ−カテニンと会合し、細胞骨格への連結を形成する。ＣＡＤＨ５は、ＫＲＩＴ１と協同的に作用して、適正な内皮細胞極性及び血管腔を確立及び維持する。これらの効果は、Ｐａｒ極性複合体及びＲＡＰ１Ｂの動員及び活性化により媒介される。ＣＡＤＨ５は、ＰＲＫＣＺの活性化並びにリン酸化したＰＲＫＣＺ、ＰＡＲＤ３、ＴＩＡＭ１及びＲＡＰ１Ｂの、細胞結合部への局在化に要求される（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ３３１５１）。
クラスリン重鎖１（ＣＬＨ１又はＣＬＴＣ）
ＣＬＨ１は、被覆小窩及び小胞の多面体被覆の主要なタンパク質である。２つの異なるアダプタータンパク質複合体が、クラスリン格子を、細胞膜又はトランスゴルジ網へと連結する。ＣＬＨ１は、微小管間架橋として作用することにより、有糸分裂紡錘体の動原体線維の安定化に寄与することが提起されている、ＴＡＣＣ３／ｃｈ−ＴＯＧ／クラスリン複合体の構成要素として作用する。ＴＡＣＣ３／ｃｈ−ＴＯＧ／クラスリン複合体は、動原体線維の張力の維持に要求される。ＣＬＨ１は、早期オートファゴソームの形成において、役割を果たす（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ００６１０）。
コートマーサブユニットガンマ２（ＣＯＰＧ２）
ＣＯＰＧ２は、ジリシンモチーフに結合し、ゴルジ体の非クラスリン被覆小胞と可逆的に会合し、ＥＲから、ゴルジ体を経由して、トランスゴルジ網までの生合成タンパク質の輸送をさらに媒介する、細胞質ゾルタンパク質複合体である。コートマー複合体は、ゴルジ膜からの出芽に要求され、ジリシンタグ付けタンパク質の、ゴルジ体〜ＥＲ間の逆向き輸送に不可欠である。哺乳動物において、コートマーは、小型のＧＴＰ結合性タンパク質である、ＡＤＰリボシル因子（ＡＲＦ）と会合する膜だけにより動員され；複合体はまた、ゴルジ体の構造的完全性並びにＬＤＬ受容体のプロセシング、活性及びエンドサイトーシス性リサイクリングにも影響を及ぼす（類似性による）（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９ＵＢＦ２）。
ＤＮＡポリメラーゼデルタサブユニット２（ＤＰＯＤ２又はＰＯＬＤ２）
三量体及び四量体のＤＮＡポリメラーゼデルタ複合体（それぞれ、Ｐｏｌデルタ３及びＰｏｌデルタ４）の構成要素として、ＤＰＯＤ２は、ラギング鎖の合成及び修復を含む、高忠実度のゲノム複製において、役割を果たす。Ｐｏｌデルタ３及びＰｏｌデルタ４は、ＰＯＬＤ４の非存在又は存在により特徴付けられる。Ｐｏｌデルタ３及びＰｏｌデルタ４は、触媒活性の差違を呈する。最も注目すべきことに、Ｐｏｌデルタ３は、Ｐｏｌデルタ４より高度な校正活性を示す。Ｐｏｌデルタ３及びＰｏｌデルタ４のいずれも、インビトロにおいて、岡崎フラグメントをプロセシングするが、Ｐｏｌデルタ３はまた、Ｐｏｌデルタ４と比較して、鎖置換活性がほぼ見られず、５’側のブロッキングオリゴヌクレオチドに行き当たると、失速することから、このタスクの遂行についてもより適している。Ｐｏｌデルタ３のアイドリング過程は、容易にライゲーションされうるニックを維持しながら、ギャップの形成を回避しうる。ＤＮＡポリメラーゼカッパと共に、ＤＮＡポリメラーゼデルタは、ＵＶ照射後における、ヌクレオチド切出し修復（ＮＥＲ）合成の約半分を実施する。ＤＮＡ複製ストレスの条件下において、ＤＰＯＤ２は、切断誘導複製（ＢＩＲ）を介する、切断された複製フォークの修復に要求される。ＤＰＯＤ２は、ＤＮＡポリメラーゼゼータ（ＲＥＶ３Ｌ）又はＤＮＡポリメラーゼイータ（ＰＯＬＨ）とは独立に、Ｐｏｌデルタ４により実施される、Ｏ６−メチルグアニン又は非塩基性部位を保有する鋳型の、損傷乗り越え合成（ＴＬＳ）に関与している。ＤＰＯＤ２は、損傷と反対側に挿入されるヌクレオチドからの伸長を促進することにより、ＤＮＡポリメラーゼデルタによる、非塩基性部位のバイパスを容易とする。ＤＰＯＤ２はまた、ＰＯＬＺ複合体の構成要素としてのＴＬＳにも関与する。ＤＰＯＤ２は、ＰＯＬＤ３と共に、ＲＥＶ３Ｌ及びＲＥＶ７だけからなる、最小限のＤＮＡポリメラーゼゼータ複合体によるＤＮＡ合成の効率及び生産性を、劇的に増大させる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ４９００５）。
デスモグレイン２（ＤＳＧ２）
ＤＳＧ２は、細胞間デスモソーム結合の構成要素である。ＤＳＧ２は、プラークタンパク質と、細胞間接着を媒介する中間径フィラメントとの相互作用に関与している（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ１４１２６）。
免疫グロブリン可変重鎖３−７（ＨＶ３０７又はＩＧＨＶ３−７）
ＨＶ３０７は、抗原認識に参与する、免疫グロブリン重鎖の可変的ドメインのＶ領域である。抗体としてもまた公知の免疫グロブリンは、Ｂリンパ球により産生された、膜結合型又は分泌型の糖タンパク質である。体液性免疫の認識相において、膜結合型免疫グロブリンは、特異的な抗原が結合すると、Ｂリンパ球の、免疫グロブリンを分泌する血漿細胞への、クローン性の拡大及び分化を誘発する受容体として用いられる。分泌された免疫グロブリンは、体液性免疫のエフェクター相を媒介し、この結果として、結合した抗原の消失をもたらす。抗原結合性部位は、その会合する軽鎖の可変ドメインと併せた、１つの重鎖の可変ドメインにより形成される。したがって、各免疫グロブリンは、特定の抗原に対する、顕著なアフィニティーを伴う、２つの抗原結合性部位を有する。可変ドメインは、Ｖ−（Ｄ）−Ｊ再配列と呼ばれる過程によりアセンブルされ、次いで、体細胞超突然変異にかけられるが、これが、抗原への曝露及び選択の後、特定の抗原に対するアフィニティー成熟を可能とする（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０１７８０）。
Ｒａｓ ＧＴＰアーゼ活性化様タンパク質ＩＱＧＡＰ２（ＩＱＧＡ２又はＩＱＧＡＰ２）
ＩＱＧＡ２は、活性化したＣＤＣ４２及びＲＡＣ１に結合するが、それらのＧＴＰアーゼ活性を刺激しないと考えられる。ＩＱＧＡ２は、カルモジュリンと会合する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ１３５７６）。
ケラチンＩ型細胞骨格１４（Ｋ１Ｃ１４又はＫＲＴ１４）
Ｋ１Ｃ１４は、中間径フィラメントタンパク質であり、非らせん状テールドメインは、ＫＲＴ５−ＫＲＴ１４フィラメントが、大型のバンドルへと自己組織化され、インビトロにおいて、ケラチン中間径フィラメントの復元力に関与する機械的特性を増強することの促進に関与している（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０２５３３）。
ケラチンＩ型細胞骨格１９（Ｋ１Ｃ１９又はＫＲＴ１９）
Ｋ１Ｃ１９は、筋線維の組織化に関与している。ＫＲＴ８と併せて、Ｋ１Ｃ１９は、横紋筋のコスタメアにおいて、収縮装置を、ジストロフィンへと連結する一助となる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０８７２７）。
免疫グロブリンカッパ可変１−５（ＫＶ１０５又はＩＧＫＶ１−５）
ＫＶ１０５は、抗原認識に参与する、免疫グロブリン軽鎖の可変的ドメインのＶ領域である。抗体としてもまた公知の免疫グロブリンは、Ｂリンパ球により産生された、膜結合型又は分泌型の糖タンパク質である。体液性免疫の認識相において、膜結合型免疫グロブリンは、特異的な抗原が結合すると、Ｂリンパ球の、免疫グロブリンを分泌する血漿細胞への、クローン性の拡大及び分化を誘発する受容体として用いられる。分泌された免疫グロブリンは、体液性免疫のエフェクター相を媒介し、この結果として、結合した抗原の消失をもたらす。抗原結合性部位は、その会合する軽鎖の可変ドメインと併せた、１つの重鎖の可変ドメインにより形成される。したがって、各免疫グロブリンは、特定の抗原に対する、顕著なアフィニティーを伴う、２つの抗原結合性部位を有する。可変ドメインは、Ｖ−（Ｄ）−Ｊ再配列と呼ばれる過程によりアセンブルされ、次いで、体細胞超突然変異にかけられるが、これが、抗原への曝露及び選択の後、特定の抗原に対するアフィニティー成熟を可能とする（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０１６０２）。
ラミニンサブユニットガンマ１（ＬＡＭＣ１）
高アフィニティーの受容体であるＬＡＭＣ１を介する細胞への結合は、他の細胞外マトリックス成分と相互作用することにより、胚発生時における、細胞の、組織への接合、遊走及び組織化を媒介すると考えられる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ１１０４７）。
ミトコンドリアリンゴ酸デヒドロゲナーゼ（ＭＤＨＭ又はＭＤＨ２）
ＭＤＨＭは、クエン酸回路内の、ＮＡＤ／ＮＡＤＨ補因子系を用いて、リンゴ酸の、オキサロ酢酸への可逆的酸化を触媒する。この遺伝子によりコードされたタンパク質は、ミトコンドリアに局在化され、細胞質ゾルとミトコンドリアとの代謝的協同作用において作動する、リンゴ酸−アスパラギン酸シャトルにおいて、枢要的役割を果たしうる。この遺伝子について、異なるアイソフォームをコードする、いくつかの転写物変異体が見出されている（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ４０９２６）。
リボシルジヒドロニコチンアミドデヒドロゲナーゼ［キノン］（ＮＱＯ２）
ＮＱＯ２は、解毒経路に関与する、ヒドロキノンのコンジュゲーション反応との関連のほか、プロトロンビン合成における、グルタミン酸残基の、ビタミンＫ依存性ガンマ−カルボキシル化などの生合成過程に関与する、キノンレダクターゼとして用いられる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ１６０８３）。
ミエロペルオキシダーゼ（ＰＥＲＭ又はＭＰＯ）
ＰＥＲＭは、多形核白血球による宿主防御系の一部である。ＰＥＲＭは、広範にわたる生物に対する、殺菌活性の一因である。刺激されたＰＭＮ内において、ＭＰＯは、次亜ハロゲン酸、生理学的状況において、主に、次亜塩素酸及びＰＭＮの殺菌性を、大幅に増強する、他の毒性中間体の産生を触媒する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０５１６４）。
プラスチン３（ＰＬＳＴ又はＰＬＳ３）
ＰＬＳＴは、腸微絨毛、有毛細胞の不動毛及び線維芽細胞の糸状仮足において見出された、アクチンバンドル化タンパク質である。ＰＬＳＴは、骨発生の調節において、役割を果たしうる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ１３７９７）。
ニコチン酸ホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＰＮＣＢ又はＮＡＰＲＴ）
ＰＮＣＢは、ニコチン酸（ＮＡ）の、ＮＡモノヌクレオチド（ＮａＭＮ）への転換を触媒する。ＰＮＣＢは、ＮＡが、細胞のＮＡＤレベルを上昇させ、細胞の酸化ストレスを防止するのに不可欠である。ＰＮＣＢは、ＡＴＰを消費する、ニコチン酸及び５−ホスホ−Ｄ−リボース１−リン酸からの、ベータ−ニコチン酸Ｄ−リボヌクレオチドの合成を触媒する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ６ＸＱＮ６）。
受容体型チロシンタンパク質ホスファターゼＣ（ＰＴＰＲＣ）
ＰＴＰＲＣは、抗原受容体を介するＴ細胞の活性化に要求されるタンパク質である、チロシンタンパク質ホスファターゼである。ＰＴＰＲＣは、ＤＰＰ４に結合すると、Ｔ細胞共活性化の正の調節因子として作用する。第１のＰＴＰアーゼドメインが、酵素活性を有するのに対し、第２のＰＴＰアーゼドメインは、第１のＰＴＰアーゼドメインの基質特異性に影響を及ぼすと考えられる。Ｔ細胞が活性化すると、ＰＴＰＲＣは、ＳＫＡＰ１及びＦＹＮを動員し、これらを脱リン酸化する。ＰＴＰＲＣは、ＬＹＮを脱リン酸化し、これにより、ＬＹＮ活性をモジュレートする（類似性による）（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０８５７５）。
セプチン７（ＳＥＰＴ７）
ＳＥＰＴ７は、フィラメントを形成する細胞骨格ＧＴＰアーゼである。ＳＥＰＴ７は、アクチン細胞骨格の正常な組織化に要求される。ＳＥＰＴ７は、有糸分裂の正常な進行に要求される。ＳＥＰＴ７は、細胞質分裂に関与している。ＳＥＰＴ７は、ＣＥＮＰＥの、動原体との正常な会合に要求される。ＳＥＰＴ７は、毛様体形成及び集合的な細胞運動において、役割を果たす。ＳＥＰＴ７は、ＳＥＰＴ１２、ＳＥＰＴ６、ＳＥＰＴ２と共に、フィラメント構造を形成し、おそらく、減数分裂後の分化時に、精子テールの構造的完全性及び運動性に要求される、精子輪において、ＳＥＰＴ４と共にフィラメント構造を形成する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ１６１８１）。
細胞質アルギニンｔＲＮＡリガーゼ（ＳＴＲＣ又はＲＡＲＳ）
ＳＹＲＣは、タンパク質合成時における、特異的なアミノ酸の、コグネイトのｔＲＮＡへの接合を触媒する、高分子複合体の一部を形成する。ＳＹＲＣは、ＡＩＭＰ１の分泌をモジュレートし、炎症性サイトカインであるＥＭＡＰ２の、ＡＩＭＰ１からの生成に関与しうる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ５４１３６）。
チオレドキシン様タンパク質１（ＴＸＮＬ１）
ＴＸＮＬ１は、酸化還元電位を、約−２５０ｍＶとする、活性のチオレドキシンである（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：０４３３９６）。
ＵＤＰグルコース：糖タンパク質グルコシルトランスフェラーゼ１（ＵＧＧＧ１又はＵＧＧＴ１）
ＵＧＧＧ１は、小さなフォールディングの欠損を伴う糖タンパク質を認識する。ＵＧＧＧ１は、タンパク質のミスフォールディング部分の近傍において、単一のＮ−グリカンを再グリコシル化するので、小胞体内のタンパク質フォールディングについての品質管理をもたらす。再グリコシル化タンパク質は、小胞体へのリサイクリング及びリフォールディング又は分解について、カルレティキュリンにより認識される（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９ＮＹＵ２）。
ＷＤリピート含有タンパク質１（ＷＤＲ１）
ＷＤＲ１は、ＡＤＦ／コフィリンファミリータンパク質と共に、アクチンフィラメントのディスアセンブリーを誘導する。ＷＤＲ１は、コフィリン媒介性のアクチンの切離しを増強する（類似性による）。ＷＤＲ１は、細胞質分裂に関与している。ＷＤＲ１は、葉状仮足状の膜突出部を制限することにより、走化性細胞の遊走に関与している。ＷＤＲ１は、心筋サルコメアの組織化に関与している。ＷＤＲ１は、心筋細胞の増殖及び維持に要求される（類似性による）。ＷＤＲ１は、巨核細胞の成熟及び血小板の放出に関与している。ＷＤＲ１は、濾胞上皮発生時の平面内細胞極性（ＰＣＰ）の確立及びＰＣＰ時の細胞形状に変化に要求され；機能は、ＣＦＬ１及び／又はＤＳＴＮ／ＡＤＦとの協同作用に関与すると考えられる。ＷＤＲ１は、皮質張力の生成／維持（類似性による）に関与している。ＷＤＲ１は、上皮頂端細胞の結合のアセンブリー及び維持に関与し、傍接合部のアクトミオシンベルトの組織化において、役割を果たす（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：０７５０８３）。
神経芽細胞分化関連タンパク質ＡＨＮＡＫ（ＡＨＮＫ又はＡＨＮＡＫ）
ＡＨＮＫは、神経細胞の分化に要求されると考えられる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ０９６６６）。
レチナールデヒドロゲナーゼ１（ＡＬ１Ａ１又はＡＬＤＨ１Ａ１）
ＡＬ１Ａ１は、レチンアルデヒドを、レチノイン酸へと転換／酸化する。ＡＬ１Ａ１は、遊離レチナール及び細胞レチノール結合性タンパク質が結合したレチナールに結合する（類似性による）。ＡＬ１Ａ１は、より広範な特異性を有することが可能であり、インビボにおいて、他のアルデヒドを酸化する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ００３５２）。
アミノペプチダーゼＮ（ＡＭＰＮ又はＡＮＰＥＰ）
ＡＭＰＮは、胃及び膵臓のプロテアーゼによる、タンパク質の加水分解から生成したペプチドの最終的な消化において役割を果たす、特異性が広範なアミノペプチダーゼである。ＡＭＰＮはまた、アンジオテンシンＩＩＩ及びＩＶ、神経ペプチド並びにケモカインなどのペプチドホルモンを含む、多様なペプチドのプロセシングにも関与している。ＡＭＰＮはまた、抗原提示細胞の主要組織適合性複合体クラスＩＩ分子に結合したペプチドの切断にも関与する場合がある。ＡＭＰＮは、血管新生において役割を有することが可能であり、コレステロールの結晶化を促進しうる。ＡＭＰＮは、ヒトコロナウイルス２２９Ｅ／ＨＣｏＶ−２２９Ｅに対する受容体として作用する。ヒトコロナウイルス２２９Ｅ（ＨＣｏＶ−２２９Ｅ）感染の場合、ＡＭＰＮは、ＨＣｏＶ−２２９Ｅのスパイク糖タンパク質に対する受容体として用いられる。ＡＭＰＮは、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）感染もまた媒介する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ１５１４４）。
Ｆ−アクチンキャッピングタンパク質サブユニットベータ（ＣＡＰＺＢ）
ＣＡＰＺＢは、アクチンフィラメントの急速に増殖する末端（反矢じり端）に、Ｃａ２＋非依存的に結合し、これにより、これらの末端における、サブユニットの交換をブロッキングする、Ｆ−アクチンキャッピングタンパク質である。他のキャッピングタンパク質（ゲルソリン及びセベリンなど）と異なり、これらのタンパク質は、アクチンフィラメントを切り離さない。ＣＡＰＺＢは、細胞形態の調節及び細胞骨格の組織化において、役割を果たす（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ４７７５６）。
カテプシンＤ（ＣＡＴＤ又はＣＴＳＤ）
ＣＡＴＤは、細胞内タンパク質分解において活性の酸プロテアーゼである。ＣＡＴＤは、ＡＰＰの分解をもたらす、ＡＤＡＭ３０による切断及び活性化の後のＡＰＰプロセシングにおいて、役割を果たす。ＣＡＴＤは、乳がん及び、おそらく、アルツハイマー病など、いくつかの疾患の発症機序に関与している（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０７３３９）。
ＣＡＰ−Ｇｌｙドメイン含有リンカータンパク質２（ＣＬＩＰ２）
ＣＬＩＰ２は、微小管を、樹状突起間ギャップ結合により連結された、ニューロンの球根状の樹状突起付属器内に主に存在する膜状細胞小器官である、樹状突起層板小体（ＤＬＢ）へと連結する。ＣＬＩＰ２は、脳特異的な細胞小器官の移動の制御において作動しうる（類似性による）（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９ＵＤＴ６）。
クロモグラニンＡ（ＣＭＧＡ又はＣＨＧＡ）
パンクレアスタチン：膵臓からの、グルコース誘導性のインスリン放出を、強力に阻害する。カテスタチン：非競合的ニコチン性コリン作動性アンタゴニストとして作用することにより、クロマフィン細胞及びノルアドレナリン作動性ニューロンからの、カテコールアミンの放出を阻害する。カテスタチンは、グラム陽性菌である、Ｓ．アウレウス（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）及びＭ．ルテンス（Ｍ．ｌｕｔｅｕｓ）並びにグラム陰性菌Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）及びＰ．アエルギノーサ（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）に対する抗菌活性を提示する。カテスタチンは、マスト細胞の遊走、脱顆粒並びにサイトカイン及びケモカインの産生を誘導しうる。カテスタチンは、インビトロにおいて、フリーラジカルの強力なスカベンジャーとして作用する。カテスタチンは、心機能及び血圧の調節において、役割を果たしうる。セルピニン：ｃＡＭＰ−ＰＫＡ−ＳＰ１経路を介して、プロテアーゼであるネクシン１（ＳＥＲＰＩＮＥ２）の転写を上方調節することにより、内分泌細胞内の、顆粒の生体内発生を調節する。これは、ゴルジ複合体内の顆粒タンパク質の分解の阻害をもたらし、これは、顆粒の形成を促進する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ１０６４５）。
ファシン（ＦＳＣＮ１）
ＦＳＣＮ１は、アクチン／ファシン比を、最小において４．１：１として、フィラメント状アクチンを、バンドルへと組織化する。ＦＳＣＮ１は、アクチンフィラメントバンドルの組織化並びに微小突起、膜ひだ及びストレス線維の形成において、役割を果たす。ＦＳＣＮ１は、糸状仮足などの細胞突出部の多様なセットの形成並びに細胞の運動性及び遊走に重要である（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ１６６５８）。
ＧＭＰレダクターゼ２（ＧＭＰＲ２）
ＧＭＰＲ２は、ＧＭＰの、ＩＭＰへの、不可逆的ＮＡＤＰＨ依存性脱アミノ化を触媒する。ＧＭＰＲ２は、ヌクレオ塩基、ヌクレオシド誘導体及びヌクレオチド誘導体の、Ｇヌクレオチドから、Ａヌクレオチドへの転換並びに細胞内の、Ａヌクレオチドと、Ｇヌクレオチドとの均衡の維持において機能する。ＧＭＰＲ２は、細胞の分化をモジュレートすることにおいて、役割を果たす（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９Ｐ２Ｔ１）。
７８ｋＤａグルコース調節型タンパク質（ＧＲＰ７８又はＨＳＰＡ５）
ＧＲＰ７８は、小胞体内部の多量体タンパク質複合体のアセンブリーを容易とすることにおいて、役割を果たす。ＧＲＰ７８は、おそらく、ＤＮＡＪＣ１０の、その基質からの放出を容易とする、ＤＮＡＪＣ１０とのその相互作用を介して、タンパク質の適正なフォールディング及びミスフォールディングされたタンパク質の分解に関与している（類似性による）。ＧＲＰ７８は、分泌型タンパク質であると考えられる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ１１０２１）。
グルタミン酸システインリガーゼ触媒性サブユニット（ＧＳＨ１又はＧＣＬＣ）
ガンマ−グルタミルシステインシンセターゼとしてもまた公知のＧＳＨ１は、グルタチオン合成の第１の律速酵素である。酵素は、２つのサブユニット：重鎖触媒性サブユニット及び軽鎖調節性サブユニットからなる。ＧＳＨ１遺伝子座は、触媒性サブユニットをコードするが、調節性サブユニットは、第１ｐ２２〜ｐ２１染色体上に配置された、異なる遺伝子に由来する。ＧＳＨ１遺伝子座における突然変異は、ガンマ−グルタミルシステインシンセターゼの欠損に起因する溶血性貧血と関連しており、心筋梗塞を生じやすい（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ４８５０６）。
細胞質イソクエン酸デヒドロゲナーゼ［ＮＡＤＰ］（ＩＤＨＣ又はＩＤＨ１）
ＩＤＨＣは、ヒトにおいて、第２染色体上のＩＤＨ１遺伝子によりコードされた酵素である。イソクエン酸デヒドロゲナーゼは、イソクエン酸の、２−オキソグルタミン酸への、酸化的脱カルボキシル化を触媒する。これらの酵素は、それらのうちの一方は、ＮＡＤ＋を、電子アクセプターとして使用し、他方は、ＮＡＤＰ＋を、電子アクセプターとして使用する、２つの顕著に異なるサブクラスに属する。５つのイソクエン酸デヒドロゲナーゼ：ミトコンドリアマトリックスに局在する、３つのＮＡＤ＋依存性イソクエン酸デヒドロゲナーゼ及びそれらのうちの一方が、ミトコンドリアであり、他方が、主に、細胞質ゾルである、２つのＮＡＤＰ＋依存性イソクエン酸デヒドロゲナーゼが報告されている。各ＮＡＤＰ＋依存性アイソザイムは、ホモ二量体である。ＩＤＨＣ遺伝子によりコードされたタンパク質は、細胞質及びペルオキシソームにおいて見出された、ＮＡＤＰ＋依存性イソクエン酸デヒドロゲナーゼである。ＩＤＨＣは、ＰＴＳ（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍａｌ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｓｉｇｎａｌ）−１配列を含有する。この酵素の、ペルオキシソーム内の存在は、２，４−ジエノイル−ＣｏＡの、３−エノイル−ＣｏＡへの転換などのペルオキシソーム内還元のための、ＮＡＤＰＨの再生並びに２−オキソグルタミン酸を消費するペルオキシソーム反応、すなわち、フィタン酸の、アルファ−ヒドロキシル化における役割を示唆する。細胞質ＩＤＨＣは、細胞質内のＮＡＤＰＨの産生において、著明な役割を果たす。ＩＤＨＣ遺伝子について、同じタンパク質をコードする、代替的にスプライシングされた転写物変異体も見出されている（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｏ７５８７４）。
ケラチンＩ型細胞骨格２０（Ｋ１Ｃ２０又はＫＲＴ２０）
Ｋ１Ｃ２０は、腸上皮内の、ケラチンフィラメントの組織化の維持において、著明な役割を果たす。リン酸化されると、Ｋ１Ｃ２０は、小腸内のムチンの分泌において、役割を果たす（類似性による）（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ３５９００）。
ＫＲＲ１小サブユニットプロセソーム構成要素相同体（ＫＲＲ１）
ＫＲＲ１は、４０Ｓリボソームの生体内発生に要求される。Ｋｖは、プレ１８ＳリボソームＲＮＡの核小体によるプロセシング及びリボソームアセンブリーに関与している（類似性による）（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ１３６０１）。
マンノース結合性タンパク質Ｃ（ＭＢＬ２）
ＭＢＬ２は、自然免疫による防御に関与する、カルシウム依存性レクチンである。ＭＢＬ２は、異なる微生物において、マンノース、フコース及びＮ−アセチルグルコサミンに結合し、レクチン補体経路を活性化させる。ＭＢＬ２は、後期アポトーシス細胞並びにアポトーシスブレブ及び壊死性細胞に結合するが、早期アポトーシス細胞に結合せず、マクロファージによるそれらの取込みを容易とする。ＭＢＬ２は、ＤＮＡに結合しうる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ１１２２６）。
核内輸送因子２（ＮＴＦ２又はＮＵＴＦ２）
ＮＴＦ２は、カーゴ受容体媒介性核細胞質輸送における、ＲＡＮの機能に不可欠である、ＧＤＰ結合型ＲＡＮの、細胞質から、核への移入を媒介する。これにより、ＮＴＦ２は、カーゴ受容体媒介性核細胞質輸送において、一般的な役割を間接的に果たす。ＮＴＦ２は、細胞質ゾル内のＧＤＰ結合型ＲＡＮと相互作用し、ヌクレオポリンとの、その相互作用を介して、ＧＤＰ結合型ＲＡＮを、核内小孔複合体へと動員し、その核内移入を促進する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ６１９７０）。
ホスホグリセリン酸キナーゼ１（ＰＧＫ１）
解糖酵素としてのその役割に加えて、ＰＧＫ−１は、ポリメラーゼアルファ補因子タンパク質（プライマー認識タンパク質）として作用する。ＰＧＫ１は、精子運動性において、役割を果たしうる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ００５５８）。
血清アミロイドＡ−１タンパク質（ＳＡＡ１）
ＳＡＡ１は、ヒトにおいて、ＳＡＡ１遺伝子によりコードされたタンパク質である。ＳＡＡ１は、肝細胞により主に産生される、主要な急性相タンパク質であって、感染、組織損傷及び悪性腫瘍に応答する急性相タンパク質である。血液循環へと放出されると、ＳＡＡ１は、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）と会合するアポリポタンパク質として存在する。ＳＡＡ１は、その沈着物が、炎症性アミロイドーシスをもたらす、アミロイドＡ（ＡＡ）の主要な前駆体である（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０ＤＪＩ８）。
トランスフェリン受容体タンパク質１（ＴＦＲ１又はＴＦＲＣ）
鉄の細胞への取込みは、リガンドに占有されたトランスフェリン受容体の、特化したエンドソームへの、受容体媒介性エンドサイトーシスを介して生じる。エンドソームの酸性化は、鉄の放出をもたらす。次いで、アポトランスフェリン−受容体複合体は、中性ｐＨへの復帰及びアポトランスフェリンの、その受容体に対するアフィニティーの付随的な喪失と共に、細胞表面へとリサイクリングされる。トランスフェリン受容体は、赤血球及び神経系の発生に必要である（類似性による）。第２のリガンドである、遺伝性ヘモクロマトーシスタンパク質であるＨＦＥは、重複するＣ末端の結合性部位への結合について、トランスフェリンと競合する。ＴＦＲ１は、鉄の取込みを介して、Ｔ細胞及びＢ細胞の増殖を、正に調節する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０２７８６）。
一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、対象がＴＢＩを負っていることを、これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対象に由来する試料中の検出及び１つ以上のＴＢＩバイオマーカーの、対照の対象（例えば、ＴＢＩを負っていない対象）における検出の欠如又は、場合によって、重度ＴＢＩを負っている対象における検出の欠如に基づき決定するのに使用されうる。これらのＴＢＩバイオマーカーは、１４３３Ｇ、ＡＣＫ１、ＡＣＹ１、ＡＫＡ１２、ＡＲＧＩ１、ＣＡＤＨ５、ＣＬＨ１、ＣＯＰＧ２、ＤＰＯＤ２、ＤＳＧ２、ＨＶ３０７、ＩＱＧＡ２、Ｋ１Ｃ１４、Ｋ１Ｃ１９、ＫＶ１０５、ＬＡＭＣ１、ＭＤＨＭ、ＮＱＯ２、ＰＥＲＭ、ＰＬＳＴ、ＰＮＣＢ、ＰＴＰＲＣ、ＳＥＰＴ７、ＳＹＲＣ、ＴＲＸＲ２、ＴＸＮＬ１、ＵＧＧＧ１、ＷＤＲ１、ＡＨＮＫ、ＡＬ１Ａ１、ＡＭＰＮ、ＣＡＰＺＢ、ＣＡＴＤ、ＣＬＩＰ２、ＣＭＧＡ、ＦＳＣＮ１、ＧＭＰＲ２、ＧＲＰ７８、ＧＳＨ１、ＩＤＨＣ、Ｋ１Ｃ２０、ＫＲＲ１、ＭＢＬ２、ＮＴＦ２、ＰＣＢＰ２、ＰＧＫ１、ＳＡＡ１、ＴＦＲ１又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上を含みうる。これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対象における測定又は検出は、対象が軽度ＴＢＩを負っていることを、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーの、対照の対象又は重度ＴＢＩを負っている対象における量、濃度及び／又は発現レベルを検出、測定、比較及び／又は定量する必要から独立して指し示すのに十分でありうる。これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、対照の対象又はＴＢＩを負っていない対象において存在しうるが、これは一般に、本明細書において記載された、従来の手段を介する検出が可能ではない量において存在する。したがって、場合によって、これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対象における検出は、対象が軽度ＴＢＩを負っていることを指し示す。
一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、対象が特定の下位分類の軽度ＴＢＩを負っていることを決定するのに使用されうる。特定の理論、基礎病因又は疾患機構に束縛されずに述べると、これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、軽度ＴＢＩを負っている対象を、４つのサブクラス（例えば、サブクラス１、サブクラス２、サブクラス３又はサブクラス４）のうちの１つへと分類するのに使用されうる。例えば、ＡＣＫ１、ＡＣＹ１、ＰＬＳＴ、ＰＮＣＢ、ＰＴＰＲＣ、ＵＧＧＧ１又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上の、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス１の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。ＡＫＡ１２、ＨＶ３０７、ＰＥＲＭ、ＫＶ１０５、ＮＱＯ２、ＳＥＰＴ７、ＳＹＲＣ、ＴＲＸＲ２又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上の、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス２の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。そして、１４３３Ｂ、ＡＲＧＩ１、ＣＡＤＨ５、ＣＬＨ１、ＣＯＰＧ２、ＤＰＯＤ２、ＤＳＧ２、ＩＱＧＡ２、Ｋ１Ｃ１４、ＬＡＭＣ１、ＭＤＨＭ、ＴＸＮＬ１又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上の、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス３の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。これらのＴＢＩバイオマーカーのレベルは、単独で又は軽度ＴＢＩのパネル若しくはシグネチャーの一部として組み合わせて検出又は測定されうる。
一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、ＴＢＩバイオマーカーとして同定されている場合もあり、同定されていない場合もある、他のバイオマーカーと共に含まれうる。例えば、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、ＡＨＮＫ、ＡＬ１Ａ１、ＡＭＰＮ、ＣＡＰＺＢ、ＣＡＴＤ、ＣＬＩＰ２、ＣＭＧＡ、ＦＳＣＮ１、ＧＭＰＲ２、ＧＲＰ７８、ＧＳＨ１、ＩＤＨＣ、Ｋ１Ｃ２０、ＫＲＲ１、ＭＢＬ２、ＮＴＦ２、ＰＣＢＰ２、ＰＧＫ１、ＳＡＡ１、ＴＦＲ１又はこれらの組合せのうちの１つ以上を含みうる、バイオマーカーのパネル内に含まれうる。場合によって、他のＴＢＩバイオマーカー及び非ＴＢＩバイオマーカーを伴う、ＴＢＩバイオマーカーのパネルは、個々のバイオマーカー単独より大きな程度において、ＴＢＩの診断の一助となりうる。
ｃ．軽度ＴＢＩシグネチャー
下記において記載される、以下の軽度ＴＢＩバイオマーカーは、単独又は組合せで検出された場合に、健常対象を、軽度ＴＢＩ及び／又は特殊なサブクラスの軽度ＴＢＩを負っている対象から識別することが可能であると同定された。
Ｂ型エフリン受容体４（ＥＰＨＢ４）
Ｂ型エフリン受容体４は、ヒトにおいて、ＥＰＨＢ４遺伝子によりコードされたタンパク質である。エフリン受容体及びそれらのリガンドであるエフリンは、特に、神経系における、多数の発生過程を媒介する。それらの構造及び配列関係に基づき、エフリンは、グリコシルホスファチジルイノシトール連結により、膜へとアンカリングされた、エフリンＡ（ＥＦＮＡ）クラスと、膜貫通タンパク質である、エフリンＢ（ＥＦＮＢ）クラスとに分けられる。受容体のＥｐｈファミリーは、それらの細胞外ドメイン配列の類似性並びにそれらの、エフリンＡリガンド及びエフリンＢリガンドへの結合についてのアフィニティーに基づき、２つの群へと分けられる。エフリン受容体は、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）ファミリーの、最大のサブグループを構成する。ＥＰＨＢ４遺伝子によりコードされたタンパク質は、エフリンＢ２に結合し、血管の発生において、不可欠の役割を果たす（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ５４７６０）。
免疫グロブリン可変重鎖１−３（ＨＶ１０３又はＩＧＨＶ１−３）
ＨＶ１０３は、抗原認識に参与する、免疫グロブリン重鎖の可変的ドメインのＶ領域である。抗体としてもまた公知の免疫グロブリンは、Ｂリンパ球により産生された、膜結合型又は分泌型の糖タンパク質である。体液性免疫の認識相において、膜結合型免疫グロブリンは、特異的な抗原が結合すると、Ｂリンパ球の、免疫グロブリンを分泌する血漿細胞への、クローン性の拡大及び分化を誘発する受容体として用いられる。分泌された免疫グロブリンは、体液性免疫のエフェクター相を媒介し、この結果として、結合した抗原の消失をもたらす。抗原結合性部位は、その会合する軽鎖の可変ドメインと併せた、１つの重鎖の可変ドメインにより形成される。したがって、各免疫グロブリンは、特定の抗原に対する、顕著なアフィニティーを伴う、２つの抗原結合性部位を有する。可変ドメインは、Ｖ−（Ｄ）−Ｊ再配列と呼ばれる過程によりアセンブルされ、次いで、体細胞超突然変異にかけられるが、これが、抗原への曝露及び選択の後、特定の抗原に対するアフィニティー成熟を可能とする（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ａ０Ａ０Ｃ４ＤＨ２９）。
免疫グロブリン定常重鎖デルタ（ＩＧＨＤ）
ＩＧＨＤは、免疫グロブリン重鎖の定常領域である。抗体としてもまた公知の免疫グロブリンは、Ｂリンパ球により産生された、膜結合型又は分泌型の糖タンパク質である。体液性免疫の認識相において、膜結合型免疫グロブリンは、特異的な抗原が結合すると、Ｂリンパ球の、免疫グロブリンを分泌する血漿細胞への、クローン性の拡大及び分化を誘発する受容体として用いられる。分泌された免疫グロブリンは、体液性免疫のエフェクター相を媒介し、この結果として、結合した抗原の消失をもたらす。抗原結合性部位は、その会合する軽鎖の可変ドメインと併せた、１つの重鎖の可変ドメインにより形成される。したがって、各免疫グロブリンは、特定の抗原に対する、顕著なアフィニティーを伴う、２つの抗原結合性部位を有する。可変ドメインは、Ｖ−（Ｄ）−Ｊ再配列と呼ばれる過程によりアセンブルされ、次いで、体細胞超突然変異にかけられるが、これが、抗原への曝露及び選択の後、特定の抗原に対するアフィニティー成熟を可能とする。ＩｇＤは、大半の末梢Ｂ細胞の表面上における、主要な抗原受容体アイソタイプであり、末梢Ｂ細胞の表面上において、ＩｇＤは、ＩｇＭと共に共発現される。膜結合型ＩｇＤ（ｍＩｇＤ）は、タンパク質チロシンキナーゼのＳｒｃファミリーによる、ＣＤ７９Ａ及びＣＤ７９Ｂのリン酸化を誘導する。可溶性ＩｇＤ（ｓＩｇＤ）の、血清中濃度は、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＭの濃度を下回るが、ＩｇＥの濃度よりはるかに高濃度である。Ｂ細胞上に存在するＩｇＭ分子と、ＩｇＤ分子とは、同一なＶ領域及び抗原結合性部位を有する。抗原が、Ｂ細胞受容体に結合した後、分泌形態であるｓＩｇＤは、消失する。ＩｇＤは、ＴＮＦ、ＩＬ１Ｂ及びＩＬ１ＲＮの、強力な誘導剤である。ＩｇＤはまた、末梢血単核細胞からの、ＩＬ６、ＩＬ１０及びＬＩＦの放出も誘導する。単球は、インビトロの、ＩｇＤの存在下における、サイトカインの主な産生細胞であると考えられる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０１８８０）。
エステルヒドロラーゼＣ１１ｏｒｆ５４（ＣＫ０５４又はＣ１１ｏｒｆ５４）
ＣＫ０５４は、ヒトにおいて、Ｃ１１ｏｒｆ５４遺伝子によりコードされたタンパク質である。ヒト遺伝子である、Ｃ１１ｏｒｆ５４はまた、ＰＴＤ０１２及びＰＴＯＤ１２としても公知である。Ｃ１１ｏｒｆ５４は、酢酸ｐ−ニトロフェニル上において、ヒドロラーゼ活性を呈し、エステル結合に対して作用するが、全体的な機能は、科学界によりいまだ十分に理解されていない。ＣＫ０５４は、細菌内において見出された、最も遠隔の相同体に対して、高度に保存的である（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９Ｈ０Ｗ９）。
精巣上体特異的アルファ−マンノシダーゼ（ＭＡ２Ｂ２又はＭＡＮ２Ｂ２）
ＭＡ２Ｂ２は、アルファ−Ｄ−マンノシド内、末端の非還元性アルファ−Ｄ−マンノース残基の加水分解を触媒する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９Ｙ２Ｅ５）。
タンパク質ｄｉａｐｈａｎｏｕｓ相同体１（ＤＩＡＰ１又はＤＩＡＰＨ１）
ＤＩＡＰ１は、Ｒｈｏ依存的に作用して、ＰＦＹ１を、膜へと動員する。ＤＩＡＰ１は、アクチンケーブル及びストレス線維など、Ｆ−アクチン構造のアセンブリーに要求される。ＤＩＡＰ１は、アクチンフィラメントを核化する。ＤＩＡＰ１は、アクチンフィラメントの反矢じり端に結合し、アクチンの重合及び脱重合を緩徐化させる。ＤＩＡＰ１は、細胞質分裂及び血清応答因子の転写活性化に要求される。ＤＦＲタンパク質は、シグナル伝達及びアクチン動態の調節において、ＲｈｏとＳｒｃチロシンキナーゼとをカップリングさせる。ＤＩＡＰ１は、ＭＡＰＲＥ１及びＡＰＣのための足場タンパク質として機能して、微小管を安定化させ、細胞の遊走を促進する（類似性による）。ＤＩＡＰ１は、神経突起伸長促進活性を有する（類似性による）。有毛細胞内において、ＤＩＡＰ１は、有毛細胞内のアクチン重合の調節において、役割を果たしうる。ＭＥＭＯ１−ＲＨＯＡ−ＤＩＡＰＨ１シグナル伝達経路は、細胞皮質の微小管の、ＥＲＢＢ２依存性の安定化において、重要な役割を果たす。ＤＩＡＰ１は、ＧＳＫ３Ｂ活性の調節を介して、ＡＰＣ及びＣＬＡＳＰ２の、細胞膜への局在化を制御する。膜に結合したＡＰＣは、微小管の捕捉及び安定化に要求される、ＭＡＣＦ１の、細胞膜への局在化を可能とする。ＤＩＡＰ１は、細胞形態の調節及び細胞骨格の組織化において、役割を果たす。ＤＩＡＰ１は、細胞形状の制御において要求される。ＤＩＡＰ１は、脳の発生において、役割を果たす（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｏ６０６１０）。
プロコラーゲンリシン２−オキソグルタミン酸５−ジオキシゲナーゼ１（ＰＬＯＤ１）
ＰＬＯＤ１は、コラーゲンアルファ鎖内のリシン残基のヒドロキシル化を触媒し、コラーゲン原線維の正常なアセンブリー及び架橋に要求される、ＰＬＯＤ１、Ｐ３Ｈ３及びＰ３Ｈ４から構成された複合体の一部である（類似性による）。ＰＬＯＤ１は、コラーゲン内の、−Ｘａａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−配列内の、ヒドロキシリシン残基を形成する。これらのヒドロキシリシンは、炭水化物単位に対する接合部位として用いられ、分子間コラーゲン架橋の安定性に不可欠である（蓋然的である）（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ０２８０９）。
免疫グロブリン可変カッパ１−３３（ＫＶ１３３又はＩＧＫＶ１−３３）
ＫＶ１３３は、抗原認識に参与する、免疫グロブリン軽鎖の可変的ドメインのＶ領域である。抗体としてもまた公知の免疫グロブリンは、Ｂリンパ球により産生された、膜結合型又は分泌型の糖タンパク質である。体液性免疫の認識相において、膜結合型免疫グロブリンは、特異的な抗原が結合すると、Ｂリンパ球の、免疫グロブリンを分泌する血漿細胞への、クローン性の拡大及び分化を誘発する受容体として用いられる。分泌された免疫グロブリンは、体液性免疫のエフェクター相を媒介し、この結果として、結合した抗原の消失をもたらす。抗原結合性部位は、その会合する軽鎖の可変ドメインと併せた、１つの重鎖の可変ドメインにより形成される。したがって、各免疫グロブリンは、特定の抗原に対する、顕著なアフィニティーを伴う、２つの抗原結合性部位を有する。可変ドメインは、Ｖ−（Ｄ）−Ｊ再配列と呼ばれる過程によりアセンブルされ、次いで、体細胞超突然変異にかけられるが、これが、抗原への曝露及び選択の後、特定の抗原に対するアフィニティー成熟を可能とする（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０１５９４）。
本明細書において開示された通り、以下のバイオマーカー：ＴＰＰ２、ＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＬ９Ａ１、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＩＮＦ２、Ｍ３Ｋ５、ＳＢＳＮ、ＳＹＥＰ、ＭＹＬＫ及びＳＡＭＰもまた、単独で又は互いと組み合わせて、かつ、本節における他のバイオマーカーと組み合わせて検出された場合に、健常対象を、軽度ＴＢＩ及び／又は特殊なサブクラスの軽度ＴＢＩを負っている対象から識別することが可能であると同定された。これらのバイオマーカーについての記載は、上記においてなされたので、ここでは繰り返されない。
一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、対象が特定の下位分類の軽度ＴＢＩを負っていることを決定するのに使用されうる。特定の理論、基礎病因又は疾患機構に束縛されずに述べると、これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、軽度ＴＢＩを負っている対象を、４つのサブクラス（例えば、サブクラス１、サブクラス２、サブクラス３又はサブクラス４）のうちの１つへと分類するのに使用されうる。一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、対象が軽度ＴＢＩを負っていることを、対象に由来する試料中のこれらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対照の対象における対応するＴＢＩバイオマーカーの量、濃度及び／又は発現レベルより高度又は低度の量、濃度及び／又は発現レベルにおける検出に基づき決定するのに使用されうる。これらのＴＢＩバイオマーカーのレベルのうちの１つ以上の、対照の対象（例えば、ＴＢＩを負っていない対象）と比較した増大又は減少の、対象における測定又は検出は、対象が軽度ＴＢＩを負っていることを指し示すのに十分であることが可能であり、場合によって、対象が特定のサブクラスの軽度ＴＢＩを負っていることを指し示すのに十分でありうる。
例えば、ＴＰＰ２、ＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＬ９Ａ１、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＩＮＦ２又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上の、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス４の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。場合によって、対照の対象によるレベルと比較して、高レベルのＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ若しくはこれらの任意の組合せ及び／又は低レベルのＴＰＰ２、ＡＬ９Ａ１、ＩＮＦ２若しくはこれらの任意の組合せの、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス４の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。
一部の実施形態において、ＴＰＰ２、ＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＮＦ２、ＩＧＨＤ、ＣＫ０５４、Ｍ３Ｋ５、ＡＢＨＥＢ、ＡＬ９Ａ１、ＤＮＭ１Ｌ又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上の、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス３の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。場合によって、対照の対象によるレベルと比較して、高レベルのＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ若しくはこれらの任意の組合せ及び／又は低レベルのＴＰＰ２、ＩＧＨＤ、ＣＫ０５４、Ｍ３Ｋ５、ＡＬ９Ａ１若しくはこれらの任意の組合せの、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス３の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。
一部の実施形態において、ＮＣＯＲ１、ＴＰＰ２、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＩＮＦ２、ＳＢＳＮ、ＡＬ９Ａ１、ＭＡ２Ｂ２又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上の、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス２の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。場合によって、対照の対象によるレベルと比較して、高レベルのＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＳＢＳＮ若しくはこれらの任意の組合せ及び／又は低レベルのＴＰＰ２、ＩＮＦ２、ＡＬ９Ａ１、ＭＡ２Ｂ２若しくはこれらの任意の組合せの、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス２の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。
他の実施形態において、Ｋ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ、ＫＶ１３３、ＡＬ９Ａ１、ＥＰＨＢ４又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上の、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス１の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。場合によって、対照の対象によるレベルと比較して、高レベルのＫ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ、ＥＰＨＢ４若しくはこれらの任意の組合せ及び／又は低レベルのＫＶ１３３及びＡＬ９Ａ１若しくはこれらの任意の組合せの、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス１の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。
これらのＴＢＩバイオマーカーのレベルは、単独で又は軽度ＴＢＩのパネル若しくはシグネチャーの一部として組み合わせて検出又は測定されうる。
一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、ＴＢＩバイオマーカーとして同定されている場合もあり、同定されていない場合もある、他のバイオマーカーと共に含まれうる。例えば、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、ＭＹＬＫ、ＳＡＭＰ又はこれらの組合せのうちの１つ以上を含みうる、バイオマーカーのパネル内に含まれうる。場合によって、他のＴＢＩバイオマーカー及び非ＴＢＩバイオマーカーを伴う、ＴＢＩバイオマーカーのパネルは、個々のバイオマーカー単独より大きな程度において、ＴＢＩの診断の一助となりうる。
下記において記載される、以下の軽度ＴＢＩバイオマーカーは、単独又は組合せで検出された場合に、健常対象を、軽度ＴＢＩ及び／又は特殊なサブクラスの軽度ＴＢＩを負っている対象から識別することが可能であると同定された。
細胞質ジネイン軽鎖１（ＤＹＬ１又はＤＹＮＬＬ１）
ＤＹＬ１は、細胞質ジネイン１複合体の、いくつかの非触媒性アクセサリー構成要素のうちの１つとして作用し、ジネインを、カーゴ及びジネイン機能を調節するアダプタータンパク質へと連結することに関与すると考えられる。細胞質ジネイン１は、小胞及び細胞小器官の、微小管に沿った、細胞内の逆向き運動のためのモーターとして作用する。ＤＹＬ１は、細胞骨格構造の空間的分布を変化させる又は維持することにおいて、役割を果たしうる。ＤＹＬ１は、ニューロンの一酸化窒素シンターゼに結合し、この触媒活性を阻害する。ＤＹＬ１は、ＥＳＲ１のトランス活性化機能を促進し、ＥＳＲ１の核内局在化において、役割を果たす。ＤＹＬ１は、ＢＣＬ２Ｌ１１を、微小管へと封鎖することにより、ＢＣＬ２Ｌ１１のアポトーシス活性を調節する。アポトーシス刺激があると、ＢＣＬ２Ｌ１１−ＤＹＮＬＬ１複合体は、細胞質ジネインから解離し、ミトコンドリアへと移行し、ＢＣＬ２を封鎖し、これにより、その抗アポトーシス活性を中和する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ６３１６７）。
ピューロマイシン感受性アミノペプチダーゼ（ＰＳＡ又はＮＰＥＰＰＳ）
ＰＳＡは、いくつかのペプチドに対する、広範な基質特異性を伴うアミノペプチダーゼである。ＰＳＡは、細胞の増殖及び生存に不可欠の、タンパク質分解性イベントに関与している。ＰＳＡは、神経ペプチド活性の調節因子として作用しうる。ＰＳＡは、ＭＨＣクラスＩ分子のための抗原プロセシング経路において、役割を果たす。ＰＳＡは、細胞傷害性Ｔ細胞エピトープ前駆体に対する、Ｎ末端トリミングに関与している。ＰＳＡは、多くの細胞内タンパク質内において見出されたポリＱペプチドを消化する。ＰＳＡは、正常脳に由来するタウを、アルツハイマー病脳に由来するタウより効率的に消化する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ５５７８６）。
ＥＧＦ含有フィブリン様細胞外マトリックスタンパク質１（ＦＢＬＮ３又はＥＦＥＭＰ１）
ＦＢＬＮ３は、ＥＧＦ受容体である、ＥＧＦＲに結合し、ＥＧＦＲの自己リン酸化及び下流のシグナル伝達経路の活性化を誘発する。ＦＢＬＮ３は、細胞の接着及び遊走において、役割を果たしうる。ＦＢＬＮ３は、軟骨細胞分化の、負の調節因子として機能しうる。嗅覚上皮において、ＦＢＬＮ３は、グリア細胞の遊走、分化及びグリア細胞が、ニューロンの神経突起伸長を支援する能力を調節しうる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ１２８０５）。
血清アルブミン（ＡＬＢＵ又はＡＬＢ）
ＡＬＢＵは、血漿の主なタンパク質であり、水、Ｃａ２＋、Ｎａ＋、Ｋ＋、脂肪酸、ホルモン、ビリルビン及び薬物に対する良好な結合能を有する。その主な機能は、血液のコロイド浸透圧の調節である。ＡＬＢＵは、血漿中の、主要な亜鉛輸送体であり、典型的に、全ての血漿亜鉛のうちの、約８０％に結合する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０２７６８）。
ミトコンドリア３−ケトアシル−ＣｏＡチオラーゼ（ＴＨＩＭ又はＡＣＡＡ２）
ＴＨＩＭは、ＢＮＩＰ３媒介性アポトーシス及びミトコンドリアダメージを消失させることに関与している（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ４２７６５）。
免疫グロブリン可変カッパ１−３９（ＫＶ１３９又はＩＧＫＶ１−３９）
ＫＶ１３９は、抗原認識に参与する、免疫グロブリン軽鎖の可変的ドメインのＶ領域である。抗体としてもまた公知の免疫グロブリンは、Ｂリンパ球により産生された、膜結合型又は分泌型の糖タンパク質である。体液性免疫の認識相において、膜結合型免疫グロブリンは、特異的な抗原が結合すると、Ｂリンパ球の、免疫グロブリンを分泌する血漿細胞への、クローン性の拡大及び分化を誘発する受容体として用いられる。分泌された免疫グロブリンは、体液性免疫のエフェクター相を媒介し、この結果として、結合した抗原の消失をもたらす。抗原結合性部位は、その会合する軽鎖の可変ドメインと併せた、１つの重鎖の可変ドメインにより形成される。したがって、各免疫グロブリンは、特定の抗原に対する、顕著なアフィニティーを伴う、２つの抗原結合性部位を有する。可変ドメインは、Ｖ−（Ｄ）−Ｊ再配列と呼ばれる過程によりアセンブルされ、次いで、体細胞超突然変異にかけられるが、これが、抗原への曝露及び選択の後、特定の抗原に対するアフィニティー成熟を可能とする（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０１５９７）。
マンナン結合性レクチンセリンプロテアーゼ２（ＭＡＳＰ２）
ＭＡＳＰ２は、マンノース結合性レクチンを介する補体系の活性化において、重要な役割を果たす、血清プロテアーゼである。自己触媒性切断による活性化の後、ＭＡＳＰ２は、Ｃ２及びＣ４を切断し、それらの活性化をもたらし、Ｃ３コンベルターゼの形成をもたらす（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｏ００１８７）。
本明細書において開示された通り、以下の軽度ＴＢＩバイオマーカー：ＡＮＸＡ６、ＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＤＩＡＰ１、ＤＮＭ１Ｌ、ＥＰＨＢ４、ＧＬＯ２、ＨＶ１０３、ＩＧＨＡ２、ＩＧＨＤ、ＰＬＯＤ１、ＳＢＳＮ、ＳＹＥＰ、ＭＹＬＫ及びＳＡＭＰもまた、単独で又は互いと組み合わせて、かつ、本節における他のバイオマーカーと組み合わせて検出された場合に、健常対象を、軽度ＴＢＩ及び／又は特殊なサブクラスの軽度ＴＢＩを負っている対象から識別することが可能であると同定された。これらのバイオマーカーについての記載は、上記においてなされたので、ここでは繰り返されない。
一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、対象が特定の下位分類の軽度ＴＢＩを負っていることを決定するのに使用されうる。特定の理論、基礎病因又は疾患機構に束縛されずに述べると、これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、軽度ＴＢＩを負っている対象を、４つのサブクラス（例えば、サブクラス１、サブクラス２、サブクラス３又はサブクラス４）のうちの１つへと分類するのに使用されうる。一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、対象が軽度ＴＢＩを負っていることを、対象に由来する試料中のこれらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対応するＴＢＩバイオマーカーの対照の対象における量、濃度及び／又は発現レベルより高度又は低度の量、濃度及び／又は発現レベルにおける検出に基づき決定するのに使用されうる。これらのＴＢＩバイオマーカーのレベルのうちの１つ以上の、対照の対象（例えば、ＴＢＩを負っていない対象）と比較した増大又は減少の、対象における測定又は検出は、対象が軽度ＴＢＩを負っていることを指し示すのに十分であることが可能であり、場合によって、対象が特定のサブクラスの軽度ＴＢＩを負っていることを指し示すのに十分でありうる。
例えば、ＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＳＢＳＮ、ＧＬＯ２、ＳＹＥＰ又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上の、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス４の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。場合によって、対照の対象によるレベルと比較して、高レベルのＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＳＢＳＮ、ＧＬＯ２、ＳＹＥＰ又はこれらの任意の組合せの、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス４の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。
一部の実施形態において、ＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＡＬＢＵ、ＴＨＩＭ、ＩＧＨＡ２、ＫＶ１３９又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上の、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス３の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。場合によって、対照の対象によるレベルと比較して、高レベルのＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＡＬＢＵ、ＴＨＩＭ、ＩＧＨＡ２、ＫＶ１３９又はこれらの任意の組合せの、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス３の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。
一部の実施形態において、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＳＢＳＮ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＤＹＬ１、ＰＳＡ、ＥＰＨＢ４又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上の、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス２の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。場合によって、対照の対象によるレベルと比較して、高レベルのＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＳＢＳＮ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＤＹＬ１、ＰＳＡ、ＥＰＨＢ４又はこれらの任意の組合せの、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス２の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。
他の実施形態において、Ｋ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ、ＥＰＨＢ４、ＦＢＬＮ３又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上の、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス１の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。場合によって、対照の対象によるレベルと比較して、高レベルのＫ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ、ＥＰＨＢ４、ＦＢＬＮ３又はこれらの任意の組合せの、ＴＢＩを負った可能性がある対象における検出又は測定は、対象がサブクラス１の軽度ＴＢＩを実際に負ったことを指し示しうる。
これらのＴＢＩバイオマーカーのレベルは、単独で又は軽度ＴＢＩのパネル若しくはシグネチャーの一部として組み合わせて検出又は測定されうる。
一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、ＴＢＩバイオマーカーとして同定されている場合もあり、同定されていない場合もある、他のバイオマーカーと共に含まれうる。例えば、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、ＡＮＸＡ６、ＭＡＳＰ２、ＭＹＬＫ、ＳＡＭＰ又はこれらの組合せのうちの１つ以上を含みうる、バイオマーカーのパネル内に含まれうる。場合によって、他のＴＢＩバイオマーカー及び非ＴＢＩバイオマーカーを伴う、ＴＢＩバイオマーカーのパネルは、個々のバイオマーカー単独より大きな程度において、ＴＢＩの診断の一助となりうる。
ｄ．除外のためのＴＢＩバイオマーカー
下記において記載される、以下のＴＢＩバイオマーカーは、単独又は組合せで検出された場合に、健常対象を、ＴＢＩを負っている対象から識別することが可能であると同定された。
ＳＨ３ドメイン結合グルタミン酸リッチ様タンパク質（ＳＨ３ＢＧＲＬ）
ＳＨ３ドメイン結合性グルタミン酸リッチ様タンパク質３は、ヒトにおいて、ＳＨ３ＢＧＲＬ３遺伝子によりコードされたタンパク質である。１０．５ｋＤａのタンパク質である、ＳＨ３結合性グルタミン酸リッチ様タンパク質３は、５．０の等電点を有する。ＳＨ３結合性グルタミン酸リッチ（ＳＨ３ＢＧＲ）遺伝子は、ヒト第２１染色体に位置する。２つの相同な遺伝子である、ＳＨ３ＢＧＲＬ及びＳＨ３ＢＧＲＬ３は、それぞれ、第Ｘｑ１３．３及び１ｐ３４．３〜３５染色体に位置し、ＳＨ３ＢＧＲタンパク質のＮ末端領域と類似する、小型のタンパク質をコードする。ＳＨ３ＢＧＲＬ３タンパク質は、Ｅ．コリのグルタレドキシン１との著明な類似性を示し、３つのタンパク質全ては、チオレドキシン様タンパク質ファミリーに属することが予測される。グルタレドキシン（ＧＲＸ）は、多くの細胞内タンパク質のジスルフィド還元を触媒する、遍在性のオキシドレダクターゼであり、多くの酸化還元経路において、重要な役割を果たす。しかし、ＳＨ３ＢＧＲＬ３タンパク質は、グルタレドキシンの酵素機能を欠き、酸化還元活性の調節因子としての役割を有しうる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｏ７５３６８）。
ベータ−アクチン様タンパク質２（ＡＣＴＢＬ又はＡＣＴＢＬ２）
ＡＣＴＢＬは、アクチンファミリーのメンバーである。アクチンは、多様な種類の細胞運動性に関与する、高度な保存的タンパク質であり、全ての真核細胞内において、遍在的に発現される（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ５６２Ｒ１）。
ミトコンドリアアルデヒドデヒドロゲナーゼ（ＡＬＤＨ２）
ＡＬＤＨ２は、アルデヒドの酸化を触媒する。「デヒドロゲナーゼ」という名称にも拘わらず、それらの酸化方式は、水素の除去ではなく、酸素の添加である（すなわち、ＡＬＤＨ２は、アルデヒド（Ｒ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｈ）を、カルボン酸（Ｒ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｈ）へと転換する。）。現在、ヒトゲノム内において、１９のＡＬＤＨ遺伝子が同定されている。ＡＬＤＨ遺伝子は、外因的及び内因的に発生したアルデヒドの解毒を含む、多種多様な生物学的過程に参与する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０５０９１）。
アネキシンＡ５（ＡＮＸＡ５）
ＡＮＸＡ５は、血液凝固カスケードに関与する、トロンボプラスチン特異的複合体の間接的阻害剤として作用する、抗凝固タンパク質である（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０８７５８）。
カテリシジン抗微生物性ペプチド（ＣＡＭＰ）
ＣＡＭＰは、細菌リポ多糖（ＬＰＳ）に結合し、抗菌活性を呈する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ４９９１３）。
コピン３（ＣＰＮＥ３）
ＣＰＮＥ３は、増殖因子であるヘレグリンの刺激に応答する、ＥＲＢＢ２媒介性腫瘍細胞遊走において役割を果たす、カルシウム依存性リン脂質結合性タンパク質である（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｏ７５１３１）。
軟骨酸性タンパク質１（ＣＲＡＣ１又はＣＲＴＡＣ１）
ＣＲＡＣ１は、関節深部層軟骨の領域間部基質内において見出された、グリコシル化細胞外マトリックスタンパク質をコードする。ＣＲＡＣ１は、培養物中の、軟骨細胞を、骨芽細胞及び間葉系幹細胞から識別するマーカーとして使用される。ＦＧ−ＧＡＰモチーフ及びＲＧＤインテグリン結合性モチーフの存在は、ＣＲＡＣ１タンパク質が、細胞間相互作用又は細胞−マトリックス間相互作用に関与しうることを示唆する。ＣＲＡＣ１遺伝子内のコピー数変化が、１型神経線維腫症関連グロームス腫瘍において観察されている。代替的スプライシングは、複数の転写物変異体を結果としてもたらす（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９ＮＱ７９）。
シスタチンＣ（ＣＹＴＣ又はＣＳＴ３）
システインプロテイナーゼの阻害剤として、ＣＹＴＣは、この酵素活性の局所的調節因子として、重要な生理学的役割を果たすと考えられる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０１０３４）。
アスパルチルアミノペプチダーゼ（ＤＮＰＥＰ）
ＤＮＰＥＰは、Ｎ末端における酸性アミノ酸に対する特異性を伴うアミノペプチダーゼである。ＤＮＰＥＰは、細胞内のタンパク質及びペプチドの代謝において、重要な役割を果たす可能性が高い（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９ＵＬＡ０）。
真核生物翻訳開始因子３サブユニットＩ（ＥＩＦ３Ｉ）
ＥＩＦ３Ｉは、タンパク質合成の開始におけるいくつかの段階に要求される、真核生物翻訳開始因子３（ｅＩＦ−３）複合体の構成要素である。ｅＩＦ−３複合体は、４０Ｓリボソームと会合し、４３Ｓ開始前複合体（４３Ｓ ＰＩＣ）を形成するように、ｅＩＦ−１、ｅＩＦ−１Ａ、ｅＩＦ−２：ＧＴＰ：メチオニル−ｔＲＮＡｉ及びｅＩＦ−５の動員を容易とする。ｅＩＦ−３複合体は、ｍＲＮＡの、４３Ｓ ＰＩＣへの動員及びｍＲＮＡの、ＡＵＧ認識についての走査を刺激する。ｅＩＦ−３複合体はまた、終結後のリボソーム複合体のディスアセンブリー及びリサイクリングにも要求され、その後、開始の前における、４０Ｓリボソームサブユニットと、６０Ｓリボソームサブユニットとの未成熟接合を防止する。ｅＩＦ−３複合体は、細胞周期、分化及びアポトーシスを含む細胞増殖に関与するｍＲＮＡのサブセットを特異的にターゲティングし、これらの翻訳を開始し、ＲＮＡステムループ結合の異なる方式を使用して、翻訳の活性化又は抑制を行う（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ１３３４７）。
グルタチオンシンセターゼ（ＧＳＨＢ又はＧＳＳ）
ＧＳＨＢは、グルタチオン（ＧＳＨ）生合成経路における、第２の酵素である。ＧＳＨＢは、ガンマ−グルタミルシステインとグリシンとの縮合を触媒して、グルタチオンを形成する。グルタチオンシンセターゼはまた、強力な抗酸化剤でもある。ＧＳＨＢは、細菌、酵母、哺乳動物及び植物を含む、多数の種において見出される。ヒトにおいて、ＧＳＳの欠損は、常染色体劣性により遺伝し、重度の代謝的アシドーシス、５−オキソプロリン尿症、溶血速度の増大及び中枢神経系の機能不全の原因となる。ＧＳＳの欠損は、植物及びヒトにおいて、同様に、あるスペクトルの有害な症状を引き起こしうる。真核生物において、ＧＳＳは、ホモ二量体の酵素である。基質結合性ドメインは、３層のアルファ／ベータ／アルファ構造を有する。この酵素は、その後、グリシンに対する好適な求核攻撃を実施するために、アシルリン酸中間体を用い、これを安定化させる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ４８６３７）。
細胞間接着分子１（ＩＣＡＭ１）
ＩＣＡＭ１タンパク質は、白血球接着タンパク質ＬＦＡ−１（インテグリンアルファ−Ｌ／ベータ−２）に対するリガンドである。白血球の経内皮遊走時に、ＩＣＡＭ１の係合は、ＡＲＨＧＥＦ２６／ＳＧＥＦ及びＲＨＯＧの活性化を介して、内皮頂端カップのアセンブリーを促進する。ＩＣＡＭ１は、主要な受容体群である、Ａ〜Ｂ型ライノウイルスカプシドタンパク質に対する受容体として作用する。ＩＣＡＭ１は、コックサッキーウイルスＡ２１カプシドタンパク質に対する受容体として作用する。カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス／ＨＨＶ−８感染時に、ＩＣＡＭ１は、おそらく、感染細胞の、細胞傷害性Ｔリンパ球及びＮＫ細胞による溶解を防止するために、ウイルスＥ３ユビキチンリガーゼであるＭＩＲ２により分解される（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０５３６２）。
（ＨＶ３２３又はＩＧＨＶ３−２３）
ＨＶ３２３は、抗原認識に参与する、免疫グロブリン重鎖の可変的ドメインのＶ領域である。抗体としてもまた公知の免疫グロブリンは、Ｂリンパ球により産生された、膜結合型又は分泌型の糖タンパク質である。体液性免疫の認識相において、膜結合型免疫グロブリンは、特異的な抗原が結合すると、Ｂリンパ球の、免疫グロブリンを分泌する血漿細胞への、クローン性の拡大及び分化を誘発する受容体として用いられる。分泌された免疫グロブリンは、体液性免疫のエフェクター相を媒介し、この結果として、結合した抗原の消失をもたらす。抗原結合性部位は、その会合する軽鎖の可変ドメインと併せた、１つの重鎖の可変ドメインにより形成される。したがって、各免疫グロブリンは、特定の抗原に対する、顕著なアフィニティーを伴う、２つの抗原結合性部位を有する。可変ドメインは、Ｖ−（Ｄ）−Ｊ再配列と呼ばれる過程によりアセンブルされ、次いで、体細胞超突然変異にかけられるが、これが、抗原への曝露及び選択の後、特定の抗原に対するアフィニティー成熟を可能とする（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０１７６４）。
ヘテロ核リボ核タンパク質Ｄ０（ＨＮＲＰＤ又はＨＮＲＮＰＤ）
ＨＮＲＰＤは、多くの原がん遺伝子及びサイトカインｍＲＮＡの３’−ＵＴＲ内に見出されたＡＵリッチエレメント（ＡＲＥ）を含有するＲＮＡ分子に、高アフィニティーにより結合する。ＨＮＲＰＤはまた、二本鎖及び一本鎖のＤＮＡ配列にも、特異的に結合し、転写因子として機能する。ＲＮＡ結合性ドメインの各々は、一本鎖非単調５’−ＵＵＡＧ−３’配列だけに特異的に結合することが可能であり、また、一本鎖５’−ＴＴＡＧＧＧ−３’テロメアＤＮＡリピートにも弱く結合しうる。ＨＮＲＰＤは、５’−ＵＵＡＧＧＧ−３’リピートを伴うＲＮＡオリゴヌクレオチドに、テロメア一本鎖ＤＮＡ ５’−ＴＴＡＧＧＧ−３’リピートより緊密に結合する。ＲＲＭ１の、ＤＮＡへの結合は、テロメアの伸長において、役割を果たしうる、ＤＮＡ四重鎖構造の形成を阻害する。ＨＮＲＰＤは、翻訳にカップリングしたｍＲＮＡ代謝回転に関与しうる。ＨＮＲＰＤは、細胞質内の、他のＲＮＡ結合性タンパク質と共に、不安定性（ｍＣＲＤ）ドメインの、主要なコード領域決定基により媒介された、ＦＯＳ ｍＲＮＡの細胞質脱アデニル化／翻訳−分解相互作用に関与する。ＨＮＲＰＤは、概日時計コア遺伝子のリズム発現の調節において、役割を果たしうる。ＨＮＲＰＤは、ＣＲＹ１ ｍＲＮＡの３’ＵＴＲに直接結合し、ＣＲＹ１のリズム翻訳を誘導する。ＨＮＲＰＤはまた、ＰＥＲ２翻訳の調節にも関与しうる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ１４１０３）。
免疫グロブリン可変カッパ１Ｄ−３３（ＫＶＤ３３又はＩＧＫＶ１Ｄ−３３）
ＫＶＤ３３は、抗原認識に参与する、免疫グロブリン軽鎖の可変的ドメインのＶ領域である。抗体としてもまた公知の免疫グロブリンは、Ｂリンパ球により産生された、膜結合型又は分泌型の糖タンパク質である。体液性免疫の認識相において、膜結合型免疫グロブリンは、特異的な抗原が結合すると、Ｂリンパ球の、免疫グロブリンを分泌する血漿細胞への、クローン性の拡大及び分化を誘発する受容体として用いられる。分泌された免疫グロブリンは、体液性免疫のエフェクター相を媒介し、この結果として、結合した抗原の消失をもたらす。抗原結合性部位は、その会合する軽鎖の可変ドメインと併せた、１つの重鎖の可変ドメインにより形成される。したがって、各免疫グロブリンは、特定の抗原に対する、顕著なアフィニティーを伴う、２つの抗原結合性部位を有する。可変ドメインは、Ｖ−（Ｄ）−Ｊ再配列と呼ばれる過程によりアセンブルされ、次いで、体細胞超突然変異にかけられるが、これが、抗原への曝露及び選択の後、特定の抗原に対するアフィニティー成熟を可能とする（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０１５９３）。
第ＩＸ凝固因子（ＦＡ９又はＦ９）
第ＩＸ因子は、Ｃａ２＋イオン、リン脂質及び第ＶＩＩＩａ因子の存在下において、第Ｘ因子を、その活性形態へと転換することにより、血液凝固の内因系経路に参与する、ビタミンＫ依存性血漿タンパク質である（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ００７４０）。
補体Ｈ因子関連タンパク質４（ＦＨＲ４又はＣＦＨＲ４）
ＦＨＲ４は、補体の調節に関与している。ＦＨＲ４は、リポタンパク質と会合することが可能であり、脂質代謝において、役割を果たしうる（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９２４９６）。
ＦＥＲＭ及びＰＤＺドメイン含有タンパク質１（ＦＲＰＤ１又はＦＲＭＰＤ１）
ＦＲＰＤ１は、膜結合型ＧＰＳＭ１を安定化させ、これにより、その、ＧＮＡＩ１との相互作用を促進するように作用する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ５ＳＹＢ０）。
熱ショックタンパク質ＨＳＰ９０ベータ（ＨＳ９０Ｂ又はＨＳＰ９０ＡＢ１）
ＨＳ９０Ｂは、例えば、細胞周期の制御及びシグナル伝達に関与する、特殊な標的タンパク質の成熟、構造維持及び適正な調節を促進する、分子シャペロンである。ＨＳ９０Ｂは、そのＡＴＰアーゼ活性と連関する機能サイクルを経る。このサイクルは、おそらく、クライアントタンパク質内のコンフォメーション変化を誘導し、これにより、それらの活性化を引き起こす。ＨＳ９０Ｂは、その基質認識、ＡＴＰアーゼサイクル及びシャペロン機能をモジュレートする、多様なコシャペロンと、動的に相互作用する。ＨＳ９０Ｂは、特異的クライアント及び中心的シャペロン自体と、同時に相互作用することが可能なアダプターとして作用する、多様なコシャペロンタンパク質又は複合体とのその相互作用を介して、ある範囲のクライアントタンパク質クラスと係合する。ＡＴＰ及びコシャペロンに続く、クライアントタンパク質の動員は、機能的シャペロンを形成する。シャペロニング過程が完了した後、適正にフォールディングしたクライアントタンパク質及びコシャペロンは、ＡＤＰが結合した、部分的にオープンなコンフォメーションにあるＨＳＰ９０を離れ、最終的に、ＡＤＰは、ＨＳＰ９０から放出され、ＨＳＰ９０は、次のサイクルのために、オープンコンフォメーションを獲得する。そのシャペロン活性を別として、ＨＳ９０Ｂはまた、転写機構の調節においても役割を果たす。ＨＳＰ９０及びそのコシャペロンは、少なくとも３つの異なるレベルにおいて、転写をモジュレートする。まず、ＨＳＰ９０及びそのコシャペロンは、多様な生理学的キューに応答して、ある特定の転写因子の定常状態レベルを変更する。第２に、ＨＳＰ９０及びそのコシャペロンは、ヒストンデアセチラーゼ又はＤＮＡメチルトランスフェラーゼなど、ある特定の後成的修飾因子の活性をモジュレートし、これにより、環境の変化に応答する。第３に、ＨＳＰ９０及びそのコシャペロンは、ヒストンの、ある特定の遺伝子のプロモーター領域からの排除に関与し、これにより、遺伝子の発現をオンにする。ＨＳ９０Ｂは、ＳＴＵＢ１媒介性のＳＭＡＤ３のユビキチン化及び分解の阻害を介する、ＴＧＦベータシグナル伝達の、ＳＴＵＢ１媒介性阻害にアンタゴナイズする。ＨＳ９０Ｂは、ＢＩＲＣ２をシャペロニングし、これにより、ＢＩＲＣ２を、プロテアソーム機構による自己ユビキチン化及び分解から保護することにより、細胞分化を促進する。ＨＳ９０Ｂは、熱ショック下において、ＪＡＫ２及びＰＲＫＣＥの両方をシャペロニングし、その固有の転写を活性化させることにより、ＳＴＡＴ１のリン酸化／活性化に関与する、主なシャペロンである（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０８２３８）。
アルファ−マンノシダーゼ２（ＭＡ２Ａ１又はＭＡＮ２Ａ１）
ＭＡ２Ａ１は、複合体Ｎ−グリカンの生合成における、最初の関与段階を触媒する。ＭＡ２Ａ１は、Ｎ−グリカン成熟経路における最終的な加水分解段階である、高マンノースの、複合体Ｎ−グリカンへの転換を制御する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ１６７０６）。
プレニルシステインオキシダーゼ１（ＰＣＹＯＸ又はＰＣＹＯＸ１）
ＰＣＹＯＸは、プレニル化タンパク質の分解に関与している。ＰＣＹＯＸは、ファルネシルシステイン及びゲラニルゲラニルシステインなどのプレニル−Ｌ−システインのチオエーテル結合を切断する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９ＵＨＧ３）。
プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＰＮＰＨ又はＰＮＰ）
ＰＮＰＨは、ベータ−（デオキシ）リボヌクレオシド分子内の、Ｎ−グリコシド結合の、加リン酸分解性分解を触媒し、対応する遊離プリン塩基及び五炭糖−１−リン酸の形成をもたらす、プリンヌクレオシドホスホリラーゼである（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ００４９１）。
ビタミンＫ依存性タンパク質Ｃ（ＰＲＯＣ）
ＰＲＯＣは、カルシウムイオン及びリン脂質の存在下における、第Ｖａ因子及び第ＶＩＩＩａ因子の不活化により、血液凝固を調節する、ビタミンＫ依存性セリンプロテアーゼである。ＰＲＯＣは、内皮細胞の障壁機能に対して、保護効果を及ぼす（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ０４０７０）。
６０Ｓリボソームタンパク質Ｌ３（ＲＬ３又はＲＰＬ３）
ＲＬ３は、細胞質リボソームの大型サブユニットの構成要素である（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ３９０２３）。
セリン／アルギニン反復マトリックスタンパク質２（ＳＲＲＭ２）
ＳＲＲＭ２は、プレｍＲＮＡのスプライシングに関与している。ＳＲＲＭ２は、スプライセオソームの触媒中心における、スプライシングの第１の触媒段階において又はこの前に機能しうる。ＳＲＲＭ２は、触媒中心又はＲＮＡ基質の位置を安定化させることにより機能しうる（類似性による）。ＳＲＲＭ２は、ＲＮＡに結合する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９ＵＱ３５）。
チューブリンベータ１鎖（ＴＢＢ１又はＴＵＢＢ１）
ＴＢＢＩは、微小管の主要な構成物質である、チューブリンのサブユニットである。ＴＢＢＩは、１モルが、ベータ鎖上の可換部位にあり、１モルが、アルファ鎖上の非可換部位にある、２モルのＧＴＰ（類似性による）に結合する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ９Ｈ４Ｂ７）。
テネイシン（ＴＥＮＡ又はＴＮＣ）
ＴＥＮＡは、遊走するニューロン並びに発生時、シナプス可塑性時のアクソン並びにニューロンの再生の誘導に関与する、細胞外マトリックスタンパク質である。ＴＥＮＡは、単層の星状細胞上において増殖した皮質ニューロンからの神経突起伸長を促進する。ＴＥＮＡは、インテグリンアルファ８／ベータ１、アルファ９／ベータ１、アルファＶ／ベータ３及びアルファＶ／ベータ６に対するリガンドである。腫瘍内において、ＴＥＮＡは、内皮細胞の伸長、遊走及び発芽により、血管新生を刺激する（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｐ２４８２１）。
ミトコンドリア７５ｋＤａ熱ショックタンパク質（ＴＲＡＰ１）
ＴＲＡＰ１は、ＡＴＰアーゼ活性を発現させるシャペロンである。ＴＲＡＰ１は、ＰＩＮＫ１及びミトコンドリア複合体Ｉの下流において、ミトコンドリアの機能及び極性化を維持することに関与している。ＴＲＡＰ１は、酸化的リン酸化と、好気的解糖との平衡をモジュレートすることが可能な、ミトコンドリア呼吸の、負の調節因子である。ＴＲＡＰ１の、ミトコンドリア呼吸に対する影響は、おそらく、ミトコンドリアＳＲＣのモジュレーション及びＳＤＨＡの阻害により媒介される（ＵｎｉＰｒｏｔ基本受託番号：Ｑ１２９３１）。
一部の実施形態において、上記において列挙された、ＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、対象がＴＢＩを負っていないことを、これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対象に由来する試料中の検出に基づき決定するのに使用されうる（除外のためのＴＢＩバイオマーカー）。これらのＴＢＩバイオマーカーは、ＡＣＴＢＬ、ＡＬＤＨ２、ＡＮＸＡ５、ＣＡＭＰ、ＣＰＮＥ３、ＣＲＡＣ１、ＣＹＴＣ、ＤＮＰＥＰ、ＥＩＦ３Ｉ、ＧＳＨＢ、ＩＣＡＭ１、ＨＶ３２３、ＨＮＲＰＤ、ＫＶＤ３３、ＦＡ９、ＦＨＲ４、ＦＲＰＤ１、ＨＳ９０Ｂ、ＭＡ２Ａ１、ＰＣＹＯＸ、ＰＮＰＨ、ＰＲＯＣ、ＲＬ３、ＳＨ３Ｌ３、ＳＲＲＭ２、ＴＢＢ１、ＴＥＮＡ、ＴＲＡＰ１又はこれらの任意の組合せのうちの１つ以上を含みうる。これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対象における測定又は検出は、対象がＴＢＩを負っていないことを、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーの、対照の対象における量、濃度及び／又は発現レベルを検出、測定、比較及び／又は定量する必要から独立して指し示すのに十分でありうる。これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上は、ＴＢＩを負っている対象において存在しうるが、これは一般に、本明細書において記載された、従来の手段を介する検出が可能ではない量において存在する。したがって、場合によって、これらのＴＢＩバイオマーカーのうちの１つ以上の、対象における検出は、対象がＴＢＩを負っていないことを指し示す。これらのＴＢＩバイオマーカーのレベルは、単独で又は軽度ＴＢＩのパネル若しくはシグネチャーの一部として組み合わせて検出又は測定されうる。
７．ＴＢＩバイオマーカーのレベルを測定するための方法
上記において記載された方法において、ＴＢＩバイオマーカーレベルは、イムノアッセイ、タンパク質免疫沈降、免疫電気泳動、化学解析、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及びウェスタンブロット解析若しくはタンパク質免疫染色などの抗体依存的方法、電気泳動解析、タンパク質アッセイ、競合的結合アッセイ、機能的タンパク質アッセイ又は高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、質量分析法若しくは液体クロマトグラフィー−質量分析（ＬＣ／ＭＳ）又はキャピラリー電気泳動（ＣＥ）−ＭＳ、若しくは直接的注入、若しくはＭＳとカップリングさせた任意の分離前工程などのクロマトグラフィー法又は分光法など、任意の手段により測定されうる。また、当業者に公知の臨床化学フォーマットのアッセイも利用されうる。
一部の実施形態において、ＴＢＩバイオマーカーのレベルを測定するステップは、試料を、第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーと接触させるステップを含む。一部の実施形態において、第１の特異的結合メンバーは、捕捉抗体であり、第２の特異的結合メンバーは、検出抗体である。一部の実施形態において、ＴＢＩバイオマーカーのレベルを測定するステップは、試料を、同時に又は逐次的に、任意の順序において、（１）ＴＢＩバイオマーカー上又はＴＢＩバイオマーカー断片上のエピトープに結合して、捕捉抗体−ＴＢＩバイオマーカー抗原複合体（例えば、ＴＢＩバイオマーカー捕捉抗体−ＴＢＩバイオマーカー抗原複合体）を形成する捕捉抗体（例えば、ＴＢＩバイオマーカー捕捉抗体）及び（２）検出可能な標識を含み、捕捉抗体が結合していないＴＢＩバイオマーカー上のエピトープに結合して、ＴＢＩバイオマーカー抗原−検出抗体複合体（例えば、ＴＢＩバイオマーカー抗原−ＴＢＩバイオマーカー検出抗体複合体）を形成する、検出抗体（例えば、ＴＢＩバイオマーカー検出抗体）と接触させて、捕捉抗体−ＴＢＩバイオマーカー抗原−検出抗体複合体（例えば、ＴＢＩバイオマーカー捕捉抗体−ＴＢＩバイオマーカー抗原−ＴＢＩバイオマーカー検出抗体複合体）を形成すること、並びにＴＢＩバイオマーカーの、試料中量又は試料中濃度を、捕捉抗体−ＴＢＩバイオマーカー抗原−検出抗体複合体内の検出可能な標識により発生したシグナルに基づき測定することを含む。
一部の実施形態において、第１の特異的結合メンバーは、固体支持体上に固定化される。一部の実施形態において、第２の特異的結合メンバーは、固体支持体上に固定化される。一部の実施形態において、第１の特異的結合メンバーは、下記で記載されるＴＢＩバイオマーカー抗体である。
一部の実施形態において、試料は、希釈される又は希釈されない。試料は、約１〜約２５マイクロリットル、約１〜約２４マイクロリットル、約１〜約２３マイクロリットル、約１〜約２２マイクロリットル、約１〜約２１マイクロリットル、約１〜約２０マイクロリットル、約１〜約１８マイクロリットル、約１〜約１７マイクロリットル、約１〜約１６マイクロリットル、約１５マイクロリットル又は約１マイクロリットル、約２マイクロリットル、約３マイクロリットル、約４マイクロリットル、約５マイクロリットル、約６マイクロリットル、約７マイクロリットル、約８マイクロリットル、約９マイクロリットル、約１０マイクロリットル、約１１マイクロリットル、約１２マイクロリットル、約１３マイクロリットル、約１４マイクロリットル、約１５マイクロリットル、約１６マイクロリットル、約１７マイクロリットル、約１８マイクロリットル、約１９マイクロリットル、約２０マイクロリットル、約２１マイクロリットル、約２２マイクロリットル、約２３マイクロリットル、約２４マイクロリットル又は約２５マイクロリットルでありうる。一部の実施形態において、試料は、約１〜約１５０マイクロリットル若しくはこれ未満又は約１〜約２５マイクロリットル若しくはこれ未満である。
ポイントオブケアデバイス以外の、一部の測定器（例えば、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製の測定器であるＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ Ａｌｉｎｉｔｙ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ及び他のコア検査測定器など）は、変動係数を１０％以下として、ＴＢＩバイオマーカーの、約０．０３２μｇ／Ｌの試料中レベルを測定することが可能でありうる。他の検出法は、ナノポアデバイス又はナノウェルデバイスの使用を含む又はこれらにおける使用に適合させうる。ナノポアデバイスの例については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれている、国際特許公開第ＷＯ２０１６／１６１４０２号において記載されている。ナノウェルデバイスの例については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれている、国際特許公開第ＷＯ２０１６／１６１４００号において記載されている。
ａ．質量分析による検出
本明細書において使用された、「ＭＳデータ」とは、一般に、質量分析計から得られた、生のＭＳデータ並びに／又はペプチド及びそれらのフラグメント（例えば、遷移及びＭＳピーク）が既に同定、解析及び／若しくは定量された処理されたＭＳデータを指す。本開示の一部の実施形態において、ＭＲＭ−ＭＳ若しくはＳＲＭ−ＭＳ及び／又はＰＲＭ−ＭＳに基づく方法は、特殊なペプチドの、複雑な混合物中の、検出及び正確な定量を可能とする。ＳＲＭ／ＭＲＭ−ＭＳは、複雑な試料中の存在度が小さい物質の、信頼でき、かつ、包括的な定量に対する、潜在的可能性を伴う技術である。ＳＲＭ／ＭＲＭ−ＭＳは、三連四重極様測定器上において実施されるが、この場合、選択性の増大は、衝突誘導解離を介して得られる。２つの質量分析器（Ｑ１及びＱ３）を、静的質量フィルターとして使用して、選択された前駆体の特定のフラグメントをモニタリングするのは、非走査型質量分析法である。三連四重極型測定器上において、限定せずに述べると、エレクトロスプレーイオン化、化学イオン化、電子イオン化、大気圧化学イオン化及びマトリックス支援レーザー脱着イオン化を含む、多様なイオン化法が使用されうる。第１の質量分析器及びコリジョンセルは、いずれも、供給源からのイオンへと、時間依存的に、持続的に曝露されている。イオンが、第３の質量分析器へと移動すると、時間依存性は、因子となる。三連四重極型測定器上において、第１の四重極質量フィルターである、Ｑ１は、試料が、イオン化供給源を離れた後における、一次ｍ／ｚ選別器である。選択された質量対電荷比以外の質量対電荷比を伴うイオンは、Ｑ１に進入することが許容されない。「ｑ２」と表記され、第１の四重極質量フィルターＱ１と、第２の四重極質量フィルターＱ３との間に配置されたコリジョンセルは、試料のフラグメンテーションが、アルゴン、ヘリウム又は窒素などの不活性ガスの存在下において生じる場所である。次いで、コリジョンセルから出ると、フラグメント化されたイオンは、第２の四重極質量フィルターであるＱ３へと移り、ここで、ｍ／ｚの選択が、再度生じうる。
前駆体及び選択されたフラグメントイオンと関連する、質量対電荷（ｍ／ｚ）値の特殊な対は、「遷移」と称される。検出器は、選択された遷移に合致するイオンについてのカウンティングデバイスとして作用し、これにより、時間経過にわたる強度分布を返す。ＭＲＭ−ＭＳとは、異なる前駆体／フラグメント対の間を、迅速に切り替えることにより、複数のＳＲＭ−ＭＳ遷移を、クロマトグラフィーによる時間スケール上の、同じ実験内において測定する場合である。典型的に、三連四重極型測定器は、一連の遷移を循環し、各遷移のシグナルを、溶出時間の関数として記録する。方法は、所与の解析物についての、複数の遷移の、クロマトグラフィーによる共溶出をモニタリングすることにより、さらなる選択性を可能とする。
質量分析及びプロテオミクスに対する、一般的な参考文献について、例えば、Ｓａｌｖａｔｏｒｅ Ｓｅｃｈｉ、「Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ｂｙ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ」（「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」）、２版、２０１６年版、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ、２００９）；Ｄａｎｉｅｌ Ｍａｒｔｉｎｓ−ｄｅ−Ｓｏｕｚａ、「Ｓｈｏｔｇｕｎ Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、２０１４年版、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ、２０１４）；Ｊｏｒｇ Ｒｅｉｎｄｅｒｓ及びＡｌｂｅｒｔ Ｓｉｃｋｍａｎｎ、「Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ： Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」（「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」）、２００９年版、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ、２００９）並びにＪｏｒｇ Ｒｅｉｎｄｅｒｓ、「Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃｓ ｉｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」（「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ」）、１版、２０１６年版、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ、２００９）を参照されたい。
加えて、高分解度質量分析計を使用して、単一の解析において、全ての遷移についての、並列的検出を伴う、ＳＲＭも適用されうる。ＰＲＭ−ＭＳは、選択されたペプチドを定量し（Ｑ１）、よって、タンパク質を定量するための、高選択性、高感度及びハイスループットをもたらす（ＭＳ１）。ここでもまた、各タンパク質について、複数のペプチドが、特異的に選択されうる。ＰＲＭ−ＭＳ法は、質量分析計の四重極を使用して、標的前駆体イオンを単離し、ターゲティングされた前駆体イオンを、コリジョンセル内においてフラグメント化し、次いで、結果として得られるプロダクトイオンを、Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析器内において検出する。定量は、データ収集の後、１つ以上のフラグメントイオンを、５〜１０ｐｐｍの質量ウインドウにより抽出することにより実行される。ＰＲＭ−ＭＳは、四重極飛行時間（ＱＴＯＦ）質量分析計又は四重極−Ｏｒｂｉｔｒａｐハイブリッド型（ＱＯｒｂｉｔｒａｐ）質量分析計を使用して、ペプチド／タンパク質定量化を実行する。ＱＴＯＦの例は、ＴｒｉｐｌｅＴＯＦ ６６００又は５６００システム（Ｓｃｉｅｘ）；Ｘ５００Ｒ ＱＴＯＦシステム（Ｓｃｉｅｘ）；６５００シリーズのＡｃｃｕｒａｔｅ−Ｍａｓｓ Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ Ｔｉｍｅ−ｏｆ−Ｆｌｉｇｈｔ （Ｑ−ＴＯＦ）（Ａｇｉｌｅｎｔ）又はＸｅｖｏ Ｇ２−ＸＳ ＱＴｏｆ Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ Ｔｉｍｅ−ｏｆ−Ｆｌｉｇｈｔ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ（Ｗａｔｅｒｓ）を含むがこれらに限定されない。ＱＯｂｉｔｒａｐの例は、Ｑ Ｅｘａｃｔｉｖｅ Ｈｙｂｒｉｄ Ｑｕａｄｒｕｐｏｌｅ−Ｏｒｂｉｔｒａｐ Ｍａｓｓ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）又はＯｒｂｉｔｒａｐ Ｆｕｓｉｏｎ Ｔｒｉｂｒｉｄ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を含むがこれらに限定されない。
一部の実施形態において、本明細書において開発された方法は、生物学的試料（複数可）中の、ポリペプチド（複数可）又はタンパク質（複数可）の定量へと適用されうる。ポリペプチド又はタンパク質を含む、任意の種類の生物学的試料が、出発点で有ることが可能であり、本明細書において開示された方法により解析されうる。実際、任意のタンパク質／ペプチド含有試料（例えば、組織、細胞）は、本明細書においてもたらされた方法のために使用されることが可能であり、これにより解析されうる。本明細書における方法はまた、消化により得られたペプチド混合物と共に使用される場合もある。ポリペプチド又はタンパク質の消化は、酵素的切断戦略、化学的切断戦略、物理的切断戦略又はこれらの組合せなど、任意の種類の切断戦略を含む。一部の実施形態に従い、本明細書において提示される方法の、以下のパラメータ：トリプシン（又は他のプロテアーゼ）による消化及びペプチドの除去、応答が最良のポリペプチド、応答が最良のタンパク質、応答が最良のペプチド、応答が最良の断片、フラグメント強度比（高ピーク強度及び再現可能なピーク強度の増大）、最適の衝突エネルギー及び方法の感度及び／又は特異度を最大化する、全ての最適のパラメータが決定される。
他の実施形態において、ポリペプチド及び／若しくは対応するタンパク質の定量又は対応するタンパク質の活性／調節が所望される。選択されたペプチドは、安定的同位体により標識され、目的のタンパク質の、絶対的定量を達成する、内部標準物質（ＳＩＬ）として使用される。定量された安定標識ペプチド類似体によるタグを、ペプチド試料へと、公知の量において添加し；その後、タグ及び目的のペプチドを、質量分析により定量し、タンパク質の内因性レベルの絶対的定量を得る。
本開示の一部の実施形態においてバイオマーカーは、上記において記載した、気相イオンを検出する質量分析計を利用する方法である、質量分析により検出されうる。質量分析計の例は、飛行時間、磁気セクター、四重極フィルター、イオントラップ、イオンサイクロトロン共鳴、静電セクター解析器、前出のハイブリッド又は組合せなどである。一実施形態において、質量分析法は、マトリックス支援レーザー脱着／イオン化飛行時間（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ又はＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ）を含む。別の実施形態において、方法は、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦタンデム質量分析（ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ ＭＳ／ＭＳ）を含む。さらに別の実施形態において、質量分析は、当業者により想定されうる、別の適切な方法（複数可）と組み合わされうる。例えば、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦは、本明細書において記載されたトリプシン消化及びタンデム質量分析又は富化と共に用いられうる。別の実施形態において、質量分析法は、多重反応モニタリング（ＭＲＭ）又は定量的ＭＲＭである。
一部の実施形態において、質量分析法は、バイオマーカーに結合するクロマトグラフィー特性を有することクロマトグラフィー樹脂上において、１つ以上のバイオマーカーを捕捉することにより、第１の富化を伴う。例えば、バイオマーカーを、ＣＭ Ｃｅｒａｍｉｃ ＨｙｐｅｒＤ Ｆ樹脂などのカチオン交換樹脂上において捕捉し、樹脂を洗浄し、バイオマーカーを溶出させ、ＭＡＬＤＩにより検出しうる。代替的に、この方法に先だって、カチオン交換樹脂への適用の前に、試料を、アニオン交換樹脂上において分画することもできる。一実施形態において、アニオン交換樹脂上において分画し、ＭＡＬＤＩにより、直接検出することもできる。別の実施形態において、バイオマーカーを、バイオマーカーに結合する抗体を含むイムノクロマトグラフィー樹脂上において捕捉し、樹脂を洗浄して、結合しなかった素材を除去し、バイオマーカーを、樹脂から溶出させ、溶出させたバイオマーカーを、ＭＡＬＤＩにより又は別のＭＳ測定器上において（定量のための任意の方法を使用して）検出することもできる。
本開示のバイオマーカーはまた、他の適切な方法によっても検出されうる。この目的に利用されうる検出パラダイムは、光学法、電気化学法（電圧測定法及び電流測定法技法）、原子間力顕微鏡法及びラジオ周波数法、例えば、多重極共鳴分光法を含む。共焦点顕微鏡法及び非共焦点顕微鏡法の両方に加えて、光学法の例は、蛍光、発光、化学発光、吸光度、反射率、透過率及び複屈折又は屈折率の検出（例えば、表面プラズモン共鳴、偏光解析法、共振ミラー法、グレーティングカプラー導波路法又は干渉法）である又は任意のＭＳ測定器及び任意のＭＳ法を使用する質量分析による。
８．ＴＢＩバイオマーカー認識抗体
本明細書において記載された方法は、「ＴＢＩバイオマーカー抗体」と称される、ＴＢＩバイオマーカー又はこの断片に特異的に結合する単離抗体を使用しうる。ＴＢＩバイオマーカー抗体は、ＴＢＩバイオマーカー状態を、外傷性脳損傷の尺度として評価する、ＴＢＩバイオマーカーの、生体試料中の存在を検出する、ＴＢＩバイオマーカーの、生体試料中に存在する量を定量する又はＴＢＩバイオマーカーの、生体試料中の存在を検出し、かつ、ＴＢＩバイオマーカーの、生体試料中量を定量するのに使用されうる。
ＴＢＩバイオマーカー抗体は、ＴＢＩバイオマーカー、この断片、ＴＢＩバイオマーカーのエピトープ又はこの変異体に結合する、任意の抗体を含む。抗体は、抗ＴＢＩバイオマーカー抗体の断片又はこの変異体若しくは誘導体でありうる。抗体は、ポリクローナル又はモノクローナル抗体でありうる。抗体は、キメラ抗体、単鎖抗体、アフィニティー成熟抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体若しくはＦａｂ断片などの抗体断片又はこれらの混合物でありうる。抗体の断片又は誘導体は、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片又はｓｃＦｖ断片を含みうる。抗体の誘導体は、ペプチド模倣体により作製されうる。さらに、単鎖抗体を作製するために記載されている技法は、単鎖抗体を作製するように適合させうる。
抗ＴＢＩバイオマーカー抗体は、キメラ抗ＴＢＩバイオマーカー抗体又はヒト化抗ＴＢＩバイオマーカー抗体でありうる。一実施形態において、ヒト化抗体及びキメラ抗体のいずれも、一価である。一実施形態において、ヒト化抗体及びキメラ抗体のいずれも、Ｆｃ領域へと連結された、単一のＦａｂ領域を含む。
ヒト抗体は、ファージディスプレイ技術又はヒト免疫グロブリン遺伝子を発現させるトランスジェニックマウスにより導出されうる。ヒト抗体は、ヒトのインビボにおける免疫応答の結果として作出及び単離されうる。例えば、Ｆｕｎａｒｏら、ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２００８（８）：８５を参照されたい。したがって、抗体は、ヒトの産物であることが可能であり、動物レパートリーではない場合がある。抗体は、ヒト由来であるため、自己抗原に対する反応性の危険性は、最小化しうる。代替的に、標準的な酵母ディスプレイライブラリー及び酵母ディスプレイ技術は、ヒト抗ＴＢＩバイオマーカー抗体を選択及び単離するのに使用されうる。例えば、ナイーブヒト単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）のライブラリーは、ヒト抗ＴＢＩバイオマーカーＩ抗体を選択するのに使用されうる。トランスジェニック動物は、ヒト抗体を発現させるのに使用されうる。
ヒト化抗体は、所望の抗原に結合する非ヒト種抗体に由来する抗体分子であって、非ヒト種に由来する、１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）及びヒト免疫グロブリン分子に由来するフレームワーク領域を有する抗体分子でありうる。
抗体は、それが、当技術分野において公知の抗体と異なる生物学的機能を保有するという点において、公知の抗体と識別可能である。
抗体は、ＴＢＩバイオマーカーのペプチド、この断片又はこの変異体に免疫特異的に結合しうる。抗体は、エピトープ領域内の、少なくとも３アミノ酸、少なくとも４アミノ酸、少なくとも５アミノ酸、少なくとも６アミノ酸、少なくとも７アミノ酸、少なくとも８アミノ酸、少なくとも９アミノ酸又は少なくとも１０アミノ酸を免疫特異的に認識することが可能であり、これらに結合しうる。抗体は、エピトープ領域のうちの、少なくとも３連続アミノ酸、少なくとも４連続アミノ酸、少なくとも５連続アミノ酸、少なくとも６連続アミノ酸、少なくとも７連続アミノ酸、少なくとも８連続アミノ酸、少なくとも９連続アミノ酸又は少なくとも１０連続アミノ酸を有するエピトープを免疫特異的に認識することが可能であり、これらに結合しうる。
９．抗体の調製／作製
抗体は、当業者に周知の技法を含む、様々な技法のうちのいずれかにより調製されうる。一般に、抗体は、従来の技法を介する又は抗体の遺伝子、重鎖及び／若しくは軽鎖の、適切な細菌細胞宿主若しくは哺乳動物細胞宿主へのトランスフェクションであって、組換えでありうる抗体の作製を可能とするためのトランスフェクションを介する、モノクローナル抗体の作出を含む細胞培養法により作製されうる。「トランスフェクション」という用語の多様な形態は、外因性ＤＮＡの、原核宿主細胞又は真核宿主細胞への導入のために一般に使用されている、多種多様な技法、例えば、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、ＤＥＡＥ−デキストラントランスフェクションなどを包含することが意図される。抗体を、原核宿主細胞又は真核宿主細胞において発現させることが可能であるが、そのような真核細胞（そして、特に、哺乳動物細胞）は、原核細胞より、アセンブルし、適正にフォールディングされ、免疫学的に活性である抗体を分泌する可能性が高いため、抗体の、真核細胞内の発現が好ましく、哺乳動物宿主細胞内の発現が最も好ましい。
組換え抗体を発現させるための、例示的な哺乳動物宿主細胞は、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ及びＳｈａｒｐ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１５９：６０１〜６２１（１９８２）において記載されているように、ＤＨＦＲ選択用マーカーと共に使用されるチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、７７：４２１６〜４２２０（１９８０）において記載されているｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞を含む）、ＮＳ０骨髄腫細胞、ＣＯＳ細胞及びＳＰ２細胞を含む。抗体遺伝子をコードする組換え発現ベクターが、哺乳動物宿主細胞へと導入される場合、抗体は、宿主細胞内の抗体の発現又は、より好ましくは、宿主細胞が増殖する培養培地への抗体の分泌を可能とするのに十分な時間にわたり、宿主細胞を培養することにより作製される。抗体は、標準的なタンパク質精製法を使用して、培養培地から回収されうる。
宿主細胞はまた、Ｆａｂ断片又はｓｃＦｖ分子などの機能的抗体断片を作製するのにも使用されうる。上記の手順に対する変化形も実施されうることが理解される。例えば、宿主細胞に、抗体の軽鎖及び／又は重鎖の機能的断片をコードするＤＮＡをトランスフェクトすることが所望されうる。組換えＤＮＡ技術はまた、目的の抗原への結合に必要でない軽鎖及び重鎖の一方又は両方をコードするＤＮＡの一部又は全部を除去するのにも使用されうる。また、このような切断型ＤＮＡ分子から発現した分子も、抗体に包含される。加えて、１つの重鎖及び１つの軽鎖が、抗体（すなわち、ヒトトロポニンＩに結合する）であり、他の重鎖及び軽鎖が、ヒトＴＢＩバイオマーカー以外の抗原に特異的である、二官能性抗体も、抗体を、標準的な化学的架橋法を介して、第２の抗体へと架橋することにより作製されうる。
抗体又はこの抗原結合性部分を組換え発現させるための好ましい系において、抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクターが、リン酸カルシウム媒介型トランスフェクションにより、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞へと導入される。組換え発現ベクター内において、高レベルの遺伝子の転写を駆動するように、抗体重鎖遺伝子及び抗体軽鎖遺伝子の各々が、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントへと作動的に連結される。組換え発現ベクターはまた、メトトレキサートによる選択／増幅を使用するベクターをトランスフェクトされたＣＨＯ細胞の選択を可能とするＤＨＦＲ遺伝子も保有する。抗体の重鎖及び軽鎖の発現を可能とするように、選択された形質転換体の宿主細胞が培養され、無傷抗体が培養培地から回収される。組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞にトランスフェクトし、形質転換体について選択し、宿主細胞を培養し、抗体を培養培地から回収するのに、標準的な分子生物学法が使用される。なおさらに、組換え抗体を合成する方法は、組換え抗体が合成されるまで、宿主細胞を、適切な培養培地中において培養することによることが可能である。方法は、組換え抗体を、培養培地から単離するステップをさらに含みうる。
モノクローナル抗体を調製する方法は、所望の特異性を有する抗体を作製することが可能な不死細胞株の調製を伴う。このような細胞株は、免疫化された動物から得られた脾臓細胞から作製されうる。動物は、ＴＢＩバイオマーカー又はこの断片及び／若しくは変異体により免疫化されうる。動物を免疫化するのに使用されるペプチドは、ヒトＦｃ、例えば、ヒト抗体の断片結晶化可能領域又はテール領域をコードするアミノ酸を含みうる。次いで、脾臓細胞が、例えば、骨髄腫細胞融合パートナーとの融合により不死化されうる。様々な融合法が利用されうる。例えば、脾臓細胞及び骨髄腫細胞が、非イオン性洗浄剤と、数分間にわたり組み合わされ、次いで、低密度において、ハイブリッド細胞の増殖を支援するが、骨髄腫細胞の増殖を支援しない、選択培地上に播種される。このような一技法は、ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン（ＨＡＴ）選択を使用する。別の技法は、電気融合を含む。十分な時間、通例、約１〜２週間の後、ハイブリッド体のコロニーが観察される。単一のコロニーが選択され、それらの培養物上清は、ポリペプチドに対する結合活性について調べられる。高度な反応性及び特異性を有するハイブリドーマが使用されうる。
モノクローナル抗体は、増殖するハイブリドーマコロニーの上清から単離されうる。加えて、収率を増強するように、ハイブリドーマ細胞株の、マウスなどの、適切な脊椎動物宿主の腹腔への注射など、多様な技法が利用されうる。次いで、モノクローナル抗体は、腹水又は血液から採取されうる。夾雑物は、クロマトグラフィー、ゲル濾過、沈殿及び抽出など、従来の技法により、抗体から除去されうる。アフィニティークロマトグラフィーは、抗体を精製する工程において使用されうる方法の例である。
タンパク質分解酵素であるパパインは、優先的にＩｇＧ分子を切断して、それらのうちの２つ（Ｆ（ａｂ）断片）の各々が、無傷の抗原結合部位を含む、共有結合的ヘテロ二量体を含む、いくつかの断片をもたらす。酵素であるペプシンは、ＩｇＧ分子を切断して、両方の抗原結合性部位を含む、Ｆ（ａｂ’）２断片を含む、いくつかの断片をもたらすことが可能である。
Ｆｖ断片は、ＩｇＭの、優先的なタンパク質分解性切断により作製されうるが、まれな場合に、ＩｇＧ免疫グロブリン分子又はＩｇＡ免疫グロブリン分子の優先的なタンパク質分解性切断によっても作製されうる。Ｆｖ断片は、組換え法を使用して導出されうる。Ｆｖ断片は、天然抗体分子の抗原認識能及び抗原結合能の大半を保持する抗原結合性部位を含む、非共有結合的ＶＨ：：ＶＬヘテロ二量体を含む。
抗体、抗体断片又は誘導体は、それぞれ、ＣＤＲに対する支持をもたらし、ＣＤＲの、互いに対する空間的関係を規定する、重鎖及び軽鎖のフレームワーク（「ＦＲ」）のセットの間に挿入された、重鎖及び軽鎖の相補性決定領域（「ＣＤＲ」）のセットを含みうる。ＣＤＲのセットは、重鎖Ｖ領域又は軽鎖Ｖ領域からなる、３つの超可変領域を含有しうる。
必須の特異性を有する抗体を作製又は単離する、他の適切な方法であって、当技術分野において公知の方法を使用して、例えば、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｈｉｒｅ、ＵＫ）、ＭｏｒｐｈｏＳｙｓ（Ｍａｒｔｉｎｓｒｅｉｄ／Ｐｌａｎｅｇｇ、Ｄｅｌ．）、Ｂｉｏｖａｔｉｏｎ（Ａｂｅｒｄｅｅｎ、Ｓｃｏｔｌａｎｄ、ＵＫ）、ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ（Ｌｕｎｄ、Ｓｗｅｄｅｎ）など、多様な市販品の販売元から市販されている、ペプチドライブラリー又はタンパク質ライブラリー（例えば、バクテリオファージライブラリー、リボソームライブラリー、オリゴヌクレオチドライブラリー、ＲＮＡライブラリー、ｃＤＮＡライブラリー、酵母ライブラリーなどのディスプレイライブラリーであるがこれらに限定されない。）から組換え抗体を選択する方法を含むがこれらに限定されない方法が使用されうる。米国特許第４，７０４，６９２号；同第５，７２３，３２３号；同第５，７６３，１９２号；同第５，８１４，４７６号；同第５，８１７，４８３号；同第５，８２４，５１４号；同第５，９７６，８６２号を参照されたい。代替的な方法は、ヒト抗体のレパートリーを作製することが可能な、トランスジェニック動物の免疫化（例えば、ＳＣＩＤマウス、Ｎｇｕｙｅｎら（１９９７）、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、４１：９０１〜９０７；Ｓａｎｄｈｕら（１９９６）、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、１６：９５〜１１８；Ｅｒｅｎら（１９９８）、Ｉｍｍｕｎｏｌ．、９３：１５４〜１６１）であって、当技術分野において公知であり、かつ／又は本明細書において記載された、トランスジェニック動物の免疫化に依拠する。このような技法は、リボソームディスプレイ（Ｈａｎｅｓら（１９９７）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９４：４９３７〜４９４２；Ｈａｎｅｓら（１９９８）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９５：１４１３０〜１４１３５）；単一細胞による抗体作製技術（例えば、選択リンパ球抗体法（「ＳＬＡＭ」）（米国特許第５，６２７，０５２号、Ｗｅｎら（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１７：８８７〜８９２；Ｂａｂｃｏｏｋら（１９９６）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９３：７８４３〜７８４８）；ゲル微小液滴及びフローサイトメトリー（Ｐｏｗｅｌｌら（１９９０）、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、８：３３３−３３７；Ｏｎｅ Ｃｅｌｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓ．）；Ｇｒａｙら（１９９５）、Ｊ．Ｉｍｍ．Ｍｅｔｈ．、１８２：１５５〜１６３；Ｋｅｎｎｙら（１９９５）、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．、１３：７８７〜７９０）；Ｂ細胞の選択（Ｓｔｅｅｎｂａｋｋｅｒｓら（１９９４）、Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｏｒｔｓ、１９：１２５〜１３４（１９９４））を含むがこれらに限定されない。
アフィニティー成熟抗体は、当技術分野において公知である、多数の手順のうちのいずれか１つにより作製されうる。例えば、Ｍａｒｋｓら、ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０：７７９〜７８３（１９９２）は、ＶＨとＶＬとのドメインシャッフリングによるアフィニティー成熟について記載している。ＣＤＲ残基及び／又はフレームワーク残基のランダム突然変異誘発については、Ｂａｒｂａｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９１：３８０９〜３８１３（１９９４）；Ｓｃｈｉｅｒら、Ｇｅｎｅ、１６９：１４７〜１５５（１９９５）；Ｙｅｌｔｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：１９９４〜２００４（１９９５）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５４（７）：３３１０〜３３１９（１９９５）；Ｈａｗｋｉｎｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２６：８８９〜８９６（１９９２）により記載されている。選択的突然変異誘発位置及び活性増強アミノ酸残基を伴う接触位置又は超変異位置における選択的突然変異については、米国特許第６，９１４，１２８Ｂ１号において記載されている。
抗体の変異体はまた、抗体をコードするポリヌクレオチドを、トランスジェニック動物又はこのような抗体をそれらのミルク中に産生するヤギ、ウシ、ウマ、ヒツジなどの哺乳動物をもたらすのに適する宿主へと送達することを使用しても調製されうる。これらの方法は、当技術分野において公知であり、例えば、米国特許第５，８２７，６９０号；同第５，８４９，９９２号；同第４，８７３，３１６号；同第５，８４９，９９２号；同第５，９９４，６１６号；同第５，５６５，３６２号及び同第５，３０４，４８９号において記載されている。
抗体の変異体はまた、このような抗体、指定された部分又は変異体を、植物の部分又はこれらから培養された細胞において産生する、トランスジェニック植物及び培養植物細胞（例えば、タバコ、トウモロコシ及びウキクサであるがこれらに限定されない。）をもたらすように、ポリヌクレオチドを送達することによっても調製されうる。例えば、Ｃｒａｍｅｒら（１９９９）、Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４０：９５〜１１８及びこの文献において引用された参考文献は、例えば、誘導性プロモーターを使用する、大量の組換えタンパク質を発現させるトランスジェニックのタバコ葉の産生について記載している。トランスジェニックトウモロコシは、他の組換え系において産生された又は天然の供給源から精製された哺乳動物タンパク質と同等の生物学的活性を伴う哺乳動物タンパク質を、市販品生産のレベルにおいて発現させるのに使用されている。例えば、Ｈｏｏｄら、Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．（１９９９）、４６４：１２７〜１４７及びこの文献において引用された参考文献を参照されたい。抗体の変異体はまた、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）などの抗体断片を含むトランスジェニック植物の種子であって、タバコの種子及びバレイショの塊茎を含む種子からも大量に作製されている。例えば、Ｃｏｎｒａｄら（１９９８）、Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３８：１０１〜１０９及びこの文献において引用された参考文献を参照されたい。したがって、抗体はまた、公知の方法に従いトランスジェニック植物を使用しても作製されうる。
抗体の誘導体は、例えば、外因性配列を付加して、免疫原性を修飾する又は結合、アフィニティー、オン速度、オフ速度、アビディティー、特異性、半減期若しくは他の任意の適切な特徴を低減、増強若しくは修飾することにより作製されうる。一般に、可変領域及び定常領域の非ヒト配列を、ヒトアミノ酸又は他のアミノ酸により置換しながら、非ヒトＣＤＲ配列又はヒトＣＤＲ配列のうちの一部又は全部が維持される。
小型の抗体断片は、２つの抗原結合性部位を有するダイアボディーであって、断片が、同じポリペプチド鎖において、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）へと接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ ＶＬ）を含む、ダイアボディーでありうる。例えば、ＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１６１及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４〜６４４８を参照されたい。同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能とするには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは、別の鎖の相補性ドメインと対合し、２つの抗原結合性部位を創出するように強いられる。また、参照によりその全体において本明細書に組み込まれ、かつ、１つ以上のアミノ酸が、親抗体の超可変領域内へと挿入され、標的抗原に対する結合アフィニティーが、この抗原に対する親抗体の結合アフィニティーの少なくとも約２倍強い抗体変異体についても開示する、Ｃｈｅｎらによる、米国特許第６，６３２，９２６号も参照されたい。
抗体は、直鎖状抗体でありうる。当技術分野において、直鎖状抗体を作るための手順が公知であり、Ｚａｐａｔａら（１９９５）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．、８（１０）：１０５７〜１０６２において記載されている。略述すると、これらの抗体は、抗原結合性領域の対を形成する、タンデムのＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）の対を含む。直鎖状抗体は、二重特異性又は単一特異性でありうる。
抗体は、プロテインＡ精製、硫酸アンモニウム沈殿又はエタノール沈殿、酸抽出、アニオン交換クロマトグラフィー又はカチオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー及びレクチンクロマトグラフィーを含むがこれらに限定されない、公知の方法により、組換え細胞培養物から回収及び精製されうる。高速液体クロマトグラフィー（「ＨＰＬＣ」）もまた、精製のために使用されうる。
抗体を検出可能に標識することは、有用でありうる。抗体を、これらの薬剤へとコンジュゲートさせるための方法は、当技術分野において公知である。例示だけを目的として述べると、抗体は、放射性原子、発色団、フルオロフォアなどの検出可能部分により標識されうる。このような標識抗体は、インビボにおける又は単離された被験試料中の診断法のために使用されうる。このような標識抗体は、サイトカイン、リガンド、別の抗体へと連結されうる。抗腫瘍効果を達成するための、抗体へのカップリングに適する薬剤は、インターロイキン２（ＩＬ−２）及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのサイトカイン；光力学療法における使用のための光増感剤であって、アルミニウム（ＩＩＩ）フタロシアニンテトラスルホン酸、ヘマトポルフィリン及びフタロシアニンを含む光増感剤；ヨウ素１３１（１３１Ｉ）、イットリウム９０（９０Ｙ）、ビスマス２１２（２１２Ｂｉ）、ビスマス２１３（２１３Ｂｉ）、テクネチウム９９ｍ（９９ｍＴｃ）、レニウム１８６（１８６Ｒｅ）及びレニウム１８８（１８８Ｒｅ）などの放射性核種；ドキソルビシン、アドリアマイシン、ダウノルビシン、メトトレキサート、ダウノマイシン、ネオカルチノスタチン及びカルボプラチンなどの抗生剤；ジフテリア毒素、緑膿菌外毒素Ａ、ブドウ球菌エンテロトキシンＡ、アブリンＡ毒素、リシンＡ（脱グリコシル化リシンＡ及び天然リシンＡ）、ＴＧＦ−アルファ毒素、タイワンコブラに由来する細胞毒素（ナジャ・ナジャ・アトラ）及びゲロニン（植物毒素）など、細菌毒素、植物毒素及び他の毒素；レストリクトシン（アスペルギルス・レストリクツスにより産生されたリボソーム不活化タンパク質）、サポリン（サポナリア・オフィキナリスに由来するリボソーム不活化タンパク質）及びＲＮアーゼなどの、植物、細菌及び真菌に由来する、リボソーム不活化タンパク質；チロシンキナーゼ阻害剤；ｌｙ２０７７０２（二フッ素化プリンヌクレオシド）；抗嚢胞剤（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド、毒素をコードするプラスミド、メトトレキサートなど）を含有するリポソーム並びに他の抗体又はＦ（ａｂ）などの抗体断片を含む。
ハイブリドーマ技術、選択リンパ球抗体法（ＳＬＡＭ）、トランスジェニック動物及び組換え抗体ライブラリーの使用を介する抗体の作製については、下記において、より詳細に記載される。
１０．ＴＢＩバイオマーカーを認識するアプタマー
本開示の方法は、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーを検出又は同定するアプタマーの使用を含む。アプタマーは、ＴＢＩペプチドバイオマーカーなどの標的分子に対する高アフィニティー及び選択性を有するプローブの開発における使用に適する。アプタマーは、有機低分子〜タンパク質及びペプチドの範囲にわたる、それらの標的に特異的に結合する能力を有する、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、ＲＮＡ又は修飾核酸を含む。標的認識のためのベースは、当技術分野において公知の、一本鎖オリゴヌクレオチドにより形成された三次構造である。一部の実施形態において、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーを検出又は同定するのに使用されるアプタマーは、アプタマーが、オリゴヌクレオチドの、標的分子への反復的結合による、合成のＤＮＡ又はＲＮＡのランダム配列のライブラリーから選択されるＳＥＬＥＸとして公知の、インビトロにおける選択工程を介して得られうる。
一部の実施形態において、候補ＴＢＩバイオマーカー捕捉剤についてのスクリーニングのために使用される、アプタマーライブラリー混合物を構成する核酸は、化学修飾を伴う又は伴わない、一本鎖のＤＮＡ又はＲＮＡでありうる。選択工程時における、さらなる化学的実体の、ＤＮＡへの導入は、例えば、５−アルキン修飾ヌクレオ塩基（例えば、チミン）の使用を含みうる。加えて、５−Ｃ８−アルキン修飾ヌクレオチド三リン酸、例えば、デオキシチミジンは、市販されている又は合成されうる。このような５−Ｃ８−アルキン修飾ヌクレオ塩基は、ＰＣＲにより、ＤＮＡへと導入されうる。このような修飾は、いわゆる生体直交型化学を用いて、例えば、それぞれのアジドの、アルキンを伴うＣｕ（Ｉ）触媒１，３−双極子環化付加を使用して、さらに誘導体化されうる。Ｃｕ（Ｉ）触媒アジド−アルキン環化付加（ＣｕＡＡＣ）のほか、銅非含有歪み促進アジド−アルキン環化付加（ＳＰＡＡＣ）反応もまた有用である。細胞系又は生命系に関する一部の実施形態において、歪み促進アジド−アルキン環化付加は、Ｃｕ（Ｉ）の使用と関連する毒性問題を克服しうる。任意の数の、所望の化学修飾が、スクリーニング目的のために使用されるオリゴヌクレオチドライブラリーへと追加されうる。このような修飾の例は、限定せずに述べると、脂肪族残基、芳香族残基、帯電残基、塩基性残基、酸性残基、ヘテロ芳香族残基、糖型残基、金属含有残基又はペプチド残基を含む。
一部の実施形態において、アジド−アルキン化学基を含有するように修飾されるヌクレオ塩基は、エチニルｄＵヌクレオチド、エチニルｄＡヌクレオチド、エチニルｄＣヌクレオチド又はエチニルｄＧヌクレオチド、プロピニルｄＵヌクレオチド、プロピニルｄＡヌクレオチド、プロピニルｄＣヌクレオチド又はプロピニルｄＧヌクレオチド又はブチニルｄＵヌクレオチド、ブチニルｄＡヌクレオチド、ブチニルｄＣヌクレオチド又はブチニルｄＧヌクレオチドを含みうる。他の実施形態において、アジド−アルキン化学基を含有するように修飾されるヌクレオ塩基は、エチニルｄＵヌクレオチド、エチニルｄＡヌクレオチド、エチニルｄＣヌクレオチド又はエチニルｄＧヌクレオチドでありうる。これらの例示的修飾を伴うヌクレオチドアプタマーライブラリーは、ＤＮＡアプタマーライブラリーの化学的多様性を増強するために、多様なＳＥＬＥＸベースの選択法において使用されうる。核酸の出発混合物又は候補混合物は、例えば、クリック化学により導入される官能化を含むように、混合物のメンバーのうちの少なくとも２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、少なくとも９９％又は１００％が修飾されるように修飾されうる。１００％未満の修飾が、オリゴヌクレオチド内の、ある特定の位置が修飾されることを可能とするが、他の位置が修飾されることは可能としないことによる、多様性の増強を可能とするのに対し、１００％の修飾は、選択工程における一貫性を確保する。一部の実施形態において、多様性をさらに増強するように、オリゴヌクレオチド内の異なる位置において、異なる修飾がなされる。
ＴＢＩバイオマーカーを認識するアプタマーは、１つ以上のＴＢＩバイオマーカーの、生物学的試料（例えば、タンパク質、核酸又は微小胞など、目的の生物学的実体）中の存在又はレベルを検出する、多様な方法において使用されうる。アプタマーは、コグネイトＴＢＩバイオマーカーの存在又はレベルを評価する、結合剤又は捕捉剤として機能しうる。診断法及び／又は予後診断法を対象とする、本開示の多様な実施形態において、１つ以上のアプタマーは、１つ以上のアプタマーが、選択された生物学的試料と接触して、１つ以上のアプタマーが、その標的ＴＢＩバイオマーカー分子と会合する又はこれに結合することを可能とする、リガンド−標的ベースのアッセイにおいて構成されうる。アプタマーはまた、評価された生物学的試料及び検出されたバイオマーカーに基づき、複数のＴＢＩバイオマーカーのプロファイル（「バイオマーカー」プロファイル又は「バイオマーカー」シグネチャー）を同定するのにも使用されうる。生物学的試料のバイオマーカープロファイルは、評価されうる、１つ以上の目的のバイオマーカーの存在、レベル又は他の特徴であって、限定せずに述べると、存在、レベル、配列、突然変異、再配列、転座、欠失、後成的修飾、メチル化、翻訳後修飾、対立遺伝子、活性、複雑なパートナー、安定性、半減期などを含む存在、レベル又は他の特徴を含みうる。
バイオマーカープロファイル又はバイオマーカーシグネチャーは、疾患の存在、疾患の病期分類、疾患のモニタリング、疾患の層別化又は疾患の検出、転移若しくは再発若しくは進行のための監視など、診断基準及び／又は予後診断基準を査定するのに使用されうる。例えば、本開示の方法は、ＴＢＩバイオマーカープロファイルを、重度ＴＢＩ、軽度ＴＢＩ又は軽度ＴＢＩのサブクラスなど、選択された状態又は疾患と相関させるための方法を含みうる。バイオマーカープロファイルはまた、治療介入を含む処置モダリティーに関する決定を下すときに、臨床においても使用されうる。アプタマーの検出、同定及び／又は定量に基づくバイオマーカープロファイルは、イメージング手順（例えば、ＭＲＩ）を実施すべきかどうかを含む、処置の決定を下すのにも、臨床においてさらに使用されうる。
１１．方法の変化形
試料中に存在する目的の解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）の存在又は量を決定する、開示された方法は、本明細書において記載された通りでありうる。方法はまた、解析物を解析するための他の方法を念頭に置いて、適合させる場合もある。周知の変化形の例は、酵素による検出（酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）又は酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ））を含む、サンドイッチイムノアッセイ（例えば、モノクローナル−モノクローナルサンドイッチイムノアッセイ、モノクローナル−ポリクローナルサンドイッチイムノアッセイ）、競合阻害イムノアッセイ（例えば、フォワード競合阻害イムノアッセイ及びリバース競合阻害イムノアッセイ）、酵素多重化イムノアッセイ法（ＥＭＩＴ）、競合結合アッセイなどのイムノアッセイ、生物発光エネルギー移動（ＢＲＥＴ）、ワンステップ抗体検出アッセイ、同種アッセイ、異種アッセイ、キャプチャーオンザフライアッセイなどを含むがこれらに限定されない。
ａ．イムノアッセイ
目的の解析物及び／又はこのペプチド若しくは断片（例えば、ＴＢＩバイオマーカー及び／又はこのペプチド若しくは断片）は、ＴＢＩバイオマーカー抗体を、イムノアッセイにおいて使用して解析されうる。解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）の存在又は量は、抗体を使用し、解析物への特異的結合を検出して決定されうる。例えば、抗体又はこの抗体断片は、解析物に特異的に結合しうる。所望の場合、抗体のうちの１つ以上は、１つ以上の、市販のモノクローナル／ポリクローナル抗体と組み合わせて使用されうる。このような抗体は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）及びＥｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Ｐｌｙｍｏｕｔｈ Ｍｅｅｔｉｎｇ、ＰＡ）などの企業から市販されている。
体内試料中に存在する、解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）の存在又は量は、サンドイッチイムノアッセイ（例えば、放射性同位元素の検出（ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）を含む、モノクローナル−モノクローナルサンドイッチイムノアッセイ、モノクローナル−ポリクローナルサンドイッチイムノアッセイ）及び酵素による検出（酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）又は酵素免疫測定アッセイ（ＥＬＩＳＡ）（例えば、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ Ａｓｓａｙ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ））などのイムノアッセイを使用して、たやすく決定されうる。使用されうるポイントオブケアデバイスの例は、ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）（Ａｂｂｏｔｔ、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ）である。使用されうる、他の方法は、化学発光マイクロ粒子イムノアッセイ、特に、例として述べると、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）自動式解析器（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ）を用いる化学発光マイクロ粒子イムノアッセイを含む。他の方法は、例えば、質量分析及び解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）に対する抗解析物（例えば、抗ＴＢＩバイオマーカー）抗体（モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体など）又はこれらの抗体断片を使用する、免疫組織化学（例えば、組織生検に由来する切片を伴う。）を含む。他の検出法は、例えば、それらの各々が、参照によりその全体において本明細書に組み込まれている、米国特許第６，１４３，５７６号；同第６，１１３，８５５号；同第６，０１９，９４４号；同第５，９８５，５７９号；同第５，９４７，１２４号；同第５，９３９，２７２号；同第５，９２２，６１５号；同第５，８８５，５２７号；同第５，８５１，７７６号；同第５，８２４，７９９号；同第５，６７９，５２６号；同第５，５２５，５２４号及び同第５，４８０，７９２号において記載されている検出法を含む。抗体の、解析物への特異的免疫結合は、抗体へと接合された、蛍光タグ又は発光タグ、金属及び放射性核種などの直接的標識を介して又はアルカリホスファターゼ若しくは西洋ワサビペルオキシダーゼなどの間接的標識を介して検出されうる。
固定化された抗体又はこの抗体断片の使用は、イムノアッセイへと組み込まれうる。抗体は、磁性粒子又はクロマトグラフィーマトリックス粒子、アッセイプレート（マイクロ滴定ウェルなど）の表面、固体基質材料の小片などの、様々な支持体へと固定化されうる。アッセイストリップは、固体支持体上のアレイ内の抗体又は複数の抗体をコーティングすることにより調製されうる。次いで、このストリップは、被験試料へと浸漬させ、有色スポットなどの、測定可能なシグナルを発生させるように、洗浄及び検出ステップを介して、速やかに処理されうる。
同種フォーマットが使用されうる。例えば、被験試料が、対象から得られた後に、混合物が調製される。混合物は、解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）について評価される被験試料及び特異的結合パートナーを含有する。混合物を形成するのに、被験試料及び特異的結合パートナーが添加される順序は、それほど重要ではない。被験試料は、特異的結合パートナーと同時に接触される。一部の実施形態において、特異的結合パートナーと、被験試料中に含有された、任意のＴＢＩバイオマーカーとは、特異的結合パートナー−解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）抗原複合体を形成することが可能である。特異的結合パートナーは、抗解析物抗体（例えば、ＴＢＩバイオマーカーの、少なくとも３連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに結合する抗ＴＢＩバイオマーカー抗体）でありうる。さらに、特異的結合パートナーは、上記において記載された、検出可能な標識により標識されうる又はこれを含有しうる。
異種フォーマットが使用されうる。例えば、被験試料が、対象から得られた後に、第１の混合物が調製される。混合物は、解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）について評価される被験試料及び第１の特異的結合パートナーを含有し、この場合、第１の特異的結合パートナーと、被験試料中に含有された、任意のＴＢＩバイオマーカーとは、第１の特異的結合パートナー−解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）抗原複合体を形成する。第１の特異的結合パートナーは、抗解析物抗体（例えば、ＴＢＩバイオマーカーの、少なくとも３連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに結合する抗ＴＢＩバイオマーカー抗体）でありうる。混合物を形成するのに、被験試料及び第１の特異的結合パートナーが添加される順序は、それほど重要ではない。
第１の特異的結合パートナーは、固相上に固定化されうる。イムノアッセイにおいて使用される固相（特異的結合パートナーのための）は、磁性粒子、ビーズ、試験管、マイクロ滴定プレート、キュベット、膜、足場形成分子、薄膜、濾紙、ディスク及びチップなどであるがこれらに限定されない、当技術分野において公知である、任意の固相でありうる。固相がビーズである実施形態において、ビーズは、磁気ビーズ又は磁性粒子でありうる。磁気ビーズ／磁性粒子は、強磁性、フェリ磁性、常磁性、超常磁性又は磁性流体でありうる。例示的な強磁性材料は、Ｆｅ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｇｄ、Ｄｙ、ＣｒＯ２、ＭｎＡｓ、ＭｎＢｉ、ＥｕＯ及びＮｉＯ／Ｆｅを含む。フェリ磁性材料の例は、ＮｉＦｅ２Ｏ４、ＣｏＦｅ２Ｏ４、Ｆｅ３Ｏ４（又はＦｅＯ・Ｆｅ２Ｏ３）を含む。ビーズは、磁性であり、１つ以上の非磁性層により取り囲まれた固体コア部分を有しうる。代替的に、磁性部分は、非磁性コアの周囲の層でありうる。第１の特異的結合メンバーが固定化される固体支持体は、乾燥形態又は液体で保管されうる。磁気ビーズは、第１の特異的結合メンバーが固定化される磁気ビーズを伴う試料と接触させる前に又はこの後で、磁界下に置かれうる。
第１の特異的結合パートナー−解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）抗原複合体を含有する混合物が形成された後に、当技術分野において公知である、任意の技法を使用して、任意の結合していない解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）が、複合体から除去される。例えば、結合していない解析物は、洗浄することにより除去されうる。しかし、被験試料中に存在する、全ての解析物が、第１の特異的結合パートナーに結合するように、第１の特異的結合パートナーは、被験試料中に存在する、任意の解析物に対する過剰量において存在することが所望される。
任意の結合していない解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）が除去された後に、第２の特異的結合パートナーを、混合物へと添加して、第１の特異的結合パートナー−目的の解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）−第２の特異的結合パートナー複合体を形成する。第２の特異的結合パートナーは、抗解析物抗体（例えば、ＴＢＩバイオマーカーの、少なくとも３連続アミノ酸を含むアミノ酸配列を有するエピトープに結合するＴＢＩバイオマーカー抗体）でありうる。さらに、第２の特異的結合パートナーは、上記された、検出可能な標識により標識される又はこれを含有する。
固定化された抗体又はこの抗体断片の使用は、イムノアッセイへと組み込まれうる。抗体は、磁性粒子又はクロマトグラフィーマトリックス粒子（磁気ビーズなど）、ラテックス粒子又は表面修飾ラテックス粒子、ポリマー又はポリマー薄膜、プラスチック又はプラスチック薄膜、平面状基質、アッセイプレート（マイクロ滴定ウェルなど）の表面、固体基質材料の小片などの、様々な支持体へと固定化されうる。アッセイストリップは、固体支持体上のアレイ内の抗体又は複数の抗体をコーティングすることにより調製されうる。次いで、このストリップは、被験試料へと浸漬させ、有色スポットなどの、測定可能なシグナルを発生させるように、洗浄及び検出ステップを介して、速やかに処理されうる。
（１）サンドイッチイムノアッセイ
サンドイッチイムノアッセイは、抗体（すなわち、少なくとも１つの捕捉抗体）と、検出抗体（すなわち、少なくとも１つの検出抗体）とからなる、２つの層の間の抗原の量を測定する。捕捉抗体及び検出抗体は、抗原、例えば、ＴＢＩバイオマーカーなど、目的の解析物上の、異なるエピトープに結合する。捕捉抗体の、エピトープへの結合は、検出抗体の、エピトープへの結合に干渉しないことが所望される。モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体のいずれも、サンドイッチイムノアッセイにおける、捕捉抗体及び検出抗体として使用されうる。
一般に、少なくとも２つの抗体が、被験試料中の解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）を分離及び定量するのに利用される。より具体的に、少なくとも２つの抗体は、解析物の、ある特定のエピトープに結合し、「サンドイッチ」と称される免疫複合体を形成する。１つ以上の抗体が、被験試料中の解析物を捕捉する（これらの抗体は、しばしば、「捕捉」抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）又は「捕捉」抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）と称される。）のに使用される場合があり、１つ以上の抗体が、検出可能な（すなわち、定量可能な）標識を、サンドイッチに結合させるのに使用される（これらの抗体は、しばしば、「検出」抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ）又は「検出」抗体（ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）と称される。）。サンドイッチアッセイにおいて、抗体の、そのエピトープへの結合は、アッセイ中の他の任意の抗体の、そのそれぞれのエピトープへの結合により減弱されないことが所望される。抗体は、解析物を含有することが推測される被験試料と接触した、１つ以上の第１の抗体が、第２の抗体又は後続の抗体により認識されるエピトープの全部又は一部に結合せず、これにより、１つ以上の第２の検出抗体が、解析物に結合する能力に干渉しないように選択される。
抗体は、前記イムノアッセイ中の、第１の抗体として使用されうる。抗体は、解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）上のエピトープに免疫特異的に結合する。本開示の抗体に加えて、前記イムノアッセイは、第１の抗体により認識されない又は第１の抗体に結合しないエピトープに免疫特異的に結合する、第２の抗体を含みうる。
解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）を含有することが推測される被験試料は、少なくとも１つの、第１の捕捉抗体（又は抗体）及び少なくとも１つの、第２の検出抗体と同時に又は逐次的に接触させうる。サンドイッチアッセイフォーマットにおいて、解析物を含有することが推測される被験試料はまず、第１の抗体−解析物抗原複合体の形成を可能とする条件下において、特定のエピトープに特異的に結合する、少なくとも１つの、第１の捕捉抗体と接触させる。１つを超える捕捉抗体が使用される場合、第１の複数の捕捉抗体−ＴＢＩバイオマーカー抗原複合体が形成される。サンドイッチアッセイにおいて、抗体、好ましくは、少なくとも１つの捕捉抗体は、被験試料に予測される解析物の最大量に対するモル過剰量において使用される。例えば、マイクロ粒子コーティング緩衝液１ｍｌ当たり約５μｇ／ｍｌ〜約１ｍｇ／ｍｌの抗体が使用されうる。
ｉ．抗ＴＢＩバイオマーカー捕捉抗体
任意選択的に、被験試料を、少なくとも１つの、第１の捕捉抗体と接触させる前に、少なくとも１つの、第１の捕捉抗体は、第１の抗体−解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）複合体の、被験試料からの分離を容易とする固体支持体に結合しうる。当技術分野において公知である、任意の固体支持体であって、ウェル、チューブ又はビーズ（マイクロ粒子など）の形態のポリマー材料から作られた固体支持体を含むがこれらに限定されない固体支持体が使用されうる。抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ（又はａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ））は、そのような結合が、解析物に結合する抗体の能力に干渉しないことを条件として、吸着により、化学的カップリング剤を使用する共有結合により又は当技術分野において公知である他の手段により、固体支持体に結合しうる。さらに、必要な場合、固体支持体は、抗体上の多様な官能基との反応性を可能とするように、誘導体化されうる。このような誘導体化は、無水マレイン酸、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド及び１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドなどであるがこれらに限定されない、ある特定のカップリング剤の使用を要求する。
その後、解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）を含有することが推測される被験試料は、第１の捕捉抗体（又は複数の抗体）−解析物複合体の形成を可能とするためにインキュベートされる。インキュベーションは、約４．５〜約１０．０のｐＨ、約２℃〜約４５℃の温度において、少なくとも約１分間〜約１８時間、約２〜６分間、約７〜１２分間、約５〜１５分間又は約３〜４分間の時間にわたり実行されうる。
ｉｉ．検出抗体
次いで、第１の／複数の捕捉抗体−解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）複合体の形成後、複合体は、少なくとも１つの、第２の検出抗体と接触させる（第１の／複数の抗体−解析物抗原−第２の抗体複合体の形成を可能とする条件下において）。一部の実施形態において、被験試料は、捕捉抗体と同時に、検出抗体と接触させる。第１の抗体−解析物複合体が、１つを超える検出抗体と接触させる場合、第１の／複数の捕捉抗体−解析物−複数の検出抗体複合体が形成される。少なくとも第２の（及び後続の）抗体が、第１の抗体−解析物複合体と接触させる場合、第１の抗体と同様に、上記された条件と同様の条件下におけるインキュベーション時間が、第１の／複数の抗体−解析物−第２の／複数の抗体複合体の形成に要求される。好ましくは、少なくとも１つの、第２の抗体は、検出可能な標識を含有する。検出可能な標識は、第１の／複数の抗体−解析物−第２の／複数の抗体複合体の形成の前に、これと同時に又はこの後に、少なくとも１つの、第２の抗体に結合しうる。当技術分野において公知である、任意の検出可能な標識が使用されうる。
化学発光アッセイは、Ａｄａｍｃｚｙｋら、Ａｎａｌ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ、５７９（１）：６１〜６７（２００６）において記載されている方法に従い実施されうる。任意の適切なアッセイフォーマットが使用されうるが、マイクロプレート用化学発光測定器（Ｍｉｔｈｒａｓ ＬＢ−９４０、Ｂｅｒｔｈｏｌｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｕ．Ｓ．Ａ．，ＬＬＣ、Ｏａｋ Ｒｉｄｇｅ、ＴＮ）は、小容量の複数の試料についてのアッセイを、迅速に可能とする。化学発光測定器は、９６ウェル黒色ポリスチレン製マイクロプレート（Ｃｏｓｔａｒ＃３７９２）を使用する、複数の試薬注入器を装備されうる。各試料が、個別のウェルへと添加されうるのに続き、利用されたアッセイの種類により決定される通り、他の試薬の同時的／逐次的な添加がなされうる。酸性化によるなど、アクリジニウムアリールエステルを用いる、中性溶液中又は塩基性溶液中の擬塩基の形成は回避されることが所望される。次いで、化学発光応答が、ウェルごとに記録される。この点で、化学発光応答を記録するための時間は、部分的に、利用された試薬の添加と、特定のアクリジニウムの添加との間の遅延に依存する。
化学発光アッセイのための混合物を形成するのに、被験試料及び特異的結合パートナーが添加される順序は、それほど重要ではない。第１の特異的結合パートナーが、アクリジニウム化合物により、検出可能に標識される場合、検出可能に標識された第１の特異的結合パートナー−抗原（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）複合体が形成される。代替的に、第２の特異的結合パートナーが使用され、第２の特異的結合パートナーが、アクリジニウム化合物により、検出可能に標識される場合、検出可能に標識された第１の特異的結合パートナー−解析物−第２の特異的結合パートナー複合体が形成される。標識されたものであれ、標識されていないものであれ、結合していない任意の特異的結合パートナーは、洗浄など、当技術分野において公知である、任意の技法を使用して、混合物から除去されうる。
過酸化水素は、混合物中、インサイチューにおいて発生しうる又は上記されたアクリジニウム化合物の添加の前に、これと同時に又はこの後に、混合物へと施されうる、若しくは供給されうる。過酸化水素は、当業者に明らかである方式など、多数の方式により、インサイチューにおいて発生しうる。
代替的に、過酸化水素の供給源は、混合物へと、単純に添加されうる。例えば、過酸化水素の供給源は、過酸化水素を含有することが公知である、１つ以上の緩衝液又は他の溶液でありうる。この点で、過酸化水素の溶液が、単純に添加されうる。
少なくとも１つの塩基性溶液を、試料へと、同時的に又はその後において添加したら、検出可能なシグナル、すなわち、解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）の存在を示す化学発光シグナルが発生する。塩基性溶液は、少なくとも１つの塩基を含有し、１０以上、好ましくは、１２以上のｐＨを有する。塩基性溶液の例は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アンモニウム、水酸化マグネシウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、水酸化カルシウム、炭酸カルシウム及び重炭酸カルシウムを含むがこれらに限定されない。試料へと添加される塩基性溶液の量は、塩基性溶液の濃度に依存する。使用された塩基性溶液の濃度に基づき、当業者は、試料へと添加される塩基性溶液の量を容易に決定しうる。化学発光標識以外の他の標識も利用されうる。例えば、酵素標識（アルカリホスファターゼを含むがこれに限定されない）が利用されうる。
発生した化学発光シグナル又は他のシグナルは、当業者に公知の規定の技法を使用して検出されうる。発生したシグナルの強度に基づき、目的の解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）の、試料中の量が定量されうる。具体的に、解析物の、試料中の量は、発生したシグナルの強度に比例する。存在する解析物の量は、発生した光の量を、解析物についての検量線と比較することにより又は参照標準物質との比較により定量されうる。検量線は、解析物の既知の濃度の系列希釈液又は溶液を使用して、質量分析、重量測定法及び当技術分野において公知の他の技法により作成されうる。
（２）フォワード競合阻害アッセイ
フォワード競合フォーマットにおいて、公知の濃度の、蛍光標識、切断可能なリンカーと接合されたタグなどを有する、標識された目的の解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）のアリコートが、被験試料中の目的の解析物と、目的の解析物抗体（例えば、ＴＢＩバイオマーカー抗体）への結合について競合するように使用される。
フォワード競合アッセイにおいて、固定化された特異的結合パートナー（抗体など）は、被験試料及び標識された目的の解析物、目的の解析物の断片又は目的の解析物の変異体と、逐次的に又は同時に接触させうる。目的の解析物のペプチド、目的の解析物の断片又は目的の解析物の変異体は、切断可能なリンカーと接合されたタグから構成された、検出可能な標識を含む、任意の検出可能な標識により標識されうる。このアッセイにおいて、抗体は、固体支持体へと固定化されうる。代替的に、抗体は、マイクロ粒子又は平面状基質などの固体支持体上に固定化された、抗分子種抗体などの抗体へとカップリングされうる。
標識された目的の解析物、被験試料及び抗体は、サンドイッチアッセイフォーマットとの関連において、上記された条件と同様の条件下においてインキュベートされる。次いで、抗体−目的の解析物複合体の、２つの異なる分子種が作出されうる。具体的に述べると、作出された抗体−目的の解析物複合体のうちの１つが、検出可能な標識（例えば、蛍光標識など）を含有するのに対し、他の抗体−目的の解析物複合体は、検出可能な標識を含有しない。抗体−目的の解析物複合体は、検出可能な標識の定量の前に、残りの被験試料から分離されうるが、そうされなくともよい。次いで、抗体−目的の解析物複合体が、残りの被験試料から分離されるのかどうかに関わらず、抗体−目的の解析物複合体内において検出可能な標識の量が定量される。次いで、目的の解析物（膜に会合した目的の解析物、可溶性の目的の解析物、可溶性の目的の解析物の断片、目的の解析物（膜に会合した目的の解析物又は可溶性の目的の解析物）の変異体又はこれらの任意の組合せなど）の、被験試料中濃度が、例えば、上記された通りに決定されうる。
（３）リバース競合阻害アッセイ
リバース競合アッセイにおいて、固定化された目的の解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）は、被験試料及び少なくとも１つの標識された抗体と、逐次的に又は同時に接触させうる。
目的の解析物は、上記においてサンドイッチアッセイフォーマットとの関連において論じられた固体支持体などの固体支持体に結合させうる。
固定化された目的の解析物、被験試料及び少なくとも１つの標識された抗体は、サンドイッチアッセイフォーマットとの関連において、上記された条件と同様の条件下においてインキュベートされる。次いで、目的の解析物−抗体複合体の２つの異なる分子種が作出されうる。具体的に述べると、作出された目的の解析物−抗体複合体のうちの１つが、固定化され、検出可能な標識（例えば、蛍光標識など）を含有するのに対し、他の目的の解析物−抗体複合体は、固定化されず、検出可能な標識を含有する。固定化されなかった目的の解析物−抗体複合体及び残りの被験試料は、洗浄など、当技術分野において公知の技法を介して、固定化された目的の解析物−抗体複合体の存在から除去される。次いで、固定化されなかった目的の解析物−抗体複合体が除去されたら、タグの切断後に、固定化された、目的の解析物−抗体複合体内の、検出可能な標識の量が定量される。次いで、目的の解析物の、被験試料中濃度が、上記された通り、検出可能な標識の数量を比較することにより決定されうる。
（４）ワンステップイムノアッセイ又は「キャプチャーオンザフライ」アッセイ
キャプチャーオンザフライイムノアッセイにおいて、固体基質は、固定化剤によりあらかじめコーティングされている。捕捉剤、解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）及び検出剤が、固体基質へと併せて添加されるのに続き、検出の前に、洗浄ステップがなされる。捕捉剤は、解析物に結合することが可能であり、固定化剤のためのリガンドを含む。捕捉剤及び検出剤は、本明細書において記載された又は当技術分野において公知である、捕捉又は検出が可能な、抗体又は他の任意の部分でありうる。リガンドは、ペプチドタグを含むことが可能であり、固定化剤は、抗ペプチドタグ抗体を含みうる。代替的に、リガンド及び固定化剤は、キャプチャーオンザフライアッセイのために利用されるように、併せて結合することが可能な薬剤の任意の対（例えば、特異的結合対及び当技術分野において公知である対など、他の対）でありうる。１つを超える解析物が測定されうる。一部の実施形態において、固体基質は、抗原によりコーティングされる場合があり、解析される解析物は、抗体である。この方法はまた、ＭＳによる検出及び定量ともカップリングさせうる。
ワンステップイムノアッセイ又は「キャプチャーオンザフライ」における、ある特定の、他の実施形態において、固定化剤（ビオチン、ストレプトアビジンなど）によりあらかじめコーティングされた固体支持体（マイクロ粒子など）並びに少なくとも第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバー（それぞれ、捕捉試薬及び検出試薬として機能する）が使用される。第１の特異的結合メンバーは、固定化剤のためのリガンド（例えば、固体支持体上の固定化剤が、ストレプトアビジンである場合、第１の特異的結合メンバー上のリガンドは、ビオチンでありうる。）を含み、また、目的の解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）にも結合する。第２の特異的結合メンバーは、検出可能な標識を含み、目的の解析物に結合する。固体支持体並びに第１の特異的結合メンバー及び第２の特異的結合メンバーは、被験試料へと（逐次的に又は同時に）添加されうる。第１の特異的結合メンバー上のリガンドは、固体支持体上の固定化剤に結合して、固体支持体／第１の特異的結合メンバー複合体を形成する。試料中に存在する、任意の目的の解析物は、固体支持体／第１の特異的結合メンバー複合体に結合して、固体支持体／第１の特異的結合メンバー／解析物複合体を形成する。第２の特異的結合メンバーは、固体支持体／第１の特異的結合メンバー／解析物複合体に結合し、検出可能な標識が検出される。検出の前に、任意選択の洗浄ステップが利用されうる。ワンステップアッセイにおける、ある特定の実施形態において、１つを超える解析物が測定されうる。ある特定の、他の実施形態において、２つを超える特異的結合メンバーが利用されうる。ある特定の、他の実施形態において、複数の検出可能な標識が添加されうる。ある特定の、他の実施形態において、複数の、目的の解析物が検出されうる又は質量分析の使用を含め、これらの量、レベル若しくは濃度が、測定、決定若しくは評価されうる。
キャプチャーオンザフライアッセイの使用は、本明細書において記載され、当技術分野において公知である、様々なフォーマットにおいてなされうる。例えば、フォーマットは、上記されたようなサンドイッチアッセイでありうるが、代替的に、競合アッセイであることも可能であり、単一特異性の結合メンバーを用いうる又は公知である変化形など、他の変化形も使用しうる。この方法はまた、ＭＳによる検出及び定量ともカップリングさせうる。
１２．他の因子
上記された、診断法、予後診断法、危険性層別化法及び／又は評価法は、診断、予後診断及び評価のための他の因子の使用をさらに含みうる。一部の実施形態において、外傷性脳損傷は、Ｇｌａｓｇｏｗ昏睡スケール又は拡張版Ｇｌａｓｇｏｗ転帰スケール（ＧＯＳＥ）を使用して診断されうる。他の検査、スケール又は指標もまた、単独で又はＧｌａｓｇｏｗ昏睡スケールと組み合わせて使用されうる。例は、Ｒａｎｃｈｏｓ Ｌｏｓ Ａｍｉｇｏｓスケールである。Ｒａｎｃｈｏｓ Ｌｏｓ Ａｍｉｇｏｓスケールは、意識、認知、行動及び環境との相互作用のレベルを測定する。Ｒａｎｃｈｏｓ Ｌｏｓ Ａｍｉｇｏｓスケールは、レベルＩ：応答なし；レベルＩＩ：一般的な応答；レベルＩＩＩ：局所的応答；レベルＩＶ：混乱（興奮）；レベルＶ：混乱（不適切）；レベルＶＩ：混乱（適切）；レベルＶＩＩ：自動的（適切）及びレベルＶＩＩＩ：意図的（適切）を含む。
１３．試料
一部の実施形態において、試料は、ヒト対象が、物理的振盪、閉鎖性頭部外傷若しくは開放性頭部外傷を結果としてもたらす外部の機械的力若しくは他の力、１回以上の転倒、爆発若しくは爆破による鈍的衝撃により引き起こされた頭部損傷又は他の種類の鈍力外傷を負った後において得られる。一部の実施形態において、ヒト対象が、化学物質、毒素又は化学物質と毒素との組合せを摂取した後又はこれらへと曝露された後において、試料が得られる。このような化学物質及び／又は毒素の例は、火、カビ、アスベスト、害虫駆除剤、殺虫剤、有機溶剤、塗料、糊、ガス（一酸化炭素、硫化水素及びシアン化物など）、有機金属（メチル水銀、テトラエチル鉛及び有機スズなど）及び／又は１つ以上の乱用薬物を含む。一部の実施形態において、試料は、自己免疫疾患、代謝性障害、脳腫瘍、低酸素症、１つ以上のウイルス、髄膜炎、水頭症又はこれらの組合せを患うヒト対象から得られる。
さらに別の実施形態において、本明細書において記載された方法はまた、下記される抗ＴＢＩバイオマーカー抗体又はこの抗体断片を使用して、対象におけるＴＢＩバイオマーカーのレベルを決定することにより、対象が軽度外傷性脳損傷を有する又はこれを発症する危険性があるのかどうかを決定するのにも使用されうる試料を使用する。したがって、特定の実施形態において、本開示はまた、本明細書において論じられ、当技術分野において公知である、外傷性脳損傷を有する又はこの危険性がある対象が、治療又は処置の候補であるのかどうかを決定するための方法も提示する。一般に、対象は、少なくとも（ｉ）頭部への損傷を受けた対象；（ｉｉ）１つ以上の化学物質及び／若しくは毒素を摂取した及び／若しくはこれらへと曝露された対象；（ｉｉｉ）自己免疫疾患、代謝性障害、脳腫瘍、低酸素症、１つ以上のウイルス、髄膜炎、水頭症を患う、若しくはこれらの任意の組合せを患う対象又は（ｉｖ）（ｉ）〜（ｉｉｉ）の任意の組合せ又はＴＢＩを有する、若しくはＴＢＩの危険性があると実際に診断された対象（例えば、自己免疫疾患、代謝性障害、脳腫瘍、低酸素症、１つ以上のウイルス、髄膜炎、水頭症若しくはこれらの組合せを患う対象など）及び／又は本明細書において記載された、望ましくない（すなわち、臨床的に所望されない）濃度又は量のＴＢＩバイオマーカー又はＴＢＩバイオマーカー断片を顕示した対象である。
ａ．被験又は生物学的試料
本明細書において使用された「試料」、「被験試料」、「生物学的試料」とは、ＴＢＩバイオマーカーを含有する又はこれを含有することが推測される体液試料を指す。試料は、任意の適切な供給源に由来しうる。場合によって、試料は、液体、流動性の粒子状固体又は固体粒子の懸濁流体を含みうる。場合によって、試料は、本明細書において記載された解析の前に処理されうる。例えば、試料は、解析の前に、その供給源から、分離又は精製されうるが、ある特定の実施形態において、ＴＢＩバイオマーカーを含有する非処理試料が、直接的にアッセイされうる。特定の例において、ＴＢＩバイオマーカーを含有する供給源は、ヒト体内物質（例えば、体液、全血、血清、血漿などの血液、尿、唾液、汗、痰、精液、粘液、涙液、リンパ液、羊水、間質液、肺洗浄液、脳脊髄液、糞便、組織、臓器など）である。組織は、骨格筋組織、肝臓組織、肺組織、腎臓組織、心筋組織、脳組織、骨髄、子宮頸部組織、皮膚などを含みうるがこれらに限定されない。試料は、液体試料又は固体試料の液体抽出物でありうる。ある特定の場合、試料の供給源は、組織の分解／細胞の溶解により可溶化されうる、臓器又は生検試料などの組織でありうる。
広範にわたる容量の体液試料が解析されうる。少数の例示的な実施形態において、試料容量は、約０．５ｎＬ、約１ｎＬ、約３ｎＬ、約０．０１μＬ、約０．１μＬ、約１μＬ、約５μＬ、約１０μＬ、約１００μＬ、約１ｍＬ、約５ｍＬ、約１０ｍＬなどでありうる。場合によって、体液試料の容量は、約０．０１μＬ〜約１０ｍＬの間、約０．０１μＬ〜約１ｍＬの間、約０．０１μＬ〜約１００μＬの間又は約０．１μＬ〜約１０μＬの間である。
場合によって、体液試料は、アッセイにおける使用の前に希釈されうる。例えば、ＴＢＩバイオマーカーを含有する供給源が、ヒト体液（例えば、血液、血清）である実施形態において、体液は、適切な溶媒（例えば、ＰＢＳ緩衝液などの緩衝液）により希釈されうる。体液試料は、使用の前に、約１倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約１０倍、約１００倍以上希釈されうる。他の場合に、体液試料は、アッセイにおける使用の前に希釈されない。
場合によって、試料は、解析前処理を経る場合がある。解析前処理は、非特異的タンパク質の除去及び／又は効果的であるが廉価で実施可能な混合機能性などの、さらなる機能性をもたらしうる。解析前処理の一般的方法は、動電トラッピング、ＡＣ動電現象、表面音響波、等速電気泳動、誘電泳動、電気泳動又は当技術分野において公知である、他の前濃縮法の使用を含みうる。場合によって、体液試料は、アッセイにおける使用の前に濃縮されうる。例えば、ＴＢＩバイオマーカーを含有する供給源が、ヒト体液（例えば、血液、血清）である実施形態において、体液は、沈殿、蒸発、濾過、遠心分離又はこれらの組合せにより濃縮されうる。体液試料は、使用の前に、約１倍、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約１０倍、約１００倍以上濃縮されうる。
ｂ．対照
対照試料を含むことが所望でありうる。対照は、上記された通り、対象に由来する試料と共時的に解析されうる。対象試料から得られた結果は、対照試料から得られた結果と比較されうる。試料についてのアッセイ結果が比較されうる、検量線が用意されうる。このような検量線は、マーカーのレベルを、アッセイ単位、すなわち、蛍光標識が使用される場合なら、蛍光のシグナル強度の関数として提示する。複数のドナーから採取された試料を使用して、正常健常組織内のＴＢＩバイオマーカーの基準レベル並びに上記において明示された特徴のうちの１つ以上を有しうるドナーから採取された組織内の、「危険性がある」ＴＢＩバイオマーカーのレベルについての検量線が用意されうる。
したがって、上記を念頭に置いて、ＴＢＩバイオマーカーの、被験試料中の存在、量又は濃度を決定するための方法が提供される。方法は、例えば、ＴＢＩバイオマーカー上のエピトープに結合する、少なくとも１つの捕捉抗体及び捕捉抗体に対するエピトープと異なる、ＴＢＩバイオマーカー上のエピトープに結合する、少なくとも１つの検出抗体を用いるイムノアッセイにより、被験試料を、ＴＢＩバイオマーカーについてアッセイするステップを含み、任意選択的に、検出可能な標識を含み、ＴＢＩバイオマーカーの、被験試料中の存在、量又は濃度についての、直接的指標又は間接的指標として、検出可能な標識により発生したシグナルを、ＴＢＩバイオマーカーの、較正物質中の存在、量又は濃度についての、直接的指標又は間接的指標として発生したシグナルと比較するステップを含む。較正物質は、任意選択的に、較正物質の各々が、系列内の他の較正物質とＴＢＩバイオマーカーの濃度が異なる、較正物質の系列の一部であり、これが好ましい。
１４．キット
本明細書において、被験試料を、１つ以上のＴＢＩバイオマーカー及び／又はこれらの断片についてアッセイ又は評価するために使用されうるキットが提示される。キットは、被験試料を、ＴＢＩバイオマーカーについてアッセイするための、少なくとも１つの構成要素及び被験試料を、ＴＢＩバイオマーカーについてアッセイするための指示書を含む。例えば、キットは、被験試料を、ＴＢＩバイオマーカーについて、イムノアッセイ（例えば、化学発光マイクロ粒子イムノアッセイ）により又は質量分析アッセイ（例えば、ＰＲＭ−ＭＳ又はＭＲＭ／ＳＲＭ−ＭＳ）によりアッセイするための指示書を含みうる。キット内に含まれる指示書は、パッケージング材料に貼付されうる又はパッケージの添付文書として含まれうる。指示書は、典型的に、文書又は印刷物でありうるが、このようなものに限定されない。このような指示書を保存し、これらを末端使用者へと通信することが可能な、任意のメディアが、本開示により想定される。このようなメディアは、電子保存メディア（例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ）、光学メディア（例えば、ＣＤ ＲＯＭ）などを含むがこれらに限定されない。本明細書において使用された「指示書」という用語は、指示書を提供するインターネットサイトのアドレスを含みうる。
少なくとも１つの構成要素は、ＴＢＩバイオマーカーに特異的に結合する、１つ以上の単離抗体又はこれらの抗体断片を含む、少なくとも１つの組成物を含みうる。抗体は、ＴＢＩバイオマーカー検出抗体及び／又はＴＢＩバイオマーカー捕捉抗体でありうる。
代替的に又は、加えて、キットは、較正物質若しくは対照（例えば、精製され、任意選択的に、凍結乾燥したＴＢＩバイオマーカー）並びに／又はアッセイを行うための、少なくとも１つの容器（例えば、抗ＴＢＩバイオマーカー抗体により、あらかじめコーティングされうる、チューブ、マイクロ滴定プレート又はストリップ）並びに／又はそれらのうちの一方が濃縮溶液、検出可能な標識（例えば、酵素標識）のための基質溶液若しくは停止溶液として提供されうる、アッセイ緩衝液若しくは洗浄緩衝液などの緩衝液を含みうる。好ましくは、キットは、アッセイを実施するのに必要な、全ての構成要素、すなわち、試薬、標準物質、緩衝液、希釈剤などを含む。指示書はまた、検量線を作成するための指示書も含みうる。
キットは、ＴＢＩバイオマーカーを定量するための参照標準物質をさらに含みうる。参照標準物質は、ＴＢＩバイオマーカー濃度を内挿及び／又は外挿するための検量線を確立するのに利用されうる。標準物質缶は、アミノ酸残基から構成されたタンパク質断片若しくはペプチド断片又は多様な解析物について、安定的なＮ１５同位体により標識されたタンパク質断片若しくはペプチド断片のほか、試料処理のための標準物質であって、タンパク質中のスパイク物質及び定量用ペプチドを伴う標準物質を含む標準物質を含む。一部の実施形態において、ＴＢＩバイオマーカーの参照標準物質は、健常基準集団から導出された、第９９百分位数に対応する。このような参照標準物質は、当技術分野において公知である、規定の技法を使用して決定されうる。
ＴＢＩバイオマーカーに特異的な組換え抗体などの、キット内に提供される任意の抗体に、フルオロフォア、放射性部分、酵素、ビオチン／アビジン標識、発色団、化学発光標識などの、検出可能な標識を組み込むことが可能である又はキットは、抗体を標識付けするための試薬若しくは抗体（例えば、検出抗体）を検出するための試薬及び／又は解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）を標識付けするための試薬若しくは解析物（例えば、ＴＢＩバイオマーカー）を検出するための試薬を含みうる。抗体、標準物質ペプチド若しくはペプチド断片、較正物質及び／又は対照は、個別の容器内に用意されうる又は適切なアッセイフォーマット、例えば、マイクロ滴定プレートへとあらかじめ分注されうる。
任意選択的に、キットは、品質管理のための構成要素（例えば、感度パネル、較正物質及び陽性対照）を含む。品質管理試薬の調製は、当技術分野において周知であり、様々な免疫診断用生成物のための添付シート上に記載されている。感度パネルメンバーは、任意選択的に、アッセイ性能の特徴を確立するのに使用され、さらに、任意選択的に、イムノアッセイキット試薬の完全性及びアッセイの標準化についての、有用な指標である。
キットはまた、任意選択的に、診断アッセイを行うのに要求される又は品質管理査定を容易とする、他の試薬であって、緩衝液、塩、酵素、酵素補因子、基質、検出試薬などの試薬も含みうる。被験試料の単離及び／又は処理のための緩衝液及び溶液（例えば、前処理試薬）など、他の構成要素もまた、キットに含まれうる。加えて、キットは、１つ以上の他の対照も含みうる。キットの構成要素のうちの１つ以上を凍結乾燥することができ、この場合、キットは、凍結乾燥した構成要素の復元に適する試薬をさらに含みうる。
キットの多様な構成要素は、任意選択的に、必要に応じて、適切な容器、例えば、マイクロ滴定プレートにより提供される。キットは、試料を保持又は保存するための容器（例えば、尿試料、全血試料、血漿試料又は血清試料のための容器又はカートリッジ）をさらに含みうる。適切な場合、キットはまた、任意選択的に、反応槽、混合槽及び試薬又は被験試料の調製を容易とする他の構成要素も含有しうる。キットはまた、シリンジ、ピペット、鉗子、計量スプーンなど、被験試料を得る一助となるための、１つ以上の器具も含みうる。
検出可能な標識が、少なくとも１つのアクリジニウム化合物である場合、キットは、少なくとも１つのアクリジニウム−９−カルボキサミド、少なくとも１つのアクリジニウム−９−カルボキシレートアリールエステル又はこれらの任意の組合せを含みうる。検出可能な標識が、少なくとも１つのアクリジニウム化合物である場合、キットはまた、緩衝液、溶液及び／又は少なくとも１つの塩基性溶液など、過酸化水素の供給源も含みうる。所望の場合、キットは、磁性粒子、ビーズ、試験管、マイクロ滴定プレート、キュベット、膜、足場形成分子、薄膜、濾紙、ディスク又はチップなどの固相を含有しうる。
所望の場合、キットは、単独で又は被験試料を、外傷性脳損傷又は障害のバイオマーカーなどのバイオマーカーでありうる、別の解析物についてアッセイするための指示書とさらに組み合わせて、１つ以上の構成要素をさらに含みうる。
ａ．キット及び方法の適合
本明細書において記載されたイムノアッセイにより、ＴＢＩバイオマーカーの、被験試料中濃度を評価又は決定するためのキット（又はこの構成要素）並びに方法は、例えば、米国特許第５，０６３，０８１号、米国特許出願公開第２００３／０１７０８８１号、同第２００４／００１８５７７号、同第２００５／００５４０７８号及び同第２００６／０１６０１６４号において記載されており、例えば、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ）により、Ａｂｂｏｔｔ Ｐｏｉｎｔ ｏｆ Ｃａｒｅ（ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）又はｉ−ＳＴＡＴ Ａｌｉｎｉｔｙ、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）として市販されている、様々な自動式システム及び半自動式システム（固相がマイクロ粒子を含むシステムを含む）のほか、米国特許第５，０８９，４２４号及び同第５，００６，３０９号において記載されており、例えば、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ）により、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）又はＡｂｂｏｔｔ Ａｌｉｎｉｔｙデバイスのシリーズとして市販されているシステムにおける使用に適合させうる。
自動式システム又は半自動式システムの、非自動式システム（例えば、ＥＬＩＳＡ）と比較した、一部の差違は、第１の特異的結合パートナー（例えば、解析物抗体又は捕捉抗体）が、接合された基質（サンドイッチの形成及び解析物の反応性に影響を及ぼしうる）並びに捕捉ステップ、検出ステップ及び／又は任意選択の洗浄ステップの長さ及びタイミングを含む。ＥＬＩＳＡなどの非自動式フォーマットが、試料及び捕捉試薬を伴う、比較的長いインキュベーション時間（例えば、約２時間）を要求しうるのに対し、自動式フォーマット又は半自動式フォーマット（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）及び任意の後継のプラットフォーム、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）は、比較的短いインキュベーション時間（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）、Ａｌｉｎｉｔｙの場合、約１８分間）を有しうる。同様に、ＥＬＩＳＡなどの非自動式フォーマットが、コンジュゲート試薬などの検出抗体を、比較的長いインキュベーション時間（例えば、約２時間）にわたりインキュベートするのに対し、自動式フォーマット又は半自動式フォーマット（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）及び任意の後継のプラットフォーム）は、比較的短いインキュベーション時間（例えば、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）、Ａｌｉｎｉｔｙ及び任意の後継のプラットフォームの場合、約４分間）を有しうる。
Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから市販されている、他のプラットフォームは、ＡｘＳＹＭ（登録商標）、ＩＭｘ（登録商標）（例えば、参照によりその全体において本明細書に組み込まれている、米国特許第５，２９４，４０４号を参照されたい。）、ＰＲＩＳＭ（登録商標）、ＥＩＡ（ビーズ）及びＱｕａｎｔｕｍ（商標）ＩＩ並びに他のプラットフォームを含むがこれらに限定されない。加えて、アッセイ、キット及びキットの構成要素は、例えば、電気化学アッセイシステム又は他の携帯型アッセイシステム若しくはポイントオブケアアッセイシステム上の、他のフォーマットにおいて利用されうる。前述の通り、本開示は、例えば、サンドイッチイムノアッセイを実施する、市販の、Ａｂｂｏｔｔ Ｐｏｉｎｔ ｏｆ Ｃａｒｅ（ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）電気化学イムノアッセイシステムに適用可能である。イムノセンサー並びにこれらの製造法及び単回使用のための検査デバイスにおける動作については、例えば、それらの全体において参照によりこれに関するそれらの教示について本明細書に組み込まれている、米国特許第５，０６３，０８１号、米国特許出願公開第２００３／０１７０８８１号、同第２００４／００１８５７７号、同第２００５／００５４０７８号及び同第２００６／０１６０１６４号において記載されている。
特に、アッセイの、ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）システムへの適合に関して、以下の構成が好ましい。微細加工シリコンチップが、金製の電流測定用作業電極及び銀塩化銀基準電極の対と共に作製される。作業電極のうちの１つにおいて、捕捉抗体を固定化されたポリスチレンビーズ（直径を０．２ｍｍとする）が、電極上の、パターン化されたポリビニルアルコールのポリマーコーティングへと接着される。このチップが、イムノアッセイに適する流体フォーマットと共に、ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）カートリッジへとアセンブルされる。シリコンチップの部分に、それらのうちのいずれも、検出可能に標識されうる、１つ以上のＴＢＩバイオマーカー抗体（ＴＢＩバイオマーカーに結合しうる、１つ以上のモノクローナル／ポリクローナル抗体又はこれらの断片、これらの変異体又はこれらの変異体の断片）又は１つ以上の抗ＴＢＩバイオマーカーＤＶＤ−Ｉｇ（又はＴＢＩバイオマーカーに結合しうる、この断片、この変異体又はこの変異体の断片）などの、ＴＢＩバイオマーカーに対する特異的結合パートナーが存在する。カートリッジの流体パウチ内に、ｐ−アミノフェノールホスフェートを含む水性試薬が存在する。
作動時に、ＴＢＩを患うことが推測される対象に由来する試料が、検査カートリッジの保持チャンバーへと添加され、カートリッジが、ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）リーダーへと挿入される。カートリッジ内のポンプエレメントが、試料を、チップを含有する導管へと押し出す。試料は、センサーと接触させ、酵素コンジュゲートを、試料へと溶解させる。試料は、センサーにわたり振動させて、約２〜１２分間にわたる、サンドイッチの形成を促進する。アッセイの最後から二番目のステップにおいて、試料は、廃液チャンバーへと押し出され、アルカリホスファターゼ酵素に対する基質を含有する洗浄液が、過剰量の酵素コンジュゲート及び試料を、センサーチップから洗い落とすのに使用される。アッセイの最後のステップにおいて、アルカリホスファターゼ標識は、ｐ−アミノフェノールホスフェートと反応して、リン酸基を切断し、作業電極において、遊離ｐ−アミノフェノールを、電気化学的に酸化させる。測定された電流に基づき、リーダーは、組み込まれたアルゴリズム及び工場において決定された較正曲線により、ＴＢＩバイオマーカーの、試料中量を計算することが可能となる。
本明細書において記載された方法及びキットは、必然的に、イムノアッセイを実行するための、他の試薬及び方法を包含する。例えば、当技術分野において公知であり、かつ／又は、コンジュゲート希釈剤及び／若しくは較正物質希釈剤として、例えば、洗浄に用いるように、たやすく調製若しくは最適化されうる、多様な緩衝液が包含される。例示的なコンジュゲート希釈剤は、ある特定のキット（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ）において利用され、２−（Ｎ−モルホリノ）エタンスルホン酸（ＭＥＳ）、塩、タンパク質ブロッキング剤、抗微生物剤及び洗浄剤を含有する、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）コンジュゲート希釈剤である。例示的な較正物質希釈剤は、ある特定のキット（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ａｂｂｏｔｔ Ｐａｒｋ、ＩＬ）において利用され、ＭＥＳ、他の塩、タンパク質ブロッキング剤及び抗微生物剤を含有する緩衝液を含む、ＡＲＣＨＩＴＥＣＴ（登録商標）ヒト較正物質希釈剤である。加えて、２００８年１２月３１日に出願された、米国特許出願第６１／１４２，０４８号において記載されている通り、シグナル発生の改善は、例えば、シグナル増幅剤としてのシグナル抗体へと連結された核酸配列を使用する、ｉ−ＳＴＡＴ（登録商標）カートリッジフォーマットにおいて得られうる。ｉ−Ｓｔａｔに使用された適合など、カートリッジの、マルチプレックス使用への適合については、例えば、その内容が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第６，４３８，４９８号などの特許文献において記載されている。
本明細書において記載された方法及びキットはまた、単一分子カウンティングも伴いうる。ある特定の実施形態において、解析物を解析するための方法は、試料中に存在する解析物を評価するステップを伴いうる。ある特定の実施形態において、評価するステップは、解析物の試料中の存在及び／又は解析物の試料中濃度を決定するために使用されうる。ある特定の実施形態において、方法はまた、試料中に存在する、複数の異なる解析物の存在及び／又は濃度を決定するためにも使用されうる。
１つ以上の目的の解析物の単一分子の検出を可能とする、当技術分野において公知である、任意のデバイスが、本明細書において記載されたシステムにおいて使用されうる。例えば、デバイスは、マイクロ流体デバイス、デジタルマイクロ流体デバイス（ＤＭＦ）、表面音響波ベースのマイクロ流体デバイス（ＳＡＷ）、統合型ＤＭＦ／解析物検出デバイス、統合型ＳＡＷ／解析物検出デバイス又はロボットベースのアッセイ処理ユニットでありうる。使用されうる他のデバイスの例は、Ｑｕａｎｔｅｒｉｘ ＳＩＭＯＡ（商標）（Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ）、Ｓｉｎｇｕｌｅｘ製の単一分子カウンティング（ＳＭＣ（商標））技術（Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ、例えば、その内容が、参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第９，２３９，２８４号を参照されたい。）などを含む。
他の検出法は、ナノポアデバイス又はナノウェルデバイスの使用を含む又はこれらにおける使用に適合させうる。ナノポアデバイスの例については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれている、国際特許公開第２０１６／１６１４０２号において記載されている。ナノウェルデバイスの例については、参照によりその全体において本明細書に組み込まれている、国際特許公開第２０１６／１６１４００号において記載されている。
本明細書において記載された方法及びキットは、ＤＩＡ−ＭＳ、ＤＤＡ−ＭＳ又はＳＲＭ／ＭＲＭ−ＭＳ又はＰＲＭ−ＭＳを使用する質量分析を伴いうる。ある特定の実施形態において、解析物を解析するための方法は、試料を、解析物の存在について評価するステップを伴いうる。ある特定の実施形態において、試料を、解析物の存在について評価するステップは、解析物又は断片の、試料中の存在及び／又は濃度を決定するために使用されうる。ある特定の実施形態において、方法はまた、複数の、異なる解析物又は解析物断片の、試料中の存在及び／又は濃度を決定するためにも使用されうる。定量は、内部対照のタンパク質又はペプチド断片を使用して実施されうる。
本明細書の、ある特定の実施形態は、外傷性脳損傷などの疾患を評価するのに利用されると有利であるが、アッセイ及びキットはまた、適宜、任意選択的に、他の疾患、障害及び状態における多様なバイオマーカーを評価するのにも利用されうる。
アッセイ法はまた、外傷性脳損傷などの疾患を改善する化合物を同定するのにも使用されうる。例えば、本明細書において記載された、多様なバイオマーカーのうちのいずれかを発現させる細胞は、候補化合物と接触させうる。本明細書において記載された方法及びアッセイを使用して、化合物と接触した細胞内の、これらのバイオマーカーのうちの１つ以上の発現レベルは、対照細胞内の発現レベルと比較されうる。
本開示は、以下の非限定例により例示された、複数の態様を有する。
１５．実施例
当業者に、本明細書において記載された、本開示の方法の、他の適切な改変及び適合は、容易に適用可能かつ認識可能であり、本開示の範囲又は本明細書において開示された態様及び実施形態から逸脱しない限りにおいて、適切な同等物を使用してなされうることが容易に明らかとなる。さて、本開示について詳細に記載してきたが、これは、本開示の一部の態様及び実施形態を例示することだけを意図するものであり、本開示の範囲に対して限定的であると考えられるべきではない、以下の例を参照することにより、より明確に理解される。本明細書において言及された、全ての雑誌の参考文献、米国特許及び刊行物の開示は、参照によりそれらの全体において本明細書に組み込まれている。
本開示は、以下の非限定例により例示された、複数の態様を有する。
［実施例１］
外傷性脳損傷についての、マルチモダリティー分類スキームの開発
本研究の目標は、損傷の性質（種類）及び重症度を指し示す、脳損傷についての分類スキームを開発することであった。外傷患者を、解析のための３つの群：脳損傷だけの群、脳以外の損傷だけの群及び損傷の組合せ群へと分けた。脳損傷による外傷群及び脳以外の損傷による外傷群を、互い及び脳外傷／脳以外の外傷の組合せ群と比較した。これらの外傷群を、非外傷対照と比較した。外傷患者に由来するＣＳＦを、非外傷患者に由来するＣＳＦと比較した。副次的目標は、単独の尺度又は組合せによる尺度のうちのいずれかが、ＴＢＩの後における臨床転帰の予測因子としての有用性を有するのかどうかを決定することであった。
外傷性脳損傷についての、客観的なマルチモダリティー分類スキーム及び転帰尺度を、いくつかの手段：１）血液ベースのバイオマーカー；２）生理学的測定及び査定並びに３）放射線手段（ＣＴ及び３テスラＭＲＩ（また、３Ｔ ＭＲＩとしても公知である））に基づき開発した。血液ベースのバイオマーカーは、どの細胞型がダメージを受けたか（例えば、ニューロンと対比したグリア）を指し示すことが可能であり、放射線は、構造変化を検出しうる。
研究施設：外傷患者を、ミネソタ州のＨｅｎｎｅｐｉｎ Ｃｏｕｎｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ（ＨＣＭＣ）において募集した。参加者は、ＨＣＭＣの救急科（ＥＤ）若しくはトラウマベイに搬送される又は神経外科へと直接移送される患者である、全ての年齢の外傷患者を含んだ。主要な精神障害又は神経障害を有する、発達異常である又は囚人である場合、外傷患者を除外した。対象は、全ての外傷入院についての診療記録の検索及び院内において利用された、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｓｕｒｇｅｏｎｓの外傷登録との照合により同定した。
全ての外傷患者は、搬送時に、スクリーニングのために募集され、１）標準化された（テンプレート化された）既往歴及び身体診察；２）他の適応のために採血する場合の、血清バイオマーカーについての解析；３）臨床的に適応の場合の放射線研究；４）１）〜３）により、臨床的に適応の場合の追跡；５）手術室へと運ばれる患者だけにおける、病理学的検体解析；６）脳室造瘻カテーテルを施される患者だけにおける、ＣＳＦ解析；７）Ｌｉｃｏｘ検査を受ける患者だけにおける、脳組織酸素化解析並びに８）臨床的に適応の場合の、ＴＢＩセンターにおける転帰評価を受けた。入院時に、潜在的な参加者は、説明同意文書を提出する前に、２４時間にわたるスクリーニング過程（表２）を受けた。
Figure 2021509475
上記を経た、同意した患者及び対照（年齢及び性別をマッチさせた）を、以下：１）ゲノム、血清及びＣＳＦについてのスクリーニング；並びに２）選ばれた状況（被験群における血清マーカー；対照群における正常マーカー）下における３Ｔ ＭＲＩのさらなる研究にかけた。外傷患者は、脳以外の損傷患者、ＣＴ陰性患者〜手術を要求する構造的脳損傷患者の範囲の全スペクトルを含んだ。患者及び対照を、約１５カ月間にわたり募集した。生存する外傷対象は、ＨＣＭＣによる医療を終えるまで追跡した。ＥＲにおいて査定され、退院した対象は、調査研究のための追跡に招聘した。
スクリーニング過程は、標準化され、テンプレート化された、既往歴及び身体診察を含んだ。テンプレートは、患者が、頭部外傷を患っているのかどうかについて尋ねる、１つのさらなる質問を伴う、ＥＰＩＣにおいて現行の、「Ｓｕｒｇｅｒｙ−Ｔｒａｕｍａ Ｈｉｓｔｏｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃａｌ」テンプレートであった。患者が、頭部外傷を患っていた場合、さらなる情報のために、３つのセクションが、自動的にドロップダウンした。第１のセクションは、Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ ｔｒａｕｍａ ｈｉｓｔｏｒｙ ａｎｄ ｐｈｙｓｉｃａｌテンプレートからの情報であって、くも膜下グレード、出血グレード、脳内出血及び社会的履歴（教育の水準、雇用、生活環境及び民族）を含む情報であった。後の２つのセクションは、標準化された脳損傷評価ツール：Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｏｎｃｕｓｓｉｏｎ（ＳＡＣ）及びＳｙｍｐｔｏｍ Ｓｅｖｅｒｉｔｙ Ｓｃｏｒｅ（ＳＳＳ）であった。これらの評価の小児科版も利用可能であり、適応の場合、使用した。加えて、「Ｓｕｒｇｅｒｙ Ｔｒａｕｍａ Ｈｉｓｔｏｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃａｌ」テンプレートに既に含まれていた、意識喪失についての質問は、意識喪失事象及び患者の現在の見当識について、より明確な理解をもたらす質問のサブセットと共に、このドロップダウンセクションへとコピーされた。入院から最初の２４時間においてなされた、臨床的に最も正確な評価を、将来のデータ解析のために使用した。
非ＴＢＩ対象もまた、以下の基準：登録時に、１５〜５０歳の間であること；性別、年齢、利き手、教育水準及びスキャナー基準の点において、ＴＢＩ集団と同様の特徴を有すること；並びに対象に、説明同意文書を提出させる又は親若しくは年少者のための保護者により同意し、研究の全ての部分への参加のための研究評価を完了させるのに十分に明瞭な会話及び言語の流暢さが可能であることに基づき組み入れた。非ＴＢＩ対象は、過去６カ月以内に、軽度ＴＢＩを有すると診断されている場合；過去１０年以内に、中等度〜重度のＴＢＩ（ＧＣＳ＜１３）の既往を有する場合；過去１０年間に、再発性の発作を伴うてんかんを有する場合；過去１０年間に、ＤＡＳＴ−１０スクリーニングに基づく、薬物の乱用（マリファナを除く）がある場合；ＡＵＤＩＴ−Ｃスクリーニングに基づく、アルコールの乱用がある場合；些少であると分類され、研究の実行又は完全性に影響を及ぼさないと予測される障害を除く、進行中の、主軸Ｉ又はＩＩの精神障害を有する場合；脳腫瘤、神経外科、脳卒中、白質疾患及び／又は認知症の履歴を有すること；既知の認知機能不全又は構造的脳疾患／脳奇形を有する場合；既往のニューロイメージング所見において、構造的脳損傷を有する場合；抗精神病薬／抗てんかん薬を処方されたことがある場合；研究手順を、正確に完了させることが可能でない場合（緊急の医療上の必要に起因する場合など）若しくはこの意思がない場合又は治験責任医師の意見により、研究結果に影響を及ぼしうる、任意の利益相反を有する場合又はＭＲＩ走査に対する禁忌であって、ａ．施設の慣行に従う、進行中の妊娠又は推測される妊娠；ｂ．治験責任医師に従う、研究参加時において対象への危険を構成しうる、他の状態及びｃ．施設のＭＲ安全性方針のいずれか一部に準拠できないことを含む禁忌を有する場合に除外した。
検体の回収及び操作：各検体の回収において、最大４０ｍＬ（茶さじ約３杯）の血液を得た。試験管２本の血清及び同２本の血漿を、来院１、２、４及び５回目に採取した。来院３回目に、試験管２本の血清、試験管１本の血漿及び試験管１又は２本の全血を採取した。これらの研究検体を、処理し、アリコート分割し、凍結させ、バイオマーカー検査及び保存のために、Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓへと送付した。試料アリコートを、さらなるＴＢＩバイオマーカー検査のために、検査施設へと送付した。検体は、必要な測定を実施するのに十分な容量を含有しない場合；著しく溶血している、脂質異常性若しくは黄疸性である場合；適正な種類の回収試験管に回収されていない場合；適正にラベル付けされていない場合又は回収施設若しくはＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓにより適正に保存されていない場合、研究に評価不能であると考えた。
血清／血漿検体は、採血を介して得た。臨床目的のために、入院時に、採血を得た場合、調査研究目的のために、さらなる検体を得、保持した。臨床目的のために、血液を採取しなかった場合、熟練の調査研究従事者が、調査研究に要求される血液を採取した。標準治療により、中心静脈アクセスが要求されない場合、血液は、静脈穿刺により採取したが、中心静脈アクセスの場合、血液は、このアクセスを介して採取した。１回目の採血は、入院時に行い、２回目の採血は、１回目の３〜６時間後に行い、３回目の採血は、外傷の２４時間後において行った。ＴＢＩに対する感受性についての遺伝子マーカー又はＴＢＩの予測マーカーを見出す、発見の取組みもまた、進行中であった。各時点において、４０ｍＬ（茶さじ３杯未満）：２０ｍＬの血清（試験管２本）及び２０ｍＬの血漿（試験管２本）ずつの血液を回収した。来院１回目に、試験管２本の血清及び試験管１本の血漿だけを、血液バイオマーカー解析のために回収した。この全血回収は、全血試験管内の６．０ｍＬであった。患者を、来院１回目ではなく、来院２回目において登録した場合、血液バイオマーカー解析のために、試験管２本の血清及び試験管１本の血漿を回収した。この全血回収は、全血試験管内の６．０ｍＬであった。
採取される血液の量は、ＮＩＮＯＳ標準化表（表３）に従い制限した。採血の試行回数は、７歳未満の小児の場合、２回の試行に制限した。ＮＩＮＯＳ標準化表が、研究に十分な血液の採取を可能としない場合又は小児患者における採血への試行が２回にわたり失敗した場合、本研究におけるバイオマーカー解析を完了させるために、臨床標準治療下において採取された、残りの血液試料へのアクセスを求めた。この採血は、外傷性脳損傷と関連する、最大３９０の、血液ベースのバイオマーカーについての解析を可能とした。
Figure 2021509475
初期身体診察に加えて、手術室へと送られた患者は、病理学的検体解析を経、Ｌｉｃｏｘ検査を受けた患者は、脳組織酸素化情報を記録され、脳室造瘻カテーテルを施された患者は、解析のために、ＣＳＦを回収された。ＣＳＦを解析するために、５．０ｍＬを、血液を採取した間隔と同じ間隔において回収した。標準治療に従い、放射線研究を実施した。説明同意文書が得られるまでは、スクリーニング過程時に実施された評価のいずれも、残りのデータと共に解析することはなかった。患者が、最終的に、調査研究に同意しなかった場合、検体及び初期評価は廃棄した。
参加者が退院した後、臨床経過についての情報であって、ＥＤにおいて過ごした時間、使用された任意の手術又は他のニューロモニタリング法及び急性ケア転帰の査定を含む情報のために、患者の医療記録にアクセスした。患者が、ＩＣＵにおいて時間を過ごした場合、この時間からも、モバーグモニターによるデータ及び毎日の治療集中レベルを含む情報を抽出した。
外傷患者を、解析のための３つの群：脳損傷だけ、脳以外の損傷だけ及び損傷の組合せへと分けた。年齢及び性別をマッチさせた、２つの対照群：非外傷対照及びＣＳＦ対照を、この研究に組み入れ、ＥＤから募集した。非外傷対照は、外傷を経ていない患者であり、この群は、大部分、脳損傷のために入院した患者の家族及び友人から構成されていた。いずれの対照群も、採血及び認知、神経並びに生活の質の評価（ＳＡＣ、ＮＯＳ−ＴＢＩ、ＱｏＬＡＢＩ）を含む、単回の集中評価を受けることに同意した。選択的な、脳室造瘻カテーテル又は腰部ドレナージカテーテルを施される患者は、ＣＳＦ対照群の一部となることに、（手術前に）同意した。５ｍＬのＣＳＦを、この対照群内の患者の脳室造瘻カテーテルから、それらの標準治療の一部として、脳室造瘻カテーテルを施された研究群の部分から回収されたＣＳＦとの比較のために回収した。ＣＳＦ対照群はまた、他の２つの対照群と同じ集中評価であって、採血及び３Ｔ ＭＲＩスキャンを含む集中評価に参加する機会も与えられた。
追跡：研究の追跡部分に参加することに同意した全ての患者は、帰院するように請われた。帰院した患者は、２週間後、４週間後、数カ月後、６カ月後及び１年後において、ＴＢＩ Ｏｕｔｐａｔｉｅｎｔ Ｃｌｉｎｉｃに来院した。患者が、ＴＢＩ Ｏｕｔｐａｔｉｅｎｔ Ｃｌｉｎｉｃにおいて、日時の予約をしなかった場合、これらの時点において、Ｂｒａｉｎ Ｉｎｊｕｒｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂ（ＰＬ．６１０）へと来院するように、日時を予約した。表４は、各評価のための時系列を提示する。バイオマーカー解析のための採血は、上記で記載した方法と同じ方法により、５つの追跡時点の各々において行った。表１０及び１１に列挙した転帰評価バッテリーは、３カ月後、６カ月後及び１年後に完了させた。標準治療の一部である放射線スキャンに、参加者の診療記録を介してアクセスしたが、選ばれた同意参加者及び対照もまた、それらの脳損傷の、２週間後及び６カ月後に、３Ｔ ＭＲＩスキャンを受けた。各ＭＲＩ検査は、約１時間を要し、以下のパルスシーケンス：（１）矢状面短ＴＲローカライザー、（２）横断面Ｆｓｅイメージング、（３）横断面ＦＬＡＩＲイメージング、（４）横断面ＳＷＩイメージング、（５）横断面Ｔ２＊イメージングを含んだ。患者が、追跡のために来院できない場合、損傷の３カ月後及び１年後に、電話を介して連絡して、電話により実施されるようにデザインされた、１５〜２０分間にわたる認知評価である、ＢＴ ＡＣＴを完了させた。
Figure 2021509475
Figure 2021509475
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統計学的解析の計画：患者１例ごとに、若しくはインシデントバケットからの時間ごとに又はこれらの両方について、各バイオマーカーについて採取された最大濃度を検討することにより、バイオマーカーデータを解析した。バイオマーカーの血中濃度と、臨床神経学的データ及び磁気共鳴イメージングデータとの関連を決定する主要目的に取り組むため、複合解析を用いた。主成分分析を使用して、どのバイオマーカーが、同じ分散を説明しうるのか又はバイオマーカーが、極めて小さな分散に寄与しているのかどうかについて検討した。バイオマーカーを、ロジスティック回帰分析において使用し、一部のバイオマーカーを、主成分分析からの結果及び臨床インプットに基づき除外した。０．０５の有意水準を、ロジスティック回帰分析のために使用した。また、ＲＯＣ解析も使用して、このデータセットについて、ＭＲＩ状態又は神経学検査の転帰を決定するときの、各バイオマーカーの予測能力を検討した。
［実施例２］
ＤＩＡ−ＭＳ解析
発見ベースのデータ非依存型取得を使用する質量分析（ＤＩＡ−ＭＳ）を、軽度ＴＢＩを伴う個体及び対照に由来する４９例の血漿に対して実行した。これらの試料のうちの１５例は、既知の外傷性脳損傷を有さない健常患者に由来した。残りの３４例の試料中、３３例の試料は、軽度外傷性脳損傷（ｍＴＢＩ）を被っていると医師により診断された患者に由来し、残りの試料は、重度外傷性脳損傷（ｓＴＢＩ）を被っていると医師により診断された患者に由来する血漿である。コホート内の患者の各々についてのＧＣＳスコアもまた得たが、全ては、正常範囲内にあった（プールされた重度ＴＢＩ試料を例外とする）。ＣＴスキャンを、対象のサブセットに対して実施し、ＣＴ陽性対象に由来する試料を組み入れた（図１Ａを参照されたい。）。血漿試料を、トリプシンにより消化して、ペプチドを作出し、これを、ＤＩＡ−ＭＳを使用して解析した（ペプチドの同一性は、下記に組み入れる。）。全ての定量可能なペプチド及びタンパク質を組み入れた。２つの固有のペプチドに基づくＧＦＡＰ検出もまた、データから選択的に抜き出し、図１に組み入れ、イムノアッセイ（ＥＬＩＳＡベースのＧＦＡＰアッセイ）を使用して独立に評価されたＧＦＡＰレベルもまた、図１に組み入れた。
上記した方法を使用して、ＴＢＩの多様なクラス及びサブクラスについての、ＴＢＩバイオマーカーを同定した。表７は、重度ＴＢＩ（検出可能なＧＦＡＰレベルを伴う、プールされたｓＴＢＩ試料によりクラスター化された）と関連する候補ＴＢＩバイオマーカーを示す。ＳＡＭＰは、ｓＴＢＩ群において下方調節され（健常対照群内において上方調節され）、ＣＡＮＤ１及びＧＬＯ２は、ｓＴＢＩ群において上方調節された（健常対照群内において下方調節された）。ＥＲＡＰ１、ＳＹＹＣ、Ｃ１ＲＬ及びＡＴＰＧは、ｓＴＢＩ群内だけにおいて検出され、健常対照においては検出されなかった（すなわち、固有の発現）。
Figure 2021509475
教師なしの解析：教師なしのクラスター化解析を、ＤＩＡ−ＭＳにより得られたプロテオームデータへと適用して、患者コホート試料を、どのようにしてクラスター化し、任意の臨床的群分けにより不偏化するのかを、それらの分子プロテオームプロファイルに従い決定した。この解析における帰無仮説は、プロテオームデータが、ＴＢＩの存在又は重症度に関連するクラスター化パターンを伴わずに、全ての試料にわたり、ランダムに散布されることである。図１Ａに示される通り、クラスター化解析の対照ブランチ（５つの群分けのうちの、最下方の群分け）は、１５例中１０例の健常試料を、ＴＢＩ試料から弁別することに成功した。最終的に、４つのさらなるサブクラスターが明らかとなったが、これらは、軽度ＴＢＩのサブクラスに対応する。これらのデータをまとめ、下記に概括する。
教師なしのクラスター解析は、５つのクラスターをもたらした（図１Ａ〜１Ｃ）。これは、健常個体と名指された、元の１０例の試料からなる、「健常」対象のクラスター（すなわち、対照の群分け）を含む。加えて、これらのデータ及び随伴する解析は、軽度ＴＢＩの、４つの顕著に異なるサブクラスの存在を裏付けた。明確さ及び差別化を目的として、これらのクラスターの各々に、番号：ＴＢＩ−１クラスター＝軽度ＴＢＩサブクラス１；ＴＢＩ−２クラスター＝軽度ＴＢＩサブクラス２；ＴＢＩ−３クラスター＝軽度ＴＢＩサブクラス３及び複合ＴＢＩクラスター＝軽度ＴＢＩサブクラス４（「合併軽度」ＴＢＩともまた称する）を割り当てた。
「軽度ＴＢＩサブクラス１」（ＴＢＩ−１）とは、軽度ＴＢＩを有すると分類され、また、サブクラス２、３又は４の各々のうちの、対照（例えば、健常対照又はＴＢＩを負っていない対照）と異なり、中等度〜重度のＴＢＩを伴う対象と異なり、軽度ＴＢＩを伴う対象と異なる血漿プロテオームシグネチャーも呈する対象を指す。「軽度ＴＢＩサブクラス２」（ＴＢＩ−２）とは、軽度ＴＢＩを有すると分類され、また、サブクラス１、３又は４の各々のうちの、対照（例えば、健常対照又はＴＢＩを負っていない対照）と異なり、中等度〜重度のＴＢＩを伴う対象と異なり、軽度ＴＢＩを伴う対象と異なる血漿プロテオームシグネチャーも呈する対象を指す。「軽度ＴＢＩサブクラス３」（ＴＢＩ−３）とは、軽度ＴＢＩを有すると分類され、また、サブクラス１、２又は４の各々のうちの、対照（例えば、健常対照又はＴＢＩを負っていない対照）と異なり、中等度〜重度のＴＢＩを伴う対象と異なり、軽度ＴＢＩを伴う対象と異なる血漿プロテオームシグネチャーも呈する対象を指す。「軽度ＴＢＩサブクラス４」（複合型ＴＢＩ）とは、軽度ＴＢＩを有すると分類され、また、サブクラス１、２又は３の各々のうちの、対照（例えば、健常対照又はＴＢＩを負っていない対照）と異なり、中等度〜重度のＴＢＩを伴う対象と異なり、軽度ＴＢＩを伴う対象と異なる血漿プロテオームシグネチャーも呈する対象を指す。加えて、軽度ＴＢＩサブクラス４を伴う対象は、重度ＴＢＩを有する対象の、プールされた試料から得られたプロテオームシグネチャーに相似するプロテオームシグネチャーを呈するので、本明細書において、このサブクラスは、「合併軽度ＴＢＩ」と称される。本明細書において開示されたデータにおいて、軽度ＴＢＩサブクラス４クラスター（「複合型ＴＢＩ」）は、最大数の、ＧＦＡＰレベル（ＥＬＩＳＡベースのＧＦＡＰアッセイ及びＧＦＡＰ質量分析に基づく）が上昇した対象を含有し、ＣＴスキャンが陽性である対象だけを含有した。
試料の由来を匿名化し、教師なしのクラスター化が完了したら、４つの鍵となるパラメータを、個別に組み入れ、これらを、図１Ａに示した。これらのパラメータは、グリアバイオマーカースコア（陽性（グレー）（ＥＬＩＳＡベースのＧＦＡＰアッセイ）、陰性（黒）、境界域（白）、未定又は情報を欠く（ライトグレー））；ＣＴスキャンスコア（陽性（グレー）、陰性（黒）又は実施なし（ライトグレー））；ＭＳを使用して得られた、ＧＦＡＰタンパク質発現レベル（最低（黒）〜最高（グレー）の間の連続数値）；性別（男性（グレー）又は女性（黒））；及び年齢（２０（黒）〜５９（グレー）歳の間の連続数値）を含んだ。
この解析に基づき、疾患徴候としてのＴＢＩが、ＴＢＩバイオマーカーシグネチャーに基づき、記載及び類別されうる、あるスペクトルの損傷状態を含むことが結論づけられた。４つの異なるクラスターを、４つの異なる軽度ＴＢＩのサブクラスに対応するものとして同定した（図１Ｂ〜１Ｃ）。複合ＴＢＩクラスターは、ＣＴスキャンが陽性である個体に限る、重度ＴＢＩプールされた試料、大多数のＧＦＡＰバイオマーカー陽性試料（イムノアッセイにより検出された）及び大多数のＧＦＡＰ陽性試料（ＭＳデータに基づく）を含有するので、軽度ＴＢＩサブクラスのうちの最重度のサブクラスを表す。
対照クラスターは、全ての臨床的マーカー及び生化学マーカーについて陰性であり、公知のＴＢＩを伴わない患者に由来する試料をもっぱら含有するので、健常個体を表す。この群を、全ての後続の解析のための、健常対照セットとして使用した。
ＴＢＩ−１クラスターは、重度が最も小さい、軽度ＴＢＩのサブクラスを表す。このクラスターは、一部の指定の対照試料及びＭＳによる、低度であるが、検出可能なＧＦＡＰレベルを伴う試料を含有する。加えて、図１Ｂ〜１Ｃに示される通り、教師なしのクラスター化解析は、２つのさらなる軽度ＴＢＩサブクラスである、ＴＢＩ−２クラスター及びＴＢＩ−３クラスターの同定をもたらした。ＴＢＩ−２及びＴＢＩ−３いずれの群分けも、ＴＢＩ−１クラスター（重度が最も小さい）及び複合ＴＢＩクラスター（重度が最も大きい）のいずれとも顕著に異なることが示された、別個のクラスターを表す。
したがって、これらのデータ及び付随する解析は、４つの顕著に異なる軽度ＴＢＩのサブクラスの存在を裏付ける。
次に、これらの４つの「非健常」サブクラスターを、「健常」クラスター（対照）に対して比較し、この比較を、ｌｏｇ２［倍数変化］値として表した。表８Ａ及び８Ｂは、それらのｌｏｇ２［倍数変化］値に従い、それぞれ、１０の最も示差的に調節されたタンパク質及び１０の最も大きく上方調節されたタンパク質の同一性を含む。
Figure 2021509475
Figure 2021509475
疾患クラスターの各々を差別化するのに加えて、予備的層別化解析を、推定クラス又は軽度ＴＢＩサブクラスの重症度に基づき実行した。対応のある一対比較を、「健常」対照クラスターの非存在下における、「非健常」クラスターの各組合せの間において実施した。これらのデータを、下記の表９に、ｌｏｇ２［倍数変化］値の大きさが最も大きい、各群内１０ずつのタンパク質として、それらのＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤと共にまとめる。
Figure 2021509475
次いで、各クラスターに固有のタンパク質は、ＴＢＩの所与のサブクラスについての排他的候補ＴＢＩバイオマーカーとして、潜在的に含まれる可能性があるので、これらを同定しようとする取組みにおいて、データを評価した（図２Ａ〜２Ｃ）。教師なしのクラスター化解析から導出された、５つの主な試料サブクラスターの各々は、最小で５つの、固有に発現したタンパク質を含有した。これらのタンパク質は、各サブクラス内において、固有に増大したタンパク質と共に含まれうる（表８及び９）。図２Ａ〜２Ｃは、教師なしの解析に基づき、試料クラスターの間において、共通のタンパク質及び固有のタンパク質を含む。教師なしのクラスター化解析から導出された、５つの主な試料サブクラスターの各々は、最小で５つの、固有に発現したタンパク質を有する。図２Ａは、同定された５つのサブグループクラスターの間において、共通のタンパク質及び固有のタンパク質を伴うベン図を含み；図２Ｂは、各サブグループクラスター内において定量された、全タンパク質及び固有タンパク質についての数値カウントを含む。図２Ｃは、各サブグループクラスター内において定量された固有タンパク質についての、Ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ及び簡略名を含む。
教師ありの解析：盲検化した教師なしの解析が完了したら、試料を、それらが由来する患者のＴＢＩ状態に関して匿名化した。このさらなる情報は、教師ありの解析の、何回かにわたる反復を実施することを可能とした。
この教師ありの解析の、最初の反復において、ＴＢＩ由来試料から得られた、全てのタンパク質数量を、非ＴＢＩ試料（患者の特徴付けに基づく）に由来するタンパク質数量と比較し、タンパク質を、それらの示差的発現の大きさに従いランク付けした。これは、２つの個別の基準：１）タンパク質を、変化の方向性（上方調節及び下方調節された）に関わらず、それらの示差的発現の大きさに従いランク付けすること；及び２）上方調節されたタンパク質は、バイオマーカーとしての検出に、より好適であるため、タンパク質を、それらの示差的に上方調節された発現の大きさに従いランク付けすることに従い行った。これらは、軽度ＴＢＩを、対照から識別するために有用な、高確率のＴＢＩバイオマーカー候補である。これらのデータを、表１０及び図２Ａ〜２Ｃにまとめる。
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図３Ａ〜３Ｂは、健常試料と、ＴＢＩ患者試料との間において、共通又は固有であるタンパク質についての代表的ベンプロットを含む。各群内の全ての試料中において検出されたタンパク質だけを、この解析に組み入れた（図３Ａ）。図３Ｂは、全てのＴＢＩ試料中において固有に発現した、８つのタンパク質についてのリストであって、それらのＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ及びタンパク質名を含むリストを含む。ＡＬ９Ａ１及びＳＹＴＣが、脳において発現されるのに対し、ＦＡ５は、凝固に関する（いずれの表記も、ＵｎｉＰｒｏｔによる注釈付き情報（ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ）に基づく）。これらのタンパク質は、サブクラス１〜３の全て（ＴＢＩ−１、ＴＢＩ−２、ＴＢＩ−３）及びより重度である、軽度ＴＢＩサブクラス４（複合ＴＢＩ）を包含する、３４例のＴＢＩ試料全てにおける発現の、１５例の健常対照試料コホートと比較した増大又は固有の発現を示す（図１及び２を参照されたい。）。図３Ａ〜３Ｂは、高確率の群分けを表し、これらのタンパク質のうちの一部を、教師ありのモデル及び教師なしのモデルによるタンパク質パネルの一部として見出した。
加えて、下記の表１１は、重度ＴＢＩ、軽度ＴＢＩ又はＴＢＩの非存在など、対象のＴＢＩを決定するための手法のうちの、より総合的なものを提示する。表１１は、差違モデルを使用して、ＴＢＩの全てのクラスにわたり見出されたタンパク質を含む。
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ブートストラップフォレスト解析：教師ありの解析のさらなる反復において、定量的ＤＩＡ−ＭＳデータについての、従来の教師ありの解析に対する代替的手法として、ブートストラップフォレスト解析を実施した。この解析は、タンパク質を、全体のうちの、それらの寄与割合に従いランク付けするが、これを、表１２にまとめる。
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全体的なデータセットを、ブートストラップフォレスト解析を介してまとめることに加えて、個々のタンパク質の寄与を評価した。図４Ａ〜４Ｅにおいて示される通り、この手法を、予測モデルの基準を満たす、合計５つの個別の決定木にまとめる。この解析は、所与のタンパク質が、ＴＢＩを伴う患者を、それらの健常対応物から識別することが可能なバイオマーカーとして用いられる能力についての定量的カットオフを、関連する診断確率と共に定めた。単一のタンパク質が、この区別を行うことが十分に可能ではない場合、複数のタンパク質の組合せを、同定及び規定した。
［実施例３］
ＴＢＩバイオマーカーの、タンパク質及びペプチド断片
質量分析法は、典型的に、質量分析計における、物理的変化を経たイオンの検出を伴う。しばしば、物理的変化は、選択された前駆体イオンをフラグメント化すること及び結果として得られるフラグメントイオンの質量スペクトルを記録することを伴う。フラグメントイオンの質量スペクトル中の情報は、前駆体イオンの構造の解明における、有用な一助となることが多い。質量分析／質量分析（ＭＳ／ＭＳ又はＭＳ２）スペクトルを得るのに使用された、一般的な手法は、適切なｍ／ｚ解析器により、選択された前駆体イオンを単離し、解離を誘導するために、前駆体イオンを、中性ガスとのエネルギー衝突下に置き、最後に、質量スペクトルを生成するために、フラグメントイオンを質量分析にかけることである。
本開示に基づき、当業者に認知される通り、ＤＩＡ−ＭＳ（又はＤＤＡ−ＭＳ）において使用された、このようなペプチド断片は、タンパク質／バイオマーカーを同定するのに使用されうる。より具体的に、以下の表は、本明細書において同定及び記載され、それらの対応するペプチド断片配列と並んで列挙された、多様なＴＢＩバイオマーカーのＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ番号及び簡略名を含む。
ＤＩＡ−ＭＳに加えて、ＤＤＡ−ＭＳ及びＳＲＭ／ＭＲＭ−ＭＳは、多様なペプチド解析物の、信頼でき、かつ、包括的な定量のために使用されうる。ＳＲＭ／ＭＲＭ−ＭＳは、一般に、三連四重極様測定器上において実施されるが、この場合、選択性の増大は、衝突誘導解離を介して得られる。２つの質量分析器（Ｑ１及びＱ３）を、静的質量フィルターとして使用して、選択された前駆体の特定のフラグメントをモニタリングするのは、非走査型質量分析法である。三連四重極型測定器上において、限定せずに述べると、エレクトロスプレーイオン化、化学イオン化、電子イオン化、大気圧化学イオン化及びマトリックス支援レーザー脱着イオン化を含む、多様なイオン化法が使用されうる。前駆体及び選択されたフラグメントイオンと関連する、質量対電荷（ｍ／ｚ）値の特殊な対は、「遷移」と称される。検出器は、選択された遷移に合致するイオンについてのカウンティングデバイスとして作用し、これにより、時間経過にわたる強度分布を返す。ＭＲＭ−ＭＳとは、異なる前駆体／フラグメント対の間を、迅速に切り替えることにより、複数のＳＲＭ−ＭＳ遷移を、クロマトグラフィーによる時間スケール上の、同じ実験内において測定する場合である。典型的に、三連四重極型測定器は、一連の遷移を循環し、各遷移のシグナルを、溶出時間の関数として記録する。方法は、所与の解析物についての、複数の遷移の、クロマトグラフィーによる共溶出をモニタリングすることにより、さらなる選択性を可能とする。潜在的なペプチドを、本開示において概括された、異なる分類についての表１３〜２１に列挙する。
加えて、高分解度質量分析計を使用して、単一の解析において、全ての遷移についての、並列的検出がなされる、ＰＲＭ−ＭＳも使用されうる。ＰＲＭ−ＭＳは、選択されたペプチドを定量し（Ｑ１）、よって、タンパク質を定量するための、高選択性、高感度及びハイスループットをもたらす。ここでもまた、各タンパク質について、複数のペプチドが、特異的に選択されうる。ＰＲＭ−ＭＳ法は、質量分析計の四重極を使用して、標的前駆体イオンを単離し、ターゲティングされた前駆体イオンを、コリジョンセル内においてフラグメント化し、次いで、結果として得られるプロダクトイオンを、Ｏｒｂｉｔｒａｐ質量分析器内において検出する。ＰＲＭ−ＭＳは、四重極飛行時間（ＱＴＯＦ）質量分析計又は四重極−Ｏｒｂｉｔｒａｐハイブリッド型（ＱＯｒｂｉｔｒａｐ）質量分析計を使用して、ペプチド／タンパク質定量化を実行する。潜在的なペプチドを、本開示において概括された、異なる分類についての表１３〜２１に列挙する。
一部の実施形態において、本明細書において記載された方法は、生物学的試料（複数可）中の、ポリペプチド（複数可）又はタンパク質（複数可）の定量へと適用されうる。ポリペプチド又はタンパク質を含む、任意の種類の生物学的試料が、出発点で有ることが可能であり、本明細書における方法により解析されうる。実際、任意のタンパク質／ペプチド含有試料（例えば、組織、細胞）は、本明細書においてもたらされた方法のために使用されることが可能であり、これにより解析されうる。本明細書における方法はまた、消化により得られたペプチド混合物と共に使用される場合もある。ポリペプチド又はタンパク質の消化は、酵素的切断戦略、化学的切断戦略、物理的切断戦略又はこれらの組合せなど、任意の種類の切断戦略を含む。一部の実施形態に従い、本明細書において提示される方法の、以下のパラメータ：トリプシン（又は他のプロテアーゼ）による消化及びペプチドの除去、応答が最良のポリペプチド、応答が最良のタンパク質、応答が最良のペプチド、応答が最良の断片、フラグメント強度比（高ピーク強度及び再現可能なピーク強度の増大）、最適の衝突エネルギー及び方法の感度及び／又は特異度を最大化する、全ての最適のパラメータが決定される。
他の実施形態において、ポリペプチド及び／若しくは対応するタンパク質の定量又は対応するタンパク質の活性／調節が所望される。選択されたペプチドは、安定的同位体により標識され、目的のタンパク質の、絶対的定量を達成する、内部標準物質（ＳＩＬ）として使用される。定量された安定標識ペプチド類似体によるタグを、ペプチド試料へと、公知の量において添加し；その後、タグ及び目的のペプチドを、質量分析により定量し、タンパク質の内因性レベルの絶対的定量を得る。
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前出の詳細な記載及び付属の実施例は、例示的なものであるに過ぎず、併載の特許請求の範囲及びそれらの同等物だけによって規定される、本開示の範囲に対する限定として理解されないものとすることが理解される。
開示された実施形態に対する、多様な変化及び改変が、当業者に明らかである。この精神及び範囲から逸脱しない限りにおいて、限定せずに述べると、化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成、組成物、製剤又は本開示の使用法に関する変化及び改変を含む、このような変化及び改変がなされうる。
完全を期するために、本開示の多様な態様は、以下の番号付けされた条項に明示される。
条項１．少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、対象から得られた試料を検査するステップ；並びに試料中の、ＡＬ９Ａ１、ＡＴＰＧ、Ｃ１ＲＬ、ＣＡＮＤ１、ＥＰＩＰＬ、ＧＬＯ２、ＩＧＨＡ２、ＰＺＰ、ＳＹＴＣ、ＳＹＹＣ若しくはこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー若しくはこの断片を測定若しくは検出するステップ；及び／又は試料中の、ＡＢＨＥＢ、ＡＬ９Ａ１、ＤＮＭ１Ｌ、ＦＣＮ２、ＩＮＦ２、Ｋ２２Ｅ、Ｍ３Ｋ５、ＮＣＯＲ１、ＳＢＳＮ、ＳＹＥＰ、ＴＰＰ２若しくはこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー若しくはこの断片を測定若しくは検出するステップを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象が外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負った又は負った可能性があることを指し示す方法。
条項２．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＬ９Ａ１、ＡＴＰＧ、Ｃ１ＲＬ、ＥＰＩＰＬ、ＩＧＨＡ２、ＰＺＰ、ＳＹＴＣ、ＳＹＹＣ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択され；少なくとも１つのバイオマーカーが、健常対象から得られた試料中において、検出可能ではない、条項１に記載の方法。
条項３．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＴＰＧ、Ｃ１ＲＬ、ＳＹＹＣ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される、条項１又は条項２に記載の方法。
条項４．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＣＡＮＤ１、ＧＬＯ２又はこれらの組合せからなる群から選択され；ＣＡＮＤ１及びＧＬＯ２のレベルが、健常対象から得られた試料中のＣＡＮＤ１及びＧＬＯ２のレベルと比較して高い、条項１に記載の方法。
条項５．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＢＨＥＢ、ＡＬ９Ａ１、ＤＮＭ１Ｌ又はこれらの組合せからなる群から選択され；ＡＢＨＥＢのレベルが、健常対象から得られた試料中のＡＢＨＥＢのレベルと比較して高く；かつ／又はＡＬ９Ａ１及びＤＮＭ１Ｌのレベルが、健常対象から得られた試料中のＡＬ９Ａ１及びＤＮＭ１Ｌのレベルと比較して低い、条項１に記載の方法。
条項６．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、Ｍ３Ｋ５、ＳＢＳＮ、ＳＹＥＰ又はこれらの組合せからなる群から選択され；少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象が軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示す、条項１に記載の方法。
条項７．ＳＢＳＮ及びＳＹＥＰのレベルが、健常対象から得られた試料中のＳＢＳＮ及びＳＹＥＰのレベルと比較して高く；かつ／又はＭ３Ｋ５のレベルが、健常対象から得られた試料中のＭ３Ｋ５のレベルと比較して低い、条項１又は条項６に記載の方法。
条項８．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＩＮＦ２、ＳＹＥＰ又はこれらの組合せからなる群から選択される、条項１に記載の方法。
条項９．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＮＸＡ６、ＥＲＡＰ１、ＥＺＲＩ、ＦＡ５、Ｇ６ＰＩ、ＭＹＬＫ、ＳＡＭＰ又はこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーをさらに含む、条項１に記載の方法。
条項１０．少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、対象から得られた試料を検査するステップ；並びに試料中の、１４３３Ｇ、ＡＣＫ１、ＡＣＹ１、ＡＫＡ１２、ＡＲＧＩ１、ＣＡＤＨ５、ＣＬＨ１、ＣＯＰＧ２、ＤＰＯＤ２、ＤＳＧ２、ＨＶ３０７、ＩＱＧＡ２、Ｋ１Ｃ１４、Ｋ１Ｃ１９、ＫＶ１０５、ＬＡＭＣ１、ＭＤＨＭ、ＮＱＯ２、ＰＥＲＭ、ＰＬＳＴ、ＰＮＣＢ、ＰＴＰＲＣ、ＳＥＰＴ７、ＳＹＲＣ、ＴＲＸＲ２、ＴＸＮＬ１、ＵＧＧＧ１、ＷＤＲ１又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこの断片を測定若しくは検出するステップを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象が軽度外傷性脳損傷（ｍＴＢＩ）を負った又は負った可能性があることを指し示す方法。
条項１１．少なくとも１つのバイオマーカーが、健常対象から得られた試料中において、検出可能ではない、条項１０に記載の方法。
条項１２．少なくとも１つのバイオマーカーが、重度ＴＢＩ（ｓＴＢＩ）を負っている対象から得られた試料中において、検出可能ではない、条項１０に記載の方法。
条項１３．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、試料中の、ＡＣＫ１、ＡＣＹ１、ＰＬＳＴ、ＰＮＣＢ、ＰＴＰＲＣ、ＵＧＧＧ１又はこれらの任意の組合せからなる群から選択され；少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス１のｍＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示す、条項１０〜１２のいずれかに記載の方法。
条項１４．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、試料中の、ＡＫＡ１２、ＨＶ３０７、ＰＥＲＭ、ＫＶ１０５、ＮＱＯ２、ＳＥＰＴ７、ＳＹＲＣ、ＴＲＸＲ２又はこれらの任意の組合せからなる群から選択され；少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス２のｍＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示す、条項１０〜１２のいずれかに記載の方法。
条項１５．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、試料中の、１４３３Ｂ、ＡＲＧＩ１、ＣＡＤＨ５、ＣＬＨ１、ＣＯＰＧ２、ＤＰＯＤ２、ＤＳＧ２、ＩＱＧＡ２、Ｋ１Ｃ１４、ＬＡＭＣ１、ＭＤＨＭ、ＴＸＮＬ１又はこれらの任意の組合せからなる群から選択され；少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス３のｍＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示す、条項１０〜１２のいずれかに記載の方法。
条項１６．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＨＮＫ、ＡＬ１Ａ１、ＡＭＰＮ、ＣＡＰＺＢ、ＣＡＴＤ、ＣＬＩＰ２、ＣＭＧＡ、ＦＳＣＮ１、ＧＭＰＲ２、ＧＲＰ７８、ＧＳＨ１、ＩＤＨＣ、Ｋ１Ｃ２０、ＫＲＲ１、ＭＢＬ２、ＮＴＦ２、ＰＣＢＰ２、ＰＧＫ１、ＳＡＡ１、ＴＦＲ１又はこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーをさらに含む、条項１０に記載の方法。
条項１７．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＴＰＰ２、ＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＬ９Ａ１、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＩＮＦ２又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス４の軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示すパネル。
条項１８．ＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ及びＤＮＭ１Ｌのレベルが、健常対象から得られた試料中のＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ及びＤＮＭ１Ｌのレベルと比較して高く；かつ／又はＴＰＰ２、ＡＬ９Ａ１及びＩＮＦ２のレベルが、健常対象から得られた試料中のＴＰＰ２、ＡＬ９Ａ１及びＩＮＦ２のレベルと比較して低い、条項１７に記載のバイオマーカーパネル。
条項１９．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＴＰＰ２、ＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＮＦ２、ＩＧＨＤ、ＣＫ０５４、Ｍ３Ｋ５、ＡＢＨＥＢ、ＡＬ９Ａ１、ＤＮＭ１Ｌ又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス３の軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示すパネル。
条項２０．ＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＡＢＨＥＢ及びＤＮＭ１Ｌのレベルが、健常対象から得られた試料中のＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＡＢＨＥＢ及びＤＮＭ１Ｌのレベルと比較して高く；かつ／又はＴＰＰ２、ＩＧＨＤ、ＣＫ０５４、Ｍ３Ｋ５及びＡＬ９Ａ１のレベルが、健常対象から得られた試料中のＴＰＰ２、ＩＧＨＤ、ＣＫ０５４、Ｍ３Ｋ５及びＡＬ９Ａ１のレベルと比較して低い、条項１９に記載のバイオマーカーパネル。
条項２１．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＮＣＯＲ１、ＴＰＰ２、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＩＮＦ２、ＳＢＳＮ、ＡＬ９Ａ１、ＭＡ２Ｂ２又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス２の軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示すパネル。
条項２２．ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ及びＳＢＳＮのレベルが、健常対象から得られた試料中のＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ及びＳＢＳＮのレベルと比較して高く；かつ／又はＴＰＰ２、ＩＮＦ２、ＡＬ９Ａ１及びＭＡ２Ｂ２のレベルが、健常対象から得られた試料中のＴＰＰ２、ＩＮＦ２、ＡＬ９Ａ１及びＭＡ２Ｂ２のレベルと比較して低い、条項２１に記載のバイオマーカーパネル。
条項２３．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：Ｋ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ、ＫＶ１３３、ＡＬ９Ａ１、ＥＰＨＢ４又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス１の軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示すパネル。
条項２４．Ｋ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ及びＥＰＨＢ４のレベルが、健常対象から得られた試料中のＫ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ及びＥＰＨＢ４のレベルと比較して高く；かつ／又はＫＶ１３３及びＡＬ９Ａ１のレベルが、健常対象から得られた試料中のＫＶ１３３及びＡＬ９Ａ１のレベルと比較して低い、条項２３に記載のバイオマーカーパネル。
条項２５．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＭＹＬＫ、ＳＡＭＰ又はこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーをさらに含む、条項１に記載の方法。
条項２６．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＳＢＳＮ、ＧＬＯ２、ＳＹＥＰ又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、健常対象における少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、対象における少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、対象がサブクラス４の軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示すパネル。
条項２７．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＡＬＢＵ、ＴＨＩＭ、ＩＧＨＡ２、ＫＶ１３９又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、健常対象における少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、対象における少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、対象がサブクラス３の軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示すパネル。
条項２８．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＳＢＳＮ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＤＹＬ１、ＰＳＡ、ＥＰＨＢ４又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、健常対象における少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、対象における少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、対象がサブクラス２の軽度ＴＢＩを負った又は負った可能性があることを指し示すパネル。
条項２９．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：Ｋ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ、ＥＰＨＢ４、ＦＢＬＮ３又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、健常対象における少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、対象における少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、対象がサブクラス１の軽度ＴＢＩを負った、又は負った可能性があることを指し示すパネル。
条項３０．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＮＸＡ６、ＭＡＳＰ２、ＭＹＬＫ、ＳＡＭＰ又はこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーをさらに含む、条項１０に記載の方法。
条項３１．対象が外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っていないことを決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＡＣＴＢＬ、ＡＬＤＨ２、ＡＮＸＡ５、ＣＡＭＰ、ＣＰＮＥ３、ＣＲＡＣ１、ＣＹＴＣ、ＤＮＰＥＰ、ＥＩＦ３Ｉ、ＧＳＨＢ、ＩＣＡＭ１、ＨＶ３２３、ＨＮＲＰＤ、ＫＶＤ３３、ＦＡ９、ＦＨＲ４、ＦＲＰＤ１、ＨＳ９０Ｂ、ＭＡ２Ａ１、ＰＣＹＯＸ、ＰＮＰＨ、ＰＲＯＣ、ＲＬ３、ＳＨ３Ｌ３、ＳＲＲＭ２、ＴＢＢ１、ＴＥＮＡ、ＴＲＡＰ１又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの、対象における測定又は検出が、対象がＴＢＩを負っていないことを指し示すパネル。
条項３２．少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、実際の頭部損傷又は推測される頭部損傷の後において、対象から試料を得るステップ；並びに試料中の、ＡＬ９Ａ１、ＡＴＰＧ、Ｃ１ＲＬ、ＣＡＮＤ１、ＥＰＩＰＬ、ＧＬＯ２、ＩＧＨＡ２、ＰＺＰ、ＳＹＴＣ、ＳＹＹＣ若しくはこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー若しくはこの断片を測定若しくは検出するステップ；及び／又は試料中の、ＡＢＨＥＢ、ＡＬ９Ａ１、ＤＮＭ１Ｌ、ＦＣＮ２、ＩＮＦ２、Ｋ２２Ｅ、Ｍ３Ｋ５、ＮＣＯＲ１、ＳＢＳＮ、ＳＹＥＰ、ＴＰＰ２若しくはこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー若しくはこの断片を測定若しくは検出するステップを含む方法。
条項３３．少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象が外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っていることを指し示す、条項３２に記載の方法。
条項３４．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＬ９Ａ１、ＡＴＰＧ、Ｃ１ＲＬ、ＥＰＩＰＬ、ＩＧＨＡ２、ＰＺＰ、ＳＹＴＣ、ＳＹＹＣ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択され；少なくとも１つのバイオマーカーが、健常対象から得られた試料中において、検出可能ではない、条項３２又は条項３３に記載の方法。
条項３５．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＴＰＧ、Ｃ１ＲＬ、ＳＹＹＣ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される、条項３２〜３４のいずれかに記載の方法。
条項３６．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＣＡＮＤ１、ＧＬＯ２又はこれらの組合せからなる群から選択され；ＣＡＮＤ１及びＧＬＯ２のレベルが、健常対象から得られた試料中のＣＡＮＤ１及びＧＬＯ２のレベルと比較して高い、条項３２又は条項３３に記載の方法。
条項３７．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＢＨＥＢ、ＡＬ９Ａ１、ＤＮＭ１Ｌ又はこれらの組合せからなる群から選択され；ＡＢＨＥＢのレベルが、健常対象から得られた試料中のＡＢＨＥＢのレベルと比較して高く、かつ／又はＡＬ９Ａ１及びＤＮＭ１Ｌのレベルが、健常対象から得られた試料中のＡＬ９Ａ１及びＤＮＭ１Ｌのレベルと比較して低い、条項３２又は条項３３に記載の方法。
条項３８．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、Ｍ３Ｋ５、ＳＢＳＮ、ＳＹＥＰ又はこれらの組合せからなる群から選択され；ＳＢＳＮ及びＳＹＥＰのレベルが、健常対象から得られた試料中のＳＢＳＮ及びＳＹＥＰのレベルと比較して高く、かつ／又はＭ３Ｋ５のレベルが、健常対象から得られた試料中のＭ３Ｋ５のレベルと比較して低い、条項３２又は条項３３に記載の方法。
条項３９．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＩＮＦ２、ＳＹＥＰ又はこれらの組合せからなる群から選択される、条項３２又は条項３３に記載の方法。
条項４０．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＮＸＡ６、ＥＲＡＰ１、ＥＺＲＩ、ＦＡ５、Ｇ６ＰＩ、ＭＹＬＫ、ＳＡＭＰ又はこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーをさらに含む、条項３２〜３９のいずれかに記載の方法。
条項４１．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＭＹＬＫ、ＳＡＭＰ又はこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーをさらに含む、条項３２〜３９のいずれかに記載の方法。
条項４２．少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、実際の頭部損傷又は推測される頭部損傷の後において、対象から試料を得るステップ；及び試料中の、１４３３Ｇ、ＡＣＫ１、ＡＣＹ１、ＡＫＡ１２、ＡＲＧＩ１、ＣＡＤＨ５、ＣＬＨ１、ＣＯＰＧ２、ＤＰＯＤ２、ＤＳＧ２、ＨＶ３１９、ＩＱＧＡ２、Ｋ１Ｃ１４、Ｋ１Ｃ１９、ＫＶ１０５、ＬＡＭＣ１、ＭＤＨＭ、ＮＱＯ２、ＰＥＲＭ、ＰＬＳＴ、ＰＮＣＢ、ＰＴＰＲＣ、ＳＥＰＴ７、ＳＹＲＣ、ＴＲＸＲ２、ＴＸＮＬ１、ＵＧＧＧ１、ＷＤＲ１又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこの断片を測定又は検出するステップを含む方法。
条項４３．少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象が外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っていることを指し示す、条項４２に記載の方法。
条項４４．少なくとも１つのバイオマーカーが、健常対象から得られた試料中において、検出可能ではない、条項４２又は条項４３に記載の方法。
条項４５．少なくとも１つのバイオマーカーが、重度ＴＢＩを負っている対象から得られた試料中において、検出可能ではない、条項４２〜４４のいずれかに記載の方法。
条項４６．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、試料中の、ＡＣＫ１、ＡＣＹ１、ＰＬＳＴ、ＰＮＣＢ、ＰＴＰＲＣ、ＵＧＧＧ１又はこれらの任意の組合せからなる群から選択され；少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス１の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示す、条項４２〜４４のいずれかに記載の方法。
条項４７．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、試料中の、ＡＫＡ１２、ＨＶ３１９、ＰＥＲＭ、ＫＶ１０５、ＮＱＯ２、ＳＥＰＴ７、ＳＹＲＣ、ＴＲＸＲ２又はこれらの任意の組合せからなる群から選択され；少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス２の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示す、条項４２〜４４のいずれかに記載の方法。
条項４８．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、試料中の、１４３３Ｂ、ＡＲＧＩ１、ＣＡＤＨ５、ＣＬＨ１、ＣＯＰＧ２、ＤＰＯＤ２、ＤＳＧ２、ＩＱＧＡ２、Ｋ１Ｃ１４、ＬＡＭＣ１、ＭＤＨＭ、ＴＸＮＬ１又はこれらの任意の組合せからなる群から選択され；少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス３の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示す、条項４２〜４４のいずれかに記載の方法。
条項４９．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＨＮＫ、ＡＬ１Ａ１、ＡＭＰＮ、ＣＡＰＺＢ、ＣＡＴＤ、ＣＬＩＰ２、ＣＭＧＡ、ＦＳＣＮ１、ＧＭＰＲ２、ＧＲＰ７８、ＧＳＨ１、ＩＤＨＣ、Ｋ１Ｃ２０、ＫＲＲ１、ＭＢＬ２、ＮＴＦ２、ＰＣＢＰ２、ＰＧＫ１、ＳＡＡ１、ＴＦＲ１又はこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーをさらに含む、条項４２〜４８のいずれかに記載の方法。
条項５０．少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＮＸＡ６、ＭＡＳＰ２、ＭＹＬＫ、ＳＡＭＰ又はこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーをさらに含む、条項４２〜４８のいずれかに記載の方法。
条項５１．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＴＰＰ２、ＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＬ９Ａ１、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＩＮＦ２又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス４の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示すパネル。
条項５２．ＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ及びＤＮＭ１Ｌのレベルが、健常対象から得られた試料中のＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ及びＤＮＭ１Ｌのレベルと比較して高く；かつ／又はＴＰＰ２、ＡＬ９Ａ１及びＩＮＦ２のレベルが、健常対象から得られた試料中のＴＰＰ２、ＡＬ９Ａ１及びＩＮＦ２のレベルと比較して低い、条項５１に記載のバイオマーカーパネル。
条項５３．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＴＰＰ２、ＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＮＦ２、ＩＧＨＤ、ＣＫ０５４、Ｍ３Ｋ５、ＡＢＨＥＢ、ＡＬ９Ａ１、ＤＮＭ１Ｌ又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス３の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示すパネル。
条項５４．ＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＡＢＨＥＢ及びＤＮＭ１Ｌのレベルが、健常対象から得られた試料中のＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＡＢＨＥＢ及びＤＮＭ１Ｌのレベルと比較して高く；かつ／又はＴＰＰ２、ＩＧＨＤ、ＣＫ０５４、Ｍ３Ｋ５及びＡＬ９Ａ１のレベルが、健常対象から得られた試料中のＴＰＰ２、ＩＧＨＤ、ＣＫ０５４、Ｍ３Ｋ５及びＡＬ９Ａ１のレベルと比較して低い、条項５３に記載のバイオマーカーパネル。
条項５５．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＮＣＯＲ１、ＴＰＰ２、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＩＮＦ２、ＳＢＳＮ、ＡＬ９Ａ１、ＭＡ２Ｂ２又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス２の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示すパネル。
条項５６．ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ及びＳＢＳＮのレベルが、健常対象から得られた試料中のＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ及びＳＢＳＮのレベルと比較して高く；かつ／又はＴＰＰ２、ＩＮＦ２、ＡＬ９Ａ１及びＭＡ２Ｂ２のレベルが、健常対象から得られた試料中のＴＰＰ２、ＩＮＦ２、ＡＬ９Ａ１及びＭＡ２Ｂ２のレベルと比較して低い、条項５５に記載のバイオマーカーパネル。
条項５７．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：Ｋ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ、ＫＶ１０２、ＡＬ９Ａ１、ＥＰＨＢ４又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がサブクラス１の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示すパネル。
条項５８．Ｋ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ及びＥＰＨＢ４のレベルが、健常対象から得られた試料中のＫ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ及びＥＰＨＢ４のレベルと比較して高く；かつ／又はＫＶ１０２及びＡＬ９Ａ１のレベルが、健常対象から得られた試料中のＫＶ１０２及びＡＬ９Ａ１のレベルと比較して低い、条項５７に記載のバイオマーカーパネル。
条項５９．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＳＢＳＮ、ＧＬＯ２、ＳＹＥＰ又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、健常対象における少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、対象における少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、対象がサブクラス４の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示すパネル
条項６０．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＡＬＢＵ、ＴＨＩＭ、ＩＧＨＡ２、ＫＶ１３９又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、健常対象における少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、対象における少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、対象がサブクラス３の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示すパネル。
条項６１．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＳＢＳＮ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＤＹＬ１、ＰＳＡ、ＥＰＨＢ４又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、健常対象における少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、対象における少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、対象がサブクラス２の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示すパネル。
条項６２．対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：Ｋ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ、ＥＰＨＢ４、ＦＢＬＮ３又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、健常対象における少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、対象における少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、対象がサブクラス１の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示すパネル。
条項６３．対象が外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っていないことを決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＡＣＴＢＬ、ＡＬＤＨ２、ＡＮＸＡ５、ＣＡＭＰ、ＣＰＮＥ３、ＣＲＡＣ１、ＣＹＴＣ、ＤＮＰＥＰ、ＥＩＦ３Ｉ、ＧＳＨＢ、ＩＣＡＭ１、ＨＶ３０３、ＨＮＲＰＤ、ＫＶ１２１、ＦＡ９、ＦＨＲ４、ＦＲＰＤ１、ＨＳ９０Ｂ、ＭＡ２Ａ１、ＰＣＹＯＸ、ＰＮＰＨ、ＰＲＯＣ、ＲＬ３、ＳＨ３Ｌ３、ＳＲＲＭ２、ＴＢＢ１、ＴＥＮＡ、ＴＲＡＰ１又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、対象における少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、対象がＴＢＩを負っていないことを指し示すパネル。
条項６４．少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、実際の頭部損傷又は推測される頭部損傷の後において、対象から試料を得るステップ；及び試料中の、ＰＺＰ、ＥＰＩＰＬ、ＩＧＨＡ２、ＡＬ９Ａ１、Ｇ６ＰＩ、ＳＹＴＣ、ＥＺＲＩ、ＦＡ５又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片のうちの、少なくとも１つのペプチドを測定又は検出するステップを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの、少なくとも１つのペプチドが、配列番号４〜２６０からなる群から選択される、方法。
条項６５．ＰＺＰ、ＥＰＩＰＬ、ＩＧＨＡ２、ＡＬ９Ａ１、Ｇ６ＰＩ、ＳＹＴＣ、ＥＺＲＩ、ＦＡ５又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片を単離又は同定するための、配列番号４〜２６０からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドの使用。
条項６６．少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、実際の頭部損傷又は推測される頭部損傷の後において、対象から試料を得るステップ；及び試料中の、ＮＣＯＲ１、ＡＢＨＥＢ、ＡＮＸＡ６、ＤＮＭ１Ｌ、ＦＣＮ２、ＨＢＡ、ＭＹＬＫ、ＳＢＳＮ、ＡＨＮＫ、Ｋ２２Ｅ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片のうちの、少なくとも１つのペプチドを測定又は検出するステップを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの、少なくとも１つのペプチドが、配列番号２６１〜６９８からなる群から選択される、方法。
条項６７．ＮＣＯＲ１、ＡＢＨＥＢ、ＡＮＸＡ６、ＤＮＭ１Ｌ、ＦＣＮ２、ＨＢＡ、ＭＹＬＫ、ＳＢＳＮ、ＡＨＮＫ、Ｋ２２Ｅ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片を単離又は同定するための、配列番号２６１〜６９８からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドの使用。
条項６８．少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、実際の頭部損傷又は推測される頭部損傷の後において、対象から試料を得るステップ；及び試料中の、ＣＡＮＤ１、ＳＹＥＰ、ＧＬＯ２、ＤＩＡＰ１、ＤＹＬ１、ＰＳＡ、ＥＰＨＢ４、ＰＬＯＤ１、ＦＢＬＮ３、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＴＨＩＭ、ＩＧＨＡ２、ＫＶ１０５、ＭＡＳＰ２又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片のうちの、少なくとも１つのペプチドを測定又は検出するステップを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの、少なくとも１つのペプチドが、配列番号６９９〜９２６からなる群から選択される、方法。
条項６９．ＣＡＮＤ１、ＳＹＥＰ、ＧＬＯ２、ＤＩＡＰ１、ＤＹＬ１、ＰＳＡ、ＥＰＨＢ４、ＰＬＯＤ１、ＦＢＬＮ３、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＴＨＩＭ、ＩＧＨＡ２、ＫＶ１０５、ＭＡＳＰ２又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片を単離又は同定するための、配列番号６９９〜９２６からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドの使用。
条項７０．少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、実際の頭部損傷又は推測される頭部損傷の後において、対象から試料を得るステップ；及び試料中の、ＳＡＭＰ、１４３３Ｂ、ＦＩＢＢ、ＲＳ２８、ＴＲＦＥ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片のうちの、少なくとも１つのペプチドを測定又は検出するステップを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの、少なくとも１つのペプチドが、配列番号９２７〜９６８からなる群から選択される、方法。
条項７１．ＳＡＭＰ、１４３３Ｂ、ＦＩＢＢ、ＲＳ２８、ＴＲＦＥ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片を単離又は同定するための、配列番号９２７〜９６８からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドの使用。
条項７２．少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、実際の頭部損傷又は推測される頭部損傷の後において、対象から試料を得るステップ；及び試料中の、ＤＹＬ１、ＦＢＬＮ３、ＰＳＡ、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片のうちの、少なくとも１つのペプチドを測定又は検出するステップを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの、少なくとも１つのペプチドが、配列番号９６９〜９９６からなる群から選択される、方法。
条項７３．ＤＹＬ１、ＦＢＬＮ３、ＰＳＡ、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片を単離又は同定するための、配列番号９６９〜９９６からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドの使用。
条項７４．少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、実際の頭部損傷又は推測される頭部損傷の後において、対象から試料を得るステップ；及び試料中の、ＦＣＮ２、ＨＢＡ、ＡＨＮＫ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片のうちの、少なくとも１つのペプチドを測定又は検出するステップを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの、少なくとも１つのペプチドが、配列番号９９７〜１１８２からなる群から選択される、方法。
条項７５．ＦＣＮ２、ＨＢＡ、ＡＨＮＫ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片を単離又は同定するための、配列番号９９７〜１１８２からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドの使用。
条項７６．少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、実際の頭部損傷又は推測される頭部損傷の後において、対象から試料を得るステップ；及び試料中の、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＴＨＩＭ、ＩＧＨＡ２、ＫＶ１０５、ＭＡＳＰ２、ＤＩＡＰ１、ＰＬＯＤ１、ＥＰＨＢ４、ＦＢＬＮ３、ＤＹＬ１、ＰＳＡ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片のうちの、少なくとも１つのペプチドを測定又は検出するステップを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの、少なくとも１つのペプチドが、配列番号１１８３〜１３１９からなる群から選択される、方法。
条項７７．ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＴＨＩＭ、ＩＧＨＡ２、ＫＶ１０５、ＭＡＳＰ２、ＤＩＡＰ１、ＰＬＯＤ１、ＥＰＨＢ４、ＦＢＬＮ３、ＤＹＬ１、ＰＳＡ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片を単離又は同定するための、配列番号１１８３〜１３１９からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドの使用。
条項７８．少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、実際の頭部損傷又は推測される頭部損傷の後において、対象から試料を得るステップ；及び試料中の、ＣＡＮＤ１、ＧＬＯ２、ＥＲＡＰ１、ＳＹＹＣ、Ｃ１ＲＬ、ＡＴＰＧ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片のうちの、少なくとも１つのペプチドを測定又は検出するステップを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの、少なくとも１つのペプチドが、配列番号１３２０〜１４３８からなる群から選択される、方法。
条項７９．ＣＡＮＤ１、ＧＬＯ２、ＥＲＡＰ１、ＳＹＹＣ、Ｃ１ＲＬ、ＡＴＰＧ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片を単離又は同定するための、配列番号１３２０〜１４３８からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドの使用。
条項８０．少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、実際の頭部損傷又は推測される頭部損傷の後において、対象から試料を得るステップ；及び試料中の、ＡＣＴＢＬ、ＡＬＤＨ２、ＡＮＸＡ５、ＣＡＭＰ、ＣＰＮＥ３、ＣＲＡＣ１、ＣＹＴＣ、ＤＮＰＥＰ、ＥＩＦ３Ｉ、ＧＳＨＢ、ＩＣＡＭ１、ＨＶ３２３、ＨＮＲＰＤ、ＫＶＤ３３、ＦＡ９、ＦＨＲ４、ＦＲＰＤ１、ＨＳ９０Ｂ、ＭＡ２Ａ１、ＰＣＹＯＸ、ＰＮＰＨ、ＰＲＯＣ、ＲＬ３、ＳＨ３Ｌ３、ＳＲＲＭ２、ＴＢＢ１、ＴＥＮＡ、ＴＲＡＰ１又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片のうちの、少なくとも１つのペプチドを測定又は検出するステップを含み、少なくとも１つのバイオマーカーの、少なくとも１つのペプチドが、配列番号１４３９〜１９２３からなる群から選択される、方法。
条項８１．ＡＣＴＢＬ、ＡＬＤＨ２、ＡＮＸＡ５、ＣＡＭＰ、ＣＰＮＥ３、ＣＲＡＣ１、ＣＹＴＣ、ＤＮＰＥＰ、ＥＩＦ３Ｉ、ＧＳＨＢ、ＩＣＡＭ１、ＨＶ３２３、ＨＮＲＰＤ、ＫＶＤ３３、ＦＡ９、ＦＨＲ４、ＦＲＰＤ１、ＨＳ９０Ｂ、ＭＡ２Ａ１、ＰＣＹＯＸ、ＰＮＰＨ、ＰＲＯＣ、ＲＬ３、ＳＨ３Ｌ３、ＳＲＲＭ２、ＴＢＢ１、ＴＥＮＡ、ＴＲＡＰ１又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片を単離又は同定するための、配列番号１４３９〜１９２３からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドの使用。

Claims (32)

  1. 少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、
    実際の頭部損傷又は推測される頭部損傷の後において、対象から試料を得るステップ；並びに
    前記試料中の、ＡＬ９Ａ１、ＡＴＰＧ、Ｃ１ＲＬ、ＣＡＮＤ１、ＥＰＩＰＬ、ＧＬＯ２、ＩＧＨＡ２、ＰＺＰ、ＳＹＴＣ、ＳＹＹＣ若しくはこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー若しくはこの断片を測定若しくは検出するステップ；及び／又は
    前記試料中の、ＡＢＨＥＢ、ＡＬ９Ａ１、ＤＮＭ１Ｌ、ＦＣＮ２、ＩＮＦ２、Ｋ２２Ｅ、Ｍ３Ｋ５、ＮＣＯＲ１、ＳＢＳＮ、ＳＹＥＰ、ＴＰＰ２若しくはこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー若しくはこの断片を測定若しくは検出するステップ
    を含む方法。
  2. 前記少なくとも１つのバイオマーカーの前記測定又は検出が、前記対象が外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っていることを指し示す、請求項１に記載の方法。
  3. 前記少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＬ９Ａ１、ＡＴＰＧ、Ｃ１ＲＬ、ＥＰＩＰＬ、ＩＧＨＡ２、ＰＺＰ、ＳＹＴＣ、ＳＹＹＣ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択され；前記少なくとも１つのバイオマーカーが、健常対象から得られた試料中において、検出可能ではない、請求項１又は請求項２に記載の方法。
  4. 前記少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＴＰＧ、Ｃ１ＲＬ、ＳＹＹＣ又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
  5. 前記少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＣＡＮＤ１、ＧＬＯ２又はこれらの組合せからなる群から選択され；ＣＡＮＤ１及びＧＬＯ２のレベルが、健常対象から得られた試料中のＣＡＮＤ１及びＧＬＯ２のレベルと比較して高い、請求項１又は請求項２に記載の方法。
  6. 前記少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＢＨＥＢ、ＡＬ９Ａ１、ＤＮＭ１Ｌ又はこれらの組合せからなる群から選択され；
    ＡＢＨＥＢのレベルが、健常対象から得られた試料中のＡＢＨＥＢのレベルと比較して高く、かつ／又は
    ＡＬ９Ａ１及びＤＮＭ１Ｌのレベルが、健常対象から得られた試料中のＡＬ９Ａ１及びＤＮＭ１Ｌのレベルと比較して低い、請求項１又は請求項２に記載の方法。
  7. 前記少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、Ｍ３Ｋ５、ＳＢＳＮ、ＳＹＥＰ又はこれらの組合せからなる群から選択され；
    ＳＢＳＮ及びＳＹＥＰのレベルが、健常対象から得られた試料中のＳＢＳＮ及びＳＹＥＰのレベルと比較して高く、かつ／又は
    Ｍ３Ｋ５のレベルが、健常対象から得られた試料中のＭ３Ｋ５のレベルと比較して低い、請求項１又は請求項２に記載の方法。
  8. 前記少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＩＮＦ２、ＳＹＥＰ又はこれらの組合せからなる群から選択される、請求項１又は請求項２に記載の方法。
  9. 前記少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＮＸＡ６、ＥＲＡＰ１、ＥＺＲＩ、ＦＡ５、Ｇ６ＰＩ、ＭＹＬＫ、ＳＡＭＰ又はこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーをさらに含む、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
  10. 前記少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＭＹＬＫ、ＳＡＭＰ又はこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーをさらに含む、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
  11. 少なくとも１つのバイオマーカーを測定又は検出する方法であって、
    実際の頭部損傷又は推測される頭部損傷の後において、対象から試料を得るステップ；及び
    前記試料中の、１４３３Ｇ、ＡＣＫ１、ＡＣＹ１、ＡＫＡ１２、ＡＲＧＩ１、ＣＡＤＨ５、ＣＬＨ１、ＣＯＰＧ２、ＤＰＯＤ２、ＤＳＧ２、ＨＶ３０７、ＩＱＧＡ２、Ｋ１Ｃ１４、Ｋ１Ｃ１９、ＫＶ１０５、ＬＡＭＣ１、ＭＤＨＭ、ＮＱＯ２、ＰＥＲＭ、ＰＬＳＴ、ＰＮＣＢ、ＰＴＰＲＣ、ＳＥＰＴ７、ＳＹＲＣ、ＴＲＸＲ２、ＴＸＮＬ１、ＵＧＧＧ１、ＷＤＲ１又はこれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカー又はこの断片を測定又は検出するステップ
    を含む方法。
  12. 前記少なくとも１つのバイオマーカーの前記測定又は検出が、前記対象が外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っていることを指し示す、請求項１１に記載の方法。
  13. 前記少なくとも１つのバイオマーカーが、健常対象から得られた試料中において、検出可能ではない、請求項１１又は請求項１２に記載の方法。
  14. 前記少なくとも１つのバイオマーカーが、重度ＴＢＩを負っている対象から得られた試料中において、検出可能ではない、請求項１１〜１３のいずれかに記載の方法。
  15. 前記少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、前記試料中の、ＡＣＫ１、ＡＣＹ１、ＰＬＳＴ、ＰＮＣＢ、ＰＴＰＲＣ、ＵＧＧＧ１又はこれらの任意の組合せからなる群から選択され；
    前記少なくとも１つのバイオマーカーの前記測定又は検出が、前記対象がサブクラス１の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示す、請求項１１〜１３のいずれかに記載の方法。
  16. 前記少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、前記試料中の、ＡＫＡ１２、ＨＶ３０７、ＰＥＲＭ、ＫＶ１０５、ＮＱＯ２、ＳＥＰＴ７、ＳＹＲＣ、ＴＲＸＲ２又はこれらの任意の組合せからなる群から選択され；
    前記少なくとも１つのバイオマーカーの前記測定又は検出が、前記対象がサブクラス２の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示す、請求項１１〜１３のいずれかに記載の方法。
  17. 前記少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、前記試料中の、１４３３Ｂ、ＡＲＧＩ１、ＣＡＤＨ５、ＣＬＨ１、ＣＯＰＧ２、ＤＰＯＤ２、ＤＳＧ２、ＩＱＧＡ２、Ｋ１Ｃ１４、ＬＡＭＣ１、ＭＤＨＭ、ＴＸＮＬ１又はこれらの任意の組合せからなる群から選択され；
    前記少なくとも１つのバイオマーカーの前記測定又は検出が、前記対象がサブクラス３の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示す、請求項１１〜１３のいずれかに記載の方法。
  18. 前記少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＨＮＫ、ＡＬ１Ａ１、ＡＭＰＮ、ＣＡＰＺＢ、ＣＡＴＤ、ＣＬＩＰ２、ＣＭＧＡ、ＦＳＣＮ１、ＧＭＰＲ２、ＧＲＰ７８、ＧＳＨ１、ＩＤＨＣ、Ｋ１Ｃ２０、ＫＲＲ１、ＭＢＬ２、ＮＴＦ２、ＰＣＢＰ２、ＰＧＫ１、ＳＡＡ１、ＴＦＲ１又はこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーをさらに含む、請求項１１〜１７のいずれかに記載の方法。
  19. 前記少なくとも１つのバイオマーカー又はこれらの断片が、ＡＮＸＡ６、ＭＡＳＰ２、ＭＹＬＫ、ＳＡＭＰ又はこれらの組合せからなる群から選択される少なくとも１つのバイオマーカーをさらに含む、請求項１１〜１７のいずれかに記載の方法。
  20. 対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＴＰＰ２、ＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＬ９Ａ１、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＩＮＦ２又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、
    前記少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、前記対象がサブクラス４の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示す
    パネル。
  21. ＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ及びＤＮＭ１Ｌのレベルが、健常対象から得られた試料中のＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ及びＤＮＭ１Ｌのレベルと比較して高く；かつ／又は
    ＴＰＰ２、ＡＬ９Ａ１及びＩＮＦ２のレベルが、健常対象から得られた試料中のＴＰＰ２、ＡＬ９Ａ１及びＩＮＦ２のレベルと比較して低い、請求項２０に記載のバイオマーカーパネル。
  22. 対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＴＰＰ２、ＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＮＦ２、ＩＧＨＤ、ＣＫ０５４、Ｍ３Ｋ５、ＡＢＨＥＢ、ＡＬ９Ａ１、ＤＮＭ１Ｌ又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、
    前記少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、前記対象がサブクラス３の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示す
    パネル。
  23. ＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＡＢＨＥＢ及びＤＮＭ１Ｌのレベルが、健常対象から得られた試料中のＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＡＢＨＥＢ及びＤＮＭ１Ｌのレベルと比較して高く；かつ／又は
    ＴＰＰ２、ＩＧＨＤ、ＣＫ０５４、Ｍ３Ｋ５及びＡＬ９Ａ１のレベルが、健常対象から得られた試料中のＴＰＰ２、ＩＧＨＤ、ＣＫ０５４、Ｍ３Ｋ５及びＡＬ９Ａ１のレベルと比較して低い、請求項２２に記載のバイオマーカーパネル。
  24. 対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＮＣＯＲ１、ＴＰＰ２、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＩＮＦ２、ＳＢＳＮ、ＡＬ９Ａ１、ＭＡ２Ｂ２又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、
    前記少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、前記対象がサブクラス２の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示す
    パネル。
  25. ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ及びＳＢＳＮのレベルが、健常対象から得られた試料中のＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ及びＳＢＳＮのレベルと比較して高く；かつ／又は
    ＴＰＰ２、ＩＮＦ２、ＡＬ９Ａ１及びＭＡ２Ｂ２のレベルが、健常対象から得られた試料中のＴＰＰ２、ＩＮＦ２、ＡＬ９Ａ１及びＭＡ２Ｂ２のレベルと比較して低い、請求項２４に記載のバイオマーカーパネル。
  26. 対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：Ｋ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ、ＫＶ１３３、ＡＬ９Ａ１、ＥＰＨＢ４又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、
    前記少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、前記対象がサブクラス１の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示す
    パネル。
  27. Ｋ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ及びＥＰＨＢ４のレベルが、健常対象から得られた試料中のＫ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ及びＥＰＨＢ４のレベルと比較して高く；かつ／又は
    ＫＶ１３３及びＡＬ９Ａ１のレベルが、健常対象から得られた試料中のＫＶ１３３及びＡＬ９Ａ１のレベルと比較して低い、請求項２６に記載のバイオマーカーパネル。
  28. 対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＣＡＮＤ１、ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＳＢＳＮ、ＧＬＯ２、ＳＹＥＰ又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、
    健常対象における前記少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、前記対象における前記少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、前記対象がサブクラス４の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示す
    パネル。
  29. 対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＮＣＯＲ１、ＨＶ１０３、ＩＧＨＤ、ＡＢＨＥＢ、ＤＮＭ１Ｌ、ＡＬＢＵ、ＴＨＩＭ、ＩＧＨＡ２、ＫＶ１３９又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、
    健常対象における前記少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、前記対象における前記少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、前記対象がサブクラス３の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示す
    パネル。
  30. 対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＮＣＯＲ１、Ｋ２２Ｅ、ＡＢＨＥＢ、ＳＢＳＮ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＤＹＬ１、ＰＳＡ、ＥＰＨＢ４又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、
    健常対象における前記少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、前記対象における前記少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、前記対象がサブクラス２の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示す
    パネル。
  31. 対象の外傷性脳損傷（ＴＢＩ）状態を決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：Ｋ２２Ｅ、ＤＮＭ１Ｌ、ＤＩＡＰ１、ＡＢＨＥＢ、ＰＬＯＤ１、ＳＹＥＰ、ＥＰＨＢ４、ＦＢＬＮ３又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、
    健常対象における前記少なくとも１つのバイオマーカーのレベルと比較した、前記対象における前記少なくとも１つのバイオマーカーの高レベルの測定又は検出が、前記対象がサブクラス１の軽度ＴＢＩを負っていることを指し示す
    パネル。
  32. 対象が外傷性脳損傷（ＴＢＩ）を負っていないことを決定するためのバイオマーカーパネルであって、以下のバイオマーカー：ＡＣＴＢＬ、ＡＬＤＨ２、ＡＮＸＡ５、ＣＡＭＰ、ＣＰＮＥ３、ＣＲＡＣ１、ＣＹＴＣ、ＤＮＰＥＰ、ＥＩＦ３Ｉ、ＧＳＨＢ、ＩＣＡＭ１、ＨＶ３２３、ＨＮＲＰＤ、ＫＶＤ３３、ＦＡ９、ＦＨＲ４、ＦＲＰＤ１、ＨＳ９０Ｂ、ＭＡ２Ａ１、ＰＣＹＯＸ、ＰＮＰＨ、ＰＲＯＣ、ＲＬ３、ＳＨ３Ｌ３、ＳＲＲＭ２、ＴＢＢ１、ＴＥＮＡ、ＴＲＡＰ１又はこれらの任意の組合せのうちの少なくとも１つを含み、
    前記対象における前記少なくとも１つのバイオマーカーの測定又は検出が、前記対象がＴＢＩを負っていないことを指し示す
    パネル。
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