JP2021506931A - 病原体減少血小板組成物および関連方法 - Google Patents
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Abstract
Description
約20,000〜約150000pg/mlのTGF−β1、好ましくは約70000〜約120000pg/mlのTGF−Pl;および/または
約100〜600pg/mlのEGF、好ましくは約200〜約600pg/mlのEGF;および/または
約5〜約250pg/mlのFGFb、好ましくは約50〜200pg/mlのFGFb;および/または
約10〜約70ng/mlのPDGF−AB、好ましくは約40〜約65ng/mlのPDGF−AB;および/または
約1〜約20ng/mlのPDGF−BB、好ましくは約2〜約15ng/mlのPDGF−BB;および/または
約400〜1100pg/mlのSDF−lα、好ましくは約500〜約1000pg/mlのSDF−lα;および/または
約10〜約800pg/mlのVEGF、好ましくは約100〜約600pg/mlのVEGF。
約0.5〜2.5g/dLのグロブリン、好ましくは約1.5〜2.5g/dLのグロブリン;および/または、
約2〜5g/dLのアルブミン、好ましくは約3〜4g/dLのアルブミン;および/または、
約100〜200mmol/Lのナトリウム、好ましくは約120〜約160のmmol/Lナトリウム;
約40〜200mg/dLのトリグリセリド、好ましくは約50〜120mg/dLのトリグリセリド;および/または、
約150〜300mg/dLのグルコース、好ましくは約150〜250mg/dLのグルコース;および/または
約5〜12mg/dLのカルシウム、好ましくは約6〜10mg/dLのカルシウム;および/または
約100万〜350万ng/mLのフィブリノーゲン、好ましくは約150万〜250万ng/mLのフィブリノーゲン。
約20〜約150ng/mlのTGF−β1、好ましくは約25〜約150ng/mlのTGF−β1;および/または
約1000〜約4000pg/mlのEGF、好ましくは約2000〜約3500pg/mlのEGF;および/または
約50〜約200pg/mlのFGFb、好ましくは約75〜約200pg/mlのFGFb;および/または
約10〜約50ng/mlのPDGF−AB、好ましくは約15〜約40ng/mlのPDGF−AB;および/または
約1〜約15ng/mlのPDGF−BB、好ましくは約2〜約15ng/mlのPDGF−BB。
約0.5〜2.5g/dLのグロブリン、好ましくは約1〜2g/dLのグロブリン;および/または
約2〜5g/dLのアルブミン、好ましくは約3〜4g/dLのアルブミン;および/または
約100〜200ミリモル/Lのナトリウム、好ましくは約120〜約160ミリモル/Lのナトリウム;および/または
約40〜70mg/dLのトリグリセリド、好ましくは約50〜65mg/dLのトリグリセリド;および/または
約150〜300mg/dLのグルコース、好ましくは約150〜250mg/dLのグルコース。
少なくとも約20ng/ml、典型的には約20〜約150ng/mlの範囲、好ましくは約25〜約150ng/mlの範囲のレベルのTGF−β1;および/または
少なくとも約1000pg/mlのレベル、典型的には約1000〜約4000pg/mlの範囲、好ましくは約2000〜約3500pg/mlの範囲のレベルのEGF;および/または
少なくとも約50pg/ml、典型的には約50〜200pg/mlの範囲、好ましくは約75〜約200pg/mlの範囲のレベルのFGFb;および/または
少なくとも約10ng/ml、典型的には約10〜約50ng/mlの範囲、好ましくは約15〜約40ng/mlの範囲のレベルのPDGF−ABは;および/または
少なくとも約1ng/ml、典型的には約1〜約15ng/mlの範囲、好ましくは約2〜約15ng/mlの範囲のレベルのPDGF−BB。
TGF−Pβ1:少なくとも約60%、典型的には約60%〜約90%の範囲;および/または
FGFb:少なくとも約50%、典型的には約50%〜約90%の範囲内;および/または
EGF:少なくとも約50%、典型的には約50%〜約80%の範囲;および/または
PDGF−AB:少なくとも約50%、典型的には約50%〜約80%の範囲;および/または
PDGF−BB:少なくとも約50%、典型的には約50%〜約80%の範囲。
少なくとも約10pg/mlのレベルの不活化FGFb;および/または
少なくとも約50pg/mlのレベルの不活化EGF;および/または
少なくとも約3ng/mLのレベルの不活化PDGF−AB;および/または
少なくとも約0.5ng/mLのレベルの不活性化PDGF−BB;および/または
少なくとも約0.5ng/mLのレベルの不活性化TGF−β。
実施例1
方法
合計120個の凍結血小板ユニット(それぞれ約250mL)を4℃で一晩解凍し、切り開いて、内容物を1つの25L血液互換性バッグにプールした。解凍およびプールされた血小板のバッグから、600mLの液体血小板を1L極低温凍結保存(Freeze−Pak)バッグに移した。次に、この再パッケージされた血小板ユニットを−20℃で凍結し、バッグの形状と内容物が3cmの厚さになるように均一に平らになるようにした。凍結した600mLの血小板サンプルをそれぞれ、冷たいシッパーコンテナー内のドライアイスにパッケージした。パッケージングされたユニットは、電子ビーム処理施設に一晩移した。パッケージされたユニットは、厚さ3cmのバッグの両面処理により得られた最小−最大線量範囲にかけられた。以下の表Iは、この実施例で評価された最小最大用量範囲を示している。
電子ビーム処理した血小板ユニットをHPLに変換した。概ね、解凍後に、血小板ユニットのpHは7.75+/−0.25に調整した。1.0g/Lの塩化カルシウム脱水物を各バッグに加えて凝固を開始させた。次に、バッグを室内の温度および湿度において85RPMで2時間振とうし、4℃でさらに24〜48時間インキュベートした。凝固した物質をバッグから分離し、抽出した液体を滅菌グレードのフィルターで濾過した。
ELISAキットとマイクロプレートリーダー(Synergy Neo2 Plate Reader、BioTek Instruments)を使用して、FGFb、PDGF−BB、PDGF−AB、EGF、およびTGF−βについて、準備したHPLの成長因子測定を行った。各処理および対照の成長因子を三重に分析した。ELISAは製造業者のプロトコルに従って行った。ELISAを実行する前に、一連の希釈を行い、分析した各成長因子に適切な希釈を使用した。
細胞増殖検証アッセイの準備として、先に低温保存された間葉系幹細胞(MSC)を解凍し、適切な細胞培養培地(10%HPLと1%ペニシリン−ストレプトマイシン−アムホテリシン(pen/strep/amp)を添加したDMEM)を使用して5000細胞/cm2でプレーティングした。MSCを70〜80%の集密度まで増殖させた後、細胞を回収し実験用に播種(seed)した。細胞培養試験は、マルチウェルプレートを使用して行った。各実験で、細胞を12ウェルプレートに20,000細胞/ウェルで1mLの培地でプレーティングした。播種の翌日に培地交換を行い、5日後に、またはいずれかのサンプルが70〜80%の集密度に達したときに実験を停止した。細胞が最初の培地交換の3日後に70〜80%の密集度に達しなかった場合、4日目に2回目の培地交換を行った。
データは、少なくとも3回の実験の平均±標準偏差として示されている。グループ間の統計分析は、スチューデントのt検定と一元配置分散分析を使用して実行された。p<0.05は統計的に有意な差を示すと考えられる(*=p<0.05、**=p<0.001、***=p<0.0002、****=p<0.0001)。
結果
MSC成長における電子ビーム照射の影響を調べるために、2つの異なるMSC(ASCとBM−MSC)について細胞成長性能をテストした。この実施例で前述したように、細胞は10%HPLおよび1%ペニシリン−ストレプトマイシン−アムホテリシン(pen/strep/amp)で調製した培地で培養した。その結果を図4及び図5に示す。図4は、様々な最小線量範囲で処理されたHPLが補充された培地におけるASC細胞増殖の比較を提供する。Aは細胞数を使用した細胞増殖分析で、Bは対照群の割合を使用した細胞増殖分析である。データは、ASC細胞の増殖が40kGy以上の最小線量範囲で有意に減少したことを示している(*=p<0.05、**=p<0.001、***=p<0.0002、****=p<0.0001)。報告データは、異なるHPLバッチの3つの独立した実験の平均である。図5は、様々な最小線量範囲で処理されたHPLが補充された培地におけるBM−MSC細胞増殖の比較を提供する。Aは細胞数を使用した細胞増殖分析で、Bは対照群の割合を使用した細胞増殖分析である。データは、ASC細胞の成長が40kGy以上の最小線量範囲の大幅に減少したことを示している(*=p<0.05、**=p<0.001、***=p<0.0002、****=p<0.0001)。報告データは、異なるHPLバッチの3つの独立した実験の平均である。示されているように、この作業の条件下では、電子ビーム照射は、40kGy以上の放射線量範囲でASC細胞の成長に悪影響を及ぼし始め、BM−MSC細胞成長は45kGy以上の線量範囲で影響を受ける。
図6は、MSC細胞増殖に関連することが知られているELISAによって測定された5つの増殖因子FGFb、EGF、FPDGF−AB、PDGF−BB、およびTGF−βlのレベルを提供する。報告データは、異なるHPLバッチの3つの独立した実験の平均である。示されているように、この研究の条件下では、テストされた成長因子の中で、FGFbが電子ビーム照射によって最も減少した。
対照群の中と電子ビームで処理した材料の中とで培養された細胞の間の形態には、明らかな違いはなかった。
実施例2
方法
合計240個の凍結血小板ユニット(それぞれ約250mL)を4°Cで一晩解凍し、切り開いて内容物をプールした。次に、プールされた血小板を2つの別々の滅菌プラスチック容器に均等に分けた。最初の容器から6.5Lのプールされた液体血小板を4x25Lのフレックスバッグ(Flex bag)のそれぞれに移した。2番目の容器からの血小板を、以下に説明するようにHPLを作るために直ちに処理した。次に、このHPLを各6.5リットルで3x25Lのフレックスバッグのそれぞれに移した。対照として使用するために、100mLのHPLを個別に凍結した。次に、最初の容器から再パッケージされた血小板と2番目の容器から処理されたHPLを−20°Cで凍結し、各フレックスバッグの形状が3cmの厚さでできるだけ均一な平らに近いことを確認した。すべてのサンプルと対照を、コールドシッパーコンテナー内のドライアイス上にパッケージし、電子ビーム処理のために施設に送った。電子ビーム処理に指定されたユニットは、ドライアイスに乗って電子ビームを通して搬送され、厚さ3cmのバッグの第1の面に指向性電子ビーム放射線を40−54kGyの線量範囲で照射し、バッグをドライアイス上で反転し、バッグが再びドライアイス上に置かれて運ばれて、厚さ3cmのバッグの第2の面に電子ビーム放射線を照射した。送った対照には電子ビーム処理をしなかった。
細胞増殖検証アッセイの準備として、先に凍結保存していたASCおよびMSCを解凍し、適切な細胞培養培地を使用して5000細胞/cm2でプレーティングした。細胞を70〜80%の集密度まで増殖させた後、それらを回収して実験用に播種した。細胞培養実験は、マルチウェルプレートを使用して行った。各実験では、細胞を12ウェルプレート内に、1mLの培地で20,000細胞/ウェルでプレーティングした。播種の翌日に培地交換を行い、5日後に、またはいずれかのサンプルが70〜80%の集密度に達したときに実験を停止した。最初の培地交換の3日後に細胞が70〜80%の集密度に達しなかった場合には、4日目に2回目の培地交換を行った。
データは、単一の実験からのスクリーニング実験を除いて、少なくとも3つの実験の平均±標準偏差として表示されている。グループ間の統計分析は、スチューデントのt検定と一元配置分散分析を使用して実行した。p<0.05は、統計的に有意な差を示すとみなされた(*=p<0.05、**=p<0.001、***=p<0.0002、****=p<0.0001)。
結果
MSC成長に対する電子ビーム照射の影響を調べるために、2つの異なるMSC(ASCとBM−MSC)について細胞成長性能をテストした。これらの細胞は、上記したように、10%HPLおよび1%ペニシリン−ストレプトマイシン−アムホテリシン(DMEM)で調製した培地で培養した。結果を図7および8に示す。図7は、電子ビーム照射された血小板と電子ビーム照射されたHPLとから処理されたHPLを補充した培地におけるASC細胞増殖の比較を提供する。Aは細胞数を使用した細胞増殖分析、Bは対照群に対する割合を使用した細胞増殖分析。(*=p<0.05、**=p<0.001、***=p<0.0002、****=p<0.0001)。図8は、電子ビーム照射された血小板と電子ビーム照射されたHPLとから処理されたHPLを補充した培地におけるBM−MSC細胞増殖の比較を提供する。Aは細胞数を使用した細胞増殖分析、Bは対照群に対する割合を使用した細胞増殖分析(*=p<0.05、**=p<0.001、***=p<0.0002、****=p<0.0001)。示されているように、テストされた最小−最大線量範囲(40−54kGy)では、電子ビーム照射された血小板とHPLの両方が、ASCおよびBM−MSC細胞の成長をサポートする有益な能力を示した。電子ビーム照射した血小板とHPLの両方は、テストされた条件下での対照群と比較して有意に低下したASC細胞増殖を示した。BM−MSCの場合、対照に比べてBM−MSC成長のわずかな非有意な損失が電子ビーム照射された血小板で観察され、成長の有意な減少が先に電子ビーム照射したHPLで観察された。
図9は、5つの成長因子(MSCの成長に関連することが知られているFGFb、EGF、PDGF−AB、PDGF−BB、およびTGF−β)の濃度のELISA測定の結果を示している。報告データは、3つの独立した実験の平均である(*=p<0.05、**=p<0.001、***=p<0.0002、****=p<0.0001)。示されているように、ビーム処理された材料は、テストされた成長因子の有益なレベルを保持している。テストした条件下では、電子ビーム照射により、血小板とHPLの両方でFGFbの濃度が減少した。対照群と比較したEGF、PDGF−BBおよびTGF−β1のレベルの有意な上昇は、電子ビーム処理した血小板から調製されたHPLでも測定されたが、電子ビーム処理したHPLではこれらの成長因子のレベルに有意な減少が観察された。
対照群で培養した細胞と電子ビーム処理した材料で培養した細胞との間に、形態において明らかな違いは認められなかった。
実施例3
合計125個の凍結血小板ユニット(それぞれ約250mL)を4℃で一晩解凍し、切り開いて、内容物を1つの25L血液適合性バッグにプールした。プールされた血小板ユニットのバッグから、液体血小板を600mLずつ3個の別のIL極低温凍結保存バッグ(Charter Medical、ウィンストンセーラム、ノースカロライナ州)に移した。次に、この再パッケージされた3つの血小板ユニットを−20°Cで凍結し、バッグ+内容物の形状が可能な限り3cmの厚さの均一な平らになるようにした。凍結した600mLの血小板サンプルをそれぞれ、冷たい移送容器内のドライアイスにパッケージした。パッケージされたユニットは、電子ビーム処理のために施設に夜間に移された。電子ビーム処理に指定された血小板ユニットは、厚さ3cmのバッグの両面処理により得られた最小−最大線量範囲にさらされた。表3は、ここで評価された最小−最大線量範囲を示している。
テスト/結果
指標細胞に対する細胞毒性効果とウイルス感染力の干渉についてサンプルをテストした。細胞毒性および干渉の試験は、ウイルス不活化試験の前に行われた。血小板およびHPLサンプルの干渉結果は表4および5にそれぞれまとめられている。
表6および7のウイルス不活化値は、特定の数以上であるとして示されている。これは、電子ビーム処理が、示された不活性化値の最小値を不活性化できたと解釈できる。スパイクされて電子ビーム処理された材料のテストは、サンプル容量600mLからサブサンプリングした代表の20mLに対して実行された。この実験のすべての電子ビーム処理されたサンプル、血小板およびHPLは、テストされたボリュームからプラークを返さなかった。プラークが検出されない場合でも、全体ではなく代表的なサンプルをテストするには、ウイルスの不活化を計算するための統計計算が必要である。この計算では、サンプルのテスト全体の割合と、テストされていない残りに存在する可能性のあるウイルスが検出されない確率に基づいて不活化値が返される。
特定の実施形態のリスト
実施形態4 実施形態2の方法であって、上記照射の後に、上記血小板濃縮物の血小板を溶解して血小板溶解物を形成することをさらに含む方法。
少なくとも約20ng/ml、20〜約150ng/mlの範囲、より好ましくは約25〜約150ng/mlの範囲のレベルのTGF−β1、および/または
少なくとも約1000pg/ml、好ましくは約1000〜約4000pg/mlの範囲、より好ましくは約2000〜約3500pg/mlの範囲のレベルのEGF、および/または
少なくとも約50pg/ml、好ましくは約50〜約200pg/mlの範囲、より好ましくは約75〜約200pg/mlの範囲のレベルのFGFb、および/または
少なくとも約10ng/ml、好ましくは約10〜約50ng/mlの範囲、より好ましくは約15〜約40ng/mlの範囲のレベルのPDGF−AB、および/または
少なくとも約1ng/ml、好ましくは約1〜約15ng/mlの範囲、より好ましくは約2〜約15ng/mlの範囲のレベルであるPDGF−BB、
を含む、上記実施形態のいずれかに記載の方法。。
少なくとも約20ng/ml、好ましくは約20〜約150ng/mlの範囲、より好ましくは約25〜約150ng/mlの範囲のレベルのTGF−β1、および/または
少なくとも約1000pg/ml、好ましくは約1000〜約4000pg/mlの範囲、より好ましくは約2000〜約3500pg/mlの範囲のレベルのEGF、および/または
少なくとも約50pg/ml、好ましくは約50〜約200pg/mlの範囲、より好ましくは約75〜約200pg/mlの範囲のレベルのFGFb、および/または
少なくとも約10ng/ml、好ましくは約10〜約50ng/mlの範囲、より好ましくは約15〜約40ng/mlの範囲のレベルのPDGF−AB、および/または
少なくとも約1ng/ml、好ましくは約1〜約15ng/mlの範囲、より好ましくは約2〜約15ng/mlの範囲のレベルのDGF−BB、
を含む、上記実施形態のいずれかに記載の方法。
少なくとも約1000pg/ml、好ましくは約1000〜約4000pg/mlの範囲、より好ましくは約2000〜約3500pg/mlの範囲のレベルのEGF、および/または
少なくとも約50pg/ml、好ましくは約50〜約200pg/mlの範囲、より好ましくは約75〜約200pg/mlの範囲のレベルのFGFb、および/または
少なくとも約10ng/ml、好ましくは約10〜約50ng/mlの範囲、より好ましくは約15〜約40ng/mlの範囲のレベルのPDGF−AB、および/または
少なくとも約1ng/ml、好ましくは約1〜約15ng/mlの範囲、より好ましくは約2〜約15ng/mlの範囲のレベルのPDGF−BB、
を有する、実施形態34から37のいずれかに記載の組成物。
Claims (45)
- 血小板濃縮物または血小板溶解物を含む凍結組成物に電子ビーム放射線を照射することを含む、病原体減少血小板組成物を作製する方法。
- 該組成物が血小板濃縮物を含む、請求項1記載の方法。
- 該組成物が血小板溶解物を含む、請求項1記載の方法。
- 該照射の後に、該血小板濃縮物の血小板を溶解して血小板溶解物を形成することをさらに含む、請求項2に記載の方法。
- 該組成物は、血小板溶解物を含み、非溶解血小板を本質的に含まない、請求項1記載の方法。
- 該照射が、約10〜約100kGy、より好ましくは約30〜約70kGyの電子ビーム放射線を該凍結組成物に照射するように行われる、請求項1乃至5のいずれか一項に記載の方法。
- 該電子ビーム放射線が、該凍結組成物の第1面、および該第1面の反対側の該凍結組成物の第2面に照射され、好ましくは、該凍結組成物の該第1面と該第2面との間の最大厚さが約5cm以下とされている、請求項1乃至6のいずれか一項に記載の方法。
- 該照射の間に、該凍結組成物が容器内に保持され、該電子ビーム放射線が該容器を突き抜けて該凍結組成物の中に至るようにされた、請求項1乃至7のいずれか一項に記載の方法。
- 該照射の後に、該組成物が、該照射の前に該組成物中に存在していたFGFb、EGF、PDGF−AB、PDGF−BB、およびTGF−β1の少なくとも1つの初期レベルの少なくとも50%を保持する、請求項1乃至8のいずれか一項に記載の方法。
- 該照射が、該組成物中の少なくとも1つのウイルスの少なくとも3対数減少を達成するのに有効な線量の電子ビーム放射線を提供する、請求項1乃至9のいずれか一項に記載の方法。
- 該凍結組成物の平均厚さが、0.5cm〜5cmの範囲である、請求項1乃至10のいずれか一項に記載の方法。
- 該電子ビーム放射線が、約5から約15MeVのエネルギーレベルを有する、請求項1乃至11のいずれか一項に記載の方法。
- 該照射の間に該凍結組成物を冷却することをさらに含む、請求項1乃至12のいずれか一項に記載の方法。
- 該冷却することは、ドライアイスまたは別の凍結塊から負の熱エネルギーを該凍結組成物に移すことを含む、請求項13に記載の方法。
- 該冷却することは、冷却されたガス状雰囲気から負の熱エネルギーを該凍結組成物に移すことを含む、請求項13または14に記載の方法。
- 該冷却することは機械的冷凍庫内で行われる、請求項15に記載の方法。
- 該電子ビーム放射線が、該凍結組成物の第1面に照射される、請求項1乃至16のいずれか一項に記載の方法。
- 該凍結組成物が約3cm以下の平均厚さを有する、請求項1乃至17のいずれか一項に記載の方法。
- 該電子ビーム放射線が該凍結組成物の第1面に照射され、該照射の方向で該凍結塊が約5cm以下の平均厚さを有する、請求項1乃至18のいずれか一項に記載の方法。
- 該平均厚さが3cm以下である、請求項19に記載の方法。
- 該照射が、電子ビーム放射線を該組成物中の少なくとも1つのウイルスのレベルの低減を達成するのに有効な線量で該凍結組成物に照射することを含む、請求項1乃至20のいずれか一項に記載の方法。
- 該低減は、少なくとも3対数低減である、請求項21に記載の方法。
- 該ウイルスがウシウイルス性下痢ウイルスである、請求項21または22に記載の方法。
- 該照射が、約2:1以下の最大/最小線量比を提供するように行われる、請求項1乃至23のいずれか一項に記載の方法。
- 該凍結組成物が少なくとも約3g/dLの総タンパク質含有量を有する、請求項1乃至24のいずれか一項に記載の方法。
- 該照射の前に、液体形態の該組成物を保持する変形可能な容器を第1の形状に適合させ、該容器で該組成物を該第1の形状で凍結して該凍結組成物を提供することを含む、請求項1乃至25のいずれか一項に記載の方法。
- 該凍結組成物が、少なくとも50ml、好ましくは約50ml〜約10Lの範囲の容量を有する、請求項1乃至26のいずれか一項に記載の方法。
- 該照射の後に、該凍結組成物を解凍して液体組成物を形成することをさらに含む、請求項1乃至27のいずれか一項に記載の方法。
- 該解凍の後に、該液体組成物を1つの包装容器または複数の包装容器に移送することをさらに含む、請求項28に記載の方法。
- 該移送が、該液体組成物を複数の容器に移送することを含む、請求項30に記載の方法。
- 該移送が無菌移送操作である、請求項29または30に記載の方法。
- 該凍結組成物が凍結血小板溶解物を含み、該照射の後に、血小板溶解物が、
少なくとも約20ng/ml、好ましくは約20〜約150ng/mlの範囲、より好ましくは約25〜約150ng/mlの範囲のレベルのTGF−β1、および/または
少なくとも約1000pg/ml、好ましくは約1000〜約4000pg/mlの範囲、より好ましくは約2000〜約3500pg/mlの範囲のレベルのEGF、および/または
少なくとも約50pg/ml、好ましくは約50〜約200pg/mlの範囲、より好ましくは約75〜約200pg/mlの範囲のレベルのFGFb、および/または
少なくとも約10ng/ml、好ましくは約10〜約50ng/mlの範囲、より好ましくは約15〜約40ng/mlの範囲のレベルのPDGF−AB、および/または
少なくとも約1ng/ml、好ましくは約1〜約15ng/mlの範囲、より好ましくは約2〜約15ng/mlの範囲のレベルであるPDGF−BB、
を有する、請求項1乃至31のいずれか一項に記載の方法。 - 該凍結組成物が凍結血小板濃縮物を含み、当該方法が、該照射の後に該血小板濃縮物から第1の血小板溶解物を調製することを含み、該第1の血小板溶解物が、
少なくとも約20ng/ml、好ましくは約20〜約150ng/mlの範囲、より好ましくは約25〜約150ng/mlの範囲のレベルのTGF−β1、および/または
少なくとも約1000pg/ml、好ましくは約1000〜約4000pg/mlの範囲、より好ましくは約2000〜約3500pg/mlの範囲のレベルのEGF、および/または
少なくとも約50pg/ml、好ましくは約50〜約200pg/mlの範囲、より好ましくは約75〜約200pg/mlの範囲のレベルのFGFb、および/または
少なくとも約10ng/ml、好ましくは約10〜約50ng/mlの範囲、より好ましくは約15〜約40ng/mlの範囲のレベルのPDGF−AB、および/または
少なくとも約1ng/ml、好ましくは約1〜約15ng/mlの範囲、より好ましくは約2〜約15ng/mlの範囲のレベルであるPDGF−BB、
を有する、請求項1乃至31のいずれか一項に記載の方法。 - 血小板濃縮物または血小板溶解物を含む組成物であって、凍結状態にある間に、(i)該組成物中の少なくとも1つのウイルスのレベルの減少を達成するのに有効な線量で、および/または(ii)約10kGy〜約100kGyの範囲の線量で、電子ビーム放射線が照射された組成物を含む、電子ビームを照射した血小板組成物。
- 該減少が少なくとも3対数減少である、請求項34に記載の組成物。
- 該減少が少なくとも5対数減少である、請求項34に記載の組成物。
- 電子ビーム誘発タンパク質修飾を有する生物学的に活性な血小板溶解物を有する、組成物。
- 少なくとも約20ng/ml、好ましくは約20〜約150ng/mlの範囲、より好ましくは約25〜約150ng/mlの範囲のレベルのTGF−β1、および/または
少なくとも約1000pg/ml、好ましくは約1000〜約4000pg/mlの範囲、より好ましくは約2000〜約3500pg/mlの範囲のレベルのEGF、および/または
少なくとも約50pg/ml、好ましくは約50〜約200pg/mlの範囲、より好ましくは約75〜約200pg/mlの範囲のレベルのFGFb、および/または
少なくとも約10ng/ml、好ましくは約10〜約50ng/mlの範囲、より好ましくは約15〜約40ng/mlの範囲のレベルのPDGF−AB、および/または
少なくとも約1ng/ml、好ましくは約1〜約15ng/mlの範囲、より好ましくは約2〜約15ng/mlの範囲のレベルのPDGF−BB、
を有する請求項34乃至37のいずれか一項に記載の組成物。 - 請求項34乃至38のいずれか一項に記載の血小板溶解物組成物、または請求項1乃至33のいずれか一項に記載の方法を使用して調製された血小板溶解物組成物を含む培養培地中で細胞を培養することを含む、細胞を培養する方法。
- 該細胞が、免疫細胞、好ましくはT細胞またはNK細胞を含む、請求項39記載の方法。
- 請求項39または40に記載の方法に従って培養された細胞を患者に投与することを含む、患者を治療する方法。
- 請求項34乃至38のいずれか一項に記載の血小板溶解物組成物、または請求項1乃至33のいずれか一項に記載の方法を使用して調製された血小板溶解物組成物を患者に投与することを含む、患者を治療する方法。
- 該照射の間に該凍結組成物を冷却することをさらに含む、請求項1または2に記載の方法。
- 該凍結組成物が凍結血小板溶解物を含み、該照射の後に、該血小板溶解物が:
少なくとも約20ng/ml、好ましくは約20〜約150ng/mlの範囲、より好ましくは約25〜約150ng/mlの範囲のレベルのTGF−β1、および/または
少なくとも約1000pg/ml、好ましくは約1000〜約4000pg/mlの範囲、より好ましくは約2000〜約3500pg/mlの範囲のレベルのEGF、および/または
少なくとも約50pg/ml、好ましくは約50〜約200pg/mlの範囲、より好ましくは約75〜約200pg/mlの範囲のレベルのFGFb、および/または
少なくとも約10ng/ml、好ましくは約10〜約50ng/mlの範囲、より好ましくは約15〜約40ng/mlの範囲のレベルのPDGF−AB、および/または
少なくとも約1ng/ml、好ましくは約1〜約15ng/mlの範囲、より好ましくは約2〜約15ng/mlの範囲のレベルのPDGF−BB、
を有する、請求項1又は3に記載の方法。 - 該凍結組成物が凍結血小板濃縮物を含み、該照射の後に該血小板濃縮物から第1の血小板溶解物を調製することを含み、該第1の血小板溶解物が、
少なくとも約20ng/ml、好ましくは約20〜約150ng/mlの範囲、より好ましくは約25〜約150ng/mlの範囲のレベルのTGF−β1、および/または
少なくとも約1000pg/ml、好ましくは約1000〜約4000pg/mlの範囲、より好ましくは約2000〜約3500pg/mlの範囲のレベルのEGF、および/または
少なくとも約50pg/ml、好ましくは約50〜200pg/mlの範囲、より好ましくは約75〜約200pg/mlの範囲のレベルのFGFb、および/または
少なくとも約10ng/ml、好ましくは約10〜約50ng/mlの範囲、より好ましくは約15〜約40ng/mlの範囲のレベルのPDGF−AB、および/または
少なくとも約1ng/ml、好ましくは約1〜約15ng/mlの範囲、より好ましくは約2〜約15ng/mlの範囲のレベルのPDGF−BB、
を有する、請求項1または2に記載の方法。
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