JP2021505129A - アンジェルマン症候群アンチセンス治療 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2017年12月1日に出願された米国仮出願第62/593,431号および2018年5月24日に出願された出願シリアル第62/676,034号の優先権を主張するものであり、これらは参照によりそれらのすべてが本明細書に組み込まれる。
本出願は、2018年11月30日に作成された「922001−2020 Sequence Listing_ST25」という題名のASCII.txtファイルとして電子形態で提出された配列表を含む。配列表の内容は、そのすべてが本明細書に組み込まれる。
(i)正常な頭囲を有し、かつ大きな先天性異常がない、正常な出生前および出生時履歴;
(ii)新生児および/または乳児の時期の授乳時に困難がある;
(iii)6〜12月齢までに発達遅延のエビデンスがみられ、時に、躯幹の低緊張状態に関連付けられる;
(iv)不安定な四肢の動き、および/または笑いの増大;
(v)発達は遅延されるが、進展する(技能の喪失はない);
(vi)正常な代謝、血液、および化学的ラボ的プロファイル;
(vii)MRIまたはCTを使用して評価された場合に構造的に正常な脳(軽度の皮質萎縮または髄鞘形成異常を有することがある)。
(i)発達の遅延、機能的に重大である;
(ii)運動またはバランス障害、通常は、歩行失調および/または四肢の振戦運動。いくつかの実施形態では、そのような運動障害は軽度であり得る。いくつかの実施形態では、そのような運動障害は、明らかな運動失調として現れないが、例えば、前傾、不安定さ、不器用さ、または素早くぎくしゃくした動きであるか、またはそれらを含み得る;
(iii)独特な挙動:笑い/笑顔の頻度が増えること;明らかに幸せな様子;簡単に興奮する性格、多くの場合、高揚して手を羽ばたかせたり手を振ったりする運動を伴う;多動的挙動の任意の組み合わせ
(iv)言語障害、例えば、言葉の使用を欠いているか、または最小限である;代替的または追加的に、感受性および非言語的コミュニケーションスキルは言語スキルに比べて高い。
(i)頭囲の成長が、遅延され、不釣り合いなものであり、通常は、結果として、2歳までに小脳症を生じる(正常なOFCの≦2S.D.)。いくつかの実施形態では、小脳症は、15q11.2−q13欠失を伴う人においてより顕著である;
(ii)てんかん発作、通常は、3歳までに発症する。いくつかの実施形態では、てんかん発作の重症度は、年齢に従って減少し得るが、それにも関わらず、いくつかの実施形態では、てんかん発作障害は、大人になっても継続する。
(iv)当該技術分野において知られているような特徴的なパターンを伴う異常なEEG。いくつかの実施形態では、EEGの異常さは、人生の初めの2年で生じ、臨床的特徴に先行することがあり、臨床的なてんかん発作事象に相関しないこともある。
(i)平らな後頭部
(ii)後頭動脈溝
(iii)舌を突き出している
(iv)舌を押し出す;吸い込み/飲み込み障害
(v)乳児期の授乳における問題および/または躯幹の低緊張状態
(vi)上顎前突
(vii)広く開いた口、広く隙間の空いた歯
(viii)頻繁によだれを垂らす
(ix)過剰な噛む/口の動きの挙動
(x)斜視
(xi)色素不足の皮膚、薄い色の髪の毛および眼の色、いくつかの実施形態では、家族と比較して決定され、典型的には欠失の場合においてのみ見られる。
(xii)過剰な四肢下部の深部腱反射
(xiii)特に歩行運動中の、高揚した湾曲した腕の位置
(xiv)回内または外反した足首を伴うすそ広がりな足どり
(xv)熱に対する感受性の増大
(xvi)異常な睡眠覚醒サイクル、および睡眠の必要性の減少
(xvii)水に対する興味/水に魅惑されること;特定の紙およびプラスチックなどのカサカサ音のなる物品に対して魅惑されること
(xviii)食べ物に関連した異常な挙動
(xix)肥満(年齢の高い小児において)
(xx)脊柱側湾症
(xxi)便秘
結果
マウスおよびヒトCNSのRNA−配列決定分析は、UBE3A−ASの安定性および/または転写のために重要であると考えられている領域を同定した。領域のさらなる分析は、マウスとヒトとの間の低レベルの配列保存を示した(図1A〜1D)。
ASのための療法の開発に向けて、マウスおよびヒトニューロンにおいて、特定領域を標的とするASOがUbe3a−AS/UBE3A−ASを阻害し、父方Ube3a/UBE3Aアレルの発現を再活性化するかを決定するために、実験が実施された。まとめると、知見は、マウスおよびヒトニューロンにおけるこの領域を標的とするASOは強力なアンチセンス活性を有し、Ube3a/UBE3Aの刷り込みを反転させることを示す。
アンチセンスオリゴヌクレオチド設計
アンチセンスオリゴヌクレオチド(ASO)は、Soligo(核酸の統計的折り畳みおよび調節性RNAの研究のためのソフトウェア)を使用して設計された。簡単に言うと、最も低い結合部位分断エネルギーおよび自由結合エネルギーを伴う候補ASO(20〜18mer)が、各標的配列について同定され、次いで、増大した効果を有するモチーフについて検査した。Soligoにより作製された標的配列の予測された最も低い自由エネルギー質量中心二次構造内のアクセシビリティに基づいて、ASOはさらにフィルターにかけられた。いくつかの場合では、RNAfoldおよびMfoldにより作製された最も低い自由エネルギー構造を使用して、二次構造モデルが比較された。
海馬ニューロンの初代培養液は、Ube3am+/pYFPの雄と野生型C57BL/6J雌を交配することによるP0−P1子マウス(Ube3am+/p+およびUbe3am+/pYFP)から産生された。遺伝子型は、以前に記載された方法を使用して決定された。簡単に言うと、海馬ニューロンは、ポリ−D−リジン(152028、Thermo Fisher Scientific)およびラミニン(23017−01、Thermo Fisher Scientific)をコーティングした96ウェルオプティカルボトムプレートにて、B27(Invitrogen)およびペニシリン/ストレプトマイシン(Invitrogen)を補足した神経基礎A培地(Invitrogen、San Diego、CA)中で培養した。培養液は使用時まで5%のCO2中、37℃で維持された。
マウス初代海馬ニューロンは、10DIV(治療の3日後)に、4%のパラホルムアルデヒドを用いて固定された。次いで、培養液は、1XPBSで2回洗浄され、PBS中の4%のパラホルムアルデヒドで15分間固定され、次いで、1XPBS中で3回洗浄された。細胞は、5%のヤギまたはロバ血清を加えたPBS(T−PBS)中の0.3%のトリトン−X100中で、1〜2時間、室温で穏やかに攪拌しながらブロッキングされた。細胞は、抗−GFP[Novus Biologicals、NB 600−308(ウサギ)]および抗−NeuN(Millipore、05−557(mouse)]抗体と共に24時間、4℃で穏やかに攪拌しながらインキュベートされた。細胞は、0.1%のTween 20 1XPBS中で各々15分間ずつ3回洗浄され、次いで、抗ウサギ488(Jackson ImmunoResearch、111−545−144)および抗マウスCy3(Jackson ImmunoResearch、115−165−166)二次抗体と共に24時間4℃で暗所にてインキュベートされた。次いで、細胞は、0.1%のTween20 1XPBS中で各々15分間ずつ4回洗浄された。3回目の洗浄において1:1000の希釈でHoechst染色(Thermo Fisher Scientific)を使用して、核が標識された。
GABA作動性およびグルタミン酸作動性誘導多能性幹細胞(iPSC)由来神経前駆細胞(NRC−100−010−001およびGNC−301−030−001、Cellular Dynamics International、Madison WI)を、製造元のプロトコルに従ってニューロンに分化させた。簡単に言うと、神経前駆細胞は解凍され、化学的に画定された培地中で再懸濁され、ポリ−D−リジンおよびラミニンでコーティングされた滅菌培養プレートへ添加された。プレーティングの24時間後に培地を交換し、次いで、培地の半分をその後3〜5日毎に交換した。
培養されたiPSC−由来ニューロンについて、Cell−to−CTキット(Thermo Fisher Scientific)を55μlのライセート容積にて使用して、RNA単離およびcDNA合成を実施した。
標的転写物の定常状態RNAレベルは、TaqMan定量的リバース−転写PCR(qRT−PCR)アッセイを使用して測定された。全反応容積は、10uLであり、2μlのcDNA、1Xの遺伝子発現マスターミックス(4369016、Thermo Fisher Scientific、Waltham、MA)、および1XのTaqManプライマーアッセイ(Thermo Fisher Scientific)を含んだ。サイクリング条件は、50℃で2分間、95℃で10分間、ならびに95℃で15秒間および60℃で1分間の40サイクルであり、各サイクルの60℃での工程において読み取りが行われた。反応は、BIO−RAD T1000 CFX96サーモサイクラー(Bio−Rad Laboratories、Hercules CA)において実行され、内部対照(PPIA、Hs99999904_m1、Thermo Fisher Scientific)および標的[UBE3A−AS、Hs01372957_m1;SNORD116−11、Hs04275268_gH;SNORD115、Hs04275288_gH;IPW、Hs03455409_s1;SNORD109A/B、AP47WVR(Thermo Fisher Scientific);UBE3A:フォワードATATGTGGAAGCCGGAATCT(配列番号500);リバース:CCCAGAACTCCCTAATCAGAA(配列番号501);およびプローブ:ATGACGGTGGCTATACCAGG(配列番号502)]反応を共に実施した。データを取り出し、BIORAD CFX Maestroソフトウェア(Bio−Rad Laboratories)で分析した。内部対照Cq値≧30を有する試料をフィルター分けした。データの品質を視覚的に調査して、技術的および/またはプレートレプリケートの間の不一致を同定した。推測統計および記述統計のための測定は、ΔΔCq値(2−ΔΔCq=2−(Cq[標的]−Cq[内部対照])−(Cq[標的]−Cq[内部対照]))からなる。
マウス組織および細胞から産生されたRNA−配列決定データの分析は、Snord115クラスターの3’−末端とUbe3aアンチセンス(Ube3a−AS)転写物の5’−末端との間に位置する領域を明らかにし、これは、Snord115宿主遺伝子転写物のプロセシングおよびUbe3a−ASの転写のために重要であると考えられている遺伝要素を含有している(図6A〜6D)。ヒト組織から産生されたRNA−配列決定データの分析は、SNORD115クラスターの3’末端とSNORD109Bとの間に位置する領域を明らかにし(図7A〜7G)、これは、マウスにおいて観察されたものと同様の要素を含んだ;しかし、この領域の比較分析は、ヒトとげっ歯類との間には配列保存がほとんどないか、または全く存在しないことを示した。
RNA−配列決定
RNAは、Qiagen RNAeasy Plus(74136、Qiagen、Hilden、Germany)を使用して単離された。RNA濃度は、Qubit蛍光定量(Thermo Fisher Scientific)を使用して決定され、RNA品質は、4200 Agilent TapeStation(Agilent、Santa Clara、CA)を使用して評価された。RNA−配列決定ライブラリーは、Illumina TruSeq Stranded Total RNAキット(20020597、Illumina、Inc.、San Diego、CA)を製造元のプロトコルに従って使用して産生された。75塩基対の対になった末端配列決定は、Texas A&M Institute for Genome Sciences and Society Genomics coreにおいて、NextSeq 500(Illumina、San Diego、CA)を使用して実施された。生の配列決定読み取りは、CASAVAを使用して処理された。得られたFASTQ配列は、FASTQCを使用して調べられた。
ASO−4およびASO−6.1標的配列を標的とし、かつ異なる骨格設計およびRNA修飾からなる18個のASOが、潜在的なリードASOを同定するために設計された(表17)。正常なiPSC由来ニューロン(GABA作動性)は、10ポイントの1/2log用量曲線の各ASOで治療され、IC50およびE最大値を比較された。神経前駆細胞は18DIVでニューロンに分化し、次いで、10ポイントの1/2log用量応答ASO[1nM、3nM、10nM、30nM、100nM、300nM、1μM、3μM、10μM、および30μM(n=2)]で治療された。24DIVにて、UBE3A−ASの定常状態RNAレベルが測定され、上記したように用量応答曲線が近似された(図8Aおよび表18)。用量応答曲線は有意に異なった(並列試験:F(51,606)=7.86;p<0.0001;R2=0.90)ので、相対的効力は推定されなかった。近似曲線の階層的なクラスター化は、ASOの3クラスターを明らかにし、クラスター1が9つの最も強力なASOを表した(図8Bおよび8C)。クラスター1の分析は、ASOが同様の曲線を有し(並列試験:F(24,299)=1.01;p=0.5;R2=0.93)、ASO−4.4.PS.Lが他のASOと比べて少なくとも3倍強力であることを示した(表19)。しかし、さらなる分析は、ASO−4.4.PS.L、ASO−6.1.PS.M、およびASO−6.1.PO−1.Mが等価なIC50値を有するが、他のASOは若干効力が少ないことを示した(表20)。相対的効力および内部選択基準に基づいて、ASO−4.4.PS.LおよびASO−6.1.PO−1.Oがさらに調査された。
方法は、別記されない限り、実施例2で記載されたものと同様であった。
次いで、ASO−6.1.PS.OおよびASO−4.4.PS.Lの効力が、15q11−q13領域の母方由来欠失を有するアンジェルマン症候群患者からのiPSC由来ニューロンにおいて調べられた。誘導多能性幹細胞は、ニューロンに分化し、次いで、10ポイントの1/2log用量曲線のASO−6.1.PO−1.OおよびASO−4.4.PS.L[1nM、3nM、10nM、30nM、100nM、300nM、1μM、3μM、10μM、および30μM(n=3)]で治療された。治療の6日後に、UBE3A−ASの定常状態RNAレベルが測定され、用量応答曲線が上記したように近似された(図9A)。用量応答曲線は、ASO間で同様であったが(並列試験:F(3,132)=1.07、p=0.4、R2=0.82)、ASO−4.4.PS.L(437nM)はASO−6.1.PO−1.O(1.22uM)よりもおよそ2.7倍だけより強力であった。IC50値は等価であった[ASO−6.1.PO−1.O/ASO−4.4.PS.L IC50比:=0.96(信頼下限=0.9;信頼上限=1.0)]。E最大値は同様であった(30μM:ASO−4.4.PS.L=0.01±0.0007;ASO−6.1.PO−1.O=0.05±0.004)が、信頼区間[ASO−6.1.PO−1.O/ASO−4.4.PS.L E最大比:=−9.1(信頼下限=−224;信頼上限=205)]に起因して等価であるとは見なされなかった。
方法は、別記されない限り、実施例2で記載されたものと同様であった。
アンジェルマン症候群iPS細胞(AG1−0 iPSCs)(ECN001、Kerafast、Boston、MA)は、ヒト胚性幹細胞培地[DMEM/F12(11330−057、Gibco Biosciences、Dublin、Ireland)、20%のノックアウト血清リプレイスメント(10828−028、Thermo Fisher Scientific)、1Xの非必須アミノ酸、2mMのL−グルタミン、7μl/mLの2−メルカプトエタノール、および4μg/mLの基礎線維芽細胞成長因子]中で、照射マウス胚性線維芽細胞と共培養された。初回継代では、PluriSTEMヒトES/iPS培地(SCM130、Millipore Sigma、Burlington、MA)についての製品マニュアルに従って、AG1−0細胞が継代され、この培地は、フィーダーフリーであり、細胞を解離するためにDispaseII(SCM133、Millipore Sigma)を利用する。Matrigel(商標)hESC適格性マトリックス(354277、Corning BD Biosciences、Corning、NY)を細胞外マトリックスとして使用した。第2の継代では、マトリックスは、ビクロネクチン(CC130、Millipore Sigma)に変更された。続く継代の間、分化した細胞がコロニーのおよそ<5%を表すまで、分化の領域は手動で除去された。4回の続く継代の後、AG1−0細胞は、細胞外マトリックスとしてビクロネクチンを欠いているMillipore ES/iPS神経新生キット(SCR603、SCM110、およびSCM111)を使用して、分化された。初回継代はEZ−LiFT(SCM139、Millipore Sigma)を用いて実施され、高品質のiPS細胞を得た。神経前駆細胞をステージゼロ(P0)で凍結し、その後、分化のために解凍した。分化は、ポリ−D−リジン(10μg/mL)およびラミニン[10μg/mL(23017−015、Gibco)でコーティングされた滅菌培養プレートにて、分化培地(SCM111)中、分化の10日間において実施された。いくつかの場合では、細胞は、セルラーダイナミクス維持培地(NRM−100−121−001、Cellular Dynamics International、Madison、WI)中で分化された。
ASO−4.4.PS.LおよびASO−6.1.PO−1.Oが、PWS多シストロン性転写物によりコードされるRNA転写物のレベルに影響を与えるかを決定するために、RNA−配列決定が、各ASOで治療されたAS iPS細胞において実施され、SNURF、SNRPN、SNORD116宿主遺伝子転写物(SNHG116)、SNORD116 snoRNA、IPW、SNORD115宿主遺伝子転写物(SNHG115)、SNORD115 snoRNA、およびUBE3A−ASの定常状態RNAレベルが定量化された。UBE3A定常状態RNAレベルも測定された。アンジェルマン症候群iPS細胞は上記したようにニューロンへと分化し、次いで、ビヒクル(1%のH2O、n=3)、ASO−4.4.PS.L(30uμM、n=3)およびASO−6.1.PO−1.O(30μM、n=3)で治療された。治療の6日後、培養液から単離された総RNA(rRNA枯渇した)に対して、RNA RNA−配列決定が実施された。SNHG116、SNHG115、およびUBE3A−AS転写物の注釈を作製するために、トランスクリプトームが、ビヒクルRNA−seqデータからアセンブリされ、次いで、参照遺伝子注釈へと組み込まれた。ビヒクルに対して、SNURF、SNRPN、SNHG116、SNORD116 snoRNA、およびSNORD115 snoRNAの定常状態RNAレベルは同様であり、有意に異ならなかった。ASO−6.1.PO−1.Oではなく、ASO−4.4.PS.Lは、IPWレベル(1.5倍)を減少したが、効果は有意ではなかった。ASO−6.1.PO−1.OおよびASO−4.4.PS.Lは、SNHG115およびUBE3A−AS RNAレベルを有意に減少した。ASO−6.1.PO−1.OおよびASO−4.4.PS.Lは、SNHG115レベルに対して同様の効果を有した;しかし、ASO−4.4.PS.Lは、ASO−6.1.PO−1.O(ASO−4.4.PS.L:−6.1倍変化;ASO−6.1.PO−1.O:−2.8倍変化)よりも、UBE3A−AS RNAレベルに対してはるかに大きな効果を有した。ASO治療は、UBE3A RNAレベルをおよそ1.2倍増大したが、効果は有意ではなかった(図10および表21)。
方法は、別記されない限り、実施例4で記載されたものと同様であった。
RefSeq遺伝子注釈の正規化されたFPKM(100万あたり1000あたりの断片)値は、デフォルト設定および以下のオプションを用いるCuffnormを使用して推定される:−u。各遺伝子注釈のFPKM値は、各試料についてアウトプットファイルから決定され、記述および推測統計のために使用された。
ASO−4およびASO−6標的領域は、いくつかの非ヒト霊長類(NHP)種にわたって保存されており、故に、大型動物モデルにおける安全性および効率性の研究の両方が可能となる。中枢神経系(CNS)におけるASO−4.4.PS.LおよびASO−6.1.PO−1.Oの効能を調べるために、ASOが、髄腔内腰部穿刺によりカニクイザルマカクへ送達された。動物は、ビヒクル(0.9%の食塩水、n=5)、ASO−6.1.PO−1.O(10mg、n=3)、およびASO.4.4.PS.L(10mg、n=3)の単回ボーラス注射を投与された。治療の28日後、中枢神経(CNS)組織が収集され、UBE3A−ASの定常状態RNAレベルが測定された。総じて、ASO−4.4.PS.Lは、ASO−6.1.PO−1.Oよりも、UBE3A−AS RNAレベルに対してより大きな効果を有した(表22)。ASO−4.4.PS.Lは、大部分のCNS領域においてUBE3A−AS RNAを減少し、側頭葉、一次運動皮質、脳橋、髄、海馬、淡蒼球、前頭皮質(放射冠)、前頭前野、および脊髄腰部において大きな効果を有した。同様に、ASO−6.1.PO−1.Oは、大部分のCNS領域においてUBE3A−AS RNAレベルを減少し、大きな効果は、脳橋、動眼神経核、および脊髄腰部において観察された(図11および表23)。
ASOの投与
NHP研究は、Northern Biomedical Research and Charles River Laboratoriesにて、Institutional Animal Care and Use Committeesの各制度により認可されたプロトコルを使用して実施された。2〜4kgの体重の雄および雌カニクイザルマカク(Macaca fascicularis)を麻酔し、単回1mL用量のASOまたはビヒクルを髄腔内腰部穿刺により投与した。ビヒクル対照品目(0.9%の塩化ナトリウム)中に凍結乾燥したASOを溶解させることにより、投与用溶液を調製し、0.2μmのフィルターを介して濾過した。CNSおよび脊髄試料を回収し、CNSを4mmの冠状スライスに切片化した。組織試料を即時凍結し、RNA単離まで−80℃で貯蔵した。
4mmの組織パンチを目的の各領域から採取し、そのおよそ半分はRNA単離のために使用した。RNA単離は、Qiagen RNeasyプラスミニキット(74136、Qiagen)を使用して実施され、組織崩壊および溶解は、TissueLyser II中の5mmのステンレススチールビーズを用いて実施された。RNAは、2容積の30μlの水中に溶離され、全溶離容積は60μlとなった。RNAは、QubitおよびRNA XRアッセイ(Q33224、Thermo Fisher Scientific)を用いて定量化された。cDNAは、高性能RNA−to−cDNAキット(4387406、Thermo Fisher Scientific)を全反応容積50μlで使用して、2μgのインプットRNAから合成された。
カニクイザルマカクのUBE3A−AS RNAレベルは、SYBR緑色定量的リバース−転写PCR(qRT−PCR)を使用して推定された。全反応容積は、10μlであり、2μlのcDNA、1XのPowerUp SYBRグリーンマスターミックス(A25741、Thermo Fisher Scientific)、および500nMの各プライマー(フォワードおよびリバース)を含んだ。サイクリング条件は、50℃で2分間、95℃で2分間、ならびに95℃で15秒間および60℃で1分間の40サイクルであり、各サイクルの60℃での工程において読み取りが行われた。反応は、BIO−RAD T1000 CFX96サーモサイクラーで実行され、内部対照(PPIA、フォワード:GTCTCCTTCGAGCTGTTTGC (配列番号503);リバース:CCTTTCTCTCCAGTGCTCAGA (配列番号504))および標的(UBE3A−AS、フォワード:CCTGTGAACTTTCAACCAGGA (配列番号505);リバース:GGATCAGACTCCAGGCCTTC(配列番号506))反応が別々に実施された。データが回収され、初期分析がBIORAD CFX Maestroソフトウェアを用いて実施され、深層統計分析は、ExcelおよびJMPを用いて実施された。
いくつかの実施形態では、標的配列は、UBE3A−ASエクソン1〜5およびSNORD109Bエクソン1〜2を含むエクソン境界である。標的配列は、各エクソン(隣接エクソンの5’および3’−末端を表す19個のヌクレオチド)のエクソンの境界を中心として配置する38個のヌクレオチド(各エクソンの19個のヌクレオチド)からなる。セグメント1〜2、2〜3、3〜4、5〜6、7〜8、9〜10、および11〜12を含むエクソン境界を伴う、12セグメントの配列が存在した。染色体コーディネートは表24に提供される。スプライスされたエクソン(|、エクソンのジャンクション)および介入エクソンの配列([])を示す単一の合成されたジャンクション配列が作製された。エクソンのジャンクションを標的とするASO(20−、19、および18−mer)は、表25に提供される。
AATGAAATCTTCTGATTTG|TAAGACATGCTGCCAAGAG[]ATTAGTTTTACACCTTCAG|GATAAAGACTGCTGAGAAG[]GTTTAAGGATGCTATTCTG|AAAAGACTGTGGAGGAAGA[]TTAAGGAAACCATCTCTGG|GATAAGGATGACTGAGGAA[]ATTTAAGGATGCCACTCTG|GTTAAAAGCTGAAACAACT[]GAAACTTCAGGGAAAAGAG|AAGGCCTGGAATCTGATCC(配列番号489)。
|=3’−5’ エクソンのジャンクション
[]=介入エクソンの配列
上記するように、いくつかの実施形態では、開示されたオリゴヌクレオチドは、標的核酸配列を阻害、変異、または欠失する機能的核酸、例えば、siRNA、shRNA、またはヌクレアーゼgRNAである。
Claims (13)
- 核酸配列、配列番号1、配列番号2、配列番号3、配列番号4、または配列番号5の連続した部分に少なくとも98%の相補性を有する10〜30個のヌクレオチド長の連続したヌクレオチド配列を含む、アンチセンスオリゴヌクレオチド。
- 前記オリゴヌクレオチドが、配列番号6、7、8、9、10、または11からなる群から選択される配列を含む、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- 1つ以上の修飾されたヌクレオシドを含む、請求項1または2に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記1つ以上の修飾されたヌクレオシドが、2’糖修飾されたヌクレオシドである、請求項3に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記1つ以上の2’糖修飾されたヌクレオシドが、2’−O−アルキル−RNA、2’−O−メチル−RNA、2’−アルコキシ−RNA、2’−O−メトキシエチル−RNA、2’−アミノ−DNA、2’−フルオロ−DNA、アラビノ核酸(ANA)、2’−フルオロ−ANA、およびLNAヌクレオシドからなる群から独立して選択される、請求項4に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記1つ以上の修飾されたヌクレオシドが、LNAヌクレオシドである、請求項5に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも1つの修飾されたヌクレオシド間結合を含む、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記連続したヌクレオチド配列内の前記ヌクレオシド間結合が、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項7に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記オリゴヌクレオチドが、RNアーゼHをリクルートすることができる、請求項1に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記オリゴヌクレオチドが、ギャップマーである、請求項9に記載のオリゴヌクレオチド。
- 前記オリゴヌクレオチドが、配列番号362〜392からなる群から選択される核酸配列を有する、請求項10に記載のオリゴヌクレオチド。
- 請求項1〜11のいずれか一項に記載の1つ以上のオリゴヌクレオチド、ならびに薬学的に許容される希釈剤、溶媒、担体、塩および/または賦形剤を含む、薬学的組成物。
- 治療的または予防的有効量の請求項12に記載の組成物を、アンジェルマン症候群を患っているか、またはその疑いのある対象へ投与することを含む、対象においてアンジェルマン症候群を治療または予防するための方法。
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