JP2021504438A - クレブシエラ ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対するワクチン - Google Patents

クレブシエラ ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対するワクチン Download PDF

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Abstract

本発明は、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型Ｏ３、Ｏ３ｂおよび／またはＯ５リポ多糖に関連する一般式（Ｉ）の合成オリゴ糖、並びに一般式（Ｉ）の合成オリゴ糖の複合体に関する。前記合成オリゴ糖、前記複合体、並びに前記合成オリゴ糖を含む医薬組成物および前記複合体を含む医薬組成物は、クレブシエラ・ニューモニエと関連する疾患の予防および／または治療に有用である。さらに、一般式（Ｉ）の合成オリゴ糖は、クレブシエラ・ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂおよび／またはＯ５細菌に対する抗体の検出のための免疫学的分析のマーカーとして有用である。

Description

発明の詳細な説明
［発明の分野］
本発明は、クレブシエラ ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型Ｏ３、Ｏ３ｂおよび／またはＯ５リポポリオリゴ糖、特にクレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂおよび／またはＯ５リポポリオリゴ糖のＯ−抗原および複合体に関連する一般式（Ｉ）の合成オリゴ糖に関する。前記合成オリゴ糖、前記複合体、並びに前記合成オリゴ糖を含む医薬組成物および前記複合体を含む医薬組成物は、クレブシエラ ニューモニエと関連する疾患、より特異的にクレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂおよび／またはＯ５と関連する疾患の予防および／または治療に有用である。さらに、一般式（Ｉ）の合成オリゴ糖は、クレブシエラ ニューモニエ細菌に対する抗体の検出のための免疫学的分析のマーカーとして有用である。
［発明の背景］
クレブシエラ ニューモニエは、大抵は気道および尿路にコロニー形成し、Ｋ．ニューモニエ感染症（ＫＰＩｓ）を引き起こすグラム陰性の、通性嫌気性桿菌である。ＫＰＩは、院内感染の主な原因になり、主に免疫障害を持つ患者に影響を及ぼす。過去１０年において、Ｋ．ニューモニエによって引き起こされる感染症は、ほとんど全ての利用可能な抗菌剤に耐性のある株の出現、およびそれらの世界規模での普及によって医療の場では重要な課題になっている。クレブシエラ ニューモニエによって引き起こされる感染症は、高い罹患率および高い死亡率の原因となる。したがって、Ｋ．ニューモニエによって引き起こされる感染症の予防は、高く望まれており、リスク群の予防接種は、最も費用効率が高く、および最も強力な手段である。
Ｋ．ニューモニエ細菌は、Ｋ．ニューモニエ細菌の細胞表面上に２つの抗原型を一般的に発現する。第一に、Ｏ−抗原は、リポポリオリゴ糖（ＬＰＳ）の成分であり、Ｏ−抗原において９つの血清群が存在する。第二は、Ｋ抗原であり、８０以上の血清型を有する莢膜多糖／オリゴ糖である。Ｏ−抗原は、ＬＰＳにおける最も可変的な部分であり、血清学的特異性を提供し、Ｋ抗原と共に、血清型決定のために使用される。両抗原は、細菌表面上に多糖／オリゴ糖複合体から構成され、高い免疫原性および毒性となる。タンパク質と比較して、炭水化物は進化的により安定である。担体タンパク質に共有結合されると、オリゴ糖抗原は、長期にわたりＴ細胞依存的保護を引き起こすことができる（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ １９９５，５９１）。炭水化物ワクチンの最近の動向のレビューのために、Ｃｈｅｍ．＆Ｂｉｏｌ．２０１４，２１，３８−５０を参照する。自動炭水化物合成および炭水化物に基づくワクチンの開発における当該合成の適用のレビューのために、Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｒｅｓ．２００８，３４３，１８８９−１８９６を参照する。
ＷＯ２０１６／１５６３３８ Ａ１は、クレブシエラ ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）細菌によって引き起こされる疾患の治療のための、合成カルバペネム耐性クレブシエラ ニューモニエオリゴ糖および合成カルバペネム耐性クレブシエラ ニューモニエオリゴ糖の複合体を開示する。
ワクチン（Ｖａｃｃｉｎｅ）に関する論文１９８６，４，１５は、Ｋ２、Ｋ３、Ｋ１０、Ｋ２１、Ｋ３０およびＫ５５血清型に由来する莢膜多糖から構成される６価のクレブシエラワクチンについて報告する。試験されたワクチンは、致命的な実験的クレブシエラＫ２熱傷創感染に対して高い保護があることが明らかになったため、予防接種後に機能的抗体が引き起こされることを示す。
Ｏ−抗原、すなわち、Ｋ．ニューモニエのＯ−多糖の繰り返しユニットが解明された（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，２７７（２８)，２５０７０−２５０８１）（図１参照）。
Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ３のＯ−多糖の繰り返しユニットは：
→２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１→］ｍ
からなる。
Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ３ｂのＯ−多糖の繰り返しユニットは：
→２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１→］ｍ
からなる。
Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ５のＯ−多糖の繰り返しユニットは：
→３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１→
からなる。
クレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂおよびＯ５リポ多糖に関連し、並びに保護免疫原性Ｏ−抗原エピトープ、すなわち、クレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および血清型Ｏ５によって引き起こされる疾患に対して保護する抗体を引き起こすＯ−抗原エピトープを含む、一般式（Ｉ）のよく定義された合成オリゴ糖を提供することが、本発明の目的である。前記オリゴ糖は、クレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂおよび／または血清型Ｏ５と関連する疾患の予防および／または治療に有用である複合体および複合体の医薬組成物を提供するために、免疫原性担体に結合することができる。さらに、一般式（Ｉ）の合成オリゴ糖は、クレブシエラ ニューモニエ細菌に対する抗体の検出のための免疫学的分析のマーカーとして有用である。
本発明の目的は、独立請求項の教示によって解決される。本発明の更に有利な特徴、態様および詳細は、本出願の従属請求項、明細書、図および例から明らかである。
［発明の説明］
［定義］
本願に使用される用語「リンカー」は、オリゴ糖の還元末端単糖を免疫原性担体または固体支持体と、任意に少なくとも一つの内部連結分子に結合することによって、連結することが可能な分子断片を包含する。したがって、リンカー自体の、または内部連結分子と共にリンカーの機能は、還元末端単糖と免疫原性担体と間に、または還元末端単糖と固体支持体との間に特有の距離を設立する、保持する、および／または橋渡しをすることである。オリゴ糖と免疫原性担体との間に特定の距離を保持することによって、免疫原性担体の構造（例えば、担体タンパク質の二次構造など）による免疫原性オリゴ糖エピトープの遮蔽を防ぐ。さらに、リンカーは、反応基における立体障害を減少させることによってオリゴ糖とのより大きい結合効率を提供する（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２００３，８７，１５３−１７４）。より具体的に、リンカーの一端は、還元末端単糖のアノマー中心で環外の酸素に連結され、他の末端は、窒素原子を介して内部連結分子と、または免疫原性担体もしくは固体支持体と直接連結される。
当該技術において公知のオリゴ糖複合体（例えば、多糖およびオリゴ糖−担体タンパク質複合体、抗体−薬物複合体など）のための任意のリンカーを、本発明内で使用すること
ができる。使用されるリンカー、すなわち、リンカーの長さおよび結合型は、オリゴ糖複合体の免疫原性に重大な影響を及ぼさないので（ＰＬｏＳ ＯＮＥ ２０１７，１２（１２）：ｅ０１８９１００，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．Ｍｅｔｈ．１９９６，１９１，１−１０参照）、多糖およびオリゴ糖担体タンパク質に関する多くの出版物から、当業者は、本願において開示されるオリゴ糖および複合体のための適切なリンカーを容易に想定することができる（Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｒｅｖ．２０１８での「抗菌性複合糖質ワクチン（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｖａｃｃｉｎｅｓ：タンパク質修飾のための古典的および近代的取り組みの概要（ａｎ ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｃｌａｓｓｉｃ ａｎｄ ｍｏｄｅｒｎ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｆｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ）」，進展論文（Ａｄｖａｎｃｅ Ａｒｔｉｃｌｅ），ＤＯＩ：１０．１０３９／Ｃ８ＣＳ００４９５Ａ；Ａｃｃ Ｃｈｅｍ Ｒｅｓ ２０１７，５０，１２７０−１２７９参照）。当該適切なリンカーは、無害（すなわち、非毒性）および非免疫原性（すなわち、複合体での免疫付与に対して非保護抗体の形成を導かない）であり、市販の二官能性ポリエチレングリコール（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ
Ｒｅｌｅａｓｅ ２０１３，１７２，３８２−３８９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎ．Ｍｅｔｈ．１９９６，１９１，１−１０）、グルタル酸誘導体（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００５，７０（１８），７１２３−７１３２）、アジピン酸誘導体、スクアリン酸塩誘導体、アルキン、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、例えば、市販のＭＦＣＯ−ＮＨＳ（モノフルオロ置換シクロオクチンＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）、（Ａｃｃ Ｃｈｅｍ Ｒｅｓ ２０１７，５０，１２７０−１２７９に開示されるような）マレイミド、または親水性のアルキルホスフィン酸塩および（ＷＯ２０１４０８０２５１Ａ１に開示されるような）スルホニルを含むが、これらに制限されない。
本願に使用される用語「内部連結分子」は、官能基Ｘおよび官能基Ｙを含む二官能性分子に関し、ここで、官能基Ｘは、リンカーＬにおける末端アミノ基と反応することができ、官能基Ｙは、免疫原性担体に、または固体支持体に存在する官能基と反応することができる。図３は、市販の内部連結分子の例を示すが、本願に示される実施例に対して本発明に従って使用されることができる内部連結分子を制限しない。
本願に使用される用語「アジュバント」は、免疫学的アジュバント、すなわちアジュバントに関連する抗原性を有さず、ワクチンに含まれる所与の抗原に対して免疫応答を高めることによって前記ワクチンの効果を修正するまたは増大させるワクチン組成物において使用される材料に関する。当業者にとって、古典的に認識されるアジュバントの例は：
−カルシウム塩およびアルミニウム塩（またはそれらの混合物）を含む、ミネラル含有組成物。カルシウム塩はリン酸カルシウムを含む。アルミニウム塩は、任意の適切な形態（例えば、ゲル、結晶質、非結晶質など）をとる塩と共に、水酸化物、リン酸塩、硫酸塩などを含む。これらの塩への吸着は好ましい。ミネラル含有組成物は、金属塩の粒子として形成されてもよい。水酸化アルミニウムおよびリン酸アルミニウムとして公知のアジュバントも使用されてもよい。本発明は、一般的にアジュバントとして使用される「水酸化物」または「リン酸塩」のいくつかを使用することができる。「水酸化アルミニウム」として公知のアジュバントは、一般的にオキシ水酸化アルミニウム塩であり、オキシ水酸化アルミニウム塩は、通常少なくとも部分的に結晶質である。「リン酸アルミニウム」として公知のアジュバントは、一般的に水酸化リン酸アルミニウムであり、少量の硫酸塩（すなわち、水酸化リン酸硫酸アルミニウム（ａｌｕｍｉｎｉｕｍ ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｕｌｆａｔｅ））を含むことも多い。それらは沈殿によって得られてもよく、沈殿中の反応条件および濃度は、塩においてヒドロキシルへのリン酸塩の置換の程度に影響を与える。水酸化アルミニウムとリン酸アルミニウムとの混合物は、本発明に係る製剤化において用いられることができ；
−サポニン、サポニンは、広範囲の植物種における樹皮、葉、幹、根に、および花にさえ発見されるステロール配糖体およびトリテルペノイド配糖体の異種群である。キラヤ サ
ポナリア（Ｑｕｉｌｌａｉａ ｓａｐｏｎａｒｉａ）の樹皮、モリナ（Ｍｏｒｉｎａ）木からのサポニンは、アジュバントとして広く研究されている。サポニンを、スミラックス
オルナタ（Ｓｍｉｌａｘ ｏｒｎａｔｅ）（サルサパリラ（ｓａｒｓａｐｒｉｌｌａ））、ジプソフィラ パニキュラタ（Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ ｐａｎｉｃｕｌａｔａ）（ブライド ヴェイル（ ｂｒｉｄｅｓ ｖｅｉｌ））、およびサポナリア オフィシナリス（Ｓａｐｏｎａｒｉａ ｏｆｉｃｉａｎａｌｉｓ）（ソープ ルート（ｓｏａｐ ｒｏｏｔ））から商業的に得ることもできる。サポニンアジュバント製剤は、ＱＳ２１のような精製製剤、およびＩＳＣＯＭｓのような脂質製剤を含む。サポニン組成物は、ＨＰＬＣおよびＲＰ−ＨＰＬＣを用いて精製されている。これらの技術を用いて特定の精製画分は同定されており、ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃを含む。サポニン製剤は、コレステロールのようなステロールを含んでもよい。サポニンおよびコレステロールの組み合わせは、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭｓ）と呼ばれる特有の粒子を形成するために使用することができる。ＩＳＣＯＭｓは、例えばホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンのようなリン脂質を一般的に含む。いくつかの公知のサポニンをＩＳＣＯＭｓにおいて使用することができる。好ましくは、ＩＳＣＯＭは一つ以上のＱｕｉｌＡ、ＱＨＡ＆ＱＨＣ：
−生分解性および非毒性である材料から形成される微粒子（すなわち、直径１００ｎｍ〜１５０ｐｍ、より好ましくは、直径２００ｎｍ〜３０ｐｍ、または直径５００ｎｍ〜１０ｐｍの粒子）。このような非毒性および生分解性材料は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリカプロラクトンを含むが、これらに制限されない；
−ＣＤ１ｄリガンド、例えば、α−グリコシルセラミド、フィトスフィンゴシン含有α−グリコシルセラミド、ＯＣＨ、ＫＲＮ７０００［（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−Ｏ−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−（Ｎ−ヘキサコサノイルアミノ）−１，３，４−オクタデカントリオール］、ＣＲＯＮＹ−１０１、３’’−スルホ−ガラクトシル−セラミド；７ＤＷ８−５（フナコシ株式会社）など
−免疫刺激性オリゴヌクレオチド、例えば、ＣｐＧモチーフ含有オリゴヌクレオチド（リン酸結合によってグアノシン残基に連結される非メチル化シトシン残基を含むジヌクレオチド配列）、またはＣｐＩモチーフ含有オリゴヌクレオチド（イノシンに連結されるシトシンを含有するジヌクレオチド配列）、または二本鎖ＲＮＡ、または回文配列を含むオリゴヌクレオチド、またはポリ（ｄＧ）配列を含むオリゴヌクレオチド、など。免疫刺激性オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート修飾のようなヌクレオチド修飾体／類似体を含むことができ、二本鎖または（ＲＮＡを除いて）一本鎖であることができる；
−リン酸塩含有非環式骨格に連結される脂質含有化合物、例えば、ＴＬＲ４アンタゴニストＥ５５６４など；
−油乳剤（例えば、フロイント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ）アジュバントなど）、外膜ベシクル（ＯＭＶｓ）、
を含む。
理論的に、免疫学的事象のカスケードにおいて特定の状況を好む、または増幅させることができ、より顕著な免疫学的応答に最終的につながる各分子または物質を、アジュバントとして定義することができる。
原理的には、ワクチン製剤においてアジュバントの使用を介して、
−ワクチンに適切な、または所望の免疫応答を指示する、および最適化することができ；−ワクチンの粘膜伝達、すなわち、ワクチンの、例えば頬部、または胃もしくは肺の上皮のような粘膜面、および関連するリンパ組織との接触をもたらす投与を可能にし；
−細胞媒介免疫応答を促進することができ；
−例えば、高純度抗原または組み換え抗原のような、より弱い免疫原の免疫原性を高めることができ；
−保護免疫を提供するために必要とされる抗原量または免疫付与の頻度を減らすことができ；および
−例えば、新生児、老人、および免疫障害を持つワクチン受容者などのような減少した、または弱い免疫応答を有する個人におけるワクチンの効果を改善することができる。
アジュバントの作用様式については、ほとんど知られていないが、アジュバントは、次の機構：
−抗原の生物学的または免疫学的半減期を増加すること；
−抗原提示細胞（ＡＰＣｓ）への抗原伝達を改善すること、並びにＡＰＣｓによって、例えば、抗原−アジュバント複合体の摂取後にＡＰＣによって抗原が細胞質へとエンドソーム膜を通過することを可能にすることによって、抗原処理、および抗原提示を改善すること；
−ストレス細胞または損傷細胞からの危険誘導シグナルを模倣すること、そのことは免疫応答を開始するのに役立つ；
−免疫調節サイトカインの産生を誘導すること；
−免疫システムの特定の一部となるように免疫応答にバイアスをかけること；および−抗原チャレンジの急速な分散を遮断すること、
の一つによって免疫応答を増大させることが現在は信じられている。
多糖およびオリゴ糖は、両性イオンでない場合に、ＴＩ−２（Ｔ細胞非依存的−２）抗原および低い免疫抗原性として当業者に知られている。したがって、多糖に基づくワクチン、オリゴ糖に基づくワクチンを生産するために、前記多糖、、オリゴ糖は、免疫原性担体に結合され複合体を提供し、複合体は、多糖またはオリゴ糖と比較して増加した免疫原性を示す。この文脈において、用語「免疫原性担体」は、構造として定義され、免疫原性担体は、多糖自体、オリゴ糖自体と比較して増加した免疫を示す複合体を形成するために、多糖、オリゴ糖に結合される。したがって、オリゴ糖の免疫原性担体への、好ましくはタンパク質担体への結合は、前記免疫原性担体に対する免疫応答を誘導することなく、前記オリゴ糖に対する免疫応答を刺激する効果を有する。
したがって、本発明は、一般式（Ｉ）のオリゴ糖、または一般式（Ｉ）のオリゴ糖のジアステレオ異性体もしくは薬学的に許容できる塩に関し、
式中、
ｍは、０および１から選択される整数であり；
ｘは、１〜２×ｍ＋３から選択される整数であり；
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から選択される整数であり、
−Ｔ−は、結合，−（Ｕｘ＋４）ｍ−（Ｖｘ＋２）１−ｍ−，−（Ｕｘ＋４−Ｕｘ＋３）ｍ−（Ｖｘ＋２−Ｖｘ＋１）１−ｍ−，−（Ｕｘ＋４−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２）ｍ−，または−（Ｕｘ＋４−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１）ｍ−を表し；
Ｔ＊−は、Ｈ−，Ｈ−（Ｕｘ）ｍ−（Ｖｘ）１−ｍ−，Ｈ−（Ｕｘ＋１−Ｕｘ）ｍ−（Ｖｘ＋１−Ｖｘ）１−ｍ−，Ｈ−（Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ）ｍ−，またはＨ−（Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ）ｍ−を表し；
Ｌは、リンカーを表し；
Ｅは、−ＮＨ２，−Ｎ３，−ＣＮ，−Ｏ−ＮＨ２，−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｒ’，−ＣＯＲ’，−ＣＯＮＨ−ＮＨ２，−ＳＨ，または−ＳＡｃを表し；
Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，４−ニトロフェニル，ペンタフルオロフェニル，−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル，−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），または−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル）を表す。
リンカーＬは、好ましくは２〜４０個の炭素原子（任意の側鎖の炭素原子を含む）、より好ましくは、２〜３０個、より好ましくは２〜２０個、より好ましくは、２〜１４個、より好ましくは、２〜１２個、および更により好ましくは２〜１０個の炭素原子を含む。
酸素原子（すなわち、−Ｏ−Ｌ−Ｅの酸素）とＥ基との間の最も短い原子鎖は、好ましくは２〜１４個の原子、より好ましくは２〜１２個の原子、より好ましくは２〜１０個の原子、より好ましくは２〜８個の原子からなる。最も短い鎖（最も短い鎖はアノマー中心での酸素とＮＨ２基との間の最も短い可能な連結である）が２〜６個原子からなる場合、これらの原子は好ましくは炭素原子である。最も短い鎖が４〜８個の原子からなる場合、鎖は、Ｏ、Ｎ、およびＳから選択される１個または２個のヘテロ原子を含んでもよい。最も短い鎖が９〜１４個の原子からなる場合、鎖は、Ｏ、Ｎ、およびＳから選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子を含んでもよい。
リンカー−Ｌ−または最も短い鎖は、完全に、または部分的にフッ素化されていることも好ましい。リンカー−Ｌ−は、３員環、４員環、５員環もしくは６員環の飽和炭素環、または５員環の部分的に不飽和（および非芳香族）炭素環、または４員環、５員環もしくは６員環の飽和酸素ヘテロ環、または４員環、５員環もしくは６員環の飽和窒素ヘテロ環
、または６員環の芳香族炭素環を含んでもよい。
リンカー−Ｌ−は、アミド（−ＮＨ−ＣＯ−、−ＣＯ−ＮＨ−）および／または尿素（−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−）残基を含んでもよく、好ましくは一つのみのアミド残基または尿素残基を含んでもよい。リンカーは、置換基を含んでもよく、好ましくは例えば、Ｒ１０およびＲ１１などのような２つの置換基、または例えば、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１５、およびＲ１４などのような４つの置換基を含んでもよく、置換基は、本願に定義される通りの意味を有し、好ましくは：−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＨ３，−Ｃ２Ｈ５，−Ｃ３Ｈ７，−Ｃ５Ｈ９，−Ｃ６Ｈ１３，−ＯＣＨ３，−ＯＣ２Ｈ５，−ＣＨ２Ｆ，−ＣＨＦ２，−ＣＦ３，−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２，−ＳＣＨ３，−ＳＣ２Ｈ５，−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３，−Ｎ（ＣＨ３）２，および−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２
から選択される。
リンカーＬがフッ素化される場合、２つ以上の置換基−Ｆが好ましい。
好ましくは、リンカーＬ−は：−ＣＨ２−，−（ＣＨ２）２−，−（ＣＨ２）３−，−（ＣＨ２）４−，−（ＣＨ２）５−，−（ＣＨ２）６−，−（ＣＨ２）７−，−（ＣＨ２）８−，−（ＣＨ２）９−，−（ＣＨ２）１０−，−ＣＦ２−，−（ＣＦ２）２−，−（ＣＦ２）３−，−（ＣＦ２）４−，−（ＣＦ２）５−，−（ＣＦ２）６−，−（ＣＦ２）７−，−（ＣＦ２）８−，−（ＣＦ２）９−，−（ＣＦ２）１０−，−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）２−，−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）３−，−（ＣＨ２）３−Ｏ−ＣＨ２−，−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）２−，−（ＣＨ２）２−Ｏ−ＣＨ２−，−（ＣＨ２）３−Ｏ−（ＣＨ２）２−，−（ＣＨ２）２−Ｏ−（ＣＨ２）３−，−（ＣＨ２）４−Ｏ−ＣＨ２−，−ＣＨ２−Ｏ−（ＣＨ２）４−，−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｄ−Ｌｃ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−から選択され；
ここで、−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＦ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２−，−（ＣＲ１０Ｒ１１）Ｏ−，
から選択され；
−Ｌｂ−および−Ｌｃ−は、互いに独立して：−Ｏ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｓ）−ＮＨ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−，−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−，−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−，−ＮＲ９−，−ＮＲ１８−，−ＳＯ２−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，
から選択され；
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＲ１２Ｒ１３）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−，
を表し；
−Ｌｅ−は：−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−，−（ＣＲ１４Ｒ１５）ｐ１−，−（ＣＲ１４Ｒ１５）ｐ１−Ｏ−（ＣＲ２１Ｒ２２）ｐ２−，
から選択され；
Ｒ９およびＲ１８は、互いに独立して：−ＣＨ３，−Ｃ２Ｈ５，−Ｃ３Ｈ７および−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３から選択され；
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４、Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、およびＲ２２は、互いに独立して：−Ｈ，−Ｆ，−Ｃｌ，−ＣＨ３，−Ｃ２Ｈ５，−Ｃ３Ｈ７，−Ｃ５Ｈ９，−Ｃ６Ｈ１３，−ＯＣＨ３，−ＯＣ２Ｈ５，−ＣＨ２Ｆ，−ＣＨＦ２，−ＣＦ３，−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２，−ＳＣＨ３，−ＳＣ２Ｈ５，−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３，−Ｎ（ＣＨ３）２および−Ｎ（Ｃ２Ｈ５）２から選択され；
ｏ，ｑ，ｐ１およびｐ２は、互いに独立して１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から選択される整数である。
より好ましくは、−Ｌ−は、−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；好ましくは１、２、３、および４から選択される整数である。
より好ましくは、一般式（Ｉ）のオリゴ糖は：
からなる群から選択される−Ｏ−Ｌ−Ｅ基を有し、
式中、Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，４−ニトロフェニル，ペンタフルオロフェニル，−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル，−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル）、または−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル）を表し；
Ｘは、−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｈ，または−ＳＡｃを表す。
したがって、好ましくは一般式（Ｉ）のオリゴ糖、または一般式（Ｉ）のオリゴ糖のジアステレオ異性体もしくは薬学的に許容できる塩であり
式中、
ｍは、０および１から選択される整数であり；
ｘは、１〜２×ｍ＋３から選択される整数であり；
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から選択される整数であり；好ましくは、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、および８から選択される整数であり；より好ましくは、ｎは、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；更により好ましくは、ｎは、１、２、３、および４から選択される整数であり；更により好ましくは、ｎは、１、２、および３から選択される整数であり；更により好ましくは、ｎは、１および２から選択される整数であり；
−Ｔ−は、結合，−（Ｕｘ＋４）ｍ−（Ｖｘ＋２）１−ｍ−，−（Ｕｘ＋４−Ｕｘ＋３）ｍ−（Ｖｘ＋２−Ｖｘ＋１）１−ｍ−，−（Ｕｘ＋４−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２）ｍ−，または−（Ｕｘ＋４−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１）ｍ−を表し；
Ｔ＊−は、Ｈ−，Ｈ−（Ｕｘ）ｍ−（Ｖｘ）１−ｍ−，Ｈ−（Ｕｘ＋１−Ｕｘ）ｍ−（Ｖｘ＋１−Ｖｘ）１−ｍ−，Ｈ−（Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ）ｍ−，またはＨ−（Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ）ｍ−を表し；
Ｌは、−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；好ましくは１、２、３、および４から選択される整数である。
Ｅは、−ＮＨ２，−Ｎ３，−ＣＮ，−Ｏ−ＮＨ２，−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｒ’，−ＣＯＲ’，−ＣＯＮＨ−ＮＨ２，−ＳＨ，または−ＳＡｃを表し；
Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，４−ニトロフェニル，ペンタフルオロフェニル，−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル，−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），または−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル）を表す。
本発明におけるオリゴ糖のアノマーは、−Ｏ−Ｌ−Ｅ基が結合されるＣ−１位置でのα／β−アノマーを意味する。グリコシド結合の立体化学は、一般式（Ｉ）における糖断片
Ｕ１、Ｕ２、Ｕ３、Ｕ４、Ｕ５、Ｕ６、Ｕ７、Ｕ８、Ｕ９、Ｖ１、Ｖ２、Ｖ３、Ｖ４、およびＶ５のアノマー中心に示される立体化学によって定義されるということは、炭水化物化学の当業者にとって明らかである。
本発明のオリゴ糖は、吸湿性であることができるので、様々なオリゴ糖の水和物を構築することができる。好ましくは、水分子対オリゴ糖のモル比は、１対２０、より好ましくは１対１０、最も好ましくは１対５〜１０の範囲である。
本発明におけるオリゴ糖は、塩基性および／または酸性置換基を有してもよく、有機酸もしくは有機塩基、または無機酸もしくは無機塩基と共に塩を形成してもよい。
このような酸付加塩形成のための適切な酸の例は、塩化水素酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、マロン酸、サリチル酸、ｐ−アミノサリチル酸、リンゴ酸、フマル酸、コハク酸、アスコルビン酸、マレイン酸、スルホン酸、ホスホン酸、過塩素酸、硝酸、ギ酸、プロピオン酸、グルコン酸、乳酸、酒石酸、ヒドロキシマレイン酸、ピルビン酸、フェニル酢酸、安息香酸、ｐ−アミノ安息香酸、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、亜硝酸、ヒドロキシエタンスルホン酸、エチレンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフチルスルホン酸、スルファニル酸、カンファースルホン酸、キナ酸、マンデル酸、ｏ−メチルマンデル酸、水素−ベンゼンスルホン酸、ピクリン酸、アジピン酸、ｄ−ｏ−トリ酒石酸、タルトロン酸、（ｏ，ｍ，ｐ−）トルエン酸、ナフチルアミンスルホン酸、および当業者によく知られた他の鉱酸、またはカルボン酸である。慣習的な手法で塩を生産するために、塩は、遊離塩基形を、十分な量の所望の酸と結合することによって調製される。
適切な無機塩基または有機塩基の例は、例えば、ＮａＯＨ、ＫＯＨ、ＮＨ４ＯＨ、水酸化テトラアルキルアンモニウム、リジンまたはアルギ二ンなどである。塩は、当該技術分野においてよく知られた方法を用いて慣習的な方法で、例えば、一般式（Ｉ）の化合物の溶液を、上述の基から選択される塩基の溶液と処理することによって、調製されてもよい。
一般式（Ｉ）のオリゴ糖は、−Ｏ−Ｏ−結合、および、または糖のアノマー炭素またはＣ−１炭素を介して互いに連結される、または結合される糖断片（Ｕｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３、Ｕｘ＋４、Ｖｘ、Ｖｘ＋１、Ｖｘ＋２）を含まないということは、炭水化物化学の当業者にとって明らかである。
驚くべきことに、一般式（Ｉ）のオリゴ糖は、免疫原性保護エピトープを含み、およびヒトおよび／または動物宿主においてＫ．ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５細菌に対して保護免疫応答を誘導することができることを明らかにした。一般式（Ｉ）のオリゴ糖は、抗体を引き起こし、抗体は、リポ多糖である天然Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５のＯ−抗原と交差反応し、Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５細菌を特異的に認識し、食細胞によってＫ．ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５細菌を殺すためにオプソニン化するので、Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５細菌に対する保護を与える。
本発明のオリゴ糖は、生産の純度および容易さに関して、細菌源から生産されるポリ−、オリゴ糖および細菌源から生産されるポリ−、オリゴ糖の複合体と関連する全ての問題を克服する。病原性細菌のリポ多糖のＯ−抗原からの定義された長さおよび構造の純粋なオリゴ糖の単離および精製は、面倒であり、時々実現可能でない工程であるということはよく知られている。第一に、リポ多糖のＯ−抗原の生産は、生育条件の最適化を必要とす
る。第二に、構成する単糖の構造的完全性が維持される脱重合条件が明らかにされる必要がある。最後に、定義された長さ、および構造の純粋なポリ−、オリゴ糖の単離を可能にする精製条件が決定される必要がある。通常の不純物、例えば細胞多糖、核酸、脂質およびタンパク質などに加えて、脱重合工程によって得られた所望されないオリゴ糖も、除去されなければならない。したがって、細菌源からの定義された構造および長さの純粋なオリゴ糖の生産は、面倒で、ほとんど不可能な工程である。
好ましくは一般式（ＩＩ）の合成オリゴ糖であり、
式中、ｍ、ｎ、ｘ、Ｌ、Ｅ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３、Ｕｘ＋４、Ｖｘ、Ｖｘ＋１、Ｖｘ＋２、およびＴ＊は、本願に定義される意味を有する
好ましくは、一般式（Ｉａ）および（ＩＩａ）、または一般式（Ｉａ）および（ＩＩａ）のジアステレオ異性体もしくは薬学的に許容できる塩であり、
式中、
ｘは、１、２または３から選択される整数であり；
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から選択される整数であり；好ましくは、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、および８から選択される整数であり；より好ましくは、ｎは、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；更により好ましくは、ｎは、１、２、３、および４から選択される整数であり；更により好ましくは、ｎは、１、２、および３から選択される整数であり；更により好ましくは、ｎは、１および２から選択される整数であり；
−Ｔ−は、結合，−（Ｕｘ＋４）ｍ−（Ｖｘ＋２）１−ｍ−，−（Ｕｘ＋４−Ｕｘ＋３）ｍ−（Ｖｘ＋２−Ｖｘ＋１）１−ｍ−，−（Ｕｘ＋４−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２）ｍ−，または−（Ｕｘ＋４−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１）ｍ−を表し；
Ｔ＊−は、Ｈ−，Ｈ−（Ｕｘ）ｍ−（Ｖｘ）１−ｍ−，Ｈ−（Ｕｘ＋１−Ｕｘ）ｍ−（Ｖｘ＋１−Ｖｘ）１−ｍ−，Ｈ−（Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ）ｍ−，またはＨ−（Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ）ｍ−を表し；
Ｌは、−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；好ましくは１、２、３、および４から選択される整数である。
Ｅは、−ＮＨ２，−Ｎ３，−ＣＮ，−Ｏ−ＮＨ２，−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｒ’，−ＣＯＲ’，−ＣＯＮＨ−ＮＨ２，−ＳＨ，または−ＳＡｃを表し；
Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，４−ニトロフェニル，ペンタフルオロフェニル，−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル，−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），または−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル）を表す。
さらに好ましくは、一般式（Ｉｂ）および（ＩＩｂ）、または一般式（Ｉｂ）および（ＩＩｂ）のジアステレオ異性体もしくは薬学的に許容できる塩であり、
式中、
ｘは、１、２、３、４または５から選択される整数であり；
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から選択される整数であり；好ましくは、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、および８から選択される整数であり；より好ましくは、ｎは、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；更により好ましくは、ｎは、１、２、３、および４から選択される整数であり；更により好ましくは、ｎは、１、２、および３から選択される整数であり；更により好ましくは、ｎは、１および２から選択される整数であり；
−Ｔ−は、結合，−（Ｕｘ＋４）ｍ−（Ｖｘ＋２）１−ｍ−，−（Ｕｘ＋４−Ｕｘ＋３）ｍ−（Ｖｘ＋２−Ｖｘ＋１）１−ｍ−，−（Ｕｘ＋４−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２）ｍ−，または−（Ｕｘ＋４−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１）ｍ−を表し；
Ｔ＊−は、Ｈ−，Ｈ−（Ｕｘ）ｍ−（Ｖｘ）１−ｍ−，Ｈ−（Ｕｘ＋１−Ｕｘ）ｍ−（Ｖｘ＋１−Ｖｘ）１−ｍ−，Ｈ−（Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ）ｍ−，またはＨ−（Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ）ｍ−を表し；
Ｌは、−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（Ｃ
Ｈ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；好ましくは１、２、３、および４から選択される整数である。
Ｅは、−ＮＨ２，−Ｎ３，−ＣＮ，−Ｏ−ＮＨ２，−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｒ’，−ＣＯＲ’，−ＣＯＮＨ−ＮＨ２，−ＳＨ，または−ＳＡｃを表し；
Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，４−ニトロフェニル，ペンタフルオロフェニル，−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル，−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），または−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル）を表す。
さらに好ましくは、一般式（Ｉｃ）、または一般式（Ｉｃ）のジアステレオ異性体もしくは薬学的に許容できる塩であり、
式中、
ｍは、０および１から選択される整数であり；
ｘは、１〜２×ｍ＋３から選択される整数であり；
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から選択される整数であり；好ましくは、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、および８から選択される整数であり；より好ましくは、ｎは、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；更により好ましくは、ｎは、１、２、３、および４から選択される整数であり；更により好ましくは、ｎは、１、２、および３から選択される整数であり；更により好ましくは、ｎは、１および２から選択される整数であり；
Ｌは、−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；好ましくは１、２、３、および４から選択される整数である。
Ｅは、−ＮＨ２，−Ｎ３，−ＣＮ，−Ｏ−ＮＨ２，−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｒ’，−ＣＯＲ’，−ＣＯＮＨ−ＮＨ２，−ＳＨ，または−ＳＡｃを表し；
Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，４−ニトロフェニル，ペンタフルオロフェニル，−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル，−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），または−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル）を表す。
したがって、一般式（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩ−ｃ）、（ＩＩ−ｄ）、（ＩＩ−ｅ）、（ＩＩ−ｆ）、（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩ−ｈ）、（ＩＩ−ｉ）、（ＩＩ−ｊ）、または（ＩＩ−ｋ）のオリゴ糖（式中、ｎ、Ｌ、ＥおよびＴ＊は、本願に定義される意味を有する）は、特に好ましい。
さらに好ましくは、一般式（ＩＩＩ）の合成オリゴ糖であり
式中、ｍ、ｎ、ｘ、Ｌ、Ｅ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３、Ｕｘ＋４、Ｖｘ、Ｖｘ＋１、Ｖｘ＋２およびＴ＊は、本願に定義される通りの意味を有する。
したがって、一般式（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）、（ＩＩＩ−ｅ）、（ＩＩＩ−ｆ）、（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ−ｈ）、（ＩＩＩ−ｉ）、（ＩＩＩ−ｊ）、および（ＩＩＩ−ｋ）のオリゴ糖（式中、ｎ、Ｌ、ＥおよびＴ＊は、本願に定義される意味を有する）は、特に好ましい。
式中、ｎ、ＬおよびＥは、本願に定義される通りの意味を有する。
好ましくは、整数ｘは１を表し、したがって、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＩＩ）の化合物（式中、ｘは１を表す）が特に好ましい。更により好ましくは、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＩＩ）の化合物であり、式中ｘは１を表し、Ｔ＊はＨ−を表す。一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＩＩ）の化合物（式中、Ｔ＊はＨ−を表す）も好ましい。
好ましくは、ｎは２〜１０、好ましくは１〜８、より好ましくは１〜６、更により好ましくは１〜４、更により好ましくは１〜３、更により好ましくは１〜２から選択される整数を表す。したがって、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩ−ｃ）、（ＩＩ−ｄ）、（ＩＩ−ｅ）、（ＩＩ−ｆ）、（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩ−ｈ）、（ＩＩ−ｉ）、（ＩＩ−ｊ）、（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）、（ＩＩＩ−ｅ）、（ＩＩＩ−ｆ）、（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ−ｈ）、（ＩＩＩ−ｉ）、（ＩＩＩ−ｊ）、または（ＩＩ−ｋ）（式中、ｎは２〜１０から選択される整数を表す）が特に好ましい。他の代替的な実施例において、整数は好ましくは１である。したがって、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩ−ｃ）、（ＩＩ−ｄ）、（ＩＩ−ｅ）、（ＩＩ−ｆ）、（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩ−ｈ）、（ＩＩ−ｉ）、（ＩＩ−ｊ）、（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）、（ＩＩＩ−ｅ）、（ＩＩＩ−ｆ）、（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ−ｈ）、（ＩＩＩ−ｉ）、（ＩＩＩ−ｊ）、または（ＩＩＩ−ｋ）（式中、ｎは１を表す）も好ましい。
好ましくはリンカー−Ｌ−は、−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；好ましくは１、２、３、および４から選択される整数である。
したがって、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩ−ｃ）、（ＩＩ−ｄ）、（ＩＩ−ｅ）、（ＩＩ−ｆ）、（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩ−ｈ）、（ＩＩ−ｉ）、（ＩＩ−ｊ）、（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）、（ＩＩＩ−ｅ）、（ＩＩＩ−ｆ）、（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ−ｈ）、（ＩＩＩ−ｉ）、（ＩＩＩ−ｊ）、または（ＩＩＩ−ｋ）のいずれか一つのオリゴ糖が特に好ましく、式中、
−Ｌ−は、−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり、および好ましくは１、２、３、および４から選択される整数である。
一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩ−ｃ）、（ＩＩ−ｄ）、（ＩＩ−ｅ）、（ＩＩ−ｆ）、（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩ−ｈ）、（ＩＩ−ｉ）、（ＩＩ−ｊ）、（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）、（ＩＩＩ−ｅ）、（ＩＩＩ−ｆ）、（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ−ｈ）、（ＩＩＩ−ｉ）、（ＩＩＩ−ｊ）、または（ＩＩＩ−ｋ）のいずれか一つのオリゴ糖も好ましく、式中、
−Ｌ−は：−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，および−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−から選択され；
−Ｌａ−は：−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２から選択され；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
−Ｌｄ−は：−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ
２Ｈ４−，および−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−から選択され；
−Ｌｅ−は：−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，および−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され；
ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；好ましくは１、２、３、および４から選択される整数であり；およびｎは１を表す。
更により好ましくは、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩ−ｃ）、（ＩＩ−ｄ）、（ＩＩ−ｅ）、（ＩＩ−ｆ）、（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩ−ｈ）、（ＩＩ−ｉ）、（ＩＩ−ｊ）、（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）、（ＩＩＩ−ｅ）、（ＩＩＩ−ｆ）、（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ−ｈ）、（ＩＩＩ−ｉ）、（ＩＩＩ−ｊ）、または（ＩＩＩ−ｋ）のオリゴ糖であり、式中、−Ｌ−は−（ＣＨ２）ｏーを表し、およびｏは２、３、４、５、および６から選択される整数である。
更に好ましくは、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩ−ｃ）、（ＩＩ−ｄ）、（ＩＩ−ｅ）、（ＩＩ−ｆ）、（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩ−ｈ）、（ＩＩ−ｉ）、（ＩＩ−ｊ）、（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）、（ＩＩＩ−ｅ）、（ＩＩＩ−ｆ）、（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ−ｈ）、（ＩＩＩ−ｉ）、（ＩＩＩ−ｊ）、または（ＩＩＩ−ｋ）のオリゴ糖であり、式中、−Ｌ−は−（ＣＨ２）ｏーを表し、ｏは２、３、４、５、および６から選択される整数であり、およびｎは１を表す。
より好ましい実施形態において、−Ｏ−Ｌ−Ｅは：
からなる群から選択され、
式中、Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，４−ニトロフェニル，ペンタフルオロフェニル
，−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル，−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），または−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル）を表し；
Ｘは、−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｈ，または−ＳＡｃを表す。
特に好ましくは、−Ｏ−Ｌ−Ｅは：
からなる群から選択される。
特に好ましくは、一般式（ＩＩ−ａ）のオリゴ糖であり、式中、Ｔ＊は−Ｈを表し、および−Ｏ−Ｌ−Ｅは：
からなる群から選択される。
特に好ましくは、一般式（ＩＩ−ｆ）のオリゴ糖であり、式中、Ｔ＊は−Ｈを表し、および−Ｏ−Ｌ−Ｅは：
からなる群から選択される。
さらに好ましくは、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩ−ｃ）、（ＩＩ−ｄ）、（ＩＩ−ｅ）、（ＩＩ−ｆ）、（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩ−ｈ）、（ＩＩ−ｉ）、（ＩＩ−ｊ）、（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）、（ＩＩＩ−ｅ）、（ＩＩＩ−ｆ）、（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ−ｈ）、（ＩＩＩ−ｉ）、（ＩＩＩ−ｊ）、または（ＩＩＩ−ｋ）のオリゴ糖であり、式中、−Ｌ−は−（ＣＨ２）ｏーを表し、ｏは２、３、４、５、および６から選択される整数であり、Ｅはアミノ基を表す。
更に他の好ましい実施形態において、本発明に係るオリゴ糖は：
からなる群から選択される。
［化学合成］
本発明の他の態様は、一般式（Ｉ）のオリゴ糖の合成方法に関し
式中、
ｍは、１であり；
ｘは、１〜２×ｍ＋３から選択される整数であり；
ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から選択される整数であり、
−Ｔ−は、結合を表し；
Ｔ＊−は、Ｈを表し；
Ｌは、リンカーを表し；
Ｅは、−ＮＨ２，−Ｎ３，−ＣＮ，−Ｏ−ＮＨ２，−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｒ’，−ＣＯＲ’，−ＣＯＮＨ−ＮＨ２，−ＳＨ，または−ＳＡｃを表し；
Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，４−ニトロフェニル，ペンタフルオロフェニル，−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル，−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），または−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル）を表し；
次のステップ：
Ａ１）単糖１を提供すること
式中、Ｐ１、Ｐ２およびＰ４は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥとなるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ａ２）活性化剤の存在において、単糖１を構成要素２と処理すること
式中、Ｐ１〜Ｐ４は、保護基を表し、およびＬＧ１は、脱離基を表す；
Ａ３）保護基Ｐ３の除去を行うこと；
Ａ４）活性化剤の存在下でステップＡ３）の生成物を構成要素３と処理すること
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５、およびＰ６は、保護基を表し、およびＬＧ２は、脱離基を表す；
Ａ５）保護基Ｐ６の除去を行うこと；
Ａ６）中間体化合物４ａを得るためにステップＡ４）およびＡ５）を２回繰り返すこと；
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥとなるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ａ７）式５ａの中間体化合物を得るために、Ａ２）→Ａ３）→Ａ２）→Ａ３）→Ａ４）→Ａ５）→Ａ６）の順序でステップＡ２）〜Ａ６）をｎ−１回任意に繰り返すこと、
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥとなるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでｎ、ＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ａ８）一般式（Ｉ）のオリゴ糖を得るために全ての保護基の除去を行うこと、
を含む。
一般式（Ｉ）のオリゴ糖の更なる合成方法は、次のステップ：
Ｂ１）単糖１を提供すること
式中、Ｐ１、Ｐ２およびＰ４は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥとなるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｂ２）活性化剤の存在において、単糖１を構成要素３と処理すること
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５、およびＰ６は、保護基を表し、およびＬＧ２は、脱離基を表す；
Ｂ３）保護基Ｐ６の除去を行うこと；
Ｂ４）ステップＢ２）およびＢ３）を２回繰り返すこと；
Ｂ５）活性化剤の存在下でステップＢ４）の生成物を構成要素２と処理すること
式中、Ｐ１〜Ｐ４は、保護基を表し、およびＬＧ１は、脱離基を表す；
Ｂ６）中間体化合物４ｂを得るために保護基Ｐ３の除去を行うこと；
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥとなるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｂ７）式５ｂの中間体化合物を得るために、Ｂ５）→Ｂ６）→Ｂ２）→Ｂ３）→Ｂ４）→Ｂ５）→Ｂ６）の順序でステップＢ２）〜Ｂ６）をｎ−１回任意に繰り返すこと、
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥとなるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでｎ、ＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有し；
Ｂ８）一般式（Ｉ）のオリゴ糖を得るために全ての保護基の除去を行うこと、
を含む。
一般式（Ｉ）のオリゴ糖の更なる合成方法は、次のステップ：
Ｃ１）単糖６を提供すること
式中、Ｐ１、Ｐ２およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥとなるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｃ２）活性化剤の存在において、単糖６を構成要素３と処理すること
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５、およびＰ６は、保護基を表し、およびＬＧ２は、脱離基を表す；
Ｃ３）保護基Ｐ６の除去を行うこと；
Ｃ４）活性化剤の存在下でステップＣ３）の生成物を構成要素２と処理すること
式中、Ｐ１〜Ｐ４は、保護基を表し、およびＬＧ１は、脱離基を表す；
Ｃ５）保護基Ｐ３の除去を行うこと；
Ｃ６）ステップＣ４）およびＣ５）を繰り返すこと；
Ｃ７）中間体化合物４ｄを得るためにステップＣ２）およびＣ３）を繰り返すこと；
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｃ８）式５ｄの中間体化合物を得るために、Ｃ２）→Ｃ３）→Ｃ２）→Ｃ３）→Ｃ４）→Ｃ５）→Ｃ６）→Ｃ７）の順序でステップＣ２）〜Ｃ７）をｎ−１回任意に繰り返すこと、
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでｎ、ＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｃ９）一般式（Ｉ）のオリゴ糖を得るために全ての保護基の除去を行うこと、
を含む。
一般式（Ｉ）のオリゴ糖の更なる合成方法は、次のステップ：
Ｄ１）単糖６を提供すること
式中、Ｐ１、Ｐ２およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｄ２）活性化剤の存在において、単糖６を構成要素３と処理すること
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５、およびＰ６は、保護基を表し、およびＬＧ２は、脱離基を表す；
Ｄ３）保護基Ｐ６の除去を行うこと；
Ｄ４）ステップＤ２）およびＤ３）を繰り返すこと；
Ｄ５）活性化剤の存在下でステップＤ４）の生成物を構成要素２と処理すること
式中、Ｐ１〜Ｐ４は、保護基を表し、およびＬＧ１は、脱離基を表す；
Ｄ６）保護基Ｐ３の除去を行うこと；
Ｄ７）中間体化合物４ｃを得るためにステップＤ５）およびＤ６）を繰り返すこと；
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐ、を表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｄ８）式５ｃの中間体化合物を得るために、Ｄ２）→Ｄ３）→Ｄ４）→Ｄ４）→Ｄ５）→Ｄ６）→Ｄ７）の順序でステップＤ２）〜Ｄ７）をｎ−１回任意に繰り返すこと、
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでｎ、ＥおよびＬは、本明細書に定義される通りの意味を有する；
Ｄ９）一般式（Ｉ）のオリゴ糖を得るために全ての保護基の除去を行うこと、
を含む。
一般式（Ｉ）のオリゴ糖の他の合成方法は、次のステップ：
Ｅ１）単糖６を提供すること
式中、Ｐ１、Ｐ２およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｅ２）活性化剤の存在において、単糖６を構成要素２と処理すること
式中、Ｐ１〜Ｐ４は、保護基を表し、およびＬＧ１は、脱離基を表す；
Ｅ３）保護基Ｐ３の除去を行うこと；
Ｅ４）ステップＥ２）およびＥ３）を繰り返すこと；
Ｅ５）活性化剤の存在下でステップＥ４）の生成物を構成要素３と処理すること
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５、およびＰ６は、保護基を表し、およびＬＧ２は、脱離基を表す；
Ｅ６）保護基Ｐ６の除去を行うこと；
Ｅ７）中間体化合物４ｅを得るためにステップＥ５）およびＥ６）を繰り返すこと；
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本明細書に定義される通りの意味を有する；
Ｅ８）式５ｅの中間体化合物を得るために、Ｅ５）→Ｅ６）→Ｅ２）→Ｅ３）→Ｅ４）→Ｅ５）→Ｅ６）の順序でステップＥ２）〜Ｅ６）をｎ−１回任意に繰り返すこと、
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでｎ、ＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｅ８）一般式（Ｉ）のオリゴ糖を得るために全ての保護基の除去を行うこと、
を含む。
一般式（Ｉ）のオリゴ糖の他の合成方法は、次のステップ：
Ｆ１）単糖７を提供すること
式中、Ｐ７、Ｐ８およびＰ９は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｆ２）活性化剤の存在において、単糖７を構成要素８と処理すること
式中、Ｐ７〜Ｐ１０は、保護基を表し、およびＬＧ３は、脱離基を表す；
Ｆ３）保護基Ｐ１０の除去を行うこと；
Ｆ４）活性化剤の存在下でステップＦ３）の生成物を構成要素９と処理すること
式中、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ１１、およびＰ１２は、保護基を表し、およびＬＧ４は、脱離基を表す；
Ｆ５）中間体化合物４ｆを得るために保護基Ｐ１１の除去を行うこと；
式中、Ｐ７〜Ｐ９およびＰ１２は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐ、表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｆ６）式５ｆの中間体化合物を得るために、Ｆ２）→Ｆ３）→Ｆ２）→Ｆ４）→Ｆ５）の
順序でステップＦ２）〜Ｆ５）をｎ−１回任意に繰り返すこと、
式中、Ｐ７〜Ｐ９およびＰ１２は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでｎ、ＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｆ７）一般式（Ｉ）のオリゴ糖を得るために全ての保護基の除去を行うこと、
を含む。
一般式（Ｉ）のオリゴ糖の他の合成方法は、次のステップ：
Ｇ１）単糖７を提供すること
式中、Ｐ７、Ｐ８およびＰ９は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｇ２）活性化剤の存在において、単糖７を構成要素９と処理すること
式中、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ１１、およびＰ１２は、保護基を表し、およびＬＧ４は、脱離基を表す；
Ｇ３）保護基Ｐ１１の除去を行うこと；
Ｇ４）活性化剤の存在下でステップＧ３）の生成物を構成要素８と処理すること
式中、Ｐ７〜Ｐ１０は、保護基を表し、およびＬＧ３は、脱離基を表す；
Ｇ５）中間体化合物４ｇを得るために保護基Ｐ１０の除去を行うこと；
式中、Ｐ７〜Ｐ９およびＰ１２は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｇ６）式５ｇの中間体化合物を得るために、Ｇ４）→Ｇ５）→Ｇ２）→Ｇ３）→Ｇ４）→Ｇ５）の順序でステップＧ２）〜Ｇ５）をｎ−１回任意に繰り返すこと、
式中、Ｐ７〜Ｐ９およびＰ１２は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでｎ、ＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｇ７）一般式（Ｉ）のオリゴ糖を得るために全ての保護基の除去を行うこと、
を含む。
一般式（Ｉ）のオリゴ糖の他の合成方法は、次のステップ：
Ｈ１）単糖１０を提供すること
式中、Ｐ７、Ｐ８およびＰ１２は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｈ２）活性化剤の存在において、単糖１０を構成要素８と処理すること
式中、Ｐ７〜Ｐ１０は、保護基を表し、およびＬＧ３は、脱離基を表す；
Ｈ３）保護基Ｐ１０の除去を行うこと；
Ｈ４）中間体化合物４ｈを得るためにステップＨ２）およびＨ３）繰り返すこと；
式中、Ｐ７〜Ｐ９およびＰ１２は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｈ５）活性化剤の存在下で化合物４ｈを構成要素９と任意に処理すること
式中、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ１１、およびＰ１２は、保護基を表し、およびＬＧ４は、脱離基を表し、保護基Ｐ１１の除去を行うこと、および式５ｈの中間体化合物を得るためにステップＨ２）〜Ｈ４）をｎ−１回行うこと
式中、Ｐ７〜Ｐ９およびＰ１２は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでｎ、ＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｈ６）一般式（Ｉ）のオリゴ糖を得るために全ての保護基の除去を行うこと、
を含む。
一般式（Ｉ）のオリゴ糖の更なる合成方法は、次のステップ：
Ｉ１）単糖１を提供すること
式中、Ｐ１、Ｐ２およびＰ４は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｉ２）活性化剤の存在において、単糖１を構成要素２と処理すること
式中、Ｐ１〜Ｐ４は、保護基を表し、およびＬＧ１は、脱離基を表す；
Ｉ３）保護基Ｐ３の除去を行うこと；
Ｉ４）活性化剤の存在下でステップＩ３）の生成物を構成要素３と処理すること
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５、およびＰ６は、保護基を表し、およびＬＧ２は、脱離基を表し；
Ｉ５）中間体化合物４ｉを得るために保護基Ｐ６の除去を行うこと；
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐ、を表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｉ６）式５ｉの中間体化合物を得るために、Ｉ２）→Ｉ３）→Ｉ２）→Ｉ３）→Ｉ４）→Ｉ５）の順序でステップＩ２）〜Ｉ５）をｎ−１回任意に繰り返すこと、
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでｎ、ＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｉ７）一般式（Ｉ）のオリゴ糖を得るために全ての保護基の除去を行うこと、
を含む。
一般式（Ｉ）のオリゴ糖の更なる合成方法は、次のステップ：
Ｊ１）単糖１を提供すること
式中、Ｐ１、Ｐ２およびＰ４は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通
りの意味を有する；
Ｊ２）活性化剤の存在において、単糖１を構成要素３と処理すること
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５、およびＰ６は、保護基を表し、およびＬＧ２は、脱離基を表す；
Ｊ３）保護基Ｐ６の除去を行うこと；
Ｊ４）活性化剤の存在下でステップＪ３）の生成物を構成要素２と処理すること
式中、Ｐ１〜Ｐ４は、保護基を表し、およびＬＧ１は、脱離基を表す；
Ｊ５）中間体化合物４Ｊを得るために保護基Ｐ３の除去を行うこと；
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐ、を表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｊ６）式５ｊの中間体化合物を得るために、Ｊ４）→Ｊ５）→Ｊ２）→Ｊ３）→Ｊ４）→Ｊ５）の順序でステップＪ２）〜Ｊ５）をｎ−１回任意に繰り返すこと、
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでｎ、ＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｊ７）一般式（Ｉ）のオリゴ糖を得るために全ての保護基の除去を行うこと、
を含む。
一般式（Ｉ）のオリゴ糖の更なる合成方法は、次のステップ：
Ｋ１）単糖６を提供すること
式中、Ｐ１、Ｐ２およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｋ２）活性化剤の存在において、単糖６を構成要素２と処理すること
式中、Ｐ１〜Ｐ４は、保護基を表し、およびＬＧ１は、脱離基を表す；
Ｋ３）保護基Ｐ３の除去を行うこと；
Ｋ４）中間体化合物４ｋを得るためにステップＫ２）およびＫ３）を繰り返すこと；
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｋ５）活性化剤の存在下で化合物４ｋを構成要素３と任意に処理すること
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５、およびＰ６は、保護基を表し、およびＬＧ２は、脱離基を表し、保護基Ｐ６の除去を行うこと、および式５ｋの中間体化合物を得るためにステップＫ２）〜Ｋ４）をｎ−１回繰り返すこと；
式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでｎ、ＥおよびＬは、本願に定義される通りの意味を有する；
Ｋ７）一般式（Ｉ）のオリゴ糖を得るために全ての保護基の除去を行うこと、
を含む。
Ｅｐは固体支持体または保護末端基を表す。Ｅは、−ＮＨ２，−Ｎ３，−ＣＮ，−Ｏ−ＮＨ２，−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｒ’，−ＣＯＲ’，−ＣＯＮＨ−ＮＨ２，−ＳＨ，または−ＳＡｃを表し；および対応する保護末端基Ｅｐは、−Ｎ（Ｐ１３）（Ｐ１４），−Ｎ３，−ＣＮ，−Ｏ−Ｎ（Ｐ１３）（Ｐ１４），−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｒ’，−ＣＯＮＨＮ（Ｐ１
３）（Ｐ１４），−ＳＰｓ，または−ＳＡｃを表す。
Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１３、およびＰ１４は保護基を表す。本願に使用される用語「保護基」は、有機合成において一般的に使用される基に関し、好ましくは、ヒドロキシル基およびチオールを保護するために使用される。
より好ましくは、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、およびＰ１２は、ヒドロキシル基のための適切な保護基、より好ましくは、脱保護反応の適切な順序によって次々に続けて除去されることが可能であるヒドロキシル基のための種々の適切な保護基である。ヒドロキシル基のための好ましい保護基は、アセチル、フェニル、ベンジル、イソプロピリデン、ベンジリデン、ベンゾイル、ｐ−メトキシベンジル、ｐ−メトキシベンジリデン、ｐ−メトキシフェニル、ｐ−ブロモベンジリデン、ｐ−ニトロフェニル、アリル、アセチル、イソプロピル、ｐ−ブロモベンジル、ジメトキシトリチル、トリチル、２−ナフチルメチル、ピバロイル、（２−ニトロフェニル）アセチル、トリイソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルメトキシフェニルシリル、トリエチルシリル、トリメチルシリル、２−トリメチルシリルエトキシメチル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、ベンジルオキシメチル、メチルオキシメチル、ｔｅｒｔ−ブチルオキシメチル、メトキシエチルオキシメチル、レブリノイルである。
保護基は、永続的な保護基、および一時的な保護基に区別されることができる。永続的な保護基は、全合成中安定であり、合成の後期で効率的に除去されることができる保護基である。この場合において、永続的な保護基は、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１２、Ｐ１３、およびＰ１４を含む。Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、およびＰ１２は、全合成の間、ヒドロキシル基を隠しており、一方、保護基Ｐ１３およびＰ１４は、末端基Ｅｐに存在する末端アミノ基を隠している。好ましくは、保護基Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５、Ｐ７、Ｐ８、およびＰ９は、ベンジル基であり、保護基Ｐ４は、ベンゾイル基であり、保護基Ｐ１２は、ベンジル基であり、保護基Ｐ１３は、ベンジル基であり、および保護基Ｐ１４は、ベンジルオキシカルボニル基（Ｃｂｚ）である。
一時的な保護基は、一般的に、異なる置換基の後続の導入のために、合成の様々なレベルでヒドロキシル基を遊離するために選択的に除去されることができる直交保護基であり、モノオリゴ糖、他の保護基、または分子上に存在する他の残基を含む。この場合において、一時的な保護基は、Ｐ３、Ｐ６、Ｐ１０、およびＰ１１を含む。
保護基の独創的な選択は、免疫原性担体または固体支持体へのその後の結合のために末端基を用いて官能基化された一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩ−ｃ）、（ＩＩ−ｄ）、（ＩＩ−ｅ）、（ＩＩ−ｆ）、（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩ−ｈ）、（ＩＩ−ｉ）、（ＩＩ−ｊ）、（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）、（ＩＩＩ−ｅ）、（ＩＩＩ−ｆ）、（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ−ｈ）、（ＩＩＩ−ｉ）、（ＩＩＩ−ｊ）、または（ＩＩＩ−ｋ）のオリゴ糖のライブラリーへの、適切なアクセスを可能にする。さらに、脱離基の選択は、ステップＡ２）、Ａ４）、Ｂ２）、Ｂ５）、Ｃ２）、Ｃ４）、Ｄ２）、Ｄ５）、Ｅ２）、Ｅ５）、Ｆ２）、Ｆ４）、Ｈ２）、Ｈ５）、Ｊ２）、Ｊ４）、Ｉ２）、Ｉ４）、Ｋ２）、およびＫ５）においてグリコシル化反応の立体学的結果に影響を及ぼす。先行技術から、当業者にとって、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩ−ｃ）、（ＩＩ−ｄ）、（ＩＩ−ｅ）、（ＩＩ−ｆ）、（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩ−ｈ）、（ＩＩ−ｉ）、（ＩＩ−ｊ）、（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）、（ＩＩＩ−ｅ）、（ＩＩＩ−ｆ）、（ＩＩＩ−ｇ）、（Ｉ
ＩＩ−ｈ）、（ＩＩＩ−ｉ）、（ＩＩＩ−ｊ）、または（ＩＩＩ−ｋ）の所望のマンノースオリゴ糖を得るために、保護基および反応条件を選択することは明らかである（Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１，２０００，１４７１−１４９１ およびＥｕｒ．Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００９，８７０−８８８参照）。
一時的な保護基Ｐ３、Ｐ６、Ｐ１０、およびＰ１１は：アリル、ｐ−メトキシベンジル、２−ナフチルメチル、トリ−イソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルメトキシフェニルシリル、トリエチルシリル、トリメチルシリル、２−トリメチルシリルエトキシメチル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、およびレブリノイルから好ましくは選択されるが、これらに制限されない。好ましくは、保護基Ｐ３、Ｐ６、Ｐ１０、およびＰ１１は、保護基Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１２、Ｐ１３、およびＰ１４の存在下で選択的に除去されることができる。好ましくは、Ｐ３、Ｐ６、Ｐ１０、およびＰ１１は、９−フルオレニルメトキシカルボニル、またはレブリノイルであり、より好ましくは、Ｐ３およびＰ１１は同じであり、並びにＰ６およびＰ１０は同じである。好ましい実施形態において、保護基Ｐ６およびＰ１０は、９−フルオレニルメトキシカルボニルを表し、並びに保護基Ｐ３およびＰ１１は、−フルオレニルメトキシカルボニル、またはレブリノイルを表す。
構成要素２、３、８、および９は、グリコシル化剤である。本願に使用されるように、グリコシル化剤の用語は、脱離基を有するアノマー位置で官能基化された単糖に関し、適切な活性化剤を用いて活性化すると、例えばヒドロキシル基などのような求核剤と反応することができるオキソカルベニウム中間体を提供する。したがって、グリコシル化剤２、３、８、および９は、脱離基ＬＧ１、ＬＧ２、ＬＧ３、およびＬＧ４を有するアノマー位置で官能基化される。本合成に適切な脱離基の例は、炭水化物化学の当業者によく知られており、ハロゲン化物、チオエーテル、イミダート、酢酸塩、スルホキシド、ペンテニル、およびリン酸塩を含む。
好ましくは、脱離基ＬＧ１、ＬＧ２、ＬＧ３、およびＬＧ４は：
からなる脱離基の群から選択される。
すでに述べたように、オキソカルベニウム中間体の提供は、適当な、または適切な活性化剤を用いてグリコシル化剤のアノマー位置で導入された脱離基の活性化に依存する。リン酸塩のための適切な活性化剤（すなわち、リン酸塩活性化剤）、およびイミダートのための適切な活性化剤（すなわち、イミダート活性化剤）は、例えば、シリルトリフラートまたは銀トリフラートなどのようなルイス酸であり、一方、チオエーテルのための適切な活性化剤、すなわち、チオエーテル活性化剤は：ＮＩＳ／ＴｆＯＨ，ＮＩＳ／ＴＭＳＯＴｆ，ＮＩＳ／ＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ，ＮＩＳ／ＡｇＯＴｆ，ＤＭＴＳＴ／Ｔｆ２Ｏ，ＩＤＰＣ，ＢＳＰ／Ｔｆ２Ｏ，Ｐｈ２ＳＯ／Ｔｆ２Ｏを含むが、これらに制限されない。シリルトリフラートの例は、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート、ｔｅｒｔ−ブチ
ルジメチルトリフルオロメタンスルホネート、トリイソプロピルトリフルオロメタンスルホネートを含むが、これらに制限されない。
好ましくは、ＬＧ１、ＬＧ２、ＬＧ３、およびＬＧ４はチオエーテルであり、更により好ましくはＬＧ１、ＬＧ２、ＬＧ３、およびＬＧ４は：
からなる群から選択される。
ステップＡ２）、Ａ４）、Ｂ２）、Ｂ５）、Ｃ２）、Ｃ４）、Ｄ２）、Ｄ５）、Ｅ２）、Ｅ５）、Ｆ２）、Ｆ４）、Ｇ２）、Ｇ４）、Ｈ２）、Ｈ５）、Ｊ２）、Ｊ４）、Ｉ２）、Ｉ４）、Ｋ２）およびＫ５）においてオリゴ糖間のカップリング反応は、−７８℃〜０℃もしくは−５０℃〜０℃、または−１０℃〜＋１０℃の温度で、非極性溶媒および極性非プロトン性溶媒の混合物中で、ＮＩＳ／ＴｆＯＨまたはＴＭＳＯＴｆを用いての活性化によって行われると好ましい。更により好ましくは、前記反応は、約０℃の温度でＮＩＳ／ＴｆＯＨを用いた処理によって、非極性溶媒および極性非プロトン性溶媒の混合物中で行われる。
好ましい極性非プロトン性溶媒は、テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル、およびジオキサンである。好ましい非極性溶媒は、トルエン、例えば、クロロホルムおよび塩化メチレンなどのようなハロゲン化溶媒である。非極性溶媒および極性非プロトン性溶媒の好ましい混合物は：塩化メチレン／テトラヒドロフラン、塩化メチレン／ジエチルエーテル、トルエン／ジエチルエーテル、トルエン／テトラヒドロフランである。
ステップＡ８）、Ｂ８）、Ｃ９）、Ｄ９）、Ｅ８）、Ｆ７）、Ｆ４）、Ｇ７）、Ｈ８）、Ｉ７）、Ｊ７）およびＫ７）で行われる保護基Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１２、Ｐ１３、およびＰ１４の除去は：
−溶媒の混合物中における、任意に過酸化水素の存在下での、塩基と処理することによる塩基不安定な保護基の第一の開裂（好ましくは、塩基はＮａＯＭｅ、またはＬｉＯＨである）；および
−溶媒の混合物中における、パラジウム触媒の存在下での、化合物を水素にさらすことによる水素化に敏感である保護基の第二の開裂
を含む。
本発明に係る更なる態様は、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）、（ＩＩ−ｂ）、（ＩＩ−ｃ）、（ＩＩ−ｄ）、（ＩＩ−ｅ）、（ＩＩ−ｆ）、（ＩＩ−ｇ）、（ＩＩ−ｈ）、（ＩＩ−ｉ）、（ＩＩ−ｊ）、（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）、（ＩＩＩ−ｂ）、（ＩＩＩ−ｃ）、（ＩＩＩ−ｄ）、（ＩＩＩ−ｅ）、（ＩＩＩ−ｆ）、（ＩＩＩ−ｇ）、（ＩＩＩ−ｈ）、（ＩＩＩ−ｉ）、（ＩＩＩ−ｊ）、または（ＩＩＩ−ｋ）のオリゴ糖を調製するための中間体化合物に関し、ここで、中間体化合物は、一般式（Ｉ２ａ）、（Ｉ２ｂ）、（Ｉ２ｃ）、（Ｉ２ｄ）、（Ｉ２ｅ）、（Ｉ２ｆ）、（Ｉ２ｇ）、（Ｉ２ｈ）、（Ｉ３ａ）、（Ｉ３ｂ）、（Ｉ３ｃ）、（Ｉ３ｄ）、（Ｉ３ｅ）、（Ｉ３ｆ）、（Ｉ３ｇ）、（Ｉ３ｈ）、（Ｉ３ｉ）、（Ｉ３ｊ）、（Ｉ３ｋ）、（Ｉ３ｌ）、（Ｉ３ｍ）、（Ｉ３ｎ）、（Ｉ４ａ）、（Ｉ４ｂ）、（Ｉ４ｃ）、（Ｉ４ｄ）、（Ｉ４ｅ）、（
Ｉ４ｆ）、（Ｉ４ｇ）、（Ｉ４ｈ）、（Ｉ４ｉ）、（Ｉ４ｊ）、（Ｉ５ａ）、（Ｉ５ｂ）、（Ｉ５ｃ）、（Ｉ５ｄ）、（Ｉ５ｅ）、（Ｉ５ｆ）、（Ｉ５ｇ）、（Ｉ５ｈ）、（Ｉ５ｉ）、または（Ｉ５ｊ）：
のいずれか一つを有し、
式中、Ｃは、固体支持体または保護末端基ＥであるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、およびＰ１２は、保護基を表し、並びにＥおよびＬは、上記に定義されるのと同じ意味を有する。
式（Ｉ２ａ）、（Ｉ２ｂ）、（Ｉ２ｃ）、（Ｉ２ｄ）、（Ｉ２ｅ）、（Ｉ２ｆ）、（Ｉ２ｇ）、（Ｉ２ｈ）、（Ｉ３ａ）、（Ｉ３ｂ）、（Ｉ３ｃ）、（Ｉ３ｄ）、（Ｉ３ｅ）、（Ｉ３ｆ）、（Ｉ３ｇ）、（Ｉ３ｈ）、（Ｉ３ｉ）、（Ｉ３ｊ）、（Ｉ３ｋ）、（Ｉ３ｌ）、（Ｉ３ｍ）、（Ｉ３ｎ）、（Ｉ４ａ）、（Ｉ４ｂ）、（Ｉ４ｃ）、（Ｉ４ｄ）、（Ｉ４ｅ）、（Ｉ４ｆ）、（Ｉ４ｇ）、（Ｉ４ｈ）、（Ｉ４ｉ）、（Ｉ４ｊ）、（Ｉ５ａ）、（Ｉ５ｂ）、（Ｉ５ｃ）、（Ｉ５ｄ）、（Ｉ５ｅ）、（Ｉ５ｆ）、（Ｉ５ｇ）、（Ｉ５ｈ）、（Ｉ５ｉ）、または（Ｉ５ｊ）において、好ましくは、リンカー−Ｌ−は、−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表
し；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；好ましくは、１、２、３、および４から選択される整数である。
特に好ましい中間体は、式（Ｉ２ａ）、（Ｉ２ｂ）、（Ｉ２ｃ）、（Ｉ２ｄ）、（Ｉ２ｅ）、（Ｉ２ｆ）、（Ｉ２ｇ）、（Ｉ２ｈ）、（Ｉ３ａ）、（Ｉ３ｂ）、（Ｉ３ｃ）、（Ｉ３ｄ）、（Ｉ３ｅ）、（Ｉ３ｆ）、（Ｉ３ｇ）、（Ｉ３ｈ）、（Ｉ３ｉ）、（Ｉ３ｊ）、（Ｉ３ｋ）、（Ｉ３ｌ）、（Ｉ３ｍ）、（Ｉ３ｎ）、（Ｉ４ａ）、（Ｉ４ｂ）、（Ｉ４ｃ）、（Ｉ４ｄ）、（Ｉ４ｅ）、（Ｉ４ｆ）、（Ｉ４ｇ）、（Ｉ４ｈ）、（Ｉ４ｉ）、（Ｉ４ｊ）、（Ｉ５ａ）、（Ｉ５ｂ）、（Ｉ５ｃ）、（Ｉ５ｄ）、（Ｉ５ｅ）、（Ｉ５ｆ）、（Ｉ５ｇ）、（Ｉ５ｈ）、（Ｉ５ｉ）、または（Ｉ５ｊ）中間体であり、式中、−Ｌ−は、−（ＣＨ２）ｏ−を表し、およびｏは、２、５および６から選択される整数である。
Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３、Ｐ４、Ｐ５、Ｐ６、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ９、Ｐ１０、Ｐ１１、およびＰ１２は、ヒドロキシル基のための適切な保護基、より好ましくは、脱保護反応の適切な順序によって次々に続けて除去されることが可能であるヒドロキシル基のための種々の適切な保護基である。ヒドロキシル基のための好ましい保護基は、アセチル、フェニル、ベンジル、イソプロピリデン、ベンジリデン、ベンゾイル、ｐ−メトキシベンジル、ｐ−メトキシベンジリデン、ｐ−メトキシフェニル、ｐ−ブロモベンジリデン、ｐ−ニトロフェニル、アリル、アセチル、イソプロピル、ｐ−ブロモベンジル、ジメトキシトリチル、トリチル、２−ナフチルメチル、ピバロイル、（２−ニトロフェニル）アセチル、トリイソプロピルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル、ｔｅｒｔ−ブチルメトキシフェニルシリル、トリエチルシリル、トリメチルシリル、２−トリメチルシリルエトキシメチル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、ベンジルオキシメチル、メチルオキシメチル、ｔｅｒｔ−ブチルオキシメチル、メトキシエチルオキシメチル、レブリノイルである。
したがって、中間体（Ｉ２ａ）、（Ｉ２ｂ）、（Ｉ２ｃ）、（Ｉ２ｄ）、（Ｉ２ｅ）、（Ｉ２ｆ）、（Ｉ２ｇ）、（Ｉ２ｈ）、（Ｉ３ａ）、（Ｉ３ｂ）、（Ｉ３ｃ）、（Ｉ３ｄ）、（Ｉ３ｅ）、（Ｉ３ｆ）、（Ｉ３ｇ）、（Ｉ３ｈ）、（Ｉ３ｉ）、（Ｉ３ｊ）、（Ｉ３ｋ）、（Ｉ３ｌ）、（Ｉ３ｍ）、（Ｉ３ｎ）、（Ｉ４ａ）、（Ｉ４ｂ）、（Ｉ４ｃ）、（Ｉ４ｄ）、（Ｉ４ｅ）、（Ｉ４ｆ）、（Ｉ４ｇ）、（Ｉ４ｈ）、（Ｉ４ｉ）、（Ｉ４ｊ）、（Ｉ５ａ）、（Ｉ５ｂ）、（Ｉ５ｃ）、（Ｉ５ｄ）、（Ｉ５ｅ）、（Ｉ５ｆ）、（Ｉ５ｇ）、（Ｉ５ｈ）、（Ｉ５ｉ）、または（Ｉ５ｊ）は、保護基Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５、Ｐ７、Ｐ８、およびＰ９がベンジル基であり、保護基Ｐ３、Ｐ６、Ｐ１０、およびＰ１１が９−フルオレニルメトキシカルボニル基またはレブリノイル基であり、保護基Ｐ４およびＰ１２がベンゾイル基であり、保護基Ｐ１３がベンジル基であり、および保護基Ｐ１４が、ベンジルオキシカルボニル基（Ｃｂｚ）である場合に特に好ましい。
［複合糖質］
本発明の他の態様は、−Ｏ−Ｌ−Ｅ基の末端基Ｅを介して免疫原性担体に共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｂｏｕｎｄ）または共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）している一般式（Ｉ）のオリゴ糖を含む複合体に関する。言い換えると、本発明の他の態様は、−Ｏ−Ｌ−Ｅ基の末端基Ｅを介して免疫原性担体と複合体化される一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）〜（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）〜（ＩＩＩ−ｊ）、または（ＩＩＩ−ｋ）のいずれかのオリゴ糖に関する。一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）〜（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）〜（ＩＩＩ−ｊ）、または（
ＩＩＩ−ｋ）の合成オリゴ糖を含む複合体は、−Ｏ−Ｌ−Ｅ基の末端基Ｅを介して免疫原性担体に共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｂｏｕｎｄ）、または共有結合（ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｌｉｎｋｅｄ）しており、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）〜（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）〜（ＩＩＩ−ｊ）、または（ＩＩＩ−ｋ）のいずれかのオリゴ糖を免疫原性担体と反応させることによって得られる複合体としても定義される。驚くべきことに、前記複合体は、クレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５細菌と関連する疾患に対する免疫付与のためのワクチンとして効果的であることを証明した。
オリゴ糖は、一般的にＴＩ−２（Ｔ細胞非依存的−２）抗原および低い免疫抗原性として当業者に知られている。ＴＩ−２抗原は、表面露出された免疫グロブリン受容体のクロスリンクを介して成熟Ｂ細胞によってのみ認識される抗原である。Ｔ細胞の助けなしでは、免疫記憶は生じず、ＩｇＭサブクラスから他のＩｇＧサブクラスへのアイソタイプ変換もＢ細胞親和性成熟も起こらない。さらに、オリゴ糖は、ヒト糖脂質およびヒト糖タンパク質に対する構造的相同性のためにヒトにおいて低い免疫原であると知られている。オリゴ糖の低い免疫原性特性のために、オリゴ糖は、強力なワクチンの生産に必須の特徴である、Ｂ細胞による抗体産生、および記憶細胞の形成の両方を生じさせる能力が低いことを示す。
したがって、強力なオリゴ糖に基づくワクチンを生産するために、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）〜（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）〜（ＩＩＩ−ｊ）、または（ＩＩＩ−ｋ）のオリゴ糖は、複合体を提供するために免疫原性担体に結合され、当該複合体は、オリゴ糖と比較して上昇した免疫原性を示す。したがって、本願の範囲下では、オリゴ糖断片
を含む複合体も包含され、
式中、ｍ、ｎ、ｘ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３、Ｕｘ＋４、Ｖｘ、Ｖｘ＋１、Ｖｘ＋２、ＴおよびＴ＊は、本願に定義される意味を有し、Ｏ原子を介して免疫原性担体に共有結合される。
前記複合体は、少なくとも一つの一般式（Ｉ）の合成オリゴ糖、および少なくとも一つのオリゴ糖が共有結合される免疫原性担体を含む。
驚くべきことに、免疫原性担体に共有結合している一般式（Ｉ）のオリゴ糖を含む複合体を用いての免疫付与は、一般式（Ｉ）のオリゴ糖の炭水化物部分に対する特異的な高力価の抗体の生産をもたらすことを明らかにした。前記抗体は、天然のクレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５リポポリオリゴ糖と交差反応し、オプソニン化貪食作用および殺菌活性を示すので、クレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５細菌に対する保護を与える。
この文脈において用語「免疫原性担体」は、構造として定義され、免疫原性担体は、オリゴ糖自体と比較して増加した免疫原性を示す複合体を形成するためにオリゴ糖に結合される。したがって、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）〜（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）〜（ＩＩＩ−ｊ）、または（ＩＩＩ−ｋ）のオリゴ糖の免疫原性担体への複合は、前記免疫原性担体に対する免疫応答を誘導することなく、一般式（Ｉ）のオリゴ糖に対して免疫応答を刺激する効果を有する。
好ましい免疫原性担体は、免疫調節特性を有する担体タンパク質またはグリコスフィンゴ脂質である。当業者にとって、担体タンパク質は、ジフテリアトキソイド、変異ジフテリアトキソイド、修飾ジフテリアトキソイド、変異および修飾ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、修飾破傷風トキソイド、変異破傷風トキソイド、分類不可能なヘモフィルス インフルエンザ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）の非脂質付加細胞表面リプロテイン（ｌｉｐｏｒｏｔｅｉｎ）（タンパク質Ｄ）、ナイセリア メニンジチディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）の外膜タンパク質（ＯＭＰ）複合体、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、キーホール リンペット ヘモシアニン（ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔ ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎｅ）（ＫＬＨ））、シュードモナス エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素Ａ（γＥＰＡ）の組み換え非毒性型、またはコレラトキソイド（ＣＴ）、を含む群、または、からなる群から選択されるタンパク質である。本願に使用される用語「トキソイド」は、細菌毒素（一般的に外毒素）に関し、細菌毒素の毒性は、化学的（ホルマリン）または熱処理のいずれかによって不活性化または抑制されており、一方、他の特性、一般的に免疫原性は、維持される。本願に使用される変異トキソイドは、組み換え細菌毒素であり、組み換え細菌毒素は、野生型アミノ酸配列を修正することによって、低い毒性になる、または非毒性にさえもなるように修正されている。このような変異は、一つ以上のアミノ酸の置換であり得る。このような変異トキソイドは、修飾トキソイドを提供するために相互連結分子の官能基Ｙと反応することができる官能性を当該表面に示す。前記官能性は、当業者に公知であり、還元剤の存在下で活性化エステル、イソシアネート基、またはアルデヒドと反応することができるリジン残基の第一級アミノ官能性、カルボジイミドによって活性化されることができるグルタミン酸塩残基またはアスパラギン酸塩残基のカルボキシレート官能性、またはシステイン残基のチオール官能性を含むが、これらに制限されない。
活性化エステルは、Ｎ−（γ−マレイミドブチリルオキシ）スルホスクシンイミドエステル（スルホ−ＧＭＢＳ）、スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（スルホ−ＳＩＡＢ）、スクシンイミジル−３−（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、ジスクシンイミジルグルタレート（ＤＳＧ）、ジスクシンイミジルアジペート（ＤＳＡ）、２−ピリジルジチオール−テトラオキサテトラデカン−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＰＥＧ−４−ＳＰＤＰ）を含む（図２参照）。
担体タンパク質におけるシステイン残基は、担体タンパク質の表面に相互連結分子の官能基Ｘを有する修飾担体タンパク質を提供するために、適切な相互連結分子と更に反応されることができる、対応するデヒドロアラニンに変換されることができる。
一般式Ｉのオリゴ糖は、リジン残基の第一級アミノ官能性として示す非毒性変異ジフテリア毒素ＣＲＭ１９７に結合されると特に好ましい。
ＣＲＭ１９７様野生型ジフテリア毒素は、グリシンへグルタミン酸の一つのアミノ酸置換を有するジスルフィド架橋によって結合される２つのサブユニットからなる５３５アミノ酸（５８ｋＤ）の単一ポリペプチド鎖である。プレベナー（Ｐｒｅｖｎａｒ）のような、疾患のために多くの承認された複合体ワクチンにおける担体タンパク質として利用される。
したがって、本発明の好ましい実施形態において、担体タンパク質は、相互連結分子の前記官能基Ｘを担体タンパク質の表面に有する修飾担体タンパク質を提供するために、当該表面に相互連結分子の官能基Ｙと反応することができるリジン残基の第一級アミノ官能性を示し、修飾担体タンパク質は、一般式（Ｉ）の化合物におけるリンカーの末端アミノ基と反応することができる。
相互連結分子の前記官能基Ｘは、マレイミド；α−ヨードアセチル；α−ブロモアセチル；およびＮ−ヒドロキシ−スクシンイミドエステル（ＮＨＳ）、アルデヒド、イミドエステル、カルボン酸、スルホン酸アルキル、塩化スルホニル、エポキシド、無水物、炭酸塩を含む、または、からなる群から選択される（図３参照）。
好ましくは、一般式Ｉのオリゴ糖は、非毒性変異ジフテリア毒素ＣＲＭ１９７に結合され、マレイミドによって修飾される。さらに他の好ましい実施形態において、一般式Ｉのオリゴ糖は、非毒性変異ジフテリア毒素ＣＲＭ１９７に結合され、α−ブロモアセトアミドによって修飾される。最も好ましい実施形態において、一般式Ｉのオリゴ糖は、非毒性変異ジフテリア毒素ＣＲＭ１９７に結合され、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドアジペートによって修飾される。
好ましくは、一般式（ＩＶ）の複合体であり
式中、
ｃは２〜１８を含み；
−Ｅ１−は、共有結合，−ＮＨ−，−Ｏ−ＮＨ−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＣＯ−，−ＣＨ＝ＣＨ−，−ＣＯＮＨ−，−ＣＯ−ＮＨＮＨ−，
を表し；
−Ｗ−は：
から選択され、
ａは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から選択される整数を表し、
ｂは、１、２、３、および４から選択される整数を表し、
ＣＰは、担体タンパク質であり；および
ｍ、ｎ、ｘ、Ｌ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３、Ｕｘ＋４、Ｖｘ、Ｖｘ＋１、Ｖｘ＋２、ＴおよびＴ＊は、本願に定義される通りの意味を有する。
好ましくは、Ｅ１は、共有結合、−ＮＨ−，−ＣＨ＝ＣＨ−，−ＣＯＮＨ−，
である。
好ましいＣＰは、ＣＲＭ１９７である。したがって、本発明の一つの実施形態において、複合体は一般式（ＩＶ）であり、式中、ＣＰは、ＣＲＭ１９７であり、およびｃ、−Ｅ１−、Ｗ、ｍ、ｎ、ｘ、Ｌ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３、Ｕｘ＋４、Ｖｘ、Ｖｘ＋１、Ｖｘ＋２、ＴおよびＴ＊は、本願に定義される通りの意味を有する。
好ましくは、一般式（ＩＶ）において、リンカー−Ｌ−は：−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，および−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−から選択され；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２から選択され；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
−Ｌｄ−は：−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，および−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−から選択され；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，および−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され；
および、ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；好ましくは、１、２、３、および４から選択される整数である。
さらに、一般式（ＩＶ）の複合体が好ましく、式中、−Ｗ−は、
を表し、およびａは、２、３、４、５、および６から選択される整数である。
一般式（ＩＶ）の複合体が特に好ましく、式中、
リンカー−Ｌ−は：−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，および−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−から選択され；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２から選択され；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
−Ｌｄ−は：−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ
２Ｈ４−，および−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−から選択され；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，および−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され；
ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；好ましくは、１、２、３、および４から選択される整数であり；
−Ｗ−は、
を表し、およびａは、２、３、４、５、および６から選択される整数である。
更により好ましくは、一般式（ＩＶ）の複合体であり、式中
ｘは１を表し、
Ｖ＊−はＨ−を表し、
リンカー−Ｌ−は：−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，および−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−から選択され；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２から選択され；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
−Ｌｄ−は：−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，および−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−から選択され；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，および−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−から選択され；
ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；好ましくは、１、２、３、および４から選択される整数であり；
−Ｗ−は、
を表し、およびａは、２、３、４、５、および６から選択される整数である。
特に好ましくは、一般式（ＩＶ）の複合体であり、式中、リンカー−Ｌ−は、−（ＣＨ２）ｏ−を表し、
ｏは、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；
−Ｗ−は、
を表し、およびａは、２、３、４、５、および６から選択される整数である。
さらに好ましくは、一般式（ＩＶ）の複合体であり、式中、ｘは１を表し、
Ｖ＊はＨ−を表し、
リンカー−Ｌ−は、−（ＣＨ２）ｏ−を表し、
ｏは、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；
−Ｗ−は、
を表し、およびａは、２、３、４、５、および６から選択される整数である。
好ましくは、ｃは、２〜１８、より好ましくは、５〜１５、更により好ましくは、８〜１２を含む。ｎは１を表すとさらに好ましい。
好ましくは、一般式（Ｖ）の複合体でもあり、
式中、
ｃは２〜１８を含み；
−Ｅ１−は、共有結合，−ＮＨ−，−Ｏ−ＮＨ−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＣＯ−，−ＣＨ＝ＣＨ−，−ＣＯＮＨ−，−ＣＯ−ＮＨＮＨ−，
を表し；
−Ｗ−は：
から選択され、
ａは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から選択される整数を表し、
ｂは、１、２、３、および４から選択される整数を表し；および
ｍ、ｎ、ｘ、Ｌ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３、Ｕｘ＋４、Ｖｘ、Ｖｘ＋１、およびＶｘ＋２は、本願に定義される通りの意味を有する。
他の実施形態において、前記免疫原性担体は、好ましくは、免疫調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質であり、より好ましくは、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−ヘキサコサノイルアミノオクタデカン−３，４−ジオールである。免疫調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質の用語は、本願に使用される通り、標的抗原に対して免疫システム応答を刺激することができるが、上記に定義される通りグリコスフィンゴ脂質自体では免疫性を与えない、適切なグリコスフィンゴ脂質に関する。
本願に使用されるグリコスフィンゴ脂質は、スフィンゴ脂質にα−結合される炭水化物部分を含む化合物である。好ましくは、炭水化物部分は、ヘキソピラノースであり、最も好ましくは、α−Ｄ−ガラクトピラノースである。当業者にとって、スフィンゴ脂質は、アミド結合を介して脂肪酸に連結されるＣ１８アミノアルコールを含む脂質のクラスである。Ｃ１８アミノアルコールは、ヒドロキシル基と好ましくはモノ−、ジ−、またはポリ置換される。特に好ましくは、Ｃ１８アミノアルコールは、フィトスフィンゴシンである。脂肪酸は、好ましくは、１６〜１８個の範囲の、およびより好ましくは、１８〜２６個の範囲の多数の炭素の飽和アルキル鎖を有するモノカルボン酸である。免疫調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質は、（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル）−２−ヘキサコサノイルアミノオクタデカン−３，４−ジオールを含むが、これに制限されず、ナチュラルキラー（ＮＫ）活性およびナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞によるサイトカイン産生を刺激することができ、インビボにおいて強力な抗腫瘍活性を示す（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９８，９５，５６９０）。
免疫調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質を有する一般式（Ｉ）のオリゴ糖の複合体は、熱安定性があるという利点を有する。複合体が安定であるために、免疫調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質において、官能性が導入される。前記官能性は、一般式Ｉのオリゴ糖の複合体を提供するために一般式Ｉのオリゴ糖におけるリンカーの末端アミノ基と、または免疫調節特性を有する修飾グリコスフィンゴ脂質を提供するために相互連結分子の官能基Ｙと、反応する傾向がある。
好ましくは、前記官能性は、免疫調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質の炭水化物部分におけるＣ６に導入される。したがって、免疫調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質は、官能性を用いて官能基化され、オリゴ糖の末端アミノ基と、または相互連結分子の官能基Ｙと、反応する傾向がある。アミノ基と反応する傾向がある官能性は、活性化エステ
ル、イソシアネート基、アルデヒド、エポキシド、イミドエステル、カルボン酸、アルキルスルホネート、および塩化スルホニルを含むが、これらに制限されない。相互連結分子の官能基Ｘを示す免疫調節特性を有する修飾グリコスフィンゴ脂質を提供するために、相互連結分子の官能基Ｙと反応する傾向がある官能性は、アミン、アルコール、チオール、活性化エステル、イソシアネート基、アルデヒド、エポキシド、ビニル、イミドエステル、カルボン酸、アルキルスルホネート、塩化スルホニル、ビニル基、アルキニル基、およびアジド基を含むが、これらに制限されない。
好ましくは、免疫調節特性を有するグリコスフィンゴ脂質の炭水化物部分におけるＣ６に導入される官能性は、アミン、チオール、アルコール、カルボン酸、ビニル、マレイミド、α−ヨードアセチル、α−ブロモアセチル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）、２−ピリジルジチオールを含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）、または含む（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）群から選択される。
相互連結分子の前記官能基Ｘは、マレイミド、α−ヨードアセチル、α−ブロモアセチル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＮＨＳ）、アルデヒド、カルボン酸、エポキシド、アルキルスルホネート、塩化スルホニル、無水物、炭酸塩を含む、または、からなる群から選択される。
本願に使用される用語「相互連結分子」は、官能基Ｘおよび官能基Ｙを含む二官能性分子に関し、ここで、官能基Ｘは、リンカー−Ｌ−における末端アミノ基と反応することが可能であり、官能基Ｙは、免疫原性担体または固体支持体に存在する官能基と反応することが可能である。
本発明の少なくとも一つの複合体を含むワクチンは、クレブシエラ ニューモニエの莢膜ポリ−、オリゴ糖またはクレブシエラ ニューモニエの莢膜ポリ−、オリゴ糖の複合体における非選択的開裂によって得られるオリゴ糖の単離された（および合成されていない）混合物を含むワクチンと比較して、より少ない副作用、および／またはより少ない非保護免疫応答をもたらす。さらに、本発明のワクチンは、非選択的開裂された莢膜ポリ−、オリゴ糖の単離された混合物を含むワクチンより、ＧＭＰ規則にしたがって、より容易に製造されることができ、より容易に特徴づけられることができ、そのことは、安定性および純度制御を容易にし、並びに不純物の種類および量の検出をする。
より好ましくは一般式（Ｖ−１）〜（Ｖ−１１）：
のいずれか一つの複合体であり、
式中、Ｌ、Ｅ１、Ｗ、ｃ、およびｎは、本願に定義されるのと同じ意味を有する。
より好ましくは、一般式（ＩＶ）、（Ｖ）、および（Ｖ−１）〜（Ｖ−１１）のいずれか一つの複合体であり、式中、ｎは２〜１０の整数である。
より好ましくは、一般式（ＩＶ）、（Ｖ）、および（Ｖ−１）〜（Ｖ−１１）のいずれか一つの複合体であり、式中、ｃは４〜１０から選択される。
好ましくは、−Ｗ−は、
を表し、およびａは、２、３、４、５、および６から選択される整数である。
したがって、一般式（ＩＶ）、（Ｖ）、および（Ｖ−１）〜（Ｖ−１１）の複合体は特に好ましく、式中、−Ｗ−は
を表し、およびａは２、３、４、５、および６から選択される整数である。
好ましくは、リンカー−Ｌ−は、−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；
−Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
−Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
−Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
−Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；および
ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数であり；好ましくは１、２、３、および４から選択される整数である。
最も好ましい実施形態において、Ｅ１は、共有結合，−ＮＨ−， −ＣＨ＝ＣＨ−，−ＣＯＮＨ−，
である。
一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）〜（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）〜（ＩＩＩ−ｊ）、または（ＩＩＩ−ｋ）のいずれか一つのオリゴ糖を含む複合体、および特に、一般式（ＩＶ）、（Ｖ）、および（Ｖ−１）〜（Ｖ−１１）のいずれか一つの複合体は、ヒトおよび／または動物宿主において保護免疫応答を誘導するので、クレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５細菌と関連する疾患の予防および／または治療に有用であるということが明らかになった。したがって、免疫原性担体に結合される一般式（Ｉ）のオリゴ糖を含む複合体は、リポ多糖において次のオリゴ糖断片：
−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−
（１−；
−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−
の一つを含む、クレブシエラ ニューモニエ細菌と関連する疾患の予防および／または治療に有用である。
好ましくは、リポ多糖において、上記のオリゴ糖断片の一つを含む細菌は、クレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５である。
好ましい実施形態において、免疫原性担体に結合される一般式（Ｉ）のオリゴ糖を含む複合体は、細菌と関連する疾患の、特に、細菌のＯ−多糖において、次のオリゴ糖断片：−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；−３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；−３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；−３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；−３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；−３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−、の一つを含む細菌と、好ましくはクレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５と関連する疾患の、予防および／または治療に有用であり、ここで前記疾患は、肺炎、気管支炎、髄膜炎、尿路感染症、創傷感染症、骨髄炎、菌血症、敗血症、および強直性脊椎炎を含む。
［医薬組成物］
本発明の他の態様は、少なくとも一つの薬学的に許容できるアジュバントおよび／または賦形剤と共に、免疫原性担体に結合される一般式（Ｉ）のオリゴ糖、および／または一般式（Ｉ）の少なくとも一つのオリゴ糖を含む少なくとも一つの複合体を含む医薬組成物またはワクチンに関する。前記医薬組成物は、ヒトおよび／または動物宿主において保護免疫応答を高めるために使用されることができる。理論的に、医薬組成物はヒトにおける使用のために適切である。
本発明の他の態様において、前記医薬組成物またはワクチンは、クレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ１、Ｏ２（Ｏ２ａ，Ｏ２ａｃ，．．．）、Ｏ４、Ｏ７、Ｏ８、Ｏ１２、およびカルバペネム耐性クレブシエラ ニューモニエＳＴ２５８ガラクタン−ＩＩＩを含む、または、からなる群から選択されるクレブシエラ ニューモニエ細菌における、少なくとも一つの莢膜多糖、Ｏ−多糖、および、／または莢膜多糖断片、Ｏ−多糖断片、および／またはそれらのタンパク質複合体を更に含む。
本明細書に使用される用語「アジュバント」は、免疫学的アジュバント、すなわち、ア
ジュバントに関連する抗原性はなく、ワクチンに含まれる所与の抗原への免疫応答を高めることによって、前記ワクチンの効果を修正する、または増加させるワクチン組成物において使用される材料に関する。当業者にとって、古典的に認識される免疫学的アジュバントの例は、油乳剤（例えば、フロイント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ） アジュバントなど）、サポニン、アルミニウム塩またはカルシウム塩（例えば、アルム（ａｌｕｍ）など）、非イオン性ブロック重合体界面活性剤、および他の物を含むが、これらに制限されない。
医薬組成物は、特に投与の時点で、好ましくは、水性形態であるが、非水性液体形態、またはゼラチンカプセルのような乾燥形態、または凍結乾燥品など、で存在することができる。
医薬組成物は、チオメルサールまたは２−フェノキシエタノールなどのような、一つ以上の防腐剤を含んでもよい。水銀を使わない組成物は好ましく、および防腐剤を使わないワクチンを調製することができる。
医薬組成物は、等張性を制御するために、例えばナトリウム塩などのような、生理的塩を含んでもよい。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）は、一般的であり、１〜２０ｍｇ／ｍｌで存在してもよい。存在し得る他の塩は、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、無水リン酸二ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、などを含む。
医薬組成物は、２００ｍＯｓｍ／ｋｇ〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有することができる。
医薬組成物は、普通の水（例えば、注射用水（ｗ．ｆ．ｉ））中に化合物（不溶性の金属塩を有する、または有さない）を含んでもよいが、通常一つ以上の緩衝剤を含むであろう。一般的な緩衝剤は：リン酸塩緩衝剤；トリス緩衝剤；ホウ酸塩緩衝剤；コハク酸塩緩衝剤；ヒスチジン緩衝剤（特に、水酸化アルミニウムアジュバントを有する場合）；またはクエン酸塩緩衝剤を含んでもよい。緩衝塩は、一般的に、５〜２０ｍＭの範囲で含まれるであろう。
医薬組成物は、一般的にｐＨ５．０〜９．５、例えば、ｐＨ６．０〜８．０を有する。
医薬組成物は、好ましくは、無菌および無グルテンである。
医薬組成物は、動物（および、特にヒト）患者に投与するために適切であるので、ヒト用および動物用の両方を含む。医薬組成物は、患者における免疫応答を高める方法において使用されてもよく、患者へ組成物を投与するステップを含む。
本発明の医薬組成物は、患者がクレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５にさらされる前、並びに／あるいは後に投与されてもよい。
本発明の他の態様において、本発明は、クレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、またはＯ５細菌と関連する疾患の予防および／または治療のための前記医薬組成物もしくは前記ワクチンの製造のための、免疫原性担体に結合される一般式（Ｉ）の少なくとも一つのオリゴ糖を含む少なくとも一つの複合体、および／または一般式（Ｉ）の少なくとも一つのオリゴ糖の使用に関し、特にクレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、またはＯ５細菌と関連する疾患は、肺炎、気管支炎、髄膜炎、尿路感染症、創傷感染症、骨髄炎、菌血症、敗血症、および強直性脊椎炎を含む、または、からなる群から選択される。
好ましくは、本発明は、前記医薬組成物または前記ワクチンの製造のための、一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）〜（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）〜（ＩＩＩ
−ｊ）または（ＩＩＩ−ｋ）のいずれか少なくとも一つのオリゴ糖、および／または一般式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩ−ａ）〜（ＩＩ−ｋ）、（ＩＩＩ）、（ＩＩＩ−ａ）〜（ＩＩＩ−ｊ）もしくは（ＩＩＩ−ｋ）のいずれか少なくとも一つのオリゴ糖を含む少なくとも一つ複合体の使用に関する。
より好ましくは、本発明は、前記医薬組成物または前記ワクチンの製造のために、オリゴ糖Ｉ’ａ−１〜Ｉ’ａ−１１、Ｉ’ａ−１〜Ｉ’ｂ−１１、Ｉ’ｂ−１〜Ｉ’ｃ−１１、Ｉ’ｃ−１〜Ｉ’ｃ−１１、Ｉ’ｄ−１〜Ｉ’ｄ−１１、Ｉ’ｅ−１〜Ｉ’ｅ−１１、およびＩ’ｆ−１〜Ｉ’ｆ−１１の少なくとも一つ、並びに／または、オリゴ糖Ｉ’ａ−１〜Ｉ’ａ−１１、Ｉ’ａ−１〜Ｉ’ｂ−１１、Ｉ’ｂ−１〜Ｉ’ｃ−１１、Ｉ’ｃ−１〜Ｉ’ｃ−１１、Ｉ’ｄ−１〜Ｉ’ｄ−１１、Ｉ’ｅ−１〜Ｉ’ｅ−１１およびＩ’ｆ−１〜Ｉ’ｆ−１１の少なくとも一つを含む少なくとも一つの複合体の使用に関する。
特に、本発明は、前記医薬組成物または前記ワクチンの製造のために、一般式（ＩＶ）、（Ｖ）、および（Ｖ−１）〜（Ｖ−１１）のいずれか少なくとも一つの複合体の使用に関する。
医薬組成物は、単位用量形態で調製されてもよい。好ましくは、本発明の複合体の用量は、０．１〜１０μｇ、好ましくは１〜１０μｇ、好ましくは０．２〜９μｇ、より好ましくは、０．５〜９μｇ、好ましくは１〜６μｇ、および最も好ましくは１〜５μｇで調製されてもよい。いくつかの実施形態において、単位用量は、０．１〜１０ｍＬ、例えば、約０．５ｍＬの量を有してもよい。
本発明は、例えば、単位用量を含む本発明の医薬組成物を含む送達装置（例えば、注射器、ネブライザー（ｎｅｂｕｌｉｓｅｒ）、噴霧器（ｓｐｒａｙｅｒ）、吸入器、皮膚パッチなど）も提供する。この装置は、脊椎動物の対象に組成物を投与するために使用することができる。
本発明は、本発明の医薬組成物を、例えば単位用量含む滅菌容器（例えば、バイアルなど）も提供する。
本発明は、本発明の医薬組成物の単位用量も提供する。
本発明は、本発明の医薬組成物を含む密閉容器も提供する。適切な容器は、例えば、バイアルを含む。
本発明の医薬組成物は、種々の形態で調製されてもよい。例えば、組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかとして、注入物質として調製されてもよい。注射前の液体ビヒクル中の溶液または懸濁液のために適切な固体形態を調製することもできる（例えば、凍結乾燥組成物、またはスプレー凍結乾燥組成物）。組成物は、例えば、軟膏、クリーム、または粉末などの一般的な投与のために調製されてもよい。組成物は、例えば、錠剤またはカプセルとして、スプレーとして、またはシロップとして（任意に風味をつけて）、経口投与のために調製されてもよい。組成物は、例えば、吸入器などによって、微粉またはスプレーを用いて肺投与のために調製されてもよい。組成物は、座薬として調製されてもよい。組成物は、例えば、スプレーまたは点滴剤などとして、経鼻投与、耳投与、または眼投与のために調製されてもよい。筋肉内投与のための注射は一般的である。
医薬組成物は、アジュバントの効果的な量、すなわち、単回投与で、または系列の一部として、個々に投与される場合、同時投与されるクレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５抗原への免疫応答を高めるために効果的な量を含んでもよい。
この量は、治療される個々の健康状態および体調、年齢、治療される個々の分類群（例えば、非ヒト霊長類、霊長類など）、抗体を合成するための個々の免疫システムの能力、所望される保護の程度、ワクチンの形成、医学的状況における治療する医師の評価、並びに他の関連する要因に依存して変えることができる。量は、ルーチン試験によって決定されることができる比較的広範囲で低下するであろう。
本発明のワクチンの形成および投与のための技術は、「レミントンの医薬品化学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」マック パブリッシング社（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．），イーストン（Ｅａｓｔｏｎ） ペンシルベニア（ＰＡ）において明らかにされ得る。
本発明に係る一つの複合体における、または一般式（Ｉ）の一つのオリゴ糖における治療有効量は、疾患に対して少なくとも部分的な免疫付与をもたらす化合物の量に関する。このような化合物の毒性および治療有効性は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的、薬理学的、および毒物学的手順によって決定されることができる。毒性と治療有効性との間の用量比は、治療指数である。投与される組成物の実際量は、治療される患者、患者の体重、疾患の重症度、投与方法、および処方医師における判断に依存するだろう。
本発明の他の態様は、ヒトおよび／または動物宿主においてクレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５に対する免疫応答を誘導する方法に関し、前記方法は、前記ヒトおよび／または動物宿主に対して、一般式（Ｉ）のオリゴ糖、および／または一般式（Ｉ）のオリゴ糖の塩、および／または一般式（Ｉ）のオリゴ糖の複合体もしくは一般式（Ｉ）のオリゴ糖の医薬組成物を投与することを含む。本発明に係るヒトおよび／または動物宿主において、クレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５に起因する疾患を治療または予防する方法は、前記ヒトおよび／または動物宿主に対して、少なくとも一つの一般式（Ｉ）のオリゴ糖、および／または一般式（Ｉ）のオリゴ糖の塩、および／または一般式（Ｉ）のオリゴ糖の複合体もしくは一般式（Ｉ）のオリゴ糖の医薬組成物を投与することを含む。
［免疫学的分析］
本発明の更に他の態様は、Ｏ−ポリ−、オリゴ糖において次のオリゴ糖断片：
−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
−３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−
を含む細菌に対する抗体の検出のための免疫学的分析におけるマーカーとして使用のための一般式（Ｉ）のオリゴ糖に関する。
このような分析は、Ｏ−ポリ、オリゴ糖断片において、クレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５などの上述のオリゴ糖断片の一つを含む細菌に対する抗体の検出のために有用な、例えば、マイクロアレイおよびＥＬＩＳＡを含む。
Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、およびＯ５におけるＯ−抗原は、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｏ９、およびＯ８によってそれぞれ共有される。Ｏ５−抗原は、バークホルデリア セパシア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ ｃｅｐａｒｃｉａ）Ｏ２およびＥ、並びにセラチア マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）Ｏ２８によって共有される。したがって、上述のオリゴ糖断片におけるＯ−ポリ−，オリゴ糖の一つは、大腸菌Ｏ８およびＯ９、バークホルデリア セパシアＯ２およびＥ、並びにセラチア マルセッセンスＯ２８に対する抗体の検出のために使用されることができる。
本発明のオリゴ糖は、クレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、および／またはＯ５に対する抗体の検出のために免疫学的分析を提供する固体支持体に容易に複合されることができる。前記固体支持体は、修飾固体支持体を提供するために、一般式（Ｉ）のオリゴ糖のアミノ基と、または相互連結分子の官能基Ｙと、反応する傾向がある官能性を、固体支持体表面に示し、一般式（Ｉ）のオリゴ糖のアミノ基と更に反応することができる相互連結分子の官能基Ｘを固体支持体の表面に示す。本発明に係る実施形態において、固体支持体は、マイクロアレイスライドであり、マイクロアレイスライドは、修飾マイクロアレイスライドを提供するために、相互連結分子の官能基Ｙと反応する傾向がある官能性をマイクロアレイスライド表面に示し、相互連結分子の官能基Ｘをマイクロアレイスライド表面に示す。このようなマイクロアレイスライドの例は、コーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）（登録商標）エポキシド被覆スライド、またはコーニング（Ｃｏｒｎｉｎｇ）（登録商標）ＧＡＰＳ（商標）ＩＩ被覆スライドを含むが、これらに制限されない。
好ましい実施形態において、固体支持体は、一般式（Ｉ）のオリゴ糖のアミノ基、および好ましくは、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）活性化エステルと反応する傾向がある官能性を固体支持体の表面上に示すマイクロアレイスライドである。このようなマイクロアレイスライドは、例えば、コードリンク（ＣｏｄｅＬｉｎｋ）（登録商標）ＮＨＳスライドである。
［図面の説明］
クレブシエラ ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、およびＯ５ ＬＰＳ Ｏ−多糖の繰り返しユニットの化学構造を示す。 本発明に係る相互連結分子の官能基Ｘの例を示す。 本発明に係る相互連結分子の官能基Ｘの例を示す。 本発明のＣＲＭ１９７複合体を示す。 ２１＊−ＣＲＭ１９７の構造を示す。 ６９＊−ＣＲＭ１９７の構造を示す。 免疫付与実験において使用され、１０％ポリアクリルアミドゲルを用いて分析される糖複合体（２．５μｇ／ウェル）２１＊−ＣＲＭ１９７および６９＊−ＣＲＭ１９７のＳＤＳ−ＰＡＧＥを示す。 ＫＰＣ糖複合体２１＊−ＣＲＭ１９７および６９＊−ＣＲＭ１９７のＳＥＣクロマトグラムを示す。 ２１＊−ＣＲＭ１９７および６９＊−ＣＲＭ１９７製剤を用いて免疫性を与えられたマウス（ｎ＝６）からの０日および３５日のプール血清のＥＬＩＳＡ力価を示す。２１＊−ＣＲＭ１９７および６９＊−ＣＲＭ１９７製剤における血清は、対応するＯ−抗原ＢＳＡ複合体２１＊−ＢＳＡおよび６９＊−ＢＳＡに対して試験された。両方の場合において、血清は、１％ＢＳＡ−ＰＢＳを用いて１：１００、１：１０００および１：１０，０００に希釈された。希釈された血清（１００μＬ）を、０．５μｇの対応するＢＳＡ複合体を用いて被覆したマイクロタイタープレートのウェル毎に加えた。１：１００００に希釈されたＨＲＰ結合ヤギ抗−マウス二次抗体を用いて検出を行い、ＴＭＢ基質を用いて発色させた。吸光度を４５０ｎｍで測定し、データをグラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍ）ソフトウェアを用いてプロットした。 ６９＊−ＣＲＭ１９７製剤を用いて免疫付与されたマウス（ｎ＝６）からの０日および３５日のプール血清の交差反応性を示す。６９＊−ＣＲＭ１９７製剤における血清は、対応する株、すなわち、ＬＰＳ（Ｏ５）から単離されたＬＰＳに対して試験された。血清は、１％ＢＳＡ−ＰＢＳを用いて１：２００に希釈された。希釈された血清（１００μＬ）を、１．０μｇの対応するＬＰＳを用いて被覆したマイクロタイタープレートのウェル毎に加えた。１：１００００に希釈されたＨＲＰ結合ヤギ抗−マウス二次抗体を用いて検出を行い、ＴＭＢ基質を用いて発色させた。吸光度を４５０ｎｍで測定し、データをグラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍ）ソフトウェアを用いてプロットした。 ６９＊−ＣＲＭ１９７製剤を用いて免疫性を与えられたウサギ（ｎ＝４）からの０日、７日、２１日、および３５日のプール血清のＥＬＩＳＡ力価を示す。６９＊−ＣＲＭ１９７製剤における血清は、対応するＯ−抗原ＢＳＡ複合体６９＊−ＢＳＡに対して試験された。血清は、１％ＢＳＡ−ＰＢＳを用いて１：１０００、および１：１０，０００に希釈された。希釈された血清（１００μＬ）を、０．５μｇの対応する６９＊−ＢＳＡを用いて被覆したマイクロタイタープレートのウェル毎に加えた。１：１００００に希釈されたＨＲＰ結合ヤギ抗−ウサギ二次抗体を用いて検出を行い、ＴＭＢ基質を用いて発色させた。吸光度を４５０ｎｍで測定し、データをグラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍ）ソフトウェアを用いてプロットした。 ６９＊−ＣＲＭ１９７製剤を用いて免疫付与されたウサギ（ｎ＝４）からの０日および３５日のプール血清の交差反応性を示す。６９＊−ＣＲＭ１９７製剤における血清は、異なるＫＰＣ株＃１〜＃４から単離されたＬＰＳに対して試験された。両方の場合において、血清は、ＬＰＳ（Ｏ１）、商業用ＬＰＳ（Ｏ２ａ，ｃ）、ＬＰＳ（Ｏ２ａ）、ＬＰＳ（Ｏ５）、およびＬＰＳ（Ｇａｌ ＩＩＩ）に対して試験された。血清は、１％ＢＳＡ−ＰＢＳを用いて１：２００に希釈され、および１００μＬの希釈された血清を、１．０μｇの対応するＬＰＳを用いて被覆したマイクロタイタープレートのウェル毎に加えた。１：１００００に希釈されたＨＲＰ結合ヤギ抗−ウサギ二次抗体を用いて検出を行い、ＴＭＢ基質を用いて発色させた。吸光度を４５０ｎｍで測定し、データをグラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍ）ソフトウェアを用いてプロットした。
［実施例］
［Ａ．化学合成］
一般情報：
商業用等級溶媒を、特に明記しない限り使用した。乾燥溶媒を、水乾燥溶媒システム（Ｗａｔｅｒｓ Ｄｒｙ Ｓｏｌｖｅｎｔ Ｓｙｓｔｅｍ）から得た。クロマトグラフィーのための溶媒を、使用する前に蒸留した。敏感反応を、熱−乾燥ガラス製品中で、アルゴン雰囲気下で行った。分析的薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を、０．２５ｍｍ厚のシリカゲルでプレコートされたキエセルゲル（Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ）６０ Ｆ２５４ガラス
プレートで行った。スポットを、バニリン溶液（９５％ＥｔＯＨ中に、６％（ｗ／ｖ）バニリンおよび１０％（ｖ／ｖ）硫酸を有する）またはハネシアン（Ｈａｎｅｓｓｉａｎ’ｓ）染色（水中に、５％（ｗ／ｖ）モリブデン酸アンモニウム、１％（ｗ／ｖ）硫酸セリウム（ＩＩ）、および１０％（ｖ／ｖ）硫酸を有する）を用いて染色することによって可視化した。シリカカラムクロマトグラフィーをフルカ（Ｆｌｕｋａ） キエセルゲル６０（２３０〜４００メッシュ）で行った。
１Ｈ、１３Ｃ、および二次元ＮＭＲスペクトルを、２９６Ｋでバリアン（Ｖａｒｉａｎ）４００−ＭＲスペクトロメーターを用いて測定した。化学シフト（ｄ）は、各残留溶媒ピーク（ＣＤＣｌ３：１Ｈ ＮＭＲでｄ７．２６、および１３Ｃ ＮＭＲで７７．１６；ＣＤ３ＯＤ：１Ｈ ＮＭＲでｄ３．３１、および１３Ｃ ＮＭＲで４９．１５）に関連して１００万分の１（ｐｐｍ）で報告される。次の略語は、ピーク多重度を示すために使用される：ｓ 一重項；ｄ 二重項；ｄｄ 二重項の二重項（ｄｏｕｂｌｅｔ ｏｆ ｄｏｕｂｌｅｔｓ）；ｔ 三重項；ｄｔ 三重項の二重項（ｄｏｕｂｌｅｔ ｏｆ ｔｒｉｐｌｅｔｓ）；ｑ 四重項；ｍ 多重項。カップリング定数（Ｊ）は、ヘルツ（Ｈｚ）で報告される。旋光度（ＯＲ）測定を、シュミット＆ヘンシュ（Ｓｃｈｍｉｄｔ＆Ｈａｅｎｓｈ） ウニポル（ＵｎｉＰｏｌ）Ｌ１０００偏光計を用いてλ＝５８９ｎｍで、括弧に記述される溶媒中でｇ／１００ｍＬで表される濃度（ｃ）で行った。高分解能質量分析（ＨＲＭＳ）は、ベルリン自由大学の質量分析中核施設で、アジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）６２１０ ＥＳＩ−ＴＯＦ質量分析計を用いて行われた。赤外線（ＩＲ）スペクトルは、出願人の施設でパーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）１００ ＦＴＩＲ分光計を用いて測定された。
［略語］
ＡｃＯＨ 酢酸
Ａｌｌｏｃ アリルオキシカルボニル
ａｑ．水溶液
ＢＨ３ ボラン
ＢＢｒ３ 三臭化ホウ素
Ｂｏｃ ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル
ｂｒ． ブロード
ＣＡＳ ＣＡＳ登録番号（ＣＡＳ＝ケミカル アブストラクツ サービス）
ＣＨＣｌ３ クロロホルム
ｃＨｅｘ シクロヘキサン
ｄ 二重項
ｄｄ 二重項の二重項
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＥＡＤ ジエチルアゾジカルボキシレート
ＤＩＰＥＡ Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル−エチルアミン
ＤＭＥ ジメトキシエタン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＤＰＰＡ ジフェニルホスホリルアジド
ＥＤＣ・ＨＣｌ Ｎ１−（（エチルイミノ）メチレン）−Ｎ３，Ｎ３−ジメチルプロパン−１，３−ジアミンヒドロクロリド
ＥＳ 電気スプレー
Ｅｔ２Ｏ ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ｈ 時間
ＨＣｌ 塩酸
Ｈ２Ｏ 水
ＨＯＢｔ．Ｈ２Ｏ １Ｈ−ベンゾ［ｄ］［１，２，３］トリアゾール−１−オール水和物Ｋ２ＣＯ３ 炭酸カリウム
ｍ 多重項
ＭｅＣＮ アセトニトリル
ＭｅＯＨ メタノール
ＭｅＩ ヨウ化メチル
ＭｇＳＯ４ 硫酸マグネシウム
ｍｉｎ 分
ＭＳ 質量分析
Ｎａ２ＣＯ３ 炭酸ナトリウム
ＮａＣＮＢＨ３ シアノ水素化ホウ素ナトリウム
ＮａＨＣＯ３ 炭酸水素ナトリウム
ＮａＨ 水素化ナトリウム
ＮａＯＨ 水酸化ナトリウム
Ｎａ２ＳＯ４ 硫酸ナトリウム
ＮＣＳ Ｎ−クロロスクシンイミド
ＮＩＳ Ｎ−ヨードスクシンイミド
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＰＢＳ リン酸緩衝生理食塩水
Ｐｄ／Ｃ パラジウム／炭素
ＰＰｈ３ トリフェニルホスフィン
ｑ 四重項
ｒｔ 室温
ｓ 一重項
ｓａｔ． 飽和
ｓｅｐ 七重項
ｔ 三重項
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴｓＯＨ トシル酸
Ｗｔ 重量
実施例１：単糖構成要素の合成
化合物１＊
化合物１＊を、Ｃａｒｂ．Ｒｅｓ．，２０１０，３４５，１０，１３１６−１３２３に記述される手順に従って調製した。
化合物２＊
化合物２＊を、Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ−Ａ Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１０，１６（４４），１３１６３−１３１７５に記述される手順に従って調製した。
化合物３＊
化合物３＊を、Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２０１８，（１６）１３，２２７７−２２８８に記述される手順に従って調製した。
化合物４＊
化合物４＊を、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２０１２，７７（１），１０８−１２５に記述される手順に従って調製した。
化合物５＊
化合物４＊（２ｇ，３．３０ｍｍｏｌ）を、無水ＤＣＭ（３３ｍｌ）に溶解した。臭化ベンジル（１．４ｇ，８．２４ｍｍｏｌ）およびＡｇ２Ｏ（７．６４ｇ，３３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩、激しく攪拌した。反応物はセライトに通してろ過し、減圧下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物をアイソリュート（ｉｓｏｌｕｔｅ）（登録商標）でチャージし、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）における自動精製システムを用いて精製し、生成物（１．４３ｇ，６２％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ４４Ｈ４０Ｏ６ＳＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は７１９．２４４３、実測値は７１９．２３９０であった。
化合物６＊
化合物６＊を化合物９＊から出発してＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２０１７，１３９（２），１０１１−１０１８に記述される手順に従って調製した：化合物９＊（４００ｍｇ，１．０６８ｍｍｏｌ）を、無水ピリジン（５ｍｌ）に溶解した。ＦｍｏｃＣｌ（４３１ｍｇ，１．６６６ｍｍｏｌ）およびＤＭＡＰ（１９．５８ｍｇ，０．１６０ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩、攪拌した。反応物を、酢酸エチルを用いて希釈し、および飽和ＮａＨＣＯ３、およびブライン用いて洗浄した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４を用いて乾燥させ、溶媒を蒸発させ、粗生成物を得た。粗生成物をアイソリュート（登録商標）でチャージし、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムを用いて精製し、生成物（３６０ｍｇ，５６％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３５Ｈ３２Ｏ７ＳＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は５９７．１９４７、実測値は５９７．１８５７であった。
化合物７＊
化合物６＊（１．７ｇ，２．２７４ｍｍｏｌ）を、ＢＨ３・ＴＨＦ（２７ｍｌ，２７ｍｍｏｌ）に溶解し、ＴＭＳＯＴｆ（０．４１ｍＬ，２．２７４ｍｍｏｌ）を加えた。溶液を室温で１．５時間攪拌した。反応物を、メタノールを用いて（氷／水浴を用いて冷却しながら）クエンチし、減圧下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物をアイソリュート（登録商標）でチャージし、および酢酸エチル／シクロヘキサンを用いた自動精製システムを用いて精製し、生成物（９３０ｍｇ，６１％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ４１Ｈ３８Ｏ７ＳＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は６９７．２２３６、実測値は６９７．２１８８であった。
化合物８＊
化合物７＊（９３０ｍｇ，１．３７ｍｍｏｌ）を、無水ＤＣＭ（１４ｍｌ）に溶解した。臭化ベンジル（５８９ｍｇ，３．４５ｍｍｏｌ）およびＡｇ２Ｏ（３．１９ｇ，１３．７８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、室温で一晩、激しく攪拌した。反応物を、セライト（登録商標）を通してろ過し、減圧下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物をアイソリュート（登録商標）でチャージし、およびシリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムを用いて精製し、生成物８＊（６８０ｍｇ，６５％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ４８Ｈ４４Ｏ７ＳＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は７８７．２７０５、実測値は７８７．２６５３であった。
化合物９＊
化合物９＊を、Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２０１４，２０，３５７８−３５８３に記述される手順に従って調製した。
実施例２：Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ３オリゴ糖の合成
化合物１０＊
無水ＤＣＭ（２．９ｍＬ）中に化合物５＊（５５０ｍｇ，０．７８９ｍｍｏｌ）および５−アジドペンタノール（３０６ｍｇ，２．３６８ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４Åモレキュラーシーブを加え、混合物を室温で３０分間攪拌した。その後、ＮＩＳ（２１３ｍｇ，０．９４７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を−２０℃に冷却した。ＴＭＳＯＴｆ（１４μＬ，０．０７９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１．５時間０℃で攪拌した。反応混合物を、ろ過し、ＤＣＭを用いて洗浄し、ろ液を、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（１５ｍＬ）を用いて洗浄し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、無色の粘性の高いゲルとして生成物１０＊（５１ｍｇ，４９％）を与えた。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ４３Ｈ４５Ｎ３Ｏ７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は７３８．３１５５、実測値は７３８．３１４７であった。
化合物１１＊
ＤＣＭ：ＰＢＳ（２：１，１６．８１ｍＬ）中に化合物１０＊（３６１ｍｇ，０．５０４ｍｍｏｌ）を有する溶液に、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（２２９ｍｇ，１．０１ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で２．５時間攪拌した。反応をＴＬＣ（シクロヘキサン中にＥｔＯＡｃ，２：１）によって観察した。反応を、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍｌ）を用いてクエンチし、ＤＣＭ（２×５０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン（５０ｍＬ）を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ
４で乾燥させ、ろ過し、およびろ液を減圧下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いる自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、無色のオイル状の化合物１１＊（２１０ｍｇ，７２％）を得た。ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３２Ｈ３７Ｎ３Ｏ７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は５９９．２５６３、実測値は５９９．２５５５であった。
化合物１２＊
無水ＤＣＭ（８．４ｍＬ）中に化合物５＊（２７６ｍｇ，０．３９６ｍｍｏｌ）および化合物１１＊（１９０ｍｇ，０．３３０ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を、室温で３０分間攪拌した。その後、ＮＩＳ（８９ｍｇ，０．３９６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を−２０℃に冷却した。ＴＭＳＯＴｆ（６μＬ，０．０３ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１時間０℃で攪拌した。反応混合物をろ過し、ろ液を、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（１５ｍＬ）を用いて洗浄し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥後、層を減圧下で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、濁った粘度が高いゲルとして生成物１２＊（３００ｍｇ，７８％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ７０Ｈ７１Ｎ３Ｏ１３Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１１８４．４８８５、実測値は１１８４．４９０２であった。
化合物１３＊
ＤＣＭ：ＰＢＳ（２：１，８．３ｍＬ）中に化合物１２＊（２９０ｍｇ，０．２９４ｍｍｏｌ）を有する溶液に、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（１１３ｍｇ，０．４９９ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で２．５時間攪拌し、ＴＬＣ（シクロヘキサン中にＥｔＯＡｃ，２：１）によって観察した。反応を、飽和ＮａＨＣＯ３（４０ｍｌ）を用いてクエンチし、ＤＣＭ（２×４０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン（２０ｍＬ）を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、無色のオイルとして化合物１３＊（１３６ｍｇ，５３％）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ５９Ｈ６３Ｎ３Ｏ１３Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１０４４．４２５９、実測値は１０４４．４２５２であった。
化合物１４＊
無水ＤＣＭ（３．８ｍＬ）中に化合物８＊（１３５ｍｇ，０．１７６ｍｍｏｌ）および化合物１３＊（１５０ｍｇ，０．１４７ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を、室温で３０分間攪拌した。その後、ＮＩＳ（４０ｍｇ，０．１７６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を−２０℃に冷却した。ＴＭＳＴＯｆ（２．６μＬ，０．０１５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１．５時間０℃で攪拌した。反応混合物をろ過し、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（１５ｍＬ）を用いて洗浄し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥後、粗生成物を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによって精製し、溶媒の蒸発後、濁った粘度が高いゲルとして生成物１４＊（１８４ｍｇ，７５％）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１０１Ｈ１０１Ｎ３Ｏ２０Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１６９９．６９１０、実測値は１６９９．６８８６であった。
化合物１５＊
ＤＣＭ（２ｍＬ）中に化合物１４＊（１８０ｍｇ，０．１０７ｍｍｏｌ）を有する溶液に、トリエチルアミン（２０８μＬ，１．４９１ｍｍｏｌ）を室温で加え、１時間攪拌した。揮発性物質を減圧下で除去した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、濁った粘度が高いゲルとして生成物１５＊（１３８ｍｇ，８８％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ８５Ｈ９１Ｎ３Ｏ１８Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１４７６．６１９５、実測値は１４７６．６１９８であった。
化合物１６＊
ＭｅＯＨ（０．５Ｍ）中にナトリウムメドキシドを有する溶液（０．０７５ｍＬ，０．３３０ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ：ＴＨＦ（２：１，１．５ｍＬ）の混合液中に化合物１５＊（２４ｍｇ，０．０１６ｍｍｏｌ）を有する溶液に加えた。反応物を同じ温度で２０時間攪拌した。反応物を、Ｈ２Ｏ（２ｍＬ）の添加によってクエンチし、ブライン（５ｍＬ）を用いて希釈した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、および減圧下で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、無色の粘度が高いゲルとして生成物（１８ｍｇ，８８％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ９９Ｈ９０Ｏ２２Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１２６８．５６７１、実測値は１２６８．５８１３であった。
化合物１７＊
化合物１６＊（８．６ｍｇ，６．９０μｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１ｍＬ）、ｔｅｒｔ−ブタノール（１ｍＬ）、および２滴の水の溶媒混合物中に入れた。Ｐｄ／Ｃを加え、２４時間、Ｈ２の７バール圧力、室温で水素化した。反応混合物をＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、残渣をメタノール（６ｍＬ）、（５０％メタノール−水（６ｍＬ））を用いて洗浄した。ろ液を真空下で蒸発させ、粗生成物を得た。粗生成物は１Ｈ ＮＭＲによると純粋であり、試料を回収し、凍結乾燥させ、白色の結晶性固体として化合物１７＊（３．８ｍｇ，９３％）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ２３Ｈ４３ＮＯ１６Ｈ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は５９０．２６９４、実測値は５９０．２６８３であった。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ５．１５（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），５．１１（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．８５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｄｄ，Ｊ＝３．３，１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０６−４．１２（ｍ，２Ｈ），４．０３（ｄｄ，Ｊ＝９．１，３．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８６−３．９７（ｍ，５Ｈ），３．７１−３．８６（ｍ，８Ｈ），３．６１−３．７１（ｍ，２Ｈ），３．５１−３．６１（ｍ，１Ｈ），３．０１（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．６１−１．７８（ｍ，４Ｈ），１．３９−１．５４（ｍ，２Ｈ）。
化合物１８＊
無水ＤＣＭ（１．９４ｍＬ）中に化合物８＊（４３ｍｇ，０．０５６ｍｍｏｌ）および化合物１５＊（６５ｍｇ，０．０４５ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を、室温で３０分間攪拌した。その後、ＮＩＳ（１２ｍｇ，０．０５４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を−２０℃に冷却した。ＴＭＳＴＯｆ（０．８μＬ，４．４７μｍｏｌ）を加え、反応混合物を３５分間、０℃で攪拌した。出発材料がなくなるまでＴＬＣによって反応を観察した。トリエチルアミン（２５０μｌ）を加え、混合物を、１時間にわたって徐々に室温に温めた。反応混合物をろ過し、および飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（１５ｍＬ）を用いて洗浄し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、続いて無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、濁った粘度が高いゲルとして生成物（４６ｍｇ，５４％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１１３Ｈ１１９Ｎ３Ｏ２３Ｈ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は１９０９．８１６６、実測値は１９０９．８１６０であった。
化合物１９＊
無水トルエン（０．９ｍＬ）および無水ジオキサン（０．３ｍＬ）の混合物中に化合物３＊（１６．８ｍｇ，０．０２６ｍｍｏｌ）および化合物１８＊（２８ｍｇ，０．０１５ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を、室温で１時間攪拌した。その後、ＮＩＳ（４ｍｇ，０．０１８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を−２０℃に冷却した。ＴＭＳＴＯｆ（０．２７μＬ，１．４８４μｍｏｌ）を加え、反応混合物を２時間攪拌し、室温に温めさせた。反応混合物をろ過し、および飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（１５ｍＬ）を用いて洗浄し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、続いて無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、濁った粘度が高いゲルとして生成物（３２ｍｇ，８９％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１４７Ｈ１５１Ｎ３Ｏ２９Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２４４５．０３３１、実測値は２４４５．９９５１であった。
化合物２０＊
ＭｅＯＨ中にナトリウムメトキシドを有する溶液（２５％ｗ／ｗ）（０．０５１ｍＬ，０．２２３ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ：ＴＨＦ（２：１，１．５ｍＬ）の混合物中に五糖１９＊（２７ｍｇ，０．０１１ｍｍｏｌ）を有する溶液に加えた。反応物を同じ温度で１６時間攪拌した。反応物をＨ２Ｏ（３ｍＬ）の添加によってクエンチし、ブライン（５ｍＬ）を用いて希釈した。反応混合物はＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、無色粘度が高いゲルとして生成物（１７ｍｇ，７２％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１２６Ｈ１３９Ｎ３Ｏ２６Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２１３３．９５７８、実測値は２１３３．９５１７であった。
化合物２１＊
化合物２０＊（１７ｍｇ，８．０５μｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１ｍＬ）、ｔｅｒｔ−ブタノール（１ｍＬ）、および２滴の水の溶媒混合物中に入れた。Ｐｄ／Ｃを加え、２４時間、Ｈ２バルーン下、室温で水素化した。反応混合物をＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、残渣をメタノール（６ｍＬ）、（５０％メタノール−水（６ｍＬ））を用いて洗浄した。ろ液を真空下で蒸発させ、粗生成物を得た。１Ｈ ＮＭＲ分析は、反応の完結および生成物の存在を示した。したがって、粗生成物を、水（３ｍＬ×２，ｆｒ１）、２０％アセトニトリル−水（３ｍＬ×２，ｆｒ２）、およびアセトニトリル（３ｍＬ，ｆｒ３）を用いて、Ｃ１８セッパック（Ｓｅｐａｋ）カラムに通して精製した。全ての分画を凍結し、
２４時間凍結乾燥させ、化合物２１＊（白色固体，６．４ｍｇ，８７％）の一つの純粋な分画ｆｒ１、および２つの純粋でない分画である白色のフワフワとした固体（ｆｒ２，０．４ｍｇ）、白色のフワフワとした固体（ｆｒ３，０．６ｍｇ）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３５Ｈ６３ＮＯ２６Ｈ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は９１４：３７１７、実測値は９１４：３７２５であった。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ５．３５（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），５．２８（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．０８（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．０２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．８２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．２０（ｄｄ，Ｊ＝３．３，１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０２−４．１１（ｍ，４Ｈ），３．９２−４．０１（ｍ，３Ｈ），３．８０−３．９２（ｍ，８Ｈ），３．５０−３．８０（ｍ，１８Ｈ），２．９３−３．０４（ｍ，２Ｈ），１．５８−１．７６（ｍ，４Ｈ），１．３７−１．５８（ｍ，２Ｈ）。
化合物２２＊
化合物２２＊を、化合物５＊およびアジドエタノールから出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物２３＊
化合物２３＊を、化合物５＊およびアジドデカノールから出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物２４＊
化合物２４＊を、化合物５＊および２−（２−アジドエトキシ）エタノールから出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物２５＊
化合物２５＊を、化合物５＊および３−アジド−２，２−ジフルオロプロパノールから出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物２６＊
化合物２６＊を、化合物５＊および対応するアジドアルコールから出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物２７＊
化合物２７＊を、化合物５＊および対応するアジドアルコールから出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物２８＊
化合物２８＊を、化合物５＊および対応するＳ−ベンジルチオアルコールから出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物２９＊
化合物２９＊を、化合物５＊および５−ヘキサノールから出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物３０＊
化合物３０＊を、化合物５＊および１１−アジド−３，６，９−トリオキサウンデカノールから出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物３１＊
化合物３１＊を、化合物５＊およびアジド−ＰＥＧ７−アルコールから出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物３２＊
化合物３２＊を、化合物５＊および５−ベンジルオキシペンタノールから出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物３３＊
化合物３３＊を、化合物５＊および１２−ベンジルオキシデカノールから出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物３４＊
化合物３４＊を、化合物５＊およびメチル６−ヒドロキシデカン酸から出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物３４ａ＊
化合物３４ａ＊を、化合物５＊およびメチル６−ヒドロキシデカン酸から出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物３５＊
化合物３５＊を、化合物５＊および１，２−ジベンジルグリセロール、または化合物５＊およびアセトニド保護グリセロールから出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物３６＊
化合物３６＊を、化合物５＊および２−（クロロエトキシ）エタノールから出発して化合物２１＊と同様に調製した。
化合物３７＊
化合物３７＊を、化合物５＊および４−ペンテン−１−オールからから出発して化合物２１＊と同様に調製した。
実施例３：Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ５三糖類の合成
化合物３８＊
無水トルエン（１１．４ｍＬ）と無水ジオキサン（３．７６ｍＬ）との混合物中に化合物３＊（４９０ｍｇ，０．７５８ｍｍｏｌ）および５−アジドプロパノール（２９４ｍｇ，２．２７３ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を室温で３０分間攪拌した。その後、ＮＩＳ（２０５ｍｇ，０．９０９ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を０℃に冷却した。ＴｆＯＨ（１１．４ｍｇ，０．０７６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を２時間０℃で攪拌した。反応混合物をろ過し、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（２５ｍＬ）を用いて洗浄し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×４０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２５ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、無色の粘性の高いゲルとして生成物３８＊（４２０ｍｇ，８３％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３９Ｈ４３Ｎ３Ｏ７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は６８８．２９９９、実測値は６８８．３００９であった。
化合物３９＊
ＭｅＯＨ中にナトリウムメトキシドを有する溶液（２５％ｗ／ｗ）（０．４１ｍＬ，１．８０２ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ：ＴＨＦ（２：１，１２ｍＬ）の混合液中に単糖３８＊
（４００ｍｇ，０．６０１ｍｍｏｌ）有する溶液に加えた。反応を、２０時間同じ温度で攪拌した。反応を、Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ）の添加によってクエンチし、ブライン（２０ｍＬ）を用いて希釈した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×６０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、無色粘性の高いゲルとして生成物（３００ｍｇ，８９％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３２Ｈ３９Ｎ３Ｏ６Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は５８４．２７３７、実測値は５８４．２７３８であった。
化合物４０＊
無水トルエン（１０ｍＬ）と無水ジオキサン（３．３ｍＬ）との混合物中に化合物３＊（３５５ｍｇ，０．５４８ｍｍｏｌ）および化合物３９＊（２８０ｍｇ，０．４９９ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を室温で３０分間攪拌した。その後、ＮＩＳ（１３５ｍｇ，０．５９８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を０℃に冷却した。ＴｆＯＨ（７．５ｍｇ，０．０５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１時間、０℃で攪拌した。反応混合物をろ過し、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（１５ｍＬ）を用いて洗浄し、およびＣＨ２Ｃｌ２（２×２５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、続いて無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、濁った粘度の高いゲルとして生成物（３５０ｍｇ，６４％）、および出発化合物３９＊（６２ｍｇ，２２％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ６６Ｈ７１Ｎ３Ｏ７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１１２０．４９３５、実測値は１１２０．４９２２であった。
化合物４１＊
ＭｅＯＨ中にナトリウムメトキシドを有する溶液（２５％ｗ／ｗ）（０．８ｍＬ，３．１９ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ：ＴＨＦ（２：１，７．５ｍＬ）の混合物中に化合物４０＊（３５０ｍｇ，０．３１９ｍｍｏｌ）を有する溶液に加えた。反応を、２０時間同じ温度で攪拌した。反応を、Ｈ２Ｏ（１５ｍＬ）の添加によってクエンチし、ブライン（２０ｍＬ）を用いて希釈した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×６０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、無色粘性の高いゲルとして生成物（２７８ｍｇ，８８％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ５９Ｈ６７Ｎ３Ｏ１１Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１０１６
．４６７３、実測値は１０１６．４６８６であった。
化合物４２＊
無水ＤＣＭ（１１ｍＬ）中に化合物２＊（１８０ｍｇ，０．３０４ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を、室温で３０分間攪拌させた。その後、１−（フェニルスルフィニル）ピペリジン（６９．７ｍｇ，０．３３３ｍｍｏｌ）および２，４，６−トリ−ｔｅｒｔ−ブチルピリミジン（１５０ｍｇ，０．６０６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を−６５℃に冷却し、３０分間攪拌した。無水トリフリック（Ｔｒｉｆｌｉｃ）（６１μＬ，０．３６２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を２０分間−６５℃で攪拌した。反応混合物を、その後−７８℃に冷却し、ＤＣＭ（５ｍＬ）中に化合物４１＊（２７５ｍｇ，０．２７７ｍｍｏｌ）を有する溶液を滴下し、６時間、−７８℃で攪拌し、その後１時間にわたって０℃に温めた。反応混合物を、ろ過し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２５ｍＬ）を用いて洗浄し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×３５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、濁った粘度が高いゲルとして生成物（２２０ｍｇ，５４％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ９９Ｈ９５Ｎ３Ｏ１６Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１４９６．６６１０、実測値は１４９６．６６２３であった。
化合物４３＊
化合物４２＊（８ｍｇ，５．９９μｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１ｍＬ）、ｔＢｕＯＨ（１ｍＬ）、および２滴の水の溶媒混合物中に入れた。Ｐｄ／Ｃを加え、Ｈ２バルーン下、室温で水素化した。反応混合物をＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、残渣をメタノール（６ｍＬ）、（５０％メタノール−水（６ｍＬ））を用いて洗浄した。ろ液を真空下で蒸発させ、粗生成物を得た。粗生成物は１Ｈ ＮＭＲによると純粋であり、試料を回収し、凍結乾燥させ、白色結晶性固体（３．５３ｍｇ，定量的）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ２３Ｈ４３ＮＯ１６Ｈ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は５９０．２６６０、実測値は５９０．２８１４であった。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ２Ｏ）δ５．１２（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．０７（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．７７（ｓ，１Ｈ），４．２８（ｄｄ，Ｊ＝３．
４，１．８Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ，１Ｈ），３．８１−４．００（ｍ，６Ｈ），３．４８−３．８１（ｍ，１１Ｈ），３．３６（ｄｄｄ，Ｊ＝９．４，６．７，２．３Ｈｚ，１Ｈ），２．９８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．５８−１．７４（ｍ，４Ｈ），１．３６−１．５１（ｍ，２Ｈ）。
化合物４４＊
化合物４４＊を、化合物３＊およびアジドエタノールから出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物４５＊
化合物４５＊を、化合物５＊およびアジドデカノールから出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物４６＊
化合物４６＊を、化合物５＊および２−（２−アジドエトキシ）エタノールから出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物４７＊
化合物４７＊を、化合物５＊および３−アジド−２，２−ジフルオロプロパノールから出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物４８＊
化合物４８＊を、化合物５＊および対応するアジドアルコールから出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物４９＊
化合物４９＊を、化合物５＊および対応するアジドアルコールから出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物５０＊
化合物５０＊を、化合物５＊および対応するＳ−ベンジルチオアルコールから出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物５１＊
化合物５１＊を、化合物５＊および５−ヘキサノールから出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物５２＊
化合物５２＊を、化合物５＊および１１−アジド−３，６，９−トリオキサウンデカノールから出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物５３＊
化合物５３＊を、化合物５＊およびアジド−ＰＥＧ７−アルコールから出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物５４＊
化合物５４＊を、化合物５＊およ５−ベンジルオキシペンタノールから出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物５５＊
化合物５５＊を、化合物５＊および１２−ベンジルオキシデカノールから出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物５６＊
化合物５６＊を、化合物５＊およびメチル６−ヒドロキシデカン酸から出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物５６ａ＊
化合物５６ａ＊を、化合物５＊およびメチル６−ヒドロキシデカン酸から出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物５７＊
化合物５７＊を、化合物５＊および１，２−ジベンジルグリセロールから出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物５８＊
化合物５８＊を、化合物５＊および２−（クロロエトキシ）エタノールから出発して化合物４３＊と同様に調製した。
化合物５９＊
化合物５９＊を、化合物５＊および４−ペンテン−１−オールから出発して化合物４３＊と同様に調製した。
実施例４：Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ５六糖類の合成
化合物６０＊
ＤＣＭ：ＰＢＳ（２：１，７．４ｍＬ）中に化合物４２＊（２２０ｍｇ，０．１４９ｍｍｏｌ）を有する溶液に、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（６７．７ｍｇ，０．２９８ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で４時間攪拌し、ＴＬＣ（シクロヘキサン中にＥｔＯＡｃ，２：１）によって観察した。飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍｌ）を用いてクエンチし、ＤＣＭ（２×５０ｍＬ）を用いて反応を抽出した。合わせた有機層を、ブライン（２５ｍＬ）を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、無色のオイルとして化合物６０＊（１２５ｍｇ，６３％）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ７９Ｈ８７Ｎ３Ｏ１６Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１３５６
．５９８４、実測値は１３５６．５９８３であった。
化合物６１＊
ＤＣＭ（３ｍＬ）中に化合物８＊（１６０ｍｇ，０．２０９ｍｍｏｌ）有する溶液に、トリエチルアミン（０．２ｍＬ，１．４３５ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を、室温で１時間攪拌した。反応混合物を、減圧下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、無色のオイル（９６ｍｇ，８５％）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３３Ｈ３４Ｏ５ＳＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は５６６．２０２５、実測値は５６６．２０６５であった。
化合物６２＊
ＤＣＭ（１０ｍＬ）とＨ２Ｏ（１ｍＬ）との混合液中に化合物６１＊（１．０５ｇ，１．６２３ｍｍｏｌ）を有する溶液に、Ｎ−ヨードスクシンイミド（３６５ｍｇ，１．６２３ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸（１２４μＬ，１．６２３ｍｍｏｌ）を０℃で加え、２時間攪拌した。反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３（５０ｍＬ）水溶液およびＤＣＭ（５０ｍＬ）の間で分離した。有機層を、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（５０ｍＬ）を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。粗生成物をＥｔＯＡｃおよびシクロヘキサンを溶媒として用いてカラムクロマトグラフィーによって精製し、無色のオイルとして所望の生成物（７３０ｍｇ，８１％）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３４Ｈ３４Ｏ７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は５７７．２２０２、実測値は５７７．２２０８であった。
化合物６３＊
Ｃｓ２ＣＯ３（１４１ｍｇ，０．４３３ｍｍｏｌ）および２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニル−アセトイミドイルクロリド（１３５ｍｇ，０．６４９ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（２．２ｍＬ）中にラクトール６２＊（１２０ｍｇ，０．２１６ｍｍｏｌ）を有する溶液に加えた。反応混合物を室温で攪拌し、ＴＬＣによって観察した。２時間後、出発材料は消費され、反応物をセライト（登録商標）に通してろ過し、ＤＣＭ（１０ｍＬ）を用いて洗浄した。溶媒を蒸発させ、粗生成物（１５７ｍｇ，定量的）を、更なる精製なしで次
のステップにおいて使用した。
化合物６４＊
無水トルエン（４．６ｍＬ）およびジオキサン（１．５ｍＬ）の混合液中に化合物６３＊（１５７ｍｇ，０．２１６ｍｍｏｌ）および化合物６１＊（１１７ｍｇ，０．２１６ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を、室温で３０分間攪拌した。ＴＭＳＯＴｆ（３．９２μＬ，０．０２２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を−１０℃で１時間攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２５ｍＬ）を用いて反応をクエンチし、ＤＣＭ（２×２０ｍＬ）を用いて抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、粗生成物を得るために蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃおよびシクロヘキサンを溶媒として用いてカラムクロマトグラフィーによって精製し、無色のオイルとして所望の生成物（１９３ｍｇ，８３％）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ６７Ｈ６６Ｏ１１ＳＮａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１１０１．４２２４、実測値は１１０１．４０７３であった。
化合物６５＊
無水トルエン（４．５ｍＬ）および無水ジオキサン（１．５ｍＬ）の混合液中に化合物６４＊（１１６ｍｇ，０．１０８ｍｍｏｌ）および化合物６０＊（１２０ｍｇ，０．０９０ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を、室温で３０分間攪拌した。その後、ＮＩＳ（２６．３ｍｇ，０．１１７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を０℃に冷却した。ＴｆＯＨ（１．３５ｍｇ，８．９９μｍｏｌ）を加え、反応混合物を３時間攪拌し、室温に徐々に温めた。反応混合物をろ過し、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（１５ｍＬ）を用いて洗浄し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄した。無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、濁った粘度が高いゲルとして生成物（１１０ｍｇ，５３％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１４０Ｈ１４７Ｎ３Ｏ２７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２３
２６．０１５３、実測値は２３２６．０１７７であった。
化合物６６＊
ＭｅＯＨ中にナトリウムメトキシドを有する溶液（２５％ｗ／ｗ）（０．０５１ｍＬ，０．２３９ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ：ＴＨＦ（２：１，３ｍＬ）の混合液中に五糖類６５＊（１１０ｍｇ，０．０４８ｍｍｏｌ）有する溶液に加えた。反応を、１６時間同じ温度で攪拌した。Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）の添加によって反応をクエンチし、ブライン（１０ｍＬ）を用いて希釈した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×２０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、無色で粘性の高いゲルとして生成物６６＊（９５ｍｇ，９０％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１４０Ｈ１４７Ｎ３Ｏ２７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２２２１．９８９１、実測値は２２２１．９９６０であった。
化合物６７＊
無水ＤＣＭ（２ｍＬ）中に化合物２＊（２３．１６ｍｇ，０．０３９ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を、室温で１０分間攪拌した。その後、１−（フェニルスルフィニル）ピペリジン（８．５９ｍｇ，０．０４１ｍｍｏｌ）および２，４，６−トリ−ｔｅｒｔ−ブチルピリミジン（１８．５５ｍｇ，０．０７５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を−６５℃に冷却し、３０分間攪拌した。無水トリフリック（Ｔｒｉｆｌｉｃ）（７．５５μＬ，０．０４５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を−６５℃で１５分間攪
拌した。反応混合物を、その後、−７８℃に冷却し、ＤＣＭ（１．５ｍＬ）中に化合物６６＊（７５ｍｇ，０．０３４ｍｍｏｌ）を有する溶液を滴下し、−７８℃で６時間攪拌し、その後、１時間以内で−２５℃に温めた。反応混合物をろ過し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５ｍＬ）を用いて洗浄し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、濁った粘度が高いゲルとして（α／β混合物として）生成物（３５ｍｇ，３８％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１６４Ｈ１７１Ｎ３Ｏ３１Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２７０２．１８２８、実測値は２７０２．１７８３であった。
化合物６８＊
ＤＣＭ（２．５ｍＬ）中に化合物６７＊（３５ｍｇ，０．０１３ｍｍｏｌ）を有する溶液に、エタンチオール（９．６６μＬ，０．１３１ｍｍｏｌ）およびｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１．２４ｍｇ，６．５３μｍｏｌ）を室温で加え、混合物を１．５時間攪拌した。反応混合物を、トリエチルアミン（１ｍＬ）を用いてクエンチし、減圧下で濃縮し、残渣を、ＥｔＯＡｃおよびシクロヘキサンを溶媒として用いたカラムクロマトグラフィーによって精製し、無色のオイルの純粋な所望のβ−異性体（１６ｍｇ，４９％）として所望の生成物を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１５０Ｈ１６３Ｎ３Ｏ３１Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２５２６．１２０２、実測値は２５２６．１１５２であった。
化合物６９＊
化合物６８＊（１５ｍｇ，５．９９μｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１ｍＬ）、ｔＢｕＯＨ（１ｍＬ）、および２滴の水の溶媒混合物中に入れた。Ｐｄ／Ｃを加え、２４時間、Ｈ２バルーン下、室温で水素化した。反応混合物をＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、残渣をメタノール（６ｍＬ）、（５０％メタノール−水（６ｍＬ））を用いて洗浄した。ろ液を真空下で蒸発させ、粗生成物を得た。１Ｈ ＮＭＲ分析は、反応の完結および生成物の存在を示した。したがって、粗生成物を、水（３ｍＬ×２，ｆｒ１）、２０％アセトニトリル−水（３ｍＬ×２，ｆｒ２）、およびアセトニトリル（３ｍＬ，ｆｒ３）を用いて、Ｃ１８セッパック（Ｓｅｐａｋ）カラムに通して精製した。全ての分画を凍結し、２４時間凍結乾燥させ、化合物６９＊（白色固体，５．６４ｍｇ，８７％）の一つの純粋な分画ｆｒ１、および２つの純粋でない分画である白色のフワフワとした固体（ｆｒ２，０．２ｍｇ）、白色のフワフワとした固体（ｆｒ３，０．２ｍｇ）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ４１Ｈ７３ＮＯ３１Ｈ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は１０７６．４２４４、実測値は１０７６．４２４５であった。
１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，重水）δ５．３３（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．１４（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ），５．１０（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），５．０６（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．６５−４．６８（ｍ，２Ｈ），４．２７（ｄｔ，Ｊ＝３．２，１．４Ｈｚ，２Ｈ），４．１４−４．２０（ｍ，１Ｈ），４．０９（ｄｄ，Ｊ＝３．４，１．７Ｈｚ，１Ｈ），３．８２−４．０４（ｍ，１２Ｈ），３．４７−３．８２（ｍ，２３Ｈ），３．３２−３．４３（ｍ，２Ｈ），２．９４−３．０２（ｍ，２Ｈ），１．５９−１．７３（ｍ，４Ｈ），１．３５−１．５３（ｍ，２Ｈ）。
実施例５：Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ５九糖類の合成
化合物７０＊
無水トルエン（７．３ｍＬ）およびジオキサン（２．５ｍＬ）の混合液中に化合物６３＊（７２０ｍｇ，０．９７８ｍｍｏｌ）および４−メトキシフェノール（１２１ｍｇ，０．９７８ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を、室温で３０分間攪拌した。ＴＭＳＯＴｆ（１８μＬ，０．０９８ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を−１０℃で１時間攪拌した。反応物を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（３５ｍＬ）を用いてクエンチし、Ｄ
ＣＭ（２×５０ｍＬ）を用いて抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、粗生成物を得るために蒸発させた。残渣をＥｔＯＡｃおよびシクロヘキサンを溶媒として用いたカラムクロマトグラフィーによって精製し、無色のオイルとして所望の生成物（５４０ｍｇ，８４％）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ４１Ｈ４０Ｏ８Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は６８３．２６２１、実測値は６８３．２６４３であった。
化合物７１＊
ＭｅＯＨ中にナトリウムメトキシドを有する溶液（２５％ｗ／ｗ）（０．５２ｍＬ，２．４０６ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ：ＴＨＦ（４：１，７．５ｍＬ）の混合液中にベンゾエート７０＊（５３０ｍｇ，０．８０２ｍｍｏｌ）を有する溶液に加えた。反応を、１６時間同じ温度で攪拌した。Ｈ２Ｏ（３ｍＬ）の添加によって反応をクエンチし、ブライン（１０ｍＬ）を用いて希釈した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、無色の粘性の高いゲルとして生成物（４３０ｍｇ，９６％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ３４Ｈ３６Ｏ７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は５７９．２３５９、実測値は５７９．２３９５であった。
化合物７２＊
無水トルエン（２．３ｍＬ）および無水ジオキサン（０．８ｍＬ）の混合液中に化合物３＊（１００ｍｇ，０．１５５ｍｍｏｌ）および化合物７１＊（８６ｍｇ，０．１５５ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を、室温で３０分間攪拌した。その後、ＮＩＳ（４１．７ｍｇ，０．１８６ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を、−１０℃に冷却した。ＴｆＯＨ（２．３２ｍｇ，０．０１５ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を１時間攪拌し、徐々に室温に温めた。反応混合物をろ過し、飽和Ｎａ２Ｓ２Ｏ３溶液（２５ｍＬ）を用いて洗浄し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×３０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（１５ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、濁った粘度の高いゲルとして生成物（１３２ｍｇ，７８％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ６６Ｈ６８Ｏ１３Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１１１５．４５５８、実測値は１１１５．４５９５であった。
化合物７３＊
ＭｅＯＨ中にナトリウムメトキシドを有する溶液（２５％ｗ／ｗ）（０．０７４ｍＬ，０．３４３ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ：ＴＨＦ（４：１，２．３ｍＬ）の混合液中にベンゾエート７２＊（１２５ｍｇ，０．１１４ｍｍｏｌ）を有する溶液に加えた。反応を、１６時間同じ温度で攪拌した。Ｈ２Ｏ（３ｍＬ）の添加によって反応をクエンチし、ブライン（２５ｍＬ）を用いて希釈した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×２５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、無色の粘度の高いゲルとして生成物（１０８ｍｇ，９５％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ６１Ｈ６４Ｏ１２Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１０１１．４２９５、実測値は１０１１．４３２６であった。
化合物７４＊
無水ＤＣＭ（６ｍＬ）中に化合物２＊（１９７ｍｇ，０．３３４ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を、室温で３０分間攪拌した。その後、１−（フェニルスルフィニル）ピペリジン（７６ｍｇ，０．３６５ｍｍｏｌ）および２，４，６−トリ−ｔｅｒｔ−ブチルピリミジン（１６５ｍｇ，０．６６４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を−６５℃に冷却し、３０分間攪拌した。無水トリフリック（Ｔｒｉｆｌｉｃ）（６７μＬ，０．３９７ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を−６５℃で２０分間攪拌した。反応混合物を、その後、−７８℃に冷却し、ＤＣＭ（４ｍＬ）中に化合物７３＊（３００ｍｇ，０．３０３ｍｍｏｌ）を有する溶液を滴下し、−７８℃で６時間攪拌し、その後、１時間以内で０℃に温めた。反応混合物をろ過し、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２５ｍＬ）を用いて洗浄し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン（１０ｍＬ）を用いて洗浄し、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動精製システムによる精製は、溶媒の蒸発後、濁った粘度が高いゲルとして生成物（３００ｍｇ，６７％）を与えた。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ９２Ｈ９５Ｏ１７Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１４９２．６２６６、実測値は１４９２．６２３２であった。
化合物７５＊
アセトニトリル（８．７ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１．１ｍＬ）の混合液中に、三糖類７４＊（２８９ｍｇ，０．１９７ｍｍｏｌ）を有する溶液に、硝酸セリウムアンモニウム（１７２ｍｇ，０．３１５ｍｍｏｌ）を０℃で加え、２時間攪拌した。反応混合物をＴＬＣによって観察し、硝酸セリウムアンモニウムの他の部分（１７２ｍｇ，０．３１５ｍｍｏｌ）を加え、２時間攪拌した。反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２５ｍＬ）とＤＣＭ（３５ｍＬ）との間に分離した。水層を、ＤＣＭ（２５ｍＬ）を用いて抽出し、合わせた有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させ、粗生成物を得た。残渣を、ＥｔＯＡｃおよびシクロヘキサンを溶媒として用いたカラムクロマトグラフィーによって精製し、淡黄色のオイルとして所望の生成物（１２５ｍｇ，４６％）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ８５Ｈ８６Ｏ１６Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は１３８５．５８１４、実測値は１３８５．５８８５であった。
化合物７６＊
Ｃｓ２ＣＯ３（３８．２ｍｇ，０．１１７ｍｍｏｌ）および２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−フェニル−アセトイミドイルクロリド（３６．５ｍｇ，０．１７６ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ（８ｍＬ）中にラクトール７５＊（８０ｍｇ，０．０５９ｍｍｏｌ）を有する溶液に加えた。反応混合物を室温で攪拌し、ＴＬＣによって観察した。２時間後、全ての出発材料は消費され、反応物をセライトに通してろ過し、ＤＣＭ（２０ｍＬ）を用いて洗浄した。溶媒を蒸発させ、粗生成物（９０ｍｇ，定量的）を、更なる精製なしで次のステップにおいて使用した。
化合物７７＊
無水トルエン（２ｍＬ）およびジオキサン（０．６６ｍＬ）の混合液中に化合物７６＊（８０ｍｇ，０．０５２ｍｍｏｌ）および化合物６０＊（６９．６ｍｇ，０．０５２ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を、室温で３０分間攪拌した。ＴＭＳＯＴｆ（１μＬ，５．２１μｍｏｌ）を加え、反応混合物を−１０℃で１時間攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２０ｍＬ）を用いて反応物をクエンチし、ＤＣＭ（２×２５ｍＬ）を用いて抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させ、粗生成物を得た。残渣を溶媒としてＥｔＯＡｃおよびシクロヘキサンを用いたカラムクロマトグラフィーによって精製し、無色のオイルとして所望の生成物（７０ｍｇ，５０％）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１６４Ｈ１７１Ｎ３Ｏ３１Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２７０２．１８２８、実測値は２７０２．１８５３であった。
化合物７８＊
ＤＣＭ：ＰＢＳ（２：１，５．１ｍＬ）中に化合物７７＊（６０ｍｇ，０．０２２ｍｍｏｌ）を有する溶液に、２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノン（１０．２ｍｇ，０．０４５ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を室温で２時間攪拌し、ＴＬＣ（シクロヘキサン中にＥｔＯＡｃ，２：１）によって観察した。２，３−ジクロロ−５，６−ジシアノ−１，４−ベンゾキノンの一部（５ｍｇ）を再び加え、混合物を室温で２時間攪拌した。飽和ＮａＨＣＯ３（２５ｍｌ）を用いて反応をクエンチし、ＤＣＭ
（２×２５ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、ブライン（１５ｍＬ）を用いて洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ液を減圧下で濃縮し、粗生成物を得た。粗生成物を、シリカ（酢酸エチル／シクロヘキサン）を用いた自動フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、無色のオイル（３０ｍｇ，６３％）を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ１５３Ｈ１６３Ｎ３Ｏ３１Ｎａ＋［Ｍ＋Ｎａ］＋の計算値は２５６２．１２０２、実測値は２５６２．１２１９であった。
化合物７９＊
無水トルエン（３ｍＬ）およびジオキサン（１ｍＬ）の混合液中に化合物７６＊（３５ｍｇ，０．０２３ｍｍｏｌ）および化合物７８＊（２９ｍｇ，０．０１１ｍｍｏｌ）を有する溶液に、４ÅのＭＳを加え、混合物を、室温で３０分間攪拌した。ＴＭＳＯＴｆ（０．２μＬ，１．１４２μｍｏｌ）を加え、反応混合物を−１０℃で１時間攪拌した。反応物を、飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２０ｍＬ）を用いてクエンチし、ＤＣＭ（２×２５ｍＬ）を用いて抽出した。有機層を、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、蒸発させ、粗生成物を得た。残渣をＥｔＯＡｃおよびシクロヘキサンを溶媒として用いたカラムクロマトグラフィーによって精製し、黄色のオイルとして所望の生成物（２８ｍｇ，６３％）を得た。
ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ：Ｃ２３８Ｈ２４７Ｎ３Ｏ４６Ｈ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は３８８５．７２２、実測値は３８８５．１０５であった。
化合物８０＊
化合物７９＊（６．０ｍｇ，１．４１５μｍｏｌ）を、ＤＣＭ（１ｍＬ）、ｔＢｕＯＨ（１ｍＬ）、および２滴の水の溶媒混合物中に入れた。Ｐｄ／Ｃを加え、２４時間、Ｈ２バルーン下、室温で水素化した。反応混合物をＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、残渣をメタノール（６ｍＬ）、（５０％メタノール−水（６ｍＬ））を用いて洗浄した。ろ液を真空下で蒸発させ、粗生成物を得た。１Ｈ ＮＭＲ分析は、反応の完結および生成物の存在を示した。したがって、粗生成物を、水（３ｍＬ×２，ｆｒ１）、２０％アセトニトリル−水（３ｍＬ×２，ｆｒ２）、およびアセトニトリル（３ｍＬ，ｆｒ３）を用いて、Ｃ１８セッパック（Ｓｅｐａｋ）カラムに通して精製した。全ての分画を凍結し、２４時間凍結乾燥させ、化合物８０＊（白色固体，２．４ｍｇ，９９％）の一つの純粋な分画ｆｒ１、および２つの純粋でない分画である白色のフワフワとした固体（ｆｒ２，０．０３ｍｇ）、白色のフワフワとした固体（ｆｒ３，０．４ｍｇ）、を得た。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ＋）Ｃ５９Ｈ１０３ＮＯ４６Ｈ＋［Ｍ＋Ｈ］＋の計算値は１５６２．５８２９、実測値は１５６２．５８１５であった。
実施例５：Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ３オリゴ糖の自動合成
［一般的な方法および材料］
構成要素を調製するために使用される無水＊溶媒、並びに活性化剤、ＴＭＳＯＴｆおよびキャッピング保存溶液は、溶媒乾燥システム（ＪＣ メイヤー溶媒システムズ（Ｍｅｙｅｒ ｓｏｌｖｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍｓ））から得た。ＨＰＬＣ等級ＤＣＭを洗浄のために使用した。全ての他の洗浄溶媒（ＤＭＦ、ＴＨＦ、ジオキサン、およびＭｅＯＨ）は、試薬等級であった。
構成要素は、トルエン（３×）を用いて共蒸発によって乾燥され、約１〜２時間高真空下で乾燥されている。
全ての合成を、光開裂性リンカーを用いて修飾されたメリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）樹脂（負荷（ｌｏａｄｉｎｇ）＝０．４１ｍｍｏｌ／ｇ）を用いて、０．０１２５ｍｍｏｌのスケールで行った。リンカー負荷された樹脂の構造は次の通りである−
［保存溶液］
活性化溶液：ＤＣＭ＊：ジオキサン＊中に１５０ｍＭ ＮＩＳ／１５ｍＭ ＴｆＯＨ
酸洗浄溶液：ＤＣＭ＊中に６２ｍＭ ＴＭＳＯＴｆ
キャッピング溶液：ＤＣＭ＊中に１０％（ｖ／ｖ）Ａｃ２Ｏ／２％（ｖ／ｖ）ＭｅＳＯ３ピリジン「プレ洗浄」溶液：ＤＭＦ中に１０％（ｖ／ｖ）ピリジン
Ｆｍｏｃ脱保護溶液：ＤＭＦ中に２０％（ｖ／ｖ）ピぺリジン
［自動化モジュール］
［モジュールＡ：］最初の樹脂膨張／合成洗浄の開始
ＤＣＭ、ＤＭＦおよびＴＨＦ（それぞれ、３×、２ｍＬ、２５秒）を用いて樹脂を洗浄し、その後、パルスアルゴンバブリング（ｂｕｂｂｌｉｎｇ）を用いる不定期の混合を用いてＤＣＭ（２ｍＬ）中で３０分間膨張させる。
［モジュールＢ：］６２ｍＭ ＴＭＳＯＴｆを用いた酸洗浄
ＤＣＭ（２ｍＬ）を反応槽に供給し、温度を−２０℃に調節する。ＤＣＭを排水し、他の２ｍＬのＤＣＭに交換し、その後ＴＭＳＯＴｆ溶液（１ｍＬ）を滴下する。混合物を、１．５分間、Ａｒバブリング下でインキュベートし、その後２ｍＬのＤＣＭを用いて２５秒間、排水洗浄する。
［モジュールＣ］：チオグリコシド結合
構成要素ストック、およびグリコシル化パラメーター：
グリコシル化サイクル：
ＤＣＭ（２ｍＬ）を樹脂に加え、温度を活性化温度Ｔ１−２Ｋに設定する。冷却しながら、構成要素溶液を反応槽に供給する。設定温度を、Ｔ１−２Ｋで安定化させた後、１ｍＬの活性化剤溶液を加えることによって反応を開始する。混合をＴ１で５分間維持し、その後、第２の２０分間インキュベーションサイクルを、温度を温度Ｔ２に上げる間に開始する。インキュベーションサイクルが終了すると、反応混合物を流し出し、樹脂をＤＣＭ：ジオキサン １：１（２ｍＬ）およびＤＣＭ（２ｍＬ）を用いてそれぞれ一度洗浄する。モジュールは、２回の付加的なＤＣＭ洗浄（２ｍＬ）を行いながら温度を２５℃に上げることによって終了する。
［モジュールＤ］：キャッピング
樹脂を、ＤＭＦを用いて洗浄し（２×、２５秒）、反応槽の温度を、２５℃に設定した。ＤＭＦ中に１０％ピリジンを有する溶液２ｍＬを、反応槽に供給する。１分後、溶液を流し出し、樹脂を、ＤＣＭを用いて洗浄し（３×、２ｍＬ、２５秒）、その後、４ｍＬのキャッピング溶液を反応槽に供給し、２０分間、アルゴンバブリング下でインキュベートする。サイクルは、反応混合物を流し出し、樹脂を、ＤＣＭを用いて洗浄すること（３×、２ｍＬ、２５秒）によって終了する。
［モジュールＥ］：ＦＭＯＣ脱保護
樹脂を、ＤＭＦを用いて洗浄し（３×、２ｍＬ、２５秒）、反応槽の温度を、２５℃に調節する。２ｍＬのＦＭＯＣ脱保護溶液を、反応槽に供給する。５分後、溶液をＵＶ−センサーに通して流し出し、樹脂を、ＤＭＦ（３×、２ｍＬ）およびＤＣＭ（それぞれ５×、２ｍＬ、６０秒）を用いて洗浄する。反応槽の温度を、次のサイクルの調製において、−２０℃に下げた。
［自動化後ステップ］
［固体支持体からの開裂］
自動合成後、オリゴ糖を一連のフロー光リアクターを用いて固体支持体から開裂した。試料（標的オリゴ糖を用いて負荷された樹脂）を、２０ｍＬのＤＣＭ（アミレンを用いて安定化された、ＬＣ−ＭＳ等級）中に取り上げ、反応装置（波長＝３００ｎｍ）に１．０ｍＬ／分の速度で注入する。全ての樹脂が反応装置内にある場合、新鮮なＤＣＭ（２０ｍＬ）を、光開裂樹脂を回収するために注入する。得られたろ液は真空中で濃縮され、更なる分析および精製に供される。
［精製およびＨＰＬＣ分析］
粗生成物をヘキサン：酢酸エチル１：１中に溶解し、分析的ＨＰＬＣを用いて分析した（ＹＭＣ−ジオール（Ｄｉｏｌ）−３００カラム、１５０×４．６ｍｍ、ＥＬＳＤ検出器およびＤＡＡＤ、２８０ｎｍ）．
方法−（停止時間−６０分）
得られたオリゴ糖のリスト
［液相合成における自動化ステップからの完全に保護されたオリゴ糖における脱保護のための実験手順］
［ベンゾイルおよびアセテート脱保護：］
ＭｅＯＨ中にナトリウムメトキシドを有する溶液（２５％ｗ／ｗ）（３０〜４５ｅｑ．）を、ＭｅＯＨ：ＴＨＦ（２：１）の混合液中にベンゾエート８３＊〜８７＊（１ｅｑ．）を有する溶液に加えた。反応を、同じ温度で１６時間攪拌した。Ｈ２Ｏ（１ｍＬ）の添加によって反応をクエンチし、ブライン（５ｍＬ）を用いて希釈した。反応混合物を、ＥｔＯＡｃ（２×１０ｍＬ）を用いて抽出した。合わせた有機層を、無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。溶媒の蒸発後、粗生成物８３ａ＊〜８７ａ＊を、黄色の粘度が高いゲルとして得て、任意の更なる精製無しで次のステップにおいて使用した。
［ベンジル脱保護：］
８３ａ＊〜８７ａ＊（１ｅｑ．）を、ＤＣＭ（２ｍＬ）、ｔＢｕＯＨ（２ｍＬ）、および２滴の水の溶媒混合物中に入れた。Ｐｄ／Ｃを加え、２４時間、Ｈ２バルーン下、室温で水素化した。反応混合物をＰＴＦＥフィルターに通してろ過し、残渣をメタノール（６ｍＬ）、（５０％メタノール−水（６ｍＬ））を用いて洗浄した。ろ液を真空下で蒸発させ、粗生成物を得た。１Ｈ ＮＭＲ分析は、反応の完結および生成物の存在を示した。したがって、粗生成物を、水（３ｍＬ×２，ｆｒ１）、５０％アセトニトリル−水（３ｍＬ×２，ｆｒ２）、およびアセトニトリル（３ｍＬ，ｆｒ２）を用いて、Ｃ１８セッパック
（Ｓｅｐａｋ）カラムに通して精製した。全ての分画を凍結し、２４時間凍結乾燥させ、化合物８３ｂ＊〜８７ｂ＊の一つの純粋な分画ｆｒ１、および純粋でない分画ｆｒ２を得た。
したがって、六糖類８３ｂ＊、十糖類８４ｂ＊、十二糖類８５ｂ＊、および十五糖類８６ｂ＊を、上記のプロトコルを用いて得ている。同様のプロトコルの後に、完全に脱保護された二十糖類８７ｂ＊を化合物８７ａ＊から達成することができる。
［Ｂ Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ３およびＯ５オリゴ糖の免疫付与研究］
［材料：］
・ＥＬＩＳＡプレート（高結合、ＥＩＡ／ＲＩＡプレート、９６ウェル、低い蒸発蓋を有する平底、会社：コスター（Ｃｏｓｔａｒ）（登録商標）３３６１）
・検出抗体：ヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼ複合体（シグマ（Ｓｉｇｍａ）社、＃Ａ４９１４）およびヤギ抗−マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ペルオキシダーゼ複合体（ディアノバ（Ｄｉａｎｏｖａ）社 コード：１１５−０３５−０６８）
・ブロッキング溶液：ＰＢＳ中に１％ＦＣＳ（ｖ／ｖ）
・抗体希釈液：ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ（ｗ／ｖ）
・洗浄緩衝液：ＰＢＳ＋０．１％Ｔｗｅｅｎ２０（ＰＢＳ−Ｔ）
・現像溶液：１ステップ（Ｓｔｅｐ）（商標）ウルトラ（Ｕｌｔｒａ）ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ現像液（サーモサイエンティフィック（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）社、Ｃａｔ＃：３４０２８）
・停止溶液：２Ｍ硫酸（Ｈ２ＳＯ４）
・プレートリーダー：アントス（Ａｎｔｈｏｓ）ＨＴ２
・ソフトウェア：吸光度測定のためのウィンリード（ＷｉｎＲｅａｄ）２．３６およびデータプロッティングおよび分析のためのグラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ）７
・アルム：水酸化アルミニウムゲルアジュバント（アルヒドロゲル（登録商標）２％）、ブレンタグ（Ｂｒｅｎｎｔａｇ）社、バッチ＃：５４４７ 使用期限：２０２０年２月
・不完全フロイントアジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ）（ＩＦＡ）．インビボジェン（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）社；Ｃａｔ：ｖａｃ−ｉｆａ−１０、バッチ＃：ＩＦＡ−３９−０３；使用期限：２０１９年９月
・クアンチプロ（ＱｕａｎｔｉＰｒｏ）（商標）ＢＣＡ分析キット（ＳＩＧＭＡ）製品：ＱＰＢＣＡ−１ＫＴ；ロット＃：ＳＬＢＲ７４５１Ｖ；Ｐコード：１００２２９６４６４・ミニ−プロティアン（Ｍｉｎｉ−ＰＲＯＴＥＡＮ）（登録商標）ＴＧＸ（商標）ゲル−１０％、１０ウェル（３０μＬ／ウェル）対照 Ｎｒ：６４１７５７０８、
・プレシジョンプラスデュアルカラー（Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ Ｐｌｕｓ Ｄｕａｌ Ｃｏｌｏｒ）、Ｃａｔ：１６１０３７４；対照 Ｎｒ：６４１７９８８９９
・ゲルコード（ＧｅｌＣｏｄｅ）（商標）ブルーセーフタンパク染料（Ｂｌｕｅ Ｓａｆｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔａｉｎ）；サーモサイエンティフィック（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）社；Ｒｅｆ：１８６０９５７；ロット＃：ＴＡ２６０２６６
・クレブシエラ ニューモニエＬＰＳ．シグマ（ＳＩＧＭＡ）−Ｌ４２６８；ロット＃：１１６Ｍ ４０５７Ｖ
［方法：］
［１．細菌株およびＬＰＳ］
ＬＰＳ（Ｏ−抗原）において異なっており、莢膜を有する／有さない、クレブシエラ ニューモニエ（ＫＰＣ）株は、対応するＬＰＳを単離および精製するために使用された。精製されたＬＰＳを、酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬＩＳＡ）における被覆抗原として使用した。Ｏ２ａ，ｃＬＰＳを、シグマ−アルドリッチ社から調達した。
［２．複合糖質の生成および特徴づけ］
ＫＰＣ合成抗原は、免疫付与実験のための担体タンパク質ＣＲＭ１９７に結合される２１＊および６９＊（２１＊−ＣＲＭ１９７および６９＊−ＣＲＭ１９７）、並びに下記の手順に従ったＥＬＩＳＡのための被覆抗原としてのウシ血清アルブミンに結合される２１＊および６９＊（ＢＳＡ；（２１＊−ＣＲＭ１９７および６９＊−ＣＲＭ１９７））であった。
［一般的な結合プロトコル］
［ステップ１：ＰＮＰ−エステル合成］
化合物２１＊または６９＊（１ｅｑ）を、ＤＭＳＯまたはＤＭＳＯ−Ｈ２Ｏに、室温で、８ｍＬバイアル中で溶解した。活性化されたビス−（４−ニトロフェニル）アジペート（２０ｅｑ）を加え、５分間攪拌した。トリエチルアミン（５０ｅｑ）を加え、反応混合物を室温で３〜５時間攪拌することを可能にした。反応混合物を、液体窒素を用いて凍結し、その後１８時間凍結乾燥させ、淡黄色の粗生成物を過剰の試薬と共に得た。粗生成物を、十分な量のＣＨＣｌ３、続いてＤＣＭを用いて完全に洗浄し、過剰の試薬を除去した。固体のパラ−ニトロフェニル（ＰＮＰ）エステルを乾燥させ、次のステップのために用いた。
［ステップ２：タンパク質への結合］
結合手順：ＮａＰｉ緩衝液中に０．１５ＭのＮａＣｌを有する溶液５０μＬ中にＰＮＰエステル２１＊または６９＊を有する溶液を、緩衝液（〜１５０μＬ）中にＣＲＭ１９７またはＢＳＡ有する溶液を含む反応バイアルに滴下した。バイアルを、５０μＬの緩衝液を用いて最後にリンスし、反応バイアルを完全に移した。したがって、バイアル中の反応量は２００μＬ以下となる。反応混合物は、色が黄色になり、反応混合物を室温で２４時間攪拌した。複合溶液（２１＊−ＣＲＭ１９７、６９＊−ＣＲＭ１９７、２１＊−ＣＲＭ１９７、または６９＊−ＣＲＭ１９７）を、アミコン（登録商標）ウルトラ−０．５ｍＬ遠心ろ過機に移し、６分間、２〜８℃で遠心分離した。３００μＬの緩衝液を反応バイアルに加え、リンスし、フィルターに移し、再び遠心分離した。追加の洗浄を１×ＰＢＳ溶液を用いて行い、黄色の色が無くなり、複合体が透明溶液になるまで遠心分離した。最後の洗浄後、複合体を１×ＰＢＳ溶液中で２〜８℃で保存した。
ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣクロマトグラフィー、およびＭＡＬＤＩ分析によって、複合体を分析した。担体上の糖の負荷は、ＭＡＬＤＩ分析を用いて複合体化タンパク質と非複合体化タンパク質との間で質量を減算することによって、明確に計算した。タンパク質含有量を、製品のプロトコルにしたがってマイクロＢＣＡ方法を用いて推定した。
［２．１ ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析］
試料を、マイクロチューブ（ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ ｔｕｂｅ）中で混合し、サーモサイクラーで、５分間９５℃で加熱した。５分間室温に冷却後、試料を約２．５μｇで、１０％ポリアクリルアミドゲルの各ウェルに、１０μＬのマーカーと共にロードした。試料の泳動を１２０Ｖの定電圧で１時間行った。染色を、製品指示書のとおりにゲルコード（ＧｅｌＣｏｄｅ）（商標）ブルーセーフタンパク染料（Ｂｌｕｅ Ｓａｆｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔａｉｎ）を用いて行った。ゲルを、脱イオン化水を用いて一晩洗浄し、ゲルドキュメンテーションシステム（ｇｅｌ ｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）を用いてスキャンした。
［２．２ 複合糖質のサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）］
免疫付与研究のために使用された糖複合体（２１＊−ＣＲＭ１９７および６９＊−ＣＲＭ１９７）を、複合体化ＣＲＭタンパク質と非複合体ＣＲＭタンパク質との間の質量の差を観察するためにＳＥＣによって分析した。５０ｍＭ トリス（Ｔｒｉｓ）、２０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．２で試料を希釈し、東ソー ＴＳＫ Ｇ２０００カラム（ＳＷｘｌ，
７．８ｍｍ×３０ｃｍ，５μｍ）および東ソー ＴＳＫゲル（登録商標） ガード（Ｇｕａｒｄ）カラム（ＳＷｘｌ，６．０ｍｍ×４ｃｍ，７μｍ）を装着したアジレント（Ａｇｉｌｅｎｔ）１１００ＨＰＬＣシステムで分析を行った。流速を１ｍＬ／ｍｉｎに維持した。
［３．免疫付与のためのワクチン製剤］
複合糖質を、マウス研究のために水酸化アルミニウム（アルム）アジュバントで、およびウサギにおける免疫付与のために不完全フロイントアジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ Ａｄｊｕｖａｎｔ）（ＩＦＡ）で製剤化した。
［３．１ アルムにおける製剤］
全ての製剤を、無菌条件下で調製した。複合糖質（ＤＳ）およびＰＢＳを、５０ｍＬファルコン（Ｆａｌｃｏｎ）（商標）チューブ中で、必要とされるアルムの量（０．２５ｍｇ／ｍＬ）を除いて、最終製剤量に応じて事前に計算した適切な比率で混合した。これはＤＳ−ＰＢＳ混合物を形成した。動物当たりの抗原／ＤＳ投与量を、５μｇ／１００μＬ／動物に維持した。ＤＳ−ＰＢＳ混合物を、血清学的ピペットを用いて優しく混合した（５Ｘ）。ＤＳ−ＰＢＳ混合物に、対応する量の保存アルム（１０ｍｇ／ｍＬ）を加え、１；４０の最終アルム比率、または０．０２５０ｍｇ／ｍＬとした。混合物を、５ｍＬの血清学的ピペットを用いて優しくピペッティングすることによって（２０Ｘ）、すぐに混合した。ファルコン（商標）チューブに蓋をして、パラフィルム（登録商標）を用いて覆い、振とう機で、２５０ｒｐｍで、２時間、室温（ＲＴ）で混合させた。２時間のインキュベーション後、製剤をクリーンベンチ下に置き、等分し、更なる使用まで４℃で更に保存した。
［３．２ ＩＦＡにおける製剤］
インビボジェン（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）からの不完全フロイントアジュバントを、ウサギ免疫付与研究のためのワクチンを製剤化するために使用した。プロトコルは、製品の通りに行われた。抗原：ＩＦＡ濃度を１：１に保持した。動物当たりの抗原投与量を、５μｇ／２００μＬ／動物（１００μＬの抗原＋１００μＬのＩＦＡ）に保持した。所望の算出された量（最終免疫付与用量の５０％）でＩＦＡを１５ｍＬの滅菌ファルコン（商標）チューブに取った。算出された量（最終免疫付与用量の５０％にＰＢＳで調節された量）の希釈抗原溶液を、２０Ｇの針を装着された３ｍＬ滅菌シリンジに取った。ＤＳ溶液を、ＩＦＡを含むファルコン（商標）チューブに加え、すぐに１５秒間（５Ｘ）ボルテックスした。製剤の色は、ボルテックスをするとすぐに淡黄色から乳白色に変化し、そのことは、安定なエマルションの形成を示す。結果的に生じるワクチン製剤を、軽くボルテックスし、所望の投与量で２ｍＬの滅菌チューブに等分した。免疫付与の前に、ワクチン製剤を含むチューブをボルテックスし、その後、動物に注射した。
［３．３ アルム製剤の特徴付け］
アルムで製剤化された複合糖質を、最終アルム濃度、および製剤のｐＨを決定するために特徴付けした。
［４．免疫付与スケジュール］
マウスおよびウサギの免疫付与を、特定病原体未感染条件下で行い、食物および水を自由に提供した。マウス（ｎ＝６）およびウサギ（ｎ＝４）を、１００μＬ／マウス、および２００μＬ／ウサギの注射量でワクチン製剤（表２）を用いて皮下に免疫付与した。マウスのための抗原量は、抗原−７を除いて５μｇ／動物（抗原１、および−２はそれぞれ２．５μｇ）に保持した。ウサギのための抗原量は、５μｇ／動物に保持した。マウスおよびウサギを、０、１４、および２８日に免疫付与した。抗体力価の決定のために、マウスでは−１、７、および２２日に、ウサギでは０、７、および２１日に、それぞれ血液を採取した。３５日目に、動物を犠牲にし、血液を集めた。
［５．自家抗原被覆プレートを用いた血清の酵素結合免疫吸着分析法（ＥＬＩＳＡ）：］
［抗原によるプレートの被覆：］
複合体２１＊−ＢＳＡおよび６９＊−ＢＳＡ、並びにＬＰＳ＃１〜＃４を、被覆抗原として使用した。ＬＰＳを、１０／２０μｇ／ｍＬの濃度でイソプロパノールに溶解した。１００μＬを、各ウェルを被覆するために使用し、結果的に１〜２μｇ／ウェルの被覆濃度にした。ＬＰＳ溶液を、ウェルにロードし、滅菌ベンチ内で、室温で一晩、蒸発させた。複合体２１＊−ＢＳＡおよび６９＊−ＢＳＡのために、各複合体を、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）ｐＨ７．４に５μｇ／ｍＬの濃度で溶解した。１００μＬを各ウェルに被覆し、４℃で一晩インキュベートし、０．５μｇ／ウェルの抗原濃度を得た。
［洗浄：］
一晩、抗原の吸着後、プレートを、ＰＢＳ−Ｔ（２００μＬ／ウェル）を用いて１Ｘ洗浄し、ウェル毎の過剰な液体を、プレートを反転することによって、およびクリーンドライティッシュタオル上で軽くたたくことによって除去した。
ブロッキング：
プレートを、２００μＬの商用のブロッキング溶液を用いてブロックし、２時間室温でインキュベートした。
洗浄：
ブロッキング後、プレートを、ＰＢＳ−Ｔ（２００μＬ／ウェル）を用いて３Ｘ洗浄し、ウェル毎の過剰な液体を、プレートを反転することによって、およびクリーンドライティッシュタオル上で軽くたたくことによって除去した。
［血清の希釈およびインキュベーション：］
異なる実験群の異なる時点から集められた血清（ｎ＝４ウサギ／群、またはｎ＝６マウス／群）を、抗体希釈液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ）で、集められた血清の各希釈液へと希釈した。異なる実験群における１００μＬの希釈血清試料を、対応するウェルへデュプリケートで加え、２５０ｒｐｍに設定された振とう機で２時間、室温でインキュベートした。１００μＬ／ウェルの抗体希釈液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ）は実験的ブランクを形成した。血清を用いてインキュベートした後、プレートをＰＢＳ−Ｔを用いて４Ｘ洗浄し（２００μＬ／ウェル）、ウェル毎の過剰な液体を、プレートを反転することによって、およびクリーンドライティッシュタオル上で軽くたたくことによって除去した。
［インキュベーション（検出抗体）：］
対応する検出抗体、抗−ウサギＩｇＧ ＨＲＰ複合体または抗−マウスＩｇＧ ＨＲＰ複合体を、抗体希釈液（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ）で１：１０，０００に希釈し、１００μＬ／ウェルを加え、振とう機で、２５０ｒｐｍで１時間、室温でインキュベートした。検出抗体を用いてインキュベートした後、プレートを、ＰＢＳ−Ｔを用いて５Ｘ洗浄し（２００μＬ／ウェル）、ウェル毎の過剰な液体を、プレートを反転することによって、および
クリーンドライティッシュタオル上で軽くたたくことによって除去した。
［基質付加：］
各ウェルに、（４℃から室温に標準に戻された）滅菌済みのＴＭＢ（３，３，’，５，５’−テトラメチルベンジジン）基質を加え、暗室で１５分間インキュベートした。酵素反応における青色を、５０μＬ／ウェルの２ＭのＨ２ＳＯ４溶液を加えることによって停止し、結果的に黄色溶液になった。黄色溶液の吸光度を、プレートリーダーを用いて４５０ｎｍで測定した。
［結果：］
吸光度値を、グラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍ）ソフトウェアを用いてグラフをプロットすることによって分析した。
［結果］
［複合糖質２１＊−ＣＲＭ１９７および６９＊−ＣＲＭ１９７の特徴づけ］
免疫付与研究のために使用されるＫＰＣ抗原複合糖質２１＊−ＣＲＭ１９７および６９＊−ＣＲＭ１９７を、結合効率および抗原量のために分析した。複合糖質におけるＭＡＬＤＩ分析は、非常によい結合効率を明らかにした。複合体化ＣＲＭ１９７タンパク質と非複合体化ＣＲＭ１９７タンパク質との間の質量差は、異なる複合糖質のために２〜１５抗原／ＣＲＭ１９７分子、好ましくは、３〜１０抗原／ＣＲＭ１９７分子の負荷を生成した。
複合糖質を、１０％ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびＳＥＣによっても分析し、非複合体化ＣＲＭ１９７タンパク質と比較して、明確な質量シフトを明らかにした（図５Ａおよび図５Ｂ）。
［ＥＬＩＳＡデータ。］
２１＊−ＣＲＭ１９７および６９＊−ＣＲＭ１９７を免疫付与されたマウスからの血清は、対応する抗原を認識する（図６参照）。血清は、対応するＫ．ニューモニエＬＰＳと交差反応もする（図７参照）。２１＊−ＣＲＭ１９７および６９＊−ＣＲＭ１９７を免疫付与されたウサギからの血清は、関連したＢＳＡ複合体２１＊−ＢＳＡおよび６９＊−ＢＳＡそれぞれにおける対応するＯ−抗原を認識する（図８参照）。２１＊−ＣＲＭ１９７／６９＊−ＣＲＭ１９７を免疫付与されたマウスからの血清は、対応するＫ．ニューモニエＬＰＳを選択的に認識する（図９参照）。
本明細書において提供されたデータは、本発明における複合体を用いて免疫付与後に、本発明のオリゴ糖に対して、並びにＫ．ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、およびＯ５の天然のＯ−多糖に対する機能的な抗体を、ウサギおよびマウスにおいて誘発することを示す。抗体は、Ｋ．ニューモニエ血清型Ｏ３、Ｏ３ｂ、およびＯ５の天然のＯ−多糖（ＬＰＳ）と交差反応し、このことは、これらの抗体がＫ．ニューモニエ細菌に結合する、およびＫ．ニューモニエ感染症に対する保護を与える可能性を示す。
ＥＬＩＳＡデータは、本発明における複合体が免疫原性であり、高い抗体力価を誘導することを更に証明する。したがって、ＥＬＩＳＡ分析は、本発明の式（Ｉ）のオリゴ糖が、ウサギおよびマウスに対して免疫原性であり、交差反応性抗体を生成することを示す。

Claims (15)

  1. 一般式（Ｉ）のオリゴ糖、または一般式（Ｉ）のオリゴ糖のジアステレオ異性体もしくは薬学的に許容できる塩であって、
    式中、
    ｍは、０および１から選択される整数であり；
    ｘは、１〜２×ｍ＋３から選択される整数であり；
    ｎは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から選択される整数であり、
    −Ｔ−は、結合，−（Ｕｘ＋４）ｍ−（Ｖｘ＋２）１−ｍ−，−（Ｕｘ＋４−Ｕｘ＋３）ｍ−（Ｖｘ＋２−Ｖｘ＋１）１−ｍ−，−（Ｕｘ＋４−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２）ｍ−，または−（Ｕｘ＋４−Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１）ｍ−を表し；
    Ｔ＊−は、Ｈ−，Ｈ−（Ｕｘ）ｍ−（Ｖｘ）１−ｍ−，Ｈ−（Ｕｘ＋１−Ｕｘ）ｍ−（Ｖｘ＋１−Ｖｘ）１−ｍ−，Ｈ−（Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ）ｍ−，またはＨ−（Ｕｘ＋３−Ｕｘ＋２−Ｕｘ＋１−Ｕｘ）ｍ−を表し；
    Ｌは、リンカーを表し、および；
    Ｅは、−ＮＨ２，−Ｎ３，−ＣＮ，−Ｏ−ＮＨ２，−ＣＨ＝ＣＨ２，−Ｃ≡ＣＨ，−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｒ’，−ＣＯＲ’，−ＣＯＮＨ−ＮＨ２，−ＳＨ，または−ＳＡｃを表し；
    Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，４−ニトロフェニル，ペンタフルオロフェニル，−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル，−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル），または−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル）を表す；
    一般式（Ｉ）のオリゴ糖、または一般式（Ｉ）のオリゴ糖のジアステレオ異性体もしくは薬学的に許容できる塩。
  2. 一般式（ＩＩ）の請求項１に記載のオリゴ糖であって、
    式中、ｍ、ｎ、ｘ、Ｌ、Ｅ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３、Ｕｘ＋４、Ｖｘ、Ｖｘ＋１、Ｖｘ＋２、およびＴ＊は、請求項１に定義される意味を有する、オリゴ糖。
  3. 請求項１または請求項２に記載のオリゴ糖であって、式中、
    −Ｌ−は、−Ｌａ−，−Ｌａ−Ｌｅ−，−Ｌａ−Ｌｂ−Ｌｅ−，または−Ｌａ−Ｌｄ−Ｌｅ−を表し；
    −Ｌａ−は、−（ＣＨ２）Ｏ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）Ｏ−ＣＨ２を表し；
    −Ｌｂ−は、−Ｏ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＮＨ−，−ＮＨ−ＣＯ−を表し；
    −Ｌｄ−は、−（ＣＨ２）ｑ−，−（ＣＨ（ＯＨ））ｑ−，−（ＣＦ２）ｑ−，−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−Ｃ２Ｈ４−，または−（ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ）ｑ−ＣＨ２−を表し；
    −Ｌｅ−は、−（ＣＨ２）ｐ１−，−（ＣＦ２）ｐ１−，−Ｃ２Ｈ４−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１−，−ＣＨ２−（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｐ１，−，または−（ＣＨ２）ｐ１−Ｏ−（ＣＨ２）ｐ２−を表し；並びに
    ｏ、ｑ、ｐ１およびｐ２は、互いに独立して、１、２、３、４、５、および６から選択される整数である、オリゴ糖。
  4. 請求項１または請求項２に記載のオリゴ糖であって、式中、−Ｏ−Ｌ−Ｅは：
    からなる群から選択され、
    式中、Ｒ’は、−Ｈ，−Ｍｅ，−Ｅｔ，４−ニトロフェニル，ペンタフルオロフェニル，−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル，−（３−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジ
    ル）、または−（ジベンゾシクロオクチン−スルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジル）を表し；
    Ｘは、−Ｂｒ，−Ｃｌ，−Ｉ，−ＣＯ２Ｈ，または−ＳＡｃを表す、オリゴ糖。
  5. からなる群から選択される請求項１に記載のオリゴ糖。
  6. 前記−Ｏ−Ｌ−Ｅ基の残基Ｅを介して免疫原性担体に共有結合される、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載のオリゴ糖を含む複合体。
  7. ヒトおよび／または動物宿主における保護免疫応答の上昇において使用するための、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載のオリゴ糖または請求項６に記載の複合体。
  8. 細菌のリポ多糖において、次のオリゴ糖断片：
    −２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−
    の一つを含む前記細菌と関連する疾患の予防および／または治療において使用するための、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載のオリゴ糖または請求項６に記載の複合体。
  9. 細菌と関連する前記疾患は、肺炎、気管支炎、髄膜炎、尿路感染症、傷口感染、骨髄炎、菌血症、敗血症、および強直性脊椎炎を含む、請求項８に記載の使用のためのオリゴ糖または複合体。
  10. 少なくとも一つの薬学的に許容できるアジュバントおよび／または賦形剤と共に請求項６に記載の複合体および／または請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載のオリゴ糖を含む医薬組成物。
  11. 細菌のＯ−多糖において、次のオリゴ糖断片：
    −２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−β−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−；
    −３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，３）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１，２）−α−Ｄ−Ｍａｎ−（１−
    の一つを含む前記細菌に対する抗体の検出のための免疫学的分析におけるマーカーとして使用するための、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載のオリゴ糖。
  12. 一般式（Ｉ）のオリゴ糖の合成方法であって：
    Ａ１）単糖１を提供すること
    式中、Ｐ１、Ｐ２およびＰ４は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥとなるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、請求項１に定義される通りの意味を有し；
    Ａ２）活性化剤の存在において、単糖１を構成要素２と処理すること
    式中、Ｐ１〜Ｐ４は、保護基を表し、およびＬＧ１は、脱離基を表し；
    Ａ３）保護基Ｐ３の除去を行うこと；
    Ａ４）活性化剤の存在下でステップＡ３）の生成物を構成要素３と処理すること
    式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ５、およびＰ６は、保護基を表し、およびＬＧ２は、脱離基を表し；
    Ａ５）保護基Ｐ６の除去を行うこと；
    Ａ６）中間体化合物４ａを得るためにステップＡ４）およびＡ５）を２回繰り返すこと；
    式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥとなるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、請求項１に定義される通りの意味を有し；
    Ａ７）式５ａの中間体化合物を得るために、Ａ２）→Ａ３）→Ａ２）→Ａ３）→Ａ４）→Ａ５）→Ａ６）の順序でステップＡ２）〜Ａ６）をｎ−１回任意に繰り返すこと、
    式中、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ４およびＰ５は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥとなるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでｎ、ＥおよびＬは、請求項１に定義される通りの意味を有し；
    Ａ８）一般式（Ｉ）のオリゴ糖を得るために全ての保護基の除去を行うこと、
    を含む、方法、
    もしくは
    一般式（Ｉ）のオリゴ糖の合成方法であって：
    Ｆ１）単糖７を提供すること
    式中、Ｐ７、Ｐ８およびＰ９は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥとなるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、請求項１に定義される通りの意味を有し；
    Ｆ２）単糖７を活性化剤の存在で構成要素８と処理すること
    式中、Ｐ７〜Ｐ１０は保護基を表し、およびＬＧ３は脱離基を表し；
    Ｆ３）保護基Ｐ１０の除去を行うこと；
    Ｆ４）ステップＦ３）の生成物を活性化剤の存在下で構成要素９と処理すること
    式中、Ｐ７、Ｐ８、Ｐ１１およびＰ１２は、保護基を表し、およびＬＧ４は、脱離基を表し；
    Ｆ５）中間体化合物４ｆを得るために保護基Ｐ１１の除去を行うこと；
    式中、Ｐ７〜Ｐ９およびＰ１２は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥとなるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、請求項１に定義される通りの意味を有し；
    Ｆ６）式５ｆの中間体化合物を得るために、Ｆ２）→Ｆ３）→Ｆ２）→Ｆ４）→Ｆ５）の順序でステップＦ２）〜Ｆ５）をｎ−１回任意に繰り返すこと、
    式中、Ｐ７〜Ｐ９およびＰ１２は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥとなるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでｎ、ＥおよびＬは、請求項１に定義される通りの意味を有し；
    Ｆ７）一般式（Ｉ）のオリゴ糖を得るために全ての保護基の除去を行うこと、
    を含む、方法。
  13. 一般式（Ｉ）のオリゴ糖を調製するための中間体化合物であって、
    ここで、前記中間体化合物は、一般式（Ｉ２ａ）、（Ｉ２ｂ）、（Ｉ２ｃ）、（Ｉ２ｄ）、（Ｉ２ｅ）、（Ｉ２ｆ）、（Ｉ２ｇ）、（Ｉ２ｈ）、（Ｉ３ａ）、（Ｉ３ｂ）、（Ｉ３ｃ）、（Ｉ３ｄ）、（Ｉ３ｅ）、（Ｉ３ｆ）、（Ｉ３ｇ）、（Ｉ３ｈ）、（Ｉ３ｉ）、（Ｉ３ｊ）、（Ｉ３ｋ）、（Ｉ３ｌ）、（Ｉ３ｍ）、（Ｉ３ｎ）、（Ｉ４ａ）、（Ｉ４ｂ）、（Ｉ４ｃ）、（Ｉ４ｄ）、（Ｉ４ｅ）、（Ｉ４ｆ）、（Ｉ４ｇ）、（Ｉ４ｈ）、（Ｉ４ｉ）、（Ｉ４ｊ）、（Ｉ５ａ）、（Ｉ５ｂ）、（Ｉ５ｃ）、（Ｉ５ｄ）、（Ｉ５ｅ）、（Ｉ５ｆ）、（Ｉ５ｇ）、（Ｉ５ｈ）、（Ｉ５ｉ）、または（Ｉ５ｊ）のいずれか一つを有し：
    式中、Ｐ１〜Ｐ６は、保護基を表し、およびＣは、固体支持体または保護末端基ＥとなるＥｐを有する−Ｌ−Ｅｐを表し、ここでＥおよびＬは、請求項１に定義される通りの意味を有する、
    中間体化合物。
  14. 一般式（Ｖ）の請求項６に記載の複合体であって
    式中、
    ｃは２〜１８を含み；
    −Ｅ１−は、共有結合，−ＮＨ−，−Ｏ−ＮＨ−，−Ｏ−，−Ｓ−，−ＣＯ−，−ＣＨ＝ＣＨ−，−ＣＯＮＨ−，−ＣＯ−ＮＨＮＨ−，
    を表し；
    −Ｗ−は：
    から選択され、
    ａは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、および１０から選択される整数を表し、
    ｂは、１、２、３、および４から選択される整数を表し、並びに
    ｍ、ｎ、ｘ、Ｌ、Ｕｘ＋１、Ｕｘ＋２、Ｕｘ＋３、Ｕｘ＋４、Ｖｘ、Ｖｘ＋１およびＶｘ＋２は、請求項１で定義される通りの意味を有する、
    複合体。
  15. 前記複合体は、次の式（Ｖ−１）〜（Ｖ−１１）
    のいずれか一つを有し、
    式中、Ｌ、Ｅ１、Ｗ、ｃ、およびｎは、請求項１４に定義される通りの意味を有する、請求項１４に記載の複合体。
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