JP2021502122A - 主要組織適合複合体ベースのキメラ受容体および自己免疫疾患を治療するためのその使用 - Google Patents
主要組織適合複合体ベースのキメラ受容体および自己免疫疾患を治療するためのその使用 Download PDFInfo
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Abstract
Description
本出願は、2017年11月10日に出願された米国仮出願第62/584,449号の出願日の利益を主張する。この参照出願の内容全体は参照することにより本明細書に組み込まれる。
本明細書に記載されるMHCベースのキメラ受容体(MHC−CAR)は、抗原ペプチド(例えば、ミスフォールディングしたもの)に共役したMHC部分、および細胞質シグナル伝達ドメイン(例えば、CD3ζのもの)、1つもしくは複数の共刺激ドメイン(例えば、4−1BBもしくはCD28のもの)、またはその組合せであり得る少なくとも1つの細胞シグナル伝達部分を含む。一部の事例では、抗原ペプチドは、MHC−CARの融合ポリペプチドの部分であり得る。他の事例では、抗原ペプチドは、MHC−CARと融合ポリペプチドを形成せずにMHC−CARと複合体を形成する。本明細書において使用される場合、「共役した」という用語は、少なくとも2つの成分が、共有結合を介してまたは非共有結合性相互作用を介して、物理的に会合していることを意味する。
(a)MHC部分
本明細書に開示されるMHC−CARコンストラクトはMHC部分を含み、MHC部分は、1つまたは複数のMHCポリペプチドまたはその細胞外ドメインを含んでもよい。MHC部分は、好適な供給源、例えば、ヒトまたは非ヒト哺乳動物(例えば、サル、マウス、ラット、ウサギ、ブタなど)に由来してもよい。一部の事例では、MHC部分は、ヒトMHC分子(HLAとしても公知)からのものである。一部の事例では、他の細胞からの分子(TCRまたはBCR)と相互作用するドメインは、ヒトMHC分子からのものである。主に2つのクラスのMHC分子、MHCクラスI分子およびMHCクラスII分子があり、これらの両方は、本明細書に記載されるMHC−CARを構築するために使用され得る。様々な種(例えば、ヒト、非ヒト霊長動物、イヌ科動物、魚、オビッド(ovids)、ウシ科動物、ウマ科動物、イノシシ科動物、ネズミ科動物、およびガルス属動物)のMHCクラスIおよびクラスII分子の配列が公的な遺伝子データセット、例えば、EMBL−EBIにより提供されるIPD−MHCデータベースおよびIMGT/HLAデータベースならびに米国国立生物工学情報センター(NCBI)により提供されるdbMHCデータベースから入手可能である。
本明細書に記載されるMHC−CARの抗原ペプチドは、自己免疫疾患に関与する病原性免疫細胞(例えば、自己反応性T細胞またはB細胞)により認識可能な抗原ペプチドである。好適なMHC分子により提示される場合、そのような抗原ペプチドは、病原性T細胞の抗原特異的T細胞受容体と相互作用して、下流の免疫応答に繋がる。
MASQKRPSQRHGSKYLATASTMDHARHGFLPRHRDTGILDSIGRFFGGDRGAPKRGSGKVPWLKPGRSPLPSHARSQPGLCNMYKDSHHPARTAHYGSLPQKSHGRTQDENPVVHFFKNIVTPRTPPPSQGKGRGLSLSRFSWGAEGQRPGFGYGGRASDYKSAHKGFKGVDAQGTLSKIFKLGGRDSRSGSPMARRHHHHHH(配列番号:1)
GSKYLATASTMDHARHGFLPRHRDTGILDSIGRFFGGDRG(配列番号:2)、KYLATASTMDHARHGFLPRH(配列番号:3)、ATASTMDHARHGFLPRHRDTGIL(配列番号:4)、RDTGILDSIGRFFGGDRGAP(配列番号:5)、IGRFFGGDRGAPKRGSGKDSHHPARTAHY(配列番号:6)、APKRGSGKDSHHAARTAHY(配列番号:7)、GSGKDSHHPARTAHYGSLPQ(配列番号:8)、HHPARTAHYGSLPQKSHGR(配列番号:9)、HAARTAHYGSLPQKSQGHR(配列番号:10)、SLPQKSHGRTQDENPVVHF(配列番号:11)、PQDENPVVHFFKNIVTPRTP(配列番号:12)、TQDENPVVHFFKNIVTPRTP(配列番号:13)、QDENPVVHFFKNIVTPRTP(配列番号:14)、DENPVVHFFKNIVTPRTPP(配列番号:15)、ENPVVHFFKNIVTPR(配列番号:16)、ENPVVHFFKNIVTPRTP(配列番号:17)、ENPVVHFFKNIVTP(配列番号:18)、NPVVHFFKNIVTPRTPPPSQ(配列番号:19)、VVHFFKNIVTPRT(配列番号:20)、VVHFFKNIVTPRTPPPSQGK(配列番号:21)、KNIVTPRTPPPSQGKGRGL(配列番号:22)、PSQGKGRGLSLSRFSWGAE(配列番号:23)、GKGRGLSLSRFSWGAEGQRP(配列番号:24)、LSRFSWGAEGQRPGFGYGG(配列番号:25)、QRPGFGYGGRASDYKSAHK(配列番号:26)、ASDYKSAHKGFKGVDAQGT(配列番号:27)、FKGVDAQGTLSKIFKLGGR(配列番号:28)、VDAQGTLSKIFKLGGRDSRS(配列番号:29)、およびSKIFKLGGRDSRSGSPMARR(配列番号:30)。
GATGAGAATCCCGTGGTTCATTTTTTTAAGAACATCGTCACACCGCGCACCCCACCTG(配列番号:411)
>CAA52617.1ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質[ホモサピエンス]
MASLSRPSLPSCLCSFLLLLLLQVSSSYAGQFRVIGPRHPIRALVGDEVELPCRISPGKNATGMEVGWYRPPFSRVVHLYRNGKDQDGDQAPEYRGRTELLKDAIGEGKVTLRIRNVRFSDEGGFTCFFRDHSYQEEAAMELKVEDPFYWVSPGVLVLLAVLPVLLLQITVGLVFLCLQYRLRGKLRAEIENLHRTFDPHFLRVPCWKITLFVIVPVLGPLVALIICYNWLHRRLAGQFLEELRNPF(配列番号:31)
>AAH93045.1ミエリン結合糖タンパク質[ホモサピエンス]
MIFLTALPLFWIMISASRGGHWGAWMPSSISAFEGTCVSIPCRFDFPDELRPAVVHGVWYFNSPYPKNYPPVVFKSRTQVVHESFQGRSRLLGDLGLRNCTLLLSNVSPELGGKYYFRGDLGGYNQYTFSEHSVLDIVNTPNIVVPPEVVAGTEVEVSCMVPDNCPELRPELSWLGHEGLGEPAVLGRLREDEGTWVQVSLLHFVPTREANGHRLGCQASFPNTTLQFEGYASMDVKYPPVIVEMNSSVEAIEGSHVSLLCGADSNPPPLLTWMRDGTVLREAVAESLLLELEEVTPAEDGVYACLAENAYGQDNRTVGLSVMYAPWKPTVNGTMVAVEGETVSILCSTQSNPDPILTIFKEKQILSTVIYESELQLELPAVSPEDDGEYWCVAENQYGQRATAFNLSVEFAPVLLLESHCAAARDTVQCLCVVKSNPEPSVAFELPSRNVTVNESEREFVYSERSGLVLTSILTLRGQAQAPPRVICTARNLYGAKSLELPFQGAHRLMWAKIGPVGAVVAFAILIAIVCYITQTRRKKNVTESPSFSAGDNPPVLFSSDFRISGAPEKYESKEVSTLESH(配列番号:33)
多くの免疫細胞は、細胞増殖、分化および生存を促進する他に、細胞のエフェクター機能を活性化させるために、抗原特異的シグナルの刺激に加えて共刺激を必要とする。本明細書に記載されるMHC−CARは、1つまたは複数の共刺激シグナル伝達ドメインを含んでもよい。「共刺激シグナル伝達ドメイン」という用語は、本明細書において使用される場合、細胞内のシグナル伝達を媒介してエフェクター機能などの免疫応答を誘導するタンパク質の少なくとも一部分を指す。本明細書に記載されるMHC−CARの共刺激シグナル伝達ドメインは、シグナルを伝達し、T細胞、NK細胞、マクロファージ、好中球、または好酸球などの免疫細胞により媒介される応答をモジュレ―トする共刺激タンパク質からの細胞質シグナル伝達ドメインであり得る。
41BB細胞内ドメイン:KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL(配列番号:59)
41BBe細胞内ドメイン:pgKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELaha(配列番号:60)
CD28細胞内ドメイン:RSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS(配列番号;61)
CD28e細胞内ドメイン:pgRSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRSaha(配列番号:62)
FRB:EMWHEGLEEASRLYFGERNVKGMFEVLEPLHAMMERGPQTLKETSFNQAYGRDLMEAQEWCRKYMKSGNVKDLLQAWDLYYHVFRRI(配列番号:63)
リンカーを有するFBP
(GSSS)4−EMWHEGLEEASRLYFGERNVKGMFEVLEPLHAMMERGPQTLKETSFNQAYGRDLMEAQEWCRKYMKSGNVKDLLQAWDLYYHVFRRI−(GSSS)3(配列番号:64)
FKRB
GVQVETISPGDGRTFPKRGQTCVVHYTGMLEDGKKFDSSRDRNKPFKFMLGKQEVIRGWEEGVAQMSVGQRAKLTISPDYAYGATGHPGIIPPHATLVFDVELLKLE(配列番号:65)
リンカーを有するFKBP
(GSSS)4−GVQVETISPGDGRTFPKRGQTCVVHYTGMLEDGKKFDSSRDRNKPFKFMLGKQEVIRGWEEGVAQMSVGQRAKLTISPDYAYGATGHPGIIPPHATLVFDVELLKLE−(GSSS)3(配列番号:66)
本明細書に記載されるキメラ受容体を構築するために、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ(ITAM)を含む任意の細胞質シグナル伝達ドメインが使用され得る。「ITAM」は、本明細書において使用される場合、多くの免疫細胞中で発現されるシグナル伝達分子のテイル部分に一般に存在する保存されたタンパク質モチーフである。モチーフは、6〜8アミノ酸により分離されたアミノ酸配列YxxL/Iの2つのリピートを含んでもよく、各xは独立して、保存されたモチーフYxxL/Ix(6〜8)YxxL/Iを生成する任意のアミノ酸である。一部の例では、ITAMを含む細胞質シグナル伝達ドメインは、CD3ζのものである。一部の例では、MHC−CARは、共刺激ドメインを含まず、かつ、細胞質シグナル伝達ドメインは短いリンカーにより先行されている。例えば、クラスII MHC−CARについて、短いリンカーはTS(すなわち、MHC内部リンカー)であってもよい。例えば、クラスI MHC−CARについて、短いリンカーはPGであってもよい。一部の場合には、リンカーは、AHAであるか、または存在しなくてもよく、これは共刺激ドメインがシグナル伝達ドメインの前に存在するある特定の事例などである。
RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(配列番号:67)
AGAGTAAAGTTTTCCCGAAGTGCGGACGCTCCCGCGTATCAGCAAGGTCAAAACCAGCTTTACAACGAACTGAACTTGGGACGACGCGAAGAGTACGATGTTCTTGATAAGCGGAGAGGGCGCGATCCCGAAATGGGGGGAAAGCCTCGGAGGAAGAACCCACAAGAAGGCCTTTATAATGAACTGCAGAAGGACAAGATGGCGGAGGCGTATTCCGAAATAGGCATGAAGGGTGAACGGAGGAGAGGAAAGGGACATGACGGACTTTATCAAGGATTGTCTACCGCAACTAAAGACACCTATGACGCGTTGCACATGCAGGCTCTCCCTCCGAGA(配列番号:410)
CGGGTCAAATTTAGCAGATCCGCTGACGCACCGGCCTACCAGCAGGGCCAGAACCAACTCTACAACGAGCTGAATCTCGGCCGACGGGAAGAGTATGACGTACTCGACAAGCGGAGAGGTCGAGACCCTGAGATGGGCGGTAAACCGAGACGGAAAAATCCCCAAGAGGGTCTTTATAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAGATAGGGATGAAAGGCGAGCGGCGGAGGGGTAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAGGGACTCTCCACGGCAACCAAAGATACTTACGACGCCCTTCACATGCAAGCCCTCCCGCCACGC(配列番号:422)
本明細書に記載されるMHC−CARは、以下の成分:ヒンジドメイン、膜貫通ドメイン、シグナル(リーダー)ペプチド、およびペプチドリンカーの1つまたは複数を任意選択的にさらに含んでもよい。
MHCIリンカー1:GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号:68)
MHCIリンカー2:GGGGGGSGGSGGSGG(配列番号:69)
MHCIリンカー3:GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(配列番号:70)
MHCIリンカー4:GGGGSGGGGSGGGGS(配列番号:68)
GGGGGAGGCGGATCTGGCGGAGGCGGGAGTGGAGGCTCA(配列番号:401)
FKBP/FRB−CD8ヒンジ:
GS長ヒンジ:GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(配列番号:76)
H2−Kbヒンジ:LRWEPPPSTVSNM(配列番号:77)
HLA−A2ヒンジ:LRWEPSSQPTIPI(配列番号:78)
HLA−A3ヒンジ:LRWELSSQPTIPI(配列番号:79)
DAP10ヒンジ:QTTPGERSSLPAFYPGTSGSCSGCGSLSLP(配列番号:80)
リンカーを有するDAP10ヒンジ:(GSSS)4QTTPGERSSLPAFYPGTSGSCSGCGSLSLP(配列番号:81)
DAP12ヒンジ:LRPVQAQAQSDCSCSTVSP(配列番号:82)
リンカーを有するDAP12ヒンジ:(GSSS)4LRPVQAQAQSDCSCSTVSP(配列番号:83)
FcIgGIIIaヒンジ:GLAVSTISSFFPPGYQ(配列番号:84)
CD8αヒンジ:TTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACD(配列番号:85)
IgGlヒンジ:
EPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(配列番号:86)
DRA*0101ヒンジ:EFDAPSPLPETTE(配列番号:87)
DRB1*1501ヒンジ:VEWRARSESAQSK(配列番号:88)
GAGTTCGACGCCCCATCACCGCTTCCAGAAACGACTGAA(配列番号:417)
GTTGAGTGGAGGGCGCGGTCAGAGAGCGCACAATCTAAA(配列番号:404)
CD8a膜貫通ドメイン:IYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYC(配列番号:89)
HLA−A2膜貫通ドメイン:VGIIAGLVLFGAVITGAVVAAVMW(配列番号:90)
HLA−A3膜貫通ドメイン:VGIIAGLVLLGAVITGAVVAAVMW(配列番号:91)
CD3ゼータ膜貫通ドメイン:LCYLLDGILFIYGVILTALFL(配列番号:92)
DR*1501膜貫通ドメイン:MLSGVGGFVLGLLFLGAGLFI(配列番号:93)
DR*1501e膜貫通ドメイン:MLSGVGGFVLGLLFLGAGLFIYFRNQ(配列番号:94)
DRA*0101膜貫通ドメイン:NVVCALGLTVGLVGIIIGTIFII(配列番号:416)
DRA*0101e膜貫通ドメイン:NVVCALGLTVGLVGIIIGTIFIIKGL(配列番号:418)
ATGCTGTCAGGAGTAGGCGGATTTGTACTCGGACTCCTCTTTTTGGGCGCTGGGTTGTTTATCTACTTTAGAAACCAA(配列番号:406)
AACGTTGTCTGCGCTCTTGGCCTGACAGTGGGCCTGGTAGGCATTATTATCGGGACCATCTTTATCATCAAAGGTTTG(配列番号:419)
Notch膜貫通ドメイン:
ILDYSFTGGAGRDIPPPQIEEACELPECQVDAGNKVCNLQCNNHACGWDGGDCSLNFNDPWKNCTQSLQCWKYFSDGHCDSQCNSAGCLFDGFDCQLTEGQCNPLYDQYCKDHFSDGHCDQGCNSAECEWDGLDCAEHVPERLAAGTLVLVVLLPPDQLRNNSFHFLRELSHVLHTNVVFKRDAQGQQMIFPYYGHEEELRKHPIKRSTVGWATSSLLPGTSGGRQRRELDPMDIRGSIVYLEIDNRQCVQSSSQCFQSATDVAAFLGALASLGSLNIPYKIEAVKSEPVEPPLPSQLHLMYVAAAAFVLLFFVGCGVLLSRKRRR(配列番号:95)
Notch 2膜貫通ドメイン:
PCVGSNPCYNQGTCEPTSENPFYRCLCPAKFNGLLCHILDYSFTGGAGRDIPPPQIEEACELPECQVDAGNKVCNLQCNNHACGWDGGDCSLNFNDPWKNCTQSLQCWKYFSDGHCDSQCNSAGCLFDGFDCQLTEGQCNPLYDQYCKDHFSDGHCDQGCNSAECEWDGLDCAEHVPERLAAGTLVLVVLLPPDQLRNNSFHFLRELSHVLHTNVVFKRDAQGQQMIFPYYGHEEELRKHPIKRSTVGWATSSLLPGTSGGRQRRELDPMDIRGSIVYLEIDNRQCVQSSSQCFQSATDVAAFLGALASLGSLNIPYKIEAVKSEPVEPPLPSQLHLMYVAAAAFVLLFFVGCGVLLSRKRRR(配列番号:96)
ATGGTATGCTTGAAGCTCCCGGGCGGGTCCTGCATGACCGCTCTCACTGTTACTCTTATGGTCCTTAGTTCACCGCTTGCCCTG(配列番号:397)
ATGGCAATATCTGGTGTTCCTGTCCTCGGGTTTTTTATCATAGCCGTACTGATGTCAGCACAGGAATCATGGGCG(配列番号:414)
本明細書に記載される1つまたは複数の成分を含む本明細書に開示されるMHC−CARコンストラクトは、任意の好適なフォーマットで構成されていてもよい。例示的なMHCクラスIコンストラクトおよびMHCクラスIIコンストラクトを図7および図8に提供する。
HLA A2:
GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDGETRKVKAHSQTHRVDLGTLRGYYNQSEAGSHTVQRMYGCDVGSDWRFLRGYHQYAYDGKDYIALKEDLRSWTAADMAAQTTKHKWEAAHVAEQLRAYLEGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDAPKTHMTHHAVSDHEATLRCWALSFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGQEQRYTCHVQHEGLPKPLT(配列番号:109)
HLA A3:
GSHSMRYFFTSVSRPGRGEPRFIAVGYVDDTQFVRFDSDAASQRMEPRAPWIEQEGPEYWDQETRNVKAQSQTDRVDLGTLRGYYNQSEAGSHTIQIMYGCDVGSDGRFLRGYRQDAYDGKDYIALNEDLRSWTAADMAAQITKRKWEAAHEAEQLRAYLDGTCVEWLRRYLENGKETLQRTDPPKTHMTHHPISDHEATLRCWALGFYPAEITLTWQRDGEDQTQDTELVETRPAGDGTFQKWAAVVVPSGEEQRYTCHVQHEGLPKPLT(配列番号:110)
上記についての微小拡張:LRWE(配列番号:111)
H−2Kbアルファ3ドメイン(下線/斜体)を有するHLA A2
ベータ−2−ミクログロブリン(ヒト):
IQRTPKIQVYSRHPAENGKSNFLNCYVSGFHPSDIEVDLLKNGERIEKVEHSDLSFSKDWSFYLLYYTEFTPTEKDEYACRVNHVTLSQPKIVKWDRDM(配列番号:114)
ベータ−2−ミクログロブリン(マウス):
IQKTPQIQVYSRHPPENGKPNILNCYVTQFHPPHIEIQMLKNGKKIPKVEMSDMSFSKDWSFYILAHTEFTPTETDTYACRVKHASMAEPKTVYWDRDM(配列番号:115)
DRB1*1501:
GDTRPRFLWQPKRECHFFNGTERVRFLDRYFYNQEESVRFDSDVGEFRAVTELGRPDAEYWNSQKDILEQARAAVDTYCRHNYGVVESFTVQRRVQPKVTVYPSKTQPLQHHNLLVCSVSGFYPGSIEVRWFLNGQEEKAGMVSTGLIQNGDWTFQTLVMLETVPRSGEVYTCQVEHPSVTSPLT(配列番号:117)
DRA*0101
IKEEHVIIQAEFYLNPDQSGEFMFDFDGDEIFHVDMAKKETVWRLEEFGRFASFEAQGALANIAVDKANLEIMTKRSNYTPITNVPPEVTVLTNSPVELREPNVLICFIDKFTPPVVNVTWLRNGKPVTTGVSETVFLPREDHLFRKFHYLPFLPSTEDVYDCRVEHWGLDEPLLKHW(配列番号:118)
DRB1*1501ヒト/IA−Dベータマウス(突然変異残基を太字および下線としている)
GGAGACACAAGACCCCGATTCTTGTGGCAGCCCAAAAGGGAGTGCCATTTTTTCAATGGGACGGAACGAGTTCGCTTCCTTGATCGGTACTTTTACAACCAAGAAGAGAGTGTACGGTTCGACTCAGATGTCGGCGAGTTCCGAGCGGTTACGGAATTGGGGCGACCTGACGCGGAGTACTGGAACTCCCAAAAGGATATTTTGGAGCAGGCACGAGCAGCTGTGGACACCTATTGTCGACATAATTATGGTGTGGTGGAATCCTTTACAGTTCAGCGGCGGGTGCAACCTAAAGTGACCGTGTATCCATCTAAAACGCAACCCCTCCAACACCATAACCTCCTGGTGTGTTCCGTAAGCGGCTTCTATCCCGGGTCAATTGAGGTCAGGTGGTTCCTCAACGGTCAGGAGGAGAAGGCCGGAATGGTAAGTACTGGTCTTATCCAGAACGGAGACTGGACCTTCCAAACTTTGGTAATGTTGGAAACGGTGCCGCGATCCGGGGAGGTGTATACATGCCAAGTTGAACACCCGAGTGTTACGAGCCCCCTGACG(配列番号:402)
DRA*0101をコードする例示的な核酸配列を以下に提供する:
ATAAAAGAAGAGCACGTGATAATACAGGCGGAGTTTTATTTGAACCCGGACCAGAGCGGTGAGTTCATGTTCGATTTTGATGGCGACGAGATATTTCACGTTGACATGGCAAAAAAGGAAACGGTGTGGAGACTTGAGGAGTTTGGACGATTCGCATCATTTGAGGCACAAGGAGCACTCGCCAATATCGCGGTGGACAAGGCCAACCTGGAGATCATGACAAAACGCTCCAATTATACGCCTATCACTAATGTGCCCCCTGAGGTTACTGTGCTCACAAATTCTCCCGTAGAACTTAGGGAACCTAACGTCCTCATATGTTTCATCGACAAGTTCACTCCTCCGGTGGTCAATGTAACGTGGCTTCGGAATGGTAAGCCGGTCACCACGGGTGTCTCAGAGACCGTATTTCTGCCCAGAGAAGACCACCTCTTCCGCAAATTTCATTACCTTCCCTTTCTTCCTTCAACGGAAGACGTTTACGACTGCAGGGTCGAACATTGGGGGCTTGACGAGCCACTTCTCAAGCATTGG(配列番号:415)
TCRアルファMBP:
METLLGVSLVILWLQLARVNSQQGEEDPQALSIQEGENATMNCSYKTSINNLQWYRQNSGRGLVHLILIRSNEREKHSGRLRVTLDTSKKSSSLLITASRAADTASYFCATAAVGGFKTIFGAGTRLFVKANIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESSCDVKLVEKSFETDTNLNFQNLSVIGFRILLLKVAGFNLLMTLRLWSS(配列番号:123)
TCRベータMBP
MLLLLLLLGLAGSGLGAVVSQHPSWVISKSGTSVKIECRSLDFQATTMFWYRQFPKQSLMLMATSNEGSKATYEQGVEKDKFLINHASLTLSTLTVTSAHPEDSSFYICSARDLTSGANNEQFFGPGTRLTVLEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYSLSSRLRVSATFWQNPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRADCGFTSESYQQGVLSATILYEILLGKATLYAVLVSALVLMAMVKRKDSRG(配列番号;124)
TCRアルファクラスI
mamllgasvl ilwlqpdwvn sqqkndd
QQVKQNSPSLSVQEGRISILNCDYTNSMFDYFLWYKKYPAEGPTFLISISSIKDKNADGRFTVFLNKSAKHLSLHIVPSQPGDSAVYFCAAMEGAQKLVFGQGTRLTINPNIQNPDPAVYQLRDSKSSDKSVCLFTDFDSQTNVSQSKDSDVYITDKTVLDMRSMDFKSNSAVAWSNKSDFACANAFNNSIIPEDTFFPSPESS
Cdvklve ksfetdtnln fqnlsvigfr illlkvagfn llmtlrlwss(配列番号:125)
TCRベータクラスI:
msigllccaa lsllwagpv
NAGVTQTPKFQVLKTGQSMTLQCAQDMNHEYMSWYRQDPGMGLRLIHYSVGAGITDQGEVPNGYNVSRSTTEDFPLRLLSAAPSQTSVYFCASSYPGGGFYEQYFGPGTRLTVTEDLKNVFPPEVAVFEPSEAEISHTQKATLVCLATGFYPDHVELSWWVNGKEVHSGVSTDPQPLKEQPALNDSRYALSSRLRVSATFWQDPRNHFRCQVQFYGLSENDEWTQDRAKPVTQIVSAEAWGRAD
cgftse syqqgvlsat ilyeillgka tlyavlvsal vlmamvkrkd srg(配列番号:126)
4G7−CARバージョン1:
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVQLQQSGPELIKPGASVKMSCKASGYTFTSYVMHWVKQKPGQGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCARGTYYYGSRVFDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQAAPSIPVTPGESVSISCRSSKSLLNSNGNGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTAGTKLELKRSDPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(配列番号:127)
4G7−CARバージョン2:
METDTLLLWV LLLWVPGSTG EVQLQQSGPE LIKPGASVKM SCKASGYTFT SYVMHWVKQK PGQGLEWIGY INPYNDGTKY NEKFKGKATL TSDKSSSTAY MELSSLTSED SAVYYCARGT YYYGSRVFDY WGQGTTLTVS SGGGGSGGGG SGGGGSDIVM TQAAPSIPVT PGESVSISCR SSKSLLNSNG NTYLYWFLQR PGQSPQLLIY RMSNLASGVP DRFSGSGSGT AFTLRISRVE AEDVGVYYCM QHLEYPFTFG AGTKLELKRS DPTTTPAPRP PTPAPTIASQ PLSLRPEACR PAAGGAVHTR GLDFACDIYI WAPLAGTCGV LLLSLVITLY CKRGRKKLLY IFKQPFMRPV QTTQEEDGCS CRFPEEEEGG CELRVKFSRS ADAPAYQQGQ NQLYNELNLG RREEYDVLDK
RRGRDPEMGG KPRRKNPQEG LYNELQKDKM AEAYSEIGMK GERRRGKGHD GLYQGLSTAT KDTYDALHMQ ALPPR(配列番号:128)
4G7−CARバージョン2
atggagacagacactcttctcctttgggtcttgctgctgtgggttcccggaagcacaggagaagtacagttgcaacagtctgggccagaactcatcaaacccggagcttctgtaaaaatgtcatgcaaagctagtggatatacatttacttcttacgtgatgcactgggtaaaacagaaacctggtcaggggcttgagtggatcgggtacattaacccatataatgacggcaccaaatataacgagaaattcaagggaaaggctacgcttacatcagataagtccagtagcaccgcttatatggaacttagcagccttacttccgaagattccgcggtgtattactgcgcgagagggacttactactacgggagtcgagtattcgattattggggtcaaggcacgacgctcacggtgagctcaggtggtggagggtctgggggtggcggcagtggtggggggggctcagacatcgtgatgacccaggcagcaccttctatcccggtaaccccaggcgagtctgtatctatcagttgtcggtccagcaagtctcttctcaacagtaatggcaatacatatctttactggttcctccaaaggcctgggcaaagtcctcaacttcttatatatcggatgtccaatcttgcgagtggcgtacccgacaggttttcagggtctgggagcggaacagcttttacgttgagaatatccagggtagaagctgaggacgtcggtgtatattattgcatgcaacatctcgaatacccctttaccttcggcgctggtacaaagctcgaattgaaacgcagcgatccaaccacgacgccagcgccacgaccacctacgcccgctccaactattgcctcccagcccctgagtcttcggccagaagcgtgtagacctgctgccggcggggccgttcatacgcggggccttgactttgcatgtgatatctatatatgggctcctttggcgggaacttgcggagtgcttcttttgtcactcgtgataacgttgtattgtaaaaggggtcgaaagaaactcctctatatatttaagcagccctttatgaggcccgtgcaaacaacacaagaagaggacggatgctcttgtcgattcccggaagaggaggagggggggtgtgagcttagggtcaagttttctcgctctgccgacgcgccagcctatcaacagggccaaaaccagctgtataacgaactcaacctcgggcgccgggaagagtatgacgtccttgacaaacggcgcggtcgcgaccctgaaatgggtggaaaaccgaggcgaaagaacccccaggagggactttacaacgaattgcaaaaagacaagatggccgaagcctattccgaaattggaatgaaaggcgagcggagacgaggtaaggggcatgacggcctgtatcaagggctctctacggccacgaaggatacttacgacgcccttcatatgcaagctcttccaccacgg(配列番号:390)
MVCLKLPGGSCMTALTVTLMVLSSPLALASDENPVVHFFKNIVTPRTPPGGGGSGGGGSGGSGDTRPRFLWQPKRECHFFNGTERVRFLDRYFYNQEESVRFDSDVGEFRAVTELGRPDAEYWNSQKDILEQARAAVDTYCRHNYGVVESFTVQRRVQPKVTVYPSKTQPLQHHNLLVCSVSGFYPGSIEVRWFLNGQEEKAGMVSTGLIQNGDWTFQTLVMLETVPRSGEVYTCQVEHPSVTSPLTVEWRARSESAQSKMLSGVGGFVLGLLFLGAGLFIYFRNQTSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(配列番号:412)
ATGGTATGCTTGAAGCTCCCGGGCGGGTCCTGCATGACCGCTCTCACTGTTACTCTTATGGTCCTTAGTTCACCGCTTGCCCTGGCATCTGATGAGAATCCCGTGGTTCATTTTTTTAAGAACATCGTCACACCGCGCACCCCACCTGGGGGAGGCGGATCTGGCGGAGGCGGGAGTGGAGGCTCAGGAGACACAAGACCCCGATTCTTGTGGCAGCCCAAAAGGGAGTGCCATTTTTTCAATGGGACGGAACGAGTTCGCTTCCTTGATCGGTACTTTTACAACCAAGAAGAGAGTGTACGGTTCGACTCAGATGTCGGCGAGTTCCGAGCGGTTACGGAATTGGGGCGACCTGACGCGGAGTACTGGAACTCCCAAAAGGATATTTTGGAGCAGGCACGAGCAGCTGTGGACACCTATTGTCGACATAATTATGGTGTGGTGGAATCCTTTACAGTTCAGCGGCGGGTGCAACCTAAAGTGACCGTGTATCCATCTAAAACGCAACCCCTCCAACACCATAACCTCCTGGTGTGTTCCGTAAGCGGCTTCTATCCCGGGTCAATTGAGGTCAGGTGGTTCCTCAACGGTCAGGAGGAGAAGGCCGGAATGGTAAGTACTGGTCTTATCCAGAACGGAGACTGGACCTTCCAAACTTTGGTAATGTTGGAAACGGTGCCGCGATCCGGGGAGGTGTATACATGCCAAGTTGAACACCCGAGTGTTACGAGCCCCCTGACGGTTGAGTGGAGGGCGCGGTCAGAGAGCGCACAATCTAAAATGCTGTCAGGAGTAGGCGGATTTGTACTCGGACTCCTCTTTTTGGGCGCTGGGTTGTTTATCTACTTTAGAAACCAAACAAGTAGAGTAAAGTTTTCCCGAAGTGCGGACGCTCCCGCGTATCAGCAAGGTCAAAACCAGCTTTACAACGAACTGAACTTGGGACGACGCGAAGAGTACGATGTTCTTGATAAGCGGAGAGGGCGCGATCCCGAAATGGGGGGAAAGCCTCGGAGGAAGAACCCACAAGAAGGCCTTTATAATGAACTGCAGAAGGACAAGATGGCGGAGGCGTATTCCGAAATAGGCATGAAGGGTGAACGGAGGAGAGGAAAGGGACATGACGGACTTTATCAAGGATTGTCTACCGCAACTAAAGACACCTATGACGCGTTGCACATGCAGGCTCTCCCTCCGAGA(配列番号:413)
MAISGVPVLGFFIIAVLMSAQESWAIKEEHVIIQAEFYLNPDQSGEFMFDFDGDEIFHVDMAKKETVWRLEEFGRFASFEAQGALANIAVDKANLEIMTKRSNYTPITNVPPEVTVLTNSPVELREPNVLICFIDKFTPPVVNVTWLRNGKPVTTGVSETVFLPREDHLFRKFHYLPFLPSTEDVYDCRVEHWGLDEPLLKHWEFDAPSPLPETTENVVCALGLTVGLVGIIIGTIFIIKGLTSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(配列番号:423)
ATGGCAATATCTGGTGTTCCTGTCCTCGGGTTTTTTATCATAGCCGTACTGATGTCAGCACAGGAATCATGGGCGATAAAAGAAGAGCACGTGATAATACAGGCGGAGTTTTATTTGAACCCGGACCAGAGCGGTGAGTTCATGTTCGATTTTGATGGCGACGAGATATTTCACGTTGACATGGCAAAAAAGGAAACGGTGTGGAGACTTGAGGAGTTTGGACGATTCGCATCATTTGAGGCACAAGGAGCACTCGCCAATATCGCGGTGGACAAGGCCAACCTGGAGATCATGACAAAACGCTCCAATTATACGCCTATCACTAATGTGCCCCCTGAGGTTACTGTGCTCACAAATTCTCCCGTAGAACTTAGGGAACCTAACGTCCTCATATGTTTCATCGACAAGTTCACTCCTCCGGTGGTCAATGTAACGTGGCTTCGGAATGGTAAGCCGGTCACCACGGGTGTCTCAGAGACCGTATTTCTGCCCAGAGAAGACCACCTCTTCCGCAAATTTCATTACCTTCCCTTTCTTCCTTCAACGGAAGACGTTTACGACTGCAGGGTCGAACATTGGGGGCTTGACGAGCCACTTCTCAAGCATTGGGAGTTCGACGCCCCATCACCGCTTCCAGAAACGACTGAAAACGTTGTCTGCGCTCTTGGCCTGACAGTGGGCCTGGTAGGCATTATTATCGGGACCATCTTTATCATCAAAGGTTTGACTTCCCGGGTCAAATTTAGCAGATCCGCTGACGCACCGGCCTACCAGCAGGGCCAGAACCAACTCTACAACGAGCTGAATCTCGGCCGACGGGAAGAGTATGACGTACTCGACAAGCGGAGAGGTCGAGACCCTGAGATGGGCGGTAAACCGAGACGGAAAAATCCCCAAGAGGGTCTTTATAATGAACTCCAGAAGGATAAGATGGCTGAAGCCTATTCTGAGATAGGGATGAAAGGCGAGCGGCGGAGGGGTAAGGGCCATGATGGCCTTTACCAGGGACTCTCCACGGCAACCAAAGATACTTACGACGCCCTTCACATGCAAGCCCTCCCGCCACGC(配列番号:424)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEVQLQQSGPELIKPGASVKMSCKASGYTFTSYVMHWVKQKPGQGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCARGTYYYGSRVFDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQAAPSIPVTPGESVSISCRSSKSLLNSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGAGTKLELKRSDPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSSGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPMSGESMNFSDVFDSSEDYFVSVNTSYYSVDSEMLLCSLQEVRQFSRLFVPIAYSLICVFGLLGNILVVITFAFYKKARSMTDVYLLNMAIADILFVLTLPFWAVSHATGAWVFSNATCKLLKGIYAINFNCGMLLLTCISMDRYIAIVQATKSFRLRSRTLPRSKIICLVVWGLSVIISSSTFVFNQKYNTQGSDVCEPKYQTVSEPIRWKLLMLGLELLFGFFIPLMFMIFCYTFIVKTLVQAQNSKRHKAIRVIIAVVLVFLACQIPHNMVLLVTAANLGKMNRSCQSEKLIGYTKTVTEVLAFLHCCLNPVLYAFIGQKFRNYFLKILKDLWCVRRKYKSSGFSCAGRYSENISRQTSETADNDNASSFTM(配列番号:425)
METDTLLLWVLLLWVPGSTGEVQLQQSGPELIKPGASVKMSCKASGYTFTSYVMHWVKQKPGQGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFKGKATLTSDKSSSTAYMELSSLTSEDSAVYYCARGTYYYGSRVFDYWGQGTTLTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQAAPSIPVTPGESVSISCRSSKSLLNSNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASGVPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYCMQHLEYPFTFGAGTKLELKRSDPTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSSGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPMSGESMNFSDVFDSSEDYFVSVNTSYYSVDSEMLLCSLQEVRQFSRLFVPIAYSLICVFGLLGNILVVITFAFYKKARSMTDVYLLNMAIADILFVLTLPFWAVSHATGAWVFSNATCKLLKGIYAINFNCGMLLLTCISMDRYIAIVQATKSFRLRSRTLPRSKIICLVVWGLSVIISSSTFVFNQKYNTQGSDVCEPKYQTVSEPIRWKLLMLGLELLFGFFIPLMFMIFCYTFIVKTLVQAQNSKRHKAIRVIIAVVLVFLACQIPHNMVLLVTAANLGKMNRSCQSEKLIGYTKTVTEVLAFLHCCLNPVLYAFIGQKFRNYFLKILKDLWCVRRKYKSSGFSCAGRYSENISRQTSETADNDNASSFTMGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKANFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYK(配列番号:429)
atggagacagacactcttctcctttgggtcttgctgctgtgggttcccggaagcacaggagaagtacagttgcaacagtctgggccagaactcatcaaacccggagcttctgtaaaaatgtcatgcaaagctagtggatatacatttacttcttacgtgatgcactgggtaaaacagaaacctggtcaggggcttgagtggatcgggtacattaacccatataatgacggcaccaaatataacgagaaattcaagggaaaggctacgcttacatcagataagtccagtagcaccgcttatatggaacttagcagccttacttccgaagattccgcggtgtattactgcgcgagagggacttactactacgggagtcgagtattcgattattggggtcaaggcacgacgctcacggtgagctcaggtggtggagggtctgggggtggcggcagtggtggggggggctcagacatcgtgatgacccaggcagcaccttctatcccggtaaccccaggcgagtctgtatctatcagttgtcggtccagcaagtctcttctcaacagtaatggcaatacatatctttactggttcctccaaaggcctgggcaaagtcctcaacttcttatatatcggatgtccaatcttgcgagtggcgtacccgacaggttttcagggtctgggagcggaacagcttttacgttgagaatatccagggtagaagctgaggacgtcggtgtatattattgcatgcaacatctcgaatacccctttaccttcggcgctggtacaaagctcgaattgaaacgcagcgatccaaccacgacgccagcgccacgaccacctacgcccgctccaactattgcctcccagcccctgagtcttcggccagaagcgtgtagacctgctgccggcggggccgttcatacgcggggccttgactttgcatgtgatatctatatatgggctcctttggcgggaacttgcggagtgcttcttttgtcactcgtgataacgttgtattgtaaaaggggtcgaaagaaactcctctatatatttaagcagccctttatgaggcccgtgcaaacaacacaagaagaggacggatgctcttgtcgattcccggaagaggaggagggggggtgtgagcttagggtcaagttttctcgctctgccgacgcgccagcctatcaacagggccaaaaccagctgtataacgaactcaacctcgggcgccgggaagagtatgacgtccttgacaaacggcgcggtcgcgaccctgaaatgggtggaaaaccgaggcgaaagaacccccaggagggactttacaacgaattgcaaaaagacaagatggccgaagcctattccgaaattggaatgaaaggcgagcggagacgaggtaaggggcatgacggcctgtatcaagggctctctacggccacgaaggatacttacgacgcccttcatatgcaagctcttccaccacggggttcgagcggcagtggagagggcagaggaagtctgctaacatgcggtgacgtcgaggagaatcctggcccaatgagtggggaaagtatgaacttcagcgatgtatttgactcctccgaagattactttgtatctgtgaatacgagctattactccgtcgatagtgaaatgctgctctgtagtctccaagaagtccgccaattcagtcgcctcttcgttcccatcgcgtactcccttatttgtgtttttggccttctgggtaacatcctggttgtaatcacattcgctttctataaaaaagctcggagtatgactgatgtttaccttcttaacatggctatagcggacattctttttgtgcttactctcccattctgggctgtgagccatgcaacaggggcgtgggttttttcaaatgccacatgtaagctgcttaaagggatctatgcaataaacttcaattgcgggatgctcctgctgacatgcatcagtatggatcgatacatagctatagtacaggcgactaagtccttccgcctgcgatcccgcacactgcctaggagcaaaattatttgcctcgtcgtatgggggctctcagtgatcatctcctccagtacgtttgtctttaaccagaaatataacacacagggttctgatgtatgtgaaccaaagtatcagacagtgagtgaaccaatacggtggaagttgcttatgttgggcttggagctgctttttgggtttttcatcccactgatgttcatgattttctgttatacatttattgttaagaccttggttcaggcgcaaaatagcaagagacataaggcaattcgagtcatcattgccgtggtgttggtcttcttggcctgtcagatcccccataatatggttctgctcgtcaccgccgctaacttgggtaagatgaatcgatcttgtcagtccgagaagttgatcggatacaccaaaactgtgacagaagtgctggccttccttcactgttgtctgaacccagttttgtatgcttttataggacagaagtttcgaaattacttcttgaaaatcctcaaggacctctggtgtgttcgaaggaagtacaagagctctggctttagttgcgctgggcgctacagtgagaatatatcccggcagacctccgagactgctgataatgacaacgcaagttccttcactatgggatccggcgcaacaaacttctctctgctgaaacaagccggagatgtcgaagagaatcctggaccggtgagcaagggcgaggagctgttcaccggggtggtgcccatcctggtcgagctggacggcgacgtaaacggccacaagttcagcgtgtctggcgagggcgagggcgatgccacctacggcaagctgaccctgaagttcatctgcaccaccggcaagctgcccgtgccctggcccaccctcgtgaccaccctgacctacggcgtgcagtgcttcagccgctaccccgaccacatgaagcagcacgacttcttcaagtccgccatgcccgaaggctacgtccaggagcgcaccatcttcttcaaggacgacggcaactacaagacccgcgccgaggtgaagttcgagggcgacaccctggtgaaccgcatcgagctgaagggcatcgacttcaaggaggacggcaacatcctggggcacaagctggagtacaactacaacagccacaacgtctatatcatggccgacaagcagaagaacggcatcaaggcgaacttcaagatccgccacaacatcgaggacggcagcgtgcagctcgccgaccactaccagcagaacacccccatcggcgacggccccgtgctgctgcccgacaaccactacctgagcacccagtccgccctgagcaaagaccccaacgagaagcgcgatcacatggtcctgctggagttcgtgaccgccgccgggatcactctcggcatggacgagctgtacaagtaa(配列番号:430)
MVCLKLPGGSCMTALTVTLMVLSSPLALASDENPVVHFFKNIVTPRTPPGGGGSGGGGSGGSGDTRPRFLWQPKRECHFFNGTERVRFLDRYFYNQEESVRFDSDVGEFRAVTELGRPDAEYWNSQKDILEQARAAVDTYCRHNYGVVESFTVQRRVQPKVTVYPSKTQPLQHHNLLVCSVSGFYPGSIEVRWFLNGQEEKAGMVSTGLIQNGDWTFQTLVMLETVPRSGEVYTCQVEHPSVTSPLTVEWRARSESAQSKMLSGVGGFVLGLLFLGAGLFIYFRNQTSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSSGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPMAISGVPVLGFFIIAVLMSAQESWAIKEEHVIIQAEFYLNPDQSGEFMFDFDGDEIFHVDMAKKETVWRLEEFGRFASFEAQGALANIAVDKANLEIMTKRSNYTPITNVPPEVTVLTNSPVELREPNVLICFIDKFTPPVVNVTWLRNGKPVTTGVSETVFLPREDHLFRKFHYLPFLPSTEDVYDCRVEHWGLDEPLLKHWEFDAPSPLPETTENVVCALGLTVGLVGIIIGTIFIIKGLTSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(配列番号:431)
atggtatgcttgaagctcccgggcgggtcctgcatgaccgctctcactgttactcttatggtccttagttcaccgcttgccctggcatctgatgagaatcccgtggttcatttttttaagaacatcgtcacaccgcgcaccccacctgggggaggcggatctggcggaggcgggagtggaggctcaggagacacaagaccccgattcttgtggcagcccaaaagggagtgccattttttcaatgggacggaacgagttcgcttccttgatcggtacttttacaaccaagaagagagtgtacggttcgactcagatgtcggcgagttccgagcggttacggaattggggcgacctgacgcggagtactggaactcccaaaaggatattttggagcaggcacgagcagctgtggacacctattgtcgacataattatggtgtggtggaatcctttacagttcagcggcgggtgcaacctaaagtgaccgtgtatccatctaaaacgcaacccctccaacaccataacctcctggtgtgttccgtaagcggcttctatcccgggtcaattgaggtcaggtggttcctcaacggtcaggaggagaaggccggaatggtaagtactggtcttatccagaacggagactggaccttccaaactttggtaatgttggaaacggtgccgcgatccggggaggtgtatacatgccaagttgaacacccgagtgttacgagccccctgacggttgagtggagggcgcggtcagagagcgcacaatctaaaatgctgtcaggagtaggcggatttgtactcggactcctctttttgggcgctgggttgtttatctactttagaaaccaaacaagtagagtaaagttttcccgaagtgcggacgctcccgcgtatcagcaaggtcaaaaccagctttacaacgaactgaacttgggacgacgcgaagagtacgatgttcttgataagcggagagggcgcgatcccgaaatggggggaaagcctcggaggaagaacccacaagaaggcctttataatgaactgcagaaggacaagatggcggaggcgtattccgaaataggcatgaagggtgaacggaggagaggaaagggacatgacggactttatcaaggattgtctaccgcaactaaagacacctatgacgcgttgcacatgcaggctctccctccgagaggttcgagcggcagtggagagggcagaggaagtctgctaacatgcggtgacgtcgaggagaatcctggcccaatggcaatatctggtgttcctgtcctcgggttttttatcatagccgtactgatgtcagcacaggaatcatgggcgataaaagaagagcacgtgataatacaggcggagttttatttgaacccggaccagagcggtgagttcatgttcgattttgatggcgacgagatatttcacgttgacatggcaaaaaaggaaacggtgtggagacttgaggagtttggacgattcgcatcatttgaggcacaaggagcactcgccaatatcgcggtggacaaggccaacctggagatcatgacaaaacgctccaattatacgcctatcactaatgtgccccctgaggttactgtgctcacaaattctcccgtagaacttagggaacctaacgtcctcatatgtttcatcgacaagttcactcctccggtggtcaatgtaacgtggcttcggaatggtaagccggtcaccacgggtgtctcagagaccgtatttctgcccagagaagaccacctcttccgcaaatttcattaccttccctttcttccttcaacggaagacgtttacgactgcagggtcgaacattgggggcttgacgagccacttctcaagcattgggagttcgacgccccatcaccgcttccagaaacgactgaaaacgttgtctgcgctcttggcctgacagtgggcctggtaggcattattatcgggaccatctttatcatcaaaggtttgacttcccgggtcaaatttagcagatccgctgacgcaccggcctaccagcagggccagaaccaactctacaacgagctgaatctcggccgacgggaagagtatgacgtactcgacaagcggagaggtcgagaccctgagatgggcggtaaaccgagacggaaaaatccccaagagggtctttataatgaactccagaaggataagatggctgaagcctattctgagatagggatgaaaggcgagcggcggaggggtaagggccatgatggcctttaccagggactctccacggcaaccaaagatacttacgacgcccttcacatgcaagccctcccgccacgc(配列番号:71)
MGTSLLCWMALCLLGADHADACPYSNPSLCSGGGGSELPTQGTFSNVSTNVSPAKPTTTACPYSNPSLCSGGGGSPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRRRVCKCPRPVVRSGSGQCTNYALLKLAGDVESNPGPPTGMVCLKLPGGSCMTALTVTLMVLSSPLALASDENPVVHFFKNIVTPRTPPGGGGSGGGGSGGSGDTRPRFLWQPKRECHFFNGTERVRFLDRYFYNQEESVRFDSDVGEFRAVTELGRPDAEYWNSQKDILEQARAAVDTYCRHNYGVVESFTVQRRVQPKVTVYPSKTQPLQHHNLLVCSVSGFYPGSIEVRWFLNGQEEKAGMVSTGLIQNGDWTFQTLVMLETVPRSGEVYTCQVEHPSVTSPLTVEWRARSESAQSKMLSGVGGFVLGLLFLGAGLFIYFRNQTSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSSGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPMAISGVPVLGFFIIAVLMSAQESWAIKEEHVIIQAEFYLNPDQSGEFMFDFDGDEIFHVDMAKKETVWRLEEFGRFASFEAQGALANIAVDKANLEIMTKRSNYTPITNVPPEVTVLTNSPVELREPNVLICFIDKFTPPVVNVTWLRNGKPVTTGVSETVFLPREDHLFRKFHYLPFLPSTEDVYDCRVEHWGLDEPLLKHWEFDAPSPLPETTENVVCALGLTVGLVGIIIGTIFIIKGLTSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(配列番号:211)
atgggtacttcactgttgtgctggatggcactttgtcttttgggtgccgatcatgctgatgcatgtccgtactccaatcctagcctgtgctccggggggggagggagtgaactccctacacagggaaccttctctaatgtctccaccaacgtctcccctgcaaaaccgaccacaacagcttgcccctatagtaacccttccctctgtagtggaggggggggttcacctgctccacgccctcctacccccgcgccaacgatcgcgtcacaaccgctcagtcttaggccggaagcctgtaggccagcggctggcggtgcggttcatacgcggggattggattttgcctgcgacatttacatttgggctccgctggccggtacttgtggggtattgctgttgtctcttgttattacgctttattgcaatcacaggaacaggcgacgagtatgcaaatgcccgcggcccgtcgtgagatctgggtccggccaatgtactaactacgctttgttgaaactcgctggcgatgttgaaagtaaccccggtcctccaacaggtatggtatgcttgaagctcccgggcgggtcctgcatgaccgctctcactgttactcttatggtccttagttcaccgcttgccctggcatctgatgagaatcccgtggttcatttttttaagaacatcgtcacaccgcgcaccccacctgggggaggcggatctggcggaggcgggagtggaggctcaggagacacaagaccccgattcttgtggcagcccaaaagggagtgccattttttcaatgggacggaacgagttcgcttccttgatcggtacttttacaaccaagaagagagtgtacggttcgactcagatgtcggcgagttccgagcggttacggaattggggcgacctgacgcggagtactggaactcccaaaaggatattttggagcaggcacgagcagctgtggacacctattgtcgacataattatggtgtggtggaatcctttacagttcagcggcgggtgcaacctaaagtgaccgtgtatccatctaaaacgcaacccctccaacaccataacctcctggtgtgttccgtaagcggcttctatcccgggtcaattgaggtcaggtggttcctcaacggtcaggaggagaaggccggaatggtaagtactggtcttatccagaacggagactggaccttccaaactttggtaatgttggaaacggtgccgcgatccggggaggtgtatacatgccaagttgaacacccgagtgttacgagccccctgacggttgagtggagggcgcggtcagagagcgcacaatctaaaatgctgtcaggagtaggcggatttgtactcggactcctctttttgggcgctgggttgtttatctactttagaaaccaaacaagtagagtaaagttttcccgaagtgcggacgctcccgcgtatcagcaaggtcaaaaccagctttacaacgaactgaacttgggacgacgcgaagagtacgatgttcttgataagcggagagggcgcgatcccgaaatggggggaaagcctcggaggaagaacccacaagaaggcctttataatgaactgcagaaggacaagatggcggaggcgtattccgaaataggcatgaagggtgaacggaggagaggaaagggacatgacggactttatcaaggattgtctaccgcaactaaagacacctatgacgcgttgcacatgcaggctctccctccgagaggttcgagcggcagtggagagggcagaggaagtctgctaacatgcggtgacgtcgaggagaatcctggcccaatggcaatatctggtgttcctgtcctcgggttttttatcatagccgtactgatgtcagcacaggaatcatgggcgataaaagaagagcacgtgataatacaggcggagttttatttgaacccggaccagagcggtgagttcatgttcgattttgatggcgacgagatatttcacgttgacatggcaaaaaaggaaacggtgtggagacttgaggagtttggacgattcgcatcatttgaggcacaaggagcactcgccaatatcgcggtggacaaggccaacctggagatcatgacaaaacgctccaattatacgcctatcactaatgtgccccctgaggttactgtgctcacaaattctcccgtagaacttagggaacctaacgtcctcatatgtttcatcgacaagttcactcctccggtggtcaatgtaacgtggcttcggaatggtaagccggtcaccacgggtgtctcagagaccgtatttctgcccagagaagaccacctcttccgcaaatttcattaccttccctttcttccttcaacggaagacgtttacgactgcagggtcgaacattgggggcttgacgagccacttctcaagcattgggagttcgacgccccatcaccgcttccagaaacgactgaaaacgttgtctgcgctcttggcctgacagtgggcctggtaggcattattatcgggaccatctttatcatcaaaggtttgacttcccgggtcaaatttagcagatccgctgacgcaccggcctaccagcagggccagaaccaactctacaacgagctgaatctcggccgacgggaagagtatgacgtactcgacaagcggagaggtcgagaccctgagatgggcggtaaaccgagacggaaaaatccccaagagggtctttataatgaactccagaaggataagatggctgaagcctattctgagatagggatgaaaggcgagcggcggaggggtaagggccatgatggcctttaccagggactctccacggcaaccaaagatacttacgacgcccttcacatgcaagccctcccgccacgc(配列番号:403)
MGTSLLCWMALCLLGADHADACPYSNPSLCSGGGGSELPTQGTFSNVSTNVSPAKPTTTACPYSNPSLCSGGGGSPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRRRVCKCPRPVVRSGSGQCTNYALLKLAGDVESNPGPPTGMVCLKLPGGSCMTALTVTLMVLSSPLALASDENPVVHFFKNIVTPRTPPGGGGSGGGGSGGSGDTRPRFLWQPKRECHFFNGTERVRFLDRYFYNQEESVRFDSDVGEFRAVTELGRPDAEYWNSQKDILEQARAAVDTYCRHNYGVVESFTVQRRVQPKVTVYPSKTQPLQHHNLLVCSVSGFYPGSIEVRWFLNGQEEKAGMVSTGLIQNGDWTFQTLVMLETVPRSGEVYTCQVEHPSVTSPLTVEWRARSESAQSKMLSGVGGFVLGLLFLGAGLFIYFRNQTSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSSGSGEGRGSLLTCGDVEENPGPMAISGVPVLGFFIIAVLMSAQESWAIKEEHVIIQAEFYLNPDQSGEFMFDFDGDEIFHVDMAKKETVWRLEEFGRFASFEAQGALANIAVDKANLEIMTKRSNYTPITNVPPEVTVLTNSPVELREPNVLICFIDKFTPPVVNVTWLRNGKPVTTGVSETVFLPREDHLFRKFHYLPFLPSTEDVYDCRVEHWGLDEPLLKHWEFDAPSPLPETTENVVCALGLTVGLVGIIIGTIFIIKGLTSRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRGSGATNFSLLKQAGDVEENPGPVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKANFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYK*(配列番号:405)
atgggtacttcactgttgtgctggatggcactttgtcttttgggtgccgatcatgctgatgcatgtccgtactccaatcctagcctgtgctccggggggggagggagtgaactccctacacagggaaccttctctaatgtctccaccaacgtctcccctgcaaaaccgaccacaacagcttgcccctatagtaacccttccctctgtagtggaggggggggttcacctgctccacgccctcctacccccgcgccaacgatcgcgtcacaaccgctcagtcttaggccggaagcctgtaggccagcggctggcggtgcggttcatacgcggggattggattttgcctgcgacatttacatttgggctccgctggccggtacttgtggggtattgctgttgtctcttgttattacgctttattgcaatcacaggaacaggcgacgagtatgcaaatgcccgcggcccgtcgtgagatctgggtccggccaatgtactaactacgctttgttgaaactcgctggcgatgttgaaagtaaccccggtcctccaacaggtatggtatgcttgaagctcccgggcgggtcctgcatgaccgctctcactgttactcttatggtccttagttcaccgcttgccctggcatctgatgagaatcccgtggttcatttttttaagaacatcgtcacaccgcgcaccccacctgggggaggcggatctggcggaggcgggagtggaggctcaggagacacaagaccccgattcttgtggcagcccaaaagggagtgccattttttcaatgggacggaacgagttcgcttccttgatcggtacttttacaaccaagaagagagtgtacggttcgactcagatgtcggcgagttccgagcggttacggaattggggcgacctgacgcggagtactggaactcccaaaaggatattttggagcaggcacgagcagctgtggacacctattgtcgacataattatggtgtggtggaatcctttacagttcagcggcgggtgcaacctaaagtgaccgtgtatccatctaaaacgcaacccctccaacaccataacctcctggtgtgttccgtaagcggcttctatcccgggtcaattgaggtcaggtggttcctcaacggtcaggaggagaaggccggaatggtaagtactggtcttatccagaacggagactggaccttccaaactttggtaatgttggaaacggtgccgcgatccggggaggtgtatacatgccaagttgaacacccgagtgttacgagccccctgacggttgagtggagggcgcggtcagagagcgcacaatctaaaatgctgtcaggagtaggcggatttgtactcggactcctctttttgggcgctgggttgtttatctactttagaaaccaaacaagtagagtaaagttttcccgaagtgcggacgctcccgcgtatcagcaaggtcaaaaccagctttacaacgaactgaacttgggacgacgcgaagagtacgatgttcttgataagcggagagggcgcgatcccgaaatggggggaaagcctcggaggaagaacccacaagaaggcctttataatgaactgcagaaggacaagatggcggaggcgtattccgaaataggcatgaagggtgaacggaggagaggaaagggacatgacggactttatcaaggattgtctaccgcaactaaagacacctatgacgcgttgcacatgcaggctctccctccgagaggttcgagcggcagtggagagggcagaggaagtctgctaacatgcggtgacgtcgaggagaatcctggcccaatggcaatatctggtgttcctgtcctcgggttttttatcatagccgtactgatgtcagcacaggaatcatgggcgataaaagaagagcacgtgataatacaggcggagttttatttgaacccggaccagagcggtgagttcatgttcgattttgatggcgacgagatatttcacgttgacatggcaaaaaaggaaacggtgtggagacttgaggagtttggacgattcgcatcatttgaggcacaaggagcactcgccaatatcgcggtggacaaggccaacctggagatcatgacaaaacgctccaattatacgcctatcactaatgtgccccctgaggttactgtgctcacaaattctcccgtagaacttagggaacctaacgtcctcatatgtttcatcgacaagttcactcctccggtggtcaatgtaacgtggcttcggaatggtaagccggtcaccacgggtgtctcagagaccgtatttctgcccagagaagaccacctcttccgcaaatttcattaccttccctttcttccttcaacggaagacgtttacgactgcagggtcgaacattgggggcttgacgagccacttctcaagcattgggagttcgacgccccatcaccgcttccagaaacgactgaaaacgttgtctgcgctcttggcctgacagtgggcctggtaggcattattatcgggaccatctttatcatcaaaggtttgacttcccgggtcaaatttagcagatccgctgacgcaccggcctaccagcagggccagaaccaactctacaacgagctgaatctcggccgacgggaagagtatgacgtactcgacaagcggagaggtcgagaccctgagatgggcggtaaaccgagacggaaaaatccccaagagggtctttataatgaactccagaaggataagatggctgaagcctattctgagatagggatgaaaggcgagcggcggaggggtaagggccatgatggcctttaccagggactctccacggcaaccaaagatacttacgacgcccttcacatgcaagccctcccgccacgcggatccggcgcaacaaacttctctctgctgaaacaagccggagatgtcgaagagaatcctggaccggtgagcaagggcgaggagctgttcaccggggtggtgcccatcctggtcgagctggacggcgacgtaaacggccacaagttcagcgtgtctggcgagggcgagggcgatgccacctacggcaagctgaccctgaagttcatctgcaccaccggcaagctgcccgtgccctggcccaccctcgtgaccaccctgacctacggcgtgcagtgcttcagccgctaccccgaccacatgaagcagcacgacttcttcaagtccgccatgcccgaaggctacgtccaggagcgcaccatcttcttcaaggacgacggcaactacaagacccgcgccgaggtgaagttcgagggcgacaccctggtgaaccgcatcgagctgaagggcatcgacttcaaggaggacggcaacatcctggggcacaagctggagtacaactacaacagccacaacgtctatatcatggccgacaagcagaagaacggcatcaaggcgaacttcaagatccgccacaacatcgaggacggcagcgtgcagctcgccgaccactaccagcagaacacccccatcggcgacggccccgtgctgctgcccgacaaccactacctgagcacccagtccgccctgagcaaagaccccaacgagaagcgcgatcacatggtcctgctggagttcgtgaccgccgccgggatcactctcggcatggacgagctgtacaagtaa`(配列番号:409)
抗CS1−CAR−v1(Luc63−V1 CAR):
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVKLLESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFDFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTPSLKDKFIISRDNAKNTLYLQMSKVRSEDTALYYCARPDGNYWYFDVWGAGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVGIAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFCQQYSSYPYTFGGGTKLEIKGLAVSTISSFFPPGYQKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(配列番号:129)
抗CS1−CAR−v2(Luc63−V2 CAR):
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抗CS1−CAR−v3(Luc63−V3 CAR):
MALPVTALLLPLALLLHAARPEVKLLESGGGLVQPGGSLKLSCAASGFDFSRYWMSWVRQAPGKGLEWIGEINPDSSTINYTPSLKDKFIISRDNAKNTLYLQMSKVRSEDTALYYCARPDGNYWYFDVWGAGTTVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVGIAVAWYQQKPGQSPKLLIYWASTRHTGVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLADYFCQQYSSYPYTFGGGTKLEIKEPKSPDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMIARTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR(配列番号:131)
抗CS1−CAR−v4(Luc90−V1 CAR):
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抗CS1−CAR−v5(Luc90−V2 CAR):
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抗CS1−CAR−v6(Luc90−V3 CAR):
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抗CA1−CAR−v7(Luc34−V1 CAR):
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抗CS1−CAR−v8(Luc34−V2 CAR):
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抗CS1−CAR−v9(Luc34−V3 CAR):
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抗CS1−CAR−v10(LucX1−V1 CAR)
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抗CS1−CAR−v11(LucX1−V2 CAR)
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抗CS1−CAR−v12(LucX1−V3 CAR):
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抗CS1−CAR−v13(LucX2−V1 CAR):
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抗CS1−CAR−v14(LucX2−V2 CAR):
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抗CS1−CAR−v15(LucX2−V3 CAR):
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本明細書に記載される任意のMHC−CARコンストラクトは、組換え技術などの常用の方法により調製され得る。本発明におけるキメラ受容体を調製する方法は、MHC−CARコンストラクト(単一のポリペプチドまたは2つのサブユニットを含む)をコードするまたは全体としてコードする核酸または核酸セットの生成を伴う。一部の実施形態では、核酸はまた、MHC−CARの2つのサブユニットのためのコーディング配列の間、またはMHC−CARのためのコーディング配列と宿主細胞中でMHC−CARと共発現される他の遺伝子のためのコーディング配列との間において自己切断性ペプチド(例えば、P2A、T2A、またはE2Aペプチド)をコードする(以下の議論を参照)。
(i)MHC−CAR発現免疫細胞
本明細書に記載されるMHC−CARを発現する免疫細胞は、MHC/ペプチド−TCRのエンゲージメントを介して自己免疫疾患に関与する病原性細胞(例えば、自己反応性T細胞)を認識できる細胞の特定の集団を提供する。MHC−CARのMHCペプチド部分と病原性細胞上のコグネイトTCRとの間の相互作用は、MHC−CARのシグナル伝達ドメイン(複数可)を介してMHC−CAR発現免疫細胞を活性化させて(任意選択的に免疫細胞の細胞膜シグナル伝達分子を局在化させることによる)、MHC−CAR発現免疫細胞の増殖および/またはエフェクター機能に繋がり、次にそれが病原性細胞を除去する。免疫細胞は、T細胞、NK細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、またはその任意の組合せであり得る。一部の実施形態では、免疫細胞はT細胞である。一部の実施形態では、免疫細胞はNK細胞である。特定の例は以下の実施例において提供される。
MGTSLLCWMALCLLGADHADACPYSNPSLCSGGGGSELPTQGTFSNVSTNVSPAKPTTTACPYSNPSLCSGGGGSPAPPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRRRVCKCPRPVV(配列番号:144)
MGTSLLCWMALCLLGADHADACPYSNPSLCSGGGGSELPTQGTFSNVSTNVSPAKPTTTACPYSNPSLCSGGGGSPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCNHRNRRRVCKCPRPVV(配列番号:394)
ATGGGTACTTCACTGTTGTGCTGGATGGCACTTTGTCTTTTGGGTGCCGATCATGCTGATGCATGTCCGTACTCCAATCCTAGCCTGTGCTCCGGGGGGGGAGGGAGTGAACTCCCTACACAGGGAACCTTCTCTAATGTCTCCACCAACGTCTCCCCTGCAAAACCGACCACAACAGCTTGCCCCTATAGTAACCCTTCCCTCTGTAGTGGAGGGGGGGGTTCACCTGCTCCACGCCCTCCTACCCCCGCGCCAACGATCGCGTCACAACCGCTCAGTCTTAGGCCGGAAGCCTGTAGGCCAGCGGCTGGCGGTGCGGTTCATACGCGGGGATTGGATTTTGCCTGCGACATTTACATTTGGGCTCCGCTGGCCGGTACTTGTGGGGTATTGCTGTTGTCTCTTGTTATTACGCTTTATTGCAATCACAGGAACAGGCGACGAGTATGCAAATGCCCGCGGCCCGTCGTG(配列番号:395)
1つまたは複数の追加の遺伝子改変は、MHC−CARコンストラクション(MHC-CAR construction)のトランスフェクションの前、同時、または後に宿主免疫細胞に導入され得る。例えば、1つまたは複数のマーカーおよび/または自殺遺伝子が宿主免疫細胞に導入されてもよい。例としては、緑色蛍光タンパク質(GFP)、強化型青色蛍光タンパク質(eBFP)、およびRQR8(CD34およびCD20からの標的エピトープを組み合わせたT細胞用の小型マーカー/自殺遺伝子。Philip et al., Blood 124(8):1277-87; 2014)などのRQR遺伝子が挙げられる。そのようなマーカー/自殺遺伝子は、MHC−CAR成分を用いて1つの発現カセット中で構築されてもよい。
VSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIKANFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYK(配列番号:427)
gtgagcaagggcgaggagctgttcaccggggtggtgcccatcctggtcgagctggacggcgacgtaaacggccacaagttcagcgtgtctggcgagggcgagggcgatgccacctacggcaagctgaccctgaagttcatctgcaccaccggcaagctgcccgtgccctggcccaccctcgtgaccaccctgacctacggcgtgcagtgcttcagccgctaccccgaccacatgaagcagcacgacttcttcaagtccgccatgcccgaaggctacgtccaggagcgcaccatcttcttcaaggacgacggcaactacaagacccgcgccgaggtgaagttcgagggcgacaccctggtgaaccgcatcgagctgaagggcatcgacttcaaggaggacggcaacatcctggggcacaagctggagtacaactacaacagccacaacgtctatatcatggccgacaagcagaagaacggcatcaaggcgaacttcaagatccgccacaacatcgaggacggcagcgtgcagctcgccgaccactaccagcagaacacccccatcggcgacggccccgtgctgctgcccgacaaccactacctgagcacccagtccgccctgagcaaagaccccaacgagaagcgcgatcacatggtcctgctggagttcgtgaccgccgccgggatcactctcggcatggacgagctgtacaagtaa(配列番号:428)
MSGESMNFSDVFDSSEDYFVSVNTSYYSVDSEMLLCSLQEVRQFSRLFVPIAYSLICVFGLLGNILVVITFAFYKKARSMTDVYLLNMAIADILFVLTLPFWAVSHATGAWVFSNATCKLLKGIYAINFNCGMLLLTCISMDRYIAIVQATKSFRLRSRTLPRSKIICLVVWGLSVIISSSTFVFNQKYNTQGSDVCEPKYQTVSEPIRWKLLMLGLELLFGFFIPLMFMIFCYTFIVKTLVQAQNSKRHKAIRVIIAVVLVFLACQIPHNMVLLVTAANLGKMNRSCQSEKLIGYTKTVTEVLAFLHCCLNPVLYAFIGQKFRNYFLKILKDLWCVRRKYKSSGFSCAGRYSENISRQTSETADNDNASSFTM(配列番号:391)
atgagtggggaaagtatgaacttcagcgatgtatttgactcctccgaagattactttgtatctgtgaatacgagctattactccgtcgatagtgaaatgctgctctgtagtctccaagaagtccgccaattcagtcgcctcttcgttcccatcgcgtactcccttatttgtgtttttggccttctgggtaacatcctggttgtaatcacattcgctttctataaaaaagctcggagtatgactgatgtttaccttcttaacatggctatagcggacattctttttgtgcttactctcccattctgggctgtgagccatgcaacaggggcgtgggttttttcaaatgccacatgtaagctgcttaaagggatctatgcaataaacttcaattgcgggatgctcctgctgacatgcatcagtatggatcgatacatagctatagtacaggcgactaagtccttccgcctgcgatcccgcacactgcctaggagcaaaattatttgcctcgtcgtatgggggctctcagtgatcatctcctccagtacgtttgtctttaaccagaaatataacacacagggttctgatgtatgtgaaccaaagtatcagacagtgagtgaaccaatacggtggaagttgcttatgttgggcttggagctgctttttgggtttttcatcccactgatgttcatgattttctgttatacatttattgttaagaccttggttcaggcgcaaaatagcaagagacataaggcaattcgagtcatcattgccgtggtgttggtcttcttggcctgtcagatcccccataatatggttctgctcgtcaccgccgctaacttgggtaagatgaatcgatcttgtcagtccgagaagttgatcggatacaccaaaactgtgacagaagtgctggccttccttcactgttgtctgaacccagttttgtatgcttttataggacagaagtttcgaaattacttcttgaaaatcctcaaggacctctggtgtgttcgaaggaagtacaagagctctggctttagttgcgctgggcgctacagtgagaatatatcccggcagacctccgagactgctgataatgacaacgcaagttccttcactatg(配列番号:392)
ATGAGCGGGGAATCAATGAATTTCAGCGATGTTTTCGACTCCAGTGAAGATTATTTTGTGTCAGTCAATACTTCATATTACTCAGTTGATTCTGAGATGTTACTGTGCTCCTTGCAGGAGGTCAGGCAGTTCTCCAGGCTATTTGTACCGATTGCCTACTCCTTGATCTGTGTCTTTGGCCTCCTGGGGAATATTCTGGTGGTGATCACCTTTGCTTTTTATAAGAAGGCCAGGTCTATGACAGACGTCTATCTCTTGAACATGGCCATTGCAGACATCCTCTTTGTTCTTACTCTCCCATTCTGGGCAGTGAGTCATGCCACTGGTGCGTGGGTTTTCAGCAATGCCACGTGCAAGTTGCTAAAAGGCATCTATGCCATCAACTTTAACTGCGGGATGCTGCTCCTGACTTGCATTAGCATGGACCGGTACATCGCCATTGTACAGGCGACTAAGTCATTCCGGCTCCGATCCAGAACACTACCGCGCACGAAAATCATCTGCCTTGTTGTGTGGGGGCTGTCAGTCATCATCTCCAGCTCAACTTTTGTCTTCAACCAAAAATACAACACCCAAGGCAGCGATGTCTGTGAACCCAAGTACCAGACTGTCTCGGAGCCCATCAGGTGGAAGCTGCTGATGTTGGGGCTTGAGCTACTCTTTGGTTTCTTTATCCCTTTGATGTTCATGATATTTTGTTACACGTTCATTGTCAAAACCTTGGTGCAAGCTCAGAATTCTAAAAGGCACAAAGCCATCCGTGTAATCATAGCTGTGGTGCTTGTGTTTCTGGCTTGTCAGATTCCTCATAACATGGTCCTGCTTGTGACGGCTGCAAATTTGGGTAAAATGAACCGATCCTGCCAGAGCGAAAAGCTAATTGGCTATACGAAAACTGTCACAGAAGTCCTGGCTTTCCTGCACTGCTGCCTGAACCCTGTGCTCTACGCTTTTATTGGGCAGAAGTTCAGAAACTACTTTCTGAAGATCTTGAAGGACCTGTGGTGTGTGAGAAGGAAGTACAAGTCCTCAGGCTTCTCCTGTGCCGGGAGGTACTCAGAAAACATTTCTCGGCAGACCAGTGAGACCGCAGATAACGACAATGCGTCGTCCTTCACTATG(配列番号:393)
任意の従来の遺伝子改変アプローチを使用して、本明細書に記載されるような方式で免疫細胞を遺伝子改変することができる。一部の実施形態では、遺伝子改変は、ゲノム編集を使用して行われる。「ゲノム編集」は、生物の任意のタンパク質コーディングまたは非コーディングヌクレオチド配列を含むゲノムを改変して標的遺伝子の発現をノックアウトする方法を指す。一般に、ゲノム編集方法は、例えば標的化されるヌクレオチド配列において、ゲノムの核酸を切断することができるエンドヌクレアーゼの使用を伴う。ゲノム中の二本鎖切断の修復が修復されて突然変異が導入されてもよく、かつ/または外因性核酸が標的化される部位に挿入されてもよい。
本明細書に開示される任意のMHC−CAR発現T細胞は制御性T細胞(Treg)であり得、Tregは、濾胞性制御性細胞の免疫モジュレーション活性を模倣するものであってもよい。本明細書において使用される場合、サプレッサーT細胞としても公知である制御性T細胞またはTreg細胞は、免疫系をモジュレ―トし、自己抗原への寛容を維持し、かつ/または自己免疫疾患を予防するT細胞の亜集団を指す。Treg細胞は免疫抑制因子として機能して、自己免疫疾患に関与する病的なCD4+および/またはCD8+細胞などのエフェクターT細胞の誘導および/または増殖を抑制または下方調節する。
本明細書に記載されるMHC−CAR(それを含むコーディング核酸またはベクター)を発現する宿主免疫細胞は、MS、I型糖尿病、ループス、関節リウマチなどの自己免疫疾患に関与する病原性細胞の標的化および除去のために有用である。一部の実施形態では、対象は哺乳動物、例えば、ヒト、サル、マウス、ウサギ、または家畜哺乳動物である。一部の実施形態では、対象はヒト、例えば、自己免疫疾患(例えば、MS)を有する、有することが疑われる、またはそのリスクがあるヒト患者である。
ように改変されてもよい。代替的に、Treg細胞は、例えば、PD−L1/PD−1をノックアウトし、CXCR5を提示して胚中心および/または異所性リンパ節への経路制御を行い、好適なMHC−CARおよび/または抗CD19−CARを発現するように改変されてもよい。Treg細胞のこれらの種類は、炎症の部位において病原性細胞と相互作用
し、病原性相互作用を遮断し、かつ/または炎症性環境を緩和してもよい。それらは、早期疾患ステージにおいて(病原性を阻害するため)または細胞傷害性療法の後(炎症性環境に戻ることを予防するため)に使用され得る。
本開示はまた、自己免疫における自己反応性T細胞などの病原性免疫細胞の抑制において使用するためのMHC−CAR発現免疫細胞の使用のためのキットを提供する。そのようなキットは、本明細書に記載されるものなど)のMAR−CARを発現する免疫細胞、および薬学的に許容される担体を含む組成物を含む1つまたは複数の容器を含んでもよい。
MBPロード主要組織適合複合体−キメラ抗原受容体(MHC−CAR)を標的化する抗原特異的T細胞受容体(TCR)のためのコンストラクトをアッセイ用のTCRノックアウトを有する細胞への再導入のために設計する。TCRコンストラクトの設計は、刊行された構造を有する抗原特異的TCRおよびヒト細胞株において検証されたTCR発現コンストラクトに基づく[17、46、51、52]。標識化のために緑色蛍光タンパク質(eGFP)またはルシフェラーゼを遺伝学的にコードさせる[28]。TCRコンストラクトおよびレポーティング遺伝子を含む例示的なレンチウイルス発現ベクターを図1に提供する。
(i)MHC−CARコンストラクトの設計
MBP 84−102エピトープをヒト白血球抗原HLADR2に遺伝学的に関連付ける養子細胞療法用の受容体を生成し、これはキメラ細胞内シグナル伝達ドメインを組み込んでいるかまたは欠いている[29]。抗原−主要組織適合複合体(Ag−MHC)ドメインは受容体として働き、MBP特異的標的細胞のTCRに結合する。Ag−MHC−CARは、CD3−ζ(すなわち、第一世代シグナル伝達ドメイン)を有する前臨床マウスモデルにおいて検証されており、[9、25]において提供される方法論にしたがって、ヒトにおける有効性のために追加の共刺激シグナル伝達ドメイン(すなわち、第二または第三世代シグナル伝達ドメイン)と任意選択的に組み合わせてもよい。MHC−CARの様々な設計の概略図を図2に提供する。
以下において議論する多数の細胞株は、MHC−CARコンストラクトを試験するために選択される。臨床転換可能なプロトコールを確立するためにアッセイを次にヒトT細胞において継続する。
ヒトT細胞を選択して、TALENによるTCRa、およびCD52またはCIITA遺伝子の不活性化を確認した後、TALENを使用して、MHC−CARと組み合わせて評価を行う。転写活性化因子様エフェクター(TALEN)は、配列特異的な方式でDNAに結合する。DNA結合ドメインは、特異的なヌクレオチド認識を付与する異なる2アミノ酸RVD(リピート可変ジペプチドモチーフ)を有する高度に保存された33〜34アミノ酸配列を含有する[23、31]。
− MHC−CAR−(FOX3P)−(CS1またはCD19 CAR)/(CS−1 CARのために必要とされるCS−1ノックアウト)
− MHC−CAR−(FOX3P)−(CCR7またはCXCR5)
− RQRタグ:操作されたT細胞は、リツキシマブ(殺傷スイッチ)を用いて除去され得る。新たに承認された抗CD20抗体Ocrevusのためのタグが生成され得る。
− ラパマイシンスイッチ:患者がラパマイシン(タクロリムス)を用いて治療される場合にのみ不活性/活性のCAR
− CD52ノックアウト:存在する免疫細胞の数を減少させるためのレムトラダ(アレムツズマブ)を用いる事前治療を可能とする
− VLA−4ノックアウト:病原性免疫細胞を末梢に移動させるためにタイサブリを用いて治療し得るが、操作された細胞はそこに留まることを強いられる(脳脊髄にスタックした細胞として確立されたMSを有する患者にとって理想的でないことがあるが、VLA−4の同時のmRNA発現はそれらの位置への一時的な接近を提供し得る)
− 操作されたT細胞からのIL−6抗体(トシリズマブ(Toclizumab))の分泌:操作されたT細胞が脳および脊髄に接近しないとならないが、BBBに起因してこの薬物は該位置に接近できない場合に役立つ
(i)MHC−CARを発現する初代T細胞の調製
初代T細胞は、以下のように調製され得る。T細胞を末梢血単核細胞から単離し(EasySep Human T Cell Enrichment Kit、Stemcell Technologies)、(X−VIVO 15培地、Lonza;20mg/mlのIl−2、Miltenyi;5%のヒトAB血清、Seralab)を用いて活性化させる(Dynabeads Human T−Activator CD3/CD28、Life Technologies)。MBP抗原ペプチドを含有する好適なMHC−CARコンストラクトを従来の方法を使用して初代T細胞に導入する。MHC−CARコンストラクトの表面発現をFACSおよび抗体染色により検証する。
コンストラクトのトラフィッキングおよび発現(mRNA、マルチシストロン性mRNA、レンチウイルスを用いる)が検証されたら、活性試験をin vitroで実行する。全ての試験を異なるエフェクター:標的(E:F)細胞濃度において実行する。in vitro試験は、MHC−CARシグナル伝達ドメインおよびT細胞サブセットの初期評価を提供する。
エレクトロポレーションの24時間後に、MHC−CARを用いて一過的に操作されたヒトT細胞をプレート結合HLA−DR抗体を用いて刺激して、MHC−CAR(様々なシグナル伝達ドメインを含有する)が機能的かどうかを決定する。Il−2産生をStemCell IL−2 ELISAキットを使用して24時間後に測定する。この試験は、バリアントを再操作または放棄すべきかどうかに関する迅速なアッセイを提供する[29]。
TCRを一過的に発現する標的細胞株をエレクトロポレーションの24時間後にTCR発現について磁気的に選別し、照射を行って、抗原特異的TCRとのMHC−CARのエンゲージメントがT細胞を含有するMHC−CARの増殖を刺激するかどうかを試験する。代替的に、TCRを安定に発現する標的細胞株に照射を行う。(+/−抗原特異的)TCRを提示する照射された細胞をCFSE標識MHCCAR細胞とインキュベートし、異なるT:E比での培養後に増殖を測定する[30]。
CAR T細胞をRQR上のエピトープ(使用される標的細胞上で発現されていない)またはT細胞マーカーの代わりにeBFPを通じて標識する。一過性または安定発現(一過性発現の例を記載する)を有する細胞株についてアッセイを行う。エレクトロポレーションの24時間後に、RQR8またはBFPのいずれかを有するMHC−CARヒトT細胞を標的(抗原特異的TCR SupT1もしくはJurkat)または対照(+/−TCR JurkatもしくはTCR− SupT1)細胞と6時間共培養する。一過性発現(および後に安定発現)の標的細胞に抗原特異的TCRをエレクトロポレートし、エレクトロポレーション後にCD3磁気ビーズを用いて選別する。RQR+またはBFP+ MHC−CAR T細胞(抗リツキシマブ抗体、QBEnd10抗体を用いて同定される)をフローサイトメトリーにより解析して、表面上の脱顆粒マーカーCD107aの発現を検出する[2]。
一過性または安定発現(一過性発現を記載する)を有する細胞株についてアッセイを行う。MHC−CARを一過的に発現するヒトT細胞をエレクトロポレーションの24時間後に標的細胞との共培養後のサイトカイン分泌について評価する。MHC−CARを一過的に発現するヒトT細胞を標的(抗原特異的TCR含有JurkatもしくはSupT1細胞)または対照(+/−非抗原特異的JurkatもしくはSupT1)細胞と24時間共培養する。抗原特異的TCRを次にアッセイ前の照射により殺傷する。上清を回収し、TH1/TH2 cytokine cytometric bead array kitを使用して解析してT細胞により産生されるサイトカインを定量化する[13]。MHC−CAR T細胞は、抗原特異的TCR発現標的細胞との共培養でIFNおよび他のサイトカインを産生するが、対照細胞との共培養では産生しない。
様々なレベルのMHC−CAR発現細胞を、トランスフェクションの24時間後に照射したTCR T細胞とインキュベートする。共培養物を24時間維持する。インキュベーションおよび遠心分離後、上清をELISAによるIFNγ検出を用いて試験する。
TCR T細胞を治療的MHC−CARの他に対照細胞とインキュベートする。MHC−CAR T細胞との共培養の前に標的および対照細胞を蛍光細胞内色素(CFSEまたはCell Trace Violet)を用いて標識する。共培養物を4時間インキュベートする。このインキュベーション期間後、細胞を固定可能生存色素(fixable viability dye)を用いて標識し、フローサイトメトリーにより解析する。各細胞集団(標的または陰性対照)の生存を決定し、特異的細胞溶解のパーセンテージを算出する。細胞傷害性アッセイを形質導入の48時間後に実行する。
PBMCを、MHC−CARコンストラクトを発現する照射またはミトマイシン処理した操作されたT細胞と共培養する。対照として、PBMCを、MHC−CARコンストラクトを発現しない照射またはミトマイシン処理した操作されたT細胞と共培養する。7日後、ヒト患者ドナーAからの細胞増殖をXTT比色アッセイまたはCFSE希釈(FACS分析)により測定する。細胞増殖が対照において観察されるが、操作されたT細胞が、分泌されるFPを発現する場合、細胞増殖は期待されないか、または限られた細胞増殖が期待される。この実験からの結果は、MHC−CAR発現T細胞がFPを発現する場合にアロ反応性T細胞の増殖は阻害されることを示すことを目的とする。
抗原特異的TCRとのMHC−CARのエンゲージメントがMHC−CAR含有T細胞の増殖を刺激するかどうかを試験するために、TCRを一過的に発現する標的細胞株をエレクトロポレーションの24時間後にTCR発現について磁気的に選別し、照射を行う。代替的に、TCRを安定に発現する標的細胞株に照射を行う。(+/−抗原特異的)TCRを提示する照射された細胞をCFSE標識MHC−CAR細胞とインキュベートし、異なるT:E比での培養後に増殖を測定する。
マウスT細胞中のMHC−CAR(マウスおよびヒトMHCを有する)は、多発性硬化症についてのマウスモデルである実験的アレルギー性脳脊髄炎において治療効果を以前に示している[25、29]。ここで我々は、ヒト細胞中のMHC−CARがヒトT細胞株中のヒトTCRを標的化できるかどうかを、以前のCAR T前臨床研究におけるものと類似のin vivoマウスモデルを使用して試験する[39]。in vivo試験は、MHC−CARシグナル伝達ドメインおよびT細胞サブセットのさらなる評価を可能とする。
形質導入T細胞を25%の乳仔ウサギ補体(AbD Serotec)に4時間、医薬的補体(リツキシマブ、タイサブリ、またはアレムツズマブ)を含めてまたは含めずに曝露して、補体依存性細胞傷害性(CDC)媒介性感受性を調べる。Miltenyi CD34磁気ビーズ選択形質導入RQR8 T細胞を同様に処理されたQ8形質導入T細胞の集団に対して比較してCDC媒介性欠失の特異性を実証する。CDCアッセイパラメーターのさらなる調査は、12.5、25、50、および100mg/mLの医薬的補体とインキュベートされたRQR8形質導入T細胞を使用する経時/用量滴定アッセイおよび1〜120分の範囲内の時点評価を通じて達成された。
多発性硬化症および他の自己免疫疾患に関与する病的なTリンパ球を抗原特異的に標的化する療法は、抗原非特異的な療法と比較して向上した治療指数を有することが期待される。この実施例は、治療的T細胞をMSに関与するミエリン塩基性タンパク質特異的Tリンパ球に対して選択的に向け直すためにキメラ抗原受容体を使用する例示的な細胞性免疫療法を提供する。
CD4+ T細胞をRosetteSep(STEMCELL Technologies)を介してPMBCから単離し、CD25+細胞について濃縮した後(Miltenyi Biotec)、FACSにより生CD4+CD45RO−CD45RA+CD25+ TregおよびCD4+CD45RO−CD45RA+CD25−対照T細胞に選別する。選別したT細胞を、Tregまたは非reg対照Tについてそれぞれ1,000U/mlまたは100U/mLのIL−2中のαCD3 mAbをロードした人工APC(aAPC)を用いて刺激する。1日後、細胞にレンチウイルスを用いて形質導入する。7日目に、ΔNGFR+細胞を磁気選択(Miltenyi Biotec)を用いて精製した後、上記のようなaAPCを用いて再刺激し、6〜7日間拡大増殖させた。
表現型解析のために、細胞を固定可能生存色素(FVD)(65−0865−14および65−0866−14、eBioscience)を用いて染色し、表面マーカーについて固定/透過処理の前にFOXP3/Transcription Factor Staining Buffer Set(eBioscience)を用いて染色した後、細胞内タンパク質について染色を行った。サイトカイン産生の解析のために、細胞をブレフェルジンA(10μg/ml)の存在下で10ng/mlのPMAおよび500ng/mlのイオノマイシン(全てSigma−Aldrich)を用いて4時間刺激した。試料をフローサイトメトリーにより解析した。
PBMCをPKH26またはPKH67(Sigma−Aldrich、PKH26GL−1KTおよびPKH67GL−1KT)を用いて標識し、Tregを細胞増殖色素(CPD)eFluor450(eBiosciences、65−0842−85)を用いて標識した後、製造者の一般的3Dゲルプロトコールにしたがって1×DMEMおよび10%のFCSから構成される1.5%のラットテイルコラーゲンI型の3Dゲル(Ibidi)中に懸濁する。細胞懸濁液をピペットで採ってμ−Slide Chemotaxis3Dに入れ、Leica TCS SP8共焦点顕微鏡上で35℃および5%のCO2の加湿インキュベーター(Tokai Hit)中で30分間重合させる。外チャンバーを1×DMEMで満たし、×10/0.30対物レンズを使用して2分毎に3時間画像を記録する。eFluor450、PKH67、およびPKH26を405nm、488nm、および561nmにおいて励起し、蛍光発光をそれぞれ415〜470nm、495〜525nm、および570〜650nmにおいて収集する。CAR−Tregと標的または対照細胞のいずれかとの間の相互作用の数を20分毎に定量化する。動かない細胞は解析から除外した。視野当たりの各標識細胞種の総数は、ImageJ(imagej.nih.gov/ij/)におけるanalyze particles機能を使用して計数することができる。
安定なFoxp3のTreg安定発現は、Foxp3遺伝子座内のTSDRの選択的な脱メチル化と関連付けられる。安定発現について試験するために、凍結T細胞ペレットからのDNAをDNeasy Blood and Tissue Kit(QIAGEN)を用いて単離し、EZ Direct Kit(Zymo Research)を用いてバイサルファイト変換した。BisDNAのPCRをHuman FOXP3 Kit(Epigen DX)を用いて行い、PyroMark buffer(QIAGEN)を使用するパイロシークエンシングのために調製した後、Biotage PyroMark Q96 MD pyrosequencer(QIAGEN)でアッセイした。結果をPyro Q−CpG software(Biotage)を用いて算出した。
サイトカイン産生を測定するために、T細胞株をK562細胞(1のK562:2のT細胞)を用いて48時間刺激する。上清を回収し、サイトカイン濃度をHuman Th1/Th2/Th17 Cytokine Kit(BD Biosciences)により決定し、解析した。
標的に特異的なTregはCD4+ T細胞増殖を抑制することもできたかどうかを試験するために、MHC CAR特異的CD4+ Tクローンを単離する。エプスタインバーウイルス形質転換Bリンパ芽球様(B lymphablastoid)細胞株にレンチウイルスを使用してMHC−CARを形質導入した。EBV細胞株を終夜生育し、150Gyで照射し、CAR発現Tregまたは従来のT細胞の非存在下または存在下でCPD標識MHC CAR特異的CD4+ Tクローンと共培養した。増殖を4日後に決定し、MHC CAR特異的クローンの抑制のパーセンテージを以下のように増殖のパーセンテージを使用して算出する:(100−[(増殖MHC CAR+試験の%)/(増殖MHC CAR単独の%)]×100)。
モノ/ポリシストロン性mRNAのエレクトロポレーションまたはレンチウイルス形質導入後に受容体をヒトT細胞において発現させる。受容体の発現をフローサイトメトリーを使用して解析する。要約すると、抗CD3/CD28コートビーズおよびIL2を用いて数日(3〜5)予備活性化させた5×106個のT細胞をcytoporation buffer T中に再懸濁し、45μgのmRNAをエレクトロポレートした。エレクトロポレーションの24時間後、複数鎖CARをコードするポリシストロン性mRNAを使用して操作されたヒトT細胞を固定可能生存色素eFluor−780およびPE共役ヤギ抗マウスIgG F(ab’)2断片特異的を用いて標識し、フローサイトメトリーにより解析した。代替的に、受容体をレンチウイルス中にベクター化し、発現させ、同様に解析した。
形質導入T細胞を以前に記載された通りに走化性アッセイにおいて使用した[Burkle et al., Blood, 110(9):3316-3325, 2007;Wu and Hwang, Journal of immunology, 168(10):5096, 2002.;Singh et al., Journal of immunology, 180(1):214-221, 2008.;Ryu et al., Molecules and Cells, 39.12:898-908, 2016.]。細胞(培地中の約20,000細胞、100万細胞、5×106/mL)を5μm孔径フィルターの上部に2連で置いた一方、ケモカインありおよびなしの培地を下チャンバーに入れた。37℃での30分、1h、3h、5hr、24hr後、プレートの底に落ちた移動細胞を以下の通りに処理した:
MHC−CARをコードするコンストラクトを実施例2に議論したように構築し、HEK293細胞中での発現について評価した。簡潔に述べれば、コンストラクト1は、EF1アルファ短プロモーター、CD19 CAR(4G7−CAR)、CCR6、およびGFPを含み(配列番号:426により提供される);コンストラクト2は、EF1アルファ短プロモーター、RQR8、MHC−CAR1部分B MHC−CAR1部分A、およびGFPを含む(配列番号:409により提供される)。
CCR6の検出のために、細胞をAPC(17−1969−42、eBioscience)に共役した抗CCR6モノクローナル抗体とインキュベートし、CD19の検出のために、細胞をビオチン化CD19(Acro CD9−H8259、Acro Biosystems)の後にストレプトアビジン−PE(405203、BioLegend(登録商標))とインキュベートした。
RQR8中に含まれるエピトープからのCD34発現の検出のために、細胞を抗CD34 APC共役モノクローナル抗体とインキュベートし、MHC−CAR発現の検出のために、細胞を抗HLA−DR抗体とインキュベートした。
atggagacagacactcttctcctttgggtcttgctgctgtgggttcccggaagcacaggagaagtacagttgcaacagtctgggccagaactcatcaaacccggagcttctgtaaaaatgtcatgcaaagctagtggatatacatttacttcttacgtgatgcactgggtaaaacagaaacctggtcaggggcttgagtggatcgggtacattaacccatataatgacggcaccaaatataacgagaaattcaagggaaaggctacgcttacatcagataagtccagtagcaccgcttatatggaacttagcagccttacttccgaagattccgcggtgtattactgcgcgagagggacttactactacgggagtcgagtattcgattattggggtcaaggcacgacgctcacggtgagctcaggtggtggagggtctgggggtggcggcagtggtggggggggctcagacatcgtgatgacccaggcagcaccttctatcccggtaaccccaggcgagtctgtatctatcagttgtcggtccagcaagtctcttctcaacagtaatggcaatacatatctttactggttcctccaaaggcctgggcaaagtcctcaacttcttatatatcggatgtccaatcttgcgagtggcgtacccgacaggttttcagggtctgggagcggaacagcttttacgttgagaatatccagggtagaagctgaggacgtcggtgtatattattgcatgcaacatctcgaatacccctttaccttcggcgctggtacaaagctcgaattgaaacgcagcgatccaaccacgacgccagcgccacgaccacctacgcccgctccaactattgcctcccagcccctgagtcttcggccagaagcgtgtagacctgctgccggcggggccgttcatacgcggggccttgactttgcatgtgatatctatatatgggctcctttggcgggaacttgcggagtgcttcttttgtcactcgtgataacgttgtattgtaaaaggggtcgaaagaaactcctctatatatttaagcagccctttatgaggcccgtgcaaacaacacaagaagaggacggatgctcttgtcgattcccggaagaggaggagggggggtgtgagcttagggtcaagttttctcgctctgccgacgcgccagcctatcaacagggccaaaaccagctgtataacgaactcaacctcgggcgccgggaagagtatgacgtccttgacaaacggcgcggtcgcgaccctgaaatgggtggaaaaccgaggcgaaagaacccccaggagggactttacaacgaattgcaaaaagacaagatggccgaagcctattccgaaattggaatgaaaggcgagcggagacgaggtaaggggcatgacggcctgtatcaagggctctctacggccacgaaggatacttacgacgcccttcatatgcaagctcttccaccacggggttcgagcggcagtggagagggcagaggaagtctgctaacatgcggtgacgtcgaggagaatcctggcccaatgagtggggaaagtatgaacttcagcgatgtatttgactcctccgaagattactttgtatctgtgaatacgagctattactccgtcgatagtgaaatgctgctctgtagtctccaagaagtccgccaattcagtcgcctcttcgttcccatcgcgtactcccttatttgtgtttttggccttctgggtaacatcctggttgtaatcacattcgctttctataaaaaagctcggagtatgactgatgtttaccttcttaacatggctatagcggacattctttttgtgcttactctcccattctgggctgtgagccatgcaacaggggcgtgggttttttcaaatgccacatgtaagctgcttaaagggatctatgcaataaacttcaattgcgggatgctcctgctgacatgcatcagtatggatcgatacatagctatagtacaggcgactaagtccttccgcctgcgatcccgcacactgcctaggagcaaaattatttgcctcgtcgtatgggggctctcagtgatcatctcctccagtacgtttgtctttaaccagaaatataacacacagggttctgatgtatgtgaaccaaagtatcagacagtgagtgaaccaatacggtggaagttgcttatgttgggcttggagctgctttttgggtttttcatcccactgatgttcatgattttctgttatacatttattgttaagaccttggttcaggcgcaaaatagcaagagacataaggcaattcgagtcatcattgccgtggtgttggtcttcttggcctgtcagatcccccataatatggttctgctcgtcaccgccgctaacttgggtaagatgaatcgatcttgtcagtccgagaagttgatcggatacaccaaaactgtgacagaagtgctggccttccttcactgttgtctgaacccagttttgtatgcttttataggacagaagtttcgaaattacttcttgaaaatcctcaaggacctctggtgtgttcgaaggaagtacaagagctctggctttagttgcgctgggcgctacagtgagaatatatcccggcagacctccgagactgctgataatgacaacgcaagttccttcactatg(配列番号:426)
コンストラクト2の核酸配列(配列番号:409)
CD3の発現を評価して、T細胞受容体アルファ定常(TRAC)遺伝子を標的化するCRISPR法の有効性を決定した。簡潔に述べれば、TRAC遺伝子を標的化するsgRNAを、フォワードプライマー(5’−AGCGCTCTCGTACAGAGTTGG−3’(配列番号:385))およびリバースプライマー(5’−AAAAAAAGCACCGACTCGGTGCC−3’(配列番号:386)を使用して標的部位を増幅することにより生成した。
5’− GAG AAU CAA AAU CGG UGA AUG UUU UAG AGC UAG AAA UAG CAA GUU AAA AUA AGG CUA GUC CGU UAU CAA CUU GAA AAA GUG GCA CCG AGU CGG UGC UUU U −3(配列番号:384)
により提供される。
5’− 2’OMe(G(ps)A(ps)G(ps))AAU CAA AAU CGG UGA AUG UUU UAG AGC UAG AAA UAG CAA GUU AAA AUA AGG CUA GUC CGU UAU CAA CUU GAA AAA GUG GCA CCG AGU CGG UGC 2’OMe(U(ps)U(ps)U(ps)U −3’(配列番号:387)
により提供される。2’OMe=2’O)−メチルRNAおよびps=ホスホロチオエート。
例示的なコンストラクト2においてコードされるRQR8殺傷スイッチの有効性を細胞生存アッセイを使用して評価した。簡潔に述べれば、HEK細胞に培地単独、コンストラクト1(配列番号:X)、コンストラクト2(リツキシマブ媒介性RQR8殺傷スイッチをコードする;配列番号:X)、またはコンストラクト1およびコンストラクト2の両方をトランスフェクトした。トランスフェクトされたHEK293細胞を回収し、計数し、1×10^6細胞/mLで再懸濁した。300uLの細胞懸濁液を48ウェル組織培養プレートの4つのウェルのそれぞれに移した。100uLの完全培地および4uLのリツキシマブを第2のウェルに加え、100uLの新たに調製した乳仔ウサギ補体および4uLのリツキシマブを第4のウェルに加えた。プレートを2、4、または24時間インキュベートした。1uLの冷却したアネキシンV緩衝液(150mMのNaCl、10mMのHEPES、10mMのCaCl)を加えることによりアッセイを終了させた後、試料を3mLのアネキシンV緩衝液を含有する事前調製したフローサイトメトリーチューブに移した。
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本明細書に開示される特徴の全てを任意の組合せで組み合わせてもよい。本明細書に開示される各特徴は、同じ、同等の、または類似の目的を果たす代替的な特徴により置換されてもよい。したがって、別段の明示的な記載がなければ、開示される各特徴は、同等または類似の特徴の包括的シリーズの例に過ぎない。
Claims (76)
- 主要組織適合複合体(MHC)ベースのキメラ受容体であって、
(i)自己免疫疾患に関与する抗原からの抗原ペプチドに共役したMHC分子の細胞外ドメイン、および
(ii)細胞質シグナル伝達ドメイン、少なくとも1つの共刺激ドメイン、またはその組合せ
を含む、MHCベースのキメラ受容体。 - 前記少なくとも1つの共刺激ドメインを含む、請求項1に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- 前記少なくとも1つの共刺激ドメインが、4−1BB(CD137)からの共刺激ドメイン、CD28からの共刺激ドメイン、またはその組合せである、請求項2に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- 前記MHCベースのキメラ受容体が、細胞質シグナル伝達ドメインを含まない、請求項2または請求項3に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- (i)と(ii)との間に位置するヒンジドメインをさらに含む、請求項1〜4のいずれか1項に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- CD3ζの細胞質シグナル伝達ドメインを含む、請求項1〜5のいずれか1項に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- 前記抗原ペプチドが、ミエリン塩基性タンパク質(MBP)、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質(MOG)、プロテオリピドタンパク質(PLP)、インスリン、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、または表1に記載されるものからの抗原ペプチドである、請求項1〜3のいずれか1項に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- 前記MHC分子がクラスI MHCである、請求項1〜7のいずれか1項に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- 前記クラスI MHCがヒトクラスI MHCである、請求項8に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- 前記キメラ受容体の前記細胞外ドメインが、前記抗原ペプチドに融合した前記クラスI MHCのアルファ鎖の細胞外ドメインを含む、請求項8または請求項9に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- 前記キメラ受容体が、(i)前記クラスI MHC分子の前記細胞外ドメイン、および(ii)前記細胞質ドメイン、前記少なくとも1つの共刺激ドメイン、または前記その組合せを含む融合ポリペプチドである、請求項10に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- 前記キメラ受容体が融合ポリペプチドであり、前記融合ポリペプチドが、N末端からC末端へ、シグナルペプチド、第1のペプチドリンカー、前記抗原ペプチド、第2のペプチドリンカー、マクログロブリンの細胞外ドメイン、第3のペプチドリンカー、前記クラスI MHC分子、膜貫通ドメイン、前記少なくとも1つの共刺激ドメイン、およびCD3ζを含む、請求項11に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- 前記MHC分子がクラスII MHCである、請求項1〜7のいずれか1項に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- 前記クラスII MHCがヒトMHC IIである、請求項13に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- 前記キメラ受容体が、第1のMHCクラスIIの細胞外ドメインを含む第1のポリペプチド、および第2のMHCクラスIIのベータ鎖の細胞外ドメインを含む第2のポリペプチドを含み、かつ、前記抗原ペプチドが、前記第1のポリペプチドまたは前記第2のポリペプチドのいずれかに融合しており、かつ、前記第1のポリペプチドまたは前記第2のポリペプチドのいずれかが、前記細胞質シグナル伝達ドメイン、前記少なくとも1つの共刺激ドメイン、または前記その組合せをさらに含む、請求項13または請求項14に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- 前記キメラ受容体が、(i)第1のMHCクラスII分子のアルファ鎖の細胞外ドメイン、(ii)第2のMHCクラスII分子のベータ鎖の細胞外ドメイン、(iii)前記抗原ペプチド、および(iv)前記細胞質シグナル伝達ドメイン、前記少なくとも1つの共刺激ドメイン、または前記その組合せを含む融合ポリペプチドである、請求項13または請求項14に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- 前記第1のMHCクラスIIがHLA−DRA*1010である、請求項13〜16のいずれか1項に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- 前記第2のMHCクラスIIがHLA−DRB1*1501である、請求項13〜17のいずれか1項に記載のMHCベースのキメラ受容体。
- 全体として請求項1〜18のいずれか1項に記載のMHCベースのキメラ受容体をコードする、核酸または核酸セット。
- 前記核酸または核酸セットがウイルスベクター中に位置する、請求項19に記載の核酸または核酸セット。
- 請求項1〜18のいずれか1項に記載のMHCベースのキメラ受容体を発現する、遺伝子改変免疫細胞。
- T細胞である、請求項21に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 内因性T細胞受容体(TCR)の活性が抑制される、請求項22に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記内因性TCRのアルファ鎖、前記内因性TCRのベータ鎖、または両方が、前記内因性TCRの表面発現を阻害するように突然変異または欠失している、請求項23に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 内因性CD52の発現が阻害される、請求項22〜24のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 自殺遺伝子、マーカー遺伝子、または両方をさらに発現する、請求項21〜25のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記自殺遺伝子がRQR8である、請求項26に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記マーカー遺伝子が蛍光タンパク質遺伝子である、請求項26に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記免疫細胞が、リンパ節への送達および保持のためにさらに改変されている、請求項21〜28のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記免疫細胞が、VAP−1、L−セレクチン、CCR7、またはその組合せを過剰発現するようにさらに操作されている、請求項29に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 内因性スフィンゴシン−1−リン酸受容体1の発現が前記免疫細胞において阻害されている、請求項29または請求項30に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記免疫細胞が、三次リンパ節または異所性リンパ節への送達および保持のための1つまたは複数の表面分子を発現するようにさらに改変されている、請求項21〜28のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記免疫細胞が、IL6STノックアウト、IL6Rノックアウト、または両方を用いて改変されている、請求項21〜32のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記免疫細胞が、ケモカイン受容体を発現または過剰発現するようにさらに改変されている、請求項21〜33のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記ケモカイン受容体が、炎症組織への病的細胞の遊走に関与する、請求項34に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記ケモカイン受容体が、CCR5、CXCR3、CCR4、CCR3、CCR6、CXCR3、CXCR4、CXCR5、またはその組合せを含む、請求項35に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記免疫細胞が、接着受容体を発現または過剰発現するようにさらに改変されている、請求項21〜36のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記接着受容体が、炎症領域への病的な免疫細胞のトラフィッキングに関与する、請求項37に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記接着受容体が、VLA−4、α4β1、α4β7、αLβ2、またはその組合せを含む、請求項38に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- PD−1シグナル伝達の遮断を結果としてもたらす遺伝子改変をさらに含む、請求項21〜39のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記改変が、PD−1ノックアウト、PD−L1ノックアウト、またはその組合せである、請求項40に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 制御性T細胞であり、前記制御性T細胞がCD25+である、請求項21〜41のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記制御性T細胞が、末梢血単核細胞から単離されたCD25++CD45R+ T細胞に由来する、請求項42に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記制御性T細胞が、CD25をコードする導入遺伝子を含む、請求項42に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記制御性T細胞が、FoxP3をコードする導入遺伝子を含む、請求項42〜44のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記制御性T細胞が、CD19に特異的なキメラ受容体、CS−1に特異的なキメラ受容体、または両方をさらに発現する、請求項42〜45のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記制御性T細胞が、CCR6、CXCR5、PD−1、またはその組合せをさらに発現する、請求項42〜46のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記制御性T細胞がCD4+である、請求項42〜47のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記制御性T細胞が、自己抗原に特異的な抗体を提示する、請求項42〜48のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記自己抗原が、表1に列記される自己抗原である、請求項49に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記自己抗原がMOGである、請求項50に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記細胞が抗炎症性サイトカインを分泌する、請求項42〜51のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記抗炎症性サイトカインが、Il−35、IL−10、および/またはTGF−ベータを含む、52に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 細胞傷害性リンパ球であり、前記細胞傷害性T細胞がCD8+である、請求項22〜41のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記細胞傷害性T細胞が、末梢血単核細胞から単離されたCD8+ T細胞に由来する、請求項54に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記細胞傷害性T細胞が、CD19に特異的なキメラ受容体、CS−1に特異的なキメラ受容体、または両方をさらに発現する、請求項54または請求項55に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 前記細胞傷害性T細胞が、CCR6、CXCR5、PD−1、またはその組合せをさらに発現する、請求項54〜56のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞。
- 自己免疫疾患を有する対象において自己反応性免疫細胞を抑制する方法であって、前記対象に有効量の請求項21〜57のいずれか1項に記載の遺伝子改変免疫細胞を投与することを含む、方法。
- 前記遺伝子改変免疫細胞がT細胞である、請求項58に記載の方法。
- 前記自己免疫疾患が多発性硬化症である、請求項58または請求項59に記載の方法。
- 前記遺伝子改変免疫細胞が自己細胞である、請求項58〜60のいずれか1項に記載の方法。
- 前記遺伝子改変免疫細胞が同種細胞である、請求項58〜60のいずれか1項に記載の方法。
- 前記遺伝子改変免疫細胞が前記対象のリンパ節に投与される、請求項58〜62のいずれか1項に記載の方法。
- 前記対象が、CD52に特異的な抗体を含む療法を受けている、請求項58〜63のいずれか1項に記載の方法。
- 前記対象が、多発性硬化症を有するまたはそのリスクがあるヒト患者であり、かつ、前記改変T細胞が、請求項33〜43のいずれか1項に記載のTreg細胞である、請求項58〜64のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ヒト患者が早期ステージMS患者であり、かつ、前記Treg細胞が、前記MHC−CARを発現し、かつ以下の遺伝子改変:
(i)PD−L1および/またはPD−1ノックアウト、
(ii)CCR6および/またはCXCR5の表面発現、
(iii)MOGに特異的な抗体またはその抗原結合断片の表面提示、ならびに
(iv)CD19を標的化するキメラ受容体の表面発現
の1つまたは複数を有する、請求項65に記載の方法。 - 前記ヒト患者が、再発寛解性MSまたは早期ステージ進行性を有し、かつ、前記Treg細胞が、前記MHC−CARを発現し、かつ以下の改変:
(i)CD19を標的化するキメラ受容体の表面発現、および
(ii)CXCR5の表面発現
の1つまたは複数を有する、請求項66に記載の方法。 - 前記ヒト患者が、再発寛解性MSまたは早期ステージ進行性を有し、かつ、前記Treg細胞が、前記MHC−CARを発現し、かつ以下の改変:
(i)MOGに特異的な抗体またはその抗原結合断片の表面提示、および
(ii)CCR6の表面発現
の1つまたは複数を有する、請求項66に記載の方法。 - 前記ヒト患者が、慢性進行性形態のMSを有し、かつ、前記Treg細胞が、前記MHC−CARを発現し、かつ以下の改変:
(i)CS−1を標的化するキメラ受容体の表面発現、ならびに
(ii)CXCR4および/またはCXCR3を標的化する作用物質の表面発現
の1つまたは複数を有する、請求項66に記載の方法。 - 前記ヒト患者が早期ステージMS患者であり、かつ、前記細胞傷害性CD8 T細胞が、前記MHC−CARを発現し、かつ以下の遺伝子改変:
(i)PD−L1および/またはPD−1ノックアウト、
(ii)CCR6および/またはCXCR5の表面発現、
(iii)MOGに特異的な抗体またはその抗原結合断片の表面提示、ならびに
(iv)CD19を標的化するキメラ受容体の表面発現
の1つまたは複数を有する、請求項66に記載の方法。 - 前記対象が、多発性硬化症を有するまたはそのリスクがあるヒト患者であり、かつ、前記遺伝子改変T細胞が、請求項54〜57のいずれか1項に記載の細胞傷害性CD8+ T細胞である、請求項58〜67のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ヒト患者が、再発寛解性MSまたは早期ステージ進行性を有し、かつ、前記細胞傷害性CD8 T細胞が、前記MHC−CARを発現し、かつ、以下の改変:
(i)CD19を標的化するキメラ受容体の表面発現、および
(ii)CXCR5の表面発現
の1つまたは複数を有する、請求項71に記載の方法。 - 前記ヒト患者が、再発寛解性MSまたは早期ステージ進行性を有し、かつ、前記細胞傷害性CD8 T細胞が、前記MHC−CARを発現し、かつ以下の改変:
(i)MOGに特異的な抗体またはその抗原結合断片の表面提示、および
(ii)CCR6の表面発現
の1つまたは複数を有する、請求項71に記載の方法。 - 前記ヒト患者が、慢性進行性形態のMSを有し、かつ、前記細胞傷害性CD8 T細胞が、前記MHC−CARを発現し、かつ以下の改変:
(i)CS−1を標的化するキメラ受容体の表面発現、ならびに
(ii)CXCR4および/またはCXCR3を標的化する作用物質の表面発現
の1つまたは複数を有する、請求項71に記載の方法。 - 前記ヒト患者が、請求項33〜43のいずれか1項に記載のTreg細胞、および請求項54〜57のいずれか1項に記載の細胞傷害性細胞の両方を投与される、請求項58〜74のいずれか1項に記載の方法。
- 前記Treg細胞および前記細胞傷害性細胞が、同時または逐次的に投与される、請求項75に記載の方法。
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