JP2021501583A - 抗体および使用方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明の態様は、CRTAMに対する抗体および他の治療用タンパク質、そのような抗体および治療用タンパク質をコードする核酸、抗体および他の治療用タンパク質を調製する方法、ならびにCRTAMに対する抗体および他の治療用タンパク質を使用することによる癌などの疾患の処置方法を含む。
本明細書を解釈する目的のために、以下の定義が適用され、適切な場合はいつでも、単数形で使用される用語は複数形も含み、逆もまた同様である。
SWISS−PROTによれば、CRTAMはネクチンファミリーのI型膜タンパク質である。このタンパク質は、1つのIg様V型(免疫グロブリン様)ドメイン、1つのIg様C型(免疫グロブリン様)ドメイン(Yeh et al.,Cell.2008 Mar 7;132(5):846−5)、1つの膜貫通領域、および配列番号11のアミノ酸18〜287間の細胞外尾部からなる。
本発明の態様は、本明細書に記載される、抗CRTAM抗体、一般的には治療および/または診断抗体を含む。本発明の方法での使用が見出される抗体は、本明細書にさらに記載される従来の抗体および抗体誘導体、抗原結合断片ならびに模倣物を含む、本明細書に記載される多くの形式のいずれを取ることもできる。いくつかの実施形態では、抗体は、本明細書で定義される6つのCDRのセット(本明細書で説明される少数のアミノ酸変化を含む)から選択される1つ以上のCDRを有する。上記で概説したように、本明細書で使用される「抗体」という用語は、様々な構造を指す。
いくつかの実施形態では、抗体は、異なる種由来の混合物、例えば、キメラ抗体および/またはヒト化抗体であり得る。すなわち、本発明において、CDRセットは、本明細書において配列により具体的に記載されたもの以外のフレームワークおよび定常領域ととともに使用され得る。
本発明は、CRTAMポリペプチドまたはその一部に結合するCRTAM抗体を提供する。CRTAMアミノ酸配列の一例は、配列番号11で提供される。対象CRTAM抗体は、腫瘍における免疫応答を増強するために、免疫細胞活性化、例えば、T細胞活性化および/またはNK細胞活性化を誘導または増強することができる。これらの抗体は、本明細書では「抗CRTAM」抗体または説明を簡単にするための「CRTAM抗体」のいずれかで称される。
本発明は、「抗体誘導体」または「抗体類似体」と称される場合もあるバリアント抗体をさらに提供する。すなわち、CDRにおけるアミノ酸修飾(親和性成熟)、Fc領域におけるアミノ酸修飾、グリコシル化バリアント、および他のタイプの共有結合修飾(例えば、薬物コンジュゲートの結合について)を含むがこれらに限定されない、本発明の抗体に対して行うことができる多くの修飾がある。
別の態様では、本発明は、本発明の抗CRTAM抗体またはその断片を含む二重特異性および多重特異性分子を含む。本発明の抗体またはその抗原結合部分は、2つの異なる結合部位または標的分子に結合する二重特異性分子を生成するために、別の機能性分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質(例えば、受容体に対する別の抗体またはリガンド)に誘導体化または連結することができる。いくつかの実施形態では、本発明の抗体またはその抗原結合部分は、少なくとも3つの異なる結合部位または標的分子に結合する多重特異性分子を生成するために、少なくとも2つの機能性分子、例えば、他のペプチドまたはタンパク質(例えば、受容体に対する他の抗体またはリガンド)に誘導体化または連結することができる。本発明の二重特異性または多重特異性分子を作製するために、本発明の抗体は、別の抗体、抗体断片、ペプチド、または結合模倣物などの1つ以上の他の結合分子に機能的に連結できることができ(例えば、化学結合、遺伝子融合、非共有結合などにより)、その結果、二重特異性または多重特異性分子が生じる。
別のタイプの共有結合修飾は、グリコシル化における変更である。例えば、非グリコシル化抗体(すなわち、グリコシル化を欠く抗体)を作製することができる。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を高めるために変更することができる。そのような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内におけるグリコシル化の1つ以上の部位を変更することによって達成することができる。例えば、1つ以上の可変領域フレームワークのグリコシル化部位を排除し、それにより、その部位におけるグリコシル化を排除する、1つ以上のアミノ酸置換を行うことができる。そのような非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を高め得る。このようなアプローチは、Coらによる米国特許第5,714,350号および第6,350,861号にさらに詳細に記載されており、297位のアスパラギンを除去することによって達成することができる。
本発明は、開示された抗CRTAM抗体を産生するための方法をさらに提供する。これらの方法は、本発明の抗体をコードする単離された核酸を含む宿主細胞を培養することを包含する。当業者によって理解されるように、これは、抗体の性質に応じて様々な方法で行うことができる。いくつかの実施形態では、本発明の抗体が完全長の従来抗体である場合、例えば、宿主細胞は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードする核酸を含み、抗体が産生され、かつ単離することができるような条件下で培養することができる。
本発明の態様は、薬学的に許容される担体ととともに製剤化された、本発明の1つ以上のCRTAM抗体もしくはその抗原結合部分(またはCRTAM抗体もしくはその抗原結合部分の組み合わせ)を含む組成物、例えば医薬組成物を含む。このような組成物は、本発明の(例えば2つ以上の異なる)抗体または二重特異性分子のうちの1つまたはそれらの組み合わせを含み得る。例えば、本発明の医薬組成物は、標的抗原上の異なるエピトープに結合するかまたは補体活性を有する抗体の組み合わせを含むことができる。
本発明の抗体、抗体組成物、および方法は、免疫介在性障害の診断および処置を含む、多くのインビトロおよびインビボでの診断および治療有用性を有する。
ハイブリドーマの生成
ラットモノクローナル抗CRTAM抗体を遺伝子免疫により産生した。CRTAM ECD(配列番号12)を使用して、免疫化のためのプラスミドpB8−CRTAM−hum.ECD(Aldevron、フライブルク)を作成した。プラスミドpB8−CRTAM−hum.ECDを使用して、3匹のラットを免疫化した。免疫化したラット由来の脾細胞を骨髄腫細胞株と融合させ、業界の標準的手法を使用してハイブリドーマを生成した。
動物をベクター(pB8−CRTAM−hum.ECD)で免疫化した。免疫化動物の血清中の標的特異的抗体(「抗体力価」)の存在を検出するために、フローサイトメトリーに基づくアッセイ(FACS試験)を行った。
FACSアッセイを使用して、過剰発現しているハイブリドーマ細胞を同定した。一次スクリーニングから、108個のハイブリドーマクローンが陽性であると同定された。
組換えhCRTAM/Fcキメラ(R&D Systems、カタログ1695−CR)を、1×Dulbeccoのリン酸緩衝生理食塩水(DPBS)(カタログ番号12−565−136、Thermo Scientific)で希釈した高結合アッセイプレート(カタログ番号SH30028−03、Thermo Scientific)に100ng/ウェルでコーティングした。Tecan Hydro speed 96ウェルプレートウォッシャーを使用して、プレートを洗浄用緩衝液、1×DPBS、および0.05%Tween20(カタログ番号BP337−500、Fisher Scientific)で3回洗浄した。
モノクローナル抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードするcDNA配列を標準的なPCR技術を使用して得て、標準的なDNA配列決定技術を使用して配列決定した。スクリーニングから選択された5A11の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を図1に示す。
インビトロ活性化T細胞の調製
上記のように、末梢血単核細胞(PBMC)をヒトバフィーコートから単離した。2E6細胞/ml PBMCを、T細胞培養培地(5%FBSを含むAIM V培地、カタログ#SH3008703、Fisher、ピッツバーグ、ペンシルバニア州)および300u IL2(カタログ#200−02、Peprotech、ロッキーヒル、ニュージャージー州)において、100ng/mlの抗CD3(OKT3)の存在下で4日間培養した。この後、細胞を抗CD3/抗CD28活性化ビーズ(カタログ#11132D、Thermo Fisher、ウォルサム、マサチューセッツ州)で24時間培養した後、FACS分析を行った(データは示していない)。
蛍光活性化細胞選別(FACS)分析を標準プロトコルに従って96ウェルプレート形式で実施した。活性化T細胞を上記のようにして調製した。染色プロトコルの後続のすべてのステップは、室温で行った遠心分離ステップを除いて、氷冷試薬を用いて氷上で実施した。抗体の3倍連続希釈液をFACS緩衝液中に調製し、133nM〜1pMの範囲の最終濃度での12点の滴定曲線を得た。対応するハイブリドーマ上清、アイソタイプ対照、および陽性対照抗体を氷冷FACS緩衝液中で希釈して、最終濃度30nMの単一点で試験した。抗体希釈液を、各細胞株について1つのウェルにそれぞれ分注した(100μL/ウェル)。1つのウェルはFACS緩衝液で未染色のままであった。一次抗体または対照とともに30分間インキュベーションした後、FACS緩衝液を添加することによって細胞を2回洗浄し、続いて1200rpmで5分間遠心分離した。上清を捨て、細胞ペレットを保持した。二次抗体、ヤギ抗ラットIgG(H+L)−RPEを1μg/mLの作用(working)濃度に希釈し、一次抗体で染色されていないウェルのうちの1つを除くすべてのウェルに適用した。二次抗体を細胞とともに30分間インキュベートした。細胞を、FACS緩衝液を添加することによって2回洗浄し、続いて1200rpmで5分間遠心分離した。最終細胞ペレットを、150μLのFACS緩衝液+50μlの4%パラホルムアルデヒドに再懸濁し、フローサイトメーターで取得する準備をするまで固定した。取得するまでプレートを4℃で放置した。Guava Easycyte Plusハイスループットフローサイトメーター(96ウェルプレート)を使用して、各試料の幾何平均蛍光強度(GMFIまたは幾何平均(Geo Mean))を決定し、Guava Cytosoft Proソフトウェアモジュール、バージョン2.2.2(Millipore、ビレリカ、マサチューセッツ州)を使用して、生データを分析した。Geo Meanを抗体濃度に対してプロットし、GraphPad(商標)Prismソフトウェアを使用して、非線形回帰、シグモイド用量反応分析を行い、活性化T細胞への抗体結合についてのEC50を計算した。
酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)
酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)分析を標準的なプロトコルに従って96ウェルプレート形式で行った。96ウェルELISAプレート(カタログ番号12−565−136、Thermo Scientific)を、4℃で一晩、1×Dulbeccoのリン酸緩衝生理食塩水(DPBS)中の1μg/mL cyno CRTAM HIgG1−Fcタンパク質100μl(カタログ番号SH30028−03、Thermo Scientific)でコーティングした。プレートを洗浄用緩衝液、1×DPBS、および0.05%Tween20(カタログ番号BP337−500、Fisher Scientific)で3回洗浄し、250μlのスーパーブロック緩衝液(カタログ番号37515、Thermo Scientific)で室温で30分間ブロッキングした後、洗浄用緩衝液で再度3回洗浄した。
抗CRTAMおよび抗CD3抗体によるインビトロ活性化T細胞の調製
96ウェル非組織培養プレートを2μg/ml OKT3および異なる濃度の抗CRTAM抗体/アイソタイプ(1:2希釈で20μg/mlから11回滴定)で4℃で一晩コーティングした。プレートをPBSで2回洗浄し、続いてAIMVおよび5%FBSで30分間ブロッキングした。ブロッキング後、実施例3に記載されるように産生された10万個のOKT3プライミング(OKT3−primed)T細胞(4日目)を新鮮なAIMV培地に再懸濁し、プレート上に添加した。37℃で1日インキュベーションした後、上清を回収し、IFNγ ELISAアッセイでの使用のために希釈した。
IFNγを、eBiosciencesの対応するReady−SET−Go!ELISAキット(カタログ#50−173−24 Fischer Scientific)で測定した。製造元の説明書に従って、高結合プレート(Corning 3690)を捕捉抗体(コーティング用緩衝液で1:250に希釈)で4℃で一晩コーティングし、次いで洗浄用緩衝液(PBS+0.05%Tween−20)で3回洗浄した。プレートを、Assay Diluentを使用してシェーカー上で1時間ブロッキングした。細胞培養上清を適切な希釈(IFNγについては1:400)でプレートに添加し、シェーカー上で2時間インキュベートし、続いて3回洗浄した。Assay Diluentで1:250に希釈したビオチン化検出抗体(キットに付属)を添加し、プレートシェーカー上で1時間インキュベートした。プレートを洗浄用緩衝液で洗浄し、アッセイ希釈液で1:1000に希釈したHRP結合ストレプトアビジン(キットに付属)を添加した。プレートシェーカー上で30分間インキュベートした後、プレートを洗浄し、TMB基質溶液(キット中に提供)を添加した。約5〜10分後に2N H2SO4溶液を添加して発色反応を停止し、プレートリーダーで450nm(OD450)において吸光度を読み取った。
5A11抗体は、抗体CR24.1と比較した場合、OKT3で予め活性化されたT細胞において増強された活性を示し、IFNγ産生の増加を反映した(図5)。これは、CRTAMに対する抗体が、免疫系が阻害されている患者において治療効果があることを示す。
CDR移植技術を使用して、ラット5A11モノクローナル抗体のヒト化を行った。ヒト化プロセスを先導し、親ラット残基を保存するか、または該親ラット残基をそのヒト生殖細胞系列対応物と置き換えるかの決定を助けるために、5A11ラットモノクローナル抗体のFvの相同性分子モデルを構築した。
相同性モデル構築の方法論
抗体BUH−5A11−F2(「5A11」)のモデルを、確立されたプロトコル(Ramos OHP.Computer−assisted modeling of antibody variable domains.Methods Mol Biol 2012;907:39−55)に従って構築した。可変重鎖(VH)および軽鎖(VL)配列は、フレームワークおよびCDR配列を分けるために、IMGT規則に従って別々に番号付け/注釈付けした。
最も相同なラット生殖細胞系列IGHV10−5*01とのアミノ酸の違い
ラット5A11ハイブリドーマから単離されたVHのアミノ酸配列(Kabat番号付けスキームによるCDR領域は太字で示されている)。
5A11ラット重鎖可変(VH)領域とラット生殖細胞系列免疫グロブリンVH10−5*01(IGHV10−5*01)との間の91%の同一性(合計100個のアミノ酸のうちの91個の同一残基)。
5A11ラットCDR領域が移植されるヒトフレームワーク受容体VH領域の選択は、IgBLASTを使用し、ラットVH領域のアミノ酸配列を入力として用いて、IMGTヒトVH遺伝子データベースを検索することによって行われた。ヒト生殖細胞系列に対する親抗体の配列アラインメントに基づいて、最も近似する一致(matching)エントリーを同定した。受容体としての最適なヒト生殖細胞系列の同定は、以下の順序付けられた基準:Kabatによって定義されたフレームワーク全体の配列同一性、ならびに鎖間インターフェース残基および親CDRの標準的コンフォメーションを有する支持(support)ループの同一性および/または適合性に基づいた。この分析から、ヒト生殖細胞系列IGHV3−73*01は、ヒトフレームワーク受容体領域として最良の選択であるようと思われ、全体の同一性割合は75%であった(合計100個のうちの75個の残基)。したがって、このヒト生殖細胞系列をヒト化形態の設計に使用した。ラット生殖細胞系列J2遺伝子(IGHJ2*01)は、対応するラット5A11 VHJ遺伝子と最も相同なセグメント遺伝子として同定された。FR4では、5A11 VHの配列はラットIGHJ2*01生殖細胞系列遺伝子の配列と同一である。ラットJ2セグメント遺伝子をCDR3およびFR4を上回るヒトJセグメント遺伝子と比較し、ヒトJセグメントIGHJ4(IGHJ4*01)を選択した。
ヒト化形態A
Kabat命名法によって定義されたラットCDR(太字)をIGHV3−73*01に移植して、以下の詳細な配列を取得した。下線が引かれている残基は、フレームワークラット残基(CDR残基の外にある)、すなわち、親ラット5A11 VH配列から保存されている。それらの残基は、抗体の完全な活性を維持するために構造的に重要であり得るために保存されてきた。
形態A
軽鎖の設計
最も相同なラット生殖細胞系列IGLV4−S1*01とのアミノ酸の違い
ラット5A11 VLのアミノ酸配列(CDR領域が強調表示されている)
5A11ラットVLとラット生殖細胞系列免疫グロブリンλ可変IGLV4−S1*01との間の97.9%(94/96)同一性(合計96個のアミノ酸のうちの94個の同一残基)。
5A11 VLラットCDR領域が移植されるヒトフレームワーク受容体VL領域の選択は、IgBLASTを使用し、ラットVL領域のアミノ酸配列を入力として、IMGTヒトVL遺伝子データベースを検索することによって行った。ヒト生殖細胞系列に対する親抗体の配列アラインメントに基づいて、最も近似する一致エントリーを同定した。受容体としての最適なヒト生殖細胞系列の同定は、以下の順序付けられた基準:Kabatによって定義されたフレームワーク全体の配列同一性、ならびに鎖間インターフェース残基の同一性および/または適合性(compatibility)、ならびに親CDRの規準的なコンフォメーションを有する支持ループ(support loop)に基づいた。この分析から、ヒト生殖細胞系列IGLV3−27*01は、ヒトフレームワーク受容体領域として最良の選択であると思われ、全体の同一性割合は64.6%であった(合計96個のうちの62個の残基)。したがって、このヒト生殖細胞系列をヒト化形態の設計に使用した。
ヒト化形態
Kabat番号付けによって定義されたラットCDRをIGLV3−27*01に移植して、以下の詳細な配列を取得した。抗体の完全な活性を維持するために構造的に重要な多くのラットフレームワーク残基が保持されている。これにより、IGLV3−27*01ヒト生殖細胞系列と87.5%同一性(96個のうちの84個のアミノ酸残基)を有するヒト化形態が得られた。
抗CRTAM抗体によって誘導された細胞傷害性能力を、刺激後のCD8+細胞傷害性リンパ球によるパーフォリンおよびグランザイムB産生を測定することによって評価した。市販のキット(Miltenyi Biotec)を使用して、ヒトCD8 T細胞を健康なドナーPBMCからネガティブ単離した(negatively isolated)。単離されたCD8細胞を、プレートに結合したCD3(OKT3、0.1μg/ml)および異なる用量の5A11で4日間刺激した。プレート上の刺激に続いて、CD8細胞をPMA(25ng/ml)、イオノマイシン(10μg/ml)、およびブレフェルジン(10μg/ml)で4時間処理した。次いで細胞を洗浄し、4%PFAで10分間固定し、0.5%サポニンを含むPBSで希釈したフローサイトメトリー用のパーフォリンおよびグランザイムB抗体で15分間染色した。染色後、細胞を0.5%サポニンを含むPBSで2回、FACS緩衝液(2%FCSおよび2mM EDTAを含むPBS)で1回洗浄した。洗浄した細胞をFACS緩衝液に再懸濁し、Attune NxT(Fisher Scientific)フローサイトメーターを使用して分析した。図7および図8に詳細を示されるように、5A11の用量を増加させて刺激することにより、CD8 T細胞の細胞傷害性能力が用量依存的に増加した。
抗CRTAM抗体を使用したMCF−7乳癌細胞に対するT細胞の細胞傷害性を、T細胞およびMCF−7細胞のアンカーとしてHer2/CD3二重特異性抗体を使用して評価した。抗CRTAM抗体を腫瘍細胞、PBMC、およびHer2/CD3二重特異性抗体を含むアッセイウェルに添加したときに、追加の細胞傷害性が観察された。抗CRTAM抗体の作用に関連する細胞傷害性の割合を、抗CRTAM抗体で処理していない細胞と比較したときの死滅率として計算した。
NSCLC(図10)または乳癌(図11)腫瘍からの原発腫瘍由来腫瘍浸潤リンパ球(TIL)を、示された濃度に希釈したCR24.1、5A11、またはペンブロリズマブ、および完全RPMI培地で1μg/mlに希釈したOKT3で96時間刺激した。刺激後、TILを採取し、カウントし、IFNγ ELISPOTプレート(Mabtech)上に100,000細胞/ウェルでプレーティングした。プレートを37℃で24時間インキュベートし、続いて製造業者の説明書に従って展開した。スポットの数をImmunoSpot(登録商標)Series5 ELISPOTアナライザーを使用して読み取り、データをGraphPad Prismソフトウェアを使用して分析した。
NSCLC腫瘍からの原発腫瘍由来腫瘍浸潤リンパ球(TIL)を、0.1μg/ml、1.0μg/ml、または10μg/mlの5A11、ペンブロリズマブ(10μg/ml)、または完全RPMI培養培地で1μg/mlに希釈したOKT3で96時間刺激した。刺激後、TILを採取し、カウントし、IFNγ ELISPOTプレート(Mabtech)上に100,000細胞/ウェルでプレーティングした。プレートを37℃で24時間インキュベートし、続いて製造業者の説明書に従って展開した。スポットの数をImmunoSpot(登録商標)Series5 ELISPOTアナライザーを使用して読み取り、データをGraphPad Prismソフトウェアを使用して分析した。
図12は、すべての用量の5A11がTILを活性化して、ペンブロリズマブによって産生されたものに対してより高い量のIFNγを産生したことを示している。
Delfia(登録商標)(Promega)キットに記載されるようにして、K562細胞を染色した。染色されたK562細胞を、10μg/mlに希釈した5A11、CR24.1、またはペンブロリズマブの存在下、1:20の標的とエフェクターとの比で健康なドナーPBMC(IL−2とともに72時間事前培養した)と混合した。50IU/mlのIL−2をアッセイの陽性対照として使用した。すべての条件を3回繰り返した。共培養物を37℃で3時間インキュベートした。3時間後、20μlの共培養上清を収集し、製造元の説明書(Delfia(登録商標)Promega)に従ってアッセイした。320nm励起、615発光、100マイクロ秒の遅延、100マイクロ秒の積分での時間分解蛍光測定(TRF)についてSpectraMaxM5プレートリーダーを使用して、結果を読み取った。具体的な溶解度の計算を可能にするための製造元が推奨するすべての対照がアッセイに含まれており、キットの取扱説明書に詳述されているようにして計算を行った。
アイソタイプ対照(10mg/kg;BIW×3)および5A11抗体(10mg/kg;BIW×3)をインビボモデルで試験した。各コホートは10匹のマウスを含んでいた。各コホートを半分に分け、5匹のマウスに2人の健康なヒトドナーのうちの1人から単離および調製したPBMCを腹腔内注射した。3日後、マウスにHCC827腫瘍細胞を皮下接種した。1日後、上記の投与スケジュールで試験抗体による処置を開始した。体重(BW)をモニタリングし、腫瘍を毎週3回測定した。マウスを健康および有害な副作用について頻繁に検査した。移植片対宿主疾患の証拠により、マウスを安楽死させた。処置の結果を、示された研究日に測定した際の対照群の平均腫瘍体積に対する処置群の平均腫瘍体積の差の尺度である、腫瘍増殖阻害(TGI)によって決定した。
ヒト化5A11抗体の結合親和性を、抗hIgG捕捉バイオセンサー(カタログ#18−5060)を使用したOctet(登録商標)(ForteBio)によって決定した。
抗ヒトIgG−Fc捕捉(AHC)ForteBioバイオセンサーに、1μg/mLの濃度の試験抗体を300秒にわたって充填した。
Claims (26)
- CRTAMに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、
配列番号5を含むCDR−H1配列、
配列番号6を含むCDR−H2配列、および
配列番号7を含むCDR−H3配列を含む重鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合断片。 - 配列番号8および配列番号15からなる群から選択される配列を含むCDR−L1配列、
配列番号9を含むCDR−L2配列、および
配列番号10および配列番号16からなる群から選択される配列を含むCDR−L3配列からなる群から選択される少なくとも1つのCDR配列を含む軽鎖可変領域をさらに含む、請求項1に記載の抗体または抗原結合断片。 - 前記軽鎖可変領域が、
配列番号8の配列を含むCDR−L1、
配列番号9の配列を含むCDR−L2、および
配列番号10の配列を含むCDR−L3を含む、請求項2に記載の抗体または抗原結合断片。 - 前記軽鎖可変領域が、
配列番号15の配列を含むCDR−L1、
配列番号9の配列を含むCDR−L2、および
配列番号16の配列を含むCDR−L3を含む、請求項2に記載の抗体または抗原結合断片。 - CRTAMに結合する抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が、
配列番号5を含むCDR−H1、
配列番号6を含むCDR−H2、および
配列番号7を含むCDR−H3、を含む重鎖可変領域、ならびに
配列番号15を含むCDR−L1、
配列番号9を含むCDR−L2、および
配列番号16を含むCDR−L3を含む、軽鎖可変領域、
またはそれらのバリアントを含み、前記バリアントが、i)独立して、前記CDR−H1、前記CDR−H2、前記CDR−H3、前記CDR−L1、前記CDR−L2、および前記CDR−L3のうちの任意の1つ以上において1、2、3、4、5、もしくは6個のアミノ酸置換、付加、および/または欠失を有し、あるいはii)集合的に、前記CDR−H1、前記CDR−H2、前記CDR−H3、前記CDR−L1、前記CDR−L2、および前記CDR−L3を含むCDRセットにおいて1、2、3、4、5、6、7、8、9、もしくは10個のアミノ酸置換、付加、および/または欠失を有する、抗体またはその抗原結合断片。 - 抗体またはその抗原結合断片であって、前記抗体または抗原結合断片が、
i)配列番号1の3つの重鎖CDRおよび配列番号2の3つの軽鎖CDR、または
ii)配列番号13の3つの重鎖CDRおよび配列番号14の3つの軽鎖CDRを含み、
前記CDRが、KabatまたはChothia番号付け方式によって定義される、抗体またはその抗原結合断片。 - 抗体またはその抗原結合断片であって、
配列番号13と少なくとも約80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、または99%同一である配列を含む重鎖可変領域、および
配列番号14と少なくとも約80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、または99%同一である配列を含む軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合断片。 - 配列番号13を含む重鎖可変領域、および配列番号14を含む軽鎖可変領域を含む、請求項7に記載の抗体またはその抗原結合断片。
- 請求項1〜8のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片によって認識されるCRTAMタンパク質上のエピトープに結合するか、または請求項1〜8のいずれか一項に記載の抗体と結合について交差競合する、抗体またはその抗原結合断片。
- 請求項1〜8のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片のヒトCRTAMに対する結合親和性の少なくとも約80%、少なくとも約85%、少なくとも約90%、少なくとも約91%、少なくとも約92%、少なくとも約93%、少なくとも約94%、少なくとも約95%、少なくとも約96%、少なくとも約97%、少なくとも約98%、または少なくとも約99%を保持する、請求項9に記載の抗体またはその抗原結合断片。
- 前記抗体または抗原結合断片が、モノクローナル抗体である、請求項1〜10のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
- 前記抗体または抗原結合断片が、キメラ、ヒト化、二重特異性、またはヒト抗体もしくは抗原結合断片である、請求項11に記載の抗体またはその抗原結合断片。
- 前記抗体または抗原結合断片が、1つ以上のFc受容体への結合が低減されているかまたはそれらに結合しない、Fcをサイレンシングした操作されたIgG1抗体または抗原結合断片である、1〜12のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
- 前記抗体または抗原結合断片が、T細胞の細胞傷害性を誘導および/または増強することができる、請求項1〜13のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
- 前記抗原結合断片が、Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、Fv、scFv、および単一ドメイン抗体からなる群から選択される、請求項1〜14のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片。
- i)請求項1〜15のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片の重鎖可変領域、および/または
ii)請求項1〜15のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合断片の軽鎖可変領域をコードする、ポリヌクレオチド。 - 請求項16に記載の少なくとも1つのポリヌクレオチドを含む、発現ベクター。
- i.請求項16に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター、または
ii.請求項16に記載の抗体またはその抗原結合部分の前記重鎖可変領域をコードする前記ポリヌクレオチドを含む第1の発現ベクター、および請求項16に記載の抗体またはその抗原結合部分の前記軽鎖可変領域をコードする前記ポリヌクレオチドを含む第2の発現ベクターを含む、宿主細胞。 - 抗体またはその抗原結合断片を作製する方法であって、請求項18に記載の宿主細胞を、前記抗体または前記抗原結合断片が前記宿主細胞において発現される条件下で培養することと、任意選択により前記抗体または抗原結合断片を単離することと、を含む、方法。
- 請求項1〜15のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
- 癌を有する対象を処置する方法であって、有効量の、請求項1〜15または20のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
- 癌の処置に使用するための医薬の製造における、請求項1〜15または20のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または医薬組成物の使用。
- 癌の処置に使用するための、請求項1〜15または20のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または医薬組成物。
- 前記癌が、小細胞肺癌、非小細胞肺癌(扁平上皮癌および腺癌を含む)、メラノーマを含む皮膚癌、乳癌(TNBCを含む)、結腸直腸癌、胃癌(gastric cancer)、卵巣癌、子宮頸癌、前立腺癌、腎臓癌、肝細胞癌を含む肝臓癌、膵臓癌、頭頸部癌、鼻咽頭癌、食道癌、膀胱癌および他の尿路上皮癌、胃癌(stomach cancer)、神経膠腫、神経膠芽腫、精巣癌、甲状腺癌、骨癌、胆嚢癌および胆管癌、子宮癌、副腎癌、肉腫、GIST、神経内分泌腫瘍、ならびに血液悪性腫瘍からなる群から選択される、請求項21〜23のいずれか一項に記載の方法または使用。
- 前記医薬組成物または医薬が、有効量の第2の治療剤をさらに含む、請求項21〜24のいずれか一項に記載の方法または使用。
- 治療での使用または医薬としての使用のための、請求項1〜15または20のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片または医薬組成物。
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