JP2021501574A - 免疫細胞、特に好塩基性顆粒球の同定のためのエピジェネティックマーカーとしてのmcc - Google Patents
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Abstract
Description
好塩基性顆粒球を同定するため、以下の配列(AMP2694、配列番号1)による、ヒトゲノム領域由来のバイサルファイト変換サンプルでqPCRを行った。関連するCpGを太字で示す:
SEQ ID No. 配列番号
Reverse amplification primer リバース増幅プライマー
Forward primerTpG-specific フォワードプライマーTpG特異的
Reverse primerTpG-specific リバースプライマーTpG特異的
ProbeTpG-specific プローブTpG特異的
Forward primerCpG-specific フォワードプライマーCpG特異的
Reverse primerCpG-specific リバースプライマーCpG特異的
ProbeCpG-specific プローブCpG特異的
CP Value Cp値
Plasmid Units プラスミド単位
CpG specificPCR-System CpG特異的PCRシステム
GAPDH specificPCR-System GAPDH特異的PCRシステム
図1
B cells B細胞
Cytotixic T cells 細胞傷害性(正:Cytotoxic)T細胞
Granulocytes 顆粒球
Monocytes 単球
Natural killercells ナチュラルキラー細胞
Basophils 好塩基球
Eosinophils 好酸球
Neutrophils 好中球
Claims (15)
- サンプルにおいて好塩基性顆粒球を同定する方法であって、大腸癌変異(MCC)哺乳類遺伝子領域における少なくとも1つのCpG位置の修飾、例えばメチル化状態を解析することを含み、解析される前記遺伝子領域が好ましくは配列番号1による位置にあり、非好塩基性顆粒球と比較した前記遺伝子領域の脱メチル化、又は修飾、例えばメチル化の欠如が好塩基性顆粒球の指標である、方法。
- 前記少なくとも1つのCpG位置が、解析される前記遺伝子領域の転写開始、プロモーター領域、5'又は3'非翻訳領域、エキソン、イントロン、エキソン/イントロン境界よりも上流の5'領域に存在する、及び/又は解析される前記遺伝子領域の転写停止よりも下流の3'領域に存在する、請求項1に記載の方法。
- 前記少なくとも1つのCpG位置が、配列番号1によるアンプリコンにおけるCpG位置1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、及び18から選択されるCpGから選択され、好ましくは配列番号2又は3によるバイサルファイト変換された配列によるアンプリコン番号2694におけるCpG位置57、69、76、80、119、136、142、162、186、198、233、281、292、303、307、339、351及び362から選択される、請求項1又は2に記載の方法。
- バイサルファイト変換可能性の解析が、メチル化特異的酵素消化、バイサルファイトシークエンシングから選択される方法、プロモーターメチル化、CpGアイランドメチル化、MSP、HeavyMethyl、MethyLight、Ms-SNuPEから選択される解析、及び増幅DNAの検出に依存する他の方法を含む、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 解析される前記領域中の前記メチル化の頻度の相対量とコントロール遺伝子、例えばGAPDHのメチル化頻度の相対量との比較に基づく好塩基性顆粒球の相対量の定量を更に含む、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記サンプルが、ヒト血液サンプルを含む哺乳類の体液、又は組織、器官、若しくは細胞型の血液サンプル、血液リンパ球のサンプル又はそれらの画分から選択される、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 前記好塩基性顆粒球と、濾胞性ヘルパーT細胞、B細胞、細胞傷害性T細胞、好中性顆粒球、単球、NK細胞、及びTヘルパー細胞から選択される細胞型の全て、又は少なくとも1つとの区別を更に含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 同定される細胞の精製及び/又は濃縮の工程を伴わずに、好ましくは全血及び/又は非トリプシン処理組織を使用して行われる、請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- 前記哺乳類の免疫状態を、同定された前記好塩基性顆粒球に基づき決定する工程を更に含む、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 哺乳類において好塩基性顆粒球のレベルをモニタリングする方法であって、請求項5〜9のいずれか1項に記載の方法を行うことと、さらに、同定された細胞の相対量を、以前に、又は並行して同じ哺乳類から採取されたサンプル、及び/又はコントロールサンプルと比較することとを含む、方法。
- 化学的及び/又は生物学的物質を前記哺乳類に与えるのに応じた、前記好塩基性顆粒球の量を、測定及び/又はモニタリングすることを更に含む、請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。
- 前記哺乳類が、自己免疫疾患、移植拒絶、感染症、癌、及び/又はアレルギーを罹患している、又は罹患する可能性がある、請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- MCC遺伝子領域中のCpG位置のバイサルファイト到達性の解析に基づき、哺乳類において好塩基性顆粒球を同定し、定量し、及び/又はモニタリングするためのキットであって、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法を行うための要素を含み、特にa)バイサルファイト試薬と、b)配列番号1による領域中のCpG位置から選択されるCpG位置のメチル化状態を解析するための材料、例えば配列番号4〜11による配列から選択されるオリゴマーとを含む、キット。
- 配列番号4〜11のいずれかによるオリゴマー、又は配列番号1、2、若しくは3によるアンプリコン。
- 哺乳類における好塩基性顆粒球の同定、定量、及び/又はモニタリングへの請求項13に記載のキット、又は請求項14に記載のオリゴマー若しくはアンプリコンの使用。
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