JP2021500314A - 構造化された水相とセリシンとを含む組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、構造化された水５〜１００重量％を含む組成物に関し、当該組成物は、水の重量に対してセリシン０．１〜１０重量％を含み、前記セリシンは、二次構造中に８０％超の割合のベータシートを有する。二次構造中の８０％超の割合のベータシートは、優れた水構造化剤であり、化粧製品、医薬製品、食品製品および洗剤組成物などの幅広い製品の水相を構造化するのに好適に使用できることが見いだされた。

Description

本発明は、構造化された水相と、水の重量に対してセリシン０．１〜１０重量％とを含む組成物に関し、前記セリシンは、二次構造中のベータシートの割合が８０％を超える。

水性の化粧品、医薬品、ティッシュエンジニアリング、洗剤、食品製剤では、製剤のレオロジー特性を制御して、製剤が望ましい感触、外観、粘度などを有するようにする必要がある。水構造化剤は、レオロジー特性を調整するために、かかる製剤の水相に適用される成分である。水構造化剤の性質、水性の組成および適用される水構造化剤の濃度に応じて、これらのレオロジー特性は大きく異なり得る。

絹の成分であるセリシンは、水構造化剤として機能することのできるタンパク質である。シルクは、カイコのカイコガ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）に由来する天然のタンパク質繊維であり、通常、２つのタンパク質、フィブロイン（７０〜８０％）とセリシン（２０〜３０％）とで構成され、残部は、ワックス、炭水化物および無機物質の混合物である。フィブロインは、繊細なツインスレッドとして存在する繊維状の糖タンパク質であり、繭の形成に役立つセリシンの層で覆われている。カイコの乾燥した繭から絹を製造するために、フィブロインは、いわゆる「脱ガム」プロセスによってセリシンから分離され、セリシンは廃水中に廃棄される。熱または加圧下の熱による脱ガムは、不純物が少なくなるという利点がある。多くの工業的除去方法には、石鹸および洗剤による抽出、酵素加水分解、酸またはアルカリ加水分解が含まれる。

最近まで、セリシンは絹生産の廃棄物と見なされていた。セリシンは、１０〜４００ｋＤａ以上の幅広い分子量で存在する。セリシンは、主にアモルファスランダムコイルを生じ、より少ない程度のベータシート構造を生ずる（Ｐａｄａｍｗａｒ ｅｔ ａｌ。、Ｓｉｌｋ ｓｅｒｉｃｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：Ａ ｒｅｖｉｅｗ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＆Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４、６３、ｐｐ３２３−３２９）。

米国特許出願公開第２００９／１７６９６５号は、単離されたセリシンの分子構造が、セリシン溶液を照射することによって改変されて、ラジカルスカベンジング能力およびチロシナーゼ阻害能力が改善された高分子量セリシンを生成できることを開示している。ベータシート構造が最大５０％得られる（図２、２００ｋＧｙ線量放射線）。分子構造が改変されたセリシンは、食品、化粧品、および／または医薬品および薬など、抗酸化能やチロシナーゼ阻害能を向上させるさまざまな製品の製造に用いることができる。

特開２００６−１１１６６７号公報は、セリシンハイドロゲルの製造方法を開示している。分子量が５０ｋＤａ超のシルク抽出物が提供され、それにアルコールが加えられ、混合物は静置される。セリシン水溶液中のセリシンは、アミド吸収帯のランダム構造に属する１６４１ｃｍ^−１までの吸収を示す。一方、セリシンハイドロゲルは、アミドＩ吸収帯のベータシート構造に属する１６２０ｃｍ^−１までの吸収を示す。セリシン分子間の水素結合の形成を刺激するエタノールの添加、および、その結果生じる三次元ネットワークは、セリシンハイドロゲルを形成する。

米国特許出願公開第２０１６／０１３６２４１号は、セリシンハイドロゲルを開示する。フィブロイン欠乏変異カイコであるカイコガ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）の繭が原料として利用される。原料の抽出と精製によりセリシン溶液を調製した後、架橋剤（アルデヒド類、ゲニポシド）で架橋してセリシンハイドロゲルを得る。架橋されたセリシンハイドロゲルは、セリシンの天然のコンフォメーションを維持していた。

Ｐａｄａｍｗａｒ ｅｔ ａｌ．、Ｓｉｌｋ ｓｅｒｉｃｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：Ａ ｒｅｖｉｅｗ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＆Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４、６３、ｐｐ３２３−３２９ 米国特許出願公開第２００９／１７６９６５号 特開２００６−１１１６６７号公報 米国特許出願公開第２０１６／０１３６２４１号

本発明者らは、絹から、二次構造中に非常に高い割合（＞８０％）のベータシートを有するセリシンの単離を可能にする方法を開発した。さらに、そのようなセリシンは優れた水構造化剤であり、化粧品、医薬品、食品および洗剤組成物などの幅広い製品の水相の構造化に適切に使用できることが見出された。

したがって本発明は、５〜１００重量％の構造化された水相を含む組成物を提供し、当該組成物は、水の重量に対して０．１〜１０重量％のセリシンを含み、前記セリシンは、二次構造において８０％超の割合のベータシートを有する。

本発明のセリシン、すなわち、８０％超のベータシート構造を有するセリシンは、以下の工程を含む方法によってカイコの繭から単離することができる。
・繭を約５ｘ５ｍｍの小片に切る；
・繭を約２５℃の脱塩水（脱イオン水）による第１の洗浄処理に供する；
・繭を約７０℃の脱イオン水による第２の洗浄処理に供する；
・繭を約２５℃でエタノールによる第２の洗浄処理に供する；
・３０℃未満の温度で蒸発させることにより、洗浄した繭からエタノールを除去する；
・乾燥洗浄した繭の重量の１重量部を約２０重量部の熱湯（約９５℃）と組み合わせて、水性懸濁液を形成する；
・水性懸濁液を約１２０℃の温度で約５分〜約２０分間維持する；
・加熱した懸濁液を４０００Ｇで２０分間遠心分離した後、デカントしてセリシンタンパク質抽出物を回収する。

上記方法において、水性懸濁液は、約１２０℃の温度で１５分まで、好ましくは１０分、最も好ましくは５分まで維持されることが好ましい。本発明者らは、水性懸濁液が約１２０℃の温度で約２０分まで維持される場合、そのようにして生成したセリシンが８０％超の割合の二次構造中のベータシートを有することを決定した。ベータシート形態のセリシンの量は、当該温度が長時間維持されると減少する。

米国特許出願公開第２００９／０１７６９６５号によって記載された従来技術の方法とは対照的に、高ベータシートのセリシンは、ガンマ線、電子またはＸ線放射による照射を使用することなく、容易に使用可能することができる。

本願の組成物のセリシン構造化水相のレオロジー特性は、ｐＨを変更することにより、および／または多価カチオン（例えば、Ｚｎ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｃａ^２）の濃度を調整することにより変更することができる。

本発明の組成物を調製する方法も提供され、前記方法は以下を含む：
・二次構造においてベータシートの割合が８０％超であるセリシンを含む水性成分を提供すること；および
・１００重量部の水性成分を、少なくとも５重量部の１以上の成分と混合すること。

発明の詳細な説明
本明細書で使用される場合、「含む（comprising）」の語は、「から本質的になる（consisting essentially of）」および「からなる（consisting of）」の語を包含する。「含む（comprising）」の語が使用されている場合、列挙された工程または選択肢は包括的である必要はない。

特に指定のない限り、「ｘからｙまで」という形式で表される数値範囲には、ｘとｙが含まれるものと理解される。

値または量の範囲を規定する場合、任意の特定の上限値または量を、任意の特定の下限値または量に関連付けることができる。

実施例および比較実験を除いて、または、他に明確に示された場合を除いて、すべての数は「約」という語によって修飾されていると理解されるべきである。

本明細書に含まれるすべてのパーセンテージと比率は、特に明記しない限り重量で算出する。

本明細書で使用される場合、不定冠詞「a」または「an」およびその対応する定冠詞「the」は、別段の指定がない限り、少なくとも１つ、または１つ以上を意味する。

上記個々のセクションで言及した本発明の様々な特徴は、必要に応じて、必要な変更を加えて他のセクションに適用される。したがって、１つのセクションで規定された特徴は、必要に応じて他のセクションで規定された特徴と組み合わせることができる。セクションの見出しは、便宜のためにのみ追加されており、開示を制限することを意図するものではない。

本発明は、図面に示した実施形態に限定されない。したがって、請求項で言及された特徴の後に参照番号が続く場合、そのような番号は、請求項の理解度を高める目的でのみ含まれ、請求項の範囲を限定するものではないことを理解されたい。

本発明は、構造化された水相を５〜１００重量％含む組成物に関し、当該組成物は、水の重量に対して０．１〜１０重量％のセリシンを含み、前記セリシンは、二次構造においてベータシートの割合が８０％超である。

本明細書で使用する「構造化された水相」の語は、特に明記しない限り、１つまたは複数の親水コロイドの存在により、非ニュートン挙動を示す水相を指す。

本明細書で使用する「セリシン」の語は、特に明記しない限り、カイコガから得られたセリシンポリペプチドを指し、前記ポリペプチドは少なくとも２ｋＤａの分子量を有する。カイコガ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）のセリシンは、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢデータベース識別子Ｐ０７８５６で識別される。「セリシン」の語は、天然のセリシンの部分的に加水分解された形態も包含する。

本明細書で使用される「二次構造」の語は、他に示されない限り、アルファヘリックス、ベータシートまたはランダムコイルとして示される、セリシンポリペプチドの局所セグメントの空間的配置を指す。

本明細書で使用する「アルファヘリックス」の語は、他に示さない限り、堅く巻かれたバックボーンがロッドの内側部分を形成し、側鎖がらせん状配列で外側に伸びるロッド状構造である分子構造の一部を指す。アルファヘリックスは、主鎖のＮＨ基とＣＯ基との間の水素結合によって安定化される。特に、各アミノ酸のＣＯ基は、バックボーンシーケンスの４残基先（ｉ＋４）に位置するアミノ酸のＮＨ基と水素結合を形成する（Ｂｅｒｇ ＪＭ、Ｔｙｍｏｃｚｋｏ ＪＬ、Ｓｔｒｙｅｒ Ｌ., Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５ｔｈ Ｅｄ. Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ, Ｗ Ｈ Ｆｒｅｅｍａｎ, ２００２, ３．３.１）。

本明細書で使用する「ベータシート」の語は、特に明記しない限り、２つ以上のベータ鎖を水素結合で連結することによって形成される分子構造の一部を指す。ベータストランドは、バックボーンが伸長したコンフォメーションで、通常３〜１０のアミノ酸長のポリペプチド鎖のストレッチである。ベータシートにおいて隣接する鎖は、反対方向（逆平行βシート）または同じ方向（平行βシート）に伸びることができる。逆平行配置では、各アミノ酸のＮＨ基とＣＯ基とがそれぞれ並列配置の隣接鎖上のパートナーのＣＯ基とＮＨ基とに水素結合しているため、水素結合スキームはより複雑になりる。各アミノ酸について、ＮＨ基は隣接する鎖の１つのアミノ酸のＣＯ基に水素結合しているが、ＣＯ基は鎖に沿ってさらに２残基のアミノ酸のＮＨ基に水素結合している（Ｂｅｒｇ ＪＭ、Ｔｙｍｏｃｚｋｏ ＪＬ、Ｓｔｒｙｅｒ Ｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５ｔｈ Ｅｄ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＷＨ Ｆｒｅｅｍａｎ、２００２、３．３．２）。

本明細書で使用する「ランダムコイル」の語は、特に明記しない限り、アルファヘリックスまたはベータシートなどの、規定された水素結合パターンを欠く分子構造の一部を指す。

セリシンの二次構造は、「遠紫外」スペクトル領域（１９０〜２５０ｎｍ）の円二色性分光法を使用して決定することができる。これらの波長では、発色団はペプチド結合であり、通常の折り畳まれた環境にあるときにシグナルが発生する。およそ１９５ｎｍでの残基あたりの最大楕円率（θ）とおよそ２２０ｎｍでの最小楕円率は、ベータシート構造に特徴的である。約１９０ｎｍでの残基あたりの最大楕円率（θ）と、約２０５ｎｍと２２５ｎｍでの２つの最小値は、アルファヘリックスに特徴的である。約２００ｎｍの最小楕円率と２１０〜２２０ｎｍmの広い最大値は、ランダムコイル構造に特徴的である。

特に好ましい実施形態によれば、本発明の組成物中のセリシンは、二次構造中のベータシートの割合が８０％を超え、さらには８５％を超え、最も好ましくは９０％を超える。

好ましい一実施形態では、セリシンは、２ｋＤａ〜４００ｋＤａの範囲、好ましくは２５ｋＤａ〜３００ｋＤａの範囲、より好ましくは４０ｋＤａ〜２５０ｋＤａ、さらにより好ましくは６０〜２００ｋＤｄａの範囲の分子量を有する。

本発明の好ましい実施形態では、組成物は、水の重量に対して０．２〜４重量％のセリシンを含む。好ましくは、組成物は、水の重量に対して０．３〜３重量％のセリシン、より好ましくは水の重量に対して０．４〜２重量％のセリシンを含む。

好ましくは、組成物に含まれるセリシンの少なくとも８０重量％は、構造化された水相中に存在する。より好ましくは、組成物に含まれるセリシンの少なくとも９０重量％、最も好ましくはセリシンの少なくとも９５重量％が構造化された水相中に存在する。

本発明者らは、構造化された水相が、２．０〜４．０、または５．５〜１０．５の範囲のｐＨを有する場合、セリシンの水構造化能力が最適であることを発見した。好ましくは、構造化された水相は、５．８〜９．５の範囲、さらにより好ましくは６〜８．５の範囲のｐＨを有する。

本発明の組成物は、単相水性組成物の形態で、または１つ以上の追加の別個の相を含む組成物の形態で提供され得る。そのような多相組成物の例は、乳濁液および懸濁液である。特に好ましい実施形態によれば、組成物は、１つ以上の非水性相を１〜８０重量％、より好ましくは５〜７０重量％、最も好ましくは１０〜５０重量％含む。

特に好ましい実施形態によれば、構造化された水相は連続水相である。そのような連続構造化水相を含む組成物は、好ましくは２５℃で５０〜３０００Ｐａの範囲、より好ましくは１００〜２０００Ｐａの範囲、最も好ましくは２００〜８００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する。この組成物の損失弾性率（Ｇ”）は、好ましくは１０〜３００Ｐａの範囲、より好ましくは２０〜２００Ｐａの範囲、最も好ましくは５０〜１００Ｐａの範囲である。

振動レオロジーを使用すると、異なる時間スケールで材料の粘性様の特性と弾性様の特性の両方を定量化できる。振動レオメーターの基本原理は、サンプルに正弦波のせん断変形を引き起こし、結果として生じる応力応答を測定することである。プローブされる時間スケールは、せん断変形の振動周波数ωによって決定される。２つのプレートの間にサンプルが置かれる。上部プレートが静止している間、モーターが下部プレートを回転させ、それにより時間依存性ひずみγ（ｔ）＝γ・ｓｉｎ（ωｔ）をサンプルに課す。同時に、サンプルが上部プレートに加えるトルクを測定することにより、時間依存応力σ（ｔ）が定量化される。

流体製品の貯蔵弾性率（Ｇ’）と損失弾性率（Ｇ”）の双方は、２５℃で、ＡＲ１０００レオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を使用して、コーンプレートジオメトリを使用して、コーン直径４０ｍｍ、コーン角度は２°、打ち切りギャップは５８μｍである。適用されるプログラム設定は次のとおりである。
・応力τは、製品のＬｉｎｅａｉｒ粘弾性範囲で選択される（ＬＶＥＲは振幅スイープによって決定される）。応力は１Ｐａで一定に保たれる。
・角周波数ωの増加するランプログは、６．２８ｒａｄ／ｓから始まり、低周波数から高周波数までサンプルに設定される。終了ωは、６２８．３２ｒａｄ／ｓである。
・測定点を集める設定は「時間設定なし」である。この手法では、装置は定常状態の状態を待ってから、測定点をとる。
・１０進ごとに（every decade）１０個の測定ポイントが取得される。

さらに別の好ましい実施形態によれば、構造化された水相は、親水コロイドの三次元ネットワークによって構造化されるゲル化水相である。ゲル化水相は、セリシン（セリシンハイドロゲル）のみからなる三次元ネットワークによってゲル化されてもよく、あるいは、他のゲル化剤をも含む三次元ネットワークを含んでもよい。

構造化された水相は、通常、水を少なくとも５０重量％含む。好ましくは、構造化された水相は、少なくとも６０重量％の水、より好ましくは少なくとも７０重量％の水、さらにより好ましくは少なくとも８０重量％の水、そして最も好ましくは少なくとも８５重量％の水を含む。

特に好ましい実施形態によれば、本組成物は、疎水性相１〜８０重量％と、構造化された水相２０〜９９重量％とを含むエマルションである。より好ましくは、エマルションは、疎水性相５〜７０重量％と、構造化された水相３０〜９５重量％とを含む。最も好ましくは、エマルションは、疎水性相１０〜５０重量％と、構造化された水相５０〜９０重量％とを含む。疎水性相と構造化された水相とに加え、エマルション組成物は、他の相、例えば、固体材料の小さな粒子からなる分散相を含んでもよい。

本発明者らは、セリシンの水構造化能力が、多価金属カチオンの存在により増強され得ることを見出した。その結果、さらに別の好ましい実施形態では、組成物は、少なくとも０．０８ｍｍｏｌの多価金属カチオンを含み、前記多価金属カチオンは、Ｚｎ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｃａ^２＋およびそれらの組み合わせから選択される。より好ましくは、組成物は、少なくとも０．１ｍｍｏｌの前記多価金属カチオン、さらにより好ましくは０．２〜０．９ｍｍｏｌの範囲の前記多価金属カチオン、より好ましくは０．３〜０．８ｍｍｏｌの前記多価金属カチオン、最も好ましくは０．４〜０．６ｍｍｏｌの前記多価金属カチオンを含む。

本発明に従って使用されるセリシンは、好ましくは、高純度のセリシン品質である。したがって、別の好ましい実施形態では、本組成物は、１：５以下、好ましくは１：１０以下のフィブロイン：セリシンの重量比で、フィブロインとセリシンとを含む。

特に好ましい実施形態では、構造化された水相はセリシンハイドロゲルを含む。本発明のセリシンは、追加の親水コロイドを必要とせずにハイドロゲルを形成することが見出された。典型的には、組成物に含まれるセリシンは、水の重量に対して１％のセリシンの濃度で自立ゲルを形成することができる。さらにより好ましくは、前記自立ゲルは、２５℃で少なくとも２００Ｐａの貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する。

米国特許出願公開第２０１６／０３６２４１号に記載されているセリシンとは異なり、本発明のセリシンはグルタルアルデヒドで架橋されたセリシンではない。さらにより好ましくは、セリシンは、架橋されたセリシンではない。

米国特許出願公開第２００９／１７６９６５号に記載されているセリシンとは異なり、本発明のセリシンは、１０ｋＧｙ〜５００ｋＧｙの吸収線量で放射線に曝された放射線照射セリシンではない。

本組成物の構造化された相は、好ましくは０．１重量％未満のエタノール、より好ましくは０．０１重量％未満のエタノールを含む。

特定の実施形態では、本組成物は、水の重量に対して少なくとも０．３％、好ましくは少なくとも０．４％のセリシンを含む。このセリシンは、好ましくは、少なくとも１０ｋＤａの分子量を有し、二次構造において８０％超の割合のベータシートを有する。

さらにより好ましい実施形態では、組成物は、分子量が少なくとも１５ｋＤａであり、かつ、二次構造中のベータシートの割合が８５％を超える、少なくとも０．３重量％、好ましくは少なくとも０．４重量％のセリシンを含む。

本発明の組成物は、好ましくは化粧製品、より好ましくはローション、クリーム、軟膏および膏薬から選択される化粧製品である。本発明の別の態様は、本明細書で前に先に定義された組成物を調製する方法に関し、前記方法は以下を含む：
・二次構造におけるベータシートの割合が８０％を超えるセリシンを含む水性成分を提供すること、および
・１００重量部の水性成分を、少なくとも５重量部、好ましくは少なくとも１０重量部、より好ましくは少なくとも２０重量部の１以上の他の成分と混合すること。

好ましくは、セリシンを含有する水性成分は、それが１以上の他の成分と混合される場合、液体である。水性成分が、水性成分をゲル化するのに十分な濃度でセリシンを含む場合、水性成分は、混合前に液化し、混合後にゲル化させることができる。これは、混合前に水性成分のｐＨを４．０〜５．５の範囲のｐＨに調整した後、前記混合の後に３．９未満のｐＨまたは５．６を超えるｐＨにｐＨ調整することによって達成することができる。

本方法において水性成分と混合される１つ以上の他の成分は、好ましくは、充填剤、染料、ｐＨ調整剤、溶媒、ポリマーおよび増粘剤からなる群から選択される。

特に好ましい実施形態によれば、当該方法は、Ｚｎ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｃａ^２およびそれらの組み合わせから選択される多価金属カチオンの水溶性塩の添加を含む。

実施例
実施例１：セリシン抽出
セリシンは、カイコガ（Ｂｏｍｂｙｘ ｍｏｒｉ）の繭から次の手順で抽出した：
ｉ）繭を超純水および脱気した水に周囲温度で１５分間浸し、５分ごとに内容物を振とうした。繭は、鉗子を使用して水から分離した。
ｉｉ）事前に洗浄した小片を、脱気した超純水に７０℃で３０分間（５分ごとに振とうしながら）再度浸した。繭は鉗子を使用して水から分離した。
ｉｉｉ）室温で繭をエタノールに１５分間浸した（３分ごとに振とう）。繭は、鉗子を使用してエタノールから分離した。

繭をワットマン濾紙で周囲温度および大気圧で乾燥させた。乾燥した繭は、抽出プロセスのストック材料として使用された。既知量の水を容器に入れ、９５℃に加熱した（底部攪拌オートクレーブを使用）。予め洗浄した繭（繭と水との比１：３０）を水に加え、そのようにして得られた懸濁液を異なる抽出方式に供した。

・サンプル１を攪拌下に維持し、５分間１２０℃に加熱した。
・サンプル２を、３０分の抽出時間を使用して、同じ条件下で抽出した。
・サンプル３も、同じ条件で、９０分の抽出時間を使用して抽出した。

加熱期間の終わりに、加熱を止め、圧力をすぐに解放した（これにより、スラリーのより速い冷却が可能になる）。

セリシンを、遠心分離（６０００ ｒｐｍ（４，０００Ｇ）で３０分間）とデカントによりフィブロインから分離した。抽出物のセレシン含有量は約１．１重量％であった。

サンプル1の抽出されたセリシンの分子量は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析によって決定され、３５ｋＤａ〜２５０ｋＤａであることが見出された。

実施例２：二次構造
実施例１のサンプル１〜３におけるセリシンタンパク質の二次構造は、円二色性（ＣＤ）測定を使用して分析した。タンパク質の二次構造の標準ＣＤスペクトルを１９５〜２４０ｎｍの波長スキャンを使用して記録し（図１参照）、次にオンライン分析ソフトウェア「Ｋ２Ｄ３」を使用してデータをフィッティングした（図２ａ＝サンプル１、図２ｂ＝サンプル２、および図２ｃ＝サンプル３を参照）。折り畳まれたタンパク質は、αヘリックス；βシート；ループ（二次構造ドメインを相互接続するリンカー残基）の二次構造で構成される。ソフトウェア「Ｋ２Ｄ３」は、スキャン波長として２００〜２４０ｎｍを取る。円偏光二色性からの平均残基楕円率値は、二次構造（αヘリックスおよびβシート）に寄与するアミノ酸のパーセントを指し、リンカー領域の残基は含まれない。すべての二次構造の最大合計（４６％）は、セリシンタンパク質の計算モデルから取得された。セリシンのベータシート構造は、Ｋ２Ｄ３ソフトウェアの結果を使用して推定された。

ＣＤデータは、以下の式を使用して、波長の関数として、平均残留楕円率（ＭＲＥ、ｄｅｇ ｃｍ^２ ｄｍｏｌ⁻¹として表される）に関して提示される：

式中、［θ］_ＭＲＥは、算出された平均残基楕円率（ｄｅｇ ｃｍ² ｍｏｌ⁻¹）であり；ＭＲＷは、ペプチド結合の平均残基重量であり［ＭＲＷは、ＭＲＷ＝Ｍ／Ｎ^−１として計算され、式中、Ｍはペプチド鎖の分子量（Ｄａ）であり、Ｎは鎖内のアミノ酸の数である］；［θ］_Ｏｂｓは、観測された楕円率（度で表される）であり;ｄは経路の長さ（ｃｍ）であり；ｃはタンパク質濃度（ｇＬ^−１）である。ＣＤスペクトルはすべて、バッファー濃度に関して補正され、二次構造はＷｅｂベースのＫ２Ｄ３分析ツールＫ２Ｄ３を使用して算出された：Ｋｅｌｌｙ ｅｔ ａｌ. （ ２００５） Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ １７５１ ： １ １９−３９. ＰＭＩＤ：１６０２７０５３ ｎｅｕｒａｌ ｎｅｔｗｏｒｋ ｓｏｆｔｗａｒｅ ｐａｃｋａｇｅ。

ＣＤ測定の結果を表１に示す。

実施例３：レオロジー検討
実施例１のセリシン抽出物のレオロジー特性は、これらの抽出物の（２５℃における）貯蔵弾性率および損失弾性率を測定することにより決定された。結果を表２に示す。

異なる濃度の実施例１のサンプル１を使用して、ハイドロゲルを形成した。ハイドロゲルの貯蔵弾性率と損失弾性率を測定した（２５℃にて）。これらの測定結果を表３に示す。

実施例４：金属イオンの存在下でのレオロジー検討
Ｚｎ^２＋を含有するハイドロゲルは、実施例１のサンプル１を使用し、そして異なる量のＺｎＣｌ_２を添加することによって調製した。

ハイドロゲルの貯蔵弾性率および損失弾性率を決定した。 これらの測定結果を表４に示す。

実施例５：ｐＨの影響
セリシンハイドロゲルの貯蔵弾性率に対するｐＨの影響を、実施例１のサンプル１を使用して決定した。セリシンの０．９％水溶液のｐＨは、ＨＣｌ（モル濃度０．１）またはＮａＯＨ（モル濃度０．１）を使用して調整され、異なるｐＨの溶液が提供された。

ハイドロゲルの貯蔵弾性率および損失弾性率を決定した。これらの測定の結果を表５に示す。

ハイドロゲルは、ｐＨ＜３．５と、ｐＨ６〜９．５の間で形成された。ｐＨ４〜５．５の範囲では、ハイドロゲルは形成されなかった。

Claims (14)

1. 構造化された水相５〜１００重量％を含む組成物であって、
   当該組成物が、水の重量に対してセリシン０．１〜１０重量％を含み、
   前記セリシンが、二次構造中のベータシートの割合が８０％を超える、組成物。
2. セリシンが２ｋＤａ〜４００ｋＤａの範囲の分子量を有する、請求項１に記載の組成物。
3. 水の重量に対し、０．２〜４重量％のセリシンを含む、請求項１または２に記載の組成物。
4. 前記構造化された水相のｐＨが、２．０〜４．０または５．５〜１０．５の範囲である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
5. １つ以上の非水性相１〜８０重量％、および、構造化された水相２０〜９９重量％を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の組成物。
6. 少なくとも０．０８ｍｍｏｌの多価金属カチオンを含み、
   前記多価金属カチオンが、Ｚｎ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｃａ^２＋およびそれらの組み合わせから選択される、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
7. 前記構造化された水相がセリシンハイドロゲルを含む、請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物。
8. 前記構造化された水相が連続水相である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の組成物。
9. 前記構造化された水相が水を少なくとも５０重量％含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の組成物。
10. 水の重量に対してセリシンを少なくとも０．４重量％含み、
    前記セリシンの分子量が少なくとも１０ｋＤａであり、二次構造中のベータシートの割合が８０％超である、請求項１〜９のいずれか一項に記載の組成物。
11. ローション、クリーム、軟膏および膏薬から選択されるがこれらに限定されない化粧製品である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物。
12. ・８０％超の割合のベータシートを二次構造中に有するセリシンを含む水性成分を提供する工程と、
    ・１００重量部の水性成分を少なくとも５重量部の１つ以上の他の成分と混合する工程と
    を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の組成物の調製方法。
13. 前記１つ以上の他の成分が、充填剤、染料、ｐＨ調整剤、溶媒、ポリマーおよび増粘剤からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
14. Ｚｎ^２＋、Ｃｕ^２＋、Ｃａ^２＋およびそれらの組み合わせから選択される多価金属カチオンの水溶性塩の添加を含む、請求項１３または１４に記載の方法。