JP2021137023A - 組換え改変ワクシニアウイルスアンカラ(mva)rsウイルス(rsv)ワクチン - Google Patents
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Abstract
Description
ワクチンは、典型的には、標的感染性因子または病原体(例えば、ウイルス、細菌、もしくは寄生虫)に対する保護免疫を誘導するために、以下を含むいくつかの戦略のうちの1つを使用する:(1)不活化病原体の調製;(2)生の弱毒化病原体(遺伝的に弱毒化した病原体株を含む)の調製;(3)精製タンパク質サブユニットワクチンの調製;(4)病原体抗原および/またはアジュバントをコードするウイルスベクターに基づくワクチン、および(5)病原体抗原をコードするDNAに基づくワクチン。
MVAは、Vaccination Institute(Ankara,Turkey)で何年も維持され、ヒトのワクチン接種のための基盤として使用されていた皮膚ワクシニア株アンカラのニワトリ胚線維芽細胞で570を超える連続継代によって産生される[漿尿膜ワクシニアウイルスアンカラウイルス、CVA;検討にはMayr et al.(1975),Infection 3,6−14を参照]。しかしながら、ワクシニアウイルスに関連したワクチン接種後の合併症が重症であることが多いため、より弱毒化された、より安全な天然痘ワクチンを作製しようとするいくつかの試みがあった。
「抗原決定基」という用語は、宿主の免疫系を刺激して、細胞応答および/または液性抗体応答のいずれかの抗原特異的免疫応答を起こす任意の分子を指す。抗原決定基は、宿主においてなおも免疫応答を誘発し、抗原の一部を形成するタンパク質、ポリペプチド、抗原タンパク質断片、抗原、およびエピトープ;例えば、グリコシル化タンパク質、ポリペプチド、抗原タンパク質断片、抗原およびエピトープを含む、タンパク質、ポリペプチド、ならびに抗原タンパク質断片、抗原およびエピトープの相同体または変異体;そしてそのような分子をコードするヌクレオチド配列を含んでもよい。したがって、タンパク質、ポリペプチド、抗原タンパク質断片、抗原およびエピトープは、特定の天然ヌクレオチドまたはアミノ酸配列に限定されないが、天然の配列と同一な配列、ならびに欠失、付加、挿入、および置換等の天然の配列に対する修飾を包含する。
RSVのヌクレオチド配列およびタンパク質
本明細書で述べるRSV遺伝子は、たとえ、株または分離株間で遺伝子の正確な配列および/またはゲノムの位置が異なる可能性がある場合であっても、任意のRSV株または分離株の対応するタンパク質をコードする遺伝子、またはその遺伝子の相同体もしくは変異体を指す。
特定の実施形態において、組換えMVAは、RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする少なくとも1つの異種ヌクレオチド配列を発現する。特定の実施形態において、RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする少なくとも1つの異種ヌクレオチド配列は、RSV F抗原決定基をコードする。特定の実施形態において、RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする少なくとも1つの異種ヌクレオチド配列は、RSV G抗原決定基をコードする。特定の実施形態において、RSV F抗原決定基は、RSV株A2に由来する。特定の実施形態において、RSV G抗原決定基は、RSV株A2に由来する。
特定の実施形態において、RSV膜糖タンパク質の1つ以上の抗原決定基と、RSVヌクレオカプシドタンパク質の1つ以上の抗原決定基とをコードする異種ヌクレオチド配列が、MVAゲノムまたはMVA−BNゲノムの様々な挿入部位に組み入れられる。RSVタンパク質の1つ以上の抗原決定基をコードする異種ヌクレオチド配列は、図1に示すように、別個の転写単位として、または融合遺伝子として、組換えMVAに挿入することができる。
一実施形態において、異種RSVヌクレオチド配列のうちの1つ、それ以上、または全ての発現は、1つ以上のポックスウイルスプロモーターの制御下にある。特定の実施形態において、ポックスウイルスプロモーターは、Pr7.5プロモーター、ハイブリッド初期/後期プロモーター、PrSプロモーター、合成もしくは天然の初期もしくは後期プロモーター、または牛痘ウイルスATIプロモーターである。特定の実施形態において、ポックスウイルスプロモーターは、PrSプロモーター(配列番号39)、Pr7.5プロモーター(配列番号40)、PrSynIImプロモーター(配列番号41)、PrLE1プロモーター(配列番号42)、およびPrH5mプロモーター(配列番号43[L.S.Wyatt et al.(1996),ワクチン14(15):1451−1458])からなる群から選択される。特定の実施形態において、ポックスウイルスプロモーターは、PrSプロモーター(配列番号39)である。特定の実施形態において、ポックスウイルスプロモーターは、Pr7.5プロモーター(配列番号40)である。特定の実施形態において、ポックスウイルスプロモーターは、PrSynIImプロモーター(配列番号41)である。特定の実施形態において、ポックスウイルスプロモーターは、PrLE1プロモーター(配列番号42)である。特定の実施形態において、ポックスウイルスプロモーターは、PrH5mプロモーター(配列番号43)である。
RSVワクチンおよび薬学的組成物
本明細書に記載のMVA−BNを含む組換えMVAウイルスは、高度に複製が制限されており、ひいては高度に弱毒化されているため、それらは、ヒトおよび免疫不全のヒトさえも含む幅広い哺乳動物の治療の理想的な候補である。したがって、活性医薬物質ならびに薬学的組成物およびワクチンとして使用するための本発明による組換えMVAを本明細書に提供し、全て、ヒトを含む生きた動物の体内に免疫応答を誘導することを目的とする。
本明細書に記載の組換えMVAのうちのいずれか1つ以上を含むキットも本明細書に提供される。キットは、RSV感染症のリスクがある対象に組換えMVAを投与するための指示と一緒に、組換えMVAの1つまたは複数の容器またはバイアルを含むことができる。特定の実施形態において、対象はヒトである。指示は、組換えMVAが単回投与または複数回投与(すなわち、2回、3回、4回等)で対象に投与されることを示し得る。特定の実施形態において、指示は、組換えMVAウイルスが、1回目(予備刺激)および2回目(追加免疫)の投与でナイーブまたは非ナイーブな対象に投与されることを示す。
対象動物を免疫する方法、ならびに対象動物を免疫する方法において使用するための組換えMVA、および対象動物を免疫するための薬物またはワクチンの調製における本明細書に提供される組換えMVAの使用もまた、本明細書に提供される。特定の実施形態において、動物は哺乳動物である。特定の実施形態において、哺乳動物は、ラット、ウサギ、ブタ、マウス、またはヒトであり、方法は、本明細書に提供される組換えMVAのうちのいずれか1つ以上の用量を対象に投与することを含む。
1.筋肉内投与は除外される、鼻腔内投与によってRSV感染症を治療または予防するための、少なくとも1つのRSウイルス(RSV)膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列を含む、組換え改変ワクシニアウイルスアンカラ(MVA)。
2.薬学的組成物および/またはワクチンの調製のための、少なくとも1つのRSウイルス(RSV)膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列を含む組換え改変ワクシニアウイルスアンカラ(MVA)の使用であって、薬学的組成物および/またはワクチンは鼻腔内投与され、筋肉内投与は除外される、使用。
3.ヒトを含む対象をRSV感染症に対して免疫する方法であって、RSウイルス(RSV)膜糖タンパク質の少なくとも1つの抗原決定基をコードするヌクレオチド配列を含む組換え改変ワクシニアウイルスアンカラ(MVA)を、ヒトを含む対象に鼻腔内投与することを含み、筋肉内投与は除外される、方法。
4.鼻腔内投与のみを含む、項目1に記載の組換えMVA、項目2に記載の使用、および/または項目3に記載の方法。
5.皮下投与を含む、項目1に記載の組換えMVA、項目2に記載の使用、および/または項目3に記載の方法。
6.組換えMVAは、RSVヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、項目1もしくは4〜5のいずれか1つの記載の組換えMVA、項目2、4、もしくは5のいずれか1つに記載の使用、および/または項目3〜5のいずれか1つの方法。
7.RSウイルス(RSV)膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドの抗原決定基をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列と、を含む、組換え改変ワクシニアウイルスアンカラ(MVA)。
8.RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、RSV F抗原決定基をコードする、項目1〜7のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
9.RSV F膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列をさらに含む、項目1〜8のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
10.RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、全長RSV F膜糖タンパク質をコードする、項目1〜9のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
11.RSV F膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、RSV株A、好ましくはA2および/またはAlongに由来する、項目8〜10のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
12.RSV F膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、配列番号4のアミノ酸配列 をコードするヌクレオチド配列を含む、項目8〜11のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
13.RSV F膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列配列は、配列番号3のヌクレオチド配列を含む、項目8〜12のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
14.RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、切断型RSV F膜糖タンパク質をコードする、項目1〜13のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
15.切断型RSV F膜糖タンパク質をコードするヌクレオチド配列は、RSV株A、好ましくはAlongに由来する、項目14に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
16.切断型RSV F膜糖タンパク質は、膜貫通ドメインを欠損する、項目14または15に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
17.切断型RSV F膜糖タンパク質は、細胞質ドメインを欠損する、項目14〜16のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
18.RSV F膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、配列番号6のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、項目8〜17のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
19.RSV F膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、配列番号5のヌクレオチド配列を含む、項目8〜18のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
20.RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、RSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする、前記項目のいずれかに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
21.RSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列をさらに含む、項目1〜20のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
22.RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、全長RSV G膜糖タンパク質をコードする、項目1〜21のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
23.RSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、RSV株A、好ましくは株A2、および/またはBに由来する、項目20〜22のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
24.RSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、配列番号2のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、項目20〜23のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
25.RSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、配列番号1のヌクレオチド配列を含む、項目20〜24のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
26.RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、切断型RSV G膜糖タンパク質をコードする、項目1〜25のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
27.切断型RSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、RSV株Bに由来する、項目26に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
28.切断型RSV G膜糖タンパク質は、膜貫通ドメインを欠損する、項目26または27に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
29.切断型RSV G膜糖タンパク質は、細胞質ドメインを欠損する、項目26〜28のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
30.RSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、配列番号8のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、項目20〜29のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
31.RSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、配列番号7のヌクレオチド配列を含む、項目20〜30のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
32.RSVヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、RSV Nヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードする、項目6〜31のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
33.RSVヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、RSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基をコードする、項目6〜32のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
34.RSVヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、全長タンパク質をコードする、項目6〜33のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
35.RSV Nヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、RSV株A、好ましくは株A2に由来する、項目32〜34のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
36.RSVヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列は、RSV N ヌクレオカプシドおよびRSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基をコードする、項目32〜35のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
37.RSV N ヌクレオカプシドおよびRSV M2マトリックスタンパク質の両方の抗原決定基は、単一の読み取り枠によってコードされる、項目36に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
38.RSV N ヌクレオカプシドおよびRSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基は、自己切断プロテアーゼドメインによって分離される、項目36または37に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
39.自己切断プロテアーゼドメイン配列は、口蹄疫ウイルスに由来する、項目38に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
40.自己切断プロテアーゼドメイン配列は、プロテアーゼ2A断片配列である、項目38または39に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
41.自己切断プロテアーゼドメイン配列は、配列番号12のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、項目38〜40のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
42.自己切断プロテアーゼドメインは、配列番号11のヌクレオチド配列を含む、項目38〜41のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
43.単一の読み取り枠は、配列番号18のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む、項目37〜42のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
44.単一の読み取り枠は、配列番号17のヌクレオチド配列を含む、項目37〜43のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
45.RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする1つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードする1つのヌクレオチド配列とを含む、前記項目のいずれかに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
46.RSV F膜糖タンパク質およびRSV Nヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基を含む、項目45に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
47. RSV F膜糖タンパク質およびRSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基を含む、項目45に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
48.RSV G膜糖タンパク質およびRSV Nヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基を含む、項目45に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
49.RSV G膜糖タンパク質およびRSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基を含む、項目45に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
50.RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする2つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードする1つのヌクレオチド配列とを含む、項目1〜44のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
51.RSV Fおよび/またはG膜糖タンパク質ならびにRSV Nヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基を含む、項目50に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
52.RSV Fおよび/またはG膜糖タンパク質ならびにRSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基を含む、項目50に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
53.RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする2つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードする2つのヌクレオチド配列とを含む、項目1〜44のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
54.RSV Fおよび/またはG膜糖タンパク質の抗原決定基と、RSV Nヌクレオカプシドおよび/またはM2マトリックスタンパク質の抗原決定基とをコードするヌクレオチド配列を含む、項目53に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
55.RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする3つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードする2つのヌクレオチド配列とを含む、項目1〜44のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
56.2つのRSV F膜糖タンパク質および/または1つのRSV G膜糖タンパク質の抗原決定基と、RSV Nヌクレオカプシドタンパク質および/またはRSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基とを含む、項目55に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
57.2つのRSV G膜糖タンパク質および/または1つのRSV F膜糖タンパク質の抗原決定基と、RSV Nヌクレオカプシドタンパク質および/またはRSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基とを含む、項目55に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
58.RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする4つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードする1つのヌクレオチド配列とを含む、項目1〜44のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
59.2つのRSV F膜糖タンパク質および/または2つのRSV G膜糖タンパク質の抗原決定基とRSV Nヌクレオカプシドタンパク質またはRSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基とを含む、項目58に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
60.RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする4つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードする2つのヌクレオチド配列とを含む、項目1〜44のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
61.2つのRSV F膜糖タンパク質および/または2つのRSV G膜糖タンパク質の抗原決定基と、RSV Nヌクレオカプシドタンパク質および/またはRSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基とを含む、項目60に記載の組換えMVA、使用および/または方法。
62. 組換えMVAを作製するために使用されるMVAは、MVA−BNまたはその誘導体である、項目1〜61のいずれか1つに記載の組換えMVA、使用および/または方法。
63.活性医薬物質として使用するための、項目1または4〜62のいずれか1つに記載の組換えMVA。
64.項目1または4〜63のいずれか1つの記載の組換えMVA、任意選択的に薬学的に許容される担体および/または希釈剤を含む、薬学的組成物および/またはワクチン。65.薬学的組成物および/またはワクチンの調製のための、項目1または4〜63のいずれか1つの記載の組換えMVAの使用。
66.RSV感染症を治療または予防するための、項目6〜63のいずれか1つに記載の組換えMVA、項目64の薬学的組成物および/もしくはワクチン、ならびに/または項目2、4〜6、8〜62、もしくは65のいずれか1つに記載の使用。
67.項目1、4〜63もしくは66のいずれか1つに記載の組換えMVAならびに/または項目64〜66に記載の薬学的組成物および/もしくはワクチンを、ヒトを含む対象に投与することを含む、ヒトを含む対象をRSV感染症に対して免疫する方法。
68.組換えMVAは、107〜109 TCID50の用量で投与されるかまたは投与されるべきである、項目1、4〜63もしくは66のいずれか1つに記載の組換えMVA、項目64〜66に記載の薬学的組成物および/もしくはワクチン、項目2、4〜6、8〜62、65もしくは66のいずれか1つに記載の使用、ならびに/または項目3〜6、8〜62もしくは67のいずれか1つに記載の方法。
69.組換えMVAは、鼻腔内投与および/または皮下投与されるかまたはされるべきである、項目5〜68のいずれか1つに記載の組換えMVA、薬学的組成物および/もしくはワクチン、使用ならびに/または方法。
70.組換えMVAは、ヒトを含む免疫学的にナイーブなまたは免疫学的に成熟な対象に、単回投与または複数回投与で投与されるかまたは投与されるべきである、項目1〜69のいずれか1つに記載の組換えMVA、薬学的組成物および/もしくはワクチン、使用ならびに/または方法。
71.2歳を上回るヒトを含む対象に投与するための、項目1〜70のいずれか1つに記載の組換えMVA、薬学的組成物および/もしくはワクチン、使用ならびに/または方法。
72.2歳未満のヒトを含む対象に投与するための、項目1〜70のいずれか1つに記載の組換えMVA、薬学的組成物および/もしくはワクチン、使用ならびに/または方法。73.項目1、4〜63、66または68〜72のいずれか1つに記載の組換えMVAの1つまたは複数のバイアルと、RSV感染症のリスクがある対象にウイルスを投与するための指示とを含む、キット。
74.1回目の投与(予備刺激)のための第1のバイアルまたは容器中、および2回目の投与(追加免疫)のための第2のバイアルまたは容器中に組換えMVAを含む、項目1、4〜63、66もしくは68〜72のいずれか1つに記載の組換えMVAを含むキット、および/または項目73に記載のキット。
75.3回目、4回目、またはさらなる投与(追加免疫)のための第3、第4、またはさらなるバイアルまたは容器中に組換えMVAを含む、項目73または74に記載のキット。
76.項目1、4〜63または66のいずれか1つに記載の組換えMVAを含む、細胞。77.以下のステップを含む、項目1、4〜63、66または68〜72のいずれか1つに従って組換えMVAを作製する方法:
(a)宿主細胞をMVAウイルスに感染させるステップ、
(b)感染細胞を、RSV抗原決定基をコードするヌクレオチド配列を含む組換えベクターでトランスフェクトするステップであって、前記ヌクレオチド配列は、MVAウイルスゲノムへのヌクレオチド配列の組込みを指示することが可能なゲノムMVAウイルス配列をさらに含む、ステップ、
(c)作製された組換えMVAウイルスを同定、単離、および任意選択的に精製するステップ。
78.項目77に記載の方法に従って作製される、組換えMVA。
79.以下のステップを含む、いずれか1つの項目1、4〜63、66もしくは68〜72に従って組換えMVAを生成するため、および/または前記組換えMVAのゲノムから発現される抗原決定基を生成するための方法:
(a)宿主細胞を、項目1、4〜63、66もしくは項目68〜72のいずれか1つに記載の組換えMVAに感染させるステップ、または該細胞を組換えMVAの組換えDNAでトランスフェクトするステップ、
(b)感染またはトランスフェクトされた細胞を培養するステップ、
(c)前記細胞からMVAおよび/または抗原決定基を単離するステップ。
80.項目79の方法によって得られた、組換えMVAおよび/または抗原決定基。
81.対象がRSV感染症再発のリスクがあるかどうかを決定する方法であって、RT−qPCRにより前記対象から採取した試料中にRSVが存在するかどうかを決定し、RSVの存在は、RSV感染症再発の存在を示唆する、方法。
82.対象がRSVに対する無菌免疫を獲得したかどうかを決定する方法であって、RT−qPCRにより前記対象から採取した試料中にRSVが存在するかどうかを決定し、RSVの存在は、対象がRSVに対する無菌免疫を獲得していないことを示唆する、方法。83.項目82に記載の方法によってRSVに対する無菌免疫を獲得していないと診断された対象を免疫する方法であって、項目1、4〜63、66、68〜72、78もしくは80のいずれか1つに記載の組換えMVA、および/または項目64、66もしくは68〜72のいずれか1つに記載の薬学的組成物および/もしくはワクチンを対象に鼻腔内投与することを含む、方法。
84.項目82に記載の方法によってRSVに対する無菌免疫を獲得していないと診断された対象を免疫する方法(前記方法は、前記組換えMVAを対象に鼻腔内投与することを含む)において使用するための、項目1、4〜63、66、68〜72、78もしくは80のいずれか1つに記載の組換えMVA、および/または項目64、66もしくは68〜72のいずれか1つに記載の薬学的組成物および/もしくはワクチン。
85.項目82に記載の方法によってRSVに対する無菌免疫を獲得していないと診断された対象を免疫するための薬学的組成物および/またはワクチンの調製のための、項目1、4〜63、66、68〜72、78または80のいずれか1つに記載の組換えMVAの使用であって、薬学的組成物および/またはワクチンは、鼻腔内投与のためである、使用。
86.項目82に記載の方法によってRSVに対する無菌免疫を獲得していないと診断された対象において無菌免疫を誘導する方法であって、項目1、4〜63、66、68〜72、78もしくは80のいずれか1つに記載の組換えMVA、および/または項目64、66もしくは68〜72のいずれか1つに記載の薬学的組成物および/もしくはワクチンを対象に鼻腔内投与することを含む、方法。
87.項目82に記載の方法によってRSVに対する無菌免疫を獲得していないと診断された対象において無菌免疫を誘導する方法(前記方法は、前記組換えMVAを対象に鼻腔内投与することを含む)において使用するための、項目1、4〜63、66、68〜72、78もしくは80のいずれか1つに記載の組換えMVA、および/または項目64、66もしくは68〜72のいずれか1つに記載の薬学的組成物および/もしくはワクチン。88.項目82に記載の方法によってRSVに対する無菌免疫を獲得していないと診断された対象において無菌免疫を誘導するための薬学的組成物および/またはワクチンの調製のための、項目1、4〜63、66、68〜72、78もしくは80のいずれか1つに記載の組換えMVAの使用であって、薬学的組成物またはワクチンは、鼻腔内投与のためである、使用。
実施例1:組換えMVAの構築
組換えMVAの作製は、組換えMVAを選択するための選択マーカーを使用したCEF細胞における相同的組換えを介して、示されるプロモーター(図1)と一緒にRSVコード配列をMVAゲノムに挿入することによって行われた。挿入部位としての遺伝子間領域(IGRs)の使用については、国際特許公開WO 03/097845に記載されている。選択マーカーを欠失させるために、相同的組換えの第2のステップを用いた。
RSV−A2−Gのコード配列は、RSV−A2株糖タンパク質Gの天然に存在する配列に基づいている。融合タンパク質RSV−F−A2 BNのコード配列も、RSV−A2株に基づいているが、Bavarian Nordicによって修飾された。両方の挿入遺伝子は、ヒト適合化コドンの使用頻度を用いてGeneartにより合成され、組換えプラスミドのクローニングに用いられた。RSV−A2−Gのタンパク質配列は、GenBank配列P03423.1に対して100%の同一性を示す。RSV−F−A2 BNのタンパク質配列は、103位における1つの単一アミノ酸交換(PからA)のために、GenBank配列P03420.1に対して99%の同一性を示すのみである。
RSV−N−A2およびRSV−M2−A2のコード配列は、それぞれのRSV−A2株糖タンパク質の自然に存在する配列に基づいている。両方の遺伝子は、単一プロモーターの制御下で2つの別個の天然タンパク質の発現を可能にする2A自己切断ペプチド配列によって接続される[M.D.Ryan et al.(1991),J.Gen.Virol.72(Pt 11):2727−2732]。RSV−G(B)およびRSV−F A long BN のコード配列を切断して膜貫通ドメインを除去し、発現されたタンパク質を分泌することができるようにした。挿入した全ての遺伝子は、最適なコドン使用頻度を用いてGeneartにより合成され、組換えプラスミドのクローニングに用いられた。RSV−N−A2およびRSV−M2−A2のタンパク質配列は、GenBank配列P03418.1およびP04545.1に対してそれぞれ100%の同一性を示す。切断型RSV−G(B)のタンパク質配列は、GenBank配列P20896.1に対して100%の同一性を示す。切断型RSV−F A long BNのコード配列は、R.P.Du et al.(1994)Biotechnology(N Y)12(8):813−818に記載されるように、RSV−Fタンパク質の最初の526個のアミノ酸を含有するように設計した。
MVA−mBN210BΔM2は、M2(A2)遺伝子の12番目のコドンに欠失変異体を含むため、機能的M2を発現することができない。この欠失は、2つのアミノ酸スレオニンおよびアラニンの、M2(A2)の最初の11個のアミノ酸への付加、続いて転写の停止(UGA停止コドン)を引き起こす。
ワクチン候補MVA−mBN199Bは、RSVの糖タンパク質(G)および融合(F)タンパク質をコードし、MVA−mBN201BDM2およびMVA−mBN201Bは、全長FおよびGタンパク質に加えてFおよびGの切断型、ヌクレオカプシドタンパク質(N)、ならびにMVA−mBN201Bの場合はRSVのマトリックスタンパク質(M2)も発現する(図1を参照)。この実験の目的は、皮下(sc)または鼻腔内(in)投与経路を介した2回または3回の免疫化後に、MVA−mBN199Bと比較してMVA−mBN201BΔM2およびMVA−mBN201Bの免疫原性および保護効果を分析することであった。
1×108 TCID50のMVA−mBN199B(群3、4、および5)、1×108 TCID50 MVA−mBN201B(群6、7、および8)、または1×108 TCID50 MVA−mBN201BΔM2(群9)で、マウスを皮下(sc)または鼻腔内(in)処理した。表1に従って、2回(群3、4、6、7、および9)または3回(群5および8)のいずれかでマウスを処理した。表7に従って、2つの対照群をTBSで(sc)(群1)、またはRSVで(in)(群2)2回処理した。免疫化または曝露の前日および屠殺日に、血液を採取した。酵素結合免疫吸着測定法(ELISA)により、RSV特異的IgGの力価を測定した。48日目に、マウスの半数を屠殺した。それらの脾臓を摘出し、免疫吸着スポット法(ELISPOT)によるRSV特異的T細胞応答の分析のために調製した。49日目に、残りのマウスを106 pfuのRSV A2に曝露した(in)。曝露日から開始して、外観および体重を毎日監視した。曝露後4日目に、高用量のケタミン−キシラジンの注射によりマウスを屠殺し、最終採血を行った。肺洗浄後、肺を摘出し、プラークアッセイおよびRT−qPCRによりRSV負荷を分析した。
実験動物.Janvier(Route des Chenes Secs、F−53940 Le Genest−Saint−Isle,France)から48匹の7週齢のメスBALB/cJ Rj(H−2d)マウスを入手した。全てのマウスは、特定の病原体を有していなかった。
体重.体重標準的手順に従って、曝露日から屠殺するまで、毎日体重を監視した。
液性免疫応答の分析:血清試料からのRSV特異的IgG抗体応答の分析.最初に、組換えRSV FおよびGタンパク質のみでコーティングしたプレートを使用するIBL−Hamburgキットに基づくELISAにより、血清を分析した(図2および図3)。図2に示すように、単回免疫化後、免疫化に用いた経路(scまたはin)に関係なく、3つ全ての構築物(MVA−mBN199B、MVA−mBN201BDM2、およびMVA−mBN201B)で同様のRSV特異的IgG応答(0.870〜1.347の範囲のOD)が観察された。2回目の免疫化が、抗体応答に2.0倍から3.5倍近くの増加をもたらしたのに対し(2.627〜3.407の範囲のOD)、3回目のsc注射は、B細胞応答にわずかな影響を及ぼしたに過ぎず、2回目の免疫化後のODと比較して約0.500OD単位の増加をもたらした。組換えRSV Fタンパク質のみでコーティングしたプレートを使用するIBL Hamburgキットに基づくELISAでも同様の結果が得られた(図4)。
MVA−mBN201Bは、MVA−mBN199B構築物にも含まれる全長RSV FおよびGタンパク質に加えて、RSV FおよびGタンパク質の切断型を発現するが、MVA−mBN201Bは、同様の規模の液性免疫応答を誘導した。RSV FおよびGのELISAと比較してRSV FのみのELISAにおいて測定された同様に良好な応答によって判断されるように、両方の構築物が、主にRSV Fタンパク質に対する抗体応答を誘導した。2回のin適用後の抗体レベルは、2回のsc適用後よりも高かった。2回のin適用によって誘導される抗体応答レベルに達するには、3回目のsc適用が必要であった。対照的に、sc経路対in経路、または2回対3回のsc適用を用いて誘導したT細胞応答に大きな差は認められなかった。しかしながら、MVA−mBN199Bが良好なRSV F特異的細胞応答を誘導したのに対し、MVA−mBN201Bでは強いM2特異的T細胞応答が観察された。MVA−mBN201Bによって誘導されたRSV G特異的応答も、MVA−mBN199Bと比較してより顕著であった。MVA−mBN201Bによって誘導されたT細胞応答のパターンは、RSV免疫化によって誘導されたT細胞応答に類似していたが、はるかにより高かった。
ワクチン候補MVA−mBN199Bは、RSVの糖タンパク質(G)および融合(F)タンパク質をコードし、MVA−mBN201Bは、RSVの全長タンパク質、ヌクレオカプシドタンパク質(N)、およびマトリックスタンパク質(M2)に加えてFおよびGの切断型を発現する(図1を参照)。これらの実験の目的は、皮下(sc)または鼻腔内(in)投与経路による2回の免疫化後に、MVA−mBN199BおよびMVA−mBN201Bの安全性をFI−RSVと比較して分析することであった。
表xに従って、1×108 TCID50のMVA−mBN199B(群3および4)、1×108 TCID50 MVA−mBN201B(群5および6)で、3週間開けて2回マウスを皮下(sc)または鼻腔内(in)処理した。表xに従って、3つの対照群を2回、TBSで(sc)処理するか(群1)、またはRSVでin処理するか(群2)、または30μgのFI−RSVでim処理(群7)した。35日目に、マウスを106 pfuのRSV A2に曝露(in)した。曝露後4日目に、高用量のケタミン−キシラジンの注射によりマウスを屠殺し、最終採血を行った。肺洗浄後、ELISAによりBAL中のIL4およびIL5レベルを分析した。
実験動物.Janvier(Route des Chenes Secs、F−53940 Le Genest−Saint−Isle,France)から7週齢のメスBALB/cJ Rj(H−2d)マウスを入手した。全てのマウスは、特定の病原体を有していなかった。
市販のELISAキット(eBIOSCIENCE Cat N°BMS613のmIL4 PLATINUM ELISAおよびeBIOSCIENCE Cat N°88−7054−22のREADY−SET−GO MIL−5 ELISA)を使用して、気管支肺胞洗浄(BAL)上清中のIL−4およびIL−5のレベルを測定した。
FI−RSVで観察されたようなIL−4(図11)およびIL−5(図12)産生の増加は、MVA−mBN199BまたはMVA−mBN201Bの場合には観察されなかった。MVA−mBN199BまたはMVA−mBN201Bでマウスをin免疫した時、両方のサイトカインは検出レベル未満であった。
Th2応答によって評価されるように、MVA−mBN199BおよびMVA−mBN201Bのどちらとも、FI−RSVと比較して重篤な疾患を誘導しなかった。
ワクチン候補MVA−mBN199Bは、RSVの糖タンパク質(G)および融合(F)タンパク質をコードし、MVA−mBN201Bは、RSVの全長タンパク質、ヌクレオカプシドタンパク質(N)、およびマトリックスタンパク質(M2)に加えてFおよびGの切断型を発現し、MVA−mBN294Bは、RSVの1つのFおよび2つの2G全長タンパク質、ヌクレオカプシドタンパク質(N)、およびマトリックスタンパク質(M2)を発現する(図1を参照)。MVA−mBN294Aは、なおも1つのクローニングカセットを有するMVA−mBN294Bのクローニングにおける中間産物である。このクローニングカセットは、導入遺伝子の発現またはトランスジェニックタンパク質の免疫原性特性のいずれにも影響しない。これらの実験の目的は、皮下(sc)投与経路による2回の免疫化後に、MVA−mBN294Aの免疫原性、有効性、および安全性をMVA−mBN199BおよびMVA−mBN201Bと比較して分析することであった。
表6に従って、予備刺激−追加免疫スケジュール(0日目および21日目)において、1x108 TCID50のMVA−mBN294A、MVA−mBN199B、またはMVA−mBN201Bをマウスにワクチン接種(sc)した。表6に従って、TBSまたはRSV−A2で対照群を2回皮下処理した。表6に従って、ホルマリン不活化(FI)−RSVを1回または2回筋肉内(im)注射した。
実験動物.Janvier(Route des Chenes Secs、F−53940 Le Genest−Saint−Isle,France)から7週齢のメスBALB/cJ Rj(H−2d)マウスを入手した。全てのマウスは、特定の病原体を有していなかった。
動物の識.別各ケージ内の動物を個別に識別するために、標準的手順に従って耳パンチを行った。
血液試料採取.標準的手順に従って、眼球後または顔面静脈の穿刺により血液試料(約150μl)を採取した(詳細については表7を参照)。標準的手順に従ってさらに処理するために、血液試料を実験室に移した。
血液試料の処理および血清の保存.実験室に移した後、標準的手順に従って血液試料を処理して血清にした。調製後、分析のために必要となるまで、血清を−20℃(±5℃)で保存した。
100μlのBAL液をサイトスピンで遠心分離する(800rpm、5分)ことにより、2つのスライドを調製した。スライドを一晩乾燥させ、次いで染色した。顕微鏡によりスライドを分析して、好酸球および好中球の割合を決定した。次いで、残りのBALを遠心分離した(12,000rpm、5分)。調製後、BAL上清を分析まで−20℃(±5℃)で保存した。市販のELISAキット(eBIOSCIENCE Cat N°BMS613のmIL4 PLATINUM ELISA およびeBIOSCIENCE Cat N°88−7054−22のREADY−SET−GO MIL−5 ELISA)を使用して、気管支肺胞洗浄(BAL)上清中のIL−4およびIL−5のレベルを測定した。
RSV プラークアッセイおよびRT−qPCRにより細胞試料中のRSV負荷を決定した。
生存段階の個々のステップの間に全ての情報を収集するために、生存段階のフロー図を用意した。さらに、マウスまたはケージに特有な情報を、対応するケージカードに記録した。ケージカードは、試験の原データとは見なされないが、Upper Bavariaの政府からの要求であった。
液性免疫応答の分析:
RSV特異的IgG応答(ELISA、図13)およびRSV特異的中和抗体応答(PRNT、図14)の両方について、3つの構築物(MVA−mBN199B、MVA−mBN201B、およびMVA−mBN294A)の間にいずれの差も観察されなかった。
予想されたように、MVA−mBN294Aは、MVA−mBN201Bと同様のT細胞応答パターンを有し(図15)、M2 T細胞応答が優勢であるFおよびM2の両方に特異的な応答を誘導する。対照的に、MVA−mBN199Bは、F特異的応答を誘導したのみであったが、MVA−mBN201BおよびMVA−mBN294Aよりも高いレベルであった。
RSV A2株によるRSV.曝露最後の免疫化の2週間後、マウスを106 pfuのRSV(A2)に鼻腔内曝露した。曝露後4日目に、マウスを屠殺した。1mlのPBSで肺を洗浄した後、肺を摘出し、上述のように実施したプラークアッセイおよびRT−qPCRにより肺内のRSV負荷を決定した。
実施例3に記載した実験に使用したFI−RSVのバッチとは対照的に、この試験に使用した新しいバッチは、IL−4またはIL−5の産生にはいずれの増加も示さなかった。しかしながら、我々は、このバッチを用いて、FI−RSVに関する重篤な疾患の主な特徴であるBAL液中の好酸球および好中球の浸潤を検出することができた。MVA−mBN199B、MVA−mBN201B、およびMVA−mBN294Aで重篤な疾患の徴候が検出可能であった。
MVA−mBN294A(MVA−mBN294Bと同等)とMVA−mBN201Bとの間の差にもかかわらず、どちらも同様のB細胞およびT細胞応答を誘導し、重篤な疾患を誘発することなく同様の保護を提供する。どちらの構築物も、膜糖タンパク質(FおよびG)の抗原決定基のみを発現したMVA−mBN199Bよりも良好な保護を誘導した。
なお、本願は、特許請求の範囲に記載の発明に関するものであるが、他の態様として以下も包含し得る。
1.筋肉内投与は除外される、鼻腔内投与によってRSV感染症を治療または予防するための、少なくとも1つのRSウイルス(RSV)膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列を含む、組換え改変ワクシニアウイルスアンカラ(MVA)。
2.鼻腔内投与のみを含む、上記1に記載の組換えMVA。
3.前記組換えMVAは、RSVヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、上記1または2に記載の組換えMVA。
4.RSウイルス(RSV)膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドの抗原決定基をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列と、を含む、組換え改変ワクシニアウイルスアンカラ(MVA)。
5.前記RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする前記ヌクレオチド配列は、RSV Fおよび/またはRSV Gの抗原決定基をコードする、上記1〜4のいずれか1項に記載の組換えMVA。
6.RSVヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードする前記ヌクレオチド配列は、前記RSV N ヌクレオカプシドおよび/またRSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基をコードする、上記3〜5のいずれか1項に記載の組換えMVA。
7.RSV膜糖タンパク質、好ましくは、前記RSV Fまたは前記RSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする1つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質、好ましくは前記RSV Nまたは前記RSV M2タンパク質の抗原決定基をコードする1つのヌクレオチド配列と、を含む、前記上記のいずれかに記載の組換えMVA。
8.RSV膜糖タンパク質、好ましくは前記RSV Fおよび/または前記RSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする2つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質、好ましくは前記RSV Nヌクレオカプシドまたは前記RSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基をコードする1つのヌクレオチド配列と、を含む、上記1〜6のいずれか1項に記載の組換えMVA。
9.RSV膜糖タンパク質、好ましくはRSV Fおよび/またはRSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする2つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質、好ましくはRSV Nおよび/または前記RSV M2タンパク質の抗原決定基をコードする2つのヌクレオチド配列と、を含む、上記1〜6のいずれか1項に記載の組換えMVA。
10.RSV膜糖タンパク質、好ましくは、2つのRSV F膜糖タンパク質および/もしくは1つのRSV G膜糖タンパク質、または2つのRSV G膜糖タンパク質および/もしくは1つのRSV F膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする3つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質、好ましくは前記RSV Nヌクレオカプシドおよび/または前記RSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基をコードする2つのヌクレオチド配列と、を含む、上記1〜6のいずれか1項に記載の組換えMVA。11.RSV膜糖タンパク質、好ましくは2つのRSV F膜糖タンパク質および/または2つのRSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする4つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質、好ましくは、前記RSV Nヌクレオカプシドまたは前記RSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基をコードする1つのヌクレオチド配列と、を含む、上記1〜6のいずれか1項に記載の組換えMVA。
12.RSV膜糖タンパク質、好ましくは2つのRSV F膜糖タンパク質および/または2つのRSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする4つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質、好ましくは前記RSV Nおよび/または前記RSV M2タンパク質の抗原決定基をコードする2つのヌクレオチド配列と、を含む、上記1〜6のいずれか1項に記載の組換えMVA。
13.対象がRSV感染症再発のリスクがあるかどうかを決定する方法であって、RT−qPCRにより前記対象から採取した試料中にRSVが存在するかどうかを決定し、RSVの存在は、RSV感染症再発の存在を示唆する、方法。
14.対象がRSVに対する無菌免疫を獲得したかどうかを決定する方法であって、RT−qPCRにより前記対象から採取した試料中にRSVが存在するかどうかを決定し、RSVの存在は、対象がRSVに対する無菌免疫を獲得していないことを示唆する、方法。15.上記14に記載の方法によってRSVに対する無菌免疫を獲得していないと診断された対象を免疫し、かつ/または前記対象において無菌免疫を誘導する方法であって、前記方法は前記組換えMVAの前記対象への鼻腔内投与を含む、上記1〜12のいずれか1項に記載の組換えMVA。
Claims (15)
- 筋肉内投与は除外される、鼻腔内投与によってRSV感染症を治療または予防するための、少なくとも1つのRSウイルス(RSV)膜糖タンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列を含む、組換え改変ワクシニアウイルスアンカラ(MVA)。
- 鼻腔内投与のみを含む、請求項1に記載の組換えMVA。
- 前記組換えMVAは、RSVヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードするヌクレオチド配列をさらに含む、請求項1または2に記載の組換えMVA。
- RSウイルス(RSV)膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドの抗原決定基をコードする少なくとも1つのヌクレオチド配列と、を含む、組換え改変ワクシニアウイルスアンカラ(MVA)。
- 前記RSV膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする前記ヌクレオチド配列は、RSV Fおよび/またはRSV Gの抗原決定基をコードする、請求項1〜4のいずれか1項に記載の組換えMVA。
- RSVヌクレオカプシドタンパク質の抗原決定基をコードする前記ヌクレオチド配列は、前記RSV N ヌクレオカプシドおよび/またRSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基をコードする、請求項3〜5のいずれか1項に記載の組換えMVA。
- RSV膜糖タンパク質、好ましくは、前記RSV Fまたは前記RSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする1つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質、好ましくは前記RSV Nまたは前記RSV M2タンパク質の抗原決定基をコードする1つのヌクレオチド配列と、を含む、前記請求項のいずれかに記載の組換えMVA。
- RSV膜糖タンパク質、好ましくは前記RSV Fおよび/または前記RSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする2つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質、好ましくは前記RSV Nヌクレオカプシドまたは前記RSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基をコードする1つのヌクレオチド配列と、を含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の組換えMVA。
- RSV膜糖タンパク質、好ましくはRSV Fおよび/またはRSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする2つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質、好ましくはRSV Nおよび/または前記RSV M2タンパク質の抗原決定基をコードする2つのヌクレオチド配列と、を含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の組換えMVA。
- RSV膜糖タンパク質、好ましくは、2つのRSV F膜糖タンパク質および/もしくは1つのRSV G膜糖タンパク質、または2つのRSV G膜糖タンパク質および/もしくは1つのRSV F膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする3つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質、好ましくは前記RSV Nヌクレオカプシドおよび/または前記RSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基をコードする2つのヌクレオチド配列と、を含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の組換えMVA。
- RSV膜糖タンパク質、好ましくは2つのRSV F膜糖タンパク質および/または2つのRSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする4つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質、好ましくは、前記RSV Nヌクレオカプシドまたは前記RSV M2マトリックスタンパク質の抗原決定基をコードする1つのヌクレオチド配列と、を含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の組換えMVA。
- RSV膜糖タンパク質、好ましくは2つのRSV F膜糖タンパク質および/または2つのRSV G膜糖タンパク質の抗原決定基をコードする4つのヌクレオチド配列と、RSVヌクレオカプシドタンパク質、好ましくは前記RSV Nおよび/または前記RSV M2タンパク質の抗原決定基をコードする2つのヌクレオチド配列と、を含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の組換えMVA。
- 対象がRSV感染症再発のリスクがあるかどうかを決定する方法であって、RT−qPCRにより前記対象から採取した試料中にRSVが存在するかどうかを決定し、RSVの存在は、RSV感染症再発の存在を示唆する、方法。
- 対象がRSVに対する無菌免疫を獲得したかどうかを決定する方法であって、RT−qPCRにより前記対象から採取した試料中にRSVが存在するかどうかを決定し、RSVの存在は、対象がRSVに対する無菌免疫を獲得していないことを示唆する、方法。
- 請求項14に記載の方法によってRSVに対する無菌免疫を獲得していないと診断された対象を免疫し、かつ/または前記対象において無菌免疫を誘導する方法であって、前記方法は前記組換えMVAの前記対象への鼻腔内投与を含む、請求項1〜12のいずれか1項に記載の組換えMVA。
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WO2012048817A2 (en) * | 2010-10-15 | 2012-04-19 | Bavarian Nordic A/S | Recombinant modified vaccinia virus ankara influenza vaccine |
WO2012085936A2 (en) * | 2010-12-20 | 2012-06-28 | Panacea Biotech Ltd | Recombinant respiratory syncytial virus plasmids and vaccines |
WO2012089833A2 (en) * | 2010-12-30 | 2012-07-05 | Okairos Ag | Expression Systems |
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