JP2021127292A - Ｍｅｆ２ｄ融合型急性リンパ性白血病の治療方法及び治療剤 - Google Patents

Abstract

【課題】 ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病の治療方法及び治療剤を提供する。【解決手段】 ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤を含む治療剤を提供する。【選択図】なし

Description

本発明は、ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病の治療方法及び治療剤に関する。

急性リンパ性白血病（Acute lymphoblastic leukemia、ＡＬＬ）は、骨髄においてリンパ芽球が増殖する造血器の悪性腫瘍性疾患であり、芽球の浸潤によるリンパ節や肝臓・脾臓などの腫大が伴うことがある。日本国内の年間の新規の発症数は約１０００人である。白血病細胞が骨髄や血液中で異常に増え、正常な赤血球、白血球、血小板が作られなくなるため、１）赤血球が少なくなることによる貧血の症状（息切れや動悸）、２）白血球が少なくなることによる、抵抗力の低下（感染症にかかりやすくなる）、３）血小板が少なくなることによる出血しやすくなる（鼻血が出やすくなるなど）が初期症状として表れることがある。

ＡＬＬは主に染色体の転座、欠失などの染色体異常、その結果として生じる、他の遺伝子との融合遺伝子などの遺伝子変異によって起こることが報告されている（非特許文献１）。その染色体異常等によって、現在１４のサブグループに分類されている：
グループ１：ＭＥＦ２Ｄ融合型（ＭＥＦ２Ｄ-ＢＣＬ９、ＭＥＦ２Ｄ-ＨＮＲＮＰＵＬ１、ＭＥＦ２Ｄ-ＤＡＺＡＰ１、ＭＥＦ２Ｄ-ＣＳＦ１Ｒ、ＭＥＦ２Ｄ-ＳＳ１８など）
グループ２：ＴＣＦ３-ＰＢＸ１融合型
グループ３：ＥＴＶ６-ＲＵＮＸ１融合様型
グループ４：ＤＵＸ４融合型
グループ５ ＺＮＦ３８４融合型（ＥＰ３００-ＺＮＦ３８４，ＴＣＦ３-ＺＮＦ３８４，ＴＡＦ１５-ＺＮＦ３８４、ＳＭＡＲＣＡ２-ＺＮＦ３６２など）
グループ６：ＢＣＲ-ＡＢＬ１融合型／フィラデルフィア染色体様（ＢＣＲ-ＡＢＬ１，ＩＧＨ-ＣＲＬＦ２など）
グループ７：染色体数異常
グループ８：ＫＭＴ２Ａ融合型（ＫＭＴ２Ａ-ＡＦＦ１，ＫＭＴ２Ａ-ＭＬＬＴ１，ＫＭＴ２Ａ-ＭＬＬＴ３など）
グループ９：ＰＡＸ５及びＣＲＬＦ２融合型（Ｐ２ＲＹ８-ＣＲＬＦ２，ＰＡＸ５-ＮＯＬ４Ｌ，ＰＡＸ５-ＡＵＴＳ２など）
グループ１０：ＰＡＸ５変異型
グループ１１：ＩＫＺＦ１変異型
グループ１２：ＺＥＢ２変異／ＩＧＨ-ＣＥＢＰＥ融合型
グループ１３：ＴＣＦ３／４-ＨＬＦ融合型
グループ１４：ＮＵＴＭ１融合型

ＡＬＬは主にアドリアマイシン、シクロフォスファミド、ビンクリスチン、Ｌ−アスパラギナーゼ、メソトレキサート、シタラビン、ステロイド剤など多種類の抗がん剤を組み合わせて投与することにより治療されるが、グループ１、６及び８のＡＬＬは予後不良であった。しかしグループ６のＢＣＲ-ＡＢＬ１融合型／フィラデルフィア染色体様（９番染色体と２２番染色体の転座によって起こる）については、ＢＣＲ-ＡＢＬ１融合タンパク質は活性化したチロシンキナーゼであるため、ＢＣＲ-ＡＢＬ１の働きを抑える分子標的薬の一種であるイマチニブ（商品名：グリベック）やダサチニブ（商品名：スプリセル）、ニロチニブ（商品名：タシグナ）というチロシンキナーゼ阻害剤が、染色体検査や遺伝子検査後、実際の治療に使われるようになった。

グループ６の原因遺伝子であるＡＢＬ１（ABL Proto-Oncogene 1, Non-Receptor Tyrosine Kinase）とグループ８の原因遺伝子であるＫＭＴ２Ａ（Lysine Methyltransferase 2A）が酵素なのに対して、グループ１のＭＥＦ２Ｄ（Ｍyocyte Ｅnhancer Ｆactor 2）融合型は、ＭＥＦ２Ｄ（1q22）が転写因子であり、ＭＥＦ２Ｄが融合するＢＣＬ９Transcription Coactivator（1q21.2）やＨＮＲＮＰＵＬ１（Heterogeneous Nuclear Ribonucleoprotein U Like 1）（19q13.2）も核内の局在する転写関連遺伝子であるため（非特許文献２）、分子標的薬を開発するのが難しかった。

Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 2018;115(50):E11711-E20 NATURE COMMUNICATIONS 2016 7:13331

本発明は、ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病の治療方法及び治療剤を提供することを目的とする。

ＳＲＥＢＦ１（ステロール調節配列結合蛋白１；Sterol Regulatory Element Binding Transcription Factor 1）（HGNC:11289；Gene ID: 6720；染色体17p11.2）は、ＤＮＡ結合ドメインである塩基性 (basic) 領域とタンパク質相互作用に働くＨＬＨモチーフを有する（ｂＨＬＨ）転写因子の１つであり、スプライシングバリアントとして、ＳＲＥＢＦ１ａとＳＲＥＢＦ１ｃが存在している。ＳＲＥＢＦ１は、ＥＲに結合する膜タンパク質型の前駆体として翻訳され、コレステロール枯渇下の条件でゴルジ体へ移行し、切断酵素（ＭＢＴＰＳ１（Membrane Bound Transcription Factor Peptidase, Site １；Ｓ１Ｐ（site-1 protease）ともいう；EC 3.4.21.112）及びＭＢＴＰＳ２（Membrane Bound Transcription Factor Peptidase, Site ２（Ｓ２Ｐ（site-2 protease）ともいう；EC 3.4.24.85）により部分分解されて膜から切り離されることにより成熟体となり（プロセシング）、核内に移行し、ステロール制御配列（sterol regulatory element 1 (SRE-1) ）(5'-ATCACCCCAC-3')又はＥ-ｂｏｘモチーフ(5'-ATCACGTGA-3')に結合して、遺伝子発現を制御する。ＳＲＥＢＦ１は、このような遺伝子発現調節によって、主に脂肪酸の合成とコレステロールの合成に関与することが知られている。
ＥＧＲ１(Early Growth Response 1)はzinc finger型の転写因子である（HGNC: 3238；Entrez Gene: 1958；染色体5q31.2）。5'-GCG(T/G)GGGCG-3'(EGR結合部位)を認識して結合する。
ＢＣＬ６(B-Cell Lymphoma 6 Protein)はzinc finger型の転写因子である（HGNC: 1001；Entrez Gene: 604；染色体3q27.3）。5'-TTCCTAGAA-3' (BCL6-結合部位)を認識して結合する。
ＦＯＳ(Fos Proto-Oncogene, AP-1 Transcription Factor Subunit)はleucine zipper型の核内タンパク質であり、転写因子であるJUN/AP-1と結合して機能する転写調節因子である。
ＩＲＦ８(Interferon Regulatory Factor 8)はＩＲＦファミリー転写因子の１つである（HGNC: 5358；Entrez Gene: 3394 ；染色体16q24.1）。5'-AAANNGAAA-3'（インターフェロン刺激応答配列（IFN-stimulated response element (ISRE)））を認識して結合する。
本願発明者らは鋭意研究の結果、ＳＲＥＢＦ１、ＥＧＲ１、ＢＣＬ６、ＦＯＳ、およびＩＦＲ８の活性抑制剤が、ＭＥＦ２Ｄ型急性リンパ性白血病の白血病細胞の増殖を抑え、ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病を治療できることを新たに見出した。

本発明は、以下の実施態様を含む。
［１Ａ］ＳＲＥＢＦ１、ＥＧＲ１、ＢＣＬ６、ＦＯＳ、およびＩＦＲ８からなる群から選ばれる少なくとも一つのタンパク質の活性抑制剤を有効成分として含む、ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病を治療するための医薬組成物。
［２Ａ］前記ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病が、ＭＥＦ２Ｄ-ＢＣＬ９融合型急性リンパ性白血病、ＭＥＦ２Ｄ-ＨＮＲＮＰＵＬ１融合型急性リンパ性白血病、ＭＥＦ２Ｄ-ＤＡＺＡＰ１融合型急性リンパ性白血病、ＭＥＦ２Ｄ-ＣＳＦ１Ｒ融合型急性リンパ性白血病又はＭＥＦ２Ｄ-ＳＳ１８融合型急性リンパ性白血病である、［１Ａ］に記載の医薬組成物。
［３Ａ］前記ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤が、ＳＲＥＢＦ１のプロセシング阻害剤である、［１Ａ］又は［２Ａ］に記載の医薬組成物。
［４Ａ］前記ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤が、コレステロール又は脂肪酸である、［１Ａ］又は［２Ａ］に記載の医薬組成物。
［５Ａ］前記ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤が、前記ＳＲＥＢＦ１のアンチセンスＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはｓｉＲＮＡである、［１Ａ］又は［２Ａ］に記載の医薬組成物。
［６Ａ］前記ＳＲＥＢＦ１のプロセシング阻害剤が、ファトスタチン（ｆａｔｏｓｔａｔｉｎ）、ＦＧＨ１００１９、又はベツリン（Ｂｅｔｕｌｉｎ）である［３Ａ］に記載の医薬組成物。
［７Ａ］前記コレステロール又は脂肪酸が、魚油、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、又はオメガ３脂肪酸（エステル）である、［４Ａ］に記載の医薬組成物。
［８Ａ］前記ＳＲＥＢＦ１のｍｉＲＮＡがｍｉＲ-３３である、［５Ａ］に記載の医薬組成物。

［１Ｂ］ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病の患者において、ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病を治療する方法であって、
１）前記患者において、ＭＥＦ２Ｄ遺伝子の染色体転座又は他の遺伝子との遺伝子融合などの遺伝子変異を検出し、
２）前記ＭＥＦ２Ｄ遺伝子の染色体転座又は他の遺伝子との遺伝子融合などの遺伝子変異を検出した前記患者に、ＳＲＥＢＦ１、ＥＧＲ１、ＢＣＬ６、ＦＯＳ，およびＩＦＲ８からなる群から選ばれる少なくとも一つのタンパク質の活性抑制剤を投与する工程を含む、方法。
［２Ｂ］前記ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病が、ＭＥＦ２Ｄ-ＢＣＬ９融合型急性リンパ性白血病、ＭＥＦ２Ｄ-ＨＮＲＮＰＵＬ１融合型急性リンパ性白血病、ＭＥＦ２Ｄ-ＤＡＺＡＰ１融合型急性リンパ性白血病、ＭＥＦ２Ｄ-ＣＳＦ１Ｒ融合型急性リンパ性白血病又はＭＥＦ２Ｄ-ＳＳ１８融合型急性リンパ性白血病である、［１Ｂ］に記載の方法。
［３Ｂ］前記ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤が、前記ＳＲＥＢＦ１のプロセシング阻害剤である、［１Ｂ］又は［２Ｂ］に記載の方法。
［４Ｂ］前記ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤が、コレステロール又は脂肪酸である、［１Ｂ］又は［２Ｂ］に記載の方法。
［５Ｂ］前記ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤が、前記ＳＲＥＢＦ１のアンチセンスＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはｓｉＲＮＡである、［１Ｂ］又は［２Ｂ］に記載の方法。
［６Ｂ］前記ＳＲＥＢＦ１のプロセシング阻害剤が、ファトスタチン（ｆａｔｏｓｔａｔｉｎ）、ＦＧＨ１００１９、又はベツリン（Ｂｅｔｕｌｉｎ）である［３Ｂ］に記載の方法。
［７Ｂ］前記コレステロール又は脂肪酸が、魚油、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、又はオメガ３脂肪酸（エステル）である、［４Ｂ］に記載の方法。
［８Ｂ］前記ＳＲＥＢＦ１のｍｉＲＮＡがｍｉＲ-３３である、［５Ｂ］に記載の方法。

［１Ｃ］ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病の治療における使用のための、ＳＲＥＢＦ１、ＥＧＲ１、ＢＣＬ６、ＦＯＳ，およびＩＦＲ８からなる群から選ばれる少なくとも一つのタンパク質の活性抑制剤。
［２Ｃ］前記ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病が、ＭＥＦ２Ｄ-ＢＣＬ９融合型急性リンパ性白血病、ＭＥＦ２Ｄ-ＨＮＲＮＰＵＬ１融合型急性リンパ性白血病、ＭＥＦ２Ｄ-ＤＡＺＡＰ１融合型急性リンパ性白血病、ＭＥＦ２Ｄ-ＣＳＦ１Ｒ融合型急性リンパ性白血病又はＭＥＦ２Ｄ-ＳＳ１８融合型急性リンパ性白血病である、［１Ｃ］に記載の活性抑制剤。
［３Ｃ］前記ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤が、前記ＳＲＥＢＦ１のプロセシング阻害剤である、［１Ｃ］又は［２Ｃ］に記載の活性抑制剤。
［４Ｃ］前記ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤が、コレステロール又は脂肪酸である、［１Ｃ］又は［２Ｃ］に記載の活性抑制剤。
［５Ｃ］前記ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤が、前記ＳＲＥＢＦ１のアンチセンスＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはｓｉＲＮＡである、［１Ｃ］又は［２Ｃ］に記載の活性抑制剤。
［６Ｃ］前記ＳＲＥＢＦ１のプロセシング阻害剤が、ファトスタチン（ｆａｔｏｓｔａｔｉｎ）、ＦＧＨ１００１９、又はベツリン（Ｂｅｔｕｌｉｎ）である［３Ｃ］に記載の活性抑制剤。
［７Ｃ］前記コレステロール又は脂肪酸が、魚油、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、又はオメガ３脂肪酸（エステル）である、［４Ｃ］に記載の活性抑制剤。
［８Ｃ］前記ＳＲＥＢＦ１のｍｉＲＮＡがｍｉＲ-３３である、［５Ｃ］に記載の活性抑制剤。

［１Ｄ］ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病の治療剤の製造における、ＳＲＥＢＦ１、ＥＧＲ１、ＢＣＬ６、ＦＯＳ，およびＩＦＲ８からなる群から選ばれる少なくとも一つのタンパク質の活性抑制剤の使用。
［２Ｄ］前記ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病が、ＭＥＦ２Ｄ-ＢＣＬ９融合型急性リンパ性白血病、ＭＥＦ２Ｄ-ＨＮＲＮＰＵＬ１融合型急性リンパ性白血病、ＭＥＦ２Ｄ-ＤＡＺＡＰ１融合型急性リンパ性白血病、ＭＥＦ２Ｄ-ＣＳＦ１Ｒ融合型急性リンパ性白血病又はＭＥＦ２Ｄ-ＳＳ１８融合型急性リンパ性白血病である、［１Ｃ］に記載の使用。
［３Ｄ］前記ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤が、前記ＳＲＥＢＦ１のプロセシング阻害剤である、［１Ｄ］又は［２Ｄ］に記載の使用。
［４Ｄ］前記ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤が、コレステロール又は脂肪酸である、［１Ｄ］又は［２Ｄ］に記載の使用。
［５Ｄ］前記ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤が、前記ＳＲＥＢＦ１のアンチセンスＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはｓｉＲＮＡである、［１Ｄ］又は［２Ｄ］に記載の使用。
［６Ｄ］前記ＳＲＥＢＦ１のプロセシング阻害剤が、ファトスタチン（ｆａｔｏｓｔａｔｉｎ）、ＦＧＨ１００１９、又はベツリン（Ｂｅｔｕｌｉｎ）である［３Ｄ］に記載の使用。
［７Ｄ］前記コレステロール又は脂肪酸が、魚油、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、又はオメガ３脂肪酸（エステル）である、［４Ｄ］に記載の使用。
［８Ｄ］前記ＳＲＥＢＦ１のｍｉＲＮＡがｍｉＲ-３３である、［５Ｄ］に記載の使用。

本発明により、ＭＥＦ２Ｄ型急性リンパ性白血病を治療できる。

本発明の一実施例における、マウスの細胞を用いた、ＭＥＦ２Ｄ融合型遺伝子変異とｐｒｅ-ＢＣＲ細胞の関係を示す図である。図１Ａ：フローサイトメトリーを用いて、ｐｒｅＢ陽性細胞を検出した結果；図１Ｂ：ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９を発現するｐｒｏＢ細胞を移植したマウスのカプラン・マイヤー生存曲線；図１Ｃ：ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９を発現するｐｒｏＢ細胞を移植したマウスの骨髄中のリンパ芽球の監察結果；図１Ｄ：フローサイトメトリーを用いた、ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９を発現するｐｒｏＢ細胞を移植したマウスのリンパ芽球の表面抗原の解析結果を示す。 本発明の一実施例における、ヒトの細胞を用いた、ＭＥＦ２Ｄ融合型遺伝子変異とｐｒｅ-ＢＣＲ細胞の関係を示す図である。図２Ａ上段：ｐｒｅ−ＢＣＲ構成分子のノックダウンの影響を示す、フローサイトメトリーの結果；図２Ａ下段：ｐｒｅ−ＢＣＲ構成分子のノックダウンによる細胞増殖抑制効果；図２Ｂ：ＧＦＰのノックダウンによる、Ｋ７−ＨＡ−ＧＦＰ細胞におけるＭＥＦ２Ｄ−ＨＮＲＮＰＵＬ１の発現の減少（上段：フローサイトメトリーの結果；下段：ウェスタンブロテティングの結果）；図２Ｃ上段：ＭＥＦ２Ｄ−ＨＮＲＮＰＵＬ１の発現を抑制したＣＤ８陽性画分の細胞における、フローサイトメトリーによるｐｒｅＢＣＲの発現解析結果；図２Ｃ下段：ＭＥＦ２Ｄ−ＨＮＲＮＰＵＬ１の発現を抑制したＣＤ８陽性画分の細胞における細胞増殖解析結果；図２Ｄ：細胞死検出試薬（7- アミノアクチノマイシン（７ＡＡＤ）及びアネキシンＶ（Annexin V））を用いた、フローサイトメトリーの結果を示す。 本発明の一実施例における、各転写関連因子ｓｈＲＮＡによる、細胞増殖阻害（図３Ａ）及びＭＥＦ２Ｄ−ＨＮＲＮＰＵＬ１の発現の減少(図３Ｂ)を示す図である。数値は、コントロール（ｓｈＲＮＡ＿Ｌｕｃｉ投与）を１とした時の値を示す。 本発明の一実施例における、ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤による、ＭＥＦ２Ｄ融合タンパク質の発現抑制を示す図である。Ｋａｓｕｍｉ−７細胞において、ファトスタチン、ベツリン及びＦＧＨ１００１９は、ＭＥＦ２Ｄ−ＨＮＲＮＰＵＬ１の発現を減少させ、活性型ＳＲＥＢＦ１（分解型）を減少させた（図４Ａ）。数値はコントロール（ｖｅｈｉｃｌｅ）を１とした時の値を示す。ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤は、Ｋａｓｕｍｉ−７細胞だけでなく、Ｋａｓｕｍｉ−９及びＴＳ−２、ならびに臨床検体細胞（ｃａｓｅ−１及びｃａｓｅ−２）においても、ＭＥＦ２Ｄ融合型遺伝子産物を減少させた(図４Ｂ)。 本発明の一実施例における、白血病細胞の増殖阻害及びｐｒｅＢＣＲの発現減少を示す図である。白血病細胞にファトスタチン、ベツリン及びＦＧＨ１００１９を投与した時の細胞数、ｐｒｅＢＣＲ発現量を図５Ａ及びＢに示す。ボリノスタットとパノビノスタットを白血病細胞に投与した時の細胞数を図５Ｃに示す。なお、図５Ｂのｘ軸は対数目盛である。 本発明の一実施例における、ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤による生体内薬物感受性アッセイの結果を示す図である。ＦＧＨ１００１９を投与したマウスと陰性対照（ｖｅｈｉｃｌｅ）を投与したマウスから採取した細胞をフローサイトメトリーで解析し（図６Ａ）、ＧＦＰ陽性細胞の割合を算出した（図６Ｂ）。ＦＧＨ１００１９と陰性対照（ｖｅｈｉｃｌｅ）を投与したマウスの生存率を図６Ｃに示す。

以下、本発明の好ましい実施の形態につき、添付図面を用いて詳細に説明するが、必ずしもこれに限定するわけではない。なお、本発明の目的、特徴、利点、及びそのアイデアは、本明細書の記載により、当業者には明らかであり、本明細書の記載から、当業者であれば、容易に本発明を再現できる。以下に記載された発明の実施の形態及び具体的な実施例などは、本発明の好ましい実施態様を示すものであり、例示又は説明のために示されているのであって、本発明をそれらに限定するものではない。本明細書で開示されている本発明の意図並びに範囲内で、本明細書の記載に基づき、様々な改変並びに修飾ができることは、当業者にとって明らかである。

本発明の一態様は、ＳＲＥＢＦ１、ＥＧＲ１、ＢＣＬ６、ＦＯＳ、およびＩＦＲ８からなる群から選ばれる少なくとも一つのタンパク質の活性抑制剤を有効成分として含む、ＭＥＦ２Ｄ型急性リンパ性白血病を治療するための医薬組成物である。なお、本明細書で用いられる「ＭＥＦ２Ｄ融合型」という用語は、その白血病細胞がＭＥＦ２Ｄ遺伝子の全部または一部とＢＣＬ９、ＨＮＲＮＰＵＬ１、ＤＡＺＡＰ１、ＣＳＦ１、ＳＳ１８などの融合遺伝子を有することを意味するものとする。そして、ＭＥＦ２Ｄ遺伝子の全部または一部とＢＣＬ９遺伝子との融合遺伝子を有することをＭＥＦ２Ｄ-ＢＣＬ９融合型などと称するものとし、他の融合遺伝子についても同様に表記する。
タンパク質の活性抑制剤とは、それによって最終的にそのタンパク質の活性が抑制される薬剤であればよい。具体的には、タンパク質の活性抑制剤は、そのタンパク質をコードする遺伝子の転写や翻訳を阻害して発現量を減らしてもよく、タンパク質の前駆体が成熟体になるのを阻害して成熟タンパク質の量を減らしてもよく、タンパク質の機能を直接的に、または間接的に阻害してもよい。ここで、タンパク質の機能は、それぞれのターゲット遺伝子の転写制御機能である。
ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤は、化合物の例としては、ファトスタチン（ｆａｔｏｓｔａｔｉｎ）、ＦＧＨ１００１９、ベツリン（Ｂｅｔｕｌｉｎ）等が挙げられる。
ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤はコレステロールや脂肪酸であってもよい。天然物としては、例えば、魚油、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、オメガ３脂肪酸（エステル）が挙げられる。
あるいは、ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤は、ＳＲＥＢＦ１遺伝子の発現を阻害するアンチセンスＮＡ、ｍｉＮＡ（たとえばｍｉＲ−３３（Nature Communications 2013 vol.4 p.2883））、またはｓｉＮＡであってもよい。これらの核酸（ＮＡ）は、ＲＮＡであってもよく、ＤＮＡであってもよく、ＲＮＡとＤＮＡのキメラであってもよい。また、それらの公知の修飾体が含まれていてもよく、人工核酸が含まれていてもよい。
あるいは、ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤は、ＳＲＥＢＦ１を分解するＭＢＴＰＳ１やＭＢＴＰＳ２のプロテアーゼ活性の活性抑制剤であってもよい。
ＥＧＲ１活性抑制剤としては、Forskolin、adenosine、A2B receptor agonist BAY60-6583、Cicaprost、およびDimethylcelecoxib(DMC)などの発現阻害剤、Mithramycin A(MMA)、ドミナント・ネガティブ変異体（J.Neurosci. vol.21, pp.5893-5901, 2001）が挙げられる。
ＢＣＬ６活性抑制剤としては、CID5721353（2-((5Z)-5-(5-Bromo-2-oxo-1H-indol-3-ylidene)-4-oxo-2-sulfanylidene-1,3-thiazolidin-3-yl)butanedioic acid）、 BI-3812(Cell Rep. vol.20, pp.2860-2875, 2017)、 FX1、ドミナント・ネガティブ変異体（J Immunol. vol. 171, pp.426-31, 2003）などが挙げられる。
ＦＯＳ活性抑制剤としては、Ｔ５２２４（3-(5-(4-(cyclopentyloxy)-2-hydroxybenzoyl)-2-((3-oxo-2,3-dihydrobenzo[d]isoxazol-6-yl)methoxy)phenyl)propanoic acid）、ドミナント・ネガティブ変異体（Proc Natl Acad Sci U S A. vol.87, pp.3806-3810, 1990）が挙げられる。
ＩＦＲ８活性抑制剤としては、PIAS1が挙げられる。
あるいは、これらの転写関連因子を認識して結合し、その転写活制御機能を阻害する、抗体もしくはその抗原結合断片やアプタマーであってもよい。

＜医薬品＞
本医薬組成物を用いて製造する医薬品は、共溶媒系を含んでもよい。例えば、ベンジルアルコール、非極性界面活性剤、水混和性有機ポリマー、水相、ＶＰＤ共溶媒系（３ｗ／ｖ％のベンジルアルコール、８ｗ／ｖ％の非極性界面活性剤ポリソルベート８０（商標）、および６５ｗ／ｖ％のポリエチレングリコール３００を含む無水エタノールの溶液）が挙げられるが、これらに限定されない。共溶媒系の割合は、それらの溶解度および毒性特性を著しく変化させることなく大幅に変化することができる。さらに、共溶媒成分の同一性は変更するこができる。例えば、他の界面活性剤をポリソルベート８０（商標）の代わりに使用してもよく、他の生体適合性ポリマーは、ポリエチレングリコール、例えば、ポリビニルピロリドンに取って代わり、他の糖または多糖は、デキストロースと置き換わり得るが、これらに限定されない。
これらは、有効成分以外の様々な目的の各種成分を含有してもよい。例えば、１種以上の医薬的に許容され得る賦形剤、崩壊剤、希釈剤、滑沢剤、着香剤、着色剤、甘味剤、酸味剤、矯味剤、懸濁化剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、補助剤、防腐剤、緩衝剤、結合剤、安定化剤、コーティング剤、局所麻酔剤、等張化剤などが挙げられる。具体的には、賦形剤としては、水、エタノール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、アミラーゼ、炭酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、カオリン、ヒドロキシメチルセルロース、微結晶セルロース、滑石、珪酸、粘性パラフィン、ポリビニルピロリドンなどを、結合剤としては、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドンなどを、崩壊剤としては乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖などを、滑沢剤としては精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコールなどを、緩衝剤としてはクエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどを、安定化剤としてはトラガント、アラビアゴム、ゼラチン、ピロ亜硫酸ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、チオグリコール酸、チオ乳酸などを、局所麻酔剤としては塩酸プロカイン、塩酸リドカインなどを、等張化剤としては、塩化ナトリウム、ブドウ糖などを例示できる。
上記医薬の投与経路は、有効成分の剤形によって、全身投与または局所投与のいずれも選択することができる。いずれの場合も、経口経路、非経口経路のどちらであってもよい。非経口経路としては、静脈内投与、動脈内投与、経皮投与、皮下投与、皮内投与、筋肉内投与、腹腔内投与、経粘膜投与などを挙げることができる。局所投与の場合、くも膜下注入、脳室内注入、脳せき髄液内注入（例えば髄腔内注入）などが例示できる。脳関門の通過を考慮に入れて、全身投与と局所投与（特に、脳内投与）を併用してもよい。
剤形は、特に限定されず、上記投与経路に適した剤形であればよい。例えば、経口投与のためには、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、丸剤、液剤、乳剤、懸濁液、溶液剤、酒精剤、シロップ剤、エキス剤、エリキシル剤とすることができる。非経口剤としては、例えば、皮下注射剤、静脈内注射剤、筋肉内注射剤、腹腔内注射剤などの注射剤；経皮投与または貼付剤、軟膏またはローション；口腔内投与のための舌下剤、口腔貼付剤；ならびに経鼻投与のためのエアゾール剤；坐剤とすることができる。これらの製剤は、製剤工程において通常用いられる公知の方法により製造することができる。また本発明に係る薬剤は、持続性または徐放性剤形であってもよい。
上記医薬に含有される有効成分の量は、該有効成分の用量範囲や投薬の回数などにより適宜決定できる。用量範囲は特に限定されず、含有される成分の有効性、投与形態、投与経路、疾患の種類、対象の性質（体重、年齢、病状および他の医薬の使用の有無など）、および担当医師の判断など応じて適宜選択できる。
薬学的に許容可能な塩は、有機塩、無機塩、酸性塩、塩基性塩、金属塩、非金属塩、酸付加塩、塩基付加塩など様々な分類の塩や様々な態様の塩が考えられる。例としては、酢酸塩、酸性リン酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酒石酸水素塩、ホウ酸塩、酪酸塩、塩化物、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、蟻酸塩、フマル酸塩、ゲンチシン酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、二塩化水素化物、ヨウ化水素酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、パモン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩、プロピオン酸塩、糖酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トルエンスルホン酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アルミニウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩、リチウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩、ナトリウム塩、亜鉛塩、ジエタノールアミン塩などが挙げられるが、これらに限定されない。

本実施例で用いた細胞株
Ｋａｓｕｍｉ−７（ｐｒｅＢＣＲ^＋ＭＥＦ２Ｄ−ＨＮＲＮＰＵＬ１融合型急性リンパ芽球性白血病細胞株）、Ｋａｓｕｍｉ−９（ｐｒｅＢＣＲ^＋ＭＥＦ２Ｄ−ＨＮＲＮＰＵＬ１融合型急性リンパ芽球性白血病細胞株）、Ｋａｓｕｍｉ−２（ｐｒｅＢＣＲ^＋非ＭＥＦ２Ｄ融合型白血病細胞株）、ＮＡＬＬ−１（ｐｒｅＢＣＲ^―型白血病細胞株）、およびＮＡＧＬ−１細胞（ｐｒｅＢＣＲ^＋非ＭＥＦ２Ｄ融合型白血病細胞株）は、ＪＣＲＢ細胞バンクから購入した。ＮＡＬＭ−１（ｐｒｅＢＣＲ^＋フィラデルフィア染色体型白血病細胞株）およびＲｅｈ細胞（ｐｒｅＢＣＲ^―白血病細胞株）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した。ＮＡＬＭ６細胞（ｐｒｅＢＣＲ^＋非ＭＥＦ２Ｄ融合型白血病細胞株）はＤＳＭＺ（https://www.dsmz.de/）から入手した。ＡＴ２細胞（ｐｒｅＢＣＲ^―細胞株）は、シカゴ大学より提供された。ＴＳ−２細胞（ｐｒｅＢＣＲ^＋ＭＥＦ２Ｄ−ＤＡＺＡＰ１型急性リンパ芽球性白血病細胞株）は、東京医科歯科大学医学研究所より提供された。

本実施例で用いた臨床検体
名古屋大学病院または日本赤十字社名古屋第一病院で治療された、原発性Ｂ−ＡＬＬを有する４７歳の男性（症例１；ＭＥＦ２Ｄ−ＨＮＲＮＰＵＬ１融合型）、および１６歳の男性（症例２；ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９融合型）の白血病細胞試料を用いた。ＭＥＦ２Ｄ融合遺伝子はＲＴ−ＰＣＲによって検出され、配列を決定した。

試薬
本実施例で用いた、試薬、抗体、ｓｈＲＮＡ、プライマーなどを以下の表１〜表５に示す。

Ｋ７−ＨＡ−ＧＦＰ細胞の作製
Ｋａｓｕｍｉ−７細胞に、１）ヒトHNRNPUL1遺伝子のストップコドンの下流を標的とするｇＲＮＡ（GUGUGACCCAGAGGCUCCCGG；配列番号２１）を発現するlentiCRISPR V2（＃52961、addgene、ウォータータウン、MA、USA）と、２）ヒトHNRNPUL1遺伝子のストップコドンの上流および下流のそれぞれ約1kbpを含むフラグメント、２Ａ配列(gcaacaaacttctctctgctgaaacaagccggagatgtcgaagagaatcctggacc；配列番号２２)及びＧＦＰのｃＤＮＡを含むpBluescript SKII（Agilent、カリフォルニア州サンタクララ）をトランスフェクトし、CRISPR-Cas９システムを使用してゲノム編集し、内因性MEF2D-HNRNPUL1融合タンパク質のカルボキシ末端に血球凝集素（ＨＡ）がタグ付けされ、２Ａ配列によりＧＦＰと共発現されるＫａｓｕｍｉ−７ＧＦＰ陽性細胞株を作製した（以降、Ｋ７−ＨＡ−ＧＦＰ細胞と呼ぶ）。

１．ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９とｐｒｅＢＣＲ^＋Ｂ細胞の関係
ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９とＧＦＰを同時に発現させるため、ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９ｃＤＮＡ（配列番号２３）をｐＭＳＣＶ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰベクターにクローニングした。
胎児肝細胞（交尾後１４日、ＢＡＬＢ／ｃマウス）を、１５％ＦＢＳ、幹細胞因子、Ｆｌｔ３リガンド、インターロイキン−７、および２−メルカプトエタノールを添加したIscove’s Modified Dulbecco培地中で、ＯＰ９ストロマ細胞上で培養することにより、Ｂ２２０^＋ｃ−Ｋｉｔ^＋ｐｒｏ−Ｂ細胞に分化させた。
Ｂ２２０^＋ｃ−Ｋｉｔ^＋ｐｒｏ−Ｂ細胞に、ｐＭＳＣＶ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰベクター（±ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９ｃＤＮＡ）を含む組換えレトロウイルスを感染させ、ＧＦＰの発現をマーカーとして、感染した細胞を選択した。得られたｐｒｏ−Ｂ細胞（＋ＧＦＰ±ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９ｃＤＮＡ）を、致死量以下（２Ｇｙ）の放射線照射された免疫不全ＮＳＧ（ＮＯＤ ｓｃｉｄ ｇａｍｍａ）マウス（８〜１０週齢、雌）に静脈内移植（１ｘ１０^７細胞）した（ＧＦＰｏｎｌｙ（Ｃｔｒ）：ｎ ＝１０；ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９：ｎ＝１１）。３週間後、骨髄細胞を回収し、分化したｐｒｅＢ細胞を検出するため、抗ｐｒｅＢＣＲ（プレＢ細胞受容体）抗体を用いてフローサイトメトリーを行った（図１Ａ）。
その結果、ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９を発現させたｐｒｏ−Ｂ細胞を移植した場合（ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９）、ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９を発現させないｐｒｏ−Ｂ細胞を移植した場合（ＧＦＰ−ｏｎｌｙ）に比べて有意にｐｒｅＢＣＲ陽性の細胞の割合が増えていた。これは、ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９の発現が、ｐｒｅＢＣＲ^＋細胞の増加させることを示している。

同じように調製したｐｒｏ−Ｂ細胞１ｘ１０^７個を、致死量以下の放射線を照射（２Ｇｙ）した免疫不全ＮＳＧ（ＮＯＤ ｓｃｉｄ ｇａｍｍａ）マウス（８〜１０週齢、雌、各々ｎ＝５）に静脈注射によって移植した。生存率のカプラン・マイヤー分析は、R packages survival（バージョン2.44-1.1）を使用して行った（図１Ｂ）。
移植から１２０日後に、ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９を発現していない対照のｐｒｏ−Ｂ細胞を移植した個体は健常なのに対して（点線）、ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９を発現しているｐｒｏ−Ｂ細胞を移植した個体は、すでに死亡したか、又はひん死の状態であった（実線）。
ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９を発現するｐｒｏ−Ｂ細胞を投与されたマウスを死亡前に検査したところ、脾臓が肥大していることと骨髄中に多数のリンパ芽球が存在することが観察された(図１Ｃ)。そして、骨髄中の細胞を抗体を用いたフローサイトメトリーで細胞を分類したところ、９０％以上がＧＦＰ^＋ＣＤ１９^＋Ｂ細胞であり、ｐｒｅＢＣＲを発現していた（図１Ｄ）。
これは、ＭＥＦ２Ｄ−ＢＣＬ９を発現したｐｒｏ−Ｂ細胞の投与がＡＬＬの病態（リンパ芽球の浸潤、脾臓などの腫大）を引き起こすことを示す。

２．ＭＥＦ２Ｄ−ＡＬＬ細胞における、ｐｒｅＢＣＲの発現とＭＥＦ２Ｄ融合タンパク質の必要性
ｐｒｅＢＣＲの構成分子であるＩｇ膜型μ鎖、ＣＤ７９Ａ、およびＣＤ７９ＢのｓｈＲＮＡ（shIgm/Fw、shCD79A/Fw、shCD79B/Fw）をコードする二本鎖ＤＮＡをそれぞれ、ヒトＣＤ８の細胞外ドメインを共発現させるＣＳＩＩｈＵ６ＰＧＫｈＣＤ８ベクターのｈＵ６プロモーターの下流のＢａｍＨＩ／ＣｌａＩ部位に挿入することにより、各ｓｈＲＮＡを発現するレンチウイルスベクターを作製した。それぞれのレンチウイルスベクターをウィルスエンベロープにパッケージングし、Centriprep-10K（Merk-Millipore、Darmstadt、Germany）を使用してレンチウイルスを濃縮した。得られたレンチウイルスをＫａｓｕｍｉ−７細胞に各々感染させ、ＭＡＣＳ磁気細胞分離システム（Miltenyi Biotech、Bergisch Gladbach、Germany）と抗ヒトＣＤ８抗体（HIT8a; Biolegend、San Diego、CA、USA）を用いてｓｈＲＮＡが導入された細胞を分離した。
その結果、Ｉｇ膜型μ鎖、ＣＤ７９Ａ、およびＣＤ７９Ｂの発現を各々抑制することにより、ｈＣＤ８陽性細胞の増殖が抑制された（図２Ａ）。

ＧＦＰに対するｓｈＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ−ＧＦＰ−１及びｓｈＲＮＡ−ＧＦＰ−２；表４）をコードする二本鎖ＤＮＡを、ＣＳＩＩｈＵ６ＰＧＫｈＣＤ８ベクターに挿入した。ＧＦＰｓｈＲＮＡ発現レンチウイルスベクターをウィルスエンベロープにパッケージングし、Centriprep-10K（Merk-Millipore、Darmstadt、Germany）を使用してレンチウイルスを濃縮した。レンチウイルスをＫ７−ＨＡ−ＧＦＰ細胞に感染させ、MACS磁気細胞分離システム（Miltenyi Biotech、Bergisch Gladbach、Germany）と抗ヒトＣＤ８抗体（HIT8a; Biolegend、San Diego、CA、USA）を用いてＧＦＰｓｈＲＮＡを発現する細胞を分離した。コントロールとして（Ｃｔｒ）、ルシフェラーゼに対するｓｈＲＮＡをコードする二本鎖ＤＮＡを用いて実験を行った（ｓｈＲＮＡ−Ｌｕｃｉ）。Ｋ７−ＨＡ−ＧＦＰ細胞では、ＭＥＦ２Ｄ−ＨＮＲＮＰＵＬ１とＧＦＰが一本のｍＲＮＡとして発現するので、ＧＦＰのｓｈＲＮＡによってＭＥＦ２Ｄ−ＨＮＲＮＰＵＬ１の発現を抑制することができる。
このようにしてＭＥＦ２Ｄ−ＨＮＲＮＰＵＬ１の発現を抑制した結果、Ｋ７−ＨＡ−ＧＦＰ細胞のＣＤ８陽性画分でのみＧＦＰが減少した（図２Ｂ）。なお、ＣＤ８陽性画分の細胞では、ｐｒｅＢＣＲの発現を減少させ（図２Ｃ上段）、細胞増殖の抑制が生じており（図２Ｃ下段）、さらに細胞死（図２Ｄ）が生じていた。
これはＭＥＦ２Ｄ融合タンパク質の存在がｐｒｅＢＣＲの発現増強を介して、ＭＥＦ２Ｄ−ＡＬＬの症状（すなわち白血病細胞の増加）を引き起こし、ＭＥＦ２Ｄ融合タンパク質の発現を抑制することにより、ＭＥＦ２Ｄ−ＡＬＬの症状が抑えられることを示している。

３．転写因子ｓｈＲＮＡによる、ＭＥＦ２Ｄ融合タンパク質の発現抑制及び細胞増殖抑制
各転写因子に対するｓｈＲＮＡ発現のためのオリゴＤＮＡ（二本鎖）を、CSIIhU6PGKhCD8ベクターに挿入した。コントロールとして、ルシフェラーゼに対するｓｈＲＮＡをコードする二本鎖ＤＮＡを用いて実験を行った（ｓｈＲＮＡ＿Ｌｕｃｉ）。作成したレンチウイルスベクターをウィルスエンベロープにパッケージし、Centriprep-10K（Merk-Millipore、Darmstadt、Germany）を使用してレンチウイルスを濃縮した。レンチウイルスをＫ７−ＨＡ−ＧＦＰ細胞に感染させ、９６時間培養し、培養後の細胞数を調べ、細胞に存在する各タンパク質をウェスタンブロッティングで検出した（図３）。
その結果、ＳＲＥＢＦ１、ＥＧＲ１、ＢＣＬ６、ＦＯＳ、またはＩＦＲ８の発現を抑制することにより、コントロールと比較して、Ｋ７−ＨＡ−ＧＦＰ細胞の数も減少し（図３Ａ）、ＨＡ融合タンパク質（すなわち、ＭＥＦ２Ｄ−ＨＮＲＮＰＵＬ１融合タンパク質）の発現も抑制された（図３Ｂ）。

４．ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤による、ＭＥＦ２Ｄ融合タンパク質の発現抑制
ｐｒｅ−ＢＣＲ^＋ＭＥＦ２Ｄ−ＡＬＬ型細胞株である、Ｋａｓｕｍｉ−７、Ｋａｓｕｍｉ−９及びＴＳ−２、ならびに臨床検体細胞（ｃａｓｅ−１及びｃａｓｅ−２）に、ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤である、ファトスタチン、ＦＧＨ１００１９及びベツリンを投与した。７２時間培養後の細胞に存在するＭＥＦ２Ｄ融合タンパク質をウェスタンブロッティングで検出した。その結果、ファトスタチン、ＦＧＨ１００１９及びベツリンは、活性型ＳＲＥＢＦ１（分解型）を減少させ、ＭＥＦ２Ｄ融合タンパク質の発現を阻害した（図４）。

５．Ｅｘ ｖｉｖｏ薬物感受性アッセイ
ｐｒｅ−ＢＣＲ⁻細胞株（ＡＴ２、ＮＡＬＬ−１、ＮＡＬＭ−１及びＲｅｈ）、ｐｒｅ−ＢＣＲ^＋非ＭＥＦ２Ｄ融合型細胞株（Ｋａｓｕｍｉ−２，ＮＡＧＬ−２及びＮＡＬＭ−６）及びｐｒｅ−ＢＣＲ^＋ＭＥＦ２Ｄ融合型細胞株（Ｋａｓｕｍｉ−７、Ｋａｓｕｍｉ９及びＴＳ−２）、ならびに臨床検体細胞を、薬剤または対照（ＤＭＳＯのみ）の存在下で３日間、１×１０^５／ｍｌの密度で培養した。生細胞数を顕微鏡下でカウントし、生存細胞の割合を対照を１として計算した。グラフはRパッケージggplot2（バージョン3.2.0）を使用して作成した（図５Ａ）。その結果、ファトスタチン、ＦＧＨ１００１９及びベツリンはいずれも、ｐｒｅ−ＢＣＲ^＋ＭＥＦ２Ｄ−ＡＬＬ型細胞株の増殖を阻害したのに対し、ｐｒｅ−ＢＣＲ^―細胞株及びｐｒｅ−ＢＣＲ^＋非ＭＥＦ２Ｄ−ＡＬＬ型細胞株の増殖は阻害しなかった。また、培養後の細胞において、ＦＧＨ１００１９によって、ＭＥＦ２Ｄ融合型であるＫａｓｕｍｉ−７、Ｋａｓｕｍｉ−９、ＴＳ−２及び臨床検体細胞（ｃａｓｅ１、ｃａｓｅ２）ではｐｒｅ−ＢＣＲの発現が抑制されていたが、非ＭＥＦ２Ｄ融合型であるＮＡＬＭ−６、Ｋａｓｕｍｉ−２、ＮＡＧＬ１ではｐｒｅ−ＢＣＲの発現の抑制はされなかった(図５Ｂ)。
一方、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）などに投与されるヒストン脱アセチル化酵素阻害薬であるボリノスタットやパノビノスタットはすべての細胞の増殖を阻害した（図５Ｃ）。

６．ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤による生体内薬物感受性アッセイ
Ｋａｓｕｍｉ−７細胞に、ルシフェラーゼ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰを発現するレトロウイルス（ＭＩＧ−Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ−ＩＲＥＳ−ＧＦＰ：Ａｄｄｇｅｎｅ＃７５０２１）を感染させ、ＧＦＰで選別した。５×１０^６ 個の細胞を、２４時間間隔で２０ｍｇ／体重ｋｇのブスルファン（B2635、Sigma-Aldrich、セントルイス、MO、USA）を２回の腹腔内注射することにより、造血幹細胞を死滅させる前処理したＮＳＧマウスに静脈内移植した。
マウスには、抗菌剤であるエンロフロキサシン（Enrofloxacin）（BAYER Pharmaceuticals 、Leverkusen、ドイツ）を飲料水に混ぜ（１７０ ｍｇ／Ｌ）、自由に摂取させた。３％ＤＭＳＯ／２０％ＰＥＧ３００／３％Ｔｗｅｅｎ８０／生理食塩水に溶解したＦＧＨ１００１９（２５ｍｇ／体重ｋｇ／日）を移植後、週に６日経口胃管栄養法により与えた（図６）。移植後８週及び１１週経過後、マウスから血液を採取し、ＧＦＰ陽性細胞の割合を調べた(図６Ａ及びＢ)。
生存率のカプラン・マイヤー分析は、R packages survival（バージョン2.44-1.1）を使用して行った（図６Ｃ）。
その結果、ＦＧＨ１００１９を投与した個体は白血病細胞（ＧＦＰを発現するＫａｓｕｍｉ−７細胞）が減少し、生存率も上昇した。

これらの結果は、ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤が、ＭＥＦ２Ｄ−ＡＬＬ型の白血病に特異的に効果があることを示している。

本発明により、ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病の治療方法及び治療剤を提供することができる。

Claims (8)

1. ＳＲＥＢＦ１、ＥＧＲ１、ＢＣＬ６、ＦＯＳ、およびＩＦＲ８からなる群から選ばれる少なくとも一つのタンパク質の活性抑制剤を有効成分として含む、ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病を治療するための医薬組成物。
2. 前記ＭＥＦ２Ｄ融合型急性リンパ性白血病が、ＭＥＦ２Ｄ-ＢＣＬ９融合型急性リンパ性白血病、ＭＥＦ２Ｄ-ＨＮＲＮＰＵＬ１融合型急性リンパ性白血病、又はＭＥＦ２Ｄ-ＤＡＺＡＰ１融合型急性リンパ性白血病ＭＥＦ２Ｄ-ＳＳ１８融合型急性リンパ性白血病である、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤は、前記ＳＲＥＢＦ１タンパク質のプロセシング阻害剤である、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
4. 前記ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤は、コレステロール又は脂肪酸である、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
5. 前記ＳＲＥＢＦ１活性抑制剤は、前記ＳＲＥＢＦ１タンパク質をコードするＳＲＥＢＦ１遺伝子のアンチセンスＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはｓｉＲＮＡである、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
6. 前記ＳＲＥＢＦ１タンパク質のプロセシング阻害剤が、ファトスタチン（ｆａｔｏｓｔａｔｉｎ）、ＦＧＨ１００１９、又はベツリン（Ｂｅｔｕｌｉｎ）である請求項３に記載の医薬組成物。
7. 前記コレステロール又は脂肪酸が、魚油、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、又はオメガ３脂肪酸（エステル）である、請求項４に記載の医薬組成物。
8. 前記ＳＲＥＢＦ１のｍｉＲＮＡがｍｉＲ-３３である、請求項５に記載の医薬組成物。
   
   

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