JP2021098684A

JP2021098684A - ｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤及びその調製方法

Info

Publication number: JP2021098684A
Application number: JP2020089448A
Authority: JP
Inventors: 夕林孫; Xilin Sun; 麗娜呉; Lina Wu; 栄阿; Rong A; オラワトシンアティニュークオラグバッジュー; Oluwatosin Atinuke Olagbaju; 凱王; Kai Wang; 麗麗楊; Lili Yang; 立欣程; Lixin Chen; 文菊喬; Wenju Qiao; 暁紅孫; Xiaohong Sun
Original assignee: Harbin Engineering University; Harbin Medical University
Current assignee: Harbin Engineering University; Harbin Medical University
Priority date: 2019-12-23
Filing date: 2020-05-22
Publication date: 2021-07-01
Also published as: CN111110875B; US20210077637A1; CN111110875A

Abstract

【課題】ｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤及びその調製方法の提供。【解決手段】造影剤は、１９Ｆ信号及びＣＥＳＴデュアル信号を有するデュアルモーダルナノ粒子造影剤（１９Ｆ−ＣＥＳＴ）であり、ｐＨ・酸素の二重感度のＣＥＳＴ造影剤である。調製方法は、複数種のリン脂質系界面活性剤とコレステロールを均一に混合し、リン脂質系界面活性剤のブレンドを得て、クロロホルム又はクロロホルムとメタノールの混合溶媒で溶解し、ローダミンを加えた後、ロータリーエバポレーターによって乾固するまで蒸発し、４０℃の真空オーブンで一晩乾燥させ、最後に機械分散又は超音波振盪の方式でグリセリンを加えた水に分散させ、脂質修飾体を得るステップと、パーフルオロカーボン、該脂質修飾体、グリセリン、水を混合して、プローブを用いて超音波で均一に混合し、押出機で押し出す、パーフルオロカーボンナノエマルションを調製するステップを含む。【選択図】図１

Description

本発明は、磁気共鳴イメージングの技術分野に属し、特にｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤の調製方法、及びそれにより得られた二重感度造影剤に関する。

病理組織（例えば、炎症、感染、腫瘍組織）は、ｐＨ、温度、周囲の環境などが、正常組織とは大きく異なっている。

ＣＥＳＴ化学交換飽和移動（ＣｈｅｍｉｃａｌＥｘｃｈａｎｇｅＳａｔｕｒａｔｉｏｎＴｒａｎｓｆｅｒ、ＣＥＳＴ）イメージングの基本原理は、交換可能なプロトンプールにプレ飽和パルス（ＲａｄｉｏＦｒｅｑｕｅｎｃｙ、ＲＦ）を印加して、交換可能なプール内の水素プロトンを飽和させ、次に、飽和水素プロトンを、周囲のフリープール内の水素プロトンと化学交換することにより、水の信号を低減させることである。したがって、水分子信号の変化を検出することで、生体高分子の濃度や代謝などの情報を間接的に反映することができる。生体内の高分子溶質又は代謝産物の濃度は一般に低い（マイクロモル又はミリモル）ため、一般的なＭＲ画像で信号を観察することは困難である。しかし、化学交換飽和移動は実際に信号増幅の役割を果たし、低濃度の溶質又は代謝産物に関する情報を検出可能にする。

一般に、ＣＥＳＴイメージングは、生体組織の関心領域のｐＨ値、特に腫瘍細胞外のｐＨ値を非侵襲的に検出することができる。

タンパク質、グルコース、イノシトール、グルタミン酸などの多くの生体内因性高分子は、活性水素プロトンを含み、ＣＥＳＴ造影剤の基本特性を満たしているため、内因性ＣＥＳＴ造影剤として使用できる。（ＣｈｅｍｉｃａｌＥｘｃｈａｎｇｅＳａｔｕｒａｔｉｏｎＴｒａｎｓｆｅｒ（ＣＥＳＴ）Ｉｍａｇｉｎｇ：ＤｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆＴｅｃｈｎｉｑｕｅａｎｄＰｏｔｅｎｔｉａｌＣｌｉｎｉｃａｌＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ，ＣｕｒｒＲａｄｉｏｌＲｅｐ．２０１３Ｊｕｎｅ１；１（２）：１０２−１１４）

パーフルオロカーボン（ＰＦＣ）は、高い酸素溶解性及び疎水性を有し、その安全性及び生体適合性が十分に確認されている。ただし、現在臨床的に使用される１Ｈ−ＭＲＩ磁場強度は３．０Ｔ以下であり、^１９Ｆ−ＭＲＩは、それ自体の比較的低い感度を補うために、より高い磁場強度（４．７〜１４．０Ｔ）を必要とし、それに加えて、循環血液による希釈作用によりパーフルオロカーボン（ＰＦＣ）のターゲットプローブ関連の研究には、特定の障害をもたらす。（ＰｅｒｆｌｕｏｒｏｏｃｔｙｌｂｒｏｍｉｄｅＮａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｆｏｒＵｌｔｒａｓｏｕｎｄＩｍａｇｉｎｇａｎｄＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ，ＩｎｔＪＮａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ．２０１８Ｖ１３Ｎ：３０５３−３０６７；Ｅｉｇｈｔ−Ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ，ＳｔａｂｌｅＦｅ（ＩＩ）ＣｏｍｐｌｅｘａｓａＤｕａｌ ^１９ＦａｎｄＣＥＳＴＣｏｎｔｒａｓｔＡｇｅｎｔｆｏｒＲａｔｉｏｍｅｔｒｉｃｐＨＩｍａｇｉｎｇ，ＩｎｏｒｇＣｈｅｍ．２０１７Ｏｃｔ１６；５６（２０）：１２２０６−１２２１３）

腫瘍細胞外ｐＨ値（ｐＨｅ）は、通常、腫瘍細胞内ｐＨ値（ｐＨｉ）よりも低く、それは、正常組織と反対である。ただし、腫瘍細胞外のこの酸性環境は、腫瘍細胞の増殖を促進し、アポトーシス、代謝適応、移動及び浸潤を回避することにより癌の進行を促進する。したがって、腫瘍細胞外ｐＨ値の測定は、悪性度の分析にとって非常に重要である。ただし、体内の組成は複雑であり、直接水飽和効果（ｄｉｒｅｃｔｗａｔｅｒｓａｔｕｒａｔｉｏｎ、ＤＳ）や半固体プールの従来のＭＴコントラスト（ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌＭＴｃｏｎｔｒａｓｔ、ＭＴＣ）、ＮＯＥ（ＮｕｃｌｅａｒＯｖｅｒｈａｕｓｅｒＥｆｆｅｃｔ、ＮＯＥ）など、磁場に対する多くの干渉要因があり、また、内因性ＣＥＳＴ造影剤の感度は低く、混合効果による影響を受けやすく、生体内での標的化合物の正確な測定が困難である。（ＰｏｔｅｎｔｉｏｍｅｔｒｉｃａｎｄＲｅｌａｘｏｍｅｔｒｉｃＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆａＧａｄｏｌｉｎｉｕｍ−ＢａｓｅｄＭＲＩＣｏｎｔｒａｓｔＡｇｅｎｔｆｏｒＳｅｎｓｉｎｇＴｉｓｓｕｅｐＨ，ＩｎｏｒｇＣｈｅｍ．２００７，４６，５２６０−５２７０；ＡＧｅｎｅｒａｌＭＲＩ−ＣＥＳＴＲａｔｉｏｍｅｔｒｉｃＡｐｐｒｏａｃｈｆｏｒｐＨＩｍａｇｉｎｇ：ＤｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｏｎｏｆｉｎＶｉｖｏｐＨＭａｐｐｉｎｇｗｉｔｈＩｏｂｉｔｒｉｄｏｌ，ＪＡｍＣｈｅｍＳｏｃ．２０１４Ｖ１３６Ｎ４１：１４３３３−６）

腫瘍組織の代謝、血中酸素飽和度、及び組織酸素含有量も正常組織とは異なる。そのため、ＢＯＬＤ−ＭＲＩによる腫瘍血管及び血中酸素飽和状況の評価、ヘモグロビン酸素飽和レベルの変化に基づくイメージングは注目を集めてきた。（Ｉｍａｇｉｎｇｔｕｍｏｕｒｈｙｐｏｘｉａｗｉｔｈｏｘｙｇｅｎ−ｅｎｈａｎｃｅｄＭＲＩａｎｄＢＯＬＤＭＲＩ，ＢｒＪＲａｄｉｏｌ．２０１９Ｖ９２Ｎ１０９５：２０１８０６４２）

本発明は、ｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤及びその調製方法並びに用途を提供しており、^１９Ｆ信号及びＣＥＳＴデュアル信号を有するデュアルモーダルナノ粒子造影剤（^１９Ｆ−ＣＥＳＴ）であり、ｐＨ・酸素の二重感度のＣＥＳＴ造影剤であり、ＣＥＳＴイメージングで含有量が非常に少ない物質の特性を検出して^１９Ｆ信号の感度が低いという問題を補うことができる。

本発明は、ｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤の調製方法を提供しており、前記方法は、
複数種のリン脂質系界面活性剤とコレステロールを均一に混合し、ホスファチジルコリンリポソーム、ホスファチジルグリセロールリポソーム及びコレステロールからなるリン脂質系界面活性剤のブレンドを得て、クロロホルム又はクロロホルムとメタノールの混合溶媒で溶解し、ローダミンを加えた後、ロータリーエバポレーターを用いて乾固するまで蒸発し、４０℃の真空オーブンで一晩ベークし、最後に、機械的分散又は超音波振盪の方式でグリセリンを加えた水に分散させ、脂質修飾体を得る、脂質修飾体を調製するステップ（１）と、
パーフルオロカーボン、ステップ（１）で得られた脂質修飾体、グリセリン、水を混合して、プローブを用いて超音波で均一に混合し、押出機で押し出し、パーフルオロカーボンナノエマルションを得る、パーフルオロカーボンナノエマルションを調製するステップ（２）と、を含む。

ｐＨ・酸素の二重感度のＣＥＳＴ造影剤を調製するために、更に、ステップ（１）で得られた脂質修飾体では、リン脂質系界面活性剤のブレンド、クロロホルムとメタノールの混合溶媒、ローダミンの質量比は、（８０−９５）：（３５−４５）：（０．５−２）である。

ステップ（１）では、前記ホスファチジルコリンリポソームは、ジミリスチルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ジラウロイルホスファチジルコリン（ＤＬＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）及びパルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）を含み、
前記ホスファチジルグリセロールリポソームは、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）を含む。

更に、リン脂質系界面活性剤のブレンドは、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）及びコレステロールからなる。

更に、ホスファチジルコリンリポソーム、ホスファチジルグリセロールリポソーム及びコレステロールのモル比は、（６０−８０）：（１０−１５）：（１０−２５）である。

更に、ステップ（２）で得られたパーフルオロカーボンナノエマルションでは、パーフルオロカーボン、グリセリンが、総質量の１０−４０％を占め、水が、全質量の５５−８５％を占め、リン脂質系界面活性剤が、全質量の１−５％を占める。

更に、ステップ（２）で得られたパーフルオロカーボンナノエマルションでは、パーフルオロカーボンとグリセリンの質量比は、１０−２０：１である。

更に、パーフルオロカーボン（ＰＦＣ）は、パーフルオロオクタンブロミド、パーフルオロ−１５−クラウン−５−エーテル、ＦＣ−３２８０（（Ｃ_８Ｆ_１８））及びＦＣ−７７（（Ｃ_８Ｆ_１６Ｏ））から選択される１種又は複数種である。

更に、ステップ（１）における超音波振盪の超音波パワーは、ステップ（２）における超音波処理の超音波パワーより小さい。

ステップ（１）では、超音波振盪は、時間が５秒−１０秒、パワーがＰ_１が４００Ｗ＞Ｐ_１＞３００Ｗであり、ステップ（２）では、超音波処理は、時間が６０秒−７０秒、パワーＰ_２がＰ_２＞Ｐ_１且つ４５０Ｗ＞Ｐ_２≧４００Ｗである。

本発明は、上記のいずれか１項に記載の方法により調製されるｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤をさらに提供する。ステップ（２）で得られたエマルションから、透析の方式によって効果的にコーティングされていない成分を除去すれば、ＣＥＳＴ造影剤プローブを得ることができる。

ＣＥＳＴイメージングは、生体組織の関心領域のｐＨ値、特に腫瘍細胞外のｐＨ値を非侵襲的に検出することができる。ただし、体内の組成は複雑であり、例えば、ＤＳ効果及びＭＴＣ効果、ＮＯＥ効果など、磁場に対する多くの干渉要因があり、また、内因性ＣＥＳＴ造影剤の感度は低く、混合効果による影響を受けやすく、イメージングするとき、標的化合物の正確な測定が困難である。腫瘍組織の代謝、血中酸素飽和度、及び組織酸素含有量も正常組織とは異なる。そのため、ＢＯＬＤ−ＭＲＩによる腫瘍血管及び血中酸素飽和状況の評価、ヘモグロビン酸素飽和レベルの変化に基づくイメージングは注目を集めてきた。

本発明の発明者らは、パーフルオロカーボン（ＰＦＣ）ナノエマルションの信号に対する酸素の影響と規則性を最初に発見しており、このイメージング信号の規則性により、生物学的パーフルオロカーボン（ＰＦＣ）ナノエマルションの酸素運搬と放出レベルに関する研究のための基礎を築くことができる。パーフルオロカーボン（ＰＦＣ）の酸素運搬特性を発見して研究し、ＣＥＳＴ信号に対する酸素含有量の影響を研究することによって、パーフルオロカーボン（ＰＦＣ）ナノ粒子を用いてＣＥＳＴイメージングを行って、組織又は腫瘍部位のプローブの経時的な酸素運搬量の分析を可能にし、これに基づいてｐＨ・酸素の二重感度のＣＥＳＴ造影剤を調製する。

ｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子を検出する水和粒径の図である。ｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子を検出するＺＥＴＡ電位の図である。ｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子の^１Ｈ磁気共鳴スペクトルである。図３−１に示すＡの拡大図である。ｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子の^１Ｈ−ＭＲＣＥＳＴイメージングのＺ−スペクトルである。ｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子の透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）の図である。ｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子のＴ１重み付け（６−１）及び^１９Ｆ信号画像（６−２）である。ｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子の体積希釈比は、それぞれ、１：５、１：１０、１：２０、１：１００である。ｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子のＣＥＳＴ信号ＳＴ％ｍａｐカラーマップである。図（７−１）のプレ飽和パルスパワーは１．２μＴ、飽和時間は３ｓであり、図（７−２）のプレ飽和パルスパワーは２．４μＴ、飽和時間は３ｓである。ｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子の体積希釈比は、それぞれ１、１：５、１：１０、１：２０、１：１００である。異なる希釈比のｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子の、異なるプレ飽和パルスと異なる飽和時間とのヒストグラムである。図（８−１）のプレ飽和パルスパワーは１．２μＴ、図（８−２）のプレ飽和パルスパワーは２．４μＴである。ｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子のｐＨ感度標準曲線である。ｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子のＯ_２感度曲線である。

以下、本発明の実施例における図面を参照しながら、本発明の実施例における技術案を明瞭かつ完全に説明する。言うまでもなく、説明される実施例は、本発明の一部の実施例にすぎず、全部の実施例ではない。本発明における実施例に基づいて、当業者が創造性のある労働を必要とせずに得られる他の実施例は、すべて本発明の特許請求の範囲に属する。

本発明の１つの実施例は、ｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤の調製方法を提供し、前記方法は以下のステップを含む。
（１）複数種のリン脂質系界面活性剤とコレステロールを均一に混合し、リン脂質系界面活性剤のブレンドを得て、クロロホルムとメタノールの混合溶媒で溶解し、ローダミンを加えた後、ロータリーエバポレーターを用いて乾固するまで蒸発し、４０℃の真空オーブンで一晩ベークし、最後に、超音波振盪の方式でグリセリンを加えた水に分散させ、脂質修飾体を得る、脂質修飾体を調製するステップ（１）。

リン脂質系界面活性剤のブレンドは、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）及びコレステロールからなり、それらの間のモル比はＤＰＰＣ：ＤＰＰＧ：コレステロール＝７５：１５：２０である。

リン脂質系界面活性剤のブレンド、クロロホルムとメタノールの混合溶媒、ローダミンの質量比は、８５：３５：０．７である。

超音波振盪は、処理時間が５秒、パワーが３６０Ｗである。

パーフルオロカーボン、ステップ（１）で得られた脂質修飾体、グリセリン、水を混合して、プローブを用いて超音波で均一に混合し、押出機（アヴァンティミニ押出機（Ａｖａｎｔｉ））で押し出し、パーフルオロカーボンナノエマルションを得る、パーフルオロカーボンナノエマルションを調製するステップ（２）。

パーフルオロカーボンは、全質量の３１．２５％を占め、グリセリンは、全質量の２％を占め、水は、全質量の６４．７５％を占め、リン脂質系界面活性剤は、全質量の２％を占める。

パーフルオロカーボン（ＰＦＣ）は、パーフルオロ−１５−クラウン−５−エーテルから選択される。

超音波は、処理時間が６５秒、パワーが４００Ｗである。

ステップ（２）で得られたエマルションから、透析の方式によって効果的にコーティングされていない成分が除去され、ＣＥＳＴ造影剤プローブが得られる。

以下、本発明の実施例におけるＣＥＳＴ造影剤プローブに対して、特性評価及び効果検証実験をさらに行う。

（１）ｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子のＭＲＣＥＳＴイメージング
合成したｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノエマルションは、原液であり、それぞれ体積比で希釈され、体積はそれぞれ（１、１／５、１／１０、１／２０、１／１００）であり、０．２５ｍｌＥＰチューブに入れ、４０ｍｌ遠心チューブに蒸留水を加えて固定し、^１９ＦＭＲ、Ｔ１ＲＡＲＥ、Ｔ１ｍａｐｐｉｎｇ、Ｔ２ｍａｐｐｉｎｇ、ＣＥＳＴＥＰＩシーケンススキャンを行い、ＭＡＴＬＡＢ(登録商標)、ＧｒａｐｈｐａｄＰｒｉｓｍ７によるデータ処理を行い、プローブのＣＥＳＴ信号効率を分析して計算する。スキャンパラメータは、ＲｅｐｅｔｉｔｉｏｎＴｉｍｅ：１００００ｍｓ，ＥｃｈｏＴｉｍｅ：２０ｍｓ，Ｓｌｉｃｅｔｈｉｃｋｎｅｓｓ：２ｍｍ，ＦＯＶ：３５＊３５ｍｍ^，Ｂａｎｄｗｉｄｔｈ：３０００００，Ａｖｅｒａｇｅｓ：１，Ｒｅｐｅｔｅｔｉｏｎｓ：９５，Ｓｅｇｍｅｎｔｓ：１，ＮｕｍｂｅｒＯｆｆｓｅｔＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔ：９５，ＭｉｎＣＥＳＴＯｆｆｓｅｔ：４０００，ＭａｘＣＥＳＴＯｆｆｓｅｔ：−４０００，ＲＦＡｍｐｌｉｔｕｄｅμＴ：３，Ｌｅｎｇｔｈ：５０００ｍｓ，Ｄｕｒａｔｉｏｎｔｉｍｅ：３ｓ，５ｓ，８ｓ，Ｓａｔｕｒａｔｉｏｎｐｏｗｅｒ：０．２，０．５，０．８，１．０，１．２，２．４，３．５，４．７μＴである。

（２）ｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子の特性評価
ｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子のナノスケール粒子の特性評価には、透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）を使用してナノ粒子のサイズ、形態及び構造特性を観察し、ナノ粒子粒度電位分析計を使用して室温でｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子の水和粒径、Ｚｅｔａ電位、多分散指数を測定した結果、ナノスケール粒径の要件を満たし、溶液の安定性は良好である。

^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子は、動的光散乱（ＤＬＳ）で１２３．４ｎｍの水和粒径を有し、腫瘍領域のＥＰＲを効果的に向上させるために、強力な保証を提供する（図１）。

溶質中の^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子の細胞モデルを修飾するホスファチジルコリン様リポソームの含有量は非常に少なく、１Ｈ磁気共鳴スペクトルでプロトンピークを検出することは困難である（図３）。図３−１に示すように、ｐＨ・酸素の二重感度^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴイメージングナノ粒子のプロトンスペクトルピークはほとんど検出されず、図３−１に示すＡを３−６ｐｐｍで拡大すると（図３−２）、非常に小さなプロトンスペクトルピークを検出できる。しかし、ＣＥＳＴイメージング技術では、ホスファチジルコリン様リポソームに由来する−ＯＨ基のＣＥＳＴ信号ピークを簡単に見つけることができる（図４）。

^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子の^１９Ｆ及びＣＥＳＴデュアル信号ソースは、空間的位置決めの品質を効果的に向上させることができる（希釈比が１：５の場合、^１９Ｆ信号は^１９Ｆ−ＭＲＩで大幅に弱められるが、^１Ｈ−ＭＲＣＥＳＴイメージングでは、プレ飽和パルスのパワーは２．４μＴであり、飽和時間が３ｓである場合、６３％と高いＣＥＳＴ信号が検出でき、^１９Ｆ−ＭＲＩは、希釈比が１：１００の場合は、^１９Ｆ信号をほぼ検出できないが、ＣＥＳＴイメージングでは、３６％と高い信号を検出できるため、^１９Ｆ信号の位置特定に「ビーコン」のような作用を提供できる。図（６−２）、図（７−２））。

ＣＥＳＴ造影剤は、遊離水の酸解離定数の影響を受けるため、プレ飽和パルスが０．８μＴ及び３μＴの場合、レシオメーター法により、^１９Ｆ−ＭＲＩ／ＣＥＳＴマルチモーダルイメージングナノ粒子のｐＨ感度標準曲線を得て、標準曲線に従って関心領域の酸性度をさらに検出できる。

パーフルオロカーボン（ＰＦＣ）ナノエマルションが酸素運搬特性を有するため、パーフルオロカーボン（ＰＦＣ）ナノエマルションの信号に対する酸素の影響とパターンを最初に発見しており、このイメージング信号法則により、生物学的パーフルオロカーボン（ＰＦＣ）ナノエマルションの酸素運搬と放出度に関する研究のための基礎を築くことができる。

以上、本発明の実施例を示して説明したが、上記実施例は、例示的なものであることを理解でき、本発明を限定するものとして理解してはいけない。当業者であれば、本発明の原理及び趣旨から逸脱することなく、本発明の範囲内で上記実施例に対して変更、修正、置換や変形を行うことができる。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲及びその等価物により限定されることを理解できる。

以上は、本発明の具体的な実施形態に過ぎず、本発明の特許請求の範囲はこれに限られず、当業者であれば、本発明に開示される技術範囲内で、容易に想到できる変更や置換は、いずれも本発明の保護範囲内に含まれる。従って、本発明の保護範囲は、前記特許請求の範囲の保護範囲を基準とする。

Claims

ｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤の調製方法であって、
複数種のリン脂質系界面活性剤とコレステロールを均一に混合し、ホスファチジルコリンリポソーム、ホスファチジルグリセロールリポソーム及びコレステロールからなるリン脂質系界面活性剤のブレンドを得て、クロロホルム又はクロロホルムとメタノールの混合溶媒で溶解し、ローダミンを加えた後、ロータリーエバポレーターを用いて乾固するまで蒸発し、４０℃の真空オーブンで一晩ベークし、最後に、機械的分散又は超音波振盪の方式でグリセリンを加えた水に分散させ、脂質修飾体を得る、脂質修飾体を調製するステップ（１）と、
パーフルオロカーボン、ステップ（１）で得られた脂質修飾体、グリセリン、水を混合して、プローブを用いて超音波で均一に混合し、押出機で押し出し、パーフルオロカーボンナノエマルションを得る、パーフルオロカーボンナノエマルションを調製するステップ（２）と、を含む、ことを特徴とするｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤の調製方法。
ステップ（２）で得られたパーフルオロカーボンナノエマルションででは、パーフルオロカーボン、グリセリンが、総質量の１０−４０％を占め、水が、全質量の５５−８５％を占め、リン脂質系界面活性剤が、全質量の１−５％を占める、ことを特徴とする請求項１に記載のｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤の調製方法。
ステップ（２）で得られたパーフルオロカーボンナノエマルションでは、パーフルオロカーボンとグリセリンの質量比は、１０−２０：１である、ことを特徴とする請求項２に記載のｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤の調製方法。
パーフルオロカーボンは、パーフルオロオクタンブロミド、パーフルオロ−１５−クラウン−５−エーテル、ＦＣ−３２８０及びＦＣ−７７から選択される１種又は複数種である、ことを特徴とする請求項１に記載のｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤の調製方法。
ステップ（１）で得られた脂質修飾体では、リン脂質系界面活性剤のブレンド、クロロホルムとメタノールの混合溶媒、ローダミンの質量比は、（８０−９５）：（３５−４５）：（０．５−２）である、ことを特徴とする請求項１に記載のｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤の調製方法。
ステップ（１）では、超音波振盪は、時間が５秒−１０秒、パワーがＰ_１が４００Ｗ＞Ｐ_１＞３００Ｗであり、ステップ（２）では、超音波処理は、時間が６０秒−７０秒、パワーＰ_２がＰ_２＞Ｐ_１且つ４５０Ｗ＞Ｐ_２≧４００Ｗである、ことを特徴とする請求項１に記載のｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤の調製方法。
ホスファチジルコリンリポソーム、ホスファチジルグリセロールリポソーム及びコレステロールのモル比は、（６０−８０）：（１０−１５）：（１０−２５）である、ことを特徴とする請求項１に記載のｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤の調製方法。
請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法により調製される、ｐＨ・酸素の二重感度磁気共鳴イメージング造影剤。