JP2021093930A - 細胞培養容器、細胞培養システム及びスフェロイド培養方法 - Google Patents

Abstract

【課題】細胞を培養場所に容易に配置することを可能にしつつ、細胞の培養時に培養液を循環させることが可能な細胞培養容器を提供する。【解決手段】細胞培養容器１０は、閉空間ＳＰを画する内壁面１１と、閉空間ＳＰに連通している第１入口１２及び第１出口１３とを備えている。内壁面１１は、ウェル１１ａａ及びウェル１１ａａに接続された溝１１ａｂが形成された第１面１１ａと、第１面１１ａと接触及び離間することが可能なように第１面１１ａに対向している第２面１１ｂとを有する。第１面１１ａと第２面１１ｂとが接触している状態において、第１入口１２及び第１出口１３が溝１１ａｂと第２面１１ｂとに画された流路１１ｃに接続されている。【選択図】図１

Description

本発明は、細胞培養容器、細胞培養システム及びスフェロイド培養方法に関する。

特許文献１（特開２０１９−４５号公報）には、スフェロイド培養に用いられる細胞培養バックが記載されている。特許文献１に記載の細胞培養バックにおいては、細胞バック内に細胞を含む培養液を供給するとともに、当該細胞を沈降させることにより、細胞がバックの下面に形成された凹部内に配置される。このように、特許文献１に記載の細胞培養バックによると、細胞を凹部内に容易に配置することができる。凹部内に配置された細胞は、培養されてスフェロイド（細胞集塊）となる。

特開２０１９−４５号公報

しかしながら、特許文献１に記載の細胞培養バックにおいては、細胞をスフェロイド培養する際に培養液を循環させることが想定されていない。また、特許文献１に記載の細胞培養バックにおいては、培養されたスフェロイドを取り出す際に、スフェロイドへのダメージをどのように軽減するかについて、特段の配慮がなされていない。

本発明は、第１に、細胞を培養場所に容易に配置することを可能にしつつ、細胞の培養時に培養液を循環させることが可能な細胞培養容器、細胞培養システム及びスフェロイド培養方法を提供する。本発明は、第２に、培養されたスフェロイドを取り出す際のダメージを軽減することが可能なスフェロイド培養方法を提供する。

本発明の一態様に係る細胞培養容器は、閉空間を画する内壁面と、閉空間に連通している第１入口及び第１出口とを備える。内壁面は、ウェル及びウェルに接続された溝が形成された第１面と、第１面と接触及び離間することが可能なように第１面に対向している第２面とを有する。第１面と第２面とが接触している状態において、第１入口及び第１出口が溝と第２面とに画された流路に接続されている。

本発明の一態様に係る細胞培養システムは、上記の細胞培養容器と、第１面から第２面に向かう方向において細胞培養容器を挟み込むように細胞培養容器に取り付けられた第１挟持部材及び第２挟持部材を有し、第１挟持部材と第２挟持部材との間隔が調整可能な挟持装置とを備える。

本発明の一態様に係るスフェロイド培養方法は、ウェル及びウェルに接続されている溝が形成された第１面と、第１面の鉛直上方に配置され、かつ第１面と対向している第２面とを含み、閉空間を画する内壁面を有する細胞培養容器を準備する工程と、細胞を含む第１液を閉空間内に供給するとともに、ウェル中に細胞を沈降させる工程と、閉空間内に第２液を流すことにより、ウェル中に沈降しなかった細胞を閉空間内から排出する工程と、
第１面と第２面とを接触させる工程と、第２面と溝とに画される流路に培養液である第３液を循環させることにより、ウェル中において細胞のスフェロイドを培養する工程とを備える。

本発明の他の態様に係るスフェロイド培養方法は、ウェルが形成された第１面と、第１面の鉛直上方に配置され、かつ第１面と対向している第２面とを含み、閉空間を画する内壁面を有する細胞培養容器を準備する工程と、ウェル中において細胞のスフェロイドを培養する工程と、スフェロイドが培養された後、第１面が第２面の鉛直上方に位置するように細胞培養容器を反転させることにより第２面上にスフェロイドを沈降させるとともに、第２面上に沈降したスフェロイドを閉空間内から取り出す工程とを備える。

本発明の一態様に係る細胞培養容器、細胞培養システム及びスフェロイド培養方法によると、細胞を培養場所に容易に配置することを可能にしつつ、細胞の培養時に培養液を循環させることが可能となる。本発明の他の態様に係るスフェロイド培養方法によると、培養されたスフェロイドを取り出す際のダメージを軽減することが可能となる。

第１面１１ａと第２面１１ｂとが離間している状態における細胞培養容器１０の断面図である。 第１面１１ａと第２面１１ｂとが接触している状態における細胞培養容器１０の断面図である。 第１板部材１６の第１主面１６ａ側から見た平面図である。 細胞培養容器２０の分解斜視図である。 第１面１１ａと第２面１１ｂとが離間している状態における細胞培養容器２０の断面図である。 第１面１１ａと第２面１１ｂとが接触している状態における細胞培養容器２０の断面図である。 細胞培養システム１００の概略図である。 挟持装置５０の模式図である。 実施形態に係るスフェロイド培養方法における工程図である。 細胞沈降工程Ｓ２における細胞培養システム１００の模式図である。 細胞除去工程Ｓ３における細胞培養システム１００の模式図である。 培養工程Ｓ４における細胞培養システム１００の模式図である。 スフェロイド取り出し工程Ｓ５における細胞培養システム１００の模式図である。

実施形態の詳細を、図面を参酌しながら説明する。以下の図面においては、同一又は相当する部分に同一の参照符号を付し、重複する説明は繰り返さない。

（実施形態に係る細胞培養容器の構成）
以下に、実施形態に係る細胞培養容器（以下「細胞培養容器１０」とする）の構成を説明する。

図１は、第１面１１ａと第２面１１ｂとが離間している状態における細胞培養容器１０の断面図である。図２は、第１面１１ａと第２面１１ｂとが接触している状態における細胞培養容器１０の断面図である。図１及び図２に示されるように、細胞培養容器１０は、内壁面１１と、第１入口１２と、第１出口１３とを有している。細胞培養容器１０は、第２入口１４と、第２出口１５とをさらに有していてもよい。

内壁面１１は、閉空間ＳＰを画している。内壁面１１は、第１面１１ａと、第２面１１ｂとを有している。第１面１１ａ及び第２面１１ｂは、対向している。第１面１１ａ及び第２面１１ｂは、接触及び離間が可能になっている。第１入口１２、第１出口１３、第２入口１４及び第２出口１５は、閉空間ＳＰに連通している。

細胞培養容器１０は、例えば、第１板部材１６と、第２板部材１７と、フィルム部材１８とにより構成されている。第１板部材１６は、第１主面１６ａを有している。第２板部材１７は、第２主面１７ａを有している。第１板部材１６及び第２板部材１７は、第１主面１６ａ及び第２主面１７ａが互いに対向するように配置されている。

フィルム部材１８は、第１主面１６ａと第２主面１７ａとの間の空間を閉塞するように第１板部材１６及び第２板部材１７に取り付けられている。これにより、閉空間ＳＰが画されている。

フィルム部材１８は、例えばシリコーンゴムのように可撓性がある材料により形成されている。これにより、第１主面１６ａと第２主面１７ａとは、接触及び離間が可能になっている。第１主面１６ａ及び第２主面１７ａは、それぞれ、第１面１１ａ及び第２面１１ｂに対応している。

第１面１１ａには、ウェル１１ａａ及び溝１１ａｂが形成されている。ウェル１１ａａの数は、例えば、複数である。第１面１１ａは、ウェル１１ａａ及び溝１１ａｂが形成されている位置において、窪んでいる。ウェル１１ａａは、溝１１ａｂよりも深い。第１面１１ａと第２面１１ｂとが接触している状態において、溝１１ａｂと第２面１１ｂは、流路１１ｃを画している。溝１１ａｂがウェル１１ａａに接続されているため、流路１１ｃもウェル１１ａａに接続されている。

図３は、第１板部材１６の第１主面１６ａ側から見た平面図である。図３に示されるように、ウェル１１ａａは、平面視において、例えば千鳥格子状に配列されている。溝１１ａｂは、隣り合うウェル１１ａａの間を延在しているとともに、ウェル１１ａａに接続されている。

図１及び図２に示されるように、第１入口１２及び第１出口１３は、第２板部材１７を厚さ方向に貫通している。これにより、第１入口１２及び第１出口１３は、閉空間ＳＰに連通されている。第１入口１２及び第１出口１３は、第１面１１ａと第２面１１ｂとが接触している状態において流路１１ｃに接続されている。すなわち、第１面１１ａと第２面１１ｂとが接触している状態において、第１入口１２から供給される液体は、流路１１ｃを流れ、第１出口１３から排出される。

第２入口１４及び第２出口１５は、フィルム部材１８を厚さ方向に貫通している。これにより、第２入口１４及び第２出口１５は、閉空間ＳＰに連通されている。なお、第２入口１４及び第２出口１５は、必ずしもフィルム部材１８に形成される必要はない。

第２入口１４から供給される液体は、第１面１１ａと第２面１１ｂとが離間している状態においては、第１面１１ａと第２面１１ｂとの間の空間を通過して第２出口１５に向かう。しかしながら、第１面１１ａと第２面１１ｂ接触している状態においては、第２入口１４から液体が供給されても、当該液体は、第１面１１ａと第２面１１ｂとの間の空間を通過することはできない。

第１入口１２及び第１出口１３は、第１板部材１６に形成されていてもよい。第１入口１２を第２板部材１７（第１板部材１６）に形成する一方で、第１出口１３を第１板部材１６（第２板部材１７）に形成してもよい。つまり、第１入口１２及び第１出口１３は、少なくとも第１面１１ａと第２面１１ｂとが接触している状態において、流路１１ｃに接続される位置に形成されていれば足りる。

＜実施形態の変形例に係る細胞培養容器＞
以下に、実施形態の変形例に係る細胞培養容器（以下「細胞培養容器２０」とする）の構成を説明する。ここでは、細胞培養容器１０の構成と異なる点を主に説明し、重複する説明は繰り返さないものとする。

細胞培養容器２０の構成は、第１面１１ａ及び第２面１１ｂを含み、閉空間ＳＰを画している内壁面１１と、閉空間ＳＰに連通している第１入口１２、第１出口１３、第２入口１４及び第２出口１５とを有している点に関して、細胞培養容器１０の構成と共通している。

図４は、細胞培養容器２０の分解斜視図である。図５は、第１面１１ａと第２面１１ｂとが離間している状態における細胞培養容器２０の断面図である。図６は、第１面１１ａと第２面１１ｂとが接触している状態における細胞培養容器２０の断面図である。図４、図５及び図６に示されるように、細胞培養容器２０の構成は、第３板部材２１と、蓋部材２２と、取り付け部材２３とにより構成されている点に関して、細胞培養容器１０の構成と異なっている。

第３板部材２１は、第３主面２１ａを有している。第３主面２１ａの中央には、凹部２１ｂが形成されている。凹部２１ｂは、平面視において、矩形形状を有している。凹部２１ｂの底面は、第１面１１ａに対応している。

蓋部材２２は、凹部２１ｂを閉塞するように、第３板部材２１に取り付けられている。これにより、閉空間ＳＰが画されている。蓋部材２２は、中央部２２ａと、周縁部２２ｂとを有している。中央部２２ａは、平面視において、矩形形状を有しており、蓋部材２２の中央に位置している。周縁部２２ｂは、中央部２２ａから張り出しており、凹部２１ｂの周囲にある第３主面２１ａに取り付けられている。

第３板部材２１側を向く中央部２２ａの面は、第２面１１ｂに対応している。蓋部材２２は、例えば、シリコーンゴムのように可撓性のある材料により形成されている。そのため、中央部２２ａを第３板部材２１に向かって押下することにより、第３板部材２１側を向く中央部２２ａの面（第２面１１ｂ）と凹部２１ｂの底面（第１面１１ａ）とが接触するとともに、中央部２２ａに加えられた押下力を除くことにより、第３板部材２１側を向く中央部２２ａの面と凹部２１ｂの底面とが離間する。

第１入口１２及び第１出口１３は、中央部２２ａを厚さ方向に貫通することにより、閉空間ＳＰと連通している。第１入口１２及び第１出口１３は、第３板部材２１側を向く中央部２２ａの面と凹部２１ｂの底面とが接触している状態において、流路１１ｃに接続されている。なお、細胞培養容器２０においては、流路１１ｃは、第３板部材２１側を向く中央部２２ａの面と凹部２１ｂの底面に形成された溝１１ａｂにより画されている。

第２入口１４及び第２出口１５は、凹部２１ｂと蓋部材２２とにより画された閉空間ＳＰに連通するように、例えば第３板部材２１の側面に形成されている。

取り付け部材２３は、例えば、平板状の部材である。取り付け部材２３の中央には、取り付け部材２３を厚さ方向に貫通している穴２３ａが形成されている。穴２３ａは、例えば、矩形形状を有している。穴２３ａには、中央部２２ａが挿入されている。取り付け部材２３は、蓋部材２２（周縁部２２ｂ）を介在させて第３主面２１ａに固定されている。この固定は、例えば、ネジ止めにより行われる。これにより、蓋部材２２が第３主面２１ａに取り付けられることになる。

（実施形態に係る細胞培養システムの構成）
以下に、実施形態に係る細胞培養システム（以下「細胞培養システム１００」とする）の構成を説明する。

図７は、細胞培養システム１００の概略図である。図７に示されるように、細胞培養システム１００は、細胞培養容器１０と、第１チューブ３１、第２チューブ３２、第３チューブ３３、第４チューブ３４、第５チューブ３５、第６チューブ３６及び第７チューブ３７と、第１コネクタ３８及び第２コネクタ３９と、第１ポンプ４０及び第２ポンプ４１とを有している。図７において図示されていないが、細胞培養システム１００は、挟持装置５０（図８参照）をさらに有している。

第１チューブ３１は、一方端において、第１入口１２に接続されている。第２チューブ３２は、一方端において、第１出口１３に接続されている。第１チューブ３１及び第２チューブ３２の他方端は、第３容器４４に接続されている。第３容器４４には、第３液が貯留されている。第３液は、培養液である。

第３チューブ３３は、一方端において、第２入口１４に接続されている。第３チューブ３３は、他方端において、第１コネクタ３８に接続されている。第４チューブ３４及び第５チューブ３５は、一方端において、第１コネクタ３８に接続されている。第４チューブ３４を流れる液は第１コネクタ３８を介して第３チューブ３３へと流れ、第５チューブ３５を流れる液は第１コネクタ３８を介して第３チューブ３３へと流れる。

第４チューブ３４の他方端は、第１容器４２に接続されている。第１容器４２には、第１液が貯留されている。第１液は、例えば、細胞を含有している培養液である。なお、第１液は、細胞を含有している緩衝液であってもよい。第５チューブ３５の他方端は、第２容器４３に接続されている。第２容器４３には、第２液が貯留されている。第２液は、緩衝液又は培養液である。

第２コネクタ３９は、第２出口１５に接続されている。第６チューブ３６及び第７チューブ３７は、一方端において、第２コネクタ３９に接続されている。第２出口１５を流れる液は、第２コネクタ３９を介して第６チューブ３６及び第７チューブ３７へと流れる。第６チューブ３６の他方端は、第４容器４５に接続されている。第７チューブ３７の他方端は、第５容器４６に接続されている。

第１ポンプ４０は、第３チューブ３３に取り付けられている。第２ポンプ４１は、第１チューブ３１に取り付けられている。第１ポンプ４０及び第２ポンプ４１は、例えばチューブポンプである。

上記においては、細胞培養容器１０が第２入口１４及び第２出口１５を有している例を説明したが、細胞培養容器１０が第２入口１４を有していない場合、例えば、第１入口１２に三方弁を接続するとともに、当該三方弁に第１チューブ３１及び第３チューブ３３をそれぞれ接続すればよい。同様にして、細胞培養容器１０が第２出口１５を有していない場合、例えば、第１出口１３に三方弁を接続するとともに、当該三方弁に第２チューブ３２及び第２コネクタ３９をそれぞれ接続すればよい。

図８は、挟持装置５０の模式図である。図８に示されるように、挟持装置５０は、第１挟持部材５１及び第２挟持部材５２と、第１柱部材５３及び第２柱部材５４とを有している。第１挟持部材５１及び第２挟持部材５２は、例えば、平板状の部材である。第１挟持部材５１及び第２挟持部材５２は、第１面１１ａから第２面１１ｂに向かう方向において細胞培養容器１０を挟み込むように、細胞培養容器１０に取り付けられている。

第１柱部材５３及び第２柱部材５４は、第１面１１ａから第２面１１ｂに向かう方向に沿って延在している柱状の部材である。第１柱部材５３及び第２柱部材５４は、一方端において、第１挟持部材５１に取り付けられている。

第２挟持部材５２には、第２挟持部材５２を厚さ方向に貫通している穴５２ａ及び穴５２ｂが形成されている。穴５２ａ及び穴５２ｂには、それぞれ、第１柱部材５３及び第２柱部材５４が挿入されている。

これにより、第２挟持部材５２が、第１面１１ａから第２面１１ｂに向かう方向及び第２面１１ｂから第１面１１ａに向かう方向に沿って、スライド可能になっている。第２挟持部材５２を第１挟持部材５１に対してスライドさせることにより、第１面１１ａと第２面１１ｂとの間の間隔が調整可能になっている。このことを別の観点から言えば、第２挟持部材５２を第１挟持部材５１に対してスライドさせることにより、第１面１１ａと第２面１１ｂとを接触又は離間させることができる。

上記の例においては、細胞培養システム１００に細胞培養容器１０を用いられたが、細胞培養システム１００においては、細胞培養容器１０に代えて、細胞培養容器２０が用いられてもよい。

（実施形態に係るスフェロイド培養方法）
以下に、実施形態に係るスフェロイド培養方法を説明する。

図９は、実施形態に係るスフェロイド培養方法における工程図である。図９に示されるように、スフェロイド培養方法は、準備工程Ｓ１と、細胞沈降工程Ｓ２と、細胞除去工程Ｓ３と、培養工程Ｓ４と、スフェロイド取り出し工程Ｓ５とを有している。

準備工程Ｓ１においては、細胞培養容器１０を含む細胞培養システム１００が準備される。なお、準備工程Ｓ１において、細胞培養容器１０は、第２面１１ｂが第１面１１ａの鉛直上方に位置するように配置されている。また、準備工程Ｓ１において、第１面１１ａと第２面１１ｂとは、離間している。

図１０は、細胞沈降工程Ｓ２における細胞培養システム１００の模式図である。図１０に示されるように、細胞沈降工程Ｓ２においては、クリップ４７により、第１チューブ３１、第２チューブ３２、第５チューブ３５、第６チューブ３６及び第７チューブ３７中における液の流れが止められている。

この状態で第１ポンプ４０を駆動することにより、第１液が、第４チューブ３４、第１コネクタ３８、第３チューブ３３及び第２入口１４を通って、閉空間ＳＰの内部に供給される。閉空間ＳＰの内部に第１液が供給された状態で時間が経過すると、第１液に含まれている細胞が重力によりウェル１１ａａ中に沈降される。

図１１は、細胞除去工程Ｓ３における細胞培養システム１００の模式図である。図１１に示されるように、細胞除去工程Ｓ３においては、クリップ４７により、第１チューブ３１、第２チューブ３２、第４チューブ３４及び第７チューブ３７中における液の流れが止められている。

この状態で第１ポンプ４０を駆動することにより、第２液が、第５チューブ３５、第１コネクタ３８、第３チューブ３３及び第２入口１４を通って閉空間ＳＰの内部に供給されるとともに、第２出口１５、第２コネクタ３９及び第６チューブ３６を通って閉空間ＳＰから排出される。これに伴い、細胞沈降工程Ｓ２においてウェル１１ａａ中に沈降しなかった細胞が、閉空間ＳＰ内から排出され、第４容器４５に貯められる。

図１２は、培養工程Ｓ４における細胞培養システム１００の模式図である。図１２に示されるように、培養工程Ｓ４においては、第１面１１ａと第２面１１ｂとが接触される。また、培養工程Ｓ４においては、クリップ４７により、第３チューブ３３、第４チューブ３４、第６チューブ３６及び第７チューブ３７中における液の流れが止められている。

この状態で第２ポンプ４１を駆動することにより、第３液が、第１チューブ３１及び第１入口１２を通って流路１１ｃに供給されるとともに、流路１１ｃ、第１出口１３及び第２チューブ３２を通って第３容器４４に戻る。このように、培養工程Ｓ４においては、第１面１１ａと第２面１１ｂとが接触した状態において、流路１１ｃに第３液を流すことにより、流路１１ｃに接続されているウェル１１ａａ中の細胞に第３液に含まれる養分、酸素等が供給され、ウェル１１ａａ中において細胞がスフェロイド培養される。

図１３は、スフェロイド取り出し工程Ｓ５における細胞培養システム１００の模式図である。図１３に示されるように、スフェロイド取り出し工程Ｓ５においては、第１面１１ａと第２面１１ｂとが離間される。また、スフェロイド取り出し工程Ｓ５においては、細胞培養容器１０が、第１面１１ａが第２面１１ｂの鉛直上方に位置するように反転されている。この状態で時間が経過すると、ウェル１１ａａ中において培養されたスフェロイドが、重力により第２面１１ｂ上に沈降する。

さらに、スフェロイド取り出し工程Ｓ５においては、クリップ４７により、第１チューブ３１、第２チューブ３２、第４チューブ３４及び第６チューブ３６中における液の流れが止められている。この状態で第１ポンプ４０を駆動することにより、第２液が、第５チューブ３５、第１コネクタ３８、第３チューブ３３及び第２入口１４を通って閉空間ＳＰの内部に供給されるとともに、第２出口１５、第２コネクタ３９及び第６チューブ３６を通って閉空間ＳＰから排出される。これに伴い、第２面１１ｂ上に沈降したスフェロイドが、閉空間ＳＰ内から排出され、第５容器４６に貯められる。

（実施形態に係る細胞培養容器の効果）
以下に、細胞培養容器１０の効果を説明する。

細胞培養容器１０においては、第１面１１ａと第２面１１ｂとが離間している状態において、第１液を閉空間ＳＰ内に供給して第１液中の細胞をウェル１１ａａ中に沈降させるとともに、ウェル１１ａａ中に沈降されなかった細胞を閉空間ＳＰ内に第２液を供給して除去することにより、細胞を培養が行われる位置（すなわち、ウェル１１ａａ中）に容易に配置することができる。

細胞培養容器１０においては、第１面１１ａと第２面１１ｂとが離間している状態において、第１入口１２及び第１出口１３がウェル１１ａａに接続された流路１１ｃに接続されているため、第３液（培養液）を循環させながら、スフェロイド培養を行うことができる。なお、培養液が間欠的にしか交換されない場合、培養される細胞の周囲において、細胞から放出された老廃物の蓄積、細胞の周囲における酸素、養分等の不足が生じる。そのため、細胞培養容器１０を用いることにより、スフェロイド培養の安定性が高まる。

また、細胞培養容器１０を用いたスフェロイド培養においては、培養場所への細胞の配置、スフェロイド培養及びスフェロイドの取り出しが全て閉空間内において行うことが可能であるため、細胞培養容器の外部に付着した細菌等の異物がスフェロイドに混入することを抑制することができる。

（実施形態に係るスフェロイド培養方法の効果）
実施形態に係るスフェロイド培養方法においては、細胞沈降工程Ｓ２及び細胞除去工程Ｓ３が行われることにより、細胞を培養が行われる位置（すなわち、ウェル１１ａａ中）に容易に配置することができる。また、スフェロイド培養方法においては、培養工程Ｓ４において、培養液を循環させながら細胞の培養を行うことができる。

実施形態に係るスフェロイド培養方法においては、培養場所への細胞の配置（細胞沈降工程Ｓ２、細胞除去工程Ｓ３）、スフェロイド培養（培養工程Ｓ４）及びスフェロイドの取り出し（スフェロイド取り出し工程Ｓ５）を全て閉空間内において行うことが可能であるため、細胞培養容器の外部に付着した細菌等の異物がスフェロイドに混入することを抑制することができる。

＜スフェロイド取り出し工程Ｓ５の効果＞
スフェロイド取り出し工程Ｓ５においては、ウェル１１ａａ中において培養されたスフェロイドを、重力の作用により第２面１１ｂ上に緩やかに沈降する。第２面１１ｂ上にスフェロイドが沈降されれば、スフェロイドを液（第２液）の流れ等により器具（例えば、ピペット等）を用いることなく取り出すことができる。このように、スフェロイド取り出し工程Ｓ５によると、取り出し過程において培養したスフェロイドにダメージが加わることを抑制できる。

以上のように本発明の実施形態について説明を行ったが、上述の実施形態を様々に変形することも可能である。また、本発明の範囲は、上述の実施形態に限定されるものではない。本発明の範囲は、特許請求の範囲によって示され、特許請求の範囲と均等の意味及び範囲内での全ての変更を含むことが意図される。

１０，２０ 細胞培養容器、１１ 内壁面、１１ａ 第１面、１１ａａ ウェル、１１ａｂ 溝、１１ｂ 第２面、１１ｃ 流路、１２ 第１入口、１３ 第１出口、１４ 第２入口、１５ 第２出口、１６ 第１板部材、１６ａ 第１主面、１７ 第２板部材、１７ａ 第２主面、１８ フィルム部材、２１ 第３板部材、２１ａ 第３主面、２１ｂ 凹部、２２ 蓋部材、２２ａ 中央部、２２ｂ 周縁部、２３ 取り付け部材、２３ａ 穴、３１ 第１チューブ、３２ 第２チューブ、３３ 第３チューブ、３４ 第４チューブ、３５ 第５チューブ、３６ 第６チューブ、３７ 第７チューブ、３８ 第１コネクタ、３９ 第２コネクタ、４０ 第１ポンプ、４１ 第２ポンプ、４２ 第１容器、４３ 第２容器、４４ 第３容器、４５ 第４容器、４６ 第５容器、４７ クリップ、５０ 挟持装置、５１ 第１挟持部材、５２ 第２挟持部材、５２ａ，５２ｂ 穴、５３ 第１柱部材、５４ 第２柱部材、１００ 細胞培養システム、２０１９ 特開、Ｓ１ 準備工程、Ｓ２ 細胞沈降工程、Ｓ３ 細胞除去工程、Ｓ４ 培養工程、Ｓ５ スフェロイド取り出し工程、ＳＰ 閉空間。

Claims (7)

1. 閉空間を画する内壁面と、前記閉空間に連通している第１入口及び第１出口とを備え、
   前記内壁面は、ウェル及び前記ウェルに接続された溝が形成された第１面と、前記第１面と接触及び離間することが可能なように前記第１面に対向している第２面とを有し、
   前記第１面と前記第２面とが接触している状態において、前記第１入口及び前記第１出口が前記溝と前記第２面とに画された流路に接続されている、細胞培養容器。
2. 前記閉空間に連通している第２入口及び第２出口をさらに備える、請求項１に記載の細胞培養容器。
3. 請求項２に記載の前記細胞培養容器と、
   前記第１面から前記第２面に向かう方向において前記細胞培養容器を挟み込むように前記細胞培養容器に取り付けられた第１挟持部材及び第２挟持部材を有し、前記第１挟持部材と前記第２挟持部材との間隔が調整可能な挟持装置とを備える、細胞培養システム。
4. ウェル及び前記ウェルに接続されている溝が形成された第１面と、前記第１面の鉛直上方に配置され、かつ前記第１面と対向している第２面とを含み、閉空間を画する内壁面を有する細胞培養容器を準備する工程と、
   細胞を含む第１液を前記閉空間内に供給するとともに、前記ウェル中に前記細胞を沈降させる工程と、
   前記閉空間内に第２液を流すことにより、前記ウェル中に沈降しなかった前記細胞を前記閉空間内から排出する工程と、
   前記第１面と前記第２面とを接触させる工程と、
   前記第２面と前記溝とに画される流路に培養液である第３液を循環させることにより、前記ウェル中において前記細胞のスフェロイドを培養する工程とを備えた、スフェロイド培養方法。
5. 前記スフェロイドが培養された後に、前記第１面と前記第２面とを離間させる工程と、
   前記第１面と前記第２面とが離間している状態において前記第１面が前記第２面の鉛直上方に位置するように前記細胞培養容器を反転させることにより、前記第２面上に前記スフェロイドを沈降させる工程と、
   前記第２液を前記閉空間内に流すことにより、前記第２面上に沈降した前記スフェロイドを前記閉空間内から取り出す工程とをさらに備えた、請求項４に記載のスフェロイド培養方法。
6. 前記細胞培養容器は、前記閉空間に連通しており、前記第１面と前記第２面とが接触した状態において前記流路に接続する第１入口及び第１出口と、前記第１面と前記第２面とが離間している状態においてのみ前記閉空間を介して互いに接続される第２入口及び第２出口をさらに有し、
   前記第１液及び前記第２液は、前記第２入口を介して前記閉空間に供給され、
   前記第３液は、前記第１入口を介して前記流路に供給される、請求項４又は請求項５に記載のスフェロイド培養方法。
7. ウェルが形成された第１面と、前記第１面の鉛直上方に配置され、かつ前記第１面と対向している第２面とを含み、閉空間を画する内壁面を有する細胞培養容器を準備する工程と、
   前記ウェル中において細胞のスフェロイドを培養する工程と、
   前記スフェロイドが培養された後、前記第１面が前記第２面の鉛直上方に位置するように前記細胞培養容器を反転させることにより前記第２面上に前記スフェロイドを沈降させるとともに、前記第２面上に沈降した前記スフェロイドを前記閉空間内から取り出す工程とを備えた、スフェロイド培養方法。

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