JP2020535401A - 神経障害のバイオマーカーとしてインフラマソームタンパク質を検出するための方法 - Google Patents

神経障害のバイオマーカーとしてインフラマソームタンパク質を検出するための方法 Download PDF

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Abstract

本発明は、対象からの試料中のインフラマソームの成分を、多発性硬化症、脳卒中または外傷性脳傷害などの脳傷害についてのマーカーとして検出するための組成物および方法を提供する。そのようなインフラマソームマーカーを使用して、多発性硬化症、脳卒中、軽度認知機能障害または外傷性脳傷害などの脳傷害を有する対象について、予後を決定し、処置を指示し、処置に対する応答を監視する方法も記載する。本明細書において、さまざまな神経学的または精神医学的状態およびそれらの使用の方法に対する高感度および特異度を有するバイオマーカーとして有用なインフラマソーム成分を提示する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１８年７月１１日に出願された米国仮出願第６２／６９６，５４９号、および２０１７年９月２０日に出願された米国仮出願第６２／５６０，９６３号に基づく優先権の利益を主張し、これらはそれぞれ、すべての目的について、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
連邦政府の支援を受けた研究についての陳述
本発明は、国立衛生研究所によって付与された、助成金番号５Ｒ４２ＮＳ０８６２７４−０３およびＮＳ０８６２７４の米国政府の支援により行われた。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。
分野
本発明は、一般に、免疫学および医学の分野に関する。より詳細には、本発明は、哺乳動物から得られた試料中の、ＡＳＣ（カスパーゼ活性化動員ドメイン（ＣＡＲＤ）を含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質）活性、カスパーゼ−１、ＩＬ−１８、ＩＬ−１β、ＮＯＤ様受容体（ＮＬＲ）およびＡｂｓｅｎｔ ｉｎ Ｍｅｌａｎｏｍａ２（ＡＩＭ２）様受容体（ＡＬＲ）ならびに他のインフラマソームタンパク質を、多発性硬化症（ＭＳ）、脳卒中、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）または外傷性脳傷害（ＴＢＩ）などの神経障害についてのバイオマーカーとして検出するための組成物および方法に関する。
配列表に関する陳述
本出願に関連する配列表は、紙コピーの代わりにテキストフォーマットで提供し、これにより参照により本明細書に組み込まれる。配列表を含有するテキストファイルの名称は、ＵＮＭＩ＿０１４＿００ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔである。テキストファイルは、約１．１ＫＢであり、２０１８年９月２０日に作成されたものであり、ＥＦＳ−Ｗｅｂを介して電子的に提出されている。
背景
多発性硬化症（ＭＳ）は、中枢神経系（ＣＮＳ）に影響を与える進行性の自己免疫障害である。病理学的には、これは、脊髄および脳における脱髄、ならびに炎症性病変の存在によって特徴付けられる（Compston A. The pathogenesis and basis for treatment in multiple sclerosis. Clin Neurol Neurosurg. 2004;106:246-8）。臨床的には、ＭＳを有する患者には、霧視、筋力低下、疲労、眩暈、ならびにバランスおよびゲートの問題が存在する（Compston A. The pathogenesis and basis for treatment in multiple sclerosis. Clin Neurol Neurosurg. 2004;106:246-8）。米国単独では、ＭＳを有する４００，０００人の患者が、世界では約２００万人の患者がいる（Compston A. The pathogenesis and basis for treatment in multiple sclerosis. Clin Neurol Neurosurg. 2004;106:246-8）。
１９６０年代から、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇのオリゴクローナルバンド（ＯＣＢ）は、ＭＳの診断において、古典的なバイオマーカーとして使用されてきた（Stangel M, Fredrikson S, Meinl E, Petzold A, Stuve O and Tumani H. The utility of cerebrospinal fluid analysis in patients with multiple sclerosis. Nat Rev Neurol. 2013;9:267-76）。しかしながら、ＩｇＧ−ＯＣＢの特異度は、たった６１％であり、結果として、他の診断基準が、ＭＳの診断を臨床的に決定するために必要であり（Teunissen CE, Malekzadeh A, Leurs C, Bridel C and Killestein J. Body fluid biomarkers for multiple sclerosis--the long road to clinical application. Nat Rev Neurol. 2015;11:585-96）、現在のところ、ＣＳＦ限定ＩｇＧ−ＯＣＢは、ＭＲＩとは独立に、ＣＩＳからＣＤＭＳへの変換のための良好な予測因子である（Tintore M, Rovira A, Rio J, Tur C, Pelayo R, Nos C, Tellez N, Perkal H, Comabella M, Sastre-Garriga J and Montalban X. Do oligoclonal bands add information to MRI in first attacks of multiple sclerosis? Neurology. 2008;70:1079-83）。同様の結果は、ＩｇＭ−ＯＣＢを分析する場合に得られている（Villar LM, Masjuan J, Gonzalez-Porque P, Plaza J, Sadaba MC, Roldan E, Bootello A and Alvarez-Cermeno JC. Intrathecal IgM synthesis predicts the onset of new relapses and a worse disease course in MS. Neurology. 2002;59:555-9）。ＭＳの分野における研究の重要な領域は、ＭＳが発生する危険性がある者を予測するための適切なバイオマーカー、疾患の進行または悪化のバイオマーカー、ならびに処置の応答および予後のバイオマーカーの特定である。
毎年、１７５０万人が心臓血管疾患に関して死亡しており、そのうち、６７０万人が脳卒中の結果として起こる（Mendis S, Davis S and Norrving B. Organizational update: the world health organization global status report on noncommunicable diseases 2014; one more landmark step in the combat against stroke and vascular disease. Stroke. 2015;46:e121-2）。脳卒中バイオマーカーのいくつかの大規模な研究があったにもかかわらず、現在のところ、脳卒中の患者のケアにおいて使用されるゴールドスタンダードのバイオマーカーであるものはない。脳卒中に対して高感度および高特異度を提供するバイオマーカーについての必要性が依然として存在する。
米国疾病管理センター（「ＣＤＣ」）は、外傷性脳傷害（「ＴＢＩ」）を「頭部への衝突、打撃もしくは衝撃、または貫通する頭部傷害によって引き起こされ得る脳の正常な機能の破壊として」定義している。２０１０年現在で、ＣＤＣは、米国において、１００，０００個体あたり、８２３．７人のＴＢＩ関連の救急外来受診、入院および死亡を記録している（米国疾病管理センター「外傷性脳傷害および脳震とうウェブサイト」https://www.cdc.gov/traumaticbraininjury/index.html（２０１８年６月２１日現在））。ＴＢＩの分野における研究の重要な領域は、ＴＢＩが発生する危険性に対する適切なバイオマーカー、疾患の診断、進行または悪化のバイオマーカー、ならびに処置の応答および予後のバイオマーカーの特定である。インフラマソームにおける以前の研究は、インフラマソームタンパク質を外傷性脳傷害後のバイオマーカーとして使用することができることを示している。インフラマソームは、カスパーゼ−１の活性化ならびに炎症性サイトカインであるＩＬ−１ベータおよびＩＬ１８のプロセシングに関与する先天性免疫応答の多タンパク質複合体である。インフラマソームは、とりわけ脳および脊髄への傷害後の炎症応答に寄与する。
Compston A. The pathogenesis and basis for treatment in multiple sclerosis. Clin Neurol Neurosurg. 2004;106:246-8 Stangel M, Fredrikson S, Meinl E, Petzold A, Stuve O and Tumani H. The utility of cerebrospinal fluid analysis in patients with multiple sclerosis. Nat Rev Neurol. 2013;9:267-76 Teunissen CE, Malekzadeh A, Leurs C, Bridel C and Killestein J. Body fluid biomarkers for multiple sclerosis--the long road to clinical application. Nat Rev Neurol. 2015;11:585-96 Tintore M, Rovira A, Rio J, Tur C, Pelayo R, Nos C, Tellez N, Perkal H, Comabella M, Sastre-Garriga J and Montalban X. Do oligoclonal bands add information to MRI in first attacks of multiple sclerosis? Neurology. 2008;70:1079-83 Villar LM, Masjuan J, Gonzalez-Porque P, Plaza J, Sadaba MC, Roldan E, Bootello A and Alvarez-Cermeno JC. Intrathecal IgM synthesis predicts the onset of new relapses and a worse disease course in MS. Neurology. 2002;59:555-9 Mendis S, Davis S and Norrving B. Organizational update: the world health organization global status report on noncommunicable diseases 2014; one more landmark step in the combat against stroke and vascular disease. Stroke. 2015;46:e121-2 https://www.cdc.gov/traumaticbraininjury/index.html（２０１８年６月２１日現在）
目的の多くは、正常な老化および認知症もしくはアルツハイマー病（ＡＤ）の間の境界または移行状態の論題に関して発生している。この状態は、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）、初期認知症および分離性記憶機能障害を含むいくつかの記述語を受け入れている。軽度認知機能障害（ＭＣＩ）を有する対象は、年齢および教育について予期されるものを超える記憶機能障害を有するが、まだ認知症ではない。これらの対象は、多くの予測研究および早期介入治験の焦点となっている。しかしながら、ＭＣＩについての診断基準は、一般に解明されておらず、バイオマーカーの存在を欠いている。
このように、本明細書において、上記で特定された必要性に対処するために、さまざまな神経学的または精神医学的状態およびそれらの使用の方法に対する高感度および特異度を有するバイオマーカーとして有用なインフラマソーム成分を提示する。
概要
一態様では、本明細書において、多発性硬化症（ＭＳ）を有すると疑われる患者を評価する方法であって、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；ＭＳに関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、前記タンパク質シグネチャーが、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および前記患者が前記タンパク質シグネチャーの存在を示す場合、ＭＳを有するとして前記患者を選択するステップを含む方法を提供する。一部の場合では、前記患者が、ＭＳと一致する臨床症状を呈する。一部の場合では、前記ＭＳが、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）、一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）または進行再発型ＭＳ（ＰＲＭＳ）である。一部の場合では、前記患者から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である。一部の場合では、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−１ベータ、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１、ＩＬ−１８、ＩＬ−１ベータおよびＡＳＣのそれぞれを含む。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む。一部の場合では、前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する。一部の場合では、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照から得られた生体試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する。一部の場合では、前記対照から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である。一部の場合では、前記対照が、健康な個体であり、前記健康な個体が、ＭＳと一致する臨床症状を呈さない個体である。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、ＡＳＣの前記レベルが、対照から得られた前記生体試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも５０％高い。一部の場合では、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する。一部の場合では、患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む。一部の場合では、前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表７から選択される。一部の場合では、前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される。
別の態様では、本明細書において、脳卒中を患っていると疑われる患者を評価する方法であって、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；脳卒中または脳卒中関連傷害に関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、前記タンパク質シグネチャーが、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および前記患者が前記タンパク質シグネチャーの存在を示す場合、脳卒中を患っているとして前記患者を選択するステップを含む方法を提供する。一部の場合では、前記患者が、脳卒中と一致する臨床症状を呈し、前記脳卒中が、虚血性脳卒中、一過性虚血性脳卒中または出血性脳卒中である。一部の場合では、前記患者から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である。一部の場合では、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−１ベータ、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１、ＩＬ−１８、ＩＬ−１ベータおよびＡＳＣのそれぞれを含む。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む。一部の場合では、前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する。一部の場合では、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照から得られた生体試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する。一部の場合では、前記対照から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である。一部の場合では、前記対照が、健康な個体であり、前記健康な個体が、ＭＳと一致する臨床症状を呈さない個体である。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、前記対象から得られた血清試料中のＡＳＣの前記レベルが、対照から得られた血清試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも７０％高い。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、前記対象から得られた血清由来ＥＶ試料中のＡＳＣの前記レベルが、対照から得られた血清由来ＥＶ試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも１１０％高い。一部の場合では、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する。一部の場合では、患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも１００％の感度、および少なくとも９５％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む。一部の場合では、前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表８から選択される。一部の場合では、患者から得られた前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも１００％の感度、および少なくとも１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む。一部の場合では、前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表９から選択される。一部の場合では、前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される。
なお別の態様では、本明細書において、多発性硬化症（ＭＳ）と診断された患者を処置する方法であって、前記患者に、ＭＳのための標準ケアの処置を投与するステップを含み、ＭＳの診断が、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を検出することによって行われた、方法を提供する。一部の場合では、前記ＭＳが、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）、一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）または進行再発型ＭＳ（ＰＲＭＳ）である。一部の場合では、前記標準ケアの処置が、疾患転帰の修正、再発の管理、症状の管理またはそれらの任意の組合せを対象とする治療から選択される。一部の場合では、疾患転帰の修正を対象とする前記治療が、ベータ−インターフェロン、酢酸グラチラマー、フィンゴリモド、テリフルノミド、フマル酸ジメチル、ミトキサントロン、オクレリズマブ、アレムツズマブ、ダクリズマブおよびナタリズマブから選択される。
さらに別の態様では、本明細書において、脳卒中または脳卒中関連傷害と診断された患者を処置する方法であって、前記患者に、脳卒中または脳卒中関連傷害のための標準ケアの処置を投与するステップを含み、脳卒中または脳卒中関連傷害の診断が、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を検出することによって行われた、方法を提供する。一部の場合では、前記脳卒中が、虚血性脳卒中、一過性虚血性脳卒中または出血性脳卒中である。一部の場合では、前記脳卒中が、虚血性脳卒中または一過性虚血性脳卒中であり、前記標準ケアの処置が、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、抗血小板薬、抗凝固薬、頸動脈血管形成術、頸動脈内膜剥離術、動脈内血栓溶解および脳虚血における機械的血塊除去（ＭＥＲＣＩ）またはこれらの組合せから選択される。一部の場合では、前記脳卒中が、出血性脳卒中であり、前記標準ケアの処置が、動脈瘤クリッピング、コイル塞栓術または動静脈奇形（ＡＶＭ）修復である。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルの上昇が、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１、ＩＬ−１８およびＡＳＣである。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣである。一部の場合では、前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する。一部の場合では、前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である。
なおさらなる態様では、本明細書において、外傷性脳傷害（ＴＢＩ）を有すると疑われる患者を評価する方法であって、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；ＴＢＩに関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、前記タンパク質シグネチャーが、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および前記患者が前記タンパク質シグネチャーの存在を示す場合、ＴＢＩを有するとして前記患者を選択するステップを含む方法を提供する。一部の場合では、前記患者が、ＴＢＩと一致する臨床症状を呈する。一部の場合では、前記患者から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である。一部の場合では、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−１β、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含む。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む。一部の場合では、前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する。一部の場合では、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照から得られた生体試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する。一部の場合では、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含み、カスパーゼ−１の前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のカスパーゼ−１の前記レベルよりも少なくとも５０％高い。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、ＡＳＣの前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも５０％高い。一部の場合では、前記対照から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である。一部の場合では、前記対照が、健康な個体であり、前記健康な個体が、ＴＢＩと一致する臨床症状を呈さない個体である。一部の場合では、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する。一部の場合では、患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される。一部の場合では、前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む。一部の場合では、前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表１１Ｂ、表１２Ｂ、表１４Ａ、表１６、表１７または表１９から選択される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含む。一部の場合では、前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表１１Ａまたは表１５から選択される。
なお別の態様では、本明細書において、脳傷害を有すると疑われる患者を評価する方法であって、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；脳傷害に関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、前記タンパク質シグネチャーが、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および前記患者が前記タンパク質シグネチャーの存在を示す場合、脳傷害を有するとして前記患者を選択するステップを含む方法を提供する。一部の場合では、前記患者が、脳傷害と一致する臨床症状を呈する。一部の場合では、前記患者から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である。一部の場合では、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−１β、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む。一部の場合では、前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含む。一部の場合では、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照から得られた生体試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、ＡＳＣの前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも５０％高い。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含み、カスパーゼ−１の前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のカスパーゼ−１の前記レベルよりも少なくとも５０％高い。一部の場合では、前記対照から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である。一部の場合では、前記対照が、健康な個体であり、前記健康な個体が、脳傷害と一致する臨床症状を呈さない個体である。一部の場合では、前記脳傷害が、外傷性脳傷害、脳卒中、軽度認知機能障害または多発性硬化症から選択される。一部の場合では、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する。一部の場合では、前記脳傷害が、外傷性脳傷害（ＴＢＩ）である。一部の場合では、患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される。一部の場合では、前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む。一部の場合では、前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表１１Ｂ、１２Ｂ、１４Ａ、１６、１７または１９から選択される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含む。一部の場合では、前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表１１Ａまたは１５から選択される。一部の場合では、脳傷害は、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）である。一部の場合では、患者から得られた生体試料は、血清であり、患者は、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度で、ＭＣＩを有するとして選択される。一部の場合では、生体試料は、血清であり、患者は、少なくとも５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、ＭＣＩを有するとして選択される。一部の場合では、生体試料は、血清であり、患者は、少なくとも９０％の感度、および少なくとも７０％の特異度で、ＭＣＩを有するとして選択される。一部の場合では、感度および／または感度は、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される。一部の場合では、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質は、ＡＳＣを含む。一部の場合では、感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値は、表２２または２３から選択される。一部の場合では、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質は、ＩＬ−１８を含む。一部の場合では、感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値は、表２２または２５から選択される。一部の場合では、脳傷害は、多発性硬化症（ＭＳ）である。一部の場合では、患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む。一部の場合では、前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表７から選択される。一部の場合では、前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される。一部の場合では、前記脳傷害が、脳卒中である。一部の場合では、患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも１００％の感度、および少なくとも９５％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む。一部の場合では、前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表８から選択される。一部の場合では、患者から得られた前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される。一部の場合では、前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも１００％の感度、および少なくとも１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む。一部の場合では、前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表９から選択される。一部の場合では、前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される。
なおさらなる態様では、本明細書において、軽度認知機能障害（ＭＣＩ）を有すると疑われる患者を評価する方法であって、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；ＭＣＩに関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、前記タンパク質シグネチャーが、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および前記患者が前記タンパク質シグネチャーの存在を示す場合、ＭＣＩを有するとして前記患者を選択するステップを含む方法を提供する。一部の場合では、前記患者が、ＭＣＩと一致する臨床症状を呈する。一部の場合では、前記患者から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である。一部の場合では、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−１β、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＩＬ−１８を含む。一部の場合では、前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する。一部の場合では、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照から得られた生体試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、ＡＳＣの前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも５０％高い。一部の場合では、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＩＬ−１８を含み、ＩＬ−１８の前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のＩＬ−１８の前記レベルよりも少なくとも２５％高い。
図１Ａ〜１Ｄは、インフラマソームタンパク質がＭＳ患者の血清中で上昇していることを図示する。ＭＳを有する患者および健康なドナーからの血清試料中のカスパーゼ−１（図１Ａ）、ＡＳＣ（図１Ｂ）、ＩＬ−１β（図１Ｃ）およびＩＬ−１８（図１Ｄ）のタンパク質レベル（ｐｇ／ｍｌ）。有意性のｐ値を、上記それぞれの箱ひげ図で示す。箱およびひげを、５番目および９５番目のパーセンタイルについて示す。カスパーゼ−１：Ｎ＝９の対照およびＮ＝１９のＭＳ；ＡＳＣ：Ｎ＝１１５の対照およびＮ＝３２のＭＳ；ＩＬ−１β：Ｎ＝２１の対照およびＮ＝８のＭＳ；ならびにＩＬ−１８：Ｎ＝１１９の対照およびＮ＝３２のＭＳ。
図２Ａ〜２Ｄは、ＭＳおよび健康なドナーの血清試料からのカスパーゼ−１（図２Ａ）、ＡＳＣ（図２Ｂ）、ＩＬ−１β（図２Ｃ）およびＩＬ−１８（図２Ｄ）についてのＲＯＣ曲線を図示する。
図３は、ＭＳのバイオマーカーとしての血清中のインフラマソームタンパク質を図示する。カスパーゼ−１、ＡＳＣ、ＩＬ−１ベータおよびＩＬ−１８についてのＲＯＣ曲線。カスパーゼ−１：Ｎ＝９の対照およびＮ＝１９のＭＳ；ＡＳＣ：Ｎ＝１１５の対照およびＮ＝３２のＭＳ；ＩＬ−１ベータ：Ｎ＝２１の対照およびＮ＝８のＭＳ；ならびにＩＬ−１８：Ｎ＝１１９の対照およびＮ＝３２のＭＳ。
図４は、実施例１からの多発性硬化症（ＭＳ）を有する対象の特徴を含む表を図示する。
図５Ａ〜５Ｄは、インフラマソームタンパク質が脳卒中患者の血清中で上昇していることを図示する。脳卒中を有する患者および健康なドナーからの血清試料中のカスパーゼ−１（図５Ａ）、ＡＳＣ（図５Ｂ）、ＩＬ−１ベータ（図５Ｃ）およびＩＬ−１８（図５Ｄ）のタンパク質レベル（ｐｇ／ｍｌ）。有意性のｐ値を、上記それぞれの箱ひげ図で示す。箱およびひげを、５番目および９５番目のパーセンタイルについて示す。Ｎ．Ｓ．＝有意ではない。カスパーゼ−１：Ｎ＝８の対照およびＮ＝１３の脳卒中；ＡＳＣ：Ｎ＝７５の対照およびＮ＝１６の脳卒中；ＩＬ−１ベータ：Ｎ＝９の対照およびＮ＝８の脳卒中；ならびにＩＬ−１８：Ｎ＝７９の対照およびＮ＝１５の脳卒中。
図６は、脳卒中のバイオマーカーとしての血清中のインフラマソームタンパク質を図示する。カスパーゼ−１、ＡＳＣ、ＩＬ−１ベータおよびＩＬ−１８についてのＲＯＣ曲線。カスパーゼ−１：Ｎ＝８の対照およびＮ＝１３の脳卒中；ＡＳＣ：Ｎ＝７５の対照およびＮ＝１６の脳卒中；ＩＬ−１ベータ：Ｎ＝９の対照およびＮ＝８の脳卒中；ならびにＩＬ−１８：Ｎ＝７９の対照およびＮ＝１５の脳卒中。
図７Ａは、血清由来細胞外小胞（ＥＶ）からの総タンパク質レベルの比較を図示する。ブラッドフォードアッセイを、血清からのＥＶの分離後に行って、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキット（ＩＮＶＴＲ）およびＥｘｏＱｕｉｃｋキット（ＥＱ）を用いて、分離物中の総タンパク質濃度を決定した。データは、平均＋／−ＳＥＭとして示す。群あたりＮ＝６。図７Ｂは、ロードされた総タンパク質の代表イメージを表す。血清由来ＥＶタンパク質の無染色イメージ。等量のタンパク質溶解物（１０ｍｌ）を、基準ゲルのそれぞれのレーンにロードした。図７Ｃは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキット（ＩＮＶ）およびＥｘｏＱｕｉｃｋキット（ＥＱ）を用いて分離された、ロードされたＥＶに相当する全レーンの定量化を示す棒グラフを表す。
図８Ａ〜８Ｆは、脳卒中患者からの血清中のＥＶの特徴付けを図示する。図８Ａは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキット（ＩＮ）およびＥｘｏＱｕｉｃｋキット（ＥＱ）を用いて分離された、ＣＤ８１およびＮＣＡＭ陽性ＥＶの代表的な免疫ブロットを表す。＋Ｃｏｎｔｒ：分離されたＥＶの陽性対照。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキット（ＩＮＶ）およびＥｘｏＱｕｉｃｋキット（ＥＱ）を用いて血清から分離されたＣＤ８１−（図８Ｂ）およびＮＣＡＭ−（図８Ｃ）陽性ＥＶの定量化。図８Ｄは、２つの異なる手法によって分離されたＥＶの電子顕微鏡イメージを表す。バー＝１００ｎｍ。分離された血清由来ＥＶのナノ粒子追跡分析／粒径分布。ナノ粒子追跡分析は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキット（図８Ｅ）およびＥｘｏＱｕｉｃｋキット（図８Ｆ）を用いて分離された血清由来ＥＶ試料中の粒子のサイズ分布および濃度を予測する。 図８Ａ〜８Ｆは、脳卒中患者からの血清中のＥＶの特徴付けを図示する。図８Ａは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキット（ＩＮ）およびＥｘｏＱｕｉｃｋキット（ＥＱ）を用いて分離された、ＣＤ８１およびＮＣＡＭ陽性ＥＶの代表的な免疫ブロットを表す。＋Ｃｏｎｔｒ：分離されたＥＶの陽性対照。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキット（ＩＮＶ）およびＥｘｏＱｕｉｃｋキット（ＥＱ）を用いて血清から分離されたＣＤ８１−（図８Ｂ）およびＮＣＡＭ−（図８Ｃ）陽性ＥＶの定量化。図８Ｄは、２つの異なる手法によって分離されたＥＶの電子顕微鏡イメージを表す。バー＝１００ｎｍ。分離された血清由来ＥＶのナノ粒子追跡分析／粒径分布。ナノ粒子追跡分析は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキット（図８Ｅ）およびＥｘｏＱｕｉｃｋキット（図８Ｆ）を用いて分離された血清由来ＥＶ試料中の粒子のサイズ分布および濃度を予測する。 図８Ａ〜８Ｆは、脳卒中患者からの血清中のＥＶの特徴付けを図示する。図８Ａは、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキット（ＩＮ）およびＥｘｏＱｕｉｃｋキット（ＥＱ）を用いて分離された、ＣＤ８１およびＮＣＡＭ陽性ＥＶの代表的な免疫ブロットを表す。＋Ｃｏｎｔｒ：分離されたＥＶの陽性対照。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキット（ＩＮＶ）およびＥｘｏＱｕｉｃｋキット（ＥＱ）を用いて血清から分離されたＣＤ８１−（図８Ｂ）およびＮＣＡＭ−（図８Ｃ）陽性ＥＶの定量化。図８Ｄは、２つの異なる手法によって分離されたＥＶの電子顕微鏡イメージを表す。バー＝１００ｎｍ。分離された血清由来ＥＶのナノ粒子追跡分析／粒径分布。ナノ粒子追跡分析は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキット（図８Ｅ）およびＥｘｏＱｕｉｃｋキット（図８Ｆ）を用いて分離された血清由来ＥＶ試料中の粒子のサイズ分布および濃度を予測する。
図９Ａ〜９Ｃは、ＡＳＣが脳卒中患者の血清由来ＥＶにおいて上昇していることを図示する。脳卒中を有する患者および健康なドナーからの血清由来ＥＶ中のＡＳＣ（図９Ａ）、ＩＬ−１ベータ（図９Ｂ）およびＩＬ−１８（図９Ｃ）のタンパク質レベル（ｐｇ／ｍｌ）。有意性のｐ値を、上記それぞれの箱ひげ図で示す。箱およびひげを、５番目および９５番目のパーセンタイルについて示す。Ｎ．Ｓ．＝有意ではない。ＡＳＣ：Ｎ＝１６の対照およびＮ＝１６の脳卒中；ＩＬ−１ベータ：Ｎ＝１０の対照およびＮ＝９の脳卒中；ならびにＩＬ−１８：Ｎ＝１６の対照およびＮ＝１３の脳卒中。
図１０は、脳卒中のバイオマーカーとしての血清由来ＥＶ中のインフラマソームタンパク質を図示する。ＡＳＣ、ＩＬ−１ベータおよびＩＬ−１８についてのＲＯＣ曲線。ＡＳＣ：Ｎ＝１６の対照およびＮ＝１６の脳卒中；ＩＬ−１ベータ：Ｎ＝１０の対照およびＮ＝９の脳卒中；ならびにＩＬ−１８：Ｎ＝１６の対照およびＮ＝１３の脳卒中。
図１１は、実施例２からの脳卒中を有する対象の特徴を含む表を図示する。
図１２Ａ〜１２Ｄは、脳卒中および健康なドナーの血清試料からのカスパーゼ−１（図１２Ａ）、ＡＳＣ（図１２Ｂ）、ＩＬ−１ベータ（図１２Ｃ）およびＩＬ−１８（図１２Ｄ）についてのＲＯＣ曲線を図示する。
図１３Ａ〜１３Ｆは、血清由来ＥＶ中のインフラマソームタンパク質の特徴付けを図示する。図１３Ａは、血清からのＥＶ中のインフラマソームタンパク質の免疫ブロット分析の代表イメージを表す。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキット（ＩＮ）およびＥｘｏＱｕｉｃｋキット（ＥＱ）を使用した、血清に由来するＥＶ中の（図１３Ｂ）ＮＬＲＰ３、（図１３Ｃ）カスパーゼ−１、（図１３Ｄ）ＡＳＣ、（図１３Ｅ）ＩＬ−１ベータ、および（図１３Ｆ）ＩＬ−１８の免疫ブロット分析の定量化。データは、平均＋／−ＳＥＭとして表す。群あたりＮ＝６。＊ｐ＜０．０５。 図１３Ａ〜１３Ｆは、血清由来ＥＶ中のインフラマソームタンパク質の特徴付けを図示する。図１３Ａは、血清からのＥＶ中のインフラマソームタンパク質の免疫ブロット分析の代表イメージを表す。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキット（ＩＮ）およびＥｘｏＱｕｉｃｋキット（ＥＱ）を使用した、血清に由来するＥＶ中の（図１３Ｂ）ＮＬＲＰ３、（図１３Ｃ）カスパーゼ−１、（図１３Ｄ）ＡＳＣ、（図１３Ｅ）ＩＬ−１ベータ、および（図１３Ｆ）ＩＬ−１８の免疫ブロット分析の定量化。データは、平均＋／−ＳＥＭとして表す。群あたりＮ＝６。＊ｐ＜０．０５。 図１３Ａ〜１３Ｆは、血清由来ＥＶ中のインフラマソームタンパク質の特徴付けを図示する。図１３Ａは、血清からのＥＶ中のインフラマソームタンパク質の免疫ブロット分析の代表イメージを表す。Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキット（ＩＮ）およびＥｘｏＱｕｉｃｋキット（ＥＱ）を使用した、血清に由来するＥＶ中の（図１３Ｂ）ＮＬＲＰ３、（図１３Ｃ）カスパーゼ−１、（図１３Ｄ）ＡＳＣ、（図１３Ｅ）ＩＬ−１ベータ、および（図１３Ｆ）ＩＬ−１８の免疫ブロット分析の定量化。データは、平均＋／−ＳＥＭとして表す。群あたりＮ＝６。＊ｐ＜０．０５。
図１４Ａ〜１４Ｃは、脳卒中および健康なドナーの血清由来細胞外小胞からの、ＡＳＣ（図１４Ａ）、ＩＬ−１ベータ（図１４Ｂ）およびＩＬ−１８（図１４Ｃ）についてのＲＯＣ曲線を図示する。
図１５Ａ〜１５Ｄは、インフラマソームタンパク質がＴＢＩ患者の血清中でどのように上昇しているかを図示する。ＴＢＩを有する患者および健康なドナー（対照）からの血清試料中のＡＳＣ（図１５Ａ）、カスパーゼ−１（図１５Ｂ）、ＩＬ−１８（図１５Ｃ）およびＩＬ−１β（図１５Ｄ）のタンパク質レベル（ｐｇ／ｍｌ）。ＡＳＣ：Ｎ＝１２０の対照およびＮ＝２０のＴＢＩ。カスパーゼ−１：Ｎ＝１１の対照およびＮ＝１９のＴＢＩ。ＩＬ−１８：Ｎ＝１２０の対照およびＮ＝２１のＴＢＩ。ＩＬ−１β：Ｎ＝２５の対照およびＮ＝１０のＴＢＩ。箱およびひげを、５番目および９５番目のパーセンタイルについて示す。＊ｐ＜０．０５。 図１５Ａ〜１５Ｄは、インフラマソームタンパク質がＴＢＩ患者の血清中でどのように上昇しているかを図示する。ＴＢＩを有する患者および健康なドナー（対照）からの血清試料中のＡＳＣ（図１５Ａ）、カスパーゼ−１（図１５Ｂ）、ＩＬ−１８（図１５Ｃ）およびＩＬ−１β（図１５Ｄ）のタンパク質レベル（ｐｇ／ｍｌ）。ＡＳＣ：Ｎ＝１２０の対照およびＮ＝２０のＴＢＩ。カスパーゼ−１：Ｎ＝１１の対照およびＮ＝１９のＴＢＩ。ＩＬ−１８：Ｎ＝１２０の対照およびＮ＝２１のＴＢＩ。ＩＬ−１β：Ｎ＝２５の対照およびＮ＝１０のＴＢＩ。箱およびひげを、５番目および９５番目のパーセンタイルについて示す。＊ｐ＜０．０５。 図１５Ａ〜１５Ｄは、インフラマソームタンパク質がＴＢＩ患者の血清中でどのように上昇しているかを図示する。ＴＢＩを有する患者および健康なドナー（対照）からの血清試料中のＡＳＣ（図１５Ａ）、カスパーゼ−１（図１５Ｂ）、ＩＬ−１８（図１５Ｃ）およびＩＬ−１β（図１５Ｄ）のタンパク質レベル（ｐｇ／ｍｌ）。ＡＳＣ：Ｎ＝１２０の対照およびＮ＝２０のＴＢＩ。カスパーゼ−１：Ｎ＝１１の対照およびＮ＝１９のＴＢＩ。ＩＬ−１８：Ｎ＝１２０の対照およびＮ＝２１のＴＢＩ。ＩＬ−１β：Ｎ＝２５の対照およびＮ＝１０のＴＢＩ。箱およびひげを、５番目および９５番目のパーセンタイルについて示す。＊ｐ＜０．０５。 図１５Ａ〜１５Ｄは、インフラマソームタンパク質がＴＢＩ患者の血清中でどのように上昇しているかを図示する。ＴＢＩを有する患者および健康なドナー（対照）からの血清試料中のＡＳＣ（図１５Ａ）、カスパーゼ−１（図１５Ｂ）、ＩＬ−１８（図１５Ｃ）およびＩＬ−１β（図１５Ｄ）のタンパク質レベル（ｐｇ／ｍｌ）。ＡＳＣ：Ｎ＝１２０の対照およびＮ＝２０のＴＢＩ。カスパーゼ−１：Ｎ＝１１の対照およびＮ＝１９のＴＢＩ。ＩＬ−１８：Ｎ＝１２０の対照およびＮ＝２１のＴＢＩ。ＩＬ−１β：Ｎ＝２５の対照およびＮ＝１０のＴＢＩ。箱およびひげを、５番目および９５番目のパーセンタイルについて示す。＊ｐ＜０．０５。
図１６Ａ〜１６Ｄは、ＴＢＩ患者および健康なドナーの血清試料からのカスパーゼ−１（図１６Ａ）、ＡＳＣ（図１６Ｂ）、ＩＬ−１β（図１６Ｃ）およびＩＬ−１８（図１６Ｄ）についてのＲＯＣ曲線を図示する。
図１７Ａ〜１７Ｂは、インフラマソームタンパク質がＴＢＩ患者のＣＳＦ中でどのように上昇しているかを図示する。ＴＢＩを有する患者および健康なドナー（対照）からのＣＳＦ試料中のＡＳＣ（図１７Ａ）およびＩＬ−１８（図１７Ｂ）のタンパク質レベル（ｐｇ／ｍｌ）。ＡＳＣ：Ｎ＝２１の対照およびＮ＝１５のＴＢＩ。ＩＬ−１８：Ｎ＝２４の対照およびＮ＝１６のＴＢＩ。箱およびひげを、５番目および９５番目のパーセンタイルについて示す。＊ｐ＜０．０５。 図１７Ａ〜１７Ｂは、インフラマソームタンパク質がＴＢＩ患者のＣＳＦ中でどのように上昇しているかを図示する。ＴＢＩを有する患者および健康なドナー（対照）からのＣＳＦ試料中のＡＳＣ（図１７Ａ）およびＩＬ−１８（図１７Ｂ）のタンパク質レベル（ｐｇ／ｍｌ）。ＡＳＣ：Ｎ＝２１の対照およびＮ＝１５のＴＢＩ。ＩＬ−１８：Ｎ＝２４の対照およびＮ＝１６のＴＢＩ。箱およびひげを、５番目および９５番目のパーセンタイルについて示す。＊ｐ＜０．０５。
図１８Ａ〜１８Ｂは、ＴＢＩ患者および健康なドナーのＣＳＦ試料からのＡＳＣ（図１８Ａ）およびＩＬ−１８（図１８Ｂ）についてのＲＯＣ曲線を図示する。
図１９Ａ〜１９Ｃは、ＴＢＩの予後のバイオマーカーとしてのインフラマソームタンパク質を図示する。ＴＢＩを有する患者からの血清試料中のカスパーゼ−１（図１９Ａ）、ＡＳＣ（図１９Ｂ）およびＩＬ−１８（図１９Ｃ）のタンパク質レベル（ｐｇ／ｍｌ）。群を、ＧＯＳＥに基づいて、好ましい転帰および好ましくない転帰に分けた。有意性のｐ値を、上記それぞれの箱ひげ図で示す。箱およびひげを、５番目および９５番目のパーセンタイルについて示す。カスパーゼ−１：Ｎ＝４の好ましい、およびＮ＝１６の好ましくない；ＡＳＣ：Ｎ＝５の好ましい、およびＮ＝１６の好ましくない；ＩＬ−１８：Ｎ＝５の好ましい、およびＮ＝１６の好ましくない。 図１９Ａ〜１９Ｃは、ＴＢＩの予後のバイオマーカーとしてのインフラマソームタンパク質を図示する。ＴＢＩを有する患者からの血清試料中のカスパーゼ−１（図１９Ａ）、ＡＳＣ（図１９Ｂ）およびＩＬ−１８（図１９Ｃ）のタンパク質レベル（ｐｇ／ｍｌ）。群を、ＧＯＳＥに基づいて、好ましい転帰および好ましくない転帰に分けた。有意性のｐ値を、上記それぞれの箱ひげ図で示す。箱およびひげを、５番目および９５番目のパーセンタイルについて示す。カスパーゼ−１：Ｎ＝４の好ましい、およびＮ＝１６の好ましくない；ＡＳＣ：Ｎ＝５の好ましい、およびＮ＝１６の好ましくない；ＩＬ−１８：Ｎ＝５の好ましい、およびＮ＝１６の好ましくない。 図１９Ａ〜１９Ｃは、ＴＢＩの予後のバイオマーカーとしてのインフラマソームタンパク質を図示する。ＴＢＩを有する患者からの血清試料中のカスパーゼ−１（図１９Ａ）、ＡＳＣ（図１９Ｂ）およびＩＬ−１８（図１９Ｃ）のタンパク質レベル（ｐｇ／ｍｌ）。群を、ＧＯＳＥに基づいて、好ましい転帰および好ましくない転帰に分けた。有意性のｐ値を、上記それぞれの箱ひげ図で示す。箱およびひげを、５番目および９５番目のパーセンタイルについて示す。カスパーゼ−１：Ｎ＝４の好ましい、およびＮ＝１６の好ましくない；ＡＳＣ：Ｎ＝５の好ましい、およびＮ＝１６の好ましくない；ＩＬ−１８：Ｎ＝５の好ましい、およびＮ＝１６の好ましくない。
図２０Ａ〜２０Ｂは、２回目（図２０Ａ）および４回目（図２０Ｂ）の採取についてのＡＳＣの転帰（好ましい対好ましくない）についてのＲＯＣ曲線を図示する。
図２１Ａ〜２１Ｄは、インフラマソームタンパク質がＭＣＩ患者の血清中で上昇していることを図示する。ＭＣＩを有する患者および年齢がマッチした健康なドナー（対照）からの血清試料中のＡＳＣ（図２１Ａ）、カスパーゼ−１（図２１Ｂ）、ＩＬ−１８（図２１Ｃ）およびＩＬ−１ベータ（図２１Ｄ）のタンパク質レベル（ｐｇ／ｍｌ）。有意性のｐ値を、上記それぞれの箱ひげ図で示す。
図２２Ａ〜２２Ｄは、ＭＣＩおよび年齢がマッチした健康なドナーの血清試料からのＡＳＣ（図２２Ａ）、カスパーゼ−１（図２２Ｂ）、ＩＬ−１８（図２２Ｃ）およびＩＬ−１ベータ（図２２Ｄ）についてのＲＯＣ曲線を図示する。
図２３は、ＭＣＩのバイオマーカーとしての血清中のインフラマソームタンパク質を図示する。図２２Ａ〜２２Ｄからのカスパーゼ−１、ＡＳＣ、ＩＬ−１ベータおよびＩＬ−１８についてのＲＯＣ曲線を単一のグラフに重ね合わせる。
詳細な説明
定義
他に定義されていない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって通常理解される意味と同じ意味を有する。
本明細書で使用される場合、「タンパク質」および「ポリペプチド」は、同義語として使用されて、長さまたは翻訳後の修飾、例えば、グリコシル化もしくはリン酸化にかかわらず、アミノ酸の任意のペプチド連結鎖を意味する。
「カスパーゼ活性化動員ドメイン（ＣＡＲＤ）を含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質」および「ＡＳＣ」という用語は、ＡＳＣ遺伝子もしくはそのアイソフォームの発現産物、またはＡＳＣ（例えば、ヒトにおけるＮＰ＿０３７３９０（Ｑ９ＵＬＺ３−１）、ＮＰ＿６６０１８３（Ｑ９ＵＬＺ３−２）もしくはＱ９ＵＬＺ３−３、またはラットにおけるＮＰ＿７５８８２５（ＢＡＣ４３７５４））と少なくとも６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％のアミノ酸配列同一性を持ち、ＡＳＣの機能活性を示すタンパク質を意味する。タンパク質の「機能活性」は、タンパク質の生理学的機能に関連する任意の活性である。ＡＳＣの機能活性としては、例えば、カスパーゼ−１の活性化および細胞死の開始のためのタンパク質の動員が挙げられる。
「ＡＳＣ遺伝子」または「ＡＳＣ核酸」という用語は、天然のＡＳＣをコードする核酸配列、ＡＳＣ ｃＤＮＡが転写することができるゲノム配列、および／または前述のアレルバリアントおよびホモログを意味する。この用語は、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡおよびＲＮＡを包含する。
本明細書で使用される場合、「インフラマソーム」という用語は、カスパーゼ−１を活性化する多タンパク質（例えば、少なくとも２つのタンパク質）複合体を意味する。さらに、「インフラマソーム」という用語は、カスパーゼ−１活性を活性化する多タンパク質複合体を指すことができ、これは、次に、ＩＬ−１β、ＩＬ−１８およびＩＬ−３３のプロセシングおよび活性化を制御する。Arend et al. 2008；Li et al. 2008；およびMartinon et al. 2002を参照されたい、このそれぞれは、それらの全体が参照によって組み込まれる。「ＮＬＲＰ１インフラマソーム」、「ＮＡＬＰ１インフラマソーム」、「ＮＬＲＰ２インフラマソーム」、「ＮＡＬＰ２インフラマソーム」、「ＮＬＲＰ３インフラマソーム」、「ＮＡＬＰ３インフラマソーム」、「ＮＬＲＣ４インフラマソーム」、「ＩＰＡＦインフラマソーム」または「ＡＩＭ２インフラマソーム」という用語は、少なくともカスパーゼ−１および１つのアダプタータンパク質、例えばＡＳＣのタンパク質複合体を意味する。例えば、「ＮＬＲＰ１インフラマソーム」および「ＮＡＬＰ１インフラマソーム」という用語は、カスパーゼ−１の活性化ならびにインターロイキン−１β、インターロイキン１８およびインターロイキン−３３のプロセシングのためのＮＬＲＰ１、ＡＳＣ、カスパーゼ−１、カスパーゼ−１１、ＸＩＡＰおよびパネキシン−１を含有する多タンパク質複合体を意味し得る。「ＮＬＲＰ２インフラマソーム」および「ＮＡＬＰ２インフラマソーム」という用語は、ＮＬＲＰ２（別名ＮＡＬＰ２）、ＡＳＣおよびカスパーゼ−１を含有する多タンパク質複合体を意味し得るが、「ＮＬＲＰ３インフラマソーム」および「ＮＡＬＰ３インフラマソーム」という用語は、ＮＬＲＰ３（別名ＮＡＬＰ３）、ＡＳＣを含有する多タンパク質複合体を意味し得、「ＮＬＲＣ４インフラマソーム」および「ＩＰＡＦインフラマソーム」という用語は、ＮＬＲＣ４（別名ＩＰＡＦ）、ＡＳＣおよびカスパーゼ−１を含有する多タンパク質複合体を意味し得る。加えて、「ＡＩＭ２インフラマソーム」という用語は、ＡＩＭ２、ＡＳＣおよびカスパーゼ−１を含む多タンパク質複合体を意味し得る。
本明細書で使用される場合、「配列同一性」という語句は、２つの配列を、サブユニットのマッチングを最大化するように、すなわち、ギャップおよび挿入を考慮に入れて、アライメントさせた場合に、２つの配列（例えば、核酸配列、アミノ酸配列）における対応する位置での同一のサブユニットのパーセンテージを意味する。配列同一性は、配列解析ソフトウェア（例えば、Ａｃｃｅｌｒｙｓ ＣＧＣ製のＳｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して測定することができる。
「治療有効量」および「有効投薬量」という語句により、治療的に（例えば、臨床的に）望ましい結果を生み出すのに十分な量を意味し；この結果の正確な特質は、処置される障害の特質に応じて変わるであろう。例えば、処置される障害がＳＣＩである場合、結果は、運動技能および自発運動の機能における改善、脊髄病変の減少などであり得る。本明細書に記載の組成物は、１日あたり１回または複数回から１週間あたり１回または複数回、投与することができる。当業者は、限定されないが、疾患または障害の重症度、以前の処置、対象の全体的な健康および／または年齢、ならびに他の疾患の存在を含む、ある特定の因子が、対象を有効に処置するために必要な投薬量およびタイミングに影響を及ぼし得ることを認識するだろう。また、本発明の組成物の治療有効量を用いる対象の処置は、単回処置または一連の処置を含むことができる。
本明細書で使用される場合、「処置」という用語は、患者への本明細書に記載の治療剤または本明細書に記載の方法によって特定される治療剤の適用または投与として、あるいは疾患、疾患の症状もしくは疾患に対する素因を、治療し、治癒し、緩和し、軽減し、変化させ、是正し、寛解し、改善し、または影響を及ぼすことを目的とした、疾患、疾患の症状または疾患に対する素因を有する患者から分離された組織もしくは細胞系への治療剤の適用または投与として定義される。
「患者」、「対象」および「個体」という用語は、本明細書において互換可能に使用され、例えば、ヒト患者などの処置される哺乳動物対象を意味する。一部の場合では、本発明の方法は、実験動物、獣医学的適用、ならびに限定されないが、マウス、ラットおよびハムスターを含むげっ歯類ならびに霊長類を含む疾患のための動物モデルの開発における使用が見出される。
本明細書において互換可能に使用される場合、「Ａｂｓｅｎｔ ｉｎ Ｍｅｌａｎｏｍａ２」および「ＡＩＭ２」は、ＡＩＭ２遺伝子またはアイソフォームの発現産物；あるいはＡＩＭ２（例えば、受託番号ＮＸ＿０１４８６２、ＮＰ００４８２４、ＸＰ０１６８５８３３７、ＸＰ００５２４５６７３、ＡＡＢ８１６１３、ＢＡＦ８４７３１、ＡＡＨ１０９４０）と少なくとも６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列同一性を持ち、ＡＩＭ２の機能活性を示すタンパク質を意味し得る。
本明細書において互換可能に使用される場合、「ＮＡＬＰ１」および「ＮＬＲＰ１」は、ＮＡＬＰ１もしくはＮＬＲＰ１遺伝子またはアイソフォームの発現産物；あるいはＮＡＬＰ１（例えば、受託番号ＡＡＨ５１７８７、ＮＰ＿００１０２８２２５、ＮＰ＿１２７５００、ＮＰ＿１２７４９９、ＮＰ＿１２７４９７、ＮＰ０５５７３７）と少なくとも６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列同一性を持ち、ＮＡＬＰ１の機能活性を示すタンパク質を意味する。
本明細書において互換可能に使用される場合、「ＮＡＬＰ２」および「ＮＬＲＰ２」は、ＮＡＬＰ２もしくはＮＬＲＰ２遺伝子またはアイソフォームの発現産物；あるいはＮＡＬＰ２（例えば、受託番号ＮＰ＿００１１６７５５２、ＮＰ＿００１１６７５５３、ＮＰ＿００１１６７５５４またはＮＰ＿０６０３２２）と少なくとも６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列同一性を持ち、ＮＡＬＰ２の機能活性を示すタンパク質を意味する。
本明細書において互換可能に使用される場合、「ＮＡＬＰ３」および「ＮＬＲＰ３」は、ＮＡＬＰ３もしくはＮＬＲＰ３遺伝子またはアイソフォームの発現産物；あるいはＮＡＬＰ３（例えば、受託番号ＮＰ＿００１０７３２８９、ＮＰ＿００１１２０９３３、ＮＰ＿００１１２０９３４、ＮＰ＿００１２３００６２、ＮＰ＿００４８８６、ＮＰ＿８９９６３２、ＸＰ＿０１１５４２３５０、ＸＰ＿０１６８５５６７０、ＸＰ＿０１６８５５６７１、ＸＰ＿０１６８５５６７２またはＸＰ＿０１６８５５６７３）と少なくとも６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列同一性を持ち、ＮＡＬＰ３の機能活性を示すタンパク質を意味する。
本明細書において互換可能に使用される場合、「ＮＬＲＣ４」および「ＩＰＡＦ」は、ＮＬＲＣ４もしくはＩＰＡＦ遺伝子またはアイソフォームの発現産物；あるいはＮＬＲＣ４（例えば、受託番号ＮＰ＿００１１８６０６７、ＮＰ００１１８６０６８、ＮＰ＿００１２８９４３３またはＮＰ＿０６７０３２）と少なくとも６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のアミノ酸配列同一性を持ち、ＮＬＲＣ４の機能活性を示すタンパク質を意味する。
「脳卒中」および「虚血性脳卒中」という用語は、脳または脊髄の部分への血流が妨げられる場合を意味する。「虚血性脳卒中」および「一過性虚血性脳卒中」という用語は、酸素が豊富な血液を脳または脊髄に供給する動脈の遮断によって、脳または脊髄の部分への血流が妨げられる場合を意味する。「出血性脳卒中」という用語は、脳または脊髄における動脈が血液を漏出させるか、または破裂した場合に、脳または脊髄の部分への血流が妨げられる場合を意味する。
「ＣＮＳへの外傷性傷害」とは、場合によりＣＮＳの機能の永続的または一過的な機能障害をもたらす、外部の機械力からＣＮＳへの任意の侵襲を意味する。
「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、キメラ抗体、ヒト化抗体、抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体、可溶性または結合型で標識され得る抗体、および限定されないが、酵素切断、ペプチド合成もしくは組換え手法などの任意の公知の手法によって提供されるこれらの断片、領域または誘導体を含むことを意味する。本発明のこのような抗ＡＳＣおよび抗ＮＬＲＰ１抗体は、カスパーゼ−１の活性化を妨害する、ＡＳＣおよびＮＬＲＰ１の部分とそれぞれ結合する能力がある。
従来の分子生物学的手法を含む方法を本明細書に記載する。このような手法は、一般に、当技術分野において公知であり、Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., vol. 1-3, ed. Sambrook et al., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 2001；およびCurrent Protocols in Molecular Biology, ed. Ausubel et al., Greene Publishing and Wiley-Interscience, New York, 1992（定期的なアップデートによる）などの方法論の論文において詳細に記載されている。免疫学的手法は、一般に、当技術分野において公知であり、Advances in Immunology, volume 93, ed. Frederick W. Alt, Academic Press, Burlington, MA, 2007；Making and Using Antibodies: A Practical Handbook, eds. Gary C. Howard and Matthew R. Kaser, CRC Press, Boca Raton, FL, 2006；Medical Immunology, 6th ed., edited by Gabriel Virella, Informa Healthcare Press, London, England, 2007；およびHarlow and Lane ANTIBODIES: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1988などの方法論の論文において詳細に記載されている。
本明細書に記載の組成物および方法と同様または同等の組成物および方法を、本発明の実施または試験において使用することができるが、適切な組成物および方法を下記に記載する。本明細書において列挙されたすべての刊行物、特許出願および特許は、それらの全体が参照によって組み込まれる。矛盾する場合において、定義を含む本明細書が支配する。下記で議論される特定の実施形態は、実例のみであって、限定することを意図しない。
概略
本明細書において、脳傷害を有すると疑われる患者を診断または評価するための組成物および方法を提供する。この方法は、患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；脳傷害に関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、タンパク質シグネチャーが、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および患者がタンパク質シグネチャーの存在を示す場合、脳傷害を有するとして患者を選択するステップを含み得る。脳傷害は、外傷、変性または先天性の問題に起因する患者の脳の任意の侵襲であり得る。脳傷害は、多発性硬化症（ＭＳ）、脳卒中、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）、認知機能障害（例えば、軽度認知機能障害（ＭＣＩ））または外傷性脳傷害（ＴＢＩ）から選択され得る。一実施形態では、脳傷害はＭＳである。別の実施形態では、脳傷害は脳卒中である。さらに別の実施形態では、脳傷害はＴＢＩである。また別の実施形態では、脳傷害はＭＣＩである。
一実施形態では、本明細書において、多発性硬化症（ＭＳ）を有する患者を診断または評価するための方法であって、患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；ＭＳに関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、タンパク質シグネチャーが、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および患者がタンパク質シグネチャーの存在を示す場合、ＭＳを有するとして患者を選択するステップを含む方法を提供する。患者は、ＭＳと一致する臨床症状を呈し得る。本明細書において提供される方法および組成物の使用により、患者は、当技術分野において公知の任意の種類のＭＳと診断され得る。ＭＳは、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）、一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）または進行再発型ＭＳ（ＰＲＭＳ）であり得る。
別の実施形態では、本明細書において、脳卒中を患っていると疑われる患者を診断または評価するための方法であって、患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；脳卒中または脳卒中関連傷害に関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、タンパク質シグネチャーが、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および患者がタンパク質シグネチャーの存在を示す場合、脳卒中を患っているとして患者を選択するステップを含む方法を提供する。患者は、脳卒中と一致する、当技術分野において公知の臨床症状を呈し得る。脳卒中は、虚血性脳卒中、一過性虚血性脳卒中または出血性脳卒中であり得る。
一実施形態では、本明細書において、外傷性脳傷害（ＴＢＩ）を有する患者を診断または評価するための方法であって、患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；ＴＢＩに関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、タンパク質シグネチャーが、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および患者がタンパク質シグネチャーの存在を示す場合、ＴＢＩを有するとして患者を選択するステップを含む方法を提供する。患者は、ＴＢＩと一致する臨床症状を呈し得る。本明細書において提供される方法および組成物の使用により、患者は、当技術分野において公知の任意の種類のＴＢＩと診断され得る。
一実施形態では、本明細書において、認知機能障害を有する患者を診断または評価するための方法を提供する。認知機能障害は、軽度または重度であり得る。一実施形態では、認知機能障害は軽度認知機能障害（ＭＣＩ）である。この方法は、患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；認知機能障害（例えば、ＭＣＩ）に関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、タンパク質シグネチャーが、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および患者がタンパク質シグネチャーの存在を示す場合、認知機能障害（例えば、ＭＣＩ）を有するとして患者を選択するステップを含む。患者は、認知機能障害（例えば、ＭＣＩ）と一致する臨床症状を呈し得る。本明細書において提供される方法および組成物の使用により、患者は、当技術分野において公知の任意の種類の認知機能障害、例えばＭＣＩなどと診断され得る。ＭＣＩに罹患した対象によって多くの場合に示される症状の例としては、もの忘れ（より頻繁に物事を忘れる、および／または重要なイベントを忘れる）、集中の欠如（一連の思考の喪失）、決断を行う、指示を理解する、もしくは物事を計画する場合に不安または困惑を感じる、精通している環境を進むトラブル、ならびに／または衝動的および問題のある判断を挙げることができる。ＭＣＩを有する対象は、うつ、易刺激性、不安または感情鈍麻を経験する場合もある。
本発明の一態様では、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、ＴＢＩ、脳卒中またはＭＳ）を有すると疑われる患者を診断または評価する方法は、患者から得られた生体試料中の１つもしくは複数のインフラマソームタンパク質の測定されたレベル、存在量または濃度、あるいは患者から得られた生体試料から調製されたインフラマソームタンパク質プロファイルに基づいて、脳傷害に関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップを含む。ある特定の実施形態では、タンパク質シグネチャーは、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む。タンパク質シグネチャーにおける少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルは、対照の対象から得られた生体試料中のタンパク質のレベルもしくはパーセンテージに対して、または本明細書にさらに記載の所定の参照値または参照値の範囲に対して、増大し得る。対照の対象は、健康な個体であり得る。健康な個体は、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、ＴＢＩ、脳卒中またはＭＳ）に関連する症状を示さない個体であり得る。タンパク質シグネチャーは、ある特定の実施形態では、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含み得る。タンパク質シグネチャーを示す患者は、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、ＴＢＩ、脳卒中またはＭＳ）を有するとして選択または特定され得る。
一部の実施形態では、生体試料中の１つもしくは複数のインフラマソームタンパク質の測定されたレベル、濃度または存在量は、インフラマソームタンパク質プロファイルを調製するために使用され、ここで、プロファイルは、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、ＴＢＩ、脳卒中またはＭＳ）の重症度を示す。インフラマソームタンパク質プロファイルは、必要に応じて、対照の対象から得られた生体試料中の１つもしくは複数のインフラマソームタンパク質のレベル、存在量、パーセンテージまたは濃度に関するか、あるいは本明細書に記載の所定の値または参照値の範囲に関する、患者の生体試料中で測定された１つもしくは複数のインフラマソームタンパク質のレベル、存在量、パーセンテージまたは濃度を含み得る。対照の対象は、健康な個体であり得る。健康な個体は、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、ＴＢＩ、脳卒中またはＭＳ）に関連する症状を示さない個体であり得る。
少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベル、パーセンテージまたは濃度は、単一の時点で評価し、所定の参照値または参照値の範囲と比較することができ、あるいは、複数の時点で評価し、所定の参照値または以前に評価された値と比較することができる。
本明細書で使用される場合、「所定の参照値」または参照値の範囲は、既知試料から確かめられたインフラマソームタンパク質のレベルまたは濃度の所定の値または参照値の範囲を指すことができる。例えば、所定の参照値または参照値の範囲は、対照の対象（例えば、健康な対象）から得られた生体試料中のインフラマソームタンパク質のレベルまたは濃度を反映し得る。対照の対象は、一部の実施形態では、評価される患者と年齢がマッチし得る。患者および対照の対象から得られた生体試料は、両方とも同じ種類の試料（例えば、血清、または血清由来細胞外小胞（ＥＶ））であり得る。このように、特定の実施形態では、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の測定されたレベル、パーセンテージまたは濃度は、対照試料（すなわち、健康な対象から得られた）中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベル、パーセンテージまたは濃度に対して、比較または決定される。対照または健康な対象は、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、ＴＢＩ、脳卒中またはＭＳ）に関連する症状を示さない対象であり得る。
他の実施形態では、所定の参照値または参照値の範囲は、臨床測定もしくは死後の分析によって評価された脳傷害（例えば、ＭＣＩ、ＴＢＩ、脳卒中またはＭＳ）の既知の重症度を有する患者から得られた試料中のインフラマソームタンパク質のレベルまたは濃度を反映し得る。所定の参照値は、インフラマソームタンパク質の既知の量または濃度でもあり得る。インフラマソームタンパク質のこのような既知の量または濃度は、対照の対象の集団もしくは前記脳傷害の既知のレベルを有する患者の集団からのインフラマソームタンパク質の平均レベルまた濃度と相関し得る。別の実施形態では、所定の参照値は、例えば、平均プラスもしくはマイナス標準偏差、または信頼区間を表し得る、値の範囲であり得る。参照値の範囲は、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、ＴＢＩ、脳卒中またはＭＳ）の重症度のさまざまなレベルにわたる特定のインフラマソームタンパク質についての個々の参照値を指すこともできる。ある特定の実施形態では、所定の参照値または参照値の範囲に対する１つもしくは複数のインフラマソームタンパク質（例えば、ＡＳＣ、カスパーゼ−１またはＩＬ−１８）のレベルの増加は、より重度の脳傷害を示す。
本明細書において提供されるいずれかの方法で検出または測定される少なくとも１つのインフラマソームタンパク質は、１つまたは複数のインフラマソームタンパク質であり得る。一実施形態では、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質は、複数のインフラマソームタンパク質である。複数とは、少なくとも、または最大で、２つ、３つ、４つもしくは５つのインフラマソームタンパク質であり得る。少なくとも１つのインフラマソームタンパク質または複数のインフラマソームタンパク質は、例えば、ＮＡＰＬ１／ＮＬＲＰ１、ＮＡＬＰ２／ＮＬＲＰ２、ＮＡＬＰ３／ＮＬＲＰ３、ＩＰＡＦ／ＮＬＲＣ４またはＡＩＭ２インフラマソームなどの当技術分野において公知の任意のインフラマソームの成分であり得る。一実施形態では、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質は、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、またはインターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１ベータ）である。一実施形態では、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質は、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）である。一実施形態では、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質はカスパーゼ−１である。一実施形態では、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質はＩＬ−１８である。
本明細書において提供される方法のインフラマソームタンパク質および他のマーカータンパク質は、当業者に公知のさまざまな方法によって、生体試料中で測定することができる。例えば、タンパク質は、限定されないが、液体クロマトグラフィー、ガスクロマトグラフィー、質量分析、イムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ、免疫蛍光アッセイ、ＦＲＥＴに基づくアッセイ、免疫ブロット、ＥＬＩＳＡまたは液体クロマトグラフィーに続く質量分析（例えば、ＭＡＬＤＩ ＭＳ）を含む方法によって、測定することができる。当業者は、本発明の任意の特定のバイオマーカータンパク質を測定および定量化するための他の適切な方法を確かめることができる。
一実施形態では、本明細書において提供されるいずれかの方法で検出もしくは測定される少なくとも１つのインフラマソームタンパク質または複数のインフラマソームタンパク質は、イムノアッセイの使用により検出または測定することができる。イムノアッセイは、当技術分野において公知の任意のイムノアッセイであり得る。例えば、イムノアッセイは、免疫ブロット、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）またはマイクロ流体イムノアッセイであり得る。本明細書において提供される方法における使用のためのマイクロ流体イムノアッセイの例は、Ｓｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘ（商標）プラットフォーム（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）である。
本明細書において提供される方法における使用のためのイムノアッセイは、インフラマソームタンパク質に対して作られた抗体を利用することができる。インフラマソームの成分は、例えば、ＮＡＰＬ１、ＮＡＬＰ２、ＮＡＬＰ３、ＮＬＲＣ４またはＡＩＭ２インフラマソームなどの当技術分野において公知の任意のインフラマソームの成分であり得る。一実施形態では、インフラマソームタンパク質は、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、またはインターロイキン−１ベータ（ＩＬ−１ベータ）である。一実施形態では、インフラマソームタンパク質は、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）である。一実施形態では、インフラマソームタンパク質はカスパーゼ−１である。一実施形態では、インフラマソームタンパク質はＩＬ−１８である。一実施形態では、インフラマソームタンパク質はＩＬ−１ベータである。
ＡＳＣに特異的に結合する任意の適切な抗体を使用することができ、例えば、特別注文または市販のＡＳＣ抗体を、本明細書において提供される方法において使用することができる。抗ＡＳＣ抗体は、例えば、ヒトまたはラットＡＳＣタンパク質などの哺乳動物のＡＳＣタンパク質のドメインまたはその部分に特異的に結合する抗体であり得る。本明細書における方法での使用のための抗ＡＳＣ抗体の例は、米国特許第８６８５４００号に見られるものであり得、その内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。本明細書において提供される方法における使用のための市販の抗ＡＳＣ抗体の例としては、限定されるものではないが、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ製の０４−１４７抗ＡＳＣ、クローン２ＥＩ−７マウスモノクローナル抗体、ＭｉｌｌｉｐｏｒｅＳｉｇｍａ製のＡＢ３６０７−抗ＡＳＣ抗体、Ｂｉｏｒｂｙｔ製のｏｒｂ１９４０２１抗ＡＳＣ、ＬｉｆｅＳｐａｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製のＬＳ−Ｃ３３１３１８−５０抗ＡＳＣ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ製のＡＦ３８０５抗ＡＳＣ、Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ製のＮＢＰ１−７８９７７抗ＡＳＣ、Ｒｏｃｋｌａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ製の６００−４０１−Ｙ６７抗ＡＳＣ、ＭＢＬ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ製のＤ０８６−３抗ＡＳＣ、Ａｄｉｐｏｇｅｎ製のＡＬ１７７抗ＡＳＣ、モノクローナル抗ＡＳＣ（クローンｏ９３Ｅ９）抗体、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製の抗ＡＳＣ抗体（Ｆ−９）、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ製の抗ＡＳＣ抗体（Ｂ−３）、Ｅｎｚｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ製のＡＳＣポリクローナル抗体−ＡＤＩ−９０５−１７３またはＬｅｉｎｃｏ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのＡ１６１抗ヒトＡＳＣが挙げられる。ヒトＡＳＣタンパク質は、受託番号ＮＰ＿０３７３９０．２（Ｑ９ＵＬＺ３−１）、ＮＰ＿６６０１８３（Ｑ９ＵＬＺ３−２）またはＱ９ＵＬＺ３−３であり得る。ラットＡＳＣタンパク質は、受託番号ＮＰ＿７５８８２５（ＢＡＣ４３７５４）であり得る。マウスＡＳＣタンパク質は、受託番号ＮＰ＿０７５７４７．３であり得る。一実施形態では、抗体は、哺乳動物ＡＳＣタンパク質（例えば、ヒトまたはラットＡＳＣ）のＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、またはその部分もしくは断片に結合する。この実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトまたはラットＡＳＣのＰＹＤドメインもしくはその断片と、少なくとも６５％（例えば、６５、７０、７５、８０、８５％）の配列同一性を有するアミノ酸配列に特異的に結合する。一実施形態では、抗体は、哺乳動物ＡＳＣタンパク質（例えば、ヒトまたはラットＡＳＣ）のＣ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）またはその部分もしくは断片に結合する。この実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトまたはラットＡＳＣのＣＡＲＤドメインもしくはその断片と、少なくとも６５％（例えば、６５、７０、７５、８０、８５％）の配列同一性を有するアミノ酸配列に特異的に結合する。別の実施形態では、抗体は、ラットＡＳＣの領域、例えば、ＡＬＲＱＴＱＰＹＬＶＴＤＬＥＱＳ（配列番号１）（すなわち、受託番号ＢＡＣ４３７５４のラットＡＳＣの１７８〜１９３残基）のアミノ酸配列に特異的に結合する抗体である。この実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ラットＡＳＣのＡＬＲＱＴＱＰＹＬＶＴＤＬＥＱＳ（配列番号１）のアミノ酸配列と、少なくとも６５％（例えば、６５、７０、７５、８０、８５％）の配列同一性を有するアミノ酸配列に特異的に結合する。別の実施形態では、抗体は、ヒトＡＳＣの領域、例えば、ＲＥＳＱＳＹＬＶＥＤＬＥＲＳ（配列番号２）のアミノ酸配列に特異的に結合する抗体である。この実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＡＳＣのＲＥＳＱＳＹＬＶＥＤＬＥＲＳ（配列番号２）のアミノ酸配列と、少なくとも６５％（例えば、６５、７０、７５、８０、８５％）の配列同一性を有するアミノ酸配列に特異的に結合する。
任意の適切な抗ＮＬＲＰ１抗体（例えば、市販または特別注文）を、本明細書において提供される方法において使用することができる。本明細書における方法での使用のための抗ＮＬＲＰ１抗体の例は、米国特許第８６８５４００号に見られるものであり得、その内容は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。本明細書において提供される方法における使用のための市販の抗ＮＬＲＰ１抗体の例としては、限定されるものではないが、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ製のヒトＮＬＲＰ１ポリクローナル抗体ＡＦ６７８８、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅのウサギポリクローナル抗ＮＬＲＰ１ ＡＢＦ２２、Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓのウサギポリクローナル抗ＮＬＲＰ１ ＮＢ１００−５６１４８、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈのマウスポリクローナル抗ＮＬＲＰ１ ＳＡＢ１４０７１５１、Ａｂｃａｍのウサギポリクローナル抗ＮＬＲＰ１ ａｂ３６８３、Ｂｉｏｒｂｙｔのウサギポリクローナル抗ＮＬＲＰ１ ｏｒｂ３２５９２２、ｍｙｂｉｏｓｏｕｒｃｅのウサギポリクローナル抗ＮＬＲＰ１ ＭＢＳ７００１２２５、Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓのヒツジポリクローナルＡＦ６７８８、Ａｖｉｖａ Ｓｙｓｔｅｍｓのマウスモノクローナル抗ＮＬＲＰ１ ｏａｅｄ００３４４、Ａｖｉｖａ Ｓｙｓｔｅｍｓのウサギポリクローナル抗ＮＬＲＰ１ ＡＲＯ５４４７８＿Ｐ０５０、Ｏｒｉｇｅｎｅのウサギポリクローナル抗ＮＬＲＰ１ ＡＰＯ７７７５ＰＵ−Ｎ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｏｎｌｉｎｅのウサギポリクローナル抗ＮＬＲＰ１ ＡＢＩＮ７６８９８３、Ｐｒｏｓｃｉのウサギポリクローナル抗ＮＬＲＰ１ ３０３７、Ｐｒｏｔｅｉｎｔｅｃｈのウサギポリクローナル抗ＮＬＲＰ１ １２２５６−１−ＡＰ、Ｅｎｚｏのマウスモノクローナル抗ＮＬＲＰ１ ＡＬＸ−８０４−８０３−Ｃ１００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎのマウスモノクローナル抗ＮＬＲＰ１ ＭＡ１−２５８４２、ＧｅｎｅＴｅｘのマウスモノクローナル抗ＮＬＲＰ１ ＧＴＸ１６０９１、Ｒｏｃｋｌａｎｄのウサギポリクローナル抗ＮＬＲＰ１ ２００−４０１−ＣＸ５、またはＣｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙのウサギポリクローナル抗ＮＬＲＰ１ ４９９０が挙げられる。ヒトＮＬＲＰ１タンパク質は、受託番号ＡＡＨ５１７８７、ＮＰ＿００１０２８２２５、ＮＰ＿０５５７３７、ＮＰ＿１２７４９７、ＮＰ＿１２７４９９またはＮＰ＿１２７５００であり得る。一実施形態では、抗体は、哺乳動物のＮＬＲＰ１タンパク質（例えば、ヒトＮＬＲＰ１）のパイリン、ＮＡＣＨＴ、ＬＲＲ１−６、ＦＩＩＮＤもしくはＣＡＲＤドメイン、またはその部分もしくは断片に結合する。この実施形態では、本明細書に記載の抗体は、ヒトＮＬＲＰ１の特異的ドメイン（例えば、パイリン、ＮＡＣＨＴ、ＬＲＲ１−６、ＦＩＩＮＤまたはＣＡＲＤ）もしくはその断片と、少なくとも６５％（例えば、６５、７０、７５、８０、８５％）の配列同一性を有するアミノ酸配列に特異的に結合する。一実施形態では、Ａｙｅｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓによって特別注文で設計および製造されたニワトリ抗ＮＬＲＰ１ポリクローナルを使用することができる。この抗体は、以下のヒトＮＬＲＰ１のアミノ酸配列：ＣＥＹＹＴＥＩＲＥＲＥＲＥＫＳＥＫＧＲ（配列番号３）に対して作られ得る。一実施形態では、抗体は、配列番号３または配列番号４のアミノ酸配列と少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列に特異的に結合する。
カスパーゼ−１に特異的に結合する任意の適切な抗体を使用することができ、例えば、特別注文品または市販品を、本明細書において提供される方法において使用することができる。本明細書において提供される方法における使用のための市販の抗カスパーゼ−１抗体の例としては、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ：カタログ番号ＭＡＢ６２１５またはカタログ番号ＡＦ６２１５；Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ：カタログ番号３８６６、カタログ番号２２５またはカタログ番号４１９９；Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ：カタログ番号ＮＢ１００−５６５６５、カタログ番号ＮＢＰ１−４５４３３、カタログ番号ＮＢ１００−５６５６４、カタログ番号ＭＡＢ６２１５、カタログ番号ＡＦ６２１５、カタログ番号ＮＢＰ２−６７４８７、カタログ番号ＮＢＰ２−１５７１３、カタログ番号ＮＢＰ２−１５７１２、カタログ番号ＮＢＰ１−８７６８０、カタログ番号ＮＢ１２０−１８７２、カタログ番号ＮＢＰ１−７６６０５またはカタログ番号Ｈ０００００８３４−Ｍ０１が挙げられる。
ＩＬ−１８に特異的に結合する任意の適切な抗体を使用することができ、例えば、特別注文品または市販品を、本明細書において提供される方法において使用することができる。本明細書において提供される方法における使用のための市販の抗ＩＬ−１８抗体の例としては、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ：カタログ番号Ｄ０４４−３，カタログ番号Ｄ０４５−３、カタログ番号ＭＡＢ６４６、カタログ番号ＡＦ２５４８、カタログ番号Ｄ０４３−３、カタログ番号ＭＡＢ２５４８、ＭＡＢ９１２４、カタログ番号ＭＡＢ９１２４１、カタログ番号ＭＡＢ９１２４３、カタログ番号ＭＡＢ９１２４４またはカタログ番号ＭＡＢ９１２４２；Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ：カタログ番号ＡＦ２５４８、カタログ番号Ｄ０４３−３、カタログ番号ＭＡＢ２５４８、カタログ番号ＭＡＢ９１２４、カタログ番号ＭＡＢ９１２４３、カタログ番号ＭＡＢ９１２４４、カタログ番号ＭＡＢ９１２４１、カタログ番号Ｄ０４５−３、カタログ番号ＭＡＢ９１２４２またはカタログ番号Ｄ０４４−３が挙げられる。
ＩＬ−１ベータに特異的に結合する任意の適切な抗体を使用することができ、例えば、特別注文品または市販品を、本明細書において提供される方法において使用することができる。本明細書において提供される方法における使用のための市販の抗ＩＬ−１８抗体の例としては、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ：カタログ番号ＭＡＢ６０１、カタログ番号ＭＡＢ２０１、カタログ番号ＭＡＢ６９６４、カタログ番号ＭＡＢ６０１Ｒ、カタログ番号ＭＡＢ８４０６またはカタログ番号ＭＡＢ６２１５；Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ：カタログ番号３１２０２、カタログ番号６３１２４、カタログ番号１２４２６またはカタログ番号１２５０７；Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ：カタログ番号ＡＦ−２０１−ＮＡ、カタログ番号ＮＢ６００−６３３、カタログ番号ＭＡＢ２０１、カタログ番号ＭＡＢ６０１、カタログ番号ＮＢＰ１−１９７７５、カタログ番号ＮＢＰ２−２７３４５、カタログ番号ＡＢ−２０１−ＮＡ、カタログ番号ＮＢＰ２−２７３４２、カタログ番号ＮＢＰ２−６７８６５、カタログ番号ＮＢＰ２−２７３４３、カタログ番号ＮＢＰ２−２７３４０、カタログ番号ＮＢＰ２−２７３４０、カタログ番号ＮＢ１２０−８３１９、カタログ番号２３６００００２、カタログ番号ＭＡＢ８４０６、カタログ番号ＮＢ１００−７３０５３、カタログ番号ＮＢ１２０−１０７４９またはカタログ番号ＭＡＢ６０１Ｒが挙げられる。
競合阻害によってモノクローナル抗体の特異性および親和性を決定するための方法は、Harlow, et al., Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1988、Colligan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1992, 1993)およびMuller, Meth. Enzymol. 92:589-601, 1983に見ることができ、これらの参照文献は、全体として参照によって本明細書に組み込まれる。
本発明の抗インフラマソーム（例えば、抗ＡＳＣおよび抗ＮＬＲＰ１）抗体は、限定されないが、ポリペプチドもしくは抗原断片による適切な動物への接種、リンパ球の集団のｉｎ ｖｉｔｒｏの刺激、合成的方法、ハイブリドーマ、および／またはこのような抗ＡＳＣもしくは抗ＮＬＲＰ１抗体をコードする核酸を発現する組換え細胞などの方法に従って、日常的に作ることができる。精製された組換えＡＳＣまたはそのペプチド断片、例えば、ラットＡＳＣ（例えば、受託番号ＢＡＣ４３７５４）の１７８〜１９３残基（配列番号１）またはヒトＡＳＣの配列番号２を使用する動物の免疫化は、抗ＡＳＣ抗体を調製する方法の例である。同様に、精製された組換えＮＬＲＰ１またはそのペプチド断片、例えば、ラットＮＡＲＰ１のＭＥＥ ＳＱＳ ＫＥＥ ＳＮＴ ＥＧ−ｃｙｓ残基（配列番号４）またはヒトＮＡＬＰ１の配列番号３を使用する動物の免疫化は、抗ＮＬＲＰ１抗体を調製する方法の例である。
ＡＳＣまたはＮＬＲＰ１に特異的に結合するモノクローナル抗体は、当業者に公知の方法によって得られ得る。例えば、Kohler and Milstein, Nature 256:495-497, 1975；米国特許第４，３７６，１１０号；Ausubel et al., eds., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1987, 1992)；Harlow and Lane ANTIBODIES: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1988； Colligan et al., eds., Current Protocols in Immunology, Greene Publishing Assoc. and Wiley Interscience, N.Y., (1992, 1993)を参照されたい、これらの内容は、参照により全体として本明細書に組み込まれる。このような抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＧＩＬＤを含む任意の免疫グロブリンクラス、およびこれらの任意のサブクラスであり得る。本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｓｉｔｕまたはｉｎ ｖｉｖｏで培養され得る。
本明細書において提供されるいずれかの方法において、「生体試料」は、患者もしくは対象から得られた任意の体液または組織を指すことができる。生体試料としては、限定されないが、全血、赤血球、血漿、血清、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、尿、唾液、涙液、頬側スワブ、ＣＳＦ、ＣＮＳ微小透析液および神経組織を挙げることができる。一実施形態では、生体試料は、ＣＳＦ、唾液、血清、血漿または尿である。ある特定の実施形態では、生体試料はＣＳＦである。別の実施形態では、生体試料は、血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である。ＥＶは、当技術分野において公知の任意の方法によって血清から分離することができる。患者または試験対象から得られた生体試料が、対照の対象から得られた生体試料と同じ種類であり得ることに留意すべきである。
一部の例では、本明細書において提供される方法は、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、最大で１００％の成功予測で、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、脳卒中、ＭＳまたはＴＢＩ）を診断または検出する能力を有し得る。
一部の例では、本明細書において提供される方法は、少なくとも約７０％、少なくとも約７１％、少なくとも約７２％、約７３％、約７４％、約７５％、約７６％、約７７％、約７８％、約７９％、約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、最大で１００％の感度および／または特異度で、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、脳卒中、ＭＳまたはＴＢＩ）を診断または検出する能力を有し得る。
一実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルの上昇の検出が、少なくとも７５、８０、９０％、９５％、９９％または１００％の感度で患者がＭＳを有すると決定するような、ＭＳである。別の実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルの上昇の検出が、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で患者がＭＳを有すると決定するような、ＭＳである。これらの実施形態のための所定の参照値は、表７に示すカットオフ値であり得る。さらに別の実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルの上昇の検出が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度で患者がＭＳを有すると決定するような、ＭＳである。この実施形態のための所定の参照値は、表７に示すカットオフ値であり得る。一部の場合では、参照値の範囲は、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度に達するために、約３００ｐｇ／ｍｌ〜約３４０ｐｇ／ｍｌであり得る。
一実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルの上昇の検出が、少なくとも７５、８０、９０％、９５％、９９％または１００％の感度で患者が脳卒中を患っていると決定するような、脳卒中である。別の実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルの上昇の検出が、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で患者がＭＳを有すると決定するような、脳卒中である。これらの実施形態のための所定の参照値は、表８に示すカットオフ値であり得る。別の実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルの上昇の検出が、少なくとも１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、患者が脳卒中を患っていると決定するような、脳卒中である。この実施形態のための所定の参照値は、表８に示すカットオフ値であり得る。一部の場合では、参照値の範囲は、少なくとも１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度に達するために、約３８０ｐｇ／ｍｌ〜約４０５ｐｇ／ｍｌであり得る。脳卒中は、本明細書に提供されるような、虚血性または出血性（hemorraghic）であり得る。
一実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清由来ＥＶ中のＡＳＣのレベルの上昇の検出が、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度で患者が脳卒中を患っていると決定するような、脳卒中である。別の実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清由来ＥＶ中のＡＳＣのレベルの上昇の検出が、少なくとも７５、８０、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で患者がＭＳを有すると決定するような、脳卒中である。これらの実施形態のための所定の参照値は、表９に示すカットオフ値であり得る。別の実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清由来ＥＶ中のＡＳＣのレベルの上昇の検出が、少なくとも１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、患者が脳卒中を患っていると決定するような、脳卒中である。この実施形態のための所定の参照値は、表９に示すカットオフ値であり得る。一部の場合では、参照値の範囲は、少なくとも１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度に達するために、約７０ｐｇ／ｍｌ〜約９０ｐｇ／ｍｌであり得る。脳卒中は、本明細書に提供されるような、虚血性または出血性であり得る。
一実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルの上昇の検出が、少なくとも７５、８０、９０％、９５％、９９％または１００％の感度で患者がＴＢＩを有すると決定するような、ＴＢＩである。別の実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルの上昇の検出が、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で患者がＴＢＩを有すると決定するような、ＴＢＩである。これらの実施形態のための所定の参照値は、表１６に示すカットオフ値であり得る。さらに別の実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルの上昇の検出が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度で患者がＴＢＩを有すると決定するような、ＴＢＩである。この実施形態のための所定の参照値は、表１６に示すカットオフ値であり得る。一部の場合では、参照値の範囲は、少なくとも８０％の感度、および少なくとも７０％の特異度に達するために、約２７５ｐｇ／ｍｌ〜約４５０ｐｇ／ｍｌであり得る。
一実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のカスパーゼ−１のレベルの上昇の検出が、少なくとも７５、８０、９０％、９５％、９９％または１００％の感度で患者がＴＢＩを有すると決定するような、ＴＢＩである。別の実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のカスパーゼ−１のレベルの上昇の検出が、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で患者がＴＢＩを有すると決定するような、ＴＢＩである。これらの実施形態のための所定の参照値は、表１５に示すカットオフ値であり得る。さらに別の実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のカスパーゼ−１のレベルの上昇の検出が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度で患者がＴＢＩを有すると決定するような、ＴＢＩである。この実施形態のための所定の参照値は、表１５に示すカットオフ値であり得る。一部の場合では、参照値の範囲は、少なくとも７０％の感度、および少なくとも７５％の特異度に達するために、約２．８１２ｐｇ／ｍｌ〜約１．８５３ｐｇ／ｍｌであり得る。
一実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルの上昇の検出が、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度で患者がＭＣＩを有すると決定するような、ＭＣＩである。別の実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルの上昇の検出が、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で患者がＭＣＩを有すると決定するような、ＭＣＩである。これらの実施形態のための所定の参照値は、表２２および２３に示すカットオフ値であり得る。さらに別の実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルの上昇の検出が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも７０％の特異度で患者がＭＣＩを有すると決定するような、ＭＣＩである。この実施形態のための所定の参照値は、表２２および２３に示すカットオフ値であり得る。一部の場合では、参照値の範囲は、少なくとも９０％の感度、および少なくとも７０％の特異度に達するために、約２５７ｐｇ／ｍｌ〜約３４２ｐｇ／ｍｌであり得る。
一実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のＩＬ−１８のレベルの上昇の検出が、少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度で患者がＭＣＩを有すると決定するような、ＭＣＩである。別の実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のＩＬ−１８のレベルの上昇の検出が、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で患者がＭＣＩを有すると決定するような、ＭＣＩである。これらの実施形態のための所定の参照値は、表２２および２５に示すカットオフ値であり得る。さらに別の実施形態では、脳傷害は、本明細書において提供される対照（例えば、所定の参照値または参照値の範囲）と比較して、患者から得られた血清中のＩＬ−１８のレベルの上昇の検出が、少なくとも７０％の感度、および少なくとも５５％の特異度で患者がＭＣＩを有すると決定するような、ＭＣＩである。この実施形態のための所定の参照値は、表２２および２５に示すカットオフ値であり得る。一部の場合では、参照値の範囲は、少なくとも７０％の感度、および少なくとも５０％の特異度に達するために、約２００ｐｇ／ｍｌ〜約２１４ｐｇ／ｍｌである。
本明細書において提供されるいずれかの方法において、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、脳卒中、ＭＳまたはＴＢＩ）を予測または診断するためのインフラマソームタンパク質（例えば、ＡＳＣ）の感度および／または特異度は、信頼区間（例えば９５％）で、曲線下面積（ＡＵＣ）値の計算によって決定される。曲線下面積（ＡＵＣ）は、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線から決定することができる。
一実施形態では、脳傷害は、対照の対象から得られた生体試料中の同じ少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを上回って所定のパーセンテージまで上昇した患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルまたは濃度の検出が、ＭＳを有すると患者を示すような、ＭＳである。患者および対照の対象から得られた生体試料は、同じ種類（例えば、血清、または血清由来ＥＶ）であり得る。所定のパーセンテージは、約、最大で、または少なくとも、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％または２００％であり得る。少なくとも１つのインフラマソームタンパク質は、カスパーゼ−１、ＩＬ−１８、ＩＬ−１ベータおよびＡＳＣから選択することができる。一実施形態では、脳傷害は、対照の対象から得られた血清試料中のＡＳＣのレベルよりも少なくとも５０％高い、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルまたは濃度の検出が、ＭＳを有すると患者を示すような、ＭＳである。
一実施形態では、脳傷害は、対照の対象から得られた生体試料中の同じ少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを上回って所定のパーセンテージまで上昇した患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルまたは濃度の検出が、ＭＳを有すると患者を示すような、脳卒中である。患者および対照の対象から得られた生体試料は、同じ種類（例えば、血清、または血清由来ＥＶ）であり得る。所定のパーセンテージは、約、最大で、または少なくとも、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％または２００％であり得る。少なくとも１つのインフラマソームタンパク質は、カスパーゼ−１、ＩＬ−１８、ＩＬ−１ベータおよびＡＳＣから選択することができる。一実施形態では、脳傷害は、対照の対象から得られた血清試料中のＡＳＣのレベルよりも少なくとも７０％高い、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルまたは濃度の検出が、脳卒中を患っていると患者を示すような、脳卒中である。一実施形態では、脳傷害は、対照の対象から得られた血清由来ＥＶ試料中のＡＳＣのレベルよりも少なくとも１１０％高い、患者から得られた血清由来ＥＶ中のＡＳＣのレベルまたは濃度の検出が、脳卒中を患っていると患者を示すような、脳卒中である。
一実施形態では、脳傷害は、対照の対象から得られた生体試料中の同じ少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを上回って所定のパーセンテージまで上昇した患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルまたは濃度の検出が、ＴＢＩを有すると患者を示すような、ＴＢＩである。患者および対照の対象から得られた生体試料は、同じ種類（例えば、血清、または血清由来ＥＶ）であり得る。所定のパーセンテージは、約、最大で、または少なくとも、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％または２００％であり得る。少なくとも１つのインフラマソームタンパク質は、カスパーゼ−１、ＩＬ−１８、ＩＬ−１ベータおよびＡＳＣから選択することができる。一実施形態では、脳傷害は、対照の対象から得られた血清試料中のＡＳＣのレベルよりも少なくとも５０％高い、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルまたは濃度の検出が、ＴＢＩを有すると患者を示すような、ＴＢＩである。
一実施形態では、脳傷害は、対照の対象から得られた生体試料中の同じ少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを上回って所定のパーセンテージまで上昇した患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルまたは濃度の検出が、ＭＣＩを有すると患者を示すような、ＭＣＩである。患者および対照の対象から得られた生体試料は、同じ種類（例えば、血清、または血清由来ＥＶ）であり得る。所定のパーセンテージは、約、最大で、または少なくとも、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％、１００％、１１０％、１２０％、１３０％、１４０％、１５０％、１６０％、１７０％、１８０％、１９０％または２００％であり得る。少なくとも１つのインフラマソームタンパク質は、カスパーゼ−１、ＩＬ−１８、ＩＬ−１ベータおよびＡＳＣから選択することができる。一実施形態では、脳傷害は、対照の対象から得られた血清試料中のＡＳＣのレベルよりも少なくとも５０％高い、患者から得られた血清中のＡＳＣのレベルまたは濃度の検出が、ＭＣＩを有すると患者を示すような、ＭＣＩである。
本発明は、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、脳卒中、ＭＳまたはＴＢＩ）を有する患者についての予後を決定する方法も提供する。一実施形態では、この方法は、患者から得られた生体試料を提供するステップ、および生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定して、上記に記載のインフラマソームタンパク質プロファイルを調製するステップを含み、ここで、インフラマソームタンパク質プロファイルは、患者の予後を示す。一部の実施形態では、所定の参照値または参照値の範囲に対する１つもしくは複数のインフラマソームタンパク質（例えば、ＩＬ−１８、ＮＬＲＰ１、ＡＳＣ、カスパーゼ−１またはこれらの組合せ）のレベルの増加は、より悪い予後を示す。例えば、所定の参照値または参照値の範囲に対する１つもしくは複数のインフラマソームタンパク質のレベルの約２０％〜約３００％の増加は、より悪い予後を示す。一部の場合では、インフラマソームタンパク質は、ＡＳＣであり、所定の参照値は、表７〜９、１６、２２または２３に由来し得る。
処置の方法
本発明の他の実施形態では、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、脳卒中、ＭＳまたはＴＢＩ）を有すると患者を診断または評価する方法は、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の測定されたレベルに基づいて、または脳傷害（例えば、ＭＣＩ、脳卒中、またはＭＳもしくはＴＢＩ）に関連するタンパク質シグネチャーが特定された場合に、患者に、前記脳傷害（例えば、ＭＣＩ、ＴＢＩ、脳卒中またはＭＳ）の標準ケアの処置を投与するステップをさらに含む。脳傷害（例えば、ＭＣＩ、脳卒中、ＭＳまたはＴＢＩ）を有すると患者を診断または評価する方法は、本明細書に記載の方法を使用して確かめることができる。一部の実施形態では、脳傷害を有する患者を診断または評価する方法は、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の測定されたレベルに基づいて、または脳傷害に関連するタンパク質シグネチャー、もしくはより重度の脳傷害が特定された場合、患者に、神経保護処置を投与するステップをさらに含む。このような神経保護処置としては、興奮毒性、酸化的ストレスおよび炎症を低減させる薬物が挙げられる。このように、適切な神経保護処置としては、限定されるものではないが、メチルプレドニゾロン、１７アルファ−エストラジオール、１７ベータ−エストラジオール、ジンセノサイド、プロゲステロン、シンバスタチン、デプレニル、ミノサイクリン、レスベラトロール、および他のグルタミン酸受容体アンタゴニスト（例えば、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト）ならびに抗酸化剤が挙げられる。一部の実施形態では、神経保護処置は、インフラマソームタンパク質に対する抗体、またはその結合断片、例えば、本明細書において提供されるインフラマソームタンパク質に対する抗体である。
標準ケアの処置の成功または応答は、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定することによって監視することもできる。したがって、一部の実施形態では、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、脳卒中、ＭＳまたはＴＢＩ）を有する患者を評価または診断する方法は、処置の後に患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ、処置に対する正の応答に関連する処置のタンパク質シグネチャーを調製するステップであって、処置のタンパク質シグネチャーが少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの低減を含む、ステップ、および処置に対して正に応答する処置のタンパク質シグネチャーの存在を示す患者を特定するステップをさらに含む。１つまたは複数のインフラマソームタンパク質（例えば、ＡＳＣ、ＩＬ−１８またはカスパーゼ−１）のレベル、存在量または濃度の低減は、患者における処置の有効性を示す。処置の後に得られた試料中で測定された１つまたは複数のインフラマソームタンパク質は、処置の前に得られた試料中で測定されたインフラマソームタンパク質と同じまたは異なり得る。インフラマソームタンパク質のレベルはまた、処置の投薬量または頻度を調整するために使用され得る。インフラマソームタンパク質のレベルは、本明細書において提供される方法および手法を使用して、確かめることができる。
一実施形態では、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、ＴＢＩ、脳卒中またはＭＳ）はＭＳであり、標準ケアの処置は、疾患転帰の修正、再発の管理、症状の管理またはそれらの任意の組合せを対象とする治療から選択される。疾患転帰の修正を対象とする治療は、ベータ−インターフェロン、酢酸グラチラマー、フィンゴリモド、テリフルノミド、フマル酸ジメチル、ミトキサントロン（mitoxanthrone）、オクレリズマブ、アレムツズマブ、ダクリズマブおよびナタリズマブから選択することができ、脳卒中は、虚血性脳卒中、一過性虚血性脳卒中または出血性脳卒中である。
別の実施形態では、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、ＴＢＩ、脳卒中またはＭＳ）は、虚血性脳卒中または一過性虚血性脳卒中であり、標準ケアの処置は、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、抗血小板薬、抗凝固薬、頸動脈血管形成術、頸動脈内膜剥離術、動脈内血栓溶解および脳虚血における機械的血塊除去（ＭＥＲＣＩ）またはこれらの組合せから選択される。また別の実施形態では、脳傷害（例えば、ＴＢＩ、脳卒中またはＭＳ）は、出血性脳卒中であり、標準ケアの処置は、動脈瘤クリッピング、コイル塞栓術または動静脈奇形（ＡＶＭ）修復である。
別の実施形態では、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、ＴＢＩ、脳卒中またはＭＳ）は、ＴＢＩであり、標準ケアの処置は、利尿薬、抗発作薬、昏睡を誘導する薬物、外科手術および／またはリハビリテーションから選択される。利尿薬は、組織中の液体の量を低減させ、尿量を増加させるために使用することができる。外傷性脳傷害を有する人々に静脈内に与えられる利尿薬は、脳の内側の圧力の低減を助けることができる。抗発作薬は、発作によって引き起こされる可能性がある任意の追加の脳の損傷を回避するために、最初の週の間に与えられ得る。継続的な抗発作処置は、発作が起こる場合にのみ使用される。昏睡を誘導する薬物は、昏睡状態の脳が機能するために必要な酸素が少ないので、人々を一時的な昏睡状態にする薬物として使用されることがあり得る。これは、脳における圧力の増加によって血管が圧迫され、脳細胞に正常な量の栄養素および酸素を供給することができない場合に、特に有益であり得る。ＴＢＩの重症度は、グラスゴー昏睡尺度を使用して評価することができる。この１５点の試験は、医師または他の救急医療スタッフが、指示に従って、眼および手足を動かす人の能力をチェックすることによって、脳傷害の初期の重症度を評価するのに役立ち得る。発声の干渉性は、重要な糸口を提供することもできる。能力は、グラスゴー昏睡尺度において、３〜１５でスコア化される。より高いスコアは、重度のより低い傷害を意味する。
さらに別の実施形態では、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、ＴＢＩ、脳卒中またはＭＳ）は、ＭＣＩであり、標準ケア処置は、コンピューター化認知訓練、集団記憶訓練、個々の無誤学習セッション、家族記憶戦略介入、ＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）、ＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）、ｇｉｎｋｏ ｂｉｌｏｂａ、ドネペジル、リバスチグミン（rivastigimine）、トリフルサル、Ｈｕａｎｎａｏ Ｙｉｃｏｎｇカプセル、ピリベジル、ニコチンパッチ、ビタミンＥ、ビタミンＢ１２およびＢ６、葉酸、ロフェコキシブ、ガランタミン、コリンエステラーゼ阻害剤、メマンチン、リチウム、Ｗｕｚｉ Ｙａｎｚｏｎｇ顆粒、ニンジンならびに運動から選択される。
キット
本明細書において、脳傷害（例えば、ＭＣＩ、脳卒中、ＭＳまたはＴＢＩ）に関連するインフラマソームタンパク質プロファイルを調製するためのキットも提供する。キットは、少なくとも１つのインフラマソームタンパク質を測定するための試薬、および患者の脳傷害（例えば、ＭＣＩ、脳卒中、ＭＳまたはＴＢＩ）の重症度を評価するための前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質を測定するための使用説明書を含み得る。本明細書で使用される場合、「試薬」は、本明細書に記載の方法のいずれか１つによって、１つもしくは複数のタンパク質を検出または定量化するために必要な成分を指す。例えば、一部の実施形態では、１つまたは複数のインフラマソームタンパク質を測定するためのキットは、本明細書に記載の１つまたは複数のインフラマソームタンパク質を検出するために、液体もしくはガスクロマトグラフィー、質量分析、イムノアッセイ、免疫ブロットまたは電気泳動を行うための試薬を含むことができる。一部の実施形態では、キットは、ＩＬ−１８、ＡＳＣ、カスパーゼ−１もしくはこれらの組合せから選択される１つまたは複数のインフラマソームタンパク質を測定するための試薬を含む。
一実施形態では、キットは、１つまたは複数のインフラマソームタンパク質に特異的に結合する標識化結合パートナーを含み、前記１つまたは複数のインフラマソームタンパク質は、ＩＬ−１８、ＡＳＣ、カスパーゼ−１およびこれらの組合せからなる群から選択される。インフラマソームタンパク質への特異的な結合のための適切な結合パートナーとしては、限定されるものではないが、抗体およびその断片、アプタマー、ペプチドなどが挙げられる。ある特定の実施形態では、ＡＳＣを検出するための結合パートナーは、抗体またはその断片であり、ＡＳＣに対する抗体は、当技術分野において公知の任意の抗体および／または市販品であり得る。本明細書において提供される方法における使用のための抗ＡＳＣ抗体の例を本明細書に記載する。ある特定の実施形態では、ＡＳＣを検出するための結合パートナーは、ラットＡＳＣおよびヒトＡＳＣの配列番号１または配列番号２のアミノ酸配列にそれぞれ特異的に結合する、抗体もしくはその断片、アプタマー、またはペプチドである。ある特定の実施形態では、ＩＬ−１８を検出するための結合パートナーは、抗体またはその断片である。ＩＬ−１８への抗体は、例えば、本明細書において提供されるものなどの、当技術分野において公知の任意の抗体および／または市販品であり得る。ある特定の実施形態では、カスパーゼ−１を検出するための結合パートナーは、抗体またはその断片である。カスパーゼ−１への抗体は、例えば、本明細書において提供されるものなどの、当技術分野において公知の任意の抗体および／または市販品であり得る。ある特定の実施形態では、ＩＬ−１ベータを検出するための結合パートナーは、抗体またはその断片である。ＩＬ−１ベータへの抗体は、例えば、本明細書において提供されるものなどの、当技術分野において公知の任意の抗体および／または市販品であり得る。結合パートナーにコンジュゲートすることができる標識としては、金属ナノ粒子（例えば、金、銀、銅、白金、カドミウムおよび複合ナノ粒子）、蛍光標識（例えば、フルオレセイン、テキサスレッド、緑色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質、シアン蛍光タンパク質、Ａｌｅｘａ染料分子など）および酵素標識（例えば、アルカリホスファターゼ、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ベータ−ガラクトシダーゼ、ベータ−ラクタマーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、ラクトペルオキシダーゼ、ルシフェラーゼ、ミエロペルオキシダーゼおよびアミラーゼ）が挙げられる。
本発明を、以下の具体的実施例によってさらに説明する。実施例は、説明のみのために提供され、本発明の範囲を決して限定するものとして解釈されるべきではない。
（実施例１）
多発性硬化症（ＭＳ）のバイオマーカーとしてのインフラマソームタンパク質の検討
多発性硬化症（ＭＳ）は、脳および脊髄に影響を与える自己免疫疾患である。ＭＳを有する患者のケアに重要なことは、疾患の開始、疾患の悪化および処置への応答を予測することができるバイオマーカーについての必要性である１。
インフラマソームは、ＣＮＳにおいて脊髄傷害後の炎症を媒介することが最初に記載された先天性免疫応答の重要なメディエーターである２。インフラマソームは、カスパーゼ−１の活性化ならびに炎症促進性サイトカインであるＩＬ−１βおよびＩＬ−１８のプロセシングに関与する多タンパク質複合体である３。
この実施例において、ＭＳを有する患者からの血清試料中のインフラマソームタンパク質の発現レベルが決定される。さらに、ＭＳのバイオマーカーとしてのインフラマソームシグナル伝達タンパク質の感度および特異度の検討を調べた。
材料および方法
参加者：
この研究において、１２０人の正常なドナーおよびＭＳと診断された３２人の患者からの血清試料を分析した。試料は、ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴから購入した。正常なドナー群は、２０〜７０歳の年齢範囲の、６０人の男性および６０人の女性のドナーから得られた試料で構成された。ＭＳ群の年齢範囲は、２４〜６４歳の年齢範囲の患者から得られた試料で構成された（図４）。
タンパク質アッセイ：
血清中のインフラマソームタンパク質のＡＳＣ、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１８の濃度を、Ｓｉｍｐｌｅ ＰｌｅｘおよびＳｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘ Ｅｘｐｌｏｒｅｒソフトウェアを使用して分析した。示す結果は、三反復で行われたそれぞれの試料の平均に相当する。当技術分野において公知の任意のシステム／機器を体液中のタンパク質（例えば、インフラマソームタンパク質）のレベルを測定するために使用することができることに留意すべきである。
バイオマーカー分析：
Ｐｒｉｓｍ７ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を、Ｓｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘ Ｅｘｐｌｏｒｅｒソフトウェアから得られたデータを分析するために使用した。群の間の比較を、異常値の特定、続いて、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線下面積および９５％信頼区間（ＣＩ）の決定の後に行った。使用した有意性のｐ値は＜０．０５であった。それぞれのバイオマーカーの感度および特異度を、異なるカットオフポイントの範囲について得た。アッセイの検出のレベルを下回るタンパク質値を与える試料は、その検体についての分析に含めなかった。
ＲＯＣ曲線は、曲線下面積（ＡＵＣ）としてまとめられる。完全なＡＵＣ値は、１．０であり、ここで、集団中の１００％の対象は、ＭＳを有するか、または有さないかが正しく分類される。対照的に、０．５のＡＵＣは、対象が、ＭＳについて陽性または陰性のいずれかに無作為に分類され、臨床的有用性がないことを示す。０．９〜１．０の間のＡＵＣは優れたバイオマーカーに、０．８〜０．９の間のＡＵＣは良好なバイオマーカーに、０．７〜０．８の間のＡＵＣは見込みがあるバイオマーカーに、０．６〜０．７の間のＡＵＣは不十分なバイオマーカーに、０．５〜０．６の間のＡＵＣは不合格のバイオマーカーに当てはめることが提案されている１０。
結果
カスパーゼ−１、ＡＳＣおよびＩＬ−１８は、ＭＳ患者の血清中で上昇する
ＭＳ患者からの血清試料を分析し、インフラマソームシグナル伝達タンパク質のカスパーゼ−１、ＡＳＣ、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１８のタンパク質発現について、Ｓｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘアッセイ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ）を使用して、健康／対照の個体からの血清と比較した（図１Ａ〜１Ｄ）。ＭＳ患者の血清中のカスパーゼ−１、ＡＳＣおよびＩＬ−１８のタンパク質レベルは、対照群より高かった。しかしながら、ＩＬ−１βのレベルは、ＭＳにおいて対照よりも低かった。これらの知見は、ＭＳの病理におけるインフラマソームについての役割を示す以前の報告と一致した６、８、１１。
ＡＳＣおよびカスパーゼ−１は、ＭＳの良好な血清バイオマーカーである
次いで、これらのインフラマソームシグナル伝達タンパク質がＭＳについての病理の信頼できるバイオマーカーである可能性があるかを決定するために、カスパーゼ−１（図２Ａ）、ＡＳＣ（図２Ｂ）、ＩＬ−１ベータ（図２Ｃ）およびＩＬ−１８（図２Ｄ）についての曲線下面積（ＡＵＣ）を決定した。測定された３つのタンパク質のうち、ＡＳＣは、０．９４４８のＡＵＣおよび０．９０３２〜０．９８６４の間のＣＩ（表１）を有する最良のバイオマーカー（図３）であることを示した。加えて、０．８４８のＡＵＣおよび０．７０３〜０．９９２９の間のＣＩを有するカスパーゼ−１も、有望なＭＳのバイオマーカーである。
さらにまた、ＡＳＣについてのカットオフポイントは、８４％の感度および９０％の感度で３５２．４ｐｇ／ｍｌであった（表２）。カスパーゼ−１については、カットオフポイントは、８９％の感度および５６％の特異度で１．３０２ｐｇ／ｍｌであった（表２）。また、本発明者らは、ＡＳＣに関して、１００％の感度のために、カットオフポイントは、５８．２６％の特異度で２４７．２ｐｇ／ｍｌであり、１００％の特異度のために、カットオフポイントは、４６５．１ｐｇ／ｍｌおよび６５．６３％の感度であったことを見出した。カスパーゼ−１の場合では、１００％の感度のために、カットオフポイントは、４４．４４％の特異度で１．１１１ｐｇ／ｍｌであった。１００％の特異度のために、カットオフポイントは、５２．６３％の感度で２．７１８ｐｇ／ｍｌであった。このように、これらの知見は、カスパーゼ−１およびＡＳＣがＭＳのためのバイオマーカーであり得ることを示す。
結論
この研究において、健康な対象と比較した場合に、統計学的に有意に高いＩＬ−１８のレベルがＭＳ患者の血清中で検出された。加えて、患者のコホートにおけるＩＬ−１８についてのＡＵＣは、０．６０５２〜０．８０９７の間のＣＩおよび８４％の感度で０．７０７５であったが、しかしながら、特異度は、カットオフポイントが１９０．１ｐｇ／ｍｌであった場合にたった４４％であった。カットオフポイントが１０４．２ｐｇ／ｍｌであった場合、感度は１００％であったが、特異度はたった６．７２３％であった。同様に、カットオフポイントが４２７．２ｐｇ／ｍｌであった場合、特異度は１００％であったが、感度はたった１５．６３％であった。
さらに、ＩＬ−１βのレベルは、対照群よりもＭＳ群に有意に低かった。ＡＵＣは、０．５８０６〜０．９４３２の間のＣＩで０．７６１９であった。カットオフポイントが６２％の特異度で０．８２５であった場合、感度は１００％であった。
カスパーゼ−１のより高いタンパク質レベルはまた、ＭＳ患者の血清中で見られた。重要なことには、カスパーゼ−１についてのＡＵＣは、０．７０３〜０．９９２９の間のＣＩで０．８４８であった。１．３０２ｐｇ／ｍｌのカットオフポイントで、感度は、５６％の特異度で８９％であった。また、１００％の感度で、カットオフポイントは、４４．４４％の特異度で１．１１１ｐｇ／ｍｌであったが、１００％の特異度で、感度は、２．７１８ｐｇ／ｍｌのカットオフポイントで５２．６３％であった。
また、この実施例において、ＡＳＣは、０．９４４８のＡＵＣおよび０．９０３２〜０．９８６４の間の狭いＣＩで、最も有望なバイオマーカーであった。３５２．４ｐｇ／ｍｌのカットオフポイントは、８４％の感度および９０％の特異度をもたらした。カットオフポイントが２４７．２ｐｇ／ｍｌであった場合、感度は１００％であり、特異度は５８％であった。
このように、これらの知見に基づくと、カスパーゼ−１およびＡＳＣは、高ＡＵＣ値および高感度を有する有望なバイオマーカーである。重要なことには、ＭＳのためのバイオマーカーとしてのカスパーゼ−１およびＡＳＣと他の診断基準の組合せは、この実施例において記載されるものを越えて、ＭＳのためのこれらのバイオマーカーの感度をさらに増加させ得る。ＭＳを有する患者および視神経脊髄炎を有する患者の間を識別するために使用される、血清アクアポリン４抗体（ＡＱＰ４−ＩｇＧ）などの一部の臨床的に使用されるバイオマーカーは、測定のために使用されるアッセイに応じて、１２．５％〜１００％の間の範囲で６２．３％の感度の中央値を有する２９。
１９６０年代から、免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇのオリゴクローナルバンド（ＯＣＢ）は、ＭＳの診断において、古典的なバイオマーカーとして使用されてきた３０。しかしながら、ＩｇＧ−ＯＣＢの特異度は、たった６１％であり、結果として、他の診断基準が、ＭＳの診断を臨床的に決定するために必要であり３１、現在のところ、ＣＳＦ限定ＩｇＧ−ＯＣＢは、ＭＲＩとは独立に、ＣＩＳからＣＤＭＳへの変換についての良好な予測因子である３２。同様の結果は、ＩｇＭ−ＯＣＢを分析する場合に得られている３３。興味深いことに、麻疹、風疹および水痘帯状疱疹（ＭＲＺ）に対するＩｇＧは、ＭＳ患者のＣＳＦに存在し、したがって、ＭＲＺ特異的ＩｇＧは、ＭＳ診断のバイオマーカーとして使用される可能性を有する３４。
重要なことには、この研究において、カスパーゼ−１およびＡＳＣは、高いＡＵＣ値で、ＭＳ病理の可能性のあるバイオマーカーとして特定された；８０％を上回る感度、かつ９０％のＡＳＣの特異度の場合において、それぞれ０．９４４８および０．８４８。
参照による組み込み
以下の参照文献は、すべての目的のために、それらの全体が参照によって組み込まれる。
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（実施例２）
脳卒中のバイオマーカーとしてのインフラマソームタンパク質の検討
序論
バイオマーカーは、客観的に測定することができ、正常または病理学的な生物学的プロセスの指標として評価することができる特徴である９。このため、脳卒中の文脈において、血液または他の体液中のバイオマーカーを、脳卒中の開始の指標として使用することができる。しかしながら、これまでに、脳卒中の診断および管理において通常使用される入手可能なバイオマーカーはない。この目的で、ＩＬ−１０または腫瘍壊死因子などのサイトカイン、およびＣ反応性タンパク質、高移動度群ボックス−１または熱ショックタンパク質などの他の炎症性タンパク質は、脳卒中の患者におけるさらなるバイオマーカー分析のための可能性のある候補として考えられている１０〜１２。
この実施例において、Ｓｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘアッセイ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ）を、カスパーゼ−１、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、インターロイキン（ＩＬ）−１ベータのインフラマソームタンパク質レベルについて、脳卒中患者および対照のドナーからの血清および血清由来ＥＶ試料を分析するために使用した。受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線および関連する信頼区間を、脳卒中後の患者および健康な影響を受けていないドナーからの血清および血清由来ＥＶ試料の分析の後に計算して、インフラマソームタンパク質の感度および特異度を測定し、脳卒中のバイオマーカーとしてのインフラマソームシグナル伝達タンパク質の可能性を確立した。
方法
参加者：この実施例において、８０人の正常なドナーおよび脳卒中と診断された１６人の患者からの血清試料を分析した。試料は、ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴから購入した。正常なドナー群は、４６〜７０歳の年齢範囲の、４０人の男性および４０人の女性ドナーから得られた試料で構成された。脳卒中群の年齢範囲は、４６〜８７歳の年齢範囲の患者から得られた試料で構成された（図１１）。
ＥＶの分離：
血清キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からの総エキソソーム分離による：血清からの総エキソソーム分離を、製造者の使用説明書（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に従って使用した。簡潔には、１００μｌのそれぞれの試料を、２０００×ｇで３０分間遠心分離した。次いで、上清を、２０μｌの総エキソソーム分離試薬とともに４℃で３０分間インキュベートし、続いて、１０，０００×ｇで１０分間、室温で遠心分離した。上清を廃棄し、ペレットを５０μｌのＰＢＳに再懸濁させた。
ＥｘｏＱｕｉｃｋによる：ＥＶを、６に記載のようにして、ＥｘｏＱｕｉｃｋ（ＥＱ、Ｓｙｓｔｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して、血清試料から分離した。簡潔には、１００μｌのそれぞれの試料を３，０００×ｇで１５分間遠心分離した。次いで、上清を、２４．２３μｌのＥｘｏＱｕｉｃｋエキソソーム沈殿溶液（血清用）とともに４℃で３０分間インキュベートし、続いて、１，５００×ｇで３０分間、遠心分離した。上清を廃棄し、残ったＥＱ溶液を１，５００×ｇで５分間遠心分離した。次いで、ペレットを５０μｌのＰＢＳに再懸濁させた。
タンパク質アッセイ：
血清および血清由来ＥＶ中のカスパーゼ−１、ＡＳＣ、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１８のタンパク質濃度を決定するために、Ｓｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘアッセイを行い、Ｓｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘ Ｅｘｐｌｏｒｅｒソフトウェアで分析した。示す結果は、三反復で行われたそれぞれの試料の平均に相当する。当技術分野において公知の任意のシステム／機器を体液中のタンパク質（例えば、インフラマソームタンパク質）のレベルを測定するために使用することができることに留意すべきである。
タンパク質の定量化
分離されたＥＶ中のタンパク質濃度を定量化するために、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）タンパク質アッセイキット（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｆｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．）を、製造者の使用説明書に従って使用した。血清由来ＥＶを、記載されているように、溶解緩衝液に溶解した（１：１希釈）６。
ナノ粒子追跡分析（ＮＴＡ）
ＥＶをＮａｎｏＳｉｇｈｔ ＮＳ３００（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ、およびＭａｌｖｅｒｎ、Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ）によって分析した。分離されたエキソソームを分析のためのＰＢＳ（１：１０００）に希釈し、次いで、３回の９０秒のビデオを記録した。データを、最小バックグラウンドを維持しながら、可能な限り多くの粒子を追跡するために、それぞれの試料について最適化された検出閾値および１０に設定されたスクリーニングゲインで、Ｎａｎｏｓｉｇｈｔ ＮＴＡ ２．３分析ソフトウェア（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｃｏｍｐａｎｙ）を使用して分析した。少なくとも３つの独立した測定をそれぞれの分離された試料について行った。
免疫ブロット法
分離されたＥＶ中のインフラマソームシグナル伝達タンパク質の検出のために、ＥＶを、タンパク質溶解緩衝液に再懸濁させ、１５に記載されているように、免疫ブロット法によって分解した。簡潔には、ペレットの溶解の後、タンパク質を、ＮＬＲＰ３（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、カスパーゼ−１（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ）、ＡＳＣ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）、ＩＬ−１ベータ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）、ＩＬ−１８（Ａｂｃａｍ）、ＣＤ８１（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）およびＮＣＡＭ（Ｓｉｇｍａ）に対する抗体（１：１０００希釈）を使用して、１０〜２０％のＣｒｉｔｅｒｉｏｎ ＴＧＸステインフリープレキャストゲル（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）中で分解した。バンド密度の定量化を、ＵＮ−ＳＣＡＮ−ＩＴ ｇｅｌ ５．３ソフトウェア（Ｓｉｌｋ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を使用して行った。１０μｌの試料をロードした。膜中の化学発光基質（ＬｕｍｉＧｌｏ、Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）を、ＣｈｅｍｉＤｏｃ Ｔｏｕｃｈイメージングシステム（ＢｉｏＲａｄ）を使用してイメージングした。
ゲルイメージング
Ｃｒｉｔｅｒｉｏｎ ＴＧＸステインフリープレキャストゲル中の総タンパク質を、ＣｈｅｍｉＤｏｃ Ｔｏｕｃｈイメージングシステム（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、タンパク質の移動後に、ＣｈｅｍｉＤｏｃ Ｔｏｕｃｈのトレイにゲルを置くことによって、イメージングした。次いで、イメージをスクリーンにおいて調整して、ゲルの全体を示し、アプリケーションウィンドウにおいてステインフリーブロットの設定を実行した。
統計分析
ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎおよびＥｘｏＱｕｉｃｋの分離手順の間の統計比較を、両側スチューデントのｔ検定を使用して行った。
電子顕微鏡手順
ＥＶを、ｆｏｒｍｖａｒ−炭素でコーティングされたグリッドにロードした。次いで、１０μｌの試料滴を、きれいなパラフィルム上に置き、グリッドを、３０分間浮かせた（表を下にして）。その後のステップも、１０μｌの泡上にグリッドを浮かせることによって行った。次いで、ＥＶがロードされたグリッドを、０．１ＭのＭｉｌｌｏｎｉｇのリン酸緩衝液（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）で５分間すすいだ。過剰の液体を排出した。次いで、グリッドを、２％のグルタルアルデヒド中に５分間置いた。その後の洗浄を、７つの異なる泡上で、０．１ＭのＭｉｌｌｏｎｉｇのリン酸緩衝液で５分間、続いて、蒸留水で２分間を７回すすぐことによって行って、過剰のグルタルアルデヒドを除去した。次いで、グリッドを、０．４％の酢酸ウラニル溶液に５分間、移した。グリッドを、イメージングのために乾燥させた。イメージを、８０ｋＶの電圧でＪｏｅｌ ＪＥＭ−１４００透過型電子顕微鏡およびデジタルＧａｔａｎカメラを用いて取得した。
バイオマーカー分析
データを、Ｐｒｉｓｍ７ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を使用して分析した。タンパク質レベルについての群の間の比較を、最初に異常値を特定すること、続いて片側ｔ検定、次いでＲＯＣ曲線下面積、ならびに９５％の信頼区間およびｐ値を決定することによって行った（使用した有意性のｐ値は＜０．０５であった）。最後に、それぞれのバイオマーカーの感度、特異度、陽性予測値（ＰＰＶ）、陰性予測値（ＮＰＶ）および精度を、異なるカットオフポイントの範囲について得た。アッセイの検出のレベルを下回るタンパク質値を与える試料は、特定の検体についての分析に含めなかった。
結果
カスパーゼ−１、ＡＳＣおよびＩＬ−１８は、脳卒中患者の血清中で上昇する：脳卒中患者および対照ドナーからの血清中のインフラマソームタンパク質のタンパク質レベルを決定するために、血清試料を、Ｓｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘシステムを用いて分析した。カスパーゼ−１、ＡＳＣおよびＩＬ−１８のタンパク質レベルは、対照試料と比較した場合、脳卒中患者の血清中で高かったが、ＩＬ−１のレベルは有意差がなかった（図５Ａ〜５Ｄ）。これらの知見は、インフラマソームが脳卒中後の炎症応答に関与することを示す以前のデータを確認する４、１６。
脳卒中の血清バイオマーカーとしてのＡＳＣ：脳卒中患者からの血清中のより高いレベルのインフラマソームタンパク質は、インフラマソームタンパク質が脳卒中の良好なバイオマーカーであることを示す十分な証拠ではない場合がある。このため、ＲＯＣ分析を行って（図６および図１２Ａ〜１２Ｄ）、ＡＵＣを決定した。ＡＳＣについてのＡＵＣは、０．９９１４〜１．００４の間の信頼区間で０．９９７５であった（表３）。ＡＳＣについてのカットオフポイントは、１００％の感度および９６％の特異度で４０４．８ｐｇ／ｍｌであった（表４）。このように、ＡＳＣは脳卒中の信頼できるバイオマーカーであると思われる。
脳卒中患者から分離されたＥＶにおいてロードされたタンパク質の量：血清試料から分離されたエキソソーム中に存在するタンパク質の量を計算するために、ＢＣＡアッセイを、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ法およびＥＱ法によって得られた分離物から行った。データは、ＥＱ法が、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ法よりもよりタンパク質を分離することが可能であったことを示した（図７Ａ〜７Ｃ）。
免疫ブロット分析の間にどのぐらいのタンパク質がゲルにロードされたかを可視化するために、ＣｈｅｍｉＤｏｃ Ｔｏｕｃｈイメージングシステムのステインフリーブロットの設定を使用した。図７Ｂにおける代表的なイメージは、プロテアーゼ阻害剤カクテル（Ｓｉｇｍａ）を含有する溶解緩衝液中に再懸濁された血清由来ＥＶの１０μｌをロードした場合、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキットに相当するレーンは、ＥＱキットに相当するレーンよりもタンパク質が少なかったが、しかしながら、群の間に統計学的有意性がなかったことを示した。
ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのキットおよびＥＱは、脳卒中を有する患者の血清から、ＣＤ８１およびＮＣＡＭ陽性のＥＶを分離する：ＥＶ中に存在するインフラマソームタンパク質が脳卒中の有望なバイオマーカーであるかを決定するために、脳卒中患者の血清からのＥＶを分離した。２つの異なるＥＶ分離の手法を使用して、インフラマソーム含有ＥＶを分離する最も適切な方法を特定した。加えて、ＥＶ｛Ａｎｄｒｅｕ、２０１４ ＃３３｝のマーカーであるテトラスパニンタンパク質のＣＤ８１、およびニューロン由来ＥＶのマーカーである神経細胞接着分子（ＮＣＡＭ）を使用して、分離ＥＶが脳由来であることを実証した｛Ｖｅｌｌａ、２０１６ ＃３６｝。したがって、両方の方法、ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎおよびＥＱからの１つは、ＣＤ８１および（ＮＣＡＭ）陽性ＥＶを分離することが可能であった（図８Ａ）。しかしながら、ＥＱは、より高いレベルのこれらのタンパク質を単離するように見えるが、２つの群の間に統計学的有意差はなかった（図８Ｂおよび図８Ｃ）。ＥＶ陽性対照分離物（Ｓｙｓｔｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を並行して行った。
電子顕微鏡法を、２つの手法によって分離されたＥＶに対して行い、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキットがより均一で円形の小胞を与えたことを見出した（図８Ｄ）。加えて、ＮＴＡ分析は、粒径が両方の手法について４０〜５０ｎｍの範囲であり、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ法によるＥＶの粒子濃度が１．２７ｅ＋００９粒子／ｍｌであり、ＥＱ法による粒子濃度が７．５６＋００８粒子／ｍｌであったことを明らかにした（図８Ｅおよび図８Ｆ）。これらを基に、電子顕微鏡法によって決定された小胞の粒径および均一性に基づくと、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ法がＥＶを分離するためにより適切であるように見える。
ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎのキットおよびＥＱは、脳卒中を有する患者の血清から、インフラマソーム陽性のＥＶを分離する：インフラマソームタンパク質がＥＶ中に存在することが以前に示されている６。インフラマソームタンパク質発現のレベルを、２つの異なる方法によって比較し、２つの異なる方法の間のＮＬＰＲ３、カスパーゼ−１、ＡＳＣおよびＩＬ−１８のレベルに統計学的有意差は見られなかった。しかしながら、ＥＱ法は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ法よりもより高いレベルのＩＬ−１ベータを有するＥＶを分離することが可能であった（図１３Ａ〜１３Ｆを参照されたい）。
ＡＳＣは、脳卒中患者の血清から分離されたＥＶにおいて上昇する：１６人の年齢がマッチしたドナーおよび１６の脳卒中試料の血清からのＥＶ（図１１）を分離し、Ｓｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘ技術を用いてこれらの分離されたＥＶ中のインフラマソームタンパク質のレベルを分析した。ＡＳＣのタンパク質レベルは、対照と比較した場合に、脳卒中試料からの血清由来ＥＶ中で高いままであった（図９Ａ〜９Ｃ）。しかしながら、ＩＬ−１ベータおよびＩＬ−１８のレベルは、２つの群の間で有意差はなかったが、これらの分離ＥＶ中のカスパーゼ−１のレベルは、この検体についてのこれらのアッセイの検出限界を下回った。
血清由来ＥＶ中のＡＳＣは脳卒中の良好なバイオマーカーである：血清由来ＥＶ中のインフラマソームタンパク質が脳卒中の実行可能なバイオマーカーであり得るかを決定するために、ＲＯＣ分析（図１４Ａ〜１４Ｃを参照されたい）を実施し、ＡＳＣが、１のＡＵＣ（表５）および９７．５７ｐｇ／ｍｌのカットオフポイント（表６）を有する脳卒中の信頼できるバイオマーカーであることを見出した（図１０）。
結論
この実施例において、ＡＳＣが脳卒中の開始の信頼できるバイオマーカーであることを示した。血清中のＡＳＣについての曲線下面積（ＡＵＣ）は、０．９９１４〜１．００４の間の信頼区間で０．９９７５であった。このＡＵＣ値は、この研究で分析された他のインフラマソームシグナル伝達タンパク質よりも高く：カスパーゼ−１（０．７５）、ＩＬ−１ベータ（０．６１１１）およびＩＬ−１８（０．６６７５）、ＡＳＣが、この研究で調べられた他のインフラマソームタンパク質に対して優れたバイオマーカーであることを示す。ＡＳＣについてのカットオフポイントは、使用された試料のコホートで、１００％の感度および９６％の特異度で４０４．８ｐｇ／ｍｌであった。重要なことには、ＡＵＣは、患者の小サブセットからの血清由来ＥＶ試料を分析すると、１に増加した。したがって、血清由来ＥＶ中のＡＳＣについてのカットオフポイントは、９７．５７ｐｇ／ｍｌであることが見出された。
この研究において、ＥＱキットを用いてより高いレベルのタンパク質の分離が得られたにもかかわらず、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎキットは、電子顕微鏡によって、および分離された小胞のＮＴＡ分析によって、可視化されたような、より良好な品質のＥＶを提供することが可能であった。重要なことには、両方の方法は、インフラマソームタンパク質を含有するＥＶの分離に効果的であった。
結論として、これらの研究は、血清および血清由来ＥＶ中の脳卒中のバイオマーカーとして、インフラマソームタンパク質、特に、ＡＳＣの可能性を強調する。
参照による組み込み
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（実施例３）
外傷性脳傷害（ＴＢＩ）のバイオマーカーとしてのインフラマソームタンパク質の検討
米国疾病管理センター（「ＣＤＣ」）によって定義されるように、外傷性脳傷害（「ＴＢＩ」）は「頭部への衝突、打撃もしくは衝撃、または貫通する頭部傷害によって引き起こされ得る脳の正常な機能の破壊」である。ＴＢＩを有する患者のケアに重要なことは、開始、悪化および処置への応答を予測することができるバイオマーカーについての必要性である。加えて、分析のためにこれらのバイオマーカーを回収する最小限の侵襲的な方法についての必要性がある。
インフラマソームは、ＣＮＳにおいて脊髄傷害後の炎症を媒介することが最初に記載されている先天性免疫応答の重要なメディエーターである２。インフラマソームは、カスパーゼ−１の活性化ならびに炎症促進性サイトカインであるＩＬ−１βおよびＩＬ−１８のプロセシングに関与する多タンパク質複合体である３。
この実施例において、ＴＢＩを有する患者からの血清試料中のインフラマソームタンパク質の発現レベルが決定される。さらに、ＴＢＩのバイオマーカーとしてのインフラマソームシグナル伝達タンパク質の感度および特異度の検討を調べた。
材料および方法
参加者：
この研究において、１２０人の正常なドナーおよびＴＢＩと診断された２１人の患者からの血清試料を分析した。試料は、ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴから購入した。正常なドナー群は、２０〜７０歳の年齢範囲の、６０人の男性および６０人の女性ドナーから得られた試料で構成された。ＴＢＩ群の年齢範囲は、２４〜６４歳の年齢範囲の患者から得られた試料で構成された。加えて、２１の対照の脳脊髄液（「ＣＳＦ」）試料を、ＢｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎＩＶＴから得て、９つのＣＳＦ試料を患者のコホートから得た。
タンパク質アッセイ：
血清およびＣＳＦ中のインフラマソームタンパク質のＡＳＣ、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１８の濃度を、Ｓｉｍｐｌｅ ＰｌｅｘおよびＳｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘ Ｅｘｐｌｏｒｅｒソフトウェアを使用して分析した。示す結果は、三反復で行われたそれぞれの試料の平均に相当する。当技術分野において公知の任意のシステム／機器を体液中のタンパク質（例えば、インフラマソームタンパク質）のレベルを測定するために使用することができることに留意すべきである。試料を、患者が病院に到着してから最初の５日間、１日３回採取した。試料を、１回目、２回目の採取（１日目）、ならびに４回目および６回目の採取（２日目）について分析した。
バイオマーカー分析：
Ｐｒｉｓｍ７ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を、Ｓｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘ Ｅｘｐｌｏｒｅｒソフトウェアから得られたデータを分析するために使用した。群の間の比較を、異常値の特定、続いて、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線下面積および９５％信頼区間（ＣＩ）の決定の後に行った。使用した有意性のｐ値は＜０．０５であった。それぞれのバイオマーカーの感度および特異度を、異なるカットオフポイントの範囲について得た。アッセイの検出のレベルを下回るタンパク質値を与える試料は、その検体についての分析に含めなかった。
ＲＯＣ曲線は、曲線下面積（ＡＵＣ）としてまとめられる。完全なＡＵＣ値は、１．０であり、ここで、集団中の１００％の対象は、ＴＢＩを有するか、または有さないかが正しく分類される。対照的に、０．５のＡＵＣは、対象が、ＴＢＩについて陽性または陰性のいずれかに無作為に分類され、臨床的有用性がないことを示す。０．９〜１．０の間のＡＵＣは優れたバイオマーカーに、０．８〜０．９の間のＡＵＣは良好なバイオマーカーに、０．７〜０．８の間のＡＵＣは見込みがあるバイオマーカーに、０．６〜０．７の間のＡＵＣは不十分なバイオマーカーに、０．５〜０．６の間のＡＵＣは不合格のバイオマーカーに当てはめることが提案されている５。
結果
カスパーゼ−１およびＡＳＣは、ＴＢＩ後の患者の血清中で上昇する
ＴＢＩ患者からの血清試料を分析し、インフラマソームシグナル伝達タンパク質のカスパーゼ−１、ＡＳＣ、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１８のタンパク質発現について、Ｓｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘアッセイ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ）を使用して、健康／対照の個体からの血清と比較した（図１５Ａ〜１５Ｄ）。ＴＢＩ患者の血清中のカスパーゼ−１、ＡＳＣおよびＩＬ−１８のタンパク質レベルは、対照群より高かった。しかしながら、ＩＬ−１βのレベルは、ＴＢＩにおいて対照よりも低かった。
ＡＳＣおよびカスパーゼ−１は、ＴＢＩの良好な血清バイオマーカーである
次いで、これらのインフラマソームシグナル伝達タンパク質がＴＢＩの病理の信頼できるバイオマーカーである可能性があるかを決定するために、カスパーゼ−１、ＡＳＣ、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１８についての曲線下面積（ＡＵＣ）（図１６Ａ〜Ｄ）を決定した。測定されたタンパク質のうち、カスパーゼ−１およびＡＳＣは、それぞれ、０．９３のＡＵＣ（４回目の採取）および０．９０（６回目の採取）で（表１０Ａ〜１０Ｄ）、最良のバイオマーカー（図１６ＡおよびＢ）であることを示した。
表１０Ａ〜Ｄ：１回目、２回目、４回目および６回目の採取について、面積、標準誤差（ＳＴＤ．ＥＲＲＯＲ）、９５％の信頼区間（ＣＩ）およびｐ値を含む、血清中のインフラマソームシグナル伝達タンパク質であるカスパーゼ−１（表１０Ａ）、ＡＳＣ（表１０Ｂ）、ＩＬ−１β（表１０Ｃ）およびＩＬ−１８（表１０Ｄ）についてのＲＯＣ分析の結果。
さらにまた、カスパーゼ−１についてのカットオフポイントは、９４％の感度および８９％の特異度で１．９４３ｐｇ／ｍｌであった（表１１Ａ）。ＡＳＣについては、カットオフポイントは、８５％の感度および９９％の特異度で４５１．３ｐｇ／ｍｌであった（表１１Ｂ）。また、本発明者らは、カスパーゼ−１に関して、１００％の感度のために、カットオフポイントは、７８％の特異度で１．６７９ｐｇ／ｍｌであったことを見出した。ＡＳＣについては、カットオフポイントは、１５３．４ｐｇ／ｍｌであり、１９％の特異度であった（表１６（４回目の採取）を参照されたい）。カスパーゼ−１の場合では、１００％の特異度のために、カットオフポイントは、７８％の感度で２．７１７ｐｇ／ｍｌであった（表１５（４回目の採取）を参照されたい）。１００％の特異度でのＡＳＣについては、カットオフポイントは、８５％の感度で４６２．４ｐｇ／ｍｌであった（表１６（４回目の採取）を参照されたい）。このように、これらの知見は、カスパーゼ−１およびＡＳＣがＴＢＩのための信頼できる血清バイオマーカーであることを示す。
表１１Ａ〜Ｂ：カットオフポイント（ｐｇ／ｍｌ）、感度および特異度、ならびに陽性および陰性尤度比（ＬＲ＋／ＬＲ−）を含む、血清中のカスパーゼ−１（表１１Ａ）およびＡＳＣ（表１１Ｂ）についてのＲＯＣ分析の結果。
ＡＳＣは、ＴＢＩ後の好ましくない転帰を有する患者の血清中で上昇する
ＴＢＩ患者を、その臨床転帰に従って、６〜８のスコアを有する患者が、好ましい転帰を有すると考えられ、１〜４のスコアを有する患者が、好ましくない転帰を有すると考えられる、拡張グラスゴー転帰尺度（ＧＯＳＥ）に基づいて、好ましい転帰または好ましくない転帰のいずれかに分けた（表１２Ａおよび１２Ｂ）。ＡＳＣのタンパク質レベルは、好ましい転帰を有する患者から得られた試料と比較した場合に、好ましくない転帰を有するＴＢＩ患者の血清中で高かったが（図１９Ｂ）、カスパーゼ−１（図１９Ａ）およびＩＬ−１８（図１９Ｃ）のレベルは、２つの群の間で統計的に相違しなかったことが見出された。
ＡＳＣは、血清中のＴＢＩの良好な予後のバイオマーカーである
ＡＳＣをＴＢＩの予後のバイオマーカーとして使用することができるかを決定するために、本発明者らは、２回目（図２０Ａ）および４回目（図２０Ｂ）の採取でＡＳＣについてＡＵＣを決定した。ＡＳＣについてのＡＵＣは、４回目の採取において、０．７９１４〜１．０４２の間のＣＩで、０．９１６７であった（表１２Ａ）。さらにまた、カットオフポイントは、８６％の感度および１００％の特異度で５４７．６ｐｇ／ｍｌであった（表１２Ｂおよび表１９（４回目の採取））。このように、これらの知見は、ＡＳＣが血清中のＴＢＩの有望な予後のバイオマーカーであることを示した。
表１２Ａ〜Ｂ：１回目、２回目および４回目の採取について、面積、標準誤差（ＳＴＤ．ＥＲＲＯＲ）、９５％信頼区間（ＣＩ）およびｐ値（表１２Ａを参照されたい）、カットオフポイント（ｐｇ／ｍｌ）、感度および特異度、ならびに陽性および陰性尤度比（ＬＲ＋／ＬＲ−）（表１２Ｂを参照されたい）を含む、好ましい転帰（表１２Ａ）対好ましくない転帰（表１２Ｂ）についての血清中のＡＳＣについてのＲＯＣ分析の結果。
ＡＳＣおよびＩＬ−１８は、ＴＢＩ後の患者のＣＳＦ中で上昇する
ＴＢＩ患者からのＣＳＦ試料を分析し、インフラマソームシグナル伝達タンパク質のＡＳＣおよびＩＬ−１８のタンパク質発現について、Ｓｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘアッセイ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｉｍｐｌｅ）を使用して、健康／対照の個体からのＣＳＦと比較した（図１７Ａおよび１７Ｂ）。ＴＢＩ患者の血清中のＡＳＣおよびＩＬ−１８のタンパク質レベルは両方とも、対照群におけるより高かった。
ＡＳＣおよびＩＬ−１８は、ＴＢＩの良好なＣＳＦバイオマーカーである
次いで、これらのインフラマソームシグナル伝達タンパク質がＴＢＩの病理の信頼できるバイオマーカーである可能性があるかを決定するために、ＣＳＦ中のＡＳＣおよびＩＬ−１８についての曲線下面積（ＡＵＣ）（図１８Ａおよび１８Ｂ）を決定した。ＡＳＣおよびＩＬ−１８は、それぞれ、１．０のＡＵＣ（６回目の採取）および０．８４（１回目の採取）で（表１３Ａおよび１３Ｂ）、最良のバイオマーカー（図１８Ａおよび１８Ｂ）であることを示した。
表１３Ａおよび１３Ｂ：カットオフポイント（ｐｇ／ｍｌ）、感度および特異度、ならびに陽性および陰性尤度比（ＬＲ＋／ＬＲ−）を含む、ＣＳＦ中のＡＳＣ（表１３Ａ）およびＩＬ−１８（表１３Ｂ）についてのＲＯＣ分析の結果。
さらにまた、ＡＳＣについてのカットオフポイントは、１００％の感度および１００％の特異度で７４．３３ｐｇ／ｍｌであった（表１４Ａおよび表１７）。ＩＬ−１８については、カットオフポイントは、８０％の感度および６８％の特異度で２．７２２ｐｇ／ｍｌであった（表１４Ｂおよび表１８）。表１８に示すように、ＩＬ−１８の場合では、１００％の特異度のために、カットオフポイントは、６０％の感度で３．８７９ｐｇ／ｍｌであり、１００％の感度のために、カットオフポイントは、１６％の特異度で１．３５８ｐｇ／ｍｌであった。このように、これらの知見は、ＡＳＣおよびＩＬ−１８がＴＢＩのための信頼できる血清バイオマーカーであることを示す。
表１４Ａ〜Ｂ：カットオフポイント（ｐｇ／ｍｌ）、感度および特異度、ならびに陽性および陰性尤度比（ＬＲ＋／ＬＲ−）を含む、ＣＳＦ中のＡＳＣ（表１４Ａ）およびＩＬ−１８（表１４Ｂ）についてのＲＯＣ分析の結果。
結論
この研究において、健康な対象と比較した場合に、ＴＢＩの患者の血清中で、統計学的に有意に高いＡＳＣおよびカスパーゼ−１のレベルが検出された。この研究において、本発明者らは、ＡＳＣおよびＩＬ−１８が、それぞれ１．０および０．８４のＡＵＣ値で、ＣＳＦ中のＴＢＩについての信頼できるバイオマーカーであることを示す。最も重要なことには、ＣＳＦを得ることは非常に侵襲的な手順であるので、その結果、血清における本発明者らの知見は、典型的な臨床背景に対して、さらにいっそう適用可能である。したがって、本発明者らは、ＡＳＣについてのＡＵＣ値が０．９０であり、カスパーゼ−１についてのＡＵＣ値が０．９３であったことを見出した。このように、カスパーゼ−１およびＡＳＣは、脳傷害を有する患者のケアにおけるバイオマーカーとして考慮されるべきである。
また、データは、ＴＢＩ後に慢性的に望ましくない転帰を有する患者と望ましい転帰を有する患者を比較する場合、ＡＳＣについてのＡＵＣは０．９２であったことを示し、このように、血清中のＴＢＩバイオマーカーとして、この場合において、脳傷害の予測バイオマーカーとして、ＡＳＣの有用性を強調する。
このように、これらの知見に基づくと、ＡＳＣおよびカスパーゼ（caspace）−１は両方とも、血清中で高ＡＵＣ値、高感度および高特異度を有する有望なバイオマーカーである。加えて、これらの知見に基づくと、ＡＳＣおよびＩＬ−１８は両方とも、ＣＳＦ中で高ＡＵＣ値、高感度および高特異度を有する有望なバイオマーカーである。重要なことには、ＴＢＩのためのバイオマーカーとしてのＡＳＣと他の診断基準は、この実施例において記載されるものを越えて、ＴＢＩのためのバイオマーカーとしてＡＳＣの感度をさらに増加させ得る。
重要なことには、この研究において、ＡＳＣは、０．９４４８の高ＡＵＣ値、ならびに８０％を上回る感度および９０％を超える特異度で、ＴＢＩ病理の可能性のあるバイオマーカーとして特定された。
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（実施例４）
軽度認知機能障害（ＭＣＩ）のバイオマーカーとしてのインフラマソームタンパク質の検討
序論
バイオマーカーは、客観的に測定することができ、正常または病理学的な生物学的プロセスの指標として評価することができる特徴である１。ＭＣＩを有する患者のケアに重要なことは、開始、悪化および処置への応答を予測することができるバイオマーカーについての必要性である。加えて、分析のためにこれらのバイオマーカーを回収する最小限の侵襲的な方法についての必要性がある。
方法
参加者：
この実施例において、試料はＢｉｏＩＶＴから購入した。試料のドナーは、ＩＲＢ番号２０１７０４３９でＳｅｒａＴｒｉａｌｓ，ＬＬＣ．によって支援された「Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓａｍｐｌｅｓ ｆｏｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ」という研究に登録された。ここで、５０〜６８歳の年齢範囲の７２人の正常な男性および女性のドナーからの血清試料、ならびに５６〜９１歳の年齢範囲のＭＣＩと診断された３２人の男性および女性の患者（表２０）からの血清試料を分析した。
Ｓｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘアッセイ
ＭＣＩおよび年齢がマッチした対照からの血清試料中のインフラマソームタンパク質（カスパーゼ−１、ＡＳＣ、ＩＬ−１βおよびＩＬ−１８）濃度の分析を、２、３に記載されるように、Ｅｌｌａ Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｙｓｔｅｍ）を使用して行った。
バイオマーカー分析
Ｓｉｍｐｌｅ Ｐｌｅｘアッセイによって得られたデータを、Ｐｒｉｓｍ７ソフトウェア（ＧｒａｐｈＰａｄ）を用いて分析した。最初に、異常値を除き、受診者動作特性（ＲＯＣ）を計算し、このようにして、９５％信頼区間、標準偏差およびｐ値を得る。有意性のｐ値は、０．０５未満で考慮した。次いで、カットオフポイントを、異なる特異度および感度、ならびにそれらのそれぞれの尤度比の範囲について得た２、３。
結果
ＡＳＣおよびＩＬ−１８は、ＭＣＩを有する患者の血清中で上昇する
ＭＣＩ患者および年齢がマッチした健康なドナーからの血清試料を、ＡＳＣ（図２１Ａ）、カスパーゼ−１（図２１Ｂ）、ＩＬ−１８（図２１Ｃ）およびＩＬ−１β（図２１Ｄ）のタンパク質発現レベルについて分析した。ここで、ＡＳＣおよびＩＬ−１８のタンパク質レベルは、対照群と比較した場合に、ＭＣＩ群で有意に高いことを見出し、このため、ＭＣＩの病理においてＡＳＣおよびＩＬ−１８の関わりを示唆する。
ＡＳＣは、ＭＣＩの有望な血清バイオマーカーである
インフラマソームシグナル伝達タンパク質をＭＣＩのバイオマーカーとして使用することができるかを決定するために、曲線下面積（ＡＵＣ）を、カスパーゼ−１（図２２Ａ）、ＡＳＣ（図２２Ｂ）、ＩＬ−１β（図２２Ｃ）およびＩＬ−１８（図２２Ｄ）について決定した。図２３は、互いに重ね合わされた図２２Ａ〜２２ＤからのすべてのＲＯＣ曲線を示す。分析されたすべてのタンパク質のうち、ＡＳＣは、最も高い０．９７４（ｐ＜０．０００１）のＡＵＣ、続いて、ＩＬ−１８は、０．６８９６（ｐ＝０．００２５）のＡＵＣを示した（表２１）。ＡＳＣについてのカットオフポイントは、１００％の感度および７４％の特異度で２６４．９ｐｇ／ｍｌであったが（表２２および２３を参照されたい）；ＩＬ−１８は、７４％の感度および５８％の特異度で２１３．９ｐｇ／ｍｌのカットオフポイントを有していた（表２２および２５）。表２２に加えて、カスパーゼ−１およびＩＬ−１ベータについてのカットオフポイントおよび感度／特異度のデータは、それぞれ、表２４および２６に見ることができる。
参照による組み込み
以下の参照文献は、すべての目的のために、それらの全体が参照によって組み込まれる。
1.) Biomarkers Definitions Working G. Biomarkers and surrogate endpoints: preferred definitions and conceptual framework. Clin Pharmacol Ther. 2001;69:89-95.
2.) Brand FJ, 3rd, Forouzandeh M, Kaur H, Travascio F, & de Rivero Vaccari JP (2016) Acidification changes affect the inflammasome in human nucleus pulposus cells. J Inflamm (Lond) 13(1):29.
3.) Keane RW, Dietrich WD, & de Rivero Vaccari JP (2018) Inflammasome Proteins As Biomarkers of Multiple Sclerosis. Front Neurol 9:135.
本開示の番号付けした実施形態
本開示によって検討される他の主題を、以下の番号付けした実施形態において提示する。
実施形態１． 多発性硬化症（ＭＳ）を有すると疑われる患者を評価する方法であって、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；ＭＳに関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、前記タンパク質シグネチャーが、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および前記患者が前記タンパク質シグネチャーの存在を示す場合、ＭＳを有するとして前記患者を選択するステップを含む方法。
実施形態２． 前記患者が、ＭＳと一致する臨床症状を呈する、実施形態１に記載の方法。
実施形態３． 前記ＭＳが、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）、一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）または進行再発型ＭＳ（ＰＲＭＳ）である、実施形態１または２に記載の方法。
実施形態４． 前記患者から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、上記実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５． 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される、上記実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−１ベータ、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである、上記実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１、ＩＬ−１８、ＩＬ−１ベータおよびＡＳＣのそれぞれを含む、上記実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、実施形態１〜６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９． 前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する、実施形態５〜８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０． 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照から得られた生体試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する、上記実施形態のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１． 前記対照から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、実施形態１０に記載の方法。
実施形態１２． 前記対照が、健康な個体であり、前記健康な個体が、ＭＳと一致する臨床症状を呈さない個体である、実施形態１０または１１に記載の方法。
実施形態１３． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、ＡＳＣの前記レベルが、対照から得られた前記生体試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも５０％高い、実施形態１０〜１２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４． 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する、実施形態１〜９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１５． 患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される、実施形態１４に記載の方法。
実施形態１６． 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される、実施形態１４または１５に記載の方法。
実施形態１７． 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される、実施形態１４に記載の方法。
実施形態１８． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、実施形態１４〜１７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１９． 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表７から選択される、実施形態１８に記載の方法。
実施形態２０． 前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される、実施形態１５〜１７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２１． 脳卒中を患っていると疑われる患者を評価する方法であって、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；脳卒中または脳卒中関連傷害に関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、前記タンパク質シグネチャーが、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および前記患者が前記タンパク質シグネチャーの存在を示す場合、脳卒中を患っているとして前記患者を選択するステップを含む方法。
実施形態２２． 前記患者が、脳卒中と一致する臨床症状を呈し、前記脳卒中が、虚血性脳卒中、一過性虚血性脳卒中または出血性脳卒中である、実施形態２１に記載の方法。
実施形態２３． 前記患者から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、実施形態２１または２２に記載の方法。
実施形態２４． 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される、実施形態２１〜２３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２５． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−１ベータ、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである、実施形態２１〜２４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２６． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１、ＩＬ−１８、ＩＬ−１ベータおよびＡＳＣのそれぞれを含む、実施形態２１〜２５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２７． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、実施形態２１〜２５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２８． 前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する、実施形態２５〜２７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２９． 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照から得られた生体試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する、実施形態２１〜２８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３０． 前記対照から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、実施形態２９に記載の方法。
実施形態３１． 前記対照が、健康な個体であり、前記健康な個体が、ＭＳと一致する臨床症状を呈さない個体である、実施形態２９または３０に記載の方法。
実施形態３２． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、前記対象から得られた血清試料中のＡＳＣの前記レベルが、対照から得られた血清試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも７０％高い、実施形態２９〜３１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３３． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、前記対象から得られた血清由来ＥＶ試料中のＡＳＣの前記レベルが、対照から得られた血清由来ＥＶ試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも１１０％高い、実施形態２９〜３１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３４． 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する、実施形態２１〜２８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３５． 患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、実施形態３４に記載の方法。
実施形態３６． 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、実施形態３４または３５に記載の方法。
実施形態３７． 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも１００％の感度、および少なくとも９５％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、実施形態３４に記載の方法。
実施形態３８． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、実施形態３５〜３７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態３９． 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表８から選択される、実施形態３８に記載の方法。
実施形態４０． 患者から得られた前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、実施形態３４に記載の方法。
実施形態４１． 前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、実施形態３４または４０に記載の方法。
実施形態４２． 前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも１００％の感度、および少なくとも１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、実施形態３４に記載の方法。
実施形態４３． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、実施形態４０〜４２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４４． 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表９から選択される、実施形態４３に記載の方法。
実施形態４５． 前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される、実施形態３５〜３７または４０〜４２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４６． 多発性硬化症（ＭＳ）と診断された患者を処置する方法であって、前記患者に、ＭＳのための標準ケアの処置を投与するステップを含み、ＭＳの診断が、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を検出することによって行われた、方法。
実施形態４７． 前記ＭＳが、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）、一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）または進行再発型ＭＳ（ＰＲＭＳ）である、実施形態４６に記載の方法。
実施形態４８． 前記標準ケアの処置が、疾患転帰の修正、再発の管理、症状の管理またはそれらの任意の組合せを対象とする治療から選択される、実施形態４６または４７に記載の方法。
実施形態４９． 疾患転帰の修正を対象とする前記治療が、ベータ−インターフェロン、酢酸グラチラマー、フィンゴリモド、テリフルノミド、フマル酸ジメチル、ミトキサントロン、オクレリズマブ、アレムツズマブ、ダクリズマブおよびナタリズマブから選択される、実施形態４８に記載の方法。
実施形態５０． 脳卒中または脳卒中関連傷害と診断された患者を処置する方法であって、前記患者に、脳卒中または脳卒中関連傷害のための標準ケアの処置を投与するステップを含み、脳卒中または脳卒中関連傷害の診断が、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を検出することによって行われた、方法。
実施形態５１． 前記脳卒中が、虚血性脳卒中、一過性虚血性脳卒中または出血性脳卒中である、実施形態５０に記載の方法。
実施形態５２． 前記脳卒中が、虚血性脳卒中または一過性虚血性脳卒中であり、前記標準ケアの処置が、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、抗血小板薬、抗凝固薬、頸動脈血管形成術、頸動脈内膜剥離術、動脈内血栓溶解および脳虚血における機械的血塊除去（ＭＥＲＣＩ）またはこれらの組合せから選択される、実施形態５０または５１に記載の方法。
実施形態５３． 前記脳卒中が、出血性脳卒中であり、前記標準ケアの処置が、動脈瘤クリッピング、コイル塞栓術または動静脈奇形（ＡＶＭ）修復である、実施形態５０または５１に記載の方法。
実施形態５４． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルの上昇が、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される、実施形態４６〜５３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５５． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する、実施形態４６〜５４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５６． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する、実施形態４６〜５４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５７． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである、実施形態４６〜５６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態５８． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１、ＩＬ−１８およびＡＳＣである、実施形態５６または５７に記載の方法。
実施形態５９． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣである、実施形態５６または５７に記載の方法。
実施形態６０． 前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する、実施形態５９に記載の方法。
実施形態６１． 前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、実施形態４６〜６０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６２． 外傷性脳傷害（ＴＢＩ）を有すると疑われる患者を評価する方法であって、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；ＴＢＩに関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、前記タンパク質シグネチャーが、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および前記患者が前記タンパク質シグネチャーの存在を示す場合、ＴＢＩを有するとして前記患者を選択するステップを含む方法。
実施形態６３． 前記患者が、ＴＢＩと一致する臨床症状を呈する、実施形態６２に記載の方法。
実施形態６４． 前記患者から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、実施形態６２または６３に記載の方法。
実施形態６５． 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される、実施形態６２〜６４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６６． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−１β、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである、実施形態６２〜６５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６７． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含む、実施形態６１〜６６のいずれか１つに記載の方法。
少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含み、カスパーゼ−１のレベルが、対照から得られた生体試料中のカスパーゼ−１のレベルよりも少なくとも５０％高い、実施形態６５〜６７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６８． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、実施形態６１〜６６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態６９． 前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する、実施形態６６または６８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７０． 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照から得られた生体試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する、実施形態６２〜６９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７１． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含み、カスパーゼ−１の前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のカスパーゼ−１の前記レベルよりも少なくとも５０％高い、実施形態７０に記載の方法。
実施形態７２． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、ＡＳＣの前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも５０％高い、実施形態７０に記載の方法。
実施形態７３． 前記対照から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、実施形態７０〜７２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７４． 前記対照が、健康な個体であり、前記健康な個体が、ＴＢＩと一致する臨床症状を呈さない個体である、実施形態７０〜７３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７５． 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する、実施形態６２〜６９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態７６． 患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される、実施形態７５に記載の方法。
実施形態７７． 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される、実施形態７５または７６に記載の方法。
実施形態７８． 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される、実施形態７５に記載の方法。
実施形態７９． 前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される、実施形態７６〜７６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８０． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、実施形態７５〜７９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８１． 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表１１Ｂ、表１２Ｂ、表１４Ａ、表１６、表１７または表１９から選択される、実施形態７９に記載の方法。
実施形態８２． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含む、実施形態７５〜７９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８３． 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表１１Ａまたは表１５から選択される、実施形態８２に記載の方法。
実施形態８４． 脳傷害を有すると疑われる患者を評価する方法であって、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；脳傷害に関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、前記タンパク質シグネチャーが、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および前記患者が前記タンパク質シグネチャーの存在を示す場合、脳傷害を有するとして前記患者を選択するステップを含む方法。
実施形態８５． 前記患者が、脳傷害と一致する臨床症状を呈する、実施形態８４に記載の方法。
実施形態８６． 前記患者から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、実施形態８４または８５に記載の方法。
実施形態８７． 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される、実施形態８４〜８６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８８． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−１β、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである、実施形態８４〜８７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８９． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、実施形態８４〜８８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９０． 前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する、実施形態８８または８９に記載の方法。
実施形態９１． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含む、実施形態８４〜８８のいずれかに記載の方法。
実施形態９２． 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照から得られた生体試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する、実施形態８４〜９１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９３． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、ＡＳＣの前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも５０％高い、実施形態９２に記載の方法。
実施形態９４． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含み、カスパーゼ−１の前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のカスパーゼ−１の前記レベルよりも少なくとも５０％高い、実施形態９２に記載の方法。
実施形態９５． 前記対照から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、実施形態９２〜９４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９６． 前記対照が、健康な個体であり、前記健康な個体が、脳傷害と一致する臨床症状を呈さない個体である、実施形態９２〜９５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９７． 前記脳傷害が、外傷性脳傷害、脳卒中、軽度認知機能障害または多発性硬化症から選択される、実施形態８４〜９６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９８． 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する、実施形態８４〜９１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９９． 前記脳傷害が、外傷性脳傷害（ＴＢＩ）である、実施形態９８に記載の方法。
実施形態１００． 患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される、実施形態９９に記載の方法。
実施形態１０１． 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される、実施形態９８または９９に記載の方法。
実施形態１０２． 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される、実施形態９９に記載の方法。
実施形態１０３． 前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される、実施形態１００〜１０２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０４． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、実施形態９９〜１０３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０５． 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表１１Ｂ、１２Ｂ、１４Ａ、１６、１７または１９から選択される、実施形態１０４に記載の方法。
実施形態１０６． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含む、実施形態９９〜１０３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０７． 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表１１Ａまたは１５から選択される、実施形態１０６に記載の方法。
実施形態１０８． 前記脳傷害が、多発性硬化症（ＭＳ）である、実施形態９８に記載の方法。
実施形態１０９． 患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される、実施形態１０８に記載の方法。
実施形態１１０． 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される、実施形態１０８または１０９に記載の方法。
実施形態１１１． 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される、実施形態１０８に記載の方法。
実施形態１１２． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、実施形態１０８〜１１１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１３． 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表７から選択される、実施形態１１２に記載の方法。
実施形態１１４． 前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される、実施形態１０９〜１１３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１５． 前記脳傷害が、脳卒中である、実施形態９８に記載の方法。
実施形態１１６． 患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、実施形態１１５に記載の方法。
実施形態１１７． 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、実施形態１１５または１１６に記載の方法。
実施形態１１８． 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも１００％の感度、および少なくとも９５％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、実施形態１１５に記載の方法。
実施形態１１９． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、実施形態１１６〜１１８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１２０． 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表８から選択される、実施形態１１９に記載の方法。
実施形態１２１． 患者から得られた前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、実施形態１１５に記載の方法。
実施形態１２２． 前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、実施形態１１５または１２１に記載の方法。
実施形態１２３． 前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも１００％の感度、および少なくとも１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、実施形態１１５に記載の方法。
実施形態１２４． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、実施形態１２１〜１２３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１２５． 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表９から選択される、実施形態１２４に記載の方法。
実施形態１２６． 前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される、実施形態１１６〜１１８または１２１〜１２３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１２７． 軽度認知機能障害（ＭＣＩ）を有すると疑われる患者を評価する方法であって、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；ＭＣＩに関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、前記タンパク質シグネチャーが、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および前記患者が前記タンパク質シグネチャーの存在を示す場合、ＭＣＩを有するとして前記患者を選択するステップを含む方法。
実施形態１２８． 前記患者が、ＭＣＩと一致する臨床症状を呈する、実施形態１２７に記載の方法。
実施形態１２９． 前記患者から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、実施形態１２７または１２８に記載の方法。
実施形態１３０． 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される、実施形態１２７〜１２９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３１． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−１β、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである、実施形態１２７〜１３０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３２． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、実施形態１２７〜１３１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３３． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＩＬ−１８を含む、実施形態１２７〜１３１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３４． 前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する、実施形態１３１〜１３２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３５． 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照から得られた生体試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する、実施形態１２７〜１３４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３６． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、ＡＳＣの前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも５０％高い、実施形態１３５に記載の方法。
実施形態１３７． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＩＬ−１８を含み、ＩＬ−１８の前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のＩＬ−１８の前記レベルよりも少なくとも２５％高い、実施形態１３５に記載の方法。
実施形態１３８． 前記対照から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、実施形態１３５〜１３７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３９． 前記対照が、健康な個体であり、前記健康な個体が、ＭＣＩと一致する臨床症状を呈さない個体である、実施形態１３５〜１３８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４０． 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する、実施形態１２７〜１３４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４１． 患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも５５％の特異度で、ＭＣＩを有するとして選択される、実施形態１４０に記載の方法。
実施形態１４２． 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度で、ＭＣＩを有するとして選択される、実施形態１４０または１４１に記載の方法。
実施形態１４３． 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも７０％の感度、および少なくとも５５％の特異度で、ＭＣＩを有するとして選択される、実施形態１４０に記載の方法。
実施形態１４４． 前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される、実施形態１４０〜１４３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４５． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、実施形態１４０〜１４４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４６． 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表２２から選択される、実施形態１４５に記載の方法。
実施形態１４７． 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＩＬ−１８を含む、実施形態１４０〜１４４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４８． 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表２２から選択される、実施形態１４７に記載の方法。
上記に記載のさまざまな実施形態を組み合わせて、さらなる実施形態を提供することができる。本明細書において指され、および／または出願データシートにおいて列挙された、すべての米国特許、米国特許出願公開、米国特許出願、外国の特許、外国の特許出願ならびに非特許刊行物は、それらの全体が、参照によって本明細書に組み込まれる。実施形態の態様は、必要により、さまざまな特許、出願および刊行物の概念を利用して、改変して、よりさらなる実施形態を提供することができる。
これらの変更および他の変更は、上記の詳細な説明を考慮して、実施形態を作り出すことができる。一般に、以下の特許請求の範囲において、使用される用語は、本明細書および特許請求の範囲に開示された特定の実施形態に特許請求の範囲を限定すると解釈されるべきではないが、すべての可能な実施形態を、そのような特許請求の範囲が権利を与えられる均等物の全範囲と一緒に含むと解釈されるべきである。したがって、特許請求の範囲は、本開示によって限定されない。

Claims (148)

  1. 多発性硬化症（ＭＳ）を有すると疑われる患者を評価する方法であって、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；ＭＳに関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、前記タンパク質シグネチャーが、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および前記患者が前記タンパク質シグネチャーの存在を示す場合、ＭＳを有するとして前記患者を選択するステップを含む方法。
  2. 前記患者が、ＭＳと一致する臨床症状を呈する、請求項１に記載の方法。
  3. 前記ＭＳが、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）、一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）または進行再発型ＭＳ（ＰＲＭＳ）である、請求項１または２に記載の方法。
  4. 前記患者から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、請求項１に記載の方法。
  5. 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される、請求項１に記載の方法。
  6. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−１ベータ、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである、請求項１に記載の方法。
  7. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１、ＩＬ−１８、ＩＬ−１ベータおよびＡＳＣのそれぞれを含む、請求項１に記載の方法。
  8. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、請求項１に記載の方法。
  9. 前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する、請求項８に記載の方法。
  10. 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照から得られた生体試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する、請求項１に記載の方法。
  11. 前記対照から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、請求項１０に記載の方法。
  12. 前記対照が、健康な個体であり、前記健康な個体が、ＭＳと一致する臨床症状を呈さない個体である、請求項１０に記載の方法。
  13. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、ＡＳＣの前記レベルが、対照から得られた前記生体試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも５０％高い、請求項１０に記載の方法。
  14. 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する、請求項１に記載の方法。
  15. 患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される、請求項１４に記載の方法。
  17. 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される、請求項１４に記載の方法。
  18. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、請求項１４に記載の方法。
  19. 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表７から選択される、請求項１８に記載の方法。
  20. 前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される、請求項１５に記載の方法。
  21. 脳卒中を患っていると疑われる患者を評価する方法であって、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；脳卒中または脳卒中関連傷害に関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、前記タンパク質シグネチャーが、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および前記患者が前記タンパク質シグネチャーの存在を示す場合、脳卒中を患っているとして前記患者を選択するステップを含む方法。
  22. 前記患者が、脳卒中と一致する臨床症状を呈し、前記脳卒中が、虚血性脳卒中、一過性虚血性脳卒中または出血性脳卒中である、請求項２１に記載の方法。
  23. 前記患者から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、請求項２１に記載の方法。
  24. 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される、請求項２１に記載の方法。
  25. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−１ベータ、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである、請求項２１に記載の方法。
  26. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１、ＩＬ−１８、ＩＬ−１ベータおよびＡＳＣのそれぞれを含む、請求項２１に記載の方法。
  27. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、請求項２１に記載の方法。
  28. 前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する、請求項２７に記載の方法。
  29. 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照から得られた生体試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する、請求項２１に記載の方法。
  30. 前記対照から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、請求項２９に記載の方法。
  31. 前記対照が、健康な個体であり、前記健康な個体が、ＭＳと一致する臨床症状を呈さない個体である、請求項２９に記載の方法。
  32. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、前記対象から得られた血清試料中のＡＳＣの前記レベルが、対照から得られた血清試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも７０％高い、請求項２９に記載の方法。
  33. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、前記対象から得られた血清由来ＥＶ試料中のＡＳＣの前記レベルが、対照から得られた血清由来ＥＶ試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも１１０％高い、請求項２９に記載の方法。
  34. 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する、請求項２１に記載の方法。
  35. 患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、請求項３４に記載の方法。
  36. 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、請求項３４に記載の方法。
  37. 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも１００％の感度、および少なくとも９５％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、請求項３４に記載の方法。
  38. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、請求項３５に記載の方法。
  39. 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表８から選択される、請求項３８に記載の方法。
  40. 患者から得られた前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、請求項３４に記載の方法。
  41. 前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、請求項３４に記載の方法。
  42. 前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも１００％の感度、および少なくとも１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、請求項３４に記載の方法。
  43. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、請求項４０に記載の方法。
  44. 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表９から選択される、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される、請求項３５または４０に記載の方法。
  46. 多発性硬化症（ＭＳ）と診断された患者を処置する方法であって、前記患者に、ＭＳのための標準ケアの処置を投与するステップを含み、ＭＳの診断が、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を検出することによって行われた、方法。
  47. 前記ＭＳが、再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ）、二次進行型ＭＳ（ＳＰＭＳ）、一次進行型ＭＳ（ＰＰＭＳ）または進行再発型ＭＳ（ＰＲＭＳ）である、請求項４６に記載の方法。
  48. 前記標準ケアの処置が、疾患転帰の修正、再発の管理、症状の管理またはそれらの任意の組合せを対象とする治療から選択される、請求項４６に記載の方法。
  49. 疾患転帰の修正を対象とする前記治療が、ベータ−インターフェロン、酢酸グラチラマー、フィンゴリモド、テリフルノミド、フマル酸ジメチル、ミトキサントロン、オクレリズマブ、アレムツズマブ、ダクリズマブおよびナタリズマブから選択される、請求項４８に記載の方法。
  50. 脳卒中または脳卒中関連傷害と診断された患者を処置する方法であって、前記患者に、脳卒中または脳卒中関連傷害のための標準ケアの処置を投与するステップを含み、脳卒中または脳卒中関連傷害の診断が、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を検出することによって行われた、方法。
  51. 前記脳卒中が、虚血性脳卒中、一過性虚血性脳卒中または出血性脳卒中である、請求項５０に記載の方法。
  52. 前記脳卒中が、虚血性脳卒中または一過性虚血性脳卒中であり、前記標準ケアの処置が、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、抗血小板薬、抗凝固薬、頸動脈血管形成術、頸動脈内膜剥離術、動脈内血栓溶解および脳虚血における機械的血塊除去（ＭＥＲＣＩ）またはこれらの組合せから選択される、請求項５０に記載の方法。
  53. 前記脳卒中が、出血性脳卒中であり、前記標準ケアの処置が、動脈瘤クリッピング、コイル塞栓術または動静脈奇形（ＡＶＭ）修復である、請求項５０に記載の方法。
  54. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルの上昇が、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される、請求項４６〜５３のいずれか一項に記載の方法。
  55. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する、請求項５４に記載の方法。
  56. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する、請求項５４に記載の方法。
  57. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである、請求項５６に記載の方法。
  58. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１、ＩＬ−１８およびＡＳＣである、請求項５６に記載の方法。
  59. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣである、請求項５６に記載の方法。
  60. 前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する、請求項５９に記載の方法。
  61. 前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、請求項５４に記載の方法。
  62. 外傷性脳傷害（ＴＢＩ）を有すると疑われる患者を評価する方法であって、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；ＴＢＩに関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、前記タンパク質シグネチャーが、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および前記患者が前記タンパク質シグネチャーの存在を示す場合、ＴＢＩを有するとして前記患者を選択するステップを含む方法。
  63. 前記患者が、ＴＢＩと一致する臨床症状を呈する、請求項６２に記載の方法。
  64. 前記患者から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、請求項６２に記載の方法。
  65. 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される、請求項６２に記載の方法。
  66. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−１β、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである、請求項６２に記載の方法。
  67. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、請求項６２に記載の方法。
  68. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含む、請求項６２に記載の方法。
  69. 前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する、請求項６７に記載の方法。
  70. 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照から得られた生体試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する、請求項６２に記載の方法。
  71. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含み、カスパーゼ−１の前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のカスパーゼ−１の前記レベルよりも少なくとも５０％高い、請求項７０に記載の方法。
  72. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、ＡＳＣの前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも５０％高い、請求項７０に記載の方法。
  73. 前記対照から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、請求項７０に記載の方法。
  74. 前記対照が、健康な個体であり、前記健康な個体が、ＴＢＩと一致する臨床症状を呈さない個体である、請求項７０に記載の方法。
  75. 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する、請求項６２に記載の方法。
  76. 患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される、請求項７５に記載の方法。
  77. 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される、請求項７５に記載の方法。
  78. 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される、請求項７５に記載の方法。
  79. 前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される、請求項７６に記載の方法。
  80. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、請求項７５に記載の方法。
  81. 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表１１Ｂ、表１２Ｂ、表１４Ａ、表１６、表１７または表１９から選択される、請求項７９に記載の方法。
  82. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含む、請求項７５に記載の方法。
  83. 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表１１Ａまたは表１５から選択される、請求項８２に記載の方法。
  84. 脳傷害を有すると疑われる患者を評価する方法であって、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；脳傷害に関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、前記タンパク質シグネチャーが、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および前記患者が前記タンパク質シグネチャーの存在を示す場合、脳傷害を有するとして前記患者を選択するステップを含む方法。
  85. 前記患者が、脳傷害と一致する臨床症状を呈する、請求項８４に記載の方法。
  86. 前記患者から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、請求項８４に記載の方法。
  87. 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される、請求項８４に記載の方法。
  88. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−１β、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである、請求項８４に記載の方法。
  89. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、請求項８４に記載の方法。
  90. 前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する、請求項８８に記載の方法。
  91. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含む、請求項８４に記載の方法。
  92. 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照から得られた生体試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する、請求項８４に記載の方法。
  93. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、ＡＳＣの前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも５０％高い、請求項９２に記載の方法。
  94. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含み、カスパーゼ−１の前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のカスパーゼ−１の前記レベルよりも少なくとも５０％高い、請求項９２に記載の方法。
  95. 前記対照から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、請求項９２に記載の方法。
  96. 前記対照が、健康な個体であり、前記健康な個体が、脳傷害と一致する臨床症状を呈さない個体である、請求項９２に記載の方法。
  97. 前記脳傷害が、外傷性脳傷害、脳卒中、軽度認知機能障害または多発性硬化症から選択される、請求項８４に記載の方法。
  98. 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する、請求項８４に記載の方法。
  99. 前記脳傷害が、外傷性脳傷害（ＴＢＩ）である、請求項９８に記載の方法。
  100. 患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される、請求項９９に記載の方法。
  101. 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される、請求項９８に記載の方法。
  102. 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度で、ＴＢＩを有するとして選択される、請求項９９に記載の方法。
  103. 前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される、請求項１００に記載の方法。
  104. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、請求項９９に記載の方法。
  105. 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表１１Ｂ、１２Ｂ、１４Ａ、１６、１７または１９から選択される、請求項１０４に記載の方法。
  106. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、カスパーゼ−１を含む、請求項９９に記載の方法。
  107. 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表１１Ａまたは１５から選択される、請求項１０６に記載の方法。
  108. 前記脳傷害が、多発性硬化症（ＭＳ）である、請求項９８に記載の方法。
  109. 患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される、請求項１０８に記載の方法。
  110. 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される、請求項１０８に記載の方法。
  111. 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも９０％の感度、および少なくとも８０％の特異度で、ＭＳを有するとして選択される、請求項１０８に記載の方法。
  112. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、請求項１０８に記載の方法。
  113. 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表７から選択される、請求項１１２に記載の方法。
  114. 前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される、請求項１０９に記載の方法。
  115. 前記脳傷害が、脳卒中である、請求項９８に記載の方法。
  116. 患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、請求項１１５に記載の方法。
  117. 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、請求項１１５に記載の方法。
  118. 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも１００％の感度、および少なくとも９５％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、請求項１１５に記載の方法。
  119. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、請求項１１６に記載の方法。
  120. 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表８から選択される、請求項１１９に記載の方法。
  121. 患者から得られた前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも９０％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、請求項１１５に記載の方法。
  122. 前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、請求項１１５に記載の方法。
  123. 前記生体試料が、血清由来ＥＶであり、前記患者が、少なくとも１００％の感度、および少なくとも１００％の特異度で、脳卒中を患っているとして選択される、請求項１１５に記載の方法。
  124. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、請求項１２１に記載の方法。
  125. 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表９から選択される、請求項１２４に記載の方法。
  126. 前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される、請求項１１６〜１１８または１２１〜１２３のいずれか一項に記載の方法。
  127. 軽度認知機能障害（ＭＣＩ）を有すると疑われる患者を評価する方法であって、前記患者から得られた生体試料中の少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルを測定するステップ；ＭＣＩに関連するタンパク質シグネチャーの存在または非存在を決定するステップであって、前記タンパク質シグネチャーが、前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質のレベルの上昇を含む、ステップ；および前記患者が前記タンパク質シグネチャーの存在を示す場合、ＭＣＩを有するとして前記患者を選択するステップを含む方法。
  128. 前記患者が、ＭＣＩと一致する臨床症状を呈する、請求項１２７に記載の方法。
  129. 前記患者から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、請求項１２７に記載の方法。
  130. 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質に対する１つまたは複数の抗体を利用するイムノアッセイによって測定される、請求項１２７に記載の方法。
  131. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、インターロイキン１８（ＩＬ−１８）、ＩＬ−１β、カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、カスパーゼ−１、またはこれらの組合せである、請求項１２７に記載の方法。
  132. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、請求項１２７に記載の方法。
  133. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＩＬ−１８を含む、請求項１２７に記載の方法。
  134. 前記抗体が、ＰＹＲＩＮ−ＰＡＡＤ−ＤＡＰＩＮドメイン（ＰＹＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）のドメイン、または前記ＡＳＣタンパク質のＰＹＤもしくはＣＡＲＤドメインの部分に結合する、請求項１３１に記載の方法。
  135. 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、対照から得られた生体試料中の前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルに対して増大する、請求項１２７に記載の方法。
  136. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含み、ＡＳＣの前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のＡＳＣの前記レベルよりも少なくとも５０％高い、請求項１３５に記載の方法。
  137. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＩＬ−１８を含み、ＩＬ−１８の前記レベルが、前記対照から得られた前記生体試料中のＩＬ−１８の前記レベルよりも少なくとも２５％高い、請求項１３５に記載の方法。
  138. 前記対照から得られた前記生体試料が、脳脊髄液（ＣＳＦ）、ＣＮＳ微小透析液、唾液、血清、血漿、尿または血清由来細胞外小胞（ＥＶ）である、請求項１３５に記載の方法。
  139. 前記対照が、健康な個体であり、前記健康な個体が、ＭＣＩと一致する臨床症状を呈さない個体である、請求項１３５に記載の方法。
  140. 前記タンパク質シグネチャーにおける前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質の前記レベルが、所定の参照値または参照値の範囲に対して増大する、請求項１２７に記載の方法。
  141. 患者から得られた前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度、および少なくとも５５％の特異度で、ＭＣＩを有するとして選択される、請求項１４０に記載の方法。
  142. 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９９％または１００％の感度で、ＭＣＩを有するとして選択される、請求項１４０に記載の方法。
  143. 前記生体試料が、血清であり、前記患者が、少なくとも７０％の感度、および少なくとも５５％の特異度で、ＭＣＩを有するとして選択される、請求項１４０に記載の方法。
  144. 前記感度および／または感度が、９５％の信頼区間で、受診者動作特性（ＲＯＣ）曲線からの曲線下面積（ＡＵＣ）を使用して決定される、請求項１４０に記載の方法。
  145. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＡＳＣを含む、請求項１４０に記載の方法。
  146. 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表２２から選択される、請求項１４５に記載の方法。
  147. 前記少なくとも１つのインフラマソームタンパク質が、ＩＬ−１８を含む、請求項１４０に記載の方法。
  148. 前記感度、特異度または両方を決定するためのカットオフ値が、表２２から選択される、請求項１４７に記載の方法。
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