JP2020534134A - 脂肪由来幹細胞を含む生体材料およびその作製方法 - Google Patents
脂肪由来幹細胞を含む生体材料およびその作製方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020534134A JP2020534134A JP2020537863A JP2020537863A JP2020534134A JP 2020534134 A JP2020534134 A JP 2020534134A JP 2020537863 A JP2020537863 A JP 2020537863A JP 2020537863 A JP2020537863 A JP 2020537863A JP 2020534134 A JP2020534134 A JP 2020534134A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- biomaterial
- particles
- cells
- present
- bone
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000012620 biological material Substances 0.000 title claims abstract description 599
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 83
- 108010035042 Osteoprotegerin Proteins 0.000 claims abstract description 77
- 102000008108 Osteoprotegerin Human genes 0.000 claims abstract description 77
- XXUPLYBCNPLTIW-UHFFFAOYSA-N octadec-7-ynoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC#CCCCCCC(O)=O XXUPLYBCNPLTIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 76
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 claims abstract description 62
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 32
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 claims abstract description 32
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 15
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 250
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims description 174
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 claims description 155
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 claims description 155
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims description 139
- 230000007547 defect Effects 0.000 claims description 58
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims description 57
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims description 57
- 230000009818 osteogenic differentiation Effects 0.000 claims description 43
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 34
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 31
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 claims description 29
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 claims description 26
- 210000002805 bone matrix Anatomy 0.000 claims description 24
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 claims description 18
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 17
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 claims description 17
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 9
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 250
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 181
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 108
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 62
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 62
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 62
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 62
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 62
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 56
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 55
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 55
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 52
- 108010008951 Chemokine CXCL12 Proteins 0.000 description 51
- 102000006573 Chemokine CXCL12 Human genes 0.000 description 50
- 230000033558 biomineral tissue development Effects 0.000 description 48
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 47
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 45
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 description 37
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 35
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 34
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 34
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 34
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 33
- 208000007103 Spondylolisthesis Diseases 0.000 description 31
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 31
- 102000014128 RANK Ligand Human genes 0.000 description 29
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 29
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 29
- 108010025832 RANK Ligand Proteins 0.000 description 28
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 28
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 28
- 239000000047 product Substances 0.000 description 26
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 25
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 25
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 24
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 23
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 22
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 22
- 239000000463 material Substances 0.000 description 21
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 20
- 239000006873 mp medium Substances 0.000 description 20
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 19
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 19
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 19
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 18
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical group C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 17
- 102100024506 Bone morphogenetic protein 2 Human genes 0.000 description 17
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 17
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 17
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 17
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 17
- 230000008569 process Effects 0.000 description 17
- 102100022544 Bone morphogenetic protein 7 Human genes 0.000 description 16
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 16
- 101000762366 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 2 Proteins 0.000 description 16
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 16
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 15
- 101000899361 Homo sapiens Bone morphogenetic protein 7 Proteins 0.000 description 15
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 15
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 15
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 15
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 15
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 15
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 15
- 229910010293 ceramic material Inorganic materials 0.000 description 14
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 14
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 14
- 238000007443 liposuction Methods 0.000 description 14
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 14
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 14
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 14
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 13
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 12
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 12
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 12
- 210000005009 osteogenic cell Anatomy 0.000 description 12
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 12
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 12
- 229940078499 tricalcium phosphate Drugs 0.000 description 12
- 229910000391 tricalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 12
- 235000019731 tricalcium phosphate Nutrition 0.000 description 12
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 11
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 11
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 11
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 11
- 108010009906 Angiopoietins Proteins 0.000 description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 10
- 102000004067 Osteocalcin Human genes 0.000 description 10
- 108090000573 Osteocalcin Proteins 0.000 description 10
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 10
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 10
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 10
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 10
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 10
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 10
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 10
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 10
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 10
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 10
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 10
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 10
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 10
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 10
- DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxomolybdenum Chemical compound O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.OP(O)(O)=O DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 10
- 229960003339 sodium phosphate Drugs 0.000 description 10
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 10
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 10
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 10
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 9
- -1 hPL Chemical compound 0.000 description 9
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 9
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 9
- 210000004705 lumbosacral region Anatomy 0.000 description 9
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 9
- 102000009840 Angiopoietins Human genes 0.000 description 8
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 8
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 8
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 8
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 8
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 8
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 8
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 8
- 102100039037 Vascular endothelial growth factor A Human genes 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 8
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 8
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 8
- 238000013461 design Methods 0.000 description 8
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 8
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 8
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 8
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 8
- 206010017076 Fracture Diseases 0.000 description 7
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 7
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 7
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 7
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 7
- 229960004279 formaldehyde Drugs 0.000 description 7
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 7
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 7
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 7
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 7
- 238000011552 rat model Methods 0.000 description 7
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 7
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 6
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 6
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 6
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 201000006490 Spondylolysis Diseases 0.000 description 6
- 229960002648 alanylglutamine Drugs 0.000 description 6
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 6
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 6
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 230000003345 hyperglycaemic effect Effects 0.000 description 6
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 6
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 6
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 6
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 6
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 6
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 6
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000010603 microCT Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 6
- 206010065687 Bone loss Diseases 0.000 description 5
- 101001066676 Homo sapiens Integrase Proteins 0.000 description 5
- 101001066681 Homo sapiens Integrase Proteins 0.000 description 5
- 101001066682 Homo sapiens Integrase Proteins 0.000 description 5
- 101001066686 Homo sapiens Integrase Proteins 0.000 description 5
- 101001066687 Homo sapiens Integrase Proteins 0.000 description 5
- 101001066688 Homo sapiens Integrase Proteins 0.000 description 5
- 101001066689 Homo sapiens Integrase Proteins 0.000 description 5
- 101001067009 Homo sapiens Integrase Proteins 0.000 description 5
- 102100038277 Prostaglandin G/H synthase 1 Human genes 0.000 description 5
- 108010046722 Thrombospondin 1 Proteins 0.000 description 5
- 102100036034 Thrombospondin-1 Human genes 0.000 description 5
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 5
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 5
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 5
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 description 5
- 102000054456 human reducing agent and tunicamycin-responsive Human genes 0.000 description 5
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 5
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 5
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 5
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 5
- 210000005167 vascular cell Anatomy 0.000 description 5
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000002045 Endothelin Human genes 0.000 description 4
- 108050009340 Endothelin Proteins 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 102000003971 Fibroblast Growth Factor 1 Human genes 0.000 description 4
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 101000669513 Homo sapiens Metalloproteinase inhibitor 1 Proteins 0.000 description 4
- 208000007623 Lordosis Diseases 0.000 description 4
- 102100039364 Metalloproteinase inhibitor 1 Human genes 0.000 description 4
- 206010031264 Osteonecrosis Diseases 0.000 description 4
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 4
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 4
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 4
- 102100033456 TGF-beta receptor type-1 Human genes 0.000 description 4
- 108010011702 Transforming Growth Factor-beta Type I Receptor Proteins 0.000 description 4
- 108010083162 Twist-Related Protein 1 Proteins 0.000 description 4
- 102100030398 Twist-related protein 1 Human genes 0.000 description 4
- 102100038217 Vascular endothelial growth factor B Human genes 0.000 description 4
- 206010048245 Yellow skin Diseases 0.000 description 4
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 4
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 4
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 4
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000035194 endochondral ossification Effects 0.000 description 4
- ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N endothelin-1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H]2CSSC[C@@H](C(N[C@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2)=O)NC(=O)[C@@H](CO)NC(=O)[C@H](N)CSSC1)C1=CNC=N1 ZUBDGKVDJUIMQQ-UBFCDGJISA-N 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 4
- 229940029303 fibroblast growth factor-1 Drugs 0.000 description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 4
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 4
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 4
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 4
- 238000013425 morphometry Methods 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000012488 skeletal system development Effects 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 4
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 4
- 102100034594 Angiopoietin-1 Human genes 0.000 description 3
- 238000009020 BCA Protein Assay Kit Methods 0.000 description 3
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 208000016216 Choristoma Diseases 0.000 description 3
- 108010024682 Core Binding Factor Alpha 1 Subunit Proteins 0.000 description 3
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 3
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 3
- 102000020086 Ephrin-A1 Human genes 0.000 description 3
- 108010043945 Ephrin-A1 Proteins 0.000 description 3
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 3
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 3
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 3
- 101000924552 Homo sapiens Angiopoietin-1 Proteins 0.000 description 3
- 101000728679 Homo sapiens Apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD Proteins 0.000 description 3
- 101000605122 Homo sapiens Prostaglandin G/H synthase 1 Proteins 0.000 description 3
- 101000661600 Homo sapiens Steryl-sulfatase Proteins 0.000 description 3
- 101000830603 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 11 Proteins 0.000 description 3
- 101000742579 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor B Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 102100025751 Mothers against decapentaplegic homolog 2 Human genes 0.000 description 3
- 101710143123 Mothers against decapentaplegic homolog 2 Proteins 0.000 description 3
- 102100030610 Mothers against decapentaplegic homolog 5 Human genes 0.000 description 3
- 101710143113 Mothers against decapentaplegic homolog 5 Proteins 0.000 description 3
- 238000011887 Necropsy Methods 0.000 description 3
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 3
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 description 3
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 description 3
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 3
- 102100025368 Runt-related transcription factor 2 Human genes 0.000 description 3
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 description 3
- ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N Streptozotocin Natural products O=NN(C)C(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 description 3
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 238000003491 array Methods 0.000 description 3
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 3
- 210000002449 bone cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 3
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000002316 cosmetic surgery Methods 0.000 description 3
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 3
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 3
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 3
- 102000050702 human PYCARD Human genes 0.000 description 3
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000003780 keratinization Effects 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 238000007433 macroscopic evaluation Methods 0.000 description 3
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 3
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 3
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 3
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 230000009772 tissue formation Effects 0.000 description 3
- 231100000820 toxicity test Toxicity 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 3
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 3
- KRQUFUKTQHISJB-YYADALCUSA-N 2-[(E)-N-[2-(4-chlorophenoxy)propoxy]-C-propylcarbonimidoyl]-3-hydroxy-5-(thian-3-yl)cyclohex-2-en-1-one Chemical compound CCC\C(=N/OCC(C)OC1=CC=C(Cl)C=C1)C1=C(O)CC(CC1=O)C1CCCSC1 KRQUFUKTQHISJB-YYADALCUSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091023043 Alu Element Proteins 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000010392 Bone Fractures Diseases 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 2
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 2
- 206010008805 Chromosomal abnormalities Diseases 0.000 description 2
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 2
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 2
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 2
- 102100023721 Ephrin-B2 Human genes 0.000 description 2
- 206010063560 Excessive granulation tissue Diseases 0.000 description 2
- 101710182386 Fibroblast growth factor receptor 1 Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 2
- 101001049392 Homo sapiens Ephrin-B2 Proteins 0.000 description 2
- 101100066427 Homo sapiens FCGR1A gene Proteins 0.000 description 2
- 101000742596 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor C Proteins 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100025725 Mothers against decapentaplegic homolog 4 Human genes 0.000 description 2
- 101710143112 Mothers against decapentaplegic homolog 4 Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 2
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102100032236 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 11B Human genes 0.000 description 2
- 101710178443 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 11B Proteins 0.000 description 2
- 102100038232 Vascular endothelial growth factor C Human genes 0.000 description 2
- 238000011892 Von Kossa's method Methods 0.000 description 2
- 102100036973 X-ray repair cross-complementing protein 5 Human genes 0.000 description 2
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 210000000593 adipose tissue white Anatomy 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001264 anterior cruciate ligament Anatomy 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 2
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 2
- 230000002559 cytogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 230000009429 distress Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 2
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000642 iatrogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003090 iliac artery Anatomy 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- 229940090044 injection Drugs 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 2
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 description 2
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 description 2
- 239000004632 polycaprolactone Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 2
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 2
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- 230000035752 proliferative phase Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 2
- 150000004728 pyruvic acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 238000002278 reconstructive surgery Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 230000006884 regulation of angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 210000004003 subcutaneous fat Anatomy 0.000 description 2
- GBNXLQPMFAUCOI-UHFFFAOYSA-H tetracalcium;oxygen(2-);diphosphate Chemical compound [O-2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O GBNXLQPMFAUCOI-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 2
- 230000007838 tissue remodeling Effects 0.000 description 2
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000005526 vasoconstrictor agent Substances 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- DSGKWFGEUBCEIE-UHFFFAOYSA-N (2-carbonochloridoylphenyl) acetate Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(Cl)=O DSGKWFGEUBCEIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RJPSHDMGSVVHFA-UHFFFAOYSA-N 2-[carboxymethyl-[(7-hydroxy-4-methyl-2-oxochromen-8-yl)methyl]amino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CC1=C(O)C=CC2=C1OC(=O)C=C2C RJPSHDMGSVVHFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100034111 Activin receptor type-1 Human genes 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 229930183010 Amphotericin Natural products 0.000 description 1
- QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N Amphotericin A Natural products OC1C(N)C(O)C(C)OC1OC1C=CC=CC=CC=CCCC=CC=CC(C)C(O)C(C)C(C)OC(=O)CC(O)CC(O)CCC(O)C(O)CC(O)CC(O)(CC(O)C2C(O)=O)OC2C1 QGGFZZLFKABGNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 238000000035 BCA protein assay Methods 0.000 description 1
- 108010049931 Bone Morphogenetic Protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010049870 Bone Morphogenetic Protein 7 Proteins 0.000 description 1
- 108010007726 Bone Morphogenetic Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007350 Bone Morphogenetic Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 description 1
- 102100025423 Bone morphogenetic protein receptor type-1A Human genes 0.000 description 1
- 102100027052 Bone morphogenetic protein receptor type-1B Human genes 0.000 description 1
- 102100025422 Bone morphogenetic protein receptor type-2 Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102100031650 C-X-C chemokine receptor type 4 Human genes 0.000 description 1
- 108091011896 CSF1 Proteins 0.000 description 1
- 229910014497 Ca10(PO4)6(OH)2 Inorganic materials 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 206010007710 Cartilage injury Diseases 0.000 description 1
- ZEOWTGPWHLSLOG-UHFFFAOYSA-N Cc1ccc(cc1-c1ccc2c(n[nH]c2c1)-c1cnn(c1)C1CC1)C(=O)Nc1cccc(c1)C(F)(F)F Chemical compound Cc1ccc(cc1-c1ccc2c(n[nH]c2c1)-c1cnn(c1)C1CC1)C(=O)Nc1cccc(c1)C(F)(F)F ZEOWTGPWHLSLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000011359 Chromosome disease Diseases 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000015775 Core Binding Factor Alpha 1 Subunit Human genes 0.000 description 1
- 108010037464 Cyclooxygenase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000052510 DNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 101710096438 DNA-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000050554 Eph Family Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108091008815 Eph receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010015719 Exsanguination Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010019393 Fibrin Foam Proteins 0.000 description 1
- 102100023593 Fibroblast growth factor receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 208000003899 Foreign-Body Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 206010017577 Gait disturbance Diseases 0.000 description 1
- 201000000628 Gas Gangrene Diseases 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- 101000799140 Homo sapiens Activin receptor type-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000934638 Homo sapiens Bone morphogenetic protein receptor type-1A Proteins 0.000 description 1
- 101000984546 Homo sapiens Bone morphogenetic protein receptor type-1B Proteins 0.000 description 1
- 101000934635 Homo sapiens Bone morphogenetic protein receptor type-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000922348 Homo sapiens C-X-C chemokine receptor type 4 Proteins 0.000 description 1
- 101001046870 Homo sapiens Hypoxia-inducible factor 1-alpha Proteins 0.000 description 1
- 101001078158 Homo sapiens Integrin alpha-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000599852 Homo sapiens Intercellular adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000934372 Homo sapiens Macrosialin Proteins 0.000 description 1
- 101000617130 Homo sapiens Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000635938 Homo sapiens Transforming growth factor beta-1 proprotein Proteins 0.000 description 1
- 101000798130 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 11B Proteins 0.000 description 1
- 208000013016 Hypoglycemia Diseases 0.000 description 1
- 206010021033 Hypomenorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 102100022875 Hypoxia-inducible factor 1-alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100025323 Integrin alpha-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000001702 Intracellular Signaling Peptides and Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010068964 Intracellular Signaling Peptides and Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101150059802 KU80 gene Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 206010061223 Ligament injury Diseases 0.000 description 1
- 206010024769 Local reaction Diseases 0.000 description 1
- 102100028123 Macrophage colony-stimulating factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100025136 Macrosialin Human genes 0.000 description 1
- 102100025744 Mothers against decapentaplegic homolog 1 Human genes 0.000 description 1
- 229920001046 Nanocellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000009905 Neurofibromatoses Diseases 0.000 description 1
- 208000002804 Osteochondritis Diseases 0.000 description 1
- 201000009859 Osteochondrosis Diseases 0.000 description 1
- 102100026466 POU domain, class 2, transcription factor 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710084413 POU domain, class 2, transcription factor 3 Proteins 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 235000014676 Phragmites communis Nutrition 0.000 description 1
- 208000035965 Postoperative Complications Diseases 0.000 description 1
- 108050003243 Prostaglandin G/H synthase 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 101710102802 Runt-related transcription factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101700032040 SMAD1 Proteins 0.000 description 1
- 206010040943 Skin Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010040844 Skin exfoliation Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000013201 Stress fracture Diseases 0.000 description 1
- 101710088580 Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000004367 Tibial Fractures Diseases 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 102100030742 Transforming growth factor beta-1 proprotein Human genes 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 102100024568 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 11 Human genes 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 101710124921 X-ray repair cross-complementing protein 5 Proteins 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 102000019997 adhesion receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010013985 adhesion receptor Proteins 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 210000003486 adipose tissue brown Anatomy 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N alizarin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=C(O)C(O)=CC=C3C(=O)C2=C1 RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940009444 amphotericin Drugs 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002639 bone cement Substances 0.000 description 1
- 230000014461 bone development Effects 0.000 description 1
- 229940112869 bone morphogenetic protein Drugs 0.000 description 1
- 230000010478 bone regeneration Effects 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 229940111217 buprenorphine injection Drugs 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000006369 cell cycle progression Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000004568 cement Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 208000024971 chromosomal disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000000515 collagen sponge Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000002591 computed tomography Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 102000003675 cytokine receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010057085 cytokine receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 230000035618 desquamation Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000003981 ectoderm Anatomy 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001900 endoderm Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 230000010393 epithelial cell migration Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 1
- 210000001105 femoral artery Anatomy 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000003176 fibrotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002082 fibula Anatomy 0.000 description 1
- 239000010408 film Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000008570 general process Effects 0.000 description 1
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002641 glycemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000034659 glycolysis Effects 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001126 granulation tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003370 grooming effect Effects 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000052781 human TNFRSF11B Human genes 0.000 description 1
- 102000053529 human TNFSF11 Human genes 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000001969 hypertrophic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002650 immunosuppressive therapy Methods 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 238000001871 ion mobility spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 1
- 238000002684 laminectomy Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 230000036244 malformation Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003475 metalloproteinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 206010028320 muscle necrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013188 needle biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 201000004931 neurofibromatosis Diseases 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100001083 no cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001019 normoglycemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000392 octacalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002747 omentum Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000004072 osteoblast differentiation Effects 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012268 protein inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940121649 protein inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 238000002601 radiography Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 108091006084 receptor activators Proteins 0.000 description 1
- 108700015048 receptor decoy activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000018448 secretion by cell Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 231100000019 skin ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005477 standard model Effects 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000003894 surgical glue Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- YIGWVOWKHUSYER-UHFFFAOYSA-F tetracalcium;hydrogen phosphate;diphosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].OP([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O YIGWVOWKHUSYER-UHFFFAOYSA-F 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 239000010409 thin film Substances 0.000 description 1
- 210000004888 thoracic abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000003106 tissue adhesive Substances 0.000 description 1
- 229940075469 tissue adhesives Drugs 0.000 description 1
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 1
- 208000037816 tissue injury Diseases 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 description 1
- 230000009184 walking Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
- 210000002517 zygapophyseal joint Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/02—Inorganic materials
- A61L27/12—Phosphorus-containing materials, e.g. apatite
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
- A61L27/3608—Bone, e.g. demineralised bone matrix [DBM], bone powder
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
- A61L27/3633—Extracellular matrix [ECM]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
- A61L27/3821—Bone-forming cells, e.g. osteoblasts, osteocytes, osteoprogenitor cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3804—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by specific cells or progenitors thereof, e.g. fibroblasts, connective tissue cells, kidney cells
- A61L27/3834—Cells able to produce different cell types, e.g. hematopoietic stem cells, mesenchymal stem cells, marrow stromal cells, embryonic stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3839—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by the site of application in the body
- A61L27/3843—Connective tissue
- A61L27/3847—Bones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/38—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells
- A61L27/3839—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix containing added animal cells characterised by the site of application in the body
- A61L27/3843—Connective tissue
- A61L27/3852—Cartilage, e.g. meniscus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0667—Adipose-derived stem cells [ADSC]; Adipose stromal stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0697—Artificial constructs associating cells of different lineages, e.g. tissue equivalents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
- A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
- A61L2300/412—Tissue-regenerating or healing or proliferative agents
- A61L2300/414—Growth factors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/02—Materials or treatment for tissue regeneration for reconstruction of bones; weight-bearing implants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/06—Materials or treatment for tissue regeneration for cartilage reconstruction, e.g. meniscus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2513/00—3D culture
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/90—Substrates of biological origin, e.g. extracellular matrix, decellularised tissue
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Botany (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Hematology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
脂肪由来幹細胞(ASC)増殖の段階と、
第4継代でのASC骨原性分化の段階と、
多次元誘導、好ましくは3D誘導の段階と
を含む、方法である。
本発明では、以下の用語は以下のような意味を有する:
本発明は、脂肪組織由来幹細胞(ASC)と生体適合材料と細胞外基質とを含む多次元構造を有し、オステオプロテジェリン(OPG)を含む、生体材料に関する。
細胞増殖の段階と、
細胞分化の段階と、
多次元誘導の段階と
を含む。
ASC増殖の段階と、
ASCの骨原性分化の段階と、
多次元誘導、好ましくは3D誘導の段階と
を含む。
対象から細胞、好ましくはASCを単離する段階と、
細胞、好ましくはASCを増殖させる段階と、
増殖した細胞、好ましくは増殖したASCを分化させる段階と、
分化細胞、好ましくは分化したASCを生体適合材料の存在下で培養する段階と
を含む。
以下の実施例により本発明をさらに説明する。
hASCの単離
インフォームドコンセントおよび血清学的スクリーニングの後、コールマン法による腹部領域の脂肪吸引によってヒト皮下脂肪組織を回収した。
工程ののちの諸段階に十分な量の細胞を得るため、増殖期にhASCを4回継代した(P1、P2、P3およびP4)。
継代P4(すなわち、第4継代)で、細胞をもう一度遠心分離し、MD培地(分化培地)に再懸濁させた。再懸濁後、細胞をもう一度カウントした後、適切な細胞密度までMD培地で希釈し、150cm2フラスコに体積70mLの細胞懸濁液を播種し、骨原性MD培地を供給した。第4継代の後は、この方法に従い、細胞を直接、骨原性MD培地で培養した。したがって、細胞がコンフルエンスに達していないうちに骨原性MD培地を加えた。
細胞がコンフルエンスに達したとき、形態学的変化がみられ、フラスコ内に類骨小結節(骨組織成熟の前に形成される骨基質の非ミネラル化有機部分)が少なくとも1つ観察された場合に3D誘導を開始した。
DBM:150cm2フラスコに1000〜1200mg±10%(RTI Surgical社、米国)、
HA/β−TCP粒子:150cm2フラスコに65/35の比で1.5cm3(Teknimed社、フランス)、
HA粒子:150cm2フラスコに1.5cm3(Biocetis社、フランス)または
β−TCP粒子:150cm2フラスコに1.5cm3(Biocetis社、フランス)
をゆっくりと均一に撒いた。
材料および方法
細胞毒性
L929細胞(マウス線維芽細胞、5%FBSを添加したRPMI培地で培養)で細胞毒性を評価した。次いで、トランスウェルインサート法を実施して細胞毒性を解析した。
6.6mg/cm2のDBM、
150cm2の容器に3種類の異なる量、すなわち、1.5cm3、2.85cm3および5.91cm3のHA/β−TCP、
150cm2の容器に1.5cm3のHA粒子または
150cm2の容器に1.5cm3のβ−TCP粒子
に負荷し、次いで個々のウェルに入れ、37℃/5%CO2で24時間インキュベートした。
相対細胞生存率=(OD−ブランク)処理/(OD−ブランク)未処理×100
(OD−ブランク)未処理:陰性対照(未処理細胞)の(OD−ブランク)の平均値。
生体適合性粒子の添加から4週間後および8週間後、MD培地中の構造物の生検試料を採取した。
ヘマトキシリン−エオシン染色およびマッソン・トリクロム染色を実施した後、組織の構造、細胞充実度および細胞外基質の存在を評価した。
組織の骨分化およびミネラル化をそれぞれオステオカルシン(1/200希釈のオステオカルシン抗体、参照ab13418、Abcam社)およびマイクロCTで評価した。
形成された組織の生物活性を評価するため、生体適合性粒子の添加から4週間後および8週間後、タンパク質の抽出および定量化に生検試料を採取した。比色分析(BCA Protein Assay Kit、ThermoFisher Scientific社)およびBMP2、BMP7、VEGF、SDF1α、IGF1に関するELISA(Human Quantikine ELISAキット、RD Systems社)により、供給業者の指示通りに総タンパク質および成長因子含有量を定量化した。
無hPL条件で72時間培養した後、(MD培地またはMP培地での)培養物のASCおよび(DBMまたはHA/βTCPの添加により約8週間にわたって誘導した)多次元培養物のASCの上清を回収し、のちの定量化にそのまま−20℃で直接保管した。生体適合性粒子単独のタンパク質も抽出して、OPGおよびRANKLのレベルを定量化した。
細胞毒性
DBMに細胞毒性は検出されなかった。トランスウェルインサート法を用いて細胞をDBMと24時間培養したところ、細胞生存率の百分率の増加さえ認められた(170.3%まで、図1)。
生体適合性粒子との4週間または8週間のインキュベーション後、構造物間に有意差は認められなかった。
生体適合材料添加の数日後、骨原性細胞および分散した生体適合材料粒子がミネラル化細胞外基質の中に徐々に閉じ込められていった。
両組織とも細胞外基質のオステオカルシン染色が陽性であり(図5D)、ASCが適切に骨原性細胞に分化したことが示された。
生体適合性粒子との4週間または8週間のインキュベーション後、構造物間に有意差は認められなかった。
MP/MD培地、DBMを用いて形成した生体材料、HA/β−TCPを用いて形成した生体材料、HAを用いて形成した生体材料およびβ−TCPを用いて形成した生体材料中のhASCの上清のOPG/RANKL分泌を定量化した。
材料および方法
組織作製
2つの異なるドナーに由来する脂質幹細胞を用いて組織を製造した。実施例1のプロトコルに従い、生体適合材料にDBMを用いてNVD−1を作製した。NVD−1の作製プロトコルに従ってNVD−0を作製したが、以下の2つの重要な修正を加えた:(i)NVD−0の培地(MPおよびMD)には(NVD−1の培地の5%HPLの代わりに)10%FBSを用い、(ii)NVD−0作製の第4継代では、(NVD−1作製で第4継代から骨原性分化およびDBM粒子添加まで細胞を直接MDで培養したのに代えて)細胞を増殖培地(MP)でコンフルエンシーまで培養し、次いで、MDで骨原性分化およびDBM粒子添加まで培養した。
粒子添加の8週間後、組織の生検試料を採取した。生検試料をホルモールで固定し、ヘマトキシリン−エオシン(当業者に公知の方法によるHE染色)用に調製した。組織を組織学的に解析し、特徴を明らかにした、すなわち、HEスライドで細胞をカウントした後、基質の細胞充実度および効力比を求めた。
形成された組織の生物活性を評価するため、粒子添加の8週間後、各組織につき3例の生検試料を採取し、重量を測定した。この27例の生検試料をHPLもFBSも含まないMD中に72時間置いた。次いで、分泌された成長因子のELISA(BMP2、BMP7、IGF1、SDF1a、VEGF、OPG、RANKL)による定量化に上清を回収した。
組織学的解析
組織学的解析の結果(n=1)から、NVD−1の方がNVD−0よりも細胞充実度が高いことが明らかになった。表2および図10に示すように、両群とも組織中の基質の割合は同程度であったが、NVD−1の方がNVD−0よりも重要な基質密度がみられた。
NVD−1とNVD−0との間に意味のある差がみられ、NVD−1の方がNVD−0よりもVEGFおよびSDF1aの含有量が高く、IGF1およびOPGの含有量が低いことが示された(表3)。BMP2およびRANKLは定量化の下限未満であった。
材料および方法
Qiazol溶解試薬(Qiagen社、ヒルデン、ドイツ)およびPrecellysホモジナイザー(Bertin instruments社、モンティニー=ル=ブルトンヌー、フランス)を用いて、増殖培地(MP)のASC(n=4、4例の異なるヒト脂肪組織ドナー由来)、分化培地のASC(MD、粒子を含まない古典的な骨原性培地で培養した細胞)(n=4、4例の異なるヒト脂肪組織ドナー由来)および1.5cm3のHA/β−TCPを用いて形成した生体材料(n=4、4例の異なるヒト脂肪組織ドナー由来)から全RNAを抽出した。Rneasy mini kit(Qiagen社、ヒルデン、ドイツ)を追加のオンカラムDNアーゼ消化とともに製造業者の指示通りに用いて、RNAを精製した。分光光度計(Spectramax 190、Molecular Devices社、カリフォルニア州、米国)を用いて、RNAの性質および量を明らかにした。市販のPCRアレイ(Human RT2 Profiler Assay−血管新生;Human RT2 Profiler Assay−骨形成、Qiagen社)による骨原性および血管新生の遺伝子発現プロファイルには、RT2RNA first strand kit(Qiagen社、ヒルデン、ドイツ)を用いて全RNA0.5μgからcDNAを合成した。増幅産物の検出にはABI Quantstudio 5システム(Applied Biosystems社)およびSYBR Green ROX Mastermix(Qiagen社、ヒルデン、ドイツ)を用いた。ΔΔCT法に従って定量化を実施した。各試料の最終結果を3種類のハウスキーピング遺伝子(ACTB、B2MおよびGAPDH)の発現レベルの平均値に対して正規化した。
本発明の生体材料では、84種類の被験骨原性遺伝子のうち骨格発生に関与する11種類の遺伝子(ACVR1、BMPR1A、BMPR1B、BMPR2、CSF1、EGFR、FGFR1、IGFR1、RUNX2、TGFBR1、TWIST1)、3種類の転写因子(SMAD2、SMAD4、SMAD5)、2種類の成長因子(VEGFA、VEGFB)および3種類の細胞接着分子(ITGA1、ITGB1、ICAM1)がMPのASCまたはMDのASCと比較して調節されることがわかった(図11)。
4.1.in vitro
組織傷害に最もよくみられる要素の1つが低酸素状態の存在である。間質が損傷すると多くの場合、凝固カスケードが活性化し、低酸素状態の領域が生じる。このことに関連して、本発明の生体材料が、移植後の血管新生の鍵となる成長因子であるVEGF(Madrigal M et al.,J Transl Med.2014 Oct 11;12:260)を分泌する能力を評価した。様々な組織で酸素圧が低下すると、血管内皮成長因子(VEGF)などの血管新生遺伝子の転写を誘導する低酸素誘導因子(HIF−1α)(Ahluwalia A et al.,Curr Med Chem.2012;19(1):90−97;Hawkins KE et al.,Regen Med.2013;8(6):771−782)のほかにもMSC化学誘引間質細胞由来因子1(SDF−1α)(Youn SW et al.,Blood.2011;117:4376−4386.Ceradini DJ et al.,Nat Med.2004;10(8):858−864)の活性化が起こることが知られている。
低酸素濃度が生体材料の血管新生促進特性に及ぼす影響を評価するため、3例のドナー由来のASCと1.5cm3HA/β−TCPとから形成した生体材料をPBSで2回洗浄し、(培地中に外因性成長因子が存在しないよう)hPLを含まない骨原性分化培地(MD)10mLが入った6ウェルプレートで、二重反復でインキュベートした。プレートを5%CO2、37℃で72時間、低酸素状態(1%O2)または酸素正常状態(21%O2)に置いた。次いで、ELISAによるVEGFおよびSDF−1αの定量化に上清を回収した。
低酸素圧では2D(MPおよびMD)での細胞によるVEGF分泌が増大した(1%O2対21%O2で、MPがそれぞれ242±51pg/105細胞対29±27pg/105細胞、MDがそれぞれ565±507pg/105細胞対182±216pg/105細胞(p<0.05))が、低酸素状態が本発明の生体材料のVEGF分泌に及ぼす影響はみられなかった(1%O2対21%O2でそれぞれ、760±594pg/105細胞対806±530pg/105細胞)(図13A)。したがって、低酸素圧が本発明の生体材料の使用に対する限定要因となることはない。
低酸素条件下での本発明の生体材料の生物活性を明らかにする目的で、筋壊死の前臨床モデルを実施した。Schubertら(Biomaterials,2011;32(34):8880−91)によって示された異所性モデルは、生体材料の生物活性を検討するゴールドスタンダードモデルであり、腰部領域内の焼灼脊椎傍筋によって形成されたポケットに被験品(生体材料)を移植することにある。
ヌードラットに、いかなる移植片拒絶反応も起こらないよう本発明の生体材料(ヒト起源)を移植する、2つの実験を実施した。
第一の実験
移植から1か月後、生体材料の内部に血管内部成長の存在が確認された(図14)。
移植後第29日、本発明の生体材料中にヒト細胞が存在することが明らかになった(データ不掲載)。
骨形成における本発明の生体材料の効果を試験するため、ラットモデルの臨界寸法の骨欠損をデザインした。このモデルについては文献(Saxer et al.,Stem Cells 2016−Manassero et al.,Journal of Visualized Experiments 2016)に十分に記載されている。
本発明のヒト生体材料のレシピエントには、いかなるT細胞免疫反応も起こらないよう雄ヌードラットを選択した。簡潔に述べれば、ヌードラット14個体(HA/β−TCP粒子単独および生体材料それぞれのレシピエント7個体からなる2つのグループ)にRatFix System(登録商標)(RISystem社、スイス)を用いることによって、ラット大腿骨に臨界寸法の骨欠損を実施した。5mmの欠損を生じさせ、スクリューで固定したプレートを用いることにより、大腿骨の2つのセグメントを連結した。
移植から1か月後、本発明の生体材料は大腿骨の両セグメントの間に完全に統合されて、二皮質骨融合(2つの大腿皮質構造物の連続性)が起こっていた(図15、左上および左下)が、HA/β−TCP粒子単独のものは骨欠損内に位置し、全く統合されていなかった(図17、右上および右下)。実際、皮質骨とHA/β−TCP粒子との間に架橋はみられず、両側皮質融合(図17右下の記号*で示される)および大腿骨欠損端の萎縮様相もみられなかった。
試験の目的
GLP準拠試験(試験CP−2017025)を実施して、(i)治験製品が目的とする臨床使用に関連する条件に従った関連動物モデルでの生体材料の全般的毒性(いわゆる「CP−2017025−毒性試験群」)および(ii)治験細胞の生体内分布および異所性組織の継続的発達能(いわゆる「CP−2017025−生体内分布群」)を評価するという2つの目的を遂行した。
「生体内分布試験群」の目的には、健常な9週齢ホモ接合ヌード胸腺欠損ラット20個体(雄10個体および雌10個体;Hsd:RH−Foxn1 rnu/rnu)をグループ1および2(1グループ当たり雄5個体および雌5個体)に無作為に割り付けた(表4)。
グループ1および2の個体の骨髄、脳、生殖腺、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺、骨格筋および脾臓ならびにグループ2の個体の投与部位の試料に定量化の限界値以下のヒトDNAが検出されることはなかった。グループ1の個体の全投与部位およびグループ1の10個体のうち1個体の心臓にヒトDNAが検出された。
GLP準拠試験2件を含めた以下の動物試験3件により、生体材料開発のための非臨床毒性試験を実施した:
−脊椎固定ラットモデルを用いた生体材料に関する単回投与毒性試験(GLP試験CP−2017025−毒性試験群);
−NSGマウスを用いた生体材料に関する腫瘍形成能試験(GLP試験CP−2017026);および
−NSGマウスを用いて腫瘍形成能を検討した生体材料に関する局所耐容性試験(CP−2017073)。
GLP準拠試験(試験CP−2017025)を実施して、(i)治験製品が目的とする臨床使用に関連する条件に従った関連動物モデルでの生体材料の全般的毒性(いわゆる「CP−2017025−毒性試験群」)および(ii)治験細胞の生体内分布および異所性組織の継続的発達能(いわゆる「CP−2017025−生体内分布群」)を評価するという2つの目的を遂行した。
「毒性試験群」の目的には、健常な9週齢ホモ接合ヌード胸腺欠損ラット40個体(雄20個体および雌20個体;Hsd:RH−Foxn1 rnu/rnu)をグループ1および2(1グループ当たり雄10個体および雌10個体)に無作為に割り付けた(表5)。
モニタリング期間中、重要な観察結果は報告されなかった。体重に関して、グループ1と2の個体間に体重の統計的有意差は観察されなかった。第3日および第29日に採取した血液試料に関して実施した解析から、血液学的パラメータ、生化学的パラメータおよび凝固パラメータに関してグループ1と2の個体間に重要な差は報告されなかった。肉眼的には、実施した剖検から重要な事柄は報告されなかった。顕微鏡的には、グループ1の全個体の移植部位に生体材料移植によるものと考えられる異物肉芽腫が観察された。これ以外に生体材料移植に起因すると考えられる組織病理学的な全身変化は観察されなかった。
ヒトでは、骨肉腫を含めた様々な肉腫が間葉起源であることを裏付ける証拠が相当量得られている。一方、MSCについては、長期培養で染色体異常が発現するものの、in vitroで自然形質転換が起こることは示されていない(Aguilar et al.,Stem Cells.2007,25(6):1586−1594;Bernardo et al.,Cancer Res.2007,67(19):9142−9149;Xiao et al.,Clin.Sarcoma Res.2013,3(1):10)。このような奇形はこれまでに記載されており、in vitroの培養条件に対する自然な適応であって、形質転換リスクが高いこととは関係ないことが示唆されている(Tarte et al.,Blood.2010,115(8):1549−1553)。
背景および目的
MSC由来細胞療法を実施する場合、これまでにヒト患者に腫瘍形成が観察されたことはないが、こうして得られた結果は、患者に対する腫瘍形成能のリスクを確認するものでも排除するものでもない(Barkholt et al.,Cytotherapy.2013,15(7):753−759)。
この試験には、健常な7週齢のNSG雌マウス30個体を含めた。マウスを2つのグループ(グループ1には20個体、グループ2には10個体)に無作為に割り付けた。グループ1の個体には、生体材料(1.5×107個の細胞を含む1g(±1cm3))を切開により皮下空隙に移植した(臨床バッチと同じ工程に従って製造し、研究CP−2017025に使用したものと同じバッチ)。グループ2の個体には、HT−29細胞を皮下注射により接種した(0.9%NaCl 200μlで107個/個体)。
グループ2(HT−29、陽性対照)のマウス10個体に進行性の腫瘍成長がみられ、D27(最初の屠殺の日)の平均腫瘍体積(MTV)が611.6±335.4mm3であった。1個体のマウスを腫瘍の壊死により屠殺し、他の9個体のマウスはTV>1000mm3のため屠殺した。グループ2のマウスの剖検時に実施した器官の肉眼観察で異常はみられなかった。
背景および目的
GLP腫瘍形成能試験CP−2017026では、生体材料移植片の局所耐容性が低いことが観察され、このことは、NSG免疫不全マウスに固い材料を大量に皮下移植したことを原因とする機械的外傷と関係があるものと考えられた。
7週齢の健常なNSG(NOD scidガンマ)免疫不全雌マウス16個体を2つのグループ(1グループ当たり8個体)に無作為に割り付けた。グループ1の個体には、生体材料(1.5×107個の細胞を含む1g)を切開により右側腹部の皮下空隙に移植した。グループ2の個体には、生体材料(各部位に0.75×107個の細胞を含む2×0.5g)を切開により右側腹部および左側腹部の皮下空隙に移植した。マウスの生存率、行動および体重を実験終了まで週2回記録した。各個体について毎日、臨床徴候および局所反応を観察した。グループ1のマウス(1部位を被験品で治療)は最大6か月間観察した。グループ2のマウス(2部位を被験品で治療)は15日間にわたってモニターした。各個体について肉眼剖検を実施した。グループ1の個体(被験品)については、組織病理学的検査用に移植部位、肝臓、脾臓、肺、心臓、腎臓、脳、鼠経リンパ節(目に見える場合)のスライドを作製した。
グループ1のマウスのうち、D79からD85まで体重減少がみられた1個体を除いて、各マウスの体重はD0から屠殺まで徐々に増加した。前者のマウスはD89に死亡していた。
・生体材料を1つまたは2つの部位に投与したところ、両群とも、移植部位に黄色の皮膚が観察される場合でも局所耐容性に何ら有意な影響を及ぼすことはなかった。この観察結果に関して、グループ1の個体には、D44に移植部位に最後に黄色の皮膚が観察されて以降、回復がみられた。
・雌NSGマウスに1.5×107個の細胞を含む生体材料を単回皮下移植し、6か月間の追跡後に肉眼および顕微鏡で検討したところ、腫瘍形成の誘導はみられなかった。
・組織病理検査報告書には、1.5×107個の細胞を含む生体材料1gをNSGマウスに皮下移植しても、6か月間にわたって細胞増殖の誘導はみられないことが記載されていた。移植部位には、被験品と直接関係のある多房性のミネラル化がみられた。
10.1.hASCの単離
インフォームドコンセントおよび血清学的スクリーニングの後、コールマン法による腹部領域の脂肪吸引によってヒト皮下脂肪組織を回収した。
工程ののちの諸段階に十分な量の細胞を得るため、増殖期にhASCを4回継代した(P1、P2、P3およびP4)。
継代P4(すなわち、第4継代)で、細胞をもう一度遠心分離し、MD培地(分化培地)に再懸濁させた。再懸濁後、細胞をもう一度カウントした後、適切な細胞密度までMD培地で希釈し、150cm2フラスコに体積70mLの細胞懸濁液を播種し、骨原性MD培地を供給した。第4継代の後は、この方法に従い、細胞を直接、骨原性MD培地で培養した。したがって、細胞がコンフルエンスに達していないうちに骨原性MD培地を加えた。
細胞がコンフルエンスに達したとき、形態学的変化がみられ、フラスコ内に類骨小結節(骨組織成熟の前に形成される骨基質の非ミネラル化有機部分)が少なくとも1つ観察された場合に3D誘導を開始した。
11.1.材料および方法
11.1.1.構造/組織学的検査
ASCとCultispher GおよびCultispher S粒子とから得られる3D構造物の形成を試験した。6例の異なるドナーに由来する継代4のコンフルエントなASCにCultispherの粒子を加えた。様々な体積、すなわち、150cm2の容器当たり1cm3、1.5cm3、2cm3の粒子を試験した。細胞を分化培地(DMEM 4.5g/LグルコースとUltraglutamine+1%ペニシリン/ストレプトマイシン+0.5%アンホテリシンAB+デキサメタゾン(1μM)、アスコルビン酸(0.25mM)およびリン酸ナトリウム(2.93mM))で維持し、3〜4日毎に培地を交換した。
生物活性に関するin vitro試験を、(i)最終産物中の成長因子VEGF、IGF1、SDF−1αの抽出および定量化ならびに(ii)低酸素状態および高血糖状態(例えば、糖尿病性創傷治癒の条件)での本発明の生体材料の成長因子の分泌/含有能により評価した。さらに、(iii)本発明の生体材料の生物活性特性をqRT−PCRにより分子レベルでin vitroで特徴付けた。
形成された組織の生物活性を評価するため、ゼラチン(1.5cm3)の添加から4週間後および8週間後、タンパク質の抽出および定量化に生検試料を採取した。比色分析(BCA Protein Assay Kit、ThermoFisher Scientific社)およびVEGF、SDF1α、IGF1に関するELISA(Human Quantikine ELISAキット、RD Systems社)により、供給業者の指示通りに総タンパク質および成長因子含有量を定量化した。
本発明の生体材料の生物活性ならびにこの3D構造物の生物活性に対する酸素状態および血糖状態の影響を評価するため、Cultispher G(1.5cm3)と3例のドナー由来のASCとで形成された8週間後の組織の生検試料をPBSで2回すすぎ、HPLを含まない4.5g/L(高血糖条件)または1g/L(正常血糖条件)グルコースのMD 10mLが入った6ウェルプレートに二つ組で入れた。プレートを低酸素状態(1%O2)または酸素正常状態(21%O2)に5%CO2、37℃で72時間置いた。次いで、比色分析(BCA Protein Assay Kit、ThermoFisher Scientific社)およびELISA(BMP2、BMP7、VEGF、SDF−1α、IGF1、FGFb(Human Quantikine ELISAキット、RD Systems社)による総タンパク質および成長因子定量化にそれぞれ上清を回収した。タンパク質の抽出、精製ならびに総タンパク質および成長因子含有量の定量化に組織を処理した。
脈管形成および血管新生に関与する遺伝子の発現の解析により、本発明の生体材料の血管新生促進能を検討した。様々な状態にある脂肪幹細胞、すなわち、増殖培地中の脂肪幹細胞(表現型の方向付けがない、MP)、粒子を含まない古典的な骨原性培地(MD)中の脂肪幹細胞および最後に本発明の生体材料(脂肪幹細胞および細胞外基質による三次元無足場構造物の形成を誘導することを目的とする1.5cm3の粒子)による遺伝子発現を解析した。
生体材料(「組織」とも呼ぶ)の成熟がその特性に及ぼす影響をミネラル化レベルの評価、組織学的評価(細胞充実度の決定)および生物活性の評価(成長因子VEGF、IGF1、SDF−1αの抽出および定量化)によって評価した。本明細書では、生体材料の成熟は、ASCを分化培地中でCultispher粒子とともに培養する期間を意味する。
11.2.1.構造/組織学的検査
Cultispher粒子をhASCとともに増殖培地で培養した場合、3D構造物は得られなかった。肉眼レベルの3D構造物がみられなかったのと同じように、顕微鏡レベルの構造物も形成されなかった。
成長因子の含有および分泌
Cultispher GおよびCultispher S単独ではタンパク質含有はみられなかった。IGF−1がごくわずかに検出されたが、ELISA法の定量化下限値未満であった。
qRT−PCR解析によって解析した84種類の血管新生促進遺伝子のうち13種類のmRNAが、異なる培養条件間で調節されていた。10種類の遺伝子が本発明の生体材料で増殖培地のASCよりもアップレギュレートされ(ANG、ANGPT1、EPHB4、EDN1、LEP、THBS1、PTGS1、VEGFA、VEGFBおよびVEGFC)、2種類の遺伝子が本発明の生体材料でMPのASCよりもダウンレギュレートされていた(ID1、TIMP1)(図24)。
ミネラル化レベルの評価
4週間後、8週間後、12週間後および25週間後の3D移植片の拡大写真では同じ肉眼レベルの構造(図6、上パネル)が明らかになり、マイクロCTで解析した。ミネラル化体積の百分率を求めたところ、4週間後が0.07%、8週間後が0.28%±0.33%であり、12週間後が1.24%±0.35%であり、25週間後が2,77%であった(図25、下パネル)。
解析した異なる組織で同程度の細胞充実度が定量化されたことから、組織の成熟が細胞含有量に及ぼす影響はみられなかった(データ不掲載)。
4週間、8週間、12週間および25週間の成熟の時点での生体材料の生物活性をタンパク質抽出、精製およびELISAによる成長因子(VEGF、IGF1、SDF−1α)の定量化の後に検討した(表9)。
12.1.材料および方法
12.1.1.ヌードラットを用いたin vivo実験
第0日、10個の本発明の生体材料(7.5週間の成熟期間にわたって、1.5cm3のCultispher GまたはCultispher Sとともに実施例10に記載した通りに培養したASC)の複製物をヌードラットの焼灼腰部筋に縫合した。移植の29日後、生体材料を回収して画像および組織学的検査により解析した。
第0日、10個の本発明の生体材料(7.5週間の成熟期間にわたって、1.5cm3のCultispher GまたはCultispher Sとともに実施例10に記載した通りに培養したASC)の複製物をWistarラットの焼灼腰部筋に縫合した。移植の29日後、生体材料を回収して画像および組織学的検査により解析した。
12.2.1.ヌードラットを用いたin vivo実験
in vivo実験中、苦痛の徴候も著明な病変の徴候もみられず、この製品が動物に有害作用を引き起こさないことが示された。
Wistarラットでは、第29日に実施したX線写真にミネラル化を示唆する放射線不透過性の構造物の存在が観察された(図27)。
13.1.材料および方法
13.1.1.試料の調製
約0.5gの生体材料(8週間の成熟期間にわたって、1.5cm3のCultispher Sとともに実施例10に記載した通りに培養したASC)の試料10個をヌードラット10個体の脊椎傍筋に移植するために調製した。さらに、Cultispher S粒子の約0.5gの試料2個を対照として用いた。
動物は、獣医療組織による承認を受けている動物施設「Centre Preclinique Atlanthera」で飼育し、現時点での法律(実験目的で用いる動物に関する2013年2月1日の法令番号2013−118)に従ったあらゆる実験手順で用いた。試験開始前、動物を最低7日間順化させ、その間、動物の全般的状態を毎日追跡した。動物は、空調管理された動物舎で標準寸法のプラスチック製の箱の中に入れて飼育した。人工的な昼/夜の光周期を明期12時間と暗期12時間に設定した。全個体は、水を自由摂取させ、市販の固形飼料を自由摂取させた。耳標(リング)により各個体を識別した。
第0日、ヌードラット10個体の焼灼腰部筋に生体材料の複製物を縫合し、ヌードラット1個体の腰部筋に生じさせた筋焼灼区画内に粒子を単独で移植した。移植の29日後、生体材料が含まれている筋肉を回収して、画像および組織学的検査により解析した。
ラットに完全に麻酔をかけて、最良の条件下で外科手術を実施した。外科手術のほぼ30分前、ブプレノルフィン注射で無痛処置を開始した後、翌日、もう1度注射を実施した。
実験期間を通して毎日、個体の全般的臨床状態を確認した。週2回、呼吸器、眼球、心血管、胃腸管の徴候;運動活動および行動;発作の徴候;皮膚の評価;移植部位の炎症に重点を置いて詳細な臨床経過観察を実施した。
第29日、ラットを放血により屠殺し、肉眼的評価を実施した。剖検では、死体の外観を観察し、内部の病変異常の可能性を示す病的体液喪失があれば記録した。
筋肉の移植片部位を露出させ、局所組織反応ならびに移植片の存在および局在に重点を置いて詳細な肉眼的評価を実施した(X線撮影解析)。
小動物イメージング用の高解像度X線マイクロCTシステム、SkyScan1076を用いて、標本にミネラル化の解析を実施した。
製品のin vivoの血管新生および骨誘導特性を評価するため、筋肉試料の組織学的解析を実施した。
13.2.1.組織学的解析
HE染色後、組織中の細胞数を求めた(図29):146.5±50.4個/mm2。
苦痛の徴候も著明な病変の徴候もみられず、この製品が動物に有害作用を引き起こさないことが示された。実験を通して記録したラットの体重から、いずれの個体も、第2日に体重の増加はみられず、次いで、第2日〜第28日に規則的な体重増加がみられることがわかった。多くの場合、外科手術直後に体重増加がみられなくなることが観察され、これは被験製品のいかなる毒性も示すものではないと考えられる。第2日〜第28日に観察された規則的な体重増加は、粒子がラットの代謝に影響を及ぼさなかったことを裏付けるものである。in vivo実験終了時の剖検では、肉眼レベルで際立った器官の病変は一切みられなかった。
第29日に実施したX線写真では、生体材料を移植した全部位にミネラル化を示唆する放射線不透過性の構造物の存在が観察された(図31)。
血管新生を明らかするため、線維性結合組織中の毛細血管の存在を検討した。
14.1.材料および方法
14.1.1.動物
250〜300gの雌Wistarラット56個体にストレプトゾトシン(50mg/kg)を腹腔内投与した。ストレプトゾトシン投与の7〜10日後、血糖レベルを尾静脈血から血糖検査ストリップにより測定した。グルコースレベルが11.1mMを超えたラットを高血糖であるとし、試験に含めた(n−42匹)。
−偽治療群(n=10、雌Wistarラット);
−Cultispher群(n=10、雌Wistarラット)、すなわち、粒子単独;
−生体材料群(n=14、雌Wistarラット)、すなわち、ASCと組織を形成するゼラチン粒子
に分けた。
約0.5gのCultispher粒子の試料を14例調製し、ガンマ線を照射した。
移植後第0日、第15日、第24日および第34日、下肢の写真を撮影した。
下肢を切開して創傷組織を取り出し、この最後のものを横方向に向けて、組織の厚さ全体にわたる組織学スライドを得た。5μmの組織学スライドを作製し、上皮(op ‘t Veld RC et al,Biomaterials 2018)および真皮のスコアリング(Yates C et al,Biomaterials 2007)にHEで染色した:
創傷(中心部および辺縁部)の代表的な切片3枚の上皮治癒のスコア:
−0:上皮細胞の移動がみられない、
−1:部分的な移動、
−2:角化を伴わない/部分的角化を伴う全面的移動、
−3:全面的角化を伴う全面的移動、
−4:肥厚の進行。
−0:治癒がみられない、
−1:炎症性浸潤、
−2:肉芽組織の存在−線維増殖および血管新生、
−3:肉芽組織に代わるコラーゲン沈着が50%超、
−4:肥厚性線維化応答。
ストレプトゾトシン注射を実施したラット56個体のうち、42個体に高血糖症が認められ、試験に選択し、14個体に低血糖症が認められ、外科合併症が認められたため、試験から除外した。
創傷の肉眼写真を図32に示す。生体材料群には、外科手術後第15日(D15)に他のグループ(偽治療対照および粒子単独)よりも良好な創傷治癒が見られる。この差は、虚血性創傷、非虚血性創傷ともに目で確認できるものである。
各時点で非虚血性創傷に関して評価した上皮および真皮のスコアを図35に示す。本発明の生体材料では、真皮も表皮も他のグループと比較して迅速であった。
Claims (15)
- 骨原性分化脂肪由来幹細胞(ASC)と生体適合材料と細胞外基質とを含む多次元構造を有し、オステオプロテジェリン(OPG)を分泌する、生体材料。
- OPGを少なくとも生体材料1g当たり約5ng、好ましくは少なくとも約10ng/g分泌する、請求項1に記載の生体材料。
- 前記生体適合材料が粒子の形態である、請求項1または2に記載の生体材料。
- 前記生体適合材料が脱灰骨基質(DBM)の粒子である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の生体材料。
- 前記DBM粒子が、約50〜約2500μmの範囲の平均径を有する、請求項4に記載の生体材料。
- 前記生体適合材料がリン酸カルシウムの粒子である、請求項1〜3のいずれか1項に記載の生体材料。
- 前記リン酸カルシウムの粒子が、約50μm〜約1500μmの範囲の平均サイズを有する、請求項6に記載の生体材料。
- 前記リン酸カルシウムの粒子が、ヒドロキシアパタイト(HA)および/またはβリン酸三カルシウム(β−TCP)の粒子である、請求項6または7に記載の生体材料。
- 前記リン酸カルシウムの粒子が、10/90〜90/10、好ましくは20/80〜80/20の範囲の比のHA/β−TCPの粒子である、請求項6〜8のいずれか1項に記載の生体材料。
- VEGFを少なくとも生体材料1g当たり約10ng含む、請求項1〜9のいずれか1項に記載の生体材料。
- 三次元のものである、請求項1〜10のいずれか1項に記載の生体材料。
- 請求項1〜11のいずれか1項に記載の多次元生体材料を含む、医療装置。
- 請求項1〜11のいずれか1項に記載の多次元生体材料を作製する方法であって、
脂肪由来幹細胞(ASC)増殖の段階と、
第4継代でのASC骨原性分化の段階と、
多次元誘導、好ましくは3D誘導の段階と
を含む、方法。 - 請求項13に記載の方法によって得られる、多次元生体材料。
- 骨欠損および/または軟骨欠損の治療に使用する、請求項1〜11のいずれか1項に記載の生体材料。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762561045P | 2017-09-20 | 2017-09-20 | |
US62/561,045 | 2017-09-20 | ||
EP18163717.4 | 2018-03-23 | ||
EP18163717 | 2018-03-23 | ||
PCT/EP2018/075544 WO2019057861A1 (en) | 2017-09-20 | 2018-09-20 | BIOMATERIAL COMPRISING STEM CELLS DERIVED FROM ADIPOSE TISSUE AND PROCESS FOR PRODUCING THE SAME |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020534134A true JP2020534134A (ja) | 2020-11-26 |
JP2020534134A5 JP2020534134A5 (ja) | 2021-09-09 |
JP7273418B2 JP7273418B2 (ja) | 2023-05-15 |
Family
ID=63643002
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020537863A Active JP7273418B2 (ja) | 2017-09-20 | 2018-09-20 | 脂肪由来幹細胞を含む無足場構造物用生体材料およびその作製方法 |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20200268942A1 (ja) |
EP (2) | EP4082587A1 (ja) |
JP (1) | JP7273418B2 (ja) |
KR (1) | KR102673401B1 (ja) |
CN (1) | CN111107887B (ja) |
AU (1) | AU2018335854B9 (ja) |
BR (1) | BR112020005465B1 (ja) |
CA (1) | CA3076388C (ja) |
ES (1) | ES2926274T3 (ja) |
IL (1) | IL273311B (ja) |
MX (1) | MX2020003143A (ja) |
RU (1) | RU2020116309A (ja) |
SG (1) | SG11202001585PA (ja) |
TW (1) | TW201919720A (ja) |
WO (1) | WO2019057861A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2020116310A (ru) * | 2017-09-20 | 2022-01-10 | Новадип Биосьёнс | Биоматериал, медицинское устройство, способ получения многомерного материала, многомерный материал |
EP4041865A1 (en) * | 2019-11-29 | 2022-08-17 | Novadip Biosciences | Biomaterials for the prevention and the treatment of tissue disorders |
TWI755993B (zh) * | 2020-12-23 | 2022-02-21 | 集醫股份有限公司 | 脂肪組織處理裝置 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012528643A (ja) * | 2009-06-04 | 2012-11-15 | ウニベルシテ カソリーク デ ルーベン | 多次元生体材料およびその製造方法 |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5306303A (en) * | 1991-11-19 | 1994-04-26 | The Medical College Of Wisconsin, Inc. | Bone induction method |
US6039762A (en) * | 1995-06-07 | 2000-03-21 | Sdgi Holdings, Inc. | Reinforced bone graft substitutes |
US20030082152A1 (en) * | 1999-03-10 | 2003-05-01 | Hedrick Marc H. | Adipose-derived stem cells and lattices |
US9095562B2 (en) * | 2007-07-05 | 2015-08-04 | Regenerative Sciences, Inc. | Methods and compositions for optimized expansion and implantation of mesenchymal stem cells |
PL2274023T3 (pl) * | 2008-04-10 | 2020-09-07 | Bonus Therapeutics Ltd | Protetyczne implanty podobne do kości |
AU2015202527A1 (en) * | 2009-06-04 | 2015-06-11 | Cliniques Universitaires Saint-Luc | Multi-dimensional biomaterial and method for producing the same |
US9707318B2 (en) | 2009-10-29 | 2017-07-18 | Shaker A. Mousa | Compositions of novel bone patch in bone and vascular regeneration |
EP2768542A4 (en) | 2011-10-21 | 2015-08-05 | Univ Maryland | BONE PASTES COMPRISING BIOFONCTIONALIZED CALCIUM PHOSPHATE CEMENTS WITH ENHANCED CELLULAR FUNCTIONS FOR BONE REPAIR |
US10030228B2 (en) * | 2012-04-13 | 2018-07-24 | Case Western Reserve University | Scaffold-free tissue constructs |
GB201410506D0 (en) * | 2014-06-12 | 2014-07-30 | Cell Therapy Ltd | Hybrid composition |
JP7468983B2 (ja) * | 2015-06-03 | 2024-04-16 | ウィスコンシン アラムニ リサーチ ファンデーション | 虚血性疾患または虚血性損傷を処置するための心臓線維芽細胞由来細胞外マトリックスおよびその注射可能製剤 |
-
2018
- 2018-09-20 SG SG11202001585PA patent/SG11202001585PA/en unknown
- 2018-09-20 US US16/646,754 patent/US20200268942A1/en active Pending
- 2018-09-20 IL IL273311A patent/IL273311B/en unknown
- 2018-09-20 BR BR112020005465-8A patent/BR112020005465B1/pt active IP Right Grant
- 2018-09-20 MX MX2020003143A patent/MX2020003143A/es unknown
- 2018-09-20 CA CA3076388A patent/CA3076388C/en active Active
- 2018-09-20 AU AU2018335854A patent/AU2018335854B9/en active Active
- 2018-09-20 EP EP22175965.7A patent/EP4082587A1/en active Pending
- 2018-09-20 TW TW107133195A patent/TW201919720A/zh unknown
- 2018-09-20 JP JP2020537863A patent/JP7273418B2/ja active Active
- 2018-09-20 EP EP18773179.9A patent/EP3684433B1/en active Active
- 2018-09-20 CN CN201880061013.6A patent/CN111107887B/zh active Active
- 2018-09-20 ES ES18773179T patent/ES2926274T3/es active Active
- 2018-09-20 WO PCT/EP2018/075544 patent/WO2019057861A1/en unknown
- 2018-09-20 KR KR1020207008127A patent/KR102673401B1/ko active IP Right Grant
- 2018-09-20 RU RU2020116309A patent/RU2020116309A/ru unknown
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2012528643A (ja) * | 2009-06-04 | 2012-11-15 | ウニベルシテ カソリーク デ ルーベン | 多次元生体材料およびその製造方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
J APPL ORAL SCI, vol. 25, no. 1, JPN6023000133, February 2017 (2017-02-01), pages 10 - 19, ISSN: 0005027945 * |
STEM CELLS INTERNATIONAL, vol. Vol.2016, Article ID 1934270, JPN6022031600, 2016, pages 1 - 12, ISSN: 0004959571 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
IL273311A (en) | 2020-04-30 |
JP7273418B2 (ja) | 2023-05-15 |
KR102673401B1 (ko) | 2024-06-07 |
WO2019057861A1 (en) | 2019-03-28 |
CN111107887B (zh) | 2022-08-19 |
ES2926274T3 (es) | 2022-10-25 |
CN111107887A (zh) | 2020-05-05 |
CA3076388C (en) | 2024-04-23 |
RU2020116309A3 (ja) | 2022-02-07 |
AU2018335854B9 (en) | 2021-11-11 |
BR112020005465B1 (pt) | 2023-12-12 |
RU2020116309A (ru) | 2022-01-10 |
EP3684433B1 (en) | 2022-07-06 |
MX2020003143A (es) | 2020-07-28 |
AU2018335854B2 (en) | 2021-06-24 |
TW201919720A (zh) | 2019-06-01 |
EP3684433A1 (en) | 2020-07-29 |
IL273311B (en) | 2022-08-01 |
EP4082587A1 (en) | 2022-11-02 |
CA3076388A1 (en) | 2019-03-28 |
BR112020005465A2 (pt) | 2020-09-29 |
AU2018335854A1 (en) | 2020-03-12 |
KR20200087748A (ko) | 2020-07-21 |
SG11202001585PA (en) | 2020-03-30 |
US20200268942A1 (en) | 2020-08-27 |
AU2018335854A9 (en) | 2021-11-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7273418B2 (ja) | 脂肪由来幹細胞を含む無足場構造物用生体材料およびその作製方法 | |
AU2018335254B2 (en) | Biomaterial comprising adipose-derived stem cells and method for producing the same | |
US20210322644A1 (en) | Biomaterial comprising adipose-derived stem cells and gelatin and method for producing the same | |
Hivernaud et al. | Comparing “intra operative” tissue engineering strategies for the repair of craniofacial bone defects | |
US11602579B2 (en) | Biomaterial comprising adipose-derived stem cells and method for producing the same | |
TW202113069A (zh) | 包括脂肪幹細胞和明膠的生物材料和產生該生物材料之方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210730 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210730 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20220113 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220802 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20220823 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221027 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230110 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230310 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230404 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230421 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7273418 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |