JP2020525491A - メンタアルベンシス抽出物を含む微塵による皮膚細胞損傷ケア用、皮膚バリア強化用、及び抗老化又は抗炎症組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
メンタアルベンシス葉及びアセトバクターアセチ(Acetovacter aceti)を準備した後、これらを26℃で48時間発酵させた。そして、当該醗酵物を、精製水とエタノールとを3:7の割合で混合した抽出溶媒、すなわち、70%エタノールを抽出溶媒として常温抽出した。常温抽出後に1次ろ過を施して抽出物に含まれていた固相の材料を除去し、次いで、抽出物を濃縮してエタノールを除去した後、これを分離及び精製した。そして、遠心分離及び2次ろ過後に乾燥して、メンタアルベンシス抽出物を得た。
微塵の捕集は、ローボリウムエアサンプラー(Sensidyne、Gillian、Low Volume Air Sampler、FL、U.S.a.)を利用し、フィルタパック(Filter pack)は測定日毎の午前10時前後にフィルタとデニューダを取り替えて約24時間試料を採取した。28日間に亘ってソウル市の風下地域(韓国京畿道竜仁市處仁區所在、韓国外国語大学校外国学総合研究センター生活館6階屋上)で毎日微塵を捕集し、測定時間は真空ポンプのオンと同時にタイマーを作動させ、真空ポンプのオフ時にタイマーの時間を記録した。採取流量は16.7L/minとし、測定開始時の流量計(Model 4143、TSI Inc.)で流量を測定し、測定の終了時に再度流量を測定した。フィルタパック(filter pack)に組み込まれるTeflonフィルタは、試料採取の前と後に重さを測定した。Teflonフィルタの重さを測定する前に24時間に亘って相対湿度40%のデシケーター(NIKKO、Japan)に恒量させてから、小数点5桁が表示される電子秤(DVG215CD、Ohaus)で重さを2回測定してその平均値を記録した。試料を採取した後も、重さを測定する前にデシケーターで24時間に亘って恒量させてから重さを2回測定し、採取前に測定した重さと比較して質量濃度を算出した。微塵の抽出は、Teflonフィルタを1mLのエタノールに濡らしてから14mLのDWを入れてフィルタのエアロゾル捕集面が水面に当接するようにした状態で蓋を閉じた後に超音波洗浄器で30分間超音波を与えて行った。ろ過段階で水分による誤差を最小化するために乾燥器(decicator)で48時間フィルタの水分を完全に除去した後、0.1mgまで測定可能な超精密秤(Mettler Toledo COMPANY社製)を利用してフィルタの重さを秤量し、フィルタの抽出前と後の重さを秤量した。
(正常ヒト)角質形成細胞株(Human normal epidermal keratinocytes)は、ロンザ社(Lonza、Inc.,米国メリーランド州ウォーカーズビル所在)から購入して継代培養した後、CO2培養器(CO2 incubator)で37℃、5%CO2条件下で培養した。細胞培養液はロンザ社の指針書に従った。500mlのKBM−2(KBMTM−2、CC−3103)培地にKGM−2ブレットキットCC−4152(KGM TM−2 Bullet kit、CC−4152)(成分:BPE(Bovine pituitary extract))、ヒト上皮成長因子(human epidermal growth factor、hEGF)、インシュリン(Insulin)、ヒドロコルチゾン(Hydrocortisone)、トランスフェリン(Transferrin)、エピネフリン(Epinephrine)、及びゲンタマイシン硫酸塩+アムホフェリシン−B(Gentamycin Suflate+Amphofericin−B:GA−1000))を添加したKGM−2ブレットキットCC−3107(KGM TM−2 Bullet Kit、CC−3107)を用いた。
微塵処理による細胞毒性の有無を確認するために、Mossmanら(J.Immunol. Methods,65,55-63,1983)の方法で(正常ヒト)角質形成細胞株を用いたMTT実験を行った。
RNA−塩基配列データ処理及び分析のために、Trapnell et al.(2012)によって開発された一般的な分析段階を参照した。FastQC(http://www.bioinformatics.babraham.ac.uk/projects/fastqc/)を用いてRNA−seqデータ品質を確認し、FASTX(http://hannonlab.cshl.edu/fastx_toolkit/)を用いて、正確度が落ちるベース及びアダプタ配列を除去した。次いで、Tophat(Trapnell et al.,2009)とヒトゲノム(hg19)を用いてアラインメントを行い、各サンプルのデータ量をRSeQCと再命名されたEVER−seqを用いて確認した(Wang et al.,2012)。また、Cufflinksを用いて転写体(transcript)の発現レベルを定量し、微塵分散液処理サンプルと正常サンプルとの転写レベルを比較した(Trapnell et al.,2010)。FDR adjusted p−value<0.05に、≧2.0 fold−changeの厳しいカットオフを適用して、直径2.5μmの微塵の分散液の処理時の有意な発現差を示す遺伝子を決定した。測定結果は、下記の[表4]及び[図2a]〜[図2g]に示されている。
実施例2で抽出した直径2.5μmの微塵を実施例3で培養したヒト正常角質皮膚細胞に対し細胞培養培地1mlに12.5μgの量で処理し、表3に表した遺伝子のプライマー(applied biosystems TaqMan(登録商標) Primers)で相対的mRNA発現量を測定した。メンタアルベンシス抽出物は実施例1で調製したものを用いた。
本発明の実施例に係るメンタアルベンシス抽出物100mg、ラクトース400mg、とうもろこし澱粉400mg及びステアリン酸マグネシウム2mgを混合した後、通常の錠剤の製造方法に従い打錠して錠剤を製造した。
本発明の実施例に係るメンタアルベンシス抽出物100mg、ラクトース400mg、とうもろこし澱粉400mg及びステアリン酸マグネシウム2mgを混合した後、通常のカプセル剤の製造方法に従いゼラチンカプセルに充填してカプセル剤を製造した。
本発明の実施例に係るメンタアルベンシス抽出物50mg、無水結晶ブドウ糖250mg及び澱粉550mgを混合し、流動層造粒機を用いて顆粒に成形した後、分包に充填した。
Claims (19)
- メンタアルベンシス(Mentha Arvensis)抽出物を有効成分として含む、微塵による皮膚損傷ケア用組成物。
- 前記微塵による皮膚損傷ケアは、皮膚バリア強化、抗老化、及び抗炎症からなる群より選択されたいずれか一つ以上である、請求項1に記載の組成物。
- メンタアルベンシス(Mentha Arvensis)抽出物を有効成分として含む、皮膚バリア強化用組成物。
- メンタアルベンシス(Mentha Arvensis)抽出物を有効成分として含む、抗老化組成物。
- メンタアルベンシス(Mentha Arvensis)抽出物を有効成分として含む、抗炎症組成物。
- 前記メンタアルベンシス抽出物は、組成物の総重量に対して0.000001〜30重量%の範囲で含まれた、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記メンタアルベンシス抽出物は、水、C1〜C6の無水又は含水低級アルコール、アセトン、ブチレングリコール、エチルアセテート、ジエチルアセテート、ジエチルエーテル、ベンゼン、クロロホルム、及びヘキサンからなる群より選択されたいずれか一つ以上の抽出溶媒で抽出されたものである、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記メンタアルベンシス抽出物は、メンタアルベンシスの葉から抽出されたものである、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記メンタアルベンシスは、発酵したメンタアルベンシスであり、
前記醗酵は、アセトバクター属(Acetovacter sp.)微生物を添加して醗酵させることである、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物。 - 前記アセトバクター属(Acetovacter sp.)微生物は、アセトバクターアセチ(Acetovacter aceti)である、請求項9に記載の組成物。
- 当該組成物は、IL−1a(NM_000575)、IL−1B(NM_000576)、IL−36G(NM_019618)、S100A7(NM_002963)、LCE3D(NM_032563)、PTGS2(NM_000963)、XDH(NM_000379)からなる群より選択される一つ以上の発現を抑制する、請求項1又は2に記載の組成物。
- 当該組成物は、IL−36G(NM_019618)、S100A7(NM_002963)及びLCE3D(NM_032563)からなる群より選択される一つ以上の発現を抑制する、請求項3に記載の組成物。
- 当該組成物は、IL−1a(NM_000575)、IL−1B(NM_000576)、PTGS2(NM_000963)及びXDH(NM_000379)からなる群より選択される一つ以上の発現を抑制する、請求項4に記載の組成物。
- 当該組成物は、IL−1a(NM_000575)、IL−1B(NM_000576)及びPTGS2(NM_000963)からなる群より選択される一つ以上の発現を抑制する、請求項5に記載の組成物。
- 当該組成物は、角質形成細胞(keratinocyte)に適用される、請求項11〜14のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記メンタアルベンシス抽出物は、10〜500mg/kg/日の投与量で投与される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物。
- 当該組成物は、化粧料組成物である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物。
- 当該組成物は、薬学的組成物である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物。
- 当該組成物は、健康機能食品組成物である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の組成物。
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