JP2020521987A - 光学検出方法 - Google Patents
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Abstract
Description
第1の主題に従うと、本発明は、1つのポリマー又は複数のポリマーの混合物の、化合物、例えば1以上の酵素、に対する感受性を検出する為の方法であって、
該一つのポリマー又は該複数のポリマーの混合物を含む、個別化された複数のマイクロデポジット(micro−deposits)を、該化合物に曝露すること、そして
該一つのポリマー又は該複数のポリマーの混合物と該化合物との間の相互作用と関連する、該化合物に曝露されたマイクロデポジットの組み合わせの外観の変化、及び/又は該化合物に曝露された該マイクロデポジットのうちの少なくとも1つの大きさ及び/又は屈折率の変化を検出すること
で構成される工程を含む上記方法に関する。
該1以上のポリマー及び/又は該複数のポリマーの1以上の混合物を含む、個別化された複数のマイクロデポジットを、該化合物に曝露すること、そして
該1以上のポリマー及び/又は該複数のポリマーの1以上の混合物と該化合物との間の相互作用と関連する、該化合物に曝露されたマイクロデポジットの組み合わせの外観の変化、及び/又は該化合物に曝露された該マイクロデポジットのうちの少なくとも1つの大きさ及び/又は屈折率の変化を、干渉法によって検出すること
で構成される工程を含む上記方法に関する。
−該架橋反応は、多数の化学官能基(アルコール、アミン、フェノール)と行われ得、従って多数のクラスの生体ポリマーを架橋することを可能にする、
−水溶性樹脂製剤が存在する、
−架橋が単純である:モノマーは室温で安定であり、且つ該モノマーは、膜が乾燥雰囲気下で1時間、90℃にさらされた際に反応し、この処理は、大部分の生体ポリマーに適合する。
−単一の酵素又は複数の酵素の混合物を研究する可能性、
−異なる組成の1組のポリマー又は複数のポリマーの複数の混合物を、同一の支持体上に、同一のパターンで、又はある巨視的パターンから別のパターンへ堆積させる為の能力、
−マーカーを使用すること無しに酵素−ポリマー相互作用の検出、
−同等のインキュベーション時間について、蛍光性基質又は発色基質を使用する慣用的な生化学技術の感度と同等以上に良好な感度レベル
−試験される試料の種類(炭水化物のデポジットの物理化学的特性)に応じて検出ダイナミクス(dynamics)を調節する可能性、
−2つの分析レベルの統合:a)加水分解の有無を可視化することを可能にする巨視的分析、b)酵素の活性に関する半定量的データを抽出することを可能にする微視的分析。
本発明はまた、
支持体、
該支持体により担持される個別化された複数のマイクロデポジット、ここで、該マイクロデポジットの厚さは、適切な光、好ましくは単色光、で照射された際に干渉パターンの形成を可能にするように選択され、各マイクロデポジットが少なくとも1つのポリマーを含む、
を備えている装置、特に上記で定義されている方法を行う為の装置に関する。
支持体、
該支持体により担持される個別化された複数のマイクロデポジット、ここで、各マイクロデポジットは、適切な光、特に単色光、で照射された際に干渉パターンを形成させ、各マイクロデポジットが少なくとも1つのポリマーを含む、
を含む、上記で定義された本発明に従う方法を行う為に特に好適な装置に関する。
本発明の主題はまた、本発明に従う装置並びに、上記1つのポリマーと相互作用して、該マイクロデポジットの寸法及び/又は屈折率の変化をもたらす化合物を含む、組み合わせである。この変化は、該ポリマーと化合物との間の酵素分解反応に起因しうる。
本発明は、上記1以上のポリマーを含有するインクのドットを、インクジェット印刷によって上記支持体上へ堆積させて、上記マイクロデポジットを形成することを含む、本発明に従う装置を製造する為の方法に関する。
本発明の主題はまた、本発明に従う装置を製造する為の方法を行うのに特に好適なインク、好ましくは水性インク、であって、
−1以上のポリマー、好ましくは1つの「ポリマー」、
−結合剤、好ましくは樹脂、特にはメラミン−ホルムアルデヒド、及び
−該インクの乾燥中に凸状のマイクロデポジットの形成を許すように選択される有機共溶媒、好ましくはジメチルスルホキシド(DMSO)
を含む上記インクである。
検出装置の製造
ポリマーに関して様々な酵素又は複数の酵素の混合物を試験する為の本発明に従う装置は、先に説明された製造方法に従って用意された。
インクジェット印刷に好適な第1の水性インク組成物は、使用されるポリマーがアラビノキシランである、下記の特定に従って調製された。
シリコンウェハが、支持体として使用される。
組成物1の変形例1に従って予め調製されたインクがインクジェットプリンタ内に搭載され、インクドットがラスタードットとして上記支持体上に印刷される。
−インク吐出温度:室温(20℃〜30℃)、
−液滴の吐出体積(マイクロデポジット当たり):65pL±5pL、
−マイクロデポジットの厚さ:1μm未満
−液滴の吐出速度:5〜6m/s、及び
−巨視的パターン:一辺の長さが4cm、巨視的パターンにおける2つのマイクロデポジット間の間隔が70μmに等しい正方行列
。
樹脂の架橋及びマイクロデポジットの固形化が完了するまで、液状インクドットが堆積されたところの支持体は、10〜180分間、130℃に置かれる。
このようにして製造された該装置は、市販のキシラナーゼ(それぞれ異なるレベルの活性を有する)の酵素溶液による、デポジット中に存在するポリマー、すなわちアラビノキシラン(AX)、の分解速度を研究する為に使用された。
図7は、本発明に従う巨視的パターンの組み合わせの写真を表し、それは、水中における37℃での2時間の浸漬による水和、引き続き、0.25g/LのBSA溶液中における37℃での1時間の不動態化の後に、60分間、種々の濃度(14.8〜0.23nkat/mL)のキシラナーゼと接触して置かれた。
図8は、AXに対する酵素の活性を定量する為に種々の濃度の酵素に曝露された巨視的パターンから無作為に選択されたマイクロデポジットの行列像を表す。キシラナーゼは、種々の曝露時間について、0.45〜14.6nkat/mLの濃度で懸濁させる。
Claims (30)
- 1以上のポリマーの及び/又は複数のポリマーの1以上の混合物の、化合物に対する感受性を検出する為の方法であって、
該1以上のポリマー及び/又は該複数のポリマーの1以上の混合物を含む、個別化された複数のマイクロデポジット(21)を、該化合物に曝露すること、そして
該1以上のポリマー及び/又は該複数のポリマーの1以上の混合物と該化合物との間の相互作用と関連する、該化合物に曝露された1組のマイクロデポジットの外観の変化、及び/又は該化合物に曝露された該マイクロデポジットのうちの少なくとも1つの大きさ及び/又は屈折率の変化を、干渉法によって検出すること
で構成される工程を含む、前記方法。 - 該マイクロデポジットの厚さ(h)が、適切な光で照射された際に干渉パターンの形成を可能にするように選択され、好ましくは100nm〜1500nmである、請求項1に記載の方法。
- 該マイクロデポジットの最大の寸法(d)が、10μm〜100μmである、請求項1又は2に記載の方法。
- 各マイクロデポジットの厚さが、1つのみの極大値をとる、請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 各マイクロデポジット(21)が、凸状外面を有する、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 少なくとも1つのマイクロデポジットの体積の変化の、干渉法による検出が、特に、当該マイクロデポジットについて観察される干渉パターンの変化の観察により、行われ、体積のこの変化が、該1以上のポリマー及び/又は該複数のポリマーの1以上の混合物と該化合物との間の相互作用の影響下で起きる、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 該検出が、該干渉パターンの拡大後に行われる、請求項6に記載の方法。
- 干渉縞の局在性から、該マイクロデポジットの体積を再構成することを含む、請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- 該マイクロデポジット(21)が、ラスタードットの形態で配置される、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 該マイクロデポジット(21)が、巨視的パターン(20)で配置され、該巨視的パターン(20)は好ましくは互いに分離され、好ましくは自動堆積用マルチウェルグリッドのウェル様に配置される、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 該マイクロデポジット(21)が、反射性支持体(10)上に置かれる、請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。
- 該マイクロデポジットが、疎水性支持体(10)上に置かれる、請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 該化合物が酵素であり、該化合物と該ポリマーとの間の該相互作用が好ましくは、該化合物による該ポリマーの分解である、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。
- 該1以上のポリマーが、生体ポリマー、特に、オリゴ糖及び多糖、例えばセルロース、キシラン、ペクチン、キトサン、キチン、キシログルカン、β−グルカン、及びアラビノキシラン;ペプチド及びタンパク質、例えばウシ又はヒトの血清アルブミン、及びグルテニン;核酸、例えばデオキシリボ核酸及びリボ核酸;クチン、スベリン、並びにリグニンからなる群から選択される生体ポリマー、である、請求項1〜13のいずれか1項に記載の方法。
- 該マイクロデポジットが、樹脂、特に熱硬化性樹脂、特にメラミン−ホルムアルデヒド樹脂、を含む、請求項1〜14のいずれか1項に記載の方法。
- 支持体(10)、
該支持体により担持される個別化された複数のマイクロデポジット(21)、ここで該マイクロデポジットの厚さは、適切な光、好ましくは単色光、で照射された際に干渉パターンの形成を可能にするように選択され、各マイクロデポジットは、少なくとも1つのポリマーを含む、
を備えている、請求項1〜15のいずれか1項に記載の方法を行う為の装置(1)。 - 該マイクロデポジット(21)の厚さが、100nm〜1500nmである、請求項16に記載の装置。
- 該マイクロデポジット(21)の最大の寸法が、10μm〜100μmである、請求項16又は17に記載の装置。
- 各マイクロデポジット(21)の厚さが、1つのみの極大値をとる、請求項16〜18のいずれか1項に記載の装置。
- 各マイクロデポジット(21)が、凸状外面を有する、請求項16〜19のいずれか1項に記載の装置。
- 該マイクロデポジット(21)が、ラスタードットの形態で配置されている、請求項16〜20のいずれか1項に記載の装置。
- 該マイクロデポジット(21)が、巨視的パターン(20)で配置されており、該巨視的パターン(20)は好ましくは互いに分離されており、好ましくは自動堆積用マルチウェルグリッドのウェル様に配置されている、請求項16〜21のいずれか1項に記載の装置。
- 該支持体(10)が反射性である、請求項16〜22のいずれか1項に記載の装置。
- 該支持体(10)が疎水性であり、特にフッ素化材料で処理されている、請求項16〜23のいずれか1項に記載の装置。
- 該1以上のポリマーが、1つの酵素又は1組の酵素によって分解可能である、請求項16〜24のいずれか1項に記載の装置。
- 該1以上のポリマーが、生体ポリマー、特に、オリゴ糖及び多糖、例えばセルロース、キシラン、ペクチン、キトサン、キチン、キシログルカン、β−グルカン、及びアラビノキシラン;ペプチド及びタンパク質、例えばウシ又はヒトの血清アルブミン、及びグルテニン;核酸、例えばデオキシリボ核酸及びリボ核酸;クチン、スベリン、並びにリグニンからなる群から選択される生体ポリマー、である、請求項16〜24のいずれか1項に記載の装置。
- 該マイクロデポジットが、樹脂、特に熱硬化性樹脂、特にメラミン−ホルムアルデヒド樹脂、を含む、請求項16〜26のいずれか1項に記載の装置。
- 請求項16〜27のいずれか1項に記載の装置並びに、上記ポリマーと、特に酵素分解によって、相互作用して、該マイクロデポジットの寸法及び/又は屈折率の変化をもたらす化合物を含む、組み合わせ。
- 該1以上のポリマーを含有するインクのドットをインクジェット印刷によって該支持体(10)上に堆積させて、該マイクロデポジット(21)を形成することを含む、請求項16〜27のいずれか1項に記載の装置を製造する為の方法。
- 請求項29に記載の方法を行う為のインクであって、
ポリマー、特に酵素によって分解可能であるポリマー、好ましくはオリゴ糖及び多糖、例えばセルロース、キシラン、ペクチン、キトサン、キチン、キシログルカン、β−グルカン、及びアラビノキシラン;ペプチド及びタンパク質、例えばウシ又はヒトの血清アルブミン、及びグルテニン;核酸、例えばデオキシリボ核酸及びリボ核酸;クチン、スベリン、並びにリグニンから選択されるポリマー、
結合剤、好ましくは樹脂、特にメラミン−ホルムアルデヒド、並びに
該インクの乾燥中に凸状のマイクロデポジットの形成を許すように選択される有機共溶媒、好ましくはDMSO、
を含み、好ましくはインクジェットプリンタカートリッジ内に充填される、前記インク。
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