JP2020520649A - 有機化合物の生産方法 - Google Patents
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Abstract
Description
I) 遺伝子改変微生物を、同化可能な炭素源としてスクロースを含む培養培地中で培養して上記遺伝子改変微生物に有機化合物を生産させること、
II) プロセスステップI)で得られた発酵ブロスから有機化合物を回収すること
を含み、上記遺伝子改変微生物は、
A) 遺伝子改変されていない元の微生物と比較して、rbsK遺伝子によりコードされる酵素の活性の増加をもたらす少なくとも1つの遺伝子改変
を含み、上記元の微生物はパスツレラ科に属する。
A) 遺伝子改変されていない元の微生物と比較して、rbsK遺伝子によりコードされる酵素の活性の増加をもたらす少なくとも1つの遺伝子改変
を含む遺伝子改変微生物が使用され、上記元の微生物はパスツレラ科に属する。
i) パスツレラ科の元の微生物を提供すること;
ii) 上記微生物を、rbsK遺伝子によりコードされる酵素の活性が増加するような方法で遺伝子改変すること;
iii) 場合により、rbsK遺伝子によりコードされる酵素とは異なる1つ以上のさらなる酵素の活性の増加又は低減をもたらす微生物のさらなる遺伝子改変を実施すること
を含む方法により入手可能であり、プロセスステップiii)は、プロセスステップI)の後(特にプロセスステップii)の前、プロセスステップii)の後、又はプロセスステップii)の前後)のいつでも実施することができる。
a1) 配列番号3のヌクレオチド配列を有する核酸;
b1) 配列番号4のアミノ酸配列をコードする核酸;
c1) a1)又はb1)の核酸と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%又は少なくとも99.9%、最も好ましくは100%同一である核酸であって、同一性がa1)又はb1)の核酸の全長にわたる同一性である核酸;
d1) a1)又はb1)の核酸によりコードされるアミノ酸配列と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%又は少なくとも99.9%、最も好ましくは100%同一であるアミノ酸配列をコードする核酸であって、同一性が、a1)又はb1)の核酸によりコードされるアミノ酸配列の全長にわたる同一性である核酸;
e1) a1)又はb1)による核酸のいずれかの相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る核酸;及び
f1) a1)又はb1)の核酸のいずれかと同じタンパク質をコードするが、遺伝コードの縮重により上記a1)又はb1)の核酸とは異なる核酸
からなる群から選択される核酸を含む。
B) 遺伝子改変されていない元の微生物と比較して、fruA遺伝子によりコードされる酵素の活性の低減をもたらす少なくとも1つの遺伝子改変
を含む。
a2) 配列番号5のヌクレオチド配列を有する核酸;
b2) 配列番号6のアミノ酸配列をコードする核酸;
c2) a2)又はb2)の核酸と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%又は少なくとも99.9%、最も好ましくは100%同一である核酸であって、同一性が、a2)又はb2)の核酸の全長にわたる同一性である核酸;
d2) a2)又はb2)の核酸によりコードされるアミノ酸配列と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%又は少なくとも99.9%、最も好ましくは100%同一であるアミノ酸配列をコードする核酸であって、同一性が、a2)又はb2)の核酸によりコードされるアミノ酸配列の全長にわたる同一性である核酸;
e2) a2)又はb2)による核酸のいずれかの相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る核酸;及び
f2) a2)又はb2)の核酸のいずれかと同じタンパク質をコードするが、遺伝コードの縮重により上記a2)又はb2)の核酸とは異なる核酸
からなる群から選択される核酸を含む。
本発明による方法において使用される遺伝子改変微生物は、A) 遺伝子改変されていない元の微生物と比較して、rbsK遺伝子によりコードされる酵素の活性の増加をもたらす少なくとも1つの遺伝子改変を含む。かかる遺伝子改変は、例えば、rbsK遺伝子自体の改変及び/又はrbsK遺伝子の調節エレメントの改変であってよく、上記rbsK遺伝子の改変及び/又はrbsK遺伝子の調節エレメントの改変は、rbsK遺伝子及び/又はrbsK遺伝子の調節エレメントが改変されていない元の微生物と比較して、rbsK遺伝子によりコードされる酵素の活性の増加をもたらす。
a3) 配列番号7のヌクレオチド配列を有する核酸;
b3) a3)の核酸と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%又は少なくとも99.9%、最も好ましくは100%同一である核酸であって、同一性がa3)の核酸の全長にわたる同一性である核酸
からなる群から選択される核酸を含む。
本発明による方法において使用される遺伝子改変微生物の特に好ましい実施形態によれば、遺伝子改変微生物は、B) 遺伝子改変されていない元の微生物と比較してfruA遺伝子によりコードされる酵素の活性の低減をもたらす少なくとも1つの遺伝子改変、をさらに含む。このような遺伝子改変は、例えば、fruA遺伝子自体の改変及び/又はfruA遺伝子の調節エレメントの改変であって、fruA遺伝子の改変及び/又はfruA遺伝子の調節エレメントの改変が、fruA遺伝子及び/又はfruA遺伝子の調節エレメントが改変されていない元の微生物と比較して、fruA遺伝子によりコードされる酵素の活性の低減をもたらす上記改変であり得る。
- 低減されたピルビン酸ギ酸リアーゼ活性、
- 低減された乳酸デヒドロゲナーゼ活性、及び/又は
- 低減されたピルビン酸ギ酸リアーゼ活性及び低減された乳酸デヒドロゲナーゼ活性
によりさらに特徴付けることができる。
α1) 配列番号8のヌクレオチド配列を有する核酸;
α2) 配列番号9のアミノ酸配列をコードする核酸;
α3) α1)又はα2)の核酸と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%又は少なくとも99.9%、最も好ましくは100%同一である核酸であって、同一性がα1)又はα2)の核酸の全長にわたる同一性である核酸;
α4) α1)又はα2)の核酸によりコードされるアミノ酸配列と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%又は少なくとも99.9%、最も好ましくは100%同一であるアミノ酸配列をコードする核酸であって、同一性がα1)又はα2)の核酸によりコードされるアミノ酸配列の全長にわたる同一性である核酸;
α5) α1)又はα2)による核酸のいずれかの相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る核酸;及び
α6) α1)又はα2)の核酸のいずれかと同じタンパク質をコードするが、遺伝コードの縮重により上記α1)又はα2)の核酸とは異なる核酸
からなる群から選択される核酸を含む。
β1) 配列番号10のヌクレオチド配列を有する核酸;
β2) 配列番号11のアミノ酸配列をコードする核酸;
β3) β1)又はβ2)の核酸と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%又は少なくとも99.9%、最も好ましくは100%同一である核酸であって、同一性がβ1)又はβ2)の核酸の全長にわたる同一性である核酸;
β4) β1)又はβ2)の核酸によりコードされるアミノ酸配列と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%又は少なくとも99.9%、最も好ましくは100%同一であるアミノ酸配列をコードする核酸であって、同一性がβ1)又はβ2)の核酸によりコードされるアミノ酸配列の全長にわたる同一性である核酸;
β5) β1)又はβ2)による核酸のいずれかの相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る核酸;及び
β6) β1)又はβ2)の核酸のいずれかと同じタンパク質をコードするが、遺伝コードの縮重により上記β1)又はβ2)の核酸とは異なる核酸
からなる群から選択される核酸を含む。
γ1) 配列番号12のヌクレオチド配列を有する核酸;
γ2) 配列番号13のアミノ酸配列をコードする核酸;
γ3) γ1)又はγ2)の核酸と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%又は少なくとも99.9%、最も好ましくは100%同一である核酸であって、同一性がγ1)又はγ2)の核酸の全長にわたる同一性である核酸;
γ4) γ1)又はγ2)の核酸によりコードされるアミノ酸配列と少なくとも70%、少なくとも80%、少なくとも85%、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも96%、少なくとも97%、少なくとも98%、少なくとも99%、少なくとも99.5%、少なくとも99.6%、少なくとも99.7%、少なくとも99.8%又は少なくとも99.9%、最も好ましくは100%同一であるアミノ酸配列をコードする核酸であって、同一性がγ1)又はγ2)の核酸によりコードされるアミノ酸配列の全長にわたる同一性である核酸;
γ5) γ1)又はγ2)による核酸のいずれかの相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る核酸;及び
γ6) γ1)又はγ2)の核酸のいずれかと同じタンパク質をコードするが、遺伝コードの縮重により上記γ1)又はγ2)の核酸とは異なる核酸
からなる群から選択される核酸を含む。
C) ldhA遺伝子若しくは少なくともその一部の欠失、ldhA遺伝子の調節エレメント若しくは少なくともその一部の欠失、又はldhA遺伝子への少なくとも一つの変異の導入;
D) pflD遺伝子若しくは少なくともその一部の欠失、pflD遺伝子の調節エレメント若しくは少なくともその一部の欠失、又はpflD遺伝子への少なくとも一つの変異の導入;
E) pflA遺伝子若しくは少なくともその一部の欠失、pflA遺伝子の調節エレメント若しくは少なくともその一部の欠失、又はpflA遺伝子への少なくとも一つの変異の導入;
F) ldhA遺伝子若しくは少なくともその一部の欠失、ldhA遺伝子の調節エレメント若しくは少なくともその一部の欠失、又はldhA遺伝子への少なくとも一つの変異の導入
及び
pflD遺伝子若しくは少なくともその一部の欠失、pflD遺伝子の調節エレメント若しくは少なくともその一部の欠失、又はpflD遺伝子への少なくとも一つの変異の導入;
あるいは
G) ldhA遺伝子若しくは少なくともその一部の欠失、ldhA遺伝子の調節エレメント若しくは少なくともその一部の欠失、又はldhA遺伝子への少なくとも一つの変異の導入
及び
pflA遺伝子若しくは少なくともその一部の欠失、pflA遺伝子の調節エレメント若しくは少なくともその一部の欠失、又はpflA遺伝子への少なくとも一つの変異の導入
をさらに含むことが好ましい。
- rbsK遺伝子が(好ましくはackAプロモーターの制御下のエピソームプラスミド上で)過剰発現されており、より好ましくはfruA遺伝子が(好ましくはfruA遺伝子又は少なくともその一部の欠失により)不活性化されており、且つrbsK遺伝子が(好ましくはackAプロモーターの制御下のエピソームプラスミド上で)過剰発現されているバスフィア属、好ましくはバスフィア・スクシニシプロデュセンス種、最も好ましくはバスフィア・スクシニシプロデュセンス種DD1株の改変細菌細胞;
- rbsK遺伝子が(好ましくはackAプロモーターの制御下のエピソームプラスミド上で)過剰発現されており、より好ましくはfruA遺伝子が(好ましくはfruA遺伝子又は少なくともその一部の欠失により)不活性化されており、且つrbsK遺伝子が(好ましくはackAプロモーターの制御下のエピソームプラスミド上で)過剰発現されており、これらの遺伝子改変に加えて、好ましくはldhA遺伝子の改変により、特に配列番号8による核酸配列を有し且つ配列番号9によるアミノ酸配列を有するLdhAをコードするldhA遺伝子の欠失により乳酸デヒドロゲナーゼの活性が低減されているバスフィア属、好ましくはバスフィア・スクシニシプロデュセンス種、最も好ましくはバスフィア・スクシニシプロデュセンス種DD1株の改変細菌細胞;
- rbsK遺伝子が(好ましくはackAプロモーターの制御下のエピソームプラスミド上で)過剰発現されており、より好ましくはfruA遺伝子が(好ましくはfruA遺伝子又は少なくともその一部の欠失により)不活性化されており、且つrbsK遺伝子が(好ましくはackAプロモーターの制御下のエピソームプラスミド上で)過剰発現されており、さらにこれらの遺伝子改変に加えて、好ましくはpflA遺伝子又はpflD遺伝子の改変により、特に配列番号10による核酸配列を有し且つ配列番号11によるアミノ酸配列を有するPflAをコードするpflA遺伝子の改変により、又は配列番号12による核酸配列を有し且つ配列番号13によるアミノ酸配列を有するPflDをコードするpflD遺伝子の改変によりピルビン酸ギ酸リアーゼの活性が低減されているバスフィア属、好ましくはバスフィア・スクシニシプロデュセンス種、最も好ましくはバスフィア・スクシニシプロデュセンス種DD1株の改変細菌細胞;
- rbsK遺伝子が(好ましくはackAプロモーターの制御下のエピソームプラスミド上で)過剰発現されており、より好ましくはfruA遺伝子が(好ましくはfruA遺伝子又は少なくともその一部の欠失により)不活性化されており、且つrbsK遺伝子が(好ましくはackAプロモーターの制御下のエピソームプラスミド上で)過剰発現されており、さらにこれらの遺伝子改変に加えて、好ましくはldhA遺伝子及びpflA遺伝子の改変により、特に配列番号8による核酸配列を有し且つ配列番号9によるアミノ酸配列を有するLdhAをコードするldhA遺伝子の改変により、又は配列番号10による核酸配列を有し且つ配列番号11によるアミノ酸配列を有するPflAをコードするpflA遺伝子の改変により、又はldhA遺伝子及びpflD遺伝子の改変、特に配列番号8による核酸配列を有し且つ配列番号9によるアミノ酸配列を有するLdhAをコードするldhA遺伝子の改変により、又は配列番号12による核酸配列を有し且つ配列番号13によるアミノ酸配列を有するPflDをコードするpflD遺伝子の改変により乳酸デヒドロゲナーゼ及びピルビン酸ギ酸リアーゼの活性が低減されているバスフィア属、好ましくはバスフィア・スクシニシプロデュセンス種、最も好ましくはバスフィア・スクシニシプロデュセンス種DD1株の改変細菌細胞
である。
同化可能な炭素源:スクロース
温度:30〜45℃
pH:5.5〜7.0
供給ガス:CO2
である。
I) プロセスステップI)で得られた発酵ブロスに含まれる有機化合物の、又はプロセスステップII)で得られた回収された有機化合物の、少なくとも1つの化学反応による上記有機化合物とは異なる二次有機産物への変換
をさらに含む。
b1) プロセスステップI)又はII)で得られたコハク酸の、THF及び/又はBDO及び/又はGBLへの直接触媒的水素化、又は
b2) プロセスステップI)又はII)で得られたコハク酸及び/又はコハク酸塩の、その対応するジ低級アルキルエステルへの化学的エステル化、及びそれに続く前記エステルのTHF及び/又はBDO及び/又はGBLへの触媒的水素化、
のいずれかを含む。
b) プロセスステップI)又はII)で得られたコハク酸アンモニウム塩の、それ自体公知の方法でのピロリドンへの化学的変換
を含む。
A) 遺伝子改変されていない元の微生物と比較して、rbsK遺伝子によりコードされる酵素の活性の増加をもたらす少なくとも1つの遺伝子改変
を含む遺伝子改変微生物によりさらに提供され、ここで上記元の微生物はパスツレラ科に属する。
ベクター及び株の構築を、以前に報告された標準技術(Becker et al., Biotechnology and Bioengineering, Vol. 110 (2013), 3013-3023頁)により実行した。構築した全ての変異株を表1に列挙する:
DD1株の生産性を、炭素源としてのスクロースの存在下で、変異株DD1 PackArbsK及びDD1 ΔfruAPackArbsKの生産性と比較した。以下に記載される培地及びインキュベーション条件を利用して生産性を分析した。
生理学的研究及びスクシネート生産のため、B.スクシニシプロデュセンスの第1前培養を、1リットル当たり:50gスクロース、5g酵母抽出物(Becton Dickinson、フランクリンレイクス、ニュージャージー州、米国)、5gバクトペプトン144(Becton Dickinson)、1g NaCl、0.2g MgCl2・6H2O、0.2g CaCl2・2H2O、3g K2HPO4、1g(NH4)2SO4、及び50g MgCO3を含有する複合培地中で行った。第2前培養及び主培養については、1リットル当たり:50gスクロース、1g NaCl、0.2g MgCl2・6H2O、0.2g CaCl2・2H2O、3g K2HPO4、5g(NH4)2SO4、3mgチアミン・HCl、0.6mgリボフラビン、3mgニコチン酸、10mg Ca-パントテネート、1mg ピリドキサール・HCl、0.5mgビオチン、0.05mgシアノコバラミン、及び50g MgCO3を含有する最小培地を使用した。二酸化炭素を、0.8バールの超過気圧で培養ボトル(血清フラスコ)に適用した。プラスミド含有株の培養のため、クロラムフェニコールを50μg mL-1の最終濃度まで培地に添加した。
血清中の嫌気培養のため、サンプリング用のブチルゴムシールを備え、0.8バールの超過気圧のCO2雰囲気下で10mL培地が充填された30mL血清ボトル中でフラスコ培養を行った。凍結ストックから播種された後、第1前培養液を、オービタルシェーカー上で37℃及び130rpmにて8時間インキュベートした。指数関数的増殖中、細胞を遠心分離(3分、16,000×g、16℃)により回収し、1mL培地で洗浄し、第2前培養液に播種するために使用して、初期吸光度(OD600)を0.3とした。10時間のインキュベーション後、指数関数的に増殖している細胞を上記のとおりに回収及び洗浄し、その後主培養液に播種するために使用して初期OD600を0.08とした。
コハク酸をHPLCにより分析した。粗無細胞抽出物中で酵素活性を決定した。粗無細胞抽出物の調製のため、細胞を遠心分離(5分、5,000×g、4℃)により回収し、100mM Tris・HCl(0.75mMジチオスレイトール、pH7.8)で洗浄し、同じバッファー中で0.33(g細胞湿重量)mL-1の濃度まで再懸濁し、その後ベンチトップホモジナイザー(Precellys 24, Peqlab, VWR International GmbH, Darmstadt, Germany)で破壊した。酵素活性を、37℃で分光光度的に定量した(Spectronic Helios, Thermo Electron Corporation, Waltham, Massachusetts, 255 USA)。動態パラメータの決定のため、フルクトキナーゼを、Helanto et al. 2006により記載されるとおりに100mM Tris・HCl(pH7.8、10mM MgCl2)、1U mL-1グルコース6-リン酸デヒドロゲナーゼ、2U mL-1ホスホグルコイソメラーゼ、1mM NADP+及び異なる濃度のATP(0〜5mM)及びフルクトース(0〜25mM)中でアッセイした。
DD1株、DD1 PackArbsK株及びDD1 ΔfruAPackArbsK株におけるフルクトキナーゼの活性の決定のための酵素アッセイの結果を表3に示す。
Claims (15)
- 有機化合物の生産方法であって、該方法が、
I) 遺伝子改変微生物を、同化可能な炭素源としてスクロースを含む培養培地中で培養して該遺伝子改変微生物に有機化合物を生産させること、
II) プロセスステップI)で得られた発酵ブロスから該有機化合物を回収すること
を含み、該遺伝子改変微生物は、
C) 遺伝子改変されていない元の微生物と比較してrbsK遺伝子によりコードされる酵素の活性の増加をもたらす少なくとも1つの遺伝子改変を含み、
該元の微生物がパスツレラ科に属する、
前記方法。 - 有機化合物がコハク酸である、請求項1に記載の方法。
- 元の微生物がバスフィア属に属する、請求項1又は2に記載の方法。
- 元の微生物が、バスフィア・スクシニシプロデュセンス種に属する、請求項3に記載の方法。
- 元の微生物が、DSM 18541の下でDSMZ(ドイツ)に寄託されているバスフィア・スクシニシプロデュセンスDD1株である、請求項4に記載の方法。
- rbsK遺伝子が、以下:
a1) 配列番号3のヌクレオチド配列を有する核酸;
b1) 配列番号4のアミノ酸配列をコードする核酸;
c1) a1)又はb1)の核酸と少なくとも70%同一である核酸であって、同一性がa1)又はb1)の核酸の全長にわたる同一性である核酸;
d1) a1)又はb1)の核酸によりコードされるアミノ酸配列と少なくとも70%同一であるアミノ酸配列をコードする核酸であって、同一性が、a1)又はb1)の核酸によりコードされるアミノ酸配列の全長にわたる同一性である核酸;
e1) a1)又はb1)による核酸のいずれかの相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る核酸;及び
f1) a1)又はb1)の核酸のいずれかと同じタンパク質をコードするが、遺伝コードの縮重により上記a1)又はb1)の核酸とは異なる核酸
からなる群から選択される核酸を含む、請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。 - 少なくとも1つの遺伝子改変A)が、rbsK遺伝子の改変、rbsK遺伝子の調節エレメントの改変又は両方の組み合わせを含む、請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法。
- 少なくとも1つの遺伝子改変A)がrbsK遺伝子の過剰発現改変を含む、請求項7に記載の方法。
- 遺伝子改変微生物が、
D) 遺伝子改変されていない元の微生物と比較してfruA遺伝子によりコードされる酵素の活性の低減をもたらす少なくとも1つの遺伝子改変
をさらに含む、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。 - fruA遺伝子が、以下:
a2) 配列番号3のヌクレオチド配列を有する核酸;
b2) 配列番号4のアミノ酸配列をコードする核酸;
c2) a2)又はb2)の核酸と少なくとも70%同一である核酸であって、同一性が、a2)又はb2)の核酸の全長にわたる同一性である核酸;
d2) a2)又はb2)の核酸によりコードされるアミノ酸配列と少なくとも70%同一であるアミノ酸配列をコードする核酸であって、同一性が、a2)又はb2)の核酸によりコードされるアミノ酸配列の全長にわたる同一性である核酸;
e2) a2)又はb2)による核酸のいずれかの相補配列とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得る核酸;及び
f2) a2)又はb2)の核酸のいずれかと同じタンパク質をコードするが、遺伝コードの縮重により上記a2)又はb2)の核酸とは異なる核酸
からなる群から選択される核酸を含む、請求項9に記載の方法。 - 少なくとも1つの遺伝子改変B)が、fruA遺伝子の改変、fruA遺伝子の調節エレメントの改変、又は両方の組み合わせを含む、請求項10に記載の方法。
- 少なくとも1つの改変B)がfruA遺伝子の不活性化を含む、請求項11に記載の方法。
- 遺伝子改変微生物であって、
A) 遺伝子改変されていない元の微生物と比較して、rbsK遺伝子によりコードされる酵素の活性の増加をもたらす少なくとも1つの遺伝子改変
を含み、該元の微生物がパスツレラ科に属する、
前記遺伝子改変微生物。 - 遺伝子改変が、請求項7〜12のいずれか1項に定義されるものである、請求項13に記載の遺伝子改変微生物。
- 同化可能な炭素源としてのスクロースからの有機化合物の発酵生産のための、
請求項13又は14に記載の遺伝子改変微生物の使用。
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