JP2020518564A - 細胞外小胞を用いた全身移植片対宿主病を治療する方法 - Google Patents
細胞外小胞を用いた全身移植片対宿主病を治療する方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2020518564A JP2020518564A JP2019558492A JP2019558492A JP2020518564A JP 2020518564 A JP2020518564 A JP 2020518564A JP 2019558492 A JP2019558492 A JP 2019558492A JP 2019558492 A JP2019558492 A JP 2019558492A JP 2020518564 A JP2020518564 A JP 2020518564A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- administration
- extracellular vesicles
- gvhd
- stem cells
- cdc
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 title claims abstract description 115
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 title claims abstract description 113
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 54
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 title claims abstract description 38
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 claims abstract description 112
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 60
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims abstract description 29
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims abstract description 21
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims abstract description 15
- 210000003195 fascia Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 claims abstract description 10
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 claims abstract description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 20
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 16
- 238000011134 hematopoietic stem cell transplantation Methods 0.000 claims description 14
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 claims description 14
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 10
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 4
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 claims description 4
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000002583 cell-derived microparticle Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000003897 hepatic stem cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 claims description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 claims description 2
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 claims description 2
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 claims description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 2
- 210000004991 placental stem cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 claims 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 abstract description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 33
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 27
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 11
- 238000011161 development Methods 0.000 description 11
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 9
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 9
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 9
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 9
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 9
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 9
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 9
- 101000691214 Haloarcula marismortui (strain ATCC 43049 / DSM 3752 / JCM 8966 / VKM B-1809) 50S ribosomal protein L44e Proteins 0.000 description 8
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 8
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 8
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 6
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 6
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 6
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 6
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 5
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 5
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 5
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 5
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 5
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 5
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 5
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 208000017760 chronic graft versus host disease Diseases 0.000 description 5
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 5
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 5
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 5
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 5
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 102100025222 CD63 antigen Human genes 0.000 description 4
- 102100027221 CD81 antigen Human genes 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 4
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 4
- 101000934368 Homo sapiens CD63 antigen Proteins 0.000 description 4
- 101000914479 Homo sapiens CD81 antigen Proteins 0.000 description 4
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 4
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 4
- 210000002175 goblet cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- -1 miR-27a Proteins 0.000 description 4
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 4
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 3
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 3
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 3
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 3
- 206010015943 Eye inflammation Diseases 0.000 description 3
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 3
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 3
- 206010067993 Mucosal necrosis Diseases 0.000 description 3
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 208000024340 acute graft versus host disease Diseases 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 208000027503 bloody stool Diseases 0.000 description 3
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 210000003683 corneal stroma Anatomy 0.000 description 3
- 210000003560 epithelium corneal Anatomy 0.000 description 3
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 208000035861 hematochezia Diseases 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- FVVLHONNBARESJ-NTOWJWGLSA-H magnesium;potassium;trisodium;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanoate;acetate;tetrachloride;nonahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[Mg+2].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].CC([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O FVVLHONNBARESJ-NTOWJWGLSA-H 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 3
- 108091032320 miR-146 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091024530 miR-146a stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 108091048308 miR-210 stem-loop Proteins 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 3
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100165655 Arabidopsis thaliana BRO1 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 2
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 2
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 2
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000958041 Homo sapiens Musculin Proteins 0.000 description 2
- 101100082597 Homo sapiens PDCD6IP gene Proteins 0.000 description 2
- 108091070494 Homo sapiens miR-22 stem-loop Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 2
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 206010067472 Organising pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 206010068786 Overlap syndrome Diseases 0.000 description 2
- 206010033733 Papule Diseases 0.000 description 2
- 102100033344 Programmed cell death 6-interacting protein Human genes 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 210000000068 Th17 cell Anatomy 0.000 description 2
- 102000002689 Toll-like receptor Human genes 0.000 description 2
- 108020000411 Toll-like receptor Proteins 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 208000015322 bone marrow disease Diseases 0.000 description 2
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 2
- 150000001783 ceramides Chemical class 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 2
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 2
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 2
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000001085 differential centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001249 flow field-flow fractionation Methods 0.000 description 2
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 2
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 2
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000005241 right ventricle Anatomy 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000000822 sequential centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- 102000004899 14-3-3 Proteins Human genes 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 102100022900 Actin, cytoplasmic 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 206010004173 Basophilia Diseases 0.000 description 1
- 102100027217 CD82 antigen Human genes 0.000 description 1
- 101100507655 Canis lupus familiaris HSPA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000002177 Cataract Diseases 0.000 description 1
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 1
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 1
- 101710163595 Chaperone protein DnaK Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010012741 Diarrhoea haemorrhagic Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 206010061857 Fat necrosis Diseases 0.000 description 1
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010061459 Gastrointestinal ulcer Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101710178376 Heat shock 70 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101710152018 Heat shock cognate 70 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 102100034051 Heat shock protein HSP 90-alpha Human genes 0.000 description 1
- 101000760079 Homo sapiens 14-3-3 protein epsilon Proteins 0.000 description 1
- 101000914469 Homo sapiens CD82 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101001016865 Homo sapiens Heat shock protein HSP 90-alpha Proteins 0.000 description 1
- 101001019455 Homo sapiens ICOS ligand Proteins 0.000 description 1
- 101000777628 Homo sapiens Leukocyte antigen CD37 Proteins 0.000 description 1
- 101000980823 Homo sapiens Leukocyte surface antigen CD53 Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101001091538 Homo sapiens Pyruvate kinase PKM Proteins 0.000 description 1
- 101000611194 Homo sapiens Trinucleotide repeat-containing gene 6A protein Proteins 0.000 description 1
- 108091068853 Homo sapiens miR-100 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069006 Homo sapiens miR-125b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069087 Homo sapiens miR-125b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044796 Homo sapiens miR-1290 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069022 Homo sapiens miR-130a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091079265 Homo sapiens miR-1915 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067692 Homo sapiens miR-199a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067467 Homo sapiens miR-199a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067484 Homo sapiens miR-199b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070493 Homo sapiens miR-21 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067573 Homo sapiens miR-222 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070492 Homo sapiens miR-23a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070373 Homo sapiens miR-24-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070374 Homo sapiens miR-24-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070371 Homo sapiens miR-25 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091069018 Homo sapiens miR-27b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068837 Homo sapiens miR-29b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068845 Homo sapiens miR-29b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091072689 Homo sapiens miR-320e stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091067013 Homo sapiens miR-337 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091032109 Homo sapiens miR-423 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091055320 Homo sapiens miR-4516 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 102100034980 ICOS ligand Human genes 0.000 description 1
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102100031586 Leukocyte antigen CD37 Human genes 0.000 description 1
- 102100024221 Leukocyte surface antigen CD53 Human genes 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- 108091008065 MIR21 Proteins 0.000 description 1
- 108091007424 MIR27B Proteins 0.000 description 1
- 108091046841 MiR-150 Proteins 0.000 description 1
- 108091027766 Mir-143 Proteins 0.000 description 1
- 108091062170 Mir-22 Proteins 0.000 description 1
- 108091080995 Mir-9/mir-79 microRNA precursor family Proteins 0.000 description 1
- 102100025725 Mothers against decapentaplegic homolog 4 Human genes 0.000 description 1
- 101710143112 Mothers against decapentaplegic homolog 4 Proteins 0.000 description 1
- 206010061297 Mucosal erosion Diseases 0.000 description 1
- 206010028116 Mucosal inflammation Diseases 0.000 description 1
- 201000010927 Mucositis Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 206010031009 Oral pain Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 101710098940 Pro-epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 1
- 102100034911 Pyruvate kinase PKM Human genes 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 206010037868 Rash maculo-papular Diseases 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N Tacrolimus Chemical compound C1C[C@@H](O)[C@H](OC)C[C@@H]1\C=C(/C)[C@@H]1[C@H](C)[C@@H](O)CC(=O)[C@H](CC=C)/C=C(C)/C[C@H](C)C[C@H](OC)[C@H]([C@H](C[C@H]2C)OC)O[C@@]2(O)C(=O)C(=O)N2CCCC[C@H]2C(=O)O1 QJJXYPPXXYFBGM-LFZNUXCKSA-N 0.000 description 1
- 108700031126 Tetraspanins Proteins 0.000 description 1
- 102000043977 Tetraspanins Human genes 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 101150014014 Traf6 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102100040241 Trinucleotide repeat-containing gene 6A protein Human genes 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 210000002159 anterior chamber Anatomy 0.000 description 1
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 210000001008 atrial appendage Anatomy 0.000 description 1
- 230000003190 augmentative effect Effects 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000003339 best practice Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000001815 biotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004323 caveolae Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000009134 cell regulation Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 201000009805 cryptogenic organizing pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000009699 differential effect Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- NJDNXYGOVLYJHP-UHFFFAOYSA-L disodium;2-(3-oxido-6-oxoxanthen-9-yl)benzoate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=CC(=O)C=C2OC2=CC([O-])=CC=C21 NJDNXYGOVLYJHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 238000002651 drug therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000001174 endocardium Anatomy 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 210000001163 endosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008378 epithelial damage Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000003628 erosive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 238000005188 flotation Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 1
- 208000007565 gingivitis Diseases 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 1
- 229930004094 glycosylphosphatidylinositol Natural products 0.000 description 1
- 208000037824 growth disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003701 histiocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000046949 human MSC Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003832 immune regulation Effects 0.000 description 1
- 229940124644 immune regulator Drugs 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000002134 immunopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 230000035992 intercellular communication Effects 0.000 description 1
- 230000006662 intracellular pathway Effects 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 210000005246 left atrium Anatomy 0.000 description 1
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 201000011486 lichen planus Diseases 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005976 liver dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000001365 lymphatic vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000713 mesentery Anatomy 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 108091070946 miR-128 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091060382 miR-140 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091030617 miR-140-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091023370 miR-140-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091027034 miR-148a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091047758 miR-185 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091050874 miR-19a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091086850 miR-19a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091088468 miR-19a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091037787 miR-19b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091062762 miR-21 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091041631 miR-21-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091044442 miR-21-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061917 miR-221 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091035591 miR-23a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091092825 miR-24 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091032978 miR-24-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091064025 miR-24-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070404 miR-27b stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091059501 miR-320a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091088570 miR-320a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070041 miR-320a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091065447 miR-320a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091054114 miR-320a-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091071616 miR-376c stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091047084 miR-9 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091034121 miR-92a stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091028159 miR-92a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091025616 miR-92a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091049973 miR-92a-4 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 208000013435 necrotic lesion Diseases 0.000 description 1
- 230000007896 negative regulation of T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000025020 negative regulation of T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 235000015816 nutrient absorption Nutrition 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000010503 organ complication Effects 0.000 description 1
- 230000008816 organ damage Effects 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000001144 postural effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000005245 right atrium Anatomy 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000021058 soft food Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 229960001967 tacrolimus Drugs 0.000 description 1
- QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N tacrolimus Natural products CO[C@H]1C[C@H](CC[C@@H]1O)C=C(C)[C@H]2OC(=O)[C@H]3CCCCN3C(=O)C(=O)[C@@]4(O)O[C@@H]([C@H](C[C@H]4C)OC)[C@@H](C[C@H](C)CC(=C[C@@H](CC=C)C(=O)C[C@H](O)[C@H]2C)C)OC QJJXYPPXXYFBGM-SHYZHZOCSA-N 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 210000004876 tela submucosa Anatomy 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 230000002477 vacuolizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/34—Muscles; Smooth muscle cells; Heart; Cardiac stem cells; Myoblasts; Myocytes; Cardiomyocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/50—Placenta; Placental stem cells; Amniotic fluid; Amnion; Amniotic stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/51—Umbilical cord; Umbilical cord blood; Umbilical stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
- A61K35/545—Embryonic stem cells; Pluripotent stem cells; Induced pluripotent stem cells; Uncharacterised stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
GVHDは、100日のカットオフを使用して開始時間に基づいて、急性バリアント及び慢性バリアントに古典的に分類される。慢性GVHDの臨床症状には、扁平苔癬に似た皮膚の合併症、又は強皮症の皮膚症状、胃腸管の潰瘍及び硬化を伴うドライ口腔粘膜、並びに血清ビリルビン濃度の上昇が含まれる。これとは対照的に、急性GVHDの患者は、一般的に、古典的な斑点状丘疹、下痢を伴う腹部疝痛、及び血清ビリルビン濃度の上昇を示す。しかしながら、この従来の分類は、急性及び慢性GVHDの兆候がこれらの指定された期間外で起こり得ることを認識することによって検証されてきた。この観察は、急性GVHDと慢性GVHDを区別するために、設定時間よりもむしろ、臨床所見の使用の増加につながった。GVHDの診断に広く受け入れられている米国立衛生研究所(NIH)のコンセンサス基準は、慢性GVHD及び急性GVHDの診断的又は典型的特徴が共に出現する重複症候群を含む。例えば、Filipovichら、「慢性移植片対宿主病における臨床試験のための基準についての米国立衛生研究所のコンセンサス開発プロジェクト:I.診断及びステージングの作業部会報告書(National Institutes of Health Consensus Development Project on Criteria for Clinical Trials in Chronic Graft−Versus−Host disease:I.Diagnosis and Staging Working Group Report)」、Biol Blood Marrow Transplant,11(12):945(2005)を参照されたい。
・古典的慢性GVHD:慢性GVHDの特徴は、急性GVHDの兆候又は症状なく存在する。
・オーバーラップ症候群:慢性GVHDと急性GVHDの両方の特徴が存在する。
カーディオスフェアは、国際公開2005/012510、及びMessinaら、「ヒト及びマウスの心臓からの成人心臓幹細胞の単離及び増殖(Isolation and Expansion of Adult Cardiac Stem Cells From Human and Murine Heart)」、Circulation Research,95:911−921(2004)に記載されているように、自己接着性クラスターとして成長する未分化心臓細胞であり、これらの開示はその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
CDCは、例えば、米国特許出願公開第2012/0315252号に記載されるような方法でカーディオスフェアを操作することによって作製された細胞の集団であり、この開示は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。例えば、CDCは、培養容器の固体表面への細胞の付着を促進する物質、例えば、フィブロネクチン、ヒドロゲル、ポリマー、ラミニン、血清、コラーゲン、ゼラチン、又はポリ−D−リジンでコーティングされた固体表面上にカーディオスフェアを播種し、付着単層培養としてそれらを増殖させることによって作製することができる。CDCは、標準的な細胞培養方法に応じて、繰り返し継代、例えば、2回以上継代することができる。
エクソソームは、多胞体又は細胞の原形質膜のエンドソーム関連領域を含む特定の細胞内経路を介して形成される小胞である。エクソソームは、直径約20〜150nmのサイズの範囲であり得る。場合によって、それらは、約1.1〜1.2g/mLの特徴的浮遊密度、及び特徴的脂質組成を有する。それらの脂質膜は、典型的には、コレステロールに富み、スフィンゴミエリン、セラミド、脂質ラフト及び露出ホスファチジルセリンを含有する。エクソソームは、インテグリン及び細胞接着分子などの特定のマーカータンパク質を発現するが、一般的に、リソソーム、ミトコンドリア、又はカベオラのマーカーを欠いている。いくつかの実施形態において、エクソソームは、限定されないが、タンパク質、DNA及びRNA(例えば、マイクロRNA及び非コードRNA)などの細胞由来の成分を含有する。いくつかの実施形態において、エクソソームは、エクソソームのレシピエントに対して同種、自己、異種、又は同系である供給源から得られる細胞から得ることができる。
本発明を、さらに、以下の非限定的な実施例を参照して説明する。
CDCを、その開示が参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第2012/0315252号に記載されるように調製した。
CDCが所望のコンフルエンシーに達したとき、フラスコをPBSで3回洗浄した。CDCを、無血清培地(IMDM)で処理し、15日間、5%O2、5%CO2で、37℃でインキュベートした。15日後、225mLのBDファルコンポリプロピレンコニカルチューブ(BD 352075−ブルートップ)に馴化培地を収集し、細胞及びデブリを除去するために(ペレットを乱さないように注意して)、4℃で20分間、2,000rpmで遠心分離した。馴化培地を、0.45μmの膜フィルターに通した。馴化培地を、遠心フィルターを用いて濃縮した。3KDaのセントリコンプラス70遠心フィルターを、10〜25mLの分子グレードの水で予備洗浄し、18℃で、5分間、3220gで遠心分離した。フィルターを洗浄した後、全ての残りの水を、フィルターに触れることなく注意深く除去した。15mLの馴化培地をフィルターに添加し、18℃で45分間、3220gで遠心分離した。最初のスピン後、残りの培地をピペッティングにより混合し、次いで、所望の濃度に達するまで再度遠心した。次いで、最終試料を0.22μmのシリンジフィルターに通した。Nanosightを用いた粒子計数のために、25μLの濃縮馴化培地を975μLのPBSで希釈した。濃縮馴化培地の別の100μLを用いて、タンパク質濃度を測定した。タンパク質を、DCタンパク質アッセイを用いて定量した。場合によって、履歴データを用いて、遠心分離(UFC)試料による限外濾過中のタンパク質の濃度を計算した。濃縮馴化培地を、直ちに用いるか、又は−80℃で保存した。
25%PEGの適切な量を、濾過した濃縮馴化培地に添加した。試料をオービタルシェーカー上で、12〜16時間、4℃でインキュベートした。インキュベーションが完了したら、試料を4℃で30分間、1500gで遠心分離した。ペレットを乱すことなく、上清を慎重に除去した。ペレットを、所望の量の無血清培地に再懸濁し、粒子計数のために採取した。
A)10kDa&1000KDaの方法
10kDa又は1000kDaの細孔サイズのフィルターを介して、EVを含有するCDC馴化培地(CM)を濾過した後に、CDC−EV(10kDa又は1000kDa)薬物物質を得る。分泌されたEV及び濃縮CMで構成される最終生成物をPlasmaLyte Aで製剤化し、凍結保存する。
ヒト骨髄間葉系幹細胞(MSC−EV)に由来する細胞外小胞を、CDC−EV生成のための同様のプロセスに従って、10kDaの細孔サイズのフィルターを通してEVを含有するMSC CMを濾過した後に得る。MSC−EVは、定義された無血清条件下で培養したヒトMSCから得られる細胞を含まない濾過滅菌生成物である。分泌EV及び濃縮CMで構成される最終生成物を、PlasmaLyte Aで製剤化し、凍結保存する。凍結された最終生成物は、解凍後に、直接結膜下注射に「すぐに使用できる」。
CDC−EV生成のための同様のプロセスに従って10kDaの細孔サイズのフィルターを通して、EVを含有するA1細胞株CMを濾過した後に、newt A1細胞株(Newt−EV)に由来する細胞外小胞を得る。Newt−EVは、定義された無血清条件下で培養したNewt A1細胞から得られる細胞を含まない濾過滅菌生成物である。分泌EV及び濃縮CMで構成される最終生成物を、PlasmaLyte Aで製剤化し、凍結保存する。凍結した最終生成物は、解凍後に、直接結膜下注射にすぐに使用できる。
試験品は、定義された無血清条件下で培養し、実施例1〜4に例示されるように調製したヒトCDCから得られる細胞を含まない濾過滅菌生成物である。試験品の一般的な特徴を表2にまとめる。
レシピエントBALB/cマウス(n=45、雄、6〜8週齢)及びドナーC57BL/6(n=30、雄、6〜10週齢)を、Charles River Laboratories(Wilmington、MA)から入手した。動物を、研究開始前に順応させた。この期間中、不良な状態を示した全てのものを除去するために、動物を毎日観察した。
A)統計分析
パラメトリックデータ(体重変化、生着)を、ビヒクル対照群と全てのグループを比較するために、Holm−Sidak多重比較検定と共に一方向ANOVAを用いて評価した。ノンパラメトリックデータ(GVHDスコア)を、Dunnの事後検定と共にクラスカル・ウォリスで分析した。全ての統計分析を、グラフパッドプリズム6.01ソフトウェア(La Jolla、CA)を用いて行った。統計的有意性は、p<0.05の場合に達成された。
表4及び図7Aに示すマルチパラメータGVHDスコアリングシステムを使用して評価した場合、脾細胞及び骨髄細胞の静脈内注射は全ての動物においてGVHDを誘発した。図7Aに示すように、全体的なGVHDスコアの減少が、CDC−EVを投与した両方のグループで観察され、個々のGVHDパラメータ(姿勢、活動、毛の質感、皮膚の完全性)を図8A〜Dにまとめる。
図6Aに示すように、脾細胞及び骨髄細胞の静脈内注射は、全ての動物において体重減少を誘導し、研究の終わりまで、増減の変化が観察された。21日目の投与の開始後、全ての動物は体重の減少を示し続け、33日目ごろにピークに達し、40日目くらいまでに部分的に回復した。CDC−EVの低用量又は高用量のいずれかを投与した動物は、54日目の研究終了時まで一般的な体重増加を経験し続けたが、ビヒクル単独で処置した動物は、体重を減らし続けた。実際、ビヒクル処置動物は、それらの多くが死亡すると予想された研究の終わりに向かって非常に多くの体重を失っていった。
図9に示すように、研究期間中、全ての動物について生存を追跡し、生存率をプロットし、低用量及び高用量の両方のCDC−EVで処置すると、生存に有益な効果をもたらすように思われた。
血便及び下痢の発症を試験の全期間追跡した。研究中のいかなる時点でも、血便の発症はなかった(データは示さず)。図10A〜Bに示すように、高用量のCDC−EVでの処置は下痢の発症を減少させるように思われたが、CDC−EVでの処置の結果として、下痢の発症における劇的な効果は観察されなかった。
54日目に屠殺する直前に、眼の炎症を評価し、スコア化し、1%フルオレセインナトリウムの滴を各眼に適用し、次いで、眼を生理食塩水で洗い流し、拡大下で、コバルト青色光で角膜の蛍光を見た。マスクされた/盲検の観察者に、目に見られる角膜フルオレセイン染色の程度に基づいて、各動物の各眼に、次のような0〜4のスコア:0=染色なし;0.5=微量の点状染色;1=点状染色;2=角膜表面積の25%までの染色;3=角膜表面積の50%までの染色;4=50%超の角膜表面染色を割り当てた。各眼のスコアを平均化して、各グループの「眼スコア」を得た。図11A〜Cは、CDC−EV処置群において眼のスコアがより低い傾向(したがって、より少ない角膜染色、眼の炎症が減少した兆候)があったが、高用量で処置した動物は、さらにより良好であったことを示す。
表3に記載したグループ1〜3の動物からの14種のマウス結腸試料及び14種のマウスの眼を、病理組織学的検査のために日常的な方法で処理した。ブロックごとに1つのスライドを切断し、ヘマトキシリン及びエオシン(H&E)で染色するか、又は組織構造及び炎症性浸潤の顕微鏡分析をした。ガラススライドを、委員会認定の獣医病理学者が光顕微鏡を用いて評価した。結腸を定性的に評価し、表5〜8に列挙した組織病理学的基準に従って、炎症、浮腫、粘膜びらん、及び杯細胞枯渇についてスコア化した。所定のスライド上の長手方向セクションの各々をスコア化した。平均スコアを計算し、各パラメータについて報告した。また、平均合計スコアを、炎症、浮腫、粘膜壊死、及び杯細胞枯渇の合計として計算した。
マウスにおけるGVHD性大腸炎の予想される組織学的病変には、主に大腸粘膜における単核炎症;浮腫による粘膜下層及びリンパ管の拡張;浸食及び好中球の浸潤の有無にかかわらず、上皮損傷又は粘膜壊死;並びに杯細胞の枯渇が含まれた。例えば、Eigenbrodtら、「ヒト大腸GVHD及び炎症性腸疾患とのマウス結腸移植片対宿主病(GVHD)の組織学的類似性(Histologic Similarity of Murine Colonic Graft−versus−host Disease (GVHD) to Human Colonic GVHD and Inflammatory Bowel Disease)」、Am J Pathol,137:1065−76(1990)を参照されたい。さらに予想される病変には、リンパ神経膠細胞集合、上皮細胞アポトーシスを有する結腸腺へのリンパ球の浸潤;腺伸長、好塩基球増加症及び有糸分裂指数の増加によって特徴付けられる上皮過形成;並びに亜急性炎症を伴う腸間膜脂肪壊死、結腸隣接腸間膜への好中球、マクロファージ及びより少ないリンパ球及び形質細胞の浸潤が含まれた。
GVHDを有するマウスからの眼における予想される組織学的病変には、上皮細胞の空胞化及び/又はアポトーシスを同時に伴う角膜上皮への少数のリンパ球の浸潤によって特徴付けられるリンパ神経膠細胞集合が含まれ、潰瘍に進行する角膜上皮の壊死が1つの試料中に存在していた。例えば、Perezら、「眼の移植片対宿主病における角膜縁損傷(Limbus Damage in Ocular Graft−versus−Host−Disease)」、Biol Blood Marrow Transplant,17:270−273(2011)を参照されたい。角膜の亜急性炎症は、間質浮腫又は不定期の間質壊死病巣を伴う、角膜間質及び/又は上皮への好中球、リンパ球又は組織球の浸潤によって特徴付けられた。新生血管形成は、角膜間質への血管の内部成長によって特徴づけられた。亜急性炎症はまた、角膜縁、結膜(存在する場合)及び虹彩又は前房を含む前部ブドウ膜に観察された。石灰化は、角膜間質内又は角膜上皮(上皮下)のすぐそばのサブ基底ゾーンに見られた。レンズ上皮の後方移動及び崩壊並びに気泡細胞形成によって特徴付けられるレンズ繊維変性(白内障形成)が同様に観察された。
本研究の目的は、T細胞の調節と関連するCDC−EVの免疫学的活性を決定することであった。
図16については、有益なエクソソームマーカー発現を、ウェスタンブロット法を用いるCDC−EVによって分析した。CDC−EV(20μl=10μg)を、RIPA緩衝液を用いて溶解し、10%SDS−PAGEゲルにロードし、次いで、ニトロセルロース膜に移した。膜を5%のBSAでブロッキングし、次いで、HSP70、CD81、CD63、ALIX、HLA II及びβアクチンに特異的な抗体とハイブリダイズした。CDC及び樹状細胞(DC)溶解物並びにエクソソームを含まない上清(SN)を対照として使用した。CDC−EVは、予想されるエクソソームマーカーCD81、CD63及びALIXを発現したが、SNが完全に陰性であった。
単球を、2つの異なる健康なドナーから取得した血液試料から単離した。単離した単球をGM−CSF(20ng/ml)及びIL4(20ng/ml)の組み合わせで6日間刺激し、DCに分化させた。GM−CSF+IL4での単球の分化は、HLA II、CD80、及びCD86の分子の適度な発現、CD16(単球/マクロファージのマーカー)の欠如、及びTLR−2の低発現によって特徴付けられる未成熟DC(iDC)を生成する。次いで、これらの単球由来のiDCをHLAミスマッチCDC−EVと一晩インキュベートした。
CDC−EVの取り込みについてのT細胞の能力をインビトロで評価した。ヒトCDC−EVを、膜色素DiDを用いて蛍光標識し、Jurkat T細胞(Jurkat、クローンE6−;ATTC(登録商標)TIN−152(商標))に添加した。取り込みを、EVを添加した1時間後、4時間後、又は一晩フローサイトメトリーによって測定した。試験したJurkatT細胞は、試験した異なる時点でDiD蛍光について陽性であり、それらがCDC−EVを取り込むことが示された(図18)。
次いで、同種設定で進行中の免疫応答を調節するCDC−EVの能力を調査した。この目的のために、図19に示すように、U底96ウェルプレート中で、HLAミスマッチ非分画CFSE標識PBMC(1×105)を様々な用量のCDC−EVの非存在下又は存在下で、PHA(1μg/ml)で刺激し(上のパネル)、同種のT細胞増殖を、CFSEを監視することによって評価した。CDC−EVは、PHA誘導性CD4+及びCD8+T細胞の増殖を下方制御することができた。図19に示すように、T細胞増殖のCDC−EV誘導性下方制御は用量依存的であり、使用した最高用量(20×109粒子)で、CDC−EVは、それらの親細胞よりも、進行中の応答を下方制御するのにより強力であった。
Claims (25)
- それを必要とする対象における全身移植片対宿主病(GVHD)を治療する方法であって、前記対象に治療有効量の細胞外小胞を全身投与することを含む方法。
- 前記全身GVHDが急性又は慢性である、請求項1に記載の方法。
- 治療有効量の細胞外小胞の前記投与が、皮膚、粘膜、胃腸管、肝臓、及び肺からなる群から選択される少なくとも1つの器官に対する全身GVHDの治療をもたらす、請求項2に記載の方法。
- 治療有効量の細胞外小胞の前記投与が、皮膚、粘膜、胃腸管、肝臓、及び肺からなる群から選択される少なくとも2つの器官に対する全身GVHDの治療をもたらす、請求項2に記載の方法。
- 治療有効量の細胞外小胞の前記投与が、皮膚、粘膜、胃腸管、肝臓、肺、関節及び筋膜、及び生殖器からなる群から選択される少なくとも1つの器官に対する全身GVHDの治療をもたらす、請求項2に記載の方法。
- 治療有効量の細胞外小胞の前記投与が、皮膚、粘膜、胃腸管、肝臓、肺、関節及び筋膜、及び生殖器からなる群から選択される少なくとも2つの器官に対する全身GVHDの治療をもたらす、請求項2に記載の方法。
- 治療有効量の細胞外小胞の前記投与が、皮膚、粘膜、胃腸管、肝臓、肺、関節及び筋膜、及び生殖器、及び眼からなる群から選択される少なくとも1つの器官に対する全身GVHDの治療をもたらす、請求項2に記載の方法。
- 治療有効量の細胞外小胞の前記投与が、眼に対する全身GVHDの治療をもたらす、請求項2に記載の方法。
- 治療有効量の細胞外小胞が、前記対象が造血幹細胞移植(HSCT)を受けた後に1回又は複数回投与される、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 治療有効量の細胞外小胞が、HSCT後1、2、3、4、5、6、7、及び/又は8週間投与される、請求項9に記載の方法。
- 複数回投与が、連続投与の間に7日間あけて行われる、請求項10に記載の方法。
- 前記全身投与が、血管内投与、脳室内投与、髄腔内投与、皮下投与、皮内投与又は腹腔内投与を介するものである、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記血管内投与が、静脈内投与、動脈内投与、又は冠動脈内投与である、請求項12に記載の方法。
- 前記細胞外小胞が、胚性幹細胞、多能性幹細胞、複能性幹細胞、人工多能性幹細胞、出生後の幹細胞、成体幹細胞、間葉系幹細胞、造血幹細胞、内皮幹細胞、上皮幹細胞、神経幹細胞、心臓前駆細胞を含む心臓幹細胞、骨髄由来幹細胞、脂肪由来幹細胞、肝幹細胞、末梢血由来幹細胞、臍帯血由来の幹細胞、又は胎盤幹細胞などの再生幹細胞に由来する、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞外小胞が、エクソソーム、微小胞、膜粒子、膜小胞、エクソソーム様小胞、エクトソーム、エクトソーム様小胞、又はエクソ小胞である、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞外小胞が、カーディオスフェア、カーディオスフェア由来細胞(CDC)、又はnewt A1細胞株から得られる、請求項15に記載の方法。
- 前記対象が哺乳動物である、請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法。
- 前記哺乳動物がヒトである、請求項に記載の方法。
- それを必要とする対象における全身GVHDを治療する方法であって、CDCに由来する治療有効量の細胞外小胞を前記対象に全身投与することを含む方法。
- CDCに由来する治療有効量の細胞外小胞の前記投与が、皮膚、粘膜、胃腸管、肝臓、及び肺からなる群から選択される少なくとも1つの器官に対する全身GVHDの治療をもたらす、請求項19に記載の方法。
- CDCに由来する治療有効量の細胞外小胞の前記投与が、皮膚、粘膜、胃腸管、肝臓、及び肺からなる群から選択される少なくとも2つの器官に対する全身GVHDの治療をもたらす、請求項19に記載の方法。
- CDCに由来する治療有効量の細胞外小胞の前記投与が、皮膚、粘膜、胃腸管、肝臓、肺、関節及び筋膜、及び生殖器からなる群から選択される少なくとも1つの器官に対する全身GVHDの治療をもたらす、請求項19に記載の方法。
- CDCに由来する治療有効量の細胞外小胞の前記投与が、皮膚、粘膜、胃腸管、肝臓、肺、関節及び筋膜、及び生殖器からなる群から選択される少なくとも2つの器官に対する全身GVHDの治療をもたらす、請求項19に記載の方法。
- CDCに由来する治療有効量の細胞外小胞の前記投与が、皮膚、粘膜、胃腸管、肝臓、肺、関節及び筋膜、及び生殖器、及び眼からなる群から選択される少なくとも1つの器官に対する全身GVHDの治療をもたらす、請求項19に記載の方法。
- CDCに由来する治療有効量の細胞外小胞の前記投与が、眼に対する全身GVHDの治療をもたらす、請求項19に記載の方法。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201762502474P | 2017-05-05 | 2017-05-05 | |
US62/502,474 | 2017-05-05 | ||
US201762506880P | 2017-05-16 | 2017-05-16 | |
US62/506,880 | 2017-05-16 | ||
PCT/US2018/031257 WO2018204889A1 (en) | 2017-05-05 | 2018-05-04 | Methods of treating systemic graft-versus-host disease with extracellular vesicles |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020518564A true JP2020518564A (ja) | 2020-06-25 |
JP7360704B2 JP7360704B2 (ja) | 2023-10-13 |
Family
ID=64016763
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019558492A Active JP7360704B2 (ja) | 2017-05-05 | 2018-05-04 | 細胞外小胞を用いた全身移植片対宿主病を治療する方法 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11529376B2 (ja) |
EP (1) | EP3600151A4 (ja) |
JP (1) | JP7360704B2 (ja) |
WO (1) | WO2018204889A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2021147924A1 (zh) * | 2020-01-20 | 2021-07-29 | 医微细胞生物技术(广州)有限公司 | 囊泡在制备用于治疗或预防肝脏疾病药物中的应用 |
EP4099984A4 (en) | 2020-02-05 | 2024-05-01 | Diadem Biotherapeutics Inc | ARTIFICIAL SYNAPSES |
US20230218678A1 (en) * | 2020-03-18 | 2023-07-13 | The Catholic University Of Korea Industry-Academic Cooperation Foundation | Cord blood plasma-derived exosome or mimetic thereof and pharmaceutical use thereof |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015524844A (ja) * | 2012-08-13 | 2015-08-27 | シーダーズ−サイナイ・メディカル・センターCedars−Sinai Medical Center | 組織再生のためのエキソソームおよびマイクロリボ核酸 |
WO2016043654A1 (en) * | 2014-09-15 | 2016-03-24 | Agency For Science, Technology And Research | Methods of treating graft versus host disease (gvhd) or epidermolysis bullosa (eb) with exosomes |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2691296T3 (es) * | 2012-04-03 | 2018-11-26 | Reneuron Limited | Micropartículas de células madre |
IL294395A (en) * | 2014-10-27 | 2022-08-01 | Univ Central Florida Res Found Inc | Methods and compositions for natural killer cells |
-
2018
- 2018-05-04 JP JP2019558492A patent/JP7360704B2/ja active Active
- 2018-05-04 EP EP18795151.2A patent/EP3600151A4/en active Pending
- 2018-05-04 WO PCT/US2018/031257 patent/WO2018204889A1/en unknown
- 2018-05-04 US US16/610,859 patent/US11529376B2/en active Active
-
2022
- 2022-11-09 US US17/983,797 patent/US20230330154A1/en active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2015524844A (ja) * | 2012-08-13 | 2015-08-27 | シーダーズ−サイナイ・メディカル・センターCedars−Sinai Medical Center | 組織再生のためのエキソソームおよびマイクロリボ核酸 |
WO2016043654A1 (en) * | 2014-09-15 | 2016-03-24 | Agency For Science, Technology And Research | Methods of treating graft versus host disease (gvhd) or epidermolysis bullosa (eb) with exosomes |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
ILIC, D., TRENTO, C.: "Latest developments in the field of stem cell research and regenerative medicine compiled from publi", REGENERATIVE MEDICINE, vol. 12, no. 1, JPN6022017704, 30 November 2016 (2016-11-30), pages 5 - 12, ISSN: 0005049384 * |
KORDELAS, L. ET AL.: "MSC-derived exosomes: a novel tool to treat therapy-refractory graft-versus-host disease", LEUKEMIA, vol. 28, no. 4, JPN6022017706, 2014, pages 970 - 973, XP093054462, ISSN: 0005049382, DOI: 10.1038/leu.2014.41 * |
LENER, T. ET AL.: "Applying extracellular vesicles based therapeutics in clinical trials - an ISEV position paper", JOURNAL OF EXTRACELLULAR VESICLES, vol. 4, JPN6022017705, 2015, pages 30087, ISSN: 0005049383 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20230330154A1 (en) | 2023-10-19 |
US20200054686A1 (en) | 2020-02-20 |
EP3600151A1 (en) | 2020-02-05 |
US11529376B2 (en) | 2022-12-20 |
EP3600151A4 (en) | 2021-01-13 |
JP7360704B2 (ja) | 2023-10-13 |
WO2018204889A1 (en) | 2018-11-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20230330154A1 (en) | Methods of treating systemic graft- versus-host disease with extracellular vesicles | |
AU2017218143B2 (en) | Adipose tissue derived mesenchymal stromal cell conditioned media and methods of making and using the same | |
JP7022994B2 (ja) | 眼炎症および目の化学的損傷を細胞外小胞で処置する方法 | |
JP7249693B2 (ja) | 誘導されたエキソソームを含む皮膚再生及び創傷治癒用組成物 | |
Bazzoni et al. | Extracellular vesicle-dependent communication between mesenchymal stromal cells and immune effector cells | |
JP2021520790A (ja) | 細胞型特異的エキソソームおよびそれらの使用 | |
WO2016057560A1 (en) | Polarization of macrophages to a healing phenotype by cardiosphere-derived cells and by the exosomes secreted by such cells | |
US20210032598A1 (en) | Activation-induced tissue-effector cells suitable for cell therapy and extracelluar vesicles derived therefrom | |
KR20200029475A (ko) | 인간 구강 점막 줄기세포 분비체 | |
US9855330B2 (en) | Granulysin in immunotherapy | |
AU2018335788A1 (en) | Methods and compositions for the treatment of epidermolysis bullosa | |
US20180104186A1 (en) | Methods and compositions for the treatment of epidermolysis bullosa | |
JP7120628B2 (ja) | 細胞外小胞による放射線誘発性皮膚炎を予防するまたは治療する方法 | |
CA3142020A1 (en) | Exosomes for disease treatment | |
Williams et al. | Versatility of mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles in tissue repair and regenerative applications | |
US20230210898A1 (en) | Microparticle-Assisted Treg Therapy for Treatment of Tissue Injury and Fibrosis | |
US20230392168A1 (en) | Compositions and methods related to megakaryocyte-derived extracellular vesicles for treating myeloproliferative neoplasms | |
US20230190819A1 (en) | Compositions and methods containing exosomes | |
Zhou et al. | MSC-exosomes in regenerative medicine | |
WO2013126329A1 (en) | Compositions and methods for enhancing neuronal growth and differentiation | |
Gomzikova et al. | Extracellular vesicles derived from mesenchymal stem cells: biological activity and approaches of large-scale production | |
Aranda | The Applications of Multidomain Peptide Hydrogels as Scaffolds for 3D Cell Culture |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210427 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220510 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220810 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20221213 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230313 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230502 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230731 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230829 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230925 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7360704 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |