JP2020516312A - 産物及び組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
[S-X1-P-X2]3-A-X3- (I)
[式中、
Sは、糖類を表し、ここで糖類は、N-アセチルガラクトサミンであり、
X1は、C3〜C6アルキレン又は(-CH2-CH2-O)m(-CH2)2-[式中、mは1、2、又は3である]であり、
Pは、ホスフェート又は修飾されたホスフェート(好ましくはチオホスフェート)であり、
X2は、アルキレン、又は式(-CH2)n-O-CH2-[式中、n=1〜6である]のアルキレンエーテルであり、
Aは、分岐ユニットであり、
X3は、架橋ユニットを表し、
本発明に係る核酸は、ホスフェート又は修飾されたホスフェート(好ましくはチオホスフェート)を介してX3にコンジュゲートされている]
を含みうる。
のうちの1つを有する、コンジュゲートされた核酸を提供する。
i)カチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩、
ii)ステロイド、
iii)ホスファチジルエタノールアミンリン脂質、
iv)PEG化脂質
を含みうる。
(i)非結合リン酸酸素の一方若しくは両方、及び/又は結合リン酸酸素の1つ若しくは複数(本発明の核酸の5'末端及び3'末端における場合であっても結合しているものとする)の変化、例えば置換、
(ii)リボース糖の構成成分、例えばリボース糖の2'ヒドロキシルの変化、例えば置換、
(iii)ホスフェート部分の「デホスホ」リンカーによる置換、
(iv)天然に存在する塩基の修飾又は置換、
(v)リボース-ホスフェート骨格の置換又は修飾、
(vi)RNAの3'末端又は5'末端の修飾、例えば、末端ホスフェート基の除去、修飾、若しくは置換、又はRNAの3'末端若しくは5'末端のいずれかに対する部分(例えば蛍光標識部分)のコンジュゲーション
のうちの1つ又は複数を含みうる。
[S-X1-P-X2]3-A-X3- (I)
[式中、
Sは、糖類を表し、ここで糖類は、N-アセチルガラクトサミンであり、
X1は、C3〜C6アルキレン又は(-CH2-CH2-O)m(-CH2)2-[式中、mは1、2、又は3である]であり、
Pは、ホスフェート又は修飾されたホスフェート(好ましくはチオホスフェート)であり、
X2は、アルキレン、又は式(-CH2)n-O-CH2-[式中、n=1〜6である]のアルキレンエーテルであり、
Aは、分岐ユニットであり、
X3は、架橋ユニットを表し、
本発明に係る核酸は、ホスフェート又は修飾されたホスフェート(好ましくはチオホスフェート)を介してX3にコンジュゲートされている]
を含みうる。
各nは、独立して、1〜20の整数を表す)
から選択される構造を有することができる。
各nは、独立して、1〜20の整数を表す)
から選択される構造を有することができる。
各nは、独立して、1〜20の整数を表す)
から選択される構造を有することができる。
[S-X1-P-X2]3-A-X3- (II)
[式中、
Sは、糖類を表し、
X1は、C3〜C6アルキレン又は(-CH2-CH2-O)m(-CH2)2-[式中、mは1、2、又は3である]であり、
Pは、ホスフェート又は修飾されたホスフェート(好ましくはチオホスフェート)であり、
X2は、C1〜C8アルキレンであり、
Aは、
X3は、架橋ユニットであり、
本発明に係る核酸は、ホスフェート又は修飾されたホスフェート(好ましくはチオホスフェート)を介してX3にコンジュゲートされている]
を含みうる。
の構造を有しうる。
[S-X1-P-X2]3-A-X3- (III)
[式中、
Sは、糖類を表し、
X1は、C3〜C6アルキレン又は(-CH2-CH2-O)m(-CH2)2-[式中、mは1、2、又は3である]であり、
Pは、ホスフェート又は修飾されたホスフェート(好ましくはチオホスフェート)であり、
X2は、式-C3H6-O-CH2-のアルキレンエーテルであり、
Aは、分岐ユニットであり、
X3は、-CH2-O-CH2-、-CH2-O-C2H4-、-CH2-O-C3H6-、-CH2-O-C4H8-、-CH2-O-C5H10-、-CH2-O-C6H12-、-CH2-O-C7H14-、及び-CH2-O-C8H16-(各事例において、-CH2-基はAに結合している)からなる群から選択される式のアルキレンエーテルであり、
本発明に係る核酸は、ホスフェート又は修飾されたホスフェート(好ましくはチオホスフェート)を介してX3にコンジュゲートされている]
を含みうる。
Y1は、-O-を表す場合があり、Y2は、=O若しくは=Sを表す場合があり、
Y1は、=Oを表す場合があり、Y2は、-CH3、-SH、-ORX、若しくは-BH3を表す場合があり、
Y1は、=Sを表す場合があり、Y2は、-CH3、ORX、若しくは-SHを表す場合がある。
のうちの1つを有する、コンジュゲートされた核酸を更に提供する。
i)カチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩、
ii)ステロイド、
iii)ホスファチジルエタノールアミンリン脂質、
iv)PEG化脂質
を含む、脂質製剤を含みうる。
Xは、O、S、又はNHを表し、
R1及びR2は、それぞれ独立して、C4〜C22直鎖状若しくは分岐状アルキル鎖、又は1つ若しくは複数の二重結合を有するC4〜C22直鎖状若しくは分岐状アルケニル鎖を表し、アルキル鎖又はアルケニル鎖は、任意選択により、介在するエステル、アミド、又はジスルフィドを含有し、
XがS又はNHを表す場合、R3及びR4は、それぞれ独立して、水素、メチル、エチル、モノアミン若しくはポリアミン部分を表すか、又はR3及びR4は一緒にヘテロシクリル環を形成し、
XがOを表す場合、R3及びR4は、それぞれ独立して、水素、メチル、エチル、モノアミン若しくはポリアミン部分を表すか、又はR3及びR4は一緒にヘテロシクリル環を形成するか、又はR3は水素を表し、R4はC(NH)(NH2)を表す。
(i)逆位ヌクレオチド、好ましくは第2の鎖の3'末端における3'-3'結合、
(ii)1つ又は複数のホスホロジチオエート結合、
(iii)第1の鎖の11位又は13位に対応する第2の鎖のヌクレオチドが、2'O-メチル修飾で修飾されておらず、好ましくは、これらの位置の一方又は両方が2'フルオロ修飾を含む
(iv)核酸が、2'-O-メチル修飾を有するヌクレオチドを全体の少なくとも80%含む
(v)核酸が、2'フルオロ修飾を有するヌクレオチドを20%以下含む
5'GUAACCAAGAGUAUUCCAU 3'
レブシラン 3'-CUACCCUAAAGUACAUUGGUUCU-5'
5'-UGGGAUUUCAUGUAACCAAGA 3'
フィツシラン 3'-GACCAAUUGUGGUAAAUGAAGUU-5'
5'-GGUUAACACCAUUUACUUCAA 3'
セムジシラン 3'-TTUUUUCGUUCUAUAAAAAUAUUAU-5'
5'-AAGCAAGAUAUUUUUAUAAUA 3'
ギボシラン 3'-UGGUCUUUCUCACAGAGUAGAAU 5'
5'-CAGAAAGAGUGUCUCAUCUUA 3'
インクリシラン 3'-AAGAUCUGGACAAAACGAAAACA 5'
5'-CUAGACCUGUTUUGCUUUUGU 3'
[(2S,4R)-1-{1-[(2-アセトアミド-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノシル)オキシ]-16,16-ビス({3-[(3-{5-[(2-アセトアミド-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノシル)オキシ]ペンタンアミド}プロピル)アミノ]-3-オキソプロポキシ}メチル)-5,11,18-トリオキソ-14-オキサ-6,10,17-トリアザノナコサン-29-オイル}-4-ヒドロキシピロリジン-2-イル]メチル水素all-P-ambo-2'-O-メチル-P-チオアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチル-P-チオアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオログアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオログアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチル-3'-アデニレート及びall-P-ambo-チミジリル-(5'→3')-チミジリル-(5'→3')-2'-O-メチル-P-チオウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチル-P-チオウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルシチジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオログアニリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルシチジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロ-P-チオウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロ-P-チオアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジン
の二重鎖である。
グアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-アデニリル-(3'→5')-アデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-アデニリル-(3'→5')-アデニリル-(3'→5')-グアニリル-(3'→5')-アデニリル-(3'→5')-グアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-アデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-アデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-チミジリル-(3'→5')-チミジンのチミジリル-(5'→3')-チミジリル-(5'→3')-シチジリル-(5'→3')-アデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-ウリジリル-(5'→3')-グアニリル-(5'→3')-グアニリル-(5'→3')-ウリジリル-(5'→3')-ウリジリル-(5'→3')-シチジリル-(5'→3')-ウリジリル-(5'→3')-シチジリル-(5'→3')-アデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-アデニリル-(5'→3')-アデニリル-(5'→3')-グアニリル-(5'→3')-グアニリル-(5'→3')-ウリジリル-(5'→3')-アデノシンと
のRNA二重鎖である。
[(2S,4R)-1-{1-[(2-アセトアミド-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノシル)オキシ]-16,16-ビス({3-[(3-{5-[(2-アセトアミド-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノシル)オキシ]ペンタンアミド}プロピル)アミノ]-3-オキソプロポキシ}メチル)-5,11,18-トリオキソ-14-オキサ-6,10,17-トリアザノナコサン-29-オイル}-4-ヒドロキシピロリジン-2-イル]メチル水素all-P-ambo-2'-O-メチル-P-チオシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチル-P-チオウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオログアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-チミジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-O-メチル-3'-ウリジレート及びall-P-ambo-2'-O-メチル-P-チオアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチル-P-チオアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルグアニリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオログアニリル-(5'→3')-2'-O-メチルグアニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルシチジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(5'→3')-2'-O-メチルグアニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチル-P-チオアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロ-P-チオシチジリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデノシン
の二重鎖である。
[(2S,4R)-1-{1-[(2-アセトアミド-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノシル)オキシ]-16,16-ビス({3-[(3-{5-[(2-アセトアミド-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノシル)オキシ]ペンタンアミド}プロピル)アミノ]-3-オキソプロポキシ}メチル)-5,11,18-トリオキソ-14-オキサ-6,10,17-トリアザノナコサン-29-オイル}-4-ヒドロキシピロリジン-2-イル]メチル水素all-P-ambo-2'-O-メチル-P-チオシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチル-P-チオアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオログアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオログアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオログアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチル-3'-アデニレート及びall-P-ambo-2'-O-メチル-P-チオウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチル-P-チオグアニリル-(5'→3')-2'-O-メチルグアニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルシチジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルシチジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルシチジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルシチジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルグアニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルグアニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオログアニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロ-P-チオアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロ-P-チオアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジン
の二重鎖である。
[(2S,4R)-1-{30-(2-アセトアミド-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノシル)-14,14-bis[16-(2-アセトアミド-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノシル)-5,11-ジオキソ-2,16-ジオキサ-6,10-ジアザヘキサデシル]-12,19,25-トリオキソ-16,30-ジオキサ-13,20,24-トリアザトリアコンタノイル}-4-ヒドロキシピロリジン-2-イル]メチル水素2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオログアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニレートの2'-O-メチル-P-チオシチジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロ-P-チオウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(5'→3')-2'-O-メチルシチジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルグアニリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオログアニリル-(5'→3')-2'-O-メチルグアニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジンとの二重鎖
である。
[(2S,4R)-1-{30-(2-アセトアミド-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノシル)-14,14-bis[16-(2-アセトアミド-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノシル)-5,11-ジオキソ-2,16-ジオキサ-6,10-ジアザヘキサデシル]-12,19,25-トリオキソ-16,30-ジオキサ-13,20,24-トリアザトリアコンタノイル}-4-ヒドロキシピロリジン-2-イル]メチル水素(P-RS)-2'-デオキシ-2'-フルオロ-P-チオグアニリル-(3'→5')-(P-RS)-2'-O-メチル-P-チオグアニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニレート及び(P-RS)-2'-O-メチル-P-チオウリジリル-(3'→5')-(P-RS)-2'-デオキシ-2'-フルオロ-P-チオウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオログアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(3'→5')-(P-RS)-2'-O-メチル-P-チオシチジリル-(3'→5')-(P-RS)-2'-O-メチル-P-チオアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアノシン
の二重鎖である。
{(2S,4R)-1-{1-[(2-アセトアミド-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノシル)オキシ]-16,16-ビス-({3-[(3-{5-[(2-アセトアミド-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノシル)オキシ]ペンタンアミド}プロピル)アミノ]-3-オキソプロポキシ}メチル)-5,11,18-トリオキソ-14-オキサ-6,10,17-トリアザノナコサン-29-オイル}-4-ヒドロキシピロリジン-2-イル}メチル水素all-P-ambo-2'-O-メチル-P-チオグアニリル-(3'→5')-2'-O-メチル-P-チオアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチル-3'-アデニレートのall-P-ambo-2'-O-メチル-P-チオアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチル-P-チオシチジリル-(5'→3')-2'-O-メチルシチジリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルグアニリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルグアニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルグアニリル-(5'→3')-2'-O-メチルグアニリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチル-P-チオウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロ-P-チオアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジンとの二重鎖
である。
{(2S,4R)-1-{1-[(2-アセトアミド-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノシル)オキシ]-16,16-ビス-({3-[(3-{5-[(2-アセトアミド-2-デオキシ-β-D-ガラクトピラノシル)オキシ]ペンタンアミド}プロピル)アミノ]-3-オキソプロポキシ}メチル)-5,11,18-トリオキソ-14-オキサ-6,10,17-トリアザノナコサン-29-オイル}-4-ヒドロキシピロリジン-2-イル}メチル水素all-P-ambo-2'-O-メチル-P-チオウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチル-P-チオグアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロシチジリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(3'→5')-2'-デオキシ-2'-フルオロウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-2'-O-メチル-3'-アデニレートのall-P-ambo-2'-O-メチル-P-チオシチジリル-(5'→3')-2'-O-メチル-P-チオウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルシチジリル-(5'→3')-2'-O-メチルシチジリル-(5'→3')-2'-O-メチルシチジリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルグアニリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルシチジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロアデニリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオログアニリル-(5'→3')-2'-O-メチルグアニリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジリル-(5'→3')-2'-O-メチル-P-チオウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシ-2'-フルオロ-P-チオシチジリル-(5'→3')-2'-O-メチルウリジンとの二重鎖
である。
アデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-グアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-グアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-ウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-シチジリル-(3'→5')-アデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-アデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-ウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-ウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-グアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジンの[(2R,3S)-3-ヒドロキシオキソラン-2-イル]メチル水素ウリジリル-(5'→3')-2'-デオキシシチジリル-(5'→3')-シチジリル-(5'→3')-ウリジリル-(5'→3')-シチジリル-(5'→3')-アデニリル-(5'→3')-アデニリル-(5'→3')-グアニリル-(5'→3')-グアニリル-(5'→3')-ウリジリル-(5'→3')-グアニリル-(5'→3')-ウリジリル-(5'→3')-アデニリル-(5'→3')-アデニリル-(5'→3')-グアニリル-(5'→3')-アデニリル-(5'→3')-シチジリル-(5'→3')-シチジリル-(5'→3')-5'-グアニレートとの二重鎖
である。
グアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-グアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-アデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-アデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-ウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-シチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-シチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-シチジリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-ウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-アデノシンの2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-グアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-アデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-グアニリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-ウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルグアニリル-(3'→5')-アデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルアデニリル-(3'→5')-アデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-アデニリル-(3'→5')-2'-O-メチルウリジリル-(3'→5')-ウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジリル-(3'→5')-ウリジリル-(3'→5')-2'-O-メチルシチジンとの二重鎖
である。
本発明は、RNAi[RNA干渉]活性を有するsiRNA分子を選択するための方法であって、
(1)第1の(アンチセンス)鎖の11位又は13位に対応する第2の(センス)鎖上のヌクレオチドを修飾して、ヌクレオチド糖に2'Oメチル修飾を導入するステップ、
(2)2'Oメチル修飾が、その2'位に修飾がないことだけが異なるsiRNA、又は同じヌクレオチドに2'フルオロ修飾を有するsiRNAと比較して、siRNAの活性を低減させるかどうかを判定するステップ、及び
(3)修飾がSiRNA活性に影響を与える場合、siRNAの活性を低減させる位置に2'Oメチル修飾である修飾を有しない分子を選択し、かつ/又は、ヌクレオチドの2'位を2フルオロで修飾するか、又は修飾されていないヌクレオチドをその位置に使用するステップ
を含む、方法に関する。
(1)第1の(アンチセンス)鎖の11位又は13位に対応する第2の(センス)鎖上のヌクレオチドを修飾して、ヌクレオチド糖に2'フルオロ修飾以外の修飾を有するヌクレオチドを導入するステップ、
(2)修飾が、その2'位に修飾がないことだけが異なるsiRNA、又は同じヌクレオチドに2'フルオロ修飾を有するsiRNAと比較して、siRNAの活性を低減させるかどうかを判定するステップ、及び
(3)修飾がsiRNA活性に影響を与える場合、siRNAの活性を低減させるその修飾を有しない分子を選択し、かつ/又は、ヌクレオチドの2'位を2'フルオロ修飾で修飾するか、又は修飾されていないヌクレオチドをsiRNAのその位置に使用するステップ
を含む、方法。
1 各塩基の糖部分の2'位を2'O-メチル残基に変化させることにより、siRNA分子を修飾するステップ、
2 2'O-メチル修飾が、同じ位置に2'フルオロ修飾を有する同じsiRNAと比較して、又は同じ位置に修飾を有しないsiRNAと比較して、siRNAの活性を低減させる位置を識別するために、SiRNAの活性を評価するステップ、及び
3 ステップ2で低減した活性を示さないすべての位置において2'Oメチルで修飾されたsiRNA分子を選択するステップ
を含む、方法に関する。
任意選択により、
a.第1の鎖及び/又は第2の鎖の3'及び/又は5'の逆位ヌクレオチドは、ホスホジエステル結合の手段により、ホスフェート基を介して隣接したヌクレオチドに結合しているか、又は
b.第1の鎖及び/又は第2の鎖の3'及び/又は5'の逆位ヌクレオチドは、ホスホロチオエート基を介して隣接したヌクレオチドに結合しているか、又は
c.第1の鎖及び/又は第2の鎖の3'及び/又は5'の逆位ヌクレオチドは、ホスホロジチオエート基を介して隣接したヌクレオチドに結合している。
すべてのオリゴヌクレオチドは、商業的なオリゴヌクレオチド製造元(Eurogentec社、Belgium)から得たか、或いは10μmolスケールでホスホラミダイト化学を使用してAKTA oligopilot 10合成機(GE Healthcare社)で合成した。市販の塩基が負荷されたCPG固体支持体(500A、50μmol/g)、2'O-メチルRNAホスホラミダイト、及び2'フルオロDNAホスホラミダイト(ChemGenes社及びLinkTech社)を、製造元が推奨する手順に従って使用した。0.3Mのベンジルチオテトラゾール(BTT)活性化剤の存在下で、ホスホラミダイトの0.1Mアセトニトリル溶液を使用して、アミダイト結合を行った。補助的試薬としては、0.05Mのl2を含むピリジン/H2O(9/1、v/v)を酸化剤として、40%のAc2Oを含むアセトニトリルをCapAとして、20%のN-メチルイミダゾールを含むアセトニトリルをCapBとして、3%のジクロロ酢酸を含むトルエンをDMT除去として、20%のジエチルアミンを含むアセトニトリルを最終洗浄液として使用した(EMP Biotech社)。EDITH(LinkTech社)をチオール化試薬として使用した。アセトニトリル(<20ppm H2O)はEMP Biotech社から購入した。他の試薬及び溶媒はすべて市販されており、標準的な試薬品質で使用した。
マウスCLIC4を標的とする配列を使用して、第1の鎖の14位における2'-OMeがsiRNA活性に及ぼす影響を試験した。CLC01は、交互になった2'-OMe/2'-OHで修飾されている。CLC15は、第1の鎖の14位が2'-OMeで修飾されているが、CLC16のこの位置は、2'-OMeで修飾されていない。CLC15及びCLC16における他の位置はすべて、同様に修飾されている。「UT」は、siRNA処置試料を正規化した無処置の試料を示す。「Luc」を非標的化対照として使用した。
マウスCLIC4を標的とする配列を使用して、第1の鎖の14位における2'-OMeがsiRNA活性に及ぼす影響を試験した。CLC01は、交互になった2'-OMe/2'-OHで修飾されている。CLC22は、第1の鎖の4位、9位、及び14位が2'-OMeで修飾されているが、CLC28は、第1の鎖の4位、9位、及び15位が2'-OMeで修飾されている。CLC22及びCLC28の第2の鎖は、同様に修飾されている。「UT」は、siRNA処置試料を正規化した無処置の試料を示す。「Luc」を非標的化対照として使用した。
マウスCLIC4を標的とする配列を使用して、第1の鎖の2位における2'-OMeがsiRNA活性に及ぼす影響を試験した。CLC56は、第1の鎖の2位及び4位が2'-OMeで、そして3位が2'-OHで修飾されている。対照的に、CLC57は2位及び4位に2'-OH、そして3位に2'-OMeを有する。第1の鎖及び第2の鎖の他の位置はすべて、同様に修飾されている。「UT」は、siRNA処置試料を正規化した無処置の試料を示す。「Luc」を非標的化対照として使用した。
マウスCLIC4を標的とする配列を使用して、第1の鎖の2位における2'-OMeがsiRNA活性に及ぼす影響を試験した。CLC56は、第1の鎖の2位及び4位が2'-OMeで、そして3位が2'-OHで修飾されている。対照的に、CLC57は2位及び4位に2'-OH、そして3位に2'-OMeを有する。第1の鎖及び第2の鎖の他の位置はすべて、同様に修飾されている。「UT」は、siRNA処置試料を正規化した無処置の試料を示す。「Luc」を非標的化対照として使用した。
マウスCLIC4を標的とする配列を使用して、第1の鎖の2位における2'-OMeがsiRNA活性に及ぼす影響を試験した。CLC01は、交互になった2'-OMe/2'-OHで修飾されている。CLC28は、第1の鎖の4位に2'-OMeを有するが、CLC59は、2位に2'-OMeを有し、CLC60は、第1の鎖の3位に2'-OMeを有する。第1の鎖及び第2の鎖の他の位置はすべて、同様に修飾されている。「UT」は、siRNA処置試料を正規化した無処置の試料を示す。「Luc」を非標的化対照として使用した。
ヒトHFE2を標的とする配列を使用して、第1の鎖の2位における2'-OMeがsiRNA活性に及ぼす影響を試験した。HFE04は、第1の鎖の2位が2'-Fで、そして3位が2'-OMeで修飾されているが、HFE06は、2位が2'-OMeで、そして3位が2'-Fで修飾されている。第1の鎖及び第2の鎖の他の位置はすべて、同様に修飾されている。「UT」は、siRNA処置試料を正規化した無処置の試料を示す。「Luc」を非標的化対照として使用した。
実施例8a及び8bは、同じ実験の生物学的複製物を表す。
交互になったパターン(2'-OMeから2'-Fへの変化、そしてその逆)との関連で一度に1つの位置を対象とすることにより、2'-OMeに対する耐性を調査した。ALD01は完全に交互になっており、ALD13〜ALD21は、第1の鎖のすべての偶数位置に2'-Fから2'-Meへの変化を含有し、ALD22〜ALD31は、第1の鎖のすべての奇数位置に2'-OMeから2'-Fへの変化を含有し、ALD32〜ALD41は、第2の鎖のすべての奇数位置に2'-Fから2'-OMeへの変化を含有し、ALD42〜ALD50は、第2の鎖のすべての偶数位置に2'-OMeから2'-Fへの変化を含有する。ALD13は、第1の鎖の2位に2'-OMeを含有し、ALD19は、第1の鎖の14位に2'-OMeを含有し、ALD35は、第2の7位に2'-OMeを含有し、ALD36は、第2の鎖の9位に2'-OMeを含有する。
交互になったパターン(2'-OMeから2'-Fへの変化、そしてその逆)との関連で一度に1つの位置を対象とすることにより、2'-OMeに対する耐性を調査した。ALD01は完全に交互になっており、ALD13〜ALD21は、第1の鎖のすべての偶数位置に2'-Fから2'-Meへの変化を含有し、ALD22〜ALD31は、第1の鎖のすべての奇数位置に2'-OMeから2'-Fへの変化を含有し、ALD32〜ALD41は、第2の鎖のすべての奇数位置に2'-Fから2'-OMeへの変化を含有し、ALD42〜ALD50は、第2の鎖のすべての偶数位置に2'-OMeから2'-Fへの変化を含有する。ALD13は、第1の鎖の2位に2'-OMeを含有し、ALD19は、第1の鎖の14位に2'-OMeを含有し、ALD35は、第2の鎖の7位に2'-OMeを含有し、ALD36は、第2の鎖の9位に2'-OMeを含有する。
2つの異なるALDH2 siRNA配列の活性に対する修飾の影響
ALDH2に対するsiRNAの、第1の鎖における2'-OMeに対する2位及び14位の耐性、並びに第2の鎖における2'-OMeに対する7位及び9位の耐性を分析した。ALD58は、両方の鎖に交互になった2'-OMe/2'-Fを含有する。ALD59〜ALD61は、すべて交互になった第2の鎖と共に第1の鎖の2位及び/又は14位に2'-Fを含有するが、ALD62〜ALD64は、すべて交互になった第1の鎖と共に第2の鎖の7位及び/又は9位に2'-Fを含有する。2位(ALD60)及び14位(ALD59)は、2'-OMeで修飾されると活性を失うが、2位及び14位に2'-OMeがなければ、活性が回復する(ALD61)。第2の鎖のうち、7位(ALD63)及び9位(ALD62)は、2'OMeで修飾されると活性を失うが、7位及び9位に2'-OMeがなければ、活性が回復する(ALD64)。
ALDH2に対する異なるsiRNAの、第1の鎖における2'-OMeに対する2位及び14位の耐性、並びに第2の鎖における2'-OMeに対する7位及び9位の耐性を分析した。ALD72は、両方の鎖に交互になった2'-OMe/2'-Fを含有する。ALD73〜ALD75は、すべて交互になった第2の鎖と共に第1の鎖の2位及び/又は14位に2'-Fを含有するが、ALD76〜ALD78は、すべて交互になった第1の鎖と共に第2の鎖の7位及び/又は9位に2'-Fを含有する。2位(ALD74)及び14位(ALD73)は、2'-OMeで修飾されると活性を失うが、2位及び14位に2'-OMeがなければ、活性が回復する(ALD75)。第2の鎖のうち、7位(ALD77)及び9位(ALD76)は、2'OMeで修飾されると活性を失うが、7位及び9位に2'-OMeがなければ、活性が回復する(ALD78)。
DGAT2を標的とするsiRNAの活性に対する修飾の影響
DGAT2に対するsiRNAの、第1の鎖における2'-OMeに対する2位及び14位の耐性、並びに第2の鎖における2'-OMeに対する7位及び9位の耐性を分析した。DGT01は、両方の鎖に交互になった2'-OMe/2'-Fを含有する。DGT02〜DGT04は、すべて交互になった第2の鎖と共に第1の鎖の2位及び/又は14位に2'-Fを含有するが、DGT05〜DGT07は、すべて交互になった第1の鎖と共に第2の鎖の7位及び/又は9位に2'-Fを含有する。2位(DGT03)及び14位(DGT02)は、2'-OMeで修飾されると活性を失うが、2位及び14位に2'-OMeがなければ、活性が少なくとも部分的に回復する(DGT04)。第2の鎖のうち、7位(DGT06)及び9位(DGT05)は、2'OMeで修飾されると活性を失うが、7位及び9位に2'-OMeがなければ、活性が回復する(DGT07)。
siRNA活性に対するDNA修飾の影響
TMPRSS6に対するsiRNAの、第1の鎖におけるDNA修飾に対する2位及び14位の耐性、並びに第2の鎖におけるDNA修飾に対する7位及び9位の耐性を分析した。TMP01は、両方の鎖に交互になった2'-OMe/2'-Fを含有する。TMP93は、第1の鎖の14位に2'-OMeを含有するが、TMP113は、同じ位置に2'-Hを含有する。TMP94は、第1の鎖の2位に2'-OMeを含有するが、TMP112は、同じ位置に2'-Hを含有する。TMP97は、第2の鎖の9位に2'-OMeを含有するが、TMP117は、同じ位置に2'-Hを含有する。TMP98は、第2の鎖の7位に2'-OMeを含有するが、TMP116は、同じ位置に2'-Hを含有する。
siRNA活性に対するLNA修飾の影響
TMPRSS6に対するsiRNAの、第1の鎖におけるLNA修飾に対する2位及び14位の耐性、並びに第2の鎖におけるLNA修飾に対する7位及び9位の耐性を分析した。TMP01は、両方の鎖に交互になった2'-OMe/2'-Fを含有する。TMP93は、第1の鎖の14位に2'-OMeを含有するが、TMP111は、同じ位置にLNAを含有する。TMP94は、第1の鎖の2位に2'-OMeを含有するが、TMP110は、同じ位置にLNAを含有する。TMP97は、第2の鎖の9位に2'-OMeを含有するが、TMP115は、同じ位置にLNAを含有する。TMP98は、第2の鎖の7位に2'-OMeを含有するが、TMP114は、同じ位置にLNAを含有する。
TMPRSS6を標的とする様々なGalNAc-siRNAコンジュゲートのノックダウン活性
第2の鎖のある特定の鎖位置における2'-O-メチル化の影響を、GalNAc-siRNAコンジュゲートとの関連で調査した。すべてのコンジュゲートは、同じ第1の鎖を含有する。STS12009V23は、すべて2'-O-メチル化された第2の鎖を含有し、STS12009V25は、1つの2'-F修飾を第2の鎖の9位に有し、STS12009V26は、1つの2'-F修飾を第2の鎖の7位に有し、STS12009V27は、3つの2'-F修飾を第2の鎖の7位〜9位に有する。
第2の鎖のある特定の位置における2'-O-メチル化の影響を、GalNAc-siRNAコンジュゲートとの関連で調査した。すべてのコンジュゲートは、同じ第1の鎖を含有する。STS12009V41L4は、交互になった2'-F/2'-OMeを有する第2の鎖を含有し、STS12009V23は、すべて2'-O-メチル化された第2の鎖を含有し、STS12009V25は、1つの2'-F修飾を第2の鎖の9位に有し、STS12009V26は、1つの2'-F修飾を第2の鎖の7位に有し、STS12009V27は、3つの2'-F修飾を第2の鎖の7位〜9位に有する。
第2の鎖のある特定の位置における2'-O-メチル化の影響を、GalNAc-siRNAコンジュゲートとの関連で調査した。すべてのコンジュゲートは、同じ第1の鎖を含有する。STS12009V23は、すべて2'-O-メチル化された第2の鎖を含有し、STS12009V25は、1つの2'-F修飾を第2の鎖の9位に有し、STS12009V26は、1つの2'-F修飾を第2の鎖の7位に有し、STS12009V27は、3つの2'-F修飾を第2の鎖の7位〜9位に有する。
複数の位置におけるDNA修飾の影響
TMPRSS6に対するsiRNAの、第1の鎖におけるDNAに対する2位及び14位の耐性、並びに第2の鎖におけるDNAに対する7位〜9位の耐性を分析した。TMP70は、両方の鎖に交互になった2'-OMe/2'-Fを含有するが、TMP119は、第1の鎖の2位及び14位並びに第2の鎖の7位〜9位を除くすべての位置に2'-OMeを含有する。TMP120〜TMP126は、2'-F位置に異なる数のDNA置換を含有する。
主要な位置におけるDNAの組み込み。
ヒトALDH2を標的とするsiRNAを用い、DNAに対する第1の鎖の2位及び14位の耐性、並びにDNAに対する第2の鎖の7位〜9位の耐性を分析した。ALD58は、両方の鎖に交互になった2'-OMe/2'-Fを含有するが、ALD61及びALD90〜ALD92は、第1の鎖に低減した2'-Fパターンを含有し、2位にDNA(ALD90)、14位にDNA(ALD91)、そして2位及び14位にDNAがあり(ALD92)、ALD93〜ALD96は、第2の鎖に低減した2'-Fパターンを含有し、7位にDNA(ALD94)、9位にDNA(ALD95)、そして7位及び9位にDNAがある(ALD96)。ALD97は、第2の鎖の7位、8位、及び9位に2'-Fを含有するが、ALD98は、これらの位置にDNAを含有する。
主要な位置におけるDNAの組み込み。
ヒトALDH2を標的とする第2のsiRNAを用い、DNAに対する第1の鎖の2位及び14位の耐性、並びにDNAに対する第2の鎖の7位〜9位の耐性を分析した。ALD72は、両方の鎖に交互になった2'-OMe/2'-Fを含有するが、ALD75及びALD99〜ALD101は、第1の鎖に低減した2'-Fパターンを含有し、2位にDNA(ALD99)、14位にDNA(ALD100)、そして2位及び14位にDNAがある(ALD101)。ALD102〜ALD105は、第2の鎖に低減した2'-Fパターンを含有し、7位にDNA(ALD103)、9位にDNA(ALD104)、そして7位及び9位にDNAがある(ALD105)。ALD106は、第2の鎖の7位、8位、及び9位に2'-Fを含有するが、ALD107は、これらの位置にDNAを含有する。
主要な位置におけるDNAの組み込み。
ヒトDGAT2を標的とするsiRNAを用い、DNAに対する第1の鎖の2位及び14位の耐性、並びにDNAに対する第2の鎖の7位〜9位の耐性を分析した。DGT01は、両方の鎖に交互になった2'-OMe/2'-Fを含有するが、DGT04及びDGT11〜DGT13は、第1の鎖に低減した2'-Fパターンを含有し、2位にDNA(DGT11)、14位にDNA(DGT12)、そして2位及び14位にDNAがある(DGT13)。DGT14-DGT17は、第2の鎖に低減した2'-Fパターンを含有し、7位にDNA(DGT15)、9位にDNA(DGT16)、そして7位及び9位にDNAがある(DGT17)。DGT18は、第2の鎖の7位、8位、及び9位に2'-Fを含有するが、DGT19は、これらの位置にDNAを含有する。
主要な位置における2'-O-メトキシエチル(MOE)の組み込み。
ALDH2を標的とするsiRNAを用い、2'-O-MOEに対する第1の鎖の2位及び14位の耐性、並びに2'-O-MOEに対する第2の鎖の7位及び9位の耐性を分析した。ALD108は、低減した数の2'-Fを両方の鎖に含有する。これに関連して、第1の鎖の2位(ALD115)、14位(ALD116)、又は2位及び14位の両方(ALD117)に2'-O-MOEが配置されている。同様に、第2の鎖の7位(ALD118)、9位(ALD119)、又は7位及び9位の両方(ALD120)に2'-O-MOEが配置されている。ルシフェラーゼに対するsiRNAを非標的化対照(「Luc」)として使用した。
第1の鎖における主要な位置の識別。
GHRを標的とするsiRNAにおいて、交互になったパターン(2'-OMeから2'-Fへの変化、そしてその逆)との関連で一度に1つの位置を対象とすることにより、2'-OMeに対する耐性を調査した。GHR03は、完全に交互になった2'-OMe/2'-Fを含有し、GHR07〜GHR15は、第1の鎖のすべての偶数位置に2'-Fから2'-OMeへの変化を含有し、GHR16〜GHR25は、第1の鎖のすべての奇数位置に2'-OMeから2'-Fへの変化を含有する。GHR07は、第1の鎖の2位に2'-OMeを含有し、GHR13は、第1の鎖の14位に2'-OMeを含有する。ルシフェラーゼを標的とするsiRNA(「Luc」)を対照として使用した。
1。細胞における標的遺伝子の発現を阻害するための核酸であって、第1の鎖の少なくとも一部分、及び第1の鎖と少なくとも部分的に相補的な第2の鎖の少なくとも一部分を含む、少なくとも1つの二重鎖領域を含み、該第1の鎖が、該標的遺伝子から転写されるRNAの少なくとも一部分と少なくとも部分的に相補的であり、該第1の鎖が、RISCによる前記核酸のプロセシングを容易にするために、修飾されたヌクレオチド又は修飾されていないヌクレオチドを複数の位置に含む、核酸。
a)両末端が平滑末端であるか、又は
b)一方の末端にオーバーハングを有し、他方に平滑末端を有するか、又は
c)両末端にオーバーハングを有する、
先行する記述のいずれかに係る核酸。
[S-X1-P-X2]3-A-X3- (I)
[式中、
Sは、糖類を表し、ここで糖類は、N-アセチルガラクトサミンであり、
X1は、C3〜C6アルキレン又は(-CH2-CH2-O)m(-CH2)2-[式中、mは1、2、又は3である]であり、
Pは、ホスフェート又は修飾されたホスフェート(好ましくはチオホスフェート)であり、
X2は、アルキレン、又は式(-CH2)n-O-CH2-[式中、n=1〜6である]のアルキレンエーテルであり、
Aは、分岐ユニットであり、
X3は、架橋ユニットを表し、
本発明に係る核酸は、ホスフェート又は修飾されたホスフェート(好ましくはチオホスフェート)を介してX3にコンジュゲートされている]
を含む、記述36から42のいずれかに係る核酸。
のうちの1つを有する、コンジュゲートされた核酸。
i)カチオン性脂質、又はその薬学的に許容される塩、
ii)ステロイド、
iii)ホスファチジルエタノールアミンリン脂質、
iv)PEG化脂質
を含む製剤と
を含む、組成物。
ステロイドが、
ホスファチジルエタノールアミンリン脂質が、
PEG化脂質が、
記述48又は49における組成物。
Claims (17)
- 細胞における標的遺伝子の発現を阻害するための核酸であって、第1の鎖の少なくとも一部分、及び前記第1の鎖と少なくとも部分的に相補的な第2の鎖の少なくとも一部分を含む、少なくとも1つの二重鎖領域を含み、前記第1の鎖が、前記標的遺伝子から転写されるRNAの少なくとも一部分と少なくとも部分的に相補的であり、前記第1の鎖が、修飾されたヌクレオチドを複数の位置に含み、前記第1の鎖の5'末端から2位及び14位にあるヌクレオチドが、2'O-メチル修飾で修飾されていない、核酸。
- 前記第1の鎖の5'末端から2位及び14位にあるヌクレオチドが修飾されている、請求項1に記載の核酸。
- 前記第1の鎖の5'末端から2位及び14位にあるヌクレオチドが、2'O-メチル修飾で修飾されておらず、前記第1の鎖の13位に対応する前記第2の鎖上のヌクレオチドが、2'O-メチル修飾で修飾されていない、請求項2に記載の核酸。
- 前記第1の鎖の5'末端から2位及び14位にあるヌクレオチドが、2'O-メチル修飾で修飾されておらず、前記第1の鎖の11位に対応する前記第2の鎖上のヌクレオチドが、2'O-メチル修飾で修飾されていない、請求項2に記載の核酸。
- 前記第1の鎖の5'末端から2位及び14位にあるヌクレオチドが、2'O-メチル修飾で修飾されておらず、前記第1の鎖の11位及び13位に対応する前記第2の鎖上のヌクレオチドが、2'O-メチル修飾で修飾されていない、請求項2から4に記載の核酸。
- 前記第1の鎖の5'末端から11位及び/又は13位に対応する前記第2の鎖上のヌクレオチドが修飾されている、請求項1から5のいずれか一項に記載の核酸。
- 前記第1の鎖の5'末端から2位及び14位にあるヌクレオチドが、2'O-メチル修飾で修飾されておらず、前記第1の鎖の11位、又は13位、又は11位及び13位、又は11位〜13位に対応する前記第2の鎖上のヌクレオチドが、2'フルオロ修飾で修飾されている、請求項2から6に記載の核酸。
- 前記第1の鎖の5'末端から2位及び14位にあるヌクレオチドが、2'フルオロ修飾で修飾されており、前記第1の鎖の11位、又は13位、又は11位及び13位、又は11位〜13位に対応する前記第2の鎖上のヌクレオチドが、2'O-メチル修飾で修飾されていない、請求項2から7のいずれか一項に記載の核酸。
- 前記第1の鎖の5'末端から2位及び14位にあるヌクレオチドが、2'フルオロ修飾で修飾されており、前記第1の鎖の11位、又は13位、又は11位及び13位、又は11位〜13位に対応する前記第2の鎖上のヌクレオチドが、2'フルオロ修飾で修飾されている、請求項2から8のいずれか一項に記載の核酸。
- 好ましくは前記第1の鎖及び第2の鎖の両方の全ヌクレオチドに対するパーセンテージとして測定した場合、前記第1の鎖及び/又は第2の鎖のヌクレオチドの50%超が2'O-メチル修飾を含む、例えば、前記第1の鎖及び/又は第2の鎖の55%、60%、65%、70%、75%、80%、若しくは85%超、又はそれ以上が2'O-メチル修飾を含む、請求項1から9のいずれか一項に記載の核酸。
- 両方の鎖の全ヌクレオチドに対するパーセンテージとして、20%以下(例えば15%以下又は10%以下)の2'フルオロ修飾を前記第1の鎖及び/又は第2の鎖に含む、請求項1から10のいずれか一項に記載の核酸。
- 前記第1の鎖及び前記第2の鎖のうちの少なくとも1つの3'末端における末端ヌクレオチドが、逆位ヌクレオチドであり、かつ前記末端ヌクレオチドの3'炭素及び隣接したヌクレオチドの3'炭素を介して隣接したヌクレオチドに結合しており、かつ/又は、前記第1の鎖及び前記第2の鎖のうちの少なくとも1つの5'末端における末端ヌクレオチドが、逆位ヌクレオチドであり、かつ前記末端ヌクレオチドの5'炭素及び隣接したヌクレオチドの5'炭素を介して隣接したヌクレオチドに結合しているか、或いは、前記核酸がホスホロジチオエート結合を含む、請求項1から11のいずれか一項に記載の核酸。
- リガンドとコンジュゲートされた、請求項1から12のいずれか一項に記載の核酸。
- 請求項1から12のいずれか一項に記載の核酸又はコンジュゲートされた核酸と、生理学的に許容される賦形剤とを含む、組成物。
- 疾患又は障害の処置における使用のための、請求項1から13のいずれか一項に記載の核酸若しくはコンジュゲートされた核酸又は請求項14に記載の組成物。
- 疾患又は障害を処置するための医薬の製造における、請求項1から13のいずれか一項に記載の核酸若しくはコンジュゲートされた核酸又は請求項14に記載の組成物の使用。
- 処置を必要とする個体に、請求項1から14のいずれか一項に記載の核酸又はコンジュゲートされた核酸を含む組成物を投与する工程を含む、疾患又は障害を処置する方法。
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