JP2020508336A - 細胞療法における投薬に関する組成物、製造物品、および方法 - Google Patents

細胞療法における投薬に関する組成物、製造物品、および方法 Download PDF

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Abstract

治療用T細胞組成物の1つまたは複数の用量の投与を含む細胞療法に関連した使用のための方法、組成物、および製造物品が、本明細書において提供される。T細胞組成物の細胞は、キメラ受容体などの組換え受容体、例えば、キメラ抗原受容体（CAR）、またはT細胞受容体（TCR）などの他のトランスジェニック受容体を発現する。投与される細胞の数もしくは細胞の単位、および/または投与される細胞の効力を含む、提供される態様の特徴は、様々な利点、例えば、T細胞組成物が投与された対象における毒性のより低い危険性を提供する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、米国仮特許出願：「COMPOSITIONS, ARTICLES OF MANUFACTURE AND METHODS RELATED TO DOSING IN CELL THERAPY」という名称の、2017年2月27日に出願された、第62/464,371号；「COMPOSITIONS, ARTICLES OF MANUFACTURE AND METHODS RELATED TO DOSING IN CELL THERAPY」という名称の、2017年3月1日に出願された、第62/465,817号；「COMPOSITIONS, ARTICLES OF MANUFACTURE AND METHODS RELATED TO DOSING IN CELL THERAPY」という名称の、2017年3月10日に出願された、第62/470,180号；「COMPOSITIONS, ARTICLES OF MANUFACTURE AND METHODS RELATED TO DOSING IN CELL THERAPY」という名称の、2017年6月29日に出願された、第62/527,002号；「COMPOSITIONS, ARTICLES OF MANUFACTURE AND METHODS RELATED TO DOSING IN CELL THERAPY」という名称の、2017年11月1日に出願された、第62/580,416号；「COMPOSITIONS, ARTICLES OF MANUFACTURE AND METHODS RELATED TO DOSING IN CELL THERAPY」という名称の、2017年11月10日に出願された、第62/584,740号；および「COMPOSITIONS, ARTICLES OF MANUFACTURE AND METHODS RELATED TO DOSING IN CELL THERAPY」という名称の、12月8日に出願された、第62/596,703号の優先権の恩典を主張し、これらの内容は全ての目的について参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる。
参照による配列表の組み入れ
本出願は、電子的なフォーマットの配列表と共に出願される。配列表は、サイズが37,444バイトである、2018年2月27日に作成された、735042009340SeqList.TXTという名称のファイルとして提供される。配列表の電子的なフォーマットでの情報は、参照によりその全体が組み入れられる。
分野
本開示は、治療用T細胞組成物の1つまたは複数の用量の投与を伴う細胞療法、ならびにそれにおける使用のための方法、組成物および製造物品に関する。T細胞組成物の細胞は、組換え受容体、例えば、キメラ受容体、例えば、キメラ抗原受容体(CAR)または他のトランスジェニック受容体、例えば、T細胞受容体(TCR)を発現する。投与される細胞の数もしくは細胞の単位および／または投与される細胞の効力を含む、本開示の態様の特徴は、T細胞組成物が投与される対象における毒性の危険性がより低いといった、様々な利点を提供する。
背景
様々な細胞療法方法が、疾患および状態を治療するために利用可能である。例えば、そのような方法の毒性の危険性を低下させるために、改善方法が必要である。例えば、対象における投与された細胞の有効性を維持しながら、細胞療法に対する毒性の危険性を低下させるために、改善方法が必要である。そのような必要性を満たす組成物、製造物品、方法および使用を提供する。
概要
細胞療法、例えば、養子細胞療法、例えば、そのような治療法に関連し得る、1つまたは複数の望ましくないもしくは有害な効果または毒性、あるいはその危険性、例えば、毒性、例えば、重度の毒性、例えば、脳水腫に関連するかまたは脳水腫を伴う毒性を含む重度のまたは致命的な神経毒性を予測する、低減させる、予防する、改善することにおいて有用なものに関する態様を、本明細書に提供する。そのような提供される態様の中には、CAR-T細胞療法を含む操作T細胞療法のような養子細胞免疫療法に関するかまたは養子細胞免疫療法用であるもののような、製造物品、組成物、例えば、細胞の1つまたは複数の単位用量を含有する組成物、ならびに方法および使用がある。
提供される態様の中には、以下を含むもののような、製造物品がある：
（a）抗原へ特異的に結合する、任意でキメラ抗原受容体(CAR)である、組換え受容体を含むT細胞を含む治療用T細胞組成物の単位用量を含む容器であって、該単位用量が所定の範囲内の参照単位(RU)の標的数を含有し、所与の組成物中のRUは以下の式によって定義され：
RU＝A×B
式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換であるか、あるいは、所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ
Bは、所与の組成物中の組換え受容体依存性の、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値、またはその分数もしくは倍数もしくは変換である、容器；および
（b）対象、任意で疾患または状態を有するかまたは有する疑いがある対象に、組成物、任意でその1つまたは複数の単位用量を投与するための、説明書。
さらに、以下を含む製造物品を提供する：
（a）治療用T細胞組成物の単位用量を含む容器であって、治療用T細胞組成物が、抗原へ特異的に結合する、任意でキメラ抗原受容体(CAR)である、組換え受容体を含むT細胞を含み、
該単位用量は、
（i）総組換え受容体発現細胞の標的数もしくは総CD3+組換え受容体発現細胞の標的数もしくは総CD8+組換え受容体発現細胞の標的数、またはおよそこれらの数、あるいは
（ii）所定の範囲内の参照単位(RU)の標的数またはおよそこれらの数
を含有し、該参照RUの標的数はRUの閾値数以下であり、該単位用量は、閾値数を超えるRUを含有せず、所与の組成物中のRUの数は以下の式よって定義され：
RU＝A×B
式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ、
Bは、所与のT細胞組成物中の、組換え受容体依存性の、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である、容器；ならびに
（b）対象、任意で疾患または状態を有するかまたは有する疑いがある対象に、組成物、任意でその1つまたは複数の単位用量を投与するための、説明書。
さらに、以下を含む製造物品を提供する：
（a）抗原へ特異的に結合するキメラ抗原受容体(CAR)を発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物の単位用量を含む、容器であって、該単位用量は、治療用T細胞組成物の標的用量を含有し、
（i）組成物の組換え受容体依存性活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値が、閾値以上である場合、標的用量は、組成物の所定の表現型の細胞の第1の数であり（または第1の数範囲内にあり）；
（ii）パラメータの値が閾値未満である場合、標的用量は、組成物の所定の表現型の細胞の第2の数であり（または第2の数範囲内にあり）、
第1の数（または第1の範囲）は第2の数（または第2の範囲）より低い、容器；ならびに
（b）対象、任意で疾患または状態を有するかまたは有する疑いがある対象に、組成物、任意でその1つまたは複数の単位用量を投与するための、説明書。
さらに、以下を含む製造物品を提供する：
（a）治療用T細胞組成物の単位用量を含む容器であって、治療用T細胞組成物が、抗原へ特異的に結合する、任意でキメラ抗原受容体(CAR)である、組換え受容体を含むT細胞を含み、該単位用量は治療用T細胞組成物の標的用量を含有し、かつ、治療用T細胞組成物は、Bについての下側規格限界（LSL）を上回りかつ上側規格限界（USL）を下回り、Bは、組成物の組換え受容体依存性活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値である、容器；ならびに
（b）対象、任意で疾患または状態を有するかまたは有する疑いがある対象に、組成物、任意でその1つまたは複数の単位用量を投与するための、説明書。
治療方法を本明細書に提供し、該方法は、疾患または状態に関連する抗原へ特異的に結合する、組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体(CAR)を含む細胞を含むT細胞組成物の単位用量を、疾患または状態を有する対象へ投与する工程を含み、該単位用量は、所定の範囲内の参照単位(RU)の標的数を含有し、所与の組成物中のRUは以下の式によって定義され：
RU＝A×B
式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ、
Bは、所与の組成物中の、組換え受容体依存性の、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である。
治療方法をさらに提供し、該方法は、疾患または状態に関連する抗原へ特異的に結合する、組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体(CAR)を含む細胞を含むT細胞組成物の単位用量を、疾患または状態を有する対象へ投与する工程を含み、該単位用量は、
（i）総組換え受容体発現細胞の標的数もしくは総CD8+組換え受容体発現細胞の標的数、またはおよそこれらの数、あるいは、
（ii）所定の範囲内の参照単位(RU)の標的数またはおよそこれらの数
を含有し、この標的数はRUの閾値数以下であり、該単位用量は、閾値数を超えるRUを含有せず、所与の組成物中のRUの数は以下の式によって定義され：
RU＝A×B
式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ、
Bは、所与のT細胞組成物中の、組換え受容体依存性の、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である。
特定の態様において、Aは、T細胞の総数、CD3+細胞の総数、CD4+もしくはCD8+細胞の総数、CD3+CAR+細胞の総数、CD8+CAR+細胞の総数、CD4+ CAR+の総数、または前述のもののいずれかの生存もしくは生存細胞の総数、あるいはその倍数または変換値である。いくつかの態様において、Aは、CD3+細胞の総数、CD8+の総数、CD3+CAR+細胞の総数、CD8+CAR+細胞の総数、または前述のもののいずれかの生存もしくは生存細胞の総数、あるいはその倍数または変換値である。ある態様において、Aは、CD3+ CAR+細胞であるアポトーシス性マーカー陰性(-)細胞の総数、CD4+ CAR+であるアポトーシス性マーカー陰性(-)細胞の総数、CD8+ CAR+細胞であるアポトーシス性マーカー陰性(-)細胞の総数、またはその倍数または変換値であり、ここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。特定の態様において、Aは、アポトーシス性マーカー-CD3+ CAR+細胞の総数、またはアポトーシス性マーカー-CD8+ CAR+細胞の総数であり、任意で、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
治療方法をさらに提供し、該方法は、疾患または状態に関連する抗原へ特異的に結合する、組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体(CAR)を含む細胞を含むT細胞組成物の単位用量を、疾患または状態を有する対象へ投与する工程を含み、該単位用量は、治療用T細胞組成物の標的用量を含有し、
（i）組成物の、組換え受容体依存性の、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値が、閾値以上である場合、標的用量は、組成物の所定の表現型の細胞の第1の数であり（または第1の数範囲内にあり）；
（ii）パラメータの値が閾値未満である場合、標的用量は、組成物の所定の表現型の細胞の第2の数であり（または第2の数範囲内にあり）、
第1の数（または第1の範囲）は第2の数（または第2の範囲）より低い。
T細胞組成物の単位用量を含む治療用組成物をアッセイする方法をさらに提供し、該方法は以下を含む：
（a）疾患または状態を有する対象から誘導され、かつ、疾患または状態に関連する抗原へ特異的に結合する、組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体(CAR)をコードする核酸で形質導入された、T細胞を含むT細胞組成物由来の試料をアッセイする工程であって、アッセイは細胞組成物についてのBを決定し、Bは、所与の組成物中の組換え受容体依存性活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である、工程；および
（b）Bに基づいて細胞組成物の効力を評価し、かつ／または、組成物がBについての下側規格限界(LSL)を上回るかまたはBについての上側規格限界(USL)を下回るかどうかを評価する工程。
治療用T組成物をアッセイする方法をさらに提供し、該方法は、疾患または状態に関連する抗原へ特異的に結合する組換え受容体を含むT細胞を含むT細胞組成物由来の試料を、Bに基づいて細胞組成物の効力について評価し、かつ／または、組成物がBについての下側規格限界(LSL)を上回るかまたはBについての上側規格限界(USL)を下回るかどうかを評価する工程を含む。
治療用T細胞組成物に対する毒性の危険性を評価する方法をさらに提供し、該方法は以下を含む：
（a）対象へ投与されたT細胞組成物由来の試料を、所定の範囲内の参照単位(RU)について評価する工程であって、T細胞組成物が、疾患または状態に関連する抗原へ特異的に結合する組換え受容体を含むT細胞を含み、所与の組成物中のRUは以下の式によって定義され：
RU＝A×B
式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ、
Bは、所与の組成物中の組換え受容体依存性の、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値、またはその分数もしくは倍数もしくは変換である、工程；および
（b）RUをRUの参照安全数と比較する工程であって、該比較により、対象が、有害事象、任意で重度の有害事象、任意でグレード4もしくはグレード5以上の重度の神経毒性または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性を発症する危険性があるかないかが示される、工程。
T細胞組成物の単位用量を含む治療用組成物を製造する方法をさらに提供し、該方法は以下を含む：
（a）疾患または状態を有する対象から誘導され、かつ、疾患または状態に関連する抗原へ特異的に結合する、組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体(CAR)をコードする核酸で形質導入された、T細胞を含むT細胞組成物をアッセイする工程であって、アッセイは細胞組成物についてのBを決定し、Bは、所与の組成物中の、組換え受容体依存性の、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である、工程；および
（b）組成物の全部または一部および任意で別の溶液を容器に充填し、T細胞組成物の単位用量を達成する工程であって、該単位用量はT細胞組成物の参照単位(RU)の標的数を含有し、所与の組成物中のRUは以下の式によって定義され：
RU＝A×B
式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均である、工程。
T細胞組成物の単位用量を含む治療用組成物を製造する方法をさらに提供し、該方法は、疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体を含むT細胞を含むT細胞組成物の全部または一部、および任意で別の溶液を容器に充填し、T細胞組成物の単位用量を達成する工程を含み、該単位用量はT細胞組成物の参照単位(RU)の標的数を含有し、所与の組成物中のRUは以下の式によって定義され：
RU＝A×B
式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ、
Bは、所与の組成物中の、組換え受容体依存性の、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である。
細胞療法のための治療用T細胞組成物を製造する方法をさらに提供し、該方法は、約1000万個の細胞〜約7000万個の細胞／mL（両端の値を含む）の濃度までの、T細胞を含む組成物の全部または一部、および任意で別の溶液を容器に充填する工程を含む。
疾患もしくは状態に関連するかまたは疾患もしくは状態によって発現される抗原に特異的な組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体(CAR)を含む細胞の数を含む治療用T細胞組成物の単位用量を提供し、ここで、細胞の数は、5.0×106〜2.25×107、5.0×106〜2.0×107、5.0×106〜1.5×107、5.0×106〜1.0×107、5.0×106〜7.5×106、7.5×106〜2.25×107、7.5×106〜2.0×107、7.5×106〜1.5×107、7.5×106〜1.0×107、1.0×107〜2.25×107、1.0×107〜2.0×107、1.0×107〜1.5×107、1.5×107〜2.25×107、1.5×107〜2.0×107、2.0×107〜2.25×107個、および約5.0×106〜約2.25×107、約5.0×106〜約2.0×107、約5.0×106〜約1.5×107、約5.0×106〜約1.0×107、約5.0×106〜約7.5×106、約7.5×106〜約2.25×107、約7.5×106〜約2.0×107、約7.5×106〜約1.5×107、約7.5×106〜約1.0×107、約1.0×107〜約2.25×107、約1.0×107〜約2.0×107、約1.0×107〜約1.5×107、約1.5×107〜約2.25×107、約1.5×107〜約2.0×107、約2.0×107〜約2.25×107個の組換え受容体発現細胞（各々両端の値を含む）、任意で、CD8+である、または、アポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+である、組換え受容体発現細胞であり、任意で、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
対象の血液中の組換え受容体発現細胞の数をアッセイする工程を含む、対象に毒性の危険性があるかどうかを決定する方法を本明細書に提供し、該対象は、組換え受容体発現細胞の用量が以前に投与されたことがあり、該対象は、以下の場合に毒性を発症する危険性がある：
（i）投与開始後4日以内で、対象の血液中の組換え受容体発現細胞の数が、少なくとも2個または少なくとも約2個の組換え受容体発現細胞／マイクロリットルである場合；
（ii）投与開始後5または6日以内で、対象の血液中の組換え受容体発現細胞の数が、少なくとも5個もしくは少なくとも約5個の組換え受容体発現細胞／マイクロリットルであるか、または、少なくとも10個もしくは少なくとも約10個の組換え受容体発現細胞／マイクロリットルである場合；または
（iii）投与開始後7日以内で、対象の血液中の組換え受容体発現細胞の数が、少なくとも15個または少なくとも約15個の組換え受容体発現細胞／マイクロリットルである場合。
対象に毒性の危険性があるかどうかを決定する方法を本明細書にさらに提供し、該方法は以下を含む：
（a）組換え受容体を発現する細胞の用量を、疾患または状態を有する対象へ投与する工程；および
（b）細胞の投与後、対象の血液中の組換え受容体発現細胞の数をアッセイする工程；ここで、対象は、以下の場合に毒性を発症する危険性がある：
（i）投与開始後4日以内で、対象の血液中の組換え受容体発現細胞の数が、少なくとも2個または少なくとも約2個の組換え受容体発現細胞／マイクロリットルである場合；
（ii）投与開始後5または6日以内で、対象の血液中の組換え受容体発現細胞の数が、少なくとも5個もしくは少なくとも約5個の組換え受容体発現細胞／マイクロリットルであるか、または、少なくとも10個もしくは少なくとも約10個の組換え受容体発現細胞／マイクロリットルである場合；または
（iii）投与開始後7日以内で、対象の血液中の組換え受容体発現細胞の数が、少なくとも15個または少なくとも約15個の組換え受容体発現細胞／マイクロリットルである場合。
治療用T細胞組成物の製造における使用のための刺激試薬を評価するための方法をさらに提供し、該方法は、
（i）刺激試薬を使用して製造されたT細胞組成物を、組換え受容体依存性活性または表現型について評価する工程；および
（ii）組換え受容体依存性活性または表現型を、対照組成物からもたらされる同じ活性または表現型と比較するか、または、組換え受容体依存性活性または表現型についての標準単位と比較する工程
を含み、
ここで、刺激試薬を使用して製造された細胞組成物の組換え受容体依存性活性または表現型が、対照組成物によってまたは標準単位からもたらされる同じ活性とは、多くとも40％または多くとも30％または多くとも20％または多くとも10％または多くとも5％異なる場合、刺激剤は、治療用T細胞組成物を製造するための方法における使用についてのリリースに適していると決定される。
任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、治療用T細胞組成物の組換え受容体依存性活性または表現型の程度またはレベルは、ある局面において、対象への治療用T細胞組成物の投与後に有害副作用を発症する危険性に関連する、治療用組成物および／またはそのプロダクションに特有の特質または特性を表す。いくつかの局面において、そのような危険性は、1つまたは複数の危険因子を有するある対象において、例えば以下の対象において、より大きいかまたはより高い発生率で生じる：
（i）治療用T細胞組成物の投与開始前に、より少ない事前療法、任意で2つ未満の事前療法を受けたことがある対象、
（ii）若年、任意で30歳未満の対象、
（iii）対象由来のアフェレーシス試料中のCD4:CD8の比がある閾値を下回る、任意で1:1を下回るまたは1.5:1を下回るまたは0.5:1を下回るまたはそれ以下である対象であって、例えばここで、投与される用量が、例えば、用量中のCD4+またはCD8+ T細胞の数または比を指定することなく、総T細胞または操作もしくは組換え受容体（例えばCAR）を発現する総T細胞に基づく、対象；
（iv）治療される対象の群の中での平均体重を超える体重を有する対象；
（v）120,000未満または約120,000未満の血小板カウントを有する対象；
（vi）B細胞白血病、任意で急性リンパ性白血病(ALL)を有する対象；
（vii）治療用T細胞組成物の投与開始前に、例えば、投与開始直前にまたは投与開始前1ヶ月以内に、高疾患負荷量を有する対象であって、高疾患負荷量が、任意で、5％以上の骨髄芽球のパーセント、二方向積和（sum of product diameter）(SPD)、または乳酸デヒドロゲナーゼのレベルに基づいて決定される、対象；あるいは
（viii）急性リンパ芽球性白血病(ALL)のフィラデルフィア染色体(Ph+)および／またはPh染色体様(Ph様)分子サブタイプを示さない対象；
（ix）治療用T細胞組成物の投与開始前にブリッジング化学療法（bridging chemotherapy）を受けたことがある対象；
（x）治療用T細胞組成物の投与開始前に、任意でフルダラビンおよび／またはシクロホスファミドの投与を含む、リンパ球枯渇療法でプレコンディショニングされたことがある対象；ならびに／あるいは
（xi）治療用T細胞組成物の投与開始前の血液試料中のインターロイキン-15 (IL-15)のレベル、量または濃度が閾値を超える対象。いくつかの態様において、提供される態様、例えば、提供される方法、製造物品、組成物、用量および投薬戦略は、対象への投薬に関してなど、そのような特質または特性を説明し（account for）、それによって、対象が、治療用T細胞組成物の投与後に、有害事象または毒性、例えば、重度の神経毒性、あるいはグレード3以上または長期にわたるグレード3、グレード4もしくはグレード5の神経毒性を発症する危険性または可能性を防止、改善または低減する。
任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、例示的な特質は、個々の対象へ投与される個々の用量中の、生存細胞の、および／または様々な表現型の細胞の、数または頻度（または数/kg）を含む。例示的なそのような表現型は、フローサイトメトリーによって評価されるような、1つまたは複数の表面マーカーの発現を含んだ。例えば、いくつかの局面において、表現型はCD3+、CD8+、CD4+、および／またはCAR+を含む。さらに、表現型の中には、生存性、および、機能的な、健康なまたは生物学的に活性な細胞に関連するかまたはこれらを示すかまたはこれらを示すとみなされるものがある。ある局面において、そのような表現型は、アポトーシス、アポトーシス性細胞、または1つもしくは複数の死もしくはアポトーシス経路進入の様々な（例えば、初期もしくは後期）段階を示すマーカー（例えば、アネキシンV、カスパーゼ3）の陰性のまたは低い存在または発現を含む。特定の局面において、そのようなマーカーは、非CAR抗原特異的様式で、例えば、PMA/イオノマイシンおよび／またはFOXP3に応答して細胞内サイトカイン染色(ICS)において、サイトカインまたは他の因子を産生する細胞の能力を含む。いくつかの局面において、マーカーおよび表現型は、T細胞活性化、疲弊、幹様特性、ナイーブT細胞、寿命、T細胞サブセット、メモリー表現型（複数可）、および1つまたは複数のTメモリーサブセット（TCM、TEM、およびTSCMのうちの1つまたは複数）の表現型のうちの1つまたは複数に関連するものを含む。
任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、治療用細胞組成物関連特質は、投与された用量中のCD8+CAR+ T細胞の総数、アポトーシスを示す因子［例えば、アネキシンVでの表面染色(アネキシンV-)またはカスパーゼ3開裂］について陰性である（非アポトーシス性細胞を示す）と観察された投与された用量中のCD8+CAR+ T細胞の総数または（例えば、CD8+CAR+ T細胞中での）頻度を含む。特定の例において、治療用細胞組成物関連特質は、投与された用量中のCD3+CAR+ T細胞の総数、アポトーシスを示す因子（例えば、アネキシンVでの表面染色(アネキシンV-)またはカスパーゼ3開裂）について陰性である（非アポトーシス性細胞を示す）と観察された投与された用量中のCD3+CAR+ T細胞の総数または（例えば、CD3+CAR+ T細胞中での）頻度を含む。
任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、例示的なパラメータは、生存細胞濃度(VCC)、薬物製品の接種と採取との間の細胞の増大倍率；および投与された用量中のベクターコピー数(VCN)を含む、治療用組成物および／またはそのプロダクションに特有の特性である。さらに、例示的なパラメータの中には、組成物中の細胞の機能または活性または他の特徴もしくは能力に一般に関連するかまたはこれらを示すものがある。これらの中には、TCRおよび／またはCAR-誘導性または依存性様式で誘導されるものを含む、増殖および活性化または活性の様々な表示を含む、細胞刺激のアウトカムに関連する様々な特質がある。機能または活性に関する例示的なそのようなパラメータは、CAR抗原特異的刺激または他の刺激に応答しての、組成物中の細胞による1つまたは複数の因子（例えば、様々なサイトカイン）の産生の測定値またはレベル（例えば、量または1細胞当たりの濃度もしくはレベル）であった。
任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、組成物のCAR-標的化抗原特異的活性および機能（例えば、CAR抗原依存性サイトカイン分泌および細胞傷害性）を示すパラメータは、共培養アッセイにおいて評価される。評価される治療用組成物の細胞は、CD19発現標的細胞の存在下でインキュベートされる。サイトカインアッセイについて、サイトカイン（複数可）（例えば、IL-2、IFNγ、TNFα、IL-6、sCD137、MIP1b、MIP1a、IL-10、IL-4、IL-13、IL-5またはGM-CSF）の蓄積量(pg/mL)は、例えばおよそ22〜24時間の、標的細胞と、同じ体積中に、同じ数の形質導入またはCAR+細胞を含む様々な組成物の量とのインキュベーション後に評価され得る。そのようなアッセイは、用量中のCAR+細胞当たりの抗原特異的サイトカイン分泌の測定値を提供した。他のアッセイにおいて、CD19発現標的細胞に対する細胞溶解活性が、T細胞とのインキュベーション後に評価された。
任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、非CAR抗原特異的刺激に応答しての活性または機能的効果の測定値、例えば、例えば磁気ビーズ上にコーティングされた、抗CD3/抗CD28での刺激後のサイトカインまたは他の因子の産生が評価される。そのようなアッセイにおいて、培養物中におけるT細胞中のより少ないCAR+細胞を含む培養物は、測定値のより高い相対レベルを示し得る。
任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、ベクターコピー数（1細胞当たりまたは1ゲノム当たり）に関する関係は、細胞適合性の代理指標および／または組成物中の操作された細胞または操作されなかった細胞の相対的な表示に関連した複数の変数および／または組成物中の総細胞の密度と考えられる。例えば、いくつかの態様において、プロセスの開始時に全般的にあまり健康でない血液試料由来の細胞は、形質導入段階中の生存のより低い可能性を有し、かつ／または、形質導入中の細胞死は形質導入効率を改善し得る。従って、ある場合において、レンチウイルスまたはガンマレトロウイルスベクター形質導入によって導入されるものなどの、組成物当たりのウイルスベクターのより高いコピー数は、細胞のより大きなパーセンテージがプロセスの開始時に不健康であった組成物を示し得、特定の局面において、神経毒性と例えば逆に相関した特性を有していた場合がある。いくつかの態様において、形質導入のより高い頻度は、凍結保存、貯蔵および解凍中に操作（例えば、CAR+）細胞のより高い頻度を有する組成物をもたらし得る。ある局面において、用量が操作細胞（またはそのサブタイプ、例えば、CAR+CD3+）の数に基づく場合、操作細胞のより高い頻度を有するそのような組成物は、より低い全体的な細胞密度を含み得、これは、特定の態様において、生物学的に活性な細胞または非アポトーシス性細胞の減少したレベルまたは頻度と相関する。
任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、対象へ投与される用量中の、アポトーシスのマーカー（アネキシンVを含む）についての表面染色について陰性である細胞の数または正規化数の様々な測定値（または、製品の細胞中での、例えば、CAR+CD3+またはCAR+CD8+中での、そのようなアポトーシス性マーカー-陰性細胞の頻度）は、有害事象、例えば毒性、例えば神経毒性と相関または関連する。いくつかの局面において、アネキシンVおよびカスパーゼ3は、全般的に、類似していると観察された。そのようなパラメータはまたCAR-T細胞組成物の機能または効力に関連すると考えられ得、従って、有効性に関連すると予期され得るが、これらの変数は、一般に、治療応答転帰、例えば、対象が完全奏効を達成するかまたは奏効を達成しないかどうかと有意には相関しない。
任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、治療用CAR-T細胞組成物の特質またはパラメータ（例えば、抗原特異的活性および／または生存性）、対象因子および／または特徴（例えば、年齢、体重、および／または疾患）、ならびに他の治療（例えば、事前治療の数）の組み合わせは、例えば、CAR-T細胞組成物での治療後、致命的な神経毒性を発症する危険性に関連する。
任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、脳水腫は、CAR T細胞の早期の急速な増大、および／または、IL-15、炎症バイオマーカーおよびCAR-T成長因子のレベルの上昇と相関および／または関連する。いくつかの局面において、CD8+ CAR+細胞の用量および機能は、対象特徴および／または因子と共に、早期のかつ／または急速なCAR-T細胞増大を駆動する、これと相関する、かつ／またはこれに関連する。
任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、対象特徴および／または因子は、若年（例えば、30歳未満）、事前治療（例えば、2つ以下の事前レジメンでのもの）、強化ブリッジング化学療法、および／または、リンパ球枯渇用などの、高強度フルダラビン／シクロホスファミドの使用であるかまたはこれらを含む。
任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、脳水腫、例えば、CAR-T細胞療法に関連するかつ／またはCAR-T細胞療法に続く脳水腫は、内皮損傷および完全な血液脳関門(BBB)破壊に関連する。ある局面において、脳水腫は、脳のCAR T細胞浸潤、中枢神経系(CNS)白血病、または事前CNS白血病療法に関連しない。
任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、例えばCAR-T細胞療法での、治療前にまたは治療に先立って、ハイリスク患者を同定することは、危険性、例えば、神経毒性または脳水腫などの毒性の危険性または可能性を潜在的に管理および軽減するために重要である。特定の局面において、致命的な神経毒性の危険性は、CAR-T細胞組成物の可変性を最小化すること、例えば、生存性、CD4+/CD8+比、および活性などのパラメータについての細胞組成物間での可変性を最小化することによって、軽減、低減、および／または減少され得る。ある局面において、規定された組成物製品、例えば、規定されたパラメータを有するCAR-T細胞組成物の使用は、用量および機能における可変性を低減させることができる。
任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、提供される方法、製造物品、組成物、用量および投薬戦略は、それらが、試薬の変化に由来するものおよび／または患者間可変性を含む、可変性の潜在的な供給源を考慮に入れ、必要に応じて、調節または修正する点で、有利である。例えば、ある態様において、T細胞刺激／増大試薬（またはそのロット）の使用を伴うプロセスによって操作T細胞を製造することが有利であり得、T細胞刺激／増大試薬は、パラメータの閾値レベル、例えば、治療用組成物のそのようなパラメータに関する特異的活性と比較した場合に変動の許容範囲未満または以内であると放出アッセイによって確認されていた（例えば、例えばそのようなアッセイに関する対照試薬または標準単位と比較した場合、T細胞操作プロセスによって製造された最終T細胞組成物中の抗原特異的活性の特定の程度を誘導するために必要な試薬の量または相対量の測定値）。特定の態様において、提供される態様は、細胞用量を伴い、ここで、そのような特異的活性パラメータ（例えば、抗原特異的炎症誘発性サイトカイン測定値）における任意の可変性が許容範囲内かつ／または上側規格限界未満であることを確認するための放出アッセイを伴うプロセスによって、細胞は製造された。いくつかの態様において、提供されるプロセスは、そのような放出アッセイを含む。ある態様において、細胞組成物の製造は、そのようなパラメータの変動が許容範囲内にある試薬および／またはプロセスを使用して行われる。特定の態様において、提供される方法、組成物および製造物品は、それらが、例えば、特異的活性パラメータと共に、毒性の危険性と相関する第2のパラメータにおける可変性を最小化することによって、そのような特異的活性パラメータにおける潜在的な変動に関連する危険性を軽減する投薬および／または細胞製造戦略を使用する点で有利である。例えば、プロセスによって製造される生物学的に活性なまたは健康な細胞（例えば、非アポトーシス性細胞）の頻度の変動を最小化することによって、安全性に対する特異的活性関連パラメータの変化の影響を最小化することができる。いくつかの態様において、生物学的に活性なまたは非アポトーシス性の細胞（例えば、生物学的に活性なまたは非アポトーシス性の操作細胞または操作CD8+細胞）の数または頻度に関する特徴（複数可）を含む用量または投薬戦略は、抗原特異的活性パラメータの変動に関連する危険性を低減させる。ある局面において、これは、そのような細胞の上限を含み、かつ／または、参照単位に基づいて、例えば、生物学的に活性な細胞の数を考慮に入れる式に基づいて、用量を規定する、用量によって達成される。
特定の態様において、操作細胞中でのそのような生物学的に活性な細胞の頻度の減少した可変性を伴うプロセスの使用は、ある患者（例えば、アポトーシスの傾向が低いかまたはより健康である細胞を有する患者）が、全体として操作T細胞数に基づく投薬の場合に、意図されるよりも高い用量の生物学的に活性な細胞を不注意に与えられる危険性を低減させる。表現型および機能に対するより大きな程度の制御を有するこのプロセスのようなプロセスは、抗原特異的様式で炎症誘発性サイトカインを作る、該プロセスによって製造された細胞の能力における可変性の程度を低減させることがさらに観察された。上記の研究における結果は、特に、生物学的に活性な操作細胞の数と組み合わせた場合に、そのような細胞特異的活性パラメータを考慮に入れる投薬戦略（例えば、そのような活性の特定の標的範囲（または閾値のみ）が所定の用量で表されるようなもの）は、依然として安全域内にありながら、または、望まれない毒性（例えば、神経毒性）の危険性を低減しながら、所望の臨床または治療転帰を達成することができる用量を提供するために使用することができるという解釈と一貫している。
いくつかの態様において、生物学的に活性な操作細胞の一貫してより高い頻度をもたらすプロセスの使用は、より高い頻度の操作細胞がアポトーシス性マーカーについて陽性であるかまたはそうでなければあまり健康でない、他の投薬戦略と比較した場合、（操作（例えばCAR+）細胞の数の見込みから）遥かにより低い細胞用量の使用を可能にする。例えば、本明細書における観察に基づいて、また、利用可能な投薬戦略は一般にアポトーシス性細胞の頻度を考慮に入れていないという観察を考慮して、ある態様において、操作（例えば、CAR+）T細胞（例えば、操作CD8+および／またはCD4+細胞）の数は、500万、1000万、1100万、1200万、1300万、1400万、1500万、1600万、1700万、1800万、1900万、2000万、3000万、4000万または5000万個の細胞と同じぐらい低い。
任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、提供される態様は、所与の組成物中に存在する所定の表現型の、細胞の数、またはその倍数もしくは分数もしくは変換を評価または決定することを含む。いくつかの態様において、Aは、所与の組成物中の2つ以上の表現型の、細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均である。ある態様において、単位の標的数は、単位の閾値数未満であり、これは、任意で、参照単位の安全数であり、ここで、参照単位の安全数は、組換え受容体（任意でCAR）を発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での治療後に解析される対象の群に関して、有害事象を発症した群における対象内の対象へ投与された治療法の参照単位の最小数である。特定の態様において、有害事象は、重度の有害事象、任意で重度の神経毒性、任意でグレード4もしくはグレード5以上または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である。
いくつかの態様において、参照単位の標的数は、安全係数に対応する量だけ、および／または1.5〜3倍の範囲内、任意で約2倍の量だけ、または有害事象を発症しなかった（任意でグレード0〜2の神経毒性）対象の群の標準偏差の倍数である量だけ、参照単位の安全数より少なく、任意で倍数は1.5〜3倍の範囲内である。ある態様において、参照単位の標的数は、参照単位の参照有効数以上であり、参照有効数は、組換え受容体（任意でCAR）を含む治療用T細胞組成物での治療後に解析される対象の群に関して、所望の治療転帰、任意で部分奏効または完全奏効(CR)を示した群の中での1または複数の対象へ投与された治療法の単位の数である。
特定の態様において、Aは、所与の組成物中の2つ以上の表現型の、細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均である。いくつかの態様において：標的数は、アポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD3+である、CD3+である組換え受容体発現細胞の標的数であり、任意でここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3であり；または、標的数は、アポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+である、CD8+である組換え受容体発現細胞の標的数であり、任意でここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
ある態様において、（i）における細胞の標的数は、5.0×106〜2.25×107、5.0×106〜2.0×107、5.0×106〜1.5×107、5.0×106〜1.0×107、5.0×106〜7.5×106、7.5×106〜2.25×107、7.5×106〜2.0×107、7.5×106〜1.5×107、7.5×106〜1.0×107、1.0×107〜2.25×107、1.0×107〜2.0×107、1.0×107〜1.5×107、1.5×107〜2.25×107、1.5×107〜2.0×107、2.0×107〜2.25×107個、および約5.0×106〜約2.25×107、約5.0×106〜約2.0×107、約5.0×106〜約1.5×107、約5.0×106〜約1.0×107、約5.0×106〜約7.5×106、約7.5×106〜約2.25×107、約7.5×106〜約2.0×107、約7.5×106〜約1.5×107、約7.5×106〜約1.0×107、約1.0×107〜約2.25×107、約1.0×107〜約2.0×107、約1.0×107〜約1.5×107、約1.5×107〜約2.25×107、約1.5×107〜約2.0×107、約2.0×107〜約2.25×107個の組換え受容体発現細胞（各々両端の値を含む）、任意で、CD3+もしくはCD8+である、または、アポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+である、組換え受容体発現細胞であり、任意でここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
特定の態様において、（i）における細胞の標的数は、以下である：少なくともまたは少なくとも約5×106、6×106、7×106、8×106、9×106、10×106〜約15×106個の組換え受容体発現細胞（各々両端の値を含む）、任意で、CD8+である、または、アポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+である、組換え受容体発現細胞、任意でここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である；少なくともまたは少なくとも約5.55×106、6.66×106、7.77×106、8.99×106、1.0×107、1.1×107〜約1.67×107個の組換え受容体発現細胞（各々両端の値を含む）、任意で、CD8+である、または、アポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+である、組換え受容体発現細胞、任意でここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である；少なくともまたは少なくとも約6.25×106、7.5×106、8.75×106、1.0×107、1.13×107、1.25×107〜約1.9×107個の組換え受容体発現細胞（各々両端の値を含む）、任意で、CD8+である、または、アポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+である、組換え受容体発現細胞、任意でここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である；少なくともまたは少なくとも約7.14×106、8.5×106、1.0×107、1.14×107、1.29×107、1.42×107〜約2.14×107個の組換え受容体発現細胞（各々両端の値を含む）、任意で、CD8+である、または、アポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+である、組換え受容体発現細胞、任意でここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
いくつかの態様において、（i）における細胞の標的数は、少なくともまたは少なくとも約5×106、6×106、7×106、8×106、9×106、10×106〜約15×106個の、アポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり（各々両端の値を含む）、任意でここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。ある態様において、（i）における細胞の標的数は、少なくともまたは少なくとも約6.25×106、7.5×106、8.75×106、1.0×107、1.13×107、1.25×107〜約1.9×107個の、CD8+である組換え受容体発現細胞である（各々両端の値を含む）。
特定の態様において、RUの標的参照数は、単位の閾値数未満であるかまたはRUの参照安全数未満であり、ここで、RUの参照安全数は、組換え受容体（任意でCAR）を発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での治療後に解析される対象の群に関して、有害事象を発症した群における対象内の対象へ投与された治療法の参照単位の最小数である。
いくつかの態様において、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、Bは、所与の組成物中の組換え受容体依存性活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値である。ある態様において、Aおよび／またはBは、それぞれ、数または値の変換であり、ここで、変換は、対数変換、べき変換またはロジット変換を含む。特定の態様において、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、Bは、所与のT細胞組成物中のCAR-依存性活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値の倍数または変換であり、任意でここで、Bは値の対数変換である。
いくつかの態様において、対数変換は、常用対数(log10(x))、自然対数(ln(x))または二進対数(log2(x))である。ある態様において、組成物中の生存細胞の数であり、かつ／あるいは、アポトーシス性でない、初期アポトーシスもしくはアポトーシスを示す因子を示さない、アポトーシスの初期段階にない、またはアポトーシスの後期段階にない細胞の数であり、かつ／あるいは、特定の分化状態の細胞の数であり、かつ／あるいは、メモリー／幹様特質を有する細胞の数であり、あるいは、その倍数または変換である。
特定の態様において、表現型は、CD3、CD4もしくはCD8のうちの1つもしくは複数である表面マーカーの陽性発現を含み、かつ／または、組換え受容体、任意でCAR、もしくは組換え受容体の発現についての代理マーカーの陽性発現を含む。いくつかの態様において、表現型は、CD3+ CAR、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+である。ある態様において、表現型は、アポトーシスを示すかまたはアポトーシスのカスケードもしくは経路における1つもしくは複数のステップを示す因子の非存在、任意でアポトーシスのマーカーの発現の非存在を含む。特定の態様において、表現型は、アポトーシスのマーカー、任意で、初期アポトーシスまたは後期アポトーシスのマーカーの陰性発現を含む。いくつかの態様において、アポトーシスのマーカーは、表面ホスファチジルセリンであり、かつ／もしくは、アネキシンVで検出され、または、カスパーゼの活性型もしくはプロ型（proform）、任意でカスパーゼ3の活性もしくはプロ型である。ある態様において、表現型はアネキシン-を含む。
特定の態様において、表現型は、任意で抗原もしくは組換え受容体に非特異的な、かつ／または、ポリクローナル的に産生される、サイトカインのうちの1つもしくは組み合わせの産生の指標を含み、ここで、1つもしくは複数のサイトカインは、IL-2、IL-13、IL-17、IFNγまたはTNFαである。いくつかの態様において、産生の指標は、ポリクローナル薬剤、抗原特異的薬剤、または組換え受容体（任意でCAR）に結合する薬剤と共にT細胞組成物の試料をインキュベートすることを含む、アッセイ、任意で細胞内サイトカイン染色アッセイにおいて測定される。ある態様において、薬剤は、PMAおよびイオノマイシンであるかまたはこれらを含み、または、T細胞受容体もしくはT細胞受容体複合体アゴニストであるかまたはこれらを含む。特定の態様において、表現型は、活性化マーカーの陰性発現を含み、ここで、活性化マーカーは、CD25、CD127、LAG3、Ki67およびその組み合わせの中より選択される。
いくつかの態様において、表現型は、疲弊マーカーの陰性発現を含み、ここで、疲弊マーカー（exhaustion maker）は、PD1もしくはFOXP3遺伝子産物またはその組み合わせである。ある態様において、表現型は、ナイーブ表現型またはメモリー表現型を含み、任意でここで、メモリー表現型は、Tエフェクターメモリー表現型、Tセントラルメモリー表現型、またはCD45RAを発現するTエフェクターメモリー表現型(Temra)を含む。
いくつかの態様において、組換え受容体依存性活性の閾値は、参照安全値未満であり、ここで、参照安全値は、組換え受容体（任意でCAR）を発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での治療後に解析される対象の群に関して、有害事象を発症した群における対象内の対象へ投与された治療用組成物のCAR-依存性活性の最小値である。ある態様において、測定は、抗原、抗原を発現する細胞、および／または、組換え受容体（任意でCAR）へ特異的に結合する薬剤の存在下での所与の組成物またはその試料の固定時間（任意で24時間）の培養またはインキュベーションを伴うアッセイにおいて行われる。特定の態様において、アッセイはELISAである。
いくつかの態様において、因子の測定値は、（i）因子の濃度、相対濃度、量、または相対量；あるいは（ii）所与の組成物の投入細胞の1単位当たりの因子の量または相対量；あるいは（iii）時間の1単位（任意で1時間）当たり所与の組成物の投入細胞の1単位当たりの因子の量または相対量；あるいは（iv）（i）〜（iii）のいずれかを示すレベルである。ある態様において、1つまたは複数の因子は、可溶性因子の1つまたは組み合わせ、任意で、サイトカイン、ケモカインまたは可溶性受容体、任意で可溶性共刺激受容体の1つまたは組み合わせである。特定の態様において、1つまたは複数の因子は、炎症誘発性サイトカイン、Th2サイトカインおよびTh17サイトカインのうちの1つまたはこれらの組み合わせである。いくつかの態様において、1つまたは複数の因子は、IL-2、IFNγ、TNFα、IL4、IL-5、IL-10、IL-13、GM-CSF、sCD137、MIP1aおよびM1Pbのうちの1つまたはこれらの組み合わせである。ある態様において、1つまたは複数の因子は、IL-2、IFNγ、TNFαおよびIL-10のうちの1つまたはこれらの組み合わせである。特定の態様において、1つまたは複数の因子は、前述の可溶性因子の2つ以上のいずれかの組み合わせであり、パラメータは、2つ以上の因子の測定値の算術平均または幾何平均である。
いくつかの態様において、パラメータは、TNFα、IFNγおよびIL-2のうちの少なくとも2つのまたはTNFα、IFNγおよびIL-2の測定値（任意で量または濃度）の算術平均または幾何平均である。ある態様において、パラメータは、測定値の正規化値であり、ここで、正規化は、因子の参照測定値と比較された場合のものである。特定の態様において、参照測定値は、キメラ抗原受容体(CAR)を含む複数（任意で、少なくとも10、少なくとも15、少なくとも20）の参照治療用T細胞組成物の中での測定値の平均値であり、ここで：（i）参照治療用T細胞組成物の各々は、対象への投与後に許容される安全性プロファイルをもたらすことが観察または決定されており、任意で、該対象は、抗原を発現するかまたは抗原に関連する疾患または状態を有し；かつ／あるいは、（ii）参照治療用T細胞組成物の各々は、対象への投与後に所望の有効性をもたらすことが観察または決定されており、任意で、該対象は、抗原を発現するかまたは抗原に関連する疾患または状態を有する。いくつかの態様において、許容される安全性プロファイルは、観察されるグレード2以上の神経毒性の非存在またはグレード3以上の神経毒性の非存在である。ある態様において、許容される安全性プロファイルは、観察されるグレード3以上の神経毒性の非存在である。
特定の態様において、有効性は、部分奏効であるかまたは完全奏効(CR)である。いくつかの態様において、参照測定値は、治療用T細胞組成物と同じ方法によって製造されたが、組換え受容体（任意でCAR）を発現しない、抗原を特異的に認識しないかつ／またはいかなる組換え受容体（任意でいかなるCAR）も発現しない、参照T細胞組成物中の因子の、同じアッセイによる、測定値である。ある態様において、パラメータは、1つまたは複数の因子の測定値の患者特異的変動を制御するために正規化される。
特定の態様において、パラメータは、対照因子の、同じアッセイにおける同じ測定値と比較される、因子の測定値の正規化値であり、ここで、治療用T細胞組成物中の対照因子のレベルは、有害事象もしくは毒性転帰またはその可能性もしくは危険性を示さないまたはこれらと相関しないもしくは有意に相関しないことが、公知であるかまたは観察されており、ここで、有害事象または毒性転帰は、任意で重度の神経毒性である。いくつかの態様において、対照因子は、T細胞組成物の投与後に有害事象を発症した複数の対象の中で、有害事象の発症と統計的に相関しないかつ／または相関しない因子であり、任意で、対照因子は、IL-5、IL-13、GM-CSF、およびIL-6のうちの1つもしくはこれらの組み合わせであるかまたはこれらを含み、任意でここで、対照因子の測定値は、前述のもののうちの2つ以上の算術平均または幾何平均である。
ある態様において、パラメータは、細胞溶解活性またはその測定値を含まない。特定の態様において、パラメータは、組換え受容体依存性もしくは抗原特異的細胞溶解活性またはその測定値を含まない。いくつかの態様において、表現型は、CD8+ CAR+細胞またはアポトーシス性マーカー - CD8+ CAR+細胞であり、任意でここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3であり；かつ、パラメータは、炎症誘発性サイトカインの測定値であり、これは、任意で、TNFα、IL-2、およびIFNγのうちの1つまたはこれらの組み合わせであり、またはその正規化値である。
ある態様において、有害事象はグレード4または5の神経毒性であり、かつ、単位の閾値数は：Aがアポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、1.75×107であるかまたは約1.75×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、2.19×107であるかまたは約2.19×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、1.25×107であるかまたは約1.25×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、1.56×107であるかまたは約1.56×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、1.5×107であるかまたは約1.5×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、1.88×107であるかまたは約1.88×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、1.5×107であるかまたは約1.5×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、1.88×107であるかまたは約1.88×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.0×107であるかまたは約2.0×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.5×107であるかまたは約2.5×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、1.25×107であるかまたは約1.25×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、1.56×107であるかまたは約1.56×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、1.75×107であるかまたは約1.75×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.19×107であるかまたは約2.19×107であり、任意でここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
特定の態様において、有害事象はグレード4または5の神経毒性であり、かつ、標的参照単位の所定の範囲は：Aがアポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、2.0×105〜1.75×107または約2.0×105〜約1.75×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、2.5×105〜2.19×107または約2.5×105〜約2.19×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、4×105〜1.25×107または約4×105〜約1.25×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、5×106〜1.56×107または約5×106〜約1.56×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、2.0×105〜1.5×107または約2.0×105〜約1.5×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、2.5×105〜1.88×107または約2.5×105〜約1.88×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、3.0×105〜1.5×107または約3.0×105〜約1.5×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、3.75×105〜1.88×107または約3.75×105〜約1.88×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.0×105〜2.0×107または約3.0×105〜約2.0×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.75×105〜2.5×107または約3.75×105〜2.5×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、4.0×105〜1.25×107または約4.0×105〜約1.25×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、5.0×105〜1.56×107または約5.0×105〜約1.56×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、4.0×105〜1.75×107または約4.0×105〜約1.75×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、5.0×105〜2.19×107または約5.0×105〜約2.19×107（両端の値を含む）であり、任意でここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
いくつかの態様において、有害事象は少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性であり、かつ、単位の閾値数は：Aがアポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、1.0×106であるかまたは約1.0×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、1.25×106であるかまたは約1.25×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、2.0×106であるかまたは約2.0×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、3.0×106であるかまたは約3.0×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、3.75×106であるかまたは約3.75×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、1.5×106であるかまたは約1.5×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、1.88×106であるかまたは約1.88×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.12×106であるかまたは約3.12×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.0×106であるかまたは約3.0×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.75×106であるかまたは約3.75×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.0×106であるかまたは約2.0×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり、任意でここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
ある態様において、有害事象は少なくとも長期にわたるグレード3であり、かつ、標的参照単位の所定の範囲は：Aがアポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、3.0×105〜1.0×106または約3.0×105〜約1.0×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、3.75×105〜1.25×106または約3.75×105〜約1.25×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、4×105〜2.0×106または約4×105〜約2.0×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、5×106〜2.5×106または約5×106〜約2.5×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、2.0×105〜3.0×106または約2.0×105〜約3.0×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、2.5×105〜3.75×106または約2.5×105〜約3.75×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、3.0×105〜1.5×106または約3.0×105〜約1.5×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、3.75×105〜1.88×106または約3.75×105〜約1.88×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.0×105〜2.5×106または約3.0×105〜約2.5×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.75×105〜3.12×106または約3.75×105〜約3.12×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、4.0×105〜3.0×106または約4.0×105〜約3.0×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、5.0×105〜3.75×106または約5.0×105〜約3.75×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、4.0×105〜2.0×106または約4.0×105〜約2.0×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、5.0×105〜2.5×106または約5.0×105〜約2.5×106（両端の値を含む）であり、任意でここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
特定の態様において、治療用T細胞組成物は、約1000万個の細胞／mL〜約7000万個の細胞／mLまたは約1000万個の生存細胞／mL〜約7000万個の生存細胞／mL（各々両端の値を含む）を含む。いくつかの態様において、治療用T細胞組成物は、約1500万個の細胞または生存細胞／mL〜約6000万個の細胞または生存細胞／mL（各々両端の値を含む）を含む。ある態様において、T細胞組成物は、1000万個を超える細胞または生存細胞／mLを含む。特定の態様において、治療用T細胞組成物は、1500万個を超える細胞または1500万個を超える細胞／mLを含む。いくつかの態様において、組成物は凍結保護剤をさらに含み、かつ／または、物品は、対象への投与前に組成物を解凍するための説明書をさらに含む。
ある態様において、疾患または状態は、がん、任意で、骨髄腫、リンパ腫または白血病である。特定の態様において、疾患または状態はB細胞悪性腫瘍であり、任意で、B細胞悪性腫瘍は、急性リンパ芽球性白血病(ALL)、成人ALL、慢性リンパ芽球性白血病(CLL)、非ホジキンリンパ腫(NHL)、およびびまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)からなる群より選択される。いくつかの態様において、抗原は、αvβ6インテグリン(avb6インテグリン)、B細胞成熟抗原(BCMA)、B7-H3、B7-H6、炭酸脱水酵素9 (CA9、CAIXまたはG250としても公知)、がん-精巣抗原、がん/精巣抗原1B (CTAG、NY-ESO-1およびLAGE-2としても公知)、がん胎児性抗原(CEA)、サイクリン、サイクリンA2、C-Cモチーフケモカインリガンド1 (CCL-1)、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD123、CD138、CD171、上皮成長因子タンパク質(EGFR)、切断型上皮成長因子タンパク質(tEGFR)、III型上皮成長因子受容体突然変異（type III epidermal growth factor receptor mutation）(EGFR vIII)、上皮糖タンパク質2 (EPG-2)、上皮糖タンパク質40 (EPG-40)、エフリンB2、エフリン受容体A2 (EPHa2)、エストロゲン受容体、Fc受容体様5 (FCRL5；Fc受容体ホモログ5またはFCRH5としても公知)、胎児アセチルコリン受容体(胎児AchR)、葉酸結合タンパク質(FBP)、葉酸受容体α、ガングリオシドGD2、O-アセチル化GD2 (OGD2)、ガングリオシドGD3、糖タンパク質100 (gp100)、Gタンパク質共役型受容体5D (GPCR5D)、Her2/neu (受容体チロシンキナーゼerb-B2)、Her3 (erb-B3)、Her4 (erb-B4)、erbB二量体、ヒト高分子量メラノーマ関連抗原(HMW-MAA)、B型肝炎表面抗原、ヒト白血球抗原A1 (HLA-A1)、ヒト白血球抗原A2 (HLA-A2)、IL-22受容体α(IL-22Ra)、IL-13受容体α2 (IL-13Ra2)、キナーゼ挿入ドメイン受容体(kdr)、カッパ軽鎖、L1細胞接着分子(L1-CAM)、L1-CAMのCE7エピトープ、ロイシンリッチリピート含有8ファミリーメンバーA (LRRC8A)、ルイスY、メラノーマ関連抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、メソテリン、c-Met、マウスサイトメガロウイルス(CMV)、ムチン1 (MUC1)、MUC16、ナチュラルキラーグループ2メンバーD (NKG2D)リガンド、メランA (MART-1)、神経細胞接着分子(NCAM)、腫瘍胎児抗原、メラノーマ優先発現抗原(PRAME)、プロゲステロン受容体、前立腺特異抗原、前立腺幹細胞抗原(PSCA)、前立腺特異的膜抗原(PSMA)、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体1 (ROR1)、サバイビン、栄養膜糖タンパク質(TPBG、5T4としても公知)、腫瘍関連糖タンパク質72 (TAG72)、血管内皮増殖因子受容体(VEGFR)、血管内皮増殖因子受容体2 (VEGFR2)、ウィルムス腫瘍1 (WT-1)、病原体特異的抗原、またはユニバーサルタグと関連する抗原、および／またはビオチン化分子、および／またはHIV、HCV、HBVもしくは他の病原体によって発現される分子である。受容体によって標的化される抗原は、いくつかの態様において、B細胞悪性腫瘍に関連する抗原、例えば、多数の公知のB細胞マーカーのいずれかを含む。いくつかの態様において、抗原は、CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79bまたはCD30であるかまたはこれらを含む。
特定の態様において、物品は、容器が単位の標的数を含有することを示す情報をさらに含有する。いくつかの態様において、容器は第1の容器であり、物品は追加の容器をさらに含み、ここで、追加の容器の各々は、T細胞組成物の単位の標的数を含む単位用量を含む。ある態様において、追加の容器は、約1000万個の細胞または生存細胞／mL〜約7000万個の細胞または生存細胞／mL、約1500万個の細胞または生存細胞〜約6000万個の細胞または生存細胞／mL（各々両端の値を含む）、1000万個を超える細胞または生存細胞／mL、1500万個を超える細胞または生存細胞／mL、またはその組み合わせを含む。特定の態様において、単位用量は、アネキシンVでの検出についてまたはカスパーゼ3の活性型もしくはプロ型について陰性である、多くとも15×106の数のCD8+CAR+細胞を含有する。いくつかの態様において、単位用量は、CARについて陽性のある数のCD4+細胞をさらに含み、該数は、1:1または約1:1のCD8+CAR+細胞の比でのものである。
ある態様において、T細胞組成物は、プロセスによって製造され、
生物学的に活性な細胞の特徴および／またはアポトーシスまたはアポトーシスの初期もしくは後期段階の非存在を示す表現型の細胞の、(1)組成物中のCAR+細胞中での頻度、(2)組成物中のCAR+CD3+細胞中での頻度、および／または(3)組成物中のCAR+CD8+細胞中での頻度が、プロセスによって製造された複数のT細胞組成物中の該頻度の平均値とは、多くとも40％、または多くとも30％、または多くとも20％、または多くとも10％、または多くとも5％だけ異なり、かつ／または、多くとも1標準偏差だけそのような平均値と異なり；あるいは
アポトーシスまたはアポトーシスの初期もしくは後期段階の非存在を示す表現型の細胞の組成物中の、(1)組成物中のCAR+細胞中での頻度、(2)組成物中のCAR+CD3+細胞中での頻度、および／または(3)組成物中のCAR+CD8+細胞中での頻度が、プロセスによって製造された複数のT細胞組成物の中で、多くとも40％または多くとも20％または多くとも10％だけ異なる。
特定の態様において、プロセスは以下を含む：
（a）T細胞を含む細胞の集団を、組換え受容体をコードする核酸分子を含む薬剤と共に、集団中の細胞中へ組換え受容体をコードする核酸を導入するための条件下で、インキュベートする工程；および
（b）該インキュベーション前、中および／または後に、細胞を刺激する工程であって、刺激が、細胞の一次シグナル、シグナル伝達、刺激、活性化および／または増大を誘導する刺激条件の存在下で、細胞をインキュベートすることを含む、工程。いくつかの態様において、プロセスは、（a）の前に、生物学的試料から細胞の集団を単離する工程をさらに含む。ある態様において、単離は、任意で正または負の選択によって、CD3の表面発現に基づいてまたはCD4およびCD8の一方もしくは両方の表面発現に基づいて細胞を選択することを含む。
いくつかの態様において、生物学的試料は、全血試料、バフィーコート試料、末梢血単核細胞(PBMC)試料、未分画T細胞試料、リンパ球試料、白血球試料、アフェレーシス生成物、または白血球アフェレーシス生成物であるかまたはこれらを含む。
ある態様において、刺激条件は、TCR複合体の1つもしくは複数の成分の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、および／または、1つもしくは複数の共刺激分子の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる刺激試薬と共のインキュベーションを含む。
特定の態様において、刺激試薬は、TCR複合体のメンバーへ特異的に結合する一次薬剤、およびT細胞共刺激分子へ特異的に結合する二次薬剤を含む。いくつかの態様において、一次薬剤は、CD3へ特異的に結合し、かつ／または、共刺激分子は、CD28、CD137 (4-1-BB)、OX40、またはICOSからなる群より選択される。ある態様において、一次および二次薬剤は、抗体を含み、かつ／または、固体支持体（任意でビーズ）の表面上に存在する。
特定の態様において、
刺激試薬は、組換え受容体依存性活性または抗原特異的活性、任意で、炎症誘発性サイトカインの組換え受容体依存性または抗原特異的依存性産生または蓄積が、刺激試薬を使用するプロセスによって製造された複数のT細胞組成物の中での炎症誘発性サイトカインの産生または蓄積の測定値の平均値とは、多くとも40％、または多くとも30％、または多くとも20％、または多くとも10％、または多くとも5％だけ異なり、かつ／または、多くも1標準偏差だけそのような平均値と異なることが決定された、刺激試薬であり；かつ／あるいは
刺激試薬は、組換え受容体依存性活性または抗原特異的活性、任意で、炎症誘発性サイトカインの組換え受容体依存性または抗原特異的依存性産生または蓄積が、プロセスによって製造された複数のT細胞組成物の中で、多くとも40％、または多くとも30％、または多くとも20％、または多くとも10％、または多くとも5％だけ異なることが決定された、刺激試薬であり；かつ／あるいは
刺激試薬は、刺激試薬を使用して製造された細胞組成物の、組換え受容体依存性活性または抗原特異的活性、任意で、炎症誘発性サイトカインの組換え受容体依存性または抗原特異的依存性産生または蓄積が、対照組成物とは多くとも40％、多くとも30％、多くとも20％、または多くとも10％、または多くとも5％だけ異なることが決定された、刺激試薬であり、ここで、対照組成物および細胞組成物は、対照組成物が組換え受容体依存性活性の標準単位または対照刺激試薬の存在下で行われる以外は、同じ細胞集団由来を含む、同じプロセスを使用して製造される。いくつかの態様において、対照刺激試薬は、プロセスにおいて用いられる場合、組換え受容体依存性活性または抗原特異的活性が変動の許容範囲内にあるT細胞組成物を製造することが既知である。
ある態様において、約1000万個の細胞〜約7000万個の細胞／mL（両端の値を含む）の濃度までの、T細胞組成物の全部または一部、および任意で別の溶液を容器に充填する。特定の態様において、容器に別の溶液を充填し、溶液は、凍結保護剤、任意でDMSOを含む。いくつかの態様において、濃度は、約1500万〜約6000万個の細胞／mL（両端の値を含む）である。ある態様において、濃度は、1000万個の細胞／mLを超える。特定の態様において、濃度は、1500万個の細胞／mLを超える。いくつかの態様において、DMSOの濃度は、7.5％であるかまたは約7.5％であるかまたは多くとも7.5％である。ある態様において、濃度は、6000万個の細胞／mL（per m）を超える。特定の態様において、DMSOの濃度は、7.5％を超え、任意で7.5％〜9.0％または約7.5％〜約9.0％（両端の値を含む）である。
いくつかの態様において、充填は、自動化方式で、任意で閉鎖系において、行われる。ある態様において、調節された単位用量は、組換え受容体（任意でCAR）を発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物で治療される対象の群の平均単位用量より少なく、任意で、1.5倍より少なく、2倍より少なく、3倍より少なく、4倍より少ない。特定の態様において、T細胞組成物の試料、任意で凍結保存試料が、対象へのT細胞組成物の投与後に評価される。いくつかの態様において、BがUSLを上回る場合、対象は、毒性の危険性があると決定される。ある態様において、BがUSLを上回る場合、組成物が投与される対象は、細胞組成物の投与後に、かつ、任意で、毒性転帰の徴候または症状の発症前に、毒性転帰またはサイトカイン放出症候群の可能性を改善または低減するために、モニターされかつ／または薬剤で処置される。
抗CD19 CAR発現細胞を含有するT細胞組成物の投与後の異なる時点でのCAR+細胞/μL血液の濃度を表示するグラフを示す。データは、グレード3以下(星印)、グレード4 (五角形)、またはグレード5 (円)の神経毒性を発症した対象について示される。 抗CD19 CAR発現細胞を含有するT細胞組成物の投与後の異なる時点でのCAR+細胞/μL血液の濃度を表示するグラフを示す。データは、グレード2以下(正方形)、グレード3 (星印)、長期にわたるグレード3 (菱形)、グレード4 (五角形)、またはグレード5 (矢印を伴う円)の神経毒性を発症した対象について示される。 図3A〜3Vは、抗CD19 CARを発現する細胞を含有する細胞組成物の種々のパラメータを定量化する箱ひげ図を示す。左側の箱ひげ図は、グレード4以下の神経毒性を発症した対象に由来する細胞組成物の測定値と、グレード5の神経毒性を発症した対象に由来する細胞組成物の測定値とを比較する。右側の箱ひげ図は、完全奏効(CR)を経験した対象に由来する細胞組成物の測定値と、奏効を経験しなかった(NR)対象に由来する細胞組成物の測定値とを比較する。奏効が不明の対象に由来する細胞組成物の測定値もこの箱ひげ図に示される(NA)。図3Aの箱ひげ図は、対象へ投与したCD8+CAR+アポトーシス性マーカー陰性細胞の総数の測定値を示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Bの箱ひげ図は、投与した用量中の内部サイトカイン染色(ICS)によるPMA/イオノマイシン後のIL-13について陽性のCD8+CAR+細胞のパーセンテージを示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Cの箱ひげ図は、投与したCD8+CAR+アポトーシス性マーカー(アネキシンV)陰性細胞の数/kgを示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Dの箱ひげ図は、CD127+について陽性のCD4+CAR+細胞のパーセンテージを示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Eの箱ひげ図は、注入された細胞の総数/kgを示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Fの箱ひげ図は、ICSによるPMA/イオノマイシン後のIL-13について陽性のCD4+CAR+細胞のパーセンテージを示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Gの箱ひげ図は、投与したCD8+CAR+細胞中でのアポトーシス性マーカー(アネキシンV)陽性細胞の頻度を示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Hの箱ひげ図は、QPCRによるFOXP3のレベルを示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Iの箱ひげ図は、投与したCD3+CAR+アポトーシス性マーカー(アネキシンV)陰性細胞の総数を示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Jの箱ひげ図は、投与したCD3+CAR+アポトーシス性マーカー(アネキシンV)陰性細胞の数/kgを示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Kの箱ひげ図は、凍結保存薬物製品(CDP)の生存細胞濃度を示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Lの箱ひげ図は、注入された総細胞を示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Mの箱ひげ図は、CD4+CAR+細胞中のIL2のICSを示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Nの箱ひげ図は、投与したCD3+CAR+細胞中でのアポトーシス性マーカー(アネキシンV)陽性細胞の頻度を示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Oの箱ひげ図は、CD4+細胞当たりのFOXP3+細胞の頻度を示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Pの箱ひげ図は、CD3+細胞の頻度を示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Qの箱ひげ図は、投与したCD8+CAR+細胞の数/kgを示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Rの箱ひげ図は、総細胞当たりの非抗原/CAR特異的IL-10産生(CD3/28刺激)を示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Sの箱ひげ図は、CD4+CAR+細胞のTNFαのICSを示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Tの箱ひげ図は、CD8+CAR+細胞のTNFαのICSを示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Uの箱ひげ図は、総細胞当たりの非抗原/CAR特異的IL-6産生(CD3/28刺激)を示す。 図3Aの説明を参照のこと。図3Vの箱ひげ図は、投与したCD3+CAR+細胞の数/kgを示す。 抗CD19 CARを発現する細胞を含有する細胞組成物による、CD19での刺激後のTNFα産生を定量化する箱ひげ図を示す。左側の箱ひげ図は、グレード4以下の神経毒性を発症した対象に由来する細胞組成物の測定値と、グレード5の神経毒性を発症した対象に由来する細胞組成物の測定値とを比較する。右側の箱ひげ図は、CRを経験した対象に由来する細胞組成物の測定値と、NRを経験した対象に由来する細胞組成物の測定値とを比較する。奏効が不明の対象に由来する細胞組成物の測定値もこの箱ひげ図に示される(NA)。 図5Aおよび5Bは、抗CD19 CARを発現する細胞を含有する細胞組成物による、CD19での刺激後のサイトカイン産生を定量化する箱ひげ図を示す。左側の箱ひげ図は、グレード4以下の神経毒性を発症した対象に由来する細胞組成物の測定値と、グレード5の神経毒性を発症した対象に由来する細胞組成物の測定値とを比較する。右側の箱ひげ図は、CRを経験した対象に由来する細胞組成物の測定値と、NRを経験した対象に由来する細胞組成物の測定値とを比較する。奏効が不明の対象に由来する細胞組成物の測定値もこの箱ひげ図に示される(NA)。図5Aの箱ひげ図は、抗原刺激されたIL-2産生を示す。 図5Aの説明を参照のこと。図5Bの箱ひげ図は、抗原刺激されたIFNγ産生を示す。 投与した用量中のアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数および抗原刺激されたTNFα産生の二次元散布図を示す。グレード4以下(円)またはグレード5の神経毒性(三角形)を発症した対象に由来する細胞組成物からのデータポイントを、図6Aに示す。 投与した用量中のアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数および抗原刺激されたTNFα産生の二次元散布図を示す。グレード0〜2、3、長期にわたる3 (3p)、4、および5の神経毒性を発症した対象に由来する細胞組成物からのデータポイントを、図6Bに示す。図6Bにおいて、グレード5の神経毒性を発症し、かつ、シクロホスファミド(CY)またはフルダラビンおよびシクロホスファミド(Flu/CY)でのリンパ球枯渇化学療法を受けた、対象に関連するデータポイントを示す。楕円は、対象がグレード5の神経毒性または脳水腫を示さなかった臨床研究から評価された11個の例示的な細胞組成物の大多数についてのこれらのパラメータについての範囲を示す。 投与した用量中のアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数および抗原刺激されたTNFα産生の二次元散布図を示す。グレード4以下(正方形および円)またはグレード5の神経毒性(三角形)を発症した対象に由来する細胞組成物からのデータポイントを示す。追加の臨床研究の対象から誘導された細胞組成物を示す(正方形)。 異なるグレードの神経毒性を発症した対象についての、投与したアポトーシスマーカー (アネキシンV)- CD8+CAR+細胞の数×TNFα産生の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 異なる奏効を有する対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数×TNFα産生の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 異なるグレードの神経毒性を発症した対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数×IFNγ産生の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 異なる臨床奏効を有する対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数×IFNγ産生の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 異なるグレードの神経毒性を発症した対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数×IL-2産生の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 異なる臨床奏効を有する対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数×IL-2産生の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 異なるグレードの神経毒性を発症した対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数(A)×正規化TNFα産生(B)の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 図14A-1の説明を参照のこと。 異なる奏効を有する対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数(A)×正規化TNFα産生(B)の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 異なるグレードの神経毒性を発症した対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数(A)×正規化IFNγ産生(B)の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 図15A-1の説明を参照のこと。 異なる奏効を有する対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数(A)×正規化IFNγ産生(B)の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 異なるグレードの神経毒性を発症した対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数(A)×正規化IL-2産生(B)の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 図16A-1の説明を参照のこと。 異なる奏効を有する対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数(A)×正規化IL-2産生(B)の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 異なるグレードの神経毒性を発症した対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシンV)- CD8+CAR+細胞の数(A)×正規化TNFαおよびIFNγ産生(B)の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 図17A-1の説明を参照のこと。 異なる奏効を有する対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシンV)- CD8+CAR+細胞の数(A)×正規化TNFαおよびIFNγ産生(B)の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 異なるグレードの神経毒性を発症した対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数(A)×正規化TNFαおよびIL-2産生(B)の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 図18A-1の説明を参照のこと。 異なる奏効を有する対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシンV-) CD8+CAR+細胞の数(A)×正規化TNFαおよびIL-2産生(B)の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 異なるグレードの神経毒性を発症した対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシン-) CD8+CAR+細胞の数(A)×正規化IFNγおよびIL-2産生(B)の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 図19A-1の説明を参照のこと。 異なる奏効を有する対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシン-) CD8+CAR+細胞の数(A)×正規化IFNγおよびIL-2産生(B)の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 異なるグレードの神経毒性を発症した対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシン-) CD8+CAR+細胞の数(A)×正規化TNFα、IFNγ、およびIL-2産生(B)の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 図20A-1の説明を参照のこと。 異なる奏効を有する対象についての、投与したアポトーシスマーカー-(アネキシン-) CD8+CAR+細胞の数(A)×正規化TNFα、IFNγ、およびIL-2産生(B)の、個々のデータポイントを表示するグラフを示す。 実施例1に記載されるプロセス(A)および実施例2に記載される代替プロセス(B)によって製造された抗CD19 CAR+細胞を含有する組成物由来の細胞の表現型を表示するグラフを示す。図21Aは、CD8+CAR+細胞中でのアポトーシスマーカー-(アネキシンV-)細胞のパーセンテージを表示する箱ひげ図を示す。 実施例1に記載されるプロセス(A)および実施例2に記載される代替プロセス(B)によって製造された抗CD19 CAR+細胞を含有する組成物由来の細胞の表現型を表示するグラフを示す。図21Bは、例示的なプロセスAおよび例示的なプロセスBによって製造された細胞組成物について、投与したアネキシン陰性CD8+CAR+細胞およびサイトカイン産生についての個々の細胞組成物の値を表示するグラフを示す。影付きの箱は、観察された分布を示す。 グレード0〜2またはグレード3〜5の神経毒性を発症した対象へ投与したCD3+CAR+細胞の数/kg (×106細胞/kg)の個々のデータポイントを示す。 抗CD19 CARを発現する細胞を含有するT細胞組成物を比較する箱ひげ図を示す。図23Aおよび23Bは、製造中の異なるロットからの同じ試薬で処理されたものを含有するT細胞組成物を比較する箱ひげ図を示す。図23Aは、細胞による、CD19での刺激後のTNFα産生を定量化する。図23Bは、CD8+CAR+細胞中でのCD27+/CD28+細胞の頻度を表示する。0〜2 (正方形)、3 (矢印を伴う星印)、長期にわたる3 (3p; 菱形)、4 (矢印を伴う五角形)、および5 (円)の神経毒性グレードに関連するT細胞組成物からのデータポイントを示す。 図23Aの説明を参照のこと。 抗CD19 CARを発現する細胞を含有するT細胞組成物を比較する箱ひげ図を示す。図23Cは、異なる条件下で貯蔵された同じ培地で作製された抗CD19 CARを発現する細胞を含有するT細胞組成物中における、CD19発現細胞での刺激後のTNFα産生を示す。 実施例8に記載されるCAR T細胞を含有する操作細胞組成物を作製するためのプロセスの異なる段階でのCD4+およびCD8+細胞について濃縮されたT細胞組成物のT細胞純度を表示する箱ひげ図を示す。組成物中のCD4+およびCD8+細胞の頻度(総白血球に対する％)を示す。 用量レベル1 (DL1)および用量レベル2 (DL2)での個々の用量中のCD3+ T細胞のレベルを描写するグラフを示す。 高または低量製剤中にCAR-T細胞を含有する治療用細胞組成物のカスパーゼ-3陰性CD4+およびCD8+ T細胞の濃度、生存性、および頻度を表示する箱ひげ図を示す。 注入されたCAR T細胞を含有する個々の治療用細胞組成物の制御された用量、T細胞表現型、および細胞特異的機能を表示するグラフを示す。個々の対象へ注入されたCD4+CAR+、CD8+CAR+、CD4+CAR+TNFα、CD8+CAR+TNFα、CD4+CAR+CCR7+、CD8+CAR+CCR7+の量のデータポイントを示す。 以下を表示するグラフを示す：（i）多数の個々の対象の各々について、枠で囲まれていない個々のドットは、ピークでの最大PK測定値（CAR+ T細胞数/μL血液（PK測定値））を示す（個々の対象間に基づいて；抗CD19 CAR発現T細胞組成物での対象の治療後にCAR+ T細胞数を評価した時点中での、CAR+ T細胞の最も高い数が測定された時点）（ドットはまた、各対象について観察された神経毒性の最も高いグレードを示す：グレード0〜2 (正方形)、グレード3 (星印)、長期にわたるグレード3 (菱形)、グレード4 (矢印を伴う五角形)、またはグレード5 (円) の神経毒性）；ならびに（ii）そのようなT細胞組成物の投与前および後の様々な示される時点での血清中のIL-15 (ピコグラム/mL)の初期または後期CAR+ T細胞ピーク（それぞれ、範囲バーを伴う枠で囲まれたドットを有する上および下の線によって示される）を有したとみなされるそのような患者のものについての、レベル中央値。楕円は、他の対象と比較した場合の、CAR-T細胞の早期の急速な増大が観察された対象を示す。
詳細な説明
本願において言及された、特許文書、科学文献、およびデータベースを含む刊行物は全て、それぞれ個々の刊行物が個々に参照により組み入れられるのと同じ程度に、全ての目的のためにその全体が参照により組み入れられる。本明細書において示された定義が、参照により本明細書に組み入れられる特許、出願、公開された出願、および他の刊行物に示された定義と相違するか、または他の点で一致しない場合、参照により本明細書に組み入れられる定義ではなく、本明細書において示された定義が優先される。
本明細書において用いられるセクションの見出しは、系統立ててまとめることだけを目的とし、説明された対象を限定すると解釈してはならない。
I．毒性の危険性を低下させるための治療用T細胞組成物中の用量および用量決定
様々な腫瘍を含む、疾患および状態の治療のための操作T細胞療法のような、細胞療法に関して使用されるための方法、組成物、および製造物品を、本明細書に提供する。提供される態様は、疾患または状態に関連する分子を認識しかつ／またはこれへ特異的に結合し、応答をもたらす、例えば、そのような分子へ結合するとそのような分子に対する免疫反応をもたらすように設計された組換え受容体を発現するなど、組換えタンパク質を発現するように操作されたものような、操作T細胞を含有する治療用T細胞組成物に関する。受容体は、キメラ受容体、例えば、キメラ抗原受容体(CAR)、および他のトランスジェニック抗原受容体、例えば、トランスジェニックT細胞受容体(TCR)を含み得る。
提供される態様は、いくつかの局面において、治療用T細胞組成物の機能または活性、例えば、抗原特異的または組換え受容体依存性活性に関するあるパラメータが、T細胞組成物が投与された対象において、有害事象または毒性、例えば重度の神経毒性を発症する可能性の危険性を予測し得、かつ／または、治療用T細胞組成物の効力についての情報を提供し得る、局面に関する。提供される態様の局面はまた、治療用T細胞組成物の投薬に関して使用されるためのものを含む、ある表現型（例えば、生物学的に活性な細胞または細胞集団を示す表現型）の細胞の数と、治療用T細胞組成物中に存在する細胞の機能または活性（例えば、抗原特異的または組換え受容体依存性活性）との関数である、単位のある数、例えば単位の標的数、を含有する単位用量を投与または提供することに関する。いくつかの局面において、提供される方法は、T細胞組成物の効力を保証しながら、治療用T細胞組成物の用量が投与される対象における毒性の危険性を改善または低減することができる。細胞を含有し、そのような投薬レジメンに従う投与について設計された、製造物品も提供する。
いくつかの態様において、提供される方法、用量、単位用量、組成物、および製造物品は、細胞療法の適切な用量を決定しかつ／または療法用の細胞組成物をリリースする場合に、あるパラメータおよびそれらの組み合わせを考慮に入れることが、有利であり得るという観察に基づく。ある利用可能な方法において、用量は、特定の細胞タイプ、例えば、特定の活性を示すように操作された細胞タイプ、例えば、操作受容体について陽性である細胞タイプ、の数に基づく。例えば、ある利用可能な方法および用量において、用量は、生存する操作T細胞の、またはそのサブセットの、例えば、生存する細胞傷害性（例えば、CD8+）操作T細胞の数（または患者体重当たりの数）の間の観察されたまたは疑われる関係に基づく。様々な状況において、そのような数は、有効性および／または安全性転帰、例えば、奏効ならびに／または神経毒性(NTx)、脳水腫およびCRSなどの毒性の危険性と関係があり得る。それにもかかわらず、そのようなメトリクスは、いくつかの状況において、特に他の変数を考慮に入れず、毒性の、例えば重度の神経毒性または脳水腫の、危険性を一貫して十分に予測しないという観察に基づく態様を、本明細書に提供する。従って、そのようなメトリクスのみに頼る、用量を規定しそしてリリースについて製品を評価するためのアプローチは、完全には満足ではない場合がある。例えば、そのようなアプローチは、いくつかの状況において、安全かつ有効な細胞療法について、適切な安全域および／または治療濃度域を規定しない場合がある。そのような欠点に取り組む方法（治療、投薬、用量決定、および放出アッセイ方法を含む）、ならびに用量および治療用組成物を、本明細書に提供する。
いくつかの局面において、ある製品特異的特質および臨床または患者特異的因子が、細胞療法の投与後に毒性を発症する危険性、相対的危険性または確率に影響を与え得ることが、本明細書において見出される。いくつかの場合において、そのような製品特異的および／または患者特異的特質の可変性は、対象の群内の異なる個体へ投与される治療用細胞組成物の用量の特質、および／または、そのような投与後にそのような異なる個体において観察される転帰における可変性をもたらし得る。いくつかの局面において、そのような可変性は、様々な個々の対象へ投与される用量の一定の類似性にもかかわらず観察され、例えば、ここで、投与される用量または組成物は、同じ操作受容体（例えばキメラ抗原受容体）を発現するように操作された細胞を含有し、同じベクターを含有するかまたはこれで形質導入もしくはトランスフェクトされ；いくつかの局面において、異なる対象へ投与される異なる用量または組成物は、同じ数（または対象の体重もしくは他の特徴当たりの数）の細胞（または特定の表現型の細胞）を含むかまたはこれらを含有するかまたはこれらからなる。いくつかの局面において、細胞組成物の1つまたは複数の特質の可変性を制御することは、そのような危険性を最小化することができ、かつ／または、用量または転帰の特質におけるそのような可変性を最小化することができる。いくつかの局面において、特定の療法が投与される対象にわたる、1つまたは複数の製品または組成物特質の変動の程度などの可変性を最小化または制御すること（または一貫性を増加させること）は、そうでなければそのような転帰または用量特質に影響を与えるであろう患者特異的因子または臨床因子の可変性を有する患者間で、転帰または用量特質の可変性の影響を最小化することができる。例えば、いくつかの局面において、製品または組成物特質（複数可）における可変性を低減させることは、例えば、特定の奏効または臨床転帰を達成する可能性を低減させるまたは実質的に低減させることなく、対象または対象の集団が、治療関連毒性、例えば、神経毒性または脳水腫またはそのグレードを発症する危険性または可能性における可変性を低減させることができ、またはこれらを低減させることができる。いくつかの場合において、臨床または患者特異的因子を説明する可変性の低減は、細胞療法の投与後に、毒性、例えば神経毒性または脳水腫を発症する危険性を最小化し得る。
いくつかの局面において、細胞組成物の単位用量間での可変性は、操作細胞療法の作製または製造において用いられる製造プロセスの1つまたは複数の局面に起因し得る。いくつかの場合において、原材料またはその取り扱いもしくは貯蔵に対する変更は、毒性の危険性および／または転帰に影響を与えることが本明細書において観察された変数に影響を与え得る。いくつかの局面において、原材料のロット間可変性もしくは貯蔵／取り扱いおよび／または多数の対象にわたって行われるプロセス間での異なる原材料の使用は、作製される細胞組成物のある局面に、可変性の増加または増加もしくは減少によってなど、影響を与え得、例えば、局面は、変えられる場合、細胞療法が投与される対象間で、特に、ある患者特異的特質が異なるそのような対象間で、毒性危険性または臨床転帰の可変性をもたらし得る。いくつかの態様において、（例えば、任意のもしくは全ての）原材料（複数可）、ロット（複数可）、試薬（複数可）またはそれらの貯蔵もしくは取り扱い、またはそれらに対する変更の結果としての、1つまたは複数のそのような製品特質または危険性もしくは可能性における可変性に対する潜在的な影響についての評価、試験、および／または制御を伴うアプローチを提供する。いくつかの態様において、そのようなアプローチは、対象へ投与される細胞組成物の製造においてまたはそのような投与前に、そのような原材料、ロット、貯蔵もしくは取り扱いの使用前に行われるアッセイなどのアッセイを含む。いくつかの局面において、アッセイは、細胞組成物中の1つまたは複数の特質、例えば、毒性の危険性もしくは転帰に影響を与えることまたはそのような転帰の患者間での可変性の影響を悪化させることが本明細書において観察された特質に対する、原材料、ロット、変更、または取り扱いもしくは貯蔵方法の影響を評価する。いくつかの局面において、アッセイは、別の材料、ロット、または貯蔵もしくは取り扱い方法と比較して、許容可能に低い程度の変動かどうか、または、そのような1つまたは複数の特質に対して、許容可能に低い影響かどうかを評価する。いくつかの局面において、原材料、ロット、または貯蔵もしくは取り扱いのための方法は、アッセイがそのような変動または影響が許容範囲または値または限界内にあることを確認する場合（例えば、確認する場合にのみまたは確認後にのみ）、患者へ投与されるべき細胞療法の製造における使用のためにリリースされ、または、そのような細胞療法は患者へ投与される。任意のそのような態様のうちのいくつかにおいて、評価されるそのようなパラメータは、生物学的に活性な細胞、非アポトーシス性細胞、健康な細胞、特定の効力の細胞の数またはパーセンテージ（または、所定の表現型の、生物学的に活性な、非アポトーシス性、または健康なもしくは効力のある細胞の数またはパーセンテージ）、ならびに／あるいは、組成物の効力を示すメトリック、例えば、1細胞当たりの効力を含み得る。いくつかの態様において、1つまたは複数のそのような特質の可変性が、新しい原材料またはロットまたは貯蔵もしくは取り扱い方法で一定のレベル未満であることを決定することは、そのような新しい原材料またはロットまたは貯蔵もしくは取り扱い方法の実施後の毒性の危険性または応答の減少を軽減することができる。いくつかの態様において、そのような提供される方法の中には、製品のリリース前に組成物をアッセイし、かつ／または、そのようなパラメータに基づいて投薬戦略を調節する方法がある。
いくつかの態様において、1つまたは複数の危険性または転帰、例えば、毒性の危険性、または適切な用量は、1つまたは複数の治療または患者特異的変数に依存し得るかまたはこれらと共に変動し得る。例えば、神経毒性または脳水腫またはそのグレードを含む、ある毒性の危険性といくつかの態様において相関し得る例示的な臨床および患者特質の中には、患者の健康状態または年齢（例えば、患者が30歳を超えるかまたは30歳以下であるかどうか）、事前治療歴、例えば、事前治療の数および／または患者が治療前にリンパ球枯渇および／または保持化学療法（holding chemotherapy）を受けたことがあるかどうか（例えば、フルダラビンを含むもの）が含まれる。特に、細胞療法（例えば、CAR-T細胞療法）の細胞の用量の投与後に毒性を発症する危険性、相対的危険性および／または確率を増加させ得る患者または臨床特質の中には、例えば、より少ない事前療法、例えば、2つまたはより少ない事前療法、若年、例えば、30歳より若い、患者アフェレーシス試料中のCD4+対CD8+ T細胞の比、または、体重に基づく細胞の投薬に起因して対象へ投与される細胞の数、例えば、より重い体重を有する対象へ投与されるより多い細胞が含まれる。そのような特質は、対象から作製される操作細胞組成物の結果として生じる特質に影響を与え得、かつ／または、細胞療法（例えば、CAR T細胞）の投与後に毒性を発症する危険性に寄与し得る注入時の患者因子に影響を与え得る。1つまたは複数のそのような患者特異的または治療特質の可変性を有する患者間で、転帰の可変性および／または毒性の危険性を低下させるアプローチを提供する。1または複数の患者への細胞療法の用量の決定または処方または投与において、そのような患者特異的または治療特異的な特質を考慮に入れるアプローチを、さらに提供する。
いくつかの態様において、提供されるアプローチ、例えば、投与方法および用量は、より健康であり、より若い、例えば30歳より若い、より少ない事前療法、例えば2つもしくはより少ない事前療法を有した、または、ある事前治療、例えば、リンパ球枯渇療法もしくは化学療法（例えば、フルダラビンを含むもの）および／または移植を有した、対象へ投与される用量中において、より少ない細胞、またはより少ない生物学的に活性なもしくは効力のある細胞（もしくは操作細胞）を含む（またはこれらを投与することを含む）。他の態様において、プロセスまたは投薬アプローチの特質は、そのような患者特異的因子の可変性を説明し、例えば、その結果、そのような患者特異的因子は、毒性または他の危険性の可変性をもたらさないかまたはこれらの実質的な可変性をもたらさない。いくつかの態様において、提供される方法は、可変的な体重の対象を含む、治療される対象の群の各々へそのような細胞タイプ（複数可）の正確なまたは固定した用量を投与するように、フラットな投薬、例えば、CAR+細胞の総数、CAR+CD8+ T細胞および／またはCAR+/CD4+ T細胞の総数を実施する。いくつかの局面において、患者特異的変数は、療法が自己由来の場合は投薬に関係し、その結果、患者の細胞の特性は、組成物中の細胞の健康状態または機能または適合性に関係する。
いくつかの局面において、ある患者または臨床因子は、療法が投与される対象内で細胞療法の投与された細胞の増大を増幅することができ、これは、いくつかの場合において、細胞療法の投与後、毒性、例えば神経毒性を発症する、増加した、危険性、相対的危険性または確率に影響を与えることができ、例えば、これらを増加させることができ、またはこれらに関連し得るかもしくはこれらに関連する。いくつかの態様において、神経毒性または脳水腫などの毒性を発症する危険性に関連する患者または臨床因子としては、疾患タイプ（例えば、ALL）；疾患負荷量（例えば、体積測定値または炎症マーカーの存在によって決定される）；対象が事前ブリッジング化学療法またはリンパ球枯渇療法（例えば、フルダラビン(Flu)またはシクロホスファミドおよびフルダラビン(CY/Flu)を伴う）を受けたことがあるかどうか；細胞療法の投与開始後2、3、4、5、6または7日以内など、血液中のピーク早期組換え受容体(例えば、CAR)発現T細胞増大；ならびに／あるいは、細胞療法の投与開始後2、3、4、5、6または7日以内など、血液または血清中のIL-15のピークレベル（例えば、30 pg/mL以上）の存在が挙げられる。いくつかの態様において、提供されるアプローチ、例えば、提供されるプロセスおよび／または投薬戦略、例えば、用量および／または可変性を制御するためのアプローチは、そのような危険性を最小化するもしくは低減させることができ、かつ／または、そのような危険性または転帰に対する患者または臨床因子の影響を最小化することができる。そのようなアプローチの中には、そのような対象への用量の調節または決定においてそのような因子が考慮に入れられるアプローチ、および、プロセスまたは投薬の特質が毒性の危険性または転帰に対するそのような因子の影響を最小化するために使用されるアプローチがある。
いくつかの態様において、提供される組成物、用量および方法は、それらが、個々の対象へ投与される細胞の用量における、毒性、例えば神経毒性、例えば重度の神経毒性の形態および／または脳水腫のような有害事象と相関することが観察された因子における、可変性を制限する点で、有利である。そのような可変性は、いくつかの局面において、そのような可変性を説明または修正する用量または用量決定アプローチによって、例えば、有害事象に相関することが公知の特性を示す細胞または細胞の表現型の数に基づく投薬によって、制限または低減される。いくつかの局面において、可変性は、そのような可変性を説明する放出アッセイの使用によって制限される。いくつかの態様において、操作T細胞の数に加えて、用量および／または製品リリースは、さらに、重要なメトリクスの組み合わせの1つまたは複数に基づく。そのようなメトリクスは、いくつかの局面において、生存細胞が生物学的に活性であるかまたは健康である（例えば、死についてプログラムされていない）程度を示すパラメータを含み、これは、いくつかの局面において、検出可能なアポトーシス性マーカーの非存在に基づいて、および／または、瀕死のまたはアポトーシス性細胞と比較して、ある因子の細胞内産生の比較的低いレベルに基づいて決定される。いくつかの局面において、メトリクスは、全体として操作T細胞の数のみを考慮することとは対照的に、操作CD8+細胞の頻度、および／または、操作細胞中でのCD4:CD8細胞の比を含む。いくつかの局面において、メトリクスは、組成物中に存在する抗原または細胞特異的活性の程度を示すパラメータ、例えば、組成物中の細胞が、抗原または細胞特異的刺激に応答して、ある活性または機能、例えば、ある因子（例えば炎症誘発性サイトカイン）の分泌を発揮することができる程度の測定値を含む。
いくつかの態様において、用量は、生物学的に活性な操作T細胞の数に基づき；いくつかの局面において、生物学的に活性なとは、細胞死を受けるようにプログラムされていない細胞の特性、例えば、非アポトーシス性細胞の特性、またはアポトーシス経路への進入の表示を示さない細胞の特性を指す。いくつかの局面において、用量は、生物学的に活性な操作CD8+ T細胞の数に基づき、かつ／または、用量が生物学的に活性な操作T細胞の総数に基づく場合、生物学的に活性なCD8+操作T細胞の上限または閾値数もまた指定される。
いくつかの態様において、単位用量が比較的一貫した数の生物学的に活性な操作細胞を包含することを保証することは、プロセスによって製造される組成物中で、低いかまたは許容もしくは閾値変動未満であるそのような生物学的に活性な集団中の変動を示す細胞製造プロセスによって一部分達成され、これらの組成物は、多数の異なる対象、例えば、異なる特徴を有する対象、例えば、異なる年齢、事前療法の数および／またはタイプ、ならびに適応症およびそのサブタイプまたは重症度もしくはグレードの対象由来の試料に由来するものを含む。いくつかの局面において、そのようなプロセスは、プロセスによって製造された複数の細胞組成物中の該頻度の平均値から多くとも20％または多くとも10％または多くとも5％だけ変動する、かつ／または、多くとも1標準偏差だけそのような平均値から変動するか、または、そのような様々な試料および患者間で、プロセスによって製造された複数のT細胞組成物間で、多くとも20％、または多くとも10％、または多くとも5％だけ変動する、そのような生物学的に活性な集団の頻度を生じさせる。いくつかのそのような局面において、用量は、そのような細胞中での生物学的に活性なまたは非アポトーシス性細胞の予想される頻度、および／または、対象の代表的な集団から操作された細胞組成物にわたるそのような頻度の変動を考慮に入れて、操作T細胞またはCD8+操作T細胞の数（または患者体重または身長または血液量当たりの数）に基づく。いくつかの局面において、用量中の細胞の集団の数は、そのような変動および頻度を考慮に入れて、適切な安全域を提供するように、例えば、閾値を下回るように、選択される。
いくつかの態様において、用量および／または製品リリースは、効力を示すメトリック、例えば、有害事象または毒性の危険性に関する情報を提供する抗原特異的または細胞特異的活性の特定の測定値にさらに基づく。いくつかの局面において、そのようなメトリックは、重度のまたは特定のグレード（例えば、グレード3、長期にわたるグレード3、グレード4および／またはグレード5）の神経毒性あるいは脳水腫のような、有害事象の危険性と相関することが本明細書において観察または記載されたパラメータであるかまたはこれを含む。いくつかの局面において、パラメータは、炎症誘発性サイトカインの、ならびに／またはTNFa、IFNg、IL-2、およびIL-10のうちの1つまたは組み合わせの操作細胞特異的または抗原特異的放出を示す。
いくつかの態様において、アプローチは、（例えば、異なる対象および／またはプロセスにおける活性化試薬などの異なる原材料の使用から操作された細胞間での）可変性をさらに説明する。例えば、いくつかの態様において、細胞特異的活性または効力を示すパラメータは、そのような対象またはプロセス間で変動し得るが、有害な転帰を予想しない、同様の測定値に対して正規化される。例えば、細胞特異的活性を示すパラメータ（例えば、炎症誘発性サイトカインの抗原特異的分泌の測定値）は、いくつかの局面において、別のパラメータ、例えば、望まれない転帰、例えば、重度またはグレード（例えば、グレード3、長期にわたるグレード3、グレード4および／またはグレード5）の神経毒性あるいは脳水腫と相関しないまたはこれを予想しない因子の抗原特異的または細胞特異的放出に対してまたは比して正規化され得る。例えば、いくつかの態様において、IL-5、IL-13、GM-CSF、およびIL-6のようなサイトカインの分泌は、望まれない転帰と相関しないまたはこれを予想しないことが観察される。細胞特異的抗原に応答して、それは、異なる対象から操作された細胞間で変動し得るが（例えば、患者間可変性）、このパラメータの可変性は、重度またはグレード（例えば、グレード3、長期にわたるグレード3、グレード4および／またはグレード5）の神経毒性あるいは脳水腫のような、望まれない転帰の危険性と一般に相関しないまたはこれを予想しない。いくつかの態様において、そのようなサイトカインのうちの1つまたは複数の分泌は、2つ以上のIL-5、IL-13、GM-CSF、およびIL-6の測定値の算術平均または幾何平均のような、対照因子として役立ち得る。
いくつかの局面において、現在利用可能な方法は、治療用T細胞組成物の安全性および有効性の両方を特徴付けるためには満足ではない。例えば、いくつかの場合において、現在の方法は、下側閾値放出パラメータを利用し（例えば、治療用T細胞組成物のインターフェロンγ放出を測定）、これは安全性上限を含まない。いくつかの場合において、治療用T細胞組成物は、下側閾値が満たされない限り、治療法としてのさらなる使用についてリリースされず；例えば、治療用T細胞組成物が、規定されるアッセイにおいてサイトカインの閾値量を超えて放出しない場合、組成物は患者中への注入についてリリースされない。いくつかの局面において、そのようなパラメータは、サイトカイン放出、細胞傷害性顆粒放出、およびT細胞活性化状態の決定（例えば、1つまたは複数の活性化マーカーを発現する細胞の一定のパーセンテージ）を含み得る。いくつかの局面において、現在利用されるパラメータは、CAR+細胞および／または特異的表現型を示す細胞のパーセンテージの下限を含む。いくつかの方法において、治療用T細胞組成物が最小の活性（即ち、最小限の量のサイトカインを放出し、かつ／または、細胞傷害性アッセイにおいて一定のレベルで機能する）または表現型を有することを保証することによって、有効性が制御され得るが、組成物が投与について安全であるかどうかが、同様のパラメータの上限を使用して決定されないという可能性がある。
提供される態様は、治療用T細胞組成物の機能または活性に関連する、ある表現型および／またはパラメータが、T細胞組成物が投与される対象において、毒性、例えば重度の神経毒性を発症する危険性に関連するという知見に基づく。いくつかの局面において、投与される細胞の適合性は、毒性の危険性に相関する特徴であることが見出される。いくつかの態様において、アポトーシス性表現型を有さない細胞、および／または、アポトーシスを示すパラメータ（例えば、アネキシンVによって検出されるような、初期または後期アポトーシスを示すパラメータ）を示さない表現型を有する細胞、および／または、あるサイトカイン（例えば、炎症誘発性サイトカイン）を産生する細胞のような、生物学的活性を示す表現型を有する対象へ投与される細胞の数または用量が、毒性の危険性と相関し得る。いくつかの局面において、より高い総数の細胞（例えば、総CD3+CAR+細胞もしくはCD8+CAR+細胞またはそのサブセットに基づく）を受容する対象は、より少ない総数のそのような細胞を受容する対象と比べて、重度の毒性を発症するより大きな危険性があり得る。いくつかの場合において、そのような特徴を有する総細胞の数を考慮に入れず、かつ／または、治療される対象の群間で投与される細胞の表現型もしくは機能の高度の可変性がある、ある投薬レジメンは、ある局面において、治療される対象において毒性発症の全体的な危険性をもたらし得る。
いくつかの局面において、そのような表現型を示す投与される細胞のより低い総用量が、例えば毒性の危険性を改善または最小化するために、望ましい場合があることが見出される。さらに、細胞のそのような特徴は、細胞が投与される対象における毒性の危険性に影響を与え得るが、少なすぎるそのような細胞を投与することは、治療用組成物の有効性を低減させ得る。有効性を説明するために、例えば十分な細胞が対象へ投与されて効果を達成することを保証するために、細胞溶解活性、サイトカインの産生、または治療用T細胞組成物に関連する他の因子に基づいてなど、細胞組成物の効力の下限を設定することが、投薬方法の中では、一般的である。しかし、本明細書に記載される研究は、下位レベルの効力または機能しか満たされていない、細胞の固定用量を含む、細胞の用量を投与する投薬方法は、そのような細胞が高レベルの抗原特異的活性または機能を示す場合、対象を毒性の危険にさらし得ることを実証する。
本明細書における知見に基づいて、細胞の単位用量が以下の2つのファンクションに基づく方法、組成物および製造物品を提供する：(A)生物学的活性を示す表現型などの、ある表現型の細胞の数、ならびに、(B)組成物中の組換え受容体依存性活性および／または抗原特異的活性を示すかまたはこれと相関するパラメータの値。AまたはBの指標であることが本明細書において見出される例示的な変数は、実施例を含む本明細書の他の箇所に記載される。いくつかの態様において、ファンクションB、例えば、抗原特異的サイトカイン、例えば、炎症誘発性サイトカイン、産生または蓄積は、例えば、対象の特定の疾患または状態、対象の年齢、対象の体重、事前治療、およびT細胞の1つまたは複数の機能的特質を変更し得るかまたはこれに影響を与え得る他の因子に起因して、患者特異的危険因子を含む、対象に由来する細胞から作製されたT細胞組成物間で異なり得るかつ／または可変であり得るものである。
いくつかの態様において、Bは、治療用T細胞組成物の安全性の指標であることが見出される。いくつかの場合において、Bが高すぎる場合、より低い用量の細胞が、重度の神経毒性などの、毒性の危険性を低減させるかまたは最小化するために投与されるべきである。いくつかの場合において、Bが閾値レベルまたは限界を下回る場合、投与することができる用量に対してより大きなウィンドウが存在し得、その結果、重度の毒性などの、毒性または有害事象を発症する既知の危険性なしに、細胞の標的用量を対象へ投与することができる。いくつかの局面において、投与される治療用T細胞組成物中の総細胞または特定の表現型（例えば、CD3+CAR+もしくはCD8+CAR+もしくはアネキシンV-CD8+CAR+）の総細胞の数を制御または調節することは、治療される対象間での投与されるT細胞組成物の活性の総単位を標準化または調整することができ、それによって、そうでなければ一部の対象において毒性、例えば重度の毒性を発症する危険性へ至っていた場合がある、対象の群に由来するT細胞組成物にわたるT細胞間でのBの機能的差異または活性差異を説明する。
いくつかの態様において、組換え受容体依存性（例えば、CAR依存性）、例えば抗原特異的活性のパラメータの値である、Bは、T細胞組成物についての効力制御を提供することができる。いくつかの局面において、BのT細胞機能に基づく効力アッセイは既存の方法に対して利点を提供することができる。先ず、いくつかの局面において、細胞組成物についての既存の効力アッセイは、安全性とは対照的に、細胞の有効性、例えば、細胞溶解活性および／またはIFNγ産生と相関する特徴に依存する。さらに、そのような効力アッセイは、アッセイ内で効力の下限または下位レベルのみを有することが多い。
本明細書における知見に基づいて、提供される態様の中には、効力アッセイ、例えば、下側規格限界(LSL)および／または上側規格限界(USL)が存在する効力アッセイがある。いくつかの局面において、USLはパラメータBに基づく。いくつかの局面において、USLは、例えば対象へ組成物を投与する前の放出アッセイに関して、T細胞組成物の安全点検を提供する。上記に示したように、様々な臨床基準および他の患者特異的特徴が、操作細胞の機能の程度または範囲に影響を与え得る。同様に、いくつかの場合において、細胞組成物の製造もしくは操作、および／または、細胞プロセスによって生成された細胞の凍結に関して使用される、試薬を含む、全体的なプロセスもまた、同じプロセスによって生成された複数のT細胞組成物間でのBの可変性をもたらし得る。いくつかの場合において、15×106細胞/mL未満の密度を下回って細胞を凍結させることは、可変性の増加および／またはT細胞組成物の効力の減少をもたらし得ることが見出される。いくつかの態様において、提供される方法は、細胞組成物を評価するために特に有利であり、ここで、生物学的活性を示す表現型、例えばアネキシンV-CD8+CAR+、を含む、下記に記載される表現型Aのような、ある表現型を有する細胞の可変性は、プロセスによって製造された複数のT細胞組成物間で、またはプロセスによって製造された複数のT細胞組成物中の表現型の頻度の平均値から、20％超、30％超、40％超、50％超またはそれ以上だけ変動するかまたは変動する可能性が高く、かつ／あるいは、多くとも1標準偏差だけそのような平均値から変動するかまたは変動する可能性が高い。
提供される方法および用量のいくつかの態様において、細胞は、神経毒性についての危険性と（単独でまたは組み合わせて）相関することが本明細書において観察された因子のような、因子の可変性を最小化するように設計されたプロセスによって製造される。そのような態様のいくつかの局面において、投薬は、そのようなパラメータがより可変であるプロセスを使用して細胞が製造される場合に存在し得る毒性の危険性を増加させることなく、操作細胞または操作T細胞またはT細胞集団の総数または相対数に基づき得る。いくつかの局面において、そのようなプロセスは、レンチウイルスベクターの使用、CD4および／またはCD8細胞のようなT細胞のサブセットの規定された比を含む。いくつかの局面において、それらは、CD28ドメインとは対照的に41BB由来共刺激ドメインを有するCARを含む細胞の操作を含む。いくつかの局面において、プロセスは、T細胞サブセットの制御された比率、表現型、機能および代謝状態の制御を可能にするためのサイトカインおよび試薬、ならびに／あるいは、凍結保存、貯蔵および／または投与前の試料の解凍中の制御されたかつ比較的高い総細胞密度（例えば、1000万〜6000万個または1500万〜6000万個の細胞／mL（各々両端の値を含む））を含む。いくつかの局面において、T細胞の代謝および機能特性がより容易に制御されるプロセスが使用される。いくつかの態様において、そのようなプロセスは、細胞死に影響を与え得る患者特異的変数の状況においてさえ、生物学的に活性な細胞の一貫した用量を提供するために使用される。
態様の中には、プロセスが、プロセスを使用して作製された試料中での様々なアポトーシス性マーカーについての陰性によって測定されるような、CD8+CAR+細胞中での生物学的に活性なまたは健康な細胞のより高い頻度を生じさせる態様がある。いくつかの局面において、異なる対象からこのプロセスによって製造された試料間でこのパラメータのより低い程度の変動がある。本明細書において観察されるように、そのような細胞の数はグレード5の神経毒性および脳水腫と相関し得、一方、CD3+CAR+生存細胞（生物学的に活性な細胞に対してアポトーシス性状態を説明しない）は、必ずしも毒性を予測しないか、またはこの危険性に関して安全性境界を明確には規定しない場合がある。
いくつかの態様において、操作細胞中でのそのような生物学的に活性な細胞の頻度の減少した可変性を伴うプロセスの使用は、ある患者、例えば、記載されるようなある患者特異的危険因子を有する患者（例えば、アポトーシスの傾向が低いかまたはより健康である細胞を有する患者）が、全体として操作T細胞数に基づく投薬の場合に、意図されるよりも高い用量の生物学的に活性な細胞を不注意に与えられる危険性を低減させる。表現型および機能に対するより大きな程度の制御を有するプロセスは、抗原特異的様式で炎症誘発性サイトカインを作る、該プロセスによって製造された細胞の能力における可変性の程度を低減させることがさらに観察された。本明細書における結果は、特に、生物学的に活性な操作細胞の数と組み合わせた場合に、そのような細胞特異的活性パラメータを考慮に入れる投薬戦略（例えば、そのような活性の特定の標的範囲（または閾値のみ）が所定の用量で表されるようなもの）は、依然として安全域内にありながら、または、望まれない毒性（例えば、神経毒性）の危険性を低減しながら、所望の臨床または治療転帰を達成することができる用量を提供するために使用することができるという解釈と一貫している。
いくつかの態様において、生物学的に活性な操作細胞の一貫してより高い頻度をもたらすプロセスの使用は、より高い頻度の操作細胞がアポトーシス性マーカーについて陽性であるかまたはそうでなければあまり健康でない、他の投薬戦略と比較した場合、（操作細胞、例えばCAR+細胞の数の見込みから）遥かにより低い細胞用量の使用を可能にする。例えば、本明細書における観察に基づいて、また、利用可能な投薬戦略は一般にアポトーシス性細胞の頻度を考慮に入れていないという観察を考慮して、ある態様において、操作（例えば、CAR+）T細胞（例えば、操作CD8+および／またはCD4+細胞）の数は、500万、1000万、1100万、1200万、1300万、1400万、1500万、1600万、1700万、1800万、1900万、2000万、3000万、4000万または5000万個の細胞と同じぐらい低い。
提供される方法は、細胞組成物をモニターまたは評価し、組成物が対象へ投与されるかどうか、組成物が重度の神経毒性のような毒性を発症する危険性と相関する可能性が高いかどうかを決定することができる放出アッセイを提供する。いくつかの態様において、BがUSLを上回る場合、T細胞組成物は、対象へ投与されないことを推奨され、かつ／または、対象へ投与される単位用量は、変更または調節される。BがUSLを下回る場合、製品は治療用にリリースされ得る。いくつかの態様において、BがLSLを上回るかつ／またはUSLを下回るかどうかを評価することはまた、T細胞組成物を以前に投与された対象が重度の毒性のような毒性を発症する危険性があるかどうかについての情報を提供することができる。いくつかの態様において、対象へ投与されるT細胞組成物の試料の評価は、Bについて事後に行われる。いくつかの態様において、T細胞組成物が投与された対象は、BがUSL以上である場合、重度の神経毒性のような、毒性を発症する危険性があると決定される。そのような態様において、組成物が投与された対象は、細胞組成物の投与後に、かつ、任意で、毒性転帰の徴候または症状の発症前に、毒性転帰、例えば神経毒性またはサイトカイン放出症候群の可能性を改善または低減するために、モニターされかつ／または薬剤で処置される。
いくつかの局面において、提供される態様は、養子細胞療法の有効性は、そのような細胞が投与される対象中における毒性の発症によって制限され得るという観察に基づき、この毒性は、いくつかの場合において、重度であり得る。例えば、いくつかの場合において、組換え受容体（例えばCAR）を発現する細胞の用量を投与することは、CRSまたは神経毒性などの、毒性またはその危険性を生じさせ得る。いくつかの場合において、そのような細胞のより高い用量は、例えば、増大および／または存続を促進することによってなど、細胞への曝露を増加させることによって、治療の有効性を増加させ得るが、それらはまた、毒性またはより重度の毒性を発症するさらにより大きな危険性を生じさせ得る。さらに、いくつかの場合において、より高い疾患負荷量を有する対象もまた、毒性またはより重度の毒性を発症するより大きな危険性があり得る。
毒性を処置または改善するためのある利用可能な方法は、必ずしも、完全に満足だとは限らない場合がある。多くのそのようなアプローチは、例えば、サイトカイン遮断、および／または、高用量ステロイドなどの薬剤の送達によるなど、毒性の下流作用を標的とすることに注目し、これはまた、投与された細胞の機能を排除するかまたは損なう可能性がある。さらに、そのようなアプローチは、しばしば、毒性の身体的徴候または症状の検出時にのみ、そのような介入の投与を伴い、これらは、一般に、中程度または重度の毒性（例えば中程度または重度CRS）の徴候または症状を伴う。これらの他のアプローチの多くはまた、養子細胞療法に関連し得る、神経毒性などの毒性の他の形態を予防しない。いくつかの場合において、これは、そのような症状が重度である時であり、従って、毒性を改善または処置するために、さらにより過酷なまたはより極端な処置（例えば、より高い投薬量またはまたは増加した投与頻度）を必要とし得る。
ある代替アプローチの使用は、そのような課題の満足いく解決手段を提供しない。いくつかの場合において、このような薬剤および療法（例えば、ステロイド）は、それ自体、毒性副作用に関連する。そのような副作用は、より高い用量または頻度でさらにより大きくなる場合があり、ここで、細胞療法から生じ得る毒性の重症度を処置または改善するために、薬剤または療法を投与するかまたはこれらで処置することが必要である。さらに、いくつかの場合において、毒性を処置するための薬剤または療法は、細胞療法の有効性、例えば、細胞療法の部分として提供される細胞上に発現されるキメラ受容体（例えばCAR）の有効性を制限し得ると考えられている（Sentman (2013) Immunotherapy, 5:10）。
提供される態様は、治療用T細胞組成物が投与される対象中における、重度の神経毒性などの、毒性の危険性に対処するかまたはこれに取り組むことにおいて利点を提供する。いくつかの態様において、重度の神経毒性などの、毒性を対象が発症する可能性は、提供される態様によって低減されるかまたは妨げられ、ここで、組成物の安全性特徴は、対象の投薬によって評価および／または調節される。いくつかの態様において、重度の毒性などの、毒性を対象が発症する可能性は、対象への投与のためのリリース前に治療用T細胞組成物の安全性をモニターまたは評価することによって、ならびに／あるいは、細胞の多くとも標的用量または細胞の参照単位(RU)の標的数もしくは多くとも標的数を含有する細胞の単位用量を投与することによって、低減されるかまたは妨げられる。
いくつかの態様において、提供される態様は、例えば、他の方法と比較した場合に、より低い程度のまたはより低い程度の危険性の、毒性、毒性転帰または症状、毒性促進プロファイル、因子もしくは特性、例えば、サイトカイン放出症候群(CRS)または神経毒性に関連するかまたはこれらを示す症状または転帰を生じさせる特徴を含むように設計されるかまたは含み、他の方法においては、治療用T細胞組成物は、安全性制御についてのアッセイにおいて評価されておらず、かつ／または、治療用T組成物は、AおよびBを考慮に入れかつ／またはRUの標的数（例えば、RUの閾値数未満）で投薬するか、または、治療用T細胞組成物の、細胞の標的数でもしくは所定の標的範囲内の細胞数で投薬する、提供される投薬式に従って対象へ投与されなかった。
毒性および毒性転帰
いくつかの局面において、細胞療法などの、療法の毒性転帰は、サイトカイン放出症候群(CRS)または重度CRS(sCRS)であるかまたはこれらと関連するかまたはこれらを示す。CRS、例えばsCRSは、場合によっては、養子T細胞療法後に、および他の生物製品が対象に投与された後に起こることがある。Davila et al., Sci Transl Med 6, 224ra25 (2014); Brentjens et al., Sci. Transl. Med. 5, 177ra38 (2013); Grupp et al., N. Engl. J. Med. 368, 1509-1518 (2013); およびKochenderfer et al., Blood 119, 2709-2720 (2012); Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-78を参照されたい。
典型的に、CRSは、例えば、T細胞、B細胞、NK細胞、単球、および／またはマクロファージによって媒介される悪化した全身免疫応答によって引き起こされる。このような細胞は、多量の炎症メディエーター、例えば、サイトカインおよびケモカインを放出することがある。サイトカインは急性炎症応答を誘発することがある、および／または微小血管漏出、心不全、もしくは死亡の原因となり得る内皮臓器損傷を誘導することがある。重度の、命に関わるCRSは、肺浸潤および肺損傷、腎不全、または播種性血管内凝固につながる可能性がある。他の重度の、命に関わる毒性には、心毒性、呼吸窮迫、神経毒性、および／または肝不全が含まれ得る。
CRSの転帰、徴候および症状は、公知であり、本明細書に記載されるものを含む。いくつかの態様において、特定の投薬レジメンまたは投与が所定のCRS関連転帰、徴候または症状をもたらすかまたはもたらさない場合、特定の転帰、徴候および症状ならびに／またはその量もしくは程度が明示され得る。
CAR発現細胞の投与の状況では、CRS、例えば重度CRSは、典型的には、CARを発現する細胞を注入して6〜20日後に起こる。Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-78を参照されたい。場合によっては、CRSは、CAR T細胞の注入後、6日未満または20日を超える時点で起こる。CRSの発生率およびタイミングは注入時のベースラインサイトカインレベルまたは腫瘍負荷量と関係する場合がある。一般的に、CRSは、インターフェロン(IFN)-γ、腫瘍壊死因子(TNF)-α、および／またはインターロイキン(IL)-2の血清レベルの上昇を伴う。CRSにおいて迅速に誘導され得る他のサイトカインは、IL-1β、IL-6、IL-8、およびIL-10である。
どの患者が、sCRSを発症するリスクがある可能性が高いかを予測するために、CRSの発症と相関するように思われるCRS判定基準が開発されている（Davilla et al. Science translational medicine. 2014;6(224):224ra25を参照されたい）。因子には、発熱、低酸素、低血圧、神経変化、処置によって誘導される上昇が処置前の腫瘍負荷量およびsCRS症状の両方とよい相関を示すことができる炎症誘発性サイトカイン、例えば7つのサイトカインのセット（IFNγ、IL-5、IL-6、IL-10、Flt-3L、フラクタルカイン、およびGM-CSF）の血清レベルの上昇が含まれる。CRSの診断および管理に関する他のガイドラインは公知である（例えば、Lee et al, Blood. 2014;124(2):188-95を参照されたい）。いくつかの態様において、CRSグレードを反映する判定基準は、以下の表1に詳述した判定基準である。
（表１）CRSの例示的なグレード分類基準
Figure 2020508336
いくつかの態様において、投与後に、対象が、(1)少なくとも3日間の少なくとも38℃の発熱；(2)(a)投与直後のレベルと比較しての以下の群の7つのサイトカインのうちの少なくとも2つについての少なくとも75の最大倍数変化：インターフェロンガンマ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、フラクタルカイン、およびIL-5、ならびに／または、(b)投与直後のレベルと比較しての以下の群の7つのサイトカインのうちの少なくとも1つについての少なくとも250の最大倍数変化：インターフェロンガンマ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、フラクタルカイン、およびIL-5、のいずれかを含むサイトカイン上昇；ならびに(c)毒性の少なくとも1つの臨床徴候、例えば、低血圧（少なくとも1種類の静脈内血管作動性昇圧薬(intravenous vasoactive pressor)を必要とする）；低酸素（PO2 < 90％）、または、1つまたは複数の神経障害（精神状態変化、鈍麻、および／または発作を含む）を示すのであれば、対象は、細胞療法またはその用量の細胞の投与に応答または付随して「重度CRS」（「sCRS」）を発症しているとみなされる。いくつかの態様において、重度CRSは、表1に記載されるような、3以上のグレードを有するCRSを含む。
いくつかの態様において、転帰は、表1に記載されるような、重度CRSまたはグレード3 CRS以上、例えば、グレード4以上に関連する。いくつかの態様において、これらは、以下のうちの1つまたは複数を含む：持続性の発熱、例えば、2日以上、例えば、3日以上、例えば、4日以上にわたる、または少なくとも3日間連続した、指定された温度の発熱、例えば、38℃または約38℃を超える発熱；38℃または約38℃を超える発熱；サイトカインの上昇、例えば、少なくとも2つのサイトカイン（例えば、インターフェロンガンマ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、フラクタルカイン、およびIL-5、ならびに／または腫瘍壊死因子アルファ(TNFα)からなる群のうちの少なくとも2つ）の治療前レベルと比較しての、例えば少なくとも75または少なくとも約75の、最大倍数変化、あるいは、例えば、そのようなサイトカインのうちの少なくとも1つの少なくとも250または少なくとも約250の、最大倍数変化；ならびに／あるいは、毒性の少なくとも1つの臨床徴候、例えば、低血圧（例えば、少なくとも1種類の静脈内血管作動性昇圧薬によって測定した時）；低酸素（例えば、90％未満または約90％未満の血漿酸素(PO2)レベル）；ならびに／あるいは、1つまたは複数の神経障害（精神状態変化、鈍麻、および発作を含む）。いくつかの態様において、重度CRSは、集中治療室(ICU)における管理またはケアを必要とするCRSを含む。
いくつかの態様において、重度CRSは、(1)持続性の発熱（少なくとも3日にわたる少なくとも38℃の発熱）および(2)少なくとも20 mg/dLまたは少なくとも約20 mg/dLのCRPの血清レベルの組み合わせを包含する。いくつかの態様において、重度CRSは、2種類以上の昇圧薬の使用を必要とする低血圧、または機械換気を必要とする呼吸不全を包含する。いくつかの態様において、昇圧薬の投薬量は、第2のまたは後続の投与において増加される。
いくつかの態様において、重度CRSまたはグレード3 CRSは、アラニンアミノトランスフェラーゼの増加、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの増加、悪寒、熱性好中球減少症、頭痛、左心室機能不全、脳症、水頭症、および／または、振戦を包含する。
いくつかの局面において、細胞療法などの、療法の毒性転帰は、神経毒性もしくは重度の神経毒性であるか、神経毒性もしくは重度の神経毒性に関連するか、または神経毒性もしくは重度の神経毒性を示す。いくつかの態様において、神経毒性の臨床リスクに関連する症状には、錯乱、せん妄、表出性失語、鈍麻、ミオクローヌス、嗜眠、精神状態変化、痙攣、発作様活動、発作（任意で、脳波[EEG]によって確認される）、高レベルのβアミロイド(Aβ)、高レベルのグルタミン酸、および高レベルの酸素ラジカルが含まれる。いくつかの態様において、神経毒性は、（例えば、グレード1〜5スケールを用いて）重症度に基づいてグレード分類される（例えば、Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (December 2010); National Cancer Institute-Common Toxicity Criteria version 4.03 (NCI-CTCAE v4.03)を参照されたい）。
いくつかの場合では、神経症状は、sCRSの初発症状であり得る。神経症状は、いくつかの態様において、神経症状は、細胞療法注入から5〜7日後に始まるのが見られる。いくつかの態様において、神経変化の期間は3〜19日間の範囲であり得る。いくつかの場合において、神経変化の回復は、sCRSの他の症状が消散した後に生じる。いくつかの態様において、神経変化の消散の時間または程度は、抗IL-6および／またはステロイドでの処置によっては促進されない。
いくつかの態様において、投与後に、対象が、1)末梢運動神経の炎症または変性を含む末梢性運動ニューロパチーの症状；2)末梢感覚神経の炎症または変性を含む末梢性感覚ニューロパチーの症状、ジセステジア、例えば、異常な感覚および不快な感覚の原因となる感覚認知のゆがみ、神経痛、例えば、神経もしくは神経群に沿った激しく痛い感覚、ならびに／またはパレステジア、例えば、刺激の非存在下での刺痛、しびれ、圧力、冷感、および温感の異常な皮膚感覚の原因となる感覚ニューロンの機能障害の中から、セルフケア（例えば、入浴、衣服の着脱、食事、トイレの使用、服薬）を制限する症状を示すのであれば、対象は、細胞療法またはその用量の細胞の投与に応答または付随して「重度の神経毒性」を発症しているとみなされる。いくつかの態様において、重度の神経毒性は、グレード3以上の神経毒性、例えば、表2に示した神経毒性を含む。いくつかの態様において、重度の神経毒性は、グレード3の神経毒性の症状が10日間以上持続する場合、長期にわたるグレード3であるとみなされる。いくつかの態様において、毒性、例えば神経毒性、例えばグレード3または4の神経毒性は、所定のグレード（例えばグレード3以上）の神経毒性の症状が少なくとも10日間もしくは少なくとも約10日間または少なくとも11日間もしくは少なくとも約11日間または少なくとも10〜11日間もしくは約10〜11日間存在するかまたは存在していた場合、長期にわたる神経毒性（例えば、長期にわたるグレード3の神経毒性）であるとみなされる。長期にわたるグレード3の神経毒性は、一般に、9日間、8日間もしくは1週間を超えてまたは平均9日間、8日間もしくは1週間を超えて持続するグレード3の神経毒性に関連する。いくつかの局面において、長期にわたらないグレード3の神経毒性は、一般に、9日間、8日間もしくは1週間を超えてまたは平均9日間、8日間もしくは1週間（あるいはいくつかの場合においてより少ない、例えば、6、5、4または3日間）を超えて持続しないグレード3の神経毒性の症状に関連する。
（表２）神経毒性の例示的なグレード分類基準
Figure 2020508336
いくつかの態様において、治療方法、使用、製造物品、単位用量を含む、提供される態様は、他の態様または方法と比較して、細胞療法後に神経毒性に関連する低減された症状をもたらす。例えば、提供される方法に従って治療された対象は、他の方法によって治療された対象と比較して、四肢脱力または麻痺、記憶、視力および／または知力の低下、制御不能な強迫および／または強制行動、妄想、頭痛、認知的および行動的問題、例えば、運動制御不能、認知低下、および自律神経機能障害、ならびに性機能障害などの、神経毒性の低減された症状を有し得る。いくつかの態様において、提供される方法に従って治療された対象は、末梢性運動ニューロパチー、末梢性感覚ニューロパチー、ジセステジア、神経痛またはパレステジアに関連する低減された症状を有し得る。
いくつかの態様において、方法は、ニューロン死などの、神経系および／または脳に対する損傷を含む神経毒性に関連する転帰を低減させる。いくつかの局面において、方法は、βアミロイド(Aβ)、グルタミン酸、および酸素ラジカルなどの、神経毒性に関連する因子のレベルを低減させる。
いくつかの態様において、提供される治療用T細胞組成物、または提供される方法に従って投与についてリリースされる治療用T細胞組成物の1つまたは複数の単位用量が投与される、かつ／あるいは、提供される方法に従って投与される、対象は、重度の有害事象、例えば少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性、例えばグレード4もしくはグレード5の神経毒を発症する低減された可能性がある。いくつかの局面において、提供される態様に従って治療された対象は、神経毒性を発症しないか、あるいは、対象が他の方法によって、または提供され方法に従って評価されなかった治療用T細胞組成物を含む他の治療用T細胞組成物で治療された場合と比べて、より重度ではないグレードの神経毒性を発症する。
II．細胞組成物の特質
本明細書における提供される方法は、治療用T細胞組成物中の細胞の特質に関する。いくつかの態様において、特質は、単独でまたは組み合わせて、有害事象または毒性、例えば重度の毒性、例えば少なくとも長期にわたるグレード3の毒性またはグレード4もしくはグレード5の毒性を発症する危険性と相関する。いくつかの態様において、特質は、本明細書において「A」とも称される、組成物中の細胞の表現型であり、細胞または細胞集団の生物学的活性を示す表現型を含む。いくつかの態様において、特質は、本明細書において「B」とも称される、組換え受容体依存性活性、例えば抗原特異的活性である。いくつかの態様において、T細胞組成物中の細胞の特質Aおよび／またはBは、提供される方法に関して考慮される。いくつかの局面において、特質AおよびBの関数が、参照単位(RU)の標的数の決定に関して、例えば、治療用T細胞組成物の単位用量の提供または投与に関して、考慮される。いくつかの局面において、特質Bの閾値、またはBの下側規格レベル(LSL)および上側規格レベル(USL)は、効力アッセイまたは放出アッセイに関してなど、治療用T細胞組成物の安全性または安全性の可能性を評価または決定するために使用される。特質Aおよび／またはBが考慮または評価される様々な例示的な方法を提供する。
A．細胞組成物の表現型
いくつかの態様において、表現型「A」は、表面分子および／またはT細胞組成物内の細胞もしくは細胞の部分母集団によって産生され得るかもしくは蓄積し得る分子を含む、1つまたは複数の特異的分子の存在または非存在である。いくつかの態様において、表現型は、直接または逆に、T細胞組成物内の細胞のまたは細胞の集団の生物学的活性を示すかまたは表示する。いくつかの態様において、表現型は、細胞活性、例えば、刺激に応答しての因子の産生を含み得る。ある態様において、細胞組成物の評価は、細胞組成物の表現型を同定、検出、または定量化するために行われる。特定の態様において、細胞組成物の測定は、特異的分子の発現またはレベルの存在、非存在、程度を同定、検出、または定量化するために行われる。
いくつかの態様において、表現型は、細胞の生存性を示す。いくつかの態様において、表現型は、アポトーシスの非存在、アポトーシスの初期段階の非存在、またはアポトーシスの後期段階の非存在を示す。いくつかの態様において、表現型は、アポトーシス、初期アポトーシスまたは後期段階またはアポトーシスの非存在を示す因子の非存在である。いくつかの態様において、表現型は、組換え受容体発現T細胞（例えば、CAR+ T細胞）またはCD8+ T細胞、ナイーブT細胞、またはメモリーT細胞もしくはメモリー幹様特質を示すT細胞のある部分母集団などの、T細胞の部分母集団またはサブセットの表現型である。いくつかの態様において、表現型は、活性化されていない、かつ／または、1つもしくは複数の活性化マーカーの発現について欠如しているかまたは減少しているもしくは低い細胞の表現型である。いくつかの態様において、表現型は、疲弊していない、かつ／または、1つもしくは複数の疲弊マーカーの発現について欠如しているかまたは減少しているもしくは低い細胞の表現型である。
いくつかの態様において、表現型は、1つまたは複数の特異的分子、例えば、表現型を示すある表面マーカー、例えば、表現型を示す表面タンパク質、細胞内マーカー、または表現型を示す核酸、または表現型を示す他の分子もしくは因子の細胞中の発現の存在、非存在、またはレベルによって示される。いくつかの態様において、表現型は、特異的分子のうちの1つまたは複数の陽性または陰性発現であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、特異的分子は、表面マーカー、例えば、膜糖タンパク質もしくは受容体、アポトーシスもしくは生存性に関連するマーカー、または、免疫細胞の状態を示す特異的分子、例えば、活性化、疲弊、または成熟もしくはナイーブ表現型に関連するマーカーを含むが、これらに限定されない。いくつかの態様において、特異的分子に基づいて細胞を評価するかまたは測定、カウント、および／もしくは定量化するための任意の公知の方法が、表現型の細胞の数を決定するために使用され得る。
いくつかの態様において、表現型は、細胞中の1つまたは複数の特異的分子の陽性または陰性発現であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、陽性発現は、細胞中の特異的分子の検出可能な量によって示される。ある態様において、検出可能な量は、細胞中の特異的分子の任意の検出される量である。特定の態様において、検出可能な量は、細胞中の、バックグラウンド、例えば、バックグラウンド染色、シグナルなどよりも大きい量である。ある態様において、陽性発現は、閾値、例えば、既定の閾値よりも大きい、特異的分子の量である。同様に、特定の態様において、特異的分子の陰性発現を有する細胞は、陽性発現を有すると決定されなかった任意の細胞であり得るか、または、特異的分子の検出可能な量またはバックグラウンドを上回る特異的分子の検出可能な量を欠く細胞である。いくつかの態様において、特異的分子の量が閾値を下回る場合、細胞は特異的分子の陰性発現を有する。当業者は、型通りの技能の事柄として、特異的分子についての陽性および／または陰性発現を定義するために閾値を定義する方法、ならびに、閾値は、アッセイまたは検出方法、特異的分子のアイデンティティー、検出に使用される試薬、および機器使用に限定されないが、特定のパラメータに従って定義され得ることを理解する。
特異的分子を検出しかつ／または細胞の表現型を分析するために使用され得る方法の例としては、生化学分析；免疫化学分析；画像解析；細胞形態学的分析；分子解析、例えば、PCR、シーケンシング、DNAメチル化の決定；プロテオミクス解析、例えば、タンパク質グリコシル化および／またはリン酸化パターンの決定；ゲノミクス解析；エピゲノミクス解析；トランスクリプトミクス解析；ならびにそれらの任意の組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、表現型の分子特徴が、画像解析、PCR（PCRの標準および全ての変形を含む）、マイクロアレイ（DNAマイクロアレイ、マイクロRNA用のMMchip、タンパク質マイクロアレイ、細胞マイクロアレイ、抗体マイクロアレイ、および炭水化物アレイを含むが、これらに限定されない）、シーケンシング、バイオマーカー検出、またはDNAメチル化もしくはタンパク質グリコシル化パターンを決定するための方法によって分析される。特定の態様において、特異的分子は、ポリペプチド、即ち、タンパク質である。いくつかの態様において、特異的分子はポリヌクレオチドである。
いくつかの態様において、特異的分子の陽性または陰性発現は、それぞれ、正に選択された細胞または負に選択された細胞上に発現している1種類もしくは複数種の表面マーカー（マーカー+）または比較的高いレベルで発現している1種類もしくは複数種の表面マーカー（マーカーhigh）に特異的に結合する1種類または複数種の抗体または他の結合剤と細胞をインキュベートすることによって、決定される。特定の態様において、陽性または陰性発現は、フローサイトメトリー、免疫組織化学、または特異的マーカーを検出するための任意の他の好適な方法によって決定される。
特定の態様において、特異的分子の発現はフローサイトメトリーで評価される。フローサイトメトリーは、細胞を液体流に懸濁させ、そしてそれらに電子的検出装置のそばを通過させることによって、細胞カウント、細胞選別、バイオマーカー検出およびタンパク質工学において用いられるレーザー-もしくはインピーダンス-ベースの、生物物理的技術である。それは1秒当たり最大数千の粒子の物理的および化学的特徴の同時多変数解析を可能にする。
フローサイトメーターによってもたらされたデータは、ヒストグラムを作るために、一次元で、または二次元ドットプロットでまたはさらには三次元でプロットされ得る。これらのプロット上の領域は、「ゲート」と呼ばれる、一連のサブセット抽出を作ることによって、蛍光強度に基づいて、連続的に分離され得る。特異的ゲーティングプロトコルは、特に免疫学に関して診断および臨床目的のために存在する。プロットは対数目盛上に作成されることが多い。異なる蛍光色素の発光スペクトルが重なるため、検出器でのシグナルは、電子的にならびにコンピュータ的に補正されなければならない。フローサイトメーターを使用して蓄積されたデータは、ソフトウェア、例えば、JMP (統計ソフトウェア), WinMDI,[10] Flowing Software,[11] およびweb-based Cytobank[12]), Cellcion, FCS Express, FlowJo, FACSDiva, CytoPaint (aka Paint-A-Gate),[13] VenturiOne, CellQuest Pro, Infinicyt またはCytospecを使用することによって、解析することができる。
フローサイトメトリーは、当技術分野において標準技術であり、当業者は、1つまたは複数の特異的分子を検出してデータを解析し、細胞の集団中において1つまたは複数の特異的分子の発現を決定するために、プロトコルを設計または調整する方法を容易に理解する。フローサイトメトリーのための標準プロトコルおよび技術は、Loyd “Flow Cytometry in Microbiology; Practical Flow Cytometry by Howard M. Shapiro; Flow Cytometry for Biotechnology by Larry A. Sklar, Handbook of Flow Cytometry Methods by J. Paul Robinson, et al., Current Protocols in Cytometry, Wiley-Liss Pub, Flow Cytometry in Clinical Diagnosis, v4, (Carey, McCoy, and Keren, eds), ASCP Press, 2007, Ormerod, M.G. (ed.) (2000) Flow Cytometry -A practical approach. 3rd edition. Oxford University Press, Oxford, UK, Ormerod, M.G. (1999) Flow Cytometry. 2nd edition. BIOS Scientific Publishers, Oxford., およびFlow Cytometry -A basic introduction. Michael G. Ormerod, 2008において見出される。
いくつかの態様において、細胞は、さらなる解析のために表現型によって選別される。いくつかの態様において、同じ細胞組成物中の異なる表現型の細胞は、蛍光標識細胞分取（FACS）によって選別される。FACSは、特異的な光散乱および蛍光特徴に基づいて、細胞の不均一混合物を、一度に1個の細胞ずつ2つ以上の容器へと選別することを可能にする、特殊なタイプのフローサイトメトリーである。それは、個々の細胞からの蛍光シグナルの高速で客観的かつ定量的な読み取りならびに特に関心がある細胞の物理的分離を提供するため、有用な科学機器である。
いくつかの態様において、表現型は、総T細胞の数または総CD3+ T細胞の数を含む。特定の態様において、細胞T組成物、例えば、組換え受容体またはCARを発現する細胞を含有する治療用T細胞組成物は、T細胞の1つまたは複数の異なるサブタイプを含み得る。いくつかの態様において、表現型は、T細胞サブタイプのアイデンティティーであるかまたはこれを含む。T細胞の異なる集団またはサブタイプとしては、エフェクターT細胞、ヘルパーT細胞、メモリーT細胞、調節性T細胞、CD4+ T細胞、およびCD8+ T細胞が挙げられるが、これらに限定されない。ある態様において、T細胞サブタイプは、特異的分子の存在または非存在を検出することによって同定され得る。ある態様において、特異的分子は、T細胞サブタイプを同定するために使用され得る表面マーカーである。
いくつかの態様において、表現型は、表面マーカー、例えば、CD3、CD4、CD8、CD28、CD62L、CCR7、CD27、CD127、CD45RA、および／またはCD45ROである、1つまたは複数の特異的分子の陽性または高レベル発現である。ある態様において、表現型は、1つまたは複数の表面マーカー、例えば、CD3+、CD4+、CD8+、CD28+、CD62L+、CCR7+、CD27+、CD127+、CD4+、CD8+、CD45RA+、および／またはCD45RO+の陽性表面マーカー発現に基づくなど、T細胞のまたはT細胞の部分母集団もしくはサブセットの表面マーカーである。
ある態様において、表面マーカーは組換え受容体（例えばCAR）の発現を示す。特定の態様において、表面マーカーは、組換え受容体（例えばCAR）の発現であり、これは、いくつかの局面において、抗イディオタイプ抗体などの抗体を使用して決定され得る。いくつかの態様において、組換え受容体の発現を示す表面マーカーは、代理マーカーである。いくつかの態様において、代理マーカーは、組換え受容体（例えばCAR）と共に細胞表面上に同時発現されるように作られているタンパク質である。特定の態様において、そのような代理マーカーは、活性を有さないかまたはほとんど有さないように改変された表面タンパク質である。ある態様において、代理マーカーは、形質導入のために使用される組換え受容体をコードする同じポリヌクレオチド上にコードされる。代理マーカーの非限定的な例としては、切断型EGFR (EGFRt)、切断型HER2 (tHER2)または前立腺特異的膜抗原(PSMA)もしくはその改変型が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの局面において、マーカー、例えば、代理マーカーは、全部または一部（例えば、切断型形態）のCD34、NGFR、CD19、もしくは切断型CD19、例えば切断型非ヒトCD19、または上皮成長因子受容体(例えば、tEGFR)を含む。ある態様において、CARの検出可能な量を有する細胞は、CAR+であるかまたはこれを含む表現型を有する。特定の態様において、代理マーカーの検出可能な量を有する細胞は、CAR+であるかまたはこれを含む表現型を有する。
ある態様において、表現型は、表面マーカーCD3、CD4、CD8、および／または組換え受容体(例えば、CAR)または組換え受容体(例えば、CAR)の発現を示すかまたはこれと相関するその代理マーカーのうちの1つまたは複数の、発現、例えば表面発現を含む。
特定の態様において、表現型は、表面マーカーである1つまたは複数の特異的分子の発現によって同定される。ある態様において、表現型は、CD3、CD4、CD8、および／または組換え受容体（例えばCAR）の陽性または陰性発現であるかまたはこれらを含む。ある態様において、組換え受容体はCARである。特定の態様において、表現型は、CD3+/CAR+、CD4+/CAR+、および／またはCD8+/CAR+を含む。
いくつかの態様において、表現型は生存性である。ある態様において、表現型は、細胞が通常の機能的細胞プロセスを受け、かつ／または、壊死もしくはプログラム細胞死を受けるプロセスを受けたことがないかもしくはこのプロセス下にないことを示すマーカーの陽性発現である。いくつかの態様において、生存性は、細胞の酸化還元電位、細胞膜の完全性、またはミトコンドリアの活性もしくは機能によって評価され得る。いくつかの態様において、生存性は、細胞死に関連する特異的分子の非存在、またはアッセイにおける細胞死の表示の非存在である。
いくつかの態様において、表現型は、細胞生存性であるかまたはこれを含む。ある態様において、細胞の生存性は、当技術分野において型通りである多数の手段によって検出、測定、および／または評価され得る。そのような生存性アッセイの非限定的な例としては、色素取り込みアッセイ（例えば、カルセインAMアッセイ）、XTT細胞生存性アッセイ、および色素排除アッセイ（例えば、トリパンブルー、エオシン、またはプロピジウム色素排除アッセイ）が挙げられるが、これらに限定されない。生存性アッセイは、細胞用量、細胞組成物、および／または細胞試料中の生存細胞の数またはパーセンテージ（例えば、頻度）を決定するために有用である。特定の態様において、表現型は、他の特徴、例えば組換え受容体発現と共に、細胞生存性を含む。
ある態様において、表現型は、細胞生存性、生存CD3+、生存CD4+、生存CD8+、生存CD3+/CAR+、生存CD4+/CAR+、生存CD8+/CAR+、またはその組み合わせであるかまたはこれらを含む。
特定の態様において、表現型は、アポトーシスの非存在および／または細胞がアポトーシス性プロセスを受けている表示であるかまたはこれを含む。アポトーシスは、特徴的な細胞変化および死に至る一連の定型化した形態学的および生化学的事象を含むプログラム細胞死のプロセスである。これらの変化は、小胞形成、細胞収縮、核断片化、クロマチン凝縮、染色体DNA断片化、および全体的なmRNA分解を含む。アポトーシスは、十分に特徴付けられたプロセスであり、様々な段階に関連する特異的分子が当技術分野において周知である。
いくつかの態様において、表現型は、アポトーシスの初期段階の非存在、ならびに／またはアポトーシスの初期段階に関連する指標および／もしくは特異的分子の非存在である。アポトーシスの初期段階において、細胞膜およびミトコンドリア膜の変化が明らかとなる。生化学的変化もまた、細胞質および細胞核において明らかである。例えば、アポトーシスの初期段階は、あるカスパーゼ、例えば、2、8、9、および10の活性化によって示され得る。特定の態様において、表現型は、アポトーシスの後期段階の非存在、ならびに／またはアポトーシスの後期段階に関連する指標および／もしくは特異的分子の非存在である。アポトーシスの中期から後期の段階は、膜完全性のさらなる喪失、クロマチン凝縮およびDNA断片化によって特徴付けられ、カスパーゼ3、6、および7の活性化などの生化学的事象を含む。
特定の態様において、表現型は、プログラム細胞死に関連する1つまたは複数の因子の陰性発現である。ある態様において、表現型は、アポトーシスを開始することが公知のアポトーシス促進因子、例えば、死受容体経路のメンバー、ミトコンドリア（固有）経路の活性化メンバー、例えば、Bcl-2ファミリーメンバー、例えばBax、BadおよびBid、ならびにカスパーゼを含む、アポトーシスに関連する1つまたは複数の因子の陰性発現である。いくつかの態様において、表現型は、アポトーシスのマーカーの陰性量または低量である。ある態様において、表現型はアポトーシスのマーカーの陰性発現である。ある態様において、表現型は、細胞組成物とインキュベートされるかまたは接触されると、アポトーシスを受けている細胞へ優先的に結合する指標（例えばアネキシンV分子）の非存在である。いくつかの態様において、表現型は、細胞中のアポトーシス状態を示す1つまたは複数のマーカーの発現であるかまたはこれらを含む。
いくつかの態様において、表現型は、アポトーシスについてのマーカーである特異的分子の陰性（または低）発現である。様々なアポトーシスマーカーが、当業者に公知であり、これらとしては、1つまたは複数のカスパーゼの活性の増加、即ち、活性化カスパーゼ、PARP開裂の増加、Bcl-2ファミリータンパク質の活性化および／またはトランスロケーション、細胞死経路のメンバー、例えば、FasおよびFADD、核収縮の存在（例えば、顕微鏡によってモニターされる）、ならびに染色体DNA断片化の存在（例えば、染色体DNAラダーの存在）、またはTUNEL染色およびアネキシンV染色を含むアポトーシスアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。
カスパーゼは、アスパラギン酸残基後のタンパク質を開裂する酵素であり、この用語は「システイン-アスパラギン酸プロテアーゼ」に由来する。カスパーゼはアポトーシスに関与し、従って、カスパーゼ-3などのカスパーゼの活性化は、アポトーシスの増加または復活を示す。ある態様において、カスパーゼ活性化は当業者に公知の方法によって検出することができる。いくつかの態様において、活性化カスパーゼへ特異的に結合する（即ち、開裂されたポリペプチドへ特異的に結合する）抗体が、カスパーゼ活性化を検出するために使用することができる。別の例において、カスパーゼ活性の蛍光色素阻害剤（fluorochrome inhibitor of caspase activity）（FLICA）アッセイが、カスパーゼ-3によるアセチルAsp-Glu-Val-Asp 7-アミド-4-メチルクマリン(Ac-DEVD-AMC)の加水分解を検出する（即ち、蛍光性7-アミノ-4-メチルクマリン(AMC)の放出を検出する）ことによって、カスパーゼ-3活性化を検出するために利用され得る。FLICAアッセイは、複数のカスパーゼによって処理される基質の産物を検出することによって、カスパーゼ活性化を決定するために使用され得る（例えば、FAM-VAD-FMK FLICA）。他の技術としては、発光カスパーゼ-8テトラペプチド基質(Z-LETD-アミノルシフェリン)、カスパーゼ-9テトラペプチド基質(Z-LEHD-アミノルシフェリン)、カスパーゼ-3/7基質(Z-DEVD-アミノルシフェリン)、カスパーゼ-6基質(Z-VEID-アミノルシフェリン)、またはカスパーゼ-2基質(Z-VDVAD-アミノルシフェリン)を使用するThe CASPASE-GLO（登録商標）カスパーゼアッセイ(PROMEGA)が挙げられる。
ある態様において、表現型は、細胞中における活性カスパーゼ-1、活性カスパーゼ-2、活性カスパーゼ-3、活性カスパーゼ-7、活性カスパーゼ-8、活性カスパーゼ-9、活性カスパーゼ-10および／または活性カスパーゼ-13の陰性発現であるかまたはこれらを含む。特定の態様において、表現型は、活性カスパーゼ3-であるかまたはこれを含む。いくつかの態様において、上記のいずれかなどの、カスパーゼの前駆形態（チモーゲン開裂）形態もまた、アポトーシスの存在を示すマーカーである。いくつかの態様において、表現型は、カスパーゼ-3のなどの前駆形態、カスパーゼの前駆形態の非存在または陰性発現であるかまたはこれらを含む。
いくつかの態様において、アポトーシスのマーカーは、開裂されたポリADP-リボースポリメラーゼ1(PARP)である。PARPは、アポトーシスの初期段階中にカスパーゼによって開裂される。従って、開裂PARPペプチドの検出は、アポトーシスについてのマーカーである。特定の態様において、表現型は、開裂PARPの陽性または陰性発現であるかまたはこれらを含む。
いくつかの態様において、アポトーシスのマーカーは、アポトーシスに関連する細胞中の特徴を検出する試薬である。ある態様において、試薬はアネキシンV分子である。アポトーシスの初期段階中、脂質ホスファチジルセリン(PS)は、原形質膜の内側リーフレットから外側リーフレットへトランスロケートする。PSは、通常、健康な細胞および／または非アポトーシス性細胞中の内膜に限定される。アネキシンVは、高親和性でホスファチジルセリン(PS)へ優先的に結合するタンパク質である。蛍光タグまたは他のレポーターへコンジュゲートされると、アネキシンVは、アポトーシスのこの初期細胞表面指標を迅速に検出するために使用され得る。いくつかの態様において、外膜上のPSの存在は、アポトーシスの後期段階まで持続する。従って、いくつかの態様において、アネキシンV染色は、アポトーシスの初期段階および後期段階の両方の表示である。ある態様において、アネキシン、例えばアネキシンVは、検出可能な標識でタグ化され、細胞組成物の細胞とインキュベートされ、これへ曝露され、かつ／またはこれと接触され、例えばフローサイトメトリーによって、アポトーシスを受けている細胞を検出する。いくつかの態様において、蛍光タグ化アネキシン、例えばアネキシンVは、例えばアネキシン-V/7-AADアッセイを用いての、フローサイトメトリー解析用に、細胞を染色するために使用される。アネキシンでのアポトーシス検出に適した代替のプロトコルとしては、放射標識アネキシンVを利用する技術およびアッセイが挙げられる。ある態様において、表現型は、アネキシンによる陰性染色、例えばアネキシンV-であるかまたはこれを含む。特定の態様において、表現型は、外側原形質膜上のPSの非存在であるかまたはこれを含む。ある態様において、表現型は、アネキシン、例えばアネキシンVによって結合されない細胞であるかまたはこれを含む。ある態様において、外膜上の検出可能なPSを欠いている細胞は、アネキシンV-である。特定の態様において、標識アネキシンVと共のインキュベーション後にアッセイ、例えばフローサイトメトリーにおいてアネキシンV-によって結合されていない細胞は、アネキシンV-である。
特定の態様において、表現型は、アネキシンV-、アネキシンV- CD3+、アネキシンV-CD4+、アネキシンV- CD8+、アネキシンV-CD3+/CAR+、アネキシンV- CD4+/CAR+、アネキシンV- CD8+/CAR+、活性化カスパーゼ3-、活性化カスパーゼ3-/CD3+、活性化カスパーゼ3-/CD4+、活性化カスパーゼ3- /CD8+、活性化カスパーゼ3-/CD3+/CAR+、活性化カスパーゼ3-/ CD4+/CAR+、活性化カスパーゼ3-/CD8+/CAR+、またはその組み合わせである。
特定の態様は、アポトーシスについてのマーカーの発現について陽性の細胞が、プログラム細胞死を受けており、低減した免疫機能を示すかまたは免疫機能を示さず、かつ、活性化、増大を受ける、かつ／または、抗原へ結合して、免疫反応もしくは活性を開始する、これを行う、もしくはこれに寄与する、たとえあったとしても、減少した能力を有すること意図する。特定の態様において、表現型は、活性化カスパーゼについての陰性発現および／またはアネキシンVでの陰性染色によって定義される。
ある態様において、表現型は、活性化カスパーゼ3- (カスパーゼ3-)および／またはアネキシンV-であるかまたはこれを含む。
ある態様において、表現型は、炎症性細胞死に関連する1つまたは複数の因子の陰性発現である。いくつかの態様において、炎症性細胞死はピロトーシスである。特定の態様において、ピロトーシスは、ウイルス感染したかつ／または形質導入された細胞、例えば、ウイルス感染したかつ／または形質導入されたCD4+および／またはCD8+ T細胞中において生じるかまたは潜在的に生じ得る。いくつかの態様において、ピロトーシスは、細胞溶解、細胞膨潤、細孔形成、DNA断片化、および／またはカスパーゼ-1活性化のうちの1つまたは複数であるかまたはこれらに関連し得る。ある態様において、ピロトーシスは、膜小胞形成、カスパーゼ-3活性化、および／またはシトクロム-C放出をもたらさない。
いくつかの態様において、ピロトーシスに関連する1つまたは複数の因子は、パターン認識受容体、インフラマソーム、活性カスパーゼ-1、活性IL-1b、および／または活性IL-18であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、1つまたは複数の因子は、活性化および／またはライゲート化パターン受容体であるかまたはこれらを含む。特定の態様において、1つまたは複数の因子は、活性化および／またはライゲート化TLR、NOD様受容体、RIG-I、MDA5、および／またはSTINGであるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、1つまたは複数の因子は、活性IL-1bであるかまたはこれを含む。特定の態様において、1つまたは複数の因子は、活性IL-18であるかまたはこれを含む。ある態様において、1つまたは複数の因子は、活性カスパーゼ-1であるかまたはこれを含む。
ある態様において、表現型は、活性化カスパーゼ-1- (カスパーゼ-1-)であるかまたはこれを含む。いくつかの態様において、表現型は、活性IL-1b-であるかまたはこれを含む。特定の態様において、表現型は、活性IL-18-であるかまたはこれを含む。
特定の態様において、炎症性細胞死は、ネクロトーシスであるかまたはこれを含む。ある態様において、表現型は、ネクロトーシスに関連する1つまたは複数の因子の陰性発現である。いくつかの態様において、ネクロトーシスは、RIPキナーゼファミリーの活性化によって駆動される壊死性プログラム細胞死である。いくつかの態様において、ネクロトーシスは、TNF受容体ファミリーの結合および／もしくは活性化後に、ならびに／または、パターン認識受容体の係合後に（即ち、ウイルス成分結合性RIG-I/MDA5もしくは関連経路）、生じるかまたは生じ得る。いくつかの態様において、ウイルス感染中のTNFαの産生は、その受容体TNFR1の刺激、TNFR関連死タンパク質TRADDの活性化をもたらし、これは、次に、RIPK1を活性化し、RIPK3を動員し、ネクロソームが形成される。いくつかの態様において、ネクロソームの形成は、MLKLのリン酸化およびMLKLのオリゴマー化をもたらし、これは、MLKLが原形質膜および細胞器官中へ進入および透過するのを可能にする。いくつかの態様において、MLKLの統合は、炎症性表現型および損傷関連分子パターン（DAMP）の放出をもたらし、これらは、免疫反応を誘発する。
いくつかの態様において、ネクロトーシスに関連する1つまたは複数の因子は、活性化および／もしくはライゲート化パターン認識受容体、例えば、活性化および／もしくはライゲート化RIG-I/MDA5、活性化TNFR1、TRADD、ネクロソーム、ならびに／またはリン酸化および／もしくはオリゴマー化MLKLである。いくつかの態様において、ネクロトーシスに関連する1つまたは複数の因子は、活性化RIPキナーゼ、例えば、RIPK1、RIPK2、RIPK3、RIPK4、および／またはRIPK5であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、1つまたは複数の因子は、活性化RIPK1および／またはRIPK3である。いくつかの態様において、表現型は、活性化RIPK1-、活性化RIPK3-、リン酸化MLKL-、および／またはオリゴマー化MLKL-であるかまたはこれらを含む。
特定の態様において、表現型は、オートファジーに関連する1つまたは複数の因子の陰性発現である。いくつかの態様において、オートファジーは、ある細胞培養条件下で、例えば、重要な栄養素が制限される条件下でおよび／またはあるサイトカインに応答して、生じるかつ／または生じ得る、細胞固有異化機構であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、オートファジーは、カスパーゼ活性と無関係に生じる。
いくつかの態様において、オートファジーは、マクロオートファジー、ミクロオートファジー、および／またはシャペロン媒介オートファジーである。いくつかの態様において、オートファジーマーカーに関連する1つまたは複数の因子としては、AMPK、ULK1、ULK2および／もしくは他のAtgファミリーメンバー(例えば、ATG16L)、PIK3C3、BECN1、Vps34、Beclin-1、MAP1LC3A,B,C、GABARAP、GABARAPL1、GABARAPL2、UVRAG、IRGM、CLN3、Parkin、p62、およびLAMP2、ならびに／または、Behrends, Nature. 2010 Jul l ;466(7302):68-76およびGlick et al. J Pathol. 2010 May;221(l):3-12に記載されるような他の公知の因子が挙げられる。いくつかの態様において、表現型は、AMPK-、ULK1-、ULK2-、PIK3C3-、BECN1-、Vps34-、Beclin-1-、MAP1LC3A-、MAP1LC3B-、MAP1LC3C-、GABARAP-、GABARAPL1-、GABARAPL2-、UVRAG-、IRGM-、CLN3-、Parkin-、p62-、および／またはLAMP2-である。
表現型の中には、T細胞の1つまたは複数のサブタイプまたは部分母集団に一般に関連する1つまたは複数のマーカーの発現または表面発現、あるいはそれらの表現型がある。T細胞サブタイプおよび部分母集団は、CD4+および／またはCD8+ T細胞ならびにそのサブタイプを含み得、これらは、ナイーブT (TN)細胞、エフェクターT細胞(TEFF)、メモリーT細胞およびそのサブタイプ、例えば、幹細胞メモリーT (TSCM)、セントラルメモリーT (TCM)、エフェクターメモリーT (TEM)、TEMRA細胞または最終分化エフェクターメモリーT細胞、腫瘍浸潤リンパ球(TIL)、未熟T細胞、成熟T細胞、ヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞、粘膜関連インバリアントT (MAIT)細胞、自然および適応制御性T (Treg)細胞、ヘルパーT細胞、例えば、TH1細胞、TH2細胞、TH3細胞、TH17細胞、TH9細胞、TH22細胞、濾胞性ヘルパーT細胞、アルファ/ベータT細胞、およびデルタ/ガンマT細胞を含み得る。
いくつかの態様において、表現型は、メモリーT細胞またはメモリーT細胞サブセットの表現型であるかまたはこれらを含む。メモリーT細胞は、それらのコグネイト抗原へ以前曝露されたことがある抗原特異的T細胞である。メモリーT細胞は、感染症が消散した後、長期間持続する。メモリーT細胞は、それらのコグネイト抗原への再曝露で、多数のエフェクターT細胞へ迅速に増大し、従って、過去の感染症に対する「記憶」を免疫系に提供する。メモリーT細胞は、3つのサブタイプ：セントラルメモリーT細胞(TCM細胞)および2つのタイプのエフェクターメモリーT細胞(TEM細胞およびTEMRA細胞)を含む。いくつかの態様において、表現型は、メモリーT細胞（またはそれに関連する1つまたは複数のマーカー）、例えば、TCM細胞、TEM細胞、TEMRA細胞、メモリー幹T細胞(TSCM)細胞、またはその組み合わせの表現型であるかまたはこれらを含む。特定の態様において、表現型は、メモリーおよび／またはメモリーT細胞もしくはそのサブタイプについてのマーカーである1つまたは複数の特異的分子の発現であるかまたはこれらを含む。
特定の態様において、表現型は、ナイーブT細胞についてのマーカーである1つまたは複数の特異的分子の発現であるかまたはこれらを含む。ナイーブT細胞は、骨髄で産生された新たなT細胞を含み、免疫系が過去に処理したことがない抗原を含有する新しく遭遇する病原体に対して応答することができる。それらのコグネイト抗原による刺激後、活性化ナイーブT細胞の一部が、メモリー細胞へ発達する。
いくつかの態様において、表現型は、メモリーT細胞またはナイーブT細胞であるかまたはこれらを含む。ある態様において、表現型は、メモリーについてのマーカーである1つまたは複数の特異的分子の陽性または陰性発現である。いくつかの態様において、メモリーマーカーは、メモリーT細胞集団を規定するために使用され得る特異的分子である。
いくつかの態様において、表現型は、非メモリーT細胞またはそのサブタイプに関連する1つまたは複数のマーカーの表現型であるかまたはこれらを含み；いくつかの局面において、それは、ナイーブ細胞に関連する表現型またはマーカー（複数可）であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、表現型はCCR7+/CD27+/CD28+/CD45RA+である。ある態様において、表現型は、CCR7+/CD45RA+であるかまたはこれを含む。いくつかの態様において、表現型は、セントラルメモリーT細胞の表現型であるかまたはこれを含む。特定の態様において、表現型は、CCR7+/CD27+/CD28+/CD45RA-であるかまたはこれを含む。いくつかの態様において、表現型は、エフェクターメモリー細胞であるかまたはこれを含む。いくつかの態様において、表現型は、CCR7-/CD27+/CD28+/CD45RA-であるかまたはこれを含む。ある態様において、表現型は、TEMRA細胞またはTSCM細胞の表現型であるかまたはこれらを含む。ある態様において、表現型は、CD45RA+であるかまたはこれを含む。特定の態様において、表現型は、CCR7-/CD27-/CD28-/CD45RA+であるかまたはこれを含む。いくつかの態様において、表現型は、CD27+/CD28+、CD27-/CD28+、CD27+/CD28-、またはCD27-/CD28-のうちの1つであるかまたはこれらを含む。
いくつかの態様において、表現型は、前述の表現型特性のいずれかであるかまたはこれらを含み、組換え受容体の発現をさらに含む：例えば、メモリーT細胞もしくはメモリーサブタイプに関連しかつCARを発現する表現型、または、CARを発現するナイーブ細胞に関連する表現型。ある態様において、表現型は、CARを発現するセントラルメモリーT細胞または幹セントラルメモリーT細胞の表現型であるかまたはこれを含む。特定の態様において、表現型は、CARを発現するエフェクターメモリー細胞の表現型であるかまたはこれを含む。いくつかの態様において、表現型は、CARを発現するTEMRA細胞の表現型であるかまたはこれを含む。特定の態様において、表現型は、CAR+/CCR7+/CD27+/CD28+/CD45RA-；CAR+/CCR7-/CD27+/CD28+/CD45RA-；CAR+/CCR7-/CD27-/CD28-/CD45RA+；CAR+/CD27+/CD28+；CAR+/CD27-/CD28+；CAR+/CD27+/CD28-；またはCAR+/CD27-/CD28-であるかまたはこれらを含む。
ある態様において、表現型は、アポトーシスのマーカーについて陰性であるT細胞の表現型であるかまたはこれらを含む。ある態様において、表現型は、アポトーシスのマーカーについて陰性であるナイーブ細胞であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、アポトーシスのマーカーは活性化カスパーゼ3である。いくつかの態様において、アポトーシスのマーカーは、アネキシンVによる陽性染色である。
特定の態様において、表現型は、CARを発現する、アポトーシスのマーカーについて陰性である、メモリーT細胞またはそのサブタイプの表現型であるかまたはこれらを含む。特定の態様において、表現型は、CARを発現する、アポトーシスのマーカーについて陰性である、メモリーT細胞またはその特定のサブタイプの表現型であるかまたはこれらを含む。ある態様において、表現型は、CARを発現する、アポトーシスのマーカーについて陰性である、ナイーブ細胞の表現型であるかまたはこれらを含む。ある態様において、表現型は、CARを発現する、アポトーシスのマーカーについて陰性である、セントラルメモリーT細胞もしくはTSCM細胞またはナイーブ細胞の表現型であるかまたはこれらを含む。特定の態様において、表現型は、CARを発現する、アポトーシスのマーカーについて陰性である、エフェクターメモリー細胞の表現型であるかまたはこれらを含む。ある態様において、表現型は、アネキシンV-/CAR+/CCR7+/CD27+/CD28+/CD45RA-；アネキシンV-/CAR+/CCR7-/CD27+/CD28+/CD45RA-；アネキシンV-/CAR+/CCR7-/CD27-/CD28-/CD45RA+；アネキシンV-/CAR+/CD27+/CD28+；アネキシンV-/CAR+/CD27-/CD28+；アネキシンV-/CAR+/CD27+/CD28-；またはアネキシンV-/CAR+/CD27-/CD28-であるかまたはこれを含む。ある態様において、表現型は、活性化カスパーゼ3-/CAR+/CCR7+/CD27+/CD28+/CD45RA-；活性化カスパーゼ3-/CAR+/CCR7-/CD27+/CD28+/CD45RA-；活性化カスパーゼ3-/CAR+/CCR7-/CD27-/CD28-/CD45RA+；活性化カスパーゼ3-/CAR+/CD27+/CD28+；活性化カスパーゼ3-/CAR+/CD27-/CD28+；活性化カスパーゼ3-/CAR+/CD27+/CD28-；または活性化カスパーゼ3-/CAR+/CD27-/CD28-であるかまたはこれを含む。
いくつかの態様において、表現型は、疲弊マーカーの陽性または陰性発現であるかまたはこれらを含む。T細胞疲弊は、多くの慢性感染症およびがん中に生じるT細胞機能障害の状態である。それは、不十分なエフェクター機能、阻害性受容体の持続発現、および機能的なエフェクターまたはメモリーT細胞のそれとは異なる転写状態によって定義される。疲弊は感染症および腫瘍の最適な制御を妨げる。ある態様において、表現型は、疲弊に関連する特異的分子の陽性または陰性発現であるかまたはこれらを含む。ある態様において、特異的分子は、疲弊または疲弊に関連する質、例えば、不十分なエフェクター機能もしくは阻害性受容体発現に関連する、任意の分子である。特定の態様において、表現型は、免疫チェックポイント阻害剤の陽性または陰性発現である。特定の態様において、疲弊マーカーは、CTLA-4、FOXP3、PD-1、TIGIT、LAB-3、2B4、BTLA、TIM3、VISTA、もしくはCD96、またはその組み合わせである。ある態様において、表現型は、CTLA-4、FOXP3、PD-1、TIGIT、LAB-3、2B4、BTLA、TIM3、VISTA、もしくはCD96、またはその組み合わせの陽性または陰性発現である。特定の態様において、表現型は、PD1および／またはFOXP3の陽性または陰性発現である。
ある態様において、表現型は、T細胞活性化に関連する特異的分子の陰性発現である。いくつかの態様において、表現型は、活性化マーカーである特異的分子のうちの1つまたは複数の陰性発現であるかまたはこれらを含む。T細胞活性化とは、抗原提示細胞(APC)によるT細胞の刺激での、T細胞による免疫反応の誘発を指す。この相互作用経路は、T細胞活性化ならびにそれらの下流経路をトリガーする主要な刺激シグナルを説明する。一般に、T細胞活性化は、2つの同時シグナルを必要とする。第1のものは、ペプチド抗原を運ぶ主要組織適合遺伝子複合体(MHC)分子へのT細胞受容体複合体(TCR)の結合である。第2のものは、B7-2またはB7-1などの、APCの表面におけるタンパク質への共刺激受容体CD28の結合によって提供される。ある態様において、特異的分子は、TCR活性化に関連し、例えば、T細胞活性化の結果として活性化、変更、または発現される。いくつかの態様において、特異的分子は、CD28受容体の活性化に関連し、例えば、T細胞活性化の結果として活性化、変更、または発現される分子である。
いくつかの態様において、表現型は、疲弊マーカーの陽性または陰性発現であるかまたはこれらを含む。T細胞疲弊は、多くの慢性感染症およびがん中に生じるT細胞機能障害の状態である。それは、不十分なエフェクター機能、阻害性受容体の持続発現、および機能的なエフェクターまたはメモリーT細胞のそれとは異なる転写状態によって定義される。疲弊は感染症および腫瘍の最適な制御を妨げる。ある態様において、表現型は、疲弊に関連する特異的分子の陽性または陰性発現であるかまたはこれらを含む。ある態様において、特異的分子は、疲弊または疲弊に関連する質、例えば、不十分なエフェクター機能もしくは阻害性受容体発現に関連する、任意の分子である。特定の態様において、表現型は、免疫チェックポイント阻害剤の陽性または陰性発現である。特定の態様において、疲弊マーカーは、CTLA-4、FOXP3、PD-1、TIGIT、LAB-3、2B4、BTLA、TIM3、VISTA、もしくはCD96、またはその組み合わせである。ある態様において、表現型は、CTLA-4、FOXP3、PD-1、TIGIT、LAB-3、2B4、BTLA、TIM3、VISTA、もしくはCD96、またはその組み合わせの陽性または陰性発現である。特定の態様において、表現型は、PD1および／またはFOXP3の陽性または陰性発現である。
いくつかの態様において、表現型は、組換え受容体またはCARを発現するCD3+細胞中の疲弊マーカーの陽性または陰性発現であるかまたはこれらを含む。特定の態様において、表現型は、組換え受容体またはCARを発現するCD4+細胞中の疲弊マーカーの陽性または陰性発現であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、表現型は、疲弊マーカーおよびCD3+の陽性または陰性発現、ならびに組換え受容体またはCARの陽性発現であるかまたはこれらを含む。特定の態様において、表現型は、組換え受容体またはCARを発現するCD4+細胞中の疲弊マーカーの陽性または陰性発現であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、表現型は、組換え受容体またはCARを発現するCD8+細胞中の疲弊マーカーの陽性または陰性発現であるかまたはこれらを含む。特定の態様において、疲弊マーカーは、CTLA-4、FOXP3、PD-1、TIGIT、LAB-3、2B4、BTLA、TIM3、VISTA、またはCD96のうちの1つまたは複数である。特定の態様において、疲弊マーカーはPD1および／またはFOXP3である。
特定の態様において、表現型は、PD1-/CD3+、PD1-/CD4+、PD1-/CD8+、PD1-/CD3+/CAR+、PD1-/CD4+/CAR+、PD1-/CD8+/CAR+、PD1-/アネキシンV-、PD1-/アネキシンV-/CD3+、PD1-/アネキシンV-/CD4+、PD1-/アネキシンV-/CD8+、PD1-/アネキシンV/-CD3+/CAR+、PD1-/アネキシンV-/ CD4+/CAR+、PD1-/アネキシンV-/CD8+/CAR+、PD1-/活性化カスパーゼ3-、PD1-/活性化カスパーゼ3-/CD3+、PD1-/活性化カスパーゼ3-/CD4+、PD1-/活性化カスパーゼ3- /CD8+、PD1-/活性化カスパーゼ3-/CD3+/CAR+、PD1-/活性化カスパーゼ3-/ CD4+/CAR+、PD1-/活性化カスパーゼ3-/CD8+/CAR+、またはその組み合わせであるかまたはこれらを含む。
ある態様において、表現型は、FOXP3-/CD3+、FOXP3-CD4+、FOXP3-/CD8+、FOXP3-/CD3+/CAR+、FOXP3-/CD4+/CAR+、FOXP3-/CD8+/CAR+、FOXP3-/アネキシンV-、FOXP3-/アネキシンV-/CD3+、FOXP3-/アネキシンV-/CD4+、FOXP3-/アネキシンV-/CD8+、FOXP3-/アネキシンV/-CD3+/CAR+、FOXP3-/アネキシンV-/ CD4+/CAR+、FOXP3-/アネキシンV-/CD8+/CAR+、FOXP3-/活性化カスパーゼ3-、FOXP3-/活性化カスパーゼ3-/CD3+、FOXP3-/活性化カスパーゼ3-/CD4+、FOXP3-/活性化カスパーゼ3- /CD8+、FOXP3-/活性化カスパーゼ3-/CD3+/CAR+、FOXP3-/活性化カスパーゼ3-/ CD4+/CAR+、FOXP3-/活性化カスパーゼ3-/CD8+/CAR+、またはその組み合わせであるかまたはこれらを含む。
ある態様において、表現型は、T細胞活性化に関連する特異的分子の陰性発現である。いくつかの態様において、表現型は、活性化マーカーである特異的分子のうちの1つまたは複数の陰性発現であるかまたはこれらを含む。T細胞活性化とは、抗原提示細胞(APC)によるT細胞の刺激での、T細胞による免疫反応の誘発を指す。この相互作用経路は、T細胞活性化ならびにそれらの下流経路をトリガーする主要な刺激シグナルを説明する。一般に、T細胞活性化は、2つの同時シグナルを必要とする。第1のものは、ペプチド抗原を運ぶ主要組織適合複合体(MHC)分子へのT細胞受容体複合体(TCR)の結合である。第2のものは、B7-2またはB7-1などの、APCの表面におけるタンパク質への共刺激受容体CD28の結合によって提供される。ある態様において、特異的分子は、TCR活性化に関連し、例えば、T細胞活性化の結果として活性化、変更、または発現される。いくつかの態様において、特異的分子は、CD28受容体の活性化に関連し、例えば、T細胞活性化の結果として活性化、変更、または発現される分子である。
特定の態様において、表現型は、活性化マーカーである特異的分子のうちの1つまたは複数の陰性発現であるかまたはこれらを含む。ある態様において、活性化マーカーは、CD25、CD26、CD27、CD28、CD30、CD71、CD154、CD40L、CD127、LAG3、Ki67、またはその組み合わせのうちの1つまたは複数である。ある態様において、表現型は、CD25、CD26、CD27、CD28、CD30、CD71、CD154、CD40L、CD127、LAG3、またはKi67のうちの1つまたは複数の陰性または陽性発現である。ある態様において、表現型は、CD25、CD127、LAG3、Ki67、またはその組み合わせの発現であるかまたはこれらを含む。
いくつかの態様において、表現型は、組換え受容体またはCARを発現するCD3+細胞中の活性化マーカーの陽性または陰性発現であるかまたはこれらを含む。特定の態様において、表現型は、組換え受容体またはCARを発現するCD4+細胞中の活性化マーカーの陽性または陰性発現であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、表現型は、組換え受容体またはCARを発現するCD8+細胞中の活性化マーカーの陽性または陰性発現であるかまたはこれらを含む。特定の態様において、活性化マーカーは、CD25、CD26、CD27、CD28、CD30、CD71、CD154、CD40L、CD127、LAG3、またはKi67のうちの1つまたは複数である。特定の態様において、活性化マーカーは、CD25、CD127、LAG3、Ki67、またはその組み合わせである。
特定の態様において、表現型は、活性化マーカーの陽性または陰性発現、ならびに、CD3+、CD4+、CD8+、CD3+/CAR+、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+、アネキシンV-、アネキシンV-/CD3+、アネキシンV-/CD4+、アネキシンV-/CD8+、アネキシンV/-CD3+/CAR+、アネキシンV-/ CD4+/CAR+、アネキシンV-/CD8+/CAR+、活性化カスパーゼ3-、活性化カスパーゼ3-/CD3+、活性化カスパーゼ3-/CD4+、活性化カスパーゼ3- /CD8+、活性化カスパーゼ3-/CD3+/CAR+、活性化カスパーゼ3-/ CD4+/CAR+、活性化カスパーゼ3-/CD8+/CAR+、またはその組み合わせであるかまたはこれらを含む。
いくつかの態様において、表現型は、刺激、例えば、免疫細胞機能を刺激、トリガー、誘導、刺激、または長期にわたる刺激に対する応答によって評価される。ある態様において、細胞は、刺激条件または刺激剤の存在下でインキュベートされ、表現型は、刺激に対する応答であるかまたはこれを含む。特定の態様において、表現型は、1つまたは複数の刺激に応答しての可溶性因子の産生または分泌であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、表現型は、1つまたは複数の刺激に応答しての可溶性因子の欠如または産生または分泌であるかまたはこれらを含む。ある態様において、可溶性因子はサイトカインである。
いくつかの態様において、刺激条件は、特定の培地、温度、酸素含有量、二酸化炭素含量、時間、薬剤、例えば、栄養素、アミノ酸、抗生物質、イオン、および／または刺激因子、例えば、サイトカイン、ケモカイン、抗原、結合パートナー、融合タンパク質、組換え可溶性受容体、ならびに細胞を活性化するように設計された任意の他の薬剤のうちの1つまたは複数を含み得る。いくつかの態様において、細胞は刺激され、表現型が、可溶性因子、例えばサイトカインまたはケモカインが産生または分泌されるかどうかによって、決定される。いくつかの態様において、刺激は非特異的であり、即ち、抗原特異的刺激ではない。いくつかの態様において、細胞は、刺激条件または刺激剤の存在下で、約1時間、約2時間、約3時間、約4時間、約5時間、約6時間、約7時間、約8時間、約9時間、約10時間、約11時間、約12時間、約18時間、約24時間、約48時間、または1時間〜4時間、1時間〜12時間、12時間〜24時間（各々両端の値を含む）の期間の間、または24時間を超えて、インキュベートされる。
いくつかの態様において、細胞は、組換え受容体に特異的である抗原またはそのエピトープである薬剤、または、組換え受容体へ結合しかつ／またはこれを認識する抗体またはその断片である薬剤、あるいはその組み合わせで刺激される。いくつかの態様において、組換え受容体はCARであり、薬剤は、CARに特異的である抗原またはそのエピトープであるか、または、CARへ結合しかつ／またはこれを認識する抗体またはその断片であるか、あるいはその組み合わせである。特定の態様において、細胞は、CARによって認識される抗原の表面発現を有する標的細胞の存在下で細胞をインキュベートすることによって刺激される。ある態様において、組換え受容体はCARであり、薬剤は、CARへ結合する抗体またはその活性断片、変異体、もしくは部分である。ある態様において、CARへ結合する抗体またはその活性断片、変異体、もしくは部分は、抗イディオタイプ（抗ID）抗体である。
いくつかの態様において、刺激条件または薬剤は、TCR複合体の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる、1つまたは複数の薬剤、例えばリガンドを含む。いくつかの局面において、薬剤は、T細胞中においてTCR/CD3細胞内シグナル伝達カスケードを作動または開始させる。そのような薬剤としては、例えば固体支持体（例えばビーズ）へ結合された、抗体、例えば、TCR成分および／または共刺激受容体に特異的な抗体（例えば、抗CD3、抗CD28）、ならびに／あるいは、1つまたは複数のサイトカインが挙げられ得る。いくつかの態様において、1つまたは複数の薬剤はPMAおよびイオノマイシンである。
特定の態様において、表現型は、1つまたは複数の刺激に応答してのサイトカインの産生または分泌であるかまたはこれを含む。サイトカインの産生および／または分泌は、免疫反応に寄与し、抗ウイルスタンパク質の誘導およびT細胞増殖の誘導を含む種々のプロセスに関与する。サイトカインは、予め形成された因子ではないが、細胞活性化に応答して迅速に産生および分泌される。サイトカインの産生または分泌は、当技術分野において公知の任意の好適な技術によって測定、検出、および／または定量化され得る。
ある態様において、表現型は、1つまたは複数のサイトカインの産生である。特定の態様において、1つまたは複数のサイトカインの産生は、細胞内サイトカイン染色によって測定、検出、および／または定量化される。フローサイトメトリーによる細胞内サイトカイン染色(ICS)は、単一細胞レベルでサイトカイン産生を研究するためによく適している技術である。それは、細胞刺激後の小胞体内サイトカインの産生および蓄積を検出し、特定のサイトカインの産生について陽性または陰性である細胞集団の同定、あるいは閾値に基づいての高産生細胞と低産生細胞との分離を可能にする。ICSはまた、細胞表面マーカーを使用する免疫表現型検査のための他のフローサイトメトリープロトコルと組み合わせて、または特定の細胞サブグループ中のサイトカイン産生にアクセスするためのMHCマルチマーと共に使用することができるため、非常にフレキシブルでありかつ用途の広い方法である。サイトカイン産生を測定または検出するための他の単一細胞技術としては、ELISPOT、限界希釈法、およびT細胞クローニングが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの態様において、表現型はサイトカインの産生である。特定の態様において、表現型は、サイトカインの産生の欠如である。特定の態様において、表現型は、サイトカインの高レベルの産生について陽性であるかまたはサイトカインの高レベルの産生である。ある態様において、表現型は、サイトカインの低レベルの産生について陰性であるかまたはサイトカインの低レベルの産生である。サイトカインとしては、IL-1、IL-1β、IL-2、sIL-2Ra、IL-3、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-13、IL 27、IL-33、IL-35、TNF、TNFアルファ、CXCL2、CCL2、CCL3、CCL5、CCL17、CCL24、PGD2、LTB4、インターフェロンガンマ(IFN-γ)、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)、マクロファージ炎症性タンパク質(MIP)-1a、MIP-1b、Flt-3L、フラクタルカイン、および／またはIL-5が挙げられ得るが、これらに限定されない。
いくつかの態様において、表現型は、サイトカインの産生であるかまたはこれを含む。ある態様において、表現型は、2つ以上のサイトカインの産生であるかまたはこれらを含む。ある態様において、表現型は、1つまたは複数のサイトカインの産生の欠如であるかまたはこれを含む。ある態様において、表現型は、IL-2、IL-13、IFNγ、またはTNFαのうちの1つまたは複数の、産生またはその欠如であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、表現型は、サイトカインの、産生の存在および／または高レベルの産生の存在である。いくつかの態様において、表現型は、サイトカインの低い、減少した、または存在しない産生である。
いくつかの態様において、表現型は、例えば、分泌が妨げられるかまたは阻害される場合に刺激剤の存在下でまたは刺激条件下で評価されるような、サイトカインの内部（細胞内）産生であるかまたはこれを含む。特定の態様において、表現型は、サイトカインの内部産生の欠如または非存在であるかまたはこれらを含む。ある態様において、表現型は、ICSアッセイで評価されるような、2つ以上のサイトカインの産生の場合の1つまたは複数のサイトカインの内部量であるかまたはこれらを含む。ある態様において、表現型は、ICSアッセイで評価されるような、IL-2、IL-13、IFNγ、またはTNFαのうちの1つまたは複数の内部量であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、表現型は、ICSアッセイで評価されるような、1つまたは複数のサイトカインの低い内部量または検出可能な量の欠如であるかまたはこれらを含む。ある態様において、表現型は、ICSアッセイで評価されるような、IL-2、IL-13、IFNγ、またはTNFαの低い内部量または検出可能な量の欠如であるかまたはこれらを含む。
特定の態様は、表現型が、サイトカインの産生、またはサイトカインについての産生の欠如もしくは低量を含み得ることを意図する。これは、サイトカインのアイデンティティー、サイトカインを検出するために行われるアッセイ、およびアッセイで使用される刺激剤または条件を含むが、これらに限定されない、いくつかの因子に依存し得る。例えば、いくつかの態様において、表現型は、ICSによって示されるようなIL-13産生の欠如または低レベルであるかまたはこれを含み、一方、いくつかの態様において、表現型は、ICSによって示されるようなIFNγの産生であるかまたはこれを含むことが、意図される。
いくつかの態様において、表現型は、1つまたは複数のサイトカインの産生、およびCD3+、CD4+、CD8+、CD3+/CAR+、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+、アネキシンV-、アネキシンV- CD3+、アネキシンV-CD4+、アネキシンV- CD8+、アネキシンV-CD3+/CAR+、アネキシンV- CD4+/CAR+、アネキシンV- CD8+/CAR+、活性化カスパーゼ3-、活性化カスパーゼ3-/CD3+、活性化カスパーゼ3-/CD4+、活性化カスパーゼ3- /CD8+、活性化カスパーゼ3-/CD3+/CAR+、活性化カスパーゼ3-/ CD4+/CAR+、もしくは活性化カスパーゼ3-/CD8+/CAR+のいずれか、またはその組み合わせであるかまたはこれらを含む。特定の態様において、表現型は、CD4+/CAR+および／またはCD8+/CAR+中の1つまたは複数のサイトカインの産生であるかまたはこれらを含む。
いくつかの態様において、表現型は、1つまたは複数のサイトカインの産生の欠如であるかまたはこれを含む。ある態様において、表現型は、1つまたは複数のサイトカインの産生の欠如、およびCD3+、CD4+、CD8+、CD3+/CAR+、CD4+/CAR+、 CD8+/CAR+、アネキシンV-、アネキシンV- CD3+、アネキシンV-CD4+、アネキシンV- CD8+、アネキシンV-CD3+/CAR+、アネキシンV- CD4+/CAR+、アネキシンV- CD8+/CAR+、活性化カスパーゼ3-、活性化カスパーゼ3-/CD3+、活性化カスパーゼ3-/CD4+、活性化カスパーゼ3- /CD8+、活性化カスパーゼ3-/CD3+/CAR+、活性化カスパーゼ3-/ CD4+/CAR+、もしくは活性化カスパーゼ3-/CD8+/CAR+のいずれか、またはその組み合わせであるかまたはこれらを含む。
特定の態様において、表現型は、ICSアッセイで評価されるようなIL-2、IL-13、IFNγ、またはTNFαのうちの1つまたは複数の内部量の存在または非存在、および、細胞のサブセットまたは特定の細胞タイプの細胞についての1つまたは複数の特異的マーカーであるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、表現型は、IL-2、IL-13、IFNγ、またはTNFαのうちの1つまたは複数の、産生またはその欠如、ならびにCD4+/CAR+および／またはCD8+/CAR+であるかまたはこれらを含む。ある態様において、表現型は、IL-2の産生、ならびにCD4+/CAR+および／またはCD8+/CAR+であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、表現型は、IL-2の欠如または低産生、ならびにCD4+/CAR+および／またはCD8+/CAR+であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、表現型は、IL-13の産生、ならびにCD4+/CAR+および／またはCD8+/CAR+であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、表現型は、IL-13の産生、ならびにCD4+/CAR+および／またはCD8+/CAR+であるかまたはこれらを含む。ある態様において、表現型は、IL-13の欠如または低産生、ならびにCD4+/CAR+および／またはCD8+/CAR+であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、表現型は、IFNγの産生、ならびにCD4+/CAR+および／またはCD8+/CAR+であるかまたはこれらを含む。ある態様において、表現型は、TNFαの産生、ならびにCD4+/CAR+および／またはCD8+/CAR+であるかまたはこれらを含む。ある態様において、表現型は、TNFαの欠如または低産生、ならびにCD4+/CAR+および／またはCD8+/CAR+であるかまたはこれらを含む。
任意の1つまたは複数の表現型が、単独でまたは組み合わせて、提供される方法に従って評価または決定され得る。いくつかの態様において、表現型は、CD3+、CD3+/CAR+、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+、またはその組み合わせである。
ある態様において、表現型はCD3+であるかまたはこれを含む。ある態様において、表現型はCD3+/CAR+であるかまたはこれを含む。いくつかの態様において、表現型はCD8+/ CAR+であるかまたはこれを含む。ある態様において、表現型は、であるかまたはこれを含む。
特定の態様において、表現型はアネキシン-/CD3+/ CAR+であるかまたはこれを含む。いくつかの態様において、表現型はアネキシン-/CD4+/CAR+であるかまたはこれを含む。特定の態様において、表現型はアネキシン-/CD8+/CARである。
特定の態様において、表現型は、細胞内IL-2の欠如もしくは低量およびCD4+/CAR+であるかまたはこれを含む。特定の態様において、表現型は、細胞内IL-13の欠如もしくは低量およびCD4+/CAR+であるかまたはこれを含む。いくつかの態様において、表現型は、IL-13の細胞内発現の欠如もしくは低量およびCD8+/CAR+細胞である。特定の態様において、表現型は、細胞内TNFαの欠如もしくは低量 CD4+/CAR+である。
ある態様において、表現型はCD8+/CAR+であるかまたはこれを含む。ある態様において、表現型はアネキシン-/CD8+/CAR+であるかまたはこれを含む。
ある態様において、細胞組成物の特定の表現型の細胞の数、倍数、または分数が、決定、測定、獲得、検出、観察、および／または同定される。いくつかの態様において、細胞組成物はT細胞組成物である。ある態様において、細胞組成物は、組換え受容体（例えばCAR）を発現する細胞を含有する。特定の態様において、細胞組成物は、疾患または状態を治療するために対象へ投与され得る、組換え受容体を発現する細胞を含有する治療用T組成物である。ある態様において、表現型の細胞の数は、細胞組成物の表現型の細胞の総量である。ある態様において、表現型の細胞の数は、細胞組成物の用量中に存在する表現型の細胞の総数である。特定の態様において、表現型の細胞の数は、細胞組成物の試料中に存在する表現型の細胞の数である。いくつかの態様において、表現型の細胞の数は、細胞組成物、またはその用量もしくは試料中に存在する表現型の細胞の、頻度、比率、および／またはパーセンテージとして表現され得る。
いくつかの態様において、細胞組成物は対象から得られ、表現型の細胞の数、倍数、または分数は、対象体重に対して正規化された、細胞組成物中に存在する表現型の細胞の数である。ある態様において、表現型の測定値は、対象体重1ポンド当たりの表現型の細胞の数である。特定の態様において、表現型の測定値は、対象体重1 lb、2 lb、3 lb、4 lb、5 lb、10 lb、または20 lb（of 20 lbs.）当たりの表現型の細胞の数である。いくつかの態様において、表現型の測定値は、対象体重1 kg当たりの表現型の細胞の数である。特定の態様において、表現型の測定値は、対象体重1 kg、2 kg、3 kg、4 kg、5 kg、10 kg、または20 kg当たりの表現型の細胞の数である。
特定の態様において、表現型の細胞の数、倍数、または分数は、例えば、数、倍数、または分数の関連する値の範囲を圧縮するために、変換される。いくつかの態様において、変換は、データセット中の各ポイントへの決定論的数学関数の任意の適用であり、例えば、各データポイントxは、変換値y＝f(x)で置き換えられ、ここで、fは関数である。一般に、適用される予定である統計的推測手順の仮定にデータがより厳密に合うように見えるように、またはグラフの解釈可能性もしくは外観を改善するために、変換が適用され得る。大抵の場合、データを変換するために使用される関数は、可逆的であり、一般に連続的である。変換は、通常、比較可能な測定値の集合へ適用される。好適な変換の例としては、対数および平方根変換、逆数変換、ならびにべき変換が挙げられるが、これらに限定されない。ある態様において、表現型の細胞の数、倍数、または分数は、対数変換によって変換される。ある態様において、対数変換は、常用対数(log10(x))、自然対数(ln(x))または二進対数(log2(x))である。
B．抗原特異的または組換え受容体依存性活性
特定の態様は、組換え受容体依存性活性、例えばCAR依存性活性、または「B」が、組換え受容体を発現しない細胞中においては生じないかつ／または生じることができない組換え受容体を発現する細胞中において生じる活性であることを意図する。いくつかの態様において、組換え受容体依存性活性は、組換え受容体の活性または存在に依存する活性である。組換え受容体依存性活性は、組換え受容体の発現および／もしくは存在によって、または組換え受容体の活性の変化（例えば、受容体刺激）によって、直接または間接的に影響される、任意の細胞プロセスであり得る。いくつかの態様において、組換え受容体依存性活性は、細胞分裂、DNA複製、転写、タンパク質合成、膜輸送、タンパク質トランスロケーション、および／または分泌などの細胞プロセスを含み得るが、これらに限定されず、あるいは、それは、免疫細胞機能、例えば細胞溶解活性であり得る。ある態様において、組換え受容体依存性活性は、CAR受容体のコンフォメーション（confirmation）の変化、細胞内シグナル伝達分子のリン酸化、タンパク質の分解、転写、翻訳、タンパク質のトランスロケーション、ならびに／または、タンパク質もしくは成長因子、サイトカインなどの、因子の産生および分泌によって、測定され得る。ある態様において、組換え受容体はCARである。
ある態様において、組換え受容体依存性活性、例えばCAR依存性活性は、因子の測定値、例えば、量もしくは濃度、または細胞組成物の刺激後の量もしくは濃度の変化である。ある態様において、因子は、タンパク質、リン酸化タンパク質、開裂されたタンパク質、トランスロケートされたタンパク質、活性コンフォメーションのタンパク質、ポリヌクレオチド、RNAポリヌクレオチド、mRNA、および／またはshRNAであり得る。ある態様において、測定値は、キナーゼ活性の増加もしくは減少、プロテアーゼ活性、ホスファターゼ活性、cAMP産生、ATP代謝、トランスロケーション、例えば、タンパク質の核局限化、転写活性の増加、翻訳活性の増加、可溶性因子の産生および／もしくは分泌、細胞取り込み、ユビキチン化、ならびに／あるいはタンパク質分解を含み得るが、これらに限定されない。
特定の態様において、因子は、分泌される可溶性因子、例えば、ホルモン、成長因子、ケモカイン、および／またはサイトカインである。
いくつかの態様において、組換え受容体活性、例えば、CAR依存性活性は、刺激に対する応答である。ある態様において、細胞は、刺激条件または刺激剤の存在下でインキュベートされ、活性は、刺激に対する応答の少なくとも1つの局面であるかまたはこれらを含む。応答は、細胞内シグナル伝達事象、例えば、受容体分子の増加した活性、1つまたは複数のキナーゼの増加したキナーゼ活性、1つまたは複数の遺伝子の転写の増加、1つまたは複数のタンパク質の増加したタンパク質合成、および／または細胞内シグナル伝達分子、例えば、タンパク質の増加したキナーゼ活性を含み得るが、これらに限定されない。いくつかの態様において、応答または活性は、免疫活性に関連し、可溶性因子（例えばサイトカイン）の産生および／もしくは分泌（section）、抗体産生の増加、ならびに／または細胞溶解活性の増加を含み得るが、これらに限定されない。
特定の態様において、細胞組成物の刺激に対する応答は、刺激に対する応答、即ち、刺激によって開始される、トリガーされる、支えられる、延長される、および／または引き起こされる少なくとも1つの活性を測定、検出、または定量化することによって、評価される。ある態様において、細胞は刺激され、刺激に対する応答は、組換え受容体を発現する細胞に特異的である活性である。ある態様において、活性は組換え受容体特異的活性であり、活性は、組換え受容体を発現する細胞中において生じるが、該受容体を発現しない細胞中においては、生じないか、または最小限にのみ生じる。特定の態様において、組換え受容体はCARである。いくつかの態様において、活性はCAR依存性活性である。
細胞、例えば免疫細胞またはT細胞を刺激するために使用される条件は、特定の培地、温度、酸素含有量、二酸化炭素含量、時間、薬剤、例えば、栄養素、アミノ酸、抗生物質、イオン、および／または刺激因子、例えば、サイトカイン、ケモカイン、抗原、結合パートナー、融合タンパク質、組換え可溶性受容体、ならびに細胞を活性化するように設計された任意の他の薬剤のうちの1つまたは複数を含み得る。いくつかの態様において、細胞は刺激され、活性が、可溶性因子、例えばサイトカインまたはケモカインが産生または分泌されるかどうかによって、決定される。いくつかの態様において、刺激は非特異的であり、即ち、抗原特異的刺激ではない。
いくつかの態様において、活性は、組換え受容体を発現する細胞に特異的である。いくつかの態様において、組換え受容体を発現する細胞に特異的である活性は、組換え受容体の発現を欠く細胞中においては生じない。ある態様において、組換え受容体はCARであり、活性はCAR依存性活性である。特定の態様において、活性は、活性が組換え受容体を発現する細胞中に存在するのと同じ条件下では、組換え受容体の発現を欠く細胞中には存在しない。ある態様において、CAR依存性活性は、同じ条件下で、CAR-細胞中においては、CAR依存性活性と比べて約10％、約20％、約30％、約40％、約50％、約60％ 約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、約97％、約98％、約99％、または約99％、より少ない。
いくつかの態様において、活性は、組換え受容体（例えばCAR）を発現する細胞に特異的であり、活性は、組換え受容体を発現する細胞に特異的である薬剤での刺激によってまたは刺激条件下でもたらされる。いくつかの態様において、組換え受容体はCARであり、CAR特異的刺激は、CAR+細胞中において活性を刺激、トリガー、開始、および／または延長するが、CAR-細胞中においては活性を刺激、トリガー、開始、および／または延長しない。いくつかの態様において、CAR依存性活性は、CAR特異的刺激による刺激後、CAR+細胞中におけるのと比べてCAR-細胞中において、約10％、約20％、約30％、約40％、約50％、約60％ 約70％、約75％、約80％、約85％、約90％、約95％、約97％、約98％、約99％、または約99％、より少ない。
ある態様において、活性は、組換え受容体に特異的である薬剤によって刺激される、組換え受容体依存性、例えば、CAR依存性活性である。いくつかの態様において、組換え受容体特異的薬剤、例えば、CAR特異的薬剤は、組換え受容体、例えばCARによって結合および／または認識される抗原またはそのエピトープである。いくつかの態様において、組換え受容体特異的薬剤は、組換え受容体へ結合しかつ／またはこれを認識する抗体またはその活性断片である。いくつかの態様において、薬剤は、組換え受容体へ結合する、抗イディオタイプ抗体またはその活性断片、変異体、もしくは部分(抗ID)である。ある態様において、組換え受容体特異的薬剤は、その表面上に抗原を発現する細胞である。いくつかの態様において、組換え受容体依存性活性は、組換え受容体によって結合および／または認識される抗原またはそのエピトープによって刺激される。ある態様において、組換え受容体依存性活性は、組換え受容体へ結合しかつ／またはこれを認識する抗体またはその活性断片によって刺激される。特定の態様において、組換え受容体依存性活性は抗IDによって刺激される。
いくつかの態様において、活性は、組換え受容体（例えばCAR）を発現する細胞を含有する細胞組成物中において測定され、測定値は、1つまたは複数の対照と比較される。ある態様において、対照は、刺激されなかった細胞の、同様のまたは同一の組成物である。例えば、いくつかの態様において、活性は、薬剤と共のインキュベーション後または中に細胞組成物中において測定され、結果として生じる測定値は、薬剤と共にインキュベートされない同様のまたは同一の細胞組成物からの活性の対照測定値と比較される。いくつかの態様において、活性は組換え受容体依存性活性であり、細胞組成物および対照細胞組成物は両方とも、組換え受容体を発現する細胞を含有する。いくつかの態様において、活性は組換え受容体依存性活性であり、対照は、組換え受容体を発現する細胞、例えばCAR+細胞を含有しない、同様の細胞組成物から得られる。従って、いくつかの態様において、組換え受容体発現細胞を含有する細胞組成物、および、組換え受容体発現細胞を含有しない対照細胞組成物が、組換え受容体発現特異的薬剤と接触される。ある態様において、対照は、刺激前に得られる、組換え受容体を発現する同じ細胞組成物からの測定値である。ある態様において、対照測定値は、バックグラウンドシグナルを決定するために得られ、対照測定値が活性の測定値から引かれる。いくつかの態様において、細胞組成物中の活性の測定値は、対照測定値によって割られ、対照レベルに対する活性の比率である値が得られる。
特定の態様において、活性は、可溶性因子の産生および／または分泌であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、活性は、可溶性因子の産生および／または分泌であるかまたはこれらを含む組換え受容体（例えばCAR）依存性活性である。ある態様において、可溶性因子はサイトカインまたはケモカインである。
可溶性因子の産生または分泌の測定について好適な技術は、当技術分野において公知である。可溶性因子の産生および／または分泌は、因子の細胞外量の濃度もしくは量を決定することによって、または因子をコードする遺伝子の転写活性の量を決定することによって、測定することができる。好適な技術としては、イムノアッセイ、アプタマーベースのアッセイ、組織学的または細胞学的アッセイ、mRNA発現レベルアッセイ、酵素結合免疫測定法(ELISA)、イムノブロッティング、免疫沈降、ラジオイムノアッセイ(RIA)、免疫染色、フローサイトメトリーアッセイ、表面プラズモン共鳴(SPR)、化学ルミネセンスアッセイ、ラテラルフローイムノアッセイ、阻害アッセイ、またはアビディティアッセイ、タンパク質マイクロアレイ、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)、Meso Scale Discovery (MSD)電気化学発光、およびビーズベースの多重イムノアッセイ(MIA)などのアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、好適な技術は、可溶性因子に特異的に結合する検出可能な結合試薬を用いてもよい。
特定の態様において、可溶性因子の測定値は、ELISA（酵素結合免疫測定法）によって測定される。ELISAは、ペプチド、サイトカイン、抗体およびホルモンなどの物質の検出および定量化用に設計されたプレートベースのアッセイ技術である。ELISAにおいて、可溶性因子は、固体表面へ固定化され、次いで、酵素へ連結されている抗体と複合体化されなければならない。検出は、検出可能なシグナルを生じさせるための基質と共のインキュベーションによって、コンジュゲート化酵素活性を評価することによって、達成される。いくつかの態様において、CAR依存性活性は、ELISAアッセイを用いて測定される。
いくつかの態様において、組換え受容体依存性活性は、可溶性因子の分泌または産生である。ある態様において、産生または分泌は、組換え受容体発現細胞、例えばCAR発現細胞を含有する細胞組成物中において、組換え受容体特異的薬剤、例えば、CAR+特異的薬剤によって刺激される。いくつかの態様において、組換え受容体特異的薬剤は、組換え受容体に特異的である抗原またはそのエピトープ；抗原を発現する細胞、例えば標的細胞；または、組換え受容体へ結合しかつ／またはこれを認識する抗体またはその部分もしくは変異体；あるいはその組み合わせである。ある態様において、組換え受容体特異的薬剤は、組換え受容体によって結合または認識される抗原またはそのエピトープを含む組換えタンパク質である。
ある態様において、組換え受容体依存性可溶性因子産生および／または分泌は、組換え受容体（例えばCAR）を発現する細胞を含有する細胞組成物を、組換え受容体特異的薬剤、例えばCAR+特異的薬剤と共にインキュベートすることによって、測定される。ある態様において、可溶性因子はサイトカインまたはケモカインである。いくつかの態様において、組換え受容体発現細胞を含有する細胞組成物の細胞は、ある量の時間の間、組換え受容体特異的薬剤の存在下でインキュベートされ、そして、可溶性因子の産生および／または分泌が、インキュベーション中の1つまたは複数の時点で測定される。いくつかの態様において、細胞は、最大または約1時間、約2時間、約3時間、約4時間、約5時間、約6時間、約7時間、約8時間、約9時間、約10時間、約11時間、約12時間、約18時間、約19時間、約20時間、約21時間、約22時間、約23時間、約24時間、約48時間、または1時間〜4時間、1時間〜12時間、12時間〜24時間（各々両端の値を含む）の期間の間、または24時間を超えて、CAR特異的薬剤と共にインキュベートされ、そして、可溶性因子、例えばサイトカインの量が検出される。
いくつかの態様において、組換え受容体特異的薬剤は、組換え受容体によって認識される抗原を発現する標的細胞である。いくつかの態様において、組換え受容体はCARであり、細胞組成物の細胞は、約10:1、約5:1、約4:1、約3:1、約2:1、約1:1、約1:2、約1:3、約1:4、約1:5、約1:6、約1:7、約1:8、約1:9、もしくは約1:10、または前述もののいずれかの間の範囲、例えば、10:1〜1:1、3:1〜1:3、もしくは1:1〜1:10（各々両端の値を含む）の比率での、標的細胞に対する細胞組成物の総細胞、CAR+細胞、CAR+/CD8+細胞、またはアネキシン-/CAR+/CD8+細胞の比率で、標的細胞と共にインキュベートされる。
いくつかの態様において、細胞組成物の、約1×102〜約1×104、約1×103〜約1×105、約1×104〜約1×106、約1×105〜約1×107、約1×106〜約1×108、約1×107〜約1×109、または約1×108〜約1×1010個の細胞（各々両端の値を含む）が、組換え受容体特異的薬剤、例えば、CAR+特異的試薬と共にインキュベートされる。いくつかの態様において、細胞組成物の約1×106〜約1×107個の細胞（両端の値を含む）が、組換え受容体特異的薬剤、例えば、CAR+特異的試薬と共にインキュベートされる。ある態様において、組成物の約2.5×106個の細胞が、組換え受容体特異的薬剤と共にインキュベートされる。ある態様において、細胞組成物の、約1×102〜約1×104、約1×103〜約1×105、約1×104〜約1×106、約1×105〜約1×107、約1×106〜約1×108、約1×107〜約1×109、または約1×108〜約1×1010個の組換え受容体発現細胞、CAR+細胞、CAR+/CD8+細胞、またはアネキシン-/CAR+/CD8+細胞（各々両端の値を含む）が、CAR+特異的薬剤と共にインキュベートされる。
いくつかの態様において、細胞組成物の細胞は、ある体積の細胞培地中において、組換え受容体特異的薬剤、例えば、CAR+特異的薬剤と共にインキュベートされる。ある態様において、細胞は、少なくとももしくは約1μL、少なくとももしくは約10μL、少なくとももしくは約25μL、少なくとももしくは約50μL、少なくとももしくは約100μL、少なくとももしくは約500μL、少なくとももしくは約1 mL、少なくとももしくは約1.5 mL、少なくとももしくは約2 mL、少なくとももしくは約2.5 mL、少なくとももしくは約5 mL、少なくとももしくは約10 mL、少なくとももしくは約20 mL、少なくとももしくは約25 mL、少なくとももしくは約50 mL、少なくとももしくは約100 mLの、または100 mLを超える体積中において、組換え受容体特異的薬剤と共にインキュベートされる。ある態様において、細胞は、約1μL〜約100μL、約100μL〜約500μL、約500μL〜約1 mL、約500μL〜約1 mL、約1 mL〜約10 mL、約10 mL〜約50 mL、または約10 mL〜約100 mL（各々両端の値を含む）に入る体積中において、CAR+特異的薬剤と共にインキュベートされる。ある態様において、細胞は、約100μL〜約1 mL（両端の値を含む）の体積中において、組換え受容体特異的薬剤と共にインキュベートされる。特定の態様において、細胞は、約500μLの体積中において、組換え受容体特異的薬剤と共にインキュベートされる。
いくつかの態様において、細胞組成物の細胞は、約1 fmol〜約1 pmol、約1 pmol〜約1nmol、約1 nmol〜約1μmol、約1μmol〜約1 mmol、または約1 mmol〜1 mol（各々両端の値を含む）の量で、CAR+特異的薬剤と共にインキュベートされる。特定の態様において、細胞組成物の細胞は、約1 fM〜約1 pM、約1 pM〜約1nM、約1 nM〜約1μM、約1μM〜約1 mM、または約1 mM〜1 mol（各々両端の値を含む）の濃度で、CAR+特異的薬剤と共にインキュベートされる。例示的な単位としては、pg/mL、pg/(mL/時間)、pg(mL×細胞)、pg/(mL×時間×細胞)、およびpg/(mL×時間×106細胞)が挙げられるが、これらに限定されない。
ある態様において、組換え受容体特異的活性、例えばCAR+特異的活性の測定値は、インキュベーション中の時点または終了時の、T細胞組成物中の可溶性因子の、量もしくは濃度、または相対量もしくは濃度である。特定の態様において、測定値は、対照測定値によって引かれるか、または対照測定値に対して正規化される。いくつかの態様において、対照測定値は、インキュベーション前に得られた同じ細胞組成物からの測定値である。特定の態様において、対照測定値は、組換え受容体特異的刺激剤と共にインキュベートされなかった同一の対照細胞組成物から得られた測定値である。ある態様において、対照は、組換え受容体陽性細胞を含有しない細胞組成物から、組換え受容体特異的薬剤と共のインキュベーション中の同一の時点で得られた測定値である。
いくつかの態様において、測定値は、対照と比較しての量または濃度の正規化された比率である。特定の態様において、測定値は、ある量の時間当たりの、例えば、1分間当たりまたは1時間当たりの、可溶性因子の量または濃度である。いくつかの態様において、測定値は、1細胞当たりまたは1セットもしくは参照数の細胞当たりの、例えば、100細胞当たり、103細胞当たり、104細胞当たり、105細胞当たり、106細胞当たりなどの、可溶性因子の量または濃度である。ある態様では（In certain）、測定値は、ある量の時間当たり、1細胞当たりまたは参照数の細胞当たりの、可溶性因子の量または濃度である。いくつかの態様において、測定値は、細胞組成物の、組換え受容体を発現する細胞、CAR+細胞、CAR+/CD8+細胞、またはアネキシン-/CAR+/CD8+細胞当たりの、可溶性因子の量または濃度である。ある態様において、測定値は、ある量の時間当たり（例えば、1分間当たりまたは1時間当たり）、細胞組成物の、組換え受容体を発現する細胞、CAR+細胞、CAR+/CD8+細胞、またはアネキシン-/CAR+/CD8+細胞当たりの、可溶性因子の量または濃度である。いくつかの態様において、測定値は、ある量の時間当たり、組換え受容体もしくはCAR+特異的薬剤の量または濃度当たりの、可溶性因子の量または濃度である。いくつかの態様において、測定値は、1細胞当たりまたは1セットもしくは参照数の細胞当たり、CAR+特異的薬剤の量または濃度当たりの、可溶性因子の量または濃度である。ある態様では、測定値は、ある量の時間当たり、組換え受容体もしくはCAR+特異的薬剤の量または濃度当たり、1細胞当たりまたは参照数の細胞当たりの、可溶性因子の量または濃度である。いくつかの態様において、測定値は、組換え受容体もしくはCAR+特異的薬剤の量または濃度当たり、細胞組成物の、組換え受容体を発現する細胞、CAR+細胞、CAR+/CD8+細胞、またはアネキシン-/CAR+/CD8+細胞当たりの、可溶性因子の量または濃度である。ある態様において、測定値は、ある量の時間当たり、組換え受容体もしくはCAR+特異的薬剤の量または濃度当たり、細胞組成物の、CAR+細胞、CAR+/CD8+細胞、またはアネキシン-/CAR+/CD8+細胞当たりの、可溶性因子の量または濃度である。
特定の態様において、組換え受容体またはCAR依存性活性は、2つ以上の可溶性因子の産生または分泌である。ある態様において、組換え受容体またはCAR依存性活性は、2、3、4、5、6、7、8、9、10の、または10を超える可溶性因子の産生または分泌である。いくつかの態様において、2、3、4、5、6、7、8、9、10の、または10を超える可溶性因子の測定値は、算術平均または幾何平均へ組み合わされる。ある測定値において、組換え受容体活性の測定値は、2、3、4、5、6、7、8、9、10の、または10を超える可溶性因子の合成数の分泌である。
特定の態様において、組換え受容体依存性活性の測定値は、例えば対数変換によって、変換される。ある態様において、組換え受容体活性の測定値は、常用対数(log10(x))、自然対数(ln(x))または二進対数(log2(x))によって変換される。いくつかの態様において、組換え受容体依存性活性の測定値は、2つ以上の（two more）の産生または分泌の測定値の合成数である。いくつかの態様において、可溶性因子の産生または分泌の2つ以上の測定値は、合成測定値へ組み合わされる前に変換される。特定の態様において、組換え受容体依存性活性の測定値は、参照測定値に対して正規化する前に変換される。ある態様において、組換え受容体依存性活性の測定値は、参照測定値に対する正規化前に変換される。
ある態様において、可溶性因子はサイトカインである。サイトカインは、細胞連絡において広く機能するシグナル伝達小分子の大群である。サイトカインは、大抵の場合、インターロイキン、ケモカイン、およびインターフェロンを含む、様々な免疫調節分子に関連する。あるいは、サイトカインはそれらの構造によって特徴づけられ得、これらは4つのファミリー、4アルファヘリックスファミリー（IL-2サブファミリー、IFNサブファミリー、およびIL-10サブファミリーを含む）；IL-1ファミリー、IL-17ファミリー、ならびに、トランスホーミング増殖因子βファミリーのメンバーを含むシステインノットサイトカインに分類され得る。いくつかの態様において、CAR依存性活性は、インターロイキン、インターフェロン、およびケモカインを含む1つまたは複数の可溶性因子の産生または分泌である。特定の態様において、CAR依存性活性は、IL-2ファミリーメンバー、IFNサブファミリーメンバー、IL-10サブファミリーメンバー；IL-1ファミリーメンバー、IL-17ファミリーメンバー、システインノットサイトカイン、および／またはトランスホーミング増殖因子βファミリーのメンバーのうちの1つまたは複数の産生または分泌である。
特定の態様において、組換え受容体またはCAR依存性活性は、IL-1、IL-1β、IL-2、sIL-2Ra、IL-3、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-13、IL 27、IL-33、IL-35、TNF、TNFアルファ、CXCL2、CCL2、CCL3、CCL5、CCL17、CCL24、PGD2、LTB4、インターフェロンガンマ(IFN-γ)、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)、マクロファージ炎症性タンパク質(MIP)-1a、MIP-1b、Flt-3L、フラクタルカイン、および／またはIL-5のうちの1つまたは複数の産生および／または分泌である。ある態様において、CAR依存性活性は、Th17サイトカインの産生または分泌である。いくつかの態様において、Th17サイトカインはGMCSFである。いくつかの態様において、CAR依存性活性は、Th2サイトカインの産生または分泌を含み、ここで、Th2サイトカインは、IL-4、IL-5、IL-10、またはIL-13である。
ある態様において、組換え受容体またはCAR依存性活性は、炎症誘発性サイトカインの産生または分泌である。炎症誘発性サイトカインは、炎症反応を開始し、自然免疫反応を媒介する病原体に対する宿主防御を調節することにおいて役割を果たす。炎症誘発性サイトカインとしては、インターロイキン(IL)、インターロイキン-lβ(IL-1)、インターロイキン-3 (IL-3)、インターロイキン-5 (IL-5)、インターロイキン-6 (IL-6)、インターロイキン-13 (IL-13)、腫瘍壊死因子(TNF)、CXC-ケモカインリガンド2 (CXCL2)、CC-ケモカインリガンド2 (CCL2)、CC-ケモカインリガンド3 (CCL3)、CC-ケモカインリガンド5 (CCL5)、CC-ケモカインリガンド17 (CCL17)、CC-ケモカインリガンド24 (CCL24)、プロスタグランジンD2 (PGD2)およびロイコトリエンB4 (LTB4)ならびにIL-33.)が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、CAR依存性活性は、インターロイキンおよび／またはTNFファミリーメンバーの産生および／または分泌である。特定の態様において、CAR依存性活性は、IL-1、IL-6、IL-8、およびIL-18、TNFα、またはその組み合わせの産生および／または分泌である。
特定の態様において、CAR特異的活性は、IL-2、IFNγ、TNFαまたはその組み合わせの分泌である。
特定の態様において、活性は、T細胞組成物の細胞溶解性（細胞傷害性）である。特定の態様において、活性は、組換え受容体（例えばCAR）依存性細胞溶解活性である。いくつかの態様において、組換え受容体依存性細胞溶解活性は、組換え受容体を発現する細胞、または組換え受容体を発現する細胞を含有する細胞組成物を、組換え受容体によって結合および／または認識される抗原および／またはエピトープを発現する標的細胞に曝露する、これらと共にインキュベートする、かつ／またはこれらと接触させることによって、評価される。細胞溶解活性は、経時的に標的細胞数を直接または間接的に測定することによって、測定することができる。例えば、標的細胞は、検出可能なマーカー共にインキュベートされ、その後、組換え受容体発現細胞と共にインキュベートされ得る；標的細胞が溶解される場合に検出可能なマーカー、または生存する標的細胞中において検出可能である検出可能なマーカー。これらの読み出しは、直接的または間接的な標的細胞数および／または標的細胞死を提供し、アッセイ中の異なる時点で測定され得る。標的細胞数の減少および／または標的細胞死の増加は、細胞の細胞溶解活性を示す。細胞溶解アッセイを行うための好適な方法は、当技術分野において公知であり、これらとしては、クロム-51放出アッセイ、非放射性クロムアッセイ、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル(CFSE)、PKH-2、およびPKH-26などの蛍光色素を使用するフローサイトメトリーアッセイが挙げられるが、これらに限定されない。
ある態様において、組換え受容体（例えばCAR）依存性細胞溶解活性は、組換え受容体を発現する細胞を含有する細胞組成物を、組換え受容体によって結合または認識される抗原またはそのエピトープを発現する標的細胞と共にインキュベートすることによって、測定される。ある態様において、組換え受容体はCARである。いくつかの態様において、細胞組成物の細胞は、約10:1、約5:1、約4:1、約3:1、約2:1、約1:1、約1:2、約1:3、約1:4、約1:5、約1:6、約1:7、約1:8、約1:9、もしくは約1:10の比率で、または10:1〜1:1、3:1〜1:3、または1:1〜1:10（各々両端の値を含む）の比率で、標的細胞と共にインキュベートされる。いくつかの態様において、細胞組成物の細胞は、約10:1、約5:1、約4:1、約3:1、約2:1、約1:1、約1:2、約1:3、約1:4、約1:5、約1:6、約1:7、約1:8、約1:9、もしくは約1:10、または10:1〜1:1、3:1〜1:3、もしくは1:1〜1:10（各々両端の値を含む）の比率での、標的細胞に対する細胞組成物のCAR+細胞、CAR+/CD8+細胞、またはアネキシン-/CAR+/CD8+細胞の比率で、標的細胞と共にインキュベートされる。
ある態様において、細胞組成物の細胞は、最大または約1時間、約2時間、約3時間、約4時間、約5時間、約6時間、約8時間、約12時間、約18時間、約24時間、約48時間、または48時間を超えて、標的細胞と共にインキュベートされる。いくつかの態様において、細胞組成物は、約18時間、19時間、20時間、21時間、22時間、23時間、または24時間、インキュベートされる。いくつかの態様において、細胞組成物の、約1×102〜約1×104、約1×103〜約1×105、約1×104〜約1×106、約1×105〜約1×107、約1×106〜約1×108、約1×107〜約1×109、または約1×108〜約1×1010個の細胞（各々両端の値を含む）が、標的細胞と共にインキュベートされる。ある態様において、細胞組成物の、約1×102〜約1×104、約1×103〜約1×105、約1×104〜約1×106、約1×105〜約1×107、約1×106〜約1×108、約1×107〜約1×109、または約1×108〜約1×1010個のCAR+細胞、CAR+/CD8+細胞、またはアネキシン-/CAR+/CD8+細胞（各々両端の値を含む）が、標的細胞と共にインキュベートされる。
いくつかの態様において、活性の測定値は対照と比較される。ある態様において、対照は、細胞組成物と共にインキュベートされない標的細胞の培養物である。いくつかの態様において、対照は、同じ比率で標的細胞と共にインキュベートされるCAR+細胞を含有しない対照細胞組成物からの測定値である。
ある態様において、細胞溶解活性アッセイの測定値は、インキュベーション中の時点または終了時で生存している標的細胞の数である。ある態様において、測定値は、インキュベーション中に放出される標的細胞死のマーカー（例えばクロム-51）の量である。いくつかの態様において、測定値は、単独でインキュベートされた対照の標的細胞の量から、所定の時点での共インキュベーション下の標的細胞の量を引くことによって決定される、標的細胞死の量である。いくつかの態様において、測定値は、標的細胞の出発量と比較しての、ある時点で残っている標的細胞のパーセンテージである。特定の態様において、測定値は、ある量の時間にわたって殺された細胞の量である。ある態様において、測定値は、細胞組成物の各細胞当たり殺された細胞の量である。いくつかの態様において、測定値は、1細胞当たり殺された細胞の量、または1セット数もしくは参照の細胞当たり殺された細胞の量、例えばこれらに限定されないが、組成物の100細胞当たり、103細胞当たり、104細胞当たり、105細胞当たり、106細胞当たり、107細胞当たり、108細胞当たり、109細胞当たり、または1010細胞当たり、殺された標的細胞の量である。特定の態様において、測定値は、細胞組成物の、各CAR+細胞、CAR+/CD8+細胞、もしくはアネキシン-/CAR+/CD8+細胞、またはその参照もしくはセット数当たり殺された細胞の量である。ある態様において、測定値は、細胞組成物の細胞当たりの、ある量の時間にわたって殺された細胞の量である。特定の態様において、測定値は、細胞組成物のCAR+細胞、CAR+/CD8+細胞、またはアネキシン-/CAR+/CD8+細胞当たりの、ある量の時間にわたって殺された細胞の量である。
いくつかの態様において、組換え受容体依存性活性は細胞溶解活性ではない。特定の態様において、CAR+依存性活性は細胞溶解活性ではない。
参照標準
特定の態様は、組換え受容体依存性活性および／またはCAR+依存性活性の測定値が、参照測定値（即ち、参照測定値）に対して正規化され得ることを意図する。特定の態様において、参照測定値は、活性の、既定の測定値、またはその値である。いくつかの態様において、参照測定値は、異なる対象から誘導される複数の細胞組成物の平均値または最頻値である。いくつかの態様において、複数の細胞組成物は、異なる対象から誘導され、同じ組換え受容体を発現する細胞を含有する。ある態様において、参照標準は、組換え受容体依存性活性の測定と同じ方法で正規化されたかまたは対照群から引かれた測定値から誘導される。特定の態様において、参照測定値は、組換え受容体活性の測定と同じアッセイ条件下で得られた異なる細胞組成物から得られた測定値から誘導される。特定の態様において、組換え受容体依存性活性の測定値は、参照測定値に対して正規化される。
ある態様において、参照測定値は、複数の細胞組成物からの測定値の平均値または最頻値である。ある態様において、参照測定値は、複数の細胞組成物中の細胞の少なくとも一部によって発現される同じCARを発現する細胞を含有する細胞組成物から得られる。ある態様において、参照測定値は、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25の、25を超える、30を超える、40を超える、または50を超える細胞組成物から得られた測定値の平均値または中央値である。
ある態様において、組換え受容体特異的またはCAR特異的活性の測定値は、疾患または状態を有するヒト対象に由来する細胞組成物から得られ、参照測定値と比較される。ある態様において、参照測定値は、治療用T細胞組成物である細胞組成物から得られる。ある態様において、治療用T細胞組成物は、例えば臨床試験において、ヒト対象へ治療的に投与された細胞組成物である。いくつかの態様において、参照T細胞組成物の投与後の安全性および有効性転帰は、既知である。ある態様において、対象は、抗原を発現するかまたは抗原に関連する疾患または状態を有する。
いくつかの態様において、参照T細胞組成物の各々は、対象へ投与されたことがある。特定の態様において、対象への参照T細胞組成物の投与は、対象への投与後に許容される安全性プロファイルをもたらすことが観察および決定された。特定の態様において、参照T細胞組成物の投与は、いかなる重度の毒性ももたらさなかった。ある態様において、参照T細胞組成物の投与は、いかなる重度の神経毒性ももたらさなかった。特定の態様において、参照T細胞組成物は、全て、神経毒性についてのグレード4以下、グレード3以下、グレード2以下、グレード1以下、またはグレード0スコアに関連した組成物である。いくつかの態様において、参照細胞組成物は、許容される安全性プロファイルに関連する。特定の態様において、許容される安全性プロファイルは、観察されるグレード1以上、観察されるグレード2以上、観察されるグレード3以上、またはグレード4以上の神経毒性の非存在である。ある態様において、参照T細胞組成物は、観察されるグレード3以上の神経毒性の非存在という許容される安全性プロファイルに関連する。特定の態様において、参照T細胞組成物は、観察されるグレード3以上の神経毒性の非存在という許容される安全性プロファイルに関連する。
ある態様において、参照治療用T細胞組成物の各々は、対象への投与後に所望の有効性をもたらすことが観察または決定されている。ある態様において、参照T細胞組成物を投与された対象のような、対象は、抗原を発現するかまたは抗原に関連する疾患または状態を有した。特定の態様において、参照治療用T細胞組成物の各々は、完全奏効(CR)をもたらすことが観察または決定された。
いくつかの態様において、組換え受容体依存性活性の測定値は、1つまたは複数の可溶性因子の産生または分泌の測定値である。ある態様において、可溶性因子は、1つまたは複数のサイトカインである。特定の態様において、CAR特異的活性は、2つ以上のサイトカインの分泌である。ある態様において、2つ以上のサイトカインの組換え受容体依存性分泌の測定値は、細胞組成物から得られ、対応のサイトカインの参照測定値に対して正規化される。いくつかの態様において、2つ以上の正規化された測定値は、参照測定値に対して正規化される。いくつかの態様において、正規化された測定値は、単一の合成値へ組み合わされる。
特定の態様において、CAR特異的活性は、IL-2、IFNγ、TNFα、またはその組み合わせの分泌である。ある態様において、IL-2、IFNγ、TNFα、またはその組み合わせのCAR-依存性分泌の測定値は、細胞組成物から得られ、対応のサイトカインの参照測定値に対して正規化される。いくつかの態様において、IL-2、IFNγ、およびTNFαのうちの2つ以上の測定値は、参照測定値に対して正規化される。いくつかの態様において、正規化された測定値は、単一の値へ組み合わされる。
特定の態様は、参照測定値が、許容される安全性プロファイルおよびまたは所望の有効性に関連した参照組成物から誘導される場合、1に近い正規化された測定値は、許容される安全性プロファイルおよび／または所望の有効性に同様に関連する高い確率を有することを意図する。ある態様は、T細胞組成物由来の測定値は、測定値対参照測定値の比がほぼまたはおよそ1:1である場合、許容される安全性プロファイルおよび／または所望の有効性に関連する高い確率を有することを意図する。
特定の態様は、特定のサイトカインのCAR+依存性分泌は、有害事象または毒性転帰または可能性を示さない、またはこれらと相関しない、もしくは有意には相関しないことが観察されたことを意図する。これらのサイトカインについて、CAR-依存性分泌の測定値は、T細胞組成物の治療的投与の安全性または有効性を予測する。いくつかの態様において、安全性または有効性と相関しないかまたはこれらを示さないサイトカインのCAR-依存性分泌の測定値は、測定され、他の対象に由来する細胞組成物から得られた対応のサイトカインの測定値から誘導された参照測定値と比較されるかまたはこれに対して正規化される。いくつかの態様において、安全性または有効性と相関しないかまたはこれらを示さないサイトカインのCAR-依存性サイトカイン分泌の測定値は、細胞組成物がCAR-依存性刺激に対して可変応答をもたらすかどうかを決定するために、対応の参照測定値と比較される。いくつかの態様において、分泌は、安全性または有効性と相関するかまたはこれらを示すとはみなされない。特定の態様は、IL-4、IL-5、IL-10、またはIL-13のCAR-依存性サイトカイン分泌の1つまたは複数の測定値、あるいはその合成数の正規化は、細胞組成物から得られた測定値の可変性および信頼性を決定するために有用であることを意図する。
III．治療用T細胞組成物を評価する方法
治療用組成物の、いくつかの態様において、疾患または状態を有する対象への治療用T細胞組成物の1つまたは複数の単位用量の投与前または投与と同時または投与後の治療用T細胞組成物の、効力および／または安全性および／または活性および／または有効性を特徴付けるかまたは評価することを伴う方法を本明細書に提供する。いくつかの態様において、提供される方法は、本明細書に記載されるT細胞組成物の投与で有害事象を発症する危険性を評価する。いくつかの態様において、T細胞組成物は、該組成物が決定された安全性範囲外にあると決定される場合、対象へのその後の投与についてリリースされない。いくつかの局面において、提供される方法は、他の局面の中でも、細胞組成物を評価し、組成物が対象へ投与されるかどうか、組成物が重度の神経毒性のような毒性を発症する危険性と相関する可能性が高いかどうか、および／または、組成物が効果的である可能性が高いかどうかを決定することができる、放出アッセイを提供する。いくつかの態様において、BがUSLを上回る場合、T細胞組成物は、対象へ投与されないことを推奨され、かつ／または、対象へ投与される単位用量は、変更または調節される。BがUSLを下回る場合、製品は治療用にリリースされ得る。
いくつかの態様において、本明細書に記載される方法を使用して評価される試料は、疾患または状態を有する対象から誘導され、かつ、疾患または状態に関連する抗原へ特異的に結合する、組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体(CAR)をコードする核酸で形質導入された、T細胞を含むT細胞組成物から得られるかまたは誘導される。いくつかの局面において、本明細書に記載されるアッセイは、細胞組成物についてのBを決定し、ここで、Bは、所与の組成物中の、組換え受容体依存性活性の程度を示すかまたはこれと相関する、パラメータの値、またはその倍数もしくは変換である。治療用T組成物をアッセイする方法を本明細書にさらに提供し、該方法は、疾患または状態に関連する抗原へ特異的に結合する組換え受容体を含むT細胞を含むT細胞組成物由来の試料を、Bに基づいて細胞組成物の効力について評価する工程を含み、ここで、Bは、所与の組成物中の活性の程度を示すかまたはこれと相関する、パラメータの値、またはその倍数もしくは変換である。いくつかの態様において、提供される方法は、さらに、Bに基づいて細胞組成物の効力を評価し、かつ／または、組成物がLSLを上回るかおよび／またはBについてのUSLを下回るかどうかを評価する。
いくつかの態様において、BがUSLを上回る場合、対象へ投与される単位用量は、変更または調節され、調節された単位用量は、細胞の標的数またはT細胞組成物の参照単位(RU)の標的数を含有し、所与の組成物中のRUは式：RU＝A×Bによって定義され、式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ、Bは、所与の組成物中の組換え受容体依存性の、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値、またはその分数もしくは倍数もしくは変換である。
いくつかの態様において、パラメータは、1つまたは複数の因子の測定値またはその正規化値である。いくつかの態様において、産生の指標は、ポリクローナル薬剤、抗原特異的薬剤、または組換え受容体に結合する薬剤と共にT細胞組成物の試料をインキュベートすることを含む、細胞内サイトカイン染色アッセイにおいて測定される。いくつかの態様において、測定は、抗原、抗原を発現する細胞、および／または、組換え受容体（任意でCAR）へ特異的に結合する薬剤の存在下での所与の組成物またはその試料の固定時間（任意で24時間）の培養またはインキュベーションを伴うアッセイにおいて行われる。いくつかの局面において、アッセイはELISAである。
いくつかの態様において、因子の測定値は、因子の濃度、相対濃度、量、または相対量；所与の組成物の投入細胞の1単位当たりの因子の量または相対量；時間の1単位（任意で1時間）当たり所与の組成物の投入細胞の1単位当たりの因子の量または相対量、を示す測定値またはレベルである。いくつかの態様において、1つまたは複数の因子は、可溶性因子の1つまたは組み合わせ、任意で、サイトカイン、ケモカインまたは可溶性受容体、任意で可溶性共刺激受容体の1つまたは組み合わせである。
いくつかの態様において、パラメータは、1つまたは複数の因子の測定値またはその正規化値である。いくつかの態様において、組換え受容体依存性活性は、IL-1、IL-1β、IL-2、sIL-2Ra、IL-3、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、IL-13、IL 27、IL-33、IL-35、TNF、TNFアルファ、CXCL2、CCL2、CCL3、CCL5、CCL17、CCL24、PGD2、LTB4、インターフェロンガンマ(IFN-γ)、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)、マクロファージ炎症性タンパク質(MIP)-1a、MIP-1b、Flt-3L、フラクタルカイン、および／またはIL-5のうちの1つまたは複数の産生または蓄積の測定値である。ある態様において、CAR依存性活性は、Th17サイトカインの産生または分泌である。いくつかの態様において、Th17サイトカインはGMCSFである。いくつかの態様において、組換え受容体依存性活性は、Th2サイトカインの産生または蓄積の測定値であり、ここで、Th2サイトカインは、IL-4、IL-5、IL-10、またはIL-13である。ある態様において、Bは、炎症誘発性サイトカイン、例えば、インターロイキン(IL)、インターロイキン-lβ(IL-1)、インターロイキン-3 (IL-3)、インターロイキン-5 (IL-5)、インターロイキン-6 (IL-6)、インターロイキン-13 (IL-13)、腫瘍壊死因子(TNF)、CXC-ケモカインリガンド2 (CXCL2)、CC-ケモカインリガンド2 (CCL2)、CC-ケモカインリガンド3 (CCL3)、CC-ケモカインリガンド5 (CCL5)、CC-ケモカインリガンド17 (CCL17)、CC-ケモカインリガンド24 (CCL24)、プロスタグランジンD2 (PGD2)およびロイコトリエンB4 (LTB4)ならびにIL-33の産生および／または分泌を示す。いくつかの態様において、組換え受容体依存性活性は、インターロイキンおよび／またはTNFファミリーメンバー、例えば、IL-1、IL-6、IL-8、およびIL-18、TNFα、またはその組み合わせの産生または蓄積の測定値である。特定の態様において、組換え受容体依存性活性は、IL-2、IFNγ、TNFα、またはその組み合わせの産生または蓄積の測定値である。いくつかの態様において、1つまたは複数の因子は、炎症誘発性サイトカイン、Th2サイトカインおよびTh17サイトカインのうちの1つまたはこれらの組み合わせである。いくつかの態様において、1つまたは複数の因子は、IL-2、IFNγ、TNFα、IL4、IL-5、IL-10、IL-13、GM-CSF、sCD137、MIP1aおよびM1Pbのうちの1つまたはこれらの組み合わせである。いくつかの態様において、1つまたは複数の因子は、IL-2、IFNγ、TNFαおよびIL-10のうちの1つまたはこれらの組み合わせである。
いくつかの態様において、1つまたは複数の因子は、可溶性因子の1つまたは組み合わせ、任意で、サイトカイン、ケモカインまたは可溶性受容体、任意で可溶性共刺激受容体の1つまたは組み合わせである。いくつかの態様において、パラメータは、2つ以上の因子の測定値の算術平均または幾何平均である。いくつかの態様において、パラメータは、TNFα、IFNγおよびIL-2のうちの少なくとも2つのまたはTNFα、IFNγおよびIL-2の測定値（任意で量または濃度）の算術平均または幾何平均である。いくつかの態様において、パラメータは、測定値の正規化値であり、ここで、正規化は、因子の参照測定値と比較された場合のものである。
いくつかの態様において、Aは、所与の組成物中に存在する所定の表現型の、細胞の数、またはその倍数もしくは分数もしくは変換である。いくつかの局面において、Aは、所与の組成物中の2つ以上の表現型の、細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均であり、ここで任意で、2つ以上の表現型は、CD8+を含む第1の表現型およびCD4+を含む第2の表現型を含む。
いくつかの態様において、参照RUの標的数は、RUの閾値数以下であり、ここで、調節された単位用量は、閾値数を超えるRUを含有しない。いくつかの局面において、単位の標的数は、単位の閾値数未満であり、これは、任意で、参照単位の安全数であり、ここで、参照単位の安全数は、組換え受容体（任意でCAR）を発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での治療後に分析される対象の群に関して、有害事象を発症した群における対象の中で、対象へ投与された療法の参照単位の最小数である。いくつかの局面において、有害事象は、重度の有害事象、任意で重度の神経毒性、任意でグレード4もしくはグレード5以上または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である。いくつかの局面において、参照単位の標的数は、安全係数に対応する量だけ、および／または、1.5〜3倍の範囲内、任意で約2倍の量だけ、または、有害事象を発症しなかった（任意でグレード0〜2の神経毒性）対象の群の標準偏差の倍数である量だけ、参照単位の安全数より少なく、任意でここで、倍数は1.5〜3倍の範囲内である。いくつかの態様において、参照単位の標的数は、安全係数に対応する量だけ参照単位の安全数より少ない。ある態様において、安全係数は、安全数の0.5倍〜10倍、1.0〜5.0倍、もしくは1.5〜3倍の範囲内にあり、かつ／または、1倍、1.5倍、2倍、2.5倍、もしくは3倍、約1倍、1.5倍、2倍、2.5倍、もしくは3倍、または少なくとも1倍、1.5倍、2倍、2.5倍、もしくは3倍である。特定の態様において、安全係数は安全数より少ない。いくつかの態様において、安全係数は、組換え受容体（例えばCAR）を発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での治療後に分析される対象の群に関して、有害事象を発症しなかった群における対象（例えば、グレード2以下の神経毒性を経験した群における対象）へ投与された参照単位中の用量の平均（例えば平均値）からの標準偏差の倍数である。いくつかの態様において、安全係数は、標準偏差の0.5倍〜10倍、1.0〜5.0倍、もしくは1.5〜3倍の範囲内にあり、かつ／または、1倍、1.5倍、2倍、2.5倍、もしくは3倍、約1倍、1.5倍、2倍、2.5倍、もしくは3倍、または少なくとも1倍、1.5倍、2倍、2.5倍、もしくは3倍である。いくつかの態様において、安全係数に対応する量だけ安全数を下回る参照単位の数または用量は、奏効（例えばCR）を示した対象の群に関してのように、奏効（例えばCR）に関連する参照単位の数または用量を含む。
いくつかの局面において、参照単位の標的数は、参照単位の参照有効数以上であり、ここで、参照有効数は組換え受容体（任意でCAR）を含む治療用T細胞組成物での治療後に分析される対象の群に関して、所望の治療転帰、任意で部分奏効または完全奏効(CR)を示した群の中での1または複数の対象へ投与された療法の単位の数である。
いくつかの局面において、調節された単位用量は、組換え受容体（任意でCAR）を発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物で治療される対象の群の平均単位用量より少なく、任意で、1.5倍より少なく、2倍より少なく、3倍より少なく、4倍より少ない。
いくつかの態様において、T細胞組成物の試料、任意で凍結保存試料が、対象へのT細胞組成物の投与後に評価される。いくつかの態様において、BがUSLを上回る場合、対象は、毒性の危険性があると決定される。いくつかの態様において、BがUSLを上回る場合、組成物が投与される対象は、細胞組成物の投与後に、かつ、任意で、毒性転帰の徴候または症状の発症前に、毒性転帰またはサイトカイン放出症候群の可能性を改善または低減するために、モニターされかつ／または薬剤で処置される。
治療用T細胞組成物に対する毒性の危険性を評価する方法を本明細書にさらに提供し、該方法は以下を含む：
(a)対象へ投与されたT細胞組成物由来の試料を、所定の範囲内の参照単位(RU)について評価する工程であって、T細胞組成物が、疾患または状態に関連する抗原へ特異的に結合する組換え受容体を含むT細胞を含み、所与の組成物中のRUは式：
RU＝A×B
によって定義され、式中、
Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ、
Bは、所与の組成物中の組換え受容体依存性の、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値、またはその分数もしくは倍数もしくは変換である、工程；および
(b)RUをRUの参照安全数と比較する工程であって、該比較により、対象が、有害事象、任意で重度の有害事象、任意で、グレード4もしくはグレード5以上の重度の神経毒性または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性を発症する危険性があるかないかが示される、工程。
いくつかの局面において、Aは、所与の組成物中に存在する所定の表現型の細胞の数、またはその倍数もしくは分数もしくは変換である。いくつかの局面において、Aは、所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均であり、任意で、2つ以上の表現型は、CD8+を含む第1の表現型およびCD4+を含む第2の表現型を含む。いくつかの局面において、RUの参照安全数は、組換え受容体（任意でCAR）を発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での治療後に分析される対象の群に関して、有害事象を発症した群における対象の中で、対象へ投与された療法の参照単位の最小数である。いくつかの局面において、比較が、RUが参照安全RUを上回ることを示す場合、組成物が投与された対象は、細胞組成物の投与後に、かつ、任意で、毒性転帰の徴候または症状の発症前に、毒性転帰またはサイトカイン放出症候群の可能性を改善または低減するために、モニターされ、かつ/または薬剤で処置される。
T細胞組成物の単位用量を含む治療用組成物を製造する方法をさらに提供し、該方法は以下を含む：
(a)疾患または状態を有する対象から誘導され、かつ、疾患または状態に関連する抗原へ特異的に結合する、組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体(CAR)をコードする核酸で形質導入された、T細胞を含むT細胞組成物をアッセイする工程であって、アッセイが細胞組成物についてのBを決定し、Bは、所与の組成物中の、組換え受容体依存性の、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である、工程；および
(b)組成物の全部または一部および任意で別の溶液を容器（例えばバイアル）に充填し、T細胞組成物の単位用量を達成する工程であって、該単位用量はT細胞組成物の参照単位(RU)の標的数を含有し、所与の組成物中のRUは式：
RU＝A×B
によって定義され、式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均である、工程。
T細胞組成物の単位用量を含む治療用組成物を製造する方法をさらに提供し、該方法は以下を含む：疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体を含むT細胞を含むT細胞組成物の全部または一部、および任意で別の溶液を容器（例えばバイアル）に充填し、T細胞組成物の単位用量を達成する工程であって、該単位用量はT細胞組成物の参照単位(RU)の標的数を含有し、所与の組成物中のRUは式：
RU＝A×Bによって定義され、式中、
Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ、
Bは、所与の組成物中の、組換え受容体依存性の、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である、工程。
いくつかの局面において、Aは、所与の組成物中に存在する所定の表現型の細胞の数、またはその倍数もしくは分数もしくは変換である。いくつかの局面において、Aは、所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均であり、任意で、2つ以上の表現型は、CD8+を含む第1の表現型およびCD4+を含む第2の表現型を含む。
いくつかの態様において、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、Bは、所与の組成物中の組換え受容体依存性活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値である。いくつかの態様において、Aおよび／またはBは、それぞれ、数または値の変換であり、該変換は、対数変換、べき変換またはロジット変換を含む。いくつかの態様において、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、Bは、所与のT細胞組成物中のCAR-依存性活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値の倍数または変換であり、任意で、Bは値の対数変換である。いくつかの態様において、対数変換は、常用対数(log10(x))、自然対数(ln(x))または二進対数(log2(x))である。
いくつかの態様において、Aは、組成物中の生存細胞の数であり、かつ／あるいは、アポトーシス性でない、初期アポトーシスもしくはアポトーシスを示す因子を示さない、アポトーシスの初期段階にない、またはアポトーシスの後期段階にない細胞の数であり、かつ／あるいは、特定の分化状態の細胞の数であり、かつ／あるいは、メモリー／幹様特質を有する細胞の数であり、あるいは、その倍数または変換である。いくつかの態様において、表現型は、アポトーシスを示すかまたはアポトーシスのカスケードもしくは経路における1つもしくは複数のステップを示す因子の非存在、任意でアポトーシスのマーカーの発現の非存在を含む。いくつかの態様において、表現型は、アポトーシスのマーカー、任意で、初期アポトーシスまたは後期アポトーシスのマーカーの陰性発現を含む。いくつかの態様において、アポトーシスのマーカーは、表面ホスファチジルセリンであり、かつ／もしくは、アネキシンVで検出され、または、カスパーゼの活性もしくは前駆形態、任意でカスパーゼ3の活性もしくは前駆形態である。いくつかの態様において、表現型はアネキシン-を含む。いくつかの態様において、Aは、T細胞の総数、CD3+細胞の総数、CD4+もしくはCD8+細胞の総数、CD3+CAR+細胞の総数、CD8+CAR+細胞の総数、CD4+ CAR+の総数、または前述のもののいずれかの生存もしくは生存細胞の総数、あるいはその倍数または変換値である。いくつかの態様において、Aは、CD3+細胞の総数、CD8+の総数、CD3+CAR+細胞の総数、CD8+CAR+細胞の総数、または前述のもののいずれかの生存もしくは生存細胞の総数、あるいはその倍数または変換値である。いくつかの態様において、Aは、CD3+ CAR+細胞であるアポトーシス性マーカー陰性(-)細胞の総数、CD4+ CAR+であるアポトーシス性マーカー陰性(-)細胞の総数、CD8+ CAR+細胞であるアポトーシス性マーカー陰性(-)細胞の総数、またはその倍数または変換値であり、ここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたはカスパーゼである。Aは、アネキシン- CD3+ CAR+細胞の総数、アネキシン- CD4+ CAR+の総数、アネキシン- CD8+ CAR+細胞の総数、またはその倍数または変換値である。いくつかの態様において、Aは、アネキシン- CD3+ CAR+細胞の総数、またはアネキシン- CD8+ CAR+細胞の総数である。
いくつかの態様において、表現型は、CD3、CD4もしくはCD8のうちの1つもしくは複数である表面マーカーの陽性発現を含み、かつ／または、組換え受容体、任意でCAR、もしくは組換え受容体の発現についての代理マーカーの陽性発現を含む。いくつかの局面において、表現型は、CD3+ CAR、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+である。いくつかの態様において、表現型は、任意で抗原もしくは組換え受容体に非特異的な、かつ／または、ポリクローナル的に産生される、サイトカインのうちの1つもしくは組み合わせの産生の指標を含み、ここで、1つもしくは複数のサイトカインは、IL-2、IL-13、IL-17、IFNγまたはTNFαである。いくつかの態様において、産生の指標は、ポリクローナル薬剤、抗原特異的薬剤、または組換え受容体（任意でCAR）に結合する薬剤と共にT細胞組成物の試料をインキュベートすることを含む、アッセイ、任意で細胞内サイトカイン染色アッセイにおいて測定される。いくつかの態様において、薬剤は、PMAおよびイオノマイシンであるかまたはこれらを含み、または、T細胞受容体もしくはT細胞受容体複合体アゴニストであるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、表現型は、活性化マーカーの陰性発現を含み、ここで、活性化マーカーは、CD25、CD127、LAG3、Ki67およびその組み合わせの中より選択される。いくつかの態様において、表現型は、疲弊マーカーの陰性発現を含み、ここで、疲弊マーカーは、PD1もしくはFOXP3遺伝子産物またはその組み合わせである。いくつかの態様において、表現型は、Tエフェクターメモリー表現型、Tセントラルメモリー表現型、またはCD45RAを発現するTエフェクターメモリー表現型(Temra)を含む。
いくつかの態様において、組換え受容体依存性活性は、炎症誘発性サイトカイン、任意で、TNFα、IFNγ、IL-2およびIL-10のうちの1つまたはこれらの組み合わせの産生または蓄積の測定値である。いくつかの態様において、参照測定値は、キメラ抗原受容体(CAR)を含む複数（任意で、少なくとも10、少なくとも15、少なくとも20）の参照治療用T細胞組成物の中での測定値の平均値であり、ここで：(i)参照治療用T細胞組成物の各々は、対象への投与後に許容される安全性プロファイルをもたらすことが観察または決定されており、任意で、該対象は、抗原を発現するかまたは抗原に関連する疾患または状態を有し；かつ／あるいは、(ii)参照治療用T細胞組成物の各々は、対象への投与後に所望の有効性をもたらすことが観察または決定されており、任意で、該対象は、抗原を発現するかまたは抗原に関連する疾患または状態を有する。
いくつかの特定の態様において、パラメータは、測定値の正規化値であり、ここで、正規化は、因子の参照測定値と比較された場合のものである。いくつかの態様において、参照測定値は、キメラ抗原受容体(CAR)を含む複数（任意で、少なくとも10、少なくとも15、少なくとも20）の参照治療用T細胞組成物の中での測定値の平均値であり、ここで：(i)参照治療用T細胞組成物の各々は、対象への投与後に許容される安全性プロファイルをもたらすことが観察または決定されており、任意で、該対象は、抗原を発現するかまたは抗原に関連する疾患または状態を有し；かつ／あるいは、(ii)参照治療用T細胞組成物の各々は、対象への投与後に所望の有効性をもたらすことが観察または決定されており、任意で、該対象は、抗原を発現するかまたは抗原に関連する疾患または状態を有する。いくつかの態様において、許容される安全性プロファイルは、観察されるグレード2以上の神経毒性の非存在またはグレード3以上の神経毒性の非存在である。
いくつかの態様において、許容される安全性プロファイルは、観察されるグレード3以上の神経毒性の非存在であるいくつかの態様において、有効性は、部分奏効であるかまたは完全奏効(CR)である。いくつかの態様において、参照測定値は、治療用T細胞組成物と同じ方法によって製造されたが、組換え受容体（任意でCAR）を発現しない、抗原を特異的に認識しないかつ／またはいかなる組換え受容体（任意でいかなるCAR）も発現しない、参照T細胞組成物中の因子の、同じアッセイによる、測定値である。いくつかの態様において、パラメータは、1つまたは複数の因子の測定値の患者特異的変動を制御するために正規化される。いくつかの態様において、パラメータは、対照因子の、同じアッセイにおける同じ測定値と比較される、因子の測定値の正規化値であり、ここで、治療用T細胞組成物中の対照因子のレベルは、有害事象もしくは毒性転帰またはその可能性もしくは危険性を示さないまたはこれらと相関しないもしくは有意に相関しないことが、公知であるかまたは観察されており、ここで、有害事象または毒性転帰は、任意で重度の神経毒性である。いくつかの態様において、対照因子は、T細胞組成物の投与後に有害事象を発症した複数の対象の中で、有害事象の発症と統計的に相関しないかつ／または相関しない因子であり、任意で、対照因子は、IL-5、IL-13、GM-CSF、およびIL-6のうちの1つもしくはこれらの組み合わせであるかまたはこれらを含み、任意で、対照因子の測定値は、前述のもののうちの2つ以上の算術平均または幾何平均である。
いくつかの態様において、パラメータは、細胞溶解活性またはその測定値を含まない。いくつかの態様において、パラメータは、組換え受容体依存性もしくは抗原特異的細胞溶解活性またはその測定値を含まない。
いくつかの特定の態様において、表現型は、CD8+ CAR+細胞またはアネキシン- CD8+ CAR+細胞であり；かつ、パラメータは、炎症誘発性サイトカインの測定値であり、これは、任意で、TNFα、IL-2、およびIFNγのうちの1つまたはこれらの組み合わせであり、またはその正規化値である。
いくつかの態様において、有害事象はグレード4または5の神経毒性であり、かつ、閾値は：Aがアポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、1.75×107であるかまたは約1.75×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、2.19×107であるかまたは約2.19×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、1.25×107であるかまたは約1.25×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、1.56×107であるかまたは約1.56×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、1.5×107であるかまたは約1.5×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、1.88×107であるかまたは約1.88×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、1.5×107であるかまたは約1.5×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、1.88×107であるかまたは約1.88×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.0×107であるかまたは約2.0×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.5×107であるかまたは約2.5×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、1.25×107であるかまたは約1.25×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、1.56×107であるかまたは約1.56×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、1.75×107であるかまたは約1.75×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.19×107であるかまたは約2.19×107であり、任意で、アポトーシスマーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
いくつかの態様において、有害事象はグレード4または5の神経毒性であり、かつ、標的参照単位の所定の範囲は：Aがアポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、2.0×105〜1.75×107または約2.0×105〜約1.75×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、2.5×105〜2.19×107または約2.5×105〜約2.19×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、4×105〜1.25×107または約4×105〜約1.25×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、5×106〜1.56×107または約5×106〜約1.56×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、2.0×105〜1.5×107または約2.0×105〜約1.5×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、2.5×105〜1.88×107または約2.5×105〜約1.88×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、3.0×105〜1.5×107または約3.0×105〜約1.5×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、3.75×105〜1.88×107または約3.75×105〜約1.88×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.0×105〜2.0×107または約3.0×105〜約2.0×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.75×105〜2.5×107または約3.75×105〜約2.5×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、4.0×105〜1.25×107または約4.0×105〜約1.25×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、5.0×105〜1.56×107または約5.0×105〜約1.56×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、4.0×105〜1.75×107または約4.0×105〜約1.75×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、5.0×105〜2.19×107または約5.0×105〜約2.19×107（両端の値を含む）であり、任意で、アポトーシスマーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
いくつかの態様において、有害事象は少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性であり、かつ、閾値は：Aがアポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、1.0×106であるかまたは約1.0×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、1.25×106であるかまたは約1.25×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、2.0×106であるかまたは約2.0×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、3.0×106であるかまたは約3.0×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、3.75×106であるかまたは約3.75×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、1.5×106であるかまたは約1.5×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、1.88×106であるかまたは約1.88×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.12×106であるかまたは約3.12×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.0×106であるかまたは約3.0×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.75×106であるかまたは約3.75×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.0×106であるかまたは約2.0×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり、任意で、アポトーシスマーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
いくつかの態様において、有害事象は少なくとも長期にわたるグレード3であり、かつ、標的参照単位の所定の範囲は：Aがアポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、3.0×105〜1.0×106または約3.0×105〜約1.0×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、3.75×105〜1.25×106または約3.75×105〜約1.25×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、4×105〜2.0×106または約4×105〜約2.0×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、5×106〜2.5×106または約5×106〜約2.5×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、2.0×105〜3.0×106または約2.0×105〜約3.0×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、2.5×105〜3.75×106または約2.5×105〜約3.75×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、3.0×105〜1.5×106または約3.0×105〜約1.5×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、3.75×105〜1.88×106または約3.75×105〜約1.88×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.0×105〜2.5×106または約3.0×105〜約2.5×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.75×105〜3.12×106または約3.75×105〜約3.12×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、4.0×105〜3.0×106または約4.0×105〜約3.0×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、5.0×105〜3.75×106または約5.0×105〜約3.75×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、4.0×105〜2.0×106または約4.0×105〜約2.0×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、5.0×105〜2.5×106または約5.0×105〜約2.5×106（両端の値を含む）であり、任意で、アポトーシスマーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
本明細書に記載される任意の他の態様と組み合され得るいくつかの態様において、組換え受容体はCARである。いくつかの態様において、CARは、抗原へ特異的に結合する細胞外抗原認識ドメインと、ITAMを含む細胞内シグナル伝達ドメインとを含み、任意で、細胞内シグナル伝達ドメインは、CD3-ゼータ(CD3ζ)鎖の細胞内ドメインを含み；かつ／または、CARは共刺激シグナル伝達領域をさらに含み、これは、任意で、CD28または4-1BBのシグナル伝達ドメインを含む。任意の他の態様と組み合され得るいくつかの態様において、T細胞はCD4+またはCD8+である。いくつかの態様において、T細胞は、任意で対象に対して自己由来または同種異系である、初代T細胞である。
IV．治療用T細胞組成物での治療方法
治療用T細胞組成物の1つまたは複数の単位用量を、疾患または状態を有する対象へ投与することを伴う方法を、本明細書に提供する。いくつかの態様において、1つまたは複数の単位用量は、A（表現型の細胞の数）および／またはB（組換え受容体依存性活性、例えばCAR-依存性活性、例えば抗原特異的活性、の程度に関連するパラメータの値）に基づく、細胞組成物の単位の標的参照数を含有する。
A．疾患および状態ならびに投与方法
いくつかの態様において、組換え受容体を発現する細胞の用量を、対象へ投与し、がんを含む、疾患、状態、および障害を治療または予防する。いくつかの態様において、細胞、集団、および組成物を、例えば養子細胞療法、例えば養子T細胞療法によって、治療される特定の疾患または状態を有する対象または患者へ投与する。いくつかの態様において、細胞および組成物、例えば、操作組成物ならびにインキュベーションおよび／または他の処理工程後の生産終了組成物を、対象、例えば、疾患もしくは状態を有するかまたは疾患もしくは状態の危険性がある対象へ投与する。いくつかの局面において、方法は、それによって、操作T細胞によって認識される抗原を発現するがん中の腫瘍負荷量を減少させることによってなど、疾患または状態を治療し、例えば、疾患または状態の1つまたは複数の症状を改善する。
養子細胞療法のために細胞を投与するための方法は公知であり、提供される方法および組成物に関連して用いられる場合がある。例えば、養子T細胞療法方法は、例えば、Gruenbergらへの米国特許出願公開第2003/0170238号; Rosenbergへの米国特許第4,690,915号; Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85)に記載されている。例えば、Themeli et al. (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara et al. (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338を参照されたい。
処置される疾患または状態は、抗原の発現が、疾患 状態または障害の病因に関連かつ／または関与する、例えば、そのような疾患、状態、または障害を引き起こすか、これらを悪化させるか、または他の方法でこれらに関与する、任意のものであり得る。例示的な疾患および状態には、細胞の悪性疾患またはトランスフォーメーションと関連する疾患または状態（例えば、がん）、自己免疫疾患もしくは炎症疾患、または、例えば、細菌、ウイルスもしくは他の病原体によって引き起こされる、感染症が含まれ得る。処置され得る様々な疾患および状態と関連する抗原を含む、例示的な抗原は、上述される。特定の態様において、キメラ抗原受容体またはトランスジェニックTCRは、疾患または状態と関連する抗原へ特異的に結合する。
疾患、状態、および障害の中には、固形腫瘍、血液悪性腫瘍、およびメラノーマを含み、局所および転移性の腫瘍を含む腫瘍、感染症、例えば、ウイルスまたは他の病原体、例えば、HIV、HCV、HBV、CMVによる感染、ならびに寄生生物疾患、ならびに自己免疫性疾患および炎症性疾患がある。一部の態様において、疾患または状態は、腫瘍、がん、悪性腫瘍、新生物、または他の増殖性の疾患もしくは障害である。このような疾患には、白血病、リンパ腫、例えば、慢性リンパ性白血病(CLL)、急性リンパ芽球性白血病(ALL)、非ホジキンリンパ腫、急性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、難治性濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、無痛性B細胞リンパ腫、B細胞悪性腫瘍、結腸がん、肺がん、肝臓がん、乳がん、前立腺がん、卵巣がん、皮膚がん、メラノーマ、骨がん、および脳がん、卵巣がん、上皮がん、腎細胞がん、膵臓腺がん、ホジキンリンパ腫、子宮頸がん、結腸直腸がん、グリア芽細胞腫、神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、髄芽腫、骨肉腫、滑膜肉腫、ならびに／または中皮腫が含まれるが、これに限定されない。いくつかの態様において、対象は急性リンパ芽球性白血病(ALL)を有する。いくつかの態様において、対象は非ホジキンリンパ腫を有する。
一部の態様において、疾患または状態は、ウイルス感染、レトロウイルス感染、細菌感染、および原生動物感染、免疫不全症、サイトメガロウイルス(CMV)、エプスタイン-バーウイルス(EBV)、アデノウイルス、BKポリオーマウイルスなどがあるが、これに限定されない感染性の疾患または状態である。一部の態様において、疾患または状態は、自己免疫性または炎症性の疾患または状態、例えば、関節炎、例えば、関節リウマチ(RA)、I型糖尿病、全身性エリテマトーデス(SLE)、炎症性腸疾患、乾癬、硬皮症、自己免疫性甲状腺疾患、グレーブス病、クローン病、多発性硬化症、喘息、および／または移植に関連する疾患もしくは状態である。
いくつかの態様において、疾患または障害に関連する抗原は、オーファンチロシンキナーゼ受容体RORl、tEGFR、Her2、Ll-CAM、CD19、CD20、CD22、メソテリン、CEA、およびB型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、EGFR、EGP-2、EGP-4、0EPHa2、ErbB2、3、もしくは4、FBP、胎児アセチルコリン受容体、GD2、GD3、HMW-MAA、IL-22Rα、IL-13Rα2、kdr、カッパ軽鎖、ルイスY、L1-細胞接着分子、MAGE-A1、メソテリン、MUC1、MUC16、PSCA、NKG2Dリガンド、NY-ESO-1、MART-1、gp100、腫瘍胎児抗原、ROR1、TAG72、VEGF-R2、がん胎児性抗原(CEA)、前立腺特異抗原、PSMA、Her2/neu、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンB2、CD123、CS-1、c-Met、GD-2、およびMAGE A3、CE7、ウィルムス腫瘍1 (WT-1)、サイクリン、例えばサイクリンA1 (CCNA1)、および／またはビオチン化分子、および／またはHIV、HCV、HBVもしくは他の病原体によって発現される分子からなる群より選択される。
いくつかの態様において、抗原は、αvβ6インテグリン(avb6インテグリン)、B細胞成熟抗原(BCMA)、B7-H3、B7-H6、炭酸脱水酵素9 (CA9、CAIXまたはG250としても公知)、がん-精巣抗原、がん/精巣抗原1B (CTAG、NY-ESO-1およびLAGE-2としても公知)、がん胎児性抗原(CEA)、サイクリン、サイクリンA2、C-Cモチーフケモカインリガンド1 (CCL-1)、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD123、CD138、CD171、上皮成長因子タンパク質(EGFR)、切断型上皮成長因子タンパク質(tEGFR)、III型上皮成長因子受容体突然変異(EGFR vIII)、上皮糖タンパク質2 (EPG-2)、上皮糖タンパク質40 (EPG-40)、エフリンB2、エフリン受容体A2 (EPHa2)、エストロゲン受容体、Fc受容体様5 (FCRL5；Fc受容体ホモログ5またはFCRH5としても公知)、胎児アセチルコリン受容体(胎児AchR)、葉酸結合タンパク質(FBP)、葉酸受容体アルファ、ガングリオシドGD2、O-アセチル化GD2 (OGD2)、ガングリオシドGD3、糖タンパク質100 (gp100)、Gタンパク質共役型受容体5D (GPCR5D)、Her2/neu (受容体チロシンキナーゼerb-B2)、Her3 (erb-B3)、Her4 (erb-B4)、erbB二量体、ヒト高分子量メラノーマ関連抗原(HMW-MAA)、B型肝炎表面抗原、ヒト白血球抗原A1 (HLA-A1)、ヒト白血球抗原A2 (HLA-A2)、IL-22受容体アルファ(IL-22Ra)、IL-13受容体アルファ2 (IL-13Ra2)、キナーゼ挿入ドメイン受容体(kdr)、カッパ軽鎖、L1細胞接着分子(L1-CAM)、L1-CAMのCE7エピトープ、ロイシンリッチリピート含有8ファミリーメンバーA (LRRC8A)、ルイスY、メラノーマ関連抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、メソテリン、c-Met、マウスサイトメガロウイルス(CMV)、ムチン1 (MUC1)、MUC16、ナチュラルキラーグループ2メンバーD (NKG2D)リガンド、メランA (MART-1)、神経細胞接着分子(NCAM)、腫瘍胎児抗原、メラノーマ優先発現抗原(PRAME)、プロゲステロン受容体、前立腺特異抗原、前立腺幹細胞抗原(PSCA)、前立腺特異的膜抗原(PSMA)、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体1 (ROR1)、サバイビン、栄養膜糖タンパク質(TPBG、5T4としても公知)、腫瘍関連糖タンパク質72 (TAG72)、血管内皮増殖因子受容体(VEGFR)、血管内皮増殖因子受容体2 (VEGFR2)、ウィルムス腫瘍1 (WT-1)、病原体特異的抗原、またはユニバーサルタグと関連する抗原、および／またはビオチン化分子、および／またはHIV、HCV、HBVもしくは他の病原体によって発現される分子であるかまたはこれを含む。受容体によって標的化される抗原は、いくつかの態様において、B細胞悪性腫瘍に関連する抗原、例えば、多数の公知のB細胞マーカーのいずれかを含む。いくつかの態様において、抗原は、CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79bまたはCD30であるかまたはこれらを含む。
一部の態様では、細胞療法、例えば、養子T細胞療法は、細胞療法を受けようとする対象から、またはこのような対象に由来する試料から細胞が単離される、および／または別の方法で調製される自家移入によって行われる。従って、一部の局面では、前記細胞は、対象、例えば、処置および細胞を必要とする患者に由来し、単離および処理された後に同じ対象に投与される。
一部の態様では、細胞療法、例えば、養子T細胞療法は、細胞療法を受けようとする対象、または細胞療法を最終的に受ける対象以外の対象、例えば、第1の対象から、細胞が単離される、および／または別の方法で調製される同種異系移入によって行われる。このような態様では、次いで、前記細胞は、同じ種の異なる対象、例えば、第2の対象に投与される。一部の態様では、第1の対象および第2の対象は遺伝的に同一である。一部の態様では、第1の対象および第2の対象は遺伝的に似ている。一部の態様では、第2の対象は第1の対象と同じHLAクラスまたはスーパータイプを発現する。
前記細胞は、任意の適切な手段によって、例えば、大量瞬時注入によって、注射、例えば、静脈内注射または皮下注射、眼内注射、眼周囲注射、網膜下注射、硝子体内注射、経中隔注射、強膜下注射、脈絡膜内注射、前房内注射、結膜下(subconjectval)注射、結膜下(subconjuntival)注射、テノン嚢下注射、眼球後注射、眼球周囲注射、または後強膜近傍(posterior juxtascleral)送達によって投与することができる。一部の態様では、前記細胞は、非経口投与、肺内投与、および鼻腔内投与によって、所望であれば、局所処置の場合、病巣内投与によって投与される。非経口注入には、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または皮下投与が含まれる。一部の態様では、ある特定の用量が前記細胞の単回大量瞬時投与によって投与される。一部の態様では、ある特定の用量が、前記細胞の複数回大量瞬時投与によって、例えば、3日以下の期間にわたって投与されるか、または前記細胞の連続注入投与によって投与される。
疾患の予防または処置のために、適切な投与量は、治療される疾患のタイプ、細胞または組換え受容体のタイプ、疾患の重症度および経過、細胞が治療目的または予防目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴、および細胞に対応する応答、ならびに主治医の判断に左右されることがある。前記組成物および細胞は、一部の態様では、一度に、または一連の処置にわたって対象に適切に投与される。
一部の態様では、前記細胞は、組み合わせ処置の一部として、例えば、別の治療介入、例えば、抗体または操作された細胞または受容体または薬剤、例えば、細胞傷害剤または治療剤と同時に、または任意の順番で連続して投与される。前記細胞は、一部の態様では、1種類もしくは複数種のさらなる治療剤と共に、または別の治療介入と共に同時に、または任意の順番で連続して同時投与される。ある状況では、前記細胞は、前記細胞集団が1種類もしくは複数種のさらなる治療剤の効果を強化するような十分に短い期間で別の療法と一緒に同時投与されるか、または逆もまた同じである。一部の態様では、前記細胞は、1種類または複数種のさらなる治療剤の前に投与される。一部の態様では、前記細胞は、1種類または複数種のさらなる治療剤の後に投与される。一部の態様では、1種類または複数種のさらなる薬剤は、例えば、持続性を強化するために、サイトカイン、例えば、IL-2を含む。一部の態様では、前記方法は化学療法剤の投与を含む。
一部の態様において、前記方法は、例えば、用量の投与前に腫瘍負荷を低減するために、化学療法剤、例えば、コンディショニング化学療法剤を投与することを含む。
対象を免疫枯渇(immunodepleting)（例えば、リンパ球枯渇(lymphodepleting)）療法を用いてプレコンディショニングすると、一部の局面において、養子細胞療法(ACT)の効果を改善することができる。
従って、一部の態様において、前記方法は、細胞療法の開始前に、プレコンディショニング薬剤、例えば、リンパ球枯渇剤または化学療法剤、例えば、シクロホスファミド、フルダラビン、またはその組み合わせを対象に投与する工程を含む。例えば、細胞療法の開始の少なくとも2日前に、例えば、少なくとも3日前、4日前、5日前、6日前、または7日前に、対象にプレコンディショニング薬剤が投与されてもよい。一部の態様において、細胞療法の開始の7日前を超えずに、例えば、6日前、5日前、4日前、3日前、または2日前を超えずに、対象にプレコンディショニング薬剤が投与される。例示的なプレコンディショニング投薬レジメンは、国際特許出願番号WO2016/191756に記載されている。
一部の態様において、対象は、20 mg/kg〜120 mg/kgまたは約20 mg/kg〜約120 mg/kg、例えば、40 mg/kg〜80 mg/kgまたは約40 mg/kg〜約80 mg/kg（各々両端の値を含む）の用量のシクロホスファミドを用いてプレコンディショニングされる。一部の局面において、対象は、60 mg/kgまたは約60 mg/kgのシクロホスファミドを用いてプレコンディショニングされる。いくつかの態様において、対象は、200 mg/m2〜4440 mg/m2または約200 mg/m2〜約4440 mg/m2、例えば、200 mg/m2〜500 mg/m2または約200 mg/m2〜約500 mg/m2（各々両端の値を含む）の用量のシクロホスファミドを用いてプレコンディショニングされる。いくつかの場合では、対象は、300 mg/m2のシクロホスファミドで、いくつかの場合において毎日、例えば300 mg/m2/日を用いてプレコンディショニングされる。いくつかの場合では、対象は、500 mg/m2または約500 mg/m2のシクロホスファミドで、いくつかの場合において毎日、例えば500 mg/m2/日を用いてプレコンディショニングされる。いくつかの場合では、対象は、2220〜4440 mg/m2または約2220〜約4440 mg/m2のシクロホスファミドを用いてプレコンディショニングされる。いくつかの局面において、対象は、200 mg/m2/日、250 mg/m2/日、300 mg/m2/日、350 mg/m2/日、400 mg/m2/日、450 mg/m2/日、500 mg/m2/日、550 mg/m2/日、600 mg/m2/日、650 mg/m2/日、700 mg/m2/日、800 mg/m2/日、900 mg/m2/日、もしく1000 mg/m2/日、または約200 mg/m2/日、約250 mg/m2/日、約300 mg/m2/日、約350 mg/m2/日、約400 mg/m2/日、約450 mg/m2/日、約500 mg/m2/日、約550 mg/m2/日、約600 mg/m2/日、約650 mg/m2/日、約700 mg/m2/日、約800 mg/m2/日、約900 mg/m2/日、もしくは約1000 mg/m2/日を用いてプレコンディショニングされる。一部の態様において、シクロホスファミドは、単一用量で投与されてもよく、複数の用量で投与されてもよく、例えば、毎日、1日おきに、または3日ごとに投与されてもよい。一部の態様において、シクロホスファミドは1日または2日または3日またはそれ以上にわたって1日1回投与される。一部の態様において、本明細書に記載される用量は、日用量、例えば、3日にわたって毎日投与される、mg/m2/日を示す。
一部の態様では、リンパ球枯渇剤がフルダラビンを含む場合、対象には、1 mg/m2〜100 mg/m2もしくは約1 mg/m2〜約100 mg/m2、例えば、10 mg/m2〜75 mg/m2もしくは約10 mg/m2〜約75 mg/m2、15 mg/m2〜50 mg/m2もしくは約15 mg/m2〜約50 mg/m2、20 mg/m2〜30 mg/m2もしくは約20 mg/m2〜約30 mg/m2、または24 mg/m2〜26 mg/m2もしくは約24 mg/m2〜約26 mg/m2（各々両端の値を含む）の用量のフルダラビンが投与される。場合によっては、対象は、10 mg/m2/日、15 mg/m2/日、20 mg/m2/日、25 mg/m2/日、30 mg/m2/日、35 mg/m2/日、40 mg/m2/日、45 mg/m2/日、50 mg/m2/日、55 mg/m2/日、60 mg/m2/日、65 mg/m2/日、70 mg/m2/日、75 mg/m2/日、80 mg/m2/日、85 mg/m2/日、90 mg/m2/日、95 mg/m2/日、100 mg/m2/日、200 mg/m2/日、もしくは300 mg/m2/日、または約10 mg/m2/日、約15 mg/m2/日、約20 mg/m2/日、約25 mg/m2/日、約30 mg/m2/日、約35 mg/m2/日、約40 mg/m2/日、約45 mg/m2/日、約50 mg/m2/日、約55 mg/m2/日、約60 mg/m2/日、約65 mg/m2/日、約70 mg/m2/日、約75 mg/m2/日、約80 mg/m2/日、約85 mg/m2/日、約90 mg/m2/日、約95 mg/m2/日、約100 mg/m2/日、約200 mg/m2/日、もしくは約300 mg/m2/日を用いてプレコンディショニングされる。場合によっては、対象には25 mg/m2のフルダラビンが投与される。場合によっては、対象には30 mg/m2のフルダラビンが投与される。一部の態様では、フルダラビンは、単一用量で投与されてもよく、複数の用量で投与されてもよく、例えば、毎日、1日おきに、または3日ごとに投与されてもよい。一部の態様では、フルダラビンは、例えば、1〜5日、例えば、3〜5日にわたって毎日投与される。一部の態様において、本明細書に記載される用量は、日用量、例えば、3日にわたって毎日投与される、mg/m2/日を示す。
一部の態様では、リンパ球枯渇剤は、薬剤の組み合わせ、例えば、シクロホスファミドとフルダラビンの組み合わせを含む。従って、薬剤の組み合わせは、任意の用量または投与計画、例えば、上述の用量または投与計画のシクロホスファミドと、任意の用量または投与計画、例えば、上述の用量または投与計画のフルダラビンを含んでもよい。例えば、一部の局面では、第一用量または後続用量の前に、60mg/kg(約2g/m2)のシクロホスファミドと3〜5用量の25mg/m2フルダラビンが対象に投与される。
投薬
薬学的組成物は、一部の態様では、細胞を、前記疾患または状態を処置または予防するのに有効な量、例えば、治療的有効量または予防的有効量で含む。いくつかの態様において、組成物は、疾患または状態の負荷量を減少させるために有効な量で細胞を含む。
いくつかの態様において、治療用T細胞組成物の1つまたは複数の単位用量を対象へ投与する工程を伴う方法を提供し、ここで、各単位用量は、(i)総組換え受容体発現(例えば、CAR発現)細胞の標的数、または、ある表現型の組換え受容体発現(例えば、CAR発現)細胞の標的数もしくは合計；あるいは(ii) RUの所定または標的範囲内にあるT細胞組成物の参照単位(RU)の標的数のいずれかを含有する。いくつかの態様において、単位用量は、安全数を超える参照単位など、閾値数を超えるRUを含有しない。
いくつかの態様において、疾患または状態に関連する抗原へ特異的に結合する、組換え受容体、例えばキメラ抗原受容体(CAR)を含む細胞を含むT細胞組成物の単位用量を、疾患または状態を有する対象へ投与する工程を伴う治療方法を提供し、該単位用量は、所定の範囲内の参照単位(RU)の標的数を含有する。所与の組成物中のRUは式RU＝A×Bによって定義され、式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ、Bは、所与の組成物中の、組換え受容体依存性の、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはこれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である。AおよびBに関連する例示的な特質は、投与のための細胞の単位用量の決定または提供に関して本明細書に記載される。
いくつかの態様において、Aは、CD8+細胞または本明細書に記載される他の表現型であるかまたはこれらを含む表現型のような、所与の組成物中に存在する所定の表現型の、細胞の数、またはその倍数もしくは分数もしくは変換である。いくつかの態様において、Aは、所与の組成物中の2つ以上の表現型の、細胞の数、またはその倍数、分数もしくは変換の平均または加重平均である。一例において、2つ以上の表現型は、CD8+を含む第1の表現型およびCD4+を含む第2の表現型を含む。
いくつかの態様において、投与のための単位用量中に含有される単位の標的数は、参照単位の閾値数（例えば、少なくとも長期にわたるグレード3以上の毒性またはグレード4もしくはグレード5毒性などの、重度の毒性などの、有害事象の危険性を示すと同定されたかまたは分かった既定の閾値）よりも少ない。いくつかの態様において、RUの閾値数は参照単位の安全数であり、これは、治療用T細胞組成物で同様に治療された対象の群または複数の対象から決定することができ、典型的に、治療用T細胞組成物は、同じまたは類似の方法を使用して、製造、例えば、操作、培養、栽培、活性化、凍結保存されたものである。いくつかの態様において、複数の対象は、少なくとも10の対象、例えば、少なくとも15、少なくとも20、少なくとも25、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、少なくとも100またはそれ以上の対象を含む。
いくつかの態様において、参照単位の安全数は、組換え受容体（例えばCAR）を発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での治療後に分析される対象の群に関して、有害事象を発症した群における対象の中で、対象へ投与された療法の参照単位の最小数である。いくつかの態様において、有害事象は、重度の有害事象、任意で重度の神経毒性、任意でグレード4もしくはグレード5以上または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である。
いくつかの態様において、参照単位の標的数は、安全係数に対応する量だけ、および／または、1.5〜3倍の範囲内、任意で約2倍の量だけ、または、有害事象を発症しなかった（任意でグレード0〜2の神経毒性）対象の群の標準偏差の倍数である量だけ、参照単位の安全数より少なく、任意で、倍数は1.5〜3倍の範囲内である。
いくつかの態様において、参照単位の標的数は、参照単位の参照有効数以上であり、これは、治療用T細胞組成物で同様に治療された対象の群または複数の対象から決定することができ、典型的に、治療用T細胞組成物は、同じまたは類似の方法を使用して、製造、例えば、操作、培養、栽培、活性化、凍結保存されたものである。いくつかの態様において、複数の対象は、少なくとも10の対象、例えば、少なくとも15、少なくとも20、少なくとも25、少なくとも30、少なくとも40、少なくとも50、少なくとも60、少なくとも70、少なくとも80、少なくとも90、少なくとも100またはそれ以上の対象を含む。いくつかの態様において、参照単位の有効数は、組換え受容体（任意でCAR）を含む治療用T細胞組成物での治療後に分析される対象の群に関して、所望の治療転帰、任意で部分奏効または完全奏効(CR)を示した群の中での1または複数の対象へ投与された療法の単位の数である。
いくつかの態様において、疾患または状態に関連する抗原へ特異的に結合する、組換え受容体、例えばキメラ抗原受容体(CAR)を含む細胞を含むT細胞組成物の単位用量を、疾患または状態を有する対象へ投与する工程を伴う方法を提供し、ここで、治療用組成物の総CD8+組換え受容体発現細胞の標的数が投与され、かつ／または、そのような細胞の単位用量が投与され、ここで、所定の範囲内の参照単位の標的数が上述のように投与される。いくつかの場合において、投与される参照単位の標的数は、RUの閾値数以下であり、その結果、単位用量は、閾値数を超えるRUを含有しない。いくつかの局面において、投与される標的数の総CD8+組換え受容体細胞は、アポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+であるCD8+であり、任意で、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
いくつかの態様において、提供される方法は、ある数の細胞を含有する用量、例えば、標的数の細胞を提供する用量を投与する工程を伴う。いくつかの態様において、用量、例えば、細胞の標的数は、5.0×106〜2.25×107、5.0×106〜2.0×107、5.0×106〜1.5×107、5.0×106〜1.0×107、5.0×106〜7.5×106、7.5×106〜2.25×107、7.5×106〜2.0×107、7.5×106〜1.5×107、7.5×106〜1.0×107、1.0×107〜2.25×107、1.0×107〜2.0×107、1.0×107〜1.5×107、1.5×107〜2.25×107、1.5×107〜2.0×107、2.0×107〜2.25×107、または約5.0×106〜約2.25×107、約5.0×106〜約2.0×107、約5.0×106〜約1.5×107、約5.0×106〜約1.0×107、約5.0×106〜約7.5×106、約7.5×106〜約2.25×107、約7.5×106〜約2.0×107、約7.5×106〜約1.5×107、約7.5×106〜約1.0×107、約1.0×107〜約2.25×107、約1.0×107〜約2.0×107、約1.0×107〜約1.5×107、約1.5×107〜約2.25×107、約1.5×107〜約2.0×107、約2.0×107〜約2.25×107（各々両端の値を含む）である。いくつかの態様において、そのような用量、例えば、そのような標的数の細胞は、投与される組成物中の総組換え受容体発現細胞を指す。いくつかの態様において、そのような用量、例えば、そのような標的数の細胞は、CD8+であるか、または、アポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+である、総組換え受容体発現細胞を指す。いくつかの態様において、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
いくつかの態様において、単位用量の細胞の用量は、ある数の細胞、例えば標的数の細胞、少なくともまたは少なくとも約5×106、6×106、7×106、8×106、9×106、10×106〜約15×106個の組換え受容体発現細胞、例えば、CD8+であるかまたはアポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+である組換え受容体発現細胞を含有し、任意で、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
いくつかの態様において、単位用量の細胞の用量は、ある数の細胞、例えば標的数の細胞、少なくともまたは少なくとも約5.55×106、6.66×106、7.77×106、8.99×106、1.0×107、1.1×107〜約1.67×107個の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+である、または、アポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+である、組換え受容体発現細胞を含有し、例えば、ここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
いくつかの態様において、単位用量の細胞の用量は、ある数の細胞、例えば標的数の細胞、少なくともまたは少なくとも約6.25×106、7.5×106、8.75×106、1.0×107、1.13×107、1.25×107〜約1.9×107個の組換え受容体発現細胞を含有し、任意で、CD8+である、または、アポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+である、組換え受容体発現細胞、例えば、ここで、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
いくつかの態様において、単位用量の細胞の用量は、ある数の細胞、例えば標的数の細胞、少なくともまたは少なくとも約（between at least or at least about between at least or at least about）7.14×106、8.5×106、1.0×107、1.14×107、1.29×107、1.42×107〜約2.14×107個の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+である、または、アポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+である、組換え受容体発現細胞を含有し、任意で、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
いくつかの態様において、単位用量の細胞の用量は、ある数の細胞、例えば標的数の細胞、少なくともまたは少なくとも約5×106、6×106、7×106、8×106、9×106、10×106〜約15×106個の、アポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+である組換え受容体発現細胞を含有し、任意で、アポトーシス性マーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
いくつかの態様において、単位用量の細胞の用量は、ある数の細胞、例えば標的数の細胞、少なくともまたは少なくとも約6.25×106、7.5×106、8.75×106、1.0×107、1.13×107、1.25×107〜約1.9×107個の、CD8+である組換え受容体発現細胞を含有する。
いくつかの態様において、前記方法は、疾患または状態に関連する抗原へ特異的に結合する、組換え受容体、例えばキメラ抗原受容体(CAR)を含む細胞を含むT細胞組成物の単位用量を、疾患または状態を有する対象へ投与する工程を含み、該単位用量は、所定の範囲内の参照単位(RU)の標的数を含有する。いくつかの態様において、参照単位の標的数は、閾値未満、例えば、参照安全値未満である。いくつかの局面において、有害事象は、重度の有害事象、例えば、グレード4もしくはグレード5以上の重度の神経毒性または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である。いくつかの態様において、閾値は、安全係数に対応する量だけ、または少なくとも2倍だけ、参照安全値より少ない。
いくつかの態様において、有害事象はグレード4または5の神経毒性であり、かつ、閾値は：Aがアポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、1.75×107であるかまたは約1.75×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、2.19×107であるかまたは約2.19×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、1.25×107であるかまたは約1.25×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、1.56×107であるかまたは約1.56×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、1.5×107であるかまたは約1.5×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、1.88×107であるかまたは約1.88×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、1.5×107であるかまたは約1.5×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、1.88×107であるかまたは約1.88×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.0×107であるかまたは約2.0×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.5×107であるかまたは約2.5×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、1.25×107であるかまたは約1.25×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、1.56×107であるかまたは約1.56×107であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、1.75×107であるかまたは約1.75×107であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.19×107であるかまたは約2.19×107である。いくつかの態様において、アポトーシスマーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
いくつかの態様において、有害事象はグレード4または5の神経毒性であり、かつ、標的参照単位の所定の範囲は：Aがアポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、2.0×105〜1.75×107または約2.0×105〜約1.75×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、2.5×105〜2.19×107または約2.5×105〜約2.19×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、4×105〜1.25×107または約4×105〜約1.25×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、5×106〜1.56×107または約5×106〜約1.56×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、2.0×105〜1.5×107または約2.0×105〜約1.5×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、2.5×105〜1.88×107または約2.5×105〜約1.88×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、3.0×105〜1.5×107または約3.0×105〜約1.5×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、3.75×105〜1.88×107または約3.75×105〜約1.88×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.0×105〜2.0×107または約3.0×105〜約2.0×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.75×105〜2.5×107または約3.75×105〜約2.5×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、4.0×105〜1.25×107または約4.0×105〜約1.25×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、5.0×105〜1.56×107または約5.0×105〜約1.56×107（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、4.0×105〜1.75×107または約4.0×105〜約1.75×107（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、5.0×105〜2.19×107または約5.0×105〜約2.19×107（両端の値を含む）である。いくつかの態様において、アポトーシスマーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
いくつかの態様において、有害事象は少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性であり、かつ、閾値は：Aがアポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、1.0×106であるかまたは約1.0×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、1.25×106であるかまたは約1.25×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、2.0×106であるかまたは約2.0×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、3.0×106であるかまたは約3.0×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、3.75×106であるかまたは約3.75×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、1.5×106であるかまたは約1.5×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、1.88×106であるかまたは約1.88×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.12×106であるかまたは約3.12×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.0×106であるかまたは約3.0×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.75×106であるかまたは約3.75×106であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.0×106であるかまたは約2.0×106であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、2.5×106であるかまたは約2.5×106である。いくつかの態様において、アポトーシスマーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
いくつかの態様において、有害事象は少なくとも長期にわたるグレード3であり、かつ、標的参照単位の所定の範囲は：Aがアポトーシス性マーカー陰性(-)かつCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、3.0×105〜1.0×106または約3.0×105〜約1.0×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαまたはその正規化値である場合、3.75×105〜1.25×106または約3.75×105〜約1.25×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、4×105〜2.0×106または約4×105〜約2.0×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγまたはその正規化値である場合、5×106〜2.5×106または約5×106〜約2.5×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、2.0×105〜3.0×106または約2.0×105〜約3.0×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIL-2またはその正規化値である場合、2.5×105〜3.75×106または約2.5×105〜約3.75×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、3.0×105〜1.5×106または約3.0×105〜約1.5×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIFNγまたはその正規化値である場合、3.75×105〜1.88×106または約3.75×105〜約1.88×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.0×105〜2.5×106または約3.0×105〜約2.5×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFαおよびIL-2またはその正規化値である場合、3.75×105〜3.12×106または約3.75×105〜約3.12×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、4.0×105〜3.0×106または約4.0×105〜約3.0×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがIFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、5.0×105〜3.75×106または約5.0×105〜約3.75×106（両端の値を含む）であり；Aがアポトーシス性マーカー陰性(-) CD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、4.0×105〜2.0×106または約4.0×105〜約2.0×106（両端の値を含む）であり；AがCD8+CAR+であり、かつ、BがTNFα、IFNγおよびIL-2またはその正規化値である場合、5.0×105〜2.5×106または約5.0×105〜約2.5×106（両端の値を含む）である。いくつかの態様において、アポトーシスマーカーはアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である。
ある態様において、細胞、または細胞の個々のサブタイプ集団が、約100万〜約1000億個の細胞の範囲で、および／または体重1キログラムあたりの細胞の量で、例えば、100万〜約500億個の細胞（例えば、約500万個の細胞、約2500万個の細胞、約5億個の細胞、約10億個の細胞、約50億個の細胞、約200億個の細胞、約300億個の細胞、約400億個の細胞、または前述の値のいずれか2つによって規定された範囲）、例えば、約1000万〜約1000億個の細胞（例えば、約2000万個の細胞、約3000万個の細胞、約4000万個の細胞、約6000万個の細胞、約7000万個の細胞、約8000万個の細胞、約9000万個の細胞、約100億個の細胞、約250億個の細胞、約500億個の細胞、約750億個の細胞、約900億個の細胞、または前述の値のいずれか2つによって規定された範囲）、場合によっては、約1億個の細胞〜約500億個の細胞（例えば、約1億2000万個の細胞、約2億5000万個の細胞、約3億5000万個の細胞、約4億5000万個の細胞、約6億5000万個の細胞、約8億個の細胞、約9億個の細胞、約30億個の細胞、約300億個の細胞、約450億個の細胞）（またはこれらの範囲の間にある任意の値）の量でおよび／または体重1キログラムあたりの量で、対象に投与される。投与量は、疾患もしくは障害に特有の特質、ならびに／または患者および／もしくは他の処置に応じて変化することがある。
一部の態様において、例えば、対象がヒトである場合、用量は、約5×108個より少ない全組換え受容体(例えば、CAR)発現細胞、T細胞、もしくは末梢血単核細胞(PBMC)、例えば、約1×106〜5×108個の範囲のこのような細胞、例えば、2×106、5×106、1×107、5×107、1×108、または5×108個もしくは全てのこのような細胞、または前述の値のいずれか2つの間の範囲を含む。
いくつかの態様において、遺伝子操作細胞の用量は、1×105〜5×108個の総CAR発現T細胞、1×105〜2.5×108個の総CAR発現T細胞、1×105〜1×108個の総CAR発現T細胞、1×105〜5×107個の総CAR発現T細胞、1×105〜2.5×107個の総CAR発現T細胞、1×105〜1×107個の総CAR発現T細胞、1×105〜5×106個の総CAR発現T細胞、1×105〜2.5×106個の総CAR発現T細胞、1×105〜1×106個の総CAR発現T細胞、1×106〜5×108個の総CAR発現T細胞、1×106〜2.5×108個の総CAR発現T細胞、1×106〜1×108個の総CAR発現T細胞、1×106〜5×107個の総CAR発現T細胞、1×106〜2.5×107個の総CAR発現T細胞、1×106〜1×107個の総CAR発現T細胞、1×106〜5×106個の総CAR発現T細胞、1×106〜2.5×106個の総CAR発現T細胞、2.5×106〜5×108個の総CAR発現T細胞、2.5×106〜2.5×108個の総CAR発現T細胞、2.5×106〜1×108個の総CAR発現T細胞、2.5×106〜5×107個の総CAR発現T細胞、2.5×106〜2.5×107個の総CAR発現T細胞、2.5×106〜1×107個の総CAR発現T細胞、2.5×106〜5×106個の総CAR発現T細胞、5×106〜5×108個の総CAR発現T細胞、5×106〜2.5×108個の総CAR発現T細胞、5×106〜1×108個の総CAR発現T細胞、5×106〜5×107個の総CAR発現T細胞、5×106〜2.5×107個の総CAR発現T細胞、5×106〜1×107個の総CAR発現T細胞、1×107〜5×108個の総CAR発現T細胞、1×107〜2.5×108個の総CAR発現T細胞、1×107〜1×108個の総CAR発現T細胞、1×107〜5×107個の総CAR発現T細胞、1×107〜2.5×107個の総CAR発現T細胞、2.5×107〜5×108個の総CAR発現T細胞、2.5×107〜2.5×108個の総CAR発現T細胞、2.5×107〜1×108個の総CAR発現T細胞、2.5×107〜5×107個の総CAR発現T細胞、5×107〜5×108個の総CAR発現T細胞、5×107〜2.5×108個の総CAR発現T細胞、5×107〜1×108個の総CAR発現T細胞、1×108〜5×108個の総CAR発現T細胞、1×108〜2.5×108個の総CAR発現T細胞、もしくは2.5×108〜5×108個の総CAR発現T細胞、または約1×105〜約5×108個の総CAR発現T細胞、約1×105〜約2.5×108個の総CAR発現T細胞、約1×105〜約1×108個の総CAR発現T細胞、約1×105〜約5×107個の総CAR発現T細胞、約1×105〜約2.5×107個の総CAR発現T細胞、約1×105〜約1×107個の総CAR発現T細胞、約1×105〜約5×106個の総CAR発現T細胞、約1×105〜約2.5×106個の総CAR発現T細胞、約1×105〜約1×106個の総CAR発現T細胞、約1×106〜約5×108個の総CAR発現T細胞、約1×106〜約2.5×108個の総CAR発現T細胞、約1×106〜約1×108個の総CAR発現T細胞、約1×106〜約5×107個の総CAR発現T細胞、約1×106〜約2.5×107個の総CAR発現T細胞、約1×106〜約1×107個の総CAR発現T細胞、約1×106〜約5×106個の総CAR発現T細胞、約1×106〜約2.5×106個の総CAR発現T細胞、約2.5×106〜約5×108個の総CAR発現T細胞、約2.5×106〜約2.5×108個の総CAR発現T細胞、約2.5×106〜約1×108個の総CAR発現T細胞、約2.5×106〜約5×107個の総CAR発現T細胞、約2.5×106〜約2.5×107個の総CAR発現T細胞、約2.5×106〜約1×107個の総CAR発現T細胞、約2.5×106〜約5×106個の総CAR発現T細胞、約5×106〜約5×108個の総CAR発現T細胞、約5×106〜約2.5×108個の総CAR発現T細胞、約5×106〜約1×108個の総CAR発現T細胞、約5×106〜約5×107個の総CAR発現T細胞、約5×106〜約2.5×107個の総CAR発現T細胞、約5×106〜約1×107個の総CAR発現T細胞、約1×107〜約5×108個の総CAR発現T細胞、約1×107〜約2.5×108個の総CAR発現T細胞、約1×107〜約1×108個の総CAR発現T細胞、約1×107〜約5×107個の総CAR発現T細胞、約1×107〜約2.5×107個の総CAR発現T細胞、約2.5×107〜約5×108個の総CAR発現T細胞、約2.5×107〜約2.5×108個の総CAR発現T細胞、約2.5×107〜約1×108個の総CAR発現T細胞、約2.5×107〜約5×107個の総CAR発現T細胞、約5×107〜約5×108個の総CAR発現T細胞、約5×107〜約2.5×108個の総CAR発現T細胞、約5×107〜約1×108個の総CAR発現T細胞、約1×108〜約5×108個の総CAR発現T細胞、約1×108〜約2.5×108個の総CAR発現T細胞、もしくは約2.5×108〜約5×108個の総CAR発現T細胞を含む。
いくつかの態様において、遺伝子操作細胞の用量は、少なくともまたは少なくとも約1×105個のCAR発現細胞、少なくともまたは少なくとも約2.5×105個のCAR発現細胞、少なくともまたは少なくとも約5×105個のCAR発現細胞、少なくともまたは少なくとも約1×106個のCAR発現細胞、少なくともまたは少なくとも約2.5×106個のCAR発現細胞、少なくともまたは少なくとも約5×106個のCAR発現細胞、少なくともまたは少なくとも約1×107個のCAR発現細胞、少なくともまたは少なくとも約2.5×107個のCAR発現細胞、少なくともまたは少なくとも約5×107個のCAR発現細胞、少なくともまたは少なくとも約1×108個のCAR発現細胞、少なくともまたは少なくとも約2.5×108個のCAR発現細胞、または少なくともまたは少なくとも約5×108個のCAR発現細胞を含む。
一部の態様において、細胞療法は、以下の細胞数を含む用量の投与を含む：1×105〜5×108もしくは約1×105〜約5×108個の全ての組換え受容体発現細胞、全T細胞、もしくは全末梢血単核細胞(PBMC)、5×105〜1×107もしくは約5×105〜約1×107個の全ての組換え受容体発現細胞、全T細胞、もしくは全末梢血単核細胞(PBMC)、または1×106〜1×107もしくは約1×106〜約1×107個の全ての組換え受容体発現細胞、全T細胞、もしくは全末梢血単核細胞(PBMC)（各々両端の値を含む）。一部の態様において、細胞療法は、以下の細胞数を含む細胞の用量の投与を含む：少なくとももしくは少なくとも約1×105個の全ての組換え受容体発現細胞、全T細胞、もしくは全末梢血単核細胞(PBMC)、例えば、少なくとももしくは少なくとも1×106個、少なくとももしくは少なくとも約1×107個、少なくとももしくは少なくとも約1×108個のそのような細胞。一部の態様において、前記数は、CD3+またはCD8+の、場合によってはさらに組換え受容体を発現する（例えば、CAR+）細胞の総数に関する。一部の態様において、細胞療法は、以下の細胞数を含む用量の投与を含む：1×105〜5×108もしくは約1×105〜約5×108個のCD3+もしくはCD8+全T細胞またはCD3+もしくはCD8+組換え受容体発現細胞、5×105〜1×107もしくは約5×105〜約1×107個のCD3+もしくはCD8+全T細胞またはCD3+もしくはCD8+組換え受容体発現細胞、または1×106〜1×107もしくは約1×106〜約1×107個のCD3+もしくはCD8+全T細胞またはCD3+もしくはCD8+組換え受容体発現細胞（各々両端の値を含む）。一部の態様において、細胞療法は、以下の細胞数を含む用量の投与を含む：1×105〜5×108もしくは約1×105〜約5×108個の全てのCD3+/CAR+もしくはCD8+/CAR+細胞、5×105〜1×107もしくは約5×105〜約1×107個の全てのCD3+/CAR+もしくはCD8+/CAR+細胞、または1×106〜1×107もしくは約1×106〜約1×107個の全てのCD3+/CAR+もしくはCD8+/CAR+細胞（各々両端の値を含む）。
いくつかの態様において、用量のT細胞は、CD4+ T細胞、CD8+ T細胞、またはCD4+およびCD8+ T細胞を含む。
一部の態様において、例えば、対象がヒトである場合、前記用量のCD8+ T細胞（CD4+およびCD8+ T細胞を含む用量中を含む）は、約1×106〜5×108個（両端の値を含む）の全組換え受容体(例えば、CAR)発現CD8+細胞、例えば、約5×106〜1×108個の範囲のこのような細胞、このような細胞、1×107、2.5×107、5×107、7.5×107、1×108、もしくは5×108個の全てのこのような細胞、または前述の値のいずれか2つの間の範囲を含む。一部の態様において、患者に複数の用量が投与され、前記用量の各々、または全用量は前述の値のいずれかの範囲内でもよい。一部の態様において、細胞の用量は、以下の投与を含む：1×107〜0.75×108もしくは約1×107〜約0.75×108個の全ての組換え受容体発現CD8+ T細胞、1×107〜2.5×107個の全ての組換え受容体発現CD8+ T細胞、1×107〜0.75×108もしくは約1×107〜約0.75×108個の全ての組換え受容体発現CD8+ T細胞（各々両端の値を含む）。一部の態様において、細胞の用量は、以下の投与を含む：1×107もしくは約1×107、2.5×107もしくは約2.5×107、5×107もしくは約5×107、7.5×107もしくは約7.5×107、1×108もしくは約1×108、または5×108もしくは約5×108個の全ての組換え受容体発現CD8+ T細胞。
一部の態様において、細胞、例えば、組換え受容体発現T細胞の用量は、単一用量として対象へ投与されるか、または、2週間、1ヶ月間、3ヶ月間、6ヶ月間、1年間またはそれ以上の期間内に1回のみ投与される。
養子細胞療法の状況では、ある特定の「用量」の投与は、ある特定の量または数の細胞を、単回組成物投与および／または中断されない（uninterrupted）単回投与、例えば、単回注射または連続注入として投与することを包含し、ある特定の量または数の細胞を、3日以下の指定された期間にわたって複数の個々の組成物または注入の形で提供される分割用量として投与することも包含する。従って、ある状況では、用量は、1つの時点で与えられるか、または開始する、指定された数の細胞の単回投与または連続投与である。しかしながら、ある状況では、用量は、3日以下の期間にわたって、例えば、3日もしくは2日にわたって1日1回の、複数回の注射もしくは注入の形で投与されるか、または1日にわたって複数回の注入によって投与される。
従って、一部の局面において、用量の細胞は単一の薬学的組成物に入れられて投与される。一部の態様において、用量の細胞は複数の組成物に入れられて投与され、複数の組成物は合わさって第一用量の細胞を含有する。
用語「分割用量」は、何日もわたって投与されるように分割された用量を指す。このタイプの投薬は本発明の方法に包含され、単一用量とみなされる。
従って、用量は、一部の局面において、分割用量として投与されてもよい。例えば、一部の態様では、前記用量は2日または3日にわたって対象に投与されてもよい。分割投薬のための例示的な方法は、初日に用量の25％を投与する段階と、2日目に用量の残りの75％を投与する段階を含む。他の態様では、初日に第一用量の33％が投与されてもよく、2日目に残りの67％が投与されてもよい。一部の局面では、初日に用量の10％が投与され、2日目に用量の30％が投与され、3日目に用量の60％が投与される。一部の態様では、分割用量は3日を超えて広げられることはない。
いくつかの態様において、細胞は、所望の投薬量で投与され、これは、いくつかの局面において、細胞または細胞タイプおよび／または所望の比率の細胞タイプの、所望の用量または数を含む。従って、細胞の投薬量は、いくつかの態様において、総細胞の標的数、または単位の標的参照数、および個々の集団またはサブタイプの所望の比率、例えばCD4+対CD8+比率に基づく。いくつかの態様において、細胞の投薬量は、総細胞の所望の標的数、または個々の集団中もしくは個々の細胞タイプ中の単位の標的参照数に基づく。いくつかの態様において、投薬量は、総細胞の所望の数、標的参照単位、所望の比率、および個々の集団中の細胞の所望の総数などの、そのような特徴の組み合わせに基づく。
いくつかの態様において、細胞の集団またはサブタイプ、例えば、CD8+およびCD4+ T細胞は、総細胞の所望の用量（例えば、T細胞の所望の用量）の許容される差異以内で投与される。いくつかの局面において、所望の用量は、細胞の所望の数、または、細胞が投与される対象の体重の単位当たりの細胞の所望の数（例えば、細胞/kg）である。いくつかの局面において、所望の用量は、細胞の最小数、または体重の単位当たりの細胞の最小数以上である。いくつかの局面において、所望の用量で投与される、総細胞の中には、個々の集団またはサブタイプが、所望のアウトプット比率（例えば、CD4+対CD8+比率）でまたはほぼ所望のアウトプット比率（例えば、CD4+対CD8+比率）で、例えば、そのような比率の一定の許容される差異または誤差内で、存在する。
いくつかの態様において、細胞は、細胞の個々の集団またはサブタイプのうちの1つまたは複数の所望の用量、例えば、CD4+細胞の所望の用量および／またはCD8+細胞の所望の用量、の許容される差異以内で投与される。いくつかの局面において、所望の用量は、サブタイプもしくは集団の細胞の所望の数、または、細胞が投与される対象の体重の単位当たりのそのような細胞の所望の数（例えば、細胞/kg）である。いくつかの局面において、所望の用量は、集団もしくはサブタイプの細胞の最小数、または体重の単位当たりの集団もしくはサブタイプの細胞の最小数以上である。
従って、いくつかの態様において、投薬量は、総細胞の所望の固定用量および所望の比率に基づき、かつ／または、個々のサブタイプもしくは部分母集団のうちの1つまたは複数（例えば各々）の所望の固定用量に基づく。従って、いくつかの態様において、投薬量は、所望の固定用量（これは、T細胞の最小用量以上かつ／または最大用量以上であり得る）、およびいくつかの局面においてCD4+対CD8+細胞の所望の比率に基づき、かつ／または、CD4+および／もしくはCD8+細胞の所望の固定用量に基づく。
いくつかの態様において、標的用量または用量は、5×106もしくは約5×106を含むかまたは5×106未満もしくは約5×106未満であり（CD8+CAR+細胞）、7×106もしくは約7×106を含むかまたは7×106未満もしくは約7×106未満であり（CD8+ CAR+細胞またはCD3+CAR+細胞）、8×106もしくは約8×106を含むかまたは8×106未満もしくは約8×106未満であり（CD8+ CAR+細胞またはCD3+CAR+細胞）、8×106もしくは約8×106を含むかまたは8×106未満もしくは約8×106未満であり（CD8+ CAR+細胞またはCD3+CAR+細胞）、9×106もしくは約9×106を含むかまたは9×106未満もしくは約9×106未満であり（CD8+ CAR+細胞またはCD3+CAR+細胞）、10×106もしくは約10×106を含むかまたは10×106未満もしくは約10×106未満であり（CD8+ CAR+細胞）、11×106もしくは約11×106を含むかまたは11×106未満もしくは約11×106未満であり（CD8+ CAR+細胞またはCD3+CAR+細胞）、12×106もしくは約12×106を含むかまたは12×106未満もしくは約12×106未満であり（CD8+ CAR+細胞）、13×106もしくは約13×106を含むかまたは13×106未満もしくは約13×106未満であり（CD8+ CAR+細胞またはCD3+CAR+細胞）、14×106もしくは約14×106を含むかまたは14×106未満もしくは約14×106未満であり（CD8+ CAR+細胞）、15×106もしくは約15×106を含むかまたは15×106未満もしくは約15×106未満であり（CD8+ CAR+細胞またはCD3+CAR+細胞）、20×106もしくは30×106もしくは40×106もしくは50×106または約20×106もしくは約30×106もしくは約40×106もしくは約50×106を含むかあるいは20×106未満もしくは30×106未満もしくは40×106未満もしくは50×106未満または約20×106未満もしくは約30×106未満もしくは約40×106未満もしくは約50×106未満である（CD8+ CAR+細胞またはCD3+CAR+細胞）。そのような態様のいくつかの局面において、そのような用量の70、75、80、85、もしくは90％または約70、75、80、85、もしくは90％または少なくとも70、75、80、85、もしくは90％または少なくとも約70、75、80、85、もしくは90％のCD8+CAR+細胞が、細胞健康状態または生物学的に活性なCAR細胞を示す1つまたは複数の特性または表現型、例えば、アポトーシス性マーカーの非存在を示し、かつ／または、細胞を製造するために使用されたプロセスは、時間の70〜90％以内または平均80％で、用量中のCD8+CAR+細胞の中でのそのような細胞のパーセンテージを達成する。いくつかの局面において、用量中での生物学的に活性なまたは機能的なまたは非アポトーシス性の細胞の頻度の変動は閾値未満であり、かつ／または、頻度は、時間の1、5、10もしくは20％を超えて70〜80％の範囲の外に変動しない。
いくつかの態様において、細胞は、複数の細胞集団またはサブタイプ（例えば、CD4+およびCD8+細胞もしくはサブタイプ）の所望のアウトプット比率の許容される範囲以内で投与される。いくつかの局面において、所望の比率は、特定の比率であり得るか、またはある範囲の比率であり得る。例えば、いくつかの態様において、所望の比率（例えば、CD4+対CD8+細胞の比率）は、5:1もしくは約5:1〜5:1もしくは約5:1（または約1:5より大きく約5:1より小さい）、または1:3もしくは約1:3〜3:1もしくは約3:1（または約1:3より大きく約3:1より小さい）、例えば、2:1もしくは約2:1〜1:5もしくは約1:5（または約1:5より大きく約2:1より小さい）（各々両端の値を含む）、あるいは、例えば、5:1、4.5:1、4:1、3.5:1、3:1、2.5:1、2:1、1.9:1、1.8:1、1.7:1、1.6:1、1.5:1、1.4:1、1.3:1、1.2:1、1.1:1、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9: 1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5、もしくは1:5、または約5:1、約4.5:1、約4:1、約3.5:1、約3:1、約2.5:1、約2:1、約1.9:1、約1.8:1、約1.7:1、約1.6:1、約1.5:1、約1.4:1、約1.3:1、約1.2:1、約1.1:1、約1:1、約1:1.1、約1:1.2、約1:1.3、約1:1.4、約1:1.5、約1:1.6、約1:1.7、約1:1.8、約1:1.9: 約1:2、約1:2.5、約1:3、約1:3.5、約1:4、約1:4.5、もしくは約1:5である。いくつかの局面において、許容される差異は、所望の比率の約1％、約2％、約3％、約4％ 約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約35％、約40％、約45％、約50％以内であり、これらの範囲の間の任意の値を含む。
B．患者および／または臨床因子
提供される態様のいくつかにおいて、本明細書に提供される方法に従う細胞の用量は、本明細書に記載されるいずれかなどの患者特異的および／または臨床的危険因子を有する対象へ投与され得る。いくつかの態様において、治療されるそのような対象の中で、方法は、方法によって治療された対象の群全体、あるいはそのような患者特異的または臨床的危険因子を有さない対象と比較して、毒性（例えば、重度の有害副作用、CRS、および／もしくは神経毒性、またはそのグレード）の発生率または危険性において、実質的な差異、有意な差異、または閾値レベルもしくは程度を超える差異をもたらさない。ある態様において、対象の総数、または危険因子を有さない対象と比較しての、そのような危険因子を有する対象についての差異は、1％、5％、10％、15％、20％、25％または30％、35％または40％以下である。いくつかの態様において、毒性はCRSである。特定の態様において、毒性は、グレード2以上、グレード3以上、グレード4以上、またはグレード5のCRSである。ある態様において、毒性は神経毒性である。特定の態様において、毒性は、グレード2以上、グレード3以上、グレード4以上、またはグレード5の神経毒性である。いくつかの態様において、毒性は、脳水腫であるかまたは脳水腫に関連する。
ある態様において、本明細書に提供される方法に従う細胞の用量は、本明細書に記載されるいずれかなどの、患者および／または臨床因子を有さない対象へ投与される。いくつかの態様において、細胞の減少したおよび／またはより低い用量が、患者および／または臨床因子を有する対象へ投与される。ある態様において、減少したおよび／またはより低い用量は、患者および／または臨床因子を有さない対象へ投与される用量と比べて、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、もしくは95％より少ないか、または少なくとも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、もしくは95％より少ない。ある態様において、細胞の用量が投与される患者および／または臨床因子を有さない対象と、細胞のより低い用量が投与される患者および／または臨床因子を有する対象との間で、毒性（例えば、重度の有害副作用、CRS、および／または神経毒性）の発生率の実質的な差異はない。
いくつかの態様において、患者および／または臨床因子は、事前療法の量、例えば、治療用T細胞組成物の投与開始前の1つまたは複数の療法である。いくつかの態様において、事前療法は、治療用T細胞組成物と同じ疾患および／または状態を治療するために投与された。特定の態様において、患者および／または臨床因子は、10より少ない事前療法、9より少ない事前療法、8より少ない事前療法、7より少ない事前療法、6より少ない事前療法、5より少ない事前療法、4より少ない事前療法、3より少ない事前療法、2より少ない事前療法、または1より少ない事前療法である。いくつかの態様において、患者および／または臨床因子は、3より少ない事前療法である。ある態様において、患者および／または臨床因子は、2またはそれより少ない事前療法である。
ある態様において、患者および／または臨床因子は、年齢、例えば、治療用T細胞組成物の投与開始時の対象年齢である。ある態様において、患者および／または臨床因子は、若年および／または比較的若い年齢である。いくつかの態様において、患者および／または臨床因子は、65歳、60歳、55歳、50歳、45歳、40歳、35歳、30歳、25歳、または20歳未満の年齢である。特定の態様において、患者および／または臨床因子は、30歳未満の年齢である。
特定の態様において、患者および／または臨床因子は、対象由来のアフェレーシス試料中のCD4:CD8 T細胞の比率である。いくつかの態様において、患者および／または臨床因子は、一定の閾値を下回るアフェレーシス試料中のCD4:CD8 T細胞の比率である。ある態様において、患者および／または臨床因子は、3:1, 2:1、1.5:1、1:1、0.9:1、0.8:1、0.7:1、0.6:1、0.5:1、0.4:1、0.3:1、0.2:1、または0.1:1を下回るCD4:CD8 T細胞の比率である。ある態様において、アフェレーシス試料中のCD4:CD8 T細胞の比率は、投与される用量が総T細胞または組換え受容体を発現する総T細胞に基づく場合、患者および／または臨床因子である。特定の態様において、患者および／または臨床因子は、1:5を下回る、1:1を下回る、または0.5:1を下回る、アフェレーシス試料中のCD4:CD8 T細胞の比率である。
ある態様において、患者および／または臨床因子は、対象の重量、例えば、体重である。ある態様において、対象体重は、治療用T細胞組成物が投与される時点での対象の体重である。ある態様において、患者および／または臨床因子は、100 lbを上回る、125lbを上回る、150 lbを上回る、175 lbを上回る、200 lbを上回る、225 lbを上回る、250 lbを上回る、275 lbを上回る、300 lbを上回る、350 lbを上回る、または400 lbを上回る、体重である。特定の態様において、患者および／または臨床因子は、50 kg、60 kg、70 kg、80 kg、90 kg、100 kg、125 kg、150 kg、175 kg、または200 kgを上回る、体重である。いくつかの態様において、患者および／または臨床因子は、対象の群の中での平均体重よりも高い体重である。特定の態様において、患者および／または臨床因子は、対象の群の中での平均値、中央値、および／または最頻値よりも高い体重である。いくつかの態様において、対象の群は同じ治療用細胞組成物で治療される。
ある態様において、患者および／または臨床因子は血小板カウントである。いくつかの態様において、患者および／または臨床因子は、500,000未満、450,000未満、400,000未満、350,000未満、300,000未満、250,000未満、200,000未満、180,000未満、160,000未満、140,000未満、120,000未満、100,000未満、75,000未満、50,000未満、もしくは25,000未満、または約500,000未満、約450,000未満、約400,000未満、約350,000未満、約300,000未満、約250,000未満、約200,000未満、約180,000未満、約160,000未満、約140,000未満、約120,000未満、約100,000未満、約75,000未満、約50,000未満、もしくは約25,000未満の血小板カウントである。いくつかの態様において、患者および／または臨床因子は120,000未満の血小板カウントである。
特定の態様において、患者および／または臨床因子は、白血病を有していることである。いくつかの態様において、患者または臨床因子は、B細胞白血病を有していることである。ある態様において、白血病は、急性リンパ芽球性白血病(ALL)、非ホジキンリンパ腫(NHL)、慢性リンパ性白血病(CLL)、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫(DLBCL)、または急性骨髄性白血病(AML)である。ある態様において、患者および／または臨床因子は急性リンパ性白血病(ALL)を有している。
特定の態様において、患者および／または臨床因子は、高疾患負荷量、例えば、治療用T細胞組成物の投与開始前の高疾患負荷量である。ある態様において、患者および／または臨床因子は、治療用T細胞組成物の投与開始直前の、または治療用T細胞組成物の投与開始前1週間、2週間、3週間、4週間、5週間、6週間、7週間、8週間、9週間、1ヶ月、2ヶ月、3ヶ月、4ヶ月、5ヶ月、6ヶ月以内の、または6ヶ月を超える、高疾患負荷量である。いくつかの態様において、高疾患負荷量は、骨髄芽球のパーセントに基づいて決定される。ある態様において、高疾患負荷量は、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、または10％以上の芽細胞である。いくつかの態様において、患者および／または臨床因子は、治療用T細胞組成物の投与開始直前のまたは開始前1ヶ月以内の5％を超える芽細胞の疾患負荷量である。ある態様において、患者および／または臨床因子は、高疾患負荷量、例えば、二方向積和(SPD)、または乳酸デヒドロゲナーゼのレベルである。
特定の態様において、患者および／または臨床因子は、高腫瘍負荷量、例えば、治療用T細胞組成物の投与開始前の高疾患負荷量である。いくつかの態様において、腫瘍負荷量を示す因子は、腫瘍（複数可）の体積測定値である。いくつかの態様において、体積測定値は、腫瘍サイズ、腫瘍直径、腫瘍体積、腫瘍質量、腫瘍ロードもしくはバルク、腫瘍関連浮腫、腫瘍関連壊死、および／または転移の数もしくは程度などの、病巣（複数可）の測定値である。いくつかの態様において、腫瘍の体積測定値は、二次元測定値である。例えば、いくつかの態様において、病巣（複数可）の面積が、全ての測定可能な腫瘍の最長径と最長の垂直の直径との積として計算される。いくつかの場合において、腫瘍の体積測定値は、一次元測定値である。いくつかの場合において、測定可能な病巣のサイズは最長径として評価される。いくつかの態様において、二方向積和(SPD)、最長腫瘍直径(LD)、最長腫瘍直径和(SLD)、壊死、腫瘍体積、壊死体積、壊死-腫瘍比(NTR)、腫瘍周囲浮腫(PTE)、および浮腫-腫瘍比(ETR)が測定される。
腫瘍負荷量を測定および評価するための例示的な方法としては、例えば、Carceller et al., Pediatr Blood Cancer. (2016) 63(8):1400-1406およびEisenhauer et al., Eur J Cancer. (2009) 45(2):228-247に記載されるものが挙げられる。いくつかの態様において、体積測定は、全ての測定可能な腫瘍の最大の垂直の直径の積の和を決定することによって測定される二方向積和(SPD)である。いくつかの局面において、腫瘍または病巣は、最長径(LD)を有する一次元で、および／または、全ての測定可能な病巣の最長腫瘍直径和(SLD)を決定することによって、測定される。いくつかの態様において、腫瘍の体積測定値は、腫瘍壊死の体積測定定量化、例えば、壊死体積および／または壊死-腫瘍比(NTR)である；Monsky et al., Anticancer Res. (2012) 32(11): 4951-4961を参照されたい。いくつかの局面において、腫瘍の体積測定値は、腫瘍関連浮腫の体積測定定量化、例えば、腫瘍周囲浮腫(PTE)および／または浮腫-腫瘍比(ETR)である。いくつかの態様において、測定は、イメージング技術、例えば、対象の、コンピュータ断層撮影法(CT)、陽電子断層撮影法(PET)、および／または核磁気共鳴映像法(MRI)を使用して行うことができる。
いくつかの態様において、体積測定値はSPDであり、いくつかの場合において、毒性、例えばCRSまたはNTの発症は、閾値を上回るSPD値と相関する。いくつかの態様において、体積測定値はSPDであり、閾値は、30/cm2であるかもしくは約30/cm2であり、40/cm2であるかもしくは約40/cm2であり、50/cm2であるかもしくは約50/cm2であり、60/cm2であるかもしくは約60/cm2であり、または70/cm2であるかもしくは約70/cm2である。いくつかの態様において、体積測定値はSPDであり、閾値は、30/cm2であるかもしくは約30/cm2であり、40/cm2であるかもしくは約40/cm2であり、50/cm2であるかもしくは約50/cm2であり、60/cm2であるかもしくは約60/cm2であり、または70/cm2であるかもしくは約70/cm2である。ある態様において、患者および／または臨床因子は、30/cm2を超える、40/cm2を超える、50/cm2を超える、60/cm2を超える、または70/cm2を超えるSPDである。
いくつかの態様において、腫瘍の体積測定値は、スクリーニングセッション、例えば、対象中の状態または疾患を確認および／または同定するための型通りの評価または採血で決定される。
特定の態様において、患者および／または臨床因子は、炎症マーカーのレベル、量、および／または濃度である。いくつかの態様において、炎症マーカーは、C反応性タンパク質(CRP)、赤血球沈降速度(ESR)、アルブミン、フェリチン、β2ミクログロブリン(β2-M)、または乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)のレベルまたは存在であるかまたはこれらを含み、検出および評価される。いくつかの態様において、炎症マーカーは、免疫アッセイを使用して評価される。例えば、酵素結合免疫測定法(ELISA)、酵素免疫測定法(EIA)、ラジオイムノアッセイ(RIA)、表面プラズモン共鳴(SPR)、ウェスタンブロット、ラテラルフローアッセイ、免疫組織化学、タンパク質アレイまたはイムノ-PCR (iPCR)が、炎症マーカーを検出するために使用することができる。いくつかの態様において、炎症マーカーの存在、レベル、量、および／または濃度は、腫瘍負荷量、例えば、高腫瘍負荷量を示す。いくつかの場合において、炎症マーカーのアッセイまたは評価は、フローサイトメトリーの使用である。いくつかの場合において、試薬は、炎症マーカーに結合する可溶性タンパク質である。いくつかの例において、試薬は、C反応性タンパク質(CRP)、赤血球沈降速度(ESR)、アルブミン、フェリチン、β2ミクログロブリン(β2-M)、または乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)に結合するタンパク質である。
いくつかの態様において、患者および／または臨床因子は、治療用T細胞組成物の投与を受ける前の対象の群から得られた試料中において測定された炎症マーカーのレベル、量または濃度の、平均値、中央値、または平均の、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、75％、100％、150％、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍を超えるか、または約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約40％、約50％、約75％、約100％、約150％、約1倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍を超えるか、または5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、75％、100％、150％、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍であり、かつ／あるいは、中央値または平均と比べて3、2.5、2、1.5、1、0.8、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、または0.1標準偏差より大きい、炎症マーカーのレベル、量または濃度であり、ここで、群の対象の各々は、治療用T細胞組成物の投与後にグレード2以上、グレード3以上、長期にわたるグレード3以上、グレード4以上、またはグレード5の毒性を発症しなかった。いくつかの態様において、毒性は神経毒性である。
いくつかの態様において、バイオマーカー、例えば炎症マーカーは、C反応性タンパク質(CRP)であるかまたはこれを含む。いくつかの態様において、CRPは、血清、血漿、または血液などの試料からヒトCRPの定量的測定値を得るために、インビトロ酵素結合免疫測定法を使用して評価される。いくつかの例において、CRPは、ヒト酵素結合免疫測定法(ELISA)を使用して検出される。いくつかの態様において、バイオマーカー、例えば、炎症マーカーは赤血球沈降速度(ESR)であるかまたはこれを含む。いくつかの態様において、ESRは、垂直のピペットまたはチューブ中の血漿から分離後に赤血球が落下した距離（ミリメートル／時間）を測定することによって、評価される。いくつかの態様において、バイオマーカーはアルブミンであるかまたはこれを含む。いくつかの局面において、アルブミンは、比色試験またはインビトロ酵素結合免疫測定法を使用して、評価される。いくつかの例において、アルブミンは、ヒト酵素結合免疫測定法(ELISA)を使用して検出される。いくつかの態様において、バイオマーカー、例えば、炎症マーカーは、フェリチンまたはβ2ミクログロブリンであるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、フェリチンまたはβ2ミクログロブリンは、イムノアッセイを使用して評価されるか、またはELISAを使用して検出される。いくつかの局面において、バイオマーカー、例えば、炎症マーカーは乳酸デヒドロゲナーゼ(LDH)であるかまたはこれを含み、LDHは、比色試験またはインビトロ酵素結合免疫測定法を使用して、評価される。
いくつかの態様において、患者および／または臨床因子は、LDHのレベル、濃度、および／または量である。いくつかの態様において、毒性、例えばCRSまたはNTの発症は、閾値を上回るLDH値と相関する。いくつかの態様において、炎症マーカーはLDHであり、閾値は、300単位/リットルであるかもしくは約300単位/リットルであり、400単位/リットルであるかもしくは約400単位/リットルであり、500単位/リットルであるかもしくは約500単位/リットルであり、または600単位/リットルであるかもしくは約600単位/リットルである。特定の態様において、患者および／または臨床的危険因子は、少なくとも300単位/リットル、少なくとも400単位/リットル、少なくとも500単位/リットル、または少なくとも600単位/リットルである。
いくつかの態様において、LDHのレベル、濃度および／または数は、例えば腫瘍またはがんについての、疾患負荷量の代理であり、潜在的な神経毒性リスク評価、および／または、ある対象の治療のリスク適合投薬もしくは調節に有用であり得る。いくつかの局面において、LDHレベルは、単独で、および／または、別の治療前パラメータ、例えば、疾患負荷量の別の測定値もしくは指標、例えば、体積測定的腫瘍測定値、例えば、二方向積和(SPD)、または、本明細書に記載されるいずれかのような、疾患負荷量の他のCTベースのもしくはMRIベースの体積測定的測定値と組み合わせて、評価され得る。いくつかの局面において、疾患負荷量を示す1つまたは複数のパラメータが、評価され、いくつかの状況において、T細胞療法後に神経毒性を発症する危険性の存在、非存在または程度を示し得る。いくつかの局面において、1つまたは複数のパラメータは、LDHおよび／または体積測定的腫瘍測定値を含む。いくつかの態様において、パラメータはSPDおよび／またはLDHである。
いくつかの態様において、患者および／または臨床因子は、治療用T細胞組成物の投与開始前にブリッジング化学療法を受けることである。
特定の態様において、患者および／または臨床因子は、例えば治療用T細胞組成物の投与開始前の、リンパ球枯渇療法でのプレコンディショニングである。いくつかの態様において、リンパ球枯渇療法は、化学療法の投与であるかまたはこれを含む。ある態様において、リンパ球枯渇療法は、 の投与であるかまたはこれを含む。特定の態様において、患者および／または臨床因子は、治療用T細胞組成物の投与開始前のフルダラビンおよび／またはシクロホスファミドでのプレコンディショニングである。ある態様において、患者および／または臨床因子は、治療用T細胞組成物の投与開始前のシクロホスファミドでのプレコンディショニングである。いくつかの態様において、患者および／または臨床因子は、治療用T細胞組成物の投与開始前のフルダラビンおよびシクロホスファミドでのプレコンディショニングである。
ある態様において、患者および／または臨床因子は、疾患の分子サブタイプである。ある態様において、患者および／または臨床因子は、白血病の分子サブタイプである。特定の態様において、患者および／または臨床因子は、ALLの分子サブタイプである。ある態様において、患者および／または臨床因子は、フィラデルフィア染色体陽性(Ph+)ではないALLの分子サブタイプ、または、ALLのフィラデルフィア染色体(Ph)様分子サブタイプ、例えば、非Ph分子サブタイプである。特定の態様において、ALLの非Ph分子サブタイプとしては、TCF3-PBX1融合、ETV6-RUNX1融合、EP300-ZNF384融合、KMT2A-AFF1融合、高倍数性、またはdic(9;20)染色体異常、例えば、dic(9;20)(p13.2;q11.2)に関連するサブタイプが挙げられるが、これらに限定されない。
ある態様において、フィラデルフィア染色体は、新しいキメラ遺伝子およびタンパク質を生じさせる転座、t(9;22)(q34;ql 1)を含有し、これは、染色体22上のBCR遺伝子と染色体9上のエーベルソンチロシンキナーゼ(ABL1)をコードする遺伝子をと融合させる。特定の態様において、ALLのフィラデルフィア様(Ph様)サブタイプは、「クラスターグループR8」、「フィラデルフィア染色体(Ph)様」、「Ph様」、「BCR-ABL1様」、または「活性化チロシンキナーゼ遺伝子発現シグネチャー」と様々に呼ばれる、関連する遺伝子発現シグネチャーによって特徴付けられる。これらの遺伝子発現シグネチャーは、いくつかの態様において、Ph様対象はフィラデルフィア染色体転座またはBCR-ABL1融合転写物を有さない（to not have）という事実にもかかわらず、Ph+ ALL対象において測定される遺伝子発現プロファイルと非常に類似していることが示された。Ph+および／またはPh様ALLサブタイプを同定および／または決定する方法および技術は、記載されている（例えば、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、Roberts et al., N Engl J Med (2014) 371(11): 1005-1015; Roberts et al. Cancer Cell (2012) 14;22(2):153-66; Perez-Andreu et al. Nature Genetics (2013) 45(12): 1494-1498; Yap et al. Leuk Lymphoma (2017) 58(4): 950-958; Roberts et al. J Clin Oncol (2017) 35(4): 394-401; Harvey et al. Blood (2013) 122:826; Harvey et al., Blood (2010) 116(23): 4874-4884; およびPct App. No. WO 2013/090419を参照されたい）。
いくつかの態様において、患者および／または臨床因子は、治療用T細胞組成物の投与開始前の、血液、血清、または血漿試料中のサイトカインのレベル、量または濃度である。いくつかの態様において、サイトカインは、インターロイキン、例えば、インターロイキン-15 (IL-15)である。特定の態様において、患者および／または臨床因子は、治療用T細胞組成物の投与開始前の血液試料中のIL-15の上昇したレベル、量または濃度である。ある態様において、患者および／または臨床因子は、治療用T細胞組成物の投与開始前の血液、血清、または血漿試料中の1 pg/ mL、5 pg/ mL、10 pg/ mL、15 pg/ mL、20 pg/ mL、25 pg/ mL、30 pg/ mL、35 pg/ mL、40 pg/ mL、45 pg/ mL、50 pg/ mL、100 pg/ mL、150 pg/ mL、200 pg/ mL、250 pg/ mL、または300 pg/ mL以上であるIL-15のレベル、量または濃度である。ある態様において、患者および／または臨床因子は、治療用T細胞組成物の投与開始前の血液、血清、または血漿試料中の30 pg/ mL以上であるIL-15のレベル、量または濃度である。
特定の態様において、患者および／または臨床因子は、組換え受容体で操作された細胞の用量を含む治療用T細胞組成物の投与を受ける前の対象の群から得られた血液試料中において測定されたIL-15のレベル、量または濃度の、平均値、中央値、または平均の、5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、75％、100％、150％、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍を超えるか、または約5％、約10％、約15％、約20％、約25％、約30％、約40％、約50％、約75％、約100％、約150％、約1倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍を超えるか、または5％、10％、15％、20％、25％、30％、40％、50％、75％、100％、150％、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍であり、かつ／あるいは、中央値または平均と比べて3、2.5、2、1.5、1、0.8、0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、または0.1標準偏差より大きい、IL-15のレベル、量または濃度であり、ここで、群の対象の各々は、治療用T細胞組成物の投与後にグレード2以上、グレード3以上、長期にわたるグレード3以上、グレード4以上、またはグレード5の毒性を発症しなかった。いくつかの態様において、毒性は神経毒性である。
ある態様において、患者および／または臨床因子は、組換え受容体発現細胞、例えばCAR T細胞のインビボ増大であるような、対象への投与後の細胞組成物の薬物動態特性である。いくつかの態様において、薬物動態パラメータは、曝露、数、濃度、持続および増殖を含み得る。いくつかの場合において、薬物動態は、投与後に、最大（ピーク）血漿濃度(Cmax)、ピーク時間（即ち、最大血漿濃度(Cmax)が生じる時；Tmax）、最小血漿濃度（即ち、治療剤、例えばCAR+ T細胞、の用量間の最小血漿濃度；Cmin）排出半減期(T1/2)、および曲線下面積（即ち、治療剤CAR+ T細胞の血漿濃度に対して時間をプロットすることによって作成される曲線下面積；AUC）などの、パラメータを測定することによって、評価され得る。投与後の血漿中の特定の治療剤、例えばCAR+ T細胞の濃度が、血液試料中の治療剤、例えばCAR+ T細胞の濃度の評価に適した当技術分野において公知の任意の方法、または本明細書に記載される任意の方法を使用して測定され得る。例えば、核酸ベースの方法、例えば定量的PCR(qPCR)、またはフローサイトメトリーベースの方法、または他のアッセイ、例えば、イムノアッセイ、ELISA、もしくはクロマトグラフィー／質量分析に基づくアッセイを使用することができる。
いくつかの態様において、投与された細胞、例えばCAR+ T細胞組成物の薬物動態(PK)が、利用可能性、例えば投与された細胞のバイオアベイラビリティを評価するために決定される。いくつかの態様において、投与された細胞の決定される薬物動態パラメータは、最大（ピーク）血漿濃度(Cmax)、例えば、CD3+ CAR+細胞、CD4+ CAR+細胞およびもしくはCD8+ CAR+ T細胞のCmax；Cmaxが達成される時点(Tmax)、例えば、CD3+ CAR+細胞、CD4+ CAR+細胞およびもしくはCD8+ CAR+ T細胞のTmax、ならびにまたは、曲線下面積(AUC)、例えば、CD3+ CAR+細胞、CD4+ CAR+細胞およびもしくはCD8+ CAR+ T細胞のAUC0-28を含む。いくつかの態様において、薬物動態パラメータは、ピークCD3+ CAR+ T細胞濃度(Cmax CD3+ CAR+ T細胞)、またはCD8+ CAR+ T細胞濃度(Cmax CD8+ CAR+ T細胞)である。いくつかの態様において、薬物動態パラメータは、CD3+ CAR+ T細胞のAUC0-28 (AUC0-28 CD3+ CAR+ T細胞)、またはCD8+ CAR+ T細胞のAUC0-28 (AUC0-28 CD8+ CAR+ T細胞)である。
増大および／または持続を示す、曝露、例えば、細胞、例えば、T細胞療法のために投与されたT細胞の、数または濃度は、対象が曝露される細胞の最大数または濃度、検出可能な細胞または一定の数もしくはパーセンテージを上回る細胞の期間、経時的な数または濃度についての曲線下面積(AUC)、および／または、それらの組み合わせおよびそれらの指標によって示され得る。そのようなアウトカムは、公知の方法、例えば、特定の試料、例えば、血液、血清、血漿もしくは組織、例えば腫瘍試料中の、核酸またはDNAの総量と比較しての、組換え受容体をコードする核酸のコピー数を検出するためのqPCR、ならびに／または、受容体に特異的な抗体を一般に使用して、受容体を発現する細胞を検出するフローサイトメトリーアッセイを使用して評価され得る。細胞ベースのアッセイもまた、疾患もしくは状態の細胞または受容体によって認識される抗原を発現する細胞へ結合するおよび／またはこれらを中和するおよび／または応答（例えば、細胞傷害反応）を誘導することができる細胞などの、機能細胞の数またはパーセンテージまたは濃度を検出するために、使用され得る。
いくつかの態様において、曝露は、治療剤、例えばCAR+ T細胞の用量の投与後の薬物動態解析によって決定されるような、治療剤濃度-時間曲線下面積(AUC)として記載され得る。いくつかの場合において、AUCは、細胞療法において投与される細胞について、細胞*日/μLで、またはその対応の単位で表される。いくつかの態様において、AUCは、患者集団、例えばサンプル患者集団中における平均AUC、例えば1人または複数の患者からの平均AUCとして、測定される。いくつかの態様において、全身曝露は、一定の期間内の、例えば、0日目から1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、21、28日目もしくはそれ以上、または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15週間目もしくはそれ以上、または1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18、24、48ヶ月目もしくはそれ以上までの、曲線下面積(AUC)を指す。いくつかの態様において、AUCは、患者集団、例えばサンプル患者集団からの平均AUCなどの、全ての測定されたデータおよび測定された薬物動態(PK)パラメータから推定されるデータを含む、治療剤、例えばCAR+ T細胞の投与後0日目から28日目までのAUC (AUC0-28)として測定される。いくつかの態様において、経時的な曝露、例えば、一定の期間についてのAUC、例えばAUC0-28を決定するために、治療剤濃度-時間曲線が、経時的なパラメータ（例えば細胞濃度）の複数の測定値または評価、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、21または28日毎にまたはそれ以上で得られた測定値を使用して作成される。
いくつかの態様において、T細胞の投与後の対象中にける組換え受容体を発現する細胞（例えば、T細胞ベースの療法について投与されるCAR発現細胞）の存在および／または量が、決定される。いくつかの局面において、核酸ベースの方法、例えば定量的PCR(qPCR)が、対象の血液または血清または臓器または組織試料（例えば、疾患部位、例えば腫瘍試料中における組換え受容体を発現する細胞（例えば、T細胞ベースの療法について投与されるCAR発現細胞）の量を評価するために使用される。いくつかの局面において、持続は、DNA 1マイクログラム当たりの受容体（例えばCAR）をコードするDNAもしくはプラスミドのコピーとして、あるいは、試料（例えば、血液もしくは血清試料）1マイクロリットル当たりの、または、試料1マイクロリットル当たり末梢血単核細胞(PBMC)もしくは白血球もしくはT細胞の総数当たりの、受容体発現（例えばCAR発現）細胞の数として、定量化される。いくつかの態様において、qPCRまたは他の核酸ベースの方法のために使用されるプライマーまたはプローブは、組換え受容体をコードする核酸、ならびに／または、プラスミドおよび／もしくはベクターの他の成分もしくはエレメント、例えば調節エレメント、例えば、プロモーター、転写および／もしくは転写後調節エレメント、または応答エレメント、またはマーカー、例えば代理マーカーに結合する、これらを認識する、かつ／またはこれらを増幅することに特異的である。いくつかの態様において、プライマーは、ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント(WPRE)などの、調節エレメントに特異的であり得る。
いくつかの態様において、細胞は、T細胞、例えばCAR発現T細胞の投与後2、3、4、5、6、7、14、15、27、もしくは28日または少なくとも2、3、4、5、6、7、14、15、27、もしくは28日で、対象中において検出される。いくつかの局面において、細胞は、T細胞、例えばCAR発現T細胞の投与後、2、4、もしくは6週間、または3、6、もしくは12、18、もしくは24、もしくは30もしくは36ヶ月、または1、2、3、4、5年もしくはそれ以上で、あるいは、少なくとも、2、4、もしくは6週間、または3、6、もしくは12、18、もしくは24、もしくは30もしくは36ヶ月、または1、2、3、4、5年もしくはそれ以上で、検出される。いくつかの態様において、受容体を発現する細胞は、例えば、qPCRまたはフローサイトメトリーベースの検出方法などの、指定される方法によって、対象の血清、血漿、血液または組織、例えば腫瘍試料中において、検出可能である。
いくつかの態様において、受容体発現細胞、例えばCAR発現細胞は、T細胞、例えばCAR発現T細胞の投与後、対象中において増大する。いくつかの局面において、細胞への対象の曝露の増加は、細胞の増大の増加を含む。本明細書に示されるように、細胞療法の投与後、早期に、例えば7日以内、例えば4〜7日以内に起こる増加した増大は、毒性を発症する危険性または可能性の高い危険性（risk of likely risk）に関連し、これらと相関し、かつ／またはこれらを示し得る。いくつかの態様において、投与された組換え受容体発現細胞の薬物動態特性について対象がモニターされる方法が提供され、早期のまたは急速な増大が検出される場合、毒性または毒性の危険性もしくは可能性の高い危険性を改善するための1つまたは複数の薬剤が、対象へ投与され得る。毒性を改善するための例示的な薬剤は、公知であり、例えばセクションIV.Eに記載されている。
特定の態様において、薬物動態パラメータは、対象中の細胞の早期のまたは急速な増大を示す組換え受容体発現細胞の数である。いくつかの態様において、1マイクロリットル当たり、少なくとも2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、もしくは200個、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、もしくは200個、または約2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、125、150、もしくは200個の組換え受容体発現細胞が、細胞療法の投与開始後4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、もしくは14日以内にまたは14日を超えて収集された血液または血清試料中において検出される場合、そのような検出可能な増大が示され得る。いくつかの態様において、薬物動態パラメータは、投与開始後4日以内に収集された血液または血清試料中において1マイクロリットル当たり少なくとも2個、2個、または約2個である組換え受容体発現細胞の数である。特定の態様において、薬物動態パラメータは、投与開始後5または6日以内に収集された血液または血清試料中において1マイクロリットル当たり少なくとも5個、5個、または約5個である組換え受容体発現細胞の数である。いくつかの態様において、薬物動態パラメータは、投与開始後5または6日以内に収集された血液または血清試料中において1マイクロリットル当たり少なくとも10個、10個、または約10個である組換え受容体発現細胞の数である。特定の態様において、薬物動態パラメータは、投与開始後7日以内に収集された血液または血清試料中において1マイクロリットル当たり少なくとも15個、15個、または約15個である組換え受容体発現細胞の数である。
特定の態様において、治療用T細胞組成物の投与についての試験を設計する方法を、本明細書に提供する。いくつかの態様において、方法は、記載されるいずれかのような、1つまたは複数の患者および／または臨床的危険因子の存在または非存在に基づいて、対象を治療レジメンへ割り当てる工程を含む。いくつかの態様において、患者および／または臨床因子を有さないか、またはこれらを有すると同定もしくは見なされない対象は、治療用T細胞組成物の用量を受容するように割り当てられる。特定の態様において、対象は、患者および／または臨床因子を有するか、または有すると同定もしくは見なされ、細胞の減少したおよび／またはより低い用量が投与されるように割り当てられる。ある態様において、減少したおよび／またはより低い用量は、患者および／または臨床因子を有さない対象へ投与される用量と比べて、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、もしくは95％より少ないか、または少なくとも5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、もしくは95％より少ない。ある態様において、細胞の用量が投与される患者および／または臨床因子を有さない対象と、細胞のより低い用量が投与される患者および／または臨床因子を有する対象との間で、毒性（例えば、重度の有害副作用、CRS、および／または神経毒性）の発生率の実質的な差異はない。
ある態様において、対象が以下を含むがこれらに限定されない1つまたは複数の患者および／または臨床因子を有する場合、対象は、低用量または減少用量が投与されるように割り当てられる：
(i)治療用T細胞組成物の投与開始前に、より少ない事前療法、任意で2つ未満の事前療法を受けたことがある対象、
(ii)若年、任意で30歳未満の対象、
(iii)対象由来のアフェレーシス試料中のCD4:CD8の比がある閾値を下回る、任意で1:1を下回るまたは1.5:1を下回るまたは0.5:1を下回るまたはそれ以下である対象であって、任意で、投与される用量が、総T細胞または組換え受容体を発現する総T細胞に基づく、対象；
(iv)治療される対象の群の中での平均体重を超える体重を有する対象；
(v)120,000未満または約120,000未満の血小板カウントを有する対象；
(vi)B細胞白血病、任意で急性リンパ性白血病(ALL)を有する対象；
(vii)治療用T細胞組成物の投与開始前に、例えば、投与開始直前にまたは投与開始前1ヶ月以内に、高疾患負荷量を有する対象であって、高疾患負荷量が、任意で、5％以上の骨髄芽球のパーセント、二方向積和(SPD)、または乳酸デヒドロゲナーゼのレベルに基づいて決定される、対象；
(ix)治療用T細胞組成物の投与開始前にブリッジング化学療法を受けたことがある対象；
(x)治療用T細胞組成物の投与開始前に、任意でフルダラビンおよび／またはシクロホスファミドの投与を含む、リンパ球枯渇療法でプレコンディショニングされたことがある対象；
(xi)治療用T細胞組成物の投与開始前の血液試料中のインターロイキン-15 (IL-15)のレベル、量または濃度が、閾値に等しいかまたは閾値を超える対象であって、任意で、閾値が30 pg/ mL血漿である、対象、
(xii)組換え受容体を発現する細胞の急速なインビボ増大、
(xiii)急性リンパ芽球性白血病(ALL)のフィラデルフィア染色体(Ph+)および／またはPh染色体様(Ph様)分子サブタイプを示さない対象。
C．応答転帰
いくつかの態様において、T細胞組成物の投与後の対象における応答転帰は、モニターまたは評価することができる。いくつかの態様において、応答転帰は応答無しである。いくつかの態様において、応答転帰は部分奏効である。いくつかの態様において、応答転帰は完全奏効(CR)である。いくつかの態様において、応答転帰は、対象における疾患負荷量をモニターすることによって評価される。いくつかの態様において、応答無し、部分奏効または臨床もしくは完全奏効の存在を評価することができる。
いくつかの態様において、部分奏効または完全奏効は、治療剤が、対象中における疾患または状態の増大または負荷を減少させるかまたは防止するものである。例えば、疾患または状態が腫瘍である場合、治療剤（例えば、CAR T細胞）での治療前と比較して、腫瘍サイズ、嵩、転移、骨髄中の芽細胞のパーセンテージもしくは分子的に検出可能ながんの減少、および／または、予後もしくは生存または腫瘍負荷と関連する他の症状の改善が存在する場合、疾患負荷の減少が存在するかまたはある。
いくつかの態様では、疾患または状態は腫瘍であり、疾患負荷の減少は腫瘍のサイズの減少である。いくつかの態様において、疾患負荷の減少は、対象またはその体液もしくは器官もしくは組織中の疾患細胞の負荷または数、腫瘍の質量または体積、または転移の程度または範囲などの、1つまたは複数の因子の減少によって示される。いくつかの態様において、疾患負荷、例えば、腫瘍負荷は、形態学的疾患および／または微小残存病変の範囲について評価またはモニターされ得る。
いくつかの態様では、対象における疾患または状態の負荷量が検出、評価、または測定される。疾患負荷量は、いくつかの局面では、対象にある、または対象の臓器、組織、もしくは体液、例えば、血液もしくは血清にある疾患細胞または疾患関連細胞、例えば、腫瘍細胞の総数を検出することによって検出されてもよい。いくつかの態様において、疾患負荷量、例えば、腫瘍負荷量は、固形腫瘍の質量および／または転移の数もしくは程度を測定することによって評価される。いくつかの局面では、対象の生存、ある特定の期間内での生存、生存の程度、無再発生存もしくは無症状生存(symptom-free survival)または無再発生存(relapse-free survival)の存在もしくは期間が評価される。いくつかの態様では、前記疾患または状態の任意の症状が評価される。いくつかの態様では、疾患負荷量または状態負荷量の測定値が指定される。
いくつかの態様において、疾患負荷量は、対象における、または対象の臓器、組織、もしくは体液における、例えば、腫瘍の臓器もしくは組織または別の位置、例えば、転移を示す位置における疾患の細胞の総数を包含してもよい。例えば、腫瘍細胞は、ある特定の血液腫瘍の状況では血液中または骨髄中で検出および／または定量されてもよい。疾患負荷量は、いくつかの態様では、腫瘍の質量、転移の数もしくは程度、および／または骨髄に存在する芽細胞のパーセントを含んでもよい。
いくつかの態様において、対象は白血病を有する。疾患負荷量の程度は、血液または骨髄における残存白血病を評価することによって確かめることができる。
いくつかの態様において、治療剤での治療前の骨髄中の芽細胞のパーセントと比較して、骨髄中の芽細胞のパーセントが減少している場合、応答転帰が存在する。いくつかの態様において、治療前の骨髄中の芽細胞の数またはパーセントと比較して、骨髄中の芽細胞の数またはパーセンテージが、少なくともまたは少なくとも約20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％またはそれ以上、低下または減少している場合、疾患負荷量の減少が存在する。
いくつかの態様において、対象が形態学的疾患を示さない（非形態学的疾患）かまたは実質的な形態学的疾患を示さない場合、対象は奏効を示す。いくつかの態様において、対象は、例えば、光学顕微鏡によって検出された時に骨髄に5％超または5％の芽細胞があれば、形態学的疾患を示す。いくつかの態様において、対象は、骨髄に5％未満の芽細胞があれば完全寛解または臨床寛解を示す。
いくつかの態様において、対象が、治療前に形態学的疾患を示し、かつ、治療後に分子疾患（例えば、例えば、フローサイトメトリーまたは定量的PCRによって検出されるように、分子的に検出可能である、微小残存病変(MRD)）有りまたは無しで完全寛解（例えば、骨髄中の5％未満の芽細胞）を示す場合、対象は、低減または減少した疾患負荷量を示す。いくつかの態様において、対象が、治療前に分子疾患を示し、かつ、治療後に分子疾患を示さない場合、対象は、低減または減少した疾患負荷量を示す。
いくつかの態様において、対象は完全寛解を示すことがあるが、少ない割合の、（光学顕微鏡法により）形態学的に検出不可能な残存白血病細胞が存在する。骨髄に5％未満の芽細胞を示し、かつ分子的に検出可能ながんを示せば、対象は微小残存病変(MRD)を示すといわれる。いくつかの態様では、分子的に検出可能ながんは、少数の細胞の高感度検出を可能にする様々な任意の分子的技法を用いて評価することができる。いくつかの局面では、このような技法には、ユニークなIg/T細胞受容体遺伝子再編成、または染色体転座によって生じた融合転写物を確かめることができるPCRアッセイが含まれる。いくつかの態様では、フローサイトメトリーを用いて、白血病特異的免疫表現型に基づいてがん細胞を特定することができる。いくつかの態様では、がんの分子的検出によって、100,000個の正常細胞の中で1個と少ない白血病細胞もしくは芽細胞、または10,000個の正常細胞の中で1個の白血病細胞もしくは芽細胞を検出することができる。いくつかの態様では、例えば、PCRまたはフローサイトメトリーによって100,000個の細胞の中で少なくとも1個もしくは1個超の白血病細胞が検出されれば、対象は、分子的に検出可能なMRDを示す。
いくつかの態様では、場合によっては、PCRまたはフローサイトメトリー法を用いて白血病細胞が対象において検出できないように、対象の疾患負荷量は、分子的に検出不可能であるか、またはMRD-である。
いくつかの態様において、応答転帰は、CRの非存在または完全奏効の存在であり、対象は、微小残存病変または分子検出可能疾患状態を達成するかまたは示す。いくつかの態様において、応答転帰は、分子的に検出可能な疾患を有するCRの存在または分子的に検出可能な疾患を有さないCRの存在である。いくつかの態様において、対象は、本明細書に記載されるような方法、例えば、フローサイトメトリーまたはqPCR法によって分子疾患または骨髄中の芽細胞を評価する方法を使用して、疾患負荷量について評価される。
前記細胞が投与されたら、操作された細胞集団の生物学的活性は、いくつかの態様では、例えば、多数の公知の方法のどの方法でも測定される。評価するパラメータには、インビボでは、例えば、イメージングによる、またはエクスビボでは、例えば、ELISAもしくはフローサイトメトリーによる、操作された、もしくは天然のT細胞または他の免疫細胞と抗原との特異的結合が含まれる。ある特定の態様では、操作された細胞が標的細胞を破壊する能力が、当技術分野において公知の任意の適切な方法、例えば、細胞傷害性アッセイ、例えば、Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009)、およびHerman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)に記載の細胞傷害性アッセイを用いて測定することができる。ある特定の態様では、前記細胞の生物学的活性は、1つまたは複数のサイトカイン、例えば、CD107a、IFNγ、IL-2、およびTNFの発現および／または分泌をアッセイすることによって測定される。いくつかの局面では、生物学的活性は、臨床転帰、例えば、腫瘍負荷量または腫瘍量(tumor load)の低減を評価することによって測定される。
D．毒性を改善または処置するための薬剤
いくつかの態様において、本明細書に提供される方法は、組換え受容体（例えばCAR）を発現する細胞を含む細胞療法の投与後に、毒性の危険性もしくは可能性の高い危険性について対象をモニターすること、および／または、毒性、例えば重度の毒性、例えば重度のCRSもしくは重度の神経毒性を発症する危険性もしくは可能性の高い危険性がある対象を同定することに関する。いくつかの態様において、方法は、細胞療法の毒性、例えばCRSまたは神経毒性、例えば重度CRSまたは重度の神経毒性を処置する、1つまたは複数の薬剤または治療法を投与することを含む。いくつかの態様において、対象に毒性、例えば重度の毒性を発症する危険性があると決定される時に、および／または、毒性の1つまたは複数の徴候または症状が現れた時に、薬剤が投与される。
いくつかの態様において、薬剤はステロイドである。いくつかの態様において、薬剤は、IL-6受容体、CD122受容体（IL-2Rベータ受容体）、もしくはCCR2のような、サイトカイン受容体のアンタゴニストもしくはインヒビターであるか、または、IL-6、MCP-1、IL-10、IFN-γ、IL-8、もしくはIL-18のような、サイトカインのインヒビターである。いくつかの態様において、薬剤は、サイトカイン受容体および／またはサイトカイン（例えばTGF-β）のアゴニストである。いくつかの態様において、薬剤、例えば、アゴニスト、アンタゴニストまたはインヒビターは、抗体もしくは抗原結合性断片、小分子、タンパク質もしくはペプチド、または核酸である。
いくつかの態様において、流体ボーラスが、例えば、CRSに関連する低血圧を処置するために、介入として用いられ得る。いくつかの態様において、標的ヘマトクリットレベルは>24％である。いくつかの態様において、介入は、血液または血漿濾過を伴う吸収性樹脂技術の使用を含む。いくつかの場合において、介入は、透析、プラスマフェレーシス、または同様の技術を含む。いくつかの態様において、昇圧剤またはアセトアミノフェンが用いられ得る。
1．ステロイド
いくつかの態様において、細胞療法に対する毒性、例えば、グレード2以上のまたは重度のCRSまたは神経毒性の発症または発症のリスクを、処置する、かつ／または、予防、遅延、または軽減する、薬剤は、ステロイド、例えば、コルチコステロイドである。コルチコステロイドは、典型的に、グルココルチコイドおよびミネラルコルチコイドを含む。
任意のコルチコステロイド、例えば、グルココルチコイドが、本明細書に提供される方法において使用することができる。いくつかの態様において、グルココルチコイドは合成および非合成グルココルチコイドを含む。例示的なグルココルチコイドとしては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：アルクロメタゾン、アルゲストン、ベクロメタゾン（例えば、ジプロピオン酸ベクロメタゾン）、ベタメタゾン（例えば、17-吉草酸ベタメタゾン、酢酸ベタメタゾンナトリウム、リン酸ベタメタゾンナトリウム、吉草酸ベタメタゾン）、ブデソニド、クロベタゾール（例えば、プロピオン酸クロベタゾール）、クロベタゾン、クロコルトロン（例えば、ピバル酸クロコルトロン）、クロプレドノール、コルチコステロン、コルチゾンおよびヒドロコルチゾン（例えば、酢酸ヒドロコルチゾン）、コルチバゾール、デフラザコルト、デソニド、デスオキシメタゾン、デキサメタゾン（例えば、21-リン酸デキサメタゾン、酢酸デキサメタゾン、リン酸デキサメタゾンナトリウム）、ジフロラゾン（例えば、二酢酸ジフロラゾン）、ジフルコルトロン、ジフルプレドナート、エノキソロン、フルアザコート、フルクロロニド、フルドロコルチゾン（例えば、酢酸フルドロコルチゾン）、フルメタゾン（例えば、ピバル酸フルメタゾン）、フルニソリド、フルオシノロン（例えば、フルオシノロンアセトニド）、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルトロン、フルオロメトロン（例えば、酢酸フルオロメトロン）、フルペロロン（例えば、酢酸フルペロロン）、フルプレドニデン、フルプレドニゾロン、フルランドレノリド、フルチカゾン（例えば、プロピオン酸フルチカゾン）、ホルモコルタール、ハルシノニド、ハロベタゾール、ハロメタゾン、ハロプレドン、ヒドロコルタマート、ヒドロコルチゾン（例えば、21-酪酸ヒドロコルチゾン、アセポン酸ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンブテプラート、酪酸ヒドロコルチゾン、シピオン酸ヒドロコルチゾン、ヘミコハク酸ヒドロコルチゾン、ヒドロコルチゾンプロブタート（hydrocortisone probutate）、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、吉草酸ヒドロコルチゾン）、エタボン酸ロテプレドノール、マジプレドン、メドリゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン（アセポン酸メチルプレドニゾロン、酢酸メチルプレドニゾロン、ヘミコハク酸メチルプレドニゾロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム）、モメタゾン（例えば、フロ酸モメタゾン）、パラメタゾン（例えば、酢酸パラメタゾン）、プレドニカルバート、プレドニゾロン（例えば、プレドニゾロン25-ジエチルアミノアセタート、リン酸プレドニゾロンナトリウム、21-ヘミコハク酸プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン；ファルネシル酸プレドニゾロン、ヘミコハク酸プレドニゾロン、プレドニゾロン-21(β-D-グルクロニド)、メタスルホ安息香酸プレドニゾロン、プレドニゾロンステアグラート、テブト酸プレドニゾロン、テトラヒドロフタル酸プレドニゾロン）、プレドニゾン、プレドニバール、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン（例えば、トリアムシノロンアセトニド、トリアムシノロンベネトニド、トリアムシノロンヘキサアセトニド、トリアムシノロンアセトニド21-パルミタート、二酢酸トリアムシノロン）。これらのグルココルチコイドおよびそれらの塩は、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, ed., Mack Pub. Co., Easton, Pa. (16th ed. 1980)において詳細に議論されている。
いくつかの例において、グルココルチコイドは、コルチゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロンおよびプレドニゾンの中より選択される。特定の例において、グルココルチコイドはデキサメタゾンである。
いくつかの態様において、薬剤は、コルチコステロイドであり、CRSまたは神経毒性のような、細胞療法に対する毒性の1つまたは複数の症状を処置する、改善するまたは低減させるために治療的有効である量で投与する。いくつかの態様において、改善または成功した処置の指標は、毒性等級付けスケール（例えば、CRSまたは神経毒性等級付けスケール）上の関連スコアを示さないこと、例えば、3未満のスコア、の決定、または、本明細書において議論されるような等級付けスケールにおける等級付けもしくは重症度の変化、例えば、スコア4からスコア3への変化を含む。
いくつかの局面において、コルチコステロイドは治療的有効用量で提供される。治療的有効濃度は、公知のインビトロまたはインビボ（例えば、動物モデル）系において試験することによって経験的に決定することができる。例えば、CRSまたは神経毒性のような、細胞療法に対する毒性の症状または有害効果を改善するために投与される選択されたコルチコステロイドの量は、標準臨床技術によって決定することができる。さらに、最適な投薬量範囲の特定を助けるために、動物モデルを用いることができる。経験的に決定することができる、正確な投薬量は、特定の治療用調製物、レジメンおよび投薬計画、投与経路、ならびに疾患の重篤度に依存し得る。
コルチコステロイドは、毒性に関連する、例えば、CRSまたは神経毒性に関連する、1つまたは複数の症状を改善するために有効である任意の量で投与され得る。コルチコステロイド、例えば、グルココルチコイドは、例えば、1用量当たり、0.1〜100 mg、0.1〜80 mg、0.1〜60 mg、0.1〜40 mg、0.1〜30 mg、0.1〜20 mg、0.1〜15 mg、0.1〜10 mg、0.1〜5 mg、0.2〜40 mg、0.2〜30 mg、0.2〜20 mg、0.2〜15 mg、0.2〜10 mg、0.2〜5 mg、0.4〜40 mg、0.4〜30 mg、0.4〜20 mg、0.4〜15 mg、0.4〜10 mg、0.4〜5 mg、0.4〜4 mg、1〜20 mg、1〜15 mgもしくは1〜10 mg、または約0.1〜100 mg、約0.1〜80 mg、約0.1〜60 mg、約0.1〜40 mg、約0.1〜30 mg、約0.1〜20 mg、約0.1〜15 mg、約0.1〜10 mg、約0.1〜5 mg、約0.2〜40 mg、約0.2〜30 mg、約0.2〜20 mg、約0.2〜15 mg、約0.2〜10 mg、約0.2〜5 mg、約0.4〜40 mg、約0.4〜30 mg、約0.4〜20 mg、約0.4〜15 mg、約0.4〜10 mg、約0.4〜5 mg、約0.4〜4 mg、約1〜20 mg、約1〜15 mgもしくは1〜10 mg（各々両端の値を含む）の量で、70 kgの成人ヒト対象へ投与され得る。典型的に、コルチコステロイド、例えば、グルココルチコイドは、1用量当たり、0.4〜20 mgまたは約0.4〜20 mg、例えば、0.4 mg、0.5 mg、0.6 mg、0.7 mg、0.75 mg、0.8 mg、0.9 mg、1 mg、2 mg、3 mg、4 mg、5 mg、6 mg、7 mg、8 mg、9 mg、10 mg、11 mg、12 mg、13 mg、14 mg、15 mg、16 mg、17 mg、18 mg、19 mgもしくは20 mg、または約0.4 mg、約0.5 mg、約0.6 mg、約0.7 mg、約0.75 mg、約0.8 mg、約0.9 mg、約1 mg、約2 mg、約3 mg、約4 mg、約5 mg、約6 mg、約7 mg、約8 mg、約9 mg、約10 mg、約11 mg、約12 mg、約13 mg、約14 mg、約15 mg、約16 mg、約17 mg、約18 mg、約19 mgもしくは約20 mgの量で、平均的な成人ヒト対象へ投与される。
いくつかの態様において、コルチコステロイドを、例えば、0.001 mg/kg(対象の)、0.002 mg/kg、0.003 mg/kg、0.004 mg/kg、0.005 mg/kg、0.006 mg/kg、0.007 mg/kg、0.008 mg/kg、0.009 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.025 mg/kg、0.03 mg/kg、0.035 mg/kg、0.04 mg/kg、0.045 mg/kg、0.05 mg/kg、0.055 mg/kg、0.06 mg/kg、0.065 mg/kg、0.07 mg/kg、0.075 mg/kg、0.08 mg/kg、0.085 mg/kg、0.09 mg/kg、0.095 mg/kg、0.1 mg/kg、0.15 mg/kg、0.2 mg/kg、0.25 mg/kg、0.30 mg/kg、0.35 mg/kg、0.40 mg/kg、0.45 mg/kg、0.50 mg/kg、0.55 mg/kg、0.60 mg/kg、0.65 mg/kg、0.70 mg/kg、0.75 mg/kg、0.80 mg/kg、0.85 mg/kg、0.90 mg/kg、0.95 mg/kg、1 mg/kg、1.05 mg/kg、1.1 mg/kg、1.15 mg/kg、1.20 mg/kg、1.25 mg/kg、1.3 mg/kg、1.35 mg/kgもしくは1.4 mg/kg、または約0.001 mg/kg(対象の)、約0.002 mg/kg、約0.003 mg/kg、約0.004 mg/kg、約0.005 mg/kg、約0.006 mg/kg、約0.007 mg/kg、約0.008 mg/kg、約0.009 mg/kg、約0.01 mg/kg、約0.015 mg/kg、約0.02 mg/kg、約0.025 mg/kg、約0.03 mg/kg、約0.035 mg/kg、約0.04 mg/kg、約0.045 mg/kg、約0.05 mg/kg、約0.055 mg/kg、約0.06 mg/kg、約0.065 mg/kg、約0.07 mg/kg、約0.075 mg/kg、約0.08 mg/kg、約0.085 mg/kg、約0.09 mg/kg、約0.095 mg/kg、約0.1 mg/kg、約0.15 mg/kg、約0.2 mg/kg、約0.25 mg/kg、約0.30 mg/kg、約0.35 mg/kg、約0.40 mg/kg、約0.45 mg/kg、約0.50 mg/kg、約0.55 mg/kg、約0.60 mg/kg、約0.65 mg/kg、約0.70 mg/kg、約0.75 mg/kg、約0.80 mg/kg、約0.85 mg/kg、約0.90 mg/kg、約0.95 mg/kg、約1 mg/kg、約1.05 mg/kg、約1.1 mg/kg、約1.15 mg/kg、約1.20 mg/kg、約1.25 mg/kg、約1.3 mg/kg、約1.35 mg/kgもしくは約1.4 mg/kgの投薬量で、典型的に約70 kg〜75 kgの体重の、平均的な成人ヒト対象へ、投与することができる。
コルチコステロイド、またはグルココルチコイド、例えば、デキサメタゾンは、経口的に（錠剤、液体もしくは液体濃縮物）、PO、静脈内に(IV)、筋肉内に、または（例えば薬学的製剤に関して）任意の他の公知の経路もしくは本明細書に記載される経路によって、投与することができる。いくつかの局面において、コルチコステロイドはボーラスとして投与され、他の局面において、それは一定期間にわたって投与され得る。
いくつかの局面において、グルココルチコイドは、1日を超える期間にわたって、例えば、2日間にわたって、3日間にわたって、または4日間にわたって、投与され得る。いくつかの態様において、コルチコステロイドは、1日当たり1回、1日当たり2回、または1日当たり3回以上、投与され得る。例えば、コルチコステロイド、例えば、デキサメタゾンは、いくつかの例において、3日間、1日2回、10 mg（または等価）IVで投与され得る。
いくつかの態様において、コルチコステロイド、例えば、グルココルチコイドの投薬量は、処置につき連続的により低い投薬量で投与される。従って、いくつかのそのような処置レジメンにおいて、コルチコステロイドの用量は先細りとなる。例えば、コルチコステロイドは、4 mgの初回用量（または、デキサメタゾンを参照してのような、等価用量）で投与され得、それぞれの連続投与時に、用量が次の投与については3 mg、次の投与については2 mg、そして次の投与については1 mgであるように、用量は低下され得る。
一般に、投与されるコルチコステロイドの用量は、異なるコルチコステロイド間に有効性の差が存在するため、特定のコルチコステロイドに依存する。典型的に、薬物は有効性が異なり、従って、等価効果を得るためには用量が変わり得ることが理解される。表4は、様々なグルココルチコイドおよび投与経路についての有効性による等価を示す。臨床投薬における等価有効性は周知である。等価なステロイド投薬に関する情報（非時間治療様式）は、British National Formulary (BNF) 37, March 1999に見られ得る。
（表４）グルココルチコイド投与
Figure 2020508336
従って、いくつかの態様において、1.0 mg〜20 mgデキサメタゾン／日、例えば、1.0 mg〜15 mgデキサメタゾン／日、1.0 mg〜10 mgデキサメタゾン／日、2.0 mg〜8 mgデキサメタゾン／日、もしくは2.0 mg〜6.0 mgデキサメタゾン／日、または約1.0 mg〜20 mgデキサメタゾン／日、例えば、約1.0 mg〜15 mgデキサメタゾン／日、約1.0 mg〜10 mgデキサメタゾン／日、約2.0 mg〜8 mgデキサメタゾン／日、もしくは約2.0 mg〜6.0 mgデキサメタゾン／日（各々両端の値を含む）の等価投薬量で、ステロイドを投与する。いくつかの場合において、4 mgもしくは約4 mgまたは8 mgもしくは約8 mgデキサメタゾン／日の等価用量で、ステロイドを投与する。
いくつかの態様において、トシリズマブでの処置後に熱が持続する場合、、ステロイドが投与される。例えば、いくつかの態様において、デキサメタゾンが、持続熱を伴って、最高で6〜12時間毎に、5〜10 mgの投薬量で、経口または静脈内投与される。いくつかの態様において、トシリズマブが、酸素補給と同時にまたは酸素補給後に投与される。
2．他の薬剤
いくつかの態様において、CRSまたは神経毒性のような、細胞療法の毒性の症状を処置または改善する薬剤は、サイトカインを標的とするものであり、例えば、トランスホーミング増殖因子β(TGF-β)、インターロイキン6(IL-6)、インターロイキン10(IL-10)、IL-2、MIP1β(CCL4)、TNFα、IL-1、インターフェロンγ(IFN-γ)、または単球走化性タンパク質-1(MCP-1)のような、サイトカインのアンタゴニストまたはインヒビターである。いくつかの態様において、CRSまたは神経毒性のような、細胞療法の毒性の症状を処置または改善する薬剤は、IL-6受容体(IL-6R)、IL-2受容体(IL-2R/CD25)、MCP-1(CCL2)受容体(CCR2もしくはCCR4)、TGF-β受容体(TGF-βI、II、もしくはIII)、IFN-γ受容体(IFNGR)、MIP1β受容体(例えば、CCR5)、TNFα受容体(例えば、TNFR1)、IL-1受容体(IL1-Rα/IL-1Rβ)、またはIL-10受容体(IL-10R)のような、サイトカイン受容体を標的とする（例えば、これを阻害するかまたはこれのアンタゴニストである）ものである。
CRSまたは神経毒性のような、細胞療法に対する毒性の症状または有害効果を改善するために投与される、CRSまたは神経毒性のような、細胞療法の毒性の症状を処置または改善する選択された薬剤の量は、標準臨床技術によって決定することができる。例示的な有害事象としては、アラニンアミノトランスフェラーゼの増加、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼの増加、悪寒、発熱性好中球減少症、頭痛、低血圧、左心室機能不全、脳症、水頭症、発作、および／または振戦が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの態様において、薬剤を、30 mg〜5000 mg、例えば、50 mg〜1000 mg、50 mg〜500 mg、50 mg〜200 mg、50 mg〜100 mg、100 mg〜1000 mg、100 mg〜500 mg、100 mg〜200 mg、200 mg〜1000 mg、200 mg〜500 mgもしくは500 mg〜1000 mg、または約30 mg〜5000 mg、例えば、約50 mg〜1000 mg、約50 mg〜500 mg、約50 mg〜200 mg、約50 mg〜100 mg、約100 mg〜1000 mg、約100 mg〜500 mg、約100 mg〜200 mg、約200 mg〜1000 mg、約200 mg〜500 mgもしくは約500 mg〜1000 mgの投薬量で投与する。
いくつかの態様において、薬剤を、0.5 mg/kg〜100 mg/kg、例えば、1 mg/kg〜50 mg/kg、1 mg/kg〜25 mg/kg、1 mg/kg〜10 mg/kg、1 mg/kg〜5 mg/kg、5 mg/kg〜100 mg/kg、5 mg/kg〜50 mg/kg、5 mg/kg〜25 mg/kg、5 mg/kg〜10 mg/kg、10 mg/kg〜100 mg/kg、10 mg/kg〜50 mg/kg、10 mg/kg〜25 mg/kg、25 mg/kg〜100 mg/kg、25 mg/kg〜50 mg/kgもしくは（to）50 mg/kg〜100 mg/kg、または約0.5 mg/kg〜100 mg/kg、例えば、約1 mg/kg〜50 mg/kg、約1 mg/kg〜25 mg/kg、約1 mg/kg〜10 mg/kg、約1 mg/kg〜5 mg/kg、約5 mg/kg〜100 mg/kg、約5 mg/kg〜50 mg/kg、約5 mg/kg〜25 mg/kg、約5 mg/kg〜10 mg/kg、約10 mg/kg〜100 mg/kg、約10 mg/kg〜50 mg/kg、約10 mg/kg〜25 mg/kg、約25 mg/kg〜100 mg/kg、約25 mg/kg〜50 mg/kgもしくは約50 mg/kg〜100 mg/kg、投与する。いくつかの態様において、薬剤を、1 mg/kg〜10 mg/kg、2 mg/kg〜8 mg/kg、2 mg/kg〜6 mg/kg、2 mg/kg〜4 mg/kg、もしくは6 mg/kg〜8 mg/kg、または約1 mg/kg〜10 mg/kg、約2 mg/kg〜8 mg/kg、約2 mg/kg〜6 mg/kg、約2 mg/kg〜4 mg/kg、もしくは約6 mg/kg〜8 mg/kg（各々両端の値を含む）の投薬量で投与する。いくつかの局面において、薬剤を、少なくともまたは少なくとも約または約1 mg/kg、2 mg/kg、4 mg/kg、6 mg/kg、8 mg/kg、10 mg/kgまたはそれ以上の投薬量で投与する。いくつかの態様において、薬剤を4 mg/kgまたは8 mg/kgの用量で投与する。
いくつかの態様において、前記薬剤は、注射、例えば、静脈内注射または皮下注射、眼内注射、眼周囲注射、網膜下注射、硝子体内注射、経中隔注射、強膜下注射、脈絡膜内注射、眼房内注射、結膜下注射、結膜下注射、テノン嚢下注射、眼球後注射、眼球周囲注射、または後強膜近傍送達によって投与される。いくつかの態様において、前記薬剤は、非経口投与、肺内投与、および鼻腔内投与によって、所望であれば、局所処置の場合、病巣内投与によって投与される。非経口注入には、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、または皮下投与が含まれる。
いくつかの態様において、薬剤の量は、約またはおよそ、1日2回、毎日、1日おきに、週3回、毎週、1週おきに、または月1回、投与される。
いくつかの態様において、薬剤は、下記に記載されるような薬学的組成物または製剤のような、組成物または製剤の一部として投与される。従って、いくつかの場合において、薬剤を含む組成物は、下記に記載されるように投与される。他の局面において、薬剤は、単独で投与され、任意の公知の許容される投与経路によって、または、例えば組成物および薬学的製剤に関して、本明細書に記載される投与経路によって、投与され得る。
いくつかの態様において、CRSまたは神経毒性のような、細胞療法の毒性の症状を処置または改善する薬剤は、抗体または抗原結合性断片である。いくつかの態様において、薬剤は、トシリズマブ、シルツキシマブ、サリルマブ、オロキズマブ(CDP6038)、エルシリモマブ、ALD518/BMS-945429、シルクマブ(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301、またはFM101である。
いくつかの態様において、薬剤は、IL-6またはIL-6受容体(IL-6R)のアンタゴニストまたはインヒビターである。いくつかの局面において、薬剤は、IL-6またはIL-6Rへ結合する抗体または抗原結合性断片のような、IL-6活性を中和する抗体である。例えば、いくつかの態様において、薬剤は、トシリズマブ（アトリズマブ）またはサリルマブ、抗IL-6R抗体であるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、薬剤は、米国特許第8,562,991号に記載される抗IL-6R抗体である。いくつかの場合において、IL-6を標的化する薬剤は、抗IL-6抗体、例えば、シルツキシマブ、エルシリモマブ、ALD518/BMS-945429、シルクマブ(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301、FM101、またはオロキズマブ(CDP6038)である。いくつかの局面において、薬剤は、リガンド-受容体相互作用を阻害することによってIL-6活性を中和し得る。この一般的なタイプのアプローチの実行可能性は、インターロイキン-1についての天然の受容体アンタゴニストを用いて実証された。Harmurn, C. H. et al., Nature (1990) 343:336-340を参照されたい。いくつかの局面において、IL-6/IL-6Rアンタゴニストまたはインヒビターは、米国特許第5591827号に記載されるもののような、IL-6ムテインである。いくつかの態様において、IL-6/IL-6Rのアンタゴニストまたはインヒビターである薬剤は、小分子、タンパク質もしくはペプチド、または核酸である。
いくつかの態様において、薬剤はトシリズマブである。いくつかの態様において、トシリズマブが、1 mg/kg〜12 mg/kgもしくは約1 mg/kg〜12 mg/kg、例えば、4 mg/kg、8 mg/kg、もしくは10 mg/kg、または約4 mg/kg、約8 mg/kg、もしくは約10 mg/kgの投薬量で、提供される方法に従う早期介入として投与される。いくつかの態様において、トシリズマブは静脈内注入によって投与される。いくつかの態様において、トシリズマブは、アセトアミノフェンに応答しない10時間持続する39℃を超える持続性発熱について投与される。いくつかの態様において、症状が初回用量の48時間に再発する場合、トシリズマブの第2の投与が提供される。
いくつかの態様において、薬剤は、TGF-βまたはTGF-β受容体（例えば、TGF-β受容体I、II、もしくはIII）のアゴニストまたは刺激物質である。いくつかの局面において、薬剤は、TGF-βまたはその受容体の1つへ結合する抗体または抗原結合性断片のような、TGF-β活性を増加させる抗体である。いくつかの態様において、TGF-βおよび／またはその受容体のアゴニストまたは刺激物質である薬剤は、小分子、タンパク質もしくはペプチド、または核酸である。
いくつかの態様において、薬剤は、MCP-1(CCL2)またはMCP-1受容体（例えば、MCP-1受容体CCR2もしくはCCR4）のアンタゴニストまたはインヒビターである。いくつかの局面において、薬剤は、MCP-1またはその受容体の1つ(CCR2もしくはCCR4)へ結合する抗体または抗原結合性断片のような、MCP-1活性を中和する抗体である。いくつかの態様において、MCP-1アンタゴニストまたはインヒビターは、Gong et al. J Exp Med. 1997 Jul 7; 186(1): 131-137またはShahrara et al. J Immunol 2008; 180:3447-3456に記載される任意のものである。いくつかの態様において、MCP-1および／またはその受容体（CCR2もしくはCCR4）のアンタゴニストまたはインヒビターである薬剤は、小分子、タンパク質もしくはペプチド、または核酸である。
いくつかの態様において、薬剤は、IFN-γまたはIFN-γ受容体(IFNGR)のアンタゴニストまたはインヒビターである。いくつかの局面において、薬剤は、IFN-γまたはその受容体(IFNGR)へ結合する抗体または抗原結合性断片のような、IFN-γ活性を中和する抗体である。いくつかの局面において、IFN-γ中和抗体は、Dobber et al. Cell Immunol. 1995 Feb;160(2):185-92またはOzmen et al. J Immunol. 1993 Apr 1;150(7):2698-705に記載される任意のものである。いくつかの態様において、IFN-γ/IFNGRのアンタゴニストまたはインヒビターである薬剤は、小分子、タンパク質もしくはペプチド、または核酸である。
いくつかの態様において、薬剤は、IL-10またはIL-10受容体(IL-10R)のアンタゴニストまたはインヒビターである。いくつかの局面において、薬剤は、IL-10またはIL-10Rへ結合する抗体または抗原結合性断片のような、IL-10活性を中和する抗体である。いくつかの局面において、IL-10中和抗体は、Dobber et al. Cell Immunol. 1995 Feb;160(2):185-92またはHunter et al. J Immunol. 2005 Jun 1;174(11):7368-75に記載される任意のものである。いくつかの態様において、IL-10/IL-10Rのアンタゴニストまたはインヒビターである薬剤は、小分子、タンパク質もしくはペプチド、または核酸である。
V．操作細胞
1つまたは複数の組換え抗原受容体を発現する操作細胞を本明細書に提供する。いくつかの態様において、細胞は、キメラ抗原受容体などの、組換え受容体で遺伝子操作された細胞を含み得る。
A．組換え抗原受容体
トランスジェニックTCRなどの、T細胞受容体(TCR)も含む、キメラ抗原受容体(CAR)などの、機能的非TCR抗原受容体などの、リガンド結合性ドメインもしくはその結合性断片を含有するキメラ受容体を含む、組換え受容体を発現する、T細胞などの、操作細胞、ならびにそれらの成分を、提供する。CARなどの、キメラ受容体は、いくつかの局面においてはリンカーおよび／または膜貫通ドメイン（複数可）を介して、1つまたは複数の細胞内シグナル伝達成分へ連結された、細胞外抗原（またはリガンド）結合性ドメインを一般に含む。
1．キメラ抗原受容体
CARを含む例示的な抗原受容体、ならびにこのような受容体を操作するための方法およびこのような受容体を細胞に導入するための方法には、例えば、国際特許出願公開番号WO200014257、WO2013126726、WO2012/129514、WO2014031687、WO2013/166321、WO2013/071154、WO2013/123061、米国特許出願公開第US2002131960号、同第US2013287748号、同第US20130149337号、米国特許第6,451,995号、同第7,446,190号、同第8,252,592号、同第8,339,645号、同第8,398,282号、同第7,446,179号、同第6,410,319号、同第7,070,995号、同第7,265,209号、同第7,354,762号、同第7,446,191号、同第8,324,353号、および同第8,479,118号、ならびに欧州特許出願第EP2537416号に記載のもの、ならびに／またはSadelain et al., Cancer Discov., 3(4): 388-398 (2013); Davila et al. PLoS ONE 8(4): e61338 (2013); Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., 24(5): 633-39 (2012); Wu et al., Cancer, 18(2): 160-75 (2012)に記載のものが含まれる。いくつかの局面において、抗原受容体には、米国特許第7,446,190号に記載のCAR、および国際特許出願公開番号WO/2014055668 A1に記載のものが含まれる。CARの例には、上述の任意の刊行物、例えば、WO2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、米国特許第7,446,190号、米国特許第8,389,282号、Kochenderfer et al., Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang et al., J. Immunother. 35(9): 689-701 (2012); およびBrentjens et al., Sci Transl Med,. 5(177) (2013)に開示されるCARが含まれる。WO2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、米国特許第7,446,190号、および米国特許第8,389,282号も参照されたい。キメラ受容体、例えば、CARは、一般的に、細胞外抗原結合ドメイン、例えば、抗体分子の一部、一般的に、抗体の可変重(VH)鎖領域および／または可変軽(VL)鎖領域、例えば、scFv抗体断片を含む。
いくつかの態様において、組換え受容体、例えば抗原受容体は、例えば、抗原、リガンドおよび／またはマーカーへ特異的に結合する、細胞外抗原結合性またはリガンド結合性ドメインを含有する。抗原受容体の中には、機能的非TCR抗原受容体、例えば、キメラ抗原受容体（CAR）がある。いくつかの態様において、抗原受容体は、抗原へ特異的に結合する細胞外抗原認識ドメインを含有するCARである。いくつかの態様において、CARは、特定の抗原、マーカーまたはリガンド、例えば、養子療法によって標的化される特定の細胞タイプにおいて発現される抗原、例えば、がんマーカー、および／または減衰応答を誘導するように意図される抗原、例えば、正常もしくは非罹患細胞タイプ上に発現される抗原、についての特異性を用いて構築される。従って、CARは、典型的に、その細胞外部分に、1つまたは複数のリガンド結合分子（例えば、抗原結合分子）、例えば、1つまたは複数の抗原結合性断片、ドメイン、もしくは部分、または1つまたは複数の抗体可変ドメイン、および／または抗体分子を含む。いくつかの態様において、CARは、抗体分子の抗原結合性部分（複数可）、例えば、モノクローナル抗体（mAb）の可変重鎖（VH）および可変軽鎖（VL）に由来する単鎖抗体断片（scFv）、または単一ドメイン抗体（sdAb）、例えば、sdFv、ナノボディ、VHHおよびVNARを含む。いくつかの態様において、抗原結合性断片は、フレキシブルリンカーによって連結された抗体可変領域を含む。
いくつかの態様において、キメラ受容体によって標的化される抗原の中には、養子細胞療法を介して標的化しようとする疾患、状態、または細胞タイプの状況において発現している抗原がある。疾患および状態の中には、血液がん、免疫系のがん、例えば、リンパ腫、白血病、および／または骨髄腫、例えば、B、T、および骨髄性の白血病、リンパ腫、ならびに多発性骨髄腫を含むがんおよび腫瘍を含む、増殖性、新生物性、および悪性の疾患および障害がある。いくつかの態様では、受容体によって標的化される抗原はポリペプチドである。いくつかの態様では、それは糖質または他の分子である。いくつかの態様では、抗原は、正常な、または標的ではない細胞もしくは組織(例えば、健康な細胞もしくは組織中)と比較して、前記疾患または状態の細胞、例えば、腫瘍細胞または病原性細胞の表面で選択的に発現しているか、または過剰発現している。他の態様では、前記抗原は正常細胞の表面で発現している、および／または操作された細胞の表面で発現している。
受容体によって標的化される抗原は、いくつかの態様において、オーファンチロシンキナーゼ受容体ROR1、tEGFR、Her2、Ll-CAM、CD19、CD20、CD22、メソテリン、CEA、およびB型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、EGFR、EGP-2、EGP-4、0EPHa2、ErbB2、3、もしくは4、FBP、胎児アセチルコリン受容体、GD2、GD3、HMW-MAA、IL-22Rα、IL-13Rα2、kdr、カッパ軽鎖、ルイスY、L1-細胞接着分子、MAGE-A1、メソテリン、MUC1、MUC16、PSCA、NKG2Dリガンド、NY-ESO-1、MART-1、gp100、腫瘍胎児抗原、ROR1、TAG72、VEGF-R2、がん胎児性抗原(CEA)、前立腺特異抗原、PSMA、Her2/neu、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンB2、CD123、c-Met、GD-2、およびMAGE A3、CE7、ウィルムス腫瘍1 (WT-1)、サイクリン、例えばサイクリンA1 (CCNA1)、および／またはビオチン化分子、および／またはHIV、HCV、HBVもしくは他の病原体によって発現される分子を含む。
いくつかの態様において、受容体によって標的化される抗原は、αvβ6インテグリン(avb6インテグリン)、B細胞成熟抗原(BCMA)、B7-H3、B7-H6、炭酸脱水酵素9 (CA9、CAIXまたはG250としても公知)、がん-精巣抗原、がん/精巣抗原1B (CTAG、NY-ESO-1およびLAGE-2としても公知)、がん胎児性抗原(CEA)、サイクリン、サイクリンA2、C-Cモチーフケモカインリガンド1 (CCL-1)、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD123、CD138、CD171、上皮成長因子タンパク質(EGFR)、切断型上皮成長因子タンパク質(tEGFR)、III型上皮成長因子受容体突然変異(EGFR vIII)、上皮糖タンパク質2 (EPG-2)、上皮糖タンパク質40 (EPG-40)、エフリンB2、エフリン受容体A2 (EPHa2)、エストロゲン受容体、Fc受容体様5 (FCRL5；Fc受容体ホモログ5またはFCRH5としても公知)、胎児アセチルコリン受容体(胎児AchR)、葉酸結合タンパク質(FBP)、葉酸受容体アルファ、ガングリオシドGD2、O-アセチル化GD2 (OGD2)、ガングリオシドGD3、糖タンパク質100 (gp100)、Gタンパク質共役型受容体5D (GPCR5D)、Her2/neu (受容体チロシンキナーゼerb-B2)、Her3 (erb-B3)、Her4 (erb-B4)、erbB二量体、ヒト高分子量メラノーマ関連抗原(HMW-MAA)、B型肝炎表面抗原、ヒト白血球抗原A1 (HLA-AIA1)、ヒト白血球抗原A2 (HLA-A2)、IL-22受容体アルファ(IL-22Ra)、IL-13受容体アルファ2 (IL-13Ra2)、キナーゼ挿入ドメイン受容体(kdr)、カッパ軽鎖、L1細胞接着分子(L1-CAM)、L1-CAMのCE7エピトープ、ロイシンリッチリピート含有8ファミリーメンバーA (LRRC8A)、ルイスY、メラノーマ関連抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、メソテリン、c-Met、マウスサイトメガロウイルス(CMV)、ムチン1 (MUC1)、MUC16、ナチュラルキラーグループ2メンバーD (NKG2D)リガンド、メランA (MART-1)、神経細胞接着分子(NCAM)、腫瘍胎児抗原、メラノーマ優先発現抗原(PRAME)、プロゲステロン受容体、前立腺特異抗原、前立腺幹細胞抗原(PSCA)、前立腺特異的膜抗原(PSMA)、受容体チロシンキナーゼ様オーファン受容体1 (ROR1)、サバイビン、栄養膜糖タンパク質(TPBG、5T4としても公知)、腫瘍関連糖タンパク質72 (TAG72)、血管内皮増殖因子受容体(VEGFR)、血管内皮増殖因子受容体2 (VEGFR2)、ウィルムス腫瘍1 (WT-1)、病原体特異的抗原、またはユニバーサルタグと関連する抗原、および／またはビオチン化分子、および／またはHIV、HCV、HBVもしくは他の病原体によって発現される分子を含む。受容体によって標的化される抗原は、いくつかの態様において、B細胞悪性腫瘍に関連する抗原、例えば、多数の公知のB細胞マーカーのいずれかを含む。いくつかの態様において、受容体によって標的化される抗原は、CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79bまたはCD30であるかまたはこれらを含む。
いくつかの態様において、CARは病原体特異的抗原に結合する。いくつかの態様において、CARは、ウイルス抗原（例えば、HIV、HCV、HBVなどに由来するウイルス抗原）、細菌抗原、および／または寄生生物抗原に特異的である。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片（例えば、scFvもしくはVHドメイン）は、CD19などの抗原を特異的に認識する。いくつかの態様において、抗体または抗原結合性断片は、CD19へ特異的に結合する抗体または抗原結合性断片から誘導されるか、またはその変異体である。
いくつかの態様では、scFvおよび／またはVHドメインはFMC63に由来する。FMC63は、一般的に、ヒト由来のCD19を発現するNalm-1および-16細胞に対して作製されたマウスモノクローナルIgG1抗体を指す（Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302）。FMC63抗体は、SEQ ID NO:38に示したCDR H1、SEQ ID NO:39に示したCDR H2、SEQ ID NO:40または54に示したCDR H3、ならびにSEQ ID NO:35に示したCDR L1、SEQ ID NO:36または55に示したCDR L2、およびSEQ ID NO:37または56に示したCDR L3を含む。FMC63抗体は、SEQ ID NO:41のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)、およびSEQ ID NO:42のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)を含む。いくつかの態様では、svFvは、SEQ ID NO:35のCDR L1配列、SEQ ID NO:36のCDR L2配列、およびSEQ ID NO:37のCDR L3配列を含む可変軽鎖、ならびに／またはSEQ ID NO:38のCDR H1配列、SEQ ID NO:39のCDR H2配列、およびSEQ ID NO:40のCDR H3配列を含む可変重鎖、またはそれらに対して少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％またはそれ以上の配列同一性を有する前述のもののいずれかの変異体を含む。いくつかの態様では、scFvは、SEQ ID NO:41に示したFMC63の可変重鎖領域、およびSEQ ID NO:42に示したFMC63の可変軽鎖領域、またはそれらに対して少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％またはそれ以上の配列同一性を有する前述のもののいずれかの変異体を含む。いくつかの態様では、可変重鎖および可変軽鎖はリンカーによって接続される。いくつかの態様では、リンカーはSEQ ID NO:58に示される。いくつかの態様では、scFvは、順に、VHと、リンカーと、VLとを含む。いくつかの態様では、scFvは、順に、VLと、リンカーと、VHとを含む。いくつかの態様では、svFcは、SEQ ID NO:57に示したヌクレオチド配列、またはSEQ ID NO:57と少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、もしくは99％の配列同一性を示す配列によってコードされる。いくつかの態様では、scFvは、SEQ ID NO:43に示したアミノ酸配列、またはSEQ ID NO:43と少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、もしくは99％の配列同一性を示す配列を含む。
いくつかの態様において、scFvおよび／またはVHドメインはSJ25C1に由来する。SJ25C1は、ヒト由来のCD19を発現するNalm-1および-16細胞に対して作製されたマウスモノクローナルIgG1抗体である（Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302）。SJ25C1抗体は、それぞれSEQ ID NO:47-49に示したCDR H1、H2、およびH3、ならびにそれぞれSEQ ID NO:44-46に示したCDR L1、L2、およびL3配列を含む。SJ25C1抗体は、SEQ ID NO:50のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域(VH)、およびSEQ ID NO:51のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域(VL)を含む。いくつかの態様では、svFvは、SEQ ID NO:44に示したCDR L1配列、SEQ ID NO:45に示したCDR L2、およびSEQ ID NO:46に示したCDR L3を含む可変軽鎖、ならびに／またはSEQ ID NO:47に示したCDR H1、SEQ ID NO:48に示したCDR H2、およびSEQ ID NO:49に示したCDR H3配列を含む可変重鎖、またはそれらに対して少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％またはそれ以上の配列同一性を有する前述のもののいずれかの変異体を含む。いくつかの態様では、scFvは、SEQ ID NO:50に示したSJ25C1の可変重鎖領域、およびSEQ ID NO:51に示したSJ25C1の可変軽鎖領域、またはそれらに対して少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％またはそれ以上の配列同一性を有する前述のもののいずれかの変異体を含む。いくつかの態様では、可変重鎖および可変軽鎖はリンカーによって接続される。いくつかの態様では、リンカーはSEQ ID NO:52に示される。いくつかの態様では、scFvは、順に、VHと、リンカーと、VLとを含む。いくつかの態様では、scFvは、順に、VLと、リンカーと、VHとを含む。いくつかの態様では、scFvは、SEQ ID NO:53に示したアミノ酸配列、またはSEQ ID NO:53と少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、もしくは99％の配列同一性を示す配列を含む。
いくつかの局面において、CARは、ユニバーサルタグまたはユニバーサルエピトープに結合するまたはこれらを認識する、例えばこれらに特異的に結合する、リガンド結合性（例えば、抗原結合性）ドメインを含有する。いくつかの局面において、結合性ドメインは、疾患または障害に関連する抗原を認識する異なる結合性分子（例えば、抗体もしくは抗原結合性断片）へ連結され得る、分子、タグ、ポリペプチドおよび／またはエピトープに結合することができる。例示的なタグまたはエピトープは、色素（例えば、フルオレセインイソチオシアネート）またはビオチンを含む。いくつかの局面において、疾患または障害に関連する抗原（例えば、腫瘍抗原）を認識するタグへ連結された結合性分子（例えば、抗体もしくは抗原結合性断片）は、タグに特異的なCARを発現する操作細胞と共に、操作細胞の細胞傷害性または他のエフェクター機能をもたらす。いくつかの局面において、疾患または障害に関連する抗原へのCARの特異性は、タグ化結合性分子（例えば、抗体）によって提供され、異なるタグ化結合性分子が、異なる抗原を標的化するために使用することができる。ユニバーサルタグまたはユニバーサルエピトープに特異的な例示的なCARとしては、例えば、U.S. 9,233,125、WO 2016/030414、Urbanska et al., (2012) Cancer Res 72: 1844-1852、およびTamada et al., (2012). Clin Cancer Res 18:6436-6445に記載されるものが挙げられる。
いくつかの態様において、CARは、TCR様の抗体、例えば、主要組織適合遺伝子複合体(MHC)-ペプチド複合体として細胞表面上に提示される細胞内抗原（例えば腫瘍関連抗原）を特異的に認識する抗体または抗原結合性フラグメント（例えばscFv）を含有する。いくつかの態様において、MHC-ペプチド複合体を認識する抗体またはその抗原結合部分は、抗原受容体などの組換え受容体の一部として、細胞上に発現させることができる。抗原受容体には、キメラ抗原受容体（CAR）などの機能的非T細胞受容体(TCR)抗原受容体が含まれる。いくつかの態様において、ペプチド-MHC複合体に向けられたTCR様特異性を示す抗体または抗原結合断片を含有するCARはまた、TCR様CARと呼ばれることもある。いくつかの態様において、CARはTCR様CARであり、抗原は、処理されたペプチド抗原、例えば、細胞内タンパク質のペプチド抗原であり、これは、TCRのように、MHC分子の状況において細胞表面上で認識される。いくつかの態様において、TCR様CARのMHC-ペプチド複合体に特異的な細胞外抗原結合ドメインは、いくつかの局面ではリンカーおよび／または膜貫通ドメイン（複数可）を介して、1つまたは複数の細胞内シグナル伝達成分へ連結される。いくつかの態様において、そのような分子は、典型的には、天然抗原受容体（例えばTCR）を介したシグナル、および、任意で、このような受容体と共刺激受容体との組み合わせを介したシグナルを模倣するか、またはこれに似せることができる。
「主要組織適合遺伝子複合体」（MHC）への言及は、いくつかの場合には、細胞機構によって処理されたペプチド抗原を含むポリペプチドのペプチド抗原と複合体を形成することができる多型ペプチド結合部位または結合溝を含むタンパク質、通常糖タンパク質を指す。いくつかの場合には、MHC分子は、TCRまたはTCR様抗体などの、T細胞上の抗原受容体が認識可能な立体配座で抗原を提示するために、ペプチドとの複合体、すなわちMHC-ペプチド複合体としてを含めて、細胞表面上に表示または発現され得る。通常MHCクラスI分子は、いくつかの場合には3つのαドメインを備える膜貫通α鎖、および非共有結合したβ2ミクログロブリンを有するヘテロ二量体である。通常MHCクラスII分子は、2つの膜貫通糖タンパク質、αおよびβから構成され、それらは両方とも、典型的には膜を貫通している。MHC分子は、ペプチドに結合するための1つまたは複数の抗原結合部位および適切な抗原受容体による認識に必要な配列を含むMHCの有効部分を含み得る。いくつかの態様では、MHCクラスI分子は、サイトゾルに由来するペプチドを細胞表面に送達し、そこでMHC-ペプチド複合体は、通常CD8＋T細胞であるが、いくつかの場合にはCD4＋T細胞などのT細胞によって認識される。いくつかの態様では、MHCクラスII分子は、小胞系に由来するペプチドを細胞表面に送達し、そこでそれらは、典型的にはCD4＋T細胞によって認識される。通常MHC分子は、マウスではH-2、ヒトではヒト白血球抗原（HLA）と総称される一群の連鎖する遺伝子座によってコードされる。したがって、典型的には、ヒトMHCはヒト白血球抗原（HLA）とも称され得る。
「MHC-ペプチド複合体」または「ペプチド-MHC複合体」という用語またはその変形は通常、MHC分子の結合溝または裂におけるペプチドの非共有相互作用などによる、ペプチド抗原とMHC分子との複合体または結合を指す。いくつかの態様では、MHC-ペプチド複合体は細胞の表面に存在するかまたは表示される。いくつかの態様では、MHC-ペプチド複合体は、TCR、TCR様CAR、またはその抗原結合部分などの抗原受容体によって特異的に認識され得る。
いくつかの態様では、ペプチド抗原またはエピトープなどのポリペプチドのペプチドは、抗原受容体による認識などのために、MHC分子と結合することができる。通常ペプチドは、ポリペプチドまたはタンパク質などのより長い生物学的分子の断片に由来するかまたはそれに基づく。いくつかの態様では、ペプチドは、典型的には長さが約8〜約24アミノ酸である。いくつかの態様では、ペプチドは、MHCクラスII複合体における認識のために9〜22アミノ酸または約9〜22アミノ酸の長さを有する。いくつかの態様では、ペプチドは、MHCクラスI複合体における認識のために8〜13アミノ酸または約8〜13アミノ酸の長さを有する。いくつかの態様では、MHC-ペプチド複合体などのMHC分子の状況でペプチドを認識すると、TCRまたはTCR様CARなどの抗原受容体は、T細胞増殖、サイトカイン産生、細胞傷害性T細胞応答または他の応答などのT細胞応答を誘導するT細胞への活性化シグナルを生成または誘発する。
いくつかの態様では、TCR様抗体または抗原結合部分は、公知であるかまたは公知の方法によって生成することができる（例えば米国特許出願公開第2002/0150914号；同第2003/0223994号；同第2004/0191260号；同第2006/0034850号；同第2007/00992530号；同第20090226474号；同第20090304679号；および国際出願公開第03/068201号参照）。
いくつかの態様では、MHC-ペプチド複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、特定のMHC-ペプチド複合体を含む有効量の免疫原で宿主を免疫することによって生成することができる。いくつかの場合には、MHC-ペプチド複合体のペプチドは、MHCに結合することができる抗原、例えば腫瘍抗原、例えばユニバーサル腫瘍抗原、骨髄腫抗原、または以下に記載される他の抗原のエピトープである。いくつかの態様では、次いで、免疫応答を惹起するために有効量の免疫原を宿主に投与し、ここで免疫原は、MHC分子の結合溝内のペプチドの三次元提示に対する免疫応答を惹起するのに十分な期間、その三次元形態を保持する。次いで、宿主から収集した血清を、MHC分子の結合溝内のペプチドの三次元提示を認識する所望の抗体が生成されているかどうかを決定するために検定する。いくつかの態様では、生成された抗体を、抗体が、MHC分子単独、関心対象のペプチド単独、およびMHCと無関係なペプチドとの複合体からMHC-ペプチド複合体を識別できることを確認するために評価することができる。その後所望の抗体を単離することができる。
いくつかの態様では、MHC-ペプチド複合体に特異的に結合する抗体またはその抗原結合部分は、ファージ抗体ライブラリなどの抗体ライブラリディスプレイ法を使用することによって作製できる。いくつかの態様では、例えば、ライブラリのメンバーが1つまたは複数のCDRの1つまたは複数の残基において変異している、変異型Fab、scFvまたは他の抗体型のファージディスプレイライブラリを作製することができる。例えば米国特許出願公開第20020150914号、同第20140294841号、およびCohen CJ.et al.（2003）J Mol.Recogn.16:324-332参照。
本明細書における「抗体」という用語は最も広い意味で使用され、無傷の抗体、ならびに断片抗原結合（Fab）断片、F（ab'）2断片、Fab'断片、Fv断片、組換えIgG（rIgG）断片、抗原に特異的に結合することができる可変重鎖（VH）領域、一本鎖可変断片（scFv）を含む一本鎖抗体断片、および単一ドメイン抗体（例えばsdAb、sdFv、ナノボディ、VHH、またはVNAR）断片を含む機能的（抗原結合）抗体断片を含む、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体を含む。この用語は、遺伝子操作されたおよび/または他の方法で修飾された形態の免疫グロブリン、例えばイントラボディ、ペプチボディ、キメラ抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、およびヘテロコンジュゲート抗体、多重特異性、例えば二重特異性抗体、ダイアボディ、トリアボディ、およびテトラボディ、タンデムdi-scFv、タンデムtri-scFvを包含する。特に明記されない限り、「抗体」という用語はその機能的抗体断片を包含すると理解されるべきである。この用語はまた、IgGおよびそのサブクラス、IgM、IgE、IgA、およびIgDを含む任意のクラスまたはサブクラスの抗体を含む、無傷または完全長抗体を包含する。いくつかの局面において、CARは、例えば異なる特異性を持つ2つの抗原結合ドメインを含有する二重特異的CARである。
いくつかの態様では、抗原結合タンパク質、抗体、およびその抗原結合断片は、完全長抗体の抗原を特異的に認識する。いくつかの態様では、抗体の重鎖および軽鎖は完全長であり得るか、または抗原結合部分（Fab、F（ab'）2、Fvまたは一本鎖Fv断片（scFv））であり得る。他の態様では、抗体重鎖定常領域は、例えばIgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD、およびIgEから選択され、特に、例えばIgG1、IgG2、IgG3、およびIgG4から、より具体的にはIgG1（例えばヒトIgG1）から選択される。別の態様では、抗体軽鎖定常領域は、例えばκまたはλ、特にκから選択される。
提供される抗体の中には抗体断片がある。「抗体断片」とは、無傷の抗体が結合する抗原に結合する無傷の抗体の一部を含む、無傷の抗体以外の分子を指す。抗体断片の例には、Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F（ab'）2；ダイアボディ；直鎖抗体；可変重鎖（VH）領域、scFvおよび単一ドメインVH単一抗体などの一本鎖抗体分子；ならびに抗体断片から形成される多重特異性抗体が含まれるが、これらに限定されるわけではない。特定の態様では、抗体は、scFvなどの可変重鎖領域および/または可変軽鎖領域を含む一本鎖抗体断片である。
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体の抗原への結合に関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれVHおよびVL）は概ね類似の構造を有し、各ドメインは4つの保存されたフレームワーク領域（FR）および3つのCDRを含む。（例えばKindt et al.Kuby Immunology,6th ed.,W.H.Freeman and Co.,page 91（2007）参照。）単一のVHまたはVLドメインが、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体を、抗原に結合する抗体由来のVHまたはVLドメインを用いて単離して、それぞれ相補的VLまたはVHドメインのライブラリをスクリーニングしてもよい。例えばPortolano et al., J. Immunol.150:880-887（1993）；Clarkson et al., Nature 352:624-628（1991）参照。
単一ドメイン抗体（sdAb）は、抗体の重鎖可変ドメインの全部もしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全部もしくは一部を含む抗体断片である。特定の態様では、単一ドメイン抗体はヒト単一ドメイン抗体である。いくつかの態様では、CARは、抗原、例えばがんマーカーまたは標的とされる細胞もしくは疾患、例えば腫瘍細胞もしくはがん細胞の細胞表面抗原、例えば本明細書に記載されるかまたは公知の標的抗原のいずれかに特異的に結合する抗体重鎖ドメインを含む。例示的な単一ドメイン抗体は、sdFv、ナノボディ、VHHまたはVNARを含む。
抗体断片は、無傷の抗体のタンパク質分解消化ならびに組換え宿主細胞による産生を含むがこれらに限定されるわけではない、様々な技術によって作製することができる。いくつかの態様では、抗体は、合成リンカー、例えばペプチドリンカーによって連結された2つもしくはそれ以上の抗体領域もしくは鎖を有するものなどの、天然には生じない配置を含む断片、および/または天然の無傷の抗体の酵素消化によっては生成され得ない断片などの、組換えによって生成された断片である。いくつかの態様では、抗体断片はscFvである。
「ヒト化」抗体は、すべてまたは実質的にすべてのCDRアミノ酸残基が非ヒトCDRに由来し、すべてまたは実質的にすべてのFRアミノ酸残基がヒトFRに由来する抗体である。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。非ヒト抗体の「ヒト化型」は、親の非ヒト抗体の特異性および親和性を保持しながら、典型的にはヒトに対する免疫原性を低下させるために、ヒト化を受けた非ヒト抗体の変異体を指す。いくつかの態様では、ヒト化抗体中のいくつかのFR残基は、例えば抗体特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えばCDR残基が由来する抗体）からの対応する残基で置換される。
したがって、いくつかの態様では、TCR様CARを含むキメラ抗原受容体は、抗体または抗体断片を含む細胞外部分を含有する。いくつかの態様では、抗体または断片はscFvを含む。いくつかの局面では、抗体または抗原結合断片は、抗原結合断片または分子の複数、例えばライブラリなどをスクリーニングことによって、例えば、特定の抗原またはリガンドへの結合についてscFvライブラリをスクリーニングすることによって、得ることができる。
いくつかの局面では、組換え受容体、例えば、キメラ抗原受容体は、1つまたは複数のリガンド（例えば、抗原）結合ドメイン、例えば抗体またはその断片などを含む細胞外部分、および1つまたは複数の細胞内シグナル伝達領域もしくはドメイン（細胞質シグナル伝達ドメインまたは領域とも互換的に呼ばれる）を含む。いくつかの局面では、組換え受容体、例えば、CARは、スペーサーおよび/または膜貫通ドメインもしくは部分をさらに含む。いくつかの局面では、スペーサーおよび/または膜貫通ドメインは、リガンド（例えば、抗原）結合ドメインを含む細胞外部分と、細胞内シグナル伝達領域またはドメインとを連結することができる。
いくつかの態様では、組換え受容体、例えばCARの抗体部分は、免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部、例えば、ヒンジ領域、例えばIgG4ヒンジ領域、ならびに/またはCH1/CLおよび/もしくはFc領域などをさらに含む。いくつかの態様では、定常領域または部分は、IgG4またはIgG1などのヒトIgGのものである。いくつかの局面では、定常領域の部分は、抗原認識成分、例えばscFvと膜貫通ドメインとの間のスペーサー領域として機能する。スペーサーは、スペーサーが存在しない場合と比較して、抗原結合後の細胞の応答性の増加をもたらす長さのものであり得る。例示的なスペーサー、例えばヒンジ領域は、国際特許出願公報第WO2014031687号に記載されているものを含む。いくつかの例では、スペーサーは、12アミノ酸もしくは約12アミノ酸の長さであるか、または12アミノ酸以下の長さである。例示的なスペーサーとしては、少なくとも約10〜229アミノ酸、約10〜200アミノ酸、約10〜175アミノ酸、約10〜150アミノ酸、約10〜125アミノ酸、約10〜100アミノ酸、約10〜75アミノ酸、約10〜50アミノ酸、約10〜40アミノ酸、約10〜30アミノ酸、約10〜20アミノ酸、または約10〜15アミノ酸を有する、および列挙された範囲のいずれかの両端の値の間の任意の整数個のアミノ酸を含むものが挙げられる。いくつかの態様では、スペーサー領域は、約12アミノ酸もしくはそれ未満、約119アミノ酸もしくはそれ未満、または約229アミノ酸もしくはそれ未満を有する。いくつかの態様では、スペーサーは、250アミノ酸未満の長さ、200アミノ酸未満の長さ、150アミノ酸未満の長さ、100アミノ酸未満の長さ、75アミノ酸未満の長さ、50アミノ酸未満の長さ、25アミノ酸未満の長さ、20アミノ酸未満の長さ、15アミノ酸未満の長さ、12アミノ酸未満の長さ、または10アミノ酸未満の長さである。いくつかの態様では、スペーサーは、10〜250アミノ酸の長さ、10〜150アミノ酸の長さ、10〜100アミノ酸の長さ、10〜50アミノ酸の長さ、10〜25アミノ酸の長さ、10〜15アミノ酸の長さ、15〜250アミノ酸の長さ、15〜150アミノ酸の長さ、15〜100アミノ酸の長さ、15〜50アミノ酸の長さ、15〜25アミノ酸の長さ、25〜250アミノ酸の長さ、25〜100アミノ酸の長さ、25〜50アミノ酸の長さ、50〜250アミノ酸の長さ、50〜150アミノ酸の長さ、50〜100アミノ酸の長さ、100〜250アミノ酸の長さ、100〜150アミノ酸の長さ、もしくは150〜250アミノ酸の長さ、または概ねそれらの長さである。例示的なスペーサーとしては、IgG4ヒンジ単独、CH2およびCH3ドメインに連結されたIgG4ヒンジ、またはCH3ドメインに連結されたIgG4ヒンジが挙げられる。例示的なスペーサーとしては、これらに限定されないが、Hudecek et al. Clin. Cancer Res., 19:3153（2013)、国際特許出願公報第WO2014031687号、米国特許第8,822,647号、または米国特許出願公開第US2014/0271635号に記載されているものが挙げられる。
いくつかの態様では、定常領域または部分は、IgG4またはIgG1などのヒトIgGのものである。いくつかの局面では、スペーサーはポリペプチドスペーサー、例えば、以下から選択される1つまたは複数のポリペプチドスペーサーなどである：（a）免疫グロブリンヒンジまたはその改変型の全部または一部を含むもしくはそれらからなる、または約15アミノ酸またはそれ未満を含み、かつCD28細胞外領域またはCD8細胞外領域を含まない、（b）免疫グロブリンヒンジ、任意でIgG4ヒンジの全部または一部、またはその改変型を含むもしくはそれらからなる、および/または約15アミノ酸またはそれ未満を含み、かつCD28細胞外領域またはCD8細胞外領域を含まない、または（c）12アミノ酸または約12アミノ酸の長さであり、および/または免疫グロブリンヒンジ、任意でIgG4の全部または一部、またはその改変型を含むかもしくはそれらからなる；または（d）式中X1がグリシン、システインまたはアルギニンでありかつX2がシステインまたはスレオニンである、式X1PPX2P（SEQ ID NO: 31）を含むまたはそれらからなる。いくつかの態様では、スペーサーは、配列ESKYGPPCPPCP（SEQ ID NO: 1に示す）を有し、SEQ ID NO: 2に示す配列によってコードされる。いくつかの態様では、スペーサーは、SEQ ID NO: 3に示す配列を有する。いくつかの態様では、スペーサーは、SEQ ID NO: 4に示す配列を有する。いくつかの態様では、定常領域または部分は、IgDのものである。いくつかの態様では、スペーサーは、SEQ ID NO: 5に示すに配列を有する。いくつかの態様では、スペーサーは、SEQ ID NO: 1、3、4または5 または27〜34のいずれかと少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、またはそれらを上回る配列同一性を示すアミノ酸の配列を有する。
この抗原認識ドメインは通常、CARの場合には、TCR複合体などの抗原受容体複合体を介して活性化を模倣するシグナル伝達成分、および/または別の細胞表面受容体を介するシグナルなどの、1つまたは複数の細胞内シグナル伝達成分に連結されている。したがって、いくつかの態様では、抗原結合成分（例えば抗体）は、1つまたは複数の膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインに連結されている。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは細胞外ドメインに融合されている。一態様では、受容体、例えばCAR中のドメインの1つと天然に関連している膜貫通ドメインが使用される。いくつかの場合には、膜貫通ドメインは、同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのそのようなドメインの結合を回避して、受容体複合体の他の成員との相互作用を最小限に抑えるように選択されるかまたはアミノ酸置換によって改変される。
いくつかの態様における膜貫通ドメインは、天然の供給源または合成供給源のいずれかに由来する。供給源が天然である場合、いくつかの局面におけるドメインは、任意の膜結合または膜貫通タンパク質に由来する。膜貫通領域には、T細胞受容体、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137（4-1BB）、CD154のα鎖、β鎖、またはζ鎖に由来する（すなわち少なくともその膜貫通領域含む）ものが含まれる。あるいは、いくつかの態様における膜貫通ドメインは合成である。いくつかの局面では、合成膜貫通ドメインは、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を主に含む。いくつかの局面では、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンのトリプレットが合成膜貫通ドメインの各末端に見出される。いくつかの態様では、結合は、リンカー、スペーサー、および/または膜貫通ドメインによる。いくつかの局面において、膜貫通ドメインは、CD28の膜貫通部分またはその変異体を含む。細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインは、直接または間接的に連結され得る。いくつかの態様において、細胞外ドメインおよび膜貫通ドメインは、本明細書に記載するもののようなスペーサーによって連結される。
細胞内シグナル伝達ドメインの中には、天然の抗原受容体を介するシグナル、共刺激受容体と合わせてそのような受容体を介するシグナル、および/または共刺激受容体のみを介するシグナルを模倣するまたはそれらに近似するものがある。いくつかの態様では、短いオリゴペプチドリンカーまたはポリペプチドリンカー、例えばグリシンおよびセリンを含むもの、例えばグリシン-セリンダブレットなどの2〜10アミノ酸長のリンカーが存在し、CARの膜貫通ドメインと細胞質シグナル伝達ドメインとの間に結合を形成する。
受容体、例えばCARは、通常少なくとも1つの細胞内シグナル伝達成分を含む。いくつかの態様では、受容体は、T細胞活性化および細胞毒性を媒介するTCR CD3鎖、例えばCD3ζ鎖などのTCR複合体の細胞内成分を含む。したがって、いくつかの局面では、抗原結合部分は1つまたは複数の細胞シグナル伝達モジュールに連結されている。いくつかの態様では、細胞シグナル伝達モジュールは、CD3膜貫通ドメイン、CD3細胞内シグナル伝達ドメイン、および/または他のCD膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、受容体、例えばCARは、Fc受容体γ、CD8、CD4、CD25またはCD16などの1つまたは複数の追加の分子の一部をさらに含む。例えば、いくつかの局面では、CARまたは他のキメラ受容体は、CD3-ゼータ（CD3ζ）またはFc受容体γとCD8、CD4、CD25またはCD16との間のキメラ分子を含む。
いくつかの態様では、CARまたは他のキメラ受容体の連結時に、受容体の細胞質ドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメインは、正常なエフェクター機能または免疫細胞、例えばCARを発現するように操作されたT細胞の応答の少なくとも1つを活性化する。例えば、いくつかの状況では、CARは、T細胞の機能、例えば細胞溶解活性またはTヘルパー活性、例えばサイトカインまたは他の因子の分泌を誘導する。いくつかの態様では、抗原受容体成分または共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインの末端切断された部分は、例えばそれがエフェクター機能シグナルを伝達する場合、無傷の免疫刺激鎖の代わりに使用される。いくつかの態様では、1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、T細胞受容体（TCR）の細胞質配列、およびいくつかの局面では、天然の状況でそのような受容体と協調的に作用して、抗原受容体結合後にシグナル伝達を開始する共受容体のものも含む。
天然のTCRに関連して、完全な活性化は通常、TCRを介したシグナル伝達だけでなく、共刺激シグナルも必要とする。
したがって、いくつかの態様では、完全な活性化を促進するために、二次シグナルまたは共刺激シグナルを生成するための成分もCARに含まれる。他の態様では、CARは共刺激シグナルを生成するための成分を含まない。いくつかの局面では、追加のCARが同じ細胞中で発現され、二次シグナルまたは共刺激シグナルを生成するための成分を提供する。
T細胞活性化は、いくつかの局面では、2つのクラスの細胞質シグナル伝達配列:TCRを介して抗原依存性の一次活性化を開始するもの（一次細胞質シグナル伝達配列）、および抗原非依存的に作用して二次または共刺激シグナルを提供するもの（二次細胞質シグナル伝達配列）によって媒介されると説明される。いくつかの局面では、CARはそのようなシグナル伝達成分の一方または両方を含む。
いくつかの局面では、CARは、TCR複合体の一次活性化を調節する一次細胞質シグナル伝達配列を含む。刺激性に作用する一次細胞質シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはITAMとして公知のシグナル伝達モチーフを含み得る。一次細胞質シグナル伝達配列を含むITAMの例には、TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD8、CD22、CD79a、CD79bおよびCD66dに由来するものが含まれる。いくつかの態様では、CAR中の細胞質シグナル伝達分子は、細胞質シグナル伝達ドメイン、その一部、またはCD3ζに由来する配列を含む。
いくつかの態様では、CARは、CD28、4-1BB、OX40、DAP10、およびICOSなどの共刺激受容体のシグナル伝達ドメインおよび/または膜貫通部分を含む。いくつかの局面では、同じCARが活性化成分と共刺激成分の両方を含む。
いくつかの態様では、活性化ドメインは1つのCAR内に含まれ、一方共刺激成分は、別の抗原を認識する別のCARによって提供される。いくつかの態様では、CARは、活性化または刺激性CAR、共刺激性CARを含み、両方とも同じ細胞上で発現される（国際公開公報第2014/055668号参照）。いくつかの局面では、細胞は、1つまたは複数の刺激性もしくは活性化CARおよび/または共刺激性CARを含む。いくつかの態様では、細胞は、阻害性CAR（iCAR、Fedorov et al., Sci.Transl.Medicine,5（215）（2013）参照）、例えば疾患または状態に関連するおよび/または特異的である抗原以外の抗原を認識するCARをさらに含み、それにより、疾患を標的とするCARを介して送達される活性化シグナルが、阻害性CARのそのリガンドへの結合によって低減または阻害され、例えばオフターゲット効果を減少させる。
特定の態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、CD3（例えばCD3ζ）細胞内ドメインに連結されたCD28膜貫通ドメインおよびシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、CD3ζ細胞内ドメインに連結された、キメラCD28およびCD137（4-1BB、TNFRSF9）共刺激ドメインを含む。
いくつかの態様では、CARは、細胞質部分に1つまたは複数、例えば2つまたはそれ以上の共刺激ドメインおよび活性化ドメイン、例えば一次活性化ドメインを包含する。例示的なCARは、CD3ζ、CD28、および4-1BBの細胞内成分を含む。
いくつかの態様では、CARもしくは他の抗原受容体は、受容体を発現するための細胞の形質導入もしくは操作を確認するために使用し得る細胞表面マーカーなどのマーカー、例えば末端切断されたEGFR（tEGFR）などの短縮型の細胞表面受容体をさらに含む。いくつかの局面では、マーカーは、CD34、NGFR、または上皮増殖因子受容体（例えばtEGFR）の全部または一部（例えば短縮形態）を含む。いくつかの態様では、マーカーをコードする核酸は、切断可能なリンカー配列、例えばT2Aなどのリンカー配列をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されている。例えば、マーカー、および任意でリンカー配列は、公開特許出願番号2014031687号に開示されている任意のものであり得る。例えば、マーカーは、任意で、T2A切断可能リンカー配列などのリンカー配列に連結されている短縮型EGFR（tEGFR）であり得る。短縮型EGFR（例えばtEGFR）のための例示的なポリペプチドは、SEQ ID NO：7もしくは23に示すアミノ酸の配列、またはSEQ ID NO：7もしくは23と少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％もしくはそれ以上の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む。例示的なT2Aリンカー配列は、SEQ ID NO：6に示すアミノ酸の配列、またはSEQ ID NO：6と少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％もしくはそれ以上の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む。
いくつかの態様では、マーカーは、天然ではT細胞上に見出されない、または天然ではT細胞の表面上に見出されない分子、例えば細胞表面タンパク質、またはその一部である。いくつかの態様では、分子は非自己分子、例えば非自己タンパク質、すなわち細胞が養子移入される宿主の免疫系によって「自己」として認識されないものである。
いくつかの態様では、マーカーは、治療機能を果たさない、および/または遺伝子操作のため、例えば成功裏に操作された細胞を選択するためのマーカーとして使用されること以外には全く作用をもたらさない。他の態様では、マーカーは、治療分子または何らかの所望の作用を及ぼす分子、例えば、養子移入時またはリガンドとの遭遇時に細胞の応答を増強するおよび/または減弱させる共刺激分子または免疫チェックポイント分子などの、インビボで遭遇される細胞に対するリガンドであり得る。
いくつかの場合には、CARは、第一、第二、第三、または第四世代のCARと称される。いくつかの局面では、第一世代のCARは、例えば、抗原結合の際にCD3鎖誘導シグナルを介する、一次刺激または活性化シグナルのみを提供するものである；いくつかの局面では、第二世代のCARは、そのようなシグナルと、共刺激シグナル、例えば、CD28、CD137（4-1BB)、OX40（CD134)、CD27、DAP10、DAP12、NKG2D、ICOS、および/または他の共刺激受容体など1つまたは複数の共刺激受容体に由来する細胞内シグナル伝達領域またはドメインを含むものなどとを提供するものである；いくつかの局面では、第三世代のCARは、例えば、CD28、CD137（4-1BB)、OX40（CD134)、CD27、DAP10、DAP12、NKG2D、ICOS、および/または他の共刺激受容体から選択される、異なる共刺激受容体の複数の共刺激ドメインを含むものである；いくつかの局面では、第四世代のCARは、例えば、CD28、CD137（4-1BB)、OX40（CD134)、CD27、DAP10、DAP12、NKG2D、ICOS、および/または他の共刺激受容体から選択される、異なる共刺激受容体の3つ以上の共刺激ドメインを含むものである。
いくつかの態様では、キメラ抗原受容体は、抗体または抗体断片を含む細胞外部分を含有する。いくつかの局面では、キメラ抗原受容体は、抗体または断片を含む細胞外部分と細胞内シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの態様では、抗体または断片はscFvを含み、細胞内ドメインはITAMを含む。いくつかの局面では、細胞内シグナル伝達ドメインは、CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖のζ鎖のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様では、キメラ抗原受容体は、細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを連結する膜貫通ドメインを含む。いくつかの局面では、膜貫通ドメインはCD28の膜貫通部分を含む。いくつかの態様では、キメラ抗原受容体はT細胞共刺激分子の細胞内ドメインを含む。細胞外ドメインの抗原結合部分と膜貫通ドメインは直接または間接的に連結され得る。いくつかの態様では、細胞外ドメインの抗原結合部分と膜貫通ドメインは、本明細書に記載されるものなどのスペーサーによって連結されている。いくつかの態様では、受容体は、膜貫通ドメインが由来する分子の細胞外部分、例えばCD28細胞外部分を含む。いくつかの態様では、キメラ抗原受容体は、T細胞共刺激分子またはその機能的変異体に由来する細胞内ドメインを、例えば膜貫通ドメインと、ITAM含有、例えばCD3ζ由来のシグナル伝達ドメインとの間に含む。いくつかの局面では、T細胞共刺激分子はCD28または41BBである。
例えば、いくつかの態様では、CARは、抗体、例えば抗体断片、CD28の膜貫通部分またはその機能的変異体であるかまたはそれを含む膜貫通ドメイン、ならびにCD28のシグナル伝達部分またはその機能的変異体およびCD3ζのシグナル伝達部分またはその機能的変異体を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様では、CARは、抗体、例えば抗体断片、CD28の膜貫通部分またはその機能的変異体であるかまたはそれを含む膜貫通ドメイン、ならびに4-1BBのシグナル伝達部分またはその機能的変異体およびCD3ζのシグナル伝達部分またはその機能的変異体を含む細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかのそのような態様では、受容体は、ヒトIg分子などのIg分子の一部、例えばIgヒンジまたはその変異体、例えばIgG4ヒンジまたはその変異体を含むスペーサー、例えばヒンジのみのスペーサーをさらに含む。
いくつかの態様では、組換え受容体、例えばCARの膜貫通ドメインは、ヒトCD28の膜貫通ドメイン（例えばアクセッション番号P10747.1）またはその変異体、例えばSEQ ID NO：8に示すアミノ酸の配列、またはSEQ ID NO：8と少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％もしくはそれ以上の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む膜貫通ドメインであるかまたはそれを含む；いくつかの態様では、組換え受容体の膜貫通ドメイン含有部分は、SEQ ID NO：9に示すアミノ酸の配列、またはSEQ ID NO：9と少なくとももしくは少なくとも約85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％もしくはそれ以上の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。
いくつかの態様では、組換え受容体、例えばCARの細胞内シグナル伝達成分は、ヒトCD28の細胞内共刺激シグナル伝達ドメインまたはその機能的変異体もしくは部分、例えば天然CD28タンパク質の186〜187位にLLからGGへの置換を有するドメインを含む。例えば、細胞内シグナル伝達ドメインは、SEQ ID NO：10もしくは11に示すアミノ酸の配列、またはSEQ ID NO：10もしくは11と少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％もしくはそれ以上の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含み得る。いくつかの態様では、細胞内ドメインは、4-1BBの細胞内共刺激シグナル伝達ドメイン（例えばアクセッション番号Q07011.1）またはその機能的変異体もしくは部分、例えばSEQ ID NO：12に示すアミノ酸の配列、またはSEQ ID NO：12と少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％もしくはそれ以上の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む。
いくつかの態様では、組換え受容体、例えばCARの細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトCD3ζ刺激シグナル伝達ドメインまたはその機能的変異体、例えばヒトCD3ζのアイソフォーム3の112アミノ酸の細胞質ドメイン（アクセッション番号P20963.2）、または米国特許第7,446,190号もしくは同第8,911,993号に記載されているCD3ζシグナル伝達ドメインを含む。例えば、いくつかの態様では、細胞内シグナル伝達ドメインは、SEQ ID NO：13、14もしくは15に示すアミノ酸の配列、またはSEQ ID NO：13、14もしくは15と少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％もしくはそれ以上の配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む。
いくつかの局面では、スペーサーは、IgGのヒンジ領域のみ、例えばIgG4またはIgG1のヒンジのみ、例えばSEQ ID NO：1に示すヒンジのみのスペーサーを含む。他の態様では、スペーサーは、任意でCH2および/またはCH3ドメインに連結されたIgヒンジ、例えばIgG4由来のヒンジであるかまたはそれを含む。いくつかの態様では、スペーサーは、例えばSEQ ID NO：4に示すような、CH2およびCH3ドメインに連結されたIgヒンジ、例えばIgG4ヒンジである。いくつかの態様では、スペーサーは、例えばSEQ ID NO：3に示すような、CH3ドメインのみに連結されたIgヒンジ、例えばIgG4ヒンジである。いくつかの態様では、スペーサーは、グリシン-セリンリッチ配列または他の柔軟なリンカー、例えば公知の柔軟なリンカーであるかまたはそれを含む。
例えば、いくつかの態様では、CARは、scFvを含む抗体断片などの抗体、スペーサー、例えばヒンジ領域および/または重鎖分子の1つもしくは複数の定常領域などの免疫グロブリン分子の一部を含むスペーサー、例えばIgヒンジ含有スペーサー、CD28由来の膜貫通ドメインの全部または一部を含む膜貫通ドメイン、CD28由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、ならびにCD3ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様では、CARは、抗体またはscFvなどの断片、任意のIgヒンジ含有スペーサーなどのスペーサー、CD28由来の膜貫通ドメイン、4-1BB由来の細胞内シグナル伝達ドメイン、およびCD3ζ由来のシグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの態様では、そのようなCAR構築物をコードする核酸分子は、例えばCARをコードする配列の下流に、T2Aリボソームスキップエレメントおよび/またはtEGFR配列をコードする配列をさらに含む。いくつかの態様では、配列は、SEQ ID NO：6に示すT2Aリボソームスキップエレメント、またはSEQ ID NO：6と少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％もしくはそれ以上の配列同一性を示すアミノ酸の配列をコードする。いくつかの態様では、抗原受容体（例えばCAR）を発現するT細胞はまた、短縮型EGFR（EGFRt）を非免疫原性選択エピトープとして発現するように生成することもでき（例えば同じ構築物から2つのタンパク質を発現するためにT2Aリボソームスイッチによって分離されたCARとEGFRtをコードする構築物の導入によって）、これはその後、そのような細胞を検出するためのマーカーとして使用することができる（例えば米国特許第8,802,374号参照）。いくつかの態様では、配列は、SEQ ID NO：7もしくは23に示すtEGFR配列、またはSEQ ID NO：7もしくは23と少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％もしくはそれ以上の配列同一性を示すアミノ酸の配列をコードする。
対象に投与される細胞によって発現されるCARなどの組換え受容体は、通常、治療されている疾患もしくは状態またはその細胞において発現される、それに関連する、および/またはそれに対して特異的な分子を認識するまたはそれに特異的に結合する。分子、例えば抗原に特異的に結合すると、受容体は通常、ITAM形質導入シグナルなどの免疫刺激シグナルを細胞内に送達し、それによって疾患または状態を標的とする免疫応答を促進する。例えば、いくつかの態様では、細胞は、疾患もしくは状態の細胞もしくは組織によって発現されるか、または疾患もしくは状態に関連する抗原に特異的に結合するCARを発現する。
B．TCR
いくつかの態様では、腫瘍の抗原、ウイルスまたは自己免疫タンパク質などの標的ポリペプチドのペプチドエピトープまたはT細胞エピトープを認識するT細胞受容体（TCR）またはその抗原結合部分を発現する、T細胞などの操作された細胞が提供される。
いくつかの態様では、「T細胞受容体」または「TCR」は、可変α鎖およびβ鎖（それぞれTCRαおよびTCRβとしても知られる）または可変γ鎖およびδ鎖（それぞれTCRαおよびTCRβとしても知られる）またはそれらの抗原結合部分を含み、MHC分子に結合したペプチドに特異的に結合することができる分子である。いくつかの態様では、TCRはαβ形態である。典型的には、αβおよびγδ形態で存在するTCRは通常構造的に類似するが、それらを発現するT細胞は異なる解剖学的位置または機能を有し得る。TCRは、細胞の表面上にまたは可溶性形態で見出され得る。通常TCRは、それが通常は主要組織適合遺伝子複合体（MHC）分子に結合した抗原を認識することに関与するT細胞（またはTリンパ球）の表面上に見出される。
特に明記されない限り、「TCR」という用語は、完全なTCR、ならびにその抗原結合部分または抗原結合断片を包含すると理解されるべきである。いくつかの態様では、TCRは、αβ形態またはγδ形態のTCRを含む、無傷または完全長のTCRである。いくつかの態様では、TCRは、完全長未満のTCRであるが、MHC分子に結合した特定のペプチドに結合する、例えばMHC-ペプチド複合体に結合する抗原結合部分である。いくつかの場合には、TCRの抗原結合部分または断片は、完全長または無傷のTCRの構造ドメインの一部のみを含み得るが、それでもなお、完全なTCRが結合するMHC-ペプチド複合体などのペプチドエピトープに結合することができる。いくつかの場合には、抗原結合部分は、特定のMHC-ペプチド複合体に結合するための結合部位を形成するのに十分な、TCRの可変α鎖および可変β鎖などのTCRの可変ドメインを含む。通常、TCRの可変鎖は、ペプチド、MHCおよび/またはMHC-ペプチド複合体の認識に関与する相補性決定領域を含む。
いくつかの態様では、TCRの可変ドメインは、通常は抗原認識ならびに結合能力および特異性に対する主な寄与因子である、超可変ループまたは相補性決定領域（CDR）を含む。いくつかの態様では、TCRのCDRまたはそれらの組み合わせは、所与のTCR分子の抗原結合部位の全部または実質的に全部を形成する。TCR鎖の可変領域内の様々なCDRは、通常、CDRと比較してTCR分子間で通常より少ない変動性を示すフレームワーク領域（FR）によって分離されている（例えばJores et al., Proc.Nat'l Acad.Sci.U.S.A.87:9138,1990；Chothia et al., EMBO J.7:3745,1988参照；またLefranc et al., Dev.Comp.Immunol.27:55,2003も参照のこと）。いくつかの態様では、CDR3は、抗原結合もしくは特異性に関与する主なCDRであるか、または抗原認識および/もしくはペプチド-MHC複合体のプロセシングされたペプチド部分との相互作用のために、所与のTCR可変領域上の3つのCDRのうちで最も重要である。いくつかの状況では、α鎖のCDR1は特定の抗原ペプチドのN末端部分と相互作用することができる。いくつかの状況では、β鎖のCDR1はペプチドのC末端部分と相互作用することができる。いくつかの状況では、CDR2は、MHC-ペプチド複合体のMHC部分との相互作用またはMHC部分の認識に最も強く寄与するか、またはそれに関与する主要なCDRである。いくつかの態様では、β鎖の可変領域は、通常はスーパー抗原結合に関与し、抗原認識には関与しないさらなる超可変領域（CDR4またはHVR4）を含み得る（Kotb（1995）Clinical Microbiology Reviews,8:411-426）。
いくつかの態様では、TCRはまた、定常ドメイン、膜貫通ドメインおよび/または短い細胞質尾部を含み得る（例えばJaneway et al., Immunobiology:The Immune System in Health and Disease,3rd Ed.,Current Biology Publications,p.4:33,1997参照）。いくつかの局面では、TCRの各々の鎖は、1つのN末端免疫グロブリン可変ドメイン、1つの免疫グロブリン定常ドメイン、膜貫通領域、およびC末端に短い細胞質尾部を有し得る。いくつかの態様では、TCRは、シグナル伝達の媒介に関与するCD3複合体のインバリアントタンパク質と会合している。
いくつかの態様では、TCR鎖は1つまたは複数の定常ドメインを含む。例えば、所与のTCR鎖（例えばα鎖またはβ鎖）の細胞外部分は、2つの免疫グロブリン様ドメイン、例えば可変ドメイン（例えばVαまたはVβ；典型的にはKabatナンバリングに基づき鎖のアミノ酸1〜116位、Kabat et al., 「Sequences of Proteins of Immunological Interest,US Dept. Health and Human Services,Public Health Service National Institutes of Health,1991,5th ed.）、および細胞膜に隣接する定常ドメイン（例えばα鎖定常ドメインもしくはCα、典型的にはKabatナンバリングに基づき鎖の117〜259位またはβ鎖定常ドメインもしくはCβ、典型的にはKabatに基づき鎖の117〜295位）を含み得る。例えば、いくつかの場合には、2本の鎖によって形成されるTCRの細胞外部分は、2つの膜近位定常ドメイン、および2つの膜遠位可変ドメインを含み、これらの可変ドメインはそれぞれCDRを含む。TCRの定常ドメインは、システイン残基がジスルフィド結合を形成し、それによってTCRの2本の鎖を連結する短い連結配列を含み得る。いくつかの態様では、TCRが定常ドメイン内に2つのジスルフィド結合を含むように、TCRは、α鎖およびβ鎖のそれぞれにさらなるシステイン残基を有し得る。
いくつかの態様では、TCR鎖は膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様では、膜貫通ドメインは正に荷電している。いくつかの場合には、TCR鎖は細胞質尾部を含む。いくつかの場合には、その構造は、TCRがCD3およびそのサブユニットのような他の分子と会合することを可能にする。例えば、膜貫通領域を有する定常ドメインを含むTCRは、タンパク質を細胞膜に固定し、CD3シグナル伝達装置または複合体のインバリアントサブユニットと会合し得る。CD3シグナル伝達サブユニット（例えばCD3γ、CD3δ、CD3εおよびCD3ζ鎖）の細胞内尾部は、TCR複合体のシグナル伝達能力に関与する1つまたは複数の免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフまたはITAMを含む。
いくつかの態様では、TCRは、2本の鎖αおよびβ（または任意でγおよびδ）のヘテロ二量体であり得るか、または一本鎖TCR構築物であり得る。いくつかの態様では、TCRは、1つまたは複数のジスルフィド結合などによって連結されている2本の別々の鎖（α鎖とβ鎖またはγ鎖とδ鎖）を含むヘテロ二量体である。
いくつかの態様では、TCRは、実質的に完全長のコード配列が容易に利用可能であるVα,β鎖の配列などの公知のTCR配列から生成することができる。細胞供給源から、V鎖配列を含む完全長TCR配列を得るための方法は周知である。いくつかの態様では、TCRをコードする核酸は、所与の1つまたは複数の細胞内のもしくは細胞から単離されたTCRコード核酸のポリメラーゼ連鎖反応（PCR）増幅、または公的に入手可能なTCR DNA配列の合成などの様々な供給源から得ることができる。
いくつかの態様では、TCRは、T細胞（例えば細胞傷害性T細胞）などの細胞、T細胞ハイブリドーマまたは他の公的に入手可能な供給源などの生物学的供給源から得られる。いくつかの態様では、T細胞は、インビボで単離された細胞から得ることができる。いくつかの態様では、TCRは胸腺的に選択されたTCRである。いくつかの態様では、TCRはネオエピトープ拘束性TCRである。いくつかの態様では、T細胞は、培養されたT細胞ハイブリドーマまたはクローンであり得る。いくつかの態様では、TCRまたはその抗原結合部分は、TCRの配列の知識から合成的に生成することができる。
いくつかの態様では、TCRは、標的ポリペプチド抗原またはその標的T細胞エピトープに対して候補TCRのライブラリをスクリーニングすることから同定または選択されたTCRから生成される。TCRライブラリは、PBMC、脾臓または他のリンパ系器官に存在する細胞を含む、対象から単離されたT細胞からのVαおよびVβのレパートリの増幅によって作製することができる。いくつかの場合には、T細胞は腫瘍浸潤リンパ球（TIL）から増幅することができる。いくつかの態様では、TCRライブラリはCD4＋またはCD8＋細胞から作製することができる。いくつかの態様では、TCRは、正常なまたは健康な対象のT細胞供給源、すなわち正常なTCRライブラリから増幅することができる。いくつかの態様では、TCRは、罹患対象のT細胞供給源、すなわち罹患TCRライブラリから増幅することができる。いくつかの態様では、縮重プライマーを使用して、ヒトから得られたT細胞などの試料におけるRT-PCRなどによって、VαおよびVβの遺伝子レパートリを増幅する。いくつかの態様では、scTvライブラリは、増幅産物がクローニングされるかまたはリンカーによって分離されるように構築されるナイーブVαおよびVβライブラリから構築することができる。対象および細胞の供給源に依存して、ライブラリはHLA対立遺伝子特異的であり得る。あるいは、いくつかの態様では、TCRライブラリは、親または骨格TCR分子の突然変異誘発または多様化によって作製することができる。いくつかの局面では、TCRは、例えばα鎖またはβ鎖の突然変異誘発などによる指向性進化に供される。いくつかの局面では、TCRのCDR内の特定の残基が変更されている。いくつかの態様では、選択されたTCRを親和性成熟によって改変することができる。いくつかの態様では、ペプチドに対するCTL活性を評価するためのスクリーニングなどによって、抗原特異的T細胞を選択し得る。いくつかの局面では、TCR、例えば抗原特異的T細胞上に存在するTCRは、結合活性、例えば抗原に対する特定の親和性またはアビディティなどによって選択し得る。
いくつかの態様では、TCRまたはその抗原結合部分は、改変または操作されているものである。いくつかの態様では、指向性進化法を使用して、特定のMHC-ペプチド複合体に対するより高い親和性などの変更された特性を有するTCRを生成する。いくつかの態様では、指向性進化は、酵母ディスプレイ（Holler et al., （2003）Nat Immunol,4,55-62；Holler et al., （2000）Proc Natl Acad Sci U S A,97,5387-92）、ファージディスプレイ（Li et al., （2005）Nat Biotechnol,23,349-54）、またはT細胞ディスプレイ（Chervin et al., （2008）J Immunol Methods,339,175-84）を含むがこれらに限定されるわけではないディスプレイ法によって達成される。いくつかの態様では、ディスプレイアプローチは、公知のTCR、親TCR、または参照TCRを操作するまたは改変することを含む。例えば、いくつかの場合には、野生型TCRを、CDRの1つまたは複数の残基が変異している変異誘発されたTCRを生成するための鋳型として使用することができ、所望の標的抗原に対するより高い親和性などの所望の変更された特性を有する変異体を選択する。
いくつかの態様では、関心対象のTCRを作製または生成する際に使用するための標的ポリペプチドのペプチドは、公知であるかまたは当業者によって容易に同定され得る。いくつかの態様では、TCRまたは抗原結合部分を生成する際に使用するのに適したペプチドは、関心対象の標的ポリペプチド、例えば下記の標的ポリペプチド中のHLA拘束性モチーフの存在に基づいて決定することができる。いくつかの態様では、ペプチドは、当業者に公知のコンピュータ予測モデルを用いて同定される。いくつかの態様では、MHCクラスI結合部位を予測するために、そのようなモデルとしては、ProPred1（Singh and Raghava（2001）Bioinformatics 17（12）:1236-1237）およびSYFPEITHI（Schuler et al., （2007）Immunoinformatics Methods in Molecular Biology,409（1）:75-93 2007）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。いくつかの態様では、MHC拘束性エピトープは、全白人の約39〜46％で発現されるHLA-A0201であり、したがって、TCRまたは他のMHC-ペプチド結合分子を調製するのに使用するためのMHC抗原の適切な選択である。
コンピュータ予測モデルを用いたHLA-A0201結合モチーフならびにプロテアソームおよび免疫プロテアソームの切断部位は当業者に公知である。MHCクラスI結合部位を予測するために、そのようなモデルとしては、ProPred1（Singh and Raghava,ProPred:prediction of HLA-DR binding sites. Bioinformatics 17（12）:1236-1237 2001により詳細に記載されている）、およびSYFPEITHI（Schuler et al., SYFPEITHI, Database for Searching and T-Cell Epitope Prediction.in Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, vol 409（1） :75-93 2007参照）が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
いくつかの態様では、TCRまたはその抗原結合部分は、結合特性などの1つまたは複数の特性が変更されている、組換え生産された天然タンパク質またはその変異型であり得る。いくつかの態様では、TCRは、ヒト、マウス、ラット、または他の哺乳動物などの様々な動物種の1つに由来し得る。TCRは細胞結合型でも可溶型でもよい。いくつかの態様では、提供される方法の目的のために、TCRは細胞の表面に発現される細胞結合型である。
いくつかの態様では、TCRは完全長TCRである。いくつかの態様では、TCRは抗原結合部分である。いくつかの態様では、TCRは二量体TCR（dTCR）である。いくつかの態様では、TCRは一本鎖TCR（sc-TCR）である。いくつかの態様では、dTCRまたはscTCRは、国際公開公報第03/020763号、同第04/033685号、同第2011/044186号に記載されている構造を有する。
いくつかの態様では、TCRは膜貫通配列に対応する配列を含む。いくつかの態様では、TCRは細胞質配列に対応する配列を含む。いくつかの態様では、TCRはCD3とTCR複合体を形成することができる。いくつかの態様では、dTCRまたはscTCRを含む任意のTCRは、T細胞の表面上に活性TCRを生じるシグナル伝達ドメインに連結され得る。いくつかの態様では、TCRは細胞の表面上に発現される。
いくつかの態様では、dTCRは、TCRα鎖可変領域配列に対応する配列がTCRα鎖定常領域細胞外配列に対応する配列のN末端に融合している第一のポリペプチド、およびTCRβ鎖可変領域配列に対応する配列がTCRβ鎖定常領域細胞外配列に対応する配列のN末端に融合している第二のポリペプチドを含み、第一のポリペプチドと第二のポリペプチドはジスルフィド結合によって連結されている。いくつかの態様では、結合は、天然の二量体αβTCR中に存在する天然の鎖間ジスルフィド結合に対応し得る。いくつかの態様では、鎖間ジスルフィド結合は天然のTCR中には存在しない。例えば、いくつかの態様では、1つまたは複数のシステインをdTCRポリペプチド対の定常領域細胞外配列に組み込むことができる。いくつかの場合には、天然および非天然の両方のジスルフィド結合が望ましいことがあり得る。いくつかの態様では、TCRは、膜に固定するための膜貫通配列を含む。
いくつかの態様では、dTCRは、可変αドメイン、定常αドメインおよび定常αドメインのC末端に結合した第一の二量体化モチーフを含むTCRα鎖、ならびに可変βドメイン、定常βドメインおよび定常βドメインのC末端に結合した第一の二量体化モチーフを含むTCRβ鎖を含み、ここで、第一と第二の二量体化モチーフは容易に相互作用して、第一の二量体化モチーフ中のアミノ酸と第二の二量体化モチーフ中のアミノ酸との間に共有結合を形成し、TCRα鎖とTCRβ鎖を一緒に連結する。
いくつかの態様では、TCRはscTCRである。典型的には、scTCRは当業者に公知の方法を用いて生成することができる。例えばSoo Hoo,W.F.et al., PNAS（USA）89,4759（1992）；Wulfing,C.and Pluckthun,A.,J.Mol.Biol.242,655（1994）；Kurucz,I.et al., PNAS（USA）90 3830（1993）；国際公開公報第96/13593号、同第96/18105号、同第99/60120号、同第99/18129号、同第03/020763号、同第2011/044186号；およびSchlueter,C.J.et al., J.Mol.Biol.256,859（1996）参照。いくつかの態様では、scTCRは、TCR鎖の会合を容易にするために導入された非天然ジスルフィド鎖間結合を含む（例えば国際公開公報第03/020763号参照）。いくつかの態様では、scTCRは、そのC末端に融合した異種ロイシンジッパーが鎖の会合を促進する、非ジスルフィド結合短縮型TCRである（例えば国際公開公報第99/60120号参照）。いくつかの態様では、scTCRは、ペプチドリンカーを介してTCRβ可変ドメインに共有結合したTCRα可変ドメインを含む（例えば国際公開公報第99/18129号参照）。
いくつかの態様では、scTCRは、TCRα鎖可変領域に対応するアミノ酸配列によって構成される第一のセグメント、TCRβ鎖定常ドメイン細胞外配列に対応するアミノ酸配列のN末端に融合したTCRβ鎖可変領域配列に対応するアミノ酸配列によって構成される第二のセグメント、および第一のセグメントのC末端を第二のセグメントのN末端に連結するリンカー配列を含む。
いくつかの態様では、scTCRは、α鎖細胞外定常ドメイン配列のN末端に融合したα鎖可変領域配列によって構成される第一のセグメント、ならびにβ鎖細胞外定常配列と膜貫通配列との配列のN末端に融合したβ鎖可変領域配列によって構成される第二のセグメント、ならびに任意で、第一のセグメントのC末端を第二のセグメントのN末端に連結するリンカー配列を含む。
いくつかの態様では、scTCRは、β鎖細胞外定常ドメイン配列のN末端に融合したTCRβ鎖可変領域配列によって構成される第一のセグメント、ならびにα鎖細胞外定常配列と膜貫通配列との配列のN末端に融合したα鎖可変領域配列によって構成される第二のセグメント、ならびに任意で、第一のセグメントのC末端を第二のセグメントのN末端に連結するリンカー配列を含む。
いくつかの態様では、第一および第二のTCRセグメントを連結するscTCRのリンカーは、TCRの結合特異性を保持しながら、単一のポリペプチド鎖を形成することができる任意のリンカーであり得る。いくつかの態様では、リンカー配列は、例えば式-P-AA-P-を有してよく、式中、Pはプロリンであり、AAはアミノ酸配列を表し、アミノ酸はグリシンおよびセリンである。いくつかの態様では、第一および第二のセグメントは、その可変領域配列がそのような結合のために配向されるように対合される。したがって、いくつかの場合には、リンカーは、第一のセグメントのC末端と第二のセグメントのN末端との間、またはその逆の間の距離を橋渡しするのに十分な長さを有するが、scTCRの標的リガンドへの結合を遮断または低減するほどには長くない。いくつかの態様では、リンカーは、10〜45個のアミノ酸、例えば10〜30個のアミノ酸もしくは26〜41個のアミノ酸残基、例えば29、30、31もしくは32個のアミノ酸、またはおよそこれらの個数のアミノ酸を含み得る。いくつかの態様では、リンカーは、式-PGGG-（SGGGG）5-P-（SEQ ID NO：16）を有し、式中、Pはプロリンであり、Gはグリシンであり、およびSはセリンである。いくつかの態様では、リンカーは、配列GSADDAKKDAAKKDGKS（SEQ ID NO：17）を有する。
いくつかの態様では、scTCRは、α鎖の定常ドメインの免疫グロブリン領域の残基をβ鎖の定常ドメインの免疫グロブリン領域の残基に連結する共有ジスルフィド結合を含む。いくつかの態様では、天然TCR中の鎖間ジスルフィド結合は存在しない。例えば、いくつかの態様では、1つまたは複数のシステインを、scTCRポリペプチドの第一および第二のセグメントの定常領域細胞外配列に組み込むことができる。いくつかの場合には、天然および非天然の両方のジスルフィド結合が望ましい場合もある。
導入された鎖間ジスルフィド結合を含むdTCRまたはscTCRのいくつかの態様では、天然のジスルフィド結合は存在しない。いくつかの態様では、天然の鎖間ジスルフィド結合を形成する天然のシステインの1つまたは複数は、セリンまたはアラニンなどの別の残基に置換されている。いくつかの態様では、導入されるジスルフィド結合は、第一および第二のセグメント上の非システイン残基をシステインに変異させることによって形成することができる。TCRの例示的な非天然ジスルフィド結合は、国際公開公報第2006/000830号に記載されている。
いくつかの態様では、TCRまたはその抗原結合断片は、10-5〜10-12Mまたは約10-5〜10-12Mならびにその中のすべての個々の値および範囲の標的抗原に対する平衡結合定数で親和性を示す。いくつかの態様では、標的抗原はMHC-ペプチド複合体またはリガンドである。
いくつかの態様では、α鎖およびβ鎖などのTCRをコードする1つまたは複数の核酸は、PCR、クローニングまたは他の適切な手段によって増幅し、適切な1つまたは複数の発現ベクターにクローニングすることができる。発現ベクターは、任意の適切な組換え発現ベクターであり得、任意の適切な宿主を形質転換またはトランスフェクトするために使用することができる。適切なベクターには、プラスミドおよびウイルスなどの、増殖および増大のため、または発現のため、またはその両方のために設計されたものが含まれる。
いくつかの態様では、ベクターは、pUCシリーズ（Fermentas Life Sciences）、pBluescriptシリーズ（Stratagene, LaJolla, Calif.）、pETシリーズ（Novagen, Madison, Wis.）、pGEXシリーズ（Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden）、またはpEXシリーズ（Clontech, Palo Alto, Calif.）のベクターであり得る。いくつかの場合には、λG10、λGT11、λZapII（Stratagene）、λEMBL4、およびλNM1149などのバクテリオファージベクターも使用することができる。いくつかの態様では、植物発現ベクターを使用することができ、これには、pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121およびpBIN19（Clontech）が含まれる。いくつかの態様では、動物発現ベクターには、pEUK-Cl、pMAMおよびpMAMneo（Clontech）が含まれる。いくつかの態様では、レトロウイルスベクターなどのウイルスベクターが使用される。
いくつかの態様では、組換え発現ベクターは、標準的な組換えDNA技術を用いて調製することができる。いくつかの態様では、ベクターは、適切に、かつベクターがDNAベースであるかRNAベースであるかを考慮に入れて、ベクターが導入される宿主の種類（例えば細菌、真菌、植物、または動物）に特異的な転写および翻訳開始および終止コドンなどの調節配列を含み得る。いくつかの態様では、ベクターは、TCRまたは抗原結合部分（または他のMHC-ペプチド結合分子）をコードするヌクレオチド配列に機能的に連結された非天然プロモーターを含み得る。いくつかの態様では、プロモーターは、非ウイルスプロモーターまたはウイルスプロモーター、例えばサイトメガロウイルス（CMV）プロモーター、SV40プロモーター、RSVプロモーター、およびマウス幹細胞ウイルスの長い末端反復配列中に見られるプロモーターであり得る。当業者に公知の他のプロモーターも企図される。
いくつかの態様では、TCRをコードするベクターを作製するために、関心対象のTCRを発現するT細胞クローンから単離された全cDNAからα鎖およびβ鎖をPCR増幅し、発現ベクターにクローニングする。いくつかの態様では、α鎖とβ鎖は同じベクターにクローニングされる。いくつかの態様では、α鎖とβ鎖は異なるベクターにクローニングされる。いくつかの態様では、作製されたα鎖およびβ鎖は、レトロウイルスベクター、例えばレンチウイルスベクターに組み込まれる。
C．マルチターゲティング
いくつかの態様では、細胞および方法は、それぞれが同じかまたは異なる抗原を認識し、典型的にはそれぞれが異なる細胞内シグナル伝達成分を含む、細胞上の2つまたはそれ以上の遺伝子操作された受容体の発現などのマルチターゲティング戦略を含む。そのようなマルチターゲティング戦略は、例えば国際特許出願公報第2014055668A1号（例えば、オフターゲット細胞、例えば正常細胞上では個別に存在するが、治療される疾患または状態の細胞上でのみ一緒に存在する2つの異なる抗原を標的とする、活性化CARと共刺激CARとの組み合わせを記載する）、ならびにFedorov et al., Sci.Transl.Medicine,5（215）（2013）（活性化CARが正常細胞または非罹患細胞、および治療される疾患または状態の細胞の両方で発現される1つの抗原に結合し、阻害性CARが正常細胞または治療されることが望ましくない細胞でのみ発現される別の抗原に結合するものなどの、活性化CARと阻害性CARを発現する細胞を記載する）に記載されている。
例えば、いくつかの態様では、細胞は、通常第一の受容体によって認識される抗原、例えば第一の抗原への特異的結合時に細胞への活性化シグナルを誘導することができる第一の遺伝子操作された抗原受容体（例えばCARまたはTCR）を発現する受容体を含む。いくつかの態様では、細胞は、通常第二の受容体によって認識される第二の抗原への特異的結合時に免疫細胞への共刺激シグナルを誘導することができる第二の遺伝子操作された抗原受容体（例えばCARまたはTCR）、例えばキメラ共刺激受容体をさらに含む。いくつかの態様では、第一の抗原と第二の抗原は同じである。いくつかの態様では、第一の抗原と第二の抗原は異なる。
いくつかの態様では、第一および/または第二の遺伝子操作された抗原受容体（例えばCARまたはTCR）は、細胞への活性化シグナルを誘導することができる。いくつかの態様では、受容体は、ITAMまたはITAM様モチーフを含有する細胞内シグナル伝達成分を含む。いくつかの態様では、第一の受容体によって誘導される活性化は、細胞内でのシグナル伝達またはタンパク質発現の変化を含み、結果として、ITAMリン酸化および/またはITAM媒介シグナル伝達カスケードの開始などの免疫応答の開始、免疫学的シナプスの形成および/または結合した受容体付近の分子（例えばCD4もしくはCD8など）のクラスター化、NF-κBおよび/またはAP-1などの1つまたは複数の転写因子の活性化、ならびに/またはサイトカインなどの因子の遺伝子発現、増殖、および/もしくは生存の誘導をもたらす。
いくつかの態様では、第一および/または第二の受容体は、CD28、CD137（4-1BB）、OX40、CD27、DAP10、DAP12、NKG2D、ICOSおよび/または他の共刺激受容体などの共刺激受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様では、第一の受容体と第二の受容体は、異なる共刺激受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。一態様では、第一の受容体はCD28共刺激シグナル伝達領域を含み、第二の受容体は4-1BB共刺激シグナル伝達領域を含むか、またはその逆である。
いくつかの態様では、第一および/または第二の受容体は、ITAMまたはITAM様モチーフを含む細胞内シグナル伝達ドメインと共刺激受容体の細胞内シグナル伝達ドメインの両方を含む。
いくつかの態様では、第一の受容体はITAMまたはITAM様モチーフを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、第二の受容体は共刺激受容体の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。同じ細胞内で誘導される活性化シグナルと組み合わせる共刺激シグナルは、免疫応答、例えば遺伝子発現の増加、サイトカインおよび他の因子の分泌、ならびに細胞死滅などのT細胞媒介エフェクター機能のような堅固で持続的な免疫応答をもたらすものである。
いくつかの態様では、第一の受容体単独の連結または第二の受容体単独の連結のいずれもが、堅固な免疫応答を誘導しない。いくつかの局面では、1つの受容体のみが連結されている場合、細胞は、抗原に対して寛容もしくは非応答性になるか、または阻害され、および/または因子を増殖もしくは分泌するまたはエフェクター機能を実行するように誘導されない。しかしながら、いくつかのそのような態様では、第一および第二の抗原を発現する細胞の遭遇時などに複数の受容体が連結されると、例えば1つもしくは複数のサイトカインの分泌、増殖、持続性、および/または標的細胞の細胞傷害性死滅などの免疫エフェクター機能の実行によって示されるように、完全な免疫活性化または刺激などの所望の応答が達成される。
いくつかの態様では、2つの受容体はそれぞれ、細胞への活性化シグナルおよび阻害性シグナルを誘導し、その結果、一方の受容体によるその抗原への結合は細胞を活性化するまたは応答を誘導するが、第二の阻害性受容体によるその抗原への結合はその応答を抑制または減弱させるシグナルを誘導する。例は、活性化CARと阻害性CARまたはiCARとの組み合わせである。そのような戦略は、例えば、活性化CARが、疾患または状態において発現されるが正常細胞上でも発現される抗原に結合し、阻害性受容体が、正常細胞上で発現されるが疾患または状態の細胞上では発現されない別の抗原に結合する場合に使用され得る。
いくつかの態様では、マルチターゲティング戦略は、特定の疾患または状態に関連する抗原が非罹患細胞上でおよび/または操作された細胞自体で、一過性に（例えば遺伝子操作に関連する刺激時に）または永続的に発現される場合に用いられる。そのような場合、2つの別々のおよび個別に特異的な抗原受容体の連結を必要とすることによって、特異性、選択性、および/または有効性が改善され得る。
いくつかの態様では、複数の抗原、例えば第一および第二の抗原は、がん細胞などの標的とされる細胞、組織、または疾患もしくは状態で発現される。いくつかの局面では、細胞、組織、疾患または状態は、多発性骨髄腫または多発性骨髄腫細胞である。いくつかの態様では、複数の抗原のうちの1つまたは複数は通常、正常もしくは非罹患細胞もしくは組織などの細胞療法で標的とすることが望ましくない細胞、および/または操作された細胞自体でも発現される。そのような態様では、細胞の応答を達成するために複数の受容体の連結を必要とすることによって、特異性および/または活性が達成される。
D. 操作のための細胞および細胞の調製
操作された組換え受容体を含む細胞、例えば本明細書に記載されている細胞などの細胞もまた提供される。そのような細胞の集団、そのような細胞を含むおよび/またはそのような細胞が濃縮された組成物も提供され、例えば、それらにおいて、組換え受容体、例えばキメラ受容体を発現する細胞は、組成物中の総細胞またはT細胞またはCD8+もしくはCD4+細胞などのある特定の種類の細胞の少なくとも50、60、70、80、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、またはそれらを上回るパーセントを構成する。組成物の中には、例えば養子細胞療法などでの、投与のための薬学的組成物および製剤が含まれる。例えば、提供される方法などにしたがって、対象、例えば患者に細胞および組成物を投与するための治療方法も提供される。
したがって、組換え受容体、例えばCARを発現する遺伝子操作された細胞も提供される。細胞は通常、哺乳動物細胞などの真核細胞であり、典型的にはヒト細胞である。いくつかの態様では、細胞は、血液、骨髄、リンパ、またはリンパ系器官に由来し、先天性または適応免疫の細胞などの免疫系の細胞、例えばリンパ球を含む骨髄またはリンパ系細胞、典型的にはT細胞および/またはNK細胞である。他の例示的な細胞としては、人工多能性幹細胞（iPSC）を含む多能性幹細胞などの幹細胞が挙げられる。細胞は、典型的には、対象から直接単離されたもの、および/または対象から単離されて凍結されたものなどの初代細胞である。いくつかの態様では、細胞は、T細胞または他の細胞型の1つまたは複数のサブセット、例えば全T細胞集団、CD4＋細胞、CD8＋細胞、およびそれらの亜集団、例えば機能、活性化状態、成熟度、分化、増大、再循環、局在化、および/もしくは持続能力についての潜在能、抗原特異性、抗原受容体の種類、特定の器官もしくは区画における存在、マーカーもしくはサイトカイン分泌プロファイル、ならびに/または分化の程度によって定義されるものを含む。治療される対象に関して、細胞は同種異系および/または自己由来であり得る。方法の中には、既製の方法が含まれる。既製の技術などに関するいくつかの局面では、細胞は、人工多能性幹細胞（iPSC）などの幹細胞のような多能性である。いくつかの態様では、方法は、凍結保存の前または後に、対象から細胞を単離すること、本明細書に記載のようにそれらを調製し、処理し、培養し、および/または操作すること、ならびにそれらを同じ患者に再導入することを含む。
T細胞ならびに/またはCD4＋および/もしくはCD8＋T細胞のサブタイプおよび亜集団の中には、ナイーブT（TN）細胞、エフェクターT細胞（TEFF）、メモリーT細胞およびそのサブタイプ、例えば幹細胞メモリーT（TSCM）細胞、セントラルメモリーT（TCM）細胞、エフェクターメモリーT（TEM）細胞、または最終分化エフェクターメモリーT細胞、腫瘍浸潤リンパ球（TIL）、未熟T細胞、成熟T細胞、ヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞、粘膜関連インバリアントT（MAIT）細胞、天然のおよび適応制御性T（Treg）細胞、ヘルパーT細胞、例えばTH1細胞、TH2細胞、TH3細胞、TH17細胞、TH9細胞、TH22細胞、濾胞性ヘルパーT細胞、α/βT細胞、およびδ/γT細胞がある。
いくつかの態様では、細胞はナチュラルキラー（NK）細胞である。いくつかの態様では、細胞は、単球または顆粒球、例えば骨髄細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、肥満細胞、好酸球、および/または好塩基球である。
いくつかの態様では、細胞は、遺伝子操作によって導入された1つまたは複数の核酸を含み、それによってそのような核酸の組換え産物または遺伝子操作された産物を発現する。いくつかの態様では、核酸は異種であり、すなわち通常は細胞または細胞から得られる試料中には存在せず、例えば操作されている細胞中に通常は認められない別の生物もしくは細胞、またはそのような細胞が由来する生物から得られるものである。いくつかの態様では、複数の異なる細胞型からの様々なドメインをコードする核酸のキメラ組み合わせを含有するものを含む、天然には認められない核酸などの核酸は、天然には存在しない。
いくつかの態様では、細胞療法、例えば、組換え受容体を発現する細胞を含む治療用細胞組成物の製造、作製または生成は、1つまたは複数のさらなる処理工程、例えば、細胞の活性化もしくは刺激、形質導入、培養、増大、洗浄、懸濁、希釈、濃縮、および/または製剤化のための工程などを含む処理を介して実行することができる。いくつかの態様では、細胞療法を作製または生成する方法は、対象から細胞を単離すること、調製すること、処理すること、1つまたは複数の刺激条件下で培養することを含む。いくつかの態様では、方法は、以下の順番で実施される処理工程を含む：第一に、細胞、例えば初代細胞を生物学的試料から単離、例えば選択または分離する；選択された細胞を形質導入用のベクター粒子と共にインキュベートし、任意で、刺激試薬の存在下で単離された細胞を刺激する工程が続く；形質導入した細胞を培養して、例えば細胞を増大させる；形質導入した細胞を組成物に製剤化し、組成物を提供される医用材料容器内に導入する。いくつかの態様では、作製された操作された細胞は、凍結保存の前または後に、同じ対象に再導入される。
いくつかの態様では、1つまたは複数の処理工程には、（a）細胞を含む生物学的試料（例えば、全血試料、バフィーコート試料、末梢血単核細胞（PBMC）試料、未分画T細胞試料、リンパ球試料、白血球試料、アフェレーシス産物、または白血球アフェレーシス産物）を洗浄する工程；（b）例えば、免疫親和性に基づく分離のための選択試薬または免疫親和性試薬と細胞とのインキュベーションによって、細胞の所望のサブセットまたは集団（例えば、CD4+および/またはCD8+T細胞）を試料から単離する工程、例えば、選択する工程；（c）細胞を刺激条件および/または刺激試薬に曝露することによって細胞を活性化および/または刺激する工程であって、該工程は、ウイルスベクター粒子と細胞とのインキュベーションの前に、その間におよび/またはその後に実施することができる；（d）単離した細胞、例えば選択した細胞などをウイルスベクター粒子と共にインキュベートする工程、例えば、細胞に形質導入する工程；（e）記載されたそのような方法を用いて細胞を培養する（culturing）、培養する（cultivating）、または増大させる工程；および（f）形質導入した細胞を、例えば、薬学的に許容される緩衝液、凍結保存剤または他の適した媒体で製剤化する工程の1つまたは複数が含まれ得る。いくつかの態様では、PBMC試料、未分画T細胞試料、リンパ球試料、白血球試料、アフェレーシス産物、または白血球アフェレーシス産物の細胞は、寒冷凍結され、次いで、細胞を単離、選択、インキュベート、形質導入、トランスフェクト、培養、増大、および/または製剤化するための任意の工程の前に解凍される。
いくつかの態様では、例えば、細胞の希釈、濃縮および/または緩衝液交換のための、洗浄する工程または懸濁する工程の1つまたは複数のさらなる工程もまた、上記工程のいずれかの前にまたは後に実施することができる。いくつかの局面では、得られる操作された細胞組成物は、1つまたは複数の提供される医用培養容器内に導入される。
いくつかの態様では、臨床用途での、例えば養子細胞療法における、細胞の調製における1つ、複数、または全ての工程は、細胞を非滅菌条件に曝露することなくおよび滅菌室または滅菌キャビネットを使用する必要なく実施される。そのようなプロセスのいくつかの態様では、細胞は、単離、分離または選択、形質導入、洗浄、任意で活性化または刺激、および製剤化され、全て閉鎖システムの中で行われる。そのようなプロセスのいくつかの局面において、細胞は、閉鎖システムから発現され、生体材料容器の1つまたは複数に導入される。いくつかの態様では、方法は自動化された方式で実施される。いくつかの態様では、工程の1つまたは複数は、閉鎖システムまたは閉鎖デバイスから離れて実施される。
いくつかの態様では、閉鎖システムは、細胞療法を製造、作製、または生成するための方法の他の処理工程の1つまたは複数を実施するために用いられる。いくつかの態様では、処理工程、例えば、単離、選択および/または濃縮、処理、形質導入および操作に関連するインキュベーション、ならびに製剤化の工程の1つまたは複数または全ては、統合システムもしくは自己完結型システム中のシステム、デバイス、または装置を用いて、および/または自動化されたもしくはプログラム可能な方式で、実施される。いくつかの局面では、システムまたは装置は、システムまたは装置に接続されたコンピュータおよび/またはコンピュータプログラムを含み、これにより、使用者が、処理、単離、操作および製剤化工程の様々な局面をプログラムする、制御する、そのアウトカムを評価する、および/または調整することが可能になる。1つの例では、システムは、国際特許出願公報第WO2009/072003号、またはUS 20110003380 A1に記載されているようなシステムである。1つの例では、システムは、国際公開公報第WO2016/073602号に記載されているようなシステムである。
いくつかの態様では、操作された細胞の調製は、1つまたは複数の培養および/または調製工程を含む。組み換え受容体、例えばCARを導入するための細胞は、生物学的試料などの試料、例えば対象から得られたまたは対象に由来するものから単離され得る。いくつかの態様では、細胞が単離される対象は、疾患もしくは状態を有するか、または細胞療法を必要とするか、または細胞療法が投与される対象である。いくつかの態様における対象は、細胞が単離、処理、および/または操作されている養子細胞療法などの特定の治療的介入を必要とするヒトである。
したがって、いくつかの態様における細胞は初代細胞、例えば初代ヒト細胞である。試料には、組織、体液、および対象から直接採取した他の試料、ならびに分離、遠心分離、遺伝子操作（例えばウイルスベクターによる形質導入）、洗浄、および/またはインキュベーションなどの1つまたは複数の処理工程から得られる試料が含まれる。生物学的試料は、生物学的供給源から直接得られた試料または処理された試料であり得る。生物学的試料には、血液、血漿、血清、脳脊髄液、滑液、尿および汗などの体液、組織および臓器に由来する処理された試料を含む組織および臓器試料が含まれるが、これらに限定されるわけではない。
いくつかの局面では、細胞が由来するまたは単離される試料は、血液もしくは血液由来の試料であるか、またはアフェレーシスもしくは白血球アフェレーシスの産物であるかもしくはそれに由来する。例示的な試料としては、全血、末梢血単核細胞（PBMC）、白血球、骨髄、胸腺、組織生検材料、腫瘍、白血病、リンパ腫、リンパ節、腸管関連リンパ組織、粘膜関連リンパ組織、脾臓、他のリンパ組織、肝臓、肺、胃、腸、結腸、腎臓、膵臓、乳房、骨、前立腺、子宮頸、精巣、卵巣、扁桃腺、または他の臓器、および/またはそれに由来する細胞が挙げられる。試料には、細胞療法、例えば養子細胞療法に関連して、自己由来および同種異系供給源由来の試料が含まれる。
いくつかの態様では、細胞は細胞株、例えばT細胞株に由来する。いくつかの態様における細胞は、異種供給源、例えばマウス、ラット、非ヒト霊長動物、またはブタから得られる。
いくつかの態様では、細胞の単離は、1つまたは複数の調製および/または非親和性ベースの細胞分離工程を含む。いくつかの例では、細胞は、例えば不要な成分を除去する、所望の成分を濃縮する、特定の試薬に感受性の細胞を溶解または除去するために、洗浄、遠心分離、および/または1つもしくは複数の試薬の存在下でインキュベートされる。いくつかの例では、細胞は、密度、付着特性、サイズ、感受性、および/または特定の成分に対する耐性などの1つまたは複数の特性に基づいて分離される。
いくつかの例では、対象の循環血液由来の細胞は、例えばアフェレーシスまたは白血球アフェレーシスによって得られる。試料は、いくつかの局面では、T細胞を含むリンパ球、単球、顆粒球、B細胞、他の有核白血球、赤血球、および/または血小板を含み、いくつかの局面では、赤血球および血小板以外の細胞を含む。
いくつかの態様では、対象から採集された血球を、例えば血漿画分を除去し、その後の処理工程のために細胞を適切な緩衝液または培地に入れるために洗浄する。いくつかの態様では、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）で細胞を洗浄する。いくつかの態様では、洗浄溶液は、カルシウムおよび/またはマグネシウムおよび/または多くのもしくはすべての二価カチオンを含まない。いくつかの局面では、洗浄工程は、製造業者の指示に従って半自動「フロースルー」遠心分離機（例えばCobe 2991細胞プロセッサ、Baxter）を用いて達成される。いくつかの局面では、洗浄工程は、遠心分離機のチャンバ、例えばA-200/FおよびA-200遠心分離機チャンバを含む、Sepax（登録商標）およびSepax（登録商標）2システムと共に使用するためのものを含む、BiosafeSAによって製造および販売されている遠心分離機チャンバの中で、製造業者の指示に従って行われる。いくつかの局面では、洗浄工程は、製造業者の指示に従って接線流ろ過（TFF）によって達成される。いくつかの態様では、細胞は、洗浄後に、例えばCa＋＋/Mg＋＋を含まないPBSなどの様々な生体適合性緩衝液に再懸濁される。特定の態様では、血球試料の成分を除去し、細胞を培地に直接再懸濁する。
いくつかの態様では、方法は、密度に基づく細胞分離方法、例えば赤血球を溶解することによる末梢血からの白血球の調製、およびパーコールまたはフィコール勾配による遠心分離を含む。
いくつかの態様では、単離方法は、表面マーカー、例えば表面タンパク質、細胞内マーカー、または核酸などの1つまたは複数の特定の分子の細胞における発現または存在に基づく種々の細胞型の分離を含む。いくつかの態様では、そのようなマーカーに基づく分離のための任意の公知の方法を使用し得る。いくつかの態様では、分離は、親和性または免疫親和性に基づく分離である。例えば、いくつかの局面における単離は、1つまたは複数のマーカー、典型的には細胞表面マーカーの細胞での発現または発現レベルに基づく細胞および細胞集団の分離、例えばそのようなマーカーに特異的に結合する抗体または結合パートナーとのインキュベーション、続いて通常は、洗浄工程および抗体または結合パートナーに結合していない細胞からの抗体または結合パートナーに結合した細胞の分離によるものを含む。
そのような分離工程は、試薬に結合した細胞をさらなる使用のために保持する陽性選択、および/または抗体もしくは結合パートナーに結合しなかった細胞を保持する陰性選択に基づき得る。いくつかの例では、両方の画分をさらなる使用のために保持する。いくつかの局面では、陰性選択は、分離が、所望の集団以外の細胞によって発現されるマーカーに基づいて最も良好に行われるように、異種集団において細胞型を特異的に同定する抗体が利用可能でない場合に特に有用であり得る。
分離は、特定の細胞集団または特定のマーカーを発現する細胞の100％の濃縮または除去をもたらす必要はない。例えば、マーカーを発現する細胞などの特定の種類の細胞の陽性選択または濃縮は、そのような細胞の数または割合を増加させることを指すが、マーカーを発現しない細胞の完全な非存在をもたらす必要はない。同様に、マーカーを発現する細胞などの特定の種類の細胞の陰性選択、除去、または枯渇は、そのような細胞の数または割合を減少させることを指すが、そのような細胞すべての完全な除去をもたらす必要はない。
いくつかの例では、1回の工程から陽性または陰性選択された画分が、その後の陽性または陰性選択などの別の分離工程に供される、複数回の分離工程が行われる。いくつかの例では、それぞれが陰性選択の標的となるマーカーに特異的な複数の抗体または結合パートナーと共に細胞をインキュベートすることなどによって、複数のマーカーを同時に発現する細胞を単一の分離工程で枯渇させることができる。同様に、様々な細胞型上に発現された複数の抗体または結合パートナーと共に細胞をインキュベートすることによって、複数の細胞型を同時に陽性選択することができる。
例えば、いくつかの局面では、T細胞の特定の亜集団、例えば陽性または高レベルの1つまたは複数の表面マーカー、例えばCD28＋、CD62L＋、CCR7＋、CD27＋、CD127＋、CD4＋、CD8＋、CD45RA＋、および/またはCD45RO＋T細胞を発現する細胞は、陽性または陰性選択技術によって単離される。
例えばCD3＋、CD28＋T細胞は、CD3/CD28結合磁気ビーズ（例えばDYNABEADS（登録商標）M-450 CD3/CD28T Cell Expander）を用いて陽性選択することができる。
いくつかの態様では、単離は、陽性選択による特定の細胞集団の濃縮、または陰性選択による特定の細胞集団の枯渇によって行われる。いくつかの態様では、陽性または陰性選択は、それぞれ陽性または陰性選択された細胞上に発現される（マーカー＋）または比較的高いレベルで発現される（マーカー高）1つまたは複数の表面マーカーに特異的に結合する1つまたは複数の抗体または他の結合剤と共に細胞をインキュベートすることによって達成される。
いくつかの態様では、T細胞は、B細胞、単球、またはCD14などの他の白血球のような非T細胞上に発現されるマーカーの陰性選択によってPBMC試料から分離される。いくつかの局面では、CD4＋またはCD8＋選択工程を用いてCD4＋ヘルパーT細胞とCD8＋細胞傷害性T細胞を分離する。そのようなCD4＋およびCD8＋集団は、1つまたは複数のナイーブT細胞、メモリーT細胞、および/またはエフェクターT細胞亜集団上に発現されるまたは比較的高い程度に発現されるマーカーについての陽性または陰性選択によって、さらに亜集団に分類することができる。
いくつかの態様では、CD8＋細胞は、それぞれの亜集団に関連する表面抗原に基づく陽性選択または陰性選択などによって、ナイーブ、セントラルメモリー、エフェクターメモリー、および/またはセントラルメモリー幹細胞がさらに濃縮または枯渇される。いくつかの態様では、セントラルメモリーT（TCM）細胞の濃縮は、いくつかの局面ではそのような亜集団において特に堅固である、投与後の長期生存、増殖、および/または生着を改善するためなどの有効性を高めるために行われる。Terakura et al., （2012）Blood.1:72-82；Wang et al., （2012）J Immunother.35（9）:689-701参照。いくつかの態様では、TCMに富むCD8＋T細胞とCD4＋T細胞とを組み合わせることは、有効性をさらに増強する。
態様では、メモリーT細胞は、CD8＋末梢血リンパ球のCD62L＋およびCD62L-サブセットの両方に存在する。PBMCは、例えば抗CD8抗体および抗CD62L抗体を使用して、CD62L-CD8＋および/またはCD62L＋CD8＋画分を濃縮または枯渇させることができる。
いくつかの態様では、セントラルメモリーT（TCM）細胞の濃縮は、CD45RO、CD62L、CCR7、CD28、CD3、および/またはCD127の陽性または高表面発現に基づく；いくつかの局面では、それは、CD45RAおよび/またはグランザイムBを発現するかまたは高発現する細胞についての陰性選択に基づく。いくつかの局面では、TCM細胞が濃縮されたCD8＋集団の単離は、CD4、CD14、CD45RAを発現する細胞の枯渇、およびCD62Lを発現する細胞の陽性選択または濃縮によって行われる。一局面では、セントラルメモリーT（TCM）細胞の濃縮は、CD4発現に基づいて選択された細胞の陰性画分から出発して、これをCD14およびCD45RAの発現に基づく陰性選択、ならびにCD62Lの発現に基づく陽性選択に供して行われる。いくつかの局面ではそのような選択は同時に行われ、他の局面では連続的にどちらの順序でも行われる。いくつかの局面では、CD8＋細胞集団または亜集団を調製するのに使用されるのと同じCD4発現に基づく選択工程が、任意で1つまたは複数のさらなる陽性または陰性選択工程後に、CD4に基づく分離からの陽性および陰性画分の両方が保持され、方法のその後の工程で使用されるように、CD4＋細胞集団または亜集団を生成するためにも用いられる。
特定の例では、PBMCの試料または他の白血球試料を、陰性画分と陽性画分の両方が保持されるCD4＋細胞の選択に供する。次いで、陰性画分を、CD14およびCD45RAまたはROR1の発現に基づく陰性選択、ならびにCD62LまたはCCR7などのセントラルメモリーT細胞に特徴的なマーカーに基づく陽性選択に供し、ここで陽性選択と陰性選択はどちらの順序でも行われる。
CD4＋Tヘルパー細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を同定することによって、ナイーブ細胞、セントラルメモリー細胞、およびエフェクター細胞に分類される。CD4＋リンパ球は標準的な方法によって得ることができる。いくつかの態様では、ナイーブCD4＋Tリンパ球は、CD45RO-、CD45RA＋、CD62L＋、CD4＋T細胞である。いくつかの態様では、セントラルメモリーCD4＋細胞はCD62L＋およびCD45RO＋である。いくつかの態様では、エフェクターCD4＋細胞はCD62L-およびCD45RO-である。
一例では、陰性選択によってCD4＋細胞を濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的にはCD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR、およびCD8に対する抗体を含む。いくつかの態様では、抗体または結合パートナーは、陽性および/または陰性選択のための細胞の分離を可能にする、磁気ビーズまたは常磁性ビーズなどの固体支持体またはマトリックスに結合される。例えば、いくつかの態様では、細胞および細胞集団は、免疫磁気（または親和性磁気）分離技術（Methods in Molecular Medicine,vol.58:Metastasis Research Protocols,Vol.2:Cell Behavior In vitro and In vivo,p 17-25 Edited by:S.A.Brooks and U.Schumacher（著作権）Humana Press Inc.,Totowa,NJに総説されている）を用いて分離または単離される。
いくつかの局面では、2つ以上の選択工程が連続的に実施されてもよい。例えば、分離されるべき細胞の試料または組成物は、CD8+細胞の選択に供され、ここで、陰性および陽性画分の両方が保持される。CD8陰性画分は、CD4+細胞の選択にさらに供されてもよい。いくつかの局面では、分離されるべき細胞の試料または組成物は、CD4+細胞の選択に供され、ここで、陰性および陽性画分の両方が保持され、CD4陰性画分はCD8+細胞の選択に供されてもよい。細胞選択のための例示的な方法は、その全体が参照により組み入れられる、国際特許出願公報第WO2015157384号および/または第WO 2015/164675号に記載され、それらの全部または一部は、本明細書に記載の方法と関連して用いることができる。
いくつかの局面では、分離される細胞の試料または組成物は、小型の磁化可能または磁気応答性材料、例えば磁気応答性粒子または微粒子、例えば常磁性ビーズ（例えばDynalbeadsまたはMACSビーズなど）と共にインキュベートされる。磁気応答性材料、例えば粒子は通常、分離することを所望する、例えば陰性または陽性選択することを所望する1つまたは複数の細胞、または細胞集団上に存在する分子、例えば表面マーカーに特異的に結合する結合パートナー、例えば抗体に直接または間接的に結合される。
いくつかの態様では、磁性粒子またはビーズは、抗体または他の結合パートナーなどの特異的結合成員に結合した磁気応答性材料を含む。磁気分離方法に使用される多くの周知の磁気応答性材料がある。適切な磁性粒子としては、参照により本明細書に組み入れられる、Moldayの米国特許第4,452,773号、および欧州特許第452342B号に記載されているものが挙げられる。Owenの米国特許第4,795,698号およびLibertiらの米国特許第5,200,084号に記載されているもののようなコロイドサイズの粒子が他の例である。
インキュベーションは通常、抗体もしくは結合パートナー、または磁性粒子もしくはビーズに付着している、そのような抗体もしくは結合パートナーに特異的に結合する二次抗体もしくは他の試薬などの分子が、試料中の細胞上に存在する場合は細胞表面分子に特異的に結合する条件下で行われる。
いくつかの局面では、試料を磁場中に置き、磁気応答性粒子または磁化可能粒子が付着している細胞を磁石に引きつけ、非標識細胞から分離する。陽性選択の場合は、磁石に引き寄せられる細胞が保持される；陰性選択の場合は、引き寄せられない細胞（非標識細胞）が保持される。いくつかの局面では、陽性選択と陰性選択の組み合わせは同じ選択工程の間に行われ、この場合は陽性画分と陰性画分が保持され、さらに処理されるかまたはさらなる分離工程に供される。
特定の態様では、磁気応答性粒子は、一次抗体または他の結合パートナー、二次抗体、レクチン、酵素、またはストレプトアビジンで被覆されている。特定の態様では、磁性粒子は、1つまたは複数のマーカーに特異的な一次抗体のコーティングを介して細胞に付着している。特定の態様では、ビーズではなく細胞を一次抗体または結合パートナーで標識し、次いで細胞型特異的二次抗体または他の結合パートナー（例えばストレプトアビジン）で被覆した磁性粒子を添加する。特定の態様では、ストレプトアビジン被覆磁性粒子を、ビオチン化一次抗体または二次抗体と組み合わせて使用する。
いくつかの態様では、磁気応答性粒子は、その後インキュベート、培養および/または操作されることになる細胞に付着したままである；いくつかの局面では、粒子は患者への投与のための細胞に付着したままである。いくつかの態様では、磁化可能粒子または磁気応答性粒子は細胞から除去される。細胞から磁化可能粒子を除去する方法は公知であり、例えば競合する非標識抗体、および磁化可能粒子または切断可能なリンカーに結合した抗体の使用を含む。いくつかの態様では、磁化可能粒子は生分解性である。
いくつかの態様では、親和性に基づく選択は、磁気活性化細胞選別（MACS）（Miltenyi Biotec,Auburn,CA）による。磁気活性化細胞選別（MACS）システムは、磁化された粒子が付着した細胞の高純度の選択が可能である。特定の態様では、MACSは、外部磁場の印加後に非標的種と標的種が連続的に溶出されるモードで動作する。すなわち、磁化粒子に付着した細胞は、付着していない種が溶出されている間、適所に保持される。次に、この最初の溶出工程が完了した後、磁場に捕捉されて溶出が妨げられていた種は、それらが溶出され、回収され得るように何らかの方法で解放される。特定の態様では、非標的細胞は標識され、細胞の不均一な集団から除去される。
特定の態様では、単離または分離は、本発明の方法の単離、細胞調製、分離、処理、インキュベーション、培養、および/または製剤化工程のうちの1つまたは複数を実行するシステム、機器、または装置を用いて実施される。いくつかの局面では、システムは、例えばエラー、使用者の取り扱い、および/または汚染を最小限に抑えるために、これらの工程のそれぞれを閉鎖環境または無菌環境で実行するために使用される。一例では、システムは、国際特許出願公報第2009/072003号、またはUS20110003380A1号に記載されているシステムである。いくつかの局面では、アフェレーシスもしくは白血球アフェレーシス産物、またはそれらに由来する試料が処理され、および/または単離または選択は、その内容が参照によりその全体が組み入れられる国際特許出願公報第WO2016/073602号またはUS 2016/0122782に記載されるようなシステム、デバイス、装置、および/または方法を用いて実行される。いくつかの態様では、単離または分離は、その内容が参照によりその全体が組み入れられる、国際特許出願公報第WO 2015/164675号に記載される方法により実行される。
いくつかの態様では、システムまたは装置は、統合システムもしくは自己完結型システムで、および/または自動化されたもしくはプログラム可能な方式で、単離、処理、操作、および製剤化工程のうちの1つまたは複数、例えば全部を実行する。いくつかの局面では、システムまたは装置は、システムまたは装置に接続されたコンピュータおよび/またはコンピュータプログラムを含み、これにより、使用者が処理、単離、操作および製剤化工程をプログラムする、制御する、そのアウトカムを評価する、および/またはその様々な局面を調整することが可能になる。
いくつかの局面では、分離および/または他の工程は、例えば閉鎖系および無菌系における臨床規模レベルでの細胞の自動分離のために、CliniMACSシステム（Miltenyi Biotic）を用いて行われる。構成要素には、統合マイクロコンピュータ、磁気分離ユニット、蠕動ポンプ、および様々なピンチバルブが含まれ得る。統合コンピュータは、いくつかの局面では、機器のすべての構成要素を制御し、標準化された順序で反復手順を実行するようにシステムに指示する。いくつかの局面における磁気分離ユニットは、可動永久磁石と選択カラム用のホルダとを含む。蠕動ポンプはチューブセット全体の流速を制御し、ピンチバルブと共に、システムを通る緩衝液の制御された流れおよび細胞の継続的な懸濁を確実にする。
いくつかの局面におけるCliniMACSシステムは、滅菌非発熱性溶液中で供給される抗体結合磁化可能粒子を使用する。いくつかの態様では、細胞を磁性粒子で標識した後、細胞を洗浄して過剰の粒子を除去する。続いて細胞調製バッグをチューブセットに接続し、次に緩衝剤を含むバッグおよび細胞収集バッグにチューブセットを接続する。チューブセットは、プレカラムと分離カラムを含むあらかじめ組み立てられた滅菌チューブからなり、使い捨て専用である。分離プログラムの開始後、システムは自動的に細胞試料を分離カラムに適用する。標識細胞はカラム内に保持され、非標識細胞は一連の洗浄工程によって除去される。いくつかの態様では、本明細書に記載の方法で使用するための細胞集団は標識されておらず、カラム内に保持されない。いくつかの態様では、本明細書に記載の方法で使用するための細胞集団は標識されており、カラム内に保持される。いくつかの態様では、本明細書に記載の方法で使用するための細胞集団は、磁場の除去後にカラムから溶出され、細胞収集バッグ内に収集される。
特定の態様では、分離および/または他の工程は、CliniMACS Prodigyシステム（Miltenyi Biotec）を使用して行われる。いくつかの局面におけるCliniMACS Prodigyシステムは、遠心分離による細胞の自動洗浄および分画を可能にする細胞処理ユニットを備える。CliniMACS Prodigyシステムはまた、ソース細胞産物の巨視的層を識別することによって最適な細胞分画エンドポイントを決定する搭載カメラおよび画像認識ソフトウェアを含み得る。例えば、末梢血は、自動的に赤血球、白血球、および血漿層に分離され得る。CliniMACS Prodigyシステムはまた、例えば細胞分化および増殖、抗原負荷、ならびに長期細胞培養などの細胞培養プロトコルを達成する統合細胞培養チャンバを含み得る。入力ポートは培地の無菌除去および補充を可能にし、細胞は統合顕微鏡を使用してモニタリングすることができる。例えばKlebanoff et al., （2012）J Immunother.35（9）:651-660,Terakura et al., （2012）Blood.1:72-82およびWang et al., （2012）J Immunother.35（9）:689-701参照。
いくつかの態様では、本明細書に記載の細胞集団はフローサイトメトリーによって収集および濃縮（または枯渇）され、フローサイトメトリーでは、複数の細胞表面マーカーについて染色された細胞が流体流中で運ばれる。いくつかの態様では、本明細書に記載の細胞集団は、分取規模（FACS）選別によって収集および濃縮（または枯渇）される。特定の態様では、本明細書に記載の細胞集団は、FACSに基づく検出システムと組み合わせた微小電気機械システム（MEMS）チップの使用によって収集および濃縮（または枯渇）される（例えばWO2010/033140号、Cho et al., （2010）Lab Chip 10,1567-1573；およびGodin et al., （2008）J Biophoton.1（5）:355-376参照）。どちらの場合も、細胞を複数のマーカーで標識して、明確に定義されたT細胞サブセットを高純度で単離することができる。
いくつかの態様では、抗体または結合パートナーは、陽性選択および/または陰性選択のための分離を容易にするために、1つまたは複数の検出可能なマーカーで標識される。例えば、分離は蛍光標識抗体への結合に基づき得る。いくつかの例では、1つまたは複数の細胞表面マーカーに特異的な抗体または他の結合パートナーの結合に基づく細胞の分離は、例えばフローサイトメトリー検出システムと組み合わせた、分取規模（FACS）および/または微小電気機械システム（MEMS）チップを含む蛍光活性化細胞選別（FACS）などによって流体流中で行われる。そのような方法は、同時に複数のマーカーに基づく陽性選択および陰性選択を可能にする。
いくつかの態様では、調製方法は、単離、インキュベーション、および/または操作の前または後のいずれかに、細胞を凍結する、例えば凍結保存する工程を含む。いくつかの態様では、凍結およびその後の解凍工程は、細胞集団中の顆粒球および、ある程度まで、単球を除去する。いくつかの態様では、細胞は、例えば血漿および血小板を除去するための洗浄工程の後に、凍結溶液中に懸濁される。いくつかの局面では様々な公知の凍結溶液およびパラメータのいずれを使用してもよい。一例は、20％DMSOおよび8％ヒト血清アルブミン（HSA）を含有するPBS、または他の適切な細胞凍結培地を使用することを含む。次にこれを培地で1:1に希釈して、DMSOおよびHSAの最終濃度がそれぞれ10％および4％になるようにする。いくつかの態様では、細胞は、本明細書に記載される、任意の方法によって、ならびに/または任意の試薬、容器、凍結溶液、および/もしくは凍結保護剤と共に凍結される。いくつかの態様では、細胞は次いで、毎分1°または約1°の速度で-80℃に凍結され、液体窒素貯蔵タンクの気相中で保存される。
いくつかの態様では、提供される方法には、培養（cultivation）、インキュベーション、培養（culture）、および/または遺伝子操作工程が含まれる。例えば、いくつかの態様では、枯渇細胞集団および培養開始組成物をインキュベートするおよび/または操作するための方法が提供される。
したがって、いくつかの態様では、細胞集団は培養開始組成物中でインキュベートされる。インキュベーションおよび/または操作は、ユニット、チャンバ、ウェル、カラム、チューブ、チューブセット、バルブ、バイアル、培養皿、バッグ、または培養または細胞を培養するための他の容器などの培養容器中で実行されてもよい。
いくつかの態様では、細胞は、遺伝子操作の前にまたはそれに関連してインキュベートおよび/または培養される。インキュベーション工程は、培養（culture）、培養（cultivation）、刺激、活性化、および/または繁殖を含むことができる。いくつかの態様では、組成物または細胞は、刺激条件または刺激物質の存在下でインキュベートされる。そのような条件には、集団中の細胞の増殖、増大、活性化、および/もしくは生存を誘導する、抗原曝露を模倣する、ならびに/または組換え抗原受容体の導入などの遺伝子操作のために細胞をプライミングするように設計されたものが含まれる。
条件は、特定の培地、温度、酸素含量、二酸化炭素含量、時間、作用物質、例えば栄養素、アミノ酸、抗生物質、イオン、および/または刺激因子、例えばサイトカイン、ケモカイン、抗原、結合パートナー、融合タンパク質、組換え可溶性受容体、および細胞を活性化するように設計された任意の他の作用物質などの1つまたは複数を含むことができる。いくつかの局面では、細胞は1つまたは複数のサイトカインの存在下でインキュベートされ、いくつかの態様では、サイトカインカクテルは、例えば、国際特許出願公報第WO2015157384号に記載されているようなものを利用することができる。いくつかの態様では、細胞は、形質導入の前に、それと同時に、またはそれの後に、1つまたは複数のサイトカインおよび/またはサイトカインカクテルと共にインキュベートされる。
いくつかの態様では、刺激条件または刺激物質は、TCR複合体の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる、1つまたは複数の作用物質、例えばリガンドを含む。いくつかの局面では、作用物質は、T細胞におけるTCR/CD3細胞内シグナル伝達カスケードを作動または開始させる。そのような作用物質には、TCRに特異的なものなどの抗体、例えば抗CD3が含まれ得る。いくつかの態様では、刺激条件は、共刺激受容体、例えば抗CD28を刺激することができる、1つまたは複数の作用物質、例えばリガンドを含む。いくつかの態様では、そのような作用物質および/またはリガンドは、ビーズなどの固体支持体および/または1つもしくは複数のサイトカインに結合してもよい。例示的な刺激試薬は本明細書において、例えば第V-D-1章などに記載される。任意で、増大方法は、抗CD3抗体および/または抗CD28抗体を培養培地に（例えば、少なくとも約0.5 ng/mLの濃度で）添加する工程をさらに含んでもよい。いくつかの態様では、刺激物質は、IL-2、IL-15、および/またはIL-7を含む。いくつかの局面では、IL-2濃度は、少なくとも約10単位/mLである。いくつかの態様では、刺激物質は、例えば、10単位/mL、20単位/mL、50単位/mL、100単位/mL、250単位/mL、500単位/mL、600単位/mL、700単位/mL、800単位/mL、900単位/mL、もしくは1,000単位/mL、少なくともそれらの値、または概ねそれらの値の濃度での、IL-2、IL-7、および/またはIL-15を含む。
いくつかの局面では、インキュベーションは、Riddellらに対する米国特許第6,040,1 77号、Klebanoff et al.(2012) J Immunother. 35(9): 651-660、Terakuraet al. (2012) Blood. 1:72-82、および/またはWang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701に記載されているような技術にしたがって行われる。いくつかの局面では、インキュベーションは、その内容が参照によりその全体が組み入れられる国際特許出願公報第WO2016/073602号またはUS 2016/0122782に記載されているようなシステム、デバイス、装置、および/または方法を用いて行われる。いくつかの態様では、インキュベーションおよび/または培養は、その内容が参照によりその全体が組み入れられる、国際特許出願公報第WO 2015/164675号に記載される方法にしたがって行われる。いくつかの態様では、遠心分離チャンバにおいて実施されるインキュベーションの少なくとも一部は、試薬と混合して刺激および/または活性化を誘導することを含む。いくつかの態様では、選択細胞などの細胞は、遠心分離チャンバにおいて刺激条件または刺激物質と混合される。そのような工程のいくつかの局面では、ある体積の細胞は、細胞培養プレートまたは他のシステムにおいて類似の刺激を行うときに通常利用されるものよりはるかに少ない量の1つまたは複数の刺激条件または刺激物質と混合される。
いくつかの態様では、刺激物質は、遠心分離チャンバ、例えばチューブまたはバッグ中での周期的な振とうまたは回転による混合なしに選択を行うときに同じ数の細胞または同じ体積の細胞のほぼ同じまたは同様の選択効率を達成するのに典型的に用いられるまたはそれを達成するのに必要とされる刺激物質の量と比較して、実質的にそれを下回る（例えば、該量の5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、または80％以下である）量でチャンバのキャビティ内で細胞に添加される。いくつかの態様では、インキュベーションは、例えば、10 mL〜200 mL、例えば少なくとも10 mL、20 mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL、70 mL、80 mL、90 mL、100 mL、150 mL、もしくは200 mL、または概ね少なくともそれらの値、または概ねそれらの値、またはそれらの値などの、試薬のインキュベーションでの標的体積を達成するように、細胞および刺激物質にインキュベーション緩衝液を添加することによって実施される。いくつかの態様では、インキュベーション緩衝液および刺激物質は、細胞への添加の前に予め混合される。いくつかの態様では、インキュベーション緩衝液および刺激物質は、細胞に別々に添加される。いくつかの態様では、刺激インキュベーションは、エネルギー的に有利な相互作用を促進することを助け、それによって細胞の刺激および活性化を達成しながら全刺激物質のより少ない使用を可能にすることができる、周期的な緩やかな混合条件によって行われる。
いくつかの態様では、インキュベーションは概して、混合条件下で、例えば旋回の存在下などで、概して比較的低い力または速度、例えば600 rpm〜1700 rpmまたは約600 rpm〜1700 rpm（例えば、600 rpm、1000 rpm、もしくは1500 rpm、もしくは1700 rpm、または概ねそれらの値、または少なくともそれらの値）などの細胞をペレット化するのに用いられるものより低い速度で、例えば80 g〜100 gまたは約80 g〜100 g（例えば、80 g、85 g、90 g、95 g、もしくは100 g、または概ねそれらの値、または少なくともそれらの値）の試料またはチャンバもしくは他の容器の壁でのRCFで、行われる。いくつかの態様では、旋回は、そのような低速度での旋回と、その後に続く静止期間の間隔の繰り返し、例えば1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10秒間の旋回および/または静止など、例えばおよそ1または2秒間の旋回、その後およそ5、6、7、または8秒間の静止などを用いて行われる。
いくつかの態様では、インキュベーション、例えば刺激物質を伴うインキュベーション、の全期間は、それぞれ両端の値を含む、1時間から96時間、1時間から72時間、1時間から48時間、4時間から36時間、8時間から30時間、もしくは12時間から24時間の間、または約1時間から約96時間、約1時間から約72時間、約1時間から約48時間、約4時間から約36時間、約8時間から約30時間、もしくは約12時間から約24時間の間、例えば少なくとも6時間、12時間、18時間、24時間、36時間、もしくは72時間、または概ね少なくともそれらの時間などである。いくつかの態様では、さらなるインキュベーションは、それぞれ両端の値を含む、1時間から48時間、4時間から36時間、8時間から30時間、もしくは12時間から24時間の間、または約1時間から約48時間、約4時間から約36時間、約8時間から約30時間、もしくは約12時間から約24時間の間の時間である。
いくつかの態様では、処理する工程には、組換えタンパク質をコードする核酸分子の導入が含まれる。そのような組換えタンパク質の中には、第V章で記載するいずれかなどの組換え受容体が含まれる。組換え受容体などの組換えタンパク質をコードする核酸分子の細胞への導入は、いくつかの公知のベクターのいずれかを用いて行われてもよい。そのようなベクターには、レンチウイルスおよびガンマレトロウイルスシステムを含む、ウイルスおよび非ウイルスシステム、ならびにPiggyBacまたはSleeping Beautyベースの遺伝子導入システムなどのトランスポゾンベースのシステムが含まれる。例示的な方法としては、ウイルス、例えばレトロウイルスまたはレンチウイルス、形質導入、トランスポゾン、およびエレクトロポレーションを介することを含む、受容体をコードする核酸の移入のためのものが挙げられる。
いくつかの態様では、遺伝子導入は、例えば、サイトカインまたは活性化マーカーの発現によって測定されるように、増殖、生存、および/または活性化などの応答を誘導する刺激と組み合わせることなどによって、最初に細胞を刺激し、続いて活性化した細胞を形質導入し、培養中で臨床適用に十分な数まで増大させることによって達成される。
いくつかの態様では、組換え核酸は、組換え感染性ウイルス粒子、例えば、シミアンウイルス40（SV40）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（AAV）、およびヒト免疫不全ウイルス(HIV)に由来するベクターなどを使用して細胞に移入される。いくつかの態様では、組換え核酸が、組換えのレンチウイルスベクターまたはレトロウイルスベクター、例えばガンマ-レトロウイルスベクターなどを使用してT細胞に移入される。
ウイルス形質導入、例えば、レンチウイルス形質導入の方法は公知である。例示的な方法は、例えば、Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; Cooper et al. (2003) Blood. 101:1637-1644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114;およびCavalieri et al.(2003) Blood. 102(2): 497-505に記載される。
いくつかの態様では、導入は、組成物の1つまたは複数の細胞を、組換えタンパク質、例えば組換え受容体をコードする核酸分子と接触させることによって行われる。いくつかの態様では、接触は、スピノキュレーション（spinoculation）（例えば、遠心による接種）など遠心によって生じさせることができる。そのような方法には、国際公開公報第WO2016/073602号に記載されるようなもののいずれかが含まれる。例示的な遠心分離チャンバには、Biosafe SAによって製造および販売されているものが含まれ、A-200/FおよびA-200遠心分離チャンバならびにそのようなシステムによる使用のための種々のキットを含む、Sepax(登録商標)およびSepax(登録商標)2システムによる使用のためのものが含まれる。例示的なチャンバ、システム、ならびに処理用の器具類およびキャビネットは、例えば、それらのそれぞれの内容が参照によりその全体が本明細書に組み入れられる、米国特許第6,123,655号、米国特許第6,733,433号、および公開された米国特許出願公開第US 2008/0171951号、および公開された国際特許出願公開第WO 00/38762号に記載される。そのようなシステムによる使用のための例示的なキットとしては、これらに限定されないが、製品名CS-430.1、CS-490.1、CS-600.1、またはCS-900.2でBioSafe SAによって販売されている使い捨てキットが挙げられる。
いくつかの態様では、システムは、システムにおいて実施される形質導入工程および1つまたは複数の種々の他の処理工程、例えば、本明細書または国際公開公報第WO2016/073602号において記載されているような遠心分離チャンバシステムによってにまたはそれに接続して行うことができる1つまたは複数の処理工程などの局面を操作する、自動化する、制御する、および/またはモニタリングするための器具類を含む、他の器具類との集合体（association）に含まれるおよび/または該集合体内に配置される。この器具類は、いくつかの態様では、キャビネット内に含まれる。いくつかの態様では、器具類には、制御回路、遠心機、カバー、モーター、ポンプ、センサー、ディスプレイ、およびユーザー・インターフェースを含む収納容器を含む、キャビネットが含まれる。例示的なデバイスは、米国特許第6,123,655号、米国特許第6,733,433号、およびUS 2008/0171951に記載される。
いくつかの態様では、システムは、一連の容器、例えば、バッグ、チューブ、二方コック、クランプ、コネクタ、および遠心分離チャンバを含む。いくつかの態様では、容器、例えばバックなどは、同じ容器または別々の容器、例えば同じバッグまたは別々のバッグ中に、形質導入させる細胞およびウイルスベクター粒子を含む1つまたは複数の容器、例えばバッグなどを含む。いくつかの態様では、システムは、チャンバおよび/または他の構成要素の中に引き入れられ、方法時に構成要素および/または組成物を希釈する、再懸濁する、および/または洗浄する、媒体、例えば希釈剤および/または洗浄溶液などを含む1つまたは複数の容器、例えばバッグなどをさらに含む。容器は、システム中の1つまたは複数の位置に、例えば、入力ライン、希釈ライン、洗浄ライン、廃棄ライン、および/または出力ラインに対応する位置などに接続することができる。
いくつかの態様では、チャンバは、例えばその回転軸を中心として、チャンバの回転をもたらすことができる、遠心機と連結される。回転は、細胞の形質導入と関連するインキュベーションの前に、その間に、および/もしくはその後に、ならびに/または他の処理工程の1つまたは複数において行われてもよい。よって、いくつかの態様では、種々の処理工程の1つまたは複数は、回転下で、例えば特定の力で行われる。チャンバは典型的には、チャンバが遠心時に垂直に位置しかつ側壁および軸が垂直または概ね垂直であり、端壁が水平または概ね水平であるような、垂直なまたは概ね垂直な回転が可能である。
いくつかの態様では、細胞、ウイルス粒子、および試薬を含む組成物は、概して比較的低い力または速度、例えば600 rpm〜1700 rpmまたは約600 rpm〜約1700 rpm（例えば、600 rpm、1000 rpm、もしくは1500 rpm、もしくは1700 rpm、または概ねそれらの値、または少なくともそれらの値）などの細胞をペレット化するのに用いられるものより低い速度で回転され得る。いくつかの態様では、回転は、例えばチャンバまたはキャビティの内壁または外壁にて測定される、100 g〜3200 gまたは約100 g〜約3200 g（例えば、100 g、200 g、300 g、400 g、500 g、1000 g、1500 g、2000 g、2500 g、3000 g、もしくは3200 g、または概ねこれらの値、または少なくともこれらの値、または概ねこれらの値）の力、例えば相対遠心力で行われる。「相対遠心力」またはRCFという用語は概して、回転の軸と比較して空間における特定の位置で、地球の重力を基準として、物体または物質（細胞、試料、もしくはペレット、および/または回転させるチャンバもしくは他の容器における特定の位置など）に与えられる有効な力であると理解される。値は、重力、回転速度、および回転の半径（回転軸からRCFが測定される物体、物質、または粒子の距離）を考慮して、周知の式を用いて決定され得る。
いくつかの態様では、遺伝子操作の少なくとも一部、例えば形質導入の間に、および/または遺伝子操作の後に、細胞は、上述のように、細胞の培養または増大などのために、容器、例えば遺伝子操作細胞の培養用のバッグなどに移入される。いくつかの態様では、細胞の培養または増大のための容器は、バイオリアクターバッグ、例えば灌流バッグなどである。
いくつかの態様では、提供される方法は、操作された細胞を培養するための1つまたは複数の工程、例えば、増殖および/または増大を促進する条件化で細胞を培養する工程を含む。いくつかの態様では、操作された細胞は、遺伝子操作する工程、例えば形質導入またはトランスフェクションによって組換えポリペプチドを細胞に導入する工程の後に、増殖および/または増大を促進する条件化で培養される。特定の態様では、細胞は、刺激条件下でインキュベートされ、かつ組換えポリヌクレオチド、例えば組換え受容体をコードするポリヌクレオチドで形質導入またはトランスフェクトされた後に、培養される。いくつかの態様では、培養は、濃縮されたT細胞の1つまたは複数の培養組成物を生成する。
いくつかの局面では、培養培地は、T細胞などの細胞の成長、培養、増大、または増殖を支持する適応培養培地である。いくつかの局面では、培地は、塩類、アミノ酸、ビタミン、糖類、またはそれらの任意の組み合わせの混合物を含む液体であり得る。いくつかの態様では、培養培地は、例えばインキュベーション時に細胞の培養、増大、または増殖を刺激する、1つまたは複数の刺激条件または作用物質をさらに含有する。いくつかの態様では、刺激条件は、IL-2、IL-7、またはIL-15から選択される1つまたは複数のサイトカインであるか、またはそれらを含む。いくつかの態様では、サイトカインは組換えサイトカインである。いくつかの態様では、培養またはインキュベーション時の培養培地中の1つまたは複数のサイトカインの濃度は、独立して、1 IU/mL〜1500 IU/mLまたは約1 IU/mL〜約1500 IU/mL、例えば、1 IU/mL〜100 IU/mL、2 IU/mL〜50 IU/mL、5 IU/mL〜10 IU/mL、10 IU/mL〜500 IU/mL、50 IU/mL〜250 IU/mL、もしくは100 IU/mL〜200 IU/mL、50 IU/mL〜1500 IU/mL、100 IU/mL〜1000 IU/mL、もしくは200 IU/mL〜600 IU/mL、または約1 IU/mL〜約100 IU/mL、約2 IU/mL〜約50 IU/mL、約5 IU/mL〜約10 IU/mL、約10 IU/mL〜約500 IU/mL、約50 IU/mL〜約250 IU/mL、もしくは約100 IU/mL〜約200 IU/mL、約50 IU/mL〜約1500 IU/mL、約100 IU/mL〜約1000 IU/mL、もしくは約200 IU/mL〜約600 IU/mLである。いくつかの態様では、1つまたは複数のサイトカインの濃度は、独立して、少なくとも1 IU/mL、5 IU/mL、10 IU/mL、50 IU/mL、100 IU/mL、200 IU/mL、500 IU/mL、1000 IU/mL、もしくは1500 IU/mLまたは少なくとも概ねこれらの値である。
いくつかの局面では、細胞は、操作された細胞および培養培地の移入後の時間の少なくとも一部の間インキュベートされる。いくつかの態様では、刺激条件には概して、ヒトTリンパ球などの初代免疫細胞の成長に適した温度、例えば、少なくとも約25℃、概して少なくとも約30℃、および概して37℃または約37℃が含まれる。いくつかの態様では、細胞は、25〜38℃、例えば30〜37℃などの温度で、例えば37℃±2℃または約37℃±2℃でインキュベートされる。いくつかの態様では、インキュベーションは、培養、例えば培養または増大が所望のまたは許容限界の細胞の密度、数または用量をもたらすまでの時間にわたって行われる。いくつかの態様では、インキュベーションは、24時間、48時間、72時間、96時間、5日間、6日間、7日間、8日間、9日間、もしくはそれ以上を超える、または概ねそれらの期間を超える、または約24時間、約48時間、約72時間、約96時間、約5日間、約6日間、約7日間、約8日間、約9日間、またはそれ以上、または24時間、48時間、72時間、96時間、5日間、6日間、7日間、8日間、9日間、またはそれ以上である。
いくつかの態様では、細胞は、細胞培養中の二酸化炭素の標的量を維持する条件下でインキュベートされる。いくつかの局面では、これは、成長時の細胞の最適な培養、増大、および増殖を確かなものにする。いくつかの局面では、二酸化酸素（CO2）の量は、該気体の10％から0％（v/v）の間、例えば該気体の8％から2％（v/v）の間、例えば5％または約5％（v/v）CO2の量である。
いくつかの態様では、細胞は、バイオリアクターに接続して用いられる容器、例えばバッグを用いてインキュベートされる。いくつかの場合には、バイオリアクターは、いくつかの局面では酸素移動を増加できる、モーショニング（motioning）またはロッキングに供することができる。バイオリアクターのモーショニングには、これらに限定されないが、水平軸にそった回転、垂直軸に沿った回転、バイオリアクターの傾斜した（tilted）または傾倒した（inclined）水平軸に沿ったロッキング運動、またはそれらの任意の組み合わせが含まれ得る。いくつかの態様では、インキュベーションの少なくとも一部はロッキングによって行われる。ロッキング速度およびロッキング角度は、所望の攪拌を達成するように調整され得る。いくつかの態様では、ロック角度は、20°、19°、18°、17°、16°、15°、14°、13°、12°、11°、10°、9°、8°、7°、6°、5°、4°、3°、2°、または1°であるか、または約20°、約19°、約18°、約17°、約16°、約15°、約14°、約13°、約12°、約11°、約10°、約9°、約8°、約7°、約6°、約5°、約4°、約3°、約2°、または約1°である。ある特定の態様では、ロック角度は、両端の値を含む、6〜16°の間である。他の態様では、ロック角度は7〜16°の間である。他の態様では、ロック角度は、両端の値を含む、8〜12°の間である。いくつかの態様では、ロック速度は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、1 12、13、14 15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40 rpmである。いくつかの態様では、ロック速度は、両端の値を含む、4から12 rpmの間、例えば4から6 rpmの間である。細胞培養増大の少なくとも一部は、例えば5°〜10°の間（両端の値を含む）、例えば6°の角度などで、5〜15 RPMの間（両端の値を含む）、例えば6 RMPまたは10 RPMの速度の一定のロッキング速度での、ロッキング運動によって実施される。CD4+細胞およびCD8+細胞は、それらがそれぞれ許容限界量または細胞密度に到達するまで、それぞれ別々に増大される。
いくつかの態様では、インキュベーションの少なくとも一部は、静止条件下で行われる。いくつかの態様では、インキュベーションの少なくとも一部は、例えば培養時に使用済み培地を外部に灌流しかつ新鮮な培地を内部に灌流するような、灌流によって行われる。いくつかの態様では、方法は、例えばフィードポートなどを通して、新鮮な培養培地を細胞培養内に灌流する工程を含む。いくつかの態様では、灌流時に加えられる培養培地は、1つまたは複数の刺激物質、例えば1つまたは複数の組換えサイトカイン、例えばIL-2、IL-7、および/またはIL-15などを含有する。いくつかの態様では、灌流時に加えられる培養培地は、静止インキュベーション時に用いられる同じ培養培地である。
いくつかの態様では、インキュベーションに続いて、容器、例えばバッグは、細胞療法を製造、作製、または生成するための1つまたは複数の他の処理工程を行うためのシステムに再接続される、例えば、遠心分離チャンバを含むシステムに再接続される。いくつかの局面では、培養細胞は、培養細胞の製剤化のためにバッグからチャンバの内部キャビティに移入される。
いくつかの態様では、T細胞は、培養開始組成物に、非分裂末梢血単核細胞（PBMC）などのフィーダー細胞を添加すること（例えば、得られる細胞集団が、増大させる初期集団中の各Tリンパ球につき少なくとも約5、10、20、または40またはそれを上回るPBMCフィーダー細胞を含むように）；および培養物をインキュベートすること（例えばT細胞の数を増大させるのに十分な時間）によって増大させる。いくつかの局面では、非分裂フィーダー細胞は、γ線照射PBMCフィーダー細胞を含み得る。いくつかの態様では、PBMCは、細胞分裂を妨げるために約3000〜3600ラドの範囲のγ線を照射される。いくつかの局面では、フィーダー細胞は、T細胞の集団の添加の前に培養培地に添加される。
いくつかの態様では、刺激条件は、ヒトTリンパ球の成長に適した温度、例えば少なくとも約25℃、概して少なくとも約30℃、概して37℃または約37℃を含む。任意で、インキュベーションは、非分裂EBV形質転換リンパ芽球様細胞（LCL）をフィーダー細胞として添加することをさらに含んでもよい。LCLは、約6000〜10,000ラドの範囲のγ線で照射することができる。いくつかの局面におけるLCLフィーダー細胞は、少なくとも約10:1のLCLフィーダー細胞 対 初期Tリンパ球の比率などの、任意の適切な量で提供される。
態様では、抗原特異的CD4+および/またはCD8+T細胞などの抗原特異的T細胞は、ナイーブまたは抗原特異的Tリンパ球を抗原で刺激することによって得られる。例えば、サイトメガロウイルス抗原に対する抗原特異的T細胞株またはクローンは、感染した対象からT細胞を単離し、同じ抗原で細胞をインビトロで刺激することによって作製することができる。
いくつかの態様では、操作された細胞は、細胞を形質導入、トランスフェクト、培養、および/または増大した後の製剤化のために収集、例えば回収される。いくつかの態様では、細胞は、処理工程、例えば単離、選択、インキュベーション、刺激、活性化、形質導入、トランスフェクション、培養、および/または増大工程などの始動および/もしくは開始、または終了および/もしくは完了の後、一定量の時間以内に、例えば、2日目、3日目、4日目、5日目、6日目、7日目、8日目、9日目、10日目、11日目、12日目、13日目、もしくは14日目に、または2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、10日、11日、12日、13日、もしくは14日以内に回収される。ある特定の態様では、操作された細胞は、培養後に、例えば、培養の1日目、2日目、3日目、4日目、5日目、6日目、7日目、8日目、9日目、もしくは10日目にまたは1日、2日、3日、4日、5日、6日、7日、8日、9日、もしくは10日以内に、および/または操作された細胞および/または操作された細胞を含む細胞組成物が許容限界の細胞密度、細胞数、および/または増大まで増大された後に収集される。いくつかの態様では、回収された細胞は、例えば第VI章に記載されているような方法など、本明細書に記載の任意の方法によって製剤化される。
1. 刺激試薬
いくつかの態様では、細胞は、T細胞を活性化および/または増大できる刺激試薬と共にインキュベートされ得るおよび/またはそれと接触され得る。ある特定の態様では、刺激試薬は、細胞、例えばT細胞を活性化および/または増大できる1つまたは複数の作用物質、例えば生体分子に結合または連結される粒子、例えばビーズを含む。いくつかの態様では、1つまたは複数の作用物質はビーズに結合される。いくつかの態様では、ビーズは生体適合性である、すなわち、生物学的使用に適している材料で構成される。いくつかの態様では、ビーズは、培養細胞、例えば培養T細胞に対して非毒性である。いくつかの態様では、ビーズは、作用物質と細胞との間の相互作用を可能にするような形で作用物質を付着させることができる任意の粒子であってもよい。
いくつかの態様では刺激試薬は、ビーズに、例えばビーズの表面に結合するまたは他の方法で付着する細胞、例えばT細胞を活性化および/または増大できる1つまたは複数の作用物質を含む。ある特定の態様では、ビーズは非細胞粒子である。特定の態様では、ビーズには、コロイド粒子、マイクロスフェア、ナノ粒子、または磁気ビーズなどが含まれ得る。いくつかの態様では、ビーズはアガロースビーズである。ある特定の態様では、ビーズはセファロースビーズである。
特定の態様では、刺激試薬は、単分散するビーズを含む。ある特定の態様では、単分散するビーズは、相互に5％未満の直径標準偏差を有するサイズ分散を含む。
いくつかの態様では、ビーズは、1つまたは複数の作用物質、例えばビーズの表面に(直接的にまたは間接的に)共役、結合、または連結される作用物質を含有する。いくつかの態様では、本明細書において企図される作用物質には、これらに限定されないが、RNA、DNA、タンパク質（例えば酵素）、抗原、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、抗体断片、炭水化物、脂質、レクチン、または所望の標的に対する親和性を有する任意の他の生体分子が含まれ得る。いくつかの態様では、所望の標的は、T細胞受容体および/またはT細胞受容体の成分である。ある特定の態様では、所望の標的はCD3である。ある特定の態様では、所望の標的は、共刺激分子、例えばCD28である。1つまたは複数の作用物質は、当技術分野において公知のおよび利用可能な多様な方法によって、ビーズに直接的にまたは間接的に付着させてもよい。付着は共有結合性、非共有結合性、静電気的、または疎水性であってもよく、例えば化学的手段、機械的手段、または酵素的手段を含む、多様な付着手段によって達せされてもよい。いくつかの態様では、生体分子（例えば、ビオチン化抗CD3抗体）が、ビーズに直接付着される別の生体分子（例えば、抗ビオチン抗体）を介して、ビーズに間接的に付着されてもよい。
いくつかの態様では、ビーズに付着させる1つまたは複数の作用物質は抗体である。抗体には、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体（免疫グロブリンFc領域を有する完全長抗体を含む）、ポリエピトープ特異性を有する抗体組成物、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体、ダイアボディ、および一本鎖分子、ならびに抗体断片（例えば、Fab、F(ab')2、およびFv））が含まれ得る。いくつかの態様では、刺激試薬は、抗体断片（抗原結合断片を含む）、例えば、Fab、Fab'-SH、Fv、scFv、または(Fab')2断片である。IgG、IgM、IgA、IgD、およびIgE定常領域を含む、任意のアイソタイプの定常領域が、本明細書において企図される抗体に用いることができること、およびそのような定常領域は任意のヒトまたは動物種（例えばマウス種）から入手できることが理解されるであろう。いくつかの態様では、作用物質は、T細胞受容体の1つまたは複数の成分に結合するおよび/またはそれを認識する抗体である。特定の態様では、作用物質は抗CD3抗体である。ある特定の態様では、作用物質は、共受容体に結合するおよび/またはそれを認識する抗体である。いくつかの態様では、刺激試薬は抗CD28抗体を含む。
いくつかの態様では、ビーズは、約0.001μm超、約0.01μm超、約0.1μm超、約1.0μm超、約10μm超、約50μm超、約100μm超、または約1000μm超、かつ約1500μm以下である直径を有する。いくつかの態様では、ビーズは、約1.0μm〜約500μm、約1.0μm〜約150μm、約1.0μm〜約30μm、約1.0μm〜約10μm、約1.0μm〜約5.0μm、約2.0μm〜約5.0μm、または約3.0μm〜約5.0μmの直径を有する。いくつかの態様では、ビーズは約3μm〜約5μmの直径を有する。いくつかの態様では、ビーズは、少なくとも0.001μm、0.01μm、0.1μm、0.5μm、1.0μm、1.5μm、2.0μm、2.5μm、3.0μm、3.5μm、4.0μm、4.5μm、5.0μm、5.5μm、6.0μm、6.5μm、7.0μm、7.5μm、8.0μm、8.5μm、9.0μm、9.5μm、10μm、12μm、14μm、16μm、18μm、または20μmの直径を有する。ある特定の態様では、ビーズは4.5μmまたは約4.5μm、または少なくとも概ねそれらの値、または概ねそれらの値の直径を有する。ある特定の態様では、ビーズは2.8μmまたは約2.8μmの直径を有する。
いくつかの態様では、ビーズは、0.001 g/cm3超、0.01 g/cm3超、0.05 g/cm3超、0.1 g/cm3超、0.5 g/cm3超、0.6 g/cm3超、0.7 g/cm3超、0.8 g/cm3超、0.9 g/cm3超、1 g/cm3超、1.1 g/cm3超、1.2 g/cm3超、1.3 g/cm3超、1.4 g/cm3超、1.5 g/cm3超、2 g/cm3超、3 g/cm3超、4 g/cm3超、または5 g/cm3超の密度を有する。いくつかの態様では、ビーズは、それぞれ両端の値を含む、約0.001 g/cm3〜約100 g/cm3、約0.01 g/cm3〜約50 g/cm3、約0.1 g/cm3〜約10 g/cm3、約0.1 g/cm3〜約.5 g/cm3、約0.5 g/cm3〜約1 g/cm3、約0.5 g/cm3〜約1.5 g/cm3、約1 g/cm3〜約1.5 g/cm3、約1 g/cm3〜約2 g/cm3、または約1 g/cm3〜約5 g/cm3の間の密度を有する。いくつかの態様では、ビーズは、約0.5 g/cm3、約0.5 g/cm3、約0.6 g/cm3、約0.7 g/cm3、約0.8 g/cm3、約0.9 g/cm3、約1.0 g/cm3、約1.1 g/cm3、約1.2 g/cm3、約1.3 g/cm3、約1.4 g/cm3、約1.5 g/cm3、約1.6 g/cm3、約1.7 g/cm3、約1.8 g/cm3、約1.9 g/cm3、または約2.0 g/cm3の密度を有する。ある特定の態様では、ビーズは約1.6 g/cm3の密度を有する。特定の態様では、ビーズまたは粒子は約1.5 g/cm3の密度を有する。ある特定の態様では、粒子は約1.3 g/cm3の密度を有する。
ある特定の態様では、複数のビーズは均一な密度を有する。ある特定の態様では、均一な密度は、平均ビーズ密度の10％未満、5％未満、または1％未満の密度標準偏差を含む。
いくつかの態様では、ビーズは、それぞれ両端の値を含む、各粒子のグラム当たり約0.001 m2(m2/g)〜約1,000 m2/g、約.010 m2/g〜約100 m2/g、約 0.1 m2/g〜約10 m2/g、約0.1 m2/g〜約1 m2/g、約1 m2/g〜約10 m2/g、約10 m2/g〜約100 m2/g、約0.5 m2/g〜約20 m2/g、約0.5 m2/g〜約5 m2/g、または約1 m2/g〜約4 m2/gの間の表面面積を有する。いくつかの態様では、粒子またはビーズは、約1 m2/g〜約4 m2/gの表面面積を有する。
いくつかの態様では、ビーズは、作用物質に共役、連結、または結合することができる少なくとも1つの材料をビーズ表面にまたはその近くに含む。いくつかの態様では、ビーズは表面に機能を持たせている、すなわち、結合分子、例えばポリヌクレオチドまたはポリペプチドと共有結合を形成することができる官能基を含む。特定の態様では、ビーズは、表面に露出したカルボキシル基、アミノ基、ヒドロキシル基、トシル基、エポキシ基、および/またはクロロメチル基を含む。特定の態様では、ビーズは、表面に露出したアガロースおよび/またはセファロースを含む。ある特定の態様では、ビーズ表面は、結合分子に結合または付着することができる付着した刺激試薬を含む。特定の態様では、生体分子はポリペプチドである。いくつかの態様では、ビーズは表面に露出したプロテインA、プロテインG、またはビオチンを含む。
いくつかの態様では、ビーズは磁場中で反応する。いくつかの態様では、ビーズは磁気ビーズである。いくつかの態様では、磁気ビーズは常磁性である。特定の態様では、磁気ビーズは超常磁性である。ある特定の態様では、ビーズは、磁場に曝露されない限り、いかなる磁気特性も示さない。
特定の態様では、ビーズは、磁性コア、常磁性コア、または超常磁性コアを含む。いくつかの態様では、磁性コアは金属を含む。いくつかの態様では、金属は、これらに限定されないが、鉄、ニッケル、銅、コバルト、ガドリニウム、マンガン、タンタル、亜鉛、ジルコニウム、またはそれらの任意の組み合わせであり得る。ある特定の態様では、磁性コアは、金属酸化物（例えば、酸化鉄）、フェライト（例えば、マンガンフェライト、コバルトフェライト、ニッケルフェライト等）、ヘマタイト、および金属合金（例えば、CoTaZn）を含む。いくつかの態様では、磁性コアは、フェライト、金属、金属合金、酸化鉄、または二酸化クロムの1つまたは複数を含む。いくつかの態様では、磁性コアは、元素鉄またはその化合物を含む。いくつかの態様では、磁性コアは、マグネタイト（Fe3O4）、マグヘマイト（γFe2O3）、またはグレイジャイト（Fe3S4）の1つまたは複数を含む。いくつかの態様では、内部コアは酸化鉄（例えば、Fe3O4）を含む。
ある特定の態様では、ビーズは、表面に機能を持たせたコートまたはコーティングによって覆われている磁性、常磁性、および/または超常磁性コアを含む。いくつかの態様では、コートは、これらに限定されないが、ポリマー、多糖、シリカ、脂肪酸、タンパク質、炭素、アガロース、セファロース、またはそれらの組み合わせを含むことができる材料を含むことができる。いくつかの態様では、ポリマーは、ポリエチレングリコール、ポリ(乳酸-co-グリコール酸)、ポリグルタルアルデヒド、ポリウレタン、ポリスチレン、またはポリビニルアルコールであり得る。ある特定の態様では、外側のコートまたはコーティングはポリスチレンを含む。特定の態様では、外側コーティングは表面に機能をもたせている。
いくつかの態様では、刺激試薬は、金属酸化物コア（例えば、酸化鉄コア）およびコートを含むビーズを含み、ここで、金属酸化物コアは少なくとも1つの多糖（例えば、デキストラン）を含み、コートは少なくとも1つの多糖（例えば、アミノデキストラン）、少なくとも1つのポリマー（例えば、ポリウレタン）、およびシリカを含む。いくつかの態様では、金属酸化物コアはコロイド性酸化鉄コアである。ある特定の態様では、1つまたは複数の作用物質は、抗体またはその抗原結合断片を含む。特定の態様では、1つまたは複数の作用物質は、抗CD3抗体および抗CD28抗体を含む。いくつかの態様では、刺激試薬は、抗CD3抗体、抗CD28抗体、および抗ビオチン抗体を含む。いくつかの態様では、刺激試薬は抗ビオチン抗体を含む。いくつかの態様では、ビーズは約3μm〜約10μmの直径を有する。いくつかの態様では、ビーズは約3μm〜約5μmの直径を有する。ある特定の態様では、ビーズは約3.5μmの直径を有する。
いくつかの態様では、刺激試薬は、金属酸化物コア（例えば、酸化鉄内部コア）およびコート（例えば、保護コート）を含むビーズに付着している1つまたは複数の作用物質を含み、ここで、該コートはポリスチレンを含む。ある特定の態様では、ビーズは、超常磁性鉄コア、例えば、マグネタイト（Fe3O4）および/またはマグヘマイト（γFe2O3）cを含むコア、およびポリスチレンコートまたはコーティングを含む、単分散性超常磁性ビーズである。いくつかの態様では、ビーズは非多孔性である。いくつかの態様では、ビーズは、それに1つまたは複数の作用物質が付着している、機能を持たせた表面を含む。ある特定の態様では、1つまたは複数の作用物質は、表面でビーズに共有結合される。いくつかの態様では、1つまたは複数の作用物質は抗体またはその抗原結合断片を含む。いくつかの態様では、1つまたは複数の作用物質は、抗CD3抗体および抗CD28抗体を含む。ある特定の態様では、ビーズは、約1.5 g/cm3の密度および約1 m2/g〜約4 m2/gの表面積を有する。特定の態様では；ビーズは、約4.5μmの直径および約1.5 g/cm3の密度を有する単分散性超常磁性ビーズである。いくつかの態様では、ビーズは、約2.8μmの平均直径および約1.3 g/cm3の密度を有する単分散性超常磁性ビーズである。
E．遺伝子操作のためのベクターおよび方法
組換え受容体をコードするポリヌクレオチド（核酸分子）は、そのような受容体を発現させるために細胞を遺伝子操作するためのベクター中に含められ得る。いくつかの態様において、ベクターまたは構築物は、その発現を駆動するためにポリペプチドまたは受容体をコードするヌクレオチドへ機能的に連結された1つまたは複数のプロモーターを含有する。いくつかの態様において、プロモーターは、1つのまたは1つを超える核酸分子へ機能的に連結される。
いくつかの場合において、ベクターは、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルスベクター、例えば、レンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである。いくつかの態様において、組換え受容体をコードする、ベクターなどの、ポリヌクレオチドは、例えば、レトロウイルス形質導入、トランスフェクション、または形質転換によって、培養細胞を含有する組成物中へ導入される。
遺伝子操作された成分、例えば組換え受容体、例えばCARまたはTCRを導入するための様々な方法が、周知であり、提供される方法および組成物と共に使用することができる。例示的な方法には、ウイルスベクター、例えば、レトロウイルスまたはレンチウイルス、非ウイルスベクター、またはトランスポゾン、例えば、Sleeping Beautyトランスポゾンシステムを介した方法を含む、ポリペプチドまたは受容体をコードする核酸を移入するための方法が含まれる。遺伝子移入の方法は、形質導入、エレクトロポレーション、または細胞中への遺伝子移入をもたらす他の方法を含み得る。
いくつかの態様において、遺伝子移入は、最初に、細胞を刺激し、例えば、細胞を、例えば、サイトカインまたは活性化マーカーの発現によって測定されるような増殖、生存、および／または活性化などの応答を誘導する刺激と組み合わせ、その後に、活性化された細胞に形質導入し、臨床用途に十分な数まで培養で増殖させることによって成し遂げられる。
ある状況では、刺激因子（例えば、リンホカインまたはサイトカイン）の過剰発現が、対象における毒性に関連する因子など、対象において望まれない転帰またはより低い有効性を潜在的にもたらす可能性への対抗策を講じることが望ましい場合がある。従って、ある状況では、操作細胞は、例えば、養子免疫療法において投与された時に、インビボで細胞を負の選択に対して感受性にする遺伝子セグメントを含む。例えば、いくつかの局面において、前記細胞は、細胞が投与される対象のインビボ条件の変化の結果として排除可能になるように操作される。負の選択が可能な表現型は、投与された薬剤、例えば、化合物に対する感受性を付与する遺伝子の挿入に起因してもよい。負の選択が可能な遺伝子には、ガンシクロビル感受性を付与する単純ヘルペスウイルスI型チミジンキナーゼ(HSV-I TK)遺伝子（Wigler et al., Cell II :223, I977）；細胞ヒポキサンチンホスフリボシルトランスフェラーゼ（phosphribosyltransferase）(HPRT)遺伝子、細胞アデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ(APRT)遺伝子、細菌シトシンデアミナーゼ、（Mullen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:33 (1992)）が含まれる。
いくつかの態様において、組換え核酸は、組換え感染性ウイルス粒子、例えば、シミアンウイルス40(SV40)、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス(AAV)に由来するベクターを用いて細胞に移入される。いくつかの態様において、組換え核酸は、組換えレンチウイルスベクターまたはレトロウイルスベクター、例えば、γ-レトロウイルスベクターを用いてT細胞に移入される（例えば、Koste et al. (2014) Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25; Carlens et al. (2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46; Alonso-Camino et al. (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park et al., Trends Biotechnol. 2011 November 29(11): 550-557を参照されたい）。
いくつかの態様において、組換え受容体および／または追加のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、ベクター中に含有されるか、1つまたは複数のベクター中へクローニングされ得る。いくつかの態様において、1つまたは複数のベクターが、宿主細胞、例えば操作用の細胞を形質転換またはトランスフェクトするために使用され得る。例示的なベクターとしては、導入、増殖および増大または発現または両方のために設計されたベクター、例えば、プラスミドおよびウイルスベクターが含まれる。いくつかの局面において、ベクターは、発現ベクター、例えば、組換え発現ベクターである。いくつかの態様において、組換え発現ベクターは、標準組換えDNA技術を使用して調製され得る。
いくつかの態様において、ベクターは、pUCシリーズ(Fermentas Life Sciences)、pBluescriptシリーズ(Stratagene, LaJolla, Calif.)、pETシリーズ(Novagen, Madison, Wis.)、pGEXシリーズ(Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden)、またはpEXシリーズ(Clontech, Palo Alto, Calif.)のベクターであり得る。場合によっては、バクテリオファージベクター、例えば、λG10、λGT11、λZapII (Stratagene)、λEMBL4、およびλNM1149も使用することができる。いくつかの態様において、植物発現ベクターが使用され得、pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121およびpBIN19 (Clontech)を含む。いくつかの態様において、動物発現ベクターはpEUK-Cl、pMAMおよびpMAMneo (Clontech)を含む。
いくつかの態様において、ベクターは、レトロウイルスベクターなどの、ウイルスベクターである。いくつかの態様において、組換え受容体および／または追加のポリペプチド（複数可）をコードするポリヌクレオチドは、レトロウイルスベクターもしくはレンチウイルスベクターを介して、またはトランスポゾンを介して、細胞中へ導入される（例えば、Baum et al. (2006) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 13:1050-1063; Frecha et al. (2010) Molecular Therapy 18:1748-1757; およびHackett et al. (2010) Molecular Therapy 18:674-683を参照されたい）。
いくつかの態様において、転写単位は、IRESを含有するバイシストロニック単位として操作され得、これは、単一のプロモーターからのメッセージによって遺伝子産物（例えば、組換え受容体および追加のポリペプチドをコードする）の同時発現を可能にする。あるいは、いくつかの場合において、単一のプロモーターは、自己開裂ペプチド（例えば、2A配列）またはプロテアーゼ認識部位（例えば、フーリン）をコードする配列によって互いに分離された2つまたは3つの遺伝子（例えば、マーカーをコードし、かつ、組換え受容体をコードする）を、単一のオープンリーディングフレーム(ORF)中に含有するRNAの発現を指示し得る。従って、ORFは、単一のポリペプチドをコードし、これは、翻訳中（2Aの場合）または翻訳後のいずれかに、個々のタンパク質へ処理される。いくつかの場合において、T2Aなどの、ペプチドは、2AエレメントのC末端でのペプチド結合の合成をリボソームにスキップさせることができ（リボソームスキッピング）、2A配列の末端と下流にある次のペプチドとの間での分離に至る（例えば、de Felipe, Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004)およびde Felipe et al. Traffic 5:616-626 (2004)を参照されたい）。様々な2Aエレメントが公知である。本明細書に開示される方法およびシステムにおいて使用することができる2A配列の例は、非限定的に、口蹄疫ウイルス(F2A、例えば、SEQ ID NO: 21)、A型ウマ鼻炎ウイルス(E2A、例えば、SEQ ID NO: 20)、トセア・アシグナ（Thosea asigna）ウイルス(T2A、例えば、SEQ ID NO: 6または17)、および米国特許出願公開第20070116690号に記載されるようなブタテッショウウイルス-1(P2A、例えば、SEQ ID NO: 18または19)由来の2A配列である。
いくつかの態様において、組換え受容体（例えばCAR）は、プロモーターの制御下にある。いくつかの態様において、ベクターはプロモーターを含む。いくつかの態様において、プロモーターは構成的プロモーターであるかまたはこれを含む。例示的な構成的プロモーターとしては、例えば、シミアンウイルス40初期プロモーター(SV40)、サイトメガロウイルス前初期プロモーター(CMV)、ヒトユビキチンCプロモーター(UBC)、ヒト伸長因子1αプロモーター(EF1α)、マウスホスホグリセレートキナーゼ1プロモーター(PGK)、およびCMV初期エンハンサーとカップリングしたトリβ-アクチンプロモーター(CAGG)が挙げられる。いくつかの態様において、構成的プロモーターは、合成または改変プロモーターである。いくつかの態様において、プロモーターは、脊髄増殖性肉腫ウイルスエンハンサーと共に改変MoMuLV LTRのU3領域を含有する合成プロモーターである、MNDプロモーターであるかまたはこれを含む（Challita et al. (1995) J. Virol. 69(2):748-755を参照されたい）。いくつかの態様において、プロモーターは組織特異的プロモーターである。別の態様において、プロモーターはウイルスプロモーターである。別の態様において、プロモーターは非ウイルスプロモーターである。いくつかの態様において、例示的なプロモーターとしては、ヒト伸長因子1アルファ(EF1α)プロモーターもしくはその改変型またはMNDプロモーターが挙げられ得るが、これらに限定されない。
いくつかの態様において、プロモーターは、調節性プロモーター（例えば、誘導性プロモーター）である。いくつかの態様において、プロモーターは、誘導性プロモーターまたは抑制性プロモーターである。いくつかの態様において、プロモーターは、Lacオペレーター配列、テトラサイクリンオペレーター配列、ガラクトースオペレーター配列もしくはドキシサイクリンオペレーター配列を含むか、またはその類似体であるか、あるいは、Lacリプレッサーもしくはテトラサイクリンリプレッサー、またはその類似体によって結合または認識されることができる。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、調節エレメント、例えば、プロモーターを含まない。
いくつかの場合において、組換え受容体をコードする核酸配列は、シグナルペプチドをコードするシグナル配列を含有する。いくつかの局面において、シグナル配列は、天然ポリペプチドに由来するシグナルペプチドをコードし得る。他の局面において、シグナル配列は、異種または非天然シグナルペプチド、例えば、SEQ ID NO:25に記載され、SEQ ID NO:24に記載のヌクレオチド配列によってコードされる、GMCSFRアルファ鎖の例示的なシグナルペプチドをコードし得る。いくつかの場合において、組換え受容体、例えば、キメラ抗原受容体(CAR)をコードする核酸配列は、シグナルペプチドをコードするシグナル配列を含有する。非限定的で例示的なシグナルペプチドとしては、例えば、SEQ ID NO: 25に記載され、SEQ ID NO:24に記載のヌクレオチド配列によってコードされる、GMCSFRアルファ鎖シグナルペプチド、またはSEQ ID NO:26に記載されるCD8アルファシグナルペプチドが挙げられる。
いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、1つまたは複数の追加のポリペプチド、例えば、1つまたは複数のマーカーおよび／または1つまたは複数のエフェクター分子をコードする、核酸配列を含有する。いくつかの態様において、1つまたは複数のマーカーは、形質導入マーカー、代理マーカーおよび／または選択マーカーを含む。例えば、1つまたは複数の追加のポリペプチドをコードする、導入される追加の核酸配列の中には、Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11:6 (1991); およびRiddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992)に記載のように、移入された細胞の生存性および／または機能を促進することによってなど、療法の有効性を改善することができる核酸配列；細胞を選択および／または評価するための、例えば、インビボ生存または局在化を評価するための遺伝子マーカーを提供するための核酸配列（ucleic acid sequence）；例えば、細胞をインビボで負の選択に対して感受性にすることによって安全性を改善する核酸配列が含まれる；ドミナントポジティブ選択マーカーと負の選択マーカーとの融合から得られた二機能性の選択可能な融合遺伝子の使用について説明している、WO 1992008796およびWO 1994028143、ならびに米国特許第6,040,177号も参照されたい。
いくつかの態様において、単一のプロモーターは、自己開裂ペプチド（例えば、2A配列）またはプロテアーゼ認識部位（例えば、フーリン）をコードする配列によって互いに分離された2つまたは3つの遺伝子（例えば、代謝経路の調節に関与する分子をコードし、かつ、組換え受容体をコードする）を、単一のオープンリーディングフレーム(ORF)中に含有するRNAの発現を指示し得る。従って、ORFは、単一のポリペプチドをコードし、これは、翻訳中（2Aの場合）または翻訳後のいずれかに、個々のタンパク質へ処理される。いくつかの場合において、T2Aなどの、ペプチドは、2AエレメントのC末端でのペプチド結合の合成をリボソームにスキップさせることができ（リボソームスキッピング）、2A配列の末端と下流にある次のペプチドとの間での分離に至る（例えば、de Felipe, Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004)およびde Felipe et al. Traffic 5:616-626 (2004)を参照されたい）。様々な2Aエレメントが公知である。本明細書に開示される方法および核酸において使用することができる2A配列の例は、非限定的に、口蹄疫ウイルス(F2A、例えば、SEQ ID NO: 22)、A型ウマ鼻炎ウイルス(E2A、例えば、SEQ ID NO: 21)、トセア・アシグナウイルス(T2A、例えば、SEQ ID NO: 6または18)、および米国特許出願公開第20070116690号に記載されるようなブタテッショウウイルス-1(P2A、例えば、SEQ ID NO: 19または20)由来の2A配列である。
いくつかの態様において、ベクターは、1つまたは複数のマーカーをコードする核酸配列を含有する。いくつかの態様において、1つまたは複数のマーカーは、形質導入マーカー、代理マーカーおよび／または選択マーカーである。
いくつかの態様において、マーカーは形質導入マーカーまたは代理マーカーである。形質導入マーカーまたは代理マーカーは、ポリヌクレオチド、例えば、組換え受容体をコードするポリヌクレオチドが導入された細胞を検出するために使用することができる。いくつかの態様において、形質導入マーカーは、細胞の改変を表示または確認することができる。いくつかの態様において、代理マーカーは、組換え受容体（例えばCAR）と共に細胞表面上に同時発現されるように作られているタンパク質である。特定の態様において、そのような代理マーカーは、活性を有さないかまたはほとんど有さないように改変された表面タンパク質である。ある態様において、代理マーカーは、組換え受容体をコードする同じポリヌクレオチド上にコードされる。いくつかの態様において、組換え受容体をコードする核酸配列は、内部リボソーム侵入部位(IRES)によって、または自己開裂性ペプチドもしくはリボソームスキッピングを引き起こすペプチド（例えば、2A配列、例えば、T2A、P2A、E2AもしくはF2A）をコードする核酸によって任意で分離された、マーカーをコードする核酸配列へ機能的に連結されている。外因性マーカー遺伝子は、いくつかの場合において、操作細胞に関して利用され、細胞の検出または選択を可能にし得、いくつかの場合において、細胞自殺を促進もし得る。
例示的な代理マーカーは、細胞表面ポリペプチドの切断形態、例えば、非機能性であり、かつ、シグナルまたは細胞表面ポリペプチドの完全長形態によって通常変換されるシグナルを変換しないかまたは変換することができず、かつ／または、インターナライズしないかまたはインターナライズすることができない、切断形態を含み得る。例示的な切断型細胞表面ポリペプチドは、成長因子または他の受容体の切断形態、例えば、切断型ヒト上皮成長因子受容体2 (tHER2)、切断型上皮成長因子受容体(tEGFR、SEQ ID NO:7もしくは23に記載の例示的なtEGFR)または前立腺特異的膜抗原(PSMA)もしくはその改変型を含む。tEGFRは、抗体セツキシマブ(Erbitux（登録商標）)または他の治療用抗EGFR抗体もしくは結合性分子によって認識されるエピトープを含有し得、これは、tEGFR構築物で操作された細胞、およびコードされた外因性タンパク質を同定もしくは選択するために、ならびに／または、コードされた外因性タンパク質を発現する細胞を排除もしくは分離するために、使用することができる。米国特許第8,802,374号およびLiu et al., Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430-434)を参照されたい。いくつかの局面において、マーカー、例えば、代理マーカーは、全部または一部（例えば、切断型形態）のCD34、NGFR、CD19、もしくは切断型CD19、例えば切断型非ヒトCD19、または上皮成長因子受容体(例えば、tEGFR)を含む。
いくつかの態様において、マーカーは、蛍光タンパク質、例えば、緑色蛍光タンパク質(GFP)、高感度緑色蛍光タンパク質(EGFP)、例えば、super-fold GFP (sfGFP)、赤色蛍光タンパク質(RFP)、例えば、tdTomato、mCherry、mStrawberry、AsRed2、DsRedもしくはDsRed2、シアン蛍光タンパク質(CFP)、青緑色蛍光タンパク質(BFP)、高感度青色蛍光タンパク質(EBFP)、および黄色蛍光タンパク質(YFP)、ならびにそれらのバリアント、例えば、蛍光タンパク質の、種バリアント、単量体バリアント、および、コドン最適化および／または高感度バリアントであるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、マーカーは、酵素、例えば、ルシフェラーゼ、大腸菌（E. coli）由来のlacZ遺伝子、アルカリホスファターゼ、分泌型胎盤アルカリホスファターゼ(SEAP)、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)であるかまたはこれらを含む。例示的な発光レポーター遺伝子としては、ルシフェラーゼ(luc)、β-ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)、β-グルクロニダーゼ(GUS)またはそれらのバリアントが挙げられる。
いくつかの態様において、マーカーは選択マーカーである。いくつかの態様において、選択マーカーは、外因性薬剤または薬物に対して耐性を与えるポリペプチドであるかまたはこれを含む。いくつかの態様において、選択マーカーは抗生物質耐性遺伝子である。いくつかの態様において、選択マーカーは、哺乳動物細胞に抗生物質耐性を与える、抗生物質耐性遺伝子である。いくつかの態様において、選択マーカーは、ピューロマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、ブラストサイジン耐性遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子、ジェネティシン耐性遺伝子もしくはゼオシン耐性遺伝子またはそれらの改変型であるかまたはこれらを含む。
いくつかの態様において、レトロウイルスベクター、例えば、モロニーマウス白血病ウイルス(MoMLV)、骨髄増殖性肉腫ウイルス(MPSV)、マウス胚性幹細胞ウイルス(MESV)、マウス幹細胞ウイルス(MSCV)、脾フォーカス形成ウイルス(SFFV)、またはアデノ随伴ウイルス(AAV)に由来するレトロウイルスベクターには末端反復配列(LTR)がある。ほとんどのレトロウイルスベクターはマウスレトロウイルスに由来する。いくつかの態様において、レトロウイルスには、任意の鳥類細胞供給源または哺乳動物細胞供給源に由来するレトロウイルスが含まれる。レトロウイルスは典型的に両種指向性である。両種指向性とは、レトロウイルスが、ヒトを含む、いくつかの種の宿主細胞に感染できることを意味する。一態様において、発現させようとする遺伝子はレトロウイルスgag配列、pol配列、および／またはenv配列に取って代わる。多数の例示的なレトロウイルス系が述べられている（例えば、米国特許第5,219,740号; 同第6,207,453号; 同第5,219,740号; Miller and Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A. D. (1990) Human Gene Therapy 1:5-14; Scarpa et al. (1991) Virology 180:849-852; Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; およびBoris-Lawrie and Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109）。
レンチウイルス形質導入法は公知である。例示的な方法は、例えば、Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; Cooper et al. (2003) Blood. 101:1637-1644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; およびCavalieri et al. (2003) Blood. 102(2): 497-505に記載されている。いくつかの態様において、組換え受容体および／または1つまたは複数の追加のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、例えば、レトロウイルス形質導入、トランスフェクション、または形質転換によって、培養細胞を含有する組成物中へ導入される。
いくつかの態様において、組換え核酸はエレクトロポレーションを介してT細胞に移入される（例えば、Chicaybam et al, (2013) PLoS ONE 8(3): e60298およびVan Tedeloo et al. (2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437を参照されたい）。いくつかの態様において、組換え核酸は転位を介してT細胞に移入される（例えば、Manuri et al. (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437; Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; およびHuang et al. (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126を参照されたい）。免疫細胞において遺伝物質を導入および発現する他の方法には、リン酸カルシウムトランスフェクション（例えば、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.に記載）、プロトプラスト融合、カチオン性リポソームを介したトランスフェクション；タングステン粒子によって促進されるマイクロパーティクルボンバードメント（microparticle bombardment）（Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)）；およびリン酸ストロンチウムDNA共沈殿（Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987)）が含まれる。いくつかの局面において、洗浄工程は、遠心チャンバ、例えば、Biosafe SAによって製造および販売されるもの、例えば、Sepax（登録商標）およびSepax（登録商標）2システムと共に使用するためのもの、例えば、A-200/FおよびA-200遠心チャンバにおいて、製造業者の説明書に従って、行われる。
組換え産物をコードする核酸を移入するための他のアプローチおよびベクターは、例えば、国際特許出願公開番号WO2014055668および米国特許第7,446,190号に記載のものである。
いくつかの態様において、細胞、例えば、T細胞は、増殖中または増殖後のいずれかにおいて、例えば、T細胞受容体(TCR)またはキメラ抗原受容体(CAR)でトランスフェクトされ得る。所望のポリペプチドまたは受容体の遺伝子の導入のためのこのトランスフェクションは、例えば、任意の好適なレトロウイルスベクターを用いて行うことができる。遺伝子組み換えされた細胞集団は、次いで、最初の刺激（例えば、CD3/CD28刺激）から解放され得、その後、例えば、新たに導入された受容体を介して、第2のタイプの刺激で刺激され得る。この第2のタイプの刺激は、ペプチド/MHC分子の形態での抗原刺激、遺伝子導入された受容体のコグネイト（架橋）リガンド（例えば、CARの天然リガンド）、または新しい受容体のフレームワーク内に直接結合する（例えば、受容体内の定常領域を認識することによって）任意のリガンド（例えば、抗体）を含み得る。例えば、Cheadle et al, “Chimeric antigen receptors for T-cell based therapy” Methods Mol Biol. 2012; 907:645-66またはBarrett et al., Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine Vol. 65: 333-347 (2014)を参照されたい。
さらなる核酸、例えば、導入用の遺伝子の中には、Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11:6 (1991); およびRiddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992)に記載のように、療法の効力を改善するための、例えば、移入された細胞の生存および／または機能を促進することによって療法の効力を改善するための遺伝子；細胞を選択および／または評価するための、例えば、インビボ生存または局在化を評価するための遺伝子マーカーを提供するための遺伝子；安全性を改善する、例えば、細胞をインビボで負の選択に対して感受性にすることによって安全性を改善する遺伝子がある。ドミナントポジティブ選択マーカーと負の選択マーカーとの融合から得られた二機能性の選択可能な融合遺伝子の使用について説明している、LuptonらによるPCT/US91/08442およびPCT/US94/05601の公報も参照されたい。例えば、Riddell et al., 米国特許第6,040,177号の縦列14〜17を参照されたい。
いくつかの態様において、前記細胞は遺伝子操作の前に、または遺伝子操作に関連してインキュベートおよび／または培養される。インキュベーション工程は、培養、発育、刺激、活性化、および／または増殖を含んでもよい。インキュベーションおよび／または操作は、培養容器、例えば、ユニット、チャンバ、ウェル、カラム、チューブ、チューブセット、弁、バイアル、培養皿、バック、または細胞を培養もしくは発育するための他の容器の中で行われてもよい。いくつかの態様において、前記組成物または細胞は刺激条件または刺激薬剤の存在下でインキュベートされる。このような条件は、遺伝子操作のために、例えば、組換え抗原受容体を導入するために、集団内の細胞の増殖（proliferation）、増殖（expansion）、活性化、および／もしくは生存を誘導するように、抗原曝露を模倣するように、ならびに／または細胞を初回刺激（prime）するように設計された条件を含む。いくつかの態様において、1つまたは複数のインキュベーション工程は、ロッキングバイオリアクター、例えば、WAVE（商標）Bioreactor (GE Healthcare)またはBIOSTAT（登録商標）RM (Sartorius)を使用して行われ得る。いくつかの態様において、1つまたは複数のインキュベーション工程は、スタティックバイオリアクターまたはインキュベーションチャンバを使用して行われ得る。具体的な態様において、1つまたは複数のインキュベーション工程についてロッキングバイオリアクターを使用する場合、抗せん断剤（anti-shear agent）、例えばポロキサマーが、組成物へ添加され得る。
いくつかの場合において、細胞、例えばT細胞が活性化されることを必要としないベクターが使用され得る。いくつかのそのような場合において、細胞は、活性化前に、選択および／または形質導入され得る。従って、細胞は、細胞の培養前または培養後に、いくつかの場合においては、培養の少なくとも一部と同時にまたは培養の少なくとも一部の間に、操作され得る。
条件は、特定の培地、温度、酸素含有量、二酸化炭素含有量、時間、薬剤、例えば、栄養分、アミノ酸、抗生物質、イオン、および／または刺激因子、例えば、サイトカイン、ケモカイン、抗原、結合パートナー、融合タンパク質、組換え可溶性受容体、ならびに細胞を活性化するように設計された他の任意の薬剤のうち1つまたは複数を含んでもよい。いくつかの局面において、細胞は、1つまたは複数のサイトカインの存在下でインキュベートされ、いくつかの態様において、例えば国際特許出願公開番号WO2015157384に記載されるように、サイトカインカクテルが用いられ得る。いくつかの態様において、細胞は、形質導入前、形質導入と同時、または形質導入後に、1つまたは複数のサイトカインおよび／またはサイトカインカクテルと共にインキュベートされる。
いくつかの態様において、刺激条件または刺激薬剤には、TCR複合体の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる1種または複数種の薬剤、例えば、リガンドが含まれる。いくつかの局面において、この薬剤は、T細胞におけるTCR/CD3細胞内シグナル伝達カスケードをオンにするか、または開始する。このような薬剤には、抗体、例えば、TCR成分に特異的な抗体、例えば、抗CD3が含まれ得る。いくつかの態様において、刺激条件は、共刺激受容体を刺激することができる1種または複数種の薬剤、例えば、リガンド、例えば、抗CD28を含む。いくつかの態様において、このような薬剤および／またはリガンドは、ビーズなどの固体支持体に結合され得、かつ／または1種類もしくは複数種のサイトカインであり得る。任意で、増殖方法は、抗CD3および／または抗CD28の抗体を（例えば、少なくとも約0.5ng/mLの濃度で）培養培地に添加する工程をさらに含んでもよい。いくつかの態様において、刺激薬剤には、IL-2および／またはIL-15、例えば、少なくとも約10単位/mLの濃度のIL-2が含まれる。ある態様において、刺激条件は、本明細書に記載される任意の刺激試薬、例えば、セクションV-D-1に記載されるものと共のインキュベーションを含む。
いくつかの局面において、インキュベーションは、Riddellらへの米国特許第6,040,177号、Klebanoff et al.(2012) J Immunother. 35(9): 651-660、Terakura et al. (2012) Blood.1:72-82、および／またはWang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701に記載の技法などの技法に従って行われる。いくつかの局面において、形質導入は、国際特許出願公開番号WO2016/073602またはUS 2016/0122782に記載されるようなシステム、デバイス、装置、および／または方法を使用して行われ、これらの内容は参照によりそれらの全体が組み入れられる。いくつかの態様において、形質導入は、国際特許出願公開番号WO 2015/164675に記載される方法に従って行われ、これらの内容は参照によりそれらの全体が組み入れられる。
いくつかの態様において、T細胞は、（例えば、結果として生じた細胞集団が、増殖させようとする初期集団内でTリンパ球1個につき少なくとも約5個、10個、20個、もしくは40個またはそれより多いPBMCフィーダー細胞を含有するように）フィーダー細胞、例えば、非分裂末梢血単核球（PBMC）を培養開始組成物に添加し；培養物を（例えば、T細胞の数を増やすのに十分な時間にわたって）インキュベートすることによって、増殖される。いくつかの局面において、非分裂フィーダー細胞はγ線を照射したPBMCフィーダー細胞を含んでもよい。いくつかの態様において、細胞分裂を阻止するために、PBMCに約3000〜3600ラドの範囲のγ線が照射される。いくつかの局面において、フィーダー細胞が培養培地に添加された後に、T細胞の集団が添加される。
いくつかの態様において、刺激条件は、ヒトTリンパ球の増殖に適した温度、例えば、少なくとも約25℃、一般的には少なくとも約30度、および一般的には37℃または約37℃を含む。任意で、インキュベーションは、フィーダー細胞として非分裂性のEBV形質転換リンパ芽球様細胞（LCL）を添加する工程をさらに含んでもよい。LCLに、約6000〜10,000ラドの範囲のγ線を照射することができる。LCLフィーダー細胞は、いくつかの局面では、LCLフィーダー細胞と初回Tリンパ球との比が少なくとも約10:1などの任意の適切な量で提供される。
いくつかの態様において、調製方法は、単離、インキュベーション、および／または操作の前または後のいずれかに、細胞を凍結、例えば、凍結保存するための工程を含む。いくつかの態様において、凍結工程およびその後の解凍工程によって、細胞集団の中にある顆粒球が取り除かれ、単球がある程度まで取り除かれる。いくつかの態様において、例えば、血漿および血小板を取り除く洗浄工程の後に、前記細胞は凍結溶液に懸濁される。様々な任意の公知の凍結溶液およびパラメータをいくつかの局面で使用することができる。一例は、20％DMSOおよび8％ヒト血清アルブミン（HSA）を含有するPBS、または他の適切な細胞凍結培地を使用することを伴う。次いで、DMSOおよびHSAの最終濃度がそれぞれ10％および4％になるように、これを培地で1:1に希釈する。次いで、細胞は通常、1分につき1°の速度で-80℃まで凍結され、液体窒素貯蔵タンクの気相の中で保管される。いくつかの態様において、組成物は、凍結保存に適したバッグ中に封入される（例えば、CryoMacs（登録商標）Freezing Bags, Miltenyi Biotec）。いくつかの態様において、組成物は、凍結保存に適したバイアル中に封入される（例えば、CellSeal（登録商標）Vials, Cook Regentec）。いくつかの態様において、凍結のための工程および／または試薬は、本明細書に記載される凍結のための工程および／または試薬のいずれかであるかまたはこれらを含む。
特定の態様において、細胞は、例えば、例えば血漿および血小板を取り除くための、洗浄工程の後に、細胞は凍結される。いくつかの態様において、細胞は、組換え受容体（例えばCAR）を発現する細胞（例えばCD4+および／またはCD8+ T細胞）の製造および／または作製に関連する任意の工程の前、後、および／または間に、凍結される。ある態様において、そのような工程は、細胞のサブセット（例えば、CD4+および／またはCD8+ T細胞）の選択および／または単離、細胞（例えば、T細胞またはそのサブセット）の刺激および／または増大、あるいは細胞のトランスフェクションまたは形質導入を含むがこれらの限定されない、操作細胞の作製に関連する任意の工程を含み得る。いくつかの態様において、細胞は、細胞の選択および／または単離、細胞の刺激および／または増大、あるいは細胞のトランスフェクションまたは形質導入の前に、対象から収集されたアフェレーシス試料の細胞である。特定の態様において、細胞は、操作プロセスの完了後に、例えば、単離、選択、刺激、活性化、形質導入、トランスフェクション、および／または増大の1つまたは複数の工程を伴うプロセスの後に、凍結される。
いくつかの態様において、細胞は、凍結溶液、例えば、凍結保護剤および／または凍結保護剤を含有する溶液中に懸濁される。凍結保護剤を含有する凍結保存またはガラス化培地または溶液を含有する凍結溶液を含む、様々な任意の公知の凍結溶液およびパラメータをいくつかの局面で使用することができる。好適な凍結保護剤としては、ジメチルスルホキシド(DMSO)、グリセロール、グリコール、プロピレングリコール、エチレングリコール、プロパンジオール、ポリエチレングリコール(PEG)、1,2-プロパンジオール(PROH)、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの例において、凍結保存溶液は、ポリビニルピロリジオン（polyvinyl pyrrolidione）、ヒドロキシエチルデンプン、多糖、単糖、アルギナート、トレハロース、ラフモース（raffmose）、デキストラン、ヒト血清アルブミン、フィコール、リポタンパク質、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルデンプン、自己由来血漿、またはそれらの混合物を含むがこれらに限定されない、1つまたは複数の非細胞透過性凍結保存剤を含有することができる。いくつかの態様において、細胞は、体積で約1％〜約20％、約3％〜約9％、または約6％〜約9％（各々両端の値を含む）の凍結保護剤の最終濃度を有する凍結溶液中に懸濁される。ある態様において、凍結溶液中の凍結保護剤の最終濃度は、体積で約3％、約4％、約5％、約5.5％、約6％、約6.5％、約7％、約7.5％、約8％、約8.5％、約9％、約9.5％、または約10％である。
いくつかの態様において、細胞は、例えば、特定の細胞密度、例えば、既知のまたは制御された細胞密度で、凍結される。ある態様において、凍結プロセス中の細胞密度は、凍結プロセス中におよび／または凍結プロセスに起因して生じる細胞死および／または細胞損傷に影響を与え得る。
例えば、特定の態様において、細胞密度は、凍結プロセス中の周囲との平衡、例えば、浸透圧平衡に影響を与える。いくつかの態様において、この平衡は、脱水であり、脱水を含み、かつ／または、脱水をもたらす。ある態様において、脱水は、凍結溶液（例えば、DMSOおよび／またはDMSO含有溶液）との接触、組み合わせ、および／またはインキュベーションで生じる、細胞脱水であるかまたはこれを含む。特定の態様において、脱水は、細胞へ曝露される有効液体水濃度を低減させることによるなど、細胞外空間における氷晶の核形成および拡張に起因する脱水であるかまたはこれを含む。いくつかの態様において、細胞は、異なる（例えば、より高いまたはより低い）細胞密度で凍結される細胞と比べてより遅いかつ／またはより少ない急速脱水をもたらす細胞密度で、凍結される。いくつかの態様において、細胞は、同じまたは同様の条件下において、異なる（例えば、より高いまたはより低い）細胞密度で凍結される細胞と比べて（that）、約5％、約10％、約20％、約25％、約30％、約40％、約50％、約60％、約70％、約80％、約90％、約100％、約125％、約150％、約175％、約200％、約1倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約10倍、約50倍、もしくは約100倍、少なくとも5％、少なくとも10％、少なくとも20％、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも100％、少なくとも125％、少なくとも150％、少なくとも175％、少なくとも200％、少なくとも1倍、少なくとも2倍、少なくとも3倍、少なくとも4倍、少なくとも5倍、少なくとも10倍、少なくとも50倍、もしくは少なくとも100倍、または5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、125％、150％、175％、200％、1倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍、50倍、もしくは100倍、より遅い脱水をもたらす細胞密度で凍結される。
いくつかの態様において、凍結保護剤はDMSOである。特定の態様において、細胞は、体積で約1％〜約20％、約3％〜約9％、または約6％〜約9％（各々両端の値を含む）のDMSOの最終濃度を有する凍結溶液中に懸濁される。ある態様において、凍結溶液中のDMSOの最終濃度は、体積で約3％、約4％、約5％、約5.5％、約6％、約6.5％、約7％、約7.5％、約8％、約8.5％、約9％、約9.5％、または約10％である。
特定の態様において、細胞は、0.1×106細胞/mL〜5,000×106細胞/mLもしくは約0.1×106細胞/mL〜約5,000×106細胞/mL、1×106細胞/mL〜500×106細胞/mLもしくは約1×106細胞/mL〜約500×106細胞/mL、5×106細胞/mL〜150×106細胞/mLもしくは約5×106細胞/mL〜約150×106細胞/mL、10×106細胞/mL〜70×106細胞/mLもしくは約10×106細胞/mL〜約70×106細胞/mL、または15×106細胞/mL〜60×106細胞/mLもしくは約15×106細胞/mL〜約60×106細胞/mL（各々両端の値を含む）の密度で凍結溶液中に懸濁される。いくつかの態様において、細胞は生存細胞である。
ある態様において、細胞は、1×106細胞/mL〜1×108細胞/mLもしくは約1×106細胞/mL〜約1×108細胞/mL、1×106細胞/mL〜2×107細胞/mLもしくは約1×106細胞/mL〜約2×107細胞/mL、1×107細胞/mL〜5 ×107細胞/mLもしくは約1×107細胞/mL〜約5 ×107細胞/mL、または1×107細胞/mL〜5×107細胞/mLもしくは約1×107細胞/mL〜約5×107細胞/mL（各々両端の値を含む）の密度で凍結溶液中に懸濁される。ある態様において、細胞は、約1×106細胞/mL、約2×106細胞/mL、約5×106細胞/mL、約1×107細胞/mL、約1.5×107細胞/mL、約2×107細胞/mL、約2.5×107細胞/mL、約2.5×107細胞/mL、約2.5×107細胞/mL、約3×107細胞/mL、約3.5×107細胞/mL、約4×107細胞/mL、約4.5×107細胞/mL、または約5×107細胞/mL（各々両端の値を含む）の密度で凍結溶液中に懸濁される。ある態様において、細胞は、約1.5×107細胞/mL〜約6×107細胞/mL（両端の値を含む）の密度で凍結溶液中に懸濁される。ある態様において、細胞は、少なくとも約1×107細胞/mLの密度で凍結溶液中に懸濁される。特定の態様において、細胞は、少なくとも約1.5×107細胞/mLの密度で凍結溶液中に懸濁される。いくつかの態様において、細胞は生存細胞である。
いくつかの態様において、細胞は容器中において凍結される。ある態様において、容器は、凍結容器および／または凍結保護容器である。低温凍結に適した容器としては、バイアル、バッグ、例えば、プラスチックバッグ、およびカンが挙げられるが、これらに限定されない。特定の態様において、細胞、例えば、同じ細胞組成物（例えば、CAR発現細胞を含有する細胞組成物）の細胞が、1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、または10個を超える個別の容器中において凍結される。例えば、いくつかの態様において、細胞および／または細胞の組成物は、ある体積中に、例えば、溶液、凍結溶液、および／または凍結保護剤中に懸濁され、それは容器に適した体積よりも大きく、従って、その体積は2つ以上の容器中に置かれる。いくつかの態様において、体積は、100 mL、50 mL、25 mL、20 mL、15 mL、10 mL、5 mL、もしくは5 mL未満であるか、約100 mL、約50 mL、約25 mL、約20 mL、約15 mL、約10 mL、約5 mL、もしくは約5 mL未満であるか、または100 mLより少ない、50 mLより少ない、25 mLより少ない、20 mLより少ない、15 mLより少ない、10 mLより少ない、5 mLより少ない、もしくは5 mL未満より少なく、細胞は、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、または10個を超える個別のバイアル中において凍結される。特定の態様において、細胞の同じ体積が各バイアル中へ置かれる。いくつかの態様において、バイアルは、同一のバイアル、例えば、同じ型、モデル、および／または生産ロットのバイアルである。特定の態様において、体積は、10 mL、15 mL、20 mL、25 mL、30 mL、40 mL、50 mL、60 mL、70 mL、80 mL、90 mL、100 mL、120 mL、150 mL、200 mL、もしくは200 mL超であるか、約10 mL、約15 mL、約20 mL、約25 mL、約30 mL、約40 mL、約50 mL、約60 mL、約70 mL、約80 mL、約90 mL、約100 mL、約120 mL、約150 mL、約200 mL、もしくは約200 mL超であるか、または10 mLより多く、15 mLより多く、20 mLより多く、25 mLより多く、30 mLより多く、40 mLより多く、50 mLより多く、60 mLより多く、70 mLより多く、80 mLより多く、90 mLより多く、100 mLより多く、120 mLより多く、150 mLより多く、200 mLより多く、もしくは200 mL超より多く、細胞は、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、または10個を超える個別のバッグ中において凍結される。特定の態様において、細胞の同じ体積が各バッグ中へ置かれる。いくつかの態様において、バッグは、同一のバッグ、例えば、同じ型、モデル、および／または生産ロットのバッグである。
いくつかの態様において、容器はバイアルである。ある態様において、容器は、0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、7 mL、8 mL、9 mL、10 mL、11 mL、12 mL、13 mL、14 mL、15 mL、16 mL、17 mL、18 mL、19 mL、20 mL、25 mL、30 mL、35 mL、40 mL、45 mL、もしくは50 mLの、約0.5 mL、約1 mL、約2 mL、約3 mL、約4 mL、約5 mL、約6 mL、約7 mL、約8 mL、約9 mL、約10 mL、約11 mL、約12 mL、約13 mL、約14 mL、約15 mL、約16 mL、約17 mL、約18 mL、約19 mL、約20 mL、約25 mL、約30 mL、約35 mL、約40 mL、約45 mL、もしくは約50 mLの、または少なくとも0.5 mL、少なくとも1 mL、少なくとも2 mL、少なくとも3 mL、少なくとも4 mL、少なくとも5 mL、少なくとも6 mL、少なくとも7 mL、少なくとも8 mL、少なくとも9 mL、少なくとも10 mL、少なくとも11 mL、少なくとも12 mL、少なくとも13 mL、少なくとも14 mL、少なくとも15 mL、少なくとも16 mL、少なくとも17 mL、少なくとも18 mL、少なくとも19 mL、少なくとも20 mL、少なくとも25 mL、少なくとも30 mL、少なくとも35 mL、少なくとも40 mL、少なくとも45 mL、もしくは少なくとも50 mLの、充填容積を有するバイアルである。いくつかの態様において、バイアルは、1 mL〜120 mL、1 mL〜20 mL、1 mL〜5 mL、1mL〜10 mL、1 mL〜40 mL、または20 mL〜40 mL（各々両端の値を含む）の充填容積を有する。いくつかの態様において、バイアルは、凍結バイアル、凍結保護バイアル、および／またはクライオバイアルである。好適なバイアルは公知であり、CellSeal（登録商標）Vials (Cook Regentec)、ならびに、参照によりそれらの全体が本明細書に組み入れられる、米国特許第US 8,936,905号、同第US 9,565,854号および同第US 8,709,797号に記載されるバイアルを含むが、これらに限定されない。
特定の態様において、容器はバッグである。ある態様において、容器は、0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL、6 mL、7 mL、8 mL、9 mL、10 mL、11 mL、12 mL、13 mL、14 mL、15 mL、16 mL、17 mL、18 mL、19 mL、20 mL、25 mL、30 mL、35 mL、40 mL、45 mL、もしくは50 mLの、約0.5 mL、約1 mL、約2 mL、約3 mL、約4 mL、約5 mL、約6 mL、約7 mL、約8 mL、約9 mL、約10 mL、約11 mL、約12 mL、約13 mL、約14 mL、約15 mL、約16 mL、約17 mL、約18 mL、約19 mL、約20 mL、約25 mL、約30 mL、約35 mL、約40 mL、約45 mL、もしくは約50 mLの、または少なくとも0.5 mL、少なくとも1 mL、少なくとも2 mL、少なくとも3 mL、少なくとも4 mL、少なくとも5 mL、少なくとも6 mL、少なくとも7 mL、少なくとも8 mL、少なくとも9 mL、少なくとも10 mL、少なくとも11 mL、少なくとも12 mL、少なくとも13 mL、少なくとも14 mL、少なくとも15 mL、少なくとも16 mL、少なくとも17 mL、少なくとも18 mL、少なくとも19 mL、少なくとも20 mL、少なくとも25 mL、少なくとも30 mL、少なくとも35 mL、少なくとも40 mL、少なくとも45 mL、もしくは少なくとも50 mLの、充填容積を有するバッグである。いくつかの態様において、バッグは、1 mL〜120 mL、1 mL〜20 mL、1 mL〜5 mL、1 mL〜40 mL、20 mL〜40 mL、1 mL〜70 mL、または50 mL〜70 mL（各々両端の値を含む）の充填容積を有する。いくつかの態様において、バッグは、100 mL、75 mL、70 mL、50 mL、25 mL、20 mL、もしくは10 mLの、約100 mL、約75 mL、約70 mL、約50 mL、約25 mL、約20 mL、もしくは約10 mLの、または100 mL未満、75 mL未満、70 mL未満、50 mL未満、25 mL未満、20 mL未満、もしくは10 mL未満の、ボリュームで充填される。好適なバッグは公知であり、CryoMacs（登録商標）Freezing Bags (Miltenyi Biotec)を含むが、これらに限定されない。ある態様において、ボリュームは室温でのボリュームである。いくつかの態様において、ボリュームは、37℃〜4℃、16℃〜27℃（両端の値を含む）の、あるいは、16℃、17℃、18℃、19℃、20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、35℃、36℃、もしくは37℃での、約16℃、約17℃、約18℃、約19℃、約20℃、約21℃、約22℃、約23℃、約24℃、約25℃、約26℃、約27℃、約28℃、約29℃、約30℃、約31℃、約32℃、約33℃、約34℃、約35℃、約36℃、もしくは約37℃での、または少なくとも16℃、少なくとも17℃、少なくとも18℃、少なくとも19℃、少なくとも20℃、少なくとも21℃、少なくとも22℃、少なくとも23℃、少なくとも24℃、少なくとも25℃、少なくとも26℃、少なくとも27℃、少なくとも28℃、少なくとも29℃、少なくとも30℃、少なくとも31℃、少なくとも32℃、少なくとも33℃、少なくとも34℃、少なくとも35℃、少なくとも36℃、もしくは少なくとも37℃での、ボリュームである。いくつかの態様において、ボリュームは25℃でのボリュームである。
いくつかの態様において、1 mL〜20 mL（両端の値を含む）の培地または溶液（例えば凍結溶液）の体積中の細胞が、1つまたは複数のバイアル中において凍結される。いくつかの態様において、1つまたは複数のバイアルは、1 mL〜5 mL（両端の値を含む）の充填容積を有する。ある態様において、20 mL〜120 mL（両端の値を含む）の培地または溶液（例えば凍結溶液）の体積中の細胞が、1つまたは複数のバッグ中において凍結される。特定の態様において、1つまたは複数のバッグは、20 mL〜40 mL（両端の値を含む）の充填容積を有する。いくつかの態様において、120 mL以上の培地または溶液（例えば凍結溶液）の体積中の細胞が、1つまたは複数のバッグ中において凍結される。ある態様において、1つまたは複数のバッグは、50 mL〜70 mL（両端の値を含む）の充填容積を有する。
ある態様において、細胞は、ある表面積対体積比で、容器（例えばバッグまたはバイアル）中に置かれる、溶液（例えば凍結溶液）中において凍結される。特定の態様において、表面積対体積比は、0.1 cm-1〜100 cm-1；1 cm-1〜50 cm-1、1 cm-1〜20 cm-1、1 cm-1〜10 cm-1、2 cm-1〜10 cm-1、3 cm-1〜7 cm-1、もしくは3 cm-1〜6 cm-1、または約0.1 cm-1〜約100 cm-1；約1 cm-1〜約50 cm-1、約1 cm-1〜約20 cm-1、約1 cm-1〜約10 cm-1、約2 cm-1〜約10 cm-1、約3 cm-1〜約7 cm-1、もしくは約3 cm-1〜約6 cm-1（各々両端の値を含む）である。特定の態様において、表面積対体積比は、3 cm-1〜6 cm-1または約3 cm-1〜約6 cm-1である。いくつかの態様において、表面積対体積比は、3 cm-1、4 cm-1、5 cm-1、6 cm-1、もしくは7 cm-1であるか、約3 cm-1、約4 cm-1、約5 cm-1、約6 cm-1、もしくは約7 cm-1であるか、または少なくとも3 cm-1、少なくとも4 cm-1、少なくとも5 cm-1、少なくとも6 cm-1、もしくは少なくとも7 cm-1である。
いくつかの態様において、凍結保存培地への移動は、培地を除去するためなどの試料（例えば操作細胞組成物）の洗浄、および／または、後の凍結のための適切な凍結保存緩衝液もしくは培地中における細胞の置き換えを伴い得る、1つまたは複数の処理工程に関連する。ある態様において、凍結保存培地への移動は、閉鎖無菌系において臨床規模レベルで完全自動化される。ある態様において、凍結保存培地への移動は、CliniMACSシステム(Miltenyi Biotec)を使用して行われる。
いくつかの態様において、細胞は解凍される。特定の態様において、細胞は、急速に、例えば、細胞を過熱することなくまたは37℃超などの高温へ細胞を曝露することなく可能な限り急速に、解凍される。いくつかの態様において、急速解凍は、高濃度の凍結保護剤および／またはDMSOへの細胞の曝露を低減させかつ／または妨げる。特定の態様において、解凍が生じる速度は、細胞が凍結および解凍される容器、例えば、バイアルおよび／またはバッグの特性によって影響され得る。特定の態様において、細胞は、37℃、35℃、32℃、30℃、29℃、28℃、27℃、26℃、25℃、24℃、23℃、22℃、21℃、20℃、もしくは15℃の、約37℃、約35℃、約32℃、約30℃、約29℃、約28℃、約27℃、約26℃、約25℃、約24℃、約23℃、約22℃、約21℃、約20℃、もしくは約15℃の、または37℃未満、35℃未満、32℃未満、30℃未満、29℃未満、28℃未満、27℃未満、26℃未満、25℃未満、24℃未満、23℃未満、22℃未満、21℃未満、20℃未満、もしくは15℃未満の、または15℃〜30℃、23℃〜28℃、もしくは24℃〜26℃（各々両端の値を含む）の温度で解凍される。いくつかの態様において、細胞は、ヒートブロック上またはウォーターバス中で解凍される。ある態様において、細胞は、ヒートブロックまたはウォーターバスにおいて解凍されない。いくつかの態様において、細胞は室温で解凍される。いくつかの態様において、容器壁の厚みは、細胞解凍速度に影響を与え、例えば、厚い壁を有する容器中の細胞は、より薄い壁を有する容器中と比べてより遅い速度で解凍される。いくつかの態様において、低い表面積対体積比を有する容器は、遅いかつ／または不均一な解凍速度を有する。いくつかの態様において、低温凍結された細胞は、1 cm-1、2 cm-1、3 cm-1、4 cm-1、5 cm-1、6 cm-1、もしくは7 cm-1、8 cm-1、9 cm-1、もしくは10 cm-1であるか、約1 cm-1、約2 cm-1、約3 cm-1、約4 cm-1、約5 cm-1、約6 cm-1、もしくは約7 cm-1、約8 cm-1、約9 cm-1、もしくは約10 cm-1であるか、または少なくとも1 cm-1、少なくとも2 cm-1、少なくとも3 cm-1、少なくとも4 cm-1、少なくとも5 cm-1、少なくとも6 cm-1、もしくは少なくとも7 cm-1、少なくとも8 cm-1、少なくとも9 cm-1、もしくは少なくとも10 cm-1である、表面積対体積比を有するものを含有するものの中において（in a containing having）、急速に解凍される。特定の態様において、細胞は、120分間、90分間、60分間、45分間、30分間、25分間、20分間、15分間、もしくは10分間で、約120分間、約90分間、約60分間、約45分間、約30分間、約25分間、約20分間、約15分間、もしくは約10分間で、または120分間未満、90分間未満、60分間未満、45分間未満、30分間未満、25分間未満、20分間未満、15分間未満、もしくは10分間未満で、解凍される。いくつかの態様において、細胞は、10分間〜60分間、15分間〜45分間、または15分間〜25分間（各々両端の値を含む）で解凍される。特定の態様において、細胞は、20分間で、約20分間で、または20分間未満で、解凍される。
ある態様において、解凍された細胞は、投与前に、または任意の後の操作および／もしくは処理工程の前に、静置され、例えば、インキュベートまたは培養される。いくつかの態様において、細胞は、低量かつ／もしくは検出不可能な量の凍結保護剤中において、または、凍結保護剤（例えばDMSO）の非存在下で、静置される。特定の態様において、解凍された細胞は、例えば、凍結保護剤および／またはDMSOを除去するための、洗浄工程の後または直後に、静置される。いくつかの態様において、静置は、37℃でのまたは約37℃での培養および／またはインキュベーションであるかまたはこれらを含む。いくつかの態様において、静置は、任意の処理もしくは操作工程で使用されるかつ／またはこれらに関連する、任意の試薬、例えば、刺激試薬、ビーズ試薬、または組換えサイトカインの非存在下で行われる。いくつかの態様において、細胞は、5分間、10分間、15分間、30分間、1時間、2時間、3時間、4時間、5時間、6時間、8時間、12時間、18時間、もしくは24時間、約5分間、約10分間、約15分間、約30分間、約1時間、約2時間、約3時間、約4時間、約5時間、約6時間、約8時間、約12時間、約18時間、もしくは約24時間、または少なくとも5分間、少なくとも10分間、少なくとも15分間、少なくとも30分間、少なくとも1時間、少なくとも2時間、少なくとも3時間、少なくとも4時間、少なくとも5時間、少なくとも6時間、少なくとも8時間、少なくとも12時間、少なくとも18時間、もしくは少なくとも24時間、静置される。ある態様において、細胞は、2時間、約2時間、または少なくとも2時間、静置される。
いくつかの態様において、細胞を処理および／または操作するための前記方法の前、間、または後のいずれかに、細胞は、凍結、例えば、凍結保存される。いくつかの態様において、凍結工程およびその後の解凍工程によって、細胞集団の中にある顆粒球が取り除かれ、単球がある程度まで取り除かれる。細胞は通常、1分につき1°の速度で-80℃まで凍結され、液体窒素貯蔵タンクの気相の中で保管される。いくつかの態様において、細胞は、速度制御フリーザーを使用して1分につき1°または約1°の速度で能動的にかつ／または有効に冷却される。いくつかの態様において、細胞は、速度制御フリーザーを用いて凍結させることができる。いくつかの局面において、速度制御フリーザーは、プログラムされた冷却プロファイルで、例えば、複数の冷却および／または加熱速度を有するプロファイルで、細胞を凍結するために使用される。そのような凍結プロファイルは、核形成、例えば氷形成を制御するように、例えば、細胞内氷形成を低減させるように、プログラムされ得る。
いくつかの態様において、特定の濃度もしくは細胞密度での細胞組成物、凍結保護剤の存在下で凍結された細胞組成物、および／または、特定の体積もしくは表面対体積比で容器へ充填された細胞組成物などの、記載されるような細胞および組成物のいずれかを含む凍結細胞の特徴は、代替手段によって凍結された細胞と比べて、改善された、増加した、かつ／またはより速い増大；改善された、増加した、かつ／または増強された細胞生存、および、細胞死、例えば壊死、プログラム細胞死、および／またはアポトーシスの減少した事象；改善された、増強された、かつ／または増加した活性、例えば細胞溶解活性；ならびに／あるいは、解凍後の老化または休止の減少した事象を含む。
特定の態様において、細胞は、本明細書に提供される細胞密度および／または表面積対体積比で凍結され、同じまたは同様の条件下で異なる細胞密度および／または異なる表面積対体積比で凍結された細胞と比較した場合、凍結、低温凍結および／または凍結保存中のおよび／またはこれらに起因しての、減少した細胞死、例えば、壊死および／またはアポトーシスを有する。特定の態様において、細胞は、本明細書に提供される細胞密度および／または表面積対体積比で凍結され、凍結、低温凍結および／または凍結保存後48時間以内に、例えば、凍結細胞の解凍後、減少した、遅延した細胞死、例えば、例えば壊死、プログラム細胞死、またはアポトーシスによって、死滅する細胞の量の減少を有する。ある態様において、同じまたは同様の条件下で異なる細胞密度および／または異なる表面積対体積比で凍結される細胞と比較した場合、凍結および／または凍結保存中におよび／またはこれらに起因して、少なくともまたは約5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、もしくは99％、より少ない細胞が死滅する。ある態様において、提供される細胞密度および／または表面積対体積比で凍結された細胞の40％、30％、25％、20％、15％、10％、5％、1％、0.1％、または0.01％未満が、凍結、低温凍結および／または凍結保存中におよび／またはこれらからの結果として、死滅する。
いくつかの態様において、細胞は、本明細書に提供される細胞密度および／または表面積対体積比で凍結され、同じまたは同様の条件下で異なる（a different a different）細胞密度および／または異なる表面積対体積比で凍結された細胞と比較した場合、凍結、低温凍結、および／または凍結保存に起因してのおよび／またはこれらから生じる、減少した老化または休止の事象を有する。特定の態様において、同じまたは同様の条件下で異なる細胞密度および／または異なる表面積対体積比で凍結された細胞と比較した場合、少なくともまたは約5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、もしくは99％、より少ない細胞が、老化および／または休止細胞である。ある態様において、細胞は、提供される細胞密度および／または表面積対体積比で凍結され、細胞の40％、30％、25％、20％、15％、10％、5％、1％、0.1％、または0.01％未満が、凍結、低温凍結および／または凍結保存からの結果として、老化および／または休止となる。
ある態様において、細胞は、本明細書に提供される細胞密度および／または表面積対体積比で凍結され、例えば低温凍結され、同じまたは同様の条件下で異なる細胞密度および／または表面積対体積比で凍結された細胞と比較した場合、細胞の解凍後、例えば、本明細書に記載される刺激試薬と共のインキュベーションによるなどの刺激条件下で、改善された、より速い、かつ／またはより急速な増大を有する。特定の態様において、同じまたは同様の条件下で異なる細胞密度および／または異なる表面積対体積比で凍結された細胞と比較した場合、細胞は、5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、もしくは10倍、約5％、約10％、約20％、約25％、約30％、約40％、約50％、約60％、約70％、約80％、約90％、約100％、約150％、約200％、約1倍、約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、もしくは約10倍、または少なくとも5％、少なくとも10％、少なくとも20％、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも100％、少なくとも150％、少なくとも200％、少なくとも1倍、少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも3倍、少なくとも4倍、少なくとも5倍、もしくは少なくとも10倍、より速くかつ／またはより急速な速度で増大する。例えば、いくつかの態様において、解凍された細胞は、同じまたは同様の条件下で異なる細胞密度および／または異なる表面積対体積比で凍結された、解凍された細胞と比較した場合、5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、もしくは99％、約5％、約10％、約20％、約25％、約30％、約40％、約50％、約60％、約70％、約80％、約90％、約95％、もしくは約99％、または少なくとも5％、少なくとも10％、少なくとも20％、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも95％、もしくは少なくとも99％、より少ない時間で、閾値増大、例えば、既定の細胞数、密度、または係数、例えば2倍の増大に達する。
いくつかの態様において、細胞は、前記細胞密度で凍結され、例えば低温凍結され、同じまたは同様の条件下で異なる細胞密度で（例えばより高いまたはより低い密度で）凍結された細胞と比較した場合、細胞の解凍後、例えば、本明細書に記載される細胞溶解活性を測定するための任意のアッセイによって測定されるような、改善された、増加した、かつ／またはより高い細胞溶解活性を有する。特定の態様において、細胞溶解活性は、同じまたは同様の条件下で異なる密度で凍結された細胞と比較した場合、5％、10％、20％、25％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、もしくは10倍、約5％、約10％、約20％、約25％、約30％、約40％、約50％、約60％、約70％、約80％、約90％、約100％、約150％、約200％、約1倍、約1.5倍、約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、もしくは約10倍、または少なくとも5％、少なくとも10％、少なくとも20％、少なくとも25％、少なくとも30％、少なくとも40％、少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、少なくとも100％、少なくとも150％、少なくとも200％、少なくとも1倍、少なくとも1.5倍、少なくとも2倍、少なくとも3倍、少なくとも4倍、少なくとも5倍、もしくは少なくとも10倍、増加する。
VI．組成物および製剤
細胞を含む組成物をさらに提供し、これは、薬学的組成物および製剤、例えば、ある特定の用量で投与するための、またはある特定の用量を分けて投与するための数の細胞を含む単位用量形態組成物を含む。薬学的組成物および製剤は、一般に、1つまたは複数の任意選択の薬学的に許容される担体または賦形剤を含む。いくつかの態様において、前記組成物は、少なくとも1つの追加の治療剤を含む。
用語「薬学的製剤」は、薬学的製剤に含まれる活性成分の生物学的活性が有効になるような形をとり、製剤が投与される対象に対して容認できないほどの毒性がある、さらなる成分を含有しない調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」とは、対象に無毒な、活性成分以外の、薬学的製剤中にある成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝液、賦形剤、安定剤、または保存剤が含まれるが、これに限定されない。
いくつかの局面では、担体の選択は、一つには、特定の細胞によって、および／または投与方法によって決定される。従って、様々な適切な製剤がある。例えば、薬学的組成物は保存剤を含有してもよい。適切な保存剤には、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸ナトリウム、および塩化ベンザルコニウムが含まれ得る。いくつかの局面では、2種類以上の保存剤の混合物が用いられる。保存剤またはその混合物は典型的には全組成物の重量に対して約0.0001％〜約2％の量で存在する。担体は、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に記載されている。薬学的に許容される担体は、一般的に、使用される投与量および濃度でレシピエントに無毒であり、緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸、および他の有機酸；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化物質；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチルアルコールもしくはベンジルアルコール；アルキルパラベン、例えば、メチルパラベンもしくはプロピルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；3-ペンタノール；およびm-クレゾール）；低分子量（約10残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む、単糖、二糖、および他の糖質；キレート剤、例えば、EDTA；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール；塩を形成する対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Zn-タンパク質錯体）；ならびに／または非イオン界面活性剤、例えば、ポリエチレングリコール(PEG)を含むが、これらに限定されない。
いくつかの局面では、緩衝剤が前記組成物に含まれる。適切な緩衝剤には、例えば、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸、リン酸カリウム、ならびに様々な他の酸および塩が含まれる。いくつかの局面では、2種類以上の緩衝剤の混合物が用いられる。緩衝剤またはその混合物は典型的には全組成物の重量に対して約0.001％〜約4％の量で存在する。投与可能な薬学的組成物を調製するための方法は公知である。例示的な方法は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed. (May 1, 2005)において、さらに詳細に説明されている。
前記製剤は水溶液を含み得る。前記製剤または組成物はまた、前記細胞で処置される特定の適応症、疾患、または状態に有用な複数種の活性成分、好ましくは前記細胞を補足する活性を有する活性成分も含有してよく、この場合、それぞれの活性は互いに悪影響を及ぼさない。このような活性成分は、所期の目的に有効な量で組み合わせられて適切に存在する。従って、いくつかの態様では、薬学的組成物は、他の薬学的に活性な薬剤または薬物、例えば、化学療法剤、例えば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メトトレキセート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、および／またはビンクリスチンをさらに含む。
いくつかの態様において、組成物は、疾患または状態の負荷量を減少させるために有効な量で、および／または、対象中においてCRSもしくは重度CRSを生じさせず、かつ／または、本明細書に記載される方法の他の転帰のいずれかをもたらす量で、細胞を含む。
薬学的組成物は、いくつかの態様では、細胞を、前記疾患または状態を処置または予防するのに有効な量、例えば、治療的有効量または予防的有効量で含む。治療効力または予防効力は、いくつかの態様では、処置される対象を定期的に評価することによってモニタリングされる。望ましい投与量は、細胞の単回大量瞬時投与によって送達されてもよく、細胞の複数回大量瞬時投与によって送達されてもよく、細胞の連続注入投与によって送達されてもよい。
細胞および組成物は、標準的な投与技法、製剤、および／または装置を用いて投与され得る。細胞の投与は自家投与でもよく、または異種投与でもよい。例えば、ある対象から免疫応答性細胞または前駆細胞を入手し、同じ対象または異なる適合性の対象に投与することができる。末梢血に由来する免疫応答性細胞またはその子孫（例えば、インビボ、エクスビボ、またはインビトロで得られる）を、カテーテル投与を含む局所注射、全身注射、局所注射、静脈内注射、または非経口投与を介して投与することができる。治療用組成物（例えば、遺伝子組換えされた免疫応答性細胞を含有する薬学的組成物）が投与される時に、一般的に、注射用単位剤形（溶液、懸濁液、エマルジョン）の形で製剤化される。
製剤には、経口投与、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、肺投与、経皮投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、頬投与、舌下投与、または坐剤投与のための製剤が含まれる。いくつかの態様では、前記細胞集団は非経口投与される。本明細書で使用する用語「非経口」は、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、直腸投与、腟投与、および腹腔内投与を含む。いくつかの態様では、前記細胞は、静脈内注射、腹腔内注射、または皮下注射による末梢全身送達を用いて対象に投与される。
組成物は、いくつかの態様では、滅菌した液体調製物、例えば、等張性水溶液、懸濁液、エマルジョン、分散液として提供されるか、または粘性のある組成物として提供され、これらは、いくつかの局面では、選択されたpHまで緩衝化されてもよい。液体調製物は、通常、ゲル、他の粘性のある組成物、および固体組成物より調製しやすい。さらに、液体組成物の方が、投与するのに、特に、注射によって投与するのに若干便利である。他方で、粘性のある組成物は、特定の組織との長い接触期間をもたらすように適切な粘性の範囲内で製剤化することができる。液体組成物または粘性のある組成物は、例えば、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）、およびその適切な混合物を含有する、溶媒または分散媒でもよい担体を含んでもよい。
滅菌注射液は、前記細胞を溶媒の中に取り入れて、例えば、適切な担体、希釈剤、または賦形剤、例えば、滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどと混合して調製することができる。前記組成物は、望ましい投与経路および調製物に応じて、補助物質、例えば、湿潤剤、分散剤、または乳化剤（例えば、メチルセルロース）、pH緩衝剤、ゲル化または粘性を高める添加剤、保存剤、着香剤、および／または着色剤を含有することができる。いくつかの局面では、適切な調製物を調製するために標準的な教科書が調べられる場合がある。
抗菌性保存剤、抗酸化物質、キレート剤、および緩衝液を含む、前記組成物の安定性および無菌性を向上させる様々な添加剤を添加することができる。微生物の作用は、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸によって防止することができる。注射用薬学的剤形の長期吸収は、吸収を遅延する薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを使用することによって引き起こすことができる。
インビボ投与のために使用しようとする製剤は一般的に無菌である。無菌性は、容易に、例えば、滅菌濾過膜で濾過することによって成し遂げられ得る。
いくつかの態様において、治療用T細胞組成物は、1 mL当たり約1000万個の細胞〜1 mL当たり約7000万個の細胞、または1 mL当たり約1000万個の生存細胞〜1 mL当たり約7000万個の生存細胞（各々両端の値を含む）を含む。いくつかの態様において、治療用T細胞組成物は、1 mL当たり約1500万個の細胞または生存細胞〜1 mL当たり約6000万個の細胞または生存細胞（各々両端の値を含む）を含む。いくつかの態様において、T細胞組成物は、1 mL当たり1000万個を超える細胞または生存細胞を含む。いくつかの態様において、治療用T細胞組成物は、1 mL当たり1500万個を超える細胞または1500万個を超える細胞を含む。
いくつかの態様において、物品は、容器、例えば、バイアルまたはバッグ、例えばIVバッグ、または注射器が、単位の標的数を含有することを示す情報をさらに含有する。
いくつかの態様において、製造物品、容器は第1の容器であり、物品は追加の容器をさらに含み、ここで、追加の容器の各々は、T細胞組成物の単位の標的数を含む単位用量を含む。いくつかの態様において、追加の容器は、1 mL当たり約1000万個の細胞または生存細胞〜1 mL当たり約7000万個の細胞または生存細胞、1 mL当たり約1500万個の細胞または生存細胞〜約6000万個の細胞または生存細胞、1 mL当たり1000万個を超える細胞または生存細胞、1 mL当たり1500万個を超える細胞または生存細胞（各々両端の値を含む）、またはその組み合わせを含む。いくつかの態様において、組成物は凍結保護剤をさらに含み、かつ／または、物品は、対象への投与前に組成物を解凍するための説明書をさらに含む。
いくつかの態様において、例えば、血漿および血小板を取り除く洗浄工程の後に、前記細胞は凍結溶液に懸濁される。様々な任意の公知の凍結溶液およびパラメータをいくつかの局面で使用することができる。一例は、20％DMSOおよび8％ヒト血清アルブミン（HSA）を含有するPBS、または他の適切な細胞凍結培地を使用することを伴う。次いで、DMSOおよびHSAの最終濃度がそれぞれ10％および4％になるように、これを培地で1:1に希釈する。
様々な任意の公知の凍結溶液およびパラメータをいくつかの局面で使用することができる。いくつかの態様において、細胞試料は、凍結保護剤を含有する凍結保存またはガラス化培地または溶液を含有することができる。好適な凍結保護剤としては、ジメチルスルホキシド（dimethy sulfoxide）(DMSO)、グリセロール、グリコール、プロピレングリコール、エチレングリコール、プロパンジオール、ポリエチレングリコール(PEG)、1,2-プロパンジオール(PROH)、またはそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの例において、凍結保存溶液は、ポリビニルピロリジオン、ヒドロキシエチルデンプン、多糖、単糖、アルギナート、トレハロース、ラフモース、デキストラン、ヒト血清アルブミン、フィコール、リポタンパク質、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシエチルデンプン、自己由来血漿、またはそれらの混合物を含むがこれらに限定されない、1つまたは複数の非細胞透過性凍結保存剤を含有することができる。いくつかの態様において、細胞は、体積で約1％〜約20％、約3％〜約9％、または約6％〜約9％（各々両端の値を含む）の凍結保護剤の最終濃度を有する凍結溶液中に懸濁される。ある態様において、凍結溶液中の凍結保護剤の最終濃度は、体積で約3％、約4％、約5％、約5.5％、約6％、約6.5％、約7％、約7.5％、約8％、約8.5％、約9％、約9.5％、または約10％である。
いくつかの態様において、凍結保護剤はDMSOである。特定の態様において、細胞は、体積で約1％〜約20％、約3％〜約9％、または約6％〜約9％（各々両端の値を含む）のDMSOの最終濃度を有する凍結溶液中に懸濁される。ある態様において、凍結溶液中のDMSOの最終濃度は、体積で約3％、約4％、約5％、約5.5％、約6％、約6.5％、約7％、約7.5％、約8％、約8.5％、約9％、約9.5％、または約10％である。
ある態様において、細胞は、約1×106細胞/mL〜約1×108細胞/mL、約1×106細胞/mL〜約2×107細胞/mL、約1×107細胞/mL〜約5 ×107細胞/mL、または約1×107細胞/mL〜5×107細胞/mL（各々両端の値を含む）の密度で凍結溶液中に懸濁される。ある態様において、細胞は、約1×106細胞/mL、約2×106細胞/mL、約5×106細胞/mL、約1×107細胞/mL、約1.5×107細胞/mL、約2×107細胞/mL、約2.5×107細胞/mL、約2.5×107細胞/mL、約2.5×107細胞/mL、約3×107細胞/mL、約3.5×107細胞/mL、約4×107細胞/mL、約4.5×107細胞/mL、または約5×107細胞/mLの密度で凍結溶液中に懸濁される。ある態様において、細胞は、約1.5×107細胞/mL〜約6×107細胞/mL（両端の値を含む）の密度で凍結溶液中に懸濁される。ある態様において、細胞は、少なくとも約1×107細胞/mLの密度で凍結溶液中に懸濁される。特定の態様において、細胞は、少なくとも約1.5×107細胞/mLの密度で凍結溶液中に懸濁される。いくつかの態様において、細胞は生存細胞である。
いくつかの態様において、凍結保存培地への移動は、培地を除去するためなどの試料（例えば操作細胞組成物）の洗浄、および／または、後の凍結のための適切な凍結保存緩衝液もしくは培地中における細胞の置き換えを伴い得る、1つまたは複数の処理工程に関連する。ある態様において、凍結保存培地への移動は、閉鎖無菌系において臨床規模レベルで完全自動化される。ある態様において、凍結保存培地への移動は、CliniMACSシステム(Miltenyi Biotec)を使用して行われる。
いくつかの態様において、細胞を処理および／または操作するための前記方法の前、間、または後のいずれかに、細胞は、凍結、例えば、凍結保存される。いくつかの態様において、凍結工程およびその後の解凍工程によって、細胞集団の中にある顆粒球が取り除かれ、単球がある程度まで取り除かれる。細胞は通常、1分につき1°の速度で-80℃まで凍結され、液体窒素貯蔵タンクの気相の中で保管される。
いくつかの態様において、組成物は凍結保存に適したバッグ中に封入される（例えば、CryoMacs（登録商標）Freezing Bags, Miltenyi Biotec）。いくつかの態様において、組成物は、凍結保存に適したバイアル中に封入される（例えば、CellSeal（登録商標）Vials, Cook Regentec）。
VII．製造物品
養子細胞療法のために、提供される方法に従って対象に前記細胞を投与するための、ならびに前記細胞および組成物を保管および投与するための製造物品、例えば、キットおよびデバイスをさらに提供する。
製造物品は、1つまたは複数の容器、典型的には、複数の容器と、包装材料と、前記容器（複数可）および／もしくはパッケージの表面にあるか、または前記容器（複数可）および／もしくはパッケージに付けられたラベルまたは添付文書とを備え、一般的には、ラベルまたは添付文書は前記細胞を対象に投与するための説明書を含む。
前記容器は、一般的に、投与される前記細胞、例えば、その1つまたは複数の単位用量を収容する。製造物品は典型的には複数の容器を備え、それぞれの容器には1単位用量の前記細胞が入っている。単位用量は、第1の用量において対象に投与される前記細胞の量または数でもよく、第1の用量または任意の1つまたは複数の連続用量において投与される前記細胞の数の2倍（またはそれ以上）でもよい。単位用量は、投与方法に関連して対象に投与される、前記細胞の最も少ない用量または可能性のある最も少ない用量でもよい。いくつかの態様において、単位用量は、本明細書における方法に従って、特定の疾患もしくは状態を有する任意の対象、または任意の対象へ、単回投与で投与される、細胞の最小数、または細胞の数、または参照単位の最小数、または標的参照単位、または標的範囲内の参照単位である。いくつかの態様において、単位用量中の細胞の数は、用量において、特定の対象、例えば、前記細胞が誘導された対象に投与することが望ましい、細胞の数、または、組換え受容体発現細胞もしくはCAR発現細胞の数、または、ある表現型（例えば、CD8+、アポトーシスマーカー陰性（例えば、アネキシンV-またはカスパーゼ3-）かつCD8+）のそのような細胞の数である。いくつかの態様において、単位用量中の標的数の参照単位または標的範囲内の参照単位は、細胞の数または組換え受容体発現細胞もしくはCAR発現細胞の数、またはある表現型（例えば、CD8+、アポトーシスマーカー陰性（例えば、アネキシンV-またはカスパーゼ3-）かつCD8+）のそのような細胞の数と、組成物の組換え受容体依存性活性（例えば、抗原特異的活性）との関数としての組成物の参照単位であり、用量において、特定の対象、例えば、前記細胞が誘導された対象に投与することが望ましい。いくつかの態様において、前記細胞は、本明細書に提供されるような方法によって治療される予定であるかまたはその必要がある対象から誘導されたものである。
いくつかの態様において、製造物品は、本明細書の他の箇所に記載される式に従うような、所定の範囲内の参照単位(RU)の標的数を含有する細胞の単位用量を含有する。参照単位(RU)の標的数または総細胞の標的数の例示的な単位用量は、本開示の全体にわたって記載されるいかなるものも含む。
いくつかの態様において、容器の各々は、単位用量の細胞を個々に含み、これは、例えば、同じであるかまたは実質的に同じである、細胞の数、または組換え発現細胞もしくはCAR発現細胞の数、またはある表現型（例えば、CD8+、アポトーシスマーカー陰性（例えば、アネキシンV-またはカスパーゼ3-））のそのような細胞の数を含む。いくつかの態様において、容器の各々は、単位用量の細胞を個々に含み、これは、例えば、同じであるかまたは実質的に同じである、標的参照単位の数または標的範囲内の参照単位の数を含む。
好適な容器には、例えば、瓶、バイアル、注射器、および可撓性のあるバッグ、例えば、注入バッグが含まれる。特定の態様において、前記容器は、バッグ、例えば、可撓性のあるバッグ、例えば、対象に細胞を注入するのに適した可撓性のあるバッグ、例えば、可撓性のあるプラスチックバッグもしくはPVCバッグ、および／またはIV溶液バッグである。前記バッグは、いくつかの態様では、前記細胞および組成物の無菌溶液および無菌送達を提供するように密閉することができる、および／または滅菌することができる。いくつかの態様において、前記容器、例えば、バッグの容量は、10ml、20ml、30ml、40ml、50ml、60ml、70ml、80ml、90ml、100ml、200ml、300ml、400ml、500ml、もしくは1000ml、または約10ml、約20ml、約30ml、約40ml、約50ml、約60ml、約70ml、約80ml、約90ml、約100ml、約200ml、約300ml、約400ml、約500ml、もしくは約1000ml容量、または少なくとも10ml、少なくとも20ml、少なくとも30ml、少なくとも40ml、少なくとも50ml、少なくとも60ml、少なくとも70ml、少なくとも80ml、少なくとも90ml、少なくとも100ml、少なくとも200ml、少なくとも300ml、少なくとも400ml、少なくとも500ml、もしくは少なくとも1000ml、または少なくとも約10ml、少なくとも約20ml、少なくとも約30ml、少なくとも約40ml、少なくとも約50ml、少なくとも約60ml、少なくとも約70ml、少なくとも約80ml、少なくとも約90ml、少なくとも約100ml、少なくとも約200ml、少なくとも約300ml、少なくとも約400ml、少なくとも約500ml、もしくは少なくとも約1000ml容量、例えば、10mLもしくは約10mLから100mLもしくは約100mL、または10mLもしくは約10mLから500mLもしくは約500mL容量（各々両端の値を含む）である。いくつかの態様において、前記容器、例えば、バッグは、安定な、ならびに／あるいは様々な温度の1つまたは複数において、例えば、低温、例えば、-20℃未満もしくは約-20℃未満、-80℃未満もしくは約-80℃未満、-120℃未満もしくは約-120℃未満、-135℃未満もしくは約-135℃未満、または-20℃もしくは約-20℃、-80℃もしくは約-80℃、-120℃もしくは約-120℃、-135℃もしくは約-135℃、ならびに／あるいは凍結保存に適した温度、ならびに／あるいは他の温度、例えば、前記細胞を解凍するのに適した温度、および体温、例えば、37℃または約37℃、例えば、処置の直前に、例えば、対象の場所または処置の場所、例えば、ベッドサイドで解凍が可能な温度で、細胞を安定して保管および／もしくは維持する材料である、ならびに／あるいはこのような材料から作られる。
前記容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。いくつかの態様において、前記容器は、例えば、チューブを接続するための、または1つもしくは複数のチューブにカニューレ挿入するための、例えば、静脈内注入もしくは他の注入のためにカニューレ挿入するための、ならびに／あるいは他の容器、例えば、細胞培養バッグおよび／もしくは保管バッグまたは他の容器に移入する目的で、ならびにこれから移入する目的で接続するための1つまたは複数のポート、例えば、無菌のアクセスポートを有する。例示的な容器には、注射用に針で穴を開けることができる栓が付いたものを含む、注入バッグ、静脈内溶液バッグ、バイアルが含まれる。
さらに、製造物品は、1つもしくは複数の識別情報および／または使用のための説明書が付いた添付文書またはラベルを備えてもよい。いくつかの態様において、情報または説明書は、特定の状態もしくは疾患を処置するために、その内容を使用することができるか、もしくは使用しなければならならいこと、および／またはそのために説明書を提供することを示す。ラベルまたは添付文書は、疾患または状態を処置するために製造物品の中身が用いられることを示してもよい。いくつかの態様において、ラベルまたは添付文書は、例えば、提供される方法の任意の態様に従って、第1の用量および1つまたは複数の連続用量の前記細胞を投与することを伴う方法を介して、対象、例えば、前記細胞が得られた対象を処置するための説明書を提供する。いくつかの態様において、説明書は、第1の用量において1単位用量、例えば、製造物品の中にある1個の個別容器の内容物を投与し、それに続いて、特定の時点で、もしくは特定の時間枠内で、および／あるいは対象において1つもしくは複数の因子もしくは転帰の存在もしくは非存在または量もしくは程度が検出された後に、1つまたは複数の連続用量を投与することを規定している。
いくつかの態様において、説明書は、対象に1つまたは複数の単位用量を投与することを規定している。
いくつかの態様において、ラベルまたは添付文書またはパッケージは、前記細胞が得られた、および／または前記細胞が投与される対象の具体的な身元を示す識別子を備える。自家移入の場合、前記細胞が得られた対象の身元は、前記細胞が投与される対象の身元と同じである。従って、識別情報は、前記細胞が特定の患者、例えば、前記細胞が最初に得られた患者に投与されることを指定することがある。このような情報は、バーコードまたは他のコード化した識別子の形で包装材料および／またはラベルの中に存在してもよく、対象の名前および／または他の識別特性を示してもよい。
製造物品は、いくつかの態様では、前記細胞を含む組成物、例えば、その個々の単位剤形を収容する、1つまたは複数の、典型的には複数の容器を備え、1つまたは複数のさらなる容器と、その中に収容される、さらなる薬剤、例えば、細胞傷害剤またはそうでない場合は治療剤、例えば、前記細胞と一緒に、組み合わせて投与される、例えば、同時に、または任意の順番で連続して投与される、さらなる薬剤を含む組成物をさらに備える。代わりに、または加えて、製造物品は、薬学的に許容される緩衝液を収容する別の容器または同じ容器をさらに備えてもよい。製造物品は、緩衝液、希釈剤、フィルター、チューブ、針、および／または注射器などの他の材料をさらに備えてもよい。
用語「添付文書」は、適応症、用法、投与量、投与、併用療法、禁忌症についての情報、および／またはこのような治療製品の使用に関する警告を収めている、市販の治療製品パッケージに慣例に従って入れられている説明書を指すために用いられる。
VIII. 定義
別途定義されない限り、本明細書において用いられるすべての専門用語、表記法、ならびに他の技術用語および科学用語または用語法は、請求項に記載される主題が関係する技術分野における当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有することが意図される。いくつかの場合には、一般に理解されている意味を有する用語が、明瞭さのために、かつ/または即座の参照のために本明細書において定義されており、そのような定義が本明細書に含まれることは、当技術分野において一般に理解されていることを超える実質的な違いを表すように必ずしも解釈されなければならないことはない。
本明細書において用いられる場合、単数形である「1つの（a）」、「1つの（an）」、および「その（the）」は、文脈がそうでないことを明らかに示さない限り、複数の言及物を含む。例えば、「1つの（a）」または「1つの（an）」は、「少なくとも1つの」または「1つまたは複数の」を意味する。本明細書に記載される局面および変形は、局面および変形「からなる」こと、ならびに/または局面および変形「から本質的になる」ことを含むと理解される。
本開示の全体を通して、請求項に記載される主題の様々な局面が、範囲形式で示される。範囲形式での記載は、単に便宜および簡潔のためであり、請求項に記載される主題の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきではないことが理解されなければならない。したがって、範囲の記載は、可能な部分範囲、およびその範囲内の個々の数値をすべて具体的に開示していると見なされなければならない。例えば、値の範囲が提供される場合、その範囲の上限と下限との間の、それぞれの間にある値、およびその指定された範囲における任意の他の指定された値または間にある値が、請求項に記載される主題内に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限および下限が、より小さい範囲に独立して含まれてもよく、また、指定された範囲における任意の具体的に除外された限界の支配下にある、請求項に記載される主題の範囲内に包含される。指定された範囲が限界の一方または両方を含む場合、それらの含まれる限界のどちらかまたは両方を除外する範囲もまた、説明されるかまたは請求項に記載される主題に含まれる。このことは、範囲の広さにかかわらず、当てはまる。
本明細書において用いられる「約」という用語は、この技術分野における当業者には容易に知られる、それぞれの値についての通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」を伴う値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータそのものに向けられる態様を含む（かつ説明する）。例えば、「約X」に言及する説明は、「X」の説明を含む。
本明細書において用いられる場合、組成物とは、細胞を含む、2つ以上の生成物、物質、または化合物の任意の混合物を指す。組成物は、溶液、懸濁物、液体、粉末、ペースト、水性、非水性、またはそれらの任意の組み合わせであってもよい。
本明細書において用いられる場合、細胞または細胞の集団が特定のマーカーについて「陽性」であると述べることは、特定のマーカー、典型的には表面マーカーの細胞上または細胞中の検出可能な存在を指す。表面マーカーに言及するとき、この用語は、フローサイトメトリーによって、例えば、マーカーに特異的に結合する抗体で染色し、該抗体を検出することによって検出されるような表面発現の存在を指し、該染色は、その他の点では同一の条件下で、アイソタイプが一致した対照で同じ手順を行って検出される染色を実質的に上回るレベルで、フローサイトメトリーによって検出可能であり、かつ/またはマーカーについて陽性であることが知られている細胞についてのレベルに実質的に類似したレベルであり、かつ/またはマーカーについて陰性であることが知られている細胞についてのレベルよりも実質的に高いレベルである。
本明細書において用いられる場合、細胞または細胞の集団が特定のマーカーについて「陰性」であると述べることは、特定のマーカー、典型的には表面マーカーの細胞上または細胞中の実質的な検出可能な存在の欠如を指す。表面マーカーに言及するとき、この用語は、フローサイトメトリーによって、例えば、マーカーに特異的に結合する抗体で染色し、該抗体を検出することによって検出されるような表面発現の非存在を指し、該染色は、その他の点では同一の条件下で、アイソタイプが一致した対照で同じ手順を行って検出される染色を実質的に上回るレベルでは、フローサイトメトリーによって検出されず、かつ/またはマーカーについて陽性であることが知られている細胞についてのレベルよりも実質的に低いレベルであり、かつ/またはマーカーについて陰性であることが知られている細胞についてのレベルと比較した際に実質的に類似したレベルである。
本明細書において用いられる「ベクター」という用語は、連結される別の核酸を増やすことができる核酸分子を指す。この用語には、自己複製する核酸構造物としてのベクター、および導入されている宿主細胞のゲノム中に組み込まれるベクターが含まれる。ある特定のベクターは、機能的に連結される核酸の発現を方向付けることができる。そのようなベクターは、本明細書において「発現ベクター」と呼ばれる。
IX. 例示的な態様
1. （a）抗原に特異的に結合する、任意でキメラ抗原受容体（CAR）である組換え受容体を含むT細胞を含む治療用T細胞組成物の単位用量を含む容器であって、該単位用量が、所与の範囲内の参照単位（RU）の標的数を含有し、所与の組成物におけるRUが、以下の式によって定義され：
RU＝A×B
式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ
Bは、所与の組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその分数もしくは倍数もしくは変換である、容器；および
（b）対象、任意で疾患または状態を有するかまたは有する疑いがある対象に、組成物、任意でその1つまたは複数の単位用量を投与するための、説明書
を含む、製造物品。
2. Aが、所与の組成物中に存在する所与の表現型の細胞の数、またはその倍数もしくは分数もしくは変換である、態様1に記載の製造物品。
3. Aが、所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均である、態様1に記載の製造物品。

4. 前記単位の標的数が、任意で参照単位の安全数である単位の閾値数よりも小さく、該参照単位の安全数が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療法の参照単位の最低数である、態様1〜3のいずれかに記載の製造物品。
5. 前記有害事象が、重度の有害事象、任意で重度の神経毒性、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上のまたは少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である、態様4に記載の製造物品。
6. 前記参照単位の標的数が、安全係数に対応する量だけ、および/または1.5〜3倍の範囲内、任意で約2倍の量だけ、または有害事象を発生しなかった、任意でグレード0〜2の神経毒性の対象の群の標準偏差の倍数である量だけ、参照単位の安全数よりも小さく、任意で、該倍数が1.5〜3倍の範囲内である、態様4または態様5に記載の製造物品。
7. 前記参照単位の標的数が、参照単位の参照有効数以上であり、該参照有効数が、組換え受容体、任意でCARを含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、所望の治療転帰、任意で部分奏効または完全奏効（CR）を示した群の中の1または複数の対象に投与された治療法の単位の数である、態様1〜6のいずれかに記載の製造物品。
8. （a）抗原に特異的に結合する、任意でキメラ抗原受容体（CAR）である組換え受容体を含むT細胞を含む治療用T細胞組成物の単位用量を含む容器であって:
該単位用量が、(i)全組換え受容体発現細胞の標的数もしくは全CD3+組換え受容体発現細胞の標的数もしくは全CD8+組換え受容体発現細胞の標的数、または（ii）RUの閾値数以下である、所与の範囲内の参照単位（RU）の標的数、または、概ねそれらの標的数を含有し、該単位用量が、RUの閾値数よりも多くを含有せず、
所与の組成物におけるRUの数が、以下の式によって定義され：
RU＝A×B
式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ
Bは、所与のT細胞組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である、容器；および
（b）対象、任意で疾患または状態を有するかまたは有する疑いがある対象に、組成物、任意でその1つまたは複数の単位用量を投与するための、説明書
を含む、製造物品。
9. Aが、所与の組成物中に存在する所与の表現型の細胞の数、またはその倍数もしくは分数もしくは変換である、態様8に記載の製造物品。
10. Aが、所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均である、態様8に記載の製造物品。
11. 前記標的数が、アポトーシスマーカー陰性（-）かつCD3+である、CD3+である組換え受容体発現細胞の標的数であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVもしくは活性カスパーゼ3であるか；または
前記標的数が、アポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である、CD8+である組換え受容体発現細胞の標的数であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVもしくは活性カスパーゼ3である、
態様8〜10のいずれかに記載の製造物品。
12. （i）における細胞の標的数が、それぞれ両端の値を含む、5.0×106〜2.25×107個および約5.0×106〜2.25×107個、5.0×106〜2.0×107個および約5.0×106〜2.0×107個、5.0×106〜1.5×107個および約5.0×106〜1.5×107個、5.0×106〜1.0×107個および約5.0×106〜1.0×107個、5.0×106〜7.5×106個および約5.0×106〜7.5×106個、7.5×106〜2.25×107個および約7.5×106〜2.25×107個、7.5×106〜2.0×107個および約7.5×106〜2.0×107個、7.5×106〜1.5×107個および約7.5×106〜1.5×107個、7.5×106〜1.0×107個および約7.5×106〜1.0×107個、1.0×107〜2.25×107個および約1.0×107〜2.25×107個、1.0×107〜2.0×107個および約1.0×107〜2.0×107個、1.0×107〜1.5×107個および約1.0×107〜1.5×107個、1.5×107〜2.25×107個および約1.5×107〜2.25×107個、1.5×107〜2.0×107個および約1.5×107〜2.0×107個、2.0×107〜2.25×107個および約2.0×107〜2.25×107個の組換え受容体発現細胞、任意で、CD3+もしくはCD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、態様1〜11のいずれかに記載の製造物品。
13. （i）における細胞の標的数が：
それぞれ両端の値を含む、少なくとも5×106個または少なくとも約5×106個、少なくとも6×106個または少なくとも約6×106個、少なくとも7×106個または少なくとも約7×106個、少なくとも8×106個または少なくとも約8×106個、少なくとも9×106個または少なくとも約9×106個、少なくとも10×106個または少なくとも約10×106個と、約15×106個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である；
それぞれ両端の値を含む、少なくとも5.55×106個または少なくとも約5.55×106個、少なくとも6.66×106個または少なくとも約6.66×106個、少なくとも7.77×106個または少なくとも約7.77×106個、少なくとも8.99×106個または少なくとも約8.99×106個、少なくとも1.0×107個または少なくとも約1.0×107個、少なくとも1.1×107個または少なくとも約1.1×107個と、約1.67×107個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である；
それぞれ両端の値を含む、少なくとも6.25×106個または少なくとも約6.25×106個、少なくとも7.5×106個または少なくとも約7.5×106個、少なくとも8.75×106個または少なくとも約8.75×106個、少なくとも1.0×107個または少なくとも約1.0×107個、少なくとも1.13×107個または少なくとも約1.13×107個、少なくとも1.25×107個または少なくとも約1.25×107個と、約1.9×107個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である；
それぞれ両端の値を含む、少なくとも7.14×106個または少なくとも約7.14×106個、少なくとも8.5×106個または少なくとも約8.5×106個、少なくとも1.0×107個または少なくとも約1.0×107個、少なくとも1.14×107個または少なくとも約1.14×107個、少なくとも1.29×107個または少なくとも約1.29×107個、少なくとも1.42×107個または少なくとも約1.42×107個と、約2.14×107個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
態様1〜12のいずれかに記載の製造物品。
14. （i）における細胞の標的数が、それぞれ両端の値を含む、少なくとも5×106個または少なくとも約5×106個、少なくとも6×106個または少なくとも約6×106個、少なくとも7×106個または少なくとも約7×106個、少なくとも8×106個または少なくとも約8×106個、少なくとも9×106個または少なくとも約9×106個、少なくとも10×106個または少なくとも約10×106個と、約15×106個との間の、アポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、態様1〜13のいずれかに記載の製造物品。
15. （i）における細胞の標的数が、それぞれ両端の値を含む、少なくとも6.25×106個または少なくとも約6.25×106個、少なくとも7.5×106個または少なくとも約7.5×106個、少なくとも8.75×106個または少なくとも約8.75×106個、少なくとも1.0×107個または少なくとも約1.0×107個、少なくとも1.13×107個または少なくとも約1.13×107個、少なくとも1.25×107個または少なくとも約1.25×107個と、約1.9×107個との間の、CD8+である組換え受容体発現細胞である、態様1〜13のいずれかに記載の製造物品。
16. 前記RUの標的参照数が、単位の閾値数よりも小さいか、またはRUの参照安全数よりも小さく、該RUの参照安全数が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療法の参照単位の最低数である、態様8〜15のいずれかに記載の製造物品。
17. 前記有害事象が、重度の有害事象、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上の重度の神経毒性または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である、態様16に記載の製造物品。
18. 前記RUの標的参照数が、安全係数に対応する量だけ、または少なくとも2倍だけ、単位の参照安全数よりも小さい、態様16または態様17に記載の製造物品。
19. 前記参照単位の標的数が、参照単位の参照有効数以上であり、該参照有効数が、組換え受容体、任意でCARを含むT細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、所望の治療転帰、任意で完全奏効（CR）を示した対象の中の1または複数の対象に投与された治療法の参照単位の数である、態様8〜18のいずれかに記載の製造物品。
20. Aが、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、かつBが、所与の組成物における組換え受容体依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値である、態様1〜19のいずれか1つに記載の製造物品。
21. Aおよび/またはBが、それぞれ、数または値の変換であり、該変換が、対数変換、べき変換、またはロジット変換を含む、態様1〜20のいずれか1つに記載の製造物品。
22. Aが、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、かつBが、所与のT細胞組成物におけるCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値の倍数または変換であり、任意で、Bが値の対数変換である、
態様1〜21のいずれか1つに記載の製造物品。
23. 前記対数変換が、常用対数（log10(x)）、自然対数（ln(x)）、または二進対数（log2(x)）である、態様21または態様22に記載の製造物品。
24. Aが、組成物における生存細胞の数である、かつ/または、アポトーシス性ではない、早期アポトーシスもしくはアポトーシスを示す因子を示さない、アポトーシスの早期ではない、またはアポトーシスの後期ではない細胞の数である、かつ/または、特定の分化状態の細胞の数である、かつ/または、メモリー/ステム様の特性を有する細胞の数であるか、またはその倍数もしくは変換である、態様1〜23のいずれかに記載の製造物品。
25. 前記表現型が、CD3、CD4、もしくはCD8のうちの1つもしくは複数である表面マーカーの陽性発現を含む、かつ/または組換え受容体、任意でCAR、もしくは組換え受容体の発現についての代理マーカーの陽性発現を含む、態様1〜24のいずれかに記載の製造物品。
26. 前記表現型が、CD3+ CAR、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+である、態様25に記載の製造物品。
27. 前記表現型が、アポトーシスを示すかまたはアポトーシスのカスケードもしくは経路における1つもしくは複数の段階を示す因子、任意でアポトーシスのマーカーの発現の非存在を含む、態様1〜26のいずれかに記載の製造物品。
28. 前記表現型が、アポトーシスのマーカー、任意で早期アポトーシスまたは後期アポトーシスのマーカーの陰性発現を含む、態様1〜27のいずれかに記載の製造物品。
29. 前記アポトーシスのマーカーが、表面ホスファチジルセリンであり、かつ/もしくはアネキシンVで検出されるか、またはカスパーゼの活性型もしくはプロ型、任意でカスパーゼ3の活性型もしくはプロ型である、態様28に記載の製造物品。
30. 前記表現型がアネキシン-を含む、態様1〜29のいずれかに記載の製造物品。

31. 前記表現型が、任意で抗原もしくは組換え受容体に対して非特異的な、かつ/またはポリクローナルに産生されるサイトカインのうちの1つまたは組み合わせの産生の指標を含み、該1つまたは複数のサイトカインが、IL-2、IL-13、IL-17、IFN-γ、またはTNF-αである、態様1〜30のいずれかに記載の製造物品。
32. 前記産生の指標が、アッセイ、任意で、T細胞組成物の試料と、ポリクローナル作用物質、抗原特異的作用物質、または組換え受容体、任意でCARに結合する作用物質とのインキュベーションを含む細胞内サイトカイン染色アッセイにおいて測定される、態様31に記載の製造物品。
33. 前記作用物質が、PMAおよびイオノマイシンであるかもしくはそれを含む、または、T細胞受容体もしくはT細胞受容体複合体アゴニストであるかもしくはそれを含む、態様31または態様32に記載の製造物品。
34. 前記表現型が、活性化マーカーの陰性発現を含み、該活性化マーカーが、CD25、CD127、LAG3、Ki67、およびそれらの組み合わせの中から選択される、態様1〜33のいずれかに記載の製造物品。
35. 前記表現型が、消耗マーカーの陰性発現を含み、該消耗マーカーが、PD1もしくはFOXP3遺伝子産物、またはそれらの組み合わせである、態様1〜34のいずれかに記載の製造物品。
36. 前記表現型が、ナイーブ表現型またはメモリー表現型を含み、任意で、該メモリー表現型が、Tエフェクターメモリー表現型、Tセントラルメモリー表現型、またはCD45RAを発現するTエフェクターメモリー表現型（Temra）を含む、態様1〜35のいずれかに記載の製造物品。
37. Aが、T細胞の総数、CD3+細胞の総数、CD4+もしくはCD8+細胞の総数、CD3+ CAR+細胞の総数、CD8+ CAR+細胞の総数、CD4+ CAR+の総数、または前述のいずれかの生細胞もしくは生存細胞の総数、またはその倍数もしくは変換値である、態様1〜36のいずれかに記載の製造物品。
38. Aが、CD3+細胞の総数、CD8+の総数、CD3+ CAR+細胞の総数、CD8+ CAR+細胞の総数、または前述のいずれかの生細胞もしくは生存細胞の総数、またはその倍数もしくは変換値である、態様1〜37のいずれかに記載の製造物品。
39. Aが、CD3+ CAR+細胞であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、CD4+ CAR+であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、CD8+ CAR+細胞であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、またはその倍数もしくは変換値であり、該アポトーシスマーカーが、アネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、態様1〜38のいずれかに記載の製造物品。
40. Aが、アポトーシスマーカー-CD3+ CAR+細胞の総数、またはアポトーシスマーカー-CD8+ CAR+細胞の総数であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、態様1〜39のいずれかに記載の製造物品。
41. （a）抗原に特異的に結合するキメラ抗原受容体（CAR）を発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物の単位用量を含む容器であって、該単位用量が、治療用T細胞組成物の標的用量を含有し、
（i）組成物の組換え受容体依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値が閾値以上である場合は、該標的用量が、組成物の所与の表現型の細胞の第1の数であり（または数の第1の範囲内であり）；
（ii）パラメータの値が閾値未満である場合は、該標的用量が、組成物の所与の表現型の細胞の第2の数であり（または数の第2の範囲内であり）、
第1の数（または第1の範囲）が第2の数（または第2の範囲）よりも低い、容器；および
（b）対象、任意で疾患または状態を有するかまたは有する疑いがある対象に、組成物、任意でその1つまたは複数の単位用量を投与するための、説明書
を含む、製造物品。
42. 前記組換え受容体依存性の活性の閾値が、参照安全値よりも小さく、該参照安全値が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療用組成物のCAR依存性の活性の最低値である、態様41に記載の製造物品。
43. 前記有害事象が、重度の有害事象、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上の重度の神経毒性または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である、態様42に記載の製造物品。
44. 前記閾値が、安全係数に対応する量だけ、または少なくとも2倍だけ、参照安全値よりも小さい、態様42または態様43に記載の製造物品。
45. 第1の数が、1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、6.0倍、7.0倍、8.0倍、9.0倍、10.0倍以上よりも多く、または約1.5倍、約2.0倍、約3.0倍、約4.0倍、約5.0倍、約6.0倍、約7.0倍、約8.0倍、約9.0倍、約10.0倍以上よりも多くの分、第2の数よりも低い、態様41〜44のいずれかに記載の製造物品。
46. （a）抗原に特異的に結合する、任意でキメラ抗原受容体（CAR）である組換え受容体を含むT細胞を含む治療用T細胞組成物の単位用量を含む容器であって、
該単位用量が、治療用T細胞組成物の標的用量を含有し；かつ
該治療用T細胞組成物が、Bについての下側規格限界（LSL）よりも上であり、かつ上側規格限界（USL）よりも下であり、Bが、組成物の組換え受容体依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値である、容器；および
（b）対象、任意で疾患または状態を有するかまたは有する疑いがある対象に、組成物、任意でその1つまたは複数の単位用量を投与するための、説明書
を含む、製造物品。
47. 組成物が、BについてのUSLよりも下である場合にのみ、対象の処置のために生成物が放出される、態様46に記載の製造物品。
48. 前記組換え受容体依存性の活性が、炎症誘発性サイトカイン、任意で、TNF-α、IFN-γ、IL-2、およびIL-10のうちの1つまたは組み合わせの産生または蓄積の測定値である、態様41〜47のいずれかに記載の製造物品。
49. 前記パラメータが、1つまたは複数の因子の測定値、またはその正規化された値である、態様1〜48のいずれか1つに記載の製造物品。
50. 前記測定値が、抗原、抗原を発現する細胞、および/または組換え受容体、任意でCARに特異的に結合する作用物質の存在下での、所与の組成物またはその試料の固定された時間、任意で24時間にわたる培養またはインキュベーションを含むアッセイにおけるものである、態様49に記載の製造物品。
51. 前記アッセイがELISAである、態様50に記載の製造物品。
52. 前記因子の測定値が、
（i）因子の濃度、相対濃度、量、もしくは相対量；または
（ii）所与の組成物の投入細胞の単位当たりの因子の量もしくは相対量、または
（iii）時間の単位、任意で1時間当たりの、所与の組成物の投入細胞の単位当たりの因子の量もしくは相対量；または
（iv）（i）〜（iii）のいずれかを示すレベル
である、態様49〜51のいずれかに記載の製造物品。
53. 前記1つまたは複数の因子が、可溶性因子のうちの1つまたは組み合わせ、任意で、サイトカイン、ケモカイン、または可溶性受容体、任意で可溶性共刺激受容体のうちの1つまたは組み合わせである、態様49〜52のいずれかに記載の製造物品。
54. 前記1つまたは複数の因子が、炎症誘発性サイトカイン、Th2サイトカイン、およびTh17サイトカインのうちの1つまたは組み合わせである、態様49〜53のいずれかに記載の製造物品。
55. 前記1つまたは複数の因子が、IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL4、IL-5、IL-10、IL-13、GM-CSF、sCD137、MIP1a、およびM1Pbのうちの1つまたは組み合わせである、態様49〜54のいずれかに記載の製造物品。
56. 前記1つまたは複数の因子が、IL-2、IFN-γ、TNF-α、およびIL-10のうちの1つまたは組み合わせである、態様49〜55のいずれかに記載の製造物品。
57. 前記1つまたは複数の因子が、前述の可溶性因子のうちの2つ以上のいずれかの組み合わせであり、かつ前記パラメータが、2つ以上の因子の測定値の算術平均または幾何平均である、態様53〜56のいずれかに記載の製造物品。
58. 前記パラメータが、TNF-α、IFN-γ、およびIL-2のうちの少なくとも2つの、またはTNF-α、IFN-γ、およびIL-2の測定値、任意で量または濃度の算術平均または幾何平均である、態様49〜57のいずれかに記載の製造物品。
59. 前記パラメータが、測定値の正規化された値であり、正規化が、因子の参照測定値と比較した通りである、態様49〜58のいずれかに記載の製造物品。
60. 前記参照測定値が、キメラ抗原受容体（CAR）を含む参照治療用T細胞組成物の多数、任意で少なくとも10、少なくとも15、少なくとも20の間の測定値の平均であり、
（i）該参照治療用T細胞組成物のそれぞれが、対象への投与後に許容される安全プロファイルを結果としてもたらすことが観察されているかもしくは決定されており、任意で、該対象が、抗原を発現するかもしくはそれに関連する疾患もしくは状態を有する；かつ/または
（ii）該参照治療用T細胞組成物のそれぞれが、対象への投与後に所望の有効性を結果としてもたらすことが観察されているかもしくは決定されており、任意で、該対象が、抗原を発現するかもしくはそれに関連する疾患もしくは状態を有する、
態様59に記載の物品または製造。
61. 前記許容される安全プロファイルが、観察されるグレード2以上の神経毒性の非存在、またはグレード3以上の神経毒性の非存在である、態様60に記載の製造物品。
62. 前記許容される安全プロファイルが、観察されるグレード3以上の神経毒性の非存在である、態様60または態様61に記載の製造物品。
63. 前記有効性が、部分奏効であるかまたは完全奏効（CR）である、態様60〜62のいずれかに記載の製造物品。
64. 前記参照測定値が、治療用T細胞組成物と同じ方法によって生成されるが、組換え受容体、任意でCARを発現しない、抗原を特異的に認識しない、かつ/またはいかなる組換え受容体、任意でいかなるCARも発現しない参照T細胞組成物における因子の、同じアッセイによる測定値である、態様59に記載の製造物品。
65. 前記パラメータが、1つまたは複数の因子の測定値の患者特異的変動のために対照に対して正規化されている、態様64に記載の製造物品。
66. 前記パラメータが、対照因子の同じアッセイにおける同じ測定値と比較した、因子の測定値の正規化された値であり、治療用T細胞組成物における該対照因子のレベルが、有害事象または毒性転帰またはその可能性もしくは危険性を示さないかまたはそれと相関しないかまたはそれと有意には相関しないことが知られているか、または観察されており、該有害事象または毒性転帰が任意で、重度の神経毒性である、態様64または態様65に記載の製造物品。
67. 前記対照因子が、T細胞組成物の投与後に有害事象を発生した多数の対象の中で、有害事象の発生と統計学的に相関していない、かつ/または相関しない因子であり、任意で、該対照因子が、IL-5、IL-13、GM-CSF、およびIL-6のうちの1つまたは組み合わせであるかまたはそれを含み、任意で、該対照因子の測定値が、前述のうちの2つ以上の算術平均または幾何平均である、態様66に記載の製造物品。
68. 前記パラメータが、細胞溶解活性またはその測定値を含まない、態様1〜67のいずれかに記載の製造物品。
69. 前記パラメータが、組換え受容体依存性のもしくは抗原特異的な細胞溶解活性またはその測定値を含まない、態様1〜68のいずれかに記載の製造物品。
70. 前記表現型が、CD8+ CAR+細胞またはアポトーシスマーカー-CD8+ CAR+細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3であり；かつ
前記パラメータが、任意で、TNF-α、IL-2、およびIFN-γのうちの1つまたは組み合わせである炎症誘発性サイトカインの測定値であるか、またはその正規化された値である、
態様1〜40および49〜69のいずれかに記載の製造物品。
71. 前記有害事象が、グレード4または5の神経毒性であり、かつ前記単位の閾値数が、
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、1.75×107であるかまたは約1.75×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、2.19×107であるかまたは約2.19×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.25×107であるかまたは約1.25×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.56×107であるかまたは約1.56×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、1.5×107であるかまたは約1.5×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、1.88×107であるかまたは約1.88×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.5×107であるかまたは約1.5×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.88×107であるかまたは約1.88×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、2.0×107であるかまたは約2.0×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、2.5×107であるかまたは約2.5×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、1.25×107であるかまたは約1.25×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、1.56×107であるかまたは約1.56×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、1.75×107であるかまたは約1.75×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、2.19×107であるかまたは約2.19×107であり、
任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
態様1〜70のいずれかに記載の製造物品。
72. 前記有害事象が、グレード4または5の神経毒性であり、かつ前記標的参照単位の所与の範囲が、
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.0×105〜1.75×107または約2.0×105〜1.75×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.5×105〜2.19×107または約2.5×105〜2.19×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4×105〜1.25×107または約4×105〜1.25×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5×106〜1.56×107または約5×106〜1.56×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.0×105〜1.5×107または約2.0×105〜1.5×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.5×105〜1.88×107または約2.5×105〜1.88×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.0×105〜1.5×107または約3.0×105〜1.5×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.75×105〜1.88×107または約3.75×105〜1.88×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.0×105〜2.0×107または約3.0×105〜2.0×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.75×105〜2.5×107または約3.75×105〜2.5×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4.0×105〜1.25×107または約4.0×105〜1.25×107であり；
AがCD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5.0×105〜1.56×107または約5.0×105〜1.56×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4.0×105〜1.75×107または約4.0×105〜1.75×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5.0×105〜2.19×107または約5.0×105〜2.19×107であり、
任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
態様1〜71のいずれかに記載の製造物品。
73. 前記有害事象が、少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性であり、かつ前記単位の閾値数が、
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、1.0×106であるかまたは約1.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、1.25×106であるかまたは約1.25×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、2.0×106であるかまたは約2.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、3.0×106であるかまたは約3.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、3.75×106であるかまたは約3.75×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.5×106であるかまたは約1.5×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.88×106であるかまたは約1.88×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、3.12×106であるかまたは約3.12×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、3.0×106であるかまたは約3.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、3.75×106であるかまたは約3.75×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、2.0×106であるかまたは約2.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
態様1〜70のいずれかに記載の製造物品。
74. 前記有害事象が、少なくとも長期にわたるグレード3であり、かつ前記標的参照単位の所与の範囲が、
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.0×105〜1.0×106または約3.0×105〜1.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.75×105〜1.25×106または約3.75×105〜1.25×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4×105〜2.0×106または約4×105〜2.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5×106〜2.5×106または約5×106〜2.5×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.0×105〜3.0×106または約2.0×105〜3.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.5×105〜3.75×106または約2.5×105〜3.75×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.0×105〜1.5×106または約3.0×105〜1.5×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.75×105〜1.88×106または約3.75×105〜1.88×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.0×105〜2.5×106または約3.0×105〜2.5×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.75×105〜3.12×106または約3.75×105〜3.12×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4.0×105〜3.0×106または約4.0×105〜3.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5.0×105〜3.75×106または約5.0×105〜3.75×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4.0×105〜2.0×106または約4.0×105〜2.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5.0×105〜2.5×106または約5.0×105〜2.5×106であり、
任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
態様1〜70および73のいずれかに記載の製造物品。
75. 前記治療用T細胞組成物が、それぞれ両端の値を含む、1mL当たり約1000万個の細胞〜1mL当たり約7000万個の細胞、または1mL当たり約1000万個の生存細胞〜1mL当たり約7000万個の生存細胞を含む、態様1〜74のいずれかに記載の製造物品。
76. 前記治療用T細胞組成物が、両端の値を含む、1mL当たり約1500万個の細胞または生存細胞〜1mL当たり約6000万個の細胞または生存細胞を含む、態様1〜75のいずれかに記載の製造物品。
77. 前記T細胞組成物が、1mL当たり1000万個よりも多い細胞または生存細胞を含む、態様1〜76のいずれかに記載の製造物品。
78. 前記治療用T細胞組成物が、1500万個よりも多い細胞または1mL当たり1500万個よりも多い細胞を含む、態様1〜77のいずれかに記載の製造物品。
79. 前記組成物が凍結保護剤をさらに含み、かつ/または前記物品が、対象への投与の前に組成物を融解するための説明書をさらに含む、態様1〜78のいずれかに記載の製造物品。
80. 前記疾患または状態が、がん、任意で骨髄腫、リンパ腫、または白血病である、態様1〜79のいずれかに記載の製造物品。
81. 前記疾患または状態が、B細胞悪性腫瘍であり、任意で、B細胞悪性腫瘍が、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、成人ALL、慢性リンパ芽球性白血病（CLL）、非ホジキンリンパ腫（NHL）、およびびまん性大細胞型B細胞リンパ腫（DLBCL）からなる群より選択される、態様80に記載の製造物品。
82. 前記抗原が、CD19、CD22、ROR1、Igκ、Her2、L1-CAM、CD20、メソテリン、CEA、B型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、EGFR、EGP-2、EGP-4、EPHa2、ErbB2、ErbB3、ErbB4、FBP、胎児アセチルコリン受容体、GD2、GD3、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13R-α2、kdr、κ軽鎖、ルイスY、L1細胞接着分子、MAGE-A1、メソテリン、MUC1、MUC16、PSCA、NKG2Dリガンド、NY-ESO-1、MART-1、gp100、胎児腫瘍性抗原、TAG72、VEGF-R2、がん胎児性抗原（CEA）、前立腺特異抗原、PSMA、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンB2、CD123、CS-1、c-Met、GD-2、MAGE A3、CE7、ウィルムス腫瘍1（WT-1）、およびサイクリンA1（CCNA1）である、態様1〜81のいずれかに記載の製造物品。
83. 前記組換え受容体がCARである、態様1〜82のいずれかに記載の製造物品。
84. CARが、抗原に特異的に結合する細胞外抗原認識ドメイン、およびITAMを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、任意で、該細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞内ドメインを含み；かつ/またはCARが、CD28もしくは4-1BBのシグナル伝達ドメインを任意で含む共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、態様83に記載の製造物品。
85. 前記T細胞がCD4+またはCD8+である、態様1〜84のいずれかに記載の製造物品。
86. 前記T細胞が、対象から得られた初代T細胞である、態様1〜85のいずれかに記載の製造物品。
87. 前記容器が単位の標的数を含有することを示す情報をさらに含有する、態様1〜86のいずれかに記載の製造物品。
88. 前記容器が第1の容器であり、かつ前記物品が、追加の容器をさらに含み、該追加の容器のそれぞれが、T細胞組成物の単位の標的数を含む単位用量を含む、態様1〜87のいずれかに記載の製造物品。

89. 前記追加の容器が、それぞれ両端の値を含む、1mL当たり約1000万個の細胞もしくは生存細胞〜1mL当たり約7000万個の細胞もしくは生存細胞、1mL当たり約1500万個の細胞もしくは生存細胞〜約6000万個の細胞もしくは生存細胞、または1mL当たり1000万個よりも多い細胞もしくは生存細胞、1mL当たり1500万個よりも多い細胞もしくは生存細胞、またはそれらの組み合わせを含む、態様88に記載の製造物品。
90. 前記単位用量が、アネキシンVでの検出についてまたはカスパーゼ3の活性型もしくはプロ型について陰性である、CD8+CAR+細胞の15×106以下の数を含有する、態様1〜89のいずれかに記載の製造物品。
91. 前記単位用量が、CARについて陽性のCD4+細胞の数をさらに含み、該数が、1:1のまたは約1:1のCD8+CAR+細胞の比である、態様1〜90のいずれかに記載の製造物品。
92. 前記T細胞組成物が、あるプロセスによって生成され、ここで、
生物学的に活性を有する細胞の特徴および/またはアポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在の特徴を示す表現型の細胞の、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の頻度、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物における該頻度の平均から、40％以下もしくは30％以下もしくは20％以下もしくは10％以下もしくは5％以下だけ変動する、かつ/または1以下の標準偏差だけそのような平均から変動するか；あるいは
アポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在を示す表現型の細胞の組成物における、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の頻度、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物の中で、40％以下または20％以下または10％以下だけ変動する、
態様1〜91のいずれかに記載の製造物品組成物。
93. 前記プロセスが、以下を含む、態様92に記載の製造物品：
（a）T細胞を含む細胞の集団と、組換え受容体をコードする核酸分子を含む作用物質との、集団における細胞中に組換え受容体をコードする核酸を導入する条件下でのインキュベーション；ならびに
（b）該インキュベーションの前、その最中、および/またはその後の細胞の刺激であって、一次シグナル、シグナル伝達、刺激、活性化、および/または細胞の増大を誘導する刺激条件の存在下での細胞のインキュベーションを含む、刺激。
94. 前記プロセスが、（a）の前に、生物学的試料からの細胞の集団の単離をさらに含む、態様93に記載の製造物品。
95. 前記単離が、任意で陽性選択または陰性選択による、CD3の表面発現に基づくか、またはCD4およびCD8のうちの一方もしくは両方の表面発現に基づく細胞の選択を含む、態様94に記載の製造物品。
96. 前記単離が、免疫親和性に基づく選択の実施を含む、態様94または態様95に記載の製造物品。
97. 前記生物学的試料が、全血試料、バフィーコート試料、末梢血単核細胞（PBMC）試料、未分画T細胞試料、リンパ球試料、白血球試料、アフェレーシス産物、または白血球アフェレーシス産物であるか、またはそれを含む、態様94〜96に記載の製造物品。
98. 前記刺激条件が、TCR複合体の1つもしくは複数の成分の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、および/または1つもしくは複数の共刺激分子の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる刺激試薬とのインキュベーションを含む、態様93〜97のいずれかに記載の製造物品。
99. 前記刺激試薬が、TCR複合体のメンバーに特異的に結合する一次作用物質、およびT細胞共刺激分子に特異的に結合する二次作用物質を含む、態様98に記載の製造物品。
100. 前記一次作用物質が、CD3に特異的に結合し、かつ/または前記共刺激分子が、CD28、CD137（4-1-BB）、OX40、もしくはICOSからなる群より選択される、態様98または態様99に記載の製造物品。
101. 前記一次作用物質および二次作用物質が、抗体を含み、かつ/または固体支持体、任意でビーズの表面上に存在する、態様99または態様100に記載の製造物品。
102. 前記刺激試薬が、組換え受容体依存性の活性または抗原特異的な活性、任意で、炎症誘発性サイトカインの組換え受容体依存性または抗原特異的依存性の産生または蓄積が、刺激試薬を用いたプロセスによって生成される多数のT細胞組成物の間の炎症誘発性サイトカインの産生または蓄積の測定値の平均から、40％以下もしくは30％以下もしくは20％以下もしくは10％以下もしくは5％以下だけ変動する、かつ/または1以下の標準偏差だけそのような平均から変動することが決定されているものである；かつ/あるいは
前記刺激試薬が、組換え受容体依存性の活性または抗原特異的な活性、任意で、炎症誘発性サイトカインの組換え受容体依存性または抗原特異的依存性の産生または蓄積が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物の中で、40％以下または30％以下または20％以下または10％以下または5％以下だけ変動することが決定されているものである；かつ/あるいは
前記刺激試薬が、刺激試薬を用いて生成される細胞組成物の組換え受容体依存性の活性または抗原特異的な活性、任意で、炎症誘発性サイトカインの組換え受容体依存性または抗原特異的依存性の産生または蓄積が、対照組成物から40％以下、30％以下、20％以下、または10％以下、または5％以下だけ変動することが決定されているものであり、該対照組成物および細胞組成物が、対照刺激試薬または組換え受容体依存性の活性についての標準単位の存在下で対照組成物が実施される以外は、同じ細胞の集団由来を含み、同じプロセスを用いて生成される、
態様98〜101のいずれかに記載の製造物品。
103. 前記対照刺激試薬が、プロセスにおいて使用されるときに、組換え受容体依存性の活性または抗原特異的な活性が許容される変動の範囲内であるT細胞組成物を生成することが知られている、態様102に記載の製造物品。
104. 前記細胞の刺激が、任意で18〜24時間、37度でまたは約37度で、インキュベーションの前に実施されるかまたは開始される、態様93〜103のいずれかに記載の製造物品。
105. 前記刺激条件が、IL-2、IL-15、およびIL-7の中から選択されるサイトカインを含む、態様93〜104のいずれかに記載の製造物品。
106. 前記細胞の刺激が、任意で閾値濃度を達成する時間にわたって、インキュベーションの後に実施される、態様93〜105のいずれかに記載の製造物品。
107. （c）両端の値を含む、1mL当たり約1000万個の細胞〜約7000万個の細胞の濃度までの、T細胞組成物のすべてまたは一部分、および任意で別の溶液での容器の充填をさらに含む、態様93〜106のいずれかに記載の製造物品。
108. 前記容器が別の溶液で充填され、該溶液が、凍結保護剤、任意でDMSOを含む、態様107に記載の製造物品。
109. 前記濃度が、両端の値を含む、1mL当たり約1500万〜約6000万個の細胞である、態様107または態様108に記載の製造物品。
110. 前記濃度が、1mL当たり1000万個の細胞よりも高い、態様107〜109のいずれかに記載の製造物品。
111. 前記濃度が、1mL当たり1500万個の細胞よりも高い、態様107〜110のいずれかに記載の製造物品。
112. DMSOの濃度が、7.5％であるかまたは約7.5％であるかまたは7.5％以下である、態様107〜111のいずれかに記載の製造物品。
113. 前記濃度が、1mL当たり6000万個の細胞よりも高い、態様107または態様108に記載の製造物品。
114. DMSOの濃度が、7.5％よりも高く、任意で、両端の値を含む、7.5％〜9.0％または約7.5％〜9.0％である、態様107〜108および113のいずれかに記載の製造物品。
115. 前記組換え受容体をコードする核酸分子を含む作用物質が、ウイルスベクター、任意でレンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである、態様93〜114のいずれかに記載の製造物品。
116. 前記充填が、自動化された方式、任意で閉鎖系で実施される、態様107〜115のいずれかに記載の製造物品。
117. 前記容器における細胞の凍結、または80℃未満もしくは約80℃未満の温度での前記容器の保存をさらに含む、態様93〜116のいずれかに記載の製造物品。
118. 疾患または状態を有する対象に、該疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）を含む細胞を含むT細胞組成物の単位用量を投与する工程を含む、処置の方法であって、
該単位用量が、所与の範囲内の参照単位（RU）の標的数を含有し、所与の組成物におけるRUが、以下の式によって定義され：
RU＝A×B
式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ
Bは、所与の組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である、処置の方法。
119. Aが、所与の組成物中に存在する所与の表現型の細胞の数、またはその倍数もしくは分数もしくは変換である、態様118に記載の方法。
120. Aが、所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均である、態様118に記載の方法。

121. 前記単位の標的数が、任意で参照単位の安全数であるRUの閾値数よりも小さく、該参照単位の安全数が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療法の参照単位の最低数である、態様118〜120のいずれかに記載の方法。
122. 前記有害事象が、重度の有害事象、任意で重度の神経毒性、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上のまたは少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である、態様121に記載の方法。
123. 前記参照単位の標的数が、安全係数に対応する量だけ、および/または1.5〜3倍の範囲内、任意で約2倍の量だけ、または有害事象を発生しなかった、任意でグレード0〜2の神経毒性の対象の群の標準偏差の倍数である量だけ、参照単位の安全数よりも小さく、任意で、該倍数が1.5〜3倍の範囲内である、態様121または態様122に記載の方法。
124. 前記参照単位の標的数が、参照単位の参照有効数以上であり、該参照有効数が、組換え受容体、任意でCARを含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、所望の治療転帰、任意で部分奏効または完全奏効（CR）を示した群の中の1または複数の対象に投与された治療法の単位の数である、態様118〜123のいずれかに記載の方法。
125. 疾患または状態を有する対象に、該疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）を含む細胞を含むT細胞組成物の単位用量を投与する工程を含む、処置の方法であって、
該単位用量が、（i）全組換え受容体発現細胞の標的数もしくは全CD8+組換え受容体発現細胞の標的数、または（ii）RUの閾値数以下である、所与の範囲内の参照単位（RU）の標的数、または、概ねそれらの標的数を含有し、該単位用量が、RUの閾値数よりも多くを含有せず、
所与の組成物におけるRUの数が、以下の式によって定義され：
RU＝A×B
式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数もしくは関数であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ
Bは、所与のT細胞組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である、処置の方法。
126. Aが、所与の組成物中に存在する所与の表現型の細胞の数、またはその倍数もしくは分数もしくは変換である、態様125に記載の方法。
127. Aが、所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均である、態様125に記載の方法。
128. 前記標的数が、アポトーシスマーカー陰性（-）かつCD3+またはCD8+である、CD3+またはCD8+である組換え受容体発現細胞の標的数であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、態様118〜127のいずれかに記載の方法。
129. （i）における細胞の標的数が、それぞれ両端の値を含む、5.0×106〜2.25×107個および約5.0×106〜2.25×107個、5.0×106〜2.0×107個および約5.0×106〜2.0×107個、5.0×106〜1.5×107個および約5.0×106〜1.5×107個、5.0×106〜1.0×107個および約5.0×106〜1.0×107個、5.0×106〜7.5×106個および約5.0×106〜7.5×106個、7.5×106〜2.25×107個および約7.5×106〜2.25×107個、7.5×106〜2.0×107個および約7.5×106〜2.0×107個、7.5×106〜1.5×107個および約7.5×106〜1.5×107個、7.5×106〜1.0×107個および約7.5×106〜1.0×107個、1.0×107〜2.25×107個および約1.0×107〜2.25×107個、1.0×107〜2.0×107個および約1.0×107〜2.0×107個、1.0×107〜1.5×107個および約1.0×107〜1.5×107個、1.5×107〜2.25×107個および約1.5×107〜2.25×107個、1.5×107〜2.0×107個および約1.5×107〜2.0×107個、2.0×107〜2.25×107個および約2.0×107〜2.25×107個の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、態様125〜128のいずれかに記載の方法。
130. （i）における細胞の標的数が：
それぞれ両端の値を含む、少なくとも5×106個または少なくとも約5×106個、少なくとも6×106個または少なくとも約6×106個、少なくとも7×106個または少なくとも約7×106個、少なくとも8×106個または少なくとも約8×106個、少なくとも9×106個または少なくとも約9×106個、少なくとも10×106個または少なくとも約10×106個と、約15×106個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である；
それぞれ両端の値を含む、少なくとも5.55×106個または少なくとも約5.55×106個、少なくとも6.66×106個または少なくとも約6.66×106個、少なくとも7.77×106個または少なくとも約7.77×106個、少なくとも8.99×106個または少なくとも約8.99×106個、少なくとも1.0×107個または少なくとも約1.0×107個、少なくとも1.1×107個または少なくとも約1.1×107個と、約1.67×107個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である；
それぞれ両端の値を含む、少なくとも6.25×106個または少なくとも約6.25×106個、少なくとも7.5×106個または少なくとも約7.5×106個、少なくとも8.75×106個または少なくとも約8.75×106個、少なくとも1.0×107個または少なくとも約1.0×107個、少なくとも1.13×107個または少なくとも約1.13×107個、少なくとも1.25×107個または少なくとも約1.25×107個と、約1.9×107個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である；
それぞれ両端の値を含む、少なくとも7.14×106個または少なくとも約7.14×106個、少なくとも8.5×106個または少なくとも約8.5×106個、少なくとも1.0×107個または少なくとも約1.0×107個、少なくとも1.14×107個または少なくとも約1.14×107個、少なくとも1.29×107個または少なくとも約1.29×107個、少なくとも1.42×107個または少なくとも約1.42×107個と、約2.14×107個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
態様125〜129のいずれかに記載の方法。
131. （i）における細胞の標的数が、それぞれ両端の値を含む、少なくとも5×106個または少なくとも約5×106個、少なくとも6×106個または少なくとも約6×106個、少なくとも7×106個または少なくとも約7×106個、少なくとも8×106個または少なくとも約8×106個、少なくとも9×106個または少なくとも約9×106個、少なくとも10×106個または少なくとも約10×106個と、約15×106個との間の、アポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、態様125〜130のいずれかに記載の方法。
132. （i）における細胞の標的数が、それぞれ両端の値を含む、少なくとも6.25×106個または少なくとも約6.25×106個、少なくとも7.5×106個または少なくとも約7.5×106個、少なくとも8.75×106個または少なくとも約8.75×106個、少なくとも1.0×107個または少なくとも約1.0×107個、少なくとも1.13×107個または少なくとも約1.13×107個、少なくとも1.25×107個または少なくとも約1.25×107個と、約1.9×107個との間の、CD8+である組換え受容体発現細胞である、態様125〜130のいずれかに記載の方法。
133. 前記RUの標的参照数が、RUの参照安全数よりも小さく、該RUの参照安全数が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療法の参照単位の最低数である、態様118〜132のいずれかに記載の方法。
134. 前記有害事象が、重度の有害事象、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上の重度の神経毒性または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である、態様133に記載の方法。
135. 前記RUの標的参照数が、安全係数に対応する量だけ、または少なくとも2倍だけ、単位の参照安全数よりも小さい、態様133または態様134に記載の方法。
136. 前記参照単位の標的数が、参照単位の参照有効数以上であり、該参照有効数が、組換え受容体、任意でCARを含むT細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、所望の治療転帰、任意で完全奏効（CR）を示した対象の中の1または複数の対象に投与された治療法の参照単位の数である、態様118〜135のいずれかに記載の方法。
137. Aが、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、かつBが、所与の組成物における組換え受容体依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値である、態様118〜136のいずれか1つに記載の方法。
138. Aおよび/またはBが、それぞれ、数または値の変換であり、該変換が、対数変換、べき変換、またはロジット変換を含む、態様118〜137のいずれか1つに記載の方法。
139. Aが、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、かつBが、所与のT細胞組成物におけるCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値の倍数または変換であり、任意で、Bが値の対数変換である、態様118〜138のいずれか1つに記載の方法。
140. 前記対数変換が、常用対数（log10(x)）、自然対数（ln(x)）、または二進対数（log2(x)）である、態様138または態様139に記載の方法。
141. Aが、組成物における生存細胞の数である、かつ/または、アポトーシス性ではない、早期アポトーシスもしくはアポトーシスを示す因子を示さない、アポトーシスの早期ではない、またはアポトーシスの後期ではない細胞の数である、かつ/または、特定の分化状態の細胞の数である、かつ/または、メモリー/ステム様の特性を有する細胞の数であるか、またはその倍数もしくは変換である、態様118〜140のいずれかに記載の方法。
142. 前記表現型が、CD3、CD4、もしくはCD8のうちの1つもしくは複数である表面マーカーの陽性発現を含む、かつ/または組換え受容体、任意でCAR、もしくは組換え受容体の発現についての代理マーカーの陽性発現を含む、態様118〜141のいずれかに記載の方法。
143. 前記表現型が、CD3+ CAR、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+である、態様142に記載の方法。
144. 前記表現型が、アポトーシスを示すかまたはアポトーシスのカスケードもしくは経路における1つもしくは複数の段階を示す因子、任意でアポトーシスのマーカーの発現の非存在を含む、態様118〜143のいずれかに記載の方法。
145. 前記表現型が、アポトーシスのマーカー、任意で早期アポトーシスまたは後期アポトーシスのマーカーの陰性発現を含む、態様118〜144のいずれかに記載の方法。
146. 前記アポトーシスのマーカーが、表面ホスファチジルセリンであり、かつ/もしくはアネキシンVで検出されるか、またはカスパーゼの活性型もしくはプロ型、任意でカスパーゼ3の活性型もしくはプロ型である、態様145に記載の方法。
147. 前記表現型がアネキシン-を含む、態様118〜146のいずれかに記載の方法。
148. 前記表現型が、任意で抗原もしくは組換え受容体に対して非特異的な、かつ/またはポリクローナルに産生されるサイトカインのうちの1つまたは組み合わせの産生の指標を含み、該1つまたは複数のサイトカインが、IL-2、IL-13、IL-17、IFN-γ、またはTNF-αである、態様118〜147のいずれかに記載の方法。
149. 前記産生の指標が、アッセイ、任意で、T細胞組成物の試料と、ポリクローナル作用物質、抗原特異的作用物質、または組換え受容体、任意でCARに結合する作用物質とのインキュベーションを含む細胞内サイトカイン染色アッセイにおいて測定される、態様148に記載の方法。
150. 前記作用物質が、PMAおよびイオノマイシンであるかもしくはそれを含む、または、T細胞受容体もしくはT細胞受容体複合体アゴニストであるかもしくはそれを含む、態様148または態様149に記載の方法。
151. 前記表現型が、活性化マーカーの陰性発現を含み、該活性化マーカーが、CD25、CD127、LAG3、Ki67、およびそれらの組み合わせの中から選択される、態様118〜150のいずれかに記載の方法。
152. 前記表現型が、消耗マーカーの陰性発現を含み、該消耗マーカーが、PD1もしくはFOXP3遺伝子産物、またはそれらの組み合わせである、態様118〜151のいずれかに記載の方法。
153. 前記表現型が、ナイーブ表現型またはメモリー表現型を含み、任意で、該メモリー表現型が、Tエフェクターメモリー表現型、Tセントラルメモリー表現型、またはCD45RAを発現するTエフェクターメモリー表現型（Temra）を含む、態様118〜152のいずれかに記載の方法。
154. Aが、T細胞の総数、CD3+細胞の総数、CD4+もしくはCD8+細胞の総数、CD3+ CAR+細胞の総数、CD8+ CAR+細胞の総数、CD4+ CAR+の総数、または前述のいずれかの生細胞もしくは生存細胞の総数、またはその倍数もしくは変換値である、態様118〜153のいずれかに記載の方法。
155. Aが、CD3+細胞の総数、CD8+の総数、CD3+ CAR+細胞の総数、CD8+ CAR+細胞の総数、または前述のいずれかの生細胞もしくは生存細胞の総数、またはその倍数もしくは変換値である、態様118〜154のいずれかに記載の方法。
156. Aが、CD3+ CAR+細胞であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、CD4+ CAR+であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、CD8+ CAR+細胞であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、またはその倍数もしくは変換値であり、該アポトーシスマーカーが、アネキシンVまたはカスパーゼである、態様118〜155のいずれかに記載の方法。
157. Aが、アポトーシスマーカー-CD3+ CAR+細胞の総数、またはアポトーシスマーカー-CD8+ CAR+細胞の総数であり、該アポトーシスマーカーが、アネキシンVまたはカスパーゼ3である、態様118〜156のいずれかに記載の方法。
158. 疾患または状態を有する対象に、該疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）を含む細胞を含むT細胞組成物の単位用量を投与する工程を含む、処置の方法であって、
該単位用量が、治療用T細胞組成物の標的用量を含有し、
（i）組成物の組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値が閾値以上である場合は、該標的用量が、組成物の所与の表現型の細胞の第1の数であり（または数の第1の範囲内であり）；
（ii）パラメータの値が閾値未満である場合は、該標的用量が、組成物の所与の表現型の細胞の第2の数であり（または数の第2の範囲内であり）、
第1の数（または第1の範囲）が第2の数（または第2の範囲）よりも低い、処置の方法。
159. 前記組換え受容体依存性の活性の閾値が、参照安全値よりも小さく、該参照安全値が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療用組成物のCAR依存性の活性の最低値である、態様158に記載の方法。
160. 前記有害事象が、重度の有害事象、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上の重度の神経毒性または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である、態様159に記載の方法。
161. 前記閾値が、安全係数に対応する量だけ、または少なくとも2倍だけ、参照安全値よりも小さい、態様159または態様160に記載の方法。
162. 第1の数が、1.5倍、2.0倍、3.0倍、4.0倍、5.0倍、6.0倍、7.0倍、8.0倍、9.0倍、10.0倍以上よりも多く、または約1.5倍、約2.0倍、約3.0倍、約4.0倍、約5.0倍、約6.0倍、約7.0倍、約8.0倍、約9.0倍、約10.0倍以上よりも多くの分、第2の数よりも低い、態様159〜161のいずれかに記載の方法。
163. 前記組換え受容体依存性の活性が、炎症誘発性サイトカイン、任意で、TNF-α、IFN-γ、IL-2、およびIL-10のうちの1つまたは組み合わせの産生または蓄積の測定値である、態様118〜162のいずれかに記載の方法。
164. 前記パラメータが、1つまたは複数の因子の測定値、またはその正規化された値である、態様118〜163のいずれか1つに記載の方法。
165. 前記測定値が、抗原、抗原を発現する細胞、および/または組換え受容体、任意でCARに特異的に結合する作用物質の存在下での、所与の組成物またはその試料の固定された時間、任意で24時間にわたる培養またはインキュベーションを含むアッセイにおけるものである、態様164に記載の方法。
166. 前記アッセイがELISAである、態様165に記載の方法。
167. 前記因子の測定値が、
（i）因子の濃度、相対濃度、量、もしくは相対量；または
（ii）所与の組成物の投入細胞の単位当たりの因子の量もしくは相対量、または
（iii）時間の単位、任意で1時間当たりの、所与の組成物の投入細胞の単位当たりの因子の量もしくは相対量；または
（iv）（i）〜（iii）のいずれかを示すレベル
である、態様164〜166のいずれかに記載の方法。
168. 前記1つまたは複数の因子が、可溶性因子のうちの1つまたは組み合わせ、任意で、サイトカイン、ケモカイン、または可溶性受容体、任意で可溶性共刺激受容体のうちの1つまたは組み合わせである、態様164〜167のいずれかに記載の方法。
169. 前記1つまたは複数の因子が、炎症誘発性サイトカイン、Th2サイトカイン、およびTh17サイトカインのうちの1つまたは組み合わせである、態様164〜168のいずれかに記載の方法。
170. 前記1つまたは複数の因子が、IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL4、IL-5、IL-10、IL-13、GM-CSF、sCD137、MIP1a、およびM1Pbのうちの1つまたは組み合わせである、態様164〜169のいずれかに記載の方法。
171. 前記1つまたは複数の因子が、IL-2、IFN-γ、TNF-α、およびIL-10のうちの1つまたは組み合わせである、態様164〜170のいずれかに記載の方法。
172. 前記1つまたは複数の因子が、前述の可溶性因子のうちの2つ以上のいずれかの組み合わせであり、かつ前記パラメータが、2つ以上の因子の測定値の算術平均または幾何平均である、態様168〜171のいずれかに記載の方法。
173. 前記パラメータが、TNF-α、IFN-γ、およびIL-2のうちの少なくとも2つの、またはTNF-α、IFN-γ、およびIL-2の測定値、任意で量または濃度の算術平均または幾何平均である、態様168〜172のいずれかに記載の方法。
174. 前記パラメータが、測定値の正規化された値であり、正規化が、因子の参照測定値と比較した通りである、態様164〜173のいずれかに記載の方法。
175. 前記参照測定値が、キメラ抗原受容体（CAR）を含む参照治療用T細胞組成物の多数、任意で少なくとも10、少なくとも15、少なくとも20の間の測定値の平均であり、
（i）該参照治療用T細胞組成物のそれぞれが、対象への投与後に許容される安全プロファイルを結果としてもたらすことが観察されているかもしくは決定されており、任意で、該対象が、抗原を発現するかもしくはそれに関連する疾患もしくは状態を有する；かつ/または
（ii）該参照治療用T細胞組成物のそれぞれが、対象への投与後に所望の有効性を結果としてもたらすことが観察されているかもしくは決定されており、任意で、該対象が、抗原を発現するかもしくはそれに関連する疾患もしくは状態を有する、
態様174に記載の物品または製造。
176. 前記許容される安全プロファイルが、観察されるグレード2以上の神経毒性の非存在、またはグレード3以上の神経毒性の非存在である、態様175に記載の方法。
177. 前記許容される安全プロファイルが、観察されるグレード3以上の神経毒性の非存在である、態様175または態様176に記載の方法。
178. 前記有効性が、部分奏効であるかまたは完全奏効（CR）である、態様177のいずれかに記載の方法。
179. 前記参照測定値が、治療用T細胞組成物と同じ方法によって生成されるが、組換え受容体、任意でCARを発現しない、抗原を特異的に認識しない、かつ/またはいかなる組換え受容体、任意でいかなるCARも発現しない参照T細胞組成物における因子の、同じアッセイによる測定値である、態様178に記載の方法。
180. 前記パラメータが、1つまたは複数の因子の測定値の患者特異的変動のために対照に対して正規化されている、態様179に記載の方法。
181. 前記パラメータが、対照因子の同じアッセイにおける同じ測定値と比較した、因子の測定値の正規化された値であり、治療用T細胞組成物における該対照因子のレベルが、有害事象または毒性転帰またはその可能性もしくは危険性を示さないかまたはそれと相関しないかまたはそれと有意には相関しないことが知られているか、または観察されており、該有害事象または毒性転帰が任意で、重度の神経毒性である、態様179または態様180に記載の方法。
182. 前記対照因子が、T細胞組成物の投与後に有害事象を発生した多数の対象の中で、有害事象の発生と統計学的に相関していない、かつ/または相関しない因子であるかまたはそれを含み、任意で、該対照因子が、IL-5、IL-13、GM-CSF、およびIL-6のうちの1つまたは組み合わせであり、任意で、該対照因子の測定値が、前述のうちの2つ以上の算術平均または幾何平均である、態様181に記載の方法。
183. 前記パラメータが、細胞溶解活性またはその測定値を含まない、態様118〜182のいずれかに記載の方法。
184. 前記パラメータが、組換え受容体依存性のもしくは抗原特異的な細胞溶解活性またはその測定値を含まない、態様118〜183のいずれかに記載の方法。
185. 前記表現型が、CD8+ CAR+細胞またはアポトーシスマーカー-CD8+ CAR+細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3であり；かつ
前記パラメータが、任意で、TNF-α、IL-2、およびIFN-γのうちの1つまたは組み合わせである炎症誘発性サイトカインの測定値であるか、またはその正規化された値である、
態様118〜184のいずれかに記載の方法。
186. 前記有害事象が、グレード4または5の神経毒性であり、かつ前記閾値が、
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、1.75×107であるかまたは約1.75×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、2.19×107であるかまたは約2.19×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.25×107であるかまたは約1.25×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.56×107であるかまたは約1.56×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、1.5×107であるかまたは約1.5×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、1.88×107であるかまたは約1.88×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.5×107であるかまたは約1.5×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.88×107であるかまたは約1.88×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、2.0×107であるかまたは約2.0×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、2.5×107であるかまたは約2.5×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、1.25×107であるかまたは約1.25×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、1.56×107であるかまたは約1.56×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、1.75×107であるかまたは約1.75×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、2.19×107であるかまたは約2.19×107であり、
任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
態様118〜185のいずれかに記載の方法。
187. 前記有害事象が、グレード4または5の神経毒性であり、かつ前記標的参照単位の所与の範囲が、
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.0×105〜1.75×107または約2.0×105〜1.75×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.5×105〜2.19×107または約2.5×105〜2.19×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4×105〜1.25×107または約4×105〜1.25×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5×106〜1.56×107または約5×106〜1.56×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.0×105〜1.5×107または約2.0×105〜1.5×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.5×105〜1.88×107または約2.5×105〜1.88×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.0×105〜1.5×107または約3.0×105〜1.5×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.75×105〜1.88×107または約3.75×105〜1.88×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.0×105〜2.0×107または約3.0×105〜2.0×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.75×105〜2.5×107または約3.75×105〜2.5×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4.0×105〜1.25×107または約4.0×105〜1.25×107であり；
AがCD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5.0×105〜1.56×107または約5.0×105〜1.56×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4.0×105〜1.75×107または約4.0×105〜1.75×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5.0×105〜2.19×107または約5.0×105〜2.19×107であり、
任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
態様118〜186のいずれかに記載の方法。
188. 前記有害事象が、少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性であり、かつ前記閾値が、
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、1.0×106であるかまたは約1.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、1.25×106であるかまたは約1.25×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、2.0×106であるかまたは約2.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、3.0×106であるかまたは約3.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、3.75×106であるかまたは約3.75×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.5×106であるかまたは約1.5×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.88×106であるかまたは約1.88×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、3.12×106であるかまたは約3.12×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、3.0×106であるかまたは約3.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、3.75×106であるかまたは約3.75×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、2.0×106であるかまたは約2.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
態様118〜185のいずれかに記載の方法。
189. 前記有害事象が、少なくとも長期にわたるグレード3であり、かつ前記標的参照単位の所与の範囲が、
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.0×105〜1.0×106または約3.0×105〜1.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.75×105〜1.25×106または約3.75×105〜1.25×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4×105〜2.0×106または約4×105〜2.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5×106〜2.5×106または約5×106〜2.5×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.0×105〜3.0×106または約2.0×105〜3.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.5×105〜3.75×106または約2.5×105〜3.75×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.0×105〜1.5×106または約3.0×105〜1.5×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.75×105〜1.88×106または約3.75×105〜1.88×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.0×105〜2.5×106または約3.0×105〜2.5×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.75×105〜3.12×106または約3.75×105〜3.12×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4.0×105〜3.0×106または約4.0×105〜3.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5.0×105〜3.75×106または約5.0×105〜3.75×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4.0×105〜2.0×106または約4.0×105〜2.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5.0×105〜2.5×106または約5.0×105〜2.5×106であり、
任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
態様118〜185および188のいずれかに記載の方法。
190. 前記治療用T細胞組成物が、それぞれ両端の値を含む、1mL当たり約1000万個の細胞〜1mL当たり約7000万個の細胞、または1mL当たり約1000万個の生存細胞〜1mL当たり約7000万個の生存細胞を含む、態様118〜189のいずれかに記載の方法。
191. 前記治療用T細胞組成物が、それぞれ両端の値を含む、1mL当たり約1500万個の細胞または生存細胞〜1mL当たり約6000万個の細胞または生存細胞を含む、態様118〜190のいずれかに記載の方法。
192. 前記T細胞組成物が、当たり1000万個よりも多い細胞または生存細胞を含む、態様118〜191のいずれかに記載の方法。
193. 前記治療用T細胞組成物が、1500万個よりも多い細胞または1mL当たり1500万個よりも多い細胞を含む、態様118〜192のいずれかに記載の方法。
194. 前記疾患または状態が、がん、任意で骨髄腫、リンパ腫、または白血病である、態様118〜193のいずれかに記載の方法。
195. 前記疾患または状態が、B細胞悪性腫瘍、任意で、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、成人ALL、慢性リンパ芽球性白血病（CLL）、非ホジキンリンパ腫（NHL）、およびびまん性大細胞型B細胞リンパ腫（DLBCL）からなる群より選択されるB細胞悪性腫瘍である、態様194に記載の方法。
196. 前記抗原が、CD19、CD22、ROR1、Igκ、Her2、L1-CAM、CD20、メソテリン、CEA、B型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、EGFR、EGP-2、EGP-4、EPHa2、ErbB2、ErbB3、ErbB4、FBP、胎児アセチルコリン受容体、GD2、GD3、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13R-α2、kdr、κ軽鎖、ルイスY、L1細胞接着分子、MAGE-A1、メソテリン、MUC1、MUC16、PSCA、NKG2Dリガンド、NY-ESO-1、MART-1、gp100、胎児腫瘍性抗原、TAG72、VEGF-R2、がん胎児性抗原（CEA）、前立腺特異抗原、PSMA、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンB2、CD123、CS-1、c-Met、GD-2、MAGE A3、CE7、ウィルムス腫瘍1（WT-1）、およびサイクリンA1（CCNA1）である、態様118〜195のいずれかに記載の方法。
197. 前記組換え受容体がCARである、態様118〜196のいずれかに記載の方法。
198. CARが、抗原に特異的に結合する細胞外抗原認識ドメイン、およびITAMを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、任意で、該細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞内ドメインを含み；かつ/またはCARが、CD28もしくは4-1BBのシグナル伝達ドメインを任意で含む共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、態様197に記載の方法。
199. 前記T細胞がCD4+またはCD8+である、態様118〜198のいずれかに記載の方法。
200. 前記T細胞が初代T細胞であり、任意で、該T細胞が、対象に対して自己由来であるか、または対象に対して同種異系である、態様118〜199のいずれかに記載の方法。
201. 前記単位用量が、アネキシンVでの検出についてまたはカスパーゼ3の活性型もしくはプロ型について陰性である、CD8+CAR+細胞の15×106以下の数を含有する、態様118〜200のいずれかに記載の方法。
202. 前記単位用量が、CARについて陽性のCD4+細胞の数をさらに含み、該数が、少なくとも1:1のもしくは約1:1のCD8+CAR+細胞の比であるか、または1:1のもしくは約1:1のCD8+CAR+細胞の比である、態様118〜201のいずれかに記載の方法。
203. T細胞組成物の投与の前にリンパ球枯渇化学療法を投与する工程をさらに含み、かつ/または対象が、T細胞組成物の投与の前にリンパ球枯渇化学療法を受けている、態様118〜202のいずれかに記載の方法。
204. 前記リンパ球枯渇化学療法が、フルダラビンおよび/またはシクロホスファミドの対象への投与を含む、態様203に記載の方法。
205. シクロホスファミドが、30 mg/kgからのもしくは30 mg/kgから60 mg/kgまでの量で投与され、かつ/またはフルダラビンが、25 mg/m2からのもしくは約25 mg/m2から30 mg/m2までの量で投与される、態様204に記載の方法。
206. シクロホスファミドが、900からのもしくは900から1000 mgまでの量で投与され、かつ/またはフルダラビンが、25 mg/m2からのもしくは約25 mg/m2から30 mg/m2までの量で投与される；または
シクロホスファミドが、300 mg/m2からのもしくは約300 mg/m2からの量で投与され、かつ/またはフルダラビンが、30 mg/m2からのもしくは約30 mg/m2からの量で投与される、
態様204に記載の方法。
207. シクロホスファミドが、500 mg/m2からのもしくは約500 mg/m2からの量で投与され、かつ/またはフルダラビンが、30 mg/m2からのもしくは約30 mg/m2からの量で投与される、態様204に記載の方法。
208. シクロホスファミドが、500 mg/m2からのもしくは約500 mg/m2からの量で投与され、かつ/またはフルダラビンが、60 mg/m2からのもしくは約60 mg/m2からの量で投与される、態様204に記載の方法。
209. 前記リンパ球枯渇療法が、連続する3日間にわたって1日当たり1回投与される、態様203〜208のいずれかに記載の方法。
210. 前記リンパ球枯渇療法が、T細胞組成物の投与の5日前、4日前、および3日前に投与される、態様203〜209のいずれかに記載の方法。
211. 前記リンパ球枯渇療法が、3〜5日間にわたって毎日1回、任意で3日間にわたって毎日1回投与される、態様203〜210のいずれかに記載の方法。
212. フルダラビンおよびシクロホスファミドが連続的に投与される、態様204〜211のいずれかに記載の方法。
213. フルダラビンおよびシクロホスファミドが同時的に投与される、態様204〜211のいずれかに記載の方法。
214. 以下の工程を含む、T細胞組成物の単位用量を含む治療用組成物をアッセイする方法：
（a）疾患または状態を有する対象に由来し、かつ疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）をコードする核酸が形質導入されたT細胞を含むT細胞組成物由来の試料をアッセイする工程であって、該アッセイが、細胞組成物についてのBを決定し、Bが、所与の組成物における組換え受容体依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である、工程；ならびに
（b）Bに基づいて細胞組成物の効力を評価する工程、および/または組成物が、Bについての下側規格限界（LSL）よりも上であるか、もしくはBについての上側規格限界（USL）よりも下であるかを評価する工程。
215. 治療用T組成物をアッセイする方法であって、疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体を含むT細胞を含むT細胞組成物由来の試料を、Bに基づいて細胞組成物の効力について評価する工程、および/または組成物が、Bについての下側規格限界（LSL）よりも上であるか、もしくはBについての上側規格限界（USL）よりも下であるかを評価する工程を含む、方法。
216. 組成物が、BについてのUSLよりも下である場合にのみ、対象の処置のために生成物が放出される、態様214または態様215に記載の方法。
217. BがUSLよりも上である場合は、組成物を対象に投与しないこと、または対象に投与される細胞の数を調整された単位用量に変更することを推奨する、該調整された単位用量が、T細胞組成物の細胞の標的数または参照単位（RU）の標的数を含有し、所与の組成物におけるRUが、以下の式によって定義される、態様214または態様215に記載の方法：
RU＝A×B
式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ
Bは、所与の組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその分数もしくは倍数もしくは変換である。
218. Aが、所与の組成物中に存在する所与の表現型の細胞の数、またはその倍数もしくは分数もしくは変換である、態様214〜217のいずれかに記載の方法。
219. Aが、所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均である、態様214〜217のいずれかに記載の方法。
220. 前記単位の標的数が、任意で参照単位の安全数である単位の閾値数よりも小さく、該参照単位の安全数が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療法の参照単位の最低数である、態様214〜219のいずれかに記載の方法。
221. 前記有害事象が、重度の有害事象、任意で重度の神経毒性、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上のまたは少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である、態様220に記載の方法。
222. 前記参照単位の標的数が、安全係数に対応する量だけ、および/または1.5〜3倍の範囲内、任意で約2倍の量だけ、または有害事象を発生しなかった、任意でグレード0〜2の神経毒性の対象の群の標準偏差の倍数である量だけ、参照単位の安全数よりも小さく、任意で、該倍数が1.5〜3倍の範囲内である、態様220または態様221に記載の方法。
223. 前記参照単位の標的数が、参照単位の参照有効数以上であり、該参照有効数が、組換え受容体、任意でCARを含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、所望の治療転帰、任意で部分奏効または完全奏効（CR）を示した群の中の1または複数の対象に投与された治療法の単位の数である、態様217〜222のいずれかに記載の方法。
224. 前記調整された単位用量が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物で処置された対象の群の平均単位用量よりも少ない、任意で1.5倍少ない、2倍少ない、3倍少ない、4倍少ない、態様217〜223のいずれかに記載の方法。
225. T細胞組成物の試料、任意で凍結保存された試料が、T細胞組成物の対象への投与後に評価される、態様214〜224のいずれかに記載の方法。
226. BがUSLよりも上である場合は、対象が、毒性の危険性があると判定される、態様214〜225のいずれかに記載の方法。
227. BがUSLよりも上である場合は、組成物を投与された対象が、細胞組成物の投与後、および任意で毒性転帰の徴候または症状の発生の前に、モニタリングされ、かつ/または毒性転帰もしくはサイトカイン放出症候群の可能性を改善もしくは低減するように作用物質で処置される、態様214〜225のいずれかに記載の方法。
228. 以下の工程を含む、治療用T細胞組成物に関して毒性の危険性を評価する方法：
（a）対象に投与されているT細胞組成物由来の試料を、所与の範囲内の参照単位（RU）について評価する工程であって、該T細胞組成物が、疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体を含むT細胞を含み、所与の組成物におけるRUが、以下の式によって定義され：
RU＝A×B
式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の、細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ
Bは、所与の組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその分数もしくは倍数もしくは変換である、工程；および
（b）RUをRUの参照安全数と比較する工程であって、該比較により、対象が、有害事象、任意で重度の有害事象、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上の重度の神経毒性または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性を発生する危険性があるかまたはないかが示される、工程。
229. Aが、所与の組成物中に存在する所与の表現型の細胞の数、またはその倍数もしくは分数もしくは変換である、態様228に記載の方法。
230. Aが、所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均である、態様229に記載の方法。
231. 前記RUの参照安全数が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療法の参照単位の最低数である、態様228〜230のいずれかに記載の方法。
232. 前記比較が、RUが参照安全RUよりも上であることを示す場合は、組成物を投与された対象が、細胞組成物の投与後、および任意で毒性転帰の徴候または症状の発生の前に、モニタリングされ、かつ/または毒性転帰もしくはサイトカイン放出症候群の可能性を改善もしくは低減するように作用物質で処置される、態様228〜231のいずれかに記載の方法。
233. 以下の工程を含む、T細胞組成物の単位用量を含む治療用組成物を生成する方法：
（a）疾患または状態を有する対象に由来し、かつ疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）をコードする核酸が形質導入されたT細胞を含むT細胞組成物をアッセイする工程であって、該アッセイが、細胞組成物についてのBを決定し、Bが、所与の組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である、工程；および
（b）T細胞組成物の単位用量を達成するために、容器に、組成物のすべてまたは一部分、および任意で別の溶液を充填する工程であって、該単位用量が、T細胞組成物の参照単位（RU）の標的数を含有し、所与の組成物におけるRUが、以下の式によって定義され：
RU＝A×B、式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均である、工程。
234. 以下の工程を含む、T細胞組成物の単位用量を含む治療用組成物を生成する方法：T細胞組成物の単位用量を達成するために、容器を、疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体を含むT細胞を含むT細胞組成物のすべてまたは一部分、および任意で別の溶液で充填する工程であって、該単位用量が、T細胞組成物の参照単位（RU）の標的数を含有し、所与の組成物におけるRUが、以下の式によって定義され：
RU＝A×B
式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ
Bは、所与の組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である、工程。
235. Aが、所与の組成物中に存在する所与の表現型の細胞の数、またはその倍数もしくは分数もしくは変換である、態様233または態様234に記載の方法。
236. Aが、所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均である、態様233または態様234に記載の方法。
237. Aが、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、かつBが、所与の組成物における組換え受容体依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値である、態様217〜236のいずれか1つに記載の方法。
238. Aおよび/またはBが、それぞれ、数または値の変換であり、該変換が、対数変換、べき変換、またはロジット変換を含む、態様217〜237のいずれか1つに記載の方法。
239. Aが、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、かつBが、所与のT細胞組成物におけるCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値の倍数または変換であり、任意で、Bが値の対数変換である、態様217〜238のいずれか1つに記載の方法。
240. 前記対数変換が、常用対数（log10(x)）、自然対数（ln(x)）、または二進対数（log2(x)）である、態様238または態様239に記載の方法。
241. Aが、組成物における生存細胞の数である、かつ/または、アポトーシス性ではない、早期アポトーシスもしくはアポトーシスを示す因子を示さない、アポトーシスの早期ではない、またはアポトーシスの後期ではない細胞の数である、かつ/または、特定の分化状態の細胞の数である、かつ/または、メモリー/ステム様の特性を有する細胞の数であるか、またはその倍数もしくは変換である、態様217〜240のいずれかに記載の方法。
242. 前記表現型が、CD3、CD4、もしくはCD8のうちの1つもしくは複数である表面マーカーの陽性発現を含む、かつ/または組換え受容体、任意でCAR、もしくは組換え受容体の発現についての代理マーカーの陽性発現を含む、態様217〜241のいずれかに記載の方法。
243. 前記表現型が、CD3+ CAR、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+である、態様242に記載の方法。
244. 前記表現型が、アポトーシスを示すかまたはアポトーシスのカスケードもしくは経路における1つもしくは複数の段階を示す因子、任意でアポトーシスのマーカーの発現の非存在を含む、態様217〜243のいずれかに記載の方法。
245. 前記表現型が、アポトーシスのマーカー、任意で早期アポトーシスまたは後期アポトーシスのマーカーの陰性発現を含む、態様217〜244のいずれかに記載の方法。
246. 前記アポトーシスのマーカーが、表面ホスファチジルセリンであり、かつ/もしくはアネキシンVで検出されるか、またはカスパーゼの活性型もしくはプロ型、任意でカスパーゼ3の活性型もしくはプロ型である、態様245に記載の方法。
247. 前記表現型がアネキシン-を含む、態様217〜246のいずれかに記載の方法。
248. 前記表現型が、任意で抗原もしくは組換え受容体に対して非特異的な、かつ/またはポリクローナルに産生されるサイトカインのうちの1つまたは組み合わせの産生の指標を含み、該1つまたは複数のサイトカインが、IL-2、IL-13、IL-17、IFN-γ、またはTNF-αである、態様217〜247のいずれかに記載の方法。
249. 前記産生の指標が、アッセイ、任意で、T細胞組成物の試料と、ポリクローナル作用物質、抗原特異的作用物質、または組換え受容体、任意でCARに結合する作用物質とのインキュベーションを含む細胞内サイトカイン染色アッセイにおいて測定される、態様248に記載の方法。
250. 前記作用物質が、PMAおよびイオノマイシンであるかもしくはそれを含む、または、T細胞受容体もしくはT細胞受容体複合体アゴニストであるかもしくはそれを含む、態様248または態様249に記載の方法。
251. 前記表現型が、活性化マーカーの陰性発現を含み、該活性化マーカーが、CD25、CD127、LAG3、Ki67、およびそれらの組み合わせの中から選択される、態様217〜250のいずれかに記載の方法。
252. 前記表現型が、消耗マーカーの陰性発現を含み、該消耗マーカーが、PD1もしくはFOXP3遺伝子産物、またはそれらの組み合わせである、態様217〜251のいずれかに記載の方法。
253. 前記表現型が、ナイーブ表現型またはメモリー表現型を含み、任意で、該メモリー表現型が、Tエフェクターメモリー表現型、Tセントラルメモリー表現型、またはCD45RAを発現するTエフェクターメモリー表現型（Temra）を含む、態様217〜252のいずれかに記載の方法。
254. Aが、T細胞の総数、CD3+細胞の総数、CD4+もしくはCD8+細胞の総数、CD3+ CAR+細胞の総数、CD8+ CAR+細胞の総数、CD4+ CAR+の総数、または前述のいずれかの生細胞もしくは生存細胞の総数、またはその倍数もしくは変換値である、態様217〜253のいずれかに記載の方法。
255. Aが、CD3+細胞の総数、CD8+の総数、CD3+ CAR+細胞の総数、CD8+ CAR+細胞の総数、または前述のいずれかの生細胞もしくは生存細胞の総数、またはその倍数もしくは変換値である、態様217〜253のいずれかに記載の方法。
256. Aが、CD3+ CAR+細胞であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、CD4+ CAR+であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、CD8+ CAR+細胞であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、またはその倍数もしくは変換値であり、該アポトーシスマーカーが、アネキシンVまたはカスパーゼである、態様217〜253のいずれかに記載の方法。
257. Aが、アネキシン- CD3+ CAR+細胞の総数またはアネキシン- CD8+ CAR+細胞の総数である、態様217〜256のいずれかに記載の方法。
258. 前記組換え受容体依存性の活性が、炎症誘発性サイトカイン、任意で、TNF-α、IFN-γ、IL-2、およびIL-10のうちの1つまたは組み合わせの産生または蓄積の測定値である、態様214〜257のいずれかに記載の方法。
259. 前記パラメータが、1つまたは複数の因子の測定値、またはその正規化された値である、態様214〜258のいずれか1つに記載の方法。
260. 前記測定値が、抗原、抗原を発現する細胞、および/または組換え受容体、任意でCARに特異的に結合する作用物質の存在下での、所与の組成物またはその試料の固定された時間、任意で24時間にわたる培養またはインキュベーションを含むアッセイにおけるものである、態様259に記載の方法。
261. 前記アッセイがELISAである、態様260に記載の方法。
262. 前記因子の測定値が、
（i）因子の濃度、相対濃度、量、もしくは相対量；または
（ii）所与の組成物の投入細胞の単位当たりの因子の量もしくは相対量、または
（iii）時間の単位、任意で1時間当たりの、所与の組成物の投入細胞の単位当たりの因子の量もしくは相対量；または
（iv）（i）〜（iii）のいずれかを示すレベル
である、態様259〜261のいずれかに記載の方法。
263. 前記1つまたは複数の因子が、可溶性因子のうちの1つまたは組み合わせ、任意で、サイトカイン、ケモカイン、または可溶性受容体、任意で可溶性共刺激受容体のうちの1つまたは組み合わせである、態様259〜262のいずれかに記載の方法。
264. 前記1つまたは複数の因子が、炎症誘発性サイトカイン、Th2サイトカイン、およびTh17サイトカインのうちの1つまたは組み合わせである、態様259〜263のいずれかに記載の方法。
265. 前記1つまたは複数の因子が、IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL4、IL-5、IL-10、IL-13、GM-CSF、sCD137、MIP1a、およびM1Pbのうちの1つまたは組み合わせである、態様259〜264のいずれかに記載の方法。
266. 前記1つまたは複数の因子が、IL-2、IFN-γ、TNF-α、およびIL-10のうちの1つまたは組み合わせである、態様259〜265のいずれかに記載の方法。
267. 前記1つまたは複数の因子が、前述の可溶性因子のうちの2つ以上のいずれかの組み合わせであり、かつ前記パラメータが、2つ以上の因子の測定値の算術平均または幾何平均である、態様259〜266のいずれかに記載の方法。
268. 前記パラメータが、TNF-α、IFN-γ、およびIL-2のうちの少なくとも2つの、またはTNF-α、IFN-γ、およびIL-2の測定値、任意で量または濃度の算術平均または幾何平均である、態様259〜267のいずれかに記載の方法。
269. 前記パラメータが、測定値の正規化された値であり、正規化が、因子の参照測定値と比較した通りである、態様259〜268のいずれかに記載の方法。
270. 前記参照測定値が、キメラ抗原受容体（CAR）を含む参照治療用T細胞組成物の多数、任意で少なくとも10、少なくとも15、少なくとも20の間の測定値の平均であり、
（i）該参照治療用T細胞組成物のそれぞれが、対象への投与後に許容される安全プロファイルを結果としてもたらすことが観察されているかもしくは決定されており、任意で、該対象が、抗原を発現するかもしくはそれに関連する疾患もしくは状態を有する；かつ/または
（ii）該参照治療用T細胞組成物のそれぞれが、対象への投与後に所望の有効性を結果としてもたらすことが観察されているかもしくは決定されており、任意で、該対象が、抗原を発現するかもしくはそれに関連する疾患もしくは状態を有する、
態様269に記載の方法。
271. 前記許容される安全プロファイルが、観察されるグレード2以上の神経毒性の非存在、またはグレード3以上の神経毒性の非存在である、態様270に記載の方法。
272. 前記許容される安全プロファイルが、観察されるグレード3以上の神経毒性の非存在である、態様270または態様271に記載の方法。
273. 前記有効性が、部分奏効であるかまたは完全奏効（CR）である、態様270〜272のいずれかに記載の方法。
274. 前記参照測定値が、治療用T細胞組成物と同じ方法によって生成されるが、組換え受容体、任意でCARを発現しない、抗原を特異的に認識しない、かつ/またはいかなる組換え受容体、任意でいかなるCARも発現しない参照T細胞組成物における因子の、同じアッセイによる測定値である、態様269に記載の方法。
275. 前記パラメータが、1つまたは複数の因子の測定値の患者特異的変動のために対照に対して正規化されている、態様274に記載の方法。
276. 前記パラメータが、対照因子の同じアッセイにおける同じ測定値と比較した、因子の測定値の正規化された値であり、治療用T細胞組成物における該対照因子のレベルが、有害事象または毒性転帰またはその可能性もしくは危険性を示さないかまたはそれと相関しないかまたはそれと有意には相関しないことが知られているか、または観察されており、該有害事象または毒性転帰が任意で、重度の神経毒性である、態様274または態様275に記載の方法。
277. 前記対照因子が、T細胞組成物の投与後に有害事象を発生した多数の対象の中で、有害事象の発生と統計学的に相関していない、かつ/または相関しない因子であるかまたはそれを含み、任意で、該対照因子が、IL-5、IL-13、GM-CSF、およびIL-6のうちの1つまたは組み合わせであり、任意で、該対照因子の測定値が、前述のうちの2つ以上の算術平均または幾何平均である、態様276に記載の方法。
278. 前記パラメータが、細胞溶解活性またはその測定値を含まない、態様214〜277のいずれかに記載の方法。
279. 前記パラメータが、組換え受容体依存性のもしくは抗原特異的な細胞溶解活性またはその測定値を含まない、態様214〜278のいずれかに記載の方法。
280. 前記表現型が、CD8+ CAR+細胞またはアポトーシスマーカー-CD8+ CAR+細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3であり；かつ
前記パラメータが、任意で、TNF-α、IL-2、およびIFN-γのうちの1つまたは組み合わせである炎症誘発性サイトカインの測定値であるか、またはその正規化された値である、
態様217〜279のいずれかに記載の方法。
281. 前記有害事象が、グレード4または5の神経毒性であり、かつ前記閾値が、
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、1.75×107であるかまたは約1.75×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、2.19×107であるかまたは約2.19×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.25×107であるかまたは約1.25×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.56×107であるかまたは約1.56×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、1.5×107であるかまたは約1.5×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、1.88×107であるかまたは約1.88×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.5×107であるかまたは約1.5×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.88×107であるかまたは約1.88×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、2.0×107であるかまたは約2.0×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、2.5×107であるかまたは約2.5×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、1.25×107であるかまたは約1.25×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、1.56×107であるかまたは約1.56×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、1.75×107であるかまたは約1.75×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、2.19×107であるかまたは約2.19×107であり、
任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
態様217〜280のいずれかに記載の方法。
282. 前記有害事象が、グレード4または5の神経毒性であり、かつ前記標的参照単位の所与の範囲が、
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.0×105〜1.75×107または約2.0×105〜1.75×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.5×105〜2.19×107または約2.5×105〜2.19×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4×105〜1.25×107または約4×105〜1.25×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5×106〜1.56×107または約5×106〜1.56×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.0×105〜1.5×107または約2.0×105〜1.5×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.5×105〜1.88×107または約2.5×105〜1.88×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.0×105〜1.5×107または約3.0×105〜1.5×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.75×105〜1.88×107または約3.75×105〜1.88×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.0×105〜2.0×107または約3.0×105〜2.0×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.75×105〜2.5×107または約3.75×105〜2.5×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4.0×105〜1.25×107または約4.0×105〜1.25×107であり；
AがCD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5.0×105〜1.56×107または約5.0×105〜1.56×107であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4.0×105〜1.75×107または約4.0×105〜1.75×107であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5.0×105〜2.19×107または約5.0×105〜2.19×107であり、
任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
態様217〜281のいずれかに記載の方法。
283. 前記有害事象が、少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性であり、かつ前記閾値が、
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、1.0×106であるかまたは約1.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、1.25×106であるかまたは約1.25×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、2.0×106であるかまたは約2.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、3.0×106であるかまたは約3.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、3.75×106であるかまたは約3.75×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.5×106であるかまたは約1.5×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、1.88×106であるかまたは約1.88×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、3.12×106であるかまたは約3.12×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、3.0×106であるかまたは約3.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、3.75×106であるかまたは約3.75×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、2.0×106であるかまたは約2.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、2.5×106であるかまたは約2.5×106であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
態様217〜280のいずれかに記載の方法。
284. 前記有害事象が、少なくとも長期にわたるグレード3であり、かつ前記標的参照単位の所与の範囲が、
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.0×105〜1.0×106または約3.0×105〜1.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.75×105〜1.25×106または約3.75×105〜1.25×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4×105〜2.0×106または約4×105〜2.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5×106〜2.5×106または約5×106〜2.5×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.0×105〜3.0×106または約2.0×105〜3.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、2.5×105〜3.75×106または約2.5×105〜3.75×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.0×105〜1.5×106または約3.0×105〜1.5×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIFN-γまたはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.75×105〜1.88×106または約3.75×105〜1.88×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.0×105〜2.5×106または約3.0×105〜2.5×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-αおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、3.75×105〜3.12×106または約3.75×105〜3.12×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4.0×105〜3.0×106または約4.0×105〜3.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがIFN-γおよびIL-2またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5.0×105〜3.75×106または約5.0×105〜3.75×106であり；
Aがアポトーシスマーカー陰性（-）CD8+CAR+である場合、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、4.0×105〜2.0×106または約4.0×105〜2.0×106であり；
AがCD8+CAR+であり、かつBがTNF-α、IFN-γ、およびIL-2、またはその正規化された値である場合は、両端の値を含む、5.0×105〜2.5×106または約5.0×105〜2.5×106であり、
任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
態様217〜280および283のいずれかに記載の方法。
285. 前記組換え受容体がCARである、態様214〜284のいずれかに記載の方法。

286. CARが、抗原に特異的に結合する細胞外抗原認識ドメイン、およびITAMを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、任意で、該細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞内ドメインを含み；かつ/またはCARが、CD28もしくは4-1BBのシグナル伝達ドメインを任意で含む共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、態様285に記載の方法。
287. 前記T細胞がCD4+またはCD8+である、態様214〜286のいずれかに記載の方法。
288. 前記T細胞が、任意で対象に対して自己由来または同種異系の、初代T細胞である、態様214〜287のいずれかに記載の方法。
289. 細胞療法のための治療用T細胞組成物を生成する方法であって、容器に、両端の値を含む、1mL当たり約1000万個の細胞〜約7000万個の細胞の濃度まで、T細胞を含む組成物のすべてまたは一部分、および任意で別の溶液を充填する工程を含む、方法。
290. 前記T細胞が、疾患または状態を有する対象に由来し、かつ疾患または状態に関連するかまたはそれによって発現される抗原に特異的な組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）をコードする核酸が形質導入されており、かつ/または該T細胞が、組換え受容体、任意でCARを含む、態様289に記載の方法。
291. 前記容器が、両端の値を含む、1mL当たり約1500万〜約6000万個の細胞で充填される、態様233〜290のいずれかに記載の方法。
292. 前記容器が、1mL当たり1000万個よりも多い細胞で充填される、態様233〜291のいずれかに記載の方法。
293. 前記容器が、1mL当たり1500万個よりも多い細胞で充填される、態様233〜292のいずれかに記載の方法。
294. 前記充填が、自動化された方式で実施される、態様233〜293のいずれかに記載の方法。
295. 前記充填が、閉鎖系で実施される、態様233〜295のいずれかに記載の方法。
296. 前記容器が別の溶液で充填され、該溶液が、凍結保護剤、任意でDMSOを含む、態様233〜295のいずれかに記載の方法。
297. 細胞を前記容器内で凍結する工程、または前記容器を80℃未満もしくは約80℃未満の温度で保存する工程をさらに含む、態様233〜295のいずれかに記載の方法。
298. 前記組換え受容体がCARである、態様233〜298のいずれかに記載の方法。
299. CARが、抗原に特異的に結合する細胞外抗原認識ドメイン、およびITAMを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、任意で、該細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞内ドメインを含み；かつ/またはCARが、CD28もしくは4-1BBのシグナル伝達ドメインを任意で含む共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、態様298に記載の方法。
300. 前記T細胞がCD4+またはCD8+である、態様233〜299のいずれかに記載の方法。
301. 前記T細胞が、任意で対象に対して自己由来または同種異系の、初代T細胞である、態様233〜301のいずれかに記載の方法。
302. 前記T細胞組成物が、あるプロセスによって生成され、ここで、
生物学的に活性を有する細胞の特徴および/またはアポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在の特徴を示す表現型の細胞の頻度、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物における該頻度の平均から、40％以下もしくは30％以下もしくは20％以下もしくは10％以下もしくは5％以下だけ変動する、かつ/または1以下の標準偏差だけそのような平均から変動するか；あるいは
アポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在を示す表現型の細胞の組成物における、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の頻度、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物の中で、40％以下または20％以下または10％以下だけ変動する、
態様118〜301のいずれかに記載の方法。
303. 前記プロセスが、以下を含む、態様302に記載の方法：
（a）T細胞を含む細胞の集団と、組換え受容体をコードする核酸分子を含む作用物質との、集団における細胞中に組換え受容体をコードする核酸を導入する条件下でのインキュベーション；ならびに
（b）該インキュベーションの前、その最中、および/またはその後の細胞の刺激であって、一次シグナル、シグナル伝達、刺激、活性化、および/または細胞の増大を誘導する刺激条件の存在下での細胞のインキュベーションを含む、刺激。
304. 前記プロセスが、（a）の前に、生物学的試料からの細胞の集団の単離をさらに含む、態様303に記載の方法。
305. 前記単離が、任意で陽性選択または陰性選択による、CD3の表面発現に基づくか、またはCD4およびCD8のうちの一方もしくは両方の表面発現に基づく細胞の選択を含む、態様304に記載の方法。
306. 前記単離が、免疫親和性に基づく選択の実施を含む、態様304または態様305に記載の方法。
307. 前記生物学的試料が、全血試料、バフィーコート試料、末梢血単核細胞（PBMC）試料、未分画T細胞試料、リンパ球試料、白血球試料、アフェレーシス産物、または白血球アフェレーシス産物であるか、またはそれを含む、態様304〜306に記載の方法。
308. 前記刺激条件が、TCR複合体の1つもしくは複数の成分の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、および/または1つもしくは複数の共刺激分子の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる刺激試薬とのインキュベーションを含む、態様303〜307のいずれかに記載の方法。
309. 前記刺激試薬が、TCR複合体のメンバーに特異的に結合する一次作用物質、およびT細胞共刺激分子に特異的に結合する二次作用物質を含む、態様308に記載の方法。
310. 前記一次作用物質が、CD3に特異的に結合し、かつ/または前記共刺激分子が、CD28、CD137（4-1-BB）、OX40、もしくはICOSからなる群より選択される、態様308または態様309に記載の方法。
311. 前記一次作用物質および二次作用物質が、抗体を含み、かつ/または固体支持体、任意でビーズの表面上に存在する、態様306または態様310に記載の方法。
312. 前記刺激試薬が、組換え受容体依存性の活性または抗原特異的な活性、任意で、炎症誘発性サイトカインの組換え受容体依存性または抗原特異的依存性の産生または蓄積が、刺激試薬を用いたプロセスによって生成される多数のT細胞組成物の間の炎症誘発性サイトカインの産生または蓄積の測定値の平均から、40％以下もしくは30％以下もしくは20％以下もしくは10％以下もしくは5％以下だけ変動する、かつ/または1以下の標準偏差だけそのような平均から変動することが決定されているものである；かつ/あるいは
前記刺激試薬が、組換え受容体依存性の活性または抗原特異的な活性、任意で、炎症誘発性サイトカインの組換え受容体依存性または抗原特異的依存性の産生または蓄積が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物の中で、40％以下または30％以下または20％以下または10％以下または5％以下だけ変動することが決定されているものである；かつ/あるいは
前記刺激試薬が、刺激試薬を用いて生成される細胞組成物の組換え受容体依存性の活性または抗原特異的な活性、任意で、炎症誘発性サイトカインの組換え受容体依存性または抗原特異的依存性の産生または蓄積が、対照組成物から40％以下または30％以下または20％以下または10％以下または5％以下だけ変動することが決定されているものであり、該対照組成物および細胞組成物が、対照刺激試薬または組換え受容体依存性の活性についての標準単位の存在下で対照組成物が実施される以外は、同じ細胞の集団由来を含み、同じプロセスを用いて生成される、
態様308〜311のいずれかに記載の方法。
313. 前記対照刺激試薬が、プロセスにおいて使用されるときに、組換え受容体依存性の活性または抗原特異的な活性が許容される変動の範囲内であるT細胞組成物を生成することが知られている、態様312に記載の方法。
314. 前記細胞の刺激が、任意で18〜24時間、37度でまたは約37度で、インキュベーションの前に実施されるかまたは開始される、態様303〜313のいずれかに記載の方法。
315. 前記刺激条件が、IL-2、IL-15、およびIL-7の中から選択されるサイトカインを含む、態様303〜314のいずれかに記載の方法。
316. 前記細胞の刺激が、任意で閾値濃度を達成する時間にわたって、インキュベーションの後に実施される、態様303〜315のいずれかに記載の方法。
317. （c）両端の値を含む、1ml当たり約1000万個の細胞〜約7000万個の細胞の濃度までの、T細胞組成物のすべてまたは一部分、および任意で別の溶液での容器の充填、をさらに含む、態様303〜316のいずれかに記載の方法。
318. 前記容器が別の溶液で充填され、該溶液が、凍結保護剤、任意でDMSOを含む、態様317に記載の方法。
319. 前記濃度が、両端の値を含む、1ml当たり約1500万〜約6000万個の細胞である、態様317または態様318に記載の方法。
320. 前記濃度が、1ml当たり1000万個の細胞よりも高い、態様317〜319のいずれかに記載の方法。
321. 前記濃度が、1ml当たり1500万個の細胞よりも高い、態様317〜320のいずれかに記載の方法。
322. DMSOの濃度が、7.5％であるかまたは約7.5％であるかまたは7.5％以下である、態様317〜321のいずれかに記載の方法。
323. 前記濃度が、1mL当たり6000万個の細胞よりも高い、態様317または態様318に記載の方法。
324. DMSOの濃度が、7.5％よりも高く、任意で、両端の値を含む、7.5％〜9.0％または約7.5％〜9.0％である、態様317〜320および323のいずれかに記載の方法。
325. 前記組換え受容体をコードする核酸分子を含む作用物質が、ウイルスベクター、任意でレンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである、態様303〜324のいずれかに記載の方法。
326. 前記充填が、自動化された方式、任意で閉鎖系で実施される、態様317〜325のいずれかに記載の方法。
327. 前記容器における細胞の凍結、または80℃未満もしくは約80℃未満の温度での前記容器の保存をさらに含む、態様303〜326のいずれかに記載の方法。
328. 疾患または状態に関連するかまたはそれによって発現される抗原に特異的な組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）を含む細胞の数を含む、治療用T細胞組成物の単位用量であって、該細胞の数が、それぞれ両端の値を含む、5.0×106〜2.25×107個および約5.0×106〜2.25×107個、5.0×106〜2.0×107個および約5.0×106〜2.0×107個、5.0×106〜1.5×107個および約5.0×106〜1.5×107個、5.0×106〜1.0×107個および約5.0×106〜1.0×107個、5.0×106〜7.5×106個および約5.0×106〜7.5×106個、7.5×106〜2.25×107個および約7.5×106〜2.25×107個、7.5×106〜2.0×107個および約7.5×106〜2.0×107個、7.5×106〜1.5×107個および約7.5×106〜1.5×107個、7.5×106〜1.0×107個および約7.5×106〜1.0×107個、1.0×107〜2.25×107個および約1.0×107〜2.25×107個、1.0×107〜2.0×107個および約1.0×107〜2.0×107個、1.0×107〜1.5×107個および約1.0×107〜1.5×107個、1.5×107〜2.25×107個および約1.5×107〜2.25×107個、1.5×107〜2.0×107個および約1.5×107〜2.0×107個、2.0×107〜2.25×107個および約2.0×107〜2.25×107個の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、単位用量。
329. 前記細胞の数が、
それぞれ両端の値を含む、少なくとも5×106個または少なくとも約5×106個、少なくとも6×106個または少なくとも約6×106個、少なくとも7×106個または少なくとも約7×106個、少なくとも8×106個または少なくとも約8×106個、少なくとも9×106個または少なくとも約9×106個、少なくとも10×106個または少なくとも約10×106個と、約15×106個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である；
それぞれ両端の値を含む、少なくとも5.55×106個または少なくとも約5.55×106個、少なくとも6.66×106個または少なくとも約6.66×106個、少なくとも7.77×106個または少なくとも約7.77×106個、少なくとも8.99×106個または少なくとも約8.99×106個、少なくとも1.0×107個または少なくとも約1.0×107個、少なくとも1.1×107個または少なくとも約1.1×107個と、約1.67×107個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である；
それぞれ両端の値を含む、少なくとも6.25×106個または少なくとも約6.25×106個、少なくとも7.5×106個または少なくとも約7.5×106個、少なくとも8.75×106個または少なくとも約8.75×106個、少なくとも1.0×107個または少なくとも約1.0×107個、少なくとも1.13×107個または少なくとも約1.13×107個、少なくとも1.25×107個または少なくとも約1.25×107個と、約1.9×107個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である；
それぞれ両端の値を含む、少なくとも7.14×106個または少なくとも約7.14×106個、少なくとも8.5×106個または少なくとも約8.5×106個、少なくとも1.0×107個または少なくとも約1.0×107個、少なくとも1.14×107個または少なくとも約1.14×107個、少なくとも1.29×107個または少なくとも約1.29×107個、少なくとも1.42×107個または少なくとも約1.42×107個と、約2.14×107個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
態様328に記載の単位用量。
330. 前記細胞の数が、それぞれ両端の値を含む、少なくとも5×106個または少なくとも約5×106個、少なくとも6×106個または少なくとも約6×106個、少なくとも7×106個または少なくとも約7×106個、少なくとも8×106個または少なくとも約8×106個、少なくとも9×106個または少なくとも約9×106個、少なくとも10×106個または少なくとも約10×106個と、約15×106個との間の、CD8+である組換え受容体発現細胞である、態様328または態様329に記載の単位用量。
331. 前記細胞の数が、それぞれ両端の値を含む、少なくとも6.25×106個または少なくとも約6.25×106個、少なくとも7.5×106個または少なくとも約7.5×106個、少なくとも8.75×106個または少なくとも約8.75×106個、少なくとも1.0×107個または少なくとも約1.0×107個、少なくとも1.13×107個または少なくとも約1.13×107個、少なくとも1.25×107個または少なくとも約1.25×107個と、約1.9×107個との間の、アポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、態様328または態様329に記載の単位用量。
332. 前記単位用量が、参照単位（RU）の閾値数よりも多くを含有せず、所与の組成物におけるRU-の数が、以下の式によって定義される、態様328〜332のいずれかに記載の単位用量：
RU＝A×B
式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の細胞の数、またはその倍数もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ
Bは、所与のT細胞組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である。
333. 前記参照単位の閾値数が、単位の参照安全数よりも小さく、該単位の参照安全数が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療法の単位の最低数である、態様332に記載の単位用量。
334. 前記有害事象が、重度の有害事象、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上の重度の神経毒性または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である、態様333に記載の単位用量。
335. 前記単位の閾値数が、安全係数に対応する量だけ、または少なくとも2倍だけ、単位の参照安全数よりも小さい、態様333または態様334に記載の単位用量。
336. 前記単位の閾値数が、単位の参照有効数以上であり、該参照有効数が、組換え受容体、任意でCARを含むT細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、所望の治療転帰、任意で完全奏効（CR）を示した群の中の1または複数の対象に投与された治療法の単位の数である、態様332〜335のいずれかに記載の単位用量。
337. 前記組成物中のCD8+細胞および/またはCD8+CAR+細胞のうちの少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも75％、少なくとも80％、または少なくとも90％が、アポトーシスマーカーについて陽性ではないか、アポトーシス性ではないか、またはアポトーシスの早期ではないか、またはアポトーシスの後期ではない、態様121〜127のいずれかに記載の単位用量。
338. 1.88×107個以下のCD8+ CAR+ T細胞、任意で、アポトーシス性ではないか、アポトーシスの早期ではないか、またはアポトーシスの後期ではないCD8+ CAR+ T細胞を含む、態様328〜337のいずれかに記載の単位用量。
339. 少なくとも5×106個のアネキシン- CD8+ CAR+細胞を含むが、1.5×107個以下のアネキシン- CD8+ CAR+細胞を含む、態様328〜338のいずれかに記載の単位用量組成物。
340. 前記T細胞組成物が、あるプロセスによって生成され、ここで、
生物学的に活性を有する細胞の特徴および/またはアポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在の特徴を示す表現型の細胞の頻度、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物における該頻度の平均から、40％以下もしくは30％以下もしくは20％以下もしくは10％以下もしくは5％以下だけ変動する、かつ/または1以下の標準偏差だけそのような平均から変動するか；あるいは
アポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在を示す表現型の細胞の組成物における、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の頻度、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物の中で、40％以下または20％以下または10％以下だけ変動する、
態様328〜339のいずれか一項に記載の単位用量組成物。
341. 前記プロセスが、以下を含む、態様340に記載の単位用量：
（a）T細胞を含む細胞の集団と、組換え受容体をコードする核酸分子を含む作用物質との、集団における細胞中に組換え受容体をコードする核酸を導入する条件下でのインキュベーション；ならびに
（b）該インキュベーションの前、その最中、および/またはその後の細胞の刺激であって、一次シグナル、シグナル伝達、刺激、活性化、および/または細胞の増大を誘導する刺激条件の存在下での細胞のインキュベーションを含む、刺激。
342. 前記プロセスが、（a）の前に、生物学的試料からの細胞の集団の単離をさらに含む、態様341に記載の単位用量。
343. 前記単離が、任意で陽性選択または陰性選択による、CD3の表面発現に基づくか、またはCD4およびCD8のうちの一方もしくは両方の表面発現に基づく細胞の選択を含む、態様342に記載の単位用量。
344. 前記単離が、免疫親和性に基づく選択の実施を含む、態様342または態様343に記載の単位用量。
345. 前記生物学的試料が、全血試料、バフィーコート試料、末梢血単核細胞（PBMC）試料、未分画T細胞試料、リンパ球試料、白血球試料、アフェレーシス産物、または白血球アフェレーシス産物であるか、またはそれを含む、態様342〜344に記載の単位用量。
346. 前記刺激条件が、TCR複合体の1つもしくは複数の成分の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、および/または1つもしくは複数の共刺激分子の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる刺激試薬とのインキュベーションを含む、態様341〜345のいずれかに記載の単位用量。
347. 前記刺激試薬が、TCR複合体のメンバーに特異的に結合する一次作用物質、およびT細胞共刺激分子に特異的に結合する二次作用物質を含む、態様346に記載の単位用量。
348. 前記一次作用物質が、CD3に特異的に結合し、かつ/または前記共刺激分子が、CD28、CD137（4-1-BB）、OX40、もしくはICOSからなる群より選択される、態様346または態様347に記載の単位用量。
349. 前記一次作用物質および二次作用物質が、抗体を含み、かつ/または固体支持体、任意でビーズの表面上に存在する、態様347または態様348に記載の単位用量。
350. 前記刺激試薬が、組換え受容体依存性の活性または抗原特異的な活性、任意で、炎症誘発性サイトカインの組換え受容体依存性または抗原特異的依存性の産生または蓄積が、刺激試薬を用いたプロセスによって生成される多数のT細胞組成物の間の炎症誘発性サイトカインの産生または蓄積の測定値の平均から、40％以下もしくは30％以下もしくは20％以下もしくは10％以下もしくは5％以下だけ変動する、かつ/または1以下の標準偏差だけそのような平均から変動することが決定されているものである；かつ/あるいは
前記刺激試薬が、組換え受容体依存性の活性または抗原特異的な活性、任意で、炎症誘発性サイトカインの組換え受容体依存性または抗原特異的依存性の産生または蓄積が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物の中で、40％以下または30％以下または20％以下または10％以下または5％以下だけ変動することが決定されているものである；かつ/あるいは
前記刺激試薬が、刺激試薬を用いて生成される細胞組成物の組換え受容体依存性の活性または抗原特異的な活性、任意で、炎症誘発性サイトカインの組換え受容体依存性または抗原特異的依存性の産生または蓄積が、対照組成物から40％以下または30％以下または20％以下または10％以下または5％以下だけ変動することが決定されているものであり、該対照組成物および細胞組成物が、対照刺激試薬または組換え受容体依存性の活性についての標準単位の存在下で対照組成物が実施される以外は、同じ細胞の集団由来を含み、同じプロセスを用いて生成される、
態様346〜349のいずれかに記載の単位用量。
351. 前記対照刺激試薬が、プロセスにおいて使用されるときに、組換え受容体依存性の活性または抗原特異的な活性が許容される変動の範囲内であるT細胞組成物を生成することが知られている、態様350に記載の単位用量。
352. 前記細胞の刺激が、任意で18〜24時間、37度でまたは約37度で、インキュベーションの前に実施されるかまたは開始される、態様341〜351のいずれかに記載の単位用量。
353. 前記刺激条件が、IL-2、IL-15、およびIL-7の中から選択されるサイトカインを含む、態様341〜352のいずれかに記載の単位用量。
354. 前記細胞の刺激が、任意で閾値濃度を達成する時間にわたって、インキュベーションの後に実施される、態様341〜353のいずれかに記載の単位用量。
355. （c）両端の値を含む、1ml当たり約1000万個の細胞〜約7000万個の細胞の濃度までの、T細胞組成物のすべてまたは一部分、および任意で別の溶液での容器の充填、をさらに含む、態様341〜354のいずれかに記載の単位用量。
356. 前記容器が別の溶液で充填され、該溶液が、凍結保護剤、任意でDMSOを含む、態様355に記載の単位用量。
357. 前記濃度が、両端の値を含む、1ml当たり約1500万〜約6000万個の細胞である、態様355または態様356に記載の単位用量。
358. 前記濃度が、1ml当たり1000万個の細胞よりも高い、態様355〜357のいずれかに記載の単位用量。
359. 前記濃度が、1ml当たり1500万個の細胞よりも高い、態様355〜358のいずれかに記載の単位用量。
360. DMSOの濃度が、7.5％であるかまたは約7.5％であるかまたは7.5％以下である、態様355〜359のいずれかに記載の単位用量。
361. 前記濃度が、1mL当たり6000万個の細胞よりも高い、態様355または態様356に記載の単位用量。
362. DMSOの濃度が、7.5％よりも高く、任意で、両端の値を含む、7.5％〜9.0％または約7.5％〜9.0％である、態様355〜358および361のいずれかに記載の単位用量。
363. 前記組換え受容体をコードする核酸分子を含む作用物質が、ウイルスベクター、任意でレンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである、態様341〜362のいずれかに記載の単位用量。
364. 前記充填が、自動化された方式、任意で閉鎖系で実施される、態様355〜363のいずれかに記載の単位用量。
365. 前記容器における細胞の凍結、または80℃未満もしくは約80℃未満の温度での前記容器の保存をさらに含む、態様341〜364のいずれかに記載の単位用量。
366. 組換え受容体発現細胞の用量を以前に投与されている対象の血液における組換え受容体発現細胞の数をアッセイする工程を含む、対象に毒性の危険性があるかを判定する方法であって、
（i）投与の開始後4日以内に、対象の血液における組換え受容体発現細胞の数が、マイクロリットル当たり少なくとも2個もしくは少なくとも約2個の組換え受容体発現細胞である場合；
（ii）投与の開始後5日または6日以内に、対象の血液における組換え受容体発現細胞の数が、マイクロリットル当たり少なくとも5個もしくは少なくとも約5個の組換え受容体発現細胞であるか、またはマイクロリットル当たり少なくとも10個もしくは少なくとも約10個の組換え受容体発現細胞である場合；または
（iii）投与の開始後7日以内に、対象の血液における組換え受容体発現細胞の数が、マイクロリットル当たり少なくとも15個もしくは少なくとも約15個の組換え受容体発現細胞である場合は、
該対象に毒性の発生の危険性がある、方法。
367. （a）疾患または状態を有する対象に、組換え受容体を発現する細胞の用量を投与する工程；および
（b）細胞を投与した後、対象の血液における組換え受容体発現細胞の数をアッセイする工程
を含む、対象に毒性の危険性があるかを判定する方法であって、
（i）投与の開始後4日以内に、対象の血液における組換え受容体発現細胞の数が、マイクロリットル当たり少なくとも2個もしくは少なくとも約2個の組換え受容体発現細胞である場合；
（ii）投与の開始後5日または6日以内に、対象の血液における組換え受容体発現細胞の数が、マイクロリットル当たり少なくとも5個もしくは少なくとも約5個の組換え受容体発現細胞であるか、またはマイクロリットル当たり少なくとも10個もしくは少なくとも約10個の組換え受容体発現細胞である場合；または
（iii）投与の開始後7日以内に、対象の血液における組換え受容体発現細胞の数が、マイクロリットル当たり少なくとも15個もしくは少なくとも約15個の組換え受容体発現細胞である場合は、
該対象に毒性の発生の危険性がある、方法。
368. 対象に毒性を発生する危険性があると判定された場合は；組換え受容体発現細胞の投与を中断する、より少ない用量の組換え受容体発現細胞の用量を該対象に投与する；異なる組換え受容体を発現する細胞を該対象に投与する；および/または、毒性の発生を処置する、予防する、遅延させる、または減衰させることができる作用物質を該対象に投与する、態様366または態様367に記載の方法。
369. 対象に毒性を発生する危険性があると判定された場合は、毒性の発生を処置する、予防する、遅延させる、または減衰させることができる作用物質を該対象に投与する、態様366〜368のいずれかに記載の方法。
370. （i）組換え受容体依存性の活性または表現型について、刺激試薬を用いて生成されたT細胞組成物を評価する工程；および
（ii）組換え受容体依存性の活性または表現型を、対照組成物から生成された同じ活性もしくは表現型と、または組換え受容体依存性の活性もしくは表現型についての標準単位と比較する工程
を含む、治療用T細胞組成物の生成における使用について刺激試薬を評価するための方法であって、
刺激試薬を用いて生成された細胞組成物の組換え受容体依存性の活性または表現型が、対照組成物によって生成された同じ活性から、または標準単位から、40％以下または30％以下または20％以下または10％以下または5％以下だけ変動する場合は、刺激剤が、治療用T細胞組成物を生成するための方法における使用についての放出に適していると判定される、方法。
371. 前記組換え受容体依存性の活性が、抗原特異的な活性である、態様370に記載の方法。
372. 前記対照組成物およびT細胞組成物が、対照刺激試薬の存在下で対照組成物が実施される以外は、同じ細胞の集団由来を含み、同じプロセスを用いて生成される、態様370または態様371に記載の方法。
373. 組換え受容体依存性の活性が、評価され、対照組成物から生成された同じ活性と比較されるか、または組換え受容体依存性の活性についての標準単位と比較される、態様370〜372のいずれかに記載の方法。
374. 前記組換え受容体依存性の活性が、炎症誘発性サイトカインの組換え受容体依存性または抗原特異的依存性の産生または蓄積である、態様370〜373のいずれかに記載の方法。
375. 前記炎症誘発性サイトカインが、IL-2、TNF-α、IFNγ、またはIL-10である、態様364に記載の方法。
376. 表現型が、評価され、対照組成物から生成された同じ表現型と比較されるか、または表現型についての標準単位と比較される、態様370〜372のいずれかに記載の方法。
377. 前記表現型が、特定の分化状態および/またはメモリー/ステム様表現型を含む、態様370〜372および376のいずれかに記載の方法。
378. 前記表現型が、CD3、CD8、CD27、CD28である表面マーカーの陽性発現を含む、かつ/または組換え受容体、任意でCAR、もしくは組換え受容体の発現についての代理マーカーの陽性発現を含む、態様370〜372、376、および377のいずれかに記載の方法。
379. 前記表現型がCD27+/CD28+/CD8+を含む、態様370〜372および376〜378のいずれかに記載の方法。
380. 前記刺激試薬が、TCR複合体の1つもしくは複数の成分の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、および/または1つもしくは複数の共刺激分子の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる、態様370〜379のいずれかに記載の方法。
381. 前記刺激試薬が、TCR複合体のメンバーに特異的に結合する一次作用物質、およびT細胞共刺激分子に特異的に結合する二次作用物質を含む、態様370〜380のいずれかに記載の方法。
382. 前記一次作用物質が、CD3に特異的に結合し、かつ/または前記共刺激分子が、CD28、CD137（4-1-BB）、OX40、もしくはICOSからなる群より選択される、態様380または態様381に記載の方法。
383. 前記一次作用物質および二次作用物質が、抗体を含み、かつ/または固体支持体、任意でビーズの表面上に存在する、態様381または態様382に記載の方法。
384. mL当たり約1000万個の細胞〜約7000万個の細胞の濃度の治療用T細胞組成物、および任意で別の溶液を含む容器であって、該治療用T細胞組成物が、組換え受容体を含むT細胞を含む、容器。
385. 前記濃度が、1mL当たり約1500万〜約6000万個の細胞である、態様384に記載の容器。
386. 前記濃度が、1mL当たり1500万個の細胞であるか、または1mL当たり約1500万個の細胞である、態様384または385に記載の容器。
387. 別の溶液で充填され、該溶液が、凍結保護剤、任意でDMSOを含む、態様384または385に記載の容器。
388. バイアルであるかまたはバッグである、態様384〜386のいずれかに記載の容器。
389. バイアル、任意で低温貯蔵バイアルであり、かつ組成物の体積が、20 mL以下、任意で、1 mL〜20 mL、1 mL〜15 mL、1 mL〜10 mL、1 mL〜5 mL、1 mL〜2.5 mL、2.5 mL〜20 mL、2.5 mL〜15 mL、2.5 mL〜10 mL、2.5 mL〜5 mL、5 mL〜20 mL、5 mL〜15 mL、5 mL〜10 mL、10 mL〜20 mL、10 mL〜15 mL、または15 mL〜20 mLである、態様384〜387のいずれかに記載の容器。
390. 前記容器がバッグ、任意で凍結バッグであり、かつ組成物の体積が、
それぞれ両端の値を含む、15 mL〜150 mLもしくは約15 mL〜150 mL、20 mL〜100 mLもしくは約20 mL〜100 mL、20 mL〜80 mLもしくは約20 mL〜80 mL、20 mL〜60 mLもしくは約20 mL〜60 mL、20 mL〜40 mLもしくは約20 mL〜40 mL、40 mL〜100 mLもしくは約40 mL〜100 mL、40 mL〜80 mLもしくは約40 mL〜80 mL、40 mL〜60 mLもしくは約40 mL〜60 mL、60 mL〜100 mLもしくは約60 mL〜100 mL、60 mL〜80 mLもしくは約60 mL〜80 mL、または80 mL〜100 mLもしくは約80 mL〜100 mLである；または
少なくとも15 mLもしくは少なくとも約15 mL、少なくとも20 mLもしくは少なくとも約20 mL、少なくとも30 mLもしくは少なくとも約30 mL、少なくとも40 mLもしくは少なくとも約40 mL、少なくとも50 mLもしくは少なくとも約50 mL、少なくとも60 mLもしくは少なくとも約60 mL、少なくとも70 mLもしくは少なくとも約70 mL、少なくとも80 mLもしくは少なくとも約80 mL、または少なくとも90 mLもしくは少なくとも約90 mLである；かつ/または
100 mL以下である、
態様384〜388のいずれかに記載の容器。
391. 前記容器における組成物の体積に対する表面積の比が、
それぞれ両端の値を含む、0.1 cm-1〜100 cm-1もしくは約0.1 cm-1〜100 cm-1；1 cm-1〜50 cm-1もしくは約1 cm-1〜50 cm-1、1 cm-1 〜20 cm-1もしくは約1 cm-1 〜20 cm-1、1 cm-1〜10 cm-1もしくは約1 cm-1〜10 cm-1、1 cm-1〜7 cm-1もしくは約1 cm-1〜7 cm-1、1 cm-1〜6 cm-1もしくは約1 cm-1〜6 cm-1、1 cm-1〜3 cm-1もしくは約1 cm-1〜3 cm-1、1 cm-1〜2 cm-1もしくは約1 cm-1〜2 cm-1、2 cm-1〜20 cm-1もしくは約2 cm-1〜20 cm-1、2 cm-1〜10 cm-1もしくは約2 cm-1〜10 cm-1、2 cm-1〜7 cm-1もしくは約2 cm-1〜7 cm-1、2 cm-1〜6 cm-1もしくは約2 cm-1〜6 cm-1、2 cm-1〜3 cm-1もしくは約2 cm-1〜3 cm-1、3 cm-1〜20 cm-1もしくは約3 cm-1〜20 cm-1、3 cm-1〜10 cm-1もしくは約3 cm-1〜10 cm-1、3 cm-1〜7 cm-1もしくは約3 cm-1〜7 cm-1、3 cm-1 〜6 cm-1もしくは約3 cm-1 〜6 cm-1、6 cm-1〜20 cm-1もしくは約6 cm-1〜20 cm-1、6 cm-1〜10 cm-1もしくは約6 cm-1〜10 cm-1、6 cm-1〜7 cm-1もしくは約6 cm-1〜7 cm-1、 7 cm-1〜20 cm-1もしくは約7 cm-1〜20 cm-1、7 cm-1〜10 cm-1もしくは約7 cm-1〜10 cm-1、または7 cm-1〜20 cm-1もしくは約7 cm-1〜20 cm-1である；または
3 cm-1、4cm-1、5 cm-1、6 cm-1、7 cm-1、10 cm-1、15 cm-1、もしくは20 cm-1であるか、約3 cm-1、約4 cm-1、約5 cm-1、約6 cm-1、約7 cm-1、約10 cm-1、約15 cm-1、もしくは約20 cm-1であるか、または少なくとも3 cm-1、少なくとも4 cm-1、少なくとも5 cm-1、少なくとも6 cm-1、少なくとも7 cm-1、少なくとも10 cm-1、少なくとも15 cm-1、もしくは少なくとも20 cm-1である、
態様384〜390のいずれかに記載の容器。
392. 前記T細胞が、疾患または状態を有する対象に由来し、かつ疾患または状態に関連するかまたはそれによって発現される抗原に特異的な組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）をコードする核酸が形質導入されており、かつ/または該T細胞が、組換え受容体、任意でCARを含む、態様384〜3391のいずれかに記載の容器。
393. 前記組換え受容体がCARである、態様97〜105のいずれかに記載の容器。
394. CARが、抗原に特異的に結合する細胞外抗原認識ドメイン、およびITAMを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、任意で、該細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞内ドメインを含み；かつ/またはCARが、4-1BBのシグナル伝達ドメインを任意で含む共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、態様106に記載の容器。
395. 前記T細胞がCD4+またはCD8+である、態様97〜107のいずれかに記載の容器。
396. 前記T細胞が初代T細胞である、態様97〜108のいずれかに記載の方法。
397. 前記T細胞組成物が、あるプロセスによって生成され、ここで、
生物学的に活性を有する細胞の特徴および/または、アポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在の特徴を示す表現型の細胞の、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の頻度、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物における該頻度の平均から、40％以下もしくは30％以下もしくは20％以下もしくは10％以下もしくは5％以下だけ変動する、かつ/または1以下の標準偏差だけそのような平均から変動するか；あるいは
アポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在を示す表現型の細胞の組成物における、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の頻度、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物の中で、40％以下または20％以下または10％以下だけ変動する、
態様97〜109のいずれかに記載の容器。
X. 実施例
以下の実施例は、例示のみを目的として含まれるものであり、本発明の範囲を限定することを意図しない。
実施例1：重度の神経毒性を予測するCAR+T細胞組成物のパラメータの決定
種々のパラメータを、抗CD19キメラ抗原受容体（CAR）を発現するように操作された自己由来T細胞を含有する治療用組成物による再発性または難治性急性リンパ芽球性白血病（ALL）を有する対象の処置後に評価した。評価されるパラメータには、治療用細胞組成物および用量のパラメータ（機能的特性ならびに種々の表現型の細胞の数および頻度を含む）、患者特徴、ならびに奏効および毒性関連転帰を示すものを含む臨床および処置パラメータが含まれた。
パラメータを、個別の対象について事後に分析し、記述分析、グラフ分析、ノンパラメトリック分析、およびモデルベース分析を含む、複数の統計分析を用いて、対象間で比較した。異なるパラメータ間の関係を評価した。具体的には、試験は、個別の患者および細胞組成物または用量の種々のパラメータが、治療奏効を示す可能性ならびに/または神経毒性、例えば重度のもしくはグレード5の神経毒性および脳浮腫などの有害な転帰の危険性と（正比例してまたは反比例して）相関する程度を評価した。
A. CAR+T細胞療法
評価される対象（N＝38）は、成人ALLの処置用の抗CD19キメラ抗原受容体（CAR）を発現する自己由来T細胞を含有するT細胞組成物が投与された。処置の開始時に、38名の対象のうち、32名は骨髄中に疾患の形態学的証拠（少なくとも5％の芽球）を示しており、6名はPCRによって分子的に検出可能な疾患を示していた。対象は、1回目またはそれ以降のサルベージ療法（処置後の同種異系造血幹細胞処置を含む）を受けた、髄外のフィラデルフィア染色体陽性（Ph+）の疾患を含む再発性または急性の形態学的CD19陽性疾患（骨髄中の5％を超える芽球によって定義される）を有する、18歳以上であり、0〜2の米国東海岸癌臨床試験グループ（ECOG）スコアを有した。対象は、血清クレアチニン≦1.5×正常上限[ULN]または＞30 mL/分/1.73 m2のクレアチニンクリアランス、アラニンアミノトランスフェラーゼ＜5×ULN、ビリルビン＜2.0 mg/dL、≦グレード1の呼吸困難および室内気で≧92％の酸素飽和度、ならびに≧40％の左室駆出分画の値によって示されるような適切な器官機能を有した。対象には、事前ブリナツモマブ処置を受けた対象も含まれた。除外基準には、孤立性髄外疾患またはBurkett病、該疾患（CNS3）またはCNS病理を伴う活動性CNS合併症、活動性急性（グレードII〜IV）または広範囲慢性移植片対宿主病（GvHD）、活動性感染症、および事前遺伝子療法が含まれた。対象には、過去6ヶ月以内にアレムツズマブ、過去3ヶ月内にクロファラビンもしくはクラドリビン、過去4週間内にGvHD医薬、または過去1週間以内にサルベージ化学療法および治療用コルチコステロイドで処置されたものが含まれる対象もまた、除外された。
試験に含まれる対象の人口統計学およびベースライン特徴を表E1-Aに示す。
（表Ｅ１−Ａ）人口統計学およびベースライン特徴
Figure 2020508336
IT、髄腔内；LD、リンパ球枯渇。
aハイパーCVADはAまたはB、フルダラビンおよび/またはシタラビンを含むレジメンに分けられる。
投与された治療用T細胞組成物は、個々の対象からの白血球アフェレーシス試料に由来するT細胞（CD4+細胞およびCD8+細胞を含む）の免疫親和性に基づく選択、その後の抗CD19 CARをコードするウイルスベクターによる活性化および形質導入、増大、ならびに凍結保存を含むプロセスによって作製された。CARは、マウス抗体に由来する抗CD19 scFvと、細胞外領域、膜貫通ドメイン、および共刺激領域を含むCD28の領域と、CD3-ゼータ細胞内シグナル伝達ドメインを含有した。凍結保存した細胞組成物を、静脈内投与の前にベッドサイドで解凍した。充填され凍結保存されている細胞組成物の全量を投与した。
細胞を、およそ1×106個のCD3+CAR+細胞/kg（対象の体重）の第1の標的用量で投与した。投与のための標的用量および用量の範囲を、投与される用量当たり様々な数のCD3+CAR+細胞の範囲で、同様の組成物が投与されている形態学的疾患（morphologic disease）を有する対象の群について毒性転帰を比較することに一部基づき評価した。具体的には、CD3+CAR+/kg用量と、対象がグレード3の神経毒性を発生しているか否かを含む有無との関係を評価した、標的用量および用量範囲は、グレード3以上の神経毒性を示している対象のいずれかに投与されたCD3+CAR+細胞/kgのうち最低数から、少なくとも1.5×106個のCD3+CAR+細胞/kgの安全域を差し引いたものを下回った。図22を参照。用量は、CD4+細胞 対 CD8+細胞の数もしくは頻度、または他のT細胞サブセットの数もしくは頻度を考慮しなかった。CAR抗原+細胞に対する細胞傷害活性を効力の測定値として評価した。一部の対象は、初回用量後およそ14〜28日目の間に2回目の用量を受けた。自己由来CAR発現細胞の投与前に、対象は、シクロホスファミド（約1〜3 g/m2）のみの単回用量、またはシクロホスファミド（30〜60 mg/kg）およびフルダラビン（25 mg/m2〜30 mg/m2、3日間毎日投与）のいずれかを含む、プレコンディショニングリンパ球枯渇化学療法を投与されている。
対象は、奏効および他の転帰についてモニタリングされ、骨髄、末梢血、および脳脊髄液（CSF）の検査よるものを含んだ。対象を、米国国立癌研究所-共通毒性基準（CTCAE）スケール、バージョン4.03（NCI-CTCAE v4.03）に従って、1〜5のスケールに等級分けした神経毒性（錯乱、失語症、脳症、ミオクローヌス発作、痙攣、嗜眠、および/または精神状態の変化の症状を含む神経学的合併症）についても評価およびモニタリングした。共通毒性基準（CTCAE）スケール、バージョン4.03（NCI-CTCAE v4.03）。2009年5月28日に公表された有害事象に関する共通用語集（CTCAE）バージョン4、アメリカ合衆国保健福祉省（v4.03:2010年6月14日）；およびGuido Cavaletti＆Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6,657-666（December 2010）を参照。サイトカイン放出症候群（CRS）も決定し、モニタリングし、重症度に基づいて等級分けした。
奏効（完全奏効（CR）または不完全骨髄回復（CRi）を伴う完全奏効を示した対象のパーセンテージ（CR/CRi率）（中央値4ヶ月の追跡期間で））および毒性転帰を、処置の開始時に形態学的疾患を示している対象について、表E1-BおよびE1-Cに要約する。（NE＝評価不能）。示すように、対象の56％はグレード3〜5の神経毒性を発生した。5名の対象はグレード5の神経毒性、特にグレード5の脳浮腫を発生した。
（表Ｅ１−Ｂ）処置した対象の概要
Figure 2020508336
（表Ｅ１−Ｃ）形態学的疾患を有する処置した32名の対象の転帰（処置合計＝38名の対象）
Figure 2020508336
処置したさらなる6名の対象は、処置の時点で最小残存疾患（MRD+）について陽性であった。
CAR-T細胞療法に付随する少なくとも15例のグレード5の神経毒性および少なくとも13症例の脳浮腫が、公的に利用可能な情報から報告される、複数の異なる臨床試験において報告されており、これらには、様々な製造プロトコルによって、様々な疾患または適用の処置のために作製された、様々な抗原結合ドメインおよび様々な共刺激ドメインを有する様々なCARを発現するCAR-T細胞を伴う試験におけるものが含まれている。
B. 血中でのCAR+T細胞の薬物動態（PK）
分析を、細胞組成物の第1の用量、および該当する場合には、第2の用量の投与後の種々の時点での対象からの血液に由来する試料に対して行った。試料を、血中でのCAR発現細胞の存在および数についてフローサイトメトリーによって分析した。
図1および2に示すように、より重度の神経毒性を発症した対象、特にグレード5の神経毒性および脳浮腫を発症した対象の血液中で、CAR発現T細胞のより急速なピーク増大が観察された。例えば、結果は、これらの対象が、細胞の第1の用量後4〜7日以内に1μLの血液当たり検出可能なレベルのCAR+細胞を示し、細胞が投与された後7日以内に全てのそのような対象の血液中には1μLの血液当たり20個を上回るCAR+細胞が観察されることを示した。グレード3または4の神経毒性を有する対象では、CAR+T細胞のピーク増大は概して、もっと遅くに1マイクロリットル当たりより低いピーク数のCAR+T細胞で観察された（図2）。
C. 様々な対象における臨床、患者、トランスレーショナル、およびCMCパラメータの評価および比較
様々な程度の神経毒性を含む、治療開始時の疾患の重症度および治療転帰または毒性の発生による患者の様々な群について、種々のパラメータを評価した。相関および有意性の有無を、本実施例および実施例2において記載されているような記述分析、グラフ分析、ノンパラメトリック分析、およびモデルベース分析によって評価した。およそ500の臨床およびトランスレーショナルパラメータを、一変量および多変量ロジスティック回帰を用いて分析した。およそ140の化学・製造およびその品質管理（Chemistry, Manufacturing, and Control）（CMC）パラメータを、ノンパラメトリック検定およびパーティションベース（ディシジョンツリー）の方法を用いる一変量分析および多変量分析を用いて検討した。
様々なCMC特性を、（対象に投与された凍結保存治療用組成物の試料から解凍された（CDP））対象に投与されたT細胞組成物由来の試料において評価した。試料を、様々なパラメータの存在、非存在、レベル、正規化レベル、量、および/または正規化量について分析した。評価した例示的な臨床および患者特性の中には、患者の年齢、事前治療歴および患者が処置前にリンパ球枯渇化学療法および/または維持化学療法を受けていたかどうか、神経毒性の発生およびグレード、ならびに他の毒性転帰が含まれた。細胞組成物特異的なパラメータおよび/または用量関連パラメータには、（投与された用量および/または対象の体重当たりの投与された用量における）種々の細胞集団の量および頻度（またはその正規化値）、サイトカイン産生、CAR抗原刺激に応答しての細胞傷害活性、ならびに種々の条件に応答しての活性化もしくは刺激および/またはエフェクター機能などの機能を示す他のパラメータが含まれた。CAR+T細胞の注入後に個々の対象において観察される神経毒性および他の転帰に対する治療用組成物における種々のパラメータ（個別のおよびいくつかの場合にはそれらの組み合わせ）の相関の程度を評価した。
処置の開始時に形態学的疾患を示す対象のサブセットについてのある特定のパラメータについての例示的な統計解析の結果は、患者の年齢、事前治療歴、ならびにリンパ球枯渇化学療法および/または維持化学療法がグレード5の神経毒性の発生と相関する（正比例でまたは反比例で）という知見と一致した。例えば、この対象の群では、30歳未満のより若い患者、少ない数（2回以下）の事前療法を受けている患者、および3ヶ月以内にフルダラビンまたは積極的維持化学療法を受けている患者は、この試験においてグレード5の神経毒性を発症する傾向が強かった。例示的臨床因子についての細胞療法による治療後の脳浮腫の経験に対する計算されたオッズ比推定値を表E1-Dに示す。該オッズ比を、人口統計学または治療歴に関連するグレード5の神経毒性の発症のオッズを、人口統計学または治療歴の非存在に関連するオッズで割ることによって計算した。1を上回るオッズ比は、グレード5の神経毒性を発症する確率または可能性の増加を示した。
（表Ｅ１−Ｄ）脳浮腫に関連する例示的臨床因子
Figure 2020508336
事前CNS放射線照射、髄腔内（IT）化学療法による事前処置、事前CNS疾患、事前同種異系細胞療法、より高いECOGパフォーマンスステータス、またはブリナツモマブによる事前処置について、より高いリスクとの関連は観察されなかった。
この試験では、ある特定のそのようなパラメータ（例えば、若い（≦30 y）患者年齢および少ない事前処置）は、ある特定の治療用組成物特異的特性または用量関連特性（CAR誘導性細胞活性を示すCD19、CAR抗原を発現する細胞の存在下での解凍治療用細胞組成物の培養において測定された、細胞の投与を受けた対象でのCD8+CAR+AnnV陰性細胞の総数および炎症誘発性サイトカイン、IL-2の抗原特異的蓄積のレベルを含む）と相関することも観察された。評価した例示的特性の中には、個々の対象に投与された個々の用量における生存細胞および/または様々な表現型の細胞の数または頻度（または数/kg）も含まれた。例示的なそのような表現型には、フローサイトメトリーによって評価されるような、1つまたは複数の表面マーカーの発現も含まれた。例えば、表現型には、CD3+、CD8+、CD4+、および/またはCAR+が含まれた。表現型の中には、生存性、および機能的な、健全な、または生物学的に活性な細胞に関連する、またはそれを示す、またはそれを示すと見なされるものも含まれた。いくつかの局面では、そのような表現型には、アポトーシス、アポトーシス細胞、または1つもしくは複数の死もしくはアポトーシス経路の進入の様々なステージ、例えば初期または後期を示すマーカー（例えば、アネキシンV、カスパーゼ3）の陰性のまたは低い存在または発現が含まれた。いくつかの局面では、そのようなマーカーには、非CAR抗原特異的に、例えばPMA/イオノマイシンおよび/またはFOXP3に応答しての細胞内サイトカイン染色（ICS）などにおける、サイトカインまたは他の因子を産生する細胞の能力が含まれた。いくつかの局面では、マーカーおよび表現型には、T細胞の活性化、疲弊、幹様特性、ナイーブT細胞、寿命延長、T細胞サブセット、TCM、TEM、TSCMなどのTメモリーサブセットのメモリー表現型に関連するものが含まれた。
例えば、治療用細胞組成物関連特性には、投与される用量中のCD8+CAR+T細胞の総数、アネキシンV（アネキシンV-）またはカスパーゼ3切断による表面染色（非アポトーシス細胞を示す）などアポトーシスを示す因子について陰性であることが観察された投与された用量中のCD8+CAR+T細胞の総数または頻度（例えば、CD8+CAR+T細胞の中の）が含まれた。いくつかの例では、治療用細胞組成物関連特性には、投与される用量中のCD3+CAR+T細胞の総数、アネキシンV（アネキシンV-）またはカスパーゼ3切断による表面染色（非アポトーシス細胞を示す）などアポトーシスを示す因子について陰性であることが観察された投与された用量中のCD3+CAR+T細胞の総数または頻度（例えば、CD3+CAR+T細胞の中の）が含まれた。
例示的パラメータの中には、生存細胞濃度（VCC）、薬物製品の接種から収集の間の細胞の倍率増大（fold expansion）；および投与用量中のベクターコピー数（VCN）を含む、治療用組成物および/またはその産生に特有の性質も含まれた。
例示的パラメータの中には、組成物中の細胞の機能または活性または他の特性もしくは能力に一般的に関連するまたはそれを示すものも含まれた。これらの中には、TCRおよび/もしくはCAR誘導性または依存的に誘導されるものを含む、増殖および活性化または活性の様々な指標を含む、細胞刺激の転帰に関連する種々の特性が含まれた。機能または活性に関連する例示的なそのようなパラメータは、CAR抗原特異的刺激または他の刺激に応答しての、組成物中の細胞による1つまたは複数の因子（例えば種々のサイトカインなど）の産生の程度またはレベル（例えば細胞当たりのその量または濃度またはレベルなど）であった。
細胞内サイトカイン染色（ICS）アッセイでは、フローベースの方法を用いて、組成物中の細胞が非抗原特異的刺激に応答して種々のサイトカインを産生する能力を評価した。細胞を、ゴルジ阻害剤の存在下でPMA/イオノマイシンで刺激した。FoxP3発現を、FOXP3遺伝子のTreg特異的脱メチル化領域（TSDR）を標的とするqPCRアッセイによって評価した。Treg表現型を示すFOXP3のレベルは観察されなかった。
組成物のCAR標的化抗原特異的活性および機能（例えば、CAR抗原依存性サイトカイン分泌および細胞傷害性など）を示す複数のパラメータを、共培養アッセイで評価した。評価される治療用組成物の細胞を、CD19発現標的細胞の存在下でインキュベートした。サイトカインアッセイでは、サイトカイン（例えば、IL-2、IFNγ、TNF-α、IL-6、sCD137、MIP1b、MIP1a、IL-10、IL-4、IL-13、IL-5、またはGM-CSF）の蓄積量（pg/mL）を、およそ22〜24時間の期間、同じ体積での、標的細胞と同じ数の形質導入細胞またはCAR+細胞を含む量の種々の組成物とのインキュベーション後に評価した。そのようなアッセイは、用量中のCAR+細胞当たりの抗原特異的サイトカイン分泌の程度を提供した。他のアッセイでは、CD19発現標的細胞に対する細胞溶解活性を、T細胞とのインキュベーションに評価した。
いくつかの場合には、非CAR抗原特異的刺激に応答しての活性または機能的作用の測定値、例えば、磁気ビーズ上にコートされた、抗CD3/抗CD28による刺激後のサイトカインまたは他の因子の産生などを評価した。そのようなアッセイでは、培養物中のT細胞内により少ないCAR+細胞を含む培養物が、測定値のより高い相対レベルを示す可能性がある。
表E2は、本試験において対象に投与された治療用細胞組成物および/またはその用量について評価された特性のうち偏りのない方法で選択された複数の特性のリストを示す。これらの特性を、処置の開始時に形態学的疾患を示した対象のサブセット（22）について一変量分析を介して評価した。表E2は、一変量分析に基づき、各特性が、（グレード5の神経毒性/脳浮腫 対 他の対象を比較する）神経毒性グレードおよび/または脳浮腫と相関する（正比例で（+）または反比例で（-））ことが観察される程度を示すp値を列記する。15名の対象の間で、各特性が奏効転帰と相関したまたは相関しなかった程度（完全奏効（CR）または奏効なし（NR）を達成した対象と比較することによって評価する）もまた評価した；表E2はこの比較についてのp値も列記する。
表E2に列記したパラメータは、所与の特性と神経毒性/脳浮腫（グレード5の神経毒性/CE 対 グレード4以下の神経毒性）との間の一変量統計比較に基づき、最も低いp値から最も高いp値に、降順に並べられる。神経毒性のグレードに関するp値が0.2以下であったパラメータでは、表E2はさらに、神経毒性との観察された関連性が正比例である（（+）、パラメータの平均レベルまたは程度が、グレード4以下の神経毒性を有する対象と比較して、グレード5の神経毒性および脳浮腫を有する対象では上回ることが観察されたことを示す）、または反比例である（（-）、パラメータの平均レベルまたは程度が、グレード5の対象においてより低いことが観察されたことを示す）かどうかをさらに示す。
図3Aから図3Uは、パラメータとグレード5の神経毒性との間に（正比例のまたは反比例の）関係性が観察されたパラメータのサブセットについてのプロットを示し、様々な神経毒性または奏効群における個々の対象の結果を図示する。神経毒性に関してこれらのプロットで観察されるp値は0.05以下であった。
図3Vは、対象に投与されたCD3+CAR+細胞の数/kg（用量）の程度ならびに対象がグレード5の神経毒性を発症したかどうか（右側）および/または完全奏効を達成したかどうか（左側）を比較するプロットを示す。2つの変数の間で関係性が観察されたのに対して、CD3+CAR+細胞/kgはグレード5の神経毒性の強力な予測因子ではなく、明白な安全域は観察されなかった。この結果は、生物学的に活性な（例えば、非アポトーシス性の）細胞および/またはCD8細胞 対 CD4細胞の表現などの他のパラメータを考慮せずに、CD3+CAR+用量の数または頻度だけに基づいて用量を規定することは、重度の神経毒性の危険性を予防するのに適切ではない可能性があるという解釈、および本明細書において観察されたような1つまたは複数の予測パラメータを考慮する投与戦略を開発する利点と一致する。
図4、5Aおよび5Bは、様々な神経毒性または奏効群における個々の対象について、個別のサイトカイン（TNFα、IFNガンマ、IL-2）の抗原特異的分泌の程度のプロットおよびp値を示す。
示すように、治療用細胞組成物および用量において評価されたいくつかのパラメータは、対象への組成物の投与後のグレード5の神経毒性の発生と有意に相関する（正比例してまたは反比例して）ことが観察された。
（表Ｅ２）治療用細胞組成物および/または用量のパラメータの評価、ならびに神経毒性および奏効転帰との相関
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ベクターコピー数（細胞毎またはゲノム毎）に関して本試験において観察された関係は、細胞適合度ならびに/または組成物中の操作されたもしくは操作されていない細胞の相対的表現および/または組成物中の総細胞の密度に関連する複数変数の代理指標とみなされることが観察された。例えば、いくつかの態様では、プロセスの開始時に概して健全ではなかった血液試料由来の細胞は、形質導入期の間に生き残る可能性は低く、および/または形質導入時の細胞死は形質導入効率を改善することができる。よって、いくつかの局面では、いくつかの場合には、組成物当たりのより高いコピー数のウイルスベクター、例えばレンチウイルスまたはガンマレトロウイルスベクター形質導入を介して導入されたものなどは、細胞の大部分がプロセス開始時に健全ではなかった組成物を示す可能性があり、いくつかの局面では、神経毒性と、例えば反比例に、相関する性質を有している可能性がある。いくつかの態様では、高い頻度の形質導入は、凍結保存、貯蔵、および解凍時に高い頻度の操作された（例えばCAR+）細胞を有する組成物をもたらし得る。いくつかの局面では、用量が操作された細胞（またはそのサブタイプ、例えばCAR+CD3+）の数に基づく場合、操作された細胞の頻度が高いそのような細胞は、より低い全体細胞密度を含む可能性があり、いくつかの態様では、生物学的に活性なまたは非アポトーシス性の細胞のレベルまたは頻度の低下と相関する。
この一変量分析の結果は、グレード5の神経毒性/脳浮腫の発生と（正比例してまたは反比例して）有意に相関することが観察された用量および/または治療用組成物の複数のパラメータを特定した。そのようなパラメータの中には、用量中の投与された非アポトーシス性CAR+T細胞または非アポトーシス性CAR+CD8+T細胞など、生物学的に活性な細胞を一般に示す表現型を有する細胞の数、患者体重当たりの数、および/または頻度を示すものが含まれた。グレード5の神経毒性と相関するいくつかのパラメータは、治療奏効転帰（ここでは、対象が完全奏効を達成するかまたは奏効無しであるか否か）と有意に相関しないことが観察された。種々の場合では、CRを達成する幾人かの対象は、グレード5の神経毒性などの望ましくない作用を発症した対象の間で観察された（正の相関に対して）最低数に対応する閾値レベルを（正の相関に対して）下回るこれらのパラメータのレベルを有することが観察された。例えば、この結果は、CARを発現する生物学的に活性なまたは非アポトーシス性のCD3+および/もしくはCD8+細胞の数を用いて、神経毒性の危険性を低下させかつ奏効が観察される範囲内にある安全境界および有効性境界の範囲内で用量を決定できることを示した。致死的な神経毒性とT細胞分化状態または他の表現型との間で関連性は特定されなかった。
対象に投与した用量中の（アネキシンVを含む）アポトーシスのマーカーの表面染色で陰性であった細胞の数または正規化した数（または産物の細胞内、例えばCAR+CD3+またはCAR+CD8+内などのそのようなアポトーシスマーカー陰性細胞の頻度）の種々の測定値は、神経毒性と相関することが観察された。アネキシンVおよびカスパーゼ3についての結果は概して、類似していることが観察された。そのようなパラメータもまた、CAR-T細胞組成物の機能または効力に関連すると見なされる可能性があり、よって有効性に関係することが期待され得たが、これらの変数は概して、治療奏効転帰、この場合には対象が完全奏効または奏効無しを達成するかどうか、と有意に相関することが観察されなかった（例えば、図2〜5を参照）。
結果は、グレード5の神経毒性もしくは脳浮腫および/または神経毒性の重症度を予測するパラメータとしての（種々の測定値から示されるような）非アポトーシス性（および/または生物学的に活性な）T細胞もしくはCAR+細胞またはそのサブセットの頻度または数の使用、およびCAR-T療法のための適切な投与量および/または適切な安全限界を決定するためのそのようなパラメータの使用に一致した。
実施例2：重度の神経毒性および/または脳浮腫を予測するCAR+T細胞組成物のパラメータの多変量分析
一変量解析は概して、一度に1つの共変量を検討する。多変量解析は、一度におよび/または組み合わせで複数の共変量を検討し、概して、共分散、すなわち共変量間の相互作用を考慮することができる。
多変量分析を実施し、臨床転帰および/または毒性転帰と強く相関するおよび/またはそれに対して高い予測値を有する（一変量分析で個別に評価したものの中での）パラ-メータの組み合わせを特定した。
再帰的な2因子分割ツリー分析（two factor partition tree analysis）を実施し、様々な特性の組み合わせを分析した。具体的には、およそ250の共変量（パラメータ）を含む、一変量分析からの複合データセットを、二項分類のためのアプローチに基づく分割（アルゴリズム的ディシジョンツリー）を用いて調べた。一般に、古典的回帰法は、典型的には物理化学データおよび/または仮説検定により適している関数（線形および非線形）関係を生じる。分割法は概して、いくつかの態様では生物学的データおよび探索的分析により適している可能性があるアルゴリズム的（「ツリー」）モデルを生じる。Support Vector Machines（SVM）およびArtificial Neural Networks（ANN）などのデータマイニング技術を比較すると、分割モデルは解釈の容易さにおいて利点を有し得る。
分割モデルは概して、例えば、平均奏効を予測する、ネストされた「if-then-else」ビン/バケットを含む。いくつかの態様では、分割法はアプリオリモデルを前提としないことから、ノイズの多いまたは主観的な測定値、非線形性、および混合データ型（すなわち、カテゴリー的および/または連続的である予測因子および奏効変数）によるデータセットを評価するのにより有用である。
一般に、ツリーベースのアプローチは、非パラメトリックであり、他の多変量法と比較して、ノイズの多い測定値および主観的な測定値、連続的およびカテゴリー的な変数の組み合わせ、ならびに非線形関係を扱う能力がよりよく備わっている。
この試験でのアプローチでは、38名の対象の集団全体についてのデータおよび、別個に、24名の形態学的対象の集団についてのデータを検討した。神経毒性との相関を、3種類の異なる方法で：対象がグレード5の神経毒性を発症したか否か、対象がグレード4または5の神経毒性を発症したか否か、および対象がグレード4、5または長期にわたる（10日以上）のグレード3の神経毒性（3p）を発症したかどうかにしたがって、患者をグループ分けすることによって評価した。一度に最大でも2つの共変量（1つは一次予測因子および1つの二次予測因子）の組み合わせを用い、かつ分割のサイズを5つの観測値の最小値に維持することによって、モデル複雑性を最小化した。
擬陽性と擬陰性の数が十分に小さい限りは、（同じ）最良の一次予測因子および複数の二次予測因子を用いて複数の代替モデルを生じさせる、反復探索が行われた。次いで、該探索は次善の一次予測因子を検討し、工程を繰り返した。複数の代替モデルを評価し、より優れたモデル（擬陽性および擬陰性の数が最も少ないもの）は類似の共変量を一貫して用いることを見出した。
特定のパラメータの対は、この方法によって、神経毒性（例えば、グレード5の神経毒性）の重症度について強力な予測力を有することが観察された。そのような対の中には、投与された用量中の特定の細胞集団（CAR+CD3+非アポトーシス性またはCAR+CD8+非アポトーシス性など）の数または正規化した数と、治療用組成物中のCAR抗原特異的活性の指標、例えば炎症誘発性サイトカインなどとの組み合わせが含まれた。そのような対の中には、1：1の比でCD19発現細胞との共培養中に0.25×106個のCD3+CAR+細胞を含有する治療用組成物の試料の18時間共培養後の上清中の蓄積によって測定されるTNFα産生を示すパラメータとの組み合わせでの、対象に投与されたアポトーシスマーカー陰性CD8+CAR発現細胞の組み合わせが含まれた（図6Aおよび6Bを参照）。類似の知見は、TNFαの代わりにIFNγおよびIL-2などの他の炎症誘発性サイトカインでも観察された。
これらの変数の組み合わせは、この試験では反比例または正比例のどちらでも（CR対CR無しで測定されたように）奏効を強力に予測することは観察されなかった（例えば、図9、11、13を参照）。加えて、実施例1に記載される試験においてCRまたはCRiを達成した対象の複数は、グレード5の神経毒性/脳浮腫を発症した対象の中で投与された任意の用量における最低の数（または正規化数）を下回るアポトーシスマーカー-CD8+CAR+細胞の数（正規化数）を含む細胞産物の用量を受けていた。同様に、CRを達成した複数の対象は、グレード5の神経毒性/脳浮腫を発症した対象のいずれかに投与された組成物の中で観察された最低のものを下回るCAR抗原特異的サイトカイン（例えば、TNFα、IFNγ、IL-2）産生のレベルを有するとアッセイを介して決定された細胞組成物を投与されていた（例えば、図4および5を参照）。
別の試験からの事後分析からの結果は、用量を決定するおよび神経毒性を予測するために特定された共変量対の有用性と一致した。再発性または難治性成人ALLを有する（様々な奏効の範囲にわたる表現について選択された）対象のサブセット（31名のうち11名）に対して別の臨床試験において投与された同様の抗CD19 CAR発現細胞組成物後の結果を、上述の試験において神経毒性転帰と相関するまたは反比例して相関するように思われるある特定のパラメータの測定値について分析した。31名の対象のうち、77％はCRまたはCRiを経験しており、CR/CRi 対象の中で61％再発および27％幹細胞移植（SCT）の比率であった。42％はグレード3以上のCRSを経験しかつ35％がグレード3または4の神経毒性を示し；31名の対象のうち誰もグレード5の神経毒性または脳浮腫を経験しなかった。
この他の試験における対象および細胞組成物について、投与されたアポトーシスマーカー陰性CD8+CAR発現細胞の数および抗原特異的活性の同じパラメータ（上記で用いたようなCD19発現細胞との共培養を伴うアッセイにおけるTNFα蓄積の同じ測定値）を含む、ある特定のパラメータを、概して上述のように、評価および比較した。結果を図7および図6Bに示す。誰もグレード5の神経毒性または脳浮腫を示さなかった、他の類似の臨床試験から評価された11名の対象の各々に対して投与された用量では、（i）アポトーシスマーカー陰性CAR発現CD8+細胞の数は、上記の試験におけるいずれかのグレード5の神経毒性の対象に投与された用量中のそのような細胞の最低数を下回った、および/または（ii）CAR誘導性活性（例えば、TNFα産生の測定値）を示すパラメータのレベル（B）は上記の試験におけるグレード5の対象の用量において観察された最低レベルを下回った。図6Bに示すように、評価した他の試験における対象の大部分内でのこのアッセイでの一般製品プロファイル範囲は、斜線の楕円によって示されるように、CAR誘導性活性を示すようなレベルを下回った。
したがって、類似のCAR発現細胞組成物による別の試験における対象内では、誰もグレード5の神経毒性を発症せず、神経毒性を予測する対における共変量の一方または両方とも、毒性を経験するいずれかの患者で観察されたレベルを下回った。同様の結果が、TNFαに代えてIFNγまたはIL-2を評価したときにも観察された。この結果は、機能特性（抗原発現細胞との共培養後の炎症誘発性サイトカインの分泌によって評価されるCAR抗原特異的活性の程度）と非アポトーシス性CAR+CD8+細胞の数（重量当たりの数）との組み合わせを使用して、神経毒性の危険性または重症度を最小限にする適切な用量を決定または評価するという解釈と一致する。
試験の結果は、複合アプローチを用いてCAR-T組成物の投与のための適切な単位用量を定義することの利点と一致した。例えば、この結果は、単位用量が2つ以上のパラメータに基づく、および/または投与されるべき単位用量の放出が、そのような2つ以上のパラメータのそれぞれによって潜在的にもたらされ得る任意の変動性を考慮した後にのみに行われる、アプローチの有用性と一致する。例えば、この結果は、用量が、（B）炎症促進性サイトカインのCAR誘導性産生などのCAR誘導性/依存性および/または抗原特異的活性を示す、(A) 特定の表現型（CD3+CAR+、CD8+CAR+、またはCD8+CAR+アポトーシスマーカー陰性など) および他の細胞の数もしくは量または複数の表現型の細胞の複合数に関連している、単位用量を投与するおよび/または適切な用量を特定することの利点と一致する。この結果は、（1）活性の程度(B)が（毒性との相関に基づく）ある特定の閾値数を下回るという条件で、細胞の標的数（A）が投与される、（2）異なるの標的用量（A）が、Bが所与の1つまたは複数の閾値を上回るまたは下回るかどうかに応じて投与される（および任意で、Bが上限安全閾値を上回る場合には、細胞は投与されない）、および/または(3)用量が、参照単位の標的数、AおよびBの関数（例えば、A×Bまたは変換値の関数またはAおよびBの倍数）に基づいて決定される参照単位の数として定義される、複合アプローチの有用性と一致した。
さらに、いくつかの場合には、操作されたT細胞組成物を生成するためのプロセスにおいて -他の類似の細胞操作プロセスにおいて- 用いられる貯蔵もしくは取扱い条件または原材料もしくは試薬のロットの変化が、例えば別の共変量との組み合わせで、例えば上述の試験において、最終的な治療用組成物において、神経毒性および/または脳浮腫の重症度と関係を有することが本明細書において確認されたある特定のパラメータと相関するように見えることが確認された。例えば、そのような貯蔵もしくは取扱い条件またはそのような材料または試薬のロットの相違は、CAR抗原を発現する細胞との共培養に応答しての炎症促進性サイトカイン（例えば、TNFα）産生の測定値など、方法によって生成される治療用組成物における抗原特異的活性のある特定の測定値の変化と相関することが観察された。
例示的パラメータの測定値（CAR抗原特異的TNFα産生およびCAR+細胞の中のCD27+/CD28+表現型の頻度の測定値）で観察されたレベルを、2種類の異なるロットの原材料を用いるプロセスによって作製された、2つの群の治療用細胞組成物について比較した。
結果を図23Aおよび23Bに示す。示すように、これらのパラメータのレベルは試料間で異なっていた。原材料の一方のロット（ロット2）を用いるプロセスを用いて作製された細胞組成物では、同じ試薬の別のロット（ロット1）を用いる同等のプロセスを用いて作製されたものと比較して、各パラメータのより高い平均レベルが観察された（TNFα：p＝0.066）；（CD27+/CD28+頻度：p＝0.018）。図23Bは、各個別の細胞組成物が投与された対象が発症した神経毒性/脳浮腫のグレードをさらに示す。15名の対象のうち、より高いグレードの神経毒性/脳浮腫が、ロット2の試薬を用いて生成された細胞組成物を投与された対象内で観察された。
別の例では、試薬の貯蔵および/または取扱いもまた、別の同様の細胞操作プロセスにおいて2種類の異なる貯蔵および/または取扱い条件で用いられる、同じ細胞培養培地を用いるプロセスによって作製された、2つの群の治療用細胞組成物間でパラメータに影響を与えることも観察された。各条件下で貯蔵された同じ培地から作製された2つの群の治療用細胞組成物を、CAR抗原を発現する細胞との共培養に応答してのTNFα産生について評価した。図23Cに示すように、TNFα産生のレベルは試料間で異なっていた。第1の貯蔵条件下で貯蔵された培地を用いて作製された細胞組成物では、第2の貯蔵条件下で貯蔵された同じ培地を用いて作製されたものと比較して、より低いTNFα産生の傾向が観察された。
この観察は、様々な対象に由来する細胞から生成された組成物、および/または例えば試薬または他の原材料の異なるロットを用いる、原材料または試薬の1つまたは複数の異なる貯蔵または取扱い条件の存在下で生成された組成物という観点から、組成物中のある特定の細胞/抗原特異的活性に寄与する可能性がある因子における変動性の程度を考慮すること（例えば、投与戦略内で産物および/または因子の事前放出についてのアッセイすること）が、例えば、安全かつ有効な細胞組成物用量の特定において、有利であり得るという解釈と一致した。この結果は、本明細書において提供される態様のある特定の利点を強調する。いくつかの局面では、例えば異なる投与量または細胞産物において、そのようなパラメータにおける変動性を避けるために、そのような変化を組み込むプロセスを用いて作った細胞組成物の1つまたは複数のパラメータ、例えば神経毒性の危険性に関連することが本明細書において観察されたパラメータなどを試験する放出アッセイなどを用いて、例えば新たなロットまたは異なる条件下で貯蔵されたもしくは取り扱われた試薬を導入する際に、そのようなパラメータの変動性を低下させるおよび/またはそのような異なる条件/ロット間での変動性の許容可能な範囲を確認することは有利である。
いくつかの態様では、提供される方法、製造物品、組成物、用量、および投与戦略は、試薬の変更および/または患者間の変動性に由来するものを含む、変動性の潜在的原因について考慮し、該当する場合には、調整または修正するという点で利点を有する。例えば、いくつかの態様では、パラメータの閾値レベル、例えば治療用組成物のそのようなパラメータに関する特定の活性と比較して、分散の許容可能な範囲を下回るまたはその範囲内であることが放出アッセイによって検証されている（例えば、そのようなアッセイに関する対照試薬または標準単位と比較して、T細胞操作プロセスによって生成された最終T細胞組成物において特定の程度の抗原特異的活性を誘導するのに必要とされる試薬の量または相対的量の測定値など）T細胞刺激/増大試薬（またはそのロット）の使用を伴うプロセスによって操作されたT細胞を生成することは、利点を有し得る。いくつかの態様では、提供される態様は、そのような特定の活性パラメータ（例えば、抗原特異的炎症誘発性サイトカインの測定値）における任意の変動性が許容される範囲の範囲内であるおよび/または上側規格限界を下回ることを確認する放出アッセイを伴うプロセスによって細胞が生成されている、細胞用量を伴う。いくつかの態様では、提供されるプロセスには、そのような放出アッセイが含まれる。いくつかの態様では、細胞組成物の産生は、そのようなパラメータの分散が許容可能な範囲の範囲内である試薬および/またはプロセスを用いて行われる。いくつかの態様では、提供される方法、組成物、および製造物品は、例えば、特定の活性パラメータと共に毒性の危険性に相関する第2パラメータの変動性を最小化することによって、そのような特定の活性パラメータにおける潜在的な分散に関連する危険性を軽減する投与および/または細胞産生戦略を用いるという利点を有する。例えば、プロセスによって生成される生物学的に活性なまたは健全な細胞（例えば、非アポトーシス性細胞）の頻度の分散を最小化することによって、安全性に対する特定の活性関連パラメータの変化の影響を最小化することができる。いくつかの態様では、生物学的に活性なまたは非アポトーシス性の細胞、例えば生物学的に活性なまたは非アポトーシス性の操作された細胞または操作されたCD8+細胞などの数または頻度に関連する特徴を含む用量または投与戦略は、抗原特異的活性パラメータの分散に関連する危険性を低下させる。いくつかの局面では、これは、そのような細胞の上限を含む用量および/または参照単位に基づいて、例えば生物学的に活性な細胞の数を考慮する式に基づいて用量を規定する用量によって達成される。
実施例1における試験において対象に投与された組成物を、再発性または難治性NHLを有する対象に由来する血液試料から、操作されたT細胞を生成するための代替方法プロセスによって生成された組成物と比較した。プロセスは、同じ対象に由来する操作されたT細胞のCD4+およびCD8+集団を、別個に作製し、次いで、ほぼ標的比率で混合することを伴った。各集団を、例えば、細胞の活性化、形質導入（レンチウイルスベクターの使用を伴う）、およびまたは増大時に、サイトカインを含む様々な因子および試薬の使用を伴う類似のプロセスを介して作製した。プロセスは、上述の試験におけるプロセスで用いた密度と同じ程度に高い細胞密度で細胞を製品容器に充填すること、凍結保存すること、および解凍することをさらに伴い、試料を通じて一貫していた（実施例4を参照）。概して、プロセスは、最終組成物中の操作された細胞の表現型、機能、および代謝プロファイルに対する制御の程度の増強を可能にした。CARは、CD28ドメインではなく41BB由来共刺激ドメインを含んだ。
プロセス（例えば、T細胞サブセット、サイトカイン、および試薬の制御された比率を用いて、表現型、機能、および代謝状態の制御を可能にするプロセス）用いて生成されかつ凍結保存時に高い細胞密度に制御された試料間では、実施例1で分析した試料間と比較して、重度の神経毒性の危険性を強力に予測する（単独でおよび/または組み合わせで）することが本明細書において観察された治療用細胞組成物の特性の対象間変動性が低いことが観察された。
例えば、代替プロセス（B）は、実施例1に記載したように投与される試料と比較して、該プロセスを用いて作製した試料内で種々のアポトーシスマーカーが陰性であることによって測定される、高い頻度の生物学的に活性なまたは健全な細胞をCD8+CAR+細胞内にもたらした（例えば、図21Aを参照）。加えて、様々な対象から該プロセスによって生成された試料間でこのパラメータの分散の程度はより低かった。本明細書において観察されるように、そのような細胞の数は、グレード5の神経毒性および脳浮腫と相関することが観察されたのに対して、CD3+CAR+生存細胞（アポトーシス状態 対 生物学的に活性な細胞を考慮しない）は、正確さに欠ける予測因子であり、安全境界を明確に定義しなかった。いくつかの態様では、操作細胞間でのそのような生物学的に活性な細胞の頻度の変動性を低下させるプロセスの使用は、全体として操作されたT細胞数に基づき投与するときに、ある特定の患者（例えば、アポトーシスの傾向が少ない細胞を有するまたはより健常である患者）に、生物学的に活性な細胞の意図した用量より高い用量を不注意に与えるという危険性を低下させる。表現型および機能に対する制御の程度が優れているこのプロセスなど、プロセスは、該プロセスによって生成された細胞が抗原特異的に炎症誘発性サイトカインを作る能力の変動性の程度を低下させることがさらに観察されている（例えば、図21Bを参照）。上述の試験での結果は、特に、生物学的に活性な操作された細胞の数と組み合わせた場合に、そのような細胞特異的活性パラメータを考慮する投与戦略（例えば、そのような活性の特異的標的範囲（または閾値を超えない）が所与の用量で表されるように）を用いて、所望の臨床または治療転帰を達成することができる一方で、依然として安全域または望ましくない毒性、例えば神経毒性を低下させる範囲内にある用量を提供できるという解釈と一致する。
いくつかの態様では、一貫して高頻度の生物学的に活性な操作された細胞を常にもたらすプロセスの使用は、高頻度の操作された細胞がアポトーシスマーカーについて陽性であるかまたはそうでなければ健常ではない、他の投与戦略と比較して、（操作された細胞、例えばCAR+細胞の数の予測から）はるかに低い細胞用量の使用を可能にする。例えば、本明細書に記載の観察に基づき、かつ利用可能な投与戦略は概してアポトーシス細胞の頻度を考慮していないという観察を考慮すると、いくつかの態様では、操作された（例えば、CAR+）T細胞（例えば、操作されたCD8+および/またはCD4+細胞）の数は、500万、1000万、1100万、1200万、1300万、1400万、1500万、1600万、1700万、1800万、1900万、2000万、3000万、4000万、または5000万個の細胞と少ない数である。
実施例3：標的用量単位の決定および式
例示的な用量、用量範囲、ならびに投与および用量決定のための方法および式を、神経毒性のグレードを予測すると思われる多変量分析において特定されたパラメータの組み合わせに基づき、特定および開発した。
全38名の対象または形態学的対象についてのみデータを評価した。用量データを37/38名の対象について入手し；奏効との相関（CR対CR無し）を形態学的疾患負荷患者についてのみ考慮し、グレード5の神経毒性を発症している対象については考慮せず、CRについて評価しなかった。個々の対象について、投与した用量における参照単位（RU）の数を決定し、ここで、RU＝A×Bであり、Aはアポトーシスマーカー陰性、CD8+、CAR発現細胞の数と等しく、Bは組成物中の細胞の中でのCAR抗原特異的活性を示すパラメータであった。いくつかの分析（図8〜13を参照）では、Bは、複数のサイトカインについての、個々のサイトカインの抗原特異的産生のレベルを示す測定値（例えば、濃度/時/インプット細胞数）、またはそのような測定値の幾何平均もしくは算術平均であった。
他の分析（図14〜20を参照）では、Bは、グレード0〜2の神経毒性を有する対象間でのそのような測定値の中心傾向に対して正規化された、そのような測定値または複合測定値に基づく、1つまたは複数のサイトカインレベルを示す正規化値であった。
結果を、神経毒性のグレード（対象を、グレード4または5の神経毒性を発症したか否かまたは長期にわたるグレード3（3p）、4または5の神経毒性を発症したかどうかによって分類した）および/または奏効率（CR/CR無し）に従って分類した対象のサブセットについて対数目盛上にプロットした。
結果を図8〜20に示す。具体的には、図8〜13は38名の対象間の結果を示す。
図14、15、および16は、32名の形態学的疾患対象間のRUの結果を示し、ここで、Aはアポトーシスマーカー陰性、CD8+、CAR発現細胞の数に等しく、Bは、グレード0〜2の神経毒性を有する対象間の個々のサイトカインの測定値の中心傾向に対して正規化された個々のサイトカイン（それぞれ、TNFα、IFNγ、およびIL-2）の抗原特異的産生の補正された測定値であった（図14A、15A、および16Aは神経毒性グレードにしたがって分類した対象による結果を示し、図14B、15B、および16Bは奏効（CR対CR無し）にしたがって分類した対象による結果を示す）。
種々のRU数における分離を、様々なグレードの毒性を示す対象の分類間で観察した。結果を用いて、参照単位（式RU＝A×Bに基づく）の例示的な上限数または閾値数、および例示的な標的RUおよび標的用量を特定した。いくつかの例では、閾値または標的RUは、特定のグレードの神経毒性を発症している対象間で決定されたRUを下回るように特定され、いくつかの局面では、安全域に対応するRUの数より少なく、例えばRUの1.5分の1または2分の1の減少をもたらした。奏効にしたがって患者を分類するプロットは、標的RU値および標的用量は許容可能な奏効域の範囲内であるという知見と一致した。
実施例4：凍結保存した組成物中の総細胞密度と細胞機能および他の特性を示す組成物のパラメータとの相関
治療用T細胞組成物の凍結保存および保存貯蔵時の、細胞密度、例えば、生存細胞濃度（VCC）の影響を検討した。ある特定の組成物における細胞密度の増加は、細胞生存を低下させることが知られている。しかしながら、本明細書では、治療上の使用のための一部の凍結保存した細胞組成物、特に、相対的に低い細胞密度（例えば、総凍結体積に対して10％細胞体積を下回る）で凍結保存された細胞組成物では、組成物、例えば治療用産物の凍結保存、貯蔵および/または解凍時の細胞密度の増加は、例えば、細胞健全性（cell health）および/または生物学的活性および/または機能に関して、利点を有し得ることが観察された。
実施例1に記載される臨床試験において対象に投与される凍結保存した治療用細胞組成物を、およそ1％（総凍結体積のパーセンテージとしての細胞体積）を下回るさまざまな密度で、DMSOと一緒に寒冷凍結した。上述の種々のパラメータを評価する試験において、細胞組成物由来の試料は、同様の期間を含む、投与される細胞組成物を維持、輸送および解凍したものを模倣する条件下で寒冷凍結、維持および解凍した。
凍結保存、貯蔵および解凍時の細胞密度の影響を評価するために、様々な細胞密度（1×106細胞/mL、8×106細胞/mL、および15×106細胞/mL）で様々な濃度のDMSO（体積でおよそ3％から9％の間のDMSO）と共に寒冷凍結されている、様々な対象由来の細胞組成物を評価した。次いで、凍結保存した細胞組成物を解凍し、組成物中の細胞の効力（抗原特異的細胞傷害性の測定値によって評価される）を評価した。
結果は、細胞効力の増加は概して、凍結保存時の高い細胞濃度および/またはDMSO濃度に関連することを示した。この結果は、凍結保存条件は治療用T細胞組成物の生物学的活性に影響を与えることができるという解釈と一致した。
さらなる試験において、抗CD19 CARを発現する細胞を含有する細胞組成物を、（例えば、1×106細胞/mL、2×106細胞/mL、5×106細胞/mL、10×106細胞/mL、20×106細胞/mL、50 ×106細胞/mL、および100×106細胞/mLの）様々な濃度で7.5％ DMSOと寒冷凍結し、80度でおよそ15時間貯蔵し、解凍し、次いで、フローサイトメトリーによって生存性（生存細胞濃度（VCC）および直径、ならびにアポトーシスのマーカー（例えば、アネキシンVおよび活性型カスパーゼ3）について分析した。
寒冷凍結および解凍の期間、この試験において観察された生存細胞濃度の低下（％差VCC）は、10〜45％の範囲であった。これらの特性について濃度間で全体的な傾向は観察されなかった。
アポトーシスマーカーを評価した結果は、CD4+CAR発現細胞およびCD8+CAR発現細胞の両方で全体的な傾向を明らかにし、細胞がより低い細胞濃度で凍結および貯蔵されている組成物では、解凍後に高いレベルの細胞アポトーシスマーカー+細胞が観察された。具体的には、結果は、7.5％ DMSOなど試験したDMSO濃度の範囲で、いくつかの態様において、凍結保存、貯蔵および解凍時に、1 mL当たり1000万もしくは約1000万から6000万もしくは約6000万または1500万もしくは約1500万から6000万もしくは7000万もしくは約6000万もしくは7000万個の細胞の全体的細胞密度が、凍結保存および解凍後の組成物中の細胞健全性および/または生物学的に活性な細胞の頻度の増加に特に有利であることを示した。
この結果は、治療用T細胞産物の凍結保存においてCD8+細胞および/またはCD4+細胞の高い細胞密度および細胞濃度の有用性と一致する。
実施例5：様々な対象における神経病理の評価および比較
神経病理の剖検評価を、キメラ抗原受容体（CAR）を発現するように操作されたT細胞を含有する治療用組成物による処置後に、グレード4または5の神経毒性を含む重度の神経毒性および/または脳浮腫を発症した、急性リンパ芽球性白血病（ALL）を有する4名の対象において実施した。具体的には、剖検試験を、グレード5の脳浮腫を経験している2名の対象（n＝2）および脳浮腫なしに重度の神経毒性を経験している2名の対象（n＝2）において行った。結果は概ね、B-ALLによる脳障害が、脳浮腫における因子となることは観察されなかったという結論を裏付ける。脳浮腫を有する2名の対象では、CNSにおいて、自然免疫細胞、B-ALLがん細胞、およびCD19+がん細胞のいずれも観察されなかった。さらに、脳浮腫を有する患者では、浮腫は、血管原性であり、細胞傷害性ではないことが観察される傾向があった。脳浮腫を有する患者では、血管周囲のフィブリンおよび赤血球溢血が、完全な血液脳関門の破壊（BBB）を示唆した。BBBはこれらの対象において観察された。内皮損傷も観察された。しかしながら、いかなる顕著なT細胞浸潤も存在しないように見え、脳浮腫は、脳またはCNS内のCAR T細胞の浸潤および/または活性化の結果として発症したものではなかったという結論と一致した。
さらに、星細胞およびミクログリアの損傷/活性化の血管周囲およびより広範なパターンが、BBBを示す脳浮腫を発症している対象の脳において観察された。観察は、ミクログリア活性化は、CAR-T細胞療法を投与した対象における脳浮腫の発症の寄与因子であったという結論と一致した。加えて、グレード4の神経毒性を発症した対象において観察された星細胞増殖とは対照的に、脳浮腫を発症した対象では星細胞に対する不可逆的損傷（脳症関連病変（clasmatodendrosis））が観察された。脳浮腫を示した対象における末梢組織、例えば肺、肝臓、または腎臓などでは、有意な浮腫は観察されなかった。BBBの完全な破壊およびその結果生じる血管原性浮腫は、グレード4の神経毒性を発症した対象では観察されなかった。
脳浮腫を発症しなかった対象（n＝2）の剖検では、局所的損傷に対する単純応答とは一致しない、広範なCD8+T細胞浸潤が観察された。T細胞はこれらの対象ではCNS中に存在した。脳浮腫のないこれらの対象では、血流脳関門病変の証拠は観察されなかった。
実施例6：再発性および難治性非ホジキンリンパ腫（NHL）を有する対象に対する抗CD19 CAR発現細胞の投与
CD19に特異的なキメラ抗原受容体（CAR）を発現する自己由来T細胞を含有する治療用CAR+T細胞組成物を、B細胞悪性腫瘍を有する対象に投与した。投与された治療用T細胞組成物は、処置される個々の対象由来の白血球アフェレーシス試料からのCD4+およびCD8+細胞の免疫親和性に基づく濃縮を含むプロセスによって作製された。単離されたCD4+およびCD8+T細胞を、抗CD19 CARをコードするレンチウイルスベクターによって別々に活性化し、独立して形質導入した。操作されたCD4+およびCD8+T細胞を、細胞の閾値数に対するサイトカインの存在下で独立して増大した。増大後、細胞を低容量で製剤化および凍結保存した。CARは、マウス抗体由来の抗CD19 scFv、免疫グロブリン由来のスペーサー、CD28由来の膜貫通ドメイン、4-1BB由来の共刺激領域、およびCD3ζ細胞内シグナル伝達ドメインを含んだ。凍結保存した細胞組成物を、静脈内投与前に解凍した。およそ1：1の標的比で投与される製剤化CD4+CAR+細胞集団および製剤化CD8+CAR+集団を投与することによって、治療用T細胞用量を定義された細胞組成物として投与した。
A. 対象および処置
実施例6.A.1
この実施例6.A.1に記載される試験は、B細胞悪性腫瘍を有する患者にそのような療法を投与する進行中の臨床試験における特定の時点（6.A.1）を通じて対象の処置および評価を記載する。具体的には、新たに発生したまたは低悪性度リンパ腫（NOS）から形質転換したびまん性大細胞型B細胞リンパ腫（DLBCL）、原発性縦隔大細胞型B細胞リンパ腫（PMBCL）、および2種類の療法の失敗後の濾胞性リンパ腫グレード3b（FLG3B）を含む、再発性または難治性（R/R）の侵襲性非ホジキンリンパ腫（NHL）を有する成人ヒト対象のコホート（全体コホート）（この時点では55名）。処置された対象の中には、0〜2の米国東海岸癌臨床試験グループ（ECOG）スコア（追跡期間の中央値3.2ヶ月）を有する対象が含まれた。全体コホートには、マントル細胞リンパ腫（MCL）を有する対象は含まれなかった。以前の同種異系幹細胞移植（SCT）、二次性中枢神経系（CNS）障害またはECOGスコア2に基づいて除外された対象はなく、必要とされるアフェレーシスのための最小絶対リンパ球数（ALC）はなかった。
全体コホート内のコアサブセットの対象（パフォーマンスステータス不良（ECOG2）、辺縁帯リンパ腫（MZL）から形質転換したDLBCL、および/または慢性リンパ性白血病（CLL、リヒター症候群）を有する対象を除く全体コホート内の対象（コアコホート））について、転帰を別々に評価した。実施例1.A.1の時点で、このコアコホート内の44名の対象についての転帰を評価した。
実施例6.A.1の時点での全体コホートおよびコアコホートの対象の人口統計学およびベースライン特徴を表E3に示す。
（表Ｅ３）人口統計学およびベースライン特徴
Figure 2020508336
＊最後の化学療法を含むレジメンに対してSDもしくはPDまたは自己由来SCT後＜12ヶ月に再発
表E4に示すように、対象に、CAR発現T細胞の単回投与または2回投与（各単回投与はそれぞれCD4+CAR発現T細胞およびCD8+CAR発現T細胞の別々の注入による）を以下のように投与した：5×107個の総CAR発現T細胞を含有する用量レベル1（DL-1）の単回投与（実施例6.A.1で評価した対象についてn＝30）、各投与をおよそ14日の間隔を置いて投与したDL1の2回投与（投与の誤りのため、2回投与スケジュールによって2回のDL2投与を誤って受けた1名の対象を含む、実施例6.A.1で評価した対象についてn＝6）、または1×108個（DL-2）の総CAR発現T細胞を含有する用量レベル2（DL-2）の単回投与（実施例6.A.1で評価した対象についてn＝18）。CAR+T細胞注入の3日前から開始して、対象にフルダラビン（flu、30 mg/m2）およびシクロホスファミド（Cy、300 mg/m2）を用いたリンパ球枯渇化学療法を行った。
（表Ｅ４）抗CD19 CART細胞を含有する細胞組成物のT細胞サブセットの用量レベルおよび数
Figure 2020508336
実施例6.A.2
実施例6.A.2では、上記のこの実施例において記載した臨床試験におけるその後の時点で、結果を第2の時点にて分析した。実施例6.A.2におけるこの分析時点で、74名の患者が処置されていた（男性51名、女性23名）。対象には、全体DLBCLコホートにおける69名の対象（67名のDLBCL NOS（新たに発生45名、FLからの形質転換14名、CLLまたはMZLからの形質転換8名）、1名のFLグレード3B、および1名のPMBCLを含む）、およびMCLコホートにおける5名の対象が含まれた。全体（DLBCL）コホートにおける対象間で、年齢の中央値は61歳（範囲26、82）であり、事前治療の中央値は3（範囲1、12）であり、46名（67％）が化学療法抵抗性であり、32名（46％）が何らかの事前移植を受けており、少なくとも16名（23％）の患者がダブルヒット/トリプルヒットリンパ腫を有していた。コアコホート中の49名の対象を6.A.2におけるこの時点で評価した。
B. 安全性
CAR-T細胞療法の投与後の治療中に発生した有害事象（TEAE）の有無を評価した。対象を、米国国立癌研究所-共通毒性基準（CTCAE）スケール、バージョン4.03（NCI-CTCAE v4.03）に従って、1〜5のスケールに等級分けした神経毒性（錯乱、失語症、脳症、ミオクローヌス発作、痙攣、嗜眠、および/または精神状態の変化の症状を含む神経学的合併症）についても評価およびモニタリングした。共通毒性基準（CTCAE）スケール、バージョン4.03（NCI-CTCAE v4.03）。2009年5月28日に公表された有害事象に関する共通用語集（CTCAE）バージョン4、アメリカ合衆国保健福祉省（v4.03:2010年6月14日）およびGuido Cavaletti＆Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6,657-666（December 2010）を参照。サイトカイン放出症候群（CRS）も決定し、モニタリングし、重症度に基づいて等級分けした。Lee et al,Blood.2014；124（2）:188-95を参照。
実施例6.B.1
実施例6.B.1は、実施例6.B.1における分析時点に基づく結果を記載する。
実施例6.B.1の分析における全体コホート対象の84％において、重度（グレード3以上）のサイトカイン放出症候群（CRS）および重度の神経毒性は観察されなかった。加えて、全体コホート対象の60％はいかなるグレードのCRSも神経毒性も発症しなかったことが観察された。用量レベル間で、CRS、神経毒性（NT）、sCRS、または重度の神経毒性（sNT）の発生率に差は観察されなかった。表E5は、CAR-T細胞の少なくとも1回用量を受けた28日後の患者におけるサイトカイン放出症候群（CRS）および神経毒性有害事象の発生率を要約している。表E5に示すように、DL2の単回投与またはDL1の2回投与を受けたいずれの対象においてもsCRS（グレード3〜4）は観察されなかった。重度の神経毒性または重度のCRS（グレード3〜4）が、全体コホートの対象の16％（9/55）およびコアサブセット中の対象の18％（8/44）で観察された。対象の11％（n＝6）がトシリズマブを投与され、対象の24％（n＝13）がデキサメタゾンを投与された。全体コホート内のECOG2対象間で、観察されたCRSおよび神経毒性の割合はそれぞれ71％および29％であった。
（表Ｅ５）実施例6.B.1についてのCRSおよび神経毒性有害事象の有無の評価
Figure 2020508336
†投与の誤りのためにDL2の2用量スケジュールで処置された1名の患者を含む
実施例6.B.2
実施例6.B.2は、実施例6.B.2の時点での評価を記載する。最長でこの時点まで、リンパ球枯渇（LD）からCAR発現T細胞の投与後90日までの有害事象（AE）データを収集した。2回目の時点で、DLBCLコホート（全体コホート）中の69名の対象を安全性について評価し、38名がDL1の単回投与を受け、25名がDL2の単回投与を受け、および6名がDL1の2回投与スケジュールを受けていた。CRSまたはNT以外の最も一般的なTEAEには、好中球減少（41％、28/69）、疲労（30％、21/69）、血小板減少（30％、21/69）、および貧血（26％、18/69）が含まれた。グレード5のTEAEであるびまん性肺胞傷害が1例観察された。
急性注入毒性は観察されず、全体コホート中の対象の大多数に当たる64％（44/69）がCRSまたはNTを有さないことが観察され、CAR発現T細胞の外来送達が可能であり得ることが示された。CRSおよびNTを含むCAR T細胞関連の毒性の比率は用量レベル間で差がなかった。安全性プロファイルは、コホートおよび用量レベル間で類似していることが観察された。いずれかのグレードのCRSまたはNTを経験した全体コホート中の25名の対象（36％）の中で、21名（30％）がCRSを有し、14名（20％）がNTを有していた。グレード3のCRSを有していた対象はおらず、1名だけ（1％、1/69）がグレード4のCRSを有しており、ICU治療が必要であった；他の29％（20/69）はグレード1〜2のCRSを有していた。NTを有する20％の対象のうち、6％（4/69）はグレード1〜2を有し、14％（10/69）はグレード3〜4を有し、2名（3％）が発作を発症した。グレード5のCRSまたはグレード5のNTは観察されなかった。脳浮腫の発生は観察されなかった。分析の時点で進行中であったグレード1振戦の1例を除いて、すべてのCRSおよびNT事象は消失した。最初のCRSおよびNTの発症までの時間の中央値は、それぞれ5日（範囲2、12）および10日（範囲5、23）であった。注入後最初の72時間以内に、いずれの対象もNTを有することは観察されず、10％（7/69）だけがCRS（すべてグレード1）を有することが観察された；＞70％の対象においてCRSがNTに先行した。全体として、13名の対象（19％）が抗サイトカイン療法（トシリズマブ単独1名（1％）、デキサメタゾン単独6名（9％）、または両方6名（9％））によるCRSまたはNTに対する介入を必要とし、1名だけが何らかの昇圧剤によるサポートを必要とした。トシリズマブおよびデキサメタゾンの投与の中央値はそれぞれ1と6であった。CRSおよびNTの持続期間の中央値は、それぞれ5日および11日であった。コアコホート（n＝49）の分析も、CRSおよびNTの同様の発生率を示した。
この評価では、CRSおよび/またはNTの低い発生率と遅い発症が用量で観察され、発熱の最初の徴候または一定期間を超えて持続する発熱時の入院などによる外来注入の実現可能性を支持した。6.B.2での評価時に、4名の対象が外来で治療を受けていた。
C. 処置後の奏効転帰
CAR+T細胞の投与後1、3、6、7、12、18、および24ヶ月目に腫瘍量を評価することを含めて、対象を奏効についてモニタリングした。
実施例6.C.1
実施例6.C.1は、実施例6.A.1および6.B.1の分析時点に基づく結果を記載する。
奏効率を表E6に列記する。多数の前治療が行われた、または予後不良である、および/または再発性もしくは難治性疾患を有する対象を含む対象のコホートにおいて、高い持続的な奏効率が観察された。コア（n＝44）コホートにおける全用量にわたる対象では、観察された全奏効率（ORR）は86％であり、観察された完全奏効（CR）率は59％であった。コアコホートについて3ヶ月時点では、全奏効率（ORR）は66％であり； 3ヶ月時点のCR率はコアコホートの中で50％であった。コアコホートでは、3ヶ月ORRは用量レベル1で58％（11/19）、用量レベル2で78％であった；3ヶ月CR率は用量レベル1で42％（8/19）、用量レベル2で56％（5/9）であり、示唆された治療転帰への用量奏効作用と一致していた。加えて、この結果は、用量と奏効の持続性との間の関係と一致した。
（表Ｅ６）奏効
Figure 2020508336
DL1S：DL1の単回投与スケジュール；DL2S:DL2の単回投与スケジュール；DL1D:DL1の2回投与スケジュール
aPD、死亡、または28日目の再病期分類スキャンの事象があった患者を含んだ。データスナップショットより28日未満前に処置された患者は含めなかった。
b分母は、3ヶ月での効果の評価またはPDもしくは死亡の事前評価に関するデータスナップショットの日より3ヶ月以上前にCAR T細胞療法を受けた患者の数である。
c投与の誤りのためにDL2の2回投与スケジュールで処置された1名の患者を含む
評価の特定の時点より6ヶ月以上前に処置された対象の中で、3ヶ月目に奏効していた10名の患者のうち、9名（90％）は6ヶ月目にも奏効のままであった。評価時点で、奏効であったコアサブセットにおける対象の97％が生存し、追跡期間中であり、追跡期間の中央値は3.2ヶ月であった。長期生存が奏効者において観察され、CRを有する対象では奏効の持続性が増加した。3ヶ月目に奏効であった患者は全員、評価時点で生存していたが、パフォーマンスステータス不良（ECOG 2）を伴う5/6名の対象は亡くなっていた。
実施例6.C.2
実施例6.C.2は、実施例6.A.2および6.B.2の分析時点に基づく結果を記載する。
実施例6.C.2の時点まで、全体DLBCLコホート中の68名の対象を奏効について評価した。全奏効率または客観的奏効率（OR）、3ヶ月客観的奏効率、および6ヶ月の客観的奏効率はそれぞれ、75％（51/68）、49％（27/55）、および40％（14/35）であった。完全奏効（CR）率、3ヶ月CR率、および6ヶ月CR率はそれぞれ、56％（38/68）、40％（22/55）、および37％（13/35）であった。DL1と比較してDL2で処置された対象では、3ヶ月目に奏効率が改善する傾向が観察された：ORRについては63％（12/19；95％CI 38、84）対40％（12/30；95％CI 23、59）、p＝0.148、およびCRについては58％（11/19；95％CI 34、80）対27％（8/30；95％CI:12、46）、p＝0.0385。16名のダブル/トリプルヒットリンパ腫対象のうち、ORRは81％であり、3ヶ月CR率は60％であった。
コアコホート（実施例1.C.2の時点でn＝49）では、OR、3ヶ月、および6ヶ月のOR率はそれぞれ、84％（41/49）、65％（26/40）、および57％（13/23）であった。CR率、3ヶ月CR率、および6ヶ月CR率はそれぞれ、61％（30/49）、53％（21/40）、および52％（12/23）であった。高用量にて3ヶ月目に持続的なORRおよびCRの改善の同様の傾向が観察された。具体的には、DL2を投与されたコアコホートにおける患者では、3ヶ月ORRは80％（12/15；95％CI 52、96）であり、3ヶ月CRは73％（11/15；95％CI 45、92）であり、これと比較してDL1を投与されたコアコホートの対象では3ヶ月ORRおよびCR率は52％（11/21；95％CI 30、74）および33％（7/21；95％CI 15、57）であり、それぞれp＝0.159およびp＝0.0409であった。DL2を受け、3ヶ月間の追跡調査を受けたコアコホート中の対象（n＝15）内では、3ヶ月のORRは80％であり、3ヶ月のCRは73％であった。
1.C.2のこの時点での全体コホートおよびコアコホートにおけるDORの中央値はそれぞれ、5.0および9.2ヶ月であった；全体コホートにおけるCRの持続期間の中央値は9.2ヶ月であった。CRの持続期間の中央値は、コアコホートでは到達していなかった。全生存期間（OS）中央値は、全体コホートでは13.7ヶ月であり、コアコホートでは到達していなかった。6ヶ月OSは、全体コホートでは75％であり、追跡期間の中央値は5.8ヶ月であった。6ヶ月OSはコアコホートでは88％であり、追跡期間の中央値は5.6ヶ月であった。
D. 血液中のCAR＋T細胞の評価
実施例6.A.1、6.B.1および6.C.1に記載した時点からのデータに基づき、薬物動態学的分析を行い、治療後の様々な時点での末梢血中のCAR＋T細胞の数を評価した。DLBCLコホートにおいて実施例6.A.1の時点で評価した55名の対象および以下の実施例7に記載のマントル細胞リンパ腫（MCL）コホート中の4名の対象（同じ時点で評価した）からの結果を分析した。薬物動態（PK）測定は、CAR構築物中で発現されたマーカーを検出するための有効性が確認されたフローサイトメトリーおよびCAR構築物の組み込みを検出するための定量的PCRに基づくアッセイを用いて行われた。B細胞形成不全を、抗CD19抗体を用いるフローサイトメトリーによって評価した。対数スケール上にプロットした細胞数/μL血液（中央値±四分位数）によって測定されるCD4＋およびCD8＋CAR発現細胞を、評価期間を通じて両方の投与用量レベルで検出した。DL1と比較してDL2を受けた対象は、末梢血中のCD3＋/CAR＋、CD4＋/CAR＋、およびCD8＋/CAR＋T細胞サブセットについてより高い中央値Cmaxおよび中央値AUC0-28を有していた（AUC0-28:DL2対DL1は、CD3＋、CD4＋、およびCD8＋についてそれぞれ1836対461、350対182、および1628対114であった；CD8＋についてはp＜0.05；Cmax:DL2対DL1はそれぞれ、99.8対27.9、15.1対5.2、および73.1対5.5細胞/μLであった）。最大のCD3＋CAR＋T細胞増大までの時間の中央値は15日（範囲8〜29）であり、用量レベル間で差はなかった。CD4＋およびCD8＋CAR発現T細胞は、比較的類似のレベルで骨髄にホーミングした。
曲線下面積（AUC）（血液中の経時的なCD8＋CAR＋T細胞数）の中央値の増加が、より低い用量レベルと比較して、より高い用量レベルを投与された対象の間で、毒性の増加が観察されることなく観察された。非奏効者（PD）よりも奏効者（CR/PR）においてより高いピークCD8＋/CAR＋T細胞曝露が観察された；3および6ヶ月までを含む評価期間にわたる細胞の持続性が、疾患が進行していた対象においてさえも観察された。CD8＋CAR＋T細胞の中央値Cmaxおよび中央値AUC0-28は、奏効対象においてより高く、3ヶ月目で持続的な奏効があった（3ヶ月目のCR/PR対3ヶ月目のPDにおいて、CD8＋Cmax中央値＝20.8対5.5；CD8＋AUC0-28中央値＝235対55）。CAR T細胞の持続性について評価した対象のうち、3ヶ月目に、29名の対象の90％および93％がそれぞれ検出可能なCD8＋およびCD4＋CAR＋T細胞を有していた；6ヶ月目には、19名の対象のうち63％および58％がそれぞれ検出可能なCD8＋およびCD4＋CAR＋T細胞を有していた。3ヶ月目および6ヶ月目に、持続的奏効または再発を有する対象間で、CAR＋T細胞の持続性に統計的に有意な差は観察されなかった。B細胞形成不全（＜1細胞/μl）が、3ヶ月目にほぼ対象全員に当たる97％（34/35）で、および6ヶ月目には100％（24/24）で明らかになったにもかかわらず、CAR＋T細胞は、PKを有する11名の対象の89％において再発の時点で検出可能であった。
DL1と比較してDL2でのより高いCmaxおよびAUC0-28がCRSまたはNTの増加と関連することは観察されなかった。いずれのNTでも、またはグレード2を超えるCRSでも、CD4＋/CAR＋およびCD8＋/CAR＋T細胞のAUC中央値は、DL2でのAUC中央値よりもそれぞれ5〜10倍および3〜5倍高かった。より高い疾患負荷および炎症誘発性サイトカインのベースラインレベルは、より高いピークレベルのCAR＋T細胞、より高いサイトカインピークレベル、ならびにより高いCRSおよびNTの発生率と関連することが観察された。この結果は、DL2でのより高いCmaxおよび中央値AUC0-28がCRSまたはNTを増加させないという結論と一致した。
実施例7：マントル細胞リンパ腫（MCL）を有する対象への抗CD19 CAR発現細胞の投与
実施例1で記載したように作製した、CD19に特異的なキメラ抗原受容体（CAR）を発現する自己由来T細胞を含有する治療用CAR＋T細胞組成物を、1種類の治療に失敗したマントル細胞リンパ腫（MCL）を有する4名のヒト対象に投与した。凍結保存した細胞組成物を静脈内投与の前に解凍した。治療用T細胞組成物は、およそ1:1の標的比で投与される同じ対象に由来するCAR＋操作T細胞の製剤化したCD4＋集団およびCD8＋集団を有する定義された組成の細胞生成物として投与された。対象に、5×107個のCAR発現T細胞を含有する用量レベル1（DL1）の単回投与でCAR発現T細胞の用量（CD4＋およびCD8＋CAR発現T細胞の分割用量として）を投与した。CAR＋T細胞注入の3日前に開始して、対象は、フルダラビン（flu、30 mg/m2）およびシクロホスファミド（Cy、300 mg/m2）によるリンパ球枯渇化学療法を受けた。
実施例1で記載したように、対象を奏効および毒性についてモニタリングした。いずれの対象においてもCRSまたは神経毒性は観察されなかった。処置された4名の対象のうち、2名の対象はPR（持続性ではない）を達成し、2名の患者は進行性疾患を有していた。
実施例8：投与用の治療用T細胞組成物の特性および組成物の作製のためのプロセス
上記実施例2における投与に用いられた、CD19に特異的なキメラ抗原受容体（CAR）を発現する自己由来T細胞を含有する例示的治療用T細胞組成物を、フローサイトメトリーおよびインビトロアッセイを用いて、100を超える表現型特性、機能性特性、および細胞健全性関連特性について評価した。再発性/難治性B細胞非ホジキンリンパ腫の処置に対する抗CD19 CAR-T細胞療法を評価する臨床試験に登録した対象由来の治療用細胞組成物を調べた（N＝63；コアコホート）。種々の特性について、細胞を操作前および操作後に評価した。評価した特性には、実施例1に記載されたものが含まれた、例示的な評価特性を表E7に示す。細胞健全性および記憶ならびに細胞産物の他の表現型に関連する表現型マーカーを、フローサイトメトリーを用いて調べた。T細胞機能性を、インビトロ抗原特異的バイオアッセイを用いて評価した。特性解析および放出試験を、投与した細胞組成物のものに対応する典型的な数の凍結-解凍サイクルを受けた製剤化された治療用T細胞組成物からの試料に対して行った。
（表Ｅ７）抗CD19 CAR T細胞を含有する治療用細胞組成物において測定された代表的な特徴解析特性
Figure 2020508336
投与用の細胞組成物の作製のために、自己由来細胞を白血球アフェレーシスを介して対象から単離した。白血球アフェレーシス試料を、CAR発現細胞の作製のためのプロセスに供した。プロセスは、CD4+およびCD8+T細胞の精製用の、自動された洗浄および免疫親和性ベースの選択を用いる細胞の洗浄を伴い、その結果、CD8+（細胞の中央値99％、Inter Quartile Range（IQR）98〜100％がCD8+であった）細胞およびCD4+（細胞の中央値99％、IQR 99〜100％がCD4+であった）細胞についてそれぞれ濃縮されている、2種類の組成物が得られた。
図24に示しかつ表E8に要約するように、自動化されたT細胞精製は、示した純度のCD8+およびCD4+T細胞集団をもたらした。いくつかの態様では、そのような精製局面は、T細胞特異的試薬との増大またはインキュベーションの増大持続時間または他の局面と非依存的に、該プロセス中の形質導入工程において非T細胞に形質導入する可能性を低下させ得る、および/または治療用細胞組成物において高いT細胞純度をもたらし得る。
（表Ｅ８）プロセス工程によるＴ細胞純度（総白血球に対する％）
Figure 2020508336
濃縮したCD4+およびCD8+組成物の細胞を、41BB共刺激ドメインを有する抗CD19 CARをコードするベクターによるレンチウイルス形質導入に別々に供した。次いで、形質導入した集団を、細胞増大のための刺激試薬の存在下で別々にインキュベートした。増大したCD8+およびCD4+細胞を別々に製剤化および凍結保存し、投与まで貯蔵した。細胞健全性を示すパラメータにおける、ロット間および/または異なる患者、例えば異なる患者特性を有する患者に由来する細胞組成物間のばらつきを最小化するために、細胞をロット間で一定の体積で保持した。細胞産物は、狭い範囲の生存細胞濃度を示した（対象の1つの群の細胞組成物の評価に基づく、CD8+：中央値31×106細胞/mL、IQR 28〜40×106細胞/mL、N＝38；CD4+：中央値35×106細胞/mL、IQR 31〜40×106、N＝36）。
投与の現場で、（DL1またはDL2などでの）適切な用量でのCD8+CAR+およびCD4+CAR+細胞の数に対応する各組成物の標的量にしたがって、細胞を解凍し、投与した。ロット間の細胞健全性のばらつきを最小化するために、製剤化では、凍結保存および貯蔵を、狭い範囲の生存細胞濃度での一定量で保持した（CD8+：中央値31×106細胞/mL、IQR 28〜40×106細胞/mL、N＝38；CD4+：中央値35×106細胞/mL、IQR 31〜40×106、N＝36）。
臨床試験の間、高量製剤から低量製剤へのプロセス変更を行った。変更後の治療用細胞組成物は、厳密に制御された範囲の生存細胞濃度で、一定の低量で製剤化された。いくつかの場合には、低量製剤を、高量製剤に代えて用いた。投与用の組成物中のCAR発現T細胞の健全性を示すパラメータを、例えば、高量で製剤化された細胞組成物における、解凍後の、生存性、細胞表面アネキシンV発現、および活性型細胞内カスパーゼ3のレベルを測定することなどによって評価し、低量で製剤化されたものと比較した。
高量製剤から低量製剤へのプロセス変更は、プロセスロバスト性の増加および細胞健全性特性の変動性の低下をもたらした。個々の細胞組成物からのCD4+およびCD8+T細胞間の濃度の値、生存細胞のパーセンテージ、および活性型カスパーゼ3陰性細胞のパーセンテージを図25に示し、表E9に要約する。アネキシンV発現細胞の中央値パーセンテージは、CD8+CAR+T細胞の11％（IQR 9〜18％；N＝33）、およびCD4+CAR+T細胞の10％（IQR 8〜17％；N＝31）であった。カスパーゼ3発現はアネキシンV発現に類似することが観察された。低量製剤への移行は、プロセスのロバスト性増加をもたらし、細胞健全性特性の分散を減少させた。
（表Ｅ９）細胞健全性特性
Figure 2020508336
・投与用の組成物中のCAR+CD4+およびCAR+CD8+T細胞の量を正確に制御した。対象の例示的なセットに実際に投与された細胞の数は、所与の用量の細胞の標的数の8％以下の範囲内であることが観察された：DL1で細胞を投与された対象（n＝48）では2.4〜2.7×107個の（標的±8％）CD4+CAR+T細胞および2.4〜2.7×107個の（標的±8％） CD8+CAR+T細胞。
・DL2で細胞を投与された対象（n＝20）では4.6〜5.1×107個の（標的±8％）CD4+CAR+T細胞または4.6〜5.1×107個の（標的±8％） CD8+CAR+T細胞。
投与用量の範囲は、対象の様々な例示的なセットにおいて変動性が低いことが見出された：
- DL1（n＝34）では48〜52×106個のCD3+CAR+T細胞
- DL2（n＝29）では96〜101×106個のCD3+CAR+T細胞
- DL1（n＝34）では24〜27×106個のCD4+CAR+T細胞またはCD8+CAR+T細胞
- DL2（n＝29）では46〜51×106個のCD4+CAR+T細胞またはCD8+CAR+T細胞。
図26に示すように、対象に投与されたCAR発現T細胞組成物は、高いT細胞純度および低いロット間の分散を示すことが観察された。プロセスおよび産物の制御は、細胞特異的T細胞機能においてロット間の変動性が低いCART T細胞を含有する治療用細胞組成物をもたらした。
インビトロでの抗原特異的サイトカイン蓄積および細胞内サイトカイン染色（ICS）は、複数のサイトカイン（IL-2、TNF-αおよびIFN-γ）のサイトカイン産生ではロット間の分散が同様に低いことを示した。例示的なICS試験において、組成物からの細胞を、CD19で刺激し、TNF-αを含むサイトカイン、および記憶表現型マーカーとしてC-Cケモカイン受容体7型（CCR7）を含む表面タンパク質について染色し、フローサイトメトリーによって分析した。サイトカインまたは表面タンパク質について陽性であった投与用の組成物中の細胞の数を決定した。図27は、DL1およびDL2での投与用のCAR T細胞組成物中に存在するCD4+CAR+およびCD8+CAR+細胞、CD4+CAR+TNF-α+およびCD8+CAR+TNF-α+細胞、CD4+CAR+CCR7+およびCD8+CAR+CCR7+の数を示す。これらの結果を表E10に要約する。結果は、CD4+CAR+およびCD8+CAR+細胞、CD4+CAR+TNF-α+およびCD8+CAR+TNF-α+細胞、CD4+CAR+CCR7+およびCD8+CAR+CCR7+細胞の数の変動性が低いことを示す。例えば、TNF-α産生に陽性な細胞の数では範囲が狭いことが観察された（n＝61）。
（表Ｅ１０）制御された用量、T細胞表現型、および細胞特異的機能（×106細胞）
Figure 2020508336
CD19による刺激後の腫瘍壊死因子α（TNFα）のCAR+細胞による産生を示すパラメータは、異なるロット間で狭い範囲を示し、CD4+CAR+T細胞（N＝59）では37％の相対標準偏差（RSD）およびCD8+CAR+T細胞（N＝61）では51％であった。
この結果は、CD4+およびCD8+CAR T細胞の厳密かつ一定の用量を含有する組成物、CD4+およびCD8+T細胞培養条件の制御および最適化、サイトカイン産生の低い変動性、ならびに/または投与用の組成物の一定の製剤および量は、組成物における一定の細胞健全性をもたらすことができるという観察と一致した。提供される態様において、そのような製造および制御プロセスの局面は、幾人かの異なる対象に由来し、かつ該対象への投与用に作製された細胞を用いる操作されたそのような細胞組成物の特性の低い変動性に寄与する。いくつかの局面におけるそのような局面には、対象間での投与されるCD4+およびCD8+細胞の厳密な一貫して均一な用量の使用；例えば異なる対象間などで表現型（例えばCCR7）およびインビトロ機能（例えば、抗原刺激後のIL-2、TNF-αおよびIFN-γ産生）の薬物製品ロット間での低い変動性をもたらすものなど、CD4+およびCD8+T細胞培養条件の制御および最適化；ならびに細胞健全性を示す特性における方法によって作製された治療用細胞組成物間の一貫性をもたらし得るまたはそれに寄与し得る薬物製品の一定の製剤および量の使用が含まれる。
実施例9：CAR+T細胞療法後の神経毒性の発生に関連するさらなるベースライン因子
ALLおよびNHLなどのB細胞悪性腫瘍に対するいくつかの異なる臨床試験においてCAR-T細胞組成物による処置前に測定された種々のベースライン因子を評価し、グレード3以上の神経毒性を発生しているおよび発生していない対象間で比較した。3つの臨床試験からのデータを分析した（ALLを有する対象における抗CD19 CAR-T処置を伴う実施例1に記載の試験（試験1）、再発性または難治性成人ALLを有する対象に投与される類似の抗CD19 CAR処置を伴う実施例2に記載の臨床試験（試験2）、およびALLおよび非ホジキンリンパ腫（NHL）を含むB細胞悪性腫瘍を有する対象を異なる抗CD19 CARを発現する細胞で処置するさらなる臨床試験（試験3）を含む）。対象は抗CD19 CAR-T細胞組成物を投与され、臨床奏効および有害転帰についてモニタリングされた。神経毒性を実施例1に記載のように0〜5のスケールに等級分けした。
ベースライン因子を事後に分析し、いくつかの統計分析を用いて対象間で比較した。対象においてグレード3以上の神経毒性に関連することが観察された例示的ベースライン因子を下記の表E11-AおよびE11-Bに列記する、これらには、CAR-T細胞の投与前の血清IL-15のレベルおよび血小板細胞数、疾患型（ALLと比較して非ホジキンリンパ腫（NHL））、ならびに骨髄中の芽球のパーセンテージによって定義される疾患負荷が含まれる。遺伝子発現シグネチャーもまた、特定したパラメータの中に含まれた：フィラデルフィア染色体に陽性である対象（Ph+）またはPh+遺伝子発現プロファイルに似ている遺伝子発現プロファイルを有する対象（Ph様）は、そうではない対象（非Ph）よりグレード3以上の神経毒性の場合が有意に少なかった。試験1においてグレード3以上の神経毒性に関連した例示的ベースライン因子を、表E11-Aに示す。3つの臨床試験全体にわたってグレード3以上の神経毒性に関連した例示的ベースライン因子を、表E11-Bに示す。
（表Ｅ１１−Ａ）試験1においてグレード3以上の神経毒性に関連した例示的ベースラインパラメータ
Figure 2020508336
（表Ｅ１１−Ｂ）グレード３以上の神経毒性に関連した例示的ベースラインパラメータ
Figure 2020508336
a両側フィッシャーの正確確率検定
b高IL-15≧30 pg/mL
試験1においてCAR-T細胞の投与後の種々の時点で対象から収集した血液試料を、CAR+-T細胞数について分析した。対象からのサイトカイン、例えばIL-15の血清レベルを、前処置（スクリーニング）時および処置後の種々の時点（2日目、4日目、および7日目）で評価した。結果は、長期の致死的な神経毒性が、IL-15、T細胞促進サイトカインのレベルの初期の急速な上昇、およびCAR T細胞増大と関連することを明らかにした。
実施例1で述べたように、より急速なCAR-T細胞増大およびより初期でのCAR発現T細胞のピーク増大が、より重度の神経毒性を発生した対象、特にグレード5の神経毒性および脳浮腫を発生した対象の血液中で観察された。例えば、結果は、これらの対象が、細胞の初回投与後4〜7日以内に血液μL当たり検出可能なレベルのCAR+細胞を示し、細胞が投与された後7日以内に全てのそのような対象の血液中で血液μL当たり20個を超えるCAR+細胞が観察された（図1および2を参照）。より低い重症度が低い神経毒性を有する対象では、CAR+T細胞のピーク増大は概してより後期に観察され、マイクロリットル当たりのCAR+T細胞のピーク数はより少なかった（図2、28）。
サイトカインのうち、その中央値レベルがCAR-T細胞注入後にベースラインレベルに対して数倍に達したサイトカインはIL-2（14倍）、IL-6（2.7倍）、IL-10（3.5倍）、IL-15（2.5 倍）、およびIFN-γ（3.3倍）であった。より初期でのピークCAR-T 細胞増大（7日目までにピークCAR+-T数）を経験した対象の群では、CAR-T細胞増大のピークがより後期である対象と比較して、投与後4日目までにより高い中間ベースライン血清IL-15レベルおよび血清中でのより急激な増加が観察された（図28）。血清IL-15レベルを測定する次の時点（7日目）までに、急速なピーク増大を伴うこれらの対象における血清IL-15レベルは低下し、より後期のピーク増大を伴う対象のレベルとおよそ同等であるかそれを下回った。この結果は、ベースライン血清IL-15レベルおよび/またはIL-15レベルのより高いもしくは急速な増加が、CAR-T細胞処置後の神経毒性もしくは脳浮腫の潜在的な危険性またはそれらの重症度を示し得るまたはそれと相関し得るという結論と一致した。リンパ球枯渇およびブリッジング化学療法はまた、IL-15などのT細胞増殖促進サイトカインの増加に関連することも観察される。
本発明は、特定の開示される態様に範囲を限定されることを意図せず、それらは、例えば本発明の様々な局面を例示するために提供される。記載される組成物および方法に対する様々な変更が、本明細書中の説明および教示から明らかになるであろう。そのような変形は、本開示の真の範囲および精神から逸脱することなく実施され得るものであり、本開示の範囲内に含まれることが意図されている。
配列
Figure 2020508336
Figure 2020508336
Figure 2020508336
Figure 2020508336

Claims (174)

  1. （a）抗原に特異的に結合する、任意でキメラ抗原受容体（CAR）である組換え受容体を含むT細胞を含む治療用T細胞組成物の単位用量を含む容器であって、該単位用量が、所与の範囲内の参照単位（RU）の標的数を含有し、所与の組成物におけるRUが、以下の式によって定義され：
    RU＝A×B
    式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ
    Bは、所与の組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその分数もしくは倍数もしくは変換である、容器；および
    （b）対象、任意で疾患または状態を有するかまたは有する疑いがある対象に、組成物、任意でその1つまたは複数の単位用量を投与するための、説明書
    を含む、製造物品。
  2. 前記参照単位の標的数が、参照単位の安全数よりも小さく、該参照単位の安全数が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療法の参照単位の最低数である、請求項1に記載の製造物品。
  3. 前記有害事象が、重度の有害事象、任意で重度の神経毒性、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上のまたは少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である、請求項2に記載の製造物品。
  4. 前記参照単位の標的数が、安全係数に対応する量だけ、および/または1.5〜3倍の範囲内、任意で約2倍の量だけ、または有害事象を発生しなかった対象の群に投与された治療用T細胞組成物の単位の平均数の標準偏差の倍数である量だけ、参照単位の安全数よりも小さく、任意で該対象の群がグレード0〜2の神経毒性を示し、任意で該倍数が1.5〜3倍の範囲内である、請求項2または請求項3に記載の製造物品。
  5. 前記参照単位の標的数が、参照単位の参照有効数以上であり、該参照有効数が、組換え受容体、任意でCARを含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、所望の治療転帰、任意で部分奏効または完全奏効（CR）を示した群の中の1または複数の対象に投与された治療法の単位の数である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の製造物品。
  6. Aが、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、かつBが、所与の組成物における組換え受容体依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値である；
    Aおよび/またはBが、それぞれ、数または値の変換であり、該変換が、対数変換、べき変換、またはロジット変換を含む；
    Aが、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、かつBが、所与のT細胞組成物におけるCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値の倍数または変換であり、任意で、Bが値の対数変換である、
    請求項1〜5のいずれか一項に記載の製造物品。
  7. 前記表現型が、CD3、CD4、もしくはCD8のうちの1つもしくは複数である表面マーカーの陽性発現を含む、かつ/または組換え受容体、任意でCAR、もしくは組換え受容体の発現についての代理マーカーの陽性発現を含む、請求項1〜6のいずれか一項に記載の製造物品。
  8. 前記表現型が、CD3+ CAR、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+である、請求項7に記載の製造物品。
  9. 前記表現型が、アポトーシスを示すかまたはアポトーシスのカスケードもしくは経路における1つもしくは複数の段階を示す因子の非存在を含み、任意で、該表現型が、アポトーシスのマーカーの陰性発現を含む、請求項1〜8のいずれか一項に記載の製造物品。
  10. 前記アポトーシスのマーカーが、表面ホスファチジルセリンであり、かつ/もしくはアネキシンVで検出されるか、またはカスパーゼの活性型もしくはプロ型（proform）、任意でカスパーゼ3の活性型もしくはプロ型である、請求項9に記載の製造物品。
  11. 前記表現型がアネキシン-を含む、請求項1〜10のいずれか一項に記載の製造物品。
  12. Aが、CD3+ CAR+細胞であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、CD4+ CAR+であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、CD8+ CAR+細胞であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、またはその倍数もしくは変換値であり、該アポトーシスマーカーが、アネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、請求項1〜11のいずれか一項に記載の製造物品。
  13. （a）抗原に特異的に結合する組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）を発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物の単位用量を含む容器であって、該単位用量が、治療用T細胞組成物の標的用量を含有し、
    （i）組成物の組換え受容体依存性の活性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値が閾値以上である場合は、該標的用量が、組成物の所与の表現型の細胞の第1の数であるか、または該細胞の数の第1の範囲内であり、
    （ii）パラメータの値が閾値未満である場合は、該標的用量が、組成物の所与の表現型の細胞の第2の数であるか、または該細胞の数の第2の範囲内であり、
    第1の数が第2の数よりも低いか、または第1の範囲が第2の範囲よりも低い、容器；および
    （b）対象、任意で疾患または状態を有するかまたは有する疑いがある対象に、組成物、任意でその1つまたは複数の単位用量を投与するための、説明書
    を含む、製造物品。
  14. 前記組換え受容体依存性の活性、任意でCAR依存性の活性の閾値が、参照安全値よりも小さく、該参照安全値が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療用組成物の組換え受容体依存性の活性の最低値であり、任意で、該有害事象が、重度の有害事象、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上の重度の神経毒性または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である、請求項13に記載の製造物品。
  15. （a）抗原に特異的に結合する、任意でキメラ抗原受容体（CAR）である組換え受容体を含むT細胞を含む治療用T細胞組成物の単位用量を含む容器であって、
    該単位用量が、治療用T細胞組成物の標的用量を含有し、かつ
    該治療用T細胞組成物が、Bについての下側規格限界（LSL）よりも上であり、かつ上側規格限界（USL）よりも下であり、Bが、組成物の組換え受容体依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値である、容器；および
    （b）対象、任意で疾患または状態を有するかまたは有する疑いがある対象に、組成物、任意でその1つまたは複数の単位用量を投与するための、説明書
    を含む、製造物品。
  16. 前記パラメータが、1つまたは複数の因子、任意で可溶性因子の測定値、またはその正規化された値、任意で、サイトカイン、ケモカイン、または可溶性受容体、任意で可溶性共刺激受容体のうちの1つまたは組み合わせである、請求項1〜48のいずれか一項に記載の製造物品。
  17. 前記測定値が、抗原、抗原を発現する細胞、および/または組換え受容体、任意でCARに特異的に結合する作用物質の存在下での、所与の組成物またはその試料の固定された時間、任意で24時間にわたる培養またはインキュベーションを含むアッセイにおけるものである、請求項16に記載の製造物品。
  18. 前記因子の測定値が、
    （i）因子の濃度、相対濃度、量、もしくは相対量、または
    （ii）所与の組成物の投入細胞の単位当たりの因子の量もしくは相対量、または
    （iii）時間の単位、任意で1時間当たりの、所与の組成物の投入細胞の単位当たりの因子の量もしくは相対量、または
    （iv）（i）〜（iii）のいずれかを示すレベル
    である、請求項16または請求項17に記載の製造物品。
  19. 前記1つまたは複数の因子が、炎症誘発性サイトカイン、Th2サイトカイン、およびTh17サイトカインのうちの1つまたは組み合わせであるか、あるいは
    前記1つまたは複数の因子が、IL-2、IFNγ、TNFα、IL4、IL-5、IL-10、IL-13、GM-CSF、sCD137、MIP1a、およびM1Pbのうちの1つ、または2つ以上の組み合わせ、任意で、IL-2、IFNγ、TNFα、およびIL-10のうちの1つ、または2つ以上の組み合わせである、
    請求項16〜18のいずれか一項に記載の製造物品。
  20. 前記パラメータが、TNFα、IFNγ、およびIL-2のうちの少なくとも2つの、またはTNFα、IFNγ、およびIL-2の測定値、任意で量または濃度の算術平均または幾何平均である、請求項16〜19のいずれか一項に記載の製造物品。
  21. 前記表現型が、CD8+ CAR+細胞またはアポトーシスマーカー-CD8+ CAR+細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3であり、かつ
    前記パラメータが、任意で、TNFα、IL-2、およびIFNγのうちの1つまたは組み合わせである炎症誘発性サイトカインの測定値であるか、またはその正規化された値である、
    請求項1〜20のいずれか一項に記載の製造物品。
  22. 前記治療用T細胞組成物が、1mL当たり約1000万個の細胞〜1mL当たり約7000万個の細胞、1mL当たり約1000万個の生存細胞〜1mL当たり約7000万個の生存細胞、または1mL当たり約1500万個の細胞もしくは生存細胞〜1mL当たり約6000万個の細胞もしくは生存細胞を含む、請求項1〜21のいずれか一項に記載の製造物品。
  23. 前記T細胞組成物が、1mL当たり1000万個よりも多い細胞もしくは生存細胞、または1mL当たり1500万個よりも多い細胞もしくは1500万個よりも多い生存細胞を含む、請求項1〜22のいずれか一項に記載の製造物品。
  24. 前記組成物が凍結保護剤をさらに含み、かつ/または前記物品が、対象への投与の前に組成物を融解するための説明書をさらに含む、請求項1〜23のいずれか一項に記載の製造物品。
  25. 前記疾患または状態が、がん、任意で骨髄腫、リンパ腫、または白血病である、請求項1〜24のいずれか一項に記載の製造物品。
  26. 前記疾患または状態が、B細胞悪性腫瘍であり、任意で、B細胞悪性腫瘍が、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、成人ALL、慢性リンパ芽球性白血病（CLL）、非ホジキンリンパ腫（NHL）、およびびまん性大細胞型B細胞リンパ腫（DLBCL）からなる群より選択される、請求項25に記載の製造物品。
  27. 前記組換え受容体がCARである、請求項1〜26のいずれか一項に記載の製造物品。
  28. CARが、抗原に特異的に結合する細胞外抗原認識ドメイン、およびITAMを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、任意で、該細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞内ドメインを含み；かつ/またはCARが、4-1BBのシグナル伝達ドメインを任意で含む共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、請求項27に記載の製造物品。
  29. 前記T細胞がCD4+またはCD8+である、請求項1〜28のいずれか一項に記載の製造物品。
  30. 前記T細胞が、対象から得られた初代T細胞である、請求項1〜29のいずれか一項に記載の製造物品。
  31. 前記容器が単位の標的数を含有することを示す情報をさらに含有する、請求項1〜30のいずれか一項に記載の製造物品。
  32. 前記容器が第1の容器であり、かつ前記物品が、追加の容器をさらに含み、該追加の容器のそれぞれが、T細胞組成物の単位の標的数を含む単位用量を含む、請求項1〜31のいずれか一項に記載の製造物品。
  33. 前記T細胞組成物が、あるプロセスによって生成され、ここで、
    生物学的に活性を有する細胞の特徴および/またはアポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在の特徴を示す表現型の細胞の、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の頻度、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物における該頻度の平均から、40％以下もしくは30％以下もしくは20％以下もしくは10％以下もしくは5％以下だけ変動する、かつ/または1以下の標準偏差だけそのような平均から変動するか；あるいは
    アポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在を示す表現型の細胞の組成物における、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の頻度、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物の中で、40％以下または20％以下または10％以下だけ変動する、
    請求項1〜32のいずれか一項に記載の製造物品組成物。
  34. 疾患または状態を有する対象に、該疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）を含む細胞を含むT細胞組成物の単位用量を投与する工程を含む、処置の方法であって、
    該単位用量が、所与の範囲内の参照単位（RU）の標的数を含有し、所与の組成物におけるRUが、以下の式によって定義され：
    RU＝A×B
    式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ
    Bは、所与の組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である、
    処置の方法。
  35. 前記参照単位の標的数が、参照単位の安全数よりも小さく、該参照単位の安全数が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療法の参照単位の最低数である、請求項34に記載の方法。
  36. 前記有害事象が、重度の有害事象、任意で重度の神経毒性、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上のまたは少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である、請求項35に記載の方法。
  37. 前記参照単位の標的数が、安全係数に対応する量だけ、および/または1.5〜3倍の範囲内、任意で約2倍の量だけ、または有害事象を発生しなかった対象の群に投与された治療用T細胞組成物の単位の平均数の標準偏差の倍数である量だけ、参照単位の安全数よりも小さく、任意で該対象の群がグレード0〜2の神経毒性を示し、任意で該倍数が1.5〜3倍の範囲内である、請求項35または請求項36に記載の方法。
  38. 前記参照単位の標的数が、参照単位の参照有効数以上であり、該参照有効数が、組換え受容体、任意でCARを含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、所望の治療転帰、任意で部分奏効または完全奏効（CR）を示した群の中の1または複数の対象に投与された治療法の単位の数である、請求項34〜37のいずれか一項に記載の方法。
  39. Aが、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、かつBが、所与の組成物における組換え受容体依存性の活性の程度を示すかもしくはそれと相関するパラメータの値である；
    Aおよび/もしくはBが、それぞれ、数もしくは値の変換であり、該変換が、対数変換、べき変換、もしくはロジット変換を含む；または
    Aが、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、かつBが、所与のT細胞組成物におけるCAR依存性の活性の程度を示すかもしくはそれと相関するパラメータの値の倍数もしくは変換であり、任意で、Bが値の対数変換である、
    請求項34〜38のいずれか一項に記載の方法。
  40. 前記表現型が、CD3、CD4、もしくはCD8のうちの1つもしくは複数である表面マーカーの陽性発現を含む、かつ/または組換え受容体、任意でCAR、もしくは組換え受容体の発現についての代理マーカーの陽性発現を含む、請求項34〜39のいずれか一項に記載の方法。
  41. 前記表現型が、CD3+ CAR、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+である、請求項40に記載の方法。
  42. 前記表現型が、アポトーシスを示すかまたはアポトーシスのカスケードもしくは経路における1つもしくは複数の段階を示す因子の非存在を含み、任意で、該表現型が、アポトーシスのマーカーの陰性発現を含む、請求項34〜40のいずれか一項に記載の方法。
  43. 前記アポトーシスのマーカーが、表面ホスファチジルセリンであり、かつ/もしくはアネキシンVで検出されるか、またはカスパーゼの活性型もしくはプロ型、任意でカスパーゼ3の活性型もしくはプロ型である、請求項42に記載の方法。
  44. 前記表現型がアネキシン-を含む、請求項34〜43のいずれか一項に記載の方法。
  45. Aが、CD3+ CAR+細胞であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、CD4+ CAR+であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、CD8+ CAR+細胞であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、またはその倍数もしくは変換値であり、該アポトーシスマーカーが、アネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、請求項34〜44のいずれか一項に記載の方法。
  46. 疾患または状態を有する対象に、該疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）を含む細胞を含むT細胞組成物の単位用量を投与する工程を含む、処置の方法であって、
    該単位用量が、治療用T細胞組成物の標的用量を含有し、
    （i）組成物の組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値が閾値以上である場合は、該標的用量が、組成物の所与の表現型の細胞の第1の数であるか、または該細胞の数の第1の範囲内であり、
    （ii）パラメータの値が閾値未満である場合は、該標的用量が、組成物の所与の表現型の細胞の第2の数であるか、または該細胞の数の第2の範囲内であり、
    第1の数が第2の数よりも低いか、または第1の範囲が第2の範囲よりも低い、
    処置の方法。
  47. 前記組換え受容体依存性の活性の閾値が、参照安全値よりも小さく、該参照安全値が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療用組成物のCAR依存性の活性の最低値であり、任意で、該有害事象が、重度の有害事象、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上の重度の神経毒性または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である、請求項46に記載の方法。
  48. 前記パラメータが、1つまたは複数の因子、任意で可溶性因子の測定値、またはその正規化された値、任意で、サイトカイン、ケモカイン、または可溶性受容体、任意で可溶性共刺激受容体のうちの1つまたは組み合わせである、請求項34〜47のいずれか一項に記載の方法。
  49. 前記測定値が、抗原、抗原を発現する細胞、および/または組換え受容体、任意でCARに特異的に結合する作用物質の存在下での、所与の組成物またはその試料の固定された時間、任意で24時間にわたる培養またはインキュベーションを含むアッセイにおけるものである、請求項48に記載の方法。
  50. 前記因子の測定値が、
    （i）因子の濃度、相対濃度、量、もしくは相対量、または
    （ii）所与の組成物の投入細胞の単位当たりの因子の量もしくは相対量、または
    （iii）時間の単位、任意で1時間当たりの、所与の組成物の投入細胞の単位当たりの因子の量もしくは相対量、または
    （iv）（i）〜（iii）のいずれかを示すレベル
    である、請求項48または請求項49に記載の方法。
  51. 前記1つまたは複数の因子が、炎症誘発性サイトカイン、Th2サイトカイン、およびTh17サイトカインのうちの1つまたは組み合わせであるか、あるいは
    前記1つまたは複数の因子が、IL-2、IFNγ、TNFα、IL4、IL-5、IL-10、IL-13、GM-CSF、sCD137、MIP1a、およびM1Pbのうちの1つ、または2つ以上の組み合わせ、任意で、IL-2、IFNγ、TNFα、およびIL-10のうちの1つ、または2つ以上の組み合わせである、
    請求項48〜50のいずれか一項に記載の方法。
  52. 前記パラメータが、TNFα、IFNγ、およびIL-2のうちの少なくとも2つの、またはTNFα、IFNγ、およびIL-2の測定値、任意で量または濃度の算術平均または幾何平均である、請求項48〜51のいずれか一項に記載の方法。
  53. 前記表現型が、CD8+ CAR+細胞またはアポトーシスマーカー-CD8+ CAR+細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3であり、かつ
    前記パラメータが、任意で、TNFα、IL-2、およびIFNγのうちの1つまたは組み合わせである炎症誘発性サイトカインの測定値であるか、またはその正規化された値である、
    請求項34〜52のいずれか一項に記載の方法。
  54. 前記治療用T細胞組成物が、1ml当たり約1000万個の細胞〜1mL当たり約7000万個の細胞、1mL当たり約1000万個の生存細胞〜1mL当たり約7000万個の生存細胞、または1mL当たり約1500万個の細胞もしくは生存細胞〜1mL当たり約6000万個の細胞もしくは生存細胞を含む、請求項34〜54のいずれか一項に記載の方法。
  55. 前記T細胞組成物が、1mL当たり1000万個よりも多い細胞もしくは生存細胞、または1mL当たり1500万個よりも多い細胞もしくは生存細胞を含む、請求項34〜54のいずれか一項に記載の方法。
  56. 前記疾患または状態が、がん、任意で骨髄腫、リンパ腫、または白血病である、請求項34〜55のいずれか一項に記載の方法。
  57. 前記疾患または状態が、B細胞悪性腫瘍、任意で、急性リンパ芽球性白血病（ALL）、成人ALL、慢性リンパ芽球性白血病（CLL）、非ホジキンリンパ腫（NHL）、およびびまん性大細胞型B細胞リンパ腫（DLBCL）からなる群より選択されるB細胞悪性腫瘍である、請求項56に記載の方法。
  58. 前記組換え受容体がCARである、請求項34〜57のいずれか一項に記載の方法。
  59. CARが、抗原に特異的に結合する細胞外抗原認識ドメイン、およびITAMを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、任意で、該細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞内ドメインを含み；かつ/またはCARが、4-1BBのシグナル伝達ドメインを任意で含む共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、請求項58に記載の方法。
  60. 前記T細胞がCD4+またはCD8+である、請求項34〜59のいずれか一項に記載の方法。
  61. 前記T細胞が初代T細胞であり、任意で、該T細胞が、対象に対して自己由来であるか、または対象に対して同種異系である、請求項34〜60のいずれか一項に記載の方法。
  62. T細胞組成物の投与の前にリンパ球枯渇化学療法を投与する工程をさらに含み、かつ/または対象が、T細胞組成物の投与の前にリンパ球枯渇化学療法を受けている、請求項34〜61のいずれか一項に記載の方法。
  63. 前記リンパ球枯渇化学療法が、フルダラビンおよび/またはシクロホスファミドの対象への投与を含む、請求項62に記載の方法。
  64. 以下の工程を含む、T細胞組成物の単位用量を含む治療用組成物をアッセイする方法：
    （a）疾患または状態を有する対象に由来し、かつ疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）をコードする核酸が形質導入されたT細胞を含むT細胞組成物由来の試料をアッセイする工程であって、該アッセイが、細胞組成物についてのBを決定し、Bが、所与の組成物における組換え受容体依存性の活性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である、工程；ならびに
    （b）Bに基づいて細胞組成物の効力を評価する工程、および/または組成物が、Bについての下側規格限界（LSL）よりも上であるか、もしくはBについての上側規格限界（USL）よりも下であるかを評価する工程。
  65. 以下の工程を含む、治療用T組成物をアッセイする方法：
    疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体を含むT細胞を含むT細胞組成物由来の試料を、Bに基づいて細胞組成物の効力について評価する工程、および/または
    組成物が、Bについての下側規格限界（LSL）よりも上であるか、もしくはBについての上側規格限界（USL）よりも下であるかを評価する工程。
  66. 組成物が、BについてのUSLよりも下である場合にのみ、対象の処置のために生成物が放出される、請求項64または請求項65に記載の方法。
  67. BがUSLよりも上である場合は、組成物を対象に投与しないこと、または対象に投与される細胞の数を調整された単位用量に変更することを推奨し、該調整された単位用量が、T細胞組成物の細胞の標的数または参照単位（RU）の標的数を含有し、所与の組成物におけるRUが、以下の式によって定義され：
    RU＝A×B
    式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ
    Bは、所与の組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその分数もしくは倍数もしくは変換である、
    請求項64または請求項65に記載の方法。
  68. 前記単位の標的数が、参照単位の安全数よりも小さく、該参照単位の安全数が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療法の参照単位の最低数である、請求項67に記載の方法。
  69. 前記有害事象が、重度の有害事象、任意で重度の神経毒性、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上のまたは少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である、請求項68に記載の方法。
  70. 前記参照単位の標的数が、安全係数に対応する量だけ、および/または1.5〜3倍の範囲内、任意で約2倍の量だけ、または有害事象を発生しなかった対象の群に投与された治療用T細胞組成物の単位の平均数の標準偏差の倍数である量だけ、参照単位の安全数よりも小さく、任意で該対象の群がグレード0〜2の神経毒性を示し、任意で該倍数が1.5〜3倍の範囲内である、請求項68または請求項69に記載の方法。
  71. 前記参照単位の標的数が、参照単位の参照有効数以上であり、該参照有効数が、組換え受容体、任意でCARを含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、所望の治療転帰、任意で部分奏効または完全奏効（CR）を示した群の中の1または複数の対象に投与された治療法の単位の数である、請求項67〜70のいずれか一項に記載の方法。
  72. 前記調整された単位用量が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物で処置された対象の群に投与された平均単位用量よりも少ない、任意で1.5倍少ない、2倍少ない、3倍少ない、4倍少ない、請求項67〜71のいずれか一項に記載の方法。
  73. T細胞組成物の試料、任意で凍結保存された試料が、T細胞組成物の対象への投与後に評価される、請求項67〜72のいずれか一項に記載の方法。
  74. BがUSLよりも上である場合は、
    対象が、毒性の危険性があると判定される；かつ/あるいは
    組成物を投与された対象が、細胞組成物の投与後、および任意で毒性転帰の徴候または症状の発生の前に、モニタリングされ、かつ/または毒性転帰もしくはサイトカイン放出症候群の可能性を改善もしくは低減するように作用物質で処置される、
    請求項67〜73のいずれか一項に記載の方法。
  75. 以下の工程を含む、治療用T細胞組成物に関して毒性の危険性を評価する方法：
    （a）対象に投与されているT細胞組成物由来の試料を、参照単位（RU）について評価する工程であって、T細胞組成物が、疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体を含むT細胞を含み、所与の組成物におけるRUが、以下の式によって定義され：
    RU＝A×B
    式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の、細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ
    Bは、所与の組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその分数もしくは倍数もしくは変換である、工程；および
    （b）RUを単位の参照安全数と比較する工程であって、該比較により、対象が、有害事象、任意で重度の有害事象、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上の重度の神経毒性または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性を発生する危険性があるかまたはないかが示される、工程。
  76. 前記単位の参照安全数が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療法の参照単位の最低数である、請求項75に記載の方法。
  77. 前記比較が、RUが単位の参照安全数よりも上であることを示す場合は、組成物を投与された対象が、細胞組成物の投与後、および任意で毒性転帰の徴候または症状の発生の前に、モニタリングされ、かつ/または毒性転帰もしくはサイトカイン放出症候群の可能性を改善もしくは低減するように作用物質で処置される、請求項75に記載の方法。
  78. 以下の工程を含む、T細胞組成物の単位用量を含む治療用組成物を生成する方法：
    （a）疾患または状態を有する対象に由来しかつ疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）をコードする核酸が形質導入されたT細胞を含むT細胞組成物由来の試料をアッセイする工程であって、該アッセイが、細胞組成物についてのBを決定し、Bが、所与の組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその分数もしくは倍数もしくは変換である、工程；および
    （b）T細胞組成物の単位用量を達成するために、組成物のすべてまたは一部分および任意で別の溶液を、容器に充填する工程であって、該単位用量が、T細胞組成物の参照単位（RU）の標的数を含有し、所与の組成物におけるRUが、以下の式によって定義され：
    RU＝A×B、
    式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均である、工程。
  79. 以下の工程を含む、T細胞組成物の単位用量を含む治療用組成物を生成する方法：
    T細胞組成物の単位用量を達成するために、疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体を含むT細胞を含むT細胞組成物のすべてまたは一部分、および任意で別の溶液を、容器に充填する工程であって、該単位用量が、T細胞組成物の参照単位（RU）の標的数を含有し、所与の組成物におけるRUが、以下の式によって定義され：
    RU＝A×B
    式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ
    Bは、所与の組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその分数、倍数、もしくは変換である、工程。
  80. Aが、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、かつBが、所与の組成物における組換え受容体依存性の活性の程度を示すかもしくはそれと相関するパラメータの値である；
    Aおよび/もしくはBが、それぞれ、数もしくは値の変換であり、該変換が、対数変換、べき変換、もしくはロジット変換を含む；または
    Aが、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の数であり、かつBが、所与のT細胞組成物におけるCAR依存性の活性の程度を示すかもしくはそれと相関するパラメータの値の倍数もしくは変換であり、任意で、Bが値の対数変換である、
    請求項67〜79のいずれか一項に記載の方法。
  81. 前記表現型が、CD3、CD4、もしくはCD8のうちの1つもしくは複数である表面マーカーの陽性発現を含む、かつ/または組換え受容体、任意でCAR、もしくは組換え受容体の発現についての代理マーカーの陽性発現を含む、請求項67〜80のいずれか一項に記載の方法。
  82. 前記表現型が、CD3+ CAR、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+である、請求項81に記載の方法。
  83. 前記表現型が、アポトーシスを示すかまたはアポトーシスのカスケードもしくは経路における1つもしくは複数の段階を示す因子の非存在を含み、任意で、該表現型が、アポトーシスのマーカーの陰性発現を含む、請求項67〜82のいずれか一項に記載の方法。
  84. 前記アポトーシスのマーカーが、表面ホスファチジルセリンであり、かつ/もしくはアネキシンVで検出されるか、またはカスパーゼの活性型もしくはプロ型、任意でカスパーゼ3の活性型もしくはプロ型である、請求項83に記載の方法。
  85. 前記表現型がアネキシン-を含む、請求項67〜84のいずれか一項に記載の方法。
  86. Aが、CD3+ CAR+細胞であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、CD4+ CAR+であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、CD8+ CAR+細胞であるアポトーシスマーカー陰性（-）細胞の総数、またはその倍数もしくは変換値であり、該アポトーシスマーカーが、アネキシンVまたはカスパーゼである、請求項67〜85のいずれか一項に記載の方法。
  87. 前記パラメータが、1つまたは複数の因子、任意で可溶性因子の測定値、またはその正規化された値、任意で、サイトカイン、ケモカイン、または可溶性受容体、任意で可溶性共刺激受容体のうちの1つまたは組み合わせである、請求項64〜86のいずれか一項に記載の方法。
  88. 前記測定値が、抗原、抗原を発現する細胞、および/または組換え受容体、任意でCARに特異的に結合する作用物質の存在下での、所与の組成物またはその試料の固定された時間、任意で24時間にわたる培養またはインキュベーションを含むアッセイにおけるものである、請求項87に記載の方法。
  89. 前記因子の測定値が、
    （i）因子の濃度、相対濃度、量、もしくは相対量、または
    （ii）所与の組成物の投入細胞の単位当たりの因子の量もしくは相対量、または
    （iii）時間の単位、任意で1時間当たりの、所与の組成物の投入細胞の単位当たりの因子の量もしくは相対量、または
    （iv）（i）〜（iii）のいずれかを示すレベル
    である、請求項87または請求項88に記載の方法。
  90. 前記1つまたは複数の因子が、炎症誘発性サイトカイン、Th2サイトカイン、およびTh17サイトカインのうちの1つまたは組み合わせであるか、あるいは
    前記1つまたは複数の因子が、IL-2、IFNγ、TNFα、IL4、IL-5、IL-10、IL-13、GM-CSF、sCD137、MIP1a、およびM1Pbのうちの1つ、または2つ以上の組み合わせ、任意で、IL-2、IFNγ、TNFα、およびIL-10のうちの1つ、または2つ以上の組み合わせである、
    請求項87〜89のいずれか一項に記載の方法。
  91. 前記パラメータが、TNFα、IFNγ、およびIL-2のうちの少なくとも2つの、またはTNFα、IFNγ、およびIL-2の測定値、任意で量または濃度の算術平均または幾何平均である、請求項87〜90のいずれか一項に記載の方法。
  92. 前記表現型が、CD8+ CAR+細胞またはアポトーシスマーカー-CD8+ CAR+細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3であり、かつ
    前記パラメータが、任意で、TNFα、IL-2、およびIFNγのうちの1つまたは組み合わせである炎症誘発性サイトカインの測定値であるか、またはその正規化された値である、
    請求項67〜91のいずれか一項に記載の方法。
  93. 前記組換え受容体がCARである、請求項64〜92のいずれか一項に記載の方法。
  94. CARが、抗原に特異的に結合する細胞外抗原認識ドメイン、およびITAMを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、任意で、該細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞内ドメインを含み；かつ/またはCARが、4-1BBのシグナル伝達ドメインを任意で含む共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、請求項93に記載の方法。
  95. 前記T細胞がCD4+またはCD8+である、請求項64〜94のいずれか一項に記載の方法。
  96. 前記T細胞が、任意で対象に対して自己由来または同種異系の、初代T細胞である、請求項64〜95のいずれか一項に記載の方法。
  97. mL当たり約1000万個の細胞〜約7000万個の細胞の濃度の治療用T細胞組成物、および任意で別の溶液を含む容器であって、該治療用T細胞組成物が、組換え受容体を含むT細胞を含む、容器。
  98. 前記濃度が、1mL当たり約1500万〜約6000万個の細胞である、請求項97に記載の容器。
  99. 前記濃度が、1mL当たり1500万個の細胞であるか、または1mL当たり約1500万個の細胞である、請求項97または請求項98に記載の容器。
  100. 前記容器が別の溶液で充填され、該溶液が、凍結保護剤、任意でDMSOを含む、請求項97または請求項98に記載の容器。
  101. バイアルであるかまたはバッグである、請求項97〜100のいずれか一項に記載の容器。
  102. 前記容器がバイアル、任意で低温貯蔵バイアルであり、かつ組成物の体積が、20 mL以下、任意で、1 mL〜20 mL、1 mL〜15 mL、1 mL〜10 mL、1 mL〜5 mL、1 mL〜2.5 mL、2.5 mL〜20 mL、2.5 mL〜15 mL、2.5 mL〜10 mL、2.5 mL〜5 mL、5 mL〜20 mL、5 mL〜15 mL、5 mL〜10 mL、10 mL〜20 mL、10 mL〜15 mL、または15 mL〜20 mLである、請求項97〜101のいずれか一項に記載の容器。
  103. 前記容器がバッグ、任意で凍結バッグであり、かつ組成物の体積が、
    それぞれ両端の値を含む、15 mL〜150 mLもしくは約15 mL〜150 mL、20 mL〜100 mLもしくは約20 mL〜100 mL、20 mL〜80 mLもしくは約20 mL〜80 mL、20 mL〜60 mLもしくは約20 mL〜60 mL、20 mL〜40 mLもしくは約20 mL〜40 mL、40 mL〜100 mLもしくは約40 mL〜100 mL、40 mL〜80 mLもしくは約40 mL〜80 mL、40 mL〜60 mLもしくは約40 mL〜60 mL、60 mL〜100 mLもしくは約60 mL〜100 mL、60 mL〜80 mLもしくは約60 mL〜80 mL、または80 mL〜100 mLもしくは約80 mL〜100 mLである；あるいは
    少なくとも15 mLもしくは少なくとも約15 mL、少なくとも20 mLもしくは少なくとも約20 mL、少なくとも30 mLもしくは少なくとも約30 mL、少なくとも40 mLもしくは少なくとも約40 mL、少なくとも50 mLもしくは少なくとも約50 mL、少なくとも60 mLもしくは少なくとも約60 mL、少なくとも70 mLもしくは少なくとも約70 mL、少なくとも80 mLもしくは少なくとも約80 mL、または少なくとも90 mLもしくは少なくとも約90 mLである；かつ/あるいは
    100 mL以下である、
    請求項97〜101のいずれか一項に記載の容器。
  104. 前記容器における組成物の体積に対する表面積の比が、
    それぞれ両端の値を含む、0.1 cm-1〜100 cm-1もしくは約0.1 cm-1〜100 cm-1；1 cm-1〜50 cm-1もしくは約1 cm-1〜50 cm-1、1 cm-1 〜20 cm-1もしくは約1 cm-1 〜20 cm-1、1 cm-1〜10 cm-1もしくは約1 cm-1〜10 cm-1、1 cm-1〜7 cm-1もしくは約1 cm-1〜7 cm-1、1 cm-1〜6 cm-1もしくは約1 cm-1〜6 cm-1、1 cm-1〜3 cm-1もしくは約1 cm-1〜3 cm-1、1 cm-1〜2 cm-1もしくは約1 cm-1〜2 cm-1、2 cm-1〜20 cm-1もしくは約2 cm-1〜20 cm-1、2 cm-1〜10 cm-1もしくは約2 cm-1〜10 cm-1、2 cm-1〜7 cm-1もしくは約2 cm-1〜7 cm-1、2 cm-1〜6 cm-1もしくは約2 cm-1〜6 cm-1、2 cm-1〜3 cm-1もしくは約2 cm-1〜3 cm-1、3 cm-1〜20 cm-1もしくは約3 cm-1〜20 cm-1、3 cm-1〜10 cm-1もしくは約3 cm-1〜10 cm-1、3 cm-1〜7 cm-1もしくは約3 cm-1〜7 cm-1、3 cm-1 〜6 cm-1もしくは約3 cm-1 〜6 cm-1、6 cm-1〜20 cm-1もしくは約6 cm-1〜20 cm-1、6 cm-1〜10 cm-1もしくは約6 cm-1〜10 cm-1、6 cm-1〜7 cm-1もしくは約6 cm-1〜7 cm-1、 7 cm-1〜20 cm-1もしくは約7 cm-1〜20 cm-1、7 cm-1〜10 cm-1もしくは約7 cm-1〜10 cm-1、または7 cm-1〜20 cm-1もしくは約7 cm-1〜20 cm-1である；あるいは
    3 cm-1、4cm-1、5 cm-1、6 cm-1、7 cm-1、10 cm-1、15 cm-1、もしくは20 cm-1であるか、約3 cm-1、約4 cm-1、約5 cm-1、約6 cm-1、約7 cm-1、約10 cm-1、約15 cm-1、もしくは約20 cm-1であるか、または少なくとも3 cm-1、少なくとも4 cm-1、少なくとも5 cm-1、少なくとも6 cm-1、少なくとも7 cm-1、少なくとも10 cm-1、少なくとも15 cm-1、もしくは少なくとも20 cm-1である、
    請求項97〜103のいずれか一項に記載の容器。
  105. 前記T細胞が、疾患または状態を有する対象に由来し、かつ疾患または状態に関連するかまたはそれによって発現される抗原に特異的な組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）をコードする核酸が形質導入されており、かつ/または該T細胞が、組換え受容体、任意でCARを含む、請求項97〜104のいずれか一項に記載の容器。
  106. 前記組換え受容体がCARである、請求項97〜105のいずれか一項に記載の容器。
  107. CARが、抗原に特異的に結合する細胞外抗原認識ドメイン、およびITAMを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、任意で、該細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞内ドメインを含み；かつ/またはCARが、4-1BBのシグナル伝達ドメインを任意で含む共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、請求項106に記載の容器。
  108. 前記T細胞がCD4+またはCD8+である、請求項97〜107のいずれか一項に記載の容器。
  109. 前記T細胞が初代T細胞である、請求項97〜108のいずれか一項に記載の方法。
  110. 前記T細胞組成物が、あるプロセスによって生成され、ここで、
    生物学的に活性を有する細胞の特徴および/またはアポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在の特徴を示す表現型の細胞の、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の頻度、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物における該頻度の平均から、40％以下もしくは30％以下もしくは20％以下もしくは10％以下もしくは5％以下だけ変動する、かつ/または1以下の標準偏差だけそのような平均から変動するか；あるいは
    アポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在を示す表現型の細胞の組成物における、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の頻度、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物の中で、40％以下または20％以下または10％以下だけ変動する、
    請求項97〜109のいずれか一項に記載の容器。
  111. 前記容器に、1mL当たり約1000万個の細胞〜約7000万個の細胞の濃度まで、T細胞を含む組成物のすべてまたは一部分、および任意で別の溶液を充填する工程を含む、細胞療法のための治療用T細胞組成物を生成する方法であって、該T細胞が、組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）を含む、方法。
  112. 前記T細胞が、疾患または状態を有する対象に由来し、かつ疾患または状態に関連するかまたはそれによって発現される抗原に特異的な組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）をコードする核酸が形質導入されており、かつ/または該T細胞が、組換え受容体、任意でCARを含む、請求項111に記載の方法。
  113. 前記容器が、1mL当たり約1500万〜約6000万個の細胞で充填される、請求項78〜96および112のいずれか一項に記載の方法。
  114. 前記容器が、1mL当たり1000万個の細胞で、または1mL当たり約1000万個の細胞で、または1mL当たり1000万個よりも多い細胞で充填される、請求項78〜96、112、および113のいずれか一項に記載の方法。
  115. 前記容器が、1mL当たり1500万個の細胞で、または1mL当たり約1500万個の細胞で、または1mL当たり1500万個よりも多い細胞で充填される、請求項78〜96および112〜114のいずれか一項に記載の方法。
  116. 前記充填が、自動化された方式で実施され、かつ/または閉鎖系で実施される、請求項78〜96および112〜115のいずれか一項に記載の方法。
  117. 前記容器が別の溶液で充填され、該溶液が、凍結保護剤、任意でDMSOを含む、請求項78〜96および112〜116のいずれか一項に記載の方法。
  118. 細胞を前記容器内で凍結する工程、または前記容器を80℃未満もしくは約80℃未満の温度で保存する工程をさらに含む、請求項78〜96および112〜117のいずれか一項に記載の方法。
  119. 前記容器が、バイアルであるかまたはバッグである、請求項78〜96および112〜118のいずれか一項に記載の方法。
  120. 前記容器がバイアル、任意で低温貯蔵バイアルであり、かつ該容器が、20 mL以下、任意で、1 mL〜20 mL、1 mL〜15 mL、1 mL〜10 mL、1 mL〜5 mL、1 mL〜2.5 mL、2.5 mL〜20 mL、2.5 mL〜15 mL、2.5 mL〜10 mL、2.5 mL〜5 mL、5 mL〜20 mL、5 mL〜15 mL、5 mL〜10 mL、10 mL〜20 mL、10 mL〜15 mL、または15 mL〜20 mLの体積まで組成物で充填されている、請求項78〜96および112〜119のいずれか一項に記載の方法。
  121. 前記容器がバッグ、任意で凍結バッグであり、かつ該容器が、
    それぞれ両端の値を含む、15 mL〜150 mLもしくは約15 mL〜150 mL、20 mL〜100 mLもしくは約20 mL〜100 mL、20 mL〜80 mLもしくは約20 mL〜80 mL、20 mL〜60 mLもしくは約20 mL〜60 mL、20 mL〜40 mLもしくは約20 mL〜40 mL、40 mL〜100 mLもしくは約40 mL〜100 mL、40 mL〜80 mLもしくは約40 mL〜80 mL、40 mL〜60 mLもしくは約40 mL〜60 mL、60 mL〜100 mLもしくは約60 mL〜100 mL、60 mL〜80 mLもしくは約60 mL〜80 mL、または80 mL〜100 mLもしくは約80 mL〜100 mLである；あるいは
    少なくとも15 mLもしくは少なくとも約15 mL、少なくとも20 mLもしくは少なくとも約20 mL、少なくとも30 mLもしくは少なくとも約30 mL、少なくとも40 mLもしくは少なくとも約40 mL、少なくとも50 mLもしくは少なくとも約50 mL、少なくとも60 mLもしくは少なくとも約60 mL、少なくとも70 mLもしくは少なくとも約70 mL、少なくとも80 mLもしくは少なくとも約80 mL、または少なくとも90 mLもしくは少なくとも約90 mLである；かつ/あるいは
    100 mL以下である
    体積まで組成物で充填されている、請求項78〜96および112〜120のいずれか一項に記載の方法。
  122. 前記容器が、
    それぞれ両端の値を含む、0.1 cm-1〜100 cm-1もしくは約0.1 cm-1〜100 cm-1、1 cm-1〜50 cm-1もしくは約1 cm-1〜50 cm-1、1 cm-1 〜20 cm-1もしくは約1 cm-1 〜20 cm-1、1 cm-1〜10 cm-1もしくは約1 cm-1〜10 cm-1、1 cm-1〜7 cm-1もしくは約1 cm-1〜7 cm-1、1 cm-1〜6 cm-1もしくは約1 cm-1〜6 cm-1、1 cm-1〜3 cm-1もしくは約1 cm-1〜3 cm-1、1 cm-1〜2 cm-1もしくは約1 cm-1〜2 cm-1、2 cm-1〜20 cm-1もしくは約2 cm-1〜20 cm-1、2 cm-1〜10 cm-1もしくは約2 cm-1〜10 cm-1、2 cm-1〜7 cm-1もしくは約2 cm-1〜7 cm-1、2 cm-1〜6 cm-1もしくは約2 cm-1〜6 cm-1、2 cm-1〜3 cm-1もしくは約2 cm-1〜3 cm-1、3 cm-1〜20 cm-1もしくは約3 cm-1〜20 cm-1、3 cm-1〜10 cm-1もしくは約3 cm-1〜10 cm-1、3 cm-1〜7 cm-1もしくは約3 cm-1〜7 cm-1、3 cm-1 〜6 cm-1もしくは約3 cm-1 〜6 cm-1、6 cm-1〜20 cm-1もしくは約6 cm-1〜20 cm-1、6 cm-1〜10 cm-1もしくは約6 cm-1〜10 cm-1、6 cm-1〜7 cm-1もしくは約6 cm-1〜7 cm-1、 7 cm-1〜20 cm-1もしくは約7 cm-1〜20 cm-1、7 cm-1〜10 cm-1もしくは約7 cm-1〜10 cm-1、または7 cm-1〜20 cm-1もしくは約7 cm-1〜20 cm-1である；あるいは
    3 cm-1、4 cm-1、5 cm-1、6 cm-1、7 cm-1、10 cm-1、15 cm-1、もしくは20 cm-1であるか、約3 cm-1、約4 cm-1、約5 cm-1、約6 cm-1、約7 cm-1、約10 cm-1、約15 cm-1、もしくは約20 cm-1であるか、または少なくとも3 cm-1、少なくとも4 cm-1、少なくとも5 cm-1、少なくとも6 cm-1、少なくとも7 cm-1、少なくとも10 cm-1、少なくとも15 cm-1、もしくは少なくとも20 cm-1である、
    体積に対する表面積の比まで組成物で充填されている、請求項78〜96および112〜121のいずれか一項に記載の方法。
  123. 前記組換え受容体がCARである、請求項78〜96および112〜122のいずれか一項に記載の方法。
  124. CARが、抗原に特異的に結合する細胞外抗原認識ドメイン、およびITAMを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、任意で、該細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞内ドメインを含み；かつ/またはCARが、4-1BBのシグナル伝達ドメインを任意で含む共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、請求項123に記載の方法。
  125. 前記T細胞がCD4+またはCD8+である、請求項78〜96および112〜124のいずれか一項に記載の方法。
  126. 前記T細胞が、任意で対象に対して自己由来または同種異系の、初代T細胞である、請求項78〜96および112〜125のいずれか一項に記載の方法。
  127. 前記T細胞組成物が、あるプロセスによって生成され、ここで、
    生物学的に活性を有する細胞の特徴および/またはアポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在の特徴を示す表現型の細胞の、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の頻度、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物における該頻度の平均から、40％以下もしくは30％以下もしくは20％以下もしくは10％以下もしくは5％以下だけ変動する、かつ/または1以下の標準偏差だけそのような平均から変動するか；あるいは
    アポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在を示す表現型の細胞の組成物における、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の頻度、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物の中で、40％以下または20％以下または10％以下だけ変動する、
    請求項34〜96および112〜126のいずれか一項に記載の方法。
  128. 疾患または状態に関連するかまたはそれによって発現される抗原に特異的な組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）を含む細胞の数を含む、治療用T細胞組成物の単位用量であって、
    該細胞の数が、5.0×106〜2.25×107個および約5.0×106〜2.25×107個、5.0×106〜2.0×107個および約5.0×106〜2.0×107個、5.0×106〜1.5×107個および約5.0×106〜1.5×107個、5.0×106〜1.0×107個および約5.0×106〜1.0×107個、5.0×106〜7.5×106個および約5.0×106〜7.5×106個、7.5×106〜2.25×107個および約7.5×106〜2.25×107個、7.5×106〜2.0×107個および約7.5×106〜2.0×107個、7.5×106〜1.5×107個および約7.5×106〜1.5×107個、7.5×106〜1.0×107個および約7.5×106〜1.0×107個、1.0×107〜2.25×107個および約1.0×107〜2.25×107個、1.0×107〜2.0×107個および約1.0×107〜2.0×107個、1.0×107〜1.5×107個および約1.0×107〜1.5×107個、1.5×107〜2.25×107個および約1.5×107〜2.25×107個、1.5×107〜2.0×107個および約1.5×107〜2.0×107個、2.0×107〜2.25×107個および約2.0×107〜2.25×107個の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、単位用量。
  129. 前記細胞の数が、
    少なくとも5×106個または少なくとも約5×106個、少なくとも6×106個または少なくとも約6×106個、少なくとも7×106個または少なくとも約7×106個、少なくとも8×106個または少なくとも約8×106個、少なくとも9×106個または少なくとも約9×106個、少なくとも10×106個または少なくとも約10×106個と、約15×106個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である；
    少なくとも5.55×106個または少なくとも約5.55×106個、少なくとも6.66×106個または少なくとも約6.66×106個、少なくとも7.77×106個または少なくとも約7.77×106個、少なくとも8.99×106個または少なくとも約8.99×106個、少なくとも1.0×107個または少なくとも約1.0×107個、少なくとも1.1×107個または少なくとも約1.1×107個と、約1.67×107個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である；
    少なくとも6.25×106個または少なくとも約6.25×106個、少なくとも7.5×106個または少なくとも約7.5×106個、少なくとも8.75×106個または少なくとも約8.75×106個、少なくとも1.0×107個または少なくとも約1.0×107個、少なくとも1.13×107個または少なくとも約1.13×107個、少なくとも1.25×107個または少なくとも約1.25×107個と、約1.9×107個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である；
    少なくとも7.14×106個または少なくとも約7.14×106個、少なくとも8.5×106個または少なくとも約8.5×106個、少なくとも1.0×107個または少なくとも約1.0×107個、少なくとも1.14×107個または少なくとも約1.14×107個、少なくとも1.29×107個または少なくとも約1.29×107個、少なくとも1.42×107個または少なくとも約1.42×107個と、約2.14×107個との間の組換え受容体発現細胞、任意で、CD8+であるかまたはアポトーシスマーカー陰性（-）かつCD8+である組換え受容体発現細胞であり、任意で、該アポトーシスマーカーがアネキシンVまたは活性カスパーゼ3である、
    請求項128に記載の単位用量。
  130. 前記単位用量が、参照単位（RU）の閾値数よりも多くを含有せず、所与の組成物におけるRUの数が、以下の式によって定義され：
    RU＝A×B
    式中、Aは、所与の組成物中に存在する表現型の細胞の細胞の数、またはその倍数もしくは変換であるか、あるいは所与の組成物中の2つ以上の表現型の細胞の数、またはその倍数、分数、もしくは変換の平均または加重平均であり；かつ
    Bは、所与のT細胞組成物における組換え受容体依存性、任意でCAR依存性の活性の程度を示すかまたはそれと相関するパラメータの値、またはその倍数もしくは変換である、
    請求項128または請求項129に記載の単位用量。
  131. 前記参照単位の閾値数が、単位の参照安全数よりも小さく、該単位の参照安全数が、組換え受容体、任意でCARを発現するT細胞を含む治療用T細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、有害事象を発生した群における対象内の対象に投与された治療法の単位の最低数であり、任意で、該有害事象が、重度の有害事象、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上の重度の神経毒性または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である、請求項130に記載の単位用量。
  132. 前記単位の閾値数が、安全係数に対応する量だけ、および/または1.5〜3倍の範囲内、任意で約2倍の量だけ、または有害事象を発生しなかった対象の群に投与された治療用T細胞組成物の単位の平均数の標準偏差の倍数である量だけ、単位の参照安全数よりも小さく、任意で、該対象の群がグレード0〜2の神経毒性を示し、任意で、該倍数が1.5〜3倍の範囲内である、請求項130または請求項131に記載の単位用量。
  133. 前記単位の閾値数が、単位の参照有効数以上であり、該参照有効数が、組換え受容体、任意でCARを含むT細胞組成物での処置後に解析された対象の群に関して、所望の治療転帰、任意で完全奏効（CR）を示した群の中の1または複数の対象に投与された治療法の単位の数である、請求項130〜132のいずれか一項に記載の単位用量。
  134. 前記組成物中のCD8+細胞および/またはCD8+CAR+細胞のうちの少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも75％、少なくとも80％、または少なくとも90％が、アポトーシスマーカーについて陽性ではないか、アポトーシス性ではないか、またはアポトーシスの早期ではないか、またはアポトーシスの後期ではない、請求項130〜133のいずれか一項に記載の単位用量。
  135. 前記T細胞組成物が、あるプロセスによって生成され、ここで、
    生物学的に活性を有する細胞の特徴および/またはアポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在の特徴を示す表現型の細胞の、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の頻度、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物における該頻度の平均から、40％以下もしくは30％以下もしくは20％以下もしくは10％以下もしくは5％以下だけ変動する、かつ/または1以下の標準偏差だけそのような平均から変動するか；あるいは
    アポトーシスまたは早期もしくは後期のアポトーシスの非存在を示す表現型の細胞の組成物における、（1）組成物におけるCAR+細胞の中の頻度、（2）組成物におけるCAR+CD3+細胞の中の頻度、および/または（3）組成物におけるCAR+CD8+細胞の中の頻度が、プロセスによって生成される多数のT細胞組成物の中で、40％以下または20％以下または10％以下だけ変動する、
    請求項130〜134のいずれか一項に記載の単位用量組成物。
  136. 組換え受容体発現細胞の用量を以前に投与されている対象の血液試料における組換え受容体発現細胞の数をアッセイする工程を含む、対象に毒性の危険性があるかを判定する方法であって、組換え受容体発現細胞のピーク増大が、細胞療法の投与の7日以内または約7日以内に起こる場合は、該対象に毒性の発生の危険性がある、方法。
  137. 組換え受容体発現細胞の用量を以前に投与されている対象の血液試料における組換え受容体発現細胞の数をアッセイする工程を含む、対象に毒性の危険性があるかを判定する方法であって、
    （i）投与の開始後4日以内に、対象の血液試料における組換え受容体発現細胞の数が、1マイクロリットル当たり少なくとも2個もしくは少なくとも約2個の組換え受容体発現細胞である場合；
    （ii）投与の開始後5日または6日以内に、対象の血液試料における組換え受容体発現細胞の数が、1マイクロリットル当たり少なくとも5個もしくは少なくとも約5個の組換え受容体発現細胞であるか、または1マイクロリットル当たり少なくとも10個もしくは少なくとも約10個の組換え受容体発現細胞である場合；または
    （iii）投与の開始後7日以内に、対象の血液試料における組換え受容体発現細胞の数が、1マイクロリットル当たり少なくとも15個もしくは少なくとも約15個の組換え受容体発現細胞である場合は、
    該対象に毒性の発生の危険性がある、方法。
  138. （a）疾患または状態を有する対象に、組換え受容体を発現する細胞の用量を投与する工程；および
    （b）細胞を投与した後、対象の血液における組換え受容体発現細胞の数をアッセイする工程
    を含む、対象に毒性の危険性があるかを判定する方法であって、
    （i）投与の開始後4日以内に、対象の血液試料における組換え受容体発現細胞の数が、1マイクロリットル当たり少なくとも2個もしくは少なくとも約2個の組換え受容体発現細胞である場合；
    （ii）投与の開始後5日または6日以内に、対象の血液試料における組換え受容体発現細胞の数が、1マイクロリットル当たり少なくとも5個もしくは少なくとも約5個の組換え受容体発現細胞であるか、または1マイクロリットル当たり少なくとも10個もしくは少なくとも約10個の組換え受容体発現細胞である場合；または
    （iii）投与の開始後7日以内に、対象の血液試料における組換え受容体発現細胞の数が、1マイクロリットル当たり少なくとも15個もしくは少なくとも約15個の組換え受容体発現細胞である場合は、
    該対象に毒性の発生の危険性がある、方法。
  139. さらに、対象由来の血液または血清試料において検出されるインターロイキン-15（IL-15）のレベル、量、または濃度が閾値以上である場合は、対象に毒性を発生する危険性があり、任意で、該閾値が30 pg/mLであり、任意で、該試料が、細胞療法の投与の開始後1日、2日、3日、4日、もしくは5日目に、または約1日、約2日、約3日、約4日、もしくは約5日目に、または1日以内、2日以内、3日以内、4日以内、もしくは5日以内に対象から得られる、請求項136〜139のいずれか一項に記載の方法。
  140. 組換え受容体発現細胞の用量を以前に投与されている対象の血液または血清試料におけるインターロイキン-15（IL-15）のレベル、量、または濃度をアッセイする工程を含む、対象に毒性の危険性があるかを判定する方法であって、
    検出されるインターロイキン-15（IL-15）のレベル、量、または濃度が閾値以上である場合は、該対象に毒性の発生の危険性があり、任意で、該閾値が30 pg/mLであり、任意で、該試料が、細胞療法の投与の開始後1日、2日、3日、4日、もしくは5日目に、または約1日、約2日、約3日、約4日、もしくは約5日目に、または1日以内、2日以内、3日以内、4日以内、もしくは5日以内に対象から得られる、方法。
  141. （a）疾患または状態を有する対象に、組換え受容体を発現する細胞の用量を投与する工程；および
    （b）細胞を投与した後、対象の血液または血清試料におけるインターロイキン-15（IL-15）のレベル、量、または濃度をアッセイする工程
    を含む、対象に毒性の危険性があるかを判定する方法であって、
    検出されるインターロイキン-15（IL-15）のレベル、量、または濃度が閾値以上である場合は、該対象に毒性の発生の危険性があり、任意で、該閾値が30 pg/mLであり、任意で、該試料が、細胞療法の投与の開始後1日、2日、3日、4日、もしくは5日目に、または約1日、約2日、約3日、約4日、もしくは約5日目に、または1日以内、2日以内、3日以内、4日以内、もしくは5日以内に対象から得られる、方法。
  142. 前記毒性が、グレード4以上もしくはグレード5以上の神経毒性、または少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性である、請求項136〜141のいずれか一項に記載の方法。
  143. 対象に毒性を発生する危険性があると判定された場合は、組換え受容体発現細胞の投与を中断する、より少ない用量の組換え受容体発現細胞の用量を該対象に投与する、異なる組換え受容体を発現する細胞を該対象に投与する、および/または、毒性の発生を処置する、予防する、遅延させる、または減衰させることができる作用物質を該対象に投与する、請求項16〜142のいずれか一項に記載の方法。
  144. （a）組換え受容体依存性の活性または表現型について、試験条件または原材料の存在下で生成されたT細胞組成物を評価する工程；および
    （b）組換え受容体依存性の活性または表現型を、対照組成物から生成された同じ活性もしくは表現型と、または組換え受容体依存性の活性もしくは表現型について標準単位と比較する工程
    を含む、治療用T細胞組成物の生成における使用について条件または原材料を評価するための方法であって、
    試験条件または原材料を用いて生成された細胞組成物の組換え受容体依存性の活性または表現型が、対照組成物によって生成された同じ活性から、または標準単位から、40％以下または30％以下または20％以下または10％以下または5％以下だけ変動する場合は、該試験条件または原材料が、T細胞組成物を生成するための方法における使用についての放出に適していると判定される、方法。
  145. （i）生物学的試料からのT細胞の集団の選択、それによる投入組成物の取得；
    （ii）T細胞を含む該投入組成物と、組換え受容体をコードする核酸分子を含む作用物質との、集団における細胞中に組換え受容体をコードする核酸を導入する条件下でのインキュベーションであって、任意で、該組換え受容体をコードする核酸分子を含む作用物質が、ウイルスベクター、任意でレンチウイルスベクターまたはガンマレトロウイルスベクターである、インキュベーション；ならびに
    （iii）該インキュベーションの前、その最中、および/またはその後の細胞の刺激であって、一次シグナル、シグナル伝達、刺激、活性化、および/または細胞の増大を誘導する刺激条件の存在下での細胞のインキュベーションを含む、刺激
    を含むプロセスによって、前記治療用T細胞組成物が生成され、ここで、試験条件または原材料は、段階（i）〜（iii）のうちの1つまたは複数に存在する、請求項144に記載の方法。
  146. 前記試験条件または原材料が、血清の存在もしくは濃度；血清のタイプもしくは量、培養における時間；刺激条件の存在もしくは量；刺激条件のタイプもしくは量；アミノ酸の存在もしくは量；温度；投入組成物の供給源もしくは細胞タイプ；投入組成物における細胞タイプの比もしくはパーセンテージ、任意でCD4+/CD8+細胞比；ビーズの存在もしくは量；細胞密度；静置培養；振盪培養；灌流；ウイルスベクターのタイプ；ベクターコピー数；形質導入アジュバントの存在；凍結保存における投入組成物の細胞密度；組換え受容体の発現の程度；または細胞表現型を調節する化合物の存在を含む、請求項144または請求項145に記載の方法。
  147. 前記試験条件または原材料が、刺激条件の存在を含み、該刺激条件が、TCR複合体の1つもしくは複数の成分の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、および/または1つもしくは複数の共刺激分子の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる試薬とのインキュベーションを含む、請求項145または請求項146に記載の方法。
  148. 刺激試薬が、TCR複合体の1つもしくは複数の成分の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメイン、および/または1つもしくは複数の共刺激分子の1つもしくは複数の細胞内シグナル伝達ドメインを活性化することができる、請求項147に記載の方法。
  149. 刺激試薬が、TCR複合体のメンバーに特異的に結合する一次作用物質、およびT細胞共刺激分子に特異的に結合する二次作用物質を含む、請求項147または請求項148に記載の方法。
  150. 前記一次作用物質が、CD3に特異的に結合し、かつ/または前記共刺激分子が、CD28、CD137（4-1-BB）、OX40、もしくはICOSからなる群より選択される、請求項149に記載の方法。
  151. 前記一次作用物質および二次作用物質が、抗体を含み、かつ/または固体支持体、任意でビーズの表面上に存在する、請求項149または請求項150に記載の方法。
  152. 前記対照組成物およびT細胞組成物が、対照組成物が対照の条件または原材料の存在下で実施される以外は、同じ細胞の集団由来を含み、同じプロセスを用いて生成される、請求項144〜151のいずれか一項に記載の方法。
  153. 前記対照が、原材料または条件の対照ロットまたは標準である、請求項152に記載の方法。
  154. 前記方法が、試験条件または原材料の存在下で生成された多数の治療用T細胞組成物に対して実施され、
    試験条件または原材料を用いて生成された多数の細胞組成物のそれぞれの組換え受容体依存性の活性または表現型が、対照組成物によって生成された同じ活性から、または標準単位から、40％以下または30％以下または20％以下または10％以下または5％以下だけ変動する場合は、試験原材料または条件が、治療用T細胞組成物を生成するための方法における使用についての放出に適していると判定される、
    請求項144〜153のいずれか一項に記載の方法。
  155. 前記組換え受容体依存性の活性が、抗原特異的な活性である、請求項144〜154のいずれか一項に記載の方法。
  156. 前記組換え受容体依存性の活性が、組換え受容体依存性のまたは抗原特異的依存性の、炎症誘発性サイトカインの産生または蓄積であり、任意で、該炎症誘発性サイトカインが、IL-2、TNFα、IFNγ、またはIL-10である、請求項144〜155のいずれか一項に記載の方法。
  157. 前記表現型が、特定の分化状態および/またはメモリー/ステム様表現型を含む、請求項144〜156のいずれか一項に記載の方法。
  158. 前記表現型が、CD3、CD8、CD27、CD28である表面マーカーの陽性発現を含む、かつ/または組換え受容体、任意でCAR、もしくは組換え受容体の発現についての代理マーカーの陽性発現を含む、請求項144〜157のいずれか一項に記載の方法。
  159. 前記表現型がCD27+/CD28+/CD8+を含む、請求項144〜158のいずれか一項に記載の方法。
  160. 請求項111〜127のいずれか一項に記載の方法によって生成される治療用T細胞組成物を含む、細胞組成物。
  161. 疾患または状態を有する対象に、請求項160に記載の細胞組成物、または請求項128〜135のいずれか一項に記載の細胞の1つもしくは複数の単位用量を投与する工程を含む、処置の方法。
  162. 前記方法に従って処置された対象の50％、60％、70％、もしくは80％よりも多く、または約50％、約60％、約70％、もしくは約80％よりも多くが、グレード3以上のサイトカイン放出症候群（CRS）を示さず、かつ/またはグレード3以上の神経毒性、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上のまたは少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性を示さず、かつ/あるいは、該方法に従って処置された対象の40％または50％または55％よりも多くが、いかなる神経毒性もCRSも示さない、請求項34〜63および161のいずれか一項に記載の方法。
  163. 前記方法に従って処置された全対象と比較した際に、該方法が、
    （i）治療用T細胞組成物の投与の開始の前に、より少数の事前療法、任意で2つ未満の事前療法を受けていた対象、（ii）若い年齢、任意で30歳未満の対象、（iii）対象由来のアフェレーシス試料におけるCD4:CD8の比が、ある特定の閾値よりも下、任意で1:1よりも下もしくは1.5:1よりも下もしくは0.5:1よりも下であるかまたはそれよりも低く、任意で、投与される用量が、全T細胞または組換え受容体を発現する全T細胞に基づく、対象；（iv）処置された対象の群の中で平均体重よりも重い体重を有する対象；（v）120,000未満もしくは約120,000未満の血小板数を有する対象；（vi）B細胞白血病、任意で急性リンパ球性白血病（ALL）を有する対象；（vii）任意で、5％以上の骨髄芽球のパーセント、積和直径（SPD）、もしくは乳酸デヒドロゲナーゼのレベルに基づいて判定されるような、治療用T細胞組成物の投与の開始の前に、例えばその直前にもしくはその1か月前以内に、高い疾患負荷を有する対象；または（ix）治療用T細胞組成物の投与の開始の前に、架橋化学療法を受けていた対象；（x）治療用T細胞組成物の投与の開始の前に、任意でフルダラビンおよび/もしくはシクロホスファミドの投与を含むリンパ球枯渇療法で前調整されていた対象；ならびに/または（xi）治療用T細胞組成物の投与の開始の前に、血液試料におけるインターロイキン-15（IL-15）のレベル、量、または濃度が、閾値よりも大きいかまたは同等であり、任意で、該閾値が30 pg/ml血清である、対象
    の中で、重度の有害副作用の発生率においていかなる有意な差も結果としてもたらさない、請求項34〜63、161および162のいずれか一項に記載の方法。
  164. 前記重度の有害副作用が、グレード3以上の神経毒性、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上のまたは少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性であるか、または脳浮腫である、請求項163に記載の方法。
  165. 前記治療用T細胞組成物の投与が、該治療用T細胞組成物の投与の前にもしくはそれと同時に、および/または発熱以外の毒性の徴候もしくは症状の発生の前に、毒性の発生を処置する、予防する、遅延させる、または減衰させることができる作用物質または処置を投与することを含まない；かつ/または
    任意で、対象が、持続性の発熱、または解熱薬での処置後に1℃よりも大きく低減するかもしくは低減していないかもしくは低減しない発熱を示さない限り、または示すまで、外来患者設定の対象に、および/または一晩、もしくは1日もしくは複数の連続する日数にわたる病院への対象の入院を伴わずに、および/または1日もしくは複数日にわたる病院への対象の入院を伴わずに、前記治療用T細胞組成物の投与が投与されるべきであるかまたは投与されてもよい、
    請求項34〜63および161〜165のいずれか一項に記載の方法。
  166. 1つまたは複数の危険因子の有無に基づいて、対象に処置レジメンを割り当てる工程を含む、治療用T細胞組成物を投与するための治験を設計する方法であって、
    対象が1つまたは複数の危険因子を含まない場合は、該対象は第1の用量の治療用T細胞組成物を受けるように割り当てられ、対象が危険因子のうちの1つまたは複数を含む場合は、該対象は第2の用量の治療用T細胞を受けるように割り当てられ、第2の用量は第1の用量よりも少なく、
    該1つまたは複数の危険因子が、
    （i）治療用T細胞組成物の投与の開始の前に、より少数の事前療法、任意で2つ未満の事前療法を受けていた対象、（ii）若い年齢、任意で30歳未満の対象、（iii）対象由来のアフェレーシス試料におけるCD4:CD8の比が、ある特定の閾値よりも下、任意で1:1よりも下もしくは1.5:1よりも下もしくは0.5:1よりも下であるかまたはそれよりも低く、任意で、投与される用量が、全T細胞または組換え受容体を発現する全T細胞に基づく、対象；（iv）処置された対象の群の中で平均体重よりも重い体重を有する対象；（v）120,000未満もしくは約120,000未満の血小板数を有する対象；（vi）B細胞白血病、任意で急性リンパ球性白血病（ALL）を有する対象；（vii）任意で、5％以上の骨髄芽球のパーセント、積和直径（SPD）、もしくは乳酸デヒドロゲナーゼのレベルに基づいて判定されるような、治療用T細胞組成物の投与の開始の前に、例えばその直前にもしくはその1か月前以内に、高い疾患負荷を有する対象；または（ix）治療用T細胞組成物の投与の開始の前に、架橋化学療法を受けていた対象；（x）治療用T細胞組成物の投与の開始の前に、任意でフルダラビンおよび/もしくはシクロホスファミドの投与を含むリンパ球枯渇療法で前調整されていた対象；ならびに/または（xi）治療用T細胞組成物の投与の開始の前に、血液試料におけるインターロイキン-15（IL-15）のレベル、量、または濃度が、閾値よりも大きい、対象
    から選択される、方法。
  167. 第2の用量の細胞の数または組換え受容体発現細胞の数が、第1の用量の細胞の数または組換え受容体発現細胞の数の1.5倍未満もしくは約1.5倍未満、2.0倍未満もしくは約2.0倍未満、3.0倍未満もしくは約3.0倍未満、4.0倍未満もしくは約4.0倍未満、5.0倍未満もしくは約5.0倍未満、または10倍未満もしくは約10倍未満である、請求項166に記載の方法。
  168. 第2の用量を多数の対象に投与した後に、第2の用量で処置された対象の50％よりも多くもしくは約50％よりも多く、60％よりも多くもしくは約60％よりも多く、70％よりも多くもしくは約70％よりも多く、または80％よりも多くもしくは約80％よりも多くが、グレード3以上のサイトカイン放出症候群（CRS）を示さなかった、かつ/またはグレード3以上の神経毒性、任意で、グレード4以上もしくはグレード5以上のまたは少なくとも長期にわたるグレード3の神経毒性を示さない場合は、および/または、前記方法に従って処置された対象の40％もしくは50％もしくは55％よりも多くが、いかなる神経毒性もしくはCRSも示さない場合は、用量を増加させる工程をさらに含む、請求項166または請求項167に記載の方法。
  169. 前記治療用T細胞組成物が、疾患または状態に関連する抗原に特異的に結合する組換え受容体、任意でキメラ抗原受容体（CAR）を含むT細胞を含む、請求項166〜168のいずれか一項に記載の方法。
  170. 前記組換え受容体がCARである、請求項169に記載の方法。
  171. CARが、抗原に特異的に結合する細胞外抗原認識ドメイン、およびITAMを含む細胞内シグナル伝達ドメインを含み、任意で、該細胞内シグナル伝達ドメインが、CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞内ドメインを含み；かつ/またはCARが、4-1BBのシグナル伝達ドメインを任意で含む共刺激シグナル伝達領域をさらに含む、請求項170に記載の方法。
  172. 前記T細胞がCD4+またはCD8+である、請求項166〜171のいずれか一項に記載の方法。
  173. 前記T細胞が初代T細胞であり、任意で、該T細胞が、対象に対して自己由来であるか、または対象に対して同種異系である、請求項166〜172のいずれか一項に記載の方法。
  174. 前記T細胞が初代T細胞であり、任意で、該T細胞が、対象に対して自己由来であるか、または対象に対して同種異系である、請求項166〜172のいずれか一項に記載の方法。
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