JP2020506201A - 銅−ヒドロキシピロン錯体を含む抗微生物組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
さらなる側面において、本発明は、微生物感染症を処置する方法における使用のための、例えば抗細菌感染症、例えばMRSA感染症の処置のための本明細書で記載される抗細菌組成物を提供する。他の使用において、本発明の組成物は、例えば創傷の処置において予防的に用いられることができる。
さらなる側面において、本発明は、本発明の抗細菌組成物の微生物感染の処置または予防のための医薬品の調製のための使用を提供する。
本発明の抗細菌組成物は、抗細菌剤または抗微生物剤としての使用のために、例えば細菌または微生物感染症の処置または予防のために配合されることができる。従って、本発明の組成物は、本発明の固相材料の1種類以上に加えて、薬学的に許容可能な賦形剤、キャリヤー、緩衝剤、安定化剤または当業者に周知の他の材料を含むことができる。そのような材料は、非毒性であるべきであり、かつ問題の適用に関する固相材料の有効性に有意に干渉すべきでない。
ストック
40mM銅ストックが、0.347gの塩化銅二水和物を50mLの水中で溶解させることにより調製された。結果として生じた溶液は、青色だった。
銅およびマルトールのストックを、水中で1:1の比率(v:v)で混合し、緑色の溶液を生成した。次いで、酸化還元的変換を加速するためにpHを水酸化ナトリウムで11.8に調節した。一夜で、赤色沈殿(水酸化第一銅)がバイアルの底で堆積した。
30%(w/w)PEGが添加されたこと以外は、実験Aと同じであった。水酸化第一銅への変換は、数日後でさえも観察されなかった。
PEG軟膏の調製
PEG軟膏の一般的調製
PEG軟膏は、一般に1)ポリエチレングリコール(PEG)およびプロピレングリコール(PPG)を含むPEGベースの相ならびに2)銅およびシリケート材料を含む水相で構成される。30gのPEGベースの軟膏を調製するため、11.4gのポリエチレングリコール3350(PEG3350)、9.75gのPEG400および3.81gのプロピレングリコール(PPG)が、別々のfalconチューブ中に量り取られ、PEG3350が完全に融解するまで65℃まで加熱された。PEG400およびPPGが、まず100mlビーカー中で混合され、次いで融解したPEG3350が添加され、オーバーヘッド撹拌機を用いて混合された。銅材料が、表1の通りに調製され、次いで5mlの水相が、(下の表の通りに)PEG混合物に添加された。最後に、pHが、6M HClまたは5M NaOHの溶液を用いて7〜8に調節された(pH試験紙で測定された)。最終的な軟膏は、少なくとも5分間混合され、一夜凝固させるために適切な容器中に移された。
Cu−EDTA錯体は、CuCl2.2H2Oおよびエチレンジアミン四酢酸(EDTA)二ナトリウム二水和物をUHP水中で溶解させることにより新しく調製された。pHは、1M NaOHにより7.5±0.2に調節された。銅の濃度を20mM(約1270ppm)で維持する一方で、EDTAの濃度を変化させ(20および200mM)、そうしてそれぞれ1:1および1:10のCu−EDTA比を達成することにより、様々なCu:EDTA比が達成された。
重金属MOPS(HMM)培地、pH7.2±0.2。
HMMは、重金属を試験するために開発された限定培地であり、本明細書ではグルコースおよびcas−アミノ酸(カゼインの酸加水分解物)ならびに場合により4%BSAを補われた。HMMは、それぞれの試薬の濃縮ストック溶液から調製され、pHをpH7.2±0.2に調節された(表1)。新しく調製された培地は、すぐに0.22ミクロンの膜を通して濾過され、4±2℃で保管された。
抗微生物活性が、銅化合物の存在下での大腸菌NCTC1110の増殖阻害の決定を通して評価された。比濁測定アッセイが、時間の経過にわたる細菌濃度(これは液体培地中の光学密度(595nmにおけるOD)に比例するため)を追跡するために用いられた。細菌培養物は、HMM中で30℃において一定の振盪(80rpm)の下で一夜増殖させられた。アッセイの日に、細菌懸濁液のODが、595nmにおいてプレートリーダー上で測定され、HMM中で0.05のODを達成するように希釈された。銅ストック溶液(“銅錯体の調製”の節を参照)が、0.1mlの体積中で0.8〜100mg/L Cuの典型的な濃度を達成するためにHMM(4%BSAを含む、または含まない)中で系列希釈された。次に、0.1mlの細菌培養物が添加され、30℃において一定の撹拌(80rpm)の下で銅と共にインキュベートされた。アッセイにおける最終的な銅濃度は、0.4〜50ppmの範囲であり、ODが6〜8時間の典型的な期間の間1時間ごとに測定された。ODのバックグラウンド、すなわち細菌によって引き起こされたのではないOD吸光度が、銅およびブロス由来の読み取りの干渉を除去するために決定された。増殖阻害は、以下のように計算された:
OD銅:培地+一致する濃度の銅(細菌なし)のODの減算後の、銅の存在下でHMM中でインキュベートされた細菌のOD。
PEG軟膏は、(別途記載されない限り)アッセイの前日に調製され、0.05mlまたは0.1ml(それぞれ細菌培養物の体積の10%および20%が添加された)が、注射器により24ウェルプレート上のウェル中に移された。0.5mlのタンパク質無含有HMM中の大腸菌NCTC11100培養物(銅溶液に関する抗微生物アッセイにおいて記載されたように調製された)が、軟膏の上に添加され、30℃において撹拌(80rpm)しながら24時間培養された。0、6および24時間の時点で、細菌増殖を追跡するために0.1mlが収集され、OD595nmが測定された。PEG軟膏の殺細菌作用が、6時間のインキュベーション後のPEGに曝露した細菌培養物5μlを収集して寒天プレート上に移すことにより評価された。30℃における一夜のインキュベーション後、寒天プレートは、大腸菌コロニーの存在に関して調べられた。
誘導結合プラズマ発光分光分析(ICP−OES)が、元素銅濃度を決定するために用いられた。全ての試料が、銅材料を完全に溶解させるために分析の少なくとも24時間前に5% HNO3(v/v)中で希釈された。較正標準は、0.1〜100ppmの範囲で5% HNO2中でマトリックスマッチングされた。銅の検出のために用いられた線は、324.754nmであった。
250nmのそれぞれの軟膏が、エッペンドルフチューブ中に移され、5000rpmにおいて2分間遠心分離された。次に、0.75mlの50mM NaHCO3の溶液(pH7.0)が、軟膏を含有するエッペンドルフチューブ中に注意深く移された。そのチューブが、室温で(撹拌せずに)静置され、約500mlの分割量が、上部から収集され、ICP−OESにより分析された(銅濃度)。
ブタモデルが、PEG軟膏のメチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス(MRSA)に対する有効性を調べるために用いられた。深達性部分層創傷(10mm×7mm×1.0mm)が、ブタの傍脊椎および胸部領域において7mmブレードを装着した特殊なエレクトロケラトームにより切り込まれ、創傷は、互いに2〜3cm隔てられた。創傷を負わせた直後に、25μlの105CFU/ml MRSA USA300懸濁液が、それぞれの創傷中に接種され、20分以内に、全ての創傷が、約200mgの軟膏で処置された。ポリウレタンの包帯が、軟膏の適用後にそれぞれの創傷を覆うために用いられた。0日目〜4日目に、処置は1日2回適用され、この後(5日目〜8日目)、用量は1日あたり1回の処置のみに減らされた。4日目および8日目に、皮膚生検が収集され、形成されたMRSAコロニーの数が、生検の質量あたりの細菌の総濃度(CFU/g)を得るために決定された。
臨床での抗微生物的使用に関して意図される銅組成物は、銅を殺細菌的に利用可能な形態で送達することが必要とされる。強い錯体形成剤は、生理学的流体を含む溶液中で銅を維持し、従って殺生物性銅に関する良好な送達ビヒクルであることが予想される。しかし、銅EDTAにより説明されるように、銅に関する過剰な親和性を有する配位子は、この金属を細菌との相互作用に利用不能にし、そうしてその抗細菌作用を有意に抑制する(図1)。銅塩類、例えば塩化銅は、遊離の銅を細菌に提供することができ、従って強い銅錯体よりも有利である。しかし、それらの殺細菌作用は、生物学的に関連する構成要素、例えばタンパク質の存在下で大きく減少する。この制限は、タンパク質は生理学的流体、例えば創傷滲出液中で豊富な構成要素であるため、臨床的に関連している。銅がタンパク質と相互作用するのを防ぐための明らかな解決策は、強い銅錯体を用いることであろうが、示されたように、これらは、細菌に対しては有効ではない。本明細書で提供される結果は、両親媒性錯体、例えばマルトールの使用は、これらの問題を大いに克服することを示している。これは、銅をBSAを含む細菌培地中でインキュベートすることにより実証された:銅マルトールは、40ppm銅において大腸菌増殖を完全に抑制したが、塩化銅のみでは、50ppm銅において60%阻害しか達成しなかった(図2)。
驚くべきことに、銅マルトールを含有するPEG軟膏は、調製から3週間より長い期間の後にそれらが豚モデルにおいて調製の数日後よりも有効であるように見えるように(皮膚生検1グラムあたりのMRSAのコロニー形成単位の対数がそれぞれ1.6対数CFU/g対5.1対数CFU/gであるように)、それらが古くなった際により有効になることが、さらに特筆された。いずれかの特定の理論により束縛されることを望むわけでは一切ないが、著者らは、2つの構成要素の間の関係は時間の経過により局所的抗微生物活性に関してより有利になると信じている。
Claims (27)
- ポリアルキレングリコールおよび銅ヒドロキシピロン錯体を含む抗細菌組成物。
- 請求項1に記載の抗細菌組成物であって、該銅ヒドロキシピロン化合物が、マルトールおよび/またはエチルマルトールを含む抗細菌組成物。
- 該組成物が、少なくとも10%(w/w)のポリアルキレングリコール、場合により少なくとも30%(w/w)のポリアルキレングリコール、場合により少なくとも50%(w/w)のポリアルキレングリコールを含む、請求項1または請求項2に記載の抗細菌組成物。
- 該PEG軟膏が、銅マルトールを含む、先行する請求項のいずれか1項に記載の抗細菌組成物。
- 該銅マルトール−PEG会合体が、銅マルトールを酸化還元的分解から保護する、先行する請求項のいずれか1項に記載の抗細菌組成物。
- 該ポリアルキレングリコールが、1種類以上のポリエチレングリコール類(PEG)および/または1種類以上のポリプロピレングリコール類である、先行する請求項のいずれか1項に記載の抗細菌組成物。
- 該ポリアルキレングリコールが、1種類以上のポリエチレングリコール類と1種類以上のポリプロピレングリコール類との組み合わせ、例えばPEG400、PEG3350とポリプロピレングリコールとの組み合わせ、を含む、請求項6に記載の抗細菌組成物。
- 該組成物が、軟膏またはクリームである、先行する請求項のいずれか1項に記載の抗細菌組成物。
- 銅対マルトールの比率が、1:0.5〜1:10または1:1〜1:5または1:1〜1:4である、先行する請求項のいずれか1項に記載の抗細菌組成物。
- 該組成物が、シリケート組成物である、先行する請求項のいずれか1項に記載の抗細菌組成物。
- 該シリケート組成物が、ナノシリケートである、請求項10に記載の組成物。
- 微生物感染症を処置する方法における使用のための、先行する請求項のいずれか1項に記載の抗細菌組成物。
- 該組成物がヒトの対象の処置における使用のためのものである、請求項12に記載の処置の方法における使用のための抗細菌組成物。
- 該組成物が非ヒト哺乳類の処置における使用のためのものである、請求項12に記載の処置の方法における使用のための抗細菌組成物。
- 該抗細菌組成物が局所投与される、請求項12〜14のいずれか1項に記載の処置の方法における使用のための抗細菌組成物。
- 該組成物が獣医学的使用のためのものである、請求項14に記載の処置の方法における使用のための抗細菌組成物。
- 該組成物がイヌ、ネコまたはウマの処置における使用のためのものである、請求項14〜16のいずれか1項に記載の処置の方法における使用のための抗細菌組成物。
- 該組成物が細菌感染症の処置のためのものである、請求項12〜17のいずれか1項に記載の処置の方法における使用のための抗細菌組成物。
- 該細菌感染症がグラム陰性またはグラム陽性細菌により引き起こされる、請求項13〜18のいずれか1項に記載の処置の方法における使用のための抗細菌組成物。
- 該細菌感染症がMRSA感染症の処置である、請求項18または19に記載の処置の方法における使用のための抗細菌組成物。
- 創傷の処置のための方法における使用のための、請求項12〜20のいずれか1項に記載の処置の方法における使用のための抗細菌組成物。
- 該細菌感染症が、エスケリキア属の種、例えば大腸菌、スタフィロコッカス属の種、例えばS.エピデルミス、S.アウレウスおよびメチシリン耐性スタフィロコッカス・アウレウス(“MRSA”)、バシラス属の種、例えばB.サブチリス、シュードモナス属の種、例えばP.エルジノーサ、ビブリオ属の種、例えばV.フィシェリ、ストレプトコッカス属の種、例えばS.ピオゲネスおよびS.ニューモニエ、クレブシエラ属の種、マイクロコッカス属の種、例えばM.ルテウス、クロストリジウム属の種、例えばC.ディフィシル、アシネトバクター属の種、例えばA.バウマニ、マイコバクテリウム属の種、例えばM.ツベルクローシスもしくはサルモネラ属の種、クラミジア属の種、または真菌種、例えばカンジダ属の種、例えばC.アルビカンスにより引き起こされる、請求項18〜21のいずれか1項に記載の処置の方法における使用のための抗細菌組成物。
- 請求項1〜11のいずれか1項に記載の抗細菌組成物、および薬学的に許容可能なキャリヤーを含む、医薬組成物。
- 該組成物が、局所送達のために配合される、請求項23に記載の医薬組成物。
- 微生物感染の処置または予防のための医薬品の調製のための、請求項1〜11のいずれか1項に記載の抗細菌組成物の使用。
- 微生物感染症を処置または予防する方法であって、該方法が、処置を必要とする患者に療法上有効量の請求項1〜11のいずれか1項に記載の抗細菌組成物を投与することを含む、前記方法。
- 該組成物が、局所投与のために、より好ましくは対象の皮膚への適用のために配合されている、請求項12〜22、25または26のいずれか1項に記載の。処置の方法における使用のための組成物、使用または方法。
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