JP2020094015A - Hyaluronic acid production promoter, joint function improving agent, and oral composition - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、ヒアルロン酸産生促進剤及び関節機能改善剤、並びに、ヒアルロン酸の産生促進及び関節機能の改善の少なくともいずれのために用いられる経口用組成物に関する。 The present invention relates to a hyaluronic acid production promoter and a joint function improving agent, and an oral composition used for promoting hyaluronic acid production and/or improving joint function.
関節の表面を覆っている軟骨や滑膜組織から分泌される滑液（関節液）は、関節の荷重の衝撃を和らげたり、関節の動きを滑らかにしたりする機能を果たしていることが知られている。前記滑液の主成分であるヒアルロン酸は、関節をスムーズに動かすための潤滑剤及びクッションの役割を果たしている。 It is known that the synovial fluid (synthetic fluid) secreted by the cartilage and synovial tissue covering the surface of joints has the function of softening the impact of joint load and smoothing the movement of joints. There is. Hyaluronic acid, which is the main component of the synovial fluid, functions as a lubricant and a cushion for moving joints smoothly.
前記滑液中のヒアルロン酸濃度は、正常な人の場合には、約３．４ｍｇ／ｍＬ〜５ｍｇ／ｍＬであるが、変形性関節症の場合には前記濃度が約３０％〜５０％低下することが知られている。そして、滑液中のヒアルロン酸量の減少又はその粘性の低下によって、軟骨の摩耗、関節痛、運動障害といった症状が現れる。 The hyaluronic acid concentration in the synovial fluid is about 3.4 mg/mL to 5 mg/mL in a normal person, but in osteoarthritis, the concentration decreases by about 30% to 50%. Is known to do. Then, due to a decrease in the amount of hyaluronic acid in the synovial fluid or a decrease in its viscosity, symptoms such as cartilage wear, joint pain, and movement disorder appear.
前記疾患において、潤滑機能の改善、関節軟骨の被覆（保護）、痛みの抑制及び病的関節液の改善若しくは正常化のために、関節液中のヒアルロン酸量を増加させることが考えられる。例えば、慢性関節リウマチ患者にヒアルロン酸ナトリウムの関節注入療法を行うと前記改善が認められることが報告されている（非特許文献１参照）。
しかしながら、前記疾患の治療は長期にわたり、しかも医師の処方を必要とするという問題がある。また、ヒアルロン酸を外から与えても根本的機能改善にはならず、充分な効果が期待できないという問題もある。
In the above diseases, it is considered that the amount of hyaluronic acid in the synovial fluid is increased in order to improve the lubrication function, cover (protect) the articular cartilage, suppress pain, and improve or normalize the pathological synovial fluid. For example, it has been reported that the above-mentioned improvement is observed when a joint injection therapy of sodium hyaluronate is performed on a rheumatoid arthritis patient (see Non-Patent Document 1).
However, there is a problem in that the treatment of the above diseases is long-term and requires a doctor's prescription. Further, there is a problem that even if external hyaluronic acid is given, the fundamental function is not improved, and a sufficient effect cannot be expected.
また、ヒアルロン酸は、皮膚においても多く存在している。皮膚の老化又は病的状態により細胞機能が低下してくると、生体内のヒアルロン酸量が減少し、その結果、皮膚の乾燥、肌荒れ、ハリ、弾力性の減少、シミ、シワの増加などを引き起こす。このような状態を改善すべく、ヒアルロン酸、自然保湿因子等の生体成分を配合した化粧料を皮膚に塗布するなどの方法がとられている。
しかしながら、ヒアルロン酸は、皮膚からはほとんど吸収されないという問題がある。
Hyaluronic acid is also present in large amounts in the skin. When cell function declines due to skin aging or pathological condition, the amount of hyaluronic acid in the body decreases, and as a result, skin dryness, rough skin, firmness, loss of elasticity, stains, wrinkles increase etc. cause. In order to improve such a condition, a method of applying a cosmetic containing a biological component such as hyaluronic acid and a natural moisturizing factor to the skin is used.
However, there is a problem that hyaluronic acid is hardly absorbed from the skin.
そのため、単にヒアルロン酸そのものを外から補給するのではなく、本来ヒトが備え持つ生体内の自己回復力を利用し、生体内でヒアルロン酸の産生を促進させることによって、生体の機能を根本的に改善する物質の開発が期待されている。
このようなヒト細胞のヒアルロン酸の産生を促進する薬剤としては、インシュリン様成長因子−１、上皮成長因子（非特許文献２参照）、インターロイキン−１（非特許文献３参照）等のサイトカイン、或いはフォルボールエステル（非特許文献４参照）などが知られている。
しかしながら、いずれも医薬品や飲食品等として簡便にかつ安心して使用することができるものではないという問題がある。
Therefore, instead of simply replenishing hyaluronic acid itself from the outside, by utilizing the in vivo self-recovery power originally possessed by humans and promoting the production of hyaluronic acid in vivo, the function of the body is fundamentally improved. Development of improving substances is expected.
Such agents that promote the production of hyaluronic acid in human cells include cytokines such as insulin-like growth factor-1, epidermal growth factor (see Non-Patent Document 2), interleukin-1 (see Non-Patent Document 3), Alternatively, phorbol ester (see Non-Patent Document 4) and the like are known.
However, there is a problem that none of them can be simply and safely used as medicines and foods and drinks.
したがって、生体内においてヒアルロン酸産生量を高め、産生されたヒアルロン酸が関節に補充されることによって変形性関節症に対して効果を発揮する、即ち、関節のスムーズな動きを維持し、関節の変形を防ぎ、変形性関節症による痛み、運動障害などへの予防及び改善効果や、皮膚の乾燥、肌荒れ、ハリ、弾力性の減少、シミ、シワなどへの予防及び改善効果などを有する簡便で安全性の高い素材の提供が強く望まれている。 Therefore, by increasing the amount of hyaluronic acid produced in the body, and by exerting an effect on osteoarthritis by supplementing the produced hyaluronic acid to the joint, that is, maintaining smooth movement of the joint, Prevents deformity, has the effect of preventing and improving pain due to osteoarthritis, movement disorders, etc., and has the effect of preventing and improving dry skin, rough skin, firmness, elasticity, spots, wrinkles, etc. The provision of highly safe materials is strongly desired.
一方、天然物であるクコは、古来よりその果実、根皮、及び葉が食用或いは漢方薬として服用されており、その安全性が確立されている。
しかしながら、クコの果実の抽出物は、ヒト真皮線維芽細胞又はヒト表皮角化細胞に対して、有意なヒアルロン酸産生促進作用を示さなかったとの報告がなされており（特許文献１参照）、ヒアルロン酸産生促進作用、関節機能改善作用などについては報告されておらず、前記素材としては期待されていないものであった。
On the other hand, wolfberry, which is a natural product, has its fruits, root bark, and leaves taken since ancient times as an edible or herbal medicine, and its safety has been established.
However, it has been reported that the extract of wolfberry fruit did not show a significant hyaluronic acid production promoting action on human dermal fibroblasts or human epidermal keratinocytes (see Patent Document 1), and hyaluronic acid. No acid production promoting action, joint function improving action, etc. have been reported, and it was not expected as the material.
本発明は、従来における前記諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、優れたヒアルロン酸産生促進作用を有し、かつ安全性の高いヒアルロン酸産生促進剤、関節機能改善剤、及び経口用組成物を提供することを目的とする。 An object of the present invention is to solve the above-mentioned problems in the related art and achieve the following object. That is, an object of the present invention is to provide a highly safe hyaluronic acid production promoter, a joint function improving agent, and an oral composition having an excellent hyaluronic acid production promoting action.
本発明者らは、前記目的を達成すべく鋭意検討を行った結果、クコ抽出物が、優れたヒアルロン酸産生促進作用を有することを知見し、本発明の完成に至った。 As a result of intensive studies aimed at achieving the above object, the present inventors have found that the wolfberry extract has an excellent hyaluronic acid production promoting action, and have completed the present invention.
本発明は、本発明者らの前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ クコ抽出物を含有することを特徴とするヒアルロン酸産生促進剤である。
＜２＞ 前記＜１＞に記載のヒアルロン酸産生促進剤を含有することを特徴とする関節機能改善剤である。
＜３＞ ヒアルロン酸の産生促進及び関節機能の改善の少なくともいずれのために用いられる経口用組成物であって、前記＜１＞に記載のヒアルロン酸産生促進剤及び前記＜２＞に記載の関節機能改善剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする経口用組成物である。
The present invention is based on the above findings of the present inventors, and means for solving the above problems are as follows. That is,
<1> A hyaluronic acid production promoter characterized by containing a wolfberry extract.
<2> A joint function improving agent comprising the hyaluronic acid production promoter according to <1> above.
<3> An oral composition used for promoting production of hyaluronic acid and/or improving joint function, comprising the hyaluronic acid production promoter according to <1> and the joint according to <2>. An oral composition comprising at least one of a function improving agent.
本発明によると、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、優れたヒアルロン酸産生促進作用を有し、かつ安全性の高いヒアルロン酸産生促進剤、関節機能改善剤、及び経口用組成物を提供することができる。 According to the present invention, it is possible to solve the above-mentioned problems in the related art, achieve the above-mentioned object, have an excellent hyaluronic acid production-promoting action, and have high safety, a hyaluronic acid production-promoting agent, a joint function improving agent, And an oral composition can be provided.
（ヒアルロン酸産生促進剤）
本発明のヒアルロン酸産生促進剤は、クコ抽出物を含有し、更に必要に応じて、その他の成分を含有してなる。
(Hyaluronic acid production promoter)
The hyaluronic acid production promoter of the present invention contains a wolfberry extract and, if necessary, further contains other components.
＜クコ抽出物＞
クコ（枸杞）は、ナス科クコ属の落葉低木である。前記クコは、日本及び朝鮮、中国、台湾などに分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。クコは古来よりその果実、根皮、及び葉が食用、生薬、或いは漢方薬として服用されており、前記生薬としては、クコの果実からなる枸杞子（クコシ）、クコの根皮からなる地骨皮（ジコッピ）、クコの葉からなる枸杞葉（クコヨウ）などが挙げられる。このように、クコは、安全性の高い植物である。
<wolfberry extract>
A wolfberry is a deciduous shrub of the family Solanaceae. The wolfberry is distributed in Japan, Korea, China, Taiwan and the like, and is easily available from these regions. Since ancient times, wolfberry has taken its fruits, root bark, and leaves as an edible, herbal medicine, or herbal medicine, and as the herbal medicine, husks made of wolfberry fruit, husks made of wolfberry root bark. (Zikoppi), wolfberry leaves (Kukoyou) and the like. As such, wolfberry is a highly safe plant.
クコの種としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ Ｍｉｌｌ、Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ Ｍｉｌｌ．ｖａｒ．ｐｏｔａｎｉｎｉｉ Ａ．Ｍ．Ｌｕ等のＬｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ；Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ Ｌ．、Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ Ｌ．ｖａｒ．ａｕｒａｔｉｃａｒｐｕｍ Ｋ．Ｆ．Ｃｈｉｎｇ等のＬｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ；Ｌｙｃｉｕｍ ｒｕｔｈｅｎｉｃｕｍ；Ｌｙｃｉｕｍ ｔｒｕｎｃａｔｕｍ Ｙ．Ｃ．Ｗａｎｇ等のＬｙｃｉｕｍ ｔｒｕｎｃａｔｕｍ；Ｌｙｃｉｕｍ ｄａｓｙｓｔｅｍｕｍ Ｐｏｊａｒｋ、Ｌｙｃｉｕｍ ｄａｓｙｓｔｅｍｕｍ Ｐｏｊａｒｋ ｖａｒ．ｒｕｂｒｉｃａｕｌｉｕｍ Ａ．Ｍ．Ｌｕ等のＬｙｃｉｕｍ ｄａｓｙｓｔｅｍｕｍ；Ｌｙｃｉｕｍ ｅｙｌｉｎｄｒｉｃｕｍ Ｋｕａｎｇ ｅｔ Ａ．Ｍ．Ｌｕ等のＬｙｃｉｕｍ ｅｙｌｉｎｄｒｉｃｕｍなどが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。これらの中でも、前記クコの種としては、Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ（以下、「野菜用クコ」と称することがある）、Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ（以下、「長葉クコ」と称することがある）が好ましい。 The species of wolfberry is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the intended purpose. Examples thereof include Lycium chinense Mill and Lycium chinense Mill. var. potanini A. M. Lu et al., Lycium chinense ; Lycium barbarum L.; , Lycium barbarum L.; var. auraticarpum K. F. Ching et al., Lycium barbarum ; Lycium ruthenicum ; Lycium truncatum Y.; C. Wang et al., Lycium truncatum ; Lycium dastemum Pojark, Lycium dastemum Pojark var. rubricaulium A. M. Lu et al., Lycium dastemum ; Lycium eylindricum Kuang et A.; M. Examples thereof include Lycium eylindricum such as Lu. These may be used alone or in combination of two or more. Among them, Lycium chinense (hereinafter sometimes referred to as “vegetable wolfberry”) and Lycium barbarum (hereinafter sometimes referred to as “long leaf wolfberry”) are preferable as the species of wolfberry.
前記クコ抽出物は、抽出原料として使用する抽出部位から調製したものを使用してもよいし、市販品を使用してもよい。
前記クコの前記抽出部位としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、葉部、枝部、幹部、樹皮部、花部、果実部、根部などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。これらの中でも、前記クコの抽出部位としては、葉部が好ましい。
The wolfberry extract may be prepared from the extraction site used as an extraction raw material, or may be a commercially available product.
The extraction site of the wolfberry is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose, and examples thereof include a leaf part, a branch part, a trunk part, a bark part, a flower part, a fruit part, and a root part. These may be used alone or in combination of two or more. Among these, the leaf portion is preferable as the extraction site of the wolfberry.
前記クコの抽出部位の調製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記抽出部位を乾燥させた後、そのまま又は粗砕機を用い粉砕して溶媒抽出に供する方法などが挙げられる。前記乾燥は、天日で行ってもよいし、通常使用されている乾燥機を用いて行ってもよい。 The method for preparing the extraction part of the wolfberry is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose.For example, after the extraction part is dried, it is pulverized as it is or using a coarse crusher for solvent extraction. The method of providing it may be mentioned. The drying may be performed in the sun or using a commonly used dryer.
前記クコ抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている方法により容易に得ることができる。前記クコ抽出物の形態としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出液そのもの、抽出液の希釈液、抽出液の濃縮液、抽出液の乾燥物などが挙げられる。 The wolfberry extract can be easily obtained by a method generally used for plant extraction. The form of the wolfberry extract is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose.For example, the extract itself, the diluent of the extract, the concentrate of the extract, the dried product of the extract, etc. Can be mentioned.
前記クコの抽出方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料である前記クコの前記抽出部位を投入し、必要に応じて適宜攪拌しながら可溶性成分を溶出した後、濾過して抽出残渣を除くことにより抽出液を得る方法などが挙げられる。
また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
The method for extracting the wolfberry is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose.For example, the extraction site of the wolfberry, which is the extraction raw material, is put into a treatment tank filled with an extraction solvent, if necessary. A method of obtaining an extract by removing the extraction residue by filtering after eluting the soluble component while appropriately agitating may be mentioned.
Further, it may be used as an extraction raw material after pretreatment such as degreasing with a non-polar solvent such as hexane. By performing the pretreatment such as degreasing, the extraction treatment with the polar solvent can be efficiently performed.
前記クコの抽出条件（抽出時間及び抽出温度）、抽出溶媒、及びその使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。 The extraction conditions (extraction time and extraction temperature) of the wolfberry, the extraction solvent, and the amount used are not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose.
前記クコの抽出溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、親水性溶媒、又はこれらの混合溶媒が挙げられる。 The wolfberry extract solvent is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the intended purpose. Examples thereof include water, a hydrophilic solvent, and a mixed solvent thereof.
前記水としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。 The water is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose, for example, pure water, tap water, well water, mineral water, mineral water, hot spring water, spring water, fresh water, purified water, hot water, Examples include ion-exchanged water, physiological saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline and the like. These may be used alone or in combination of two or more.
前記親水性溶媒としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。 The hydrophilic solvent is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the intended purpose. Examples thereof include lower alcohols having 1 to 5 carbon atoms such as methanol, ethanol, propyl alcohol and isopropyl alcohol; acetone, methyl ethyl ketone and the like. Lower aliphatic ketone; polyhydric alcohol having 2 to 5 carbon atoms such as 1,3-butylene glycol, propylene glycol and glycerin. These may be used alone or in combination of two or more.
前記混合溶媒における前記水に対する前記親水性溶媒の使用量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、前記低級アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部、前記低級脂肪族ケトンを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜４０質量部、前記多価アルコールを使用する場合は、水１０質量部に対して１質量部〜９０質量部添加することが好ましい。 The amount of the hydrophilic solvent used in the mixed solvent with respect to the water is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the intended purpose. When the lower alcohol is used, it is used in an amount of 10 parts by mass of water. 1 part by mass to 90 parts by mass, 1 part by mass to 40 parts by mass with respect to 10 parts by mass of water when using the lower aliphatic ketone, and 10 parts by mass of water when using the polyhydric alcohol. It is preferable to add 1 to 90 parts by mass.
前記クコの抽出溶媒の温度としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、室温乃至溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。 The temperature of the wolfberry extract solvent is appropriately selected depending on the intended purpose without any limitation, but it is preferably used at room temperature to a temperature not higher than the boiling point of the solvent.
これらの中でも、前記クコの抽出溶媒としては、熱水、水と低級アルコールとの混合溶媒が好ましい。 Among these, as the wolfberry extract solvent, hot water and a mixed solvent of water and a lower alcohol are preferable.
得られた前記クコ抽出物は、前記クコ抽出物の希釈物、濃縮物、乾燥物、粗精製物、精製物などを得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製などの処理を施してもよい。 The obtained wolfberry extract is subjected to a treatment such as dilution, concentration, drying, and purification according to a conventional method in order to obtain a diluted product, a concentrate, a dried product, a crudely purified product, a purified product, etc. of the wolfberry extract. May be.
前記クコ抽出物の精製方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、液−液分配抽出、各種クロマトグラフィー、膜分離などの精製方法が挙げられる。 The method for purifying the wolfberry extract is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the intended purpose. Examples thereof include purification methods such as liquid-liquid partition extraction, various chromatographies, and membrane separation.
前記ヒアルロン酸産生促進剤における前記クコ抽出物の含有量としては、特に制限はなく、前記クコ抽出物の生理活性等によって適宜調整することができる。前記ヒアルロン酸産生促進剤は、前記クコ抽出物そのものであってもよい。 The content of the wolfberry extract in the hyaluronic acid production promoter is not particularly limited and can be appropriately adjusted depending on the physiological activity of the wolfberry extract and the like. The hyaluronic acid production promoter may be the wolfberry extract itself.
＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、前記ヒアルロン酸産生促進剤の利用形態に応じて適宜選択することができ、例えば、賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、甘味料、酸味料、調味料、着色料、香料、美白剤、保湿剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、皮膚栄養剤などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
<Other ingredients>
The other components are not particularly limited and may be appropriately selected depending on the usage form of the hyaluronic acid production promoter, for example, an excipient, a moisture-proofing agent, a preservative, a strengthening agent, a thickener, Emulsifiers, antioxidants, sweeteners, acidulants, seasonings, colorants, fragrances, whitening agents, moisturizers, oily ingredients, UV absorbers, surfactants, alcohols, powder ingredients, coloring agents, aqueous ingredients, water , Skin nutrients and the like. These may be used alone or in combination of two or more.
前記ヒアルロン酸産生促進剤における前記その他の成分の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。 The content of the other components in the hyaluronic acid production promoter is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose.
前記ヒアルロン酸産生促進剤は、細胞におけるヒアルロン酸の産生を促進する作用を有するものである。
前記細胞としては、ヒアルロン酸産生能を有する細胞であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、滑膜細胞、真皮線維芽細胞、表皮角化細胞、正常ヒト中皮細胞、関節軟骨細胞などが挙げられる。これらの中でも、滑膜細胞におけるヒアルロン酸産生促進作用を有することが好ましい。
前記ヒアルロン酸産生促進作用を確認する方法としては、特に制限はなく、公知の方法の中から適宜選択することができ、例えば、後述する実施例に記載の試験方法などが挙げられる。
The hyaluronan production promoter has an action of promoting the production of hyaluronan in cells.
The cell is not particularly limited as long as it has a hyaluronic acid-producing ability, and can be appropriately selected according to the purpose. For example, synovial cells, dermal fibroblasts, epidermal keratinocytes, normal humans. Examples include mesothelial cells and articular chondrocytes. Among these, it is preferable to have a hyaluronic acid production promoting action in synovial cells.
The method for confirming the hyaluronic acid production promoting action is not particularly limited and may be appropriately selected from known methods, and examples thereof include the test methods described in Examples described later.
＜用途＞
前記ヒアルロン酸産生促進剤は、優れたヒアルロン酸産生作用を有し、安全性が高いため、産生されたヒアルロン酸が関節に補充されることにより、関節のスムーズな動きの維持又は改善、並びに、関節における軟骨の摩耗等による関節の変形、関節痛、病的関節液、運動障害などの予防又は改善、更に変形性関節症の予防又は改善に好適に用いることができる。したがって、前記ヒアルロン酸産生促進剤は、後述する本発明の関節機能改善剤にも好適に用いることができる。
また、前記ヒアルロン酸産生促進剤は、優れたヒアルロン酸産生作用を有し、安全性が高いため、皮膚の乾燥、肌荒れ、ハリ、弾力性の減少、シミ、シワなどの予防又は改善にも好適に用いることができる。
また、前記ヒアルロン酸産生促進剤は、優れたヒアルロン酸産生作用を有し、安全性が高いため、ヒアルロン酸の産生促進用の経口用組成物としても好適に用いることができる。
更に、前記ヒアルロン酸産生促進剤は、ヒアルロン酸産生促進作用の作用機構に関する研究のための試薬としても好適に用いることができる。
<Use>
Said hyaluronic acid production promoter has an excellent hyaluronic acid production action, since it is highly safe, by supplementing the produced hyaluronic acid to the joint, maintaining or improving the smooth movement of the joint, and, It can be preferably used for prevention or improvement of joint deformation due to abrasion of cartilage in joints, joint pain, pathological synovial fluid, movement disorder, and prevention or improvement of osteoarthritis. Therefore, the hyaluronic acid production promoter can be preferably used also for the joint function improving agent of the present invention described later.
Further, the hyaluronic acid production promoter has an excellent hyaluronic acid production action, and is highly safe, and therefore suitable for preventing or improving dry skin, rough skin, firmness, decrease in elasticity, stains, wrinkles, etc. Can be used for.
Further, the hyaluronic acid production promoter has an excellent hyaluronic acid production action and is highly safe, and therefore can be suitably used as an oral composition for promoting the production of hyaluronic acid.
Further, the hyaluronic acid production promoter can be preferably used as a reagent for research on the mechanism of action of hyaluronic acid production promoting action.
前記ヒアルロン酸促進剤の用法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、経口、非経口、外用などの投与形態が挙げられる。 The usage of the hyaluronic acid accelerator is appropriately selected depending on the intended purpose without any limitation, and examples thereof include oral, parenteral, and external administration forms.
前記ヒアルロン酸促進剤の剤型としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、錠剤、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、エキス剤、シロップ剤等の経口投与剤；注射剤、点滴剤、坐剤等の非経口投与剤；軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤、頭髪化粧料等の外用剤などが挙げられる。 The dosage form of the hyaluronic acid accelerator is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the intended purpose. For example, oral administration agents such as tablets, powders, capsules, granules, extracts and syrups; Parenteral administration agents such as injections, drops, suppositories, etc.; ointments, creams, emulsions, lotions, packs, bath agents, external preparations such as hair cosmetics and the like.
前記ヒアルロン酸促進剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、その作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することもできる。 The hyaluronic acid accelerator is preferably applied to humans, but animals other than humans (for example, mice, rats, hamsters, dogs, cats, cattle, pigs) can be used as long as the action and effect thereof are exhibited. , Monkeys, etc.).
（関節機能改善剤）
前記関節機能改善剤は、上述した本発明のヒアルロン酸産生促進剤を含有し、更に必要に応じて、その他の成分を含有してなる。
(Joint function improving agent)
The joint function improving agent contains the above-described hyaluronic acid production promoter of the present invention, and further contains other components as necessary.
本発明における関節機能改善作用とは、関節における潤滑機能、関節における軟骨の摩耗等による関節の変形、関節痛、病的関節液、運動障害などを改善する作用を有するものである。慢性関節リウマチ患者にヒアルロン酸ナトリウムの関節注入療法を行うと上述した改善が認められることが報告されている（「炎症」、日本炎症学会、１１巻、１６頁、１９９１年、キチン・キトサン研究、２００７年、Ｖｏｌ．１３、Ｎｏ．３参照）。そのため、前記ヒアルロン酸産生促進剤を含有する本発明の前記関節機能改善剤は、上記関節機能改善作用を有するものである。 The joint function improving action in the present invention has a function of improving the lubrication function in the joint, the deformation of the joint due to the wear of cartilage in the joint, the joint pain, the pathological synovial fluid, the movement disorder and the like. It has been reported that the above-mentioned improvement is observed when performing joint injection therapy of sodium hyaluronate in patients with rheumatoid arthritis ("inflammation", Japanese Society of Inflammation, Vol. 11, p. 16, 1991, Chitin-Chitosan Study, 2007, Vol. 13, No. 3). Therefore, the joint function improving agent of the present invention containing the hyaluronic acid production promoter has the joint function improving action.
＜ヒアルロン酸産生促進剤＞
前記ヒアルロン酸産生促進剤は、上述した本発明のヒアルロン酸産生促進剤である。
前記関節機能改善剤における前記ヒアルロン酸産生促進剤の含有量としては、特に制限はなく、前記クコ抽出物の生理活性等によって適宜調整することができる。前記関節機能改善剤は、前記ヒアルロン酸産生促進剤のみからなるものであってもよい。
<Hyaluronic acid production promoter>
The hyaluronic acid production promoter is the hyaluronic acid production promoter of the present invention described above.
The content of the hyaluronic acid production promoter in the joint function improving agent is not particularly limited and can be appropriately adjusted depending on the physiological activity of the wolfberry extract and the like. The joint function improving agent may consist of only the hyaluronic acid production promoter.
＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、前記関節機能改善剤の利用形態に応じて適宜選択することができ、例えば、賦形剤、防湿剤、防腐剤、強化剤、増粘剤、乳化剤、酸化防止剤、甘味料、酸味料、調味料、着色料、香料、美白剤、保湿剤、油性成分、紫外線吸収剤、界面活性剤、アルコール類、粉末成分、色剤、水性成分、水、皮膚栄養剤などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
<Other ingredients>
The other components are not particularly limited and may be appropriately selected depending on the usage form of the joint function improving agent. For example, an excipient, a moisture proofing agent, a preservative, a strengthening agent, a thickener, an emulsifier. , Antioxidants, sweeteners, acidulants, seasonings, colorants, fragrances, whitening agents, moisturizers, oily components, ultraviolet absorbers, surfactants, alcohols, powder components, colorants, aqueous components, water, Skin nutrition agents and the like can be mentioned. These may be used alone or in combination of two or more.
前記関節機能改善剤における前記その他の成分の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。 The content of the other components in the joint function improving agent is not particularly limited and can be appropriately selected depending on the purpose.
＜用途＞
前記関節機能改善剤は、前記ヒアルロン酸産生促進剤を含有するため、関節における潤滑機能、関節における軟骨の摩耗等による関節の変形、関節痛、病的関節液、運動障害などの改善に好適に用いることができる。
また、前記関節機能改善剤は、安全性が高いため、関節機能の改善用の経口用組成物としても好適に用いることができる。
<Use>
Since the joint function improving agent contains the hyaluronic acid production promoter, it is suitable for improving lubrication function in joints, deformation of joints due to wear of cartilage in joints, joint pain, pathological synovial fluid, and movement disorders. Can be used.
Further, since the joint function improving agent is highly safe, it can be suitably used as an oral composition for improving joint function.
前記関節機能改善剤の用法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、経口、非経口、外用などの投与形態が挙げられる。 The usage of the joint function improving agent is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the intended purpose. Examples thereof include oral, parenteral, and external administration forms.
前記節機能改善剤の剤型としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、錠剤、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、エキス剤、シロップ剤等の経口投与剤；注射剤、点滴剤、坐剤等の非経口投与剤；軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、浴用剤、頭髪化粧料等の外用剤などが挙げられる。 The dosage form of the node function improving agent is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the intended purpose. For example, oral administration agents such as tablets, powders, capsules, granules, extracts and syrups; Parenteral administration agents such as injections, drops, suppositories, etc.; ointments, creams, emulsions, lotions, packs, bath agents, external preparations such as hair cosmetics and the like.
前記関節機能改善剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、その作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することもできる。 The joint function-improving agent is preferably applied to humans, but animals other than humans (for example, mice, rats, hamsters, dogs, cats, cows, pigs) can be used as long as the action and effect thereof are exhibited. , Monkeys, etc.).
（経口用組成物）
本発明の経口用組成物は、上述した本発明のヒアルロン酸産生促進剤及び上述した本発明の関節機能改善剤の少なくともいずれかを含有し、更に必要に応じて、その他の成分を含有する。
(Composition for oral use)
The oral composition of the present invention contains at least one of the above-mentioned hyaluronic acid production promoter of the present invention and the above-mentioned joint function improving agent of the present invention, and further contains other components as necessary.
本発明における経口用組成物は、ヒアルロン酸の産生促進及び関節機能の改善の少なくともいずれのために用いられるものである。前記ヒアルロン酸の産生促進のために用いられる経口用組成物を「ヒアルロン酸産生促進用経口用組成物」、前記関節機能の改善のために用いられる経口用組成物を「関節機能改善用経口用組成物」とそれぞれ称することがある。 The oral composition of the present invention is used for at least promotion of production of hyaluronic acid and improvement of joint function. The oral composition used to promote the production of hyaluronic acid is referred to as “oral composition for promoting hyaluronic acid production”, and the oral composition used to improve the joint function is referred to as “oral composition for improving joint function. Sometimes referred to as "composition."
前記経口用組成物とは、人の健康に危害を加えるおそれが少なく、通常の社会生活において、経口又は消化管投与により摂取されるものをいい、行政区分上の食品、医薬品、医薬部外品などの区分に制限されるものではない。したがって、前記経口用組成物は、経口的に摂取される一般食品、健康食品（機能性飲食品）、保健機能食品（特定保健用食品，栄養機能食品，機能性表示食品）、医薬部外品、医薬品等を構成する飲食品を幅広く含むものを意味する。 The oral composition refers to a composition that is less likely to cause harm to human health and that is taken orally or by digestive tract administration in normal social life, and is a food, drug, quasi drug under administrative division. It is not limited to such categories. Therefore, the composition for oral use is a general food, a health food (functional food and drink), a food with health claims (food for specified health use, a nutritionally functional food, a food with functional claims), a quasi drug, which is orally ingested. , Means a wide range of foods and drinks that compose pharmaceuticals and the like.
前記経口用組成物の種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、茶飲料、清涼飲料、炭酸飲料、栄養飲料、果実飲料、乳酸飲料等の飲料；アイスクリーム、アイスシャーベット、かき氷等の冷菓；そば、うどん、はるさめ、ぎょうざの皮、しゅうまいの皮、中華麺、即席麺等の麺類；飴、キャンディー、ガム、チョコレート、錠菓、スナック菓子、ビスケット、ゼリー、ジャム、クリーム、焼き菓子、パン等の菓子類；カニ、サケ、アサリ、マグロ、イワシ、エビ、カツオ、サバ、クジラ、カキ、サンマ、イカ、アカガイ、ホタテ、アワビ、ウニ、イクラ、トコブシ等の水産物；かまぼこ、ハム、ソーセージ等の水産・畜産加工食品；加工乳、発酵乳等の乳製品；サラダ油、てんぷら油、マーガリン、マヨネーズ、ショートニング、ホイップクリーム、ドレッシング等の油脂及び油脂加工食品；ソース、たれ等の調味料；カレー、シチュー、親子丼、お粥、雑炊、中華丼、かつ丼、天丼、うな丼、ハヤシライス、おでん、マーボドーフ、牛丼、ミートソース、玉子スープ、オムライス、餃子、シューマイ、ハンバーグ、ミートボール等のレトルトパウチ食品；サラダ、漬物等の惣菜；種々の形態の健康・美容・栄養補助食品；錠剤、顆粒剤、カプセル剤、ドリンク剤、トローチ等の医薬品、医薬部外品などが挙げられる。 The type of the oral composition is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the intended purpose. Examples thereof include tea beverages, soft drinks, carbonated drinks, nutritional drinks, fruit drinks, drinks such as lactic acid drinks; ice. Frozen desserts such as cream, ice sorbet, shaved ice; noodles such as buckwheat, udon, harusame, gyoza skin, maimai skin, Chinese noodles, instant noodles; candy, candy, gum, chocolate, confectionery, snacks, biscuits, jellies, Confectionery such as jams, creams, baked goods, breads; crabs, salmon, clams, tuna, sardines, shrimp, bonito, mackerel, whales, oysters, saury, squid, red snails, scallops, abalone, sea urchins, salmon roe, tokobushi, etc. Seafood; Processed fish and livestock products such as kamaboko, ham, sausage; Dairy products such as processed milk and fermented milk; Salad oil, tempura oil, oils and fats and processed foods such as margarine, mayonnaise, shortening, whipped cream, dressing; sauces, sauces, Seasonings such as sauces: curry, stew, oyakodon, porridge, porridge, Chinese rice bowl, bonito bowl, tempura bowl, eel bowl, hayashi rice, oden, marbo dofu, beef bowl, meat sauce, egg soup, omelet rice, dumplings, chouxmai, hamburger, Retort pouch foods such as meatballs; side dishes such as salads and pickles; health, beauty and nutritional supplements in various forms; pharmaceuticals such as tablets, granules, capsules, drinks, troches, and quasi drugs Be done.
＜ヒアルロン酸産生促進剤及び／又は関節機能改善剤＞
前記経口用組成物における前記ヒアルロン酸産生促進剤及び前記関節機能改善剤の少なくともいずれかの含有量としては、特に制限はなく、使用目的、症状、性別等を考慮して適宜変更することができる。
<Hyaluronic acid production promoter and/or joint function improving agent>
The content of at least one of the hyaluronic acid production promoter and the joint function improving agent in the oral composition is not particularly limited and may be appropriately changed in consideration of the purpose of use, symptoms, sex and the like. ..
＜その他の成分＞
前記経口用組成物における前記その他の成分としては、特に制限はなく、通常の経口用組成物の製造に用いられる補助的原料又は添加物又はその他の成分の中から目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよいし、２種以上を併用してもよい。
<Other ingredients>
The other components in the oral composition are not particularly limited, and may be appropriately selected from auxiliary raw materials or additives or other components used in the production of ordinary oral compositions according to the purpose. For example, glucose, fructose, sucrose, maltose, sorbitol, stevioside, rubusoside, corn syrup, lactose, citric acid, tartaric acid, malic acid, succinic acid, lactic acid, L-ascorbic acid, dl-α-tocopherol, erythorbin. Sodium acid, glycerin, propylene glycol, glycerin fatty acid ester, polyglycerin fatty acid ester, sucrose fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, gum arabic, carrageenan, casein, gelatin, pectin, agar, vitamin Bs, nicotinic acid amide, calcium pantothenate , Amino acids, calcium salts, pigments, fragrances, preservatives and the like. These may be used alone or in combination of two or more.
前記経口用組成物における前記その他の成分の配合量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。 The blending amount of the other components in the oral composition is not particularly limited and may be appropriately selected depending on the purpose.
＜用途＞
前記経口用組成物は、日常的に経口摂取することが可能であり、有効成分であるクコ抽出物の働きによって、ヒアルロン酸産生促進作用や関節機能改善作用をはじめとする様々な生理活性作用を極めて効果的に発揮させることができるので、ヒアルロン酸の産生促進及び関節機能の改善の少なくともいずれかの用途に好適に用いることができる。
<Use>
The composition for oral administration can be orally taken on a daily basis, and by the action of the wolfberry extract which is an active ingredient, various physiologically active actions including a hyaluronic acid production promoting action and a joint function improving action are exerted. Since it can be exerted extremely effectively, it can be suitably used for at least one of the purposes of promoting production of hyaluronic acid and improving joint function.
前記経口用組成物は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ハムスター、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、サルなど）に対して適用することもできる。 Although the oral composition is preferably applied to humans, animals other than humans (e.g., mice, rats, hamsters, dogs, cats, cows, as long as the respective effects are exhibited, It can also be applied to pigs, monkeys, etc.).
以下、本発明の実施例を説明するが、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるものではない。 Examples of the present invention will be described below, but the present invention is not limited to these examples.
（製造例１：野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉熱水抽出物の製造）
乾燥した野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉２０ｇに、溶媒として前記乾燥クコ葉の１０倍量（ｗ／ｖ）の水を加え、８０℃で２時間還流抽出を行った。次いで、減圧濾過を行った後、前記溶媒を除去し、野菜用クコ葉熱水抽出物とした。収率は、２７．８％であった。
(Production Example 1: for vegetables wolfberry (production of Lycium chinense) Hanetsu water extract)
To 20 g of dried wolfberry ( Lycium chinense ) leaves for vegetables, 10 times the amount of water (w/v) of the dried wolfberry leaves was added as a solvent, and reflux extraction was carried out at 80° C. for 2 hours. Then, after performing vacuum filtration, the solvent was removed to obtain a hot water extract of wolfberry leaf for vegetables. The yield was 27.8%.
（製造例２：野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉５０容量％エタノール抽出物の製造）
乾燥した野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉２０ｇに、溶媒として前記乾燥クコ葉の１０倍量（ｗ／ｖ）の５０容量％エタノールを加え、８０℃で２時間還流抽出を行った。次いで、減圧濾過を行った後、前記溶媒を除去し、野菜用クコ葉５０容量％エタノール抽出物とした。収率は、２９．４％であった。
(Production Example 2: Production of 50% by volume ethanol extract of wolfberry ( Lycium chinense ) leaves for vegetables)
To 20 g of dried wolfberry ( Lycium chinense ) leaves for vegetables, 10 volume (w/v) of 50 volume% ethanol of the dried wolfberry leaves was added as a solvent, and reflux extraction was performed at 80° C. for 2 hours. Then, after performing vacuum filtration, the solvent was removed to obtain a 50% by volume ethanol extract of wolfberry leaf for vegetables. The yield was 29.4%.
（製造例３：野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉８０容量％エタノール抽出物の製造）
乾燥した野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉２０ｇに、溶媒として前記乾燥クコ葉の１０倍量（ｗ／ｖ）の８０容量％エタノールを加え、８０℃で２時間還流抽出を行った。次いで、減圧濾過を行った後、前記溶媒を除去し、野菜用クコ葉８０容量％エタノール抽出物とした。収率は、１９．８％であった。
(Production Example 3: Production of 80% by volume ethanol extract of wolfberry ( Lycium chinense ) leaves for vegetables)
To 20 g of dried wolfberry ( Lycium chinense ) leaves for vegetables, 10 volume (w/v) of 80 volume% ethanol of the dried wolfberry leaves was added as a solvent, and reflux extraction was performed at 80° C. for 2 hours. Then, after vacuum filtration was performed, the solvent was removed to obtain an 80% by volume ethanol extract of wolfberry leaf for vegetables. The yield was 19.8%.
（製造例４：長葉クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ）葉熱水抽出物の製造）
前記製造例１において、野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉を、長葉クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ）葉に変更したこと以外は、製造例１と同様の方法で長葉クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ）葉熱水抽出物を製造した。収率は、２７．１％であった。
(Production Example 4: Production of long-leaf wolfberry ( Lycium barbarum ) leaf hot water extract)
In the production example 1, the vegetables for wolfberry (Lycium chinense) leaves, except for changing the long leaf wolfberry (Lycium barbarum) leaves, long leaf wolfberry (Lycium barbarum) in the same manner as in Production Example 1 Hanetsu water extract Manufactured. The yield was 27.1%.
（製造例５：長葉クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ）葉８０容量％エタノール抽出物の製造）
前記製造例３において、野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉を、長葉クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ）葉に変更したこと以外は、製造例３と同様の方法で長葉クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ）葉８０容量％エタノール抽出物を製造した。収率は、１９．２％であった。
(Production Example 5: Production of 80% by volume ethanol extract of long-leaf wolfberry ( Lycium barbarum ) leaves)
In the above Production Example 3, the vegetables for wolfberry (Lycium chinense) leaves, except for changing the long leaf wolfberry (Lycium barbarum) leaves, in the same manner as in Production Example 3 long leaf wolfberry (Lycium barbarum) leaves 80 volume% An ethanol extract was produced. The yield was 19.2%.
［試験例１：ヒト滑膜細胞におけるヒアルロン酸産生促進作用試験］
（実施例１：野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉熱水抽出物）
ヒト慢性関節リウマチ患者由来の滑膜細胞（ＨＦＬＳ−ＲＡ、ＣＥＬＬ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ，ＩＮＣ製）を、１０％Ｇｒｏｗｔｈ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ含有ヒト滑膜細胞増殖培地（Ｓｙｎｏｖｉｏｃｙｔｅ Ｂａｓａｌ Ｍｅｄｉｕｍ、ＣＥＬＬ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ，ＩＮＣ．製）を用いて７日間培養した。なお、培養装置としては、ＣＯ２インキュベーター（三洋電機株式会社製）を用い、培養条件としては、ＣＯ２濃度５％、インキュベーション温度３７℃とした。その後、Ｔｒｙｐｓｉｎ／ＥＤＴＡ溶液（ＣＥＬＬ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ，ＩＮＣ．製）を用いて３分間トリプシン処理を行い、前記滑膜細胞（ＨＦＬＳ−ＲＡ）を回収した。次いで、回収した細胞を１．２５×１０５細胞／ｍＬの濃度になるように１％Ｇｒｏｗｔｈ Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｓ含有ヒト滑膜細胞増殖培地で希釈した後、９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μＬずつ播種し、２４時間前培養した。
[Test Example 1: Test for promoting hyaluronan production in human synovial cells]
(Example 1: Lycium chinense leaf hot water extract for vegetables)
Human chronic rheumatoid arthritis patient-derived synovial cells (HFLS-RA, CELL APPLICATIONS, INC) were used with human synovial cell growth medium containing 10% Growth Supplements (Synoviocyte Basal Medium, CELL APPLICATIONS, INC.). Cultured for a day. A CO 2 incubator (manufactured by Sanyo Electric Co., Ltd.) was used as the culture device, and the culture conditions were a CO 2 concentration of 5% and an incubation temperature of 37°C. Then, trypsin treatment was carried out for 3 minutes using a Trypsin/EDTA solution (manufactured by CELL APPLICATIONS, INC.) to collect the synovial cells (HFLS-RA). Then, the collected cells were diluted with 1% Growth Supplements-containing human synovial cell growth medium to a concentration of 1.25×10 5 cells/mL, and then seeded in a 96-well plate at 100 μL per well, 24 Precultured for an hour.
前記前培養後、培地中に、被験試料として１％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ヒト滑膜細胞増殖培地で溶解した製造例１の野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉熱水抽出物を１ウェル当たり１００μＬ添加し、７２時間培養した。なお、培地中の前記被験試料の最終濃度は、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ、又４００μｇ／ｍＬとなるようにした。 After the pre-culture, the wolfberry ( Lycium chinense ) leaf hot water extract for vegetables of Production Example 1 dissolved in a 1% (v/v) FBS-containing human synovial cell growth medium as a test sample in the medium was added per well. 100 μL was added and cultured for 72 hours. The final concentration of the test sample in the medium was 50 μg/mL, 100 μg/mL, 200 μg/mL, or 400 μg/mL.
また、培地中に、前記被験試料を溶解した１％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ヒト滑膜細胞増殖培地を１ウェル当たり１００μＬ添加したことに代えて、１％（ｖ／ｖ）ＦＢＳ含有ヒト滑膜細胞増殖培地のみを１ウェル当たり１００μＬ添加したこと以外は、同様の方法で培養したものを陰性コントロールとした。 In addition, 1% (v/v) FBS-containing human synovial cell growth medium in which the test sample was dissolved was added to the medium in an amount of 100 μL per well. A negative control was obtained by culturing in the same manner except that only 100 μL of the membrane cell growth medium was added per well.
次いで、前記培養後、各ウェルの培養上清を回収し、該培養上清中のヒアルロン酸量を、ヒアルロン酸結合タンパク質（ＨＡＢＰ）を用いたサンドイッチ法により測定した。
具体的には、前記培養上清をＡｓｓａｙ Ｂｕｆｆｅｒ（０．５Ｍ ＮａＣｌ、０．０２％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ／ＰＢＳ）にて１１倍希釈後、ＨＡＢＰプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ ｉｎｃ．製）にアプライした。室温で２時間放置後、Ｗａｓｈｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（１．５Ｍ ＮａＣｌ、０．０５％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ−２０、ｄＨ２Ｏ）にて洗浄後、ＨＡＢＰ−Ｂ（株式会社ホクドー製、Ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｐｒｏｔｅｉｎ）を１００μＬ添加し、１時間反応させた。その後、Ｓｔｒｅｐｔ Ａｂｉｄｉｎ−ＨＲＰ（Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．， Ｉｎｃ.製）で発色した後、４１５ｎｍにおける吸光度を測定した。ヒアルロン酸量は、各ウェルから得られた培養上清について測定された吸光度を、ヒアルロン酸の標準品を用いた検量線から換算した。
前記ヒアルロン酸量から、下記式（１）によりヒアルロン酸産生促進率を算出し、ヒアルロン酸産生促進作用を評価した。結果を下記表１に示す。
ヒアルロン酸産生促進率（％）＝Ａ／Ｂ × １００ ・・・式（１）
ただし、前記式（１）中、「Ａ」は、前記被験試料を添加した場合のヒアルロン酸量を示し、「Ｂ」は、前記被験試料を添加しなかった場合（前記陰性コントロール）のヒアルロン酸量を示す。
Then, after the culture, the culture supernatant of each well was collected, and the amount of hyaluronic acid in the culture supernatant was measured by the sandwich method using hyaluronic acid binding protein (HABP).
Specifically, the culture supernatant was diluted 11-fold with Assay Buffer (0.5M NaCl, 0.02% (v/v) Tween-20, 1% (w/v) BSA/PBS), and then HABP was diluted. It was applied to a plate (manufactured by Corning inc.). After standing at room temperature for 2 hours, washing with Washing Buffer (1.5 M NaCl, 0.05% (v/v) Tween-20, dH 2 O), HABP-B (manufactured by Hokudo Co., Ltd., Biotinylated Hyaluronan Binding Protein). ) Was added and reacted for 1 hour. After that, color was developed with Strept Abidin-HRP (manufactured by Merck & Co., Inc.), and then the absorbance at 415 nm was measured. The amount of hyaluronic acid was calculated by converting the absorbance measured for the culture supernatant obtained from each well from a calibration curve using a standard product of hyaluronic acid.
From the amount of hyaluronic acid, the hyaluronic acid production promoting rate was calculated by the following formula (1) to evaluate the hyaluronic acid production promoting action. The results are shown in Table 1 below.
Hyaluronic acid production promoting rate (%)=A/B×100... Formula (1)
However, in the formula (1), “A” represents the amount of hyaluronic acid when the test sample was added, and “B” was hyaluronic acid when the test sample was not added (negative control). Indicates the amount.
（実施例２：野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉５０容量％エタノール抽出物）
実施例１において、被験試料として使用した製造例１の野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉熱水抽出物を、製造例２の野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉５０容量％エタノール抽出物に変更し、培地中の前記被験試料の最終濃度を、６．２５μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ、又４００μｇ／ｍＬに変更したこと以外は、実施例１と同様にして、ヒアルロン酸産生促進作用を評価した。結果を表１に示す。
(Example 2: 50% by volume ethanol extract of wolfberry ( Lycium chinense ) leaves for vegetables)
In Example 1, the wolfberry ( Lycium chinense ) leaf hot water extract for vegetables of Production Example 1 used as a test sample was changed to a wolfberry ( Lycium chinense ) leaf 50% by volume ethanol extract for vegetables of Production Example 2, In the same manner as in Example 1 except that the final concentration of the test sample in the medium was changed to 6.25 μg/mL, 25 μg/mL, 50 μg/mL, 100 μg/mL, 200 μg/mL, or 400 μg/mL. The effect of promoting hyaluronic acid production was evaluated. The results are shown in Table 1.
（実施例３：野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉８０容量％エタノール抽出物）
実施例２において、被験試料として使用した製造例２の野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉５０容量％エタノール抽出物を、製造例３の野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉８０容量％エタノール抽出物に変更したこと以外は、実施例２と同様にして、ヒアルロン酸産生促進作用を評価した。結果を表１に示す。
(Example 3: 80% by volume ethanol extract of wolfberry ( Lycium chinense ) leaves for vegetables)
In Example 2, 50% by volume ethanol extract of wolfberry ( Lycium chinense ) leaves for vegetables of Production Example 2 used as a test sample was changed to 80% by volume ethanol extract of wolfberry ( Lycium chinense ) leaves for vegetables of Production Example 3. The hyaluronic acid production promoting action was evaluated in the same manner as in Example 2 except for the above. The results are shown in Table 1.
（実施例４：長葉クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ）葉熱水抽出物）
実施例１において、被験試料として使用した製造例１の野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉熱水抽出物を、製造例４の長葉クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ）葉熱水抽出物に変更し、培地中の前記被験試料の最終濃度を、６．２５μｇ／ｍＬ又４００μｇ／ｍＬに変更したこと以外は、実施例１と同様にして、ヒアルロン酸産生促進作用を評価した。結果を表１に示す。
(Example 4: Long-leaf wolfberry ( Lycium barbarum ) leaf hot water extract)
In Example 1, the wolfberry ( Lycium chinense ) leaf hot water extract of Production Example 1 used as a test sample was changed to the long-leaved wolfberry ( Lycium barbarum ) leaf hot water extract of Production Example 4 in the medium. The hyaluronic acid production promoting action was evaluated in the same manner as in Example 1 except that the final concentration of the above-mentioned test sample was changed to 6.25 μg/mL or 400 μg/mL. The results are shown in Table 1.
（実施例５：長葉クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ）葉８０容量％エタノール抽出物）
実施例１において、被験試料として使用した製造例１の野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉熱水抽出物を、製造例５の長葉クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ ）葉８０容量％エタノール抽出物に変更し、培地中の前記被験試料の最終濃度を、６．２５μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ、又４００μｇ／ｍＬに変更したこと以外は、実施例１と同様にして、ヒアルロン酸産生促進作用を評価した。結果を表１に示す。
(Example 5: Long-leaf wolfberry ( Lycium barbarum ) leaf 80% by volume ethanol extract)
In Example 1, the wolfberry ( Lycium chinense ) leaf hot water extract of Production Example 1 used as a test sample was changed to the long-leaved wolfberry ( Lycium barbarum ) leaf 80% by volume ethanol extract of Production Example 5, and In the same manner as in Example 1, except that the final concentration of the test sample in the medium was changed to 6.25 μg/mL, 25 μg/mL, 100 μg/mL, or 400 μg/mL, hyaluronic acid production promoting action was performed. evaluated. The results are shown in Table 1.
表１の結果より、実施例１〜３の野菜用クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ）葉抽出物、並びに、実施例４及び５の長葉クコ（Ｌｙｃｉｕｍ ｂａｒｂａｒｕｍ）葉抽出物のいずれにおいても、ヒト滑膜細胞における優れたヒアルロン酸産生促進作用が認められた。なお、具体的なデータを示していないが、陰性コントロールとしての被験試料を添加しない系では、ヒアルロン酸産生促進作用は認められなかった。 From the results of Table 1, human synovial cells were obtained in any of the wolfberry ( Lycium chinense ) leaf extracts for vegetables of Examples 1 to 3 and the long-leaf wolfberry ( Lycium barbarum ) leaf extracts of Examples 4 and 5. An excellent hyaluronic acid production-promoting effect was observed. Although no specific data is shown, no hyaluronic acid production promoting action was observed in the system in which the test sample was not added as a negative control.
本発明の態様としては、例えば、以下のものなどが挙げられる。
＜１＞ クコ抽出物を含有することを特徴とするヒアルロン酸産生促進剤である。
＜２＞ 滑膜細胞におけるヒアルロン酸産生促進作用を有する前記＜１＞に記載のヒアルロン酸産生促進剤である。
＜３＞ 前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載のヒアルロン酸産生促進剤を含有することを特徴とする関節機能改善剤である。
＜４＞ ヒアルロン酸の産生促進及び関節機能の改善の少なくともいずれのために用いられる経口用組成物であって、前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載のヒアルロン酸産生促進剤及び前記＜３＞に記載の関節機能改善剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする経口用組成物である。
Examples of aspects of the present invention include the following.
<1> A hyaluronic acid production promoter characterized by containing a wolfberry extract.
<2> The hyaluronic acid production promoter according to <1>, which has a hyaluronic acid production promoting action in synovial cells.
<3> A joint function improving agent, which comprises the hyaluronic acid production promoter according to any one of <1> to <2>.
<4> An oral composition used for promoting production of hyaluronic acid and/or improving joint function, comprising the hyaluronic acid production promoter according to any one of <1> to <2> above. An oral composition comprising at least one of the joint function improving agents described in <3>.
本発明によれば、優れたヒアルロン酸産生促進作用を有し、かつ安全性の高いヒアルロン酸産生促進剤を提供することができる。前記ヒアルロン酸産生促進剤は、関節機能改善剤として利用することができる。また、前記ヒアルロン酸産生促進剤を経口組成物とすることにより、これらを主成分とした飲食品などとして変形性関節症の症状緩和に利用することができる。具体的には、関節のスムーズな動きの維持又は改善、並びに、関節における軟骨の摩耗等による関節の変形、関節痛、病的関節液、運動障害などの予防又は改善、更に変形性関節症の予防又は改善に利用することができる。 According to the present invention, it is possible to provide a highly safe hyaluronan production promoter having an excellent hyaluronan production promoting action. The hyaluronic acid production promoter can be used as a joint function improving agent. In addition, when the hyaluronic acid production promoter is used as an oral composition, it can be used as a food or drink containing these as a main component to alleviate the symptoms of osteoarthritis. Specifically, maintaining or improving smooth movement of joints, and preventing or improving joint deformity due to abrasion of cartilage in joints, joint pain, pathological synovial fluid, movement disorder, and further osteoarthritis. It can be used for prevention or improvement.
Claims (4)
請求項１から２のいずれかに記載のヒアルロン酸産生促進剤及び請求項３に記載の関節機能改善剤の少なくともいずれかを含有することを特徴とする経口用組成物。 An oral composition used for promoting production of hyaluronic acid and/or improving joint function,
An oral composition comprising at least one of the hyaluronic acid production promoter according to claim 1 and the joint function improving agent according to claim 3.
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