JP2019537617A

JP2019537617A - インターロイキン１７ａを標的とする抗体、その製造方法及び応用

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Publication number: JP2019537617A
Application number: JP2019528444A
Authority: JP
Inventors: 向▲陽▼ 朱; 明清蔡; ▲海▼佳于; 慧峰 ▲賈▼; 玲 ▲兪▼
Original assignee: ▲華▼博生物医▲薬▼技▲術▼（上▲海▼）有限公司
Priority date: 2017-07-21
Filing date: 2018-01-19
Publication date: 2019-12-26
Anticipated expiration: 2038-01-19
Also published as: EP3656789A1; WO2019015282A1; CN108359011B; US20200071394A1; US10981983B2; CN108359011A; EP3656789A4; JP6865826B2

Abstract

本発明は、インターロイキン１７Ａ（ＩＬ−１７Ａ）を標的とする抗体、その製造方法及び応用を提供する。具体的に、本発明は、新規抗ＩＬ−１７Ａモノクローナル抗体を提供する。本発明の抗体は、ＩＬ−１７Ａ抗原に高い特異性で結合することができ、高い親和性および低い免疫原性を有し、そして様々な炎症または自己免疫疾患などのＩＬ−１７Ａ関連の疾患を予防または治療する薬物の製造に用いられる。

Description

本発明は、医学分野に関し、具体的に、インターロイキン１７Ａ（ＩＬ−１７とも呼ばれる）を標的とする抗体、その製造方法及び応用に関する。

現在まで、ＩＬ−１７ファミリーの６つのメンバー、即ち、ＩＬ−１７Ａ（ＩＬ−１７）、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ（ＩＬ−２５）、ＩＬ−１７Ｆが発見されている。これらのインターロイキン−１７サイトカインは、対応する受容体に結合して、異なる炎症反応を仲介することができる。

ＩＬ−１７Ａは、活性化ＣＤ４^＋Ｔ細胞によって分泌されることが最初に発見された。このタイプの特徴的にＩＬ−１７Ａを分泌するＴ細胞サブセットは、Ｔｈ１７細胞と呼ばれる。Ｔｈ１７細胞に加えて、細胞毒性ＣＤ８^＋Ｔ細胞（Ｔｃ１７）、γδＴ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ−１７）、およびＢ細胞も特定の条件下でＩＬ−１７Ａを発現することができる。単球、好中球、ナチュラルキラー細胞、およびリンパ組織誘導様（Ｌｔｉ−ｌｉｋｅ）細胞を含む先天性免疫細胞もＩＬ−１７Ａを産生することができる。最近、トリパノソーマ感染症に関する研究において、Ｂ細胞もＩＬ−１７Ａを産生することができることが見出された。腸管パネス細胞および腸上皮細胞のようないくつかの非免疫細胞もストレス下でＩＬ−１７Ａを産生することができる。Ｔｈ１７細胞は体内に最も広く分布し、そして炎症反応において広範囲の効果を有するので、それは一般的にＩＬ−１７Ａの主な供給源であると考えられる。ＩＬ−１７Ａを産生する先天性細胞は、主に身体の初期防御細胞として宿主の抗感染免疫反応に関与する。

ＩＬ−１７Ａは、３５ｋＤａの分子量を有する１５５個のアミノ酸の２本鎖からのジスルフィドによって結合されるホモ二量体である。ＩＬ−１７の構造は、２３個のアミノ酸からなるシグナルペプチド（ＡＡ）および１２３個のアミノ酸鎖の領域からなる。

Ｉ型細胞表面に結合するＩＬ−１７の受容体はＩＬ−１７Ｒと呼ばれ、ＩＬ−１７ＲＡ、ＩＬ−１７ＲＢおよびＩＬ−１７ＲＣのうち少なくとも３つがある。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、ホモ二量体またはヘテロ二量体の形でＩＬ−１７ＲＡおよびＩＬ−１７ＲＣ受容体複合体に結合してシグナルを伝達し、自己免疫疾患、複数の炎症反応および宿主抗感染免疫反応に関与する。ＩＬ−１７ＣはＩＬ−１７ＲＡおよびＩＬ−１７ＲＥ受容体複合体に結合して下流のシグナルを活性化し、抗感染免疫、自己免疫疾患および炎症反応を促進する。ＩＬ−１７ＢはＩＬ−１７ＲＢと結合することができることを見出したが、その下流シグナルは不明のままである。ＩＬ−１７ＲＢは、またＩＬ−１７ＲＡと受容体複合体を形成して、ＩＬ−１７Ｅを仲介してＩＩ型免疫反応を誘導することができる。ＩＬ−１７Ｅは、また腫瘍細胞におけるアポトーシスを促進することが報告された。ＩＬ−１７Ｄの受容体および下流シグナルならびにオーファン受容体ＩＬ−１７ＲＤのリガンドおよび下流シグナルは依然として不明である。

ＩＬ−１７Ａは主に、上皮細胞および間質細胞を含む非造血由来細胞のシグナル活性化を誘導する。ＩＬ−１７Ａはさまざまな炎症性因子やケモカインの発現を誘導して、さまざまな免疫細胞の動員を促進し、それによって自己免疫疾患を促進する。ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７Ｆ、及びそれらの主にＴ細胞サブセットを分泌するＴｈ１７細胞もまた、慢性関節リウマチ（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ：ＲＡ）と多発性硬化症（ｍｕｌｔｉｐｌｅｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：ＭＳ）、及び炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｂｏｗｅｌｄｉｓｅａｓｅ：ＩＢＤ）、乾癬（ｐｓｏｒｉａｓｉｓ）、全身性エリテマトーデス（ｓｙｓｔｅｍｉｃｌｕｐｕｓｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ：ＳＬＥ）と１型糖尿病（ＳＬＥ）及び１型糖尿病（ｔｙｐｅ１ｄｉａｂｅｔｅｓ：Ｔ１Ｄ）のような自己免疫疾患などの自己免疫疾患を含む様々な自己免疫疾患において重要な役割を果たすことが研究により見出される。

ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、主に標的細胞に様々な炎症性因子およびケモカインを発現させることによって炎症反応を促進する機能を発揮する。ＩＬ−１７Ａは細胞表面受容体ＩＬ−１７ＲＡに結合し、ＩＬ−１７ＲＣを動員して下流のシグナル伝達経路を仲介するヘテロ二量体を形成する。ＩＬ−１７はその受容体に結合してＴＲＡＦ６（ＴＮＦ−ｒｅｃｅｐｔｏｒａｓｓｏｃｉａｔｅｄｆａｃｔｏｒ６）を活性化する。ＩＬ−１７は、ＮＦ−ｋＢと、ＥＲＫ１、ＥＲＫ２、ＪＮＫ、およびｐ３８を含む３つのＭＡＰ（マイトジェン活性化タンパク質）酵素を活性化するＩＬ−１およびＴＮＦと同じ転写経路を共有する。これらの経路は、滑膜細胞と軟骨細胞の両方に見られる。

従って、様々な関連疾患におけるＩＬ−１７Ａの役割および機能を考慮して、患者を治療することに適した改善された抗ＩＬ−１７特異的抗体を開発することが当技術分野において依然として必要とされている。

本発明の目的は、抗ＩＬ−１７Ａ抗体、その製造方法及び用途を提供することである。

本発明の第１態様において、
ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示されるＣＤＲ１と、
ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示されるＣＤＲ２と、及び
ＳＥＱＩＤＮＯ：９に示されるＣＤＲ３との３つの相補性決定領域ＣＤＲを含む抗体の重鎖可変領域を提供する

別の好ましい一例において、前記アミノ酸配列のいずれか１つのアミノ酸配列は、任意に選択された少なくとも１つの（例えば、１〜３つ、好ましくは１〜２つ、より好ましくは１つ）アミノ酸を追加、削除、修飾及び／又は置換し、またＩＬ−１７Ａとの結合親和性を保持することができる派生配列をさらに含む。

別の好ましい一例において、前記重鎖可変領域は、ヒト由来のＦＲ領域またはマウス由来のＦＲ領域をさらに含む。

別の好ましい一例において、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：１に示されるアミノ酸配列を有する。

別の好ましい一例において、前記重鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５に示されるアミノ酸配列を有する。

本発明の第２態様は、本発明の第１態様による重鎖可変領域を有する抗体の重鎖を提供する。

別の好ましい一例において、前記抗体の重鎖は、重鎖定常領域をさらに含む。

別の好ましい一例において、前記重鎖定常領域はヒト由来、マウス由来又はウサギ由来である。

本発明の第３態様は、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１０に示されるＣＤＲ１’と、
アミノ酸配列がＫＶＳであるＣＤＲ２’と、及び
ＳＥＱＩＤＮＯ：１１に示されるＣＤＲ３’との３つの相補性決定領域ＣＤＲを含む抗体の軽鎖可変領域を提供する。

別の好ましい一例において、前記軽鎖可変領域は、ヒト由来のＦＲ領域またはマウス由来のＦＲ領域をさらに含む。

別の好ましい一例において、前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：２に示されるアミノ酸配列を有する。

別の好ましい一例において、前記軽鎖可変領域は、ＳＥＱＩＤＮＯ：５ＳＥＱＩＤＮＯ：６に示されるアミノ酸配列を有する。

本発明の第４態様は、本発明の第３態様による軽鎖可変領域を有する抗体の軽鎖を提供する。

別の好ましい一例において、前記抗体の軽鎖は、軽鎖定常領域をさらに含む。

別の好ましい一例において、前記軽鎖定常領域はヒト由来、マウス由来又はウサギ由来である。

本発明の第５態様において、
（１）本発明の第１態様に記載の重鎖可変領域と、及び／又は
（２）本発明の第３態様に記載の軽鎖可変領域とを有し、
又は、本発明の第２態様に記載の重鎖と、及び／又は本発明の第４態様に記載の軽鎖とを有する抗体を提供する。

別の好ましい一例において、前記抗体がヒトＩＬ−１７Ａタンパク質（好ましくは野生型）の親和性に対するＥＣ_５０は、５−５０ｎｇ／ｍｌである。

別の好ましい一例において、前記抗体がヒトＩＬ−１７Ａタンパク質（好ましくは野生型）の親和性に対するＥＣ_５０は、１５.４ｎｇ／ｍｌである。

別の好ましい一例において、前記抗体は、動物由来抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、又はそれらの組み合わせから選択される。

別の好ましい一例において、前記抗体は、二本鎖抗体、又は一本鎖抗体である。

別の好ましい一例において、前記抗体は、モノクローナル抗体である。

別の好ましい一例において、前記抗体は、部分的または完全ヒト化モノクローナル抗体である。

別の好ましい一例において、前記抗体の重鎖可変領域配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ.：１又は５に示されたとおりであり、及び／又は前記抗体の軽鎖可変領域配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ.：２又は６に示されたとおりである。

別の好ましい一例において、前記抗体の重鎖可変領域配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ.：１に示されたとおりであり、また、前記抗体の軽鎖可変領域配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ.：２に示されたとおりである。

別の好ましい一例において、前記抗体の重鎖可変領域配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ.：５に示されたとおりであり、また、前記抗体の軽鎖可変領域配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ.：６に示されたとおりである。

別の好ましい一例において、前記抗体は、薬物コンジュゲートの形態である。

本発明の第６態様において、
（ｉ）本発明の第１態様に記載の重鎖可変領域、本発明の第２態様に記載の重鎖、本発明の第３態様に記載の軽鎖可変領域、本発明の第４態様に記載の軽鎖、または本発明の第５態様に記載の抗体と、及び
（ｉｉ）発現及び／又は精製を補助する任意に選択されたタグ配列とを有する組換えタンパク質を提供する。

別の好ましい一例において、前記タグ配列は、６Ｈｉｓタグを含む。

別の好ましい一例において、前記組換えタンパク質（またはポリペプチド）は、融合タンパク質を含む。

別の好ましい一例において、前記組換えタンパク質は、単量体、二量体、または多量体である。

本発明の第７態様において、ＣＡＲ構築物を提供し、前記ＣＡＲ構築物のモノクローナル抗体抗原結合領域のｓｃＦＶセグメントは、ＩＬ−１７Ａに特異的に結合する結合領域であり、前記ｓｃＦｖは、本発明の第１態様に記載の重鎖可変領域及び本発明の第３態様に記載の軽鎖可変領域を有することを特徴とする。

本発明の第８態様において、前記免疫細胞が本発明の第７態様による外因性ＣＡＲ構築物を発現することを特徴とする組換え免疫細胞を提供する。

別の好ましい一例において、前記免疫細胞は、ＮＫ細胞、Ｔ細胞からなる群から選択される。

別の好ましい一例において、前記免疫細胞は、ヒト又はヒト以外の哺乳動物（例えば、マウス）に由来する。

本発明の第９態様において、
（ａ）本発明の第１態様に記載の重鎖可変領域、本発明の第２態様に記載の重鎖、本発明の第３態様に記載の軽鎖可変領域、本発明の第４態様に記載の軽鎖、又は本発明の第５態様に記載の抗体、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される抗体部分と、及び
（ｂ）検出可能なマーカー、薬物、毒素、サイトカイン、放射性核種、酵素、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される前記抗体部分にカップリングするカップリング部分と、を含有する抗体薬物コンジュゲートを提供する。

別の好ましい一例において、前記抗体部分は、化学結合またはリンカーを介して前記カップリング部分にカップリングされる。

本発明の第１０態様において、本発明の第１態様に記載の記重鎖可変領域、本発明の第２態様に記載の重鎖、本発明の第３態様に記載の軽鎖可変領域、本発明の第４態様に記載の軽鎖、又は本発明の第５態様に記載の抗体、本発明の第６態様に記載の組換えタンパク質、本発明の第８態様に記載の免疫細胞、本発明の第９態様に記載の抗体薬物コンジュゲート、又はそれらの組み合わせからなる群から選択され、（ａ）検出試薬又はキットを製造し、及び／又は（ｂ）ＩＬ−１７Ａ関連疾患を予防及び／又は治療する薬物を製造することを特徴とする活性成分の用途を提供する。

別の好ましい一例において、前記活性成分は、ＩＬ−１７Ａ関連疾患を予防及び／又は治療するために使用される。

別の好ましい一例において、前記ＩＬ−１７Ａ関連疾患は、炎症、自己免疫疾患、またはそれらの組み合わせからなる群から選択され、好ましくは自己免疫疾患である。

別の好ましい一例において、前記疾患は、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、多発性硬化症、炎症性関節炎、またはそれらの組み合わせからなる群から選択され、好ましくは炎症性関節炎である。

別の好ましい一例において、前記炎症性関節炎は、変形性関節症、慢性関節リウマチ、慢性関節リウマチ、またはそれらの組み合わせからなる群から選択され、好ましくは慢性関節リウマチである。

別の好ましい一例において、前記抗体は、薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の形態である。

別の好ましい一例において、前記検出試薬又はキットは、ＩＬ−１７Ａ関連疾患を診断するために使用される。

別の好ましい一例において、前記検出試薬又はキットは、試料中のＩＬ−１７Ａタンパク質を検出するために使用される。

別の好ましい一例において、前記検出試薬は、試験片である。

本発明の第１１態様において、
（ｉ）本発明の第１態様に記載の記重鎖可変領域、本発明の第２態様に記載の重鎖、本発明の第３態様に記載の軽鎖可変領域、本発明の第４態様に記載の軽鎖、又は本発明の第５態様に記載の抗体、本発明の第６態様に記載の組換えタンパク質、本発明の第８態様に記載の免疫細胞、本発明の第９態様に記載の抗体薬物コンジュゲート、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される活性成分と、及び
（ｉｉ）薬学的に許容されるベクターと、を含有する薬物組成物を提供する。

別の好ましい一例において、前記薬物組成物は、液体製剤である。

別の好ましい一例において、前記薬物組成物は、注射剤である。

本発明の第１２態様において、
（１）本発明の第１態様に記載の記重鎖可変領域、本発明の第２態様に記載の重鎖、本発明の第３態様に記載の軽鎖可変領域、本発明の第４態様に記載の軽鎖、又は本発明の第５態様に記載の抗体、又は
（２）本発明の第６態様に記載の組換えタンパク質、
（３）本発明の第７態様に記載のＣＡＲ構築物からなる群から選択されたポリペプチドをコードするポリヌクレオチド（ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）を提供する。

本発明の第１３態様において、本発明の第１２態様に記載のポリヌクレオチドを含有するベクターを提供する。

別の好ましい一例において、前記ベクターは、細菌プラスミド、バクテリオファージ、酵母プラスミド、植物細胞ウイルス、アデノウイルス（ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）などの哺乳動物細胞ウイルス、レトロウイルス（ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓ）、または他のベクターを含む。

本発明の第１４態様において、本発明の第１３態様に記載のベクターを含み、又はゲノム中に本発明の第１２態様に記載のポリヌクレオチドが組み込まれた遺伝子操作された宿主細胞を提供する。

本発明の第１５態様において、試料中のＩＬ−１７Ａタンパク質をインビトロ（ｉｎｖｉｔｒｏ）で検出（診断性または非診断性を含む）する方法を提供し、前記方法は、
（１）インビトロで、前記試料を本発明の第５態様に記載の抗体に接触させるステップと、
（２）抗原−抗体複合体が形成されているかどうかを検出し、ここで、複合体の形成は、試料中にＩＬ−１７Ａタンパク質が存在することを意味するステップとを含む。

本発明の第１６態様において、基板（支持板）及び試験ストリップを含む検出パネルを提供し、前記試験ストリップは、本発明の第５態様に記載の抗体又は本発明の第９態様に記載の免疫複合体を含有する。

本発明の第１７態様において、
（１）本発明の第５態様に記載の抗体を含有する第１容器と、及び／又は
（２）本発明の第５態様に記載の抗体に対する二次抗体を含有する第２容器とを含み、
又は、本発明の第１６態様に記載の検出パネルを含むキットを提供する。

本発明の第１８態様において、
（ａ）発現に適した条件において、本発明の第１４態様に記載の宿主細胞を培養するステップと、
（ｂ）培養物から本発明の第５態様に記載の抗体又は本発明の第６態様に記載の組換えタンパク質である組換えポリペプチドを分離するステップと、を含む組換えポリペプチドの製造方法を提供する。

本発明の第１９態様において、必要とする対象に本発明の第５態様に記載の抗体、前記抗体の抗体−薬物コンジュゲート、又は前記抗体を発現するＣＡＲ−Ｔ細胞、又はそれらの組み合わせを投与するステップを含むことを特徴とするＩＬ−１７Ａ関連疾患の方法を提供する。

本発明の範囲内で、本発明の前記各技術的特徴と以下（例えば、実施例）に具体的に記述される各技術的特徴との間をお互いに組み合わせて、新しいまたは好ましい技術方案を形成することができることを理解すべきである。スペースに限りがあるため、ここでは繰り返さない。

マウスにおけるイミキモド（ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）誘発乾癬に対するデキサメタゾン（ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）およびヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体の改善効果を示す。

本発明者らは、広範囲かつ徹底的な研究を介して、大規模スクリーニングを経て、意外に極めて優れた親和性および特異性を有する抗ＩＬ−１７Ａモノクローナル抗体を獲得し、この抗体に基づいてヒト化抗体を獲得した。本発明の抗体は、ＩＬ−１７Ａ抗原に高い特異性で結合することができ、非常に高い親和性（ＥＬＩＳＡによるとＥＣ_５０は約１５．４ｎｇ／ｍｌと測定される）を有し、そしてＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７受容体との結合を著しく阻害し、哺乳類動物には目に見える毒の副作用はない。本発明はこれに基づいて完成したものである。

用語
本明細書で使用されるように、用語「コンジュゲート」とは、標的に結合することができる可溶性受容体又はそのフラグメント又はその類似体、又は抗体又はそのフラグメント又はその類似体を指す。本発明に記載の「ＩＬ−１７Ａコンジュゲート」とは、ＩＬ−１７Ａを特異的に認識してＩＬ−１７Ａに結合する抗体又はそのフラグメント又はその類似体を指す。

本明細書で使用されるように、用語「投与」及び「処理」とは、外因性薬物、治療剤、診断剤、又は組成物が動物、ヒト、被験体、細胞、組織、器官又は生物流体に応用されることを指す。「投与」及び「処理」は、治療、薬物動態学、診断、研究及び実験法を指すことができる。細胞の処理は、試薬と細胞との接触、及び試薬と流体との接触、流体と細胞との接触を含む。「投与」及び「処理」はまた、試薬、診断、結合組成物または他の細胞によるインビトロ及びエクスビボ処理を意味する。「処理」は、ヒト、動物又は研究対象に応用される場合、治療的処理、予防又は予防性措置、研究及び診断を指し、ＩＬ−１７Ａコンジュゲートとヒト又は動物、対象、細胞、組織、生理学的区画または生理学的流体との接触を含む。

本明細書で使用されるように、用語「治療」とは、本発明の任意のＩＬ−１７Ａコンジュゲート及びその組成物を含む、１つ又は複数の疾患症状を有する患者に内用または外用の治療薬を投与することを指し、前記治療剤はこれらの症状に治療効果を持つことが知られる。通常、患者は、１つまたは複数の疾患症状を緩和するための有効な量（治療有効量）の治療剤を投与される。

本明細書で使用されるように、用語「任意の」又は「任意に」は、後術する事象または状況が起こり得るが必ずしも起こる必要はないことを意味する。例えば、「１〜３個の抗体重鎖可変領域を任意に含む」とは、特定の配列の抗体重鎖可変領域が、１、２、または３個を有してもよいが、必須ではないことを意味する。

抗体
本明細書で使用されるように、用語「抗体」とは、鎖間ジスルフィド結合によって２つの同一の重鎖と２つの同一の軽鎖とが結合することによって形成されるテトラペプチド鎖構造である免疫グロブリンを指す。免疫グロブリン重鎖定常領のアミノ酸組成および配置順序が異なるため、その抗原性も異なる。従って、免疫グロブリンは５つのクラスに分類されることができ、又は免疫グロブリンの異なるタイプと呼ばれることができ、即ち、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥであり、異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常領域はそれぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。ＩｇＧは、免疫グロブリンの最も重要なクラスを表し、化学構造と生物学的の機能の違いにより、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４の４つのサブクラスに分類できる。軽鎖は定常領域の違いによってκ又はλ鎖に分けられる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元配置は当業者にはよく知られている。

抗体重鎖及び軽鎖のＮ端に近い約１１０個のアミノ酸の配列は変化が大きく、可変領域（Ｖ領域）であり、Ｃ端に近い残りのアミノ酸配列は、比較的安定しており、定常領域（Ｃ領域）である。可変領域は、３つの超可変領域（ＨＶＲ）および４つの配列が比較的に保守的であるＦＲ領域（ＦＲ）を含む。４つのＦＲのアミノ酸配列は比較的に保守的なであり、結合反応に直接関与しない。３つの超可変領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）としても呼ばれる抗体の特異性を決定する。軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）および重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）は、それぞれ３つのＣＤＲ領域と４つのＦＲ領域からなり、アミノ末端からカルボキシ末端への順はＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４である。軽鎖の３つのＣＤＲ領域、即ち、軽鎖超可変領域（ＬＣＤＲ）は、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を指し、重鎖の３つのＣＤＲ領域、即ち、重鎖超可変領域（ＨＣＤＲ）は、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を指す。本発明の抗体または抗原結合フラグメントのＬＣＶＲおよびＨＣＶＲ領域のＣＤＲアミノ酸残基は、数および位置において既知のＫａｂａｔ番号付け規則（ＬＣＤＲ１−３、ＨＣＤＲ２−３）に、またはｋａｂａｔおよびｃｈｏｔｈｉａ番号付け規則（ＨＣＤＲ１）に従う。天然の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域中の４つのＦＲ領域は、大体β折り畳み構造をなし、３つのＣＤＲによって連結されてリンカーを形成し、場合によっては部分的なβ折り畳み構造を形成してもよい。各鎖のＣＤＲは、ＦＲ領域によって互いに密接に結合し、そして他の鎖のＣＤＲと共に抗体の抗原結合部位を形成する。同種の抗体のアミノ酸配列を比較して、どのアミノ酸がＦＲまたはＣＤＲ領域を構成するかを決定することができる。定常領域は、抗体と抗原の結合に直接関与しないが、それらは関与する抗体の抗体依存性細胞毒性などの異なるエフェクター機能を示す。

本明細書で使用されるように、用語「抗原結合フラグメント」とは、抗原結合活性を有するＦａｂフラグメント、Ｆａｂ'フラグメント、Ｆ（ａｂ'）２フラグメント、または単一のＦｖフラグメントを指す。Ｆｖ抗体は、抗体重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含むが、定常領域は含まず、そして抗原結合部位全体で最小の抗体フラグメントを有する。一般的に、Ｆｖ抗体は、ＶＨドメインとＶＬドメインとの間にポリペプチドリンカーも含み、抗原結合に望ましい構造を形成することができる。

本明細書で使用されるように、用語「抗原決定基」とは、抗原上で不連続で、本発明の抗体または抗原結合フラグメントによって認識される三次元空間部位を指す。

本発明は、完全抗体だけでなく、免疫学的に活性な抗体のフラグメントまたは他の配列を有する抗体によって形成された融合タンパク質をさらに含む。従って、本発明は抗体のフラグメント、誘導体及び類似体をさらに含む。

本発明において、抗体は、当業者に周知の技術によって製造されたマウス、キメラ、ヒト化または完全ヒト抗体を含む。ヒトおよび非ヒト部分を含むキメラおよびヒト化モノクローナル抗体などの組換え抗体は、本技術分野において周知の組換えＤＮＡ技術を用いて製造することができる。

本明細書で使用されるように、用語「モノクローナル抗体」とは、単一細胞由来のクローンから分泌される抗体を指す。モノクローナル抗体は、非常に特異的であり、単一の抗原性エピトープを標的とする。前記細胞は、真核細胞株、原核細胞株またはファージクローン細胞株であり得る。

本明細書で使用されるように、用語「キメラ抗体」は、マウス抗体のＶ領域遺伝子をヒト抗体のＣ領域遺伝子とキメラ遺伝子にスプライスし、次いでベクターを挿入し、宿主細胞によって発現される抗体分子をトランスフェクトする。それは、親マウス抗体の高い特異性および親和性を保持するだけでなく、そのヒト由来Ｆｃセグメントが生物学的効果を効果的に仲介することも可能にする。

本明細書で使用されるように、用語「ヒト化抗体」は、非ヒト抗体（好ましくはマウスモノクローナル抗体）に由来する（または実質的に由来する）ＣＤＲ領域、及び実質的にヒト由来抗体配列に由来するＦＲ領域と定常領域を有する本発明のマウス抗体の可変領域操作型であり、即ち、マウス抗体のＣＤＲ領域配列は、異なる種類のヒト生殖系列抗体フレームワーク配列上に移植される。ＣＤＲ配列は抗体−抗原相互作用の大部分に関与しているため、特定の天然に存在する抗体の特性を模倣する組換え抗体はは、発現ベクターを構築することによって発現させることができる。

本発明において、抗体単一特異性、二重特異性、三重特異性、またはより多重特異性であり得る。

本発明において、本発明の抗体は、その保守的な変異体をさらに含み、本発明の抗体のアミノ酸配列と比較して最大１０個、好ましくは最大８つ、より好ましくは最大５つ、最適に好ましくは最大３つのアミノ酸が、類似または類似の性質のアミノ酸によって置換されてポリペプチドを形成することを指す。これらの保守的な変異体ポリペプチドは、好ましくは表Ａによるアミノ酸置換により製造される。

抗ＩＬ−１７Ａ抗体
本明細書で使用されるように、用語「ＩＬ−１７Ａ」とは、一般的に、天然または組換えのヒトＩＬ−１７Ａ、及びヒトＩＬ−１７Ａの非ヒトホモログを指す。他に示さない限り、ＩＬ−１７Ａのモル濃度は、ＩＬ−１７Ａのホモ二量体の分子量（例えば、ヒトＩＬ−１７Ａは、３０ＫＤａ）を用いて計算した。

本明細書で使用されるように、用語「ヒトＩＬ−１７Ａ（ｈｕＩＬ−１７Ａ）」とは、成熟型のヒトＩＬ−１７Ａタンパク質登録番号ＮＰ−００２１８０及びＡＡＴ２２０６４（即ち、残基２４〜１５５）、及びその天然の変異体および多型を指す。

本発明は、重鎖および軽鎖を含むＩＬ−１７Ａに対する高い特異的かつ高親和性の抗体を提供し、前記重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を含み、前記軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を含む。

好ましくは、重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列及び軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列のそれぞれのＣＤＲは、
ａ１）ＳＥＱＩＤＮｏ.：７、
ａ２）ＳＥＱＩＤＮｏ.：８、
ａ３）ＳＥＱＩＤＮｏ.：９、
ａ４）ＳＥＱＩＤＮｏ.：１０、
ａ５）ＫＶＳ、
ａ６）ＳＥＱＩＤＮｏ.：１１、
ａ７）前記アミノ酸配列のいずれか１つの少なくとも１つ（例えば、１〜５つ、１〜３つ、好ましくは１〜２つ、より好ましくは１つ）のアミノ酸配列を、付加、欠失、修飾及び／又は置換することによりＩＬ−１７Ａ結合親和性を有する配列からなる群から選択される。

別の好ましい一例において、前記少なくとも１つのアミノ酸配列を付加、欠失、修飾及び／又は置換することによって形成される配列は、好ましくは、少なくとも８０％、好ましくは、少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％、最適に好ましくは、９５％の相同性を有する。

本発明の抗体は、二本鎖または一本鎖抗体であり、そして動物由来抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、より好ましくはヒト化抗体、ヒト−動物キメラ抗体、より好ましくは、全ヒト化抗体から選択されることができる。

本発明の抗体誘導体は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）_２又は当分野における他の公知の抗体誘導体等、及びＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭ抗体又は他のサブタイプの抗体中のいずれか１つ又は多数のような一本鎖抗体、及び／又は抗体フラグメントであり得る。

ここで、前記動物は、好ましくはマウスのような哺乳動物である。

本発明の抗体は、ヒトＩＬ−１７Ａを標的とするマウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ＣＤＲ移植抗体及び／又は修飾抗体であり得る。

本発明の好ましい一実施例において、前記ＳＥＱＩＤＮｏ.：７、８及び９のいずれかの１つ又は多数の配列、またはそれらの少なくとも１つのアミノ酸が付加、欠失、修飾及び／又は置換することによりＩＬ−１７Ａ結合親和性を有する配列は、重鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ領域に位置する。

本発明の好ましい一実施例において、前記ＳＥＱＩＤＮｏ.：１０、アミノ酸配列、ＫＶＳ及びＳＥＱＩＤＮｏ.：１１中のいずれかの１つ又は多数の配列、又はそれらの少なくとも１つのアミノ酸が付加、欠失、修飾及び／又は置換することによりＩＬ−１７Ａ結合親和性を有する配列は、軽鎖可変領域（ＶＨ）のＣＤＲ領域に位置する。

本発明のより好ましい一実施例において、ＶＨＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、ＳＥＱＩＤＮｏ.：７、８及び９のいずれか１つ又は多数の配列、又はれらの少なくとも１つのアミノ酸が付加、欠失、修飾及び／又は置換することによりＩＬ−１７Ａ結合親和性を有する配列からそれぞれ独立して選択され、ＶＬＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３は、ＳＥＱＩＤＮｏ.：１０、アミノ酸配列、ＫＶＳ及びＳＥＱＩＤＮｏ.：１１中のいずれかの１つ又は多数の配列、又はそれらの少なくとも１つのアミノ酸が付加、欠失、修飾及び／又は置換することによりＩＬ−１７Ａ結合親和性を有する配列からそれぞれ独立して選択される。

本発明の前記内容において、前記付加、欠失、修飾及び／又は置換されるアミノ酸の数は、好ましくは、最初のアミノ酸配列の全アミノ酸数の４０％未満であり、より好ましくは、３５％未満であり、より好ましくは、１〜３３％であり、より好ましくは、５〜３０％であり、より好ましくは、１０〜２５％であり、より好ましくは、１５〜２０％である。

本発明において、前記付加、欠失、修飾及び／又は置換されるアミノ酸の数は、通常１、２、３、４又は５つであり、好ましくは、１〜３つであり、より好ましくは、１〜２つであり、最適に好ましくは、１つである。

抗体の製造
モノクローナル抗体の産生に適した任意の方法は、本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体を産生することに用いられることができる。例えば、動物は、連結されたまたは天然に存在するＩＬ−１７Ａホモ二量体またはそのフラグメントで免疫することができる。アジュバント、免疫賦活剤、反復追加免疫を含む適切な免疫方法を使用することができ、そして１つまたは複数の経路を使用することができる。

ＩＬ−１７Ａに特異的な非ヒト抗体の産生のための免疫原（抗原）として任意の適切な形態のＩＬ−１７を使用することができ、前記抗体の生物学的活性がスクリーニングされる。刺激免疫原は、天然ホモ二量体を含む全長成熟ヒトＩＬ−１７Ａ、または単一／複数のエピトープを含むペプチドであり得る。免疫原は、単独で使用されることができ、または当該分野で公知の１つまたは複数の免疫原性エンハンサーと組み合わせて使用されることができる。免疫原は、天然の供給源から精製されることができ、または遺伝子改変細胞において産生されることができる。免疫原をコードするＤＮＡは、その供給源においてゲノム性または非ゲノム性（例えばｃＤＮＡ）であることができる。免疫原をコードするＤＮＡは、アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクター、バキュロウイルスベクター、材料、及び非ウイルスベクターを含むがこれらに限定されない適切な遺伝子ベクターを用いて発現させることができる。

本発明の抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体を生産する例示的な方法は、実施例１に記載される。

ヒト化抗体は、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥを含む任意のクラスの免疫グロブリンから選択することができる。本発明において、抗体は、ＩｇＧ抗体であり、ＩｇＧ１サブタイプが使用される。必要な定常ドメイン配列の最適化は、以下の実施例に記載の生物学的測定を用いて抗体をスクリーニングして所望の生物学的活性を得ることによって容易に達成される。

同様に、任意の種類の軽鎖は、本明細書の化合物及び方法において使用されることができる。特に、κ、λ鎖またはそれらの変異体は本発明の化合物および方法において有用である。

本発明の抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体をヒト化する例示的な方法は、実施例４に記載される。

本発明の抗体またはそのフラグメントのＤＮＡ分子の配列は、ＰＣＲ増幅またはゲノムライブラリースクリーニングなどの従来の技術によって得ることができる。さらに、軽鎖および重鎖のコード配列を互いに融合させて、一本鎖抗体を形成することができる。

関連配列が得られたら、組換え方法を用いて関連配列を大量に得ることができる。これは通常、それをベクターにクローニングし、それを細胞に移入し、次いで増殖した宿主細胞から従来の方法により単離することにより関連する配列を得られる。

さらに、特にフラグメントの長さが短い場合、人工的に合成する方法を使用して関連配列を合成することができる。通常、配列が長いフラグメントは、まず複数の小さなフラグメントを合成し、次に連結を行うことによって得ることができる。次いで、このＤＮＡ配列を当該分野で公知の様々な既存のＤＮＡ分子（またはベクター）および細胞に導入することができる。

本発明はまた、前記の適切なＤＮＡ配列、及び適切なプロモーターまたは制御配列を含むベクターに関する。これらのベクターは、それらがタンパク質を発現することを可能にするために適切な宿主細胞を形質転換するために使用されることができる。

宿主細胞は、細菌細胞などの原核細胞、または酵母細胞などの低級真核細胞、または哺乳動物細胞などの高等真核細胞であることができる。好ましい動物細胞は、ＣＨＯ−Ｓ、ＣＨＯ−Ｋ１、ＨＥＫ−２９３細胞を含むがこれらに限定されない。

本発明において、宿主細胞を組換えＤＮＡで形質転換するステップは、当該分野において周知の技術によって行われる。得られた形質転換体は、既存の方法により培養することができ、本発明の遺伝子によりコードされるポリペプチドを発現する。使用される宿主細胞に応じて、それは通常の培地を使用して適切な条件下で培養される。

一般的に、得られる宿主細胞は、本発明の抗体の発現に適した条件下で培養される。次いで、従来の免疫グロブリン精製ステップを使用して、例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、モレキュラーシーブクロマトグラフィーまたはアフィニティークロマトグラフィーなどの当業者に周知の従来の分離および精製手段によって、本発明の抗体を得る。

得られたモノクローナル抗体は、既存の方法により同定することができる。例えば、モノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降法またはインビトロ結合アッセイ（ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ））によって測定することができる。

応用
本発明は、例えば診断用調製物の調製、またはＩＬ−１７Ａに関連する疾患の予防及び／又は治療用の薬剤の調製のための本発明の抗体の用途を提供する。前記ＩＬ−１７Ａ関連疾患は、乾癬、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、多発性硬化症、炎症性腸疾患（クローン病、潰瘍性大腸炎など）、変形性関節症、関節リウマチ（ＲＡ）、慢性関節リウマチまたは骨粗鬆症、炎症性線維症（例、強皮症、肺線維症および硬化症）、喘息（アレルギー性喘息を含む）、アレルギー、およびがんを含むがこれらに限定されない炎症性疾患、自己免疫疾患などを含む。

薬物組成物
本発明はさらに組成物を提供する。好ましい例において、前記組成物は、前記の抗体またはその活性フラグメントまたはその融合タンパクまたはそのＡＤＣまたは対応するＣＡＲ−Ｔ細胞、および薬学的に許容されるベクターを含む医薬組成物である。ｐＨ値は、配合される物質の性質および治療される疾患によって変化されるが、一般的に、これらの材料は、通常にｐＨが約５〜８であり、好ましくは、約６〜８である毒性のなく、不活性で、薬学的に許容される水性ベクター媒体に配合することができる。配合された薬物組成物は、腫瘍内投与、腹腔内投与、静脈内投与、または局所投与を含むがこれらに限定されない従来の経路によって投与することができる。

本発明に記載の抗体は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞免疫療法（ＣＡＲ−Ｔ）などに用いられる細胞内でヌクレオチド配列を発現させるための細胞療法であってもよい。

本発明の薬物組成物は、ＩＬ−１７Ａタンパク質分子との結合に直接に使用することができ、従って、ＩＬ−１７Ａに関連する疾患の予防および治療に使用することができる。さらに、他の治療剤を同時に使用することができる。

本発明の薬物組成物は、安全な有効量（例えば、０．００１〜９９ｗｔ％、より好ましくは、０．０１〜９０ｗｔ％、さらに好ましくは、０．１〜８０ｗｔ％）の本発明の前記モノクローナル抗体（またはそのコンジュゲート）および薬学的に許容されるベクターまたは賦形剤を含有する。このようなベクターは、食塩水、緩衝液、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、およびそれらの組み合わせを含む（しかし、これらに限定されない）。薬物製剤は、投与方法に適合させるべきである。本発明の薬物組成物は、注射剤の形態、例えば、生理食塩水またはグルコースおよび他の補助剤を含有する水溶液を用いて既存の方法により製造することができる。注射剤および液剤などの薬物組成物は、無菌条件下で製造することが好ましい。投与される活性成分の量は、治療上有効な量、例えば、１日当たり約１マイクログラム／１キログラム体重〜約５ミリグラム／１キログラム体重である。さらに、本発明のポリペプチドは、他の治療剤と共に使用することもできる。

薬物組成物を使用する場合、安全な有効量の薬物組成物を哺乳動物に投与することであり、ここで安全な有効量は、通常少なくとも約１０マイクログラム／１キログラム体重であり、そしてほとんどの場合約５０ミリグラム／１キログラム体重であり、好ましくは、この投与量は、約１０マイクログラム／１キログラム体重〜約２０ミリグラム／１キログラム体重である。もちろん、具体的な投与量はまた、投与経路、患者の健康などのような、熟練した医師の技量の範囲内である要因も考慮すべきである。

検出用途及びキット
本発明の抗体は、診断情報を提供するために、例えばサンプルを検出するための検出用途に使用することができる。

本発明において、使用されるサンプル（試料）は、細胞、組織サンプル、および生検標本を含む。本発明で使用される「生検」という用語は、当業者に知られているすべての種類の生検を含むものとする。従って、本発明において使用される生検は、例えば内視鏡的方法または器官の穿刺または針生検によって製造された組織サンプルを含むことができる。

本発明に使用されるサンプルは、固定または保存された細胞または組織サンプルを含む。

本発明は、本発明の抗体（またはそのフラグメント）を含むキットをさらに提供し、そして本発明の好ましい一例において、前記キットは、容器、使用説明書、緩衝液などをさらに含む。好ましい例において、本発明の抗体は検出パネル上に固定されることができる。

本発明の主な利点
（ａ）本発明の抗体は、優れた生物学的活性および特異性を有し、そして高い親和性（ＥＣ_５０は、ＥＬＩＳＡによれば約１０〜２０ｎｇ／ｍｌに高くなり得る）を有する。さらに、ＩＬ−１７Ａに対して良好な結合親和性を有し、そして他のファミリーメンバーＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７ＥおよびＩＬ−１７Ｆに対して結合性を有さず、ＩＬ−１７Ａを標的とする抗体として使用されることができる。
（ｂ）本発明のヒト化抗体は、マウス抗体に比べて、ＩＬ−１７Ａとのより優れた親和性を有するだけでなく、より低い免疫原性を有する。
（ｃ）本発明の抗体は、哺乳動物自体に目に見える副作用なしに、ＩＬ−１７ＡとＩＬ−１７受容体との結合を著しく阻害することができる。
（ｄ）本発明の抗体は、特定の非ヒト哺乳動物のＩＬ−１７Ａと一定の親和性を有し、動物モデルにおける試験及び品質管理検出を補助する。

本発明を具体的な実施例に結びついて、以下にさらに説明する。これらの実施例は本発明の範囲を限定することを意図するものでなく、本発明を説明するためであることを理解すべきである。具体的な条件を規定しない以下の実施例における実験方法は、通常、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ等、分子クローニング：実験室マニュアル（ＮｅｗＹｏｒｋ：ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ, １９８９）に記載の条件、または製造業者が推奨する条件のような通常の製造条件に従って製造される。特記しない限り、百分率および部数は重量百分率および重量部数である。

実施例１：ヒトＩＬ−１７Ａに対するマウスモノクローナル抗体−独自抗体の製造方法
１.１マウス由来モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞の製造
まず、ヒトＩＬ−１７Ａタンパク質を抗原として使用し、アジュバントで乳化した後、ＢＡＬＢ／ｃマウスを用いてマルチポイント皮下免疫を行い、免疫したマウスの血清力価をモニターし、要件を満たした後、マウス脾細胞と骨髄腫（Ｓｐ２／０）を採取して融合させ、ＨＡＴによるスクリーニングによって、ハイブリドーマポリクローナル（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｉｓｐｏｌｙｃｌｏｎａｌ）細胞を獲得する。

１.２間接ＥＬＩＳＡ−ハイブリドーマ細胞のスクリーニング方法
高特異的結合ポリクローナルをＥＬＩＳＡ検出方法によりスクリーニングし、モノクローナル培養を行い、そして高特異的モノクローナル細胞株をＥＬＩＳＡ方法によりスクリーニングし、ＨＴ１０８０細胞によってＩＬ−６放出アッセイを行い、そして細胞機能的効果を有するモノクローナル細胞株をスクリーニングし、次いでＢｉａｃｏｒｅ法により親和性および半減期を分析して、最終的にＩＬ−１７Ａを発現するモノクローナル細胞を獲得した。

試験材料：
組換えヒトＩＬ−１７Ａ、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１２０４７−ＨＮＡＳ

試験方法：
ヒトＩＬ−１７ＡをＣＢＳで１μｇ／ｍｌのコーティング溶液に調製し、５０μＬ／ウェルを酵素標準プレートに加え、２〜８℃で１２時間以上コーティングして残留液を捨て、３％のミルクをウェル当たり２００μＬを加え、室温で１時間ブロッキングした。各ウェルに２００μＬ以上のＰＢＳＴを加えて１回洗浄い、ハイブリドーマ上清を１００μｇ／ｍｌに希釈し、さらに１０回のグラジエントを１０倍希釈して、１００μＬ／ウェルをプレートに加えた。室温で１時間インキュベートし、１ウェルあたり２００μＬ以上のＰＢＳＴを加え、４回洗浄し、３％ミルク−ＰＢＳＴを加えた２５０００倍希釈したＨＲＰ結合ヤギ抗マウスＩｇＧＦｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ社から購入）を１００μＬ／ウェルで加える。室温で１時間インキュベートした後、２００μＬ以上のＰＢＳＴを各ウェルに加え、６回洗浄し、そして叩いて乾かした。１ウェルあたり１００μＬになるようにＴＭＢ着色溶液を添加する。室温で５分間反応させた後、２ＭのＨ２ＳＯ４、５０μＬ／ウェルを添加することによって反応を停止させた。反応が停止した酵素マーカープレートをマイクロプレートリーダーに載せ、吸光度ＯＤ４５０値を４５０ｎｍの波長で読み取った。

試験結果：

表１から分かるように、スクリーニングされた複数の抗体のうち、ハイブリドーマ１４Ｆ１０／９Ｆ６（またはそれから産生される抗体）は、ヒトＩＬ−１７ａに対して非常に高い結合活性を有する。

実施例２：抗ＩＬ−１７Ａ抗体Ｖ−遺伝子配列クローニング
５'ＲＡＣＥ技術に基づいて、ハイブリドーマ７Ｄ６／５Ｈ８によって発現されるマウス抗体の可変領域をコードするＤＮＡ配列を測定する。要するに、ＳＭＡＲＴ５’ＲＡＣＥ合成Ｋｉｔ（ＴＡＫＡＲＡ，Ｎｏ．６３４８５９）を製造元の指示に従って使用して、重鎖および軽鎖の遺伝子特異的ｃＤＮＡを製造した。アガロースゲル電気泳動によりＰＣＲ産物を分析した。重鎖と軽鎖の両方の可変領域のサイズは、約５００塩基対である。反応により得られた適切なサイズの増幅ＰＣＲ産物をベクターｐＥＡＳＹ−ＢｌｕｎｔＳｉｍｐｌｅプラスミド（北京全式金、Ｎｏ．ＣＢ１１１−０２）にクローニングし、Ｓｔｅｌｌａｒ大腸菌コンピテントセル（ＴＡＫＡＲＡ，Ｎｏ．６３６７６３）に形質転換した。ユニバーサルＭ１３フォワードまたはリバースプライマーを用いたコロニーＰＣＲによってクローンをスクリーニングし、２〜３個のクローンをＤＮＡ配列分析のために各反応から選択した。各クローンの各配列決定反応結果は、Ｅｘｐａｓｙ−ｔｒａｎｓｌａｔｅツール（ｈｔｔｐ:／／ｗｅｂ.ｅｘｐａｓｙ.ｏｒｇ／ｔｒａｎｓｌａｔｅ／）を使用して分析した。測定結果は、７Ｄ６／５Ｈ８によって発現された抗ＩＬ１７Ａ抗体Ｖ領域配列が以下の通りであることを示した。

ここで、下線は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３（ＳＥＱＩＤＮＯ.：７、８及び９）である。

ここで、下線は、ＣＤＲ１’、ＣＤＲ２’、ＣＤＲ３’（ＳＥＱＩＤＮＯ.：１０、アミノ酸配列：ＫＶＳ及びＳＥＱＩＤＮＯ.：１１）である。

実施例３：キメラ抗体の構築及び発現
３.１キメラ抗体の製造
ＰＣＲクローン化マウス７Ｄ６／５Ｈ８ＶＨおよびＶＬ領域ｃＤＮＡをそれぞれヒトＩｇＧ１およびｋ定常領域に連結することにより、キメラ重鎖および軽鎖を構築した。たＰＣＲプライマーでマウスｃＤＮＡ配列の５'および３'端を修飾し、前記プライマーは、各鎖に適切なリーダー配列を付加し、既存の組換え抗体発現ベクターｐＨＢ−Ｆｃへのクローニングを可能にする制限部位を増加させるように設計された。ｐＨＢ−Ｆｃプラスミドベクターの製造方法は以下の用である。ｐｃＤＮＡ／ＨＡ−ＦＬＡＧ（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ＃：ＦＪ５２４３７８）ベクターを出発プラスミドとして使用し、エンドヌクレアーゼＥｃｏＲＩの後にヒトＩｇＧ１またはｋの定常領域配列を加え、エンドヌクレアーゼＨｉｎｄＩＩＩの前にヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）プロモーター配列（登録番号：Ｘ１７４０３）を加え、チャイニーズハムスターグルタミンシンテターゼ遺伝子（Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ＃：Ｘ０３４９５）をアンピシリン耐性遺伝子の後およびＨＣＭＶプロモーターの前に加えた。

タンパク質発現に使用した宿主細胞は、ＡＴＣＣ社から購入したＣＨＯ−Ｋ１細胞（Ｃａｔ＃ＣＣＬ−６１）である。この細胞を一連の家畜化工程を経て、無血清培地（ＥＸ−ＣＥＬＬＴＭ３０２）に懸濁して培養されえるＣＨＯ−Ｋ１細胞に家畜化した。この細胞を用いて、構築した軽鎖および重鎖組換え発現プラスミドをエレクトロポレーションにより細胞に移した。３〜５日間インキュベーターで培養した。間接ＥＬＩＳＡにより、ＣＨＯ−Ｋ１トランスフェクション上清からの抗体濃度を測定した。これは、トランスフェクトしたＣＨＯ−Ｋ１細胞が約３０ｍｇ／Ｌのキメラ抗体を分泌することを示す。

陽性対照としてのＮｏｖａｒｔｉｓヒト化抗ＩＬ−１７抗体（ＮｏｖａｒｔｉｓｍＡｂ）を、ＵＳ７,８０７,１５５Ｂ２（ＡＩＮ４５７）に提供されているヒト化配列に従ってクローニングし、発現のために一過性にトランスフェクトした。

３.２キメラ抗体の測定
試験材料：
組換えヒトＩＬ−１７Ａ、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１２０４７−ＨＮＡＳ
組換えマウスＩＬ−１７Ａ、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、ＰＢＶ１０１５９Ｒ−０１０

試験方法：
方法は、実施例１と同じであり、ハイブリドーマ上清の代わりにキメラ抗体を使用し、ＨＲＰ結合ヤギ抗マウスＩｇＧＦｃの代わりにＨＲＰ結合ウサギ抗ヒトＩｇＧＦｃ抗体（洛陽佰奥通実験材料センター）を使用し、組換えヒトおよびマウスＩＬ−１７Ａとの結合活性をそれぞれ測定した。

試験結果：

結果は、キメラ抗体がヒトＩＬ−１７Ａに結合し、マウスＩＬ−１７Ａにも結合し、また４未満の計算されたＥＣ５０値は、すべて４０ｎｇ／ｍｌより低いことを実証している。

実施例４：ヒト化抗体の製造
４.１ヒト化抗体の製造
抗体のヒト化は以下の方法で行った。要すると、抗体の可変鎖配列をＮＣＢＩタンパク質データベース中の利用可能な配列と比較し、同定および分析により、ＣＤＲ移植重鎖および軽鎖が適切に構築されているヒトフレームワークを最終的に決定する。

その後の試験およびスクリーニングに基づいて、１つの好ましいＦＲ領域は、ｈｕ−ＶＨ（ＳＥＱＩＤＮＯ：３）に由来するヒト化ＦＲ領域であり、軽鎖は、ｈｕ−ＶＬ（ＳＥＱＩＤＮＯ：４）のヒト化ＦＲ領域である。

ｈｕ−ＶＨＳＥＱＩＤＮＯ：３
ＱＶＱＬＶＱＳＧＳＥＬＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＳＹＡＭＮＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＮＴＮＴＧＮＰＴＹＡＱＧＦＴＧＲＦＶＦＳＬＤＴＳＶＳＴＡＹＬＱＩＣＳＬＫＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ

ｈｕ−ＶＬＳＥＱＩＤＮＯ：４
ＤＩＶＭＴＱＴＰＬＳＬＳＶＴＰＧＱＰＡＳＩＳＣＫＳＳＱＳＬＬＨＳＤＧＫＴＹＬＹＷＹＬＱＫＰＧＱＰＰＱＬＬＩＹＥＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＶＧＶＹＹＣＭＱＳＩＱＬＰ

修飾の時、ヒト抗体のＦＲ領域に保存されたアミノ酸残基および抗体ＦＲ領域の重要なアミノ酸残基に従って、形質転換部位を設計し、キメラ抗体の重鎖および軽鎖の可変領域に対して、それぞれにヒト化突然変異設計し、ＰＣＲ技術を用いてヒト化点突然変異抗体発現プラスミドを増幅し構築した。ヒト化点変異抗体発現プラスミドを、ＣＨＯ−Ｋ１（ＡＴＣＣ，ＮＯ.ＣＣＬ−６１）細胞でそれぞれ発現させ、精製してヒト化抗体タンパク質を獲得した。ＥＬＩＳＡ、受容体結合阻害アッセイ、Ｂｉａｃｏｒｅおよび細胞活性アッセイによって、非常に優れた性能を有するヒト化抗体（「ＨＢ００１７抗体」と命名）を獲得した。

ＨＢ００１７抗体のＶＨ及びＶＬ配列は、それぞれＳＥＱＩＤＮＯ.：５及び６に示されるようである。

実験結果は、ヒト化抗体ＨＢ００１７がマウス抗体より優れた親和性および特異性を有することを示し、実施例４．２を参照する。

４.２ヒト化抗体の測定
試験材料：
組換えヒトＩＬ−１７Ａ、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１２０４７−ＨＮＡＳ

試験方法：
方法は、実施例１と同じであり、ハイブリドーマ上清の代わりにＨＢ００１７抗体を使用し、ＨＲＰ結合ヤギ抗マウスＩｇＧＦｃの代わりにＨＲＰ結合ウサギ抗ヒトＩｇＧＦｃ抗体（洛陽佰奥通実験材料センター）を使用し、組換えヒトＩＬ−１７Ａとの結合活性を測定した。

試験結果：

結果は、ヒト化後、本発明者らは、ヒトＩＬ−１７Ａに対する結合活性が低下されることなく、さらに向上されたヒト化抗体ＨＢ００１７を獲得したことを実証している。ＥＣ_５０は、キメラ抗体と比較して、１５０％（３８.５５／１５.４−１００％＝１５０％）向上され、元のマウス抗体と比較して、約１１.６倍向上した。相較于陽性対照抗体と比較して、本発明の抗体のＥＣ_５０値が低く、ヒトＩＬ−１７Ａに対するより強い結合活性を有する。

実施例５：ヒト化モノクローナル抗体の異なる種類の免疫交差反応
本実施例において、采用ＥＬＳＩＡ方法を用いて、抗ＩＬ−１７Ａ抗体と異なる種類のＩＬ−１７Ａに対する抗原−抗体結合能力を測定した。

試験材料：
組換えヒトＩＬ−１７Ａ、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１２０４７−ＨＮＡＳ
組換えアカゲザル（Ｒｈｅｓｕｓ）ＩＬ−１７Ａ、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、９０３０６−ＫＮＡＢ
組換えマウスＩＬ−１７Ａ、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、ＰＢＶ１０１５９Ｒ−０１０
組換えラットＩＬ−１７Ａ、ＡＢＧＥＮＴ、ＰＢＶ１０１５４ｒ

試験方法：
方法は、実施例１と同じであり、ハイブリドーマ上清の代わりにＨＢ００１７抗体を使用し、ＨＲＰ結合ヤギ抗マウスＩｇＧＦｃの代わりにＨＲＰ結合ウサギ抗ヒトＩｇＧＦｃ抗体（洛陽佰奥通実験材料センター）を使用し、ヒトＩＬ−１７Ａ、アカゲザＩＬ−１７Ａル、マウスＩＬ−１７Ａ及びラットＩＬ−１７Ａとの結合活性をそれぞれ測定した。

試験結果：

表６〜９から分かるように、本発明のヒト化モノクローナル抗体ＨＢ００１７抗体は、ヒトＩＬ−１７Ａへの結合に加えて、マウス、アカゲザルおよびラットＩＬ−１７Ａにも結合し、臨床動物実験を補助する。

実施例６：ヒト化モノクローナル抗体の親和性検出
本実施例において、ＢＩＡＣＯＲＥ法を用いて、抗原−抗体結合動力学および親和性を測定した

試験材料：
組換えヒトＩＬ−１７Ａ、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１２０４７−ＨＮＡＳ
アミノカップリングキット、ＧＥ、ＢＲ−１０００−５０
ＨＢＳ−ＥＰ（１０Ｘ）、ＧＥ、ＢＲ−１００６−６９
ヒト抗体捕捉キット（ＨｕｍａｎＡｎｔｉｂｏｄｙＣａｐｔｒｕｅＫｉｔ）、ＧＥ、ＢＲ−１００８−３９

試験方法：
アミノカップリングキットを用いて、ヒト抗体捕捉抗体（ＨｕｍａｎＡｎｔｉｂｏｄｙＣａｐｔｕｒｅＡｎｔｉｂｏｙ）、抗ヒト捕捉−ＣＭ５チップ（Ａｎｔｉ−ＨｕｍａｎＣａｐｔｕｒｅ−ＣＭ５チップ）をアミノカップリングでＳシリーズセンサーチップ（ＳｅｒｅｉｓＳＳｅｎｓｏｒＣｈｉｐＣＭ５）に固定化した。室温で２０〜３０ｍｉｎ平衡化し、チップを機器に装填した。抗原を平衡緩衝液で希釈し、抗原を５つの濃度勾配の１０ｎＭの初期希釈液で希釈し、そして２つのゼロ濃度（即ち、平衡緩衝液）および１つの複製濃度（一般的に最低濃度反復）を設定する。抗体試料を平衡緩衝液で実験作業濃度に希釈し、２〜８℃で密封した。試料分析が完了した後、対応する分析プログラムを使用してデータを分析し、動力学、１：１結合モデル（Ｋｉｎｅｔｉｃｓ、１：１結合モデル）、および試料の動力学パラメータを得るためのフィッティング分析を用いて、明白な参照結合がないことを確認する。

試験結果：

ヒトＩＬ−１７Ａの親和性定数（ＫＤ（Ｍ））の結果は、本発明のＨＢ００１７抗体の親和性が陽性対照抗体に対して、ほぼ一桁高く、より強い親和性を有することを示した。

実施例７：ヒト化モノクローナル抗体の細胞レベルの生物活性測定
ＩＬ−１７Ａは、ＴＮＦαまたはＴＮＦβの相乗効果下で、ＨＴ１０８０を刺激してＩＬ-６を産生する。ＩＬ-１７Ａの効果は、本発明のＨＢ００１７抗体によって中和され、それによってＩＬ-６の発現レベルをさらに阻害する。本発明の抗体の生物学的活性が実証されている。

試験材料：
ＤＭＥＭグルタミン＋１０％の不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）＋１％のＰＳ（二重抗体）（成長培地）
組換えヒトＩＬ−１７Ａ、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１２０４７−ＨＮＡＳ
組換えヒトＴＮＦα、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１０６０２−ＨＮＡＥ
ＨｕｍａｎＩＬ−６ＥＬＩＳＡＭＡＸ^ＴＭＤｅｌｕｘｅＳｅｔ、４３０５０６、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ

試験方法：
対数増殖期のＨＴ１０８０細胞を使用すると、コンフルエンスは８０％〜９０％になり、実験を実行できる。細胞培養フラスコ内の培地を捨て、ＰＢＳで１回洗浄し、０.２５％のトリプシン〜０.０２％のＥＤＴＡ消化液を適量加え、細胞培養インキュベーターに入れて１〜２分後に、培養フラスコを軽くたたいて細胞を取り除いた。増殖培地を添加して単一細胞懸濁液を調製し、細胞を１０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。増殖培地を再懸濁して計数した。細胞を増殖培地で２．５×１０^５／ｍｌに希釈し、５０μｌ／ウェルを細胞培養プレートに添加した後、細胞培養インキュベーター内で５時間以上培養して、細胞を接着させた。抗体および陽性対照をブランク培地（ＤＭＥＭグルタミン）で２００μｇ／ｍｌに希釈し、８つの勾配濃度を２００μｇ／ｍｌで３．１６倍にさらに希釈した。組換えヒトＩＬ-１７Ａをブランク培地で４０ｎｇ／ｍｌに希釈し、組換えヒトＴＮＦ-αをブランク培地で２０ｎｇ／ｍｌに希釈した。希釈した組換えヒトＩＬ-１７Ａと組換えヒトＴＮＦ-αを１：１の容量比で混合した。その後、９勾配濃度の抗体または陽性対照を１：１の体積比で混合し、３７℃で１時間インキュベートした。

インキュベートした抗体または陽性対照の９濃度勾配を、各５０μｌ／ウェルとって、９６ウェル細胞培養プレートの各ウェルに添加し、各濃度について２つの複製ウェルを作製し、５０μｌのＩＬ−１７＆ＴＮＦαの混合物を陽性対照ウェルとして使用し、５０μｌのブランク培地をブランク対照ウェルとして、３つの複製ウェルを使用した、３つの複製ウェル。次いで細胞培養プレートを３７℃、５％のＣＯ_２の条件で一晩培養した。

ＨｕｍａｎＩＬ−６ＥＬＩＳＡＭＡＸＴＭＤｅｌｕｘｅＳｅｔＫｉｔに従って、ＥＬＩＳＡプレートをコーティングし、翌日に一晩培養した９６ウェル細胞培養を採取し、培養上清を吸引し、２０倍に希釈した。ＥＬＩＳＡ検出は、ＨｕｍａｎＩＬ−６ＥＬＩＳＡＭＡＸＴＭＤｅｌｕｘｅＳｅｔの説明書に従って行った。

試験結果：

表１１の結果は、本発明のＨＢ００１７抗体の生物学的活性は、陽性対照抗体と比較して、ほぼ６倍向上され、良好な生物学的活性を有することを示している。

実施例８：ヒト化モノクローナル抗体の抗原結合特異性
本実施例において、試験ＨＢ００１７抗体とＩＬ−１７異なるサブタイプの結合特異性を試験した。

試験材料：
組換えヒトＩＬ−１７Ａ、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１２０４７−ＨＮＡＳ
組換えヒトＩＬ−１７Ｂ、Ｒ＆Ｄ、８１２９−ＩＬ
組換えヒトＩＬ−１７Ｄ、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１００７６−Ｈ０８Ｓ
組換えヒトＩＬ−１７Ｅ、ＡＢＧＥＮＴ、ＰＢＶ１０１５４ｒ
組換えヒトＩＬ−１７Ｆ、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、１１８５５−Ｈ０７Ｈ−５
組換えヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆ、ＳｉｎｏＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ、ＣＴ０４７−Ｈ０８Ｈ−２０

試験方法：
方法は、実施例１と同じであり、ハイブリドーマ上清の代わりにＨＢ００１７抗体を使用し、ＨＲＰ結合ヤギ抗マウスＩｇＧＦｃの代わりにＨＲＰ結合ウサギ抗ヒトＩｇＧＦｃ抗体（洛陽佰奥通実験材料センター）を使用し、ヒトＩＬ−１７Ａ、ヒトＩＬ−１７Ｂ、ヒトＩＬ−１７Ｄ、ヒトＩＬ−１７Ｅ、ヒトＩＬ−１７Ｆ及ヒトＩＬ−１７Ａ／Ｆとの結合活性それぞれを測定した。

試験結果：

表１２の結果は、ＨＢ００１７抗体がヒトＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ａ／Ｆに結合し、そして他のファミリーメンバーＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ及びＩＬ−１７Ｆには結合せず、良好な抗原結合特異性を有することを示している。

実施例９：ヒト化モノクローナル抗体のインビボ有効性試験
本実施例は、イミキモド誘発マウス乾癬モデルを使用して実施され、本発明の抗体が、ＩＬ−１７受容体（例えば、ｈＩＬ−１７ＲＡ）へのＩＬ−１７の結合を遮断することによってインビボで、乾癬の症状または関連指標を改善され得るかどうかを検証する。

試験方法は、以下のようである。

２０ｇほどの３２匹のＣ５７ＢＬ／６メスマウスの背中を脱毛し、３日後に感作させた。感作を感作の２日前に４組（各組８匹）に分け、I組は、溶媒対照群であり、ＰＢＳを投与し、II組は、同種の対照群であり、１００ｍｇ／ｋｇの陰性対照試料であるヒトＩｇＧ１（ＰＢＳで希釈）を投与し、III組は、ＨＢ００１７抗体投与組であり、１００ｍｇ／ｋｇのＨＢ００１７抗体を投与し、IV組は、陽性対照組であり、１ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾン（ＰＢＳで希釈）を投与した。前記の組のそれぞれに、組分けの日およびモデルの２日目（ｄａｙ２）に１日１回腹腔内注射した。感作当日（ｄａｙ１）に、各組のマウスは５日間連続して、約６２．５ｍｇのイミキモドクリーム（５％）を右耳および背中の皮膚に塗布した。

感作当日から毎日マウスの右耳の厚みをスパイラルマイクロメーターで測定し、対照として０日目の右耳の厚さを用いて、マウスの耳の腫れの厚さのデータを計算した。同時にマウスの体重を量り、皮膚スケール、硬結および紅斑を観察し、４段階で、０点、病気なし、１点、軽度、２点、中程度、３点、重度、４点、とても深刻で評価した。

結果を図１に示されている。結果は、本発明のヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体ＨＢ００１７が、デキサメタゾンと比較してイミキモド誘発マウス乾癬モデルに対して著しい改善効果を有することを示している。

本発明において言及される全ての文書は、各文書が参照として別々に引用されているように、参照により本明細書に組み込まれる。さらに、本発明の前記の教示を読んだ後に、添付の特許請求の範囲の形で、当業者は本発明に対して様々な修正および変更をなすことができ、これらの同等の形態もまた、添付の特許請求の範囲によって定義される範囲内にあることを理解されたい。

Claims

抗体の重鎖可変領域であって、
ＳＥＱＩＤＮＯ：７に示されるＣＤＲ１と、
ＳＥＱＩＤＮＯ：８に示されるＣＤＲ２と、及び
ＳＥＱＩＤＮＯ：９に示されるＣＤＲ３との３つの相補性決定領域ＣＤＲを含む、前記抗体の重鎖可変領域。
抗体の重鎖であって、
請求項１に記載の前記重鎖可変領域を有する、前記抗体の重鎖。
抗体の軽鎖可変領域であって、
ＳＥＱＩＤＮＯ：１０に示されるＣＤＲ１’と、
アミノ酸配列がＫＶＳであるＣＤＲ２’と、及び
ＳＥＱＩＤＮＯ：１１に示されるＣＤＲ３’との３つの相補性決定領域ＣＤＲを含む、前記抗体の軽鎖可変領域。
抗体の軽鎖であって、
請求項３に記載の前記軽鎖可変領域を有する、前記抗体の軽鎖。
抗体であって、
（１）請求項１に記載の重鎖可変領域と、及び／又は
（２）請求項３に記載の軽鎖可変領域とを有し、
又は、請求項２に記載の重鎖と、及び／又は請求項４に記載の軽鎖とを有する、前記抗体。
前記抗体は、動物由来抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはそれらの組み合わせから選択されることを特徴とする
請求項５に記載の抗体。
前記抗体の重鎖可変領域配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ.：１または５に示されるとおりであり、及び／又は
前記抗体の軽鎖可変領域配列は、ＳＥＱＩＤＮＯ.：２または６に示されるとおりであることを特徴とする
請求項５に記載の抗体。
組換えタンパク質であって、
（ｉ）請求項１に記載の重鎖可変領域、請求項２に記載の重鎖、請求項３に記載の軽鎖可変領域、請求項４に記載の軽鎖、又は請求項５に記載の抗体と、及び
（ｉｉ）発現及び／又は精製を補助する任意に選択されたタグ配列とを有する、前記組換えタンパク質。
ＣＡＲ構築物であって、
前記ＣＡＲ構築物のモノクローナル抗体抗原結合領域のｓｃＦＶセグメントは、ＩＬ−１７Ａに特異的に結合する結合領域であり、前記ｓｃＦｖは、請求項１に記載の重鎖可変領域及び請求項３に記載の軽鎖可変領域を有する、前記ＣＡＲ構築物。
請求項１に記載の重鎖可変領域、請求項２に記載の重鎖、請求項３に記載の軽鎖可変領域、請求項４に記載の軽鎖、又は請求項５に記載の抗体、請求項８に記載の組換えタンパク質、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される活性成分の用途であって、
前記活性成分は、（ａ）検出試薬又はキットを製造し、及び／又は（ｂ）ＩＬ−１７Ａ関連疾患を予防及び／又は治療する薬物を製造するために使用される、前記活性成分の用途。