JP2019530642A - 改良されたＦｃ受容体結合を有する高次多量体化免疫グロブリンＦＣ組成物を作製するためのヒトタンパク質断片の融合タンパク質 - Google Patents

改良されたＦｃ受容体結合を有する高次多量体化免疫グロブリンＦＣ組成物を作製するためのヒトタンパク質断片の融合タンパク質 Download PDF

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Abstract

本発明は、免疫グロブリンＦｃの一連の完全組み換え型多量体化形態に関し、これにより、免疫細胞受容体に多価免疫グロブリンＦｃを提示する。融合タンパク質は、ストラドマーと呼ばれる、ホモ二量体画分および高次多量体画分の両方として存在する。本発明は、ＦｃγＲおよび補体に結合し、かつ疾患の治療および予防において有用である融合タンパク質に関する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１６年７月２２日に出願された米国仮特許出願第６２／３６５，９１９号に対する優先権を主張し、その内容全体が、参照により本明細書に組み込まれる。
電子的に提出されたテキストファイルの説明
本明細書で電子的に提供されるテキストファイルの内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる：配列表（ファイル名：ＧＬＩＫ＿０１９＿０１ＷＯ＿ＳｅｑＬｉｓｔ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ、記録日：２０１７年７月２４日、ファイルサイズ：６８キロバイト）のコンピュータ可読形式のコピー。
本発明は一般に、免疫学、自己免疫、炎症、および腫瘍免疫学の分野に関する。より具体的には、本発明は、改変されたＦｃ受容体結合、および補体系の要素への改良された結合を呈する自然に連結された免疫グロブリンＦｃドメインを含む、生物活性生物模倣型分子、そのような生物模倣物を含む組成物、ならびにそのような生物模倣物を作製し、使用する方法に関する。本発明は更に、補体媒介疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、血液障害、および癌などの病理学的病態の治療または予防に関する。
ヒト血漿からの免疫グロブリン産物は、１９５０年代初頭以降、免疫不全障害、ならびにより最近では自己免疫疾患および炎症性疾患の治療に使用されている。ヒトＩＶＩＧ（ｈＩＶＩＧ）は、典型的には９０％超の未修飾ＩｇＧを含有する、プールされたヒト血漿から製造される滅菌の精製免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）産物の製剤であり、これには少量かつ可変量の多量体免疫グロブリンＩｇＡ、またはＩｇＭしか含まれない（Ｒｕｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ａｃａｄ Ｄｅｒｍａｔｏｌ，２００１，Ｊｕｎ；４４（６）：１０１０−１０２４）。ＩＶＩＧは、低ＩｇＧレベルの患者における日和見感染を予防するためのＩｇＧ置換療法として最初に使用された（Ｂａｅｒｅｎｗａｌｔｄｔ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ，６（３），ｐ４２５−４３４，２０１０）。しかしながら、現在、ｈＩＶＩＧの最も一般的な使用は、慢性炎症性脱髄性多発ニュウーロパチーの治療においてであり、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ギラン・バレー症候群、および川崎病の治療にも認可されている。
数万人の血液ドナーからプールされるプールされたヒトＩＶＩＧは、未変性ＩｇＧ１の可溶性凝集体の自然効果を模倣するごく少量かつ可変量（０．１〜５％）のＩｇＧ１凝集体を含有し、ｈＩＶＩＧは有効な臨床治療である一方で、不十分な減菌の可能性、不純物もしくは感染物質（ウイルスおよびプリオンを含む）の存在、このプールされたヒト血液産物の利用可能性の欠如、ロット差、費用が高い、腎機能に影響を及ぼす可能性がある大きなタンパク質負荷（１〜２ｇ／ｋｇ）、ならびに長い投与時間（４〜８時間、複数日にわたって分散される場合がある）を含むいくつかの欠点がある。更に、ｈＩＶＩＧのロット間のＩｇＡ含有量は異なり、ＩｇＡ欠損レシピエントにおいてアレルギーおよびアナフィラキシー反応を引き起こす可能性がある。加えて、患者１人に使用される大量のｈＩＶＩＧおよびヒトドナーに依存する結果として、ｈＩＶＩＧの製造は高価であり、供給が制限される。
未変性免疫グロブリンＩｇＧ１Ｆｃドは、標準Ｆｃ受容体、新生児受容体ＦｃＲｎ、鉄、タンパク質Ａ、ＦｃＲＬ１−６、ＴＲＩＭ２１、およびＤＣ−ＳＩＧＮを含む数十を超えるリガンドに自然に結合する。これらのリガンドとの免疫グロブリン（Ｉｇ）相互作用は、ＩｇのＦｃドメインを通して媒介される。主に単一のモノクローナル抗体の文脈において、標準ＩｇＧ Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ；ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩ）への改変された結合、補体タンパク質への改変された結合、および抗体依存性、細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用（ＡＤＣＰ）、または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）などの改変されたエフェクター機能をもたらす、ＩｇＧ１のＦｃドメインにおける様々な点変異が記載されている。
臨床的に、少数のｈＩＶＩＧの多量体画分が病理学的免疫複合体によって媒介されるある特定の疾患の治療において偏って効果的であることを示唆するデータがあり、微量（＜１〜５％）のＩｇＧがＩＶＩＧ内に凝集形態として存在し、ＩｇＧ二量体がｈＩＶＩＧの５〜１５％を構成し得ることが観察されてきた。この少ない割合の多量体ＩｇＧは、増加した結合力によりＩｇＧ Ｆｃ受容体（ＦｃγＲ）への結合のための病理学的免疫複合体を阻害すると考えられる。したがって、親和性と結合力との相互作用の間に生じる複雑性を考えると、文献に記載される点変異（その多くが所与のモノクローナル抗体の親和性を改変する）がどのように多量体Ｆｃから構成される分子がＦｃγＲまたは補体タンパク質に結合する能力に影響を及ぼすかは不明である。多量体Ｆｃまたは凝集Ｆｃは、凝集されていない免疫グロブリンまたはモノクローナル抗体では見られない強力な結合をもたらすＦｃγＲおよび補体Ｃ１ｑを含むがこれらに限定されない標的リガンドに多価Ｆｃを提示する。
ｕｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｍ Ａｃａｄ Ｄｅｒｍａｔｏｌ，２００１，Ｊｕｎ；４４（６）：１０１０−１０２４ Ｂａｅｒｅｎｗａｌｔｄｔ，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ，６（３），ｐ４２５−４３４，２０１０
本発明は、ストラドマー単位のＦｃドメインが１つ以上の点変異および多量体化ドメインを含む、ストラドマー単位を含む生物活性生物模倣型分子に関する。本明細書に記載されるように、抗体機能を修飾するために以前に記載された変異（例えば、モノクローナル抗体において標準ＦｃγＲ結合を低減または排除するために）は、多量体化ストラドマーの文脈において同じ効果を有しない。多量体化ストラドマーの文脈におけるかかる変異の効果は、完全に予想不可能である。一態様において、本明細書に記載の生物模倣型分子は、補体Ｃ１ｑへの保持もしくは改良された結合、および／または標準ＦｃγＲへの保持もしくは改良された結合を有する。生物活性融合タンパク質生物模倣物を含む組成物、およびそれを使用するための方法が提供される。
いくつかの実施形態において、本発明は、Ｆｃドメインの２３６、２６７、２６８、３２４、および／または２９９位のうちの少なくとも１つに対応する１つ以上の点変異を含む少なくとも１つのホモ二量体ＩｇＧ１Ｆｃドメインと、少なくとも１つの多量体化ドメインとを含むストラドマー単位を提供する。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの２３６位に点変異を含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｇ２３６Ｒを含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの２３３位に点変異を更に含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｓ２６７Ｑ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｓ２６７Ｇ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｓ２６７Ｋ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｓ２６７Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｄ、Ｓ２６７Ｑ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｑ、Ｓ２６７Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｄ、Ｓ２６７Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む。
いくつかの実施形態において、本発明は、Ｆｃドメインの２６７、２６８、３２４、および２９９位に点変異を含むストラドマー単位を提供し、２９９位の点変異は、Ｔ２９９ＳまたはＴ２９９Ｃ以外の点変異である。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｓ２６７Ｑ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＴ２９９Ａを含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｓ２６７Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＴ２９９Ａを含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｓ２６７Ｈ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＴ２９９Ａを含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＴ２９９Ａを含む。
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの３２８位に点変異を更に含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＬ３２８Ｆを含む。
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの２３４および２３５位に点変異を更に含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む。
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの２３３、２３４、２３５位に点変異、および２３６位に欠失を更に含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、および２３６位に欠失を含む。
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの２９９位に点変異を含み、２９９位の点変異は、Ｔ２２９ＳまたはＴ２９９Ｃ以外の点変異である。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｔ２９９Ａを含む。
いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの４３０位に点変異を更に含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、点変異Ｔ２９９ＡおよびＥ４３０Ｇを含む。
いくつかの実施形態において、本発明は、ＩｇＧ１Ｆｃドメインの２９９位に点変異、ならびに４３０、４４０、および／または３４５位に１つ以上の追加の点変異を含む少なくとも１つのホモ二量体ＩｇＧ１Ｆｃドメインと、少なくとも１つのホモ二量体ＩｇＧ１ＦｃドメインのＣ末端に位置するＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメインとを含むストラドマー単位を提供し、該ストラドマー単位は、他の一般的なストラドマーまたは親ストラドマーと比較して６個のホモ二量体単位を含む、より高いパーセンテージのストラドマー（「六量体ストラドマー」）を含む多量体化ストラドマーに多量体化する。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの２９９、３４５、４３０、および４４０位に点変異を含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｔ２９９Ａ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、およびＳ４４０Ｙを含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの２９９、４３０、および４４０位に点変異を含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｔ２９９Ａ、Ｅ４３０Ｇ、およびＳ４４０Ｙを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のストラドマー単位は、Ｆｃドメインの２９９および３４５位に点変異を含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｔ２９９ＡおよびＥ３４５Ｒを含む。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、Ｆｃドメインの点変異Ｔ２９９Ａを含む。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のストラドマー単位は、Ｆｃドメインの２９７、２９８、または２９９位に変異を含み、Ｃ１ｑに結合し、ＣＤＣを阻害し、かつＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、および／またはＦｃγＲＩＩＩへの結合を保持する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のストラドマー単位は、ＩｇＧ１Ｆｃドメインの２９９位に点変異、ならびに４３０、４４０、および／または３４５位に１つ以上の追加の点変異を含み、かつ２９９、３４５、４３０、および／または４４０位のうちの１つ以上に点変異を含まない同一の構造のホモ二量体ストラドマー単位と比較して、補体タンパク質への改良された結合を呈する。いくつかの実施形態において、補体タンパク質はＣ１ｑである。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のストラドマー単位は、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を阻害する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のストラドマー単位は、２９９、３４５、４３０、および／または４４０位のうちの１つ以上に点変異を含み、かつ２９９、３４５、４３０、および／または４４０位のうちの１つ以上に点変異を含まない同一の構造のホモ二量体ストラドマー単位と比較して、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、および／またはＦｃγＲＩＩＩへの保持または改良された結合を呈する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のストラドマー単位は、２３６、２６７、２６８、３２４、および／または２９９位のうちの１つ以上に点変異を含み、かつ２３６、２６７、２６８、３２４、および／または２９９位のうちの１つ以上に点変異を含まない同一の構造のストラドマーと比較して、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、および／またはＦｃγＲＩＩＩへの改良または保持された結合を呈する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のストラドマー単位は、ＩｇＧ１のＥＥＭまたはＤＥＬ多型のいずれかを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のストラドマー単位は、ＩｇＧ２ヒンジ、イソロイシンジッパー、およびＧＰＰドメインからなる群から選択される多量体化ドメインを含む。いくつかの実施形態において、多量体化ドメインは、該ストラドマー単位の多量体を形成する。いくつかの実施形態において、該ストラドマー単位の多量体は、高次多量体である。いくつかの実施形態において、該ストラドマー単位の多量体は、１２個のホモ二量体ストラドマー単位を含む。いくつかの実施形態において、該ストラドマー単位の多量体は、１８個のホモ二量体ストラドマー単位を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のストラドマー単位は、低親和性Ｆｃγ受容体への改良された結合を呈する。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載のストラドマー単位は、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、リーダー配列と、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１ＣＨ２、およびＩｇＧ１ＣＨ３を含むＦｃドメインと、ＩｇＧ２ヒンジとを含む。かかる実施形態において、ストラドマー単位は、配列番号７〜２６および配列番号２８〜２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み得る。いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、配列番号３０〜３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のストラドマー単位は、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、リーダー配列と、ＩｇＧ２ヒンジと、ＩｇＧ１ヒンジと、ＩｇＧ１ＣＨ２およびＩｇＧ１ＣＨ３を含むＦｃドメインとを含む。かかる実施形態において、ストラドマー単位は、配列番号２７に従うアミノ酸配列を含み得る。
いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書に記載の２つ以上のストラドマー単位を含む、クラスターストラドマーを提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、本明細書に記載のクラスターストラドマー含む組成物を提供する。いくつかの実施形態において、組成物は、本明細書に記載の多量体化ホモ二量体を含む高分子量種多量体を含む濃縮された異種組成物である。いくつかの実施形態において、高分子量多量体は、六量体バンド以上の多量体を含む。いくつかの実施形態において、高分子量多量体は、十二量体バンド以上の多量体を含む。いくつかの実施形態において、高分子量多量体は、十八量体バンド以上の多量体を含む。いくつかの実施形態において、高分子量多量体は、ＧＬ−２０４５を含む以前に記載された多量体化ストラドマーと比較して増加したパーセンテージの六量体を含む。いくつかの実施形態において、高分子量多量体は、以前に記載された多量体化ストラドマーと比較して増加したパーセンテージの六量体、十二量体、および十八量体を含む。
いくつかの実施形態において、本発明は、補体媒介疾患、抗体媒介疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー、または血液障害を治療または予防する方法を提供し、本方法は、治療または予防を必要とする対象に本明細書に記載のストラドマーまたはその組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態において、抗体媒介疾患は、グッドパスチャー病；固形臓器移植拒絶；同種移植片の抗体媒介拒絶；黄斑変性症；寒冷凝集素症；溶血性貧血；視神経脊髄炎；神経性筋強直症；辺縁系脳炎；モルヴァン症候群；重症筋無力症；ランバート・イートン筋無力症症候群；自律神経性ニューロパチー；アルツハイマー病；アテローム動脈硬化症；パーキンソン病；全身硬直症候群または過剰驚愕症；再発性自然流産；ヒューズ症候群；全身性エリテマトーデス；自己免疫性小脳性運動失調症；強皮症、シェーグレン症候群を含む結合組織病；多発性筋炎；リウマチ性関節炎；結節性多発性動脈炎；ＣＲＥＳＴ症候群；心内膜炎；橋本甲状腺炎；混合性結合組織病；チャネル病；小児自己免疫性溶連菌関連性精神神経障害（ＰＡＮＤＡＳ）；Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体、特に、ＮＲ１、コンタクチン関連タンパク質２、ＡＭＰＡＲ、ＧｌｕＲ１／ＧｌｕＲ２、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、ＧｌｙＲアルファ１ａ、アセチルコリン受容体、ＶＧＣＣ Ｐ／Ｑ型、ＶＧＫＣ、ＭｕＳＫ、ＧＡＢＡ（Ｂ）Ｒに対する抗体に関連する臨床病態；アクアポリン−４；および天疱瘡からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、自己免疫疾患は、リウマチ性関節炎である。いくつかの実施形態において、自己免疫疾患は、自己免疫関連視力低下または難聴である。いくつかの実施形態において、補体媒介疾患は、重症筋無力症、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、膜性腎症、視神経脊髄炎、同種移植片の抗体媒介拒絶、ループス腎炎、および膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、血液障害は、鎌状赤血球症である。
いくつかの実施形態において、ストラドマーは、静脈内に、皮下に、経口に、腹腔内に、舌下に、頬側に、経皮に、真皮下埋め込みによって、または筋肉内に投与される。
いくつかの実施形態において、本発明は、補体媒介疾患、抗体媒介疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー、または血液障害に関連する、またはそれによって生じる疼痛を治療または予防する方法を提供し、本方法は、治療または予防を必要とする対象に本明細書に記載の六量体ストラドマーまたはその組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態において、抗体媒介疾患は、グッドパスチャー病；固形臓器移植拒絶；視神経脊髄炎；神経性筋強直症；辺縁系脳炎；モルヴァン症候群；重症筋無力症；ランバート・イートン筋無力症症候群；自律神経性ニューロパチー；アルツハイマー病；アテローム動脈硬化症；パーキンソン病；全身硬直症候群または過剰驚愕症；再発性自然流産；ヒューズ症候群；全身性エリテマトーデス；自己免疫性小脳性運動失調症；強皮症、シェーグレン症候群を含む結合組織病；多発性筋炎；リウマチ性関節炎；結節性多発性動脈炎；ＣＲＥＳＴ症候群；心内膜炎；橋本甲状腺炎；混合性結合組織病；チャネル病；小児自己免疫性溶連菌関連性精神神経障害（ＰＡＮＤＡＳ）；Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体、特に、ＮＲ１、コンタクチン関連タンパク質２、ＡＭＰＡＲ、ＧｌｕＲ１／ＧｌｕＲ２、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、ＧｌｙＲアルファ１ａ、アセチルコリン受容体、ＶＧＣＣ Ｐ／Ｑ型、ＶＧＫＣ、ＭｕＳＫ、ＧＡＢＡ（Ｂ）Ｒに対する抗体に関連する臨床病態；アクアポリン−４；および天疱瘡からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、自己免疫疾患は、リウマチ性関節炎、または自己免疫関連視力低下もしくは難聴である。いくつかの実施形態において、補体媒介疾患は、重症筋無力症、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、膜性腎症、視神経脊髄炎、同種移植片の抗体媒介拒絶、ループス腎炎、および膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）からなる群から選択される。いくつかの実施形態において、血液障害は、鎌状赤血球症である。
いくつかの実施形態において、ストラドマーは、静脈内に、皮下に、経口に、腹腔内に、舌下に、頬側に、経皮に、真皮下埋め込みによって、または筋肉内に投与される。
バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａ、またはＦｃＲｎへのストラドマーＧＬ−２０４５の結合を示す。 ＧＬ−２０４５およびＧ９９０の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ ＥＬＩＳＡ、およびＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。 ＧＬ−２０４５およびＧ９９０の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。 ＧＬ−２０４５および一般的なストラドマーＧ１０３２の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ ＥＬＩＳＡ、およびＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。 ＧＬ−２０４５および一般的なストラドマーＧ１０３２の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。 ＧＬ−２０４５および一般的なストラドマー１０２３の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ ＥＬＩＳＡ、およびＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。 ＧＬ−２０４５および一般的なストラドマーＧ１０２３の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。 ＧＬ−２０４５および一般的なストラドマーＧ１０４９の、各Ｆｃ受容体のＲＵｍａｘ、Ｃ１ｑ ＥＬＩＳＡ、およびＣＤＣ阻害データのレーダーグラフを提供する。 ＧＬ−２０４５および一般的なストラドマーＧ１０４９の、各Ｆｃ受容体の３００秒間でのＲＵ（ＲＵ３００ｓ）のレーダーグラフを提供する。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１０４９の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ９９０の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１１０３の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１１０４の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１１０２の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１１０１の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１１０９の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１１１１の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１１１４の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１１１７の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１１２５の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１０９４の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１０９２の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１１０７の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１０６８の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１０９９の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１０９７の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１０９８の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１１２６の結合を示す。 バイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ）によって測定される、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩａ、またはＦｃγＲＩＩａへのストラドマーＧ１１２７の結合を示す。 試験した誘導体ストラドマー化合物が基づいたＧＬ−２０４５および親化合物（Ｇ９９４またはＧ９９８）のように、誘導体ストラドマー化合物が多量体を形成することを示すゲルである。化合物ＧＬ−２０４５、Ｇ９９４、１１０３、および１１０４を、図２６Ａに示す。化合物ＧＬ−２０４５、Ｇ９９４、Ｇ１１０２、Ｇ１１０１、Ｇ１１２５、およびＧ１１０９を、図２６Ｂに示す。化合物ＧＬ−２０４５、Ｇ９９８、Ｇ１１１１、Ｇ１１１４、およびＧ１１１７を、図２６Ｃに示す。化合物ＧＬ−２０４５、Ｇ９９８、Ｇ１０６８、Ｇ１０９４、およびＧ１０９２を、図２６Ｄに示す。化合物ＧＬ−２０４５、Ｇ９９８、およびＧ１１０７を、図２６Ｅに示す。化合物ＧＬ−２０４５、Ｇ１０９９、およびＧ１０９７を、図２６Ｆに示す。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。 ＧＬ−２０４５、Ｇ１０９９、Ｇ１０９７、Ｇ１０９８、Ｇ１１２６、およびＧ１１２７に対して実行した非還元ゲルの画像を提供する。 ＥＬＩＳＡによって測定される、一般的なストラドマーのＣ１ｑ結合を示す。 ＥＬＩＳＡによって測定される、一般的なストラドマーＧ１１０２、Ｇ１１１４、およびＧ１０６９のＣ１ｑ結合を示す。 一般的なストラドマー化合物Ｇ１０９７およびＧ１０９９を有するＣＤＣ阻害アッセイを示す。ＣＤＣ＋６％は、補体およびＣＤ２０抗体の添加を示す。陽性対照は細胞＋ＣＤＣ＋６％（細胞、血清補体、および抗体）であり、陰性対照は細胞＋６％（細胞、血清補体、抗体なし）である。 一般的なストラドマー化合物（Ｇ１０９７およびＧ１０９９）および六量体ストラドマー化合物（Ｇ１０９８、Ｇ１１２６、およびＧ１１２７）を用いたＣＤＣ阻害アッセイを示す。ＣＤＣ＋６％は、補体およびＣＤ２０抗体の添加を示す。陽性対照は細胞＋ＣＤＣ＋６％（細胞、血清補体、および抗体）であり、陰性対照は細胞＋６％（細胞、血清補体、抗体なし）である。 オンライン（ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＮｅｔＮＧｌｙｃ／）で利用可能なＮｅｔＮｇｌｙｃサーバを使用して、インシリコ予想モデルに基づいた親ストラドマーＧ２０４５（図３２Ａ）の予想グリコシル化部位および親ストラドマーの非グリコシル化バリアント（Ｔ２９９Ａ点変異、図３２Ｂ）を示す。ＮｅｔＮｇｌｙｃサーバは、Ａｓｎ−Ｘａａ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ配列の文脈において、配列を調査する人工ニューラルネットワークを使用して、ヒトタンパク質におけるＮ−グリコシル化部位を予想する。 同上。
本明細書に記載の免疫調節化合物のための合理的分子設計へのアプローチは、補体タンパク質および／またはＦｃγＲ（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、および／またはＦｃγＲＩＩＩを含む）への保持または改良された結合を呈する免疫学的に活性な生物模倣物（複数可）の組み換えおよび／または生化学的作製を含む。本明細書に提供される組成物は、例えば、補体媒介疾患、抗体媒介疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー、または血液障害を治療するための有用性を有する。
本明細書で使用される場合、「１つの（ａ）」または「１つの（ａｎ）」という用語の使用は、特許請求の範囲および／または本明細書において、「含む」という用語と組み合わせて使用される場合、「１つ」を意味し得るが、「１つ以上」、「少なくとも１つ」、および「１つまたは２つ以上」の意味とも一貫する。
本明細書で使用される場合、「補体」という用語は、文献において補体系または補体カスケードと呼ばれることのある、補体カスケードのタンパク質のいずれかを指す。本明細書で使用される場合、「補体結合」または「補体への結合」という用語は、補体カスケードの構成要素のいずれかの結合を指す。補体カスケードの構成要素は、当該技術分野において既知であり、例えば、ＪａｎｅａｗｓのＩｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，８ｔｈＥｄ．，Ｍｕｒｐｈｙ ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０１２に記載されている。現在既知である３つの主要な補体経路には、古典的経路、代替経路、およびレクチン結合経路が存在する。古典的補体経路は、Ｃ１ｑＣ１ｒＣ１ｓが形成され、Ｃ４を切断した後、タンパク質Ｃ１ｑが、インタクト免疫グロブリンＩｇＭの１つ以上の分子、またはインタクト免疫グロブリンＩｇＧ１、ＩｇＧ２、もしくはＩｇＧ３の少なくとも２つの分子に結合すると活性化される。補体活性化の異なる経路は、古典的なＣ３転換酵素（Ｃ４ｂＣ２ａ）または代替Ｃ３変換酵素（Ｃ３ｂＢｂ）の作用を介してＣ３ｂの生成に集中する。Ｃ３ｂ自体は、代替Ｃ３変換酵素、ならびに古典的かつ代替Ｃ５変換酵素の重要な構成要素であり、そのそれぞれが下流補体活性化を媒介する。補体活性化は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）につながり、過剰な補体活性化は有害であり得、重症筋無力症、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、および発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）を含むいくつかの疾患と関連付けられている。モノクローナル抗体のＦｃ領域内の改変は、補体結合を改良または減少させることが示されている（Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ．２（２）：１８１−９（２０１０）。
いくつかの実施形態において、本明細書に提供されるストラドマーは、六量体ストラドマーである。本明細書において「六量体ストラドマー」という用語は、非六量体多量体化ストラドマーと比較して、多量体化して、より高いパーセンテージの、６個のストラドマー単位を含む多量体化ストラドマー、および／または６個のストラドマー単位を含むストラドマーの多量体（例えば、十二量体または十八量体）を形成するストラドマーを指す。六量体ストラドマーは、補体カスケードの１つ以上の構成要素に結合し、標準Ｆｃ受容体のうちの１つ以上および／または新生児受容体ＦｃＲｎにも結合し得る。一実施形態において、六量体ストラドマーは、六量体補体Ｃ１ｑに強力に結合する。
「直接連結される」とは、介在配列または外来配列（例えば、ＤＮＡまたはクローニング断片中の制限酵素認識部位の挿入に由来するアミノ酸配列）なく、互いに接続された２つの配列を意味する。当業者は、「直接連結される」は、多量体化能力に実質的に影響がない限り、アミノ酸の付加または除去を包含することを理解するだろう。
「相同」とは、所与の核酸またはアミノ酸配列の配列全体にわたる同一性を意味する。例えば、「８０％相同」とは、所与の配列が主張される配列と約８０％の同一性を共有し、挿入、欠失、置換、およびフレームシフトを含み得ることを意味する。当業者は、配列アラインメントが、配列の全長にわたる同一性を決定するための挿入および欠失を考慮するために行われ得ることを理解するだろう。
本明細書で使用される場合、「単離された」ポリペプチドまたはペプチドという用語は、天然に存在する対応物を有さないか、あるいは例えば、膵臓、肝臓、脾臓、卵巣、精巣、筋肉、関節組織、神経組織、消化器組織、または乳房組織もしくは腫瘍組織（例えば、乳癌組織）などの組織、または血液、血清、もしくは尿などの体液において天然にそれに付随する構成成分から分離または精製されているかのいずれかの、ポリペプチドまたはペプチドを指す。典型的には、ポリペプチドまたはペプチドは、それが、天然に関連付けられるタンパク質および他の天然に存在する有機分子を含まない、少なくとも７０乾燥重量％である場合に、「単離された」と見なされる。好ましくは、本発明のポリペプチド（またはペプチド）の調製物は、それぞれ、本発明の少なくとも８０乾燥重量％、より好ましくは少なくとも９０乾燥重量％、および最も好ましくは少なくとも９９乾燥重量％のポリペプチド（ペプチド）である。化学的に合成されるポリペプチドまたはペプチドは、その性質上、それに天然に付随する構成成分から分離されるため、合成ポリペプチドまたはペプチドは「単離される」。
本発明の単離されたポリペプチド（またはペプチド）は、例えば、天然源から（例えば、組織もしくは体液から）抽出することによって、ポリペプチドもしくはペプチドをコードする組み換え核酸の発現によって、または化学合成によって得ることができる。それが天然に起源を持つ供給源とは異なる細胞系において産生されるポリペプチドまたはペプチドは、それに天然に付随する構成成分を必ずしも含まないため、「単離される」。いくつかの実施形態において、本発明の単離されたポリペプチドは、ＩｇＧ１Ｆｃ単量体およびＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメインに対応する配列（配列番号４）のみを含み、タンパク質のクローニングまたは精製を補助し得る更なる配列（すなわち、導入された制限酵素認識部位または精製タグ）を含まない。かかる実施形態において、ポリペプチド配列はリーダー配列を含み得る。単離または精製の程度は、任意の適切な方法、例えば、カラムクロマトグラフィー、ポリアクリルアミドゲル電気泳動、またはＨＰＬＣ分析によって測定することができる。
本明細書で使用される場合、「ＦｃγＲ」および「Ｆｃγ受容体」という用語は、Ｎｉｍｍｅｒｊａｈｎ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，２００６ Ｊａｎ；２４（１）：１９−２８に記載されるか、または後に定義され得るように、免疫細胞表面上に発現されるタンパク質のＦｃガンマ受容体ファミリーの各メンバーを含む。本明細書に記載の「ＦｃγＲ」という用語は、ＦｃガンマＲＩ、ＲＩＩ、およびＲＩＩＩファミリーの全てのメンバーを包含することが意図される。Ｆｃガンマ受容体は、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）ならびにそのアイソタイプおよびアロタイプ（ＦｃγＲＩＩａ ＬＲ、ＦｃγＲＩＩａ ＨＲ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩｃ）；ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）およびそのアイソタイプ（ＦｃγＲＩＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩｂ）を含むが、ヒトにおいてこれらに限定されない、低および高親和性Ｆｃγ受容体を含む。当業者であれば、Ｄａｖｉｓ，ｅｔ ａｌ（Ｉｎｔ． Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６（９）：１３４３−１３５３）により記載されるものなど、ＦｃγＲおよびＦｃγＲホモログに結合する化合物を含む本発明が、まだ発見されない可能性がある後のＦｃγＲ、ならびに関連アイソタイプおよびアロタイプに適用されることを認識するだろう。
ｈＩＶＩＧが新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）に結合し、それを完全に飽和すること、またＦｃＲｎのかかる競合阻害がｈＩＶＩＧの生物活性において重要な役割を果たし得ることが記載されている（例えば、Ｊｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００５，６６（４）４０３−４１０）。ＦｃγＲに強く結合する免疫グロブリンは少なくともある程度ＦｃＲｎにも結合するため、当業者であれば、２つ以上のＦｃγ受容体に結合することが可能なストラドマーがＦｃＲｎにも結合し、それを完全に飽和することができることを認識するだろう。
本明細書で使用される場合、「機能的バリアント」という用語は、相同性によって基準配列に関連付けられ、基準配列と同一の生物学的効果を媒介することができる（ポリペプチドの場合）か、または基準配列によってコードされるポリペプチドと同一の生物学的効果を媒介することができるポリペプチドをコードする（ポリヌクレオチドの場合）、配列を指す。例えば、本明細書に記載される生物模倣物のいずれかの機能的バリアントは、基準配列に対して特定の配列相同性または同一性を有し、参照配列によりコードされるタンパク質に類似して免疫調節することができるだろう。機能的配列バリアントは、ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの両方を含む。配列相同性は、一般に、デフォルトパラメータ：フィルタオン、スコアマトリックス−ＢＬＯＳＵＭ６２、ワードサイズ−３、Ｅ値−１０、ギャップコスト−１１，１、およびアライメント−５０で動作するＢＬＡＳＴ２．０（Ｂａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ）を使用して評価され得る。いくつかの実施形態において、機能的バリアントは、本明細書に提供されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
本明細書を通して、特に記載のない限り、ＩｇＧ重鎖中の残基の番号付けは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１）（参照により本明細書に明示的に組み込まれる）にあるように、ＥＵインデックスのものである。「ＫａｂａｔにあるようなＥＵインデックス」とは、ヒトＩｇＧ１のＥＵ抗体の番号付けを指す。
ＤＥＬ多型およびＥＥＭ多型と呼ばれる、２つのＩｇＧ１のヒト多型が存在する。Ｋａｂａｔ番号付けに従い、ＤＥＬ多型は、３５６位にＤおよび３５８位にＬを有し、ＥＥＭ多型は、３５６位にＥおよび３５８位にＭを有する。本明細書に提供されるストラドマーは、ＤＥＬまたはＥＥＭ ＩｇＧ１多型のいずれかを含み得る。したがって、特定の変異体についての文章が、ＤＥＬ多型の文脈において明示的に作製される場合ですら、当業者は、同一の変異をＥＥＭ多型に対して行って、同一の結果を得ることができることを理解するだろう。
ＩＶＩＧ生物模倣物の構造構成要素
本明細書で使用される場合、「生物模倣物」、「生物模倣型分子」、「生物模倣型化合物」という用語、および関連する用語は、プールされたヒト静脈内免疫グロブリン（「ｈＩＶＩＧ」）、モノクローナル抗体、または抗体のＦｃ断片などの別の化合物の機能を模倣する、人為的化合物を指す。「生物活性」生物模倣物は、それらの天然に存在する対応物と同一または類似した生物活性を持つ化合物である。「天然に存在する」とは、通常、生物において見出される、分子またはその一部分を意味する。天然に存在するとは、実質的に天然に存在することも意味する。「免疫学的に活性な」生物摸倣物は、抗体、サイトカイン、インターロイキン、および当該技術分野において既知である他の免疫学的分子などの、天然に存在する免疫学的に活性な分子と同一または類似した免疫学的活性を呈する生物摸倣物である。好ましい実施形態において、本発明の生物模倣物は、本明細書に定義されるストラドマーである。本明細書で使用される場合、「親生物模倣物」は、本明細書に記載の化合物（例えば、ＧＬ−２０４５およびＧＬ−２０１９）の基盤として使用される未変異の生物模倣物を指す。
国際ＰＣＴ公開第ＷＯ２００８／１５１０８８号および米国特許第８，６８０，２３７号は、参照によりそれらの全体が組み込まれ、病理学的病態（自己免疫疾患および他の炎症性病態を含む）の治療のための、ｈＩＶＩＧの高次多量体化免疫グロブリンＦｃ生物模倣物（ストラドマーとして知られる生物活性高次多量体）を作製するために連結された免疫グロブリンＦｃドメインの使用を開示している。ＷＯ２００８／１５１０８８およびＵＳ８，６８０，２３７に記載のある特定のストラドマーには、ストラドマーの個々の構成要素間の制限部位および親和性タグを含む短い配列が含まれる。国際ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１２／０１６０７３号および米国特許出願公開第２０１３／０１５６７６５号は、個々の構成要素が、制限部位または親和性タグによって分離されるのではなく、むしろ直接連結されるストラドマーを開示している。ＷＯ２０１２／０１６０７３はまた、ＩｇＧ１Ｆｃドメインを含み、ＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメインがそのＣ末端に直接連結される、多量体化ストラドマー（ＧＬ−２０４５）も具体的に開示し、これは、Ｎ末端連結構築物（ＧＬ−２０１９、ＷＯ２００８／１５１０８８に記載）と比較して、改良された多量体化および補体結合を呈する。ある特定の実施形態において、本明細書に記載のストラドマー単位は、ＧＬ−２０４５またはＧＬ−２０１９のＦｃ領域内に１つ以上の点変異を含み、以前に記載された分子と比較して、改良された補体結合および／またはＦｃγＲ結合および／またはＦｃＲｎ結合のいずれかをもたらす。
ＧＬ−２０４５の構造は、ＩｇＧ１ヒンジ−ＩｇＧ１ＣＨ２−ＩｇＧ１ＣＨ３−ＩｇＧ２ヒンジであり、ＧＬ−２０４５のアミノ酸配列は、配列番号７および８に提供される。本明細書で使用される場合、「ＧＬ−２０４５背景上のストラドマー」などという用語は、ＩｇＧ１ヒンジ−ＩｇＧ１ＣＨ２−ＩｇＧ１ＣＨ３−ＩｇＧ２ヒンジの構造を有し、ＧＬ−２０４５と比較して１つ以上のアミノ酸変異、挿入、または欠失を含む、ストラドマーを指す。ＧＬ−２０１９の構造は、ＩｇＧ２ヒンジ−ＩｇＧ１ヒンジ−ＩｇＧ１ＣＨ２−ＩｇＧ１ＣＨ３（配列番号９）である。本明細書で使用される場合、「ＧＬ０−２０１９背景上のストラドマー」などという用語は、ＩｇＧ２ヒンジ−ＩｇＧ１ヒンジ−ＩｇＧ１ＣＨ２−ＩｇＧ１ＣＨ３の構造を有し、ＧＬ−２０１９と比較して１つ以上のアミノ酸変異、挿入、または欠失を含む、ストラドマーを指す。
以下の段落では、構造的にも機能的にも本発明の生物模倣物の構成ブロックを定義し、その後、生物摸倣物自体を定義する。しかしながら、最初に、上述のように、本発明の生物摸倣物のそれぞれが、少なくとも１つのＦｃドメインおよび１つの多量体化ドメインを有することに留意することが役立つ。最小でも、各Ｆｃドメインは、機能的ＦｃＲ結合または補体結合部位と、結果として得られるホモ二量体を高次多量体に多量体化することが可能な多量体化ドメインとを形成するために会合する２つのペプチド鎖またはアーム（単量体）を含む、二量体ポリペプチドである（またはより大きなポリペプチドの二量体領域である）。したがって、本明細書に論じられる個々の断片およびドメインの機能的形態は一般に、二量体形態、最も典型的にはホモ二量体、または実質的にホモ二量体形態で存在する。本明細書で論じられる個々の断片およびドメインの単量体は、機能的二量体構造を形成するために、第２の鎖またはアームと会合しなければならない単一鎖またはアームである。
Ｆｃ断片
「Ｆｃ断片」は、免疫グロブリンのカルボキシ末端に常に見出されるタンパク質領域またはタンパク質折り畳み構造を説明するために使用される専門用語である。Ｆｃ断片は、不完全かつ不十分なプロセスである酵素消化、例えばパパイン消化の使用を通して、モノクローナル抗体のＦａｂ断片から単離することができる（Ｍｉｈａｅｓｃｏ ａｎｄ Ｓｅｌｉｇｍａｎｎ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ１２７，４３１−４５３（１９６８）を参照されたい）。（抗原結合ドメインを含有する）Ｆａｂ断片と合わさって、Ｆｃ断片は、本明細書において完全な抗体を意味する、ホロ抗体を構成する。Ｆｃ断片は、抗体の重鎖のカルボキシ末端部分からなる。Ｆｃ断片中の鎖のそれぞれは、約２２０〜２６５アミノ酸長であり、鎖は、多くの場合ジスルフィド結合を介して連結される。Ｆｃ断片は、多くの場合１つ以上の独立した構造的折り畳みまたは機能的サブドメインを含有する。特に、Ｆｃ断片は、本明細書においてＦｃγ受容体に結合する最小構造として定義されるＦｃドメインを包含する。単離Ｆｃ断片は、二量体化される２つのＦｃ断片の単量体から構成される（例えば、本明細書において更に定義される、抗体の重鎖の２つのカルボキシ末端部分）。２つのＦｃ断片の単量体が会合する場合、結果として得られるＦｃ断片は、補体および／またはＦｃＲ結合活性を有する。
Ｆｃ部分断片
「Ｆｃ部分断片」とは、抗体の全Ｆｃ断片未満を含むが、Ｆｃ受容体結合活性および／または補体結合活性を含む、Ｆｃ断片と同一の活性を有するのに十分な構造を保持するドメインである。したがって、Ｆｃ部分断片は、Ｆｃ部分ドメインが由来する抗体のアイソタイプによって、ヒンジ領域の一部分もしくは全て、ＣＨ２ドメインの一部分もしくは全て、ＣＨ３ドメインの一部分もしくは全て、および／またはＣＨ４ドメインの一部分もしくは全てを欠いてもよい。Ｆｃ部分断片の別の例としては、ＩｇＧ１のＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含む分子が挙げられる。この例において、Ｆｃ部分断片は、ＩｇＧ１に存在するヒンジドメインを欠く。Ｆｃ部分断片は、２つのＦｃ部分断片の単量体から構成される。本明細書において更に定義されるように、２つのかかるＦｃ部分断片の単量体が会合する場合、結果として得られるＦｃ部分断片は、Ｆｃ受容体結合活性および／または補体結合活性を有する。
Ｆｃドメイン
本明細書で使用される場合、「Ｆｃドメイン」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）に結合する、またはそれによって結合され得る、（より大きなポリペプチドの文脈における）最小領域または（単離タンパク質の文脈における）最小タンパク質折り畳み構造を説明する。Ｆｃ断片およびＦｃ部分断片の両方において、Ｆｃドメインは、分子をＦｃ受容体に結合させる最小結合領域である。Ｆｃドメインは、Ｆｃ受容体によって結合される別個のホモ二量体ポリペプチドに限定され得る一方で、Ｆｃドメインが、Ｆｃ断片の一部分または全て、ならびにＦｃ部分断片の一部分または全てであり得ることも明らかだろう。本発明において、「Ｆｃドメイン」という用語が使用される場合、２つ以上のＦｃドメインを意味するものとして当業者に認識されるだろう。Ｆｃドメインは、２つのＦｃドメインの単量体から構成される。本明細書において更に定義されるように、２つのそのようなＦｃドメインの単量体が会合する場合、結果として得られるＦｃドメインは、Ｆｃ受容体結合活性および／または補体結合活性を有する。したがって、Ｆｃドメインは、補体および／またはＦｃ受容体に結合することができる二量体構造である。本明細書に記載されるストラドマーは、ストラドマーが補体および／またはＦｃ受容体に結合する能力を改変する１つ以上の変異を含む、Ｆｃドメインを含む。
Ｆｃ部分ドメイン
本明細書で使用される場合、「Ｆｃ部分ドメイン」は、Ｆｃドメインの一部分を説明する。Ｆｃ部分ドメインとしては、個々の重鎖定常領域ドメイン（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、およびＣＨ４ドメイン）、ならびに異なる免疫グロブリンクラスおよびサブクラスのヒンジ領域が挙げられる。したがって、本発明のヒトＦｃ部分ドメインとしては、ＩｇＧ１のＣＨ１ドメイン、ＩｇＧ１のＣＨ２ドメイン、ＩｇＧ１のＣＨ３ドメインのＩｇ、ならびにＩｇＧ１およびＩｇＧ２のヒンジ領域が挙げられる。他の種における対応するＦｃ部分ドメインは、その種に存在する免疫グロブリンおよびその命名に依存するだろう。好ましくは、本発明のＦｃ部分ドメインは、ＣＨ１、ＣＨ２、ならびにＩｇＧ１のヒンジドメインおよびＩｇＧ２のヒンジドメインを含む。本発明のＦｃ部分ドメインは、これらのドメインおよびヒンジのうちの２つ以上の組み合わせを更に含んでもよい。しかしながら、本発明の個々のＦｃ部分ドメインおよびその組み合わせは、ＦｃＲに結合する能力を欠く。したがって、Ｆｃ部分ドメインおよびその組み合わせは、Ｆｃドメイン未満を含む。Ｆｃ部分ドメインは、ともに連結されて、補体および／またはＦｃ受容体結合活性を有するペプチドを形成し、したがって、Ｆｃドメインを形成してもよい。本発明において、Ｆｃ部分ドメインは、本明細書に定義される本発明の生物摸倣物を作製するための構成ブロックとして、Ｆｃドメインとともに使用される。各Ｆｃ部分ドメインは、２つのＦｃ部分ドメインの単量体から構成される。２つのそのようなＦｃ部分ドメインの単量体が会合する場合、Ｆｃ部分ドメインが形成される。
上述のように、Ｆｃ断片、Ｆｃ部分断片、Ｆｃドメイン、およびＦｃ部分ドメインのそれぞれは、二量体タンパク質またはドメインである。したがって、これらの分子のそれぞれは、二量体タンパク質またはドメインを形成するために会合する２つの単量体から構成される。ホモ二量体形態の特徴および活性を上記に論じたが、単量体ペプチドを以下に論じる。
Ｆｃ断片の単量体
本明細書で使用される場合、「Ｆｃ断片の単量体」は、別のＦｃ断片の単量体と会合される場合、Ｆｃ断片を含む単鎖タンパク質である。したがって、Ｆｃ断片の単量体は、ホロ抗体のＦｃ断片を構成する抗体の重鎖のうちの１つのカルボキシ末端部分である（例えば、ＩｇＧのヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインを含む重鎖の近接部分）。一実施形態において、Ｆｃ断片の単量体は、最小でも、近接して連結してペプチドを形成する、１鎖のヒンジ領域（ヒンジ単量体）、１鎖のＣＨ２ドメイン（ＣＨ２ドメイン単量体）、および１鎖のＣＨ３ドメイン（ＣＨ３ドメイン単量体）を含む。一実施形態において、ＣＨ２、ＣＨ３、およびヒンジドメインは、異なるアイソタイプに由来する。特定の一実施形態において、Ｆｃ断片の単量体は、ＩｇＧ２ヒンジドメイン、ならびにＩｇＧ１ ＣＨ２およびＣＨ３ドメインを含有する。
Ｆｃドメインの単量体
本明細書で使用される場合、「Ｆｃドメインの単量体」は、別のＦｃドメインの単量体と会合される場合、補体に結合することができるＦｃドメインを含む単鎖タンパク質を説明する。２つのＦｃドメインの単量体の会合は、１つのＦｃドメインを形成する。
一実施形態において、本発明のＦｃドメインの単量体は、国際ＰＣＴ公開第ＷＯ２００８／１５１０８８号に記載の、以前に記載されたＦｃドメインの単量体が外来配列を含有したようには、外来配列を含有しない。代わりに、本発明のＦｃドメインの単量体は、１つの末端（例えば、Ｆｃ単量体のＮ末端）のリーダー配列（例えば、配列番号１）、および他の末端（例えば、Ｆｃ単量体のＣ末端）の多量体化ドメイン（例えば、配列番号４、５、または６）に直接連結される。当業者は、構築物がリーダー配列を有して産生される一方で、この配列は後に切断されることを認識するだろう。したがって、好ましい実施形態において、成熟タンパク質は、リーダー配列を含有しないだろう。
当業者であれば、本発明が、本発明のＦｃ断片の単量体、Ｆｃ部分断片の単量体、ストラドマー単量体、および他の単量体の構築において、Ｆｃドメインの単量体の機能的バリアントの使用を更に包含することを理解するだろう。Ｆｃドメインの単量体の機能的バリアントは、未変性Ｆｃドメインの単量体配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するだろう。
同様に、本発明はまた、本発明のＦｃ断片の単量体、Ｆｃドメインの単量体、ストラドマー単量体、および他の単量体の構築における、Ｆｃ部分ドメインの単量体の機能的バリアントの使用も包含する。Ｆｃ部分ドメインの単量体の機能的バリアントは、未変性Ｆｃ部分ドメインの単量体配列に対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するだろう。
一実施形態において、Ｆｃドメインの単量体は、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１ＣＨ２、およびＩｇＧ１ＣＨ３を含むＦｃドメインと、ＩｇＧ２ヒンジ（ＧＬ−２０４５背景）とを含み、単量体は、Ｆｃドメイン内に１つ以上の点変異を含む。一実施形態において、Ｆｃドメインの単量体は、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、ＩｇＧ２ヒンジと、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１ＣＨ２、およびＩｇＧ１ＣＨ３（ＧＬ−２０１９背景）を含むＦｃドメインとを含み、単量体は、Ｆｃドメイン内に１つ以上の点変異を含む。
ストラドマー
特定の実施形態において、本発明の生物模倣型は、ストラドマーを含む。ストラドマーは、２つ以上のＦｃ受容体の結合を可能にする生物模倣型化合物であり、それにより、機能的多価ＦｃをＦｃ受容体（例えば、低親和性および高親和性の標準ＦｃＲおよび新生児受容体（ＦｃＲｎ））、補体、ならびに他の受容体およびＦｃ相互作用分子に提示する。ストラドマーは、好ましくは、Ｆｃドメインと比較して、大幅に改善された結合を示す。多くの異なる物理的ストラドマーの高次構造は、米国特許出願公開第２０１０／０２３９６３３号および同第２０１３／０１５１６７６７号、ならびに国際ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１７／０１９５６５号に以前に記載されている。免疫グロブリンＩｇＧ１Ｆｃが結合するリガンドの大半または全てに結合するストラドマー（例えば、ＧＬ−２０４５）は、以前に開示されている（米国特許第８，６９０，２３７号、ならびに米国特許出願公開第２０１０−０２３９６３３号および同第２０１３−０１５６７６５号）。これらのストラドマー構造は、２つ以上のＦｃをＦｃ受容体に提示する分岐状および直鎖状の設計、２つ以上のＦｃをＦｃ受容体に提示する本発明の多量体化ストラドマーを含むクラスターストラドマー、ならびにＩｇＭＣＨ４ドメインおよび／またはＪ鎖の使用などを通してＦｃのコア部分への結合を介して２つ以上のＦｃをＦｃ受容体に提示するものを含むコアストラドマーを含む。
明白であるように、上記に論じられるＦｃ断片、Ｆｃ部分断片、Ｆｃドメイン、およびＦｃ部分ドメインは、様々なストラドマー高次構造の構築に使用される。更に、ホモ二量体多量体化ストラドマー単位を形成するために最初に産生され、かつ多量体化ドメイン（例えば、ＩｇＧ２ヒンジ）の包含を通して多量体化して、本発明のクラスターストラドマー（または多量体化ストラドマー）を形成するのは、上記にも論じられる個々のＦｃドメインの単量体およびＦｃ部分ドメインの単量体である。具体的なストラドマー構成は、国際ＰＣＴ公開第ＷＯ２００８／１５１０８８号、同第ＷＯ２０１２／０１６０７３号、および同第ＷＯ２０１７／０１９５６５号に詳細に説明されており、これらの内容は、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。具体的には、これらの出願に記載のストラドマーのうちのいずれかが補体および／またはＦｃγ受容体に結合する能力は、ストラドマー配列のＦｃドメイン部分の２３３および／または２３４および／または２３５および／または２３６および／または２３８および／または２６７および／または２６８および／または２９７および／または３２４および／または２９９および／または４３０および／または３４５および／または４４０位のうちの１つ以上の変異によって更に改良され得る。
ストラドマー単位単量体
本明細書で使用される場合、「ストラドマー単位単量体」という用語は、少なくとも第２のストラドマー単位単量体と会合する場合、少なくとも１つのＦｃドメインを含むストラドマー単位を形成する、単一の近接ペプチド分子を指す。一般に、ストラドマー単位は、２つの会合したストラドマー単位単量体から構成され、ストラドマーはまた、３つ以上のストラドマー単位単量体を含有してもよい。したがって、ストラドマー単位およびホモ二量体ストラドマー単位を指す場合、当業者であれば、３つ以上のストラドマー単位単量体を含むかかる構造が、ＦｃγＲ結合が実質的にインタクトのままである限り、これらの用語によって包含されることを理解するであろう。好ましい実施形態において、ストラドマー単位は、２つの同一のストラドマー単位単量体（例えば、ホモ二量体）から構成される。しかしながら、いくつかの実施形態において、ストラドマー単位は、少なくとも１つのアミノ酸残基によって互いに異なる２つのストラドマー単位単量体から構成され得、そのため、結果として得られるストラドマー単位はヘテロ二量体タンパク質である。
ストラドマー単位単量体は、別のストラドマー単位単量体と会合して「ストラドマー単位」を形成する場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８以上のＦｃドメインを形成するアミノ酸配列を有し得る。ストラドマー単位単量体は、別のストラドマー単位単量体と会合してストラドマー単位を形成する場合、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８以上のＦｃ部分ドメインを形成するアミノ酸配列を更に有し得る。
ストラドマー単位の文脈において、ＦｃドメインおよびＦｃ部分ドメインを形成するストラドマー単位単量体の領域は単に、ストラドマー単位単量体分子の連続する領域のカルボキシ末端からアミノ末端にかけて配置され得る。特定のＦｃドメインの単量体およびストラドマー単位単量体を含むＦｃ部分ドメインの単量体の配置は、重要ではない。しかしながら、配置は、２つのストラドマー単量体の会合時に２つの機能的Ｆｃドメインの形成を可能にしなくてはならない。一実施形態において、本発明のストラドマーは、ＩｇＧ１Ｆｃ単量体のＮ末端とリーダーペプチド（配列番号１）のＣ末端との間に直接連結、およびＩｇＧ１ＦｃのＣ末端とＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメイン（配列番号４）のＮ末端との間に直接連結を含有する。一実施形態において、本発明のストラドマーは、ＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメイン（配列番号４）のＮ末端とリーダーペプチド（配列番号１）のＣ末端との間に直接連結、およびＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメインのＣ末端とＩｇＧ１Ｆｃ単量体のＮ末端との間に直接連結を含有する。
明確化の一例として、当業者は、示される点変異を含む本発明のストラドマー分子が、所望される点変異を有し、また多量体化領域もコードするＦｃドメインの単量体をコードするポリヌクレオチド分子を調製することによって構築され得ることを理解するだろう。かかるポリヌクレオチド分子は発現ベクターに挿入されてもよく、これを使用して、細菌の集団を変換するか、または哺乳動物細胞の集団をトランスフェクトすることができる。その後、ストラドマー単位単量体は、変換された細菌またはトランスフェクトされた哺乳動物細胞を適切な培養条件下で培養することによって産生され得る。例えば、安定してトランスフェクトされた細胞のプールを継続するクローン細胞株は、ジェネティシン／Ｇ４１８を有する細胞を選択することによって達成することができる。あるいは、細胞は、ＣＭＶプロモーターの制御下で、本発明のストラドマーをコードするＤＮＡ（例えば、配列番号７〜３４のうちのいずれか１つに従うストラドマーをコードするＤＮＡ）で一過的にトランスフェクトされ得る。その後、発現したストラドマー単位単量体は、ストラドマー単位単量体の自己凝集時、またはストラドマー間単量体連結を使用するストラドマー単位単量体の会合時のいずれかに、機能的ストラドマー単位を形成し得る。その後、発現したストラドマー単位は、例えば、タンパク質Ａまたはタンパク質Ｇカラムを使用する親和性カラムクロマトグラフィーによって、細胞培養培地から精製され得る。当業者は、核酸構築物に含まれるリーダーペプチドは、ストラドマー単位単量体ペプチドの産生の促進だけのために使用され、成熟タンパク質の発現時に切断されることを理解するだろう。したがって、本発明の生物活性生物模倣物は、リーダーペプチドを含まない。
クラスターストラドマー
上述のように、本発明のストラドマーは、２つ以上のＦｃ受容体、好ましくは２つ以上のＦｃγＲへの結合が可能な生物模倣型化合物であり、連続、クラスター、またはコアの３つの物理的高次構造を有し得る。好ましい実施形態において、本発明のストラドマーは、本明細書において「多量体化ストラドマー」とも称されるクラスターストラドマーである。クラスターストラドマーまたは多量体化ストラドマーの文脈において、「ストラドマー単位」または「多量体化ストラドマー単位」という用語は、１つ以上のＦｃＲ（例えば、ＦｃγＲ）への結合が可能であり、他の多量体化ストラドマー単位で多量体化することが可能であり、別の多量体化ストラドマー単位と会合する場合、２つ以上のＦｃＲに結合することができる、２つの単量体（例えば、ストラドマー単位単量体）から構成される二量体タンパク質を指す。いくつかの他の手段によって（すなわち、コア部分の使用によって）ストラドマーを形成するストラドマー単位は、単純にストラドマー単位と呼ばれ、したがって、多量体化ストラドマー単位は、多量体化ドメインを含むストラドマー単位の種類である。「ストラドマー単位単量体」という用語は、少なくとも第２のストラドマー単位単量体と会合する場合、少なくとも１つのＦｃドメイン、および多量体化ストラドマーの文脈において、少なくとも１つの多量体化ドメインを含むストラドマー単位を形成する、単一の近接ペプチド分子を指す。多量体化ストラドマー単位のストラドマー単位単量体は、本明細書において「多量体化ストラドマー単位単量体」と称される。１つのストラドマー単位上に複数のＦｃドメインを含有する連続ストラドマーは、分子が少なくとも１つの多量体化ドメインも含有する限り、クラスターストラドマー単位または多量体化ストラドマー単位に分類され得る。したがって、クラスターストラドマーまたは多量体化ストラドマーは、Ｃ１ｑなどの２つ以上のＦｃγＲおよび／または補体構成要素への結合が可能な生物模倣型化合物である。いくつかの実施形態において、本発明の多量体化ストラドマーは、６個の多量体化ストラドマー単位を含み、Ｃ１ｑ分子の６つ全ての頭部に結合することができる。
上述のように、多量体化ストラドマーの文脈において、ストラドマー単位は、少なくとも１つのＦｃドメインおよび少なくとも１つの「多量体化ドメイン」を含み、本明細書において「多量体化ストラドマー単位」と称される。多量体化ドメインは、それらが天然に存在するタンパク質においてタンパク質の多量体化をもたらすことが知られているアミノ酸配列であり、その例は、米国特許出願公開第２０１３−０１５６７６５および同第２０１４−００７２５８２に記載されており、全ての目的のために参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。本明細書で使用される場合、「多量体化」は、例えば、多量体化ストラドマー単位の二量体、三量体、四量体、五量体、六量体などを形成するために（例えば、多量体化ストラドマーを形成するために）、複数の（すなわち、２個以上の）個々の多量体化ストラドマー単位を一緒に連結または結合することを指す。一般に、本明細書に記載の多量体化ドメインは、更に多量体化するために二量体タンパク質をもたらす（例えば、ストラドマー単位の多量体化）ペプチド配列を含む。ペプチド多量体化ドメインの例としては、ＩｇＧ２ヒンジ、イソロイシンジッパー、コラーゲングリシン−プロリン−プロリン（ＧＰＰ）反復、および亜鉛フィンガーが挙げられる。いくつかの実施形態において、多量体化ドメインは、ＩｇＧ２ヒンジ、イソロイシンジッパー、またはこれらの組み合わせであってもよい。
特定の実施形態において、多量体化ドメインは、ＩｇＧ２ヒンジである。当該技術分野において既知であるように、ヒトＩｇＧ２のヒンジ領域は、共有結合二量体を形成し得る（Ｙｏｏ，Ｅ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７０，３１３４−３１３８（２００３）、Ｓａｌｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２５，１３６９−１３７２（２００７））。ＩｇＧ２の二量体形成は、ＩｇＧ２ヒンジ構造においてＣ−Ｃ結合によってに媒介される可能性があり（Ｙｏｏ ｅｔ ａｌ．２００３）、ヒンジ構造が単独で二量体形成を媒介し得ることを示唆するが、ＩｇＧ２ヒンジ相互作用は様々で動的である。しかしながら、ヒト血清に見られるＩｇＧ２二量体の量は限定され、総ＩｇＧ２の１０％未満がホモ二量体の二量体として存在すると推定される（Ｙｏｏら、２００３）。更に、ホモ二量体の二量体を超えたＩｇＧ２の多量体化の定量的証拠は存在しない。（Ｙｏｏら、２００３）。つまり、未変性ＩｇＧ２は、ヒト血清中で高次多量体化を形成することが見出されていない。対照的に、ＩｇＧ２ヒンジ含有多量体化ストラドマー単位（すなわち、ＧＬ−２０４５、Ｇ０１９、およびＧ０５１、ＷＯ２０１２／０１６０７３に記載される）は、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル、分析用超遠心法、および３カ月安定性研究（湿度１００％、３７℃で）によって証明されるように、高度に安定したより高次の多量体化ストラドマーを形成する。特に、ＩｇＧ２ヒンジ含有多量体化ストラドマーの調製物は、驚くべきことに、ヒト血清中の未変性ＩｇＧ２について観察された１０％よりも高いパーセンテージの二量体を含む。例えば、二量体、三量体、四量体、およびホモ二量体のより高次の多量体を含む、多量体化ストラドマーのパーセントは、典型的には２０％を超え、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％さえも超え得る。
ヒトＩｇＧ２ヒンジ単量体のアミノ酸配列は、次の通りである：ＥＲＫＣＣＶＥＣＰＰＣＰ（配列番号４）。配列番号４の４つのシステインのいずれか１つの変異は、ストラドマー単位の多量体化の大幅な低下に関連付けられ得る。ＩｇＧ２ヒンジ単量体の２つのＣ−Ｘ−Ｘ−Ｃ部分が存在する。したがって、本発明のストラドマー単位単量体は、Ｆｃドメインの単量体とともに、ＩｇＧ２ヒンジ単量体の完全な１２個のアミノ酸配列、または４つのアミノ酸コアのいずれかもしくはその両方の、いずれかを含み得る。コア構造のＸ−Ｘは任意のアミノ酸であり得る一方で、好ましい一実施形態において、Ｘ−Ｘ配列はＶ−ＥまたはＰ−Ｐである。当業者は、ＩｇＧ２ヒンジ単量体が、ＩｇＧ２ヒンジ配列の全て、ならびにＩｇＧ２ＣＨ２およびＣＨ３ドメインの単量体配列の一部もしくは全てを含む、コアの４つのアミノ酸構造に加えて、ヒンジ配列の任意の部分から構成され得ることを理解するだろう。理論によって拘束されるものではないが、ＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメインは、ストラドマー単位の任意の部分と相互作用することによって多量体を形成することができる。つまり、１つのストラドマー単位のＩｇＧ２ヒンジは、別のストラドマー単位のＩｇＧ２ヒンジに結合し、それによって、天然のＩｇＧ１Ｆｃと比較して、Ｆｃ受容体および／または補体構成要素への増加した機能的結合を保持しながら、ホモ二量体の二量体またはホモ二量体のより高次の多量体を形成することができる。あるいは、１つの多量体化ストラドマー単位のＩｇＧ２ヒンジドメインは、別の多量体化ストラドマー単位のＩｇＧ１ヒンジに結合し、それによって、天然のＩｇＧ１Ｆｃと比較して、Ｆｃ受容体および／または補体構成要素への増加した機能的結合を保持しながら、ホモ二量体の二量体またはホモ二量体のより高次の多量体を形成することができる。１つの多量体化ストラドマー単位のＩｇＧ２ヒンジドメインが、ＩｇＧ１Ｆｃドメインの別の部分、すなわち、別の多量体化ストラドマー単位のＣＨ２またはＣＨ３ドメインに結合して、天然のＩｇＧ１Ｆｃと比較して、Ｆｃ受容体および／または補体構成要素への増加した機能的結合を保持しながら、ホモ二量体の二量体またはホモ二量体より高次の多量体を形成することもまた可能である。
ロイシンおよびイソロイシンジッパーはまた、多量体化ドメインとしても使用され得る。ロイシンおよびイソロイシンジッパー（コイルドコイルドメイン）は、タンパク質の二量体、三量体、および四量体の形成を促進することが知られている（Ｈａｒｂｕｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２６２：１４０１−１４０７（１９９３）、Ｏ’Ｓｈｅａ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２４３：５３８（１９８９））。イソロイシンジッパーが三量体を形成する天然の傾向を利用することによって、クラスターストラドマーが産生され得る。
当業者は、異なる種類のロイシンおよびイソロイシンジッパーが使用され得る一方で、好ましい一実施形態において、ＧＣＮ４転写調節因子からの修飾されたイソロイシンジッパーが使用されることを理解するだろう（Ｍｏｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４４：３１１２−３１２１（２００７）、Ｈａｒｂｕｒｙ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ２６２：１４０１−１４０７（１９９３））。修飾されたイソロイシンジッパーのアミノ酸配列は、ＧＧＧＳＩＫＱＩＥＤＫＩＥＥＩＬＳＫＩＹＨＩＥＮＥＩＡＲＩＫＫＬＩＧＥＲＧＨＧＧＧ（配列番号５）である。このイソロイシンジッパー配列は、多量体化ドメインとして使用され得るいくつかの可能な配列のうちの単に１つである。配列番号５に示される配列全体が使用されてもよい一方で、配列の下線部分は、本発明のクラスターストラドマーに使用することができるイソロイシンジッパーのコア配列を表す。したがって、本発明の多量体化ストラドマー単位単量体は、１つ以上のＦｃドメインの単量体とともに、イソロイシンジッパーの完全なアミノ酸配列または２８個のアミノ酸コアのいずれかを含み得る。当業者はまた、イソロイシンジッパーが、２８個のコアのアミノ酸構造に加えて、ジッパーの任意の部分から構成され得、したがって、２９個以上であるが、配列全体未満のアミノ酸から構成され得ることも理解するだろう。
グリシン−プロリン−プロリン（ＧＰＰ）反復は、コラーゲンタンパク質をもたらす（タンパク質結合）ヒトコラーゲンに見出されるアミノ酸配列である。当業者であれば、異なる種類のＧＰＰ反復が多量体化ドメインとして使用され得る一方で、好ましい一実施形態において、Ｆａｎら（ＦＡＳＥＢ Ｊｏｕｒｎａｌ ３７９６ ｖｏｌ．２２ ２００８）により記載されるＧＰＰ反復が使用される（配列番号６）ことを理解するだろう。このＧＰＰ反復配列は、Ｆｃドメイン単量体の単量体化に使用され得るいくつかの可能な配列のうちの単に１つである。配列番号６に示される配列全体が使用され得るが、異なる長さの反復を使用して、本明細書に記載の多量体化ストラドマー単位の多量体化を容易にすることもできる。同様に、ＧＰＰ反復内に異なるアミノ酸を含有する反復もまた、置換され得る。
グリコシル化変化は、アミノ酸置換または培養物条件の結果であるかに関わらず、本発明の生物模倣物の多量体化にも影響を与え得る。ペプチド多量体化に対するグリコシル化の影響は、当該技術分野において十分に記載されており（例えば、Ｇｒａｌｎｉｃｋ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ，Ｖｏｌ．８０，Ｎｏ．９，［Ｐａｒｔ１：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ］（Ｍａｙ １，１９８３），ｐｐ．２７７１−２７７４、Ａｓａｎｕｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ Ｓｅｒｉｅｓ Ｖｏｌ．１２２３，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００１，Ｐａｇｅｓ９７−１０１）、以下に更に論じられる。
「多量体化ストラドマー」という用語は、本明細書において、少なくとも２つのＦｃＲへの結合が可能な２つ以上の多量体化ストラドマー単位から構成される多量体化合物を指すように使用される。例えば、多量体化ストラドマー単位は、少なくとも１つの多量体化ストラドマー単位（すなわち、１つ上のＦｃドメインおよび１つ以上の多量体化ドメインを含む少なくとも１つのホモ二量体ポリペプチド）が多量体化ドメインを介して少なくとも１つの他の多量体化ストラドマー単位に結合される場合、多量体化されて多量体化ストラドマーを形成する。結果として得られる多量体化ストラドマーは、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８個以上の多量体化ストラドマー単位を含み得る。特定の実施形態において、本明細書に記載の多量体化ストラドマーは、Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲ）および／または補体構成要素からのゆっくりとした解離（結合力の特徴）を呈する。
本明細書に開示されるストラドマーおよび他の生物模倣型分子は、ヒトを含む様々な種のいずれかに由来し得ることが理解される。実際、本発明の生物摸倣型分子のうちのいずれか１つにおけるＦｃドメインまたはＦｃ部分ドメインは、２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ以上）の種の免疫グロブリンに由来し得る。しかしながら、それらはより一般に、単一種に由来するだろう。加えて、本明細書に開示される方法のいずれか（例えば、治療方法）が、任意の種に適用され得ることが理解されるだろう。一般に、対象となる種に適用される生物模倣物の構成要素は全て、その種に由来するだろう。しかしながら、全ての構成要素が異なる種のものであるか、または２つ以上の種（関連する方法が適用される種を含む、もしくは含まない）からのものである生物摸倣物もまた、使用されてもよい。
本発明のストラドマーおよび他の生物模倣物のＦｃドメインおよびＦｃ部分ドメインを含む、特定のＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４ドメイン、およびヒンジ領域は、それらが由来する免疫グロブリンサブクラス、および生物の両方に関して、独立して選択され得る。したがって、本明細書に開示のストラドマーおよび他の生物模倣物は、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、ＩｇＡ１、ＩｇＤ、ＩｇＥ、およびＩｇＭ、マウスＩｇＧ２ａ、またはイヌＩｇＡもしくはＩｇＢなどの様々な免疫グロブリン型に独立して由来する、Ｆｃドメインおよび部分Ｆｃドメインを含み得る。同様に、各Ｆｃドメインおよび部分Ｆｃドメインは、非ヒト霊長類（例えば、サル、ヒヒ、およびチンパンジー）、ヒト、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ブタ、ウサギ、ヤギ、シカ、ヒツジ、フェレット、スナネズミ、モルモット、ハムスター、コウモリ、鳥類（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、およびアヒル）、魚類、ならびに爬虫類を含む様々な種、好ましくは、哺乳動物種に由来して、種特異的またはキメラストラドマー分子を産生し得る。個々のＦｃドメインおよび部分Ｆｃドメインもまた、ヒト化され得る。
当業者は、異なるＦｃドメインおよび部分Ｆｃドメインが異なる種類の機能性を提供することを理解するだろう。例えば、ＦｃＲｎは、ＩｇＧ免疫グロブリンに特異的に結合し、他のクラスの免疫グロブリンに良好には結合しない。当業者はまた、様々な有害な結果が、ＩｇＡ注入と関連付けられるアナフィラキシーなどの特定のＩｇドメインの使用と関連付けられ得ることも理解するだろう。本明細書に開示の生物模倣物は一般に、かかる作用を回避するように設計されるべきであるが、特定の状況において、かかる作用が望ましい場合がある。
追加のＩＶＩＧ生物模倣物
追加のＩＶＩＧ生物模倣物は、米国特許出願公開第２０１５−０２１８２３６号、同第２０１７−００８８６０３号、同第２０１６−０２２９９１３号、同第２０１７−００８１４０６号、同第２０１７−００２９５０５号、ならびに国際ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１６／００９２３２号、同第ＷＯ２０１６／１３９３６５号、同第ＷＯ２０１７／００５７６７号、同第ＷＯ２０１７／０１３２０３号、および同第ＷＯ２０１７／０３６９０５号に記載されている。これらの説明は、個々の構成要素を説明するために使用される言語がわずかに異なるが、本明細書に記載の化合物の各々は、会合して少なくとも２つの機能的Ｆｃドメインを形成する（例えば、ストラドマー単位）、連続して連結されたＦｃドメイン単量体を含む二量体ポリペプチドから構成される多量体Ｆｃ化合物を本質的に説明する。Ｆｃドメイン単量体を接続するリンカーは、共有結合（例えば、ペプチド結合）、ペプチドリンカー、または非ペプチドリンカーであり得る。更に、機能的Ｆｃドメインを形成するためのＦｃドメイン単量体間の会合の性質は、標準Ｆｃ受容体および／または補体構成要素（例えば、システイン結合または静電相互作用）への結合が可能な機能的Ｆｃドメインの形成を可能にする限り重要ではない。
Ｆｃ受容体の選択的免疫調節剤（ＳＩＦ）
ＵＳ２０１６／０２２９９１３は、第１のＦｃドメイン単量体、リンカー、および第２のＦｃドメイン単量体を含む第１のポリペプチド、第３のＦｃドメイン単量体を含む第２のポリペプチド、ならびに第４のＦｃドメイン単量体を含む第３のポリペプチドを含む、Ｆｃ受容体の選択的免疫調節剤（ＳＩＦ）であるストラドマーを記載している。該第１および第３のＦｃドメイン単量体が組み合わせられて第１のＦｃドメインを形成し、該第２および第４のＦｃドメイン単量体が組み合わせられて第２のＦｃドメイン単量体を形成する。したがって、これらの化合物は、３つの独立したポリペプチドの会合を通して２つの機能的Ｆｃドメインを形成する（ＳＩＦ３（商標））。ＵＳ２０１６／０２２９９１３に開示される追加の実施形態は、最大５つのＦｃドメイン単量体を含む化合物の形成を記載している。これらの化合物は、連続的に連結されるＦｃドメイン（ＵＳ２００５／０２４９７２３およびＵＳ２０１０／０２３９６３３を参照されたい）、および配列変異を通して組み立てられる個々のＦｃドメイン単量体（そのバリアントは、ＵＳ２００６／００７４２２５に開示されている）を本質的に含む。
尾部Ｆｃ多量体
国際ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１５／１３２３６４号、同第ＷＯ２０１７／００５７６７号、および同第ＷＯ２０１７／０１３２０３号、米国特許出願公開第２０１５／０２１８２３６号は、治療を必要とする患者に多重Ｆｃ治療薬であるストラドマーを投与することを含む、自己免疫疾患または炎症性疾患のための治療方法を開示している。本明細書に記載の多重Ｆｃ治療薬は、５、６、または７個のポリペプチド単量体単位を含み、各単量体単位は、２つのＩｇＧ重鎖定常領域を含むＦｃ受容体結合部分を含む。各ＩｇＧ重鎖定常領域は、隣接ポリペプチド単量体のＩｇＧ重鎖定常領域のシステイン残基へのジスルフィド結合を介して連結されたシステイン残基を含む。ＵＳ２０１５／０２１８２３６に記載のペプチド「単量体」が２つのＩｇＧ重鎖から構成される場合、それらは実際には二量体タンパク質（例えば、Ｆｃドメイン）である。ＵＳ２０１５／０２１８２３６のいくつかの実施形態において、単量体単位は、単量体単位のポリマーへの組み立てを容易にする尾部領域を更に含む。したがって、本明細書で使用される場合、「尾部」は、本明細書ならびにＵＳ２０１０／０２３９６３３およびＵＳ２０１３／０１５６７６５に記載の多量体化ドメインと同じ目的を果たす。
３０９位に変異を含むＦｃ多量体
米国特許出願公開第２０１７−００８１４０６号および同第２０１７−００８８６０３号は、各ポリペプチド単量体がＦｃドメインを含む、ポリペプチド単量体単位から構成される多重Ｆｃ治療薬である多量体化ストラドマーを記載している。該Ｆｃドメインのそれぞれは、そのそれぞれが３０９位にシステイン（ＵＳ２０１７−００８１４０６）または３０９位にシステイン以外のアミノ酸（ＵＳ２０１７−００８８６０３）を含む、２つの重鎖Ｆｃ領域から構成される。したがって、ＵＳ２０１７−００８１４０６およびＵＳ２０１７−００８８６０３に記載のかかるポリペプチド「単量体」は、実際には二量体タンパク質（例えば、本明細書で使用されるＦｃドメイン単量体）である。ＵＳ２０１７−００８１４０６およびＵＳ２０１７−００８８６０３の重鎖Ｆｃ領域のそれぞれは、単量体を多量体に組み立てるそのＣ末端で尾部に融合される。したがって、本明細書で使用される場合、「尾部」は、本明細書に記載の多量体化ドメインと同じ目的を果たす。
連続して連結されたＦｃドメイン単量体から構成されるＦｃ多単量体
米国特許出願公開第２０１０／０１４３３５３号は、ＩｇＧの少なくとも第１および第２のＦｃ断片、少なくとも１つのＣＨ２ドメインを含むＩｇＧの第１のＩｇＧ断片のうちの少なくとも１つ、およびヒンジ領域を含み、ＩｇＧの第１および第２のＦｃ断片がヒンジを通して結合されて鎖を形成する、多重Ｆｃ治療薬である連続ストラドマーを記載している。ＵＳ２０１０／０１４３３５３のいくつかの実施形態において、実質的に同様の鎖が会合して二量体を形成する。ＵＳ２０１０／０１４３３５３の他の実施形態において、複数の実質的に同様の鎖が会合して多量体を形成する。本明細書に記載されるように、Ｆｃ断片はＦｃドメインを包含する。したがって、ＵＳ２０１０／０１４３３５３に開示される治療薬は、少なくとも２つのＦｃ受容体に結合し、多量体に組み立てることが可能な多量体化Ｆｃ治療薬を含む。
一般的なストラドマー
本発明の免疫学的に活性な化合物は、ホモ二量体の多量体であり、各ホモ二量体は、補体および／またはＦｃγＲおよび／または新生児受容体（ＦｃＲｎ）に結合する能力を持つ。したがって、多量体化されるとき、免疫学的に活性な生物模倣物は、それぞれが補体および／またはＦｃγＲ（ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、および／またはＦｃγＲＩＩＩを含む）および／またはＦｃＲｎに結合する能力を持つ少なくとも２つのホモ二量体を含有する。本明細書に提供されるストラドマーは、「一般的なストラドマー」である。本明細書において、「一般的なストラドマー」という用語は、補体カスケードおよび標準ＦｃＲ（ＦｃＲｎを含む）の１つ以上の構成要素への結合が可能なストラドマーを指す。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の一般的なストラドマーは、他よりも１つのＦｃＲへの優先的な結合を必ずしも示さないか、またはＦｃＲもしくは補体タンパク質の優先的な結合を必ずしも示さない。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の一般的なストラドマーは、１つ以上のＦｃＲへの優先的な結合または補体タンパク質への優先的な結合を示す。したがって、本明細書に記載の一般的なストラドマーは、例えば、ストラドマーを含む補体優先多重Ｆｃ治療薬を説明している国際ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１７／０１９５６５号に記載されるストラドマー実施形態とは異なる。補体優先ストラドマーは、多量体化ドメインを含み、補体優先ストラドマーがＣ１ｑなどの１つ以上の補体構成要素に優先的に結合することを可能にするＦｃドメインのＣＨ１および／またはＣＨ２領域に点変異を更に含む。この優先的結合は、補体構成要素への増加した結合を通して直接、またはストラドマーの標準Ｆｃ受容体への減少した結合を通して間接的に達成される。
一般に、本発明の免疫学的に活性な生物模倣物は、未変性ＩｇＧ１または対応する親生物模倣物と比較して、補体および／またはＦｃγＲ結合を維持または増加させるように設計される。一実施形態において、本発明の生物模倣物は、限定されないが、Ｃ１ｑ、Ｃ１ｒ、Ｃ１ｓ、Ｃ４、Ｃ４ａ、Ｃ４ａ ｄｅｓＡｒｇ、Ｃ３、Ｃ３ａ、Ｃ３ａ ｄｅｓＡｒｇ、Ｃ４ｂ２ａ３ｂ、Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂ（ｉＣ３ｂ１、ｉＣ３ｂ２、Ｃ３ｄｇ、Ｃ３ｄ、および／またはＣ３ｇを含む）、Ｃ５、Ｃ５ａ、Ｃ５ｂ、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８、およびＣ９を含む補体系の構成要素に結合する。一実施形態において、本発明の生物模倣物は、Ｃ１ｑへの保持または改良された結合を呈する。一実施形態において、本発明の生物模倣物は、Ｃ５ｂ−９膜侵襲複合体の上流の補体系の構成要素に結合する。一実施形態において、本発明の生物模倣物は、Ｃ５ａの上流の補体系の構成要素に結合する。一実施形態において、本発明の生物模倣物は、親ストラドマーと比較して、減少したＣ５ａおよび膜侵襲複合体形成を呈する。
一実施形態において、本発明の生物模倣物は、未変性ＩｇＧ１または親生物模倣物と比較して、ＦｃγＲＩおよび／またはＦｃγＲＩＩａおよび／またはＦｃγＲＩＩｂおよび／またはＦｃγＲＩＩＩを含むＦｃγＲへの維持または改良された結合を呈する。一実施形態において、本発明の生物模倣物は、維持もしくは改良されたＦｃγＲＩおよび／またはＦｃγＲＩＩａおよび／またはＦｃγＲＩＩｂおよび／またはＦｃγＲＩＩＩ結合、ならびに保持または改良された補体Ｃ１ｑ結合を呈する。自然免疫グロブリンＩｇＧ１と比較した、補体経路の構成要素および／またはＦｃγＲへの改良された結合の程度は、実際には非常に著しいものであり得、ある特定の状況下でヒトにおいて発生し得る凝集ＩｇＧ１への補体経路の構成要素および／またはＦｃγＲの結合に接近するか、またはそれを凌ぐ。「凝集未変性ＩｇＧの免疫学的活性」とは、ＩｇＧ凝集体への免疫系の曝露時に、免疫系の機能に影響を与える多量体化ＩｇＧの特性を指す。未変性多量体化ＩｇＧの具体的な特性としては、ＦｃγＲへの特異的結合の改変、免疫細胞の表面上でのＦｃγＲの架橋、またはＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、もしくは補体固定などの多量体化ＩｇＧのエフェクター機能性が挙げられる（例えば、Ｎｉｍｍｅｒｊａｈｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｅｘｐ“Ｍｅｄ．“２００７；２０４：１１−１５、Ａｕｇｅｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｕｔ．１９８５；５０：２４９−２５２、Ａｒａｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｅｘｐ“Ｍｅｄ．“１９９７；１８６：１９５７−１９６３、Ｔｅｅｌｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ．２００１；９８：１０９５−１０９９、Ａｎｄｅｒｓｏｎ ａｎｄ Ｍｏｓｓｅｒ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２；１６８：３６９７−３７０１、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ａｎｄ Ｌｕｎｄ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ．２００２；８２：５７、Ｂａｎｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００３；１７０：３９６３−３９７０、Ｓｉｒａｇａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．２００５；ｌ１５：１５５−１６０を参照されたい）。これらの特性は一般に、ホモ二量体ＩｇＧの特性に対する比較によって評価される。
いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物および組成物は、補体構成要素（複数可）、Ｃ１ｑおよび／またはＣ４および／またはＣ４ａおよび／またはＣ３および／またはＣ３ａおよび／またはＣ５および／またはＣ５ａに結合する。いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物および組成物は、Ｃ３ｂに結合する。いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物および組成物は、補体系の下流活性化を予防もしくは低減し（例えば、Ｃ５切断の低減、Ｃ５ａおよび／もしくはＣ５ｂ産生の低減、ならびに／または膜侵襲複合体形成の低減、および／または末端補体複合体形成の低減）、かつ補体依存性細胞傷害、炎症、もしくは血栓症などの下流補体媒介機能を予防または低減させる、補体分子、例えば、Ｃ１ｑ、Ｃ３、またはＣ３ｂに結合する。いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物および組成物は、Ｃ４ａ、Ｃ３ａ、および／またはＣ５ａのレベルの増加と関連付けられ、これらのレベルの増加は、抗炎症性または抗血栓性臨床プロファイルと関連付けられる。
いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物および組成物は、インタクト免疫グロブリンまたは親生物模倣物と比較して、改良された多量体化の更なる利点を有する。いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物および組成物は、多量体化して高次多量体を形成する。いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物および組成物は、インタクト免疫グロブリンおよび改良された多量体化と同じまたは改良された補体結合の利点を有する。いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物および組成物は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、もしくはＦｃγＲＩＩＩへの保持または改良された結合、および改良された多量体化を呈する。いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物および組成物は、保持または改良された補体結合を呈し、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩへの結合を保持し、かつ改良された多量体化を有する。
一実施形態において、本発明の生物模倣物および組成物は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１または親生物模倣物もしくは組成物と比較して、修飾された補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、ＡＤＣＰ、および／またはＡＤＣＣなどの修飾されたエフェクター機能を有し得る。いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物および組成物は、自然免疫グロブリンＩｇＧ１または親生物模倣物もしくは組成物と比較して、修飾された補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、ＡＤＣＰ、および／またはＡＤＣＣなどのエフェクター機能をより著しく阻害し得る。
変異および機能的バリアント
本発明はまた、ＦｃドメインまたはＦｃ部分ドメインの天然に存在するアミノ酸配列とは異なるアミノ酸を有するＦｃドメインおよびＦｃ部分ドメインを含むストラドマーを包含する。本発明の生物模倣型化合物中に包含するのが好ましいＦｃドメインは、補体および／またはＦｃγＲに対する測定可能な特異的結合親和性を有する。特異的結合は一般に、結合アッセイにおいて、後の非標識リガンドの過剰によって置換可能である標識されたリガンドの量により評価される。しかしながら、これは、当該技術分野において十分に確立されている特異的結合を評価する他の手段を除外しない（例えば、Ｍｅｎｄｅｌ＆Ｍｅｎｄｅｌ，ＢｉｏｃｈｅｍＪ．１９８５ Ｍａｙ １５；２２８（ｌ）：２６９−７２）。特異的結合は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）を通して市販されている）またはバイオレイヤー干渉法（ＦｏｒｔｅＢｉｏ（登録商標）を通して市販されている）などの、当該技術分野において周知である様々な方法で測定して、免疫学的に活性な生物模倣物の会合定数および解離定数の両方を特性付けることができる（Ａｓｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ２００５，９：５３８−５４４）。
多数のＦｃドメインおよびＦｃドメインの単量体の一次アミノ酸配列およびＸ線結晶学構造が、当該技術分野において利用可能である。例えば、Ｗｏｏｆ ｅｔ ａｌ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４Ｆｅｂ；４（２）：８９−９９を参照されたい。Ｆｃγ受容体結合能を有する代表的なＦｃドメインとしては、ヒトＩｇＧ１に由来するＦｃドメイン（配列番号２または３）が挙げられる。これらの未変性配列は、機能的な配列の部位特異的変異誘発のマッピングを含む、広範な構造−機能分析に供されている。これらの事前の構造−機能研究および利用可能な結晶学データに基づいて、当業者は、補体および／またはＦｃγＲ結合能を保ちながら、機能的Ｆｃドメイン配列バリアントを設計することができる。例えば、システイン残基は、単量体間のジスルフィド結合を改良するために付加されても、ストラドマーホモ二量体の相互作用を改変するために欠失されてもよい。更に、当業者は、改良された補体および／またはＦｃγＲ結合能を保ちながら、機能的Ｆｃドメイン配列バリアントを設計すること、または更に一層改良された補体および／またはＦｃγＲ結合能を有する機能的Ｆｃドメイン配列バリアントを設計することができる。
アミノ酸変化は、Ｆｃドメインの配列を通して見出されても、Ｆｃドメインを含む特定のＦｃ部分ドメインに単離されてもよい。本発明のストラドマーまたは生物模倣物中に使用されるＦｃドメインの機能的バリアントは、未変性Ｆｃドメインに対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するだろう。同様に、本発明のストラドマーまたは生物模倣物中に使用されるＦｃドメインの機能的バリアントは、未変性Ｆｃ部分ドメインに対して少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％の配列同一性を有するだろう。
アミノ酸変化は、ＦｃＲｎ、標準Ｆｃγ、および／または補体構成要素へのストラドマーの結合親和性を減少させるか、増加させるか、または未改変のまま維持することができる。かかる変更としては、欠失、付加、および他の置換が挙げられる。好ましい実施形態において、かかるアミノ酸変化は、保存アミノ酸置換である。保存アミノ酸置換は、典型的には、以下のグループ（つまり、グリシンおよびアラニン；バリン、イソロイシン、およびロイシン；アスパラギン酸およびグルタミン酸；アスパラギン、グルタミン、セリン、およびスレオニン；リジン、ヒスチジン、およびアルギニン；ならびにフェニルアラニンおよびチロシン）内の変化を含む。加えて、アミノ酸変化は、例えば、システイン残基の付加によって、多量体化を改良することができる。
ＦｃγＲおよび補体系の構成要素との免疫グロブリン（Ｉｇ）相互作用は、ＩｇのＦｃドメインを通して媒介され、完全抗体分子のＦｃ領域における変異は、抗体の特徴および機能に関して予想可能な結果を有する。例えば、Ｍｏｏｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｂｓ ２：２；１８（２０１０）およびＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７６；６５９１（２００１）を参照されたい。しかしながら、本発明者らは、驚くべきことに、抗体機能を修飾するため（例えば、モノクローナル抗体において標準ＦｃγＲ結合を低減または排除するため）の以前に記載された変異が、多量体化ストラドマーの文脈において同じ効果を有しないことを見出した。実際、多量体化ストラドマーの文脈における特定の変異の効果は、完全に予想不可能である。
例えば、２３６および３２８位の二重変異（Ｔａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ１１９；２０７４（２０１２））または２３３位の単一変異（Ｓｈｉｅｌｄｓ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６（９）：６５９１（２００１）は、標準ＦｃγＲへの抗体または免疫グロブリンＦｃ結合を低減することを示した。特に、２３６および３２８位における二重変異は、ＦｃγＲＩへの抗体または免疫グロブリン結合を排除することを示した（Ｔａｉら、２０１２）。しかしながら、本発明者らは、驚くべきことに、２６７、２６８、および／または３２４位の補体改良変異を更に含む多量体化ストラドマーの文脈におけるこれらの変異で、ＦｃγＲＩ結合が驚くべきことにある特定の多量体化ストラドマーにおいて保持されたことを見出した。更に、２３４および２３５位における変異が標準ＦｃγＲへの免疫グロブリン結合を低減し（Ａｒｄｕｉｎ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６５（２）：４５６−４６３（２０１５））、Ｃ１ｑ結合を低減する（ＷＯ２０１５／１３２３６４、Ａｒｄｕｉｎ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６５（２）：４５６−４６３（２０１５）、Ｂｏｙｌｅ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，４２（３）：５８０−５９０（２０１５））ことが記載されている。しかしながら、多量体化ストラドマーの文脈において、これらの点変異は標準ＦｃγＲまたはＣ１ｑのいずれかへのＦｃ結合を阻害しない。加えて、２３３および２３６位の二重変異（Ｅ２３３ＰおよびＧ２３６Ｒ）は、全ての標準ＦｃＲへのＦｃ結合を低減することが予想されるが、本発明者らは、予想外に、これらの２つの位置に変異を含むいくつかの変異の組み合わせが、驚くべきことに、未変異の親ストラドマーと比較して、１つ以上のＦｃＲへの保持または増加された結合をもたらすことを見出した。
加えて、３２８位の変異（Ｌ３２８Ｆ）は、ＦｃγＲＩＩｂへのＦｃ結合のみを増加させるこが以前に記載されたが（Ｃｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ４５；３９２６（２００８））、本発明者らは、驚くべきことに、少なくとも２６７、２６８、および３２４位での追加の変異の文脈において、３２８位に変異を含むストラドマーが、予想不可能な方法でＦｃγＲＩＩｂ以外の１つ以上の標準ＦｃγＲへの増加された結合をもたらすことを見出した。更にまた、２３８位の変異はＦｃγＲＩＩｂへのＦｃ結合を増加し、ＦｃγＲＩおよびＦｃγＲＩＩａへのＦｃ結合を減少することが以前に記載されたが、２６５位の変異は、全ての標準ＦｃγＲ結合を低減することが記載された（Ｍｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｄｅｓｉｇｎ，ａｎｄ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎｐ．１−１０（２０１３））。しかしながら、本発明者らは、２６７、２６８、および／または３２４位に少なくとも１つの補体改良変異を更に含む多量体化ストラドマーの文脈において、２３８および２６５位の変異が、ＦｃγＲＩＩａへの頑強な結合をもたらすことを以前に見出した。
したがって、当該技術分野において、抗体に対して特定の効果（例えば、抗体の文脈において、特定のＦｃγＲへのＦｃ結合を増加もしくは減少させる、またはＣ１ｑ結合を改変することが予想される変異など）を有することが既知であるアミノ酸変異の効果は、多量体化ストラドマーの文脈においては、予想することができない。
更に、ストラドマーの文脈内でも、変異の効果は、親構築物自体（すなわち、ＧＬ−２０４５およびＧＬ０１９）の関数と同様に予想不可能であり、任意の導入された変異の不在下でも予想不可能である。例えば、ＧＬ−２０４５およびＧ０１９が全く同一の構成要素を有し、かつ実際にはＩｇＧ１ Ｆｃドメインに対するＩｇＧ２ヒンジ領域の位置以外には全く同一の分子であるという事実に関わらず、これらの分子は、補体結合に関して大いに異なる活性を呈する。両方の分子がＦｃ受容体を多量体化し、それらに結合するが、ＧＬ−２０４５は、全てのＦｃ受容体ならびに補体Ｃ１ｑへの頑強な結合、およびＣＤＣの阻害を呈する。逆に、Ｇ０１９が配向においてのみＧＬ−２０４５と異なる（ＷＯ２０１２／０１６０７３を参照されたい）という事実に関わらず、Ｇ０１９は、補体Ｃ１ｑに結合しないか、またはＣＤＣも阻害しない。したがって、ＩｇＧ１Ｆｃドメインに対するＩｇＧ２ヒンジの位置を除いて同一である２つの異なるストラドマー上の同じＦｃ位置に存在する同じ変異の効果は、変異が存在しない場合でも、これら２つのストラドマーが異なる機能特徴を有するため、予想することができない。
一例として、ＷＯ２０１７／０１９５６５に記載の化合物Ｇ９９６およびＧ９９９はともに、追加の変異Ｇ２３６Ｒだけでなく、Ｃ１ｑ結合を増加させることが予想される、Ｍｏｏｒｅらに開示される三重変異（Ｓ２６７Ｅ／Ｈ２６８Ｆ／Ｓ３２４Ｔ）も保有する。これら２つの化合物間の唯一の相違は、Ｇ９９６がＧＬ−２０４５背景上にあり、Ｃ末端ＩｇＧ２ヒンジを含むが、Ｇ９９９がＧ０１９背景上にあり、Ｎ末端ＩｇＧ２ヒンジを含むことである。ＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（Ｇ９９６）におけるこのセットの変異は、標準ＦｃγＲよりもＣ１ｑへのＦｃ結合を優先的に保持したが、Ｇ０１９背景上のストラドマー（Ｇ９９９）における同じセットの変異は、Ｃ１ｑへの阻害されたＦｃ結合をもたらした。さもなければ十分に特徴付けされたセットの変異であるものにおけるこの機能の二分は、多量体化ストラドマーの文脈においてなされる変異が予想不可能であることを強調する。更に、２つのストラドマーが１つ以上の特定の位置で１つ以上の変異以外互いに同一である場合、２つのストラドマーは、変異が構造的に類似したアミノ酸である場合でも非常に異なる機能的特徴を有し得る。したがって、ストラドマーの任意の領域内のいかなる変異または変異のセットの、多量体化ストラドマーの活性に対する効果は、モノクローナル抗体に関する文献に基づいて予想することができない。
ＦｃγＲおよび補体タンパク質とのＦｃ接触は、タンパク質−タンパク質相互作用によってだけでなく、結合親和性に寄与するＦｃ上に存在するグリカンとの相互作用によっても媒介される。したがって、未変性Ｆｃドメインのアミノ酸配列の組成に加えて、Ｆｃドメインの炭水化物含有量は、Ｆｃドメイン構造および機能に重要な役割を果たす。例えば、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｊｕｌ ２００２；２７７：２６７３３−２６７４０、Ｗｒｉｇｈｔ ａｎｄ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，Ａｐｒ １９９８；１６０：３３９３−３４０２を参照されたい。Ｎ−グリカンは、ＩｇＧ１Ｆｃドメインの２９７〜２９９位に見出されるＡｓｎ−Ｘａａ−Ｓｅｒ／Ｔｈｒ／Ｃｙｓシークオン（ここで、Ｘａａは、任意のアミノ酸である）の多くの分泌および膜結合糖タンパク質上に生じる。
ＦｃドメインのＦｃγＲへの結合におけるグリコシル化の重要性は、既知のグリコシル化部位Ｎ２９７の点変異を含む、モノクローナル抗体のＩｇＧ１Ｆｃドメインにおけるグリコシル化パターン（Ｓｈｉｅｌｄｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｆｅｂ２００１；２７６：６５９１−６６０４、Ｌｕｎｄ，ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９２；２９；５３−５９）および酵素Ｆｃ脱グリコシル化（Ｍｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７６，ｐｐ４５５３９−４５５４７（２００１））の様々な改変を通して示されている。これらのデータは、２９７位の変異を介したＩｇＧ１Ｆｃドメインの非グリコシル化が全ての標準ＦｃγＲへのＦｃ結合の阻害およびＣ１ｑへの結合阻害をもたらしたことを示した（Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２００８ Ｄｅｃ ２３；１０５（５１））。本発明者らは、ＧＬ−２０４５背景上の多量体化ストラドマーの文脈において、Ｆｃドメインの２９７位の点変異が標準ＦｃγＲ受容体への結合に関して予想不可能な効果をもたらしたことを見出した。例えば、変異Ｈ２６８ＦおよびＳ３２４Ｔならびに更なるＳ２６７Ｅ変異と組み合わせて２９７位に変異を含む多量体化ストラドマーは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＣ１ｑへの強力な結合を示した（ＷＯ２０１７／０１９５６５に記載されるＧ９９８）。しかしながら、変異Ｈ２６８ＦおよびＳ３２４Ｔならびに更なるＳ２６７Ｒ変異と組み合わせた２９７位の変異は、ＦｃγＲＩへの結合、ＦｃγＲＩＩｂへの結合のみを示し、Ｃ１ｑは完全に阻害された（ＷＯ２０１７／０１９５６５に記載されるＧ１１３２）。
モノクローナル抗体の文脈において、グリコシル化コンセンサス配列の２９９位に導入された単一点変異Ｔ２９９Ａは、ＦｃγＲＩＩａへの結合を維持した非グリコシル化Ｆｃをもたらし、Ｓ２９８およびＴ２９９位の特異的二重変異（Ｓ２９８Ｇ／Ｔ２９９Ａ）は、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩＩｂへの結合を維持したが、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩ、またはＣ１ｑに結合しなかった非グリコシル化Ｆｃをもたらした（Ｓａｚｉｎｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ Ｕ Ｓ Ａ．２００８ Ｄｅｃ ２３；１０５（５１））。グリコシル化Ｔ２９９Ｓ変異が全ての標準ＦｃγＲにわたって結合を低減させたため、２９９位に存在する側鎖の性質もＦｃγＲの結合に重要であることが示された（ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０８５７５７を参照されたい）。しかしながら、多量体化ストラドマーの文脈において、２９９位の点変異の導入は、標準ＦｃγＲおよびＣ１ｑへの結合に対する予想不可能な効果を示した。例えば、多量体化ストラドマー（Ｇ１０９９）の文脈において、Ｔ２９９Ａ変異の導入は、ＦｃγＲＩＩａだけでなく、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＣ１ｑへの保持または改良されたＦｃ結合ももたらした。２６７、２６８、および３２４などの追加の変異の文脈において、Ｔ２９９Ａ変異の効果は、ＦｃγＲおよびＣ１ｑへのＦｃ結合に予想不可能に影響を及ぼした。例えば、多量体化ストラドマーの文脈において、Ｓ２６７Ｅ、Ｓ２６７Ｑ、Ｓ２６７Ｄ、Ｓ２６７Ｈ、またはＳ２６７Ｎ変異と組み合わせたＨ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＴ２９９Ａ変異の導入は、全ての標準ＦｃγＲへの結合を保持し、Ｃ１ｑへの高い結合を示したストラドマーをもたらした（本明細書に記載のＧ１０６８、１０９４、１０９２、１１０７、および１０９５を参照されたい）。対照的に、多量体化ストラドマーの文脈において、Ｓ２６７ＲまたはＳ２６７Ｋ変異と組み合わせたＨ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＴ２９９Ａ変異の導入は、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、またはＣ１ｑへの結合を保持しなかったが、ＦｃγＲＩ（ＷＯ２０１７／０１９５６５に記載のＧ１０９６）、またはＦｃγＲＩおよびＦｃγＲＩＩＩａ（ＷＯ２０１７／０１９５６５に記載のＧ１０９３）への高い結合を保持したストラドマーをもたらした。
加えて、多重Ｆｃ治療薬内に導入された同様の非グリコシル化変異は、場合によっては、多量体化ストラドマーの文脈において、同じ変異の効果とは完全に反対の機能的効果を示す。例えば、さもなければ六量体の多重Ｆｃ治療薬におけるＮ２９７Ａ変異の導入による２９７〜２９９シークオンでのＮグリカンの除去は、全ての標準ＦｃγＲへの結合を完全に阻害した（Ｂｌｕｎｄｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．ｊｂｃ．Ｍ１１７．７９５０４７，２０１７）。しかしながら、上述のように、２９７位の変異は、本明細書に記載の多量体化ストラドマーが標準ＦｃγＲに結合する能力に対して異なる効果を示し、ＦｃγＲＩおよびＦｃγＲＩＩｂへの保持または改良された結合をもたらした。更に尚、Ｔ２９９Ａ変異を含む本明細書に記載の多量体化ストラドマーの非グリコシル化六量体実施形態は、全ての標準ＦｃγＲならびにＣ１ｑへの保持された結合を示した（本明細書に記載のＧ１０９８、１１２６、および１１２７）。当業者であれば、３つ全ての位置がグリコシル化コンセンサス配列内に含まれるため、２９７、２９８、２９９位、またはそれらの組み合わせの変異がＦｃのグリコシル化レベルの低減につながる可能性が高いことを認識するであろう。しかしながら、多量体化ストラドマーの文脈において、これらの非グリコシル化変異の効果は、モノクローナル抗体の文脈において記載される効果に基づいて、または他の一見同様の多重Ｆｃ治療薬の文脈に記載される効果に基づいても予想することができない。
点変異の導入に加えて、炭水化物またはグリカン含有量は、例えば、特定の細胞株またはインビトロ酵素修飾を含む特定のタンパク質発現系を使用して、制御することができる。したがって、本発明は、ドメインが得られる未変性抗体の未変性炭水化物含有量を有するＦｃドメインを含むストラドマー単位、ならびに未変性抗体と比較して、改変された炭水化物含有量を有するそれらの生物模倣型化合物を含む。別の実施形態において、多量体化ストラドマーは、対応する親ストラドマーのホモ二量体構成要素と比較して、異なるグリコシル化パターンを特徴とする。例えば、本明細書に記載の多量体化ストラドマーは、Ｆｃドメインの非グリコシル化をもたらす１つ以上のアミノ酸変異を含み得る。かかる実施形態において、多量体化ストラドマーは、親ストラドマーの非グリコシル化バリアントである。
モノクローナル抗体おけるＦｃＲへのＦｃ結合親和性を減少させる変異は、結合力の効果がリガンド結合における減少の効果を上回っても上回らなくてもよい場合、一般的なストラドマーにおけるＦｃＲへの結合を減少させるか、増加させるか、または変化させなくてもよい。結果は、抗体変異の知識によって予想することができない。モノクローナル抗体が、それらのＦｃγＲおよび補体標的に対する親和性を有し、これが変異を導入することによって上方制御または下方制御され得る一方で、ストラドマーは、ＦｃγＲおよび補体に多価Ｆｃを提示し、したがって、それらの標的に結合するために結合力により重度に依存する。対照的に、モノクローナル抗体は、典型的には、それらのＦｃドメインを通した強力な結合は有さない。これらの特徴は、ストラドマーおよびモノクローナル抗体が、構造においてだけでなく、機能および有用性においても本質的に異なるという事実を強調する。
一般的なストラドマーの好ましい実施形態
本明細書に記載のストラドマーは、親ストラドマーと比較して、改良された補体および／またはＦｃγＲ結合を提供する。したがって、本明細書に記載のストラドマーは、補体カスケードの１つ以上の構成要素に結合し、１つ以上のＦｃγＲにも結合する「一般的なストラドマー」である。特定の実施形態において、本明細書に記載の一般的なストラドマーは、驚くべきことに、Ｇ０１９またはＧＬ−２０４５などの他の一般的なストラドマーと比較して、六量体、十二量体（例えば、六量体の二量体）、および／または十八量体（例えば、六量体の三量体）を優先的に形成し、親ストラドマー、または親ストラドマーの非グリコシル化の非六量体バリアントと比較して、改良もしくは保持された補体結合および／またはＦｃγ受容体結合を提供する。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のストラドマーはＦｃドメインを含み、Ｆｃドメインは、２９９または２９７位に点変異を含み、これらの位置における変異がＩｇＧ Ｆｃの正常なグリコシル化パターンを改変するため、本明細書において「非グリコシル化変異体」または「非グリコシル化バリアント」と称される。
点変異Ｇ２３６Ｒを有するＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号１０）は、本明細書においてＧ９９０と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ９９０は、ＦｃγＲＩへの結合が最小であり、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩａへの結合が不在であり（図２Ａ、図２Ｂ、および図７）、Ｃ１ｑ結合が低く、ＣＤＣを阻害することが不可能であることを示す（図２Ａ）。
変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号１１）は、本明細書において１１０３と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１１０３は、ＦｃγＲＩへの結合が強く、ＦｃγＲＩＩａおよびＦｃγＲＩＩＩａへの結合がわずかに減少し、ＦｃγＲＩＩｂへの結合が最小であることを示す（図８）。いくつかの実施形態において、Ｇ１１０３は、Ｃ１ｑへの結合が高く、ＣＤＣを阻害する能力を示し、おおよそのＩＣ５０は５μｇ／ｍＬである。
変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号１２）は、本明細書において１１０４と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１１０４は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩｂへの結合が強いことを示す（図９）。いくつかの実施形態において、Ｇ１１０４は、Ｃ１ｑへの結合が高く（図２８）、ＣＤＣを阻害する能力を示し、おおよそのＩＣ５０は５μｇ／ｍＬである。
変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｎ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号１５）は、本明細書において１１０５と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１１０５は、ＦｃγＲＩへの結合が強く、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩａへの結合がわずかに減少することを示す。いくつかの実施形態において、Ｇ１１０５はまた、Ｃ１ｑ結合が高く、ＣＤＣを阻害する能力も示す。
変異Ｅ２３３Ｐ、Ｓ２６７Ｑ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号１３）は、本明細書において１１０２と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１１０２は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩｂへの結合が強いことを示す（図１０）。いくつかの実施形態において、Ｇ１１０２は、Ｃ１ｑへの結合が高く（図２８および図２９）、ＣＤＣを阻害する能力を示し、おおよそのＩＣ５０は７．５μｇ／ｍＬである。
変異Ｅ２３３Ｐ、Ｓ２６７Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号１４）は、本明細書において１１０１と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１１０１は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩｂへの結合が強いことを示す（図１１）。いくつかの実施形態において、Ｇ１１０１は、Ｃ１ｑへの結合が高く（図２８）、ＣＤＣを阻害する能力を示し、おおよそのＩＣ５０は５μｇ／ｍＬである。
変異Ｅ２３３Ｐ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号１６）は、本明細書において１１０９と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１１０９は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩｂへの結合が強いことを示す（図１２）。いくつかの実施形態において、Ｇ１１０９は、Ｃ１ｑへの結合が高いことを示す。
変異Ｅ２３３Ｐ、Ｓ２６７Ｈ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号１７）は、本明細書において１１２５と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１１２５は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩｂへの結合が強いことを示す（図１６）。いくつかの実施形態において、Ｇ１１２５は、Ｃ１ｑへの結合が高く、ＣＤＣを阻害する能力を示し、おおよそのＩＣ５０は５μｇ／ｍＬである。
変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｄ、Ｓ２６７Ｑ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号１８）は、本明細書において１１１１と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１１１１は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩｂへの結合が強いことを示す（図１３）。いくつかの実施形態において、Ｇ１１１１は、Ｃ１ｑへの結合が高く、ＣＤＣを阻害する能力を示し、おおよそのＩＣ５０は５μｇ／ｍＬである。
変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｑ、Ｓ２６７Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号１９）は、本明細書において１１１４と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１１１４は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩｂへの結合が強いことを示す（図１４）。いくつかの実施形態において、Ｇ１１１４は、Ｃ１ｑへの結合が高く、ＣＤＣを阻害する能力を示し、おおよそのＩＣ５０は５μｇ／ｍＬである。
変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｄ、Ｓ２６７Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号２０）は、本明細書において１１１７と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１１１７は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩｂへの結合が強いことを示す（図１５）。いくつかの実施形態において、Ｇ１１１７は、Ｃ１ｑへの結合が高く（図２９）、ＣＤＣを阻害する能力を示し、おおよそのＩＣ５０は５μｇ／ｍＬである。
Ｇ１１０３、１１０４、１１０５、１１０２、１１０１、１１０９、１１２５、１１１１、１１１４、および１１１７に関する上記の結果は、２３３または２３６位の変異がＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩａへの結合の阻害をもたらしたことを開示する、Ｓｈｉｅｌｄｓら（Ｓｈｉｅｌｄｓ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６（９）：６５９１（２００１））を考えると、特に驚くべきことであった。これらの結果は、ストラドマーの文脈において、所与の点変異が予想できないことを更に強調する。
変異Ｓ２６７Ｑ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＴ２９９Ａを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号２１）は、本明細書において１０９４と呼ばれる。驚くべきことに、いくつかの実施形態において、Ｇ１０９４は、Ｔ２９９Ａ非グリコシル化変異を含むにも関わらず、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩｂへの結合が強いことを示す（図１７）。いくつかの実施形態において、Ｇ１０９４は、Ｃ１ｑへの結合が高く（図２８）、ＣＤＣを阻害する能力を示し、おおよそのＩＣ５０は１２．５μｇ／ｍＬである。
変異Ｓ２６７Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＴ２９９Ａを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号２２）は、本明細書において１０９２と呼ばれる。驚くべきことに、いくつかの実施形態において、Ｇ１０９２は、Ｔ２９９Ａ非グリコシル化変異を含むにも関わらず、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩｂへの結合が強いことを示す（図１８）。いくつかの実施形態において、Ｇ１０９２は、Ｃ１ｑへの結合が高く（図２８）、ＣＤＣを阻害する能力を示し、おおよそのＩＣ５０は１０μｇ／ｍＬである。
変異Ｓ２６７Ｈ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＴ２９９Ａを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号２３）は、本明細書において１１０７と呼ばれる。驚くべきことに、いくつかの実施形態において、Ｇ１１０７は、Ｔ２９９Ａ非グリコシル化変異を含むにも関わらず、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩｂへの結合が強く、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合がわずかに減少することを示す（図１９）。いくつかの実施形態において、Ｇ１１０７は、Ｃ１ｑへの結合が高く、ＣＤＣを阻害する能力を示し、おおよそのＩＣ５０は１２．５μｇ／ｍＬである。
変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＴ２９９Ａを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号２４）は、本明細書において１０６８と呼ばれる。驚くべきことに、いくつかの実施形態において、Ｇ１０６８は、Ｔ２９９Ａ非グリコシル化変異を含むにも関わらず、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩｂへの結合が強いことを示す。Ｇ１０６８もＦｃγＲＩＩＩａへの減少した結合を呈する（図２０）。いくつかの実施形態において、Ｇ１０６８は、Ｃ１ｑへの結合が高く（図２８）、ＣＤＣを阻害する能力を示し、おおよそのＩＣ５０は１０μｇ／ｍＬである。
変異Ｔ２９９ＡおよびＥ４３０Ｇを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号２５）は、本明細書において１０９７と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１０９７は、親ストラドマーの非グリコシル化非六量体バリアントと称され得る。驚くべきことに、いくつかの実施形態において、Ｇ１０９７は、Ｔ２９９Ａ非グリコシル化変異を含むにも関わらず、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩａへの結合が強いことを示す（図２２）。いくつかの実施形態において、Ｇ１０９７は、ＧＬ−２０４５親ストラドマーよりも強力なＣＤＣ阻害を示し、おおよそのＩＣ５０は２０μｇ／ｍＬである。いくつかの実施形態において、Ｇ１０９７は、驚くべきことに、親ストラドマー（ＧＬ−２０４５）または親ストラドマーの別の非グリコシル化バリアント（Ｇ１０９９）よりも強いＣＤＣ阻害を呈する（図３１）。
変異Ｔ２９９Ａを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号２６）は、本明細書においてＧ１０９９と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１０９９は、親ストラドマーの非グリコシル化非六量体バリアントとも称され得る。驚くべきことに、いくつかの実施形態において、Ｇ１０９９は、Ｔ２９９Ａ非グリコシル化変異を含むにも関わらず、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩａへの結合が強いことを示す（図２１）。いくつかの実施形態において、Ｇ１０９９は、中程度のＣＤＣ阻害を示し（図３１）、おおよそのＩＣ５０は３０μｇ／ｍＬである。
変異Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、および２３６位に欠失を含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号２９）は、本明細書において１０２３と呼ばれる。驚くべきことに、いくつかの実施形態において、Ｇ１０２３は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩａへの結合が強いことを示す。これらの結果は、２３３または２３６位の変異がＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩａへの結合の阻害をもたらしたことを開示する、Ｓｈｉｅｌｄｓら（Ｓｈｉｅｌｄｓ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６（９）：６５９１（２００１））を考えると、特に驚くべきことであった。これらの結果は、ストラドマーの文脈において、所与の点変異が予想できないことを更に強調する。いくつかの実施形態において、Ｇ１０２３は、Ｃ１ｑに強く結合し、ＣＤＣを阻害する。
変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含むＧＬ−２０４５背景上のストラドマー（配列番号２８）は、本明細書において１０３２と呼ばれる。驚くべきことに、いくつかの実施形態において、Ｇ１０３２は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩａへの結合が強く、また強いＣ１ｑ結合（図２８）およびＣＤＣ阻害を示す。これらの結果は、Ｃ１ｑ結合を阻害することが以前に記載された（ＷＯ２０１５／１３２３６４、Ａｒｄｕｉｎ ｅｔ ａｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６５（２）：４５６−４６３（２０１５）、Ｂｏｙｌｅ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，４２（３）：５８０−５９０（２０１５）を参照されたい）Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異の存在を考えると、特に驚くべきことである。
変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＬ３２８Ｆを含むＧ０１９背景上のストラドマー（配列番号２７）は、本明細書において１０４９と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１０４９は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩｂへの結合が強く、わずかに減少したＦｃγＲＩＩＩａ結合（図６）、ならびに強いＣ１ｑ結合およびＣＤＣ阻害（図５Ａ）を示す。これらの結果は、Ｃ１ｑ結合を阻害することが以前に記載された（ＷＯ２０１５／１３２３６４を参照されたい）Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ変異の存在を考えると、驚くべきことである。更に、Ｌ２３４Ｆ変異は、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を阻害することが以前に記載された。この効果は多量体化ストラドマーの文脈において観察されないが、Ｇ１０４９のＦｃγＲＩＩＩａへの結合はわずかに減少する。
本開示によって包含される例示的な一般的なストラドマーのアミノ酸配列を、表１に提供する。
六量体の一般的なストラドマー
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の一般的なストラドマーは、Ｇ０１９またはＧＬ−２０４５などの他の一般的なストラドマーと比較して、六量体多量体化ストラドマーを優先的に形成する。これらの六量体多量体化ストラドマーは、多量体Ｃ１ｑ複合体の６つの頭部に相補的な６つの結合部位を提供する。単離されたＣ１ｑ頭部は、抗体のＦｃ部分に、１００μＭの親和性で、むしろ弱く結合する（Ｈｕｇｈｅｓ−Ｊｏｎｅｓ＆Ｇａｒｄｎｅｒ，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．１６，６９７−７０１（１９７９））。しかしながら、抗原表面上の複数のエピトープに結合する抗体は、抗体を凝集し、いくつかのＣ１ｑ頭部の結合を容易にし、約１０ｎＭの改良された親和性をもたらす（Ｂｕｒｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎ．２２，１６１−２０６（１９８５））。この様式において、本発明の六量体生物模倣物および組成物は、これらのストラドマーがＦａｂを有さず（かつそのためＦｃのＦＤ部分を有さない）、凝集抗体のように抗原表面上の複数のエピトープに結合することができないにも関わらず、Ｃ１ｑへの保持もしくは改良された結合親和性または結合力を示すことができ、補体シンクとして挙動する。本発明の六量体生物模倣物は、ＩＶＩＧ内の凝集体のＦｃ部分または凝集抗体と同様に、高い結合力で補体構成要素Ｃ１ｑ、Ｃ４、Ｃ４ａ、Ｃ３、ｉＣ３ｂ、Ｃ３ａ、Ｃ３ｂ、Ｃ５、またはＣ５ａに結合することができる一方で、インタクト単離免疫グロブリンのＦｃ部分は、これらの補体構成要素に対する低い結合親和性を有し、それらに対する結合力を有さない。したがって、１つの多量体化六量体ストラドマーは、現在利用可能な療法の同等の単位よりも補体活性化の調節に対してより強力な効果を有し得る。
補体Ｃ１ｑの結合および活性化の増加は、病原体への直接結合、または抗体Ｆａｂの標的抗原への事前結合の後にＣ１ｑ結合が続くいずれかに依存すると以前は考えられていた（Ｃ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ．ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ．５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ）。しかしながら、抗ＣＤ３８モノクローナル抗体における３４５位の単一点変異（Ｅ４３５Ｒ）は、病原体への直接結合およびＣＤ３８への事前結合の両方の不在下で、オプソニン化細胞に対するＣ１ｑ結合力を５倍増加させ、ＣＤＣを１０倍増加させることが報告された。４３０および４４０での点変異（Ｅ４３０Ｇ、Ｓ４４０Ｙ）と組み合わせたこの変異も、ヒト血清において補体を直接活性化した（Ｄｉｅｂｏｌｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３４３，１２６０−１２６３（２０１４））。これらのデータは、標的細胞上に発現された標的抗原への抗体Ｆａｂ結合が、古典的な補体活性化の必要な第１ステップではなく、標的細胞への抗体結合に関係なく補体活性化の調節の治療機会の可能性を強調することを示す。Ｄｉｅｂｏｌｄｅｒらは、Ｅ４３５Ｒ／Ｅ４３０Ｇ／Ｓ４４０Ｙ三重変異体による増加した補体活性化が、一部、変異体抗体が溶液中で六量体を形成する能力によるものであり、したがって、六量体Ｃ１ｑタンパク質に対する相補的な対応物を形成することを更に示唆した。ヒトｇｐ−１２０抗体（ＩｇＧ１−ｂ１２）およびヒト２Ｇ１２抗体の六量体配置も報告されている（Ｓａｐｈｉｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒ Ｄ．５７，１６８−１７１（２００１）、Ｓａｐｈｉｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９３，１１５５−１１５９（２００１）、Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．５，１４４３−１４５５（２０１３））。
加えて、未変性ＩｇＧ１Ｆｃ配列の３０９または３１０位を変異させることによって作製されるＦｃの六量体が記載されている（米国特許公開第２０１５／０２１８２３６号）。これらの特定の点変異および尾部としてのＩｇＭＣＨ４ドメインの作用によって、Ｆｃは、一緒になって、ＦｃγＲに対する結合力を増加させると考えられる六量体構造を形成することが示されている。しかしながら、これらの化合物は、Ｃ１ｑ結合を低減するか、またはＦｃγＲの優先的なＣ１ｑ結合がなく、一般に、ＣＤＣを阻害することができない。ＷＯ２０１５／１３２３６４も、３０９および／または３１０位の変異により形成され、ＩｇＭ ＣＨ４尾部を含む六量体化合物を記載する。ＷＯ２０１５／１３２３６４は、モノクローナル抗体の文脈において特定の点変異を記載する文献に主に基づく異なる機能を有すると予想される一連の変異を更に記載する。しかしながら、本明細書に記載されるように、これらの変異のうちのいくつかは、モノクローナル抗体の文脈において十分に特徴付けられているが、それらは、多量体化ストラドマーの文脈において非常に異なる効果をもたらす。
いくつかの実施形態において、本明細書に記載の生物模倣型化合物は、驚くべきことに、主に六量体、十二量体（例えば、六量体多量体化ストラドマーの二量体）、および／または十八量体（例えば、六量体多量体化ストラドマーの六量体の三量体）を形成する。かかる実施形態において、これらの多量体化ストラドマー組成物は、低濃度で存在し得る低次多量体（例えば、図２７にあるように、ホモ二量体および／または二量体および／または三量体および／または四量体および／または五量体）を除去するため、ならびに十八量体よりも大きい多量体を除去するために実質的に精製され得る。いくつかの実施形態において、多量体化ストラドマー組成物の六量体画分は、精製されて、ＦｃγＲおよび／または補体タンパク質（例えば、Ｃ１ｑ）への保持および／または改良された結合を有する六量体多量体化ストラドマーの濃縮された、または実質的に均一な組成物をもたらす。いくつかの実施形態において、多量体化ストラドマー組成物の十二量体画分は、精製されて、ＦｃγＲおよび／または補体タンパク質（例えば、Ｃ１ｑ）への保持または改良された結合を有する十二量体多量体化ストラドマーの濃縮された、または実質的に純粋な均一な組成物をもたらす。いくつかの実施形態において、多量体化ストラドマー組成物の十八量体画分は、精製されて、ＦｃγＲおよび／または補体タンパク質（例えば、Ｃ１ｑ）への保持または改良された結合を有する十八量体多量体化ストラドマーの濃縮された、または実質的に純粋な均一な組成物をもたらす。
本発明者らは、多量体化ストラドマー単位の文脈における点変異Ｔ２９９Ａ／Ｅ３４５Ｒ、Ｔ２９９Ａ／Ｅ４３０Ｇ／Ｓ４４０Ｙ、およびＴ２９９Ａ／Ｅ３４５Ｒ／Ｅ４３０Ｇ／Ｓ４４０Ｙが、六量体多量体化ストラドマーの形成、および未変性ＩｇＧ、親ストラドマー、または親ストラドマーの非グリコシル化非六量体バリアントと比較して、増加した補体結合をもたらすことを見出した。したがって、一態様において、本開示は、点変異Ｔ２９９Ａおよび点変異Ｅ４３０Ｇ、Ｅ３４５Ｒ、および／またはＳ４４０Ｙのうちの１つ以上を含む、多量体化ストラドマー単位およびその多量体化ストラドマーを提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、Ｔ２９９Ａ、Ｅ４３０Ｇ、Ｅ３４５Ｒ、およびＳ４４０Ｙ位に点変異を含む、多量体化ストラドマー単位およびそれを含む多量体化ストラドマーを更に提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、Ｔ２９９ＡおよびＥ３４５Ｒ位に点変異を含む、多量体化ストラドマー単位およびそれを含む多量体化ストラドマーを提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、Ｔ２２９Ａ、Ｅ４３０Ｇ、およびＳ４４０Ｙ位に点変異を含む、多量体化ストラドマー単位およびそれを含む多量体化ストラドマーを提供する。
２９９、４３０、および４４０位に点変異を有するＧＬ−２０４５背景上の六量体ストラドマー（配列番号３０）は、本明細書ではＧ１０９８と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１０９８は、親ストラドマー（ＧＬ−２０４５）または親ストラドマーの非六量体非グリコシル化バリアント（例えば、Ｇ１０９９およびＧ１０９７）よりも強いＣＤＣ阻害を呈し（図３１）、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩａへの結合を保持する（図２３）。
２９９および３４５位に点変異を有するＧＬ−２０４５背景上の六量体ストラドマー（配列番号３１）は、本明細書ではＧ１１２７と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１１２７は、親ストラドマー（ＧＬ−２０４５）または親ストラドマーの非六量体非グリコシル化バリアント（例えば、Ｇ１０９９およびＧ１０９７）よりも強いＣＤＣ阻害を呈し図３１、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩａへの結合を保持する（図２５）。
２９９、３４５、４３０、および４４０位に点変異を有するＧＬ−２０４５背景上の六量体ストラドマー（配列番号３２）は、本明細書ではＧ１１２６と呼ばれる。いくつかの実施形態において、Ｇ１１２６は、親ストラドマー（ＧＬ−２０４５）または親ストラドマーの非六量体非グリコシル化バリアント（例えば、Ｇ１０９９およびＧ１０９７）よりも強いＣＤＣ阻害を呈し（図３１）、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩａへの結合を保持する（図２４）。例示的な一般的なストラドマーのアミノ酸配列を、表２に示す。変異されたアミノ酸位置は、太字および下線付きテキストで示される。
当業者であれば、画分が特定の分子量のストラドマーを含む場合、高分子量を有する全てのストラドマーを精製することもできる（例えば、ホモ二量体以上、ホモ二量体以上の二量体、三量体以上、六量体以上、または十二量体以上、または十八量体以上）ことを理解するであろう。当業者であれば、最大の分子量画分も標準的な下流製造プロセスを用いて精製して、例えば、一八量体以下または十二量体以下を残すことができることも理解するであろう。タンパク質精製の標準的な下流製造プロセスは当該技術分野で既知であり、限定されないが、サイズ排除クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、フリーフロー電気泳動、親和性クロマトグラフィー、および／または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を含み得る。これらの方法は、六量体、十二量体、および／または十八量体を含む多量体の任意の組み合わせを選択的に精製し、低次多量体（例えば、ホモ二量体、二量体、三量体、四量体、および／または五量体）の任意の組み合わせを除去するために使用され得る。例えば、いくつかの実施形態において、驚くべきことに、六量体、十二量体、または十八量体を形成する化合物の組成物は、精製されてホモ二量体のみを除去し、多量体化ストラドマーの異種組成物をもたらすことができる。いくつかの実施形態において、驚くべきことに、六量体、十二量体、または十八量体を形成する化合物の組成物は、精製されてホモ二量体、二量体、三量体、四量体、および五量体を除去し、六量体、十二量体、および十八量体の多量体化ストラドマーの異種組成物をもたらすことができる。
いくつかの実施形態において、多量体化ストラドマー組成物の六量体〜十二量体画分（すなわち、６〜１２個の多量体化ストラドマー単位から構成される多量体化ストラドマー）は、精製されて、ＦｃγＲおよび／または補体タンパク質（例えば、Ｃ１ｑ）への保持および／または改良された結合を有する、六量体〜十二量体の多量体化ストラドマーの異種組成物をもたらす。いくつかの実施形態において、多量体化ストラドマー組成物の六量体および十二量体画分は、精製されて、ＦｃγＲおよび／または補体タンパク質（例えば、Ｃ１ｑ）への保持および／または改良された結合を有する六量体および十二量体の多量体化ストラドマーの濃縮された、または実質的に純粋な異種組成物をもたらす。いくつかの実施形態において、多量体化ストラドマー組成物の六量体〜十八量体画分（すなわち、６〜１８個の多量体化ストラドマー単位から構成される多量体化ストラドマー）は、精製されて、ＦｃγＲおよび／または補体タンパク質（例えば、Ｃ１ｑ）への保持および／または改良された結合を有する、六量体〜十八量体の多量体化ストラドマーの異種組成物をもたらす。いくつかの実施形態において、多量体化ストラドマー組成物の六量体、十二量体、および十八量体画分は、精製されて、ＦｃγＲおよび／または補体タンパク質（例えば、Ｃ１ｑ）への保持および／または改良された結合を有する六量体、十二量体、および十八量体の多量体化ストラドマーの濃縮された、または実質的に純粋な異種組成物をもたらす。いくつかの実施形態において、多量体化ストラドマー組成物の十二量体画分および十八量体画分は、精製されて、ＦｃγＲおよび／または補体タンパク質（例えば、Ｃ１ｑ）への保持または改良された結合を有する十二量体および十八量体の多量体化ストラドマーの濃縮された、または実質的に純粋な異種組成物をもたらす。
いくつかの実施形態において、多量体化ストラドマーは、ＧＬ−２０４５と機能的に類似する六量体、十二量体、十八量体、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態において、本明細書に記載の六量体（および／または十二量体および／または十八量体）多量体化ストラドマー化合物は、親生物模倣物（ＧＬ−２０４５）と比較して、ＦｃγＲおよび／または補体（例えば、Ｃ１ｑ）への保持または改良された結合を示し、ＧＬ−２０４５と比較して、実質的に高い平均分子量であり、異なる分子量の多量体が少ないという追加の利点を有する。具体的には、本明細書に記載の多量体化ストラドマー化合物（例えば、１０９８、１１２６、および１１２７）は、総タンパク質のパーセンテージとしてＧＬ−２０４５よりも実質的に高いレベルで六量体レベル以上の多量体を形成する（図２７）。したがって、本発明の化合物は、Ｃ１ｑへの結合およびＣＤＣの阻害において活性が低い低次多量体で投与されない。したがって、本発明の化合物は、ＧＬ−２０４５と比較して、必要な用量が低く、かつ／または精製が少なくてもよい。
「免疫調節活性」、「免疫応答の調節」、「免疫系の調節」、および「免疫調節」は、その細胞型内の細胞型の成熟または他の細胞型への成熟を含む、１つ以上の免疫細胞の活性、能力、および相対数を変更することによって、免疫系を改変することを意味する。例えば、免疫調節は、免疫応答の抑制または活性化であり得る。例えば、一態様において、免疫調節は、Ｔ細胞またはＢ細胞における非応答性または耐性の誘導を意味し得る。本明細書で使用される場合、「耐性」という用語は、Ｔ細胞もしくはＢ細胞または免疫応答全体における状態を指し、この状態では、Ｔ細胞もしくはＢ細胞または他の免疫細胞が、その同族抗原、または通常は応答する、抗原、エピトープ、もしくは他のシグナルに応答しない。別の例として、メモリーＢ細胞の免疫調節は、特定の抗体の産生の同時減少を伴う、ある特定のメモリーＢ細胞の選択的アポトーシスをもたらす可能性がある。別の例として、免疫調節活性は、ＩＬ−６およびＩＬ−８などの自己免疫疾患において一般に上昇する、炎症促進性サイトカインまたはサイトカインの減少をもたらす可能性がある。別の例として、免疫調節活性は、後のＴＧＦ−βの分泌および切断を伴う、ＮＫＴ細胞の活性化をもたらす可能性がある。受容体の活性化を予防するために免疫細胞受容体を遮断することもまた、「免疫調節」の内に包含され、別に「阻害免疫調節」と呼ばれ得る。別の態様において、免疫調節は、免疫応答の改良または活性化であり得る。例えば、免疫調節は、Ｔ細胞またはＢ細胞の活性化を意味し得る。別の例として、未成熟単球の免疫調節は、より成熟した単球、樹状細胞、マクロファージ、または破骨細胞のより大きな集団をもたらすことができ、これらの全てが未成熟単球に由来するものである。別の例として、ＮＫ細胞の免疫調節は、改良されたＡＤＣＣをもたらす可能性がある。別の例として、免疫調節活性は、ＣＤ８β＋／ＣＤ１１ｃ＋細胞などの、さもなければ高レベルでは発現されない可能性がある表現型を有する細胞集団の増加をもたらす可能性がある。例えば、免疫細胞受容体は、免疫学的に活性な生物模倣物によって結合され、細胞内シグナリングを活性化して、別に「免疫調節の活性化」と呼ばれる様々な免疫細胞の変化を誘導することができる。
樹状細胞の調節は、例えば、樹状細胞の表面上でのＣＤ８６および／またはＣＤ１ａの発現の誘導によって、Ｔ細胞への抗原提示を促進または阻害し得る。ＣＤ１ａは、抗原提示細胞、特に樹状細胞の表面上に発現されるＭＨＣ−クラスＩ関連糖タンパク質である。ＣＤ１ａは、Ｔ細胞への脂質抗原の提示に関与する。ＣＤ８６もまた、抗原提示細胞上に発現され、Ｔ細胞に同時刺激を提供する。ＣＤ８６は、それぞれ活性化シグナルおよび阻害シグナルを送る、Ｔ細胞の表面上のＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４の両方に対するリガンドである。したがって、ＣＤ８６およびその同族受容体の発現のレベルは、耐性または特定の免疫応答のどちらが誘導されるかを決定する。好ましい一実施形態において、本発明のストラドマーは、部分的には抗原提示細胞、特に樹状細胞の表面上にＣＤ８６およびＣＤ１ａの発現を誘導することによって、免疫応答を調節することができる。
単球の成熟の調節とは、成熟樹状細胞（ＤＣ）、マクロファージ、または破骨細胞への単球の分化を指す。分化は、成熟の速度または指向を促進するように、および／または分化を受ける単球の数を増加するように、調節され得る。あるいは、分化は、分化の速度および／または分化を受ける細胞の数に関して低減され得る。
薬学的組成物
本明細書に記載されるストラドマー組成物の投与は、経口的、非経口的、または局所的に、任意の一般的な経路を介したものである。例示的な経路としては、経口、経鼻、頬側、直腸、膣、眼、皮下、筋肉内、腹腔内、静脈内、動脈内、腫瘍内、脊髄内、髄腔内、関節内、動脈内、くも膜下、舌下、口腔粘膜、気管支、リンパ管、子宮内、皮下、腫瘍内、縫合糸などの埋め込み型デバイス上もしくは埋め込み型ポリマーなどの埋め込み型デバイス内への統合、硬膜内、皮質内、または皮膚が挙げられるが、これらに限定されない。かかる組成物は通常、本明細書に記載の薬学的に許容される組成物として投与されるだろう。好ましい一実施形態において、単離されたストラドマーは、静脈内または皮下投与される。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」という用語は、任意および全ての溶剤、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、ならびに吸収遅延剤などを含む。薬学的に活性な物質のためのそのような媒質および薬剤の使用は、当該技術分野において周知である。任意の従来の媒質または薬剤が本発明のベクターまたは細胞と不適合である場合を除いて、治療組成物中でのその使用が企図される。補助的な活性成分もまた、組成物中に組み込まれてもよい。
本発明のストラドマー組成物は、中性または塩の形態で製剤化され得る。薬学的に許容される塩としては、（タンパク質の遊離アミノ基とともに形成された）酸添加塩、ならびに例えば、塩酸もしくはリン酸などの無機酸、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、およびマンデル酸などの有機酸とともに形成されたものが挙げられる。遊離カルボキシル基とともに形成された塩はまた、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化第二鉄などの無機塩基、ならびにイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、およびプロカインなどの有機塩基に由来してもよい。
減菌注射溶液は、必要量のストラドマーを、必要に応じて上記に列挙される様々な他の成分を有する適切な溶剤に組み込み、その後、濾過減菌することによって調製される。いくつかの実施形態において、滅菌注射溶液は、筋肉内、皮下、静脈内投与のために製剤化される。一般に、分散液は、様々な減菌活性成分を、基本的な分散媒質および上記に列挙されるものからの必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。滅菌注射溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、活性成分に、その事前に滅菌濾過された溶液からの任意の所望される追加成分を加えた粉末をもたらす真空乾燥および凍結乾燥技術である。
更に、一実施形態は、経口投与に好適なストラドマー組成物であり、不活性希釈剤とともに、またはそれなしで薬学的に許容される担体中に提供される。担体は、同化可能または食用であるべきであり、液体、半固体、すなわち、ペースト、または固体担体を含む。任意の従来の媒質、薬剤、希釈剤、または担体が、レシピエント、またはそれに含有されるストラドマー調製物の治療有効性に対して有害である場合を除いて、本発明の方法の実践に使用するための経口投与可能なストラドマー組成物中でのその使用は適切である。担体または希釈剤の例としては、脂肪、油、水、生理食塩溶液、脂質、リポソーム、樹脂、結合剤、および充填剤など、またはそれらの組み合わせが挙げられる。本明細書で使用される場合、「経口投与」という用語は、経口、頬側、経腸、または胃内投与を含む。
一実施形態において、ストラドマー組成物は、任意の簡便かつ実用的な様式で、すなわち、溶液、懸濁、乳化、混合、カプセル封入、マイクロカプセル封入、および吸収などによって担体と組み合わされる。そのような手順は、当業者にとって通例である。
特定の一実施形態において、粉末形態のストラドマー組成物は、半固体もしくは固体担体と組み合わされるか、または完全に混合される。混合は、粉砕などの任意の簡便な様式で実行することができる。胃を通した治療活性の損失、すなわち、胃内での変性から組成物を保護するために、安定剤もまた、混合プロセスにおいて添加されてもよい。経口投与可能な組成物中で使用するための安定剤の例としては、緩衝液、胃酸の分泌に対する拮抗薬、アミノ酸（グリシンおよびリジンなど）、炭水化物（デキストロース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、ラクトース、スクロース、マルトース、ソルビトール、マンニトールなど）、ならびにタンパク質分解性酵素阻害剤などが挙げられる。より好ましくは、経口投与される組成物について、安定剤はまた、胃酸の分泌に対する拮抗薬も含んでもよい。
更に、半固体または固体の担体と組み合わされる経口投与用のストラドマー組成物は、硬質もしくは軟質ゼラチンカプセル、錠剤、またはピルへと更に製剤化され得る。より好ましくは、ゼラチンカプセル、錠剤、またはピルは、腸溶コーティングされる。腸溶コーティングは、ｐＨが酸性である胃または腸上部内での組成物の変性を予防する。すなわち、米国特許第５，６２９，００１号を参照されたい。小腸に到達すると、その中の塩基性ｐＨがコーティングを溶解し、組成物が放出されて、腸の細胞、例えば、パイエル板Ｍ細胞と相互作用するのを可能にする。
別の実施形態において、粉末形態のストラドマー組成物は、免疫学的に活性な生物模倣物をカプセル封入するか、もしくは免疫学的に活性な生物模倣物が結合されるナノ粒子を作製する材料と組み合わされるか、または完全に混合される。各ナノ粒子は、１００ミクロン以下のサイズを有するだろう。ナノ粒子は、さもなければ経口的に生体利用可能ではないであろう免疫学的に活性な生物模倣物の消化器吸収を可能にする粘膜付着特性を有し得る。
別の実施形態において、粉末組成物は、安定剤とともに、またはそれなしで、液体担体（すなわち、水または生理食塩溶液など）と組み合わされる。
使用され得る特定のストラドマー製剤は、カリウムを含まない低張リン酸系緩衝液中の免疫学的に活性な生物模倣型タンパク質の溶液であり、緩衝液の組成は次の通りである：６ｍＭのリン酸二水素ナトリウム一水和物、９ｍＭのリン酸水素ナトリウム七水和物、５０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ７．０＋／−０．１。低張緩衝液中の免疫学的に活性な生物模倣型タンパク質の濃度は、１０μｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬの範囲であり得る。この製剤は、任意の投与経路（例えば、静脈内投与であるが、これに限定されない）を介して投与され得る。
更に、半固体の担体と組み合わされる局所投与用のストラドマー組成物は、クリームまたはゲル軟膏へと更に製剤化され得る。ゲル軟膏を形成するための好ましい担体は、ゲルポリマーである。本発明のゲル組成物の製造に使用される好ましいポリマーとしては、カルボポール、カルボキシメチルセルロース、およびプルロニックポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。具体的には、粉末Ｆｃ多量体組成物は、皮膚上または皮膚下の疾患の治療のための皮膚への適用のために、０．５〜５重量／容量％の強度のＣａｒｂｏｐｏｌ９８０などの重合剤を含有する水性ゲルと組み合わされる。本明細書で使用される場合、用語「局所投与」という用語は、皮膚、表皮、皮下、または粘膜表面への適用を含む。
更に、ストラドマー組成物は、皮下または真皮下埋め込み用のポリマーへと製剤化され得る。埋め込み型薬物注入ポリマーの好ましい製剤は、一般に安全とみなされる薬剤であり、例えば、架橋デキストラン（Ｓａｍａｎｔｈａ Ｈａｒｔ，Ｍａｓｔｅｒ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｔｈｅｓｉｓ，“Ｅｌｕｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ｆｒｏｍ ａ Ｎｏｖｅｌ Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｅｄ Ｄｅｘｔｒａｎ Ｇｅｌ：Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ”Ｖｉｒｇｉｎｉａ Ｐｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ａｎｄ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｕｎｅ８，２００９）、デキストラン−チラミン（Ｊｉｎ，ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇ．Ｐａｒｔ Ａ．１６（８）：２４２９−４０）、デキストラン−ポリエチレングリコール（Ｊｕｋｅｓ，ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｔｉｓｓｕｅ Ｅｎｇ．Ｐａｒｔ Ａ．，１６（２）：５６５−７３）、またはデキストラン−グルタルアルデヒド（Ｂｒｏｎｄｓｔｅｄ，ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ，５３：７−１３）を含み得る。当業者は、ポリマーまたはヒドロゲル内に固定されたストラドマーを組み込み、孔径を所望の直径に制御することで、多くの類似したポリマーおよびヒドロゲルが形成され得ることを理解するだろう。
製剤化時、溶液は、投薬製剤と適合する様式で、かつ症状の改善または治療をもたらすのに治療的に有効である量で投与される。製剤は、摂取可能な溶液および薬物放出カプセルなどの様々な剤形で容易に投与される。治療される対象の病態によって、投薬量にいくらかの変動が生じ得る。投与責任者は、いずれにしても、個々の対象の適切な用量を決定することができる。更に、ヒトへの投与について、調製物は、ＦＤＡの基準および他の類似の規制機関によって要求される減菌性、一般的な安全性、および純度基準を満たす。
投与経路は、治療される疾患の位置および性質により天然に変動し、例えば、皮内、経皮、真皮下、非経口、経鼻、静脈内、筋肉内、鼻腔内、皮下、経皮、気管内、腹腔内、腫瘍内、灌流、洗浄、直接注射、および経口投与を含み得る。
一実施形態において、ストラドマーは、静脈内に、皮下に、経口に、腹腔内に、舌下に、頬側に、経皮に、直腸に、真皮下埋め込みによって、または筋肉内に投与される。特定の実施形態において、ストラドマーは、静脈内に、皮下に、または筋肉内に投与される。一実施形態において、ストラドマーは、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇの用量で投与される。更なる一実施形態において、ストラドマーは、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇで投与される。また更なる一実施形態において、ストラドマーは、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇで投与される。尚更なる一実施形態において、ストラドマーは、約１ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇで投与される。尚更なる一実施形態において、ストラドマーは、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇで投与される。ストラドマーは、少なくとも１日１回、毎週、隔週、または毎月投与されてもよい。第１の投薬相が第２の投薬相の約０．１％〜約３００％を含む、二相投薬レジメンが使用されてもよい。
更なる一実施形態において、ストラドマーは、１つ以上の追加の医薬製剤および／または治療薬の投与前、投与中、または投与後に投与される。更なる一実施形態において、追加の薬学的に活性な薬剤は、ステロイド；モノクローナル抗体、融合タンパク質、または抗サイトカインなどの生物学的抗自己免疫薬；非生物学的抗自己免疫薬；免疫抑制剤；抗生物質；および抗ウイルス剤；サイトカイン；または別様に免疫調節因子として作用することが可能な薬剤を含む。尚更なる一実施形態において、ステロイドは、プレドニゾン、プレドニゾロン、コルチゾン、デキサメタゾン、モメタゾン、テストステロン、エストロゲン、オキサンドロロン、フルチカゾン、ブデソニド、ベクラメタゾン、アルブテロール、またはレバルブテロールである。尚更なる一実施形態において、モノクローナル抗体は、エクリズマブ、インフリキシマブ、アダリムマブ、リツキシマブ、トシリズマブ、ゴリムマブ、オファツムマブ、ＬＹ２１２７３９９、ベリムマブ、ベルツズマブ、メポリズマブ、ネシツムマブ、ニボルマブ、ジヌツキシマブ、セクキヌマブ、エボロクマブ、ブリナツモマブ、ペムブロリズマブ、ラムシルマブ、ベドリズマブ、シルツキシマブ、オビヌツズマブ、アドトラスツズマブ（ａｄｏｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ）、ラキシバクマブ、ペルツズマブ、ブレンツキシマブ、イピラムマブ（ｉｐｉｌｕｍｕｍａｂ）、デノスマブ、カナキヌマブ、ウステキヌマブ、カツマキソマブ、ラニビズマブ、パニツムマブ、ナタリズマブ、ベバシズマブ、セツキシマブ、エファリズマブ、オマリズマブ、トイツモマブ（ｔｏｉｔｕｍｏｍａｂ）−Ｉ１３１、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、トラスツズマブ、パリビズマブ、バシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｘｕｍａｂ）、ダクリズマブ、アブシキシマブ、ムロノノマブ（ｍｕｒｏｎｏｎｏｍａｂ）、またはセルトリズマブである。尚更なる一実施形態において、融合タンパク質は、エタネルセプトまたはアバタセプトである。尚更なる一実施形態において、抗サイトカイン生物製剤は、アナキンラである。尚更なる一実施形態において、抗リウマチ非生物学的薬物は、シクロホスファミド、メトトレキサート、アザチオプリン、ヒドロキシクロロキン、レフルノミド、ミノサイクリン、有機金化合物、ホスタマチニブ、トファシチニブ、エトリコキシブ、またはスルファサラジンである。尚更なる一実施形態において、免疫抑制剤は、シクロスポリンＡ、タクロリムス、シロリムス、ミコフェノール酸モフェチル、エベロリムス、ＯＫＴ３、抗胸腺細胞グロブリン、バシリキシマブ、ダクリズムマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍｕｍａｂ）、またはアレムツズマブである。尚更なる一実施形態において、ストラドマーは、化学療法薬の投与前、投与中、または投与後に投与される。尚更なる一実施形態において、ストラドマーおよび追加の治療薬は、ともに投与される場合、治療的相乗効果を示す。一実施形態において、ストラドマーは、追加の治療薬の投与前に投与される。別の実施形態において、ストラドマーは、追加の治療薬の投与と同時に投与される。尚別の実施形態において、ストラドマーは、追加の治療薬の投与後に投与される。
一実施形態において、ストラドマーは、埋め込み型デバイスに共有結合的に固定されて、投与される。一実施形態において、ストラドマーは、縫合糸に固定される。別の実施形態において、ストラドマーは、移植片またはステントに固定される。別の実施形態において、ストラドマーは、心臓弁、整形外科的関節置換、または埋め込まれた電子リードに固定される。別の実施形態において、ストラドマーは、埋め込み型マトリックス内に固定され、包埋される。好ましい一実施形態において、ストラドマーは、埋め込み型ヒドロゲル内に固定され、包埋される。一実施形態において、ヒドロゲルは、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸ナトリウム、またはアクリル酸ポリマーから構成される。更なる一実施形態において、ストラドマーは、免疫細胞が進入して、固定されたストラドマーと相互作用し、その後、循環に戻るのを可能にするのに十分な大きさの孔径を有するヒドロゲル内に固定されて、投与される。更なる一実施形態において、ヒドロゲルの孔径は、５〜５０ミクロンである。好ましい一実施形態において、ヒドロゲルの孔径は、２５〜３０ミクロンである。
別の実施形態において、ストラドマーは、種特異的またはキメラストラドマー分子を用いて、ヒト、非ヒト霊長類（例えば、サル、ヒヒ、およびチンパンジー）、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ブタ、ウサギ、ヤギ、シカ、ヒツジ、フェレット、スナネズミ、モルモット、ハムスター、コウモリ、鳥類（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、およびアヒル）、魚類、ならびに爬虫類を治療するために投与される。別の実施形態において、ヒトは、成人または子供である。尚別の実施形態において、ストラドマーは、補体媒介疾患を予防するために投与される。更なる一実施形態において、ストラドマーは、ペットおよび家畜におけるワクチン関連自己免疫病態を予防するために投与される。
本明細書で使用される場合、「非経口投与」という用語は、化合物が腸を介した吸収を伴うことなく対象に吸収される任意の投与形態を含む。本発明において使用される例示的な非経口投与としては、筋肉内、静脈内、腹腔内、腫瘍内、眼内、経鼻、または関節内投与が挙げられるが、これらに限定されない。
加えて、本発明のストラドマーは任意で、別の医薬品の前、その間、またはその後に投与されてもよい。
以下は、具体的な例示的疾患について示される、様々な医薬製剤カテゴリー、および好ましい投与経路の具体的な例である。
頬側または舌下溶解性錠剤：狭心症、結節性多発性動脈炎。
静脈内、筋肉内、または皮下：重症筋無力症、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、膜性腎症、視神経脊髄炎、同種移植片の抗体媒介拒絶、ループス腎炎、膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、特発性血小板減少性紫斑病、封入体筋炎、異常タンパク性ＩｇＭ脱髄性多発ニューロパチー、壊死性筋膜炎、天疱瘡、壊疽、皮膚筋炎、肉芽腫、リンパ腫、敗血症、再生不良性貧血、多系統臓器不全、多発性骨髄腫および意義不明のモノクローナル免疫グロブリン血症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、炎症性ミオパチー、血栓性血小板減少性紫斑病、筋炎、貧血、腫瘍、溶血性貧血、脳炎、脊髄炎、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス−１型に特に関連する脊髄症、白血病、多発性硬化症および視神経炎、喘息、表皮壊死融解症、ランバート・イートン筋無力症症候群、重症筋無力症、ニューロパチー、ブドウ膜炎、ギラン・バレー症候群、移植片対宿主病、全身硬直症候群、抗Ｙｏ抗体を伴う傍腫瘍性小脳変性症、傍腫瘍性脳脊髄症および抗Ｈｕ抗体を伴う感覚性ニューロパチー、全身性血管炎、全身性エリテマトーデス、自己免疫性糖尿病ニューロパチー、急性特発性自律神経障害ニューロパチー、フォークト・小柳・原田症候群、多巣性運動ニューロパチー、抗／ＧＭｌ関連下位運動ニューロン症候群、脱髄、膜性増殖性糸球体腎炎、心筋症、川崎病、リウマチ性関節炎、ならびにエヴァンス症候群ＩＭ−ＩＴＰ、ＣＩＤＰ、ＭＳ、皮膚筋炎、重症筋無力症、筋ジストロフィー。本明細書で使用される場合、「静脈内投与」という用語は、静脈内注射または注入を介して、本発明の化合物または組成物を全身循環に送達するための全ての技術を含む。
皮膚ゲル、ローション、クリーム、またはパッチ：白斑、帯状疱疹、挫瘡、口唇炎。
直腸坐剤、ゲル、または注入：潰瘍性大腸炎、痔核炎症。
経口、ピルとして、トローチ、カプセル化、または腸溶性コーティングを伴う：クローン病、セリアックスプルー、過敏性腸症候群、炎症性肝疾患、バレット食道。
皮質内：癲癇、アルツハイマー病、多発性硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病。
腹腔内注入または埋め込み：子宮内膜症。
膣内ゲルまたは坐剤：細菌性、トリコモナス性、または真菌性膣炎。
医療デバイス：冠動脈ステント上へのコーティング、人工関節。
一般的なストラドマーの治療用途
一実施形態において、自己免疫疾患、炎症性疾患、または補体媒介疾患もしくは病態などの疾患もしくは病態の治療または予防方法であって、ＩｇＧ１ Ｆｃドメインおよび多量体化ドメインを含むストラドマーを、それを必要とする対象に投与することを含む、方法が提供される。いくつかの実施形態において、実施形態、ストラドマーは六量体を優先的に形成する。いくつかの実施形態において、ストラドマーは、非変性免疫グロブリンＦｃ、親ストラドマー、または親ストラドマーの非グリコシル化バリアントと比較して、改良されたＦｃγＲおよび／または補体結合を呈する。
合理的な設計ならびにインビトロおよびインビボでの検証に基づいて、本発明のストラドマーは、炎症性疾患および障害の治療のための、ならびにアレルギー、癌、自己免疫疾患、感染性疾患、および炎症性疾患のための生物免疫療法などの様々な他の文脈における免疫機能の改変のための、重要な生物製剤としての役割を果たすだろう。本明細書に開示の免疫学的に活性な生物模倣物による治療に好適な医学的病態としては、補体活性の増加または不適切な補体活性を含む、補体活性化または補体媒介エフェクター機能によって引き起こされるか、またはそれに関連付けられる任意の疾患が挙げられる。そのような医学的病態は、エクリズマブなどの補体結合薬で現在または以前に治療されているものを含む。エクリズマブは、補体タンパク質Ｃ５（古典的補体経路においてＣ１およびＣ１ｑの下流にある補体タンパク質）に結合し、その切断および後の補体媒介細胞溶解を阻害する。本発明の生物模倣物は、当該技術分野において既知である他の補体結合薬に対する、安全かつ有効な代替物を提供する。例えば、いくつかの実施形態において、本発明の生物模倣物は、古典的補体経路のＣ１複合体における第１の下位単位であるＣ１ｑに結合する。免疫学的に活性な生物模倣物による治療に好適な医学的病態としては、重症筋無力症、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、膜性腎症、視神経脊髄炎、同種移植片の抗体媒介拒絶、ループス腎炎、黄斑変性、鎌状赤血球症、および膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書に記載の免疫学的に活性な生物模倣物による治療に好適な追加の医学的病態は、現在通例的にｈＩＶＩＧを含む広域免疫抑制療法によって治療されているもの、またはｈＩＶＩＧが自己免疫性血球減少症、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、ギラン・バレー症候群、重症筋無力症、抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫疾患、皮膚筋炎、脈管炎、およびブドウ膜炎などの、ｈＩＶＩＧが臨床的に有用であると見出されているもの（ｖａｎ ｄｅｒ Ｍｅｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．”Ｍｅｄ．“３２６，１１２３（１９９２）、Ｐ．Ｇａｊｄｏｓ ｅｔ ａｌ，Ｌａｎｃｅｔ ｉ，４０６（１９８４）、Ｓｕｌｔａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ｉｉ，７６５（１９８４）、Ｄａｌａｋａｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．”Ｍｅｄ．“３２９，１９９３（１９９３）、Ｊａｙｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｃｅｔ ３３７，１１３７（１９９１）、ＬｅＨｏａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｏｃｕｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｎｆｌａｍｍ．８，４９（２０００）を参照されたい）、ならびにモノクローナル抗体が使用され得るか、もしくは臨床用途において既に使用されている、癌または炎症性疾患病態を含む。
本発明の主題である、化合物によって効果的に治療され得るそれらの中に含まれる病態は、サイトカインネットワークの不均衡を伴う炎症性疾患、病原性自己抗体もしくは自己侵襲的Ｔ細胞によって媒介される自己免疫性障害、または慢性再発性の自己免疫性、炎症性、もしくは感染性疾患もしくはプロセスの急性期もしくは慢性期を含む。ある特定の実施形態において、本発明のストラドマーは、対象の疼痛を制御、管理、予防、または治療する際に使用され得る。「疼痛」とは、対象の身体における不快感および／または不愉快な感覚を指す。疼痛の重症度は軽度〜重度の範囲であり、疼痛頻度は、時折、稀、頻繁、または定期的であり得る。更に、疼痛症状は、急性疼痛または慢性に分類され得る。いくつかの実施形態において、疼痛は、侵害受容性疼痛（すなわち、組織損傷によって引き起こされる疼痛）、神経障害性疼痛、または心因性疼痛であり得る。いくつかの実施形態において、侵害受容性疼痛は、疾病病因に起因する外傷、感染、または損傷によって引き起こされ得る。いくつかの実施形態において、疼痛は、疾患（例えば、本明細書に記載の炎症性疾患、自己免疫疾患、補体媒介疾患、または癌）によって引き起こされるか、またはそれに関連する。特定の実施形態において、本発明のストラドマーは、本明細書に記載の疾患または障害に関連するか、またはそれによって引き起こされる疼痛の治療に使用され得る。
加えて、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病、アルツハイマー病、パーキンソン病、心筋梗塞、脳卒中、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス関連炎症、副腎白質ジストロフィー、ならびに癲癇障害、特にラスムッセン症候群、ウエスト症候群、およびレノックス・ガストー症候群を含むウイルス感染後の脳炎に関連すると考えられるものなどの、補体に関与する炎症性構成要素を有する他の医学的病態が、ストラドマーによる治療から恩恵を受けるだろう。
本明細書に記載される単離されたストラドマーを使用する療法に対する一般的なアプローチは、治療有効量の単離された免疫学的に活性な生物摸倣物を疾患または病態を有する対象に投与して、治療をもたらすことである。いくつかの実施形態において、疾患または病態は、サイトカインネットワークの不均衡を伴う炎症性疾患、病原性自己抗体もしくは自己侵襲的Ｔ細胞によって媒介される自己免疫性障害、または慢性再発性の疾患もしくはプロセスの急性期または慢性期として広く分類され得る。
本明細書で使用される場合、「治療する」および「治療」という用語は、対象が疾患もしくは病態、または疾患もしくは病態の症状の改善を有するように、治療有効量の本発明のストラドマーを対象に投与することを指す。改善は、疾患もしくは病態、または疾患もしくは病態の症状の任意の改善または治療である。改善は、観察可能または測定可能な改善であっても、対象の一般的な健康感覚の改善であってもよい。したがって、当業者は、治療が疾患病態を改善し得るが、疾患の完全な治癒ではない可能性があることを理解する。具体的には、対象における改善は、炎症の減少；Ｃ反応性タンパク質などの炎症研究用マーカーの減少；自己抗体などの自己免疫マーカーの改善、または血小板数、白血球数、もしくは赤血球数などの改善、発疹もしくは紫斑の減少、衰弱、しびれ、もしくは刺痛の減少、高血糖症の患者におけるグルコースレベルの増加、関節痛、炎症、腫れ、もしくは分解の減少、痙攣および下痢の頻度および量の減少、狭心症の減少、組織炎症の減少、または発作頻度の減少のうちの１つ以上によって証拠付けられる、自己免疫の減少；癌腫瘍負荷量の減少、腫瘍の進行までの時間の増加、癌の痛みの減少、生存期間の増加または生活の質の改善；あるいは骨粗鬆症の進行の遅延または改善のうちの１つ以上を含み得る。
本明細書で使用される場合、「治療有効量」という用語は、疾患または病態の症状の改善または治療をもたらす量を指す。
本明細書で使用される場合、「予防」とは、疾患の症状の完全な予防、疾患の症状の発症の遅延、または後に発症した疾患症状の重症度の低下を意味し得る。
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、本発明のストラドマーが本明細書に記載される方法に従って投与される、任意の哺乳動物対象を意味するように取られる。特定の一実施形態において、本開示の方法は、ヒト対象を治療するために用いられる。本開示の方法はまた、非ヒト霊長類（例えば、サル、ヒヒ、およびチンパンジー）、マウス、ラット、ウシ、ウマ、ネコ、イヌ、ブタ、ウサギ、ヤギ、シカ、ヒツジ、フェレット、スナネズミ、モルモット、ハムスター、コウモリ、鳥類（例えば、ニワトリ、シチメンチョウ、およびアヒル）、魚類、ならびに爬虫類を治療して、種特異的またはキメラストラドマー分子を産生するために用いられてもよい。
いくつかの実施形態において、本発明のストラドマーは、補体媒介疾患を治療するために使用される。本明細書で使用される場合、「補体媒介疾患」および「補体関連疾患」とは、補体系が役割を果たす疾患および病態を指す。例えば、補体媒介疾患としては、補体系の活性化の異常を伴う疾患が挙げられる。いくつかの実施形態において、補体媒介疾患は、補体カスケードの阻害によって、治療、予防、または低減することができる。補体関連疾患は、当該技術分野において既知であり、寒冷凝集素症、溶血性貧血；重症筋無力症、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、志賀毒素Ｅ．ｃｏｌｉ関連溶血性尿毒症症候群（ＳＴＥＣ−ＨＵＳ）、全身性血栓性微小血管症（ＴＭＡ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、視神経脊髄炎、再発性視神経脊髄炎（ＮＭＯ）、移植同種移植片の抗体媒介拒絶、バラケル−ジーモンス症候群、喘息、エリテマトーデス、自己免疫性心臓疾患、多発性硬化症、炎症性腸疾患、虚血再灌流障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、脊髄損傷、Ｈ因子（Ｙ４０２Ｈ）関連黄斑変性、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）を含む黄斑変性、伝性血管性浮腫、ならびに膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）、リウマチ性関節炎（ＲＡ）、急性呼吸促迫症候群（ＡＲＤＳ）、心肺バイパス手術中の補体活性化、皮膚筋炎、天疱瘡、ループス腎炎、膜性腎症、糸球体腎炎および脈管炎、ＩｇＡ腎症、急性腎不全、クリオグロブリン血症、抗リン脂質抗体症候群、ブドウ膜炎、糖尿病網膜症、血液透析、慢性閉塞性肺症候群（ＣＯＰＤ）、ならびに誤嚥性肺炎を含むが、限定されない。補体関連疾患はまた、様々な他の自己免疫性、炎症性、免疫学的、神経学的、リウマチ性、または感染病原体関連疾患を含み得る。
一実施形態において、本発明のストラドマーは、他の補体結合分子と比較して、優れた安全性および有効性を提供する。更なる一実施形態において、本発明のストラドマーは、抗Ｃ５抗体エクリズマブと比較して、優れた安全性および有効性を呈する。
補体阻害は、抗体媒介疾患を減少することが示されている（例えば、Ｓｔｅｇａｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ２０１１ Ｎｏｖ；１１（１）：２４０５−２４１３を参照されたい）。本発明のストラドマーはまた、抗体によって媒介される疾患または病態を治療するためにも使用することができる。自己抗体は、多くの既知の自己免疫疾患を媒介し、多数の他の自己免疫疾患においてある役割を果たす可能性が高い。本発明のストラドマーが使用され得る、認識されている抗体媒介疾患としては、グッドパスチャー病を含む抗糸球体基底膜抗体媒介腎炎；固形臓器移植における抗ドナー抗体（ドナー特異的同種抗体）；視神経脊髄炎における抗アクアポリン−４抗体；神経性筋強直症、辺縁系脳炎、およびモルヴァン症候群における抗ＶＧＫＣ抗体；重症筋無力症における抗ニコチン性アセチルコリン受容体および抗ＭｕＳＫ抗体；ランバート・イートン筋無力症症候群における抗ＶＧＣＣ抗体；多くの場合腫瘍に関連する辺縁系脳炎における抗ＡＭＰＡＲ抗体および抗ＧＡＢＡ（Ｂ）Ｒ抗体；全身硬直症候群または過剰驚愕症における抗ＧｌｙＲ抗体；再発性自然流産、ヒューズ症候群、および全身性エリテマトーデスにおける抗リン脂質抗体、抗カルジオリピン抗体、および抗β２糖タンパク質抗体；全身硬直症候群、自己免疫性小脳性運動失調症、または辺縁系脳炎における抗グルタミン酸デカルボキシラーゼ抗体；多くの場合卵巣奇形腫に関連するが、非傍腫瘍性でもあり得る、多くの場合青年および子供における、顕著な運動障害を伴う辺縁および皮質下特徴の両方を含む、新たに記載された症候群における抗ＮＭＤＡ受容体抗体；全身性エリテマトーデスにおける抗二本鎖ＤＮＡ抗体、抗一本鎖ＤＮＡ抗体、抗ＲＮＡ抗体、抗ＳＭ抗体、および抗Ｃ１ｑ抗体；抗Ｒｏ、抗Ｌａ、抗Ｓｃｌ７０、抗Ｊｏ−１を含む、強皮症、シェーグレン症候群、および多発性筋炎を含む結合組織病における抗核抗体および抗核小体抗体；リウマチ性関節炎における抗リウマトイド因子抗体；結節性多発性動脈炎における抗Ｂ型肝炎表面抗原抗体；ＣＲＥＳＴ症候群における抗セントロメア抗体；心内膜炎における、またはそのリスクとしての抗連鎖球菌抗体；橋本甲状腺炎における抗サイログロブリン抗体、抗甲状腺ペルオキシダーゼ抗体、および抗ＴＳＨ受容体抗体；混合性結合組織病および全身性エリテマトーデスにおける抗Ｕ１ＲＮＰ抗体；ならびに天疱瘡における抗デスモグレイン抗体および抗ケラチノサイト抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
特に、本発明のストラドマーは、うっ血性心不全（ＣＨＦ）、血管炎、酒さ、挫瘡、湿疹、心筋炎および心筋の他の病態全身性エリテマトーデス、糖尿病、脊椎症、滑膜線維芽細胞、ならびに骨髄間質；骨喪失；パジェット病、骨巨細胞腫；多発性骨髄腫；乳癌；廃用性骨減少症；栄養失調、歯周病、ゴーシェ病、ランゲルハンス細胞組織球症、脊髄損傷、急性化膿性関節炎、骨軟化症、クッシング症候群、単骨性線維性骨異形成症、多骨性線維性骨異形成症、歯周再建、および骨折；サルコイドーシス；溶骨性骨癌、肺癌、腎臓癌、および直腸癌；骨転移、骨痛管理、および液性悪性高カルシウム血症、強直性脊椎炎、ならびに他の脊椎関節症；移植拒絶、ウイルス感染、血液腫瘍、および腫瘍様病態、例えば、ホジキンリンパ腫；非ホジキンリンパ腫（バーキットリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫／慢性リンパ球性白血病、菌状息肉腫、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、辺縁帯リンパ腫、毛様細胞白血病、およびリンパ形質細胞性白血病）、リンパ球前駆細胞の腫瘍（Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫およびＴ細胞急性リンパ芽球性白血病／リンパ腫を含む）、胸腺腫、成熟Ｔ細胞およびＮＫ細胞の腫瘍（末梢Ｔ細胞白血病、成人Ｔ細胞白血病／Ｔ細胞リンパ腫、および大顆粒リンパ球性白血病を含む）、ランゲルハンス細胞組織球症、骨髄腫瘍（急性骨髄性白血病（成熟を伴うＡＭＬ、分化を伴わないＡＭＬ、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、および急性単球性白血病を含む）など）、骨髄異形成症候群、および慢性骨髄増殖性疾患（慢性骨髄性白血病を含む）、中枢神経系の腫瘍、例えば、脳腫瘍（神経膠腫、神経芽細胞腫、星状細胞腫、髄芽腫、上衣腫、および網膜芽細胞腫）、固形腫瘍（鼻咽頭癌、基底細胞癌、膵癌、胆管癌、カポジ肉腫、精巣癌、子宮癌、膣癌、もしくは子宮頸癌、卵巣癌、原発性肝癌、または子宮内膜癌）、血管系の腫瘍（血管肉腫および血管周囲細胞腫））、または他の癌を含むが、これらに限定されない病態を治療するために使用することができる。
本明細書において、「癌」とは、典型的には、未制御の細胞成長を特徴とする、哺乳動物における生理学的病態を指すか、またはそれを説明する。癌の例としては、細胞腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫（脂肪肉腫、骨原性肉腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、平滑筋肉腫、脊索腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、横紋筋肉腫、線維肉腫、粘液肉腫、および軟骨肉腫を含む）、神経内分泌腫瘍、中皮腫、滑膜腫、神経鞘腫、髄膜腫、腺癌、黒色腫、および白血病またはリンパ性悪性腫瘍が挙げられるが、これらに限定されない。かかる癌のより具体的な例としては、扁平上皮細胞癌（例えば、上皮扁平上皮細胞癌）、肺癌（ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）（小細胞肺癌（ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ）、非小細胞肺癌、肺腺癌および肺扁平上皮癌、小細胞肺癌（ｓｍａｌｌ ｃｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）を含む）、腹膜の癌、肝細胞癌、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）または胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ）（消化管癌を含む）、膵癌、膠芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌（ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ）、膀胱癌、肝細胞癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ ｃａｎｃｅｒ）または腎臓癌（ｒｅｎａｌ ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰部癌、甲状腺癌、肝細胞癌、肛門癌、陰茎癌、精巣癌、食道癌、胆道腫瘍、ユーイング腫瘍、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、胆管癌、絨毛腫、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、精巣腫瘍、肺癌（ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、膀胱癌、上皮内癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起神経膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、骨髄異形成疾患、重鎖病、神経内分泌腫瘍、神経鞘腫、および他の癌腫、ならびに頭頸部癌が挙げられる。
本発明のストラドマーは、自己免疫疾患を治療するために使用することができる。本明細書で使用される場合、「自己免疫疾患」という用語は、８０を超える様々な群の疾患および病態を指す。これらの疾患および病態の全てにおいて、根本的な問題は、身体の免疫系が身体自体を攻撃することである。自己免疫疾患は、結合組織、神経、筋肉、内分泌系、皮膚、血液、ならびに呼吸器系および消化器系を含む、全ての主要な身体系に影響を与える。自己免疫疾患はとしては、例えば、全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎、多発性硬化症、重症筋無力症、および１型糖尿病が挙げられる。
本発明の組成物および方法を使用して治療可能な疾患または病態は、鎌状赤血球症、特発性血小板減少性紫斑病、同種免疫性／自己免疫性血小板減少症、後天性免疫性血小板減少症、自己免疫性好中球減少症、自己免疫性溶血性貧血、パルボウイルスＢ１９関連赤血球無形成、後天性抗第ＶＩＩＩ因子自己免疫、後天性フォン・ヴィルブランド病、多発性骨髄腫および意義不明のモノクローナル免疫グロブリン血症、敗血症、再生不良性貧血、赤芽球癆、ダイアモンド・ブラックファン貧血、新生児溶血性疾患、免疫媒介好中球減少症、血小板輸血不応状態、新生児の輸血後紫斑病、溶血性尿毒症症候群、全身性血管炎、血栓性血小板減少性紫斑病、またはエヴァンス症候群を含むが、これらに限定されない、血液免疫学的プロセスであり得る。
疾患または病態はまた、ギラン・バレー症候群、慢性炎症性脱髄性多発ニューロパチー、異常タンパク性ＩｇＭ脱髄性多発ニューロパチー、ランバート・イートン筋無力症症候群、重症筋無力症、多巣性運動ニューロパチー、抗／ＧＭｌ関連下位運動ニューロン症候群、脱髄、多発性硬化症および視神経炎、全身硬直症候群、抗Ｙｏ抗体を伴う傍腫瘍性小脳変性症、傍腫瘍性脳脊髄症、抗Ｈｕ抗体を伴う感覚性ニューロパチー、癲癇、脳炎、脊髄炎、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス−１型に特に関連する脊髄症、自己免疫性糖尿病ニューロパチー、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンチントン病、または急性特発性自律神経障害ニューロパチーを含むが、これらに限定されない、神経免疫学的プロセスでもあり得る。
疾患または病態はまた、難聴または視力低下に関連する炎症または自己免疫でもあり得る。例えば、疾患または病態は、騒音性難聴または加齢性難聴などの自己免疫関連難聴であっても、補聴器（例えば、蝸牛埋め込み）などのデバイスの埋め込みに関連付けられるものであってもよい。いくつかの実施形態において、本明細書に提供される組成物は、デバイスの埋め込みの前、それと同時、またはその後に対象に投与されてもよい。
疾患または病態はまた、川崎病、リウマチ性関節炎、フェルティー症候群、ＡＮＣＡ陽性血管炎、自発性多発性筋炎、皮膚筋炎、抗リン脂質症候群、再発性自然流産、全身性エリテマトーデス、若年性特発性関節炎、レイノー病、ＣＲＥＳＴ症候群、またはブドウ膜炎を含むが、これらに限定されない、リウマチ性疾患プロセスでもあり得る。
疾患または病態はまた、中毒性表皮壊死融解症、壊疽、肉芽腫、自己免疫性皮膚水疱病（尋常性天疱瘡、水疱性類天疱瘡、落葉性天疱瘡を含む）、白斑、連鎖球菌毒素ショック症候群、強皮症、全身性硬化症（びまん性および限局型皮膚全身性硬化症を含む）、またはアトピー性皮膚炎（特にステロイド依存性）を含むが、これらに限定されない、皮膚免疫学的疾患プロセスでもあり得る。
疾患または病態はまた、封入体筋炎、壊死性筋膜炎、炎症性ミオパチー、筋炎、抗デコリン（ＢＪ抗原）筋炎、傍腫瘍性壊死性筋炎、Ｘ連鎖性空胞化筋炎、ペナシラミン誘導性多発性筋炎、アテローム性動脈硬化症、冠動脈疾患、または心筋症を含むが、これらに限定されない、筋骨格免疫学的疾患プロセスでもあり得る。
疾患または病態はまた、悪性貧血、自己免疫性慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、セリアック病、疱疹状皮膚炎、特発性肝硬変、反応性関節炎、クローン病、ウィップル病、潰瘍性大腸炎、または硬化性胆管炎を含むが、これらに限定されない、消化器免疫学的疾患プロセスでもあり得る。
疾患または病態はまた、移植片対宿主病、移植片の抗体媒介拒絶、骨髄移植後拒絶、感染性疾患後の炎症、リンパ腫、白血病、腫瘍、喘息、抗ベータ細胞抗体を伴う１型糖尿病、シェーグレン症候群、混合性結合組織病、アジソン病、フォークト・小柳・原田症候群、膜性増殖性糸球体腎炎、グッドパスチャー症候群、グレーブス病、橋本甲状腺炎、ウェゲナー肉芽腫症、顕微鏡的多発動脈炎（ｍｉｃｒｏｐｏｌｙａｒｔｅｒｉｔｓ）、チャーグ・ストラウス症候群、結節性多発性動脈炎、または多系統臓器不全でもあり得る。
本明細書で使用される場合、「アレルギー」とは、ＩｇＥによって媒介される全ての免疫反応、およびＩｇＥ媒介反応を模倣する反応を含む。アレルギーは、ＩｇＥ免疫応答またはＩｇＥ様免疫応答を引き起こす、タンパク質、ペプチド、炭水化物、およびこれらの組み合わせを含むアレルゲンによって誘導される。例示的なアレルギーとしては、ナッツアレルギー、花粉アレルギー、および虫刺されアレルギーが挙げられる。例示的なアレルゲンとしては、ツタウルシおよびオークのウルシオール；ハウスダスト抗原；カバノキ花粉構成成分Ｂｅｔ ｖ１およびＢｅｔ ｖ２；セロリの１５ｋｄ抗原；リンゴ抗原Ｍａｌ ｄ１；モモのＰｒｕ ｐ３；チモシー牧草花粉アレルゲンＰｈｌ ｐ１；ライグラスのＬｏｌ ｐ３、Ｌｏｌ ｐＩ、またはＬｏｌ ｐＶ；ギョウギシバのＣｙｎ ｄ１；イエダニアレルゲン、イエダニＤｅｒ ｐ１、Ｄｅｒ ｐ２、またはＤｅｒ ｆ１；グルテンのα−グリアジンおよびγ−グリアジンエピトープ；ハチ毒ホスホリパーゼＡ２；ピーナッツのＡｒａ ｈ１、Ａｒａ ｈ２、およびＡｒａ ｈ３エピトープが挙げられる。
本発明は、感染病原体によって引き起こされる疾患の治療に有効な方法および組成物を更に含む。感染病原体としては、細菌性、菌性、寄生虫性、およびウイルス性病原体が挙げられるが、これらに限定されない。そのような感染病原体の例としては、以下、ブドウ球菌、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌、大腸菌、連鎖球菌科、ナイセリア科（ｎｅｉｓｓｅｒｉａａｃｅａｅ）、球菌、腸内細菌科、腸球菌、バンコマイシン耐性腸球菌、クリプトコッカス、ヒストプラズマ、アスペルギルス、シュードモナス科、ビブリオ科、カンピロバクター、パスツレラ科、ボルデテラ、フランシセラ、ブルセラ、レジオネラ科、バクテロイデス科、グラム陰性桿菌、クロストリジウム、コリネバクテリウム、プロピオニバクテリウム、グラム陽性桿菌、炭疽菌、アクチノミセス、ノカルジア、マイコバクテリア、トレポネーマ、ボレリア、レプトスピラ、マイコプラズマ、ウレアプラズマ、リケッチア、クラミジア、カンジダ、全身性真菌症、日和見真菌症、原生動物、線形動物、吸虫、条虫、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルスおよびエプスタイン・バーウイルス、ならびに帯状疱疹ウイルスを含む）、ポックスウイルス、パポーウイルス、肝炎ウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルスおよびＣ型肝炎ウイルスを含む）、パピローマウイルス、オルソミクソウイルス（例えば、インフルエンザＡ、インフルエンザＢ、およびインフルエンザＣを含む）、パラミクソウイルス、コロナウイルス、ピコルナウイルス、レオウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、ブニヤウイルス科、ラブドウイルス、ロタウイルス、呼吸系発疹ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、ならびにレトロウイルスが挙げられる。例示的な感染性疾患としては、カンジダ症、カンジダ血症、アスペルギルス症、連鎖球菌性肺炎、連鎖球菌性の皮膚および中咽頭の病態、グラム陰性敗血症、結核、単核球症、インフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルスによって引き起こされる呼吸器疾患、マラリア、住血吸虫症、ならびにトリパノソーマ症が挙げられるが、これらに限定されない。
別の実施形態において、本明細書に記載されるストラドマーは、血液が患者から引き出され、患者に再び導入される前に約３０分〜約３時間の期間、ストラドマー（複数可）と一過的に接触するプライミング系において利用することができる。この形態の細胞療法において、患者自身のエフェクター細胞を、エキソビボでマトリックス上に固定されるストラドマーに曝露して、エフェクター細胞のストラドマーへの曝露を通してエフェクター細胞を調節する。その後、調節されたエフェクター細胞を含む血液が再び患者に注入される。そのようなプライミング系は、多数の臨床的および治療的用途を有し得る。
本明細書に開示されるストラドマーはまた、様々な文脈における免疫系応答を改変して、免疫応答プロファイルにおける特定の変化に影響を与えるように容易に適用することもできる。対象における免疫応答の改変または調節とは、免疫応答の比率または構成要素を増加、減少、または変更することを指す。例えば、サイトカインの産生または分泌レベルは、ＦｃＲと、補体に結合し、それらの受容体と相互作用するように設計されたストラドマーとの適切な組み合わせとともに、補体を標的とすることによって、所望に応じて増加または減少させることができる。抗体産生がまた増加または減少され得ても、２つ以上のサイトカインまたは免疫細胞受容体の比率が変更され得ても、追加の種類のサイトカインまたは抗体の産生が引き起こされてもよい。
好ましい一実施形態において、自己免疫性または炎症性疾患を有する対象は、本明細書に記載される治療有効量のストラドマーを対象に投与するステップを含むことで、彼らの免疫応答が改変され、治療有効量のストラドマーは、対象における免疫応答を改変する。理想的には、この介入は、対象における疾患または病態を治療する。改変された免疫応答は、応答の増加または減少であってもよく、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＩＬ−８、ＩＬ−２３、ＩＬ−７、ＩＬ−４、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１７、ＴＮＦ−α、およびＩＦＮ−αのうちのいずれかのレベルを含む、サイトカインレベルの改変を伴ってもよい。好ましい一実施形態において、療法に応答して、Ｉｌ−６またはＩＬ−８が減少する。特に好ましい一実施形態において、療法に応答して、ＩＬ−６およびＩＬ−８が減少する。しかしながら、本発明は、記載される生物摸倣物のいかなる特定の作用機構によっても限定されない。改変された免疫応答は、対象における改変された自己抗体レベルであってもよい。改変された免疫応答は、対象における改変された自己侵襲的Ｔ細胞レベルであってもよい。
例えば、自己免疫疾患におけるＴＮＦ−αの産生量の低減は、治療効果を有し得る。この実用的な用途は、尋常性乾癬、リウマチ性関節炎、乾癬性関節炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、および強直性脊椎炎を治療することが臨床的に証明されている抗ＴＮＦ−α抗体療法（例えば、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））である。これらの自己免疫疾患は異なる病因を有するが、炎症および免疫細胞活性に関連する疾患プロセスの重要な免疫学的構成要素を共有する。同様に、ＴＮＦ−α産生を低減させるように設計されたストラドマーは、これらおよび多くの他の自己免疫疾患に有効だろう。改変された免疫応答プロファイルはまた、例えば、対象自身の組織を標的とする自己抗体の抗体産生の低減、または対象における自己侵襲的Ｔ細胞レベルの改変をもたらすための、直接的または間接的な調節であってもよい。例えば、多発性硬化症は、ＩＦＮ−β療法によって治療することができる、自己反応性Ｔ細胞を伴う自己免疫障害である。例えば、Ｚａｆｒａｎｓｋａｙａ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２００７ Ｍａｙ；１２１（ｌ）：２９−３９を参照されたい。同様に、自己反応性Ｔ細胞レベルを低減させるためのストラドマー設計は、多発性硬化症に有効であり、自己反応性Ｔ細胞を伴う他の自己免疫疾患に有効であり得る。
本明細書に記載のストラドマーを使用して、樹状細胞、マクロファージ、破骨細胞、単球、もしくはＮＫ細胞を含む免疫細胞からの共刺激分子の発現を調節すること、またはこれらの同一の免疫細胞において、分化、成熟、もしくはサイトカイン（インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）を含む）分泌を阻害すること、またはインターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、もしくはインターロイキン−６（ＩＬ−６）、もしくはＩＬ−１Ｒαを含むサイトカイン分泌を増加することができる。当業者はまた、免疫細胞を免疫学的に活性な生物模倣物に曝露し、免疫細胞機能の調節を測定することにより、免疫学的に活性な生物模倣物の有効性を検証することもでき、免疫細胞は、樹状細胞、マクロファージ、破骨細胞、または単球である。一実施形態において、免疫細胞は、インビトロで免疫学的に活性な生物模倣物に曝露され、細胞表面受容体またはサイトカイン産生の量を決定するステップを更に含み、細胞表面受容体またはサイトカイン産生の量の変化は、免疫細胞機能の調節を示す。別の実施形態において、免疫細胞は、自己免疫疾患のモデル動物においてインビボで免疫学的に活性な生物模倣物に曝露され、自己免疫疾患の改善の程度を評価するステップを更に含む。
本明細書に記載されるストラドマーはまた、デバイスの構成要素としても使用することができる。例えば、いくつかの実施形態において、本明細書に提供されるストラドマーは、医療用移植片などのデバイス上にコーティングされてもよい。例えば、ストラドマーは、例えば、ブドウ膜炎または黄斑変性における眼内用途のため、浸透を改良し、薬物放出を延長するために、冠動脈ステント上にコーティングされても、ナノ粒子療法の一部であってもよい。本明細書に記載されるストラドマーはまた、診断の構成要素としても使用することができる。いくつかの実施形態において、当業者は、どの患者においてストラドマーの使用が特に有益であり得るかを決定することによって、療法を個別化することができる。例えば、当業者は、患者の免疫細胞を免疫学的に活性な生物模倣物に曝露し、フローサイトメトリーまたはサイトカインプロファイルによって免疫細胞の活性化または成熟の調節を測定して、高応答者を特定してもよい。
過剰な補体活性化および／または沈着は有害であり得、重症筋無力症、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、および発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）を含む多くの疾患と関連付けられている。脳の老化は、補体構成要素Ｃ１ｑのレベルの劇的な増加と関連付けられている（Ｓｔｅｐｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，１４ Ａｕｇｕｓｔ ２０１３，３３（３３）：１３４６０−１３４７４）。補体系は、アセチルコリン受容体抗体関連重症筋無力症の病理発生に深く関与している（Ｔｕｚｕｎ ａｎｄ Ｃｈｒｉｓｔａｄｏｓｓ，Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ Ｒｅｖ．２０１３ Ｊｕｌ；１２（９）：９０４−１１）。免疫学的、遺伝学的、およびタンパク質生化学的研究からのいくつかの発見は、補体系が加齢黄斑変性の病因において重要な役割を果たすことを示している（Ｗｅｂｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｄｔｓｃｈ Ａｒｚｔｅｂｌ Ｉｎｔ．，２０１４Ｆｅｂ；１１１（８）：１３３−１３８）。補体の古典的経路および代替経路の両方が、リウマチ性関節炎の間、およびリウマチ性関節炎の動物モデルにおいて病理学的に活性化されるという、強力な証拠が存在する（Ｏｋｒｏｊ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ“Ｍｅｄ．“２００７；３９（７）：５１７−３０）。
本明細書に引用される全ての参考文献の全体が、参照により組み込まれる。
実施例１：一般的なストラドマー
改良された標準結合および改良された補体結合を有するストラドマーを生成するために様々なアプローチが取られた。Ｆｃドメインに少なくとも１つの点変異が導入されたストラドマーを生成した。具体的には、変異は、ＷＯ２０１２／０１６０７３に記載のＧＬ−２０４５ストラドマーのＦｃドメインの２３３、２３４、２３５、２３６、２６７、２６８、２９９、３２４、３４５、４３０、および４４０位に作製された。例示的なストラドマーのアミノ酸配列を、上記の表１に示す。
生成した各ストラドマーについて、標準ＦｃγＲ結合、補体Ｃ１ｑ結合、およびＣＤＣ阻害のレベルを決定し、親ストラドマーＧＬ−２０４５（ＩｇＧ１ヒンジ−ＩｇＧ１ＣＨ２ ＩｇＧ１ ＣＨ３−ＩｇＧ２ヒンジ）と比較した。
ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩｂ、ＦｃγＲＩＩＩａ、ＦｃγＲＩＩａへの、一般的なストラドマーまたは親ストラドマーＧＬ−２０４５の結合を評価した。ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ機器を使用して、バイオレイヤー干渉法によって、解離のＲＵ値を測定した。Ｈｉｓタグ受容体タンパク質を、１×動態分析緩衝液中、センサチップに結合させ、その後、選択される精製ストラドマーを含有する１×動態緩衝液にセンサチップを移すことによって、受容体／タンパク質の結合速度を測定した。１×動態緩衝液にセンサチップを移すことによって、解離速度を測定し、ＦｏｒｔｅＢｉｏソフトウェアを使用して、測定された最大結合からＲＵ値を計算した。バイオレイヤー干渉法は、バイオセンサチップ表面上に固定化されたリガンドと溶液中の分析物との間の結合を検出する。結合が生じるとき、それはバイオセンサチップでの光学的厚さの増加を引き起こし、これは（「ＲＵ」の応答単位として検出される）波長シフトをもたらす。最大結合レベル（ＲＵ ｍａｘ）は、センサ表面上のリガンドの量を飽和させる平衡での試料結合の可能性のある最大量である。ＲＵ３００は３００秒間の解離後の残基試料結合であり、試験リガンドからの試験物品の解離速度を特徴付けるのに有用である。
化合物を特徴付けるために、４つのＦｃ受容体に対するバイオレイヤー干渉法による最大結合（ＲＵ ｍａｘ）、Ｃ１ｑへのＥＬＩＳＡ結合、および補体依存性細胞傷害の阻害を、本明細書に提供されるデータに示す。
Ｃ１ｑ結合について、９６ウェルプレートを、１×ＰＢＳ中、Ｃ１ｑ（Ｓｉｇｍａカタログ番号：Ｃ１７４０、１μｇ／ｍＬ）で一晩コーティングした。コーティングの後、プレートを標準洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で３回洗浄し、ブロッキング緩衝液（１％のＢＳＡ＋１×ＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で室温で２時間ブロッキングした。ブロッキングの後、プレートをブロッキング緩衝液中に希釈した化合物（１００μＬ／ウェル）とともにインキュベートし、標準洗浄緩衝液で３回洗浄した。Ｃ１ｑ結合化合物を、１：５０００のビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ１（カタログ番号：５５５８６９、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号：７１００−０５ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）（１００μｇ／ウェル）とともに室温で１時間インキュベートし、続いて洗浄緩衝液で３回洗浄し、その後、製造元のプロトコルに従って標準的なＴＭＢ方法を使用して１５分間発色させることによって検出した。吸光度を４５０ｎｍで読み取った。結果の要約を、表３に示す。
ＧＬ−２０４５の例示的なＦｃ受容体結合データを、図１に提供する。一般的なストラドマーＦｃγＲ結合の要約を以下の表３に提供する。
ストラドマーのそれぞれの多量体形成を評価した。簡潔に、各ストラドマーの３μｇの試料を、２０ｍＭのヨードアセトアミドと混合し、１０分間インキュベートし、その後、３〜８％のトリス−グリシン非還元タンパク質ゲル上に試料を充填した。試料をおよそ１．２時間１５０ボルトで泳動させた。結果を図２６Ａ〜図２６Ｆに提供し、これは、本明細書に記載の多量体化ストラドマーの全てが多量体化ストラドマーを形成する（例えば、ホモ二量体以上の二量体）ことを示す。
実施例２−一般的なストラドマーの改良された補体結合
Ｃ１ｑへの一般的なストラドマーの結合を評価するために研究を行い、その結果を表３に要約する。
Ｃ１ｑ結合について、９６ウェルプレートを、ＰＢＳ中、Ｃ１ｑ（Ｓｉｇｍａカタログ番号：Ｃ１７４０、１μｇ／ｍＬ）で一晩コーティングした。コーティングの後、プレートを標準洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で３回洗浄し、ブロッキング緩衝液（１％のＢＳＡ＋１−０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で室温で２時間ブロッキングする。ブロッキングの後、プレートをブロッキング緩衝液中に希釈した化合物（１００μＬ／ウェル）とともにインキュベートし、標準洗浄緩衝液で３回洗浄する。Ｃ１ｑ結合化合物を、１：５０００のビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ１（カタログ番号：５５５８６９、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号：７１００−０５ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）（１００μＬ／ウェル）とともに室温で１時間インキュベートし、続いて洗浄緩衝液で３回洗浄し、その後、製造元のプロトコルに従って標準的なＴＭＢ方法を使用して１５分間発色させることによって検出する。吸光度を４５０ｎｍで読み取る。
Ｃ３、Ｃ３ｂ、Ｃ４、およびＣ５への一般的なストラドマーの結合を評価するための研究も行う。Ｃ３結合について、９６ウェルプレートをＣ３補体構成要素（Ｑｕｉｄｅｌ番号Ａ４０１、ＰＢＳ中１μｇ／ｍｌ）で４℃で一晩コーティングし、その後、３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０で３回洗浄する。プレートをＰＢＳ１×＋２％のＢＳＡ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０で室温で２時間ブロッキングする。試験される化合物（ＧＬ−２０４５、Ｇ１０９７、Ｇ１０９８、Ｇ１０９９、Ｇ１１２６、またはＧ１１２７）を、ブロッキング緩衝液中で、結合Ｃ３とともに室温で２時間インキュベートし、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。Ｃ３と相互作用する化合物を、室温で１時間、ＰＢＳ−ＢＳＡ−（１００μＬ／ウェル）中のビオチンマウス抗ヒトＩｇＧ１（ＢＤ＃５５５ ８６９）＋ストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号：７１００−０５ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）１／５０００（ｅａ．）によって検出し、続いて４回で洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。１ウェル当たり１００μＬのＴＭＢ基質試薬で２０分間発色させ、５０μＬのＨ２ＳＯ４（１Ｍ）で反応を停止させ、４５０／６５０ｎｍで吸光度を読み取る。
Ｃ３ｂ結合について、９６ウェルプレートをＣ３ｂ補体構成要素（ＧｅｎＷａｙ Ｂｉｏｔｅｃｈ番号ＧＷＢ−８ＢＡ９９４、１ＸＰＢＳ中１μｇ／ｍＬでコーティングする。１ウェル当たり１００μＬのＣ３ｂ補体構成要素を添加し、４℃で一晩インキュベートし、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。プレートをブロッキング緩衝液（ＰＢＳ１×＋２％のＢＳＡ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）中で室温で２時間ブロッキングし、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。本明細書に記載の一般的なストラドマーを、ブロッキング緩衝液中で室温で４時間Ｃ３ｂに対して反応させ、続いて３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。結合化合物を、室温で１時間、ブロッキング緩衝液１００μＬ中のビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ１（ＢＤ番号：５５５ ８６９）＋ストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号：７１００−０５ ＳｏｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）１／５０００（ｅａ．）で検出する。ＴＭＢ基質試薬で室温で２０分間発色させ、５０μＬのＨ２ＳＯ４（１Ｍ）で反応を停止させる。吸光度を４５０／６５０ｎｍで読み取る。
Ｃ４結合について、９６ウェルプレートをＣ４補体構成要素（Ｑｕｉｄｅｌ番号Ａ４０２、ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬ）でコーティングする。１ウェル当たり１００μＬのＣ４補体構成要素を添加し、４℃で一晩インキュベートし、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。プレートをブロッキング緩衝液（ＰＢＳ１×＋２％のＢＳＡ＋０．０５％のｔｗｅｅｎ２０）中で室温で２時間ブロッキングし、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。試験される化合物（ＧＬ−２０４５、Ｇ１０９７、Ｇ１０９８、Ｇ１０９９、Ｇ１１２６、またはＧ１１２７）を、ブロッキング緩衝液中で、室温で２時間Ｃ４に対して反応させ、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。結合化合物を、室温で１時間、ブロッキング緩衝液１００μＬ中のビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ１（ＢＤ番号：５５５ ８６９）＋ストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号：７１００−０５ ＳｏｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）１／５０００（ｅａ．）で検出する。ＴＭＢ基質試薬で室温で２０分間発色させ、５０μＬのＨ２ＳＯ４（１Ｍ）で反応を停止させる。吸光度を４５０／６５０ｎｍで読み取る。
Ｃ５結合について、９６ウェルプレートをＣ５補体構成要素（Ｑｕｉｄｅｌ番号Ａ４０３、ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬ）でコーティングする。１ウェル当たり１００μＬのＣ５補体構成要素を添加し、４℃で一晩インキュベートし、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。プレートをブロッキング緩衝液（ＰＢＳ１×＋２％のＢＳＡ＋０．０５％のｔｗｅｅｎ２０）中で室温で２時間ブロッキングし、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。試験される化合物（ＧＬ−２０４５、Ｇ１０９７、Ｇ１０９８、Ｇ１０９９、Ｇ１１２６、またはＧ１１２７）を、ブロッキング緩衝液中で、室温で２時間Ｃ５に対して反応させ、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。結合化合物を、室温で１時間、ブロッキング緩衝液１００μＬ中のビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ１（ＢＤ番号：５５５ ８６９）＋ストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号：７１００−０５ ＳｏｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）１／５０００（ｅａ．）で検出する。ＴＭＢ基質試薬で室温で２０分間発色させ、５０μＬのＨ２ＳＯ４（１Ｍ）で反応を停止させた。吸光度を４５０／６５０ｎｍで読み取る。
これらの研究の結果は、本明細書に記載の一般的なストラドマーが親ストラドマー（例えば、ＧＬ−２０４５またはＧ０１９）よりも効果的に、または同じくらい効果的に補体構成要素に結合することを示す。
実施例３−六量体ストラドマー
Ｆｃドメインに少なくとも１つの点変異が導入されたストラドマーを生成した。具体的には、以下の変異は、ＷＯ２０１２／０１６０７３に記載のＧＬ−２０４５ストラドマーのＦｃドメインの２９９位、および３４５、４３０、４４０位のうちの１つ以上に作製された：Ｔ２９９Ａ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、およびＳ４４０Ｙ。例示的なストラドマーのアミノ酸配列を上記の表１および表２に示す。
生成された各ストラドマーについて、標準ＦｃγＲ結合、六量体形成、およびＣＤＣ阻害のレベルを決定した。
ストラドマーのＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、およびＦｃγＲＩＩＩａへの結合を評価した。Ｈｉｓタグ受容体タンパク質（５μｇ／ｍＬ）を、ＦｏｒｔｅＢｉｏ（カタログ番号１８−１０９２）の１×動態分析緩衝液中で３００秒間抗Ｈｉｓセンサ先端（抗ペンタＨｉｓ ＨＩＳ１Ｋ、カタログ番号１８−５１２１）に結合させた。ベースライン測定値を得るために、充填したセンサを、標識受容体またはリガンドなしの１×動態分析に６０秒間移した。ベースラインを取得した後、受容体／タンパク質の結合速度を、５０μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ、および１２．５μｇ／ｍＬの濃度で３００秒間、選択した精製ストラドマーを含有する１×動態緩衝液にセンサ先端を移すことによって測定した。１×動態緩衝液にセンサチップを移すことによって、解離速度を６００秒間測定し、ＦｏｒｔｅＢｉｏソフトウェアを使用して、測定された最大結合からＲＵ値を計算した。バイオレイヤー干渉法は、バイオセンサチップ表面上に固定化されたリガンドと溶液中の分析物との間の結合を検出する。結合が生じるとき、それはバイオセンサチップでの光学的厚さの増加を引き起こし、これは（「ＲＵ」の応答単位として検出される）波長シフトをもたらす。最大結合レベル（ＲＵ ｍａｘ）は、センサ表面上のリガンドの量を飽和させる平衡での試料結合の可能性のある最大量である。ＲＵ３００は３００秒間の解離後の残基試料結合であり、試験リガンドからの試験物品の解離速度を特徴付けるのに有用である。
本明細書に記載の六量体ストラドマーの能力を評価するために、ＣＤ２０発現Ｗｉｌ−２細胞を、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体とともに２０分間インキュベートし、その後、細胞を遠心分離し、新しい培地中に再懸濁した。次いで、細胞を、６つの濃度；１００μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、２５μｇ／ｍＬ、１２．５μｇ／ｍＬ、６．２５μｇ／ｍＬ、または３．１２５μｇ／ｍＬのストラドマーのうちの１つの本明細書に記載のストラドマーの各々を含有する培地中で９６ウェルプレート内でインキュベートした。補体依存性細胞溶解を開始させるために、血清を細胞懸濁液に添加し、プレートを３７℃で３時間インキュベートした。Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｙｔｏｔｏｘ Ｇｌｏアッセイで細胞死を定量化した。プレートの各ウェルにＣｙｔｏｔｏｘ Ａｓｓａｙ Ｒｅａｇｅｎｔを添加し、プレートを室温で１５分間、暗所でインキュベートした。１５分後にＰｒｏｍｅｇａ ＧｌｏＭａｘ ｌｕｍｉｎｏｍｅｔｅｒ上で発光を読み取り、この読み取りから細胞死を計算した。
ストラドマーのそれぞれの六量体形成を評価した。簡潔に、各ストラドマーの３μｇの試料を、２０ｍＭのヨードアセトアミドと混合し、１０分間インキュベートし、その後、３〜８％のトリス−グリシン非還元タンパク質ゲル上に試料を充填した。試料をおよそ１．２時間１５０ボルトで泳動させた。結果は、図２７に提供され、Ｇ１０９８、１１２６、および１１２７が優先的に六量体複合体を形成することを示す。更に、図２７は、Ｇ１０９８、１１２６、および１１２７が、全タンパク質のパーセンテージとして、ＧＬ−２０４５と比較して、非常に高いレベルの高分子量（六量体以上のバンド）種を形成することを明らかに示す。
Ｔ２９９Ａ点変異は、本明細書に記載のストラドマーの非グリコシル化をもたらすと予想された。図３２Ａに示されるように、親ストラドマー（ＧＬ−２０４５、配列番号７または８）の配列は、２９７位にＮ−グリコシル化部位を有すると予想され、グリコシル化コンセンサス配列は、２９７Ｎ−Ｘ−２９９Ｔである。２９７位のアスパラギン残基は、グリカンが共有結合し、２９９位のスレオニン残基が認識部位の一部である実際の部位である。図３２Ｂに示されるように、２９９位の変異（Ｔ２９９Ａ）は、このグリコシル化部位を除去することが予想され、それにより非グリコシル化ストラドマーをもたらす。
本明細書に記載のストラドマー化合物のそれぞれの非グリコシル化は、ゲル分析によって確認された。図２７に示されるように、Ｔ２９９Ａ変異を有するストラドマーの各々は、Ｇ２０４５（グリコシル化）親ストラドマーと比較して、より高い可動度を有する。
Ｇ１０９９は、ＧＬ−２０４５骨格内に挿入された１つの変異（Ｔ２９９Ａ）を有するストラドマーであり、ＦｃγＲへの標準結合を低減させるために生成された。驚くべきことに、図２３に示されるように、Ｇ１０９９は、Ｔ２９９Ａ点変異に基づいて予想されたように低減された標準結合を示さなかった。Ｇ１００９が用量依存性様式でＣＤＣ活性を阻害することができたため（３０μｇ／ｍＬのＩＣ５０）、補体タンパク質に結合するＧ１０９９の能力は保持され、潜在的に改良された（図３１）。
Ｇ１０９７は、ＧＬ−２０４５骨格内に挿入された２つの変異（Ｔ２９９ＡおよびＥ３４０Ｇ）を有するストラドマーであり、ＦｃγＲへの標準結合を低減し、補体結合を改良するために生成された。驚くべきことに、図２４に示されるように、Ｇ１０９７は、Ｔ２９９Ａ点変異に基づいて予想されたように低減された標準結合を示さなかった。しかしながら、Ｇ１０９７が用量依存性様式でＣＤＣ活性を阻害することができたため（２０μｇ／ｍＬのＩＣ５０）、補体タンパク質に結合するＧ１０９７の能力は親ストラドマー（Ｇ１０９９）の非グリコシル化バリアントと比較して、改良された（図３１）。このＩＣ５０は、Ｇ１０９９のＩＣ５０よりも実質的に低い（３０μｇ／ｍＬ）。
Ｇ１０９８は、ＧＬ−２０４５骨格内に挿入された３つの変異（Ｔ２９９Ａ、Ｅ３４０Ｇ、およびＳ４４０Ｙ）を有するストラドマーであり、ＦｃγＲへの標準結合を低減し、補体結合を改良するために生成された。驚くべきことに、図２３に示されるように、Ｇ１０９８は、Ｔ２９９Ａ点変異に基づいて予想されたように低減された標準結合を示さなかった。しかしながら、Ｇ１０９８が用量依存性様式でＣＤＣ活性を阻害することができたため（１０μｇ／ｍＬのＩＣ５０）、補体タンパク質に結合するＧ１０９８の能力は親ストラドマー（Ｇ１０９９）の非グリコシル化バリアントと比較して、改良された（図３１）。このＩＣ５０は、Ｇ１０９９のＩＣ５０よりも実質的に低い（３０μｇ／ｍＬ）。Ｇ１０９８のゲル分析は、Ｇ１０９８が優先的に多量体化されて六量体ストラドマーを形成することを更に示し、これは、Ｔ２９９Ａ変異単独（Ｇ１０９９）またはＥ４３０Ｇ（Ｇ１０９７）との組み合わせでは見られなかった特徴であった（図２７）。
Ｇ１１２６は、ＧＬ−２０４５骨格内に挿入された４つの変異（Ｔ２９９Ａ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、およびＳ４４０Ｙ）を有するストラドマーであり、ＦｃγＲへの標準結合を低減し、補体結合を改良するために生成された。驚くべきことに、図２７に示されるように、Ｇ１１２６は、Ｔ２９９Ａ点変異に基づいて予想されたように低減された標準結合を示さなかった。しかしながら、Ｇ１０９８が用量依存性様式でＣＤＣ活性を阻害することができたため（５μｇ／ｍＬのＩＣ５０）、補体タンパク質に結合するＧ１１２６の能力は親ストラドマー（Ｇ１０９９）の非グリコシル化バリアントと比較して、改良された（図３１）。このＩＣ５０は、Ｇ１０９９のＩＣ５０よりも実質的に低い（３０μｇ／ｍＬ）。Ｇ１１２６のゲル分析は、Ｇ１１２６が優先的に多量体化されて六量体ストラドマーを形成することを更に示し、これは、Ｔ２９９Ａ変異単独（Ｇ１０９９）またはＥ４３０Ｇ（Ｇ１０９７）との組み合わせでは見られなかった特徴であった（図２７）。
Ｇ１１２７は、ＧＬ−２０４５骨格内に挿入された２つの変異（Ｔ２９９ＡおよびＥ３４５Ｒ）を有するストラドマーであり、ＦｃγＲへの標準結合を低減し、補体結合を改良するために生成された。驚くべきことに、図２５に示されるように、Ｇ１１２７は、Ｔ２９９Ａ点変異に基づいて予想されたように低減された標準結合を示さなかった。しかしながら、Ｇ１１２７が用量依存性様式でＣＤＣ活性を阻害することができたため（５μｇ／ｍＬのＩＣ５０）、補体タンパク質に結合するＧ１１２７の能力は親ストラドマー（Ｇ１０９９）の非グリコシル化バリアントと比較して、改良された（図３１）。このＩＣ５０は、Ｇ１０９９のＩＣ５０よりも実質的に低い（３０μｇ／ｍＬ）。Ｇ１１２７のゲル分析は、Ｇ１１２７が優先的に多量体化されて六量体ストラドマーを形成することを更に示し、これは、Ｔ２９９Ａ変異単独（Ｇ１０９９）またはＥ４３０Ｇ（Ｇ１０９７）との組み合わせでは見られなかった特徴であった（図２７）。
本明細書に記載のストラドマー（例えば、Ｇ１０９８、Ｇ１１２６、およびＧ１１２７）は、Ｔ２９９Ａ非グリコシル化変異を含有するにもかかわらず、それらが予想外に保持された標準結合を保持したという点で、ＧＬ−２０４５のようであり、ＣＤＣ阻害によって測定されるように、補体タンパク質への保持された結合を更に示した。いくつかの実施形態において、本明細書に記載のストラドマー化合物は、ＧＬ−２０４５と比較して、標準Ｆｃγ受容体および補体タンパク質の両方への優れた結合を示す。理論に束縛されるものではないが、この増加した結合は、親化合物の非グリコシル化非六量体バージョンに存在しない、六量体Ｇ１０９８、Ｇ１１２６、およびＧ１１２７化合物に存在する結合力の増加に起因し得る。
この研究の結果の全体的な要約を、表４に提供する。
実施例４−六量体ストラドマーの改良された補体結合
Ｃ１ｑ、Ｃ３、Ｃ４、およびＣ５への六量体ストラドマーの結合を評価するための研究を行う。
Ｃ１ｑ結合について、９６ウェルプレートを、ＰＢＳ中、Ｃ１ｑ（Ｓｉｇｍａカタログ番号：Ｃ１７４０、１μｇ／ｍＬ）で一晩コーティングする。コーティングの後、プレートを標準洗浄緩衝液（ＰＢＳ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で３回洗浄し、ブロッキング緩衝液（１％のＢＳＡ＋１−０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）で室温で２時間ブロッキングする。ブロッキングの後、プレートをブロッキング緩衝液中に希釈した化合物（１００μＬ／ウェル）とともにインキュベートし、標準洗浄緩衝液で３回洗浄する。Ｃ１ｑ結合化合物を、１：５０００のビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ１（カタログ番号：５５５８６９、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）およびストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号：７１００−０５ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）（１００μＬ／ウェル）とともに室温で１時間インキュベートし、続いて洗浄緩衝液で３回洗浄し、その後、製造元のプロトコルに従って標準的なＴＭＢ方法を使用して１５分間発色させることによって検出する。吸光度を４５０ｎｍで読み取る。
Ｃ３結合について、９６ウェルプレートをＣ３補体構成要素（Ｑｕｉｄｅｌ番号Ａ４０１、ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬ）で４℃で一晩コーティングし、その後、３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０で３回洗浄する。プレートをＰＢＳ１×＋２％のＢＳＡ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０で室温で２時間ブロッキングする。試験される化合物（ＧＬ−２０４５、Ｇ１０９７、Ｇ１０９８、Ｇ１０９９、Ｇ１１２６、またはＧ１１２７）を、ブロッキング緩衝液中で、結合Ｃ３とともに室温で２時間インキュベートし、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。Ｃ３と相互作用する化合物を、室温で１時間、１×ＰＢＳ−ＢＳＡ−２％ＢＳＡ−０．５％Ｔｗｅｅｎ２０（１００μＬ／ウェル）中のビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ１（ＢＤ＃５５５ ８６９）＋ストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号：７１００−０５ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）１／５０００（ｅａ．）により検出し、続いて４回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。ＴＭＢ基質試薬１００μＬ／ウェルで２０分間発色させ、５０μＬのＨ２ＳＯ４（１Ｍ）で反応を停止させ、４５０／６５０ｎｍで吸光度を読み取る。
Ｃ４結合について、９６ウェルプレートをＣ４補体構成要素（Ｑｕｉｄｅｌ番号Ａ４０２、ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬ）でコーティングする。１ウェル当たり１００μＬのＣ４補体構成要素を添加し、４℃で一晩インキュベートし、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。プレートをブロッキング緩衝液（ＰＢＳ１×＋２％のＢＳＡ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）中で室温で２時間ブロッキングし、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。試験される化合物（ＧＬ−２０４５、Ｇ１０９７、Ｇ１０９８、Ｇ１０９９、Ｇ１１２６、またはＧ１１２７）を、ブロッキング緩衝液中で、室温で２時間、Ｃ４に対して反応させ、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。結合化合物を、室温で１時間、１００μＬのブロッキング緩衝液中のビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ１（ＢＤ番号：５５５ ８６９）＋ストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号：７１００−０５ ＳｏｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）１／５０００（ｅａ．）で検出する。ＴＭＢ基質試薬で室温で２０分間発色させ、５０μＬのＨ２ＳＯ４（１Ｍ）で反応を停止させる。吸光度を４５０／６５０ｎｍで読み取る。
Ｃ５結合について、９６ウェルプレートをＣ５補体構成要素（Ｑｕｉｄｅｌ番号Ａ４０３、ＰＢＳ中１μｇ／ｍＬ）でコーティングする。１ウェル当たり１００μＬのＣ５補体構成要素を添加し、４℃で一晩インキュベートし、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。プレートをブロッキング緩衝液（ＰＢＳ１×＋２％のＢＳＡ＋０．０５％のＴｗｅｅｎ２０）中で室温で２時間ブロッキングし、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。試験される化合物（ＧＬ−２０４５、Ｇ１０９７、Ｇ１０９８、Ｇ１０９９、Ｇ１１２６、またはＧ１１２７）を、ブロッキング緩衝液中で、室温で４時間、Ｃ５に対して反応させ、その後、３回洗浄する（３００μＬのＰＢＳ１×０．１％のＴｗｅｅｎ２０）。結合化合物を、室温で１時間、ビオチン化マウス抗ヒトＩｇＧ１（ＢＤ番号：５５５ ８６９）＋ストレプトアビジン−ＨＲＰ（カタログ番号：７１００−０５ Ｓｏｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）（１００μＬのブロッキング緩衝液中それぞれ１／５０００希釈）で検出する。ＴＭＢ基質試薬で室温で２０分間発色させ、５０μＬのＨ２ＳＯ４（１Ｍ）で反応を停止させた。吸光度を４５０／６５０ｎｍで読み取る。
これらの研究の結果は、六量体ストラドマーが親ストラドマー（ＧＬ−２０４５）または親ストラドマーの非グリコシル化非六量体バリアント（Ｇ１０９７およびＧ１０９９）と同じくらい効果的か、それらよりも効果的に補体構成要素に結合することを示す。
実施例７−関節炎の治療のための一般的なストラドマー
リウマチ性関節炎のマウスモデルの治療において本明細書に提供される一般的なストラドマー（六量体ストラドマーを含む）の有効性を評価する。不完全フロイントアジュバントで乳化したＩＩ型ウシコラーゲン（４ｍｇ／ｍＬ）で、０および２１日目にＤＢＡマウスを免疫化する、コラーゲン誘導性関節炎モデルを使用する。マウスの体重を毎週量り、関節炎の徴候について毎日スコア化する。各足をスコア化し、４つ全てのスコアの合計を関節炎指数（ＡＩ）として記録する。最大可能ＡＩは１６であり、以下の通りである：０＝目に見える作用なし；１＝１本の指が浮腫および／または紅斑；２＝２つの関節が浮腫および／または紅斑；３＝３つ以上の関節が浮腫および／または紅斑；４＝肢の変形および関節の強直を含む全ての足および指が重度の関節炎。２２日目を起点に、平均ＡＩに基づいてコラーゲン免疫化マウスを治療群に分類する。約１４日間の治療日にわたってＡＩを測定し、その後マウスを安楽死させる。治療日の間、マウスを、表１に記載される一般的なストラドマー、対照ストラドマー（ＧＬ−２０４５）、ＰＢＳ、または陽性対照としてプレドニゾロンで処置する。
研究の結果は、本明細書に記載の一般的なストラドマーで処置されたマウスが対照と比較して重症ではない関節炎を呈することを示す。
実施例５−ＩＴＰの治療および予防のための一般的なストラドマー
特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）における一般的なストラドマー（六量体ストラドマーを含む）の効果を評価するために研究を行う。血小板上のインテグリン受容体をコーティングするマウスインテグリン抗ＩＩｂ抗体に曝露した後に低血小板計数が誘導される。簡潔に、採血および血小板計数後１日目に、８週間齢のＣ５７Ｂｌ／６マウスに、ＧＬ−２０４５または表１に記載の一般的なストラドマーのいずれかを注射する。採血および血小板計数後２日目に、血小板喪失を誘導するために腹腔内注射によって投与される２００μＬのＰＢＳ中２μｇの抗体用量のマウス抗ＩＩｂ抗体でマウスを処置する。血小板計数のための採血および抗ＩＩｂ抗体注射は、３、４、および５日目も継続する。ＩＶＩＧ陽対照は２〜５日目に毎日投与される。血小板計数は、Ｄｒｅｗ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｈｅｍａｖｅｔ ９５０血球計数板を用いて数える。一般的なストラドマーおよび対照ストラドマーは、２日目に１回投与される。尾静脈ニッキングにより血液を収集し、クエン酸塩と混合して凝固を防止する。
この研究の結果は、本明細書に記載の一般的なストラドマーで処置されたマウスが対照処置マウスより重症ではないＩＴＰを呈することを示す。
実施例６−実験的自己免疫神経炎の治療における一般的なストラドマー
実験的自己免疫神経炎（ＥＡＮ）の動物モデルにおける一般的なストラドマー（六量体ストラドマーを含む）の効果を評価するために研究を行う。マウスＥＡＮモデルは、ヒト急性炎症性脱髄性多発ニューロパチーに広く使用されている動物モデルである。簡潔に、ルイスラットを、全ウシ末梢神経骨髄ミエリンで免疫化し、対照（ＧＬ−２０４５およびＩＶＩＧ）および実験処置群（表に記載される一般的なストラドマーのいずれか）にランダム化する。９日目または１０日目に始まる、一般的に体重減少である臨床的欠損の発症時に、２日間連続で、ＩＶで上記の示される処置でラットを処置する。
ＥＡＮラットは、臨床的に、電気生理学的に、および組織学的に評価される。臨床疾患重症度は、毎日の臨床的重症度分類および体重変化によって評価される。電気生理学的研究には、化合物筋活動電位（ＣＡＭＰ）および運動神経伝導速度（ＭＣＶ）の振幅の検査が含まれる。疾患のピーク時に、各群からのラットの一部を屠殺し、坐骨神経を収集し、組織病理学的変化を分析する。
この研究の結果は、本明細書に記載の一般的なストラドマーで処置されたラットが対照処置マウスより重症ではないＥＡＮを呈することを示す。

Claims (76)

  1. ストラドマー単位であって、
    少なくとも１つのホモ二量体ＩｇＧ１ Ｆｃドメインであって、前記Ｆｃドメインの２３６、２６７、２６８、３２４、および／または２９９位のうちの少なくとも１つに対応する１つ以上の点変異を含む、少なくとも１つのホモ二量体ＩｇＧ１ Ｆｃドメインと、
    少なくとも１つの多量体化ドメインと、を含む、ストラドマー単位。
  2. ２３６位に点変異を含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
  3. 点変異Ｇ２３６Ｒを含む、請求項２に記載のストラドマー単位。
  4. 前記Ｆｃドメインが、２３３位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
  5. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む、請求項４に記載のストラドマー単位。
  6. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む、請求項４に記載のストラドマー単位。
  7. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｓ２６７Ｑ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む、請求項４に記載のストラドマー単位。
  8. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｓ２６７Ｇ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む、請求項４に記載のストラドマー単位。
  9. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｓ２６７Ｋ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む、請求項４に記載のストラドマー単位。
  10. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｓ２６７Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む、請求項４に記載のストラドマー単位。
  11. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｄ、Ｓ２６７Ｑ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む、請求項４に記載のストラドマー単位。
  12. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｑ、Ｓ２６７Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む、請求項４に記載のストラドマー単位。
  13. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｇ２３６Ｄ、Ｓ２６７Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む、請求項４に記載のストラドマー単位。
  14. 前記Ｆｃドメインが、２６７、２６８、３２４、および２９９位に点変異を含み、前記２９９位の点変異は、Ｔ２９９ＳまたはＴ２９９Ｃ以外の点変異である、請求項１に記載のストラドマー単位。
  15. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｓ２６７Ｑ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＴ２９９Ａを含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
  16. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｓ２６７Ｄ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＴ２９９Ａを含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
  17. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｓ２６７Ｈ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＴ２９９Ａを含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
  18. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＴ２９９Ａを含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
  19. 前記Ｆｃドメインが、３２８位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
  20. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、およびＬ３２８Ｆを含む、請求項１９に記載のストラドマー単位。
  21. 前記Ｆｃドメインが、２３４および２３５位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
  22. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、およびＳ３２４Ｔを含む、請求項２１に記載のストラドマー単位。
  23. 前記Ｆｃドメインが、２３３、２３４、２３５位に点変異、および２３６位に欠失を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
  24. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｅ２３３Ｐ、Ｌ２３４Ｖ、Ｌ２３５Ａ、Ｓ２６７Ｅ、Ｈ２６８Ｆ、Ｓ３２４Ｔ、および２３６位に欠失を含む、請求項２３に記載のストラドマー単位。
  25. 前記Ｆｃドメインが、２９９位に点変異を含み、前記２９９位の点変異は、Ｔ２２９ＳまたはＴ２９９Ｃ以外の点変異である、請求項１に記載のストラドマー単位。
  26. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｔ２９９Ａを含む、請求項２５に記載のストラドマー単位。
  27. 前記Ｆｃドメインが、４３０位に点変異を更に含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
  28. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｔ２９９ＡおよびＥ４３０Ｇを含む、請求項２７に記載のストラドマー単位。
  29. 前記Ｆｃドメインが、ＩｇＧ１のＥＥＭまたはＤＥＬ多型のいずれかを含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
  30. 前記多量体化ドメインが、ＩｇＧ２ヒンジ、イソロイシンジッパー、およびＧＰＰドメインからなる群から選択され、前記ストラドマー単位を多量体化することができる、請求項１に記載のストラドマー単位。
  31. 前記多量体化ドメインが、前記ストラドマー単位の多量体を形成する、請求項１に記載のストラドマー単位。
  32. 前記ストラドマー単位の前記多量体が、高次多量体である、請求項３１に記載のストラドマー単位。
  33. 前記ストラドマー単位が、低親和性Ｆｃγ受容体への改良された結合を呈する、請求項１に記載のストラドマー単位。
  34. 前記ストラドマー単位が、２９７、２９８、または２９９に変異を含み、Ｃ１ｑに結合し、ＣＤＣを阻害し、かつＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、ＦｃγＲＩＩｂ、および／またはＦｃγＲＩＩＩへの結合を保持する、請求項１に記載のストラドマー単位。
  35. 前記ストラドマー単位が、２３６、２６７、２６８、３２４、および／または２９９位のうちの１つ以上に点変異を含まない同一の構造のストラドマーと比較して、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、および／またはＦｃγＲＩＩＩへの改良または保持された結合を呈する、請求項１に記載のストラドマー単位。
  36. 前記ストラドマーが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、リーダー配列と、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１ＣＨ２、およびＩｇＧ１ ＣＨ３を含むＦｃドメインと、ＩｇＧ２ヒンジと、を含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
  37. 前記ストラドマーが、配列番号７〜２６および配列番号２８〜２９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載のストラドマー単位。
  38. 前記ストラドマーが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、リーダー配列と、ＩｇＧ２ヒンジと、ＩｇＧ１ヒンジと、ＩｇＧ１ ＣＨ２およびＩｇＧ１ ＣＨ３を含むＦｃドメインと、を含む、請求項１に記載のストラドマー単位。
  39. 前記ストラドマーが、配列番号２７に従う群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３８に記載のストラドマー単位。
  40. ストラドマー単位であって、
    少なくとも１つのホモ二量体ＩｇＧ１Ｆｃドメインであって、前記ＩｇＧ１Ｆｃドメインの２９９位に点変異、ならびに４３０、４４０、および／または３４５位に１つ以上の追加の点変異を含む、ホモ二量体ＩｇＧ１Ｆｃドメインと、
    前記少なくとも１つのホモ二量体ＩｇＧ１ＦｃドメインのＣ末端に位置する、ＩｇＧ２ヒンジ多量体化ドメインと、を含み、
    前記ストラドマー単位が、六量体ストラドマー構造に多量体化される、ストラドマー単位。
  41. 前記Ｆｃドメインが、２９９、３４５、４３０、および４４０位に点変異を含む、請求項４０に記載のストラドマー単位。
  42. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｔ２９９Ａ、Ｅ３４５Ｒ、Ｅ４３０Ｇ、およびＳ４４０Ｙを含む、請求項４０に記載のストラドマー単位。
  43. 前記Ｆｃドメインが、２９９、４３０、および４４０位に点変異を含む、請求項４０に記載のストラドマー単位。
  44. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｔ２９９Ａ、Ｅ４３０Ｇ、およびＳ４４０Ｙを含む、請求項４０に記載のストラドマー単位。
  45. 前記Ｆｃドメインが、２９９および３４５位に点変異を含む、請求項４０に記載のストラドマー単位。
  46. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｔ２９９ＡおよびＥ３４５Ｒを含む、請求項４０に記載のストラドマー単位。
  47. 前記Ｆｃドメインが、点変異Ｔ２９９Ａを含む、請求項４０に記載のストラドマー単位。
  48. 前記ストラドマー単位の前記多量体が、１２個のホモ二量体ストラドマー単位を含む、請求項４０に記載のストラドマー単位。
  49. 前記ストラドマー単位の前記多量体が、１８個のホモ二量体ストラドマー単位を含む、請求項４０に記載のストラドマー単位。
  50. 前記ストラドマー単位が、２９９、２４５、４３０、および／または４４０位のうちの１つ以上に点変異を含まない同一の構造のホモ二量体ストラドマー単位と比較して、補体タンパク質への改良された結合を呈する、請求項４０に記載のストラドマー単位。
  51. 前記補体タンパク質が、Ｃ１ｑである、請求項５０に記載のストラドマー単位。
  52. 前記ホモ二量体ストラドマー単位が、補体依存性細胞傷害性を阻害する、請求項５１に記載のストラドマー単位。
  53. 前記ストラドマー単位が、２９９、３４５、４３０、および／または４４０位のうちの１つ以上に点変異を含まない同一の構造のホモ二量体ストラドマー単位と比較して、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、および／またはＦｃγＲＩＩＩへの保持または改良された結合を呈する、請求項４０に記載のストラドマー単位。
  54. 前記ストラドマー単位が、低親和性Ｆｃ受容体への保持または改良された結合を呈する、請求項５３に記載のストラドマー単位。
  55. 前記ストラドマーが、アミノ末端からカルボキシ末端にかけて、リーダー配列と、ＩｇＧ１ヒンジ、ＩｇＧ１ ＣＨ２、およびＩｇＧ１ ＣＨ３を含むＦｃドメインと、ＩｇＧ２ヒンジと、を含む、請求項４０に記載のストラドマー単位。
  56. 前記ストラドマーが、配列番号３０〜３２からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項５５に記載のストラドマー単位。
  57. 前記ＩｇＧ１Ｆｃドメインが、ＤＥＬまたはＥＥＭ多型のいずれかを含む、請求項４０に記載のストラドマー単位。
  58. 請求項１〜５７のいずれか１項に従う２つ以上のストラドマー単位を含む、クラスターストラドマー。
  59. 請求項５８に記載のクラスターストラドマーを含む、組成物。
  60. 請求項４０〜５７のいずれか１項に記載の多量体化ホモ二量体を含む高分子量種多量体を含む、濃縮された異種組成物。
  61. 前記高分子量多量体が、六量体バンド以上の多量体を含む、請求項６０に記載の組成物。
  62. 前記高分子量多量体が、十二量体バンド以上の多量体を含む、請求項６０に記載の組成物。
  63. 前記高分子量多量体が、十八量体バンド以上の多量体を含む、請求項６０に記載の組成物。
  64. 補体媒介疾患、抗体媒介疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー、または血液障害を治療または予防する方法であって、治療または予防を必要とする対象に請求項１〜５８のいずれか１項に記載のストラドマー、または請求項５９〜６３のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
  65. 前記抗体媒介疾患が、グッドパスチャー病；固形臓器移植拒絶；同種移植片の抗体媒介拒絶；黄斑変性症；寒冷凝集素症；溶血性貧血；視神経脊髄炎；神経性筋強直症；辺縁系脳炎；モルヴァン症候群；重症筋無力症；ランバート・イートン筋無力症症候群；自律神経性ニューロパチー；アルツハイマー病；アテローム動脈硬化症；パーキンソン病；全身硬直症候群または過剰驚愕症；再発性自然流産；ヒューズ症候群；全身性エリテマトーデス；自己免疫性小脳性運動失調症；強皮症、シェーグレン症候群を含む結合組織病；多発性筋炎；リウマチ性関節炎；結節性多発性動脈炎；ＣＲＥＳＴ症候群；心内膜炎；橋本甲状腺炎；混合性結合組織病；チャネル病；小児自己免疫性溶連菌関連性精神神経障害（ＰＡＮＤＡＳ）；Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体、特に、ＮＲ１、コンタクチン関連タンパク質２、ＡＭＰＡＲ、ＧｌｕＲ１／ＧｌｕＲ２、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、ＧｌｙＲアルファ１ａ、アセチルコリン受容体、ＶＧＣＣ Ｐ／Ｑ型、ＶＧＫＣ、ＭｕＳＫ、ＧＡＢＡ（Ｂ）Ｒに対する抗体に関連する臨床病態；アクアポリン−４；および天疱瘡からなる群から選択される、請求項６４に記載の方法。
  66. 前記自己免疫疾患が、リウマチ性関節炎である、請求項６４に記載の方法。
  67. 前記自己免疫疾患が、自己免疫関連視力低下または難聴である、請求項６４に記載の方法。
  68. 前記補体媒介疾患が、重症筋無力症、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、膜性腎症、視神経脊髄炎、同種移植片の抗体媒介拒絶、ループス腎炎、および膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）からなる群から選択される、請求項６４に記載の方法。
  69. 前記血液障害が、鎌状赤血球症である、請求項６４に記載の方法。
  70. 前記ストラドマーが、静脈内に、皮下に、経口に、腹腔内に、舌下に、頬側に、経皮に、真皮下埋め込みによって、または筋肉内に投与される、請求項６４に記載の方法。
  71. 補体媒介疾患、抗体媒介疾患、自己免疫疾患、炎症性疾患、アレルギー、または血液障害に関連する、またはそれによって生じる疼痛を治療または予防する方法であって、治療または予防を必要とする対象に請求項４０〜５７のいずれか１項に記載の六量体ストラドマー、または請求項６０〜６３のいずれか１項に記載の組成物を投与することを含む、方法。
  72. 前記抗体媒介疾患が、グッドパスチャー病；固形臓器移植拒絶；同種移植片の抗体媒介拒絶；黄斑変性症；寒冷凝集素症；溶血性貧血；視神経脊髄炎；神経性筋強直症；辺縁系脳炎；モルヴァン症候群；重症筋無力症；ランバート・イートン筋無力症症候群；自律神経性ニューロパチー；アルツハイマー病；アテローム動脈硬化症；パーキンソン病；全身硬直症候群または過剰驚愕症；再発性自然流産；ヒューズ症候群；全身性エリテマトーデス；自己免疫性小脳性運動失調症；強皮症、シェーグレン症候群を含む結合組織病；多発性筋炎；リウマチ性関節炎；結節性多発性動脈炎；ＣＲＥＳＴ症候群；心内膜炎；橋本甲状腺炎；混合性結合組織病；チャネル病；小児自己免疫性溶連菌関連性精神神経障害（ＰＡＮＤＡＳ）；Ｎ−メチル−Ｄ−アスパラギン酸受容体、特に、ＮＲ１、コンタクチン関連タンパク質２、ＡＭＰＡＲ、ＧｌｕＲ１／ＧｌｕＲ２、グルタミン酸デカルボキシラーゼ、ＧｌｙＲアルファ１ａ、アセチルコリン受容体、ＶＧＣＣ Ｐ／Ｑ型、ＶＧＫＣ、ＭｕＳＫ、ＧＡＢＡ（Ｂ）Ｒに対する抗体に関連する臨床病態；アクアポリン−４；および天疱瘡からなる群から選択される、請求項７１に記載の方法。
  73. 前記自己免疫疾患が、リウマチ性関節炎または自己免疫関連視力低下もしくは難聴である、請求項７１に記載の方法。
  74. 前記補体媒介疾患が、重症筋無力症、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ）、非定型溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、発作性夜間ヘモグロビン尿症（ＰＮＨ）、膜性腎症、視神経脊髄炎、同種移植片の抗体媒介拒絶、ループス腎炎、および膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）からなる群から選択される、請求項７１に記載の方法。
  75. 前記血液障害が、鎌状赤血球症である、請求項７１に記載の方法。
  76. 前記ストラドマーが、静脈内に、皮下に、経口に、腹腔内に、舌下に、頬側に、経皮に、真皮下埋め込みによって、または筋肉内に投与される、請求項７１に記載の方法。
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