JP2019528753A - 高移動度グループｂｏｘｉ突然変異体 - Google Patents

高移動度グループｂｏｘｉ突然変異体 Download PDF

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Abstract

本開示は、ＨＭＧＢ１バリアントタンパク質をコードする外因性核酸を含有するように改変された、改変ウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに関する。それは、少なくとも部分的には、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする核酸を含有するように改変され、化学療法と共に相乗効果を達成することができるＨＭＧＢ１バリアントまたはその断片を発現するワクシニアウイルスを提供する。さらに、本開示は、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスおよび様々ながんの処置においてそれらを使用する方法を提供する。

Description

認可情報
本開示は、国立衛生研究所によって授与されたＣＡ１４０２１５の下、政府支援でなされた。政府は、本開示において特定の権利を有する。
参照による援用
本明細書において陳述されるすべての刊行物、特許、特許出願、およびＮＣＢＩ受託番号は、あたかも各個々の刊行物、特許、または特許出願が詳細かつ個々に参考として援用されて示され、かつあたかもそれらの実体が提示されるのと同じ程度に参考として本明細書中に援用される。本明細書中で使用されるような用語と、援用された参考文献中に定義される用語との間に矛盾がある場合は、本開示の定義が支配する。
相互参照
本出願は、２０１６年９月２１日に出願された米国仮出願番号第６２／３９７，５２３号の利益を主張しており、この仮出願は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
要旨
一実施形態は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、外因性核酸が配列番号１３、またはその断片と少なくとも約８０％相同であるヌクレオチド配列を含む、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。一部の実施形態では、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸において、外因性核酸は、配列番号１３、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１５、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１５の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３の少なくとも１つを含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１５の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１５の残基１〜２０を含まない。
一実施形態は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、ＨＭＧＢ１バリアントがその第１（ＮＬＳ１）、第２の核局在化シグナル（ＮＬＳ２）、またはその任意の組合せの中に突然変異を含む、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、ｂｏｘＡ、ｂｏｘＢ、またはその任意の組合せの中に突然変異をさらに含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１５、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１５の４３および６５位にシステイン残基を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１５の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３の少なくとも１つを含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１５の残基２１〜７４、１０９〜１２８、または１７０〜２０３を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１５の残基１〜２０を含まない。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含み、前記核酸配列は、配列番号１３、またはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同である。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列に作動可能に連結した抗体またはその抗原結合性断片をコードする外因性核酸配列を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列に作動可能に連結したヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸配列をさらに含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＮＬＳ１中に突然変異を含むＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＮＬＳ１中の突然変異は、ＨＭＧＢ１バリアントの細胞質再配置を促進する。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＮＬＳ２中に突然変異を含むＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＮＬＳ２中の突然変異は、ＨＭＧＢ１バリアントの細胞質再配置を促進する。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＮＬＳ１およびＮＬＳ２中に突然変異を含むＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＮＬＳ１およびＮＬＳ２中の突然変異は、ＨＭＧＢ１バリアントの細胞質再配置を促進する。
一実施形態は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、ＨＭＧＢ１バリアントがヒトＨＭＧＢ１（配列番号１６）と９５％未満相同であるか、またはそれと等しい、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１６の残基１〜８５、８９〜１０８、および１５０〜１８３の少なくとも１つを含む。一部の実施形態では、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１６の残基１〜８５を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１６の残基８９〜１０８を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１６の残基１５０〜１８３を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１６の残基１〜８５、８９〜１０８、および１５０〜１８３を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１６の残基３５、４２、８９、１８１、１８９、および２０２の１つまたは複数に突然変異を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１６の残基３５、４２、８９、１８１、１８９、および２０２に突然変異を含む。
一実施形態は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１６の残基２３、４５、８９〜１０８、および１５０〜１８３を含み、ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１６と９５％未満相同であるか、またはそれと等しいアミノ酸配列を含む、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１６の残基２３〜４５、８９〜１０８、１５０〜１８３を含む。一部の実施形態では、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１６の残基３５、４２、８９、１８１、１８９、および２０２の１つまたは複数に突然変異を含む。一部の実施形態では、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１６の残基３５、４２、８９、１８１、１８９、および２０２に突然変異を含む。
一実施形態は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、外因性核酸が、配列番号１４、またはその断片と少なくとも約８０％相同であるヌクレオチド配列を含む、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、外因性核酸は、配列番号１４、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１７、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１７の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３の少なくとも１つを含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１７の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１７の残基１〜２０を含まない。
一実施形態は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、外因性核酸が、配列番号１９、またはその断片と少なくとも約８０％相同であるヌクレオチド配列を含む、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、外因性核酸は、配列番号１４、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１７、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるアミノ酸配列を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１７の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３の少なくとも１つを含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１７の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１７の残基１〜２０を含まない。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＮＬＳ２中に突然変異を含むＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＮＬＳ２中の突然変異は、ＨＭＧＢ１バリアントの細胞質再配置を促進する。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＮＬＳ１およびＮＬＳ２中に突然変異を含み、ＮＬＳ１およびＮＬＳ２中の突然変異は、ＨＭＧＢ１バリアントの細胞質再配置を促進する。一部の実施形態では、ワクシニアウイルスから発現されるＨＭＧＢ１バリアントは、細胞質中に分泌される。一部の実施形態では、ワクシニアウイルスからのＨＭＧＢ１バリアントの発現は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を欠く以外は同一のワクシニアウイルスと比較して、細胞自食作用を増強する。一部の実施形態では、ＨＭＧＢ１バリアントの発現は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を欠く以外は同一のワクシニアウイルスと比較して、ワクシニアウイルスの腫瘍特異的複製を増強する。一部の実施形態では、ＨＭＧＢ１バリアントの発現は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を欠く以外は同一のワクシニアウイルスと比較して、ワクシニアウイルスによって感染された腫瘍細胞に対する細胞傷害性免疫応答を増強する。一部の実施形態では、ＨＭＧＢ１バリアントの発現は、ワクシニアウイルスによって感染された腫瘍細胞の近傍の腫瘍細胞に対する細胞傷害性免疫応答を誘導し、近傍の腫瘍細胞は、ワクシニアウイルスによって感染しない。一部の実施形態では、ワクシニアウイルスは、そのゲノム中に１つまたは複数の欠失を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ワクシニアウイルスは、チミジンキナーゼ遺伝子の欠失を含み、外因性核酸は、チミジンキナーゼ遺伝子座に挿入される。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ワクシニアウイルスは、１つまたは複数のビルレンス遺伝子の欠失を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、細胞外エンベロープウイルス（ＥＥＶ）である。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ヒアルロニダーゼ酵素をさらに発現する。一部の実施形態では、ワクシニアウイルスは、ヒアルロニダーゼ酵素を発現し、ヒアルロニダーゼ酵素は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸に作動可能に連結したヒアルロニダーゼ酵素をコードする外因性核酸を含まない以外は同一のワクシニアウイルスの拡散と比較して、腫瘍微小環境中でのワクシニアウイルスの拡散を増加させる。一部の実施形態では、ワクシニアウイルスは、ヒアルロニダーゼ酵素を発現し、ヒアルロニダーゼ酵素は、腫瘍微小環境中でのワクシニアウイルスの拡散を増加させる。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、循環中のＨＭＧＢ１バリアントを安定化させるタンパク質をさらに発現する。一部の実施形態では、循環中のＨＭＧＢ１バリアントを安定化させるタンパク質は、免疫グロブリンまたはそのドメインである。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスにおいて、免疫グロブリンはＩｇＥである。一部の実施形態では、免疫グロブリンドメインは、Ｆｃドメインである。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含み、ＩｇＥをコードするさらなる外因性核酸配列がＨＭＧＢ１バリアントをコードする配列の上流に融合される。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、排出ポンプ遮断剤をさらに発現する。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、化学療法感作剤をさらに発現する。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、化学療法に対する感作を増強する改変を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、キメラ抗原受容体Ｔ細胞を誘引する改変を含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＣＡＲ Ｔ細胞に基づく療法の効能を増強する。
一実施形態は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする単離されたポリヌクレオチドであって、配列番号１３、またはその断片と少なくとも８５％相同である配列を含む、ポリヌクレオチドを提供する。一部の実施形態では、ポリヌクレオチドは、配列番号１５、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるアミノ酸配列を含む、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスにおいて、ＨＭＧＢ１バリアントは、その第１（ＮＬＳ１）または第２の核局在化シグナル（ＮＬＳ２）に突然変異を含む。一部の実施形態では、ＨＭＧＢ１バリアントは、ｂｏｘＡまたはｂｏｘＢ中に突然変異をさらに含む。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスにおいて、ＨＭＧＢ１バリアントは、ｂｏｘＡまたはｂｏｘＢ中に突然変異をさらに含む。一部の実施形態では、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１５の４３および６５位にシステイン残基を含む。一部の実施形態では、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１５の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜１８３の少なくとも１つを含む。一部の実施形態では、前記ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１５の残基２１〜１０５、１０８〜１８２、および１８３〜２０５を含む。
一実施形態は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは本開示に記載される単離されたポリヌクレオチド、可溶化剤、および賦形剤を含む医薬組成物を提供する。一部の実施形態では、賦形剤は、緩衝剤、安定剤、酸化防止剤、結合剤、希釈剤、分散剤、速度制御剤、潤滑剤、流動促進剤、崩壊剤、可塑剤、保存剤のうちの１つもしくは複数、またはその任意の組合せを含む。一部の実施形態では、賦形剤は、リン酸一水素二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、ミオイノシトール、ソルビトール、またはその任意の組合せを含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、保存剤を含まない。一部の実施形態では、医薬組成物は、保存剤、希釈剤、および担体のうちの１つまたは複数をさらに含む。一部の実施形態では、医薬組成物は、さらなる活性成分またはその塩をさらに含む。一部の実施形態では、可溶化剤は、滅菌水である。一部の実施形態では、医薬組成物は、さらなる活性成分をさらに含み、さらなる活性成分は、さらなる腫瘍溶解性ウイルスである。
一実施形態は、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを産生するためのプロセスであって、（ｉ）ワクシニアウイルスに基づく核酸配列を、本開示における外因性核酸配列に作動可能に連結することによって、改変されたワクシニアウイルスＤＮＡベクターを生成すること；（ｉｉ）哺乳動物細胞に、改変されたワクシニアウイルスＤＮＡベクターをトランスフェクトすること；（ｉｉｉ）ウイルス複製にとって好適な条件で哺乳動物細胞を培養すること；および（ｉｖ）ウイルス粒子を収獲することを含む、プロセスを提供する。一部の実施形態では、哺乳動物細胞は、ＨｅＬａ細胞、２９３細胞、またはＶｅｒｏ細胞を含む。一部の実施形態では、本開示に記載される外因性核酸は、改変されたワクシニアウイルスＤＮＡベクター中で、細胞外エンベロープウイルス（ＥＥＶ）を主に含有するウイルス粒子の集団を促進する。一部の実施形態では、本開示に記載される外因性核酸は、改変されたワクシニアウイルスＤＮＡベクター中で、本開示による外因性核酸を含まない以外は同一のワクシニアウイルスＤＮＡベクターと比較して、より高力価のＨｅＬａ細胞および２９３細胞のうちの少なくとも１つをもたらす。
一実施形態は、対象に、治療有効量の本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは本開示による医薬組成物を投与することを含む、がんを処置する方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、治療有効量の本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは本開示に記載される医薬組成物の投与を含み、がんは、固形腫瘍、白血病、またはリンパ腫である。一実施形態は、対象に、治療有効量の本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは本開示による医薬組成物を投与することを含む、腫瘍を処置する方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、治療有効量の本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは本開示に記載される医薬組成物の投与を含み、腫瘍は、固形腫瘍、白血病、またはリンパ腫である。一部の実施形態では、方法は、それを必要とする対象に、治療有効量の本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは本開示に記載される医薬組成物を投与することを含む。
一実施形態は、高いバイオアベイラビリティの脂肪酸を含む腫瘍を処置する方法であって、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは本開示に記載される医薬組成物を投与することを含み、ワクシニアウイルスが、高いバイオアベイラビリティの遊離脂肪酸を含む腫瘍における腫瘍選択的複製の増加を示す、方法を提供する。一実施形態は、肥満がん患者を処置する方法であって、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは本開示に記載される医薬組成物を投与することを含み、ワクシニアウイルスが、肥満がん患者における腫瘍選択的複製の増加を示す、方法を提供する。一部の実施形態では、腫瘍選択的複製の増加は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含まない以外は同一のワクシニアウイルスの腫瘍選択的複製に対するものである。一部の実施形態では、腫瘍選択的複製の増加は、非肥満がん患者におけるワクシニアウイルスの腫瘍選択的複製に対するものである。一部の実施形態では、ワクシニアウイルスは、肥満がん患者におけるＥＥＶの割合の増加をもたらす。一部の実施形態では、肥満がん患者におけるＥＥＶの割合の増加は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含まない以外は同一のワクシニアウイルスによって産生されるＥＥＶの割合に対するものである。一部の実施形態では、肥満がん患者におけるＥＥＶの割合の増加は、非肥満がん患者においてワクシニアウイルスによって産生されるＥＥＶの割合に対するものである。
一実施形態は、化学療法後のがん再発の可能性を低下させる方法であって、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは本開示に記載される医薬製剤を投与することを含む、方法を提供する。
一実施形態は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは本開示に記載される医薬製剤を、免疫療法を含む以前の処置に失敗した対象に投与することを含む、処置方法を提供する。
一実施形態は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは本開示に記載される医薬製剤を、化学療法後にがんを再発した対象に投与することを含む、処置方法を提供する。
一実施形態は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは本開示に記載される医薬製剤を、腹膜がんを有する対象に投与することを含む、処置方法を提供する。一部の実施形態では、対象は肥満である。一部の実施形態では、方法は、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬製剤の投与を含み、さらなる療法の投与をさらに含む。一部の実施形態では、方法は、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬製剤と共に、さらなる療法の投与を含み、さらなる療法は、化学療法、放射線、腫瘍溶解性ウイルス療法と共に、さらなるウイルス、免疫調節タンパク質を用いる処置、ＣＡＲ Ｔ細胞療法、抗がん剤、またはその任意の組合せを含む。一部の実施形態では、さらなる療法は、化学療法を含む。一部の実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは本明細書に記載の医薬製剤の投与と、化学療法との組合せは、化学療法と、本明細書に記載のＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含まない以外は同一のワクシニアウイルスとの組合せと比較して、相乗効果をもたらす。一部の実施形態では、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本明細書に記載の医薬製剤と組み合わせた化学療法は、本明細書に記載のＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含まない以外は同一のワクシニアウイルスと組み合わせた化学療法よりも低用量で投与される。一部の実施形態では、方法は、同時的または連続的に投与される、さらなる療法の投与を含む。一部の実施形態では、方法は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物を投与する前に投与される、さらなる療法の連続的投与を含む。一部の実施形態では、方法は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物を投与した後に投与される、さらなる療法の連続的投与を含む。一実施形態は、がん細胞における毒性効果をもたらす方法であって、がん細胞の集団に、治療有効量の本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物を投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、治療有効量の本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物の投与を含み、がん細胞の集団中の全てではないがん細胞が腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに感染する。一部の実施形態では、非感染がん細胞の増殖は、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの直接感染なしに阻害される。一部の実施形態では、非感染がん細胞中での細胞傷害性免疫応答は、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスによる直接感染なしに誘導される。一実施形態は、対象の腫瘍中に、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアベクター、または本開示に記載される医薬製剤を導入することを含む、薬物送達のための方法を提供する。一部の実施形態では、薬物は、腫瘍受容体リガンドにコンジュゲートされたナノ粒子を含む。一実施形態は、対象におけるがんを処置するための方法であって、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに感染した細胞を投与することを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、方法は、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに基づくがん療法の効能を増加させる。一部の実施形態では、方法は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物の投与を含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物は、約１０６ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１０ＰＦＵ／ｍＬの腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを含む用量で投与される。一部の実施形態では、方法は、本開示による腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物の投与を含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物は、約５×１０９ＰＦＵ／ｍＬの腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを含む用量で投与される。一部の実施形態では、方法は、本開示による腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物の投与を含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物は、独立に、第１の期間にわたって初期用量で、第２の期間にわたって中間用量で、および第３の期間にわたって高用量で投与される。一部の実施形態では、方法は、独立に、初期用量、中間用量、および高用量の投与を含み、初期用量は中間用量より低く、中間用量は高用量より低い。一部の実施形態では、第１、第２、および第３の期間は、それぞれ、約１週間〜約３週間である。一部の実施形態では、方法は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物を投与することを含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスおよび医薬組成物は、独立に、約１ｍＬ〜約５ｍＬ、約５ｍＬ〜１０ｍＬ、約１５ｍＬ〜約２０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約３０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約５０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約１００ｍＬ〜１５０ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約３５０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約４５０ｍＬ〜５００ｍＬ、約５００ｍＬ〜７５０ｍＬ、または約７５０ｍＬ〜１０００ｍＬの容量で投与される液体剤形を含む。一部の実施形態では、方法は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物を投与することを含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物は、液体剤形、固体剤形、吸入剤形、鼻内剤形、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む剤形、マイクロ粒子を含む剤形、ポリマー剤形、またはその任意の組合せで投与される。一部の実施形態では、方法は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物を投与することを含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物は、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、または約１２週間の期間にわたって投与される。一部の実施形態では、方法は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物を投与することを含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物は、１日１回、１日２回、週１回、２週毎に１回、または３週毎に１回投与される。一部の実施形態では、方法は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物を投与することを含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物は、静脈内的に、腹腔内的に、または腫瘍内注射により投与される。一部の実施形態では、方法は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物を投与することを含み、ワクシニアウイルスまたは医薬製剤は、ボーラス注射または遅い輸注として投与される。一部の実施形態では、方法は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物を投与することを含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物の投与は、第１の用量の投与から約１時間〜約３日後に第１のピークウイルス負荷を、約３日〜約１０日後に第２のピークウイルス負荷をもたらす。一部の実施形態では、方法は、さらなる療法の投与を含み、さらなる療法は、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、または約１２週間の期間にわたって投与される。一部の実施形態では、方法は、さらなる療法の投与を含み、さらなる療法は、１日１回、１週毎に１回、２週毎に１回、または３週毎に１回投与される。一部の実施形態では、方法は、さらなる療法の投与を含み、さらなる療法は、液体剤形、固体剤形、吸入剤形、鼻内剤形、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む剤形、マイクロ粒子を含む剤形、ポリマー剤形、またはその任意の組合せで投与される。一部の実施形態では、方法は、さらなる療法の投与を含み、さらなる療法は、経口的に、静脈内的に、腫瘍内注射により、または照射により投与される。一部の実施形態では、方法は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物の、それを必要とする対象への投与を含み、対象はヒトである。一部の実施形態では、方法は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物の、それを必要とする対象への投与を含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物の投与前に、対象は、がんまたは腫瘍と診断されている。一部の実施形態では、方法は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物の、それを必要とする対象への投与を含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物の投与前に、対象は、がんまたは腫瘍と診断されており、対象は肥満である。一部の実施形態では、方法は、さらなる療法と共に、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物の、それを必要とする対象への投与を含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物またはさらなる療法の投与前に、対象はがんまたは腫瘍と診断されている。一部の実施形態では、方法は、さらなる療法と共に、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物の、それを必要とする対象への投与を含み、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物の投与前に、対象はがんまたは腫瘍と診断され、対象は肥満である。一部の実施形態では、対象は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物の投与の前、それと同時、または後に、ケトン食療法（ketogenic diet）を投与される。一部の実施形態では、対象は、本開示に記載される腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、または本開示に記載される医薬組成物の投与の前、それと同時、または後に、短期間の絶食にある。
一実施形態は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む改変ウイルスであって、外因性核酸が配列番号１３、またはその断片と少なくとも約８０％相同であるヌクレオチド配列を含む、改変ウイルスを提供する。一実施形態は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む改変ウイルスであって、ＨＭＧＢ１バリアントがその第１の核局在化シグナル（ＮＬＳ１）、第２の核局在化シグナル（ＮＬＳ２）、またはその任意の組合せの中に突然変異を含む、改変ウイルスを提供する。一実施形態は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む改変ウイルスであって、ＨＭＧＢ１バリアントがヒトＨＭＧＢ１（配列番号１６）と９５％未満相同であるか、またはそれと等しい、改変ウイルスを提供する。一実施形態は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む改変ウイルスであって、ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１６の残基２３、４５、８９〜１０８、および１５０〜１８３の少なくとも１つを含み、ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１６と９５％未満相同であるか、またはそれと等しいアミノ酸配列を含む、改変ウイルスを提供する。一実施形態は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む改変ウイルスであって、外因性核酸が配列番号１４、またはその断片と少なくとも約８０％相同であるヌクレオチド配列を含む、改変ウイルスを提供する。一実施形態は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む改変ウイルスであって、外因性核酸が配列番号１９、またはその断片と少なくとも約８０％相同であるヌクレオチド配列を含む、改変ウイルスを提供する。一部の実施形態では、改変ウイルスは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス、ポリオウイルス、ＶＳＶ、コクサッキーウイルス、レオウイルス、レンチウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、麻疹ウイルス、マラバウイルス、ニューカッスル病（ＮＤＶ）、セネカバレーウイルス、メンゴウイルス、またはミクソマビルを含む。
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、ＮＬＳ１およびＮＬＳ２を含み、ＮＬＳ１は配列番号２０を含み、ＮＬＳ２は配列番号２１を含む。
本開示の新規特徴は、特に、添付の特許請求の範囲に記載される。本開示の特徴および利点のより良い理解は、本開示の原理が使用される例示的実施形態を記載する以下の詳細な説明、およびその添付の図面を参照することによって得られる。
図１は、本開示による例示的ＨＭＧＢ１バリアントの構造および発現を示す。図１（ａ）は、ＨＭＧＢ１野生型タンパク質（ｍＨＭＧＢ１ｗｔ）と比較して、ＢｏｘＡ中に位置する第１の核局在化シグナル（ＮＬＳ１）領域、およびＢｏｘＢと酸のＣ尾部との間の第２の核局在化シグナル（ＮＬＳ２）領域中に突然変異を有し、タンパク質の５’末端にＩｇＥ配列が結合した例示的なＨＭＧＢ１バリアントタンパク質（ｍＨＭＧＢ１ｍｕｔ）の図である。図１（ｂ）は、ＨＭＧＢ１バリアントタンパク質（ｍＨＭＧＢ１ｍｕｔ）のコード配列を含むワクシニアウイルスのゲノムの図である。図１（ｃ）は、ＨＭＧＢ１野生型とＨＭＧＢ１ｍｕｔとの間の分子量の差異を示し、ワクシニアウイルス株からのＨＭＧＢ１ｍｕｔの発現を示すゲル電気泳動の画像である。図１（ｄ）は、陰性対照、ＴＫ（ウイルスチミジンキナーゼ遺伝子中に欠失を有する対照腫瘍溶解性ワクシニアウイルス）またはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔ（ウイルスチミンキナーゼ遺伝子中に欠失を有し、例示的ＨＭＧＢ１バリアント、ＨＭＧＢ１ｍｕｔの発現のためのコード配列の挿入を有する腫瘍溶解性ワクシニアウイルス）による示された細胞（Ｒｅｎｃａおよび４Ｔ１）の感染後に分泌されたＨＭＧＢタンパク質の量を示すグラフである。 同上。
図２は、腫瘍増殖に対する例示的ＨＭＧＢ１バリアント（ＨＭＧＢ１ｍｕｔ）を含有するワクシニアウイルスによる処置の効果を示す。図２（ａ）および（ｂ）は、ＰＢＳ、ＴＫ（ウイルスチミジンキナーゼ遺伝子中に欠失を有する対照腫瘍溶解性ワクシニアウイルス）、またはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔ（ウイルスチミンキナーゼ遺伝子中に欠失を有し、例示的ＨＭＧＢ１バリアント、ＨＭＧＢ１ｍｕｔの発現のためのコード配列の挿入を有する腫瘍溶解性ワクシニアウイルス）を注射した後の、ＲｅｎｃａまたはＭＣ３８腫瘍を担持するマウスにおける相対腫瘍サイズを示すグラフである。
図３は、Ｒｅｎｃａ、ＭＣ３８、４Ｔ１、およびマウス胚性線維芽細胞（ＭＥＦ）を含む４つの異なる細胞株における細胞性免疫応答に対する、ならびにマウスにおける腫瘍増殖に対する、例示的ＨＭＧＢ１バリアント（ＨＭＧＢ１ｍｕｔ）を含有するワクシニアウイルスによる処置の効果を示す。対照（ＰＢＳ）、ＴＫ（ウイルスチミジンキナーゼ遺伝子中に欠失を有する対照腫瘍溶解性ワクシニアウイルス）またはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔ（ウイルスチミンキナーゼ遺伝子中に欠失を有し、例示的ＨＭＧＢ１バリアント、ＨＭＧＢ１ｍｕｔの発現のためのコード配列の挿入を有する腫瘍溶解性ワクシニアウイルス）で処理された細胞株における、（ａ）核因子カッパ−Ｂキナーゼサブユニットベータのホスホ阻害剤（ｐＩＫＫ 誘導タンパク質１０（ＩＰ−１０）；（ｄ）腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−□）；および（ｅ）インターフェロンベータ（ＩＦＮ−□）のレベルが示される。図３（ｆ）は、ＰＢＳ、ＴＫ、またはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔで処置された腫瘍を担持するマウスにおけるＩＦＮ−□ＥＬＩＳｐｏｔアッセイにより評価されたワクシニアウイルスに対する細胞性免疫応答を示すグラフである。図３（ｇ）は、ＰＢＳ、ＴＫ、またはＴＫ−ＨＭＧＢ１による処置後の、埋め込まれた腫瘍を担持するマウスにおける相対腫瘍サイズを示すグラフである。 同上。 同上。 同上。
図４は、細胞株および腫瘍担持マウスにおける、ウイルス複製および腫瘍細胞生存率に対する、例示的ＨＭＧＢ１バリアント（ＨＭＧＢ１ｍｕｔ）を含有するワクシニアウイルスによる処置の効果を示す。図４（ａ）は、ワクシニアウイルスからのＴＫ発現と比較した、ＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔを発現したＲｅｎｃａ、ＭＣ３８、および４Ｔ１細胞中でのウイルス複製の増加を示すグラフを含有する。図４（ｂ）は、ＴＫまたはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔによる処置後のＲｅｎｃａおよびＭＣ３８細胞の生存率を示すグラフを含む。図４（ｃ）は、ＴＫまたはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔで処置されたＲｅｎｃａ細胞由来腫瘍を担持するマウスにおけるウイルス遺伝子発現を示す。図４（ｄ）は、ＴＫまたはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔによる処置後の４Ｔ１細胞およびＭＥＦの生存率を示すグラフを含有する。図４（ｅ）は、ＴＫまたはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔで処置されたＭＣ３８細胞由来腫瘍を担持するマウスにおけるウイルス遺伝子発現を示す。図４（ｆ）は、全身におけるｉｎ ｖｉｖｏでのウイルス複製を示し、（ｇ）は、ＴＫまたはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔで処置された免疫欠損マウスの腫瘍中でのウイルス複製を示す。 同上。
図５は、細胞株における自食作用およびウイルス複製に対する例示的ＨＭＧＢ１バリアント（ＨＭＧＢ１ｍｕｔ）を含有するワクシニアウイルスによる処置の効果を示す。軽鎖３（ＬＣ３）は、自食作用のマーカーとして使用される可溶性タンパク質である。図５（ａ）は、ＰＢＳ、ＴＫ、またはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔで処理された細胞株中のＬＣ３＋細胞のパーセンテージを示すグラフである。図５（ｂ）は、ＴＫまたはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔのみで、またはバフィロマイシンＡまたはＬＹ２９４００２などの自食作用胞成熟の阻害剤と組み合わせて処理されたＲｅｎｃａ、ＭＣ３８、および４Ｔ１細胞株中でのウイルス複製を示すグラフを含有する。 同上。
図６は、細胞株および腫瘍担持マウスにおけるウイルス複製に対するＡｔｇ５ノックダウンおよび脂肪酸の効果を示す。図６（ａ）は、Ａｔｇ５を標的とするｓｉＲＮＡをトランスフェクトしていない、またはトランスフェクトしたＨＣＴ１１６細胞中での時間の関数としてのウイルス複製を示すグラフである。図６（ｂ）は、脂肪酸阻害剤であるセルレニンで処理していない、または処理したＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞中での時間の関数としてのウイルス複製を示すグラフである。図６（ｃ）は、対照食または高脂肪食を給餌したマウスにおけるＴＫまたはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔ発現に関する腹腔に埋め込まれた腫瘍からのウイルス遺伝子発現を示す生物発光画像である。図６（ｄ）は、対照食または高脂肪食（ＨＦＤ）を給餌したマウスにおける処置後３日目のＴＫまたはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔ発現に関する腹腔に埋め込まれた腫瘍からのウイルス遺伝子発現を定量するグラフである。 同上。
図７は、腫瘍細胞生存率および腫瘍増殖に対する、ＰＢＳ、ＴＫ、もしくはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔのみ、または化学療法剤パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））との組合せの効果を示す。図７（ａ）は、ＰＢＳ、ＴＫ、またはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔで処理されたＵＣＩ−１０１細胞から採取した培地を供給した後のパクリタキセルへの曝露後の腫瘍細胞の生存率を示すグラフである。図７（ｂ）は、パクリタキセル、ＴＫ、およびＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔの示された組合せで処置したマウスにおける時間の関数としての相対腫瘍サイズを示す。
図８は、ワクシニア株のみ、またはマトリックスメタロプロテイナーゼ−８（ＭＭＰ８）発現もしくはヒアルロニダーゼＰＨ２Ｏの発現との組合せの効果を示す。図８（ａ）は、ワクシニア株（ＷＲ）またはＭＭＰ８もしくはＰＨ２Ｏも発現する株で処置したマウスにおける腫瘍からのウイルス遺伝子発現を示す生物発光画像を含有する。図８（ｂ）は、ワクシニア株のみ（ＷＲ ＴＫのみ）、ワクシニア株とＭＭＰ８発現（ＷＲ ＴＫ−ｍｍｐ８）、またはワクシニア株とＰＨ２０発現（ＷＲ ＴＫ−ｐｈ２０）による処置に関する生物発光イメージングデータ（ｎ＝５）の定量化を示す。ＰＨ２０の発現は、ウイルス拡散の増加をもたらした。
図９は、腫瘍体積に対する、例示的なＨＭＧＢ１バリアント（ＨＭＧＢ１ｍｕｔ）のみ、またはＰＨ２０発現との組合せを含有するワクシニアウイルスによる処置の効果を示す。皮下ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍（５０〜１００ｍｍ３）を担持する無胸腺ｎｕ／ｎｕマウスを、１Ｅ７プラーク形成単位（ＰＦＵ）を使用する単回静脈内処置により示されたウイルスで処置した。示された腫瘍体積を、処置の１４日後に測定した。
図１０は、腫瘍体積に対するＨＭＧＢ１ｍｕｔおよびＰＨ２０を発現するウイルスの効果を示す。皮下Ｒｅｎｃａ腫瘍（５０〜１００ｍｍ３）を担持するマウス（ＢＡＬＢ／ｃ）を、対照としてのビヒクル、１Ｅ８ ＰＦＵのＨＭＧＢ１ｍｕｔおよびＰＨ２０を発現するウイルス（ＷＯ−Ｈ１）、または１Ｅ８ ＰＦＵのＪＸ−５９４としても公知のクラス最高の臨床ウイルスＰｅｘａ−Ｖｅｃの模倣体（ＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦ＋）の単回静脈内注射で０日目に処置した（ｎ＝１０匹／群）。腫瘍体積を、処置後の日数の関数として測定した。
図１１は、肥満マウスにおける腹膜がんのモデルにおける腫瘍体積に対する、ＨＭＧＢ１ｍｕｔおよびＰＨ２０を発現するウイルスの効果を示す。マウス（Ｃ５７／ＢＬ６）に、体重が通常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで、高脂肪食を給餌した。次いで、マウスの腹腔に、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を埋め込んだ。腫瘍増殖の後、生物発光イメージングを行った。一度、腫瘍が確立されたら、マウスを、ＰＢＳ（対照）、５Ｅ６ ＰＦＵのＨＭＧＢ１ｍｕｔとＰＨ２０とを発現するウイルス（ＷＯ−Ｈ１）、または５Ｅ６ ＰＦＵのＪＸ−５９４としても公知の、クラス最高の臨床ウイルスＰｅｘａ−Ｖｅｃの模倣体（ＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦ＋）の単回低用量の腹腔内注射で処置した。
図１２は、ケトン食療法を給餌したマウスにおける腫瘍体積に対する、ＨＭＧＢ１ｍｕｔおよびＰＨ２０を発現するウイルスの効果を示す。マウス（Ｃ５７／ＢＬ６）の腹腔に、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を埋め込んだ。腫瘍増殖の後、生物発光イメージングを行った。一度、腫瘍が確立されたら、マウスを２４ｈの飢餓期間で処置した後、ＷＯ−Ｈ１（飢餓ウイルス）を用いる低用量（５Ｅ６ ＰＦＵの腹腔内）のウイルス処置を行ったか、またはウイルスのみで処置した。
本開示の好ましい実施形態を本明細書に示し、記載してきたが、そのような実施形態がほんの一例として提供されることが当業者には明らかであろう。ここで、当業者であれば、本開示から逸脱することなく、いくつかの変形、変更、および置換を思いつくであろう。本明細書に記載される本開示の実施形態に対する様々な代替物を、本開示を実施する際に用いることができることが理解されるべきである。以下の特許請求の範囲は、本開示の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲に記載の範囲の中にある方法および構造ならびにその等価物がそれによって包含されることが意図される。
ある特定の定義
本明細書で使用される用語は、特定の事例のみを説明するためのものであり、限定を意図するものではない。本明細書で使用される場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、本文が別途明確に指摘しない限り、複数形も同様に含んでもよい。さらに、用語「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｓ）」、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、「有する（ｈａｖｉｎｇ）」、「有する（ｈａｓ）」、「有する（ｗｉｔｈ）」またはその変形が、詳細な説明および／または特許請求の範囲のいずれかにおいて使用される程度まで、そのような用語は、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」と類似する様式で包括的であることが意図される。
用語「約」または「およそ」は、当業者によって決定される特定の値に関する許容される誤差範囲内を意味してもよく、その値がどのように測定または決定されるか、例えば、測定システムの限界に一部依存するであろう。例えば、「約」は、所与の値における実施あたり、１または１より大きい標準偏差の範囲内を意味してもよい。特定の値が本出願および特許請求の範囲に記載される場合、別途記述しない限り、用語「約」は、用語「約」によって修飾される値の±１０％などの、特定の値に関する許容される誤差範囲を意味すると見なすべきである。
用語「個体」、「患者」または「対象」は、互換的に使用される。これらの用語はいずれも、医療従事者（例えば、医師、登録看護師、ナースプラクティショナー、医師助手、病院職員、またはホスピス職員）の監督（例えば、常時または断続的）を特徴とする状況を必要としない、またはそれに限定されない。一部の実施形態では、患者、対象、または個体は、医療従事者の監督下にあってもよい。
特定のウイルスに関して本明細書で使用される用語「異種核酸配列」または「外因性核酸配列」は、特定のウイルス以外の供給源を起源とする核酸配列を指してもよい。
本明細書で使用される用語「突然変異」は、当業界で一般的に理解されるようなオープンリーディングフレーム除去突然変異（open reading frame ablating mutation）などの、欠失、異種核酸の挿入、逆位または置換を指してもよい。
本明細書で使用される用語「遺伝子」は、任意選択で、コード配列の上流または下流に位置してもよい、プロモーター、オペレーター、ターミネーターなどの関連する調節領域と共に、個々のタンパク質またはＲＮＡをコードする核酸のセグメント（「コード配列」もしくは「コード領域」とも呼ばれる）を指してもよい。
本明細書で互換的に使用される用語「突然変異体ウイルス」および「改変ウイルス」は、限定されるものではないが、欠失、異種核酸の挿入、逆位、置換またはその組合せなどの、そのゲノム中に１つまたは複数の突然変異を含むウイルスを指してもよい。
ウイルスを参照して本明細書で使用される用語「天然に存在する」は、ウイルスを天然に見出すことができる、すなわち、それを天然の供給源から単離することができ、それが意図的に改変されていないことを指してもよい。
本明細書で言及される用語「阻害すること」、「低下させること」または「防止」またはこれらの用語の任意の変形は、所望の結果を達成するための任意の測定可能な減少または完全な阻害を含んでもよい。
本明細書で使用される「プロモーター」は、転写の開始および速度が制御される核酸配列の領域である制御配列であってもよい。ある特定の実施形態では、プロモーターは、調節タンパク質および分子がＲＮＡポリメラーゼおよび他の転写因子などに結合することができる遺伝子エレメントを含有してもよい。用語「作動可能に配置される」、「作動可能に連結した」、「制御下」および「転写制御下」は、プロモーターが、核酸配列の転写開始および／または発現を制御するために、その配列に関して正確な機能的位置および／または向きにあることを意味してもよい。ある特定の実施形態では、プロモーターを、核酸配列の転写活性化に関与するｃｉｓ作用調節配列を指す「エンハンサー」と共に使用しても、またはしなくてもよい。
本明細書で使用される用語「相同性」は、最適な比較のために配列を整列させることによって決定することができる２つまたはそれより多いヌクレオチドまたはアミノ酸配列の間の「相同性」または「相同性パーセント」の算出に関するものであってもよい（例えば、第１の配列の配列中にギャップを導入してもよい）。次いで、対応する位置のヌクレオチドを比較することができ、２つの配列間の同一性パーセントは、配列によって共有される同一の位置の数の関数であってもよい（すなわち、相同性％＝同一の位置数／位置の総数×１００）。例えば、第１の配列中の位置は、第２の配列中の対応する位置と同じヌクレオチドによって占有されていてもよく、その結果、分子はその位置で同一である。２つの配列間の相同性パーセントは、２つの配列の最適なアラインメントのために導入する必要がある、ギャップ数、および各ギャップの長さを考慮に入れた、配列によって共有される同一の位置の数の関数であってもよい。一部の実施形態では、比較のために整列された配列の長さは、参照配列の長さの少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９５％であってもよい。ＢＬＡＳＴ（登録商標）検索は、２つの配列間の相同性を決定することができる。相同性は、２つの配列の全長の間または２つの配列の全長の一部の間であってもよい。２つの配列は、遺伝子、ヌクレオチド配列、タンパク質配列、ペプチド配列、アミノ酸配列、またはその断片であってもよい。２つの配列の実際の比較を、例えば、数的アルゴリズムを使用する、周知の方法によって達成することができる。そのような数的アルゴリズムの非限定例は、Karlin, S.およびAltschul, S.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、９０巻、５８７３〜５８７７頁（１９９３年）に記載されている。そのようなアルゴリズムを、Altschul, S.ら、Nucleic Acids Res.、２５巻：３３８９〜３４０２頁（１９９７年）に記載のように、ＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）に組み込むことができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを使用する場合、対応するプログラム（例えば、ＮＢＬＡＳＴ）の任意の関連パラメーターを使用することができる。例えば、配列比較のためのパラメーターを、スコア＝１００、ワード長＝１２に設定するか、または変化させてもよい（例えば、Ｗ＝５またはＷ＝２０）。他の例としては、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒのアルゴリズム、ＣＡＢＩＯＳ（１９８９年）、ＡＤＶＡＮＣＥ、ＡＤＡＭ、ＢＬＡＴ、およびＦＡＳＴＡが挙げられる。別の実施形態では、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントを、例えば、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）中のＧＡＰプログラムを使用して達成することができる。
用語「対象」は、限定されるものではないが、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、またはマウスなどの動物を指してもよい。用語「対象」および「患者」は、例えば、ヒト対象などの哺乳動物対象を参照して本明細書で互換的に使用される。
用語「処置する」、「処置すること」および「処置」は、障害、疾患、もしくは状態、または障害、疾患、もしくは状態と関連する症状の１つもしくは複数を軽減すること、もしくは無効化すること；または障害、疾患、もしくは状態自体の原因を軽減すること、もしくは根絶することを含むことを意図してもよい。処置の望ましい効果は、限定されるものではないが、疾患の発生もしくは再発を防止すること、症状の軽減、疾患の任意の直接的もしくは間接的な病理学的結果を減少させること、転移を防止すること、疾患進行の速度を低下させること、疾患状態の改善もしくは緩和および寛解または予後の改善を含んでもよい。
用語「治療有効量」とは、投与した場合、処置される障害、疾患、または状態の症状の１つまたは複数の発生を防止する、またはそれをある程度軽減するのに十分であり得る化合物の量を指してもよい。用語「治療有効量」はまた、研究者、獣医師、医師、臨床医によって求められる細胞、組織、系、動物、またはヒトの生物学的応答または医学的応答を惹起するのに十分である化合物の量を指してもよい。
用語「薬学的に許容される担体」、「薬学的に許容される賦形剤」、「生理学的に許容される担体」または「生理学的に許容される賦形剤」は、液体もしくは固体充填剤、希釈剤、賦形剤、溶媒、または封入材料などの、薬学的に許容される材料、組成物、またはビヒクルを指してもよい。成分は、医薬製剤の他の成分と適合するという意味において、「薬学的に許容される」ものであってよい。また、それは、合理的な利益／危険比と釣り合う、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、免疫原性、または他の問題もしくは合併症なしにヒトおよび動物の組織もしくは臓器との接触における使用にとって好適なものであってもよい。Remington: The Science and Practice of Pharmacy、第２１版；Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia，PA、２００５年；Handbook of Pharmaceutical Excipients、第５版；Roweら編、The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: ２００５年；およびHandbook of Pharmaceutical Additives、第３版；AshおよびAsh編、Gower Publishing Company: ２００７年；Pharmaceutical Preformulation and Formulation、Gibson編、CRC Press LLC: Boca Raton，FL、２００４年を参照されたい。
用語「医薬組成物」は、本明細書に開示される化合物と、希釈剤または担体などの、他の化学成分との混合物を指してもよい。医薬組成物は、生物への化合物の投与を容易にすることができる。限定されるものではないが、経口、注射、エアロゾル、非経口、および局所投与などの化合物を投与する複数の技術が当業界で存在する。化合物を、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などの無機または有機酸と反応させることによって、医薬組成物を得ることもできる。
本明細書で使用される「抗がん剤」は、例えば、がん細胞を殺傷すること、がん細胞においてアポトーシスを誘導すること、がん細胞の増殖速度を低下させること、転移の発生もしくは数を減少させること、腫瘍サイズを減少させること、腫瘍増殖を阻害すること、腫瘍もしくはがん細胞への血液供給を減少させること、がん細胞もしくは腫瘍に対する免疫応答を促進すること、がんの進行を防止すること、もしくは阻害すること、またはがんを有する対象の寿命を増加させることにより、対象におけるがんに負に影響することができる薬剤または療法を指してもよい。抗がん剤の非限定例としては、生物学的薬剤（生物学的療法）、化学療法剤、および放射線療法剤が挙げられる。
本明細書で使用される用語「腫瘍溶解性」とは、例えば、がんまたは腫瘍細胞の直接的溶解による、がんまたは腫瘍細胞に対する免疫応答を刺激することによる、アポトーシス、毒性タンパク質の発現、自食作用およびタンパク質合成のシャットダウン、抗腫瘍免疫の誘導、またはその任意の組合せによる、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの、薬剤によるがんまたは腫瘍細胞の殺傷を指してもよい。腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの薬剤によって感染したがんまたは腫瘍細胞の直接的溶解は、前記細胞内でのウイルスの複製の結果であってもよい。ある特定の例では、用語「腫瘍溶解性」とは、前記細胞を溶解せずにがんまたは腫瘍細胞を殺傷することを指す。
改変ウイルス
一部の実施形態では、改変ウイルス、例えば、ＨＭＧＢ１バリアントタンパク質をコードすることができる外因性核酸配列を含有してもよい腫瘍溶解性ワクシニアウイルスが提供される。任意の他の腫瘍溶解性ウイルスを、単独で、またはさらなる外因性核酸配列、ウイルス遺伝子、例えば、ビルレンス遺伝子のさらなる欠失、もしくはその任意の組合せと共に、本明細書に開示される外因性核酸配列のいずれかを挿入して、ＨＭＧＢ１バリアントを発現させることによって改変することもできる。ウイルスの例としては、限定されるものではないが、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス、ポリオウイルス、ＶＳＶ、コクサッキーウイルス、レオウイルス、レンチウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、麻疹ウイルス、マラバウイルス、ニューカッスル病（ＮＤＶ）、セネカバレーウイルス、レオウイルス、メンゴウイルス、およびミクソマビルが挙げられる。
本明細書に記載されるウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントタンパク質（本明細書ではＨＭＧＢ１ｍｕｔとも呼ばれる）をコードするｍＲＮＡを生成することができる、代替的にトランスジーンとも呼ばれる１つまたは複数の外因性核酸配列を含む。構造的には、ＨＭＧＢ１タンパク質は、およそ２５ｋＤａであり、ｂｏｘＡドメイン、ｂｏｘＢドメイン、Ｃ末端酸性尾部、およびｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメインなどの、複数のドメインから構成される構造を含んでもよい。ｂｏｘＡ内に、ＨＭＧＢ１タンパク質は、第１の核局在化シグナル（ＮＬＳ１）を含んでもよく、ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン内に、ＨＭＧＢ１タンパク質は、第２の核局在化シグナル（ＮＬＳ２）を含んでもよい。図１（ａ）は、ＨＭＧＢ１タンパク質の例示的な構造的配置を示す。本開示のある特定の実施形態では、ＨＭＧＢ１バリアントをコードすることができる外因性核酸配列を含んでもよく、前記ＨＭＧＢ１バリアントがＮＬＳ１とＮＬＳ２の少なくとも一方に突然変異を含む、ウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスが記載される。外因性核酸は、ｂｏｘＡ、ｂｏｘＢとして上記されたドメイン、またはｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン、またはその任意の組合せのうちの少なくとも１つにさらなる突然変異を含んでもよい。一部の例では、ｂｏｘＡ中の１つまたは複数の突然変異は、ＨＭＧＢ１バリアントの細胞質再配置と関連してもよい。一部の事例では、外因性核酸は、Ｃ末端酸性尾部ドメインを含まなくてもよい。
細胞質再配置は、ｂｏｘＡ内のＮＬＳ１中の１つもしくは複数の突然変異、またはｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン中に位置するＮＬＳ２中の１つもしくは複数の突然変異、またはｂｏｘＡ内のＮＬＳ１と、ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン中に位置するＮＬＳ２との両方における１つもしくは複数の突然変異に帰するものであってもよい。細胞質に再配置されるＨＭＧＢ１バリアントは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードすることができる外因性核酸配列を含んでもよい腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに感染した腫瘍細胞、ならびに感染した腫瘍細胞の近傍にあるが、ワクシニアウイルスによって直接感染しない場合がある細胞において細胞傷害性免疫応答を誘導するのに有利であり得る。かくして、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、腫瘍微小環境における細胞傷害性免疫応答の誘導因子としてより有効であってよく、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含まない以外は同一のワクシニアウイルスと比較して、バイスタンダー効果により未感染細胞中で細胞傷害性免疫応答の増強を生成する。
一部の例では、本明細書に記載されるＨＭＧＢ１バリアント中に存在する突然変異、例えば、以下のドメイン：ｂｏｘＡ、ｂｏｘＢ、ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン；ｂｏｘＡ内のＮＬＳ１、ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン内のＮＬＳ２、またはその任意の組合せのうちの少なくとも１つの中の１つもしくは複数の突然変異は、ウイルス、例えば、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを化学療法と共に投与した場合、相乗効果の増強と関連してもよい；前記相乗効果は、以下のドメイン：ｂｏｘＡ、ｂｏｘＢ、ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン；ｂｏｘＡ内のＮＬＳ１、ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン内のＮＬＳ２、またはその任意の組合せのうちの少なくとも１つの中に突然変異を含んでもよいＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を欠く以外は同一のワクシニアウイルスの投与の際には見られない。化学療法との組合せの相乗効果は、免疫効果によって媒介され得、一部の事例では、ＨＭＧＢ１バリアントの、ＴＬＲ４およびＲＡＧＥの少なくとも一方への結合の増強に帰するものであり得る。
一部の例では、本明細書に記載のＨＭＧＢ１バリアント中に存在する突然変異、例えば、以下のドメイン：ｂｏｘＡ、ｂｏｘＢ、ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン；ｂｏｘＡ内のＮＬＳ１、ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン内のＮＬＳ２、またはその任意の組合せのうちの少なくとも１つの中の１つまたは複数の突然変異は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードすることができる外因性核酸を含んでもよいウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの腫瘍選択的複製の増加と関連してもよい；腫瘍選択的複製の前記増加は、以下のドメイン：ｂｏｘＡ、ｂｏｘＢ、ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン；ｂｏｘＡ内のＮＬＳ１、ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン内のＮＬＳ２、またはその任意の組合せのうちの少なくとも１つの中に突然変異を含んでもよいＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を欠く以外は同一のワクシニアウイルスの投与の際には見られない。腫瘍特異的ウイルス複製の増加は、一部の例では、自食作用に対するＨＭＧＢ１バリアントの効果によって媒介され得、一部の事例では、ＨＭＧＢ１バリアントタンパク質内のある特定のシステイン残基に帰するものであり得る。
一部の例では、本明細書に記載のＨＭＧＢ１バリアント中に存在する突然変異、例えば、以下のドメイン：ｂｏｘＡ、ｂｏｘＢ、ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン；ｂｏｘＡ内のＮＬＳ１、ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン内のＮＬＳ２、またはその任意の組合せのうちの少なくとも１つの中の１つまたは複数の突然変異は、例えば、腫瘍間質液圧（ＴＩＦＰ）を低下させる、ＨＭＧＢ１バリアントをコードすることができる外因性核酸を含んでもよい腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを投与することによる腫瘍増殖の減少と関連してもよい；ＴＩＦＰの低下による腫瘍増殖の前記減少は、以下のドメイン：ｂｏｘＡ、ｂｏｘＢ、ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン；ｂｏｘＡ内のＮＬＳ１、ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間の領域によって形成されるドメイン内のＮＬＳ２、またはその任意の組合せのうちの少なくとも１つの中に突然変異を含んでもよいＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を欠く以外は同一のワクシニアウイルスの投与の際には見られない。
ＨＭＧＢ１バリアントは、一部の実施形態では、ヒト野生型ＨＭＧＢ１（本明細書ではＨＭＧＢ１ｗｔとも呼ばれる）に対応する、配列番号１６と約８０％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約８１％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約８２％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約８３％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約８４％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約８５％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約８６％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約８７％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約８８％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約８９％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約９０％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約９１％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約９２％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約９３％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約９４％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約９５％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約９６％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約９７％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、約９８％未満相同であるか、もしくはそれと等しい、または約９９％未満相同であるか、もしくはそれと等しいアミノ酸配列を含んでもよい。
配列番号１６に記載されるアミノ酸配列内の、ＨＭＧＢ１ｗｔの様々なドメインを、以下のように記述することができる：ｂｏｘＡは残基１〜８５を含んでもよい；ｂｏｘＢは残基８８〜１６２を含んでもよく、Ｃ末端酸性尾部は残基１８６〜２１５を含んでもよい；ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間で形成されるドメインは残基１６２〜１８５を含んでもよい；ＮＬＳ１は残基２８〜５４を含んでもよい；およびＮＬＳ２は残基１７９〜１８５を含んでもよい。ウイルスの一部の例は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードすることができる外因性核酸配列を含んでもよく、ＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号１６と約９５％未満相同であるか、またはそれと等しくてもよく、残基１〜８５、８９〜１０８、および１５０〜１８３の少なくとも１つを含んでもよく、前記残基１〜８５、８９〜１０８、および１５０〜１８３の少なくとも１つは、配列番号１６のアミノ酸配列と比較して少なくとも１つの突然変異を含んでもよい。例えば、ウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、配列番号１６の残基１〜８５を含んでもよい外因性核酸配列を含んでもよく、ストレッチ内の１つまたは複数のセリン残基を、例えば、アラニンに突然変異させることができる。さらに、一部の例では、ウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、配列番号１６の残基８９〜１０８を含んでもよい外因性核酸配列を含んでもよく、ストレッチ内の１つまたは複数のフェニルアラニン残基を、例えば、グルタミン酸に突然変異させることができる。さらに他の例では、ウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、配列番号１６の残基１５０〜１８３を含んでもよい外因性核酸配列を含んでもよく、ストレッチ内のセリン残基を、例えば、アラニンに突然変異させることができる。ある特定の例では、ウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、配列番号１６の３５、４２、８９、１８１、１８９、および２０２位のうちの１つまたは複数に突然変異を含んでもよい外因性核酸配列を含んでもよい。他の例では、ウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、配列番号１６の３５、４２、８９、１８１、１８９、および２０２位の全部に突然変異を含んでもよい外因性核酸配列を含んでもよい。
一実施形態は、配列番号１６と約９５％未満相同であるか、またはそれと等しいＨＭＧＢ１バリアントをコードすることができる外因性核酸配列を含んでもよく、配列番号１６の残基２３、４５、２３〜４５、８９〜１０８、および１５０〜１８３の少なくとも１つを含んでもよいウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。そのようなウイルスの場合、２３位と４５位のアミノ酸は両方ともシステインである。残基８９〜１０８および１５０〜１８３によって包含されるストレッチに関して、本明細書に記載のＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸は、配列番号１６のアミノ酸と比較して、これらのストレッチの中に少なくとも１つの突然変異を含んでもよい。例えば、ウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、配列番号１６の残基８９〜１０８を含んでもよい外因性核酸配列を含んでもよく、ストレッチ内の１つまたは複数のフェニルアラニン残基を、例えば、グルタミン酸に突然変異させることができる。さらに他の例では、ウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、配列番号１６の残基１５０〜１８３を含んでもよい外因性核酸配列を含んでもよく、ストレッチ内のセリン残基を、例えば、アラニンに突然変異させることができる。ある特定の例では、ウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、配列番号１６の３５、４２、８９、１８１、１８９、および２０２位のうちの１つまたは複数に突然変異を含んでもよい外因性核酸配列を含んでもよい。他の例では、ウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスは、配列番号１６の３５、４２、８９、１８１、１８９、および２０２位の全部に突然変異を含んでもよい外因性核酸配列を含んでもよい。一部の例では、外因性核酸は、配列番号１６の残基２３〜５４を含み、２３および４５位のアミノ酸はシステインであってよく、そのストレッチ中のセリン残基の１つまたは複数を、例えば、アラニンに突然変異させることができる。
さらなる実施形態は、配列番号１５、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であってよいＨＭＧＢ１バリアントをコードすることができる外因性核酸配列を含んでもよいウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。上記のウイルスは、配列番号１５の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３の少なくとも１つを含んでもよい。一部の事例では、ウイルスは、配列番号１５の残基２１〜１０５、１０９〜１２８、および１７０〜２０３のうちの少なくとも１つを含んでもよい。残基１０９〜１２８および１７０〜１８３によって包含されるストレッチは、ＨＭＧＢ１バリアントの、それぞれ、ＴＬＲ４およびＲＡＧＥへの結合において役割を果たすことができる。ＨＭＧＢ１バリアントの、ＴＬＲ４およびＲＡＧＥの少なくとも一方への結合は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含むウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを化学療法と共に投与する場合、もたらし得る免疫効果と相関してもよい。配列番号１５の４３および６５位のアミノ酸は、システインであってもよい。ある特定の例では、ＨＭＧＢ１バリアントは、その成熟形態において、配列番号１５の残基１〜２０を含まなくてもよい。本明細書に記載の核酸またはアミノ酸の「断片」は、それが断片である核酸またはアミノ酸配列の全長の約１％、約２％、約３％、約４％、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％を含む部分を指してもよい。
さらなる実施形態は、配列番号１７、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であってよいＨＭＧＢ１バリアントをコードすることができる外因性核酸配列を含んでもよいウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。上記のウイルスは、配列番号１５の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３の少なくとも１つを含んでもよい。一部の事例では、ウイルスは、配列番号１７の残基２１〜１０５、１０９〜１２８、および１７０〜２０３の少なくとも１つを含んでもよい。残基１０９〜１２８および１７０〜１８３によって包含されるストレッチは、ＨＭＧＢ１バリアントの、それぞれ、ＴＬＲ４およびＲＡＧＥへの結合において役割を果たすことができる。ＨＭＧＢ１バリアントの、ＴＬＲ４およびＲＡＧＥの少なくとも一方への結合は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含むウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを化学療法と共に投与する場合、相乗効果の増強を媒介し得る免疫効果と相関してもよい。配列番号１７の４３および６５位のアミノ酸は、システインであってもよい。配列番号１５の４３および６５位のアミノ酸は、システインであってもよい。ある特定の例では、ＨＭＧＢ１バリアントは、その成熟形態において、配列番号１７の残基１〜２０を含まなくてもよい。
さらなる実施形態は、配列番号４、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であってよいＨＭＧＢ１バリアントをコードすることができる外因性核酸配列を含んでもよいウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。上記のウイルスは、配列番号４の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３の少なくとも１つを含んでもよい。一部の事例では、ウイルスは、配列番号４の残基２１〜１０５、１０９〜１２８、および１７０〜２０３の少なくとも１つを含んでもよい。残基１０９〜１２８および１７０〜１８３によって包含されるストレッチは、ＨＭＧＢ１バリアントの、それぞれ、ＴＬＲ４およびＲＡＧＥへの結合において役割を果たすことができる。ＨＭＧＢ１バリアントの、ＴＬＲ４およびＲＡＧＥの少なくとも一方への結合は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含むウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを化学療法と共に投与する場合、相乗効果の増強を媒介し得る免疫効果と相関してもよい。配列番号４の４３および６５位のアミノ酸は、システインであってもよい。配列番号４の４３および６５位のアミノ酸は、システインであってもよい。ある特定の例では、ＨＭＧＢ１バリアントは、その成熟形態において、配列番号４の残基１〜２０を含まなくてもよい。
さらなる実施形態は、配列番号５、６、２２〜２３のいずれか１つ、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であってよいＨＭＧＢ１バリアントをコードすることができる外因性核酸配列を含んでもよいウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。一部の事例では、ＨＭＧＢ１バリアントのコード配列を、ＩｇＥリーダー配列のコード配列の上流に融合することができる。得られるタンパク質は、配列番号２４および２５に例示されるように、ＩｇＥリーダー配列、次いで、ＨＭＧＢ１バリアント配列を含んでもよい。
配列番号４、１５、および１７として記載されるアミノ酸配列内の、ＨＭＧＢ１の様々なドメインを、以下のように記述することができる：ｂｏｘＡは残基２１〜１０５を含んでもよい；ｂｏｘＢは残基１０８〜１８２を含んでもよく、Ｃ末端酸性尾部は残基２０６〜２３５を含んでもよい；ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間で形成されるドメインは残基１８３〜２０５を含んでもよい；ＮＬＳ１は残基４７〜７４を含んでもよい；およびＮＬＳ２は残基１９９〜２０５を含んでもよい。
さらなる実施形態は、配列番号２４〜２５のいずれか１つ、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であってよいＨＭＧＢ１バリアントをコードすることができる外因性核酸配列を含んでもよいウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを提供する。
配列番号２２および２３として記載されるアミノ酸配列内の、ＨＭＧＢ１の様々なドメインを、以下のように記述することができる：ｂｏｘＡは残基１〜８５を含んでもよい；ｂｏｘＢは残基８８〜１６２を含んでもよく、Ｃ末端酸性尾部は残基１８６〜２１５を含んでもよい；ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間で形成されるドメインは残基１６２〜１８５を含んでもよい；ＮＬＳ１は残基２８〜５４を含んでもよい；およびＮＬＳ２は残基１７９〜１８５を含んでもよい。
配列番号２４および２５として記載されるアミノ酸配列内の、ＨＭＧＢ１の様々なドメインを、以下のように記述することができる：ｂｏｘＡは残基１９〜１０３を含んでもよい；ｂｏｘＢは残基１０６〜１８０を含んでもよく、Ｃ末端酸性尾部は残基２０４〜２３３を含んでもよい；ｂｏｘＢとＣ末端酸性尾部との間で形成されるドメインは残基１８１〜２０３を含んでもよい；ＮＬＳ１は残基４５〜７２を含んでもよい；およびＮＬＳ２は残基１９７〜２０３を含んでもよい。
配列番号１６と約９５％未満相同であるか、またはそれと等しい外因性核酸の２３および４５位、ならびに配列番号４、１５、および１７のいずれか１つと少なくとも約８０％相同である外因性核酸の４３および６５位のシステイン残基の存在は、一部の事例では、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする前記外因性核酸配列の１つを含有してもよいウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの腫瘍特異的複製の増加と相関してもよい。ＨＭＧＢ１バリアントタンパク質を発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの腫瘍特異的複製の増加は、自食作用に対するＨＭＧＢ１タンパク質の効果によって媒介され得、上で同定されたシステイン残基は、それにおいて役割を果たしてもよい。
ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸は、配列番号１３、配列番号１３、２、３、７、９、１４、および１９のいずれか１つと少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるヌクレオチド配列を含んでもよい。一部の例では、外因性核酸は、配列番号１３のいずれか１つと少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同である核酸配列を含み、前記核酸は、配列番号１５のいずれか１つと少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるＨＭＧＢ１バリアントをコードする。
一実施形態は、ＨＭＧＢ１バリアントに加えてヒアルロニダーゼをさらに発現することができるウイルス、例えば、腫瘍溶解性ウイルスを記載する。ヒアルロニダーゼを、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス内のさらなる外因性核酸配列によってコードさせることができる；前記さらなる外因性核酸配列は、配列番号１１に記載のヌクレオチド配列を有してもよく、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスから発現されるヒアルロニダーゼは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有してもよい。限定されるものではないが、ＨＹＡＬ１、ＨＹＡＬ２、およびＨＹＡＬ３、ＨＹＡＬ４、ＰＨ−２０、ＳＰＡＭ１（精子接着分子１）、およびＨＹＡＬＰ１などの、任意のヒアルロニダーゼをウイルスから発現させることができる。
一実施形態は、ＨＭＧＢ１バリアントに加えて、循環中のウイルスを安定化するタンパク質をさらに発現することができるウイルス、例えば、腫瘍溶解性ウイルスを記載する。そのようなタンパク質の例は、ＩｇＥ、Ｆｃドメインタンパク質を含んでもよい。一部の例では、ＩｇＥを、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス内のさらなる外因性核酸配列によってコードさせることができる；腫瘍溶解性ワクシニアウイルスから発現される前記ＩｇＥは、配列番号１８に記載のアミノ酸配列を有してもよい。
ヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸配列、およびＩｇＥをコードする配列を、本明細書に記載のＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列に作動可能に連結することができる。一部の例では、ＩｇＥは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする遺伝子と、ヒアルロニダーゼをコードする遺伝子との両方に上流で融合される。ＩｇＥ、ヒアルロニダーゼ、およびＨＭＧＢ１バリアントをコードする遺伝子の他の配置も企図される。
ウイルス、例えば、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに対するさらなる改変としては、限定されるものではないが、Ｂ８Ｒ（ＩＦＮ−ｇ結合タンパク質をコードする）、Ｂ１８Ｒ（Ｉ型ＩＦＮ結合タンパク質をコードする）、Ｂ１３Ｒ（抗アポトーシス活性を有するセルピンＳＰＩ−１をコードする）、Ｂ２２Ｒ（抗アポトーシス活性を有するセルピンＳＰＩ−２をコードする）、Ｂ１５Ｒ（ＩＬ−１ｂ結合タンパク質をコードする）、ＶＧＦ（ワクシニア増殖因子をコードする）、Ｅ３Ｌ（ｄｓＲＮＡ結合をコードする）、Ｋ３Ｌ（ＰＫＲ結合をコードする）などのビルレンス遺伝子の欠失が挙げられる。
改変ウイルスは、ヒアルロン酸などの化学療法感作剤；ＴＲＡＩＬまたはカスパーゼなどのアポトーシス促進剤をさらに発現することができる。一部の事例では、改変ウイルスは、多剤トランスポーター阻害剤などの排出ポンプ遮断剤をさらに発現することができる。
ある特定の実施形態では、ウイルスゲノム、例えば、チミジンキナーゼ遺伝子座中への、または腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのゲノム内の他の欠失の代わりの挿入のための外因性核酸配列を、コドン最適化することができる。さらに、そのような外因性核酸配列により発現されるＨＭＧＢ１バリアント、ならびにヒアルロニダーゼおよび安定化タンパク質配列は、得られるタンパク質が本明細書に記載のようなその対応する機能を維持するようなバリアントを有してもよい。ある特定の実施形態では、そのような変化は保存的置換と呼ばれる。本明細書で使用される用語「保存的置換」および「保存的改変」は、アミノ酸配列を含む本明細書に開示されるＨＭＧＢ１バリアントタンパク質の結合特性に有意に影響しない、またはそれを変化させないアミノ酸改変を指す。そのような保存的改変としては、アミノ酸置換、付加および欠失が挙げられる。部位特異的突然変異誘発およびＰＣＲ媒介性突然変異誘発などの、当業界で公知の標準的な技術により、本開示のＨＭＧＢ１タンパク質中に改変を導入することができる。アミノ酸を、電荷および極性などのその物理化学的特性に従って群に分類することができる。
保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同じ群内のアミノ酸で置き換えられたものである。例えば、アミノ酸を、電荷によって分類することができる：正荷電アミノ酸としては、リシン、アルギニン、ヒスチジンが挙げられ、負荷電アミノ酸としては、アスパラギン酸、グルタミン酸が挙げられ、中性電荷アミノ酸としては、アラニン、アスパラギン、システイン、グルタミン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシン、およびバリンが挙げられる。さらに、アミノ酸を、極性によって分類することができる：極性アミノ酸としては、アルギニン（塩基性極性）、アスパラギン、アスパラギン酸（酸性極性）、グルタミン酸（酸性極性）、グルタミン、ヒスチジン（塩基性極性）、リシン（塩基性極性）、セリン、トレオニン、およびチロシンが挙げられる；非極性アミノ酸としては、アラニン、システイン、グリシン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、およびバリンが挙げられる。かくして、ＨＭＧＢ１バリアントタンパク質内の１つまたは複数のアミノ酸残基を、同じ群に由来する他のアミノ酸残基で置き換えることができ、ＨＭＧＢ１バリアントタンパク質の変化を、本明細書に記載の機能的アッセイを使用して保持された機能について試験することができる。ある特定の実施形態では、特定の配列内の１個以下、２個以下、３個以下、４個以下、５個以下の残基が変化する。
例示的な保存的アミノ酸置換を、表Ｉに示す。
がん標的
本開示の実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの改変ウイルスの送達による、がんまたは腫瘍などの過増殖性疾患のための処置方法が企図される。改変ウイルス、例えば、本明細書に記載のＨＭＧＢ１バリアントタンパク質をコードする外因性核酸を含んでもよい腫瘍溶解性ワクシニアウイルスによって処置することができるがんとしては、限定されるものではないが、メラノーマ、肝細胞癌、乳がん、肺がん、腹膜がん、前立腺がん、膀胱がん、卵巣がん、白血病、リンパ腫、腎癌、膵がん、上皮癌、胃がん、結腸癌、十二指腸がん、膵腺癌、中皮腫、多形成グリア芽細胞腫、星状細胞腫、多発性骨髄腫、前立腺癌、肝細胞癌、胆管肉腫、膵腺癌、頭頸部扁平上皮癌、結腸直腸がん、腸型胃腺癌、子宮頸部扁平上皮癌、骨肉腫、上皮性卵巣癌、急性リンパ芽球性リンパ腫、骨髄増殖性新生物、および肉腫が挙げられる。
本開示の方法によって処置することができるがん細胞としては、膀胱、血液、骨、骨髄、脳、乳房、結腸、食道、胃腸、歯肉、頭部、腎臓、肝臓、肺、鼻咽頭、頸部、卵巣、前立腺、皮膚、胃、精巣、舌、または子宮に由来する細胞が挙げられる。さらに、がんは、具体的には、以下の組織型のものであってよいが、これらに限定されない：悪性新生物；癌腫；未分化癌腫；巨細胞および紡錘細胞癌；小細胞癌；乳頭癌；扁平上皮癌；リンパ上皮癌；基底細胞癌；ピロマトリックス癌；移行上皮癌；乳頭移行上皮癌；腺癌；悪性ガストリノーマ；胆管癌；肝細胞癌；混合型肝細胞癌および胆管癌；索状腺癌；腺様嚢胞癌；腺腫性ポリープにおける腺癌；家族性大腸ポリポーシス、腺癌；固形癌；悪性カルチノイド腫瘍；細気管支−肺胞腺癌；乳頭腺癌；色素嫌性癌；好酸性癌；好酸性腺癌；好塩基性癌；透明細胞腺癌；顆粒細胞癌；濾胞状腺癌；乳頭状濾胞状腺癌；非被包性硬化性癌；副腎皮質細胞癌；類内膜癌；皮膚付属器癌；アポクリン腺癌；皮脂腺癌；耳垢腺癌；粘膜表皮癌；嚢胞腺癌；乳頭状嚢胞腺癌；乳頭状漿液性嚢胞腺癌；ムチン性嚢胞腺癌；粘液腺癌；印環細胞癌；浸潤性導管癌；髄様癌；小葉癌；炎症性乳癌；乳房パジェット病；腺房細胞癌；腺扁平上皮癌；扁平上皮化生を伴う腺癌；悪性胸腺腫；悪性卵巣間質腫瘍；悪性卵胞膜細胞腫；悪性顆粒膜細胞腫；悪性男性ホルモン産生細胞腫；セルトリ細胞癌；悪性ライディッヒ細胞腫；悪性脂質細胞腫瘍；悪性傍神経節腫；悪性乳房外傍神経節腫；褐色細胞腫；グロムス腫瘍；悪性黒色腫；メラニン欠乏性黒色腫；表在拡大型黒色腫；巨大色素性母斑における悪性黒色腫；類上皮細胞黒色腫；悪性青色母斑；肉腫；線維肉腫；悪性線維性組織球腫；粘液肉腫；脂肪肉腫；平滑筋肉腫；横紋筋肉腫；胎児性横紋筋肉腫；胞巣状横紋筋肉腫；間質肉腫；悪性混合腫瘍；ミュラー管混合腫瘍；腎芽細胞腫；肝芽腫；癌肉腫；悪性間葉腫；悪性ブレンナー腫瘍；悪性葉状腫瘍；滑膜肉腫；悪性中皮腫；未分化胚細胞腫；胎生期癌；悪性奇形腫；悪性卵巣甲状腺腫；絨毛癌；悪性中腎腫；血管肉腫；悪性血管内皮腫；カポジ肉腫；悪性血管周囲細胞腫；リンパ管肉腫；骨肉腫；傍骨性骨肉腫；軟骨肉腫；悪性軟骨芽細胞腫；間葉性軟骨肉腫；骨の巨細胞腫瘍；ユーイング肉腫；悪性歯原性腫瘍；エナメル上皮肉腫；悪性エナメル上皮腫；エナメル上皮線維肉腫；悪性松果体腫；脊索腫；悪性神経膠腫；上衣腫；星状細胞腫；原形質性星状細胞腫；線維性星状細胞腫；星状芽細胞腫；膠芽細胞腫；乏突起膠腫；乏突起膠芽腫；未分化神経外胚葉性腫瘍；小脳肉腫；神経節芽細胞腫；神経芽細胞腫；網膜芽細胞腫；嗅神経原腫瘍；悪性髄膜腫；神経線維肉腫；悪性神経鞘腫；悪性顆粒細胞腫；悪性リンパ腫；ホジキン病；ホジキン側肉芽腫；小リンパ球型悪性リンパ腫；びまん性大細胞型悪性リンパ腫；濾胞性悪性リンパ腫；菌状息肉腫；他の特定の非ホジキンリンパ腫；悪性組織球増殖症；多発性骨髄腫；肥満細胞肉腫；免疫増殖性小腸疾患；白血病；リンパ性白血病；形質細胞性白血病；赤白血病；リンパ肉腫細胞性白血病；骨髄性白血病；好塩基球性白血病；好酸球性白血病；単球性白血病；肥満細胞性白血病；巨核芽球性白血病；骨髄性肉腫；およびヘアリー細胞白血病。様々な例では、本明細書に開示されるがん標的を処置するために使用することができる、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスにおける使用のためのＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号４、１５、１７、２２、２３、２４、または２５として記載される配列を含むＨＭＧＢ１バリアントであってもよい。
本開示はまた、任意の型の原発がんの局所浸潤もしくは転移、またはその両方を阻害または防止するための方法を企図する。例えば、原発がんは、黒色腫、非小細胞肺がん、小細胞肺がん、肺がん、肝細胞癌、網膜芽細胞腫、星状細胞腫、神経膠腫、歯肉がん、舌がん、白血病、神経芽細胞腫、頭頸部がん、乳がん、膵がん、前立腺がん、腎がん、骨がん、精巣がん、卵巣がん、中皮腫、子宮頸がん、消化管がん、リンパ腫、脳腫瘍、結腸がん、または膀胱がんであってもよい。ある特定の実施形態では、原発がんは、肺がんであってもよい。例えば、肺がんは、非小細胞肺癌であってもよい。さらに、本開示を使用して、がんを防止するか、または化生、異形成、および過形成などの、前がんもしくは前悪性細胞を処置することができる。また、それを使用して、扁平上皮化生、異形成、良性前立腺過形成細胞、過形成病変などの、望ましくはないが良性の細胞を阻害することもできる。一部の実施形態では、がんまたはより重篤な形態のがんへの進行を、本明細書で考察される腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの改変ウイルスによってコードされ得るＨＭＧＢ１バリアントタンパク質を含む本開示の方法によって停止、中断、または遅延させることができる。様々な例では、任意の型の原発がんの局所浸潤もしくは転移、またはその両方を阻害または防止するために使用することができる腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスにおける使用のためのＨＭＧＢ１バリアントは、配列番号４、１５、１７、２２、２３、２４、または２５として記載される配列を含むＨＭＧＢ１バリアントであってもよい。
一部の事例では、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの改変ウイルスを、腹膜がんの処置のために投与することができる。腹膜がんとは、腹膜のがんを指してもよい。腹膜は、腹壁を補強し、腹部臓器を覆う組織と定義することができる。原発性腹膜がんとは、腹膜を起源とし、身体の別の部分から腹膜に拡散したものではないがんを指してもよい。
さらに、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの改変ウイルスを、腫瘍微小環境中の遊離脂肪酸のバイオアベイラビリティが高い腫瘍の処置のために投与することができる。一部の例では、肥満患者において腫瘍中の脂肪細胞によって放出される遊離脂肪酸は、腫瘍内での改変ウイルスを養い、その複製を増強することができる。その利点を、非肥満患者、特に、腹膜がんを有する患者において実現することもできる。例えば、いくつかの腹膜がんは、網壁中で増殖する傾向があり、脂肪細胞によって養われ得るため、および腫瘍中の脂肪細胞によって放出される上記の遊離脂肪酸は、腫瘍内の改変ウイルスを養い、その複製を増強することができるため、これらのものは本開示の改変ウイルスを使用する療法のための標的であり得る。ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの改変ウイルスは、遊離脂肪酸のバイオアベイラビリティが高い腫瘍において高力価の細胞外エンベロープウイルス（ＥＥＶ）を形成することができる。
任意選択で、ヒアルロニダーゼ、例えば、ＰＨ−２０と共に、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスから利益を得ることができる例示的ながん患者集団としては、限定されるものではないが、肥満である患者、ケトン食療法または短期間の絶食にある患者、腹膜がんを有する患者、原発性腹膜がんを有する患者、子宮、膀胱、および直腸に罹患する腹膜がんを有する患者が挙げられる。さらに、免疫療法に以前に失敗した患者を、本明細書に開示される方法に従って、本明細書に記載の改変ウイルスを使用する処置のための標的集団として同定することができる。そのような患者は、さらなるラウンドの免疫療法から利益を得なくてもよく、単独での、または化学療法と組み合わせた、本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの改変ウイルスを用いる処置に移行してもよい。かくして、本開示の改変ウイルスを使用する療法は、免疫療法に失敗した患者の場合、重要な代替手段であり得る。
用語「肥満（obese）」または「肥満（obesity）」とは、個体が３０ｋｇ／ｍ２に等しいか、またはそれより高いＢＭＩを有する状態を指してもよい。世界保健機関（ＷＨＯ）の定義によれば、肥満は、以下のように分類することができる：用語「クラスＩ肥満」は、ＢＭＩが３０ｋｇ／ｍ２に等しいか、またはそれより高いが、３５ｋｇ／ｍ２よりは低い状態であってよい；用語「クラスＩＩ肥満」は、ＢＭＩが３５ｋｇ／ｍ２に等しいか、またはそれより高いが、４０ｋｇ／ｍ２よりは低い状態であってよい；用語「クラスＩＩＩ肥満」は、ＢＭＩが４０ｋｇ／ｍ２に等しいか、またはそれより高い状態であってよい。１８．５〜２４．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩは正常と分類することができ、２５．０〜２９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩは過体重と分類することができる。用語「体格指数」または「ＢＭＩ」は、身長（メートル）の二乗で除算したキログラムの体重と定義することができ、したがって、ＢＭＩはｋｇ／ｍ２の単位を有する。ＢＭＩは、肥満を定義するための尺度であってもよい。
処置方法ならびに効能および薬物動態のアッセイ
本開示は、本明細書に開示される１つまたは複数の改変ウイルスの投与により対象を処置するための方法を提供する。本明細書で互換的に使用される「個体」または「対象」は、ヒトまたは非ヒト対象を指す。非ヒト対象の非限定例としては、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、マウス、ラット、モルモット、ウサギ、ブタ、鳥類（fowl）、ウマ、ウシ、ヤギ、ヒツジ、クジラなどが挙げられる。一部の実施形態では、対象はヒトである。
がん細胞に、治療有効量の上記の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの改変ウイルス、またはそれを含有する医薬組成物を投与することを含む、がん細胞において毒性効果をもたらす方法が提供される。本開示はさらに、第１のがん細胞に、上記の改変ウイルスを投与して、第１のがん細胞を前記ウイルスに感染させることを含む、第２のがん細胞の成長および増殖のうちの少なくとも一方を阻害する方法を提供する。かくして、本明細書に開示される方法の一部の実施形態では、治療有効量の本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、またはそれを含有する医薬組成物を投与する際に全てではないがんまたは腫瘍細胞が感染し、非感染細胞の成長を、直接的感染なしに阻害することができることが企図される。
一部の例では、本開示の方法および組成物を使用して、腫瘍溶解を誘導する、細胞を殺傷する、増殖を阻害する、転移を阻害する、腫瘍サイズを低下させる、およびそうでなければ腫瘍細胞の悪性表現型を逆転させるか、または減少させるために、がん細胞または腫瘍を、治療有効用量の本明細書に記載の例示的腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそれを含有する医薬組成物と接触させることができる。ある特定の実施形態では、有効量の本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはその医薬組成物などの、本開示の改変ウイルスは、がん細胞の破壊もしくは溶解またはがん細胞の増殖もしくはサイズの阻害もしくは低下である、腫瘍溶解を誘導するのに十分な量を含んでもよい。がん細胞の増殖の低下は、例えば、前記細胞を含む腫瘍の細胞死もしくはより遅い複製速度もしくは増殖速度の低下またはがん細胞を含有する対象の生存の延長によって表すことができる。
一部の実施形態では、対象に、有効量の上記の改変ウイルスを投与することを含む、がんまたは腫瘍を有する対象を処置する方法が提供される。そのような方法における有効量は、がんの増殖速度もしくは拡散を減少させる、または対象の生存を延長させる量を含んでもよい。本開示は、腫瘍の増殖を減少させる方法であって、腫瘍に、有効量の上記の改変ウイルスを投与することを含んでもよい、方法を提供する。ある特定の実施形態では、改変ウイルス、またはその医薬組成物の有効量は、腫瘍の増殖またはサイズの遅延、阻害または減少を誘導するのに十分な量を含んでもよく、腫瘍の根絶を含んでもよい。腫瘍の増殖の減少は、例えば、増殖速度の低下または腫瘍を含有する対象の生存の延長によって表すことができる。
本開示はまた、本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの感染性もしくは抗腫瘍活性、またはその腫瘍特異的ウイルス複製の量を決定する方法であって、（ｉ）対象に、ルシフェラーゼリポーター遺伝子をさらに発現する、治療有効量の本開示による腫瘍溶解性ワクシニアウイルスもしくは医薬組成物を、単独で、またはさらなる療法と共に投与するステップ；（ｉｉ）ウイルスを投与した直後に対象から第１の生物学的試料を収集し、第１の生物学的試料中のルシフェラーゼリポーターのレベルを決定するステップ；（ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）における投与後に対象から第２の生物学的試料を収集するステップ、および（ｉｉｉ）第２の生物学的試料中のルシフェラーゼリポーターのレベルを検出するステップを含んでもよく、ルシフェラーゼのレベルがステップ（ｉｉ）よりもステップ（ｉｉｉ）において高い場合、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスが、感染性であり、抗腫瘍活性を示し、腫瘍特異的ウイルス複製を示すと決定される、方法も提供する。第２の生物学的試料は、ステップ（ｉ）における投与後、約３０分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１２時間、約１５時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、約７２時間、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約１５日、約１ヶ月、約２ヶ月までで収集される。一部の実施形態では、上記方法は、ステップ（ｉ）および（ｉｉｉ）において、対象に、治療有効量の本開示の改変ウイルス、例えば、本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそれを含む医薬組成物を投与した後の前記対象から収集された血漿試料中の、１つまたは複数のアッセイするサイトカインレベル、例えば、ＩＬ−２、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＩＦＮ−γ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３のレベルを検出することをさらに含んでもよい。本開示の一部の実施形態では、上記のステップ（ｉｉ）と（ｉｖ）の間のルシフェラーゼ生物発光の増加は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含有しない以外は同一のウイルスにおけるものと比較して、本開示の改変ウイルス、例えば、本明細書に記載のＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含有する腫瘍溶解性ワクシニアウイルスについてより高い。改変ウイルスの投与後のウイルス負荷を検出し、モニタリングするための他の例示的な技術としては、リアルタイム定量的ＰＣＲが挙げられる。
さらに、治療有効量の本開示による改変ウイルス、例えば、本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは該ワクシニアウイルスを含有する医薬組成物の投与後の薬物動態をモニタリングする方法が提供される。薬物動態をモニタリングするための例示的な方法は、以下のステップ：（ｉ）対象に、治療有効量の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそれを含む医薬組成物を、単独で、またはさらなる療法と共に投与するステップ；（ｉｉ）ステップ（ｉ）における投与後、約１５分、約３０分、約４５分、約６０分、約７５分、約９０分、約１２０分、約１８０分、および約２４０分、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１２時間、約１５時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、約７２時間、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約１５日、約１ヶ月、約２ヶ月までから選択される１つまたは複数の時点で対象から生物学的試料を収集するステップならびに（ｉｉｉ）上記時点で収集された生物学的試料中のウイルスゲノム（またはルシフェラーゼなどの、ウイルスゲノム内に挿入されたリポーター遺伝子）の量を検出するステップを含んでもよい。一部の例では、ウイルスゲノムのコピー／ｍＬは、１５分の時点で収集された試料中で最も高くてもよく、さらに、２４０分の時点で収集された試料は、検出可能な量のウイルスゲノムを含有しなくてもよい。したがって、一部の例では、ウイルスピークを、投与の約１５分後に観察することができ、大部分のウイルスは約２４０分（または４時間）後に対象の系から消失してもよい。一部の例では、第１のウイルスピークを、投与の約１５分後に観察することができ、第２のウイルスピークを、その後の時点、例えば、約３０分、約４５分、約６０分、または約９０分で収集された生物学的試料中で観察することができる。生物学的試料は、例示的な実施形態では、血液であってよく、ウイルスゲノムの量／ｍＬを、定量的ＰＣＲまたは他の適切な技術によって決定することができる。一部の例では、第１のウイルスピークを、投与の約１５分後に観察することができ、第２のウイルスピークを、本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの、本開示の改変ウイルスの投与後、約３０分、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１０時間、約１２時間、約１５時間、約２４時間、約３６時間、約４８時間、約７２時間、約４日、約５日、約６日、約７日、約８日、約９日、約１０日、約１１日、約１２日、約１３日、約１４日、約１５日、約１ヶ月、約２ヶ月までで観察することができる。
一部の例では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの改変ウイルスの腫瘍選択的複製を、ルシフェラーゼ遺伝子などのリポーター遺伝子の使用によって測定することができる。一部の実施形態では、ルシフェラーゼ遺伝子を、ウイルスのゲノム中に挿入し、腫瘍細胞をウイルスに感染させることができる。感染した腫瘍細胞中の生物発光を測定して、腫瘍選択的複製をモニタリングすることができる。一部の例は、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含有しない以外は同一の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスにおけるものと比較して、本開示の改変ウイルス、例えば、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスにおいてルシフェラーゼリポーター生物発光の増加を示す。
ヒアルロニダーゼＰＨ−２０は、細胞外マトリックス分解において機能することができ、ウイルス拡散を改善することができる。ウイルス拡散を、ルシフェラーゼ遺伝子などのリポーター遺伝子の使用によって測定することもできる。ルシフェラーゼ遺伝子をウイルスのゲノム中に挿入し、腫瘍細胞をウイルスに感染させることができる。感染した腫瘍細胞中の生物発光を測定して、ウイルス拡散を評価することができる。一部の例は、ＰＨ−２０と共に、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含有しない以外は同一の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスにおけるものと比較して、ＰＨ−２０と共に、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの、本開示の改変ウイルスにおいてルシフェラーゼリポーター生物発光の増加を示す。かくして、ある特定の例では、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を単独で、またはＰＨ−２０と共に含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスは、上記の外因性遺伝子を有さないウイルスと比較して、腫瘍特異的ウイルス複製の増加およびウイルス拡散の改善を示す。
改変ウイルスの送達
一部の実施形態では、対象に投与される、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスの量は、約１０３〜１０１２感染性ウイルス粒子もしくはプラーク形成単位（ＰＦＵ）、または約１０５〜１０１０ＰＦＵ、または約１０５〜１０８ＰＦＵ、または約１０８〜１０１０ＰＦＵであってもよい。一部の実施形態では、対象に投与される、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスの量は、約１０３〜１０１２ウイルス粒子もしくはプラーク形成単位（ＰＦＵ）、または約１０５〜１０１０ＰＦＵ、または約１０５〜１０８ＰＦＵ、または約１０８〜１０１０ＰＦＵであってもよい。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスを、約１０３ＰＦＵ／用量〜約１０４ＰＦＵ／用量、約１０４ＰＦＵ／用量〜約１０５ＰＦＵ／用量、約１０５ＰＦＵ／用量〜約１０６ＰＦＵ／用量、約１０７ＰＦＵ／用量〜約１０８ＰＦＵ／用量、約１０９ＰＦＵ／用量〜約１０１０ＰＦＵ／用量、約１０１０ＰＦＵ／用量〜約１０１１ＰＦＵ／用量、約１０１１ＰＦＵ／用量〜約１０１２ＰＦＵ／用量、約１０１２ＰＦＵ／用量〜約１０１３ＰＦＵ／用量、約１０１３ＰＦＵ／用量〜約１０１４ＰＦＵ／用量、または約１０１４ＰＦＵ／用量〜約１０１５ＰＦＵ／用量を含んでもよい用量で投与することができる。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスを、約２×１０３ＰＦＵ／用量、３×１０３ＰＦＵ／用量、４×１０３ＰＦＵ／用量、５×１０３ＰＦＵ／用量、６×１０３ＰＦＵ／用量、７×１０３ＰＦＵ／用量、８×１０３ＰＦＵ／用量、９×１０３ＰＦＵ／用量、約１０４ＰＦＵ／用量、約２×１０４ＰＦＵ／用量、約３×１０４ＰＦＵ／用量、約４×１０４ＰＦＵ／用量、約５×１０４ＰＦＵ／用量、約６×１０４ＰＦＵ／用量、約７×１０４ＰＦＵ／用量、約８×１０４ＰＦＵ／用量、約９×１０４ＰＦＵ／用量、約１０５ＰＦＵ／用量、２×１０５ＰＦＵ／用量、３×１０５ＰＦＵ／用量、４×１０５ＰＦＵ／用量、５×１０５ＰＦＵ／用量、６×１０５ＰＦＵ／用量、７×１０５ＰＦＵ／用量、８×１０５ＰＦＵ／用量、９×１０５ＰＦＵ／用量、約１０６ＰＦＵ／用量、約２×１０６ＰＦＵ／用量、約３×１０６ＰＦＵ／用量、約４×１０６ＰＦＵ／用量、約５×１０６ＰＦＵ／用量、約６×１０６ＰＦＵ／用量、約７×１０６ＰＦＵ／用量、約８×１０６ＰＦＵ／用量、約９×１０６ＰＦＵ／用量、約１０７ＰＦＵ／用量、約２×１０７ＰＦＵ／用量、約３×１０７ＰＦＵ／用量、約４×１０７ＰＦＵ／用量、約５×１０７ＰＦＵ／用量、約６×１０７ＰＦＵ／用量、約７×１０７ＰＦＵ／用量、約８×１０７ＰＦＵ／用量、約９×１０７ＰＦＵ／用量、約１０８ＰＦＵ／用量、約２×１０８ＰＦＵ／用量、約３×１０８ＰＦＵ／用量、約４×１０８ＰＦＵ／用量、約５×１０８ＰＦＵ／用量、約６×１０８ＰＦＵ／用量、約７×１０８ＰＦＵ／用量、約８×１０８ＰＦＵ／用量、約９×１０８ＰＦＵ／用量、約１０９ＰＦＵ／用量、約２×１０９ＰＦＵ／用量、約３×１０９ＰＦＵ／用量、約４×１０９ＰＦＵ／用量、約５×１０９ＰＦＵ／用量、約６×１０９ＰＦＵ／用量、約７×１０９ＰＦＵ／用量、約８×１０９ＰＦＵ／用量、約９×１０９ＰＦＵ／用量、約１０１０ＰＦＵ／用量、約２×１０１０ＰＦＵ／用量、約３×１０１０ＰＦＵ／用量、約４×１０１０ＰＦＵ／用量、約５×１０１０ＰＦＵ／用量、約６×１０１０ＰＦＵ／用量、約７×１０１０ＰＦＵ／用量、約８×１０１０ＰＦＵ／用量、約９×１０１０ＰＦＵ／用量、約１０１０ＰＦＵ／用量、約２×１０１０ＰＦＵ／用量、約３×１０１０ＰＦＵ／用量、約４×１０１０ＰＦＵ／用量、約５×１０１０ＰＦＵ／用量、約６×１０１０ＰＦＵ／用量、約７×１０１０ＰＦＵ／用量、約８×１０１０ＰＦＵ／用量、約９×１０１０ＰＦＵ／用量、約１０１１ＰＦＵ／用量、約２×１０１１ＰＦＵ／用量、約３×１０１１ＰＦＵ／用量、約４×１０１１ＰＦＵ／用量、約５×１０１１ＰＦＵ／用量、約６×１０１１ＰＦＵ／用量、約７×１０１１ＰＦＵ／用量、約８×１０１１ＰＦＵ／用量、約９×１０１１ＰＦＵ／用量、または約１０１２ＰＦＵ／用量、約１０１２ＰＦＵ／用量〜約１０１３ＰＦＵ／用量、約１０１３ＰＦＵ／用量〜約１０１４ＰＦＵ／用量、または約１０１４ＰＦＵ／用量〜約１０１５ＰＦＵ／用量を含んでもよい用量で投与することができる。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスを、５×１０９ＰＦＵ／用量を含んでもよい用量で投与することができる。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスを、最大で５×１０９ＰＦＵ／用量を含んでもよい用量で投与することができる。
一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスを、約１０３ウイルス粒子／用量〜約１０４ウイルス粒子／用量、約１０４ウイルス粒子／用量〜約１０５ウイルス粒子／用量、約１０５ウイルス粒子／用量〜約１０６ウイルス粒子／用量、約１０７ウイルス粒子／用量〜約１０８ウイルス粒子／用量、約１０９ウイルス粒子／用量〜約１０１０ウイルス粒子／用量、約１０１０ウイルス粒子／用量〜約１０１１ウイルス粒子／用量、約１０１１ウイルス粒子／用量〜約１０１２ウイルス粒子／用量、約１０１２ウイルス粒子／用量〜約１０１３ウイルス粒子／用量、約１０１３ウイルス粒子／用量〜約１０１４ウイルス粒子／用量、または約１０１４ウイルス粒子／用量〜約１０１５ウイルス粒子／用量を含んでもよい用量で投与することができる。
一部の実施形態では、本開示の改変ウイルスを、約１０３ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約１０４ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０５ＰＦＵ／ｋｇ、約１０５ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約１０７ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約１０９ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１０ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１１ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１２ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１２ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１３ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１３ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１４ＰＦＵ／ｋｇ、または約１０１４ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１５ＰＦＵ／ｋｇを含んでもよい用量で投与することができる。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスを、約２×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、３×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、４×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、５×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、６×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、７×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、８×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、９×１０３ＰＦＵ／ｋｇ、約１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０４ＰＦＵ／ｋｇ、約１０５ＰＦＵ／ｋｇ、２×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、３×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、４×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、５×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、６×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、７×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、８×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、９×１０５ＰＦＵ／ｋｇ、約１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０６ＰＦＵ／ｋｇ、約１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０７ＰＦＵ／ｋｇ、約１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０８ＰＦＵ／ｋｇ、約１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０９ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０１０ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約２×１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約３×１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約４×１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約５×１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約６×１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約７×１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約８×１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、約９×１０１１ＰＦＵ／ｋｇ、または約１０１２ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１２ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１３ＰＦＵ／ｋｇ、約１０１３ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１４ＰＦＵ／ｋｇ、または約１０１４ＰＦＵ／ｋｇ〜約１０１５ＰＦＵ／ｋｇを含んでもよい用量で投与することができる。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスを、５×１０９ＰＦＵ／ｋｇを含んでもよい用量で投与することができる。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスを、最大で５×１０９ＰＦＵ／ｋｇを含んでもよい用量で投与することができる。
一部の実施形態では、本開示の改変ウイルスを、約１０３ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０４ウイルス粒子／ｋｇ、約１０４ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０５ウイルス粒子／ｋｇ、約１０５ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０６ウイルス粒子／ｋｇ、約１０７ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０８ウイルス粒子／ｋｇ、約１０９ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０１０ウイルス粒子／ｋｇ、約１０１０ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０１１ウイルス粒子／ｋｇ、約１０１１ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０１２ウイルス粒子／ｋｇ、約１０１２ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０１３ウイルス粒子／ｋｇ、約１０１３ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０１４ウイルス粒子／ｋｇ、または約１０１４ウイルス粒子／ｋｇ〜約１０１５ウイルス粒子／ｋｇを含んでもよい用量で投与することができる。
本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの液体剤形は、ある特定の実施形態では、約１０３ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約１０４ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０５ＰＦＵ／ｍＬ、約１０５ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約１０７ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約１０９ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１０ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１１ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１２ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１２ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１３ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１３ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１４ＰＦＵ／ｍＬ、または約１０１４ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１５ＰＦＵ／ｍＬのウイルス用量を含んでもよい。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスを、約２×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、３×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、４×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、５×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、６×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、７×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、８×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、９×１０３ＰＦＵ／ｍＬ、約１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０４ＰＦＵ／ｍＬ、約１０５ＰＦＵ／ｍＬ、２×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、３×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、４×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、５×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、６×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、７×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、８×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、９×１０５ＰＦＵ／ｍＬ、約１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０６ＰＦＵ／ｍＬ、約１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０７ＰＦＵ／ｍＬ、約１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０８ＰＦＵ／ｍＬ、約１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０９ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０１０ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約２×１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約３×１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約４×１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約５×１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約６×１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約７×１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約８×１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、約９×１０１１ＰＦＵ／ｍＬ、または約１０１２ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１２ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１３ＰＦＵ／ｍＬ、約１０１３ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１４ＰＦＵ／ｍＬ、または約１０１４ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１５ＰＦＵ／ｍＬを含んでもよい用量で投与することができる。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスを、５×１０９ＰＦＵ／ｍＬを含んでもよい用量で投与することができる。一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの本開示の改変ウイルスを、最大で５×１０９ＰＦＵ／ｍＬを含んでもよい用量で投与することができる。
改変ウイルスを注射によって投与する一部の例では、用量は、約１０３ウイルス粒子／注射、１０４ウイルス粒子／注射、１０５ウイルス粒子／注射、１０６ウイルス粒子／注射、１０７ウイルス粒子／注射、１０８ウイルス粒子／注射、１０９ウイルス粒子／注射、１０１０ウイルス粒子／注射、１０１１ウイルス粒子／注射、１０１２ウイルス粒子／注射、２×１０１２ウイルス粒子／注射、１０１３ウイルス粒子／注射、１０１４ウイルス粒子／注射、または１０１５ウイルス粒子／注射を含んでもよい。改変ウイルスを注射によって投与するさらなる例では、用量は、約１０３感染性ウイルス粒子／注射、１０４感染性ウイルス粒子／注射、１０５感染性ウイルス粒子／注射、１０６感染性ウイルス粒子／注射、１０７感染性ウイルス粒子／注射、１０８感染性ウイルス粒子／注射、１０９感染性ウイルス粒子／注射、１０１０感染性ウイルス粒子／注射、１０１１感染性ウイルス粒子／注射、１０１２感染性ウイルス粒子／注射、２×１０１２感染性ウイルス粒子／注射、１０１３感染性ウイルス粒子／注射、１０１４感染性ウイルス粒子／注射、または１０１５感染性ウイルス粒子／注射を含んでもよい。さらなる実施形態では、本開示の改変ウイルスを、約１０３組織培養５０％阻害用量（ＴＣＩＤ５０）／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、１０４ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、３×１０８ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、４×１０８ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、５×１０８ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、３×１０９ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、４×１０９ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、５×１０９ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、３×１０１０ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、４×１０１０ＴＣＩＤ５０／ｋｇ、または４×１０１０ＴＣＩＤ５０／ｋｇであってよい用量で投与することができる。ここで、１０ｘは、代替的に１ｅＸと表されることに留意されたい。ある特定の実施形態では、改変ウイルスを、１または複数の用量で投与することができる。ある特定の実施形態では、ウイルスを、腫瘍中の少なくとも約２０％の細胞において、腫瘍中の少なくとも約３０％の細胞において、腫瘍中の少なくとも約４０％の細胞において、腫瘍中の少なくとも約５０％の細胞において、腫瘍中の少なくとも約６０％の細胞において、腫瘍中の少なくとも約７０％の細胞において、腫瘍中の少なくとも約８０％の細胞において、または腫瘍中の少なくとも約９０％の細胞において、腫瘍溶解を誘導するのに十分な量で投与することができる。ある特定の実施形態では、ウイルスの単回用量は、１、２、５、１０、１５、２０または２４時間の期間にわたって対象または腫瘍に投与される量を指してもよい。ある特定の実施形態では、用量を、長時間かけて、または別々の注射によって拡散させることができる。ある特定の実施形態では、例えば、第２の処置が第１の処置の１、２、３、４、５、６、７日または週以内に行われる場合、複数用量（例えば、２、３、４、５、６またはそれより多い用量）のワクシニアウイルスを対象に投与することができる。ある特定の実施形態では、複数用量の改変ウイルスを、１、２、３、４、５、６、７またはそれより多い日数または週数の期間にわたって対象に投与することができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物を、約１週〜約２週、約２週〜約３週、約３週〜約４週、約４週〜約５週、約６週〜約７週、約７週〜約８週、約８週〜約９週、約９週〜約１０週、約１０週〜約１１週、約１１週〜約１２週、約１２週〜約２４週、約２４週〜約４８週、約４８週もしくは約５２週、またはそれより長い期間にわたって投与することができる。本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物の投与頻度は、ある特定の例では、１日１回、１日２回、１週毎に１回、３週毎に１回、４週毎に１回（もしくは月１回）、８週毎に１回（もしくは２ヶ月に１回）、１２週毎に１回（もしくは３ヶ月毎に１回）、または２４週毎に１回（もしくは６ヶ月に１回）であってもよい。本明細書に開示される方法の一部の実施形態では、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物を、独立に、第１の期間にわたって初期用量で、第２の期間にわたって中間用量で、および第３の期間にわたって高用量で投与することができる。一部の実施形態では、初期用量は中間用量より低く、中間用量は高用量より低い。一部の実施形態では、第１、第２、および第３の期間は、独立に、約１週〜約２週、約２週〜約３週、約３週〜約４週、約４週〜約５週、約６週〜約７週、約７週〜約８週、約８週〜約９週、約９週〜約１０週、約１０週〜約１１週、約１１週〜約１２週、約１２週〜約２４週、約２４週〜約４８週、約４８週もしくは約５２週であるか、またはそれより長い。
一部の例では、対象に、本明細書に記載の処置方法のいずれかに従って、本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそれを含む医薬組成物などの改変ウイルスの投与の前、それと同時に、およびその後に、低炭水化物食、例えば、ケトン食療法を処方してもよい。ある特定の実施形態では、対象に、５００グラム未満の炭水化物／日、４５０グラム未満の炭水化物／日、４５０グラム未満の炭水化物／日、４００グラム未満の炭水化物／日、３５０グラム未満の炭水化物／日、３００グラム未満の炭水化物／日、２５０グラム未満の炭水化物／日、２００グラム未満の炭水化物／日、１５０グラム未満の炭水化物／日、１００グラム未満の炭水化物／日、９０グラム未満の炭水化物／日、８０グラム未満の炭水化物／日、７０グラム未満の炭水化物／日、６０グラム未満の炭水化物／日、５０グラム未満の炭水化物／日、４０グラム未満の炭水化物／日、３０グラム未満の炭水化物／日、２０グラム未満の炭水化物／日、または１０グラム未満の炭水化物／日を消費することを含んでもよい食事を処方する。
がんまたは腫瘍細胞への、本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそれを含む医薬組成物などの本開示の改変ウイルスの送達のための例示的方法は、腫瘍内注射によるものであってもよい。しかしながら、別の投与方法、例えば、静脈内、輸注、非経口、静脈内、皮内、筋肉内、経皮、直腸、尿道内、膣内、鼻内、髄腔内、または腹腔内投与を使用することもできる。投与経路は、腫瘍の位置および性質によって変化してもよい。ある特定の実施形態では、投与経路は、歯内、経皮、非経口、静脈内、筋肉内、鼻内、皮下、限局性（例えば、腫瘍の近傍、特に、腫瘍の血管系もしくは隣接する血管系）、経皮、髄腔内、気管内、腹腔内、動脈内、膀胱内、腫瘍内、吸入、かん流、洗浄または経口であってもよい。注射用量の腫瘍溶解性ウイルスを、ボーラス注射として、または遅い輸注として投与することができる。ある特定の実施形態では、改変ウイルスを、患者に埋め込まれた供給源から患者に投与することができる。ある特定の実施形態では、改変ウイルスの投与を、選択された期間にわたる連続輸注によって行うことができる。一部の例では、本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、またはそれを含有する医薬組成物を、約１５分、約３０分、約４５分、約５０分、約５５分、約６０分、約７５分、約９０分、約１００分、もしくは約１２０分、またはそれより長い期間にわたる輸注により治療有効用量で投与することができる。本開示の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは医薬組成物を、液体用量として投与することができ、ここで、投与の総容量は、約１ｍＬ〜約５ｍＬ、約５ｍＬ〜１０ｍＬ、約１５ｍＬ〜約２０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約３０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約５０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約１００ｍＬ〜１５０ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約３５０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約４５０ｍＬ〜５００ｍＬ、約５００ｍＬ〜７５０ｍＬ、または約７５０ｍＬ〜１０００ｍＬである。
医薬組成物
本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの改変ウイルスを含有する医薬組成物を、溶液、グリセロール、液体ポリエチレングリコール中の分散物、および油中のその任意の組合せとして、固体剤形で、吸入剤形として、鼻内剤形として、リポソーム製剤として、ナノ粒子を含む剤形、マイクロ粒子を含む剤形、ポリマー剤形、またはその任意の組合せとして調製することができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、滅菌水、Ｔｒｉｓ緩衝液などの可溶化剤を含んでもよい。一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、賦形剤を含んでもよい。賦形剤は、Handbook of Pharmaceutical Excipients、American Pharmaceutical Association （１９８６年）に記載された賦形剤であってもよい。好適な賦形剤の非限定例としては、緩衝剤、保存剤、安定剤、結合剤、圧縮剤、潤滑剤、キレーター、分散促進剤、崩壊剤、香料、甘味料、着色料が挙げられる。
一部の実施形態では、賦形剤は、緩衝剤であってもよい。好適な緩衝剤の非限定例としては、クエン酸ナトリウム、炭酸マグネシウム、重炭酸マグネシウム、炭酸カルシウム、および重炭酸カルシウムが挙げられる。緩衝剤として、重炭酸ナトリウム、重炭酸カリウム、水酸化マグネシウム、乳酸マグネシウム、マグネシウムグルコメート、水酸化アルミニウム、クエン酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、ポリリン酸カリウム、ピロリン酸ナトリウム、ピロリン酸カリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸三ナトリウム、リン酸三カリウム、メタリン酸カリウム、酸化マグネシウム、水酸化マグネシウム、炭酸マグネシウム、ケイ酸マグネシウム、酢酸カルシウム、グリセロリン酸カルシウム、塩化カルシウム、水酸化カルシウムおよび他のカルシウム塩またはその組合せを、医薬製剤中で使用することができる。
一部の実施形態では、賦形剤は、保存剤を含んでもよい。好適な保存剤の非限定例としては、アルファ−トコフェロールおよびアスコルビン酸塩などの酸化防止剤、ならびにパラベン、クロロブタノール、およびフェノールなどの抗微生物剤が挙げられる。酸化防止剤は、限定されるものではないが、ＥＤＴＡ、クエン酸、アスコルビン酸、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、亜硫酸ナトリウム、ｐ−アミノ安息香酸、グルタチオン、没食子酸プロピル、システイン、メチオニン、エタノールおよびＮ−アセチルシステインをさらに含んでもよい。一部の例では、保存剤としては、バリダマイシンＡ、ＴＬ−３、オルトバナジウム酸ナトリウム、フッ化ナトリウム、Ｎ−ａ−トシル−Ｐｈｅ−クロロメチルケトン、Ｎ−ａ−トシル−Ｌｙｓ−クロロメチルケトン、アプロチニン、フェニルメチルスルホニルフルオリド、ジイソプロピルフルオロホスフェート、キナーゼ阻害剤、ホスファターゼ阻害剤、カスパーゼ阻害剤、グランザイム阻害剤、細胞接着阻害剤、細胞分裂阻害剤、細胞周期阻害剤、脂質シグナリング阻害剤、プロテアーゼ阻害剤、還元剤、アルキル化剤、抗微生物剤、オキシダーゼ阻害剤、または他の阻害剤が挙げられる。
一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、賦形剤としての結合剤を含んでもよい。好適な結合剤の非限定例としては、デンプン、アルファ化デンプン、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、ポリアクリルアミド、ポリビニルオキソアゾリドン、ポリビニルアルコール、Ｃ１２〜Ｃ１８脂肪酸アルコール、ポリエチレングリコール、ポリオール、サッカリド、オリゴ糖、およびその組合せが挙げられる。医薬製剤中で使用することができる結合剤を、ジャガイモデンプン、トウモロコシデンプン、コムギデンプンなどのデンプン；スクロース、グルコース、デキストロース、ラクトース、マルトデキストリンなどの糖；天然および合成ゴム；ゼラチン；微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロースなどのセルロース誘導体；ポリビニルピロリドン（ポビドン）；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）；ワックス；炭酸カルシウム；リン酸カルシウム；ソルビトール、キシリトール、マンニトールなどのアルコールならびに水またはその組合せから選択することができる。
一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、賦形剤として潤滑剤を含んでもよい。好適な潤滑剤の非限定例としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、水素化植物油、ステロテックス、モノステアリン酸ポリオキシエチレン、タルク、ポリエチレングリコール、安息香酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、および軽油が挙げられる。医薬製剤中で使用することができる潤滑剤を、ステアリン酸金属塩（ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸アルミニウムなど）、脂肪酸エステル（フマル酸ステアリルナトリウムなど）、脂肪酸（ステアリン酸など）、脂肪アルコール、ベヘン酸グリセリル、鉱油、パラフィン、水素化植物油、ロイシン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ラウリル硫酸金属塩（ラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウムなど）、塩化ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウムおよびタルクまたはその組合せから選択することができる。
一部の実施形態では、医薬製剤は、賦形剤として分散促進剤を含んでもよい。好適な分散剤の非限定例としては、デンプン、アルギン酸、ポリビニルピロリドン、グアーゴム、カオリン、ベントナイト、精製木材セルロース、デンプングリコール酸ナトリウム、イソアモルファスシリケート（isoamorphous silicate）、および高ＨＬＢ乳化剤界面活性剤としての微結晶性セルロースが挙げられる。
一部の実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、賦形剤として崩壊剤を含んでもよい。一部の実施形態では、崩壊剤は、非発泡性崩壊剤であってもよい。好適な非発泡性崩壊剤の非限定例としては、トウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルファ化デンプンおよびその加工デンプンなどのデンプン、甘味料、粘土、例えば、ベントナイト、微結晶性セルロース、アルギネート、デンプングリコール酸ナトリウム、寒天、グアー、ローカストビーン、カラヤ、ペシチン、およびトラガカントなどの粘性物質が挙げられる。一部の実施形態では、崩壊剤は、発泡性崩壊剤であってもよい。好適な発泡性崩壊剤の非限定例としては、クエン酸と組み合わせた重炭酸ナトリウム、および酒石酸と組み合わせた重炭酸ナトリウムが挙げられる。
一部の実施形態では、賦形剤は、香料を含んでもよい。外層に組み込まれる香料を、合成フレーバー油およびフレーバー芳香族；天然油；植物、葉、花、および果実からの抽出物；ならびにその組合せから選択することができる。一部の実施形態では、香料を、シナモン油；冬緑油；ペパーミント油；クローバー油；干し草油；アニス油；ユーカリ；バニラ；レモン油、オレンジ油、ブドウおよびグレープフルーツ油などの柑橘油；ならびにリンゴ、モモ、ナシ、イチゴ、ラズベリー、チェリー、プラム、パイナップル、およびアプリコットなどの果実エッセンスからなる群から選択することができる。
一部の実施形態では、賦形剤は、甘味料を含んでもよい。好適な甘味料の非限定例としては、グルコース（コーンシロップ）、デキストロース、転化糖、フルクトース、およびその混合物（担体として使用しない場合）；サッカリンおよびナトリウム塩などのその様々な塩；アスパルテームなどのジペプチド甘味料；ジヒドロカルコン化合物、グリシルリジン；Ｓｔｅｖｉａ Ｒｅｂａｕｄｉａｎａ（ステビオシド）；スクラロースなどの、スクロースのクロロ誘導体；ならびにソルビトール、マンニトール、シリトールなどの糖アルコールが挙げられる。
一部の例では、本明細書に記載の医薬組成物は、着色料を含んでもよい。好適な着色料の非限定例としては、食品、薬物および化粧品用色素（ＦＤ＆Ｃ）、薬物および化粧品用色素（Ｄ＆Ｃ）、および外部薬物および化粧品用色素（Ｅｘｔ．Ｄ＆Ｃ）が挙げられる。着色料を、色素またはその対応するレーキとして使用することができる。
一部の例では、本明細書に記載の医薬組成物は、キレーターを含んでもよい。一部の事例では、キレーターは、抗真菌性キレーターであってもよい。例としては、限定されるものではないが、エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＤＴＡ）；ＥＤＴＡの二ナトリウム、三ナトリウム、四ナトリウム、二カリウム、三カリウム、ジリチウムおよびジアンモニウム塩；ＥＤＴＡのバリウム、カルシウム、コバルト、銅、ジスプロシウム、ユーロピウム、鉄、インジウム、ランタン、マグネシウム、マンガン、ニッケル、サマリウム、ストロンチウム、または亜鉛キレート；ｔｒａｎｓ−１，２−ジアミノシクロヘキサン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸一水和物；Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン；１，３−ジアミノ−２−ヒドロキシプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸；１，３−ジアミノプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸；エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジ酢酸；エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジプロピオン酸二塩酸塩；エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ビス（メチレンホスホン酸）半水和物；Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−三酢酸；エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラキス（メチレンホスホン酸）；Ｏ，Ｏ’−ビス（２−アミノエチル）エチレングリコール−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸；Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシベンジル）エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ−ジ酢酸；１，６−ヘキサメチレンジアミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸；Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）イミノジ酢酸；イミノジ酢酸；１，２−ジアミノプロパン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸；ニトリロ三酢酸；ニトリロ三プロピオン酸；ニトリロトリス（メチレンリン酸）の三ナトリウム塩；７，１９，３０−トリオキサ−１，４，１０，１３，１６，２２，２７，３３−オクタアザビシクロ［１１，１１，１１］ペンタトリアコンタンヘキサヒドロブロミド；またはトリエチレンテトラミン−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’，Ｎ’’’，Ｎ’’’−六酢酸が挙げられる。
また、本明細書に開示される１つまたは複数の改変ウイルスと、１つまたは複数の他の抗微生物剤または抗真菌剤、例えば、アンホテリシンＢ、アンホテリシンＢ脂質複合体（ＡＢＣＤ）、リポソームアンホテリシンＢ（Ｌ−ＡＭＢ）、およびリポソームナイスタチンなどのポリエン、ボリコナゾール、フルコナゾール、ケトコナゾール、イトラコナゾール、ポザコナゾールなどのアゾールおよびトリアゾール；カスポフンギン、ミカフンギン（ＦＫ４６３）、およびＶ−エキノカンジン（ＬＹ３０３３６６）などのグルカン合成酵素阻害剤；グリセオフルビン；テルビナフィンなどのアリルアミン；フルシトシンまたは本明細書に記載のものなどの他の抗真菌剤とを含む組合せ生成物も企図される。さらに、ペプチドを、シクロピロックスオラミン、ハロプロギン、トルナフテート、ウンデシレナート、局所ナイスタチン（nysatin）、アモロルフィン、ブテナフィン、ナフチフィン、テルビナフィン、および他の局所薬剤などの局所抗真菌剤と組み合わせることができることが企図される。一部の例では、医薬組成物は、さらなる薬剤を含んでもよい。一部の事例では、さらなる薬剤は、医薬組成物中に治療有効量で存在してもよい。
通常の保存および使用条件下で、本明細書に記載の医薬組成物は、微生物の増殖を防止するための保存剤を含んでもよい。ある特定の例では、本明細書に記載の医薬組成物は、保存剤を含まなくてもよい。注射としての使用にとって好適な医薬形態は、滅菌水性溶液または分散物および滅菌注射溶液または分散物の即時調製のための滅菌粉末を含んでもよい。医薬組成物は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、および／もしくは植物油、またはその任意の組合せを含有する溶媒または分散媒体である担体を含んでもよい。例えば、レシチンなどのコーティングの使用により、分散物の場合、必要な粒径の維持により、および界面活性剤の使用により、適切な流動性を維持することができる。微生物の作用の防止を、様々な抗細菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによってもたらすことができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖または塩化ナトリウムを含有させることが好ましいであろう。注射用組成物の長期的吸収を、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンの組成物中での使用によってもたらすことができる。
水性溶液中での非経口投与のために、例えば、液体剤形を必要に応じて好適に緩衝化し、液体希釈剤を十分な生理食塩水またはグルコースと等張性にすることができる。液体剤形は、静脈内、筋肉内、皮下、腫瘍内、および腹腔内投与にとって特に好適である。これに関して、用いることができる滅菌水性媒体は、本開示に照らせば当業者には公知であろう。例えば、１用量を、１ｍＬ〜２０ｍＬの等張性ＮａＣｌ溶液に溶解し、１００ｍＬ〜１０００ｍＬの流体、例えば、重炭酸ナトリウム緩衝生理食塩水に添加するか、または提案される輸注部位に注射することができる。
ある特定の実施形態では、滅菌注射溶液を、本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたはそれを含有する医薬組成物などの、本開示による改変ウイルスを、必要な量で、上記に列挙された様々な他の成分と共に適切な溶媒中に組み込んだ後、必要に応じて濾過滅菌することによって調製することができる。一般に、分散物は、様々な滅菌された活性成分を、基本分散媒体および上記に列挙されたものに由来する必要な他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって調製される。本明細書に開示される組成物を、中性形態または塩形態で製剤化することができる。薬学的に許容される塩としては、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基と共に形成される）および例えば、塩酸もしくはリン酸などの無機酸、または酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸と共に形成されるものが挙げられる。遊離カルボキシル基と共に形成される塩を、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化鉄などの無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカインなどの有機塩基から誘導することもできる。製剤化の際に、医薬組成物を、用量製剤と適合する様式で、また、治療有効であるような量で投与することができる。
ある特定の実施形態では、本開示の医薬組成物は、薬学的に許容される担体と共に、本明細書に開示される有効量の改変ウイルスを含んでもよい。本明細書で使用される「薬学的に許容される」とは、活性成分の生物活性の有効性に干渉しない、および／またはそれが投与される患者にとって毒性ではない任意の担体を含む。好適な薬学的担体の非限定例としては、リン酸緩衝生理食塩溶液、水、油／水エマルジョンなどのエマルジョン、様々な種類の湿潤剤および滅菌溶液が挙げられる。薬学的に適合する担体のさらなる非限定例としては、ゲル、生体吸着性マトリックス材料、改変ウイルスまたは任意の他の好適なビヒクルを含有する埋込みエレメント、送達または分配手段または材料が挙げられる。そのような担体を、従来の方法によって製剤化し、有効量で対象に投与することができる。
製造方法
本開示の改変ウイルスを、当業者には公知の方法によって製造することができる。ある特定の実施形態では、改変ウイルスを、好適な宿主細胞、例えば、ＨｅＬａ細胞、２９３細胞、またはＶｅｒｏ細胞中で増殖させ、宿主細胞から単離し、経時的な感染性の喪失が最小化されるような、ウイルスの安定性および完全性を促進する条件で保存することができる。ある特定の例示的な方法では、改変ウイルスを、細胞スタック、ローラーボトル、またはかん流バイオリアクターを使用して宿主細胞中で増殖させる。一部の例では、改変ウイルスの精製のための下流の方法は、濾過（例えば、深層濾過、接線流濾過、もしくはその組合せ）、超遠心分離、またはクロマトグラフィー捕捉を含んでもよい。改変ウイルスを、例えば、凍結乾燥などによる、凍結または乾燥によって保存することができる。ある特定の実施形態では、投与前に、保存された改変ウイルスを再構成（保存のために乾燥した場合）し、投与のために薬学的に許容される担体中に希釈することができる。
一部の実施形態では、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの、本明細書に記載の改変ウイルスは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含有しない以外は同一のウイルスと比較してＨｅＬａ細胞および２９３細胞中で高力価を示す。ある特定の例では、ＨｅＬａ細胞および２９３細胞中でのより高力価は、ＨＭＧＢ１バリアントと、ＰＨ−２０などのヒアルロニダーゼとを発現する改変ワクシニアウイルス中で見られる。
組合せ療法
ある特定の実施形態では、本開示の方法は、本明細書に開示される改変ウイルスまたはそれを含有する医薬組成物を投与した後、およびその前に、またはそれと共に、１つまたは複数のさらなる療法を投与することを含む。さらなる療法の例としては、限定されるものではないが、化学療法、放射線、さらなるウイルスを用いる腫瘍溶解性ウイルス療法、免疫調節タンパク質を用いる処置、抗がん剤、またはその任意の組合せが挙げられる。さらなる療法を、腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの改変ウイルスの投与に関して、同時的に、または連続的に投与することができる。ある特定の実施形態では、本開示の方法は、本明細書に開示される改変ウイルスを投与した後、その前に、またはそれと共に、１つまたは複数の抗がん剤またはがん療法を投与することを含んでもよい。抗がん剤としては、限定されるものではないが、化学療法剤、放射線療法剤、サイトカイン、免疫チェックポイント阻害剤、抗血管新生剤、アポトーシス誘導剤、抗がん抗体および／または抗サイクリン依存的キナーゼ剤が挙げられる。ある特定の実施形態では、がん療法は、化学療法、生物療法、放射線療法、免疫療法、ホルモン療法、抗血管療法、低温療法、毒素療法および／または外科手術またはその組合せを含んでもよい。ある特定の実施形態では、本開示の方法は、本明細書に開示される改変ウイルスを投与した後、その前に、またはそれと共に、本明細書に記載のＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの、本開示の改変ウイルスを、単独で、またはＰＨ−２０と共に投与することを含んでもよい。腫瘍溶解性ワクシニアウイルスと、化学療法との組合せは、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする核酸配列を含有しない改変ウイルス中には見られない相乗効果を達成する。上記組合せの相乗効果を有利に使用して、Ｔａｘｏｌ（登録商標）などの化学療法の用量を低下させることができる。かくして、改変ウイルスを用いる、本明細書に開示される処置方法は、例えば、化学療法に応答するが、治療用量で副作用に罹患する患者の、化学療法と関連する毒性を低下させることができる。相乗効果は、ある特定の事例では、化学療法のみ、または腫瘍溶解性ワクシニアウイルスのみと比較して、腫瘍増殖の減少をもたらすことができる。腫瘍増殖の例示的減少は、約２％〜約５０％、例えば、約５％、約１０％、約２０％、約２５％、約３５％、約４５％または約５０％であってもよい。
ある特定の実施形態では、改変ウイルスを使用する処置を、単独で、または１つもしくは複数の免疫調節剤と組み合わせて使用することができる。免疫調節剤は、腫瘍またはがんと関連する抗ウイルス免疫を抑制することができる任意の化合物、分子または物質を含んでもよい。ある特定の実施形態では、免疫調節剤は、改変ウイルスに対する先天性免疫または適応免疫を抑制することができる。免疫調節剤の非限定例としては、抗ＣＤ３３抗体またはその可変領域、抗ＣＤ１１ｂ抗体またはその可変領域、ＣＯＸ２阻害剤、例えば、セレコキシブ、サイトカイン、例えば、ＩＬ−１２、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−２、ＩＦＮ３およびＩＦＮｙ、ならびにケモカイン、例えば、ＭＩＰ−１、ＭＣＰ−１およびＩＬ−８が挙げられる。ある特定の実施形態では、免疫調節剤としては、限定されるものではないが、抗ＣＴＬＡ４、抗ＰＤ−１、抗ＰＤＬ１およびＴＬＲアゴニスト（例えば、ポリ１：Ｃ）などの免疫チェックポイント阻害剤が挙げられる。
ある特定の例では、さらなる療法が放射線である場合、例示的な線量は、５，０００Ｒａｄ（５０Ｇｙ）〜１００，０００Ｒａｄ（１０００Ｇｙ）、もしくは５０，０００Ｒａｄ（５００Ｇｙ）、または記載された範囲内の他の適切な線量であってもよい。あるいは、放射線線量は、約３０〜６０Ｇｙ、約４０〜約５０Ｇｙ、約４０〜４８Ｇｙ、もしくは約４４Ｇｙ、または記載された範囲内の他の適切な線量であってよく、その線量は、例えば、上記の線量測定試験によって決定される。本明細書で使用される「Ｇｙ」とは、１００Ｒａｄに等しい放射線の特異的吸収線量に関する単位を指してもよい。Ｇｙは、「グレイ」の省略形である。
ある特定の例では、さらなる療法が化学療法である場合、例示的な化学療法剤としては、限定されるものではないが、アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード誘導体、エチレンイミン、アルキルスルホン酸、ヒドラジンおよびトリアジン、ニトロソウレア、および金属塩）、植物アルカロイド（例えば、ビンカアルカロイド、タキサン、ポドフィロトキシン、およびカンプトテカン類似体）、抗腫瘍抗生物質（例えば、アントラサイクリン、クロモマイシンなど）、代謝拮抗剤（例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジンアンタゴニスト、プリンアンタゴニスト、およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤）、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤、および混合型抗新生物剤（例えば、リボヌクレオチドリダクターゼ阻害剤、副腎皮質ステロイド阻害剤、酵素、抗微小管剤、およびレチノイド）が挙げられる。例示的な化学療法剤としては、限定されるものではないが、アナストロゾール（Ａｒｉｍｉｄｅｘ（登録商標））、ビカルタミド（Ｃａｓｏｄｅｘ（登録商標））、ブレオマイシン硫酸塩（Ｂｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））、ブスルファン（Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、ブスルファン注射（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標））、カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、Ｎ４−ペントキシカルボニル−５−デオキシ−５−フルオロシチジン、カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、シスプラチン（Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標））、クラドリビン（Ｌｅｕｓｔａｔｉｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）またはＮｅｏｓａｒ（登録商標））、シタラビン、シトシンアラビノシド（Ｃｙｔｏｓａｒ−Ｕ（登録商標））、シタラビンリポソーム注射（ＤｅｐｏＣｙｔ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））、ダクチノマイシン（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ Ｄ、Ｃｏｓｍｅｇａｎ）、ダウノルビシン塩酸塩（Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））、ダウノルビシンクエン酸塩リポソーム注射（ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））、デキサメタゾン、ドセタキセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標））、ドキソルビシン塩酸塩（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）、Ｒｕｂｅｘ（登録商標））、エトポシド（Ｖｅｐｅｓｉｄ（登録商標））、フルダラビンリン酸塩（Ｆｌｕｄａｒａ（登録商標））、５−フルオロウラシル（Ａｄｒｕｃｉｌ（登録商標）、Ｅｆｕｄｅｘ（登録商標））、フルタミド（Ｅｕｌｅｘｉｎ（登録商標））、テザシチビン、ゲムシタビン（ジフルオロデオキシシチジン）、ヒドロキシウレア（Ｈｙｄｒｅａ（登録商標））、イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標））、イホスファミド（ＩＦＥＸ（登録商標））、イリノテカン（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標））、Ｌ−アスパラギナーゼ（ＥＬＳＰＡＲ（登録商標））、ロイコボリンカルシウム、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、６−メルカプトプリン（Ｐｕｒｉｎｅｔｈｏｌ（登録商標））、メトトレキサート（Ｆｏｌｅｘ（登録商標））、ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））、マイロターグ、パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））、フェニックス（イットリウム９０／ＭＸ−ＤＴＰＡ）、ペントスタチン、カルムスチンインプラント（Ｇｌｉａｄｅｌ（登録商標））を含むポリフェプロサン２０、タモキシフェンクエン酸塩（Ｎｏｌｖａｄｅｘ（登録商標））、テニポシド（Ｖｕｍｏｎ（登録商標））、６−チオグアニン、チオテパ、チラパザミン（Ｔｉｒａｚｏｎｅ（登録商標））、注射用トポテカン塩酸塩（Ｈｙｃａｍｐｔｉｎ（登録商標））、ビンブラスチン（Ｖｅｌｂａｎ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、およびビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、イブルチニブ、イデラリシブ、およびブレンツキシマブベドチンが挙げられる。
例示的なアルキル化剤としては、限定されるものではないが、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン誘導体、アルキルスルホン酸、ニトロソウレアおよびトリアゼン）：ウラシルマスタード（Ａｍｉｎｏｕｒａｃｉｌ Ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｃｈｌｏｒｅｔｈａｍｉｎａｃｉｌ（登録商標）、Ｄｅｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｄｅｓｍｅｔｈｙｌｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｈａｅｍａｎｔｈａｍｉｎｅ（登録商標）、Ｎｏｒｄｏｐａｎ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌ ｎｉｔｒｏｇｅｎ Ｍｕｓｔａｒｄ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｌｏｓｔ（登録商標）、Ｕｒａｃｉｌｍｏｓｔａｚａ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎ（登録商標）、Ｕｒａｍｕｓｔｉｎｅ（登録商標））、クロルメチン（Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標））、シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｃｌａｆｅｎ（登録商標）、Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（商標））、イホスファミド（Ｍｉｔｏｘａｎａ（登録商標））、メルファラン（Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））、クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））、ピポブロマン（Ａｍｅｄｅｌ（登録商標）、Ｖｅｒｃｙｔｅ（登録商標））、トリエチレンメラミン（Ｈｅｍｅｌ（登録商標）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）、Ｈｅｘａｓｔａｔ（登録商標））、トリエチレンチオホスホラミン、テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標））、チオテパ（Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標））、ブスルファン（Ｂｕｓｉｌｖｅｘ（登録商標）、Ｍｙｌｅｒａｎ（登録商標））、カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））、ロムスチン（ＣｅｅＮＵ（登録商標））、ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））、およびダカルバジン（ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標））が挙げられる。さらなる例示的なアルキル化剤としては、限定されるものではないが、オキサリプラチン（Ｅｌｏｘａｔｉｎ（登録商標））；テモゾロミド（Ｔｅｍｏｄａｒ（登録商標）およびＴｅｍｏｄａｌ（登録商標））；ダクチノマイシン（アクチノマイシン−Ｄとしても公知、Ｃｏｓｍｅｇｅｎ（登録商標））；メルファラン（Ｌ−ＰＡＭ、Ｌ−サルコライシン、およびフェニルアラニンマスタードとしても公知、Ａｌｋｅｒａｎ（登録商標））；アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）としても公知、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標））；カルムスチン（ＢｉＣＮＵ（登録商標））；ベンダムスチン（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））；ブスルファン（Ｂｕｓｕｌｆｅｘ（登録商標）およびＭｙｌｅｒａｎ（登録商標））；カルボプラチン（Ｐａｒａｐｌａｔｉｎ（登録商標））；ロムスチン（ＣＣＮＵとしても公知、ＣｅｅＮＵ（登録商標））；シスプラチン（ＣＤＤＰとしても公知、Ｐｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）およびＰｌａｔｉｎｏｌ（登録商標）−ＡＱ）；クロラムブシル（Ｌｅｕｋｅｒａｎ（登録商標））；シクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）およびＮｅｏｓａｒ（登録商標））；ダカルバジン（ＤＴＩＣ、ＤＩＣおよびイミダゾールカルボキサミド、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（登録商標）としても公知）；アルトレタミン（ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、Ｈｅｘａｌｅｎ（登録商標）としても公知）；イホスファミド（Ｉｆｅｘ（登録商標））；プレドヌムスチン；プロカルバジン（Ｍａｔｕｌａｎｅ（登録商標））；メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード、ムスチンおよびメクロレタミン塩酸塩、Ｍｕｓｔａｒｇｅｎ（登録商標）としても公知）；ストレプトゾシン（Ｚａｎｏｓａｒ（登録商標））；チオテパ（チオホスホアミド、ＴＥＳＰＡおよびＴＳＰＡ、Ｔｈｉｏｐｌｅｘ（登録商標）としても公知）；シクロホスファミド（Ｅｎｄｏｘａｎ（登録商標）、Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）、Ｎｅｏｓａｒ（登録商標）、Ｐｒｏｃｙｔｏｘ（登録商標）、Ｒｅｖｉｍｍｕｎｅ（登録商標））；ならびにベンダムスチンＨＣｌ（Ｔｒｅａｎｄａ（登録商標））が挙げられる。
例示的なアントラサイクリンとしては、限定されるものではないが、例えば、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標）およびＲｕｂｅｘ（登録商標））；ブレオマイシン（Ｌｅｎｏｘａｎｅ（登録商標））；ダウノルビシン（ダウノルビシン塩酸塩、ダウノマイシン、およびルビドマイシン塩酸塩、Ｃｅｒｕｂｉｄｉｎｅ（登録商標））；ダウノルビシンリポソーム（ダウノルビシンクエン酸塩リポソーム、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ（登録商標））；ミトキサントロン（ＤＨＡＤ、Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標））；エピルビシン（Ｅｌｌｅｎｃｅ（商標））；イダルビシン（Ｉｄａｍｙｃｉｎ（登録商標）、ＩｄａｍｙｃｉｎＰＦＳ（登録商標））；マイトマイシンＣ（Ｍｕｔａｍｙｃｉｎ（登録商標））；ゲルダナマイシン；ハービマイシン；ラビドマイシン；ならびにデスアセチルラビドマイシンが挙げられる。
例示的なビンカアルカロイドとしては、限定されるものではないが、ビノレルビン酒石酸塩（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））、ビンクリスチン（Ｏｎｃｏｖｉｎ（登録商標））、およびビンデシン（Ｅｌｄｉｓｉｎｅ（登録商標））、ビンブラスチン（ビンブラスチン硫酸塩、ビンカロイコブラスチンおよびＶＬＢとしても公知、Ａｌｋａｂａｎ−ＡＱ（登録商標）およびＶｅｌｂａｎ（登録商標））；ならびにビノレルビン（Ｎａｖｅｌｂｉｎｅ（登録商標））が挙げられる。
例示的なプロテオソーム阻害剤としては、限定されるものではないが、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））；カルフィルゾミブ（ＰＸ−１７１−００７、（Ｓ）−４−メチル−Ｎ−（（Ｓ）−１−（（（Ｓ）−４−メチル−１−（（Ｒ）−２−メチルオキシラン−２−イル）−１−オキソペンタン−２−イル）アミノ）−１−オキソ−３−フェニルプロパン−２−イル）−２−（（Ｓ）−２−（２−モルホリノアセトアミド）−４−フェニルブタンアミド）−ペンタンアミド）；マリゾミブ（ＮＰＩ−００５２）；イキサゾミブクエン酸塩（ＭＬＮ−９７０８）；デランゾミブ（ＣＥＰ−１８７７０）；およびＯ−メチル−Ｎ−［（２−メチル−５−チアゾリル）カルボニル］−Ｌ−セリル−Ｏ−メチル−Ｎ−［（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−２−メチル−２−オキシラニル］−２−オキソ−１−（フェニルメチル）エチル］−Ｌ−セリンアミド（ＯＮＸ−０９１２）が挙げられる。
本明細書で使用される「と組み合わせた」とは、本明細書に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスなどの改変ウイルスまたはそれを含む医薬組成物と、１つまたは複数の薬剤を含むさらなる療法などのさらなる療法とを、対象に、処置レジメンまたは計画の一部として投与することを意味する。ある特定の実施形態では、組み合わせて使用されることは、改変ウイルスと１つまたは複数の薬剤とを、投与前に物理的に混合すること、またはそれらを同じ時間枠にわたって投与することを必要としない。例えば、限定されるものではないが、改変ウイルスと、１つまたは複数の薬剤とを、処置される対象に同時に投与するか、または同時に、もしくは任意の順序で連続的に、もしくは異なる時点で投与することができる。
様々な実施形態では、さらなる療法を、液体剤形、固体剤形、坐剤、吸入剤形、鼻内剤形、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む剤形、マイクロ粒子を含む剤形、ポリマー剤形、またはその任意の組合せで投与することができる。ある特定の実施形態では、さらなる療法は、約１週〜約２週、約２週〜約３週、約３週〜約４週、約４週〜約５週、約６週〜約７週、約７週〜約８週、約８週〜約９週、約９週〜約１０週、約１０週〜約１１週、約１１週〜約１２週、約１２週〜約２４週、約２４週〜約４８週、約４８週もしくは約５２週、またはそれより長い期間にわたって投与される。さらなる療法の投与頻度は、ある特定の例では、１日１回、１日２回、１週毎に１回、３週毎に１回、４週毎に１回（もしくは月１回）、８週毎に１回（もしくは２ヶ月毎に１回）、１２週毎に１回（もしくは３ヶ月毎に１回）、または２４週毎に１回（６ヶ月毎に１回）であってもよい。ある特定の実施形態では、がんを有する対象を処置する方法は、対象に、配列番号４、１５、１７、１９、５、６、８、１０、および２２〜２５からなる群から選択されるアミノ酸配列およびその保存的置換と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または１００％相同であるアミノ酸配列を含むＨＭＧＢ１バリアントタンパク質をコードする１つまたは複数の核酸を発現する、有効量の改変ウイルス、例えば、ワクシニアウイルスを投与することを含んでもよい。例えば、限定されるものではないが、本開示の改変ウイルスは、配列番号８〜１０からなる群から選択される核酸配列と少なくとも約８５％、約９０％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％または１００％相同であるヌクレオチド配列を含んでもよい核酸を含んでもよい。ある特定の実施形態では、本開示の方法は、対象に、有効量の１つまたは複数の薬剤を投与することをさらに含んでもよい。例えば、限定されるものではないが、薬剤は、上記のような、抗がん剤、免疫調節剤、またはその任意の組合せであってもよい。
キット
実施形態では、本開示は、本明細書に記載の改変ウイルスを投与するためのキットを提供する。ある特定の実施形態では、本開示のキットは、改変ウイルスまたは上記の改変ウイルスを含む医薬組成物を含んでもよい。ある特定の実施形態では、本開示のキットは、使用のための指示書、デバイスおよびさらなる試薬、ならびに上記に開示された方法を実施するためのチューブ、容器およびシリンジなどの構成要素などの１つまたは複数の構成要素をさらに含んでもよい。ある特定の実施形態では、本開示のキットは、１つまたは複数の薬剤、例えば、改変ウイルスと共に投与することができる、抗がん剤、免疫調節剤、またはその任意の組合せのうちの少なくとも１つをさらに含んでもよい。
ある特定の実施形態では、本開示のキットは、本明細書に開示される改変ウイルスを含有する１つまたは複数の容器を含んでもよい。例えば、限定されるものではないが、本開示のキットは、ＰＨ２０およびＩｇＥの少なくとも一方、またはその任意の組合せを含む、または含まない、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する改変ワクシニアウイルスを含有する１つまたは複数の容器を含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＨＭＧＢ１バリアントを、細胞浸透ペプチドにコンジュゲートすることができる。
ある特定の実施形態では、本開示のキットは、配列番号４、１５、１７、および２２〜２５、ならびにその保存的置換からなる群から選択されるアミノ酸配列と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％または１００％相同であってよいアミノ酸配列を含んでもよいＨＭＧＢ１バリアントをコードする１つまたは複数の核酸を含む有効量の改変ワクシニアウイルスを含んでもよい。ある特定の実施形態では、本開示のキットは、配列番号１６、およびその保存的置換と約８５％未満相同であるか、またはそれと等しくてもよい、約９０％未満相同であるか、またはそれと等しくてもよい、約９５％未満相同であるか、またはそれと等しくてもよい、約９６％未満相同であるか、またはそれと等しくてもよい、約９７％未満相同であるか、またはそれと等しくてもよい、または約９８％未満相同であるか、またはそれと等しくてもよい、または約９９％未満相同であるか、またはそれと等しくてもよいアミノ酸配列を含んでもよいＨＭＧＢ１バリアントをコードする１つまたは複数の核酸を含む有効量の改変ワクシニアウイルスを含んでもよい。
ある特定の実施形態では、本開示のキットは、使用のための指示書、改変ウイルスを対象に投与するためのデバイス、またはさらなる薬剤もしくは化合物を対象に投与するためのデバイスを含んでもよい。例えば、限定されるものではないが、指示書は、改変ウイルス、および任意選択で、キットに含まれる他の構成要素、および対象の適切な状態、適切な用量および改変ウイルスを投与するための適切な投与方法を決定するための方法などの、投与のための方法の説明を含んでもよい。指示書はまた、処置時間の持続期間にわたって対象をモニタリングするための指針を含んでもよい。
ある特定の実施形態では、本開示のキットは、改変ウイルスを対象に投与するためのデバイスを含んでもよい。医薬および医薬組成物を投与するための当業界で公知の様々なデバイスのいずれかを、本明細書に提供されるキットに含有させることができる。例えば、限定されるものではないが、そのようなデバイスとしては、皮下注射針、静脈内注射針、カテーテル、無針注射デバイス、吸入器および点眼器などの液体ディスペンサーが挙げられる。ある特定の実施形態では、例えば、静脈内注射、腫瘍内注射、腹腔内注射によって全身的に送達される改変ウイルスを、皮下注射針およびシリンジを含むキットに含有させることができる。
以下の実施例は、本開示の範囲を限定することなく、記載された実施形態をさらに例示するものである。
（実施例１）
例示的ＨＭＧＢ１バリアントの設計および発現
予想外の治療利益を提供したＨＭＧＢ１バリアント（本明細書では「ＨＭＧＢ１ｍｕｔ」とも呼ばれる）の一例を、図１ａに示す。このダイアグラムは、ＨＭＧＢ１中の２つの核局在化シグナル（ＮＬＳ）を突然変異させ、ＩｇＥ配列を、トランスジーンのＮ末端に融合して、細胞外環境中のタンパク質を安定化したことを示す。これは、ＨＭＧＢ１バリアントの免疫活性化機能を増大させて、周囲の未感染細胞における取込みと共に、より高いバイスタンダー効果を可能にし、自食作用の増強をもたらした。
このトランスジーンを、ウイルスｐ７．５プロモーターの制御下でウイルスチミジンキナーゼ遺伝子座に挿入した（図１ｂ）。チミジンキナーゼ活性の喪失は、腫瘍選択的ＶＡＣＶベクターを作出するための良好に特徴付けられた手法である。さらに、ルシフェラーゼを、ｐＳＥ／Ｌプロモーターの制御下で同じ遺伝子座に挿入し、リポーター遺伝子として使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでのウイルス遺伝子発現を追跡した。ＨＭＧＢ１ｍｕｔの発現を、異なるウイルスによる感染後に２つのマウス腫瘍細胞株（Ｒｅｎｃａおよび４Ｔ１）に由来する培地中でのウェスタンブロット（図１ｃ）およびＥＬＩＳＡ（図１ｄ）によって確認した。
（実施例２）
例示的ＨＭＧＢ１バリアントのウイルス発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１ｍｕｔを発現する核酸を含有しない腫瘍溶解性ワクシニアウイルス（本明細書ではＴＫ−と呼ばれる）と比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、チミジンキナーゼ遺伝子が欠失され、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が付加された、本開示による例示的な改変された腫瘍溶解性ワクシニアウイルス（本明細書ではＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔと呼ばれる）の効果を探索することであった。
初期のｉｎ ｖｉｖｏでの実験において、単回静脈内用量のウイルス（ＴＫ−またはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔ）を使用して、予め確立された皮下腫瘍を有する免疫応答性マウスを処置した（図２）。正常に耐性のＲｅｎｃａ腫瘍モデルにおいて、ＨＭＧＢ１ｍｕｔ発現は有意に増強された治療活性をもたらすことが認められた。より高感度のＭＣ３８モデルでは、ＨＭＧＢ１ｍｕｔ発現は、さらなる有意な治療利益を提供したが、これはあまり劇的ではなかった。
治療活性の増強を駆動する機構をより良く定義するために、ある範囲のマウス腫瘍および正常細胞株にわたってＨＭＧＢ１ｍｕｔ発現の効果を検査した。リン酸化されたＩＫＫｂレベルがＨＭＧＢ１ｍｕｔ発現と共に有意に増加することに最初に留意した（図３ａ）。これは、ＮＦ−ｋＢ活性化をもたらし、次いで、アポトーシスするように細胞を感作する、および／または様々なサイトカインの放出を増強することができると予想される。しかしながら、先天性免疫と適応免疫の両方に関与する様々なサイトカインおよびケモカインの発現レベルは、ＨＭＧＢ１ｍｕｔを発現するウイルスによる感染後に変化しなかったか、または低下した（ＴＫ−ウイルスによる感染と比較して）（図３ｂ〜ｅ）。さらに、ナイーブなＢＡＬＢ／ｃマウスに、ＴＫ−またはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔのいずれかを接種した後、誘導された抗ウイルスＣＴＬ応答のレベルに有意な変化はなかった；事実、ＨＭＧＢ１ｍｕｔ発現に関してＣＴＬ応答の低下に向かう傾向があったが、これは有意ではなかった（図３ｆ）。最後に、Ｒｅｎｃａ腫瘍を担持するＳＣＩＤマウスをＴＫ−またはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔで処置した場合、ＨＭＧＢ１ｍｕｔ発現は、治療利益を維持した（図３ｇ）。したがって、トランスジーンによって提供される治療利益に対する非免疫成分が存在する。
ＨＭＧＢ１は、典型的には、細胞生存と関連する。かくして、ＨＭＧＢ１ｍｕｔを使用する場合、ウイルス複製の減少またはウイルス複製の増加なしが予想された。しかしながら、ＨＭＧＢ１ｍｕｔを使用する場合の１つの予想外の知見は、培養物中の複数の腫瘍細胞株にわたって見られたウイルス複製の増加であった（図４ａ）。この予想外の複製の増加は、細胞殺傷の有意でない差異にも拘わらず観察された（図４ｂおよび図４ｄ）。ＨＭＧＢ１ｍｕｔ発現は、ＩＫＫ□の活性化の増加と共に、細胞殺傷のわずかな増加をもたらしたが（図３ａ）
細胞アポトーシス。
ウイルス複製の増加は、Ｒｅｎｃａ（図４ｃ）とＭＣ３８（図４ｅ）腫瘍の両方において検出されたウイルスルシフェラーゼ遺伝子発現の有意な増加と共に、ｉｎ ｖｉｖｏの腫瘍においても見られた。この増加は、Ｒｅｎｃａ腫瘍モデルにおいてより有意であり、治療利益のより大きな増加も示した（図２）。ｉｎ ｖｉｖｏで見られた複製（ウイルス遺伝子発現）の増加は、腫瘍中での複製の増強（図４ｇ）が継続的に持続するＳＣＩＤマウスにおいてさえ、腫瘍に限定された（図４ｆ）ことは注目に値する。腫瘍を標的とするＯＶ株を作出するウイルス改変は、典型的には、腫瘍中での複製を選択的に増強するよりもむしろ、正常組織中でのウイルス複製を減弱させることを含むため、これは注目に値する。
自食作用マーカーに対するＨＭＧＢ１ｍｕｔ発現の効果を検査した。トランスジーンの発現はＬＣ３の増加をもたらすこと（図５ａ）および自食作用胞の成熟の阻害剤（小胞Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ阻害剤、バフィロマイシンＡ１）と、ＰＩ３Ｋ（ＬＹ２９４００２；ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ／ｍＴＯＲ経路は自食作用をモジュレートすることが公知である）は両方とも、ＨＭＧＢ１ｍｕｔ発現に関して元々見られるウイルス遺伝子発現の増加の喪失をもたらすこと（図５ｂ）が見られた。これは、自食作用に対するＨＭＧＢ１の効果が、ウイルス複製の増強を駆動し得ることを暗示する。
ＨＣＴ１１６細胞に、自食作用経路の重要なメディエーターであるＡｔｇ５を標的とするｓｉＲＮＡをトランスフェクトした。自食作用能力の喪失は、ウイルス複製に負に影響することが見られた（図６ａ）。この知見は、自食作用がワクシニア複製に影響しないことを示した以前の研究と矛盾する。
脂肪酸合成酵素の潜在的な役割を、ワクシニア複製について検査した。脂肪酸合成酵素阻害剤であるセルレニンもまた、ｉｎ ｖｉｔｒｏで腫瘍細胞中でのワクシニア複製を有意に減少させることが見られた（図６ｂ）。
ＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔの複製は、肥満のモデルにおける腫瘍の感染からさらに利益を得た。ＴＫ−とＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔの両方の複製は、高脂肪食を給餌されたマウスの状況において増加した（図６ｃおよび図６ｄ）。
ＨＭＧＢ１ｍｕｔは、タキソールおよびシスプラチンなどの白金に基づく薬物を含む、化学療法と相乗作用する。ＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔを感染させた細胞から培地を採取し、ウイルス粒子を除去するために濾過した後、新鮮な腫瘍細胞層上に塗布し、これらの細胞を、シスプラチンおよびタキソールなどの化学療法へのその後の曝露に対して感作した（図７ａ）。この効果は、ＨＭＧＢ１ｍｕｔを発現するウイルスについて予想外に顕著であった。
この効果は、ｉｎ ｖｉｖｏではさらにより予想外に顕著であった（図７ｂ）。Ｒｅｎｃａ腫瘍を担持するＢＡＬＢ／ｃマウスを、単独で、またはパクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標））と組み合わせて、ウイルス（ＴＫ−またはＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔ）の単回静脈内注射で処置した。ＴＫ−ＨＭＧＢ１ｍｕｔ＋Ｔａｘｏｌ（登録商標）は、任意の他の処置よりも有意に高い治療効果をもたらすことが見られた。
ウイルス拡散に対する、ワクシニア株発現のみ、またはマトリックスメタロプロテイナーゼ−８（ＭＭＰ８）発現もしくはヒアルロニダーゼＰＨ−２０の発現との組合せの効果を、マウスにおいて評価した。ワクシニア株のみ（ＷＲ ＴＫ−のみ）、ワクシニア株とＭＭＰ８発現（ＷＲ ＴＫ−ｍｍｐ８）、またはワクシニア株とＰＨ２０発現（ＷＲ ＴＫ−ｐｈ２０）で処置されたマウスにおける腫瘍の生物発光イメージングは、他の条件と比較して、ワクシニア株とＰＨ２０発現を用いる腫瘍中でウイルス拡散の有意な増加を示した（図８ａおよび図８ｂ）。
ｉｎ ｖｉｖｏでの実験により、ＨＭＧＢ１ｍｕｔとＰＨ２０発現との組合せの治療効果の増強がさらに示された。予め確立された皮下ＭＤＡ−ＭＢ−２３１腫瘍（５０〜１００ｍｍ３）を担持する免疫不全（無胸腺ｎｕ／ｎｕ）マウスを、単回静脈内用量のＰＢＳ（対照）またはウイルス（ＷＲ．ＴＫ−、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０、もしくはＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＨＭＧＢ１ｍｕｔ）で処置し、腫瘍体積を測定した。処置の１４日後に測定した場合、ＷＲ．ＴＫ−ＰＨ２０．ＨＭＧＢ１ｍｕｔを用いる処置が腫瘍体積を最も有意に減少させた（図９）。
ＨＭＧＢ１ｍｕｔとＰＨ２０発現との組合せの治療効果を、ＪＸ−５９４としても公知の、クラス最高の臨床ウイルスＰｅｘａ−Ｖｅｃの模倣体（ＷＲ．ＴＫ−ＧＭＣＳＦ＋；図１０）と比較した。皮下Ｒｅｎｃａ腫瘍（５０〜１００ｍｍ３）を担持するＢＡＬＢ／ｃマウス（ｎ＝１０匹／群）を、０日目に、対照としてのビヒクル、１Ｅ８ ＰＦＵのＨＭＧＢ１ｍｕｔとＰＨ２０を発現するウイルス（ＷＯ−Ｈ１）、または１Ｅ８ ＰＦＵのＷＲ．ＴＫ−ＧＭＳＣＦ＋を発現するウイルスの単回静脈内注射で処置した。腫瘍体積を、処置後の日数の関数として測定した。ＨＭＧＢ１ｍｕｔとＰＨ２０とを用いる処置は、Ｐｅｘａ−Ｖｅｃ模倣体を用いる処置と比較して腫瘍体積の減少をもたらした（図１０）。
ＨＭＧＢ１ｍｕｔとＰＨ２０発現との組合せの治療効果も、肥満マウスにおける腹膜がんのモデルにおいてＰｅｘａ−Ｖｅｃ模倣体と比較した。Ｃ５７／ＢＬ６マウスに、体重が正常食を給餌した対照マウスよりも１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した。次いで、マウスの腹腔に、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を埋め込んだ。腫瘍増殖の後、生物発光イメージングを行った。一度、腫瘍が確立されたら（５日後）、マウスを、ＰＢＳ（対照）、５Ｅ６ ＰＦＵのＨＭＧＢ１ｍｕｔとＰＨ２０とを発現するウイルス、または５Ｅ６ ＰＦＵのＰｅｘａ−Ｖｅｃ模倣体を発現するウイルスの単回低用量の腹腔内注射で処置した。注目すべきことに、Ｐｅｘａ−Ｖｅｃ模倣体（ＷＲ．ＴＫ−．ＧＭＣＳＦ＋）は、実際に、腫瘍増殖のわずかな増加をもたらしたが、ＨＭＧＢ１ｍｕｔとＰＨ２０とを発現するウイルス（ＷＯ−Ｈ１）は、ＰＢＳ対照と比較して全身腫瘍組織量の有意な減少を示した（図１１）。
ＨＭＧＢ１ｍｕｔとＰＨ２０発現との組合せの治療活性を、予めの短期間の飢餓の状況で評価した。Ｃ５７／ＢＬ６マウスの腹腔に、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を埋め込んだ。腫瘍増殖の後、生物発光イメージングを行った。一度、腫瘍が確立されたら（５日後）、マウスを、ウイルスのみ、または２４ｈの飢餓、次いで、低用量（５Ｅ６ ＰＦＵの腹腔内）のＨＭＧＢ１ｍｕｔとＰＨ２０とを発現する（ＷＯ−Ｈ１）ウイルスで処置した（図１２）。ＷＯ−Ｈ１はこのモデルにおいて治療活性を示したが、この効果は、ケトン食療法を模倣するように設計され、腫瘍中での自食作用を増加させると予想される予備処置である、予めの短期間の飢餓により増強されることが決定された。
（実施例３）
改変アデノ随伴ウイルスからの例示的ＨＭＧＢ１バリアントの発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する核酸を含有しないアデノ随伴ウイルスと比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が、単独で、またはＰＨ−２０をコードするさらなる外因性遺伝子と共に、ウイルスゲノム中に挿入された、本開示による、例示的な改変された腫瘍溶解性アデノ随伴ウイルスの効果を探索することである。化学療法と組み合わせた、本開示の改変されたアデノ随伴ウイルスの投与は、対照アデノ随伴ウイルスと比較して、相乗効果をもたらすことが観察される。体重が正常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した後、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を腹腔に埋め込んだマウスへの投与時に、対照ウイルスと比較して試験改変アデノ随伴ウイルスの場合、全身腫瘍組織量の有意な減少が観察される。
（実施例４）
改変単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）からの例示的ＨＭＧＢ１バリアントの発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する核酸を含有しないＨＳＶと比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が、単独で、またはＰＨ−２０をコードするさらなる外因性遺伝子と共に、ウイルスゲノム中に挿入された、本開示による、例示的な改変された腫瘍溶解性ＨＳＶの効果を探索することである。化学療法と組み合わせた、本開示の改変されたＨＳＶの投与は、対照ＨＳＶと比較して、相乗効果をもたらすことが観察される。体重が正常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した後、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を腹腔に埋め込んだマウスへの投与時に、対照ウイルスと比較して試験改変ＨＳＶの場合、全身腫瘍組織量の有意な減少が観察される。
（実施例５）
改変アデノウイルスからの例示的ＨＭＧＢ１バリアントの発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する核酸を含有しないアデノウイルスと比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が、単独で、またはＰＨ−２０をコードするさらなる外因性遺伝子と共に、ウイルスゲノム中に挿入された、本開示による、例示的な改変された腫瘍溶解性アデノウイルスの効果を探索することである。化学療法と組み合わせた、本開示の改変されたアデノウイルスの投与は、対照アデノウイルスと比較して、相乗効果をもたらすことが観察される。体重が正常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した後、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を腹腔に埋め込んだマウスへの投与時に、対照ウイルスと比較して試験改変アデノウイルスの場合、全身腫瘍組織量の有意な減少が観察される。
（実施例６）
改変水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）からの例示的ＨＭＧＢ１バリアントの発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する核酸を含有しないＶＳＶと比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が、単独で、またはＰＨ−２０をコードするさらなる外因性遺伝子と共に、ウイルスゲノム中に挿入された、本開示による、例示的な改変された腫瘍溶解性ＶＳＶの効果を探索することである。化学療法と組み合わせた、本開示の改変されたＶＳＶの投与は、対照ＶＳＶと比較して、相乗効果をもたらすことが観察される。体重が正常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した後、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を腹腔に埋め込んだマウスへの投与時に、対照ウイルスと比較して試験改変ＶＳＶの場合、全身腫瘍組織量の有意な減少が観察される。
（実施例６）
改変ポリオウイルスからの例示的ＨＭＧＢ１バリアントの発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する核酸を含有しないポリオウイルスと比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が、単独で、またはＰＨ−２０をコードするさらなる外因性遺伝子と共に、ウイルスゲノム中に挿入された、本開示による、例示的な改変された腫瘍溶解性ポリオウイルスの効果を探索することである。化学療法と組み合わせた、本開示の改変されたポリオウイルスの投与は、対照ポリオウイルスと比較して、相乗効果をもたらすことが観察される。体重が正常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した後、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を腹腔に埋め込んだマウスへの投与時に、対照ウイルスと比較して試験改変ポリオウイルスの場合、全身腫瘍組織量の有意な減少が観察される。
（実施例７）
改変ニューカッスル病ウイルス（ＮＤＶ）からの例示的ＨＭＧＢ１バリアントの発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する核酸を含有しないＮＤＶと比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が、単独で、またはＰＨ−２０をコードするさらなる外因性遺伝子と共に、ウイルスゲノム中に挿入された、本開示による、例示的な改変された腫瘍溶解性ＮＤＶの効果を探索することである。化学療法と組み合わせた、本開示の改変されたＮＤＶの投与は、対照ＮＤＶと比較して、相乗効果をもたらすことが観察される。体重が正常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した後、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を腹腔に埋め込んだマウスへの投与時に、対照ウイルスと比較して試験改変ＮＤＶの場合、全身腫瘍組織量の有意な減少が観察される。
（実施例８）
改変セネカバレーウイルス（ＳＶＶ）からの例示的ＨＭＧＢ１バリアントの発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する核酸を含有しないＳＶＶと比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が、単独で、またはＰＨ−２０をコードするさらなる外因性遺伝子と共に、ウイルスゲノム中に挿入された、本開示による、例示的な改変された腫瘍溶解性ＳＶＶの効果を探索することである。化学療法と組み合わせた、本開示の改変されたＳＶＶの投与は、対照ＳＶＶと比較して、相乗効果をもたらすことが観察される。体重が正常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した後、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を腹腔に埋め込んだマウスへの投与時に、対照ウイルスと比較して試験改変ＳＶＶの場合、全身腫瘍組織量の有意な減少が観察される。
（実施例９）
改変コクサッキーウイルスからの例示的ＨＭＧＢ１バリアントの発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する核酸を含有しないコクサッキーウイルスと比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が、単独で、またはＰＨ−２０をコードするさらなる外因性遺伝子と共に、ウイルスゲノム中に挿入された、本開示による、例示的な改変された腫瘍溶解性コクサッキーウイルスの効果を探索することである。化学療法と組み合わせた、本開示の改変されたコクサッキーウイルスの投与は、対照コクサッキーウイルスと比較して、相乗効果をもたらすことが観察される。体重が正常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した後、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を腹腔に埋め込んだマウスへの投与時に、対照ウイルスと比較して試験改変コクサッキーウイルスの場合、全身腫瘍組織量の有意な減少が観察される。
（実施例１０）
改変レオウイルスからの例示的ＨＭＧＢ１バリアントの発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する核酸を含有しないレオウイルスと比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が、単独で、またはＰＨ−２０をコードするさらなる外因性遺伝子と共に、ウイルスゲノム中に挿入された、本開示による、例示的な改変された腫瘍溶解性レオウイルスの効果を探索することである。化学療法と組み合わせた、本開示の改変されたレオウイルスの投与は、対照レオウイルスと比較して、相乗効果をもたらすことが観察される。体重が正常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した後、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を腹腔に埋め込んだマウスへの投与時に、対照ウイルスと比較して試験改変レオウイルスの場合、全身腫瘍組織量の有意な減少が観察される。
（実施例１１）
改変レンチウイルスからの例示的ＨＭＧＢ１バリアントの発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する核酸を含有しないレンチウイルスと比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が、単独で、またはＰＨ−２０をコードするさらなる外因性遺伝子と共に、ウイルスゲノム中に挿入された、本開示による、例示的な改変された腫瘍溶解性レンチウイルスの効果を探索することである。化学療法と組み合わせた、本開示の改変されたレンチウイルスの投与は、対照レンチウイルスと比較して、相乗効果をもたらすことが観察される。体重が正常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した後、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を腹腔に埋め込んだマウスへの投与時に、対照ウイルスと比較して試験改変レンチウイルスの場合、全身腫瘍組織量の有意な減少が観察される。
（実施例１２）
改変麻疹ウイルスからの例示的ＨＭＧＢ１バリアントの発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する核酸を含有しない麻疹ウイルスと比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が、単独で、またはＰＨ−２０をコードするさらなる外因性遺伝子と共に、ウイルスゲノム中に挿入された、本開示による、例示的な改変された腫瘍溶解性麻疹ウイルスの効果を探索することである。化学療法と組み合わせた、本開示の改変された麻疹ウイルスの投与は、対照麻疹ウイルスと比較して、相乗効果をもたらすことが観察される。体重が正常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した後、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を腹腔に埋め込んだマウスへの投与時に、対照ウイルスと比較して試験改変麻疹ウイルスの場合、全身腫瘍組織量の有意な減少が観察される。
（実施例１３）
改変マラバウイルスからの例示的ＨＭＧＢ１バリアントの発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する核酸を含有しないマラバウイルスと比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が、単独で、またはＰＨ−２０をコードするさらなる外因性遺伝子と共に、ウイルスゲノム中に挿入された、本開示による、例示的な改変された腫瘍溶解性マラバウイルスの効果を探索することである。化学療法と組み合わせた、本開示の改変されたマラバウイルスの投与は、対照マラバウイルスと比較して、相乗効果をもたらすことが観察される。体重が正常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した後、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を腹腔に埋め込んだマウスへの投与時に、対照ウイルスと比較して試験改変マラバウイルスの場合、全身腫瘍組織量の有意な減少が観察される。
（実施例１４）
改変ミクソマビルウイルスからの例示的ＨＭＧＢ１バリアントの発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する核酸を含有しないミクソマビルウイルスと比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が、単独で、またはＰＨ−２０をコードするさらなる外因性遺伝子と共に、ウイルスゲノム中に挿入された、本開示による、例示的な改変された腫瘍溶解性ミクソマビルウイルスの効果を探索することである。化学療法と組み合わせた、本開示の改変されたミクソマビルウイルスの投与は、対照ミクソマビルウイルスと比較して、相乗効果をもたらすことが観察される。体重が正常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した後、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を腹腔に埋め込んだマウスへの投与時に、対照ウイルスと比較して試験改変ミクソマビルウイルスの場合、全身腫瘍組織量の有意な減少が観察される。
（実施例１５）
改変メンゴウイルスからの例示的ＨＭＧＢ１バリアントの発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１バリアントを発現する核酸を含有しないメンゴウイルスと比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が、単独で、またはＰＨ−２０をコードするさらなる外因性遺伝子と共に、ウイルスゲノム中に挿入された、本開示による、例示的な改変された腫瘍溶解性メンゴウイルスの効果を探索することである。化学療法と組み合わせた、本開示の改変されたメンゴウイルスの投与は、対照メンゴウイルスと比較して、相乗効果をもたらすことが観察される。体重が正常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した後、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を腹腔に埋め込んだマウスへの投与時に、対照ウイルスと比較して試験改変メンゴウイルスの場合、全身腫瘍組織量の有意な減少が観察される。
（実施例１６）
改変ワクシニアウイルスからの、さらなるウイルス遺伝子改変と組み合わせた例示的ＨＭＧＢ１バリアントの発現はがん細胞株およびマウス腫瘍モデルにおける治療効果を増強する
この試験の目的は、ＨＭＧＢ１バリアントおよびＰＨ−２０を発現する核酸を含有せず、Ｂ８Ｒ遺伝子が欠失した腫瘍溶解性ワクシニアウイルスと比較した、がん細胞株およびマウスモデルにおける、ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸が、ＰＨ−２０をコードし、Ｂ８Ｒ遺伝子が欠失したさらなる外因性遺伝子と共に、ウイルスゲノム中に挿入された、本開示による例示的な改変された腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの効果を探索することである。化学療法と組み合わせた、本開示の改変された腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの投与は、対照の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスと比較して、相乗効果をもたらすことが観察される。体重が正常食を給餌した対照マウスより１０％を超えて増加するまで高脂肪食を給餌した後、ルシフェラーゼを発現するＭＣ−３８結腸直腸がん細胞を腹腔に埋め込んだマウスへの投与時に、対照ウイルスと比較して試験改変腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの場合、全身腫瘍組織量の有意な減少が観察される。
配列表：

Claims (151)

  1. ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、前記外因性核酸が配列番号１３、またはその断片と少なくとも約８０％相同であるヌクレオチド配列を含む、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  2. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記外因性核酸が配列番号１３、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるヌクレオチド配列を含む、請求項１に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  3. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１５、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるアミノ酸配列を含む、請求項１または２に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  4. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１５の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３の少なくとも１つを含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  5. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１５の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  6. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１５の残基１〜２０を含まない、請求項１〜５のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  7. ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、前記ＨＭＧＢ１バリアントが、その第１（ＮＬＳ１）、第２の核局在化シグナル（ＮＬＳ２）、またはその任意の組合せの中に突然変異を含む、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  8. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントがｂｏｘＡ、ｂｏｘＢ、またはその任意の組合せの中に突然変異をさらに含む、請求項７に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  9. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１５、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるアミノ酸配列を含む、請求項７または８に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  10. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１５の４３および６５位にシステイン残基を含む、請求項９に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  11. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１５の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３の少なくとも１つを含む、請求項９または１０に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  12. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１５の残基２１〜７４、１０９〜１２８、または１７０〜２０３を含む、請求項９または１０に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  13. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１５の残基１〜２０を含まない、請求項７〜１２のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  14. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含み、前記核酸配列が配列番号１３、またはその断片と少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同である、請求項７〜１３のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  15. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列に作動可能に連結した抗体またはその抗原結合性断片をコードする外因性核酸配列をさらに含む、請求項７〜１４のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  16. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列に作動可能に連結したヒアルロニダーゼをコードする外因性核酸配列をさらに含む、請求項７〜１５のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  17. ＮＬＳ１中に突然変異を含む前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＮＬＳ１中の前記突然変異が、前記ＨＭＧＢ１バリアントの細胞質再配置を促進する、請求項７〜１６のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  18. ＮＬＳ２中に突然変異を含む前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＮＬＳ２中の前記突然変異が、前記ＨＭＧＢ１バリアントの細胞質再配置を促進する、請求項７〜１６のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  19. ＮＬＳ１およびＮＬＳ２中に突然変異を含む前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＮＬＳ１およびＮＬＳ２中の前記突然変異が、前記ＨＭＧＢ１バリアントの細胞質再配置を促進する、請求項７〜１６のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  20. ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、前記ＨＭＧＢ１バリアントがヒトＨＭＧＢ１（配列番号１６）と９５％未満相同であるか、またはそれと等しい、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  21. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１６の残基１〜８５、８９〜１０８、および１５０〜１８３の少なくとも１つを含む、請求項２０に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  22. 前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１６の残基１〜８５を含む、請求項２０または２１に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  23. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１６の残基８９〜１０８を含む、請求項２０または２１に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  24. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１６の残基１５０〜１８３を含む、請求項２０または２１に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  25. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１６の残基１〜８５、８９〜１０８、および１５０〜１８３を含む、請求項２０〜２４のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  26. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１６の残基３５、４２、８９、１８１、１８９、および２０２のうちの１つまたは複数に突然変異を含む、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  27. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１６の残基３５、４２、８９、１８１、１８９、および２０２に突然変異を含む、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  28. ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、前記ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１６の残基２３、４５、８９〜１０８、および１５０〜１８３を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１６と９５％未満相同であるか、またはそれと等しいアミノ酸配列を含む、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  29. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１６の残基２３〜４５、８９〜１０８、１５０〜１８３を含む、請求項２８に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  30. 前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１６の残基３５、４２、８９、１８１、１８９、および２０２のうちの１つまたは複数に突然変異を含む、請求項２８または２９に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  31. 前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１６の残基３５、４２、８９、１８１、１８９、および２０２に突然変異を含む、請求項２８または２９に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  32. ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、前記外因性核酸が、配列番号１４、またはその断片と少なくとも約８０％相同であるヌクレオチド配列を含む、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  33. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記外因性核酸が配列番号１４、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるヌクレオチド配列を含む、請求項３２に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  34. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１７、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるアミノ酸配列を含む、請求項３１または３２に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  35. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１７の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３の少なくとも１つを含む、請求項３２〜３４のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  36. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１７の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３を含む、請求項３２〜３４のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  37. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１７の残基１〜２０を含まない、請求項３２〜３６のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  38. ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む腫瘍溶解性ワクシニアウイルスであって、前記外因性核酸が、配列番号１９、またはその断片と少なくとも約８０％相同であるヌクレオチド配列を含む、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  39. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記外因性核酸が配列番号１４、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるヌクレオチド配列を含む、請求項３８に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  40. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１７、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるアミノ酸配列を含む、請求項３８または３９に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  41. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１７の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３の少なくとも１つを含む、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  42. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１７の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜２０３を含む、請求項３８〜４０のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  43. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１７の残基１〜２０を含まない、請求項３８〜４２のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  44. ＮＬＳ２中に突然変異を含む前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＮＬＳ２中の前記突然変異が、前記ＨＭＧＢ１バリアントの細胞質再配置を促進する、請求項１〜４３のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  45. ＮＬＳ１およびＮＬＳ２中に突然変異を含む前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、ＮＬＳ１およびＮＬＳ２中の前記突然変異が、前記ＨＭＧＢ１バリアントの細胞質再配置を促進する、請求項１〜４４のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  46. 前記ワクシニアウイルスから発現される前記ＨＭＧＢ１バリアントが細胞質中に分泌される、請求項１〜４５のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  47. 前記ワクシニアウイルスからの前記ＨＭＧＢ１バリアントの発現が、前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を欠く以外は同一のワクシニアウイルスと比較して、細胞自食作用を増強する、請求項１〜４６のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  48. 前記ＨＭＧＢ１バリアントの発現が、前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を欠く以外は同一のワクシニアウイルスと比較して、前記ワクシニアウイルスの腫瘍特異的複製を増強する、請求項１〜４７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  49. 前記ＨＭＧＢ１バリアントの発現が、前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を欠く以外は同一のワクシニアウイルスと比較して、前記ワクシニアウイルスによって感染される腫瘍細胞に対する細胞傷害性免疫応答を増強する、請求項１〜４８のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  50. 前記ＨＭＧＢ１バリアントの発現が、前記ワクシニアウイルスによって感染される腫瘍細胞の近傍の腫瘍細胞に対する細胞傷害性免疫応答を誘導し、近傍の前記腫瘍細胞が前記ワクシニアウイルスによって感染されない、請求項１〜４９のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  51. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ワクシニアウイルスが、そのゲノム中に１つまたは複数の欠失を含む、請求項１〜５０のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  52. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ワクシニアウイルスが、チミジンキナーゼ遺伝子の欠失を含み、前記外因性核酸が前記チミジンキナーゼ遺伝子の遺伝子座中に挿入される、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  53. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含み、前記ワクシニアウイルスが、１つまたは複数のビルレンス遺伝子の欠失を含む、請求項１〜５１のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  54. 細胞外エンベロープウイルス（ＥＥＶ）である、請求項１〜５３のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  55. ヒアルロニダーゼ酵素をさらに発現する、請求項１〜５４のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  56. 前記ワクシニアウイルスがヒアルロニダーゼ酵素を発現し、前記ヒアルロニダーゼ酵素が、前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸に作動可能に連結した前記ヒアルロニダーゼ酵素をコードする外因性核酸を含まない以外は同一のワクシニアウイルスの拡散と比較して、腫瘍微小環境中での前記ワクシニアウイルスの拡散を増加させる、請求項１〜５５のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  57. 前記ワクシニアウイルスが前記ヒアルロニダーゼ酵素を発現し、前記ヒアルロニダーゼ酵素が腫瘍微小環境中での前記ワクシニアウイルスの拡散を増加させる、請求項１〜５６のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  58. 循環中の前記ＨＭＧＢ１バリアントを安定化させるタンパク質をさらに発現する、請求項１〜５７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  59. 循環中の前記ＨＭＧＢ１バリアントを安定化させるタンパク質が、免疫グロブリンまたはそのドメインである、請求項５８に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  60. 前記免疫グロブリンがＩｇＥである、請求項５９に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  61. 前記免疫グロブリンドメインがＦｃドメインである、請求項５９に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  62. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含み、前記ＩｇＥをコードするさらなる外因性核酸配列が、前記ＨＭＧＢ１バリアントコード配列の上流に融合される、請求項６０に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  63. 排出ポンプ遮断剤をさらに発現する、請求項１〜６２のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  64. 化学療法感作剤をさらに発現する、請求項１〜６３のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  65. 化学療法に対する感作を増強する改変を含む、請求項１〜６４のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  66. キメラ抗原受容体Ｔ細胞を誘引する改変を含む、請求項１〜６５のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  67. ＣＡＲ Ｔ細胞に基づく療法の効能を増強する、請求項１〜６６のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
  68. ＨＭＧＢ１バリアントをコードする単離されたポリヌクレオチドであって、配列番号１３、またはその断片と少なくとも８５％相同である配列を含む、単離されたポリヌクレオチド。
  69. 前記ポリヌクレオチドがＨＭＧＢ１バリアントをコードし、前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１５、またはその断片と少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、または１００％相同であるアミノ酸配列を含む、請求項６８に記載の単離されたポリヌクレオチド。
  70. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードし、前記ＨＭＧＢ１バリアントがその第１（ＮＬＳ１）または第２の核局在化シグナル（ＮＬＳ２）中に突然変異を含む、請求項６８または６９に記載の単離されたポリヌクレオチド。
  71. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードし、前記ＨＭＧＢ１バリアントがｂｏｘＡまたはｂｏｘＢ中に突然変異をさらに含む、請求項７０に記載の単離されたポリヌクレオチド。
  72. 前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードし、前記ＨＭＧＢ１バリアントがｂｏｘＡまたはｂｏｘＢ中に突然変異をさらに含む、請求項７０に記載の単離されたポリヌクレオチド。
  73. 前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１５の４３および６５位にシステイン残基を含む、請求項６８〜７２のいずれか一項に記載の単離されたポリヌクレオチド。
  74. 前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１５の残基２１〜７４、１０９〜１２８、および１７０〜１８３の少なくとも１つを含む、請求項６８〜７３のいずれか一項に記載の単離されたポリヌクレオチド。
  75. 前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１５の残基２１〜１０５、１０８〜１８２、および１８３〜２０５を含む、請求項６８〜７３のいずれか一項に記載の単離されたポリヌクレオチド。
  76. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項６８〜７５のいずれか一項に記載の単離されたポリヌクレオチド、可溶化剤、および賦形剤を含む医薬組成物。
  77. 前記賦形剤が、緩衝剤、安定剤、酸化防止剤、結合剤、希釈剤、分散剤、速度制御剤、潤滑剤、流動促進剤、崩壊剤、可塑剤、保存剤のうちの１つもしくは複数、またはその任意の組合せを含む、請求項７６に記載の医薬組成物。
  78. 前記賦形剤が、リン酸一水素二ナトリウム二水和物、リン酸二水素ナトリウム二水和物、塩化ナトリウム、ミオイノシトール、ソルビトール、またはその任意の組合せを含む、請求項７７に記載の医薬組成物。
  79. 保存剤を含まない、請求項７６〜７８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  80. 保存剤、希釈剤、および担体のうちの１つまたは複数をさらに含む、請求項７６〜７９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  81. さらなる活性成分またはその塩をさらに含む、請求項７６〜８０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  82. 前記可溶化剤が滅菌水である、請求項７６〜８１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  83. さらなる腫瘍溶解性ウイルスであるさらなる活性成分を含む、請求項７６〜８１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  84. （ｉ）請求項１〜６７のいずれか一項に記載の外因性核酸配列に、ワクシニアウイルスに基づく核酸配列を作動可能に連結することによって改変ワクシニアウイルスＤＮＡベクターを生成すること；（ｉｉ）哺乳動物細胞に、前記改変ワクシニアウイルスＤＮＡベクターをトランスフェクトすること；（ｉｉｉ）ウイルス複製にとって好適な条件で前記哺乳動物細胞を培養すること；および（ｉｖ）ウイルス粒子を収獲することを含む、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを産生するための方法。
  85. 前記哺乳動物細胞がＨｅＬａ細胞、２９３細胞、またはＶｅｒｏ細胞を含む、請求項８４に記載の方法。
  86. 前記改変ワクシニアウイルスＤＮＡベクター中の、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の外因性核酸が、細胞外エンベロープウイルス（ＥＥＶ）を主に含有するウイルス粒子の集団を促進する、請求項８４または８５に記載の方法。
  87. 前記改変ワクシニアウイルスＤＮＡベクター中の、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の外因性核酸が、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の外因性核酸を含まない以外は同一のワクシニアウイルスＤＮＡベクターと比較して、高力価のＨｅＬａ細胞および２９３細胞の少なくとも一方をもたらす、請求項８４〜８６のいずれか一項に記載の方法。
  88. 対象に、治療有効量の請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、がんを処置する方法。
  89. 治療有効量の請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物の投与を含み、前記がんが固形腫瘍、白血病、またはリンパ腫である、請求項８８に記載の方法。
  90. 対象に、治療有効量の請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、腫瘍を処置する方法。
  91. 治療有効量の請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物の投与を含み、前記腫瘍が固形腫瘍、白血病、またはリンパ腫である、請求項８７に記載の方法。
  92. それを必要とする前記対象に、治療有効量の請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、請求項８４〜８８のいずれか一項に記載の方法。
  93. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、前記ワクシニアウイルスが、高バイオアベイラビリティの遊離脂肪酸を含む腫瘍において腫瘍選択的複製の増加を示す、前記高バイオアベイラビリティの脂肪酸を含む腫瘍を処置する方法。
  94. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、前記ワクシニアウイルスが肥満がん患者において腫瘍選択的複製の増加を示す、肥満がん患者を処置する方法。
  95. 前記腫瘍選択的複製の増加が、前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含まない以外は同一のワクシニアウイルスの腫瘍選択的複製と比較したものである、請求項９３または９４に記載の方法。
  96. 前記腫瘍選択的複製の増加が、非肥満がん患者における前記ワクシニアウイルスの腫瘍選択的複製と比較したものである、請求項９４に記載の方法。
  97. 前記ワクシニアウイルスが、前記肥満がん患者においてＥＥＶの割合の増加をもたらす、請求項９４〜９６のいずれか一項に記載の方法。
  98. 前記肥満がん患者におけるＥＥＶの割合の増加が、前記ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸配列を含まない以外は同一のワクシニアウイルスによって産生されるＥＥＶの割合と比較したものである、請求項９７に記載の方法。
  99. 前記肥満がん患者におけるＥＥＶの割合の増加が、非肥満がん患者における前記ワクシニアウイルスによって産生されるＥＥＶの割合と比較したものである、請求項９８に記載の方法。
  100. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬製剤を投与することを含む、化学療法後のがん再発の可能性を低下させる方法。
  101. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬製剤を、免疫療法を含む以前の処置に失敗した対象に投与することを含む、処置方法。
  102. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬製剤を、化学療法後にがんを再発した対象に投与することを含む、処置方法。
  103. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬製剤を、腹膜がんを有する対象に投与することを含む、処置方法。
  104. 前記対象が肥満である、請求項１０１〜１０３のいずれか一項に記載の方法。
  105. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬製剤の投与を含み、さらなる療法の投与をさらに含む、請求項８８〜１０４のいずれか一項に記載の方法。
  106. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬製剤と共にさらなる療法の投与を含み、前記さらなる療法が、化学療法、放射線、さらなるウイルスを用いる腫瘍溶解性ウイルス療法、免疫調節タンパク質を用いる処置、ＣＡＲ Ｔ細胞療法、抗がん剤、またはその組合せを含む、請求項８８〜１０５のいずれか一項に記載の方法。
  107. 前記さらなる療法が化学療法を含む、請求項１０６に記載の方法。
  108. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬製剤の投与と、化学療法との組合せが、前記化学療法と、請求項１〜６７のいずれか一項に記載のＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含まない以外は同一のワクシニアウイルスとの組合せと比較して、相乗効果をもたらす、請求項１０７に記載の方法。
  109. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬製剤と組み合わせた前記化学療法が、請求項１〜６７のいずれか一項に記載のＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含まない以外は同一のワクシニアウイルスと組み合わせた化学療法よりも低用量で投与される、請求項１０６〜１０８のいずれか一項に記載の方法。
  110. 前記さらなる療法の投与を含み、前記さらなる療法が同時的または連続的に投与される、請求項１０５〜１０９のいずれか一項に記載の方法。
  111. 前記さらなる療法の連続的投与を含み、前記さらなる療法が請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与する前に投与される、請求項１１０に記載の方法。
  112. 前記さらなる療法の連続的投与を含み、前記さらなる療法が請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与した後に投与される、請求項１１１に記載の方法。
  113. がん細胞において毒性効果をもたらす方法であって、がん細胞集団に、治療有効量の請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
  114. 治療有効量の請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物の前記投与を含み、前記がん細胞集団中の全てではないがん細胞が、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに感染する、請求項１１３に記載の方法。
  115. 非感染がん細胞の増殖が、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスの直接的感染なしに阻害される、請求項１１４に記載の方法。
  116. 非感染がん細胞における細胞傷害性免疫応答が、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスによる直接的感染なしに誘導される、請求項１１４または１１５に記載の方法。
  117. 対象の腫瘍中に、請求項１〜６７のいずれかに記載の腫瘍溶解性ワクシニアベクターまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬製剤を導入することを含む、薬物送達のための方法。
  118. 前記薬物が腫瘍受容体リガンドにコンジュゲートされたナノ粒子を含む、請求項１１７に記載の方法。
  119. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに感染した細胞を投与することを含む、対象におけるがんを処置するための方法。
  120. 腫瘍溶解性ワクシニアウイルスに基づくがん療法の効能を増大させる、請求項１１９に記載の方法。
  121. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物の前記投与を含み、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは前記医薬組成物が、約１０６ＰＦＵ／ｍＬ〜約１０１０ＰＦＵ／ｍＬの前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを含む用量で投与される、請求項８８〜１２０のいずれか一項に記載の方法。
  122. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物の前記投与を含み、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは前記医薬組成物が、約５×１０９ＰＦＵ／ｍＬの前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスを含む用量で投与される、請求項８８〜１２１のいずれか一項に記載の方法。
  123. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物の前記投与を含み、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは前記医薬組成物が、独立に、第１の期間にわたって初期用量で、第２の期間にわたって中間用量で、および第３の期間にわたって高用量で投与される、請求項８８〜１２２のいずれか一項に記載の方法。
  124. 前記初期用量が前記中間用量よりも低く、前記中間用量が前記高用量よりも低い、前記初期用量、前記中間用量、および前記高用量の投与を独立に含む、請求項１２３に記載の方法。
  125. 前記第１、第２および第３の期間がそれぞれ、約１週間から約３週間である、請求項１２３または１２４に記載の方法。
  126. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスおよび前記医薬組成物が独立に、約１ｍＬ〜約５ｍＬ、約５ｍＬ〜１０ｍＬ、約１５ｍＬ〜約２０ｍＬ、約２５ｍＬ〜約３０ｍＬ、約３０ｍＬ〜約５０ｍＬ、約５０ｍＬ〜約１００ｍＬ、約１００ｍＬ〜１５０ｍＬ、約１５０ｍＬ〜約２００ｍＬ、約２００ｍＬ〜約２５０ｍＬ、約２５０ｍＬ〜約３００ｍＬ、約３００ｍＬ〜約３５０ｍＬ、約３５０ｍＬ〜約４００ｍＬ、約４００ｍＬ〜約４５０ｍＬ、約４５０ｍＬ〜５００ｍＬ、約５００ｍＬ〜７５０ｍＬ、または約７５０ｍＬ〜１０００ｍＬの容量で投与される液体剤形を含む、請求項８８〜１２５のいずれか一項に記載の方法。
  127. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは前記医薬組成物が、液体剤形、固体剤形、吸入剤形、鼻内剤形、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む剤形、マイクロ粒子を含む剤形、ポリマー剤形、またはその任意の組合せで投与される、請求項８８〜１２６のいずれか一項に記載の方法。
  128. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは前記医薬組成物が、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、または約１２週間の期間にわたって投与される、請求項８８〜１２７のいずれか一項に記載の方法。
  129. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは前記医薬組成物が、１日１回、１日２回、１週間毎に１回、２週間毎に１回、または３週間毎に１回投与される、請求項８８〜１２８のいずれか一項に記載の方法。
  130. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは前記医薬組成物が、静脈内的に、腹腔内的に、または腫瘍内注射によって投与される、請求項８８〜１２９のいずれか一項に記載の方法。
  131. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、前記ワクシニアウイルスまたは前記医薬製剤が、ボーラス注射または遅い輸注として投与される、請求項８８〜１３０のいずれか一項に記載の方法。
  132. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含み、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは前記医薬組成物の前記投与が、第１の用量の投与から、約１時間から約３日後に第１のピークウイルス負荷および約３日から約１０日後に第２のピークウイルス負荷をもたらす、請求項８８〜１３１のいずれか一項に記載の方法。
  133. 前記さらなる療法の投与を含み、前記さらなる療法が、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約６週間、約７週間、約８週間、約９週間、約１０週間、または約１２週間の期間にわたって投与される、請求項８８〜１３２のいずれか一項に記載の方法。
  134. 前記さらなる療法の投与を含み、前記さらなる療法が、１日１回、１週間毎に１回、２週間毎に１回、または３週間毎に１回投与される、請求項８８〜１３３のいずれか一項に記載の方法。
  135. 前記さらなる療法の投与を含み、前記さらなる療法が、液体剤形、固体剤形、吸入剤形、鼻内剤形、リポソーム製剤、ナノ粒子を含む剤形、マイクロ粒子を含む剤形、ポリマー剤形、またはその任意の組合せで投与される、請求項８８〜１３４のいずれか一項に記載の方法。
  136. 前記さらなる療法の投与を含み、前記さらなる療法が、経口的に、静脈内的に、腫瘍内注射により、または照射により投与される、請求項８８〜１３５のいずれか一項に記載の方法。
  137. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物の、それを必要とする対象への前記投与を含み、前記対象がヒトである、請求項８８〜１３６のいずれか一項に記載の方法。
  138. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物の、それを必要とする前記対象への前記投与を含み、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは前記医薬組成物の投与前に、前記対象ががんまたは腫瘍と診断されている、請求項８８〜１３７のいずれか一項に記載の方法。
  139. 請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物の、それを必要とする前記対象への前記投与を含み、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは前記医薬組成物の投与前に、前記対象ががんまたは腫瘍と診断され、前記対象が肥満である、請求項８８〜１３８のいずれか一項に記載の方法。
  140. 前記さらなる療法と共に、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物の、それを必要とする前記対象への前記投与を含み、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは前記医薬組成物の投与または前記さらなる療法前に、前記対象ががんまたは腫瘍と診断されている、請求項８８〜１３９のいずれか一項に記載の方法。
  141. 前記さらなる療法と共に、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物の、それを必要とする前記対象への前記投与を含み、前記腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは前記医薬組成物の投与前に、前記対象ががんまたは腫瘍と診断され、前記対象が肥満である、請求項８８〜１４０のいずれか一項に記載の方法。
  142. 前記対象が、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物の投与の前、それと同時、またはその後に、ケトン食療法を投与される、請求項８８〜１４１のいずれか一項に記載の方法。
  143. 前記対象が、請求項１〜６７のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルスまたは請求項７６〜８３のいずれか一項に記載の医薬組成物の投与の前、それと同時、またはその後に、短期間の絶食にある、請求項８８〜１４２のいずれか一項に記載の方法。
  144. ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む改変ウイルスであって、前記外因性核酸が配列番号１３、またはその断片と少なくとも約８０％相同であるヌクレオチド配列を含む、改変ウイルス。
  145. ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む改変ウイルスであって、前記ＨＭＧＢ１バリアントがその第１の核局在化シグナル（ＮＬＳ１）、第２の核局在化シグナル（ＮＬＳ２）、またはその任意の組合せの中に突然変異を含む、改変ウイルス。
  146. ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む改変ウイルスであって、前記ＨＭＧＢ１バリアントがヒトＨＭＧＢ１（配列番号１６）と９５％未満相同であるか、またはそれと等しい、改変ウイルス。
  147. ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む改変ウイルスであって、前記ＨＭＧＢ１バリアントが配列番号１６の残基２３、４５、８９〜１０８、および１５０〜１８３のうちの少なくとも１つを含み、前記ＨＭＧＢ１バリアントが、配列番号１６と９５％未満相同であるか、またはそれと等しいアミノ酸配列を含む、改変ウイルス。
  148. ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む改変ウイルスであって、前記外因性核酸が配列番号１４、またはその断片と少なくとも約８０％相同であるヌクレオチド配列を含む、改変ウイルス。
  149. ＨＭＧＢ１バリアントをコードする外因性核酸を含む改変ウイルスであって、前記外因性核酸が配列番号１９、またはその断片と少なくとも約８０％相同であるヌクレオチド配列を含む、改変ウイルス。
  150. 単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、アデノウイルス、ポリオウイルス、ＶＳＶ、コクサッキーウイルス、レオウイルス、レンチウイルス、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、麻疹ウイルス、マラバウイルス、ニューカッスル病（ＮＤＶ）、セネカバレーウイルス、メンゴウイルス、またはミクソマビルを含む、請求項１４４〜１４９のいずれか一項に記載の改変ウイルス。
  151. ＮＬＳ１が配列番号２０を含み、ＮＬＳ２が配列番号２１を含む、請求項７〜１９のいずれか一項に記載の腫瘍溶解性ワクシニアウイルス。
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